RU2380906C2 - Self-preserved biological preparation for protection of plants against diseases (versions) and method for its production (versions) - Google Patents
Self-preserved biological preparation for protection of plants against diseases (versions) and method for its production (versions) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2380906C2 RU2380906C2 RU2008114859/13A RU2008114859A RU2380906C2 RU 2380906 C2 RU2380906 C2 RU 2380906C2 RU 2008114859/13 A RU2008114859/13 A RU 2008114859/13A RU 2008114859 A RU2008114859 A RU 2008114859A RU 2380906 C2 RU2380906 C2 RU 2380906C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biomass
- self
- biological product
- antagonist
- preserving biological
- Prior art date
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологической промышленности, к производству средств защиты растений от болезней.The invention relates to the microbiological industry, to the production of plant protection products against diseases.
Одним из основных источников возбудителей болезней растений является почва, в которой развиваются и сохраняются в виде спор фитопатогенные грибы, такие как Fusarium, Helminthosporium, Rhisoctonia, Pythium, Sclerotium, Alternaria, Verticillium. Для борьбы с почвенными патогенами используются главным образом химические фунгициды. Однако интенсивное использование химических препаратов приводит к экологическим нарушениям, к появлению более устойчивых штаммов патогенных микроорганизмов и к другим нежелательным последствиям.One of the main sources of pathogens of plant diseases is the soil in which phytopathogenic fungi develop and persist as spores, such as Fusarium, Helminthosporium, Rhisoctonia, Pythium, Sclerotium, Alternaria, Verticillium. To combat soil pathogens, mainly chemical fungicides are used. However, the intensive use of chemicals leads to environmental disruptions, to the emergence of more resistant strains of pathogenic microorganisms and to other undesirable consequences.
Все шире в практике сельскохозяйственного производства используется интегрированная система защиты растений, которая включает использование биологических препаратов, в том числе на основе антагонистов, подавляющих рост фитопатогенов.Increasingly, in the practice of agricultural production, an integrated plant protection system is being used, which includes the use of biological products, including those based on antagonists that inhibit the growth of phytopathogens.
Известен жидкий препарат на основе штамма Trichoderma viride-AL (Апсите А.Ф. и др. Вест. с.-х. науки №9 (397), с.114-118, 1989). Препарат представлен мицелиальной (вегетативной) формой гриба в виде культуральной жидкости, которая эффективно защищала ячмень, овес, рожь, пшеницу, свеклу и картофель от корневых и стеблевых гнилей. Недостатком этого препарата является отсутствие товарной формы, что не позволяет обеспечить хранение препарата. Таким же недостатком обладает и препарат на основе культуральной жидкости штамма №23 Trichoderma viride (Патент РФ №2186847).A known liquid preparation based on the Trichoderma viride-AL strain (Apsite A.F. et al. Vest. S.kh.nauki nos. 9 (397), pp. 114-118, 1989). The preparation is represented by the mycelial (vegetative) form of the fungus in the form of a culture fluid that effectively protected barley, oats, rye, wheat, beets and potatoes from root and stem rot. The disadvantage of this drug is the lack of a commodity form, which does not allow for storage of the drug. A drug based on the culture fluid of strain No. 23 of Trichoderma viride also has the same drawback (RF Patent No. 2186847).
Известен жидкий препарат триходермин на основе гриба Trichoderma lignorum (Патент РФ №2035145). Для получения этого препарата культивирование проводят в жидкой среде в течение 3-5 сут, затем биомассу концентрируют и для увеличения срока хранения вводят глицерин, поливинилпирролидон или полиэтиленоксид. Однако при этом не удается сохранить биологическую активность препарата более трех месяцев даже при температуре не выше +10°С.Known liquid preparation trichodermin based on the fungus Trichoderma lignorum (RF Patent No. 2035145). To obtain this drug, cultivation is carried out in a liquid medium for 3-5 days, then the biomass is concentrated and glycerin, polyvinylpyrrolidone or polyethylene oxide are introduced to increase the shelf life. However, it is not possible to maintain the biological activity of the drug for more than three months, even at a temperature of no higher than + 10 ° C.
Известен препарат на основе мицелия штамма Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray 16, который получают в результате культивирования в течение 40-60 часов и последующего концентрирования биомассы (Патент РФ №2170511). Для увеличения срока хранения в концентрированную биомассу добавляют карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ) и соли магния. Основным недостатком препарата является также невысокий срок хранения - не более трех месяцев при температурах от +15 до +30°С.Known drug based on the mycelium of the strain Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray 16, which is obtained by culturing for 40-60 hours and subsequent concentration of biomass (RF Patent No. 2170511). To increase the shelf life, carboxymethyl cellulose (CMC) and magnesium salts are added to the concentrated biomass. The main disadvantage of the drug is also a short shelf life - no more than three months at temperatures from +15 to + 30 ° C.
Известен пастообразный препарат на основе гриба Trichoderma harzianum, используемый для борьбы с аскохитозом, белой и черной стеблевыми гнилями огурцов и томатов (Патент РФ №2094991). Препарат готовят, выращивая биомассу на твердом субстрате (зерна ячменя, пшеницы) в течение 5-7 сут, затем сушат и размалывают. Для приготовления пасты в раствор прилипателя, в качестве которого используется КМЦ, добавляют сухую размолотую биомассу гриба. Недостатками этого препарата являются многостадийность, длительный срок и трудоемкость его приготовления.Known paste-like preparation based on the fungus Trichoderma harzianum, used to combat ascochitosis, white and black stem rot of cucumbers and tomatoes (RF Patent No. 2094991). The drug is prepared by growing biomass on a solid substrate (barley, wheat) for 5-7 days, then dried and ground. To prepare the paste, a dry, ground mushroom biomass is added to the adhesive solution, which is used as CMC. The disadvantages of this drug are multi-stage, long term and the complexity of its preparation.
Известны сухие препараты Триходермин-10 и Фиор II, рекомендуемые против болезней различных сельскохозяйственных культур (Алейте А.Ф. и др. Вест. с.-х. науки №9 (397), c.114-118, 1989). Препараты изготавливают, наращивая биомассу гриба на твердом носителе (зерне, торфе, соломе) или в жидкой среде на подносах в течение длительного времени (до 14 суток). Способ производства длителен по времени и трудоемок.Dry preparations Trichodermin-10 and Fiore II are known that are recommended against diseases of various agricultural crops (Aleite A.F. et al. West. Agricultural science No. 9 (397), pp. 114-118, 1989). Preparations are made by increasing the biomass of the fungus on a solid carrier (grain, peat, straw) or in a liquid medium on trays for a long time (up to 14 days). The production method is time consuming and laborious.
Известен препарат на основе штамма Gliocladium catenulatum, эффективный против многих болезней растений, который получают культивированием на твердом носителе или в жидкой среде до полного высыпания спор с последующим высушиванием и размалыванием (Патент США №5968504). Если биомассу наращивают в жидкой среде, то перед высушиванием в нее вводят носитель, состоящий из одного или нескольких веществ из ряда - сахароза, молочный порошок, каолин, крахмал, лигнин и КМЦ. Время приготовления препарата составляет не менее 7 сут. Недостатком этого препарата также является длительный и трудоемкий процесс его приготовления.Known drug based on a strain of Gliocladium catenulatum, effective against many plant diseases, which is obtained by cultivation on a solid carrier or in a liquid medium until the spores completely rash out, followed by drying and grinding (US Patent No. 5968504). If the biomass is built up in a liquid medium, then before drying, a carrier is introduced into it, consisting of one or more of a number of substances — sucrose, milk powder, kaolin, starch, lignin, and CMC. The preparation time is at least 7 days. The disadvantage of this drug is also a long and laborious process of its preparation.
Известна фунгицидная композиция на основе штамма Trichoderma harzianum, содержащая носитель, целиком или частично состоящий из питательных веществ, которые обеспечивают интенсивное развитие гриба при применении (Патент США №5266316). Биомассу выращивают на твердой среде, основу которой составляют крахмал и целит, в течение 10 сут, затем гранулируют и сушат. Полученный препарат сохраняет активность в течение года. Однако такой способ приготовления препарата также длителен и трудоемок.Known fungicidal composition based on a strain of Trichoderma harzianum, containing a carrier, in whole or in part, consisting of nutrients that provide intensive development of the fungus when applied (US Patent No. 5266316). The biomass is grown on a solid medium, the basis of which is starch and celite, for 10 days, then granulated and dried. The resulting preparation remains active for a year. However, this method of preparation of the drug is also long and laborious.
Для повышения в полевых условиях эффективности препаратов на основе грибов, активных против болезней растений, разработаны композиции, содержащие «доставочную» среду, в состав которой могут входить песок, глина, мука, отруби, вермикулит, торф и т.д. (Патент РФ №2127521). Способ приготовления препаратов включает выращивание биомассы в течение 3-7 сут в жидкой среде. Жидкую концентрированную или лиофилизированнную биомассу добавляют в стерильные контейнеры с поставочной средой, куда вносят также NН4Сl в качестве источника азота. Контейнеры инкубируют в течение 5-20 сут при 30°С и упаковывают в трехслойные стерильные пластиковые пакеты. Полученные таким образом препараты можно хранить при +4°С в течение нескольких месяцев. Недостатком этой композиции является длительный процесс приготовления и невысокий срок хранения.To increase the efficiency of field preparations based on mushrooms that are active against plant diseases, compositions containing a “delivery” medium, which may include sand, clay, flour, bran, vermiculite, peat, etc., have been developed. (RF patent №2127521). The method of preparation includes the cultivation of biomass for 3-7 days in a liquid medium. Liquid concentrated or lyophilized biomass is added to sterile containers with a delivery medium, to which NH 4 Cl is also added as a nitrogen source. The containers are incubated for 5-20 days at 30 ° C and packaged in three-layer sterile plastic bags. Thus obtained preparations can be stored at + 4 ° C for several months. The disadvantage of this composition is the long cooking process and low shelf life.
Известна гранулированная композиция и способ стабилизации всех микробиологических агентов, используемых в биозащите сельскохозяйственных культур (Патент США №6455036). При приготовлении композиции в концентрированную биомассу, выращенную в жидкой среде, вводят сорбент, поглощающий воду (сополимер крахмала и полиакрилонитрила), вещество, стабилизирующее клеточную мембрану (обычно сахарозу или другой дисахарид), и гранулирующий агент, например диатомовую землю. Дополнительно может быть введено масло. После смешения и гранулирования смесь высушивают. Полученные таким образом препараты на основе различных биоагентов сохраняют жизнеспособность в течение года при комнатной температуре. Однако в приведенном примере для препарата на основе гриба Fusarium oxysporum время приготовления составляет более 7 сут. Кроме того, предложенная композиция является дорогостоящей, так как содержит 10-65% cахаров.Known granular composition and method of stabilization of all microbiological agents used in bioprotection of crops (US Patent No. 6455036). When preparing the composition, a sorbent that absorbs water (a starch-polyacrylonitrile copolymer), a substance stabilizing the cell membrane (usually sucrose or other disaccharide), and a granulating agent, such as diatomaceous earth, are introduced into concentrated biomass grown in a liquid medium. Additionally, oil may be added. After mixing and granulation, the mixture is dried. Thus obtained preparations based on various bioagents remain viable for a year at room temperature. However, in the above example, for a preparation based on the fungus Fusarium oxysporum, the preparation time is more than 7 days. In addition, the proposed composition is expensive, as it contains 10-65% sugar.
Наиболее близкими к предлагаемому изобретению являются композиция на основе грибов-антагонистов различных родов, активных против болезней растений, и способ ее приготовления, включающий культивирование гриба в жидкой среде в течение 6-10 сут до полного высыпания спор, концентрирование биомассы на фильтре, обработку биомассы разбавленной кислотой в концентрации от 0,02 до 0,1 N для предотвращения бактериального заражения, смешивание с пористым носителем (вермикулитом, перлитом, диатомовой землей, минеральной ватой или их смесью) и высушивание на воздухе (Патент США №5068105). Предпочтительно смешивание биомассы, разбавленной кислотой, с вермикулитом в соотношении от 1:1 до 3:1. Такой препарат сохраняет активность при комнатной температуре не менее 6 недель. Недостатком этой композиции кроме длительного процесса приготовления является невысокий срок хранения. Кроме того, такой препарат перед применением требует активации путем инкубации с разбавленной кислотой и питательными веществами в течение 1-2 дней.Closest to the proposed invention are a composition based on antagonist fungi of various genera that are active against plant diseases, and a method for its preparation, including cultivating the fungus in a liquid medium for 6-10 days until the spores are completely rash, concentrating the biomass on the filter, processing the diluted biomass acid in a concentration of 0.02 to 0.1 N to prevent bacterial infection, mixing with a porous carrier (vermiculite, perlite, diatomaceous earth, mineral wool or a mixture thereof) and dried e in air (U.S. Patent №5068105). Preferably mixing the biomass diluted with acid with vermiculite in a ratio of 1: 1 to 3: 1. Such a drug remains active at room temperature for at least 6 weeks. The disadvantage of this composition in addition to a long cooking process is the low shelf life. In addition, such a preparation before use requires activation by incubation with dilute acid and nutrients for 1-2 days.
В целом, анализ уровня техники показывает, что известные микофунгицидные препараты, которые имеют достаточно большой срок хранения, представляют собой сухие композиции, содержащие живые споры грибов-антагонистов. Однако приготовление таких препаратов весьма трудоемко и занимает длительное время (до 10 суток и более). Известные препараты, которые могут быть приготовлены быстрее (в течение 1-3 сут) и с меньшими трудовыми затратами, представляют собой жидкие или пастообразные композиции, содержащие в основном вегетативную форму грибов-антагонистов. Они имеют высокую активность, но короткий срок хранения (не более 3-х месяцев).In General, the analysis of the prior art shows that the known mycofungicidal preparations, which have a sufficiently long shelf life, are dry compositions containing live spores of antagonistic fungi. However, the preparation of such drugs is very time-consuming and takes a long time (up to 10 days or more). Known preparations that can be prepared faster (within 1-3 days) and with less labor costs, are liquid or pasty compositions containing mainly the vegetative form of antagonistic mushrooms. They have a high activity, but a short shelf life (no more than 3 months).
Задачей изобретения являлась разработка ускоренного способа получения и рецептуры препарата для борьбы с болезнями растений на основе мицелия грибов-антагонистов родов Trichoderma и Gliocladium, имеющего срок хранения не менее 6 месяцев при температурах +15 - +30°С.The objective of the invention was to develop an accelerated method for the preparation and formulation of a drug for combating plant diseases based on the mycelium of fungi antagonists of the genera Trichoderma and Gliocladium, having a shelf life of at least 6 months at temperatures of +15 - + 30 ° C.
Задачу решали следующим образом. Мицелий грибов-антагонистов получали культивированием в жидкой среде с оптимизацией условий выращивания биомассы, что позволяло получить продукт в течение 1-2 суток. После концентрирования биомассы в 3-10 раз фильтрованием, сепарированием или центрифугированием в нее вводили хотя бы одно вещество, способствующее спорообразованию. Готовый препарат упаковывали, обеспечивая доступ воздуха. Такой препарат имеет высокую активность непосредственно после его приготовления. В процессе хранения происходит спорообразование грибов-антагонистов, которое приводит к самопроизвольной консервации препарата. Таким образом, при хранении препарат переходит в споровую форму, допускающую длительное хранение без существенной потери активности. В качестве веществ, способствующих спорообразованию, использовали следующие:The problem was solved as follows. Mycelium of antagonist fungi was obtained by culturing in a liquid medium with optimization of biomass growing conditions, which made it possible to obtain the product within 1-2 days. After biomass concentration by 3-10 times by filtration, separation or centrifugation, at least one substance contributing to spore formation was introduced into it. The finished product was packaged, providing air access. Such a drug has a high activity immediately after its preparation. During storage, spore formation of antagonist fungi occurs, which leads to spontaneous preservation of the drug. Thus, during storage, the drug goes into a spore form, allowing long-term storage without significant loss of activity. As substances that contribute to spore formation, the following were used:
- кислоты в концентрации, создающей рН 2.0-5.0;- acids in a concentration that creates a pH of 2.0-5.0;
- ингибиторы клеточного метаболизма в концентрации до 0,05 мас.%;- inhibitors of cell metabolism in a concentration of up to 0.05 wt.%;
- сорбенты.- sorbents.
При использовании для приготовления препаратов сорбентов в качестве веществ, способствующих спорообразованию, возможно использование исходной культуральной жидкости без предварительного концентрирования.When using sorbents for the preparation of preparations as substances that contribute to spore formation, it is possible to use the initial culture fluid without prior concentration.
Известно применение кислот в качестве консервирующих агентов для сохранения различных продуктов. Споры бактерий при рН ниже 5,0 не прорастают, и таким образом предотвращается порча продукта (Г.Шлегель. Общая микробиология. М.: Мир, 1987, с.212). В ходе разработки настоящего изобретения выяснено, что концентрация кислот в препарате, создающая рН 2.0-5.0, не вызывает гибели грибов-антагонистов, но способствует спорообразованию. В заявляемом способе приготовления препарата используется гораздо более концентрированная кислота The use of acids as preservatives for preserving various products is known. Bacterial spores do not germinate at pH below 5.0, and product spoilage is thus prevented (G. Schlegel. General Microbiology. M: Mir, 1987, p. 212). During the development of the present invention, it was found that the concentration of acids in the preparation, creating a pH of 2.0-5.0, does not cause the death of antagonist fungi, but contributes to spore formation. In the claimed method of preparation of the drug uses a much more concentrated acid
(10-100%), чем в прототипе, что позволяет достигнуть необходимой величины рН без существенного разбавления концентрированной биомассы.(10-100%) than in the prototype, which allows you to achieve the required pH without significant dilution of the concentrated biomass.
Известны ингибиторы клеточного метаболизма, которые представляют собой соли тяжелых металлов (CuSO4, AgNO3, HgCl2 и другие). Эти соединения, которые называются также ферментными ядами, при введении в культуру вызывают гибель микроорганизмов (Г.Шлегель. Общая микробиология. М.: Мир, 1987, с.204). В ходе разработки настоящего изобретения выяснено, что небольшие концентрации ингибиторов клеточного метаболизма (до 0,05 мас.%) способствуют спорообразованию мицелиальных грибов.Known inhibitors of cell metabolism, which are salts of heavy metals (CuSO 4 , AgNO 3 , HgCl 2 and others). These compounds, which are also called enzyme poisons, when introduced into the culture, cause the death of microorganisms (G. Schlegel. General Microbiology. M: Mir, 1987, p.204). During the development of the present invention, it was found that small concentrations of cellular metabolism inhibitors (up to 0.05 wt.%) Contribute to spore formation of mycelial fungi.
Известно использование сорбентов для приготовления биопрепаратов. Сорбенты используются для обеспечения необходимого водно-солевого баланса при культивировании грибов на твердых средах (Патент США №5266316), в качестве водопоглощающих агентов, способствующих стабилизации биомассы в процессе высушивания (Патент США №5068105, Патент РФ №2035144), в качестве гранулирующих агентов (Патент США №6455036) или доставочной среды (Патент США №6280719). При таком использовании сорбентов важными характеристиками являются способность удерживать влагу, малый удельный вес, обеспечение пространства для роста гриба. Эти же характеристики сорбентов важны и при использовании их в рамках заявляемого изобретения. Однако кроме этого в ходе разработки настоящего изобретения найдено, что кислотные группы, имеющиеся на поверхности многих сорбентов, способствуют спорообразованию, действуя аналогично растворам кислот. При сорбции грибов-антагонистов на поверхности таких сорбентов грибы попадают в среду, способствующую их переходу в споровую форму. Если используется сорбент, имеющий недостаточное количество кислотных групп на своей поверхности (например, активированный уголь), дополнительное количество таких групп на поверхности может быть создано специальным введением в препарат дополнительных порций кислот.It is known to use sorbents for the preparation of biological products. Sorbents are used to provide the necessary water-salt balance when cultivating mushrooms on solid media (US Patent No. 5266316), as water-absorbing agents that help stabilize biomass during drying (US Patent No. 5068105, RF Patent No. 2035144), as granulating agents ( US Patent No. 6455036) or delivery medium (US Patent No. 6280719). With this use of sorbents, important characteristics are the ability to retain moisture, low specific gravity, and providing space for fungus growth. The same characteristics of sorbents are important when using them in the framework of the claimed invention. However, in addition to the development of the present invention, it was found that acid groups present on the surface of many sorbents contribute to spore formation, acting similarly to acid solutions. During sorption of antagonist fungi on the surface of such sorbents, fungi enter the environment, which facilitates their transition to the spore form. If a sorbent is used that has an insufficient amount of acid groups on its surface (for example, activated carbon), an additional amount of such groups on the surface can be created by the special introduction of additional portions of acids into the preparation.
Для приготовления самоконсервирующегося препарата в соответствии с настоящим изобретением может быть использовано любое из перечисленных выше веществ, способствующих спорообразованию, или их смесь. В случае приготовления препарата с использованием кислоты, а также смеси кислоты и ингибитора клеточного метаболизма препарат представляет собой жидкую или пастообразную субстанцию, в ходе хранения которой грибы-антагонисты переходят в так называемые "глубинные" споровые формы. В случае приготовления препарата с использованием сорбента, а также сорбента в смеси с кислотой препарат представляет собой твердую порошкообразную или гранулированную субстанцию, в ходе хранения которой мицелий грибов-антагонистов непосредственно контактирует с кислородом воздуха и переходит в так называемые "поверхностные" споровые формы.For the preparation of a self-preserving preparation in accordance with the present invention, any of the spore-forming substances listed above or a mixture thereof can be used. In the case of a preparation using an acid, as well as a mixture of an acid and an inhibitor of cellular metabolism, the preparation is a liquid or pasty substance, during the storage of which antagonist fungi transform into the so-called "deep" spore forms. In the case of a preparation using a sorbent, as well as a sorbent mixed with acid, the preparation is a solid powdery or granular substance, during storage of which the mycelium of antagonist fungi is in direct contact with atmospheric oxygen and passes into the so-called “surface” spore forms.
В препарат могут также вводиться дополнительно источники углерода и энергии, азота, а также прилипатели-диспергаторы, обеспечивающие оптимальные физико-химические свойства (стабильность рабочей суспензии препарата и ее высокую адгезию к обрабатываемым семенам или вегетирующим растениям).In addition, sources of carbon and energy, nitrogen, as well as dispersing adhesives that provide optimal physicochemical properties (stability of the working suspension of the preparation and its high adhesion to treated seeds or vegetative plants) can also be introduced into the preparation.
Таким образом, самоконсервирующийся биопрепарат для защиты растений от болезней в соответствии с настоящим изобретением непосредственно после приготовления может иметь следующий состав (мас.%):Thus, a self-preserving biological product for protecting plants from diseases in accordance with the present invention immediately after preparation may have the following composition (wt.%):
В ходе хранения препарата его состав изменяется - биомасса грибов-антагонистов переходит из вегетативной в споровую форму, содержание источников углерода и азота уменьшается, а содержание кислот может увеличиться в ходе метаболизма грибов.During storage of the drug, its composition changes - the biomass of antagonist fungi passes from the vegetative to the spore form, the content of carbon and nitrogen sources decreases, and the acid content can increase during the metabolism of fungi.
В качестве грибов-антагонистов могут быть использованы грибы родов Trichoderma и Gliocladium.As antagonist fungi, fungi of the genera Trichoderma and Gliocladium can be used.
В качестве источников углерода и энергии используются углеводы или их смеси, а также продукты, содержащие большое их количество, например мука или отходы переработки различных сельскохозяйственных растений, например меласса или зеленая патока.As sources of carbon and energy, carbohydrates or mixtures thereof are used, as well as products containing a large amount of them, for example flour or waste from processing various agricultural plants, for example molasses or green molasses.
В качестве веществ - источников азота могут использоваться нитраты и соли аммония, различные белковые гидролизаты и т.д. или их смеси.As substances - nitrogen sources, nitrates and ammonium salts, various protein hydrolysates, etc. can be used. or mixtures thereof.
В качестве кислот могут быть использованы неорганические и органические кислоты, такие как соляная, хлорная, азотная, муравьиная, уксусная, трихлоруксусная, лимонная или их смеси.Inorganic and organic acids, such as hydrochloric, perchloric, nitric, formic, acetic, trichloroacetic, citric or mixtures thereof can be used as acids.
В качестве ингибиторов клеточного метаболизма могут применяться соли тяжелых металлов или их смеси. Предпочтительно использование солей меди как микроэлемента, необходимого для развития растений.As inhibitors of cell metabolism, heavy metal salts or mixtures thereof can be used. It is preferable to use copper salts as a trace element necessary for the development of plants.
Сорбент представляет собой пористое вещество растительной или минеральной природы, нетоксичное для биоагента. Это могут быть различные виды активированного угля, сорбент на основе растительных остатков - лесорб, силикагель, вермикулит, торф, цеолит и т.д. или их смеси.The sorbent is a porous substance of plant or mineral nature, non-toxic to the bioagent. It can be various types of activated carbon, a sorbent based on plant residues - wood sorb, silica gel, vermiculite, peat, zeolite, etc. or mixtures thereof.
В качестве веществ - прилипателей-диспергаторов могут быть использованы набухающие в воде полимеры, обладающие высокими адгезионными свойствами (например, КМЦ, поливиниловый спирт (ПВС)) и поверхностно-активные вещества, такие как твин 20, твин 80 или их смеси. Эти вещества могут вводиться в препарат в процессе его приготовления, но могут быть добавлены и непосредственно в рабочий раствор препарата перед применением.Water-swellable polymers having high adhesive properties (for example, CMC, polyvinyl alcohol (PVA)) and surfactants such as Tween 20, Tween 80, or mixtures thereof, can be used as adhesive dispersing agents. These substances can be introduced into the drug during its preparation, but can also be added directly to the working solution of the drug before use.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Культивирование штамма №4097 Trichoderma virtue Pers ex S.F.Gray в жидкой среде.Example 1. The cultivation of strain No. 4097 Trichoderma virtue Pers ex S.F. Gray in a liquid medium.
3-5 миллионов поверхностных конидий гриба помещают в колбы объемом 750 мл с 150 мл органосинтетической среды следующего состава (на 1 л среды):3-5 million superficial conidia of the fungus are placed in 750 ml flasks with 150 ml of organosynthetic medium of the following composition (per 1 liter of medium):
Культивируют на качалке при 220 об/мин при 28°С в течение 20-48 часов. В регулярно отбираемых пробах культуральной жидкости контролируют значение рН и сухой вес биомассы гриба. Через 20-40 часов культура гриба представляет собой созревший мицелий, который становится зернистым. При микроскопировании культура гриба в этот период представлена в основном мицелием, содержащим до 10% хламидоспор. рН при этом остается в пределах 7,0±0,5.Cultivate on a shaker at 220 rpm at 28 ° C for 20-48 hours. In regularly selected samples of the culture fluid, the pH value and dry weight of the fungus biomass are monitored. After 20-40 hours, the fungus culture is a ripe mycelium, which becomes granular. During microscopy, the culture of the fungus during this period is mainly represented by mycelium containing up to 10% chlamydospores. the pH remains within 7.0 ± 0.5.
Пример 2. Получение концентрированной биомассы на основе культуральной жидкости штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 2. Obtaining concentrated biomass based on the culture fluid of strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
Культуральную жидкость по примеру 1 концентрируют сепарированием, центрифугированием или фильтрованием. Полученная биомасса содержит 5-15% сухих веществ.The culture fluid of example 1 is concentrated by separation, centrifugation or filtration. The resulting biomass contains 5-15% solids.
Пример 3. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 3. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют кислоту соляную (25%) до рН 2,0 и сахарозу в количестве 5% от веса биомассы. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер. Препараты хранят при комнатной температуре и относительной влажности не менее 30%.To the biomass obtained as described in example 2, hydrochloric acid (25%) was added to a pH of 2.0 and sucrose in an amount of 5% by weight of the biomass. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container. The drugs are stored at room temperature and relative humidity of at least 30%.
Пример 4. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 4. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют 85% крахмала, муравьиную кислоту до рН 5,0 и 0,005% AgNO3. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, add 85% starch, formic acid to pH 5.0 and 0.005% AgNO 3 . The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 5. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 5. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют кислоту хлорную (20%) до рН 2,5 и CuSO4×5H2O 0,01%. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, add perchloric acid (20%) to a pH of 2.5 and CuSO 4 × 5H 2 O of 0.01%. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 6. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 6. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют декстран в количестве 50% от веса биомассы, кислоту уксусную до рН 5,0 и КМЦ - 5%. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 2 часа для разбухания целлюлозы. Массу периодически перемешивают, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, add dextran in an amount of 50% by weight of the biomass, acetic acid to pH 5.0 and CMC - 5%. The mixture is thoroughly mixed and left for 2 hours to swell the pulp. The mass is periodically mixed, then placed in a loose container.
Пример 7. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 7. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют мелассу в количестве 30% от веса биомассы, кислоту уксусную до рН 5,0, затем кислоту лимонную до рН 4,0, CuSO4×5H2O 0,05% и КМЦ - 2%. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 2 часа для разбухания целлюлозы. Массу периодически перемешивают, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, molasses was added in an amount of 30% by weight of the biomass, acetic acid to pH 5.0, then citric acid to pH 4.0, CuSO 4 × 5H 2 O 0.05% and CMC - 2%. The mixture is thoroughly mixed and left for 2 hours to swell the pulp. The mass is periodically mixed, then placed in a loose container.
Пример 8. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 8. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют кислоту соляную (15%) до рН 3,0, лактозу в количестве 20% и крахмал в количестве 5% от веса биомассы, 0,01% Ag2SO4 и 5% ПВС. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, hydrochloric acid (15%) is added to pH 3.0, lactose in an amount of 20% and starch in an amount of 5% by weight of biomass, 0.01% Ag 2 SO 4 and 5% PVA. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 9. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma wide Pers ex S.F.Gray.Example 9. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma wide Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют кислоту соляную (15%) до рН 5,0, муку кукурузную в количестве 30% от веса биомассы, 0,01% AgNO3 и 0,04% CuSO4×5H2O. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.Hydrochloric acid (15%) was added to the biomass obtained as described in Example 2 to pH 5.0, corn flour in an amount of 30% by weight of biomass, 0.01% AgNO 3 and 0.04% CuSO 4 × 5H 2 O. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 10. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 10. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют кислоту трихлоруксусную до рН 3,5, глюкозу в количестве 10% от веса биомассы, 5% КМЦ и 5% твин 20. Смесь тщательно перемешивают, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.Trichloroacetic acid to pH 3.5, glucose in the amount of 10% by weight of biomass, 5% CMC and 5% tween 20 are added to the biomass obtained as described in example 2, the mixture is thoroughly mixed, then placed in a tightly closed container.
Пример 11. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 11. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют кислоту соляную (15%) до рН 3,0, лактозу в количестве 20% от веса биомассы, 0,01% Cu(NO3)2, 2% твина 20 и 3% КМЦ. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 2 часа для разбухания целлюлозы. Массу периодически перемешивают, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, hydrochloric acid (15%) is added to pH 3.0, lactose in an amount of 20% by weight of the biomass, 0.01% Cu (NO 3 ) 2 , 2% tween 20 and 3 % CMC. The mixture is thoroughly mixed and left for 2 hours to swell the pulp. The mass is periodically mixed, then placed in a loose container.
Пример 12. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 12. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 1, добавляют лесорб - сорбент на основе растительных остатков в количестве 90% от веса биомассы. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 1, add sorbent - sorbent based on plant residues in an amount of 90% by weight of biomass. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 13. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 13. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют 10% силикагеля, 50% крахмала и 1% NH4Cl. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, add 10% silica gel, 50% starch and 1% NH 4 Cl. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 14. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 14. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют 10% фруктозы, кислоту соляную (20%) до рН 2,0, 1% нитрата калия и вермикулит в количестве 40%. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, add 10% fructose, hydrochloric acid (20%) to a pH of 2.0, 1% potassium nitrate and vermiculite in an amount of 40%. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 15. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 15. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют 30% крахмала, 10% силикагеля, 20% торфа и 1% NH4H2PO4. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, add 30% starch, 10% silica gel, 20% peat and 1% NH 4 H 2 PO 4 . The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 16. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 16. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют 20% глюкозы, 20% активированного угля, 0,5% NH4Cl и 0,5% КNО3. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, add 20% glucose, 20% activated carbon, 0.5% NH 4 Cl and 0.5% KNO 3 . The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 17. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 17. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют муку кукурузную в количестве 20% от веса биомассы, кислоту изолимонную до рН 5,0, 15% активированного угля и КМЦ - 5%. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 2 часа для разбухания целлюлозы, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, corn flour is added in an amount of 20% by weight of the biomass, isocitric acid to pH 5.0, 15% activated carbon and CMC - 5%. The mixture is thoroughly mixed and left for 2 hours to swell the pulp, then placed in a loose container.
Пример 18. Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F.Gray.Example 18. Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.
К биомассе, полученной, как описано в примере 2, добавляют лактозу в количестве 25% от веса биомассы, кислоту уксусную до рН 5,0, затем кислоту муравьиную до рН 4,0, 20% цеолита и 1% NH4Cl. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 2, lactose is added in an amount of 25% by weight of the biomass, acetic acid to pH 5.0, then formic acid to pH 4.0, 20% zeolite and 1% NH 4 Cl. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 19. Культивирование гриба Trichoderma viride штамм 30 в жидкой среде.Example 19. Cultivation of the fungus Trichoderma viride strain 30 in a liquid medium.
3-5 миллионов поверхностных конидий гриба помещают в колбы объемом 750 мл с 150 мл органосинтетической среды следующего состава(на 1 л среды):3-5 million superficial conidia of the fungus are placed in 750 ml flasks with 150 ml of organosynthetic medium of the following composition (per 1 liter of medium):
Культивируют на качалке при 180 об/мин при 30°С в течение 20-48 часов. В регулярно отбираемых пробах культуральной жидкости контролируют значение рН и сухой вес биомассы гриба. Через 20-40 часов культура гриба представляет собой созревший мицелий. Биомассу гриба концентрируют, отделяя остатки питательной среды сепарированием, центрифугированием или фильтрованием.Cultivate on a shaker at 180 rpm at 30 ° C for 20-48 hours. In regularly selected samples of the culture fluid, the pH value and dry weight of the fungus biomass are monitored. After 20-40 hours, the fungus culture is a ripe mycelium. The fungal biomass is concentrated, separating the remains of the nutrient medium by separation, centrifugation or filtration.
Пример 20. Получение препарата на основе биомассы гриба Trichoderma viride штамм 30.Example 20. Obtaining a drug based on the biomass of the fungus Trichoderma viride strain 30.
К биомассе, полученной, как описано в примере 19, добавляют кислоту хлорную до рН 2,0. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in Example 19, perchloric acid was added to a pH of 2.0. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 21. Получение препарата на основе биомассы гриба Trichoderma viride штамм 30.Example 21. Obtaining a drug based on the biomass of the fungus Trichoderma viride strain 30.
К биомассе, полученной, как описано в примере 19, добавляют кислоту азотную (10%) до рН 3,0, крахмал в количестве 15% от веса биомассы, 0,0005% HgCl2 и 10% твина 80. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.Nitric acid (10%) was added to the biomass obtained as described in Example 19 to a pH of 3.0, starch in an amount of 15% by weight of biomass, 0.0005% HgCl 2 and 10% tween 80. The mixture was thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 22. Получение препарата на основе биомассы гриба Trichoderma viride штамм 30.Example 22. Obtaining a drug based on the biomass of the fungus Trichoderma viride strain 30.
К биомассе, полученной, как описано в примере 19, добавляют 90% лесорба. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 19, add 90% of the logger. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 23. Получение препарата на основе биомассы гриба Trichoderma viride штамм 30.Example 23. Obtaining a drug based on the biomass of the fungus Trichoderma viride strain 30.
К биомассе, полученной, как описано в примере 19, добавляют мелассу в количестве 10% от веса биомассы, 1% гидролизата БВК, 10% поливинилового спирта и 30% торфа. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 19, molasses is added in an amount of 10% by weight of the biomass, 1% BVK hydrolyzate, 10% polyvinyl alcohol and 30% peat. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 24. Культивирование гриба Gliocladium virens штамм 19 в жидкой среде.Example 24. The cultivation of the fungus Gliocladium virens strain 19 in a liquid medium.
3-5 миллионов поверхностных конидий гриба помещают в колбы объемом 750 мл с 150 мл органосинтетической среды следующего состава (г на 1 л среды):3-5 million superficial conidia of the fungus are placed in 750 ml flasks with 150 ml of organosynthetic medium of the following composition (g per 1 liter of medium):
Культивируют на качалке при 180 об/мин при 30°С в течение 20-48 часов. В регулярно отбираемых пробах культуральной жидкости контролируют значение рН и сухой вес биомассы гриба. Через 20-40 часов культура гриба представляет собой созревший мицелий, начинается образование глубинных конидий и хламидоспор. Биомассу гриба концентрируют, отделяя остатки питательной среды сепарированием, центрифугированием или фильтрованием до содержания сухих веществ 15-25%.Cultivate on a shaker at 180 rpm at 30 ° C for 20-48 hours. In regularly selected samples of the culture fluid, the pH value and dry weight of the fungus biomass are monitored. After 20-40 hours, the fungus culture is a ripe mycelium, the formation of deep conidia and chlamydospores begins. The fungal biomass is concentrated, separating the remains of the nutrient medium by separation, centrifugation or filtration to a solids content of 15-25%.
Пример 25. Получение препарата на основе биомассы гриба Gliocladium virens штамм 19.Example 25. Obtaining a preparation based on the biomass of the fungus Gliocladium virens strain 19.
К биомассе, полученной, как описано в примере 24, добавляют кислоту соляную до рН 2,0. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 24, hydrochloric acid was added to a pH of 2.0. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 26. Получение препарата на основе биомассы гриба Gliocladium virens штамм 19.Example 26. Obtaining a drug based on the biomass of the fungus Gliocladium virens strain 19.
К биомассе, полученной, как описано в примере 24, добавляют кислоту трихлоруксусную (15%) до рН 3,0, лактозу в количестве 20,0% от веса биомассы, 0,005% Ag2SO4, 10% твина 20. Смесь тщательно перемешивают, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in example 24, trichloroacetic acid (15%) is added to pH 3.0, lactose in an amount of 20.0% by weight of biomass, 0.005% Ag 2 SO 4 , 10% tween 20. The mixture is thoroughly mixed , then placed in a tightly closed container.
Пример 27. Получение препарата на основе биомассы гриба Gliocladium virens штамм 19.Example 27. Obtaining a preparation based on the biomass of the fungus Gliocladium virens strain 19.
К биомассе, полученной, как описано в примере 24, добавляют 90% лесорба. Смесь тщательно перемешивают и помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in Example 24, 90% of the logger is added. The mixture is thoroughly mixed and placed in a loose container.
Пример 28. Получение препарата на основе биомассы гриба Gliocladium virens штамм 19.Example 28. Obtaining a drug based on the biomass of the fungus Gliocladium virens strain 19.
К биомассе, полученной, как описано в примере 24, добавляют кислоту лимонную до рН 5,0, зеленую патоку в количестве 10% от веса биомассы, 10% цеолита, 5% твина 20 и 3% КМЦ. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 2 часа для разбухания целлюлозы. Массу периодически перемешивают, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.To the biomass obtained as described in Example 24, citric acid is added to pH 5.0, green molasses in an amount of 10% by weight of biomass, 10% zeolite, 5% tween 20 and 3% CMC. The mixture is thoroughly mixed and left for 2 hours to swell the pulp. The mass is periodically mixed, then placed in a loose container.
Пример 28(а). Получение препарата на основе штамма №4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray.Example 28 (a). Obtaining a drug based on strain No. 4097 Trichoderma viride Pers ex S.F. Gray
К 100 г биомассы, полученной, как описано в примере 2, добавляют 3,2 мл 20% соляной кислоты до рН 3,0, 10 г крахмала, 5 г ПВС и 10 мг CuSO4×5H2O. Смесь тщательно перемешивают, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.To 100 g of biomass obtained as described in example 2, add 3.2 ml of 20% hydrochloric acid to a pH of 3.0, 10 g of starch, 5 g of PVA and 10 mg of CuSO 4 × 5H 2 O. The mixture is thoroughly mixed, then placed in a loose container.
Полученный препарат содержит: 84,36% биомассы, 2,97% кислоты, 8,44% крахмала, 4,22% ПВС и 0,01% CuSO4×5H2O.The resulting preparation contains: 84.36% biomass, 2.97% acid, 8.44% starch, 4.22% PVA and 0.01% CuSO 4 × 5H 2 O.
Пример 28(6). Получение препарата на основе биомассы гриба Gliocladium virens штамм 19.Example 28 (6). Obtaining a preparation based on the biomass of the fungus Gliocladium virens strain 19.
К 100 г биомассы, полученной, как описано в примере 24, добавляют 20 г торфа, перемешивают, добавляют 5,5 мл ледяной уксусной кислоты до рН 4,5, и 10 г глюкозы. Смесь тщательно перемешивают, затем помещают в неплотно закрытый контейнер.To 100 g of biomass obtained as described in example 24, add 20 g of peat, mix, add 5.5 ml of glacial acetic acid to pH 4.5, and 10 g of glucose. The mixture is thoroughly mixed, then placed in a loose container.
Полученный препарат содержит: 73,65% биомассы, 14,73% торфа (сорбент), 4,25% кислоты и 7,37% глюкозы.The resulting preparation contains: 73.65% biomass, 14.73% peat (sorbent), 4.25% acid and 7.37% glucose.
Полученные таким образом препараты на основе грибов-антагонистов сохраняют биологическую активность не менее 6 месяцев при температуре +15-+30°С. Влияние компонентов препарата на сохранение биологической активности гриба приведено в таблице.Thus obtained preparations based on antagonist fungi retain biological activity for at least 6 months at a temperature of + 15- + 30 ° С. The effect of the components of the drug on the preservation of the biological activity of the fungus is shown in the table.
Для сравнения с препаратами, описанными выше, на основе биомассы грибов-антагонистов, полученной по примерам 2, 19 и 24, были приготовлены препараты, не содержащие веществ, способствующих переходу вегетативной формы грибов в споровые формы. Составы этих препаратов и результаты изменения их активности в процессе хранения приведены в таблице под номерами 29-34.For comparison with the preparations described above, based on the biomass of antagonist fungi obtained in examples 2, 19 and 24, preparations were prepared that did not contain substances that contribute to the transition of the vegetative form of fungi to spore forms. The compositions of these drugs and the results of changes in their activity during storage are shown in the table under the numbers 29-34.
Пример 29. Испытания фунгицидной активности препаратов на основе грибов-антагонистов.Example 29. Tests of the fungicidal activity of preparations based on antagonist fungi.
Фунгицидную активность препаратов определяли методом «встречных культур» (Практикум по микробиологии. Под ред. Н.С.Егорова. М.: Изд-во МГУ, 1976, 307 с.), который позволяет оценить гиперпаразитическую активность любого штамма микофильного гриба при культивировании анализируемого штамма совместно с индикаторным штаммом Fusarium graminearum, который является возбудителем фузариоза колоса зерновых культур.The fungicidal activity of the preparations was determined by the method of “counter cultures” (Workshop on Microbiology. Edited by N. S. Egorov. M.: Moscow State University Publishing House, 1976, 307 pp.), Which allows one to evaluate the hyperparasitic activity of any strain of mycophilic fungus during cultivation of the analyzed strain in conjunction with the indicator strain Fusarium graminearum, which is the causative agent of fusarium ear of cereal crops.
Исследования проводили в чашках Петри с картофельно-декстрозным агаром (КДА). Для проведения исследования использовали стерильные чашки Петри, которые в асептических условиях заливали КДА по 15 см3 в каждую. Чашки с питательной средой проверяли на стерильность, выдерживая в термостате при (26±1)°C в течение (1÷2) суток. Чашки, где был обнаружен рост микрофлоры, выбраковывали.Studies were performed in Petri dishes with potato-dextrose agar (KDA). For the study, sterile Petri dishes were used, which under aseptic conditions poured KDA 15 cm 3 each. Cups with a nutrient medium were tested for sterility, keeping in a thermostat at (26 ± 1) ° C for (1 ÷ 2) days. Cups where microflora growth was detected were discarded.
Индикаторную культуру Fusarium graminearum хранили в пробирках со скошенным агаром на среде Чапека в течение 6 месяцев без пересева. В пробирку наливали The indicator culture of Fusarium graminearum was stored in test tubes with beveled agar in Chapek's medium for 6 months without reseeding. Poured into a test tube
10-20 см3 физиологического раствора и смывали культуру с агара. По камере Горяева определяли титр спор в полученной суспензии и расчетным количеством физиологического раствора доводили титр суспензии до концентрации 106 спор/см3.10-20 cm 3 physiological saline and washed the culture from agar. The Goryaev’s chamber determined the spore titer in the resulting suspension and adjusted the suspension titer to a concentration of 10 6 spores / cm 3 with the calculated amount of physiological solution.
Для исследования фунгицидной активности использовали суспензии препаратов в концентрации 1%. На поверхность питательной среды засевали суспензию исследуемого препарата и суспензию индикаторного штамма штрихом с помощью микробиологической петли. Посев осуществляли таким образом, что индикаторный штамм и исследуемый препарат находились напротив друг друга на расстоянии примерно 2 см от центра чашки каждый. Анализ проводили в 5-и повторностях. Засеянные чашки помещали в термостат и культивировали в течение 3 суток при температуре (28±2)°C. Затем чашки вынимали из термостата и еще 3 суток выдерживали при комнатной температуре (21±1,5)°C при рассеянном освещении для стимулирования спорообразования.To study the fungicidal activity, drug suspensions were used at a concentration of 1%. A suspension of the test drug and suspension of the indicator strain were streaked with a microbiological loop on the surface of the nutrient medium. Sowing was carried out in such a way that the indicator strain and the test drug were opposite each other at a distance of about 2 cm from the center of the plate each. The analysis was carried out in 5 replicates. Inoculated plates were placed in a thermostat and cultured for 3 days at a temperature of (28 ± 2) ° C. Then the cups were removed from the thermostat and kept for 3 days at room temperature (21 ± 1.5) ° C under diffuse lighting to stimulate spore formation.
Через 6 суток с момента посева проводили анализ результатов. Для этого определяли площадь той части чашки Петри, где выросла культура гриба-антагониста. Фунгицидная активность исследуемого препарата, выраженная в процентах, определялась как среднее арифметическое величин площадей, занимаемых культурой гриба-антагониста, полученных в повторностях, по отношению к общей площади поверхности чашки Петри.After 6 days from the time of sowing, the results were analyzed. For this, the area of that part of the Petri dish where the culture of the antagonist fungus grew was determined. The fungicidal activity of the studied drug, expressed as a percentage, was determined as the arithmetic average of the areas occupied by the culture of the antagonist fungus obtained in duplicate relative to the total surface area of the Petri dish.
Изменение фунгицидной активности препаратов на основе грибов-антагонистов в процессе храненияTable
Changes in the fungicidal activity of drugs based on antagonist fungi during storage
Как следует из данных таблицы, предлагаемый комплекс компонентов способствует стабилизации биологической активности препаратов на основе грибов-антагонистов в процессе хранения за счет образования споровых форм. Если к биомассе не было добавлено никаких кислот или сорбентов (примеры 1-2, 19, 24, 29-34), то споровые формы в процессе хранения если и образовывались, то в незначительных количествах и быстро инактивировались.As follows from the table, the proposed complex of components helps to stabilize the biological activity of drugs based on antagonist fungi during storage due to the formation of spore forms. If no acids or sorbents were added to the biomass (examples 1-2, 19, 24, 29-34), then the spore forms during the storage process if formed, then in small quantities and quickly inactivated.
Источники информацииInformation sources
1. Апсите А.Ф., Швинка Ю.Э., Стрикауска С.В., Виестурс У.Э., Лисовска А.Я., Бичевскис Е.Я., Свока И.М., Беника Р.Г. Использование триходермина для защиты растений от фитопатогенных микромицетов. Вест. с.-х. науки №9 (397), c.114-118, 1989.1. Apsite A.F., Shvinka Yu.E., Strikauska S.V., Viesturs U.E., Lisovska A.Ya., Bichevskis E.Ya., Swoka I.M., Benika R.G. The use of trichodermin to protect plants from phytopathogenic micromycetes. West. S.-kh. Science No. 9 (397), c.114-118, 1989.
2. Патент РФ №2186847, МПК A01N 63/04.2. RF patent No. 2186847, IPC A01N 63/04.
3. Патент РФ №2035145, МПК A01N 63/04.3. RF patent No. 2035145, IPC A01N 63/04.
4. Патент РФ №2170511, МПК A01N 63/04, C12N 01/14.4. RF patent No. 2170511, IPC A01N 63/04, C12N 01/14.
5. Патент РФ №2094991, МПК A01N 63/04, A01G 7/00.5. RF patent No. 2094991, IPC A01N 63/04, A01G 7/00.
6. Патент США №5968504, МПК A01N 25/00, A01N 63/00, С07С 1/2, C12N 01/00.6. US patent No. 5968504, IPC A01N 25/00, A01N 63/00, C07C 1/2, C12N 01/00.
7. Патент США №5266316, МПК A01N 63/00, C12N 01/20.7. US Patent No. 5266316, IPC A01N 63/00, C12N 01/20.
8. Патент РФ №2127521, МПК A01N 63/04, C12N 01/14.8. RF patent №2127521, IPC A01N 63/04, C12N 01/14.
9. Патент США №6455036, МПК A01N 63/00, C12N 07/00, C12N 01/14, С12М 07/01.9. US Patent No. 6455036, IPC A01N 63/00, C12N 07/00, C12N 01/14, C12M 07/01.
10. Патент США №5068105, МПК А61К 35/70, C12N 01/14, A01N 63/04.10. US patent No. 5068105, IPC A61K 35/70, C12N 01/14, A01N 63/04.
11. Г.Шлегель. Общая микробиология. М.: Мир, 1987, 566 с.11. G. Schlegel. General microbiology. M.: Mir, 1987, 566 p.
12. Патент РФ №2035144, МПК A01N 63/04.12. RF patent No. 2035144, IPC A01N 63/04.
13. Патент США №6280719, МПК A01N 25/00, A01N 65/00, C07G 17/00, C12N 01/00, C12N 01/20.13. US patent No. 6280719, IPC A01N 25/00, A01N 65/00, C07G 17/00, C12N 01/00, C12N 01/20.
14. Практикум по микробиологии. Под ред. Н.С.Егорова. М.: Изд-во МГУ, 1976, 307 с.14. Workshop on microbiology. Ed. N.S. Egorova. M .: Publishing house of Moscow State University, 1976, 307 p.
Claims (16)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008114859/13A RU2380906C2 (en) | 2008-04-18 | 2008-04-18 | Self-preserved biological preparation for protection of plants against diseases (versions) and method for its production (versions) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008114859/13A RU2380906C2 (en) | 2008-04-18 | 2008-04-18 | Self-preserved biological preparation for protection of plants against diseases (versions) and method for its production (versions) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008114859A RU2008114859A (en) | 2009-10-27 |
| RU2380906C2 true RU2380906C2 (en) | 2010-02-10 |
Family
ID=41352453
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008114859/13A RU2380906C2 (en) | 2008-04-18 | 2008-04-18 | Self-preserved biological preparation for protection of plants against diseases (versions) and method for its production (versions) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2380906C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2467556C1 (en) * | 2011-03-29 | 2012-11-27 | Государственное научное учреждение Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский институт садоводства и виноградарства Россельхозакадемии | Method of biological control of alternaria of grape |
| RU2658430C1 (en) * | 2016-12-26 | 2018-06-21 | Общество с ограниченной ответственностью "Органик парк" | Method for obtaining a biological preparation for plant treatment |
-
2008
- 2008-04-18 RU RU2008114859/13A patent/RU2380906C2/en not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2467556C1 (en) * | 2011-03-29 | 2012-11-27 | Государственное научное учреждение Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский институт садоводства и виноградарства Россельхозакадемии | Method of biological control of alternaria of grape |
| RU2658430C1 (en) * | 2016-12-26 | 2018-06-21 | Общество с ограниченной ответственностью "Органик парк" | Method for obtaining a biological preparation for plant treatment |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2008114859A (en) | 2009-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9090884B2 (en) | Formulations of viable microorganisms and their methods of production and use | |
| US10993443B2 (en) | Methods and compositions for improving soybean yield | |
| EP3194564B1 (en) | Trichoderma compositions and methods of use | |
| EP3834616A1 (en) | Methods and compositions for improving corn yield | |
| Sabuquillo et al. | Development of a dried Penicillium oxalicum conidial formulation for use as a biological agent against Fusarium wilt of tomato: Selection of optimal additives and storage conditions for maintaining conidial viability | |
| US11832611B2 (en) | Methods of pest control | |
| Wearing et al. | Water potential and the saprophytic growth of Fusarium roseum “graminearum” | |
| Lewis et al. | Formulation of the Biocontrol FungusCladorrhinum foecundissimumto Reduce Damping-Off Diseases Caused byRhizoctonia solaniandPythium ultimum1 | |
| Connick et al. | Stability of microsclerotial inoculum of Colletotrichum truncatum encapsulated in wheat flour–kaolin granules | |
| US20030103944A1 (en) | Sprayable formulations of mycelium-based biological control agents produced by solid state fermention | |
| US20190133138A1 (en) | Granules containing filamentary fungi and method of preparation thereof | |
| RU2380906C2 (en) | Self-preserved biological preparation for protection of plants against diseases (versions) and method for its production (versions) | |
| Kapoor | Biocontrol potential of Trichoderma spp. against important soilborne diseases of vegetable crops | |
| AU2005223976B2 (en) | Process for the production of granules or pellets containing filamentous fungi | |
| Chu et al. | Effects of hexadecanoic acid on Fusarium oxysporum f. sp. niveum control and on growth of watermelon (Citrullus lanatus) | |
| JP7177601B2 (en) | Method for producing microbial pesticide | |
| Sutthisa et al. | Development of Trichoderma formulation and application to control durian anthracnose disease | |
| US5587158A (en) | Biological control for weed trees | |
| CN113367160B (en) | Application of trichoderma viride preparation in preventing and treating tomato gray mold | |
| Ahonsi et al. | Selection of non-pathogenic ethylene-producing rhizobacteria for accelerated depletion of Striga hermonthica seed bank | |
| CN108566950A (en) | A kind of efficient bactericidal composite of second containing pheno mycin and hexaconazole | |
| CN114766493A (en) | Bactericidal composition containing agricultural antibiotic and application thereof | |
| CN118104690A (en) | Composition containing bacillus cereus BcSc and tea cake powder and application thereof | |
| JP2001072522A (en) | Starch preparation for fungus of genus fusarium and preservation of fungus of genus fusarium | |
| Mohammed | Use of Bioherbicides for Orobanche spp. Control |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110419 |