JP2013083658A - 耐酸化性指示薬分子 - Google Patents

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Abstract

【課題】増加した耐酸化性を有する分子と、酸化条件下で分子を用いる方法を提供する。
【解決手段】（ａ）ボロン酸残基を含む芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有するアリールボロン酸残基を有していて、１以上の電子吸引基を有しない対応する分子と比較して増加した耐酸化性を有する分子を得て、（ｂ）１以上の電子吸引基を有する分子を酸化条件にかける、ことを含む、酸化条件下で分子を用いる方法。
【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照：
本出願は、２００６年１１月３０日出願の米国仮出願６０／８６１，７０７及び２００７年２月２６日出願の米国仮出願６０／９０３，２９１の利益を主張する。
発明の分野：
本発明は、増加した耐酸化性を有する蛍光指示薬などの検出可能な指示薬に関する。
関連技術の記載：
蛍光分子は、布帛及び染料用増白剤、標識、印刷用の種々のインク、抗体又は他の分子と結合させた場合にタグ及びプローブとしての診断薬などの種々の用途のために用いられており、ある分析対象物、例えばグルコースを検出するように特にデザインされている化学的及び生物学的に活性な指示薬として分子レベルで用いるように構成することができる。
フェニルボロン酸によるグルコースなどの炭水化物の錯化は長い間知られており、この相互作用の可逆性は糖類のクロマトグラフィー分離のための原理として利用されている。具体的には、１９５９年にLorand及びEdwardsによって、フェニルボロン酸の多くの飽和ポリオールとの水性会合に関する会合定数が報告された：結合相互作用は、非常に弱いもの（例えばエチレングリコール：Ｋｄ＝３６０ｍＭ）から比較的強いもの（例えばグルコース：Ｋｄ＝９．１ｍＭ）の範囲であった。J. YoonらのBioorganic and Medicinal Chemistry 1 (4): 267-71 (1993)を参照。結合メカニズムは、ボロネート部分上のヒドロキシル基がグルコース上の隣接するヒドロキシル基で置換されることによって起こると考えられている。
米国特許５，５０３，７７０（Jamesら）においては、グルコースなどの単糖類に結合すると高い強度の蛍光を発する蛍光性ボロン酸含有化合物が記載されている。この蛍光化合物は、蛍光分子、少なくとも１つのフェニルボロン酸部分、及び少なくとも１つのアミン供与窒素原子を含み、窒素原子がフェニルボロン酸部分の近傍に配置されて、ボロン酸と分子内相互作用するようになっている分子構造を有する。かかる相互作用によって、単糖類結合により化合物が蛍光を発する。T. JamesらのJ. Am. Chem. Soc. 117 (35): 8982-87 (1995)も参照。
更に、血中グルコースを検出するためにアントリルボロン酸含有化合物を用いる蛍光センサーが当該技術において公知である。例えば、J. YoonらのJ. Am. Chem. Soc. 114: 5874-5875 (1992)においては、グルコース及びフルクトース結合などの炭水化物結合を示すための蛍光化学センサーとしてアントリルボロン酸を用いることができることが記載されている。
蛍光分子は分解を受けやすく、しばしば変動する速度の酸化によって時間と共に蛍光強度（又は明るさ）を失う。酸化は、通常、技術的には「光酸化」である光退色と関係する可能性があり、或いは蛍光分子の局所環境内で種々の反応性酸素種によって酸化される。オゾンのような任意の数の潜在的な酸化剤が、環境及び大気中に存在しており、或いはヒトからバクテリアまでの範囲の生体の内部に存在している可能性がある。生体の内部において、標準的な反応性酸素種（ＲＯＳ）としては、ペルオキシド、ヒドロキシル基、ペルオキシニトリル、スーパーオキシドなどのような代表的な健康治癒反応に関与するものを挙げることができる。生体系の内部においては、分子の分解における特異的な目的の酸化に関してオキシゲナーゼと呼ばれる特異酵素も存在する。蛍光分子に対する反応性酸素種又はオキシゲナーゼ活性の有害な結果は、通常、蛍光の損失である。指示薬分子、又は受動タグ、プローブ、若しくはラベルの場合においては、装置又は診断薬の有用寿命及び感度は、蛍光信号の酸化による低下によって、限定されるか或いは完全に無効であるとみなされる可能性がある。
したがって、増加した耐酸化性を有する蛍光分子に対する必要性が未だ存在する。
発明の簡潔な概要：
一態様においては、本発明は、
（ａ）ボロン酸残基を含む芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有するアリールボロン酸残基を有していて、１以上の電子吸引基を有しない対応する分子と比較して増加した耐酸化性を有する分子を得て；そして
（ｂ）１以上の電子吸引基を有する分子を酸化条件にかける；
ことを含む、酸化条件下で分子を用いる方法に関する。
他の態様においては、本発明は、酸化雰囲気中の試料中の分析対象物の存在又は濃度を検出する方法であって、
（ａ）ボロン酸残基を含む芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有するアリールボロン酸残基を含んでいて、指示薬分子が１以上の電子吸引基を有しない対応する分子と比較して増加した耐酸化性を有する、指示薬分子を分析対象物に曝露すると変化する検出可能な性質を有する指示薬分子に試料を曝露し；そして
（ｂ）該検出可能な性質の変化を測定して、それによって該試料中の該分析対象物の存在又は濃度を測定する；
ことを含む上記方法に関する。
他の態様においては、本発明は、次式：
（式中、
それぞれのＡｒはアリール基であり；
それぞれのＲ１及びＲ２は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１〜１０の整数であり；
Ｒ４は、検出可能な部分であり；そして
それぞれのＲは、独立して、０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する結合基であり、少なくとも１つのＲは重合性モノマー単位を更に含む）
の構造を有し、１以上の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する化合物に関する。
他の態様においては、本発明は、次式：
（式中、
それぞれのＡｒはフェニル以外のアリール基であり；
それぞれのＲ１及びＲ２は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１〜１０の整数であり；
Ｒ４は、検出可能な部分であり；そして
それぞれのＲは、独立して、０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する結合基であり、少なくとも１つのＲは固体支持体又はポリマーマトリクスに結合することのできる結合基を更に含む）
の構造を有し、１以上の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する化合物に関する。
他の態様においては、本発明は、酸化雰囲気中の分析対象物の存在又は濃度を検出するための指示薬巨大分子を製造する方法であって、
（ａ）個々は、水性雰囲気中において該分析対象物の存在又は濃度を検出するために用いることが可能であるほど十分には水溶性でなく、次式：
（式中、
それぞれのＡｒはアリール基であり；
それぞれのＲ１及びＲ２は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１〜１０の整数であり；
Ｒ４は、検出可能な部分であり；そして
それぞれのＲは、独立して、０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する結合基であり、少なくとも１つのＲは重合性モノマー単位を更に含む）
の構造を有する化合物を含む１種類以上の指示薬成分モノマー；及び
（ｂ）１種類以上の親水性モノマー；
を共重合して、得られる巨大分子が水性雰囲気中で該分析対象物の存在又は濃度を検出することができるようにする；
ことを含み、該化合物は、１以上の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する、上記方法に関する。
他の態様においては、本発明は、次式：
（式中、
Ａｒはアリール基であり；
それぞれのＲ１は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
ｎは、１〜１０の整数であり；そして
Ｒは、０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する結合基であり、結合基は重合性モノマー単位及び検出可能な部分を更に含む）
の構造を有し、１つ又は複数の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する化合物に関する。
他の態様においては、本発明は、次式：
（式中、
Ａｒはアリール基であり；
それぞれのＲ１は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
ｎは、１〜１０の整数であり；そして
Ｒはクロマトグラフィー担体への結合基であり、該結合基は０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する）
の構造を有し、１つ又は複数の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する化合物に関する。
図１は、実施例１に記載の実験の結果を示す。 図２は、実施例２に記載の実験の１つの結果を示す。 図３は、実施例１に記載の実験の１つの結果を示す。 図４は、実施例３に記載の実験の結果を示す。 図５Ａは、本発明の幾つかの好ましい化合物を示す。 図５Ｂは、本発明の幾つかの好ましい化合物を示す。 図６は、実施例４に記載の実験の１つの結果を示す。 図７は、実施例４に記載の他の実験の結果を示す。 図８は、実施例４に記載の他の実験の結果を示す。
発明の詳細な記述
蛍光指示薬分子に基づく移植可能なグルコースセンサーを開発するための本発明者らの継続している研究の間に、定量的な光への累積曝露の直接的且つ予測可能な関数である光酸化に加えて、生体内で試験した一連の蛍光指示薬分子に関して、生体内（in-vivo）では起こるが生体外(in-vitro）では有意には起こらない激しく迅速な更なる蛍光信号の損失が存在することが観察された。
蛍光指示薬の試料を移植し、続いて数週間後に取り出した。次に、試料を信号の激しい損失にしたがって化学分析した。この分析により、指示薬系のボロネート認識部位がヒドロキシル基に特異的に酸化され、それによって分子内の活性の総合的な損失（具体的には蛍光変調）が引き起こされる特異反応が示された。この生体内酸化反応は下式で示される。
有害な生体内酸化反応は非常に特異的であり、ボロネート基のみを酸化し、ヒドロキシル基はその位置に残留させることが示された。１、５、及び１０μＭの過酸化水素による処理によって、酸化を生体外で再現した。生体内及び生体外のいずれにおいても、ボロネート部分のみがヒドロキシルに酸化されたことが分かった。ＲＯＳは、分子を酸化し損傷を与える可能性がある点でより一般的で非特異的であると（我々によって）考えられていたので、これは予期しなかったことであった。
本発明によれば、ボロン酸残基を含む芳香族部分に１以上の電子吸引基を付加して、これによりボロネート部分を安定化することによって、アリールボロン酸残基を含む指示薬分子を酸化に対してより耐性にすることができる。「アリール」という用語は、フェニル、多核芳香族、ヘテロ芳香族、多核ヘテロ芳香族等のような広範囲の芳香族基を包含すると理解されよう。非限定的な例としては、フェニル、ナフチル、アントリル、ピリジル等が挙げられる。
広範囲の電子吸引基が本発明の範囲内に含まれ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロ置換アルキル、カルボン酸、エステル、スルホン酸、ケトン、アルデヒド、スルホンアミド、スルホン、スルホニル、スルホキシド、ハロ置換スルホン、ハロ置換アルコキシ、ハロ置換ケトン、アミド等、又はこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
上記の式Ｉ及びＩＩに関し、Ｒ１及びＲ２は、好ましくは上記の段落において記載したような電子吸引基である。最も好ましくは、それぞれのＲ１及びＲ２はトリフルオロメチルである。更に、上述したように、或る態様においては、少なくとも１つのＲ基は、構造（Ｉ）をポリマー中に含ませることを可能にする重合性モノマー単位を含む。かかる重合性単位は周知であり、ビニル、アクリレート、メタクリレート、アクリルアミド、メタクリルアミド等が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の指示薬化合物は、グルコースを含む試料に化合物を曝露すると濃度に依存した形態で変化する検出可能な性質（構造Ｉにおいて構成成分Ｒ４として示される）を有する。多くのかかる性質が公知であり、本発明において用いることができる。例えば、指示薬化合物は、発光（蛍光又はリン光）或いは化学発光部分、吸光度ベース部分等を含んでいてよい。指示薬化合物は、それぞれが離隔しているエネルギー供与部分及びエネルギー受容部分を含んでいて、指示薬化合物がグルコースと相互作用すると検出可能な変化を有するようになっていてよい。指示薬化合物は、グルコースが存在しない場合には蛍光分子が消光分子によって消光されるように構成されている蛍光分子及び消光分子を含んでいてよい。この状況においては、グルコースが存在する場合には、指示薬は構造変化を受け、これにより消光分子が移動して蛍光分子から十分に離隔されて蛍光が発せられる。逆に、グルコースの不存在下においては、十分に離隔されていて蛍光分子が蛍光を発し、グルコースと相互作用すると、蛍光分子及び消光分子が移動して消光を引き起こすのに十分に近接するように、蛍光分子及び消光分子を構成することができる。構造変化の概念は、米国出願公開２００２／０１１９５８１（参照として本明細書中に包含する）においてより詳細に記載されている。他の態様においては、消光分子は芳香族ボロン酸を含み、対象分子（例えばグルコース）にボロン酸が結合することによって消光分子が効果的に変化して検出可能な変化を与える。これは、米国出願公開２００６／００８３６８８（その内容は参照として本明細書中に包含する）に記載されている。
また、指示薬は、認識部位、又は認識部位に対して空間的に配置されている他の部分と相互作用して、グルコースの不存在下において蛍光分子が蛍光を発することができる蛍光分子のような部分を含んでいてよい。グルコースを加えると、グルコースが、蛍光分子と認識部位との間の相互作用、或いは蛍光分子と認識部位に関して空間的に配置されている他の部分との間の相互作用と競合して、蛍光の減少を引き起こす。また、指示薬は、グルコースの不存在下において蛍光分子が認識部位又は認識部位に対して空間的に配置されている他の部分と相互作用すると、蛍光分子が蛍光を発しないか或いは比較的低いレベルの蛍光を発するように選択することができることも認識されよう。グルコースを加えると、グルコースが、蛍光分子と認識部位との間の相互作用、或いは蛍光分子と認識部位に対して空間的に配置されている他の部分との間の相互作用と競合して、蛍光の増加を引き起こす。
他の検出可能な部分としては、その蛍光が光誘起電子移動又は誘導効果によるグルコース相互作用によって影響を受けるものが挙げられる。これらとしては、米国特許６，３４４，３６０（参照として本明細書中に包含する）に開示されているランタニドキレート；多環芳香族炭化水素及びそれらの誘導体；クマリン類；BoDiPy；ダンシル；カテコール類；等が挙げられる。この部分の他のクラスとしては、アリザリンレッド等のようなその吸収スペクトルが指示薬化合物とグルコースとの相互作用によって変化するものが挙げられる。この部分の他のクラスとしては、その蛍光が近接効果によって変調されるもの、例えばダンシル／ダブシル等のようなエネルギー供与体／受容体の対が挙げられる。
好ましくは、検出可能な性質は、検出可能なスペクトル変化、例えば吸光特性（例えば吸光度及び／又はスペクトルシフト）、蛍光消失時間（時間領域又は周波数領域測定によって求める）、蛍光強度、蛍光の異方性又は偏光における変化；発光スペクトルのスペクトルシフト；時間分解異方性消失の変化（時間領域又は周波数領域測定によって求める）；等である。
使用するまで、ボロン酸認識部位を保護基によってキャップすることができることが理解されよう。このような基は周知であり、ネオペンチルグリコール、ピナコール等が挙げられる。ある態様においては、キャップされた認識部位を、その中で化合物を用いる媒体中で脱キャップする。
本発明は、また、必ずしも検出可能な基を含まない増加した耐酸化性を有する化合物も包含する。かかる化合物は、例えば糖類を分離するのに用いるクロマトグラフィー樹脂中で用いることができる。この場合においては、本化合物は、樹脂又は担体が曝露される条件に耐えることのできる結合剤によって樹脂又は他の固体担体に結合される。
本発明の指示薬化合物は、可溶である場合には、所望の場合には溶液中で直接用いることができる。他方では、所望の用途において求められている場合には、指示薬化合物は、ガラス、プラスチック、ポリマー材料等のような不溶の表面又はマトリクスの上又はその中に（例えば、機械的捕捉、又は共有若しくはイオン付加によって）固定化することができる。指示薬化合物を例えば他のポリマー内に捕捉させる場合には、捕捉材料は、好ましくは、グルコースと指示薬化合物との間の好適な相互作用を起こすのに十分にグルコースに対して透過性でなければならない。
指示薬化合物が水中に難溶か又は不溶であるが、水性媒体中での検出が望まれる場合には、例えば米国特許６，７９４，１９５（その内容は参照として本明細書中に包含する）に記載されているように、指示薬化合物を親水性モノマーと共重合して親水性巨大分子を形成することができる。
ポリマー又は担体に対する好適な結合基としては、分岐又は置換であってよく、１以上のヘテロ原子を含んでいてよく、ポリマー又は担体に対する更なる反応又は付加を行うことができる官能基を末端に有する、約１〜約２０個の連続する原子の基を挙げることができる。好適な結合基の例としては、いずれも場合によっては置換されている、アルキル；アリール；アシル；ポリアミド；ポリエーテル；並びにこれらの組み合わせが挙げられる。
また、本化合物及び検出系はポリマー形態であってよいことが上記の定義から理解されよう。而して、完全な化合物（認識部位及び検出可能な部分を含む）を既存のポリマーに結合させることができ、或いはモノマー形態の完全な化合物を重合するか又は他の好適なモノマーと共重合してポリマーを形成することができる。また、２つの別々のモノマー成分（例えば、１つは認識部位を含むもの、１つは検出可能な部分を含むもの）を共重合して、得られるポリマーが系の全ての必要な部位を含むようにすることができる。
本発明の指示薬化合物に関しては、エネルギー、医薬、及び農業の分野における指示薬としての用途などの多くの用途が存在する。例えば、指示薬化合物を用いて、血液、血漿、血清、間質液、脳脊髄液、尿、唾液、眼液、リンパ液、涙、又は汗のような生理緩衝液又は生理液中のグルコースの低レベル又は高レベルを検出して、それにより糖尿病及び副腎不全のような疾病を診断又は監視するために有益な情報を提供することができる。
ヒトの治療用途のためのグルコースの医薬／薬剤の製造には、監視及び制御が必要である。
農業における本発明に関する用途としては、大豆及び他の農産物中のグルコースのレベルを検出することが挙げられる。グルコースは、ワイン用ブドウのような高付加価値産品に関する重要な収穫の決定において注意深く監視しなければならない。グルコースは発酵プロセスにおいて最も高価な炭素の源及び供給原料であるので、最適の反応器供給速度制御のためのグルコース監視は強いアルコールの製造において重要である。また、反応器混合及びグルコース濃度の制御は、国際的に最も多量のグルコース及び発酵性（隣接ジオール）の糖類を消費するソフトドリンク及び発酵飲料の製造中に品質制御を行うためにも重要である。
指示薬化合物が蛍光指示薬の置換基を含む場合には、種々の検出法も当該技術において公知である。例えば、本発明の化合物は、蛍光検出装置において用いることができ（例えば米国特許５，５１７，３１３）、或いは視覚検査のための試験紙のようなポリマー材料に結合させることができる。この後者の技術によって、例えば、リトマス試験紙片によるｐＨの測定に類似した方法でグルコースの測定を行うことができる。ここで記載する化合物は、また、Shimazu、Hitachi、Jasco、Beckmanなどによって製造されているような分光蛍光計又は臨床分析器のような標準的な卓上分析装置と共に、簡単な試薬として用いることもできる。これらの分子は、また、Ocean Optics（Dunedin, Florida）又はOriel Opticsによって製造されているような光ファイバーをベースとするセンサー及び分析蛍光計のための分析対象物特異性化学／光学信号変換体も提供する。
米国特許５，５１７，３１３（その開示は参照として本明細書中に包含する）においては、本発明の化合物を用いて液体媒体中のグルコースの存在又は濃度を測定することができる蛍光検出装置が記載されている。検出装置は、層状に配列された蛍光指示薬分子含有マトリクス（以下、「蛍光マトリクス」）、高域フィルター、及び光検出器を含む。この装置においては、光源、好ましくは発光ダイオード（「ＬＥＤ」）を、指示薬材料内、或いは指示薬マトリクスが配置されている導波管内に少なくとも部分的に配して、光源からの入射光によって指示薬分子を蛍光させる。高域フィルターによって、光源からの散乱入射光を除去しながら、発せられた光が光検出器に到達することを可能にしている。米国特許５，５１７，３１３に記載されている装置内で用いられる指示薬分子の蛍光は、グルコースの局在によって変調、例えば減衰又は増強される。
米国特許５，５１７，３１３に記載されているセンサーにおいては、指示薬分子を含む材料は分析対象物に対して透過性である。而して、分析対象物は周囲の試験媒体から材料中に拡散し、それによって指示薬化合物によって発せられる蛍光に影響を与えることができる。光源、指示薬化合物含有材料、高域フィルター、及び光検出器は、指示薬化合物によって発せられる蛍光の少なくとも一部が光検出器に衝突して、周囲の媒体中のグルコースの濃度の指標である電気信号を生成するように構成される。
本発明の指示薬化合物を用いるための他の可能な態様によれば、検出装置は、また、米国特許５，９１０，６６１、５，９１７，６０５、及び５，８９４，３５１（これらは全て参照として本明細書中に包含する）に記載されている。
本発明の化合物は、また、例えば生体内の血中グルコースレベルを連続的に監視するための移植可能な装置において用いることもできる。好適な装置は、例えば、共に係属中の米国特許６，３３０，４６４、５，８３３，６０３、６，００２，９５４、及び６，０１１，９８４（これらは全て参照として本明細書中に包含する）に記載されている。
特に好ましい化合物としては、図５Ａ及びＢに示す化合物が挙げられる（「非置換」及び「２−メチル」と示されている化合物は、電子吸引基を含まないが、例示の目的で示す）。この化合物は、カルボン酸形態で示されており、ボロン酸基は保護されていない。しかしながら、例えばカルボン酸塩形態及び／又はキャップされたボロン酸基を有する化合物は本発明の範囲内に含まれることが理解されよう。
本発明の化合物は、当業者によって、過度量の実験を行うことなく、例えば以下に記載する一般的な手順に等しい反応機構などの容易に知られている反応機構及び試薬を用いて製造することができる。
反応式１における出発化合物２ｃは、次の一般的な合成ルートにしたがって製造することができる。
直上に示す合成法を用いて反応式１の化合物２ｃを合成することができるが、当業者は、同様に、化合物２ａ〜２ｂ及び２ｄ〜２ｉをどのように製造するかを容易に理解する（これらは全て本発明の範囲内である）ことが理解されよう。
実施例１：
グルコースの濃度を変化させることによって種々の分子（図５に示す）の蛍光の変調を測定した。結果を図１に示し、試験した分子の殆どが良好に変調したことが示される。２種類の分子（４−ニトロ及び２−メチル置換化合物）は良好に変調しなかったが、耐酸化性タグとして依然として有用であった。更なる実験において、非置換の対照試料及び本発明の２種類の化合物（４−トリフルオロメチル及び３，４−ジフルオロ）を１ｍＭの過酸化水素による酸化処理にかけ、蛍光強度の損失を測定した。これらのデータを図３に示す。
実施例２：
本発明の化合物（４−トリフルオロメチル、３，４−ジフルオロ、及び４−フルオロ）並びに対照試料（非置換）を含む幾つかのゲル（実施例３のようにして製造）を、３７℃において１０μＭの過酸化水素及び４ｍＭのグルコース／ＰＢＳへの長時間曝露にかけ、蛍光強度の損失を測定した。これらのデータを図２に示す。更に、３種類の化合物に関して測定した生体外半減期データを下表１に示す。
表中のデータにより、標準的な非置換モノマーと比較して、３，４−ジフルオロ及び４−トリフルオロメチル類縁体は、１０μＭの過酸化水素の存在下においてそれぞれ凡そ３倍及び２６倍長い半減期を有することが示される。比較のために、文献においては、通常の生理過酸化水素レベルは最大で約０．５μＭであることが報告されている。また、平均蛍光強度における差も表から注目される。いずれの類縁体もより低い全変調を示すが、蛍光は実質的により大きく（より明るい）、したがってより強い信号を与え、信号がノイズ比まで増大され、したがって副次的な効用としてセンサー製品における分解能がより大きくなる。４−トリフルオロメチル指示薬に関して測定されたより低いＫｄは、生理範囲のグルコースに対してより大きな感受性を有しているので、ヒトのグルコース検出の目的のためには標準的な対照試料よりも優れている。
実施例３：
本発明による２種類の化合物（４−トリフルオロメチル及び３，４−ジフルオロ）並びに非置換の対照試料を、それぞれヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）及びアクリル酸と共重合し、エチレングリコールジメタクリレート（ＥＧＤＭＡ）によって架橋して水不溶性のポリマーグラフトを形成し、これを次にラット中に移植し、２２又は４３日間、生体内酸化にかけた。ラットから取り出し、それぞれの化合物の蛍光を測定した。データを図４に示す。本発明の化合物は、対照試料と比較してより大きな蛍光を保持していた。
実施例４：
本発明の幾つかの化合物を、実施例３と同じように、それぞれヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）、アクリル酸、及びエチレングリコールジメタクリレート（ＥＧＤＭＡ）と共重合して水不溶性のポリマーゲルを形成した。ゲルを３７℃においてＰＢＳ中の１ｍＭの過酸化水素に曝露することによって、酸化剤に対するこれらの安定性を評価した。これらのデータを図６に示す。更なる実験においては、２種類の指示薬ゲル（４−トリフルオロメチル及び４−トリフルオロメチルスルホンゲル）を、３７℃において、ＰＢＳ中の４ｍＭのグルコースの存在下で１ｍＭの過酸化水素に曝露した。これらのデータを図７に示す。２回の上記記載の安定性実験から算出した半減期を表２に示す。更なる実験においては、種々の指示薬ゲルの０から２０ｍＭのグルコースでの蛍光変化（変調％）を測定した。結果を図８に示す。
実施例５：
３，４−ジフルオロ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｂ）：
工程１：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｂ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；２．４０ｇ、４．９１ミリモル）を、１５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、１９ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。２−（ブロモメチル）−３，４−ジフルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（２ｂ；４．９０、１４．７ミリモル、３等量）及びＤＩＥＡ（６．８ｍＬ、３９ミリモル、８．０等量）を加え、アルゴン流下で全部が溶解するまで撹拌し、次に、油浴中アルゴン流下で８０℃に３時間加熱した。真空下でＤＭＦを除去し、エーテル（２００ｍＬ）を加え、リン酸塩緩衝液（０．１Ｍの１００ｍＬ、ｐＨ７．０）で洗浄した。水溶液をエーテル（２×１００ｍＬ）で逆洗し、エーテル溶液を合わせてＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。エーテルを真空下で除去し、得られた黄色の粉末を、ヘキサン（１００ｍＬ）を用いて１５分間粉砕した。この粗生成物（２．６０ｇ）を、沸騰した８０／２０の酢酸エチル／ＩＰＡを用いて粉砕して、ＨＰＬＣによっておよそ９８％の純度の灰白色の粉末を得た。この粗試料を合わせて、沸騰した８０／２０の酢酸エチル／ＩＰＡ中に懸濁し、全ての固形分が溶解するまで酢酸エチルを加えることによって再結晶させた。冷却すると、純粋な生成物が灰白色の粉末として晶出した（１．５４ｇ、収率３２％）。
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間16.4分。
工程２：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｂ）
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｂ；１．５０ｇ、１．５１ミリモル）を１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、１０ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を、雰囲気温度において、２日以下か又はＨＰＬＣ分析によって出発物質の残留量が１％未満になったことが示されるまで撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残留生成物を３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、次に真空下で溶媒を除去した。生成物が黄色の粉末になるまで、ジクロロメタンへの溶解／蒸発処理を繰り返した。粉末を６０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で、２５０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃で更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して１．２１ｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を３０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、１００ｍＬの丸底フラスコに移した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．３８ｇ）をフラスコに加え、反応混合物を雰囲気温度において１６時間振盪した。ビーズを濾過し、５ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（０．９７９ｇ、６８％）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間14.1分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.32 (s, 12 H), 1.33 (s, 12H), 1.50 (m, 5H, O=C-C(CH2)CH 3), N-CH2CH 2CH2-N), 2.33 (t, 2H), 2.38 (t, 2H), 2.78 (m, 2H), 2.83 (m, 2H), 4.21 (s, 2H), 4.41 (s, 4H), 4.60 (s, 2H), 4.90 (t, 1H, C=CH 2), 4.95 (s, 1H, C=CH 2), 5.25 (br, 1H, NH), 7.15-7.25 (m, 1H, ArH), 7.28-7.32 (m, 1H), 7.35 (m, 4H, ArH), 7.68 (dd, 1H, ArH), 7.82 (dd, 1H, ArH), 7.8 (d, 2H, ArH), 8.20 (d, 2H, ArH)。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水）： 720.3 (M- 3H2OH+H)+, 738.3 (M-2H2O+H)+, 756.4 (M- H2O+H)+, 794.2 (M+Na)+：ビスボロン酸について。ボロン酸エステルはこの分析の酸性条件下では観察されない。
実施例６：
４−トリフルオロメチル指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｃ）：
工程１：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｃ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；２．１０ｇ、４．２９ミリモル）を、２５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。これを５ｍＬの脱気したジメチルホルムアミド中に溶解した。２−（ブロモメチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２ｃ；３．８０、１０．４ミリモル、２．４等量）を４ｍＬのＮ２散布ＤＭＦ中に溶解し、反応フラスコに加えた。溶液を撹拌し、Ｎ２で５分間フラッシュした。ＤＩＥＡ（６．０ｍＬ、３４ミリモル、８．０等量）を反応混合物に加え、溶液を、窒素の緩流下、暗所で、雰囲気温度において２晩撹拌した。４８時間後、溶媒を真空中で蒸発させた。残留生成物を１００ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、５０ｍＬのリン酸塩緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）で２回抽出した。ジクロロメタン溶液を乾燥し、真空中で蒸発させて金色の油状残渣を得た。この粗生成物を１０ｍＬのヘキサンと共に黄色の沈殿物が形成されるまで１５〜３０分間撹拌した。これを濾過し、生成物の重量を測定した（およそ３．５ｇの黄色の粉末）。熱２−プロパノール（化合物１ｇあたり＜２ｍＬのＩＰＡ）からの多重結晶化によって粗生成物を精製した。純粋な生成物（３ｃ）が回収された（およそ１．５ｇ）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間17.8分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.25 (s, 9H, C(CH 3)3), 1.32 (s, 12H, 0-C(CH 3)2C(CH 3)2, C-O), 1.35 (s, 12H, 0-C(CH 3)2C(CH 3)2, C-O), 1.46 (s, 3H, O=C-C(CH2)CH 3), 1.65 (m, 2H, N-CH2CH 2CH2-N), 2.43 (t, 2H), 2.52 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 3.04 (m, 2H), 3.98 (s, 2H), 4.05 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.82 (s, 1H), 4.88- 4.90 (br, 2H, NHがCHと重なり), 7.38-7.42 (m, 5H, ArH), 7.50 (d, 1H, ArH), 7.63 (s, 1H, ArH), 7.80 (m, 2H, ArH), 7.89 (d, 1H, ArH) , 8.32 (m, 4H, ArH)。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水): 858.4 (M-2H2O+H)+, 876.3 (M- H2O+H)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
工程２：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｃ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｃ；１．０３７ｇ、０．９８０ミリモル）を、２５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、１０ｍＬの６０：４０の脱気ＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を、雰囲気温度において、２４〜４８時間か又はＨＰＬＣ分析によって出発物質の残留量が１％未満になったことが示されるまで撹拌した。残留生成物を３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、次に真空下で溶媒を除去した。生成物が黄色の粉末になるまで、ジクロロメタンの洗浄を繰り返した。粉末を６０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で、２４０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃で更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して１ｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を１０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、１００ｍＬの丸底フラスコに移した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．５５ｇ、１ミリモル、１等量）をフラスコに加え、反応混合物を窒素で２分間フラッシュした。溶液を雰囲気温度において１６時間振盪した。ビーズを濾過し、１０ｍＬのジクロロメタンで２回洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（４ｃ）が得られた（０．６０３ｇ、指示薬の６０％）。
構造決定：
融点：９１〜９５℃（未補正）。
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する70/30の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、0.75mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間14.9分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.34 (s, 12H), 1.38 (s, 12H), 1.58-1.60 (m, 5H, O=C-C(CH2)CH 3), N-CH2CH 2CH2-N), 2.31 (t, 2H), 2.44 (t, 2H), 2.87 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 4.05 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.95 (t, 1H, C=CH 2), 5.05 (s, 1H, C=CH 2), 5.3-5.4 (br, 1H, NH), 7.38-7.42 (m, 4H, ArH), 7.52 (d, 1H, ArH), 7.68 (d, 1H, ArH), 7.80 (br s, 1H, ArH), 7.85-7.90 (m, 3H, ArH), 7.91 (d, 1H, ArH), 8.12 (d, 1H, ArH), 8.28 (d, 2H, ArH)。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水）： 802.4 (M-2H2O+H)+, 820.3 (M- H2O+H)+, 838.4 (M+H)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
実施例７：
４−フルオロ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−フルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−フルオロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｄ）：
工程１：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−フルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−フルオロベンジル］−Ｎ−［２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｄ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；７１８ｇ、１．４７ミリモル）を、５ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。２−（ブロモメチル）−４−フルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（２ｄ；１．８５ｇ、５．８７ミリモル、４等量）及びＤＩＥＡ（１．５２ｇ、１２ミリモル、８．０等量）を加え、８０℃に１８時間加熱した。次に、エーテル（１００ｍＬ）を加え、溶液をリン酸塩緩衝液（０．１Ｍの１００ｍＬを３回、ｐＨ７．０）で洗浄した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、次に真空下で除去した。粗生成物を、ヘキサン（２×５０ｍＬ）を用いて粉砕し、次に２５ｍＬの沸騰した８０／２０の酢酸エチル／ＩＰＡから再結晶して、灰白色の粉末を得た（０．５２ｇ、３７％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間15.7分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.3 (２つの重なる１重線, 24H, 0-C(CH 3)2C(CH 3)2, C-O), 1.33 (s, 9H, C(CH 3)3), 1.52 (s, 3H), 1.55 (s, 1H), 1.70 (t, 1H), 2.48 (t, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.82 (t, 2H), 3.08 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 4.05 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.82 (d, 2H), 5.05 (br, 1H), 6.83 (t, 1H). 6.84 (t, 1H), 7.08 (dd, 1H), 7.20 (dd, 1H), 7.44 (m, 4H), 7.68 (dd, 1H), 7.78 (dd, 1H), 8.36 (m, 2H) , 8.45 (m, 2H)。
ESI-MS: 957 (M+H)+, 874.4 (M+H)+：モノボロン酸エステルモノ酸について, 792.3 (M+H)+及び774.2 (M-H2O+H)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下で、ボロン酸エステル及び酸が観察された。
工程２：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−フルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−フルオロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｄ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−フルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−フルオロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｄ；０．４５０ｇ、０．４７ミリモル）を、１０ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解し、雰囲気温度において１６時間撹拌した。反応溶液をジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈し、次に、３つの部分に分けて、急速撹拌しているＮａＨＣＯ３の氷冷飽和水溶液中に加えた。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して０．３２ｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ上で１晩振盪した。ビーズを濾過し、有機溶媒を真空下で除去した。純粋な生成物（０．２３５ｇ、５５％）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間13.7分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.33 (s, 12 H), 1.35 (s, 12H), 1.62 (m, 5H, O=C-C(CH2)CH 3), N-CH2CH 2CH2-N), 2.33 (t, 2H), 2.48 (t, 2H), 2.88 (m, 2H), 2.95 (m, 2H), 4.04 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 5.00 (t, 1H, C=CH 2), 5.12 (s, 1H, C=CH 2), 5.48 (br, 1H, NH), 6.95 (dt, 1H), 7.15 (dt, 1H), 7.22 (br, 1H), 7.30 (dd, 1H), 7.48 (m, 4H), 7.80 (dd, 1H), 7.90 (m, 2H), 8.05 (dd, 1H), 8.37 (m, 2H)。
実施例８：
２，５−ジフルオロ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，５−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，５−（ジフルオロ）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｅ）：
工程１：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，５−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，５−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｅ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．８７２ｇ、１．７８ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、７ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。６−（ブロモメチル）−２，５−ジフルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（２ｅ；１．４９、４．４７ミリモル、２．５等量）及びＤＩＥＡ（１．８６ｇ、１４．４ミリモル、８．０等量）を加え、アルゴン流下で全てが溶解するまで撹拌し、次に、油浴中、アルゴン流下で８０℃に１晩加熱した。更なる６−（ブロモメチル）−２，５−ジフルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（０．３００ｇ、０．５等量）を加え、翌日の晩まで加熱を継続した。エーテル（１００ｍＬ）を反応溶液に加え、ｐＨ７．０の０．１Ｍリン酸塩緩衝液で洗浄した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒を真空下で除去し、残渣を、ヘキサン（２×５０ｍＬ）を用いて粉砕した。得られた赤褐色の固体を沸騰ヘキサン（５０ｍＬ）で処理し、デカンデーションし、所望の生成物（０．４９ｇ）を冷ヘキサンから白色の結晶として回収した。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間15.0分。
工程２：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，５−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，５−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｅ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，５−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，５−ジフルオロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｅ；０．４９）を、１０ｍＬの６０：４０中で、ＨＰＬＣによって出発物質が残留しないことが示された時点まで１晩撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣をジクロロメタン（３ｍＬ）中に溶解し、急速撹拌しているペンタン（１００ｍＬ）中に滴加した。濾過によって生成物のトリフルオロ酢酸塩が黄色の粉末として単離され（０．４０ｇ）、質量分析によって確認された。以下のようにして遊離ベースの指示薬を得た。粉末（０．２０ｇ）を１０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で１００ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。有機層を分離し、次に無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．５ｇ）をフラスコに加え、懸濁液を雰囲気温度で１晩振盪した。濾過し、溶媒を真空下で除去することによって、生成物（９５ｍｇ）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間12.9分。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水）： 720.3 (M- 3H2O+H)+, 738.3 (M- 2H2O+H)+, 756.4 (M- H2O+H)+, 778.3 (M-H2O+Na)+:ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
実施例９：３，４−ジクロロ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジクロロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジクロロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｆ）：
工程１：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジクロロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジクロロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｆ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．２５ｇ、０．５１ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、５ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。２−（ブロモメチル）−３，４−ジクロロフェニルボロン酸ピナコールエステル（２ｆ；０．５６、１．５ミリモル、３．０等量）及びＤＩＥＡ（０．７ｍＬ、４．１ミリモル、８．０等量）を加え、Ｎ２下、暗所において、室温で４８時間撹拌した。真空下でＤＭＦを除去し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を加え、リン酸塩緩衝液（０．１Ｍの４０ｍＬ、ｐＨ７．０）で洗浄した。回収されたジクロロメタン溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。真空下でジクロロメタンを除去し、得られた黄色の残渣を、Ｎ２の緩流下でヘキサン（１０ｍＬ）を用いて１５分間粉砕した。粗生成物（０．４１ｇ）を、冷ＩＰＡを用いて粉砕することによって、ＨＰＬＣによりおよそ８９％の純度の黄色の粉末が得られた（０．２９ｇ、収率５４％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間16.4分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.22 (s, 9H), 1.32 (s, 12H), 1.38 (s, 12H), 1.56 (bs, 5H), 2.35 (t, 2H), 2.50 (t, 2H), 2.78 (t, 2H), 2.91 (q, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.91 (s, 2H), 4.50 (bs, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.79 (s, 1H), 7.36 (m, 4H), 7.45 (m, 2H), 7.69 (d, 2H), 8.16 (m, 4H)。
工程２：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジクロロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジクロロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｆ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジクロロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，３−ジクロロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｆ；０．２９ｇ、０．２７ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、６ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を、雰囲気温度において、１７時間か又はＨＰＬＣ分析によって出発物質の残留量が０．１％未満になったことが示されるまで撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残留生成物を１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、次に真空下で溶媒を除去した。生成物が黄色の粉末になるまで、ジクロロメタンへの溶解／蒸発処理を繰り返した。粉末を１０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で７０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃において更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．２３ｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を１０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、１００ｍＬの丸底フラスコに移した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．１３ｇ、１等量）をフラスコに加え、反応混合物を雰囲気温度で１６時間振盪した。ビーズを濾過し、５ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（０．２ｇ、７１％）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間14.1分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.35 (s, 12H), 1.38 (s, 12H), 1.58 (m, 5H), 2.28 (t, 2H), 2.42 (t, 2H), 2.70 (q, 2H), 2.89 (t, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 4.92 (s, 1H), 4.05 (m, 1H), 5.30 (s, 1H), 7.38 (m, 3H), 7.49 (m, 4H), 7.58 (d, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 8.17 (m, 1H)。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水）： 822.3 (M-H2O+H)+, 804.4 (M-2H2O+H)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
実施例１０：
４−トリフルオロメトキシ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｇ）：
工程１：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｇ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．２ｇ、０．４１ミリモル）を、１５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。これを５ｍＬの脱気したジメチルホルムアミド中に溶解した。２−（ブロモメチル）−４−（トリフルオロメトキシ）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２ｇ；０．３７、０．９７ミリモル、２．４等量）を４ｍＬのＮ２散布ＤＭＦ中に溶解し、反応フラスコに加えた。溶液を撹拌し、Ｎ２で５分間フラッシュした。ＤＩＥＡ（０．６ｍＬ、３．５ミリモル、８．０等量）を反応混合物に加え、溶液を、窒素の緩流下、暗所において、雰囲気温度で１晩撹拌した。２４時間後、溶媒を真空中で除去した。残留生成物を１０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、１５ｍＬのリン酸塩緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）で３回抽出した。ジクロロメタン溶液を乾燥し、真空中で蒸発させて、金色の油状残渣を得た。この粗生成物を５ｍＬのエーテルと共に１５分間撹拌し、次に溶媒を除去した。黄色の油状残渣を真空下に３０分間保持して、泡沫状の粉末を得た（３ｇ；０．４１ｇ、収率９１％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間15.0分。
工程２：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｇ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｇ；０．４ｇ、０．３７ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、５ｍＬの６０：４０の脱気ＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を、雰囲気温度において、２１時間か又はＨＰＬＣ分析によって出発物質の残留量が０．１％未満になったことが示されるまで撹拌した。残留生成物を１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、次に真空下で溶媒を除去した。ジクロロメタン洗浄を数回繰り返した。粉末を１０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で８０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃において更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．１８ｇの黄色の粉末を得た（４ｇ；収率４６％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する70/30の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、0.75mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間12.9分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.32 (s, 12 H), 1.33 (s, 12H), 1.51 (s, 6H), 2.31 (bm, 2H), 2.40 (bt, 2H), 2.82 (bt, 2H), 2.89 (bm, 2H), 3.85 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.86 (d, 2H), 4.88 (bs, 1H,), 7.32 (d, 1H), 7.40 (m, 5H), 7.82 (d, 1H), 7.92 (d, 1H), 7.96 (m, 2H), 8.40 (d, 2H), 8.27 (m, 2H)。
実施例１１：
４−スルホンアミド指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｈ）：
工程１：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｈ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．２７ｇ、０．５５ミリモル）を、２５ｍＬの丸底フラスコ内において無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中に溶解した。２−（ブロモメチル）−４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２ｈ；０．５９５ｇ、１．４７ミリモル、２．７等量）及びＤＩＥＡ（０．７６５ｍＬ、４．４ミリモル、８等量）を加え、Ｎ２下、暗所において、室温で１９時間撹拌した。真空下でＤＭＦを除去し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、リン酸塩緩衝液（０．１Ｍの１０ｍＬを２回、ｐＨ７．０）で洗浄した。ジクロロメタン溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、真空下で除去した。粗生成物を、ヘキサン（２×５ｍＬ）を用いて粉砕することにより、ＨＰＬＣによっておよそ９０％の純度の黄色の粉末が得られた（０．５９ｇ、収率９４％）。
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間14.6分。
工程２：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｈ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｈ；０．４４ｇ、０．３９ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、Ｎ２散布試薬から調製した１０ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を雰囲気温度において２８時間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残留生成物を２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、次に真空下で溶媒を除去した。ジクロロメタンへの溶解／蒸発処理を、生成物が黄色の粉末になるまで４回以上繰り返した。粉末を２０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で４０ｍＬのＮａＨＣＯ３氷冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃において更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．２４ｇ（５７％）の生成物を黄色の粉末として得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する70/30の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、0.75mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間12.7分。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水）： 920.3 (M-H2O+Na)+, 898.2 (M-H2O+H)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
実施例１２：２−メチル指示薬の合成：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−メチルベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−メチルベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（８）：
工程１：２−（ブロモメチル）−６−メチルフェニルボロン酸（６）：
２，６−ジメチルフェニルボロン酸（２．２２ｇ、１４．８ミリモル）、ＮＢＳ（１．３１ｇ、７．３６ミリモル、０．５等量）、及びＡＩＢＮ（０．１７ｇ、１．０ミリモル、０．０７等量）を、還流ＣＣｌ４中で２時間加熱した。溶液を冷却し、次に濾過した。次に、溶液を水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空中で溶媒を除去した。得られた白色の粉末（１．６６ｇ）はＨＰＬＣによっておよそ８４％の純度であり、出発物質及び若干の二臭素化生成物を含んでいた。シリカゲル６０上でのカラムクロマトグラフィー（溶出条件：ジクロロメタン中０％〜２％のメタノール）では純度を向上させることができず、粗物質を次の工程に用いた。
工程２：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−メチルベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−メチルベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（７）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．８５ｇ、０．１７ミリモル）を、５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、２ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。２−（ブロモメチル）−６−メチルフェニルボロン酸（６；３８９ｍｇ、１．７ミリモル）及びＤＩＥＡ（０．２４ｍＬ、１．４ミリモル、８等量）を加え、油浴中、アルゴン充填バルーン下で８０℃に１晩加熱した。真空下でＤＭＦを除去し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を加え、リン酸塩緩衝液（０．１Ｍの１０ｍＬを３回、ｐＨ７．０）で洗浄した。有機溶媒をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒を真空下で除去し、得られた黄色の固体を、ヘキサン（２×１０ｍＬ）を用いて粉砕した。この粗生成物を、ジクロロメタン中１〜５％のメタノールで溶出するシリカゲル６０上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、純度９３％の物質を得た（５５ｍｇ、４１％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間15.8分。
工程３：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−メチルベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−メチルベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセントリフルオロ酢酸塩（８）：
９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−メチルベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−メチルベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（７；５５ｍｇ、０．０７０ミリモル）を、２ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解し、アルゴンを充填したバルーン下で１晩撹拌した。更に１０ｍＬのジクロロメタンを加え、溶媒を真空下で除去した。ジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、溶媒を再び真空下で除去した。溶解／蒸発工程を３回以上繰り返した。粗生成物を、エーテル（１０ｍＬ）、次にヘプタン（３ｍＬ）を用いて粉砕して、トリフルオロ酢酸塩としておよそ９０％の純度の生成物（５９ｍｇ、８８％）を黄色の粉末として得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間14.2分。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水）： 694.4 (M-2H2O+H)+, 712.4 (M-H2O+H)+, 730.4 (M+H)+。
実施例１３：
４−シアノ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−シアノベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−シアノベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（１４ａ）：
工程１：３−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，２，３］ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾニトリル（１１ａ）：
４−ブロモ−３−メチルベンゾニトリル（９ａ；５．０ｇ、０．０２５５モル、１．０等量）を、１５３ｍＬの無水ジメチルホルムアミドを含む２５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。酢酸カリウム（７．５ｇ、０．０７６モル、３等量）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（１０；７．１２ｇ、０．０２８モル、１．１等量）、及び［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．５６ｇ、０．０００７６モル、０．０３等量）をフラスコに加え、反応混合物を８０℃に２４時間加熱した。溶液を雰囲気温度に冷却し、懸濁液を熱濾過した。回収された溶媒を真空下で除去した。得られた油状で暗褐色の生成物を２００ｍＬの酢酸エチル中に溶解し、分液漏斗に移した。２５０ｍＬの水を加え、溶液を抽出した。有機層を回収して無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。溶媒を真空中で除去した。粗生成物を、シリカゲル６０上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出条件：２％〜２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製した。約５ｇの物質が回収された。生成物を熱ヘキサンからの結晶化によって更に精製した。純粋な生成物（１１ａ）が得られた（３．７ｇ、収率６０％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、3.9×150mm Symmetry Column HR C18 カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間10.7分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.35 (s, 12H, C(CH 3)3), 2.55 (s, 3H, CH 3), 7.41 (m, 2H, ArH), 7.81 (m, 1H, ArH)。
工程２：３−ブロモメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，２，３］ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾニトリル（１２ａ）：
３−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，２，３］ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾニトリル（１１ａ；３．３ｇ、０．０１３６モル、１．０等量）を、５０ｍＬの四塩化炭素を含む２５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。ＮＢＳ（２．５ｇ、０．０１４２モル、１．０５等量）及び触媒量の２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（０．０３ｇ、０．０００１８モル、０．０１４等量）を加え、反応混合物を５３時間還流した。得られた溶液を熱濾過し、次に溶媒を真空下で除去した。粗生成物を熱ヘキサンからの結晶化によって精製した。若干の１１ａを含む生成物（１２ａ）が得られた（３．０８ｇ、７０％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、3.9×150mm Symmetry Column HR C18 カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間13.4分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.38 (s, 12H, C(CH 3)3), 4.85 (s, 2H, CH 2Br), 7.55 (d, 1H, ArH), 7.68 (s, 1H, ArH), 7.92 (d, 1H , ArH )。
工程３：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−シアノベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−シアノベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１３ａ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．３ｇ、０．０００６１モル、１．０等量）を、２５ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、４．５ｍＬの脱気ジメチルホルムアミド中に溶解した。３−ブロモメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，２，３］ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾニトリル（１２ａ、０．５３、０．００１６モル、２．７等量）を、２ｍＬのＮ２散布ＤＭＦ中に溶解し、反応フラスコに加えた。溶液を撹拌し、Ｎ２で５分間フラッシュした。ＤＩＥＡ（０．８５ｍＬ、０．００４９モル、８．０等量）を反応混合物に加え、溶液を、窒素の緩流下、暗所において、雰囲気温度で２６時間撹拌した。反応溶媒を真空中で除去した。残留生成物を２０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、１０ｍＬのリン酸塩緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）で２回抽出した。ジクロロメタン抽出物を合わせて、乾燥し、真空中で蒸発させて金色の油状残渣を得た。この粗生成物を５ｍＬのヘキサンと共に黄色の沈殿物が形成されるまで１５〜３０分間撹拌した。これを濾過し、生成物の重量を測定した（およそ０．９ｇの黄色の粉末）。この粗生成物を、熱２−プロパノール（およそ３ｍＬのＩＰＡ）からの多重結晶化によって更に精製した。純粋な生成物（１３ａ）が回収された（０．０７ｇ、ＨＰＬＣによる純度９８．８％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 3.9×150mm Symmetry Column HR C18 カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間15.2分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.31(s, 12H, 0-C(CH 3)2C(CH 3)2, C-0), 1.34(s, 12H, 0-C(CH 3)2C(CH 3)2, C-O), 1.35(s, 9H, C(CH3)3), 1.63 (m, 3H, N-CH2CH 2CH2-N + NH重なり), 2.51 (m, 4H), 2.59(t, 2H), 3.10(q, 2H), 3.89(s, 2H), 3.99(s, 2H), 4.45(s, 2H), 4.53(s, 2H), 5.09(m, 1H), 5.13(s, 1H), 5.22 (t, 1H), 7.29(d, 1H, ArH), 7.42(d, 1H, ArH), 7.50 (m, 5H, ArH), 7.62(d, 1H, ArH), 7.70(s, 1H, ArH), 7.78(d, 1H, ArH), 8.35(m, 2H, ArH), 8.41(d, 2H, ArH)。
ESI-MS: m/z 790.4 (M+, 100%)。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
工程４：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−シアノベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−シアノベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（１４ａ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−シアノベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−シアノベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１３ａ；０．０６４ｇ、０．０６６ミリモル、１等量）を２５ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、２．５ｍＬの６０：４０の脱気ＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を雰囲気温度において２４時間撹拌した。残留生成物を５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、次に溶媒を真空下で除去した。生成物が黄色の粉末になるまでジクロロメタンによる洗浄を繰り返した。粉末を１０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で２０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃において更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．０４２ｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を３ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、２５ｍＬの丸底フラスコに移した。フラスコにＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．０３９ｇ、１ミリモル、１等量）を加え、反応混合物を窒素で２分間フラッシュした。溶液を雰囲気温度において１６時間振盪した。ビーズを濾過し、１０ｍＬのジクロロメタンで２回洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（１４ａ）が得られた（３４ｍｇの指示薬）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する70/30の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、0.75mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間12.9分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.33(s, 12H), 1.36(s, 12H), 1.65(m, 2H), 1.71 (bs, 3H), 2.35(t, 2H), 2.48(t, 2H), 2.88(t, 2H), 2.98(q, 2H), 4.01(s, 2H), 4.25(s, 2H), 4.48(s, 2H), 4.58(s, 2H), 5.10(s, 1H), 5.28(s, 1H), 5.61 (bs, 1H), 7.45(m, 5H), 7.65(d, 1H), 7.72(d, 2H), 7.81(d, 1H), 7.92(d, 2H), 8.05(d, 1H), 8.30(d, 2H)。
実施例１４：４−ニトロ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−ニトロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−ニトロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（１４ｂ）：
工程１：３−ニトロ−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，２，３］ジオキサボロラン−２−イル）トルエン（１１ｂ）：
２−ブロモ−５−ニトロトルエン（９ｂ；１０．２ｇ、４７．２ミリモル）を、酢酸カリウム（７．１４ｇ、７２．７ミリモル）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（１０；１３．３ｇ、５２．３ミリモル）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（４１３ｍｇ、０．５０６ミリモル）、及びＤＭＳＯ（５０ｍＬ）と共に１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、反応混合物を８０℃に４日間加熱した。溶液を雰囲気温度に冷却し、氷水（１２５ｍＬ）を加え、黒色の懸濁液を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。溶媒を真空中で除去し、粗生成物を、ヘキサン、次に５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲル６０上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。最も純粋なフラクションから純度約９５％の生成物が得られた（２．０９ｇ、１７％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間10.48。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.36 (s, 12H, C(CH 3)3), 2.62 (s, 3H, CH 3), 7.89 (d, 2H, ArH), 7.92 (dd, 1H, ArH), 7.97 (d, 1H)。
工程２：３−ブロモメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，２，３］ジオキサボロラン−２−イル）ニトロベンゼン（１２ｂ）：
３−ニトロ−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，２，３］ジオキサボロラン−２−イル）トルエン（１１ｂ；３．５９ｇ、１３．６ミリモル）を、５０ｍＬのベンゼンを含む５００ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。ＮＢＳ（２．６８ｇ、１５．０ミリモル、１．１等量）及び触媒量の２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ；８４ｍｇ、０．５ミリモル）を加え、反応混合物をアルゴン流下で３．５時間還流した。更なるＮＢＳ（０．２７ｇ、１．５ミリモル、０．１等量）を加え、還流を更に２時間継続した。冷却した懸濁液を濾過し、溶媒を真空下で除去した。粗生成物を熱ヘキサンからの結晶化によって精製した。生成物（１２ｂ）が得られた（２．１２ｇ、４６％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間12.5。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.40 (s, 12H, C(CH 3)3), 4.92 (s, 2H, CH 2Br), 7.98 (d, 1H, ArH), 8.08 (dd, 1H, ArH), 8.22 (d, 1H, ArH)。
工程３：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−ニトロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−ニトロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１３ｂ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．５０９ｇ、１．０４ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、５ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。４−ニトロ−２−（ブロモメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（１２ｂ；１．０９、３．１９ミリモル、３等量）及びＤＩＥＡ（１．４５ｍＬ、８．３８ミリモル、８等量）を加え、溶液を、油浴中、アルゴンを充填したバルーン下で８０℃に２時間加熱した。ＤＭＦを真空下で除去し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加え、リン酸塩緩衝液（０．１Ｍの５０ｍＬを２回、ｐＨ７．０）で洗浄した。水溶液をジクロロメタン（２５ｍＬ）で逆洗し、有機溶液を合わせてＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。真空下で有機物質を除去し、得られた赤黄色の油状物を、沸騰ヘキサン（それぞれ５０ｍＬ）を用いて２回粉砕して黄褐色の粉末を得た。沸騰８０／２０酢酸エチル／ＩＰＡを用いて粉砕することによって、１４５ｍｇの純粋な生成物が黄褐色の粉末として得られた。より純粋な生成物（４００ｍｇ）が冷酢酸エチル／ＩＰＡから沈殿し、これらの純粋な固体を合わせた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間16.0分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.32 (s, 12H, 0-C(CH 3)2C(CH 3)2, C-O), 1.36 (s, 21H, 0-C(CH 3)2C(CH 3)2, C-O + t-ブチル), 1.65 (s, 3H, O=C-C(CH2)CH 3), 1.75 (m, 2H, N-CH2CH 2CH2-N), 2.55 (t, 2H), 2.59 (t, 2H), 3.0 (t, 2H), 3.15 (m, 2H), 3.96 (s, 2H), 4.05 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 5.04 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 5.25 (br, 1H), 7.44-7.52 (m, 4H, ArH), 7.64 (d, 1H), 7.76 (dd, 1H, ArH), 7.80 (d, 1H), 7.92 (dd, 1H), 7.96 (d, 1H, ArH), 8.25 (d, 1H, ArH), 8.36-8.44 (m, 4H, ArH)。
工程４：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−ニトロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−ニトロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（１４ｂ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−ニトロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−ニトロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１３ｂ；０．４９９ｇ、０．４９３ミリモル）を、１０ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解し、１晩撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残留生成物を２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、次に溶媒を真空下で除去した。生成物が黄色の粉末になるまでジクロロメタンへの溶解／蒸発処理を更に４回繰り返した。粉末を２０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で８０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃において更に５分間撹拌した。層分配を助けるために更なるジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えた。有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して１５７ｍｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を１０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、１００ｍＬの丸底フラスコに移した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．１０ｇ）を加え、隔膜でフラスコを密封し、アルゴンでフラッシュし、反応混合物を雰囲気温度において１６時間振盪した。ビーズを濾過し、ジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（０．１２５ｍｇ、２６％）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、0.75mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間13.7分。
実施例１５：
４−トリフルオロメチルスルホン指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（２１）：
工程１：４−ブロモ−３−メチルベンゼンスルホニルフルオリド（１６）：
４−ブロモ−３−メチルベンゼンスルホニルクロリド（１５；９．８７ｇ、３６．６ミリモル）、無水フッ化カリウム（８．５０ｇ、１４６ミリモル、４等量）、及び１８−クラウン−６（０．２９９ｇ、１．１３ミリモル、０．０３等量）を無水アセトニトリル（２０ｍＬ）中で、ＨＰＬＣによって出発物質の生成物への完全な転化が示される時点まで、１晩撹拌した。反応混合物に水（１００ｍＬ）を加え、生成物を油状物として分離した。水溶液をデカントし、次にヘキサン（５０ｍＬ）で抽出した。油状物をヘキサン抽出物中に溶解し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒を真空下で除去した。ワックス状の白色の固体（８．０８ｇ、８７％）が単離された。融点＝４７〜４８℃。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する60/40の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、1.50mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間10.5分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 2.5 (s, 3H) , 7.68 (dd, 1H), 7.80 (d, 1H) , 7.86 (d, 1H)。
工程２：６−ブロモ−３−（トリフルオロメチルスルホニル）トルエン（１７）：
添加漏斗を取り付け、およそ５℃に冷却したオーブン乾燥２口フラスコ内において、ＴＡＳＦ（０．６１ｇ、２．２ミリモル）を無水ペンタン（４０ｍＬ）中に懸濁した。ペンタン（４０ｍＬ）中に溶解した４−ブロモ−３−メチルベンゼンスルホニルフルオリド（１６；５．００ｇ、１９．８ミリモル）を加え、懸濁液中に温度計を挿入した。反応温度が４〜５℃の間の保持されるように、ペンタン（２０ｍＬ）中に溶解したトリメチルトリフルオロメチルシラン（ＴＦＭ−ＴＭＳ；６．４ｍＬ、４１ミリモル、２．１等量）を添加漏斗によって懸濁液に滴加した。懸濁液を暖めながら撹拌を５時間継続した。明澄な溶液を褐色の固体からデカントし、これを水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空下で除去した。黄色の油状物（５．３５ｇ、８９％）が単離され、これを次に静置することによって結晶化（針状結晶）させた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する60/40の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、1.50mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間11.0分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 2.55 (s, 3H), 7.70 (dd, 1H), 7.85 (d, 1H) , 7.7 (d, 1H)。
工程３：２−メチル−４−（トリフルオロメチルスルホニル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（１８）：
２５０ｍＬの丸底フラスコに、酢酸カリウム（５．０ｇ、５０ミリモル）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．３７３ｇ、０．５１ミリモル）、及びビス（ピナコラート）ジボロン（５．２ｇ、２０ミリモル）を充填し、Ｎ２でフラッシュした。無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の６−ブロモ−３−（トリフルオロメチルスルホニル）トルエン（１７；５．０ｇ、１６ミリモル）を加え、懸濁液をＮ２下で８０℃に２４時間加熱した。溶媒を真空下で除去し、得られたスラリーを、９５／５のヘキサン／酢酸エチル（５００ｍＬ）によってシリカゲル６０（６０ｇ）下に溶出した。溶媒を除去することによって、６．１ｇの粗生成物が白色のワックス状固体として得られた。ヘキサンからの再結晶によって３．７８ｇ（６８％）の白色の結晶が得られ、第２の群から更に０．４４ｇが単離された。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する60/40の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、1.50mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間8.0分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.37 (s, 12H), 2.62 (s, 3H), 7.80 (m, 2H) , 8.00 (d, 1H)。
FAB MS (mNBA): 351 (M+H)+, 335 (M-15)+。
工程４：２−ブロモメチル−４−（トリフルオロメチルスルホニル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（１９）：
２−メチル−４−（トリフルオロメチルスルホニル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（１８；３．６０ｇ、１０．３ミリモル）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．９２ｇ、１０．８ミリモル、１．０４等量）、及びＡＩＢＮ（２５ｍｇ、０．１５ミリモル、０．０１５等量）を、７５Ｗの白熱電球で照射しながら還流ＣＣｌ４（７０ｍＬ）中で５時間加熱した。次に溶液を室温に到達させ、重量濾過し、溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、ヘキサン中０、５、及び次に１０％の酢酸エチルによって溶出してシリカゲル上で精製し、若干のジブロミド及び１８と混合している１９を黄色の油状物として単離した（２．６５ｇ、６０％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する60/40の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、1.50mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間8.7分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.37 (s, 12H), 4.92 (s, 2H), 7.96 (dd, 1H), 8.02 (d, 1H), 8.08 (d, 1H)。
工程５：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（２０）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．７０６ｇ、１．４４ミリモル）、２−ブロモメチル−４−（トリフルオロメチルスルホニル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（１９；２．１１ｇ）、及びＤＩＥＡ（４．５ｍＬ、２６ミリモル）を無水ＤＭＦ（１２ｍＬ）中に溶解し、Ｎ２流下、室温において撹拌した。２６時間後、溶媒を真空中で除去した。残留生成物を３０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、３０ｍＬのリン酸塩緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）で２回洗浄した。ジクロロメタン溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、真空中で蒸発させることによって橙色の油状物が得られた。この粗生成物を、ヘキサン（１０ｍＬ）を用いて粉砕し、次に最小量のＩＰＡ中に溶解し、溶液が曇り始めるまでヘキサンを加えた。溶媒を真空下で除去すると、黄色の粉末が残留した（１．９３ｇ、９５％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する70/30の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、0.75mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間17.4分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.30 (s, 12H), 1.32 (s, 12H), 1.34 (s, 9H), 1.63 (s, 3H), 1.78-1.81 (m, 2H), 2.55-2.61 (m, 4H), 2.96 (t, 2H), 3.15 (m, 2H), 3.98 (s, 2H), 4.05 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 5.10 (bs, 1H), 5.12 (s, 1H), 5.30 (bt, 1H), 7.49-7.52 (m, 4H), 7.68 (dd, 1H), 7.80 (m, 2H), 7.84 (d, 1H), 7.94 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8.40-8.42 (m, 4H)。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水): 1004.2 (M-H2O+H)+, 1006.2 (M-H2O+Na)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
工程６：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（２１）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（２０；１．００ｇ、８４３ミリモル）を、Ｎ２散布試薬から調製した３０ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を雰囲気温度において２２時間撹拌し、次に溶媒を真空下で除去した。残留生成物を３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、次に溶媒を真空下で除去した。生成物が黄色の粉末になるまで、ジクロロメタンへの溶解／蒸発処理を更に４回繰り返した。粉末を３０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で６０ｍＬのＮａＨＣＯ３氷冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃において更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．５８ｇ（６０％）の生成物を黄色の粉末として得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、Waters 4.6×100mm Symmetry 3.5μC18カラム(Sentry C18ガードカラムを有する）、注入量0.010mL（1% v/vのTFAを有する70/30の水／MeCN中に試料を溶解）、0.100mLの注入ループ、0.75mL/分、検出254nm、Ａ＝水(0.1% TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：2分で10% B；18分で10〜80% B；2分で80〜100% B；2分で100% B、保持時間15.5分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.32 (s, 12H), 1,35 (s, 12H), 1.69-1.72 (m, 5H), 2.41 (t, 2H), 2.53 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 3.03 (dd, 2H), 4.07 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 5.09 (s, 1H), 5.26 (s, 1H), 5.56 (m, 1H), 7.45-7.49 (m, 4H), 7.82 (m, 2H), 7.91 (m, 1H), 7.98 (d, 1H), 8.10-8.16 (m, 4H), 8.39 (m, 2H)。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水): 948.0 (M-H2O+H)+, 970.0 (M-H2O+Na)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
実施例１６：
３，５−ジクロロ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−（ジクロロ）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−（ジクロロ）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｉ）：
工程１：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−（ジクロロ）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−（ジクロロ）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｉ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．４０ｇ、０．８２ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、１０ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。６−（ブロモメチル）−３，５−ジクロロフェニルボロン酸ピナコールエステル（２ｉ；０．８３ｇ、２．３ミリモル、２．４等量）及びＤＩＥＡ（１．１４ｍＬ、６．６ミリモル、８．０等量）を加え、Ｎ２下、暗所において室温で２４時間撹拌した。真空下でＤＭＦを除去し、ジクロロメタン（３０ｍＬ）を加え、リン酸塩緩衝液（０．１Ｍの５０ｍＬ、ｐＨ７．０）で洗浄した。回収されたジクロロメタン溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。ジクロロメタンを真空下で除去し、得られた黄色の泡沫状残渣を、Ｎ２の緩流下でヘキサン（１０ｍＬ）を用いて１５分間粉砕した。粗生成物（１．０２ｇ）を熱ＩＰＡから結晶化させて黄色の粉末（３ｉ；０．３８ｇ、収率４４％）を得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間8.7分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.23 (s, 9H), 1.32 (s, 12H), 1.37 (s, 12H), 1.41 (bs, 3H), 1.52 (m, 2H), 2.36 (t, 2H), 2.48 (t, 2H), 2.76 (t, 2H), 2.89 (q, 2H), 4.12 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.56 (t, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.82 (t, 1H), 7.36 (m, 4H), 7.48 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.76 (t, 2H), 8.17 (m, 2H), 8.24 (m, 2H)。
工程２：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−（ジクロロ）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−（ジクロロ）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（４ｉ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−（ジクロロ）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−（ジクロロ）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３ｉ；０．３８ｇ、０．３６ミリモル）を５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、１０ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を雰囲気温度において１晩撹拌した。２０時間後、溶媒を真空下で除去した。残留生成物を１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、次に真空下で溶媒を除去した。生成物が黄色の粉末になるまで、ジクロロメタンへの溶解／蒸発処理を繰り返した。粉末を３０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃で更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して黄色の粉末を得た。この粗生成物を１５ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、１００ｍＬの丸底フラスコに移した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．２ｇ、１等量）をフラスコに加え、反応混合物を雰囲気温度において１６時間振盪した。ビーズを濾過し、１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（０．１９ｇ、収率５２％）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間7.9分。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水): 822.11 (M-H2O+H)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
実施例１７：
３，５−ビス（トリフルオロメチル）指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（２７ａ）：
工程１：２−ブロモ−４，６−ビス（トリフルオロメチル）トルエン（２３ａ）：
２，４−ビス（トリフルオロメチル）トルエン（２２ａ；１２．７ｇ、５６ミリモル）を丸底フラスコ中に配置した。次に、２８ｍＬのＴＦＡ及び７．８ｍＬのＨ２ＳＯ４（ＴＦＡの量の２８％）を加えた。ＮＢＳ（１０．０ｇ、５６ミリモル、１等量）を反応混合物に少しずつ加えた。雰囲気温度において反応を２日間進行させた。４８時間後、反応を終了した。反応混合物を氷冷水（２００ｍＬ）に注ぎ入れ、Ｅｔ２Ｏで抽出することによって有機層（油状の残渣）を水層から分離した。エーテル層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、次に層を分離した。有機層を回収し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒を除去した。純粋な生成物（１３．１ｇ、収率７７％）が僅かに黄色の油状物として回収された。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間12.3分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 2.54 (s, 3H), 7.64 (s, 1H), 8.00 (s, 1H)。
工程２：２−メチル−３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２４ａ）：
２−ブロモ−４，６−ビス（トリフルオロメチル）トルエン（２３ａ；１０．０ｇ、３０ミリモル）を丸底フラスコ中に配置し、２００ｍＬのＤＭＦ中に溶解した。次に、ＫＯＡｃ（８．８ｇ、９０ミリモル、３等量）を反応混合物に１回で加え、次にＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（０．６６ｇ、０．９ミリモル、０．０３等量）及びビス（ピナコラート）ジボロン（１０．２ｇ、４５ミリモル、１．５等量）を加えた。溶液を８０℃において２４時間撹拌した。次に、溶媒を除去し、黒色の残渣をプラグカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ）にかけて暗緑色の油状残渣を得た。この化合物を第２のカラムクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって更に精製した。純粋な生成物（８．７ｇ、７６％）が僅かに緑色の油状物として回収された。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間9.1分（ボロン酸について）及び12.8分（ピナコールエステルについて）。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.36 (s, 12H), 2.75 (s, 3H), 7.90 (s, 1H) , 8.16 (s, 1H)。
工程３：２−（ブロモメチル）−３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２５ａ）：
２−メチル−３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２４ａ；２．０ｇ、５．６ミリモル）及び５０ｍＬのＣＣｌ４を２５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。ＮＢＳ（１．０５、５．８８ミリモル、１．０５等量）及びＡＩＢＮ（０．０１３ｇ、０．０７８ミリモル、０．０１４等量）を加え、反応混合物を７５Ｗの白熱電球の存在下で３時間還流した。３時間後、溶液を室温に冷却してスクシンイミドを沈殿させた。固体を濾別した。溶媒を除去し、油状の生成物を回収した。この粗生成物を、ヘキサンを用いて粉砕することによって精製して、純度９０％の生成物（２５ａ；２．２ｇ、収率９０％）を得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間9.7分（ボロン酸について）及び12.9分（ピナコールエステルについて）。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.41 (s, 12H), 5.08 (s, 2H), 7.94 (s, 1H) , 8.24 (s, 1H)。
工程４：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（２６ａ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；０．８ｇ、１．６ミリモル）を、２５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。これを１５ｍＬの脱気ジメチルホルムアミド中に溶解した。２−（ブロモメチル）−３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２５ａ；１．６６、３．８ミリモル、２．４等量）を５ｍＬのＮ２散布ＤＭＦ中に溶解し、反応フラスコに加えた。溶液を撹拌し、Ｎ２で５分間フラッシュした。ＤＩＥＡ（２．２ｍＬ、１２．８ミリモル、８．０等量）を反応混合物に加え、溶液を、窒素の緩流下、暗所において雰囲気温度で４晩撹拌した。９６時間後、反応を６０℃において４．５時間継続した。次に、反応混合物を冷却し、溶媒を真空中で除去した。残留生成物を５０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、７０ｍＬのリン酸塩緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）で２回抽出した。ジクロロメタン溶液を乾燥し、真空中で蒸発させて、褐色がかった油状の残渣を得た。この粗生成物を、ヘキサン（１５ｍＬ）を用いて３０分間粉砕した。回収された黄色の粉末を熱ＩＰＡから結晶化して純粋な生成物を得た（２６ａ；１．２ｇ、収率５９％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間10.8分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.23 (s, 9H), 1.32 (s, 12H), 1.36 (s, 12H), 1.74 (s, 5H), 2.31 (t, 2H), 2.8 (m, 5H), 2.88 (t, 2H), 4.08 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 5.12 (s, 1H), 5.32 (s, 1H), 7.44 (m, 4H), 7.88 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 8.08 (m, 2H), 8.14 (m, 2H), 8.20 (s, 1H), 8.29 (s, 1H)。
工程５：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（２７ａ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（２６ａ；０．０１３ｇ、０．０１１ミリモル）を５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、５ｍＬの脱気した６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を雰囲気温度において１９時間撹拌した。残留生成物を１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、次に溶媒を真空下で除去した。ジクロロメタンによる洗浄を数回繰り返した。得られた油状の生成物を５ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で２５ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃で更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．０１２ｇの黄色の粉末（２７ａ）を得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間9.6分。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水): 956.0 (M-H2O+H)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
実施例１８：
５−トリフルオロメチル指示薬の合成：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（２７ｂ）：
工程１：２−ブロモ−４−トリフルオロメチルトルエン（２３ｂ）：
４−（トリフルオロメチル）トルエン（２２ｂ；９．０ｇ、５６ミリモル）を丸底フラスコ中に配置した。次に、２０ｍＬのＴＦＡ及び５．６ｍＬのＨ２ＳＯ４（ＴＦＡの量の２８％）を加えた。ＮＢＳ（１０．０ｇ、５６ミリモル、１等量）を反応混合物に少しずつ加えた。反応を雰囲気温度において１晩進行させた。２０時間後に反応を終了した。反応混合物を氷冷水（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、Ｅｔ２Ｏで抽出することによって有機層（油状残渣）を水層から分離した。エーテル層を回収し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒を除去した。純粋な生成物（７．８６ｇ、収率５９％）が僅かに黄色の油状物として回収された。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間11.7分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 2.45 (s, 3H), 7.34 (d, 1H), 7.50 (d, 1H) , 7.80 (s, 1H)。
工程２：６−メチル−３−（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２４ｂ）：
２−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）トルエン（２３ｂ；５ｇ、２１ミリモル）を丸底フラスコ中に配置し、１５０ｍＬのＤＭＦ中に溶解した。次に、ＫＯＡｃ（６．２ｇ、６３ミリモル、３等量）を反応混合物に１回で加え、次にＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（０．４６ｇ、０．６３ミリモル、０．０３等量）及びビス（ピナコラート）ジボロン（５．９ｇ、２３．１ミリモル、１．１等量）を加えた。溶液を８０℃において４８時間撹拌した。次に、溶媒を除去し、黒色の残渣をプラグカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）にかけて暗緑色の油状残渣を得た。この化合物を第２のカラムクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって更に精製した。純粋な生成物（３．５ｇ、５８％）が僅かに緑色の油状物として回収された。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間7.9分（ボロン酸について）及び12.6分（ピナコールエステルについて）。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.35 (s, 12H), 2.58 (s, 3H), 7.26 (d, 1H), 7.55 (d, 1H), 8.00 (s, 1H)。
工程３：６−（ブロモメチル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２５ｂ）：
６−メチル−３−（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２４ｂ；３．０ｇ、１０ミリモル）及び６０ｍＬのＣＣｌ４を５００ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。ＮＢＳ（１．９、１０．５ミリモル、１．０５等量）及びＡＩＢＮ（０．０２ｇ、０．１４ミリモル、０．０１４等量）を加え、反応混合物を７５Ｗの白熱電球の存在下で４．５時間還流した。４．５時間後、溶液を室温に冷却してスクシンイミドを沈殿させた。固体を濾別した。溶媒を除去し、油状の生成物を回収した。この粗生成物を、ヘキサンを用いて粉砕することによって精製して、純度８０％の生成物（２５ｂ；３．６ｇ、収率９５％）を得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間8.7分（ボロン酸について）及び12.4分（ピナコールエステルについて）。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.38 (s, 12H), 4.91 (s, 2H), 7.50 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 8.06 (s, 1H)。
工程４：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（２６ｂ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；１．０ｇ、２．０ミリモル）を、１５０ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。これを１５ｍＬの脱気ジメチルホルムアミド中に溶解した。６−（ブロモメチル）−３−（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２５ｂ；１．７５ｇ、４．８ミリモル、２．４等量）を５ｍＬのＮ２散布ＤＭＦ中に溶解し、反応フラスコに加えた。溶液を撹拌し、Ｎ２で５分間フラッシュした。ＤＩＥＡ（２．８ｍＬ、１６ミリモル、８．０等量）を反応混合物に加え、溶液を、窒素の緩流下、暗所において雰囲気温度で１晩撹拌した。２４時間後、溶媒を真空中で除去した。残留生成物を１０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、１５ｍＬのリン酸塩緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）で３回抽出した。ジクロロメタン溶液を乾燥し、真空中で蒸発させて、金色の油状残渣を得た。この粗生成物を１０ｍＬのヘキサンと共に１５分間撹拌し、次に溶媒を除去した。回収された黄色の粉末を熱ＩＰＡから結晶化して純粋な生成物を得た（２６ｂ；１．２ｇ、収率５５％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間8.1分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.29 (s, 9H), 1.31 (s, 12H), 1.35 (s, 12H), 1.55 (bs, 3H), 1.73 (m, 2H), 2.52 (m, 4H), 2.91 (t, 2H), 3.10 (q, 2H), 3.95 (s, 2H), 4.05 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.97 (s, 2H), 5.05 (t, 1H), 7.42-7.47 (m, 6H), 7.54 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.34 (m, 2H), 8.39 (m, 2H)。
工程５：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（２７ｂ）：
９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（２６ｂ；０．３９ｇ、０．３７ミリモル）を１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、２０ｍＬの脱気した６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を雰囲気温度において２３時間撹拌した。残留生成物を１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、次に溶媒を真空下で除去した。ジクロロメタンによる洗浄を数回繰り返した。粉末を１０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で８０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃で更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．３３ｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を１０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、１００ｍＬの丸底フラスコに移した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．１９ｇ、１等量）をフラスコに加え、反応混合物を雰囲気温度において１６時間振盪した。ビーズを濾過し、５ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（２７ｂ；０．２７ｇ、７２％）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間7.2分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.33 (s, 12H), 1.39 (s, 12H), 1.60-1.63 (m, 5H), 2.33 (t, 2H), 2.47 (t, 2H), 2.85-2.96 (m, 4H), 4.05 (s, 2H), 4.33 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 5.03 (s, 1H), 5.18 (s, 1H), 5.52 (bt, 1H,), 7.35-7.43 (m, 4H), 7.55-7.66 (m, 2H), 7.68 (d, 1H), 7.77-7.88 (m, 3H), 8.03 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.30 (m, 2H)。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水): 820.12 (M-H2O+H)+：ビスボロンについて。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。
実施例１９：
５−フルオロ指示薬の合成：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−フルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−フルオロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（３２ａ）：
工程１：３−フルオロ−６−メチルフェニルボロン酸ピナコールエステル（２９ａ）：
３−フルオロ−６−メチルフェニルボロン酸（１０ｇ、６５ミリモル）及び２２０ｍＬのジエチルエーテルを、丸底フラスコ中に配置した。次に、ピナコールを加え（７．６８ｇ、６５ミリモル、１等量）、得られた反応混合物を、溶液が明澄になるまで数分間撹拌した。最後に、ＭｇＳＯ４（１５．６ｇ、１３０ミリモル、２等量）を加え、溶液を、雰囲気温度において、Ｎ２バルーン下で１晩撹拌した。２４時間後、反応を終了した。ＭｇＳＯ４を濾別し、Ｅｔ２Ｏで洗浄した。有機層を回収し、次に溶媒を除去した。純粋な生成物（１５．２ｇ、収率９９％）が暗黄色の油状残渣として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間6.1分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.34 (s, 12H), 2.48 (s, 3H), 6.97 (ddd, 1H), 7.09 (dd, 1H), 7.43 (dd, 1H)。
工程２：６−（ブロモメチル）−３−フルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（３０ａ）：
３−フルオロ−６−メチルフェニルボロン酸ピナコールエステル（２９ａ；５．０１ｇ、２１．２ミリモル）及び１４０ｍＬのＣＣｌ４を、５００ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。ＮＢＳ（３．９７ｇ、２２．３ミリモル、１．０５等量）及びＡＩＢＮ（０．０５４ｇ、０．３３ミリモル、０．０１６等量）を加え、反応混合物を７５Ｗの白熱電球の存在下で３．５時間還流した。３．５時間後、溶液を室温に冷却してスクシンイミドを沈殿させた。固体を濾別した。溶媒を除去し、油状の生成物を回収した。カラムクロマトグラフィー（９５／５のヘキサン／酢酸エチル）による精製によって純粋な生成物（３０ａ；５．５９ｇ、収率８４％）が得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間7.2分（遊離ボロン酸について）及び12.1分（ピナコールエステルについて）。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.36 (s, 12H), 4.88 (s, 2H), 7.04-7.09 (ddd, 1H), 7.33-7.37 (dd, 1H), 7.47-7.50 (dd, 1H)。
工程３：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−フルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−フルオロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３１ａ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；１．０ｇ、２．０４ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、１６ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。６−（ブロモメチル）−３−フルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（３０ａ；１．９６、６．２２ミリモル、３．０等量）及びＤＩＥＡ（２．８ｍＬ、１６ミリモル、８．０等量）を加え、Ｎ２下、暗所において室温で２４時間撹拌した。真空下でＤＭＦを除去し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を加え、リン酸塩緩衝液（０．１Ｍの４０ｍＬ、ｐＨ７．０）で洗浄した。回収されたジクロロメタン溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。ジクロロメタンを真空下で除去し、得られた黄色の残渣を、Ｎ２の緩流下でヘキサン（１０ｍＬ）を用いて１５分間粉砕した。粗生成物（１．６ｇ）を熱ＩＰＡから２回結晶化させて、ＨＰＬＣによっておよそ９８．６％の純度の黄色の粉末（３１ａ；０．８９ｇ、収率４５％）を得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間7.3分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.29 (s, 9H), 1.31 (s, 12H), 1.35 (s, 12H), 1.55 (bs, 3H), 1.72 (m, 2H), 2.54 (m, 4H), 2.92 (t, 2H), 3.09 (q, 2H), 3.95 (s, 2H), 4.03 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 5.05 (t, 1H), 7.42-7.46 (m, 6H), 7.54 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.90 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.32 (m, 2H), 8.38 (m, 2H)。
工程４：９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−フルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−フルオロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（３２ａ）：
９−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−フルオロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−４−フルオロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３１ａ；０．７９ｇ、０．８２ミリモル）を１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、３０ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を雰囲気温度において１晩撹拌した。２４時間後、溶媒を真空下で除去した。残留生成物を１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、次に真空下で溶媒を除去した。生成物が黄色の粉末になるまで、ジクロロメタンへの溶解／蒸発処理を繰り返した。粉末を３０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃で更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．７ｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を２０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、１００ｍＬの丸底フラスコに移した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．４４ｇ、１等量）をフラスコに加え、反応混合物を雰囲気温度において１６時間振盪した。ビーズを濾過し、５ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（０．５５ｇ、７１％）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間6.4分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.33 (s, 12H), 1.37 (s, 12H), 1.56 (t, 2H), 1.62 (s, 3H), 2.24 (t, 2H), 2.43 (t, 2H), 2.86 (m, 2H), 4.00 (s, 2H), 4.27 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.89 (t, 1H), 5.12 (s, 1H), 5.48 (m, 1H), 7.12 (ddd, 1H), 7.29 (ddd, 1H), 7.38 (m, 4H), 7.44-7.52 (m, 2H), 7.57 (dd, 1H), 7.69 (dd, 1H), 7.83 (m, 2H), 8.24 (m, 2H)。
実施例２０：
４−クロロ指示薬の合成：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−クロロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−クロロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（３２ｂ）：
工程１：４−クロロ−２−メチルフェニルボロン酸ピナコールエステル（２９ｂ）：
４−クロロ−２−メチルフェニルボロン酸（５．０ｇ、２９ミリモル）及び１００ｍＬのジエチルエーテルを、丸底フラスコ中に配置した。次に、ピナコールを加え（３．４３、２９ミリモル、１等量）、得られた反応混合物を、溶液が明澄になるまで数分間撹拌した。最後に、ＭｇＳＯ４（６．９８、５８ミリモル、２等量）を加え、溶液を、雰囲気温度において、Ｎ２バルーン下で１晩撹拌した。２４時間後、反応を終了した。ＭｇＳＯ４を濾別し、Ｅｔ２Ｏで洗浄した。有機層を回収し、次に溶媒を除去した。純粋な生成物（７．２ｇ、収率９７％）が白色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間12.6分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.33 (s, 12H), 2.50 (s, 3H), 7.14 (m, 2H) , 7.68 (d, 1H)。
工程２：２−（ブロモメチル）−４−クロロフェニルボロン酸ピナコールエステル（３０ｂ）：
４−クロロ−２−メチルフェニルボロン酸ピナコールエステル（２９ｂ；７．２ｇ、２８．５ミリモル）及び１００ｍＬのＣＣｌ４を、５００ｍＬの丸底フラスコ中に配置した。ＮＢＳ（５．３ｇ、２９．９ミリモル、１．０５等量）及びＡＩＢＮ（０．０６６ｇ、０．３９９ミリモル、０．０１４等量）を加え、反応混合物を７５Ｗの白熱電球の存在下で６時間還流した。６時間後、溶液を室温に冷却してスクシンイミドを沈殿させた。固体を濾別した。溶媒を除去し、生成物を回収した（３０ｂ；９．３ｇ、収率９９％）。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間8.05分（遊離ボロン酸について）及び12.4分（ピナコールエステルについて）。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.36 (s, 12H), 4.85 (s, 2H), 7.24-7.28 (m, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.74 (d, 1H)。
工程３：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−クロロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−クロロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３１ｂ）：
９−［Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（１；１．０ｇ、２．０４ミリモル）を、１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、１５ｍＬのジメチルホルムアミド中で溶解するまで撹拌した。２−（ブロモメチル）−４−クロロフェニルボロン酸ピナコールエステル（３０ｂ；１．８、４．８９ミリモル、２．４等量）及びＤＩＥＡ（２．７８ｍＬ、１６．３ミリモル、８．０等量）を加え、Ｎ２下、暗所において室温で２４時間撹拌した。真空下でＤＭＦを除去し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）を加え、リン酸塩緩衝液（０．１Ｍの１００ｍＬを２回、ｐＨ７．０）で洗浄した。回収されたジクロロメタン溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。ジクロロメタンを真空下で除去し、得られた黄色の残渣を、Ｎ２の緩流下でヘキサン（１０ｍＬ）を用いて３０分間粉砕した。粗生成物（１．９ｇ）を熱ＩＰＡから結晶化させて明桃色の粉末（３１ｂ；１．６ｇ、収率７９％）を得た。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間7.7分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.27 (s, 9H), 1.31 (s, 12H), 1.35 (s, 12H), 1.50 (bs, 3H), 1.66 (m, 2H), 2.44 (t, 2H), 2.53 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 3.06 (q, 2H), 3.93 (s, 2H), 4.02 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.87 (s, 1H), 4.92 (bs, 1H), 5.00 (t, 1H), 7.09-7.15 (dd, 1H), 7.22-7.26 (dd, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.42-7.48 (m, 4H), 7.53 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.72 (d, 1H), 8.30-8.39 (m, 4H)。
工程４：９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−クロロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−クロロベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセンナトリウム塩（３２ｂ）：
９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−クロロベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−クロロベンジル］−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチルアミノ］メチル］アントラセン（３１ｂ；１．０ｇ、１０．０９ミリモル）を１００ｍＬの丸底フラスコ中に配置し、２０ｍＬの６０：４０のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ溶液中に溶解した。反応混合物を、雰囲気温度においてＮ２バルーン下で１晩撹拌した。２０時間後、溶媒を真空下で除去した。残留生成物を１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、次に真空下で溶媒を除去した。生成物が黄色の粉末になるまで、ジクロロメタンへの溶解／蒸発処理を繰り返した。粉末を３０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、温度が５℃より低く保持されるような速度で、８０ｍＬのＮａＨＣＯ３冷飽和水溶液中に滴加した。溶液を＜５℃で更に５分間撹拌し、次に層分配を行った。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して０．７ｇの黄色の粉末を得た。この粗生成物を２０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、１００ｍＬの丸底フラスコに移した。ＰＳ−ＤＥＡＭビーズ（０．４２ｇ、１等量）をフラスコに加え、反応混合物を雰囲気温度において１６時間振盪した。ビーズを濾過し、５ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機溶液を合わせて真空下で濃縮した。純粋な生成物（３２ｂ；０．５５ｇ、５７％）が黄色の粉末として得られた。
構造決定：
RP-HPLC条件：HP 1100 HPLCクロマトグラフ、ガードカラムを有するWaters 3.9×150mm NovaPak HR C18カラム、注入量0.010mL、1.5mL／分、注入ループ1.500mL、検出254nm、Ａ＝水(0.1% v/v TFA)及びＢ＝MeCN(0.1% v/v TFA)、勾配：1分で10% B；9分で10〜80% B；1分で80〜100% B；1分で100% B、保持時間6.9分。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 1.34 (s, 12H), 1.37 (s, 12H), 1.56 (t, 2H), 1.62 (bs, 3H), 2.32 (t, 2H), 2.46 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.91 (q, 2H), 4.03 (s, 2H), 4.29 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 5.00 (t, 1H), 5.10 (s, 1H), 5.44 (bt, 1H), 7.24 (m, 1H), 7.40-7.46 (m, 5H), 7.53 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.84 (m, 2H), 7.96 (d, 1H) , 8.24-8.34 (m, 2H)。
ESI-MS (TFA/アセトニトリル/水): 752.23 (M-H2O)+：ビスボロン酸について。この分析の酸性条件下ではボロン酸エステルは観察されない。

Claims (28)

  1. （ａ）ボロン酸残基を含む芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有するアリールボロン酸残基を有していて、１以上の電子吸引基を有しない対応する分子と比較して増加した耐酸化性を有する分子を得て；そして
    （ｂ）１以上の電子吸引基を有する分子を酸化条件にかける；
    ことを含む、酸化条件下で分子を用いる方法。
  2. 電子吸引基が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロ置換アルキル、カルボン酸、エステル、スルホン酸、ケトン、アルデヒド、スルホンアミド、スルホン、スルホニル、スルホキシド、ハロ置換スルホン、ハロ置換アルコキシ、ハロ置換ケトン、アミド、又はこれらの組み合わせ；の１以上を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有する分子が検出可能な基を更に含む、請求項１に記載の方法。
  4. 検出可能な基がアントラセン残基を含む、請求項３に記載の方法。
  5. 芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有する分子が、哺乳動物内に移植される装置と結合している、請求項１に記載の方法。
  6. 装置が生体内のグルコースの存在又は濃度を測定するものである、請求項５に記載の方法。
  7. 芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有する分子が、
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（４ｃ）；
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（２１）；
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（２７ａ）；
    又はこれらの残基若しくは塩を含む、請求項１に記載の方法。
  8. 酸化雰囲気中の試料中の分析対象物の存在又は濃度を検出する方法であって、
    （ａ）ボロン酸残基を含む芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有するアリールボロン酸残基を含んでいて、指示薬分子が１以上の電子吸引基を有しない対応する分子と比較して増加した耐酸化性を有する、指示薬分子を分析対象物に曝露すると変化する検出可能な性質を有する指示薬分子に試料を曝露し；そして
    （ｂ）該検出可能な性質の変化を測定して、それによって該試料中の該分析対象物の存在又は濃度を測定する；
    ことを含む上記方法。
  9. 電子吸引基が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロ置換アルキル、カルボン酸、エステル、スルホン酸、ケトン、アルデヒド、スルホンアミド、スルホン、スルホニル、スルホキシド、ハロ置換スルホン、ハロ置換アルコキシ、ハロ置換ケトン、アミド、又はこれらの組み合わせ；の１以上を含む、請求項８に記載の方法。
  10. 検出可能な性質の変化が光学変化である、請求項８に記載の方法。
  11. 分析対象物がグルコースである、請求項８に記載の方法。
  12. 芳香族部分の上に１以上の電子吸引基を有する分子が、
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（４ｃ）；
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（２１）；
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（２７ａ）；
    又はこれらの残基若しくは塩を含む、請求項８に記載の方法。
  13. 次式：
    （式中、
    それぞれのＡｒはアリール基であり；
    それぞれのＲ１及びＲ２は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
    ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１〜１０の整数であり；
    Ｒ４は、検出可能な部分であり；そして
    それぞれのＲは、独立して、０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する結合基であり、少なくとも１つのＲは重合性モノマー単位を更に含む）
    の構造を有し、１以上の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する化合物。
  14. Ｒ１及びＲ２が、それぞれ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロ置換アルキル、カルボン酸、エステル、スルホン酸、ケトン、アルデヒド、スルホンアミド、スルホン、スルホニル、スルホキシド、ハロ置換スルホン、ハロ置換アルコキシ、ハロ置換ケトン、アミド、又はこれらの組み合わせ；の１以上を含む、請求項１３に記載の化合物。
  15. Ｒ４がアントラセン残基を含む、請求項１３に記載の化合物。
  16. 化合物が、
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（４ｃ）；
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（２１）；
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（２７ａ）；
    又はこれらの残基若しくは塩を含む、請求項１３に記載の化合物。
  17. 次式：
    （式中、
    それぞれのＡｒはフェニル以外のアリール基であり；
    それぞれのＲ１及びＲ２は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
    ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１〜１０の整数であり；
    Ｒ４は、検出可能な部分であり；そして
    それぞれのＲは、独立して、０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する結合基であり、少なくとも１つのＲは固体支持体又はポリマーマトリクスに結合することのできる結合基を更に含む）
    の構造を有し、１以上の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する化合物。
  18. Ｒ１及びＲ２が、それぞれ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロ置換アルキル、カルボン酸、エステル、スルホン酸、ケトン、アルデヒド、スルホンアミド、スルホン、スルホニル、スルホキシド、ハロ置換スルホン、ハロ置換アルコキシ、ハロ置換ケトン、アミド、又はこれらの組み合わせ；の１以上を含む、請求項１７に記載の化合物。
  19. Ｒ４がアントラセン残基を含む、請求項１７に記載の化合物。
  20. 酸化雰囲気中の分析対象物の存在又は濃度を検出するための指示薬巨大分子を製造する方法であって、
    （ａ）個々は、水性雰囲気中において該分析対象物の存在又は濃度を検出するために用いることが可能であるほど十分には水溶性でなく、次式：
    （式中、
    それぞれのＡｒはアリール基であり；
    それぞれのＲ１及びＲ２は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
    ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１〜１０の整数であり；
    Ｒ４は、検出可能な部分であり；そして
    それぞれのＲは、独立して、０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する結合基であり、少なくとも１つのＲは重合性モノマー単位を更に含む）
    の構造を有する化合物を含む１種類以上の指示薬成分モノマー；及び
    （ｂ）１種類以上の親水性モノマー；
    を共重合して、得られる巨大分子が水性雰囲気中で該分析対象物の存在又は濃度を検出することができるようにする；
    ことを含み、該化合物は、１以上の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する、上記方法。
  21. Ｒ１及びＲ２が、それぞれ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロ置換アルキル、カルボン酸、エステル、スルホン酸、ケトン、アルデヒド、スルホンアミド、スルホン、スルホニル、スルホキシド、ハロ置換スルホン、ハロ置換アルコキシ、ハロ置換ケトン、アミド、又はこれらの組み合わせ；の１以上を含む、請求項２０に記載の方法。
  22. Ｒ４がアントラセン残基を含む、請求項２０に記載の方法。
  23. 化合物が、
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（４ｃ）；
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−３−（トリフルオロメチルスルホニル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（２１）；
    ９−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［３−（メタクリルアミド）プロピルアミノ］メチル］−１０−［Ｎ−［６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラノ）−２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−Ｎ−［２−（カルボキシエチル）アミノ］メチル］アントラセン（２７ａ）；
    又はこれらの残基若しくは塩を含む、請求項２０に記載の方法。
  24. 次式：
    （式中、
    Ａｒはアリール基であり；
    それぞれのＲ１は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
    ｎは、１〜１０の整数であり；そして
    Ｒは、０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する結合基であり、結合基は重合性モノマー単位及び検出可能な部分を更に含む）
    の構造を有し、１つ又は複数の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する化合物。
  25. Ｒ１が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロ置換アルキル、カルボン酸、エステル、スルホン酸、ケトン、アルデヒド、スルホンアミド、スルホン、スルホニル、スルホキシド、ハロ置換スルホン、ハロ置換アルコキシ、ハロ置換ケトン、アミド、又はこれらの組み合わせ；の１以上を含む、請求項２４に記載の化合物。
  26. 検出可能な部分がアントラセン残基を含む、請求項２４に記載の化合物。
  27. 次式：
    （式中、
    Ａｒはアリール基であり；
    それぞれのＲ１は、同一か又は異なり、電子吸引基であり；
    ｎは、１〜１０の整数であり；そして
    Ｒはクロマトグラフィー担体への結合基であり、該結合基は０〜１０個の連続か又は分岐の炭素及び／又はヘテロ原子を有する）
    の構造を有し、１つ又は複数の電子吸引基を有しない対応する化合物と比較して増加した耐酸化性を有する化合物。
  28. Ｒ１が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ハロ置換アルキル、カルボン酸、エステル、スルホン酸、ケトン、アルデヒド、スルホンアミド、スルホン、スルホニル、スルホキシド、ハロ置換スルホン、ハロ置換アルコキシ、ハロ置換ケトン、アミド、又はこれらの組み合わせ；の１以上を含む、請求項２７に記載の化合物。
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