BRPI0721056B1 - Oxidation resistant molecules - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MOLÉCULAS INDICADORAS RESISTENTES A OXIDAÇÃO".

Referência - Cruzada a Pedidos de Patente Relacionados Este pedido de patente reivindica o benefício de pedido de patente provisório U.S. No. 60/861 707 depositado em 30 de novembro de 2006, e pedido de patente provisório U.S. N° 60/903 291, depositado em 26 de fevereiro de 2007.

Declaração Com Relação a Pesquisa ou Desenvolvimento Patrocinado Pelo Governo Federal Não aplicável.

Antecedentes da Invenção 1. Campo da Invenção A presente invenção refere-se a indicadores detectáveis, incluindo indicadores fluorescentes, tendo aumentada resistência a óxidação. 2. Descrição da Técnica Relacionada Moléculas fluorescentes são usadas para uma ampla faixa de aplicações incluindo abrilhantadores de tecido e cor, sinais, várias tintas para impressão, diagnósticos como etiquetas e sondas quando ligadas a anticorpos ou outras moléculas, e podem ser configuradas em um nível molecular para serem usadas como indicadores ativos químicos e bioquímicos especificamente desenhados para detecção de certos analitos, por exemplo, glicose. A complexação de carboidratos, incluindo glicose, com ácido fenil borônico é conhecida há tempos e a reversibilidade desta interação serviu como uma base para a separação cromatográfica de açúcares. Especificamente, em 1959, Lorand e Edwards constantes de associação para associações aquosas de ácido fenil borônico com muitos polióis saturados; interações de ligação variaram de muito fracas (por exemplo, etileno glicol, Kd=360 mM) a moderadamente forte (por exemplo, glicose, Kd=9,1 mM). Ver J. Yoon, et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry 1(4):267-71 (1993). O mecanismo de ligação é acreditado ocorrer através de deslocamento dos grupos hidróxila sobre uma metade boronato com adjacentes grupos hidróxi- Ia sobre glicose. A patente U.S. 5 503 770 (James, et al.) descreve um composto contendo ácido borônico, fluorescente, que emite fluorescência em uma alta intensidade com ligação a sacarídeos, incluindo glicose. O composto fluorescente tem uma estrutura molecular compreendendo um fluoróforo, pelo menos uma metade ácido fenil borônico e pelo menos um átomo de nitrogênio provendo amina onde o átomo de nitrogênio está disposto na vizinhança da metade ácido fenil borônico de modo a interagir intramolecularmente com o ácido borônico. Tal interação pelo que faz com que o composto emita fluorescência com ligação de sacarídeo. Ver também T. James, et al., J. Am. Chem. Soc. 117(35):8982-87(1995).

Adicionalmente, sensores fluorescentes usando um composto contendo ácido antril borônico para detecção de glicose no sangue são conhecidos na técnica. Por exemplo, J. Yoon, et al., J. Am. Chem. Soc. 114:5874-5875 (1992) descreve que ácido antril borônico pode ser usado como um quimio - sensor fluorescente para sinalização de ligação de car-boidrato, incluindo ligação de glicose e frutose.

Moléculas florescentes são suscetíveis a degradação, onde elas perdem intensidade de fluorescência (ou brilho) com o tempo frequentemente através de variáveis taxas de óxidação. A óxidação pode ser comumente associada com fotoalvejamento, que é tecnicamente "foto-óxidação", ou pode ser oxidada por várias espécies oxigênio reativo dentro de ambiente local da molécula fluorescente. Qualquer número de potenciais óxidantes existente no ambiente e atmosfera tal como ozônio, ou que pode existir dentro de um corpo vivo variando de humanos a bactérias. Dentro de um corpo vivo, espécies oxigênio reativas normais (ROS) podem incluir aquelas envolvidas em típicas reações de cura saudáveis como peróxido, radicais hidróxila, pe-róxi nitrito, superóxido, e outros. Dentro de um sistema vivo também existem enzimas específicas óxigenases para o específico propósito de óxidação na quebra de moléculas. Um resultado adverso de espécies oxigênio reativo ou atividade óxigenase sobre uma molécula fluorescente é tipicamente perda de fluorescência. No caso de uma molécula indicadora, ou uma etiqueta passiva, sonda, ou rótulo, a vida útil e sensitividade do dispositivo, ou diagnóstico, é limitada, ou pode ser tornada completamente ineficaz por degradação óxidativa de sinal fluorescente. Por isso, permanece uma necessidade de moléculas fluorescentes que tenham aumentada resistência a óxidação. Sumário da Invenção Em um aspecto, a presente invenção é direcionada a um processo para uso de uma molécula em condições óxidantes, que compreende: a) obtenção de uma molécula tendo um resíduo ácido aril borônico tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons sobre a metade aromática que contém o resíduo de ácido borônico, de modo que a molécula tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparada a uma correspondente molécula sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons; e b) sujeição de molécula tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons a condições óxidantes.

Em um outro aspecto, a presente invenção é direcionada a um processo para detecção de presença ou concentração de um analito em uma amostra em um ambiente óxidante, o dito processo compreendendo: a) exposição de amostra a uma molécula indicadora tendo uma qualidade detectável que altera-se quando a molécula indicadora é exposta ao analito, a dita molécula compreendendo um resíduo ácido aril borônico tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons sobre a metade aromática que contém o resíduo ácido borônico, de modo que a molécula indicadora tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparada à correspondente molécula sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons; e b) medição de qualquer alteração na dita qualidade detectável para pelo que determinar a presença ou concentração de dito analito na dita a-mostra.

Em um outro aspecto, a presente invenção é direcionada a um composto tendo a seguinte estrutura: (I) onde: - cada Ar é um grupo arila; - cada Ri e R2 são idênticos ou diferentes e são um grupo de retirada de elétrons; - m e n são cada um independentemente inteiros de 1 a 10; - R4 é uma metade detectável; e - cada R é independentemente um grupo ligante tendo de zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos, com pelo menos um R ainda contendo uma unidade monomérica polimerizável; e onde o composto tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparado ao correspondente composto sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons.

Em um outro aspecto, a presente invenção é direcionada a um composto tendo a seguinte estrutura: onde: - cada Ar é um grupo arila outro que não-fenila; - cada Ri e R2 são idênticos ou diferentes e são um grupo de retirada de elétrons; - m e n são, cada um independentemente, inteiros de 1 a 10; - R4 é uma metade detectável; e - cada R é independentemente um grupo de ligação tendo de zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos, com pelo menos um R ainda contendo um grupo de ligação capaz de ligar-se a um suporte sólido ou uma matriz polimérica; e onde o composto tem aperfeiçoada resistência a ligação comparado ao correspondente composto sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons.

Em um outro aspecto, a presente invenção é direcionada a um processo para a produção de uma macromolécula indicadora para detecção de presença ou concentração de um analito em um ambiente óxidante, o dito processo compreendendo copolimerização de: a) um ou mais monômeros componentes indicadores que individualmente não são suficientemente solúveis em água para permitir seu uso em um ambiente aquoso para detecção de presença ou concentração do dito analito, onde o monômero componente indicador compreende composto tendo a seguinte estrutura: onde: - cada Ar é um grupo arila; - cada Ri e R2 são idênticos ou diferentes e são um grupo de retirada de elétrons; - m e n são cada um independentemente inteiros de 1 a 10; - R4 é é uma metade detectável; e - cada R é independentemente um grupo de ligação tendo de zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos, com pelo menos um R ainda contendo uma unidade monomérica polimerizável; e b) um ou mais monômeros hidrofílicos; de modo que a resultante macromolécula é capaz de detectar a presença ou concentração do dito analito em um ambiente aquoso e onde o composto tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparado ao correspondente composto sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons.

Em um outro aspecto, a presente invenção é direcionada a um composto tendo a seguinte estrutura: (II) onde: - Ar é um grupo arila; - cada R-ι é idêntico ou diferente e é um grupo de retirada de elétrons; - n é um inteiro de 1 a 10; e - R é um grupo de ligação tendo zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos, cujo grupo de ligação ainda contem uma unidade monomérica polímerizável e uma metade detectável; e onde o composto tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparado ao correspondente composto sem grupo(s) de retirada de elétrons.

Em um outro aspecto, a presente invenção é direcionada a um composto tendo a seguinte estrutura: onde: - Ar é um grupo arila; - cada Ri é o mesmo ou diferente e é um grupo de retirada de elétrons; - n é um inteiro de 1 a 10; e - R é um grupo de ligação a um suporte cromatográfico, o dito grupo de ligação tendo de zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos; e onde o composto tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparado ao correspondente composto sem o grupo(s) de retirada de elétrons.

Breve Descrição dos Desenhos A Figura 1 ilustra os resultados do experimento descrito no E- xemplo 1. A Figura 2 ilustra os resultados de um dos experimentos descritos no Exemplo 2. A Figura 3 ilustra os resultados de um dos experimentos descritos no Exemplo 1. A Figura 4 ilustra os resultados do experimento descrito no E- xemplo 3.

As Figuras 5 A e B mostram vários compostos preferidos da presente invenção. A Figura 6 ilustra os resultados de um dos experimentos descritos no Exemplo 4. A Figura 7 ilustra os resultados de um outro experimento descrito no Exemplo 4. A Figura 8 ilustra os resultados de um outro experimento descrito no Exemplo 4.

Descrição Detalhada da Invenção Durante o trabalho em andamento dos inventores para desenvolvimento de um sensor de glicose implantável baseado em uma molécula indicadora fluorescente, foi feita uma observação que em adição a foto -óxidação, que é uma função direta e previsível de exposição à luz cumulativa quantitativa, que para uma série de moléculas indicadoras fluorescentes testadas in vivo, há uma adicional, severa, e rápida perda de sinal fluorescente que ocorre in vivo, mas não ocorre significantemente in vitro.

Amostras de um indicador fluorescente foram implantadas, e subsequentemente explantadas algum período de semanas depois. As a-mostras foram então quimicamente analisadas seguindo severa perda de sinal. As análises mostraram uma reação específica pelo que o elemento de reconhecimento boronato do sistema indicador foi especificamente oxidado a um grupo hidróxila, pelo que causando perda total de atividade (especificamente, modulação de fluorescência) na molécula. Esta reação de óxidação in vivo é mostrada abaixo: inserir frmula Molécula indicada padrão Molécula indicadora alterada in vivo Energia de ligação: C-C = 358 kj/mol C-B=323 kj/mol B-0=519 kj/mol A reação de óxidação in vivo destrutiva foi mostrada ser muito específica, oxidando somente o grupo boronato, e deixando um grupo hidróxila em seu lugar. A óxidação foi duplicada in-vitro através de tratamento com peróxido de hidrogênio 1, 5, e 10 μΜ. Ambos in vitro e in vivo, somente a metade boronato foi verificada ser oxidada a hidróxila. Isto foi inesperado uma vez que ROS foram pensadas (por nós) serem mais generalizadas e indiscriminadas em onde elas podem oxidar e danificar a molécula.

De acordo com a presente invenção, moléculas indicadoras contendo um resíduo ácido aril borônico podem ser tornadas mais resistentes a óxidação através de adição de um ou mais grupos de retirada de elétrons para a metade aromática que contém o resíduo de ácido borônico, assim estabilizando a metade boronato. Será entendido que o termo "arila" abrange uma ampla faixa de grupos aromáticos, tal como fenila, aromáticos poli-nucleares, hetero aromáticos, hetero aromáticos polinucleares, etc. Exemplos não-limitantes incluem fenila, naftila, antrila, piridila, etc.

Uma ampla faixa de grupos de retirada de elétrons está dentro do escopo da invenção, e inclui, mas não é limitada a, halogênio, ciano, ni-tro, alquila substituído com halo, ácido carboxílico, éster, ácido sulfônico, cetona, aldeído, sulfonamida, sulfona, sulfonila, sulfóxido, sulfona substituída com halo, alcóxi substituído com halo, cetona substituída com halo, amida, etc., ou suas combinações.

Com relação a estruturas I e II acima, Ri e R2 preferivelmente são grupos de retirada de elétrons como descrito no parágrafo anterior. Mais preferivelmente, cada um de R1 e R2 é triflúor metila. Ainda, como notado acima, em certas realizações se pelo menos um dos grupos R conterá uma unidade monômero polimerizável que permitirá incorporação de estrutura (I) em um polímero. Tais unidades polimerizáveis são bem conhecidas, e incluem, mas não são limitadas a, vinila, acrilato, metacrilato, acrilamida, metacri-lamida, etc.

Os compostos indicadores da presente invenção têm uma qualidade detectável (mostrado como constituinte R4 na estrutura I) que se altera em uma maneira dependente de concentração quando o composto é exposto a uma amostra contendo glicose. Muitas tais qualidades são conhecidas e podem ser usadas na presente invenção. Por exemplo, o composto indicador pode incluir uma metade luminescente (fluorescente ou fosforescente) ou quimioluminescente, uma metade baseada em absorbância, etc. O composto indicador pode incluir uma metade doadora de energia e uma metade receptora de energia, cada uma espaçada de modo que há uma mudança detectável quando 0 composto indicador interage com glicose. O composto indicador pode incluir um fluoróforo e um resfriador, configurado de modo que 0 fluoróforo é rapidamente resfriado pelo resfriador quando glicose está ausente. Nesta situação, quando glicose está presente, o indicador sofre uma mudança de configuração que faz com 0 que o resfriador mova-se suficientemente distante do fluoróforo de modo que fluorescência seja emitida. Ao contrário, 0 fluoróforo e resfriador podem ser configurados de modo que na ausência de glicose, eles sejam suficientemente separados e 0 fluoróforo emite fluorescência; com interação com glicose, o fluoróforo e resfriador são movidos em proximidade suficiente para causar resfriamento. O conceito de mudança de configuração é descrito em mais detalhes no pedido de patente publicado U.S. 2002/0119581, aqui incorporado por referência. Em uma outra realização, o resfriador contem um ácido borônico aromático, e ligação do ácido borônico à molécula-alvo (por exemplo, glicose) altera a eficiência de resfriador resultando em uma mudança detectável. Tal é descrito na publicação de pedido de patente U.S. 2006/0083688, o conteúdo da qual é aqui incorporado por referência.

Alternativamente, o indicador pode incluir uma metade tal como um fluoróforo capaz de interagir com o elemento de reconhecimento ou uma outra metade espacialmente disposta com relação ao elemento de reconhecimento de modo que na ausência de glicose, o fluoróforo emite fluorescência. Com adição de glicose, a glicose compete com a interação entre o fluoróforo e o elemento de reconhecimento, ou a interação entre o fluoróforo e a outra metade disposta espacialmente com relação ao elemento de reconhecimento, causando uma redução em fluorescência. Também será reconhecido que o indicador pode ser escolhido de modo que o fluoróforo não emita fluorescência, ou um nível relativamente baixo de fluorescência, quando o fluoróforo interage com o elemento de reconhecimento ou uma outra metade espacialmente disposta com relação ao elemento de reconhecimento na ausência de glicose. Com adição de glicose, a glicose compete com a interação entre o fluoróforo e o elemento de reconhecimento, ou a interação entre o fluoróforo e a outra metade disposta espacialmente com relação ao elemento de reconhecimento, causando um aumento em fluorescência.

Outras metades detectáveis incluem aquelas cuja fluorescência é afetada por interação de glicose via transferência de elétrons fotoinduzida ou efeitos de indução. Estes incluem os quelatos lantanídeos mostrados na patente U.S. 6 344 360, aqui incorporada por referência; hidrocarbonetos poliaromáticos e seus derivados; cumarinas; BoDiPy; dansil; catecóis, etc. Uma outra classe de metades incluem aquelas cujas mudanças de espectro de absorbância com interação do composto indicador com glicose, incluindo vermelho alisarina, etc. Uma outra classe de metades inclui aquelas cuja fluorescência é modulada por efeitos de próximidade, por exemplo, pares de doador/receptor de energia como dansil/dabsil, etc.

Preferivelmente, a qualidade detectável é uma mudança espectral detectável, como mudanças em características de absorção (por exemplo, capacidade de absorção e/ou desvio espectral), em tempo de decaimento fluorescente (determinado por medição de domínio de tempo ou domínio de freqüência), intensidade fluorescente, anisotropia fluorescente ou polarização; um desvio espectral do espectro de emissão; uma mudança em decaimento de anisotropia resolvido com tempo (determinado por medição de domínio de freqüência ou domínio de tempo), etc.

Será entendido que até uso, os elementos de reconhecimento de ácido borônico podem ser capeados com um grupo de proteção. Tais grupos são bem conhecidos, e incluem neopentil glicol, pinacol, etc. Em certas realizações, o elemento de reconhecimento capeado é descapeado no meio no qual o composto é para ser usado. A presente invenção também abrange compostos com aperfeiçoada resistência a óxidação que não contêm necessariamente um grupo detectável. Tais compostos podem ser usados em, por exemplo, resinas de cromatografia usadas para separação de açúcares. Neste exemplo, os presentes compostos podem ser ligados a uma resina ou outro suporte sólido via um ligador que é capaz de suportar as condições às quais a resina ou suporte é submetido.

Os compostos indicadores da presente invenção, se solúveis, podem ser usados diretamente em solução se assim desejado. Por outro lado, se a desejada aplicação assim requer, os compostos indicadores podem ser imobilizados (tal como por arraste mecânico ou ligação covalente ou iônica) sobre ou dentro de uma superfície ou matriz insolúvel tal como vidro, plástico, materiais poliméricos, etc. Quando o composto indicador é arrastado dentro, por exemplo, de um outro polímero, o material de arraste preferivelmente deve ser suficientemente permeável a glicose para permitir apropriada interação entre glicose e o composto indicador.

Se os compostos indicadores são pobremente solúveis ou insolúveis em água, ainda detecção em um meio aquoso é desejada, o compos- to indicador pode ser copolimerizado com um monômero hidrofílico para formar uma macromolécula hidrofílica como descrito em, por exemplo, patente U.S. 6 794 195, o conteúdo da qual é aqui incorporado por referência.

Apropriados grupos de ligação a um polímero ou suporte podem incluir grupos de cerca de 1 a cerca de 20 átomos contíguos, que podem ser ramificados ou substituídos e que podem incluir um ou mais heteroátomos, que terminam em um grupo funcional capaz de ainda reação ou ligação a um polímero ou suporte. Exemplos de apropriados grupos de ligação incluem alquila; arila; acila; poliamida; poliéter; todos opcionalmente substituídos, e suas combinações.

Também será entendido a partir da definição acima que os presentes compostos e sistemas de detecção podem estar em forma poliméri-ca. Assim, um composto integral (contendo elementos de reconhecimento e metade detectável) pode ser ligado a um polímero existente, ou o composto integral em forma monomérica pode ser polimerizado ou copolimerizado com um outro monômero apropriado para formar um polímero. Alternativamente, para separar componentes monoméricos (por exemplo, um contendo os e-lementos de reconhecimento, e um contendo uma metade detectável) podem ser copolimerizados de modo que o resultante polímero contenha todos os elementos necessários do sistema.

Existem muitos usos para os compostos indicadores da presente invenção, incluindo usos como indicadores nos campos de energia, medicina, e agricultura. Por exemplo, os compostos indicadores podem ser usados para detecção de sub-níveis ou supra - níveis de glicose em tampões ou fluidos fisiológicos, como sangue, plasma, soro, fluido intersticial, fluido cérebro - espinhal, urina, saliva, fluido intraocular, linfa, lágrimas, ou suor, assim provendo valiosa informação para diagnóstico ou monitoração de doenças tais como diabetes e insuficiência adrenal.

Produção médica/farmacêutica de glicose para aplicação terapêutica humana requer monitoração e controle.

Usos para a presente invenção em agricultura incluem detecção de níveis de glicose em sojas e outros produtos de agricultura. Glicose tem de ser cuidadosamente monitorada em críticas decisões de colheita para produtos de tal alto valor total como uvas de vinhos. Como glicose é a fonte de carbono mais cara e estoque de alimentação em processos de fermentação, monitoramento de glicose para ótimo controle de taxa de alimentação de reator é importante em produção de álcool para energia. Mistura em reator e controle de concentração de glicose também são críticas para controle de qualidade durante produção de drinques suaves e bebidas fermentadas, que consumem as maiores quantidades de glicose e açúcares fermentáveis (diol vicinal) internacionalmente.

Quando os compostos indicadores incorporam substituintes indicadores fluorescentes, várias técnicas de detecção também são conhecidas. Por exemplo, os compostos da invenção podem ser usados em dispositivos sensores fluorescentes (por exemplo, patente US 5 517 313) ou podem ser ligados a material polimérico como papel de teste para inspeção visual. Está última técnica pode permitir, per exemplo, medição de glicose em uma maneira análoga à determinação de pH com um tira de papel de tornassol. Os compostos aqui descritos também podem ser utilizados como reagentes simples com instrumentação analítica de bancada padrão como espectroflu-orômetros ou analisadores clínicos como fabricados por Shimadzu, Hitachi, Jasco, Beckman e outros. Estas moléculas também podem prover transdu-ção de sinal químico/ótico específico de analito para sensores baseados em fibra ótica e fluorômetros analíticos como fabricados por Ocean Optics (Du-nedin, Florida), ou Oriel Optics. A patente U.S. 5 517 313, a exposição da qual é aqui incorporada por referência, descreve um dispositivo de sensibilização de fluorescência no qual os compostos da presente invenção podem ser usados para determinação de presença ou concentração de glicose em um meio líquido. O dispositivo sensor compreende um arranjo em camadas de uma matriz contendo molécula indicadora fluorescente (daqui por diante "matriz fluorescente"), um filtro de passe alto e um fotodetetor. Neste dispositivo, uma fonte de luz, preferivelmente um diodo de emissão de luz ("LED"), está localizado pelo menos parcialmente dentro de material indicador, ou em um guia de onda sobre o qual a matriz indicadora está disposta, de modo que a fonte de luz faz as moléculas indicadoras terem fluorescência. O filtro de alto passe permite luz emitida atingir o fotodetetor, enquanto filtrando luz incidente dispersada a partir da fonte de luz. A fluorescência das moléculas indicadoras empregadas no dispositivo descrito na patente U.S. 5 517 313 é modulada, por exemplo, atenuada ou aperfeiçoada, pela presença local de glicose.

No sensor descrito na patente U.S. 5 517 313, o material que contem a molécula indicadora é permeável ao analito. Assim, o analito pode difundir no material a partir do meio teste circundante, pelo que afetando a fluorescência emitida pelos compostos indicadores. A fonte de luz, material contendo composto indicador, filtro de alto passe e fotodetetor são configurados de modo que pelo menos uma porção da fluorescência emitida pelos compostos indicadores impacta o fotodetetor, gerando um sinal elétrico que é indicativo da concentração de glicose no meio circundante.

De acordo com outras realizações possíveis para uso de compostos indicadores da presente invenção, dispositivos sensores também são descritos nas patentes U.S. 5 910 661, 5 917 605 e 5 894 351, todas aqui incorporadas por referência.

Os compostos da presente invenção também podem ser usados em um dispositivo implantável, por exemplo, para monitorar continuamente níveis de glicose no sangue in vivo. Dispositivos apropriados são descritos em, por exemplo, patentes U.S. copendentes Nos 6 330 464, 5 833 603, 6 002 954 e 6 011 984, todas aqui incorporadas por referência.

Compostos particularmente preferidos incluem os compostos mostrados em Figuras 5A e B (os compostos designados "não-substituído" e "2-metil" não contêm um grupo de retirada de elétrons, mas são apresentados para propósitos ilustrativos). Os compostos são mostrados na forma de ácido carboxílico e com o grupo ácido borônico estando desprotegido. Entretanto, será entendido que, por exemplo, compostos tendo a forma de sal de ácido carboxílico e/ou grupos ácido borônico capeados estão dentro do escopo da presente invenção.

Os compostos da presente invenção podem ser preparados por aqueles versados na técnica sem uma indevida quantidade de experimentação usando mecanismos de reação e reagentes facilmente conhecidos, por exemplo, incluindo mecanismos de reação que são consistentes com os procedimentos genéricos descritos abaixo: Esquema 1: Síntese de indicadores de glicose a partir de ésteres fenil borô-nicos comercialmente disponíveis Esquema 2: Síntese de indicador de glicose a partir de ácido fenil borônico comercialmente disponível Esquema 3 . Sínteses de indicadores de glicose a partir de bromo benzenos di-substituídos comercialmente disponíveis Esquema 4: Síntese de indicador de glicose a partir de cloreto de sulfonila comercialmente disponível Esquema 5: Sínteses de indicadores de glicose a partir de toluenos substituídos comercialmente di-substituídos Esquema 6: Sínteses de indicador de glicose a partir de ácido fenil borônico substituído comercialmente disponível Legenda: bis-pinacolato de di-boro pinacol boro molecular BM 289 bis-pinacolato de di-boro Será entendido que embora as sínteses mostradas justo acima possam ser usadas para síntese de composto 2c de Esquema 1, aqueles versados na técnica podem facilmente entender como obter também compostos 2a-2b e 2d-2i, todos os quais estão dentro do escopo da presente invenção.

Exemplo 1 A modulação da fluorescência de várias moléculas (mostrada na Figura 5) por concentrações variáveis de glicose foi determinada. Os resultados são mostrados na Figura 1, e mostram que a maioria das moléculas testadas modulou bem. Duas das moléculas (os compostos substituídos com 4-nitro e 2-metila) não modulam bem, mas ainda são úteis como etiquetas de resistência a óxidação. Ainda em um experimento, o controle não-substituído e dois compostos da presente invenção (4-triflúor metila e 3,4-di-flúor) foram submetidos a tratamento de óxidação com peróxido de hidrogênio 1 mM, e a perda de intensidade de fluorescência foi medida. Estes dados são mostrados na Figura 3.

Exemplo 2 Vários géis (produzidos como no Exemplo 3) contendo compostos da presente invenção (4-triflúor metila, 3,4-di-flúor e 4-flúor) e um controle (não-substituído) foram submetidos a exposição de longo termo a peróxido de hidrogênio 10 μΜ e glicose/PBS 4 mM a 37°C, e a perda de intensidade de fluorescência foi medida. Estes dados são mostrados na Figura 2. Em adição, os dados de meia vida in vitro medidos para três dos compostos são mostrados na Tabela 1 abaixo.

Os dados na tabela mostram que, comparados com o monômero padrão não-substituído, os análogos 3,4-diflúor e 4-triflúor metila têm meias - vidas aproximadamente 33 e 26 vezes mais longa, respectivamente, na presença de peróxido de hidrogênio 10 μΜ. Para comparação, a literatura reporta que níveis de peróxido de hidrogênio fisiológicos típicos são apróxi- madamente no máximo 0,5 μΜ. Também são notáveis a partir da tabela as diferenças em intensidade de fluorescência média. Ambos análogos mostram menor modulação total, mas fluorescência substancialmente maior (são mais brilhantes) e assim proporcionam um sinal mais forte, elevando a razão de sinal para ruído e por isso maior resolução em produto sensor como um benefício secundário. A menor Kd medida para o indicador 4-triflúor metila é superior ao controle padrão para o propósito de percepção de glicose humana, por que ele tem maior sensitividade a glicose na faixa fisiológica.

Tabela 1 Exemplo 3 Dois compostos de acordo com a presente invenção (4-triflúor metila e 3,4-di-flúor) e o composto não-substituído foram cada um copolime-rizados com metacrilato de hidróxi etila (HEMA) e ácido acrílico, e reticula-dos com dimetacrilato de etileno glicol (EGDMA) para formação de um enxerto de polímero insolúvel em água, que foi então implantado em um rato a ser submetido a óxidação in vivo por 22 ou 43 dias. Com explante, a fluorescência de cada composto foi medida, e os dados são mostrados na Figura 4. Os compostos da presente invenção retiveram maior fluorescência comparados ao controle.

Exemplo 4 Vários compostos da presente invenção foram, cada um, polime-rizados com metacrilato de hidróxi etila (HEMA), ácido acrílico e dimetacrilato de etileno glicol (EGDMA) paraq formação de géis de polímeros insolúveis, como no Exemplo 3. Suas estabilidades na direção óxidante foi avalia- da submetendo os géis a peróxido de hidrogênio 1 mM em PBS a 37°C. Estes dados são mostrados na Figura 6. Ainda em um experimento, dois dos géis indicadores (os géis o 4-triflúor metila e 4-triflúor metil sulfona) foram submetidos a peróxido de hidrogênio 1 mM na presença de glicose 4 mM em PBS a 37°C. Estes dados são mostrados na Figura 7. Meias-vidas calculadas a partir dos dois experimentos de estabilidade mencionados anteriormente são mostradas na Tabela 2. Ainda em um experimento, a mudança fluorescente (% de modulação) a partir de glicose 0 a 20 mM de vários géis indicadores foi medida e os resultados são mostrados na Figura 8.

Tabela 2 * em solução de glicose 4 mM Exemplo 5 Síntese de indicador 3,4-diflúor: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxo borolano)-2,3-diflúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,3-diflúor benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4b) Etapa 1: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxo borolano)-2,3-diflúor ben- zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-2,3-diflúor benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (3b): 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 2,40 g, 4,91 mmol) foi colocado em um frasco de fundo redondo de 150 mLe agitado em 19 mL de dimetil for-mamida até dissolvido. Pinacol éster de ácido 2-(bromo metila)-3,4-diflúor fenil borônico (2b, 4,90, 14,7 mmols, 3 equiv.) e DIEA (6,8 mL, 39 mmols, 8,0 eq.) foram adicionados e agitados sob corrente de argônio até total dissolução, então aquecidos a 80°C em um banho de óleo e sob uma corrente de argônio por 3 horas. O DMF foi removido á vácuo, éter (200 mL) adicionado e lavado com tampão fosfato (100 mL de 0,1 M, pH 7,0). A solução aquosa foi lavada em contracorrente com éter (2x100 mL)e as soluções de éter combinadas foram secadas sobre Na2S04. O éter foi removido á vácuo e o resultante pulverizado amarelo triturado com hexanos (100 mL) por 15 minutos. Trituração do produto bruto (2,60 g) com acetato de etila/IPA 80/20 em ebulição rendeu um pulverizado quase branco de ~98% de pureza por H-PLC. Amostras brutas foram combinadas e recristalizadas através de suspensão em acetato de etila/IPA 80/20 em ebulição e adicionando acetato de etila até todo sólido ter dissolvido. Com resfriamento, produto puro cristalizou como um pulverizado quase branco (1,54 g, 32% de rendimento).

Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção de 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção 1500 Ml, detecção de 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção de 16,4 minutos.

Etapa 2: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxo borolano)-2,3-diflúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,3-diflúor benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4b) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxo borolano)-2,3-diflúor ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-2,3-diflúor benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (3b, 1,50 g, 1,51 mmols) foi colocado em um frasco de fundo redondo de 100 ml_ e dissolvido em 10 mL de uma solução CH2CI2 : TFA 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por até 2 dias ou até análises de HPLC mostrarem menos que 1% de material de partida restante. Os solventes foram removidos á vácuo. O produto residual foi dissolvido em 30 mL de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. Os tratamentos de dissolução/evaporação com diclorometano foram repetidos até 0 produto tornar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 60 mL de diclorometano e adicionado em gotas a 250 mL de NaHCOs aquoso saturado em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais a < 5°C seguido por particionamento das camadas. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada rendendo 1,21 g de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 30 mL de CH2CI2 anidro e transferido para um frasco de fundo redondo de 100 mL. Pérolas PS-DEAM (0,38 g) foram adicionadas ao frasco e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com 5 mL de diclorometano. As soluções orgânicas combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (0,979 g, 68%) foi obtido como um pulverizado amarelo. Determinação de Estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 14,1 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,32 (s, 12 H), 1,33 (s, 12H), 1,50 (m, 5H, 0=C-C(CH2)CH3), N-CH2CH2CH2-N), 2,33 (t, 2H), 2,38 (t, 2H), 2,78 (m, 2H), 2,83 (m, 2H), 4,21 (s, 2H), 4,41 (s, 4H), 4,60 (s, 2H), 4,90 (t, 1H, C=CH2), 4,95 (s, 1H, C=CH2), 5,25 (br, 1H, NH), 7,15-7,25 (m, 1H, ArH), 7,28-7,32 (m, 1H), 7,35 (m, 4H, ArH), 7,68 (dd, 1H, ArH), 7,82 (dd, 1H, ArH), 7,8 (d, 2H, ArH), 8,20 (d, 2H, ArH). ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 720.3 (M- 3H20+H)+, 738.3 (M-2H20+H)+, 756.4 (M- H20+H)+, 794.2 (M+Na)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borô-nicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Exemplo 6 Síntese de indicador 4-triflúor metila: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) pro-pil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4c).

Etapa 1: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxaborolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etila) amino] metil] antraceno (3c) 9-[N-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1,2,10 g, 4,29 mmols) foi colocado em um frasco de fundo redondo de 250 mL. Ele foi dissolvido em 5 mL de dimetil formamida desgaseificada. Pinacol éster de ácido 2-(bromo metila)-4-(triflúor metila) fenil borônico (2c, 3,80 , 10,4 mmols, 2,4 equiv.) foi dissolvido em 4 mL de DMF espargido com N2 e adicionado ao frasco de reação. A solução foi agitada e lavada com N2 por 5 minutos. DIEA (6,0 mL, 34 mmols, 8,0 e-quiv.) foi adicionada à mistura de reação e a solução foi deixada agitar sob uma corrente suave de nitrogênio e no escuro em temperatura ambiente por 2 noites. Após 48 horas o solvente foi evaporado em vácuo. O produto residual foi dissolvido em 100 mL de diclorometano e extraído com porções de 2x50 mL de tampão fosfato (0,1 M, pH 7,0). A solução de diclorometano foi secada e evaporada no vácuo resultando em um resíduo oleoso dourado. O produto bruto foi agitado por 15-30 minutos com 10 mL de hexano até ocorrer um precipitado amarelo. Ele foi filtrado e o peso do produto foi determinado (~3,5 g de pulverizado amarelo). O produto bruto foi purificado através de cristalizações múltiplas a partir de 2-propanol (< 2 mL de IPA por grama de composto). Produto puro (3c) foi coletado (~1,5 g).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 ml_, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 17,8 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,25 (s, 9H, C(CH3)3), 1,32 (s, 12H, 0-C(CH3)2C(CH3)2,C-0), 1,35 (s, 12H, 0-C(CH3)2C(CH3)2,C-O), 1,46 (s, 3H, 0=C-C(CH2)CH3), 1,65 (m, 2H, N-CH2CH2CH2-N), 2,43 (t, 2H), 2,52 (t, 2H), 2,88 (t, 2H), 3,04 (m, 2H), 3,98 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,42 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,82 (s, 1H), 4,88- 4,90 (br, 2H, NH overlap with CH), 7,38-7,42 (m, 5H, ArH), 7,50 (d, 1H, ArH), 7,63 (s, 1H, ArH), 7,80 (m, 2H, ArH), 7,89 (d, 1H, ArH), 8,32 (m, 4H, ArH). ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 858.4 (M-2H20+H)+, 876,3 (M- H20+H)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Etapa 2: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxaborolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[2- (carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4c). 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxaborolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxaborolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etila) amino] metil] antraceno (3c, 1,037 g, 0,980 mmol) foi colocado em um frasco de fundo redondo de 250 mL e dissolvido em 10 mL de uma solução de CH2CI2 : TFA desgaseificada 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 24-48 horas ou até análises de HPLC mostrarem menos que 1% de material de partida restante. O produto residual foi lavado com 30 mL de CH2CL2 seguido por remoção do solvente á vácuo. As lavagens de diclorometano foram repetidas até o produto tornar-se um pul- verizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 60 mL de diclorometano e adicionado em gotas a 240 mL de NaHC03 aquoso saturado em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais a <5°C seguido por particionamento das camadas. Os extratos orgânicos foram secados sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados rendendo 1 g de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 10 mL de CH2CI2 anidro e transferido para um frasco de 100 mL de fundo redondo. Pérolas PS-DEAM (0,55 g, 1 mmol, 1 eq.) foram adicionadas ao frasco e a mistura de reação foi lavada com nitrogênio por 2 minutos. A solução foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com 2x10 mL de diclorometano. As soluções orgânicas combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (4c) foi obtido (0,603 g, 60% de indicador).

Determinação de estrutura: p.f.: 91-95°C (não-corrigido) condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6 x 100 mm Symmetry 3,5 μ C18 (com coluna guarda Sentry C18), injeção de 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 70/30 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 mL, 0,75 mL/minuto, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 14,9 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,34 (s, 12 H), 1,38 (s, 12H), 1,58 - 1,60 (m, 5H, 0=C-C(CH2)CH3), N-CH2CjH2CH2-N), 2,31 (t, 2H), 2,44 (t, 2H), 2,87 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,35 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,95 (t, 1H, C=CH2), 5,05 (s, 1H, 0=(¾). 5,3- 5,4 (br, 1H, NH), 7,38-7,42 (m, 4H, ArH), 7,52 (d, 1H, ArH), 7,68 (d, 1H, ArH), 7,80 (brs, 1H, ArH), 7,85-7,90 (m, 3H, ArH), 7,91 (d, 1H, ArH), 8,12 (d, 1H, ArjH), 8,28 (d, 2H, ArH). ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 802.4 (M-2H20+H)+, 820.3 (M- H20+H)+, 838.4 (M+H)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Exemplo 7 Síntese de indicador 4-flúor: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-3-flúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-flúor benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4d).

Etapa 1: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-flúor benzil]- N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-flúor benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etila) amino] metil] antraceno (3d). 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1,718 g, 1,47 mmols) foi agitado em 5 mL de dimetil formamida até dissolvido. Pinacol éster de ácido 2-(bromo me-tila)-4-flúor fenil borônico (2d, 1,85 g, 5,87 mmols, 4 eq.) e DIEA (1,52 g, 12 mmoes, 8,0 eq.) foram adicionados e aquecidos a 80°C por 18 horas. Éter (100 mL) foi então adicionado e a solução lavada com tampão fosfato (3x100 mL de 0,1 M, pH 7,0). A solução orgânica foi secada sobre Na2S04 e então removida á vácuo. O produto bruto foi triturado com hexanos (2x50 mL), então cristalizado a partir de 25 mL de acetato de etila/lPA 80/20 em ebulição o que rendeu um pulverizado quase branco (0,52 g, 37%).

Determinação de Estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 15,7 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,3 (dois singletos se sobrepondo, 24H, 0-C(CH3)2C(CH3)2,C-0), 1,33 (s,9H, C(CH3)3), 1,52 (s, 3H), 1,55 (s, 1H), 1,70 (t, 1H), 2,48 (t, 2H), 2,55 (m, 2H), 2,82 (t, 2H), 3,08 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,82 (d, 2H), 5,05 (br, 1H), 6,83 (t, 1H), 6,84 (t, 1H), 7,08 (dd, 1H), 7,20 (dd, 1H), 7,44 (m, 4H), 7,68 (dd, 1H), 7,78 (dd, 1H), 8,36 (m, 2H), 8,45 (m, 2H). ESI-MS: 957 (M+H)+, 874.4 (M+H)+ para mono éster de ácido mono borôni- co, 792.3 (M+H)+ e 774.2 (M-H20+H)+ para ácido bis-borônico. Esteres bo-rônicos eácidos foram observados sob as condições ácidas desta análise. Etapa 2: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-flúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-flúor benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4d). 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-flúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-flúor benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etila) amino] metil] antraceno (3d, 0,450 g, 0,47 mmol) foi dissolvido em 10 mL de uma solução de CH2CI2:TFA 60:40 e agitado em temperatura ambiente por 16 horas. A solução de reação foi diluída com diclorometano (30 mL) então adicionada em 3 porções em NaHC03 aquoso saturado, resfriado com gelo, rapidamente agitado. A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada á vácuo rendendo 0,32 g de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em CH2CI2 anidro e agitado sobre pérolas PS-DEAM por toda noite. As pérolas foram filtradas e o solvente orgânico removido á vácuo. Produto puro (0,235 g, 55%) foi obtido como um pulverizado amarelo. Determinação de Estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 13,7 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,33 (s, 12 H), 1,35 (s, 12H), 1,62 (m, 5H, 0=C-C(CH2)CH3), N-CH2CH2CH2-N), 2,33 (t, 2H), 2,48 (t, 2H), 2,88 (m, 2H), 2,95 (m, 2H), 4,04 (s, 2H), 4,32 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,62 (s, 2H), 5,00 (t, 1H, C^CJHz), 5,12 (s, 1H, C=CH2), 5,48 (br, 1H, NH), 6,95 (dt, 1H), 7,15 (dt, 1H), 7,22 (br, 1H), 7,30 (dd, 1H), 7,48 (m, 4H), 7,80 (dd, 1H), 7,90 (m, 2H), 8,05 (dd, 1H), 8,37 (m, 2H).

Exemplo 8 Síntese de indicador 2,5-diflúor: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-2,5-diflúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,5-(diflúor) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4e) Etapa 1: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,5-diflúor ben- zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-2,5-(diflúor) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (3e) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,872 g, 1,7 8 mmols) foi colocado em um frasco de fundo redondo de 100 ml_ e agitado em 7 ml_ de dimetil formamida até dissolvido. Pinacol éster de ácido 6-(bromo metila)-2,5-diflúor fenil borônico (2e, 1,49, 4,47 mmols, 2,5 equiv.) e DIEA (1,86 g, 14,4 mmols, 8,0 equiv.) foram adicionados e agitados sob uma corrente de argônio até dissolução total e então aquecidos a 80°C em um banho de óleo e sob uma corrente de argônio por toda noite. Mais pinacol éster de ácido 6-(bromo me-tila)-2,5-diflúor fenil borônico (0,300 g, 0,5 equiv.) foi adicionado e aquecimento continuado uma segunda noite. Éter (100 ml_) foi adicionado à solução de reação e lavado com tampão fosfato 0,1 M, pH 7,0. A solução orgânica foi secada sobre Na2S04, o solvente removido á vácuo e o resíduo triturado com hexanos (2x50 mL). O resultante sólido avermelhado - marrom foi tratado com hexanos em ebulição (50 mL), decantado e o desejado produto (0,49 g) coletado como cristais brancos a partir do hexano resfriado. Determinação de estrutura: Condições de HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 15,0 minutos.

Etapa 2: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,5-diflúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5- tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,5-(diflúor) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) ami-no] metil] antraceno (4e) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,5-diflúor ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-2,5-(diflúor) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (3e, 0,49 foi agitado em 10 mL de uma 60:40 por toda noite em cujo tempo HPLC não mostrou material de partida restando. Os solventes foram removidos á vácuo, o resíduo dissolvido em diclorometano (3 mL) e adicionado em gotas em pentano em rápida agitação (100 mL). O produto sal de ácido triflúor acético foi isolado como um pulverizado amarelo através de filtração (0,40 g) e caracterizado por espectroscopia de massa. O indicador baseado livre foi obtido como se segue. O pulverizado (0,20 g) foi dissolvido em 10 mL de diclorometano e adicionado em gotas em 100 mL de NaHCC>3 aquoso saturado frio em uma taxa tal que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A camada orgânica foi separada e então secada sobre Na2S04 anidro. Pérolas PS-DEAM (0,5 g) foram adicionadas ao frasco e a suspensão foi agitada em temperatura ambiente por toda noite. Filtração e remoção do solvente á vácuo renderam produto (95 mg) como um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 12,9 minutos. ESI-MS (TFA/acetonitirla/água): 720,3 (M-3H20+H)+, 738,3 (M-2H20+H)+, 756,4 (M-H20+H)\ 778,3 (M-H20+Na)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise. Exemplo 9 Síntese de indicador 3,4-dicloro: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-2,3-dicloro benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,3-dicloro benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4f) Etapa 1: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,3-dicloro ben- zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-2,3-dicloro benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etila) amino] metil] antraceno (3f) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,25 g, 0,51 mmol) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e agitado em 5 ml_ de dimetil for-mamida até dissolvido. Pinacol éster de ácido 2-(bromo metila)-3,4-dicloro fenil borônico (2f, 0,56, 1,5 mmols, 3,0 equiv.) e DIEA (0,7 mL, 4,1 mmols, 8,0 eq.) foram adicionados e agitados sob N2, no escuro, em temperatura ambiente por 48 horas. A DMF foi removida á vácuo; diclorometano (20 mL) adicionado e lavado com tampão fosfato (40 mL de 0,1 M, pH 7,0). Solução de diclorometano coletada foi secada sobre Na2S04. O diclorometano foi removido á vácuo e o resultante resíduo amarelo triturado com hexanos (10 mL) por 15 minutos sob lento fluxo de N2. Trituração do produto bruto (0,41 g) com IPA fria rendeu um pulverizado amarelo de ~89% de pureza através de HPLC (0,29 g, rendimento de 54%).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 16,4 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,22 (s, 9H), 1,32 (s, 12H), 1,38 (s, 12H), 1,56 (bs, 5H), 2,35 (t, 2H), 2,50 (t, 2H), 2,78 (t, 2H), 2,91 (q, 2H), 4,20 (s, 2H), 4,28 (s, 2H), 4,38 (s, 2H), 4,91 (s, 2H), 4,50 (bs, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,79 (s, 1H), 7,36 (m, 4H), 7,45 (m, 2H), 7,69 (d, 2H), 8,16 (m, 4H).

Etapa 2: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,3-dicloro benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5- tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,3-dicloro benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4f) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,3-dicloro ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-2,3-dicloro benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etila) amino] metil] antraceno (3f, 0,29 g, 0,27 mmol) foi colocado em um frasco de 100 ml_ de fundo redondo e dissolvido em 6 ml_ de uma solução de CH2CI2 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 17 horas ou até análise HPLC ter mostrado menos que 0,1% de material de partida restante. Os solventes foram removidos á vácuo. O produto residual foi dissolvido em 10 ml_ de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. Os tratamentos de dissolução/evaporação com diclorometano foram repetidos até o produto tornar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 10 mL de diclorometano e adicionado em gotas em 70 mL de NaHC03 aquoso, saturado, frio em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos a < 5°C seguido por particionamento das camadas. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada rendendo 0,23 g de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 10 mL de CH2CI2 anidro e transferido para um frasco de 100 mL de fundo redondo. Pérolas PS-DEAM (0,13 g, 1 eq.) foram adicionadas ao frasco e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com 5 mL de diclorometano. As soluções orgânicas combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (0,2 g, 71%) foi obtido como um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 14,1 minutos. 1H RMN (400 ΜΗζ, CDCI3): δ 1,35 (s, 12 Η), 1,38 (s, 12Η), 1,58 (m, 5H), 2,28 (t, 2H), 2,42 (t, 2H), 2,70 (q, 2H), 2,89 (í, 2H), 4,28 (s, 2H), 4,42 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 4,92 (s, 1H), 4,05 (m, 1H), 5,30 (s, 1H), 7,38 (m, 3H), 7,49 (m, 4H), 7,58 (d, 1H), 7,72 (m, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,91 (d, 1H), 8,17 (m, 1H). ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 822.3 (M-H20+H)\ 804.4 (M-2H20+H)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Exemplo 10 Síntese de indicador 4-triflúor metóxi: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metóxi) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metóxi) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4 g) Etapa 1: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metó- xi) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metóxi) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etila) amino] metil] antraceno (3 g). 9-[N-[3-9metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,2 g, 0,41 mmol) foi colocado em um frasco de 150 mL de fundo redondo. Ele foi dissolvido em 5 mL de dimetil formamida desgaseificada. Pinacol éster de ácido 2-(bromo metila)-4-(triflúor metóxi) fenil borônico (2 g, 0,37, 0,97 mmol, 2,4 equiv.) foi dissolvido em 4 mL de DMF espargida com N2 e adicionado ao frasco de reação. A solução foi agitada e lavada com N2 por 5 minutos. DIEA (0,6 mL, 3,5 mmols, 8,0 e-quiv.) foi adicionada à mistura de reação e a solução foi deixada agitar sob uma corrente suave de nitrogênio e no escuro em temperatura ambiente por toda noite. Após 24 horas o solvente foi evaporado á vácuo. O produto residual foi dissolvido em 10 mL de diclorometano e extraído com porções de 3x15 mL de tampão fosfato (0,1 M, pH 7,0). A solução de diclorometano foi secada e evaporada em vácuo resultando em um resíduo oleoso dourado. O produto bruto foi agitado por 15 minutos com 5 mL de éter e então o solvente foi removido. O resíduo oleoso amarelo foi mantido á vácuo por 30 minutos resultando em pulverizado espumante (3 g, 0,41 g, 915 de rendimento). Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 15,0 minutos.

Etapa 2: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metóxi) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metóxi) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4 g) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metóxi) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metóxi) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etila) amino] metil] antraceno (3 g, 0,4 g, 0,37 mmol) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e dissolvido em 5 mL de uma solução de CH2CI2:TFA desgaseificada 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 21 horas ou até análises de HPLC terem mostrado menos que 0,18% de material de partida restante. O produto residual foi lavada com 10 mL de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. As lavagens de diclorometanoforam repetidas várias vezes. O pulverizado foi dissolvido em 10 mL de diclorometano e adicionado em gotas em 80 mL de NaHCOa aquoso saturado frio em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais em < 5°C seguido por particionamento das camadas. Os extratos orgânicos foram secados sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados rendendo 0,18 g de pulverizado amarelo (4 g, rendimento de 46%).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18 com coluna guarda Sentry C18, injeção 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 70/30 com TFA 1% v/v), 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 0,100 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 12,9 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,32 (s, 12 H), 1,33 (s, 12H), 1,51 (s, 6H), 2,31 (bm, 2H), 2,40 (bt, 2H), 2,82 (bt, 2H), 2,89 (bm, 2H), 3,85 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,86 (d, 2H), 4,88 (bs, 1H,), 7,32 (d, 1H), 7,40 (m, 5H), 7,82 (d, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,96 (m, 2H), 8,40 (d, 2H), 8,27 (m, 2H). Exemplo 11 Síntese de indicador 4-sulfonamida: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(N,N-dimetil sulfamoil) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(N,N-dimetil sulfamoil) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4 h) Etapa 1: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(N,N-dimetil sulfamoil) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(N,N-dimetil sulfamoil) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (3 h) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,27 g, 0,55 mmol) foi dissolvido em DMF anidra (2 ml_) em um frasco de 25 ml_ de fundo redondo. Pinacol éster de ácido 2-(bromo metila)-4-(N,N-dimetil sulfamoil) fenil borônico (2h, 0,595 g, 1,47 mmols, 2,7 equiv.) e DIEA (0,765 mL, 4,4 mmols, 8 eq.) foram adicionados e agitados sob N2, no escuro, em temperatura por 19 horas. A DMF foi removida á vácuo, diclorometano (10 mL) adicionado e lavado com tampão fosfato (2x10 mL de 0,1 M, pH 7,0). A solução de diclorometano foi secada sobre Na2S04, filtrada e removida á vácuo. Trituração do produto bruto com hexanos (2x5 mL) rendeu um pulverizado amarelo de -90% de pureza por HPLC (0,59g, rendimento de 94%).

Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10- 80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 14,6 minutos.

Etapa 2: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(N,N-dimetil sulfamoil) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(N,N-dimetil sulfamoil) ben-zil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4 h) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(N,N-dimetil sulfamoil) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(N,N-dimetil sulfamoil) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (3 h, 0,44 g, 0,39 mmols) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e dissolvido em 10 ml_ de uma solução de CH2CI2 : TFA 60:40 preparada a partir de reagentes espargidos com N2. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 28 horas. Os solventes foram removidos á vácuo. O produto residu-la foi dissolvido em 20 mL de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. Os tratamentos de dissolução/evaporação com diclorometano foram repetidos mais quatro vezes até o produto tornar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 20 mL de diclorometano e adicionado em gotas em 40 mL de NaHCOaaquoso saturado resfriado com gelo em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais a < 5°C seguido por particionamento das camadas. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada rendendo 0,24 g (57%) de produto como um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18 (com coluna guarda Sentry C18), injeção de 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 70/30 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 mL, 0,75 mL/minuto, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção de 12,7 minutos. ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 920,3 (M-FhO+Na)*, 898,2 (Μ-Η2θ+Η)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Exemplo 12 Síntese de indicador 2-metila: 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa boro-lano)-3-metil benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-metil benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (8).

Etapa 1: ácido 2-(bromo metila)-6-metil fenil borônico (6): Ácido 2,6-dimetil fenil borônico (2,22 g, 14,8 mmols), NBS (1,31 g, 7,36 mmols, 0,5 eq.) e AIBN (0,17 g, 1,0 mmol, 0,07 eq.) foram aquecidos em CCI4 em refluxo por 2 horas. A solução foi deixada resfriar e então filtrada. A solução foi então lavada com água (50 ml_), secada sobre Na2S04 e o solvente evaporado à vácuo. O resultante pulverizado branco (1,66 g) foi -84% puro por HPLC e conteve material de partida e algum produto di-bromado. Cromatografia de coluna sobre sílica gel 60 (condições de eluição 0%-2% metanol em diclorometano) falhou no aperfeiçoamento de pureza e o material bruto foi usado para a etapa seguinte.

Etapa 2: 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-metil benzil]- N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-metil benzil]-N-[2-t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (7): 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,85 g, 0,17 mmol) foi colocado em um frasco de 50 ml_ de fundo redondo e agitado em 2 ml_ de dimetil forma-mida até dissolvido. Ácido 2-(bromo metila)-6-metil fenil borônico (6, 389 mg, 1,7 mmols) e DIEA (0,24 mL, 1,4 mmols, 8 eq.) foram adicionados e aquecidos a 80°C em um banho de óleo sob um balão enchido com argônio por toda noite. A DMF foi removida á vácuo, diclorometano (20 mL) adicionado e lavado com tampão fosfato (3x10 mL de 0,1 M, pH 7,0). O solvente orgânico foi secado sobre Na2S04, 0 solvente foi removido á vácuo e o resultante sólido amarelo triturado com hexanos (2x10 mL). Este produto bruto foi puri- ficado por cromatografia instantânea de coluna sobre sílica gel 60 eluída com 1-5% metanol em diclorometano para render material puro 93% (55 mg, 41%).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3.9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 15,8 minutos.

Etapa 3: sal de ácido triflúor acético de 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-metil benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-metil benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (8). 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-metil benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-metil benzil]-N-[2-t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (7, 55 mg, 0,070 mmol) foi dissolvido em 2 mL de uma solução de CH2CI2 : TFA 60:40 e agitado por toda noite sob um balão enchido com ar-gônio. Adicionais 10 mL de diclorometano foram adicionados e os solventes foram removidos á vácuo. Diclorometano (10 mL) foi adicionado e o solvente novamente removido á vácuo. A etapa de dissolução/evaporação foi repetida mais três vezes. O produto bruto foi triturado com éter (10 mL) então hepta-no (3 mL) rendendo produto puro -90% como sal de ácido triflúor acético (59 mg, 88%) como um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3.9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 14,2 minutos. ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 694,4 (M-2H20+H)+, 712,4 (M-H20+H)+, 730,4 (M+H)+.

Exemplo 13 Síntese de indicador 4-ciano: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-ciano benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] me-til-10[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-ciano benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (14a).

Etapa 1: 3-metil-4-(4,4,5,5-tetra metil-[1,2,3] dioxa borolan-2-il) benzonitri- la (11a) 4-bromo-3-metil benzonitrila (9a, 5,0 g, 0,0255 mmol, 1,0 equiv.) foi colocado em um frasco de 250 mL de fundo redondo contendo 153 mL de dimetil formamida anidra. Acetato de potássio (7,5 g, 0,076 mol, 3 equiv.), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-octa metil-bi-1,3,2-ioxaborolano (10, 7,12 g, 0,028 mol, 1,1 equiv.) e [1,1’-bis(difenil fosfino) ferroceno] dicloro paládio (II) (0,56 g, 0,00076 mol, 0,03 equiv.) foram adicionados ao frasco e a mistura de reação foi aquecida a 80°C por 24 horas. A solução foi resfriada para temperatura ambiente e a suspensão foi filtrada quente. Solvente coletado foi removido á vácuo. O produto marrom escuro oleoso obtido foi dissolvido em 200 mL de acetato de etila e transferido para um funil de separação. 250 mL de água foram adicionados e a solução foi extraída. A camada orgânica foi coletada e secada sobre Na2S04 anidro. O solvente foi removido em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea sobre sílica gel 60 (condições de eluição 2%-20% EtOAc/hexano). Aproximadamente 5 g de material foram coletados. O produto foi ainda purificado por cristalização a partir de hexano quente. Produto puro (11a) foi obtido (3,7 g, rendimento de 60%).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna 3,9x150 mm Symmetry Column HR C18, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1%), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 10,7 minu- tos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,35 (s, 12H, C(CH3)3), 2,55 (s, 3H, CH3), 7,41 (m, 2H, ArH), 7,81 (m, 1H, ArH).

Etapa 2: 3-bromo etil-4-(4,4,5,5-tetra metil-[1,2,3] dioxa borolan-2-il) benzo nitrila (12a) 3-metil-4-(4,4,5,5-tetra metil-[1,2,3] dioxa borolan-2-il) benzo ni-trila (11a, 3,3 g, 0,0136 mol, 1,0 eq.) foi colocada em um frasco de 250 ml_ de fundo redondo contendo 50 ml_ de tetra cloreto de carbono. NBS (2,5 g, 0,0142 mol, 1,05 equiv.) e quantidade catalítica de 2,2’-azo bis isobutiro nitrila (0,03 g, 0,00018 mol, 0,014 equiv.) foram adicionados e a mistura de reação foi refluxada por 53 horas. A resultante solução foi filtrada quente e então o solvente foi removido á vácuo. O produto bruto foi purificado através de cristalização a partir de hexano quente. Produto (12a) contendo algum 11a foi obtido (3,08 g, 70%).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna 3,9x150 mm Symmetry Column HR C18, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1%), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 13,4 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,38 (s, 12H, C(CH3)3), 4,85 (s, 2H, Ct^Br), 7,55 (d, 1H, ArH), 7,68 (s, 1H, ArH), 7,92 (d, 1H, ArH).

Etapa 3: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-ciano benzil]- N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-ciano benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] an-traceno (13a) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,3 g, 0,00061 mol, 1,0 eq.) foi colocado em um frasco de 25 mL de fundo redondo e dissolvido em 4,5 mL de dimetil formamida desgaseificada. 3-bromo metil-4-(4,4,5,5-tetra metil-[1,2,3] dioxa borolan-2-il) benzonitrila (12a, 0,53, 0,0016 mol, 2,7 eq.) foi dissolvida em 2 mL de DMF espargida com N2 e adicionada ao frasco de reação. A solução foi agitada e lavada com N2 por 5 minutos. DIEA (0,85 mL, 0,0049 mol, 8,0 equiv.) foi adicionada à mistura de reação e a solução foi deixada agitar sob uma corrente suave de nitrogênio e no escuro em temperatura ambiente por 26 horas. O solvente de reação foi evaporado á vácuo. O produto residual foi dissolvido em 20 mL de diclorometano e extraído com 2 porções de 10 mL de tampão fosfato (0,1 M, pH 7,0). Os extratos de diclorometano combinados foram secados e evaporados à vácuo resultando em um resíduo oleoso dourado. O produto bruto foi agitado por 15-30 minutos com 5 mL de hexano até ocorrer um precipitado amarelo. Ele foi filtrado e o peso do produto foi determinado (~0,9 g de pulverizado amarelo). O produto bruto foi ainda purificado através de cristalizações múltiplas a partir de 2-propanol quente (~3 mL de IPA). Produto puro (13a) foi coletado (0,07 g, 98,8% de pureza por HPLC).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna 3,9x150 mm Symmetry Column HR C18, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v TFA), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 15,2 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,31(s, 12H, 0-C(CH3)2C(CH3)2,C-O), 1,34(s, 12H, 0-C(CH3)2C(CH3)2,C-O), 1,35(s, 9H, C(CH3)3), 1,63(m, 3H, N-CH2CH2CH2-N + NH sobreposição), 2,51(m, 4H), 2,59(t, 2H), 3,10(q, 2H), 3,89(s, 2H), 3,99(s, 2H), 4,45(s, 2H), 4,53(s, 2H), 5,09(m, 1H), 5,13(s, 1H), 5,22 (t, 1H), 7,29(d, 1H, ArH), 7,42(d, 1H, ArH), 7,50(m, 5H, ArH), 7,62(d, 1H, ArH), 7,70(s, 1H, ArH), 7,78(d, 1H, ArH), 8,35(m, 2H, ArH), 8,41 (d, 2H, ArH). ESI-MS: m/z 790.4 (M+, 100%). Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Etapa 4: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-ciano benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5- tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-ciano benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (14a) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-ciano benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-ciano benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (13a, 0,064 g, 0,066 mmol, 1,0 eq.) foi colocado em um frasco de 25 mL de fundo redondo e dissolvido em 2,5 mL de uma solução de CH2CI2 : TFA desgaseificada 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 24 horas. O produto residual foi lavado com 5 mL de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. As lavagens com dicloro-metano foram repetidas até 0 produto tornar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 10 mL de diclorometano e adicionado em gotas a 20 mL de NaHC03 aquoso saturado frio em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais em < 5°C seguido por particionamento das camadas. Os extratos orgânicos foram secados sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados rendendo 0,042 g de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 3 mL de CH2CI2 anidro e transferido para um frasco de 25 mL de fundo redondo. Pérolas de PS-DEAM (0,039 g, 1 mmol, 1 eq.) foram adicionadas ao frasco e a mistura de reação foi lavada com nitrogênio por 2 minutos. A solução foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com 2x10 mL de diclorometano. As soluções orgânicas combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (14a) foi obtido (34 mg de indicador).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18, injeção de 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 70/30 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 mL, 0,75 mL/minuto, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção de 12,9 minutos. 1H RMN (400 ΜΗζ, CDCI3): δ 1,33(s, 12Η), 1,36(s, 12H), 1,65(m, 2H), 1,71 (bs, 3H), 2,35(t, 2H), 2,48(t, 2H), 2,88(t, 2H), 2,98(q, 2H), 4,01 (s, 2H), 4,25(s, 2H), 4,48(s, 2H), 4,58(s, 2H), 5,10(s, 1H), 5,28(s, 1H),5,61 (bs, 1H), 7,45(m, 5H), 7,65(d, 1H), 7,72(d, 2H), 7,81(d, 1H), 7,92(d, 2H), 8,05(d, 1H), 8,30(d, 2H).

Exemplo 14 Síntese de indicador 4-nitro: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-3-nitro benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-nitro benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (14b).

Etapa 1: 3-nitro-6-(4,4,5,5-tetra metil-[1,2,3] dioxa borolan-2-il) tolueno (11b) 2-bromo-5-nitro tolueno (9b, 10,2 g, 47,2 mmols) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo com acetato de potássio (7,14 g, 72,7 mmols), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-octa metil-2,2’-bi-1,3,2-dioxa borolano (10, 13,3 g, 52,3 mmols), [1,1’-bis-(difenil fosfino) ferroceno] dicloro paládio (II) (413 mg, 0,506 mmol) e DMSO (50 mL) e a mistura de reação foi aquecida a 80°C por 4 dias. A solução foi resfriada para temperatura ambiente, água gelada (125 mL) foi adicionada e a suspensão negra foi extraída com acetato de etila (3x100 mL). O solvente foi removido em vácuo e o produto bruto foi purificado por cromatografia instantânea de coluna sobre sílica gel 60 elu-ída com hexanos e então EtOAc/hexano 5%). Produto puro aproximadamente 95% (2,09 g, 17%) foi obtido a partir da fração mais pura.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 10,48 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,36 (s, 12H, C(CH3)3), 2,62 (s, 3H, CH3), 7,89 (d, 2H, ArH), 7,92 (dd, 1H, ArH), 7,97 (d, 1H).

Etapa 2: 3-bromo metil-4-(4,4,5,5-tetra metil-[1,2,3]-dioxa borolan-2-il) ni-tro benzeno (12b) 3-nitro-6-(4,4,5,5-tetra metil-[1,2,3] dioxa borolan-2-il) tolueno (11b, 3,59 g, 13,6 mmols) foi colocado em um frasco de 500 mL de fundo redondo contendo 50 mL de benzeno. NBS (2,68 g, 15,0 mmols, 1,1 equiv.) e quantidade catalítica de 2,2’-azo bis isobutiro nitrila (AIBN, 84 mg, 0,5 mmol) foram adicionados e a rrlstura de reação foi refluxada sob uma corrente de argônio por 3,5 horas. NBS adicional (0,27 g, 1,5 mmols, 0,1 eq.) foi adicionado e refluxo continuado por mais 2 horas. A suspensão resfriada foi filtrada e o solvente foi removido á vácuo. O produto bruto foi purificado por cristalização a partir de hexano quente. Produto (12b) foi obtido (2,12 g, 46%).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 12,5 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,40 (s, 12H, C(CH3)3), 4,92 (s, 2H, CHaBr), 7,98 (d, 1H, ArH), 8,08 (dd, 1H, ArH), 8,22 (d, 1H, ArH).

Etapa 3: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-nitro benzil]- N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxo borolano)-3-nitro benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antra-ceno (13b); 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,509 g, 1,04 mmols) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e agitado em 5 mL de dimetil formamida até dissolvido. Pinacol éster de ácido 4-nitro-2-(bromo metila) fenil borônico (12b, 1,09 , 3,19 mmols, 3 equiv.) e DIEA (1,45 mL, 8,38 mmols, 8 eq.) foram adicionados e a solução aquecida a 80°C em um banho de óleo e sob um balão enchido com argônio por 2 horas. A DMF foi removi- da á vácuo. Diclorometano (50 mL) adicionado e lavado com tampão fosfato (2x50 mL de 0,1 M, pH 7,0). A solução aquosa foi lavada em contracorrente com diclorometano (25 mL) e as soluções orgânicas combinadas secadas sobre Na2S04. Os extratos orgânicos foram removidos á vácuo e o resultante óleo vermelho - amarelo triturado duas vezes com hexanos em ebulição (50 mL cada) para render um pulverizado castanho. Trituração com acetato de etila/IPA 80/20 rendeu 145 mg de produto puro como um pulverizado castanho. Mais produto puro (400 mg) precipitou do acetato de etila/IPA resfriado e os sólidos puros são combinados.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 16,0 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,32 (s, 12H, 0-C(CH3)2C(CH3)2,C-O), 1,36 (s, 21H, 0-C(CH3)2C(CH3)2,C-O + t-butyl), 1,65 (s, 3H, 0=C-C(CH2)CH3), 1,75 (m, 2H, N-CH2CH2CH2-N), 2,55 (t, 2H), 2,59 (t, 2H), 3,0 (t, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,96 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 5,04 (s, 1H), 5,08 (s, 1H), 5,25 (br, 1H), 7,44-7,52 (m, 4H, ArH), 7,64 (d, 1H), 7,76 (dd, 1H, ArH), 7,80 (d, 1H), 7,92 (dd, 1H), 7,96 (d, 1H, ArH), 8,25 (d, 1H, ArH), 8,36-8,44 (m, 4H, ArH).

Etapa 4: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-nitro benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-nitro benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (14b). 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-nitro benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxo borolano)-3-nitro benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (13b, 0,499 g, 0,993 mmols) foi dissolvido em 10 mL de uma solução de CH2Cl2:TFA 60:40 e agitado por toda noite. Os solventes foram removi- dos á vácuo, o produto residual foi dissolvido em 20 ml_ de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. Os tratamentos de dissolução/evaporação com diclorometano foram repetidos mais quatro vezes até 0 produto tornar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 20 mL de diclorometano e adicionado em gotas a 80 mL de NaHC03 aquoso saturado frio em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais em < 5°C. Diclorometano adicional (50 mL) foi adicionado para auxiliar particionamento das camadas. Os extratos orgânicos foram secados sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados rendendo 157 mg de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 10 mL de CH2CI2 anidro e transferido para um frasco de 100 mL de fundo redondo. Pérolas PS-DEAM (0,10 g) foram adicionadas, o frasco selado com um septo e lavado com argônio e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com diclorometano (2x10 mL). As soluções combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (0,125 mg, 26%) foi obtido como um pulverizado amarelo. Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 0,75 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 13,7 minutos.

Exemplo 15 Síntese de indicador 4-triflúor metil sulfona: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(trifúor metil sulfonil) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10—[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (21) Etapa 1: fluoreto de 4-bromo-3-metil benzeno sulfonila (16).

Cloreto de 4-bromo-3-metil benzeno sulfonila (15, 9,87 g, 36,6 mmols), fluoreto de potássio anidro (8,50 g, 146 mmols, 4 eq.) e 18-coroa-6 (0,299 g, 1,13 mmols, 0,03 eq.) foram agitados em acetonitrila anidra (20 mL) por toda noite em cujo momento HPLC mostrou completa conversão de material de partida em produto. Água (100 mL) foi adicionada à mistura de reação e o produto separado como um óleo. A solução aquosa foi decantada e então extraída com hexano (50 mL). O óleo foi dissolvido no extrato de hexano, secado sobre Na2S04 e o solvente removido á vácuo. Um sólido branco, céreo (8,08 g, 87%) foi isolado, p.f = 47-48°C.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18 ( com coluna guarda Sentry C18), injeção de 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 60/40 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 mL, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 10,5 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3):ô 2,5 (s, 3H), 7,68 (dd, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,86 (d, 1H).

Etapa 2: 6-bromo-3-(triflúor metil sulfonil) tolueno (17). (TASF , 0,61 g, 2,2 mmols) foi suspenso em pentano anidro (40 mL) em um frasco de 2 gargalos secado em forno equipado com funil de a-dição e resfriado para ~5°C. Fluoreto de 4-bromo-3-metil benzeno sulfonila (16, 5,00 g, 19,8 mmols) dissolvido em pentano (40 mL) foi adicionado em um termômetro inserido na suspensão. Trimetil triflúor silano (TFM-TMS, 6,4 mL, 41 mmols, 2,1 eq.) dissolvido em pentano (20 mL) foi adicionado à suspensão em gotas através do funil de adição de modo que a temperatura de reação foi mantida entre 4-5°C. Agitação foi continuada por 5 horas enquanto a suspensão foi deixada aquecer. A solução clara seja decantada a partir de um sólido marrom, lavada com água (100 mL), secada sobre Na2S04, filtrada e o solvente removido á vácuo. Um óleo amarelo (5,35 g, 89%) foi isolado o qual então cristalizou (agulhas) com repouso.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18 ( com coluna guarda Sentry C18), injeção de 0,010 ml_ (amostra dissolvida em água/MeCN 60/40 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 ml_, 1,50 mL/minuto, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 11,0 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,55 (s, 3H), 7,70 (dd, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,7 (d, 1H).

Etapa 3: pinacol éster de ácido 2-metil-4-(triflúor metil sulfonil) fenil borô-nico (18) Um frasco de 250 ml_ de fundo redondo foi carregado com acetato de potássio (5,0 g, 50 mmols), [1,1-bis(difenil fferroceno] dicloro paládio (II) (0,373 g, 0,51 mmol) e bis(pinacolato) de di-boro (5,2 g, 20 mmols) e lavado com N2. 6-bromo-3-(triflúor metil sulfonil) tolueno (17, 5,0 g, 16 mmols) em DMF anidra (100 mL) foi adicionado e a suspensão aquecida a 80°C sob N2 por 24 horas. O solvente foi removido á vácuo e a resultante pasta eluída com sílica gel 60 (60 g) com hexano/acetato de etila 95/5 (500 mL). Remoção do solvente rendeu 6,1 g de produto bruto como um sólido céreo, branco. Recristalização a partir de hexanos rendeu 3,78 g (68%) de cristais brancos; ainda 0,44 g foi isolado de uma segunda colheita.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18 ( com coluna guarda Sentry C18), injeção de 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 60/40 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 mL, 1,50 mL/minuto, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 8,0 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,37 (s, 12H), 2,62 (s, 3H), 7,80 (m, 2H), 8,00 (d, 1H). FAB MS (mNBA): 351 (M+H)+, 335 (M-15)+.

Etapa 4: pinacol éster de ácido 2-bromo metil-4-(triflúor metil sulfonil) fenil borônico (19) Pinacol éster de ácido 2-metil-4-(triflúor metil sulfonil) fenil borônico (18, 3,60 g, 10,3 mmols), N-bromo succinimida (1,92 g, 10,8 mmols, 1,04 eq.) e AIBN (25 mg, 0,15 mmol, 0,015 eq.) foram aquecidos em CCI4 em refluxo (70 mL) enquanto irradiado com um bulbo incandescente de 75 watts por 5 horas. A solução foi então deixada atingir a temperatura ambiente, filtrada por gravidade e o solvente removido á vácuo. O produto bruto foi purificado sobre sílica gel eluída com acetato de etila 0, 5 e então 10% em hexanos e 19 misturado com algum dibrometo e 18 foi isolado como um óleo amarelo (2,65 g, 60%).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18 ( com coluna guarda Sentry C18), injeção de 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 60/40 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 mL, 1,50 mL/minuto, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 8,7 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,37 (s, 12H), 4,92 (s, 2H), 7,96 (dd, 1H), 8,02 (d, 1H), 8,08 (d, 1H).

Etapa 5: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonila) etil amino] metil] antraceno (20) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,706 g, 1,44 mmols), pinacol éster de ácido 2-bromo metil-4-(triflúor metil sulfonil) fenil borônico (19, 2,11 g) e DIEA (4,5 mL, 26 mmols) foram dissolvidos em DMF anidra (12 mL) e agitados em temperatura ambiente sob uma corrente de N2. Após 26 horas, o solvente foi evaporado em vácuo. O produto residual foi dissolvido em 30 mL de diclorometano e lavado com porções de 2x30 mL de tampão fosfato (0,1 Μ, ρΗ 7,0). A solução de diclorometano foi secada sobre Na2S04, filtrada e evaporada em vácuo resultando em um óleo laranja. O produto bruto foi triturado com hexanos (10 ml_) então dissolvido em IPA mínima e hexanos adicionados até a solução tornar-se turva. Os solventes foram removidos á vácuo deixando um pulverizado amarelo (1,93 g, 95%).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18 ( com coluna guarda Sentry C18), injeção de 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 60/40 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 mL, 0,75 mL/minuto, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 17,4 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,30 (s, 12H), 1,32 (s, 12H), 1,34 (s, 9H), 1,63 (s, 3H), 1,78-1,81 (m, 2H), 2,55-2,61 (m, 4H), 2,96 (t, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,98 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 5,10 (bs, 1H), 5,12 (s, 1H), 5,30 (bt, 1H), 7,49-7,52 (m, 4H), 7,68 (dd, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,84 (d, 1H), 7,94 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,40-8,42 (m, 4H). ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 1004,2 (M-H20+H)\ 1006,2 (M-H20+Na)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Etapa 6: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) ben-zil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (21) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (20, 1,00 g, 843 mmols) foi dissolvido em 30 mL de uma solução de CH2CI2:TFA 60:40 preparada a partir de rea-gentes espargidos com N2. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 22 horas então os solventes foram removidos á vácuo. O produto residual foi dissolvido em 30 mL de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. Os tratamentos de dissolução/evaporação com diclo-rometano foram repetidos mais quatro vezes até o produto tomar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 30 mL de diclorometano e adicionado em gotas em 60 mL de NaHC03 aquoso saturado, resfriado com gelo em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais em < 5°C seguido por particio-namento das camadas. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada rendendo 0,58 g (60%) de produto como um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 4,6x100 mm Symmetry 3,5μ C18 ( com coluna guarda Sentry C18), injeção de 0,010 mL (amostra dissolvida em água/MeCN 60/40 com TFA 1% v/v), circuito de injeção de 0,100 mL, 0,75 mL/minuto, detecção em 254 nm, A = água (TFA 0,1%) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 2 minutos, 10-80% B em 18 minutos, 80-100% B em 2 minutos, 100% B 2 minutos, tempo de retenção 15,5 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,32 (s, 12H), 1,35 (s, 12H), 1,69-1,72 (m, 5H), 2,41 (t, 2H), 2,53 (t, 2H), 2,89 (t, 2H), 3,03 (dd, 2H), 4,07 (s, 2H), 4,23 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 5,09 (s, 1H), 5,26 (s, 1H), 5,56 (m, 1H), 7,45-7,49 (m, 4H), 7,82 (m, 2H), 7,91 (m, 1H), 7,98 (d, 1H), 8,10-8,16 (m, 4H), 8,39 (m, 2H). ESI-MS (TFA/acetonitrile/water): 948.0 (M-H20+H)+, 970.0 (M-H20+Na)+ para 0 ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Exemplo 16 Síntese de indicador 3,5-dicloro: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxo borolano)-2,4-(dicloro) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2—dioxa borolano)-2,4-(dicloro) ben-zil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4i) Etapa 1: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxo borolano)-2,4-(dicloro) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2—dioxa borolano)-2,4-(dicloro) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (3i) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-{2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,4 g, 0,82 mmol) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e agitado em 10 ml_ de dimetil for-mamida até dissolvido. Pinacol éster de ácido 6-(bromo metila)-3,5-dicloro fenil borônico (2i, 0,83 g, 2,3 mmols, 2,4 equiv.) e DIEA (1,14 mL, 6,6 mmols, 8,0 eq.) foram adicionados e agitados sob N2, no escuro, em temperatura ambiente por 24 horas. A DMF foi removida á vácuo, diclorometano (30 mL) adicionado e lavado com tampão fosfato (50 mL de 0,1 M, pH 7,0). A solução de diclorometano coletada foi secada sobre Na2S04. O diclorometano foi removido á vácuo e 0 resultante resíduo espumante amarelo triturado com hexanos (10 mL) por 15 minutos sob fluxo lento de N2. O produto bruto (1,02 g) foi cristalizado a partir de IPA quernte rendendo um pulverizado a-marelo (3i, 0,38 g, 44% de rendimento).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 8,7 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,23 (s, 9H), 1,32 (s, 12H), 1,37 (s, 12H), 1,41 (bs, 3H), 1,52 (m, 2H), 2,36 (t, 2H), 2,48 (t, 2H), 2,76 (t, 2H), 2,89 (q, 2H), 4,12 (s, 2H), 4,16 (s, 2H), 4,37 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 4,56 (t, 1H), 4,67 (s, 1H), 4,82 (t, 1H), 7,36 (m, 4H), 7,48 (d, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,76 (t, 2H), 8,17 (m, 2H), 8,24 (m,2H).

Etapa 2: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxo borolano)- 2,4-(dicloro) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2—dioxa borolano)-2,4-(dicloro) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4i) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxo borolano)-2,4-(dicloro) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2—dioxa borolano)-2,4-(dicloro) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (3i, 0,38 g, 0,36 mmol) foi colocado em um frasco de 50 mL de fundo redondo e dissolvido em 10 ml_ de uma solução de CH2CI2:TFA 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por toda noite. Após 20 horas os solventes foram removidos á vácuo. O produto residual foi dissolvido em 10 ml_ de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. Os tratamentos de dissolução/evaporação com diclorometano foram repetidos até o produto tornar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 30 ml_ de diclorometano e adicionado em gotas em 50 mL de NaHC03 aquoso, saturado, frio em uma taxa tal que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais a < 5°C seguido por particionamento das camadas. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada rendendo um pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 15 mL de CH2CI2 anidro e transferido para um frasco de 100 mL de fundo redondo. Pérolas PS-DEAM (0,2 g, 1 eq.) foram adicionadas ao frasco e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com 10 mL de diclorometano. As soluções orgânicas combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (0,19 g, 52% de rendimento) foi obtido como um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 7,9 minutos. ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 822,11 (M-H20+H)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Exemplo 17 Síntese de indicador 3,5-bis-(triflúor metila): Sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(Triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (27a) Etapa 1: 2-bromo-4,6-bis-(triflúor metila) tolueno (23a) 2,4-bis-(triflúor metila) tolueno (22a, 12,7 g, 56 mmols) foi colocado em um frasco de fundo redondo. Então 28 ml_ de TFA e 7,8 mL de H2S04 (28% da quantidade de TFA) foram adicionados. NBS (10,0 g, 56 mmols, 1 eq.) foi adicionado à mistura de reação em pequenas porções. A reação foi deixada correr em temperatura ambiente por dois dias. Após 48 horas a reação foi trabalhada. A mistura de reação foi vertida em água gelada (200 mL) e a camada orgânica (resíduo oleoso) foi separada da camada de água através de extração com Et20. A camada de éter foi lavada com solução aquosa saturada de NaHC03 e então as camadas foram separadas. A camada orgânica foi coletada, secada sobre Na2S04 e o solvente foi removido. O produto puro (13,1 g, 77% de rendimento) como um óleo levemente amarelo foi coletado.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 12,3 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,54 (s, 3H), 7,64 (s, 1H), 8,00 (s, 1H).

Etapa 2: Pinacol éster de ácido 2-metil-3,5-bis-(triflúor metila) fenil borônico (24a) 2-bromo-4,6-bis(triflúor metila) tolueno (23a, 10,0 g, 30 mmols) foi colocado em um frasco de fundo redondo e dissolvido em 200 mL de DMF. Então KOAC (8,8 g, 90 mmols, 3 eq.) foi adicionado à mistura de rea- ção em uma porção seguido pela adição de PdCI2(dppf) (0,66 g, 0,9 mmol, 0,03 eq.) e bis-(pinacolato) de di-boro (10,2 g, 45 mmols, 1,5 eq.). A solução foi agitada a 80°C por 24 horas. Então o solvente foi removido e o resíduo negro fopi submetido a uma cromatografia de coluna de plug (DCM) resultando em resíduo oleoso verde-escuro. O composto foi ainda purificado por uma segunda coluna de cromatografia (MeOH/DCM 2%). Produto puro (8,7 g, 76%) como um óleo levemente verde foi coletado.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3.9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 9,1 minutos (para ácido borônico) e 12,8 minutos (para pinacol és-te r). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,36 (s, 12H), 2,75 (s, 3H), 7,90 (s, 1H), 8,16 (s, 1H).

Etapa 3: pinacol éster de ácido 2-(bromo metila)-3,5-bis-(triflúor metila) fenil borônico (25a) Pinacol éster de ácido 2-metil-3,5-bis-(triflúor metila) fenil borônico (24a, 2,0 g, 5,6 mmols) e 50 mL de CCI4 foram colocados em um frasco de 250 mL de fundo redondo. NBS (1,05), 5,88 mmols, 1,05 eq.) e AIBN (0,013 g, 0,078 mmol, 0,014 eq.) foram adicionados e a mistura de reação foi refluxada por 3 horas na presença de bulbo incandescente de 75 W. Após 3 horas a solução foi resfriada para temperatura ambiente permitindo a succi-nimida precipitar. O sólido foi filtrado. O solvente foi removido e produto oleoso foi coletado. O produto bruto foi purificado por trituração com hexano que resultou em 90% de produto puro (25a, 2,2 g, 90"% de rendimento). Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3.9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 9,7minutos (para ácido borônico) e 12,9 minutos (para pinacol és-ter). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,41 (s, 12H), 5,08 (s, 2H), 7,94 (s, 1H), 8,24 (s, 1H).

Etapa 4: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(Triflúor metila) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (26a) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 0,8 g, 1,6 mmols) foi colocado em um frasco de 250 ml_ de fundo redondo. Ele foi dissolvido em 15 mL de di-metil formamida desgaseificada. Pinacol éster de ácido 2-(bromo metila)-3,5-bis-(triflúor metila) fenil borônico (25a, 1,66, 3,8 mmols, 2,4 eq.) foi dissolvido em 5 mL de DMF espargida com N2 e adicionado ao frasco de reação. A solução foi agitada e lavada com N2 por 5 minutos. DIEA (2,2 mL, 12,8 mmols, 8,0 equiv.) foi adicionada à mistura de reação e a solução foi deixada agitar sob uma suave corrente de nitrogênio e no escuro em temperatura ambiente por 4 noites. Após 96 horas a reação foi continuada por 4,5 horas a 60°C. Então a reação foi resfriada, o solvente foi evaporado em vácuo. O produto residual foi dissolvido em 50 mL de diclorometano e extraído com 2x70 mL de tampão fosfato (0,1 M, pH 7,0). A solução de diclorometano foi secada e evaporada no vácuo resultando em um resíduo oleoso amarronzado. O produto bruto foi triturado com hexano (15 mL) por 30 minutos. Pulverizado a-marelo coletado foi cristalizado a partir de IPA quente resultando em produto puro (26a, 1,2 g, 59% de rendimento).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10- 80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 10,8 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,23 (s, 9H), 1,32 (s, 12H), 1,36 (s, 12H), 1,74 (s, 5H), 2,31 (t, 2H), 2,8 (m, 5H), 2,88 (t, 2H), 4,08 (s, 2H), 4,16 (s, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,76 (s, 2H), 5,12 (s, 1H), 5,32 (s, 1H), 7,44 (m, 4H), 7,88 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 8,08 (m, 2H), 8,14 (m, 2H), 8,20 (s, 1H), 8,29 (s, 1H).

Etapa 5: Sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)- 2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(Triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (27a) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(Triflúor metila) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (26a, 0,013 g, 0,011 mmol) foi colocado em um frasco de 50mL, fundo redondo, e dissolvido em 5 ml_ de uma solução de CH2CI2:TFA desgaseificada 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 19 horas. O produto residual foi lavado com 10 ml_ de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. As lavagens de diclorometano foram repetidas várias vezes. O resultante produto oleoso foi dissolvido em 5 ml_ de diclorometano e adicionado em gotas a 25 ml_ de NaHC03 aquoso, saturado, frio em uma taxa tal que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais a < 5°C seguido por particionamento das camadas. Os extratos oprgânicos foram secados sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados, rendendo 0,012 g de pulverizado amarelo (27a).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção 9,6 minutos. ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 956,0 (M-H20+H)+ para o ácido bis-borônico. Ésteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Exemplo 18 Síntese de indicador 5-triflúor metila: Sal de sódio de 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (27b) Etapa 1: 2-bromo-4-triflúor metil tolueno (23b) 4-(triflúor metila) tolueno (22b, 9,0 g, 56 mmols) foi colocado em um frasco de fundo redondo. Então 20 mL de TFA e 5,6 mL de H2S04 (28% da quantidade de TFA) foram adicionados. NBS (10,0 g, 56 mmols, 1 eq.) foi adicionado à mistura de reação em pequenas porções. A reação foi deixada correr em temperatura ambiente por toda noite. Após 20 horas a reação foi trabalhada. A mistura de reação foi vertida em água resfriada com gelo (100 mL) e a camada orgânica (resíduo oleoso) foi separada da camada de água através de extração com Et20. A camada de éter foi coletada, secada sobre Na2S04 e o solvente foi removido. O produto puro (7,86 g, 59% de rendimento) como um óleo levemente amarelo foi coletado.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 11,7 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,45 (s, 3H), 7,34 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,80 (s, 1H).

Etapa 2: pinacol éster de ácido 6-metil-3-(triflúor metila) fenil borônico (24b) 2-bromo-4-(triflúor metiul) tolueno (23b, 5 g, 21 mmols) foi colo- cado em um frasco de fundo redondo e dissolvido em 150 ml_ de DMF. Então KOAc (6,2 g, 63 mmols, 3 eq.) foi adicionado à mistura de reação em uma porção seguido por adição de PdCfeídppf) (0,46 g, 0,63 mmol, 0,03 eq.) e bis(pinacolato) de di-boro (5,9 g, 23,1 mmols, 1,1 eq.). A solução foi agitada a 80°C por 48 horas. Então o solvente foi removido e o resíduo negro foi submetido a cromatografia de coluna de plug (EtOAc) resultando em um resíduo oleoso verde escuro. O composto foi ainda purificado por segunda cromatografia em coluna (MeOH/DCM 2%). Produto puro (3,5 g, 58%) como um óleo levemente verde foi coletado.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 7,9 minutos (para ácido borônico) e 12,6 minutos (para pinacol éster). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,35 (s, 12H), 2,58 (s, 3H), 7,26 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 8,00 (s, 1H).

Etapa 3: pinacol éster de ácido 6-(bromo metila)-3-(triflúor metila) fenil borônico (25b) Pinacol éster de ácido 6-metil-3-(triflúor metila) fenil borônico (24b, 3,0 g, 10 mmols) e 60 mL de CCL foram colocados em um frasco de 500 mL de fundo redondo. NBS (1,9, 10,5 mmols, 1,05 eq.) e AIBN (0,02 g, 0,14 mmol, 0,014 eq.) foram adicionados e a mistura de reação foi refluxada por 4,5 horas na presença de um bulbo incandescente de 75W. Após 4,5 horas a solução foi resfriada para temperatura ambiente permitindo a succi-nimida precipitar. O sólido foi filtrado. O solvente foi removido e produto oleoso foi coletado. O produto bruto foi purificado por trituração com hexano o que resultou em produto puro 80% (25b, 3,6 g, 95% de rendimento). Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3.9 χ 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 ml_, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 ml_, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 8,7 minutos (para ácido borônico) e 12,4 minutos (para pinacol éster). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,38 (s, 12H), 4,91 (s, 2H), 7,50 ((d, 1H), 7,64 (d, 1H), 8,06 (s, 1H).

Etapa 4: 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-4-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil a-mino] metil] antraceno (26b) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 1,0 g, 2,0 mmols) foi colocado em um frasco de 150 ml_ de fundo redondo. Ele foi dissolvido em 15 mL de di-metil formamida desgaseificada. Pinacol éster de ácido 6-(bromo metila)-3-(triflúor metila) fenil borônico (25b, 1,75 g, 4,8 mmols, 2,4 equiv.) foi dissolvido em 5 mL de DMF espargida com N2 e adicionado ao frasco de reação. A solução foi agitada e lavada com N2 por 5 minutos. DIEA (2,8 mL, 16 mmols, 8,0 equiv.) foi adicionada à mistura de reação e a solução foi deixada agitar sob uma suave corrente de nitrogênio e no escuro em temperatura ambiente por toda noite. Após 24 horas o solvente foi evaporado em vácuo. O produto residual foi dissolvido em 10 mL de diclorometano e extraído com 3 porções de 15 mL de tampão fosfato (0,1 M, pH 7,0). A solução de diclorometano foi secada e evaporada em vácuo resultando em um resíduo oleoso dourado. O produto em bruto foi agitado por 15 minutos com 10 mL de hexanos e então o solvente foi removido. Pulverizado amarelo coletado foi cristalizado de IPA quente rtesultando em produto puro (26b, 1,2 g, 55% de rendimento). Determinação de estrutura: Condições de RP-FIPLC: cromatógrafo de FIPLC HP 1100, coluna Waters 3.9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 8,1 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,29 (s, 9H), 1,31 (s, 12H), 1,35 (s, 12H), 1,55 (bs, 3H), 1,73 (m, 2H), 2,52 (m, 4H), 2,91 (t, 2H), 3,10 (q, 2H), 3,95 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,97 (s, 2H), 5,05 (t, 1H), 7,42-7,47 (m, 6H), 7,54 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,91 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 8,34 (m, 2H), 8,39 (m, 2H).

Etapa 5: Sal de sódio de 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)- 2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (27b) 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-4-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil a-míno] metil] antraceno (26b, 0,39 g, 0,37 mmol) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e dissolvido em 20 ml_ de uma solução de CH2CI2:TFA desgaseificada 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambioente por 23 horas. O produto residual foi lavado com 10 mL de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. As lavagens com diclorometano foram repetidas várias vezes. O pulvrizado foi dissolvido em 10 mL de diclorometano e adicionado em gotas em 80 mL de NaHCC>3 a-quoso saturado frio em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais em < 5°C seguido por particionamento das camadas. Os extratos orgânicos foram secados sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados rendendo 0,33 g de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 10 mL de ΟΗ2ΟΙ2 anidro e transferidos para um frasco de 100 mL de fundo redondo. Pérolas PS-DEAM (0,19 g, 1 eq.) foram adicionada ao frasco e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com 5 mL de diclorometano. As soluções orgânicas combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (27b, 0,27 g, 72%) foi obtido co- mo um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 ml_, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 ml_, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 7,2 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,33 (s, 12 H), 1,39 (s, 12H), 1,60-1,63 (m, 5H), 2,33 (t, 2H), 2,47 (t, 2H), 2,85-2,96 (m, 4H), 4,05 (s, 2H), 4,33 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 5,03 (s, 1H), 5,18 (s, 1H), 5,52 (bt, 1H,), 7,35-7,43 (m, 4H), 7,55-7,66 (m, 2H), 7,68 (d, 1H), 7,77-7,88 (m, 3H), 8,03 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,30 (m, 2H). ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 820.12 (M-H20+H)+ para o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

Exemplo 19 Síntese de de indicador 5-flúor: sal de sódio de 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-4-flúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-flúor benzil]-N-[2- (carbóxi etila) amino] metil] antraceno (32a) Etapa 1: Pinacol éster de ácido 3-flúor-6-metil fenil borônico (29a) Ácido 3-flúor-6-metil fenil borônico (10 g, 65 mmols) e 220 mL de éter dietílico foram colocados em um frasco de fundo redondo. Então pinacol foi adicionado (7,68 g, 65 mmols, 1 eq.) e a resultante mistura de ereação foi agitada por um par de minutos até a solução tornar-se clara. Finalmente, sulfato de magnésio (15,6 g, 130 mmols, 2 eq.) foi adicionado e a solução foi deixada agitar em temperatura ambiente sob balão de N2 por toda noite. A-pós 24 horas a reação foi tratabalhada. Sulfato de magnésio foi filtrado e lavado com Et20. A camada orgânica foi coletada e o solvente foi então removido. Produto puro (15,2 g, 99% de rendimento) foi obtido como um resíduo oleoso amarelo-escuro.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3.9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 6,1 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,34 (s, 12H), 2,48 (s, 3H), 6,97 (ddd, 1H), 7,09 (dd, 1H), 7,43 (dd, 1H).

Etapa 2: Pinacol éster de ácido 6-(bromo metila)-3-flúor fenil borônico (30a) Pinacol éster de ácido 3-flúor-6-metil fenil borônico (29a, 5,01 g, 21,2 mmols) e 140 mL de CCI4 foram colocados em um frasco de 500 mL de fundo redondo. NBS (3,97 g, 22,3 mmols, 1,05 eq.) e AIBN (0,054 g, 0,33 mmol, 0,016 eq) foram adcionados e a mistura de reação foi refluxada por 3,5 horas na presença de um bulbo incandescente de 75 W. Após 3,5 horas a solução foi resfriada para temperatura ambiente permitindo a precipitação de succinimida. O sólido foi filtrado. O solvente foi removido e produto oleoso foi coletado. Purificação com cromatografia de coluna 95/5 hexanos/acetato de etila) resultou em produto puro (30a, 5,59 g, rendimento de 84%). Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3.9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 7,2 minutos para ácido borônico livre) e 12,1 minutos (para pinacol éster). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,36 (s, 12H), 4,88 (s, 2H), 7,04-7,09 (ddd, 1H), 7,33-7,37 (dd, 1H), 7,47-7,50 (dd, 1H).

Etapa 3: 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-flúor benzil]- N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2- dioxa borolano)-4-flúor benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antra-ceno (31a) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 1,0 g, 2,04 mmols) foi colocado em um frasco de 100 ml_ de fundo redondo e agitado em 16 ml_ de dimetil for-mamida até dissolvido. Pinacol éster de ácido 6-(bromo metila)-3-flúor fenil borônico (30a, 1,96, 6,22 mmols, 3,0 equiv) e DIEA (2,8 mL, 16 mmols, 8,0 eq.) foram adicionados e agitados sob N2, no escuro, em temperatura ambiente por 24 horas. A DMF foi removida á vácuo; diclorometano (20 mL) foi adicionado e lavado com tampão fosfato (40 mL de 0,1 M, pH 7,0). Solução de diclorometano coletada foi secada sobre Na2S04. O diclorometano foi removido á vácuo e o resultante resíduo amarelo triturado com hexanos (10 mL) por 15 minutos sob fluxo lento de N2. O produto bruto (1,6 g) foi cristalizado a partir de IPA quente duas vezes rendendo um pulverizado amarelo de -98,6% de pureza por HPLC (31a, 0,89 g, 45% de rendimento). Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 7,3 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,29 (s, 9H), 1,31 (s, 12H), 1,35 (s, 12H), 1,55 (bs, 3H), 1,72 (m, 2H), 2,54 (m, 4H), 2,92 (t, 2H), 3,09 (q, 2H), 3,95 (s, 2H), 4,03 (s, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 5,05 (t, 1H), 7,42-7,46 (m, 6H), 7,54 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,90 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 8,32 (m, 2H), 8,38 (m, 2H).

Etapa 4: sal de sódio de 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-flúor benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-flúor benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (32a) 9-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-flúor benzil]- N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-flúor benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antra-ceno (31a, 0,79 g, 0,82 mmol) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e dissolvido em 30 mL de uma solução de CH2CI2:TFA 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por toda noite. Após 24 horas os solventes foram removidos á vácuo. O produto residual foi dissolvido em 10 mL de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. Os tratamentos de dissolução/evaporação com diclorometano foram repetidos até o produto tornar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 30 mL de diclorometano e adicionado em gotas em 50 mL de NaHCOa aquoso saturado em uma taxa tal que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais em < 5°C seguido por particionamento das camadas. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada rendendo 0,7 g de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 20 mL de CH2CI2 anidro e transferido em um frasco de 100 mL de fundo redondo. Pérolas PS-DEAM (0,44 g, 1 eq.) foram adicionadas ao frasco e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com 5 mL de diclorometano. As soluções orgânicas combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (0,55 g, 71%) foi obtido como um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 6,4 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,33 (s, 12 H), 1,37 (s, 12H), 1,56 (t, 2H), 1,62 (s, 3H), 2,24 (t, 2H), 2,43 (t, 2H), 2,86 (m, 2H), 4,00 (s, 2H), 4,27 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 4,61 (s, 2H), 4,89 (t, 1H), 5,12 (s, 1H), 5,48 (m, 1H), 7,12 (ddd, 1H), 7,29 (ddd, 1H), 7,38 (m, 4H), 7,44-7,52 (m, 2H), 7,57 (dd, 1H), 7,69 (dd, 1 Η), 7,83 (m,2H), 8,24 (m, 2Η).

Exemplo 20 Síntese de indicador 4-cloro: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1,3,2-dioxa borolano)-3-cloro benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] me-til]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-4-cloro benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (32b) Etapa 1: Pinacol éster de ácido 4-cloro-2-metil fenil borônico (29b) Ácido 4-cloro-2-metil fenil borônico (5,0 g, 29 mmols) e 100 ml_ de éter dietílico foram colocados em um frasco de fundo redondo. Então pinacol foi adicionado (3,43, 29 mmols, 1 eq.) e a resultante mistura de reação foi agitada por um par de minutos até a solução tornar-se clara. Finalmente, sulfato de magnésio (6,98, 58 mmols, 2 eq.) foi adicionado e a solução deixada agitar em temperatura ambiente, sob balão de N2 por toda noite. Após 24 horas a reação foi trabalhada. Sulfato de magnésio foi filtrado e lavado com Et20. A camada orgânica foi coletada e 0 solvente foi removido. Produto puro (7,2 g, 97% de rendimento) foi obtido como um pulverizado branco. Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 12,6 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 1,33 (s, 12H), 2,50 (s, 3H), 7,14 (m, 2H), 7,68 (d, 1H).

Etapa 2: Piancol éster de ácido 2-(bromo metila)-4-cloro fenil borônico (30b) Pinacol éster de ácido 4-cloro-2-metil fenil borônico (29b, 7,2 g, 28,5 mmols) e 100 mL de CCI4 foram colocados em um frasco de 500 mL de fundo redondo. NBS (5,3 g, 29,9 mmols, 1,05 eq.) e AIBN (0,066 g, 0,399 mmol, 0,014 eq.) foram adcionados e a mistura de reação foi refluxada por 6 horas na presença de um bulbo incandescente de 75W. Após 6 horas a so- lução foi resfriada para temperatura ambiente permitindo precipitação de succinimida. O sólido foi filtrado. O solvente foi removido e o produto foi coletado (30b, 9,3 g, 99% de rendimento).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 mL, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 8,05 minutos (para ácido borônico livre) e 12,4 minutos (para pinacol éster). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,36 (s, 12H), 4,85 (s, 2H), 7,24-7,28 (m, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,74 (d, 1H).

Etapa 3: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-cloro benzil]- N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-cloro benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] an-traceno (31b) 9-[N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[2-t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (1, 1,0 g, 2,04 mmols) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e agitado em 15 mL de dimetil formami-da até dissolvido. Pinacol éster de ácido 2-(bromo metila)-4-cloro fenil borônico (30b, 1,8 , 4,89 mmols, 2,4 equiv.) e DIEA (2,78 mL, 16,3 mmols, 8,0 eq.) foram adicionados e agitados sob N2, no escuro, em temperatura ambiente por 24 horas. A DMF foi removida á vácuo; diclorometano (100 mL) foi adicionado e lavado com tampão fosfato (2 x 100 mL de 0,1 M, pH 7,0). Solução de diclorometano coletada foi secada sobre Na2S04. O diclorometano foi removido á vácuo e o resultante resíduo amarelo triturado com hexanos (10 mL) por 30 minutos sob fluxo lento de N2. O produto bruto (1,9 g) foi cristalizado de IPA quente rendendo um pulverizado rosa-claro (31b, 1,6 g, 79% de rendimento).

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 χ 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 ml_, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 7,7 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,27 (s, 9H), 1,31 (s, 12H), 1,35 (s, 12H), 1,50 (bs, 3H), 1,66 (m, 2H), 2,44 (t, 2H), 2,53 (t, 2H), 2,88 (t, 2H), 3,06 (q, 2H), 3,93 (s, 2H), 4,02 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,87 (s, 1H), 4,92 (bs, 1H), 5,00 (t, 1H), 7,09-7,15 (dd, 1H), 7,22-7,26 (dd, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,42-7,48 (m, 4H), 7,53 (d, 1H), 7,63 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 8,30-8,39 (m, 4H).

Etapa 4: sal de sódio de 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-cloro benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-cloro benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (32b) 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-cloro benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-cloro benzil]-N-[2-(t-butóxi carbonil) etil amino] metil] antraceno (31b, 1,0 g, 10,09 mmols) foi colocado em um frasco de 100 mL de fundo redondo e dissolvido 20 mL de uma solução de Ch^ChiTFA 60:40. A mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente, sob balão de N2 por toda noite. Após 20 horas os solventes foram removidos á vácuo. O produto residual foi dissolvido em 10 mL de CH2CI2 seguido por remoção do solvente á vácuo. Os tratamentos de dissolução/evaporação com diclorome-tano foram repetidos até 0 produto tornar-se um pulverizado amarelo. O pulverizado foi dissolvido em 30 mL de diclorometano e adicionado em gotas em 80 mL de NaHC03 aquoso, saturado, frio, em uma taxa de modo que a temperatura permaneceu abaixo de 5°C. A solução foi agitada por 5 minutos adicionais em < 5°C seguido por particionamento das camadas. A camada orgânica foi secada sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada rendendo 0,7 g de pulverizado amarelo. O produto bruto foi dissolvido em 20 mL de CH2CI2 e transferido para um frasco de 100 mL de fundo redondo. Pérolas de PS-DEAM (0,42 g, 1 eq.) foram adicionadas ao frasco e a mistura de rea- ção foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. As pérolas foram filtradas e lavadas com 5 ml_ de diclorometano. As soluções orgânicas combinadas foram concentradas á vácuo. Produto puro (32b, 0,55 g, 57%) foi obtido como um pulverizado amarelo.

Determinação de estrutura: Condições de RP-HPLC: cromatógrafo de HPLC HP 1100, coluna Waters 3,9 x 150 mm NovaPak HR C18 com coluna guarda, injeção 0,010 ml_, 1,5 mL/minuto, circuito de injeção de 1,500 mL, detecção 254 nm, A = água (TFA 0,1% v/v) e B = MeCN (TFA 0,1% v/v), gradiente 10% B 1 minuto, 10-80% B em 9 minutos, 80-100% B em 1 minuto, 100% B 1 minuto, tempo de retenção de 6,9 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,34 (s, 12 H), 1,37 (s, 12H), 1,56 (t, 2H), 1,62 (bs, 3H), 2,32 (t, 2H), 2,46 (t, 2H), 2,86 (t, 2H), 2,91 (q, 2H), 4,03 (s, 2H), 4,29 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,58 (s, 2H), 5,00 (t, 1H), 5,10 (s, 1H), 5,44 (bt, 1H), 7,24 (m, 1H), 7,40-7,46 (m, 5H), 7,53 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,84 (m, 2H), 7,96 (d, 1H), 8,24-8,34 (m, 2H). ESI-MS (TFA/acetonitrila/água): 752.23 (M-H20)+ parar o ácido bis-borônico. Esteres borônicos não são observados sob as condições ácidas desta análise.

REIVINDICAÇÕES

Claims (28)

1. Processo para uso de uma molécula em condições óxidantes, que compreende: a) obtenção de uma molécula tendo um resíduo ácido aril borônico tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons sobre a metade aromática que contém o resíduo de ácido borônico, de modo que a molécula tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparada a uma molécula correspem quente sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons; e b) sujeição da molécula tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons a condições óxidantes.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o grupo de retirada de elétrons compreende um ou mais do seguinte: halogênio, ciano, nitro, alquila substituído com halo, ácido carboxílico, éster, ácido sulfônico, cetona, aldeído, sulfonamida, sulfona, sulfonila, sulfóxido, sulfona substituído com halo, alcóxi substituído com halo, cetona substituída com halo, amida, ou suas combinações.

3. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a molécula tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons sobre a metade aromática ainda compreende um grupo detectável.

4. Processo de acordo com a reivindicação 3, em que o grupo detectável compreende um resíduo antraceno.

5. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a molécula tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons sobre a metade aromática está associada a um dispositivo que é implantado em um animal.

6. Processo de acordo com a reivindicação 5, em que o dispositivo determina a presença ou concentração de glicose in vivo.

7. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a molécula tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons sobre a metade aromática compreende: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacri!amido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] an- traceno (4c); 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-3-triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (21); 9-N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa boirolano)-2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (27a); ou um seu resíduo ou sal.

8. Processo para detecção de presença ou concentração de um analito em uma amostra em um ambiente óxidante, o dito processo compreendendo: a) exposição de amostra a uma molécula indicadora tendo uma qualidade detectável que altera-se quando a molécula indicadora é exposta ao analito, a dita molécula compreendendo um resíduo de ácido aril borônico tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons sobre a metade aromática que contém o resíduo de ácido borônico, de modo que a molécula indicadora tem aperfeiçoada resistência a óxidação compara à molécula cor-respem quente sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons; e b) medição de qualquer alteração na dita qualidade detectável para através do que determinar a presença ou concentração do dito analito na dita amostra.

9. Processo de acordo com a reivindicação 8, em que o grupo de retirada de elétrons compreende um ou mais do seguinte: halogênio, ciano, nitro, alquila substituído com halo, ácido carboxílico, éster, ácido sulfônico, cetona, aldeído, sulfonamida, sulfona, sulfonila, sulfóxido, sulfona substituído com halo, alcóxi substituído com halo, cetona substituída com halo, amida, ou suas combinações.

10. Processo de acordo com a reivindicação 8, em que a alteração na qualidade detectável é uma alteração ótica.

11. Processo de acordo com a reivindicação 8, em que o analito é glicose.

12. Processo de acordo com a reivindicação 8, em que a molécula tendo um ou mais grupos de retirada de elétrons sobre a metade aromática compreende: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] an-traceno (4c); 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-3-triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (21); 9-N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa boirolano)-2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (27a); ou um seu resíduo ou sal.

13. Composto tendo a seguinte estrutura: (I) em que: - cada Ar é um grupo arila; - cada Ri e R2 são idênticos ou diferentes e são um grupo de retirada de elétrons; - m e n são cada um independentemente inteiros de 1 a 10; - R4 é uma metade detectável; e - cada R é independentemente um grupo ligante tendo de zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos, com pelo menos um R ainda contendo uma unidade monomérica polimerizável; e em que o composto tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparado ao correspem quente composto sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons.

14. Composto de acordo com a reivindicação 13, em que Ri e R2, cada um, compreende um ou mais do seguinte: halogênio, ciano, nitro, alquila substituído com halo, ácido carboxílico, éster, ácido sulfônico, cetona, aldeído, sulfonamida, sulfona, sulfonila, sulfóxido, sulfona substituído com halo, alcóxi substituído com halo, cetona substituída com halo, amida, ou suas combinações.

15. Composto de acordo com a reivindicação 13, em que R4 compreende um resíduo antraceno.

16. Composto de acordo com a reivindicação 13, em que o composto compreende: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzíl]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (4c); 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-3-triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (21); 9-N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (27a); ou um seu resíduo ou sal.

17. Composto tendo a seguinte estrutura: em que: - cada Ar é um grupo arila outro que não-fenila; - cada e R2 são idênticos ou diferentes e são um grupo de retirada de elétrons; - m e n são cada um independentemente inteiros de 1 a 10; - R4 é uma metade detectável; e - cada R é independentemente um grupo ligante tendo de zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos, com pelo menos um R contendo um grupo ligante capaz de ligação a um suporte sólido ou uma matriz polimérica; e em que o composto tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparado ao correspem quente composto sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons.

18. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que R1 e R2 cada um compreende um ou mais do seguinte: halogênio, ciano, nitro, alqui-la substituído com halo, ácido carboxílico, éster, ácido sulfônico, cetona, al-deído, sulfonamida, sulfona, sulfonila, sulfóxido, sulfona substituído com halo, alcóxi substituído com halo, cetona substituída com halo, amida, ou suas combinações.

19. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que R4 compreende um resíduo antraceno.

20. Processo para produção de uma macromolécula indicadora para detecção de presença ou concentração de um analito em um ambiente óxidante, 0 dito processo compreendendo copolimerização de: a) um ou mais monômeros componentes indicadores que individualmente não são suficientemente solúveis em água para permitir seu uso em um ambiente aquoso para detecção de presença ou concentração do dito analito, em que o monômero componente indicador compreende composto tendo a seguinte estrutura: em que: - cada Ar é um grupo arila; - cada Ri e R2 são idênticos ou diferentes e são um grupo de retirada de elétrons; - m e n são cada um independentemente inteiros de 1 a 10; - R4 é uma metade detectável; e - cada R é independentemente um grupo ligante tendo de zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos, com pelo menos um R ainda contendo uma unidade monomérica polimerizável; e b) um ou mais monômeros hidrofílicos; de modo que a resultante macromolécula é capaz de detectar a presença ou concentração de dito analito em um ambiente aquoso e em que o composto tem aperfeiçoada resistência a corrosão comparado ao correspem quente composto sem o um ou mais grupos de retirada de elétrons.

21. Processo de acordo com a reivindicação 20, em que Ri e R2 cada um compreende um ou mais do seguinte: halogênio, ciano, nitro, alqui-la substituído com halo, ácido carboxílico, éster, ácido sulfônico, cetona, al-deído, sulfonamida, sulfona, sulfonila, sulfóxido, sulfona substituído com halo, alcóxi substituído com halo, cetona substituída com halo, amida, ou suas combinações.

22. Processo de acordo com a reivindicação 20, em que R4 compreende um resíduo antmceno.

23. Processo de acordo com a reivindicação 20, em que o composto compreende: 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[3-(metacrilamido) propi! amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2- dioxa borolano)-3-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] an-traceno (4c); 9-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-3-(triflúor metil sulfonil) ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-3-triflúor metil sulfonil) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (21); 9-N-[6-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) ben-zil]-N-[3-(metacrilamido) propil amino] metil]-10-[N-[6-(4,4,5,5-tetra metil- 1.3.2- dioxa borolano)-2,4-bis-(triflúor metila) benzil]-N-[2-(carbóxi etila) amino] metil] antraceno (27a); ou um seu resíduo ou sal.

24. Composto tendo a seguinte estrutura: em que: - Ar é um grupo arila; - cada Ri é idêntico ou diferente e é um grupo de retirada de elétrons; - n é um inteiro de 1 a 10; e - R é um grupo de ligação tendo zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos, cujo grupo de ligação ainda contém uma unidade monomérica polimerizável e uma metade detectável; e em que o composto tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparado ao correspem quente composto sem grupo(s) de retirada de elétrons.

25. Composto de acordo com a reivindicação 24, em que Ri compreende um ou mais do seguinte: halogênio, ciano, nitro, alquila substituído com halo, ácido carboxílico, éster, ácido sulfônico, cetona, aldeído, sul-fonamida, sulfona, sulfonila, sulfóxido, sulfona substituído com halo, alcóxi substituído com halo, cetona substituída com halo, amida, ou suas combina- ções.

26. Composto de acordo com a reivindicação 24, em que a metade detectável compreende um resíduo antraceno.

27. Composto tendo a seguinte estrutura: em que: - Ar é um grupo arila; - cada Ri é idêntico ou diferente e é um grupo de retirada de elétrons; - n é um inteiro de 1 a 10; e - R é um grupo de ligação a um suporte cromatográfico, o dito grupo de ligação tendo de zero a dez carbonos contíguos ou ramificados e/ou heteroátomos; e em que o composto tem aperfeiçoada resistência a óxidação comparado ao correspem quente composto sem grupo(s) de retirada de elétrons.

28. Composto de acordo com a reivindicação 27, em que Ri compreende um ou mais do seguinte: halogênio, ciano, nitro, alquila substituído com halo, ácido carboxílico, éster, ácido sulfônico, cetona, aldeído, sul-fonamida, sulfona, sulfonila, sulfóxido, sulfona substituído com halo, alcóxi substituído com halo, cetona substituída com halo, amida, ou suas combinações.