BRPI0921699B1

BRPI0921699B1 - Complexo antioxidante, composição cosmética contendo o referido complexo e uso deste complexo

Info

Publication number: BRPI0921699B1
Application number: BRPI0921699-5A
Authority: BR
Inventors: Patricia Da Luz Moreira; Kelen Fabiola Arroteia; Cintia ROSA FERRARI; Adriano Tadeu Siqueira Jorge; Juliana Carvalhaes Lago; Jean Luc Gesztesi
Original assignee: Natura Cosmeticos S.A.
Priority date: 2008-10-30
Filing date: 2009-10-30
Publication date: 2022-09-20
Also published as: EP2344118B1; FR2937866B1; WO2010048686A1; CA2741409A1; FR2937866A1; BRPI0921699A2; ES2670335T3; EP2344118A1; US20120171308A1; US8383168B2; BRPI0921699A8

Abstract

COMPLEXO ANTIOXIDANTE, COMPOSIÇÕES COSMÉTICA E FARMACÊUTICA CONTENDO O REFERIDO COMPLEXO E USO DESTE COMPLEXO. A presente invenção refere-se a um complexo antioxidante que apresenta um efeito sinérgico entre seus ingredientes. A referida mistura compreende: a) vitamina E e/ou seus derivados; b) extrato de chá-verde e/ou seus derivados; e c) extrato de cacau. Exemplos de composições cosméticas e farmacêuticas compreendendo o dito complexo antioxidante e um veículo fisiologicamente aceitável também são descritos. O complexo antioxidante da presente invenção bem como as composições citadas acima auxiliam na proteção e prevenção de danos celulares e cutâneos resultantes da ação de radicais livres, bem como exercem atividade protetora do DNA,de proteínas e de membrana celular.

Description

[0001] A presente invenção refere-se a um complexo antioxidante para auxiliar na proteção e prevenção de danos celulares e cutâneos resultantes da ação de radicais livres.

[0002] A presente invenção refere-se ainda a composições cosméticas e farmacêuticas que compreendem o referido complexo antioxidante.

Descrição do estado da técnica

[0003] O processo de produção de energia nas células ocorre em organelas citoplasmáticas especializadas, as mitocôndrias. Este processo é, na verdade, uma reação de oxirredução gradual na qual, moléculas de glicose (C6H12O6) são oxidadas, dando origem a moléculas de gás carbônico (CO2) e moléculas de oxigênio são reduzidas dando origem a moléculas de água (H2O).

[0004] A oxidação completa de oxigênio até água ocorre em etapas, sendo que há a formação de intermediários altamente energéticos.

[0005] Esses intermediários são chamados de espécies reativas de oxigênio (EROs ou ROS - reactive oxygen species) e têm como principal característica uma alta reatividade. A maior parte dessas moléculas pode ser também classificada como radical livre, que são moléculas capazes de existência independente e que possuem um ou mais elétrons desemparelhados. Essa característica é a principal responsável pela reatividade desses radicais, uma vez que, por possuir elétron(s) desemparelhado(s), elas têm a capacidade de abstrair esses elétrons de outras moléculas, oxidando-as.

[0006] As principais espécies reativas de oxigênio geradas nas células são:

[0007] Radical Superóxido (O2-): formado logo após a primeira redução do oxigênio, ocorre em quase todas as células eucarióticas e possui importante participação em lesões biológicas secundárias.

[0008] Radical Hidroperoxila (HO2-): forma protonada do ânion superóxido, é mais reativo que o primeiro, porém, está pouco presente no pH fisiológico.

[0009] Radical Hidroxila (OH-): ROS mais reativo em sistemas biológicos que é formado a partir do peróxido de hidrogênio - H2O2, que não é um radical livre, mas é altamente tóxico para as células, além de ser importante nas reações de oxidação, pois é o substrato que dá origem ao radical hidroxila. Tem alta capacidade de oxidação de macromoléculas celulares como DNA, proteínas e lipídeos de membrana.

[00010] Oxigênio singleto (1O2): forma excitada do oxigênio molecular - sem elétrons desemparelhados -, formado em reações de sensibilização.

[00011] Como essas moléculas são altamente reativas e prejudiciais às células, porém, são formadas em grande quantidade no processo de respiração celular para produção de energia, o organismo possui mecanismos de defesa próprios para reduzir a quantidade disponível desses radicais. O sistema de defesa enzimático compreende as enzimas que catalisam a redução do oxigênio e de seus intermediários: SOD (superóxido dismutase), catalase, glutationa peroxidase, além das peroxirredoxinas. O sistema não enzimático compreende, basicamente, o ácido ascórbico (vitamina C) e o tocoferol (vitamina E).

[00012] Mesmo possuindo um sistema de defesa próprio, em diversas situações, o nível de radicais livres formados pode exceder a capacidade natural de neutralização do organismo, levando a um excesso de radicais livres que é chamado de estresse oxidativo.

[00013] Na pele, esse estado pode acontecer como consequência à exposição à radiação UV, em processos inflamatórios ou no processo de envelhecimento, quando as defesas antioxidantes diminuem e a geração de radicais livres aumenta.

[00014] Oxidação de Lipídeos (lipoperoxidação): A oxidação de lipídeos ou lipoperoxidação é uma reação em cadeia dividida em três fases: iniciação, propagação e terminação. Na iniciação, um radical livre abstrai um elétron de um lipídeo, oxidando-o e transformando-o em um radical lipídico. Na propagação, esse radical lipídico, na presença de oxigênio, gera o radical peroxila, que dá origem aos hidroperóxidos lipídicos e finalmente aos radicais alcoxila. Nesta fase, os radicais intermediários formados atacam novas moléculas de lipídeo, fazendo com que os danos propaguem-se de forma muito rápida. A reação de peroxidação lipídica termina quando um radical interage com o outro, formando os peróxidos cíclicos. Essa reação pode provocar a morte da célula, uma vez que a membrana celular é responsável pela seletividade na permeabilidade celular.

[00015] Oxidação de DNA: As bases do DNA também podem ser oxidadas pelo ataque de radicais livres. Essas modificações são, em geral, reparadas por mecanismos celulares específicos, porém, dependendo da extensão da lesão e das modificações moleculares, elas podem evoluir como mutações e contribuir para o desenvolvimento do câncer de pele, por exemplo.

[00016] Oxidação de Proteínas: As proteínas também são alvos do ataque oxidativo de radicais livres. Neste caso, ocorrem modificações nos aminoácidos, que provocam alterações estruturais (quebra da cadeia polipeptídica e modificação na cadeia lateral dos aminoácidos) e muitas vezes funcionais nestas proteínas. Essas alterações convertem as proteínas em derivados muito mais sensíveis à degradação proteolítica.

[00017] Como é do conhecimento dos técnicos versados na matéria, uma grande variedade de combinações entre ingredientes antioxidantes encontra-se disponível para aplicação cosmética e/ou farmacêutica.

[00018] O documento coreano KR 20010002411 descreve uma composição cosmética que apresenta efeitos antioxidantes, baseada na combinação entre os extratos de cacau, folhas de chá verde e grãos de café, apresentando eficácia na conservação de artigos que contêm vitamina C, além de apresentar baixa irritação à pele do usuário.

[00019] O documento japonês JP 2264720 revela uma preparação supressora eficaz no controle e inibição dos danos causados pela formação de oxigênio ativo nas células. A referida preparação é baseada em uma mistura que apresenta “substância” + vitamina, ambas resistentes à oxidação. São citados como opções de “substâncias” óxido-resistentes o pó de chá (não especificado) e o pó de cacau.

[00020] O documento norte-americano US 2005/048143 refere-se a uma composição antioxidante que compreende um flavonoide, como a quercetina, em combinação com pelo menos uma mistura de componentes derivados da vitamina E. Adicionalmente, a dita composição pode compreender extrato de chá verde.

[00021] O documento norte-americano US 2007/116838 descreve uma composição adoçante funcional que compreende, dentre os seus ingredientes, pelo menos um antioxidante que pode ser selecionado dentre um grupo especificado, onde são mencionados: extrato de cacau, extrato de chá verde, compostos derivados de tocoferol, derivados xantínicos, resveratrol, entre outros. Este documento não trata em detalhes dos antioxidantes nem mesmo de combinações entre eles.

[00022] O documento norte-americano US 2008/089941 revela uma composição de entrega de fucoidan parcialmente hidrolisado ou sulfonado que compreende, dentre os seus ingredientes, um antioxidante selecionado dentre um grupo especificado, onde são mencionados a vitamina E, rutina, cacau e resveratrol.

[00023] O documento norte-americano US 2004/208902 descreve uma composição cosmética e/ou farmacêutica que compreende, dentre os seus ingredientes, uma zeólita e pelo menos um ingrediente ativo promotor de benefícios tópicos que necessite de um sistema de liberação controlada. Esta composição compreende antioxidantes que podem ser selecionados dentre um grupo especificado, onde são mencionados: Vitamina E, tocotrienol, extrato de chá verde, polifenóis, ácido rosmarínico, dentre outros.

[00024] O documento norte-americano US 2004/023894 refere-se a uma composição antioxidante baseada na combinação entre: [delta] tocóis, como o delta-tocoferol e polifenóis advindos de Citrus sp, preferencialmente. Esta composição é destinada ao tratamento e prevenção de condições relacionadas à geração dos radicais livres.

[00025] O documento norte-americano US 2004/161435 descreve uma composição de máscara cosmética destinada ao tratamento da celulite, redução da gordura corporal, entre outros. A composição de máscara compreende, dentre os seus ingredientes, pelo menos um agente promotor de benefícios tópicos, como, por exemplo, um agente antioxidante.

[00026] O documento norte-americano US 2007/014876 trata de uma composição destinada a potencializar atividades antioxidantes compreendendo pelo menos um componente antiácido em dose suficiente para elevar o pH estomacal; pelo menos um componente antioxidante o qual reduz a geração de radicais livres, entre outros.

[00027] O documento norte-americano US 2006/251608 descreve um método de tratamento do envelhecimento cutâneo, rugas de expressão e outros sinais inerentes à pele danificada através da aplicação de uma formulação de uso tópico e oral compreendendo um ou mais antioxidantes.

[00028] O documento brasileiro PI 0000018-3 revela uma mistura branqueadora baseada na combinação entre “bearberry” e um antioxidante, que pode ser selecionado dentre: tetra-hidrocurcumina, preferencialmente, tocoferol, extrato de alecrim, entre outros.

[00029] Com base nas informações dispostas acima, pode-se notar que grande parte dos produtos cosméticos que são utilizados durante a exposição ao sol ou que oferecem tratamento e proteção contra o envelhecimento cutâneo utilizam substâncias antioxidantes em sua composição para auxiliar no combate ao excesso de radicais livres.

[00030] A partir da descrição da presente invenção a seguir, pode- se concluir que nenhum ensinamento do estado da técnica descreve ou sugere um complexo antioxidante apresentando uma combinação sinérgica de três ingredientes ativos, sendo eles: Vitamina E e/ou derivados; extrato de chá-verde e/ou derivados; e extrato de cacau contendo uma mistura de xantinas + catequinas, em faixas de concentração que potencializam o efeito antioxidante, e ainda, não propõe vantagens referentes a gastos financeiros, à estabilidade da composição cosmética e ao potencial antioxidante bastante alto, resultando em uma melhor proteção da pele com relação a danos celulares e cutâneos.

[00031] Desta forma, conclui-se que ainda não foram desenvolvidos complexos antioxidantes que apresentem uma combinação sinérgica entre pelo menos 3 de seus ingredientes ativos, tal qual, a aplicação cosmética e/ou dermatológica das mesmas.

Objetivos da invenção

[00032] A presente invenção tem como objetivo prover um complexo que apresenta atividade antioxidante altamente eficaz que pode ser utilizado isoladamente ou aplicado em composições cosméticas e/ou farmacêuticas de forma a, fornecer a estes benefícios funcionais. Este complexo antioxidante oferece proteção contra lipoperoxidação, oxidação de DNA e oxidação de proteínas.

[00033] É também objetivo desta invenção prover uma composição cosmética e uma composição farmacêutica compreendendo tal complexo antioxidante.

Breve descrição da invenção

[00034] A invenção tem por objeto um complexo antioxidante que apresenta um efeito sinérgico entre os ingredientes: Vitamina E e/ou seus derivados; extrato de chá-verde (Camellia sinensis) e/ou seus derivados; e extrato de cacau (Theobroma cacao) e/ou derivados. O referido complexo antioxidante, aplicado ou não em composições cosméticas e/ou farmacêuticas, fornece benefícios funcionais de combate aos danos causados às células e consequentemente à pele devido ao estresse oxidativo. Dentre os danos mencionados acima, podem ser citados: - lipoperoxidação, - oxidação de DNA e - oxidação de proteínas.

[00035] Outro objeto desta invenção consiste em uma composição cosmética e farmacêutica compreendendo de 0,003 % a 3,000 % do complexo antioxidante, em peso, com base no peso total da composição e um veículo farmaceuticamente aceitável. Preferencialmente, as ditas composições compreendem: - complexo antioxidante composto por: a) de 1 μg/mL a 20000μg/mL de Vitamina E; b) de 10μg/mL a 1000μg/mL de extrato de chá-verde; c) de 10μg/mL a 1000μg/mL de extrato de cacau, com base no peso total do complexo antioxidante e - veículo fisiologicamente aceitável.

Breve Descrição das figuras

[00036] A figura 1 ilustra um gráfico demonstrando os níveis de proteção contra a lipoperoxidação dos componentes das misturas combinados 2 a 2 versus a mistura dos três;

[00037] A figura 2 ilustra um gráfico demonstrando a porcentagem de proteção contra a lipoperoxidação versus a concentração total de ingredientes ativos nas misturas mais eficazes;

[00038] A figura 3 ilustra um gráfico demonstrando a porcentagem de proteção contra a lipoperoxidação obtida com a concentração de ingredientes ativos isolados versus a obtida com a concentração de ingredientes ativos na mistura;

[00039] A figura 4 ilustra um gráfico que demonstra o resultado da avaliação de quebra oxidativa do DNA plasmidial;

[00040] A figura 5 ilustra um gráfico demonstrando a formação de hidroperóxido: reações de controle e amostra;

[00041] A figura 5A ilustra um gráfico demonstrando uma curva alaranjado de xilenol com H2O2;

[00042] A figura 5B ilustra um gráfico demonstrando a formação de hidroperóxido: controles e amostras (reação);

[00043] A figura 6 ilustra um gráfico demonstrando a DPPH (neutralização de radicais livres) alcançada com a presente invenção;

[00044] A figura 7 ilustra um gráfico demonstrando a intensidade do dano ao DNA tipo CPD com ou sem o complexo antioxidante;

[00045] A figura 8 ilustra um gráfico demonstrando a intensidade do dano ao DNA tipo CPD com ou sem o complexo antioxidante;

[00046] A figura 9 ilustra um gráfico demonstrando a intensidade de fluorescência para a medição de atividade antioxidante, em que M1 representa a mistura do novo complexo antioxidante e M2 é de um complexo antioxidante conhecido;

[00047] A figura 10 ilustra um gráfico demonstrando a relação entre a concentração e a inibição do declínio de fluorescência da mistura de amostra 1 pelo método lipofílico;

[00048] A figura 11 ilustra um gráfico demonstrando a relação entre a concentração e a inibição do declínio de fluorescência da mistura de amostra 2 pelo método hidrofílico;

[00049] A figura 12 ilustra um gráfico demonstrando a relação entre a concentração e a inibição do declínio de fluorescência da mistura de amostra 2 pelo método lipofílico;

Descrição detalhada da invenção

[00050] A presente invenção descreve um complexo antioxidante que compreende pelo menos Vitamina E, extrato de chá verde e extrato de cacau. Este complexo auxilia na proteção e prevenção de danos celulares e cutâneos resultantes da ação de radicais livres.

[00051] Define-se aqui complexo antioxidante como uma composição compreendendo pelo menos 3 componentes que apresentam potencial antioxidante e quando combinados, apresentam efeito sinérgico inesperado, atingindo um potencial antioxidante muito elevado. Ainda, tal complexo antioxidante apresenta proteção contra a ação de radicais livres, oxidação de DNA e oxidação de proteína.

[00052] A presente invenção ainda descreve composições cosméticas e farmacêuticas de uso tópico para tratamento e/ou proteção da pele, formadas por uma combinação de agentes antioxidantes hidrossolúveis e Iipossolúveis em um mesmo complexo que permite uma atividade adequada em ambos os meios biológicos, tanto hidrofílico como lipofílico.

[00053] O novo complexo antioxidante de acordo com a presente invenção pode ser utilizado em formulações de produtos para a exposição ao sol, bem como em produtos contra o envelhecimento (anti-aging). Além disso, pode ser usado em produtos específicos em que a proteção do antioxidante é importante (por exemplo, em produtos antipoluição).

[00054] Os principais exemplos de produtos que podem ser preparados partindo-se do complexo antioxidante da presente invenção ou a partir de composições cosméticas e farmacêuticas compreendendo o referido complexo são: ❖ Leite hidratante corporal; ❖ Leite hidratante para o rosto; ❖ Loção hidratante corporal; ❖ Loção hidratante para o rosto; ❖ Géis; ❖ Produtos para o couro cabeludo; ❖ Protetores ou bloqueadores solares de uso adulto ou infantil, voltados ou não ao uso concomitante à prática de esportes; ❖ Hidratantes corporais ou faciais; ❖ Produtos antissinais corporais ou faciais; ❖ Produtos firmadores corporais ou faciais; ❖ Produtos autobronzeadores; ❖ Produtos repelentes de insetos; ❖ Hidratantes corporais ou faciais iluminadores da pele; ❖ Preparações farmacêuticas de aplicação tópica; ❖ Preparações cosméticas corporais ou faciais para uso infantil; ❖ Preparações cosméticas de ação localizada, específicas para região periocular, contorno dos lábios, lábios, antimanchas, antiolheiras, entre outras; ❖ Produtos antiacne; ❖ Produtos para clareamento da pele; ❖ Composições farmacêuticas para o tratamento de dermatoses específicas; ❖ Batons e bases cerosas; ❖ Blushes e Bases pigmentadas; ❖ Pós faciais; ❖ Qualquer produto de maquiagem para área dos olhos.

[00055] O complexo antioxidante da presente invenção, incorporado em composições cosméticas ou farmacêuticas apresenta, um número de vantagens e características desejadas em um produto cosmético ou farmacêutico para pele, algumas das quais são relatadas abaixo: 1. Proporciona maior proteção à pele combatendo a ação de radicais livres decorrente da radiação ultravioleta, a qual possui em seu espectro faixas de comprimento de ondas que reconhecidamente promovem a formação destas espécies. Neste sentido, é útil para formulação de protetores solares e produtos pós-sol que protegem a pele de modo mais eficiente contra os danos provocados pela exposição solar; 2. Fornece maior proteção da pele contra a formação de radicais livres decorrentes da exposição a diversos agentes poluentes, dentre eles a fumaça do cigarro. Neste sentido, é útil para preparação de formulação de produtos que protegem a pele contra estes agentes; 3. Auxilia na manutenção do equilíbrio entre a formação e combate a radicais livres, minimizando a situação de estresse oxidativo muito comum no processo de envelhecimento natural da pele. Desta forma, permite a preparação de formulações antissinais mais eficazes; 4. Não necessita de armazenamento sob refrigeração; 5. Os produtos que compreendem o complexo antioxidante da presente invenção apresentam ausência de alterações organolépticas, ao contrário de alguns produtos do estado da técnica, como, por exemplo: 1. Produtos que contêm vitamina C ou seus derivados em geral apresentam significativas alterações de aspecto, cor e odor. 6. O complexo antioxidante da presente invenção pode ser incorporado a diversas formas galênicas como: géis aquosos, géis alcoólicos, pomadas, unguentos, fluidos aquosos ou alcoólicos, emulsões água em óleo, óleo em água, água em silicone veiculados sob as denominações de géis cremes, cremes, loções, bases cerosas, pós pigmentados, bases pigmentadas dentre outras possibilidades de formas galênicas, com manutenção da estabilidade destas composições; 7. O complexo antioxidante combinado ou não com filtro solar exerce atividade protetora contra os danos oxidativos ao DNA que são decorrentes do aumento na formação de radicais livres em situação como a exposição solar e o envelhecimento cutâneo; 8. O complexo antioxidante da presente invenção exerce também atividade protetora contra a oxidação de proteínas; 9. O complexo antioxidante da presente invenção exerce também atividade protetora contra a oxidação de membranas lipídicas; 10. O complexo antioxidante da presente invenção exerce também atividade altamente eficaz na neutralização de radicais livres; 11. O complexo antioxidante da presente invenção pode ser adicionado a formulações com agentes fotoprotetores que contenham filtros solares físicos e/ou químicos em combinação; 12. O complexo antioxidante da presente invenção compreende uma combinação de agentes antioxidantes hidrossolúveis e Iipossolúveis. Desta forma, é adequado para uso em ambos os meios biológicos, tanto hidrofílicos como lipofílicos ao contrário da maioria dos produtos desta linha do estado da técnica.

Complexo antioxidante

[00056] O complexo antioxidante da presente invenção apresenta um efeito sinérgico e compreende: a) de 1 μg/mL a 20000μg/mL de Vitamina E; b) de 10μg/mL a 1000μg/mL de extrato de chá-verde; c) de 10μg/mL a 1000μg/mL de extrato de cacau, todas as quantidades com base no peso total do complexo antioxidante.

[00057] Além destes componentes, o complexo antioxidante ainda pode compreender agentes antioxidantes opcionais.

[00058] Em concretizações preferidas, o complexo antioxidante objeto da presente invenção apresenta um efeito sinérgico e compreende: a) de 10μg/mL a 200μg/mL de Vitamina E; b) de 10μg/mL a 100μg/mL de extrato de chá-verde; c) de 10μg/mL a 100μg/mL de extrato de cacau, todas as quantidades com base no peso total do complexo antioxidante.

[00059] Em uma concretização preferida, o complexo antioxidante objeto da presente invenção apresenta um efeito sinérgico e compreende: a) 10 μg/mL de acetato de tocoferol; b) 10 μg/mL de extrato de chá-verde compreendendo uma mistura de polifenóis, dentre eles catequinas; e c) 10 μg/mL de extrato de Theobroma cacao rico em catequinas e xantinas, todas as quantidades com base no peso total do complexo antioxidante.

[00060] Por outro lado, as composições cosméticas e farmacêuticas que compreendem o complexo antioxidante da presente invenção podem ainda conter diversos componentes como agentes fotoprotetores (filtros solares) e outros agentes que apresentem funções específicas requeridas para cada composição necessária para cada situação tais como, agentes sequestrantes, agentes espessantes, agentes ajustadores de pH, agentes conservantes, agentes umectantes, emolientes, corantes, agentes adsorvedores de oleosidade, ingredientes ativos como agentes antienvelhecimento entre outros.

[00061] Serão descritos a seguir com maior detalhe os componentes presentes no complexo antioxidante da presente invenção:

Vitamina E

[00062] Pode ser adicionada a formulações cosméticas na sua forma livre (tocoferol) ou na forma esterificada (acetato de tocoferol).

[00063] A primeira forma possui uma melhor performance como antioxidante, mas por possuir alta instabilidade quando exposta à luz e ao calor, muitas vezes é substituída pela segunda forma que possui melhor estabilidade.

[00064] O tocoferol é um ativo antioxidante, de natureza lipofílica, que tem alta afinidade pelas membranas celulares, auxiliando na proteção contra a lipoperoxidação. A forma de acetato de tocoferol, que é mais estável e usualmente aplicada a formulações, precisa ser hidrolisada por enzimas específicas da pele (esterases).

[00065] A vitamina E atua como antioxidante (neutraliza a ação dos radicais livres), possui ainda atividade anti-inflamatória e reduz a quantidade de células danificadas pela radiação UV.

[00066] Nas concretizações preferidas, adiciona-se vitamina E, preferencialmente um derivado de tocoferol, mais preferencialmente o acetato de tocoferila em uma quantidade que varia de 1μg/mL a 20000μg/mL, preferencialmente de 10μg/mL a 200μg/mL, com base no peso total do complexo antioxidante.

Chá verde

[00067] Extrato Seco de Chá Verde (Camellia sinensis): Este ativo antioxidante é composto por polifenóis (em grande parte catequinas). É um ingrediente ativo hidrofílico e compreende catequinas.

[00068] O extrato de chá verde atua como um antioxidante (neutraliza a ação de radicais livres), além de ter atividade anti- inflamatória e imunoprotetora.

[00069] Nas concretizações preferidas, adiciona-se extrato de chá verde, preferencialmente extrato de chá verde (Camellia sinensis) constituído de catequinas em sua grande maioria, em uma quantidade que varia de 10μg/mL a 1000μg/mL, preferencialmente de 10μg/mL a 100μg/mL, em peso, com base no peso total do complexo antioxidante.

Extrato de cacau

[00070] Extrato seco de cacau (Theobroma cacao): Ingrediente ativo que possui alto teor de catequinas e xantinas. É um ingrediente ativo hidrofílico conhecido também por apresentar atividade antioxidante. Preferencialmente, utiliza-se extrato de cacau rico em metilxantinas como cafeína e teobromina e em catequinas/epicatequinas.

[00071] As sementes de cacau possuem alto teor de substâncias químicas ativas. Entre elas polifenóis, catequinas, xantinas, etc. Essas substâncias conferem importantes propriedades terapêuticas a esta planta, como: atividade antioxidante, aumento da lipólise, proteção celular, etc. Por conter essas substâncias e exibir essas atividades, extratos de cacau podem ser utilizados em produtos para tratamento da pele, proteção solar, combate à celulite, entre outros.

[00072] Em uma concretização preferida, utiliza-se extrato de cacau com alto teor de catequina, obtido de semente não fermentada. Para obter este tipo de extrato, é necessário trabalhar a semente do cacau para inativar a enzima que provoca a degradação das catequinas, o que pode ser feito de uma das seguintes formas: - as sementes são aquecidas a alta temperatura e secas em seguida; - quebra do fruto após 7 dias a partir da data da colheita seguido de secagem direta, sem passar por processo de fermentação convencional; - quebra do fruto no dia da colheita seguido de secagem direta, sem passar por processo de fermentação convencional; ou - os frutos são colhidos, quebrados e lavados em água corrente para remoção da polpa e seguido de secagem.

[00073] Esta última maneira mostrou-se mais vantajosa para a obtenção de extrato rico nos compostos responsáveis pela atividade esperada para a presente invenção.

[00074] Nas concretizações preferidas da presente invenção, adiciona-se extrato de cacau, preferencialmente extrato de cacau (Theobroma cacao) constituído de catequinas e xantinas em sua maioria em uma quantidade que varia de 10μg/mL a 1000μg/mL, preferencialmente de 10μg/mL a 100μg/mL, em peso, com base no peso total do complexo antioxidante.

Agente Antioxidante opcional

[00075] Ainda, podem ser adicionados ao complexo antioxidante outros agentes antioxidantes opcionais.

[00076] Alguns exemplos de compostos com propriedades antioxidantes que podem ser adicionados às composições da presente invenção são:7 substâncias lipofílicas como hidroxitolueno butilado (BHT), hidroxianisol butilado (BHA), terc-butil hidroquinona (TBHQ), licopeno, extratos vegetais entre outros.

Composições cosméticas e farmacêuticas

[00077] As composições cosméticas e farmacêuticas que compreendem o complexo antioxidante da presente invenção também podem compreender alguns componentes já conhecidos do estado da técnica.

[00078] As composições cosméticas e farmacêuticas compreendem de 0,003% a 3,000% do complexo antioxidante objeto da presente invenção, em peso, com base no peso total das ditas composições e um veículo.

[00079] Em concretizações preferidas, as composições cosméticas e farmacêuticas compreendem - complexo antioxidante composto por: a) de 10μg/mL a 200μg/mL de Vitamina E; b) de 10μg/mL a 100μg/mL de extrato de chá-verde; c) de 10μg/mL a 100μg/mLde extrato de cacau, sendo todas as quantidades referentes ao peso total da composição e - um veículo cosmetica e farmaceuticamente aceitável.

Emoliente

[00080] Os emolientes desempenham diversas funções em composições cosméticas, dentre elas: adicionar ou repor lipídeos e óleos naturais à pele, solubilizar filtros solares, conferir maior espalhabilidade na aplicação do produto, modificar o mapa sensorial, etc.

[00081] Como emolientes para serem adicionados à composição da presente invenção, podem ser utilizados lipídeos convencionais como, por exemplo, óleos, ceras, lipídeos e outros componentes insolúveis em água e lipídeos polares que são os lipídeos modificados de forma a aumentar sua solubilidade em água através de esterificação de um lipídeo a uma unidade hidrofílica como, por exemplo, grupos hidróxi, grupos carbonilas entre outros. Alguns compostos que podem ser utilizados como emolientes são óleos naturais e derivados de plantas, ésteres, óleos de silicone, ácidos graxos poli-insaturados, lanolina e derivados. Alguns óleos naturais que podem ser usados são derivados de semente de damasco, gergelim, soja, amendoim, coco, azeitona, manteiga de cacau, amêndoa, abacate, carnaúba, semente de algodão, farelo de arroz, semente de pêssego, semente de manga, jojoba, noz de macadâmia, café, semente de uva, semente de abóbora, dentre outros e misturas dos mesmos.

[00082] Alguns éteres e ésteres também podem ser utilizados como emolientes como, por exemplo, ésteres de alquila C8-C30 de ácidos carboxílicos C8-C30, monoésteres de diol C1-C6 e diésteres de ácido carboxílicos C8-C30, monoésteres sacarose de álcool C10-C20 e combinações dos mesmos. Exemplos destes compostos são éter dicaprílico, lactato de cetila, palmitato de isopropila, carbonato de dicaprilila, benzoato de alquila C12-15, miristato de isopropila, isononato de isopropila, palmitato de sacarose, oleato de sacarose, lactato de isoestearila, behenato de glicerila, isoestearato de triglicerol-4, ácido carboxílico de lauril pirrolidona, triacetato de pantenila e combinações dos mesmos.

[00083] Silicones também atuam como emolientes nas composições cosméticas e farmacêuticas da presente invenção. Alguns exemplos de silicone que podem ser adicionados às referidas composições são: óleos de silicone voláteis e não voláteis como, por exemplo, ciclometicona, alquildimeticonas, dimeticona-copolióis, dimeticonóis, fenil trimeticonas, caprilil trimeticonas, silicones aminofuncionais, silicones com fenila modificados, fenil trimeticonas, silicones modificados de alquila; polissiloxano de dimetila e dietila, polissiloxano de alquila mista C1-C30, dimetil siloxanos, polimetilsiloxano, α-metil-®-metoxipolimetilsiloxano, polioxidimetilsilileno, óleo de silicone polidimetil e combinações dos mesmos ou elastômeros de silicone como crospolímero de ciclometicona e dimeticona, crospolímero de vinil dimeticona e dimeticona, crospolímero de dimeticona e dimeticona e crospolímero de ciclopentassiloxano e dimeticona.

[00084] Podem ainda ser utilizados outros alcoóis graxos, mono-, di- ou triglicerídeos que tenham caráter lipofílico como ácido dicaprilílico, além de hidrocarbonetos sintéticos e naturais, carbonatos orgânicos como carbonato de dicaprilila, alguns tipos de silicones como ciclometicona e misturas entre os mesmos.

[00085] Ademais, podem ser utilizados diversos compostos naturais como emoliente como, por exemplo, cera microcristalina, cera de carnaúba, manteiga de karitê, cera de abelha, cera de ozocerita entre outros.

Filtros solares

[00086] Para filtrar a radiação ultravioleta, pode-se adicionar agentes de proteção solar os quais podem ser hidrossolúveis ou lipossolúveis.

[00087] Alguns exemplos de filtros que absorvem os raios ultravioleta e os quais são indicados para serem adicionados à composição cosmética da presente invenção são: cânfora benzilideno e seus derivados, cânfora isoftalilideno e cânfora tereftalilideno, e seus derivados, ácido cinâmico e seus ésteres, ácido salicílico e seus ésteres, ácido benzoico e seus ésteres, ácido p-aminobenzoico e seus derivados como seus ésteres, hidroxibenzofenonas substituídas, dibenzoilmetano substituído, benzotriazol e alguns derivados como 2- arilbenzotriazol, 2-arilbenzimidazol, 2-arilbenzofuranos, 2- arilbenzoxazol, 2-arilindol, mono-fenilcianoacrilatos, difenilcianoacrilatos, entre outros filtros de raios ultravioleta conhecidos no estado da técnica.

[00088] Alguns exemplos de filtros solares indicados para a presente invenção são compostos orgânicos, muitas vezes pouco solúveis em água como derivados de triazina (por exemplo, compostos de hidroxifeniltriazina ou derivados de benzotriazol), algumas amidas como aquelas as quais contêm um grupo vinila, derivados do ácido cinâmico, benzimidazóis sulfonados, difenilmalonitrilas, oxalilamidas, derivados de cânfora, derivados de ácido salicílico como salicilatos de 2-etilhexila, homossalatos e salicilatos de isopropila, difenilacrilatos, derivados de benzofenona como benzofenona-2, benzofenona-3, e benzofenona-4, PABA como 4-dimetilamino-benzoato de 2-etilhexila, e outros filtros solares comumente adicionados a composições de produtos para proteção solar.

[00089] Além dos exemplos citados acima, há outros componentes preferidos para exercer esta função como: sulfato de metila de N, N, N-trimetil-4-(2-oxoborn-3-ilidenometil) anilínio; ácido 3, 3'-(1, 4- fenilenodimetileno) bis (7, 7-dimetil-2-oxo-biciclo-(2.2.1) 1- heptilmetanossulfônico e seus derivados; 1-(4 terc-butilfenil)-3-(4- metoxifenil) propano-1, 3-diona; ácido α-(2-oxobom-3-ilideno) tolueno- 4-sulfônico e seus sais de potássio, sódio e trietanolamina; 2-ciano- 3,3'-difenilacrilato de 2-etilhexila; 4-metoxicinamato de 2-etoxietila; 2, 2'-di-hidróxi-4-metoxibenzofenona; antranilato de metila; salicilato de trietanolamina; 2, 2', 4, 4' tetra-hidroxibenzofenona; ácido 2- fenilbenzimidazol-5-sulfônico e seus sais de potássio, sódio e trietanolamina; 4-metoxicinamato de 2-etilhexila; 2-hidróxi-4- metoxibenzofenona (oxibenzona); ácido 2-hidróxi-4- metoxibenzofenona 5-sulfônico e seu sal sódico (sulissobenzona e sulissobenzona sódica); ácido 4 aminobenzoico (PABA); salicilato de homomentila; polímero de N-{(2 e 4) [(2 oxoborn-3-ilideno) metil] benzil} acrilamida; dióxido de titânio (com ou sem revestimento lipofílico); N-etoxi-4-aminobenzoato de etila; 4-dimetilaminobenzoato de 2-etilhexila; salicilato de 2-etilhexila; 4-metoxicinamato de isopentila; 3-(4'-metilbenzilideno)-d-1-cânfora; 3-benzilideno cânfora; 2, 4, 6-trianilin-(p-carbo-2'-etil-hexil-1'-óxi)-1, 3, 5-triazina octila; óxido de zinco (com ou sem revestimento lipofílico); 2-(2H-benzotriazol-2-iI)-4- metil-6-{2-metil-3-(1,3,3,3-tetrametil-1-((trimetilsilil)óxi) dissiloxanil) propil} fenol; ácido benzoico; 4,4'-[[6-[[4-[[(1,1-dimetil-etil) amino] carbonil] fenil] amino]-1,3,5-trazina-2,4-diil] diimino] bis, bis (2 etilhexila); 2, 2'-metileno-bis-6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(tetrametil butil)- 1,1,3,3-fenol; metileno bis-benzotriazolil tetraetil butil fenol; sal monossódico do ácido 2, 2'-bis-(1, 4-fenileno)-1H-benzimidazol-4, 6 dissulfônico; (1, 3, 5)-triazina-2,4-bis {[4-(2-etil-hexilóxi)-2-hidróxi]- fenil]-6-(4-metoxifenila); bis-etilexiloxifenol metoxifenil triazina; metileno bis-benzotriazolil tetrametilbutilfenol; butil metoxidibenzoilmetano, p- metoxicinamato de 2-etilhexila, metileno bis-benzotriazolil tetrametilbutilfenol, 4-butil-4-metoxidibenzoilmetano, benzofenona 3, bis-etilhexiloxifenol metoxifenil triazina, octil triazona, dióxido de titânio, cloreto de cinamidopropiltrimônio, tosilato de dimetilpabamidopropil laurdimônio.

[00090] Ainda, há outros filtros solares que também podem atuar protegendo a pele como óxido de ferro, dióxido de titânio combinado com simeticona, óxido de zinco, compostos mono ou policarbonila como isatina, aloxano, ninidrina, gliceraldeído, aldeído mesotartárico, glutaraldeído, derivados de pirazolin-4,5-diona ou de 4,4-di- hidroxipirazolin-5-ona, metilglioxal, dialdeído 2,3-di-hidroxissuccínico, dialdeído 2-amino-3-hidroxissuccínico e dialdeído 2-benzilamino-3- hidroxissuccínico.

Veículo

[00091] A água é a base de diversas possibilidades de composições cosméticas preparadas com o complexo antioxidante já descrito, atuando como o veículo para os demais componentes. As composições da presente invenção compreendem água preferencialmente desmineralizada ou destilada em um percentual adequado (q.s.p.) para atingir 100% da fórmula com base no peso total da presente composição. Naturalmente, pode-se utilizar outros veículos cosmeticamente aceitáveis na presente invenção. Nos exemplos de composição que serão descritos mais adiante, também é utilizado como veículo álcool etílico 96°GL, veículos oleosos (óleos em geral, ceras e manteigas), veículos siliconados, entre outros.

Outros componentes opcionais

[00092] Para proporcionar as composições cosméticas e farmacêuticas da presente invenção com uma característica desejável não alcançada com os componentes já citados, pode-se adicionar ainda componentes opcionais que sejam compatíveis com as propriedades da mesma. Alguns destes compostos que podem ser adicionados às referidas composições são os seguintes: • Ingredientes ativos (encapsulados ou não): podem ser lipofílicos ou hidrofílicos como, extratos de algas marinhas, extratos vegetais, combinação de palmitoil hidroxipropil trimônio aminopectina, glicerina crospolímero, lecitina e extrato de semente de uva, alfa bisabolol (ingrediente ativo anti-inflamatório), D-pantenol (ingrediente ativo condicionador), goma biossacarídica 2 e goma biossacarídica 3 e outros ingredientes ativos comumente adicionados a composições de produtos para uso tópico; • Bacteriostáticos, bactericidas ou antimicrobiais; • Emulsionante como cetilfosfato de potássio, dentre outros; • Agentes estabilizantes como cloreto de sódio, dentre outros; • Agente sequestrante como ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e seus sais, dentre outros; • Agente ajustador de pH como trietanolamina, hidróxido de sódio, dentre outros; • Agente conservante como fenoxietanol, Cocoato de PEG- 5 e dicocoato de PEG-8,iodopropinil butilcarbamato e PEG-4, dentre outros; • Corantes de origem natural ou sintética; • Agentes espessantes como goma xantana e carbômero, dentre outros; • Extratos de plantas: camomila, alecrim, tomilho, calêndula, extrato de cenoura, extrato de zimbro, extrato de genciana, extrato de pepino, dentre outros; • Agentes condicionadores da pele; e • Outros componentes cosmeticamente aceitos, que sejam compatíveis com o complexo antioxidante da presente invenção.

Exemplos de Composição

[00093] Os exemplos a seguir são variações preferenciais de composições compreendendo o complexo antioxidante da presente invenção e não devem ser interpretadas como limitações da mesma. Nesse sentido, deve ser entendido que o escopo da presente invenção abrange outras possíveis variações, sendo limitado tão somente pelo teor das reivindicações apensas, aí incluídos os possíveis equivalentes. Exemplo 1 - Emulsão sem filtros solares

Exemplo 2 - Emulsão com filtros solares

Exemplos de Teste - Descrição das metodologias:

[00094] Para o planejamento e realização dos testes comprobatórios para eficácia antioxidante do complexo objeto da presente invenção, foram selecionadas metodologias que pudessem mimetizar o efeito protetor de membranas (lipídeos), DNA e proteínas, além de metodologias de screening rápido, como: - DPPH: o teste se baseia na reação de redução do radical livre difenil picril hidrazil (DPPH) em meio etanólico, com as matérias- primas ou substâncias a serem analisadas, sendo que o radical DPPH é reduzido por essas substâncias, alterando a tonalidade e permitindo uma medida de proteção antioxidante. Este ensaio é simples e muito utilizado para screening de substâncias, uma vez que mede um dos principais mecanismos de ação antioxidante - doação de próton para estabilização do radical DPPH. - Lipoperoxidação: neste teste incumbam-se lipossomas de fosfatidilcolina, os quais a estrutura se assemelha à membrana das células, pois a fosfatidilcolina é um dos componentes lipídicos das membranas celulares, com o radical AAPH, o qual tem a capacidade de promover a oxidação destas membranas, levando à formação de hidroperóxidos lipídicos. Estes hidroperóxidos promovem a oxidação do Fe2+ a Fe3+, o qual reage com o alaranjado de xilenol formando um composto amarelado. Os ingredientes ativos incubados com os lipossomas diminuem a oxidação das membranas, diminuindo consequentemente a reação com alaranjado de xilenol e a formação de cor. Este teste fornece como resultado a % de proteção contra a lipoperoxidação e é mais próximo da situação fisiológica, pois mimetiza o ataque às membranas celulares. - Oxidação de Proteínas: neste experimento utiliza-se BSA (albumina de soro bovino) como substrato e um sistema gerador de radicais hidroxila (reação de Fenton: H2O2 + ferro) que na presença da proteína podem gerar hidroperóxidos, devido à oxidação da cadeia lateral dos aminoácidos. Estes hidroperóxidos promovem a oxidação do Fe2+ a Fe3+, o qual reage com o alaranjado de xilenol formando um composto amarelado. Os ingredientes ativos são incubados com o BSA e com o sistema gerador de radicais livres e espera-se que estes protejam a proteína do ataque oxidativo dos radicais hidroxila. - Oxidação do DNA plasmidial: neste teste o DNA plasmidial de bactérias é exposto à radiação UVA na presença de um fotossensibilizante - riboflavina. Esta reação aumenta a formação de ROS e leva, como consequência, à quebra do DNA do plasmídio. Esta quebra é percebida na corrida em gel de agarose, onde é possível notar apenas uma banda para amostras não irradiadas e mais de uma banda para amostras irradiadas. Ingredientes ativos que oferecem proteção contra a quebra oxidativa do DNA plasmidial, devem fazer com que amostras de DNA irradiadas contendo o ingrediente ativo mantenham o mesmo perfil das amostras não irradiadas. Testes para avaliação da atividade antioxidante individual dos ingredientes ativos selecionados para a mistura:

[00095] Iniciou-se a avaliação individual de cada ingrediente ativo. Nessa etapa, selecionou-se a metodologia de lipoperoxidação que mimetiza a oxidação de membranas celulares para a tomada de decisão final na escolha dos ingredientes ativos. No entanto, o DPPH também foi utilizado, por ser uma metodologia de screening bastante útil para a comparação de potência dos ingredientes ativos. - DPPH:

[00096] Avalia-se o valor de IC-50 através dessa metodologia, ou seja, qual a quantidade de ingredientes ativos necessária para neutralizar 50% dos radicais formados no meio reacional. Quanto menor o valor, mais potente é o ingrediente ativo.

[00097] A Tabela 1 abaixo lista valores de IC-50 (%; mg/mL; μg/mL) para os ingredientes ativos selecionados:

[00098] Os valores obtidos nos dois testes anteriores foram comparados e verificou-se que não, necessariamente, os ingredientes ativos que ofereciam maior proteção por DPPH, ofereciam a melhor proteção contra a lipoperoxidação. Isso se deve, principalmente, à diferente característica dos ingredientes ativos e dos ensaios. Por este motivo, estabeleceram-se alguns critérios específicos para cada metodologia para seleção de quais ingredientes ativos deveriam continuar sendo avaliados no projeto.

[00099] DPPH: levando-se em consideração as características do ensaio, estabeleceram-se algumas faixas para classificar os ingredientes ativos em relação à potência antioxidante:

[000100] Poder antioxidante ALTÍSSIMO: substâncias que oferecem alta proteção em concentrações muito baixas - IC-50 (%) na casa de 10-4. Encaixam-se nessa classificação Chá Verde e Cacau.

[000101] Poder antioxidante ALTO: substâncias que oferecem alta proteção em concentrações baixas - IC-50 (%) na casa de 10-3. Encaixam-se nessa classificação Pariparoba, Alecrim, Tocoferol e Café.

[000102] Poder antioxidante MÉDIO: substâncias que oferecem alta proteção em concentrações muito baixas - IC-50 (%) na casa de 10-2. Encaixam-se nessa classificação Açaizeiro e Licopeno.

[000103] Como o teste de DPPH avalia um radical específico por um mecanismo de redução específico, é importante que o ingrediente ativo seja capaz de neutralizar o radical em concentrações muito baixas. Assim, estabeleceu-se como critério continuar trabalhando com os ingredientes ativos que oferecem proteção antioxidante ALTA OU ALTÍSSIMA. - Lipoperoxidação:

[000104] Essa metodologia é utilizada para avaliar a porcentagem de proteção dos ingredientes ativos contra a lipoperoxidação em 3h de reação. Fixou-se a concentração de 100 μg/mL (0,01%) para os ingredientes ativos, para o propósito de comparação da potência de proteção de cada um.

[000105] Segue abaixo uma lista dos resultados obtidos na verificação da lipoperoxidação: - Licopeno: 25,30% - Extrato de cacau (Theobroma cacao): 51,60% - Alecrim (Provital): 52,09% - Extrato de Chá Verde (Camellia sinensis): 64,89% - Café (Unichen): 72,49% - Tocoferol: 95,53%

[000106] Como todos os ingredientes ativos foram testados em uma baixa concentração (0,01%), determinou-se que os ingredientes ativos que fossem capazes de, mesmo em baixas concentrações, fornecer proteção de pelo menos 50% contra a lipoperoxidação, seriam ativos com alta potência e, portanto, deveriam continuar a ser testados. Esses ativos são: Cacau, Alecrim, Chá Verde, Café e Tocoferol.

[000107] Entretanto, o Alecrim não foi mais testado devido ao seu possível efeito abortivo. Sendo assim, estudos adicionais foram realizados para o Cacau, Chá Verde, Café e Tocoferol. - Seleção do complexo:

[000108] Os quatro componentes foram avaliados como se segue: - Ingredientes ativos 2x2: Cacau + Chá Verde; Cacau + Café; Café + Chá Verde; - ngredientes ativos + TOCOFEROL: (3) Cacau + tocoferol; (2) Chá Verde + tocoferol; Café + tocoferol -Ingredientes ativos + TOCOFEROL: (4) Cacau + Chá Verde + Tocoferol; Cacau + Café + tocoferol; Chá Verde + Café + tocoferol.

[000109] As concentrações em μg/mL das misturas testadas e os resultados percentuais para proteção contra lipoperoxidação (3h) estão resumidos abaixo, na Tabela 2 do presente relatório.

[000110] O maior valor de proteção por mistura (alcançado com a mistura 9) está demonstrado no gráfico ilustrado na figura 1 do presente relatório.

[000111] Avaliando-se a quantidade de ingredientes ativos necessária para alcançar a percentagem máxima de proteção, com base na mistura que ofereceu máxima proteção na menor dosagem, tem-se a mistura de extrato de cacau + extrato de chá verde + tocoferol como a mais eficaz. Portanto, alcançou-se um complexo antioxidante eficaz com baixa concentração de ingredientes ativos, alto grau de “vegetalização” (uso de material renovável de origem vegetal) e resultados acima do esperado.

[000112] As misturas mais eficazes estão mostradas na Figura 2 onde é demonstrada a percentagem de proteção contra lipoperoxidação em relação à concentração total de ingredientes ativos.

[000113] Como se pode concluir da tabela acima, a mistura de 10 μg/mL de chá verde, 10 μg/mL de cacau e 10 μg/mL de tocoferol, totalizando 30 μg/mL de ingredientes ativos, oferece uma alta proteção percentual contra a lipoperoxidação em 3 horas de 69,44%.

[000114] Avaliou-se a quantidade necessária de cada ingrediente ativo individual para fornecer um grau de proteção similar ao obtido com a mistura (entre 60 e 70% de proteção). Para esta análise, foram utilizados os dados da concentração testada que forneceu o resultado de proteção mais próximo de 69,44%. No entanto, como pode ser visto a partir da tabela acima, outras concentrações combinadas também resultam no efeito otimizado e positivo de proteção contra oxidação.

[000115] O gráfico referente à concentração de ingredientes ativos isolados x concentração de ingredientes ativos na mistura está ilustrado na figura 3 deste relatório. A linha representa a percentagem de proteção contra a lipoperoxidação de cada mistura e/ou ingrediente ativo e as barras representam a concentração de ingredientes ativos para cada amostra avaliada.

[000116] Nota-se que seria necessário utilizar uma concentração de tocoferol pelo menos 5x maior, uma de extrato de chá verde pelo menos 10x maior e uma de extrato de cacau pelo menos 25x maior do que as concentrações utilizadas na mistura para que fosse possível alcançar um grau de proteção similar ao conferido pela mistura de antioxidantes. Dessa forma, pode-se concluir que a interação desses ingredientes ativos é positiva para a atividade antioxidante. Este dado demonstra claramente que não era possível esperar tal resultado. O resultado final alcançado supera aquele que seria obtido quando se analisa o comportamento dos ingredientes ativos isolados. Avaliação da eficácia do novo complexo antioxidante x complexo antioxidante atu a l

[000117] Depois de definida qual era a melhor mistura antioxidante de acordo com a presente invenção (“novo” complexo antioxidante), foram realizados outros testes de eficácia antioxidante para comparação de atividade entre a mistura da presente invenção e um complexo antioxidante convencional, como se segue:

Lipoperoxidação

[000118] Um complexo antioxidante compreendendo licopeno (20 μg/mL), extrato de café (20 μg/mL) e acetato de tocoferol (equivalente a 100 μg/mL), totalizando 140 μg/mL fornece uma proteção de 70,41% contra a lipoperoxidação (3h) que é um resultado que pode ser considerado igual ao resultado para a nova mistura (69,44%).

[000119] No entanto, na nova mistura proposta, utiliza-se uma concentração de ingredientes ativos total de 30 μg/mL, ou seja, 4,7 vezes menor do que a concentração utilizada na mistura do complexo antioxidante conhecido. Dessa forma, pode-se concluir, por este teste, que a nova mistura proposta tem uma potência 4,7 x maior do que a mistura utilizada atualmente.

[000120] DPPH:No teste de DPPH a mistura da presente invenção forneceu uma proteção de 96%. Comparando-se a quantidade de ingredientes ativos necessária para neutralizar 50% dos radicais (IC50) na nova mistura em relação ao complexo antioxidante conhecido, observa-se que a primeira tem maior potência de atividade (menor valor de IC-50), conforme já havia sido observado através do protocolo de lipoperoxidação: - Teste para avaliação de proteção contra a oxidação do DNA plasmidial:

[000121] Este teste foi realizado com as amostras detalhadas na tabela 3 a seguir:

[000122] A figura 4 ilustra o resultado da avaliação c e quebra do DNA plasmidial.

[000123] O novo complexo antioxidante 10+ significa que foi utilizada uma concentração de complexo antioxidante 10x superior àquela proposta inicialmente e o novo complexo antioxidante -10, 10x inferior a concentração indicada. Foram realizados controles não irradiados para cada amostra e também foi testado um controle sem riboflavina (não ocorre a reação). Os resultados podem ser verificados na Figura 4.

[000124] Com base neste gráfico é possível concluir que a amostra não irradiada da mistura (4) tem o mesmo perfil da amostra irradiada (3) o que isso significa que essa mistura protege o DNA contra o ataque oxidativo. O mesmo resultado foi obtido com a mistura concentrada 10x. É possível concluir que o DNA não está protegido na amostra diluída 10x(na amostra 7, a qual foi irradiada, notam-se bandas representativas da quebra do DNA, diferente do controle não irradiado, amostra 8). Finalmente também é possível concluir que o complexo antioxidante conhecido não é capaz de proteger o DNA da quebra oxidativa (amostra 9 - irradiada - apresenta bandas representativas de quebra do DNA, diferente do controle não irradiado, amostra 10). - Teste para avaliação de proteção contra a oxidação de proteínas:

[000125] Este teste foi utilizado para avaliar a capacidade da mistura em questão (M1: chá verde + cacau + tocoferol) e o complexo antioxidante conhecido (M2: licofeno + café + tocoferol) na proteção contra a oxidação de proteínas (neste caso, BSA). Os resultados obtidos estão ilustrados nas figuras 5, 5A e 5B.

[000126] Este ensaio avalia a formação de hidroperóxidos de proteína por alaranjado de xilenol e por este motivo faz-se necessária a construção de uma curva de xilenol com peróxido de hidrogênio.

[000127] Percebe-se que os controles de M2 (complexo antioxidante conhecido) apresentaram um nível de oxidação superior daquele observado no controle sem ingredientes ativos ou no controle com M2. Esta possibilidade aconteceu devido à presença de metais pesados nos extratos dos componentes da mistura, que poderia acelerar a oxidação da BSA.

[000128] A avaliação do resultado obtido para a melhor condição de oxidação estabelecida (reação) mostrou que as duas misturas são capazes de proteger a BSA contra a oxidação gerada por radicais hidroxila, entretanto, M1 (novo complexo antioxidante) oferece uma proteção de 65%, enquanto a mistura 2 fornece uma proteção de 32%. Através deste ensaio, comprovou-se, também, que a mistura em questão é mais potente do que a mistura de referência. - Teste para avaliação da capacidade de neutralização de radicais livres:

[000129] Este ensaio foi utilizado para avaliar a capacidade que o ingrediente ativo tem de diminuir a formação de radicais livres. Um radical específico (DPPH) produz uma coloração roxa quando em solução etanólica. Ingredientes ativos antioxidantes capazes de doar prótons (H+) diminuem a formação de radicais, diminuindo, consequentemente a coloração roxa.

[000130] A mistura em questão (Chá verde + Cacau + Tocoferol) foi avaliada em diversas concentrações (de 0,3 μg/mL até 300 μg/mL) e os resultados indicam que a uma concentração de 15 μg/mL da mistura, uma proteção superior a 90% já é obtida.

[000131] Os resultados desse teste são demonstrados no gráfico da figura 6. Conclui-se então que se alcança um alto grau de proteção contra a ação de radicais livres utilizando quantidades pequenas dos antioxidantes da composição da presente invenção.

Formação de CPD’s (dímeros de pirimidina)

[000132] Neste ensaio, avaliou-se se a mistura de acordo com a presente invenção seria capaz de proteger o DNA dos danos diretos da radiação UVB, medidos através da quantificação de CPD's (dímeros de pirimidina - mutação comumente formada quando as células são expostas à UVB). Como as substancias avaliadas são antioxidantes, espera-se que elas atuem protegendo o DNA de forma indireta, ou seja, através da neutralização de radicais livres que atacariam as bases de DNA (conforme foi demonstrado com o protocolo de DNA plasmidial). Este teste foi realizado para investigar se os mesmos ingredientes ativos poderiam ter alguma atividade de proteção e/ou reparo do DNA contra os danos diretos (mutações) causados pela radiação UVB. Os resultados obtidos são demonstrados na Figura 7.

[000133] Pode-se concluir através destes resultados que a mistura proposta não é capaz de proteger o DNA dos danos diretos causados pela radiação UVB. Pode-se dizer, no entanto, pelo resultado do teste de DNA plasmidial que ela protege o DNA dos danos indiretos da radiação (neste caso, ataque oxidativo).

Atividade antioxidante em fibroblastos

[000134] Neste teste avaliou-se a atividade antioxidante das misturas de ingredientes ativos (complexo antioxidante novo e conhecido). No ensaio, fibroblastos humanos são expostos ao LPS para que haja a geração de espécies reativas de oxigênio, principalmente peróxido de hidrogênio. O peróxido formado oxida a diclorofluoresceína (DCFH- DA) que torna-se fluorescente. A medida de fluorescência é realizada através de um citômetro de fluxo e o resultado é a comparação das células controle com as células tratadas com as misturas de ingredientes ativos.

[000135] Os resultados obtidos demonstram que tanto o complexo antioxidante novo quanto o conhecido são capazes de reduzir significativamente o estresse oxidativo gerado em uma cultura de células exposta ao LPS como demonstrado na Figura 8, em que as duas misturas foram avaliadas em suas concentrações originais, diluídas 10 vezes (0,1x) e 10 vezes concentrada (10x).

Senescência celular (novo complexo antioxidante)

[000136] A senescência celular é um processo multifatorial e o estresse oxidativo é uma das vias responsáveis pelo desencadeamento deste processo. Por este motivo, investigou-se a atividade do complexo antioxidante de acordo com a presente invenção em reduzir o estado de senescência celular. Neste ensaio, as células são expostas à radiação UV por 04 dias e depois desse período um dos marcadores de senescência - a enzima beta- galoctosidase - é medida para avaliar o estado das células. O grupo tratado com o novo complexo antioxidante apresentou menos células senescentes em comparação com o padrão. Esse resultado é representado pela menor quantidade de células marcadas com betagal, conforme demonstrado na tabela 5 abaixo:

[000137] Os resultados demonstram que células não expostas à radiação UV (UVB-) não mantêm um nível basal de senescência. Quando expostas à radiação UV (UVB+), o número de células marcadas para senescência aumenta, entretanto, comparando-se o controle com o grupo tratado com o novo complexo antioxidante, nota- se que o último é capaz de reduzir significativamente o número de células beta-gal positivas e, portanto, o estado de senescência celular.

Avaliação do potencial antioxidante in vitro através do método hidrofílico e lipofílico ORAC

[000138] O método ORAC fornece uma fonte controlada de radicais peróxidos que simulam as reações oxidativas com lipídios em alimentos, cosméticos e sistemas fisiológicos.

[000139] O sistema compreende uma substância geradora de radicais livres, o AAPH (dicloridrato de 2,2’- azobis (2- amidinopropano)) e um marcador fluorescente, fluoresceína. A presença da substância antioxidante no meio de reação inibe o declíneo da fluorescência induzida pelo radical livre.

[000140] O valor final é calculado pela equação de regressão entre a concentração da amostra e a área sob a curva decrescente da fluorescência (AUC). Sendo os resultados expressos em micromoles equivalentes de Trolox® / g da amostra. AUC = 1+ f1/f0 + f2/f0 + f3/f0 + ... + fn/f0 - f0: fluorescência inicial t = 0 minutos - fn: fluorescência em cada amostra em t = n minutos

Considerando o valor AUC líquido = AUC amostra ou Trolox — AUC controle.

[000141] Objetivo:

[000142] Avaliar a atividade antioxidante das seguintes misturas através do método hidrofílico e lipofílico ORAC: Mistura 1 (consistindo eme amostras 9617, 6714 e T3251 na razão 1:1:1) Mistura 2 (consistindo em amostras 2705, 940 e T3251 na razão 1:1:5).

Materiais

[000143] AAPH e Trolox são da Sigma GmbH (Steinheim, Alemanha) e fluoresceína de sódio da Riedel-of-Haên (Seelze, Alemanha) e os outros são reagentes analíticos padrões.

Metodologia

[000144] Foi adicionado hexano (1 mg/mL) nas amostra individuais, as amostras foram agitadas durante 3 minutos em vortex e centrifugadas durante dois minutos em 700 g. O sobrenadante foi removido, evaporado sob fluxo de nitrogênio e analisado como fração lipofílica. O sedimento foi analisado como fração hidrofílica.

[000145] O último foi solubilizado em acetona : água (50% v/v), misturado na razão indicada para cada uma das misturas e apropriadamente diluído em tampão fosfato 75 nM pH 7,0. Então, 25 μL da amostra foram adicionados a 150 μL de solução de fluoresceína 40 nM (no tampão fosfato 75 mM pH 7,0) em placa de 96 cavidades. Após incubação a 37 °C durante 30 minutos, 25 μL de solução de AAPH 153 mM foram adicionados (no tampão fosfato 75 mM pH 7,0) e a placa foi agitada em intensidade alta durante 10 segundos. A leitura foi feita para cada minuto em uma hora com comprimento de onda de excitação de 485/20 nm e de emissão de 528/20 nm (MultiDetector leitor de microplacas Synergy - BIOTEK). O branco consistiu em 200 μL de tampão fosfato 75 mM pH 7,0 e no controle a amostra foi substituída por 25 μL de tampão fosfato 75 mM pH 7,0.

[000146] A fração lipofílica foi solubilizada, misturada na razão indicada acima para cada mistura e diluída em acetona : água (50% v/v) tendo 7% de β-ciclodextrina metilada randomizada (RMCD). As análises foram realizadas como na fração hidrofílica utilizando a solução de RMCD como branco e controladas.

[000147] Como uma nota, a mistura 2 foi solubilizada somente em acetona e diluída em RMCD.

esultados:

[000148] As Figuras 9 a 12 representam as correlações entre a diferença da área na curva das amostras com relação ao controle (AUC líquido) e a concentração das misturas para avaliação hidrofílica e lipofílica.

[000149] Os valores das atividades antioxidantes das amostras são representados abaixo. Tabela 6: Atividade antioxidante das amostras

[000150] As amostras analisadas apresentaram atividade antioxidante total comparativa considerável em comparação com Trolox® (400 μmol/g), a fração lipofílica sendo na mistura 2 o componente majoritário da atividade.

Estudos de aplicação e estabilidade

[000151] As aplicações dos ingredientes ativos foram realizadas em bases de Chronos (BDP. 581.9870.2 e 581.9869.3) e Fotoequilíbrio FPS 30 (581.9868.2) na primeira fase. Nesta etapa de avaliação individual dos ingredientes ativos, a estabilidade foi realizada segundo protocolo REVE para chá verde e cacau, uma vez que os outros ingredientes ativos já tinham histórico de aplicação no produto final. Observou-se uma modificação de cor mais significativa nas condições de 37°C e 45°C para o FPS 30 com chá verde. Entretanto, vale ressaltar que esta matéria-prima foi aplicada em uma concentração de 0,1%, 100x superior à concentração final indicada (0,001%). As outras características nos outros produtos e condições, não sofreram alterações significativas.

[000152] Na segunda fase, já com a mistura definida (de acordo com os testes acima apresentados), realizou-se aplicação da mistura de chá verde (0,001%), tocoferol (0,001%) e cacau (0,001%) nas bases de fotoequilíbrio FPS 30 e Chronos FPS 15, segundo protocolo REVE. Durante 30 dias nenhuma alteração significativa foi detectada. Dados: Tabela 7: Códigos e Status (GSP/CMP)

Tocoferol

[000153] Todos os testes apresentados foram realizados com o alfa - tocoferol. Os produtos finais propostos, no entanto, utilizam acetato de tocoferol, que não pode ser avaliado in vitro, pois depende da presença de enzimas específicas (estearases) que estão presentes na pele.

[000154] Por isso, foi realizada uma extensa busca na literatura sobre dados de conversão de acetato de tocoferol em tocoferol. Nesta busca foram encontrados dados diversos de bioconversão que variavam desde 5% até 100%. Para o propósito desta avaliação, decidiu-se, então, utilizar o pior caso descrito na literatura (taxa de bioconversão de 5%) para garantir que o acetato adicionado vai estar disponível na concentração em que os testes foram realizados. Assim, a regra de conversão da quantidade de tocoferol para acetato ficou estabelecida como sendo uma concentração 20x maior do segundo que deve ser adicionado à formulação final.

Claims

1. Complexo antioxidante, caracterizado pelo fato de que apresenta um efeito sinérgico e compreende: a) de 10 μg/mL a 200 μg/mL de Vitamina E; b) de 10 μg/mL a 100 μg/mL de extrato de chá-verde; c) de 10 μg/mL a 100 μg/mL de extrato de cacau, todas as quantidades com base no peso total do complexo antioxidante.

2. Complexo antioxidante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita Vitamina E é selecionada dentre: tocoferol e acetato de tocoferol.

3. Complexo antioxidante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito extrato de chá-verde compreende uma mistura de polifenóis, dentre eles catequinas.

4. Complexo antioxidante de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito extrato de cacau é extrato de Theobroma cacao rico em catequinas e xantinas.

5. Complexo antioxidante de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que apresenta um efeito sinérgico e compreende: a) 10 μg/mL de acetato de tocoferol; b) 10 μg/mL de extrato de chá-verde compreendendo uma mistura de polifenóis, dentre eles catequinas; e c) 10 μg/mL de extrato de Theobroma cacao rico em catequinas e xantinas, todas as quantidades com base no peso total do complexo antioxidante.

6. Complexo antioxidante de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que pode ainda compreender pelo menos um antioxidante adicional sendo selecionado dentre BHT, BHA, TBHQ e extratos vegetais.

7. Composição cosmética, caracterizada pelo fato de que compreende: a) complexo antioxidante como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6; e b) veículo cosmeticamente aceitável.

8. Composição cosmética de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a quantidade de complexo antioxidante presente varia de 0,003% a 3,000%, em peso, baseado no peso total da composição.

9. Uso do complexo antioxidante conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de ser para fabricação de composições cosméticas destinadas ao combate dos danos moleculares e morfológicos derivados das reações de: lipoperoxidação, oxidação do DNA e oxidação proteica, combate ao envelhecimento cutâneo, combate aos danos causados pelo sol e condições adversas como poluição, estresse, vento e entre outros.