BRPI0900961A2 - uso de antìgenos de leishmania em método diagnóstico, vacina e terapia para leishmaniose - Google Patents
uso de antìgenos de leishmania em método diagnóstico, vacina e terapia para leishmaniose Download PDFInfo
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Abstract
USO DE ANTìGENOS DE LEISHMANIA EM MéTODO DIAGNóSTICO, VACINA E TERAPIA PARA LEISHMANIOSE. A presente invençào se refere ao uso de antígenos recombinantes diferentes entre si obtidos a partir de genes de Leishmania chagasi/Leishrnania infantum, em ensaios visando identificar, detectar e quantificar anticorpos específicos em material biológico, incluindo soro, plasma, saliva e urina, obtido de seres humanos, de càes e de outros hospedeiros vertebrados da Lei shraania. Estes antígenos recombinantes ou seus genes ou parte dos genes que os codificam podem ser utilizados para o diagnóstico das leishmanioses, quer seja a infecção e/ou a doença. A presente invenção se refere ainda ao uso desses antígenos recombinantes, ou genes ou parte dos genes que os codificam ou ainda formulações contendo esses antígenos, para o tratamento e/ou vacinas para seres humanos, cães e outros hospedeiros vertebrados, contra leishmanioses.
Description
USO DE ANTÍGENOS OE LEISHMANIA EM MÉTODO DIAGNÓSTICO,VACINA E TERAPIA PARA LEISHMANIOSE
Campo da Invenção
A presente invenção se refere ao uso de antígenos, ouparte desses antígenos, identificados, a partir debibliotecas genéticas de Leishmania chagasi/Leishmaniainfantum, com o objetivo de identificar, detectar equantificar anticorpos específicos em material biológico,incluindo soro, plasma, saliva e urina provenientes deseres humanos, de cães e de outros hospedeiros vertebradosda Leishmania. Estes antígenos recombinantes ou seus genesou parte dos genes que os codificam podem ser utilizadospara o diagnóstico das leishmanioses, quer seja a infecçãoe/ou a doença. A presente invenção se refere ainda ao usodesses antígenos recombinantes, ou genes ou parte dos genesque os codificam ou ainda formulações contendo essesantígenos, para o tratamento e/ou vacinas para sereshumanos, cães e outros hospedeiros vertebrados, contraleishmanioses.
Fundamentos da Invenção
Leishmania é um gênero de protozoários da famíliaTrypanosomatidae. Existem cerca de 20 espécies do gêneroLeishmania capazes de causar doença no homem. Essesprotozoários, durante seu ciclo de vida, infectam um insetovetor hematófago (do gênero Phlebotomus ou do gêneroLutzomyiar ambos da família Psychodidae, comumentedenominado flebótomos) e um hospedeiro vertebrado. Após oprotozoário ser adquirido pelo inseto vetor ele setransforma dentro do tubo digestivo do hospedeiroinvertebrado, em uma forma alongada com flagelo aparenteque é denominada promastigota. No interior do inseto,formas promastigotas aderem-se, por certo período de tempo,às vilosidades das células do epitélio de revestimento dotubo digestivo e, após desenvolverem mudanças bioquímicas emorfológicas (um processo denominado metaciclogênese),perdem a aderência. Durante um novo repasto sangüíneoformas promastigotas metacíclicas podem ser transferidaspara a derme de um hospedeiro vertebrado. A partir daí, asformas promastigotas são rapidamente fagocitadas porcélulas do sistema fagocítico mononuclear e, dentro devesículas denominadas fagolisossomas, adquirem uma formaovalada, com flagelo quase que completamente restrito abolsa flagelar, chamada forma amastigota. No interior dosfagolisossomas, formas amastigotas podem se multiplicar,promover a ruptura da célula hospedeira e alcançar o meioextracelular. Posteriormente, as formas amastigotas podemser interiorizadas por novas células fagocíticas presentesna pele, mucosas e, especialmente, em órgãos com abundantenúmero de células do sistema fagocítico mononuclear, comopor exemplo, o baço, o fígado, a medula óssea e oslinfonodos. Durante o parasitismo intracelular e ou/liberação do protozoário, por ruptura ou exocitose, dascélulas hospedeiras, pode ocorrer o desenvolvimento deresposta inflamatória e de resposta imune adaptativa bemcomo alterações estruturais de órgãos do hospedeiro.
Após a introdução de Leishmania em um hospedeirovertebrado, por exemplo, o homem ou o cão, na dependênciado controle sobre a multiplicação do parasito no interiorde fagócitos, o indivíduo pode apresentar infecçãosubclinica ou exibir manifestações clínicas variadasdecorrentes do comprometimento de pele, de mucosa ou devísceras. Indivíduos que desenvolvem a doença comcomprometimento visceral, denominada leishmaniose visceral,tendem a apresentar, principalmente, anemia,hipoalbuminemia, hipergamaglobulinemia, perda de peso,hepatomegalia, esplenomegalia e, na ausência de tratamentoespecífico, na maioria das vezes, morrem. Além disso,paralelamente à apresentação de manifestações clínicas, osindivíduos infectados por Leishmania chagasi/ infantum oupor Leishmania donovani e, mais raramente, Leishmaniaarchibaldi, que talvez seja idêntica a Leishmania donovani[Jamjoom, M.B., Ashford, R.W., Bates, P.A., Chance, M.L.,Kemp, S.J., Watts, P.C., and Noyes, H.A. (2004). Leishmaniadonovani is the only cause of visceral leishmaniasis inEast África; previous descriptions of L. infantum and "L.archibaldi" from this region are a consequence ofconvergent evolution in the isoenzyme data. Parasitology129, 399-409], Leishmania tropica [Alborzi, A., Rasouli,M., and Shamsizadeh, A. (2006). Leishmania tropica-isolatedpatient with visceral leishmaniasis in southern Iran. Am JTrop Med Hyg 74, 306-307] e Leishmania amazonensis [Barrai,A., Pedral-Sampaio, D., Grimaldi Júnior, G., Momen, H.,HcMahon-Pratt, D., Ribeiro de Jesus, A., Almeida, R.,Badaro, R., Barral-Netto, M., Carvalho, E.M., and et al.(1991). Leishmaniasis in Bahia, Brazil: evidence thatLeishmania amazonensis produces a wide spectrum of clinicaidisease. Am J Trop Med Hyg 44, 536-546] que desenvolvemleishmaniose visceral, produzem grande quantidade deanticorpos reativos a variados antigenos de Leishmania.
O diagnóstico da leishmaniose visceral é muitas vezesfeito pelo encontro de manifestações clinicas, incluindo asmencionadas acima, e pelo achado de Leishmania em materialaspirado de órgãos internos, como por exemplo, a medulaóssea e o baço. Como a procura do protozoário em materialaspirado de órgãos internos é um método pouco sensível e acoleta de material é feita, obrigatoriamente, através demanipulações invasivas, alternativamente o diagnósticoclínico é confirmado por testes sorológicos. Os testessorológicos mais comumente utilizados, a imunofluorescência.indireta (IFI), o ensaio imuno-enzimático (ELISA) e o testeda aglutinação direta (DAT), utilizam Leishmania obtida decultura como fonte de antígeno. Como diferentes lotes domesmo isolado de Leishmaniar cultivados apenas em momentosdiferentes, podem exibir composição antigênica distintaentre si, a reprodutibilidade desses testes, principalmenteem termos de sensibilidade, nem sempre está assegurada[Nolan, T. J. and R. Herman.(1985) "Effects of long-term invitro cultivation on Leishmania donovani promastigotes." JProtozool 32(1): 70-5; Wilson, Μ. E., Κ. K. Hardin, etal.(1989) "Expression of the major surface glycoprotein ofLeishmania donovani chagasi in virulent and attenuatedpromastigotes." J Zmmunol 143(2): 678-84]. Além disso, emtestes diagnósticos baseados no protozoário inteiro ou emextrato do parasito, resultados falso-positivos ocorrem comalguma freqüência, devido à reação cruzada com outrosparasitos [Kar, K. (1995). Serodiagnosis of leishmaniasis.Crit Rev Microbiol 21, 123-152] . Os testes sorológicosbaseados no uso de apenas um antigeno recombinante,atualmente disponíveis, podem apresentar sensibilidadevariável, uma vez que nem todos os indivíduos infectadospor Leishmania e enfermos produzem anticorpos contra ummesmo determinado antigeno do parasita [Brandonisio, O.,Fumarola, L., Maggi, P., Cavaliere, R., Spinelli, R., andPastore, G. (2002). Evaluation of a rapidimmunochromatographic test for serodiagnosis of visceralleishmaniasis. Eur J Clin Mlcrobxol Infecb Dis 21, 461-464;Schallig, H.D., Canto-Cavalheiro, M., and da Silva, E.S.(2002). Evaluation of the direct agglutination test and therK39 dipstick test for the sero-diagnosis of visceralleishmaniasis. Mem Inst Oswaldo Cruz 97, 1015-1018; e,Sundar, S., Singh, R.K., Maurya, R., Kumar, B., Chhabra,A., Singh, V., and Rai, M. (2006). Serological diagnosis ofIndian visceral leishmaniasis: direct agglutination testversus rK39 strip test. Trans R Soc Trop Med Hyg 100, 533-537] . Dessa forma, é importante a ampliação do painel deantígenos recombinantes, por meio de seleção e produção,para o desenvolvimento de testes sorodiagnósticos maissensíveis e específicos.
A leishmaniose visceral encontra-se em franca expansãono Brasil e no mundo. Os métodos utilizados no controle daleishmaniose visceral envolvem tratamento de casos humanos,combate ao inseto vetor e controle da infecção nosreservatórios como, por exemplo, o cão. Esses métodos sãoonerosos e trabalhosos e, por isso, freqüentemente nãopodem ser aplicados de forma continuada de tal forma apromover uma restrição permanente da incidência da doença.Uma vacina contra leishmaniose capaz de prevenir odesenvolvimento da doença, da infecção nos hospedeirosvertebrados, como por exemplo, o homem ou o cão, ouprevenir a transmissão do protozoário do hospedeirovertebrado para o inseto vetor, deverá contribuir para ocontrole da enfermidade.
O sistema imune dos animais vertebrados, que écomposto por órgãos, tecidos, células e moléculas,distribuídos pelo corpo, é capaz desenvolver respostasimunes adaptativas (ou especificas) eficientes no controleda multiplicação de microrganismos invasores e, dessaforma, impedir o estabelecimento de doenças promovidas portais microrganismos [Pulendran, B. (2004). Modulatingvaccine responses with dendritic cells and Toll-Iikereceptors. Immunol Rev 199, 227-250].
As respostas imunes adaptativas podem ser agrupadas emrespostas imunes humorais (que podem ser T independentes ouT-dependentes) e respostas imunes celulares.
Nas respostas imunes humorais T-dependentes,linfócitos T CD4 produtores de citocinas como IL-4, IL-5,IL-IO e IL-13, estimulam linfócitos B a se diferenciarem eproduzirem imunoglobulinas, que funcionam como moléculasefetoras [Mosmann, T.R., and Sad, S. (1996). The expandinguniverse of T-cell subsets: Thl, Th2 and more. ImmunolToday 27, 138-146; e, Coffman, R.L. (2006). Origins of theT(H)1-T(H)2 model: a personal perspective. Nat Immunol 7,539-541] .Nas respostas imunes celulares, também denominadas deresposta imune do tipo Thl, linfócitos T CD4, produtores decitocinas como interferon gamma (IFN-γ) , interleucina (IL-2) e fator de necrose tumoral (TNF) estimulam a atividademicrobicida de macrófago e/ou a atividade citolitica delinfócitos T CD8 (linfócitos citotóxicos), resultando nadestruição de microrganismos presentes em compartimentosintracelulares [Mosmann, T.R., and Sad, S. (1996). Theexpanding universe of T-cell subsets: Thl, Th2 and more.Ixnmunol Today 17, 138-146; e, Sher, Ά., and Coffman, R.L.(1992). Regulation of immunity to parasites by T cells andT cell-derived cytokines. Annu Rev Immunol 10, 385-409].
Nos hospedeiros vertebrados, como por exemplo, o homeme o cão, além do camundongo, esse último, utilizado comomodelo experimental, o controle sobre a multiplicação daLeishmania (da infecção) e, conseqüentemente, sobre oestabelecimento de doença, está associado a desenvolvimentode resposta imune do celular especifica do tipo Thl. Nessetipo de resposta imune, células T CD4 especificas (paraantigenos de Leishmania) ativadas produzem, principalmente,as citocinas interferon gama e IL-2 e, a primeira, favoreceativação de células fagociticas capazes de destruirLeishmania dentro dos fagolisossomas, através da produçãode radicais livres de óxido nitrico e de oxigênio. Amaioria dos seres humanos enfermos com leishmaniosevisceral quando são especificamente tratados com drogascomo antimoniais pentavalentes (especialidadesfarmacêuticas: Glucantime ou Pentostan), ou anfotericina B,entre outras, desenvolvem cura clinica e, independentementede permanecerem em área endêmica, portanto, sujeitos à re-infecção, não apresentam recaída ou novo episódio dedoença. O estado de resistência adquirido, após otratamento quimioterápico, ocorre associado ao aparecimentode resposta imune celular específica do tipo Thl.
Por outro lado, cães que desenvolvem leishmaniosevisceral e são submetidos ao tratamento quimioterápicoespecífico, na maioria das vezes, com as mesmas drogasusadas no tratamento humano, embora desenvolvam redução dacarga parasitária e remissão das manifestações clínicas,apresenta, com grande freqüência, recaída após ainterrupção da administração dos fármacos, mesmo quando naausência de re-infecção [Slappendel, R. J. and E.Teske.(1997) "The effect of intravenous or subcutaneousadministration of meglumine antimonate (Glucantime) in dogswith leishmaniasis. A randomized clinicai trial." Vet Q19(1): 10-3]. Durante o período de remissão clínica, oscães tendem apresentar resposta imune celular específica,que desaparece com a recaída da enfermidade. Tais fatossugerem que métodos terapêuticos adicionais, como porexemplo, imunoterapia, provavelmente são necessários para aindução de um estado de resistência duradoura contra aleishmaniose visceral no cão.
A leishmaniose visceral ocorre em 65 países econstitui-se em um sério problema para saúde pública, emespecial para a índia, Bangladesh, o Nepal, o Sudão e oBrasil. Em vários países, nas últimas décadas, tem sidodifícil manter o controle da infecção por Leishmaniaviscerotrópica e tem ocorrido um aumento do número de casosde infecção e de doença, tanto em seres humanos quanto no cão.
Tanto uma vacina quanto uma imunoterapia eficaz contraa Leishmaniose Visceral Canina - LVC, que estabeleçam umestado de resistência contra a infecção, prevenindo odesenvolvimento da doença e/ou promovendo esterilização dainfecção e/ou impedindo a transmissão de Leishmania de cãopara flebótomo, seriam de grande utilidade no controle daendemia. Reagentes capazes de atuar tanto na prevenção comono tratamento seriam ideais. Estes seriam altamentedesejáveis por várias razões, como por exemplo: (a) umacampanha de vacinação e/ou imunoterapia canina seria bemmenos onerosa e demorada do que o atual programa deeliminação de cães, e mesmo do que um possível programa devacinação humana, (b) sua aceitação seria grande nascomunidades, pois evitaria o sacrifício de cães; (c) oscães com resistência induzida pela vacinação e/ouimunoterapia permaneceriam na área, diminuindo o aporte denovos cães susceptíveis (o que ocorre prontamente após aeliminação de cães).
Pelas razões mencionadas acima, continua havendocarência de ferramentas para o controle da infecção, taiscomo vacinas, formulações imunoterapêuticas e métodos paradiagnóstico da doença e detecção da infecção, especialmenteem doadores de sangue e em indivíduos (homem e cão) deáreas endêmicas. Nesse sentido, a presente invenção temcomo finalidade eliminar a referida carência.
Sumário da InvençãoUm primeiro objetivo da presente invenção éproporcionar antigenos recombinantes identifiçados a partirde bibliotecas genéticas de Leishmania chagasi/Leishmaniainfantum. Mais especificamente, esses antigenosrecombinantes são codificados pelos genes, or parte dosgenes, indicados a seguir: Lcil, Lci2, Lci3, Lci4, Lci5,Lci6, Lci7, Lci8, Lci9, LcilOf Lcill, Lcil2, e Lcil3. Comoilustrado na invenção esses antigenos recombinantes podemser usados para identificar, detectar e quantificaranticorpos específicos em material biológico, incluindosoro, plasma, saliva e urina, obtido de seres humanos, decães e de outros hospedeiros vertebrados da Leishmania.
Pretende-se assim utilizar estes antigenos recombinantes ouseus genes ou parte dos genes que os codificam para odiagnóstico das leishmanioses, quer seja a infecção e/ou adoença.
É ainda um objetivo da invenção, usar esses antigenosrecombinantes, ou genes ou parte dos genes que os codificamou ainda formulações contendo esses antigenos, para otratamento e/ou vacinas para seres humanos, cães e outroshospedeiros vertebrados, contra leishmanioses.Breve Descrição dos Desenhos
A Figura 1 é uma representação esquemática das regiõescodificadoras dos clones de cDNA que contém segmentos commotivos repetitivos.
A Figura 2 é uma representação esquemática das regiõescodificadoras contidas dentro dos fragmentos dos clonesgenômicos que contém segmentos com motivos repetitivos.A Figura 3 mostra uma comparação entre a seqüência dosdomínios repetitivos de 39 aminoácidos encontradoscorrespondentes aos insertos dos clones Lci2A e Lci2B e aseqüência consensual dos domínios repetitivos incluídos naseqüência do rK39 patenteada. Na Figura 3A está apresentadaa seqüência consensual patenteada para o domínio repetitivodo rK39. A Figura 3B lista todos os domínios repetitivospresentes nos clones Lci2A e Lcí2B sendo que os aminoácidosque divergem da seqüência consensual do rK39 estãosublinhados. A seqüência consensual derivada dos domíniosdo antígeno recombinante Lci2B (rLci2B) está apresentada naFigura 3C para fins ilustrativos.
A Figura 4 mostra um ensaio de "dipstick" realizado emuma tira de plástico flexível (P) , dobrávellongitudinalmente em sua região central, onde foram coladospequenos retângulos de . papel de nitrocelulose (a-h)sensibilizados com antígenos ou soluções contendo proteínascontrole.
A Figura 5 mostra uma análise representativa dealgumas das proteínas recombinantes selecionadas utilizadasnos ensaios de ELISA para imunodiagnóstico.
A Figura 6 mostra o resultado de dois conjuntos deELISA realizados com os antígenos rLcilA, rLci2B, rLci4A,rLci6A, rLci7A, rLcilOA-II, rLcil2A-II e rLcil3A e com osantígenos rLci5A-I, rLci8A-I, rLci9A-I e rLcillA-I e sorosde cães naturalmente infectados por Leishmania chagasi /Leishmania infantum (casos confirmados parasitologicamente)ou de cães sadios de área não endêmica (controle negativo).Cada símbolo corresponde ao resultado, em densidade óptica,obtido de um soro individual. A linha horizontal (de lado alado do gráfico) corresponde a média mais três desviospadrão dos resultados obtidos com os soros grupo controle.
A Figura 7 mostra o resultado de ELISA realizado comos antigenos rLcilA, rLci2B, rLci6A, rLci7A, rLcilOA-II erLcil2A-II e soros de pacientes humanos com leishmaniosevisceral (LV) e de indivíduos sadios (controle negativo).Cada símbolo corresponde ao resultado, em densidade óptica,obtido de um soro individual. A linha horizontal (de lado alado do gráfico) corresponde a média mais três desviospadrão dos resultados obtidos com os soros grupo controle.
A Figura 8 mostra o resultado de um teste rápido("lateral flow") , utilizando uma mistura em partes iguaisdos antigenos rLcilA e rLci2B.
A Figura 9 mostra a avaliação da resposta imune decamundongos injetados com salina, rLci2B ou rLci2B emassociação com saponina. A Figura 9 mostra ainda os ensaiosde linfoproliferação e de produção de IFN-γ e IL-5.
A Figura 10 mostra a avaliação da resposta imune decamundongos injetados com salina, salina/saponina,plasmídeo pBK-CMV sem inserto, rLci2B/saponina, pBK-CMV-Lci2B ou pBK-CMV-Lci2B seguido de rLci2B/saponina. A Figura10 mostra ainda os ensaios de linfoproliferação e deprodução de IFN-γ e IL-5.
A Figura 11 mostra a avaliação da resposta imuneespecífica de camundongos injetados com salina, plasmídeopBK-CMV sem inserto, pBK-CMV-Lci2B ou pBK-CMV-Lci3A.
A Figura 12 mostra a avaliação da resposta imune decamundongos injetados com salina, plasmídeo pBK-CMV seminserto ou uma mistura dos plasmideos pBK-CMV-LcilA(pLcilA) , pBK-CMV-Lci2B (pLci2B) , pBK-CMV-Lci3A (pLci3A) epBK-CMV-Lci 4A (pLci4A).
A Figura 13 mostra a resposta imune de cães que foraminjetados com salina/saponina, rLcilA/rLci2B/saponina ourLcilA/rLci2B/saponina em associação com pcDNA3.1-scca-IL-12.
Descrição Detalhada da Invenção
A invenção está baseada na identificação de proteínasde L. chagasi / L. infantum as quais foram selecionadasdevido à presença de alto título de anticorpos contra L.chagasi / L. infantum em amostras de sangue de humanos, queapresentavam manifestações clínicas de LV, ou de cães queexibiam infecção natural por L. chagasi / L. infantum. Ainvenção, assim, consiste no uso de antígenos diferentes,entre si, Lcil, Lci2, Lci3, Lci4, Lci5, Lci6, Lci7, Lci8,Lci9, LcilO, Lcill, Lcil2, e Lcil3, ou parte dessesantígenos, identificados a partir de bibliotecas genéticasde Leishmania chagasi/Leishmania infantum, úteis paraidentificar, detectar e quantificar anticorpos específicosem material biológico obtido de seres humanos, de cães e deoutros hospedeiros vertebrados da Leishmania. Estesantígenos ou seus genes ou parte dos genes que os codificampodem então ser utilizados para o diagnóstico dasleishmanioses, quer seja a infecção e/ou a doença.
A invenção propõe ainda usar os antígenos Lcil, Lci2,Lci3, Lci4, Lci5, Lci6, Lci7, Lci8, Lci9, LcilO, Lcill,Lcil2, e Lcil3, ou parte desses antígenos ou genes ou partedos genes que os codificam ou ainda formulações contendoesses antigenos, no tratamento e/ou em vacinas para sereshumanos, cães e outros hospedeiros vertebrados, contraleishmanioses.
Diversos processos conhecidos do estado da arte podemser aqui empregados para obtenção das seqüências depolinucleotideos que codificam para os polipeptideos Lcil,Lci2, Lci3, Lci4, Lci5, Lci6, Lci7, Lci8, Lci9, LcilO,Lcill, Lcil2, e Lcil3, ou parte desses polipeptideos. Essesprocessos incluem, mas não estão limitados a: (i) técnicade isolamento de DNA usando hibridização de cDNA oubibliotecas genômicas com sondas para detecção deseqüências homólogas de nucleotideos; (ii) seleção poranticorpos das bibliotecas de expressão para detectarfragmentos de DNA clonado com aspectos estruturaiscompartilhados; (iii) reação em cadeia da polimerase (PCR)em cDNA ou DNA genômico usando iniciadores capazes deamplificar seqüências de DNA de interesse; (iv) buscascomputadorizadas de base de dados de seqüências similaresaquelas de polinucleotideos que codificam Lcil, rLci2B,Lci3, Lci4, Lci5, Lci6, Lci7, Lci8, Lci9, LcilO, Lcill,Lcil2, e Lcil3; e, (v) síntese química de polinucleotideos.
Na presente invenção a identificação dos antigenos foibaseada no conhecimento de que existe expressão diferencialde antigenos de Leishmania durante a cultura (in vitro) edurante infecção do hospedeiro (in vivo). Acredita-se que aexpressão diferencial de antigenos de Leishmania éimportante na adaptação do parasito durante a infecção. Apresente invenção utilizou uma estratégia para identificaros antigenos imunoreativos e, assim, os antigenos que sãoexpressos durante infecção do hospedeiro.
Visando a obtenção de novos antigenos recombinantes aserem avaliados em ensaios imunodiagnósticos e/ou comocomponentes de vacina e/ou método imunoterápico, foramconfeccionadas uma biblioteca de cDNA e outra genômica deLeishmania chagasi/infantum. A biblioteca de cD NA foielaborada usando-se RNA de formas amastigotas purificadasde baço de hamsters enquanto que a biblioteca genômica foielaborada usando-se DNA de formas promastigotas de culturada cepa de MHOM/BR2000/Merivaldo2 de Leishmaniachagasi/infantum. Utilizando-se estas bibliotecas, e maisuma segunda biblioteca de cDNA obtida independentemente,foram selecionados um conjunto de clones recombinantes quecodificam antigenos com propriedades que os habilitam aserem usados tanto no diagnóstico da leishmaniose visceralcomo constituintes de vacina e/ou imunoterápicos.
Parasitos
O isolado de Leishmania chagasi/infantum utilizado foiobtido pela punção aspirativa de baço de um ser humano commanifestações clinicas de leishmaniose visceral (LV). Opaciente, do qual foi isolada a Leishmania, residia emJequié-Bahia, Brasil, que é uma área endêmica paraleishmaniose visceral. A partir do isolamento a Leishmaniafoi mantida em laboratório através de passagens sucessivasem meio de cultura e congelamento em nitrogênio liquido oupassagens sucessivas em hamsters, nos quais a infecçãoexibe desfecho letal. Esse isolado (MHOM/BR2000/Merivaldo2)foi definido como Leishmania chagasi/infantum pelo perfilde isoenzimas.
Para obtenção de formas promastigotas, os parasitasforam cultivados em meio de Schneider (Sigma-Aldrich, SaintLouis, MO, EUA) com 20 % de soro bovino fetal (SBF,Invitrogen Corporation). Formas amastigotas desse isoladoforam obtidas a partir de baço e fígado de hamsters,previamente inoculados com IxlO8 formas promastigotas decultura, submetidas a um pequeno número de passagenssucessivas, por via intraperitoneal. Para isso, tecidomacerado de fígado e baço foi submetido à centrifugaçãosobre um gradiente de Percoll, conforme método descrito porChang, K.P. (1980). Human cutaneous leishmania in a mousemacrophage Iine: propagation and isolation of intracellularparasites [Science 209, 1240-1242].
Soros utilizados
Durante a realização de atividades de vigilânciaepidemiológica em uma área endêmica de leishmaniosevisceral, em Jequié-Bahia (BR), cerca de cem cãesdomiciliados ou errantes foram estudados. Amostras desangue foram coletadas e, a partir daí, alíquotas de soroforam obtidas e armazenadas a -20° C. Além disso, asrespostas imunes humoral e celular específicas paraLeishmania foram avaliadas na maioria desses cães. Algunsdesses animais foram submetidos a necropsia, sendo que,imediatamente após a realização do sacrifício de cadaanimal, foi realizada punção aspirativa do baço. Parte domaterial aspirado do baço foi transferida para tuboscontendo meio bifásico de cultura para detecção deLeishmaniar conforme método previamente descrito porBarrouin-Melo et al., 2006 [Barrouin-Melo, S.M.,Larangeira, D.F., de Andrade Filho, F.A., Trigo, J.,Juliao, F.S., Franke, C.R., Palis Aguiar, P.H., Conradodos-Santos, W.L., and Pontes-de-Carvalho, L. (2006). Canspleen aspirations be safely used for the parasitologicaldiagnosis of canine visceral leishmaniosis? A study onassymptomatic and polysymptomatic animais. Vet J 171, 331-339].
Para a seleção de antigenos recombinantes nabiblioteca de cDNA de Leishmania (ver descrição abaixo),uma mistura de soro de quatro cães, exibindo resultadopositivo na cultura para detecção de Leishmania e no testede hipersensibilidade cutânea tardia (reação de Montenegro)foi preparada com volumes iguais de soro de cada animal.Para seleção de antigenos recombinantes de Leishmania nabiblioteca genômica (ver descrição abaixo), amostras desoros de seres humanos, com manifestações clinicas deleishmaniose visceral e infecção confirmada pelo encontrode Leishmania em material aspirado de medula óssea, foramcedidas pela Dra. Aldina Barrai, do Centro de PesquisasGonçalo Moniz, Fundação Oswaldo Cruz, Salvador-Bahia. Apósa realização de Western blot, foi preparada uma mistura deseis soros, com volume igual de cada soro, selecionados porreagir, separadamente, a vários antigenos de formaspromastigotas de Leishmania chagasi, a qual foi utilizadana seleção dos clones da biblioteca genômica.Confecção de bibliotecas de cDNA e genômica de Leishmaxiiachagasi/infan tumA confecção da biblioteca de cDNA foi realizadausando-se RNA de formas amastigotas de Leishmaniachagasi/infantum e reagentes da Stratagene Corporation(Stratagene Corporation, La Jolla, EUA), seguindo-se asinstruções do fabricante. Resumidamente, RNA total extraídode formas amastigotas, usando-se Trizol (Invitrogen), foiusado para transcrição reversa. Posteriormente, foirealizada a síntese da segunda fita de cDNA. Sítios derestrição para as endonucleases EcoR I e Xho I foramcolocados nas extremidades 5' e 3' das moléculas de cDNA deLeishmania. Em seguida, as moléculas de cDNA de Leishmaniaforam ligadas a dois fragmentos DNA (braço direito e braçoesquerdo) do bacteriófago λ ZAP Express, previamentedigeridos pelas endonucleases EcoR I e Xho I, e o produtoda ligação foi incubado com as proteínas de empacotamentopara gerar partículas virais.
A biblioteca genômica também foi confeccionada usando-se reagentes da Stratagene. Resumidamente, cerca de 100 ngde DNA genômico de formas promastigotas de Leishmania,parcialmente digeridos pela endonuclease Tsp509I (NewEngland Biolabs Inc., Ipswich, MA, EUA) foram ligados aosbraços do bacteriófago λ ZAP Express, previamente digeridocom EcoR I e, depois disso, o produto da ligação foisubmetido a empacotamento para gerar partículas virais.Mais tarde, as bibliotecas foram tituladas antes e depoisda amplificação dos clones, usando-se Escherichia coli dalinhagem XLl-Blue.
Seleção dos antígenos recombinantesPara a seleção de antigenos da biblioteca de cDNA,foram preparadas placas de petri com meio sólido NZY-1,5 %Agar [NaCl a 0,5 % (m/v) - MgSO4TH2O2 a 0,2 % (m/v) -extrato de levedura a 0,5 % (m/v)- caseina hidrolisada a1 % (m/v) - agar a 1,5 % (m/v)]. Sobre NZY-1,5 % Agar, foicolocada uma camada formada pela mistura de NZY-0,7 % Agar,E. coli XLl-Blue e cerca de 1 χ IO3 partículas virais dabiblioteca. As placas de petri foram incubadas a 42°C.
Cerca de quatro horas depois, membranas de nitrocelulose,previamente incubadas com isopropil-tio-galactopiranosidio(IPTG), foram colocadas sobre a camada de cima do meio decultura e as placas de petri foram incubadas a 37 0C pormais oito horas. As membranas de nitrocelulose foramremovidas, bloqueadas com leite desnatado a 5 % em salinatamponada com fosfato a 0,15 M, pH 7,4 (PBS) , com 0.05%Tween 20 (PBS-T) a 40C por cerca de 14 horas. Em seguida,as membranas foram incubadas com uma mistura de soro decães, diluída de 1:800 em leite desnatado a 5 % - PBS-T,por 1 h, a temperatura ambiente (20°C - 23°C) , sob suaveagitação. Depois disso, as membranas foram lavadas com PBS-T e incubadas com imunoglobulinas de cabra conjugadas comperoxidade, diluídas de 1:1000 em leite desnatado a 5 % -PBS-T, específicas para IgG de cão (Sigma-Aldrich) , pormais lha temperatura ambiente, sob suave agitação. Asmembranas foram lavadas e, em seguida, reveladas comtetramethilbenzidina (TMB) e peróxido de hidrogênio emtampão fosfato-citrato. A seleção de antigenos dabiblioteca genômica foi realizada com anticorpos humanos,essencialmente, conforme método descrito acima. Para isso,membranas de nitrocelulose bloqueadas com leite desnatado a5 % PBS-T foram incubadas, sucessivamente, com umamistura de seis soros humanos, diluída de 1:1000,imunoglobulinas de coelho conjugadas com peroxidase (Sigma-Aldrich), diluídas de 1:3000 e substrato de peroxidase. Nasmembranas de nitrocelulose, foram identificadas as áreascorrespondentes a placas de Iise bacteriana causadas porclones de bacteriófago λ ZAP Express. Foram coletadoscilindros das placas de petri correspondentes a clones debacteriófagos indutores da produção de polipeptídeosrecombinantes de Leishmania reativos a anticorposespecíficos. Cada um desses cilindros foi, separadamente,transferido para um tubo do tipo Eppendorf contendo 200-500 μl, de tampão SM (NaCl a 0,1 M, MgSO4 a 8 mM, Tris-HCl a50 mM, pH 7,5, e gelatina 0,01 %) . Uma a duas gotas declorofórmio foram acrescentadas a cada tubo. Para obtençãode clones isolados, foram realizados mais dois ciclos degeração de placas de Iise, impregnação de membrana denitrocelulose e reação com anticorpos específicos. Para usocomo controle negativo em alguns experimentos, foi obtidoum clone de bacteriófago λ ZAP Express sem inserto deLeishmania, seguindo-se as orientações do fabricante(Stratagene).
Obtenção de fagomideos pBK-CMV
A obtenção dos fagomideos (fagimídeos) foi realizadaconforme as instruções do fabricante (Stratagene).Resumidamente, amostras E. coli XLl-Blue foram infectadascom cada clone de bacteriófago λ, separadamente, incluindoo clone controle negativo, e o bacteriófago filamentosoauxiliador ExAssist e, depois, foram cultivadas em caldoNZY por 3 h. Após aquecimento da suspensão bacteriana, paraIise de bacteriófago λ ZAP Express, amostras debacteriófagos filamentosos empacotados com pBK-CMV de fitasimples de DNA, exibindo inserto de Leishmania ou seminseto (controle negativo), foram usadas para infectar E.coli XLOLR, para gerar pBK-CMV de fita dupla de DNA (dsDNApBK-CMV). A partir dai, dsDNA pBK-CMV foram manipuladoscomo plasmideos convencionais. Alternativamente, no caso dasegunda biblioteca de cDNA, o processo de excisão gerouclones com o plasmideo pBluescript SK(-) (Stratagene).
Caracterização dos antigenos recombinantes
As seqüências de DNA das extremidades 5' e 3' dosinsertos presentes nos clones derivados das bibliotecas decDNA e genômica de Leishmania chagasi/infantum foramobtidas a partir de reações de seqüenciamento com di-desoxiribonucleotideos, usando-se amostras de DNA dosplasmideos pBK-CMV obtidos a partir dos bacteriófagosisolados no processo de seleção. Este seqüenciamento foirealizado utilizando-se oligonucleotideos iniciadoresuniversais, como por exemplo, M13F e M13R, que se anelam aregiões que flanqueiam os insertos de Leishmaniar ereagentes da Applied Biosystems (Applied Biosystems, FosterCity, CA, EUA), seguindo-se as recomendações o fabricante.
Os produtos das reações foram fracionados em seqüenciadorABI3100 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) . Oseqüenciamento das extremidades do plasmideo pBluescript®SK(-) contendo o inserto Lcil3A foi realizado da mesmaforma.A identificação dos insertos foi realizada utilizando-se as seqüências obtidas no sequenciamento preliminar embuscas com o programa BLAST ("Basic Local Alignment SearchTool") contra seqüências protéicas de tripanosomatídeosdisponíveis nas páginas do banco de dados GeneDb(www.genedb.org - "The Wellcome Trust Institute, PathogenSequencing Unit") e também do GenBank no NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov - "National Center for BiotechnologyInformation"). Nas etapas subseqüentes, e de forma a evitarredundâncias, nos casos em que vários clones codificavampara uma mesma proteína, um ou no máximo dois clonescodificando segmentos de cada proteína foram escolhidos deforma arbitrária, e denominados com o nome da proteínaseguido de uma letra maiúscula. A maioria dos insertoscontidos nos clones selecionados das bibliotecas de cDNA(Lci2A e Lci2B, Lci3A e Lci3B, Lci4A e Lcil3A) , assim comoo inserto do clone Lci9A da biblioteca genômica, foramentão seqüenciados em sua totalidade por meio da utilizaçãode oligonucleotídeos iniciadores que se anelamespecificamente a seqüências internas dos insertos e oudeleção de segmentos internos por digestão com enzimas derestrição seguida de nova reação de sequenciamento. Estesequenciamento foi em parte realizado utilizando-se oseqüenciador AlfII da empresa Amersham Biosciences e emparte o sequencidor ABI3100 da Applied Biosystems. No casodo Lcil3A, parte do seqüenciamento foi realizado a partirda subclonagem de fragmentos menores internos em um segundovetor de clonagem (pTZ18R, PL-Pharmacia, número de acessono GenBank: L08956) e seqüenciamento com os iniciadoresM13F e M13R. Com relação aos clones derivados da bibliotecagenômica (Lci6A, LeiIA, Lci8A, LcilOA, LcillA e Lcil2A) , etambém os clones LcilA e Lci5A das bibliotecas de cDNA, asseqüências parciais obtidas das extremidades de cadainserto foram utilizadas em novas buscas com o programaBLAST contra seqüências genômicas de nucleotideos de L.chagasi/infantum disponíveis na página do GeneDb. No casodas seqüências das extremidades 5', foram encontradasseqüências equivalentes (idênticas em praticamente 100% dosnucleotideos) dentro de regiões preditas como codificadorasde proteínas enquanto que as seqüências 3' correspondentesse alinharam com seqüências próximas dentro da mesma regiãocodificadora ou em regiões intergênicas/codificadorasvizinhas. Em todos os casos as seqüências 5' e 3' de ummesmo fragmento estavam compatíveis com a presença de umúnico segmento cromossômico (ou cDNA para os LcilA e Lci5A)e delimitavam dessa forma suas extremidades. Na maioria dasanálises subseqüentes foram então utilizadas as regiõescodificadoras identificadas pelas seqüências 5' de cadainserto.
Subclonagem em vetor de expressão pRSET
De forma a expressar as respectivas proteínasrecombinantes fusionadas a uma cauda de 6 histidinas na suaextremidade amino-terminal, que permite a purificaçãodestas proteínas por cromatografia de afinidade, osinsertos codificando segmentos ou a totalidade dasproteínas rLcil, rLci2, rLci3, rLci4, rLciõ, rLci6, rLci7,rLci8, rLci9, rLcilO, rLcill, rLcil2 e rLcil3, contidos nosclones selecionados, foram subclonados em plasmídeos dasérie pRSET (Invitrogen), utilizando-se métodos de biologiamolecular convencionais. Resumidamente, para assubclonagens, cada um dos plasmideos de interesse eamostras de uma das versões (Δ, B ou C) do plasmideo pRSETforam submetidas a digestão dupla com endonucleases derestrição. Em seguida, os produtos das reações de digestãoforam purificados, após fracionamento em gel de agarose, esubmetidos à reação de ligação. Os produtos de ligaçãoforam utilizados para transformar amostras de E. colicompetentes (DH5-alfa ou TOPlO) para o subseqüenteisolamento de clones recombinantes contendo os novosplasmideos. Para cada inserto foi utilizada uma estratégiade subclonagem distinta, definida de acordo com aocorrência de sítios de restrição compatíveis com asubclonagem e com a fase de leitura adequada para aprodução dos polipeptídeos recombinantes. Em algumassituações foi possível subclonar os insertos em suatotalidade enquanto em outras situações apenas fragmentosmenores foram selecionados. Em todos os casos, asconstruções resultantes codificavam uma proteína de fusãocom um segmento de 32 aminoácidos (decorrente do vetorpRSET, MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKD, que inclui aseqüência de 6 histidinas sublinhada) na extremidade amino-terminal seguido do segmento protéico codificado pelo DNArecombinante de Leishmania e, entre os dois, alguns poucosaminoácidos codificados pelos múltiplos sítios de clonagemdo vetor. Dependendo dos sítios de clonagem utilizados, nosinsertos originários da biblioteca genômica, sem sítios determinação da tradução, alguns aminoácidos codificados pelovetor também foram incluídos na extremidade C-terminal dasproteínas.
A seguir segue uma descrição individual de cada umadas subclonagens realizada.
LcxlA
O fragmento de ~3 kb obtido por digestão com asenzimas de restrição BamH I e Xho I do plasmídeo pBK-CMV-LcilA, compreendendo toda a seqüência codificadora daproteína mais 162 nt da extremidade 5' não traduzível doseu cDNA, foi subclonado entre os mesmos sítios do vetorpRSET-B. A proteína recombinante resultante contém na suaextremidade amino-terminal, além do segmento codificado pelovetor pRSET, um segmento extra de 54 aminoácidoscodificados pelo fragmento da extremidade 5' não traduzíveldo cDNA (seqüência:
DPKHALALKLSEENTYAHRHTSLSLCALLRNPITTLLPPPPIPHAHTHTTTAAEcom um peso molecular predito final de cerca de 88 JcDa.Lci2A e o Lci2B
Dois clones distintos de pBK-CMV com insertos de cDNAsde 1902 (Lci2A) e 1203 (Lci2B) nt foram identificados. Paraa expressão da respectiva proteínas recombinantes, oinserto Lci2B foi recuperado por digestão com as enzimas derestrição BamH I e Kpn I e subclonado nos mesmos sítios doplasmídeo pRSET-B.Lci3A e Lci3B
Dois clones distintos de pBK-CMV com insertos de cDNAscom insertos de cDNAs de 2265 (Lci3A) e 1890 (Lci3B) ntforam identificados. O fragmento de cDNA original de 2265nt (Lci3A) foi subclonado sob a forma de 2 fragmentosdistintos, levando a produção de 2 proteínas de fusão compropriedades antigênicas diferenciadas. Em um primeiromomento, um fragmento de ~1300 nt foi obtido por digestãocom as enzimas EcoR I e Hind III e subclonado nos mesmossítios do vetor pRSET-C (construção denominada pRSET-Lci3A-R22) . Um segundo fragmento de -1500 nt foi recuperado pordigestão com Sac I / Kpn I e subclonado entre os mesmossítios do vetor pRSET-A (Lci3A-R3).
Lc±4A
Para a expressão da respectiva proteína recombinante ofragmento de ~2180 pb do cDNA original foi recuperado pordigestão com as enzimas restrição BamH I e Kpn I esubclonado nos mesmos sítios do plasmídeo pRSET-B.
Lci5A
Dois fragmentos de 915pb (Lci5A-I) e de 468pb (Lci5A-II) foram amplificados a partir do clone Lci5A com um mesmopar de oligonucleotídeos (oligonucleotídeo 5' - 5'CGA GGTACC GGC GCA GCG TGA GGA GCA GGC3' ; oligonucleotídeo 3' -5'CGA GAA TTC CAC CGG TGG CTC CTC CTG CTG3') · Estesfragmentos foram clonados no vetor pGEM-T Easy (Promega) esubclonados nos sítios de Kpn I e EcoR I do vetor pRSET-C,utilizando sítios de enzimas de restrição incluídos nosoligonucleotídeos (sublinhados) . A expressão dos plasmídeosresultantes em E. coli leva a produção de proteínasrecombinantes, e/ou seus produtos de degradação, de ~33kDae ~16kDa, respectivamente, para os Lci5A-I e Lci5A-II.
Lci 6A
Um fragmento de 582 pb do inserto foi recuperado pordigestão com as enzimas de restrição BamH I/Hind III esubclonado entre os mesmos sítios do vetor pRSET-C. Aproteína recombinante resultante migra em gel de SDS-PAGEcom um peso molecular aparente de ~30 kDa. Um segundofragmento, de cerca de 3,8 Kb foi obtido por digestão comBamH I/Kpn I e subclonado entre os mesmos sítios do pRSET-C. Este plasmídeo leva a produção de uma proteínarecombinante de ~40kDa, provavelmente gerada pela clivagemproteolítica da proteína, mantendo contudo sua extremidadeN-terminal, que incluí a seqüência de poli-histidinas,intacta.
Lci 7A
Um fragmento de 242 9 pb (que inclui 1437 pb daseqüência codificadora mais 982 da região intergênicasubseqüente) foi recuperado por digestão com as enzimas derestrição BamH I/Sal I e subclonado nos sítios de BamHI /Xho I do plasmídeo pRSET-B (extremidade de DNA geradapela digestão com Sal I pode ligar-se à extremidade de DNAgerada pela digestão com Xho I). A proteína recombinanteresultante migra em SDS-PAGE com um peso molecular de cercade 65 kDa.
Lci 8A
Um fragmento de 314 5 pb foi recuperado por digestãocom BamH I/Xho I e subclonado nos mesmos sítios do vetorpRSET-B. A proteína recombinante resultante migra em SDS-PAGE com um peso molecular superior a 100 kDa. Variantesdessa proteína foram obtidas por meio da deleção, no geneclonado no pRSET-B, de múltiplos fragmentos de DNA quecodificam para os domínios repetitivos por meio dedigestões parciais com a enzima Bgl I. Esses variantesforam as utilizados nos ensaios de ELISA.
Lci 9A
Um fragmento de 2400 pb foi recuperado por digestãocom BamH I/Xho I e subclonado nos mesmos sítios do vetorpRSET-B gerando o plasmideo com o inserto Lci9A-I. Para aobtenção do Lci9A-II o plasmideo resultante foi digeridocom Sal Ieo fragmento de DNA correspondente ao vetor maisparte do inserto purificado e religado. Nesta construção-1100 pb, a metade C-terminal do inserto, foi removida. Aexpressão dos plasmídeos resultantes em E. coli leva aprodução de proteínas recombinantes, e/ou seus produtos dedegradação, de >100kDa e ~40kDa, respectivamente, para osLcl9A-I e Lcl9A-II.
LcilOA
Para a expressão da respectiva proteína (rLcilOA-I) oinserto LcllOA foi recuperado integralmente (~2600 pb) pordigestão com as enzimas de restrição BamH I e Xho I, mascom digestão parcial com Xho I, e subclonado entre osmesmos sítios do plasmideo pRSET-C. Esta proteína migra emgel de SDS-PAGE com um peso molecular maior que IOOkDa masdurante sua purificação é clivada em um polipeptídeo menorcom peso estimado de ~70kDa. Para a expressão da segundaproteína recombinante (rLcilOA-II), um fragmento de 928 pb,recuperado por digestão total com as mesmas enzimas derestrição, foi também subclonado no pRSET-C. A proteínarecombinante resultante migra em gel de SDS-PAGE com umpeso molecular aparente de ~55 kDa.
LcillAPara a expressão da proteína LcillA foram utilizadastrês estratégias distintas. Na primeira delas um fragmentode 1874 pb foi recuperado por digestão com as enzimas derestrição BamH I/Not I e subclonado nos mesmos sítios dovetor pET21-A (Novagen). Em seguida este mesmo fragmento,acrescido do sítio de Xho I na sua extremidade 3' , foirecuperado do plasmídeo resultante por digestão com asenzimas BamH I/Xho I e subclonado nos mesmos sítios dopRSET-A (LcillA-I). O fragmento gênico de 1167 pbcodificando para a LcillA-II foi amplificado flanqueado porsítios para as enzimas de restrição BamH I/ Xho I(oligonucleotídeo 5' - CGA GGA TCC CCC AAC GGT GGT GGC AACAGC; oligonucleotídeo 3' - CGA CTC GAG AGT TTG GGG CGG CGTGTG AGG), clonado no vetor pGEM-T-Easy e subclonado nossítios de BamH I/ Xho I do pRSET-A. Para a LcillA-III, umfragmento de DNA de 933 pb foi amplificado tambémflanqueado por sítios para as enzimas de restrição BamH 1/Xho I (oligonucleotídeo 5' - GCA GGA TCC CCT CAC ACG CCGCCC CAA AC; oligonucleotídeo 3' - GTC CTC GAG CTG CAT AAACAC AGT CCC GTC) e clonado no pGEM-T-Easy. Em seguida,parte deste fragmento (de 67 9 pb) foi recuperado pordigestão com BamH I/Wot I e subclonado nos mesmos sítios dopET21-A. O mesmo fragmento, acrescido do sítio de Xho I nasua extremidade 3', foi recuperado do plasmídeo resultantepor digestão com as enzimas BamH I/Xho I e subclonado nosmesmos sítios do pRSET-A. Todos os fragmentos recombinantespossuem na sua extremidade aminoácidos adicionais derivadosda inclusão dos sítios de restrição necessários arealização das etapas de clonagem.Lci12Α
Para a expressão da proteína duas estratégiasdistintas foram realizadas. Na primeira, um fragmento de2800 pb, obtido por digestão com BamH I/Pst Ir foisubclonado entre os mesmos sítios do vetor pRSET-B(Lcil2A-I, peso molecular aparente da proteína recombinante>100 kDa) . Em uma segunda estratégia um fragmento menor de1600 pb foi recuperado por digestão com BamH I/Nco I esubclonado nos mesmos sítios do pRSET-B (Lcil2A-II, pesomolecular de ~90 kDa).
Lci13A
Um fragmento interno de 1005 pb, recuperado pordigestão com Pst I, foi inicialmente subclonado no sítio dePst I do vetor plasmidial pTZ18R, orientado de forma que aextremidade codificando para o trecho inicial da proteínaestava posicionada junto ao promotor T7. O plasmídeoresultante foi então digerido com as enzimas de restriçãoBamH I e Hind III (sítios que flanqueiam o sítio de Pst Ioriginal) e o fragmento resultante subclonado entre ossítios de BamH I/Hind III do pRSET-A. O plasmídeoresultante codifica para uma proteína recombinante cujaextremidade amino-terminal inclui os aminoácidoscodificados pelo vetor pRSET mais aminoácidos codificadospelos sítios de clonagem do pTZ18R (totalizando 40aminoácidos). Outros 24 aminoácidos são incluídos naextremidade carboxi-terminal da proteína recombinante,codificados pelos sítios de clonagem dos plasmídeos pTZ18Re pRSET-A.
Produção e purificação dos antígenos recombinantesEnsaios para produção de proteínas recombinantes deLeishmania foram realizados usando-se amostras de E. colida cepa BL21(DE3)pLysS (Invitrogen) transformadas com umadas construções plasmideais: pRSET-LcilA, pRSET-Lci2B,pRSET-Lei3A-R3, pRSET-Lei4A, pRSET-Lci5A-1, pRSET-Lci6A,pRSET-LcilA, pRSET-LciSA-J, pRSET-Lei 9A-1, pRSET-LcilOA-IfpRSET-LcillA-Ir pRSET-Leil2A-IIr e pRSET-Lci23A, seguindo-se as instruções do fabricante (Invitrogen) . Além disso,foram realizados ensaios para produção da proteínarecombinante rLcilA usando-se E. coli da cepa TOPlOF'(Invitrogen) transformadas com construção plasmideal pBK-CMV-LeilAr seguindo-se as recomendações dos fabricantes dabactéria hospedeira. Os sedimentos bacterianos resultantesdos ensaios mencionados acima foram submetidos aprocessamento convencional, usando-se lisozima, ácidodesoxicolato de sódio e/ou ultrasonicação. As proteínasrecombinantes solúveis ou solubilizadas com uréia,produzidas por BL21(DE3)pLysS transformadas pelasconstruções plasmideais, foram purificadas porcromatografia de afinidade, usando-se sepharose-níquel eseguindo-se as recomendações do fabricante (SepharoseChelating Fast Flow; Amersham Biosciences, Uppsalla,Suécia). A proteína recombinante produzida TOPlOF'transformada com pBK-CMV foi purificada por cromatografiade troca iônica ou por eletroeluição. A purificação poreletroeluição foi realizada em gel de poliacrilamida comdodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), usando-se um aparelhoPrep Cell modelo 491 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, EUA),seguindo-se as recomendações do fabricante. Após apurificação, o SDS foi removido da proteína poressencialmente conforme método descrito por Tuszynski eWarren, 1975 [Tuszynski, G. P. and L. Warren. (1975)"Removal of sodium dodecyl sulfate from proteins." AnalBiochem 67(1): 55-65]. A concentração das proteínas foideterminada pelo método de descrito por Bradford [Bradford,Marion M. (1976) A rapid and sensitive method for thequantitation of microgram quantities of protein utilizingthe principie of protein-dye binding. Anal Biochem. 72,248-254]. O grau pureza das proteínas foi avaliado por SDS-PAGE.
Preparação de DNA plasmideal para imunização
Colônias de Escherichia coli da linhagem TOPlOF'(Invitrogen) transformadas com uma das construçõesplasmideais pBK-CMV-LcilAf pBK-CMV-Lci2B, pBK-CMV-Lci3A,pBK-CMV-Lci4A ou plasmídeo pBK-CMV sem inserto foramusadas, separadamente, para inocular cerca 5 a 10 ml decaldo de cultura Luria-Bertani [LB, tripotona a 1 % (m/v) ,extrato de levedura a 0,5 % (m/v) e NaCl 1 % (m/v), pH 7,0]com amplicilina na concentração de 50 mg/ml. As suspensõesbacterianas foram incubadas, por oito horas, a 37°C, sobagitação constante de cerca de 300 rpm. Após esse período,uma amostra de cada cultura foi usada para inocular umvolume maior de caldo LB com amplicilina. Depois de umperíodo de incubação por cerca de 12 a 16 h, a 37°C, sobagitação constante de 300 rpm, os sedimentos bacterianosforam obtidos pela centrifugação a 6.000 χ g e a 4°C, por15 minutos, sendo, posteriormente, armazenados a -20°C atéo momento do uso. Os sedimentos bacterianos foramprocessados e os plasmídeos purificados por colunascromatográficas de troca iônica, usando-se reagentes eseguindo-se as recomendações da Qiagen (Qiagen, GmbH,Hilden, Alemanha). Após eluição das colunas, lavagem decada amostra de DNA com etanol a 70 %, incubação atemperatura ambiente por cerca de 20 minutos paraevaporação de etanol residual, DNA plasmidialcorrespondente a cada construção diferente foi ressuspensoem água deionizada (Milli-Q, Millipore, Billerica, MA,EUA), para alcançar uma concentração de cerca de 1,5 a 2,0mg/mL, e armazenado a -20°C. Antes do armazenamento, umaalíquota de cada amostra foi usada para determinação daconcentração por espectrofotometria e a integridade poreletroforese em gel de agarose. No momento do uso, cadaamostra de plasmídeo foi precipitada com NaCl a 0,1 M eetanol a 70 %. Depois disso, cada amostra foi ressuspensana concentração de 1 mg/mL DNA em solução de NaCl a 0,85 %estéril (Isofar, Duque de Caxias, Brasil).
Animais
Camundongos da linhagem isogênica BALB/c, fêmeas ou deambos os sexos, com seis a 12 semanas idade, produzidospelo biotério do Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz (CPqGM-FI0CRUZ) em Salvador-Bahia (BR), foram usados. Oscamundongos foram mantidos durante todo o período doexperimento, no biotério do CPqGM. Os animais receberamalimentação e água ad libitum.
Cães mestiços adultos com idade de cerca de 4 a 9anos, de ambos os sexos, foram obtidos nos Centro deControle de Zoonoses dos municípios de Dias D'Ávila, Laurode Freitas e Salvador (Bahia, BR). Os animais foramalojados nos canis experimentais do Laboratório Central doEstado da Bahia (LACEN) e do Centro de Pesquisas GonçaloMoniz (CPqGM) e manipulados conforme as Boas Práticas deExperimentação Animal. Visando eliminação de possíveis exoe endoparasitoses pré-existentes, cerca de três meses antesdo início do experimento, os cães foram tratados com trêsdoses de 5 mg/kg de praziquantel, 14,4 mg/kg de pirantel e15 mg/kg de febantel (Vedbrands Saúde Animal, Jacareí,Brasil) , com intervalo de sete dias entre dosesconsecutivas, e com amitraz (Schering-Plough Veterinária,São Paulo, Brasil) a 12,5%, na forma de banhos com duraçãoe intervalos variados, determinados de acordo com avaliaçãomédico-veterinária. Os animais foram imunizados paraprevenção contra leptospirose causada por duas cepas,cinomose, adenovirose, virose causada por parainfluenza,parvovirose, hepatite viral, coronavirose (vacina óctupla,Fort Dodge Laboratories, EUA), conforme recomendação dofabricante, cerca de 40 dias antes do início doexperimento. Os cães machos foram submetidos aorquiepididectomia para facilitar o manuseio e diminuir oestresse resultante da agressividade nos períodos de ciodas fêmeas (http://www.pasteur.saude.sp.gov.br/cao/cao_03.htm)cerca de 190 dias antes do início do experimento.Inicialmente, cada animal foi submetido à avaliaçãoimunológica e parasitológica para reduzir a possibilidadede uso de animal naturalmente infectado por L. chagasi noexperimento aqui descrito. Foram usados somente os animaiscom resultados negativos nos dois ensaios mencionadosacima.
Avaliação de linfoproliferação
Nos ensaios para avaliação da resposta imune emcamundongos, o baço de cada animal foi removido após osacrifício. Suspensão de células esplênicas isoladas foramobtidas. Células esplênicas foram ressuspensas em RPMI 1640suplementado com 10% de soro fetal bovino [ (v/v) , SFB,Gibco BRL Life Technologies, EUA], 2 mM de L-glutamina(Sigma-Aldrich) e 0,01 mM de 2-mercaptoetanol (Sigma-Aldrich). As células foram distribuídas em triplicatas (3 χ103/poço em 200 μL) em placas de microtitulação de 96 poçosde fundo chato (Costar Corning Inc., Nova Iorque, EUA) eincubadas por três dias na ausência de estímulo adicionalou com concanavalina A (Con A, 2 μg/mL) ou por cinco diascom extrato total de antígenos de Leishmaniachagasi/infantum (10 μg/mL) ou antígeno recombinante(rLcilA, rLci2B, rLci3A ou rLci4A nas concentrações de0,1 μg/mL, 1 μg/mL ou 10 μg/mL) a 37°C, em atmosfera úmida,com CO2 a 5 % (v/v). Foram acrescentados em cada poço 20 μΐde RPMI 1640 suplementado contendo 1 μCi de timidina[H](Amersham Biosciences, Uppsalla, Suécia). Após 18 horas, asplacas foram armazenadas a -20°C. As células foramcoletadas em papel de filtro de fibra de vidro (PackardCanberra Company, Meriden, EUA) e a avaliação de emissão departículas beta emitidas por minuto (cpm) foi realizada emcontador beta modelo Matrix 9600 (Packard CanberraCompany). Os resultados foram expressos pelos índices deproliferação [média aritmética da contagem de partículaspor minuto (cpm) de células estimuladas com Con A ouantigeno dividida média aritmética de cpm de célulascultivadas somente com meio suplementado].
Para a mensuração da produção de citocinas(interferon-gama e IL-5), esplenócitos (9 χ 10b/poço em600 μΐ.) foram cultivados em placas de poliestireno de fundochato de 24 poços (Costar Corning Inc.) em meio de culturasem estimulo adicional ou com Con A a 2 μg/mL, extratobruto de antigenos de L. chagasi (10 μg/mL) ou antigenorecombinante (rLcilA, rLci2B, rLci3A ou rLci4A, a 10 μg/mLpor 48 horas, a 37°C, em atmosfera úmida, com 5% CO2. Apóseste período, o sobrenadante foi coletado armazenado a -20°C até o momento do uso.
Para mensuração da produção de inteferon gama de cão,células mononucleares de sangue periférico (CMNSP) foramobtidas através de gradiente de Ficoll-Paque Plus (AmershamBiosciences, Suécia) e seguindo-se as recomendações dofabricante. As CMNSP foram ressuspensas em RPMI 1640suplementado com 10% de soro fetal bovino [ (v/v) , SFB,Gibco BRL Life Technologies, EUA] , 2 mM de L-glutamina(Sigma-Aldrich) e 0,01 mM de 2-mercaptoetanol (Sigma-Aldrich). Em seguida, as CMNSP foram distribuídas(1 χ 10Vpoço em 2 mL) em placas de poliestireno 6 poços(Costar Corning Inc., EUA) e, depois, cultivadas por 48 hsem estímulo adicional, com Con A (10 pg/mL) ou extratobruto de antigenos de L. chagasi/infantum (20 μg/mL) à 37°Ccom 5% CO2. Os sobrenadantes foram coletados e armazenadosa -2O0C até o momento do uso.
Quantificação de citocinasEnsaios imunoenzimáticos de captura (ELISA) foramrealizados para a mensuração da concentração de IFN-γ e IL-5 murinos presentes nos sobrenadantes de esplenócitosusando-se placas de microtitulação de 96 poços ("HighBinding"; Corning Incorporated Life Sciences) e reagentesda BD Pharmigen, seguindo-se as instruções do fabricante.As amostras foram avaliadas em duplicatas. A concentraçãode citocina da cada amostra foi determinada usando-se umacurva de calibração, programa de computador Graph Pad,PRISM, versão 4.0. e fazendo correção pelo fator dediluição.
A mensuração da concentração de IFN-γ canino emsobrenadantes de CMNSP foi realizada por ELISA de capturausando-se reagentes da R&D Systems (R&D SystemsIncorporation, Minneapolis, EUA), seguindo-se asrecomendações do fabricante. As amostras foram avaliadas emduplicata. A leitura da densidade óptica a 450 nm foirealizada em espectrofotômetro (Emax Precison MicroplateReader, Molecular Devices Corporation, Sunnyvale, CA, EUA).A concentração de IFN-γ canino foi determinada usando-se amédia aritmética de valores de densidade óptica dasduplicatas com o programa de computador Softmax 3.0,corrigidas pelo fator de diluição, quando apropriado.
Análise estatística
Os dados foram analisados com os testes paramétricosde análise de variância (ANOVA). Quando a ANOVA mostroudiferença estatística significante, a comparação entre osgrupos, dois a dois, foi realizada pelo pós-teste Tukey. 0valor definido para significância estatística foi dep<0,05.
Os Exemplos seguintes devem ser considerados comoilustrativos da presente invenção.
Isolamento dos antigenos recombinantes
0 rastreamento de clones de fagos lambda de umabiblioteca de cDNA de L. chagasi com um conjunto de quatrosoros de cães naturalmente infectados por Leishmaniachagasi/infantum, com confirmação parasitológica, levou aidentificação de 30 clones positivos. A subseqüente excisãodos fagomídeos pBK-CMV de cada um dos clones e osequenciamento das extremidades 5' e 3' de cada um dosinsertos permitiu a identificação de quatro genes distintos[LciIr Lci2, Lci3 e Lci4). Os clones de fagomídeos exibiaminsertos que codificavam uma parte ou a totalidade dospolipeptídeos correspondentes esses genes. Destes clones,24 foram encontrados para o genes Lcil (incluindo um com oinserto LcilA) , 2 para o Lci2 (com os insertos Lci2A eLci2B) , 2 para o Lci3 (com os insertos Lci3A e Lci3B) e 1para o Lci4 (com o inserto Lci4A) . Um rastreamentoadicional da biblioteca com uma mistura de três soros depacientes humanos com leishmaniose visceral levou àidentificação de um quinto gene (Lci5), através doisolamento de um único clone de fagomídeo contendo oinserto Lci5A, que codifica parte do polipeptídeocorrespondente a Lci5.
Um segundo conjunto de clones recombinantes foiselecionado a partir do rastreamento de cerca de 30.000clones de fagos lambda de uma biblioteca genômica de L.chagasi com um conjunto de seis soros de pessoasdiagnosticadas com leishmaniose visceral (diagnósticoparasitologicamente confirmado). Este rastreamento levou aidentificação de 60 clones positivos, dos quais 43 foramutilizados para a excisão dos respectivos fagomideos esequenciamento das extremidades 5' e 3' . A análise dasseqüências obtidas levou a identificação de outros 7 genes,entre eles o Lci6 (33 clones, incluindo um com o insertoLei 6A) , o Leil (4 clones, um com o inserto Lci 7A) , o Lci8(2 clones, um com o inserto Lci8A) , o Lci9 (1 clone, com oLci9A), o LcilO (1 clone, com o LeilOA) , o Leill (1 clone,com o LeillA) e o Leil2 (1 clone, com o Lçil2A).
Por fim, um terceiro rastreamento foi realizado em umaoutra biblioteca de cDNA de L. chagasi, desta vezutilizando-se soro policlonal de coelhos produzido contraas proteínas situadas na faixa de peso molecular de 67 e 94kDa de L. braziliensis. Este rastreamento levou aidentificação de dois cDNAs distintos que codificam paravariantes de uma mesma proteína, a Lcil3. Um destes foiselecionado arbitrariamente e a proteína por ele codificadadenominada de rLcil3A.
A maioria dos genes identificados codifica paraproteínas que têm em comum um alto peso molecular predito ea ocorrência em série de múltiplos motivos repetitivos, osquais variam entre as proteínas no que se refere aocomprimento e composição de aminoácidos. Isto é válido paraos genes Lei2, Lei3, Lei4, Lci5, Lei6, Lei8, Lei9, LeilO eLeil2. As proteínas codificadas por outros três genescitados acima (Lcil, Lci7 e Lcil3) têm sua função associadaa eventos de "stress" celular. Apenas o Lcill codifica parauma proteína hipotética que não se enquadra nestas duassituações. A Tabela 1 apresenta um sumário dos resultadosmais relevantes associados a cada inserto. Dados maisdetalhados sobre tais insertos serão descritos a seguir. AsFiguras 1 e 2 apresentam um esquema dos insertos que contémsegmentos repetitivos. Nestas figuras estes segmentos estãoindicados por setas com comprimento variável de acordo como seu tamanho. Na Figura 1 estão representados os insertosoriundos da biblioteca de cDNA, enquanto que na Figura 2 seencontram aqueles derivados da biblioteca genômica. NaFigura 1, em relação aos insertos correspondentes aos genesLci2 e Lci3 (A e Β), o esquema mostra apenas a extensão doscDNAs de maior comprimento que foram isolados (Lci2A eLci3A), incluindo os trechos que codificam para asextremidades C-terminais das respectivas proteínas (empreto) e as regiões 3' não traduzidas. Para o Lci4 (C) estáilustrada a região codificadora completa, obtida a partirda seqüência genômica, conforme descrito no texto, assimcomo o cDNA Lci4A completo com sua região 3' não traduzida.
No caso do Lci5 (D) está ilustrado a metade N-terminal dasua região codificadora, também obtida a partir daseqüência genômica, assim como a extensão completa do cDNALci5A. Em A, B, CeD os trechos presentes nas respectivasproteínas recombinantes estão assinalados em cinza. No casodos Lci2, Lci3 e Lci4, seqüências de aminoácidos desegmentos repetitivos isolados estão representadas, o quenão significa que todos os segmentos de uma mesma proteínasejam idênticos. Na Figura 2 estão representados os genesLci6 (A), Lci8 (B), Lci9 (C), LcilO (D) e Lcil2 (E) e/ou osinsertos presentes nos clones recombinantes Lci6A, Lci8A,Lci9A, LcilOAr e Lcil2A, onde a representação dos segmentosrepetitivos e daqueles presentes nas respectivas proteínasrecombinantes é a mesma daquela mostrada na Figura 1. Damesma forma, seqüências de aminoácidos de segmentosisolados estão representadas apenas a titulo de ilustração.
Caracterização dos antigenos recombinantes
A proteína Lcil corresponde ao homólogo citoplasmáticode L. chagasi da proteína de choque térmico de 70 kDa, maisconhecida como HSP70. Esta proteína tem sido assinalada eminúmeros ensaios voltados à identificação de proteínasimunogênicas de diferentes espécies de Leishmania. 0 termoHSP compreende diferentes famílias de proteínasclassificadas de acordo com o seu peso molecular e queatuam como chaperonas moleculares, isto é, auxiliandooutras proteínas a manter sua estrutura/função em condiçõesde stress (como o choque térmico) ou logo após a suasíntese. A família das HSP70 compreende proteínasabundantes, extremamente conservadas ao longo da evolução,e que podem ser encontradas em diferentes compartimentoscelulares. A proteína recombinante produzida após asubclonagem do inserto LcilA no vetor de expressão pRSETinclui toda a região codificadora da proteína mais umsegmento de 52 aminoácidos na sua extremidade amino-terminal codificado por parte da região 5' não traduzíveldo seu cDNA. No genoma de L. infantum (cujo acesso pode serrealizado através da página http://www.genedb.org), quatrogenes distintos foram mapeados que codificam para estaproteína, sendo que ao menos três destes parecem seridênticos ao que codifica a proteína Lcil, identificadoscom os números de acesso: LinJ28_V3.3000, LinJ28_V3.2960 eLinJ28_V3.3060. A seqüência completa de nucleotídeos dofragmento gênico codificando para a proteína rLcil,incluindo o segmento da 5'UTR presente no clonerecombinante, está mostrada na SEQ ID NO: 1 enquanto arespectiva seqüência de aminoácidos está mostrada na SEQ IDNO: 2.
Os clones contendo os insertos Lci2A e Lci2B codificama extremidade carboxi-terminal de uma proteína classificadacomo uma N-cinesina da família N-3 (segundo classificaçãoproposta por Miki, H., Setou, M., Kaneshiro, K., andHirokawa, N. (2001) . All kinesin superfamily protein, KIF,genes in mouse and human. Proc.Natl. Acad. Sci. U. S. A 98,7004-7011), previamente descrita em L. chagasi e denominadade LcKin. Esta proteína teve seu peso molecular completoestimado em cerca de 230 kDa e consiste basicamente de umdomínio motor na sua extremidade N-terminal, seguido poruma região composta por um grande número de repetições de39 aminoácidos. A região correspondente aos primeiros 956aminoácidos desta proteína, que inclui o domínio motor N-terminal, já foi clonada e seqüenciada. Desta, o segmentocompreendendo os últimos 4 6 aminoácidos da região nãorepetitiva próxima ao domínio motor mais 242 aminoácidosdos segmentos repetitivos constituem o antígeno rK39, jáutilizado em testes de diagnóstico contra leishmaniosevisceral. O uso do rK39 no diagnóstico da leishmaniosevisceral está coberto pelas patentes US5.411.865 eUS5.719.2 63 e pela patente brasileira PI1101114-9 (pedidodepositado em 14/05/1997). Os polipeptidios rLci2A erLci2B são formados basicamente por segmentos repetitivosde 39 aminoácidos com uma região não repetitiva de 76aminoácidos na sua extremidade C-terminal. A Figura IAdescreve de forma esquemática a seqüência de nucleotideosdo cDNA codificando o polipeptideo rLci2A, ilustrando osvários segmentos repetitivos de 39 aminoácidos (incluindo aseqüência de aminoácidos de um destes), a região C-terminalnão repetitiva e a seqüência 3' não traduzida. Também podese visualizar trecho da região codificadora contida noinserto Lci2B e que foi subclonado no vetor pRSET paraproduzir uma proteína recombinante fusionada a umaseqüência N-terminal de polihistidinas. 0 que diferencia opolipepetídeo codificado pelo inserto Lci2A daquelecodificado pelo inserto Lcí2B é a presença de um maiornúmero de repetições de domínios repetitivos presentes emno polipeptideo rLci2A (11 repetições enquanto no rLci2B sósão encontradas 5 completas) e um segmento mentor de DNA naregião 3' não traduzível em Lci2B (não mostrado na figura),que não interfere com a seqüência da proteína. Osfragmentos protéicos que constituem os polipeptídeosrLci2A/rLci2B e aquele compreendido pela proteína rK39parecem então constituir fragmentos distintos de uma únicaproteína de L. chagasi/infantum, cuja seqüência parcial nogenoma está disponível sob o número de acessoLinJ14_V3.1180. Entretanto, como se tratam de fragmentosdistintos de uma mesma proteína existe uma variaçãosignificativa na seqüência dos domínios repetitivos deforma que nenhuma das seqüências dos domínios presentes noscodificados pelos insertos Lci2A e Lci2B se enquadramcompletamente dentro da seqüência consenso patenteada juntocom a rK39 e a maioria diverge significativamente emdiferentes posições. A Figura 3 mostra a seqüência consensodos domínios repetitivos da rK39 (Fig. 3A) e os domíniosrepetitivos presentes nas proteínas rLci2A e rLci2B,ressaltando os aminoácidos que divergem do consenso da rK39(Fig. 3B). 0 consenso gerado pelos domínios repetitivos dopolipeptídeo rLci2B está representado de forma ilustrativana Figura 3C, lembrando que um consenso gerado a partir dasseqüências dos domínios do polipeptídeo rLci2A seria aindamais complexo. A seqüência completa de nucleotídeos dofragmento de cDNA codificando a proteína rLci2A estámostrada na SEQ ID NO: 3 e a seqüência de aminoácidos damatriz de leitura correspondente está mostrada na SEQ IDNO: 4. Já as seqüências de nucleotídeos e de aminoácidos daproteína rLci2B estão representadas nas SEQ IDs 5 e 6,respectivamente.
Insertos de dois clones codificam segmentos daproteína Lci3, o rLci3A e o rLci3B. A proteína Lci3consiste basicamente de uma seqüência de 14 aminoácidosrepetida muitas vezes (centenas de vezes no homólogo maissemelhante de L. major, o qual possui mais de 3.000aminoácidos), seguida de uma extremidade carboxi-terminalnão repetida de cerca de 240 aminoácidos. O gene quecodifica esta proteína parece estar presente no genoma deL. infantum, porém seu seqüenciamento ainda não foiconcluído (duas seqüências incompletas relacionadasnúmeros de acesso LinJ34_V3.0700 e LinJ34_V3.0710). Umaproteína relacionada de T. cruzi com motivos repetitivossemelhantes já foi descrita [Hoft, D.F., Kim, K.S., Otsu,K., Moser, D.R., Yost, W.J., Blumin, J.H., Donelson, J.E.,and Kirchhoff, L.V. (1989). Trypanosoma cruzi expressesdiverse repetitive protein antigens. Infect.Immun. 57,1959-1967]. A proteína codificada pelo clone Lci3A consistede 22 repetições de 14 aminoácidos com uma seqüênciaconsenso basicamente idêntica a de L. major e umaconservação muito grande de seqüência na região Carboxi-terminal não repetitiva (esquematizado na Figura 1B) . Aúnica diferença entre os insertos Lci3A e Lci3B é que nesteúltimo o número de repetições é menor (15 ao todo - dadosnão mostrados). A seqüência completa de nucleotídeos dofragmento de cDNA Lci3A está mostrada na SEQ ID NO: 7 e aseqüência de aminoácidos da matriz de leituracorrespondente está mostrada na SEQ ID NO: 8. A seqüênciade nucleotídeos do primeiro fragmento subclonado no vetorpRSET (Lci3A-R22) e a seqüência do respectivo fragmentoprotéico (rLci3A-R22) estão mostradas nas SEQ ID NO: 9 eSEQ ID NO: 10, respectivamente. Da mesma forma, asseqüências de nucleotídeos e aminoácidos dos segundofragmento subclonado no vetor de expressão, Lci3A-R3, estãodescritas nas SEQ ID NO: 11 e SEQ ID NO: 12,respectivamente. Conforme ilustrado na Figura IB os Lci3A-R22 e Lci3A-R3 variam quanto ao número de repetições dosegmento de 14 aminoácidos e a extensão da seqüência C-terminal não repetitiva contidos em cada proteínarecombinante.A proteína Lci4 é codificada por um gene identificadono banco de seqüências do genoma de L. infantum com onúmero de acesso LinJ36_V3.3690. Este gene codifica parauma proteína altamente conservada em eucariotos, denominadade poli-ubiquitina, e previamente descrita em outrasespécies de Leishmania. Esta proteína contém múltiplasrepetições (nove ao todo na proteína de L. infantum) daseqüência que codifica a ubiquitina, de 76 aminoácidos, queem células eucarióticas é ligado covalentemente adiferentes proteínas. A ligação a ubiquitina pode servircomo sinal para degradação de proteínas, pelo complexoproteasoma, ou ainda para seu transporte a diferentescompartimentos subcelulares. O fragmento protéico da Lci4codificado pelo clone por nós isolado, o rLci4A, compreendeas últimas duas cópias completas da ubiquitina mais umterço da cópia anterior, totalizando 173 aminoácidos. Aseqüência da ubiquitina é altamente conservada e nãoexistem diferenças significativas na sua seqüência deaminoácidos quando se compara com outras seqüências deeucariotos. A seqüência completa de nucleotídeos do geneLci4 (LinJ36_V3.3690) está mostrada na SEQ ID NO: 13 e aseqüência de aminoácidos correspondente está mostrada naSEQ ID NO: 14. Já a seqüência de nucleotídeos do insertoLcí4A, subclonado no vetor pRSET e utilizado na produção daproteína recombinante, assim como a seqüência deaminoácidos correspondente estão representadas nas SEQ IDNO: 15 e SEQ ID NO: 16, respectivamente. Representaçõesesquemáticas da seqüência protéica completa e dopolipeptídeo recombinante rLci4A podem ser observadas naFigura IC.
0 gene Lci5 é o mesmo representado no GeneDb de L.infantum com o número de acesso LinJ33_V3.3230. Este genecodifica para uma proteína hipotética cuja seqüência aindaprecisa ser revisada, tendo em vista que a sua fase deleitura se encontra interrompida por códons de terminaçãoda tradução, embora ela se inicie com uma seqüênciacontínua de 7665 pb. Uma representação esquemática dosprimeiros 4,5Kb desta seqüência codificadora pode serobservada na Figura ID e demonstra sua organização emsegmentos repetitivos de duas classes distintas. O cDNALci5A codifica para um trecho desta região englobando 4 dosdomínios repetitivos de 148 aminoácidos, totalizando 2025pb. A seqüência integral dos ~7,6Kb da primeira fase deleitura completa está representada na SEQ ID NO 17 e aseqüência de aminoácidos correspondente representada na SEQID NO 18. Já a seqüência de nucleotídeos do inserto Lci5A ea seqüência de aminoácidos por ele codificada estãorepresentadas nas SEQ ID NO: 19 e SEQ ID NO: 20,respectivamente. A seqüência de nucleotídeos do primeirofragmento clonado no vetor pRSET (Lci5A-I) e a seqüência dorespectivo fragmento protéico (rLci5A-I) estão mostradasnas SEQ ID NO: 21 e SEQ ID NO: 22, respectivamente. Damesma forma, as seqüências de nucleotídeos e aminoácidosdos segundo fragmento subclonado no vetor de expressão,Lci5A~II, estão descritas nas SEQ ID NO: 23 e SEQ ID NO:24, respectivamente. Os dois fragmentos recombinantes,totalizando 305 e 156 aminoácidos, consistem de uma e duascópias, respectivamente, do segmento repetitivo da proteínae tem a mesma extremidade N-terminal. A representaçãoesquemática destes polipeptideos recombinantes também estáilustrada na Figura ID.
A proteína Lci6 é codificada pelo mesmo geneidentificado no banco de seqüências do genoma de L.infantum com o número de acesso LinJ26_V3.1950. Este genecodifica para o ortólogo de Leishmania da proteínadenominada GB4, uma proteína descrita previamente emTrypanosoma brucei e que se associa a proteínas demicrotúbulos de citoesqueleto. Em T. brucei esta proteína écodificada por um gene muito grande, composto por inúmerasrepetições de 600 pb, porém sua forma madura é de 28 kDa(Rindisbacher, L., Hemphill, A., and Seebeck, T. (1993). Arepetitive protein from Trypanosoma brucei which caps themicrotubules at the posterior end of the cytoskeleton.Mol.Biochem.Parasitol. 58, 83-96). Em L. chagasi/infantum oseu homólogo também é codificado por um gene muito grande(7599 pb), mas as seqüências repetidas não são tãoconservadas como em T. brucei. A seqüência completa denucleotídeos do gene Lci6 está mostrada na SEQ ID NO: 25 ea seqüência de aminoácidos correspondente está mostrada naSEQ ID NO: 26. Já a seqüência de nucleotídeos do fragmentoLci6A, subclonado no vetor pRSET, e utilizado na produçãoda proteína recombinante, assim como a seqüência deaminoácidos correspondente estão representadas nas SEQ IDNO: 27 e SEQ ID NO: 28, respectivamente. A representaçãoesquemática do polipeptídeo rLci6A, ilustrando os váriosmotivos repetitivos pode ser observada na Figura 2A.A proteína Lci7 é codificada pelo mesmo geneidentificado com o acesso LinJ08_V3.1020 no genoma de L.infantum. Este gene codifica para a proteína induzida pelostress stil, originalmente descrita em L. major. 0 usodesta proteína para fins de imunização como componente deuma vacina contra Leishmaniose está previsto nas patentesUS6.365.165, US6.613.337 e US6.709.661. Seu uso paradiagnóstico, entretanto, não está explicitado nasreivindicações das referidas patentes. Esta proteína serádiscutida nesta patente então apenas no que concerne a suautilização para fins de diagnóstico.
A seqüência completade nucleotídeos do gene Lci7 está mostrada na SEQ ID NO: 29e a seqüência de aminoácidos correspondente está mostradana SEQ ID NO: 30. Já a seqüência de nucleotídeos dofragmento Lci7A, subclonado no vetor pRSET, e utilizado naprodução da proteína recombinante, assim como a seqüênciade aminoácidos correspondente estão representadas nas SEQID NO: 31 e SEQ ID NO: 32, respectivamente.
A proteína Lci8 é codificada pelo mesmo geneidentificado no banco de seqüências do genoma de L.infantum com código de acesso LinJ32_V3.2420. A principalcaracterística desta proteína é seu segmento central queconsiste de 61 repetições de 10 aminoácidos codificadas porfragmentos de DNA idênticos flanqueados por sítios para aenzima de restrição Bgl I. Este segmento central éflanqueado por regiões N- e C-terminais de 331 e 242aminoácidos de extensão, respectivamente. A Lci8 possuiortólogos identificados nos genomas de L. major e deespécies de Trypanosoma. Seu ortólogos de T. brucei é umaproteína de membrana intracelular, possivelmente associadaao transporte vesicular (Lee, M.G., Russell, D.G.,D' Alesandro, P.A. and Van der Ploeg, L. H. (1994).Identification of membrane-associated proteins inTrypanosoma brucei encoding an internai, EARLRAEE aminoacid repeat. J Biol Chem. 269, 8408-15). A seqüência denucleotídeos do gene Lci8 está mostrada na SEQ ID NO: 33 ea seqüência de aminoácidos correspondente está mostrada naSEQ ID NO: 34. A seqüência de nucleotídeos do segmento doclone Lci8A clonado no pRSET e a seqüência do respectivofragmento protéico recombinante (Lci8A-I e rLci8A-I) estãorepresentadas nas SEQ ID NO: 35 e SEQ ID NO: 36,respectivamente. A representação esquemática do gene Lci8 edo clone Lci8A, ilustrando o segmento central e os motivosrepetitivos pode ser observada na Figura 2B.
O gene Lci 9 não é representado por uma única regiãocodificadora devidamente anotada nas seqüências genômicasde L. infantum, embora segmentos idênticos às seqüênciasdas extremidades do clone Lci9A sejam encontradas em doistrechos distintos do cromossomo 28. Já em L. major um únicogene homólogo foi encontrado codificando para uma proteínacom extremidades N- e C-terminais curtas (169 e 97aminoácidos, respectivamente) e uma região centralconsistindo de 14 repetições de um motivo com 25aminoácidos seguida de outras 11 repetições com um motivorelacionado de 34 aminoácidos (LmjF28.3010). Esta proteínapossui ortólogos com baixa homologia em espécies deTrypanosoma sendo que no caso de T. cruzi seu ortólogo foiavaliados quanto ao seu uso no diagnóstico de pacientes comdoença de Chagas (GruberfA. and ZingalesfB. (1993)Trypanosoma cruzi: characterization of two recombinantantigens with potential application in the diagnosis ofChagas' disease. J. Exp. Parasitol. 76, 1-12). A seqüênciade nucleotideos do inserto do clone Lci9A com 13 repetiçõesde 25 aminoácidos seguida de 11 repetições com 34aminoácidos, flanqueadas por trechos das extremidades nãorepetitivas, está mostrada na SEQ ID NO: 37 e a seqüênciade aminoácidos correspondente está mostrada na SEQ ID NO:38. Esta seqüência foi subclonada na sua totalidade nopRSET gerando o clone Lci9A-I. Já a seqüência denucleotideos do segmento menor clonado no pRSET e aseqüência do respectivo fragmento protéico recombinante(Lci9A-II e rLci9A-II) estão representadas nas SEQ ID NO:39 e SEQ ID NO: 40, respectivamente. A representaçãoesquemática do clone Lci9A de L. infantum, ilustrando osegmento central, os motivos repetitivos e as proteínasrecombinantes produzidas pode ser observada na Figura 2C.
LcilO é codificada pelo mesmo gene identificado nobanco de seqüências do genoma de L. infantum com o númerode acesso LinJ34_V3.2360, cujo sequenciamento ainda não foiconcluído. Este gene codifica para uma proteína hipotéticade L. infantum e um ortólogo pode ser identificado emseqüências genômicas de Leishmania mas não de T. brucei ouT. cruzi. Recentemente o mesmo gene (identificado pelo seunúmero de acesso anterior no GeneDb - LinJ34.2140) foiidentificado em um outro rastreamento de biblioteca deexpressão de L. infantum com soro de humanos ou hamstersinfectados com este protozoário (Goto, Y., Coler, R.N.,Guderian, J., Mohamath, R., and Reed, S.G. (2006). Cloning,characterization, and serodiagnostic evaluation ofLeishmania infantum tandem repeat proteins. Infect.Immun.74, 3939-3945), porém, nada além disso foi descrito paraessa proteína. Até o momento nada de conclusivo pode-seinferir desta proteína a partir de sua seqüência deaminoácidos, a não ser de que se trata de uma proteína quecontém múltiplos domínios repetitivos de diferentestamanhos (variando de 68 a 198 aminoácidos) que se seguem auma região N-terminal não repetitiva. A Figura 2D mostrauma representação esquemática do clone LcilOA com osdiferentes domínios repetitivos. Na mesma figura pode-seobservar o segmento que foi incluído na proteína rLcilOA-IIe que inclui apenas uma pequena fração do segmento contendoos domínios repetitivos. A seqüência de nucleotídeos daregião codificadora da LcilO está mostrada na SEQ ID NO: 41e a seqüência de aminoácidos correspondente está mostradana SEQ ID NO: 42. A seqüência de nucleotídeos do cloneLcilOA (a mesma presente no inserto LcilOA-I) e a seqüênciade aminoácidos do respectivo fragmento protéicorecombinante estão representadas nas SEQ ID NO: 43 e SEQ IDNO: 44, respectivamente. Da mesma forma as seqüências denucleotídeos e de aminoácidos do fragmento LcilOA-II, estãorepresentadas nas SEQ ID NO: 45 e SEQ ID NO: 4 6,respectivamente.
A proteína hipotética Lci 11 é codificada pelo mesmogene identificado com o acesso LinJ35_V3.4030 no genoma deL. infantum. Esta é uma proteína hidrofílica conservada emdiferentes espécies de Leishmania mas com possíveishomólogos em espécies de Trypanosoma muito poucoconservados. Esta proteína contém um provável peptídeo desinal na sua extremidade N-terminal sugerindo uma funçãoextracelular de membrana ou secretada. Possui pontoisoelétrico alto e é rica nos aminoácidos prolina,glutamina, alanina e serina, que constituem 50% da proteínae muitas vezes estão organizados em repetições de 3 ou 4resíduos. A seqüência de nucleotídeos do gene Lcill estámostrada na SEQ ID NO: 47 e a seqüência de aminoácidoscorrespondente está mostrada na SEQ ID NO: 48. A seqüênciade nucleotídeos do primeiro fragmento subclonado no vetorpRSET (LcillA-I) e a seqüência do respectivo fragmentoprotéico (rLcillA-I) estão mostradas nas SEQ ID NO: 49 eSEQ ID NO: 50, respectivamente. Da mesma forma, asseqüências de nucleotídeos e aminoácidos do segundofragmento subclonado no vetor de expressão, LcillA-II,estão descritas nas SEQ ID NO: 51 e SEQ ID NO: 52,respectivamente, e as respectivas seqüências do LcillA-IIIestão mostradas nas SEQ IDs NOs: 53 e 54. Os trêsfragmentos recombinantes resultantes se iniciam após opeptídeo de sinal e compreendem trechos distintos daproteína. 0 rLcillA-I compreende os aminoácidos 47-667 daproteína nativa, enquanto que o rLcillA-II compreende osaminoácidos 68-450 e o rLcillA-III compreende osaminoácidos 444-667.
A proteína Lcil2, também hipotética, é codificada porum gene cuja seqüência no genoma de L. infantum possui onúmero de acesso LinJ29_V3.0110. Esta proteína possuiortólogos identificados nos genomas de L. major e deespécies de Trypanosoma. Em Τ. brucei seu ortólogo pareceser a proteína denominada de Tb-292, uma proteína demembrana que parece se associar a regiões situadas próximasao núcleo e a bolsa flagelar do parasito. Recentemente estaproteína foi identificada em uma análise de bioinformáticaque buscou identificar proteínas contendo domíniosrepetitivos no genoma de L. infantum e a região contendo odomínio repetitivo desta proteína foi reconhecida por sorosde indivíduos acometidos com leishmaniose visceral[Goto,Y., Coler,R.Ν. , and Reed,S.G. (2007). Bioinformaticidentification of tandem repeat antigens of the Leishmaniadonovani complex. Infeck. Immun. 75, 846-851]. A proteínade L. infantum é composta por uma região N-terminal decerca de 160 aminoácidos seguido de um trecho contendo 30motivos repetitivos de 8 aminoácidos e, ao final, umaregião C-terminal bem mais extensa contendo possíveismotivos trans-membrânicos e totalizando cerca de 2.000aminoácidos. A seqüência completa de nucleotídeos do Lcil2está mostrada na SEQ ID NO: 55 e a seqüência de aminoácidoscorrespondente está mostrada na SEQ ID NO: 56. A seqüênciade nucleotídeos do primeiro fragmento subclonado no vetorpRSET (Lcil2A-I) e a seqüência do respectivo fragmentoprotéico (rLcil2A-I) estão mostradas nas SEQ ID NO: 57 eSEQ ID NO: 58, respectivamente. Da mesma forma, asseqüências de nucleotídeos e aminoácidos dos segundofragmento subclonado no vetor de expressão, Lcil2A-II,estão descritas nas SEQ ID NO: 59 e SEQ ID NO: 60,respectivamente. Os dois fragmentos recombinantes seiniciam no primeiro dos 30 motivos repetitivos, incluemtodo o segmento repetitivo e parte da região C-terminal. Asduas proteínas variam na sua extremidade C-terminal etotalizam 928 e 534 aminoácidos para os polipeptídeosrLcil2A-I e rLcil2A-II respectivamente. A Figura 2E mostrauma representação esquemática da proteína rLcil2A e dasduas proteínas recombinantes geradas a partir dos insertosLcil2A-I e Lcil2A-II.
O inserto Lcil3A codifica para parte de uma proteínaque corresponde a um homólogo mitocondrial da proteína dechoque térmico HSP7 0 de L. chagasi/infantum. A seqüênciacodificadora completa do Lcil3 está está identificado nogenoma de L. infantum com o número de acessoLinJ30_V3.2530. Embora a respectiva proteína Lcil3 tambémpertença à família das HSP70s, a identidade entre aseqüência de aminoácidos de Lcil3 e de Lcil (outra proteínada família HSP70) é inferior a 50%. A proteína Lcil3 écodificada por um dos quatro genes de HSP70 mitocondrial deL. chagasi/infantum que, embora não sejam idênticos,codificam para proteínas com um nível de homologia igual ousuperior a 94% entre si [Campos, R.M., Nascimento, M.,Ferraz, J.C., Pereira, M.M., Rocham P.O., Thompson, G.M.,Cysne-Finkelstein, L., Figueiredo, R.C., de Melo Neto, O.P.(2008). Distinct mitochondrial HSP70 homologues conservedin various Leishmania species suggest novel biologicalfunctions. Mbl. Biochem. Parasitol. 160, 157-162]. Aseqüência completa de nucleotídeos do gene Lcil3 estámostrada na SEQ ID NO: 61 e a seqüência de aminoácidoscorrespondente está mostrada na SEQ ID NO: 62. A seqüênciade nucleotídeos do fragmento subclonado no vetor pRSET(Lcil3A) e a seqüência do respectivo fragmento protéicorecombinante (rLcil3A) estão representadas nas SEQ ID NO:63 e SEQ ID NO: 64, respectivamente.
Ensaios de "di.psti.ck" para detecção de anticorpos anti-Leishmania
Discos de papel de nitrocelulose foram individualmentesensibilizados com os polipeptideos rLcilA, rLci2B, rLci3A,rLci3B e rLci5A como descrito a seguir. Amostra de cadaclone de bacteriófagos Lambda ZAP codificando informaçãopara cada um dos polipeptideos rLcilA, rLci2B, rLci3A,rLci3B e rLci5A foi misturada com suspensão de E. coli,meio de cultura contendo agar e isopropil-β-Ο-tiogalactosideo (IPTG) e, depois, foi colocada em uma placade petri, para produção de cada proteína recombinantescodificada. A quantidade de bacteriófagos foi previamentedeterminada, por titulação, para causar placas de Iiseconfluentes na camada de bactérias no final de um períodode incubação de 4 horas a 42°C e 12 horas a 37°C. Após umperíodo de incubação de quatro horas da mistura debacteriófago-bactéria, discos de papel de nitroceluloseforam justapostos à superfície do agar e incubados por 12horas a 37°C, de maneira a serem sensibilizados com asproteínas recombinantes produzidas. Como controle negativodo antígeno ligado à fase sólida, discos de nitroceluloseforam sensibilizados com lisados de placas de agar nasquais a E. coli foi infectada pelo bacteriófago lambda ZAPnão recombinante. Promastigotas de L. chagasi/L. infantum,obtidos de culturas de fase estacionária em meio deSchneider's para células de inseto contendo 10% de sorobovino fetal, foram lisados a 4°C (como fonte de antigenode Leishmania) e usados para sensibilizar papel denitrocelulose na concentração de 20 μg.mL~1 de PBS, em umaincubação de 16 horas a 4°C. Sitios de ligação paraproteína possivelmente remanescentes nos discos denitrocelulose, sensibilizados com os antígenosrecombinantes ou controle, foram bloqueados pela incubaçãocom 5% (m/v) de leite em pó desnatado em PBS (PBS-L) porpelo menos uma hora a temperatura ambiente. Pequenos (8x2mm) pedaços retangulares dos discos de nitrocelulosesensibilizados com os diferentes antígenos foram cortados ecolados transversalmente em uma única fita de plásticoflexível (dipstick de 8 χ 7 00 mm) , de forma a formar umamatriz dos antígenos insolubilizados, dispostos lado alado, para serem simultaneamente testados no ensaio dedipstick. A matriz de dipstick foi formada por: (i)polipeptídeos rLcilA, rLci2B, rLci3A, rLci3B e rLci5A emlisado de E. coli; (ii) controle negativo de lisado de E.coli; e (iii) controle positivo de lisado de Leishmania.Sessenta e um soros de pacientes com leishmaniose visceralparasitologicamente confirmada, e 14 soros de indivíduossadios de área não-endêmica, foram testados na matriz depedaços de papel de nitrocelulose, sensibilizados comantígenos, descrita acima. Isto foi feito como descritoabaixo. A matriz antigênica foi incubada com diluições desoro a 1:400, em PBS-L contendo 0.05% de Tween 20 (PBS-LT) ,por duas horas a temperatura ambiente. Depois de quatrolavagens com PBS-T, a ligação de anticorpos aos antígenosfoi revelada por incubações sucessivas com anticorpos anti-Fc de IgG humana conjugados a peroxidase (específica paraIgG) e com uma mistura de peróxido de hidrogênio e ocromógeno diaminobenzidina (Sigma-Aldrich), como descritoanteriormente. A coloração de um dos pedaços de papel denitrocelulose que formavam a matriz antigênica eraconsiderada uma reação positiva conforme mostrada na Figura 4.
O resultado dos testes de 61 soros de pacientes comleishmaniose visceral, e de 14 indivíduos sadios de regiãonão-endêmica, no ensaio de dipstick mostrou sensibilidade,calculada a partir destes resultados, para os antígenosrLci2B e rLci5A de 73,8 % e 63,9 %, respectivamente, e aespecificidade para cada um dos antígenos foi de 100 %.Expressão e purificação de antígenos recombinantes
A análise eletroforética dos antígenos recombinantesproduzidos e purificados como descrito acima, realizadapara avaliar o grau de pureza desses antígenos, encontra-seilustrada na Figura 5. Os resultados mostrados nesta figurasão representativos do observado para os demais antígenos.Em alguns casos observam-se mais de uma banda queprovavelmente representam produtos de degradação dopolipeptídeo sintetizado, uma vez que não são encontradoscom as demais proteínas recombinantes.
Uso de antígenos recombinantes em ensaios imunodiagnósticospor ELISA
Poços de placas de microtitulação de poliestireno com96 poços (Cliniplate, Thermo Labsystems, Helsinki,Finlândia) foram sensibilizados com antígeno diluído em100 μία de tampão carbonato-bicarbonato de sódio a 0,1 M(Na2HCO3 a 15 ItiM e NaHCO3 a 28 mM, pH 9.6), por 16 horas, a4°C. Extrato total de antigenos de Leishmaniachagasi/infantum ou antigenos recombinantes de Leishmaniapurificados foram usados nas concentrações de 10 μg/mL e 2a 5 μg/mL, respectivamente. Sitios de ligação de proteínanão ocupados por antígeno foram bloqueados com 200 μL/poçode leite desnatado a 5 % em PBS (m/v) por lha 37 °C. Ospoços foram lavados três vezes com PBS-T. Cem microlitrosdos soros diluídos [humanos 1:1.600, caninos 1:400 (Figura13), 1:400 ou 1:200 (Figura 6), e murinos 1:200, Figuras10 e 11, 1:5.000, Figura 9] em PBS-T contendo 10% de leitedesnatado, foram adicionados aos poços em duplicatas. Asplacas foram incubadas por 1 h, a 37° C. Amostras de sorocontrole negativo e soro controle positivo foram usadas emcada ensaio. Os poços das placas de microtitulação foramlavados três vezes com PBS-T. Foram utilizados 100 μΐ; porpoço de solução de anticorpos específicos paraimunoglobulina da classe IgG humana (diluída 1:15.000),canina [diluída 1:1.000 (Figura 13) ou 1:1.200 (Figura 6)ou murina (diluída 1:400 ou 1:4.000, foram lotes diferentesde conjugado) conjugados a peroxidase (Sigma-Aldrich ouJackson Immunoresearch) conforme apropriado para o ensaio.
As placas foram incubadas por 1 h, a 37°C. Os poços foramlavados 3 vezes com PBS-T e a reação foi revelada pelaadição de 100 yL de tetrametilbenzidina (TMB; Sigma-Aldrich) em tampão citrato/acetato, por 30 minutos, atemperatura ambiente e ao abrigo de luz. A reaçãoenzimática foi interrompida pela adição de 50 μΐ, de ácidosulfúrico 4 Μ. A leitura de densidade óptica foi realizadacom filtro de 450 nm. Os resultados foram expressos comoreciprocas e médias geométricas das reciprocas dos títulosde soro.
Os resultados dos ELISAs com socos de cãesnaturalmente infectados por Leishmania chagasi e soros decães controle, inicialmente com os antígenos rLcilA,rLci2B, rLci4A, rLci6A, rLcilOA-II, rLci7A, rLcil2A-II erLcil3A e em seguida com os antígenos rLci5A-I, rLci8A-I,rLci9A-I e rLcillA-I, estão apresentados na Figura 6. Assensibilidades e especificidades desses ELISAs, para cadaantígeno recombinante, nos grupos de soros testados,encontram-se apresentadas na Tabela 2.
Os resultados do ELISA com 43 soros de pacientes comleishmaniose visceral e 50 de indivíduos sadios, com osantígenos rLcilA, rLci2B, rLci6A, rLci7A, rLcilOA-I erLcil2A-II, estão apresentados na Figura 7.
Ensaios de "lateral flow" para detecção de anticorpos anti-Leishmania
Para ilustrar ainda mais o uso da invenção para adetecção de anticorpos contra os polipeptídeosrecombinantes, uma plataforma patenteada de ensaio delateral-flow (Chembio, EUA) foi utilizada paradesenvolvimento de um kit que permitiu a detecção deanticorpos caninos contra os polipeptídeos recombinantes.Uma mistura em partes iguais dos antígenos rLcilA e rLci2Bfoi utilizada para sensibilizar o fundo de um receptáculona plataforma do kit. Volumes de 5 μL de soro não diluídode 23 cães com leishmaniose visceral parasitologicamenteconfirmada, e de 10 cães controle de uma área não-endêmica,foram aplicados em um receptáculo na plataforma do kit,seguidos por 40 μΕ de uma solução de lavagem. Depois de umperíodo de incubação de 5 minutos, a formação de linhasvisíveis na plataforma do kit indicou as reações positivas.
Um exemplo dos resultados obtidos com o teste de"lateral flow", produzido contra soros de cães controle esoros de cães naturalmente infectados por Leishmaniachagasi (formação de uma e duas bandas violetas,respectivamente), está ilustrados na Figura 8. A Tabela 3apresenta um sumário dos resultados obtidos com o conjuntode soros analisados.
Indução de resposta imune em camundongos por imunização complasmideos e/ou antígenos recombinantes
Grupos de seis a 18 camundongos fêmeas, ou fêmeas emachos, com idade entre 6 e 12 semanas foram injetados trêsvezes, com 21 dias entre cada duas séries de injeçõesconsecutivas, com:
i) 200 yL de salina ou 200 μΙ* do polipeptídeo rLci2B a500 μg/mL em salina ou em saponina a 500 μg/ml, sendo100 μL em cada flanco, por via subcutânea;
ii) 200 μΐ. de salina, 200 μ]^ de salina com saponina a500 μg/ml, 200 μΐ. do polipeptídeo rLci2B a 500 μg/mL esaponina a 500 μg/ml, 50 μg de plasmídeo pBK-CMV seminserto ou 50 μg pBK-CMV-Lci2B. Além disso, um grupo foiinjetado duas vezes com 50 μg pBK-CMV-Lci2B e uma vez com200 μΐ, do polipeptídeo rLci2B a 500 μg/mL e saponina a500 μg/ml, com 21 dias entre cada duas injeçõesconsecutivas. As injeções de salina, salina/saponina erLci2B/saponina foram realizadas por via subcutâneaenquanto que as injeções de plasmídeo foram realizadas porvia muscular, seguidas de eletroporação local (Mir, L. M.,M. F. Bureau, et al.(1999) "High-efficiency gene transferinto skeletal muscle mediated by electric pulses." ProcNatl Acad Sci USA 96(8): 4262-7; Lucas, M. L. and R.Heller. (2001) "Immunomodulation by electrically enhanceddelivery of plasmid DNA encoding IL-12 to murine skeletalmuscle." Mol Ther 3(1): 47-53];
iii) 50 pL de salina, 50 yg de pBK-CMV sem inserto oupBK-CMV-Lc3A. As injeções foram realizadas por viamuscular, seguidas de eletroporação local;
iv) 50 μ]^ de salina, 200 μg de plasmídeo pBK-CMV seminserto ou 200 pg de uma mistura, com quantidades iguais,dos plasmideos pBK-CMV-LcilAr pBK-CMV-Lci2B, pBK-CMV-Lci3Ae pBK-CMV-Lci4A. As injeções foram realizadas por viamuscular seguidas, ou não, de eletroporação local.
ELISAs para mensuração do título de anticorpos dassubclasses IgGl e IgG2a contra antígenos de Leishmaniaforam realizados, essencialmente, conforme descritoanteriormente, utilizando-se entretanto anticorpos de ratoespecíficos para IgGl ou IgG2a de camundongos conjugados abiotina (Sigma-Aldrich) e um conjugado de avidina comperoxidase (Sigma-Aldrich).
Camundongos injetados com o polipeptídeo rLci2Bproduzem anticorpos específicos da classe IgG e dassubclasses IgG2a e IgGl, conforme dados apresentados naFigura 9. Adicionalmente, esses animais desenvolvemIinfoproliferação e produção de interferon gama, bem comode interleucina-5 (IL-5), após estimulação específica invitro. Estes resultados foram obtidos por meio de ensaiosde ELISA realizados com polipeptideo rLci2B, soros doscamundongos e anticorpos anti-IgG (IgG), anti-IgGl (IgGl)ou anti-IgG2a (IgG2a) conjugados a peroxidase. Osresultados dos ensaios de Iinfoproliferação e de produçãode interferon gama (IFN-γ) e interleucina-5 (IL-5) poresplenócitos foram obtidos após estimulação in vitro com opolipeptideo rLci2B. Ainda na Figura 9 e figuras seguintes,as colunas e as barras correspondem a média e desvio padrão(X+SD), respectivamente, de valores obtidos com pelo menoscinco camundongos por grupo. A concentração de IL-5 foiavaliada em "pool" de sobrenadante de esplenócitos(*p<0,05).
Camundongos injetados com plasmideo codificando rLci2B(pBK-CMV-LCÍ2B) ou pBK-CMV-Lci2B (administrados poreletroporação) e, posteriomente, injetados com opolipeptideo rLci2B, como previamente agui descrito,produziram, respectivamente, pequena e moderada quantidadede anticorpos específicos da classe IgG (Figura 10) . Osanimais injetados somente com pBK-CMV-Lci2B ou pBK-CMV-Lci2B e rLci2B, desenvolveram anticorpos específicosexclusivamente e predominantemente da subclasse IgG2a,respectivamente (Figura 10). Além disso, esses animaisapresentam uma tendência a desenvolver linfoproliferação eprodução de interferon gama, mas não de IL-5, apósestimulação específica in vitro. Nestes resultados, osELISAs foram realizados com extrato total de antígenos deL.chagasi / L. infantum.Camundongos injetados com plasmídeo codificando rLci3A(pBK-CMV-Lci3A), como descrito anteriormente, desenvolveramanticorpos específicos da classe IgG, com moderadaquantidade de anticorpos da subclasse IgG2a e pequenaquantidade da subclasse IgGl (Figura 11). Estes resultadostambém foram obtidos por meio de ensaios de ELISArealizados com extrato total de antígenos de L. chagasi /L. infantum.
Camundongos injetados com uma mistura de plasmídeoscodificando rLcilA, rLci2B, rLci3A e rLci4A (seguida deeletroporação - EL - ou não) produziram anticorpos daclasse IgG e da subclasse IgG2a (Figura 12A, Figura 12B,Figura 12C). Nesses ensaios os resultados dos ELISAS tambémforam realizados com extrato total de antígenos de L.chagasi / L. infantum.
Indução de resposta imune em cães por rLcilA e rLci2Brecombinantes em associação à saponina
Grupos de cães foram formados com um macho e duasfêmeas (Gl) , um macho e três fêmeas (G2) e um macho e duasfêmeas (G3). Esses animais foram injetados três vezes, nosdias O, 21 e 42 do experimento, por via subcutânea, com 1mL de salina com 1 mg de saponina (Gl) ou 200 μg de rLcilA,200 pg de rLci2B e 1 mg saponina (G2 e G3), e com 0,5 mL desalina (G1 e G2) ou 800 pg de plasmídeo codificandointerleucina-12 canina de cadeia única (pcDNA3.l-scca-IL12,dos Santos, L. R., S. M. Barrouin-Melo, Chang, Y. F. ;Olsen, J.; McDonough, S. P.; Quimby, F.; dos Santos, W. L.;Pontes-de-Carvalho, L. C.; Oliveira, G. G. (2004)Recombinant single-chain canine interleukin 12 inducesinterferon gamma mRNA expression in peripheral bloodmononuclear cells of dogs with visceral leishmaniasis. VetImmunol Immunopathol 98(1-2): 43-8] diretamente nolinfonodo popliteo drenante, para promover atividadebiológica intensa.
Cães injetados com LcilA e Lci2B associados ou não aplasmídeo codificando IL-12 canina de cadeia única,produziram anticorpos da classe IgG reativos com extratobruto de antigenos Leishmania (Figura 13) . Nesses ensaiosos resultados dos ELISAS foram realizados com extrato totalde antigenos de L. chagasi / L. infantum (extrato bruto),rLcilA ou rLci2B, soros de cães e anticorpos anti-IgGconjugados à peroxidase. Na figura, cada símbolo e asbarras correspondem ao valor obtido para cada cão e asmédias aritméticas dos grupos, respectivamente (*p<0,05).
Assim, verifica-se que a presente invenção envolvetreze moléculas individuais de DNA que codificam asproteínas Lcil, Lci2B, Lci3, Lci4, Lci5, Lci6, Lci7, Lci8,Lci9, LcilO, Lcill, Lcil2 e Lcil3 no protozoário Leishmaniachagasi/Leishmania infantum e o uso delas, ou o uso deproteínas recombinantes codificadas por elas, aplicações naárea de diagnóstico, terapêutica e vacinas. Na presenteinvenção, as moléculas individuais de DNA, bem como asproteínas por elas codificadas, são usadas para prevençãoda infecção por Leishmania chagasi/infantum e por outrasespécies de Leishmania capazes de causar doença no homem ouem outros mamíferos, incluindo aqueles com importânciaveterinária, e para tratar doenças resultantes dessasinfecções. As proteínas recombinantes codificadas pelasmoléculas de DNA são usadas para a detecção de anticorposespecíficos em amostras biológicas, incluindo soro, plasma,urina e saliva, obtidas de seres humanos e de outrosmamíferos, particularmente o cão, visando a determinação dodiagnóstico de leishmaniose visceral ou a detecção dainfecção causada por Leishmania.<table>table see original document page 68</column></row><table>Tabela 2
<table>table see original document page 69</column></row><table>
a A especificidade da detecção de anticorpos anti-Leishmania foi determinada pelo uso de amostras de soro decães com Demodicose (Demodex canis), Babesiose (Babesiacanis) e Ehrlichiose (Anaplasma platys) , diagnosticados porexame parasitológico. Os valores entre parêntesescorrespondem a número de resultados positivos/número deamostras testadas. Amostras de soro de 14b, 15° ou 5d cãessadios e de área não endêmica para leishmaniose foramusados para definição do "cut off".Tabela 3
<table>table see original document page 70</column></row><table>
Proporção de soros de cães infectados por Leishmaniachagasi (n=23) e de cães não infectados (n=10) que reagiramcom uma mistura em partes iguais (massa/massa) dosantigenos rLcilA e rLci2B no teste de "lateral flow".Para facilitar a informação sobre as seqüências dainvenção, a Tabela 4 mostra os números identificadores dasseqüências com informação adicional sobre as mesmas.
Tabela 4
<table>table see original document page 71</column></row><table><table>table see original document page 72</column></row><table><table>table see original document page 73</column></row><table><table>table see original document page 74</column></row><table>
Assim, a descrição da presente invenção demonstra queuso de antigenos recombinantes diferentes obtidos a partirde genes de Leishmania chagasi/Leishmania infantumidentificam, detectam e quantificam anticorpos específicosem material biológico obtido de seres humanos, de cães e deoutros hospedeiros vertebrados da Leishmania.
Deve ficar claro que a presente invenção não estálimitada às concretizações aqui descritas. Aqueles comhabilidade na técnica irão perceber que, qualquercaracterística particular introduzida, deve ser entendidaapenas como algo que foi descrito para facilitar acompreensão.LISTAGEM SEQÜÊNCIA
I) Depositante
a) Nome: Fundação Oswaldo Cruz
b) Endereço: Av. Brasil, 4365, Castelo Mourisco, sala 05,Manguinhos - 21045-900 - Rio de Janeiro - RJ
II) Dados da Prioridade Unionista: -
III) Titulo: USO DE ANTÍGENOS DE LEISHMANIA EM MÉTODODIAGNÓSTICO, VACINA E TERAPIA PARA LEISHMANIOSE
IV) Numero de Seqüências: 64
V) Formato para leitura em computador:
a) Meio: CD ROM
b) Computador: compatível com IBM PC.
c) Sistema operacional: PC-DOS/MS-DOS.
1) Informação para a SEQ ID N0:1
LcilA Seqüência de nucleotideos do fragmento de cDNAincluindo parte da 5'UTR e a CDS.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 2127
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: 5'UTR (1)...(162)
CDS (163) ... (2127)
GATCCTAAACACGCACTCGCACTCAAGCTGTCCGAAGAGAACACATACGCGCACAGGCATACGTCTCTCTCGCTCTGCGCTCTATTACGTAACCCTATAACCACCCTCCTCCCCCCACCCCCCATCCCACACGCACATACACACACGACCACTGCCGCAGAGATGACATTCGACGGCGCCATCGGCATCGACCTGGGCACGACGTACTCGTGCGTGGGCGTGTGGCAGAACGAACGCGTGGATATCATCGCGAACGACCAGGGCAACCGCACGACACCGTCGTACGTTGCGTTCACGGACTCGGAGCGCCTGATCGGCGATGCCGCGAAGAACCAGGTGGCAATGAACCCGCACAACACGGTGTTCGACGCGAAGCGCCTGATTGGCCGCAAGTTCAACGACTCGGTTGTGCAGTCGGACATGAAGCACTGGCCGTTCAAGGTGACGACGAAGGGCGACGACAAGCCCATGATTGCGGTGCAGTACCGCGGCGAGGAGAAGACCTTCACGCCGGAGGAGATCAGCTCGATGGTGCTGCTGAAGATGAAGGAGACAGCGGAGGCGTACCTGGGCAAGCAGGTGAAGAAGGCCGTGGTGACGGTGCCGGCGTACTTCAACGACTCGCAGCGCCAGGCAACGAAGGACGCCGGCACGATTGCTGGCCTGGAGGTGCTGCGCATCATCAACGAGCCGACGGCGGCGGCCATCGCGTACGGCCTGGACAAGGGCGACGACGGCAAGGAGCGCAACGTGCTGATCTTCGACCTTGGCGGCGGCACGTTCGATGTGACGCTGTTGACGATCGACGGCGGCATCTTCGAGGTGAAGGCGACGAACGGCGACACGCACCTTGGCGGCGAGGACTTCGACAACCGCCTCGTCACGTTCTTCACCGAGGAGTTCAAGCGCAAGAACAAGGGTAAGAACCTGGCGTCGAGCCACCGCGCGCTGCGCCGTCTGCGCACGGCGTGCGAGCGCGCGAAGCGCACGCTGTCGTCCGCGACGCAGGCGACGATCGAGATCGACGCGTTGTTCGAGAACGTTGACTTTCAGGCCACCATCACGCGCGCGCGCTTCGAGGAGCTGTGCGGCGACCTGTTCCGCAGCACGATCCAGCCGGTGGAGCGCGTGCTGCAGGACGCGAAGATGGACAAGCGCTCCGTGCACGACGTGGTGCTGGTGGGCGGGTCAACGCGCATCCCGAAGGTGCAGTCCCTCGTGTCGGACTTCTTCGGCGGCAAGGAGCTGAACAAGAGCATCAACCCCGACGAGGCTGTCGCGTACGGCGCGGCGGTGCAGGCCTTCATCCTGACGGGCGGCAAGAGCAAGCAGACGGAGGGCCTGCTGCTGCTGGACGTGACGCCGCTGACGCTGGGCATCGAGACGGCCGGCGGCGTGATGACGGCGCTGATCAAGCGCAACACGACGATTCCGACCAAGAAGAGCCÀGATCTTCTCGACGTACGCGGACAACCAGCCCGGCGTGCACATCCAGGTCTTCGAGGGCGAGCGCGCGATGACGAAGGACTGCCACCTGCTGGGCACGTTCGACCTGTCCGGCATCCCGCCGGCGCCGCGCGGTGTGCCGCAGATCGAGGTGACGTTCGACCTGGACGCAAACGGCATCCTGAACGTGTCCGCGGAGGAGAAGGGCACCGGCAAGCGCAACCAGATCACCATCACCAACGACAAGGGCCGGCTGAGCAAGGACGAGATCGAGCGCATGGTGAACGACGCGATGAAGTACGAGGCGGACGACAGGGCGCAGCGCGACCGCGTGGAGGCAAAGAACGGCCTGGAGAACTACGCGTACTCGATGAAGAACACGCTCGGCGACTCGAACGTGTCCGGCAAGCTGGACGATAGCGACAAGGCCACGCTGAACAAGGAGATCGACGTGACGCTGGAGTGGCTGAGCAGCAACCAGGAGGCGACGAAGGAGGAGTACGAGCACAAGCAGAAGGAGCTGGAGAGCGTATGCAACCCGATCATGACCAAGATGTACCAGAGCATGGGCGGTGCTGGGGGCGGCATGCCCGGCGGTATGCCGGACATGAGCGGCATGAGCGGTGGTGCGGGCCCGGCCGGCGGTGCGTCCTCT
GGCCCCAAGGTCGAGGAGGTCGACTAA
2) Informação para a SEQ ID NO:2
LcilA Seqüência de aminoácidos do fragmento recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 7 08
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
DPKHALALKLSEENTYAHRHTSLSLCALLRNPITTLLPPPPIPHAHTHTTTAAEMTFDGAIGIDLGTTYSCVGVWQNERVDIIANDQGNRTTPSYVAFTDSERLIGDAAKNQVAMNPHNTVFDAKRLIGRKFNDSWQSDMKHWPFKVTTKGDDKPMIAVQYRGEEKTFTPEEISSMVLLKMKETAEAYLGKQVKKAVVTVPAYFNDSQRQATKDAGTIAGLEVLRIINEPTAAAIAYGLDKGDDGKERNVLIFDLGGGTFDVTLLTIDGGIFEVKATNGDTHLGGEDFDNRLVTFFTEEFKRKNKGKNLASSHRALRRLRTACERAKRTLSSATQATIEIDALFENVDFQATITRARFEELCGDLFRSTIQPVERVLQDAKMDKRSVHDWLVGGSTRIPKVQSLVSDFFGGKELNKSINPDEAVAYGAAVQAFILTGGKSKQTEGLLLLDVTPLTLGIETAGGVMTALIKRNTTIPTKKSQIFSTYADNQPGVHIQVFEGERAMTKDCHLLGTFDLSGIPPAPRGVPQIEVTFDLDANGILNVSAEEKGTGKRNQITITNDKGRLSKDEIERMVNDAMKYEADDRAQRDRVEAKNGLENYAYSMKNTLGDSNVSGKLDDSDKATLNKEIDVTLEWLSSNQEATKEEYEHKQKELESVCNPIMTKMYQSMGGAGGGMPGGMPDMSGMSGGAGPAGGASS
GPKVEEVD
3) Informação para a SEQ ID NO:3
Lci2A Seqüência de nucleotideos do fragmento de cDNAincluindo parte da CDS e 3'UTR.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 1902
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: CDS (1)...(1575)
3'UTR (1576)...(1881)
TCCACTGCTGCTGCGAAGACGTCGGCGGAGCAGGACCGCGAGAGGATGAGGGTCACGTTGGAGGAGCGGCTGCGCGTCGCTGAGTTGCGCGCTGCGGAGCTGGCGGGAGTGCTGGAGGCCACTGCTGCTGCGAAGACGTCGGCGGAGCAGGATCGTGAGAGGACGAGGACCACGTTGCAGGAGCAGCTTCGCGAATCCGAGGCGCGCGCTGCGGAGCTGAAGGCCGAGCTGGAGGCCACTGCTGCTGCGAAGTCGTCGGCGGAGAAGGACCGCGAGAACACGAGGGCTGCTCTGGAGGAGAAGCTAAGGGGCACCGAGGCGCGCGCTGCGGAGCTGGAAGCCCGCCTAAAGGCTATCGCTGCGACAAAGGCGTCGATCGAGCAGGAGAGGGAGAGCTCGATGGCTTCTCTGGAGGAAAGGCTAAGGGGCTCTGAGGCGCGCGCTGCGGAGCTGGCAGCTCGGCTAAAGGCTGCTGTTGCTGCGAAGTCGTCGGCGGAGCAGGAACGTGAGAACACGAGGGTGACGTTGGAGCAGCAGCTTCGCGAATCCGAGAAGCGCGCTGCGGAGCTGGCGAGTCAGCTGGAGTCCACTGCTGCTGCGAAGACGTCGGCGGAGCAGGACCGCGAGAACACGAGGGCCACGCTAGAGCAGCAGCTTCGCGAATCCGAGGAGCGCGCTGCGGACGTGAAGGCCGAGCTGGAGGCCACTGCTGCTGCGAAGACGTCGGCGGAGAAGGACCGCGAGAACACGAGGGCTGCTCTGGAGGAGAAGCTAAGGGGCACCGAGGCGCGCGCTGCGGAGCTGGCGGCCCGCCTAAAGGCTATTGCTGCGATGAAGGCGTCGATGGTGCAGGAGCGGGAAAGCGCGAGGGATGCTCTGGAGGAAAAGCTAAGGGGCTCTGAGGTGCGCGCTGCGGAGCTGGCTGCTCGGCTAAAGGCTGCTGTTGCTGCGAAGTCGTCGGCGGAGCAGGACCGCGAGAACACGAGGGCCACGCTAGAGCAGCGGCTTCGCGAATCCGAGGAGCGCGCTGCGGAGCTGGCGAGTCAGCTGGAGGCCGCTGCTGCTGCGAAGTCGTCGGCGGAGCAGGACCGCGAGAACACGAGGGCTGCTCTGGAGGAGAAGCTAAGAGGCTCCGAGGAGCGCGCTGCGGAGCTGGGAACCCGTGTAAAGGCTAGTTCTGCGGCGAAGGCTTTGGCGGAGCAGGAGCGGGACAGGATAAGGGCTGCCCTGGAGGAGAAGTTGCGTGATTCGGAGGCGCGCGCTGCGGAGCTGACGACCAAGCTGGAGGCCACTGTTGCTGCGAAGTCGTCGGCGGAGCAGGAGCGGGAGAATATAAAGGTGGCTTTAGAGGAAGAATTGGTTGATGCAAGGGCGAAATTGGCTGGAATGGAGGCGTCGTTGAAGGAATCGAAGTTGGAGTTTGAAGGTCGTGTCGGGGAGCTTGAAGGAGAGTGCGAGAAGCTGAGGAATGATAAGGTCAGGTATGCGAAAAAGGTTCAATCGCTTGAGTATCAGATGCGCATCGATGAGGCTCGACTGAAGGCGCGTCGTGATGCGGTTCATCGAAAGGAGTGAGGCGAGGATGTTATAGCGGAGAGCTCGTCGTTGTCTTGATGGGGAGGTGTTCTGCTGCGTCGCCGGCGTTACTGTAATGGTTTTGCGGCGGTGGGTAGGGCGCGATGCTGTTCTGCTGATTTCTTATTATTATATCTCCAATATTATATTGACGACATCTGCGGACTGACACCTGGCGCGCGGTCGTGACGGGAGTTGCTGACTGCGCATGCTCGGTTTACAGTACCGCAGACGATGCCGTCGTCTTTTCGATTGCGAATCAGTGCTGCCGGTGGCTATGCCGCACTTTCATCGAGATGCTTTTCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
4) Informação para a SEQ ID NO:4
Lci2A Seqüência de aminoácidos do fragmento recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 524
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
STAAAKTSAEQDRERMRVTLEERLRVAELRAAELAGVLEATAAAKTSAEQDRERTRTTLQEQLRESEARAAELKAELEATAAAKSSAEKDRENTRAALEEKLRGTEARAAELEARLKAIAATKASIEQERESSMASLEERLRGSEARAAELAARLKAAVAAKSSAEQERENTRVTLEQQLRESEKRAAELASQLESTAAAKTSAEQDRENTRATLEQQLRESEERAADVKAELEATAAAKTSAEKDRENTRAALEEKLRGTEARAAELAARLKAIAAMKASMVQERESARDALEEKLRGSEVRAAELAARLKAAVAAKSSAEQDRENTRATLEQRLRESEERAAE LASQLEAAAAAKSSAEQDRENTRAALEEKLRGSEERAAELGTRVKASSAAKALAEQERDRIRAALEEKLRDSEARAAELTTKLEATVAAKSSAEQERENIKVALEEELVDARAKLAGMEASLKESKLEFEGRVGELEGECEKLRNDKVRYAKKVQSLEYQMRIDEARLKARRDAVHRKE
5) Informação para a SEQ ID NO:5
Lci2B Seqüência de nucleotídeos do fragmento de cDNAincluindo parte da CDS e 3'UTR.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 1203
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: CDS (1)...(882)
3'UTR (883)...(1188)
GAGCTGGAGGCCACTGCTGCTGCGAAGACGTCGGCGGAGAAGGACCGCGAGAACACGAGGGCTGCTCTGGAGGAGAAGCTAAGGGGCACCGAGGCGCGCGCTGCGGAGCTGGCGGCCCGCCTAAAGGCTATTGCTGCGATGAAGGCGTCGATGGTGCAGGAGCGGGAAAGCGCGAGGGATGCTCTGGAGGAAAAGCTAAGGGGCTCTGAGGTGCGCGCTGCGGAGCTGGCTGCTCGGCTAAAGGCTGCTGTTGCTGCGAAGTCGTCGGCGGAGCAGGACCGCGAGAACACGAGGGCCACGCTAGAGCAGCGGCTTCGCGAATCCGAGGAGCGCGCTGCGGAGCTGGCGAGTCAGCTGGAGGCCGCTGCTGCTGCGAAGTCGTCGGCGGAGCAGGACCGCGAGAACACGAGGGCTGCTCTGGAGGAGAAGCTAAGAGGCTCCGAGGAGCGCGCTGCGGAGCTGGGAACCCGTGTAAAGGCTAGTTCTGCGGCGAAGGCTTTGGCGGAGCAGGAGCGGGACAGGATAAGGGCTGCCCTGGAGGAGAAGTTGCGTGATTCGGAGGCGCGCGCTGCGGAGCTGACGACCAAGCTGGAGGCCACTGTTGCTGCGAAGTCGTCGGCGGAGCAGGAGCGGGAGAATATAAAGGTGGCTTTAGAGGAAGAATTGGTTGATGCAAGGGCGAAATTGGCTGGAATGGAGGCGTCGTTGAAGGAATCGAAGTTGGAGTTTGAAGGTCGTGTCGGGGAGCTTGAAGGAGAGTGCGAGAAGCTGAGGAATGATAAGGTCAGGTATGCGAAAAAGGTTCAATCGCTTGAGTATCAGATGCGCATCGATGAGGCTCGACTGAAGGCGCGTCGTGATGCGGTTCATCGAAAGGAGTGAGGCGAGGATGTTATAGCGGAGAGCTCGTCGTTGTCTTGATGGGGAGGTGTTCTGCTGCGTCGCCGGCGTTACTGTAATGGTTTTGCGGCGGTGGGTAGGGCGCGATGCTGTTCTGCTGATTTCTTATTATTATATCTCCAATATTATATTGACGACATCTGCGGACTGACACCTGGCGCGCGGTCGTGACGGGAGTTGCTGACTGCGCATGCTCGGTTTACAGTACCGCAGACGATGCCGTCGTCTTTTCGATTGCGAATCAGTGCTGCCGGTGGCTATGCCGCACTTTCATCGAGATGCTTTTCCAAAAAAAAAAAAAAA
6) Informação para a SEQ ID NO:6
Lci2B Seqüência de aminoácidos do fragmento recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 2 93
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasiELEATAAA.KTSAEKDRENTRAALEEKLRGTEARAAELAARLKAIAAMKASMVQERESARDALEEKLRGSEVRAAELAARLKAAVAAKSSAEQDRENTRATLEQRLRESEERAAELASQLEAAAAAKSSAEQDRENTRAALEEKLRGSEERAAELGTRVKASSAAKALAEQERDRIRAALEEKLRDSEARAAELTTKLEATVAAKSSAEQERENIKVALEEELVDARAKLAGMEASLKESKLEFEGRVGELEGECEKLRNDKVRYAKKVQSLEYQMRIDEA
RLKARRDAVHRKE
7) Informação para a SEQ ID NO:7
Lci3A Seqüência de nucleotideos do fragmento de cDNAincluindo parte da CDS e 3'UTR.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 2265
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: CDS (1)...(1633)
LCÍ3A-R22 (2)... (1282)Lci4A-R3 (800)...(1630)3'UTR (1634)...(2242)
GGCACGAGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGCCGAGCTGCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCAGAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCGCAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGGCGAGCTCCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCAGAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCGCAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGCCGAGCTGCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCAGAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGGCGAGCTCCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCAGAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGGCGAGCTCCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCTGGTGAGCTGGCGGATAAGGATCCGGAGCTGGCTGCATTTCGGGAGAAGCGGCGTGCCGCGCATGGAGCGCGCGCCGATGAGCCAGAGCTGGCTGCGGCCGACGGCATCTCGACGCGCAATGCCCGCGCAGGTAGCCGAGGCCGCCCCGCTGCGCAGATAAACCCTGCCGCGGAGGCCGTCGACCCCGTCACTATCGCCGCGGAGCCGCTGTACGCTGTCACGCTGGATGAGTACAAAGCCAAGCAGACCGCTCTTGAAAATGCAGTGGAGGTGGCTTGTGCTGCTGAGGAGACTGTGAAGGAAAAGTTGAGGGAAAACTCAGATCTGATGGTAGAACTCGAGAAGGTACGCGATCAAGCTTATGAGATGGATCGTCGGCGCCAAGAGGATGGTGCGGCCATGGAAGGGGAGCTTCTTGTGGTGTTGATGGAGTTGAAGAAGCTGAAGGGAATCAATGATGCGCTGCTGGCGGTACTGCGCGACAAGGAATGCGAAGTAAAGGAACTGCGCTATCACAATGAGCTTTGGGTGGATCCCACCGGGGACAAGAAGCAGGTTGTGACACGGCACACTAAGATATTTGATGGAAACTGGGAGAGGATTGTTCGCGAGCGTCCAGAGGGCCTATTCGCAGCGTTTGTAATTGATTCTAGTAATGCATGCCACGTCCCCGGGGACAACATCAAACAAGTGAGCTTTGATCACGACTAAGTCGCGACTTTCTTGCTCGGGAGGCGGGTGATGTGTGGCGCAGTTTGAGTGGCGAACGTATGGAAGAGCTGGAGGCGGGGGAACAGCTGCCCGAGCATTTGGCGAGCCCATTGCGCGTTTGCACCACTCCTGCTCCCCCTCTGTTTTCACTCCCTCAACCTGCTTCCGCTTGCATTGTCTTTATCTCGCCTACCTTGCGTGATCTCTACGGCGTTGAAGTAAAGTGTTGTGGTCGTGGTTTTTGTGTGTTTCTGTTTGCAGATTCAGGAATAGTAGCCTGTGCTCTTTTTAGGAGGAGGTGGACTTTTCGCTCAGAGCGCATAGCGAGGAGAGAAGGTTGAGAAAGATATGCATTGTCACATTTTCCACCGATGGCACTACTCACGCCTCTCCCCTTCGTGTGTATGACATTGTTTGTATTGGTATGTCGGTAACATTGCGGGGCGATTTGTTGCGGTATCGCGTCCGAGGGGCAGCTTAGAAGCGTTTCGCCGAAAGCGACCCCATGCAGGAATTGGTGGTCGTCACTGTTCAGCAAAAGGAAACAGAAAACAAGGCCCGCTGAGGTTGAAGGGGTGCCTTGTATGCTTAGAGAGCTAAAATGTCCATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
8) Informação para a SEQ ID NO:8
Lci3A Seqüência de aminoácidos do fragmento recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 543
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasiARERAQEEAETLAAELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGDLEKAEEEAERLAGDLEKAQEEAETLAGELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGDLEKAEEEAERLAGDLEKAQEEAETLAAELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGDLEKAEEEAETLAGELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGDLEKAEEEAETLAGELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGELADKDPELAAFREKRRAAHGARADEPELAAADGISTRNARAGSRGRPAAQINPAAEAVDPVTIAAEPLYAVTLDEYKAKQTALENAVEVACAAEETVKEKLRENSDLMVELEKVRDQAYEMDRRRQEDGAAMEGELLWLMELKKLKGINDALLAVLRDKECEVKELRYHNELWVDPTGDKKQWTRHTKIFDGNWERIVRERPEGLFAAFVIDSSNACHVPGDNIKQVS FDHD
9) Informação para a SEQ ID NO:9
Lci3A-R22 Seqüência de nucleotideos do fragmento gênico quecodifica a proteína recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 1281
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
GCACGAGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGCCGAGCTGCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCAGAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCGCAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGGCGAGCTCCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCAGAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCGCAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGCCGAGCTGCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCAGAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGGCGAGCTCCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCCGGCGATCTCGAAAAGGCAGAGGAGGAGGCCGAGACACTGGCGGGCGAGCTCCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCTGGTGAGCTGGCGGATAAGGATCCGGAGCTGGCTGCATTTCGGGAGAAGCGGCGTGCCGCGCATGGAGCGCGCGCCGATGAGCCAGAGCTGGCTGCGGCCGACGGCATCTCGACGCGCAATGCCCGCGCAGGTAGCCGAGGCCGCCCCGCTGCGCAGATAAACCCTGCCGCGGAGGCCGTCGACCCCGTCACTATCGCCGCGGAGCCGCTGTACGCTGTCACGCTGGATGAGTACAAAGCCAAGCAGACCGCTCTTGAAAATGCAGTGGAGGTGGCTTGTGCTGCTGAGGAGACTGTGAAGGAAAAGTTGAGGGAAAACTCAGATCTGATGGTAGAACTCGAGAAGGTACGCGATCAAGCT
10) Informação para a SEQ ID NO: 10
Lci3A-R22 Seqüência de aminoácidos do fragmentorecombinante.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 427
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
ARERAQEEAETLAAELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGDLEKAEEEAERLAGDLEKAQEEAETLAGELQKAQEDGERQKADNRQLAS DNERLATELERAQEEAERLAGDLEKAEEEAERLAGDLEKAQEEAETLAAELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGDLEKAEEEAETLAGELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGDLEKAEEEAETLAGELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGELADKDPELAAFREKRRAAHGARADEPELAAADGISTRNARAGSRGRPAAQINPAAEAVDPVTIAAEPLYAVTLDEYKAKQTALENAVEVACAAEETVKEKLRENSDLMVELEKVRDQA
11) Informação para a SEQ ID NO: 11
Lci3A-R3 Seqüência de nucleotideos do fragmento gênico quecodifica a proteína recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 831
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
GAGCTCCAGAAGGCGCAGGAGGACGGGGAGAGGCAGAAGGCCGACAACCGCCAGCTGGCCAGCGACAACGAGCGGCTGGCCACCGAGCTGGAGAGGGCGCAGGAGGAGGCCGAGAGGCTGGCTGGTGAGCTGGCGGATAAGGATCCGGAGCTGGCTGCATTTCGGGAGAAGCGGCGTGCCGCGCATGGAGCGCGCGCCGATGAGCCAGAGCTGGCTGCGGCCGACGGCATCTCGACGCGCAATGCCCGCGCAGGTAGCCGAGGCCGCCCCGCTGCGCAGATAAACCCTGCCGCGGAGGCCGTCGACCCCGTCACTATCGCCGCGGAGCCGCTGTACGCTGTCACGCTGGATGAGTACAAAGCCAAGCAGACCGCTCTTGAAAATGCAGTGGAGGTGGCTTGTGCTGCTGAGGAGACTGTGAAGGAAAAGTTGAGGGAAAACTCAGATCTGATGGTAGAACTCGAGAAGGTACGCGATCAAGCTTATGAGATGGATCGTCGGCGCCAAGAGGATGGTGCGGCCATGGAAGGGGAGCTTCTTGTGGTGTTGATGGAGTTGAAGAAGCTGAAGGGAATCAATGATGCGCTGCTGGCGGTACTGCGCGACAAGGAATGCGAAGTAAAGGAACTGCGCTATCACAATGAGCTTTGGGTGGATCCCACCGGGGACAAGAAGCAGGTTGTGACACGGCACACTAAGATATTTGATGGAAACTGGGAGAGGATTGTTCGCGAGCGTCCAGAGGGCCTATTCGCAGCGTTTGTAATTGATTCTAGTAATGCATGCCACGTCCCCGGGGACAACATCAAACAAGTGAGCTTTGATCACGAC
12) Informação para a SEQ ID NO: 12Lci3A-R3 Seqüência de aminoácidos do fragmentorecombinante.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 277
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
ELQKAQEDGERQKADNRQLASDNERLATELERAQEEAERLAGELADKDPELAAFREKRRAAHGARADEPELAAADGISTRNARAGSRGRPAAQINPAAEAVDPVTIAAEPLYAVTLDEYKAKQTALENAVEVACAAEETVKEKLRENSDLMVELEKVRDQAYEMDRRRQEDGAAMEGELLWLMELKKLKGINDALLAVLRDKECEVKELRYHNELWVDPTGDKKQWTRHTKIFDGNWERIVRERPEGLFAA FVIDSSNACHVPGDNIKQVS FDHD
13) Informação para a SEQ ID NO: 13
Lci4 Seqüência de nucleotídeos do gene completo incluindoCDS e 3'UTR.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 3696
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: CDS(1)...(2055)
3'UTR (2056)...(3696)
ATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAACGTGAAGGCGAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGTTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAATGTGAAGGCCAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAACGTGAAGGCCAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAACGTGAAGGCCAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAATGTGAAGGCCAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAACGTGAAGGCCAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAG
CAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGTCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGG
AGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAA
GACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAACGTGAAGGCGAAGATCCAGGACAAGGAG
GGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGG
ACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCATGCAGATCTTCGT
GAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAACGTGAAGGCG
AAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGG
AGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGG
CGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACG
ATCGAGAACGTGAAGGCGAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCG
CCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCT
GGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCTAATAAGTTTCGTAGGCTGTAGCGTGGTAGCATATGGGCTCTTCGCGT
TTTTTGCGTGCTACGATGTTGCTTATGGTACTCGTAGTGTACGCCTGAGTCTTCTCGGGAGCGTGTCGCT
GTTGTGGCGTGATGTGAATGAAAATGCTTCGGAAGGGCGAGGCGGTGATGTTTGCTGAGTTTTTATTCTA
GAATGTGACGCGGCGTTGTAGGATGTGTTCGGGCCCAGTGGAGTTCGGTGTTGTGTGCAGGCACTGATAA
TGCTTGTATGTGGATTCAGTATGCAGTACACGTTACGGGGACAAGATGAATATGCCAGAGGCAAGGGTCT
TTGTCGAGCCGCGTATTGGCCCTATGAGTGGATGAATGACTATCTTCTCGATATACGTCTCGCTCTCATT
GAAGGAAGTGGAGCACGAACTCATCCGTGAGCAGCGCGTCCGATGTGCAGGGAACTAGCAAGCGGCAAGG
GGTGAGGCAAGGTGGATGCGGTTCTACTTTGCTGAAAAAAGATGCTAAAGGCTCTTATTGTTTGCTTGTG
GTGTGGCGAGAGGCTTTCTGCCCCGCCCGCTCTCCCCTGTGTGTGTCTGCACCTACCCTTCTCCAGCGCA
TCTTCTCTGTCGTGTGGCTTGCTCTCTTCACTGTCACCTCCGCTGTGTTTTTCTGCTCGCATTGTGTGCG
TGTTTTCCCCCCTTCTGTTTGGTGTGCATGTGCCCTCTGATCTGTTTCGCGCCACCCTGTTTTGTGCGTT
GTACGTGAGCTGTCTATAAAAGGACCGTGTGCGTGCTGCTGTATTCTCAGACGTGTGCATTTTCTTTTTC
CCACACCTGTTCTACCGTGCCGTGTATCAGACAAAGAGGGAGAGAGTTACTCCCGCGTGCGGATGTGAGA
GATGAAGAGGAAGCAGGGCAAGGGTACTGCGAAAGAATGGACGCGAGTCCTGAAGGGGTGAGGAGAACCG
CGCAAGACGCCGCTGGCGGTGCTGCGGCGGTGGGCACGAGGATTTGCGAAACCGACGGTCACTGTAGGAG
TGCTCGTGCCGTTGTGGAGGTTCTTTGGGGCCTTGTGTTCTGCGTTGTCATCCCCCCTCTTCATCTGCCC
GTCTTTTTTTCGAGTGTTCACACGCACCGACACTGTGCATCACTGCACCCTCTCTTCTCTCTCTACTCTC
TCTTGTATGGCATCATGTTTGCGACGCTTCAGCGTGGGCAGCTCGTGGAACGCACTGTAGCTGCATCTTC
CTCTTTTACTCTTGCCTATTTCACTGTTTCTTCTGCGCTCAGCACACCCATCTACTTATATCTCTCCATC
TATATATATATATGTGTGTGTGTATGTGCGCGCCTGTGTTTTGTGCATGCTCCACCGAAGCGCCGACCCC
TTCCCCCACTACCACTTCAAAACACCACCCTTTTTCTTCGGTTTTTGTTTGTGTGTACATCTGCCAGCCT
GTCGTTGGGCAAACCCCTGGTGCCCGCCCCTGTCTATCTGTTGCGCCTGGGTGCGCACGTTCGAGGCGGC
TGATCTCTCTCTCTTTCTCTGACACCCCCTTCTTTATGAGCCTCATCCCGGATACGGTGACGGGGAGAGG
GTCGAGAGGTGGGGAGGTGCTGTACGCACATACGTGTGTGTCTGGACAGAATAAAA
14) Informação para a SEQ ID NO: 14Lci4 Seqüência de aminoácidos completa.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 684
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
MQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLLLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGG
15) Informação para a SEQ ID NO: 15
Lci4A Seqüência de nucleotídeos do fragmento de cDNAincluindo parte da CDS e 3'UTR.I) Características da seqüência:a) Comprimento: 2177
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: CDS(1) . . . (522)
3'UTR (523)...(2163)
CTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCATGCAGA
TCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAGCGACACGATCGAGAACGT
GAAGGCGAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTGATCTTCGCCGGCAAGCAG
CTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGCTGCACCTGGTGCTGCGCC
TGCGCGGCGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACGCTGACCGGCAAGACGATCGCGCTGGAGGTGGAGCCGAG
CGACACGATCGAGAACGTGAAGGCGAAGATCCAGGACAAGGAGGGCATCCCGCCGGACCAGCAGCGCCTG
ATCTTCGCCGGCAAGCAGCTGGAGGAGGGCCGCACGCTCTCGGACTACAACATCCAGAAGGAGTCCACGC
TGCACCTGGTGCTGCGCCTGCGCGGCGGCTAATAAGTTTCGTAGGCTGTAGCGTGGTAGCATATGGGCTC
TTCGCGTTTTTTGCGTGCTACGATGTTGCTTATGGTACTCGTAGTGTACGCCTGAGTCTTCTCGGGAGCG
TGTCGCTGTTGTGGCGTGATGTGAATGAAAATGCTTCGGAAGGGCGAGGCGGTGATGTTTGCTGAGTTTT
TATTCTAGAATGTGACGCGGCGTTGTAGGATGTGTTCGGGCCCAGTGGAGTTCGGTGTTGTGTGCAGGCA
CTGATAATGCTTGTATGTGGATTCAGTATGCAGTACACGTTACGGGGACAAGATGAATATGCCAGAGGCA
AGGGTCTTTGTCGAGCCGCGTATTGGCCCTATGAGTGGATGAATGACTATCTTCTCGATATACGTCTCGC
TCTCATTGAAGGAAGTGGAGCACGAACTCATCCGTGAGCAGCGCGTCCGATGTGCAGGGAACTAGCAAGC
GGCAAGGGGTGAGGCAAGGTGGATGCGGTTCTACTTTGCTGAAAAAAGATGCTAAAGGCTCTTATTGTTT
GCTTGTGGTGTGGCGAGAGGCTTTCTGCCCCGCCCGCTCTCCCCTGTGTGTGTCTGCACCTACCCTTCTC
CAGCGCATCTTCTCTGTCGTGTGGCTTGCTCTCTTCACTGTCACCTCCGCTGTGTTTTTCTGCTCGCATT
GTGTGCGTGTTTTCCCCCCTTCTGTTTGGTGTGCATGTGCCCTCTGATCTGTTTCGCGCCACCCTGTTTT
GTGCGTTGTACGTGAGCTGTCTATAAAAGGACCGTGTGCGTGCTGCTGTATTCTCAGACGTGTGCATTTT
CTTTTTCCCACACCTGTTCTACCGTGCCGTGTATCAGACAAAGAGGGAGAGAGTTACTCCCGCGTGCGGA
TGTGAGAGATGAAGAGGAAGCAGGGCAAGGGTACTGCGAAAGAATGGACGCGAGTCCTGAAGGGGTGAGG
AGAACCGCGCAAGACGCCGCTGGCGGTGCTGCGGCGGTGGGCACGAGGATTTGCGAAACCGACGGTCACT
GTAGGAGTGCTCGTGCCGTTGTGGAGGTTCTTTGGGGCCTTGTGTTCTGCGTTGTCATCCCCCCTCTTCA
TCTGCCCGTCTTTTTTTCGAGTGTTCACACGCACCGACACTGTGCATCACTGCACCCTCTCTTCTCTCTC
TACTCTCTCTTGTATGGCATCATGTTTGCGACGCTTCAGCGTGGGCAGCTCGTGGAACGCACTGTAGCTG
CATCTTCCTCTTTTACTCTTGCCTATTTCACTGTTTCTTCTGCGCTCAGCACACCCATCTACTTATATCT
CTCCATCTATATATATATATGTGTGTGTGTATGTGCGCGCCTGTGTTTTGTGCATGCTCCACCGAAGCGC
CGACCCCTTCCCCCACTACCACTTCAAAACACCACCCTTTTTCTTCGGTTTTTGTTTGTGTGTACATCTG
CCAGCCTGTCGTTGGGCAAACCCCTGGTGCCCGCCCCTGTCTATCTGTTGCGCCTGGGTGCGCACGTTCG
AGGCGGCTGATCTCTCTCTCTTTCTCTGACACCCCCTTCTTTATGAGCCTCATCCCGGATACGGTGACGG
GGAGAGGGTCGAGAGGTGGGGAGGTGCTGTACGCACATACGTGTGTGTCTGGACAGAATAAAAAAAAAAA
AAAAAAA
16) Informação para a SEQ ID NO: 16
Lci4A Seqüência de aminoácidos do fragmento recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 173
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
LSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGGMQIFVKTLTGKTIALEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIFAGKQLEEGRTLSDYNIQKESTLHLVLRLRGG
17) Informação para a SEQ ID NO: 17
Lci5 Seqüência de nucleotídeos da Ia CDS completa.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 7 665
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: Lci5A (1456)...(3480)
LciSA-I (2482)...(3396)Lci5A-II(2482)...(2941)
ATGAAAGGCAAGCGCGTCAACCTTCACGACACGGAAAGTTTCATGTCACTCGACGAATTCGACTCTGATA
ACAACGCTTCATACACAGCGGAAAACGCCAGTGACCACACAAAGCAAGACAATCTCAGCAGTACCGCAGC
CGCGCGGAACTCTGCAGAATCTTCCATGTTACTTGAGCCGCCGGGGAACACGCCTATATCGTACCTATCA
CATTCGAACTCCCCGAAGAGCTTCGCGCCGCTGGAGGCGGCGGAGGAGGCCGGCGCGGTGCAGCGTGAGG
AGCAGGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACCCA
CCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAG
TTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCG
GCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGC
CAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACC
CGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCG
CAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCA
GCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAG
TGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGA
TGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAA
GAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCC
GAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGT
CGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCG
CGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGAT
TTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATG
CCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCA
GCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACC
TGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCC
TTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGCCGCTGGAGGCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGA
GGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACA
CACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGG
AGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGC
CGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTT
GCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCA
CCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGC
CGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCG
CAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACG
AGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTC
GATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCG
AAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCG
CCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTAGC
GCCGCTGGAGGCGGCGGAGGAGGCTGGCGCGGCGCAGCGTGAGGAGCAGGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTC
GGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGT
GGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCAC
GGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTC
TCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGG
CACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCG
CGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAG
CATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACC
GGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTT
CACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGC
AGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCA
GCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCG
CGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCA
GTGCTGCGTGCGCAGCAGCAGGAGGAGCCACCGGTGGAGGCGATGACGGCGTTCGAGGAGCATGCGCCAG
CGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCATCGTGGTGCTCTCGAGGGGGCTTCCCCGGTAGACGC
CCGTACCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGAGGCGGCGGAGGAG
GCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGGAGCCACCGGTGGAGGCGATGACGGCGTTCGAGGAGCATG
CGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCATCGTGGTGCTCTCGAGGGGGCTTCCCCGGT
AGACGCCCGTACCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTG
GAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGGAGCCACCGGTGGAGGCGATGACGGCGTTCGAGG
AGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCATCGTGGTGCTCTCGAGGGGGCTTC
CCCGGTAGACGCCCGTACCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGAC
CCGGTGGAGGAGGCCTCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGGAGCCACCGGTGGAGGCGATGACGGCGT
TCGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCATCGTGGTGCTCTCGAGGG
GGCTTCCCCGGTAGACGCCCGTACCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCACAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGGAGCCACCGGTGGAGGCGATGA
CGGCGTTCGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCATCGTGGTGCTCT
CGAGGGGGCTTCCCCGGTAGACGCCCGTACGGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTC
GCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGAAGGACGAGGCGCCGGCGGCCG
AGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGACGCCGGCACGCGAGCTCTG
GCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCCGCTGCGCTGCAT
GCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGCGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCAT
CCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGA
CCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACAAGGCGCCGGCGGCCGAGCGCGCC
GCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCG
TCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTGCATGCGCTGGC
GGAGGACAAGGCGCCGGCGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAG
GTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGT
GTGCGGAGCCCGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGCGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCC
GCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAG
CCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACA
AGGCGCCGGCGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCC
GGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAG
CCCGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGTGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGG
CACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGG
CTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCG
GTGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGGGGCGACCTTGGGTGTGCGGAGCCCGCTGCGC
TGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGTGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGC
TGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGC
GACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGCGGCCGAGC
GCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCA
GTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTGCATGCG
CTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGTGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGGGGCGACCTTG
GGTGTGCGGAGCCCGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGCGGCCGAGCGCGCCGCGGA
GCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCG
GAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGG
ACAAGGCGCCGGCGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCC
GCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCG
GAGCCGGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGTGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGG
AGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGA
GGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCG
CCGGTGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCAC
GCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGC
TGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGTGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCACCTGCGCGAG
AGGGCTACTCGCGGGGCGACCTTGGGTGTGCGGAGCCCGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGC
GCCGGCGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCA
CGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGG
CTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACAAGGCGCCGGCGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACC
CATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCTCTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTAC
TCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCCGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGTGG
CCGAGCGCGCCGCGGAGCCGCAGGAGGCACCCATGGCTGCATCCACGGAGGTGCCGCCGGCACGCGAGCT
CTGGCAGTCCGTCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGCGACGACCTCGGGTGTGCGGAGCCGGCTGCGCTG
CATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGTGGCCGAGCGCGCCGCGGAGCCGGAGGGCTACTCGCGGGGCG
ACCTTGGGTGTGCGGAGCCCGCTGCGCTGCATGCGCTGGCGGAGGACGAGGCGCCGGTGGCCGAGCGCGC
CGTGGAGCCGCAGGAGTCAAGAATTATCCGCATGA
18) Informação para a SEQ ID NO: 18
Lci5 Seqüência de aminoácidos da Ia CDS completa.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 2554
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
MKGKR VNLHDTESFMSLDEFDS DNNAS YTAENASDHTKQDNLSSTAAARNSAESSMLLEPPGNTPIS YLSHSNS PKS FAPLEAAEEAGAVQREEQAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARVVDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARVVDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWAL YERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVE PQPRLA VTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQ LASS PFTRTWALYERVAETKET PPTRAT PPAALRASESFAPLEAVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARVVDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESLAPLEAAEEAGAAQREEQAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQQEEPPVEAMTAFEEHAPALQRVGTPVEPHRGALEGAS PVDARTATPPAALRASESFASLEAAEEAAVLRAQQEEEPPVEAMTAFEEHAPALQRVGTPVEPHRGALEGASPVDARTATPPAAL RASES FASLDPVEEAAVLRAQQEEEPPVEAMTAFEEHAPALQRVGTPVEPHRGALEGASPVDARTATPPAALRASES FASLDPVEEAS VLRAQQEEE P PVEAMTAFEEHAPALQRVGT P VE PHRGALEGAS PVDART AT PPAALRAS ES FASLDPVEEATVLRAQQEEEPPVEAMTAFEEHAPALQRVGTPVEPHRGALEGASPVDARTATPPAAL RASESFASLDPVEEAAVLRAQQKDEAPAAERAAEPQEAPMAASTEVTPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDEAPAAERAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDKAPAAERAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDKAPAAERAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDEAPAAERAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDKAP AAE RAAE PQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDEAPVAERAAEPQEAPMAAS TEVP PARELWQS VAE PEGYS RDDLGCAE PAAL HALAE DEAPVAE RAAEPEGYSRGDLGCAEPAAL HALAEDEAPVAE RAAE PQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDEAPAAERAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDEAPVAE RAAEPEGYSRGDLGCAEPAAL HALAEDEAPAAERAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDKAPAAERAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDEAPVAERAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAALHALAEDEAPVAE RAAEPQEAPMAASTEVPPARELWQSVAEPEGYSRDDLGCAEPAAL HALAEDEAPVAE RAAEPHLRERATRGATLGVRSPLRCMRWRRTRRRRPSAPRSRRRHPWLHPRRCRRHASSGSPSRSRRATRATTSGVRSRLRCMRWRRTRRRRPSAPRSRRRHPWLHPRRCRRHASSGSPSRSRRATRATTSGVRSPLRCMRWRRTRRRWPSAPRSRRRHPWLHPRRCRRHASSGSPSRSRRATRATTSGVRSRLRCMRWRRTRRRWPSAPRSRRATRGATLGVRS P LRCMRWRRT RRRW PSAPWS RRS QELSA
19) Informação para a SEQ ID NO: 19Lci5A Seqüência de nucleotideos do cDNA.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 2025
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
CCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGCCGCTGGAGGCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTAGCGCCGCTGGAGGCGGCGGAGGAGGCTGGCGCGGCGCAGCGTGAGGAGCAGGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGCAGGAGGAGCCACCGGTGGAGGCGATGACGGCGTTCGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCATCGTGGTGCTCTCGAG
20) Informação para a SEQ ID NO: 20
Lci5A Seqüência de aminoácidos do fragmento codificado pelocDNA.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 675
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
PFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFAPLEAVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQ LASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAAL RASES FASLDPVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESLAPLEAAEEAGAAQREEQAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQ LASS PFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAAL RASES FASLDPVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQQEEPPVEAMTAFEEHAPALQRVGTPVEPHRGALE
21) Informação para a SEQ ID NO: 21
Lci5A-I Seqüência de nucleotídeos do Io fragmentorecombinante.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 915
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
GCGCAGCGTGAGGAGCAGGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGCATGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGCAGGAGGAGCCACCGGTG
22) Informação para a SEQ ID NO: 22
rLci5A-I Seqüência de aminoácidos do Io fragmentorecombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 305
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
AQREEQAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQEEHAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQQEEPPV
23) Informação para a SEQ ID NO: 23
Lci5A-II Seqüência de nucleotídeos do 2o fragmentorecombinante.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 4 68
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
GCGCAGCGTGAGGAGCAGGCGCCAGCGCTGCAGCGCGTCGGCACGCCGGTGGAGCCGCAGCCGCGCCTCGCGGTCACGACACACCGGGTTCGCCTGGACGGCGATTTGTGGGCGCGTGTCGTCGACGAGTGGCCGGACCTGCTCAAGCAGGAGTTCACAAGCGACGTGTGCGATGCCACGGCGCTGCCGCGGACGTCGATGCAGCGGCTGGTGCTCACAGCCGGCAGCCTCGTCGCCGACTTCCAGCTCTCGCACGGAGGCCTCGCGAAGAGGGAGCTGAACAAGCAGCTTGCCAGCTCGCCCTTCACCCGCACCTGGGCACTGTACGAGCGCGTCGCCGAGACGAAAGAGACGCCGCCCACCCGCGCCACGCCGCCGGCTGCCCTTCGCGCCTCGGAGAGCTTCGCGTCGCTGGACCCGGTGGAGGAGGCCGCAGTGCTGCGTGCGCAGCAGGAGGAGCCACCGGTG
24) Informação para a SEQ ID NO: 24
rLci5A-II Seqüência de aminoácidos do 2° fragmentorecombinante.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 156
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
AQREEQAPALQRVGTPVEPQPRLAVTTHRVRLDGDLWARWDEWPDLLKQEFTSDVCDATALPRTSMQRLVLTAGSLVADFQLSHGGLAKRELNKQLASSPFTRTWALYERVAETKETPPTRATPPAALRASESFASLDPVEEAAVLRAQQEEPPV
25) Informação para a SEQ ID NO: 25
Lci6 Seqüência de nucleotídeos do gene completo.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 7599
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: (802)...(4641)
ATGACCGCAGTCAGTGTCAACGAAAATGAGCTGGTGCACCTCAGCGTGGGCGACTTTGTCGCCATCCTCACCCATCACATGAAGGATGGCAAGCTGCACTGGATCTTGGGCTCCGTCGAGACGCCACCGTACCTGCGCGATGTCGAGATCCGCCTGTGGGCGAAGCAGCGGTTCGAGTACTACGACGAGGGCGACGCCCCGGCAGACCCGGAGACCGCGGCGCTGATGGATCGCATTGCCCAAGTGAAGGACGAACTCCGTAAGAGCATTGACCAGGCCGAGGACCTCACGGAGCAGCTGCGCGACCGCCGCGCTGCCATTATTCAGAAGATCGCCGAGGCTGACAGGTACGTGGCGGAGTCGAAGGCCGTCCGCGACGCTGCGCGCGACGACGTCGAGAGCATCTCCGATCGCAACTGGCAGGAGCTGAAGTCGTACCGTATTCCACCCAAGATGGTGTCAGTAATAATTCGCGCCGTGATGTTGCTGCTCTCGGAGGACGAGGCCCGCACGTGGCCGCATATGCAGCGAGTGCTGCGCGACTTTTACTTCAAGCGCCGCATTACAAGCTACGACCCCGTTACGCAGCTCTCCCCTGAGCGCCGGGACTACATTCTGCAGGAGTGCGTGAGCAAGAAGAGCTTTCGCTATGACCGCGCCATGCAGGGTAGCGTGGCGGTGGGCCCCATCTACTACTGGGTGCTGGCTCAGCTCGACAGCGGCGAGGCCCAGTCGCAGAAGGAAGACGTCGAGCAGGAGAAAATTGCACG
CCAGAAAGAGCTGCGCGGTGTGCTGAAGCAAATTAGCGAGCAACAGGAGCGGATATCGGAATACCAGGAG
CTCATGGATGACCTGGACGATCAGCTGCGCCTGTGCAACCAGCGCAACAGCGACGGCAGCTCCGTCGCCT
CGCACTCGCGCCGCCGCATCTCGATCAGCGACCGCTATGCGGAGAGCTTCGCAGCTCGAGAGGGGAAGGA
GTACCTTCGTCCAGCCTTCTACGCATGGAAGCCGACGGACCGCGTCATCATTGTGCTTCGCAAGAATATC
GTCTGCAACTTCGGCGCCGTCACCTCGCAGGAGCAGGAGGAGGGCTACAACATGAGCGAGCCGCAGATCC
GCATGCTGGATGAAGCCCTCATACGCTCTCAGCAGGCCCTGGAGACGATTTGCGGCGACAACGAGGGCGA
GGACGATGCCCTCGAGGAGGACATGCTCAAGCAGAACGACAACGAGACCGACCACACGGTGCGCAAAGAT
GAGGACATTCTGGAAGAGCGCCAGCGCAACGCTGCTGAGGGCAAGCCCACGCCGATTCCGACGCCGCAGG
CGAGCGACACGAACAAGGTCGGCATAGGCGCCGCCGAGGCGACGTCGAAGCTTCAGCGCACGTTTGAGGG
AAAGAACTGGCACCGCATTCTCGACCGCAAGCGTGAGGCCATCGAGGCTGCTTTCACAGAGGACTCCTCA
GAGTGCCTGAAAGTGCCGCCGTACTCGATCATGATCGAAAGCCTCATGGTCGGGAGCCTTATCGTCGACT
TCTCGGCCCAGCACGACGGCCAGCGCTCCGACGCGGAGCTGCAGGAGCGCGTGAAGACTTTCGAGTTCCC
GAAGGTCATGTCACTCTACGATGAGGAGGACGAGGAGGACGACGATGGCCCGGAGCATCAGATGAAGTTC
GGCGGCGACCGCTGGGCCGACATGACCCCGGAGCACCATGACGAGATCGAGGCCGCTTTCCTGGCGGACA
CAAGCGCCGCGACTGGTGCGCTGCAGGACGAGATTGCCGTCCAAGACATTCGCGCTGACGCGGACGAAGG
CCTCACGGTGGACTACTCGCTGCTGGACAAGGACCGTGACCCCGAGGAAGTGCAGGAGCAAGTGGACGCT
TACGCATACCCTGCTGTGTGGGCTCTGTACCAGCGGCTCGCTGGGCTGGACGCGGCGGCGCCGATCCACC
AGGTGCGCTTCCGCGGCGAGCGGTGGGCGGACATCATGCCCGGGGCTGAAGAAGCGATCAGGCAGGCGTT
TGCTGAGGACACCGCCGACGCGCTCGGCATTGCGCCGCAGCAGGTAATCCCCGACGAGATCCGCTACGAG
AAGGGACTGACGGTTCCCTACACCGTGCTCGACTGCTCGCTGGATGGCGACGAGGTCGATGCCAAGGCGG
AGGACTATCATTACCCCAACACGTGGGCGCTGTACGACCGCCTTGTGGCGGAGGCCGTCGGCGCGGCCTA
CCAGAAGAGCTTCGAGGGCGAGCACTGGGAGACGGTGCTGCACGCGGCGCGGCCAGAGGTGTCAGAAGCA
TTTTGCACAGACACGGCGAACGCCGTCAAGTCCGAGCCCGGCGACGTCGACCCTTGCTCGGTCGACACTG
ACCAGAACCGCCTGCTCGTCTCCTACAACGTTGGCGACTCGCAGCAGCGTGCCGATGAGGTGCGTGCGGA
CACCCAGGAGTACCCCTACCCAGAAGTGTGGGCGTTGTACCAGCTCGTCATCGCGGAGGAGGCCGAAGGC
ACGCGGAAGCTGTCCCAGACGTTCGACGGAGAGGCGTGGGACGCGATCAACGCGGAGATGCCGGAGCAGG
TGCGCGAGGCCTTCACGGAGGATGTGTCTGTCGCCACTCGCGTCAATCCGGCATGCGTGACGATACGCGA
CATCAAGACGAGCAAGAAGGGCATGACCGTTGAGTATGGTATTGTTCGTGAAGAGGGTCAGTCCGCGTAC
GCGACGCGCAAGGCAGCGAAGAACTTCGACTACCCGGTTACGTGGAGCCTGTACGAGGCGAACAAGAAGA
GCGCGCCGGGGCACGCCCTCAGCGGGGTTGGCGAGGGCGAGTCTGCCATCTTCGAGCGCCGCTTCGAGGG
CGATGACTGGGACATCGTTGTCGAGGGCTGTCGTGAGGAGCTCAGTGACGCCTTCCGCGCGGATACGGCG
CGTGTGCTGGGTGTGCCGAAGCAGAGCGTGCGCATCATCAGCATAGAGATAGGCAGCCCGAACGTCAAGT
ACCAGCTCGTAGACCCGCCGTGCGAGGACAGAGAGATCGAGCGGCGCATGGAGGAGGACGAGTTACCTGA
GGTGATGGATCTGTACCGTCGCTGCACACGCGCTGAGGCCGAGGGTGCGACGCCGGCGCTGCAGGACCTT
GAGGCGATGCCGCCGAAGGTGTTCGACGGAGACGAGTGGGGCTTTGTAATGGCGAACCAGCGCGCGGAGC
TGGAGAAGGCGTTCGTGAAGGACACGGCCGACGCCCTTGGTGTGAGCGATGACCAGGTGAGGGTGAAGGA
GATGAAGGTGGGTCCGTACGCGCTGCGGGTGCAGTACAGCGTGCGCGACTGCCCATCCGACGAAGCGGCG
GCGCAGGCGACCGTGGAGGACTACGCTTACCCATCCATGTGGGAGATCTACCCGGACGAGGAGGATCTGG
GCAACTGCCAGAAGACGTTCGACGGCACAGGCTGGGAGGCAATCGTTGCCTCCCGCGAGGATGACGTGAG
GGCGGCCTTCGCGAAGGACGTGGCTGAAGCCCTCAAAGCGGGCGAGCAGAGTGTTGTGGTCAAGTCCGTC
CACGCCAACGCTGAGGGCCTCGAGGTGCGCTACAACGTGACGAGCGAGGCGTGCGATAGCGAGCAGATTA
TGGAGATGCAGCAGGAGTACGGCTACCCGAACACGTGGGCGCTCTATGAGGAAGACGAAGGCAACTGGGT
GACAACGTCGCACCAGCTTGGCTTCGAGGGCGAGGACTGGGTGTACGTCGTGCAGGACAAGATGCCAGAG
CTGCAAGAGGCGTTTGTCAGTTGCACCGCCGAACTATTTCATCTGCGTCCGGAGCACATTACGAATACCA
AGTACACATTGGGCAGCCTCATCGTGGACTTTGAGTTCACACACCCGGCGAGGATGAGCGAGGAGGAGAT
CAGGAGGCAGCTCGTCACGTGCCCGTACGAGCCGGTCTGGGAACTCTACGGTTACCACCCCTGGGTCCCG
ACGGAGGTCACGGAGACGACGCACAATATCTGCTTCGAGGGGCCGGGCTGGGCGACCGTGCTGGAGTCAC
AGCGCGAGGAGCTAGAGGAGTGCTTCAAGCAGGGCACGGCGGCGGCGCTCGAGGTCGAGCCGTCTGACGT
GCGCATCGACTCGGCCGACTGCGCCGAGGAGTGCCTGTTCATCCGCACAACCGTCACCCACCACATCTTC
CAGGACAACGAGCTCCTGCAGGAGCAGCTTACCCGCTACCCATACGAGGAGGTCTGGAAACTCTACGCCG
AGGACCCGAACCAGAGCTGGACTGTCACCTCGCACCAGGTCGGGTTTGACGGCGATGACTGGATGTACAT
TGTGTCTGCCAAGAAAGAGGCGCTGGAAAAGGCCTTCCGCACGTGCACTGGTGAATCCCTAGACCTGACG
GACGAGCACATTACGAACATCGTCTTTGAGGCCAACGAGGCGGCGCTGCTGACCACCTTCGAGGTGAAGC
ACCCGAAGGAGCAGTCGGAGAAGGAGGTGAACCGGCGACTCGCCGAGTGCGACTATATGCGGGTGTGGGA
GCTGTACATTGATCACCCGTACAACCCGGAGGAGAACGAGGTGACATCGCATGAGATCGGCTTCGAGGGC
GATGAGTGGAACAAGGTAATTGCGACACAGCTGAAGCAGCTCGAGGAGGCCATCATGCTCGACACGTCCG
AGGCGCTCGAGGTGACGCCGAACGACATCACGTCGATCACGACTAGCTTCGAGAACGGAAACCTACTAAT
CGTGCGCCTCAACATCCAGCACCCGGTGCTACAGGACGAGGAGCTGATCAAAGAGCAGCTGAGCCGCTAC
CCGTACGAGCGTGTGTGGGCACTTTACGAGGATGCGCCTATCACTCCTCTTAGCGAGGAAGACGCGGTCA
GATTTAACGGTACCGGCGAGGGCGAGTCTGCCATCTTCGAGCGCCGCTTCGAGGGCGATGACTGGGACAT
CGTTGTCGAAGGCTGCCCTGAGGAGCTCAGTGACGCCTTCCGCGCGGAGGCGGCGCGTGTGCTGGGTGTGCCGAAGCAGAGCGTGCGCATCATCAGCACAGAGATAGGCAGCCTGATCGTCAAGTACCAGATCGTAGACCCGCCGTGTGAGGACAGTGAGATCGAGCGGCGCATGGAGGAGGACGAGTTACCTGAGGTGTTGAATCTGTACCGTCGTCGCATACGCGCTGAGGACGAGGGTGCGACCACGACGAGCCGCGTAAAGCCCGAGGGGAAGAAGATAACGACCCTGGAGGACTGCGGGTTTGAGGGTGAGGACTGGGACTACGTGTGGTCGATCAAGCAGGAGGCGATGCGCAAGGCCTTTGCAAAGGGTGTCGCGGACGCGCTGGGAATCAAGCCGACGGACATCCAGAACATCAACATGGAGAAGTCGGCGGACGGCATCGTGCTCGGTGCGAACGTGACGCACCCGCTGACGCAAGACTACCAGATGATCCGGCAGACGCTGAAGAACCACCCGTTCGAGGAGTTGTGGGCGCTGTACGAGACGCGGCCATACAACCCAGCTGAGTCCGTGACCACGGAGCACCTCATCTACTTCGAGGGCGAGGAATGGGACGCTGTGATGGCGGGCAAACGCGAGGAGGTGGTGGAGGCGATCCGTAAGGATACAGCGAGTGCGCTGGAGCTGCCGGCGGACGACGTAGTGAGCGTGTGTACGAAGGTGGAGCCGACTGGACTGGCCGCTACGGTCGTCGTGAGTCACTCGCCGCTGCAGGACGATGAACTGATTCACGAGGAGCTGACCAAGTACGACTACGAGCGCGTGTGGGCGCTGTACTGCCCTGAGAGTGGGCCACTGCATGGAACGAAGCACTTCGACGGCTTGAACTGGGCGGACGTAATCGGGAGCGACAAGGATGGTGTGATGCAGGCGTTTCGCGACGATACGGCCGCTGCCGTTAGCATGCGTCCGGACGATGTGGATGTGGACGACATCCGTACGACAGGCTTGGGCATGGATGTGGACTACACGGTGAACCTCGCCAACACGAGCGGGGAGGACATTGAGCATACGCTGCGGACGTACCCGTACCCGAACGTTTGGGGCCACTACCGTGTCGAAGATGAGATAACGACGCAGCAGAACTGCGGGTTCAAGGGTGAGGACTGGGACTACGTGTGGTTGATCAAGCAGGAGGCGATGCGCAAGGCCTTTGCAAAGGGTGTCGCGGACGCGCTGGGAATCAAGCCGACGGACATCCAGAACATCAACATGGAGAAGTCGGCGGACGGCATCGTGCTCGGTGCGAACGTGACGCACCCGCTGACGCAAGACTACCAGATGATCCGGCAGACGCTGAAGAACCACCCGTTCGAGGAGTTGTGGGCGCTGTACGAGACGCGGCCATGCGGCCAGGGCGATCTGAAGAGCGCCCTTGGCGGAACAGGCGACCGCGAGTCTGGCCGGCTGCAGCGTCTCTTCGAAGGCGATGACTGGGACCTCGTACTGGAGGGCTGCCCAGAGGACGCTACGGACGCCTTCCGAAAGGGTGTGGCGGACTCCGTGCACGTGTCGAAGTCGGACGTCGTTGTAATGGCGTGGCACCTGGGCAGCCTTATCATGAGTTACAAGGTGCGCAACTGCGACATGGAGGATGCCGAGATCAACGATAGGGTCCGTGCACACGAATTCCCGGAGCTGATGGCGTTGTACCGTGCGCGCGTGCGTCACGGCCAAAAGGGCGAGGGCGGTGCCACAGAGGGCAGCCCAATGCGTAAGGAGAAAGTGATTACTGTCGACATAGTTGACGAGGCTGAGGTGCCGGAGGGGTACACGCGTGTCGCGCTGAGTGTCAGCTTCGAAGGGGAGCTCTGGGAGAAGATTGTAAAGACGCGGACGCAGGAGTTGGCGGATGCTTTCCGCGCTGACACTGCCAAGTCCATTGGCGCTGCTCTGGGGGATATCCACATTCGCGAGTGCTTTGTGAGCAAGGTGCTTCTGTTGGTGCACTTCAGCGCCCGCTATGAGGCGACGATATCCGAGGCTGAGCTGCGCAAGAAGATTGATGAACACTCCTACGACAATGTCTGGGCCCTCTACGACGAGATGGAGGATGCTCTCGCAGCCGACATGTCGGAGGTCATGGTCAAGCACTTCGTCGGCGTTCACTGGGACTTTGCGATGGAGGCGTGCCCGACGCTTGTCGAGGAGGCCTTCAAGGAAGACACCGCCAATGTGCTGCGCACTCATGCCTCGAAGGTGCTCGTTGAGGACATCGCTCTGGGCAGCCTCATCGTGCGCTTCCGCGTGCAAGGGCTGACGATCTCGGAGGCGGAAGCGATGCAGATGACGGGCAACTACGCCTACCCGAAGGTGTGGGCTCTGTACATGTCCTGTGAGGAGGCGAACGGCCGTGCTTCATTGAAAAGCCACAAAAATGGAAGCGGAGGTGGCTTGTCGCGCCGACGGGCTGAGCAGCTTGTAGCGGAGGAGGGCGTGGAGTCTCAGGACACCGTGACATATCTGCGCAAGGCCCTCGCCGATGCTCGCCGCGAGCGTGACATGTACATGGAGCAGGTGGAACAAGCCGAGGAGGCGCAGCGCGCTAGTCAGAATAGTTAA
26) Informação para a SEQ ID NO: 2 6Lci6 Seqüência de aminóacidos completa.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 2532
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
MTAVSVNENELVHLSVGDFVAILTHHMKDGKLHWILGSVETPPYLRDVEIRLWAKQRFEYYDEGDAPADPETAALMDRIAQVKDELRKSIDQAEDLTEQLRDRRAAIIQKIAEADRYVAESKAVRDAARDDVESISDRNWQELKSYRIPPKMVSVIIRAVMLLLSEDEARTWPHMQRVLRDFYFKRRITSYDPVTQLSPERRDYILQECVSKKSFRYDRAMQGSVAVGPIYYWVLAQLDSGEAQSQKEDVEQEKIARQKELRGVLKQISEQQERISEYQELMDDLDDQLRLCNQRNSDGSSVASHSRRRISISDRYAESFAAREGKEYLRPAFYAWKPTDRVIIVLRKNIVCNFGAVTSQEQEEGYNMSEPQIRMLDEALIRSQQALETICGDNEGEDDALEEDMLKQNDNETDHTVRKDEDILEERQRNAAEGKPTPIPTPQASDTNKVGIGAAEATSKLQRTFEGKNWHRILDRKREAIEAAFTEDSSECLKVPPYSIMIESLMVGSLIVDFSAQHDGQRSDAELQERVKTFEFPKVMSLYDEEDEEDDDGPEHQMKFGGDRWADMTPEHHDEIEAAFLADTSAATGALQDEIAVQDIRADADEGLTVDYSLLDKDRDPEEVQEQVDAYAYPAVWALYQRLAGLDAAAPIHQVRFRGERWADIMPGAEEAIRQAFAEDTADALGIAPQQVIPDEIRYEKGLTVPYTVLDCSLDGDEVDAKAEDYHYPNTWALYDRLVAEAVGAAYQKSFEGEHWETVLHAARPEVSEAFCTDTANAVKSEPGDVDPCSVDTDQNRLLVSYNVGDSQQRADEVRADTQEYPYPEVWALYQLVIAE EAEGTRKLSQTFDGEAWDAINAEMPEQVREAFTEDVSVATRVNPACVTIRDIKTSKKGMTVEYGIVREEGQSAYATRKAAKNFDYPVTWSLYEANKKSAPGHALSGVGEGESAIFERRFEGDDWDIWEGCREELSDAFRADTARVLGVPKQSVRIISIEIGSPNVKYQLVDPPCEDREIERRMEEDELPEVMDLYRRCTRAEAEGATPALQDLEAMPPKVFDGDEWGFVMANQRAELEKAFVKDTADALGVSDDQVRVKEMKVGPYALRVQYSVRDCPSDEAAAQATVEDYAYPSMWEIYPDEEDLGNCQKTFDGTGWEAIVASREDDVRAAFAKDVAEALKAGEQS WVKSVHANAEGLEVRYNVTSEACDSEQIMEMQQEYGYPNTWALYEEDEGNWVTTSHQLGFEGEDWVY WQDKMPELQEAFVSCTAELFHLRPEHITNTKYTLGSLIVDFEFTHPARMSEEEIRRQLVTCPYEPVWELYGYHPWVPTEVTETTHNICFEGPGWATVLESQREELEECFKQGTAAALEVEPSDVRIDSADCAEECLFIRTTVTHHIFQDNELLQEQLTRYPYEEVWKLYAEDPNQSWTVTSHQVGFDGDDWMYIVSAKKEALEKAFRTCTGESLDLTDEHITNIVFEANEAALLTTFEVKHPKEQSEKEVNRRLAECDYMRVWELYIDHPYNPEENEVTSHEIGFEGDEWNKVIATQLKQLEEAIMLDTSEALEVTPNDITSITTSFENGNLLIVRLNIQHPVLQDEELIKEQLSRYPYERVW ALYEDAPITPLSEEDAVRFNGTGEGESAIFERRFEGDDWDIWEGCPEELSDAFRAEAARVLGVPKQSVRIISTEIGSLIVKYQIVDPPCEDSEIERRMEEDELPEVLNLYRRRIRAEDEGATTTSRVKPEGKKITTLEDCGFEGEDWDYVWSIKQEAMRKAFAKGVADALGIKPTDIQNINMEKSADGIVLGANVTHPLTQDYQMIRQTLKNHPFEELWALYETRPYNPAESVTTEHLIYFEGEEWDAVMAGKREEWEAIRKDTAS ALELPADDWSVCTKVEPTGLAATWVSHSPLQDDELIHEELTKYDYERVWALYCPESGPLHGTKHFDGLNWADVIGSDKDGVMQAFRDDTAAAVSMRPDDVDVDDIRTTGLGMDVDYTVNLANTSGEDIEHTLRTYPYPNVWGHYRVEDEITTQQNCGFKGEDWDYVWLIKQEAMRKAFAKGVADALGIKPTDIQNINMEKSADGIVLGANVTHPLTQDYQMIRQTLKNHPFEELWALYETRPCGQGDLKSALGGTGDRESGRLQRLFEGDDWDLVLEGCPEDATDAFRKGVADSVHVSKSDVWMAWHLGSLIMSYKVRNCDMEDAEINDRVRAHEFPELMALYRARVRHGQKGEGGATEGSPMRKEKVITVDIVDEAEVPEGYTRVALSVSFEGELWEKIVKTRTQELADAFRADTAKSIGAALGDIHIRECFVSKVLLLVHFSARYEATISEAELRKKIDEHSYDNVWALYDEMEDALAADMSEVMVKHFVGVHWDFAMEACPTLVEEAFKEDTANVLRTHASKVLVEDIALGSLIVRFRVQGLTISEAEAMQMTGNYAYPKVWALYMSCEEANGRASLKSHKNGSGGGLSRRRAEQLVAEEGVESQDTVTYLRKALADARRERDMYMEQVEQAEEAQRASQNS
27) Informação para a SEQ ID NO: 27
Lci6A Seqüência de nucleotídeos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 384 0
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
ATTAGCGAGCAACAGGAGCGGATATCGGAATACCAGGAGCTCATGGATGACCTGGACGATCAGCTGCGCC
TGTGCAACCAGCGCAACAGCGACGGCAGCTCCGTCGCCTCGCACTCGCGCCGCCGCATCTCGATCAGCGA
CCGCTATGCGGAGAGCTTCGCAGCTCGAGAGGGGAAGGAGTACCTTCGTCCAGCCTTCTACGCATGGAAG
CCGACGGACCGCGTCATCATTGTGCTTCGCAAGAATATCGTCTGCAACTTCGGCGCCGTCACCTCGCAGG
AGCAGGAGGAGGGCTACAACATGAGCGAGCCGCAGATCCGCATGCTGGATGAAGCCCTCATACGCTCTCA
GCAGGCCCTGGAGACGATTTGCGGCGACAACGAGGGCGAGGACGATGCCCTCGAGGAGGACATGCTCAAG
CAGAACGACAACGAGACCGACCACACGGTGCGCAAAGATGAGGACATTCTGGAAGAGCGCCAGCGCAACG
CTGCTGAGGGCAAGCCCACGCCGATTCCGACGCCGCAGGCGAGCGACACGAACAAGGTCGGCATAGGCGC
CGCCGAGGCGACGTCGAAGCTTCAGCGCACGTTTGAGGGAAAGAACTGGCACCGCATTCTCGACCGCAAG
CGTGAGGCCATCGAGGCTGCTTTCACAGAGGACTCCTCAGAGTGCCTGAAAGTGCCGCCGTACTCGATCA
TGATCGAAAGCCTCATGGTCGGGAGCCTTATCGTCGACTTCTCGGCCCAGCACGACGGCCAGCGCTCCGA
CGCGGAGCTGCAGGAGCGCGTGAAGACTTTCGAGTTCCCGAAGGTCATGTCACTCTACGATGAGGAGGAC
GAGGAGGACGACGATGGCCCGGAGCATCAGATGAAGTTCGGCGGCGACCGCTGGGCCGACATGACCCCGG
AGCACCATGACGAGATCGAGGCCGCTTTCCTGGCGGACACAAGCGCCGCGACTGGTGCGCTGCAGGACGA
GATTGCCGTCCAAGACATTCGCGCTGACGCGGACGAAGGCCTCACGGTGGACTACTCGCTGCTGGACAAG
GACCGTGACCCCGAGGAAGTGCAGGAGCAAGTGGACGCTTACGCATACCCTGCTGTGTGGGCTCTGTACC
AGCGGCTCGCTGGGCTGGACGCGGCGGCGCCGATCCACCAGGTGCGCTTCCGCGGCGAGCGGTGGGCGGA
CATCATGCCCGGGGCTGAAGAAGCGATCAGGCAGGCGTTTGCTGAGGACACCGCCGACGCGCTCGGCATT
GCGCCGCAGCAGGTAATCCCCGACGAGATCCGCTACGAGAAGGGACTGACGGTTCCCTACACCGTGCTCG
ACTGCTCGCTGGATGGCGACGAGGTCGATGCCAAGGCGGAGGACTATCATTACCCCAACACGTGGGCGCT
GTACGACCGCCTTGTGGCGGAGGCCGTCGGCGCGGCCTACCAGAAGAGCTTCGAGGGCGAGCACTGGGAG
ACGGTGCTGCACGCGGCGCGGCCAGAGGTGTCAGAAGCATTTTGCACAGACACGGCGAACGCCGTCAAGT
CCGAGCCCGGCGACGTCGACCCTTGCTCGGTCGACACTGACCAGAACCGCCTGCTCGTCTCCTACAACGT
TGGCGACTCGCAGCAGCGTGCCGATGAGGTGCGTGCGGACACCCAGGAGTACCCCTACCCAGAAGTGTGG
GCGTTGTACCAGCTCGTCATCGCGGAGGAGGCCGAAGGCACGCGGAAGCTGTCCCAGACGTTCGACGGAG
AGGCGTGGGACGCGATCAACGCGGAGATGCCGGAGCAGGTGCGCGAGGCCTTCACGGAGGATGTGTCTGT
CGCCACTCGCGTCAATCCGGCATGCGTGACGATACGCGACATCAAGACGAGCAAGAAGGGCATGACCGTT
GAGTATGGTATTGTTCGTGAAGAGGGTCAGTCCGCGTACGCGACGCGCAAGGCAGCGAAGAACTTCGACT
ACCCGGTTACGTGGAGCCTGTACGAGGCGAACAAGAAGAGCGCGCCGGGGCACGCCCTCAGCGGGGTTGG
CGAGGGCGAGTCTGCCATCTTCGAGCGCCGCTTCGAGGGCGATGACTGGGACATCGTTGTCGAGGGCTGTCGTGAGGAGCTCAGTGACGCCTTCCGCGCGGATACGGCGCGTGTGCTGGGTGTGCCGAAGCAGAGCGTGCGCATCATCAGCATAGAGATAGGCAGCCCGAACGTCAAGTACCAGCTCGTAGACCCGCCGTGCGAGGACAGAGAGATCGAGCGGCGCATGGAGGAGGACGAGTTACCTGAGGTGATGGATCTGTACCGTCGCTGCACACGCGCTGAGGCCGAGGGTGCGACGCCGGCGCTGCAGGACCTTGAGGCGATGCCGCCGAAGGTGTTCGACGGAGACGAGTGGGGCTTTGTAATGGCGAACCAGCGCGCGGAGCTGGAGAAGGCGTTCGTGAAGGACACGGCCGACGCCCTTGGTGTGAGCGATGACCAGGTGAGGGTGAAGGAGATGAAGGTGGGTCCGTACGCGCTGCGGGTGCAGTACAGCGTGCGCGACTGCCCATCCGACGAAGCGGCGGCGCAGGCGACCGTGGAGGACTACGCTTACCCATCCATGTGGGAGATCTACCCGGACGAGGAGGATCTGGGCAACTGCCAGAAGACGTTCGACGGCACAGGCTGGGAGGCAATCGTTGCCTCCCGCGAGGATGACGTGAGGGCGGCCTTCGCGAAGGACGTGGCTGAAGCCCTCAAAGCGGGCGAGCAGAGTGTTGTGGTCAAGTCCGTCCACGCCAACGCTGAGGGCCTCGAGGTGCGCTACAACGTGACGAGCGAGGCGTGCGATAGCGAGCAGATTATGGAGATGCAGCAGGAGTACGGCTACCCGAACACGTGGGCGCTCTATGAGGAAGACGAAGGCAACTGGGTGACAACGTCGCACCAGCTTGGCTTCGAGGGCGAGGACTGGGTGTACGTCGTGCAGGACAAGATGCCAGAGCTGCAAGAGGCGTTTGTCAGTTGCACCGCCGAACTATTTCATCTGCGTCCGGAGCACATTACGAATACCAAGTACACATTGGGCAGCCTCATCGTGGACTTTGAGTTCACACACCCGGCGAGGATGAGCGAGGAGGAGATCAGGAGGCAGCTCGTCACGTGCCCGTACGAGCCGGTCTGGGAACTCTACGGTTACCACCCCTGGGTCCCGACGGAGGTCACGGAGACGACGCACAATATCTGCTTGGAGGGGCCGGGCTGGGCGACCGTGCTGGAGTCACAGCGCGAGGAGCTAGAGGAGTGCTTCAAGCAGGGCACGGCGGCGGCGCTCGAGGTCGAGCCGTCTGACGTGCGCATCGACTCGGCCGACTGCGCCGAGGAGTGCCTGTTCATCCGCACAACCGTCACCCACCACATCTTCCAGGACAACGAGCTCCTGCAGGAGCAGCTTACCCGCTACCCATACGAGGAGGTCTGGAAACTCTACGCCGAGGACCCGAACCAGAGCTGGACTGTCACCTCGCACCAGGTCGGGTTTGACGGCGATGACTGGATGTACATTGTGTCTGCCAAGAAAGAGGCGCTGGAAAAGGCCTTCCGCACGTGCACTGGTGAATCCCTAGACCTGACGGACGAGCACATTACGAACATCGTCTTTGAGGCCAACGAGGCGGCGCTGCTGACCACCTTCGAGGTGAAGCACCCGAAGGAGCAGTCGGAGAAGGAGGTGAACCGGCGACTCGCCGAGTGCGACTATATGCGGGTGTGGGAGCTGTACATTGATCACCCGTACAACCCGGAGGAGAACGAGGTGACATCGCATGAGATCGGCTTCGAGGGCGATGAGTGGAACAAGGTAATT
28) Informação para a SEQ ID NO: 28
Lci6A Seqüência de aminóacidos da proteína recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 1280
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
ISEQQERISEYQELMDDLDDQLRLCNQRNS DGS SVASHSRRRISIS DRYAES FAAREGKEYLRPAFYAWKPTDRVIIVLRKNIVCNFGAVTSQEQEEGYNMSEPQIRMLDEALIRSQQALETICGDNEGEDDALEEDMLKQNDNETDHTVRKDEDILEERQRNAAEGKPTPIPTPQASDTNKVGIGAAEATSKLQRTFEGKNWHRILDRKREAIEAAFTEDSSECLKVPPYSIMIESLMVGSLIVDFSAQHDGQRSDAELQERVKTFEFPKVMSLYDEEDEEDDDGPEHQMKFGGDRWADMTPEHHDEIEAAFLADTSAATGALQDEIAVQDIRADADEGLTVDYSLLDKDRDPEEVQEQVDAYAYPAVWALYQRLAGLDAAAPIHQVRFRGERWADIMPGAEEAIRQAFAEDTADALGIAPQQVIPDEIRYEKGLTVPYTVLDCSLDGDEVDAKAEDYHYPNTWALYDRLVAEAVGAAYQKSFEGEHWETVLHAARPEVSEAFCTDTANAVKSEPGDVDPCSVDTDQNRLLVSYNVGDSQQRADEVRADTQEYPYPEVWALYQLVIAEEAEGTRKLSQTFDGEAWDAINAEMPEQVREAFTEDVSVATRVNPACVTIRDIKTSKKGMTVEYGIVREEGQSAYATRKAAKNFDYPVTWSLYEANKKSAPGHALSGVGEGESAIFERRFEGDDWDIWEGCREELSDAFRADTARVLGVPKQSVRIISIEIGSPNVKYQLVDPPCEDREIERRMEEDELPEVMDLYRRCTRAEAEGATPALQDLEAMPPKVFDGDEWGFVMANQRAELEKAFVKDTADALGVSDDQVRVKEMKVGPYALRVQYSVRDCPSDEAAAQATVEDYAYPSMWEIYPDEEDLGNCQKTFDGTGWEAIVASREDDVRAAFAKDVAEALKAGEQSWVKSVHANAEGLEVRYNVTSEACDSEQIMEMQQEYGYPNTWALYEEDEGNWVTTSHQLGFEGEDWVYWQDKMPELQEAFVSCTAELFHLRPEHITNTKYTLGSLIVDFEFTHPARMSEEEIRRQLVTCPYEPVWELYGYHPWVPTEVTETTHNICFEGPGWATVLESQREELEECFKQGTAAALEVEPSDVRIDSADCAEECLFIRTTVTHHIFQDNELLQEQLTRYPYEEVWKLYAEDPNQSWTVTSHQVGFDGDDWMYIVSAKKE ALEKAFRTCTGESLDLTDEHITNIVFEANEAALLTTFEVKHPKEQSEKEVNRRLAECDYMRVWELYIDHPYNPEENEVTSHEIGFEGDEWNKVI
29) Informação para a SEQ ID NO: 29
Lci7 Seqüência de nucleotídeos do gene completo.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 1641
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasid) Localização: Lc±7A (303) ...(1736)
ATGGACGCAACTGAGCTGAAGAACAAGGGGAACGAAGAGTTCTCCGCCGGCCGCTATGTGGAGGCAGTGAACTACTTCTCAAAGGCGATCCAGTTGGATGAGCAGAACAGTGTCCTCTACAGCAACCGCTCCGCCTGCTTTGCAGCCATGCAAAAGTACAAGGACGCGCTGGACGACGCCGACAAGTGCATCTCGATCAAGCCGAATTGGGCCAAGGGCTACGTGCGCCGAGGCGCAGCTCTCCATGGCATGCGCCGCTACGACGATGCCATTGCCGCGTATGAAAAGGGGCTCAAGGTGGACCCTTCCAACAGCAGCTGCGCGCAGGGCGTGAAGGACGTGCAGGTAGCCAAGGCCCGCGAAGCACGTGACCCCATCGCTCGCGTCTTCACCCCGGAGGCGTTCCGAAAGATCCAAGAGAATCCCAAGCTGTCCCTACTTATGCTGCAGCCTGACTACGTGAAGATGGTGGACACCGTCATCCGCGACCCTTCGCAGGCCCGACTGTACATGGAAGACCAGCGCTTTGCCCTGACGCTCATGTACCTGAGCGGGATGAAGATTCCCAACGATGGTGATGACGAGGAGGAGGAACGTCCGTCTGCGAAGGCGGCGGAGACAGCGAAGCCAAAAGAGGAGAAGCTTCTCACCGACAACGAGAAGGAGGCCCTGGCGCTCAAGGAGGAGGGCAACAAGCTCTACCTCTCGAAAAAGTTTGAGGAGGCGCTGACCAAGTACCAAGAGGCGCAGGTGAAAGACCCCAAGAACACTTTGTACATTCTGAACGTGTCGGCCGTGTACTTCGAGCAGGGTGACTACGACAAGTGCATCGCCGAGTGCGAGCACGGTATCGAGCACGCTCGCGAGAACCACTGCGACTACACAATCATTGCGAAGCTCATGACCCGGAACGCCTTGTGCCTCCAAAAGCAGAGGAAGTACGAGGCCGCCATTGACCTTTACAAGCGCGCCCTTGTCGAGTGGCGTAACCCTGACACCCTCAAGAAGCTCACGGAGTGCGAGAAGGAGCACCAAAAGGCGGTGGAGGAAGCCTACATCGATCCTGAGATCGCGAAGCAGAAGAAAGACGAAGGTAACCAGTACTTCAAGGAGGATAAGTTCCCCGAGGCCGTGACAGCGTACACGGAGGCCATCAAACGCAACCCTGCCGAGCACACTTCCTACAGCAATCGCGCGGCCGCTTACATCAAGCTTGGAGCCTTCAACGACGCCCTCAAGGACGCGGAGAAGTGCATTGAGCTGAAGCCCGACTTTGTTAAGGGCTACGCGCGCAAGGGTCATGCTTACTTTTGGACCAAGCAGTACAACCGCGCGCTGCAGGCGTACGATGAGGGCCTCAAGGTGGACCCGAGCAACGCGGACTGCAAGGATGGGCGGTATCGCACAATCATGAAGATTCAGGAGATGGCATCTGGCCAGTCCGCGGATGGCGACGAGGCGGCGCGCCGCGCCATGGACGATCCTGAAATCGCGGCAATCATGCAAGATAGCTATATGCAACTAGTGCTGAAGGAGATGCAGAACGATCCCACGCGCATTCAGGAGTACATGAAGGACTCCGGCATCTCAGCGAAGATCAACAAGCTGATTTCAGCTGGCATCATTCGTTTTGGTCAGTAG
30) Informação para a SEQ ID NO: 30Lci7 Seqüência de aminóacidos completa.
I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 54 6
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
MDATELKNKGNEEFSAGRYVEAVNYFSKAIQLDEQNSVLYSNRSACFAAMQKYKDALDDADKCISIKPNWAKGYVRRGAALHGMRRYDDAIAAYEKGLKVDPSNSSCAQGVKDVQVAKAREARDPIARVFTPEAFRKIQENPKLSLLMLQPDYVKMVDTVIRDPSQARLYMEDQRFALTLMYLSGMKIPNDGDDEEEERPSAKAAETAKPKEEKLLTDNEKEALALKEEGNKLYLSKKFEEALTKYQEAQVKDPKNTLYILNVSAVYFEQGDYDKCIAECEHGIEHARENHCDYTIIAKLMTRNALCLQKQRKYEAAIDLYKRALVEWRNPDTLKKLTECEKEHQKAVEEAYIDPEIAKQKKDEGNQYFKEDKFPEAVTAYTEAIKRNPAEHTSYSNRAAAYIKLGAFNDALKDAEKCIELKPDFVKGYARKGHAYFWTKQYNRALQAYDEGLKVDPSNADCKDGRYRTIMKIQEMASGQSADGDEAARRAMDDPEIAAIMQDSYMQLVLKEMQNDPTRIQEYMKDSGISAKINKLISAGIIRFGQ
31) Informação para a SEQ ID NO: 31
Lci7A Seqüência de nucleotídeos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 14 34
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
AATTGGGCCAAGGGCTACGTGCGCCGAGGCGCAGCTCTCCATGGCATGCGCCGCTACGACGATGCCATTGCCGCGTATGAAAAGGGGCTCAAGGTGGACCCTTCCAACAGCAGCTGCGCGCAGGGCGTGAAGGACGTGCAGGTAGCCAAGGCCCGCGAAGCACGTGACCCCATCGCTCGCGTCTTCACCCCGGAGGCGTTCCGAAAGATCCAAGAGAATCCCAAGCTGTCCCTACTTATGCTGCAGCCTGACTACGTGAAGATGGTGGACACCGTCATCCGCGACCCTTCGCAGGCCCGACTGTACATGGAAGACCAGCGCTTTGCCCTGACGCTCATGTACCTGAGCGGGATGAAGATTCCCAACGATGGTGATGACGAGGAGGAGGAACGTCCGTCTGCGAAGGCGGCGGAGACAGCGAAGCCAAAAGAGGAGAAGCTTCTCACCGACAACGAGAAGGAGGCCCTGGCGCTCAAGGAGGAGGGCAACAAGCTCTACCTCTCGAAAAAGTTTGAGGAGGCGCTGACCAAGTACCAAGAGGCGCAGGTGAAAGACCCCAAGAACACTTTGTACATTCTGAACGTGTCGGCCGTGTACTTCGAGCAGGGTGACTACGACAAGTGCATCGCCGAGTGCGAGCACGGTATCGAGCACGCTCGCGAGAACCACTGCGACTACACAATCATTGCGAAGCTCATGACCCGGAACGCCTTGTGCCTCCAAAAGCAGAGGAAGTACGAGGCCGCCATTGACCTTTACAAGCGCGCCCTTGTCGAGTGGCGTAACCCTGACACCCTCAAGAAGCTCACGGAGTGCGAGAAGGAGCACCAAAAGGCGGTGGAGGAAGCCTACATCGATCCTGAGATCGCGAAGCAGAAGAAAGACGAAGGTAACCAGTACTTCAAGGAGGATAAGTTCCCCGAGGCCGTGACAGCGTACACGGAGGCCATCAAACGCAACCCTGCCGAGCACACTTCCTACAGCAATCGCGCGGCCGCTTACATCAAGCTTGGAGCCTTCAACGACGCCCTCAAGGACGCGGAGAAGTGCATTGAGCTGAAGCCCGACTTTGTTAAGGGCTACGCGCGCAAGGGTCATGCTTACTTTTGGACCAAGCAGTACAACCGCGCGCTGCAGGCGTACGATGAGGGCCTCAAGGTGGACCCGAGCAACGCGGACTGCAAGGATGGGCGGTATCGCACAATCATGAAGATTCAGGAGATGGCATCTGGCCAGTCCGCGGATGGCGACGAGGCGGCGCGCCGCGCCATGGACGATCCTGAAATCGCGGCAATCATGCAAGATAGCTATATGCAACTAGTGCTGAAGGAGATGCAGAACGATCCCACGCGCATTCAGGAGTACATGAAGGACTCCGGCATCTCAGCGAAGATCAACAAGCTGATTTCAGCTGGCATCATTCGTTTTGGTCAG
32) Informação para a SEQ ID NO: 32
Lci7A Seqüência de aminóacidos da proteína recombinante.I) Características da seqüência:
a) Comprimento: 478
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
NWAKGYVRRGAALHGMRRYDDAIAAYEKGLKVDPSNSSCAQGVKDVQVAKAREARDPIARVFTPEAFRKIQENPKLSLLMLQPDYVKMVDTVIRDPSQARLYMEDQRFALTLMYLSGMKIPNDGDDEEEERPSAKAAETAKPKEEKLLTDNEKEALALKEEGNKLYLSKKFEEALTKYQEAQVKDPKNTLYILNVSAVYFEQGDYDKCIAECEHGIEHARENHCDYTIIAKLMTRNALCLQKQRKYEAAIDLYKRALVEWRNPDTLKKLTECEKEHQKAVEEAYIDPEIAKQKKDEGNQYFKEDKFPEAVTAYTEAIKRNPAEHTSYSNRAAAYIKLGAFNDALKDAEKCIELKPDFVKGYARKGHAYFWTKQYNRALQAYDEGLKVDPSNADCKDGRYRTIMKIQEMASGQSADGDEAARRAMDDPEIAAIMQDSYMQLVLKEMQNDPTRIQEYMKDSGISAKINKLISAGIIRFGQ
33) Informação para a SEQ ID NO: 33
Lci8 Seqüência de nucleotídeos do gene completo.
a) Comprimento: 3552
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: Lc±8A-I (580)...(3723)
ATGTGGAGCTTTCTGAACGATGTACGGGAGTCGGTGCGGCAGGTAGTCGCGCCTCCTCCCCGCATGAGCAGCGCAGCTAGCTCCACCACCACCGCCATGCCTATGACGGCGAATGCGAGGGAGATGGGCTTCGAGGAGGCAGTGGATCAACTGACAACTGGGCTGCTTAGCTTATGGCGCAAGGTTGACCAGACAGCCACTAAGGTCCTTCGCCAAGCCTTCGACGGAGCCGTCTCACTACGGGAGGAGGCCGTTCCACAGCTTTTTACCTTGACAGCAGAGGCGCGCGCGTCCCTCTCAGAGGACGAGCTCCTGGAGCTCCTCATAGATGCCGTCTCGCAGGCGACCGATCGCACGCATCAGGCGCTCGATGAGGCGAATTTTCTCTTGAGCCTCGGCATTGAAGAACAAATCGCGCACACGAAAGACTACGCGGGGTGCTATGAGTGGTGGGATCGAACAGTGAACCGCCGCCTCATCGTCTGCCAAGAGGTGTTGCAGGCCCGCTTCGCCGACACCTCTTCTACACCACAGCACATGGCAACGGTGATGGCGCTGCGCGCCCAAATGGATGTGATTCGACGCGCCTCGACCCAGCCACTGGCCGCTGTCGCCGCTCGCGGACGCCTTCTCGAAGACGAGCGCTACGACTTGCTCAAATCTCTCCCCGCAGTGTTTCCCCTCGAAGGAGGCGTGCAGCCCGCACACGTCAGCTTCACGGCACCCGCTGATGCGGCCTCCACCCCCCACCAGCCCACTACCGCACCCCCTAGTGAAGCTTCTTATACGCCCACCGTGGAGAGCGTGGTTGCTGCCGTGCCTCGTGACTCCTACATACCTCAGTTTAGGCCCTTTAAAGCCTCTTCAGCAAGCGCTGCCGCCGTTCCGCTAACCTGTTCCTCTACCGCTACTCTTCAAGCCTTTGACTCCACTCACTGCGAAGCGCAGCCTGCCGCTGCACACGCATCTCCATCACAGACGCAACCATCCTCTGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGCGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGCGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGCGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACACCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCTCGTGAGGGGGTCGGTGTGGTGGAGGGAGAGGAGAGTGCGGCGCGGGCGAAAGTATCGAGGGAGGCCCAGGAGGTCTCTGCAGCACTGTACGGCGAGGTGATCATGGGCTCCCAGGTGATGCAAAAGGGGATGCACACGCGGTCCTGTAGTCATAATGCGATGCTGACCCCTGCGGGGACTGTAATCGACGATGACGGGTGGGCCGAAGATGACGGCTTTGAGGAGGTAAACATGGCTCAGTTCACAAAATATCTCGGCTGCCCACAAAGACGCACTAGTTGGGGCGGTGCCGACCCGTCGTTCTCGTCATCACCGCTTTCTGCCTACCCGCAAGCATACACACCAGCGTCTGTCCAGCGGGATGCACCGCTTTCGCGCAAGAAGCTCTCGCCGCCGATAACGCCAGTGTCTGGTGCGCAACAGGCCGGAGTGACAGAGGTGGTCACTCCCACTGTGGGCCGTCGGACAGGTGGAATGAGTTTGCGTAAGAAATCCCCGACTGTGCGGGTGGCGACGGACGGAGCAACTCCCGTTTCTGCATTCCAACCTCGCGGCTCTATCGGCAGTAGTAGCAGTATGAGCAGCCCTTACGGCGGCGCCGCGAATGCTGCGTCCGGCGCAGCTGGATTGAGACCTGCACCTCGGCAGAGTGTCTTCTGTAGCCCTTCGGCAGTGAGCAAGCAATCGAAACGCCAGGTGCAACTCGAGGATGACGATAAATGGGATGAGGATTGGTAG
34) Informação para a SEQ ID NO: 34Lci8 Seqüência de aminoácidos completa.
a) Comprimento: 1183
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
MWSFLNDVRESVRQWAPPPRMSSAASSTTTAMPMTANAREMGFEEAVDQLTTGLLSLWRKVDQTATKVLRQAFDGAVSLREEAVPQLFTLTAEARASLSEDELLELLIDAVSQATDRTHQALDEANFLLSLGIEEQIAHTKDYAGCYEWWDRTVNRRLIVCQEVLQARFADTSSTPQHMATVMALRAQMDVIRRASTQPLAAVAARGRLLEDERYDLLKSLPAVFPLEGGVQPAHVSFTAPADAASTPHQPTTAPPSEASYTPTVESWAAVPRDSYIPQFRPFKASSASAAAVPLTCSSTATLQAFDSTHCEAQPAAAHASPSQTQPSSEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQAHLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREGVGWEGEESAARAKVSREAQEVSAALYGEVIMGSQVMQKGMHTRSCSHNAMLTPAGTVIDDDGWAEDDGFEEVNMAQFTKYLGCPQRRTSWGGADPSFSSSPLSAYPQAYTPASVQRDAPLSRKKLSPPITPVSGAQQAGVTEWTPTVGRRTGGMSLRKKSPTVRVATDGATPVSAFQPRGSIGSSSSMSSPYGGAANAASGAAGLRPAPRQSVFCSPSAVSKQSKRQVQLEDDDKWDEDW
35) Informação para a SEQ ID NO: 35
Lci8A-I Seqüência de nucleotideos dó fragmento gênico quecodifica a proteína recombinante.
a) Comprimento: 3144
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasiAATTTTCTCTTGAGCCTCGGCATTGAAGAACAAATCGCGCACACGAAAGACTACGCGGGGTGCTATGAGT
GGTGGGATCGAACAGTGAACCGCCGCCTCATCGTCTGCCAAGAGGTGTTGCAGGCCCGCTTCGCCGACAC
CTCTTCTACACCACAGCACATGGCAACGGTGATGGCGCTGCGCGCCCAAATGGATGTGATTCGACGCGCC
TCGACCCAGCCACTGGCCGCTGTCGCCGCTCGCGGACGCCTTCTCGAAGACGAGCGCTACGACTTGCTCA
AATCTCTCCCCGCAGTGTTTCCCCTCGAAGGAGGCGTGCAGCCCGCACACGTCAGCTTCACGGCACCCGC
TGATGCGGCCTCCACCCCCCACCAGCCCACTACCGCACCCCCTAGTGAAGCTTCTTATACGCCCACCGTG
GAGAGCGTGGTTGCTGCCGTGCCTCGTGACTCCTACATACCTCAGTTTAGGCCCTTTAAAGCCTCTTCAG
CAAGCGCTGCCGCCGTTCCGCTAACCTGTTCCTCTACCGCTACTCTTCAAGCCTTTGACTCCACTCACTG
CGAAGCGCAGCCTGCCGCTGCACACGCATCTCCATCACAGACGCAACCATCCTCTGAGGAGCAGGCACGC
CTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGCGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGA
GCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGG
CTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGCGAGGCGGAGGA
GCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGG
CTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGCG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGA
GCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGG
CTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGA
GCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGG
CTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGA
GCAGGCACACCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGC
CTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGA
GCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGG
CTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGA
GCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGC
CTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGA
GCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGC
CTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTG
AGGCGGAGGAGCAGGCACGCCTTGCCCGTGAGGCGGAGGAGCAGGCACGGCTCGCTCGTGAGGGGGTCGG
TGTGGTGGAGGGAGAGGAGAGTGCGGCGCGGGCGAAAGTATCGAGGGAGGCCCAGGAGGTCTCTGCAGCA
CTGTACGGCGAGGTGATCATGGGCTCCCAGGTGATGCAAAAGGGGATGCACACGCGGTCCTGTAGTCATA
ATGCGATGCTGACCCCTGCGGGGACTGTAATCGACGATGACGGGTGGGCCGAAGATGACGGCTTTGAGGA
GGTAAACATGGCTCAGTTCACAAAATATCTCGGCTGCCCACAAAGACGCACTAGTTGGGGCGGTGCCGAC
CCGTCGTTCTCGTCATCACCGCTTTCTGCCTACCCGCAAGCATACACACCAGCGTCTGTCCAGCGGGATG
CACCGCTTTCGCGCAAGAAGCTCTCGCCGCCGATAACGCCAGTGTCTGGTGCGCAACAGGCCGGAGTGAC
AGAGGTGGTCACTCCCACTGTGGGCCGTCGGACAGGTGGAATGAGTTTGCGTAAGAAATCCCCGACTGTG
CGGGTGGCGACGGACGGAGCAACTCCCGTTTCTGCATTCCAACCTCGCGGCTCTATCGGCAGTAGTAGCA
GTATGAGCAGCCCTTACGGCGGCGCCGCGAATGCTGCGTCCGGCGCAGCTGGATTGAGACCTGCACCTCG
GCAGAGTGTCTTCTGTAGCCCTTCGGCAGTGAGCAAGCAATCGAAACGCCAGGTGCAACTCGAG
36) Informação para a SEQ ID NO: 36
Lci8A-I Seqüência de aminóacidos da proteína recombinante.
a) Comprimento: 1048
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
NFLLSLGIEEQIAHTKDYAGCYEWWDRTVNRRLIVCQEVLQARFADTSSTPQHMATVMALRAQMDVIRRASTQPLAAVAARGRLLEDERYDLLKSLPAVFPLEGGVQPAHVSFTAPADAASTPHQPTTAPPSEASYTPTVES WAAVPRDSYIPQFRPFKASSASAAAVPLTCSSTATLQAFDSTHCEAQPAAAHASPSQTQPSSEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLARE AE EQARL ARE AE EQ ARLARE AE EQARLARE AE EQARLARE AE EQ ARLARE AE E QARLAREAE EQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQAHLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREAEEQARLAREGVGWEGEESAARAKVSREAQEVSAALYGEVIMGSQVMQKGMHTRSCSHNAMLTPAGTVIDDDGWAEDDGFEEVNMAQFTKYLGCPQRRTSWGGADPSFSSSPLSAYPQAYTPASVQRDAPLSRKKLSPPITPVSGAQQAGVTEWTPTVGRRTGGMSLRKKSPTVRVATDGATPVSAFQPRGSIGSSSSMSSPYGGAANAASGAAGLRPAPRQSVFCSPSAVSKQSKRQVQLE
37) Informação para a SEQ ID NO: 37
Lci9A Seqüência de nucleotídeos do fragmento gênicocompleto.
a) Comprimento: 24 00
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: Lc±9A-I (2)... (2398)
Lci9A-II(2)...(1099)
GGATCCAAAGAATTGCCGACCTCCTGAGAGAGAACGTGTGACGCGCTTGACTGGTACTGCTGCTGCCGAG
AAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTG
CCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGG
TGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGT
GCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCG
CGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTT
TGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTC
GGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTG
GGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTC
TGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCT
GCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCA
AGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGA
GAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCG
CCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCG
GTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCC
TGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGCAGGCCCCGTCGACCGCCTTCGGTAAGGCCCCT
CCAGGCCCAAGTGCCTTCGGCCAGACACCGCCGGCGGGAGCTGCGCAGCCGGTCGCTGGAGGGTTTGGAC
AGGCCCCGTCGACCGCCTTCGGTAAGGCCCCTCCAGGCCCAAGTGCCTTCGGCCAGACACCGCCGGCGGG
AGCTGCGCAGCCGGTCGCTGGAGGGTTTGGACAGGCCCCGTCGACCGCCTTCGGTAAGGCCCCTCCAGGC
CCAAGTGCCTTCGGCCAGACACCGCCGGCGGGAGCTGCGCAGCCGGTCGCTGGAGGGTTTGGACAGGCCC
CGTCGACCGCCTTCGGTAAGGCCCCTCCAGGCCCAAGTGCCTTCGGCCAGACACCGCCGGCGGGAGCTGC
GCAGCCGGTCGCTGGAGGGTTTGGACAGGCCCCGTCGACCGCCTTCGGTAAGGCCCCTCCAGGCCCAAGT
GCCTTCGGCCAGACACCGCCGGCGGGAGCTGCGCAGCCGGTCGCTGGAGGGTTTGGACAGGCCCCGTCGA
CCGCCTTCGGTAAGGCCCCTCCAGGCCCAAGTGCCTTCGGCCAGACACCGCCGGCGGGAGCTGCGCAGCC
GGTCGCTGGAGGGTTTGGACAGGCCCCGTCGACCGCCTTCGGTAAGGCCCCTCCAGGCCCAAGTGCCTTC
GGCCAGACACCGCCGGCGGGAGCTGCGCAGCCGGTCGCTGGAGGGTTTGGACAGGCCCCGTCGACCGCCT
TCGGTAAGGCCCCTCCAGGCCCAAGTGCCTTCGGCCAGACACCGCCGGCGGGAGCTGCGCAGCCGGTCGC
TGGAGGGTTTGGACAGGCCCCGTCGACCGCCTTCGGTAAGGCCCCTCCAGGCCCAAGTGCCTTCGGCCAG
ACACCGCCGGCGGGAGCTGCGCAGCCGGTCGCTGGAGGGTTTGGACAGGCCCCGTCGACCGCCTTCGGTA
AGGCCCCTCCAGGCCCAAGTGCCTTCGGCCAGACACCGCCGGCGGGAGCTGCGCAGCCGGTCGCTGGAGG
GTTTGGACAGGCCCCGTCGACCGCCTTCGGTAAGGCCCCTCCAGGCCCAAGTGCCTTCGGCCAGACACCG
CCGGCGGGAGCTGCGCAGCCGGTCGCTGGAGGGTTTGGACAGGCCCCGTCGACAGCCTTCGGTAAGGCAG
TGTGTGGGTTTGGAGCGGGCAGCGCGTGCGGCATCAGCGGCGGGTTCGGATCGGGTTCCACCACCGCGAG
CTTTTGCTCTGCAGCGACGCCAGTGTTCGGTCCTACAAGCGCATTTACGAGTGCGTTTGGTGGCGCTCCG
CAAGGCGGCGGCTTCTCGAG
38) Informação para a SEQ ID NO: 38
Lci9A Seqüência de aminóacidos da proteína codificada pelofragmento gênico.
a) Comprimento: 7 99
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasiDPKNCRPPERERVTRLTGTAAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQPVAGGFGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQPVAGGFGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQPVAGGFGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQ PVAGG FGQAPS TAFGKAP PG P SAFGQT P PAGAAQPVAGG FGQAPS TAFGKAP PG PSAFGQT P PAGAAQ PVAGGFGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQPVAGGFGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQPVAGGFGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQPVAGGFGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQPVAGGFGQAPSTAFGKAPPGPSAFGQTPPAGAAQPVAGGFGQAPSTAFGKAVCGFGAGSACGISGGFGSGSTTASFCSAATPVFGPTSAFTSAFGGAPQGGGFS
39) Informação para a SEQ ID NO: 39
Lci9A-II Seqüência de nucleotídeos do fragmento quecodifica a proteína recombinante.
a) Comprimento: 1098
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
GATCCAAAGAATTGCCGACCTCCTGAGAGAGAACGTGTGACGCGCTTGACTGGTACTGCTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGTTCGGCTTTGGCGCGGGTGCTGGTGCTGCCGAGAAGCCTGCCGGTGCGCCGGAGAGCAAGCCTGCCTCTGGTGGGCAGGCCCCGTCG
40) Informação para a SEQ ID NO: 40
Lci9A-II Seqüência de aminóacidos da proteína recombinante.
a) Comprimento: 366
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
DPKNCRPPERERVTRLTGTAAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGFGFGAGAGAAEKPAGAPESKPASGGQAPS
41) Informação para a SEQ ID NO: 41
LcilO Seqüência de nucleotídeos de CDS incompleta.
a) Comprimento: 54 69
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: LcilOA-I (1210)...(3816)
LcilOA-II(1210) . . . (2148)ftTGGCCCATTTACCTTTGGAGGGGTCTGTTGTCTGCTATGAGTTTCTGGACGCTAAAAGAAAGTGGCTATGGGGTGTTGGGGCTGTTACTCACTCTGATGACCGTGTGTGCGTAATCAGCCAGTGGATGGGAGCACCAGTGGATAAAGCCATGACTGCGAAGCTAGAGAGTGAGGCCGCATCTTCGAAGGCTGAGGCAAAGACCCACCAAGATCGTCTCCTTGCCATTCGAGAACGTATTGAGTCACAGAGCTGTGGAACTTCAAAGGAGGAGAAGGAGCGAACATCAGAGGAGTTGTCAGAGTGCCTTGTCTTGATTGGCAAGCATCGAAATCGCTCTCGTTCGTTGTTGGCTGACCTGGAGATAATTAAAGGGCCGTCGACAGTTCAGGTGAAATGCCAACAGTTTACCCCTGCGTCTTCTTCCATAGCAATCCTCCGCAGTTCTATTCTGCGAGTCATCTCGCATGTGACAACCCCGTCTCTCGTGCTTTCTTCAGAGGAAGTAGAGTCTATTGAGAAGGCGGTGACGCATACCCACAGCCAGCTCAACAGCGAGCTTCACAAACTCCGCGCCACCGTTGAGGCAACGGAAATAGAAAGCAACGAGTTGCGCGATCAGATTCGCAACCTCGAGGAGCAGCTGAAACGTGTGAAGACTACATTCGAACCTGTACGAATCTCTGATGGTGGAGAGAGCGGATCTGCATTCCCTGAAAAACTGAGAGAGCACGACCTTTTGAGCTTGCGGGGTGCATGGGACAGCAGCACAGCGTTGGTAATGACCGAGCATACTATCAAATTTCCTTGGGATGATGGGGATACCCTGTTGCATCACAAGCCAGAGGAAACGAAATCCGTCTTTGCCGCGGAGGCTGCCTTCGCATGTTGTGTGCCGATCCAGTGCGTGACGAATCCGAAAATGACAACACATGGAAAGCACCTTTCTGCTGAATTCTCTGTCAGTCACCCCGAAACCGTGACAACAAAGGAAATTGATCAGAGGCTCGCAAGCTACGCGTTTCCATCCATGCACCTCCTTCATGAGGAGCCTCTGGGTGTGAAAACTGGCCTCGACAGGGCTATCGAAGGCCTTGAGCACGCGCTCGGGATTCCAGAAGGTAAGCATGAAGGTCTCTACTTCGACGAATTCATGGAAAACATGCCGGACACCACTTTCAGCAACGACAAAGATGCGTACGAAAGTGAAATTGGTGACTTGCTCATGCTTCTCGACAAGCTCAATAACGAGAACCGCTCACTACAGTACACTCTAGACAAATCTGCTGCCGAGTTGAAGAGGCAGGTGTCAGAGGCTCAGAAAGATCACGACGCACTGAATACCGAGATTGCTCGGCTACGAAATATTGTCTCAAAGCTTAAGGATCTTGCAGAACAGCAGGAGACAGAACTCGTGAGAAGCCGCGTCCAGACGCAACGGGCTGAAGAAGCGCGCTTCCACTACAACCTTGCCCCACCGGCCAACGACTCACAAGACGCAGAGTACGCAGTTACAATGCAAGAGTACAAGGATCAAAAAGAGGCCACCGATAACGCTCAAAGGGCACTCGTGGAAGAGAAAGCCAAGGCGGAACAAATGCATCACCTCCTGAAAATGCATGAGCAGCAGTCTGCCCAAAACGCGAAACGGCTACGCTCCCTACAAGACGCTTTTGCAGCCGAAACCCAACAAACCGCTGAGAACTTTTGTGCACTCGAATGTGAACTCATTGACGTCCTCCTCCAGTTCAAAGCATCACAAGCACTCACCCAAGCTCTACATCACATCAACTCCCAACAGCAGGCAGAGCTTTTCTCATTCCGTGCGAGGCGGAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGCTGGAGCAGGCTCGCGAGGATGCTGCGCGCGGTGTAGCGGCGATTGAGGACAATGCTGCTGCTCTGGAGTCTGAGCTGCTGGATGTGTTGGCTGAGTTGAAGGCAGTGAAAGGTGAGAACGCTGCACTGAGGGCTGTGTGTGAGATGAAGGATGCCGCGGTTGCTGACCTCGAGAAGCACGACGTGCGCGCTAACAACAGCGATAAGGCGAAGCCGCAGACTACTTCGCGTCACACGAAGGTGTTTGAGGGCGAGGAGTGGGGCGCTGTTGTGGAGACGAAGCCGCACGCGCTTCACGACGCATTTGTGACGGATGTGTGCGCTGCATGCCGCGTCTGTCGCGATGACCTCTCTGAGATCGCGTTTGCGCTGGGGAGTCTGCAAGCGAGCGTGAGTGTGACGCACAACAGTGACATCAGCTGCGACGATATTGCGAAGCTTGTGGAGGAATACCACTATCCCAACGTGTGGGCCCTGTATGCGAAGCGGTTAGCGCCAAAGGATGGGCTTGATGAGGCCAAGGACGCGATCAGCGACCTTCAGCTCGCACTCGCCGCTAAGGAGGAGGATGCCGCCAGGGTTGCTGAGAAACTGCACGAGGAGCGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGACGCGGCCGTGGAGCAGCTGGCGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGCTGGAGCAGGCTCGCGAGGATGCTGCGCGCGGTGTAGCGGCGATTGAGGACAATGCTGCTGCTCTGGAGTCTGAGCTGCTGGATGTGTTGGCTGAGTTGAAGGCAGTGAAAGGTGAGAACGCTGCACTGAGGGCTGTGTGTGAGATGAAGGATGCCGCGGTTGCTGACCTCGAGAAGCACGACGTGCGCGCTAACAACAGCGATAAGGCGAAGCCGCAGACTACTTCGCGTCACACGAAGGTGTTTGAGGGCGAGGAGTGGGGCGCTGTTGTGGAGACGAAGCCGCACGCGCTTCACGACGCATTTGTGACGGATGTGTGCGCTGCATGCCGCGTCTGTCGCGATGACCTCTCTGAGATCGCGTTTGCGCTGGGGAGTCTGCAAGCGAGCGTGAGTGTGACGCACAACAGTGACATCAGCTGCGACGATATTGCGAAGCTTGTGGAGGAATACCACTATCCCAACGTGTGGGCCCTGTATGCGAAGCGGTTGGCGCCAAAGGATGGGCTTGATGAGGCCAAGGACGCGATCAGCGACCTTCAGCTCGCACTCGCCGCTAAGGAGGAGGATGCCGCCAGGGTTGCTGAGAAACTGCACGAGGAGCGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGACGCGGCCGTGGAGCAGCTGGCGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGAGGCGGCCGTGGAGCAGCTGGTGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGACGCGGCCGTGGAGCAGCTGGCGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCGGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGACGCGGCCGTGGAGCAGCTGGCGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGACGCGGCCGTGGAGCAGCTGGCGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCATGCCGGCAAGGCCGGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGACGCGGCCGTGGAGCAGCTGGTGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGACGCGGCCGTGGAGCAGCTGGTGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCAACGGTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCG
42) Informação para a SEQ ID NO: 42
LcilO Seqüência de aminóacidos de CDS incompleta.
a) Comprimento: 1823
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
MAHLPLEGSWCYEFLDAKRKWLWGVGAVTHSDDRVCVISQWMGAPVDKAMTAKLESEAASSKAEAKTHQDRLLAIRERIESQSCGTSKEEKERTSEELSECLVLIGKHRNRSRSLLADLEIIKGPSTVQVKCQQFTPASSSIAILRSSILRVISHVTTPSLVLSSEEVESIEKAVTHTHSQLNSELHKLRATVEATEIESNELRDQIRNLEEQLKRVKTTFEPVRISDGGESGSAFPEKLREHDLLSLRGAWDSSTALVMTEHTIKFPWDDGDTLLHHKPEETKSVFAAEAAFACCVPIQCVTNPKMTTHGKHLSAEFSVSHPETVTTKEIDQRLASYAFPSMHLLHEEPLGVKTGLDRAIEGLEHALGIPEGKHEGLYFDEFMENMPDTTFSNDKDAYESEIGDLLMLLDKLNNENRSLQYTLDKSAAELKRQVSEAQKDHDALNTEIARLRNIVSKLKDLAEQQETELVRSRVQTQRAEEARFHYNLAPPANDSQDAEYAVTMQEYKDQKEATDNAQRALVEEKAKAEQMHHLLKMHEQQSAQNAKRLRSLQDAFAAETQQTAENFCALECELIDVLLQFKASQALTQALHHINSQQQAELFSFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEELEQAREDAARGVAAIEDNAAALESELLDVLAELKAVKGENAALRAVCEMKDAAVADLEKHDVRANNSDKAKPQTTSRHTKVFEGEEWGAWETKPHALHDAFVTDVCAACRVCRDDLSEIAFALGSLQASVSVTHNSDISCDDIAKLVEEYHYPNVWALYAKRLAPKDGLDEAKDAISDLQLALAAKEEDAARVAEKLHEERAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAE RALEPQQIADEPLYAVTLEEYLGKDAAVEQLAAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEELEQAREDAARGVAAIEDNAAALESELLDVLAELKAVKGENAALRAVCEMKDAAVADLEKHDVRANNS DKAKPQTTSRHTKVFEGEEWGAWETKP HALHDAFVTDVCAACRVCRDDLSEIAFALGSLQASVSVTHNSDISCDDIAKLVEEYHYPNVWALYAKRLAPKDGLDEAKDAISDLQLALAAKEEDAARVAEKLHEERAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAE RALE PQQIADEPLYAVTLEEYLGKDAAVEQLAAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAE RALEPQQIADEPLYAVTLEEYLGKEAAVEQLVAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRN AAL EARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEEYLGKDAAVEQLAAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEEYLGKDAAVEQLAAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEEYLGKDAAVEQLAAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRN AAL EARDADGTLPMPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEEYLGKDAAVEQLVAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEEYLGKDAAVEQLVAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRNATVEARDADGTLPVP
43) Informação para a SEQ ID NO: 43
LcilOA-I Seqüência de nucleotideos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.
a) Comprimento: 2607
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasiATTGGTGACTTGCTCATGCTTCTCGACAAGCTCAATAACGAGAACCGCTCACTACAGTACACTCTAGACAAATCTGCTGCCGAGTTGAAGAGGCAGGTGTCAGAGGCTCAGAAAGATCACGACGCACTGAATACCGAGATTGCTCGGCTACGAAATATTGTCTCAAAGCTTAAGGATCTTGCAGAACAGCAGGAGACAGAACTCGTGAGAAGCCGCGTCCAGACGCAACGGGCTGAAGAAGCGCGCTTCCACTACAACCTTGCCCCACCGGCCAACGACTCACAAGACGCAGAGTACGCAGTTACAATGCAAGAGTACAAGGATCAAAAAGAGGCCACCGATAACGCTCAAAGGGCACTCGTGGAAGAGAAAGCCAAGGCGGAACAAATGCATCACCTCCTGAAAATGCATGAGCAGCAGTCTGCCCAAAACGCGAAACGGCTACGCTCCCTACAAGACGCTTTTGCAGCCGAAACCCAACAAACCGCTGAGAACTTTTGTGCACTCGAATGTGAACTCATTGACGTCCTCCTCCAGTTCAAAGCATCACAAGCACTCACCCAAGCTCTACATCACATCAACTCCCAACAGCAGGCAGAGCTTTTCTCATTCCGTGCGAGGCGGAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGCTGGAGCAGGCTCGCGAGGATGCTGCGCGCGGTGTAGCGGCGATTGAGGACAATGCTGCTGCTCTGGAGTCTGAGCTGCTGGATGTGTTGGCTGAGTTGAAGGCAGTGAAAGGTGAGAACGCTGCACTGAGGGCTGTGTGTGAGATGAAGGATGCCGCGGTTGCTGACCTCGAGAAGCACGACGTGCGCGCTAACAACAGCGATAAGGCGAAGCCGCAGACTACTTCGCGTCACACGAAGGTGTTTGAGGGCGAGGAGTGGGGCGCTGTTGTGGAGACGAAGCCGCACGCGCTTCACGACGCATTTGTGACGGATGTGTGCGCTGCATGCCGCGTCTGTCGCGATGACCTCTCTGAGATCGCGTTTGCGCTGGGGAGTCTGCAAGCGAGCGTGAGTGTGACGCACAACAGTGACATCAGCTGCGACGATATTGCGAAGCTTGTGGAGGAATACCACTATCCCAACGTGTGGGCCCTGTATGCGAAGCGGTTAGCGCCAAAGGATGGGCTTGATGAGGCCAAGGACGCGATCAGCGACCTTCAGCTCGCACTCGCCGCTAAGGAGGAGGATGCCGCCAGGGTTGCTGAGAAACTGCACGAGGAGCGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGTACCTGGGCAAGGACGCGGCCGTGGAGCAGCTGGCGGCGGAGCTGGAGGAGCAGAGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGCTGGAGCAGGCTCGCGAGGATGCTGCGCGCGGTGTAGCGGCGATTGAGGACAATGCTGCTGCTCTGGAGTCTGAGCTGCTGGATGTGTTGGCTGAGTTGAAGGCAGTGAAAGGTGAGAACGCTGCACTGAGGGCTGTGTGTGAGATGAAGGATGCCGCGGTTGCTGACCTCGAGAAGCACGACGTGCGCGCTAACAACAGCGATAAGGCGAAGCCGCAGACTACTTCGCGTCACACGAAGGTGTTTGAGGGCGAGGAGTGGGGCGCTGTTGTGGAGACGAAGCCGCACGCGCTTCACGACGCATTTGTGACGGATGTGTGCGCTGCATGCCGCGTCTGTCGCGATGACCTCTCTGAGATCGCGTTTGCGCTGGGGAGTCTGCAAGCGAGCGTGAGTGTGACGCACAACAGTGACATCAGCTGCGACGATATTGCGAAGCTTGTGGAGGAATACCACTATCCCAACGTGTGGGCCCTGTATGCGAAGCGGTTGGCGCCAAAGGATGGGCTTGATGAGGCCAAGGACGCGATCAGCGACCTTCAGCTCGCACTCGCCGCTAAGGAGGAGGATGCCGCCAGGGTTGCTGAGAAACTGCACGAGGAGCGGGCGGAGGCGGAGAGGCTTGCGAAGGAGGTGGCCGCCTTCCGCGCGAGGCGCAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAG
44) Informação para a SEQ ID NO: 44
LcilOA-I Seqüência de aminóacidos da proteína recombinante.
a) Comprimento: 8 69
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
IGDLLMLLDKLNNENRSLQYTLDKSAAELKRQVSEAQKDHDALNTEIARLRNIVSKLKDLAEQQETELVRSRVQTQRAEEARFHYNLAPPANDSQDAEYAVTMQEYKDQKEATDNAQRALVEEKAKAEQMHHLLKMHEQQSAQNAKRLRSLQDAFAAETQQTAENFCALECELIDVLLQFKASQALTQALHHINSQQQAELFSFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEELEQAREDAARGVAAIEDNAAALESELLDVLAELKAVKGENAALRAVCEMKDAAVADLEKHDVRANNSDKAKPQTTSRHTKVFEGEEWGAWETKPHALHDAFVTDVCAACRVCRDDLSEIAFALGSLQASVSVTHNSDISCDDIAKLVEEYHYPNVWALYAKRLAPKDGLDEAKDAISDLQLALAAKEEDAARVAEKLHEERAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEEYLGKDAAVEQLAAELEEQRAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAE RALE PQQIADEPLYAVTLEELEQAREDAARGVAAIEDNAAALESELLDVLAELKAVKGENAALRAVCEMKDAAVADLEKHDVRANNSDKAKPQTTSRHTKVFEGEEWGAWETKPHALHDAFVTDVCAACRVCRDDLSEIAFALGSLQASVSVTHNSDISCDDIAKL VEEYHYPNVWAL YAKRLAPKDGLDEAKDAISDLQLALAAKEEDAARVAEKLHEERAEAERLAKEVAAFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLE
45) Informação para a SEQ ID NO: 45LcilOA-II Seqüência de nucleotideos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.
a) Comprimento: 939
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
ATTGGTGACTTGCTCATGCTTCTCGACAAGCTCAATAACGAGAACCGCTCACTACAGTACACTCTAGACAAATCTGCTGCCGAGTTGAAGAGGCAGGTGTCAGAGGCTCAGAAAGATCACGACGCACTGAATACCGAGATTGCTCGGCTACGAAATATTGTCTCAAAGCTTAAGGATCTTGCAGAACAGCAGGAGACAGAACTCGTGAGAAGCCGCGTCCAGACGCAACGGGCTGAAGAAGCGCGCTTCCACTACAACCTTGCCCCACCGGCCAACGACTCACAAGACGCAGAGTACGCAGTTACAATGCAAGAGTACAAGGATCAAAAAGAGGCCACCGATAACGCTCAAAGGGCACTCGTGGAAGAGAAAGCCAAGGCGGAACAAATGCATCACCTCCTGAAAATGCATGAGCAGCAGTCTGCCCAAAACGCGAAACGGCTACGCTCCCTACAAGACGCTTTTGCAGCCGAAACCCAACAAACCGCTGAGAACTTTTGTGCACTCGAATGTGAACTCATTGACGTCCTCCTCCAGTTCAAAGCATCACAAGCACTCACCCAAGCTCTACATCACATCAACTCCCAACAGCAGGCAGAGCTTTTCTCATTCCGTGCGAGGCGGAACGCGGCGCTGGAGGCCCGCGACGCGGACGGCACGCTGCCCGTGCCGGCAAGGCCTGTGCCCGCGGGCGAGGCGGCGGAGCGCGCGCTGGAGCCGCAGCAGATCGCCGACGAGCCGCTGTACGCTGTGACGCTGGAGGAGCTGGAGCAGGCTCGCGAGGATGCTGCGCGCGGTGTAGCGGCGATTGAGGACAATGCTGCTGCTCTGGAGTCTGAGCTGCTGGATGTGTTGGCTGAGTTGAAGGCAGTGAAAGGTGAGAACGCTGCACTGAGGGCTGTGTGTGAGATGAAGGATGCCGCGGTTGCTGACCTCGAG
46) Informação para a SEQ ID NO: 46
LcilOA-II Seqüência de aminóacidos da proteínarecombinante.
a) Comprimento: 313
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
IGDLLMLLDKLNNENRSLQYTLDKSAAELKRQVSEAQKDHDALNTEIARLRNIVSKLKDLAEQQETELVRSRVQTQRAEEARFHYNLAPPANDSQDAEYAVTMQEYKDQKEATDNAQRALVEEKAKAEQMHHLLKMHEQQSAQNAKRLRSLQDAFAAETQQTAENFCALECELIDVLLQFKASQALTQALHHINSQQQAELFSFRARRNAALEARDADGTLPVPARPVPAGEAAERALEPQQIADEPLYAVTLEELEQAREDAARGVAAIEDNAAALESELLDVLAELKAVKGENAALRAVCEMKDAAVADLE
47) Informação para a SEQ ID NO: 47Lcill Seqüência de nucleotideos da CDS.
a) Comprimento: 2358
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: LcillA-I (357)... (2220)
LcillA-II (420)...(1568)LcillA-III (1548)...(2220)
ATGTACACCCGTGAGGAGCTACTGCGGATTGCAACACTCGCCAGCGCAATGGACCTGGGCCCAGAGGTGCTGCGCAAGTTCGACGTCATCGAAGTCGCCGAACCAGTCCCCGCCCCGAAGCGCCGCGAGGCAGAACCGAATTTCAAGGGCAGCGTGCTGACGGACAACTTCAGCACTAGCACCACGATCACTAACTCGGGTCCCAACGGTGGTGGCAACAGCGGCGGGAAGGGCGGCCATAACAGCGGCATGAACGGCGGCGGCAGCAGCAGCAGCAACCACACTGGCAGCTCCAGCACTCCGGCGTACGGTGCCGGCGGCGGCCGTGGCGGTGACAACCGCCGCGGCGGTGGCGGCAATGGTGGACGCGATGACAACAGCAACAGTAACAGTGTGAAGCAGTCCGGGTACGACCGCTTTGCGCCACCCGAGGGACGATTTAACCGCGGAAATCGCAATCAGGAGACCTTTGAGGAGGGCATCGAGTATGAGTTGCGGCAGAGCGCACTGCAGAAGAAACGCGTTGCCGAAACGATGGAGCGCGAGGATCGCAAGGGAGAGAACCTGAGGCAGGCCCTGGAGAAGTTCAAGCAGGAGGGCACCGACGCCGAGGCCGCAGAAGCGGAGAGGGAGACGGACGAGATTGAGCGGCTGCTGGCGGGCATCACAATGGTCGATGACGCGCCAAAGGCCGTGGTTCGCTCTCGCTTCTTCTCGGCCCAGGGCCCAACGGCTACCAGCGCCGAGCCTCCGGCGACCATGCAGCCATCGCCGCCGCCGCCACAAGCATCGACGACGCTGTCTTTTGGAGCCCCCGCGAGCAGCATTGCATCTTCCACGACAGGCGCGCCACAGGCGAGCGTGCTCCCGACGCCCGCCAACAGTGGAACGCAGGGCTACGCGAGAGGGCCGTGGTCATCTATGAAGAGCGACTCTAACCTCTGGAGCACCGCGCCGTCCATGGCAAGCGCGCTCAAGCAGTCTCTTCAGCACTCCTTGCCTCCGGCGGACGCGTCGCCGTCAGGTCAGATCAAGCCTCCGCAGCCTGCGTCGCAGCAGTCACAGCCATCCAGTTGTCCTGCGAGCACTTCTCACCAGGCAAAGAGCATGGACGCTGCGACTGCGAACGCCTCGGCCAACTCGACCGGTGCGCCGCCCGCCAGCGGGCCAGCCAGCTTTGGCGTTCCCGCGCCTGCACCAGCGAGCCCGCCCGCTCCCACGCAGAGCTCCGTACTCGGCCCTGCGAACGGACATAGCAGCACCAATATCGCCACTGCAATGGGCGCCAAGACTGGCGCATCGAGCAGTGCTGGACAGACGCAGGCGCCTCCTCACACGCCGCCCCAAACTCCGCCTCACAGTCAGCCGCAGCCATCTCGCCCGGCCCCAGCGACCGCCATCAAGGCAGCGCCGCGCAGTAGCGGGTCTAGCGGCGTTCCCACAGGCGCCTGGTCGGCGGCGGACCTGGAGCTTCTTCTGAAGAAAGGCGCCACCATGATCTCAAGCGCTCCGGCACCCCCGCCAAGCACTGCTACACCTGCCACGACGGCGCCGAAGACGCAGCCCATCACGGCGGCGGAGCTGGAGAGCATGCTCATGCAGCGGGCGCGCCAGGGCAGAGGAGCGACCGGCACTGGTATGAGCACTTTACCTCCCTCGCCTCCTCAGTTTCAGCAGCCACCTCCGCCGCAGCAGGCGCCGCTTCTTTTTGCGAACCCGTCGAAGACGCCGCCGATGCCGGCGAGCAGCAACCCTACCAGTGCGCCACTCTCCTCGCCACAGCAGCTCCCGGCCAGCATGAAGATGGCGCCAAACGGAGCGATGCTGCAGCCTAAGCAGCCGCATCAGCAGCAGCAACCGCTGCCTCCGCCGCCGCCGCCGATGCCGCCACAGATGCCCGCGCATTCTCAGCCGCAATCGCAGCCACAGCCACAGCCGCAGATGCAGCCTCAGATGCAACCGCAGCAGCACCAACCACCGTGGATGGCGATGCCGCGGCCGCCGCAGGCTCCGCCGGCACCACAGCCTAACGGTAATGGAAGTCCTATGCACAACACCCCGCCCCTGCAGCCGCTGGCTGCGAAGATGCCGCAGCCTGCTCCAATGATGCCGAATGGGCTCCAGATGCCCATGCAGATGAACGCTCAAGGGCAGTACTTTGTGGATCCGGCGCAGCTGCAGCGAGTGTACATGACTGGTCAGCCGATGATGTTCCGCCGCCCGGACGGGACTGTGTTTATGCAGGCACAGCCCATACCTCAACCACAGCCTCAGCAAGCACCGCCTCAGCAGCAGCCACCGTTCAACCCGTTCGGTACGAATGCGCAGTTTCTCTTCCAGCAGCAGCAGCGCCGCTAG
48) Informação para a SEQ ID NO: 48
Lcill Seqüência de aminóacidos da proteína completa.
a) Comprimento: 785
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
MYTREELLRIATLASAMDLGPEVLRKFDVIEVAEPVPAPKRREAEPNFKGSVLTDNFSTSTTITNSGPNGGGNSGGKGGHNSGMNGGGSSSSNHTGSSSTPAYGAGGGRGGDNRRGGGGNGGRDDNSNSNSVKQSGYDRFAPPEGRFNRGNRNQETFEEGIEYELRQSALQKKRVAETMEREDRKGENLRQALEKFKQEGTDAEAAEAERETDEIERLLAGITMVDDAPKAWRSRFFSAQGPTATSAEPPATMQPSPPPPQASTTLSFGAPASSIASSTTGAPQASVLPTPANSGTQGYARGPWSSMKSDSNLWSTAPSMASALKQSLQHSLPPADASPSGQIKPPQPASQQSQPS SCPASTSHQAKSMDAATANASANSTGAPPASGPASFGVPAPAPASPPAPTQSSVLGPANGHSSTNIATAMGAKTGASSSAGQTQAPPHTPPQTPPHSQPQPSRPAPATAIKAAPRSSGSSGVPTGAWSAADLELLLKKGATMISSAPAPPPSTATPATTAPKTQPITAAELESMLMQRARQGRGATGTGMSTLPPSPPQFQQPPPPQQAPLLFANPSKTPPMPASSNPTSAPLSSPQQLPASMKMAPNGAMLQPKQPHQQQQPLPPPPPPMPPQMPAHSQPQSQPQPQPQMQPQMQPQQHQPPWMAMPRPPQAPPAPQPNGNGSPMHNTPPLQPLAAKMPQPAPMMPNGLQMPMQMNAQGQYFVDPAQLQRVYMTGQPMMFRRPDGTVFMQAQPIPQPQPQQAPPQQQPPFNP
FGTNAQFLFQQQQRR
49) Informação para a SEQ ID NO: 49
LcillA-I Seqüência de nucleotídeos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.
a) Comprimento: 18 64
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
AATTTCAAGGGCAGCGTGCTGACGGACAACTTCAGCACTAGCACCACGATCACTAACTCGGGTCCCAACGGTGGTGGCAACAGCGGCGGGAAGGGCGGCCATAACAGCGGCATGAACGGCGGCGGCAGCAGCAGCAGCAACCACACTGGCAGCTCCAGCACTCCGGCGTACGGTGCCGGCGGCGGCCGTGGCGGTGACAACCGCCGCGGCGGTGGCGGCAATGGTGGACGCGATGACAACAGCAACAGTAACAGTGTGAAGCAGTCCGGGTACGACCGCTTTGCGCCACCCGAGGGACGATTTAACCGCGGAAATCGCAATCAGGAGACCTTTGAGGAGGGCATCGAGTATGAGTTGCGGCAGAGCGCACTGCAGAAGAAACGCGTTGCCGAAACGATGGAGCGCGAGGATCGCAAGGGAGAGAACCTGAGGCAGGCCCTGGAGAAGTTCAAGCAGGAGGGCACCGACGCCGAGGCCGCAGAAGCGGAGAGGGAGACGGACGAGATTGAGCGGCTGCTGGCGGGCATCACAATGGTCGATGACGCGCCAAAGGCCGTGGTTCGCTCTCGCTTCTTCTCGGCCCAGGGCCCAACGGCTACCAGCGCCGAGCCTCCGGCGACCATGCAGCCATCGCCGCCGCCGCCACAAGCATCGACGACGCTGTCTTTTGGAGCCCCCGCGAGCAGCATTGCATCTTCCACGACAGGCGCGCCACAGGCGAGCGTGCTCCCGACGCCCGCCAACAGTGGAACGCAGGGCTACGCGAGAGGGCCGTGGTCATCTATGAAGAGCGACTCTAACCTCTGGAGCACCGCGCCGTCCATGGCAAGCGCGCTCAAGCAGTCTCTTCAGCACTCCTTGCCTCCGGCGGACGCGTCGCCGTCAGGTCAGATCAAGCCTCCGCAGCCTGCGTCGCAGCAGTCACAGCCATCCAGTTGTCCTGCGAGCACTTCTCACCAGGCAAAGAGCATGGACGCTGCGACTGCGAACGCCTCGGCCAACTCGACCGGTGCGCCGCCCGCCAGCGGGCCAGCCAGCTTTGGCGTTCCCGCGCCTGCACCAGCGAGCCCGCCCGCTCCCACGCAGAGCTCCGTACTCGGCCCTGCGAACGGACATAGCAGCACCAATATCGCCACTGCAATGGGCGCCAAGACTGGCGCATCGAGCAGTGCTGGACAGACGCAGGCGCCTCCTCACACGCCGCCCCAAACTCCGCCTCACAGTCAGCCGCAGCCATCTCGCCCGGCCCCAGCGACCGCCATCAAGGCAGCGCCGCGCAGTAGCGGGTCTAGCGGCGTTCCCACAGGCGCCTGGTCGGCGGCGGACCTGGAGCTTCTTCTGAAGAAAGGCGCCACCATGATCTCAAGCGCTCCGGCACCCCCGCCAAGCACTGCTACACCTGCCACGACGGCGCCGAAGACGCAGCCCATCACGGCGGCGGAGCTGGAGAGCATGCTCATGCAGCGGGCGCGCCAGGGCAGAGGAGCGACCGGCACTGGTATGAGCACTTTACCTCCCTCGCCTCCTCAGTTTCAGCAGCCACCTCCGCCGCAGCAGGCGCCGCTTCTTTTTGCGAACCCGTCGAAGACGCCGCCGATGCCGGCGAGCAGCAACCCTACCAGTGCGCCACTCTCCTCGCCACAGCAGCTCCCGGCCAGCATGAAGATGGCGCCAAACGGAGCGATGCTGCAGCCTAAGCAGCCGCATCAGCAGCAGCAACCGCTGCCTCCGCCGCCGCCGCCGATGCCGCCACAGATGCCCGCGCATTCTCAGCCGCAATCGCAGCCACAGCCACAGCCGCAGATGCAGCCTCAGATGCAACCGCAGCAGCACCAACCACCGTGGATGGCGATGCCGCGGCCGC
50) Informação para a SEQ ID NO: 50
LcillA-I Seqüência de aminóacidos da proteína recombinante.
a) Comprimento: 621
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagâsi
NFKGSVLTDNFSTSTTITNSGPNGGGNSGGKGGHNSGMNGGGSSSSNHTGSSSTPAYGAGGGRGGDNRRGGGGNGGRDDNSNSNSVKQSGYDRFAPPEGRFNRGNRNQETFEEGIEYELRQSALQKKRVAETMEREDRKGENLRQALEKFKQEGTDAEAAEAERETDEIERLLAGITMVDDAPKAWRSRFFSAQGPTATSAEPPATMQPSPPPPQASTTLSFGAPASSIASSTTGAPQASVLPTPANSGTQGYARGPWSSMKSDSNLWSTAPSMASALKQSLQHSLPPADASPSGQIKPPQPASQQSQPSSCPASTSHQAKSMDAATANASANSTGAP PASGPAS FGVPAPAPASPPAPTQSSVLGPANGHSSTNIATAMGAKTGASSSAGQTQAPPHTPPQTPPHSQPQPSRPAPATAIKAAPRSSGSSGVPTGAWSAADLELLLKKGATMISSAPAPPPSTATPATTAPKTQPITAAELESMLMQRARQGRGATGTGMSTLPPSPPQFQQPPPPQQAPLLFANPSKTPPMPASSNPTSAPLSSPQQLPASMKMAPNGAMLQPKQPHQQQQPLPPPPPPMPPQMPAHSQPQSQPQPQPQMQPQMQPQQHQPPWMAMPRP
51) Informação para a SEQ ID NO: 51
LcillA-II Seqüência de nucleotídeos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.
a) Comprimento: 114 9
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
CCCAACGGTGGTGGCAACAGCGGCGGGAAGGGCGGCCATAACAGCGGCATGAACGGCGGCGGCAGCAGCAGCAGCAACCACACTGGCAGCTCCAGCACTCCGGCGTACGGTGCCGGCGGCGGCCGTGGCGGTGACAACCGCCGCGGCGGTGGCGGCAATGGTGGACGCGATGACAACAGCAACAGTAACAGTGTGAAGCAGTCCGGGTACGACCGCTTTGCGCCACCCGAGGGACGATTTAACCGCGGAAATCGCAATCAGGAGACCTTTGAGGAGGGCATCGAGTATGAGTTGCGGCAGAGCGCACTGCAGAAGAAACGCGTTGCCGAAACGATGGAGCGCGAGGATCGCAAGGGAGAGAACCTGAGGCAGGCCCTGGAGAAGTTCAAGCAGGAGGGCACCGACGCCGAGGCCGCAGAAGCGGAGAGGGAGACGGACGAGATTGAGCGGCTGCTGGCGGGCATCACAATGGTCGATGACGCGCCAAAGGCCGTGGTTCGCTCTCGCTTCTTCTCGGCCCAGGGCCCAACGGCTACCAGCGCCGAGCCTCCGGCGACCATGCAGCCATCGCCGCCGCCGCCACAAGCATCGACGACGCTGTCTTTTGGAGCCCCCGCGAGCAGCATTGCATCTTCCACGACAGGCGCGCCACAGGCGAGCGTGCTCCCGACGCCCGCCAACAGTGGAACGCAGGGCTACGCGAGAGGGCCGTGGTCATCTATGAAGAGCGACTCTAACCTCTGGAGCACCGCGCCGTCCATGGCAAGCGCGCTCAAGCAGTCTCTTCAGCACTCCTTGCCTCCGGCGGACGCGTCGCCGTCAGGTCAGATCAAGCCTCCGCAGCCTGCGTCGCAGCAGTCACAGCCATCCAGTTGTCCTGCGAGCACTTCTCACCAGGCAAAGAGCATGGACGCTGCGACTGCGAACGCCTCGGCCAACTCGACCGGTGCGCCGCCCGCCAGCGGGCCAGCCAGCTTTGGCGTTCCCGCGCCTGCACCAGCGAGCCCGCCCGCTCCCACGCAGAGCTCCGTACTCGGCCCTGCGAACGGACATAGCAGCACCAATATCGCCACTGCAATGGGCGCCAAGACTGGCGCATCGAGCAGTGCTGGACAGACGCAGGCGCCTCCTCACACGCCGCCCCAAACT
52) Informação para a SEQ ID NO: 52
LcillA-II Seqüência de aminóacidos da proteínarecombinante.a) Comprimento: 383
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
PNGGGNSGGKGGHNSGMNGGGSSSSNHTGSSSTPAY GAGGGRGGDNRRGGGGNGGRDDNSNSNSVKQSGYDRFAPPEGRFNRGNRNQETFEEGIEYELRQSALQKKRVAETMEREDRKGENLRQALEKFKQEGTDAEAAEAERETDEIERLLAGITMVDDAPKAWRSRFFSAQGPTATSAEPPATMQPSPPPPQASTTLSFGAPASSIASSTTGAPQASVLPTPANSGTQGYARGPWSSMKSDSNLWSTAPSMASALKQSLQHSLPPADASPSGQIKPPQPASQQSQPSSCPASTSHQAKSMDAATANASANSTGAPPASGPASFGVPAPAPASPPAPTQSSVLGPANGHSSTNIATAMGAKTGASSSAGQTQAPPHTPPQT
53) Informação para a SEQ ID NO: 53
LcillA-III Seqüência de nucleotideos do fragmento gênicoque codifica para a proteína recombinante.
a) Comprimento: 67 3
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
CCTCACACGCCGCCCCAAACTCCGCCTCACAGTCAGCCGCAGCCATCTCGCCCGGCCCCAGCGACCGCCATCAAGGCAGCGCCGCGCAGTAGCGGGTCTAGCGGCGTTCCCACAGGCGCCTGGTCGGCGGCGGACCTGGAGCTTCTTCTGAAGAAAGGCGCCACCATGATCTCAAGCGCTCCGGCACCCCCGCCAAGCACTGCTACACCTGCCACGACGGCGCCGAAGACGCAGCCCATCACGGCGGCGGAGCTGGAGAGCATGCTCATGCAGCGGGCGCGCCAGGGCAGAGGAGCGACCGGCACTGGTATGAGCACTTTACCTCCCTCGCCTCCTCAGTTTCAGCAGCCACCTCCGCCGCAGCAGGCGCCGCTTCTTTTTGCGAACCCGTCGAAGACGCCGCCGATGCCGGCGAGCAGCAACCCTACCAGTGCGCCACTCTCCTCGCCACAGCAGCTCCCGGCCAGCATGAAGATGGCGCCAAACGGAGCGATGCTGCAGCCTAAGCAGCCGCATCAGCAGCAGCAACCGCTGCCTCCGCCGCCGCCGCCGATGCCGCCACAGATGCCCGCGCATTCTCAGCCGCAATCGCAGCCACAGCCACAGCCGCAGATGCAGCCTCAGATGCAACCGCAGCAGCACCAACCACCGTGGATGGCGATGCCGCGGCCGC
54) Informação para a SEQ ID NO: 54
LcillA-III Seqüência de aminóacidos da proteínarecombinante.
a) Comprimento: 224
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
PHTPPQTPPHSQPQPSRPAPATAIKAAPRSSGSSGVPTGAWSAADLELLLKKGATMISSAPAPPPSTATPATTAPKTQPITAAELESMLMQRARQGRGATGTGMSTLPPSPPQFQQPPPPQQAPLLFANPSKTPPMPASSNPTSAPLSSPQQLPASMKMAPNGAMLQPKQPHQQQQPLPPPPPPMPPQMPAHSQPQSQPQPQ PQMQ PQMQ
PQQHQPPWMAMPRP
55) Informação para a SEQ ID NO: 55Lcil2 Seqüência de nucleotideos da CDS.
a) Comprimento: 7359
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: Lcil2A-I (4 57)...(3240)
Lcil2A-II (457) ... (2058)
ATGAGCACCGACAATGACATTGAGCGCCAGATCATGATGGAGATGGAGGCAGAGATCAGTCGATCGCAGGGGAATCGTCGCGATCCTTACACCAACCCGCCGCCCTTTGAACTCAGCTTTATCGAGGACGATCCCATGGAGGCGGCCCGGAAGGCAGAGGTGGACCGGATTCAGCGTGAAATCGAAGAGCGCCTCCGCCGAAAGCAGCAGCAGAAGCAGCGTGACTCTCTGGAGCTATCACCGAACTGCCCGGCCAATGAAGGTGAAATGAGTGCTGTCTACGACTCTTTACAGCAGCCCCAGAACGCTTCCTGGCCCGTTGGAGCCCATGATCGTCACGTGGTTCGCGCGTCGCTTAGCAGTGAGTCGGAGAACCGCGAGAAGGCGGAAGAAGCATCACGTCTTCGCGATGACGAGGCAGCAATGACGAGGAGAGAGACAGACGAGGAAGCCCGAATTGATATGGAGGTGCAGGTGAGAAGAAGTGCCGAGATTCAAGCGCTACGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTG
GCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCG
TGGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCG
CGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCTCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGC
CGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGC
GTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGC
CCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAG
GCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGC
AGGCGCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGAAGCTGAGGA
GCAGGCTGGTGGTCTGGAGGAGGTTCTTCGTGAGGCGCGCGCCGTGGTCATGGGAGAGTTCTCAGAGAAA
CTGAAGCAGCACAGCGCTGTTGCCGCTTTCGTGAGTGATACTGATGAGAAGCCGGTGAACTCCGCGAGCG
CGACGCACAGAGGCGACGCCCGCTGGCAGAATGAATACACGGAGCAGGGGGGCACCGGTGCAGATGCTGA
GGAGGAGCACGGGGTGCAGCAGCATGACTCGCGGTGTTGCCGTTACCGAACGAGCAGTCCGTCCGTGAGC
GACCGCGACATGCGAAGCGAGAGAAGCACAAACTCTAAAGACTCTGCCTCCGAGACGGTTAGCCGGTACT
CTTTGTCTACCCTGGAAGCCATCCGGAATGACAACGGCATCCTCTCTCGGACGGAGGAAGAAGTCTACTA
CGTGCCGCGCGTAACGAAAGAGGCGCCGTTTGAGAGTTTTGAGGAGGCTCTGTCCGCGGAGCTGAAAGCA
CACGGGCTCACAGAGGATGCGATCCGGCGCAGCTGCATTGAAGTGCACCGATACGGGACCATCCGCGAGT
CCGGCAAGTGCTTGTTTCCTCCGAGAGAGGTCACGGGGGAGGTGCCGGCGCACGGGAAGGTGCAGCTGGG
TTTCTTCTCAGCCAAGCAGACGATCATCGCCCTCCAGCGTCCACTTCGGAAGCCGAACGCAGACCGCGAG
CGACCATGTGAACCGGGCGAGCGCTCGCTGAGCACCCTCAAGTGCTACTTCGAGTCTGAGGTGCTGAGTG
ATCACACCCTGACGGTGGACGACGAGGATTACCCGCACAACGCTCCCACGGAGCGCCTGCTGACAAAGGC
GCAACTGATGAGAGGCGACAATGCCATGGTACGGAAGGCTGTCTCGCAGATTTCGTACGGCGACCCGATC
CAGGTGTGGGAGCGCGCGCAGCAGAACAGCACGGCGGCGGATGAAGCGGCGACCGAGTCGACGGCAGCGA
ACTTGTGGGTAAGCGATATCGACACCCGCAAACCCGTTCCCGCAATGCGCACCTTTACCGGAGGCTTTGT
GTACTGCATCAAGGCGACGAAGATCAGCAACCGAGTGATAGAGCTGCATGGAGCAAGCACCGATCCTCTC
GTCATCGCAGCCGCGCTGTACAGCTGGACAGAGCGGCAGAAGGTAAAGGTCTCCGAAACGTTCTACTTCG
ATTCCGAGCTGGACATCTTCTACCCTCAAAAGGAGCGCAGCGAGCTCGCCAAGAAGAATCAGGTTGTCGC
CTTTGTGCCGAACGAGTTCAAGGGAACGCTGCACCTCGTGATGCGTGTGTACCGACCCTGCTGCGAGGAG
TACGACACCTACGTTGATTTGTACAGTCGCGCAGACCGCTACAAGCAGATCCACGTTGCACCTATGAAGC
AGGAGACGTTGCTGCTGACTCAAGTGTCCGACGTGCTGGAGGAGCTAGGCTGGAACTCGGTTCCGCTCCA
GGACGAGGCAAACCACCTGCTTCCGAGGGTTGCCGTCGATCGCCTTTACCGCAAGGCCTTCTCTAACGAA
GACGTGTTCAAGGTAATGAAGGACGAGCGCTGGCGCGGAGCTCAGAAGGCGCTGCCGGTGGACATGGTCT
TCTCCATCTCAGATCTGAGCAGGCACGAAGTGGCGTTTCCCTCCGACCACCCAGAGACGCCGCCGGAGGA
GAACGAGTCGAAGGTAAGTCTGCTAGACCCTGACTTGCCGGGCGCTCGCCCGGTCATCTACCGTTACTCG
CCGTGCTGCATCCCCATCCTCAACTCCGGTTACTTCACGACATATAACAACGTGTACTATTTCTCCGTGT
CTAGGCTGAAGGTGATGTACGCCGGCTTCGTCCGCAGCATCCCTGCTTCGCATCACACTTACGTCTTTCA
GCTTTGTGTGAAGGACAAGGACGACGGACTCTCGGAGGAGGGCGCGATCAGGTGCATCTACGGGCGCGGG
CTGTCGAACCTGTCGATGGAGACGACGGCGTGGTCGTCCTCGGTACACAACTCGAATGACATGGTGCTTA
GCGACGAGTTCAAGCTGCAGCTGCCGCTAAACCTCTCCGACCGCCACCACATCTTCATGACCCTCTACGC
CACATGCÇAGAGGAAAATGCCACCGACGCCTGGGCAGCCACGTATGTTTAAAATCGGCTACGCCGCTGTG
CCACTGATGATGAACGGCGTTGTGCAGGTGCGCGACAGCATCGACATCAAGTTTGTTTCGTATGACCAGG
CAGCCGTCGCGGCCGCGGGCGGGTATCTGACGAGCTTTGCTGAGGCCCCCGTGAACTTCCTGCTCAATAA
CGGCGAGGGCGTTGTCAAGGCTTCGAGTCAGACCAAGACAACGGTTCACGCATCCAACCGCGTCATTGCA
TCTGTCTTCCAGCAGTGCCCGTCCTCGATTGCAGAGATGAGGAAGAACGACAAGGTGCTCGATGAGTGCG
GCGCGCTGCAGAAGCTGCCTGCGATGGAGGTCGACCCGCATCGTAACGTGATCAGTCTCATTGCGCAGCT
TCCGTTGGCAGAGATTCTGGCCTTCTACCCTTTCCTCACCGCGTACGCCTTCTCCCTCATCGGCTCCGGC
TCGGCGACGGTGTCGCTGGCTAACCGCATTCACATGCTCGACGTCCTTTTAGGGATTACTTCCAAGGCGC
AGCAGTACGACACATCAGCGCACACGATTCGTCGACGCCACAACAGCGAAGGTCTGACACCGCAAGTGTT
CGCCAAGACGAGCGTTGGAAGTATACTGTACCACTTCCTGTCCAATGACACCCTCTACGAAGGCGCCAAG
TGTGAGT ACAAGCGTCGCCTCTACAGTGGCATGGTCGAGGCATGGCTGAACCTACTTAAGATGGTAGCGC
AGCAGCCAAACGGTATCGGAGCCGACTCAGCGAAGGAAAAGAGCGGCACTTCCGCGCCTTCTTCCTCACC
TGCTAGCCCTGCTAGTCTTGCCCGTGGCAGCAAGGCCCCGCCGCCGGCTCGCAGTATCCTGCGTGAGATG
AGCAATCTGTCGTGGTTTCTCTTTGACACAATTCTGCGGTCCATGTACCTCTGGGGAGCCGAGAACCCGA
CAGTGCCCCGCCAGGAGCTCTTCCACTCGTCTTTTTACACCGCCGTGGCGGAGCTCTGCATTGTGGCGCT
GTCTCAGCTGTCAACATTCGATGAGAGTCAGCTTGTGCGCCACGTCGCCATCTTTGTGCGCAGCCTGATG
CACTACGCCGACCGTGGCCGCGTGCTGATGATCTACGAGCGCATCGCTGCTTACTTCGAGGAGGACGGCA
ACTTTGAGAGCCTCACCAACTTCCTCAAGTACGTGCTGGAGGACCCGGATGCGATTTACCTGCTGCTGCC
CTCCGCCGGAGCGGCCCGCCCCGTCTTCCTCACGCGCATTGTTGTTCACTCGTTCACCATTCTCATGATC
AACCCGAACCGTGTGACGCGATCGATCGCCACCGACGTGCTGTACTCATTTCTGCGTCGCCTCGCCAACG
ACTCAAGCACTCCCAGCGAGAATCTCACCTGCATCGCGGCACAGCTGTTCGCCCTGGTGCGCAACCTAGG
CCCGCACTGGAAGGCCATTACGCAGCCTAACGACAAGATACCGATTGAGGTGTTTCAGCGTGACAAGCAG
CAGCTGTCCATGACATGCTTGTGGATTCTCTACTACACGCCCCGCAGCACGTTCCGGCAATGGCTGCAGGAAGAGGTGGACGGAAAGGTGATCGCTGGCATGATGCAGATTGTGGCCGAGTCGCAGTCGACCTTCCGCTACACCGCCGCCCCCGCTTCCTCGAGTGCCGCCGGCCCCGTCGCGGGCGTTGCAAAGGACGCGGCAAACGAGGAGGTGGAGGAGAGGCGGGCGTGGGAGGCGCGCAGCACAACCTTTGTGACTGCAATCGGAACGCAAATGTGCAGCCTCTTCTTGAACGAGATTCCGAGTATATTGCGCACTGTGCGCGACAACAACCCTAACGCCGCCGTGTTCCCGTTCTTTGTCATGCTGGAGTCCGTTCTCAACCTGGGAAACTCCACCATATCCCTGCAAATGAGCTCCGCTGTGATGCACGAGGTGGTGTGCAAGCTGTTCCCGGAGATCATCAGCCGCAAGGCGAGGATGGGGAACGGCATGGTCCTGCTCACCTTCCGTCTCATGAGCAGCTGCTGCCAGTATGTTCGCTCCTCGGCCAGCTGCACGTTCCTGCTGATGAGCCAGGCCTTCTTCTCCTGGAAGAACTCTCTGTCCAAGATCAGGTCGCTGACTGCCAACGCGCTCGTCTCTGTGGCCGAGTCGCGCGTGAGGGACCTGCGCCTTGCTGGGCGCTTCATCGAGTTTCAGTTTGACGAGCTGATTGAGAGGGCCAAGGTGGAGGAGGCAAACTACACGGCGCCGTCGTGCGACTTCGCCTCTCGCTACGAGGACGACTCGAACGCGCCTGGCGGTGATGCGCAGATGAAGTACAGGCAAAAGGTCGAGGGCCAGGTTATGAGCGTGCAGCGCAATCTCCCCATCTCGCGCTACTTGCTGGAGAAGTCGAACGTGCCAGACCAACAGCCACCACGCTTCTCTAGCGACTTTACCGCCATGACGGCGACGGTGCTCAGCCTCTTCGACGATGTCTTGCGTCTGCAGATGGACGACTCAATGAAGTTCAAGGAAGCGAGGGCGACGGCGTATTTTGAGGTCTTTCGAAACTTCCTACGGCAGAACGCGCTAAAGGAAGCCCTAAAGTGGCTCTACCGCCTGCACGACGCACACAGGGCAAACAGCGACTACCTGGAGGCTGGCATGGTGCTGGTGTTCATTGCTGCCCTGTGCTTCCGCGTCACGGAGGTGTTCTACTTTGTCAAAGGGAAAGACTCGAAGGGGGCCCGCATGCCGTTTGAGGTTCTCTCGCACGTGTTCTGGCACGACTACGTGCGCATCCTACCCGAGGTGGATGCGCTGCTTCCCGCAGACACGGTGTACGCAATTGTGTCGGAGCTGTACACATGCCCCGACGACATGTGCTTCTCCATGGAGGGCCAGGTGAAGGCGCTGAAGGAGGCGGCCGAGTTTCAGGACAAAGGCCAGTACTACGAGTACTCGCTGCAGACAATAGACATTGCGAACAAGTACCTGATGGCGGTCAGCGACTTCAAAGGATCGTCGGTGGTGCACATGGCCATGTCCACCTGGTGTACCGCCATTGCAGAGCCCAAGTCGAAGCGGCACAACAGTCGCTACTTCTTCCTGTGGGCACGCATGGAACGCCACACTTTGCCCAAGTCGCGCAAGGAGCTGCATGAGGACGCGAACGACAGTAAGGTAGGCGAGAAGCCGCGCGGGCTGCCAAACGGCAACCCGATCCGCCGCATCTACAAGATGTCCACCGCCACCACGCTGGAAGAGTTCAAGAACTACGCGAGGTCGTACGTGGAGTCGCTCTTCTTTGACACATCGCTGGTGCTGCTGACAGACGACTTGACAGAGACCTTGCCGGCCCTGCCGGAGCCGGACTCGAAGCGCAAGCGCGTTGCTGCCGTGCACCGTCAACCAAATCATTGCCTTGTGACAGTGAGCGAGGCGCAGCCGTACTTCGCCAAGGGCACTCGCGTGCCCCCTGACGGCTTCGACCGGTCTATGCACATCAGCTACTTTGAGAATACCGTGAACGTCGGCAGCCGCGACGAGGTTTCGGACGGTCGCAAGCTGGACCTTATGACGCAGCGCATGAGCGTGAACACTTACGAACTGGAGCGCTCCTTTCCCTCCACGACGTCGGCCATCGACATTGCGAAGACGCATCAGGTAGTTCTCAACCCGTTCGAGACTGCAGAGGAGATGCTGAACAGCCGTCGCGAGGCCATGAACCAAGCCCCCGTCAACGATGCCTTGATCACAGTAATCCGCAAAGCCCTCTCACCAAAGGAGCTGCCGCCCGGTGCGTACATGAAGGAGGTGATCGCGGTCATGGGAGACCACCCTGAGGTGATTCATGCTGTGCGGGCGCTCAGCACTCTCGCTCGTGCAAAGCTGGAGGCCTGCGAGAAGATGGAGGCCATGTCCAAGAACCCTGAAGACTACGCGCTAGTGCTGAAGGCGGTGACCGATATCGAGTGCTGTTTGGTGGCTATGCAGCATCCCGACGAGAATGACCACGCTAGCAGCAGCGGCATGTAG
56) Informação para a SEQ ID NO: 56
Lcil2 Seqüência de aminóacidos da proteína completa.
a) Comprimento: 2452
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
MSTDNDIERQIMMEMEAEISRSQGNRRDPYTNPPPFELSFIEDDPMEAARKAEVDRIQREIEERL RRKQQQKQRDSLELSPNCPANEGEMSAVYDSLQQPQNASWPVGAHDRHVVRASLSSESENRE KAEEAS RLRDDEAAMTRRETDEEARIDMEVQVRRSAEIQALREAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARLVAEEQARREAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARREAEEQARREAEEQAGGLEEVLREARAWMGEFSEKLKQHSAVAAFVSDTDEKPVNSASATHRGDARWQNEYTEQGGTGADAEEEHGVQQHDSRCCRYRTSSPSVSDRDMRSERSTNSKDSASETVSRYSLSTLEAIRNDNGILSRTEEEVYYVPRVTKEAPFESFEEALSAELKAHGLTEDAIRRSCIEVHRYGTIRESGKCLFPPREVTGEVPAHGKVQLGFFSAKQTIIALQRPLRKPNADRERPCEPGERSLSTLKCYFESEVLSDHTLTVDDEDYPHNAPTERLLTKAQLMRGDNAMVRKAVSQISYGDPIQVWERAQQNSTAADEAATESTAANLWVSDIDTRKPVPAMRTFTGGFVYCIKATKISNRVIELHGASTDPLVIAAALYSWTERQKVKVSETFYFDSELDIFYPQKERSELAKKNQWAFVPNEFKGTLHLVMRVYRPCCEEYDTYVDLYSRADRYKQIHVAPMKQETLLLTQVSDVLEELGWNSVPLQDEANHLLPRVAVDRLYRKAFSNEDVFKVMKDERWRGAQKALPVDMVFSISDLSRHEVAFPSDHPETPPEENESKVSLLDPDLPGARPVIYRYSPCCIPILNSGYFTTYNNVYYFSVSRLKVMYAGFVRSIPASHHTYVFQLCVKDKDDGLSEEGAIRCIYGRGLSNLSMETTAWSSSVHNSNDMVLSDEFKLQLPLNLSDRHHIFMTLYATCQRKMPPTPGQPRMFKIGYAAVPLMMNGWQVRDSIDIKFVS YDQAAVAAAGGYLTSFAEAPVNFLLNNGEGVVKASSQTKTTVHASNRVIASVFQQCPSSIAEMRKNDKVLDECGALQKLPAMEVDPHRNVISLIAQLPLAEILAFYPFLTAYAFSLIGSGSATVSLANRIHMLDVLLGITSKAQQYDTSAHTIRRRHNSEGLTPQVFAKTSVGSILYHFLSNDTLYEGAKCEYKRRLYSGMVEAWLNLLKMVAQQPNGIGADSAKEKSGTSAPSSSPASPASLARGSKAPPPARSILREMSNLSWFLFDTILRSMYLWGAENPTVPRQELFHSSFYTAVAELCIVALSQLSTFDESQLVRHVAIFVRSLMHYADRGRVLMIYERIAAYFEEDGNFESLTNFLKYVLEDPDAIYLLLPSAGAARPVFLTRIWHSFTILMINPNRVTRSIATDVLYSFLRRLANDSSTPSENLTCIAAQLFALVRNLGPHWKAITQPNDKIPIEVFQRDKQQLSMTCLWILYYTPRSTFRQWLQEEVDGKVIAGMMQIVAESQSTFRYTAAPASSSAAGPVAGVAKDAANEEVEERRAWEARSTTFVTAIGTQMCSLFLNEIPSILRTVRDNNPNAAVFPFFVMLESVLNLGNSTISLQMSSAVMHEWCKLFPEIISRKARMGNGMVLLTFRLMSSCCQYVRSSASCTFLLMSQAFFSWKNSLSKIRSLTANALVSVAESRVRDLRLAGRFIEFQFDELIERAKVEEANYTAPSCDFASRYEDDSNAPGGDAQMKYRQKVEGQVMSVQRNLPISRYLLEKSNVPDQQPPRFSSDFTAMTATVLSLFDDVLRLQMDDSMKFKEARATAYFEVFRNFLRQNALKEALKWLYRLHDAHRANSDYLEAGMVLVFIAALCFRVTEVFYFVKGKDSKGARMPFEVLSHVFWHDYVRILPEVDALLPADTVYAIVSELYTCPDDMCFSMEGQVKALKEAAEFQDKGQYYEYSLQTIDIANKYLMAVSDFKGSSWHMAMSTWCTAIAEPKSKRHNSRYFFLWARMERHTLPKSRKELHEDANDSKVGEKPRGLPNGNPIRRIYKMSTATTLEEFKNYARSYVESLFFDTSLVLLTDDLTETLPALPEPDSKRKRVAAVHRQPNHCLVTVSEAQPYFAKGTRVPPDGFDRSMHISYFENTVNVGSRDEVSDGRKLDLMTQRMSVNTYELERS FPSTTSAIDIAKTHQWLNPFETAEEMLNSRREAMNQAPVNDALITVIRKALS PKELPPGAYMKEVIAVMGDHPEVIHAVRALSTLARAKLEACEKMEAMSKNPEDYALVLKAVTDIECCLVAMQHPDENDHASSSGM
57) Informação para a SEQ ID NO: 57
Lcil2A-I Seqüência de nucleotídeos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.
a) Comprimento: 2784
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
ATTGAT ATGGAGGTGCAGGTGAGAAGAAGTGCCGAGATTCAAGCGCTACGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCTCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCTGGTGGTCTGGAGGAGGTTCTTCGTGAGGCGCGCGCCGTGGTCATGGGAGAGTTCTCAGAGAAACTGAAGCAGCACAGCGCTGTTGCCGCTTTCGTGAGTGATACTGATGAGAAGCCGGTGAACTCCGCGAGCGCGACGCACAGAGGCGACGCCCGCTGGCAGAATGAATACACGGAGCAGGGGGGCACCGGTGCAGATGCTGAGGAGGAGCACGGGGTGCAGCAGCATGACTCGCGGTGTTGCCGTTACCGAACGAGCAGTCCGTCCGTGAGCGACCGCGACATGCGAAGCGAGAGAAGCACAAACTCTAAAGACTCTGCCTCCGAGACGGTTAGCCGGTACTCTTTGTCTACCCTGGAAGCCATCCGGAATGACAACGGCATCCTCTCTCGGACGGAGGAAGAAGTCTACTACGTGCCGCGCGTAACGAAAGAGGCGCCGTTTGAGAGTTTTGAGGAGGCTCTGTCCGCGGAGCTGAAAGCACACGGGCTCACAGAGGATGCGATCCGGCGCAGCTGCATTGAAGTGCACCGATACGGGACCATCCGCGAGTCCGGCAAGTGCTTGTTTCCTCCGAGAGAGGTCACGGGGGAGGTGCCGGCGCACGGGAAGGTGCAGCTGGGTTTCTTCTCAGCCAAGCAGACGATCATCGCCCTCCAGCGTCCACTTCGGAAGCCGAACGCAGACCGCGAGCGACCATGTGAACCGGGCGAGCGCTCGCTGAGCACCCTCAAGTGCTACTTCGAGTCTGAGGTGCTGAGTGATCACACCCTGACGGTGGACGACGAGGATTACCCGCACAACGCTCCCACGGAGCGCCTGCTGACAAAGGCGCAACTGATGAGAGGCGACAATGCCATGGTACGGAAGGCTGTCTCGCAGATTTCGTACGGCGACCCGATCCAGGTGTGGGAGCGCGCGCAGCAGAACAGCACGGCGGCGGATGAAGCGGCGACCGAGTCGACGGCAGCGAACTTGTGGGTAAGCGATATCGACACCCGCAAACCCGTTCCCGCAATGCGCACCTTTACCGGAGGCTTTGTGTACTGCATCAAGGCGACGAAGATCAGCAACCGAGTGATAGAGCTGCATGGAGCAAGCACCGATCCTCTCGTCATCGCAGCCGCGCTGTACAGCTGGACAGAGCGGCAGAAGGTAAAGGTCTCCGAAACGTTCTACTTCGATTCCGAGCTGGACATCTTCTACCCTCAAAAGGAGCGCAGCGAGCTCGCCAAGAAGAATCAGGTTGTCGCCTTTGTGCCGAACGAGTTCAAGGGAACGCTGCACCTCGTGATGCGTGTGTACCGACCCTGCTGCGAGGAGTACGACACCTACGTTGATTTGTACAGTCGCGCAGACCGCTACAAGCAGATCCACGTTGCACCTATGAAGCAGGAGACGTTGCTGCTGACTCAAGTGTCCGACGTGCTGGAGGAGCTAGGCTGGAACTCGGTTCCGCTCCAGGACGAGGCAAACCACCTGCTTCCGAGGGTTGCCGTCGATCGCCTTTACCGCAAGGCCTTCTCTAACGAAGACGTGTTCAAGGTAATGAAGGACGAGCGCTGGCGCGGAGCTCAGAAGGCGCTGCCGGTGGACATGGTCTTCTCCATCTCAGATCTGAGCAGGCACGAAGTGGCGTTTCCCTCCGACCACCCAGAGACGCCGCCGGAGGAGAACGAGTCGAAGGTAAGTCTGCTAGACCCTGACTTGCCGGGCGCTCGCCCGGTCATCTACCGTTACTCGCCGTGCTGCATCCCCATCCTCAACTCCGGTTACTTCACGACATATAACAACGTGTACTATTTCTCCGTGTCTAGGCTGAAGGTGATGTACGCCGGCTTCGTCCGCAGCATCCCTGCTTCGCATCACACTTACGTCTTTCAGCTTTGTGTGAAGGACAAGGACGACGGACTCTCGGAGGAGGGCGCGATCAGGTGCATCTACGGGCGCGGGCTGTCGAACCTGTCGATGGAGACGACGGCGTGGTCGTCCTCGGTACACAACTCGAATGACATGGTGCTTAGCGACGAGTTCAAGCTGCAG
58) Informação para a SEQ ID NO: 58Lcil2A-I Seqüência de aminóacidos da proteína recombinante.
a) Comprimento: 928
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
IDMEVQVRRSAEIQALREAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARLVAEEQARREAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARREAEEQARREAEEQAGGLEEVLREARAWMGEFSEKLKQHSAVAAFVSDTDEKPVNSASATHRGDARWQNEYTEQGGTGADAEEEHGVQQHDSRCCRYRTSSPSVSDRDMRSERSTNSKDSASETVSRYSLSTLEAIRNDNGILSRTEEEVYYVPRVTKEAPFESFEEALSAELKAHGLTEDAIRRSCIEVHRYGTIRESGKCLFPPREVTGEVPAHGKVQLGFFSAKQTIIALQRPLRKPNADRERPCEPGERSLSTLKCYFESEVLSDHTLTVDDEDYPHNAPTERLLTKAQLMRGDNAMVRKAVSQISYGDPIQVWERAQQNSTAADEAATESTAANLWVSDIDTRKPVPAMRTFTGGFVYCIKATKISNRVIELHGASTDPLVIAAAL YSWTERQKVKVSETFYFDSELDIFYPQKERSELAKKNQWAFVPNEFKGTLHLVMRVYRPCCEEYDTYVDLYSRADRYKQIHVAPMKQETLLLTQVSDVLEELGWNSVPLQDEANHLLPRVAVDRLYRKAFSNEDVFKVMKDERWRGAQKALPVDMVFSISDLSRHEVAFPSDHPETPPEENESKVSLLDPDLPGARPVIYRYSPCCIPILNSGYFTTYNNVYYFSVSRLKVMYAGFVRSIPASHHTYVFQLCVKDKDDGLSEEGAIRCIYGRGLSNLSMETTAWS
SSVHNSNDMVLSDEFKLQ
59) Informação para a SEQ ID NO: 59
Lcil2A-II Seqüência de nucleotídeos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.
a) Comprimento: 1602
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
ATTGATATGGAGGTGCAGGTGAGAAGAAGTGCCGAGATTCAAGCGCTACGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCTCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGCCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGTGGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCCCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCGCGTCGCGAAGCTGAGGAGCAGGCTGGTGGTCTGGAGGAGGTTCTTCGTGAGGCGCGCGCCGTGGTCATGGGAGAGTTCTCAGAGAAACTGAAGCAGCACAGCGCTGTTGCCGCTTTCGTGAGTGATACTGATGAGAAGCCGGTGAACTCCGCGAGCGCGACGCACAGAGGCGACGCCCGCTGGCAGAATGAATACACGGAGCAGGGGGGCACCGGTGCAGATGCTGAGGAGGAGCACGGGGTGCAGCAGCATGACTCGCGGTGTTGCCGTTACCGAACGAGCAGTCCGTCCGTGAGCGACCGCGACATGCGAAGCGAGAGAAGCACAAACTCTAAAGACTCTGCCTCCGAGACGGTTAGCCGGTACTCTTTGTCTACCCTGGAAGCCATCCGGAATGACAACGGCATCCTCTCTCGGACGGAGGAAGAAGTCTACTACGTGCCGCGCGTAACGAAAGAGGCGCCGTTTGAGAGTTTTGAGGAGGCTCTGTCCGCGGAGCTGAAAGCACACGGGCTCACAGAGGATGCGATCCGGCGCAGCTGCATTGAAGTGCACCGATACGGGACCATCCGCGAGTCCGGCAAGTGCTTGTTTCCTCCGAGAGAGGTCACGGGGGAGGTGCCGGCGCACGGGAAGGTGCAGCTGGGTTTCTTCTCAGCCAAGCAGACGATCATCGCCCTCCAGCGTCCACTTCGGAAGCCGAACGCAGACCGCGAGCGACCATGTGAACCGGGCGAGCGCTCGCTGAGCACCCTCAAGTGCTACTTCGAGTCTGAGGTGCTGAGTGATCACACCCTGACGGTGGACGACGAGGATTACCCGCACAACGCTCCCACGGAGCGCCTGCTGACAAAGGCGCAACTGATGAGAGGCGACAATGCCATG60) Informação para a SEQ ID NO: 60
Lcil2A-II Seqüência de aminóacidos da proteínarecombinante.
a) Comprimento: 534
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
IDMEVQVRRSAEIQALREAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARLVAEEQARREAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARRVAEEQARRVAEEQARREAEEQARREAEEQARREAEEQAGGLEEVLREARAVVMGEFSEKLKQHSAVAAFVSDTDEKPVNSASATHRGDARWQNEYTEQGGTGADAEEEHGVQQHDSRCCRYRTSSPSVSDRDMRSERSTNSKDSASETVSRYSLSTLEAIRNDNGILSRTEEEVYYVPRVTKEAPFESFEEALSAELKAHGLTEDAIRRSCIEVHRYGTIRESGKCLFPPREVTGEVPAHGKVQLGFFSAKQTIIALQRPLRKPNADRERPCEPGERSLSTLKCYFESEVLSDHTLTVDDEDYPHNAPTERLLTKAQLMRGDNAM
61) Informação para a SEQ ID NO: 61
Lcil3 Seqüência de nucleotídeos da CDS completa.
a) Comprimento: 198 6
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
d) Localização: Lcil3A (835)...(1839)
ATGTTCGCTCGTCGTGTGTGCGGAAGCGCTGCGGCGTCGGCTGCGCGCCTGGCGCGCCACGAGTCGCAGAAGGTGCAGGGCGACGTGATTGGCGTGGACCTGGGCACGACGTACAGCTGCGTGGCGACGATGGACGGCGACAAGGCGCGCGTGCTGGAGAACTCTGAGGGCTTCCGGACGACGCCGTCTGTTGTGGCGTTCAAGGGCAGCGAGAAGCTTGTGGGGCTTGCGGCGAAGCGGCAGGCGATCACGAACCCGCAGTCGACGTTCTATGCTGTGAAGCGGCTGATCGGGCGCCGGTTCGAGGACGAGCACATCCAGAAGGACATCAAGAACGTGCCGTACAAGATCGTGCGCGCCGGGAACGGTGACGCGTGGGTGCAGGACGGGAACGGGAAGCAGTACTCGCCGTCGCAGATCGGCGCGTTCGTGCTGGAGAAGATGAAGGAGACGGCGGAGAACTTCCTGGGGCACAAGGTGAGCAACGCCGTCGTGACGTGCCCGGCGTACTTCAACGACGCGCAGCGCCAGGCGACGAAGGACGCGGGGACGATTGCGGGCCTGAACGTGATCCGCGTGGTGAACGAGCCGACTGCTGCGGCGCTTGCGTACGGCATGGACAAGACGAAGGACAGCCTGATCGCGGTGTACGACCTCGGTGGCGGCACGTTCGATATCTCCGTGCTGGAGATCGCTGGCGGCGTGTTCGAGGTGAAGGCGACGAACGGCGACACGCACCTTGGCGGCGAGGACTTCGACCTGGCGCTGTCGGACTACATCCTGGAGGAGTTCCGCAAGACGAGCGGGATCGACCTGAGCAAGGAGCGGATGGCGCTGCAGCGCGTGCGCGAGGCCGCGGAGAAGGCGAAGTGCGAGCTGTCGTCTGCGATGGAGACGGAGGTGAACCTGCCGTTCATCACTGCAAACGCCGACGGCGCGCAGCACATCCAGATGCGCATCAGCCGTAGCAAGTTCGAGGGCATCACGCAGAGGCTGATCGATCGGTCGATTGCGCCGTGCAAGCAGTGCATGAAGGACGCTGGTGTGGAGCTGAAGGAGATCAACGACGTTGTGCTTGTTGGCGGCATGACGCGCATGCCGAAGGTGGTGGAGGAGGTGAAGAAGTTCTTCCAGAAGGACCCGTTCCGCGGCGTGAACCCCGACGAGGCTGTGGCGCTTGGCGCTGCGACGCTGGGCGGCGTGCTGCGCGGCGACGTGAAGGGGCTTGTGCTGCTGGACGTGACGCCGCTGTCGCTGGGCATTGAGACGCTCGGCGGCGTGTTCACGCGCATGATCCCGAAGAACACGACGATCCCGACGAAGAAGAGCCAGACGTTCTCGACTGCGGCGGACAACCAGACGCAGGTGGGGATCAAGGTGTTCCAGGGCGAGCGCGAGATGGCTGCGGACAACCAGATGATGGGCCAGTTCGACCTGGTGGGCATCCCGCCCGCGCCGCGCGGCGTGCCGCAGATTGAGGTGACGTTCGACATCGACGCGAACGGCATCTGCCACGTGACGGCGAAGGACAAGGCGACGGGCAAGACGCAGAACATCACGATCACGGCGAACGGCGGGCTGTCGAAGGAGCAGATCGAGCAGATGATCCGAGACTCGGAGCAGCACGCGGAGGCCGACCGCGTGAAGCGCGAGCTTGTGGAGGTGCGCAACAACGCGGAGACGCAGCTGACAACGGCGGAGAGGCAGCTCGGCGAGTGGAAGTACGTGAGCGATGCGGAGAAGGAGAACGTGAAGACGCTGGTGGCGGAGCTGCGCAAGGCGATGGAGAACCCGAACGTCGCGAAGGATGACCTTGCGGCTGCGACGGACAAGCTGCAGAAGGCTGTGATGGAGTGCGGCCGCACAGAGTACCAGCAGGCTGCCGCGGCCAACTCCGGCAGCACCAGCAACTCCGGTGAGCAGCAGCAGCAGCAGGGCCAAGGTGAGCAGCAGCAGCAGCAGAGCCAAGGAGAGGAGACGAAGTAA
62) Informação para a SEQ ID NO: 62Lcil3 Seqüência de aminóacidos de CDS.
a) Comprimento: 661
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasiMFARRVCGSAAASAARLARHESQKVQGDVIGVDLGTTYSCVATMDGDKARVLENSEGFRTTPSVVAFKGSEKLVGLAAKRQAITNPQSTFYAVKRLIGRRFEDEHIQKDIKNVPYKIVRAGNGDAWVQDGNGKQYSPSQIGAFVLEKMKETAENFLGHKVSNAWTCPAYFNDAQRQATKDAGTIAGLNVIRWNEPTAAALAYGMDKTKDSLIAVYDLGGGTFDISVLEIAGGVFEVKATNGDTHLGGEDFDLALSDYILEEFRKTSGIDLSKERMALQRVREAAEKAKCELSSAMETEVNLPFITANADGAQHIQMRISRSKFEGITQRLIDRSIAPCKQCMKDAGVELKEINDVVLVGGMTRMPKWEEVKKFFQKDPFRGVNPDEAVALGAATLGGVLRGDVKGLVLLDVT PLSLGIETLGGVFTRMIPKNTTIPTKKSQTFSTAADNQTQVGIKVFQGEREMAADNQMMGQFDLVGIPPAPRGVPQIEVTFDIDANGICHVTAKDKATGKTQNITITANGGLSKEQIEQMIRDSEQHAEADRVKRELVEVRNNAETQLTTAERQLGEWKYVSDAEKENVKTLVAELRKAMENPNVAKDDLAAAT DKLQKA VMECGRTEYQQAAAANSGSTSNSGEQQQQQGQGEQQQQQSQGEETK
63) Informação para a SEQ ID NO: 63
Lcil3A Seqüência de nucleotideos do fragmento gênico quecodifica para a proteína recombinante.
a) Comprimento: 1005
b) Tipo: DNA
c) Organismo: Leishmania chagasi
CTGCAGCGCGTGCGCGAGGCCGCGGAGAAGGCGAAGTGCGAGCTGTCGTCTGCGATGGAGACGGAGGTGAACCTGCCGTTCATCACTGCAAACGCCGACGGCGCGCAGCACATCCAGATGCGCATCAGCCGTAGCAAGTTCGAGGGCATCACGCAGAGGCTGATCGATCGGTCGATTGCGCCGTGCAAGCAGTGCATGAAGGACGCTGGTGTGGAGCTGAAGGAGATCAACGACGTTGTGCTTGTTGGCGGCATGACGCGCATGCCGAAGGTGGTGGAGGAGGTGAAGAAGTTCTTCCAGAAGGACCCGTTCCGCGGCGTGAACCCCGACGAGGCTGTGGCGCTTGGCGCTGCGACGCTGGGCGGCGTGCTGCGCGGCGACGTGAAGGGGCTTGTGCTGCTGGACGTGACGCCGCTGTCGCTGGGCATTGAGACGCTCGGCGGCGTGTTCACGCGCATGATCCCGAAGAACACGACGATCCCGACGAAGAAGAGCCAGACGTTCTCGACTGCGGCGGACAACCAGACGCAGGTGGGGATCAAGGTGTTCCAGGGCGAGCGCGAGATGGCTGCGGACAACCAGATGATGGGCCAGTTCGACCTGGTGGGCATCCCGCCCGCGCCGCGCGGCGTGCCGCAGATTGAGGTGACGTTCGACATCGACGCGAACGGCATCTGCCACGTGACGGCGAAGGACAAGGCGACGGGCAAGACGCAGAACATCACGATCACGGCGAACGGCGGGCTGTCGAAGGAGCAGATCGAGCAGATGATCCGAGACTCGGAGCAGCACGCGGAGGCCGACCGCGTGAAGCGCGAGCTTGTGGAGGTGCGCAACAACGCGGAGACGCAGCTGACAACGGCGGAGAGGCAGCTCGGCGAGTGGAAGTACGTGAGCGATGCGGAGAAGGAGAACGTGAAGACGCTGGTGGCGGAGCTGCGCAAGGCGATGGAGAACCCGAACGTCGCGAAGGATGACCTTGCGGCTGCGACGGACAAGCTGCAG
64) Informação para a SEQ ID NO: 64
Lcil3A Seqüência de aminóacidos da proteína recombinante.
a) Comprimento: 335
b) Tipo: PRT
c) Organismo: Leishmania chagasi
LQRVREAAEKAKCELSSAMETEVNLPFITANADGAQHIQMRISRSKFEGITQRLIDRSIAPCKQCMKDAGVELKEINDWLVGGMTRMPKWEEVKKFFQKDPFRGVNPDEAVALGAATLGGVLRGDVKGLVLLDVTPLSLGIETLGGVFTRMIPKNTTIPTKKSQTFSTAADNQTQVGIKVFQGEREMAADNQMMGQFDLVGIPPAPRGVPQIEVTFDIDANGICHVTAKDKATGKTQNITITANGGLSKEQIEQMIRDSEQHAEADRVKRELVEVRNNAETQLTTAERQLGEWKYVSDAEKENVKTLVAELRKAMENPNVAKDDLAAATDKLQ
Claims (40)
1. Polipeptídeo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmaniar onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos da SEQ ID NO:4 ou SEQ ID NO: 6.
2. Polinucleotideo isolado caracterizado por codificarpara o polipeptídeo da SEQ ID NO: 4, com a seqüência denucleotídeos representada pela SEQ ID NO:3.
3. Polipeptídeo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmaniaf onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos da SEQ ID NO:8 ou SEQ ID NO: 10 ouSEQ ID NO: 12.
4. Polinucleotideo isolado caracterizado por codificarpara o polipeptídeo da SEQ ID NO: 8, com a seqüência denucleotídeos representada pela SEQ ID NO:7.
5. Polipeptídeo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmania, onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos da SEQ ID NO:14 ou SEQ ID NO:16.
6. Polinucleotídeo isolado caracterizado por codificarpara o polipeptídeo da SEQ ID NO: 14, com a seqüência denucleotídeos representada pela SEQ ID NO:13.
7. Fragmento de cDNA caracterizado por possuir a SEQID NO:15.
8. Polipeptídeo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmania, onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO:18 ouSEQ ID NO:20 ou SEQ ID NO:22 ou SEQ ID NO:24.
9. Polinucleotídeo isolado caracterizado por codificarpara o polipeptideo da SEQ ID NO: 18, com a seqüência denucleotideos representada pela SEQ ID NO:17.
10. Fragmento de cDNA caracterizado por possuir a SEQID NO:19 ou SEQ ID N0:21 ou SEQ ID NO:23.
11. Polipeptideo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmaniar onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO:26 ouSEQ ID NO:28.
12. Polinucleotídeo isolado caracterizado porcodificar para o polipeptideo da SEQ ID NO: 26, com aseqüência de nucleotideos representada pela SEQ ID NO:25.
13. Fragmento gênico caracterizado por possuir a SEQID NO:27.
14. Polipeptideo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmania, onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO:34 ouSEQ ID NO:36.
15. Polinucleotídeo isolado caracterizado porcodificar para o polipeptideo da SEQ ID NO: 34, com aseqüência de nucleotideos representada pela SEQ ID NO:33.
16. Fragmento gênico caracterizado por possuir a SEQID NO:35.
17. polipeptideo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantígeno de Leishmaniar onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO:38 ouSEQ ID NO:40.
18. Polinucleotideo isolado caracterizado porcodificar para o polipeptideo da SEQ ID NO: 38, com aseqüência de nucleotideos representada pela SEQ ID NO:37.
19. Polipeptideo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmania, onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO:42 ouSEQ ID NO:44 ou SEQ ID NO:46.
20. Polinucleotideo isolado caracterizado porcodificar para o polipeptideo da SEQ ID NO: 42, com aseqüência de nucleotideos representada pela SEQ ID NO:41.
21. Fragmento gênico caracterizado por possuir a SEQID NO:43 ou SEQ ID NO:45.
22. Polipeptideo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmania, onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO:48 ouSEQ ID NO:50 ou SEQ ID NO:52 ou SEQ ID NO:54.
23. Polinucleotideo isolado caracterizado porcodificar para o polipeptideo da SEQ ID NO: 48, com aseqüência de nucleotideos representada pela SEQ ID NO:47.
24. Fragmento gênico caracterizado por possuir a SEQID NO:49 ou SEQ ID NO:51 ou SEQ ID NO:53.
25. Polipeptideo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmania, onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO:56 ouSEQ ID NO:58 ou SEQ ID NO:60.
26. Polinucleotideo isolado caracterizado porcodificar para o polipeptideo da SEQ ID NO: 56, com aseqüência de nucleotideos representada pela SEQ ID NO:55.
27. Fragmento gênico caracterizado por possuir a SEQID NO:57 ou SEQ ID NO:59.
28. Polipeptideo substancialmente purificadocaracterizado por possuir uma porção imunogênica de umantigeno de Leishmaniar onde o dito antigeno compreende umaseqüência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 62 ouSEQ ID NO:64.
29. Polinucleotideo isolado caracterizado porcodificar para o polipeptideo da SEQ ID NO: 62, com aseqüência de nucleotideos representada pela SEQ ID NO:61.
30. Fragmento de cDNA caracterizado por possuir a SEQID NO:63.
31. Anticorpos caracterizado por se ligarem aospolipeptideos das SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8,SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQID NO:18, SEQ ID N0:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ IDNO: 26, SEQ ID NO:28, SEQ ID N0:30, SEQ ID NO:32, SEQ IDNO: 34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID N0:40, SEQ IDNO: 42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID N0:48, SEQ IDNO: 50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ IDNO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62 ou SEQ ID NO:64.
32. Composições farmacêuticas caracterizadas por seremusadas para induzir uma resposta immune contra Leishmaniaem mamíferos, ditas composições consistindo de umaquantidade imunogenicamente efetiva de um ou mais dospolipeptideos representados pelas SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID N0:20, SEQ ID NO:22, SEQ IDNO: 24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:34, SEQ IDNO: 36, SEQ ID NO:38, SEQ ID N0:40, SEQ ID NO:42, SEQ IDNO: 44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID N0:50, SEQ IDNO: 52, SEQ ID N0:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ IDNO: 60, SEQ ID NO: 62 ou SEQ ID NO: 64 e um veiculo e/ouadjuvante farmaceuticamente aceitável, capaz de favoreceruma resposta imune predominantemente celular e poderpromover (i) proteção contra a infecção e/oudesenvolvimento de doença, (ii) regressão da doençaplenamente desenvolvida, e (iii) redução do parasitismo,incluindo cutâneo, e/ou da transmissão do parasito parainseto vetor, proporcionando conseqüentemente o controle dadoença.
33. Método para induzir uma resposta imune contrainfecção por Leishmania em mamíferos caracterizado porenvolver a administração das composições farmacêuticasdescritas na reivindicação 34.
34. Método para detectar Leishmania em uma amostracaracterizado por consistir nas etapas de:(a) colocar uma amostra suspeita de conter Leishmaniaem contato com um reagente, reagente este com capacidade deidentificar um ou mais dos polipeptideos representadospelas SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ IDNO: 28, SEQ ID NO : 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ IDNO: 36, SEQ ID NO : 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ IDNO: 44, SEQ ID NO : 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ IDNO: 52, SEQ ID NO : 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ IDNO: 60, SEQ ID NO: 62 ou SEQ ID NO : 64, e que irá se ligar aum componente de um patógeno; e,(b) revelar, direta ou indiretamente, a ligação doreagente ao componente do patógeno.
35. Método de acordo com a reivindicação 34caracterizado por o reagente capaz de ligar-se aocomponente do patógeno ser um oligonucleotideo para aidentificação de um ou mais dos polinucleotideosrepresentados pelas SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:33, SEQID NO:37, SEQ ID N0:41, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:55, SEQ IDNO:61.
36. Método de acordo com a reivindicação 34caracterizado por o reagente capaz de ligar-se aocomponente do patógeno ser um oligonucleotideo oupolinucleotideo que codifica qualquer dos polipeptideosrepresentados pelas SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID N0:16, SEQID NO:18, SEQ ID N0:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ IDNO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ IDNO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ IDNO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ IDNO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ IDNO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62 ou SEQ ID NO:64.
37. Método para detectar anticorpos caracterizado pordetectar anticorpos contra os polipeptideos, representadospelas SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:10,SEQ ID NO:12, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:18, SEQID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ IDNO: 28, SEQ ID N0:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ IDNO: 36, SEQ ID NO:38, SEQ ID N0:40, SEQ ID NO:42, SEQ IDNO: 4 4, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID N0:50, SEQ IDNO: 52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ IDNO: 60, SEQ ID NO: 62 ou SEQ ID NO: 64, através das seguintesetapas:(a) colocar uma amostra de material biológico de ummamífero com suspeita de conter Leishmania em contato comum ou mais dos polipeptideos representados pelas SEQ IDNO:4, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID N0:12,SEQ ID NO:14, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:20, SEQID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID N0:26, SEQ ID N0:28, SEQ IDNO: 30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ IDNO: 38, SEQ ID N0:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ IDNO: 4 6, SEQ ID NO:48, SEQ ID N0:50, SEQ ID NO:52, SEQ IDNO: 54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO: 60, SEQ IDNO: 62 ou SEQ ID NO: 64, sob condições que permitem aoanticorpos ligarem-se esses polipeptideos; e,(b) detectar a ligação do reagente aos oligopeptídeosou peptídeos.
38. Método para detectar polipeptideos em uma amostracom suspeita de conter Leishmania caracterizado por ométodo detectar um ou mais dos polipeptideos representadospelas SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ IDNO: 28, SEQ ID N0:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ IDNO: 36, SEQ ID NO:38, SEQ ID N0:40, SEQ ID NO:42, SEQ IDNO: 44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID N0:50, SEQ IDNO: 52, SEQ ID NO:54, SEQ ID N0:56, SEQ ID NO:58, SEQ IDNO: 60, SEQ ID NO: 62 ou SEQ ID NO: 64, através das seguintesetapas:(a) colocar a amostra em contato com um reagente capazde identificar os polipeptideos, sob condições que permitemao reagente ligar-se aos polipeptideos; e,(b) detectar a ligação aos oligopeptideos oupeptideos.
39. Método para detectar ácidos nucléicos em umaamostra suspeita de conter Leishmania caracterizado por ométodo detectar os ácidos nucléicos que codificam para umou mais dos polipeptideos representados pelas SEQ ID NO: 4,SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQID NO:14, SEQ ID N0:16, SEQ ID N0:18, SEQ ID N0:20, SEQ IDNO: 22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID N0:28, SEQ IDNO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ IDNO: 38, SEQ ID N0:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ IDNO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ IDNO: 54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO: 60, SEQ IDNO:62 ou SEQ ID NO:64, que utilize oligonucleotideoscodificando os ditos polipeptideos ou peptideos.
40. "Kit" diagnóstico para Leishmania caracterizadopor detectar anticorpos que se ligam a um ou mais dospolipeptideos representados pelas SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8, SEQ ID NOrlO, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID N0:20, SEQ ID NO:22, SEQ IDNO: 24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID N0:30, SEQ IDNO: 32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ IDNO: 40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ IDNO: 48, SEQ ID N0:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ IDNO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62 ou SEQ IDNO:64, isoladamente, ou associados entre si ou com outrosantigenos.
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