BRPI0818230B1

BRPI0818230B1 - Usos de lipídios complexos para manter ou aumentar o crescimento ou o desenvolvimento cognitivo de um feto, lactente ou criança

Info

Publication number: BRPI0818230B1
Application number: BRPI0818230-2A
Authority: BR
Inventors: Steven Charles Hodgkinson; Christopher Paul Mcjarrow; Murray D Mitchell; Angela Marie Rowan; Joanne Margaret Todd; Mark Hedley Vickers
Original assignee: Fonterra Co-Operative Group Limited
Priority date: 2007-10-19
Filing date: 2008-10-20
Publication date: 2023-10-10
Also published as: EP2211629A1; MY157300A; US20110009349A1; US20230292781A1; EP3763219A1; CN102894369B; CN102894369A; BRPI0818230A2; CN101902918A; RU2010119925A; ES2811549T3; EP2211629A4; DK2211629T3; CA2702570A1; ZA201002696B; PL2211629T3; RU2523601C2; EP2211629B1; AU2008312069B2; LT2211629T

Abstract

usos de lipídios complexos para manter ou aumentar o crescimento ou o desenvolvimento cognitivo de um feto, lactente ou criança. a presente invenção refere-se a um ou mais lipídios complexos, incluindo gangliosídios, para alcançar benefícios particulares de saúde, incluindo manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo ou manter ou aumentar o crescimento em um feto, lactente ou criança.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se ao uso de um ou mais lipídios complexos, incluindo gangliosídios, para alcançar benefícios particulares de saúde, incluindo manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo ou manter ou aumentar o crescimento em um feto, lactente ou criança.

Este requerimento é baseado nas especificações provisórias da Nova Zelândia NZ 562706 e NZ 562708, em que as duas são aqui incorporadas por referência na sua totalidade.

ANTECEDENTES

A composição do leite de mamíferos é direcionada, de modo es-pecífico, ao suporte do crescimento e desenvolvimento normais do lactente ou criança ("International Code of Marketing Breastmilk Substitutes", Organização Mundial de Saúde, Genebra, 1981).

As fórmulas maternas, fórmulas para lactentes, fórmulas de acom-panhamento, fórmulas de crescimento, produtos dietéticos e outras composições que contêm produtos lácteos são produzidas, de modo típico, usando leite não humano. No entanto, a composição nutricional do leite humano difere, em alguns aspectos, da de leite não humano. O leite completo não humano, como leite de vaca, cabra ou ovelha, contém uma proporção maior de ácidos graxos saturados do que o leite humano e tem níveis mais baixos de ácido linoléico e ácido alfa-linolénico, e ácidos graxos poli-insaturados que são essenciais para o crescimento e desenvolvimento normais. (Fox & McSweeney, 2006)

As fórmulas maternas, fórmulas para lactentes, fórmulas de acompanhamento e fórmulas de crescimento comuns, entre outros produtos, são tipicamente produzidas usando produtos lácteos magros, como leite desnatado. Usar um produto lácteo magro significa, alegadamente, que componentes indesejáveis da gordura do leite não são incluídos no produto final, mas também significa que níveis de lipídios complexos, como fosfolipí- dios e (glico)esfingolipídios, serão significativamente menores do que os do leite humano. (Sanchez-Diaz et al. 1997; Pan e Imuzi 2000)

O desenvolvimento cognitivo e crescimento ótimos são uma parte crucial do desenvolvimento de lactentes e crianças. Claramente, um de-senvolvimento cognitivo enfraquecido terá efeitos significativos na qualidade de vida. Além disso, foi mostrado que um crescimento restrito tem efeitos prejudiciais na saúde a longo prazo. Em consequência, qualquer agente que demonstre aumentar o desenvolvimento cognitivo ou manter um crescimento saudável trará grandes benefícios para lactentes e crianças. (Bryan et al. 2004)

É relatado que lipídios complexos, como gangliosídios, têm um conjunto de funções potenciais, pois os perfis de gangliosídios variam de um tecido para outro (Rueda et al. 1998). É relatado que o perfil de espécies de gangliosídios individuais se altera profundamente durante o desenvolvimento (Rõsner, 2003), é relatado que os gangliosídios têm efeitos benéficos no de-senvolvimento neural (Rahmann, 1995) e é relatado que são componentes sinápticos essenciais e indutores de migração neuronal e formação de ex-crescências de neurites (Mendez-Otero & Santiago, 2003).

É relatado que o gangliosídio GM1a atravessa a placenta em ratos (Hungund etal., 1993), mas faltam evidências definitivas da transferência de gangliosídios através da placenta humana. É relatado que a variação dos gangliosídios em leite humano e bovino, e em fórmulas para lactentes, tem potencialmente alguma importância biológica para o desenvolvimento cerebral neonatal, alergias e crescimento de lactentes (Pan et al., 2000; Rueda, 2007; Tram etal. 1997).

Em conformidade, um objetivo da presente invenção é prover meios para manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo ou crescimento de um sujeito, ou pelo menos prover ao público uma escolha útil.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Em um primeiro aspecto, a invenção refere-se a um ou mais lipídios complexos para manter ou aumentar o crescimento ou manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo de um feto, lactente ou criança.

Em outro aspecto, a invenção refere-se ao uso de um ou mais lipídios complexos, tais como: (i) um ou mais gangliosídios puros, ou (ii) uma composição compreendendo um ou mais gangliosídios (como um extrato de gordura do leite) na fabricação de uma formulação para manter ou aumentar o crescimento ou manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo de um feto, lactente ou criança, em que a formulação é administrada pela via oral a uma mãe durante a gestação.

Em outro aspecto, a invenção refere-se ao uso de um ou mais lipídios complexos na fabricação de uma formulação para manter ou aumentar o crescimento ou manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo de um feto, lactente ou criança.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a um método para manter ou aumentar o crescimento ou manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo de um feto, lactente ou criança por administração de uma composição compreendendo um ou mais lipídios complexos a um feto, lactente ou criança necessitado.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a um método de utilização de um ou mais lipídios complexos, como um ou mais gangliosídios, para manter ou aumentar o crescimento ou manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo de um feto, cujo método compreende prover a uma mãe grávida uma composição compreendendo um ou mais lipídios complexos, como um ou mais gangliosídios, e informar a mãe de que a composição irá manter ou aumentar o crescimento ou manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo do feto.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a um método de utilização de um ou mais lipídios complexos, como um ou mais gangliosídios, para manter ou aumentar o crescimento ou manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo de um sujeito, cujo método compreende prover a um sujeito uma composição compreendendo um ou mais lipídios complexos, como um ou mais gangliosídios, e informar o sujeito de que a composição irá manter ou aumentar o crescimento ou manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo do sujeito.

As formas de modalidade seguintes podem estar relacionadas a qualquer um dos aspectos mencionados acima.

Em uma forma de modalidade, um ou mais lipídios complexos são administrados a uma mãe durante a gestação e o crescimento é peso cerebral de um feto ou teor cerebral de gangliosídios de um feto.

Em uma forma de modalidade, um ou mais lipídios complexos são administrados a um lactente ou criança e o crescimento é um ou mais peso do corpo, altura do corpo e densidade mineral óssea.

De preferência, o gangliosídio é GM3. Em alternativa, o ganglio- sídio é GD3. Com maior preferência, o gangliosídio compreende GM3 e GD3. Em outras formas de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende um ou mais gangliosídios selecionados de GM1, GM2, GM3, GM4, GD1, GD2, GD3, GT1, GT2, GT3, GQ1 e GP1, e qualquer um ou mais dos derivados "a", "b" ou "c", quando existirem, e qualquer combinação de quaisquer dois ou mais dos mesmos.

De preferência, a composição compreendendo um ou mais lipídios complexos compreende pelo menos cerca de 0,1% em p/p de gangliosídios em uma base seca. Com maior preferência, a composição compreendendo um ou mais lipídios complexos compreende pelo menos 0,2% de gangliosídios p/p em uma base seca.

Em alternativa, uma formulação útil aqui compreende pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19, 19 ou 20 mg, de preferência pelo menos cerca de 5 mg ou pelo menos cerca de 10 mg de gangliosídios /100 g de formulação, e intervalos úteis podem ser escolhidos entre quaisquer destes valores (por exemplo, cerca de 1 a cerca de 20, cerca de 2 a cerca de 20, cerca de 3 a cerca de 20, cerca de 1 a cerca de 10, cerca de 2 a cerca de 10 ou cerca de 3 a cerca de 10 mg). De preferência, a formulação compreende cerca de 5 mg a cerca de 20 mg de gangliosídios /100 g de formulação.

Em alternativa, a formulação é formulada de modo a prover à mãe pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19, 19 ou 20 mg, de preferência pelo menos cerca de 7,5 mg de gangliosídios por dia, e intervalos úteis podem ser escolhidos entre quaisquer destes valores (por exemplo, cerca de 1 a cerca de 20, cerca de 2 a cerca de 20, cerca de 3 a cerca de 20, cerca de 1 a cerca de 10, cerca de 2 a cerca de 10 ou cerca de 3 a cerca de 10 mg). De preferência, a formulação é formulada de modo a prover à mãe cerca de 7,5 mg a cerca de 10 mg de gangliosídios por dia.

Em uma forma de modalidade, uma formulação útil aqui pode compreender: (a) 80-99,9% de um leite em pó selecionado de leite em pó completo, leite em pó desnatado, concentrado de proteínas do leite (MPC), isolado de proteínas do leite (MPI) e proteínas do soro, como WPC ou WPI (b) 0-20% de lipídios, como gordura do leite ou um ou mais óleos vegetais (c) 0-25% de açúcares ou ingrediente de carboidratos (d) 0,1-0,5% de mistura de vitaminas e minerais (e) 0-5% de ingredientes aromatizantes e (f) 0-5% de ingrediente de gangliosídios.

De preferência, o lipídio complexo compreende um ou mais fos- folipídios, ou um ou mais esfingolipídios, ou uma ou mais esfmgomielinas ou derivados dos mesmos, ou uma ou mais ceramidas, ou um ou mais gangliosídios, ou uma combinação de quaisquer dois ou mais dos mesmos. De preferência, o gangliosídio é GM3. Em alternativa, o gangliosídio é GD3. Em alternativa, o gangliosídio compreende uma mistura de pelo menos GM3 e GD3.

Em formas de modalidade preferidas, a formulação é um líquido (concentrado ou pronto para beber) ou fórmula materna, fórmula para lactentes, fórmula de acompanhamento, fórmula de crescimento ou produto dietético em pó.

Em algumas formas de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios (como um extrato de gordura do leite) com preende pelo menos cerca de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 ou 99,5% em peso do total de lipídios, e intervalos úteis podem ser selecionados entre quaisquer destes valores (por exemplo, cerca de 5 a cerca de 95%, cerca de 10 a cerca de 95%, cerca de 15 a cerca de 95%, cerca de 20 a cerca de 95%, cerca de 25 a cerca de 95%, cerca de 30 a cerca de 95%, cerca de 35 a cerca de 95%, cerca de 40 a cerca de 95%, cerca de 45 a cerca de 95%, cerca de 50 a cerca de 95%, cerca de 5 a cerca de 99%, cerca de 10 a cerca de 99%, cerca de 15 a cerca de 99%, cerca de 20 a cerca de 99%, cerca de 25 a cerca de 99%, cerca de 30 a cerca de 99%, cerca de 35 a cerca de 99%, cerca de 40 a cerca de 99%, cerca de 45 a cerca de 99%, cerca de 50 a cerca de 99%, cerca de 5 a cerca de 70%, cerca de 10 a cerca de 70%, cerca de 15 a cerca de 70%, cerca de 20 a cerca de 70%, cerca de 25 a cerca de 70%, cerca de 30 a cerca de 70%, cerca de 35 a cerca de 70%, cerca de 40 a cerca de 70%, cerca de 45 a cerca de 70% e cerca de 50 a cerca de 70% em peso do total de lipídios).

Em algumas formas de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios (como um extrato de gordura do leite) compreende pelo menos cerca de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 ou 99,5% em peso de fosfolipídios, e intervalos úteis podem ser selecionados entre quaisquer destes valores (por exemplo, cerca de 5 a cerca de 95%, cerca de 10 a cerca de 95%, cerca de 15 a cerca de 95%, cerca de 20 a cerca de 95%, cerca de 25 a cerca de 95%, cerca de 30 a cerca de 95%, cerca de 35 a cerca de 95%, cerca de 40 a cerca de 95%, cerca de 45 a cerca de 95%, cerca de 50 a cerca de 95%, cerca de 5 a cerca de 99%, cerca de 10 a cerca de 99%, cerca de 15 a cerca de 99%, cerca de 20 a cerca de 99%, cerca de 25 a cerca de 99%, cerca de 30 a cerca de 99%, cerca de 35 a cerca de 99%, cerca de 40 a cerca de 99%, cerca de 45 a cerca de 99%, cerca de 50 a cerca de 99%, cerca de 5 a cerca de 70%, cerca de 10 a cerca de 70%, cerca de 15 a cerca de 70%, cerca de 20 a cerca de 70%, cerca de 25 a cerca de 70%, cerca de 30 a cerca de 70%, cerca de 35 a cerca de 70%, cerca de 40 a cerca de 70%, cerca de 45 a cerca de 70% e cerca de 50 a cerca de 70% em peso de fosfolipidios).

Em algumas formas de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios (como um extrato de gordura do leite) compreende pelo menos cerca de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30% em peso de um ou mais fosfolipidios selecionados independentemente de fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, esfingomielina, fosfatidilserina e fos- fatidilinositol, e intervalos úteis podem ser selecionados entre quaisquer destes valores (por exemplo, cerca de 0,1 a cerca de 30%, cerca de 0,5 a cerca de 30%, cerca de 1 a cerca de 30%, cerca de 2 a cerca de 30%, cerca de 3 a cerca de 30%, cerca de 4 a cerca de 30%, cerca de 5 a cerca de 30%, cerca de 10 a cerca de 30%, cerca de 15 a cerca de 30%, cerca de 20 a cerca de 30%, cerca de 0,1 a cerca de 5%, cerca de 0,5 a cerca de 5%, cerca de 1 a cerca de 5%, cerca de 2 a cerca de 5%, cerca de 3 a cerca de 5%, cerca de 0,1 a cerca de 10%, cerca de 0,5 a cerca de 10%, cerca de 1 a cerca de 10%, cerca de 2 a cerca de 10%, cerca de 3 a cerca de 10%, cerca de 4 a cerca de 10%, cerca de 5 a cerca de 10%, cerca de 6 a cerca de 10%, cerca de 0,1 a cerca de 20%, cerca de 0,5 a cerca de 20%, cerca de 1 a cerca de 20%, cerca de 2 a cerca de 20%, cerca de 3 a cerca de 20%, cerca de 4 a cerca de 20%, cerca de 5 a cerca de 20%, cerca de 10 a cerca de 20%, cerca de 15 a cerca de 20% em peso de um ou mais de fosfolipidios selecionados independentemente de fosfatidilcolina, fosfatidiletanol-amina, esfingomielina, fosfatidilserina e fosfatidil-inositol).

Em algumas formas de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios (como um extrato de gordura do leite) compreende pelo menos cerca de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 99,5% em peso de gangliosídios, e intervalos úteis podem ser selecionados entre quaisquer destes valores (por exemplo, cerca de 5 a cerca de 95%, cerca de 10 a cerca de 95%, cerca de 15 a cerca de 95%, cerca de 20 a cerca de 95%, cerca de 25 a cerca de 95%, cerca de 30 a cerca de 95%, cerca de 35 a cerca de 95%, cerca de 40 a cerca de 95%, cerca de 45 a cerca de 95%, cerca de 50 a cerca de 95%, cerca de 10 a cerca de 70%, cerca de 15 a cerca de 70%, cerca de 20 a cerca de 70%, cerca de 25 a cerca de 70%, cerca de 30 a cerca de 70%, cerca de 35 a cerca de 70%, cerca de 40 a cerca de 70%, cerca de 45 a cerca de 70% e cerca de 50 a cerca de 70% em peso de fosfolipí- dios). Em uma forma de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende GD3 ou GM3 ou uma combinação dos mesmos. Em uma forma de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende um ou mais gangliosídios selecionados de GM1, GM2, GM3, GM4, GD1, GD2, GD3, GT1, GT2, GT3, GQ1 e GP1, e qualquer um ou mais dos derivados "a", "b" ou "c", quando existirem, e qualquer combinação de quaisquer dois ou mais dos mesmos.

Em algumas formas de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios (como um extrato de gordura do leite) compreende pelo menos cerca de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30% em peso de um ou mais gangliosídios selecionados independentemente de GD3 e GM3, e intervalos úteis podem ser selecionados entre quaisquer destes valores (por exemplo, cerca de 0,1 a cerca de 30%, cerca de 0,5 a cerca de 30%, cerca de 1 a cerca de 30%, cerca de 2 a cerca de 30%, cerca de 3 a cerca de 30%, cerca de 4 a cerca de 30%, cerca de 5 a cerca de 30%, cerca de 10 a cerca de 30%, cerca de 15 a cerca de 30%, cerca de 20 a cerca de 30%, cerca de 0,1 a cerca de 5%, cerca de 0,5 a cerca de 5%, cerca de 1 a cerca de 5%, cerca de 2 a cerca de 5%, cerca de 3 a cerca de 5%, cerca de 0,1 a cerca de 10%, cerca de 0,5 a cerca de 10%, cerca de 1 a cerca de 10%, cerca de 2 a cerca de 10%, cerca de 3 a cerca de 10%, cerca de 4 a cerca de 10%, cerca de 5 a cerca de 10%, cerca de 6 a cerca de 10%, cerca de 0,1 a cerca de 20%, cerca de 0,5 a cerca de 20%, cerca de 1 a cerca de 20%, cerca de 2 a cerca de 20%, cerca de 3 a cerca de 20%, cerca de 4 a cerca de 20%, cerca de 5 a cerca de 20%, cerca de 10 a cerca de 20%, cerca de 15 a cerca de 20% em peso de um ou mais gangliosídios selecionados independentemente de GD3 e GM3.

Em uma forma de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende cerca de 15% a cerca de 99% em peso do total de lipídios, cerca de 1% a cerca de 80% em peso de fosfolipidios, cerca de 1% a cerca de 25% em peso de fosfatidil-colina, cerca de 0,1% a cerca de 15% em peso de fosfatidilinositol, cerca de 0,1% a cerca de 15% em peso de fosfatidilserina, cerca de 1% a cerca de 30% em peso de fosfatidiletanolamina, cerca de 0,5% a cerca de 25% em peso de esfingomie- lina e cerca de 0,1 a cerca de 10% em peso de gangliosídios. Em algumas formas de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende cerca de 1% a cerca de 60% em peso de lactose, cerca de 1 % a cerca de 15% em peso de lactose ou cerca de 50% a cerca de 65% em peso de lactose.

Em formas de modalidade alternativas, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende cerca de 20% a cerca de 40% em peso do total de lipídios, cerca de 5% a cerca de 25% em peso de fosfolipidios e quantidades de um ou mais fosfolipidios como descrito acima. Em outras formas de modalidade alternativas, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende cerca de 70% a cerca de 99% em peso do total de lipídios, cerca de 25% a cerca de 80% em peso de fosfolipidios e quantidades de um ou mais fosfolipidios como descrito acima.

Ainda em outras formas de modalidade alternativas, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende cerca de 0,1% a cerca de 10%, cerca de 0,1% a cerca de 2,5% ou cerca de 3% a cerca de 10% em peso de um ou mais gangliosídios, de preferência selecionados independentemente de GD3 e GM3.

Em outra forma de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende cerca de 15 a 40% do total de lipídios, cerca de 10 a 25% de fosfolipidios, cerca de 1% a cerca de 6% de fos- fatidilcolina, cerca de 1% a cerca de 6% de fosfatidilinositol, cerca de 1% a cerca de 6% fosfatidilserina, cerca de 1% a cerca de 6% de fosfatidiletano- lamina e cerca de 1% a cerca de 3% de esfingomielina. Em uma forma de modalidade preferida, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende pelo menos cerca de 3% a cerca de 6% de ácido mirístico (14:0), pelo menos cerca de 12% a cerca de 20% de ácido palmítico (16:0), pelo menos cerca de 0,5% a cerca de 3% de ácido palmitoléico (16:1), pelo menos cerca de 0,1% a cerca de 1,5% de ácido margárico (17:0), pelo menos cerca de 13% a cerca de 20% de ácido esteárico (18:0), pelo menos cerca de 28% a cerca de 35% de ácido oléico (18:1), pelo menos cerca de 3% a cerca de 5% de ácido linoléico (18:2) e pelo menos cerca de 0,5% a cerca de 2,5% de linolénico (18:3). Em algumas formas de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende cerca de 0,1% a cerca de 2,5% do gangliosídio GD3, cerca de 0,1% a cerca de 1% do gangliosídio GM3, ou ambos.

Em uma forma de modalidade, a composição compreendendo um ou mais gangliosídios compreende uma ou mais fosfatidiletanolaminas, um ou mais fosfatidil-inositois, uma ou mais fosfatidilserinas, uma ou mais fosfatidilcolinas, um ou mais esfingolipídios (incluindo uma ou mais esfingo- mielinas, uma ou mais di-hidroesfingomielinas, uma ou mais ceramidas, um ou mais cerebrosídeos, ou um ou mais gangliosídios, ou qualquer combinação de quaisquer dois ou mais dos mesmos), um ou mais lisofosfolipídios (fosfolipídios que perderam um ácido graxo), ou qualquer combinação de quaisquer dois ou mais dos mesmos.

Em algumas formas de modalidade, o extrato de gordura do leite compreende: (a) cerca de 15 a cerca de 25% p/p de lipídios, cerca de 5 a cerca de 15% p/p de fosfolipídios e cerca de 0,1 a cerca de 1% p/p gangliosídios, ou (b) cerca de 15 a cerca de 25% p/p de lipídios, cerca de 5 a cerca de 15% p/p de fosfolipídios, cerca de 1 a cerca de 5% p/p de fosfatidilco- lina, cerca de 0,1 a 2% p/p de fosfatidilinositol, cerca de 0,5 a cerca de 2% p/p de fosfatidilserina, cerca de 1,5 a cerca de 6% p/p de fosfatidiletanolami- na, cerca de 1 a cerca de 5% p/p de esfingomielina e cerca de 0,1 a cerca de 1% p/p de gangliosídios, ou (c) cerca de 25 a cerca de 45% p/p de lipídios, cerca de 10 a cerca de 25% p/p de fosfolipidios e cerca de 0,1 a cerca de 2,0% p/p de gangliosídios, ou (d) cerca de 25 a cerca de 45% p/p de lipídios, cerca de 10 a cerca de 25% p/p de fosfolipidios, cerca de 1 a cerca de 5% p/p de fosfatidil- colina, cerca de 0,1 a 2% p/p de fosfatidilinositol, cerca de 0,5 a cerca de 2% p/p de fosfatidilserina, cerca de 1,5 a cerca de 6% p/p de fosfatidiletanolami- na, cerca de 1 a cerca de 5% p/p de esfingomielina e cerca de 0,1 a cerca de 2,0% p/p de gangliosídios, ou (e) cerca de 12 a cerca de 32% p/p de lipídios, cerca de 5 a cerca de 25% p/p de fosfolipidios e cerca de 0,1 a cerca de 2,0% p/p de gangliosídios, ou (f) cerca de 12 a cerca de 32% p/p de lipídios, cerca de 5 a cerca de 25% p/p de fosfolipidios, cerca de 2 a cerca de 8% p/p de fosfatidilcolina, cerca de 0,5 a 3% p/p de fosfatidilinositol, cerca de 1 a cerca de 3,5% p/p de fosfatidilserina, cerca de 1 a cerca de 10% p/p de fosfatidiletanolamina, cerca de 1 a cerca de 8% p/p de esfingomielina e cerca de 0,5 a cerca de 2,5% p/p de gangliosídios, ou (g) cerca de 80 a cerca de 99% p/p de lipídios, cerca de 20 a cerca de 75% p/p de fosfolipidios e cerca de 0,5 a cerca de 5% p/p de gangliosídios, ou (h) cerca de 80 a cerca de 99% p/p de lipídios, cerca de 20 a cerca de 75% p/p de fosfolipidios, cerca de 2 a cerca de 22 % p/p de fosfatidilcolina, cerca de 1 a cerca de 10% p/p de fosfatidilinositol, cerca de 1 a cerca de 10% p/p de fosfatidilserina, cerca de 5 a cerca de 30% p/p de fosfatidiletanolamina, cerca de 1 a cerca de 20% p/p de esfingomielina e cerca de 0,5 a cerca de 5% p/p de gangliosídios, ou (i) cerca de 90 a cerca de 99% p/p de lipídios, cerca de 20 a cerca de 40% p/p de fosfolipidios e cerca de 0,5 a cerca de 5% p/p de ganglio- sídios, ou (j) cerca de 80 a cerca de 99% p/p de lipídios, cerca de 60 a cerca de 80% p/p de fosfolipidios e cerca de 0,5 a cerca de 5% p/p de gangliosídios, ou (k) cerca de 15 a cerca de 45% p/p de lipídios, cerca de 8 a cerca de 25% p/p de fosfolipidios e cerca de 0,1 a cerca de 5% p/p de gangliosídios, ou (l) cerca de 15 a cerca de 45% p/p de lipídios, cerca de 8 a cerca de 25% p/p de fosfolipidios, cerca de 1 a cerca de 5% p/p de fosfatidilcolina, cerca de 1 a cerca de 5% p/p de fosfatidilinositol, cerca de 2 a cerca de 8% p/p de fosfatidilserina, cerca de 2 a cerca de 8% p/p de fosfatidiletanolamina, cerca de 0,5 a cerca de 5% p/p de esfingomielina e cerca de 0,1 a cerca de 5% p/p de gangliosídios, ou (m) cerca de 50 a cerca de 99% p/p de lipídios, cerca de 15 a cerca de 60% p/p de fosfolipidios e cerca de 1 a cerca de 10% p/p de gangliosídios, ou (n) cerca de 50 a cerca de 99% p/p de lipídios, cerca de 15 a cerca de 60% p/p de fosfolipidios, cerca de 1 a cerca de 10% p/p de fosfatidilcolina, cerca de 1 a cerca de 15% p/p de fosfatidilinositol, cerca de 1 a cerca de 20% p/p de fosfatidilserina, cerca de 1 a cerca de 20% p/p de fosfatidiletanolamina, cerca de 1 a cerca de 10% p/p de esfingomielina e cerca de 0,1 a cerca de 10% p/p de gangliosídios.

Em uma forma de modalidade, uma formulação útil aqui compreende pelo menos cerca de 0,1, 0,2, 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99, 99,5, 99,8 ou 99,9% em peso da composição compreendendo um ou mais gangliosídios, e intervalos úteis podem ser selecionados entre quaisquer destes valores anteriores (por e- xemplo, de cerca de 0,1 a cerca de 50%, de cerca de 0,2 a cerca de 50%, de cerca de 0,5 a cerca de 50%, de cerca de 1 a cerca de 50%, de cerca de 5 a cerca de 50%, de cerca de 10 a cerca de 50%, de cerca de 15 a cerca de 50%, de cerca de 20 a cerca de 50%, de cerca de 25 a cerca de 50%, de cerca de 30 a cerca de 50%, de cerca de 35 a cerca de 50%, de cerca de 40 a cerca de 50%, de cerca de 45 a cerca de 50%, de cerca de 0,1 a cerca de 60%, de cerca de 0,2 a cerca de 60%, de cerca de 0,5 a cerca de 60%, de cerca de 1 a cerca de 60%, de cerca de 5 a cerca de 60%, de cerca de 10 a cerca de 60%, de cerca de 15 a cerca de 60%, de cerca de 20 a cerca de 60%, de cerca de 25 a cerca de 60%, de cerca de 30 a cerca de 60%, de cerca de 35 a cerca de 60%, de cerca de 40 a cerca de 60%, de cerca de 45 a cerca de 60%, de cerca de 51 a cerca de 60%, de cerca de 51 a cerca de 60%, de cerca de 0,1 a cerca de 70%, de cerca de 0,2 a cerca de 70%, de cerca de 0,5 a cerca de 70%, de cerca de 1 a cerca de 70%, de cerca de 5 a cerca de 70%, de cerca de 10 a cerca de 70%, de cerca de 15 a cerca de 70%, de cerca de 20 a cerca de 70%, de cerca de 25 a cerca de 70%, de cerca de 30 a cerca de 70%, de cerca de 35 a cerca de 70%, de cerca de 40 a cerca de 70%, de cerca de 45 a cerca de 70%, de cerca de 51 a cerca de 70%, de cerca de 0,1 a cerca de 80%, de cerca de 0,2 a cerca de 80%, de cerca de 0,5 a cerca de 80%, de cerca de 1 a cerca de 80%, de cerca de 5 a cerca de 80%, de cerca de 10 a cerca de 80%, de cerca de 15 a cerca de 80%, de cerca de 20 a cerca de 80%, de cerca de 25 a cerca de 80%, de cerca de 30 a cerca de 80%, de cerca de 35 a cerca de 80%, de cerca de 40 a cerca de 80%, de cerca de 45 a cerca de 80%, de cerca de 51 a cerca de 80%, de cerca de 0,1 a cerca de 90%, de cerca de 0,2 a cerca de 90%, de cerca de 0,5 a cerca de 90%, de cerca de 1 a cerca de 90%, de cerca de 5 a cerca de 90%, de cerca de 10 a cerca de 90%, de cerca de 15 a cerca de 90%, de cerca de 20 a cerca de 90%, de cerca de 25 a cerca de 90%, de cerca de 30 a cerca de 90%, de cerca de 35 a cerca de 90%, de cerca de 40 a cerca de 90%, de cerca de 45 a cerca de 90%, de cerca de 51 a cerca de 90%, de cerca de 0,1 a cerca de 99%, de cerca de 0,2 a cerca de 99%, de cerca de 0,5 a cerca de 99%, de cerca de 1 a cerca de 99%, de cerca de 5 a cerca de 99%, de cerca de 10 a cerca de 99%, de cerca de 15 a cerca de 99%, de cerca de 20 a cerca de 99%, de cerca de 25 a cerca de 99%, de cerca de 30 a cerca de 99%, de cerca de 35 a cerca de 99%, de cerca de 40 a cerca de 99%, de cerca de 45 a cerca de 99% e de cerca de 51 a cerca de 99%). Podem ser usadas formas hidrolisadas da composição compreenden- do um ou mais gangliosídios, em que a hidrólise é efetuada, usando métodos conhecidos, a ser alcançada uma extensão desejada de hidrólise.

Em uma forma de modalidade, uma formulação útil aqui compreende pelo menos cerca de 0,001, 0,01, 0,05, 0,1, 0,15, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 ou 19 gramas da composição compreendendo um ou mais gangliosídios como descrito acima, e intervalos úteis podem ser selecionados entre quaisquer destes valores anteriores (por exemplo, de cerca de 0,01 a cerca de 1 grama, cerca de 0,01 a cerca de 10 gramas, cerca de 0,01 a cerca de 19 gramas, de cerca de 0,1 a cerca de 1 grama, cerca de 0,1 a cerca de 10 gramas, cerca de 0,1 a cerca de 19 gramas, de cerca de 1 a cerca de 5 gramas, cerca de 1 a cerca de 10 gramas, cerca de 1 a cerca de 19 gramas, cerca de 5 a cerca de 10 gramas e cerca de 5 a cerca de 19 gramas).

É pretendido que a referência a um intervalo de números divulgado aqui (por exemplo, 1 a 10) também incorpore referência a todos os números racionais pertencentes a esse intervalo (por exemplo, 1, 1,1, 2, 3, 3,9, 4, 5, 6, 6,5, 7, 8, 9 e 10) e também qualquer intervalo de números racionais dentro desse intervalo (por exemplo, 2 a 8, 1,5 a 5,5 e 3,1 a 4,7); em consequência, todos os subintervalos de todos os intervalos aqui expressamente divulgados são, desse modo, expressamente divulgados. Estes são apenas exemplos do que é pretendido de modo específico, e todas as combinações possíveis de valores numéricos entre o valor mais baixo e o valor mais alto enumerados devem ser consideradas como estando expressamente relatadas em este requerimento de um modo similar.

Em esta especificação, quando se fizer referência a especificações de patentes, outros documentos externos ou outras fontes de informação, em geral a finalidade é prover um contexto para discutir as características da invenção. A menos que afirmado em contrário de modo específico, a referência a esses documentos externos não deve ser considerada uma admissão de que esses documentos, ou essas fontes de informação, em qualquer jurisdição, são técnica anterior ou fazem parte do conhecimento geral comum na área.

Para os profissionais aos quais a invenção é relacionada, muitas alterações na fabricação e formas de modalidade e aplicações muito distintas da invenção ocorrerão sem sair do escopo da invenção como definida nas reivindicações apenas. As divulgações e as descrições apresentadas aqui são meramente ilustrativas, não sendo pretendido que sejam limitadoras em nenhum sentido.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

As Figuras 1 a 3 mostram resultados de vários parâmetros de teste da Tarefa do Labirinto Aquático de Morris do Exemplo 1. Os dados indicam média ± EPM, n=16 por grupos de controle (Gel em branco) de Gel em dose baixa, n=15 no grupo tratado com Gel em dose alta.

A Figura 4 mostra os resultados do Teste de Reconhecimento de um Novo Objeto do Exemplo 1.

A Figura 5 é um gráfico que mostra o crescimento pós-natal dos ratos no Exemplo 2. N=16 por grupo, os dados indicam média ± EPM.

A Figura 6 é um gráfico que mostra as alterações na composição de gangliosídios em crias de ratos no Exemplo 4. Os gangliosídios GM1a, GD1a, GD1b e GT1b estavam acrescidos de modo significativo (p < 0,05).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO 1. Definições

O termo "beta-soro" significa um ingrediente lácteo aquoso separado de correntes lácteas contendo mais de 60% de gordura que passaram por inversão de fases de uma emulsão óleo-em-água para uma água-em- óleo, como descrito abaixo. A nata é o material de partida preferido para a produção de beta-soro. Por exemplo, o beta-soro é produzido durante a produção de óleo de manteiga (também chamado de gordura anidra do leite ou AMF) a partir de nata como mostrado na Figura 2 de WO 2006/041316, aqui incorporado por referência. De preferência, o beta soro é seco; de preferência, o beta-soro seco é um pó.

O termo "compreendendo", tal como é usado em esta especificação e reivindicações, significa "consistindo pelo menos em parte em". Ao interpretar afirmações feitas em esta especificação e reivindicações que in- cluem esse termo, é necessário que estejam presentes todas as características prefaciadas por esse termo em cada afirmação, mas outras características também podem estar presentes. Termos relacionados, como "compreende" e "compreendido", devem ser interpretados do mesmo modo.

O termo "níveis na circulação fetal", tal como é usado aqui, significa níveis no sangue fetal e/ou níveis na linfa fetal e/ou níveis em tecido fetal.

O termo "lipídio complexo", tal como é usado em esta especificação, significa um lipídio selecionado do grupo que consiste em fosfolipídios e esfingolipídios, incluindo glicoesfingolipídios (cerebrosídeos e gangliosídios), ceramidas e esfingomielinas. São discutidos abaixo em mais detalhe diferentes tipos de lipídios complexos. Os lipídios complexos podem estar presentes em leite e outras fontes lácteas. Outras fontes de alguns lipídios complexos incluem qualquer tecido animal, mas em especial lipídios de tecido cerebral e nervoso, ovos, peixe, veludo de veado e plantas. De preferência, os lipídios complexos usados na presente invenção são derivados de um ingrediente lácteo. Ingredientes lácteos adequados incluem colostro, leite, frações do colostro ou frações do leite. De preferência, o ingrediente lácteo é derivado de vacas, búfalos, cabras, ovelhas ou humanos. Com muita preferência, o ingrediente lácteo é derivado de vacas. De preferência, o lipídio complexo está na forma de um extrato de gordura do leite.

Uma "quantidade eficaz" é a quantidade requerida para conferir um efeito terapêutico. As inter-relações de dosagens para animais e humanos (baseadas em miligramas por metro quadrado da superfície do corpo) são descritas por Freireich et al. (1966). A área da superfície do corpo pode ser determinada, de modo aproximado, a partir da altura e peso do sujeito. Ver, por exemplo, "Scientific Tables", Geigy Pharmaceuticals, Ardley, Nova Iorque, 1970, 537. As doses eficazes também variam, como é reconhecido pelos versados na técnica, dependendo da via de administração, utilização de veículos e similares.

Os termos "aumentar o desenvolvimento cognitivo" ou "para aumentar o desenvolvimento cognitivo" são usados aqui de forma intermutável e referem-se ao aumento da velocidade, capacidade, interesse, vontade ou abertura para aprender, rememorar ou aplicar conhecimentos. Em algumas formas de modalidade, "desenvolvimento cognitivo" refere-se a peso cerebral e teor cerebral de gangliosídios.

Os termos "aumentar ou manter o crescimento" ou "para aumentar ou manter o crescimento" são usados aqui de forma intermutável e referem-se ao aumento ou manutenção de um crescimento saudável, podendo referir-se ao aumento ou manutenção do crescimento absoluto ou taxa de crescimento relacionada ao peso, comprimento ou altura mas não aumentando a adiposidade nem decrescendo a densidade óssea.

O termo "fórmula materna", tal como é usado em esta especificação, significa uma composição para mulheres grávidas tomarem durante a gravidez. O termo "fórmula para lactentes", tal como é usado em esta especificação, significa uma composição para lactentes com idades entre os 0 dias e 6 meses. O termo "fórmula de acompanhamento", tal como é usado em esta especificação, significa uma composição para lactentes com idades entre 6 meses e 1 ano. O termo "fórmula de crescimento", tal como é usado em esta especificação, significa uma composição dirigida a lactentes e crianças com idades desde 1 ano. Uma fórmula de crescimento inclui leites em pó de crescimento ou GUMPs.

Os profissionais apreciarão que os intervalos de idades para as diferentes composições: "fórmula para lactentes", "fórmula de acompanhamento" e "fórmula de crescimento", podem variar de criança para criança, dependendo do desenvolvimento individual. Estes produtos podem estar na forma líquida, como concentrados ou líquidos prontos a beber, ou podem ser providos como concentrados em pó.

O termo "produto dietético" significa um produto processado ou formulado, em especial, para satisfazer requisitos dietéticos particulares que podem existir devido a uma condição física ou fisiológica particular e/ou doenças e distúrbios específicos e que estão presentes como tal.

O termo "extrato de gordura do leite" significa um extrato isolado de gordura de leite de mamífero não humano em que a concentração de fosfolipidios e gangliosídios do extrato é maior do que a concentração de fosfo- lipídios e gangliosídios da gordura de leite de mamífero não humano de o- corrência natural. De preferência, a concentração de pelo menos um fosfoli- pídio e pelo menos um gangliosídio em um extrato útil aqui é pelo menos cerca de 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100% mais alta do que a concentração em gordura de leite de mamífero não humano de ocorrência natural, e intervalos úteis podem ser selecionados entre estes valores. Em formas de modalidade alternativas, a concentração no extrato é maior do que a concentração em leite completo, ou em colostro completo, ou em nata de leite, ou em nata de colostro, ou em gordura anidra do leite (AMF) de leite, ou AMF de colostro.

Em uma formulação útil aqui, a formulação pode compreender, consistir essencialmente ou consistir em cerca de 0,1, 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 ou 100% em peso de leite completo, ou um derivado do leite, fresco, recombinado ou em pó, e intervalos úteis podem ser selecionados entre quaisquer destes valores anteriores (por exemplo, de cerca de 0,1 a cerca de 50%, de cerca de 0,2 a cerca de 50%, de cerca de 0,5 a cerca de 50%, de cerca de 1 a cerca de 50%, de cerca de 5 a cerca de 50%, de cerca de 10 a cerca de 50%, de cerca de 15 a cerca de 50%, de cerca de 20 a cerca de 50%, de cerca de 25 a cerca de 50%, de cerca de 30 a cerca de 50%, de cerca de 35 a cerca de 50%, de cerca de 40 a cerca de 50% e de cerca de 45 a cerca de 50%). O derivado do leite é selecionado, de preferência, de leite desnatado recombinado, em pó ou fresco, leite completo ou leite desnatado em pó reconstituí-do, concentrado de leite desnatado, retentado de leite desnatado, leite con-centrado, retentado de leite ultrafiltrado, concentrado de proteínas do leite (MPC), isolado de proteínas do leite (MPI), concentrado de proteínas do leite (MPC) depletado em cálcio, leite magro, concentrado de proteínas do leite (MPC) magro, caseína, caseinato, gordura do leite, nata, manteiga, manteiga clarificada, gordura anidra do leite (AMF), leitelho, soro de manteiga, frações duras da gordura do leite, frações moles da gordura do leite, frações de es- fingolipídios, frações de membranas de glóbulos da gordura do leite, frações de fosfolipidios, frações de lipídios complexos, colostro, uma fração do co- lostro, concentrado de proteínas do colostro (CPC), soro de leite do colostro, uma fração de imunoglobulinas do colostro, soro de leite, isolado de proteínas de soro de leite (WPI), concentrado de proteínas de soro de leite (WPC), soro de leite doce, soro de leite coalhado por ácido láctico, soro de leite coalhado por ácidos minerais, soro de leite em pó reconstituído, uma composição derivada de qualquer corrente de processamento de leite ou colostro, uma composição derivada do retentado ou permeado obtido por ultrafiltração ou microfiltração de qualquer corrente de processamento de leite ou colostro, uma composição derivada da fração eluída ou adsorvida obtida por separação cromatográfica (incluindo mas não se limitando a cromatografia iô- nica e de permeação em gel) de qualquer corrente de processamento de leite ou colostro, extratos de quaisquer destes derivados do leite, incluindo extratos preparados por fracionamento multi-estágios, cristalização diferencial, fracionamento por solventes, fracionamento supercrítico, fracionamento quase supercrítico, destilação, fracionamento centrífugo ou fracionamento com um modificador (por exemplo, sabões ou emulsionantes), hidrolisados de quaisquer derivados dos mesmos, frações dos hidrolisados e combinações derivadas dos mesmos, incluindo combinações de frações hidrolisadas e/ou não hidrolisadas. Deve ser entendido que a fonte derivados dos mesmos pode ser leite ou colostro ou uma combinação dos mesmos. Também deve ser entendido que a gordura do leite pode ser provida na forma de leite completo fresco, recombinado ou em pó, um ou mais derivados do leite como descrito acima, ou combinações dos mesmos.

Em uma forma de modalidade, uma formulação útil aqui também compreende um veículo farmaceuticamente aceitável. Em outra forma de modalidade, a formulação consiste ou então é formulada como um alimento, bebida, aditivo alimentar, aditivo para bebidas, suplemento dietético, produto nutricional, alimento médico, produto de alimentação entérica ou parentérica, substituto alimentar, agente nutracêutico, medicamento ou agente farmacêutico. Em uma forma de modalidade, a formulação toma a forma de um comprimido, um comprimido oval medicinal, uma pílula, uma cápsula endurecida ou mole ou um rebuçado. Em uma forma de modalidade, a formulação toma a forma de uma cápsula, um pó dispersível, grânulos, uma suspensão, um elixir, um líquido, ou qualquer outra forma que possa ser adicionada a alimentos ou bebidas, incluindo, por exemplo, água, leite ou sumo de fruta. Em uma forma de modalidade, a formulação também compreende um ou mais constituintes (como antioxidantes) que previnem ou reduzem a degradação da formulação durante o armazenamento ou após a administração. Estas formulações podem incluir um produto comestível capaz de transportar lipídios. Exemplos de produtos comestíveis adequados incluem produtos aquosos, produtos cozinhados, produtos de confeitaria, incluindo chocolate, géis, gelados, produtos à base de frutas reconstituídas, barras de lanche, barras alimentares, barras de muesli, coberturas, temperos, molhos, produtos lácteos, incluindo iogurtes e queijos, bebidas, incluindo bebidas à base de produtos lácteos e não lácteos, leite, leite em pó, suplementos esportivos, incluindo suplementos esportivos à base de produtos lácteos e não lácteos, sumo de fruta, aditivos alimentares, como granulados de proteínas, e produtos de suplemento dietético, incluindo comprimidos de suplementos diários. Composições nutracêuticas adequadas úteis aqui podem ser providas em formas similares.

O termo "administração oral" inclui administração oral, bucal, entérica e intragástrica.

É pretendido que o termo "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um veículo que inclui mas não se limita a um excipiente, diluente, auxiliar ou uma combinação desses que possa ser administrado a um sujeito na forma de um componente de uma composição da invenção, que não reduz a atividade da composição e não é tóxico quando administrado em doses suficientes para distribuir uma quantidade eficaz do ingrediente ativo. As formulações podem ser administradas pela via oral ou nasal.

Um "sujeito" é um animal, de preferência um mamífero, com maior preferência um mamífero de estimação ou um humano. Animais de estimação preferidos incluem gatos, cães e cavalos.

2. Lipídios complexos

Os fosfolipidios são uma classe de lipídios e um componente importante de membranas celulares. Os esfingolipídios também são uma classe de lipídios, a classe de lipídios membranares estruturalmente mais diversa. Os esfingolipídios são lipídios que compreendem, na sua maior parte, a base de 18 carbonos esfingosina (encontram-se alguns comprimentos de base diferentes), que tem um grupo acila ligado por uma ligação amida, para formar uma ceramida (Newburg, 1996). Há três tipos principais de esfingolipídios: (1) Glicoesfingolipídios (esfingolipídios que contêm açúcar), que podem ser adicionalmente subdivididos em cerebrosídeos e gangliosídios. (2) Ceramidas (que consistem simplesmente em uma cadeia de ácido graxo ligada, por uma ligação amida, a esfingosina). (3) Esfingomielinas (molécula de fosforilcolina ou fosforoetano- lamina esterificada no grupo 1-hidróxi de uma ceramida). As esfingomielinas também são fosfolipidios.

Lipídios complexos derivados de produtos lácteos são discutidos de forma extensa por Fox e McSweeney, aqui incorporado por referência.

3. Estrutura de gangliosídios

O que distingue os gangliosídios dos outros glicoesfingolipídios é o fato de conterem o açúcar ácido siálico, que tem carga negativa ao pH fisiológico.

Uma grande variedade de gangliosídio glicanos pode ser formada pela combinação de glucose (Glc), galactose (Gal), N-acetil galactosami- na (GalNAc) e ácido siálico em conjunto. À medida que aumenta a dimensão do glicano também aumenta a hidrofilicidade da porção de glicano. A porção de ceramida é hidrofóbica, o que torna toda a molécula anfifílica.

A nomenclatura que é mais habitualmente empregada, devido à sua simplicidade comparada com a nomenclatura da IUPAC, é a de Svenne- rholm (Svennerholm, 1963), relacionada à porção de glicano do gangliosídio. Todos os gangliosídios começam com G, e a letra seguinte descreve o número de resíduos de ácido siálico presentes na molécula (M = mono, D = di, T = tri, Q = quad etc.). A parte seguinte da nomenclatura é um número, que descreve o número de açúcares diferentes de ácido siálico presentes na mo- lécula (1 indica quatro açúcares diferentes do(s) ácido(s) siálico(s) ligado(s), Gal-GaINAc- Gal-GIc-ceramida; 2 indica três açúcares, GalNAc-Gal-Glc- ceramida, e 3 indica dois açúcares, Gal-GIc-ceramida). Por vezes há uma letra minúscula ligada no final para designar onde estão ligados os ácidos siálicos, habitualmente a galactose ou outro ácido siálico. Para além do gli- cano já complexo, complexidade adicional é derivada da possível adição de fucose ou modificação dos grupos hidroxila do ácido siálico com adições de acetato (ou outros grupos). A acetilação (4-, 7- ou 9-O-acetilação) tem efeitos importantes na bioatividade ou reconhecimento por outras moléculas, como proteínas. Os ácidos siálicos proveem ainda maior complexidade porque, apesar de os ácidos siálicos mais comuns serem ácido N-acetil neura- mínico (NANA) e ácido N-glicolil neuramínico (NGNA), foi mostrado que existem mais de 30 na natureza (Schauer, 2004).

Pequenas alterações estruturais em gangliosídios podem elucidar atividades biológicas acentuadamente diferentes. Um exemplo é a ligação da toxina da cólera a gangliosídios, a toxina é específica para um gangliosídio, o gangliosídio GM1. A adição de outra molécula de NANA (GD1a) ou a perda de uma galactose (GM2) conduz a ligação desprezável. Como mencionado acima, a O-acetilação afeta a atividade biológica, por exemplo, a diferença no efeito entre GD3 e 9-O-acetil GD3 na formação de excrescências neuronais, em que o último é promotor mas o primeiro não. Os e- xemplos anteriores são alterações na estrutura do glicano, e trabalhos recentes sugerem que mesmo alterações no ácido graxo ligado à esfingosina influenciam a atividade. Assim, o profissional não irá presumir que a atividade biológica atribuída a um gangliosídio será atribuída a outro, dada a especificidade da atividade para estruturas específicas de gangliosídios.

Os gangliosídios podem ser mensurados por algumas técnicas. A medição de gangliosídios pode ser efetuada mensurando o Ácido Siálico Ligado a Lipídios (LBSA) ou espécies individuais quantificadas por Cromato- grafia de Camada Fina (TLC), Cromatografia Líquida de Alto Desempenho com detecção por UV (HPLC-UV) ou por cromatografia líquida ligada a espe- trometria de massa. Algumas técnicas podem ser empregadas para extrair gangliosídios de uma variedade de materiais, e estas são bem conhecidas dos versados na técnica.

Os gangliosídios úteis aqui incluem qualquer um ou mais de GM1, GM2, GM3, GM4, GD1, GD2, GD3, GT1, GT2, GT3, GQ1 e GP1, e qualquer um dos derivados "a", "b" ou "c", quando existirem, e qualquer combinação de quaisquer dois ou mais dos mesmos. A estrutura e síntese de gangliosídios são revistas por Rosner, 2003, incorporado aqui por referência.

4. Aumento do desenvolvimento cognitivo

Um desenvolvimento cognitivo ótimo é uma parte crucial do de-senvolvimento de lactentes e crianças. Em consequência, qualquer agente que demonstre aumentar o desenvolvimento cognitivo terá grandes efeitos benéficos em lactentes e crianças.

Como referido antes, os termos "aumentar o desenvolvimento cognitivo" ou "para aumentar o desenvolvimento cognitivo" são usados aqui de forma intermutável e referem-se ao aumento da velocidade, capacidade, interesse, vontade ou abertura para aprender, rememorar ou aplicar conhecimentos.

Uma grande variedade de métodos para avaliar o desenvolvimento cognitivo é bem conhecida dos versados na técnica. Será claro que métodos particulares podem ser preferidos, dependendo da natureza da cognição a ser avaliada, as características ou identidade (tal como, mas não se limitando à espécie, idade, saúde ou bem-estar) do sujeito, ou outros fatores que possam ser aplicáveis. Por exemplo, a metodologia útil para avaliar o desenvolvimento cognitivo em sujeitos não humanos inclui o Teste do Labirinto Aquático de Morris e o Teste da Tarefa de Reconhecimento de um Novo Objeto, como descrito no Exemplo 1. A metodologia útil para avaliar o desenvolvimento cognitivo em sujeitos humanos inclui as ferramentas resumidas na Tabela 1.Tabela 1 Métodos de avaliação do desenvolvimento humano

5. Aumento do crescimento

Um crescimento ótimo é uma parte crucial do desenvolvimento de lactentes e crianças. Foi mostrado que um crescimento restrito tem efeitos prejudiciais na saúde e desenvolvimento cognitivo a longo prazo. Em consequência, qualquer agente que demonstre aumentar ou manter um crescimento saudável trará grandes benefícios para lactentes e crianças.

Como referido antes, os termos "aumentar ou manter o crescimento" ou "para aumentar ou manter o crescimento" são usados aqui de forma intermutável e referem-se ao aumento ou manutenção de um crescimento saudável, e podem referir-se ao aumento ou manutenção do crescimento absoluto ou taxa de crescimento relacionada ao peso, comprimento ou altura mas não aumentando a adiposidade ou decrescendo a densidade óssea. Estes termos também referem-se ao aumento da densidade mineral óssea e/ou peso cerebral.

6. Isolamento de lipídios complexos

Extratos ou frações contendo níveis mais altos de lipídios complexos do que o leite natural podem ser preparados de alguns modos. Estes incluem a extração de leite ou leite em pó com misturas de clorofór- mio/metanol (para um exemplo ver Martin et al., 2001) ou Tetra-hidrofurano (Neeser et al., 1991) ou extração subcrítica com Éter de dimetila (WO 2006/041316A). A extração de lipídios complexos de outros tecidos, como fontes de mamíferos, marinhas e vegetais, incluindo materiais do cérebro, tecido neural, fígado, sangue de peixe, ovos e plantas, foi alcançada por uma grande variedade de metodologias conhecidas dos versados na técnica (um desses exemplos é apresentado em Svennerholm et al., 1994). Os gangliosídios também podem ser produzidos de modo sintético ou semi- sintético. Os gangliosídios úteis aqui incluem qualquer um ou mais de GM1, GM2, GM3, GM4, GD1, GD2, GD3, GT1, GT2, GT3, GQ1 e GP1, e qualquer um dos derivados "a", "b" ou "c", quando existirem, e qualquer combinação de quaisquer dois ou mais dos mesmos. A estrutura e síntese de gangliosídios são revistas por Rosner, 2003, incorporado aqui por referência.

Exemplos de extratos úteis de acordo com a invenção incluem qualquer fração do leite "rica em gordura", por exemplo: nata, manteiga, manteiga clarificada, gordura anidra do leite (AMF), leitelho, soro de manteiga, beta soro, frações duras da gordura do leite, frações moles da gordura do leite, frações de membranas de glóbulos da gordura do leite, e combinações dos mesmos, e hidrolisados dos mesmos.

A gordura do leite é discutida de forma extensa por Fox e McS- weeney (2006), incorporado aqui por referência. Para além de lipídios, a gordura do leite inclui vitaminas, esterois e componentes minoritários. Ver Capítulo 1, "Composition and Structure of Bovine Milk Lipids", Fox e McSwe- eney, para uma descrição da gordura do leite bovino de ocorrência natural. O fracionamento da gordura do leite é discutido por Bylund, 1995, Illingworth, 2002, e Rombau et al., 2006(b), todos incorporados aqui por referência. A variação sazonal da gordura do leite é discutida por Fox e McSweeney (2006).

Exemplos de fontes de lipídios complexos úteis aqui incluem nata (tipicamente cerca de 20 a cerca de 40% de gordura por peso, de preferência cerca de 40% de gordura por peso), manteiga, manteiga clarificada, gordura anidra do leite (AMF) (tipicamente produzida por inversão de fases da nata ou desidratação da manteiga), leitelho, soro de manteiga, beta soro, frações duras da gordura do leite, frações moles da gordura do leite, extratos de esfingolipídios, extratos de membranas de glóbulos da gordura do leite, extratos de lipídios de membranas de glóbulos da gordura do leite, extratos de fosfolipidios e extratos de lipídios complexos (lipídios que originam 3 ou mais tipos de produtos de hidrólise por molécula), e combinações dos mesmos, e hidrolisados dos mesmos.

O leitelho, soro de manteiga e beta soro são discutidos por B- ylund, 1995, Rombaut et al., 2005, Rombaut et al., 2006(a), Rombaut et al., 2006(b) e requerimento internacional publicado WO 2006/041316, por e- xemplo, todos incorporados aqui por referência. Leitelho é um termo usado para descrever a fase líquida aquosa obtida da produção tradicional de manteiga usando um processo de fabricação de manteiga que pode ser um processo descontínuo (batedeira) ou um processo contínuo (Fritz). Leitelho também é um termo usado para descrever o produto secundário aquoso produzido pelo passo de concentração da nata do método tradicional de produção de AMF a partir da nata. Este método tradicional envolve concentração e depois inversão de fases da nata para produzir óleo, que é adicionalmente concentrado e polido para produzir AMF. Por fim, leitelho também é um termo usado para descrever uma combinação dos produtos secundários espuma secundária e beta soro de um processo de dois soros para a produção de AMF - ver, por exemplo, Bylund (1995) e requerimento internacional publicado WO 2006/041316 (ver Figura 2), que descrevem este processo em detalhe. Em esse processo de dois soros, o produto secundário do passo de concentração da nata é adicionalmente separado para produzir espuma secundária, e o produto secundário do passo de concentração do óleo é adicionalmente separado para produzir beta-soro. Nos primeiros dois casos, o leitelho é produzido antes de ter ocorrido qualquer inversão de fases. No terceiro caso, o leitelho é uma combinação de espuma secundária produzida antes da inversão de fases e de beta soro produzido após a inversão de fases. A concentração e polimento em estes processos são tipicamente efetuados por centrifugação. A inversão de fases é tipicamente efetuada por homogeneização. Deve ser entendido que a fonte destes extratos lipídicos lácteos pode ser leite ou colostro, ou uma combinação dos mesmos. Materiais de partida úteis para o fracionamento incluem nata, AMF, leitelho, soro de manteiga ou beta soro, de leite ou colostro ou uma combinação dos mesmos.

O fracionamento de multiestágios da gordura do leite pode ser efetuado por cristalização diferencial. Os extratos de gordura do leite são aquecidos para uma temperatura definida e as frações cristalizada ou sólida ("estearina" - fração dura) e líquida ("oleína" - fração mole) são separadas. Fracionamento em múltiplos passos refere-se ao novo fracionamento, em um passo subsequente, de um produto de um passo de fracionamento prévio. Frações moles sucessivas podem ser produzidas por fracionamento de frações moles paternas em subtrações moles e duras.

Outros métodos de fracionamento incluem inversão de fases, in- teresterificação, glicerólise, fracionamento com solventes (tal como com etanol, água ou acetona, usados de modo isolado ou sequencial), fracionamento supercrítico (ver Astaire et al., 2003, por exemplo), fracionamento quase crítico (ver WO 2004/066744, por exemplo), destilação, fracionamento centrífugo, cristalização a partir de suspensões, cristalização a seco, fracionamento com um modificador (por exemplo, sabões ou emulsionantes), ultrafiltra- ção, microfiltração, e qualquer processo de fracionamento de lipídios conhecido na técnica, e combinações destes métodos, todos como é conhecido na técnica. Em uma forma de modalidade, o método de fracionamento é selecionado de fracionamento com solventes de nata, AMF, leitelho, soro de manteiga ou beta soro, usando etanol, água ou acetona, de modo isolado ou sequencial.

Os lipídios presentes nas composições da invenção podem ser modificados de modo total ou parcial, quer seja modificação natural, química, enzimática ou por quaisquer outros métodos conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, glicosilados, sialilados, esterificados, fosforilados ou hidrolisados. Hidrolisados lipídicos podem ser preparados usando técnicas conhecidas, incluindo mas não se limitando a hidrólise ácida, hidrólise básica, hidrólise enzimática usando uma lipase, por exemplo, como descrito em Fox e McSweeney ((2006), Capítulo 15 por H.C. Deeth e C.H. Fitz-Gerald), e fermentação microbiana. Um método de hidrólise básica inclui adicionar KOH a 1% (em etanol) e aquecer por 10 minutos. O material hidrolisado pode ser neutralizado com ácido acético ou ácido clorídrico.

Material de membranas de glóbulos da gordura do leite pode ser isolado de acordo com o método de acidificação de Kanno & Dong-Hyun, 1990, e pode ser adicionalmente fracionado em frações lipídica e proteica por adição de metanol, como descrito por Kanno et al., 1975. Um extrato fosfolipídico pode ser isolado extraindo a mistura lipídica com acetona de acordo com o procedimento de Purthi et al., 1970, O resíduo lipídico pode ser adicionalmente enriquecido em lipídios de membranas de glóbulos da gordura do leite pela extração seletiva de lipídios não polares com pentano.

Métodos de fracionamento úteis para produzir extratos de gordu- ra do leite úteis aqui também são descritos nos requerimentos de patentes internacionais publicados WO 2006/041316, WO 2007/123424 e WO 2007/123425, e cada um é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

Extratos de gordura do leite preferidos de modo particular e que são úteis aqui incluem os descritos nos exemplos abaixo e os resumidos nas Tabelas 1a e 1b seguintes. Estes extratos podem ser secos e podem ser pós, opcionalmente com componentes adicionados, incluindo auxiliares de escoamento, como lactose, para melhorar a capacidade de escoamento. A fração 1 é beta-soro. As frações 2, 3, 4 e 6 são preparadas por extração com etanol de beta-soro em pó. O beta soro é a fase líquida produzida durante a fabricação de AMF. As frações que incluem beta-soro, o precursor de gordura do leite G600® (o Lote 1 é uma emulsão, o Lote 2 e Lote 3 são pós liofilizados; todos são precursores da fabricação do extrato de gordura do leite G600®), o extrato de gordura do leite G500® e o extrato de gordura do leite G600® foram obtidos da Fonterra Co-operative Group Limited, Nova Zelândia. As Frações 7 a 11 descritas na Tabela 2b abaixo podem ser produzidas de acordo com os métodos descritos no requerimento de patente internacional publicado WO 2006/041316 (ver exemplos 3 a 6). A fração 11 pode ser produzida por extração supercrítica com dióxido de carbono da Fração 9.Tabela 2a Extratos de gordura do leite úteis aqui Tabela 2b Extratos de gordura do leite úteis aqui

O extrato de gordura do leite G500® é um concentrado de gan- gliosídios do leite seco por pulverização ao qual foi adicionada lactose para melhorar a capacidade de escoamento do pó. O extrato de gordura do leite G500® tem uma composição típica de ácidos graxos de ácido mirístico (14:0) 5,6%, ácido palmítico (16:0) 18,4%, ácido palmitoléico (16:1) 1,2%, ácido margárico (17:0) 0,5%, ácido esteárico (18:0) 14,9%, ácido oléico (18:1) 31,0%, ácido linoléico (18:2) 3,8%, ácido linolénico (18:3) 1,5% e ácido araquidónico (20:4) 0,5%. O extrato de gordura do leite G600® é um concentrado de gangliosídios do leite seco por pulverização ao qual foi adicionada lactose para melhorar a capacidade de escoamento do pó. O extrato de gordura do leite G600® tem uma composição típica de ácidos graxos de ácido mirístico (14:0) 4,7%, ácido palmítico (16:0) 16,4%, ácido palmitoléico (16:1) 1,2%, ácido margárico (17:0) 0,5%, ácido esteárico (18:0) 17,0%, ácido oléico (18:1) 33,4%, ácido linoléico (18:2) 4,2%, ácido linolénico (18:3) 1,4% e ácido araquidónico (20:4) 0,6%. Antes da adição de lactose, o extrato de gordura do leite G500® e o extrato de gordura do leite G600® podem ser usados como precursores, com ou sem secagem, como liofilização ou secagem por pulverização, e sem lactose adicionada.

Nas frações descritas acima, os níveis proteicos foram determinados pelo azoto total multiplicado por 6,38. Os níveis de fosfolipídios foram determinados por31P RMN. Os níveis de gangliosídios foram determinados do modo seguinte. Em triplicado, aproximadamente 0,1 g de pó foram pesados em um tubo kimax de 16 ml_ e o peso foi registrado. Adicionaram-se 6 mL de metanol e o sistema foi misturado por sujeição a vórtice por 1 minuto. A solução foi incubada a 50°C por 10 minutos, depois adicionaram-se 6 mL de água e o sistema foi misturado por sujeição a vórtice. Deixou-se a solução repousar por 2 horas a 4°C, para assentar, e uma amostra foi coletada e passada por um filtro de 0,45 μm. A amostra foi analisada por HPLC. Usou- se uma coluna Waters Cosmosil® 5NH2-MS (Nacalai Tesque Inc, E.U.A.) com uma guarda de segurança de NH2 (Phenomenex® AJO-4302 em um suporte Phenomenex® KJO-4282). O cartucho de guarda foi mudado todos os dias da análise. Injeções de amostra foram injetadas na coluna e eluíram, a uma taxa de fluxo de 2 mL/minuto, usando o solvente A (90% de acetonitri- la, 5% de água e 5% de tampão de fosfato 5 mM pH 5,6) e solvente B (50% de acetonitrila, 45% de água e 5% de tampão de fosfato 200 mM pH 5,6). Usou-se o gradiente seguinte: 100% de A por 3,5 minutos, depois 100% de A a 55% de A por 26,5 minutos, depois 55% de A a 100% de A por 1 minuto e então 100% de A por 5 minutos (Wagener et al. (1996), Journal of Lipid Research 37, 1823-1829). Uma curva padrão externa de 0-2 ug de GD3 foi gerada usando GD3 de leitelho (Matreya N° 1504). A eluição foi monitorada a 203 nm.

7. Composições úteis de acordo com a invenção

Uma composição útil aqui pode ser formulada como um alimento, bebida, aditivo alimentar, aditivo para bebidas, suplemento dietético, produto nutricional, alimento médico, produto de alimentação entérica ou paren- térica, substituto alimentar, agente cosmecêutico ou agente farmacêutico. Formulações apropriadas podem ser preparadas pelo versado na técnica à luz da sua perícia e do ensinamento desta especificação.

Como será apreciado, a dose da composição administrada, o período da administração e o regime geral da administração podem diferir entre sujeitos, dependendo de variáveis tais como o modo de administração escolhido e a idade, sexo e/ou estado geral de saúde de um sujeito.

Em uma forma de modalidade, composições úteis aqui incluem fórmulas maternas, fórmulas para lactentes, fórmulas de acompanhamento e fórmulas de crescimento, em forma líquida (concentrado ou pronto a beber) ou de pó. Esses produtos são formulados para administrar nutrientes ao feto, lactente e criança. É apreciado que os primeiros estágios da vida (feto, lactente e criança em crescimento) envolvem um crescimento e desenvolvimento significativos. Qualquer suporte que aumente o desenvolvimento pode ter efeitos importantes no desenvolvimento do indivíduo.

Em outra forma de modalidade, composições úteis aqui incluem produtos dietéticos.

Exemplos de fórmulas, como fórmulas maternas, fórmulas para lactentes, fórmulas de acompanhamento ou fórmulas de crescimento, em forma de pó ou líquida, incluem os seguintes. Um exemplo de uma fórmula para lactentes, fórmula de acompanhamento ou fórmula de crescimento útil aqui compreende (p/p): (a) 30 - 60% de lactose (b) 15 - 35% de óleos vegetais (c) 0 - 40% de leite em pó desnatado (d) 0 - 40% de proteínas do soro do leite, como WPC ou WPI, de preferência uma WPC 80% (WPC80) e (e) 1 - 50% de um ou mais lipídios complexos úteis aqui.

Outro exemplo de uma fórmula para lactentes, fórmula de acom-panhamento ou fórmula de crescimento útil aqui compreende (p/p): (a) 40 - 60% de lactose (b) 20 - 30% de óleos vegetais (c) 10 -15% de leite em pó desnatado (d) 6 - 8% de proteínas do soro do leite, de preferência WPC80 e (e) 1 -10% de um ou mais lipídios complexos úteis aqui.

Um exemplo de uma fórmula de material útil aqui compreende (P/P): (a) 80 - 99,9% de um leite em pó selecionado de leite em pó completo, leite em pó desnatado, concentrado de proteínas do leite (MPC), isolado de proteínas do leite (MPI) e proteínas do soro do leite, como WPC ou WPI (b) 0 - 20% de lipídios, como gordura do leite ou um ou mais ó- leos vegetais (c) 0 - 25% de açúcares ou ingrediente de carboidratos (d) 0,1 - 0,5% de mistura de vitaminas e minerais (e) 0 - 5% de ingredientes aromatizantes e (f) 0 - 5% de um ou mais lipídios complexos úteis aqui.

Qualquer uma destas fórmulas também pode compreender 0,1 a 4% p/p, de preferência 2 a 4% p/p de um ou mais de uma pré-mistura de vitaminas, uma pré-mistura de minerais, lecitina, um ou mais antioxidantes, um ou mais estabilizadores, ou um ou mais nucleotídeos, ou uma combinação de quaisquer dois ou mais desses. Em algumas formas de modalidade, estas fórmulas podem ser formuladas para prover de cerca de 2700 a cerca de 3000 kJ/L.

Em formas de modalidade alternativas, as composições úteis aqui podem ser formuladas para permitir a administração a um sujeito por 5 qualquer via escolhida, incluindo mas não se limitando a administração oral.

Os seguintes exemplos não limitadores são providos para ilustrar a presente invenção e, de modo nenhum, limitam o escopo do mesmo.

EXEMPLOS Material de Teste

O precursor G600® (Fonterra Co-operative Group Limited) é um ingrediente de lipídios complexos derivado de produtos lácteos que tem a composição apresentada na tabela seguinte (energia 2730 kJ/100 g).Tabela 3 Composição do precursor G600®

A medição de gangliosídios no precursor G600® foi conduzida dissolvendo 0,1 g em 12,5 mL de metanol, seguido de incubação a 50°C por 10 minutos, seguido da adição de 12,5 ml_ de água e incubação a 4°C por 2 horas, então análise por HPLC-UV (Wagner et al., 1996).

EXEMPLO 1 - Efeito na cognição e aprendizagem 1.1 Acasalamentos calendarizados

O acasalamento calendarizado de ratos Wistar foi efetuado aos 100 dias de idade usando um monitor do ciclo sexual (EC-40, Fine Science Tools, San Francisco, E.U.A.). A confirmação do acasalamento foi efetuada via uma lavagem vaginal com solução salina esterilizada e visualização de espermatozóides ao microscópio. A taxa de sucesso da gravidez foi 100% com 28 mães acasaladas.

1.2 Suplementação nutricional

As mães foram nutridas com ração comum para ratos (Dieta 2018, Harlan Teklad, Oxon, R.U.), ao longo da gravidez e lactação, que não continha lipídios complexos do leite. As mães foram suplementadas com gangliosídios usando o gel descrito abaixo.

Os neonatais foram suplementados com gangliosídios desde o dia pós-natal 10 a ao dia 22 (pós-desmame precoce) a uma concentração de 0,02% (baixa) a 1% (alta) peso/peso do corpo (p/p) relativa à ingestão mensurada de alimentos.

Os géis para as mães e crias foram preparados usando uma formulação em gel compreendendo 10% p/v de gelatina, 10% p/v de sucrose, 5% v/v de concentrado aromatizante (aroma de framboesa Hansells®) e 0 (ensaio em Branco), 0,384% p/v (Baixa) ou 1,92% p/v (Alta) de precursor G600®. Equivalente a 0, 48 e 240 mg por 12,5 mL de gel por dia.

1.3 Suplementação pré-desmame

O suplemento foi administrado por gavagem oral usando tubos de alimentação concebidos de modo específico para utilização em crias/crias desmamadas de ratos (Instech Laboratories, produto número FTP 20-30, calibre 20, (9 mm D.E. x 0,5 mm D.l.) x 30 mm)). A dose foi 0,1 mL em água esterilizada. Os animais de controlo receberam uma pseudogavagem contendo água esterilizada.

1.4 Suplementação com gel pós-desmame

No desmame (dia pós-natal 22), os animais foram emparelhados pelo peso no grupo de tratamento e foram alojados dois por gaiola em condições padrão. As crias receberam a dieta de ração (descrita acima) e foram suplementadas com um gel contendo gangliosídios como descrito acima às doses relatadas acima.

A dieta de ração foi suplementada com os géis às doses definidas acima com base na ingestão de alimento e foi ajustada de acordo com alterações no consumo da dieta. Os géis foram colocados em qualquer uma das extremidades da plataforma de alimentação em cada gaiola e os géis foram consumidos preferencialmente à ração. Nenhum dos animais deixou restos significativos de gel usando esta técnica.

1.5 Teste do Labirinto Aquático de Morris

O Labirinto Aquático de Morris é muito usado no rato Wistar. O Labirinto Aquático de Morris é baseado na premissa de que animais desen-volveram uma estratégia ótima para explorar o seu meio ambiente e escapar à água com uma quantidade mínima de esforço. O protocolo foi retirado de Current Protocols in Neuroscience (Volume 3, Seção 8.5A.5) e foi conduzido por um período de 5 dias. Na sua forma mais básica, o labirinto aquático a- valia a aprendizagem e memória espaciais (Brandies et a!., 1989). Todos os dados foram coletados de modo automático via um computador usando um sistema de monitoração automático (AnyMaze, Stoelting, E.U.A.).

1.5.1 Resultados do Teste do Labirinto Aquático de Morris

A Figura 1 mostra o tempo que cada grupo de ratos levou para alcançar a plataforma submergida durante 4 dias de testes de aquisição. Todos os grupos foram similares no começo dos testes de aquisição. O efeito da aprendizagem ao longo do tempo foi p < 0,0001 para todos os grupos. No dia 2, os animais tratados com o gel em dose Alta aprenderam significativamente (p < 0,05) mais rápido do que os grupos de tratamento de gel em Branco e gel em dose Baixa. No entanto, pelo dia 4, todos os grupos foram similares na sua capacidade para localizar a plataforma.

A Figura 2 mostra a velocidade de natação média durante os 4 dias dos testes de aquisição no labirinto aquático, e a Figura 3 mostra a dis- tância de natação média. Não houve diferenças significativas na velocidade da natação entre qualquer um dos grupos de tratamento. A tendência para ocorrerem alterações na velocidade da natação ao longo do tempo foi p < 0,0001 para todos os grupos de tratamento. Houve uma tendência para uma velocidade da natação decrescida nos animais tratados com o gel em dose Alta (p = 0,09). Quanto à distância da natação, houve uma diferença significativa na extensão global da natação nos animais tratados com o gel em dose Alta versus gel em Branco (controles) no dia 2 dos testes, que é paralela ao tempo decrescido a à plataforma em este grupo (p < 0,05). A tendência para alterar a distância da natação ao longo do tempo foi p < 0,0001 para todos os grupos de tratamento.

1.5.2 Resumo do Labirinto Aquático de Morris

Ocorreu uma taxa melhorada da aprendizagem e parâmetros de natação de distância e velocidade no dia 2 da fase de aquisição nos animais tratados com o gel em dose Alta. Mas pelo quarto dia não se observaram diferenças significativas entre os grupos. Os resultados indicaram que animais de dose Alta aprenderam a tarefa mais rápido do que os animais de controle. A análise indica que os animais fizeram isto encurtando a distância da natação e sem nadarem mais rápido. De modo inverso, não se observaram efeitos prejudiciais do precursor G600® nos parâmetros testados. Em consequência, globalmente, os dados indicam que o precursor G600® suporta a aprendizagem.

1.6 Teste da Tarefa de Reconhecimento de um Novo Objeto

A tarefa de Reconhecimento de um Novo Objeto também é muito usada no rato Wistar. A exploração é um comportamento de aprendizagem típico de ratos quando são colocados em um ambiente novo. (Ennaceur e Delacour, 1988).

1.6.1. Resultados da Tarefa de Reconhecimento de um Novo Objeto

A atividade exploratória total, mensurada pelo tempo gasto na exploração de 4 objetos diferentes, decresceu de forma gradual desde apro-ximadamente 120 segundos para 80 segundos, consistente com a experiência dos inventores com este modelo. Os declives da aprendizagem foram similares entre os grupos (dados não mostrados). De notar que os aumentos da atividade exploratória foram mais proeminentes nos grupos tratados com gel em dose Baixa ou gel em dose Alta, comparado com o grupo tratado com o gel em Branco, quando um novo objeto foi introduzido durante o segundo ensaio do dia de testes 4.

Depois de 1 de 4 objetos familiares ter sido substituído por um novo objeto, ocorreu um aumento aproximado de 3-4 vezes da atividade exploratória nos grupos tratados com gel em dose Baixa ou gel em dose Alta, em particular o grupo de dose Alta (31,14 ± 9,34), comparado com o grupo tratado em Branco (controle) (8,28 ± 10,22, p = 0,011, teste t de duas caudas). Estes dados podem sugerir que o tratamento com lipídios complexos melhorou o estado de alerta em um ambiente alterado (Figura 4).

1.6.2. Resumo da Tarefa de Reconhecimento de um Novo Objeto

A introdução de um novo objeto originou um aumento significativo (p = 0,011) de 3-4 vezes da atividade exploratória nos grupos tratados com precursor G600®. Estes dados podem sugerir um estado mais alerta em um ambiente alterado por suplementação com lipídios complexos. De modo inverso, não se observaram efeitos prejudiciais da suplementação em este sistema.

EXEMPLO 2 - Efeito no crescimento 2.1 Acasalamentos calendarizados e suplementação nutricional

O acasalamento calendarizado de ratos Wistar e suplementação nutricional foram efetuados como descrito para o Exemplo 1.

2.2 Varredura DEXA

A composição do corpo foi avaliada usando absorciometria de raios X com energia dual (DEXA). O instrumento de DEXA diferencia o peso do corpo nos componentes de tecido mole magro, tecido mole gordo e osso, baseado na atenuação diferencial por tecidos de dois níveis de raios X. Esta técnica permite determinar se o crescimento inclui ou se é independente de um aumento da composição de gordura do corpo ou densidade mineral óssea.

2.3 Resultados

Vinte e oito fêmeas acasalaram de modo calendarizado usando um monitor do ciclo sexual e todas as 28 gravidezes foram bem-sucedidas. A ninhada de uma mãe foi excluída do estudo experimental devido à pequena dimensão da ninhada e crias macrossômicas. A dimensão das ninhadas, peso das crias e rácios sexuais machoíêmea estiveram todos bem dentro dos intervalos normais (dimensão média da ninhada 14 ± 2, peso médio das crias 6,2 ± 0,2 g). As ninhadas foram ajustadas para 8 crias, para padronizar a nutrição a ao desmame. Os machos foram usados equilibrando com fêmeas quando necessário.

No dia neonatal 10, os animais foram atribuídos de modo aleatório dentro da ninhada para receberam uma dose em Branco, dose Baixa ou dose Alta por gavagem como detalhado no Exemplo 1 acima. Por exemplo, em uma ninhada contendo 6 machos e 2 fêmeas, 2 machos foram tratados por grupo de tratamento e as fêmeas não foram tratadas. Todas as crias tratadas foram manipuladas de modo idêntico. Não se observaram mortalidades nem efeitos adversos em nenhum dos animais (n = 156 crias doseadas). A dosagem neonatal por gavagem cessou no desmame (dia 22) e foi substituída por suplementação oral com géis como descrito acima.

Os pesos no desmame situaram-se no intervalo normal, apesar de ter havido um aumento pequeno mas significativo (p < 0,05) do peso no desmame nos animais tratados com gel em dose Alta em comparação com os controles: gel em Branco 61,49 ± 0,43 g, gel em dose Baixa 62,33 ± 0,42 g, gel em dose Alta 63,22 ± 0,48 g.

2.3.1. Crescimento pós-natal

O crescimento pós-natal aumentou de modo significativo na pro-genitura suplementada com precursor G600® (gel em dose Baixa ou gel em dose Alta). Isto está mostrado na Figura 5. Este efeito não dependeu da dose e também é independente dos efeitos caloríficos marginais do suplemento de gel. No desmame (dia 22) observou-se um aumento pequeno mas significativo do peso do corpo do grupo de dose Alta comparado com o controle. No dia pós-natal 80 observou-se um aumento significativo do peso do corpo em ambos os grupos de tratamento (p < 0,05).

2.3.2 Composição do corpo

Não se observaram diferenças significativas nos marcadores de composição de gordura do corpo ou densidade mineral óssea entre quaisquer dos grupos de tratamento. Assim, o ganho de peso acrescido observado em animais suplementados com precursor G600® (gel em dose Baixa ou gel em dose Alta) não refletiu adiposidade acrescida. Houve uma ligeira tendência para um rácio acrescido gordo:magro em animais tratados com gel em dose Baixa comparados com os controles (p = 0,1). Os animais tratados com gel em dose Alta eram ligeiramente mas significativamente mais compridos (p < 0,05, comprimento nariz-ânus) do que os animais de controle. Estes resultados estão apresentados na Tabela 4 abaixo. Ocorreu um aumento pequeno mas significativo na BMD em animais tratados com dose Alta comparados com controles (p < 0,05). Tabela 4 Gordura total do corpo, rácios gordo:magro, densidade mineral óssea e comprimentos do corpo. Os dados são média ± EPM, n = 16 por grupo*: p < 0,05 comparado com controle; **: p < 0,1 comparado com controle.

2.4 Descobertas

Em consequência, os inventores descobriram que a suplemen- tação com lipídios complexos conduziu a um aumento inesperado mas significativo do ganho de peso do corpo (ambos os grupos de gel em dose Baixa e dose Alta) e comprimento (grupo de dose Alta). Este crescimento não se deveu a adiposidade acrescida, como avaliado por varredura DEXA.

EXEMPLO 3 - Ensaio de transferência de placenta

Lóbulos humanos submetidos a perfusão dual foram coletados de seis placentas de gravidezes a termo não complicadas (pacientes de Cesariana eletiva normal). Fontes arteriais e venosas maternas e fetais foram isoladas e cateterizadas e a placenta foi mantida por perfusão de tampão Krebs esterilizado (que também contém albumina do soro, para auxiliar o transporte de substâncias lipofílicas) à temperatura ambiente, em uma câmara de perfusão de ar esterilizado, a uma taxa de escoamento e pressão constantes. A técnica de perfusão usada foi modificada de Glance et al. (1984) de acordo com Collier et al. (2004).

A equilibração foi efetuada por 60 minutos, para avaliar a integridade física do tecido e circuitos (pressão arterial fetal < 40 mmHg e fugas de perfusado do circuito fetal para o materno < 2 mL/hora), e então os reservatórios materno e fetal foram substituídos com meio fresco contendo doses de substâncias de teste. Coletam-se amostras, no instante zero e depois em cada hora, de todos os circuitos, que depois são armazenadas congeladas para análise. A viabilidade metabólica da preparação é avaliada com amostras coletadas em cada hora de artérias maternas e fetais e analisadas quanto à saturação de oxigênio e dióxido de carbono, eletrólitos e consumo de glucose (Analisador de Gás no Sangue Bayer 865, Bayer Diagnostics, e produção de lactato (Hitachi 917, Roche Diagnostics). Adicionaram-se ao reservatório materno 10 μg/mL de mistura de gangliosídios derivados do leite (GM3 + GD3 - isolados do precursor G600® descrito acima). A perfusão foi conduzida por a 3 horas usando um sistema em laço fechado. Coletaram- se amostras de ambos os reservatórios em esse instante (t = 0) e em intervalos regulares, tendo sido imediatamente congeladas em azoto líquido e depois avaliadas quanto a GM3, GD3 e viabilidade dos lóbulos.

Os teores de GM3 e GD3 dos perfusados foram mensurados por LC-MS usando uma coluna Hypersil APS2, gradiente de acetonitrila de fase normal, e foram detectados no LTQ Orbitrap em varredura total de íons negativos, como descrito abaixo. As amostras de perfusado sofreram "esmagamento de proteínas" por adição a metanol e foram deixadas repousar por 60 minutos a 4°C antes da centrifugação (20 000 x g). Uma alíquota (10-50 μl_) foi carregada em um separador C18 em linha e foi lavada (MeOH 50%) antes de eluir em uma coluna Hypersil APS2 (Thermo Finnigan, MA, E.U.A.). Os gangliosídios foram separados em um gradiente de fase normal e foram detectados no Espetrômetro de massa LTQ Orbitrap (ThermoFinnigan, MA, E.U.A.) em modo de íons negativos. O sistema de LC-MS foi calibrado u- sando padrões de GD3 e GM3 adquiridos à Matreya (Pa, E.U.A.). A viabilidade dos lóbulos foi avaliada por captação de Glucose e produção de lactato, mensurados com um Autoanalyzer.

Os inventores descobriram que, em todas as experiências, houve evidências de transferência de GM3. As concentrações de GM3 no perfu- sado fetal aumentaram aproximadamente 6 vezes ao longo do tempo e por uma quantidade significativa relativa à referência. As concentrações de GM3 no perfusado materno decresceram em média por metade desde aproximadamente 300 ng/mL. Os inventores também descobriram que houve evidências, em todos os casos, de um decréscimo significativo das concentrações do GD3 materno, em média 25-30%, mas as concentrações no perfusado fetal ficaram abaixo da sensibilidade do ensaio.

Em consequência, os inventores concluem que pode ocorrer transferência de gangliosídios através da placenta humana. Apesar de ocorrer captação de GD3 e GM3 a partir do perfusado materno, parece haver uma preferência para a captação de GM3 e liberação no lado fetal. EXEMPLO 4 - Avaliação de gangliosídios cerebrais

Usou-se um método de HPLC-MS para mensurar as alterações da concentração relativa de 8 classes de gangliosídios cerebrais (GM1, GM2, GM3, GD3, GD1a, GD1b, GT1b e GQ1b). Os espetros de massa adquiridos foram filtrados pós-análise para as massas conhecidas de cada espécie de gangliosídios. O método foi então usado para comparar os níveis de gangliosídios nos cérebros de crias de rato com 2 dias de idade.

As fêmeas grávidas de rato foram nutridas com uma dieta su-plementada com um lipídio complexo derivado de produtos lácteos (precursor GM600®, descrito acima) ou um controle de equivalente calorífico. Dois dias após o nascimento, as crias foram sacrificadas e os lipídios cerebrais foram extraídos usando o protocolo de extração relatado por Svennerholm e Fredman (1980). O método de Svennerholm & Fredman foi escalado para baixo para a extração de cérebro de rato usando proporções iniciais de solventes de 2 mL de água (incluindo amostra de 0,25 g), 5,4 mL de CH3OH e 2,7 mL de CHCI3. O extrato da fase de cima final contendo gangliosídios foi ajustado para um volume final de 20 mL em CH3OH:água (50:50). Como estabilizador usou-se clorofórmio contendo etanol.

A fase de cima foi usada para a análise de gangliosídios por LC- MS. A análise de HPLC foi efetuada em um sistema de HPLC da série Agilent 1100 consistindo em uma bomba quaternária, bomba binária, desgasei- ficador, aquecedor de coluna (60°C) e sistema de autoamostragem refrigerada (5°C). As amostras ou padrões (10 uL) foram inicialmente carregados (0,5 mL/minuto; MeOH 50%) em um separador de fase reversa de poros largos (C18, 4 x 2,0 mm, 5 u, Phenomenex, CA, E.U.A.) para pré-concentração /dessalinização. Passados 2 minutos, o separador foi trocado na linha por uma coluna hidrofílica APS-2 Hypersil (150 mm x 2,1 mm, 3 μm, Thermo) acoplada a uma coluna de guarda APS-2 (10 mm x 2,1 mm d.i.). Os gangliosídios foram separados com um gradiente de acetonitrila (ACN)/ tampão de acetato de amónio descrito na Tabela 5, em que o Solvente A compreendeu 95% de Acetonitrila, 5% de Tampão de Acetato de Amónio 50 mM, pH 5,6, o Solvente B compreendeu 50:50 acetonitrila : Tampão de Acetato de Amónio 50 mM, pH 5,6, e o Solvente C compreendeu 50:50 MeOH: Água. Taxa de escoamento: 0,5 ml_/minutos.Tabela 5 Gradiente de HPLC

Ionização por eletropulverização de polaridade negativa, em modo de varredura completa (700-1650 m/z), a uma resolução de 30000, foi usada para a análise das 8 classes de gangliosídios referidas acima. Os espetros adquiridos foram filtrados pós-análise para as massas conhecidas de cada espécie de gangliosídios. O tempo da análise foi 25 minutos.

Os padrões dos gangliosídios (Matreya, Pleasant Gap, PA, E.U.A.) foram preparados a 1 mg/mL ou 0,5 mg/mL em metanokágua (50:50) e foram diluídos em série para se obter uma curva- padrão de 7 pontos para cada classe de gangliosídios que foi usada para comparar as similaridades e diferenças, quanto à composição e quantidades relativas, destas classes de gangliosídios presentes nos extratos dos grupos de controle e tratamento (Brugger etal., 1997; Koivusalo M. etal., 2001).

O total de gangliosídios estava aumentado de modo significativo no grupo de tratamento (p = 0,013 comparado com o controle). Apesar de a distribuição dos principais gangliosídios cerebrais não ter sido significativamente diferente, as quantidades de GM1, GD1a, GD1b e GT1b estavam sig-nificativamente aumentadas (Figura 6; p < 0,05). O peso cerebral para o grupo de tratamento também foi significativamente mais alto (p = 0,003). APLICAÇÃO INDUSTRIAL

A presente invenção tem utilidade para alcançar benefícios de saúde particulares, incluindo manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo e manter ou aumentar o crescimento. As formulações e composições descritas podem ser empregadas de alguns modos diferentes, incluindo fórmulas maternas, fórmulas para lactentes, fórmulas de acompanhamento, fórmulas de crescimento ou produtos dietéticos.

Os profissionais entenderão que a descrição acima é provida apenas para fins ilustrativos e que a invenção não está limitada àquela.

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Claims

1. Uso de um ou mais lipídios complexos, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de uma formulação para manter ou aumentar o crescimento de um feto, lactente ou criança enquanto não aumenta a adiposidade ou diminui a densidade óssea, em que um ou mais lipídios complexos compreendem um extrato de gordura do leite e um ou mais gangliosídios, sendo que o um ou mais gangliosídios compreendem GM3, GD3, ou uma mistura de pelo menos GM3 e GD3, em que a formulação é administrada oralmente e compreende pelo menos 8 mg de gangliosídios por 100 g em uma base seca.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a formulação é administrada oralmente a uma mãe durante a gestação e o crescimento se refere ao peso cerebral de um feto ou teor cerebral de gangliosídios de um feto.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a formulação é administrada oralmente a um lactente ou criança e o crescimento se refere a um ou mais dentre o peso do corpo, a altura do corpo e a densidade mineral óssea.

4. Uso de um ou mais lipídios complexos, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de uma formulação para manter ou aumentar o desenvolvimento cognitivo em um feto, lactente ou criança, em que um ou mais lipídios complexos compreendem um extrato de gordura do leite e um ou mais gangliosídios, sendo que o um ou mais gangliosídios compreendem GM3, GD3, ou uma mistura de pelo menos GM3 e GD3, em que a formulação é administrada oralmente e compreende pelo menos 8 mg de gangliosí- dios por 100 g em uma base seca.

5. Uso de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a formulação é administrada oralmente a uma mãe durante a gestação e o desenvolvimento cognitivo se refere ao peso cerebral de um feto ou teor cerebral de gangliosídios de um feto.

6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o um ou mais lipídios complexos compreen- dem um ou mais fosfolipídios, um ou mais esfingolipídios, uma ou mais es- fingomielinas ou derivados das mesmas, uma ou mais ceramidas, um ou mais cerebrosídeos, um ou mais gangliosídios ou qualquer combinação de quaisquer dois ou mais dos mesmos.

7. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a formulação compreende pelo menos 10 mg de gangliosídios por 100 g.

8. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a formulação compreende 10 mg a 20 mg de gangliosídios por 100 g.

9. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pelo fato de que o extrato de gordura do leite compreende: (a) 15 a 25% em p/p de lipídios, 5 a 15% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,1 a 1% em p/p de gangliosídios; ou (b) 25 a 45% em p/p de lipídios, 10 a 25% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,1 a 2,0% em p/p de gangliosídios; ou (c) 12 a 32% em p/p de lipídios, 5 a 25% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,1 a 2,0% em p/p de gangliosídios; ou (d) 80 a 99% em p/p de lipídios, 20 a 75% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,5 a 5% em p/p de gangliosídios; ou (e) 90 a 99% em p/p de lipídios, 20 a 40% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,5 a 5% em p/p de gangliosídios; ou (f) 80 a 99% em p/p de lipídios, 60 a 80% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,5 a 5% em p/p de gangliosídios; ou (g) 15 a 45% em p/p de lipídios, 8 a 25% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,1 a 5% em p/p de gangliosídios; ou (h) 50 a 99% em p/p de lipídios, 15 a 60% em p/p de fosfoli- pídios, e 1 a 10% em p/p de gangliosídios.

10. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pelo fato de que o extrato de gordura do leite compreende 15% a 99% em peso do total de lipídios, 1% a 80% em peso de fosfolipídios, 1% a 25% em peso de fosfatidilcolina, 0,1% a 15% em peso de fosfatidilinositol, 0,1% a 15% em peso de fosfatidilserina, 1% a 30% em peso de fosfatidiletanolamina, 0,5% a 25% em peso de esfingomielina e 0,1 a 10% em peso de gangliosídios.

11. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a formulação compreende pelo menos 10 mg de extrato de gordura do leite por 100 g.

12. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pelo fato de que a formulação compreende: (a) 80-99,9% em p/p de um leite em pó, (b) 0-20% em p/p de ingrediente lipídico, (c) 0-25% em p/p de açúcares ou ingrediente de carboidra to, (d) 0,1-0,5% em p/p de mistura de vitamina e mineral, (e) 0-5% em p/p de ingrediente de sabor, e (f) 0,1-5% em p/p de gangliosídeos.

13. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pelo fato de que a formulação compreende: (a) 30-60% em p/p de lactose, (b) 15-35% em p/p de óleos vegetais, (c) 0-40% em p/p de leite em pó desnatado, (d) 0-40% em p/p de proteína do soro do leite, e (e) 1-50% em p/p de um ou mais lipídeos complexos.

14. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pelo fato de que um ou mais lipídeos complexos compreende(m) (a) 15 a 25% em p/p de lipídios, 5 a 15% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,1 a 1% em p/p de gangliosídios, ou (b) 15% a 25% em p/p de lipídios, 5% a 15% em p/p de fos- folipídios, 1% a 5% em p/p de fosfatidilcolina, 0,1% a 2% em p/p de fosfatidi- linositol, 0,5% a 2% em p/p de fosfatidilserina, 1,5% a 6% em p/p de fosfati- diletanolamina, 1% a 5% em p/p de esfingomielina, e 0,1 a 1% em p/p de gangliosídios, ou (c) 25 a 45% em p/p de lipídios, 10 a 25% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,1 a 2,0% em p/p de gangliosídios, ou (d) 25% a 45% em p/p de lipídios, 10% a 25% em p/p de fosfolipídios, 1% a 5% em p/p de fosfatidilcolina, 0,1% a 2% em p/p de fosfa- tidilinositol, 0,5% a 2% em p/p de fosfatidilserina, 1,5% a 6% em p/p de fos- fatidiletanolamina, 1% a 5% em p/p de esfingomielina, e 0,1 a 2,0% em p/p de gangliosídios, ou (e) 12 a 32% em p/p de lipídios, 5 a 25% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,1 a 2,0% em p/p de gangliosídios, ou (f) 12% a 32% em p/p de lipídios, 5% a 25% em p/p de fos- folipídios, 2% a 8% em p/p de fosfatidilcolina, 0,5% a 3% em p/p de fosfatidi- linositol, 1% a 3,5% em p/p de fosfatidilserina, 1% a 10% em p/p de fosfatidi- letanolamina, 1% a 8% em p/p de esfingomielina, e 0,5 a 2,5% em p/p de gangliosídios, ou (g) 80 a 99% em p/p de lipídios, 20 a 75% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,5 a 5% em p/p de gangliosídios, ou (h) 80% a 99% em p/p de lipídios, 20% a 75% em p/p de fosfolipídios, 2% a 22% em p/p de fosfatidilcolina, 1% a 10% em p/p de fos- fatidilinositol, 1% a 10% em p/p de fosfatidilserina, 5% a 30% em p/p de fos- fatidiletanolamina, 1% a 20% em p/p de esfingomielina, e 0,5 a 5% em p/p de gangliosídios, ou (i) 90 a 99% em p/p de lipídios, 20 a 40% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,5 a 5% em p/p de gangliosídios, ou (j) 80 a 99% em p/p de lipídios, 60 a 80% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,5 a 5% em p/p de gangliosídios, ou (k) 15 a 45% em p/p de lipídios, 8 a 25% em p/p de fosfoli- pídios, e 0,1 a 5% em p/p de gangliosídios, ou (l) 15% a 45% em p/p de lipídios, 8% a 25% em p/p de fos- folipídios, 1% a 5% em p/p de fosfatidilcolina, 1% a 5% em p/p de fosfatidili- nositol, 2% a 8% em p/p de fosfatidilserina, 2% a 8% em p/p de fosfatidileta- nolamina, 0,5% a 5% em p/p de esfingomielina, e 0,1 a 5% em p/p de gan- gliosídios, ou (m) 50 a 99% em p/p de lipídios, 15 a 60% em p/p de fosfoli- pídios, e 1 a 10% em p/p de gangliosídios, ou (n) 50% a 99% em p/p de lipídios, 15% a 60% em p/p de fosfolipídios, 1% a 10% em p/p de fosfatidilcolina, 1% a 15% em p/p de fos- fatidilinositol, 1% a 20% em p/p de fosfatidilserina, 1% a 20% em p/p de fos- fatidiletanolamina, 1% a 10% em p/p de esfingomielina, e 0,1 a 10% em p/p de gangliosídios.