BRPI0914043B1 - Processo para preparar micropartículas de proteína, micropartícula de proteína, pó, suspensão aquosa, película, revestimento, matriz, placa e substrato - Google Patents

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(54) Título: PROCESSO PARA PREPARAR MICROPARTÍCULAS DE PROTEÍNA, MICROPARTÍCULA DE PROTEÍNA, PÓ, SUSPENSÃO AQUOSA, PELÍCULA, REVESTIMENTO, MATRIZ, PLACA E SUBSTRATO (51) Int.CI.: A23J 3/18; A23L 7/10; A61K 9/14; A61K 47/42 (30) Prioridade Unionista: 07/10/2008 ZA 2008/08528 (73) Titular(es): UNIVERSITY OF PRETÓRIA (72) Inventor(es): JANET TAYLOR; JOHN REGINALD NUTTALL TAYLOR

1/30 “PROCESSO PARA PREPARAR MICROPARTÍCULAS DE PROTEÍNA, MICROPARTÍCULA DE PROTEÍNA, PÓ, SUSPENSÃO AQUOSA, PELÍCULA, REVESTIMENTO, MATRIZ, PLACA E SUBSTRATO

Antecedentes da invenção [0001] A invenção provê um processo para produção de micropartículas de proteína que podem ser utilizadas para formação de micro-encapsulados, matriz ou para a formação de placas ou transformação em películas ou em revestimentos. [0002] Um grande número de processos é conhecido para preparar as microesferas ou micropartículas das proteínas para uma variedade de aplicações, tais como revestimentos de comidas, liberação de fármacos e liberação tardia de pesticidas, de fertilizantes e de agentes para limpeza do meio. Entretanto, solventes orgânicos não-ácidos tais como etanol ou acetona são frequentemente utilizados para dissolver a proteína. Estes solventes são frequentemente incompatíveis com e dificultam a remoção destes do alimento, assim existe, portanto, uma relutância das indústrias alimentícias e farmacêuticas quanto a utilização de películas de proteína ou sistemas de micropartículas. Além disso, o uso de solventes orgânicos não-ácidos não oferece uma distribuição segura com relação à emissão de vapores, o risco de fogo que eles possuem, e os possíveis resíduos que eles podem deixar no alimento ou nos fármacos. Muitos processos também requerem o uso de temperaturas elevadas.

[0003] A patente norte-americana No. US 5,736,178 ensina que a película formadora de dispersões coloidais pode ser feita a partir de soluções ácidas aquosas diluídas de proteínas derivadas de glúten por induzirem a precipitação da proteína como micropartículas. Entretanto, a proteína tem que

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2/30 ser primeiro dissolvida em um álcool, tal como, etanol, o que conduz as desvantagens listadas acima.

[0004] O depositante identificou, portanto, a necessidade de um processo para produção de micropartículas de proteína na ausência de solventes orgânicos não-ácidos tais como etanol.

Sumário da invenção [0005] De acordo com um primeiro aspecto da invenção, é provido um processo para preparar micropartículas de proteína, o processo incluindo as etapas de:

(a) dissolver a proteína prolamina de cereal em um ácido orgânico com agitação e na ausência de um álcool; e (b) diluir a solução contendo a proteína com uma solução aquosa, formando, desse modo, micropartículas de proteína tendo vacúolos.

[0006] A proteína pode ser qualquer proteína de prolamina de cereal, tal como, glúten de trigo, hordeína de cevada, zeína de milho ou cafirina de sorgo.

[0007] O ácido orgânico pode ser propiônico, láctico ou ácido acético, ou qualquer outro ácido apropriado.

[0008] Um aditivo, tal como um plastificante, agente colorante, agentes aromatizantes, conservante, traços de minerais, nutrientes, enzima, hormônio, nutracêutico, probiótico, prebiótico, fármaco, ou qualquer combinação dos mesmos, podem ser adicionados em qualquer uma das etapas (a) ou (b) .

[0009] Na etapa (a) a solução da proteína é, preferivelmente, saturada ou altamente concentrada.

[0010] Na etapa (a), a dissolução é realizada com agitação de modo a garantir que as micropartículas de proteínas

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3/30 formadas tenham vacúolos. A agitação pode ser provida por revolvimento, bateção, homogeneização, borbulha de gás através da solução ou do gênero.

[0011] Na etapa (b), a solução contendo a proteína é, preferivelmente, diluída com água para uma concentração final de 2 partes em peso da proteína a 2 a 30 partes em peso do ácido orgânico a 96 a 68 partes em peso de água, formando, desse modo, as micropartículas de proteína.

[0012] O processo pode ser realizado em uma temperatura de cerca de 20°C a 40°C e, mais particularmente, em temperatura ambiente.

[0013] A proteína pode ser modificada, tanto fisicamente, quimicamente quanto enzimaticamente, antes de ou após a dissolução, para garantir ou alterar as propriedades funcionais das micropartículas ou produtos, tal como películas formadas das mesmas. Por exemplo, a proteína pode ser reticulada com taninos, ou enzimas e/ou aquecidas.

[0014] As micropartículas de proteína assim produzidas podem ser utilizadas para preparar películas, revestimentos ou matrizes como descrito abaixo.

[0015] De acordo com um segundo aspecto da presente invenção, é provido um processo para preparar uma película completa ou um revestimento a partir das micropartículas produzidas como descrito acima, compreendendo as etapas de:

(i) preparar uma suspensão das micropartículas de proteína em uma solução aquosa de um ácido orgânico em uma concentração final de 2 partes em peso da proteína, a 2 a 60 partes em peso de um ácido orgânico para 96 a 38 partes em peso de água; e (ii) secar para que a suspensão forme a película ou o

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4/30 revestimento .

[0016] A película ou revestimento podem ser claros ou turvos e transparentes ou translúcidos.

[0017] De acordo com um terceiro aspecto da invenção, é provido um processo para preparar uma matriz a partir das micropartículas de proteína, compreendendo as etapas de:

(i) preparar uma suspensão de micropartículas em uma solução aquosa de um ácido orgânico para uma concentração final de 2 partes em peso da proteína para 2 a 60 partes em peso de um ácido orgânico para 96 a 38 partes em peso de água;

(ii) lavar para retirar	o ácido orgânico; e
(iii) secar a	suspensão	para formar a matriz.
[0018]	Os	processos	que formam o segundo	e o terceiro
aspecto	da	invenção	são preferivelmente	realizados na
ausência	de	qualquer	solvente orgânico	não-ácido, em

particular, alcoóis tais como etanol.

[0019] O ácido orgânico pode ser ácido propiônico ou ácido acético para o preparo de películas ou de revestimentos, ou propiônico, láctico ou ácido acético para o preparo de matrizes, ou de qualquer outro ácido apropriado.

[0020] A concentração final da suspensão pode ser de 2 partes em peso da proteína para 10 a 60 partes em peso do ácido orgânico para 88 a 38 partes em peso de água.

[0021] Quando o ácido orgânico utilizado é o ácido acético, a concentração final é, preferivelmente, de 2 partes em peso da proteína para 20 a 60 partes em peso do ácido acético para 78 a 38 partes em peso de água, mais preferivelmente, 2 partes em peso da proteína, para 20 a 30 partes em peso do ácido acético para 78 a 68 partes em peso de água, mais preferivelmente, de 2 partes em peso da

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5/30 proteína a 21,6 partes em peso do ácido acético para 76,4 partes em peso de água.

[0022] Entretanto, quando o ácido orgânico é acido acético e a proteína é uma solução tendo sido extraída de grãos exaurido de fermentadores ou outros co-produtos da produção de álcool de cereais, então a proporção de proteína para ácido para água é preferivelmente de 2 partes de ácido acético para 96 partes de água.

[0023] Quando o ácido orgânico utilizado é ácido propiônico ou ácido láctico, a concentração final é, preferivelmente, 2 partes em peso da proteína para 10 a 30 partes em peso de ácido propiônico ou ácido láctico para 88 a 68 partes em peso de água, mais preferivelmente, 2 partes em peso da proteína para 10 a 15 partes em peso de ácido propiônico ou ácido láctico para 88 a 83 partes em peso de água e, mais preferivelmente, 2 partes em peso de proteína para 10,8 partes em peso de ácido propiônico ou ácido láctico para 87,2 partes em peso de água.

[0024] Nos processos do segundo e do terceiro aspecto da invenção, a suspensão preparada na etapa (i) é, preferivelmente, deixada descansar por 8 a 24 horas antes da etapa (ii).

[0025] Adicionalmente, antes da etapa (ii) é adicionada, preferivelmente à suspensão, um plastificante em uma quantidade de 0,2 a 0,6 partes em peso do plastificante para 1 parte em peso da proteína, mais preferivelmente, cerca de 0,4 partes em peso do plastificante para 1 parte em peso da proteína.

[0026] Exemplos de plastificantes incluem glicerol, polietileno glicol, polipropileno glicol e ácido láctico

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6/30 utilizado sozinho ou em combinação, tartarato de dibutila, monoglicerídios tais com o ácido oléico, ácido palmítico ou ácido esteárico, trietileno glicerol e sorbitol, ou qualquer outro plastificante apropriado ou combinação dos mesmos. [0027] Um plastificante preferido é uma mistura de 1:1:1 (p/p) glicerol:polietileno glicol (400):ácido láctico.

[0028] Outros aditivos, tais como, agentes de coloração, agentes aromatizantes, conservantes, traços de minerais, nutrientes, enzimas, hormônios, nutracêuticos, fármacos, probióticos, prebióticos, drogas e combinações, podem ser adicionados antes das etapas (ii) ou (iii).

[0029] Para a preparação de uma película, a suspensão da etapa (i) pode ser fundida diretamente sobre a superfície de fundido. Em seguida, a fase líquida é removida por secagem, tanto com quanto sem a aplicação de calor, para resultar em uma película completa. A película pode ser clara ou turva, transparente ou translúcida.

[0030] Para a preparação de um revestimento em um substrato, a suspensão da etapa (i) pode ser utilizada para cobrir uma superfície do substrato. Em seguida, a fase líquida é removida por secagem, tanto com quanto sem a aplicação de calor, para resultar em um revestimento completo sobre o substrato. O revestimento pode ser claro, turvo, transparente ou translúcido.

[0031] Para a preparação de uma matriz incorporando um composto ou substância, a suspensão da etapa (i) foi adicionada ao composto ou ao substrato. Em seguida, a fase líquida foi removida por secagem, tanto com quanto sem a aplicação de aquecimento, para resultar em uma matriz opaca encapsulando ou incorporando o composto ou substância.

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7/30 [0032] De acordo com um quarto aspecto da invenção, as micropartículas de proteína podem ser formadas de acordo com o processo do primeiro aspecto da invenção de modo a incorporar ou encapsular um composto, tal como um nutriente, vitamina, enzima, hormônio, fármaco, plastificante, conservante, agente de coloração, agente aromatizante, traços de minerais, nutracêuticos, probióticos ou prebióticos, ou combinações dos mesmos. O composto pode ser adicionado tanto a solução de ácido concentrada quanto a solução aquosa antes da formação das micropartículas.

[0033] Alternativamente, a solução ou dispersão contendo as micropartículas de proteína podem ser secas para formar um pó.

[0034] Neste caso, de acordo com um quinto aspecto da invenção, é provido um processo para preparar um revestimento sobre um substrato a partir das micropartículas de proteínas secas, incluindo as etapas de:

(i) misturar as micropartículas de proteína secas com um substrato seco a ser revestido;

(ii) adicionar uma quantidade de um ácido orgânico concentrado para a mistura da etapa (i) de modo que as micropartículas de proteína revistam o substrato; e (iii) remover o ácido orgânico para fundir as micropartículas de proteína ao substrato para formar o revestimento.

[0035] O ácido orgânico pode ser removido através de evaporação, opcionalmente, com o auxílio de calor/aquecimento.

[0036] De acordo com um sexto aspecto da presente invenção, é provido um processo para incorporar um composto dentro de uma matriz formada a partir das micropartículas de

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8/30 proteína incluindo as etapas de:

(i) misturar as micropartículas de proteínas secas com uma solução do composto a ser incorporado, as micropartículas de proteína seca sendo substancialmente insolúveis em uma solução; e (ii) remover o solvente, deixando o composto incorporado dentro da matriz.

[0037] O solvente pode ser removido por evaporação, opcionalmente, com o auxílio de calor.

[0038] De acordo com um sétimo aspecto da invenção, é provido uma micropartícula de proteína formada a partir do primeiro processo descrito acima. A micropartícula deve ter vacúolos e assim, uma grande área de superfície interna, e pode ser mais leve do que uma micropartículas formada utilizando um solvente orgânico não-ácido, tal como etanol. [0039] De acordo com um oitavo aspecto da presente invenção, é provida uma solução aquosa ou dispersão de micropartículas produzidas através do primeiro processo descrito acima.

[0040] De acordo com um nono aspecto da invenção, é provido um pó seco de micropartículas de proteína produzido através do primeiro processo descrito acima.

[0041]	De	acordo com	um	décimo	aspecto	da presente
invenção,	é	provida uma	película	fundida a	partir da
dispersão	de	micropartículas	produzidas através	do segundo
processo	descrito acima.
[0042]	De	acordo com	um	décimo	primeiro	aspecto da

presente invenção, é provido um substrato tendo um revestimento de micropartículas produzidas através do segundo ou quinto processos descritos acima.

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9/30 [0043] O substrato pode ser selecionado a partir do grupo consistindo de gênero alimentício, frutas, vegetais, minimamente processados e frutas e vegetais processadas, sementes, raízes, produtos alimentícios de origem animal, agentes de coloração, agentes aromatizantes, traços de minerais, nutrientes, enzimas, hormônios, fármacos, nutracêuticos, probióticos, prebióticos, drogas e outros produtos farmacêuticos, dispositivos médicos e do gênero, e combinações destes.

[0044] A proteína inicial pode ser uma proteína comercialmente disponível tal como zeína comercial.

[0045] Alternativamente, a proteína pode ser provida através da extração da proteína a partir de todos os grãos (sorgo, milho, trigo, cevada, etc., ou misturas dos mesmos) ou um co-produto tal como, farinha, farelo, grãos de exaustão, grãos de secagem de destiladores com co-produtos solúveis ou outros co-produtos da produção de álcool a partir dos cereais, com um ácido orgânico tal como ácido acético glacial, ácido láctico ou ácido propiônico, e remoção do material sólido residual. Misturas de proteínas podem ser também utilizadas para extração, tal como àquelas encontradas em grãos de exaustão de fermentadores, grãos de secagem de destiladores com co-produtos solúveis ou outros co-produtos da produção de álcool a partir de cereais, o que pode ser misturas de, mas não a exclusão de outras combinações de cereais, por exemplo, sorgo e milho em várias proporções ou cevada e milho.

[0046] Esta solução de proteína pode então ser utilizada diretamente na etapa (b) do processo do primeiro aspecto da presente invenção.

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Breve descrição dos desenhos [0047] A figura 1 ilustra uma micrografia eletrônica de varredura de micropartículas de cafirina produzidas pelo método da técnica anterior de “Parris, Cook and Hics (2005) J. Agric. Food Chem., 53: 4788-4792, usando um etanol aquoso para dissolver a cafirina antes da formação de micropartícula;

[0048] A figura 2 ilustra micrografias das micropartículas de cafirina produzidas de acordo com o processo da presente invenção, em diferentes concentrações ácidas: a-c micrografia de luz a 5,4%; 21,6% e 40% de ácido acético, respectivamente; d-f micrografia eletrônica de varredura a 5,4%; 21,6% e 40% de ácido acético, respectivamente; g-i micrografia de transmissão de elétrons a 5,4%; 21,6% e 40% de ácido acético, respectivamente; j-l micrografia de transmissão de elétrons de alta magnitude 5,4%; 21,6% e 40$ de ácido acético, respectivamente;

[0049] A figura 3 ilustra uma micrografia eletrônica de varredura de micropartículas de cafirina seca por congelamento, produzida de acordo com o processo da presente invenção;

[0050] A figura 4 ilustra: (a) uma película fundida de micropartículas de cafirina a 2%, a partir de 21,6% de ácido acético, a película tendo aproximadamente 15 microns de espessura, flexível, colorida, clara e transparente com uma superfície lisa; e (b) uma película fundida de cafirina a partir do ácido acético glacial, a película tendo aproximadamente 30 microns de espessura, flexível, quase colorida, clara, não completamente transparente com uma superfície áspera;

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11/30 [0051] A figura 5 ilustra o efeito das micropartículas de cafirina feitas com diferentes ácidos orgânicos com concentração ácida aumentada sobre a formação da película, ac ácido acético, 5,4%; 10,8%; 21,6%; d-f ácido propiônico, 5,4%; 10,8%; 21,6%, respectivamente. (a) e (b) mostram que películas completas e claras não podem ser formadas tanto em

5,4% quanto	em	10,8% de	ácido acético,	respectivamente.	As
películas	são	opacas,	fragmentadas e	ásperas sobre	a
superfície.	Ao	contrário	, a 21,6% de	ácido acético,	uma

película lisa e transparente, clara, colorida, completa é formada (c). (d) ilustrada que com 5,4% de ácido propiônico uma película completa não pode ser formada. A película é opaca e fragmentada com uma superfície áspera, mas menor que em (a) e (b) onde o ácido acético é utilizado a 5,4% e 10,8%, respectivamente, (e) e (f) demonstram que a 10,8% e 21,6%, de ácido propiônico, respectivamente, uma película lisa e transparente, clara, colorida, e completa é formada;

[0052] A figura 6 ilustra películas e revestimento feitos a partir de micropartículas feitas diretamente de um extrato de grãos de exaustão de fermentadores de sorgo. A-20% de ácido acético; B-10% de ácido acético; C-2% de ácido acético;

D-1% de	ácido	acético;	(1) 2% de	cafirina,	(2) 1% de
cafirina;	(3)	0,5% de	cafirina. Observar que todas as
películas	estão	completas;	e
[0053]	A figura 7 ilustra abacates	minimamente	processados
durante 5	dias	a 4°C. (A)	abacate não	revestido;	(B) abacates

revestidos com uma formulação de revestimento de micropartículas definidas de acordo com a presente invenção.

Descrição detalhada da invenção [0054] A presente invenção refere-se, em um primeiro

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12/30 aspecto, a um processo para produção de dispersões de micropartículas de proteína em soluções de ácido orgânico diluídas. As micropartículas são formadas por dissolução da proteína em uma solução de ácido orgânico concentrado e então diluição da solução com uma fase aquosa.

[0055] A formação das micropartículas é dependente da solubilidade relativa da proteína na solução de ácido orgânico. Como a concentração de ácido orgânico é reduzida por adição de uma fase aquosa, a proteína não é tão solúvel e, portanto, deriva da solução, formando micropartículas. Um composto pode ser adicionado à solução antes da formação das micropartículas de modo a ser incorporado dentro, ou encapsulado pelas micropartículas. A dispersão das micropartículas no ácido orgânico diluído é estável e homogênea sob condições contaminação microbiana.

de armazenamento ambiente sem As micropartículas podem ser separadas a partir do ácido orgânico diluído, lavadas e secas para formar um pó, ou podem ser utilizadas para formar uma película contínua ou para revestir um substrato.

[0056] Como utilizado aqui, um ácido concentrado é, geralmente, relacionado como tendo uma concentração de 80% de ácido ou maior, e um ácido diluído está geralmente relacionado como tendo uma concentração menor que 80% de ácido.

[0057] Nenhum álcool, tal como etanol, é utilizado no processo e todos os constituintes podem ser compatíveis com alimentos, resultando em micropartículas apropriadas para consumo por humanos e animais. Diferente dos processos conhecidos para formação de micropartículas, o presente processo não requere temperaturas elevadas, e pode ser

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13/30 realizado em temperaturas variando de 20°C a 40°C, tal como a temperatura ambiente. Os químicos tóxicos não são requeridos também.

Tamanho de partícula e definição [0058] Como utilizado aqui, “micro” refere-se a uma partícula com um diâmetro variando de nanômetros a micrômetros. As microesferas são usualmente consideradas como sendo partículas esféricas, enquanto as micropartículas são usualmente levemente maiores e irregulares ou não-esféricas na forma. Na presente invenção, as micropartículas podem ser tanto esféricas quanto de formato irregular, mas ambas as formas, serão relacionadas com as micropartículas. O termo “micropartícula” pretende, portanto, incluir as microesferas. [0059] O tamanho das micropartículas pode variar de um tamanho de nano (nanômetros) a micrômetros, mas mais particularmente, está entre 1-10 microns para partículas esféricas e pode ser um pouco maior para partículas de formato irregulares ou para agregados de micropartículas, o que pode ser até de vários milímetros. O tamanho pode, entretanto, ser manipulado para produzir partículas maiores ou menores, dependendo do método de preparação, por exemplo, variação da taxa de diluição ou cisalhamento aplicado durante a preparação.

[0060] A formação de micropartículas com uma variação de tamanho permite múltiplas aplicações. Isto inclui uso alimentício, por exemplo, formação de filmes para embalagens de alimentos, revestimentos comestíveis para o prolongamento da vida de prateleira dos produtos alimentícios, e encapsulamento de, por exemplo, de gêneros alimentícios, produtos de ração animal, ingredientes para alimentos,

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14/30 enzimas, hormônios, agentes de coloração, agentes aromatizantes, traços de minerais, nutrientes, fármacos, nutracêuticos, probióticos e prebióticos. Outros usos nãoalimentícios poderiam incluir liberação de drogas, outros usos médicos tais como reconstrução de tecidos, matrizes de tecidos ou placas e revestimentos para cardiovasculares e outros dispositivos médicos, semicondutores biológicos e de liberação tardia de pesticidas e fertilizantes.

[0061] As micropartículas feitas através dos processos desta invenção tem uma superfície porosa áspera e numerosos furos internos ou vacúolos como mostrado por microscopia eletrônica de varredura (superfície externa) e microscopia de transmissão de elétrons (estrutura interna) (figura 2). Este método de preparação resulta, assim, na formação de micropartículas com uma área de superfície muito grande.

[0062] As micropartículas produzidas pela presente invenção têm uma superfície externa perfurada áspera, parecem ser leves, mas podem ser reforçadas através de reticulantes e formarão películas contínuas, enquanto as micropartículas produzidas pela técnica anterior usando etanol aquoso têm uma superfície externa quase plana, parece ser firme e não formam películas contínuas.

Proteínas para formação de micropartículas [0063] As proteínas são proteínas de prolamina de cereais e, mais particularmente, (mas não exclusivamente), cafirina, glúten, hordeína ou zeína ou misturas das mesmas. Tipicamente, a proteína é cafirina. As proteínas são utilizadas para preparar micropartículas uma vez que elas são naturais e tem diversas propriedades, as quais podem ser modificadas, e são degradáveis em ambas, in vitro e in vivo,

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15/30 para aminoácidos e peptídeos pequenos. Elas são, portanto, adequadas para consumo humano e animal e para administração farmacêutica. As proteínas hidrofóbicas tendo solubilidade limitada em água, mas, são solúveis em solventes orgânicos, misturas aquosas de solventes orgânicos, solventes binários e solventes com pHs extremos, tais como ácidos ou bases. A cafirina é a proteína prolamina preferida uma vez que ela é mais hidrofóbica do que outras prolaminas tais como gliadina de tricô e zeína de milho, e também é mais reticulante do que zeína, resultando em propriedades funcionais melhores.

[0064] A proteína pode ser uma proteína isolada ou pode ser extraída a partir de um co-produto material, tal como grãos de exaustão de fermentadores, grãos secos de destiladores com co-produtos solúveis ou outros co-produtos de produção de álcool a partir de cereais.

Ácidos utilizados para preparar micropartículas [0065] A proteína é dissolvida em um ácido orgânico apropriado. A proteína é usualmente considerada solúvel se 0,5% (p/v) da proteína dissolve em um solvente para formar uma solução clara em temperatura ambiente (20-25°C) (Shukla,

r., and Cheryan, M. (2001) “Zein: The Industrial Protein From corn, Industrial Crops and Products 13: 171-192).

Exemplos de ácidos orgânicos que podem ser utilizados para dissolver as proteínas são ácido acético, ácido láctico, e ácido propiônico. O uso destes ácidos confere a vantagem da compatibilidade de alimentos às micropartículas. Em adição, as micropartículas formadas neste caminho são microbianamente estáveis e nenhum conservante adicional e necessário. O ácido preferido no processo desta invenção é o ácido acético. Formação de Pó

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16/30 [0066] As micropartículas podem ser separadas a partir da solução de ácido orgânico diluído na qual elas são formadas e lavadas com uma solução aquosa. A solução aquosa é então removida e as micropartículas secas em um pó. O método de separação pode ser, por exemplo, filtração ou centrifugação. O método de secagem pode incluir liofilização, secagem rápida, secagem por pulverização, secagem em cama de fluido ou qualquer outro método de secagem apropriada. Os métodos de separação e secagem irão tipicamente ser dependentes da proteína utilizada. O pó pode ser armazenado e manuseado sem refrigeração ou outras técnicas especiais de manipulação. A re-hidratação pode ser conseguida por adição do pó em uma solução de ácido orgânico com agitação suficiente para resuspensão das partículas. A quantidade da solução de ácido orgânico diluído utilizado para reconstituição é dependente da concentração do produto final requerido e do uso para o qual ele é requerido.

[0067] As micropartículas que foram secas retêm sua estrutura. Eles são esféricas ou irregulares na forma, com uma superfície perfurada áspera, como mostrada pela microscopia eletrônica de varredura (Figura 3).

Película e formação de revestimento [0068] Quando as micropartículas de proteína são utilizadas para formar uma película livre de fixação, a suspensão de ácido orgânico diluído das micropartículas pode ser fundida diretamente sobre uma superfície de fundido. A fase líquida é então removida por secagem, tanto com quanto sem a aplicação de calor. Uma película completa (como oposta à fragmentada, trincada ou com furos) é produzida com espessuras variáveis, dependendo da concentração da proteína

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17/30 utilizada para fazer as micropartículas (figura 4a). A película terá tipicamente uma espessura de 10-30 microns. A película pode ser utilizada como um material de embalagem, tal como para gêneros alimentícios, ingredientes de alimentos e fármacos para uso veterinário e humano. A película pode também ser utilizada como um material de intercalação, tal como para separação das porções do mesmo produto alimentício, por exemplo, pizza, ou entre diferentes componentes no mesmo produto alimentício, tal como suplemento de frutas e massas em um bolo/torta para prevenir a transferência de umidade. A película pode ser clara ou turva.

[0069] Quando um revestimento é requerido sobre um substrato, a suspensão aquosa das micropartículas é utilizada para cobrir uma superfície do substrato e a fase aquosa é então deixada evaporar, formando um revestimento sobre a superfície do substrato. O substrato pode ser aquele de um gênero alimentício comestível ou ingrediente de alimentos, que é sensível a oxidação ou perda de umidade, tal como uma fruta, nozes, temperos ou vegetais tanto totalmente quanto minimamente processados ou processados ou um produto alimentício animal ou de peixe. Outros produtos adequados poderiam também ser revestidos, tais como uma flor, compostos farmacêuticos, enzimas, hormônios, composições em tabletes, ou outros fármacos, produtos biológicos ou médicos, nutrientes, nutracêuticos, probióticos, prebióticos e do gênero, ou combinações dos mesmos.

[0070] É importante que a suspensão das micropartículas de proteína seja diluída quando preparadas em relação ao segundo e terceiros processos da invenção, de modo a produzir películas e revestimentos que são completos. Isto diferencia

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18/30 os filmes e revestimentos daqueles feitos pelos processos da técnica anterior, usando etanol ou proporções diferentes de proteína: solvente : água, o que pode não ser completo. Os filmes (películas) preparados de acordo com a invenção podem ser também claros ou turvos, transparentes ou translúcidos. [0071] A dispersão das micropartículas de proteína pode ser co-formulada com vários aditivos, tal como plastificantes, que aperfeiçoam as propriedades funcionais das películas e revestimentos feitos da dispersão de micropartícula. Os filmes produzidos a partir das micropartículas de proteína são completos e podem ser feitos mais finos do que outras películas, tais como de 10 gm a 30 mm, e preferivelmente de cera d 15 mm. As películas podem também ter algumas propriedades funcionais superiores para os filmes produzidos por soluções etanólicas de proteínas, tais como propriedades de barreira de água e serem claras, transparentes ou translúcidas (ou outros filmes fundidos são frequentemente fragmentos e opacos).

Encapsulação dentro de matrizes [0072] Quando as micropartículas de proteína a serem formadas são utilizadas para encapsular um composto, o composto pode ser incorporado dentro da solução aquosa, ácido orgânico ou solução de proteína, ou uma combinação dos mesmos, antes da formação das micropartículas. Quando as soluções resultantes são misturadas com agitação, as micropartículas são formadas contendo o composto que deve ser encapsulado.

[0073] Um outro caminho para efetuar a encapsulação de um composto dentro das micropartículas é através da mistura das micropartículas da invenção, secas previamente, com uma

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19/30 substância em solução ou suspensão na qual as micropartículas não são solúveis. Na evaporação dos referidos solventes, o composto permanece encapsulado dentro das micropartículas. Modificação das micropartículas [0074] As propriedades das micropartículas podem ser modificadas para uma aplicação determinada, por exemplo, tanto pelo uso de meios químicos, enzimáticos ou físicos para alterar o início da proteína antes da ou durante a formação das micropartículas, ou após a formação das micropartículas, matrizes ou após ou durante a formação de películas ou revestimentos a partir das micropartículas. As referidas modificações podem produzir micropartículas, matrizes, placas, películas/filmes, ou revestimentos com propriedades melhoradas, tais como estabilidade térmica alterada, estabilidade no cisalhamento ou resistência as proteases. As películas ou revestimentos feitos através das referidas modificações teriam também propriedades funcionais melhoradas incluindo tensão alterada e propriedades de barreira, resistência melhorada às proteases e biodegradação tardia. Exemplos específicos de modificações de proteína são reticulantes com taninos, usando enzimas trans-glutaminase e calor.

[0075] A presente invenção é descrita ainda através dos exemplos a seguir. Os referidos exemplos, entretanto, não devem ser construídos como limitativos de qualquer caminho, tanto do conceito quanto do escopo de proteção da invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Formação das micropartículas cafirina [0076] Uma composição de acordo com uma configuração da invenção foi feita por mistura de (todas as porcentagens são

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20/30 dadas em uma base em peso) : um plastificante (10%), ácido acético glacial (66%) e cafirina (24%), e a cafirina foi dissolvida no ácido. A água destilada foi então adicionada com agitação, e as micropartículas foram formadas. A concentração da proteína foi 2%, o plastificante 40% em relação ao conteúdo da proteína e uma concentração de ácido de 5,4%.

[0077] As micropartículas foram preparadas através da pesagem de cafirina (1,8g - 88,63% de proteína) dentro de um frasco de Erlenmeyer de 125 ml. O plastificante (0,66g 1:1:1 de ácido láctico, polietileno glicol (400), glicerol-40% em relação à proteína) foram misturados com ácido acético glacial (4,34 g) antes da adição da cafirina com agitação suave. A temperatura foi mantida lentamente a 30 °C para garantir a solvatização completa. A solução de proteína foi então deixada durante a noite (16 horas) em temperatura ambiente para relaxar a proteína. Após este período, água destilada foi adicionada lentamente durante um período de 5 minutos com agitação em um peso total de 80g. Na adição da água, as micropartículas formadas, aparecem como uma suspensão coloidal branca e estável. O tamanho da partícula foi de 1-10 microns, com a maioria das micropartículas medindo 3-4 microns. Não houve um aumento aparente no tamanho das partículas com armazenamento a 8°C durante um período de 6 meses. Durante este período, não existe crescimento bacteriano sem qualquer adição de agentes antimicrobianos. Quando revisado por microscopia eletrônica de varredura, as micropartículas parecem como esferas com superfície extensivamente perfurada (Figura 2). A estrutura interna determinada por microscopia de transmissão de elétrons

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21/30 revelou vacúolos internos de tamanho variado com paredes lisas. Estes resultados mostram que as micropartículas preparadas através dos processos da presente invenção tem área de superfície interna muito grande.

Exemplo 2: Formação de micropartículas de zeína usando tanto ácido acético, ácido láctico quanto ácido propiônico.

[0078] Uma composição foi feita através da mistura de (todas as porcentagens são dadas em uma base em peso): um plastificante (9,5%), ácido acético glacial (62%) (ou ácido láctico ou ácido propiônico) e zeína comercial (ZPP Gold, Zein Protein Products, Marina, CA) (29,6%, e zeína foi dissolvida no ácido. A água destilada foi então adicionada com agitação, e as micropartículas foram formadas. A concentração da proteína foi 10%, plastificante 40% em relação ao conteúdo da proteína e uma concentração ácida de 21,6%. Para reduzir o conteúdo de proteína adicionalmente para 2%, 21,6% de ácido acético foi adicionado.

[0079] As micropartículas foram preparadas através da pesagem da zeína (4g - 100% de proteína) dentro de um frasco de Erlenmeyer de 125 ml.

[0080] O plastificante (1,32g 1:1:1 de ácido láctico, polietileno glicol (400), glicerol-40% em relação à proteína) foram misturados com ácido acético glacial (8,64 g) antes da adição da zeína com agitação suave. A temperatura foi mantida lentamente a 30°C para garantir a solvatização completa. A solução de proteína foi então deixada durante a noite (16 horas) em temperatura ambiente para relaxar a proteína. Após este período, água destilada foi adicionada lentamente durante um período de 5 minutos com agitação em um peso total de 40g, 10% de zeína, 21,6% de ácido acético. Na adição da

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22/30 água, as micropartículas formadas, aparecem como uma suspensão coloidal branca e estável. Para reduzir ainda a concentração da proteína, 21,6% de ácido acético foi utilizado para diluição.

Exemplo 3: Formação de um revestimento feito com micropartículas de cafirina e reticulada por aquecimento de modo a proteger o material revestido, por exemplo, metionina, um aminoácido limitante, das condições no rúmen de animais multi-gástricos.

[0081] As micropartículas da invenção foram utilizadas para fazer um pó seco. Este pó preparado como descrito acima na seção, “formação de pó foi misturado com uma substância seca, neste caso, o aminoácido, a metionina em uma proporção de 1:1. A mistura de pó foi então misturada com ácido acético glacial (1:2) para formar uma pasta com o auxílio de fusão junto com as micropartículas em torno da substância, por exemplo, metionina e formação de um revestimento contínuo. A pasta foi então tanto seca diretamente sobre uma superfície plana quanto, primeiramente, submetida a um procedimento único de extrusão sem exposição ao calor ou pressão excessiva. O material revestido foi então tratado por calor em uma força de tração durante 60-70°C à noite. A preparação de micropartículas revestida com metionina foi então

submetida	à	dissolução	e análise de	digestão	de pepsina
simulada	para	determinar	as características de	liberação de
metionina	.
[0082]	As	condições	de incubação	para o teste de

dissolução simulando as condições no rúmen de gado com um pH de aproximadamente 5,5 a 39°C. Não houve uma liberação de explosão de micropartículas de cafirina revestidas com

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23/30 metionina. Ao contrário, após 8 horas, aproximadamente 80% de metionina foi liberada do ácido acético glacial fundido ao revestimento de micropartículas comparado com a metionina não revestida, que foi completamente dissolvida em menos que 1 hora sob estas condições. A liberação da metionina parece ser por difusão através dos poros dentro do revestimento de micropartícula de cafirina.

[0083] Assim, pelo revestimento da metionina ou qualquer outro composto apropriado com um revestimento de micropartículas, uma liberação tardia do referido composto é efetuada. Isto permite que o composto ultrapasse o rúmen e seja absorvido no intestino do animal como desejado.

Exemplo 4: Formação de uma película livre de fixação feita com micropartículas de cafirina.

[0084] Em uma outra configuração, as micropartículas da invenção foram utilizadas para fazer uma película livre de fixação. Uma suspensão de micropartícula preparada como descrito acima no Exemplo 1 (4g - 2% de proteína, 5,4% de ácido acético por película) foi pesada em tubos plásticos de centrífugas. As suspensões foram centrifugadas a 4000 g durante 5 minutos. Os sobrenadantes foram decantados e substituídos com um peso igual de 21,6% de ácido acético. As suspensões de proteína foram então deixadas durante na noite em temperatura ambiente. O plastificante (32 mg por película, misturado 1:1:1 de ácido acético, polietileno glicol (400), glicerol- 40% em relação à proteína) foi adicionado à suspensão de proteína. A suspensão foi então fundida em um recipiente plástico plano, seco e limpo. Os recipientes foram colocados em uma superfície horizontal em um forno (não tração forçada) a 50°C e seca durante 4 horas. As películas

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24/30 foram gentilmente descascadas a partir dos recipientes fundidos. As propriedades de tensão e barreira de água das películas livres de fixação foram então determinadas.

[0085] As películas livres de fixação feitas de micropartículas de cafirina preparadas pelo método descrito aqui têm uma permeabilidade ao vapor d'água menor que as películas feitas com a mesma porcentagem de cafirina usando películas convencionais de técnicas de fusão. As propriedades de tensão das películas de micropartículas de cafirina foram similares àquelas fundidas usando filmes convencionais de técnicas de fusão.

[0086] As películas de micropartículas de cafirina foram muito mais finas (aproximadamente 15 microns) (Figura 4a) que os filmes de cafirina (30 microns) na mesma concentração de proteína fundida usando filmes convencionais em técnicas de fusão (figura 4b). Deve ser apreciado que a espessura das películas de micropartículas livres de fixação pode ser variada para obter diferentes propriedades. Similarmente, a composição exata das películas pode ser variada, para transmitir diferentes propriedades aos filmes resultantes. [0087] Adicionalmente, os filmes foram claros, coloridos e transparentes.

Exemplo 5: Formação de uma película livre de fixação feita com micropartículas de cafirina, ácido - ácido propiônico. [0088] As micropartículas, da invenção foram utilizadas para fazer uma película de fixação livre usando um ácido orgânico alternativo, por exemplo, ácido propiônico. Uma suspensão de micropartícula preparada como descrito acima no Exemplo 1 (4g - 2% de proteína, 5,4% de ácido propiônico por película) foi pesada em um tubo plástico de centrífuga. As

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25/30 suspensões foram centrifugadas a 4000 g durante 5 minutos. Os sobrenadantes foram decantados e substituídos com um peso igual de 10,8% de ácido propiônico. As suspensões de proteína foram então deixadas durante a noite a temperatura ambiente. O plastificante (32 mg por filme, misturado a 1:1:1 de ácido láctico, polietileno glicol (400), glicerol-40% em relação a proteína) foi adicionada à suspensão de proteína. A suspensão foi então fundida em um recipiente limpo, claro, plano e seco. Os recipientes foram colocados em uma superfície horizontal em um forno (não tração forçada) a 50°C e seca durante 4 horas. As películas foram gentilmente descascadas a partir dos recipientes fundidos (Figura 5e). As propriedades de tensão, barreira de água e digestabilidade da proteína das películas livres de fixação foram então determinadas (Tabela 1).

[0089] As películas fundidas de micropartículas de cafirina a partir do ácido propiônico foram similares em espessura (aproximadamente 15 microns) (Figura 5e) e de aparência (clara, colorida, e transparente) para as películas fundidas de micropartículas de cafirina (30 microns) na mesma concentração de proteína fundida usando técnicas de fundição de películas convencionais.

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Tabela 1

Propriedades funcionais de películas de cafirina de fixação livre

Propriedades funcionais	2% de película de micropartícula de cafirina (ácido acético)	2% de película de micropartícula de cafirina (ácido propiônico)	2% de película de micropartícula fundida a partir do ácido acético glacial
Espessura (gm)	14,0 (3,0)*	14,0 (5,0)	30,3 (3,4)
Permeabilidade ao vapor de água (gmm/m2 hkPa)	0,22 (0,05)	0,36 (0,11)	0,50 (0,11)
Tensão na quebra (N/mm2)	3,72 (4,87)	2,39 (4,13)	5,39 (2, 07)
Alongamento (%)	2,53 (3,37)	1,15 (1,81)	2,99 (1,79
Digestão da proteína (%)	65,7 (2,5)	69,9 (6,7)	89,0 (1,3)

*Figuras em parênteses indicam o desvio padrão

Exemplo 6: Encapsulação dos antioxidantes dietéticos dentro das micropartículas de cafirina para animais monogástricos incluindo humanos.

[0090] Micropartículas da invenção foram utilizadas para fazer um pó seco. Este pó preparado como descrito acima na seção, “formação de pó foi misturado com um composto em solução, neste caso, os antioxidantes polifenólicos catequina ou taninos condensados do sorgo dissolvidos em 70% de acetona, um solvente no qual as micropartículas não são solúveis. Na evaporação dos referidos solventes, o composto remanescente, é encapsulados dentro das micropartículas. O nível de encapsulação foi 20% de polifenol em relação à proteína. Os exemplos utilizados não excluem o uso de outras substâncias ou solventes diferentes para aquelas substâncias. Os antioxidantes de micropartículas encapsulados foram então submetidos a dissolução e simularam a digestão para

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27/30 determinar o perfil de liberação dos antioxidantes encapsulados. As condições de incubação simularam àquelas do sistema digestivo humano, que é 2 horas a 37°C com pepsina em um pH 2,0 seguido por um adicional d 2horas de incubação na mesma temperatura com tripsina/quimotripsina em pH 7,6.

[0091] Após uma liberação de queima inicial pequena, durante um período adicional de quatro horas, a catequina e o tanino condensado nas micropartículas de cafirina encapsulada mostraram nenhuma digestão de proteína virtual, mas liberou aproximadamente 70% e 50%, respectivamente, de sua atividade antioxidante total. Isto demonstrou que a encapsulação de antioxidantes polifenólicos dentro das micropartículas de cafirina permitiria uma liberação controlada do composto encapsulada no estômago humano e no trato gastrointestinal. Deve ser apreciado que as cargas de compostos ativos poderiam ser variadas de modo a obter diferentes níveis de dosagens. Similarmente, as micropartículas de cafirina com o composto encapsulado pode submeter tratamento adicional, por exemplo, por aquecimento, de modo a modificar o perfil de liberação do composto encapsulado.

Exemplo 7: Extração de cafirina dos grãos de exaustão de fermentadores de sorgo (co-produto) e a preparação direta de micropartículas de cafirina.

[0092] Os grãos de exaustão de fermentadores de sorgo (conteúdo de umidade de 75%) foram previamente embebidos durante 16 horas em uma solução aquosa de0,5% de metabisulfeto de sódio em uma proporção de sólido para solvente de 1:5. O metabisulfeto de sódio foi removido e os grãos de exaustão de fermentadores foram extraídos com ácido acético glacial em uma proporção de sólido para solvente de

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1:5 por 48 horas a temperatura ambiente. O extrato (solução de proteína) foi então separado do material sólido. O material sólido foi lavado com uma quantidade igual adicional de ácido acético glacial e dois extratos combinados. As micropartículas foram então feitas por adição lenta de água ao extrato de ácido acético glacial (solução de proteína) com agitação constante. A proporção do extrato (solução de proteína) para água adicionada foi de 1:3 (a proporção da proteína para ácido para água foi de aproximadamente 2 partes de proteína, 25 partes de ácido acético e 73 partes de água, dependendo do conteúdo original de proteína dos grãos de exaustão dos fermentadores). As micropartículas resultantes foram então separadas a partir do líquido e lavadas com água para remover qualquer ácido residual antes da secagem. As micropartículas secas feitas por este método teve uma pureza de 95% e poderia então ser utilizada em qualquer uma das aplicações descritas neste documento.

Exemplo 8: Preparação direta de películas de micropartícula de cafirina ou revestimentos a partir de um extrato de grãos de exaustão de fermentadores de sorgo.

[0093] As micropartículas feitas de grãos de exaustão de fermentadores de sorgo como descrito no exemplo 7, foram utilizados para fazer películas de fixação livre e revestimentos. Ao invés da lavagem e secagem das micropartículas, a suspensão de micropartículas pode ser tomada diretamente e seca em um filme ou revestimento. Em adição, se desejado, o ácido ou a concentração de proteína pode ser manipulada como descrito no Exemplo 4 de modo a produzir películas e revestimentos de diferentes espessuras e com diferentes propriedades funcionais (Figura 6) . As

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29/30 películas feitas por este caminho foram levemente mais grossas que àquelas feitas de cafirina isolada, tendo aproximadamente 25 microns quando 2% de cafirina foi utilizada e 15 microns, quando 1% de cafirina foi utilizada. Concentrações menores de proteína resultaram em revestimentos que poderia não ser separados da superfície de fundição.

[0094] As películas feitas deste e outros co-produtos foram usualmente levemente turva, mas ainda assim completa. A turbidez é provavelmente devido as impurezas dos co-extraídos com a cafirina. Preparar as micropartículas de cafirina pura e então utilizar estas micropartículas para preparar filmes, conseguiu-se películas claras, transparentes que são completas.

Exemplo 9: Uso de uma formulação de revestimento de micropartícula de cafirina para estender a vida de prateleira de abacates minimamente processados.

[0095] As micropartículas feitas de grãos de exaustão de fermentadores de sorgo como descrito no Exemplo 7, foram feitas de uma formulação de revestimento que foi aplicada as metades cortadas de abacates maduros para prolongar a vida de prateleira das frutas. A variedade da classe 1 dos abacates exportados (Persea americana Mill) Hass foram utilizados no experimento. Os abacates foram armazenados a 4°C, 5 dias antes de começar o experimento. Os abacates foram então amadurecidos a 22° C até estar madura para comer. Eles foram descascados e divididos manualmente antes da imersão na solução da formação de revestimento. A solução da formulação de revestimento consistiu de 2% da proteína cafirina em 2% (v/v) de ácido acético com 1:1:1 de plastificante de propileno glicol, ácido láctico e glicerol (40% p/p com

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30/30 relação a proteína). Metades de abacate não revestidas foram utilizadas como controle. Após o revestimento elas foram

secas, as	metades das frutas foram embaladas em tubos
plásticos,	que foram fechadas com tampas plásticas, e
armazenadas	a 4°C durante 5 dias. Após o período de 5 dias,
os abacates	revestidos com micropartículas não demonstraram

qualquer evidência de acastanhamento, enquanto os abacates controles demonstraram extensivo acastanhamento (Figura 7). [0096] Embora a invenção tenha sido descrita em detalhes com relação as configurações específicas das mesmas. Deverá ser apreciado pelos técnicos no assunto que várias

alterações,	modificações e outras mudanças podem ser feitas
na invenção	sem fugir do conceito e do escopo de proteção da
mesma.

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Claims (17)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Processo para preparar micropartículas de proteína, caracterizado pelo fato de incluir as etapas de:

   (a) dissolver a proteína prolamina de cereal em um ácido orgânico com agitação e na ausência de um álcool; e (b) diluir a solução contendo a proteína com uma solução aquosa, formando, desse modo, micropartículas de proteína tendo vacúolos.
2. 2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de a proteína prolamina de cereal ser selecionada a partir do grupo consistindo de glúten, hordeína, zeína e cafirina.
3. 3. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de o ácido orgânico ser selecionado do grupo consistindo de ácido propiônico, ácido láctico e ácido acético.
4. 4. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser realizado na ausência de etanol.
5. 5. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizado pelo fato de na etapa (a) a solução de proteína ser saturada ou altamente concentrada.
6. 6. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizado pelo fato de a agitação ser provida por revolvimento, bateção, homogeneização ou borbulha por gás através da solução.
7. 7. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo fato de a proteína ser reticulada com taninos ou enzimas e/ou ser tratada por calor antes ou após a etapa (a).

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8. 8. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizado pelo fato de incluir ainda uma etapa de remoção do ácido orgânico a partir da solução diluída.
9. 9. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, caracterizado pelo fato de incluir ainda uma etapa de secagem.
10. 10. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado pelo fato de incluir ainda uma etapa de formar um pó, película, revestimento, matriz ou placa a partir da solução diluída.
11. 11. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, caracterizado pelo fato de a solução na etapa (a) ser deixada descansar por 8 a 24 horas.
12. 12. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 11, caracterizado pelo fato de na etapa (b) a solução contendo a proteína ser diluída com água para uma concentração final de 2 partes em peso da proteína a 2 a 30 partes em peso do ácido orgânico de 96 a 68 partes em peso da água.
13. 13. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 12, caracterizado pelo fato de um aditivo, selecionado do grupo consistindo de um plastificante, agente colorante, agente de aromatizante, conservante, traços de minerais, nutriente, enzima, hormônio, nutracêutico, probiótico, prebiótico e fármacos, ou qualquer combinações dos mesmos, ser adicionado à solução da etapa (a) ou (b) e, ser incorporado dentro ou encapsulado pelas micropartículas de proteína.
14. 14. Processo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de o aditivo ser um plastificante selecionado do

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    3/4 grupo consistindo de glicerol, polietileno glicol, polipropileno glicol, ácido láctico, tartarato de dibutila, monoglicerídeo, ácido palmítico, ácido esteárico, trietileno glicerol e sorbitol, ou combinações dos mesmos.
15. 15. Processo, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de o plastificante estar presente em uma quantidade de 0,2 a 0,6 partes em peso da proteína.
16. 16. Micropartícula de proteína, caracterizada pelo fato de ser preparada pelo processo conforme definido em qualquer uma

    das reivindicações de 1 a 15. 17. Micropartícula, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de ter um vacúolo. 18. Pó, caracterizado pelo fato de compreender as

    micropartículas de proteína definidas na reivindicação 17.

    19. Suspensão aquosa, caracterizada pelo fato de compreender as micropartículas definidas na reivindicação 17.

    20. Película, caracterizada pelo fato de ser formada a partir das micropartículas de proteína definida na reivindicação 17.

    21. Película, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de ser completa.

    22. Revestimento, caracterizado pelo fato de ser formado a partir das micropartículas de proteína definidas na reivindicação 17.

    23. Matriz, caracterizada pelo fato de ser formada a partir das micropartículas de proteína definidas na reivindicação
17. 17.

    24. Placa, caracterizada pelo fato de ser formada a partir das micropartículas de proteína definidas na reivindicação

    17.

    25. Substrato, caracterizado pelo fato de incluir um

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    4/4 revestimento conforme definido na reivindicação 22.

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