BRPI0514411B1

BRPI0514411B1 - Formulação, e, método de produzir uma formulação

Info

Publication number: BRPI0514411B1
Application number: BRPI0514411-6A
Authority: BR
Inventors: Daniel Dix; Katherine Bowers; Goolcharran Chimanlall
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals, Inc
Priority date: 2004-08-17
Filing date: 2005-08-17
Publication date: 2020-09-15
Also published as: ES2395035T3; CN101014617B; AU2005277357B2; EP2311871A2; US20060040852A1; CA2576519A1; PT1778723E; BRPI0514411A; DK1778723T3; CN101014617A; JP2012121894A; BRPI0514411B8; EP1778723A2; JP4948410B2; JP2008510716A; CA2576519C; HK1105421A1; EP2311871A3; WO2006023665A3; SI1778723T1

Abstract

formulação, e, método de produzir uma formulação. proporciona-se formulações de um antagonista de interleucina-1 (il-1) incluindo uma formulação pré-liofilizada, um formulação liofilizada reconstituída, e uma formulação líquida estável. de preferência, o antagonista de il-1 é uma captação de il-1 constituída de um dímero de duas proteínas de fusão apresentado uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste de seq id no: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, e 26. da forma mais preferível, a proteína de fusão tem a seqüência da seq id no: 10.

Description

[0001] A presente invenção refere-se a formulações farmacêuticas compreendendo agentes capazes de inibir interleucina-1 (IL-1), e métodos para preparar e usar referidas formulações.

Declaração sobre a arte relacionada

[0002] Descreveu-se antagonistas de interleucina-1 (IL-1) capazes de bloquear ou inibir a ação biológica da IL-1. Um exemplo de antagonista de IL-1, uma captação de IL-1, é descrita na Publicação de Patentes US n° 2003/0143697, publicada em 31 de julho de 2003. Uma captação de IL-1 é uma proteína de fusão específica para IL-1 compreendendo dois componentes de receptor de IL-1 e um componente multimerizador.

[0003] Liofilização (secagem com congelamento em condições controladas) é usada comumente para armazenamento de longo prazo de proteínas. A proteína liofilizada é substancialmente resistente à degradação, agregação, oxidação, e outros processos degenerativos, enquanto no estado secado com congelamento (ver, por exemplo, US 6.436.897).

Breve sumário da invenção

[0004] Proporciona-se aqui formulações estáveis de um antagonista de interleucina-1 (IL-1). As formulações farmaceuticamente aceitáveis da invenção compreendem uma captação de IL-1 com um veículo farmaceuticamente aceitável. Em concretizações específicas proporciona-se formulações líquidas e secadas com congelamento, ou liofilizadas:

[0005] Em um primeiro aspecto exemplar, a invenção apresenta uma formulação de pré-liofilização de um antagonista de interleucina-1 (IL-1), compreendendo antagonista de proteína de IL-1 capaz de ligação e inibição da ação biológica da IL-1; um tampão; um co-solvente orgânico ou agente encorpante, e um ou mais lio-protetores. Em uma concretização específica, o antagonista de IL-1 é uma proteína de fusão capaz de ligação com IL-1; o tampão é histidina, o co-solvente orgânico ou agente encorpante é PEG, e o lio-protetor(es) é pelo menos um dentre glicina, arginina, e sacarose. Em uma concretização, a formulação pré-liofilizada da invenção não contém um conservante.

[0006] Em uma concretização da formulação de pré-liofilização da invenção, a formulação compreende, 5-100 mM de histidina, 0,5-3,0 % de PEG, 0,25-3,0 % de glicina, 5-50 mM de arginina; 0,5-30,0 % de sacarose, e 5-50 mg/ml de um antagonista de IL-1, em um pH de cerca de 6,5. Em uma concretização, a formulação de pré-liofilização pode compreender até 5 rnM de citrato e/ou 0,003-0,005 % de polissorbato. O polissorbato presente pode ser, por exemplo, polissorbato 20 ou 80.

[0007] Em uma concretização mais específica, a formulação de pré- liofilização de um antagonista de IL-1 compreende cerca de 20 mM de histidina, cerca de 1,5 % de PEG 3350, cerca de 0,5 % de glicina, cerca de 25 mM de arginina, cerca de 1,0 % de sacarose, e cerca de 40 mg/ml de captação de IL-1, em um pH de cerca de 6,5. Em uma concretização específica, o antagonista de IL-1 é uma captação de proteína de fusão de captação de IL-1 como mostrado na SEQ 10 NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26. Mais preferivelmente, a captação de IL-1 é a captação mostrada na SEQ ID - NO 10.

[0008] Em um concretização preferida, a formulação de antagonista de IL-1 de pré-liofilização consiste essencialmente de cerca de 20 mM de histidina, cerca de 1,5 % de PEG 3350, cerca de 0,5 % de glicina, cerca de 25 mM de arginina, cerca de 1,0 % de sacarose, e cerca de 40 mg/ml da proteína de fusão de IL-1 apresentando a seqüência de SEQ ID NO: 10, em um pH de cerca de 6,5. Citrato (inferior ou igual a cerca de 0,15 mM) e polissorbato (inferior ou igual a cerca de 0,005 %) podem estar presentes.

[0009] Em um segundo aspecto, a invenção apresenta uma formulação de antagonista de IL-1 de pré-liofilização que consiste essencialmente de cerca de 20 mM de histidina, cerca de 1,5 % de PEG 3350, cerca de 0,5 % de glicina, cerca de 25 mM de arginina, cerca de 1,0 % de sacarose, e cerca de 40 mg/ml da proteína de fusão de IL-1 apresentando a seqüència de SEQ ID NO: 10, em um pH de cerca de 6,5, sendo que a formulação de pré-liofilização não contém um conservante, um tampão de fosfato, mais do que quantidades em traços de NaCl, e/ou mais de 1,5 % de sacarose. Citrato pode estar presente em quantidades abaixo de cerca de 0,15 mM, e até cerca de 0,005-0,01 % de polissorbato 20 também pode estar presente.

[00010] Em um terceiro aspecto, a invenção apresenta um método de produzir uma formulação liofilizada de um antagonista de IL-1, compreendendo submeter a formulação de antagonista de IL-1 de pré- liofilização da invenção a liofilização para gerar uma formulação de antagonista de IL-1 liofilizada. A formulação liofilizada pode ser liofilizada por meio de qualquer métodos conhecido na arte para liofilizar um líquido.

[00011] Em um quarto aspecto relacionado, a invenção apresenta um método de produzir uma formulação liofilizada reconstituída de um antagonista de IL-1 compreendendo reconstituir a formulação liofilizada da invenção a uma formulação reconstituída. Em uma concretização, a formulação reconstituída é duas vezes a concentração da formulação pré- liofilizada, p. ex., o método da invenção compreende, (a) produzir uma formulação de pré-liofilização de um antagonista de IL-1 que consiste de cerca de 20 mM de histidina, cerca de 1,5 % de PEG 3350, cerca de 0,5 % de glicina, cerca de 25 mM de arginina, cerca de 1,0 % de sacarose, e, cerca de 40 mg/ml de um antagonista de proteína de IL-1, em um pH de cerca de 6,5; (b) submeter a formulação pré-liofilizada da etapa (a) a liofilização; e (c) reconstituir a formulação liofilizada da etapa (b) a uma composição consistindo de cerca de 40 mM de histidina, cerca de 3 % de PEG 3350, cerca de 1 % de glicina, cerca de 50 mM de arginina, cerca de 2,0 % de sacarose, e cerca de 80 mg/ml do antagonista de proteína de IL-1, sendo que a formulação reconstituída pode conter adicionalmente cerca de 0,2 mM de citrato e/ou cerca de 0,008 % de polissorbato 20. Em uma concretização específica, o antagonista de IL-1 é uma proteína de fusão de captação de IL-1 como mostrado na SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26. Mais preferivelmente, a captação de IL-1 é a captação mostrada na SEQ ID NO: 10. Em concretizações separadas, a formulação reconstituída é 3 vezes a concentração da formulação pré-liofilizada, p. ex., 20 mg de uma proteína antagonista de IL-l/ml de formulação de pré-liofilização é reconstituída a uma formulação final de 60 mg de proteína de antagonista de IL-l/ml. De uma maneira geral, a formulação liofilizada é reconstituída com água estéril apropriada para injeção. Em uma concretização, o líquido de reconstituição pode se água bacteriostática.

[00012] Em concretizações específicas do método de produção de uma formulação liofilizada reconstituída, uma solução de pré-liofilização está presente em um frasco como 40 mg de uma proteína de antagonista de IL-1 por ml de solução de formulação de pré-liofilização, que é liofilizada e reconstituída a uma solução a 80 mg/ml. Em outra concretização, 20 mg/ml de solução de pré-liofilização são liofilizados e reconstituídos a uma solução a 40 mg/ml. Em outra concretização, uma solução de pré-liofilização a 25 mg/ml é liofilizada e reconstituída a uma solução a 50 mg/ml. Em outra concretização, uma solução de pré-liofilização a 12,5 mg/ml é liofilizada e reconstituída a uma solução a 25 mg/ml. Em outra concretização, uma solução de pré-liofilização a 12,5 mg/ml é liofilizada e reconstituída a uma solução a 50 mg/ml. Em outra concretização, uma solução de pré-liofilização a 25 mg/ml é liofilizada e reconstituída a uma solução a 75 mg/ml. Em outra concretização, uma solução de pré-liofilização a 40 mg/ml é liofilizada e reconstituída a um solução a 120 mg/ml. Em outra concretização, uma solução de pré-liofilização a 40 mg/ml é liofilizada e reconstituída a uma solução a 20 mg/ml. De preferência, a formulação liofilizada reconstituída não contém um conservante. Em outra concretização, a formulação reconstituída inclui até 30 % de sacarose e um ou mais conservantes.

[00013] Em um quinto aspecto, a invenção apresenta uma formulação líquida estável de um antagonista de IL-1, compreendendo uma proteína de antagonista de IL-1 capaz de ligação e inibição da ação biológica da IL-1, um tampão, um co-solvente orgânico, e um ou mais estabilizantes térmicos. Em uma concretização específica, o antagonista de IL-1 é uma proteína de fusão de captação de IL-1 como mostrado na SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26. Mais preferivelmente, a captação de IL-1 mostrada na SEQ ID NO: 10. Em uma concretização, o tampão, é um tampão de fosfato. Em uma concretização, o agente de co-solvente orgânico é PEG, de preferência PEG 3350. Em uma concretização, os estabilizadores térmicos são NaCl e/ou sacarose. Mais preferivelmente, os estabilizadores térmicos são ambos, NaCl e sacarose.

[00014] Em uma concretização específica, a fórmula líquida estável de um antagonista de IL-1 compreende de 5-100 mM de tampão de fosfato, de 0,5-3 % de PEG, 25-150 mM de NaCl, 5-30 % de sacarose, 10-500 mg/ml de uma captação de proteína de IL-1, em um pH de cerca de 6-6,5. Em uma concretização mais específica, a formulação líquida estável de um antagonista de IL-1 compreende 10 mM de tampão de fosfato, 3 % de PEG 3350, 50 mM de NaCl, 5-20 % de sacarose, 12,5-50 mg/ml de uma proteína de captação de IL-1, em um pH de cerca de 6-6,5. Adicionalmente, podem estar presentes pequenas quantidades ou traços de um tampão de citrato ou polissorbato. A formulação líquida estável do antagonista de IL-1 da invenção apresenta pouca ou nenhuma precipitação como determinado por meio de inspeção visual após armazenamento de 50 mg/ml de formulação de captação de IL-1 durante até cerca de 29 meses a 5°C. Adicionalmente, observa-se pouca ou nenhuma agregação como determinado por meio de cromatografia de exclusão de tamanho, p. ex., HPLC, após armazenamento de 50 mg/ml de formulação de captação de IL-1 durante até cerca de 24 meses a 5°C.

[00015] Outros objetos e vantagens ser tornarão aparentes mediante uma revisão da descrição detalhada a seguir.

Descrição detalhada da invenção

[00016] A presente invenção não se limita a métodos particulares e condições experimentais descritas, porque referidos métodos e condições podem variar. Deve-se compreender também que a terminologia usada aqui tem apenas o objetivo de descrever concretizações particulares e não se destina a ser limitante, exceto se indicado, porque o escopo da presente invenção só se limitará pelas reivindicações anexas.

[00017] Como usado nesta descrição e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma", e "o/a" incluem referências plurais, exceto se o contexto o determinar claramente de outra forma. Assim, por exemplo, referências a "um método" incluem um ou mais métodos e/ou etapas do tipo aqui descrito e/ou que se tornarão perceptíveis àquelas pessoas versadas na arte mediante a leitura desta revelação.

[00018] Exceto se indicado de outra forma, todos as expressões e termos técnicos e científicos usados aqui têm o significado comumente compreendido por alguém com prática ordinária na arte com que a invenção se relaciona. Embora seja possível usar, na prática ou nos testes da presente invenção, quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos aqui, descreve-se agora métodos e materiais preferidos.

Descrição geral

[00019] O manuseio seguro e a administração de formulações compreendendo proteínas representam desafios significativos para formuladores farmacêuticos. Proteínas possuem propriedades químicas e físicas únicas que apresentam problemas de estabilidade: existe uma variedade de vias de degradação para proteínas, implicando em instabilidade química e física. Instabilidade química inclui desaminação, agregação, encurtamento da espinha dorsal peptídica, e oxidação dos radicais metionina. Instabilidade física compreende muitos fenômenos, incluindo, por exemplo, agregação.

[00020] Estabilidade química e física pode ser promovida removendo- se água da proteína. Liofilização (secagem com congelamento em condições controladas) é usada comumente para armazenamento de longo prazo de proteínas. A proteína liofilizada é substancialmente resistente à degradação, agregação, oxidação, e outros processos degenerativos enquanto no estado secado com congelamento. A proteína liofilizada é normalmente reconstituída com água contendo opcionalmente um conservante bacteriostático (p. ex., álcool de benzila) antes da administração:

Definições

[00021] Com o termo "dose terapeuticamente ou farmaceuticamente eficaz"compreende-se uma dose que produz o efeito desejado para o qual é administrada. A dose exata dependerá do objetivo do tratamento, e será discernível por alguém com prática na arte mediante o uso de técnicas conhecidas (ver, por exemplo, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding').

[00022] Com o termo "bloqueador", "inibidor", ou "antagonista"compreende-se uma substância que retarda ou impede uma resposta ou reação química ou fisiológica. Bloqueadores ou inibidores comuns incluem, embora sem limitação, moléculas anti-sentido, anticorpos, antagonistas e seus derivados.

[00023] O termo "farmaceuticamente aceitável" inclui aprovação por uma agência reguladora do governo federal ou estadual, ou listada na Farmacopéia dos E.U.A. outra farmacopéia geralmente reconhecida para uso em animais, e, mais particularmente, em humanos.

[00024] O termo "veículo" inclui um diluente, excipiente, ou veículo com o qual uma composição é administrada. Veículos podem incluem líquidos estéreis, como, por exemplo, água e óleos, incluindo óleos de petróleo, de origem animal, vegetal ou sintética, como, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim e análogos.

[00025] O termo "excipiente" inclui um agente não-terapêutico adicionado a uma composição farmacêutica para proporcionar uma consistência ou um efeito estabilizador desejados. Excipientes farmacêuticas vantajosos incluem, por exemplo, amido, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, farinha de arroz, greda, sílica-gel, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite em pó desnatado, glicerol, propileno glicol, água, etanol e análogos.

[00026] O termo "liofilizado" ou "secado com congelamento" inclui um estado de substância que foi submetida um procedimento de secagem, como liofilização, em que pelo menos 50 % da umidade foram removidos.

[00027] A expressão "agente encorpante" inclui um composto que é farmaceuticamente aceitável e que adiciona volume a uma torta de liofilização. De uma maneira geral, agentes encorpantes aceitáveis conhecidos na arte incluem, por exemplo, carboidratos, incluindo açúcares simples, como dextrose, ribose, frutose e análogos, açúcares de álcool, como manitol, sorbitol, dissacarídeos incluindo trealose, sacarose e lactose, polímeros naturalmente ocorrentes, como amido, dextranos, quitosano, hialuronato, proteínas (p. ex., gelatina e albumina de soro), glicogênio, e monômeros e polímeros sintéticos. Nas formulações da invenção, PEG 3350 é um co- solvente orgânico que é usado para estabilizar o antagonista de proteína de IL- 1 quando agitado, misturado, ou manuseado, e como um agente encorpante para auxiliar a produzir um volume aceitável.

[00028] O termo "lio-protetor"inclui uma substância que pode ser adicionada a uma formulação secada com congelamento ou liofilizada para auxiliar a manter a estrutura da proteína quando secada com congelamento ou liofilizada.

[00029] Um "conservante" inclui um composto bacteriostático, bactericida, fungistático ou fungicida que é geralmente adicionado a formulações para retardar ou eliminar crescimento de bactérias ou outros microorganismos contaminantes nas formulações. Conservantes incluem, por exemplo, álcool de benzila, fenol, cloreto de benzalcônio, m-cresol, timerosol, clorobutanol, metilparabeno, propilparabeno e análogos. Outros exemplos de conservantes farmaceuticamente aceitáveis podem ser encontrados na USP.

Antagonistas de IL-1

[00030] Um antagonista de IL-1 é um composto capaz de bloqueai- ou inibir a ação biológica de IL-1, incluindo proteínas de fusão capazes de aprisionar IL-1, como uma captação de IL-1. Em uma concretização preferida, a captação de IL-1 é uma proteína de fusão específica para IL-1 compreendendo dois componentes de receptor de IL-1 e um componente multimerizador, por exemplo, uma captação de IL-1 descrita na Publicação de Patente US n° 2003/0143697, publicada em 31 de julho de 2003. Em uma concretização específica, a captação de IL-1 é a proteína de fusão mostrada na SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26. Uma captação preferida de IL-1 é mostrada na SEQ ID NO: 10. A invenção compreende o uso de uma captação de IL 1 substancialmente idêntica à proteína da SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, que é proteína apresentando pelo menos 95 % de identidade, de preferência, pelo menos 97 % de identidade, e, mais preferivelmente, pelo menos 98 % de identidade com a proteína da SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 e capaz de ligação e inibição de IL-1. Adicionalmente, em concretizações específicas, o antagonista de II -1 é uma captação de IL-1 modificada compreendendo um ou mais componentes receptores e um ou mais componentes derivados de imunoglobulina específicos para IL-1 e/ou um receptor de IL-1. Em outra concretização, o antagonista de IL-1 é uma captação de IL-1 modificada compreendendo um ou mais componentes derivados de imunoglobulina específicos para IL-1 e/ou um receptor de IL-1.

[00031] A captação de IL-1 dos métodos e formulações pode ser preparada por meio de qualquer método vantajoso conhecido na arte, ou que virá a ser conhecido, que é útil na preparação de uma captação de IL-1. De preferência, a captação de IL-1 é substancialmente isenta de contaminantes de proteína no momento em que é usada para preparar a formulação farmaceuticamente aceitável. Por "substancialmente isenta de contaminantes de proteína"compreende-se que, de preferência, pelo menos 90 % do peso da proteína de uma preparação de captação de IL-1 usada para preparar uma formulação compreendendo uma captação de IL-1 é proteína de captação de IL-1, mais preferivelmente pelo menos 99 %. De preferência, a captação de IL-1 é substancialmente isenta de agregados. "Substancialmente isenta de agregados" significa que pelo menos 90 % do peso da proteína de captação de IL-1 não estão presentes em um agregado no momento em que a captação de IL-1 é usada para preparai' a formulação farmaceuticamente eficaz. A captação de IL-1 dos métodos e formulações da invenção pode conter quantidades pequenas ou traços de compostos como um resultado do processo de purificação, por exemplo, quantidades baixas ou traços de citrato e/ou polissorbato. Em uma concretização da formulação de pré-liofilização da invenção contendo cerca de 40 mg de captação de IL-l/ml, citrato pode estar presente numa concentração de cerca de 0,1 mM e/ou polissorbato pode estar presente numa concentração de cerca de 0,004 %. Se a pré-liofilização for reconstituída após liofilização a metade do seu volume original (p. ex., 80 mg/ml de captação de IL-1), a concentração resultante pode ser de 0,2 mM de citrato e/ou 0,008 % de polissorbato. Se a formulação de pré-liofilização for reconstituída após liofilização a um terço do volume original (p. ex., 120 mg/ml de captação de IL-1), as concentrações resultantes podem ser de 0,6 mM de citrato e/ou 0,012 % de polissorbato.

Liofilização e formulações liofilizadas

[00032] Em um aspecto da invenção, proporciona-se uma formulação farmaceuticamente aceitável compreendendo uma captação de IL-1, sendo que a formulação é uma formulação secada com congelamento ou liofilizada. De preferência, a formulação secada com congelamento ou liofilizada compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz de uma captação de IL-1. Formulações liofilizadas podem ser reconstituídas em soluções, suspensões, emulsões, ou qualquer outra forma vantajosa para administração ou uso. Tipicamente, formulações liofilizadas são preparadas primeiramente como líquidos, depois congeladas e liofilizadas. O volume líquido total antes da liofilização pode ser menor, igual ou maior que o volume reconstituído final da formulação liofilizada. O processo de liofilização é bem conhecido por aqueles com prática ordinária na arte, e inclui tipicamente sublimação de água de uma formulação congelada em condições controladas.

[00033] Formulações liofilizadas podem ser armazenadas numa ampla faixa de temperaturas. Formulações liofilizadas podem ser armazenadas a 30°C ou abaixo desta temperatura, por exemplo, refrigeradas a 4°C, ou à temperatura ambiente (p. ex., aproximadamente 25°C). De preferência, formulações liofilizadas são armazenadas abaixo de cerca de 25°C, mais preferivelmente, a cerca de 4-20°C; abaixo de cerca de 4°C; abaixo de cerca de -20°C; cerca de -40°C; ou cerca de -70°C.

[00034] Formulações liofilizadas são reconstituídas tipicamente para uso por meio de adição de uma solução aquosa para dissolver a formulação liofilizada. E possível usar uma ampla variedade de soluções aquosas para reconstituir uma formulação liofilizada. De preferência, formulações liofilizadas são reconstituídas com o emprego de água. Formulações liofilizadas são reconstituídas, de preferência, com uma solução que consiste essencialmente de água (p. ex., USP WFI, ou água para injetáveis) ou água bacteriostática (p. ex., USP WFI com 0,9 % de álcool de benzila). No entanto, também é possível usar soluções compreendendo tampões e/ou excipientes e/ou um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[00035] Formulações secadas com congelamento ou liofilizadas são preparadas tipicamente a partir de líquidos, ou seja, de soluções, suspensões, emulsões, e análogos. Assim, o líquido que é submetido a secagem com congelamento ou liofilização compreende, de preferência, todos os componentes desejados em uma formulação líquida reconstituída. Como um resultado, quando reconstituída, a formulação secada com congelamento ou liofilizada proporcionará uma formulação líquida desejada após reconstituição. Uma formulação líquida preferida usada para gerar uma formulação secada com congelamento ou liofilizada compreende uma captação de IL-1 numa quantidade farmaceuticamente eficaz, um tampão, um estabilizante e um agente encorpante. Formulações secadas com congelamento ou liofilizadas compreendem, de preferência, histidina, porque histidina, em comparação com fosfato, é mais eficaz para estabilizar a captação de IL-1 quando a captação de IL-1 é liofilizada. Co-solventes orgânicos, como PEG 3350, são usados para estabilizar a captação de IL-1 quando agitada, misturada, ou manuseada. Um lio-protetor é usado, de preferência, em formulações secadas com congelamento ou liofilizadas. Lio- protetores auxiliam a manter a estrutura secundária de proteínas quando secadas com congelamento ou liofilizadas. Três lio-protetores exemplares preferidos são glicina, arginina, e sacarose, que, de preferência, são usados em conjunto.

Formulações líquidas estáveis

[00036] Em um aspecto, a invenção proporciona uma formulação estável farmaceuticamente aceitável compreendendo uma captação de IL-1, sendo que a formulação é uma formulação líquida. De preferência, a formulação líquida compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz de uma captação de IL-1. A formulação também pode compreender um ou mais veículos, tampões, agentes encorpantes, estabilizantes, conservantes, e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Um exemplo de uma formulação líquida farmaceuticamente aceitável compreendendo uma captação de IL-1 compreende uma captação de IL-1 em uma quantidade farmaceuticamente eficaz, um tampão, um co-solvente, e um ou mais estabilizantes.

[00037] Uma formulação líquida preferida compreende tampão de fosfato, um co-solvente orgânico, e um ou mais estabilizantes térmicos para minimizar a formação de agregados e produtos com baixo peso molecular quando armazenados, e cerca de 12,5 mg/ml a cerca de 50 mg/ml de captação de IL-1, sendo que a formulação é de cerca de pH 6,0 a cerca de pH 6,75. Uma formulação líquida mais preferida compreende 10 mM de tampão de fosfato, 3 % de PEG, 50 mM de NaCI, 5-20 % de sacarose, e 10-100 mg/ml de captação de IL-1, sendo que a formulação encontra-se em um pH de cerca de 6,0 a cerca de 6,5. Embora NaCI ou sacarose possam ser usados como estabilizante, usou-se uma combinação de NaCI e sacarose para estabilizar a captação de IL-1 mais eficazmente do que estabilizador individual sozinho. De preferência, PEG é PEG 3350, que foi estabelecido de forma a incrementar a estabilidade da captação de IL-1.

[00038] Tabela 1 mostra o percentual de captação de IL-1 nativa ou o percentual de captação de IL-1 agregada em amostras contendo 5 ou 20 % de sacarose como determinado durante um período de até 24 meses quando incubada a 5°C. Na presença de 20 % de sacarose, a forma nativa (não- agregada) de captação de IL-1 diminuiu de 92,6 % no dia 0 para 88,9 % aos 24 meses e o percentual de agregado aumentou de 2,3 % a 3,4 % durante o mesmo período. A formulação de sacarose a 5 % apresentou uma forma nativa (não-agregada) de captação de IL-1 diminuiu de 92,4 % no dia 0 a 86,9 % após 24 meses e o percentual de agregado aumentou durante o mesmo período.

[00039] Tabela 2 mostra o percentual de captação de IL-1 nativa em amostras contendo 0,5 ou 20 % de sacarose como determinado durante um período de até 2,9 meses quando incubadas a 5°C (50 mg/ml de captação de IL-1, 10 mM de fosfato, 0,2 % de polissorbato-20,50 ou 135 (com 0 % de sacarose) mM de NaCl, pH 6,5. Na presença de 0 % de sacarose, a forma nativa (não-agregada) de captação de IL-1 diminuiu de 96,4 % no dia 0 para 0,5 % a 2,9 meses. A formulação de sacarose a 5 % apresentou uma forma nativa (não-agregada) de captação de IL-1 que diminuiu de 96,5 % no dia 0 para 39,2 % a 2,9 meses. A formulação de sacarose a 20 % apresentou uma forma nativa (não-agregada) de captação de IL-1 que diminuiu de 96,4 % no dia 0 para 95,3 % a 2,9 meses.

[00040] Formulações, quer líquidas ou secadas com congelamento e liofilizadas, podem ser armazenadas em um ambiente privado de oxigênio. Ambientes privados de oxigênio podem ser gerados por meio de armazenamento das formulações sob um gás inerte, como, por exemplo, argônio, nitrogênio, ou hélio.

[00041] Determinou-se a estabilidade de formulações pré-liofilizadas e liofilizadas. Uma formulação pré-liofilizada contendo 40 mg/ml de captação de IL-1 (SEQ ID NO: 10), 20 mM de histidina, 1,5 % de PEG-3350, 1 % de sacarose, 0,5 % de glicina, 2,5 mM de arginina-HCl, pH 6,5 foi incubada a 5°C durante de 0-52 semanas. Como mostrado na Tabela 3, a forma nativa (não-agregada) de IL-1 diminuiu de 94,9 (0 semanas) para 92,3 (52 semanas), e o percentual de agregada aumentou de 1 % para 1,8 % durante o mesmo período.

[00042] A estabilidade de uma formulação liofilizada obtendo 40 mg/ml de captação de IL-1 (SEQ ID NO: 10), 20 mM de histidina, 1,5 % de PEG-3350, 1 % de sacarose, 0,5 % de glicina, 25 mM de arginina-HCl, pH 6,5 (concentrações pré-liofilizadas) foi incubada a 25°C durante de 0-56 semanas. Como mostrado na Tabela 4, a forma nativa (não-agregada) de IL-1 diminuiu de 97,0 (0 semanas) para 94,0 (56 semanas), e o percentual de agregado aumentou de 0,8 % para 3,6 % durante o mesmo período.

[00043] Embora a invenção precedente tenha sido descrita com algum detalhe a título de ilustração e exemplos, aqueles com prática ordinária na arte perceberão facilmente que é possível realizar determinadas alterações e modificações com relação aos ensinamentos da invenção sem afastar-se do espírito ou escopo das reivindicações anexas.

Claims

1. Formulação adequada para liofilização, caracterizadapelo fato de que compreende de 5-100 mM de histidina, de 0,5-3,0 % de PEG, de 0,25-3 % de glicina, de 5-50 mM de arginina, de 0,5-30 % de sacarose, e de 5-50 mg/ml de um antagonista de proteína de IL-1 compreendendo a seqüência da proteína de fusão de SEQ ID NO: 10.

2. Formulação de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende 20 mM de histidina, 1,5 % de PEG 3350, 0,5 % de glicina, 25 mM de arginina, 1,0 % de sacarose e 40 mg/ml de antagonista de IL-1.

3. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizadapelo fato de que não contém um tampão de fosfato, mais de 1,5 % de sacarose, mais de 0,15 mM de citrato e mais de 0,005 % de polissorbato 20.

4. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizadapelo fato de que o pH pode ser de 6 a 6,75, de preferência, de 6 a 6,5, mais preferivelmente 6,5.

5. Formulação liofilizada, caracterizadapelo fato de que pode ser obtida por liofilização de uma formulação pré-liofilizada como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.

6. Método de produzir uma formulação liofilizada de um antagonista de IL-1, caracterizadopelo fato de que compreende liofilizar uma formulação pré-liofilizada como definida em qualquer uma das reivindicações precedentes para gerar uma formulação de antagonista de IL-1 liofilizada.

7. Método de produzir uma formulação liofilizada reconstituída de um antagonista de IL-1, caracterizadopelo fato de que compreende reconstituir uma formulação liofilizada como definida na reivindicação 5 ou uma formulação liofilizada obtida pelo método como definido na reivindicação 6 para uma formulação reconstituída.

8. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a formulação reconstituída compreende 20-120 mg/ml do antagonista de IL-1.

9. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a formulação reconstituída é duas vezes ou três vezes a concentração da formulação pré-liofilizada.

10. Formulação liofilizada reconstituída de um antagonista de proteína IL-1, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência da proteína de fusão de SEQ IDNO:10; dita formulação compreende 40 mM de histidina, 3 % de PEG 3350, 1 % de glicina, 50 mM de arginina, 2,0 % de sacarose e 80 mg/ml do dito antagonista de proteína IL-1.

11. Formulação líquida estável de um antagonista de proteína IL-1, caracterizada pelo fato de que compreende a sequência da proteína de fusão de SEQ IDNO:10; dita formulação compreende 10 mM de tampão de fosfato, 3 % de PEG 3350, 50 mM de NaCI, 20 % de sacarose, e de 10-100 mg/ml do antagonista de IL-1.

12. Formulação líquida de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o antagonista de IL-1 apresenta menos de 4 % de agregação mediante inspeção visual após armazenamento de uma formulação de captação de IL-1 a 50 mg/ml durante 29 meses a 5°C.