BRPI0707718A2

BRPI0707718A2 - uso de um composto

Info

Publication number: BRPI0707718A2
Application number: BRPI0707718-1A
Authority: BR
Inventors: Graham Michael Wynne; Stephen Paul Wren; Peter David Johnson; Paul Damien Price; Moor Olivier De; Gary Nugent; Colin Richard Dorgan; Richard Storer; Richard Pye
Original assignee: Summit Corp Plc
Priority date: 2006-02-10
Filing date: 2007-02-09
Publication date: 2011-05-10
Also published as: JP2009526035A; AU2007213452A1; US20100048660A1; KR20090005296A; EP1986643A1; IL193314A0; WO2007091107A1; CA2641884A1; MX2008010193A

Abstract

USO DE UM COMPOSTO. São divulgados compostos da Fórmula (I) ou (II), em que A^1^, A^2^, A^3^, A^4^ E A^5^, que podem ser os mesmos ou diferentes, representam N ou CR^1^, R~9~ representa -L-R^3^, em que L é uma ligação simples ou um grupo ligador e R representa hidrogênio ou um substituinte e além disso, quando um par adjacente de A^1^ - A^4^ cada um representa CR^1^, então os átomos de carbono adjacentes, junto com seus substituintes podem formar um anel B, quando A^5^ representa CR, então A^5^ e N - R^9^ junto com seus substituintes podem formar um anel C ou um sal deste farmaceuticamente aceitável, na fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico e/ou profilático de distrofia muscular de Duchenne, distrofia muscular de Becker ou caquexia.

Description

"USO DE UM COMPOSTO"

A presente invenção diz respeito a um método de tratamentode distrofia muscular de Duchenne.

A distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma doençaneuromuscular genética comum associada còm a deterioração progressiva dafunção muscular, o primeiro foi descrito em 150 anos pelo Neurologistafrancês, Duchenne de Boulogne, após o que a doença é denominada. DMD foicaracterizado como um distúrbio recessivo ligado por X que afeta 1 em 3.500homens causado pelas mutações no gene distrofina. O gene é o maior nogenoma humano, abrangendo 2,6 milhões pares de base DNA e contendo 79exons. Aproximadamente 60% de mutações distrofina são maiores nainserção ou anulação que levam erros na mudança da estrutura à jusante,considerando aproximadamente 40% são as mutações por ponto redisposiçõesde estruturas pequenas. A vasta maioria de pacientes DMD falta a proteínadistrofina. A distrofia muscular de Becker é muito branda na forma de DMDcausada pela redução na quantidade, ou alteração no tamanho, da proteínadistrofina. A alta incidência de DMD (1 em 10.000 espermas ou óvulos)significa que a avaliação genética nunca eliminará a doença, de modo queuma terapia efetiva é altamente desejável.

Um número de modelos de animais naturais ou projetados deDMD existem e produzem um suporte principal para estudos pré-clínicos(Allamand, V. & Campbell, Κ. P. Animal models for muscular dystrophy:valuable tools for the development of therapies. Hum. Mol. Genet. 9, 2459-2467 (2000)) Embora os modelos de cão, gato e camundongo todos tiverammutações no gene DMD e exibiram uma distrofinopatia bioquímica similar asque são vista em humanos, estas mostram variação surpreendentemente econsiderável em temos do seu fenótipo. Humanos semelhantes, os modeloscaninos (Distrofia muscular de Golden retriever e indicador de pêlo-curtoalemão) tem um fenótipo severo; estes cachorros tipicamente morrem dedeficiência cardíaca. Os cachorros oferecem a melhor fenocópia para doençashumanas, e são considerados uma alta marca de referência para estudos pré-clínicos. Infelizmente, a criação destes animais são caras e difíceis, e o cursode tempo clínico pode ser variável entre as ninhadas.

O camundongo mdx é o modelo usado mais amplamentedevido a disponibilidade, período de gestação curto, período para amadurecere custo baixo relativamente (Bulfield, G., Siller, W. G., Wight, P. A. &Moore, K. J. X distrofia muscular ligada por cromossomo (mdx) nocamundongo. Proc. Natl Acad. Sei. USA 81, 1189-1192 (1984)).

Visto que a descoberta do gene DMD a cerca de 20 anos, grausvariados do sucesso no tratamento de DMD foram atingidos em estudos deanimais pré-clínico, alguns que estão sendo seguidos nos humanos. Asestratégias terapêuticas presentes podem ser amplamente divididas em trêsgrupos: primeiro, métodos de terapia de gene; segundo, terapia celular; e porúltimo, terapia farmacológica. As terapias baseadas em células e geneoferecem vantagens fundamentais de prevenir a necessidade por deficiênciassecundárias corrigidas separadamente/patologia (por exemplo, contraturas),especialmente se iniciada precoce no curso de uma doença. Infelizmente,estes métodos apresentam um número de barreiras técnicas. A respostaimunológica contra vetores virais, mioblastos e distrofina sintetizadosnovamente foram relatados, além disso a toxicicidade, a falta de expressãoestável e dificuldade na libertação.

Os métodos farmacológicos para o tratamento de distrofiamuscular difere-se a partir de métodos com base em células e gene não sendoprojetado para libertar o gene ausente e/ou proteína. No geral, as estratégiasfarmacológicas usa medicamentos/moléculas em uma tentativa de melhorar ofenótipo por meios tal como diminuição da inflamação, melhorandohomeostase cálcica e aumentando comprometimento ou proliferação doprogenitor muscular. Estas estratégias oferecem a vantagem que estas sãofáceis para liberar sistemicamente e podem tirar vantagens de muitos tecidosde toxicidade e/ou imunológicos que diz respeito aos vetores e terapias combase celular. Embora as investigações com corticosteróides e cromoglicato desódio, para reduzir inflamação, dantroleno para manter homeostase cálcica eclenbuterol para aumentar a força muscular, tendo produzido nenhumresultado promissor destas terapias potenciais ainda tem sido mostrada a serefetiva no tratamento DMD.

Um método farmacológico alternativo é terapia de super-regulação. A terapia de super-regulação é baseada no aumento da expressãode genes alternativos para substituir um gene defeituoso e é particularmentebenéfico quando uma resposta imune é aumentada contra uma proteínaausente previamente. A super-regulação de utrofina, um paralogoautossômico de distrofma foi proposto como uma terapia potencial por DMD(Perkins & Davies, Neuromuscul Disord, SI: S78-S89 (2002), Khurana &Davies, Nat Rev Drug Discov 2:379-390 (2003)). Quando a utropina é sub-expressada em camundongos mdx transgênicos é localizada à sarcolema decélulas musculares e restauram os componentes da distrofma associado aocomplexo de proteína (DAPC), que evitam o desenvolvimento distrófico e porsua vez leva a melhora funcional do músculo esquelético. A liberaçãoadenoviral de utrofina no cachorro foi mostrada para prevenir patologia. Oinício da expressão utrofina aumentada brevemente após a origem no modelocamundongo pode ser efetiva e nenhuma toxicidade é observada quandoutrofina é expressada ubiquitosamente, que é promissor para a tradução destaterapia à humanos. A super-regulação de utrofina endógena aos níveissuficientes para diminuir a força de patologia se atingida pela liberação decompostos difusíveis pequenos.

Agora, observamos um grupo de compostos que super-regulam utrofina endógena em avaliações preditivas e, deste modo, podem serúteis no tratamento de DMD. De acordo com a invenção, fornecemos o uso deum composto da Fórmula (I) ou (II)

<formula>formula see original document page 5</formula>

em que

A1, A2, A3, A4e A5j que podem ser os mesmos ou diferentes,representam N ou CR1,

R9 representa -L-R3, em que L é uma ligação simples ou umgrupo ligador e R3 representa hidrogênio ou um substituinte ealém disso,

quando um par adjacente de A1 - A4 cada um representa CR1,então os átomos de carbono adjacentes, junto com seus substituintes podemformar um anel B,

quando A5 representa CR1, então A5 e N-R9, juntos com seussubstituintes podem formar um anel C,

ou um sal destes farmaceuticamente aceitáveis,na fabricação de um medicamento para o tratamentoterapêutico e/ou profilático da distrofia muscular de Duchenne, distrofiamuscular de Becker ou caquexia.

Quando R9 representa H, os compostos da fórmula I sãotautômeros dos compostos da fórmula II.

Os compostos da fórmula I podem existir em formasdiastereoméricas, enantioméricas e tautoméricas, todos que são incluídosdentro do escopo da invenção.

Certos compostos da fórmula I são novos. De acordo com ainvenção, também fornecemos aqueles compostos da fórmula I que são novos,junto com os processos para sua preparação, as composições que oscontenham, bem como seu uso como produtos farmacêuticos.

Alguns dos compostos que estão dentro do escopo da fórmulaI são conhecidos, tal como, mas não como produtos farmacêuticos. De acordocom a invenção, reivindicamos compostos conhecidos na técnica tal como,mas não previamente descritos para uso como produtos farmacêuticos, asprodutos farmacêuticos.

Todos os compostos da fórmula I podem ser feitos pelosmétodos convencionais. Os métodos de fabricação dos sistemas de anelheteroaromáticos são bem conhecidos na técnica. Em particular, os métodosda síntese são debatidos em Comprehensive Heterocyclic Chemistry, Vol. 1(Eds.: AR Katritzky, CW Rees), Pergamon Press, Oxford, 1984 andComprehensive Heterocyclic Chemistry II: A Review of the Literature 1982-1995 The Structure, Reactions, Synthesis, and Uses of HeterocyclicCompostos, Alan R. Katritzky (Editor), Charles W. Rees (Editor), E.F.V.Scriven (Editor), Pergamon Pr, June 1996. Outros recursos gerais queajudariam a síntese dos compostos de interesse incluem March's AdvancedOrganic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Wiley-Interscience; 5o edição (15 de Janeiro de 2001).

Os compostos da fórmula I ou sais farmaceuticamenteaceitáveis destes podem ser preparados a partir de um composto da Fórmula II

<formula>formula see original document page 6</formula>

em que A1, A2, A3, e A4 são definidos como acima, em umfechamento de anel redutivo efetuado pela reação com tiouréia-S,S-dióxidoou um sal de ditionita, por exemplo um sal metal alcalino, como descrito, porexemplo, em EP O 751 134. A reação pode ser realizada em uma soluçãoaquosa, preferivelmente uma solução aquosa alcóolica, em uma temperaturade 60 a 80 °C. A ciclização não ocorrerá na presença de certasfuncionalidades, por exemplo na presença de -NH2 ou funcionalidade -OH.Estes grupos necessitarão serem protegidos antes da ciclização. Por exemploos grupos -NH2 podem ser protegidos como amidas, e os grupos OH podemser protegidos como éteres. As estratégia de proteção adequada sãodivulgadas, por exemplo, em EP O 751 134.

Os compostos da fórmula II podem ser preparados por umareação de ligação de diazônio de um composto diazônio da Fórmula III,

<formula>formula see original document page 7</formula>em que A1, A2, A3, e A4 são definidos como acima, comderivados de fenila da fórmula IV

<formula>formula see original document page 7</formula>

em que R9 é definido como acima. As condições para ligaçãosão bem conhecidos ao químico sintético. Por exemplo, a reação podeacontecer em metanol sob condições ácidas levemente, em até 24 horas.

Os compostos da fórmula III podem ser preparados peladiasotização das aminas apropriadas da fórmula V<formula>formula see original document page 7</formula>

em que A1, A2, A3, e A4 são definidos como acima. Os métodosde diasotização são bem conhecidos na técnica, por exemplo pela reação comNaN02/Ac0H em uma solução aquosa a O a 10 °C.

Os compostos da fórmula V podem ser sintetizados pelanitração, e desproteção subseqüente, de um composto da Fórmula VI,<formula>formula see original document page 8</formula>

em que A1, A2, A3, e A4 são como definidos acima e Prepresenta um grupo de proteção apropriado ás condições de nitração. Anitração será afetada pela, por exemplo, cHN03/cH2S04 em um solventeapropriado às condições de reação.

Os compostos das fórmulas IV e VI podem ser feitos pelastécnicas convencionais conhecidas por si.

2-fenilindazóis da fórmula I podem ser feitos por umavariedade de processos, como resumido no esquema abaixo.

<formula>formula see original document page 8</formula>

Os indazóis de fenila podem ser feitos usando processosconhecidos. Por exemplo hidrazinas da fórmula VII podem ser ciclizadasusando Pd (II) catálise como descrito por Song, J.J. et al, organic Letters,2000, 2(4), 519-521.

Alternativamente, os indazóis de fenila da fórmula VII podemser sintetizados a partir de uma amina VIII usando ciclização mediada por Pd(O) como descrito por Akazome, M. et al, J. Chem. Soe. ChemicalCommunications, 1991,20, 1466-7.

Os indazóis de fenila também podem ser manipulados usandoprocessos conhecido às pessoas habilitadas. Por exemplo, a nitração (comodescrito por Elguero, J. et al, Bulletin des Societes Chimiques Belges, 1996,105(6), 355-358) dá composto nitro IX. A pessoa habilitada é bem atenta dosprocessos pelo qual os compostos nitro podem ser manipulados para dar umaampla faixa de funcionalidade. Por exemplo, a redução do composto nitro, porexemplo usando Sn/HCl, seguido pela acilação, por exemplo usando umcloreto ácido e trietil amina em CH2Cl2 dá uma amida X.

Nos processos acima podem ser necessário para qualquergrupo funcional, por exemplo hidróxi ou grupos amino, presentes no materialde partida a serem protegido, deste modo podem ser necessário remover umou mais grupos protegidos para gerar o composto da Fórmula I.

Os grupos de proteção adequados e métodos para sua remoçãosão, por exemplo, aqueles descritos em "Protective groups in OrganicSynthesis" por T. Greene e P.G.M. Wutts, John Wiley e Sons Inc., 1991. Osgrupos hidróxi podem, por exemplo, serem protegidos pelos grupos arilmetilatal como fenilmetila, difenilmetila ou tifenilmetil; grupos acila tal comoacetila, tricloroacetila ou trifluoroacetila; ou como derivados detetraidropiranila. Os grupos de proteção amino incluem grupos arilmetila talcomo benzila, (R,S)-cc-feniletila, difenilmetila ou trifenilmetila, e grupos acilatal como acetila, tricloroacetila ou trifluoroacetila. Os métodos convencionaisde desproteção podem ser usados incluindo hidrogenólise, hidrólise de ácidoou base, ou fotólise. Os grupos arilmetila podem, por exemplo, ser removidospela hidrogenólise na presença de um catalisador de metal por exemplopaládio ou carvão. Os grupos tetraidropiranila podem ser clivados pelahidrólise sob condições ácidas. Os grupos acila podem ser removidos pelahidrólise com uma base tal como hidróxido de sódio ou carbonato de potássio,ou um grupo tal como tricloroacetila pode ser removido pela redução com,por exemplo, zinco e ácido acético.

Os compostos da fórmula I, e sais destes, podem ser isolados apartir de suas misturas de reação usando técnicas convencionais.

Os sais dos compostos da fórmula I podem ser formados pelareação do ácido livre, ou um sal deste, ou uma base livre, ou um sal ouderivado deste, com um ou mais equivalentes da base ou ácido apropriado, areação pode ser realizada em um solvente ou meio em que o sal é insolúvel ouem um solvente em que o sal é solúvel, por exemplo etanol, tetraidrofuranoou éter dietílico, que podem ser removidos à vácuo, ou pela secagem porcongelamento. A reação também pode ser um processo metatético ou pode serrealizado em uma resina trocadora de íon.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos dafórmula I incluem sais de metal alcalino, por exemplo sais de potássio esódio; sais de metal alcalino terroso, por exemplo sais de magnésio e cálcio;sais dos elementos do grupo III, por exemplo sais de alumínio; e sais deamônio. Os sais com bases orgânicas adequadas, por exemplo, sais comhidroxilamina; alquilaminas inferiores, por exemplo metilamina ou etilamina;com alquilaminas inferiores substituídas, por exemplo hidróxi alquilaminassubstituídas; ou com compostos heterocíclico de nitrogênio monocíclico, porexemplo piperidina ou morfolina; e sais com aminoácidos, por exemplo comarginina, lisina etc, ou um derivado de N-alquila deste; ou com umaminoaçúcar, por exemplo N-metil-D-glucamina ou glucosamina. Os saisfisiologicamente aceitáveis não tóxicos são preferidos, embora outros sais sãotambém úteis, por exemplo no produto de isolação e purificação.

Os diastereoisômeros podem ser separados usando técnicasconvencionais, por exemplo cromatografia ou cristalização fracional. Osvários isômeros ópticos podem ser isolados pela separação de um racêmico ououtra mistura dos compostos usando técnicas convencionais, por exemplocristalização fracional ou HPLC. Alternativamente os isômeros ópticosdesejados podem ser feitos pela reação dos materiais de partida ativoopticamente apropriado sob condições que não causarão racemisação.

Os substituintes que alquila pode representar incluem metila,etila, butila, por exemplo sec butila.

O halogênio pode representar F, Cl, Br e I, especialmente Cl.Os exemplos dos substituintes que R3 no composto da Fórmula1 pode representar incluem alquila, alcóxi ou arila, cada um opcionalmentesubstituído por uma ou mais, preferivelmente um a três substituintes, R2, quepodem ser os mesmos ou diferentes.

Além disso, os compostos que podem ser mencionadosincluem aqueles de:

fórmula I de acordo com a reivindicação 1 ou da fórmula II deacordo com a reivindicação 1 em que A5 representa N, em que:

L é ligação simples e R3 representa:

tioalquila opcionalmente substituído por alquila ou arilaopcionalmente substituída,

O-arila ou tioarila, em que a arila é opcionalmente substituída,arila opcionalmente substituída,

hidroxila,

NR10R11

SO2R12,

NR13 SO2R14,

C(=W)R16,

NR15C(=W)R17,

R10, R11, R12, R13, R14, R16 e R17, que podem ser os mesmos oudiferentes, representa hidrogênio, alquila opcionalmente substituído por arilaopcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, além disso,R10 e R11 junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel,

R pode ter o mesmo significado como NR10R11,

R16 e R17, que podem ser os mesmos ou diferentes, podem,cada um, representar

alquila substituído por um ou mais de halogênio, arilaopcionalmente substituída por alcóxi ou arila opcionalmente substituída,arilóxi opcionalmente substituído,arila ou NR10R11

e quando R16 ou R17 representa NR10R11, um de R10 e R11podem representar adicionalmente CO alquila opcionalmente substituído ouCOarila opcionalmente substituído, e

Além das definições divididas com R17, R16 pode representarhidroxila;

Ou os compostos da fórmula II de acordo com a reivindicação1 em que A5 representa CH, e em que

L é ligação simples e R3 representa:

tioarila, em que a arila é opcionalmente substituída,arila opcionalmente substituída,

hidroxila,NO2,CN,

NR10R11

halogênio,SO2R12,NR13SO2R14,C(=W)R16,OC(=W)NR10R11

NR15C(=W)R17,

R10, R11, R12, R13, R14 R15, R16 e R17, que podem ser os mesmosou diferentes,

representa hidrogênio, alquila opcionalmente substituído porarila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,além disso,

R10 e R11 junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel,

R12 pode ter o mesmo significado como NR10,R11R16 e R17, que podem ser os mesmos ou diferentes, podem,

cada um, representar

alquila substituído por um ou mais de halogênio, arilaopcionalmente substituída por alcóxi ou arila opcionalmente substituída,

arilóxi opcionalmente substituído,

arila ou NR10R11

Além das definições divididas com R17, R16 podem representarhidroxila.

Os compostos que podem ser mencionados incluem aquelesem que R1 e R2, que podem ser os mesmos ou diferentes, podem representar:alquila opcionalmente substituído por um ou mais halogênio,alcóxi ou arila opcionalmente substituída, tioarila ou arilóxi,

alcóxi opcionalmente substituído por alquila ou arilaopcionalmente substituída,

hidroxila,

OC(=W)NR10R11arila,

tioarila, em que a arila é opcionalmente substituída,NO2,

CN, NR10R11

halogênio,

SO2R12,

NR13 SO2R14,

C(=W)R16,

NR15C(=W)R17,

PC=OPR40R4I,

R10, R11, R12, R13, R14, R15, R165 R17, R40 e R4I, que podem seros mesmos ou diferentes, representa hidrogênio, alquila opcionalmentesubstituído por arila opcionalmente substituída, arila opcionalmentesubstituída,

além disso,

NR10R1 'junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel, R12 pode ter o mesmo significado como NRiuR11quando R17 representa NR10R11, que NR10R11 pode representarhidrogênio, COalquila e CO arila opcionalmente substituída,

R16 pode representar hidróxi, alcóxi, ou NR10R11,e R17 pode representar alquila substituído por um ou mais dehalogênio, alcóxi, arila opcionalmente substituída ou NR10R11Outros compostos que podem ser mencionados incluemaqueles de:

L representa um grupo ligador que é:O, S ou NR185

alquileno, alquenileno, alquinileno, cada um dos quais podemser opcionalmente interrompidos por um ou mais de O, S, NR18, ou uma oumais ligações simples, duplas ou triplas C-C, e R18 representa hidrogênio,alquila, COR16

ou um composto da Fórmula II de acordo com a reivindicação1 em que A5 representa CH, em que:

L representa um grupo ligador que é:O, S, NR18,

alquileno, alquenileno, alquenileno, cada um dos quais podeser opcionalmente interrompido por um ou mais de O, S, NR18, ou uma oumais ligações simples, duplas ou triplas C-C,uma -N-N- de ligação simples,e R18 representa hidrogênio, alquila, COR16

Alquila pode representar qualquer cadeia alquila. As alquilasincluem alquila saturada e insaturada, reta e ramificada, bem como alquilacíclica, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila e cicloeptila.Entretanto, preferivelmente, quando qualquer um dos substituintes representaalquila, alquila é saturada, linear ou ramificada e tem de 1 a 10 átomos decarbono, preferivelmente de 1 a 8 átomos de carbono e mais preferivelmentede 1 a 6 átomos de carbono. Quando qualquer um dos substituintes representaalquila, um grupo preferido particularmente é cicloalquila, por exemplociclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila e cicloeptila.

A arila pode representar qualquer sistema aromático.Preferivelmente, nos compostos da fórmula I, arila é um hidrocarbonetoaromático ou um heterociclo aromático de 5 a 10 membros contendo de 1 a 4heteroátomos selecionados de um átomo de oxigênio, um átomo de enxofre eum átomo de nitrogênio como um constituinte do anel além do carbono.

Preferimos heterociclos que contém um ou dois heteroátomos. Os heterociclosaromáticos que podem ser mencionados incluem furano, tiofeno, pirrol, epiridina.

Preferivelmente particular, quando arila é um hidrocarbonoaromático, a arila representa um sistema bicíclico ou monocíclico de 6 a 10membros, por exemplo fenila ou naftaleno.

Os heterociclos insaturados e saturados que podem sermencionados incluem aqueles contendo átomos de 4 a 7 anéis,preferivelmente átomos de 5 ou 6 anéis, contendo preferivelmente um a doisheteroátomos selecionado de N, S e O. Os heterociclos que podem sermencionados incluem pirrolidina, piperidina, tetraidrofurano, piperazina emorfolina. Os heterociclos contendo N são particularmente preferidos, porexemplos quando formas de NR10R11 de um anel heterocíclico.

Como detalhado acima, quando um par adjacente de A1-A4cada um representa CR1, os átomos de carbono adjacentes, junto com seussubstituintes podem formar um anel B. Também, quando A5 representa CR1,então A5 e CR1 junto com seus substituintes podem formar um anel C.Preferivelmente anel B e/ou o anel C é um anel carbocíclico ou heterocíclicode 3 a 10 membros saturado ou insaturado.

Preferivelmente particular anel B é anel de benzeno.

Preferivelmente particular anel C é um anel heterocíclicosaturado ou insaturado de 3 a 10 membros.

Preferimos particularmente os compostos em que pelo menosum R1 representa NR15C(=W)R17, mais particularmente o grupo NR COR18.

Também preferimos os compostos em que pelo menos um R1representa CONR10R11

Para um grupo de compostos preferidos particularmente pelomenos um R1 representa um grupo amida NHCOR , em que R eselecionado de:

alquila Ci - Ce,alquila C1-C6 substituído por fenila

alquila C1-C6 substituído por alcóxi C1-C6,

haloalquila C1-C6,

perfluoroalquila C1-C6,

fenila opcionalmente substituído por um ou mais de halogênio,

alquila C1 - C6, alcóxi C1 - C6, amino, (alquila C1 - C6)amino, di(alquila C1 -C6) amino ou fenila,

CH:CH fenila,

naftila, piridinila, tiofenila e furanila.

Preferimos os compostos em que um ou ambos de R1 e R2 sãooutros do que -COOH.

Para um outro grupo de compostos preferidos particularmentepelo menos um r1 representa um grupo Nri5CONR10R1 então em que R10 eR11, que podem ser os mesmos ou diferentes, são selecionados de arilaopcionalmente substituída, alquila e COarila opcionalmente substituído. Umgrupo preferido particularmente que pelo menos um de R1 pode representar éNHCONHR15 e R15 é selecionado de fenila, alquila C1 a C6 e COfenilaopcionalmente substituído por um ou mais halogênio.

Para um outro grupo de compostos preferidos particularmentepelo menos um R1 representa alquila C1 a C6, opcionalmente substituído porfenila ou um heterociclo insaturado ou saturado de 5 a 6 membros contendoum ou dois heteroátomos selecionado de N, S e O. Os heterociclos preferidosincluem tiofeno, furano, piridina e pirrol.

Para um outro grupo de compostos preferidos particularmentepelo menos um R1 representa COR16 e R16 é alcóxi C1-C6, amino, (alquila C1-C6)amino ou di(alquila C1-C6) amino.

Para um outro grupo de compostos preferidos particularmentepelo menos um R1 representa:

NO2,halogênio,

amino ou (alquila C1- C6)amino ou di(alquila Cr C6) aminoem que a alquila Ci a C6 é opcionalmente substituído por fenila ou umheterociclo saturado ou insaturado de 5 ou 6 membros,

NHSO2alquila C1-C6, NHS02fenila,

S02alquila C1-C6,

fenila opcionalmente substituído por alcóxi C1 a C6 C1-C6,

um heterociclo mono ou bicíclico saturado ou insaturado de 5a 10 membros contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionado de N, S e O.

Também existe um amplo escopo para variação do grupo R .Preferivelmente R3 representa arila e é opcionalmente substituído por um atrês substituintes, R2, que podem ser os mesmos ou diferentes.

Preferivelmente particular, R3 é um sistema mono ou bicíclicoaromático de 5 a 10 membros, especialmente um sistema mono ou bicíclicoaromático de 5 a 10 membros de hidrocarbono, por exemplo benzeno ounaftaleno.

Alternativamente, o sistema mono ou bicíclico aromático de 5a 10 membros, pode ser um sistema heterocíclico contendo até trêsheteroátomos selecionado de Ν, O e S, por exemplo a tiofeno, furano, piridinaou pirn)L

Preferivelmente os substituintes R2 é/são selecionado de:

alquila C1-C6, opcionalmente substituído por tiofenila oufenóxi, cada um opcionalmente substituído por halogênio,

alcóxi Ci-C6

fenila,

tioalquila C1-C6

tiofenila, opcionalmente substituído por halogênio,

NO2,

CNNR10R11, em que R10 e R115 que podem ser os mesmos oudiferentes representa hidrogênio, alquila CrC6 ou junto com o nitrogênio aoqual este está ligado forma um anel de 5 a 7 membros que pode conter um oumais heteroátomos selecionados adicionais de Ν, O e S,halogênio

SO2R12, em que R12 representa um anel de 5 a 7 membros quepode conter um ou mais heteroátomos selecionados adicionais de N, O e SNHCOR17, em que R17 representa

alquila CrC6, opcionalmente substituído por:

fenila ou halogênio, ou

fenila opcionalmente substituído por alcóxi CrC6, carbóxi ouhalogênio, ou

um heterociclo saturado ou insaturado de 5 ou 6 membros,fenila ou um heterociclo saturado ou insaturado de 5 ou 6membros opcionalmente substituído por halogênio, alcóxi Ci a C6, carbóxi ouum grupo SO2NR10R11,

Preferivelmente particular quando R2 representa NR10R11,NR10R11 representa N-pirrol, N-piperidina, N1(CrC6) alquila N piperazina ouN-morfolina.

Preferivelmente o grupo ligador L representa:

-N H.NH--CH = CH-,-C=C-, ou

-NCOR16 em que R16 representa fenila ou um heterociclosaturado ou insaturado de 5 ou 6 membros opcionalmente substituído porhalogênio, alcóxi Ci a C6, carbóxi,

A1 - A4 pode representar N ou CR1. Conseqüentemente, osanéis de 6 membros pode conter 1, 2, 3 ou 4 átomos de nitrogênio. As formasde realização da invenção existem em que dois de A1 - A4 representanitrogênio, um de A1 - A4 representa nitrogênio e em que todos de A1 - A4representa CR1.

Em um grupo preferido particularmente dos compostos:

A1, A2, A3, A4 e A5 que podem ser os mesmos ou diferentes,representam N ou CR1, R9 representa -L-R3, em que L é uma ligação simplesou um grupo ligador,

O composto é da fórmula I ou da fórmula II em que A5representa N,

e

L é ligação simples e R3 representa:

tioalquila opcionalmente substituído por alquila ou arilaopcionalmente substituída, tioarila, em que a arila é opcionalmentesubstituída,

arila opcionalmente substituída,hidroxila,

NR10R11SO2R12,NR13SO2R14C(wW)R16,NR15C(=W)R17,

R10, R11, R12, R13, R14, R16 e R17, que podem ser os mesmos oudiferentes, representa hidrogênio, alquila opcionalmente substituído por arilaopcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,além disso,

R10 e R11 junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel,

R pode ter o mesmo significado como NRiuR11,R16 e R17, que podem ser os mesmos ou diferentes, podem,cada um, representaralquila substituído por um ou mais de halogênio, arilaopcionalmente substituída por alcóxi ou arila opcionalmente substituída,arilóxi opcionalmente substituído,arila ou NR10R11

e quando R16 ou R17 representa NR10R11, um de R10 e R11 poderepresentar adicionalmente CO alquila opcionalmente substituído ou COarilaopcionalmente substituído, e

Além das definições divididas com R17, R16 pode representarhidroxila;

Ou o composto é da fórmula II em que A5 representa CH, e emque L é ligação simples e R3 representa:

arila opcionalmente substituída,

hidroxila,

NO2,

CN,

NR10R11

halogênio,

SO2R12,

NR13 SO2R14,

C(=W)R16,

0C(=W)NR10R11

NR15C(=W)R17,

R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17, que podem ser os mesmos

ou diferentes,

R10 e R11 junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel,

R pode ter o mesmo significado como NR10R11,

R16 e R17, que podem ser os mesmos ou diferentes, podem,cada um, representar

alquila substituído por um ou mais de halogênio, arilaopcionalmente substituída por alcóxi

ou arila opcionalmente substituída,arilóxi opcionalmente substituído,arila ou NR10R11

e quando R16 ou R17 representa NR10R11,um de R10 e R11 poderepresentar adicionalmente CO alquila opcionalmente substituído ou COarilaopcionalmente substituído, e

Além das definições divididas com R17, R16 pode representarhidroxila e Além disso,

R1 e R2, que podem ser os mesmos ou diferentes, representam:alquila opcionalmente substituído por um ou mais halogênio,alcóxi ou arila opcionalmente substituída, tioarila ou arilóxi,

alcóxi opcionalmente substituído por alquila ou arilaopcionalmente substituída,hidroxila,OC(=W)NR10R11arila,

NO2,

CN, NR10R11halogênio,

SO2R12,

NR13SO2R14,

C(=W)R16,

NR15C(=W)R17,

R105 R115 R125 R13, R14, R15, R16 e R17, que podem ser os mesmos

ou diferentes,

NR10R11 junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel, R12 pode ter o mesmo significado como NRiuR1',

quando R17 representa NR10R11, que NR10R11 pode representarhidrogênio, COalquila e CO arila opcionalmente substituída,R16 pode representar hidróxi, alcóxi, ou NR10R1 \

e R17 pode representar alquila substituído por um ou mais dehalogênio, alcóxi, arila opcionalmente substituída ou NR10R11

quando um par adjacente de Aj - A4 cada um representa CRbentão os átomos de carbono adjacentes, junto com seus substituintes podemformar um anel B,

Também fornecemos um método para o tratamento ou

profilaxia de distrofia muscular de Duchenne, distrofia muscular de Becker oucaquexia no paciente em necessidade destes, compreendendo administrar aopaciente uma quantidade efetiva de um composto da Fórmula (I) ou (II) ouum sal farmaceuticamente aceitável.Os compostos da fórmula I para uso no tratamento de DMDserá geralmente administrado na forma de uma composição farmacêutica.

Deste modo, de acordo com o aspecto adicional da invençãoaqui é fornecido uma composição farmacêutica incluindo preferivelmentemenos do que 80% p/p, mais preferivelmente menos do que 50% p/p, porexemplo 0,1 a 20%, de um composto da Fórmula I ou um sal destefarmaceuticamente aceitável, como definido acima, em mistura com umdiluente ou carregador farmaceuticamente aceitável.

Também fornecemos um processo para a produção de uma talcomposição farmacêutica que compreende misturar os ingredientes. Exemplosde formulações farmacêuticas que podem ser usados, e diluentes oucarregadores adequados, são como seguintes:

por injeção intravenosa ou infusão - água purificada ousolução salina; para composições por inalação- lactose comum;

por tabletes, cápsulas e drágeas - celulose microcristalina,fosfato de cálcio, terra diatomáceas, um açúcar tal como lactose, dextrose oumanitol, talco, ácido esteárico, amido, bicarbonato de sódio e/ou gelatina;

por supositórios - óleos naturais ou endurecidos ou ceras.

Quando o composto é usado em solução aquosa, por exemplopara infusão, pode ser necessário incorporar outros excipientes. Em particularaqui pode ser mencionado agentes queladores ou seqüestrantes, antioxidantes,agentes ajustadores da tonicidade, agentes modificadores de pH e agentes detamponação.

As soluções contendo um composto da Fórmula I podem, sedesejado, ser evaporado, por exemplo pela secagem por congelamento ousecagem por pulverização, para dar uma composição sólida, que pode serreconstituída antes do uso.

Quando não em solução, o composto da Fórmula Ipreferivelmente é em uma forma tendo um diâmetro mediano de massa de0,01 a ΙΟμπι. A composição também pode conter agentes umectantes,estabilizantes e conserváveis, solubilizadores, por exemplo, um polímero decelulose solúvel em água tal como metilcelulose de hidroxipropila, ou umglicol solúvel em água tal como propileno glicol, agentes adoçantes e corantese flavorizantes. Onde apropriado, a composição pode ser formulada em umaforma de liberação sustentada.

O conteúdo do composto da fórmula I em uma composiçãofarmacêutica é geralmente a cerca de 0,01 a cerca de 99,9 % em peso,preferivelmente a cerca de 0,1 a cerca de 50 % em peso, relativo à preparaçãototal.

A dose do composto da Fórmula I é determinada emconsideração de idade, peso corporal, condição da saúde geral, dieta, períodode administração, método de administração, taxa de liberação, combinação demedicamentos, o nível da doença pelo qual o paciente está sob tratamento, eoutros fatores.

Enquanto a dose varia dependendo na doença alvo, condição,objeto da administração, método de administração e outros, paraadministração oral como um agente terapêutico para o tratamento de distrofiamuscular de Duchenne no sofrimento do paciente a partir de uma tal doença éde 0,01 mg - 10 g, preferivelmente 0,1 - 100 mg, é preferivelmenteadministrado em uma dose única ou em 2 ou 3 porções por dia.

A atividade potencial dos compostos da fórmula I para uso notratamento de DMD pode ser demonstrado no seguinte ensaio preditivo eavaliações.

1. Ensaio repórter de luciferase (células H2K de murina)

A linha celular usada para avaliação é um linha celular H2K decamundongo mdx imortalizado que foi estavelmente transfectado com umplasmídeo contendo fragmento «5kb do promotor utrofina A incluindo oprimeiro exon não traduzido ligado a um gene repórter de luciferase (verFigura 1).

Sob condições de baixa temperatura e meio contendointerferon, as células permanecem como mioblastos. Estas são colocadas emplacas de 96 reservatórios e cultivada na presença do composto por três dias.

O nível de luciferase é então determinada pela Iise celular e leitura da saída deluz a partir do gene de luciferase expressado utilizando uma placa deluminômetro.

Exemplo de resposta da dose farmacológica dos compostos noensaio é mostrado na Figura 2

2. Camundongo mdx

Os dados obtidos da ADMET data foi priorizado e oscompostos com a melhor atividade luciferase in vitro e dado ADMETrazoável foram priorizados para teste na prova de mdx do conceito do estudoonde o resultado foi para identificar se qualquer dos compostos tem ahabilidade de aumentar os níveis de proteína de utrofma em distrofinadeficiente muscular quando comparado ao veículo apenas dosado no controlede animais.

Aqui foram dois animais injetados com 10 mg/kg do compostoadministrado diariamente por 28 dias mais controle comparados com a idade.As amostras musculares foram retiradas e processadas para o seccionamento(para identificar aumento no tingimento sarcolemal de utrofma) e Westernblotting (para identificar o aumento total nos níveis de utrofma).

A Figura 3. Mostra um exemplo de seções musculares TAtingidas com anticorpo específico por utrofma de camundongo. A comparaçãoao músculo mdx apenas injetado com veículo, mostrou um aumento naquantidade de utrofma limitada sarcolemal.

Os músculos a partir dos camundongos tratados acima tambémforam retirados e processados por Western blotting e tingido com anticorposespecíficos (ver Figura 4). Novamente usando a dosagem no músculo comCPD-A mostrou um aumento significante nos níveis totais de utrofmapresente tanto músculo da perna TA quanto diafragma. Ambos oscamundongos expostos ao CPD-A (V2 e V3) mostraram níveis aumentadosde expressão de utrofma comparado ao controle.

Os dados de super-regulação positivos dos primeiros estudosde 28 dias foram então repetidos em um estudo de 28 dias com doiscamundongo adicionais. Um total de três compostos diferentes forammostrados duplicados na capacidade de aumentar o nível de expressão deutrofma no camundongo mdx quando liberado diariamente por 28 dias. Estedado demonstra a capacidade do composto quando liberado, causando umaumento significativo nos níveis de utrofma observados no músculo mdx eportanto dado a confidência que este método melhorará a doença como o dadoe data publicado total demonstrado que qualquer aumento de níveis deutrofma durante três dobras tem efeitos funcionais significantes em distrofinadeficiente muscular.

A manutenção da linha celular repórter H2K/mdx/Utro A

A linha celular repórter H2K/mdx/Utro A foi passada duasvezes em uma semana até aderir < 30% . As células foram desenvolvidas a 330C na presença de 10 % CO2.

Para remover os mioblastos colocando-se em placas, estesforam incubados com Tripsina / EDTA até a monocamada iniciada separar.

Meio de desenvolvimentoDMEM Gibco 4196620 % de FCS1 % de Pen/Strep

1 % de glutamina

10 ml de extrato de embrião de pintinho

Interferon(1276 905 Roche) adicionado ao meio 10 μΐ / 50 mlfrescoEnsaio de luciferase por placas de 96 reservatórios

As células da linha celular repórter H2K/mdx/Utro A porplacas de 96 reservatórios foram colocadas nas placas de 96 reservatórios(Falcon 353296, branco opaco) em uma densidade de aproximadamente 5000células/reservatórios em 190 μl de meio de desenvolvimento normal. Asplacas foram então incubadas a 33 °C na presença de 10 % de CO2 por 24horas.

Os compostos foram dosados pela adição de 10 μl docomposto diluído para cada reservatório dando uma concentração final de 10μΜ. As placas foram então incubadas por 48 horas adicionais.

As células então lisadas in situ seguindo os protocolos defabricação (Promega Steady-Glo Luciferase Assay System (E2520). Entãocontadas por 10 segundos usando uma placa de luminômetro (Victorl420).

Armazenagem do composto

Os compostos para avaliação foram armazenados a -20°Ccomo estoque de 10 mM em 100 % de DMSO até requerido.

Injeção de compostos com camundongos mdx

Mdx de uma colônia de criação foram selecionados para teste.

Os camundongos foram injetados diariamente com veículo ou 10 mg/kg docomposto usando a via intraperitoneal (ip). Os camundongos foram pesados eos compostos diluídos em 5 % de DMSO, 0,1 % de tween em PBS.

Os camundongos foram sacrificados pela deslocação cervicalem pontos de tempo desejado, e músculos retirados para análise.

Análise muscular

Imunoistoquímica

Os tecidos para o seccionamento foram dessecados, imersosem OCT (Bright Cryo-M-Bed) e congelados em isopentano esfriado pornitrogênio líquido. As crio-seções 8 μΜ não fixadas foram cortadas em umBright Cryostat e armazenadas a -80°CEm disposição para tingimento, as seções foram bloqueadasem 5 % em soro fetal bovino em PBS por 30 minutos. Os anticorposprimários foram diluídos no reagente bloqueador e incubados nas seções por1,5 horas em uma câmara úmida então lavados três vezes por 5 minutos emPBS.

Os anticorpos secundários também diluídos em agentesbloqueadores, foram incubados em 1 hora no escuro em uma câmara úmida.Finalmente as seções foram lavadas três vezes 5 minutos em PBS e tampadeslizante montada com hidromount. As lâminas foram analisadas usando ummicroscópio fluorescente Leica.

Resultados

A atividade biológica como estimada usando o ensaio repórterde luciferase em células H2K de murina, e é classificada como seguintes:

+ até 200 % relativo ao controle++ entre 201 % e 300 % relativo ao controle+++ entre 301 % e 400 % relativo ao controle++++ acima de 401 % relativo ao controle

Tabela 1: Compostos feitos pelos métodos descritos neste.

<table>table see original document page 29</column></row><table><table>table see original document page 30</column></row><table><table>table see original document page 31</column></row><table>Tabela 2: Compostos feitos pelos métodos análogos àqueles descritos neste,ou pelos métodos da literatura conhecidos ou adaptados pela pessoa habilitadana técnica.

<table>table see original document page 32</column></row><table>

Experimental

O HPLC-UV-MS foi realizado em um Gilson 321 HPLC comdetecção realizado por um Gilson 170 DAD e um espectrômetro de massaFinnigan AQA operando em modo de ionização por eletropulverização. Acoluna HPLC usada é um Phenomenex Gemini Cl8 150 χ 4,6 mm.

O HPLC preparativo foi realizado em um Gilson 321 comdetecção realizada por um Gilson 170 DAD. As frações foram coletadasusando um coletor de fração Gilson 215. A coluna de HPLC preparativausada é um Phenomenex Gemini C18 150 χ 10 mm e a fase móvel éacetonitrila/ água.

Os espectros 1H RMN foram registrados em um instrumentoBruker operando a 300 MHz. Os espectros RMN foram obtidos comosoluções CDCl3 (relatada em ppm), usando clorofórmio como a referênciapadrão (7,25 ppm) ou DMSO-D6 (2,50 ppm). Quando as multiplicidades depico são relatadas, as seguintes abreviações são usadas (singleto), d (dupleto),(tripleto), m (multipleto), br (amplificado), dd (dupleto de dupletos), dt(dupleto de tripletos), td (tripleto de dupletos). As constantes ligações, quandodadas, são relatadas em Hertz (Hz).

A cromatografia por coluna foi realizada pela cromatografiacintilante (40 a 651 = gel de sílica) ou usando um sistema de purificaçãoautomatizado (SP1™ Purification System de Biotage®). As reações nasmicroondas foram realizadas em um iniciador 8™ (Biotage). As abreviaçõesusadas são DMSO (sulfóxido de dimetila), HCl (ácido clorídrico), MgSO4(sulfato de magnésio), NaOH (hidróxido de sódio), Na2CO3 (carbonato desódio), NaHCO3 (bicarbonato de sódio), THE (tetraidrofurano).

<formula>formula see original document page 33</formula>Uma solução aquosa (10 ml) de nitrito de sódio (764 mg, 11,1mmol) foi adicionado às gotas para uma solução de N,N-dietil-p-fenilenodiamina (1,54 ml, 9,3 mmol) em 10 % ácido clorídrico aquoso (50ml) sob esfriamento. Após 15 minutos, sulfamato de amônio (1,58 g, 13,8mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada por 15 minutos. Apóso ajuste do pH ao pH 5 usando acetato de sódio, 1,3-fenilenodiamina (lg, 9,2mmol) foi adicionado; a mistura foi então agitada por 2 horas e entãobasificado por pH 9 usando IM de hidróxido de sódio. O acetato de etila foiadicionado e a camada orgânica lavada duas vezes com salmoura. As camadasorgânicas combinadas foram secadas em anidros MgSO4 e evaporadas paraproduzir um sólido vermelho. Uma solução de sulfato de cobre (10 g) emamônia aquosa (30 ml de 28 % amônia em 30 ml de água) foi adicionado aosólido vermelho obtido previamente em piridina (40 ml). A solução foi entãosubmetida ao refluxo por 16 horas. Após esfriar, o acetato de etila foiadicionado, e a camada orgânica lavada duas vezes com salmoura. Ascamadas orgânicas combinadas foram secadas em anidros MgSO4 eevaporadas para obter um sólido vermelho escuro, que foi triturado com éterdietílico para produzir 1,09 g (42 %) do composto título(LCMS RT = 7,06 minutos, MH+ 282,1)

1H RMN (DMSO): 8,02 (2H, d, J 9,3 Hz), 7,68 (1H, d, J 9,1Hz), 6,96 (1H, dd, J 9,1 2,0 Hz), 6,86 (2H, d, J9,3 Hz), 6,75 (1H, dd, J 1,9 0,6Hz), 5,55 (2H, br), 3,46 (4H, q, J 7,1 Hz ), 1,19 (6H, t, J 7,1 Hz)

Todos os compostos abaixo foram preparados seguindo omesmo procedimento geral e purificados pela trituração com éter dietílico oupela cromatografia por coluna em gel de sílica eluindo-se com um gradientede acetato de etila/hexanos.

6-Metil-2-(4-morfolinofenil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-amina

LCMS RT = 5,95 minutos, MHf 311,9; 1H RMN (DMSO):8,03 (2Η, d, J 9,2 Hz), 7,55 (1H, s), 7,11 (2H, d, J9,3 Hz), 6,81 (1H, s), 5,32(2H, s), 3,78-3,75 (4H, m), 3,19-3,16 (4H, m), 2,26 (3H, s)

2-(4-Clorofenil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-aminaLCMS RT = 6,72 minutos, MH+ 245,0; 1H RMN (DMSO):8,19 (2H, d, J 9,0 Hz), 7,69 (1H, d, J 9,4 Hz), 7,66 (2H, d, J 9,1 Hz), 6,99 (1H,dd, J 9,1 2,0 Hz), 6,68 (1H, d, J 1,9 Hz), 5,71 (2H, s)

2-(4-(Piperidin-1 -il)fenil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-aminaLCMS RT = 7,21 minutos, MH+ 294,2; 1H RMN (DMSO):7,99 (211, d, J 9,2 Hz), 7,65 (HI, d, J 9,2 Hz), 7,08 (2H, d, J 9,2 Hz), 6,92(1H, dd, J 9,0 1,9 Hz), 6,70-6,69 (111, m), 5,53 (2H, s), 3,28-3,23 (4H, m),1,68-1,54 (6H, m)

2-(4-(Dimetilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-aminaLCMS RT = 6,13 minutos, MH+ 254,1; 1H RMN (DMSO):7,99 (2H, d, J 9,2 Hz), 7,64 (1H, d, J9,2 Hz), 6,91 (1H, dd, J9,0 2,0 Hz), 6,86(2H, d, J9,2 Hz), 6,70 (1H, d, J 1,5 Hz), 5,50 (2H, s), 2,99 (6H, s)2-(4-(4-Metilpiperazin-1 -il)fenil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-amina

LCMS RT = 4,86 minutos, MH" 309,1; 1H RMN (DMSO):8,01 (2H, d, J 9,2 Hz), 7,65 (1H, d, J 9,2 Hz), 7,10 (2H, d, J 9,2 Hz), 6,93 (1H,dd, J 9,0 1,9 Hz), 6,70-6,69 (1H, m), 5,54 (2H, s), 2,23 (4H, s)

2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d] [1,2,3]triazol-5-aminaLCMS RT - 7,13 minutos, MHf 259,0; 1H RMN (DMSO):8,19 (2H, d, J 8,9 Hz), 7,65 (2H, d, J 8,9 Hz), 7,60-7,59 (1H, m), 6,80 (1H, s),5,48 (2H, s), 2,27 (3H, s)

Método 2 :Compostos II

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)nicotinamida

Para uma solução de 2-(4-clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-amina (50 mg, 0,19 mmol) e trietilamina (108 μί,0,77 mmol) em diclorometano (4 ml) foi adicionado cloridreto cloreto de 3-nicotinoila (38 mg, 0,21 mmol). A mistura resultante foi agitada emtemperatura ambiente durante a noite. O diclorometano foi adicionado e acamada orgânica foi lavada duas vezes com Na2CO3 aquoso saturado. Ascamadas orgânicas combinadas foram secadas em anidros MgSO4 eevaporadas. O sólido resultante foi lavado com éter dietílico para produzir 7mg (10 %) do composto título (LCMS RT = 6,30 minutos, MHf364,2)

1H RMN (DMSO): 10,26 (1H, s), 9,20 (1H, m), 8,82-8,79 (1H,m), 8,39-8,32 (3H, m), 8,13 (1H, s), 7,96 (1H, s), 7,74 (2H, d, J8,9 Hz), 7,65-7,57 (lH,m)

Todos os compostos abaixo foram preparados seguindo omesmo procedimento geral.

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)isonicotinamida

LCMS RT = 6,37 minutos, MH+ 364,0; 1H RMN (DMSO):10,33 (1H, s), 8,83 (211, d, J6,0 Hz), 8,33 (211, d, J 8,8 Hz), 8,12 (1H, s),7,96-7,92 (3H, m), 7,73 (2H, d, J 8,9 Hz)

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)benzamida

LCMS RT = 7,63 minutos, MH+363,1; 1H RMN (DMSO):10,05 (1H, s), 8,33 (2H, d, J9,l Hz), 8,10 (1H, s), 8,04-7,94 (3H, m), 7,73(2H, d, J9,l Hz), 7,64-7,55 (3H, m)

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)-4-metoxibenzamida

LCMS RT = 7,63 minutos, MHf 392,7; 1H RMN (DMSO):9,88 (1H, s), 8,32 (2H, d, J 9,1 Hz), 8,08 (1H, s), 8,02 (2H, d, J8,8 Hz), 7,93(1H, s), 7,73 (2H, d, J9,0 Hz), 7,09 (2H, d, J 8,8 Hz), 3,86 (3H, s)

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)-2-metoxibenzamidaLCMS RT = 9,42min; 1H RMN (DMSO): 10,23 (IH5 s), 8,78(1H, s), 8,32 (2H, d, J 9,0 Hz), 8,07-8,05 (1H, m), 7,96 (1H, s), 7,72 (2H, d, J9,0 Hz), 7,66-7,59 (1H, m), 7,33-7,15 (2H, m), 4,08 (3H, s)

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)tiofeno-2-carboxamida

LCMS RT = 7,44 minutos, MH"369,0; 1H RMN (DMSO):10,07 (1H, s), 8,32 (2H, d, J9,l Hz), 8,05-8,03 (2H, m), 7,95 (1H, s), 7,90(1H, dd, J 5,0 1,0 Hz), 7,72 (2H, d, J 8,9 Hz), 7,28-7,25 (1H, m), 2,45 (3H, s)N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)propionamida LCMS RT = 6,86 minutos, MH" 315,2; 1H RMN (DMSO):9,48 (1H, s), 8,47 (2H, d, J 8,9 Hz), 8,32 (1H, s), 8,03 (1H, s), 7,88 (2H, d, J8,9 Hz), 2,59 (3H, s), 1,30 (3H, t, J 7,1 Hz)

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)butiramida LCMS RT = 7,32 minutos, MH+ 329,1; 1H RMN (DMSO): 9,34(111, s), 8,29 (211, d, J 8,9 Hz), 8,13 (1H, s), 7,86 (1H, s), 7,71 (211, d, J 8,9Hz), 2,42 (3H, s), 1,66-1,60 (2H, m), 0,97 (3H, t, J7,l Hz)

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)pentanamida LCMS RT - 7,82 minutos, MH+ 343,2; 1H RMN (DMSO):9,34 (1H, s), 8,30 (2H, d, J 8,9 Hz), 8,13 (1H, s), 7,86 (1H, s), 7,71 (2H, d, J8,9 Hz), 2,41 (3H, s), 1,66-1,58 (2H, m), 1,42-1,33 (2H, m), 0,94 (3H, t, J7,l Hz)

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)isobutiramida LCMS RT = 7,23 minutos, MHf 329,2; 1H RMN (DMSO):9,31 (1H, s), 8,30 (2H, d, J 8,9 Hz), 8,09 (1H, s), 7,87 (1H, s), 7,71 (2H, d, J8,9 Hz), 2,77-2,73 (1H, m), 2,41 (3H, s), 1,17 (6H, d, J 6,8 Hz)

N-(2-(4-Clorofenil)-6-metil-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)furan-2-carboxamida

LCMS RT = 7,44 minutos, MH+353,1; 1H RMN (DMSO):9,89 (1H, s), 8,32 (2H, d, J9,l Hz), 8,10 (1H, s), 7,98-7,93 (2H, m),7,73 (2Η, d, J 8,9 Hz), 7,36 (1H, dd, J3,5 0,8 Hz), 6,74 (1H, dd, J3,5 1,8 Hz),2,44 (3H, s)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-6-metil-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)nicotinamida

LCMS RT = 6,94 minutos, MH+ 401,0; 1H RMN (DMSO):10,23 (1H, s), 9,20 (1H, m), 8,81-8,78 (1H, m), 8,39-8,33 (1H, m), 8,08 (2H,d, J9,l Hz), 8,01 (1H, s), 7,88-7,86 (1H, m), 7,63-7,56 (1H, m), 6,85 (2H, d, J9,2 Hz), 3,43-3,40 (4H, m), 1,15 (6H, t, J 6,7 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)isonicotinamida

LCMS RT = 6,99 minutos, ΜΗ*400,9; 1H RMN (DMSO):10,31 (1H, s), 8,82 (2H, d, J6,0 Hz), 8,08 (2H, d, J 9,2 Hz), 8,00 (1H, s), 7,93(2H, d, J 5,9 Hz), 7,89-7,87 (1H, m), 6,85 (2H, d, J9,2 Hz), 3,42-3,38 (4H, m),2,43 (3H, s), 1,15 (6H, t, J7,2 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)propionamida

LCMS RT - 7,51 minutos, MH+352,2; 1H RMN (DMSO):9,28 (111, s), 8,06-8,02 (311, m), 7,78 (111, s), 6,83 (211, d, J9,2 Hz), 3,42-3,37 (611, m), 2,38 (311, s), 1,16-1,10 (911, m)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)butiramida

LCMS RT = 7,97 minutos, MH+ 366,1; 1H RMN (DMSO):9,32 (1H, s), 8,04 (2H, d, J 8,9 Hz), 8,00 (1H, s), 7,78 (1H, s), 6,84 (2H, d, J8,9 Hz, 1,70-1,62 (211, m), 1,17-1,07 (6H, m), 0,97 (3H, t, J7,l Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5 -il)pentanamida

LCMS RT = 8,53 minutos, MH+ 379,9; 1H RMN (DMSO):9,32 (1H, s), 8,04 (2H, d, J 8,9 Hz), 8,00 (1H, s), 7,78 (1H, s), 6,83 (2H, d, J8,9 Hz), 3,50-3,35 (6H, m), 2,39 (3H, s), 1,65-1,61 (2H, m), 1,41-1,34 (2H,m), 1,17-1,07 (6Η, m), 0,94 (3Η, t, J7,l Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5 -il)isobutiramida

LCMS RT = 7,92 minutos, MHf 366,1; 1H RMN (DMSO):9,29 (1H, s), 8,05 (2H, d, J 8,9 Hz), 7,96 (1H, s), 7,78 (1H, s), 6,84 (2H, d, J8,9 Hz), 3,42-3,37 (4H,m), 2,41 (3H, s), 1,17-1,07 (12H, m)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-6-metil-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)furan-2-carboxamida

LCMS RT = 8,18 minutos, MHf 389,9; 1H RMN (DMSO):9,87 (1H, s), 8,07 (2H, d, J 9,1 Hz), 7,98 (1H, s), 7,98-7,96 (1H, m), 7,85 (1H,m), 7,34 (1H, dd, J 3,4 0,7 Hz), 6,87 (2H, d, J9,2 Hz), 6,73 (1H, dd, J3,5 1,7Hz), 3,42-3,37 (4H,m), 2,41 (3H, s), 1,17-1,07 (6H, m)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)nicotinamida

LCMS RT = 7,19 minutos, MH+ 387,1; 1H RMN (DMSO):10,69 (1H, s), 9,16 (1H, s), 8,82-8,77 (1H, m), 8,54 (1H, s), 8,34 (1H, d, J 7,8Hz), 8,08 (2H, d, J 9,3 Hz), 7,98 (1H, d, J 9,3 Hz), 7,71 (1H, dd, J 9,1 1,7 Hz),7,58-7,53 (1H, m), 6,85 (2H, d, J 9,2 Hz), 3,44 (4H, q, J6,8 Hz ), 1,18 (6H, t,J6,8 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d] [1,2,3]triazol-5-il)isonicotinamida

LCMS RT = 7,23 minutos, MH+387,1; 1H RMN (DMSO):10,74 (1H, s), 8,82 (2H, d, J5,6 Hz), 8,58-8,53 (1H, m), 8,08 (2H, d, J9,4 Hz),7,98 (1H, dd, J9,l 0,6 Hz), 7,91 (2H, d, J 6,1 Hz), 7,71 (1H, dd, J 9,1 1,8 Hz),6,86 (2H, d, J 9,1 Hz), 3,43 (4H, q, J 7,1 Hz), 1,15 (6H, t, J7,l Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)acetamida

LCMS RT = 6,89 minutos, MH+ 324,2; 1H RMN (DMSO):10,20 (1H, s), 8,38 (1H, d, Jl,8 Hz), 8,04 (2H, d, J 9,2 Hz), 7,89 (1H, dd, J 9,10,6 Hz), 7,42 (1Η, dd, J 9,2 1,8 Hz), 6,84 (2Η, d, J9,2 Hz), 3,43 (4H, q, J6,9Hz), 2,11 (3H, s), 1,14 (6H, t, J6,9 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d] [1,2,3]triazol-5-il)propionamida LCMS RT = 7,50 minutos, MH+338,2; 1H RMN (DMSO):10,12 (1H, s), 8,41 (1H, d, Jl,0 Hz), 8,04 (2H, d, J 9,2 Hz), 7,89 (1H, d, J 9,2Hz), 7,44 (1H, dd, J 9,1 1,8 Hz), 6,84 (2H, d, J9,4 Hz), 3,42 (4H, q, J6,9 Hz),2,39 (2H, q, J7,4 Hz), 1,17-1,09 (9H, m)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)butiramida

LCMS RT = 8,00 minutos, MH+ 352,1; 1H RMN (DMSO):10,13 (1H, s), 8,42-8,40 (1H, m), 8,04 (2H, d, J9,2 Hz), 7,89 (1H, d, J9,2 Hz),7,44 (1H, dd, J9,l 1,7 Hz), 6,84 (2H, d, J 9,4 Hz), 3,42 (4H, q, J 6,9 Hz), 2,36(2H, q, J 7,4 Hz), 1,72-1,60 (2H, m), 1,14 (6H, t, J7,0 Hz), 0,95 (3H, t, J 7,4Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d] [1,2,3]triazol-5-il)pentanamida

LCMS RT = 8,60 minutos, MH+ 365,9; 1H RMN (DMSO):10,13 (1H, s), 8,42-8,40 (1H, m), 8,04 (2H, d, J9,2 Hz), 7,89 (1H, d, J9,2 Hz),7,44 (1H, dd, J9,l 1,7 Hz), 6,84 (2H, d, J9,4 Hz), 3,42 (4H, q, J6,9 Hz), 2,38(2H, q, J7,4 Hz), 1,67-1,57 (2H, m), 1,42-130 (2H, m), 1,14 (6H, t, J7,0 Hz),0,92 (3H, t, J 7,4 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)isobutiramida

LCMS RT - 7,95 minutos, MHf 352,2; 1H RMN (DMSO):10,09 (111, s), 8,42-8,35 (111, m), 8,04 (2H, d, J9,2 Hz), 7,89 (HT, d, J9,2Hz), 7,46 (1H, dd, J9,l 1,8 Hz), 6,84 (2H, d, J9,4 Hz), 3,42 (4H, q, J6,9 Hz),2,70-2,61 (1H, m), 1,18-1,12 (12H, m)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)furan-2-carboxamidaLCMS RT = 7,98 minutos, MH+ 376,3; 1H RMN (DMSO):10,43 (1H, s), 8,48-8,47 (1H, m), 8,07 (2H, d, J 9,2 Hz), 7,99-7,98 (1H, m),7,94 (1H, d, J 9,2 Hz), 7,74 (1H, dd, J 9,3 1,9 Hz), 7,40 (1H, d, J 3,5 Hz), 6,85(2H, d, J 9,3 Hz), 6,75-6,72 (1H, m), 3,43 (4H, q, J7,l Hz), 1,15 (6H, t, J7,0 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)tiofeno-2-carboxamida

LCMS RT = 8,47 minutos, MH+ 391,9; 1H RMN (DMSO):10,45 (1H, s), 8,46-8,45 (1H, m), 8,09-8,06 (3H, m), 7,96 (1H, d, J9,3 Hz),7,91 (1H, dd, J5,0 1,0 Hz), 7,70 (1H, dd, J 9,2 1,8 Hz), 7,28-7,25 (1H, m),6.84 (2H, d, J 9,4 Hz), 3,43 (4H, q, J 7,0 Hz), 1,15 (6H, t, J7,0 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)benzamida

LCMS RT = 8,62 minutos, MHf 385,9; 1H RMN (DMSO):15 10,50 (1H, s), 8,54-8,53 (1H, m), 8,08 (2H, d, J 9,2 Hz), 8,02-7,99 (2H, m),7,96 (1H, dd, J 9,1 0,6 Hz), 7,74 (1H, dd, J9,2 1,8 Hz), 7,67-7,54 (3H, m),6.85 (2H, d, J9,3 Hz), 3,44 (4H, q, J7,0 Hz), 1,15 (6H, t, J7,0 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)-4-metoxibenzamida

LCMS RT = 8,58 minutos, MH"416,2; 1H RMN (DMSO):10,33 (1H, s), 8,52-8,51 (1H, m), 8,06 (2H, d, J 9,2 Hz), 8,01 (2H, d, J 8,8Hz), 7,94 (1H, d, J9,2 Hz), 7,73 (1H, dd, J 9,2 1,8 Hz), 7,09 (2H, d, J 8,8 Hz),6,85 (2H, d, J 9,3 Hz), 3,86 (3H, s), 3,43 (4H, q, J7,0 Hz), 1,15 (6H, t, J7,0Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)-2-metoxibenzamida

LCMS RT = 9,56 minutos, MH"415,9; 1H RMN (DMSO):10,40 (1H, s), 8,56-8,55 (1H, m), 8,07 (2H, d, J9,2 Hz), 7,93 (1H, d, J9,2 Hz),7,67 (1H, dd, J7,5 1,6 Hz), 7,61 (1H, dd, J 9,1 1,7 Hz), 7,56-7,51 (1H, m),7,21 (1Η, d, J 8,6 Hz), 7,10 (HI, t, J7,5 Hz), 6,85 (211, d, J9,3 Hz), 3,93 (3H,s), 3,43 (4H, q, J7,0 Hz), 1,15 (6H, t, J7,0 Hz)

4-Cloro-N-(2-(4-(dietilamino)fenil)-2H-benzo[d][l,2,3]tríazol-5-il)benzamida

LCMS RT = 9,71 minutos, MH+ 420,0; 1H RMN (DMSO):10,56 (1H, s), 8,53-8,52 (1H, m), 8,08 (2H, d, J9,2 Hz), 8,04 (2H, d, J 8,7Hz), 7,96 (1H, d, J9,l Hz), 7,72 (1H, dd, J9,2 1,8 Hz), 7,65 (2H, d, J8,6 Hz),6,85 (2H, d, J9,2 Hz), 3,44 (4H, q, J7,0 Hz), 1,15 (6H, t, J7,0 Hz)

N-(2-(4-(Dietilamino)fenil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)-4-(dimetilamino)benzamida

LCMS RT = 8,84 minutos, MHf 428,9; 1H RMN (DMSO):10,02 (1H, s), 8,43-8,42 (1H, m), 7,99 (2H, d, J9,2 Hz), 7,85-7,82 (3H, m),7,66 (1H, dd, J9,l 1,7 Hz), 6,77 (2H, d, J9,4 Hz), 6,71 (2H, d, J9,l Hz), 3,35(4H, q, J7,0 Hz), 2,94 (6H, s), 1,07 (6H, t, J7,0 Hz)N-(2-(4-Clorofenil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)propionamida

LCMS RT = 7,16 minutos, MHf 301,0; 1H RMN (DMSO):10,22 (1H, s), 8,50-8,48 (1H, m), 8,30 (2H, d, J9,0 Hz), 7,97 (1H, d, J9,3 Hz),7,71 (2H, d, J9,0 Hz), 7,50 (1H, dd, J9,3 1,7 Hz), 1,13 (3H, t, J7,l Hz)N-(2-(4-Clorofenil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)butiramida

LCMS RT = 7,64 minutos, MHf 314,8; 1H RMN (DMSO):10,22 (1H, s), 8,49-8,48 (1H, m), 8,29 (2H, d, J9,0 Hz), 7,97 (1H, d, J9,3 Hz),7,71 (2H, d, J9,0 Hz), 7,51 (1H, dd, J9,3 1,7 Hz), 2,38 (2H, t, J7,0 Hz), 1,72-1,59 (2H, m), 0,94 (3H, t, J7,4 Hz)N-(2-(4-Clorofenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)isobutiramida

LCMS RT - 7,59 minutos, MH+ 314,9; 1H RMN (DMSO):10,18 (1H, s), 8,50-8,49 (1H, m), 8,30 (2H, d, J9,0 Hz), 7,97 (1H, d, J9,3 Hz),7,71 (2H, d, J9,0 Hz), 7,53 (1H, dd, J9,3 1,7 Hz), 2,67 (1H, m), 1,15 (6H, d,J6,8 Hz)

N-(2-(4-Clorofenil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol-5-il)acetamidaLCMS RT = 6,52 minutos, MH+ 287,0; 1H RMN (DMSO):10,30 (111, s), 8,47-8,45 (111, m), 8,29 (211, d, J 9,0 Hz), 7,98 (111, d, J 9,3Hz), 7,71 (2H, d, J 9,0 Hz), 7,49 (1H, dd, J9,3 1,7 Hz), 2,13 (3H, s)

N-(2-(3,4-Diclorofenil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol-5-il)isobutiramida

LCMS RT = 8,29 minutos, MH+ 349,1; 1H RMN (DMSO):10,20 (1H, s), 8,50 (1H, dd, J 1,8 0,7 Hz), 8,48 (1H, d, J 2,5 Hz), 8,27 (1H,dd, J 8,8 2,5 Hz), 7,98 (1H, dd, J 9,2 0,7 Hz), 7,92 (1H, d, J 8,8 Hz), 7,55 (1H,dd, J9,3 1,8 Hz), 2,71-2,62 (1H, m), 1,15 (6H, d, J6,8 Hz)

<formula>formula see original document page 43</formula>

Método 3 : Compostos III

2-(4-Clorofenil)-6-(metilsulfonil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol 1 -oxido

Cloridreto de (4-Clorofenil)hidrazina (1,64 g, 9,17 mmol), 1-fluoro-4-(metilsulfonil)-2-nitrobenzeno (1,00 g, 4,56 mmol) e trihidrato deacetato de sódio (l,87g, 13,7 mmol) foram colocados em suspensão em etanol(15 ml) e aquecido a refluxo por 6 horas. A mistura foi então esfriada emtemperatura ambiente e o produto removido pela filtração.

O resíduo foi lavado com metanol, água e então metanolnovamente para produzir 1,13 g (77 %) do composto título (LCMS RT = 5,92minutos, (MH^+MeCN) 364,9).

1HRMN (DMSO): 8,39-8,38 (1H, m), 8,21-8,14 (311, m),7,98 (1H, dd, J9,2 1,7 Hz), 7,80 (211, d, J9,0 Hz), 3,38 (3H, s)

6-(Metilsulfonil)-2-(naftalen-2-il)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol 1 -óxido

LCMS RT = 6,12min; 1H RMN (DMSO): 8,84 (1H, d, J 1,8Hz), 8,42-8,41 (1H, m), 8,27-8,10 (5H, m), 8,01 (1H, dd, J9,2 1,7 Hz), 7,76-7,68 (2H, m), 3,39 (3H, s)

Método 4 : Compostos IV

2-(4-Clorofenil)-5-(metilsulfonil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol

Para uma suspensão de 2-(4-clorofenil)-6-(metilsulfonil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol 1-óxido (157 mg, 0,49 mmol) e cloreto de amônio (52mg, 0,97 mmol) em tetraidrofurano/água 5:1 v/v (6 mL) a 80°C foiadicionado pó de ferro (136 mg, 2,43 mmol). A mistura resultante foi agitadapor 3 horas a 80 °C. Após esfriar, a solução foi passada através de umaalmofada de Celite® e lavada com tetraidrofurano. O filtrado foi entãoconcentrado à vácuo, colocado em suspensão com água e extraído três vezescom acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secadas emanidros MgSO4 e evaporadas. O sólido resultante foi purificado pela eluiçãode cromatografia por coluna com acetato de etila/hexanos 25:75 v/v paraproduzir 29,7mg (20 %) do composto título (LCMS RT = 6,59 min)

1HRMN (CDCl3): 8,60-8,58 (1H, m), 8,28 (2H, d, J 9,0 Hz),8,04 (1H, dd, J 9,0 0,9 Hz), 7,82 (1H, dd, J9,0 1,6 Hz), 7,49 (2H, d, J9,0 Hz),3,06 (3H, s)

O composto abaixo foi preparado seguindo o mesmoprocedimento geral.

2-(3,4-Diclorofenil)-5-(metilsulfonil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol

LCMS RT - 7,35 minutos, MH+ 342,1; 1H RMN (DMSO):8,70-8,69 (1H, m), 8,57 (1H, d, J2,5 Hz), 8,37-8,33 (2H, m), 8,04-7,97 (2H,m), 3,37 (3H, s)

5-(Metilsulfonil)-2-(naftalen-2-il)-2H-benzo[d][ 1,2,3] triazolLCMS RT = 6,92min; 1H RMN (DMSO): 9,01 (111, d, J 2,1Hz), 8,73-8,72 (111, m), 8,52 (1H, dd, J 8,9 2,2 Hz), 8,38 (1H, dd, J 9,0 0,8Hz), 8,27 (2H, d, J 8,6 Hz), 8,13-8,08 (1H, m), 8,02 (1H, dd, J9,0 1,7 Hz),7,71-7,67 (2H, m), 3,38 (3H, s)

Método 5 : Compostos V

2-(3,4-Diclorofenil)-5-(etilsulfonil)-2H-benzo[d][l,2,3] triazolPara um frasco Schlenk seco sob nitrogênio foi adicionado 2-(3,4-diclorofenil)-5-(metilsulfonil)-2H-benzo[d][l,2,3]triazol (93,5 mg, 0,27mmol) e tetraidrofurano seco (5 mL). A solução foi então esfriada até -78 °C,e lítio bis(trimetilsilil)amida (0,30 mL, 0,30 mmol) foi adicionado. A reaçãofoi deixada agitar a -78 0C por 1 hora, e então iodeto de metila (35 μί, 0,55mmol) foi adicionado. A solução foi deixada aquecer até temperaturaambiente por 16 horas. O cloreto de amônio aquoso saturado (10 mL) foiadicionado à solução, a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foiextraída três vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadasforam secadas em anidros MgSO4 e evaporadas. O sólido resultante foipurificado pela eluição de cromatografia por coluna com acetato deetila/hexanos 20:80 v/v para produzir 52 mg (54 %) do composto título(LCMS RT = 7,65 minutos)

1H RMN (DMSO): 8,68-8,67 (1H, m), 8,57 (1H, d, J2,5 Hz),8,38-8,33 (2H, m), 8,01-7,94 (2H, m), 3,46 (2H, q, J7,5 Hz), 1,15 (3H, t, J7,4Hz)O composto abaixo foi preparado seguindo o mesmoprocedimento geral.

2-(4-Clorofenil)-5-(etilsulfonil)-2H-benzo[d] [ 1,2,3]triazol

LCMS RT = 6,89min; 1H RMN (DMSO): 8,67-8,66 (1H, m),8,39 (2H, d, J 9,1 Hz), 8,34 (1H, dd, J 9,0 0,8 Hz), 7,95 (1H, dd, J 9,0 1,6 Hz),7,79 (2H, d, J 9,0 Hz), 3,45 (2H, q, J7,3 Hz), 1,15 (3H, t, J7,4 Hz)

<formula>formula see original document page 46</formula>

Método 6 : Compostos VI

(E)-4-Cloro-N-(4-(metilsulfonil)-2-nitrobenzilideno)anilina

Para 4-(metilsulfonil)-2-nitrobenzaldeído (250 mg, 1,09 mmol)em etanol (5 mL) com peneiras moleculares em temperatura ambiente foiadicionado 4-cloroanilina (139 mg, 1,09 mmol). A mistura resultante foiagitada em temperatura ambiente por 1 hora, e então aquecida a 70 0C por 1hora. Após esfriar, a mistura foi filtrada, e o filtrado concentrado à vácuo paraproduzir o composto título, que foi usado bruto na próxima etapa.

Método 7 : Compostos VII

2-(4-Clorofenil)-6-(metilsulfonil)-2H-indazol

Uma suspensão de (E)-4-Cloro-N-(4-(metilsulfonil)-2-nitrobenzilideno)anilina (133 mg, 0,39 mmol) em fosfato de trietila (2 mL) foiagitado a 105 0C por 3 horas. Após esfriar, um sólido foi filtrado e lavadocom hexanos para produzir 89 mg (74 %) do composto título (LCMS RT =6,17 minutos, MH+ 307,0)

1HRMN (DMSO): 9,36 (111, d, J 0,9 Hz), 8,34 (111, br), 8,19(211, d, J 8,9 Hz), 8,08 (111, dd, J 8,9 0,8 Hz), 7,73 (2H, d, J8,9 Hz), 7,58(1H, dd, J 8,8 1,4 Hz), 3,30 (3H, s)

O composto abaixo foi preparado seguindo o mesmoprocedimento geral.

2-(4-Clorofenil)-6-nitro-2H-indazol

LCMS RT = 7,27min; 1H RMN (DMSO): 9,40 (1H, s), 8,76-8,74 (1H, m), 8,20 (2H, d, J9,0 Hz), 8,08 (1H, d, J9,2 Hz), 7,89 (1H, dd, J9,22,0 Hz), 7,74 (2H, d, J 8,9 Hz)2-(4-Clorofenil)-2H-indazol

LCMS RT = 7,05 minutos, MH+ 229,0; 1H RMN (DMSO):9,14 (1H, d, J 0,9 Hz), 8,14 (2H, d, J9,0 Hz), 7,77 (1H, dt, J 8,4 1,1 Hz), 7,71(1H, dd, J 8,8 0,9 Hz), 7,67 (2H, d, J 9,0 Hz), 7,33 (1H, ddd, J 8,9 6,6 1,1 Hz),7,12 (1H, ddd, J 8,4 6,6 0,8 Hz)

Método 8 : Compostos VIIa2-(4-Clorofenil)-2H-indazol-6-amina

Para 2-(4-clorofenil)-6-nitro-2H-indazol (103 mg, 0,37 mmol)em tetraidrofurano:água 4:1 v/v (5 mL) em temperatura ambiente foiadicionado cloreto de amônio (40 mg, 0,75 mmol). A mistura foi aquecida a80 °C e pó de ferro (105 mg, 1,87 mmol) foi adicionado. A mistura resultantefoi agitada a 80 °C por 3 horas. Após esfriar, a solução foi filtrada através deuma almofada de Celite® e lavada com tetraidrofurano. Após evaporação dosolvente, a camada aquosa foi extraída duas vezes com acetato de etila. Ascamadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas emanidros MgSO4 e evaporadas para produzir 84 mg (92 %) do composto título.Método 9 : Compostos VIII

N-(2-(4-Clorofenil)-2H-indazol-6-il)isobutiramidaPara uma solução de 2-(4-clorofenil)-2H-indazol-6-amina (84mg, 0,34 mmol) em piridina (5 mL) em temperatura ambiente foi adicionadocloreto de isobutirila (43 μL, 0,41 mmol). A mistura resultante foi agitada emtemperatura ambiente por 16 horas. O acetato de etila foi adicionado e acamada orgânica foi lavada duas vezes com sulfato de cobre aquoso saturado,seguido por salmoura e água. As camadas orgânicas combinadas foramsecadas em anidros MgSO4 e evaporadas. O sólido resultante foi purificadopela eluição de cromatografia por coluna com acetato de etila/hexanos 25:75v/v para produzir 11 mg (10 %) do composto título (LCMS RT = 6,38minutos, MHf 314,2)

1HRMN (DMSO): 10,14 (111, s), 9,24 (111, d, JO,8 Hz), 8,42-8,40 (111, m), 8,31 (211, d, J 9,0 Hz), 7,89 (1H, dd, J 9,1 0,7 Hz), 7,85 (2H,d, J 8,9 Hz), 7,36 (1H, dd, J 9,0 1,6 Hz), 2,90-2,81 (1H, m), 1,34 (6H, d, J 6,8Hz)

Método 10: Compostos IX

2-(4'-Clorofenil)-6-(isopropilsulfonil)-2H-indazol

Para um frasco Schlenk sob nitrogênio foi adicionado 2-(4-clorofenil)-6-(metilsulfonil)-2H-indazol (200 mg, 0,65 mmol) etetraidrofurano seco (9 mL). A solução foi então esfriado até -78 °C, e lítiobis(trimetilsilil)amida (0,72mL, 0,72 mmol) foi adicionado. A reação foideixada agitar a -78 0C por 1 hora, e então iodeto de metila (81 μι, 1,31mmol) foi adicionado. A solução foi deixada aquecer até temperaturaambiente por 16 horas. O cloreto de amônio aquoso saturado (10 mL) foiadicionado à solução, a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foiextraído três vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadasforam secadas em anidros MgSO4 e evaporadas. O sólido resultante foipurificado pela eluição de cromatografia por coluna com acetato deetila/hexanos 1:2 v/v para produzir 20 mg (9 %) do composto título (LCMSRT = 6,53 minutos, ΜΗ^335,2)

1HRMN (DMSO): 9,37 (1H, d, J0,9 Hz), 8,29-8,27 (1H, m),8,18 (2H, d, J9,0 Hz), 8,07 (1H, dd, J 8,8 0,8 Hz), 7,72 (2H, d, J9,0 Hz), 7,49(1H, dd, J 8,8 1,6 Hz), 3,58-3,48 (1H, m), 1,20 (6H, d, J6,8 Hz)Os compostos listados na Tabela 2, podem ser preparadospelos métodos análogos aquele descrito acima, ou pelos métodos da literaturaconhecidos ou adaptados pela pessoa habilitada na técnica.

Claims

1. Uso de um composto da Fórmula (I) ou (II) <formula>formula see original document page 50</formula> em queA1, A2, A3, A4 e A5j que podem ser os mesmos ou diferentes,representam N ou CR1,R9 representa -L-R3, em que L é uma ligação simples ou umgrupo ligador e R3 representa hidrogênio ou um substituinte ealém disso,quando um par adjacente de A1 - A4 cada um representa CR1,então os átomos de carbono adjacentes, junto com seus substituintes podemformar um anel B,quando A5 representa CR1, então A5 e N - R9, junto com seussubstituintes podem formar um anel C,ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,caracterizado pelo fato de ser na fabricação de ummedicamento para o tratamento terapêutico e/ou profilático de distrofiamuscular de Duchenne, distrofia muscular de Becker ou caquexia.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que R3 no composto da Fórmula 1 representa alquila, alcóxi ou arila,cada um opcionalmente substituído por um a três substituintes, R2, que podemser os mesmos ou diferentes.

3. Uso de um composto, caracterizado pelo fato de ser deacordo com:fórmula I de acordo com a reivindicação 1 ou da fórmula II deacordo com a reivindicação 1 em que A5 representa N, em que:L é ligação simples e R3 representa:tioalquila opcionalmente substituído por alquila ou arilaopcionalmente substituída,O-arila ou tioarila, em que a arila é opcionalmente substituída,arila opcionalmente substituída,hidroxila,NR10R11SO2R12,NR13SO2R14,C(=W)R16,NR15C(=W)R17,R10 R11, R12, R13, R14, R16 e R17, que podem ser os mesmos oudiferentes, representa hidrogênio, alquila opcionalmente substituído por arilaopcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,além disso,R10 e R11 junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel,R12 pode ter o mesmo significado como NR10R11R16 e R17, que podem ser os mesmos ou diferentes, podem,cada um, representaralquila substituído por uma ou mais de halogênio, arilaopcionalmente substituída por alcóxi ou arila opcionalmente substituída,arilóxi opcionalmente substituído,arila ou NR10R11 e quando R16 ou R17 representa NRi0Rii, um de R10 e R11 poderepresentar adicionalmente CO alquila opcionalmente substituído ou COarilaopcionalmente substituído e além das definições divididas com R17 , R16podem representar hidroxila;OU um composto da Fórmula II de acordo com a reivindicação-1 em que A5 representa CH e em que L é ligação simples e R3 representa:tioalquila opcionalmente substituído por alquila ou arilaopcionalmente substituída, tioarila, em que a arila é opcionalmentesubstituída,arila opcionalmente substituída,hidroxila,NO2,CN,NR10R11,halogênio,SO2R12,NR13SO2R14,C(=W)R16,OC(=W)NRioR11NR15C(=W)R17,R10, R11, R12, R13, R14, R15j R16 e R17, que podem ser osmesmos ou diferentes, representa hidrogênio, alquila opcionalmentesubstituído por arila opcionalmente substituída, arila opcionalmentesubstituída,além disso,R10 e R11 junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel,R12 pode ter o mesmo significado como NRiuR11R16 e R17, que podem ser os mesmos ou diferentes, podem,cada um, representaralquila substituído por uma ou mais de halogênio, arilaopcionalmente substituída por alcóxi ou arila opcionalmente substituída,arilóxi opcionalmente substituído,arila ou NR10R11,e quando R16 ou R17 representa NR10R11, um de R10 e R11 poderepresentar adicionalmente CO alquila opcionalmente substituído ou COarilaopcionalmente substituído e além das definições divididas com R , Rpodem representar hidroxila.

4. Uso de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelofato de que R1 e R2, que podem ser os mesmos ou diferentes, podemrepresentar:alquila opcionalmente substituído por uma ou mais halogênio,alcóxi ou arila opcionalmente substituída, tioarila ou arilóxi,alcóxi opcionalmente substituído por opcionalmente poralquila ou arila opcionalmente substituída,hidroxila,OC(=W)NR10R11arila,tioalquila opcionalmente substituído por alquila ou arilaopcionalmente substituída,tioarila, em que a arila é opcionalmente substituída,NO2,CN,NR10R11halogênio,SO2R12,NR13SO2R14,C(=W)R16,NR15C(=W)R17,P(^O)OR40R41,R10, Rn, Ri2, Ri3, Ri4, Ri5, Ri6, Rn, R40 e R4I, que podem seros mesmos ou diferentes, representa hidrogênio, alquila opcionalmentesubstituído por arila opcionalmente substituída, arila opcionalmentesubstituída,além disso,NR10R11 junto com o nitrogênio ao qual este está ligado podeformar um anel, R12 pode ter o mesmo significado como NR10R11quando R17 representa NR10R11, que NR10R11 pode representarhidrogênio, COalquila e CO arila opcionalmente substituída,R16 podem representar hidróxi, alcóxi ou NR10R11,e R17 pode representar alquila substituído por uma ou mais dehalogênio, alcóxi, opcionalmente substituído arila ou NR10R11

5. Uso de um composto, caracterizado pelo fato de ser deacordo com:fórmula I de acordo com a reivindicação 1 ou a fórmula II deacordo com a reivindicação 1 em que A5 representa N,em que:L representa um grupo ligador que é:O, S ou NR18,alquileno, alquenileno, alquinileno, cada um dos quais podeser opcionalmente interrompido por uma ou mais de O, S, NR18 , ou uma oumais ligações simples, duplas ou triplas C-C5e R18 representa hidrogênio, alquila, COR16ou um composto da Fórmula II de acordo com a reivindicação 1 em que A5 representa CH, em que:L representa um grupo ligador que é:O, S, NR18,alquileno, alquenileno, alquinileno, cada um dos quais podeser opcionalmente interrompido por uma ou mais de O, S, NR18 , ou uma oumais ligações simples, duplas ou triplas C-C,uma ligação simples -N-N-,e R18representa hidrogênio, alquila, COR16.

6. Uso de um composto de acordo com qualquer reivindicaçãoprecedente, caracterizado pelo fato de que quando qualquer um dossubstituintes representa alquila, alquila é saturada e tem de 1 to 10 átomos decarbono.

7. Uso de um composto de acordo com qualquer reivindicaçãoprecedente, caracterizado pelo fato de que arila é um hidrocarbonetoaromático ou um heterociclo aromático de 5 a 10 membros contendo de 1 a 4heteroátomos selecionados de um átomo de oxigênio, um átomo de enxofre eum átomo de nitrogênio como um constituinte do anel além do carbono.

8. Uso de um composto de acordo com qualquer reivindicaçãoprecedente, caracterizado pelo fato de que arila é fenila ou naftaleno.

9. Uso de um composto de acordo com qualquer reivindicaçãoprecedente, caracterizado pelo fato de que arila é furano, tiofeno, pirrol oupiridina.

10. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o anel B ou o anel C é um anel carbocíclico ouheterocíclico de 3 a 10 membros saturado ou insaturado.

11. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o anel B é anel de benzeno.

12. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o anel C é um anel carbocíclico saturado ouinsaturado de 3 a 10 membros.

13. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que pelo menos um Rj representa NRi5C(=W)Ri7.

14. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que pelo menos um R] representa NRi5C(^O)Ri7.

15. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que pelo menos um Ri representa CONR]0Rn·

16. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que pelo menos um Ri representa NHCORnj emque R17 é selecionado de:alquila C1-C6,alquila C1-C6 substituído por fenila,alquila CrC6 substituído por alcóxi C1- C6,haloalquila C1-C6,perfluoroalquila C1-C6,fenila opcionalmente substituído por uma ou mais dehalogênio, alquila C1-C6, alcóxi C1-C6, amino, (alquila C1-C6)amino,di(alquila C1-C6) amino ou fenila,CH:CH fenila,naftila, piridinila, tiofenila e fiiranila.

17. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que um ou ambos de Ri e R2 é outro que não-COON.

18. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que pelo menos um de Ri representaNR15CONR10R11, em que Ri0 e Rn, que podem ser os mesmos ou diferentes,são selecionados de arila opcionalmente substituída, alquila e COarilaopcionalmente substituído.

19. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que pelo menos um de Ri representa NHCONHR15e R15 é selecionado de fenila, alquila C1 a C6 e COfenila opcionalmentesubstituído por um ou mais halogênio.

20. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que pelo menos um de Ri representa alquila C1 aC6, opcionalmente substituído por fenila ou um heterociclo saturado ouinsaturado de 4 a 7 membros, preferivelmente de 5 ou 6 membros contendopreferivelmente um a dois heteroátomos selecionado de N, S e O.

21. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1caracterizado pelo fato de que pelo menos um de Ri representa CORi6 e R]6 éalcóxi CrC6, amino, (alquila CrC6)amino ou di(alquila CrC6) amino.

22. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que pelo menos um de Ri representa:NO2,halogênio,amino ou (alquila Cr C6)amino ou di(alquila CrC6) amino emque a alquila Ci a C6 é opcionalmente substituído por fenila ou um heterociclosaturado ou insaturado de 5 ou 6 membros,NHS02alquila CrC6, NHS02fenila,S02alquila CrC6,fenila opcionalmente substituído por alcóxi Ci a C6 CrC6,um heterociclo mono ou bicíclico saturado ou insaturado de 5a 10 membros contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionado de N, S e O.

23. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que R3 representa arila e é opcionalmentesubstituído por um a três substituintes, R2, que podem ser os mesmos oudiferentes.

24. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 22,caracterizado pelo fato de que R3 é um sistema mono ou bicíclico aromáticode 5 a 10 membros.

25. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 23,caracterizado pelo fato de que o sistema aromático é um hidrocarboneto.

26. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 24,caracterizado pelo fato de que o hidrocarboneto aromático é benzeno ounaftaleno.

27. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 23,caracterizado pelo fato de que o sistema aromático é um sistema heterocíclicocontendo até três heteroátomos, que podem ser os mesmos ou diferentes,selecionado de Ν, O e S.

28. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 27,caracterizado pelo fato de que o sistema heterocíclico é tiofeno, furano,piridina ou pirrol.

29. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de que os substituintes R2 são selecionados de:alquila CrC6, opcionalmente substituído por tiofenila oufenóxi, cada um opcionalmente substituído por halogênio,alcóxi Ci-Cô,fenila,tioalquila Ci-Cô,tiofenila, opcionalmente substituído por halogênio,NO2,CNNR10R11, em que Rjo e Rn, que podem ser os mesmos oudiferentes representam hidrogênio, alquila CrC6 ou junto com o nitrogênio aoqual este está ligado forma um anel de 5 a 7 membros que pode conter um oumais heteroátomos selecionados adicionais de Ν, O e S,halogênio,SO2R12, em que Rj2 representa um anel de 5 a 7 membros quepode conter um ou mais heteroátomos selecionados adicionais de Ν, O e S,NHCORn, em que RnTepresentaalquila CrC6, opcionalmente substituído por:fenila ou halogênio oufenila opcionalmente substituído por alcóxi CrC6, carbóxi, ouhalogênio ouum heterociclo saturado ou insaturado de 5 ou 6 membros,fenila ou um heterociclo saturado ou insaturado de 5 ou 6membros opcionalmente substituído por halogênio, alcóxi Ci a C6, carbóxi ouum grupo SO2NR10R11

30. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 29,caracterizado pelo fato de que NRi0Riι representa N-pirrol, N-piperidina,N'alquila (C1-C6) alquila N piperazina ou N-morfolina.

31. Uso de um composto da Fórmula II de acordo com areivindicação 1 caracterizado pelo fato de que A5 representa CH, em que Lrepresenta:-ΝΉ.ΝΗ-,-CH=CH-,-C=C- ou-NCORi6 em que Ri6 representa fenila ou um heterociclosaturado ou insaturado de 5 ou 6 membros opcionalmente substituído porhalogênio, alcóxi Cl a C6, carbóxi.

32. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que dois de Ai - A4 representam nitrogênio.

33. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que um de Ai - A4 representa nitrogênio.

34. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que todos de A1 - A4 representam CRi.

35. Uso de um composto, caracterizado pelo fato de ser comolistado na tabela 1 de acordo com a reivindicação 1.