BR112021015060A2 - Composto, e, composição farmacêutica - Google Patents

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Jan Mattsson
Ingemar Starke
Santosh S. Kulkarni
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Albireo Ab
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Abstract

composto, e, composição farmacêutica. a invenção refere-se a derivados de 1,2,5-benzotiadiazepina de fórmula (i). esses compostos são moduladores de ácido biliar com atividade inibidora do transportador apical de ácido biliar dependente de sódio (asbt) e/ou do transporte de ácido biliar hepático (lbat). a invenção também se refere a composições farmacêuticas compreendendo esses compostos e ao uso desses compostos no tratamento de doenças cardiovasculares, metabolismo de ácidos graxos e distúrbios de utilização de glicose, doenças gastrointestinais e doenças hepáticas.

Description

1 / 135 COMPOSTO, E, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica prioridade para o Pedido Indiano nº 201911004690, depositado em 6 de fevereiro de 2019; Pedido Sueco nº 1950464-6, depositado em 12 de abril de 2019; e Pedido Indiano nº 201911049981, depositado em 4 de dezembro de 2019, cujas descrições são incorporadas neste documento por referência em sua totalidade.
CAMPO TÉCNICO
[002] A invenção refere-se a derivados de 1,2,5-benzotiadiazepina de fórmula (I). Esses compostos são moduladores de ácido biliar com atividade inibidora do transportador apical de ácido biliar dependente de sódio (ASBT) e/ou do transporte de ácido biliar hepático (LBAT). A invenção também se refere a composições farmacêuticas compreendendo esses compostos e ao uso desses compostos no tratamento de doenças cardiovasculares, metabolismo de ácidos graxos e distúrbios de utilização de glicose, doenças gastrointestinais e doenças hepáticas.
FUNDAMENTOS
[003] Os ácidos biliares são detergentes fisiológicos que desempenham um papel importante na absorção intestinal e no transporte de lipídios, nutrientes e vitaminas. Eles também são moléculas de sinalização que ativam receptores nucleares e vias de sinalização celular que regulam o metabolismo de lipídios, glicose e energia. Os ácidos biliares são ácidos esteroides que são sintetizados a partir do colesterol no fígado e armazenados na vesícula biliar como micelas mistas. Durante a digestão, o duodeno desencadeia a liberação de hormônios que causam a contração da vesícula biliar, liberando ácidos biliares no intestino delgado, onde permitem a absorção de vitaminas lipossolúveis e colesterol. Quando atingem o íleo, os ácidos biliares são reabsorvidos do intestino e secretados no sangue portal para retornar ao fígado por meio da circulação venosa portal. Mais de 90%
2 / 135 dos ácidos biliares são reciclados e devolvidos ao fígado. Esses ácidos biliares são então transportados através da membrana sinusoidal dos hepatócitos e ressecretados através da membrana canalicular para a bile. Nessa primeira passagem, 75 a 90% dos ácidos biliares são absorvidos pelos hepatócitos, completando uma rodada de circulação entero-hepática. A fração de ácidos biliares que escapa de ser eliminada no fígado entra na circulação sistêmica, onde os ácidos biliares livres são filtrados pelo glomérulo renal, eficientemente recuperados nos túbulos proximais e exportados de volta para a circulação sistêmica. Curiosamente, a maioria dos ácidos biliares secretados através da membrana canalicular para a bile são derivados do agrupamento de recirculação com menos de 10% provenientes da nova síntese hepática de novo. A pequena fração de ácidos biliares que não é reabsorvida no íleo atinge o cólon. Dentro do lúmen intestinal, os ácidos biliares primários são transformados em ácidos biliares secundários sob a ação de bactérias intestinais, principalmente por reações de desidroxilação simples ou dupla do núcleo esteroide. Os ácidos biliares que escapam à absorção intestinal são posteriormente excretados nas fezes.
[004] No geral, o sistema de transporte eficiente ajuda a manter um agrupamento de ácidos biliares constante, garantindo níveis suficientemente altos de ácidos biliares conjugados no intestino para promover a absorção de lipídios, bem como reduzir a carga bacteriana do intestino delgado. O sistema também minimiza a perda de ácido biliar fecal e urinário e protege os compartimentos intestinal e hepatobiliar, eliminando detergentes potencialmente citotóxicos (conforme revisado por Kosters e Karpen (Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071); por Chiang (J. Lipid Res. 2009, vol. 50, p. 1955-1966); e por Dawson (Handb. Exp. Pharmacol. 2011, vol. 201, p. 169-203)).
[005] Verificou-se que a regulação do tamanho do agrupamento de ácidos biliares desempenha um papel fundamental na homeostase do
3 / 135 colesterol pela conversão hepática do colesterol em ácido biliar, que representa uma das principais vias de eliminação do colesterol do corpo. O fígado desempenha um papel essencial na remoção de compostos endógenos e xenobióticos do corpo. A secreção hepatobiliar normal e a circulação entero- hepática são necessárias para a eliminação de compostos endógenos como o colesterol e a bilirrubina e seus metabólitos do corpo, mantendo assim a homeostase dos lipídios e dos ácidos biliares. (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071).
[006] A reabsorção de ácidos biliares no íleo pode ser inibida por compostos inibidores do transportador apical de ácido biliar dependente de sódio (ASBT). A inibição da reabsorção do ácido biliar foi relatada como útil no tratamento de várias doenças, incluindo dislipidemia, diabetes, obesidade, obstipação, doenças hepáticas colestáticas, esteato-hepatite não alcoólica e outras doenças hepáticas. Vários compostos inibidores de ASBT foram descritos nas últimas décadas, ver, por exemplo, WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449, WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, DE 19825804, EP 864582, EP 489423, EP 549967, EP 573848, EP 624593, EP 624594, EP 624595, EP 624596, EP 0864582, EP 1173205 e EP 1535913.
[007] Apesar do número de compostos inibidores de ASBT que foram relatados anteriormente, há uma necessidade de compostos moduladores de ácidos biliares adicionais que tenham um perfil otimizado em relação à potência, seletividade e biodisponibilidade.
4 / 135
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[008] Foi descoberto que certos derivados de 1,2,5- benzotiadiazepina são inibidores potentes do transportador apical de ácido biliar dependente de sódio (ASBT) e/ou do transportador de ácido biliar hepático (LBAT), e podem ser úteis para o tratamento de doenças em que a inibição da circulação do ácido biliar é desejável.
[009] Em um primeiro aspecto, a invenção refere-se a um composto da fórmula (I) (I) em que R1 e R2 são, cada um, independentemente, C1-4 alquila; R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalcóxi, ciano, nitro, amino, N-(C1-4 alquil)amino, N,N-di(C1-4 alquil)amino e N-(aril-C1-4 alquil)amino; n é um número inteiro 1, 2 ou 3; R4 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, ciano, C1-4 alquila, C3-6 cicloalquila, C1-4 alcóxi, C3-6 cicloalquilóxi, C1-4 alquiltio, C3-6 cicloalquiltio, amino, N-(C1-4 alquil)amino e N,N-di(C1-4 alquil)amino; R5A, R5B, R5C e R5D são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, amino e C1-4 alquila; e R6 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e C1-4 alquila;
5 / 135 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0010] Em algumas modalidades, R1 é n-butila.
[0011] Em algumas modalidades, R2 é alquila C2-4. Em uma modalidade preferida, R2 é metila. Em uma outra modalidade preferida, R2 é etila. Em uma outra modalidade preferida, R2 é n-propila. Em ainda uma outra modalidade preferida, R2 é n-butila.
[0012] Em algumas modalidades, R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, amino, ciano, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi e C1-4 haloalcóxi. Em uma outra modalidade, R3 é hidrogênio. Em uma modalidade preferida, R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, flúor, cloro, bromo, hidróxi, ciano, trifluorometila, metóxi e trifluorometóxi.
[0013] Em uma modalidade preferida, n é 1, isto é, o anel fenila é substituído com apenas um substituinte R3. Em outra modalidade preferida, R3 está na posição para.
[0014] Em algumas modalidades, R4 é selecionado do grupo que consiste em halogênio, hidróxi, ciano, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 alquiltio, amino, N-(C1-4 alquil)amino e N,N-di(C1-4 alquil)amino. Em uma modalidade preferida, R4 é selecionado do grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidróxi, ciano, metila, metóxi, etóxi, metiltio, etiltio, amino, metilamino e dimetilamino. Em uma outra modalidade, R4 é selecionado do grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metóxi, etóxi, metiltio, etiltio e dimetilamino. Em uma outra modalidade preferida, R4 é selecionado do grupo que consiste em cloro, bromo, metiltio e dimetilamino.
[0015] Em algumas modalidades, R5A e R5B são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, amino e metila. Em algumas modalidades, R5A e R5B são, cada um, independentemente hidrogênio e hidróxi. Em uma outra modalidade, R5A é hidrogênio ou hidróxi e R5B é hidrogênio. Em algumas modalidades,
6 / 135 R5C e R5D são, cada um, independentemente hidrogênio ou metila. Em uma outra modalidade, R5C é hidrogênio ou metila e R5D é hidrogênio.
[0016] Em uma modalidade, R6 é hidrogênio. Em uma outra modalidade, R6 é metila.
[0017] Em uma modalidade preferida, o composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (I-a) (I-a) em que R2 é C1-4alquila; R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, ciano, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi e C1-4 haloalcóxi; n é um número inteiro 1 ou 2; R4 é selecionado do grupo que consiste em halogênio, hidróxi, ciano, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 alquiltio, amino, N-(C1-4 alquil)amino e N,N-di(C1-4 alquil)amino; R5A é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, amino e C1-4 alquila; e R 5C é hidrogênio ou C1-4alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0018] Em uma outra modalidade preferida, o composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (I-b)
7 / 135 (I-b) em que R2 é metila, etila, n-propila ou n-butila; R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, flúor, cloro, bromo, hidróxi, ciano, trifluorometila, metóxi e trifluorometóxi; R4 é selecionado do grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidróxi, ciano, metóxi, etóxi, metiltio, etiltio e dimetilamino; e R5A é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, amino e metila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0019] Em uma outra modalidade preferida, o composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (I-b) como definido acima, ainda em que R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, flúor, cloro, bromo, hidróxi e metóxi; e R4 é selecionado do grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metóxi, etóxi, metiltio, etiltio e dimetilamino.
[0020] Os compostos preferidos da invenção são compostos de fórmula (I-b), conforme definido acima, em que R2 a R5A são indicados na Tabela 1 abaixo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: Tabela 1 R2 R3 R4 R5A CH3 H SCH3 H CH3 F SCH3 H CH3 OCH3 SCH3 H CH3 OH SCH3 H CH3 C1 SCH3 H CH3 H SCH3 OH CH3 F SCH3 OH CH3 OCH3 SCH3 OH CH3 OH SCH3 OH CH3 C1 SCH3 OH
8 / 135 R2 R3 R4 R5A CH3 H N(CH3)2 H CH3 F N(CH3)2 H CH3 OCH3 N(CH3)2 H CH3 OH N(CH3)2 H CH3 C1 N(CH3)2 H CH3 H N(CH3)2 OH CH3 F N(CH3)2 OH CH3 OCH3 N(CH3)2 OH CH3 OH N(CH3)2 OH CH3 C1 N(CH3)2 OH CH2CH3 H SCH3 H CH2CH3 F SCH3 H CH2CH3 OCH3 SCH3 H CH2CH3 OH SCH3 H CH2CH3 C1 SCH3 H CH2CH3 H SCH3 OH CH2CH3 F SCH3 OH CH2CH3 OCH3 SCH3 OH CH2CH3 OH SCH3 OH CH2CH3 C1 SCH3 OH CH2CH3 H N(CH3)2 H CH2CH3 F N(CH3)2 H CH2CH3 OCH3 N(CH3)2 H CH2CH3 OH N(CH3)2 H CH2CH3 C1 N(CH3)2 H CH2CH3 H N(CH3)2 OH CH2CH3 F N(CH3)2 OH CH2CH3 OCH3 N(CH3)2 OH CH2CH3 OH N(CH3)2 OH CH2CH3 C1 N(CH3)2 OH CH2CH2CH2CH3 H SCH3 H CH2CH2CH2CH3 F SCH3 H CH2CH2CH2CH3 OCH3 SCH3 H CH2CH2CH2CH3 OH SCH3 H CH2CH2CH2CH3 C1 SCH3 H CH2CH2CH2CH3 H SCH3 OH CH2CH2CH2CH3 F SCH3 OH CH2CH2CH2CH3 OCH3 SCH3 OH CH2CH2CH2CH3 OH SCH3 OH CH2CH2CH2CH3 C1 SCH3 OH CH2CH2CH2CH3 H N(CH3)2 H CH2CH2CH2CH3 F N(CH3)2 H CH2CH2CH2CH3 OCH3 N(CH3)2 H CH2CH2CH2CH3 OH N(CH3)2 H CH2CH2CH2CH3 C1 N(CH3)2 H CH2CH2CH2CH3 H N(CH3)2 OH CH2CH2CH2CH3 F N(CH3)2 OH CH2CH2CH2CH3 OCH3 N(CH3)2 OH CH2CH2CH2CH3 OH N(CH3)2 OH CH2CH2CH2CH3 C1 N(CH3)2 OH
[0021] Em uma modalidade particular, o composto de fórmula (I) é selecionado do grupo que consiste em: ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidrobenzo-1,2,5-tiadiazepin-8-il)oxi)propanoico;
9 / 135 ácido 3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido (S)-3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido (R)-3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico; ácido (S)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico; ácido (R)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico; ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico; ácido (S)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico; ácido (R)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico; ácido 3-((3,3-dibutil-7-cloro-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra- hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido 3-((3,3-dibutil-5-(4-hidroxifenil)-7-(metiltio)-1,1- dioxido-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido 3-((3-Butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido (S)-3-((3-butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dioxido-5- fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido (R)-3-((3-butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dioxido-5- fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; O-(3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-
10 / 135 hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; (S)-O-((R)-3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; (R)-O-((R)-3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; (S)-O-((S)-3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; e (R)-O-((S)-3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0022] Conforme usado neste documento, o termo “halo” refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo.
[0023] Conforme usado neste documento, o termo “C1-6 alquila” refere-se a um grupo alquila linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono, e o termo “C1-4 alquila” refere-se a um grupo alquila linear ou ramificado tendo de 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos de C1-4 alquila incluem metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila e terc-butila.
[0024] Conforme usado neste documento, o termo “C1-4 haloalquila” refere-se a um grupo C1-4 alquila linear ou ramificado, conforme definido neste documento, em que um ou mais átomos de hidrogênio foram substituídos por halogênio. Exemplos de C1-4 haloalquila incluem clorometila, fluoroetila e trifluorometila.
[0025] Conforme usado neste documento, os termos “C1-4 alcóxi” e “C1-4 alquiltio” referem-se a um grupo C1-4 alquila linear ou ramificado ligado ao restante da molécula por meio de um átomo de oxigênio ou enxofre, respectivamente.
[0026] Conforme usado neste documento, o termo “C3-6 cicloalquila” refere-se a um anel de hidrocarboneto saturado monocíclico tendo de 3 a 6
11 / 135 átomos de carbono. Exemplos de C3-6 cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo-hexila.
[0027] O termo “arila” denota um anel monocíclico aromático composto por 6 átomos de carbono ou um sistema de anel bicíclico aromático composto por 10 átomos de carbono. Exemplos de arila incluem fenila, naftila e azulenila.
[0028] O termo “amino” refere-se a um grupo -NH2. Conforme usado neste documento, os termos “N-(C1-4 alquil)amino” e “N,N-di(C1-4 alquil)amino” referem-se a um grupo amino em que um ou ambos os átomos de hidrogênio, respectivamente, são substituídos por um grupo C1-4 alquila linear ou ramificado. Exemplos de N-(C1-4 alquil)amino incluem metilamino, etilamino e terc-butilamino, e exemplos de N,N-di-(C1-4 alquil)amino incluem dimetilamino e dietilamino.
[0029] Conforme usado neste documento, o termo “N-(aril-C1-4 alquil)amino” refere-se a um grupo amino em que um átomo de hidrogênio é substituído por um grupo aril-C1-4 alquila. Exemplos de N-(aril-C1-4 alquil)amino incluem benzilamino e feniletilamino.
[0030] Conforme usado neste documento, o termo “farmaceuticamente aceitável” refere-se aos compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são adequados para uso farmacêutico humano e que são geralmente seguros, não tóxicos e nem biologicamente nem de outra forma indesejáveis.
[0031] Conforme usado neste documento, o termo “cerca de” refere- se a um valor ou parâmetro neste documento que inclui (e descreve) modalidades que são direcionadas a esse valor ou parâmetro per se. Por exemplo, a descrição referente a “cerca de 20” inclui a descrição de “20”. As faixas numéricas incluem os números que definem a faixa. De um modo geral, o termo “cerca de” refere-se ao valor indicado da variável e a todos os valores da variável que estão dentro do erro experimental do valor indicado
12 / 135 (por exemplo, dentro do intervalo de confiança de 95% para a média) ou dentro de 10 por cento do valor indicado, o que for maior.
[0032] Os compostos de 1,2,5-benzotiadiazepina de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são inibidores do transportador apical de ácido biliar dependente de sódio (inibidores de ASBT), do transportador de ácido biliar hepático (inibidores de LBAT) ou tanto do transportador apical de ácido biliar dependente de sódio e quanto do transportador de ácido biliar hepático (inibidores duplos de ASBT/LBAT). Eles são, portanto, úteis no tratamento ou prevenção de condições, distúrbios e doenças em que a inibição da circulação do ácido biliar é desejável, tais como doenças cardiovasculares, metabolismo de ácidos graxos e distúrbios de utilização de glicose, doenças gastrointestinais e doenças hepáticas.
[0033] Doenças cardiovasculares e distúrbios do metabolismo dos ácidos graxos e utilização da glicose incluem, mas não estão limitados a hipercolesterolemia; distúrbios do metabolismo dos ácidos graxos; diabetes mellitus tipo 1 e tipo 2; complicações da diabetes, incluindo catarata, doenças micro e macrovasculares, retinopatia, neuropatia, nefropatia e retardo na cicatrização de feridas, isquemia de tecido, pé diabético, arteriosclerose, infarto do miocárdio, síndrome coronariana aguda, angina pectoris instável, angina pectoris estável, acidente vascular cerebral, doença arterial obstrutiva periférica, cardiomiopatia, insuficiência cardíaca, perturbações do ritmo cardíaco e restenose vascular; doenças relacionadas ao diabetes, como resistência à insulina (diminuição da homeostase da glicose), hiperglicemia, hiperinsulinemia, níveis elevados de ácidos graxos ou glicerol no sangue, obesidade, dislipidemia, hiperlipidemia incluindo hipertrigliceridemia, síndrome metabólica (síndrome X), aterosclerose e hipertensão; e para aumentar os níveis de lipoproteína de alta densidade.
[0034] Doenças e distúrbios gastrointestinais incluem constipação (incluindo constipação crônica, constipação funcional, constipação idiopática
13 / 135 crônica (CIC), constipação intermitente/esporádica, constipação secundária a diabetes mellitus, constipação secundária a acidente vascular cerebral, constipação secundária à doença renal crônica, constipação secundária à esclerose múltipla, constipação secundária à doença de Parkinson, constipação secundária à esclerose sistêmica, constipação induzida por fármacos, síndrome do intestino irritável com constipação (SII-C), síndrome do intestino irritável mista (SII-M), constipação funcional pediátrica e constipação induzida por opioides); doença de Crohn; má absorção primária de ácidos biliares; síndrome do intestino irritável (SII); doença inflamatória intestinal (DII); inflamação ileal; e doença de refluxo e suas complicações, como esôfago de Barrett, esofagite de refluxo biliar e gastrite de refluxo biliar.
[0035] Uma doença hepática, conforme definida neste documento, é qualquer doença no fígado e em órgãos ligados ao mesmo, como o pâncreas, veia porta, o parênquima hepático, a árvore biliar intra-hepática, a árvore biliar extra-hepática e a vesícula biliar. Em alguns casos, uma doença hepática é uma doença hepática dependente de ácidos biliares. Doenças e distúrbios hepáticos incluem, mas não estão limitados a um distúrbio metabólico hereditário do fígado; erros inatos de síntese de ácido biliar; anomalias congênitas do ducto biliar; atresia biliar; atresia biliar pós-Kasai; atresia biliar pós-transplante hepático; hepatite neonatal; colestase neonatal; formas hereditárias de colestase; xantomatose cerebrotendinosa; um defeito secundário da síntese de AB; síndrome de Zellweger; doença hepática associada à fibrose cística; deficiência de alfa1-antitripsina; síndrome de Alagilles (ALGS); síndrome de Byler; um defeito primário da síntese do ácido biliar (AB); colestase intra-hepática familiar progressiva (PFIC) incluindo PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 e PFIC não especificada, PFIC pós-desvio biliar e PFIC pós-transplante de fígado; colestase intra-hepática recorrente benigna (BRIC) incluindo BRIC1, BRIC2 e BRIC não especificada, BRIC
14 / 135 pós-desvio biliar e BRIC pós-transplante hepático; hepatite autoimune; cirrose biliar primária (CBP); fibrose hepática; doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA); esteatose hepática não alcoólica (EHNA); hipertensão portal; colestase; colestase de síndrome de Down; colestase induzida por fármacos; colestase intra-hepática da gravidez (icterícia durante a gravidez); colestase intra-hepática; colestase extra-hepática; colestase associada à nutrição parenteral (PNAC); colestase associada a fosfolipídios baixos; síndrome de colestase-linfedema 1 (LSC1); colangite esclerosante primária (CEP); colangite associada a imunoglobulina G4; colangite biliar primária; colelitíase (cálculos biliares); litíase biliar; coledocolitíase; pancreatite de cálculo biliar; doença de Caroli; malignidade dos ductos biliares; malignidade causando obstrução da árvore biliar; estenoses biliares; colangiopatia da AIDS; colangiopatia isquêmica; prurido devido a colestase ou icterícia; pancreatite; doença hepática autoimune crônica levando à colestase progressiva; esteatose hepática; hepatite alcoólica; fígado gorduroso agudo; fígado gorduroso da gravidez; hepatite induzida por fármacos; distúrbios de sobrecarga de ferro; defeito congênito na síntese de ácidos biliares tipo 1 (BAS tipo 1); lesão hepática induzida por fármacos (LHIF); fibrose hepática; fibrose hepática congênita; cirrose hepática; histiocitose de células de Langerhans (HCL); ictiose neonatal - colangite esclerosante (NISCH); protoporfiria eritropoiética (PPE); ductopenia idiopática na idade adulta (IAD); hepatite neonatal idiopática (HNI); escassez não sindrômica de ductos biliares interlobulares (NS PILBD); cirrose infantil dos índios norte- americanos (NAIC); sarcoidose hepática; amiloidose; enterocolite necrosante; toxicidades séricas causadas por ácidos biliares, incluindo distúrbios do ritmo cardíaco (por exemplo, fibrilação atrial) no cenário de perfil anormal de ácidos biliares séricos, cardiomiopatia associada à cirrose hepática (“colecardia”) e perda de músculo esquelético associada à doença hepática colestática; hepatite viral (incluindo hepatite A, hepatite B, hepatite C,
15 / 135 hepatite D e hepatite E); carcinoma hepatocelular (hepatoma); colangiocarcinoma; cânceres gastrointestinais relacionados ao ácido biliar; e colestase causada por tumores e neoplasias do fígado, das vias biliares e do pâncreas. Os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, também são úteis na intensificação da terapia com corticosteroides em doenças hepáticas.
[0036] Outras doenças que podem ser tratadas ou prevenidas pelos compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, incluem síndromes de hiperabsorção (incluindo abetalipoproteinemia, hipobetalipoproteinemia familiar (FHBL), doença de retenção de quilomícrons (CRD) e sitosterolemia); hipervitaminose e osteopetrose; hipertensão; hiperfiltração glomerular; prurido de insuficiência renal; os compostos também são úteis na proteção contra lesão renal associada à doença hepática ou metabólica.
[0037] O transporte de ácidos biliares no corpo humano é controlado pela ação dos membros da família SLC10 de proteínas carreadoras de soluto, em particular pelo polipeptídeo cotransportador de Na+-taurocolato (NTCP, também chamado de transportador de ácido biliar hepático (LBAT); símbolo do gene SLC10A1), que é expresso na membrana sinusoidal dos hepatócitos, e pelo transportador apical de ácido biliar dependente de sódio (ASBT, também chamado de transportador de ácido biliar ileal (IBAT), ISBT, ABAT ou NTCP2; símbolo do gene SLC10A2), que é expresso na membrana apical dos enterócitos ileais, células do túbulo renal proximal, epitélio biliar, grandes colangiócitos e células epiteliais da vesícula biliar. No fígado, os ácidos biliares são eficientemente extraídos do sangue portal pelo transportador de ácido biliar hepático (LBAT) e ressecretados através da membrana canalicular pela bomba de exportação de sais biliares (BSEP; símbolo do gene ABCB11). A reabsorção de ácidos biliares no íleo é tratada pelo transportador apical de ácido biliar dependente de sódio (ASBT), onde é comumente chamado de
16 / 135 transportador de ácido biliar ileal (IBAT). Tanto o LBAT quanto o ASBT funcionam como cotransportadores eletrogênicos de soluto de sódio que movem dois ou mais íons Na+ por molécula de soluto.
[0038] Os xenobióticos e endobióticos, incluindo os ácidos biliares, são captados pelo fígado a partir do sangue portal e secretados na bile por proteínas de transporte distintas com especificidades de substrato individualizadas. Os ácidos biliares conjugados com glicina e taurina existem na forma aniônica e são incapazes de atravessar as membranas por difusão e, portanto, são completamente dependentes das proteínas de transporte da membrana para entrar ou sair do hepatócito (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071). ASBT e LBAT preferem sais biliares conjugados com glicina e taurina em vez de seus homólogos não conjugados e demonstram uma maior afinidade para os sais di-hidroxílicos do que para os sais tri-hidroxílicos. Nenhum substrato de ácido biliar foi identificado para ASBT ainda, no entanto, verificou-se que LBAT também transporta uma variedade de sulfatos de esteroides, hormônios e xenobióticos.
[0039] LBAT não é tão completamente caracterizado como ASBT em termos de requisitos de inibição de fármacos. Dong et al. identificaram fármacos aprovados pela FDA que inibem o LBAT humano e compararam os requisitos de inibição de LBAT e ASBT. Uma série de estudos de inibição de LBAT foi realizada usando fármacos aprovados pela FDA, em conjunto com o desenvolvimento de modelo computacional iterativo. Os estudos de triagem identificaram 27 fármacos como novos inibidores de LBAT, incluindo irbesartana (Ki = 11,9 μM) e ezetimiba (Ki = 25,0 μM). O farmacóforo de característica comum indicou que dois hidrofóbicos e um aceitador de ligação de hidrogênio eram importantes para a inibição de LBAT. De 72 fármacos testados in vitro, um total de 31 fármacos inibiram LBAT, enquanto 51 fármacos (ou seja, mais da metade) inibiram ASBT. Portanto, embora houvesse sobreposição do inibidor, o ASBT inesperadamente foi mais
17 / 135 permissivo à inibição do fármaco do que o LBAT, e isso pode estar relacionado ao fato de o LBAT possuir menos características farmacóforas (Dong et al., Mol. Pharm. 2013, vol. 10, p. 1008–1019).
[0040] Vaz et al. descrevem a identificação da deficiência de LBAT como um novo erro inato do metabolismo com um fenótipo clínico relativamente leve. A identificação da deficiência de LBAT confirma que esse transportador é o principal sistema de importação de sais biliares conjugados para o fígado, mas também indica que transportadores auxiliares são capazes de sustentar o ciclo entero-hepático em sua ausência (Vaz et al., Hepatology 2015, vol. 61, p. 260-267). Esses achados apoiam a hipótese de que a inibição de LBAT é um mecanismo de ação seguro, pois os hepatócitos ainda têm a possibilidade de absorver a quantidade necessária de ácidos biliares.
[0041] Liu et al. descrevem a identificação de um novo tipo de hipercolanemia associada à homozigose para a mutação p.Ser267Phe em SLC10A1 (LBAT). A frequência do alelo dessa mutação no gene SLC10A1 varia em diferentes populações, com a maior incidência ocorrendo no sul da China (8% e 12% nos chineses Han e Dai respectivamente) e no Vietnã (11%). Acredita-se que essa hipercolanemia “oculta” afete 0,64% dos Han do sul, 1,44% da população chinesa Dai e 1,21% da população vietnamita. Um aumento nos níveis séricos de AB conjugados e não conjugados nos indivíduos homozigotos também foi observado. Liu et al. sugerem que esse achado é provavelmente devido ao transporte reduzido de AB da circulação portal para os hepatócitos. Isso apoia a hipótese de que a função fisiológica da circulação entero-hepática não é apenas reciclar os ácidos biliares, mas também limpar os ácidos biliares da circulação para atingir a homeostase (Karpen e Dawson, Hepatology 2015, vol. 61, p. 24-27). Alternativamente, o fígado pode sintetizar níveis aumentados de ácidos biliares para compensar a recirculação entero-hepática reduzida nos portadores homozigotos. Como o LBAT também transporta ácidos biliares não conjugados, o aumento dos
18 / 135 ácidos biliares não conjugados neste estudo não foi surpreendente (Liu et al., Scientific Reports 2017, 7: 9214, p. 1-7).
[0042] Descobriu-se que o LBAT é regulado negativamente em várias formas de lesão hepática colestática e colestase, enquanto o ASBT tem sido regulado negativamente em uma variedade de distúrbios gastrointestinais, como doença de Crohn, má absorção primária de ácido biliar, doença inflamatória intestinal e inflamação ileal, mas regulado positivamente na colestase. O LBAT também funciona como um receptor celular para a entrada viral do vírus da hepatite B (HBV) e do vírus da hepatite D (HDV), que por sua vez é a principal causa de doença hepática e carcinoma hepatocelular.
[0043] A inibição de ASBT foi investigada para diminuir os níveis de colesterol plasmático e melhorar a resistência à insulina, bem como para aliviar a carga de ácido biliar hepático na doença hepática colestática. Além disso, descobriu-se que a inibição do ASBT restaura os níveis de insulina e a normoglicemia, estabelecendo assim a inibição do ASBT como um tratamento promissor para o diabetes mellitus tipo 2. Os inibidores de ASBT também são usados para o tratamento da constipação funcional.
[0044] Como o ASBT é predominantemente expresso no íleo (onde é frequentemente chamado de IBAT), os inibidores de ASBT não precisam estar sistemicamente disponíveis. Por outro lado, o ASBT também é expresso nas células do túbulo proximal dos rins. Os inibidores de ASBT que estão sistemicamente disponíveis podem, portanto, também inibir a recaptação de ácidos biliares nos rins. Acredita-se que isso levaria ao aumento dos níveis de ácidos biliares na urina e a uma maior remoção dos ácidos biliares do corpo pela urina. Portanto, espera-se que os inibidores de ASBT disponíveis sistemicamente que exercem seu efeito não apenas no íleo, mas também nos rins, levem a uma maior redução dos níveis de ácido biliar do que os inibidores de ASBT não sistemicamente disponíveis que exercem seu efeito apenas no íleo.
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[0045] Os compostos com alta potência de inibição de ASBT são particularmente adequados para o tratamento de doenças hepáticas que causam colestase, como colestase intra-hepática familiar progressiva (PFIC), síndrome de Alagilles, atresia biliar e esteato-hepatite não alcoólica (EHNA).
[0046] A atresia biliar é uma doença hepática pediátrica rara que envolve um bloqueio parcial ou total (ou mesmo ausência) dos grandes ductos biliares. Esse bloqueio ou ausência causa colestase que leva ao acúmulo de ácidos biliares que danificam o fígado. Em algumas modalidades, o acúmulo de ácidos biliares ocorre na árvore biliar extra-hepática. Em algumas modalidades, o acúmulo de ácidos biliares ocorre na árvore biliar intra- hepática. O padrão atual de atendimento é o procedimento de Kasai, que é uma cirurgia que remove os ductos biliares bloqueados e conecta diretamente uma parte do intestino delgado ao fígado. Atualmente, não há terapias medicamentosas aprovadas para esse distúrbio.
[0047] São providos aqui métodos para o tratamento de atresia biliar em um indivíduo em necessidade, os métodos compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o indivíduo foi submetido ao procedimento de Kasai antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é administrado um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao indivíduo antes de ser submetido ao procedimento de Kasai. Em algumas modalidades, o tratamento da atresia biliar diminui o nível de ácidos biliares séricos no indivíduo. Em algumas modalidades, o nível de ácidos biliares séricos é determinado por, por exemplo, um ensaio enzimático ELISA ou os ensaios para a medição de ácidos biliares totais, conforme descrito em Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12(6): e0179200, que é incorporado por referência neste documento em sua totalidade. Em algumas modalidades, o
20 / 135 nível de ácidos biliares séricos pode diminuir em, por exemplo, 10% a 40%, 20% a 50%, 30% a 60%, 40% a 70%, 50% a 80% ou mais de 90% do nível de ácidos biliares séricos antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o tratamento da atresia biliar inclui o tratamento do prurido.
[0048] PFIC é uma doença genética rara que se estima afetar entre uma em cada 50.000 a 100.000 crianças nascidas em todo o mundo e causa doença hepática progressiva com risco de vida.
[0049] Uma manifestação de PFIC é o prurido, que geralmente resulta em uma qualidade de vida gravemente diminuída. Em alguns casos, o PFIC causa cirrose e insuficiência hepática. As terapias atuais incluem desvio biliar externo parcial (PEBD) e transplante de fígado; no entanto, essas opções podem acarretar um risco substancial de complicações pós-cirúrgicas, bem como problemas psicológicos e sociais.
[0050] Foram identificados três defeitos de genes alternativos que se correlacionam com três subtipos separados de PFIC, conhecidos como tipos 1, 2 e 3.
[0051] • PFIC, tipo 1, às vezes chamada de “doença de Byler”, é causada por secreção biliar prejudicada devido a mutações no gene ATP8B1, que codifica uma proteína que ajuda a manter um equilíbrio apropriado de gorduras conhecidas como fosfolipídios nas membranas celulares nos ductos biliares. Um desequilíbrio nesses fosfolipídios está associado à colestase e ao aumento dos ácidos biliares no fígado. Os indivíduos afetados por PFIC, tipo 1, geralmente desenvolvem colestase nos primeiros meses de vida e, na ausência de tratamento cirúrgico, evoluem para cirrose e doença hepática em estágio terminal antes do final da primeira década de vida.
[0052] • PFIC, tipo 2, às vezes chamada de “síndrome de Byler”, é causada pela secreção prejudicada de sais biliares devido a mutações no gene ABCB11, que codifica uma proteína, conhecida como bomba de exportação
21 / 135 de sais biliares, que move os ácidos biliares para fora do fígado. Os indivíduos com PFIC, tipo 2, frequentemente desenvolvem insuficiência hepática nos primeiros anos de vida e apresentam risco aumentado de desenvolver um tipo de câncer de fígado conhecido como carcinoma hepatocelular.
[0053] • PFIC, tipo 3, que normalmente se apresenta nos primeiros anos da infância com colestase progressiva, é causada por mutações no gene ABCB4, que codifica um transportador que move os fosfolipídios através das membranas celulares.
[0054] Além disso, mutações no gene TJP2, no gene NR1H4 ou no gene Myo5b foram propostas como causas de PFIC. Além disso, alguns indivíduos com PFIC não têm uma mutação em nenhum dos genes ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 ou Myo5b. Nesses casos, a causa da condição é desconhecida.
[0055] Mutações exemplificativas do gene ATP8B1 ou da proteína resultante estão listadas nas Tabelas 2 e 3, com numeração baseada na proteína ATP8B1 humana de tipo selvagem (por exemplo, SEQ ID NO: 1) ou gene (por exemplo, SEQ ID NO: 2). Mutações exemplificativas do gene ABCB11 ou da proteína resultante estão listadas nas Tabelas 4 e 5, com numeração baseada na proteína ABCB11 humana de tipo selvagem (por exemplo, SEQ ID NO: 3) ou gene (por exemplo, SEQ ID NO: 4).
[0056] Como pode ser reconhecido por aqueles versados na técnica, uma posição de aminoácido em uma sequência de proteína de referência que corresponde a uma posição de aminoácido específica na SEQ ID NO: 1 ou 3 pode ser determinada alinhando a sequência da proteína de referência com a SEQ ID NO: 1 ou 3 (por exemplo, usando um programa de software, como ClustalW2). Mudanças nesses resíduos (aqui chamadas de “mutações”) podem incluir substituições de aminoácidos simples ou múltiplas, inserções dentro das ou flanqueando as sequências e deleções dentro das ou
22 / 135 flanqueando as sequências. Como pode ser reconhecido por aqueles versados na técnica, uma posição de nucleotídeo em uma sequência de gene de referência que corresponde a uma posição de nucleotídeo específica na SEQ ID NO: 2 ou 4 pode ser determinada alinhando a sequência de gene de referência com a SEQ ID NO: 2 ou 4 (por exemplo, usando um programa de software, como ClustalW2). Mudanças nesses resíduos (aqui chamadas de “mutações”) podem incluir substituições de nucleotídeos simples ou múltiplas, inserções dentro das ou flanqueando as sequências e deleções dentro das ou flanqueando as sequências. Ver também Kooistra, et al., “KLIFS: A structural kinase-ligand interaction database,” Nucleic Acids Res. 2016, vol. 44, no. D1, pp. D365-D371, que é incorporado por referência em sua totalidade neste documento.
[0057] Sequência de proteína canônica de ATP8B1 (SEQ ID NO: 1) – Uniprot ID O43520
MSTERDSETT FDEDSQPNDE VVPYSDDETE DELDDQGSAV EPEQNRVNRE AEENREPFRK ECTWQVKAND RKYHEQPHFM NTKFLCIKES KYANNAIKTY KYNAFTFIPM NLFEQFKRAA NLYFLALLIL QAVPQISTLA WYTTLVPLLV VLGVTAIKDL VDDVARHKMD KEINNRTCEV IKDGRFKVAK WKEIQVGDVI RLKKNDFVPA DILLLSSSEP NSLCYVETAE LDGETNLKFK MSLEITDQYL QREDTLATFD GFIECEEPNN RLDKFTGTLF WRNTSFPLDA DKILLRGCVI RNTDFCHGLV IFAGADTKIM KNSGKTRFKR TKIDYLMNYM VYTIFVVLIL LSAGLAIGHA YWEAQVGNSS WYLYDGEDDT PSYRGFLIFW GYIIVLNTMV PISLYVSVEV IRLGQSHFIN WDLQMYYAEK DTPAKARTTT LNEQLGQIHY IFSDKTGTLT QNIMTFKKCC INGQIYGDHR DASQHNHNKI EQVDFSWNTY ADGKLAFYDH YLIEQIQSGK EPEVRQFFFL LAVCHTVMVD RTDGQLNYQA ASPDEGALVN AARNFGFAFL ARTQNTITIS ELGTERTYNV LAILDFNSDR KRMSIIVRTP EGNIKLYCKG ADTVIYERLH RMNPTKQETQ DALDIFANET LRTLCLCYKE IEEKEFTEWN KKFMAASVAS TNRDEALDKV YEEIEKDLIL LGATAIEDKL QDGVPETISK LAKADIKIWV LTGDKKETAE NIGFACELLT EDTTICYGED INSLLHARME NQRNRGGVYA KFAPPVQESF FPPGGNRALI ITGSWLNEIL LEKKTKRNKI LKLKFPRTEE ERRMRTQSKR RLEAKKEQRQ KNFVDLACEC SAVICCRVTP KQKAMVVDLV KRYKKAITLA IGDGANDVNM IKTAHIGVGI SGQEGMQAVM SSDYSFAQFR YLQRLLLVHG RWSYIRMCKF LRYFFYKNFA FTLVHFWYSF FNGYSAQTAY EDWFITLYNV LYTSLPVLLM GLLDQDVSDK LSLRFPGLYI VGQRDLLFNY KRFFVSLLHG VLTSMILFFI PLGAYLQTVG QDGEAPSDYQ SFAVTIASAL VITVNFQIGL DTSYWTFVNA FSIFGSIALY FGIMFDFHSA GIHVLFPSAF QFTGTASNAL RQPYIWLTII LAVAVCLLPV VAIRFLSMTI WPSESDKIQK HRKRLKAEEQ WQRRQQVFRR GVSTRRSAYA FSHQRGYADL ISSGRSIRKK RSPLDAIVAD GTAEYRRTGD S
[0058] Sequência de DNA canônica para ATP8B1 (SEQ ID NO: 2)
ATG AGT ACA GAA AGA GAC TCA GAA ACG ACA TTT GAC GAG GAT TCT CAG CCT AAT GAC GAA GTG GTT CCC TAC AGT GAT GAT GAA ACA GAA GAT GAA CTT GAT GAC CAG GGG TCT GCT GTT GAA CCA GAA CAA AAC CGA GTC AAC AGG GAA GCA GAG GAG AAC CGG GAG CCA TTC AGA AAA GAA TGT ACA TGG CAA GTC AAA GCA AAC GAT CGC AAG TAC CAC GAA CAA CCT CAC TTT ATG AAC ACA AAA TTC TTG TGT ATT AAG GAG AGT AAA TAT GCG AAT AAT GCA ATT AAA ACA TAC AAG TAC AAC GCA TTT ACC TTT ATA CCA ATG AAT CTG TTT GAG CAG TTT AAG AGA GCA GCC AAT TTA TAT TTC CTG GCT CTT CTT ATC TTA CAG GCA GTT CCT CAA ATC TCT ACC CTG GCT TGG TAC ACC ACA CTA GTG CCC CTG CTT GTG GTG CTG GGC GTC ACT GCA ATC AAA GAC CTG GTG GAC
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GAT GTG GCT CGC CAT AAA ATG GAT AAG GAA ATC AAC AAT AGG ACG TGT GAA GTC ATT AAG GAT GGC AGG TTC AAA GTT GCT AAG TGG AAA GAA ATT CAA GTT GGA GAC GTC ATT CGT CTG AAA AAA AAT GAT TTT GTT CCA GCT GAC ATT CTC CTG CTG TCT AGC TCT GAG CCT AAC AGC CTC TGC TAT GTG GAA ACA GCA GAA CTG GAT GGA GAA ACC AAT TTA AAA TTT AAG ATG TCA CTT GAA ATC ACA GAC CAG TAC CTC CAA AGA GAA GAT ACA TTG GCT ACA TTT GAT GGT TTT ATT GAA TGT GAA GAA CCC AAT AAC AGA CTA GAT AAG TTT ACA GGA ACA CTA TTT TGG AGA AAC ACA AGT TTT CCT TTG GAT GCT GAT AAA ATT TTG TTA CGT GGC TGT GTA ATT AGG AAC ACC GAT TTC TGC CAC GGC TTA GTC ATT TTT GCA GGT GCT GAC ACT AAA ATA ATG AAG AAT AGT GGG AAA ACC AGA TTT AAA AGA ACT AAA ATT GAT TAC TTG ATG AAC TAC ATG GTT TAC ACG ATC TTT GTT GTT CTT ATT CTG CTT TCT GCT GGT CTT GCC ATC GGC CAT GCT TAT TGG GAA GCA CAG GTG GGC AAT TCC TCT TGG TAC CTC TAT GAT GGA GAA GAC GAT ACA CCC TCC TAC CGT GGA TTC CTC ATT TTC TGG GGC TAT ATC ATT GTT CTC AAC ACC ATG GTA CCC ATC TCT CTC TAT GTC AGC GTG GAA GTG ATT CGT CTT GGA CAG AGT CAC TTC ATC AAC TGG GAC CTG CAA ATG TAC TAT GCT GAG AAG GAC ACA CCC GCA AAA GCT AGA ACC ACC ACA CTC AAT GAA CAG CTC GGG CAG ATC CAT TAT ATC TTC TCT GAT AAG ACG GGG ACA CTC ACA CAA AAT ATC ATG ACC TTT AAA AAG TGC TGT ATC AAC GGG CAG ATA TAT GGG GAC CAT CGG GAT GCC TCT CAA CAC AAC CAC AAC AAA ATA GAG CAA GTT GAT TTT AGC TGG AAT ACA TAT GCT GAT GGG AAG CTT GCA TTT TAT GAC CAC TAT CTT ATT GAG CAA ATC CAG TCA GGG AAA GAG CCA GAA GTA CGA CAG TTC TTC TTC TTG CTC GCA GTT TGC CAC ACA GTC ATG GTG GAT AGG ACT GAT GGT CAG CTC AAC TAC CAG GCA GCC TCT CCC GAT GAA GGT GCC CTG GTA AAC GCT GCC AGG AAC TTT GGC TTT GCC TTC CTC GCC AGG ACC CAG AAC ACC ATC ACC ATC AGT GAA CTG GGC ACT GAA AGG ACT TAC AAT GTT CTT GCC ATT TTG GAC TTC AAC AGT GAC CGG AAG CGA ATG TCT ATC ATT GTA AGA ACC CCA GAA GGC AAT ATC AAG CTT TAC TGT AAA GGT GCT GAC ACT GTT ATT TAT GAA CGG TTA CAT CGA ATG AAT CCT ACT AAG CAA GAA ACA CAG GAT GCC CTG GAT ATC TTT GCA AAT GAA ACT CTT AGA ACC CTA TGC CTT TGC TAC AAG GAA ATT GAA GAA AAA GAA TTT ACA GAA TGG AAT AAA AAG TTT ATG GCT GCC AGT GTG GCC TCC ACC AAC CGG GAC GAA GCT CTG GAT AAA GTA TAT GAG GAG ATT GAA AAA GAC TTA ATT CTC CTG GGA GCT ACA GCT ATT GAA GAC AAG CTA CAG GAT GGA GTT CCA GAA ACC ATT TCA AAA CTT GCA AAA GCT GAC ATT AAG ATC TGG GTG CTT ACT GGA GAC AAA AAG GAA ACT GCT GAA AAT ATA GGA TTT GCT TGT GAA CTT CTG ACT GAA GAC ACC ACC ATC TGC TAT GGG GAG GAT ATT AAT TCT CTT CTT CAT GCA AGG ATG GAA AAC CAG AGG AAT AGA GGT GGC GTC TAC GCA AAG TTT GCA CCT CCT GTG CAG GAA TCT TTT TTT CCA CCC GGT GGA AAC CGT GCC TTA ATC ATC ACT GGT TCT TGG TTG AAT GAA ATT CTT CTC GAG AAA AAG ACC AAG AGA AAT AAG ATT CTG AAG CTG AAG TTC CCA AGA ACA GAA GAA GAA AGA CGG ATG CGG ACC CAA AGT AAA AGG AGG CTA GAA GCT AAG AAA GAG CAG CGG CAG AAA AAC TTT GTG GAC CTG GCC TGC GAG TGC AGC GCA GTC ATC TGC TGC CGC GTC ACC CCC AAG CAG AAG GCC ATG GTG GTG GAC CTG GTG AAG AGG TAC AAG AAA GCC ATC ACG CTG GCC ATC GGA GAT GGG GCC AAT GAC GTG AAC ATG ATC AAA ACT GCC CAC ATT GGC GTT GGA ATA AGT GGA CAA GAA GGA ATG CAA GCT GTC ATG TCG AGT GAC TAT TCC TTT GCT CAG TTC CGA TAT CTG CAG AGG CTA CTG CTG GTG CAT GGC CGA TGG TCT TAC ATA AGG ATG TGC AAG TTC CTA CGA TAC TTC TTT TAC AAA AAC TTT GCC TTT ACT TTG GTT CAT TTC TGG TAC TCC TTC TTC AAT GGC TAC TCT GCG CAG ACT GCA TAC GAG GAT TGG TTC ATC ACC CTC TAC AAC GTG CTG TAC ACC AGC CTG CCC GTG CTC CTC ATG GGG CTG CTC GAC CAG GAT GTG AGT GAC AAA CTG AGC CTC CGA TTC CCT GGG TTA TAC ATA GTG GGA CAA AGA GAC TTA CTA TTC AAC TAT AAG AGA TTC TTT GTA AGC TTG TTG CAT GGG GTC CTA ACA TCG ATG ATC CTC TTC TTC ATA CCT CTT GGA GCT TAT CTG CAA ACC GTA GGG CAG GAT GGA GAG GCA CCT TCC GAC TAC CAG TCT TTT GCC GTC ACC ATT GCC TCT GCT CTT GTA ATA ACA GTC AAT TTC CAG ATT GGC TTG GAT ACT TCT TAT TGG ACT TTT GTG AAT GCT TTT TCA ATT TTT GGA AGC ATT GCA CTT TAT TTT GGC ATC ATG TTT GAC TTT CAT AGT GCT GGA ATA CAT GTT CTC TTT CCA TCT GCA TTT CAA TTT ACA GGC ACA GCT TCA AAC GCT CTG AGA CAG CCA TAC ATT TGG TTA ACT ATC ATC CTG GCT GTT GCT GTG TGC TTA CTA CCC GTC GTT GCC ATT CGA TTC CTG TCA ATG ACC ATC TGG CCA TCA GAA AGT GAT AAG ATC CAG AAG CAT CGC AAG CGG TTG AAG GCG GAG GAG CAG TGG CAG CGA CGG CAG CAG GTG TTC CGC CGG GGC GTG TCA ACG CGG CGC TCG GCC TAC GCC TTC TCG CAC CAG CGG GGC TAC GCG GAC CTC ATC TCC TCC GGG CGC AGC ATC CGC AAG AAG CGC TCG CCG CTT GAT GCC ATC GTG GCG GAT GGC ACC GCG GAG TAC AGG CGC ACC GGG GAC AGC TGA
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Tabela 2. Mutações de ATP8B1 exemplificativas Posição de aminoácido 3 (por exemplo, T3K)27 Posição de aminoácido 23 (por exemplo, P23L)5 Posição de aminoácido 45 (por exemplo, N45T)5,8,9 Posição de aminoácido 46 (por exemplo, R46X)A,25 Posição de aminoácido 62 (por exemplo, C62R)28 Posição de aminoácido 63 (por exemplo, T63T)41 Posição de aminoácido 70 (por exemplo, D70N)1,6 Posição de aminoácido 71 (por exemplo, R71H)43 Posição de aminoácido 78 (por exemplo, H78Q)19 Posição de aminoácido 82 (por exemplo, T82T)41 Posição de aminoácido 92 (por exemplo, Y92Y)41 Posição de aminoácido 93 (por exemplo, A93A)6 Posição de aminoácido 96 (por exemplo, A96G)27 Posição de aminoácido 114 (por exemplo, E114Q)8 Posição de aminoácido 127 (por exemplo, L127P6, L127V36) Posição de aminoácido 177 (por exemplo, T177T)6 Posição de aminoácido 179 (por exemplo, E179X)29 Posições de Δ aminoácido 185-28244 Posição de aminoácido 197 (por exemplo, G197Lfs*10)22 Posição de aminoácido 201 (por exemplo, R201S27, R201H35) Posição de aminoácido 203 (por exemplo, K203E5,8, K203R9, K203fs25) Posição de aminoácido 205 (por exemplo, N205fs6, N205Kfs*235) Posição de aminoácido 209 (por exemplo, P209T)4 Posição de aminoácido 217 (por exemplo, S217N)43 Posição de aminoácido 232 (por exemplo, D232D)30 Posição de aminoácido 233 (por exemplo, G233R)38 Posição de aminoácido 243 (por exemplo, L243fs*28)33 Posição de aminoácido 265 (por exemplo, C265R)25 Posição de aminoácido 271 (por exemplo, R271X13, R271R30) Posição de aminoácido 288 (por exemplo, L288S)6 Posição de aminoácido 294 (por exemplo, L294S)43 Posição de aminoácido 296 (por exemplo, R296C)11 Posição de aminoácido 305 (por exemplo, F305I)28 Posição de aminoácido 306 (por exemplo, C306R)23 Posição de aminoácido 307 (por exemplo, H307L)35 Posição de aminoácido 308 (por exemplo, G308V1, G308D6, G308S35) Posição de aminoácido 314 (por exemplo, G314S)13 Posição de aminoácido 320 (por exemplo, M320Vfs*13)11 Posição de aminoácido 337 (por exemplo, M337R)18 Posição de aminoácido 338 (por exemplo, N338K)18 Posição de aminoácido 340 (por exemplo, M340V)18 Posição de aminoácido 344 (por exemplo, I344F)6,20 Posição de aminoácido 349 (por exemplo, I349T)41 Posição de aminoácido 358 (por exemplo, G358R)28 Posição de aminoácido 367 (por exemplo, G367G)41 Posição de aminoácido 368 (por exemplo, N368D)41 Posição de aminoácido 393 (por exemplo, I393V)27 Posição de aminoácido 403 (por exemplo, S403Y)6 Posição de aminoácido 407 (por exemplo, S407N)40 Posição de aminoácido 412 (por exemplo, R412P)6 Posição de aminoácido 415 (por exemplo, Q415R)27 Posição de aminoácido 422 (por exemplo, D422H)35 Posição de aminoácido 429 (por exemplo, E429A)6 Posição de aminoácido 446 (por exemplo, G446R)4,11 Posição de aminoácido 453 (por exemplo, S453Y)6 Posição de aminoácido 454 (por exemplo, D454G)6 Posição de aminoácido 455 (por exemplo, K455N)43
25 / 135 Posição de aminoácido 456 (por exemplo, T456M3,6, T456K35) Posição de aminoácido 457 (por exemplo, G457G6, G457fs*633) Posição de aminoácido 469 (por exemplo, C469G)41 Posição de aminoácido 478 (por exemplo, H478H)41 Posição de aminoácido 500 (por exemplo, Y500H)6 Posição de aminoácido 525 (por exemplo, R525X)4 Posição de Δ aminoácido 5296 Posição de aminoácido 535 (por exemplo, H535L6, H535N41) Posição de aminoácido 553 (por exemplo, P553P)43 Posição de aminoácido 554 (por exemplo, D554N1,6, D554A35) Posições de Δ aminoácido 556-62844 Posições de Δ aminoácido 559-56335 Posição de aminoácido 570 (por exemplo, L570L)41 Posição de aminoácido 577 (por exemplo, I577V)19 Posição de aminoácido 581 (por exemplo, E581K)35 Posição de aminoácido 554 e 581 (por exemplo, D554A+E581K)35 Posição de aminoácido 585 (por exemplo, E585X)21 Posição de aminoácido 600 (por exemplo, R600W2,4, R600Q6) Posição de aminoácido 602 (por exemplo, R602X)3,6 Posição de aminoácido 628 (por exemplo, R628W)6 Posição de aminoácido 631 (por exemplo, R631Q)28 Posições de Δ aminoácido 645-6994 Posição de aminoácido 661 (por exemplo, I661T)1,4,6 Posição de aminoácido 665 (por exemplo, E665X)4,6 Posição de aminoácido 672 (por exemplo, K672fs6, K672Vfs*135) Posição de aminoácido 674 (por exemplo, M674T)19 Posição de aminoácido 78 e 674 (por exemplo, H78Q/M674T)19 Posição de aminoácido 684 (por exemplo, D684D)41 Posição de aminoácido 688 (por exemplo, D688G)6 Posição de aminoácido 694 (por exemplo, I694T6, I694N17) Posição de aminoácido 695 (por exemplo, E695K)27 Posição de aminoácido 709 (por exemplo, K709fs6, K709Qfs*4113) Posição de aminoácido 717 (por exemplo, T717N)4 Posição de aminoácido 733 (por exemplo, G733R)6 Posição de aminoácido 757 (por exemplo, Y757X)4 Posição de aminoácido 749 (por exemplo, L749P)21 Posição de aminoácido 792 (por exemplo, P792fs)6 Posição de Δ aminoácido 795-7976 Posição de aminoácido 809 (por exemplo, I809L)27 Posição de aminoácido 814 (por exemplo, K814N)28 Posição de aminoácido 833 (por exemplo, R833Q27, R833W41) Posição de aminoácido 835 (por exemplo, K835Rfs*36)35 Posição de aminoácido 845 (por exemplo, K845fs)25 Posição de aminoácido 849 (por exemplo, R849Q)24 Posição de aminoácido 853 (por exemplo, F853S, F853fs)6 Posição de aminoácido 867 (por exemplo, R867C1, R867fs6, R867H23) Posição de aminoácido 885 (por exemplo, K885T)41 Posição de aminoácido 888 (por exemplo, T888T)41 Posição de aminoácido 892 (por exemplo, G892R)6 Posição de aminoácido 912 (por exemplo, G912R)35 Posição de aminoácido 921 (por exemplo, S921S)41 Posição de aminoácido 924 (por exemplo, Y924C)28 Posição de aminoácido 930 (por exemplo, R930X6, R930Q28) Posição de aminoácido 941 (por exemplo, R941X)35 Posição de aminoácido 946 (por exemplo, R946T)41 Posição de aminoácido 952 (por exemplo, R952Q5,9,15, R952X6) Posição de aminoácido 958 (por exemplo, N958fs)6 Posição de aminoácido 960 (por exemplo, A960A)41 Posição de Δ aminoácido 97143
26 / 135 Posição de aminoácido 976 (por exemplo, A976E41, A976A43) Posição de aminoácido 981 (por exemplo, E981K)20 Posição de aminoácido 994 (por exemplo, S994R)4 Posição de aminoácido 1011 (por exemplo, L1011fs*18)33 Posição de aminoácido 1012 (por exemplo, S1012I)10 Posição de aminoácido 1014 (por exemplo, R1014X)6,11 Posição de aminoácido 1015 (por exemplo, F1015L)27 Posição de aminoácido 1023 (por exemplo, Q1023fs)6 Posição de aminoácido 1040 (por exemplo, G1040R)1,6 Posição de aminoácido 1044 (por exemplo, S0144L)34 Posição de aminoácido 1047 (por exemplo, L1047fs)6 Posição de aminoácido 1050 (por exemplo, I1050K)31 Posição de aminoácido 1052 (por exemplo, L1052R)28 Posição de aminoácido 1095 (por exemplo, W1095X)11 Posição de aminoácido 1098 (por exemplo, V1098X)35 Posição de aminoácido 1131 (por exemplo, Q1131X)44 Posição de aminoácido 1142 (por exemplo, A1142Tfs*35)43 Posição de aminoácido 1144 (por exemplo, Y1144Y)43 Posição de aminoácido 1150 (por exemplo, I1150T)41 Posição de aminoácido 1152 (por exemplo, A1152T)30 Posição de aminoácido 1159 (por exemplo, P1159P)25,43 Posição de aminoácido 1164 (por exemplo, R1164X)6 Posição de aminoácido 1193 (por exemplo, R1193fs*39)33 Posição de aminoácido 1197 (por exemplo, V1197L)41 Posição de aminoácido 1208 (por exemplo, A1208fs)6 Posição de aminoácido 1209 (por exemplo, Y1209Lfs*28)4 Posição de aminoácido 1211 (por exemplo, F1211L)27 Posição de aminoácido 1219 (por exemplo, D1219H5, D1219G27) Posição de aminoácido 1223 (por exemplo, S1223S)41 Posição de aminoácido 1233 (por exemplo, P1233P)41 Posição de aminoácido 1241 (por exemplo, G1241fs)6 Posição de aminoácido 1248 (por exemplo, T1248T)43 Mutação de sítio de splice IVS3+1_+3delGTG6 Mutação de sítio de splice IVS3-2A>G6 IVS6+5T>G17,25 Mutação de sítio de splice IVS8+1G>T6 IVS9-G>A26 IVS12+1G>A25 Mutação de sítio de splice IVS17-1G>A6 Mutação de sítio de splice IVS18+2T>C6 Mutação de sítio de splice IVS20-4CT>AA Mutação de sítio de splice IVS21+5G>A6 Mutação de sítio de splice IVS23-3C>A6 Mutação de sítio de splice IVS26+2T>A6 g.24774-42062del4 c.-4C>G41 c.145C>T12 c.181-72G>A9 c.182-5T>A41 c.182-72G>A41 c.246A>G9 c.239G>A39 c.279+1_279+3delGTG46 c.280-2A>G46 c.625_62715delinsACAGTAAT46 c.554+122C>T9 c.555-3T>C27 c.625+5 G>T4 Posição de aminoácido 209 (por exemplo, P209T) e c.625+5 G>T4
27 / 135 c.628-30G>A41 c.628-31C>T41 c.698+1G>T46 c.698+20C>T41 c.782-1G>A46 c.782-34G>A41 Δ795-79714 c.782 -1G>A4 c.852A>C27 c.941-1G>A46 c.1014C>T9 c.1029+35G>A9 c.1221-8C.G41 1226delA16 c.1429+1G>A46 c.1429+2T>G13 c.1429+49G>A41 c.1430-42A>G41 c.1493T>C12 c.1587_1589delCTT46 c.1630+2T>G27 c.1631-10T>A41 c.1637-37T>C41 1660 G>A14 1798 C>T14 1799 G>A14 c.1819-39_41delAA9 c.1819+1G>A31 c.1820-27G>A41 c.1918+8C>T27 c.1933-1G>AK46 c.2097+2T>C32 c.2097+60T>G41 c.2097+89T>C41 c.2097+97T>G41 c.2210-114T>C9 2210delA16 c.2210-45_50dupATAAAA9 c.2285+29C.T41 c.2285+32A>G41 c.2286-4_2286-3delinsAA46 c.2418+5G>A46 c.2707+3G>C27 c.2707+9T>G41 c.2707+43A>G41 c.2709-59T>C41 c.2931+9A>G41 c.2931+59T>A41 c.2932-3C>A46 c.2932+59T>A9 c.2937A>C27 c.3016-9C>A31 c.3033-3034del19 3122delTCCTA/ insACATCGATGTTGATGTTAGG45 3318 G>A14 c.3400+2T>A46 c.3401-175C>T9 c.3401-167C>T9
28 / 135 c.3401-108C>T9 c.3531+8G>T9,15 c.3532-15C>T9 Δ Phe ex 154 Ex1_Ex13del6 Ex2_Ex6del33 Ex12_Ex14del27 Éxon pulado 2445 del5’UTR-ex1811 c.*11C>T41 c.*1101 + 366G > A7 g.92918del56531 GC precedendo o éxon 16 (por exemplo, resultando em uma deleção de 4 pb)42 Mudança da matriz de leitura da extremidade 5’ do éxon 1642 Deleção de 5’ 1,4 kb46
Tabela 3. Mutações de ATP8B1 selecionadas associadas a PFIC-1 Posição de aminoácido 23 (por exemplo, P23L)5 Posição de aminoácido 78 (por exemplo, H78Q)19 Posição de aminoácido 93 (por exemplo, A93A)6 Posição de aminoácido 96 (por exemplo, A96G)27 Posição de aminoácido 127 (por exemplo, L127P)6 Posição de aminoácido 197 (por exemplo, G197Lfs*10)22 Posição de aminoácido 205 (por exemplo, N205fs)6 Posição de aminoácido 209 (por exemplo, P209T)4 Posição de aminoácido 233 (por exemplo, G233R)38 Posição de aminoácido 243 (por exemplo, L243fs*28)33 Posição de aminoácido 288 (por exemplo, L288S)6 Posição de aminoácido 296 (por exemplo, R296C)11 Posição de aminoácido 308 (por exemplo, G308V1,6) Posição de aminoácido 320 (por exemplo, M320Vfs*13)11 Posição de aminoácido 403 (por exemplo, S403Y)6 Posição de aminoácido 407 (por exemplo, S407N)40 Posição de aminoácido 412 (por exemplo, R412P)6 Posição de aminoácido 415 (por exemplo, Q415R)27 Posição de aminoácido 429 (por exemplo, E429A)6 Posição de aminoácido 446 (por exemplo, G446R)4 Posição de aminoácido 456 (por exemplo, T456M)3,6 Posição de aminoácido 457 (por exemplo, G457G6, G457fs*633) Posição de aminoácido 500 (por exemplo, Y500H)6 Posição de aminoácido 525 (por exemplo, R525X)4 Posição de Δ aminoácido 5296 Posição de aminoácido 535 (por exemplo, H535L)6 Posição de aminoácido 554 (por exemplo, D554N)1,6 Posição de aminoácido 577 (por exemplo, I577V)19 Posição de aminoácido 585 (por exemplo, E585X)21 Posição de aminoácido 600 (por exemplo, R600W)4 Posição de aminoácido 602 (por exemplo, R602X)3,6 Posição de aminoácido 661 (por exemplo, I661T)4,6 Posição de aminoácido 665 (por exemplo, E665X)4,6 Posições de Δ aminoácido 645-6994 Posição de aminoácido 672 (por exemplo, K672fs)6 Posição de aminoácido 674 (por exemplo, M674T)19 Posição de aminoácido 78 e 674 (por exemplo, H78Q/M674T)19 Posição de aminoácido 688 (por exemplo, D688G)6 Posição de aminoácido 694 (por exemplo, I694N)17 Posição de aminoácido 695 (por exemplo, E695K)27 Posição de aminoácido 709 (por exemplo, K709fs)6 Posição de aminoácido 717 (por exemplo, T717N)4
29 / 135 Posição de aminoácido 733 (por exemplo, G733R)6 Posição de aminoácido 749 (por exemplo, L749P)21 Posição de aminoácido 757 (por exemplo, Y757X)4 Posição de aminoácido 792 (por exemplo, P792fs)6 Posição de aminoácido 809 (por exemplo, I809L)27 Posição de aminoácido 853 (por exemplo, F853S, F853fs)6 Posição de aminoácido 867 (por exemplo, R867fs)6 Posição de aminoácido 892 (por exemplo, G892R)6 Posição de aminoácido 930 (por exemplo, R930X6, R952Q15) Posição de aminoácido 952 (por exemplo, R952X)6 Posição de aminoácido 958 (por exemplo, N958fs)6 Posição de aminoácido 981 (por exemplo, E981K)20 Posição de aminoácido 994 (por exemplo, S994R)4 Posição de aminoácido 1014 (por exemplo, R1014X)6,11 Posição de aminoácido 1015 (por exemplo, F1015L)27 Posição de aminoácido 1023 (por exemplo, Q1023fs)6 Posição de aminoácido 1040 (por exemplo, G1040R)1,6 Posição de aminoácido 1047 (por exemplo, L1047fs)6 Posição de aminoácido 1095 (por exemplo, W1095X)11 Posição de aminoácido 1208 (por exemplo, A1208fs)6 Posição de aminoácido 1209 (por exemplo, Y1209Lfs*28)4 Posição de aminoácido 1211 (por exemplo, F1211L)27 Posição de aminoácido 1219 (por exemplo, D1219H5, D1219G27) Mutação de sítio de splice IVS3+1_+3delGTG6 Mutação de sítio de splice IVS3-2A>G6 IVS6+5T>G17 Mutação de sítio de splice IVS8+1G>T6 IVS9-G>A26 Mutação de sítio de splice IVS17-1G>A6 Mutação de sítio de splice IVS18+2T>C6 Mutação de sítio de splice IVS21+5G>A6 g.24774-42062del4 c.145C>T12 c.239G>A39 c.625+5 G>T4 Posição de aminoácido 209 (por exemplo, P209T) e c.625+5 G>T4 c.782 -1G>A4 c.1493T>C12 c.1630+2T>G27 1660 G>A14 c.2707+3G>C27 c.2097+2T>C32 c.3033-3034del19 3318 G>A14 c.3158+8G>T15 Δ Phe ex 154 Ex1_Ex13del6 Ex2_Ex6del33 Ex12_Ex14del27 del5’UTR-ex1811 c.*1101 + 366G > A7 GC precedendo o éxon 16 (por exemplo, resultando em uma deleção de 4 pb)42 Mudança da matriz de leitura da extremidade 5’ do éxon 1642
A Uma mutação em ‘X’ denota um códon de parada precoce Referências para as Tabelas 2 e 3 1 Folmer et al., Hepatology. 2009, vol. 50(5), p. 1597-1605. 2 Hsu et al., Hepatol Res. 2009, vol. 39(6), p. 625-631. 3 Alvarez et al., Hum Mol Genet. 2004, vol. 13(20), p. 2451-2460. 4 Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.
30 / 135 5 Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958. 6 Klomp et al., Hepatology 2004, vol. 40(1), p. 27-38. 7 Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500. 8 Dixon et al., Scientific Reports 2017, vol. 7, 11823. 9 Painter et al., Eur J Hum Genet. 2005, vol. 13(4), p. 435-439. 10 Deng et al., World J Gastroenterol. 2012, vol. 18(44), p. 6504-6509. 11 Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021. 12 Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp.
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S180. Abstract Number: OP284. 13 Togawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 67, Supp.
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Hong Kong, China. 13 Feb 2009-16 Feb 2009 18 McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32.v2 19 Hasegawa et al., Orphanet J Rare Dis. 2014, vol. 9:89. 20 Stone et al., J Biol Chem. 2012, vol. 287(49), p. 41139-51. 21 Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print] 22 Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107. 23 Uegaki et al., Intern Med. 2008, vol. 47(7), p. 599-602. 24 Goldschmidt et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(4), p. 306-311. 25 Liu et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 50(2), p. 179-183. 26 Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458. 27 Bounford.
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[0059] Em algumas modalidades, a mutação em ATP8B1 é selecionada de L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X e G1040R.
[0060] Sequência de proteína canônica de ABCB11 (SEQ ID NO: 3) – Uniprot ID O95342
MSDSVILRSI KKFGEENDGF ESDKSYNNDK KSRLQDEKKG DGVRVGFFQL FRFSSSTDIW LMFVGSLCAF LHGIAQPGVL LIFGTMTDVF IDYDVELQEL QIPGKACVNN TIVWTNSSLN QNMTNGTRCG LLNIESEMIK FASYYAGIAV AVLITGYIQI CFWVIAAARQ IQKMRKFYFR RIMRMEIGWF DCNSVGELNT RFSDDINKIN DAIADQMALF IQRMTSTICG FLLGFFRGWK LTLVIISVSP LIGIGAATIG LSVSKFTDYE LKAYAKAGVV ADEVISSMRT VAAFGGEKRE VERYEKNLVF AQRWGIRKGI VMGFFTGFVW CLIFLCYALA FWYGSTLVLD EGEYTPGTLV QIFLSVIVGA LNLGNASPCL EAFATGRAAA TSIFETIDRK PIIDCMSEDG YKLDRIKGEI EFHNVTFHYP SRPEVKILND LNMVIKPGEM TALVGPSGAG KSTALQLIQR FYDPCEGMVT VDGHDIRSLN IQWLRDQIGI VEQEPVLFST TIAENIRYGR EDATMEDIVQ AAKEANAYNF IMDLPQQFDT LVGEGGGQMS GGQKQRVAIA RALIRNPKIL LLDMATSALD NESEAMVQEV LSKIQHGHTI ISVAHRLSTV RAADTIIGFE HGTAVERGTH EELLERKGVY FTLVTLQSQG NQALNEEDIK DATEDDMLAR TFSRGSYQDS LRASIRQRSK SQLSYLVHEP PLAVVDHKST YEEDRKDKDI PVQEEVEPAP VRRILKFSAP EWPYMLVGSV GAAVNGTVTP LYAFLFSQIL GTFSIPDKEE QRSQINGVCL LFVAMGCVSL FTQFLQGYAF AKSGELLTKR LRKFGFRAML GQDIAWFDDL RNSPGALTTR LATDASQVQG AAGSQIGMIV NSFTNVTVAM IIAFSFSWKL SLVILCFFPF LALSGATQTR MLTGFASRDK QALEMVGQIT NEALSNIRTV AGIGKERRFI EALETELEKP FKTAIQKANI YGFCFAFAQC IMFIANSASY RYGGYLISNE GLHFSYVFRV ISAVVLSATA LGRAFSYTPS YAKAKISAAR FFQLLDRQPP ISVYNTAGEK WDNFQGKIDF VDCKFTYPSR PDSQVLNGLS VSISPGQTLA FVGSSGCGKS TSIQLLERFY DPDQGKVMID GHDSKKVNVQ FLRSNIGIVS QEPVLFACSI MDNIKYGDNT KEIPMERVIA AAKQAQLHDF VMSLPEKYET NVGSQGSQLS RGEKQRIAIA RAIVRDPKIL LLDEATSALD TESEKTVQVA LDKAREGRTC IVIAHRLSTI QNADIIAVMA QGVVIEKGTH EELMAQKGAY YKLVTTGSPI S
[0061] Sequência de DNA canônica de ABCB11 (SEQ ID NO: 4)
ATG TCT GAC TCA GTA ATT CTT CGA AGT ATA AAG AAA TTT GGA GAG GAG AAT GAT GGT TTT GAG TCA GAT AAA TCA TAT AAT AAT GAT AAG AAA TCA AGG TTA CAA GAT GAG AAG AAA GGT GAT GGC GTT AGA GTT GGC TTC TTT CAA TTG TTT CGG TTT TCT TCA TCA ACT GAC ATT TGG CTG ATG TTT GTG GGA AGT TTG TGT GCA TTT CTC CAT GGA ATA GCC CAG CCA GGC GTG CTA CTC ATT TTT GGC ACA ATG ACA GAT GTT TTT ATT GAC TAC GAC GTT GAG TTA CAA GAA CTC CAG ATT CCA GGA AAA GCA TGT GTG AAT AAC ACC ATT GTA TGG ACT AAC AGT TCC CTC AAC CAG AAC ATG ACA AAT GGA ACA CGT TGT GGG TTG CTG AAC ATC GAG AGC GAA ATG ATC AAA TTT GCC AGT TAC TAT GCT GGA ATT GCT GTC GCA GTA CTT ATC ACA GGA TAT ATT CAA ATA TGC TTT TGG GTC ATT GCC GCA GCT CGT CAG ATA CAG AAA ATG AGA AAA TTT TAC TTT AGG AGA ATA ATG AGA ATG GAA ATA GGG TGG TTT GAC TGC AAT TCA GTG GGG GAG CTG AAT ACA AGA TTC TCT GAT GAT ATT AAT AAA ATC AAT GAT GCC ATA GCT GAC CAA ATG GCC CTT TTC ATT CAG CGC ATG ACC TCG ACC ATC TGT GGT TTC CTG TTG GGA TTT TTC AGG GGT TGG AAA CTG ACC TTG GTT ATT ATT TCT GTC AGC CCT CTC ATT GGG ATT GGA GCA GCC ACC ATT GGT CTG AGT GTG TCC AAG TTT ACG GAC TAT GAG CTG AAG GCC TAT GCC AAA GCA GGG GTG GTG GCT GAT GAA GTC ATT TCA TCA ATG AGA ACA GTG GCT GCT TTT GGT GGT GAG AAA AGA GAG GTT GAA AGG TAT GAG AAA AAT CTT GTG TTC GCC CAG CGT TGG GGA ATT AGA AAA GGA ATA GTG ATG GGA TTC TTT ACT GGA TTC GTG TGG TGT CTC ATC TTT TTG TGT TAT GCA CTG GCC TTC TGG TAC GGC TCC ACA CTT GTC CTG GAT GAA GGA GAA TAT ACA CCA GGA ACC CTT GTC CAG ATT TTC CTC AGT GTC ATA GTA GGA GCT TTA AAT CTT GGC AAT GCC TCT CCT TGT TTG GAA GCC TTT GCA ACT GGA CGT GCA GCA GCC ACC AGC ATT TTT GAG ACA ATA GAC AGG AAA CCC ATC ATT GAC TGC ATG TCA GAA GAT GGT TAC AAG TTG GAT CGA ATC AAG GGT GAA ATT GAA TTC CAT AAT GTG ACC TTC CAT TAT CCT TCC AGA CCA GAG GTG AAG ATT CTA AAT GAC CTC AAC ATG GTC ATT AAA CCA GGG GAA ATG
32 / 135
ACA GCT CTG GTA GGA CCC AGT GGA GCT GGA AAA AGT ACA GCA CTG CAA CTC ATT CAG CGA TTC TAT GAC CCC TGT GAA GGA ATG GTG ACC GTG GAT GGC CAT GAC ATT CGC TCT CTT AAC ATT CAG TGG CTT AGA GAT CAG ATT GGG ATA GTG GAG CAA GAG CCA GTT CTG TTC TCT ACC ACC ATT GCA GAA AAT ATT CGC TAT GGC AGA GAA GAT GCA ACA ATG GAA GAC ATA GTC CAA GCT GCC AAG GAG GCC AAT GCC TAC AAC TTC ATC ATG GAC CTG CCA CAG CAA TTT GAC ACC CTT GTT GGA GAA GGA GGA GGC CAG ATG AGT GGT GGC CAG AAA CAA AGG GTA GCT ATC GCC AGA GCC CTC ATC CGA AAT CCC AAG ATT CTG CTT TTG GAC ATG GCC ACC TCA GCT CTG GAC AAT GAG AGT GAA GCC ATG GTG CAA GAA GTG CTG AGT AAG ATT CAG CAT GGG CAC ACA ATC ATT TCA GTT GCT CAT CGC TTG TCT ACG GTC AGA GCT GCA GAT ACC ATC ATT GGT TTT GAA CAT GGC ACT GCA GTG GAA AGA GGG ACC CAT GAA GAA TTA CTG GAA AGG AAA GGT GTT TAC TTC ACT CTA GTG ACT TTG CAA AGC CAG GGA AAT CAA GCT CTT AAT GAA GAG GAC ATA AAG GAT GCA ACT GAA GAT GAC ATG CTT GCG AGG ACC TTT AGC AGA GGG AGC TAC CAG GAT AGT TTA AGG GCT TCC ATC CGG CAA CGC TCC AAG TCT CAG CTT TCT TAC CTG GTG CAC GAA CCT CCA TTA GCT GTT GTA GAT CAT AAG TCT ACC TAT GAA GAA GAT AGA AAG GAC AAG GAC ATT CCT GTG CAG GAA GAA GTT GAA CCT GCC CCA GTT AGG AGG ATT CTG AAA TTC AGT GCT CCA GAA TGG CCC TAC ATG CTG GTA GGG TCT GTG GGT GCA GCT GTG AAC GGG ACA GTC ACA CCC TTG TAT GCC TTT TTA TTC AGC CAG ATT CTT GGG ACT TTT TCA ATT CCT GAT AAA GAG GAA CAA AGG TCA CAG ATC AAT GGT GTG TGC CTA CTT TTT GTA GCA ATG GGC TGT GTA TCT CTT TTC ACC CAA TTT CTA CAG GGA TAT GCC TTT GCT AAA TCT GGG GAG CTC CTA ACA AAA AGG CTA CGT AAA TTT GGT TTC AGG GCA ATG CTG GGG CAA GAT ATT GCC TGG TTT GAT GAC CTC AGA AAT AGC CCT GGA GCA TTG ACA ACA AGA CTT GCT ACA GAT GCT TCC CAA GTT CAA GGG GCT GCC GGC TCT CAG ATC GGG ATG ATA GTC AAT TCC TTC ACT AAC GTC ACT GTG GCC ATG ATC ATT GCC TTC TCC TTT AGC TGG AAG CTG AGC CTG GTC ATC TTG TGC TTC TTC CCC TTC TTG GCT TTA TCA GGA GCC ACA CAG ACC AGG ATG TTG ACA GGA TTT GCC TCT CGA GAT AAG CAG GCC CTG GAG ATG GTG GGA CAG ATT ACA AAT GAA GCC CTC AGT AAC ATC CGC ACT GTT GCT GGA ATT GGA AAG GAG AGG CGG TTC ATT GAA GCA CTT GAG ACT GAG CTG GAG AAG CCC TTC AAG ACA GCC ATT CAG AAA GCC AAT ATT TAC GGA TTC TGC TTT GCC TTT GCC CAG TGC ATC ATG TTT ATT GCG AAT TCT GCT TCC TAC AGA TAT GGA GGT TAC TTA ATC TCC AAT GAG GGG CTC CAT TTC AGC TAT GTG TTC AGG GTG ATC TCT GCA GTT GTA CTG AGT GCA ACA GCT CTT GGA AGA GCC TTC TCT TAC ACC CCA AGT TAT GCA AAA GCT AAA ATA TCA GCT GCA CGC TTT TTT CAA CTG CTG GAC CGA CAA CCC CCA ATC AGT GTA TAC AAT ACT GCA GGT GAA AAA TGG GAC AAC TTC CAG GGG AAG ATT GAT TTT GTT GAT TGT AAA TTT ACA TAT CCT TCT CGA CCT GAC TCG CAA GTT CTG AAT GGT CTC TCA GTG TCG ATT AGT CCA GGG CAG ACA CTG GCG TTT GTT GGG AGC AGT GGA TGT GGC AAA AGC ACT AGC ATT CAG CTG TTG GAA CGT TTC TAT GAT CCT GAT CAA GGG AAG GTG ATG ATA GAT GGT CAT GAC AGC AAA AAA GTA AAT GTC CAG TTC CTC CGC TCA AAC ATT GGA ATT GTT TCC CAG GAA CCA GTG TTG TTT GCC TGT AGC ATA ATG GAC AAT ATC AAG TAT GGA GAC AAC ACC AAA GAA ATT CCC ATG GAA AGA GTC ATA GCA GCT GCA AAA CAG GCT CAG CTG CAT GAT TTT GTC ATG TCA CTC CCA GAG AAA TAT GAA ACT AAC GTT GGG TCC CAG GGG TCT CAA CTC TCT AGA GGG GAG AAA CAA CGC ATT GCT ATT GCT CGG GCC ATT GTA CGA GAT CCT AAA ATC TTG CTA CTA GAT GAA GCC ACT TCT GCC TTA GAC ACA GAA AGT GAA AAG ACG GTG CAG GTT GCT CTA GAC AAA GCC AGA GAG GGT CGG ACC TGC ATT GTC ATT GCC CAT CGC TTG TCC ACC ATC CAG AAC GCG GAT ATC ATT GCT GTC ATG GCA CAG GGG GTG GTG ATT GAA AAG GGG ACC CAT GAA GAA CTG ATG GCC CAA AAA GGA GCC TAC TAC AAA CTA GTC
ACC ACT GGA TCC CCC ATC AGT TGA Tabela 4. Mutações de ABCB11 exemplificativas Posição de aminoácido 1 (por exemplo, M1V)9 Posição de aminoácido 4 (por exemplo, S4X)A,64 Posição de aminoácido 8 (por exemplo, R8X)88 Posição de aminoácido 19 (por exemplo, G19R)56 Posição de aminoácido 24 (por exemplo, K24X)35 Posição de aminoácido 25 (por exemplo, S25X)5,14 Posição de aminoácido 26 (por exemplo, Y26Ifs*7)38 Posição de aminoácido 36 (por exemplo, D36D)27 Posição de aminoácido 38 (por exemplo, K38Rfs*24)73 Posição de aminoácido 43 (por exemplo, V43I)57 Posição de aminoácido 49 (por exemplo, Q49X)73
33 / 135 Posição de aminoácido 50 (por exemplo, L50S, L50W)57 Posição de aminoácido 52 (por exemplo, R52W26, R52R28) Posição de aminoácido 56 (por exemplo, S56L)58 Posição de aminoácido 58 (por exemplo, D58N)62 Posição de aminoácido 62 (por exemplo, M62K)9 Posição de aminoácido 66 (por exemplo, S66N)17 Posição de aminoácido 68 (por exemplo, C68Y)41 Posição de aminoácido 50 (por exemplo, L50S)5,7 Posição de aminoácido 71 (por exemplo, L71H)73 Posição de aminoácido 74 (por exemplo, I74R)71 Posição de aminoácido 77 (por exemplo, P77A)73 Posição de aminoácido 87 (por exemplo, T87R)67 Posição de aminoácido 90 (por exemplo, F90F)7,27 Posição de aminoácido 93 (por exemplo, Y93S13, Y93X88) Posição de aminoácido 96 (por exemplo, E96X)88 Posição de aminoácido 97 (por exemplo, L97X)39 Posição de aminoácido 101 (por exemplo, Q101Dfs*8)9 Posição de aminoácido 107 (por exemplo, C107R)36 Posição de aminoácido 112 (por exemplo, I112T)9 Posição de aminoácido 114 (por exemplo, W114R)2,9 Posição de aminoácido 123 (por exemplo, M123T)67 Posição de aminoácido 127 (por exemplo, T127Hfs*6)5 Posição de aminoácido 129 (por exemplo, C129Y)25 Posição de aminoácido 130 (por exemplo, G130G)77 Posição de aminoácido 134 (por exemplo, I134I)28 Posição de aminoácido 135 (por exemplo, E135K7,13, E135L17) Posição de aminoácido 137 (por exemplo, E137K)7 Posição de aminoácido 157 (por exemplo, Y157C)5 Posição de aminoácido 161 (por exemplo, C161X)39 Posição de aminoácido 164 (por exemplo, V164Gfs*730, V164I85) Posição de aminoácido 167 (por exemplo, A167S4, A167V7, A167T9,17) Posição de aminoácido 181 (por exemplo, R181I)35 Posição de aminoácido 182 (por exemplo, I182K)9 Posição de aminoácido 183 (por exemplo, M183V8, M183T9) Posição de aminoácido 185 (por exemplo, M185I)73 Posição de aminoácido 186 (por exemplo, E186G)2,7,22 Posição de aminoácido 188 (por exemplo, G188W)73 Posição de aminoácido 194 (por exemplo, S194P)7 Posição de aminoácido 198 (por exemplo, L198P)7 Posição de aminoácido 199 (por exemplo, N199Ifs*15X)88 Posição de aminoácido 206 (por exemplo, I206V)28 Posição de aminoácido 212 (por exemplo, A212T)73 Posição de aminoácido 217 (por exemplo, M217R)88 Posição de aminoácido 225 (por exemplo, T225P)57 Posição de aminoácido 226 (por exemplo, S226L)9 Posição de aminoácido 232 (por exemplo, L232Cfs*9)9 Posição de aminoácido 233 (por exemplo, L233S)86 Posição de aminoácido 238 (por exemplo, G238V)2,7 Posição de aminoácido 242 (por exemplo, T242I)5,7 Posição de aminoácido 245 (por exemplo, I245Tfs*26)57 Posição de aminoácido 256 (por exemplo, A256G)9 Posição de aminoácido 260 (por exemplo, G260D)7 Posição de aminoácido 269 (por exemplo, Y269Y)27 Posição de aminoácido 277 (por exemplo, A277E)77 Posição de aminoácido 283 (por exemplo, E283D)73 Posição de aminoácido 212 e 283 (por exemplo, A212T+E283D)73 Posição de aminoácido 284 (por exemplo, V284L7,39, V284A7, V284D23) Posição de aminoácido 297 (por exemplo, E297G1,2,5,7, E297K7) Posição de aminoácido 299 (por exemplo, R299K)28
34 / 135 Posição de aminoácido 303 (por exemplo, R303K8, R303M63 R303fsX32183) Posição de aminoácido 304 (por exemplo, Y304X)26 Posição de aminoácido 312 (por exemplo, Q312H)7 Posição de aminoácido 313 (por exemplo, R313S)5,7 Posição de aminoácido 314 (por exemplo, W314X)57 Posição de aminoácido 318 (por exemplo, K318Rfs*26)29 Posição de aminoácido 319 (por exemplo, G319G)7 Posição de aminoácido 327 (por exemplo, G327E)5,7 Posição de aminoácido 330 (por exemplo, W330X)24 Posição de aminoácido 336 (por exemplo, C336S)2,7 Posição de aminoácido 337 (por exemplo, Y337H)21,27 Posição de aminoácido 342 (por exemplo, W342G)50 Posição de aminoácido 354 (por exemplo, R354X)9 Posição de aminoácido 361 (por exemplo, Q361X57, Q361R74) Posição de aminoácido 366 (por exemplo, V366V28, V366D57) Posição de aminoácido 368 (por exemplo, V368Rfs*27)5 Posição de aminoácido 374 (por exemplo, G374S)3 Posição de aminoácido 380 (por exemplo, L380Wfs*18)5 Posição de aminoácido 382 (por exemplo, A382G)88 Posições de Δ aminoácido 382-3885 Posições de Δ aminoácido 383-38957 Posição de aminoácido 387 (por exemplo, R387H)9 Posição de aminoácido 390 (por exemplo, A390P)5,7 Posição de aminoácido 395 (por exemplo, E395E)28 Posição de aminoácido 404 (por exemplo, D404G)9 Posição de aminoácido 410 (por exemplo, G410D)5,7 Posição de aminoácido 413 (por exemplo, L413W)5,7 Posição de aminoácido 415 (por exemplo, R415X)42 Posição de aminoácido 416 (por exemplo, I416I)27 Posição de aminoácido 420 (por exemplo, I420T)9 Posição de aminoácido 423 (por exemplo, H423R)13 Posição de aminoácido 432 (por exemplo, R432T)1,2,7 Posição de aminoácido 436 (por exemplo, K436N)40 Posição de aminoácido 440 (por exemplo, D440E)88 Posição de aminoácido 444 (por exemplo, V444A)2 Posição de aminoácido 454 (por exemplo, V454X)49 Posição de aminoácido 455 (por exemplo, G455E)9 Posição de aminoácido 457 (por exemplo, S457Vfs*23)88 Posição de aminoácido 461 (por exemplo, K461E)2,7 Posição de aminoácido 462 (por exemplo, S462R)88 Posição de aminoácido 463 (por exemplo, T463I)5,7 Posição de aminoácido 466 (por exemplo, Q466K)5,7 Posição de aminoácido 470 (por exemplo, R470Q5,7, R470X9) Posição de aminoácido 471 (por exemplo, Y472X)5 Posição de aminoácido 472 (por exemplo, Y472C5,27, Y472X14) Posição de aminoácido 473 (por exemplo, D473Q35, D473V88) Posição de aminoácido 475 (por exemplo, C475X)29 Posição de aminoácido 481 (por exemplo, V481E)5,7 Posição de aminoácido 482 (por exemplo, D482G)2,5,7 Posição de aminoácido 484 (por exemplo, H484Rfs*5)9 Posição de aminoácido 487 (por exemplo, R487H2, R487P5) Posição de aminoácido 490 (por exemplo, N490D)5,7 Posição de aminoácido 493 (por exemplo, W493X)8 Posição de aminoácido 496 (por exemplo, D496V)88 Posição de aminoácido 498 (por exemplo, I498T)2,7 Posição de aminoácido 499 (por exemplo, G499E)73 Posição de aminoácido 501 (por exemplo, V501G)68 Posição de aminoácido 504 (por exemplo, E504K)79 Posição de aminoácido 510 (por exemplo, T510T)7
35 / 135 Posição de aminoácido 512 (por exemplo, I512T)5,7 Posição de aminoácido 515 (por exemplo, N515T5,7, N515D64) Posição de aminoácido 516 (por exemplo, I516M)17 Posição de aminoácido 517 (por exemplo, R517H)5,7 Posição de aminoácido 520 (por exemplo, R520X)5 Posição de aminoácido 523 (por exemplo, A523G)13 Posição de aminoácido 528 (por exemplo, I528Sfs*215, I528X9, I528T73) Posição de aminoácido 535 (por exemplo, A535A7, A535X89) Posição de aminoácido 540 (por exemplo, F540L)46 Posição de aminoácido 541 (por exemplo, I541L5,7, I541T5,17) Posição de aminoácido 546 (por exemplo, Q546K39, Q546H73) Posição de aminoácido 548 (por exemplo, F548Y)5,7 Posição de aminoácido 549 (por exemplo, D549V)9 Posição de aminoácido 554 (por exemplo, E554K)21 Posição de aminoácido 556 (por exemplo, G556R)67 Posição de aminoácido 558 (por exemplo, Q558H)23 Posição de aminoácido 559 (por exemplo, M559T)57 Posição de aminoácido 562 (por exemplo, G562D5,7, G562S73) Posição de aminoácido 570 (por exemplo, A570T2,5,7, A570V26) Posição de aminoácido 575 (por exemplo, R575X2,5, R575Q21) Posição de aminoácido 580 (por exemplo, L580P)57 Posição de aminoácido 586 (por exemplo, T586I)7 Posição de aminoácido 587 (por exemplo, S587X)73 Posição de aminoácido 588 (por exemplo, A588V5,7, A588P73) Posição de aminoácido 591 (por exemplo, N591S)2,7 Posição de aminoácido 593 (por exemplo, S593R)2,7 Posição de aminoácido 597 (por exemplo, V597V9, V597L13) Posição de aminoácido 603 (por exemplo, K603K)55 Posição de aminoácido 609 (por exemplo, H609Hfs*46)26 Posição de aminoácido 610 (por exemplo, I610Gfs*459, I610T57)9 Posição de aminoácido 615 (por exemplo, H615R)26 Posição de aminoácido 616 (por exemplo, R616G28, R616H73) Posição de aminoácido 619 (por exemplo, T619A)28 Posição de aminoácido 623 (por exemplo, A623A)28 Posição de aminoácido 625 (por exemplo, T625Nfs*5)26 Posição de aminoácido 627 (por exemplo, I627T)7 Posição de aminoácido 628 (por exemplo, G628Wfs*3)70 Posição de aminoácido 636 (por exemplo, E636G)2 Posição de aminoácido 648 (por exemplo, G648Vfs*65, G648V50) Posição de aminoácido 655 (por exemplo, T655I)7 Posição de aminoácido 669 (por exemplo, I669V)26 Posição de aminoácido 676 (por exemplo, D676Y)11 Posição de aminoácido 677 (por exemplo, M677V)7,13 Posição de aminoácido 679 (por exemplo, A679V)58 Posição de aminoácido 685 (por exemplo, G685W)60 Posição de aminoácido 696 (por exemplo, R696W27, R696Q58) Posição de aminoácido 698 (por exemplo, R698H7,9, R698K61, R698C88) Posição de aminoácido 699 (por exemplo, S699P)9 Posição de aminoácido 701 (por exemplo, S701P)58 Posição de aminoácido 702 (por exemplo, Q702X)89 Posição de aminoácido 709 (por exemplo, E709K)7 Posição de aminoácido 710 (por exemplo, P710P)7 Posição de aminoácido 712 (por exemplo, L712L)28 Posição de aminoácido 721 (por exemplo, Y721C)88 Posição de aminoácido 729 (por exemplo, D724N)39 Posição de aminoácido 731 (por exemplo, P731S)23 Posição de aminoácido 740 (por exemplo, P740Qfs*6)73 Posição de aminoácido 758 (por exemplo, G758R)5 Posição de aminoácido 766 (por exemplo, G766R)5,24
36 / 135 Posição de aminoácido 772 (por exemplo, Y772X)5 Posição de aminoácido 804 (por exemplo, A804A)7 Posição de aminoácido 806 (por exemplo, G806D44, G806G55) Posição de aminoácido 809 (por exemplo, S809F)81 Posição de aminoácido 817 (por exemplo, G817G)88 Posição de aminoácido 818 (por exemplo, Y818F)7 Posição de aminoácido 824 (por exemplo, G824E)42 Posição de aminoácido 825 (por exemplo, G825G)73 Posição de aminoácido 830 (por exemplo, R830Gfs*28)73 Posição de aminoácido 832 (por exemplo, R832C7,26, R832H41) Posição de aminoácido 842 (por exemplo, D842G)2 Posição de aminoácido 848 (por exemplo, D848N)73 Posição de aminoácido 855 (por exemplo, G855R)11 Posição de aminoácido 859 (por exemplo, T859R)5,7 Posição de aminoácido 865 (por exemplo, A865V)27 Posição de aminoácido 866 (por exemplo, S866A)57 Posição de aminoácido 868 (por exemplo, V868D)73 Posição de aminoácido 869 (por exemplo, Q869P)73 Posição de aminoácido 875 (por exemplo, Q875X)73 Posição de aminoácido 877 (por exemplo, G877R)56 Posição de aminoácido 879 (por exemplo, I879R)88 Posição de aminoácido 893 (por exemplo, A893V)57 Posição de aminoácido 901 (por exemplo, S901R17, S901I73) Posição de aminoácido 903 (por exemplo, V903G)57 Posição de Δ aminoácido 91912 Posição de aminoácido 923 (por exemplo, T923P)2,7 Posição de aminoácido 926 (por exemplo, A926P)2,7 Posição de aminoácido 928 (por exemplo, R928X15, R928Q40) Posição de aminoácido 930 (por exemplo, K930X5, K930Efs*795,10, K930Efs*4926) Posição de aminoácido 931 (por exemplo, Q931P)27 Posição de aminoácido 945 (por exemplo, S945N)57 Posição de aminoácido 948 (por exemplo, R948C)5,7,26 Posição de aminoácido 958 (por exemplo, R958Q)28 Posição de aminoácido 969 (por exemplo, K969K)88 Posições de Δ aminoácido 969-9725 Posição de aminoácido 973 (por exemplo, T973I)57 Posição de aminoácido 976 (por exemplo, Q976R58, Q976X88) Posição de aminoácido 979 (por exemplo, N979D)5,7 Posição de aminoácido 981 (por exemplo, Y981Y)28 Posição de aminoácido 982 (por exemplo, G982R)2,5,7 Posição de aminoácido 444 e 982 (por exemplo, V444A+G982R)38 Posição de aminoácido 995 (por exemplo, A995A)28 Posição de aminoácido 1001 (por exemplo, R1001R)9 Posição de aminoácido 1003 (por exemplo, G1003R)24 Posição de aminoácido 1004 (por exemplo, G1004D)2,7 Posição de aminoácido 1027 (por exemplo, S1027R)26 Posição de aminoácido 1028 (por exemplo, A1028A7,10,88, A1028E88) Posição de aminoácido 1029 (por exemplo, T1029K)5 Posição de aminoácido 1032 (por exemplo, G1032R)12 Posição de aminoácido 1041 (por exemplo, Y1041X)9 Posição de aminoácido 1044 (por exemplo, A1044P)88 Posição de aminoácido 1050 (por exemplo, R1050C)2,7,57 Posição de aminoácido 1053 (por exemplo, Q1053X)57 Posição de aminoácido 1055 (por exemplo, L1055P)36 Posição de aminoácido 1057 (por exemplo, R1057X2, R1057Q58) Posição de aminoácido 1058 (por exemplo, Q1058Hfs*389, Q1058fs*3817, Q1058X73) Posição de aminoácido 1061 (por exemplo, I1061Vfs*34)9 Posição de aminoácido 1083 (por exemplo, C1083Y)47 Posição de aminoácido 1086 (por exemplo, T1086T)28
37 / 135 Posição de aminoácido 1090 (por exemplo, R1090X)2,5 Posição de aminoácido 1099 (por exemplo, L1099Lfs*38)26 Posição de aminoácido 1100 (por exemplo, S1100Qfs*38)13 Posição de aminoácido 1110 (por exemplo, A1110E)5,7 Posição de aminoácido 1112 (por exemplo, V1112F)70 Posição de aminoácido 1116 (por exemplo, G1116R7, G1116F9,17, G1116E36) Posição de aminoácido 1120 (por exemplo, S1120N)88 Posição de aminoácido 1128 (por exemplo, R1128H2,7, R1128C5,7,13) Posição de aminoácido 1131 (por exemplo, D1131V)27 Posição de aminoácido 1144 (por exemplo, S1144R)7 Posição de aminoácido 1147 (por exemplo, V1147X)5 Posição de aminoácido 1153 (por exemplo, R1153C2,5,7, R1153H5) Posição de aminoácido 1154 (por exemplo, S1154P)5,7 Posição de aminoácido 1162 (por exemplo, E1162X)39 Posição de Δ aminoácido 116588 Posição de aminoácido 1164 (por exemplo, V1164Gfs*7) Posição de aminoácido 1173 (por exemplo, N1173D)57 Posição de aminoácido 1175 (por exemplo, K1175T)58 Posição de aminoácido 1186 (por exemplo, E1186K)7 Posição de aminoácido 1192 (por exemplo, A1192Efs*50)9 Posição de aminoácido 1196 (por exemplo, Q1196X)88 Posição de aminoácido 1197 (por exemplo, L1197G)7 Posição de aminoácido 1198 (por exemplo, H1198R)27 Posição de aminoácido 1204 (por exemplo, L1204P)88 Posição de aminoácido 1208 (por exemplo, Y1208C)73 Posição de aminoácido 1210 (por exemplo, T1210P5,7, T1210F57) Posição de aminoácido 1211 (por exemplo, N1211D)7 Posição de aminoácido 1212 (por exemplo, V1212F)36 Posição de aminoácido 1215 (por exemplo, Q1215X)5 Posição de aminoácido 1221 (por exemplo, R1221K)53 Posição de aminoácido 1223 (por exemplo, E1223D)7 Posição de aminoácido 1226 (por exemplo, R1226P)73 Posição de aminoácido 1228 (por exemplo, A1228V)7 Posição de aminoácido 1231 (por exemplo, R1231W5,7, R1231Q5,7) Posição de aminoácido 1232 (por exemplo, A1232D)17 Posição de aminoácido 1235 (por exemplo, R1235X)5,12 Posição de aminoácido 1242 (por exemplo, L1242I)5,7 Posição de aminoácido 1243 (por exemplo, D1243G)67 Posição de aminoácido 1249 (por exemplo, L1249X)73 Posição de aminoácido 1256 (por exemplo, T1256fs*1296)83 Posição de aminoácido 1268 (por exemplo, R1268Q)2,7 Posição de aminoácido 1276 (por exemplo, R1276H)30 Posição de aminoácido 1283 (por exemplo, A1283A28, A1283V88) Posição de aminoácido 1292 (por exemplo, G1292V)73 Posição de aminoácido 1298 (por exemplo, G1298R)5 Posição de aminoácido 1302 (por exemplo, E1302X)5 Posição de aminoácido 1311 (por exemplo, Y1311X)57 Posição de aminoácido 1316 (por exemplo, T1316Lfs*64)15 Posição de aminoácido 1321 (por exemplo, S1321N)57 Íntron 4 ((+3)A>C)1 IVS4-74A>T89 Mutação de sítio de splice 3’ Íntron 5 c.3901G>A5 Mutação de sítio de splice 5; Íntron 7 c.6111G>A5 Mutação de sítio de splice IVS7+1G>A14 IVS7+5G>A40 IVS8+1G>C76 Mutação de sítio de splice 5’; Íntron 9 c.9081delG5 Mutação de sítio de splice 5’ Íntron 9 c.9081G>T5 Mutação de sítio de splice 5’ Íntron 9 c.9081G>A5
38 / 135 Mutação de sítio de splice IVS9+1G>T14 Mutação de sítio de splice 3’ Íntron 13 c.143513_1435–8del5 Mutação de sítio de splice IVS13del-13^-814 Mutação de sítio de splice 3’ Íntron 16 c.20128T>G5 Mutação de sítio de splice IVS16-8T>G14 Mutação de sítio de splice 5’ Íntron 18 c.21781G>T5 Mutação de sítio de splice 5’ Íntron 18 c.21781G>A5 Mutação de sítio de splice 5’ Íntron 18 c.21781G>C5 Mutação de sítio de splice 3’ Íntron 18 c.21792A>G5 Mutação de sítio de splice IVS18+1G>A14 Mutação de sítio de splice 5’ Íntron 19 c.2343+1G>T5 Mutação de sítio de splice 5’ Íntron 19 c.2343+2T>C5 Mutação de sítio de splice IVS19+2T>C14 Mutação de sítio de splice IVS19+1G>A22 Mutação de sítio de splice 3’ Íntron 21 c.26112A>T5 IVS22+3A>G89 IVS 23-8 G-A36 IVS24+5G>A51 Mutação de sítio de splice 5’; Íntron 24 c.32131delG5 IVS35-6C>G89 Mutação putativa de splice 1198-1G>C17 Mutação putativa de splice 1810-3C>G17 Mutação putativa de splice 2178+1G>A17 Mutação putativa de splice 2344-1G>T17 Mutação putativa de splice c.2611-2A>T39 Mutação putativa de splice 3213+1_3213+2delinsA17 c.-24C>A44,78 c.76 13 G>T9 c.77-19T>A52 c.90_93delGAAA18 c.124G>A69 c.150 +3 A>C10 174C>T54 c.245T>C87 c.249_250insT18 270T>C54 402C>T54 585G>C54 c.611+1G>A70 c.611+4A>G36 c.612-15_-6del10bp55 c.625A>C31 c.627+5G>T31 c.625A>C/ c.627+5G>T31 696G>T54 c. 784+1G>C49 807T>C54 c.886C>T31 c.890A>G59 c.908+1G>A57 c.908+5G>A55 c.908delG59 c.909-15A>G66 957A>G54 c.1084-2A>G57 deleção 1pb 114590 1281C>T54,57 c.1309-165C > T19 c.1434 + 174G > A19
39 / 135 c.1434 + 70C > T19 c.1530C>A57 c.1587-1589delCTT31 c.1621A>C33,59 c.1638+32T>C66 c.1638+80C>T66 1671C>T54 1791G>T54 1939delA14 c.2075+3A>G53 c.2081T>A31 c.2093G>A65 2098delA16 c.2138-8T>G67 2142A>G54 c.2178+1G>T36,39 c.2179-17C>A66 c.2344-157T>G66 c.2344-17T>C66 c.2417G>A78 c.2541delG87 c.2620C>T32,33 c.2815-8A>G55 c.3003A>G37 c.3084A>G48,54 c.3213 +4 A>G9,37 c.3213 +5 G>A9 c.3268C>T75 3285A>G54 c.3382C>T75 3435A>G54 c.3491delT72 c.3589C>T57 c.3765(+1 +5)del542 c.3766-34A>G66 c.3767-3768insC6 c.3770delA67 c.3826C>T72 c.3846C>T57 c.3929delG67 c.*236A>G66 1145delC8 Ex13_Ex17del82
Tabela 5. Mutações de ABCB11 selecionadas associadas a PFIC-2 Posição de aminoácido 1 (por exemplo, M1V)9 Posição de aminoácido 4 (por exemplo, S4X)64 Posição de aminoácido 19 (por exemplo, G19R)56 Posição de aminoácido 25 (por exemplo, S25X)14 Posição de aminoácido 26 (por exemplo, Y26Ifs*7)38 Posição de aminoácido 50 (por exemplo, L50S)7,57 Posição de aminoácido 52 (por exemplo, R52W)26 Posição de aminoácido 58 (por exemplo, D58N)62 Posição de aminoácido 62 (por exemplo, M62K)9 Posição de aminoácido 66 (por exemplo, S66N)17 Posição de aminoácido 68 (por exemplo, C68Y)41 Posição de aminoácido 93 (por exemplo, Y93S)13 Posição de aminoácido 101 (por exemplo, Q101Dfs*8)9 Posição de aminoácido 107 (por exemplo, C107R)36
40 / 135 Posição de aminoácido 112 (por exemplo, I112T)9 Posição de aminoácido 114 (por exemplo, W114R)2,9 Posição de aminoácido 129 (por exemplo, C129Y)25 Posição de aminoácido 135 (por exemplo, E135K13, E135L17) Posição de aminoácido 167 (por exemplo, A167V7, A167T9,17) Posição de aminoácido 182 (por exemplo, I182K)9 Posição de aminoácido 183 (por exemplo, M183V8, M183T9) Posição de aminoácido 225 (por exemplo, T225P)57 Posição de aminoácido 226 (por exemplo, S226L)9 Posição de aminoácido 232 (por exemplo, L232Cfs*9)9 Posição de aminoácido 233 (por exemplo, L233S)86 Posição de aminoácido 238 (por exemplo, G238V)2,7 Posição de aminoácido 242 (por exemplo, T242I)7 Posição de aminoácido 245 (por exemplo, I245Tfs*26)57 Posição de aminoácido 256 (por exemplo, A256G)9 Posição de aminoácido 260 (por exemplo, G260D)57 Posição de aminoácido 284 (por exemplo, V284L)7 Posição de aminoácido 297 (por exemplo, E297G)2,7 Posição de aminoácido 303 (por exemplo, R303K8, R303M63, R303fsX32183) Posição de aminoácido 304 (por exemplo, Y304X)26 Posição de aminoácido 312 (por exemplo, Q312H)7 Posição de aminoácido 313 (por exemplo, R313S)7 Posição de aminoácido 314 (por exemplo, W314X)57 Posição de aminoácido 318 (por exemplo, K318Rfs*26)29 Posição de aminoácido 327 (por exemplo, G327E)7 Posição de aminoácido 330 (por exemplo, V330X)24 Posição de aminoácido 336 (por exemplo, C336S)2,7 Posição de aminoácido 337 (por exemplo, Y337H)21 Posição de aminoácido 342 (por exemplo, W342G)50 Posição de aminoácido 354 (por exemplo, R354X)9 Posição de aminoácido 361 (por exemplo, Q361X)57 Posição de aminoácido 366 (por exemplo, V366D)57 Posição de aminoácido 386 (por exemplo, G386X)34 Posições de Δ aminoácido 383-38957 Posição de aminoácido 387 (por exemplo, R387H)9 Posição de aminoácido 390 (por exemplo, A390P)7 Posição de aminoácido 410 (por exemplo, G410D)7 Posição de aminoácido 413 (por exemplo, L413W)7 Posição de aminoácido 415 (por exemplo, R415X)42 Posição de aminoácido 420 (por exemplo, I420T)9 Posição de aminoácido 454 (por exemplo, V454X)49 Posição de aminoácido 455 (por exemplo, G455E)9 Posição de aminoácido 461 (por exemplo, K461E)2,7 Posição de aminoácido 463 (por exemplo, T463I)7 Posição de aminoácido 466 (por exemplo, Q466K)7 Posição de aminoácido 470 (por exemplo, R470Q7, R470X9) Posição de aminoácido 472 (por exemplo, Y472X14, Y472C27) Posição de aminoácido 475 (por exemplo, C475X)29 Posição de aminoácido 481 (por exemplo, V481E)7 Posição de aminoácido 482 (por exemplo, D482G)2,7 Posição de aminoácido 484 (por exemplo, H484Rfs*5)9 Posição de aminoácido 487 (por exemplo, R487H2, R487P84) Posição de aminoácido 490 (por exemplo, N490D)7 Posição de aminoácido 493 (por exemplo, W493X)8 Posição de aminoácido 498 (por exemplo, I498T)7 Posição de aminoácido 501 (por exemplo, V501G)68 Posição de aminoácido 512 (por exemplo, I512T)7 Posição de aminoácido 515 (por exemplo, N515T7, N515D64) Posição de aminoácido 516 (por exemplo, I516M)17
41 / 135 Posição de aminoácido 517 (por exemplo, R517H)7 Posição de aminoácido 520 (por exemplo, R520X)57 Posição de aminoácido 523 (por exemplo, A523G)13 Posição de aminoácido 528 (por exemplo, I528X)9 Posição de aminoácido 540 (por exemplo, F540L)46 Posição de aminoácido 541 (por exemplo, I541L7, I541T17) Posição de aminoácido 548 (por exemplo, F548Y)7 Posição de aminoácido 549 (por exemplo, D549V)9 Posição de aminoácido 554 (por exemplo, E554K)21 Posição de aminoácido 559 (por exemplo, M559T)57 Posição de aminoácido 562 (por exemplo, G562D)7 Posição de aminoácido 570 (por exemplo, A570T7, A570V26) Posição de aminoácido 575 (por exemplo, R575X2, R575Q21) Posição de aminoácido 588 (por exemplo, A588V)7 Posição de aminoácido 591 (por exemplo, N591S)9,17 Posição de aminoácido 593 (por exemplo, S593R)2,7 Posição de aminoácido 597 (por exemplo, V597V9, V597L13) Posição de aminoácido 591 e 597 (por exemplo, N591S+V597V)9 Posição de aminoácido 603 (por exemplo, K603K)55 Posição de aminoácido 609 (por exemplo, H609Hfs*46)26 Posição de aminoácido 610 (por exemplo, I610Gfs*45)9 Posição de aminoácido 615 (por exemplo, H615R)26 Posição de aminoácido 625 (por exemplo, T625Nfs*5)26 Posição de aminoácido 627 (por exemplo, I627T)7 Posição de aminoácido 636 (por exemplo, E636G)2 Posição de aminoácido 669 (por exemplo, I669V)26 Posição de aminoácido 698 (por exemplo, R609H)9 Posição de aminoácido 112 e 698 (por exemplo, I112T+R698H)9 Posição de aminoácido 699 (por exemplo, S699P)9 Posição de aminoácido 766 (por exemplo, G766R)24 Posição de aminoácido 806 (por exemplo, G806G)55 Posição de aminoácido 824 (por exemplo, G824E)42 Posição de aminoácido 832 (por exemplo, R832C7,26, R832H41) Posição de aminoácido 842 (por exemplo, D842G)2 Posição de aminoácido 859 (por exemplo, T859R)7 Posição de aminoácido 865 (por exemplo, A865V)45 Posição de aminoácido 877 (por exemplo, G877R)56 Posição de aminoácido 893 (por exemplo, A893V)57 Posição de aminoácido 901 (por exemplo, S901R)17 Posição de aminoácido 903 (por exemplo, V903G)57 Posição de Δ aminoácido 91912 Posição de aminoácido 928 (por exemplo, R928X)15,21 Posição de aminoácido 930 (por exemplo, K930Efs*7910, K930Efs*4926) Posição de aminoácido 948 (por exemplo, R948C)7,26 Posição de aminoácido 979 (por exemplo, N979D)7 Posição de aminoácido 982 (por exemplo, G982R)2,7 Posição de aminoácido 444 e 982 (por exemplo, V444A+G982R)38 Posição de aminoácido 1001 (por exemplo, R1001R)9 Posição de aminoácido 1003 (por exemplo, G1003R)24 Posição de aminoácido 1004 (por exemplo, G1004D)2,7 Posição de aminoácido 1027 (por exemplo, S1027R)26 Posição de aminoácido 1028 (por exemplo, A1028A)10 Posição de aminoácido 1032 (por exemplo, G1032R)12 Posição de aminoácido 1041 (por exemplo, Y1041X)9 Posição de aminoácido 1050 (por exemplo, R1050C)57 Posição de aminoácido 1053 (por exemplo, Q1053X)57 Posição de aminoácido 1055 (por exemplo, L1055P)36 Posição de aminoácido 1057 (por exemplo, R1057X)2 Posição de aminoácido 1058 (por exemplo, Q1058Hfs*389, Q1058fs*3817)
42 / 135 Posição de aminoácido 1061 (por exemplo, I1061Vfs*34)9 Posição de aminoácido 1083 (por exemplo, C1083Y)47 Posição de aminoácido 1090 (por exemplo, R1090X)2 Posição de aminoácido 1099 (por exemplo, L1099Lfs*38)26 Posição de aminoácido 1100 (por exemplo, S1100Qfs*38)13 Posição de aminoácido 1110 (por exemplo, A1110E)7 Posição de aminoácido 1116 (por exemplo, G1116R7, G1116F9,17, G1116E36) Posição de aminoácido 1128 (por exemplo, R1128C)7,13 Posição de aminoácido 1131 (por exemplo, D1131V)27 Posição de aminoácido 1144 (por exemplo, S1144R)7 Posição de aminoácido 1153 (por exemplo, R1153C2,7, R1153H7,26) Posição de aminoácido 1154 (por exemplo, S1154P)7 Posição de aminoácido 1173 (por exemplo, N1173D)57 Posição de aminoácido 1192 (por exemplo, A1192Efs*50)9 Posição de aminoácido 1198 (por exemplo, H1198R)27 Posição de aminoácido 1210 (por exemplo, T1210P7, T1210F57) Posição de aminoácido 1211 (por exemplo, N1211D)7 Posição de aminoácido 1212 (por exemplo, V1212F)36 Posição de aminoácido 1231 (por exemplo, R1231W7, R1223Q7) Posição de aminoácido 1232 (por exemplo, A1232D)17 Posição de aminoácido 1235 (por exemplo, R1235X)12 Posição de aminoácido 1242 (por exemplo, L1242I)7 Posição de aminoácido 1256 (por exemplo, T1256fs*1296)83 Posição de aminoácido 1268 (por exemplo, R1268Q)2,7 Posição de aminoácido 1302 (por exemplo, E1302X)57 Posição de aminoácido 1311 (por exemplo, Y1311X)57 Posição de aminoácido 1316 (por exemplo, T1316Lfs*64)15 Íntron 4 ((+3)A>C)1 Mutação de sítio de splice IVS7+1G>A14 IVS8+1G>C76 Mutação de sítio de splice IVS9+1G>T14 Mutação de sítio de splice IVS13del-13^-814 Mutação de sítio de splice IVS16-8T>G14 Mutação de sítio de splice IVS18+1G>A14 Mutação de sítio de splice IVS19+2T>C14 IVS 23-8 G-A36 IVS24+5G>A51 Mutação putativa de splice 1198-1G>C17 Mutação putativa de splice 1810-3C>G17 Mutação putativa de splice 2178+1G>A17 Mutação putativa de splice 2344-1G>T17 Mutação putativa de splice 3213+1_3213+2delinsA17 c.-24C>A78 c.76 13 G>T9 c.77-19T>A52 c.90_93delGAAA18 c.124G>A69 c.150 +3 A>C10 c.249_250insT18 c.611+1G>A84 c.611+4A>G36 c.612-15_-6del10bp55 c.625A>C31 c.627+5G>T31 c.625A>C/ c.627+5G>T31 c.886C>T31 c.890A>G59 c.908+1G>A57 c.908+5G>A55
43 / 135 c.908delG59 deleção 1pb 127391 c.1084-2A>G57 c.1445A>G59 c.1587-1589delCTT31 c.1621A>C59 1939delA14 c.2081T>A31 2098delA16 c.2343+1 G>T80 c.2178+1G>T36 c.2417G>A78 c.2620C>T32 c.2815-8A>G55 c.3003A>G37 c.3213 +4 A>G9,37 c.3213 +5 G>A9 c.3268C>T75 c.3382C>T75 c.3765(+1 +5)del542 c.3767-3768insC6 1145delC8 Ex13_Ex17del82
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444. 80 Tibesar et al., Case Rep Pediatr. 2014, vol. 2014: 185923. 81 Ng et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 66, Supp. Supplement 2, pp. 860. Abstract Number: H-P-127. Meeting Info: 51st Annual Meeting European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2018. Geneva, Switzerland. 09 May 2018-12 May 2018. 82 Wong et al., Clin Chem. 2008, vol. 54(7), p. 1141-1148. 83 Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357. 84 Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 60, vol. 3, p. 368-374. 85 Scheimann et al., Gastroenterology 2007, vol. 132, No. 4, Suppl. 2, pp. A452. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/108th Annual Meeting of the American-Gastroenterological- Association. Washington, DC, USA. May 19 -24, 2007. Amer Gastroenterol Assoc; Amer Assoc Study Liver Dis; Amer Soc Gastrointestinal Endoscopy; Soc Surg Alimentary Tract. 86 Jaquotot-Haerranz et al., Rev Esp Enferm Dig. 2013, vol. 105(1), p. 52-54. 87 Khosla et al., American Journal of Gastroenterology 2015, vol. 110, No. Suppl. 1, pp. S397. Meeting Info.: 80th Annual Scientific Meeting of the American-College-of-Gastroenterology. Honolulu, HI, USA. October 16 -21, 2015. 88 Dröge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264. 89 Liu et al., Liver International 2010, vol. 30(6), p. 809-815. 90 Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124. 91 U.S. Patent No. 9,295,677
[0062] Em algumas modalidades, a mutação em ABCB11 é selecionada de A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C, e R1268Q.
[0063] São providos métodos de tratamento de PFIC (por exemplo, PFIC-1 e PFIC-2) em um indivíduo que incluem a realização de um ensaio em uma amostra obtida do indivíduo para determinar se o indivíduo tem uma
46 / 135 mutação associada a PFIC (por exemplo, uma mutação ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 ou Myo5b) e administração (por exemplo, administração específica ou seletiva) de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao indivíduo determinado a ter uma mutação associada a PFIC. Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação ATP8B1 ou ABCB11. Por exemplo, uma mutação conforme provida em qualquer uma das Tabelas 1 a 4. Em algumas modalidades, a mutação em ATP8B1 é selecionada de L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X e G1040R. Em algumas modalidades, a mutação em ABCB11 é selecionada de A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C, e R1268Q.
[0064] Também são providos métodos para o tratamento de PFIC (por exemplo, PFIC-1 e PFIC-2) em um indivíduo em necessidade, o método compreendendo: (a) detectar uma mutação associada a PFIC (por exemplo, uma mutação ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 ou Myo5b) no indivíduo; e (b) administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, os métodos de tratamento de PFIC podem incluir a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a um indivíduo com uma mutação associada a PFIC (por exemplo, uma mutação ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 ou Myo5b). Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação ATP8B1 ou ABCB11. Por exemplo, uma mutação conforme provida em qualquer uma das Tabelas 1 a 4. Em algumas modalidades, a mutação em ATP8B1 é selecionada de L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X e G1040R. Em algumas modalidades, a mutação em ABCB11 é selecionada de A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T,
47 / 135 N591S, A865V, G982R, R1153C, e R1268Q.
[0065] Em algumas modalidades, o indivíduo é determinado como tendo uma mutação associada a PFIC em um indivíduo ou uma amostra de biópsia do indivíduo por meio do uso de quaisquer testes reconhecidos na técnica, incluindo sequenciamento de próxima geração (NGS). Em algumas modalidades, o indivíduo é determinado como tendo uma mutação associada a PFIC usando um teste aprovado por agência reguladora, por exemplo, teste ou ensaio aprovado pela FDA para identificar uma mutação associada a PFIC em um indivíduo ou uma amostra de biópsia do indivíduo ou realizando qualquer um dos exemplos não limitativos de ensaios aqui descritos. Métodos adicionais de diagnóstico de PFIC são descritos em Gunaydin, M. et al., Hepat Med. 2018, vol. 10, p. 95-104, incorporado por referência em sua totalidade neste documento.
[0066] Em algumas modalidades, o tratamento de PFIC (por exemplo, PFIC-1 ou PFIC-2) diminui o nível de ácidos biliares séricos no indivíduo. Em algumas modalidades, o nível de ácidos biliares séricos é determinado por, por exemplo, um ensaio enzimático ELISA ou os ensaios para a medição de ácidos biliares totais, conforme descrito em Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12(6): e0179200, que é incorporado por referência neste documento em sua totalidade. Em algumas modalidades, o nível de ácidos biliares séricos pode diminuir em, por exemplo, 10% a 40%, 20% a 50%, 30% a 60%, 40% a 70%, 50% a 80% ou mais de 90% do nível de ácidos biliares séricos antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o tratamento de PFIC inclui o tratamento do prurido.
[0067] Uma vez que o LBAT é expresso nos hepatócitos, o LBAT e as substâncias inibidoras duplas de ASBT/LBAT precisam ter pelo menos alguma biodisponibilidade e fração livre no sangue. Como os compostos inibidores de LBAT só precisam sobreviver do intestino ao fígado, espera-se
48 / 135 que uma exposição sistêmica relativamente baixa de tais compostos seja suficiente, minimizando assim o risco potencial de quaisquer efeitos colaterais no resto do corpo. Espera-se que a inibição de LBAT e ASBT tenha pelo menos efeitos aditivos na redução da concentração intra-hepática de ácidos biliares. Também é esperado que um inibidor duplo de ASBT/LBAT possa reduzir os níveis de ácido biliar sem induzir diarreia, como às vezes é observado com inibidores de ASBT.
[0068] Espera-se que os compostos com elevada potência de inibição de LBAT e biodisponibilidade suficiente sejam particularmente adequados para o tratamento da hepatite. Espera-se que os compostos com uma potência inibidora dupla de ASBT/LBAT e biodisponibilidade suficiente sejam particularmente adequados para o tratamento de esteato-hepatite não alcoólica (EHNA).
[0069] EHNA é uma doença hepática crônica comum e grave que se assemelha à doença hepática alcoólica, mas que ocorre em pessoas que bebem pouco ou nenhum álcool. Em pacientes com EHNA, o acúmulo de gordura no fígado, conhecido como doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) ou esteatose, e outros fatores como colesterol LDL alto e resistência à insulina induzem inflamação crônica no fígado e podem levar à cicatrização progressiva do tecido, conhecida como fibrose e cirrose, seguida eventualmente por insuficiência hepática e morte. Verificou-se que pacientes com EHNA têm concentrações séricas totais de ácidos biliares significativamente maiores do que indivíduos saudáveis em condições de jejum (aumento de 2,2 a 2,4 vezes em EHNA) e em todos os pontos de tempo pós-prandial (aumento de 1,7 a 2,2 vezes em EHNA). Estes são impulsionados por ácidos biliares primários e secundários conjugados com taurina e glicina aumentados. Pacientes com EHNA apresentaram maior variabilidade no perfil de ácidos biliares em jejum e pós-prandial. Esses resultados indicam que os pacientes com EHNA apresentam maior exposição
49 / 135 em jejum e pós-prandial aos ácidos biliares, incluindo as espécies secundárias mais hidrofóbicas e citotóxicas. O aumento da exposição aos ácidos biliares pode estar envolvido na lesão hepática e na patogênese de DHGNA e EHNA (Ferslew et al., Dig Dis Sci. 2015, vol. 60, p. 3318-3328). Portanto, é provável que a inibição de ASBT e/ou LBAT seja benéfica para o tratamento de EHNA.
[0070] A DHGNA é caracterizada por esteatose hepática sem causas secundárias de esteatose hepática, incluindo consumo excessivo de álcool, outras doenças hepáticas conhecidas ou uso prolongado de um medicamento esteatogênico (Chalasani et al., Hepatology 2018, vol. 67(1), p. 328-357). A DHGNA pode ser categorizada em fígado gorduroso não alcoólico (FGNA) e esteato-hepatite não alcoólica (EHNA). De acordo com Chalasani et al., FGNA é definido como a presença de esteatose hepática ≥ 5% sem evidência de lesão hepatocelular na forma de balonamento de hepatócitos. EHNA é definida como a presença de ≥ 5% de esteatose hepática e inflamação com lesão de hepatócitos (por exemplo, balonamento), com ou sem qualquer fibrose hepática. EHNA também está comumente associada a inflamação hepática e fibrose hepática, que pode progredir para cirrose, doença hepática em estágio terminal e carcinoma hepatocelular. Embora a fibrose hepática nem sempre esteja presente na EHNA, a gravidade da fibrose, quando presente, pode estar ligada a resultados em longo prazo.
[0071] Existem muitas abordagens usadas para estimar e avaliar se um indivíduo tem DHGNA e, em caso afirmativo, a gravidade da doença, incluindo diferenciar se DHGNA é FGNA ou EHNA. Em algumas modalidades, a gravidade da DHGNA pode ser avaliada usando o NAS. Em algumas modalidades, o tratamento de DHGNA pode ser avaliado usando o NAS. Em algumas modalidades, o NAS pode ser determinado conforme descrito em Kleiner et al., Hepatology. 2005, 41(6):1313-1321, que é incorporado neste documento por referência em sua totalidade. Ver, por
50 / 135 exemplo, a Tabela 6 para um esquema de NAS simplificado adaptado de Kleiner. Tabela 6. Exemplo de Escore de Atividade de DHGNA (NAS) com estágio de fibrose Característica Grau Escore <5% 0 5-33% 1 Esteatose >33-66% 2 >66% 3 Sem focos 0 Inflamação <2 focos/200x 1 lobular 2-4 focos/200x 2 >4 focos/200x 3 Nenhuma 0 Pouca 1 Degeneração em Muitas balão células/Balonamento 2 proeminente Nenhum 0 Perisinusoidal ou 1 periportal Fibrose Perisinusoidal e 2 portal/periportal Fibrose septal 3 Cirrose 4
[0072] Em algumas modalidades, o NAS é determinado de forma não invasiva, por exemplo, conforme descrito na Publicação do Pedido U.S. nº 2018/0140219, que é incorporado por referência neste documento em sua totalidade. Em algumas modalidades, o NAS é determinado para uma amostra do indivíduo antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o NAS é determinado durante o período de tempo ou após o período de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, um escore de NAS menor durante o período de tempo ou após o período de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em comparação com antes da administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, indica o tratamento de DHGNA (por exemplo, EHNA). Por exemplo, uma diminuição no NAS em 1, em 2, em 3, em 4, em 5, em 6 ou em 7 indica o tratamento de DHGNA (por
51 / 135 exemplo, EHNA). Em algumas modalidades, o NAS após a administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é 7 ou menos. Em algumas modalidades, o NAS durante o período de tempo de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos. Em algumas modalidades, o NAS durante o período de tempo de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é 7 ou menos. Em algumas modalidades, o NAS durante o período de tempo de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos. Em algumas modalidades, o NAS após o período de tempo de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é 7 ou menos. Em algumas modalidades, o NAS após o período de tempo de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos.
[0073] Abordagens adicionais de avaliação e avaliação de EHNA em um indivíduo incluem a determinação de uma ou mais esteatose hepática (por exemplo, acúmulo de gordura no fígado); inflamação hepática; biomarcadores indicativos de um ou mais de dano hepático, inflamação hepática, fibrose hepática e/ou cirrose hepática (por exemplo, marcadores séricos e painéis). Outros exemplos de indicadores fisiológicos de EHNA podem incluir morfologia do fígado, rigidez do fígado e o tamanho ou peso do fígado do indivíduo.
[0074] Em algumas modalidades, EHNA no indivíduo é evidenciada por um acúmulo de gordura hepática e detecção de um biomarcador indicativo de lesão hepática. Por exemplo, ferritina sérica elevada e títulos baixos de autoanticorpos séricos podem ser características comuns de EHNA.
[0075] Em algumas modalidades, os métodos para avaliar EHNA
52 / 135 incluem imagem de ressonância magnética, seja por espectroscopia ou por fração de gordura de densidade de prótons (MRI-PDFF) para quantificar esteatose, elastografia transitória (FIBROSCAN®), gradiente de pressão venosa hepática (HPVG), medição de rigidez hepática com MRE para diagnosticar fibrose hepática significativa e/ou cirrose e avaliar características histológicas de biópsia hepática. Em algumas modalidades, a ressonância magnética é usada para detectar um ou mais dentre esteato-hepatite (EHNA- MRI), fibrose hepática (Fibro-MRI) e esteatose. Ver, por exemplo, Publicação de Pedido U.S. nº 2016/146715 e 2005/0215882, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0076] Em algumas modalidades, o tratamento de EHNA pode incluir uma diminuição de um ou mais sintomas associados a EHNA; redução na quantidade de esteatose hepática; uma diminuição no NAS; uma diminuição da inflamação hepática; uma diminuição no nível de biomarcadores indicativos de um ou mais danos hepáticos, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática; e uma redução na fibrose e/ou cirrose, uma falta de progressão adicional de fibrose e/ou cirrose, ou uma desaceleração da progressão de fibrose e/ou cirrose no indivíduo após a administração de uma ou mais doses de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0077] Em algumas modalidades, o tratamento de EHNA compreende uma diminuição de um ou mais sintomas associados a EHNA no indivíduo. Sintomas exemplificativos podem incluir um ou mais de um fígado aumentado, fadiga, dor no abdômen superior direito, inchaço abdominal, vasos sanguíneos aumentados logo abaixo da superfície da pele, seios aumentados em homens, baço aumentado, palmas das mãos vermelhas, icterícia e prurido. Em algumas modalidades, o indivíduo é assintomático. Em algumas modalidades, o peso corporal total do indivíduo não aumenta. Em algumas modalidades, o peso corporal total do indivíduo diminui. Em
53 / 135 algumas modalidades, o índice de massa corporal (IMC) do indivíduo não aumenta. Em algumas modalidades, o índice de massa corporal (IMC) do indivíduo diminui. Em algumas modalidades, a relação cintura-quadril (RCQ) do indivíduo não aumenta. Em algumas modalidades, a relação cintura- quadril (RCQ) do indivíduo diminui.
[0078] Em algumas modalidades, o tratamento de EHNA pode ser avaliado por mediação da esteatose hepática. Em algumas modalidades, o tratamento de EHNA compreende uma redução na esteatose hepática após a administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como descrito aqui. Em algumas modalidades, a esteatose hepática é determinada por um ou mais métodos selecionados do grupo que consiste em ultrassonografia, tomografia computadorizada (TC), imagem por ressonância magnética, espectroscopia por ressonância magnética (MRS), elastografia por ressonância magnética (MRE), elastografia transitória (TE) (por exemplo, FIBROSCAN®), medição do tamanho ou peso do fígado ou por biópsia do fígado (ver, por exemplo, Di Lascio et al., Ultrasound Med Biol. 2018, vol. 44(8), p. 1585-1596; Lv et al., J Clin Transl Hepatol. 2018, vol. 6(2), p. 217-221; Reeder et al., J Magn Reson Imaging. 2011, vol. 34(4), spcone; e de Lédinghen V, et al., J Gastroenterol Hepatol. 2016, vol. 31(4), p. 848-855, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade). Um indivíduo diagnosticado com EHNA pode ter mais do que cerca de 5% de esteatose hepática, por exemplo, mais do que cerca de 5% a cerca de 25%, cerca de 25% a cerca de 45%, cerca de 45% a cerca de 65% ou mais do que cerca de 65% de esteatose hepática. Em algumas modalidades, um indivíduo com mais do que cerca de 5% a cerca de 33% de esteatose hepática tem esteatose hepática de estágio 1, um indivíduo com cerca de 33% a cerca de 66% de esteatose hepática tem esteatose hepática de estágio 2, e um indivíduo com mais de cerca de 66% de esteatose hepática tem esteatose hepática de estágio 3.
54 / 135
[0079] Em algumas modalidades, a quantidade de esteatose hepática é determinada antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a quantidade de esteatose hepática é determinada durante o período de tempo ou após o período de administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, uma redução na quantidade de esteatose hepática durante o período de tempo ou após o período de administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em comparação com antes da administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, indica o tratamento de EHNA. Por exemplo, uma redução na quantidade de esteatose hepática em cerca de 1% a cerca de 50%, cerca de 25% a cerca de 75% ou cerca de 50% a cerca de 100% indica o tratamento de EHNA. Em algumas modalidades, uma redução na quantidade de esteatose hepática em cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90% ou cerca de 95% indica o tratamento de EHNA.
[0080] Em algumas modalidades, a presença de inflamação hepática é determinada por um ou mais métodos selecionados do grupo que consiste em biomarcadores indicativos de inflamação hepática e uma amostra de biópsia hepática do indivíduo. Em algumas modalidades, a gravidade da inflamação hepática é determinada a partir de uma amostra de biópsia hepática do indivíduo. Por exemplo, a inflamação hepática em uma amostra de biópsia do fígado pode ser avaliada conforme descrito em Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p. 1313-1321 e Brunt et al., Am J Gastroenterol 1999, vol. 94, p. 2467-2474, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades, a gravidade da inflamação hepática é
55 / 135 determinada antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a gravidade da inflamação hepática é determinada durante o período de tempo ou após o período de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, uma diminuição na gravidade da inflamação hepática durante o período de tempo ou após o período de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em comparação com antes da administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, indica o tratamento de EHNA. Por exemplo, uma diminuição na gravidade da inflamação hepática em cerca de 1% a cerca de 50%, cerca de 25% a cerca de 75% ou cerca de 50% a cerca de 100% indica o tratamento de EHNA. Em algumas modalidades, uma diminuição na gravidade da inflamação hepática em cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90% ou cerca de 95% indica o tratamento de EHNA.
[0081] Em algumas modalidades, o tratamento de EHNA compreende o tratamento de fibrose e/ou cirrose, por exemplo, uma diminuição na gravidade da fibrose, uma falta de progressão adicional da fibrose e/ou cirrose, ou uma desaceleração da progressão da fibrose e/ou cirrose. Em algumas modalidades, a presença de fibrose e/ou cirrose é determinada por um ou mais métodos selecionados do grupo que consiste em elastografia transitória (por exemplo, FIBROSCAN®), marcadores não invasivos de fibrose hepática e características histológicas de uma biópsia hepática. Em algumas modalidades, a gravidade (por exemplo, estágio) da fibrose é determinada por um ou mais métodos selecionados do grupo que consiste em elastografia transitória (por exemplo, FIBROSCAN®), um sistema de escore
56 / 135 de fibrose, biomarcadores de fibrose hepática (por exemplo, biomarcadores não invasivos) e gradiente de pressão venosa hepática (HVPG). Exemplos não limitativos de sistemas de escore de fibrose incluem o sistema de escore de fibrose de DHGNA (ver, por exemplo, Angulo et al., Hepatology 2007, vol. 45(4), p. 846-54), o sistema de escore de fibrose em Brunt et al., Am. J. Gastroenterol. 1999, vol. 94, p. 2467-2474, o sistema de escore de fibrose em Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p. 1313-1321, e o sistema de escore de fibrose ISHAK (ver Ishak et al., J. Hepatol. 1995, vol. 22, p. 696- 699), cujos conteúdos são aqui incorporados por referência na sua totalidade.
[0082] Em algumas modalidades, a gravidade da fibrose é determinada antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a gravidade da fibrose é determinada durante o período de tempo ou após o período de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, uma diminuição na gravidade da fibrose durante o período de tempo ou após o período de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em comparação com antes da administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, indica o tratamento de EHNA. Em algumas modalidades, uma diminuição na gravidade da fibrose, uma falta de progressão adicional da fibrose e/ou cirrose, ou uma desaceleração da progressão da fibrose e/ou cirrose indica tratamento de EHNA. Em algumas modalidades, a gravidade da fibrose é determinada usando um sistema de escore, tal como qualquer um dos sistemas de escore de fibrose aqui descritos, por exemplo, o escore pode indicar o estágio da fibrose, por exemplo, estágio 0 (sem fibrose), estágio 1, estágio 2, estágio 3 e estágio 4 (cirrose) (ver, por exemplo, Kleiner et al). Em algumas modalidades, uma diminuição no estágio da fibrose é uma diminuição na gravidade da fibrose. Por exemplo, uma
57 / 135 diminuição em 1, 2, 3 ou 4 estágios é uma diminuição na gravidade da fibrose.
Em algumas modalidades, uma diminuição no estágio, por exemplo, do estágio 4 para o estágio 3, do estágio 4 para o estágio 2, do estágio 4 para o estágio 1, do estágio 4 para o estágio 0, do estágio 3 para o estágio 2, do estágio 3 para o estágio 1, do estágio 3 ao estágio 0, do estágio 2 ao estágio 1, do estágio 2 ao estágio 0, ou do estágio 1 ao estágio 0 indica tratamento de EHNA.
Em algumas modalidades, o estágio de fibrose diminui do estágio 4 para o estágio 3, do estágio 4 para o estágio 2, do estágio 4 para o estágio 1, do estágio 4 para o estágio 0, do estágio 3 para o estágio 2, do estágio 3 para o estágio 1, do estágio 3 ao estágio 0, do estágio 2 ao estágio 1, do estágio 2 ao estágio 0, ou do estágio 1 ao estágio 0 após a administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em comparação com o anterior à administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Em algumas modalidades, o estágio de fibrose diminui do estágio 4 para o estágio 3, do estágio 4 para o estágio 2, do estágio 4 para o estágio 1, do estágio 4 para o estágio 0, do estágio 3 para o estágio 2, do estágio 3 para o estágio 1, do estágio 3 ao estágio 0, do estágio 2 ao estágio 1, do estágio 2 ao estágio 0, ou do estágio 1 ao estágio 0 durante o período da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em comparação com o anterior à administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Em algumas modalidades, o estágio de fibrose diminui do estágio 4 para o estágio 3, do estágio 4 para o estágio 2, do estágio 4 para o estágio 1, do estágio 4 para o estágio 0, do estágio 3 para o estágio 2, do estágio 3 para o estágio 1, do estágio 3 ao estágio 0, do estágio 2 ao estágio 1, do estágio 2 ao estágio 0, ou do estágio 1 ao estágio 0 após o período da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em comparação com o anterior à administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente
58 / 135 aceitável do mesmo.
[0083] Em algumas modalidades, a presença de EHNA é determinada por um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de dano hepático, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática ou sistemas de escore dos mesmos. Em algumas modalidades, a severidade da EHNA é determinada por um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de dano hepático, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática ou sistemas de escore dos mesmos. O nível do biomarcador pode ser determinado, por exemplo, medindo, quantificando e monitorando o nível de expressão do gene ou mRNA que codifica o biomarcador e/ou o peptídeo ou proteína do biomarcador. Exemplos não limitativos de biomarcadores indicativos de um ou mais de dano hepático, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática e/ou sistemas de escore dos mesmos incluem o índice de razão de aspartato aminotransferase (AST) para plaquetas (APRI); a razão de aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT) (AAR); o escore FIB-4, que é baseado no APRI, nos níveis de alanina aminotransferase (ALT) e na idade do indivíduo (ver, por exemplo, McPherson et al., Gut 2010, vol. 59(9), p. 1265-9, que é incorporado por referência neste documento em sua totalidade); ácido hialurônico; citocinas pró-inflamatórias; um painel de biomarcadores consistindo em α2-macroglobulina, haptoglobina, apolipoproteína A1, bilirrubina, gama glutamil transpeptidase (GGT) combinada com a idade e sexo de um indivíduo para gerar uma medida de fibrose e atividade necroinflamatória no fígado (por exemplo, FIBROTEST®, FIBROSURE®), um painel de biomarcadores que consiste em bilirrubina, gama-glutamiltransferase, ácido hialurônico, α2-macroglobulina combinada com a idade e sexo do indivíduo (por exemplo, HEPASCORE®; ver, por exemplo, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873), e um painel de biomarcadores consistindo em inibidor de tecido de metaloproteinase-1, ácido hialurônico e α2-macroglobulina (por exemplo,
59 / 135 FIBROSPECT®); um painel de biomarcadores consistindo em inibidor de tecido de metaloproteinases 1 (TIMP-1), propeptídeo amino-terminal de procolágeno tipo III (PIIINP) e ácido hialurônico (HA) (por exemplo, o escore de Fibrose Hepática Melhorada (ELF), ver, por exemplo, Lichtinghagen R, et al., J Hepatol. 2013 Aug;59(2):236-42, que é incorporado por referência neste documento em sua totalidade). Em algumas modalidades, a presença de fibrose é determinada por um ou mais do escore FIB-4, um painel de biomarcadores que consiste em α2-macroglobulina, haptoglobina, apolipoproteína A1, bilirrubina, gama glutamil transpeptidase (GGT) combinada com a idade e gênero de um indivíduo para gerar uma medida de fibrose e atividade necroinflamatória no fígado (por exemplo, FIBROTEST®, FIBROSURE®), um painel de biomarcadores que consiste em bilirrubina, gama-glutamiltransferase, ácido hialurônico, α2-macroglobulina combinada com a idade e sexo do indivíduo (por exemplo, HEPASCORE®; ver, por exemplo, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873), e um painel de biomarcadores consistindo em inibidor de tecido de metaloproteinase-1, ácido hialurônico e α2-macroglobulina (por exemplo, FIBROSPECT®); e um painel de biomarcadores consistindo em inibidor de tecido de metaloproteinases 1 (TIMP-1), propeptídeo amino-terminal de procolágeno tipo III (PIIINP) e ácido hialurônico (HA) (por exemplo, o escore de Fibrose Hepática Melhorada (ELF)).
[0084] Em algumas modalidades, o nível de aspartato aminotransferase (AST) não aumenta. Em algumas modalidades, o nível de aspartato aminotransferase (AST) diminui. Em algumas modalidades, o nível de alanina aminotransferase (ALT) não aumenta. Em algumas modalidades, o nível de alanina aminotransferase (ALT) diminui. Em algumas modalidades, o “nível” de uma enzima se refere à concentração da enzima, por exemplo, no sangue. Por exemplo, o nível de AST ou ALT pode ser expresso como Unidades/L.
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[0085] Em algumas modalidades, a gravidade da fibrose é determinada por um ou mais do escore FIB-4, um painel de biomarcadores que consiste em α2-macroglobulina, haptoglobina, apolipoproteína A1, bilirrubina, gama glutamil transpeptidase (GGT) combinada com a idade e gênero de um indivíduo para gerar uma medida de fibrose e atividade necroinflamatória no fígado (por exemplo, FIBROTEST®, FIBROSURE®), um painel de biomarcadores que consiste em bilirrubina, gama- glutamiltransferase, ácido hialurônico, α2-macroglobulina combinada com a idade e sexo do indivíduo (por exemplo, HEPASCORE®; ver, por exemplo, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873), que é incorporado por referência aqui em sua totalidade), e um painel de biomarcadores consistindo em inibidor de tecido de metaloproteinase-1, ácido hialurônico e α2-macroglobulina (por exemplo, FIBROSPECT®); e um painel de biomarcadores consistindo em inibidor de tecido de metaloproteinases 1 (TIMP-1), propeptídeo amino-terminal de procolágeno tipo III (PIIINP) e ácido hialurônico (HA) (por exemplo, o escore de Fibrose Hepática Melhorada (ELF)).
[0086] Em algumas modalidades, a inflamação hepática é determinada pelo nível de biomarcadores de inflamação do fígado, por exemplo, citocinas pró-inflamatórias. Exemplos não limitativos de biomarcadores indicativos de inflamação do fígado incluem interleucina-(IL) 6, interleucina-(IL) 1β, fator de necrose tumoral (TNF)-α, fator de crescimento transformador (TGF)-β, proteína quimiotática de monócitos (MCP)-1, proteína C reativa (PCR), PAI-1 e isoformas de colágeno, como Col1a1, Col1a2 e Col4a1 (ver, por exemplo, Neuman, et al., Can. J. Gastroenterol. Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618 e Patente U.S. nº
9.872.844, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade). A inflamação do fígado também pode ser avaliada pela alteração da infiltração de macrófagos, por exemplo, medindo uma alteração do nível
61 / 135 de expressão de CD68. Em algumas modalidades, a inflamação do fígado pode ser determinada medindo ou monitorando os níveis séricos ou os níveis circulantes de um ou mais de interleucina-(IL) 6, interleucina-(IL) 1β, fator de necrose tumoral (TNF)-α, fator de crescimento transformador (TGF)-β, proteína quimiotática de monócitos (MCP)-1 e proteína C reativa (PCR).
[0087] Em algumas modalidades, o nível de um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de dano hepático, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática é determinado para uma amostra do indivíduo antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o nível de um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de lesão hepática, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática é determinado durante o período de tempo ou após o período de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, uma diminuição no nível de um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de dano hepático, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática durante o período de tempo ou após o período de tempo de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em comparação com antes da administração do composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, indica o tratamento de EHNA. Por exemplo, uma diminuição no nível de um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de dano hepático, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática em pelo menos cerca de 5%, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 15%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 45%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 55%, em pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos
62 / 135 cerca de 90%, pelo menos cerca de 95% ou pelo menos cerca de 99% indica tratamento de EHNA.
Em algumas modalidades, a diminuição no nível de um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de dano hepático, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática após a administração do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é pelo menos cerca de 5%, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 15%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 45%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 55%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, em pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95% ou pelo menos cerca de 99%. Em algumas modalidades, o nível de um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de lesão hepática, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática durante o período de tempo de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é pelo menos cerca de 5%, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 15%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 45%, pelo menos cerca de 50%, em pelo menos cerca de 55%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95% ou pelo menos 99%. Em algumas modalidades, o nível de um ou mais biomarcadores indicativos de um ou mais de lesão hepática, inflamação, fibrose hepática e/ou cirrose hepática após o período de tempo de administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é pelo menos cerca de 5%, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 15%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de
63 / 135 25%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 45%, pelo menos cerca de 50%, em pelo menos cerca de 55%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95% ou pelo menos 99%.
[0088] Em algumas modalidades, o tratamento de EHNA diminui o nível de ácidos biliares séricos no indivíduo. Em algumas modalidades, o nível de ácidos biliares séricos é determinado por, por exemplo, um ensaio enzimático ELISA ou os ensaios para a medição de ácidos biliares totais, conforme descrito em Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12(6): e0179200, que é incorporado por referência neste documento em sua totalidade. Em algumas modalidades, o nível de ácidos biliares séricos pode diminuir em, por exemplo, 10% a 40%, 20% a 50%, 30% a 60%, 40% a 70%, 50% a 80% ou mais de 90% do nível de ácidos biliares séricos antes da administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a EHNA é EHNA com colestase concomitante. Na colestase, a liberação de bile, incluindo os ácidos biliares, do fígado é bloqueada. Os ácidos biliares podem causar danos aos hepatócitos (ver, por exemplo, Perez MJ, Briz O. World J. Gastroenterol. 2009, vol. 15(14), p. 1677-1689) provavelmente levando a ou aumentando a progressão da fibrose (por exemplo, cirrose) e aumentando o risco de carcinoma hepatocelular (ver, por exemplo, Sorrentino P et al., Dig. Dis. Sci. 2005, vol. 50(6), p. 1130-1135 e Satapathy SK and Sanyal AJ. Semin. Liver Dis. 2015, vol. 35(3), p. 221- 235, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades, o tratamento de EHNA inclui o tratamento do prurido. Em algumas modalidades, o tratamento de EHNA com colestase concomitante inclui o tratamento do prurido. Em algumas modalidades, um indivíduo com EHNA com colestase concomitante tem prurido.
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[0089] Biomarcadores exemplificativos para EHNA são providos na Tabela 7. Tabela 7. Biomarcadores de EHNA exemplificativos Biomarcadores de fibrose hepática Aspartato aminotransferase (AST) para índice de razão de plaquetas (APRI) Razão de aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT) (AAR) Escore de FIB-41 Ácido hialurônico Citocinas pró-inflamatórias Um painel incluindo α2-macroglobulina, haptoglobina, apolipoproteína A1, bilirrubina, gama glutamil transpeptidase (GGT) combinada com a idade e sexo de um indivíduo para gerar uma medida de fibrose e atividade necroinflamatória no fígado (por exemplo, FIBROTEST®, FIBROSURE®) Um painel incluindo bilirrubina, gama-glutamiltransferase, ácido hialurônico, α2-macroglobulina combinada com a idade e sexo do indivíduo (por exemplo, HEPASCORE®2) Um painel incluindo inibidor de tecido de metaloproteinase-1, ácido hialurônico e α2-macroglobulina (por exemplo, FIBROSPECT®) Um painel incluindo inibidor de tecido de metaloproteinases 1 (TIMP-1), propeptídeo amino-terminal de procolágeno tipo III (PIIINP) e ácido hialurônico (HA) (por exemplo, o escore de Fibrose Hepática Melhorada (ELF)3) Biomarcadores de inflamação hepática4,5 Interleucina-(IL) 6 Interleucina-(IL) 1β Fator de necrose tumoral (TNF)-α Fator de crescimento transformador (TGF)-β Proteína quimiotática de monócitos (MCP)-1 Proteína C reativa (PCR) PAI-1 Isoformas de colágeno (por exemplo, Col1a1, Col1a2 e Col4a1) Mudança de infiltração de macrófagos (por exemplo, uma mudança no nível de expressão de CD68) Referências para a Tabela 7 1 McPherson et al., Gut. 2010, vol. 59(9), p. 1265-1269. 2 Adams, et al. Clin Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873. 3 Lichtinghagen, et al. J Hepatol. 2013, vol. 59(2), p. 236-242. 4 Neuman, et al. Can J Gastroenterol Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618. 5 Patente U.S. nº 9.872.844
[0090] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem apresentar uma maior fração livre no plasma. Em algumas modalidades, a fração livre é maior que cerca de 0,2%, tal como maior que cerca de 0,4%, tal como maior que cerca de 0,6%, tal como maior que cerca de 0,8%, tal como maior que cerca de 1,0%, tal como maior que cerca de 1,25%, tal como maior do que cerca de 1,5%, tal como maior do que cerca de 1,75%, tal como maior do que cerca de 2,0%, tal como maior do que cerca de 2,5%, tal como maior do que cerca de 3%, tal como maior do que cerca de 4 %, tal como maior do que cerca de 5%, tal como maior do que cerca de 7,5%, tal como maior do que cerca de 10%, ou tal como maior do
65 / 135 que cerca de 20%.
[0091] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem ser excretados na urina. Em algumas modalidades, a fração do composto que é excretada na urina é maior que cerca de 0,2%, tal como maior que cerca de 0,4%, tal como maior que cerca de 0,6%, tal como maior que cerca de 0,8%, tal como maior do que cerca de 1,0%, tal como maior do que cerca de 2%, tal como maior do que cerca de 3%, tal como maior do que cerca de 5%, tal como maior do que cerca de 7,5%, tal como maior do que cerca de 10%, tal como maior do que cerca de 15%, tal como maior do que cerca de 20%, tal como maior do que cerca de 30%, ou tal como maior do que cerca de 50%.
[0092] Após a absorção do intestino, alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem ser circulados através da circulação entero-hepática. Em algumas modalidades, a fração do composto que circula por meio da circulação entero-hepática é maior que cerca de 0,1%, tal como maior que cerca de 0,2%, tal como maior que cerca de 0,3%, tal como maior que cerca de 0,5%, tal como maior que cerca de 1,0%, tal como maior do que cerca de 1,5%, tal como maior do que cerca de 2%, tal como maior do que cerca de 3%, tal como maior do que cerca de 5%, tal como maior do que cerca de 7%, tal como maior do que cerca de 10%, tal como maior do que cerca de 15%, tal como maior do que cerca de 20%, tal como maior do que cerca de 30%, ou tal como maior do que cerca de 50%.
[0093] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem causar excreção renal dos sais biliares. Em algumas modalidades, a fração de ácidos biliares circulantes que é excretada pela via renal é maior do que cerca de 1%, tal como maior do que cerca de 2%, tal como maior do que cerca de 5%, tal como maior do que cerca de 7%, tal como maior do que cerca de 10%, tal como maior do que cerca de 15%, tal como maior do que cerca de 20%, ou tal como maior do que cerca de 25%.
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[0094] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem mostrar permeabilidade melhorada ou ideal. A permeabilidade pode ser medida em células Caco2, e os valores são dados como valores de Papp (permeabilidade aparente) em cm/s. Em algumas modalidades, a permeabilidade é maior do que pelo menos cerca de 0,1 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 0,2 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 0,4 x 10-6 cm/s, tal como como maior do que cerca de 0,7 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 1,0 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 2 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 3 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 5 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 7 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 10 x 10-6 cm/s, tal como maior do que cerca de 15 x 10-6 cm/s.
[0095] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem apresentar uma biodisponibilidade melhorada ou ideal. Em algumas modalidades, a biodisponibilidade oral é maior que cerca de 5%, tal como maior do que cerca de 7%, tal como maior do que cerca de 10%, tal como maior do que cerca de 15%, tal como maior do que cerca de 20%, tal como maior do que cerca de 30%, tal como maior do que cerca de 40%, tal como maior do que cerca de 50%, tal como maior do que cerca de 60%, tal como maior do que cerca de 70%, ou tal como maior do que cerca de 80%. Em outras modalidades, a biodisponibilidade oral está entre cerca de 10 e cerca de 90%, como entre cerca de 20 e cerca de 80%, como entre cerca de 30 e cerca de 70% ou entre cerca de 40 e cerca de 60%.
[0096] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem ser um substrato para transportadores relevantes no rim.
[0097] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem dar origem a concentrações de ácidos biliares no intestino, no fígado e no soro que não causam efeitos gastrointestinais
67 / 135 adversos.
[0098] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem diminuir a concentração de ácidos biliares no fígado sem causar distúrbios gastrointestinais, como diarreia.
[0099] Conforme usado neste documento, os termos “tratamento”, “tratar” e “tratando” referem-se a reverter, aliviar, retardar o início ou inibir o progresso de uma doença ou distúrbio, ou um ou mais sintomas dos mesmos, como aqui descrito. Em algumas modalidades, o tratamento pode ser administrado após o desenvolvimento de um ou mais sintomas. Em outras modalidades, o tratamento pode ser administrado na ausência de sintomas. Por exemplo, o tratamento pode ser administrado a um indivíduo susceptível antes do início dos sintomas (por exemplo, em vista de um histórico de sintomas e/ou de fatores genéticos ou outros fatores de susceptibilidade). O tratamento também pode ser continuado após a resolução dos sintomas, por exemplo, para prevenir ou retardar sua recorrência.
[00100] Um sal farmaceuticamente aceitável adequado de um composto da invenção é, por exemplo, um sal de adição de base de um composto da invenção que é suficientemente ácido, tal como um sal de metal alcalino (por exemplo, um sal de sódio ou potássio), um sal de metal alcalinoterroso (por exemplo, um sal de cálcio ou magnésio), um sal de amônio ou um sal com uma base orgânica que produz um cátion fisiologicamente aceitável, por exemplo, um sal com metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2- hidroxietil)amina.
[00101] Alguns compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem ter centros quirais e/ou centros isoméricos geométricos (isômeros E e Z). Deve ser entendido que a invenção abrange todos esses isômeros ópticos, diastereoisômeros e isômeros geométricos que possuem atividade inibidora de ASBT e/ou LBAT. A invenção também
68 / 135 abrange qualquer e todas as formas tautoméricas de compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, que possuem atividade inibidora de ASBT e/ou LBAT. Certos compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem existir em formas não solvatadas bem como em formas solvatadas, tais como, por exemplo, formas hidratadas. Deve ser entendido que a invenção abrange todas essas formas solvatadas que possuem atividade inibidora de ASBT e/ou LBAT.
[00102] Em outro aspecto, a invenção se refere a uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Os excipientes podem, por exemplo, incluir cargas, aglutinantes, desintegrantes, deslizantes e lubrificantes. Em geral, as composições farmacêuticas podem ser preparadas de uma maneira convencional usando excipientes convencionais.
[00103] Exemplos de cargas adequadas incluem, mas não estão limitadas a fosfato dicálcico di-hidratado, sulfato de cálcio, lactose (tal como lactose mono-hidratada), sacarose, manitol, sorbitol, celulose, celulose microcristalina, amido seco, amidos hidrolisados e amido pré-gelatinizado. Em certas modalidades, a carga é manitol e/ou celulose microcristalina.
[00104] Exemplos de aglutinantes adequados incluem, mas não estão limitados a amido, amido pré-gelatinizado, gelatina, açúcares (como sacarose, glicose, dextrose, lactose e sorbitol), polietilenoglicol, ceras, gomas naturais e sintéticas (como goma de acácia e goma tragacanto), alginato de sódio, derivados de celulose (tais como hidroxipropilmetilcelulose (ou hipromelose), hidroxipropilcelulose e etilcelulose) e polímeros sintéticos (tais como ácido acrílico e copolímeros de ácido metacrílico, copolímeros de ácido metacrílico, copolímeros de metacrilato de metila, copolímeros de metacrilato de aminoalquila, copolímeros de ácido poliacrílico/ácido polimetacrílico e polivinilpirrolidona (povidona)). Em certas modalidades, o aglutinante é
69 / 135 hidroxipropilmetilcelulose (hipromelose).
[00105] Exemplos de desintegrantes adequados incluem, mas não estão limitados a amido seco, amido modificado (tal como amido pré-gelatinizado (parcialmente), amido glicolato de sódio e carboximetil amido de sódio), ácido algínico, derivados de celulose (tais como carboximetilcelulose de sódio, hidroxipropilcelulose, e hidroxipropilcelulose de baixa substituição (L- HPC)) e polímeros reticulados (tais como carmelose, croscarmelose sódica, carmelose de cálcio e PVP reticulado (crospovidona)). Em certas modalidades, o desintegrante é croscarmelose de sódio.
[00106] Exemplos de deslizantes e lubrificantes adequados incluem, mas não estão limitados a talco, estearato de magnésio, estearato de cálcio, ácido esteárico, beenato de glicerila, sílica coloidal, dióxido de silício aquoso, silicato de magnésio sintético, óxido de silício granulado fino, amido, lauril sulfato de sódio, ácido bórico, óxido de magnésio, ceras (como cera de carnaúba), óleo hidrogenado, polietilenoglicol, benzoato de sódio, polietilenoglicol e óleo mineral. Em certas modalidades, o deslizante ou lubrificante é estearato de magnésio ou sílica coloidal.
[00107] A composição farmacêutica pode ser convencionalmente revestida com uma ou mais camadas de revestimento. Camadas de revestimento entérico ou camadas de revestimento para liberação retardada ou alvejada do composto de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, também são contempladas. As camadas de revestimento podem compreender um ou mais agentes de revestimento e podem, opcionalmente, compreender plastificantes e/ou pigmentos (ou corantes).
[00108] Exemplos de agentes de revestimento adequados incluem, mas não estão limitados a polímeros à base de celulose (tais como etilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose (ou hipromelose), hidroxipropilcelulose, acetato ftalato de celulose, acetato succinato de celulose, acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulose e ftalato de hidroxipropilmetilcelulose), polímeros
70 / 135 à base de vinila (como álcool polivinílico) e polímeros com base em ácido acrílico e derivados dos mesmos (como copolímeros de ácido acrílico e ácido metacrílico, copolímeros de ácido metacrílico, copolímeros de metacrilato de metila, copolímeros de metacrilato de aminoalquila, copolímeros de ácido poliacrílico/ácido polimetacrílico). Em certas modalidades, o agente de revestimento é hidroxipropilmetilcelulose. Em outras modalidades, o agente de revestimento é álcool polivinílico.
[00109] Exemplos de plastificantes adequados incluem, mas não estão limitados a citrato de trietila, triacetato de glicerila, citrato de tributila, ftalato de dietila, citrato de acetil tributila, ftalato de dibutila, sebacato de dibutila e polietilenoglicol. Em certas modalidades, o plastificante é polietilenoglicol.
[00110] Exemplos de pigmentos adequados incluem, mas não estão limitados a dióxido de titânio, óxidos de ferro (tais como óxidos de ferro amarelo, marrom, vermelho ou preto) e sulfato de bário.
[00111] A composição farmacêutica pode estar em uma forma que seja adequada para administração oral, para injeção parenteral (incluindo injeção intravenosa, subcutânea, intramuscular e intravascular), para administração tópica ou para administração retal. Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica está em uma forma que é adequada para administração oral, como um comprimido ou uma cápsula.
[00112] A dosagem necessária para o tratamento terapêutico ou profilático dependerá da via de administração, da gravidade da doença, da idade e do peso do paciente e de outros fatores normalmente considerados pelo médico assistente, ao determinar o regime apropriado e o nível de dosagem para um paciente particular.
[00113] A quantidade do composto a ser administrado variará para o paciente a ser tratado e pode variar de cerca de 1 µg/kg de peso corporal a cerca de 50 mg/kg de peso corporal por dia. Uma forma de dosagem unitária, como um comprimido ou cápsula, geralmente conterá cerca de 1 a cerca de
71 / 135 250 mg de ingrediente ativo, tal como cerca de 1 a cerca de 100 mg, ou tal como cerca de 1 a cerca de 50 mg, ou tal como cerca de 1 a cerca de 20 mg, por exemplo cerca de 2,5 mg, ou cerca de 5 mg, ou cerca de 10 mg, ou cerca de 15 mg. A dose diária pode ser administrada como uma dose única ou dividida em uma, duas, três ou mais doses unitárias. Uma dose diária administrada por via oral de um modulador de ácido biliar está preferivelmente dentro de cerca de 0,1 a cerca de 250 mg, mais preferivelmente de cerca de 1 a cerca de 100 mg, tal como cerca de 1 a cerca de 5 mg, tal como cerca de 1 a cerca de 10 mg, tal como cerca de 1 a cerca de 15 mg, ou tal como cerca de 1 a cerca de 20 mg.
[00114] Em outro aspecto, a invenção se refere a um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso como medicamento. A invenção também se refere ao uso de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como um medicamento.
[00115] Em outro aspecto, a invenção se refere a um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento ou prevenção de qualquer uma das doenças aqui citadas. A invenção também se refere ao uso de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de qualquer uma das doenças aqui citadas. A invenção também se refere a um método de tratamento ou prevenção de qualquer uma das doenças aqui citadas em um indivíduo, tal como o homem, compreendendo a administração ao indivíduo em necessidade de tal tratamento ou prevenção de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Terapia combinada
[00116] Em um aspecto da invenção, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em
72 / 135 combinação com pelo menos um outro agente terapeuticamente ativo, tal como com um, dois, três ou mais outros agentes terapeuticamente ativos. O composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o pelo menos um outro agente terapeuticamente ativo podem ser administrados simultaneamente, sequencialmente ou separadamente. Os agentes terapeuticamente ativos que são adequados para combinação com os compostos de fórmula (I) incluem, mas não estão limitados a agentes ativos conhecidos que são úteis no tratamento de qualquer uma das condições, distúrbios e doenças mencionados acima.
[00117] Em uma modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com outro inibidor de ASBT. Inibidores de ASBT adequados são descritos em WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449, WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, DE 19825804, EP 864582, EP 489423, EP 549967, EP 573848, EP 624593, EP 624594, EP 624595, EP 624596, EP 0864582, EP 1173205 e EP 1535913, todos os quais são incorporados neste documento por referência em sua totalidade.
[00118] Em outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um aglutinante de ácido biliar (também chamado de um sequestrante de ácido biliar ou uma resina), tal como colesevelam, colestiramina ou colestipol. Em uma modalidade preferida de tal combinação, o aglutinante de ácido biliar é formulado para liberação do cólon. Exemplos de tais
73 / 135 formulações são descritos em, por exemplo, WO 2017/138877, WO 2017/138878, WO 2019/032026 e WO 2019/032027, todos os quais são aqui incorporados por referência na sua totalidade.
[00119] Em outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de DPP-IV, incluindo gliptinas, tais como sitagliptina, vildagliptina, saxagliptina, linagliptina, gemigliptina, anagliptina, teneligliptina, alogliptina, trelagliptina, omarigliptina, evogliptina, gosogliptina e dutogliptina, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00120] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de HMG CoA redutase, tal como fluvastatina, lovastatina, pravastatina, simvastatina, atorvastatina, pitavastatina cerivastatina, mevastatina, rosuvastatina, bervastatina ou dalvastatina, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00121] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de absorção de colesterol, como a ezetimiba, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00122] Em outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista de PPAR alfa, incluindo fibratos, tais como clofibrato, bezafibrato, ciprofibrato, clinofribrato, clofibrida, fenofibrato, genfibrozila, ronifibrato e simfribrato, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00123] Em outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista de PPAR gama, incluindo tiazolidinadionas, tais como pioglitazona, rosiglitazona e lobeglitazona, ou um sal farmaceuticamente
74 / 135 aceitável do mesmo.
[00124] Em outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista de PPAR alfa/gama duplo, incluindo glitazares, tais como saroglitazar, aleglitazar, muraglitazar ou tesaglitazar, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00125] Em outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista de PPAR alfa/delta duplo, tal como elafibranor.
[00126] Em ainda uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista de PPAR pan (isto é, um agonista de PPAR que tem atividade em todos os subtipos: α, γ e δ), tal como IVA337.
[00127] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com moduladores do receptor farnesoide X (FXR), incluindo agonistas de FXR, tais como cafestol, ácido quenodesoxicólico, ácido 6α-etil- quenodesoxicólico (ácido obeticólico; INT-747), fexaramina, tropifexor, cilofexor e MET409.
[00128] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um modulador do receptor TGR5, incluindo agonistas de TGR5, tais como ácido 6α-etil-23(S)-metilcólico (INT-777).
[00129] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista de FXR/TGR5 duplo, tal como INT-767.
[00130] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com ácido ursodesoxicólico (UDCA). Em ainda uma outra
75 / 135 modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com ácido nor- ursodesoxicólico (nor-UDCA).
[00131] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um modulador de FGF19, tal como NGM282.
[00132] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista de FGF21, tal como BMS-986036.
[00133] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com inibidor de integrina, tal como PLN-74809 e PLN-1474.
[00134] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de CCR2/CCR5, tal como cenicriviroc.
[00135] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor da protease caspase, tal como emricasan.
[00136] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de galectina-3, tal como GR-MD-02.
[00137] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de estearoil-CoA dessaturase (SCD), como o aramchol (ácido araquidil amido colanoico).
[00138] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor da cinase 1 reguladora de sinal de apoptose (ASK1), como selonsertibe.
76 / 135
[00139] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de LOXL2, tal como simtuzumabe.
[00140] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de ACC, tal como GS-0976.
[00141] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista do receptor β do hormônio da tireoide, tal como MGL3196.
[00142] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista de GLP-1, tal como liraglutida.
[00143] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um peptídeo semelhante ao glucagon duplo e agonistas do receptor de glucagon, tal como SAR425899.
[00144] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor do carreador de piruvato mitocondrial, tal como MSDC-0602K.
[00145] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agente antioxidante, tal como vitamina E.
[00146] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de SGLT1, um inibidor de SGLT2 ou um inibidor de SGLT1 e SGLT2 duplo. Exemplos de tais compostos são dapagliflozina, sotagliflozina, canagliflozina, empagliflozina, LIK066 e
77 / 135 SGL5213.
[00147] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de diacilglicerol O-Aciltransferase 2 (DGAT2), tal como DGAT2RX e PF-06865571.
[00148] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor da ácido graxo sintase (FASN), tal como TVB-
2640.
[00149] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um ativador de proteína quinase ativada por AMP (AMPK), tal como PXL-770.
[00150] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um antagonista do receptor de glicocorticoide (GR), um antagonista do receptor de mineralocorticoide (MR) ou um antagonista de GR/MR duplo. Exemplos de tais compostos são MT-3995 e CORT-118335.
[00151] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um antagonista do receptor 1 de canabinoide (CB1), tal como IM102.
[00152] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um Klothoβ (KLB) e ativador do receptor do fator de crescimento de fibroblastos (FGFR), tal como MK-3655 (anteriormente conhecido como NGM-313).
[00153] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em
78 / 135 combinação com um inibidor do ligante 24 de quimiocina (motivo c-c) (CCL24), tal como CM101.
[00154] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um antagonista de A3, tal como PBF-1650.
[00155] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um antagonista do receptor P2x7, tal como SGM 1019.
[00156] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com agonistas do receptor P2Y13, tal como CER-209.
[00157] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um oxisterol sulfatado, tal como Dur-928.
[00158] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um antagonista do receptor de leucotrieno D4 (LTD4), tal como MN-001.
[00159] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de células T natural killer tipo 1 (NKT1), tal como GRI-0621.
[00160] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um composto anti-lipopolissacarídeo (LPS), tal como IMM-124E.
[00161] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de VAP1, tal como BI1467335.
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[00162] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista do receptor de adenosina A3, tal como CF-102.
[00163] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um ativador de SIRT-1, tal como NS-20.
[00164] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista do receptor 1 de ácido nicotínico, tal como ARI-3037MO.
[00165] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um antagonista de TLR4, tal como JKB-121.
[00166] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de ceto-hexoquinase, tal como PF-06835919.
[00167] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um agonista do receptor de adiponectina, tal como ADP-
335.
[00168] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com inibidor de autotaxina, tal como PAT-505 e PF8380.
[00169] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um antagonista do receptor 3 de quimiocina (motivo c-c) (CCR3), tal como bertilimumabe.
[00170] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em
80 / 135 combinação com um estimulador do canal de cloreto, tal como cobiprostona e lubiprostona.
[00171] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor da proteína de choque térmico 47 (HSP47), tal como ND-L02-s0201.
[00172] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor do fator de transcrição da proteína de ligação ao elemento regulador de esterol (SREBP), tal como CAT-2003 e MDV-4463.
[00173] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com uma biguanidina, tal como metformina.
[00174] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com insulina.
[00175] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de glicogênio fosforilase e/ou um inibidor de glicose-6-fosfatase.
[00176] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com uma sulfonilureia, como glipizida, glibenclamida e glimepirida.
[00177] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com uma meglitinida, como repaglinida, nateglinida e ormiglitinida.
[00178] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou
81 / 135 sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor da glucosidase, tal como acarbose ou miglitol.
[00179] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de esqualeno sintase, tal como TAK-475.
[00180] Em uma outra modalidade, os compostos de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados em combinação com um inibidor de PTPB1, tal como trodusquemina, ertiprotafibe, JTT-551 e claramina. Preparação de compostos
[00181] Os compostos da invenção podem ser preparados como um ácido livre ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pelos processos descritos abaixo. Ao longo da seguinte descrição de tais processos, entende-se que, quando apropriado, grupos protetores adequados serão adicionados e subsequentemente removidos dos vários reagentes e intermediários de uma maneira que será prontamente compreendida por um versado na técnica de síntese orgânica. Os procedimentos convencionais para o uso de tais grupos protetores, bem como exemplos de grupos protetores adequados são, por exemplo, descritos em Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis por P.G.M Wutz and T.W. Greene, 4th Edition, John Wiley & Sons, Hoboken,
2006. Métodos gerais
[00182] Todos os solventes usados eram de qualidade analítica. Solventes anidros comercialmente disponíveis foram usados rotineiramente para as reações. Os materiais iniciais estavam disponíveis em fontes comerciais ou preparados de acordo com os procedimentos da literatura. 1,1- dióxido de 3,3-dibutil-8-hidroxi-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina pode ser preparado como descrito em WO 03/022286 (método 24). A temperatura ambiente refere-se a 20-25°C.
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As composições da mistura de solventes são apresentadas como porcentagens de volume ou razões de volume.
LCMS: Nome do instrumento: Agilent 1290 infinity II.
Método A: Fase móvel: A: 0,1% HCOOH em H2O: ACN (95:5), B: ACN; vazão: 1,5 mL/min; coluna: ZORBAX XDB C-18 (50 x 4,6 mm) 3,5 μM.
Método B: Fase móvel: A: 10 mM NH4HCO3 em água, B: ACN; vazão: 1,2 mL/min; coluna: XBridge C8 (50 x 4,6 mm), 3,5 μM.
Método C: Fase móvel: A: 0,1% HCOOH em água: ACN (95:5), B: ACN; vazão: 1,5 mL/min; coluna: ATLANTIS dC18 (50 x 4,6 mm), 5 μM.
Método D: Fase móvel: A: 10 mM NH4OAc em água, B: ACN; vazão: 1,2 mL/min; coluna: Zorbax Extend C18 (50 x 4,6mm) 5 μM.
Método E: Fase móvel: A: 0,1% TFA em água: ACN (95:5), B: 0,1% TFA em ACN; vazão: 1,5 mL/min; coluna: XBridge C8 (50 x 4,6 mm), 3,5 μM.
Método F: Fase móvel: A: 0,1% TFA em água, B: 0,1% TFA em ACN; vazão: 0,8 mL/min; coluna: ZORBAX ECLIPSE PLUS C18 (50 x 2,1 mm), 1,8 μM.
Método G: Fase móvel: A: 0,1% TFA em água, B: 0,1% TFA em ACN; vazão: 0,8 mL/min; coluna: Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 μm.
UPLC: Nome do instrumento: waters Acquity I Class Método A: Fase móvel: A: 0,1% HCOOH em água, B: 0,1% HCOOH em ACN; vazão: 0,8 mL/min; coluna: Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 50) mm; 1,8 μm.
HPLC: Nome do instrumento: Instrumentos da série Agilent 1260 Infinity II conforme seguido usando % com detecção de UV (maxplot). Método A: Fase móvel: A: 10 mM NH4HCO3 em água, B: ACN; vazão: 1,0 mL/min; coluna: XBridge C8 (50 x 4,6 mm, 3,5 µm).
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Método B: Fase móvel: A: 0,1% TFA em água, B: 0,1% TFA em ACN; vazão: 2,0 mL/min; coluna: XBridge C8 (50 x 4,6 mm, 3,5 µm). Método C: Fase móvel: A: 10 mM NH4OAc em água milli-q, B: ACN; vazão: 1,0 ml/min; coluna: Phenomenex Gemini C18 (150 x 4,6 mm, 3,0 μm). Método D: Fase móvel: A: 0,1% TFA em água, B: ACN; vazão: 1,0 mL/min; coluna: ATLANTIS dC18 (250 x 4,6 mm, 5,0 µm). HPLC quiral: Nome do instrumento: Agilent 1260 Infinity II Método A: Fase móvel: A: 0,1% TFA em n-hexano; B: etanol, fluxo: 1,0 mL/min; coluna: CHIRALPAK IA (250 x 4,6 mm, 5,0 μm). SFC quiral: Nome do instrumento: PIC SFC 10 (analítico) Razão entre CO2 e cossolvente varia entre 60:40 e 80:20 Método A: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 3 mL/min; coluna: YMC Amylose-SA (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método B: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 3 mL/min; coluna: Chiralpak AD-H (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método C: Fase móvel: 20 mM amônia em metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: YMC Cellulose-SC (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método D: Fase móvel: metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: Lux A1 (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método E: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em metanol; vazão: 5 mL/min; coluna: Lux C4. Método F: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: YMC Cellulose-SC.
Método G: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: Lux A1. Método H: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 3 mL/min; coluna: Lux A1 (250 x 4,6 mm, 5 μm).
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Método I: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: Chiral CCS (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método J: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 5 mL/min; coluna: YMC Cellulose-SC AD-H (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método K: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em metanol; vazão: 4 mL/min; coluna: (R,R)-Whelk-01 (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método L: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 3 mL/min; coluna: Chiralcel OX-H (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método M: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 5 mL/min; coluna: YMC Cellulose-SC (250 x 4,6 mm, 5 μm). Método N: Fase móvel: metanol; vazão: 5 mL/min; coluna: Chiralcel OX-H (250 x 4,6 mm, 5 μm). HPLC prep: Nome do instrumento: Agilent 1290 Infinity II Método A: Fase móvel: A: 0,1% TFA em água; Fase móvel; B: 0,1% TFA em CAN; vazão: 2,0 mL/min; coluna: X-Bridge C8 (50 X 4,6 mm, 3,5 μM). Método B: Fase móvel: A: 10 mM NH4OAc em água; B: ACN; vazão: 35 mL/min; coluna: X select C18 (30 x 150 mm, 5 µm). Método C: Fase móvel: A: 10 mM NH4HCO3 em água; B: ACN; vazão: 1,0 mL/min; coluna: XBridge C8 (50 x 4,6 mm, 3,5 µm). Método D: Fase móvel: A: 0,1% HCOOH em água, B: ACN; vazão: 1,0 mL/min; coluna: X select C18 (30 x 150 mm, 5 µm). SFC preparativa quiral: Nome do instrumento: PIC SFC 100 e PSC SFC 400 Razão entre CO2 e cossolvente varia entre 60:40 e 80:20 Método A: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 3 mL/min; coluna: YMC Amylose-SA (250 x 30 mm, 5 μm). Método B: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 3 mL/min; coluna: Chiralpak AD-H (250 x 30 mm, 5 μm).
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Método C: Fase móvel: 20 mM amônia em metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: YMC Cellulose-SC (250 x 30 mm, 5 μm). Método D: Fase móvel: metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: Chiral CCS (250 x 30 mm, 5 µm). Método E: Fase móvel: metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: Lux A1 (250 x 30 mm, 5 µm). Método F: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 3 mL/min; coluna: Lux A1 (250 x 30 mm, 5 µm). Método G: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em metanol; vazão: 3 mL/min; coluna: Chiral CCS (250 x 30 mm, 5 μm). Método H: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA, vazão: 5 mL/min; coluna: YMC Amylose-SC (250 x 30 mm, 5 μm). Método J: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em IPA; vazão: 3 mL/min; coluna: Chiralcel OX-H (250 x 30 mm, 5 μm). Método K: Fase móvel: 0,5% isopropilamina em metanol; vazão: 5 mL/min; coluna: YMC Cellulose-SC (250 x 30 mm, 5 μm). Método L: Fase móvel: metanol; vazão: 5 mL/min; coluna: Chiralcel OX-H (250 x 30 mm, 5 μm). HPLC preparativa quiral: Nome do instrumento: Agilent 1260 Infinity II Método A: Fase móvel: A: 0,1% TFA em n-hexano; B: etanol; vazão: 15 mL/min; coluna: CHIRALPAK IA (250 x 19 mm, 5,0 μm). Abreviações ACN acetonitrila DCM diclorometano DMAP 4-dimetilaminopiridina DMF dimetilformamida IPA álcool isopropílico LCMS cromatografia líquida - espectrometria de massa
86 / 135 HPLC cromatografia liquida de alta eficiência PE éter de petróleo SFC cromatografia em fluido supercrítico TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano TLC cromatografia de camada fina UPLC cromatografia líquida de ultra cromatografia
[00183] A invenção será agora descrita pelos seguintes exemplos que não limitam a invenção em qualquer aspecto.
[00184] Todos os documentos e referências citados são incorporados por referência.
EXEMPLOS Intermediário 1 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoato de etila
[00185] A uma suspensão agitada de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-8- hidroxi-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (12 g, 21,1 mmol) em acrilato de etila (80 mL) à temperatura ambiente, DMAP (257 mg, 2,11 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida em um tubo vedado durante 72 horas a 100°C. O progresso da reação foi monitorado por TLC, o que indicou a conversão incompleta (~40%) do material de partida. A mistura de reação foi evaporada e seca sob vácuo para produzir o composto do título bruto, que foi
87 / 135 encaminhado para a próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 15 g (goma bruta marrom). LCMS: (Método A) 669,3 (M++H), Rt. 3,66 min, 36,45% (Max). Intermediário 2 Ácido 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico Preparação 1:
[00186] A uma solução agitada de 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)- 7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8- il)oxi)propanoato de etila (Intermediário 1; 40 g, 59,79 mmol) em 1,4- dioxano (200 mL) à temperatura ambiente, HCl (6N, 200 mL) foi adicionado gota a gota e a mistura de reação foi aquecida durante 16 horas a 80°C. Após o término da reação (monitorada por LCMS), a mistura de reação foi diluída com água gelada (500 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 200 mL). A parte orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro e evaporada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna flash (eluente: 20-70% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 39% (15 g, goma marrom). LCMS: (Método E) 641,3 (M++H), Rt. 2,93 min, 75,38% (Max). Preparação 2:
[00187] A uma suspensão agitada de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-8- hidroxi-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (500 mg, 0,88 mmol) em
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[00188] THF (5 mL) a 0°C, terc-butóxido de potássio (99 mg, 0,88 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, β-propiolactona (76 mg, 1,05 mmol) foi adicionada à mistura de reação a 0°C e a mistura de reação foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi acidificada com HCl 1,5N a 0°C e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 10 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 anidro e evaporada sob vácuo. O produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna flash (eluente: 10-50% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 53% (300 mg, sólido branco). LCMS: (Método D) 641,3 (M++H), Rt. 3,48 min, 96,63% (Max). Intermediário 3 Cloridrato de etil 2-aminobutanoato
[00189] A uma solução agitada de ácido 2-aminobutanoico (100 g, 0,97 mol) em etanol (750 mL), cloreto de tionila (78 mL, 1,07 mol) foi adicionado a 0°C. A mistura de reação foi então aquecida durante 16 horas a 80°C. Após o término da reação, a mistura de reação foi concentrada sob vácuo para produzir o composto do título bruto que foi usado como tal na próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 93% (152 g, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,66 (bs, 3H), 4,25-4,16 (m, 2H), 3,98- 3,85 (m, 1H), 1,84 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,23 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 0,92 (t, J = 7,6 Hz, 3H). Intermediário 4 Butanoato de etil (E)-2-(benzilidenoamino)
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[00190] A uma solução agitada de cloridrato de etil 2-aminobutanoato (Intermediário 3; 152 g, 0,91 mol) em DCM (900 mL), trietilamina (152 mL, 1,09 mol) foi adicionada a 0°C durante um período de 30 minutos. Sulfato de magnésio (98 g, 0,82 mol) foi adicionado em porções à mistura de reação a 0°C. Benzaldeído (84 mL, 0,82 mol) foi então adicionado à mistura de reação a 0°C durante um período de 20 minutos e a mistura de reação foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi filtrada através de celite e o filtrado foi concentrado sob vácuo. O produto bruto resultante foi dissolvido em éter de petróleo (1000 mL) e novamente filtrado através de celite. O filtrado foi então concentrado sob vácuo para produzir o composto do título. Esse material bruto foi encaminhado como tal para a próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 90% (180 g, líquido marrom claro). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,40 (s, 1H), 7,79-7,76 (m, 2H), 7,49-7,47 (m, 3H), 4,16-4,10 (m, 2H), 3,98-3,95 (m, 1H), 1,92-1,89 (m, 1H), 1,79-1,74 (m, 1H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Intermediário 5 (E)-2-(benzilidenoamino)-2-etil-hexanoato de etila
[00191] A uma solução agitada de NaH (60%; 32,8 g, 0,82 mol) em DMF (100 mL) a 0°C, butanoato de etil (E)-2-(benzilidenoamino) (Intermediário 4; 180 g, 0,82 mol) em DMF (800 mL) foi adicionado lentamente ao longo de um período de 30 minutos. A mistura de reação foi
90 / 135 então agitada durante 1,5 hora à temperatura ambiente. Foi adicionado iodeto de n-butila (93 mL, 0,82 mol) à mistura de reação a 0°C e a mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com 2- propanol (100 mL) a 0°C e então diluída com água (1000 mL). A camada aquosa foi extraída com éter de petróleo (1000 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (200 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi concentrada sob vácuo e o material bruto resultante foi encaminhado como tal para a próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 88% (200 g, líquido amarelo). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,34 (s, 1H), 7,80 - 7,77 (m, 2H), 7,47- 7,44 (m, 3H), 4,16 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,51-1,79 (m, 4H), 1,31-1,18 (m, 7H), 0,88 - 0,84 (m, 6H). Intermediário 6 2-amino-2-etil-hexanoato de etila
[00192] A uma solução agitada de (E)-2-(benzilidenoamino)-2-etil- hexanoato de etila (Intermediário 5; 200 g, 0,73 mol) em éter de petróleo (500 mL), HCl diluído (1000 mL, 1,5 N) foi adicionado a 0°C e a mistura de reação foi agitada vigorosamente durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi lavada com EtOAc (2 x 100 mL). A camada aquosa foi então basificada (pH ~8,5) usando bicarbonato de sódio sólido (200 g) e extraída com EtOAc (2 x 200 mL). A camada orgânica foi lavada com água (2 x 15 mL). A parte orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo para produzir o composto do título. O material bruto foi encaminhado como tal para a próxima etapa sem qualquer
91 / 135 purificação adicional. Rendimento: 80% (110 g, líquido amarelo claro). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,08 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,68 - 1,00 (m, 13H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,77 (t, J = 7,4 Hz, 3H). Intermediário 7 2-amino-2-etil-N-fenil-hexanamida
[00193] A uma solução agitada de anilina (48,3 mL, 534 mmol) em THF (250 mL) a -78°C, n-BuLi (2,6 M em hexanos; 205 mL, 534 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de um período de 30 minutos, e a mistura de reação foi agitada durante 45 minutos de -25°C a -30°C. Em seguida, 2- amino-2-etil-hexanoato de etila (Intermediário 6; 50 g, 267 mmol) em THF (250 mL) foi adicionado à mistura de reação a -78°C e a mistura de reação foi agitada durante 2 horas a -78°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (500 mL) a - 78°C. A mistura de reação foi extraída com EtOAc (2 x 250 mL) e a camada orgânica foi lavada com água (2 x 15 mL). A parte orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo para produzir o composto do título como bruto. O produto bruto foi dissolvido em éter de petróleo (1000 mL). A parte orgânica foi lavada com 30% de metanol em água (X 250 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi concentrada sob vácuo e o bruto resultante foi encaminhado como tal para a próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 66 g (goma bruta marrom). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,30 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 7,05 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,55 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 1,76-1,07 (m, 10H), 0,86-0,77 (m, 6H). Intermediário 8 2-etil-N1-fenil-hexano-1,2-diamina
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[00194] A uma solução agitada de 2-amino-2-etil-N-fenil-hexanamida (Intermediário 7; 66 g, 0,28 mol) em THF (600 mL), dimetilsulfeto de borano (2M em THF, 253 mL, 0,51 mol) foi adicionado a 0°C e a mistura de reação foi aquecida durante 16 horas a 70°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com metanol (300 mL) a 0°C. A mistura de reação foi então aquecida durante 2 horas a 70°C. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo e o resíduo obtido foi dissolvido em EtOAc (1000 mL). A camada orgânica foi lavada com água (2 x 150 mL), seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo. O bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 40% EtOAc em hexano; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 82% (50 g, líquido marrom). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,04 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 6,61 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,49 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 5,15 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 2,79 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 1,39 - 1,17 (m, 10H), 0,88-0,79 (m, 6H). Intermediário 9 1,2-Bis(2,4-dibromo-5-metoxifenil)dissulfano
[00195] A uma solução agitada de 3-metoxibenzenotiol (100 g, 0,7 mol) em metanol (1000 mL), bromo (73 mL, 1,4 mol) foi adicionado gota a gota a 0°C e a mistura de reação foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi evaporada sob vácuo e o produto bruto obtido foi diluído com EtOAc (2000 mL) e lavado com água (2 x 500 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo. O produto bruto resultante foi dissolvido em ácido acético glacial (600 mL),
93 / 135 bromo (20 mL) foi adicionado gota a gota à temperatura ambiente e a mistura de reação foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. O sólido obtido foi removido por filtração, triturado com DCM e seco sob vácuo para produzir o composto do título puro. Rendimento: 37% (78 g, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,69 (s, 2H), 7,17 (s, 2H), 3,84 (s, 6H). Intermediário 10 Cloreto de 2,4-dibromo-5-metoxibenzenossulfonila
[00196] A uma suspensão agitada de 1,2-bis(2,4-dibromo-5- metoxifenil)dissulfano (Intermediário 9; 20,0 g, 33,67 mmol) e nitrato de potássio (17,02 g, 168,35 mmol) em acetonitrila (200 mL), foi adicionado gota a gota cloreto de sulfurila (13,6 mL, 168,35 mmol) a 0°C. A mistura de reação foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi despejada em gelo picado e o sólido obtido foi removido por filtração. O sólido foi lavado com água e seco sob vácuo para produzir o composto do título puro. Rendimento: 91% (22,5 g, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,05 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 4,01 (s, 3H). Intermediário 11 2,4-Dibromo-5-metoxi-N-(3-((fenilamino)metil)heptan-3- il)benzenossulfonamida
[00197] A uma solução agitada de 2-etil-N1-fenil-hexano-1,2-diamina (Intermediário 8; 4,9 g, 22,34 mmol) em THF (10 mL) foram adicionados cloreto de 2,4-dibromo-5-metoxibenzenossulfonila (Intermediário 10; 10,5 g,
94 / 135 28,91 mmol) e trietilamina (9,3 mL, 67,02 mmol) a 0°C e a mistura de reação foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi diluída com EtOAc (50 mL). A camada orgânica foi lavada com água (2 x 15 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi concentrada sob vácuo e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 10% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 59% (7,2 g, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,01 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,03 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 6,54 - 6,46 (m, 3H), 4,80 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,07-2,96 (m, 2H), 1,66-1,41 (m, 4H), 1,15-0,95 (m, 4H), 0,78-0,69 (m, 6H). Intermediário 12 1,1-dióxido de 7-bromo-3-butil-3-etil-8-metoxi-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5-benzotiadiazepina
[00198] A uma solução agitada de 2,4-dibromo-5-metoxi-N-(3- ((fenilamino)metil)heptan-3-il)benzenossulfonamida (Intermediário 11; 7,2 g, 13,1 mmol) em DMF (50 mL) foram adicionados carbonato de potássio (3,62 g, 26,2 mmol) e cobre em pó (834 mg, 13,1 mmol) e a mistura de reação foi aquecida durante 24 horas a 150°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi filtrada através de celite e lavada com EtOAc (25 mL). A parte filtrada foi concentrada sob vácuo e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 20% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 83% (5,1 g, sólido branco).
95 / 135 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,43-7,30 (m, 4H), 7,15-7,13 (m, 2H), 7,03-7,01 (m, 2H), 4,00-3,60 (m, 5H), 1,62-1,34 (m, 4H), 1,08-0,95 (m, 4H), 0,74-0,71 (m, 6H). LCMS: (Método A) 467,0 (M+), Rt. 3,06 min, 95,31% (max). Intermediário 13 1,1-dióxido de 7-bromo-3-butil-3-etil-8-metoxi-2-(4-metoxibenzil)-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina
[00199] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 7-bromo-3-butil-3- etil-8-metoxi-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina (Intermediário 12; 20,0 g, 42,7 mmol) em N-metil-2-pirrolidona (100 mL) foram adicionados Cs2CO3 (27,8 g, 85,5 mmol) e brometo de p-metoxibenzila (7,98 mL, 39,5 mmol) a 0°C e a mistura de reação foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi diluída com EtOAC (200 mL) e a camada orgânica foi lavada com água (2 x 50 mL). A parte orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo. O bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 10% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 64% (16 g, sólido branco). LCMS: (Método A) 587,2 (M+), Rt. 3,51 min, 92,94% (max). Intermediário 14 1,1-dióxido de 3-butil-3-etil-8-hidroxi-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5- fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina
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[00200] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 7-bromo-3-butil-3- etil-8-metoxi-2-(4-metoxibenzil)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (Intermediário 13; 16,0 g, 27,2 mmol) em DMF (120 mL), tiometoxido de sódio (9,5 g, 136,1 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida durante 16 horas a 60°C. Após o término da reação (monitorada por LCMS), a mistura de reação foi diluída com EtOAc (200 mL) e a camada orgânica foi lavada com água (2 x 50 mL). A parte orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, depois concentrada sob vácuo e o bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 10% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 65% (9,2 g, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 10,37 (bs, 1H), 7,31-7,22 (m, 5H), 7,01- 6,65 (m, 6H), 4,32-4,13 (m, 2H), 4,10-3,90 (m, 2H), 3,74 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,62-1,34 (m, 4H), 1,08-0,98 (m, 4H), 0,74-0,65 (m, 6H). LCMS: (Método E) 541,2 (M++H), Rt. 2,86 min, 93,67% (max). Intermediário 15 Ácido 3-((3-butil-3-etil-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
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O O O HO O S N O S N
[00201] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3-butil-3-etil-8- hidroxi-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (Intermediário 14; 1 g, 1,85 mmol) em THF (3 mL) a 0°C, terc-butóxido de potássio (208 mg, 1,85 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 15 minutos. Uma solução de β-propiolactona (148 mg, 2,03 mmol) em THF (2 mL) foi então adicionada gota a gota e a mistura de reação foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com HCl diluído (1,5 N, 5 mL) e então diluída com água (5 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 20 mL), e a camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL) e salmoura (20 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada, concentrada sob vácuo e o material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 35% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 48% (550 mg, sólido branco). LCMS: (Método A) 613,3 (M++H), Rt. 3,04 min, 91,99% (Max). Intermediário 16 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoato de metila
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[00202] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-8-hidroxi- 2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (500 mg, 0,87 mmol) em DMF (10 mL), Cs2CO3 (0,57 g, 1,76 mmol) e metil-2,3-epoxipropanoato (0,18 g, 1,76 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi aquecida por 12 horas a 50°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 15 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (15 mL) e salmoura (15 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 20% EtOAc/PE; gel de sílica: 230- 400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 33% (200 mg, goma incolor). LCMS: (Método A) 671,2 (M++H), Rt. 3,32 min, 44,28% (Max). Intermediário 17 Ácido 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico
O OH O O HO O S N O S N
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[00203] A uma solução de 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)-7- (metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8- il)oxi)-2-hidroxipropanoato de metila (Intermediário 16; 200 mg, 0,31 mmol) em 1,4-dioxano (3 mL), HCl diluído (6 N, 3 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida durante 16 horas a 80°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi diluída com água gelada (5 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 10 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi encaminhado para a etapa seguinte como tal sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 200 mg (goma bruta incolor). LCMS: (Método A) 657,2 (M++H), Rt. 3,0 min, 36,70% (Max). Intermediário 18 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoato de metila
[00204] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-8-hidroxi- 7-(metiltio)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina (0,63 g , 0,002 mmol) em DMF (9 mL) foi adicionado Cs2CO3 (0,92 g, 0,003 mmol) e metil- 2,3-epoxipropanoato (1,28 g, 0,0126 mmol; adicionado em porções em 3 quantidades iguais em 72 horas), e a mistura de reação foi agitada durante 72 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com HCl diluído (1,5 N, 20 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 50 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL) e salmoura (20 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O
100 / 135 material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 25% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 28% (220 mg, sólido branco). LCMS: (Método E) 550,8 (M++H), Rt. 3,22 min, 92,74% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 6,15 min, 94,48% (Max). Intermediário 19 (S)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoato de metila e (R)-3- ((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoato de metila
OH O O OH O O O O S NH O O S NH O O S N S N
[00205] Os dois enantiômeros de 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1- dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2- hidroxipropanoato de metila racêmico (Intermediário 18; 216 mg, 0,39 mmol) foram separados por SFC quiral (método A). O material foi concentrado sob vácuo a 40°C. A primeira fração de eluição correspondeu ao enantiômero 1 e a segunda fração de eluição correspondeu ao enantiômero 2. A configuração absoluta dos dois enantiômeros não é conhecida.
[00206] Cada uma das duas frações foi então tratada individualmente para purificação adicional. O resíduo obtido foi acidificado com HCl diluído (1,5 N, pH ~4) e a camada aquosa extraída com EtOAc (3 x 5 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo a 40°C para produzir um enantiômero purificado do composto do título.
[00207] Enantiômero 1: Rendimento: 46% (100 mg, goma incolor). LCMS: (Método E) 551,2 (M++H), Rt. 2,77 min, 98,09% (Max). SFC
101 / 135 quiral: (Método A) Rt. 3,58 min, 99,10% (Max).
[00208] Enantiômero 2: Rendimento: 41% (90 mg, goma incolor). LCMS: (Método E) 551,1 (M++H), Rt. 2,77 min, 91,29% (Max). SFC quiral: (Método A) Rt. 4,59 min, 99,24% (Max) Intermediário 20 Ácido 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico
[00209] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-8-hidroxi- 2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (300 mg, 0,52 mmol) em THF (10 mL), terc-butóxido de potássio (65 mg, 0,58 mmol) e β-butirolactona (68 mg, 0,79 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi aquecida por 16 horas a 60 °C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com HCl diluído(1,5 N, 5 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 10 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 40% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 72% (250 mg, goma incolor). LCMS: (Método E) 655,3 (M++H), Rt. 3,03 min, 89,11% (Max). Intermediário 21 Cloridrato de etil 2-amino-hexanoato
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[00210] A uma solução agitada de DL-Norleucina (100 g, 0,76 mol) em etanol (1L), cloreto de tionila (60,8 mL, 0,84 mol) foi adicionado a 0°C e a mistura de reação foi aquecida durante 16 horas a 80°C. Após o término da reação, a mistura de reação foi concentrada sob vácuo para produzir o composto do título bruto que foi usado como tal na próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 97% (145 g, sólido gomoso marrom). 1 H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,80 (s, 3H), 4,33-4,23 (m, 2H), 4,09-4,07 (m, 1H), 2,09-2,04 (m, 2H), 1,61-1,56 (m, 1H), 1,48-1,33 (m, 6H), 1,03-0,88 (m, 3H). Intermediário 22 (E)-2-(benzilidenoamino)hexanoato de etila
[00211] A uma solução agitada de cloridrato de etil 2-amino-hexanoato (Intermediário 21; 145 g, 0,74 mol) em DCM (1,5 L), trietilamina (124 mL, 1,2 mol) foi adicionada a 0°C durante um período de 30 minutos. Sulfato de magnésio (89,2 g, 0,74 mol) foi então adicionado em porções à mistura de reação a 0°C. Benzaldeído (75,6 mL, 0,74 mol) foi então adicionado à mistura de reação a 0°C durante um período de 20 minutos e a mistura de reação foi então agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi filtrada através de celite e o filtrado foi concentrado sob vácuo. O bruto resultante foi dissolvido em éter de petróleo (1000 mL), novamente filtrado através de celite e o filtrado foi concentrado sob vácuo para produzir o composto do título. Esse material bruto foi encaminhado como tal para a próxima etapa sem qualquer
103 / 135 purificação adicional. Rendimento: 98% (180 g, líquido marrom). 1 H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,30 (s, 1H), 7,82-7,80 (m, 2H), 7,47-7,42 (m, 3H), 4,26-4,20 (m, 2H), 3,99-3,95 (m, 1H), 2,06-2,00 (m, 1H), 1,96-1,89 (m, 1H), 1,40-1,24 (m, 7H), 0,95-0,91 (m, 3H). Intermediário 23 (E)-2-(benzilidenoamino)-2-butil-hexanoato de etila
[00212] A uma solução agitada de NaH (60%, 29,1 g, 0,73 mol) em DMF (250 mL) a 0°C, adicionou-se lentamente uma solução de hexanoato de etil (E)-2-(benzilidenoamino) (Intermediário 22; 180 g, 0,73 mol) em DMF (250 mL) ao longo de um período de 30 minutos. A mistura de reação foi agitada 1,5 hora à temperatura ambiente. Uma solução de iodeto de n-butila (82,7 mL, 0,73 mol) em DMF (250 mL) foi então adicionada a 0°C e a mistura de reação foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi diluída com água (1000 mL) e a camada aquosa foi extraída com éter de petróleo (1000 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (200 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi concentrada sob vácuo e o material bruto resultante foi encaminhado como tal para a próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 95% (210 g, líquido marrom). Intermediário 24 2-amino-2-butil-hexanoato de etila
[00213] A uma solução agitada de (E)-2-(benzilidenoamino)-2-butil-
104 / 135 hexanoato de etila (Intermediário 23; 210 g, 0,76 mol) em éter de petróleo (1000 mL), HCl diluído (1000 mL, 1,5 N) foi adicionado a 0°C e a mistura de reação foi agitada vigorosamente durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a camada orgânica foi separada e lavada com EtOAc (2 x 100 mL). A camada aquosa foi então basificada (pH ~10) usando solução de hidróxido de sódio e extraída com DCM (2 x 1000 mL). A parte orgânica combinada foi lavada com água (2 x 1000 mL), salmoura (1000 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi concentrada sob vácuo para produzir o composto do título que foi encaminhado como tal para a próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 52% (85 g, líquido marrom). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,11-4,04 (m, 2H), 1,78-1,61 (m, 4H), 1,60-1,51 (m, 3H), 1,50-1,22 (m, 7H), 1,20-0,99 (m, 3H), 0,95-0,75 (m, 6H). Intermediário 25 2-amino-2-butil-N-fenil-hexanamida
[00214] A uma solução agitada de anilina (19,1 mL, 209 mmol) em THF (250 mL) a -78°C, n-BuLi (2,6 M em hexano, 250,7 mL, 627 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de um período de 30 minutos e a mistura de reação foi agitada durante 45 minutos a -25°C a -30°C. Uma solução de 2- amino-2-butil-hexanoato de etila (Intermediário 24; 45 g, 209 mmol) em THF (200 mL) foi então adicionada à mistura de reação a -78°C e a mistura de reação foi agitada durante 2 horas naquela temperatura. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente a -78°C com isopropanol (100 mL) e, em seguida, água gelada (500 mL), e a mistura de reação foi deixada agitar durante 1 hora à temperatura ambiente. A parte aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 250 mL) e a camada orgânica
105 / 135 combinada foi lavada com água (2 x 50 mL). A parte orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo para produzir o composto do título como bruto. O material bruto obtido foi dissolvido em éter de petróleo (1000 mL), lavado com 30% de metanol em água (2 x 250 mL) e seco sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi concentrada sob vácuo e o bruto resultante foi encaminhado como tal para a próxima etapa sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 60 g (goma bruta marrom). LCMS: (Método A) 263,3 (M+), Rt. 1,29 min, 95,84% (max). Intermediário 26 2-butil-N1-fenil-hexano-1,2-diamina
[00215] A uma solução agitada de 2-amino-2-butil-N-fenil-hexanamida (Intermediário 25; 100 g, 0,38 mol) em THF (1 L), complexo de borano dimetil sulfeto (2 M em THF, 476 mL, 0,95 mol) foi adicionado a 0°C e a mistura de reação foi aquecida durante 16 horas a 70°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com metanol (300 mL) a 0°C e a mistura de reação foi aquecida durante 2 horas a 70°C. A mistura de reação foi então concentrada sob vácuo. O resíduo obtido foi dissolvido em EtOAc (1000 mL), e a camada orgânica foi lavada com água (2 x 300 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi concentrada sob vácuo e o material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 0-25% EtOAc em hexano; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 39% (37 g, líquido marrom). Intermediário 27 Ácido 2,4-dicloro-5-metoxibenzenossulfônico
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[00216] A uma solução agitada de ácido clorossulfônico (60 mL) a 0°C, 2,4-dicloroanisol (20 g, 113 mmol) foi adicionado em porções e a mistura de reação foi agitada durante 3 horas entre 0 e 10°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi despejada sobre gelo picado com agitação vigorosa e o sólido obtido foi removido por filtração. O sólido foi lavado várias vezes com água gelada (50 mL), éter de petróleo (50 mL) e depois seco sob vácuo para obter o composto do título. Rendimento: 70% (19 g, sólido esbranquiçado). LCMS: (Método A) 255,0 (M+-H), Rt. 2,66 min, 96,06% (Max). Intermediário 28 2,4-dicloro-5-metoxi-N-(5-((fenilamino)metil)nonan-5- il)benzenossulfonamida
[00217] Uma solução de ácido 2,4-dicloro-5-metoxibenzenossulfônico (Intermediário 27; 10 g, 41,5 mmol) em SOCl2 (20 mL) foi aquecida durante 12 horas a 70°C. Após consumo completo do material de partida, a mistura de reação foi concentrada sob vácuo e o resíduo obtido foi dissolvido em THF (50 mL). Uma solução de trietilamina (17 mL, 124,7 mmol) em THF (100 mL) e, em seguida, adicionou-se 2-butil-N1-fenil-hexano-1,2-diamina (Intermediário 26; 12,4 g, 49,9 mmol) a 0°C, e a mistura de reação foi agitada durante 4 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada (30 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 10 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (100 mL) e salmoura
107 / 135 (100 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 25-35% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 40% (8 g, sólido esbranquiçado). LCMS: (Método E) 487,1 (M++H), Rt. 2,93 min, 43,66% (Max). Intermediário 29 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-7-cloro-8-metoxi-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5-benzotiadiazepina
[00218] A uma solução agitada de 2,4-dicloro-5-metoxi-N-(5- ((fenilamino)metil)nonan-5-il)benzenossulfonamida (Intermediário 28; 4 g, 8,21 mmol) em DMF (20 mL) foram adicionados K2CO3 anidro (2,26 g, 16,42 mmol) e cobre em pó (0,52 g, 8,21 mmol) e a mistura de reação foi aquecida durante 16 horas a 120°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi filtrada através de celite e o bloco de celite foi lavado com DCM (10 mL). O filtrado foi concentrado sob vácuo e o material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 2-20% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 24% (900 mg, sólido esbranquiçado). LCMS: (Método E) 451,1 (M++H), Rt. 2,96 min, 34,15% (Max). Intermediário 30 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-7-cloro-8-hidroxi-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5-benzotiadiazepina
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O O
HO S NH Cl N
[00219] A uma solução de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-7-cloro-8-metoxi- 5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina (Intermediário 29; 0,9 g, 1,2 mmol) em DCM (4 mL) a -78°C, BBr3 (1 M em DCM; 4 mL, 4 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 3 h entre -10°C e 0°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada (10 mL). A camada orgânica foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL). A parte orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 0-20% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 22% (195 mg, goma amarela). LCMS: (Método E) 437,1 (M++H), Rt. 2,80 min, 53,01% (Max). Intermediário 31 1,1-dióxido de 5-(4-bromofenil)-3,3-dibutil-8-hidroxi-2-(4-metoxibenzil)- 7-(metiltio)-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina
[00220] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-8-hidroxi- 2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (3 g, 5,27 mmol) em DMF (18 mL) a 0°C foi adicionada
109 / 135 uma solução de N-bromossuccinimida (1,03 g, 5,80 mmol) em DMF (12 mL), e a mistura de reação foi agitada por 2 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi despejada em água gelada (20 mL), agitada e filtrada. O sólido obtido foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 25% EtOAc/PE; gel de sílica: 230- 400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 82% (2,8 g, sólido branco). LCMS: (Método B) 648,2 (M++2), Rt. 4,65 min, 67,27% (Max). Intermediário 32 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-8-hidroxi-2-(4-metoxibenzil)-5-(4-metoxifenil)- 7-(metiltio)-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina
[00221] A uma solução de 1,1-dióxido de 5-(4-bromofenil)-3,3-dibutil- 8-hidroxi-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (Intermediário 31; 2,0 g, 3,09 mmol) em DMF (20 mL) a 0°C, brometo cuproso (44 mg, 0,31 mmol) foi adicionado, seguido por uma solução recém-preparada de metóxido de sódio (preparada in situ adicionando sódio (0,35 g, 15,4 mmol) a metanol seco (10 mL)). A mistura de reação foi então aquecida durante 24 horas a 100°C. Após o término da reação (monitorada por UPLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com HCl diluído (1,5 N, 10 mL) e a camada aquosa foi extraída com uma mistura 1:1 de EtOAc e PE (2 x 30 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (50 mL) e salmoura (50 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte
110 / 135 orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 20% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 81% (1,5 g, sólido amarelo claro). LCMS: (Método E) 599,3 (M++H), Rt. 3,38 min, 99,50% (Max). Intermediário 33 Ácido 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)-5-(4-metoxifenil)-7-(metiltio)-1,1- dióxido-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
[00222] A uma solução de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-8-hidroxi-2-(4- metoxibenzil)-5-(4-metoxifenil)-7-(metiltio)-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (Intermediário 32; 1,5 g, 2,64 mmol) em THF (20 mL), terc-butóxido de potássio (326 mg, 2,9 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 10 minutos a 0°C. Em seguida, foi adicionada β- propiolactona (209 mg, 2,9 mmol) e a mistura de reação foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com HCl diluído (1,5 N, 20 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 30 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (30 mL) e salmoura (30 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 0-70% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 48% (850 mg, sólido branco).
111 / 135 LCMS: (Método E) 670,8 (M++H), Rt. 3,37 min, 94,99% (Max). Intermediário 34 Ácido 3-((3,3-dibutil-5-(4-metoxifenil)-7-(metiltio)-1,1-dióxido-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
[00223] A uma solução de ácido 3-((3,3-dibutil-2-(4-metoxibenzil)-5- (4-metoxifenil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico (Intermediário 33; 850 mg, 1,27 mmol) em tolueno (10 mL), trifenilamina (621 mg, 2,54 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada durante 10 minutos a 0°C. TFA (1,9 mL, 25,4 mmol) foi então adicionado e a mistura de reação foi deixada em agitação durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 0-5% MeOH/DCM; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 92% (650 mg, sólido esbranquiçado). LCMS: (Método E) 550,8 (M++H), Rt. 3,24 min, 94,98% (Max). Intermediário 35 3-((3,3-dibutil-5-(4-hidroxifenil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-2,3,4,5-tetra- hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoato de isopropila
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[00224] A uma solução de ácido 3-((3,3-dibutil-5-(4-metoxifenil)-7- (metiltio)-1,1-dióxido-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8- il)oxi)propanoico (Intermediário 34; 300 mg, 0,54 mmol) em DCM (10 mL) a -78°C, BBr3 (1,1 mL, 1,09 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 2 horas a -30°C. Após o término da reação (monitorada por UPLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com álcool isopropílico e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 0-5% MeOH/DCM; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 150 mg (sólido esbranquiçado). LCMS: (Método A) 578,8 (M++H), Rt. 2,88 min, 83,38% (Max). (Nota: durante resfriamento brusco com álcool isopropílico, o produto de esterificação do composto desejado observado que foi indicado por LCMS) Intermediário 36 1,1-dióxido de 3-butil-7-(dimetilamino)-etil-8-metoxi-2-(4-metoxibenzil)- 5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina
O O O O S N N N
[00225] A uma solução desgaseificada de 1,1-dióxido de 7-bromo-3- butil-3-etil-8-metoxi-2-(4-metoxibenzil)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (Intermediário 13; 3,5 g, 6,34 mmol) em 1,4-dioxano (35 mL) foram adicionados terc-butóxido de sódio (1,2 g, 12,6 mmol), xantfos (0,073g, 0,13 mmol) e Pd2dba3 (0,058 g, 0,06 mmol) e a solução foi desgaseificada durante 10 minutos sob atmosfera de N2. Adicionou-se N,N- dimetilamina (3,5 mL, 31,7 mmol) e a mistura de reação foi aquecida durante
113 / 135 48 horas a 100°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi concentrada e o resíduo obtido foi diluído com EtOAc (75 mL). A camada orgânica foi lavada com água (2 x 75 mL) e salmoura (75 mL), seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo. O bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 30% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 40% (1,4 g, goma marrom). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,34-7,28 (m, 5H), 7,11-7,02 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,28 (s, 1H), 4,50 (bs, 2H), 4,12 (bs, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 2,68 (s, 6H), 1,42-1,25 (m, 2H), 1,19-1,05 (m, 2H), 0,95- 0,81 (m, 4H), 0,73-0,58 (m, 6H). LCMS: (Método E) 552,1 (M++H), Rt. 2,80 min, 81,8% (max). Intermediário 37 1,1-dióxido de 3-butil-7-(dimetilamino)-3-etil-8-hidroxi-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina
[00226] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3-butil-7- (dimetilamino)-3-etil-8-metoxi-2-(4-metoxibenzil)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5benzotiadiazepina (Intermediário 36; 0,7 g, 1,22 mmol) em DMF (10 mL), metóxido de sódio (0,5 g, 6,32 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida durante 16 horas a 100°C. Após o término da reação (monitorada por TLC e LCMS), a mistura de reação foi concentrada sob vácuo e o resíduo obtido foi diluído com EtOAc (20 mL). A camada orgânica foi lavada com água (2 x 20 mL) e salmoura (20 mL), seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo. O bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 70% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-
114 / 135 400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 60% (0,4 g, sólido esbranquiçado). LCMS: (Método E) 418,2 (M++H), Rt. 2,14 min, 88,9% (max). Intermediário 38 Tritilserinato de metila
[00227] A uma solução agitada de cloridrato de serinato de metila (0,65 g, 0,5 mmol) em DCM (10 mL), trietilamina (2 mL, 1,50 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi resfriada a 0°C. Em seguida, foi adicionado cloreto de tritila (1,67 g, 0,6 mmol) e a mistura de reação foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e a camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 10 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 7% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 33% (0,7 g, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 7,54-7,50 (m, 6H), 7,32-7,27 (m, 6H), 7,24- 7,20 (m, 3H), 3,74-3,72 (m, 1H), 3,62-3,51 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 3,00 (bs, 1H), 2,33 (bs, 1H). Intermediário 39 O-(3-butil-3-etil-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)-N-tritlserinato de metila.
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[00228] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3-butil-3-etil-8- hidroxi-2-(4-metoxibenzil)-7-(metiltio)-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (Intermediário 14; 400 mg, 0,74 mmol) em tolueno (10 mL) a 0°C, trifenilfosfina (388 mg, 1,48 mmol) e tritilserinato de metila (Intermediário 38; 333 mg, 0,88 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada durante 5 minutos, depois DIAD (225 mg, 1,11 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C e a mistura de reação foi aquecida durante 3 horas a 120°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi concentrada sob vácuo. O resíduo obtido foi diluído com água (10 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 10 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 10-25% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 99% (660 mg, sólido esbranquiçado). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6):δ. 7,45 - 7,44 (m, 7H), 7,32 - 7,26 (m, 11H), 7,20 - 7,17 (m, 3H), 7,06 (s, 1H), 6,91 - 6,89 (m, 4H), 4,25 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,74 (d, J = 0,4 Hz, 2H), 3,19 (t, J = 0,4 Hz, 4H), 3,15 (s, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,24 - 1,23 (m, 3H), 1,21 - 1,13 (m, 2H), 0,99 (s, 3H), 0,66 (s, 6H). Intermediário 40 O-(3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)serinato de metila
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[00229] A uma solução agitada de O-(3-butil-3-etil-2-(4-metoxibenzil)- 7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8- il)-N-tritilserinato de metila (Intermediário 39; 300 mg, 0,44 mmol) em tolueno (5 mL) a 0°C, trifenilamina (166 mg, 0,67 mmol) e TFA (774 mg, 6,78 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi despejada em água gelada (10 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 10 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL). A parte orgânica foi então seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 25% MeOH/DCM; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 79% (140 mg, sólido verde). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,36-7,29 (m, 4H), 7,20-7,14 (m, 2H), 7,02-6,98 (m, 1H), 6,52 (s, 1H), 4,42 (s, 1H), 4,33 (s, 2H), 3,78-3,72 (m, 5H), 2,08 (s, 3H), 1,40-1,35 (m, 2H), 1,28-1,24 (m, 2H), 1,20-1,15 (m, 3H), 1,13- 1,08 (m, 3H), 1,04-0,97 (m, 6H). LCMS: (Método E) 522,3 (M++H), Rt. 2,51 min, 92,42% (Max). Exemplo 1 Ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
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[00230] A uma solução agitada de ácido 3-((3,3-dibutil-2-(4- metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dióxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico (Intermediário 2; 15 g, 23,41 mmol) em DCM seco (150 mL) a 0°C, TFA (45 mL) e trietilsilano (45 mL) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por LCMS), a mistura de reação foi diluída com água gelada (25 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 100 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 anidro e evaporada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por HPLC Prep (Método D) para produzir o composto do título. Rendimento: 47% (5,8 g, sólido esbranquiçado). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,44 (bs, 1H), 7,29 - 7,19 (m, 4H), 7,18 - 7,02 (m, 2H), 6,98 - 6,89 (m, 1H), 6,58 - 6,54 (m, 1H), 4,22 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,95 - 3,72 (m, 2H), 2,70 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,08 (s, 3H), 1,53 - 1,24 (m, 6H), 1,08 - 1,01 (m, 6H), 0,77 - 0,73 (m, 6H). LCMS: (Método D) 521,3 (M++H), Rt. 2,92 min, 99,24% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 6,22 min, 98,91% (Max). Exemplo 2 Ácido 3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
[00231] A uma solução agitada de ácido 3-((3-butil-3-etil-2-(4- metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico (Intermediário 15; 550 mg, 0,9 mmol) em DCM (6 mL), TFA (2 mL) e trietilsilano (2 mL) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente. Após o
118 / 135 término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 20-60% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 67% (300 mg, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,34-7,30 (m, 3H), 7,17 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,02 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 4,30 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,89 (s, 2H), 2,81 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,85-1,58 (m, 2H), 1,56-1,41 (m, 2H), 1,40-1,25 (m, 1H), 1,23-0,95 (m, 3H), 1,07-0,79 (m, 6H). LCMS: (Método A) 493,2 (M++H), Rt. 2,65 min, 94,21% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 5,62 min, 94,00% (Max). Exemplos 3 e 4 Ácido (S)-3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dióxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra- hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico e ácido (R)-3-((3-butil- 3-etil-7-(metiltio)-1,1-dióxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
O O O O HO O S NH HO O S NH O O S N S N
[00232] Os dois enantiômeros de ácido 3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)- 1,1-dióxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8- il)oxi)propanoico racêmico (300 mg, 0,61 mmol) foram separados por SFC quiral (método F). O material foi concentrado sob vácuo a 40°C. A primeira fração de eluição correspondeu ao enantiômero 1 e a segunda fração de eluição correspondeu ao enantiômero 2. A configuração absoluta dos dois enantiômeros não é conhecida.
[00233] Cada uma das duas frações foi então tratada individualmente para purificação adicional. O resíduo obtido foi acidificado com HCl diluído (1,5 N, pH ~4) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 15 mL). A
119 / 135 camada orgânica combinada foi lavada com água (15 mL) e salmoura (15 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo a 40°C para produzir um enantiômero purificado do composto do título.
[00234] Enantiômero 1: Rendimento: 25% (75 mg, sólido marrom claro). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,42 (s, 1H), 7,28-7,20 (m, 4H), 7,09-7,07 (m, 1H), 6,93 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H), 4,23 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,78 (bs, 2H), 2,77-2,69 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 1,73-1,59 (m, 1H), 1,56- 1,47 (m, 1H), 1,41-1,32 (m, 2H), 1,12-1,28 (m, 2H), 1,10-0,97 (m, 3H), 0,76 (t, J = 7,2 Hz, 6H). LCMS: (Método E) 493,2 (M++H), Rt. 2,54 min, 95,95% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 5,62 min, 95,16% (Max). SFC quiral: (Método H) Rt. 5,11 min, 98,47% (Max).
[00235] Enantiômero 2: Rendimento: 33% (100 mg, sólido marrom claro). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,39 (s, 1H), 7,27-7,19 (m, 4H), 7,06 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 6,92 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,22 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,78 (bs, 2H), 2,70 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,08 (s, 3H), 1,71-1,57 (m, 1H), 1,56-1,45 (m, 1H), 1,44-1,31 (m, 2H), 1,29-1,17 (m, 1H), 1,14-0,88 (m, 3H), 0,75-0,71 (m, 6H). LCMS: (Método E) 493,2 (M++H), Rt. 2,54 min, 93,60% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 5,62 min, 92,78% (Max). SFC quiral: (Método H) Rt. 5,91 min, 97,35% (Max). Exemplo 5 Ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico
[00236] A uma solução agitada de ácido 3-((3,3-dibutil-2-(4- metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-
120 / 135 benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico (Intermediário 17; 200 mg, 0,3 mmol) em DCM (10 mL), TFA (0,6 mL, 3 vol) e trietilsilano (0,6 mL, 3 vol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada (5 mL) e a camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 5 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada, concentrada sob vácuo e o material bruto resultante foi purificado por HPLC prep (método A) para produzir o composto do título. Rendimento: 11% (18 mg, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,29-7,21 (m, 4H), 7,19-7,01 (m, 2H), 6,93 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,35-4,17 (m, 1H), 4,03-3,91 (m, 2H), 3,51-3,35 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,56-0,97 (m, 12H), 0,75 (t, J = 6,4 Hz, 6H). LCMS: (Método A) 537,3 (M++H), Rt. 2,73 min, 94,57% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 5,79 min, 96,65% (Max). Exemplos 6 e 7 Ácido (S)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra- hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico e ácido (R)-3- ((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico
[00237] A uma solução agitada de enantiômero 1 de 3-((3,3-dibutil-7- (metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8- il)oxi)-2-hidroxipropanoato de metila (Intermediário 19; 90 mg, 0,16 mmol) em 1,4-dioxano (2 mL), HCl diluído (6 N, 3 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida durante 16 h a 75 °C. Após o término da reação
121 / 135 (monitorada por TLC), a mistura de reação foi diluída com água gelada (2 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 5 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (5 mL) e salmoura (5 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada, concentrada sob vácuo e o material bruto resultante foi triturado com éter de petróleo para produzir o enantiômero 1 do composto do título.
[00238] O enantiômero 2 do composto do título foi obtido seguindo o mesmo procedimento, partindo de 80 mg do enantiômero 2 do Intermediário
19. A configuração absoluta dos dois enantiômeros não é conhecida.
[00239] Enantiômero 1: Rendimento: 79% (70 mg, sólido branco). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,74 (bs, 1H), 7,26-7,22 (m, 4H), 7,13-7,11 (m, 2H), 6,95 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,24-4,15 (m, 2H), 3,78 (bs, 2H), 2,09 (s, 3H), 1,53-1,51 (m, 2H), 1,41-1,33 (m, 2H), 1,31-1,20 (m, 2H), 1,19-0,95 (m, 6H), 0,75 (t, J = 6,4 Hz, 6H). LCMS: (Método D) 537,2 (M++H), Rt. 2,86 min, 93,83% (Max). HPLC: (Método A) Rt. 5,43 min, 93,28% (Max). SFC quiral: (Método H) Rt. 3,34 min, 100% (Max).
[00240] Enantiômero 2: Rendimento: 64% (50 mg, sólido branco). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,30-7,22 (m, 4H), 7,13-7,11 (m, 2H), 6,97- 6,95 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,27-4,22 (m, 2H), 4,16-4,12 (m, 1H), 3,83 (bs, 2H), 2,09 (s, 3H), 1,53-1,51 (m, 2H), 1,41-1,33 (m, 2H), 1,31-1,20 (m, 2H), 1,19-0,95 (m, 6H), 0,75 (t, J = 6,8 Hz, 6H). LCMS: (Método D) 537,2 (M++H), Rt. 2,86 min, 96,22% (Max). HPLC: (Método A) Rt. 5,45 min, 95,09% (Max). SFC quiral: (Método H) Rt. 1,85 min, 100% (Max). Exemplo 8 Ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro- 1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico
122 / 135
[00241] A uma solução agitada de ácido 3-((3,3-dibutil-2-(4- metoxibenzil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico (Intermediário 20; 250 mg, 0,38 mmol) em DCM (10 mL), TFA (0,75 mL, 3 vol) e trietilsilano (0,75 mL, 3 vol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada (5 mL) e a camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 5 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada, concentrada sob vácuo e o material bruto resultante foi purificado por HPLC prep (Método A) para produzir o composto do título. Rendimento: 24% (50 mg, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,34-7,18 (m, 4H), 7,15-7,05 (m, 2H), 6,97-6,88 (m, 1H), 6,53 (s, 1H), 4,75-4,72 (m, 1H), 3,80 (s, 2H), 2,55-2,50 (m, 2H), 2,06 (s, 3H), 1,62-1,45 (m, 2H), 1,44-1,34 (m, 2H), 1,32-1,28 (m, 5H), 1,25-0,90 (m, 6H), 0,75-0,72 (m, 6H). LCMS: (Método A) 535,3 (M++H), Rt. 2,95 min, 98,47% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 6,29 min, 96,34% (Max). Exemplo 9 Ácido 3-((3,3-dibutil-7-cloro-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
123 / 135
[00242] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3,3-dibutil-7-cloro-8- hidroxi-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepina (Intermediário 30; 200 mg, 0,45 mmol) em THF (3 mL) a 0°C, terc-butóxido de potássio (56 mg, 0,5 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 15 minutos. Uma solução de β-propiolactona (32 mg, 0,45 mmol) em THF (1 mL) foi então adicionada gota a gota e a mistura de reação foi agitada durante 6 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com HCl diluído (1,5 N, 2 mL) e então diluída com água (2 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 5 mL) e a camada orgânica combinada foi lavada com água (5 mL) e salmoura (5 mL). A parte orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 3% MeOH/DCM; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 20% (45 mg, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,30 (bs, 1H), 7,62-7,43 (m, 1H), 7,40- 7,27 (m, 3H), 7,26-7,12 (m, 2H), 7,09-6,98 (m, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,25 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,87 (bs, 2H), 2,72 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,56-1,45 (m, 2H), 1,44- 1,31 (m, 2H), 1,29-1,19 (m, 2H), 1,15-0,91 (m, 6H), 0,89-0,72 (m, 6H). LCMS: (Método E) 509,1 (M++H), Rt. 2,78 min, 96,38% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 6,18 min, 96,38% (Max). Exemplo 10 Ácido 3-((3,3-dibutil-5-(4-hidroxifenil)-7-(metiltio)-1,1-dioxido-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
O O HO O S NH O S N HO
124 / 135
[00243] A uma solução de 3-((3,3-dibutil-5-(4-hidroxifenil)-7- (metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8- il)oxi)propanoato de isopropila (Intermediário 35; 120 mg, 0,20 mmol) em 1,4-dioxano (2 mL), HCl diluído (6 N, 4 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida durante 12 horas a 70°C. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi diluída com água gelada (5 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 5 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (5 mL) e salmoura (5 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 40-50% EtOAc/PE; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 54% (60 mg, sólido branco). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,37 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,09-7,06 (m, 3H), 6,76 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,26 (s, 1H), 4,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,87 (s, 2H), 2,67 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,00 (s, 3H), 1,59-1,35 (m, 4H), 1,33-1,07 (m, 4H), 1,06-0,81 (m, 4H), 0,74 (t, J = 6,8 Hz, 6H). LCMS: (Método E) 537,2 (M++H), Rt. 2,37 min, 98,62% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 5,22 min, 98,80% (Max). Exemplo 11 Ácido 3-((3-Butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra- hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
[00244] A uma solução agitada de 1,1-dióxido de 3-butil-7- (dimetilamino)-3-etil-8-hidroxi-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepina (Intermediário 37; 600 mg, 1,43 mmol) em THF (3 mL) a 0°C, terc-butóxido de potássio (177 mg, 1,58 mmol) foi adicionado e a
125 / 135 mistura de reação foi agitada durante 15 minutos. Uma solução de β- propiolactona (103 mg, 1,43 mmol) em THF (2 mL) foi então adicionada gota a gota e a mistura de reação foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com HCl diluído (1,5 N, 5 mL) e diluída com água (5 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 20 mL), e a camada orgânica combinada foi lavada com água (20 mL) e salmoura (20 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 3-5% MeOH/DCM; gel de sílica: 230-400 mesh) e o material obtido foi repurificado por HPLC preparativa (Método A) para produzir o composto do título. Rendimento: 6% (42 mg, sólido esbranquiçado). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,41 (s, 1H), 7,25 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,14-6,97 (m, 4H), 6,90 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 6,23 (s, 1H), 4,16 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,79 (s, 2H), 2,79-2,72 (m, 2H), 2,52 (s, 6H), 1,71-1,47 (m, 2H), 1,46- 1,33 (m, 2H), 1,32-1,17 (m, 2H), 1,11-0,97 (m, 2H), 0,76-0,67 (m, 6H). LCMS: (Método E) 490,2 (M++H), Rt. 2,41 min, 98,92% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 4,28 min, 99,05% (Max). Exemplos 12 e 13 Ácido (S)-3-((3-butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dióxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico e ácido (R)-3-((3- butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dióxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico
O O O O HO O S NH HO O S NH O O N N N N
[00245] Os dois enantiômeros de ácido 3-((3-butil-7-(dimetilamino)-3-
126 / 135 etil-1,1-dióxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8- il)oxi)propanoico racêmico (Exemplo 11; 65 mg, 0,13 mmol) foram separados por SFC quiral (método I). O material foi concentrado sob vácuo a 40°C. A primeira fração de eluição correspondeu ao enantiômero 1 e a segunda fração de eluição correspondeu ao enantiômero 2. A configuração absoluta dos dois enantiômeros não é conhecida.
[00246] Cada uma das duas frações foi então tratada individualmente para purificação adicional. O resíduo obtido foi acidificado com HCl diluído (1,5 N, pH ~4) e a camada aquosa extraída com EtOAc (3 x 5 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo a 40°C para produzir um enantiômero purificado do composto do título.
[00247] Enantiômero 1: Rendimento: 6% (5 mg, sólido esbranquiçado). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,40 (s, 1H), 7,25 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,15 (s, 1H), 7,08-7,02 (m, 3H), 6,91 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,23 (s, 1H), 4,16 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,80 (bs, 2H), 2,79-2,71 (m, 2H), 2,58 (s, 6H), 1,71-1,59 (m, 1H), 1,58-1,45 (m, 1H), 1,44-1,32 (m, 2H), 1,29-1,15 (m, 1H), 1,14-0,91 (m, 3H), 0,79-0,69 (m, 6H). LCMS: (Método E) 490,1 (M++H), Rt. 2,39 min, 98,52% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 4,32 min, 98,57% (Max). SFC quiral: (Método M) Rt. 3,09 min, 98,77% (Max).
[00248] Enantiômero 2: AS0649:Rendimento: 5% (7 mg, sólido esbranquiçado). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,40 (s, 1H), 7,25 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,15 (s, 1H), 7,08-7,03 (m, 3H), 6,91 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,24 (s, 1H), 4,16 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,80 (bs, 2H), 2,79-2,71 (m, 2H), 2,58 (s, 6H), 1,71-1,59 (m, 1H), 1,58-1,45 (m, 1H), 1,44-1,31 (m, 2H), 1,29-1,14 (m, 1H), 1,14-0,91 (m, 3H), 0,79-0,69 (m, 6H). LCMS: (Método E) 489,9 (M++H), Rt. 2,38 min, 99,66% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 4,28 min, 98,43% (Max). SFC quiral: (Método M) Rt. 4,25 min, 97,61% (Max). Exemplo 14
127 / 135 O-(3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5- benzotiadiazepin-8-il)serina
[00249] A uma solução agitada de O-(3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1- dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serinato (Intermediário 40; 140 mg, 0,27 mmol) em 1,4-dioxano (2 mL), hidróxido de lítio (23 mg, 0,53 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Após o término da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com HCl diluído (1,5 N, 2 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 5 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água (5 mL) e salmoura (5 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. A parte orgânica foi filtrada e concentrada sob vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna Isolera (eluente: 28% MeOH/DCM; gel de sílica: 230-400 mesh) para produzir o composto do título. Rendimento: 31% (42 mg, sólido esbranquiçado). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,85 (s, 2H), 7,29 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 7,11 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 6,97 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,37 - 4,34 (m, 1H), 4,20 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,89 (s, 1H), 3,63 (s, 1H), 3,10 - 3,05 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 1,63 - 1,63 (m, 8H), 1,05 - 0,72 (m, 6H). LCMS: (Método E) 508,3 (M++H), Rt. 2,39 min, 98,34% (Max). HPLC: (Método B) Rt. 4,58 min, 97,26s% (Max).
ENSAIOS BIOLÓGICOS Protocolo de ensaio IBAT (h/m)
[00250] 10.000 células (células superexpressando IBAT humano ou de camundongo) foram semeadas em placa de 96 poços (Corning CLS3809) em 200 µL de meio MEM-alfa (Gibco 12571-063) suplementado com 10% de
128 / 135 FBS (Gibco 10438026) contendo puromicina (Gibco A1113803) (10 µg//mL) e incubado a 37°C em 5% de CO2 por 48 horas. Após a incubação, o meio foi decantado dos poços e as células foram lavadas duas vezes com 300 µL de meio MEM-alfa basal (sem FBS). Após decantação do meio MEM-alfa basal de cada vez, as placas foram batidas contra toalha de papel para garantir a remoção máxima do meio residual.
[00251] Diluições de inibidor de teste (concentração de teste mais alta sendo 10 µM, diluição em série de 3 vezes, 10 pontos) preparadas em DMSO (Sigma D2650) foram adicionadas na mistura de incubação (mantendo 0,2% da concentração final de DMSO) contendo ácido 3H-taurocólico 0,25 µM (ARC ART-1368) e ácido taurocólico frio 5 µM (Sigma T4009). 50 µL da mistura de incubação contendo inibidores de teste foram então adicionados aos poços (em duplicado) e as placas foram incubadas durante 20 minutos em uma incubadora de CO2 a 37°C. Após a incubação, a reação foi interrompida mantendo as placas em mistura de água gelada por 2 a 3 minutos e, em seguida, a mistura de incubação foi aspirada completamente dos poços. Os poços foram lavados duas vezes com 250 µL de ácido taurocólico 1 mM não marcado e resfriado dissolvido em HEPES (Gibco 15630080) tamponado com HBSS (10 mM) (Gibco 14175079) (pH 7,4). As placas foram batidas contra uma toalha de papel após cada lavagem para garantir a remoção máxima do tampão de bloqueio.
[00252] 100 µL de MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) foram adicionados aos poços e mantidos durante a noite à temperatura ambiente antes da leitura das placas no contador de cintilação e luminescência de microplacas TopCount NXT™ da PerkinElmer sob o protocolo de teste 3H (definido para 120 segundos de tempo de leitura por poço). Protocolo de ensaio LBAT (h/m)
[00253] 20.000 células (células superexpressando LBAT humano ou de camundongo) foram semeadas em placa de 96 poços (Corning CLS3809) em
129 / 135 100 µL de meio MEM-alfa (Gibco 12571-063) suplementado com 10% de FBS (Gibco 10438026) contendo Geneticina (Gibco 10131-027) (1 mg/mL) e incubado a 37°C em 5% de CO2 por 24 horas. Após a incubação, o meio foi decantado dos poços e as células foram lavadas duas vezes com 300 µL de meio MEM-alfa basal (sem FBS). Após decantação do meio MEM-alfa basal de cada vez, as placas foram batidas contra toalha de papel para garantir a remoção máxima do meio residual.
[00254] Para LBAT humano, a mistura de incubação foi preparada adicionando diluições de inibidor de teste (diluição em série de 3 vezes em DMSO (Sigma D2650), 10 pontos) em MEM-alfa (sem FBS) contendo ácido 3H-taurocólico 0,3 µM (ARC ART-1368) e ácido taurocólico frio 7,5 µM (Sigma T4009) (mantendo 0,2% da concentração final de DMSO). Para LBAT de camundongo, a mistura de incubação foi preparada adicionando diluições de inibidor de teste (diluição em série de 3 vezes em DMSO, 10 pontos) em MEM-alfa (sem FBS) contendo ácido 3H-taurocólico 0,3 µM e ácido taurocólico frio 25 µM mantendo 0,2% da concentração final de DMSO).
[00255] 50 µL da mistura de incubação contendo inibidores de teste foram então adicionados aos poços (em duplicado) e as placas foram incubadas durante 20 minutos em uma incubadora de CO2 a 37°C. Após a incubação, a reação foi interrompida mantendo as placas em mistura de água gelada por 2 a 3 minutos e, em seguida, a mistura de incubação foi aspirada completamente dos poços. Os poços foram lavados duas vezes com 250 µL de ácido taurocólico 1 mM não marcado e resfriado dissolvido em HEPES (Gibco 15630080) tamponado com HBSS (10 mM) (Gibco 14175079) (pH 7,4). As placas foram batidas contra uma toalha de papel após cada lavagem para garantir a remoção máxima do tampão de bloqueio.
[00256] 100 µL de MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) foram adicionados aos poços e mantidos durante a noite à temperatura ambiente
130 / 135 antes da leitura das placas no contador de cintilação e luminescência de microplacas TopCount NXT™ da PerkinElmer sob o protocolo de teste 3H (definido para 120 segundos de tempo de leitura por poço, com orientação normal da placa). Ensaio de permeabilidade bidirecional (células Caco-2)
[00257] Células Caco-2 (Evotec) foram semeadas a uma densidade de
70.000 células/poço em placas de inserção de cultura de células Millicell® de 24 poços e mantidas em uma incubadora (37°C, 5% CO2, 95% UR) por 21 dias com troca de meio em dias alternados.
[00258] Soluções estoque (10 mM) dos compostos de teste, atenolol (marcador de baixa permeabilidade), propranolol (marcador de alta permeabilidade) e digoxina (substrato para a via de transporte da P-gp) foram preparadas em dimetilsulfóxido (DMSO). Uma solução estoque intermediária (1 mM) foi preparada diluindo 10 µL de solução estoque mestre 10 mM com 90 µL de DMSO puro. Uma solução estoque de trabalho (10 µM) foi preparada diluindo 50 µL de 1 mM com 4950 µL de tampão FaSSIF. Após a adição de compostos ao FaSSIF, as amostras foram submetidas a sonicação por 2 horas e centrifugadas a 4000 RPM por 30 minutos a 37°C. Os 4 mL do sobrenadante resultante foram usados diretamente no ensaio. A concentração final de DMSO nos experimentos de transporte foi de 1%.
[00259] No dia do ensaio, as monocamadas Caco-2 foram lavadas duas vezes com tampão de transporte (HBSS, pH 7,4) e pré-incubadas por 30 min (37°C, 5% CO2, 95% UR) em uma incubadora. A resistência elétrica das monocamadas foi medida com um sistema Millicell® - ERS. Monocamadas com valores de resistência elétrica transepitelial (TEER) maiores que 350 ohm.cm2 foram selecionadas para o ensaio.
[00260] O ensaio foi conduzido nas direções absortiva (A2B) e secretora (B2A). Os experimentos de transporte foram iniciadas pela adição de tampão de ensaio de transporte (tampão FaSSIF preparado em HBSS)
131 / 135 consistindo em compostos para o compartimento doador (câmara apical A-B; câmara basolateral B-A) em poços duplicados (n = 2). Tampão HBSS sem fármaco (pH 7,4) contendo 1% de albumina de soro bovino (BSA) foi introduzido nos compartimentos do receptor (A-B-basolateral; B-A-Apical). Os volumes dos compartimentos apical e basolateral foram de 0,4 e 0,8 mL, respectivamente. Após a adição da solução de dosagem, as placas foram incubadas em uma incubadora por 120 minutos a 37°C. Após 120 minutos, as amostras do doador e do receptor foram coletadas e a matriz combinada (1:1, 30 µL de amostra de estudo + 30 µL de tampão em branco) com o tampão oposto. Matriz de amostras de dosagem combinada (1:1, 30 µL de amostra de estudo + 30 µL de tampão em branco) com o tampão oposto. As amostras foram processadas pela adição de acetonitrila contendo padrão interno (60 µL de amostra de estudo + 200 µL de acetonitrila contendo padrão interno - Tolbutamida, 500 ng/mL). As amostras foram submetidas a vórtice e centrifugadas a 4000 rpm por 10 minutos. O sobrenadante obtido (100 µL) foi diluído com 100 µL de água e transferido para placas de 96 poços frescas. A concentração de compostos nas amostras foi analisada por cromatografia líquida-espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS) usando método bioanalítico de grau de descoberta, conforme aplicável.
[00261] A permeabilidade aparente média (Papp, x 10-6 cm/seg) dos compostos de teste, atenolol, propranolol e digoxina foram calculados da seguinte forma: onde dq/dt = taxa de transporte (taxa de transporte do composto no compartimento receptor), C0 = concentração inicial no compartimento doador, A = área de superfície da membrana filtrante efetiva. Protocolo de ensaio à base de HepaRG
[00262] Um frasco criopreservado de células diferenciadas HepaRG
132 / 135 (Biopredic International HPR116080) é descongelado em meio de descongelamento/plaqueamento/de uso geral HepaRG (Biopredic International ADD670C) suplementado com 200 mM Glutamax (Gibco 35050061) seguindo o protocolo provido pela Biopredic International. 70.000 células por poço são semeadas em placa de 96 poços (Corning CLS3809) em 100 µL de meio de descongelamento/plaqueamento/de uso geral HepaRG suplementado com Glutamax 200 mM e incubado a 37°C em 5% de CO2 por 24 horas. Após a incubação, o meio de semeadura é substituído por meio de manutenção/metabolismo HepaRG (Biopredic International ADD620C) e incubado por 6 dias, com reposição do meio de manutenção/metabolismo HepaRG a cada 48 horas. Após 7 dias de incubação após a semeadura, o meio de incubação é decantado dos poços e as células são lavadas duas vezes com 250 µL de meio basal E de William (Gibco 12551032). Após a decantação do meio basal E de William todas as vezes, as placas são batidas contra toalha de papel para garantir a remoção máxima de meio residual.
[00263] A mistura de incubação é preparada adicionando diluições de inibidor de teste (diluição em série de 3 vezes em DMSO (Sigma D2650)) em meio E de William (basal) contendo ácido 3H-taurocólico 0,3 µM (ARC ART-1368) e ácido taurocólico frio 7,5 µM (Sigma T4009) (mantendo 0,2% da concentração final de DMSO). 50 µl da mistura de incubação contendo inibidores de teste são então adicionados aos poços (em duplicado) e as placas são incubadas durante 30 minutos em uma incubadora de CO2 a 5% a 37°C. Após a incubação, a reação é interrompida mantendo as placas em mistura de água gelada por 2 a 3 minutos e a mistura de incubação é então aspirada completamente dos poços. Os poços são lavados duas vezes com 250 µL de ácido taurocólico 1 mM não marcado e resfriado dissolvido em HEPES (Gibco 15630080) tamponado com HBSS (10mM) (Gibco 14175079) (pH 7,4). As placas são batidas contra uma toalha de papel após cada lavagem para garantir a remoção máxima do tampão de bloqueio.
133 / 135
[00264] 100 µL de MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) são adicionados aos poços e mantidos durante a noite à temperatura ambiente antes da leitura das placas no contador de cintilação e luminescência de microplacas TopCount NXT™ da PerkinElmer sob o protocolo de teste 3H (definido para 120 segundos de tempo de leitura por poço, com orientação normal da placa). Preparação de diluições do composto de teste
[00265] Todos os compostos de teste foram providos na forma de pó à temperatura ambiente. Foram preparados estoques de DMSO 10 mM dos compostos de teste, divididos em alíquotas e armazenados a -20°C. A partir do estoque de DMSO 10 mM dos compostos, uma diluição em série de 3 vezes em DMSO foi preparada para obter um total de 10 diluições dos compostos de teste. 0,5 µL dessa diluição em DMSO foi adicionado a 250 µL de meio basal sem FBS contendo ácido 3H-taurocólico e ácido taurocólico frio para preparar a mistura de incubação. Estudos de biodisponibilidade
[00266] Foram utilizados camundongos machos (C57BL/6 ou CD1) ou ratos Wistar de 8 a 9 semanas de idade. Para cada composto de teste, foram usados dois grupos de 3 animais cada. Um grupo recebeu uma dose única intravenosa de 1 mg/kg (veículo DMSO 100%) pela veia da cauda e o outro grupo recebeu uma dose oral única de 10 mg/kg por meio de agulha de gavagem. O grupo que recebeu uma dose oral jejuou durante a noite. Amostras de sangue foram coletadas após 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 e 24 horas após a administração intravenosa, e após 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 e 24 horas após a administração oral. Amostras de sangue foram retiradas da veia safena. EDTA 0,2% foi usado como anticoagulante. As amostras foram analisadas por um método bioanalítico de grau de descoberta desenvolvido para a estimativa do composto de teste em plasma, usando um sistema LC- MS/MS.
134 / 135 Resultados
[00267] Os dados biológicos para os compostos dos exemplos são mostrados na Tabela 8 abaixo. Tabela 8 Permeabilidade (Caco-2) hLBAT IC50 hIBAT IC50 Biodisponibilidade Exemplo Papp A2B (nM) (nM) ER (%) (x 10-6 cm/seg) 34 (C57BL/6) 1 2908 7 9,2 0,9 59 (CD1) 98 (sal de Na+; rato) 2 736 4 3 283 23 45 (CD1) 4 3654 2 7,6 2,4 90 (rato) 5 1882 5 1,0 4,2 6 3658 14 7 2225 2 0,4 1,9 8 2633 12 9,5 0,5 9 1617 21 10,0 0,5 10 7205 2 2,1 3,1 11 1175 3 13,1 1,2 12 2222 3 14,2 1,1 13 2222 15 14 342 6 0,0 Modelo PD: Avaliação do composto de teste nos níveis totais de ácidos biliares em camundongos C57BL/6 machos.
[00268] Camundongos C57BL/6N Tac de 8 a 9 semanas de idade são usados para estudar o efeito dos moduladores de ácido biliar sobre os níveis de ácido biliar. Após o término do período de quarentena e aclimatação, os animais são randomizados com base no peso corporal em x grupos experimentais: (i) controle de veículo, e (ii) composto de teste y mg/kg po uma vez ao dia. Os animais são tratados com o composto de teste durante 7 dias. No dia 5 do estudo, os animais são alojados individualmente em gaiolas novas. No dia 7, as fezes são coletadas de cada gaiola, seguido pela coleta de sangue de cada animal por via retro-orbital. Os animais são sacrificados para coletar fígado e íleo terminal de cada animal para análise posterior. O peso corporal e o consumo de alimentos são medidos duas vezes por semana. Os perfis de lipídios séricos são analisados em amostras de soro do dia 7. Os ácidos biliares totais no soro são medidos nas amostras de soro do dia 7. A
135 / 135 excreção fecal da bile é medida na amostra fecal do dia 7. A expressão hepática de CYP7A1 e SHP é quantificada nas amostras de fígado do dia 7. Os triglicerídeos do fígado e o colesterol total são analisados nas amostras de fígado do dia 7. Modelo de ácido biliar na urina: Avaliação dos compostos de teste nos níveis de ácidos biliares na urina em camundongos C57BL/6 machos.
[00269] Camundongos C57BL/6N Tac de 8 a 9 semanas de idade são usados para estudar o efeito dos moduladores de ácido biliar sobre os níveis de ácido biliar. Após o término do período de quarentena e aclimatação, os animais são randomizados com base no peso corporal em x grupos experimentais: (i) controle de veículo, e (ii) composto de teste y mg/kg po uma vez ao dia. Os animais são tratados com o composto de teste durante 7 dias. No dia 6 do estudo, os animais são transferidos para uma gaiola metabólica. No dia 7, as fezes e a urina são coletadas de cada gaiola metabólica, seguido pela coleta de sangue de cada animal por via retro- orbital. Os animais são sacrificados para coletar o rim de cada animal para análise posterior. O peso corporal é medido duas vezes por semana. Os ácidos biliares totais no soro são medidos em amostras de soro do dia 7. A excreção fecal de ácido biliar é medida na amostra fecal do dia 7. A excreção urinária de ácidos biliares é medida na amostra do dia 7. A expressão renal de ASBT, OSTa, OSTAb e MRP2 é quantificada nas amostras do dia 7.

Claims (15)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (I) (I) em que R1 e R2 são, cada um, independentemente, C1-4 alquila; R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalcóxi, ciano, nitro, amino, N-(C1-4 alquil)amino, N,N-di(C1-4 alquil)amino e N-(aril-C1-4 alquil)amino; n é um número inteiro 1, 2 ou 3; R4 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, ciano, C1-4 alquila, C3-6 cicloalquila, C1-4 alcóxi, C3-6 cicloalquilóxi, C1-4 alquiltio, C3-6 cicloalquiltio, amino, N-(C1-4 alquil)amino e N,N-di(C1-4 alquil)amino; R5A, R5B, R5C e R5D são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, amino e C1-4 alquila; e R6 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e C1-4 alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é n-butila.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que R2 é n-butila.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2,
caracterizado pelo fato de que R2 é etila.
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, amino, ciano, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi e C1-4 haloalcóxi.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que R4 é selecionado do grupo que consiste em halogênio, hidróxi, ciano, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 alquiltio, amino, N- (C1-4 alquil)amino e N,N-di(C1-4 alquil)amino.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R5A e R5B são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidróxi, amino e metila.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R6 é hidrogênio ou metila.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em: ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidrobenzo-1,2,5-tiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido 3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido (S)-3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido (R)-3-((3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico; ácido (S)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico;
ácido (R)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)-2-hidroxipropanoico; ácido 3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5- tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico; ácido (S)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico; ácido (R)-3-((3,3-dibutil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)butanoico; ácido 3-((3,3-dibutil-7-cloro-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra- hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido 3-((3,3-dibutil-5-(4-hidroxifenil)-7-(metiltio)-1,1- dioxido-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido 3-((3-Butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido (S)-3-((3-butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dioxido-5- fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; ácido (R)-3-((3-butil-7-(dimetilamino)-3-etil-1,1-dioxido-5- fenil-2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)oxi)propanoico; O-(3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil-2,3,4,5-tetra- hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; (S)-O-((R)-3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; (R)-O-((R)-3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; (S)-O-((S)-3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; e (R)-O-((S)-3-butil-3-etil-7-(metiltio)-1,1-dioxido-5-fenil- 2,3,4,5-tetra-hidro-1,2,5-benzotiadiazepin-8-il)serina; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso como um medicamento.
12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento ou prevenção de uma doença cardiovascular ou um distúrbio do metabolismo dos ácidos graxos ou um distúrbio de utilização da glicose, tal como hipercolesterolemia; distúrbios do metabolismo dos ácidos graxos; diabetes mellitus tipo 1 e tipo 2; complicações da diabetes, incluindo catarata, doenças micro e macrovasculares, retinopatia, neuropatia, nefropatia e retardo na cicatrização de feridas, isquemia de tecido, pé diabético, arteriosclerose, infarto do miocárdio, síndrome coronariana aguda, angina pectoris instável, angina pectoris estável, acidente vascular cerebral, doença arterial obstrutiva periférica, cardiomiopatia, insuficiência cardíaca, perturbações do ritmo cardíaco e restenose vascular; doenças relacionadas ao diabetes, como resistência à insulina (diminuição da homeostase da glicose), hiperglicemia, hiperinsulinemia, níveis elevados de ácidos graxos ou glicerol no sangue, obesidade, dislipidemia, hiperlipidemia incluindo hipertrigliceridemia, síndrome metabólica (síndrome X), aterosclerose e hipertensão; e para aumentar os níveis de lipoproteína de alta densidade.
13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento ou prevenção de uma doença ou distúrbio gastrointestinal, como constipação (incluindo constipação crônica, constipação funcional, constipação idiopática crônica (CIC), constipação intermitente/esporádica, constipação secundária a diabetes mellitus, constipação secundária a acidente vascular cerebral, constipação secundária à doença renal crônica, constipação secundária à esclerose múltipla, constipação secundária à doença de Parkinson, constipação secundária à esclerose sistêmica, constipação induzida por fármacos, síndrome do intestino irritável com constipação (SII-C), síndrome do intestino irritável mista (SII-M), constipação funcional pediátrica e constipação induzida por opioides); doença de Crohn; má absorção primária de ácidos biliares; síndrome do intestino irritável (SII); doença inflamatória intestinal (DII); inflamação ileal; e doença de refluxo e suas complicações, como esôfago de Barrett, esofagite de refluxo biliar e gastrite de refluxo biliar.
14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento ou prevenção de uma doença ou distúrbio hepático, como um distúrbio metabólico hereditário do fígado; erros inatos de síntese de ácido biliar; anomalias congênitas do ducto biliar; atresia biliar; atresia biliar pós-Kasai; atresia biliar pós- transplante hepático; hepatite neonatal; colestase neonatal; formas hereditárias de colestase; xantomatose cerebrotendinosa; um defeito secundário da síntese de AB; síndrome de Zellweger; doença hepática associada à fibrose cística; deficiência de alfa1-antitripsina; síndrome de Alagilles (ALGS); síndrome de Byler; um defeito primário da síntese do ácido biliar (AB); colestase intra- hepática familiar progressiva (PFIC) incluindo PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 e PFIC não especificada, PFIC pós-desvio biliar e PFIC pós-transplante de fígado; colestase intra-hepática recorrente benigna (BRIC) incluindo BRIC1, BRIC2 e BRIC não especificada, BRIC pós-desvio biliar e BRIC pós- transplante hepático; hepatite autoimune; cirrose biliar primária (CBP); fibrose hepática; doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA); esteatose hepática não alcoólica (EHNA); hipertensão portal; colestase; colestase de síndrome de Down; colestase induzida por fármacos; colestase intra-hepática da gravidez (icterícia durante a gravidez); colestase intra- hepática; colestase extra-hepática; colestase associada à nutrição parenteral
(PNAC); colestase associada a fosfolipídios baixos; síndrome de colestase- linfedema 1 (LSC1); colangite esclerosante primária (CEP); colangite associada a imunoglobulina G4; colangite biliar primária; colelitíase (cálculos biliares); litíase biliar; coledocolitíase; pancreatite de cálculo biliar; doença de Caroli; malignidade dos ductos biliares; malignidade causando obstrução da árvore biliar; estenoses biliares; colangiopatia da AIDS; colangiopatia isquêmica; prurido devido a colestase ou icterícia; pancreatite; doença hepática autoimune crônica levando à colestase progressiva; esteatose hepática; hepatite alcoólica; fígado gorduroso agudo; fígado gorduroso da gravidez; hepatite induzida por fármacos; distúrbios de sobrecarga de ferro; defeito congênito na síntese de ácidos biliares tipo 1 (BAS tipo 1); lesão hepática induzida por fármacos (LHIF); fibrose hepática; fibrose hepática congênita; cirrose hepática; histiocitose de células de Langerhans (HCL); ictiose neonatal - colangite esclerosante (NISCH); protoporfiria eritropoiética (PPE); ductopenia idiopática na idade adulta (IAD); hepatite neonatal idiopática (HNI); escassez não sindrômica de ductos biliares interlobulares (NS PILBD); cirrose infantil dos índios norte-americanos (NAIC); sarcoidose hepática; amiloidose; enterocolite necrosante; toxicidades séricas causadas por ácidos biliares, incluindo distúrbios do ritmo cardíaco (por exemplo, fibrilação atrial) no cenário de perfil anormal de ácidos biliares séricos, cardiomiopatia associada à cirrose hepática (“colecardia”) e perda de músculo esquelético associada à doença hepática colestática; hepatite viral (incluindo hepatite A, hepatite B, hepatite C, hepatite D e hepatite E); carcinoma hepatocelular (hepatoma); colangiocarcinoma; cânceres gastrointestinais relacionados ao ácido biliar; e colestase causada por tumores e neoplasias do fígado, das vias biliares e do pâncreas; ou para uso na intensificação da terapia com corticosteroides em doença hepática.
15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento ou prevenção de síndromes de hiperabsorção (incluindo abetalipoproteinemia, hipobetalipoproteinemia familiar (FHBL), doença de retenção de quilomícrons (CRD) e sitosterolemia); hipervitaminose e osteopetrose; hipertensão; hiperfiltração glomerular; e prurido de insuficiência renal; ou para uso na proteção contra lesão renal associada à doença hepática ou metabólica.
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