BRPI1107224A2 - soluÇço para conservaÇço de orgços, processo de fabricaÇço e modo de preparo - Google Patents

Abstract

SOLUÇçO PARA CONSEERVAÇçO DE ORGçOS, PROCESSO DE FABRICAÇçO E MODO DE PREPARO; uma solução para conservação de órgaãos e tecidos vivos destinados ao transplante, a qual é obtida em duas etapas, a primeira com a elaboração de dois formulados de composições químicas distintas, denominadas soluções A e B, e a segunda etapa com o preparo solução final propriamente dita. Esta solução acondicionada, inicialmente em dois recipientes distintos, apresenta os mais altos de antioxidantes, em particular a glutationa reduzida (G-SH), componente extremamente importante para convervação de órgãos, de dispensar sua convervação á baixa temperatura e possiibilitar o aumento de prazo de validade de solução na forma pré-preparada, ou seja , antes preparo final onde mistura as formulas A e B, e ainda, aumentar a eficiência da solução na função de conservação de órgãos para transplante. As Soluções A e B podem apresentar várias formulações sem alterar seus conceitos inventivos, onde o antioxidante Glutationa Reduzida (G-SH) é isolada na solução B, juntamente ou com outros componentes, os quais não aceleram seu processo de oxidação, obtendo-se uma Solução Final através da simples mistura de seus componentes.

Description

"SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO".

O presente pedido de privilégio de invenção refere-se a "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", a qual é processada e obtida em duas etapas, seguindo normas de Boas Práticas de Fabricação de Produtos Farmacêuticos e os procedimentos para fabricação de produtos estéreis, onde a primeira é para a elaboração de dois formulados de composições químicas distintas, denominadas soluções AeB, que na seqüência serão descritas, e a segunda etapa que é o preparo propriamente dito para obtenção da solução final que permite a conservação de órgãos. Esta invenção se caracteriza pelo fato da solução se apresentar, inicialmente, separada e acondicionada em dois recipientes distintos antes do preparo final para utilização. Ela está situada no Campo de Aplicação das soluções para conservação de órgãos e tecidos vivos destinados ao transplante em seres humanos, podendo ainda ser utilizada para conservação de órgãos de animais.

Como é do conhecimento dos habilitados nesta técnica, o transplante de órgãos é hoje difundido em vários países, com protocolos bem estabelecidos de captação e conservação de órgãos de doadores, técnicas cirúrgicas de transplantes e procedimentos pós-transplante e em particular as terapias anti-rejeição do órgão transplantado. Como conseqüência, a demanda por transplantes está aumentada, tornando-se importantes as ações para o aumento na captação de órgãos através do trabalho de convencimento dos familiares dos potenciais doadores. Uma vez efetivada a doação, a preservação do órgão doado é um aspecto de vital importância para o sucesso do transplante. Entre a remoção do órgão doado e o transplante no receptor, cada órgão requer um método especial de conservação. A dimensão tempo é muito importante em todo o processo, pois ele é requerido para testar a histo-compatibilidade entre doador e receptor, a preparação do paciente receptor, e o transporte do órgão entre o local da doação e o centro transplantador. A extensão de tempo que o órgão e/ou tecido podem ser mantidos fora do corpo varia de acordo com cada órgão, idade e saúde do doador, método e solução de conservação utilizada.

O protocolo atual para conservação de órgãos e tecidos sólidos preconiza a conservação isquêmica hipotérmica. Os órgãos são coletados de doadores cadavéricos após lavagem/perfusão com uma solução de conservação à temperatura entre 2°C a 8°C. Desta forma todo o sangue do órgão é removido e a perfusão com a solução de conservação à baixa temperatura auxilia na queda da temperatura do órgão. Além de facilitar a queda da temperatura do órgão, as soluções de conservação são desenvolvidas para prevenir o edema celular, remover os radicais livres, controlar o pH, reduzir o dano isquêmico, estender o tempo de isquemia, e facilitar a recuperação do órgão após transplante e reperfusão.

A mais importante solução de conservação de órgãos sólidos intra-abdominais foi introduzida por Belzer e cols. em 1988, na Universidade de Wisconsin (US 4,798,824, US 4,873,230, US 4,879,283). Esta solução é conhecida como Solução de Belzer ou Solução da Universidade de Wisconsin (Solução de UW), e é indicada particularmente para a conservação de fígado, rim, pâncreas, e intestino delgado.

Para o transplante de fígado, a introdução da Solução de Belzer foi a primeira e mais importante inovação na preservação do órgão desde a introdução da conservação isquêmica hipotérmica em 1977. A notória efetividade da Solução de Belzer revolucionou o transplante de fígado em todos os níveis. O aumento do tempo de conservação isquêmica tem permitido testes mais detalhados de histo-compatibilidade entre doador e receptor, um melhor preparo do paciente receptor, melhor preparo das equipes transplantadoras e do centro cirúrgico, além de permitir uma maior capilaridade na captação de órgãos de doadores - a captação pode ser realizada longe dos centros transplantadores.

Evidências recentes indicam que enxertos (órgão e tecidos doados) de alta qualidade resultam em uma rápida recuperação do órgão transplantado, assim como um aumento do tempo de vida útil do enxerto.

Um dos componentes da Solução de Belzer é a glutationa, um importante antioxidante. E um tripeptídeo contendo um grupo tiol livre, e a forma biologicamente ativa encontrada intracelularmente é a forma reduzida (G-SH). A molécula da glutationa reduzida (G-SH) é composta de três aminoácidos - ácido glutâmico, cisteína, e glicina - ligados covalentemente em cadeia. O grupo sulfidrila (-SH) que confere à glutationa sua característica doadora de elétrons vem do aminoácido cisteína. A glutationa reduzida (G-SH) sofre reação de dimerização oxidativa resultando na forma biologicamente inativa - glutationa oxidada ou glutationa dissulfeto - (G-SS-G), conforme abaixo: 2 G-SH "2H > G-SS-G

Em células sadias, a concentração de glutationa oxidada (G- SS-G) normalmente é menor que 10% da concentração de glutationa total. A redução na concentração de glutationa reduzida na célula pode desencadear o processo de morte celular conhecido como apoptose. A glutationa reduzida, pela sua forte ação antioxidante age

combatendo os radicais livres formados durante a isquemia do órgão doador.

Os antioxidantes e em particular a glutationa reduzida(G-SH) exercem sua função passando da forma reduzida para a oxidada. A glutationa reduzida, por ser um forte antioxidante, é facilmente oxidada, perdendo rapidamente sua ação biológica se medidas de proteção não forem tomadas.

Atualmente, as soluções de conservação de órgãos com glutationa disponíveis o mercado, têm como única medida de proteção, a conservação da mesma em geladeira, com temperatura de 2°C - 8°C.

Verificamos que a glutationa reduzida (G-SH) nas soluções de conservação hoje disponíveis, mesmo conservados em geladeira, perdem rapidamente sua ação antioxidante, sendo detectável apenas a glutationa oxidada (G-SS-G).

Portanto, observando os requisitos mais importantes para conservação de órgãos nas soluções atualmente disponíveis, e com o objetivo de resolver os problemas encontrados no Estado da Técnica, o inventor desenvolveu a "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", a qual apresenta os mais altos níveis de antioxidantes, em particular a glutationa reduzida (G-SH), componente extremamente importante para conservação de órgãos já obtidos em soluções para esta finalidade. Outra grande vantagem que esta nova solução e seu modo de preparo apresenta é o fato da mesma dispensar a conservação à baixa temperatura e de possibilitar o aumento do prazo de validade da solução na forma pré- preparada, ou seja, antes do preparo final onde se mistura as formulas A e B.

Assim, com estas características, a presente invenção permite a obtenção de uma Solução Final com maior eficiência na conservação de órgãos e/ou tecidos vivos para transplante, e mais possibilidades de êxito da ciência para salvar vidas.

As soluções são preparadas separadamente, sendo que a solução A é preparada e envasada em bolsa ou frasco plástico em sistema fechado; a solução B é preparada com todos os cuidados para evitar a presença de oxigênio e o envase é realizado em ambiente com baixa concentração de oxigênio, em recipientes que exerçam barreira contra a passagem de oxigênio. A solução B após o envase pode também sofrer um processo de liofilização conforme o estado da arte.

Para melhor entendimento da "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", a seguir será feita uma descrição detalhada da mesma, bem como do processo de fabricação e preparo para utilização.

A solução em sua forma pré-preparada, em suas formulações "A" e "B", particularmente a solução "B", pode apresentar as seguintes variações:

Exemplo 1: Solução com as formulações Al e Bl abaixo, onde a Glutationa reduzida (G-SH) juntamente com o sulfato de magnésio (MgS04.7H20) são isolados na Solução BL

Exemplo 2: Solução com as formulações A2 e B2 abaixo, onde a Glutationa reduzida (G-SH) é isolada na Solução B2.

Exemplo 3: Solução com as formulações A3 e B3 abaixo, onde a Glutationa reduzida (G-SH) juntamente com o sulfato de magnésio (MgS04.7H20), a Adenosina, e o Alopurinol são isolados na Solução B3.

Exemplo 4: Solução com as formulações A4 e B4 abaixo, onde a Glutationa reduzida (G-SH) juntamente com o fosfato de potássio (KH2P04) são isolados na Solução B4.

Exemplo 5: Solução com as formulações A5 e B 5 abaixo, onde a Glutationa reduzida (G-SH) juntamente com o sulfato de magnésio (MgS04.7H20) são isolados na Solução B5; adicionados 2,79% do total de Acido laetobiônieo da fórmula, com a finalidade de tamponar a Solução B5.

De todos os exemplos acima descritos, o exemplo 1 com as Soluções Al e Bl é o que apresenta melhores resultados na estabilização das Soluções AeB. Assim, não ocorre turbidez na Solução Al, e a presença do sulfato de magnésio (MgS04.7H20) na Solução Bl diminui a oxidação da Glutationa reduzida (G-SH).

A seguir são apresentadas variações da Solução A, objeto deste pedido de patente, a qual é componente da Solução Final para conservação de órgãos, sem alterar seu conceito inventivo:

SOLUÇÃO Al Ácido laetobiônieo - 3,6561224% Rafinosepentaidratada - 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% KH2P04 - 0,3469000%

KOH - 0,5550612%

Adenosina - 0,1367347%

Alopurinol - 0,0138776%

Água para injeção - 88,3698755%

SOLUÇÃO A2

Ácido laetobiônieo - 3,6561224%

Rafinosepentaidratada - 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% KH2P04 0,3469000% KOH 0,5550612% Adenosina 0,1367347% Alopurinol 0,0138776% MgS04.7H20 0,1255102% Água para injeção 88,2443653% SOLUÇÃO A3 Ácido lactobiônico 3,6561224% Rafinose pentaidratada 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% KH2P04 0,3469000% KOH 0,5550612% Água para injeção 88,5204878% SOLUÇÃO A4 Ácido lactobiônico 3,6561224% Rafinose pentaidratada 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% MgS04.7H20 0,1255102% KOH 0,5550612% Adenosina 0,1367347% Alopurinol 0,0138776% Água para injeção 88,5912653%

SOLUÇÃO A5 Ácido lactobiônico

3,5540816%

Rafinose pentaidratada

1,8193878%

Hidroxietilamido 200/0,5

5,1020408%

KH2P04

0,3469000%

5

KOH

0,5550612%

Água para injeção

88,6225286%

Todos os ingredientes das formulações devem ter qualidade

farmacêutica ou similar. A fabricação da Solução A é realizada em condições ambientais controladas e seguindo as normas de Boas Práticas de Fabricação farmacêutica para produtos estéreis. O produto final deve ser estéril e livre de pirogênios ou com baixos limites de endotoxinas bacterianas, conforme monografia da Farmacopeia Européia (EP).

vidro com agitação, apropriado para manipulação de soluções farmacêuticas injetáveis. Primeiramente, adicionar quantidade suficiente de Água para injeção à temperatura entre 20°C a 85°C; adicionar e dissolver na seqüência o fosfato de potássio (KH2P04) ou o sulfato de magnésio (MgS04.7H20), o Hidroxietil amido 200/0,5, o hidróxido de potássio (KOH), o Ácido lactobiônico, o Alopurinol e a Adenosina quando presentes na fórmula, e a Rafinose. Após a solubilização dos ingredientes, o pH da solução deve estar entre 6,5 à 7,9; completar o volume com água para injeção. Filtrar a solução através de membrana com poros de 0,10 à 0,45 micrometros. Envasar em bolsas plásticas flexíveis em sistema fechado de Polipropileno ou PVC ou

O processo de fabricação ocorre em recipiente de aço inox ou Polietileno ou outro material, com volume nominal de 500 mL, 1.000 mL, 2.000 mL. Esterilizar por calor em autoclave de modo a garantir um Nível de Garantia de Esterilidade ( SAL - Sterility Assurance Levei) superior a

io·6·

A Solução B também pode apresentar variações sem mudar seu conceito inventivo, conforme segue:

SOLUÇÃO Bl

Glutationareduzida - 6,150%

MgS04.7H20 - 4,610%

KOH - 0,852%

Água para injeção - 88,388%

SOLUÇÃO B2

Glutationareduzida - 6,150%

KOH - 0,852%

Água para injeção - 92,998%

SOLUÇÃO B3

Glutationa reduzida - 6,15 0%

MgS04.7H20 - 4,610%

KOH - 0,852%

Adenosina - 6,700%

Alopurinol - 0,680%

Água para injeção - 81,008%

SOLUÇÃO B4 Glutationareduzida - 6,150% ΚΗ2Ρ04 - 17,000%

KOH - 0,852%

Água para injeção - 75,998%

SOLUÇÃO B5

Glutationareduzida - 6,150% MgS04.7H20 - 4,6100%

KOH - 0,8520%

Ácido lactobiônico - 5,0000%

Água para injeção - 83,3880%

Todos os ingredientes das formulações devem ser de qualidade farmacêutica ou similar. A fabricação deve ser realizada em condições ambientais controladas e seguindo as normas de Boas Práticas de Fabricação farmacêutica para produtos estéreis. O produto final deve ser estéril e livre de pirogênios ou com baixos limites de endotoxinas bacterianas, conforme monografia da Farmacopeia Européia (EP).

O processo de fabricação da Solução B também ocorre em recipiente de aço inox ou vidro com agitação, apropriado para manipulação de soluções farmacêuticas injetáveis. Primeiramente, adicionar quantidade suficiente de Água para injeção à temperatura entre 20°C a 85°C; borbulhar gás inerte (Nitrogênio ou Argônio) para eliminar o Oxigênio dissolvido e criar uma atmosfera inerte no recipiente - manter o borbulhamento de gás inerte durante todo o processo de fabricação; adicionar e dissolver na seqüência o sulfato de magnésio (MgS04.7H20) ou o fosfato de potássio (KH2P04), a Glutationa reduzida, o hidróxido de potássio (KOH)5 e o Ácido lactobiônico, o Alopurinol e a Adenosina, quando presentes na fórmula. Após a solubilização dos ingredientes, o pH da solução deve estar entre 6,5 à 7,9; completar o volume com água para injeção. Esterilizar a solução por filtração através de membrana com poros de 0,10 à 0,45 micrometros. Envasar assepticamente em frasco-ampolas plásticas que exerçam barreira à passagem de gases, ou de vidro, com capacidade nominal de 10 mL a 100 mL. Antes do fechamento hermético do frasco- ampola a atmosfera interna deve ser preenchida com gás inerte.

Para a apresentação em volumes variados, as Soluções AeB devem ser preparadas seguindo as proporções já descritas nas formulações.

O método de preparo da solução final para conservação de órgãos, exige cuidados especiais, do tipo: Transferir assepticamente o conteúdo de um frasco/ampola da Solução BI, contendo 20 mL de Solução BI, em uma bolsa da Solução Al, contendo 980 mL da Solução Al. A solução final será a Solução de Conservação de Órgãos e o volume final será de 1.000 mL, com a fórmula abaixo:

SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ÓRGÃOS Ácido lactobiônico - 3,5830%

Raflnosepentaidratada - 1,7830% Adenosina - 0,1340%

Alopurinol - 0,0136% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,0000%

ΚΗ2Ρ04 - 0,3400%

KOH - 0,5610%

Glutationa reduzida - 0,0922%

MgS04.7H20 - 0,1230%

Água para injeção - 88,3702%

Após o preparo final da Solução para conservação de órgãos e/ou tecidos vivos, a qual ocorre no momento do uso, onde o órgão ficará protegido, os seguintes medicamentos podem ser adicionados à solução: Dexametasona - 16 mg

Insulina - 40 UI (unidades internacionais)

Penicilina G - 200.000 UI (unidades internacionais)

Deste modo, solicitamos a concessão da patente de invenção para a "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO".

Claims (6)

1. - "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", uma solução para conservação de órgãos que é preparada seguindo as normas de Boas Práticas de Fabricação Farmacêutica para produtos estéreis, CARACTERIZADA pelo fato de ser obtida em duas etapas, onde a primeira é a elaboração de dois formulados de composições químicas distintas, denominadas Soluções A e B, e a segunda etapa é o preparo da Solução Final propriamente dita, que permite a conservação de órgãos, sendo que, inicialmente, esta ultima Solução se apresenta na forma separada e acondicionada em dois recipientes distintos.

2. - "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", conforme a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato da Solução A poder apresentar as seguintes formulações, sem alterar o conceito inventivo: SOLUÇÃO Al Ácido lactobiônico 3,6561224% Rafinose pentaidratada 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% KH2P04 0,3469000% KOH 0,5550612% Adenosina 0,1367347% Alopurinol 0,0138776% Água para injeção - 88,3698755% SOLUÇÃO A2 Ácido lactobiônico 3,6561224% Rafinose pentaidratada 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% KH2P04 0,3469000% KOH 0,5550612% Adenosina 0,1367347% Alopurinol 0,0138776% MgS04.7H20 0,1255102% Água para injeção 88,2443653% SOLUÇÃO A3 Ácido lactobiônico 3,6561224% Rafinose pentaidratada 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% KH2P04 0,3469000% KOH 0,5550612% Água para injeção 88,5204878% SOLUÇÃO A4 Ácido lactobiônico 3,6561224% Rafinose pentaidratada 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% MgS04.7H20 0,1255102% KOH - 0,5550612% Adenosina - 0,1367347% Alopurinol - 0,0138776% Água para injeção - 88,5912653% SOLUÇÃO A5 Ácido lactobiônico - 3,5540816% Rafinosepentaidratada - 1,8193878% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,1020408% KH2P04 - 0,3469000% KOH - 0,5550612% Água para injeção - 88,6225286%

3. - "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", conforme a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato da Solução B poder apresentar as seguintes formulações, sem alterar o conceito inventivo: SOLUÇÃO Bl Glutationareduzida - 6,150% MgS04.7H20 - 4,610% KOH - 0,852% Água para injeção - 88,388% SOLUÇÃO B2 Glutationareduzida - 6,150% KOH - 0,852% Água para injeção - 92,998% SOLUÇÃO B3 Glutationareduzida - 6,150% MgS04.7H20 - 4,610% KOH - 0,852% Adenosina - 6,700% Alopurinol - 0,680% Água para injeção - 81,008% SOLUÇÃO B4 Glutationareduzida - 6,150% KH2P04 - 17,000% KOH - 0,852% Água para injeção - 75,998% SOLUÇÃO B5 Glutationareduzida - 6,150% MgS04.7H20 - 4,6100% KOH - 0,8520% Ácido lactobiônico - 5,0000% Água para injeção - 83,3880%

4. - "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", conforme a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato do processo de fabricação da Solução A ser realizado em recipiente de aço inox ou vidro com agitação, devendo-se adicionar a quantidade suficiente de Água para injeção à temperatura entre 20°C a 85°C; adicionar e dissolver na seqüência o fosfato de potássio (KH2P04) ou o sulfato de magnésio (MgS04.7H20), o Hidroxietil amido 200/0,5, o hidróxido de potássio (KOH), o Ácido lactobiônico, o Alopurinol e a Adenosina quando presentes na fórmula, e a Rafinose, e ainda, após a solubilização dos ingredientes, o pH da solução deve estar entre 6,5 à 7,9; completar o volume com água para injeção; filtrar a solução através de membrana com poros de 0,10 à 0,45 micrometros; Envasar em bolsas plásticas flexíveis em sistema fechado de Polipropileno ou PVC ou Polietileno ou outro material, com volume variados, e Esterilizar por calor úmido em autoclave de modo a garantir um Nível de Garantia de Esterilidade (SAL - SterilityAssurance Levei) superior a IO"6.

5. - "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", conforme a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato do processo de fabricação da Solução B ser realizado em recipiente de aço inox ou vidro com f agitação, devendo-se adicionar a quantidade suficiente de Agua para injeção à temperatura entre 20°C a 85°C; borbulhar gás inerte (Nitrogênio ou Argônio) para eliminar o Oxigênio dissolvido e criar uma atmosfera inerte no recipiente; manter o borbulhamento de gás inerte durante todo o processo de fabricação; adicionar e dissolver na seqüência o sulfato de magnésio (MgS04.7H20) ou o fosfato de potássio (KH2P04), a Glutationa reduzida, o hidróxido de potássio (KOH), e o Ácido lactobiônico, o Alopurinol e a Adenosina, quando presentes na fórmula, e ainda, após a solubilização dos ingredientes, controlar o pH da solução que deve estar entre 6,5 à 7,9; completar o volume com água para injeção; esterilizar a solução por filtração através de membrana com poros de 0,10 à 0,45 micrometros; envasar assepticamente em frasco-ampolas plásticas que exerçam barreira à passagem de gases, ou de vidro, com capacidades variadas e, antes do fechamento hermético do frasco-ampola, preencher a atmosfera interna do recipiente com gás inerte.

6. - "SOLUÇÃO PARA CONSERVAÇÃO DE ORGÃOS, PROCESSO DE FABRICAÇÃO E MODO DE PREPARO", conforme a reivindicação 1, cuja solução final apresentara a seguinte formulação: Ácido lactobiônico 3,5830% Rafinose pentaidratada 1,7830% Adenosina 0,1340% Alopurinol 0,0136% Hidroxietilamido 200/0,5 - 5,0000% KH2P04 0,3400% KOH 0,5610% Glutationa reduzida 0,0922% MgS04.7H20 0,1230% Água para injeção 88,3702% CARACTERIZADA pelo fato do modo de preparo final da Solução seguir as proporções descritas nas formulações, exigir cuidados especiais, como transferir assepticamente o conteúdo de um frasco/ampola da Solução Bl para uma bolsa da Solução Al.