CA2445362A1 - Dispositif de culture cellulaire et tissulaire a regulation thermique - Google Patents

Abstract

Un dispositif de culture de cellules et tissus comprend au moins un puits de culture (18-i), de premier (2) et second (25) réservoirs logeant chacun au moins une poche souple (6,7; 27, 29) dont l'une au moins peut recevoir un fluide de culture, des moyens de liaison (20, 21) couplés au puits et aux poches pour la circulation du fluide de culture d'un réservoir à l'autre via le puits, des moyens de pressurisation (60-92) pour appliquer aux poches des premier (2) et second (25) réservoirs respectivement une première et/ou une seconde séquences de pressions externes définies par un module de commande (50) et destinées à gérer la circulation du fluide de culture dans le puits, et des moyens de régulation thermique (49, 51-58) pilotés par le module de commande et agencés pour maintenir une première température choisie à l'intérieur du puits et placer sous une seconde température choisie le fluid e de culture qui débouche des premier et second réservoirs pour alimenter le puits.

Description

DISPOSITIF DE CULTURE CELLULAIRE ET TISSULAIRE A
REGULATION THERMIQUE
L'invention concerne le domaine de la culture dynamique de cellules s et de tissus à l'aide d'un fluide de culture, ou milieu nutritif mis en mouvement.
Elle concerne plus précisément les dispositifs de culture de cellules et tissus comprenant i) un ou plusieurs puits de culture qui définissent des chambres destinées à recevoir des cellules ou des tissus à cultiver, ü) des premier et second réservoirs qui logent chacun au moins une poche souple, dont l'une au moins peut recevoir un fluide de culture, iii) des moyens de liaison couplés aulx) puits et aux poches pour permettre la circulation du fluide de culture d'un réservoir à l'autre via le(s) puits, et iv) des moyens de pressurisation permettant d'appliquer aux poches des premier et second ~5 réservoirs respectivement une première et/ou une seconde séquences de pressions externes qui sont définies par un ou plusieurs modules de commande et sont destinées à gérer la circulation du fluide de culture dans le(s) puits.
Ce type de dispositif, qui est décrit dans la demande de brevet FR
z o 0000548, permet de maintenir des conditions de circulation adéquates pendant toute la durée de la culture. Cependant, lorsque la culture requiert un environnement thermiquement contrôlé, les dispositifs de ce type doivent être placés à l'intérieur d'un incubateur adapté, ce qui augmente les risques biologiques liés aux déplacements, les coûts, les manipulations, 25 l'encombrement, et interdit l'observation de l'évolution de la culture à
l'aide d'un microscope pendant l'incubation. De plus, les transferts entraînent des ruptures thermiques qui peuvent engendrer des conséquences biologiques néfastes.
L'invention a pour but d'apporter une solution originale à tout ou 3 o partie des inconvénients précités.

2 Elle propose à cet effet un dispositif du type décrit dans l'introduction, dans lequel on prévoit des moyens de régulation thermique pilotés par le module de commande et destinés à maintenir une première température choisie, ou un premier cycle de température choisi, à l'intérieur du (ou des) puits etlou à placer sous une seconde température choisie, ou un second cycle de température choisi, le fluide de culture qui débouche de l'un au moins des premier et second réservoirs en vue d'alimenter le(s) puits.
Ainsi, la régulation thermique au sein du dispositif peut s'effectuer soit exclusivement au niveau des puits, soit exclusivement au niveau du fluide de culture qui alimente ces puits, soit encore simultanément au niveau des puits et du fluide de culture pour minimiser les perturbations thermiques lors de l'échange entre le fluide de culture et les cellules.
Les première et seconde températures (ou les premier et second cycles de température) sont choisi(e)s en fonction du type de culture. Elles (ils) peuvent donc étre sensiblement identiques, ou bien différent(e)s si la culture le requiert. Les secondes températures (ou les seconds cycles) peuvent également varier d'un réservoir à l'autre si cela s'avère nécessaire.
On peut également faire varier les températures (ou les cycles) en cours de culture. Pôur ce faire, les paramètres d'évolution des températures peuvent a o étre programmés, par exemple par intégration dans le programme fixant les séquences de pressions externes imposées par le module de commande.
Une telle programmation peut s'effectuer à l'aide d'une interface de saisie, ou bien directement par transfert de programmes prédéfinis dans une mémoire du dispositif, couplée (ou intégrée) au module de commande, puis z5 sélection de l'un de ces programmes (cette mémoire étant éventuellement réinscriptible par l'intermédiaire de l'interface précitée).
Dans un premier mode de réalisation du dispositif selon l'invention, les moyens de régulation thermique comprennent un circuit fluidique de chauffage comportant soit une première partie intégrée dans les parois 3o délimitant le(s) puits (il pourra s'agir de canaux de circulation formés à
la périphérie des chambres, ou d'espaces de circulation de fluide ménagés

3 dans les parois des puits, raccordés à des premiers moyens de connexion), soit des seconde et troisième parties respectivement intégrées dans les parois délimitant les premier et second réservoirs et agencées pour permettre la circulation d'un fluide caloporteur (il pourra s'agir d'espaces ménagés entre une coque interne et une coque externe qui, une fois assemblées, délimitent les premier et second réservoirs), soit encore une combinaison des première, seconde et troisième parties. Dans ce dernier cas, la seconde partie du circuit fluidique est préférentiellement agencée pour alimenter en fluide caloporteur (liquide ou gaz) la première partie tandis que la troisième partie est agencée pour collecter le fluide caloporteur qui a circulé dans la première partie. II est alors particulièrement avantageux que les seconde et troisième parties du circuit fluidique comprennent des seconds et troisièmes moyens de connexion débouchant dans l'espace inter-coques et pouvant étre chacun raccordés aux premiers moyens de connexion et à une quatrième partie (principale) du circuit fluidique destinée à l'alimentation et la collection de fluide caloporteur.
Dans ce premier mode de réalisation, le circuit fluidique de chauffage comporte de préférence une pompe couplée à un conteneur principal contenant une partie du fluide caloporteur (liquide ou gaz) et des a o moyens de chauffage électrique (comme par exemple des résistances chauffantes) destinées à chauffer le fluide caloporteur de façon contrôlée avant qu'il n'alimente les première, seconde et troisième parties.
Dans un second mode de réalisation du dispositif selon l'invention, les moyens de régulation thermique comprennent soit des premiers as éléments de chauffage électrique destinés à assurer une partie au moins du chauffage contrôlé du puits (il s'agit par exemple de résistances chauffantes placées contre, ou intégrées dans, les parois des puits), soit des seconds éléments de chauffage électrique destinés à assurer une partie au moins du chauffage contrôlé des premier et second réservoirs (il s'agit par exemple de 3 o résistances chauffantes placées contre, ou intégrées dans, les parois des réservoirs), soit encore une combinaison de premiers et seconds éléments

4 de chauffage électrique.
Bien entendu, on peut envisager un troisième mode de réalisation du dispositif selon l'invention, dans lequel les moyens de régulation thermique comprennent à la fois un circuit fluidique (comme dans le premier mode de s réalisation) et des éléments de chauffage électrique (comme dans le second mode de réalisation).
Le dispositif selon l'invention peut comporter des caractéristiques additionnelles prises séparément et en combinaison, et notamment * les premier et second réservoirs peuvent comprendre chacun une partie supérieure et une partie inférieure qui sont reliées entre elles par une partie intermédiaire étroite et qui logent chacune une poche souple, les poches souples supérieure et inférieure communiquant entre elles via la partie intermédiaire, les moyens de liaison communiquant avec les poches inférieures, les parties supérieure et inférieure comportant en outre chacune une entrée étanche. Dans le même temps, les moyens de pressurisation peuvent comprendre une pompe à fluide pour alimenter en fluide de pressurisation haute pression, via une première portion (principale) de circuit de pressurisation, une seconde portion de circuit de pressurisation raccordée à des vannes de régulation de pression, supérieures et inférieures, pilotées zo par le module de commande et destinées à alimenter chaque partie supérieure et inférieure de réservoir, via les entrées étanches, en fluide de pressurisation haute pression ou basse pression ou encore pression intermédiaire. Dans ce cas, il est particulièrement avantageux que la première portion de circuit de pressurisation comprenne une sous-partie as immergée dans le fluide caloporteur (liquide ou gaz), qui se trouve logé
dans le conteneur principal, de manière à alimenter la seconde portion de circuit de pressurisation en fluide de pressurisation réchauffé. Cela permet en effet de minimiser les perturbations thermiques du fluide de culture. Par ailleurs, on peut également prévoir un conteneur auxiliaire, logé dans le conteneur 3o principal au contact du fluide caloporteur (« bain-marie »), contenant un fluide d'humidification et alimenté en fluide de pressurisation par la sous-

5 PCT/FR02/01472 partie de la première portion de circuit de pressurisation, de manière à
alimenter la seconde portion de circuit de pressurisation avec un fluide de pressurisation présentant un degré d'humidité choisi. Cela est notamment important lorsque les poches souples sont semi-perméables ;
s * au moins deux puits, et de préférence trois, ou quatre, peuvent étre placés en série et communiquer entre eux par des moyens de liaison, un premier puits étant raccordé au premier réservoir tandis qu'un puits opposé au premier est raccordé au second réservoir ;
* les moyens de régulation thermique peuvent comprendre au moins un capteur de température pour délivrer au module de commande des mesures représentatives de la température à l'intérieur d'un puits, ou au voisinage immédiat de celui-ci ;
* un capot peut être prévu pour isoler de l'extérieur les puits, ainsi qu'éventuellement les réservoirs, voire méme l'intégralité du dispositif.
L'invention concerne en outre une installation de culture de cellules et tissus comprenant au moins deux dispositifs du type décrit ci-avant, placés en parallèle, et comportant une unique unité de commande pilotant conjointement les unités de commande de ces dispositifs, ou bien regroupant leurs fonctionnalités.
ao Cette installation peut comporter un circuit fluidique principal alimentant en parallèle les puits et/ou réservoirs de chaque dispositif. Dans ce cas, il est particulièrement avantageux de prévoir des moyens de régulation thermique centrale pilotés par l'unité de commande principale et destinés à maintenir une méme première température choisie, ou un même z5 premier cycle de température choisi, à l'intérieur des puits de chaque dispositif et/ou à placer sous une même seconde température choisie, ou un méme second cycle de température choisi, le fluide de culture qui débouche de l'un au moins desdits premier et second réservoirs de chaque dispositif pour alimenter ses puits.
3o Dans une variante, l'unité de commande principale pilote les moyens

6 de régulation thermique de chaque dispositif de sorte qu'ils maintiennent indépendamment les uns des autres une première température choisie, ou un premier cycle de température choisi, à l'intérieur des puits de leur dispositif et/ou placent, indépendamment les uns des autres, sous une s seconde température choisie, ou un second cycle de température choisi, le fluide de culture qui débouche de l'un au moins des premier et second réservoirs de leur dispositif, pour alimenter ses puits.
Par ailleurs, l'installation peut comporter un capot principal destiné à
isoler de l'extérieur, simultanément, les puits de chaque dispositif, ainsi qu'éventuellement leurs réservoirs, voire même l'intégralité des dispositifs.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à
l'examen de la description détaillée ci-après, et des dessins annexés, sur lesquels - la figure 1 illustre de façon schématique, dans une vue en coupe ~5 transversale, partielle, un dispositif de culture selon l'invention, à
plusieurs chambres, - les figures 2A et 2B illustrent des vues en perspective des deux demi-coques internes des réservoirs de la figure 1, respectivement avant et après assemblage, ao - la figure 3 illustre dans une vue en perspective les deux demi-coques internes de la figure 2 avant leur assemblage avec deux demi-coques externes des réservoirs, - les figures 4A et 4B illustrent dans des vues en perspective le positionnement d'une demi-coque interne dans la demi-coque externe as correspondante, respectivement avant et après assemblage, - la figure 5 est une vue schématique en perspective d'une installation de culture constituée de quatre dispositifs de culture placés en parallèle, - la figure 6 est une vue en perspective d'un assemblage de quatre 3 o réservoirs à double coque pour une installation du type de celle illustrée sur la figure 5, - la figure 7 illustre schématiquement un enchaînement de huit phases successives d'un aller-retour du fluide de culture dans un mode de circulation de type laminaire, s - la figure 8 illustre schématiquement un enchaînement de quatre phases successives d'un aller-retour du fluide de culture dans un mode de circulation de type turbulent, et - la figure 9 est une variante du mode turbulent illustré sur la figure 8.
Les dessins annexés sont, pour l'essentiel, de caractère certain. En io conséquence, ils pourront non seulement servir à compléter l'invention, mais aussi contribuer à sa définition, le cas échéant.
On se réfère tout d'abord aux figures 1 à 4 pour décrire un dispositif de culture de cellules et tissus, dans un mode de réalisation, non limitatif.
Le dispositif 1 illustré sur la figure 1 comprend tout d'abord un ~5 premier réservoir 2 comportant une partie supérieure 3 couplée à une partie inférieure 4 par une partie intermédiaire 5. Ce réservoir 2 est délimité par des parois rigides 15 qui lui confèrent un volume constant et sur lesquelles on reviendra plus loin.
Dans l'exemple illustré, la partie supérieure 3 du réservoir loge une a o poche souple supérieure 6. De même, la partie inférieure 4 loge une poche souple inférieure 7 qui est raccordée à la poche supérieure 6 par un conduit 8 logé dans la partie intermédiaire 5, étroitement, de sorte que les parties supérieure 3 et inférieure 4 du premier réservoir 2 soient isolées l'une de l'autre.
25 La poche supérieure 6 comporte une entrée/sortie 9 adaptée de manière à pouvoir coopérer, de façon étanche, avec une ouverture supérieure 10 formée dans l'une des cloisons de la partie supérieure 3 du premier réservoir 2. Ainsi, la poche supérieure 6 peut être raccordée à des moyens de contrôle d'accès supérieurs 11, eux-mémes raccordés à un 3 o module d'alimentation en gaz ou en fluide de culture, ou, comme illustré, à

un conteneur 14 de nutriment (ou fluide de culture), de préférence pressurisé. Pour des raisons de compacité, le conteneur de nutriment 14 est placé sous la partie supérieure 3 du réservoir 2, mais il pourrait étre placé
ailleurs.
De méme, la poche inférieure 7 comporte une entrée/sortie 12 adaptée de manière à coopérer avec une ouverture étanche formée dans la paroi de la partie inférieure 4 du premier réservoir 2, ou bien, comme cela est illustré sur la figure 1, de manière à coopérer avec des môyens de contrôle d'accès 13, ici logés à l'extérieur de la partie inférieure 4 du réservoir 2.
~o La poche inférieure 7 peut comporter deux membranes sensiblement rigides évitant son écrasement complet lorsqu'elle est soumise à des pressions très élevées, ce qui nuirait à la bonne circulation du fluide de culture.
Egalement de préférence, le premier réservoir 2 comporte, dans la ~5 partie intermédiaire 5, une autre ouverture permettant l'injection, ou l'extraction, manuelle ou automatique, d'un liquide ou d'un gaz à l'intérieur du conduit 8. II s'agira, de préférence, d'une ouverture équipée d'un septum, particulièrement approprié lorsque le dispositif d'injection ou d'extraction est une seringue munie d'une aiguille. On prévoit également, de préférence, un zo septum dans chacune des parties supérieure et inférieure des réservoirs.
Egalement de préférence, les poches supérieure 6 et inférieure 7 sont réalisées dans un matériau poreux, au moins dans le sens allant de l'extérieur vers l'intérieur. II pourra s'agir de poches en silicone, ou en polydimethylsiloxane (PDSM), ou encore en polytetrafluorethylène (PTFE), z5 ou encore en polymères dimethyl et methylvinyl siloxanes. Cela permet, en effet, des échanges gazeux entre le fluide de culture qui se trouve logé à
l'intérieur des poches souples et le gaz qui se trouve piégé à l'intérieur des parties supérieure 3 et inférieure 4 du premier réservoir 2. Ces poches peuvent étre réalisées dans des matériaux différents de manière à assurer 3o des fonctionnalités différentes, notamment au niveau des échanges avec le fluide (généralement le(s) gaz de pressurisation sur le(s)quel(s) on reviendra plus loin) qui se trouve contenu à l'intérieur des réservoirs. En outre, les poches d'un même réservoir peuvent présenter des formes et volumes différents.
s Dans l'exemple illustr sur la 1, poche infrieure figure la 7 communique avec des puits de culture 18-3, via moyens 18-1 les de contrle d'accs 13 l'ouverture infrieureforme dans la paroi et du réservoir.
Les moyens de contrôle d'accès 13 sont de préférence du type dit à pincement ». Elles comportent une extrémité creuse dans laquelle est introduite une extrémité d'un moyen de liaison 20, réalisé sous la forme d'un conduit (ou tube), et dont l'extrémité opposée débouche dans la chambre de culture 19-1 du premier puits 18-1. Cette première chambre de culture 19-1 communique avec la seconde chambre de culture 19-1 logée dans le second ~5 puits 18-2 par l'intermédiaire d'un autre moyen de liaison 21, également réalisé sous la forme d'un conduit (ou tube). De même, la seconde chambre de culture 19-2 communique avec la troisième chambre de culture 19-3 logée dans le troisième puits 18-3 par l'intermédiaire d'un autre moyen de liaison 21 réalisé sous la forme d'un conduit (ou tube). Enfin, dans cet ao exemple, un dernier moyen de liaison 20 assure la communication entre la troisième chambre de culture 19-3 et un second réservoir 25, qui va être décrit maintenant.
Ce second réservoir 25 est, de préférence, sensiblement identique au premier réservoir 2 qui a été décrit précédemment en référence aux 25 figures 1 à 4. II comporte, par conséquent, dans cet exemple, une partie supérieure 26 dans laquelle se trouve logée une poche souple supérieure 27, une partie inférieure 28 dans laquelle se trouve logée une poche souple inférieure 29 et une partie intermédiaire 23 étroite qui loge un conduit intermédiaire 24 couplant la poche supérieure 27 à la poche inférieure 29.
3 o Ce conduit 24 est également logé, de façon étroite, dans la partie intermédiaire 23, de sorte que la partie supérieure 26 soit isolée, sur le plan de l'étanchéité au gaz, de la partie inférieure 28.
La poche supérieure 27 comporte une entrée/sortie 30 adaptée, raccordée à des moyens de contrôle d'accès 31, lesquels, tout comme les moyens de contrôle d'accès 11, peuvent être raccordés à un dispositif 5 d'alimentation en fluide ou gaz 32, ou à un extracteur. De même, la poche inférieure 29 comporte une entrée/sortie 33 qui, dans l'exemple illustré, est raccordée à des moyens de contrôle d'accès 34, logés, ici, à l'extérieur de la partie inférieure 28 du second réservoir 25. ' De préférence, le second réservoir 25 comporte également, dans ses parties supérieure 26, intermédiaire 23 et inférieure 28, des ouvertures permettant l'injection, ou l'extraction, manuelle ou automatique, d'un liquide ou d'un gaz à l'intérieur des poches ou du conduit intermédiaire 31. II
s'agira, de préférence, d'ouvertures équipées d'un septum.
Dans cet exemple, les moyens de contrôle d'accès 34 sont ~5 également, de préférence, du type dit « à pincement », et comportent de ce fait une extrémité creuse à laquelle est raccordée l'extrémité du conduit de liaison 20.
Un circuit est ainsi créé entre la poche supérieure 6 du premier réservoir 2 et la poche supérieure 27 du second réservoir 25, via les ao chambres de culture 19-i (i = 1 à 3, dans cet exemple) et via les moyens de liaison 20 et 21.
Afin de permettre une culture contrôlée thermiquement, le dispositif comporte des moyens de régulation thermique destinés à assurer une régulation de température soit à l'intérieur du (ou des) puits de culture, soit 25 du fluide de culture qui alimente les puits, soit encore, et de façon préférentielle, dans les puits et au niveau du fluide de culture, comme illustré
sur les figures 1 à 4.
Dans le mode de réalisation illustré sur ces figures, la régulation de la température du fluide de culture s'effectue au niveau des deux réservoirs 30 2 et 25, par circulation d'un fluide caloporteur (liquide ou gaz) dans leurs parois rigides 15. Plus précisément, les parois 15 qui délimitent les parties supérieure et inférieure des réservoirs 2 et 25 comprennent des espaces 35 de circulation de fluide, intégrés, qui constituent une partie d'un circuit fluidique de chauffage. II est avantageux, comme illustré sur les figures 2 à

s que cet espace de circulation 35 soit délimité par l'assemblage d'une coque interne 16 et d'une coque externe 17 logeant la coque interne 16.
La coque interne 16 est constituée de préférence par assemblage de deux demi-coques 16a et 16b qui délimitent les ' parties internes supérieure, intermédiaire et inférieure de chaque réservoir 2 et 25.
La coque externe 17 est également constituée de préférence par assemblage de deux demi-coques 17a et 17b qui comportent des premiers moyens d'immobilisation 36 (ici des orifices) destinés à coopérer avec des seconds moyens d'immobilisation 37 (ici des plots) formés sur la surface externe de la coque interne 16. Elle comporte en outre, dans sa partie is supérieure, une entrée 42 équipée d'un premier connecteur 43 (propre à être raccordé à la partie principale « externe » du circuit fluidique de chauffage, et, dans sa partie inférieure, une sortie 44 munie d'un second connecteur 45 propre à être raccordé à un troisième ou quatrième connecteur 46 équipant les puits d'extrémité 18-1 et 18-3. De la sorte, le fluide caloporteur peut 2o circuler à l'intérieur des parois 15 des réservoirs 2 et 25 et assurer une régulation thermique efficace du fluide de culture qui circule dans les poches.
Pour assurer la régulation de température dans les puits, on prévoit des canaux 47 formant une autre partie du circuit fluidique de chauffage. De préférence, lorsque les puits 18 sont réalisés dans un bloc massif épais 48, 25 les canaux 47 sont formés par évidement dudit bloc 48, à la périphérie des zones délimitant les puits et, si possible, également au dessous. En variante, lorsque les réservoirs et les puits sont installés sur une plaque support, celle-ci peut comporter des canaux 47 destinés à permettre la circulation d'une partie du fluide caloporteur sous les puits 18. Les canaux 47 sont connectés 3o d'un côté au troisième connecteur 46 destiné à étre raccordé au second connecteur 45 du premier réservoir 2 et du côté opposé au quatrième connecteur 46 destiné à étre raccordé au premier connecteur 43 du second réservoir 25.
Le fluide caloporteur circule dans la partie principale du circuit fluidique de chauffage et parvient ainsi dans les parois 15 du premier s réservoir 2 par son premier connecteur 43, circule dans l'espace inter-coques 35, puis parvient au niveau de son second connecteur 45. II pénètre alors dans les canaux 47 des puits 18 par le troisième connecteur 46 et parvient au niveau de leur quatrième connecteur 46. II pénètre ensuite dans les parois du second réservoir 25 par son second connecteur 45, circule dans l'espace inter-coques, puis parvient au niveau de son premier connecteur 43 d'où il regagne la partie principale du circuit fluidique de chauffage.
Afin de permettre cette circulation du fluide caloporteur, la partie principale du circuit fluidique comporte tout d'abord un conteneur principal ~5 dans lequel se trouve logé une partie du fluide caloporteur et comportant des moyens de chauffage électrique 51, par exemple des résistances chauffantes réglables, une entrée 52 raccordée via un conduit 53 au premier connecteur 43 du second réservoir 25, et une sortie 54 raccordée à une pompe (non représentée) qui alimente via un autre conduit 55 le premier 2o connecteur 43 du premier réservoir 2. Cet autre conduit 55 est équipé, de préférence, de deux électrovannes (ou vannes pneumatiques) de régulation 56 et 57 montées en parallèle et d'un capteur de pression 58 (ou mano-contact). La température du fluide caloporteur dans le conteneur principal 49 est choisie de manière à assurer au fluide de culture, au niveau de la sortie 25 12 de la poche inférieure 7 logée dans le premier réservoir 2, une température adaptée à la culture.
Bien entendu, la température à l'intérieur des puits peut être différente de, ou sensiblement identique à, celle du fluide de culture en sortie du premier réservoir, selon les besoins.
3o Dans une variante de réalisation, les deux réservoirs 2 et 25 et les puits 18 peuvent être alimentés en parallèle par un même fluide caloporteur ou bien par des fluides caloporteurs provenant de deux ou trois circuits fluidiques de chauffage indépendants. On peut également prévoir un circuit fluidique de chauffage pour chaque partie de réservoir. On peut ainsi prévoir des réservoirs contenant des milieux de culture placés sous des températures différentes, de part et d'autre de la chambre de culture, de manière à créer des profils de température ou des cycles de température.
Les réserves (ou conteneur de nutriment) 14 et/ôu les dispositifs d'alimentation en fluide ou gaz (ou les cuves à déchets) 32 peuvent 1o également posséder leurs propres circuits de thermostatisation de manière à
maintenir leurs contenus respectifs à des températures choisies, éventuellement différentes. La thermostatisation pourra consister en un réchauffement comme en un refroidissement. II est généralement préférable de les maintenir à des températures comprises entre environ 3°C et environ 12°C pour assurer une stabilité du milieu de culture.
Dans une autre variante, radicalement différente, les moyens de régulation de température comportent des moyens de chauffage électrique, tels que des résistances chauffantes ou des éléments CTP. De tels moyens peuvent être placés en des endroits choisis sur, ou dans, les parois qui ao délimitent les réservoirs et/ou les puits.
On peut également envisager de combiner des résistances chauffantes et un circuit fluidique de chauffage.
La puissance des moyens de chauffage électrique et/ou le débit de fluide caloporteur sont pilotés par une unité de commande 50, de manière à
gérer la température du fluide caloporteur.
Par ailleurs, afin d'améliorer le contrôle de la température dans les puits et/ou dans les réservoirs, on peut prévoir en un (ou des) endroits) choisis) un (ou plusieurs) capteurs) de température délivrant des mesures à
l'unité de commande.
3o Pour gérer les volumes internes des poches supérieures 6 et 27 et des poches inférieures 7 et 29, le dispositif selon l'invention comporte des moyens de pressurisation qui vont être décrits maintenant en référence à la figure 1.
Dans le mode de réalisation illustré, on utilise des moyens de s pressurisation communs aux deux réservoirs 2 et 25, logés dans un boîtier externe 105 (tel que celui matérialisé en pointillés sur la figure 1 ), conjointement avec la majeure partie des moyens de régulation thermique.
Mais, en variante, chaque réservoir pourrait comporter ses propres moyens de pressurisation logés dans des boitiers placés, par exemple, en dessous 1o des parties supérieures des réservoirs.
Les moyens de pressurisation comportent un circuit de pressurisation 59, haute pression, comprenant un surpresseur (ou pompe) 60, alimenté en air ambiant 61 et alimentant une réserve pressurisée 62, de préférence couplée à un capteur de pression (ou mano-contact) 63. La 1s réserve 62 alimente un conduit principal 64 équipé d'un régulateur de pression 65, puis d'un premier régulateur de débit 66 et d'un filtre de particules 67 (par exemple une grille de 0,01 microns). Lorsque le dispositif est destiné à utiliser plusieurs fluides de pressurisation différents (par exemple de l'air et du dioxyde de carbone), on prévoit un conduit auxiliaire zo 68 alimenté en fluides) auxiliaires) 69 (par exemple du dioxyde de carbone), comportant un second régulateur de pression 70 suivi d'un second régulateur de débit 71, et alimentant le conduit principal 64 entre le premier régulateur de débit 65 et le filtre 67. Dans ce cas, il est avantageux de prévoir un troisième régulateur de débit 72, entre le point de raccordement 25 du conduit auxiliaire 68 et le filtre 67.
Le conduit principal 64 est destiné à alimenter en fluide pressurisé
les deux réservoirs 2 et 25, ainsi que le conteneur de fluide de culture 14.
Afin de limiter au maximum les perturbations thermiques que pourrait induire le fluide de pressurisation, lorsqu'il pénètre dans les parties supérieure et 3o inférieure des réservoirs 2 et 25, on le réchauffe à l'aide du fluide caloporteur qui se trouve logé dans le conteneur principal 49. Pour ce faire, une partie du conduit principal 64 est logée dans le conteneur principal 49, en y présentant de préférence une forme « en serpentin », ou toute autre forme favorisant les échanges thermiques.
De plus, afin de pouvoir contrôler le degré d'humidité du fluide de 5 pressurisation avant qu'il ne pénètre dans les réservoirs 2 et 25, on prévoit, de préférence dans le conteneur principal 49, un conteneur auxiliaire 74 partiellement rempli d'un liquide d'humidification, et dans lequel débouche la partie 73 du conduit principal qui est immergée dans le fluidé caloporteur.
La partie 75 du conduit principal 65 qui débouche du conteneur 1o auxiliaire 74 alimente, de préférence via un thermo-hygromètre 76, d'une première part, une première voie 77 haute pression (par exemple d'environ 45 mbar) qui est équipée de quatre vannes 78, 79, 80 et 81 montées en parallèles, d'une seconde part, une seconde voie 82 haute pression (par exemple d'environ 45 mbar) qui débouche dans le conteneur de fluide de 15 culture 14, d'une troisième part, une troisième voie 83 basse pression (par exemple d'environ 10 mbar) qui est équipée de quatre vannes 84, 85, 86 et 87 montées en parallèles ainsi que, de préférence, d'un quatrième régulateur de débit 88 placé en amont des vannes, et d'une quatrième part, une quatrième voie 89 de pression intermédiaire (par exemple d'environ 30 ao mbar) qui est équipée de préférence d'un cinquième régulateur de débit 90, suivi d'une électrovanne (ou vanne pneumatique) 91 et d'une réserve pressurisée 92, et alimente en parallèle les quatre vannes 78, 79, 80 et 81, qui sont de préférence des électrovannes ou des vannes pneumatiques.
Dans une variante, on peut prévoir des circuits fluidiques de as pressurisation différents pour gérer les volumes des poches logées dans les parties supérieure et inférieure d'un même réservoir. Cela peut en effet permettre d'utiliser des fluides de pressurisation différents au sein d'un même réservoir, de sorte que les poches assurent des fonctionnalités différentes, par exemple dans le but d'effectuer des tests comparatifs.
3 o Préférentiellement, les différentes électrovannes (ou vannes pneumatiques) 78-81 et 84-87 sont toutes de type trois voies (deux entrées et une sortie), les sorties des électrovannes (ou vannes pneumatiques) 78-81 alimentant respectivement l'une des entrées des électrovannes (ou vannes pneumatiques) 84-87 dont les sorties alimentent respectivement, via s des connecteurs 93-96 raccordés aux connecteurs 39, 41 installés au niveau des entrées étanches 38, 40, l'intérieur des parties supérieure 3 et inférieure 4 du premier réservoir 2 et l'intérieur des parties supérieure 26 et inférieure 28 du second réservoir 25, de manière à gérer les volumes des poches souples qu'elles logent.
1o Ces électrovannes (ou vannes pneumatiques) peuvent être également utilisées pour gérer l'état des moyens de contrôle d'accès 11, 13, 31 et 34 des puits 18 et poches souples, qui, comme mentionné
précédemment, sont de préférence du type dit « à pincement » et sont par exemple décrits dans le document FR 0000548. Mais il ne s'agit que d'un 15 exemple de réalisation parmi d'autres, des commutateurs ou des vannes pouvant être également utilisés.
Toutes les électrovannes et la pompe à fluide de pressurisation sont contrôlées par l'unité de commande électronique 50 qui comporte à cet effet des microprocesseurs (ou un microcontrôleur) monté sur une carte qui est, a o de préférence, connectée à une interface de liaison 97 (par exemple de type RS232) pour permettre son contrôle à distance par un ordinateur de traitement.
Le microcontrôleur 50, une fois programmé, pilote les électrovannes (ou vannes pneumatiques) de sorte que soient appliquées sur les poches, à
z5 l'aide du fluide de pressurisation, des séquences de basses et/ou hautes pressions, selon les besoins, dans les parties supérieures 3 et inférieures 4 des réservoirs 2 et 25. Bien entendu, le microcontrôleur 50 peut comporter une mémoire 98, de préférence réinscriptible, dans laquelle est stockée une multiplicité de programmes de culture, chaque programme définissant des 3o premières et secondes séquences de pressions pour gérer les volumes respectifs des différentes poches souples, ainsi que les températures de régulation des puits et/ou du fluide caloporteur.
Comme mentionné précédemment, au lieu d'utiliser un microcontrôleur pour gérer un unique circuit de pressurisation, on pourrait utiliser ce même microcontrôleur pour gérer deux circuits de pressurisation s au moins partiellement indépendants, par exemple installés sous les parties supérieures des réservoirs. Dans une autre variante, on pourrait utiliser deux microcontrôleurs indépendants, mais préalablement synchronisés, pour piloter deux circuits de pressurisation indépendants.
Préférentiellement, le dispositif comporte un capot destiné à isoler io le(s) puits, ainsi qu'éventuellement les réservoirs, du milieu extérieur.
Cela permet non seulement d'éviter que des échanges ne se produisent au niveau des différents septa, mais également de limiter les perturbations thermiques. Cela permet en outre d'instaurer une barrière de protection mécanique » autour des puits. Le capot peut également englober tout le i5 dispositif en formant une espèce d'enceinte définissant une barrière biologique, utile notamment lorsque ledit dispositif n'est plus placé sous une hotte à flux laminaire. La forme du capot et le matériau dans lequel il est réalisé peuvent être choisis de manière à permettre une observation sous microscope, ou tout autre moyen optique approprié, des cellules et tissus a o contenus dans les puits, en cours de culture. A cet effet, le capot est de préférence réalisé dans un matériau incassable, transparent au niveau des puits.
Par ailleurs, on peut prévoir au niveau des parties supérieure et inférieure de chaque réservoir 2, 25 une sortie de mise à la pression as atmosphérique, équipée d'une électrovanne (ou vanne pneumatique) 99-102 pilotée par l'unité de commande 50. En outre, comme illustré sur les figures 2 à 4, l'entrée 9, 30 des poches souples supérieures 6, 27 est de préférence placée dans un conduit rigide 103 délimité par les parois rigides des demi-coques internes 16a et 16b et muni d'une cavité supérieure 104 équipée de 3o moyens de purge (non représentés) de manière à évacuer d'éventuelles micro-bulles d'air qui pourraient se former en fonctionnement dans les poches souples des réservoirs 2 et 25.
Le dispositif selon l'invention peut étre considéré comme un boîtier de commande couplé à des éléments de type « consommable » « réservoirs et/ou puits), éventuellement à usage unique. En effet, il suffit pour ce faire de munir, d'une part, le boîtier externe de commande, pressurisation et régulation 105 de premiers 93-96 et seconds 106 moyens de connexion raccordés respectivement aux circuits de pressurisation et de régulation thermique, et d'autre part, les deux réservoirs 2 et 25 de chàque dispositif de troisièmes 39, 41 et quatrième 43 moyens de connexion respectivement 1o raccordés aux parties intérieures supérieure et inférieure des réservoirs et à
l'espace inter-coques 35, puis de connecter les premiers moyens de connexion 93-96 aux troisièmes moyens de connexion 39, 41 et les seconds moyens de connexion 106 aux quatrièmes moyens de connexion 43.
Pour procéder à une nouvelle culture on déconnecte les consommables usagés (réservoirs et/ou puits) pour les remplacer par de nouveaux consommables que l'on connecte au boîtier externe de commande.
Comme cela est illustré, schématiquement, sur les figures 5 et 6, il est possible de disposer en parallèle une multiplicité de dispositifs 1, de z o manière à constituer une installation de culture de cellules et tissus, soit à
grand rendement (cas de cultures identiques), soit à différenciation élevée (cas de cultures différentes). Dans cet exemple, l'installation comporte quatre dispositifs parallèles 1-1 à 1-4, chaque dispositif 1-i (ici i = 1 à 4) comportant trois puits de culture 18 j (ici j = 1 à 3) montés en série. Les réservoirs à
z5 espace de circulation de fluide caloporteur sont assemblés les uns aux autres par exemple par emboîtement des plots 37 des demi-coques internes 16b dans des logements 108 adaptés formés sur les demi-coques externes 17a et 17b (voir figure 6).
Ces dispositifs peuvent être complètement indépendants les uns des 3o autres. Dans ce cas, ils peuvent comporter soit une unité de commande commune qui pilote des circuits de pressurisation et de régulation thermique indépendants les uns des autres, soit des unités de commande indépendantes qui pilotent chacune un circuit de pressurisation et un circuit de régulation thermique. Dans ces cas, les températures de régulation et/ou s les fluides de pressurisation peuvent varier d'un dispositif à l'autre.
Mais, ces dispositifs peuvent étre également dépendants les uns des autres du fait de communications entre certains de leurs puits.
On peut également envisager une installation dans laquelle les dispositifs ont des puits indépendants les uns des autres, et partagent un 1o même circuit de pressurisation et un méme circuit de régulation thermique pilotés par une unité de commande commune (ou principale). Dans ce cas, la plus grande partie des moyens de pressurisation et des moyens de régulation thermique, ainsi que l'unité de commande principale sont logées dans un boîtier externe 105 (tel que celui matérialisé en pointillés sur la 15 figure 1 ). De la sorte, on peut former une installation dans laquelle les dispositifs constituent des éléments modulaires de type « consommable », éventuellement à usage unique. En effet, il suffit pour ce faire de munir, d'une part, le boîtier externe de commande, pressurisation et régulation 105 de premiers 93-96 et seconds 106 moyens de connexion raccordés a o respectivement aux circuits de pressurisation et de régulation thermique, et d'autre part, les deux réservoirs 2 et 25 de chaque dispositif de troisièmes 39, 41 et quatrième 43 moyens de connexion respectivement raccordés aux parties intérieures supérieure et inférieure des réservoirs et à l'espace inter-coques 35, puis de connecter les premiers moyens de connexion 93-96 aux 25 troisièmes moyens de connexion 39, 41 et les seconds moyens de connexion 106 aux quatrièmes moyens de connexion 43.
Pour procéder à de nouvelles cultures on retire les consommables usagés (réservoirs et/ou puits) pour les remplacer par de nouveaux consommables dans les puits desquels ont été éventuellement inoculées 3 o des cellules.
Dans une telle installation, le nombre de dispositifs assemblés en parallèle pourra varier selon les besoins.
Dans une installation selon l'invention, tout comme dans un dispositif selon l'invention, les puits de culture 18 j peuvent étre montés en série sur une plaque support 107, comme illustré sur la figure 5, ou bien directement 5 formés par évidement d'un bloc massif épais 48 (comme illustré sur la figure 1 ).
Dans le premier exemple (figure 5), la plaque support 107 pourra comporter des logements pour recevoir chaque puits 18-i j (ici i = 1 à 4, et j =
1 à 3) et des canaux 47 pour la circulation d'une partie du fluide caloporteur à la périphérie des puits. Cette plaque support 107 pourra également comporter des canaux ou conduits destinés à la circulation d'une partie du fluide de pressurisation. Dans le second exemple de réalisation, les puits de culture des dispositifs pourront être réalisés dans des blocs massifs indépendants, ou bien dans un bloc unique. Des détails sur des modes de réalisation de puits, pouvant être utilisés dans un dispositif selon l'invention, sont donnés dans le document FR 0000548.
Comme mentionné précédemment dans la description du dispositif 1, il est avantageux de prévoir un capot principal de manière à isoler de l'extérieur les puits ainsi qu'éventuellement les deux réservoirs de chaque 2o dispositif de l'installation, voire même l'intégralité des dispositifs.
Cela permet d'éviter d'utiliser un capot pour chaque dispositif.
Des exemples de modes de fonctionnement (ou en d'autres termes de premières et secondes séquences de pressions destinées à gérer les volumes des poches des réservoirs) du dispositif et de l'installation selon l'invention sont donnés dans le document FR 0000548. II est simplement rappelé ici que l'installation et le dispositif peuvent fonctionner selon différents modes mentionnés ci-après.
Un mode « laminaire » consiste à faire remonter le fluide de culture dans la poche supérieure de l'un des deux réservoirs de manière à instaurer 3o une différence de hauteur entre cette poche supérieure et les poches inférieures des deux réservoirs, puis à laisser s'écouler, par gravitation, le fluide de culture du réservoir supérieur vers les réservoirs inférieurs, et à
faire remonter le fluide de culture vers la poche supérieure de l'autre réservoir. On recommence, dans l'autre sens ("sens retour"), les mêmes opérations pour faire un cycle (ou "aller-retour") entre les deux réservoirs, via le puits. Le nombre de cycles est choisi en fonction du type de culture effectuée à l'intérieur des puits 18. Les quatre étapes d'un cycle aller-retour du mode laminaire sont regroupées sur la figure 7. Le nombre de cycles successifs est choisi en fonction du type de culture effectué.
1o Un mode « turbulent » consiste à appliquer une haute pression en permanence sur les poches inférieures 7 et 29 des premier 2 et second 25 réservoirs. En d'autres termes, les première et seconde séquences supérieures des poches supérieures des premier et second réservoirs sont constituées d'une succession de quatre périodes de basse pression. Ce mode ne comprend que deux étapes qui sont regroupées sous la forme d'un cycle « aller-retour » sur la figure 8. Le nombre de cycles successifs est choisi en fonction du type de culture effectué. Ce mode peut faire l'objet, notamment, d'une première variante (figure 9) dans laquelle la haute pression n'est plus maintenue constamment sur les deux poches inférieures

7 et 29, mais sur les deux poches supérieures 6 et 27. Cela permet d'obtenir une circulation du fluide de culture très rapide entre les deux poches inférieures 7 et 29, étant donné que ledit fluide ne peut pas remonter, du fait des hautes pressions dans les poches supérieures 6 et 27. Dans une seconde variante (non illustrée), la première séquence appliquée à chaque poche du premier réservoir consiste en une alternance de premières périodes de haute pression et de secondes périodes de basse pression, et la seconde séquence appliquée à chaque poche du second réservoir consiste en une alternance de premières périodes de basse pression et de secondes périodes de haute pression.
3 o Les deux modes de fonctionnement, laminaire et turbulent, qui viennent d'être décrits, ainsi que la variante, ne sont qué quelques-uns des nombreux exemples qui peuvent être envisagés. Ainsi, il serait possible de combiner des cycles de fonctionnement turbulent avec des cycles de fonctionnement laminaire.
L'invention s'applique à de très nombreux types de cellules et tissus, tels que notamment - les cellules intestines : Intestine 407, Caco-2, Colo 205, T84, SW
1116, WiDr, HT 29, HT 115, HT 55 ;
- les cellules endothéliales : HAOSMC (de l'acronyme anglais Human Aortic Smooth Muscle Cells) ;
- les cellules épidermales : NHEK-Neopooled (Human Epidermal Keratinocyte Neonatal), Equine Dermis ;
- les cellules cancéreuses : HeLa, CHO-K1 ;
- les cellules fibroblastiques de type intestinales : CCD-18Co - les cellules fibroblastiques de type MRC-5, 3T3, Wi-38 ;
~5 - les myélomes : SP20-Ag14, P3X63 Ag8 653, MPC11;
- les hybridomes ;
- les cellules d'insectes : SF9.
Cette liste n'est en aucun cas exhaustive ; il ne s'agit que d'exemples.
2o L'invention ne se limite pas aux modes de réalisation de dispositif et d'installation décrits ci-avant, seulement à titre d'exemple, mais elle englobe toutes les variantes que pourra envisager l'homme de l'art dans le cadre des revendications ci-après.
Ainsi, dans ce qui précède il a été question d'un circuit de régulation 25 thermique dans lequel circule un fluide caloporteur destiné à apporter des calories en vue de réchauffer. Mais, on peut envisager d'utiliser en complément un circuit de régulation thermique auxiliaire dans lequel circule un fluide frigoporteur destiné à apporter des frigories en vue de refroidir certains milieux, comme par exemple des réserves. Bien entendu, dans ce 3o cas le dispositif selon l'invention doit être équipé de moyens de refroidissement contrôlés par le module de commande.
Par ailleurs, dans ce qui précède il a été question de placer les puits sous des premières températures choisies et/ou le(s) fluides) sous une (des) secondes) températures) choisies. Mais, on peut envisager de placer s le(s) puits sous un (des) premiers) profils) ou cycles) de température et/ou le(s) fluides) sous un (des) seconds) profils) ou cycles) de température.
En outre, il est également possible d'effectuer une régulation de la section d'entrée de chaque réservoir et de la chambre, notamment lorsqu'ils sont alimentés par le même circuit caloporteur, de manière à contrôler leurs températures respectives, indépendamment.
Enfin, les moyens de régulation thermique peuvent être agencés de manière à induire un choc thermique à l'intérieur de la chambre et/ou des puits. Cela peut être particulièrement avantageux lorsqu'il faut modifier l'état des membranes cellulaires. Ce choc thermique peut être combiné à une ~5 variation de pression par un contrôle du débit du fluide et/ou de la pression interne de la chambre.

Claims (30)

REVENDICATIONS

1. Dispositif de culture de cellules et tissus du type comprenant au moins un puits de culture (18-i) agencé pour définir une chambre (19-i) propre à recevoir des cellules ou des tissus à cultiver, de premier (2) et second (25) réservoirs logeant chacun au moins une poche souple (6,7 ;27,29), l'une au moins des poches de ces réservoirs étant propre à
recevoir un fluide de culture, des moyens de liaison (20,21) couplés audit puits et auxdites poches pour permettre la circulation du fluide de culture d'un réservoir à l'autre via ledit puits, des moyens de pressurisation (60-92) agencés pour appliquer aux poches des premier (2) et second (25) réservoirs respectivement une première et/ou une seconde séquences de pressions externes définies par au moins un module de commande (50) et destinées à gérer la circulation du fluide de culture dans ledit puits, caractérisé en ce qu'il comprend des moyens de régulation thermique (35,47,49,51-58) pilotés par ledit module de commande et agencés pour maintenir une première température choisie, ou un premier cycle de température choisi, à l'intérieur dudit puits (18-i) et/ou pour placer sous une seconde température choisie, ou un second cycle de température choisi, le fluide de culture qui débouche de l'un au moins desdits premier (2) et second (25) réservoirs pour alimenter ledit puits.

2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdits moyens de régulation thermique comprennent un circuit fluidique comportant une première partie intégrée (47) dans les parois délimitant ledit puits (18-i) et agencée pour permettre la circulation d'un fluide caloporteur.

3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que la première partie du circuit fluidique comprend des premiers moyens de connexion (46) qui débouchent dans des canaux (47) de circulation de fluide caloporteur intégrés dans les parois du puits (18-i).

4. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que lesdits moyens de régulation thermique comprennent un circuit fluidique comportant des seconde et troisième parties (35) respectivement intégrées dans des parois (15) délimitant les premier (2) et second (25) réservoirs et agencés pour permettre la circulation d'un fluide caloporteur.

5. Dispositif selon la revendication 4, caractérisé en ce que les premier (2) et second (25) réservoirs sont chacun réalisés par assemblage d'une coque interne (16) et d'une coque externe (17) logeant la coque interne en ménageant un espace inter-coques (35) destiné à la circulation du fluide caloporteur.

6. Dispositif selon l'une des revendications 2 et 3 combinée à
l'une des revendications 4 et 5, caractérisé en ce que la seconde partie (35) du circuit fluidique est agencée pour alimenter en fluide caloporteur la première partie (47) et la troisième partie dudit circuit fluidique (35) est agencée pour collecter le fluide caloporteur ayant circulé dans la première partie (47).

7. Dispositif selon la combinaison des revendications 3, 5 et 6, caractérisé en ce que les seconde et troisième parties (35) du circuit fluidique comprennent des seconds (43) et troisièmes (45) moyens de connexion (45) débouchant dans l'espace inter-coques (35) et propres à être raccordés pour une première sous-partie aux premiers moyens de connexion (46) et pour une seconde sous-partie à une quatrième partie (53,55) du circuit fluidique destinée à l'alimentation et la collection de fluide caloporteur.

8. Dispositif selon l'une des revendications 2 à 7, caractérisé en ce que ledit circuit fluidique comporte une pompe couplée à un conteneur principal (49) contenant une partie du fluide caloporteur et des moyens de chauffage électrique (51) pour chauffer de façon contrôlée ledit fluide caloporteur avant qu'il n'alimente les première (47), seconde (35) et troisième (35) parties.

9. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que lesdits moyens de régulation thermique comprennent des premiers éléments de chauffage électrique destinés à assurer une partie au moins du chauffage contrôlé du puits.

10. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que lesdits moyens de régulation thermique comprennent des seconds éléments de chauffage électrique destinés à assurer une partie au moins du chauffage contrôlé des premier et second réservoirs.

11. Dispositif selon l'une des revendications 9 et 10, caractérisé en ce que lesdits éléments de chauffage électrique comprennent des résistances chauffantes solidaires des parois délimitant les réservoirs et/ou puits.

12. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que les premier (2) et second (25) réservoirs comprennent chacun une partie supérieure (3,26) et une partie inférieure (4,28) reliées entre elles par une partie intermédiaire étroite (5,23), chaque partie supérieure et inférieure des premier et second réservoirs logeant une poche souple, lesdites poches souples supérieure (6,27) et inférieure (7,29) communiquant entre elles via la partie intermédiaire (5,23), et lesdits moyens de liaison (20,21) communiquant avec les poches inférieures (6,29), les parties supérieure (3,26) et inférieure (4,28) des premier (2) et second (25) réservoirs comportant en outre chacune une entrée étanche (38,40), et en ce que les moyens de pressurisation comprennent une pompe à fluide (60) propre alimenter en fluide de pressurisation haute pression, via une première portion de circuit de pressurisation (64), une seconde portion de circuit de pressurisation (77,82,82,89) raccordée à des vannes supérieures (78,81,84,87) et inférieures (79,80,85,86) pilotées par le module de commande (50) et propres à alimenter chaque partie supérieure (3,26) et inférieure (4,28) des premier et second réservoirs, via lesdites entrées étanches (38,40), en fluide de pressurisation haute pression ou basse pression, ou pression intermédiaire.

13. Dispositif selon la combinaison des revendications 8 et 12, caractérisé en ce que la première portion de circuit de pressurisation (64,65) comprend une sous-partie (73) immergée dans le fluide caloporteur contenu dans le conteneur principal (49) de manière à alimenter la seconde portion de circuit de pressurisation (77,82,82,89) en fluide de pressurisation réchauffé.

14. Dispositif selon la revendication 13, caractérisé en ce que lesdits moyens de pressurisation comprennent un conteneur auxiliaire (74), placé dans ledit conteneur principal (49) au contact du fluide caloporteur, contenant un fluide d'humidification et alimenté en fluide de pressurisation par la sous-partie (74) de la première portion de circuit de pressurisation, de sorte que le fluide de pressurisation qui alimente la seconde portion de circuit de pressurisation (65) présente un degré d'humidité choisi.

15. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce qu'il comprend au moins deux puits (18-i) placés en série et communiquant entre eux par lesdits moyens de liaison (21), l'un des puits (18-1) étant raccordé audit premier réservoir (2) et l'autre puits (18-3) étant raccordé audit second réservoir (25).

16. Dispositif selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'il comprend un troisième puits (18-3) placé en série entre les deux autres puits et communiquant avec eux par lesdits moyens de liaison (23).

17. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisé en ce que le module de commande (50) comprend une mémoire (98) de type réinscriptible propre à stocker lesdites séquences de pression et lesdites première et seconde températures choisies, ou les premier et second cycles de température choisis.

18. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 17, caractérisé en ce que ledit module de commande (50) est agencé pour piloter les sections d'entrée de chaque réservoir et de la chambre, lorsqu'ils sont alimentés par le même circuit caloporteur, de manière à contrôler leurs températures respectives, indépendamment.

19. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 18, caractérisé en ce qu'il comprend au moins un conteneur de nutriment (14) et des dispositifs d'alimentation en fluide ou gaz (32) raccordés à des circuits de thermostatisation, et en ce que ledit module de commande (50) est agencé
pour contrôler lesdits circuits de thermostatisation de manière à maintenir les contenus respectifs du conteneur de nutriment (14) et/ou des dispositifs d'alimentation en gaz (32) à des températures choisies.

20. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 19, caractérisé en ce que chaque partie de réservoir est raccordée à un circuit fluidique de chauffage, de sorte que des parties appartenant à des réservoirs placés de part et d'autre de la chambre puissent être placées sous des températures différentes, de manière à créer des profils ou cycles de température dans lesdits puits.

21. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 20, caractérisé en ce que lesdits moyens de régulation sont agencés pour induire un choc thermique à l'intérieur de la chambre et/ou des puits.

22. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 21, caractérisé en ce que les moyens de régulation thermique comprennent au moins un capteur de température propre à délivrer au module de commande des mesures représentatives de la température à l'intérieur d'un puits.

23. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 22, caractérisé en ce qu'il comprend un capot destiné à isoler de l'extérieur au moins les puits.

24. Dispositif selon la revendication 23, caractérisé en ce que ledit capot est destiné à isoler de l'extérieur les puits et les réservoirs.

25. Installation de culture de cellules et tissus, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins deux dispositifs (1-i) selon l'une des revendications 1 à 24, placés en parallèle, et une unité de commande principale (50) assurant le pilotage conjoint desdits dispositifs.

26. Installation selon la revendication 25, caractérisée en ce qu'elle comprend un circuit fluidique principal alimentant en parallèle les puits et/ou réservoirs de chaque dispositif.

27. Installation selon la revendication 25, caractérisée en ce qu'elle comprend des moyens de régulation thermique centrale pilotés par ladite unité de commande principale (50) et agencés pour maintenir une même première température choisie, ou un même premier cycle de température choisi, à l'intérieur des puits de chaque dispositif et/ou pour placer sous une même seconde température choisie, ou un même second cycle de température choisi, le fluide de culture qui débouche dé l'un au moins desdits premier et second réservoirs de chaque dispositif pour alimenter ses puits.

28. Installation selon la revendication 27, caractérisée en ce que ladite unité de commande principale (50) pilote les moyens de régulation thermique de chaque dispositif de sorte qu'ils maintiennent indépendamment les uns des autres une première température choisie, ou un premier cycle de température choisi, à l'intérieur des puits de leur dispositif et/ou placent indépendamment les uns des autres sous une seconde température choisie, ou un premier cycle de température choisi, le fluide de culture qui débouche de l'un au moins desdits premier et second réservoirs de leur dispositif pour alimenter ses puits.

29. Installation selon l'une des revendications 25 à 28, caractérisée en ce qu'elle comprend un capot principal destiné à isoler de l'extérieur, simultanément, au moins les puits de chaque dispositif.

30. Installation selon la revendication 29, caractérisée en ce que ledit capot principal est destiné à isoler de l'extérieur, simultanément, les puits et les réservoirs de chaque dispositif.