BRPI0713904A2 - polipeptÍdeos a partir de neisseria meningitidis - Google Patents

Abstract

POLIPEPTÍDEOS A PARTIR DE NEISSERIA MENINGITIDIS. São reveladas várias proteínas meningocócicas específicas. A invenção provê polipeptídeos relacionados, ácidos nucléicos, anticorpos e métodos. Todos esses podem ser utilizados na medicina para tratar ou prevenir doença e/ou infecção causada por meningococo, como meningite bacteriana.

Description

POLIPEPTÍDEOS A PARTIR DE NEISSERIA MENINGITIDIS

Todos os documentos citados aqui são incorporados a título de referência na íntegra.

Campo Técnico

A presente invenção refere-se ao campo de Neisseria meningitidis.

Fundamentos da Técnica

Neisseria meningitidis (meningococo) é um diplococo Gram negativo não-móvel que é patogênico em seres humanos. Coloniza a faringe e causa meningite (e ocasionalmente septicemia na ausência de meningite).

Todos os meningococos patogênicos têm uma cápsula de polissacarídeo. Esses polissacarídeos formam a base de vacinas disponíveis contra sorogrupos de meningococo A,C, W13 5 e Y, porém não são apropriados para uso contra sorogrupo B. Tem havido uma grande quantidade de pesquisa para identificar antígenos alternativos para imunizar contra sorogrupo B. Tais alternativas incluíram proteínas, o lipopolissacarídeo, e vesículas de membrana externa.

As referências 1 a 7 revelam vários polipeptídeos derivados da seqüência de genoma de um meningococo de sorogrupo B, e selecionam seqüências específicas para uso em vacinas. A seqüência de genoma para uma cepa de sorogrupo A é revelada na referência 8.

Um objetivo da invenção é o de fornecer polipeptídeos adicionais para uso no desenvolvimento de vacinas para evitar e/ou tratar infecções meningocócicas. Em particular, é um objetivo fornecer polipeptídeos para uso em vacinas aperfeiçoadas para evitar e/ou tratar meningite meningocócica. Os polipeptídeos também podem ser úteis para fins de diagnóstico, e como alvos para antibióticos.

REVELAÇÃO DA INVENÇÃO

Polipeptídeos

A invenção prove polipeptídeos compreendendo as seqüências de aminoácidos meningocócicos revelados nos exemplos. Essas seqüências de aminoácidos são as SEQ ID NOS, pares, entre 2 e 78. Há desse modo 39 seqüências de aminoácidos, e essas são mencionadas como B269_nn, onde nn

é um número entre 01 e 50 (há onze B2 6 9_nn números que não

têm seqüência: 02, 03, 04, 05, 06, 07, 08, 09, 10, 12 & 40). Duas seqüências preferidas são B269_32 e B269_37.

A invenção também provê polipeptídeos compreendendo seqüências de aminoácidos que têm identidade de seqüência para as seqüências de aminoácidos meningocócicos reveladas nos exemplos. Dependendo da seqüência específica, o grau de identidade de seqüência é preferivelmente maior do que 50% (por exemplo, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais). Esses polipeptídeos incluem homólogos, ortólogos, variantes alélicos e mutantes funcionais. Tipicamente, 50% ou mais de identidade entre duas seqüências de polipeptídeo se considera como sendo uma indicação de equivalência funcional. Para qualquer SEQ ID específica, o grau de identidade de seqüência é preferivelmente maior do que os dois valores nas colunas

(B) e (A) da Tabela II da presente invenção, e é mais preferivelmente maior do que todos os valores nas colunas

(C), (B) e (A) para aquela SEQ ID.

Esses polipeptídeos podem, comparados com as seqüências meningocócicas dos exemplos, incluir uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, etc.) substituições de aminoácidos conservativas, isto é, substituições de um aminoácido com outro que tem uma cadeia lateral relacionada. Aminoácidos geneticamente codificados são genericamente divididos em quatro famílias: (1) acídica, isto é, aspartato, glutamato; (2) básica, isto é, lisina, arginina, histidina; (3) não polar, isto é, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenil alanina, metionina, triptofano; e (4) polar inalterado, isto é, glicina, asparagina, glutamina, cistina, serina, treonina, tirosina. Fenil alanina, triptofano e tirosina são às vezes classificadas conjuntamente como aminoácidos aromáticos. Em geral, a substituição de aminoácidos únicos nessas famílias não tem um grande efeito sobre a atividade biológica. Os polipeptídeos podem incluir também uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, etc.) deleções de aminoácidos únicos em relação às seqüências meningocócicas dos exemplos. Os polipeptídeos podem incluir também uma ou mais inserções (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, etc.) (por exemplo, cada um de 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos) em relação às seqüências meningocócicas dos exemplos.

A invenção provê ainda polipeptídeos compreendendo fragmentos das seqüências de aminoácidos meningocócicas reveladas nos exemplos. Os fragmentos devem compreender pelo menos η aminoácidos consecutivos a partir das seqüências e, dependendo da seqüência específica, η é 7 ou mais (por exemplo, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 ou mais). O fragmento pode compreender pelo menos uma célula-T ou, preferivelmente, um epítopo de célula-B da seqüência. Epítopos de célula TeB podem ser identificados empiricamente (por exemplo, utilizando PEPSCAN [9,10] ou métodos similares), ou podem ser previstos (por exemplo, utilizando o índice antigênico Jameson-Wolf [11], abordagens à base de matriz [12] , TEPITOPE [13] , redes neurais [14] , OptiMer & EpiMer [15, 16] , ADEPT [17] , Tsites [18] , hidrofilicidade [19] , índice antigênico [20] ou os métodos revelados na referência 21, etc.) . Outros fragmentos preferidos são (a) os peptídeos de sinal de terminal-N dos polipeptídeos meningocócicos da invenção, (b) os polipeptídeos meningocócicos, porém sem seus peptídeos de sinais de terminal-N, (c) os polipeptídeos meningocócicos, porém sem seu resíduo de aminoácido terminal-N.

Polipeptídeos da invenção podem ser preparados de muitas maneiras, por exemplo, por síntese química (totalmente ou em parte), por digestão de polipeptídeos mais longos utilizando proteases, por tradução de RNA, por purificação a partir da cultura de células (por exemplo, a partir da expressão recombinante) , a partir do próprio organismo (por exemplo, após cultura bacteriana, ou diretamente a partir de pacientes), etc. Um método preferido para a produção de peptídeos <4 0 aminoácidos de comprimento envolve síntese química in vitro [22, 23] . Síntese de peptídeo de fase sólida é particularmente preferida, como métodos baseados na química tBoc ou Fmoc [24] . A síntese enzimática [25] pode ser também utilizada em parte ou totalmente. Como alternativa para a síntese química, a síntese biológica pode ser utilizada, por exemplo, os polipeptídeos podem ser produzidos por tradução. Isso pode ser realizado in vitro ou in vivo. Métodos biológicos são em geral restritos à produção de polipeptídeos baseados em L-aminoácidos, porém a manipulação de maquinaria de tradução (por exemplo, de moléculas de tRNA de aminoacila) pode ser utilizada para permitir a introdução de D-aminoácidos (ou de outros aminoácidos não naturais, como iodotirosina ou metil fenil alanina, azido homoalanina, etc.) [26] . Onde D-aminoácidos são incluídos, entretanto, prefere-se utilizar síntese química. Polipeptídeos da invenção podem ter modificações covalentes na extremidade-C e/ou extremidade-N.

Polipeptídeos da invenção podem assumir várias formas (por exemplo, nativa, fusões, glicosilada, não glicosilada, lipidada, não lipidada, fosforilada, não fosforilada, miristoilada, não miristoilada, monomérica, multimérica, em partículas, desnaturada, etc.).

Polipeptídeos da invenção são preferivelmente fornecidos em forma purificada ou substancialmente purificada, isto é, substancialmente livre de outros polipeptídeos (por exemplo, livre de polipeptídeos de ocorrência natural), particularmente a partir de outros polipeptídeos meningocócicos ou de células hospedeiras, e são genericamente pelo menos aproximadamente 50% puro (em peso) , e normalmente pelo menos aproximadamente 90% puro, isto é menos de aproximadamente 50% e mais preferivelmente menos de aproximadamente 10% (por exemplo, 5%) de uma composição é composta de outros polipeptídeos expressos. Polipeptídeos da invenção são preferivelmente polipeptídeos meningocócicos. Polipeptídeos da invenção têm, preferivelmente, a função indicada na Tabela 1 para a seqüência relevante.

Polipeptídeos da invenção podem ser fixados em um suporte sólido. Polipeptídeos da invenção podem compreender um rótulo detectável (por exemplo, um rótulo radioativo ou fluorescente, ou um rótulo de biotina).

0 termo "polipeptídeo" se refere a polímeros de aminoácido de qualquer comprimento. 0 polímero pode ser linear ou ramificado, pode compreender aminoácidos modificados, e pode ser interrompido por não-aminoácidos. Os termos também abrangem um polímero de aminoácido que foi modificado naturalmente ou por intervenção; por exemplo, formação de ligação de dissulfeto, glicosilação, lipidação, acetilação, fosforilação ou qualquer outra manipulação ou modificação, como conjugação com um componente de rotulação. São também incluídos na definição, por exemplo, polipeptídeos contendo um ou mais análogos de um aminoácido (incluindo, por exemplo, aminoácidos não naturais, etc.), bem como outras modificações conhecidas na técnica. Polipeptídeos podem ocorrer como cadeias únicas ou cadeias associadas. Polipeptídeos da invenção podem ser glicosilados naturalmente ou não naturalmente (isto é, o polipeptídeo tem um padrão de glicosilação que difere do padrão de glicosilação encontrado no polipeptídeo de ocorrência natural, correspondente).

A invenção provê polipeptídeos compreendendo uma seqüência -X-Y- ou -Y-X-, onde: -X- é uma seqüência de aminoácidos como definido acima e -Y- não é uma seqüência como definido acima, isto é, a invenção provê proteínas de fusão. Onde o códon de extremidade-N de uma seqüência de codificação de polipeptídeo não é ATG então aquele códon será traduzido como o aminoácido padrão para aquele códon em vez de como Met, que ocorre quando o códon é um códon de partida.

A invenção provê um processo para produzir polipeptideos da invenção, compreendendo a etapa de cultivar uma célula hospedeira da invenção sob condições que induzem expressão de polipeptídeo.

A invenção provê um processo para a produção de um polipeptídeo da invenção, onde o polipeptídeo é sintetizado em parte ou totalmente utilizando meio químico.

A invenção provê uma composição compreendendo dois ou mais polipeptideos da invenção.

A invenção também provê um polipeptídeo híbrido representado pela fórmula NH2-A-[-X-L-] n-B-COOH, onde X é um polipeptídeo da invenção como definido acima, L é uma seqüência de aminoácido ligador opcional, A é uma seqüência de aminoácido terminal-N opcional, B é uma seqüência de aminoácido terminal-C opcional, e η é um número inteiro maior do que 1. O valor de η está entre 2 e x, e o valor de χ é tipicamente 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10. Preferivelmente η é 2; 3 ou 4; mais preferivelmente 2 ou 3; mais preferivelmente, η = 2. Para cada caso de n, -X- pode ser igual ou diferente. Para cada caso de η de [-X-L-] , a seqüência de aminoácido ligador -L- pode estar presente ou ausente. Por exemplo, quando n=2 o híbrido pode ser NH2-Xx- Li-X2-L2-COOH, NH2-Xi-X2-COOH, NH2-XI-LI-X2-COOH, NH2-Xi-X2- L2COOH, etc. Seqüência(s) de aminoácido ligador -L- será, tipicamente curta (por exemplo, 2 0 ou menos aminoácidos, isto é, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6,

5, 4, 3, 2, 1). Os exemplos incluem seqüências de peptídeo curtas que facilitam clonagem, ligadores de poli-glicina (isto é, Glyn onde η = 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais),

e marcadores de histidina (isto é, Hisn onde η = 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9, 10 ou mais) . Outras seqüências de aminoácido ligador apropriadas serão evidentes para aqueles versados na técnica. -A- e -B- são seqüências opcionais que serão tipicamente curtas (por exemplo, 4 0 ou menos aminoácidos,

isto é, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Os exemplos incluem seqüências lideres para orientar tráfego de polipeptideos, ou seqüências de peptídeo curtas que facilitam clonagem ou

purificação (por exemplo, marcadores de histidina, isto é, Hisn, onde n = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais) . Outras seqüências de aminoácido terminal-N e terminal-C apropriadas serão evidentes para aqueles versados na técnica.

Vários testes podem ser utilizados para avaliar a

imunogenicidade in vivo de polipeptideos da invenção. Por exemplo, polipeptideos podem ser expressos de forma recombinante e utilizados para classificar soros de pacientes por imunoblot. Uma reação positiva entre o

polipeptídeo e soro de paciente indica que o paciente montou previamente uma resposta imune à proteína em questão, isto é, a proteína é um imunógeno. Esse método também pode ser utilizado para identificar proteínas imunodominantes.

3 0 Anticorpos A invenção provê anticorpos que se ligam a polipeptideos da invenção. Esses podem ser policlonais ou monoclonais e podem ser produzidos por qualquer meio apropriado (por exemplo, por expressão recombinante). Para aumentar a compatibilidade com o sistema imune humano, os anticorpos podem ser quiméricos ou humanizados (por exemplo, refs. 27 & 28), ou anticorpos totalmente humanos podem ser utilizados. Os anticorpos podem incluir um rótulo detectável (por exemplo, para ensaios de diagnóstico). Anticorpos da invenção podem ser fixados em um suporte sólido. Anticorpos da invenção são preferivelmente anticorpos de neutralização.

Anticorpos monoclonais são particularmente úteis em identificação e purificação dos polipeptideos individuais contra os quais são dirigidos. Anticorpos monoclonais da invenção também podem ser empregados como reagentes em imunoensaios, radioimunoensaios (RIA) ou ensaios imunosorventes ligados por enzima (ELISA), etc. Nessas aplicações, os anticorpos podem ser rotulados com um reagente analiticamente detectável como radioisótopo, uma molécula fluorescente ou uma enzima. Os anticorpos monoclonais produzidos pelo método acima podem ser também utilizados para a identificação e caracterização molecular (mapeamento de epítopos) de polipeptideos da invenção. Os anticorpos da invenção são preferivelmente

fornecidos em forma purificada ou substancialmente purificada. Tipicamente, o anticorpo estará presente em uma composição que é substancialmente livre de outros polipeptideos, por exemplo, onde menos de 90% (em peso), 3 0 normalmente menos de 60% e mais normalmente menos de 50% da composição é composta de outros polipeptídeos.

Os anticorpos da invenção podem ser de qualquer isotipo (por exemplo, IgA, IgG, IgM, isto é, mas serão genericamente IgG. No isotipo IgG, anticorpos podem ser subclasse IgGl, IgG2, IgG3 ou IgG4. Os anticorpos da invenção

Os anticorpos da invenção podem assumir várias formas, incluindo anticorpos inteiros, fragmentos de anticorpo como fragmentos F(ab')2 e F(ab), fragmentos Fv

(heterodímeros não covalentes), anticorpos de cadeia única como moléculas Fv de cadeia única (scFv), minicorpos, oligocorpos, etc. O termo "anticorpo" não indica nenhuma origem especifica, e inclui anticorpos obtidos através de processos não convencionais, como exibição de fagos.

A invenção provê um processo para detectar

polipeptídeos da invenção, compreendendo as etapas de: (a) contatar um anticorpo da invenção com uma amostra biológica sob condições apropriadas para a formação de um complexo de antígeno-anticorpo; e (b) detectar os complexos.

2 0 A invenção provê um processo para detectar

anticorpos da invenção, compreendendo as etapas de: (a) contatar um polipeptídeo da invenção com uma amostra biológica (por exemplo, uma amostra de sangue ou soro) sob condições apropriadas para a formação de um complexo de

anticorpo-antígeno; e (b) detectar os complexos.

Ácidos nucléicos

A invenção provê ácido nucléico compreendendo as seqüências de nucleotídeos meningocócicas reveladas nos exemplos. Essas seqüências de ácido nucléico são as SEQ ID

3 0 Nos impares entre 1 e 77. A invenção também provê ácido nucléico compreendendo seqüências de nucleotídeos tendo identidade de seqüência com as seqüências de nucleotídeos meningocócicas reveladas nos exemplos.

A invenção também provê ácido nucléico que pode

hibridizar ao ácido nucléico meningocócico revelado nos exemplos. Reações de hibridização podem ser executadas sob condições de diferente "severidade". Condições que aumentam severidade de uma reação de hibridização amplamente conhecida e publicada na técnica [por exemplo, página 7.52 de referência 29] . Os exemplos de condições relevantes incluem (em ordem de severidade crescente): temperaturas de incubação de 25°C, 37°C, 50°C, 55°C e 68°C; concentrações de tampão de 10 χ SSC, 6 χ SSC, 1 χ SSC, 0,1 χ SSC (onde SSC é 0.15 M NaCl e 15 mM de tampão de citrato) e seus equivalentes utilizando outros sistemas de tampão; concentrações de formamida de 0%, 25%, 50% e 75%; tempos de incubação de 5 minutos a 24 horas; 1, 2 ou mais etapas de lavagem; tempos de incubação de lavagem de 1, 2 ou 15 minutos, e soluções de lavagem de 6 χ SSC, 1 X SSC, 0,1 X SSC ou água deionizada. Técnicas de hibridização e sua otimização são bem conhecidas na arte [por exemplo, vide as referências 29-32, etc.] .

Em algumas modalidades, o ácido nucléico da invenção hibridiza com um alvo da invenção sob condições de baixa severidade; em outras modalidades hibridiza sob condições de severidade intermediária; em modalidades preferidas, hibridiza sob condições de severidade elevada. Um conjunto exemplar de condições de hibridização de baixa 3 0 severidade é 50°C e 10 χ SSC. Um conjunto exemplar de condições de hibridização de severidade intermediária é 55 cC e 1 χ SSC. Um conjunto exemplar de condições de hibridização de severidade elevada é 680C e 0,1 χ SSC.

Fragmentos compreendendo ácido nucléico dessas seqüências são também fornecidos. Esses devem compreender pelo menos η nucleotídeos consecutivos a partir das seqüências meningocócicas e, dependendo da seqüência específica, η é 10 ou mais (por exemplo, 12, 14, 15, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200 ou

mais).

A invenção provê ácido nucléico da fórmula 5'-X- Y-Z-3', onde: -X- é uma seqüência de nucleotídeos consistindo em χ nucleotídeos; -Z- é uma seqüência de nucleotídeos que consiste em ζ nucleotídeos; -Y- é uma

seqüência de nucleotídeos consistindo em (a) um fragmento de uma das SEQ ID NOS: 1 a 77, de número ímpar, ou (b) o complemento de (a); e o ácido nucléico 5'-X-Y-Z-3' não é (i) um fragmento de uma das SEQ ID NOS: 1 a 77 de número ímpar nem (ii) o complemento de (i) . As frações -X- e/ou -

2 0 Z- podem compreender uma seqüência promotora (ou seu

complemento).

A invenção também provê ácido nucléico codificando os polipeptídeo e fragmentos de polipeptídeo da invenção.

A invenção inclui ácido nucléico compreendendo

seqüências complementares às seqüências reveladas na listagem de seqüência (por exemplo, para anti-sentido ou sondagem, ou para uso como iniciadores) , bem como as seqüências na orientação efetivamente mostrada.

3 0 Ácidos nucléicos da invenção podem ser utilizados em reações de hibridização (por exemplo, Northern ou Southern blots, ou em microconjuntos de ácido nucléico ou vchips de gene') e reações de amplificação (por exemplo, PCR, SDA, SSSR, LCR, TMA, NASBA, etc.) e outras técnicas de ácido nucléico.

Ácido nucléico, de acordo com a invenção pode assumir várias formas (por exemplo, de fita única, de fita dupla, vetores, iniciadores, sondas, rotulado, etc.). Ácidos nucléicos da invenção podem ser circulares ou ramificados, porém serão genericamente lineares. A menos que de outro modo especificado ou exigido, qualquer modalidade da invenção que utiliza um ácido nucléico pode utilizar a forma de fita dupla e cada uma de duas formas de fita única, complementares, que compõem a forma de fita dupla. Iniciadores e sondas são genericamente de fita única, como são ácidos nucléicos de anti-sentido.

Ácidos nucléicos da invenção são preferivelmente fornecidos em forma purificada ou substancialmente purificada, isto é, substancialmente livre de outros ácidos nucléicos (por exemplo, livre de ácidos nucléicos de ocorrência natural), particularmente de outros Haemophilus ou ácidos nucléicos de célula hospedeira, genericamente sendo pelo menos aproximadamente 50% puro (em peso) , e normalmente pelo menos aproximadamente 90% puro. Ácidos nucléicos da invenção são preferivelmente ácidos nucléicos H. influenzae.

Ácidos nucléicos da invenção podem ser preparados de muitas maneiras, por exemplo, por síntese química (por exemplo, síntese de fosforamidite de DNA) integralmente ou 3 0 em parte, por digestão de ácidos nucléicos mais longos utilizando nucleases (por exemplo, enzimas de restrição), por junção de ácidos nucléicos mais curtos ou nucleotldeos (por exemplo, utilizando ligases ou polimerases), de bibliotecas de cDNA ou genômicas, etc.

Ácido nucléico da invenção pode ser fixado em um

suporte sólido (por exemplo, uma conta, placa, filtro, filme, lâmina, suporte de microconjuntos, resina, etc.) . Ácido nucléico da invenção pode ser rotulado, por exemplo, com um rótulo radioativo ou fluorescente, ou um rótulo de

biotina. Isso é particularmente útil onde o ácido nucléico deve ser utilizado em técnicas de detecção, por exemplo, onde o ácido nucléico é um iniciador ou como uma sonda.

O termo "ácido nucléico" em geral significa uma forma polimérica de qualquer comprimento, que contém

desoxirribonucleotídeos, ribonucleotídeos, e/ou seus análogos. Incluem-se DNA, RNA, híbridos de DNA/RNA. Também inclui análogos de DNA ou RNA, como aqueles contendo colunas modificadas (por exemplo, ácidos nucléicos de peptídeo (PNAs) ou fosforotioatos) ou bases modificadas.

2 0 Desse modo, a invenção inclui mRNA, tRNA, rRNA, ribozimas, DNA, cDNA, ácidos nucléicos recombinantes, ácidos nucléicos ramificados, plasmídeos, vetores, sondas, iniciadores, etc. Onde ácido nucléico da invenção tem a forma de RNA, pode ou não ter um cap 5'.

2 5 Ácidos nucléicos da invenção compreendem

seqüências meningocócicas, como definido acima, porém podem compreender também seqüências não meningocócicas (por exemplo, em ácidos nucléicos da fórmula 5'-X-Y-Z-3', como definido acima). Isso é particularmente útil para

3 0 iniciadores, que podem desse modo compreender uma primeira seqüência complementar a um ácido nucléico PCAV alvo e uma segunda seqüência que não é complementar ao ácido nucléico alvo. Quaisquer tais seqüências não complementares no iniciador são preferivelmente 5' para as seqüências complementares. Seqüências não complementares típicas compreendem sítios de restrição ou seqüências promotoras.

Ácidos nucléicos da invenção podem ser preparados de muitas maneiras, por exemplo, por síntese química (pelo menos em parte), por digestão de ácidos nucléicos mais longos utilizando nucleases (por exemplo, enzimas de restrição), por junção de ácidos nucléicos mais curtos (por exemplo, utilizando ligases ou polimerases), de bibliotecas de cDNA ou genômicas, etc.

Ácidos nucléicos da invenção podem fazer parte de um vetor, isto é, parte de uma construção de ácido nucléico projetada para transdução/transfecção de um ou mais tipos de células. Vetores podem ser, por exemplo, "vetores de clonagem" que são projetados para isolamento, propagação e replicação de nucleotídeos inseridos, "vetores de

2 0 expressão" que são projetados para expressão de uma

seqüência de nucleotídeos em uma célula hospedeira, "vetores virais" que são projetados para resultar na produção de um vírus recombinante ou partícula semelhante a vírus, ou "vetores shuttle", que compreendem os atributos de mais de um tipo de vetor. Vetores preferidos são plasmídeos. Uma "célula hospedeira" inclui uma célula individual ou cultura de células que pode ser ou foi um receptor de ácido nucléico exógeno. Células hospedeiras incluem progênie de uma célula hospedeira única, e a

3 0 progênie pode não necessariamente ser completamente idêntica (era morfologia ou em complemento de DNA total) à célula pai de origem devido à mutação e/ou alteração natural, acidental ou deliberada. Células hospedeiras incluem células transfectadas ou infectadas in vivo ou in vitro com ácido nucléico da invenção.

Onde um ácido nucléico é DNA, será reconhecido que "U" em uma seqüência de RNA será substituído por "T" no DNA. Similarmente, onde um ácido nucléico é RNA, será reconhecido que "T" em uma seqüência de DNA será substituída por "U" no RNA.

O termo "complemento" ou "complementar", quando utilizado em relação a ácidos nucléicos se refere a emparelhamento de base Watson-Crick. Desse modo, o complemento de C é G, o complemento de G é C, o complemento de A é T ( ou U) , e o complemento de T (ou U) é A. Também é possível utilizar bases como I (inosina purina), por exemplo, para complementar as pirimidinas (C ou T) . Os termos também indicam uma direção - o complemento de 5'- ACAGT-3' é 5'-ACTGT-3' em vez de 5'-TGTCA-3'.

Ácidos nucléicos da invenção podem ser utilizados, por exemplo: para produzir polipeptídeos; como sondas de hibridização para a detecção de ácido nucléico em amostras biológicas; para gerar cópias adicionais dos ácidos nucléicos; para gerar ribozimas ou oligonucleotídeos de anti-sentido; como iniciadores ou sondas de DNA de fita única; ou como oligonucleotídeos de formação de fita tripla.

A invenção provê um processo para produzir ácido nucléico da invenção, onde o ácido nucléico é sintetizado em parte ou totalmente utilizando meio químico. A invenção provê vetores compreendendo seqüências de nucleotideo da invenção (por exemplo, vetores de expressão ou clonagem) e células hospedeiras transformadas com tais vetores.

A invenção também provê um kit que compreende

iniciadores (por exemplo, iniciadores de PCR) para amplificar uma seqüência padrão, contida em uma seqüência de ácido nucléico de meningococo, o kit compreendendo um primeiro iniciador e um segundo iniciador, onde o primeiro iniciador é substancialmente complementar à seqüência padrão e o segundo iniciador é substancialmente complementar a um complemento da seqüência gabarito, onde as partes dos iniciadores que têm complementaridade substancial definem as extremidades da seqüência gabarito como sendo amplificadas. O primeiro iniciador e/ou segundo iniciador pode incluir um rótulo detectável (por exemplo, um rótulo fluorescente) .

A invenção também provê um kit que compreende primeiro e segundo oligonucleotideos de fita única que permitem amplificação de uma seqüência de ácido nucléico meningocócico padrão, contida em um ácido nucléico de fita única ou dupla (ou mistura dos mesmos), onde: (a) o primeiro oligonucleotídeo compreende uma seqüência iniciadora que é substancialmente complementar à seqüência de ácido nucléico gabarito; (b) o segundo oligonucleotídeo compreende uma seqüência iniciadora que é substancialmente complementar ao complemento da seqüência de ácido nucléico gabarito; (c) o primeiro oligonucleotídeo e/ou o segundo oligonucleotídeo compreende(m) seqüência que não é 3 0 complementar ao ácido nucléico gabarito; e (d) as seqüências iniciadoras definem as extremidades da seqüência gabarito como sendo amplificadas. A(s) seqüência(s) não complementar(es) de característica (c) são preferivelmente a montante de (isto é, 5' para) seqüências iniciadoras. Uma ou ambas essas seqüências (c) podem compreender um sítio de restrição [por exemplo, ref.33] ou uma seqüência promotora [por exemplo, 34] . O primeiro oligonucleotídeo e/ou o segundo oligonucleotídeo pode incluir um rótulo detectável (por exemplo, um rótulo fluorescente).

A seqüência gabarito pode ser qualquer parte de uma seqüência de genoma.

A invenção provê um processo para detectar ácido nucléico da invenção, compreendendo as etapas de: (a) contatar uma sonda nucléica, de acordo com a invenção, com uma amostra biológica sob condições de hibridização para formar duplex; e (b) detectar o duplex.

A invenção provê um processo para detectar meningococo em uma amostra biológica (por exemplo, sangue), compreendendo a etapa de contatar ácido nucléico, de acordo com a invenção, com a amostra biológica sob condições de hibridização. O processo pode envolver amplificação de ácido nucléico (por exemplo, PCR, SDA, SSSR, LCR, TMA, NASBA, etc.) ou hibridização (por exemplo, microconjuntos, blots, hibridização com uma sonda em solução,etc.).

A invenção provê um processo para preparar um fragmento de uma seqüência alvo, onde o fragmento é preparado por extensão de um iniciador de ácido nucléico. A seqüência alvo e/ou o iniciador são ácidos nucléicos da invenção. A reação de extensão de iniciador pode envolver amplificação de ácido nucléico (por exemplo, PCR, SDA, SSSR, LCR, TMA, NASBA, etc.)

Amplificação de ácido nucléico, de acordo com a invenção, pode ser quantitativa e/ou tempo real.

Para certas modalidades da invenção, ácidos nucléicos são preferivelmente pelo menos 7 nucleotideos de comprimento (por exemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 224, 250, 275, 300 nucleotideos ou mais longa).

Para certas modalidades da invenção, ácidos nucléicos são preferivelmente no máximo 500 nucleotideos em comprimento (por exemplo, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22,21, 20, 19, 18, 17, 16, 15 nucleotideos ou mais curto).

Iniciadores e sondas da invenção e outros ácidos nucléicos utilizados para hibridização são preferivelmente entre 10 e 30 nucleotideos em comprimento (por exemplo, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 nucleotideos).

Composições farmacêuticas

A invenção provê composições compreendendo: (a) polipeptideo, anticorpo, e/ou ácido nucléico da invenção; e (b) um veiculo farmaceuticamente aceitável. Essas composições podem ser apropriadas como composições imunogênicas, por exemplo, ou como reagentes de diagnóstico, ou como vacinas. Vacinas de acordo com a invenção podem ser profiláticas (isto é, para evitar infecção) ou terapêuticas (isto é, para tratar infecção), porém serão tipicamente profiláticas.

Um "veiculo farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer veículo que não induz ele próprio a produção de anticorpos prejudiciais ao indivíduo que recebe a composição. Veículos apropriados são tipicamente macromoléculas grandes, lentamente metabolizadas como proteínas, polissacarídeos, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácido, sacarose, trealose, lactose e agregados de lipídeo (como lipossomas ou gotículas de óleo). Tais veículos são bem conhecidos por aqueles com conhecimentos comuns na técnica. As vacinas também podem conter diluentes, como água, solução salina, glicerol, etc.

Adicionalmente, substâncias auxiliares, como agentes umectantes ou de emulsificação, substâncias de tamponamento de pH, e similares, podem estar presentes. Solução salina fisiológica tamponada como fosfato, isenta de pirogênio, estéril, é um veículo típico. Uma discussão completa de excipientes farmaceuticamente aceitáveis é disponível na ref. 141.

Composições da invenção podem incluir um antimicrobiano, particularmente se acondicionado em um formato de dose múltipla.

Composições da invenção podem compreender detergente, por exemplo, um Tween (polisorbato) como Tween 80. Detergentes são genericamente presentes em baixos níveis, por exemplo, <0,01%.

Composições da invenção podem incluir sais de sódio (por exemplo, cloreto de sódio) para fornecer tonicidade. Uma concentração de 10±2 mg/ml NaCl é típica.

Composições da invenção incluirão, genericamente, um tampão. Um tampão de fosfato é típico.

Composições da invenção podem compreender um álcool de açúcar (por exemplo, manitol) ou um dissacarídeo (por exemplo, sacarose ou trealose), por exemplo, em torno de 15-30 mg/mol (por exemplo, 25 mg/ml), particularmente se devem ser liofilizados ou se incluem material que foi reconstituído a partir de material liofilizado. O pH de uma composição para liofilização pode ser ajustado em torno de 6,1 antes da liofilização.

Polipeptídeos da invenção podem ser administrados em combinação com outros agentes imunorreguladores. Em particular, composições incluirão normalmente um adjuvante de vacina. Adjuvantes que podem ser utilizados em composição da invenção incluem, porém não são limitados a:

A. composições contendo mineral

Composições contendo mineral, apropriadas, para uso como adjuvantes na invenção incluem sais minerais, como sais de alumínio e sais de cálcio. A invenção inclui sais minerais como hidróxidos (por exemplo, oxiidróxidos), fosfatos (por exemplo, hidróxi fosfatos, ortofosfatos) , sulfatos, etc. [por exemplo, vide os capítulos 8 & 9 da ref. 35] ou misturas de compostos minerais diferentes, com

2 5 os compostos assumindo qualquer forma apropriada (por

exemplo, gel, cristalina, amorfa, etc.), e com adsorção sendo preferida. As composições contendo mineral também podem ser formuladas como uma partícula de sal de metal [36] .

3 0 Fosfatos de alumínio são particularmente preferidos, particularmente em composições que incluem um antígeno de sacarídeo H. influenzae, e um adjuvante típico é hidróxi fosfato de alumínio amorfo com razão molar de PO4/AI entre 0,84 e 0,91, incluído em 0, 6m Al3/ml· A adsorção com uma dose baixa de fosfato de alumínio pode ser utilizada, por exemplo, entre 50 e 100 μg Al3+ por conjugado por dose. Onde há mais de um conjugado em uma composição, nem todos os conjugados necessitam ser adsorvidos. B. Emulsões de óleo

Composições de emulsão de óleo apropriadas para uso como adjuvantes na invenção incluem emulsões de esqualeno-água, como MF59 [capítulo 10 da ref. 35; vide, também ref. 37] (5% Esqualeno, 0,5% Tween 80, e 0,5% Span 85, formulado em partículas de submícron utilizando um microfluidificador). Adjuvante de Freund completo (CFA) e o adjuvante de Freund incompleto (IFA) também podem ser utilizados.

C. Formulações de saponina [capítulo 22 da ref.

35]

Formulações de saponina também podem ser utilizadas como adjuvantes na invenção. Saponinas fazem parte de um grupo heterólogo de glicosídeos de esterol e glicosídeos de triterpenóide que são encontrados na casca, folhas, troncos, raízes e mesmo flores de uma ampla gama de espécies de plantas. Saponina a partir da casca da árvore Molina Quillaia saponaria tem sido amplamente estudada como adjuvantes. Saponina também pode ser comercialmente obtida de Smilax ornata (sarsaprilla), Gypsophilia paniculata (véu 3 0 de noiva), e Saponaria officianalis (soap root). Formulações adjuvantes de saponina incluem formulações purificadas, como QS21, bem como formulações de lipídeo, como ISCOMs. QS21 é comercializado como Stimulon™.

Composições de saponina foram purificadas utilizando HPLC e RP-HPLC. Frações purificadas específicas utilizando essas técnicas foram identificadas, incluindo QS7, QS17, QS18, QS21, QH-A, QH-B e QH-C. Preferivelmente, a saponina é QS21. Um método de produção de QS21 é revelado na ref. 38. Formulações de saponina também podem compreender um esterol, como colesterol [3 9].

Combinações de saponinas e colesteróis podem ser utilizadas para formar partículas únicas, denominadas complexos de imunoestimulação (ISCOMs) [capítulo 23 da ref. 35] . ISCOMs também incluem, tipicamente, um fosfolipídeo como fosfatidil etanol amina ou fosfatidil colina. Qualquer saponina conhecida pode ser utilizada em ISCOMs. Preferivelmente, o ISCOM inclui uma ou mais de QuilA, QHA & QHC. ISCOMs são adicionalmente descritos nas refs. 39-41. Opcionalmente, os ISCOMs podem ser isentos de detergente adicional [42].

Um exame do desenvolvimento de adjuvantes baseados em saponina pode ser encontrado nas refs. 43 & 44.

D. Virosomas e partículas semelhantes a vírus

Virosomas e partículas semelhantes a vírus (VLPs) também podem ser utilizados como adjuvantes na invenção. Essas estruturas contêm, genericamente uma ou mais proteínas a partir de um vírus opcionalmente combinado ou formulado com um fosfolipídeo. São genericamente não patogênicos, não replicantes, e genericamente não contêm nenhum do genoma viral nativo. As proteínas virais podem ser recombinantemente produzidas ou isoladas a partir de vírus inteiros. Essas proteínas virais apropriadas para uso em Virossomas ou VLPs incluem proteínas derivadas de vírus de influenza (como HA ou NA) , vírus de hepatite B (como proteínas de cápside ou núcleo), vírus de Hepatite E, vírus de sarampo, vírus Sindbis, Rotavirus, vírus de doença de febre aftosa, Retrovírus, vírus Norwalk, vírus de Papiloma humano, HIV, RNA-fagos, QP-fago (como proteínas de revestimento), GA-fago, fr-fago, AP205 fago, e Ty (como proteína pl Ty retrotransposon) . VLPs são discutidos adicionalmente nas refs. 45-50. Virosomas são discutidos adicionalmente, por exemplo, na ref. 51.

E. derivados bacterianos ou microbianos Adjuvantes apropriados para uso na invenção incluem derivados bacterianos ou microbianos como derivados não tóxicos de lipopolissacarídeo enterobacteriano (LPS), derivados de Lipídeo A, oligonucleotídeos

imunoestimuladores e toxinas de ADP-ribosilação e derivados detoxifiçados dos mesmos. 2 0 Derivados não tóxicos de LPS incluem lipídeo

monofosforila A (MPL) e MPL 3-0-desacilado (3DMPL) . 3dMPL é uma mistura de lipídeo monofosforila 3 de-O-acilado A com 4, 5 ou 6 cadeias aciladas. Uma forma de "partícula pequena" preferida de lipídeo monofosforila 3 De-O-acilado A, é revelada na ref. 52. Tais "partículas pequenas" de 3dMPL são pequenas o bastante para serem filtradas estéreis através de uma membrana de 0,22 μττι [52] . Outros derivados de LPS não tóxicos incluem simulações de lipídeo monofosforila A, como derivados de fosfato de glucosaminida aminoialquila, por exemplo, RC-529 [53, 54] . Derivados de lipídeo A incluem derivados de lipídeo A de Escherichia coli como OM-174. OM-174 é descrito, pro exemplo, nas refs. 55 & 56.

Oligonucleotídeos imunoestimuladores apropriados para uso como adjuvantes na invenção incluem seqüências de nucleotídeos contendo um motivo CpG (uma seqüência de dinucleotídeo contendo uma citosina não metilada ligada por uma ligação de fosfato a uma guanosina). RNAs de fita dupla e oligonucleotídeos contendo seqüências palindrômicas ou poli(dG) também foram mostradas como sendo

imunoestimuladoras.

Os CpG's podem incluir modificações/análogos de nucleotídeo como modificações de fosforotioato e podem ser de fita dupla ou de fita única. As referências 57, 58 e 59 revelam possíveis substituições de análogo, por exemplo, substituição de guanosina com 2'-desóxi-7-deazaguanosina. 0 efeito adjuvante de oligonucleotídeos de CpG é adicionalmente discutido nas refs. 60-65.

A seqüência de CpG pode ser dirigida a TLR9, como o motivo GTCGTT ou TTCGTT [66] . A seqüência CpG pode ser específica para induzir uma resposta imune Thl, como um CpG-A ODN, ou pode ser mais específica para induzir uma resposta de célula B, como CpG-B ODN. CpG-A e CpG-B ODNs são discutidos nas refs. 67-69. Preferivelmente, o CpG é um 2 5 CpG-A ODN.

Preferivelmente, o oligonucleotídeo CpG é construído de modo que a extremidade 5' seja acessível para reconhecimento do receptor. Opcionalmente, duas seqüências de oligonucleotídeo CgP podem ser fixadas em suas extremidades 3' para formar "imunômeros". Vide, por exemplo, refs. 66 & 70-72.

Toxinas de ADP-ribosilação bacterianas e derivados detoxifiçados das mesmas podem ser utilizados como adjuvantes na invenção. Preferivelmente, a proteína é derivada de E.coli (enterotoxina instável em calor E.coli "LT"), cólera ("CT"), ou coqueluche ("PT"). O uso de toxinas de ADP-ribosilação detoxifiçadas como adjuvantes de mucosa é descrito na ref. 73 e como adjuvantes parenterais na ref. 74. A toxina ou toxóide está pref erivelmente na forma de uma holotoxina, compreendendo subunidades tanto A como B. Preferivelmente, a subunidade A contém uma mutação de detoxificação; preferivelmente a subunidade B não é mudada. Preferivelmente, o adjuvante é um mutante LT detoxifiçado como LT-K63, LT-R72 e LT-G192. O uso de toxinas ADP-ribosilação e derivados detoxifiçados dos mesmos, particularmente LT-K63 e LT-R72, como adjuvantes pode ser encontrado nas refs. 75-82. Referência numérica para substituições de aminoácido é preferivelmente baseada nos alinhamentos das subunidades A e B de toxinas ADP- ribosilação expostas na ref. 83, especificamente incorporada aqui a título de referência na íntegra.

F. imunomoduladores humanos

Imunomoduladores humanos apropriados para uso como adjuvantes na invenção incluem citocinas, como interleucinas (por exemplo, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL- 7, IL-12 [84], etc.), interferons (por exemplo, interferon-

G. Bioadesivos e mucoadesivos

Bioadesivos e mucoadesivos também podem ser utilizados como adjuvantes na invenção. Bioadesivos apropriados incluem microesferas de ácido hialurônico esterificado [86] ou mucoadesivos como derivados reticulados de ácido poliacríIico, álcool de polivinila, polivinil pirrolidona, polissacarideos e carbóxi metil celulose. Quitosana e derivados da mesma também podem ser utilizados como adjuvantes na invenção [87].

H. Micropartxculas

Microparticulas também podem ser utilizadas como adjuvantes na invenção. Microparticulas (isto é, uma partícula de

-tóxica (por exemplo, um ácido hidróxi), um ácido poliidróxi butírico, um poliortoéster, um polianidrido, um policaprolactona, etc., com poli(lactide-co-glicolide) são preferidos, opcionalmente tratados para ter uma superfície negativamente carregada (por exemplo, com SDS) ou uma superfície positivamente carregada (por exemplo, com um detergente catiônico, como CTAB).

I. Lipossomas (capítulos 13 & 14 da ref. 35)

Os exemplos de formulações de lipossoma

2 0 apropriadas para uso como adjuvantes são descritos nas

refs. 88-90).

J. Formulações de éster de polioxietileno e éter de polioxietileno

Adjuvantes apropriados para uso na invenção incluem éteres de polioxietileno e ésteres de polioxietileno [91] . Tais formulações incluem ainda tensoativos de éster de sorbitana de polioxietileno em combinação com um octoxinol [92] bem como éteres de alquila de polioxietileno ou tensoativos de éster em combinação com

3 0 pelo menos um tensoativo não iônico adicional como octoxinol [93] . Éteres de polioxietileno preferidos são selecionados a partir do seguinte grupo: éter de laurila-9- polioxietileno (laureth 9), éter de esteoríla-9- polioxietileno, éter de esteoríla-8-polioxietileno, éter de laurila-4-polioxietileno, éter de laurila-35-polioxietileno e éter de laurila-23-polioxietileno.

K. Polifosfazeno (PCPP)

Formulações PCPP são descritas, por exemplo, nas refs. 94 e 95. L. Peptídeos de muramila

Os exemplos de peptideos de muramila apropriados para uso como adjuvantes na invenção incluem N-acetil- muramila-L-treonila-D-isoglutamina (thr-MDP), N-acetil- normuramila-L-alanila-D-isoglutamina (nor-MDP), e N- acetilmuramila-L-alanila-D-isoglutaminila-L-alanina-2- (1' - 2'-dipalmitoxla-sn-glicero-3-hidróxi fosforilóxi)-etil

amina MTP-PE.

M. Compostos de imidazoquinolona

Os exemplos de imidazoquinolona apropriados para 2 0 uso como adjuvantes na invenção incluem Imiquamod e seus homólogos (por exemplo, "Resiquimod 3M") , descritos adicionalmente nas refs. 96 e 97.

A invenção pode compreender também combinações e aspectos de um ou mais dos adjuvantes identificados acima. Por exemplo, as seguintes composições adjuvantes podem ser utilizadas na invenção: (1) uma emulsão de saponina e uma de óleo em água [98]; (2) uma saponina (por exemplo, QS21) + derivado LPS não tóxico (por exemplo, 3DMPL) [99] ; (3) uma saponina (por exemplo, QS21) + um derivado LPS não tóxico (por exemplo, 3dMPL) + um colesterol; (4) uma saponina (por exemplo, QS21) + 3dMPL + IL-12 (opcionalmente + um esterol) [100] ; (5) combinações de 3dMPL com, por exemplo, QS21 e/ou emulsões de óleo em água [101] ; (6) SAF, contendo 10% de esqualeno, 0,4% de Tween 80™, 5% de polímero de bloco-plurônico L121, e thr-MDP, microfluidifiçado em uma emulsão de submícron ou submetido a vórtice para gerar uma emulsão de tamanho de partícula maior. (7) sistema adjuvante Ribi ™ (RAS), (Ribi Immunochem) contendo 2% esqualeno, 0,2% Tween 80 e um ou mais componentes de parede de célula bacteriana a partir do grupo que consiste em monofosforilipídeo A (MPL), dimicolato de trealose (TDM), e esqueleto de parede de célula (CWS), preferivelmente MPL + CWS (Detox™) ; e (8) um ou mais sais minerais (como sal de alumínio) + um derivado não tóxico de LPS (como 3dMPL).

Outras substâncias que atuam como agentes imunoestimuladores são reveladas no capítulo 7 da ref. 35.

O uso de um adjuvante de fosfato de alumínio ou hidróxido de alumínio é particularmente preferido, e antígenos são genericamente adsorvidos nesses sais. Fosfato de cálcio é outro adjuvante preferido.

O pH das composições da invenção está preferivelmente entre 6 e 8, preferivelmente aproximadamente 7. pH estável pode ser mantido pelo uso de um tampão. Onde uma composição compreende um sal de hidróxido de alumínio, prefere-se utilizar um tampão de histidina [102]. A composição pode ser estéril e/ou isenta de pirogênio. As composições da invenção podem ser isotônicas com relação a seres humanos. 3 0 As composições podem ser apresentadas em frascos, ou podem ser apresentadas em seringas cheias-pontas. As seringas podem ser fornecidas com ou sem agulhas. Uma seringa incluirá uma única dose da composição, ao passo que um frasco pode incluir uma única dose ou múltiplas doses.

Composições injetáveis serão normalmente soluções ou suspensões líquidas. Alternativamente, podem ser apresentadas em forma sólida (por exemplo, liofilizada) para solução ou suspensão em veículos líquidos antes da inj eção.

As composições da invenção podem ser embaladas em

forma de dose unitária ou em forma de múltiplas doses. Para formas de múltiplas doses, frascos são preferidos em relação a seringas pré-cheias. Volumes de dosagem eficaz podem ser rotineiramente estabelecidos, porém uma dose humana típica da composição para injeção tem um volume de 0,5 ml.

Onde uma composição da invenção deve ser preparada extemporaneamente antes do uso (por exemplo, onde um componente é apresentado em forma liofilizada) e é 2 0 apresentado como um kit, o kit pode compreender dois frascos, ou pode compreender uma seringa cheia-pronta e um frasco, com o conteúdo da seringa sendo utilizado para reativar o conteúdo do frasco antes da injeção.

Composições imunogênicas utilizadas como vacinas compreendem uma quantidade imunologicamente eficaz de antígeno(s), bem como quaisquer outros componentes, conforme necessário. Por "quantidade imunologicamente eficaz", se quer dizer que a administração dessa quantidade em um indivíduo, em uma dose única ou como parte de uma série, é eficaz para tratamento ou prevenção. Essa quantidade varia dependendo da saúde e condição física do indivíduo a ser tratado; idade, grupo taxonômico de indivíduo a ser tratado (por exemplo, primata não humano, primata, etc.), a capacidade do sistema imune do indivíduo sintetizar anticorpos, o grau de proteção desejado, a formulação da vacina, a avaliação do médico atendente sobre a situação médica, e outros fatores relevantes. Espera-se que a quantidade esteja compreendida em uma faixa relativamente ampla que pode ser determinada através de experimentos de rotina, e uma quantidade típica de cada antígeno de sacarídeo meningocócico por dose está entre 1 e 10 mg por antígeno.

Usos farmacêuticos

A invenção também provê um método de tratar um paciente, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição da invenção. O paciente pode estar em risco da doença ele próprio ou pode ser uma mulher grávida ("imunização de material").

A invenção provê ácido nucléico, polipeptídeo, ou anticorpo da invenção para uso como medicamentos (por exemplo, como composições imunogênicas ou como vacinas, incluindo para uso no tratamento ou prevenção de doença e/infecção causada por meningococo); ou como reagentes de diagnóstico. Também provê o uso de ácido nucléico, polipeptídeo, ou anticorpo da invenção na fabricação de: (i) um medicamento para tratar ou prevenir doença e/ou infecção causada por meningococo; (ii) um reagente de diagnóstico para detectar a presença de meningococo ou de anticorpos criados contra meningococo; e/ou (iii) um reagente que pode criar anticorpos contra meningococo. O meningococo pode ser de qualquer sorogrupo ou cepa, porém está preferivelmente no sorogrupo Β. A doença pode ser, por exemplo, meningite bacteriana (e particularmente meningite meningocócica) ou septicemia.

0 paciente é preferivelmente um ser humano. Onde a vacina é para uso profilático, o ser humano é preferivelmente uma criança (por exemplo, um bebê ou criança pequena) ou adolescente, por exemplo, idades de Ο- ΙΟ 18 anos; onde a vacina é para uso terapêutico, o humano é preferivelmente um adulto, por exemplo, idade de 18-55 anos. Uma vacina destinada a crianças pode ser também administrada em adultos, por exemplo, para avaliar a segurança, dosagem, imunogenicidade, etc. Um modo de verificar a eficácia de tratamento

terapêutico envolve monitorar infecção meningocócica após administração da composição da invenção. Um modo de checar a eficácia de tratamento profilático envolve monitorar respostas imunes contra um polipeptídeo administrado após 2 0 administração. A imunogenicidade de composições da invenção pode ser determinada por administrar as mesmas em sujeitos em teste (por exemplo, crianças de 12-16 meses de idade, ou modelos de animal) e então determinar parâmetros padrão incluindo títulos ELISA (GMT) de IgG. Essas respostas 2 5 imunes serão genericamente determinadas em torno de 4 semanas após administração da composição, e comparadas com valores determinados antes da administração da composição. Onde mais de uma dose da composição é administrada, mais de uma determinação pós-administração pode ser feita. Um método padrão para avaliar eficácia profilática para meningococos é o ensaio bactericida de soro (SBA). A administração resulta, preferivelmente, em um aumento em titulo de SBA para o sorogrupo relevante de pelo menos 3 vezes, e preferivelmente pelo menos 8 vezes, medido com complemento humano [103]. Se o complemento de coelho for utilizado para medir títulos de SBA então o aumento de título é preferivelmente pelo menos 128 vezes.

A administração de antígenos de polipeptídeo é um método de tratamento preferido para induzir imunidade. A administração de anticorpos da invenção é outro método de tratamento preferido. Esse método de imunização passiva é particularmente útil para crianças recém-nascidas ou para mulheres grávidas. Esse método utilizará, tipicamente, anticorpos monoclonais, que serão humanizados ou totalmente humanos.

As composições da invenção serão genericamente administradas diretamente em um paciente. A distribuição direta pode ser realizada por injeção parenteral (por exemplo, por via subcutânea, intraperitoneal, intravenosa, intramuscular ou ao espaço intersticial de um tecido), ou por via retal, oral, vaginal, tópica, transdérmica, intranasal, ocular, aural, pulmonar ou outra administração em mucosa. A administração intramuscular na coxa ou no braço superior é preferida. A injeção pode ser via uma agulha (por exemplo, uma agulha hipodérmica), porém injeção sem agulha pode ser alternativamente utilizada. Uma dose intramuscular típica é 0,5 ml.

A invenção pode ser utilizada para eliciar imunidade sistêmica e/ou de mucosa.

O tratamento de dosagem pode ser um programa de dose única ou um programa de dose múltipla. Múltiplas doses podem ser utilizadas em um programa de imunização primária e/ou em um programa de imunização de reforço. Um programa de dose primária pode ser seguido por um programa de dose de reforço. 0 timing apropriado entre doses de iniciação (por exemplo, entre 4-16 semanas) e entre iniciação e reforço, pode ser rotineiramente determinada.

Infecções bacterianas afetam várias áreas do corpo e assim as composições podem ser preparadas de várias formas. Por exemplo, as composições podem ser preparadas como injetáveis, como soluções líquidas ou suspensões. Formas sólidas apropriadas para solução ou suspensão em veículos líquidos antes da injeção também podem ser preparadas (por exemplo, uma composição liofilizada). A composição pode ser preparada para administração tópica, por exemplo, como ungüento, creme ou pó. A composição pode ser preparada para administração oral, por exemplo, como comprimido ou cápsula, ou como xarope (opcionalmente aromatizado) . A composição pode ser preparada para 2 0 administração pulmonar, por exemplo, como inalador, utilizando um pó fino ou uma pulverização. A composição pode ser preparada como supositório ou pessário. A composição pode ser preparada para administração nasal, aural ou ocular, por exemplo, como pulverização, gotas, gel ou pó [por exemplo, refs. 104 & 105] .

Componentes antigênicos adicionais de composições da invenção

A invenção também provê uma composição que compreende um polipeptídeo ou a invenção e um ou mais dos seguintes antígenos adicionais: - Um antígeno de sacarídeo a partir do sorogrupo N. meningitidis A, C, W135 e/ou Y (preferivelmente todos os quadro), como o oligossacarídeo revelado na ref. 106 a partir do sorogrupo C [vide, também, a ref. 107] ou os

oligossacarídeos da ref. 108.

Um antígeno de sacarídeo da Streptococcus pneumoniae [por exemplo, 109, 110, 111] .

- um antígeno do vírus de hepatite A, como vírus inativado [por exemplo, 112, 113] .

- um antígeno do vírus de hepatite B, como os

antígenos de superfície e/ou núcleo [por exemplo, 113, 114] .

- um antígeno de difteria, como difteria toxóide [por exemplo, capítulo 3 de ref. 115], por exemplo, o

mutante CRMi97 [por exemplo, 116] .

- um antígeno de tétano, como tétano toxóide [por exemplo, capítulo 4 da ref. 115] .

um antígeno de Bordetella pertussis, como holotoxina de coqueluche (PT) e hemaglutinina filamentosa

2 0 (FHA) de B. pertussis, também opcionalmente em combinação com pertactina e/ou aglutinogens 2 e 3 [por exemplo, ref s. 117 & 118] .

um antígeno de sacarídeo de Haemophilus influenzae B [por exemplo, 107] .

- Antígeno (s) de pólio [por exemplo, 119, 120]

como IPV.

antígenos de sarampo, caxumba e/ou rubéola [por exemplo, capítulos 9, 10 & 11 da ref. 115].

antígeno(s) de influenza, [por exemplo,

capítulo 19 da ref. 115], como as proteínas de superfície de hemaglutinina e/ou neuraminidase.

um antígeno de Moraxella catarrhalis [por exemplo, 121].

Um antígeno de proteína de Streptococcus agalactiae (estreptococo do grupo B) [por exemplo, 122, 123] .

um antígeno de saearídeo de Streptococcus agalactiae (estreptococo do grupo B).

um antígeno de Streptococcus pyogenes (estreptococo grupo A) [por exemplo, 123, 124, 125]

um antígeno de Straphylococcus aureus [por exemplo, 12 6].

A composição pode compreender um ou mais desses antígenos adicionais.

Antigenos de proteína tóxica podem ser detoxifiçados onde necessário (por exemplo, detoxificação de toxina de coqueluche por meio químico e/ou genético [118] ) .

Onde um antígeno de difteria é incluído na composição, prefere-se também incluir antígeno de tétano e antígeno de pertussis. Similarmente, onde um antígeno de tétano é incluído, prefere-se também incluir antígenos de difteria e pertussis. Similarmente, onde um antígeno de pertussis é incluído prefere-se incluir também antígenos de difteria e tétano. Combinações de DTP são assim preferidas.

Antígenos de saearídeo, preferivelmente estão na forma de conjugados. Proteínas portadoras para os conjugados incluem toxina de difteria, toxina de tétano, a proteína de membrana externa de N. meningitidis [127], peptídeos sintéticos [128, 129], proteínas de choque térmico [130, 131], proteínas de pertussis [132, 133] , proteína D a partir de H. influenzae [134], citocinas [135] , linfocinas [135] , proteínas estreptococais, hormônios [135], fatores de crescimento [135], toxina A ou B de C. difficile [136] , proteínas de absorção de ferro [137], etc. Uma proteína portadora preferida é a difteria toxóide CRMl97 [138] .

Antígenos na composição estarão, tipicamente, presentes em uma concentração de pelo menos 1 μ5/ιη1 cada. Em geral, a concentração de qualquer antígeno dado será suficiente para eliciar uma resposta imune contra aquele antígeno.

Como alternativa ao uso de antígenos de proteína nas composições imunogênicas da invenção, pode ser utilizado ácido nucléico (preferivelmente DNA, por exemplo, na forma de um plasmídeo) codificando o antígeno.

Antígenos são preferivelmente adsorvidos em um sal de alumínio.

Métodos de classificação 2 0 A invenção provê um processo para determinar se

um composto de teste se liga a um polipeptídeo da invenção. Se um composto de teste se liga a um polipeptídeo da invenção e essa ligação inibe o ciclo de vida de meningococo, então o composto de teste pode ser utilizado como um antibiótico ou como um composto principal para a elaboração de antibióticos. O processo compreenderá, tipicamente, as etapas de contatar um composto de teste com um polipeptídeo da invenção, e determinar se o composto de teste se liga ao polipeptídeo. Polipeptídeos preferidos da invenção para uso nesses processos são enzimas (por exemplo, sintetase tRNA), transportadores de membrana e polipeptídeos ribossomais. Compostos de teste apropriados incluem polipeptídeos, polipeptídeos, carboidratos, lipídeos, ácidos nucléicos (por exemplo, DNA, RNA, e formas modificadas dos mesmos), bem como compostos orgânicos pequenos (por exemplo, MW entre 200 e 2000 Da). Os compostos de teste podem ser fornecidos individualmente, porém farão, tipicamente parte de uma biblioteca (por exemplo, uma biblioteca de combinação). Os métodos para detectar uma interação de ligação incluem NMR, ensaios de ligação de filtro, ensaios de retardação de gel, ensaios de deslocamento, ressonância de plasmônio superficial, híbrido-dois inverso, etc. Um composto que se liga a um polipeptídeo da invenção pode ser testado em relação à atividade de antibiótico pelo contato do composto com bactérias de meningococo e, então, monitorando-se em termos de inibição de crescimento. A invenção também provê um composto identificado utilizando esses métodos.

Preferivelmente, o processo compreende as etapas de: (a) contatar um polipeptídeo da invenção com um ou mais compostos candidatos para fornecer uma mistura; (b) incubar a mistura para permitir interação do polipeptídeo e o(s) composto(s) candidato(s); e (c) avaliar se o composto candidato se liga ao polipeptídeo ou modula sua atividade.

2 5 Após um composto candidato ter sido identificado

in vitro como composto que se liga a um polipeptídeo da invenção então pode ser desejável executar experimentos adicionais para confirmar a função in vivo do composto em inibir crescimento e/ou sobrevivência bacteriana. Desse

3 0 modo, o método compreende a etapa adicional de contatar o composto com um meningococo e avaliar seu efeito.

0 polipeptídeo utilizado no processo de classificação pode estar livre em solução, afixado a um suporte sólido, localizado em uma superfície de célula ou localizado intracelularmente. Preferivelmente, a ligação de um composto candidato ao polipeptídeo é detectada por intermédio de um rótulo direta ou indiretamente associado ao composto candidato. 0 rótulo pode ser um fluoróforo, radioisótopo ou outro rótulo detectável. Geral

A invenção prove um meio legível por computador (por exemplo, um disco flexível, um disco rígido, um CD- ROM, um DVD, etc.) e/ou uma memória de computador e/ou um banco de dados de computador contendo uma ou mais das seqüências na listagem de seqüência.

O termo "compreendendo" abrange "incluindo" bem como "consistindo", por exemplo, uma composição "compreendendo" X pode consistir exclusivamente em X ou pode incluir algo adicional, por exemplo, X + Y. 2 0 O termo "aproximadamente" em relação a um valor

numérico χ significa, por exemplo, x±10%.

A palavra "substancialmente" não exclui "totalmente", por exemplo, uma composição que é "substancialmente isenta" de Y pode ser totalmente isenta de Y. Onde necessário, a palavra "substancialmente" pode ser omitida a partir da definição da invenção.

A identidade entre polipeptídeos é

preferivelmente determinada pelo algoritmo de busca de homologia Smith-Waterman como implementado no programa MPSRCH (Oxford Molecular), utilizando uma busca de lacuna de afinidade com parâmetros penalidade de abertura de lacuna = 12 e penalidade de extensão de lacuna = 1. A identidade entre seqüências é preferivelmente determinada, também pelo algoritmo de busca de homologia Smith-Waterman.

Os resíduos de extremidade-N nas seqüências de

aminoácidos na listagem de seqüência são dados como o aminoácido codificado pelo primeiro códon na seqüência de nucleotídeos correspondente. Onde o primeiro códon não é ATG, será entendido que será traduzido como metionina quando o códon é um códon de partida, porém será traduzido como o aminoácido não-Met indicado quando a seqüência está na extremidade-C de um associado de fusão. A invenção revela especificamente e abrange cada uma das seqüências de aminoácidos da listagem de seqüência tendo um resíduo de metionina de extremidade-N (por exemplo, um resíduo de metionina-formila) no lugar de qualquer resíduo não-Met indicado.

Códons de partida alternativos podem ser utilizados em biologia. As seqüências de aminoácido na

2 0 listagem de seqüência são baseadas em códons de partida

específicos, porém códons de partida a jusante podem ser alternativamente utilizados. Desse modo, a invenção revela e abrange, especificamente, cada uma das seqüências de aminoácido da listagem de seqüência, iniciando em qualquer resíduo de metionina a partir da seqüência que está a jusante do resíduo de terminal-N mostrado na listagem de seqüência (por exemplo, SEQ ID NOS: 5 & 10) .

Como indicado no texto acima, os ácidos nucléicos e os polipeptídeos da invenção podem incluir seqüências

3 0 que: (a) são idênticas (isto é, 100% idênticas) às seqüências reveladas na listagem de seqüência;

(b) compartilham identidade de seqüência com as seqüências reveladas na listagem de seqüência;

(c) têm 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10

alterações de aminoácido ou nucleotídeo único (deleções, inserções, substituições), que podem estar em locais separados ou podem ser contíguos, como comparado com as seqüências de (a) ou (b) ; e (d) quando alinhadas com uma seqüência específica

a partir da listagem de seqüência utilizando um algoritmo de alinhamento de pares, uma janela móvel de χ monômeros (aminoácidos ou nucleotídeos) que se movem do início (extremidade-N ou 5') para o final (extremidade-C de 3') de tal modo que para um alinhamento que se estende até ρ monômeros (onde p>x), há p-x+1 de tais janelas, cada janela tem pelo menos x.y monômeros alinhados idênticos, onde: χ é selecionado de 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200; y é selecionado de 0,50, 0,60, 0,70, 0,75, 0,80, 0,85, 0,90, 0,91, 0,92, 0,93, 0,94, 0,95, 0,96, 0,97, 0,98, 0,99; e se x.y não for um número inteiro então é arredondado até o número inteiro mais próximo. O algoritmo de alinhamento em pares preferido é o algoritmo de alinhamento global Needleman-Wunsch [139], utilizando parâmetros default (por exemplo, com penalidade de abertura de Lacuna = 10,0, e com penalidade de extensão de Lacuna = 0,5, utilizando a matriz de marcação EBLOSUM62). Esse algoritmo é convenientemente implementado na ferramenta needle no pacote EMBOSS [140]. Os ácidos nucléicos e polipeptídeos da invenção podem ter, adicionalmente, seqüências adicionais à extremidade-N/5' e/ou extremidade-C/3' dessas seqüências (a) a (d) .

A prática da presente invenção empregará, a menos que de outro modo indicado, métodos convencionais de química, bioquímica, biologia molecular, imunologia e farmacologia, nos conhecimentos da técnica. Tais técnicas são explicadas completamente na literatura. Vide, por exemplo, as referências 141-148, etc. MODOS PARA REALIZAR A INVENÇÃO

Várias seqüências de aminoácidos codificados foram identificadas no genoma da cepa M04-24 0196 de sorogrupo Β. N. meningitidis. 39 delas foram selecionadas como antígenos úteis, com base em vários critérios, e seu gene e seqüências de aminoácido são fornecidos na listagem de seqüência.

Funções biológicas previstas são fornecidas na tabela 1, porém os papéis precisos dos antígenos em biologia de meningococo não são tão importantes como sua capacidade de funcionar como imunógenos. A Tabela 1 também observa o casamento mais estreito nos genomas de sorogrupo AeB publicados nas referências 6 e 8, bem como no genoma não publicado de cepa FAM18 do sorogrupo C. Onde uma seqüência tem mais de 95% de identidade com uma seqüência conhecida (e particularmente onde tem 100% de identidade) então a invenção está mais preocupada com a identificação das propriedades antigênicas úteis da proteína do que identificação da proteína por si.

Além das anotações e comparações, características adicionais de interesse incluem: B269 17 contém um domínio de intein; B269_34 tem uma seqüência de junção em sua extremidade-C; um domínio de transmembrana está presente em B269_05, B269_10, B269_18, B269_24; e cinco domínios de transmembrana estão presentes em B269_15 e B269_29.

Utilizando a informação de seqüência da presente

invenção, as proteínas podem ser prontamente expressas em hospedeiros recombinantes e utilizadas para gerar respostas imunes utilizando técnicas conhecidas na arte.

Por exemplo, as seqüências que codificam proteínas B269_ 11, 13, 14, 15, 17, 24, 25, 26, 29, 31, 32, 34, 36, 37, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 e 59 foram inseridas nos vetores de expressão com um marcador poli- histidina terminal-C. Proteínas B269_ 14, 29, 31, 34, 37 foram também expressas em uma forma de domínio-truncado. Fusões de GST de 37, 54, 55 e 57 foram também preparadas. Proteínas expressas foram purificadas a partir de E. coli. Sem nenhuma otimização de expressão, vários graus de pureza foram vistos, por exemplo, de 20% de pureza com domínio B269_14 e B269_32, até 95% de pureza com B269_51. Expressão solúvel foi vista com proteínas B269_ 13, 24, 25, 31d0main, 32, 51, 53 e 56.

Anticorpos foram criados contra proteínas expressas por injetar os mesmos em camundongos com adjuvante completo de Freund ou hidróxido de alumínio. anti-soros foram então utilizados em western blots ou ensaios de ligação FACS contra meningococos. As seguintes proteínas B269_ poderiam ser detectadas por western blot: 13; 25; 29d0main; 51; 52 e 53. Além disso, as seguintes proteínas poderiam ser detectadas nos blots em MWs específicos: 11 (40 kDa) ; 24 (20 kDa) ; e 26 (28 kDa) . FACS revelaram as seguintes proteínas: 17; 24; 26; 2 9d0main/ 34c3oma.in / e53 .

Será entendido que a invenção foi descrita somente como exemplo e modificações podem ser feitas enquanto permanecem no escopo e espírito da invenção. Tabela 1 - Anotações aa = comprimento de polinucleotídeo

B2Ô3 SEQID M Localiza -çàO * AnotaçAo 01 2 5&Θ 0 Proteína PiIC -11 4 320 0 Ad«sina semelhante a MafA putativoadhetirv 13 β 387 C Proteína de superfamília Cuprn 14 S 420 1 Proteína de fusão-memPrana 10 670 I peptidase. família C39 16 12 331 P cts-trans isomerase peptidil-froiil puíativo 17 14 209 * Proteína hipotética conservada 18 16 265 0 Proteina de opacidade 19 18 680 I Proteína de ligaçõo-transferrina 2 20 1370 J ProteMa relacionada a hemaglutinina-hemo Iisina 21 22 734 I Proteína relacionada a hemaglutinina-hemolisina 22 24 887 5 Proteína relacionada a hemaglutinina-hemolisina 23 26 794 S Proteína relacionada a hemaglutinina-hemolisina 24 28 206 C Proteína hipotética conservada 76 30 1S02 a Proteína semelhante a heroolisina HIyJ protein 26 32 257 G Proteína hipotética conservada TIGR00294 27 34 237 I transferase de Enxofre tiossulfato ρUtativo 36 402 C provável: GIcNActraneferaseIS Putativo 29 3Θ 297 0 Proteina hipotética conservada 40 226 C Pnotefna de opacidade Opal 15 31 42 59B 0 Família de região terminal-C semelhante a YadA 32 44 201 C Proteína hipotética conservada 33, 46 337 I Glicolsil transferase putativo 34 48 529 C Proteína regulada por ferro frpA 50 676 C Proteína de ligação de transferrinaflactoferrina B 36 52 203 « mucina 3? 54 340 C Protefne hipotética conservada 38 56 376 I Sensor de dois componentes putativo cinase196 39 58 340 P Região de ligaçãoATP. sem elh arte a ATPase- HisedIna cinase A, N- twminal 41 60 1033 P proteína PiIC 42 62 333 0 Proteína hipotética conservada 43 64 229 C glicosil transferase, proteína de família grupo 2 44 66 208 B Proteína hipotética conservada 45 68 476 « Proteína mafB 46 70 229 C adesina WafB 47 72 432 0 Proteína de ligação de transferTÍna B subunidade19 48 74 809 S precursor HecA Proteína semelwntea hemofcin^hemapluSnine HecA1 Putsfrvo 40 76 783 a Hemaglirtinina possível(DUF637) família 1 50 78 300 I Proteína relacionada a hemag Iutini na-hemolisiη a hemagg I uti π ι n- hemolysin-related protein *Chave de localização: 0 = membrana externa; C citoplasma; I = membrana interna; P = espaço periplásmico; S = secretada

Tabela 2 - Relação para outras seqüências meningocócicas [6, 8]

1MC58' = correspondente mais fechado a partir da referência 6.

Colunas (a) a (c) são % de correspondentes para outras seqüências: (B) = ref6; (A) = ref8; (C) = cepa FAMl8

B269 SEQID MC58 (B) (A) (C) 01 2 NMB0049 77.6 78.2 73.1 11 4 NMB0652 62,7 100 98,4 13 6 NMB1786 51 48.4 80.3 14 8 NMB0097 51.1 59.9 100 10 NMB0098 64 28.9 94.9 16 12 NMB0281 85.4 92.1 93.5 17 14 NMB0369 83.2 61.7 91.9 18 16 NMB0442 86.4 81.5 87.1 19 18 NMB0460 71.5 70.9 41.8 20 NMB1779 67.4 70 97.4 21 22 NMB1775 82.6 87.9 96 22 24 NMB1779 81.9 80.5 95.2 23 ; 26 NMB1775 79.2 89.2 88.9 24 28 NMB0515 66.1 99.5 93.7 30 NMB0585 85,5 91 90,9 26 32 NMB0803 86.8 86.8 86.8 27 34 NMB0841 84 95.4 88.1 28 36 NMB0846 89 56.1 85.1 29 38 NMB0888 87.9 79.8 85.2 40 NMB1636 80.4 81.6 92 31 42 NMB0992 87.4 90.1 94.6 32 44 nenhum 41.2 41.2 70.9 33 46 NMB1255 73 95.4 97.5 34 48 NMB1415 89.5 80.5 98.7 50 NMB1541 68.3 78.2 56.4 36 52 NMB0891 49 53.4 78.6 37 54 nenhum 30.7 33.3 100 38 56 NMB1606 82.2 80.1 87 39 58 NMB1606 83 85.9 90.9 41 60 NMB1847 80.4 81.6 78.2 42 62 NMB1870 87.4 87.4 74.2 43 64 NMB1929 48.2 48.2 48.2 44 66 NMB1992 89.9 81.5 92.8 45 68 NMB2105 89.7 88.5 95.9 46 70 NMB2105 88 96.7 OO 47 72 NMB2132 76,5 68,6 68,7 48 74 NMB0493 85,4 55 68,2 49 76 NMB1775 67,2 82,9 99,4 50 78 NMB1779 51,2 84 83,3

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SEQ ID NO: 1

atgaacgcgcaaaatctgcctgaggtaaagtgggggcaggactatagaaaattggcgc^aaaaagca^tgaacgccaatttaccc

atacgactaatttttacaccaaaaaaaacgtaagtttatcattcaataataccgatgmgttgttgctaaaaaaftacggtactgt cctrtttcggcgcggcc^cctacctgccgccctacggcaaggtttccggttttgatgacaaaaggctgaaagagcgcggcaatgcc gtttaatfggatt catacgaccgacccagggttggtaggctacagctacgaagatgttacatgcaacagcggcaa ctgtc ctgaag ttagctataaaacccaatttatcttcgataatcacca(rrrggc^aaaaagaaaacagacagcaagctggatatatacgaagacaa aagccgcgacaattcgcccatttacaaattgcaggattatccttggttgggcgtgtctttcaatttgggcggagagagctccrtc aaaccaaagagacaaggi icd ) ggtatci Illll iagcgaggatgtgacgcagcaaaatggtacacaagaccaatacaaaggca

aaaacctcgtttatacgacagaagattacaataatcagggtaatcgtaaccatcaggacaaacaccacgccatcgce illl atct c^cgccaaactgcacctgctggacaaaaaagggattaaagatatcaccgacaaaacagtgcagttgggtgtcttgaaaccgcgc atcgatttgacggaagcgtggaaaaacaggcatgggagcrtttttggtaatggtaattggacgtttgaagataaaggagcagtca gcgtcaaacttatcttgccggaagtcaaagcaggccgctgcatcaataaaccgaacccwatcccaaagccovagccctttcccc cgcactgactgcccccgcgctgtggttcggacct gtgcaaaatggtaagatggagatgtattccgctrcggtttctacctacccc gac^gtrcgagcagccgcatcttccrtcaaaatctgaaaagaaaaaacgaccccaacamcccggccgctattccctcgcagact tgagcgcgtcggagattaaaagtamgagccgactttcacagggcggcaaaccgtcatccgattggataaaggcgtacatcagat c>aa cttaaaggcmtgaggtcgaaggttrtmgggaaacmcggo^cgaovcrrtcggca ttgttagtgaa gggagcttcatg cctgatgao\gcgagtggamaaagtgctgctgccttggacggtrcgtgctttcmtgatgacggtcaatttaacacagtcaaca aagaagaaaacaacggcaagccaaaatacagtcaaaaataccgcagccgcaacaacggcaagcacgagcgcaatttgggcgacat cgtcaacagccccatcgtggcggtcggcgagtatttggctacttccgccaacgacgggatggtgcatatcttcaaaaaaagcggc ggggatgaccgcaact at agtctgaagct cagtt afarcccgggcacgatgccgcgcaaggat att caaagccaagactccaccc ttgccaaagagctgcgcgcctttgccgaaaaaagctatgtgggcgaccgctacggcgtggacggcggctttgtcttgcgccaagt cgaatg6aaagggcaaaaccgcgtgtttatgttcggcgcgatgnnnnncacacacttaattaattaa

SEQ IO NO: 2

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SEQ ID NO: 4

mqarllipiufsvfilsacgtltgipshgggkrfaveqelvaasaraavkdmulqalhgrkvalyiatogdqgsgsltggrysid alirgeyinspavrtoytypryettaettsggltglttslstlnapalsrtqsdgsgsksslglniggmgdyrnetlttn prdta flshlvqtvfflrgidvvspanadtdvfinidvfgtirnrtemhlynaetlkaqtkleyfavdrtnkkllikpktnafeaayken

yalwmgpykvskgikpteglmvdfsdiqpygnhmgnsapsveadnshegygysdeavrrhrqgqp SEQ ID NO: 5

GTGCATATTAAC'rTTTCAATGGAATATAAAGAATrTAATGAAAATTATTTATATAAAAAGCCGTTTATTTTTAAAAAAGCTTTAG ACGTAAGITCTATCTCATGGAAAGAAATTAATGAGTTGTATCAACGTGCAGACCCTACTGATTGGCAATrTAAATITCGCAAAGG GGAAAT AATCCCCAAAGAAGCCTAT GTT GAATCATrCAATGATGTGGGTAGAATACGTCAT CGGTTTAATAAAACAGCCGTAT AT CAGT ATCTGCAAGATGOTGCAACAATGGTTTATAACCGT ATTGAT AATGAGCCATTTGTTGACAGT ATTGCT AAACAAATTGCCC AGTTTGCTO\AGCACAAA CTGTTGTTAGTGGTr ATTTGGCGTTrGGT AGTTCTCCATCATATCGTAATCATTGGGATACTCGT GA TGTGTTTGCGGTT CMTTGATT GGCAAAAAACACrGGACAGTTTCTGCTCCAAATTTTGATATGCCATTGTATATGCAGCAAGCA AAAGATATGCCGC^CATTACTCCGCCrACAA«GTAGATATGGAAGTCATTTTAGAAGCAGGAGATATTTTATATATCCCGCGTG GTTGGTGGCATAATCCTATGCCTATGAATTGTGAAACATrCCATTTAGCTATTGGAACTrTTCCGCCAAATGGTTATAATTATAT GGAATGGTTGATGAAAAAAATACCTGATATCCAGAGTATTCGTCAAAATTTCATAGACTGGGAACACGACCAAAAAAATATAGAT AATGCGGCTCAGGCAGTTACTGAAATGATGAAGAACCAAGAAAATTATCAAGCATT CATACAAGATTTTTTGGGAAATCAACGCG TAAATACTGCATTTAATATGCA AATTTrTGGAAATCTGGATAATGACAGATTACCTGAAAAT AGTACAATTAAACTCAATrCGTT GGAT AACCGTACAATTAAACAAGGATATATCATAGCGAATGGCATCAAAACCAA CTTGGA CAATGATAGCCAAACGATTTTGCAA TGGArTGCTGACAAACATAGTGTTAAGTTAACrCMCTGTATGAATrrTGCCAAAATCAAAACATTAATTTGGAAAAAGTGGAAA AATTAGTGTTTGATTTGACAATGATCGATGTATTGGAATGTTTAACTGATGAAAGATAA SEQ ID NO: 6

mhinfsmeykefnenylykkpfifkkaudvssiswkexnelyqradptdwqfkfrkgeiipkeayvesfndvgrirhrfnktavy qylqdgatmvynridnepfvosxakqiaqfaqaqtvvsgylafgsspsyrimhwdtrovfavqligkkhwtvsapnfdmplymqqa kdmphxtppttvomevxleagdilyiprgwwhnpmpmncetfhlaigtfppngynymewlmkkipdiqsirqnfidwehdqknid naaqavtemmknqenyqafiqdflgnqrvntafnmqxfgnldndrlpenstiklnsldnrtikqgyiiangiktnldndsqtilq wiadkhsvkltqlyercqnqninlekveklvfdltmidvlecltder

SEQ ID NO: 7 _____

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tcaaagtaaaactggataatcagcatattcgtatatatggcacggagaagaaattgcaaattggtatgatactagaagccgatat tttgcatgagaataaacggttatatgaatggatacttgaccctttgtatcaagtaatgggaaaaatatcatag SEQ ID NO: 8

mtlfrpevfqakknrwtgqivlvrpfslqfltffavslaailvaflifgsytnkttvtgqllpttgwrvvsqdmgviahqhvmn gdfvkkgdvlftlstsrndnngsiqarllaeaelkkslseqeiimkkrvhaaektaqentvhrfc^qmqhvrnqiimqekriais ekmlekqrylakmdaiseleknsyeiallelkaglaayqreadn lareitvqqsnlknlpeqqateisqleravsvyqqeildyq qrneqtxratisgyvssinteigqqvdtnkllmsivpkesellanlyvpsraxgfvkpndkvxlryqaypyqkfghaeghvi5xa qtalgaqewtnlgniftqtaqvnepvylikvkldnqhiriygtekklqigmileadilhenkrlyewildplyqvmgkis SEQ ID NO: 9

ttggcgtgtttggtatcggtattggggtttcatggi i i i iatacggatttgcgccatttaagggcgcüi i i i ictttgtctctta aaggcgcaacattggcaga"rttggtacggtrtgctaatagcatgaatttaactgcrcgagctgttcggttggatttagatgaatt ggtaaatttgcgcttaccctgtattttacattgggatttaaat cattttgtggtgttgcatgaagttcatcgt aat cacattgtg att atgaaccctgcttcgggttggcaaaaagtgcgtatggaagaagtctcgcgctgttttacaggcatagcgttggagct attcc ctaacacgcaatttgaagagaaacacgaaacgcgtaaaattcgcatactaccgatgttgcgcggtgtggtt'ggattaaaaaggtc tttatttcagcttctgctgctggcggcagtattac^ggtgtttgctttggcaagccc i illl i iatgcaatgggtaatagatcat gccattgtatcggcagaccg1gattt attgctaa cattggcattgggttttggtttgttgatgattgtgcagcagttggtgtcat tgttgcaaacttgggcaggtatgtatttgtctacttcattgaatatccaatggaaagccaacg1'a'itccgccgc1taatggattt accrgtttcttatttcactaaacgacacttgggcgatgtggtttcacgttttggctcggtggatagtattcaaagtacgctcacr tctactttctttgtgctggtactcaacagcattatggcagtattt"aca.ttaggg'rtaatgtatttatacagccct agtttaacgg ctgttgv attggttgtntactgatttatatcggt attcgttggctggcatattatccgttacgccatgcaaccgaagaaaatat tgttcatgctgccaa gc aaagcagttatttcatggaaaccatacgcggtattcaaaccgtt aaattatttgataaaaatgcacaa cgtc^tgcggcttggctgaacttatttgttgatacmtcaac^caggtttaacíwcacaaaaactttccgcaatgttcgc) iiiig cgaacagccttttgtttggtatcgctaatattttaattgtgtattttggtgcggtttctgtgttggacggtgttrttaccgttgg ggcgttaatggcgtttatgtcctacaaaagtcagtttgagag"raaagcaggttcattgattgaccagtttgtacaaatcaaaatg ctaggattgcacgcggaacgcttggcggatattgtgctagaaaaaacggaaaacgagcagaacaacgatttcaggctgcctaaaa atttagaacactttga'i'a'rt aaaat agaaaat at atcatttcgctatgctgaaaatgaaccatacattttgcaagattt<^gt1"t aattatcaaacaaggaac^gccattgctttrgctggacattcaggctgtgggaaatctacgctcattcaaattct^ ctgaaacctgaaagcggtcacgtgttactaggcgagaatgatatrcatgcgtttccacctgcatttatccgcaaatggagcgcaa gtgtaatgcaagatgatgtgttatttgctggctcaatcgcagaaaacatcafa i i i i i t t gatgatacgcccaatatggaaaaaat cgcattttgcgctcaaatggcgaatattcatcatgaaattgtcgctatgcctatggcgtatgaaaccttaattggrgacatggga agcgcattgagcggtg6gcaaaagcagcgtattgttctagcrcgtgcn"tatatcgtgaacccaaaatttt(3 iiiiiagacgaag ccagtagccatttggacatcaacaatgaacgtgtgattaacgataatctacgccaactcaacattaccaaaatcatggtcgcgca tcgtcaggaaactttaaatactgctgatagcgtagtttatttagacaaggtagcctga SEQ ID NO: 10

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atgaaaatcaaagccctgatgattgccgccgcattgctggcagcagccgatgtccacgccgcaccgcaaaaggcaaaaaccgcat ccgccaaagctgccaaagctgccaaagctgccaaagctgccaaagctgccaaagttgccaaagttgccaaagttgccaaagttgc

caaagttgccaaagttgccaaagtrgccaaagttgccaaagttgccaaagitgccaaagttgccaaagttgccaaagttgccaaa gttgccaaagttgccgccacggcgcaaaaagaagccgcacccgcacaacagcagggcggtatccgctrrrcagacggcattgccg ccgttgccgacaacgaagtcatcacgcgccgccggcttgccgaagccgttgccgaagccaaagccaacctgcccaaagacgcgca gataagcgaatccgagctgtcccgacaggtgctgatgcagcttgtcaaccaatccctgattgtacaggcgggcaaacgccgcaac attcaagcaagcgaagcggaaatcgatgccgtcgtcgcaaaaaatcccgccctcaaaaacctcagccccgcccaacgccgcgatt ttgccgacaacatcattgccgaaaaagtccgccagcaggcagtgatgcagaacagccgagtgagcgaagctgaaatcgatgcctt cctcgagcaggcgcaaaaacaaggcatcaccctgcccgaaggcgcaccgttgcgccaataccgcgcccaacacatcctgattaaa gccgacagcgaaaacgccgccgtcggcgcggaaagcaccatccgcaaaatctacggagaggcccgcagcggcacagacttttcca gcctagcgcgccaatattcgcaagacgcgagcgcgggo^acggcggagatttgggctggtttgccgacggcgtgatggttcccgc ctttgaagaagccgtccacgcgctcaaacccggacaggtcggcgcnnnnncacacacttaa SEQ ID NO: 12

mkikalmiaaa llaaadvhaa pq kaktas ακαακαακαα kaa kaakv akvakvakvakvakvakvakvakvakvakvakvakvak vakvaataqkeaapaqqqggirfsdgiaavadnevitrrrlaeavaeakanlpkdaqiseselsrqvlmqlvnqslivqagkrrn iqas eaeidawaknpalknlspaqrrdfadniiaekvrqqavmqnsrvseaeidafleqaqkqgitlpegaplrqyraqhilik aosenaa vgaestxrkiygearsgtdfsslarqysqdasagnggdlgwfadgvmvpafeeavhalkpgqvgaxxht

SEQ ID NO: 13

ttggtcaaaacggcagacggctacaaagctattgcccgtatccgagccggcgagagcgtcctctccaaggacgaggcaagcggaa aaatgggatacaaacccgtraccgcccgatacggo\atccgtatgaagaaaccgtttacattaaagtttcagacggcatcggcaa cagccaaacccrgatttccaaccgcatccacrcgttrrattcgggcggcaaatggattaagacggaagatttgaaagcgggaatc agg ctgtt atccga aagcggcaaaacccaaaccgiccgcaacatcgttgtcaaaccaaaaccgctcaaagcctacaatctgaccg ttgctgactggcatacctacttcgtcaagggcagtcaggcggaaacggaaggggtttgggttcataatgcgtgtccgcctaaaag aacaggaagctccaagaatgaaaaacatggagatggcggtcgaaotcamtatc^gcagaatcacgaattgctgaattaaaaaat

AAAATT ATT CCCGGAATGC ACA AAAAT GAACG ATTAAA GATTGA GAAAA CAATCAGAAATATTGCAAAAAATGCCAATCGAAAAG CAAAAGGAGAAGAGCATGGTCGACACGGTCGTTAA SEQ ID NO: 14

MVKTADGYKAIARXRAGESVLSKDEASGKMGYKPWARYGNPYEETVYIKVSDGIGNSQTLISNRIHSFYSGGKWIKTEDLKAGI RLLS ES GKTCJTVRNIWKPKPLKAYNLTVADWHTYFVKGSQAETEGVWVHNACPPKRTGSSKNEKHGDGGRSQISAES RIAELKN KIIPGMHKNERLKIEKTIRNIAKNANRKAKGEEHGRHGR SEQ ID NO: 15

ATGAATCGAGCCCCCAAAAMCCTTCTCrTCTCTTCrcrrCTCTTCTCTTCTCTTCTCrTCT

c^gtgaagacagcagccgcagcccgtattatgtgcaggcggatttagcctatgccgccgaacgcattacccacaattatccgga accaaccggtgcagacaaagacaaaataagca c^ gt aagcgattatttcagaaacatccgtgcgcattccatccaccct cgggtg tcggtcggctacgactt"cggcgactggagaatagcggcaga7tatgccagttacagaaaatggaaagaíiagtaattcttctacta atgcagaaaatagagataatgcaaaaaactacgtaaagattgaaacaaaacatcaaggaaacggcagcttccacgccgcttcttc tctcggcttatccgccatttacgatttcaaactcaacgataaattcaaaccctatatcggcgcgcgcgtcgcctacggacacgtt aaacato^ggttcattcagtggaaacaaaaaccacgactítrtacctctaaaccgacggcaacctcrc

TACAAACTGATCCCAGCAAAC CTCCCTAT CACGA AAGCCAC^GCAT CAGCAGCTTGGGT CTTGGTGT CATCGCCGGTGTCGGTTT CGACATCACGCCCAAGCTGACCTTGGAWCCGGATACCGCTACCACAACTGGGGACGCTTGGAAAACACCCGCTTCAAAACCCAC GAAGTCTCATTGGGCATGCGCTACCACTTCTGA SEQ ID NO: 16

MNPAPKKPS LLFSSLl. FSSLLFSSAAQAAS EDSS RS PYYVQADLA YAAERITHNYPEPTGAOKOKISTVSDYFRNIRAHSIHPRV SVGYDFGDWRIAADYASYRKWKESNSSTNAENRDNAKNYVKIETKHQGNGSFHAASSLGLSAIYOFKLNDKFKPYIGARVAYGHV KHQVHSVETKTTTVTSKPTATSPQGGPIIQTDPSKPPYHESHSISSLGLGVIAGVGFDITPKLTLDTGYRYHNWGRLENTRFKTH EVSLGMRYHF SEQ ID NO: 17

ATGGTGCTGCCTGTGTTTTTGTTGAGTGCTTGTTTGGGCGGCGGCGGCAGTTTCGAT O-FGATT CTGTCGATACCGAAGCCCCGC GTCCCGCGCCAAAGIATC^AGATGTTIXTTCCGAAACACCGCAAGCCC^AAAAGACCAAGGCGGATACGGTTTTGCAATGCGCTT CAAGCGGCGGMTTGGCACCCAAAAAATAAAGAAGATCATAAGGCATTATCACAAGCGGATTGGGAGAAGTTAGGTGCGGGTAAG CCAGATGAG7"rTCCCCAAAAGAATGAGA"TTTCAGCGATGGATAAGGGTACGCTGAACGAATCCATCACGCCGGGCGACGGCAAAA GCCGTGCT GAAGGCTATACGGATTTC CAA TATGTCCGCTCGGGCTAT ATCT ACCGC AACGGT GT CAATAAAATCGATTACCAAAA CAATATTGCCCTTTCCGGTCCGGACGGCTACLI I I l CTACAAAGGCAGCAATCCTTCTCAAGCTCTGCCGACGGGCAAGGCGATT TACAAAGGTACTTGGGATTATGTAACCGATGCCAAGGAAAAACAGAAGTTTCCCCAGTTGGGTAGI I I ICAAGCGGGGGATAGGT ACGGGGCTCTGTCTGCCGAGGAAGAGGATGTGTTGCGCAACAAAAGCGAGGCGAAGGAAGGTCAGACCGATTTCGGGCTGACCAG CGAGTT1"GAGGTGGACTTCGCCGCCAAGACCATGACCGGCAAACTCTACCGCAATAACCGGATTACCAATAACGAAACCGAAAAT AGAGACJW\OV\ATTAAACGTTACGACATTCAGGCTAACCTGC^CGGCAACCGCTTCAACGGCAAGGCAACGGCAACCGACAAAC C7\AAAGAGAATGAAACCAAACAACATCCCTTTGTlTCCGACTCGTCn'CTTTGAGCGGCGGCTTTTTCGGCCCGCAGGGTGAGGA ATTGGGTTTCCGCTTTTTGAGCAACGATCAAAAAGTTGCCGTTGTCGGCAGCGCGAAAACCCAAGACAAAGCCGCAAATGGCAAT

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SEQ ID NO: 20

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SEQ ID NO; 21

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ttgao\ctctatgccgtagaagagctcaactacgacaaactagacagccaaaaaaggcgcagatttctcggcatcagctacagca aagcacacgacaccacc^cccaagtcatgaamccgcgctgccctcaagggtagttgcagaatcagccaatctgcaatcaggttg ggataccaaactgcaaggcacacagtttgaaaccacactgggtggcgcaaccatacgcgcaggcgtaggcgagcaggcacgggca gatgccaagattatcctcgaagggatcaaaagcagcatccacacagaaaccgtgagcagcagcaaatctactctatggcaaaaac aggcaggacggggcagtaacatcgaaaccttgcaattgccgagtttcaccggtcccgttgcgcccgtactgtccgcacccggcgg ttacatt gtcgat attccccaaggcaatctgaaaacccaaatcgaaaccctcaccaaacagcccgagt atgcttatrtgaaacaa cttcaagttgcgaaaaacatcaactggaatcaggtgcagcttgcttacgataaatgggactacaaacaggagggcttaaccgaag caggtgcggcgattatcgcactggccgttaccgtggtcacctcaggcgcaggaaccggagccgtattgggaitaaacggtgcggc cgccgccgcaaccgatgcagcatttgcctctttggccagcc^ggcttccgtatcgttcatcaacaacaaaggcaatatcggtaac accctgaaagagctgggcagaagcagcacggtgaaaaatctggtggtígccgccgctaccgcaggcgtagccgacaaaatcggcg cttcggcactgaacaatgtcagcgataagcagtggatcaacaacctgaccgtcaacctagccaatgcgggcagtgccgcactgat

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TTGCTGGGTGTGGTTCCGGGTATCGGTGAATCGATAO\GGCCTATAAAGTAGCGAAAGCGGCAAAAAATTTACAAGGCATGAAAA AAGCCTTGGACAAGGCAGCAACCGTTGCWCTGCACAGGGCTATGTCAGTAAAACCAAAATCAAAATCGGTCAAACTGAATTAAG GGTTACTGCAGCAACTGAC^AACMTTGCrGAAAGCrATTGGCGAAGGAAGGGACACGACAGGTAAAATGACCGAGCAGT^ CACT CTTTAGCT AAACAA AATGGCTTCAGAGTGCTTTCGGGCGGCAAATACGGCGGAAATAACGGIIM GATCATGTATGGCAGG CTGCCGATGGTAGTGTCG Illl GATTGTAGAAAGTAAGCAGATTAGGAACGGTACGGTACAGCTGAATCCGAATGGTGCGGGTGG ATATACGCAAATGAGTGAGGATTGGATTAGACAAGTTTTAGATCAATTACCCGATGGTAGTCCCGCTAAAGCTGCTGTCTTCAAA GC^AATAAGAACGG<^CATTAAAAACAGCAATAGCAGGCCnTGATCGTCAAACAGGTAAGGCCGTTATTCTTCCTGTCAAAGTTC CTTCTAAAACCAATATAAGGAGATAA

SEQ ID NO: 28

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aatggtaacgatgtactgaatggtggcgaaggcaatgatcatttgaacggcgaagacggtaacgacactctgatcggcggtgccg gtaatgattacttggagggcggcagcggttcggatacttatgtcttcggcaaaggcttcggtcaggatacggtctataattacga ctacgctaccggacgcaaagacatcatccgctttaccgacggtattacagccgatatgctgacttttacccgagagggcaaccat cttcttatcaaggcaaaagacggcagtggacaagtgactgttcagtcctatttccagaacgatggctcaggtgcttaccgtatcg atgagattcatttcgataacggcaaagtactggatgttgccactgtcaaagaactggtacagcaatccaccgacggctcggacag attgtatgcctaccaatccggaaataccttaaatggcggattgggcgatgactatctgtacggtgccgacggggatgacctgctg aatggtgatgcaggcaacgacagtatctacagtggcaatggcaatgatacgctcgatggaggagaaggcaacgacgccctgtacg gctataatggtaacgatgtactgaatggtggcgaaggcaatgatcatttgaacggcgaagacggtaacgacactctgatcggcgg tgcaggcaatgarr acttggagggcggcagcggttcggatacttatgtcttcggcgaaggcttcggtcaggatacggtctataat iacgactacgctaccggacgcaaagacatcatccgctttaccgacggtattacagccgatatgctgacttttacccgagagggca

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SEQ IO NO: 30

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AT GAACGCCATTGCAGACGTGCAATCCAGCCGCGATTT ACGCAACCTGCCGATIAATCAGGTCGGC ATCAAA GACCTGCGCTTTC

CAATCTCCCTTAAAAGCAAAGAAGGCGAACAATCCACCGTCGCCCACCTGACCATGACGGTTTTCCTGCCTGCCGACCAAAAAGG

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CCGATGAAAAATATGTTACCGAAAAAGCCTACGAAAACCCGAAATTCGTGGAAGATATGGTGCGTGATGTCGCTACTTCGCTGAT

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TACCCGTAG

SEQ ID NO: 32

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SEQ ID NO: 33

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SEQ ID NO: 35

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mseplhvlvipswvpqseqdvdgiffqnqalalqrkgxktavlapmfrvlrketasiltgpygfaqyrqkgldiyawhwíyffpr fplididrxrwvraglkaferyigengipdiihahcmnyagilafkisqkygipyvvtehsstitrglvrphqwqpmknaaahas allavscrfaqvlqhkygttwqylpnilgniftrafnppqinrpdkyftfctishlrrlkghdvulsafaralakhpnlrlnigg sgqeetslkrqarqlgxahavtflgalqpeavldlmrnsdafvuasrtetfgwyiealsqglpviatrcggaesivsdgngylv pvddddalaqalikmyehhsdfepdrlrenclnefgedtvigklxgifrqaiaeygkkipvk

SEQ ID NO: 37 _

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TGCGAGAATGGCGGGCGGCTTCGGTTGTTTCAATATGTCCGAGCATTCTGCAACTGATgrTATTCCCGATACGACGCAACAAAAT TCTCCTTTTTCCTTAAAAAGGAACGGTATAGATAMCTTATTCCCATAGCGGAATCTTCAAATATCGGATATCCGGATTTTACCC AGCGCCTTAACGCATTGATTTTCCAATACGGAATCWTGATGTTAATGCAAGCGCCGATACTACCGTCGTCAGCAGCTGTGCCAA AATAGCAAAACCGGGTAAGAAAATATCTACCTTGOV^GAAGOVAAGAGTGCATTACAGATTACTAATGATGATAAACAAAATGGA AATATCACCCGTCAAAGGWTGTGGTCAATGCCrATGCGGTCGGCAGGATTGCCGGTGAGGAAGGTTTGTTCCGCTTCOVATTGA ATGATAATGGGCAGTGGGGTAATCCTCAGTTGTTGGTTAAAAAGATTAATAAAATGGATATACGGTATATTTATGTTTCCAACTG

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SEQ ID NO: 38

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SEQ ID NO: 40

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SEQ ID NO: 42

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atgattgaatccatagaaaaaccacaggaatctatcagaaaaaacagaaacccccaccgcgtcattcccgcgaaagcgggaatcc agaaacgcaacgcaacaggaatttatcggaaaaaacagaaacctcaccgccgtcattcccgcaaaagctggaatccaaaaacgca acgcggcaggacttt"atcggaaaaaacagaaaccccaccgaccgtcattcccgcaaaagcgggaatccaaaaacgcaacgcaaca ggaatttatcggaaaaaacagaaaccccaccgaccgtcattcccgcaaaagcgggaatccagcaaccgaaaaaccacaggaatct atcagcaaaaacagaaacccccaccgaccgtcattcccgcgcaggcgggaatccagaaacacaacgcggcaggactttatcggaa aaaacagaaactcc^ccgaccgtcattcccgcaamgctggaatccaaaaacgcaacgcaacaggaatttatcggaaaaaacaga aaccccaccgccgtcattcccgowvagcgggaatccagacccgtcggcacggaatcttaccggataaaacagtttccttagatt ccacgtcctag SEQ ID NO: 44

MIESIEKPQESIRKNRNPHRVXPAKAGIQKRNATGIYRKKQKPHRRHSRKSWNPKTQRGRTLSEKTETPPTVIPAKAGIQKRNAT GIYRKKQKPHRPSFPQKRESSNRKTTGIYQQKQKPPPTVIPAQAGIQKHNAAGLYRKKQKLHRPSFPQKLESKNATQQEFIGKNR

N PTAVIPAKAGIQT RRHGIL PDKTVS LDSTS

SEQ ID NO: 45 __

ATGATTTTCTCCAT CAT CGTCCCT ATTT ACMTGTGGAAAMTACCTCCGCTGCTGCGTGGATTCCGTGCTTGCCGAAM IIIlG CCGATTATGAMTGATTTTGGTCGATGACGGTTCGCCGGATGGCTGCGGGAAGATTTGCGACGAATATGCAGGCAAATATCCGCA TATAAAA GTGATT CATCAAGAAAACGGCGGGCTGTCGGATGCCCGCAACGCCGGTATCCGAGCGGCAAAAGGCGATTACCTGATC TTTTTGGACAGCGACGACTATTGGGCCGATACCAACCGTTCAAAAAACGCGGGGGGGGGGATTCTCI I IGA7TTACAACAACTTG GAGACAAAAAGGTTGATTTGATCCTGCATCCCTCGTCCCTCAATTACCACGTCATCCCCAAAGGGGCGGAC Mll CGGATAATGA

TTTTGTCCGCCATTTTGAAACG'rTGGTGGAGGGGCGGTACTATATCGCCAACGCGTGGACAAAAATCGTCAGGCGGGAAATAATC

ATCAAAAACAATCTGTTTTTCCCAAAAGGATACATTCACGAGGATTTCCCGTACAGTTTGCAATTGGCGCGTTTTATCAAGAO Γ TTGCCTTTTACGATAACCCTTTTTACC^GTACCGCGTTCTCGGCGGCTCTATCAGCCACAACATCAAATACAAAAATTTCAGCGA TGTGCTGACGCATCTCGACCGGGGTGTGGATTrmAGTCGAAAACAAAAATTCCCCCATCTACGGCGGTTTGCAAAAATTTGTC TTCGA CAATATCGGCTATCTGAGGTCTATATTGGTAAGGCTTTATTTTTCOVAAAACATTATCGT CATCTACCGGAAA TA TTTV CATTTAAAGAAAAATGCAGAAAGATATTCGGCGCGAAGGCAATCCGTCCGGTTTTTATCGGGAAGACCGCATT CAT CATAGGA"rT GCCGATATTGCGCCTGCTCGTACCGCCTATGCTGTACCCGGCAATCAAGGCCGTTTATCAAAAA ι ι ι ι ι ι ICGGAATAA

SEQ ID NO: 46

MIFSIIVPIYNVEKYLRCCVDSVLAENFADYEMILVDDGSPDGCGKICDEYAGKYPHIKVIHQENGGLSDARNAGIRAAKGDYLI FLDSDDYWADTNR5KNAGGGILFDLQQLADKKVDLILH PSSLNYHVIPKGADFSDNDFVRHFETLVEGRYYIANAWTKIVRREII IKNNLFFPKGYIHEDFPYSLQLARFIKTFAFYDNPFYQYRVLGGSISHNIKYKNFSDVLTHLDRGVDFLVENKNSPIYGGLQKFV FDNIGYLRSILVRLYFSKNIIVIYRKYFSFKEKCRKIFGAKAIRPVFIGKTAFIIGLPILRLLVPPMLYPAIKAVYQKFFSE

SEQ ID NO: 47

ATGACATCTGCAAATTTT AATA TTAACGGTTTTGGAGATGTGAAATTAA CACCCT ATTCACCACTCTTGGGATATAAAGCTTGGG A T T CA r i l AT rGGTTCTATTCAATCCTTATCTGATrTAATCTATAATGTGGATAACAATAGAAATAAAATGGAAATTACTGTTAA TAATGCTATCCAAGCTGCAGATAGCFrTTTAAGCAGTATTGGAAGAGATAACAAAATAACAAATACTGCI ICII IACTTGCATCC CTCGATAACA Il I I I I IAAATTTAAGAAATGTATCTCGAGATATACGAGAAACAGGAAAATTTAAACCT AATGAT ATT CAACAAG CAATTGGTGATATATTCATTGCTGCTGGTGATGGATTAC^ATATATAAAACAACAAACAGAGGCCATGGCTCAAAGCAAATTCTT ACCAACTAAATTAAAAACTGGTITAAATGATGTCCTTAATTCTAGAATGCTAAAATCCTCTACTtj Illi ACAGCATGAATTGAAT TATTTGGGATTT AAAAT AAAGGATTATGGAAACGA GA GGCTTGGC.GAAT CTATAATGAATATAGATGATTTTACACCAAGTAAGA TAGCAAACTTTTTTGCGGATCCTGATACATACAGCAAT GT ATTAGAA GAAGTATCTAGGTTT ATAT ATTCCTTAGTTCCTGATGA TGCAAACCCTTGGAAAGGGGGCGAAGATTATATTGGACGAGGGATAAGTGAATGGGGAGAGTTACTGGAAAAATGGTATAAACAA GATTTTCTCCCTTATCTrGAAAAA GAATGGGACCAATTTCCGAAATTT GAA GATTOGCTGCCTGAATTCCCTGAATGGGCAAGAG AGTGGTTGAAATTAGATCCCAAACGTTCAGGCAAATATCATGTCTACGACCCCCTCGCCCTAGATCTAGACGGCGACGGT ATAGA AACCGTTGCCACCAAAGGCTTTGO\GGCAGCTrATTTGATCACACCAACAACGGTAtCCGCACCGCCACCGGTTGGGTTTCTGCC GATGACGGTTTACTCGTCCGCGATTTGMCGGCAACGGCATCATCGACAACGGTGCGGAACTCTTCGGCGACAACACCAAACTGG CAGACGGTTCTTTTGCCAAAO\CGGCTATGCAGCTTTGGCCGAATTGGA"rTCAAACGGCGACAACATCATCAACGCGGCAGACGC CGCATTCCAAACCCTGCGTGTATGGCAGGATCTCAATCAGGACGGCATTTCCCAAACCAACGAACTCCGCACCCTTGAAGAATTG GGTATTCAATCTTTGGATCTCGCCTATAAAGATGTAAATAAAAA1CTCGGTAACGGTAACACTTTGGCTCAGCAAGGTAGCTACA CCAAAACAAACGGTA(^ACCGCAAAAATGGGGGATTTACTTTTAGCAGCCGACAATCTGCACAGCCGCTTCAAAGACAAAGTGGA ACTCACTGCCAAACAGGCAAAAGCCGCCAATCrTGCGGGCATTGGTCGTCTGCGCGATTTGCGCGAAGCTGCCGCATTGTCCGGC GATTrGGCCAATATGCTGAAAGOTATTCTGCCGCCGAAANNNNNCACACACTTAATTAA

SEQ ID NO: 48

M 1'SAN FNINGFGDVKLTPYSPL l.GYKAWDSFIGSIQSLSDLIYNVDNNRNKMEITVNNAIQAADSFLSSIGRDNKITNT ASLLAS LDNIFLNLRNVSRDIRETGKFKPNDIQQAIGDIFIAAGDGLQYIKQQTEAMAQSKFLPTKLKTGLNDVLNSRMLKS5TVLQHELN YLGFKIKDYGNERLGESIMNIDDFTPSKIANFFADPDTYSNVLEEVSRFIYSLVPDDANPWKGGEDYIGRGISEWGELLEKWYKQ DFLPYLEKEWDQFPKFEDWLPEFPEWAREWLKLDPKRSGKYHVYDPLALDLDGDGIETVATKGFAGSLFDHTNNGIRTATGWVSA DDGLLVRDLNGNGIIDNGAELFGDNTKLADGSFAKHGYAALAEI. DSNGDNIINAADAAFQTLRVWQDLNQDGISQTNELRTLEEL GIQSLDLAYKDVNKNLGNGNTLAQQGSYTKTNGTTAKMGDLLLAADNLHSRFKDKVELTAKQAKAANLAGIGRLRDLREAAALSG DLANMLKAYSAAEXXHTLN SEQ ID NO: 49

TTGAGGCGGAATATCGCAACTTCTGATAAGGATGGCAATGATTTTCCAAATAGCAAACAAGCAGAAGAAAAGCTGTCGTTTAAAG AGGAAGATATCCTGTTTTT ATACGGTTCCAAAAAAGATCAACGT CAGCAGCTTGAAGATAAAATT CATCAACGCAATCCTAAT GT AAAAATTAGGACATCAGAAAATGAAAATAAAAAATATGGTTATAACTTTGTAGATGCAGGTTATGTArATGTAAAGGGAGAAGAT GAAATTGAGAGGACTTCAAATT ACAAGTATTTTACTC^CCGGTrrGGTT ATGACGGTTTTGTATATTATTCCGGAGAACGTCCTT CCCAATCTTTACCGAGTTCGGGAACGGTGCAATATTCCGGCAACTGGCAATATATGACCGATGCCATACGTCATCGGACAGGAAA AGCAGGAGATCCTAGCGAAGATTTGGGTTATCTCGTTTATTACGGTCAAAATGTCGGAGCAACTTCTTATGCTGCGACTGCCGAC GACCGGGAGGGGGAGGGAAAACATCCTGCCGAATATACGGTTGATTTCGACAAAAAAACCCTGAATGGCAAGCTGATTAAAAATC AGTATGTGCAAAAGAAGGACGATGAAAAGAAACCGCTGACCATTTACAACATTACTGCAAAATTGGACGGCAACCGCTTT ACCGG CAGTGCCAAGGTCAATCCTGATTTAGCGAAAAACCATGCCAAGAAGGAGCA Il 1GI M ι ICCATACCGATGCCGATCAGCGGCTT

GAGGGCGGTTTTTTCGGCGATMGGGGGAAGAGCTTGCCGGACGGTTTATCAGCAACGACAACAGCGTATrCGGCGTATTCGCAG GCAAA(^AAAAACAGAGGCAGCAAACG«GC^GATACAAAACTTGCCTTGCCGTCrAGAAAACACACCAAAATCTTGGATTCTCT AAAAATTTCCGTTGACGAGGC^AGTGATAACAArGCCCGCCAGTTTGCCATTTCCTCTATGCCCGATCTTGGTCATCCCGACAAA CTTCTTGTCGAAGGGCGTGAAATIXCTTrGGTAAACCAAGAACAAACCATCGATCTTGCCGACGGCAGGAAAATGACCGTCCGTG CTTGTTGCGATTTTCTGACCTATGTGAAACTCGGACGGATAAAAACCGACCGCCCGGCAAGTAAATCAAAGGCGGAAGATAAAGG GGAGGATGAAGAGGGTGCAGGCGTTGATAACGGC GAAGAA GACGAAATCAGCGATGAAGACGAAGTTTCCGAAGATGAAAGCGAA GAAGACGAAGAAATCGTCGAAGAAGAAACCGAAGAAGACGAAACCGAAGAAGACGAAGAGGGGGAAGCTGAAGAGGAAGAAGCCG AAGAAGCAGAAGAAACTGAAGAAAAATCGCCGGCAGAAGGCAACGGCGATTCAGGCAGCATCCTGCCTGCCCCGGAAGCCCCTAA AGGCAGGGACATCGACCrrTTCCTGAAAGGTATCCGCACGGCGGAAGCCGACATTCCGCAAACCGGAAAAGCACACTATACCGGC ACTTGGGAAGCGCGTATCAGCAAACCCATTCAATGGGATAATAAGGCGGATAAAGCGGCAAAAGCA GAGTTT AATGTT GATTTCG GCGAGAAATCGATTTCCGGAACGCTGACGGAGAAAAATGGTGTAGAAGCTGCTTT CTATATT GAAAAAGGTGTGATTGAGGGCAA CGGTTTCCACGCGA«GCGCGCACTCGGGAGAACGGC^TCGACCTTTCCGGGCAGGGTTCGACCAGATCGCAGAGCTTCAAAGCC GACAATCTTCTTGTAACGGGCGGCTTTTACGGCCCGAAGGCGGAGGAATTGGGCGGT ACTATTrT CAATAATGATGGGAAATCTC TTAGTATAACTGAAMTATrGAAMTGMGTTGAAGTTGAAGCTGAAGCTGAAGTTGAAGTTGAAGCTGATGTTGGCAAACAGTT AGMCCTGATGMGTTMACACCMTTCGGCGTGGTATTTGGTGCGMGAMGATMTMAGAGGTGGAAAMTGA

SEQ ID NO: 50 MRRNIATSDKDGNDFPNSKQAEEKLSFKEEDILFLYGSKKDQRQQLEDKIHQRNPNVKIRTSENENKKYGYNFVDAGyVWKGED EIERTSNYKYFrHRFGYTCFVYYSGERPSQSLPSStn^QYSGNWQYMTDAIRHRTGKAGDPSEDLGYLVYYGQNVGATSYAATAD DREGEGKHPAEYTVDFDKKTI.NGKLIKNQYVQKKDDEKKPLTIYNITAKLDGNRFTGSAKVNPDLAKNHAKKEHLFFHTD ADQRL EGGFFGDKGEELAGRFXSNDNSVFGVFAGKQKTEAANAADTKLAUPSRKHTKXLDSLKISVDEASDNNARQFAISSMPDLGHPDK LLVEGREIPLVNQEQTXDLADGRKMTVRACCDFLTYVKI.GRIKTDRPASKSKAEDKGEDEEGAGVDNGEEDEXSDEDEV5EDE5E EDEEIVEEETEEDETEEDEEGEAEEEEAEEAEETEEKSPAEGNGDSGSILPAPEAPKGRDIDLFLKGIRTAEADIPQTGKAHVTG TWEARISKPIQWDNKADKAAKAEFNVDFGEKSISGTLTEKNGV EAAFYIEKGVIEGNGFHATARTRENGXDLSGQGSTRSQSFKA DNLLVTGGFYGPKAEELGGTIFNNDGKSLSITENIENEVEVEAEAEVEVEADVGKQLEPDEVKHQFGWFGAKKDNKEVEK SEQ ID NO: 51_ _

GTGGGAATCCAGI I I I I IGAGTTTCAGTCATTCCCGATAAATTGCCTTAGCATTGAATGTCTAGATTCCCGCCTGCGCGGGAATG ACGAATCCATCCGTACGGAAACCTGCACCACGTCATTCCCACGAACCTGCACCACGTCATTCCCACGAACCTGCATCCCGTCATT CCCACGAACCTGCATCCCGTCATTCCCACGAGCCTGCATCCCGTCATTCCCACGAACCTGCATCCCGTCATTCCCACGAACCTGC ATCCCGTCATrCCCACGAACCTGCATCCCGTCATTCCCACGAACCTGCATCCCGTCATTCCCACGAACCTGCATCCCGTCATTCC CA^AACCTGCATCCCGTCATTCCCACGAACCTGCATCCCGTCATTCCCACGAAAGTGGGAATCCAGTTCGTTCGGTTTCGCrTG JI^IILJj^^^T"^-TCCCT^CATrnrCCCACGAAAGTGGGAATCCAGT TCGT TC

CACACTTAATTAATTAA SEQ ID NO: 52

MGIQFFE FQSFPINCLSIECLDSRLRGNDESIRTETCTTSFPRTCTTSFPRTCIPSFPRTCIPSFPRACIPSFPRTCIPS FPRTC XPSFPRTCIPSFPRTCIPSFPRTCIPSFPRTCIPSFPRTCIPSFPRKWESSSFGFACFKFRVTSTSSFPRTCIPSFPRKWESSSF GFACFKFRVTSTSSFPRTYIPSFPRKXXTHLIN SEQ ID NO: 53

ATGCTGACAAAAAAGGAGTTTGAGAAGTTTTTAGACGAGGTTTGCACCGTATTGAGGCAAGAGGCAAAA

CCCAAGATA ι I inGAAAACAGAGTTCGTGCGCTGTGCATTGCAAAAATTCCCGCTTATGCrGACATAGTTATCAATCCTGAACC

TGTGCCGCAAATTTTCCCCGATGTTCCAATAGGGGAATATGGCGTAGAAGTCAAATTCACGCTAAAAGATACTTGGCGCAGCGTA

GCAAA CA GT ATCCAA GAGAAAAACAAAGCTGACGGTGTACAGCATATCTATGTGGTATTCGGAAAAATGGGGGGCATTCCCGATG

TG^^GCAACTTTACGAAGATAGCGTAATTCATGTCCGCACATCGCATGTrCCGCGCTTTGAGGTAGAAATAGAATCTGATCG

ACCGTCTCTGTTTGAGGGTTTCGGTATTTCCTATGCrGAATTTGCCGATTTGGATATGCATGAAAAAATGGAATATATCCGAAAA

TATGCCCGTAA^AGGCTGAAAGAAGGCGAGCGGTTATGGTGGATAGAAGACATTGACGCAGTAGACAGCCATGATCTGCCTTTGG

AAGTGCGCCnTACACTTCCCTGCCGCAGGAAGAAAAAATCCGCCTCCGAGCTGAAGCAGCATTAGTCTCCCCCCGTATTGTCTG

CTC^GGCAGGGCGAAGCAO^AATACGATAATGCCGTCCrGTATCTGATTACCTATCGCGGTGTGCTTTGTCATCAGGCGCGGGAC

TTATTCAGTGCGGGCAGCGTTGCCAACrCGGCGGAAGACTACCGTGGCGGAMCrATOTAGAAAAATCTTTAAAATTGATTGAGC

ATGAAATTGAAAAAGCTGCTTTGGAAATGGATGATGCTCTAATTGTCGAATATTGGGGAGAAAGCGTCCCGACAGAAAAACGCCT

AGAGTATTGGATTAAGATGTTGGATGATTTGGCAGATGGCTGGATACCTTCTGAATCGCTATTCAATGGTAGGTATAAAGCCAAA

TAA

SEQ ID NO: 54

mltkkefekfloevctvlrqeaknapfksqdifenrvralciakipayadivxnpepvpqifpdvpigeygvevkftlkdtwrsv ansiqeknkadgvqhiwvfgkmggipdvkwqlyedsvihvrtshvprfeveiesdrpslfegfgisyaefadldmhfkmfyirk yarnrlkegerlwwiedidavdshdlplevrlytslpqeekxrlraeaalvsprivcsgrakhkydnavlylityrgvlchqard l fsagsvansaedyrggnyvek s lklieh eiekaal emddaliveywgesvptekrleywikmldd ladgwipses lfngrykak SEQ ID NO: 55

atggtgatttccaacccccgcgaacttgaaaaactcaaagaccggattcccaatctgatcaacatcatccgcgtcgccatcgttt

ttccgctgatgattatgcacatcctcgggctggaaaccggcagccgtgcgaacctgcacgcrtcgtggacggcgtgggcgtttta tgtttggctcgccattgcctgctggctgai iiiciii i ccatcatccatccgcattggcaatggcaggctttgagaataccgagt ttcagcgcggtggcggacatcacgatgatcggcgtgctgacctacctgttcggcggcatcgactccggctrcggcatcctgattc tgcccttcgtcgtctgctcctgcctgct«gctacgggcgctaccccctgctctattccagctacgccgccatcctgctgatatt

caacgc cattgccgacggcgatatcaatatgtatccgctgattttggatgcaaaaaccgtcaccaacaccttcgtcctcgtgacc

GGCTCCTATTTCGTCGCWTGATTGCCTCGCTGTCGGTCAGATACATCGACCGTGCCGGCAAACTTGCCCATGAAAACCACGCCG CCTACCGCCGCATCAGGGGCTTGAACCAAATCGTGCTCAACCGCGTTCAGGAAGCGGTCGTCATCATCAACGTCGAGTATCAGAC CGTACrGTTCAATAAAAAGGWAAAGATCTGCTCCCCACGCTTGAAATCGGACAGCATACCGCCCTGTTCGACCCTATTACCGTT

ttatgggacaaggccccttcgcgtactttcgaacgcaatatcgacacgcccgccctgaccgcccgcatccgcgccgtgccgatga

acaaagagcagaacaagctgctcatcctctacatccgcccgcaaagcgaaattcaggcagaagccctgtccgtcaaacttgccgc gctcggacaactgaccgccaacatcgcccacgaaatccgcaaccccatgtccgccatccgccatgcaaacgacctgttgcgcgaa aatatggaagcgggggcggcagatccgttcaacgccaaattgtgcaaaatcatcgacggcaacgtctgccgtatcgacaa aatgc

tcgaagnnnnncacacacttaattaa SEQ ID NO: 56

mvisnpreleklkdripnliniirvaivfplmimhilgletgsranlhaswtawafyvwlaiacwlxffsixhphwqwqalrips

fsavaditmigvltyl fggidsgfgililpfvvcscllsygrypllyssyaaillifnaiadgdinmyplildaktvtntfvl vt gsyfvamiaslsvryidragklahenhaayrrirglnqivlnrvqeavviinveyqtvlfnkkakdllptlfigqhtalfdpitv lwdkaps rtfernidt paltariravpmnkeqnk llilyir pqs eiqaeal 5vklaalgqltaniah εirn pmsairhandl lr f nmeagaadpfnaki.ckiidgnvcridkmlexxhtln

SEQ ID NO: 57

GTGTGTGNNNNNAACACCTTCGTCCTCGTGACCGGCTCCTATTTCGTCGCCATGATTGCCTCGCTGTCGGTCAGATACATCGACC GTGCCGGCAAACTTGCCCATGAAAACCACGCCGCCTACCGCCGCATCAGGGGCTTGAACCAAATCGTGCTCAACCGCGTTCAGGA AGCGGTCGTCATCATCAACG7 CGAGTATCAGACCGTACTGTTCAATAAAAAGGCAAAAGATCTGCTCCCCACGCTTGAAATCGGA CAGWTACCGCCCTGTTCGACCCTATTACCGTTTTATGGGACAAGGCCCCTTCGCGTACTTTCGAACGCAATATCGACACGCCCG CCCTGACCGCCCGCATCCGCGCCGTGCCGATGAACAAAGAGCAGAACAAGCTGCTCATCCTCTACATCCGCCCGCAAAGCGAAAT TCAGGCAGAAGCCCTGTCCGTCAAACTTGCCGCGCTCGGACAACTGACCGCCAACATCGCCCACGAAATCCGCAACCCCATGTCC GCCATCCGCCATGCAAACGACCTGTTGCGCGAAMTATGGAAGCGGGGGCGGCAGATCCGTTCAACGCCAAATTGTGCAAAATCA

tcgacgg caacgtctgccgtatcgacaaaatgctcgaagatatttcctcgctcaacaagcgcaacaaaaccgaacgcgaaaccat

cggcctgataccgi i i i GGGAAGAATTCAAACAAGAGTTCCTGCTCGGCCATCCCGATGCCGCCGGCTGCATCCGCCTAGATATG CAGGGCAATCACCrGACTGCCTATTTCGATCCTGCCCACCTGCGGCAAATTATGTGGAACCTCGCCAACAACGCGTGGCGGCACA GCCGCAAACAGCCCGGCTCGATTrCCGTCACCATCCGCCCCGCGCAAAAAAACACCGTCTGTATCCTCTTTGCCGACCGCCCGAA GTGCAGGAACACCTGTrCGAACCCrrTTACACCACGGCGGAAAACGGCACCGGCCTCGGGCTGTATGTCGCCCGCGAACTGGCGC acgccaatttcggcgatttga SEQ ID NO: 58

mcxxntfvlvtgsyfvamxaslsvryidragklahenhaavrrirglnqivlnrvqeawiinveyqtvlfnkkakdllptleig qhtalfdpitvlwdkapsrtfernidtpaltariravpmnkeqnkllilyirpqseiqa ealsvk laalgqltaniaheirn pms airhandllrenmeagaadpfnaklckiidgnvcridkmledissunkrnkteretiglipfweefkqefllghpdaagcirldm qgnhltayfdpahlrqimwnlannawrhsrkqpgsisvtirpaqkntvcilfadrpkcrntcsnpftprrktapasgcmspanwr

SEQ ID NO: 59 _

ATGAATAAAACTTTAAAAAGGCGGGI I I ICCGCCATACCGCGCTTTATGCCGCCATCTTGATGTTTTCCCATACCGGCGGGGGGG GG GGGGCGATGGCGCAAACCCATCAATACGCTATTATCATGAACGAGCGAAAGCAGCCCGAGGTAAAGT CGAATGTGCCATCTTC AATAAAGGA CAAAGA CAGGAAACGCGAAT ATACTCATTATAAGTACAAAACAGGAGGAGGCTCTGTCTC^TTCAACAATAGCGAT gagcttgttfctcaa CAAAGCGGTACTGCCGTTTTTGGCACAGCCACCTAC CTGCCGCCCTACGGCAAGGTTTCCGGTTTT GATG ACAAAAGGCTGAAAGAGCGCGGOVATGCCGTTAATTGGATTOKTACGACCCACCCAGGGTTGATAGGCTACAGCTACGCCGGTGT CGTATGCAGAGAC^GCACAGGCT GTCCCA AACTTGTCTATAAAACCCGATTTTCCTTCGATAATCCCGACrTGGCAAAAACAGGA GGCGGGCTGGATAGGCAGACAGAGCCAAGCCGCGACAATTCGCCCATTTACAAATTGAAGGATCATCCATGGTTGGGCGTGTCTT TCAATTTGGGCAGCGAGAATACCGTCAAAAATGGCAACrCATTCAACAAATTGATATt. I ILII I IAGTGAAAACAATAAT AATCA AACCATCGTCTCTACGACAGAAAGCCACCCrATTTCCCTTGGCGACGGGCAGCGCGAACATACCGCCGTGGTCTATTATCTGAAC GCCAAACTGCACCTGCTGGACAAAAAAGGGATTAA\GATAT(^CCGACAAAACAGTGCAGTTGGGTGTCTTGAAGCCGAGCATCG ATGTGCGGAAAGGTGCCGGCTGGCTAAGI I I ! i GGGCTAGTTGGGACATTAAAGATACCGGGCAGATTCCAGTCAAGCTCGGCCT GCAGCAAGTCAAAGCAGGCCGCTGCATCAATAAACCGAACCCCAATCCCAAAGCCCAAGCCCTTTCCCCCGCACTGACTGCCCCC GCGCTGTGGTTCGGACCTGTGCAAAATGGTAAGATGGAGATGTATTCCGCTTCGGTTTCTACCTACCCCGACAGTTCGAGCAGCC GCATCTTCCTTCAAAATCTGAAAAGAAAAAACGACCCCAACAAACCCGGCCGCTATTCCCTCGCAGACTTGAGCGCGTCGGAGAT TAAAAGTAAAGAGCCGACTTTCACAGGGCGGCAAACCGTCATCCGATTGGATAAAGGCGTACATCAGAT ovva ctt AAAGGCAAT GAGGTCGAAGGTTTTAAGGGAAAC^ACGGCAACGACACTITCGGCATTGTTAGTGAAGGGAGCTTCATGCCTGATGACAGCGAGT GGAAAAAAGTGCTGCTGCCTTGGACGGTTCGTGCTTTCAATGATGACGGTCAATTTAACACAGTCykACAAAGAAGAAAACAACGG CAAGCCAAAATACAGTCAAAAATACCGCAGCCGCAACAACGGCAAGCACGAGCGCAATTTGGGCGACATCGTCAACAGCCCCATC GTGGCGGTCGGCGAGTATTTGGCTACTTCCGCCAACGACGGGATGGTGCATATCTTCAAAAAAAGCGGCGGGGATGACCGCAACT ATAGTCTGAAGCTCAGTTATATCCCGGGCACGATGCCGCGCAAGGATATTCAAAGCCAAGACTCCACCCTTGCCAAAGAGCTGCG CGCCrTTGCCGAAAAAAGCTATGTGGGCGACCGCTACGGCGTGGACGGCGGCTTTGTCTTGCGCCAAGTCGAATGGAAAGGGCAA AACCGCGTGTTTATGTTCGGCGCGATGGGCTTTGGCGGC^GAGGTGCATACGCCTrGGATTTGACCA^GCCGAAAACGGTGACC CGACCGCCGTTTCCCTGTTTGATGTCAAACATGACAATAATGGCAAGAATAGCAATAATAGCGTGCAATTAGGCTACACCGTCGG CACGCCGCAAATCGGCAAAACCCACAACGGCAAATACGCCGCCTTCCTCGCCTCTGGTTATGCGACTAAAGACATTAACAACGGC GACAATAAAACCGCGCrGTATGTGTATGATTTGGAAAGCAACAACGGTACGCCGATTGCAAAAATCGAAGTACCCAACGGCAAGG GCGGGCTTTCGTCCCCCACGCTGGTGGATAAAGATTTGGACGGCACGGTTGATATCGCCTATGCCGGCGATCGCGGCGGCAGTAT GTACCGCTTTGATTTAAGCGGCAACAACCCGACCAGTTGGTCTGCACGCGCCArrrTCAGCGGCAAOWVCCGATTACTTCCGCG CCCGCCATTTCCCAACTGAAAGACAAACGCGTGGTCATCrTCGGCACGGGCAGTGATTTGAGTGAGGAGGATGTGGACAGCAAAG AAATCCAACACGTTTACGGTAI I I I I GACAATGAAACAGACACGGGTACGGCGAAAGACGGGCAGGGCAACGGGCTGCTCGAGCA AGTGCTTAGTGAGGAAAATAAAACCTTATTCCTGACCGATTACAAGCGATCCGACGGATCGGGCAGTAAGGGGTGGGTAGTGAAG CTGAAGGAAGGACAGCGCGTTACCGTCAAACCGACCGTGGT ATTGCGrTACCGCCTTTGT AACCATCCGCAAATATAACGACGGCG GCTGCGGCGCGGAAACCGCCATTTTGGGCATCAATACCGCCGACGGCGGCAAGCTGACCAAGAAAAGCGCGCGCCCGATTGTGCC GGACACCAAT ACGGCT ATCGCGCAATATTCCGGCCATAAGAAAGGCACCAACGGCAAATCCATCCCT AT AGGTTGTATGCAAAAA GGCAATGAAATCGTCTGCCCGAACGGATATGTTTACGACAAACCGGTTAATGTGCGTTATCTGGATGAAAAGAAAACAGACGGAT TTTCAACAACGGCAGACGGCGATGCGGGCGGCAGCGGTATAGACCCCGCCGGCAAGCGTGCCGGCAAAAACAACCGCTGCTTCTC CCAAAAAGGGGTGCGCACCCTGCTGATGAACGATTTGGACAGCTTGGACATTACCGGCCCGATGTGCGGTATGAAACGAATCAGC TGGCGTGAAGTCTTCTACTGA

SEQ ID NO: 60

MNKTLKRRVFRHTALYAAILMFSHTGGGGGAMAQTHQYAIIMNERKQPEVKSNVPSSXKDKDRKREYmYKYKTGGGSVSFNNSD ELV5QQSGTAVFGT ATYLPPYGKVSGFDDKRLKERGNA VNWIHTTHPGLIGYSYAGVVCRDSTGCPKLVYKTRFSFDN PD LAKTG GG U3RHTEPSRDNS PIYK LKDH PWLGVSFNLGSENTVKNGNSFNKLISSFSENNNNQTIVSTTESHPISLGDGQREHTA VV YYLN AKLHLLDKKGIKDITDKTVQLGVLKPSIDVRKGAGWLSFWASWDIKOTGQIPVKLGLQQVKAGRCINKPNPNPKAQALSPALTAP ALWFGPVQNGKMEMYSASVSTYPDSSSSRIFLQNLKRKNDPNKPGRYSLADLSASEIKSKEPTFTGRQTVIRLDKGVHQIKLKGN EVEGFKGNNGNDTFGIVSEGSFMPDD5EWKKVLLPWTVRAFNDDGQFNTVNKEENNGKPKYSQKYRSRNNGKHERNLGDIVN5PI VA VGEYLATSAN DGMVHIFKKSGGDDRNYSLKLSYIPGTKPRKDIQSQDSTLAKELRAFAEKSYVGDRYGVDGG FVLRQV EWKGQ NRVFMFGAMGFGGRGAYAI.DLTKAENGDPTAVSLFDVKHDNNGKNSNNSVQLGYTVGTPQIGKTHNGKYAAFLASGYATKDINNG DNKTALYVYDLESNNGTPIAKIEVPNGKGGLSSPTLVDKDLDGTVDIAYAGDRGGSMYRFDLSGNNPTSWSARAIFSGNKPITSA PAISQLKDKRVVIFGTGSDLSEEDVDSKEIQHVYGIFDNETDTGTAKDGQGNGLL.EQVLSEENKTLFLTDYKRSDGSGSKGWVVK LKEGQRVTVKPTVVLRTAFVTIRKYNDGGCGAETAILGINTADGGKLTKKSARPIVPDTNTAIAQYSGHKKGTNGK5IPIGCMQK GNEIVCPNGYVYDKPVNVRYLDEKKTDGFSTTAOGDAGGSGIDPAGKRAGKNNRCFSQKGVRTLLMNDLDSLDITGPMCGMKRIS WREVFY

SEQ ID NO: 61

TTGCCTGTAAACAAAATGCCGTCTGAACCGCCGTTCGGGCGTCATTTGATTTTTGCTTCTTTGACCTGCCTCATTGATGCAGTAT GCAAAAAAAGATACCGCAACCAAAACGTTTATATATTATCTATTCTGTGTATGACTAGGAGTAAACCTGTGAACCGAACT ACCfT CTGCTGCCTTTCTCTGACCGCCGCCCTGATTCTGACCGCCTGCAGCAGCGGAGGCGGCGGAAGCGGAGGCGGCGGTGTCGCCGCC GACATCGGCGCGGGGCTTGCCGATGCACTAACCGCACCGCTCGACCATAAAGACAAAGGTTTGAAATCCCTGACATTGGAAGACr CCATTTCCCAAAACGGAACACTGACCCTGTCGGCACAAGGTGCGGAAAGAACTTTCAAAGCCGGCGACAAAGACAACAGTCTCAA CACAGGCAAACTGAAGAACGACAAAATCAGCCGCTTCGACTTTATCCGTCAAATCGAAGTGGACGGGCAGCTCATTACCTTGGAG AGCGGAGAGTTCCAAGTGTACAAACAAAGCCATTCCGCCTTAACCGCCCTTCAGACCGAGCAAGTACAAGACTCGGAGCATTCCG GGAAGATGGTTGCGAAACGCCAGTTCAGAATCGGCGACATAGTGGGCGAACATAO\TCTTTTGGCAAGCTTCCCAAAGACGTCAT GGCGA CATATCGCGGGACGGCGTTCGGTTCAGACGATGCCGGCGGAAAACTGACCTACACCATAGATTTCGCCGCCAAGCAGGGA

cacggcaamtcgmcatttgaaatcgcwgaactc^tgttgacctggccgccgccgatatcaagccggatgaaaaacaccatg ccgtcatc^gcggttccgtcctttacaaccaagccgagaaaggcagttactctctaggcatctttggcgggcaagcccaggaagt tgccggcagcgcggaagtggaaaccgcaaacggcatacgccatatcggtcttgccgccaagcaataa SEQ ID NO: 62

mpvnkmpseppfgrhlifasltclidavckkryrnqnvyilsilcmtrskpvnrttfcclsltaaliltacssggggsggggvaa digagladaltapldhkdkglksltledsisqngtltlsaqgaertfkagdkdnslntgklkndkisrfdfirqievdgqlitle sgefqvykqshsaltalqteqvqdsehsgkmvakrqfrigdivgehtsfgklpkdvmatyrgtafgsddaggkltytidfaakqg hgkiehlkspelnvdlaaadikpdekhhavisgsvlynqaekgsyslgifggqaqevagsaevetangirhiglaakq SEQ ID NO: 63

otgggcgagatggaaaaagacgcg6atatt6ccgcgatgggttcctatttg6agatttt6gcggaagaaaacaataaaagcgtgc ttgccgc cattgcccgaaacggcgaaatttggaaaaaccccctgacccxtcaggaaatc\cgtctgccttccccctccgcaaccc catacacaacaa cacgat gatt atgcggcgcagcgtcattgacggcggtttgcggttcgatcccgcctatatccacgccgaagac tataagttttggtacgaagccggcaaattgggcaggctggcgaattaccccgaagccttggtcaaataccgtttccatcaagacc agactt cttccaaa ca caacctgcaacagcgtaagacggcgtggaaaatcaaagaagaaatcagggcggggtattggaaggcggc aggcataaccgtcgggtcggactgcctgaattacgggcttttgaaatcaacggcatatgcgttgcacgaaaaagccttgtccgga caggatatcggatacctccgcctg1tcctgtac(^atatttcttgtcgttggaaaagtattctttgaccgatttactggattttc tgacagaccgcgtgatgaggaagctgtttgccgcaccgcaatataggaaaatcctgaaaaaaatgttacgcccttggaaataccg gggctattga

SEQ ID NO: 64

mgemekdadxaamgsyleilaehnnksvlaaiarngeiwknplthqeitsafplrnpihnntmxmrrsvidgglrfdpayihaed ykfwyeagklgrlanypealvkyrfhqdqtsskhnlqqrktawkikeeiragywkaagitvgsdclnygllkstayalhekalsg qdigylrlflyeyflslekysltolldfltdrvmrklfaapqyrkilkkmlrpwkyrgy SEQ ID NO: 65 _

atgacgcaagaacgtttacccgaai illl cgaccgcgccccgacgctgaccgtacaagacccgcttgccgcattcctcggcgcgg ccgaaaacggcatcctcacttaccgctacgccgatgccgtgcgcctgtgcggacattcctgcccgaccgtcgcgggcgcgtacct gatggttatcaaaggtctgaaagccctttacggcgaagagctgcccgaacgcggcggcatcgaagccgccatgcagggagcgcgc gacgaaggcacggtcggcgtaaccgcatccgtcgtccaactcctcaccggcgcagcccccgaaaccggcttcggaggcatcggaa tacagggacgcttcgcccgccgcaacctcrtatcctttggtgcaggcgaaatcaacggcacactcgcgctccgccgccgcgacac cggcaaaaccgtcgccgtcagcctcaacgccgccctgcaacccttcgcaccgcaaatgcgcgacatcatgcccaaagccgtcagc ggcagcgo^agtaccgacgaactcaaacacitcggacaactctggc^ggcacgcgttaaagcatttttgaccgaatcggcggacg acccgcagttcgtcatcgtccgcgaagtgtga SEQ ID NO: 66

mtqerlpeffdraptltvqdplaaflgaaengiltyryadavrlcghscptvagaylmvikglkalygeelperggieaamqgar degtvgvtaswqlltgaapetgfggigiqgrfarrnllsfgageingtlalrrrdtgktvavslnaalqpfapqmrdimpkavs gsastdelkhfgqlwqarvkafltesaddpqfvivrev SEQ ID NO: 67

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SEQ ID NO: 69

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SEQ ID NO: 70

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atgaaggggatgatgatgtttgaacgcagtgtgattgcaatggcntgtattttrgccctttcagcctgtgggggcggcggtggcg gatcgcccgatgttaaatcggcggacacgctgtcaaaaccggccgctcctgttgttgctgaaaaagagacagaggtaaaagaaga tgcgccacaggcaggttctcaaggacagggtgcgccatccacacaaggcagccaagatatggcggcagtttcggcagaaaataca ggcaatggcggtgcggcaacaacggacaaacccaaaaatgaagacgagggaccgcaaaatgatatgctgcaaaattccgccgaat ccgcaaatcaaacagggaacaaccaacccgccgattcttcagattccgcccccgcgtcaaaccctgcacctgcgaatggcggtag caattttggaagggttgatttggctaatggcgttttgatrgatgggccgtcgowaatataacgttgacccactgtaaaggcgat tcttgtaatggtgataatttattggatgaagaagcaccgtcaaaatcagaatttgaaaatttaaatgagtctgaacgaattgaga aatataagaaagatgggaaaagcgataaatttactaatttggttgcgacagcagttcaagctaatggaactaacaaatatgtcat CAT^ATAAAGACAAGTCCGCTTC^TCTTCATTTGCGCGAT^

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SEQ ID NO: 72

mkgmmmfersviamacifalsacggggggspdvksadtlskpaapvvaeketevkedapqagsqgqgapstqgsqdmaavsaent gngg aattdkpknedegpqn dmlqn saesanqtgnnqpadssdsapasnpapanggsnfgrvdlangvlidgpsqnitlth ckgd scngdnlldeeapsksefenlneseriekykkdgksdkftnlvatavqangtnkyviiykdksasssfarfrrsarsrrslpaem plipvnqadtlivdgeavsltghsgnifapegnyryltygaeklpggsyalrvqgepakgemlagtavyngevlhfhtengrpyp trgrfaakvdfgsksvdgiidsgddlhmgtqkfkaaidgngfkgtwtengggdvsgrfygpageevagkysyrptdaekggfgvf agkkeqd

SEQ ID NO: 73

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mrfsrfepkgrlkqqirfqttflstshhgnqtkaahrhihvgstagtttirsggdttlkgaqligkgiqadtrnlhiesvqdtet sqskqqn gnvqvtvgygfsasgsysqskvkadhasvteqsgiyagedgyqikvgnhtdlkggxitsgksaedkgknlfqtatlta sdiqnhs ryegrsfgiggsfdlnggwdgtvtdkqgrptdris laagygsdsdsqssitksgintrnihitdeagq lartgrtake

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SEQ ID NO: 75

gtgtgtgnnnnngataaacgcagctataaaaccggtaagtggtacaaactaaaacatgttactgaaatcaaagagcat aaaaacg ccaaagccgacccggtgagcctcagtgcgtcacmggtattgaaatcaaatccggcggcaatatcggtgcccacgccaccttgtt tgatgcaccccgcggctccgttaaaatcgaagccggacgtgggctggttctctatgccgtggaagatctcaactacgacaaactt gacacccgtaccaagcgcaaatttatcggcattacctacgacaaggtgcacgacaccaccacccacaccatgaaaaccgccctgc cctcaagggtagttgcagaatcggccaacctgcaatcaggctgggacgccaaactgcaaggcacccagtttgaaaccacgctggg cggcgcagccatccgtgcaggtgtaggcgatcaggcacgagcagatgccaagattaitcttgaaggcatcaaaagtagtgtgcgc

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SEQ ID NO: 77

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SEQ ID NO: 78

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Claims (17)

1. Polipeptídeo caracterizado por compreender uma seqüência de aminoãcidos que tem pelo menos 75% de identidade de seqüência com uma ou mais das SEQ ID Nos: 32, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78.

2. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender uma ou mais das seqüências de aminoãcidos SEQ ID Γ: 32, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78.

3. Polipeptídeo caracterizado por compreender um fragmento de pelo menos 7 aminoãcidos consecutivos a partir de uma ou mais das SEQ ID Nos: 32, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78.

4. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o fragmento compreende um epítopo de célula-T ou célula-B a partir da SEQ ID N°: seqüência de aminoãcido.

5. Anticorpo caracterizado por se ligar ao polipeptídeo de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4 .

6. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

7. Ácido nucléico caracterizado por compreender uma seqüência de nucleotídeo que tem pelo menos 7 5% de identidade de seqüência com uma ou mais das SEQ ID Nos: 31, -1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 33, -35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, -65, 67, 69, 71, 73, 75, 77.

8. Ácido nucléico, de acordo com a reivindicação -7 , caracterizado por compreender uma seqüência de nucleotídeos selecionada a partir das SEQ ID Nos: 31, 1, 3, -5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 35, -37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, -67, 69, 71, 73, 75, 77.

9. Ácido nucléico caracterizado pelo fato de que pode hibridizar-se ao ácido nucléico, de acordo com a reivindicação 8, sob condições de severidade elevada.

10. Ácido nucléico caracterizado por compreender um fragmento de 10 ou mais nucleotídeos consecutivos a partir de uma ou mais das SEQ ID Nos: 31, 1, 3, 5, 7, 9, -11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 35, 37,„ 39, 41, -43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, -73, 75, 77.

11. Ácido nucléico caracterizado pelo fato de que codifica o polipeptídeo de qualquer uma das reivindicações -1, 2, 3 ou 4.

12. Composição caracterizada por compreender: (a) polipeptídeo, anticorpo, e/ou ácido nucléico de qualquer reivindicação anterior; e (b) um veículo farmaceuticamente aceitável.

13. Composição, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada por compreender ainda um adjuvante de vacina.

14. Ácido nucléico, polipeptídeo, ou anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, -5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 11, caracterizado por ser para uso como medicamento.

15. Método de tratar um paciente, caracterizado por compreender administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição da reivindicação 12.

16. Uso de ácido nucléico, polipeptídeo ou anticorpo, de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4,5 f 6, 7, 8, 9, 10 ou 11, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para tratar ou prevenir doença e/ou infecção causada por Neisseria meningitidis.

17. Método, de acordo com a reivindicação 15, ou o uso, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de ser para prevenir meningite meningocócica.