BRPI1008594B1

BRPI1008594B1 - GRANULUS CONTAINING FILAMENTAL FUNGI AND PREPARATION METHOD

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Publication number: BRPI1008594B1
Authority: BR
Publication date: 2017-08-29

Description

‘GRÂNULOS CONTENDO FUNGOS FILAMENTOSOS E MÉTODO DE PREPARAÇÃO DOS MESMOS” Campo de aplicação A presente invenção se refere ao campo técnico de produtos de saúde de plantas. Em particular, se refere a um método para produzir - a nível industrial - grânulos, altamente dispersíveis em água, contendo um agente de saúde de plantas, e mais particularmente um fungo nematófago. A invenção também inclui os grânulos dispersíveis em água assim obtidos.Fields of Application The present invention relates to the technical field of plant health products. In particular, it relates to a method for producing - industrially - highly water dispersible granules containing a plant health agent, and more particularly a nematophagous fungus. The invention also includes the water dispersible granules thus obtained.

Introdução Nematóides parasíticos de plantas atacando quase todos os tipos de colheitas causando perdas anuais mundiais equivalentes a aproximadamente 500 milhões de dólares americanos têm sido conhecidos ao longo dos anos. Extremamente resistentes a tratamentos químicos, sua destruição implica no uso de produtos que são pobremente seletivos e geralmente prejudiciais ao ambiente natural.Introduction Parasitic plant nematodes attacking almost all crop types causing worldwide annual losses equivalent to approximately US $ 500 million have been known over the years. Extremely resistant to chemical treatments, their destruction implies the use of products that are poorly selective and generally harmful to the natural environment.

Partindo da ECO-92, realizada no Rio em 1992, e de acordo com as recentes leis bio-ambientais, numerosos nematocidas tradicionais são proibidos ano após ano, deixando os fazendeiros sem proteção em relação a um problema que pode ser mais ou menos drástico, dependendo das regiões climáticas e das colheitas. Portanto, o crescimento de interesse em direção a métodos alternativos ou orgânicos, que não implicam no uso de pesticidas químicos convencionais. No entanto, a fim de que se desenvolvam, tais métodos para soluções de controle “orgânico” não são somente requeridos para provar a sua eficiência, mas precisam também ser fáceis e práticos de implementar para o fazendeiro, de uma maneira similar a essa de um produto convencional.Starting from the 1992 ECO-92 in Rio and according to recent bioenvironmental laws, numerous traditional nematocides are banned year after year, leaving farmers unprotected against a more or less drastic problem, depending on climatic regions and crops. Therefore, the growth of interest towards alternative or organic methods, which do not imply the use of conventional chemical pesticides. However, in order to develop, such methods for “organic” control solutions are not only required to prove their effectiveness, but also need to be easy and practical to implement for the farmer in a similar manner to that of a farmer. conventional product.

Entre os métodos pesticidas orgânicos, o uso de microorganismos antagonistas representa uma prática cada vez mais comum. Por exemplo, conhecidos são tratamentos anti-mosquito com base na difusão de uma bactéria: o Bacillus thuringiensis. De maneira similar, é possível controlar a mosca branca que afeta as colheitas vegetais, (Trialeurodes vaporariorum), usando os esporos de um fungo parasita das larvas de aleuróides (Verticillium leucanii).Among organic pesticide methods, the use of antagonistic microorganisms represents an increasingly common practice. For example, known are anti-mosquito treatments based on the diffusion of a bacterium: Bacillus thuringiensis. Similarly, it is possible to control the whitefly that affects plant crops (Trialeurodes vaporariorum) by using the spores of a parasitic fungus on alleleid larvae (Verticillium leucanii).

Os fungos filamentosos (Deuteromycetes, comumente denominados como mofos) são caracterizados por formações tubulares finas (hifas), geralmente transparentes, que têm um diâmetro no intervalo de mícron; a totalidade das hifas forma o micélio; se reproduzem assexualmente através de conidia. Alguns fungos filamentosos que pertencem à família Moniliales (em particular Arthrobothrys conoides Dreschsler) provaram ser úteis contra nematóides: se alimentam em nematóides, desinfetando o solo destes parasitas. A fim de explorar eficientemente os fungos filamentosos, é necessário ter formulações estáveis, contendo uma alta contagem de fungos, que sejam fáceis de manipular e administrar ao solo. Infelizmente, as técnicas de produção e conservação para estes fungos, em particular para os fungos nematófagos, são ainda empíricas e os resultados obtidos até o momento não são inteiramente satisfatórios. O pedido de patente número WO-A-2005078067 descreve meios de cultura eficientes para o crescimento de fungos filamentosos, sem indicar métodos de formulação e/ou administração particulares. O pedido de patente GB-A-857161 descreve a preparação de transportadores inorgânicos (pómice, vermiculita, lã de amianto) de superfície tratada com uma cultura de fungos nematófagos. A patente dos Estados Unidos US 5.811.092 descreve o tratamento de superfície de grãos de milho com culturas de fungos nematófagos; o milho assim tratado é misturado com pequenas porções de solo para formar inoculações e os últimos são distribuídos no solo a ser tratado; o método é geralmente eficiente, mas a contagem de fungos dos grãos é bem variável e a administração no solo é escassamente homogênea. O pedido de patente número US 2007/0292932 descreve a preparação de precipitados gelatinizados contendo fungos nematófagos, adequados para administração ao solo; no entanto, a preparação, conservação e manuseio destes precipitados são bem complicados.Filamentous fungi (Deuteromycetes, commonly referred to as molds) are characterized by thin, generally transparent tubular (hyphae) formations that have a diameter in the micron range; all hyphae form the mycelium; reproduce asexually through conidia. Some filamentous fungi belonging to the Moniliales family (in particular Arthrobothrys conoides Dreschsler) have proven useful against nematodes: they feed on nematodes by disinfecting the soil of these parasites. In order to efficiently exploit filamentous fungi, it is necessary to have stable formulations containing a high fungal count that are easy to handle and administer to the soil. Unfortunately, the production and conservation techniques for these fungi, in particular nematophagous fungi, are still empirical and the results obtained so far are not entirely satisfactory. WO-A-2005078067 describes efficient culture media for the growth of filamentous fungi without indicating particular formulation and / or administration methods. GB-A-857161 describes the preparation of surface inorganic carriers (pomice, vermiculite, asbestos wool) treated with a nematophagous fungus culture. United States Patent US 5,811,092 describes surface treatment of corn grains with nematophagous fungal cultures; corn thus treated is mixed with small portions of soil to form inoculations and the latter is distributed in the soil to be treated; The method is generally efficient, but the grain fungal count is quite variable and the soil administration is sparingly homogeneous. US Patent Application No. 2007/0292932 describes the preparation of gelatinized precipitates containing nematophagous fungi suitable for administration to the soil; however, the preparation, storage and handling of these precipitates is quite complicated.

Além disso, os produtos do estado da técnica são escassamente dispersíveis em água e precisam ser dispersos no solo em forma sólida; as partículas sólidas permanecem na superfície e não permitem uma penetração adequada dos fungos nas camadas mais profundas do solo; a penetração é obtida somente no custo de operações de movimento do solo posteriores (revolvimento).In addition, prior art products are sparingly dispersible in water and need to be dispersed into the soil in solid form; solid particles remain on the surface and do not allow proper penetration of the fungi into deeper soil layers; penetration is obtained only at the cost of subsequent ground movement (revolving) operations.

Portanto, independente dos desenvolvimentos mencionados acima, nenhum dos produtos identificados até o momento é inteiramente satisfatório. Uma dificuldade particular é a de proporcionar um produto granular seco, portanto fácil de armazenar e manipular, que tem uma alta capacidade de dispersão em água e garantindo uma viabilidade mais que satisfatória da cultura, as últimas duas condições sendo desvantajosas em condições secas. A presente invenção é baseada em um método para fabricar, a nível industrial, fungos filamentosos, e mais em particular fungos nematófagos, em uma forma granular seca capaz de garantir estabilidade, viabilidade e facilidade de uso. Em particular, a invenção permite obter composições com alta contagem de fungos, fácil de manipular e administrar ao solo, capaz de realizar alta e uniforme atividade nematocida na superfície tratada; as composições são obteníveis por meio de um método de preparação que é fácil, barato e inofensivo para a viabilidade de micélia.Therefore, regardless of the developments mentioned above, none of the products identified so far is entirely satisfactory. A particular difficulty is to provide a dry granular product, therefore easy to store and handle, which has a high dispersibility in water and ensures a more than satisfactory viability of the crop, the latter two being disadvantageous under dry conditions. The present invention is based on a method of manufacturing filamentous fungi, and more particularly nematophagous fungi, in a dry granular form capable of ensuring stability, viability and ease of use. In particular, the invention allows to obtain compositions with high fungal count, easy to handle and administer to the soil, capable of performing high and uniform nematocidal activity on the treated surface; The compositions are obtainable by a preparation method that is easy, inexpensive and harmless to the viability of mycelia.

Sumário da invenção A presente invenção descreve um método para incorporar os fungos filamentosos em uma formulação particular em fase sólida, especificamente estudada para permitir uma simples, homogênea e eficiente administração dos fungos ao solo. A invenção é baseada no tratamento de uma cultura de fungos filamentosos que leva à obtenção de grânulos secos com alta contagem de fungos e facilmente dispersíveis em água. O tratamento compreende misturar um meio de cultura, anteriormente inoculado com um fungo filamentoso, com uma farinha rica em amido e um amido modificado. O produto resultante é então misturado com cargas particulares e possíveis nutrientes, em proporções adequadas para formar uma pasta facilmente granulável; os grânulos, obteníveis por meio de técnicas conhecidas por si mesmas, são recuperados e secos até um conteúdo de umidade determinado, geralmente compreendido entre 5 e 15%. O produto granular assim obtido é particularmente adequado para salvaguardar a viabilidade da micélia, é seco ao toque, facilmente manipulável pelos operadores e é altamente dispersíveis em água. Mais em detalhe, o método compreende as seguintes etapas: a) fazer crescer os fungos filamentosos em um meio de cultura líquido adequado, por um determinado período de tempo; b) misturar o produto de a) com uma farinha rica em amido e um amido modificado; c) misturar o produto de b) com cargas adequadas e possíveis nutrientes, até obter uma pasta granulável; d) formar os grânulos, recuperar os mesmos e então secar os mesmos reduzindo seu conteúdo de umidade a um valor no intervalo entre 5 e 15%.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention describes a method for incorporating filamentous fungi into a particular solid phase formulation specifically designed to enable simple, homogeneous and efficient soil administration of the fungi. The invention is based on the treatment of a filamentous fungus culture which leads to the obtainment of highly fungal dry granules easily dispersible in water. The treatment comprises mixing a culture medium previously inoculated with a filamentous fungus with a starch-rich flour and a modified starch. The resulting product is then mixed with particular fillers and possible nutrients in appropriate proportions to form an easily granular paste; The granules, obtainable by techniques known per se, are recovered and dried to a specified moisture content, generally between 5 and 15%. The granular product thus obtained is particularly suitable for safeguarding the viability of the mycelia, is dry to the touch, easily manipulated by operators and highly dispersible in water. In more detail, the method comprises the following steps: a) growing the filamentous fungi in a suitable liquid culture medium for a certain period of time; b) mixing the product of a) with a starchy flour and a modified starch; c) mixing the product from b) with suitable fillers and possible nutrients until a granulable paste is obtained; d) forming the granules, recovering them and then drying them by reducing their moisture content to a value in the range of 5 to 15%.

Um objeto adicional da presente invenção é representado pelo produto granular como tal, compreendendo em particular os componentes usados no ponto b). A invenção inclui ainda as composições nematocidas compreendendo o produto granular mencionado acima, e o uso dos produtos mencionados acima para tratar solos e/ou culturas infestadas por nematóides.A further object of the present invention is represented by the granular product as such, comprising in particular the components used in point b). The invention further includes nematocidal compositions comprising the above mentioned granular product, and the use of the above mentioned products to treat nematode infested soils and / or crops.

Descrição das figuras A Figura 1: comparação entre a agitação de uma suspensão dos grânulos do estado'da técnica, tomados como uma referência (na direita), e uma suspensão dos presentes grânulos dispersíveis (na esquerda).Description of the Figures Figure 1: Comparison between agitation of a suspension of prior art granules, taken as a reference (on the right), and a suspension of the present dispersible granules (on the left).

Descrição detalhada da invenção A presente invenção pode ser aplicada a todos os fungos filamentosos comumente conhecidos; vantajosamente, o fungo usado é um fungo nematocida, que pertence, por exemplo, à família Moniliales; particularmente preferidos dentro desta família, são os fungos do gênero Arthrobotrys da espécie conoides, em particular Arthrobotrys conoides Dreschsler. O meio de cultura para fungos filamentosos pode ser selecionado de entre aqueles conhecidos no campo. De acordo com uma modalidade preferida, compreende pelo menos uma fonte de carbono selecionada do grupo de produtos constituídos de melaços, extrato de malte, sacarose, e pelo menos uma fonte de nitrogênio orgânico selecionado de entre o extrato de levedura e a assim chamada “água de maceração de milho”. A preparação de tal meio é amplamente descrito no pedido de patente WO-A-2005078067, incorporado no presente documento por referência. Em tal meio, a fonte de carbono preferivelmente representa 70 a 85% em peso do peso seco do meio de cultura e a fonte de nitrogênio orgânico mencionada acima representa 15 a 30% em peso do peso seco do meio de cultura. O meio de cultura pode compreender ainda uma fonte de mineral nitrogênio, constituída de nitratos ou sais de amônio. No caso geral, esta fonte de mineral nitrogênio é gradualmente adicionada ao meio de cultura durante o crescimento do fungo, em quantidades não excedendo 10% em peso do peso seco do meio de cultura, preferivelmente compreendido entre 5 e 8%.Detailed Description of the Invention The present invention can be applied to all commonly known filamentous fungi; advantageously, the fungus used is a nematocidal fungus, which belongs, for example, to the Moniliales family; Particularly preferred within this family are fungi of the genus Arthrobotrys of the conoides species, in particular Arthrobotrys conoides Dreschsler. The culture medium for filamentous fungi can be selected from those known in the field. According to a preferred embodiment, it comprises at least one carbon source selected from the product group consisting of molasses, malt extract, sucrose, and at least one source of organic nitrogen selected from yeast extract and the so-called "water". maceration maize ”. The preparation of such medium is broadly described in WO-A-2005078067, incorporated herein by reference. In such medium, the carbon source preferably represents 70 to 85% by weight of the dry weight of the culture medium and the above-mentioned organic nitrogen source represents 15 to 30% by weight of the dry weight of the culture medium. The culture medium may further comprise a source of nitrogen mineral consisting of nitrates or ammonium salts. In the general case, this source of mineral nitrogen is gradually added to the culture medium during fungal growth, in amounts not exceeding 10% by weight of the dry weight of the culture medium, preferably between 5 and 8%.

Um primeiro meio de cultura preferido é constituído de 75-85% de extrato de malte e 15-25% de extrato de levedura, as porcentagens sendo dadas em peso no peso seco do meio de cultura. Outro meio de cultura usável compreende 60-65% de melaços, 10-15% de sacarose, 10-15% de água de maceração de milho e 10-15% de extrato de levedura. Este meio de cultura também contém, além disso, 5 - 8% de uma fonte de mineral nitrogênio, em particular fosfato de hidrogênio diamônio. Um último meio de cultura preferido contém duas fontes de carbono, isto é, extrato de malte, em quantidades entre 25-30%, e melaços, em quantidades entre 40-45%, bem como água de maceração de milho, em quantidades entre 25-30%. O extrato de malte é obtido pela germinação de cereais, geralmente cevada. Quando germinam, existe a produção de enzimas e mais em particular amilase, que permitem a transformação de amido em açúcares. O extrato de malte contém aproximadamente 60% de maltose, vitaminas e outros numerosos oligoelementos.A first preferred culture medium is 75-85% malt extract and 15-25% yeast extract, the percentages being given by weight on the dry weight of the culture medium. Another usable culture medium comprises 60-65% molasses, 10-15% sucrose, 10-15% corn maceration water and 10-15% yeast extract. This culture medium also contains, furthermore, 5 - 8% of a nitrogen mineral source, in particular diammonium hydrogen phosphate. A final preferred culture medium contains two carbon sources, ie malt extract, in amounts of 25-30%, and molasses, in amounts of 40-45%, as well as macerating water, in amounts of 25-30%. -30%. Malt extract is obtained by germinating cereals, usually barley. When they germinate, there is the production of enzymes and more particularly amylase, which allow the transformation of starch into sugars. Malt extract contains approximately 60% maltose, vitamins and numerous other trace elements.

Os melaços representam um subproduto de açúcar indústria e está na forma de um líquido preto amarronzado viscoso, contendo 10% de água, 35% de sacarose, 20% de outros açúcares e 15% de cinzas. O extrato de levedura é obtido por autólise de Saccharomyces cerevisiae e está na forma de um pó fino de cor amarelo pálido, facilmente solúvel em água. O extrato de levedura contém peptídeos, aminoácidos livres, bases purínicas e pirimidínicas, bem como vitaminas solúveis em água de grupo B. O extrato de levedura tem um conteúdo de nitrogênio total de 10% e um conteúdo de α -amina nitrogênio de 5%. A água de maceração de milho é obtida pela maceração de o milho a 50°C, por 24-48 horas, em água contendo dióxido de enxofre. O último reagente permite a ligação da rede de proteína que rodeia os grãos e oferece a vantagem de prevenir o desenvolvimento de microorganismos indesejados durante a maceração. A água de maceração de milho tem um conteúdo de nitrogênio total de 7%, um conteúdo de α -amuia nitrogênio de 1,7% e também contém açúcares que perfazem 5%, 4% de potássio, 3% de fósforo e 17% de minerais.Molasses represent a by-product of sugar industry and is in the form of a viscous brownish black liquid, containing 10% water, 35% sucrose, 20% other sugars and 15% ash. The yeast extract is obtained by autolysis of Saccharomyces cerevisiae and is in the form of a pale yellow fine powder, easily soluble in water. Yeast extract contains peptides, free amino acids, purine and pyrimidine bases, as well as group B water-soluble vitamins. Yeast extract has a total nitrogen content of 10% and a α-nitrogen content of 5%. Corn maceration water is obtained by macerating the corn at 50 ° C for 24-48 hours in water containing sulfur dioxide. The latter reagent allows binding of the protein network surrounding the beans and offers the advantage of preventing the development of unwanted microorganisms during maceration. Corn macerating water has a total nitrogen content of 7%, a α-ammonia nitrogen content of 1.7% and also contains sugars that make up 5%, 4% potassium, 3% phosphorus and 17%. minerals.

No método de produção de acordo com a invenção, o crescimento do fungo filamentoso nos meios de cultura mencionados acima é preferivelmente realizado por um período de 5-10 dias, e em uma temperatura constante compreendida entre 23 e 30°C. A fim de fabricar os grânulos, uma mistura é preparada constituída de um amido modificado e uma farinha rica em amido. Nesta mistura, o amido modificado preferivelmente representa 30-60% em peso, (mais preferivelmente 33%), enquanto a farinha é o restante 70-40% (mais preferivelmente 67%), estes porcentagens se referem à matéria seca. O amido modificado preferido é Cleargum, (amido octenil succinato de sódio), um produto obtido por hidrólise enzimática de um amido de milho ceroso. A farinha pode ser qualquer farinha de cereal ou outros produtos ricos em amido; preferivelmente é uma farinha de milho.In the production method according to the invention, the growth of the filamentous fungus in the above mentioned culture media is preferably carried out for a period of 5-10 days, and at a constant temperature of 23 to 30 ° C. In order to make the granules, a mixture is prepared consisting of a modified starch and a starch rich flour. In this mixture, the modified starch preferably represents 30-60% by weight, (more preferably 33%), while flour is the remaining 70-40% (more preferably 67%), these percentages refer to the dry matter. The preferred modified starch is Cleargum, (sodium octenyl succinate starch), a product obtained by enzymatic hydrolysis of a waxy maize starch. The flour may be any cereal flour or other starchy products; preferably it is a cornmeal.

Antes de ser misturada com o meio de cultura, dita mistura é adequadamente diluída em água em ebulição, em proporções de peso de 40-60% (mais preferivelmente 52 % com respeito à água). Por exemplo: 100 g de substância dissolvida em água em ebulição são compostos de 17 g de amido modificado, 35 g de farinha rica em amido e 48 g de água.Prior to being mixed with the culture medium, said mixture is suitably diluted in boiling water in weight ratios of 40-60% (more preferably 52% with respect to water). For example: 100 g of substance dissolved in boiling water is composed of 17 g of modified starch, 35 g of starch-rich flour and 48 g of water.

Após esfriamento, esta primeira mistura é adicionada, preferivelmente em uma razão volumétrica de 1:1, com o meio de cultura descrito acima, no qual o fungo filamentoso foi anteriormente inoculado e crescido. A solução resultante é então adicionada com cargas adequadas e possíveis nutrientes que, em cooperação com o resto da formulação, conferem estabilidade e nutrição aos fimgos, e permitem obter grânulos que tem a consistência e volume desejados.After cooling, this first mixture is added, preferably in a 1: 1 volumetric ratio, with the culture medium described above, in which the filamentous fungus was previously inoculated and grown. The resulting solution is then added with suitable fillers and possible nutrients which, in cooperation with the rest of the formulation, impart stability and nutrition to the fungus, and provide granules of the desired consistency and volume.

Preferivelmente, a carga é terra diatomácea, e os nutrientes são selecionados do grupo compreendendo farinhas e açúcares. Uma carga preferida é Celaton FPM 0,08. É um produto com base em carcaças diatômicas, (algas de sílica unicelulares) com tamanho de grão de aproximadamente 0,08 mícrons. Este produto é capaz de absorver uma quantidade definida de água, permitindo obter os grânulos com o volume desejado, assim protegendo os microorganismos contra possíveis ataques externos (variações de temperatura, higrometria, etc.).Preferably, the charge is diatomaceous earth, and the nutrients are selected from the group comprising flour and sugars. A preferred load is Celaton FPM 0.08. It is a product based on diatomic carcasses (unicellular silica algae) with grain size of approximately 0.08 microns. This product is capable of absorbing a defined amount of water, allowing to obtain the granules with the desired volume, thus protecting the microorganisms against possible external attacks (temperature variations, hygrometry, etc.).

Preferido entre as farinhas usáveis como nutrientes é a farinha de milho. Esta é um produto natural capaz de absorver uma quantidade de água diversas vezes maior que o seu próprio volume e, no caso específico, também contribui ao volume do grânulo. Além disso, a farinha de milho representa uma importante fonte de nutrição para os fungos filamentosos contidos nos grânulos e está imediatamente disponível ao dispersar no solo a ser tratado.Preferred among nutrient-usable flours is cornmeal. This is a natural product capable of absorbing several times more water than its own volume and, in the specific case, also contributes to the granule volume. In addition, cornmeal represents an important source of nutrition for the filamentous fungi contained in the granules and is readily available when dispersing in the soil to be treated.

Os açúcares ajudam a aumentar a viabilidade dos fungos, em particular estabilizando as membranas celulares.Sugars help to increase fungal viability, in particular by stabilizing cell membranes.

No método objeto da invenção, as cargas e possíveis nutrientes mencionados acima são adicionados à mistura formada no ponto b). Quando somente cargas são usadas, a carga é preferivelmente terra diatomácea. Quando cargas são usadas com nutrientes é preferível usar uma mistura de terra diatomácea e farinha, à qual açúcares podem ser adicionadas em pequenas quantidades. Uma mistura preferida é constituída de cargas em 30-50% (em particular 33%) em peso, e por farinhas no restante 70-50% (em particular 67%). Se forem usados, os açúcares estão geralmente presentes em quantidades variando entre 10 e 20% em peso com respeito à mistura de cargas e farinhas.In the method object of the invention, the fillers and possible nutrients mentioned above are added to the mixture formed in point b). When only charges are used, the charge is preferably diatomaceous earth. When fillers are used with nutrients it is preferable to use a mixture of diatomaceous earth and flour to which sugars may be added in small quantities. A preferred mixture consists of 30-50% (in particular 33%) by weight fillers, and the remaining 70-50% (in particular 67%) flour. If used, sugars are generally present in amounts ranging from 10 to 20% by weight with respect to the mixture of fillers and flour.

As cargas e possíveis nutrientes são adicionados, em forma misturada ou separadamente, à mistura descrita no ponto b), até uma pasta compacta ser obtida. Preferivelmente em dita pasta, a mistura de cargas e possíveis nutrientes usada no ponto c) representa desde 15% até 50% em peso. Por exemplo: 34 g da mistura com cargas e nutrientes são adicionados a 100 g da mistura descrita no ponto b). Geralmente, a pasta assim obtida tem um conteúdo de umidade no intervalo entre 30 e 60%, preferivelmente entre 35 e 55%, mais preferivelmente ao redor de 47%. Assim, a mistura resultante é submetida a tratamentos de granulação convencionais, tais como, por exemplo, extrusão, obter grânulos com dimensões diamétricas preferivelmente compreendidas entre 3 e 5 mm. O conteúdo de umidade dos grânulos antes de secagem é substancialmente idêntico a esse da pasta. A secagem dos grânulos pode ser realizada em um fluxo de ar estéril, a uma temperatura de 25-30°C. A porcentagem de umidade é reduzida, após secagem, a um valor inferior a 13%, preferivelmente no intervalo entre 9 e 10% De tal maneira, os grânulos conseguem a consistência e volume desejados. A presente invenção compreende o produto granular como tal, como resultado do processo mencionado acima. Tal produto é em forma granular, seco ao toque, e é caracterizado em particular por conter um ou mais fungos filamentosos, o amido modificado e a farinha rica em amido descrito na etapa b), e as cargas adequadas e os possíveis nutrientes descritos na etapa c). O produto granular pode ser usado como tal, ou formulado com outros ingredientes convencionais de acordo com métodos conhecidos por si mesmos; a composição pesticida resultante igualmente forma um objeto da invenção. Por último, a invenção é estendida ao uso dos produtos mencionados acima para tratar um substrato infestado por nematóides ou outros parasitas sensíveis a fungos filamentosos.Fillers and possible nutrients are added, in mixed or separate form, to the mixture described in point (b) until a compact paste is obtained. Preferably in said pulp, the mixture of fillers and possible nutrients used in point c) represents from 15% to 50% by weight. For example: 34 g of the mixture with fillers and nutrients is added to 100 g of the mixture described in point b). Generally, the pulp thus obtained has a moisture content in the range of 30 to 60%, preferably 35 to 55%, more preferably around 47%. Thus, the resulting mixture is subjected to conventional granulation treatments, such as, for example, extrusion, to obtain granules of diameter preferably between 3 and 5 mm. The moisture content of the granules prior to drying is substantially identical to that of the paste. The granules may be dried in a sterile air flow at a temperature of 25-30 ° C. The moisture content is reduced after drying to less than 13%, preferably in the range of 9 to 10%. In this way, the granules achieve the desired consistency and volume. The present invention comprises the granular product as such as a result of the process mentioned above. Such product is in granular form, dry to the touch, and is characterized in particular that it contains one or more filamentous fungi, the modified starch and starch-rich flour described in step b), and the appropriate fillers and possible nutrients described in step ç). The granular product may be used as such or formulated with other conventional ingredients according to methods known per se; The resulting pesticidal composition also forms an object of the invention. Finally, the invention is extended to the use of the aforementioned products to treat a substrate infested by nematodes or other filamentous fungus sensitive parasites.

Existem várias vantagens vinculadas à presente invenção as quais são distinguidas como segue.There are several advantages linked to the present invention which are distinguished as follows.

Para a produção: número baixo de manipulações, que permite manter a esterilidade do processo; secagem rápida, dado que o conteúdo de água já está baixo na origem; um produto altamente dispersível, que permite uma melhor avaliação do conteúdo de microorganismos; um processo protegendo a atividade dos microorganismos.For production: low number of manipulations, which allows to maintain the sterility of the process; fast drying, as the water content is already low at source; a highly dispersible product that allows a better evaluation of the microorganism content; a process protecting the activity of microorganisms.

Para o usuário: a formulação altamente dispersível permite diferentes usos: espalhado no solo puro, mas também, vantajosamente, pode ser adicionada ao sistema de irrigação; adicionar o produto à água de irrigação, elimina a necessidade de tratamentos adicionais para dispersar o nematocida; o produto líquido é disperso uniformemente na superfície e, vantajosamente, também nas camadas profundas do solo, sem requerer o revolvimento ou outras operações para mover o solo; dispersão em água ocorre em momentos rápidos (dentro de um alguns segundos) em temperatura ambiente, sob ligeira agitação; a formulação granular com baixo conteúdo de umidade gera um produto facilmente manipulável pelo usuário, seco ao contato, dispersível, fácil de carregar e descarregar de guindastes etc. sem adesão das partículas contra as paredes do contêiner.For the user: the highly dispersible formulation allows different uses: spread on pure soil, but also advantageously can be added to the irrigation system; adding the product to the irrigation water eliminates the need for additional treatments to disperse the nematocide; the liquid product is uniformly dispersed on the surface and, advantageously, also in deep soil layers, without requiring tumbling or other operations to move the soil; Water dispersion occurs at rapid times (within a few seconds) at room temperature, under slight agitation; The low moisture granular formulation generates a user-friendly, dry to contact, dispersible, easy to load and unload product from cranes, etc. no adhesion of the particles against the container walls.

Os seguintes exemplos da invenção, proporcionados para propósitos ilustrativos e não limitativos, foram feitos usando fungos filamentosos da família Moniliales, em particular usando o fungo filamentoso Arthrobotrys conoides Dreschsler. PARTE EXPERIMENTAL Exemplo 1 A cultura de fungo filamentoso foi obtida em um reator de 2 litros, contendo 1,2 1 de meio de cultura. O reator constituído de um recipiente com um fundo redondo, proporcionado com um agitador de hélice, um regulador de temperatura e esfriamento, uma entrada de ar, bem como sondas para detectar pH, concentração de O2 e temperatura. O meio, constituídos de 20 g/1 de extrato de malte e 4 g/1 de extrato de levedura, foi esterilizado antes de ser inoculado com 0 fungo conidia A. conoides. A cultura foi prolongada durante 6 dias desde a inoculação a uma temperatura de aproximadamente 27°C. Durante a cultura, foi realizada amostragem do meio de cultura para determinar a massa seca (g/1), portanto, o número de propágulos (UFC/1). A fim de determine a massa seca, 20 ml do meio de cultura foram filtrados, então secos em um forno a 100°C durante 24 horas. O número de propágulos foi determinado em 1 ml de meio de cultura. Aproximadamente 8 g/1 de fungo são obtidos no final do período de tempo indicado, com um número de propágulos equivalente e 6,109 por litro.The following examples of the invention, provided for illustrative and non-limiting purposes, were made using filamentous fungi of the Moniliales family, in particular using the filamentous fungus Arthrobotrys conoides Dreschsler. EXPERIMENTAL EXAMPLE Example 1 Filamentous fungus culture was obtained in a 2 liter reactor containing 1.2 l of culture medium. The reactor consists of a round bottomed vessel provided with a propeller stirrer, a temperature and cooling regulator, an air inlet, as well as probes to detect pH, O2 concentration and temperature. The medium, consisting of 20 g / 1 malt extract and 4 g / 1 yeast extract, was sterilized before being inoculated with conidia A. conoides fungus. The culture was prolonged for 6 days since inoculation at a temperature of approximately 27 ° C. During culture, the culture medium was sampled to determine the dry mass (g / 1), therefore, the number of propagules (CFU / 1). In order to determine the dry mass, 20 ml of the culture medium were filtered, then dried in an oven at 100 ° C for 24 hours. The number of propagules was determined in 1 ml of culture medium. Approximately 8 g / 1 of fungus is obtained at the end of the indicated time period, with an equivalent number of propagules and 6,109 per liter.

Uma mistura contendo Cleargum e amido de milho (razão em peso de 1:1) é dispersa em água em ebulição, em uma concentração de 54% em peso. Após esfriamento, 0 meio de cultura contendo o fungo nas mesmas proporções da água anteriormente adicionada é adicionado. Celaton FPM 0,08 é então adicionado à mistura assim obtida em quantidades de 28% em peso com respeito a esta primeira mistura, até obter uma pasta compacta. Esta pasta é introduzida por meio de uma espátula em uma seringa, então espalhada em quantidades regulares em uma lâmina de alumínio. Após alguns minutos de secagem sob um fluxo de ar a no máx. 30°C, a porcentagem de umidade do produto é equivalente a 7,9% e os grânulos livremente separados da lâmina de alumínio.A mixture containing Cleargum and cornstarch (1: 1 weight ratio) is dispersed in boiling water at a concentration of 54% by weight. After cooling, the culture medium containing the fungus in the same proportions as the previously added water is added. Celaton FPM 0.08 is then added to the mixture thus obtained in amounts of 28% by weight with respect to this first mixture until a compact paste is obtained. This paste is introduced by means of a spatula into a syringe, then spread in regular quantities on an aluminum foil. After a few minutes of drying under max. At 30 ° C, the moisture content of the product is equivalent to 7.9% and the granules are freely separated from the aluminum foil.

Após a introdução de um grânulo em 9 ml de água estéril e diversas diluições é possível determinar o número de propágulos contidos em um grânulo, que é equivalente a 8,103 UFC/grânulo (média aritmética de determinações em cinco grânulos) que correspondem a uma porcentagem de sobrevivência de 50%. Esta porcentagem é considerada mais do que satisfatória para o tipo de processo descrito no presente documento.After the introduction of one pellet in 9 ml of sterile water and several dilutions it is possible to determine the number of propagules contained in one pellet, which is equivalent to 8.103 CFU / pellet (arithmetic mean of determinations in five pellets) corresponding to a percentage of pellets. 50% survival. This percentage is considered more than satisfactory for the type of process described in this document.

Exemplo 2 O teste deste exemplo foi realizado usando a mesma cultura de fungos de exemplo 1, mas variando as proporções na formulação. Uma mistura contendo 18% de Cleargum e 36% de amido de milho é misturada em uma quantidade de água em ebulição formando 45% da mistura total. Após esfriamento, o meio de cultura -contendo o fungo - é adicionado em quantidades equivalentes à quantidade de água adicionada anteriormente. Então, Celaton FPM 0,08 é adicionado à mistura assim obtida em quantidades equivalentes a 25% em peso com respeito a esta primeira mistura, até uma pasta compacta ser obtida. Após alguns minutos de secagem em um fluxo de ar a 30°C, a porcentagem de umidade do produto é equivalente a 8,8%. Após dissolver um grânulo em 9 ml de água estéril e diversas diluições é possível determinar o número de propágulos contidos em um grânulo. Existem 1,104 UFC/grânulo, que correspondem a uma porcentagem de sobrevivência de 66 %. Tal porcentagem é considerada ótima para um processo do tipo descrito no presente documento.Example 2 The test of this example was performed using the same fungal culture as example 1, but varying the proportions in the formulation. A mixture containing 18% Cleargum and 36% cornstarch is mixed in boiling water to form 45% of the total mixture. After cooling, the culture medium - containing the fungus - is added in amounts equivalent to the amount of water previously added. Then Celaton FPM 0.08 is added to the mixture thus obtained in amounts equivalent to 25% by weight with respect to this first mixture until a compact paste is obtained. After a few minutes of drying in an air flow at 30 ° C, the moisture content of the product is equivalent to 8.8%. After dissolving a granule in 9 ml of sterile water and several dilutions it is possible to determine the number of propagules contained in a granule. There are 1.104 CFU / granule, which corresponds to a survival percentage of 66%. Such a percentage is considered optimal for a process of the type described herein.

Exemplo 3 O teste deste exemplo é baseado na mesma cultura de fungos de exemplo 1, mas variando as proporções na formulação. Uma mistura contendo 16% de Cleargum e 31,5% de amido de milho é misturada com 52,5% de água em ebulição. Após esfriamento, o meio de cultura contendo o fungo, é adicionado em quantidades equivalentes à quantidade de água adicionada anteriormente. Uma mistura constituída de 54% de amido de milho e 46% de Celaton FPM 0,08 é então adicionado à mistura assim obtida, em quantidades equivalentes a 45% em peso com respeito a esta primeira mistura, até uma pasta compacta ser obtida. Após alguns minutos de secagem em um fluxo de ar a 30°C, a porcentagem de umidade do produto resultante é equivalente a 9%.Example 3 The test of this example is based on the same fungal culture as example 1, but varying the proportions in the formulation. A mixture containing 16% Cleargum and 31.5% cornstarch is mixed with 52.5% boiling water. After cooling, the culture medium containing the fungus is added in amounts equivalent to the amount of water previously added. A mixture consisting of 54% cornstarch and 46% Celaton 0.08 FPM is then added to the mixture thus obtained in amounts equivalent to 45% by weight with respect to this first mixture until a compact paste is obtained. After a few minutes of drying in an air flow at 30 ° C, the moisture content of the resulting product is equivalent to 9%.

Após dissolver um grânulo em 9 ml de água estéril e diversas diluições é possível determinar o número de propágulos contidos em um grânulo, que é equivalente a 1,2.104 UFC/grânulo, que correspondem a uma porcentagem de sobrevivência de 83 %. Tal porcentagem é considerada alta, para um processo do tipo descrito no presente documento. Após um mês de armazenamento em um recipiente de plástico, a uma temperatura compreendida entre 18 e 25°C, a porcentagem de sobrevivência (número de propágulos presentes com respeito a aqueles observados imediatamente após a preparação dos grânulos) foi ainda muito alta, na ordem de aproximadamente 95%.After dissolving a granule in 9 ml of sterile water and several dilutions it is possible to determine the number of propagules contained in a granule, which is equivalent to 1.2.104 CFU / granule, which corresponds to a survival rate of 83%. Such a percentage is considered high for a process of the type described herein. After a month of storage in a plastic container at a temperature between 18 and 25 ° C, the survival percentage (number of propagules present compared to those observed immediately after granule preparation) was still very high, in the order approximately 95%.

Exemplo 4 150 g do produto granular obtido em exemplo 3 foram dispersos em 1000 ml de água em temperatura ambiente, sob ligeira agitação condições por meio de um agitador magnético a 500 rpm, por 5 minutos.150 g of the granular product obtained in example 3 were dispersed in 1000 ml of water at room temperature under mild stirring conditions by means of a magnetic stirrer at 500 rpm for 5 minutes.

Ao mesmo tempo, 150 g de precipitados gelatinizados obtidos de acordo com exemplo 1 do documento US2007/0292932 (referência) são tratados sob condições idênticas. No final da agitação, ambas as soluções são observadas visualmente para avaliar o estado de dissolução do produto. Como está claro a partir da Figura 1, os precipitados gelatinizados de referência 1 foram ainda completamente integrais, não dissolvidos e sedimentados no fundo da solução; ao contrário, os grânulos 2 de exemplo 3 da invenção foram perfeitamente dispersos. (Fig 1).At the same time, 150 g of gelatinized precipitates obtained according to example 1 of US2007 / 0292932 (reference) are treated under identical conditions. At the end of stirring, both solutions are visually observed to assess the dissolution state of the product. As is clear from Figure 1, the reference gelatinized precipitates 1 were still completely integral, undissolved and sedimented at the bottom of the solution; in contrast, the granules 2 of example 3 of the invention were perfectly dispersed. (Fig 1).

REIVINDICAÇÕES

Claims

Process for preparing filamentous fungus-containing granules comprising: (a) mixing a filamentous fungus culture with at least one modified starch and a starch-rich flour; b) add fillers to the product of a), obtain a paste which is subsequently subjected to granulation and drying.

Process according to Claim 1, characterized in that the filamentous fungus belongs to the Moniliales family, being Arthrobotrys conoides Dreschsler.

Process according to claim 1-2, characterized in that the culture medium contains one or more carbon and / or nitrogen sources, selected from: malt extract, yeast extract, molasses, sucrose, water. of maceration of corn.

Process according to claims 1-3, characterized in that the modified starch is Cleargum and the starch-rich flour is a cornmeal.

Process according to claims 1-4, characterized in that the modified starch and the starch-rich flour are present in weight ratios of 30:70 to 60:40.

Process according to claims 1-5, characterized in that the charge added in step b) is diatomaceous earth.

Process according to claims 1-6, characterized in that in step b) the nutrients selected from one or more flours and sugars are added to the product of step a).

Process according to claims 1-7, characterized in that in step b) the mixture obtained in a) is added with a mixture of fillers and flour in variable weight ratios between 30:70 and 50:50. , and optionally sugars, obtaining a paste with a moisture content of between 30 and 60%, between 35 and 55%.

Process according to claims 1-7, characterized in that the granules obtained in step b) are dried to a moisture content of less than 13%, comprised between 9 and 10%.

Granular product obtained from the process as defined in claim 1, characterized in that the product comprises one or more filamentous fungi, at least one modified starch, at least one starch-rich flour, suitable fillers and possible nutrients.

Granular product according to Claim 10, characterized in that the modified starch is Cleargum, the starch-rich flour is maize flour and the filler is diatomaceous earth and the possible nutrients are represented by sugars.

Granular product according to claims 10-11, characterized in that the filamentous fungus belongs to the Moniliales family, being Arthrobotrys conoides Dreschsler.

Use of a product or composition as described in claims 10-12, characterized in that it is for treating a substrate infested with nematodes or other filamentous fungus sensitive parasites.

Use according to claim 13, characterized in that the product or composition is dispersed in a liquid medium and administered to the substrate by means of a bony coating.