RU2814570C2

RU2814570C2 - Соединения бензотиадиазепина и их применение в качестве модуляторов желчных кислот

Info

Publication number: RU2814570C2
Application number: RU2021125969A
Authority: RU
Inventors: Пер-Йоран ГИЛЛБЕРГ; Ян МАТТСОН; Ингемар СТАРКЕ; Сантош С. Кулкарни
Original assignee: Альбирео Аб
Priority date: 2019-02-06
Filing date: 2020-02-06
Publication date: 2024-03-01

Abstract

Изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый из R¹ и R² независимо представляет собой C_1-4 алкил; R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C_1-4 алкила, С_1-4 галогеналкила, С_1-4 алкокси, С_1-4 галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(С_1-4 алкил)амино, N,N-ди(С_1-4алкил)амино и N-(арил-С_1-4алкил)амино; n представляет собой целое число 1, 2 или 3; R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C_1-4алкила, С_3-6 циклоалкила, С_1-4 алкокси, С_3-6 циклоалкилокси, С_1-4 алкилтио, С_3-6циклоалкилтио, амино, N-(С_1-4алкил) амино и N,N-ди(С_1-4алкил)амино; каждый из R^5A, R^5B, R^5C и R^5D независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и C_1-4 алкила; и R⁶ выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-4 алкила. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, обладающей активностью ингибирования апикального натрийзависимого транспортера желчных кислот (ASBT) и/или транспорта желчных кислот в печени (LBAT), на основе соединения формулы (I). Технический результат – получены новые соединения и фармацевтическая композиция на их основе, которые могут найти применение в медицине при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, нарушений метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 8 табл., 14 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к производным 1,2,5-бензотиадиазепина формулы (I). Эти соединения представляют собой модуляторы желчных кислот, обладающие активностью ингибирования апикального натрийзависимого транспортера желчных кислот (ASBT) и/или транспорта желчных кислот в печени (LBAT). Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и к применению этих соединений при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, нарушений метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени.

Предшествующий уровень техники

Желчные кислоты - это физиологические детергенты, которые играют важную роль в кишечной абсорбции и транспорте липидов, питательных веществ и витаминов. Они также являются сигнальными молекулами, которые активируют ядерные рецепторы и сигнальные пути клеток, которые регулируют липидный, глюкозный и энергетический метаболизм. Желчные кислоты - это стероидные кислоты, которые синтезируются из холестерина в печени и хранятся в желчном пузыре в виде смешанных мицелл. Желчные кислоты - это стероидные кислоты, которые синтезируются из холестерина в печени и хранятся в желчном пузыре в виде смешанных мицелл. Когда желчные кислоты достигают подвздошной кишки, они реадсорбируются из кишечника и секретируются в кровь портальной вены для возвращения в печень через портальное венозное кровообращение. Таким образом, более 90% желчных кислот перерабатываются и возвращаются в печень. Эти желчные кислоты затем транспортируются через синусоидальную мембрану гепатоцитов и повторно секретируются через канальцевую мембрану в желчь. При первом прохождении 75-90% желчных кислот поглощаются гепатоцитами, завершая один цикл энтерогепатической циркуляции. Фракция желчных кислот, которая не выводится печенью, попадает в системный кровоток, где свободные желчные кислоты фильтруются почечными клубочками, эффективно регенерируются в проксимальных канальцах и выводятся обратно в большой круг кровообращения. Интересно, что большая часть желчных кислот, секретируемых через канальцевую мембрану в желчь, поступает из рециркулирующего пула, и менее 10% приходится на новый синтез в печени de novo. Небольшая часть желчных кислот, которая не реабсорбируется в подвздошной кишке, достигает толстой кишки. Внутри просвета кишечника первичные желчные кислоты превращаются во вторичные желчные кислоты под действием кишечных бактерий, главным образом, в результате реакций одинарного или двойного дегидроксилирования стероидного ядра. Желчные кислоты, которые не всасываются в кишечнике, затем выводятся с калом.

В целом, эффективная транспортная система помогает поддерживать постоянный пул желчных кислот, обеспечивая достаточно высокий уровень конъюгированных желчных кислот в кишечнике, чтобы способствовать всасыванию липидов, а также снизить бактериальную нагрузку на тонкий кишечник. Система также минимизирует потерю фекальной и мочевой желчных кислот и защищает кишечные и гепатобилиарные компартменты, устраняя потенциально цитотоксические детергенты (по обзору Kosters and Karpen (Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071); по Chiang (J. Lipid Res. 2009, vol. 50, p. 1955-1966); и по Dawson (Handb. Exp. Pharmacol. 2011, vol. 201, p. 169-203)).

Было обнаружено, что регулирование размера пула желчных кислот играет ключевую роль в гомеостазе холестерина за счет преобразования холестерина в желчную кислоту в печени, что является основным путем выведения холестерина из организма. Печень играет важную роль в удалении из организма эндогенных и ксенобиотических соединений. Нормальная гепатобилиарная секреция и энтерогепатическая циркуляция необходимы для выведения из организма эндогенных соединений, таких как холестерин, билирубин и их метаболиты, тем самым поддерживая гомеостаз липидов и желчных кислот. (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071).

Реабсорбция желчных кислот в подвздошной кишке может подавляться соединениями-ингибиторами апикального натрийзависимого переносчика желчных кислот (ASBT). Сообщалось, что ингибирование реабсорбции желчных кислот полезно при лечении нескольких заболеваний, включая дислипидемию, диабет, ожирение, запоры, холестатические заболевания печени, неалкогольный стеатогепатит и другие заболевания печени. Ряд соединений-ингибиторов ASBT был раскрыт за последние десятилетия, см., например, WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449, WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, DE 19825804, EP 864582, EP 489423, EP 549967, EP 573848, EP 624593, EP 624594, EP 624595, EP 624596, EP 0864582, EP 1173205 и EP 1535913.

Несмотря на количество соединений-ингибиторов ASBT, о которых сообщалось ранее, существует потребность в дополнительных соединениях, модулирующих желчные кислоты, которые имеют оптимизированный профиль в отношении эффективности, селективности и биодоступности.

Подробное описание изобретения

Было обнаружено, что некоторые производные 1,2,5-бензотиадиазепина являются мощными ингибиторами апикального натрийзависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот печени (LBAT) и могут быть полезны для лечения заболеваний, при которых желательно ингибирование циркуляции желчных кислот.

В первом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I).

которое отличается тем, что

каждый из R¹ и R² независимо представляет собой C_1-4 алкил;

R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C_1-4 алкила, C_1-4 галогеналкила, C_1-4 алкокси, C_1-4 галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(C_1-4 алкил) амино, N,N-ди(C_1-4алкил) амино и N-(арил-C_1-4алкил) амино;

n представляет собой целое число 1, 2 или 3;

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C_1-4 алкила, C_3-6 циклоалкила, C_1-4 алкокси, C_3-6 циклоалкилокси, C_1-4 алкилтио, C_3-6 циклоалкилтио, амино, N-(C_1-4 алкил) амино и N,N-ди(C_1-4 алкил) амино;

каждый из R^5A, R^5B, R^5C и R^5D независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и C_1-4 алкила; и

R⁶ выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-4 алкила;

или к его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых воплощениях R¹ представляет собой n-бутил.

В некоторых воплощениях R² представляет собой C_2-4 алкил. В предпочтительном воплощении R² представляет собой метил. В другом предпочтительном воплощении R² представляет собой этил. В другом предпочтительном воплощении R² представляет собой n-пропил. В еще одном предпочтительном варианте R² представляет собой n-бутил.

В некоторых воплощениях R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино, циано, C_1-4 галогеналкила, C_1-4 алкокси и C_1-4 галогеналкокси. В другом воплощении R³ представляет собой водород. В предпочтительном воплощении R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, трифторметила, метокси и трифторметокси.

В предпочтительном воплощении n равно 1, т.е. фенильное кольцо замещено только одним заместителем R³. В другом предпочтительном воплощении R³ находится в параположении.

В некоторых воплощениях R⁴ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, циано, C_1-4 алкила, C_1-4 алкокси, C_1-4 алкилтио, амино, N-(C_1-4 алкил) амино и N, N-ди(C_1-4алкил)амино. В предпочтительном воплощении R⁴ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, метила, метокси, этокси, метилтио, этилтио, амино, метиламино и диметиламино. В другом воплощении R⁴ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, метокси, этокси, метилтио, этилтио и диметиламино. В другом предпочтительном воплощении R⁴ выбран из группы, состоящей из хлора, брома, метилтио и диметиламино.

В некоторых воплощениях R^5A и R^5B каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и метила. В некоторых воплощениях каждый из R^5A и R^5B независимо представляет собой водород или гидрокси. В другом воплощении R^5A представляет собой водород или гидрокси, и R^5B представляет собой водород. В некоторых воплощениях каждый из R^5C и R^5D независимо представляет собой водород или метил. В другом воплощении R^5C представляет собой водород или метил, а R^5D представляет собой водород.

В одном из воплощений R⁶ представляет собой водород. В другом воплощении R⁶ представляет собой метил.

В предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-a)

где

R² представляет собой C_1-4 алкил;

R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C_1-4 галогеналкила, C_1-4 алкокси и C_1-4 галогеналкокси;

n представляет собой целое число 1 или 2;

R⁴ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, циано, C_1-4 алкила, C_1-4 алкокси, C_1-4 алкилтио, амино, N-(C_1-4 алкил) амино и N,N-ди(C_1-4 алкил) амино;

R^5A выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и C_1-4 алкила; и

R^5C представляет собой водород или C_1-4алкил;

или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-b).

где

R² представляет собой метил, этил, н-пропил или н-бутил;

R³ выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, трифторметила, метокси и трифторметокси;

R⁴ выбран из группы, состоящей из выбранной из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, метокси, этокси, метилтио, этилтио и диметиламино; и

R^5A выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и метила;

или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-b), как определено выше, но где

R³ выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси и метокси; и

R⁴ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, метокси, этокси, метилтио, этилтио и диметиламино.

Предпочтительными соединениями по изобретению являются соединения формулы (I-b), как определено выше, где от R² до R^5A имеют значения, указанные в таблице 1 ниже, или их фармацевтически приемлемые соли:

Таблица 1

R²	R³	R⁴	R^5A
CH₃	H	SCH₃	H
CH₃	F	SCH₃	H
CH₃	OCH₃	SCH₃	H
CH₃	OH	SCH₃	H
CH₃	Cl	SCH₃	H
CH₃	H	SCH₃	OH
CH₃	F	SCH₃	OH
CH₃	OCH₃	SCH₃	OH
CH₃	OH	SCH₃	OH
CH₃	Cl	SCH₃	OH
CH₃	H	N(CH₃)₂	H
CH₃	F	N(CH₃)₂	H
CH₃	OCH₃	N(CH₃)₂	H
CH₃	OH	N(CH₃)₂	H
CH₃	Cl	N(CH₃)₂	H
CH₃	H	N(CH₃)₂	OH
CH₃	F	N(CH₃)₂	OH
CH₃	OCH₃	N(CH₃)₂	OH
CH₃	OH	N(CH₃)₂	OH
CH₃	Cl	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₃	H	SCH₃	H
CH₂CH₃	F	SCH₃	H
CH₂CH₃	OCH₃	SCH₃	H
CH₂CH₃	OH	SCH₃	H
CH₂CH₃	Cl	SCH₃	H
CH₂CH₃	H	SCH₃	OH
CH₂CH₃	F	SCH₃	OH
CH₂CH₃	OCH₃	SCH₃	OH
CH₂CH₃	OH	SCH₃	OH
CH₂CH₃	Cl	SCH₃	OH
CH₂CH₃	H	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₃	F	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₃	OCH₃	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₃	OH	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₃	Cl	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₃	H	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₃	F	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₃	OCH₃	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₃	OH	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₃	Cl	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	H	SCH₃	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	F	SCH₃	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	OCH₃	SCH₃	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	OH	SCH₃	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	Cl	SCH₃	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	H	SCH₃	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	F	SCH₃	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	OCH₃	SCH₃	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	OH	SCH₃	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	Cl	SCH₃	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	H	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	F	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	OCH₃	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	OH	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	Cl	N(CH₃)₂	H
CH₂CH₂CH₂CH₃	H	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	F	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	OCH₃	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	OH	N(CH₃)₂	OH
CH₂CH₂CH₂CH₃	Cl	N(CH₃)₂	OH

В конкретном воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из:

3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидробензо-1,2,5-тиадиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;

3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;

(S)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин- 8-ил)окси) пропановой кислоты;

(R)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин- 8-ил)окси) пропановой кислоты;

3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;

(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;

(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;

3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты;

(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты;

(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты;

3-((3,3-дибутил-7-хлор-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;

3-((3,3-дибутил-5-(4-гидроксифенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;

3-((3-Бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;

(S)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин- 8-ил)окси) пропановой кислоты;

(R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин- 8-ил)окси) пропановой кислоты;

О-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)серина;

(S)-O-((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил) серина;

(R)-O-((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил) серина;

(S)-O-((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)серина; и

(R)-O-((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)серина;

или их фармацевтически приемлемых солей.

Используемый в данном документе термин «галоген» относится к фтору, хлору, брому и йоду.

Используемый в данном документе термин «C_1-6 алкил» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, а термин «C_1-4 алкил» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, имеющей от 1 до 4 атомов углерода. атомы углерода. Примеры C_1-4 алкила включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил.

Используемый в данном документе термин «C_1-4галогеналкил» относится к C_1-4 алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, как в данном документе определено, в которой один или несколько атомов водорода заменены галогеном. Примеры C_1-4 галогеналкила включают хлорметил, фторэтил и трифторметил.

В контексте настоящего описания термины «C_1-4 алкокси» и «C_1-4 алкилтио» относятся к линейной или разветвленной C_1-4 алкильной группе, присоединенной к остатку молекулы через атом кислорода или серы, соответственно.

Используемый в данном документе термин «C_3-6 циклоалкил» относится к моноциклическому насыщенному углеводородному кольцу, имеющему от 3 до 6 атомов углерода. Примеры C_3-6циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин «арил» обозначает ароматическое моноциклическое кольцо, состоящее из 6 атомов углерода, или ароматическую бициклическую кольцевую систему, состоящую из 10 атомов углерода. Примеры арила включают фенил, нафтил и азуленил.

Термин «амино» относится к группе -NH₂. Используемые в данном документе термины «N-(C_1-4алкил) амино» и «N,N-ди(C_1-4алкил) амино» относятся к аминогруппе, в которой один или оба атома водорода соответственно являются заменен на неразветвленную или разветвленную C_1-4 алкильную группу. Примеры N-(C_1-4алкил)амино включают метиламино, этиламино и трет-бутиламино, а примеры N,N-ди(C_1-4алкил) амино включают диметиламино и диэтиламино.

Используемый в данном документе термин «N-(арил-C_1-4алкил) амино» относится к аминогруппе, в которой атом водорода заменен арил-C_1-4алкильной группой. Примеры N-(арил-C_1-4алкил) амино включают бензиламино и фенилэтиламино.

Используемый в данном документе термин «фармацевтически приемлемый» относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые подходят для фармацевтического применения человеком и которые обычно безопасны, нетоксичны и не являются нежелательными с биологической или иной точки зрения.

Используемый в данном документе термин «около» относится к значению или параметру в данном документе, который включает (и описывает) воплощения, которые направлены на это значение или параметр как таковые. Например, описание, относящееся к «около 20», включает описание «20». Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон. Вообще говоря, термин «около» относится к указанному значению переменной и ко всем значениям переменной, которые находятся в пределах экспериментальной ошибки указанного значения (например, в пределах 95% доверительного интервала для среднего) или в пределах 10 процентов от указанного значения, в зависимости от того, какое из них больше.

1,2,5-бензотиадиазепиновые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли являются ингибиторами апикального натрийзависимого переносчика желчных кислот (ингибиторы ASBT), переносчика желчных кислот печени (ингибиторы LBAT) или как апикального натрийзависимого переносчика желчных кислот, так и переносчика желчных кислот печени (двойные ингибиторы ASBT/LBAT). Следовательно, они полезны для обработки или профилактики состояний, нарушений и заболеваний, при которых желательно ингибирование циркуляции желчных кислот, таких как сердечно-сосудистые заболевания, нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени.

Сердечно-сосудистые заболевания и нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы включают, без ограничения указанным, гиперхолестеринемию; нарушения обмена жирных кислот; сахарный диабет 1 и 2 типа; осложнения диабета, в том числе катаракта, микро- и макрососудистые заболевания, ретинопатию, невропатию, нефропатию и замедленное заживление ран, ишемию тканей, диабетическую стопу, артериосклероз, инфаркт миокарда, острый коронарный синдром, нестабильную стенокардию, стабильную стенокардию, инсульт, окклюзионную болезнь периферических артерий, кардиомиопатию, сердечную недостаточность, нарушения сердечного ритма и рестеноз сосудов; заболевания, связанные с диабетом, такие как инсулинорезистентность (нарушение гомеостаза глюкозы), гипергликемию, гиперинсулинемию, повышенные уровни жирных кислот или глицерина в крови, ожирение, дислипидемию, гиперлипидемию, включая гипертриглицеридемию, метаболический синдром (синдром X), атеросклероз и гипертензию; и для повышения уровня липопротеинов высокой плотности.

Заболевания и расстройства желудочно-кишечного тракта включают запор (включая хронический запор, функциональный запор, хронический идиопатический запор (CIC), периодический/спорадический запор, запор на фоне сахарного диабета, запор на фоне инсульта, запор на фоне хронического заболевания почек, запор на фоне рассеянного склероза, запор на фоне болезни Паркинсона, запор на фоне системного склероза, запор, вызванный лекарствами, синдром раздраженного кишечника с запором (IBS-C), синдром раздраженного кишечника смешанный (IBS-M), детский функциональный запор и запор, вызванный опиоидами); Болезнь Крона; первичная мальабсорбция желчных кислот; синдром раздраженного кишечника (IBS); воспалительное заболевание кишечника (IBD); воспаление подвздошной кишки; и рефлюксная болезнь и ее осложнения, такие как пищевод Барретта, желчный рефлюксный эзофагит и желчный рефлюксный гастрит.

Заболевание печени, как определено в данном документе, представляет собой любое заболевание печени и связанных с ней органов, таких как поджелудочная железа, воротная вена, паренхима печени, внутрипеченочные желчные протоки, внепеченочные желчные протоки и желчный пузырь. В некоторых случаях заболевание печени - это заболевание печени, зависимое от желчных кислот. Заболевания и нарушения печени включают, без ограничения указанным: наследственное нарушение метаболизма печени; врожденные нарушения синтеза желчной кислоты; врожденные аномалии желчных протоков; атрезия желчевыводящих путей; пост-касайская билиарная атрезия; посттрансплантационная атрезия желчных путей; неонатальный гепатит; неонатальный холестаз; наследственные формы холестаза; церебротехнический ксантоматоз; вторичный дефект синтеза ЖК; синдром Зеллвегера; заболевание печени, связанное с муковисцидозом; дефицит альфа1-антитрипсина; синдром Алажиля (ALGS); синдром Байлера; первичный дефект синтеза желчной кислоты (ЖК); прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), включая PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, пост-желчный отводный PFIC и посттрансплантационный PFIC; доброкачественный рецидивирующий внутрипеченочный холестаз (BRIC), включая BRIC1, BRIC2 и неспецифический BRIC, BRIC после трансплантации желчных путей и BRIC после трансплантации печени; аутоиммунный гепатит; первичный билиарный цирроз (PBC); фиброз печени; неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD); неалкогольный стеатогепатит (NASH); портальная гипертензия; холестаз; холестаз синдрома Дауна; лекарственный холестаз; внутрипеченочный холестаз беременности (желтуха при беременности); внутрипеченочный холестаз; внепеченочный холестаз; холестаз, связанный с парентеральным питанием (PNAC); холестаз, связанный с низким содержанием фосфолипидов; синдром лимфедемного холестаза 1 (LSC1); первичный склерозирующий холангит (PSC); холангит, связанный с иммуноглобулином G4; первичный билиарный холангит; желчекаменная болезнь (желчные камни); желчный литиаз; холедохолитиаз; желчнокаменный панкреатит; болезнь Кароли; злокачественность желчных протоков; злокачественная опухоль, вызывающая непроходимость желчного дерева; стриктуры желчных путей; холангиопатия при СПИДе; ишемическая холангиопатия; кожный зуд из-за холестаза или желтухи; панкреатит; хроническое аутоиммунное заболевание печени, ведущее к прогрессирующему холестазу; стеатоз печени; алкогольный гепатит; острый жировой гепатоз; ожирение печени при беременности; лекарственный гепатит; нарушения перегрузки железом; врожденный дефект синтеза желчных кислот 1-го типа (BAS 1-го типа); лекарственное поражение печени (DILI); фиброз печени; врожденный фиброз печени; цирроз печени; гистиоцитоз из клеток Лангерганса (LCH); неонатальный ихтиоз, склерозирующий холангит (NISCH); эритропоэтическая протопорфирия (EPP); идиопатическая дуктопения в зрелом возрасте (IAD); идиопатический неонатальный гепатит (INH); несиндромальная недостаточность междольковых желчных протоков (NS PILBD); цирроз у детей североамериканских индейцев (NAIC); саркоидоз печени; амилоидоз; некротический энтероколит; токсичность сывороточной желчной кислоты, включая нарушения сердечного ритма (например, фибрилляцию предсердий) при аномальном профиле желчных кислот сыворотки, кардиомиопатию, связанную с циррозом печени («холекардию»), и истощение скелетных мышц, связанное с холестатической болезнью печени; вирусный гепатит (включая гепатит A, гепатит B, гепатит C, гепатит D и гепатит E); гепатоцеллюлярная карцинома (гепатома); холангиокарцинома; рак желудочно-кишечного тракта, связанный с желчными кислотами; холестаз, вызванный опухолями и новообразованиями печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы. Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли также полезны для усиления терапии кортикостероидами при заболевании печени.

Другие заболевания, которые можно лечить или предотвращать с помощью соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, включают синдромы гиперабсорбции (включая абеталипопротеинемию, семейную гипобеталипопротеинемию (FHBL), болезнь задержки хиломикронов (CRD) и ситостеролемию); гипервитаминоз и остеопетроз; гипертонию; клубочковую гиперфильтрацию; кожный зуд при почечной недостаточности; соединения также полезны для защиты от повреждения почек, связанного с заболеванием печени или метаболическим заболеванием.

Транспорт желчных кислот в организме человека контролируется действием членов семейства белков-переносчиков растворенных веществ SLC10, в частности, полипептида, переносящего Na+-таурохолат (NTCP, также называемого транспортером желчных кислот печени (LBAT); символ гена SLC10A1), который экспрессируется в синусоидальной мембране гепатоцитов, и апикальным натрийзависимым переносчиком желчных кислот (ASBT, также называемым переносчиком желчных кислот подвздошной кишки (IBAT), ISBT, ABAT или NTCP2; генный символ SLC10A2), который экспрессируется в апикальной мембране энтероцитов подвздошной кишки, клетки проксимальных почечных канальцев, билиарный эпителий, большие холангиоциты и эпителиальные клетки желчного пузыря. В печени желчные кислоты эффективно извлекаются из портальной крови транспортером желчных кислот печени (LBAT) и повторно секретируются через канальцевую мембрану с помощью насоса экспорта солей желчных кислот (BSEP; символ гена ABCB11). Реабсорбция желчных кислот в подвздошной кишке осуществляется апикальным натрийзависимым транспортером желчных кислот (ASBT), где его обычно называют транспортером желчных кислот в подвздошной кишке (IBAT). Как LBAT, так и ASBT действуют как электрогенные котранспортеры растворенного натрия, которые перемещают два или более иона Na + на молекулу растворенного вещества.

Ксенобиотики и эндобиотики, включая желчные кислоты, поглощаются печенью из портальной крови и секретируются в желчь различными транспортными белками с индивидуальной специфичностью к субстрату. Конъюгированные с глицином и таурином желчные кислоты существуют в анионной форме и не могут проникать через мембраны путем диффузии и, таким образом, полностью зависят от мембранных транспортных белков для входа или выхода из гепатоцита (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071). ASBT и LBAT предпочитают сопряженные с глицином и таурином соли желчных кислот по сравнению с их неконъюгированными аналогами и демонстрируют более высокое сродство к дигидроксильным солям желчных кислот, чем к солям тригидроксижелчных кислот. Субстратов, не являющихся желчными кислотами, для ASBT пока не обнаружено, однако также было обнаружено, что LBAT переносит различные стероидные сульфаты, гормоны и ксенобиотики.

LBAT не так подробно охарактеризован, как ASBT, с точки зрения требований к ингибированию лекарственными средствами. Dong et al. идентифицировали одобренные FDA лекарственные средства, которые ингибируют LBAT человека, и сравнили требования к ингибированию LBAT и ASBT. Был проведен ряд исследований ингибирования LBAT с использованием лекарственных средств, одобренных FDA, в сочетании с разработкой итеративной вычислительной модели. Скрининговые исследования позволили идентифицировать 27 лекарственных средств в качестве новых ингибиторов LBAT, включая ирбесартан (Ki = 11,9 мкМ) и эзетимиб (Ki = 25,0 мкМ). Общая особенность фармакофора указывает на то, что два гидрофоба и один акцептор водородной связи важны для ингибирования LBAT. Из 72 лекарственных средств, проверенных in vitro, в общей сложности 31 лекарственное средство ингибировало LBAT, а 51 лекарственное средство (то есть более половины) ингибировало ASBT. Следовательно, несмотря на перекрытие ингибиторов, ASBT неожиданно оказался более терпимым к ингибированию лекарственного средства, чем LBAT, и это может быть связано с тем, что LBAT обладает меньшим количеством фармакофорных свойств (Dong et al., Mol. Pharm. 2013, vol. 10, p. 1008-1019).

Vaz et al. описывают идентификацию дефицита LBAT как новой врожденной ошибки метаболизма с относительно мягким клиническим фенотипом. Идентификация дефицита LBAT подтверждает, что этот транспортер является основной системой импорта конъюгированных солей желчных кислот в печень, но также указывает на то, что вспомогательные транспортеры способны поддерживать энтерогепатический цикл в его отсутствие (Vaz et al., Hepatology 2015, vol. 61, p. 260-267). Эти данные подтверждают гипотезу о том, что ингибирование LBAT является безопасным механизмом действия, поскольку гепатоциты все еще имеют возможность поглощать необходимое количество желчных кислот.

Liu et al. описывают идентификацию нового типа гиперхоланемии, которая связана с гомозиготностью по мутации p.Ser267Phe в SLC10A1 (LBAT). Частота аллелей этой мутации в гене SLC10A1 варьирует в разных популяциях, при этом наибольшая частота встречается в Южном Китае (8% и 12% у китайских хань и дай, соответственно) и во Вьетнаме (11%). Считалось, что эта «скрытая» гиперхоланемия затронула 0,64% китайской популяции южных хань, 1,44% популяции дай и 1,21% населения Вьетнама. Также наблюдалось повышение уровней конъюгированных и неконъюгированных ЖК в сыворотке крови у гомозиготных особей. Liu et al. предполагают, что это открытие, скорее всего, связано со снижением транспорта BA из портального кровотока в гепатоциты. Это подтверждает гипотезу о том, что физиологическая функция энтерогепатической циркуляции заключается не только в рециркуляции желчных кислот, но и в удалении желчных кислот из кровотока для достижения гомеостаза (Karpen and Dawson, Hepatology 2015, vol. 61, p. 24-27). С другой стороны, печень может синтезировать повышенные уровни желчных кислот для компенсации пониженной энтерогепатической рециркуляции у гомозиготных носителей. Поскольку LBAT также транспортирует неконъюгированные желчные кислоты, увеличение количества неконъюгированных желчных кислот в этом исследовании не было неожиданным (Liu et al., Scientific Reports 2017, 7: 9214, p. 1-7).

Было обнаружено, что LBAT отрицательно регулируется при нескольких формах холестатического поражения печени и холестаза, тогда как ASBT подавляется при различных желудочно-кишечных расстройствах, таких как болезнь Крона, первичная мальабсорбция желчных кислот, воспалительные заболевания кишечника и воспаление подвздошной кишки, но положительно регулируется при холестазе. LBAT также функционирует как клеточный рецептор для проникновения вируса гепатита B (HBV) и вируса гепатита D (HDV), которые, в свою очередь, являются основной причиной заболеваний печени и гепатоцеллюлярной карциномы.

Ингибирование ASBT было исследовано на предмет снижения уровня холестерина в плазме и улучшения инсулинорезистентности, а также для уменьшения нагрузки желчных кислот в печени при холестатической болезни печени. Кроме того, было обнаружено, что ингибирование ASBT восстанавливает уровни инсулина и нормогликемию, что делает ингибирование ASBT перспективным лечением сахарного диабета 2 типа. Ингибиторы ASBT также используются для лечения функциональных запоров.

Поскольку ASBT преимущественно экспрессируется в подвздошной кишке (где его часто называют IBAT), ингибиторы ASBT не обязательно должны быть доступны системно. С другой стороны, ASBT также экспрессируется в клетках проксимальных канальцев почек. Следовательно, системные ингибиторы ASBT могут также ингибировать обратный захват желчных кислот почками. Считается, что это приведет к повышению уровня желчных кислот в моче и к усиленному удалению желчных кислот из организма с мочой. Поэтому ожидается, что системно доступные ингибиторы ASBT, которые оказывают свое действие не только на подвздошную кишку, но и на почки, приведут к большему снижению уровней желчных кислот, чем несистемно доступные ингибиторы ASBT, которые оказывают свое действие только на подвздошную кишку.

Соединения, обладающие высокой активностью ингибирования ASBT, особенно подходят для лечения заболеваний печени, вызывающих холестаз, таких как прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), синдром Алажиля, атрезия желчных путей и неалкогольный стеатогепатит (NASH).

Атрезия желчевыводящих путей - редкое заболевание печени у детей, которое включает частичную или полную закупорку (или даже отсутствие) крупных желчных протоков. Эта блокировка или отсутствие вызывает холестаз, который приводит к накоплению желчных кислот, которые повреждают печень. В некоторых воплощениях накопление желчных кислот происходит во внепеченочных желчных протоках. В некоторых воплощениях накопление желчных кислот происходит во внутрипеченочных желчных протоках. Текущий стандарт лечения - это процедура Касаи, которая представляет собой операцию по удалению закупоренных желчных протоков и прямому соединению части тонкой кишки с печенью. В настоящее время нет одобренных лекарственных средств для лечения этого расстройства.

В настоящем документе представлены способы лечения атрезии желчных путей у объекта, нуждающегося в этом, способы, включающие введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях объект прошел процедуру Касаи перед введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях объекту вводят соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль до прохождения процедуры Касаи. В некоторых воплощениях лечение атрезии желчных путей снижает уровень желчных кислот в сыворотке у объекта. В некоторых воплощениях уровень желчных кислот в сыворотке определяется, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано у Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% уровня желчных кислот в сыворотке до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях лечение атрезии желчных путей включает лечение зуда.

PFIC - это редкое генетическое заболевание, которым, по оценкам, страдает от одного из 50 000 до 100 000 детей, рожденных во всем мире, и вызывающее прогрессирующее, опасное для жизни заболевание печени.

Одним из проявлений PFIC является зуд, который часто приводит к серьезному ухудшению качества жизни. В некоторых случаях PFIC приводит к циррозу и печеночной недостаточности. Текущие методы лечения включают частичное внешнее отведение желчных протоков (PEBD) и трансплантацию печени, однако эти варианты могут нести значительный риск послеоперационных осложнений, а также психологических и социальных проблем.

Были идентифицированы три альтернативных генных дефекта, которые коррелируют с тремя отдельными подтипами PFIC, известными как типы 1, 2 и 3.

- PFIC типа 1, который иногда называют болезнью Байлера, вызывается нарушением секреции желчи из-за мутаций в гене ATP8B1, который кодирует белок, который помогает поддерживать соответствующий баланс жиров, известных как фосфолипиды, в клеточных мембранах в желчных протоках. Дисбаланс этих фосфолипидов связан с холестазом и повышенным содержанием желчных кислот в печени. У объектов, пораженных PFIC типа 1, холестаз обычно развивается в первые месяцы жизни, а при отсутствии хирургического лечения - до цирроза и терминальной стадии заболевания печени до конца первого десятилетия жизни.

- PFIC, тип 2, который иногда называют «синдромом Байлера», вызван нарушением секреции солей желчных кислот из-за мутаций в гене ABCB11, который кодирует белок, известный как насос экспорта желчной соли, который выводит желчные кислоты из печени. У объектов с PFIC типа 2 часто развивается печеночная недостаточность в течение первых нескольких лет жизни, и они подвергаются повышенному риску развития типа рака печени, известного как гепатоцеллюлярная карцинома.

- PFIC, тип 3, который обычно проявляется в первые годы детства прогрессирующим холестазом, вызван мутациями в гене ABCB4, который кодирует переносчик, перемещающий фосфолипиды через клеточные мембраны.

Кроме того, предполагается, что причиной PFIC являются мутации гена TJP2, гена NR1H4 или гена Myo5b. Кроме того, у некоторых объектов с PFIC нет мутации ни в одном из генов ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 или Myo5b. В этих случаях причина состояния неизвестна.

Типичные мутации гена ATP8B1 или полученного белка перечислены в таблицах 2 и 3 с нумерацией, основанной на белке ATP8B1 дикого типа человека (например, SEQ ID NO: 1) или гене (например, SEQ ID NO: 2). Типичные мутации гена ABCB11 или полученного белка перечислены в таблицах 4 и 5 с нумерацией, основанной на человеческом белке ABCB11 дикого типа (например, SEQ ID NO: 3) или гене (например, SEQ ID NO: 4).

Специалистам в данной области понятно, что положение аминокислоты в последовательности референсного белка, которое соответствует конкретному положению аминокислоты в SEQ ID NO: 1 или 3, может быть определено путем выравнивания последовательности референсного белка с SEQ ID NO: 1 или 3 (например, с помощью программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения в этих остатках (называемые в данном документе «мутациями») могут включать одиночные или множественные аминокислотные замены, вставки внутри последовательностей или фланкирующие их, а также делеции внутри последовательностей или фланкирующие их. Как может быть понятно специалистам в данной области, положение нуклеотида в последовательности референсного гена, которое соответствует определенному положению нуклеотида в SEQ ID NO: 2 или 4, может быть определено путем выравнивания последовательности референсного гена с SEQ ID NO: 2 или 4 (например, с помощью программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения этих остатков (называемые в данном документе «мутациями») могут включать замены одного или нескольких нуклеотидов, вставки внутри последовательностей или фланкирующие их, а также делеции внутри последовательностей или фланкирующие их. См. также Kooistra, et al., “KLIFS: A structural kinase-ligand interaction database,” Nucleic Acids Res. 2016, vol. 44, no. D1, pp. D365-D371, который полностью включен в настоящий документ ссылкой.

Каноническая последовательность белка ATP8B1 (SEQ ID NO: 1) - Uniprot ID O43520

MSTERDSETT FDEDSQPNDE VVPYSDDETE DELDDQGSAV EPEQNRVNRE AEENREPFRK ECTWQVKAND RKYHEQPHFM NTKFLCIKES KYANNAIKTY KYNAFTFIPM NLFEQFKRAA NLYFLALLIL QAVPQISTLA WYTTLVPLLV VLGVTAIKDL VDDVARHKMD KEINNRTCEV IKDGRFKVAK WKEIQVGDVI RLKKNDFVPA DILLLSSSEP NSLCYVETAE LDGETNLKFK MSLEITDQYL QREDTLATFD GFIECEEPNN RLDKFTGTLF WRNTSFPLDA DKILLRGCVI RNTDFCHGLV IFAGADTKIM KNSGKTRFKR TKIDYLMNYM VYTIFVVLIL LSAGLAIGHA YWEAQVGNSS WYLYDGEDDT PSYRGFLIFW GYIIVLNTMV PISLYVSVEV IRLGQSHFIN WDLQMYYAEK DTPAKARTTT LNEQLGQIHY IFSDKTGTLT QNIMTFKKCC INGQIYGDHR DASQHNHNKI EQVDFSWNTY ADGKLAFYDH YLIEQIQSGK EPEVRQFFFL LAVCHTVMVD RTDGQLNYQA ASPDEGALVN AARNFGFAFL ARTQNTITIS ELGTERTYNV LAILDFNSDR KRMSIIVRTP EGNIKLYCKG ADTVIYERLH RMNPTKQETQ DALDIFANET LRTLCLCYKE IEEKEFTEWN KKFMAASVAS TNRDEALDKV YEEIEKDLIL LGATAIEDKL QDGVPETISK LAKADIKIWV LTGDKKETAE NIGFACELLT EDTTICYGED INSLLHARME NQRNRGGVYA KFAPPVQESF FPPGGNRALI ITGSWLNEIL LEKKTKRNKI LKLKFPRTEE ERRMRTQSKR RLEAKKEQRQ KNFVDLACEC SAVICCRVTP KQKAMVVDLV KRYKKAITLA IGDGANDVNM IKTAHIGVGI SGQEGMQAVM SSDYSFAQFR YLQRLLLVHG RWSYIRMCKF LRYFFYKNFA FTLVHFWYSF FNGYSAQTAY EDWFITLYNV LYTSLPVLLM GLLDQDVSDK LSLRFPGLYI VGQRDLLFNY KRFFVSLLHG VLTSMILFFI PLGAYLQTVG QDGEAPSDYQ SFAVTIASAL VITVNFQIGL DTSYWTFVNA FSIFGSIALY FGIMFDFHSA GIHVLFPSAF QFTGTASNAL RQPYIWLTII LAVAVCLLPV VAIRFLSMTI WPSESDKIQK HRKRLKAEEQ WQRRQQVFRR GVSTRRSAYA FSHQRGYADL ISSGRSIRKK RSPLDAIVAD GTAEYRRTGD S

Каноническая последовательность ДНК для ATP8B1 (SEQ ID NO: 2)

ATG AGT ACA GAA AGA GAC TCA GAA ACG ACA TTT GAC GAG GAT TCT CAG CCT AAT GAC GAA GTG GTT CCC TAC AGT GAT GAT GAA ACA GAA GAT GAA CTT GAT GAC CAG GGG TCT GCT GTT GAA CCA GAA CAA AAC CGA GTC AAC AGG GAA GCA GAG GAG AAC CGG GAG CCA TTC AGA AAA GAA TGT ACA TGG CAA GTC AAA GCA AAC GAT CGC AAG TAC CAC GAA CAA CCT CAC TTT ATG AAC ACA AAA TTC TTG TGT ATT AAG GAG AGT AAA TAT GCG AAT AAT GCA ATT AAA ACA TAC AAG TAC AAC GCA TTT ACC TTT ATA CCA ATG AAT CTG TTT GAG CAG TTT AAG AGA GCA GCC AAT TTA TAT TTC CTG GCT CTT CTT ATC TTA CAG GCA GTT CCT CAA ATC TCT ACC CTG GCT TGG TAC ACC ACA CTA GTG CCC CTG CTT GTG GTG CTG GGC GTC ACT GCA ATC AAA GAC CTG GTG GAC GAT GTG GCT CGC CAT AAA ATG GAT AAG GAA ATC AAC AAT AGG ACG TGT GAA GTC ATT AAG GAT GGC AGG TTC AAA GTT GCT AAG TGG AAA GAA ATT CAA GTT GGA GAC GTC ATT CGT CTG AAA AAA AAT GAT TTT GTT CCA GCT GAC ATT CTC CTG CTG TCT AGC TCT GAG CCT AAC AGC CTC TGC TAT GTG GAA ACA GCA GAA CTG GAT GGA GAA ACC AAT TTA AAA TTT AAG ATG TCA CTT GAA ATC ACA GAC CAG TAC CTC CAA AGA GAA GAT ACA TTG GCT ACA TTT GAT GGT TTT ATT GAA TGT GAA GAA CCC AAT AAC AGA CTA GAT AAG TTT ACA GGA ACA CTA TTT TGG AGA AAC ACA AGT TTT CCT TTG GAT GCT GAT AAA ATT TTG TTA CGT GGC TGT GTA ATT AGG AAC ACC GAT TTC TGC CAC GGC TTA GTC ATT TTT GCA GGT GCT GAC ACT AAA ATA ATG AAG AAT AGT GGG AAA ACC AGA TTT AAA AGA ACT AAA ATT GAT TAC TTG ATG AAC TAC ATG GTT TAC ACG ATC TTT GTT GTT CTT ATT CTG CTT TCT GCT GGT CTT GCC ATC GGC CAT GCT TAT TGG GAA GCA CAG GTG GGC AAT TCC TCT TGG TAC CTC TAT GAT GGA GAA GAC GAT ACA CCC TCC TAC CGT GGA TTC CTC ATT TTC TGG GGC TAT ATC ATT GTT CTC AAC ACC ATG GTA CCC ATC TCT CTC TAT GTC AGC GTG GAA GTG ATT CGT CTT GGA CAG AGT CAC TTC ATC AAC TGG GAC CTG CAA ATG TAC TAT GCT GAG AAG GAC ACA CCC GCA AAA GCT AGA ACC ACC ACA CTC AAT GAA CAG CTC GGG CAG ATC CAT TAT ATC TTC TCT GAT AAG ACG GGG ACA CTC ACA CAA AAT ATC ATG ACC TTT AAA AAG TGC TGT ATC AAC GGG CAG ATA TAT GGG GAC CAT CGG GAT GCC TCT CAA CAC AAC CAC AAC AAA ATA GAG CAA GTT GAT TTT AGC TGG AAT ACA TAT GCT GAT GGG AAG CTT GCA TTT TAT GAC CAC TAT CTT ATT GAG CAA ATC CAG TCA GGG AAA GAG CCA GAA GTA CGA CAG TTC TTC TTC TTG CTC GCA GTT TGC CAC ACA GTC ATG GTG GAT AGG ACT GAT GGT CAG CTC AAC TAC CAG GCA GCC TCT CCC GAT GAA GGT GCC CTG GTA AAC GCT GCC AGG AAC TTT GGC TTT GCC TTC CTC GCC AGG ACC CAG AAC ACC ATC ACC ATC AGT GAA CTG GGC ACT GAA AGG ACT TAC AAT GTT CTT GCC ATT TTG GAC TTC AAC AGT GAC CGG AAG CGA ATG TCT ATC ATT GTA AGA ACC CCA GAA GGC AAT ATC AAG CTT TAC TGT AAA GGT GCT GAC ACT GTT ATT TAT GAA CGG TTA CAT CGA ATG AAT CCT ACT AAG CAA GAA ACA CAG GAT GCC CTG GAT ATC TTT GCA AAT GAA ACT CTT AGA ACC CTA TGC CTT TGC TAC AAG GAA ATT GAA GAA AAA GAA TTT ACA GAA TGG AAT AAA AAG TTT ATG GCT GCC AGT GTG GCC TCC ACC AAC CGG GAC GAA GCT CTG GAT AAA GTA TAT GAG GAG ATT GAA AAA GAC TTA ATT CTC CTG GGA GCT ACA GCT ATT GAA GAC AAG CTA CAG GAT GGA GTT CCA GAA ACC ATT TCA AAA CTT GCA AAA GCT GAC ATT AAG ATC TGG GTG CTT ACT GGA GAC AAA AAG GAA ACT GCT GAA AAT ATA GGA TTT GCT TGT GAA CTT CTG ACT GAA GAC ACC ACC ATC TGC TAT GGG GAG GAT ATT AAT TCT CTT CTT CAT GCA AGG ATG GAA AAC CAG AGG AAT AGA GGT GGC GTC TAC GCA AAG TTT GCA CCT CCT GTG CAG GAA TCT TTT TTT CCA CCC GGT GGA AAC CGT GCC TTA ATC ATC ACT GGT TCT TGG TTG AAT GAA ATT CTT CTC GAG AAA AAG ACC AAG AGA AAT AAG ATT CTG AAG CTG AAG TTC CCA AGA ACA GAA GAA GAA AGA CGG ATG CGG ACC CAA AGT AAA AGG AGG CTA GAA GCT AAG AAA GAG CAG CGG CAG AAA AAC TTT GTG GAC CTG GCC TGC GAG TGC AGC GCA GTC ATC TGC TGC CGC GTC ACC CCC AAG CAG AAG GCC ATG GTG GTG GAC CTG GTG AAG AGG TAC AAG AAA GCC ATC ACG CTG GCC ATC GGA GAT GGG GCC AAT GAC GTG AAC ATG ATC AAA ACT GCC CAC ATT GGC GTT GGA ATA AGT GGA CAA GAA GGA ATG CAA GCT GTC ATG TCG AGT GAC TAT TCC TTT GCT CAG TTC CGA TAT CTG CAG AGG CTA CTG CTG GTG CAT GGC CGA TGG TCT TAC ATA AGG ATG TGC AAG TTC CTA CGA TAC TTC TTT TAC AAA AAC TTT GCC TTT ACT TTG GTT CAT TTC TGG TAC TCC TTC TTC AAT GGC TAC TCT GCG CAG ACT GCA TAC GAG GAT TGG TTC ATC ACC CTC TAC AAC GTG CTG TAC ACC AGC CTG CCC GTG CTC CTC ATG GGG CTG CTC GAC CAG GAT GTG AGT GAC AAA CTG AGC CTC CGA TTC CCT GGG TTA TAC ATA GTG GGA CAA AGA GAC TTA CTA TTC AAC TAT AAG AGA TTC TTT GTA AGC TTG TTG CAT GGG GTC CTA ACA TCG ATG ATC CTC TTC TTC ATA CCT CTT GGA GCT TAT CTG CAA ACC GTA GGG CAG GAT GGA GAG GCA CCT TCC GAC TAC CAG TCT TTT GCC GTC ACC ATT GCC TCT GCT CTT GTA ATA ACA GTC AAT TTC CAG ATT GGC TTG GAT ACT TCT TAT TGG ACT TTT GTG AAT GCT TTT TCA ATT TTT GGA AGC ATT GCA CTT TAT TTT GGC ATC ATG TTT GAC TTT CAT AGT GCT GGA ATA CAT GTT CTC TTT CCA TCT GCA TTT CAA TTT ACA GGC ACA GCT TCA AAC GCT CTG AGA CAG CCA TAC ATT TGG TTA ACT ATC ATC CTG GCT GTT GCT GTG TGC TTA CTA CCC GTC GTT GCC ATT CGA TTC CTG TCA ATG ACC ATC TGG CCA TCA GAA AGT GAT AAG ATC CAG AAG CAT CGC AAG CGG TTG AAG GCG GAG GAG CAG TGG CAG CGA CGG CAG CAG GTG TTC CGC CGG GGC GTG TCA ACG CGG CGC TCG GCC TAC GCC TTC TCG CAC CAG CGG GGC TAC GCG GAC CTC ATC TCC TCC GGG CGC AGC ATC CGC AAG AAG CGC TCG CCG CTT GAT GCC ATC GTG GCG GAT GGC ACC GCG GAG TAC AGG CGC ACC GGG GAC AGC TGA

Аминокислотное положение 197 (например, G197Lfs*10)²²

Аминокислотное положение 201 (например, R201S²⁷, R201H³⁵)

Аминокислотное положение 203 (например, K203E^5,8, K203R⁹, K203fs²⁵)

Аминокислотное положение 205 (например, N205fs⁶, N205Kfs*2³⁵)

Аминокислотное положение 209 (например, P209T)⁴

Аминокислотное положение 217 (например, S217N)⁴³

Аминокислотное положение 232 (например, D232D)³⁰

Аминокислотное положение 233 (например, G233R)³⁸

Аминокислотное положение 243 (например, L243fs*28)³³

Аминокислотное положение 265 (например, C265R)²⁵

Аминокислотное положение 271 (например, R271X¹³, R271R³⁰)

Аминокислотное положение 288 (например, L288S)⁶

Аминокислотное положение 294 (например, L294S)⁴³

Аминокислотное положение 296 (например, R296C)¹¹

Аминокислотное положение 305 (например, F305I)²⁸

Аминокислотное положение 306 (например, C306R)²³

Аминокислотное положение 307 (например, H307L)³⁵

Аминокислотное положение 308 (например, G308V¹, G308D⁶, G308S³⁵)

Аминокислотное положение 314 (например, G314S)¹³

Аминокислотное положение 320 (например, M320Vfs*13)¹¹

Аминокислотное положение 337 (например, M337R)¹⁸

Аминокислотное положение 338 (например, N338K)¹⁸

Аминокислотное положение 340 (например, M340V)¹⁸

Аминокислотное положение 344 (например, I344F)^6,20

Аминокислотное положение 349 (например, I349T)⁴¹

Аминокислотное положение 358 (например, G358R)²⁸

Аминокислотное положение 367 (например, G367G)⁴¹

Аминокислотное положение 368 (например, N368D)⁴¹

Аминокислотное положение 393 (например, I393V)²⁷

Аминокислотное положение 403 (например, S403Y)⁶

Аминокислотное положение 407 (например, S407N)⁴⁰

Аминокислотное положение 412 (например, R412P)⁶

Аминокислотное положение 415 (например, Q415R)²⁷

Аминокислотное положение 422 (например, D422H)³⁵

Аминокислотное положение 429 (например, E429A)⁶

Аминокислотное положение 446 (например, G446R)^4,11

Аминокислотное положение 453 (например, S453Y)⁶

Аминокислотное положение 454 (например, D454G)⁶

Аминокислотное положение 455 (например, K455N)⁴³

Аминокислотное положение 456 (например, T456M^3,6, T456K³⁵)

Аминокислотное положение 457 (например, G457G⁶, G457fs*6³³)

Аминокислотное положение 469 (например, C469G)⁴¹

Аминокислотное положение 478 (например, H478H)⁴¹

Аминокислотное положение 500 (например, Y500H)⁶

Аминокислотное положение 525 (например, R525X)⁴

Δ Аминокислотного положения 529⁶

Аминокислотное положение 535 (например, H535L⁶, H535N⁴¹)

Аминокислотное положение 553 (например, P553P)⁴³

Аминокислотное положение 554 (например, D554N^1,6, D554A³⁵)

Δ Аминокислотных положений 556-628⁴⁴

Δ Аминокислотных положений 559-563³⁵

Аминокислотное положение 570 (например, L570L)⁴¹

Аминокислотное положение 577 (например, I577V)¹⁹

Аминокислотное положение 581 (например, E581K)³⁵

Аминокислотные положения 554 и 581 (например, D554A+E581K)³⁵

Аминокислотное положение 585 (например, E585X)²¹

Аминокислотное положение 600 (например, R600W^2,4, R600Q⁶)

Аминокислотное положение 602 (например, R602X)^3,6

Аминокислотное положение 628 (например, R628W)⁶

Аминокислотное положение 631 (например, R631Q)²⁸

Δ Аминокислотных положений 645-699⁴

Аминокислотное положение 661 (например, I661T)^1,4,6

Аминокислотное положение 665 (например, E665X)^4,6

Аминокислотное положение 672 (например, K672fs⁶, K672Vfs*1³⁵)

Аминокислотное положение 674 (например, M674T)¹⁹

Аминокислотные положения 78 и 674 (например, H78Q/M674T)¹⁹

Аминокислотное положение 684 (например, D684D)⁴¹

Аминокислотное положение 688 (например, D688G)⁶

Аминокислотное положение 694 (например, I694T⁶, I694N¹⁷)

Аминокислотное положение 695 (например, E695K)²⁷

Аминокислотное положение 709 (например, K709fs⁶, K709Qfs*41¹³)

Аминокислотное положение 717 (например, T717N)⁴

Аминокислотное положение 733 (например, G733R)⁶

Аминокислотное положение 757 (например, Y757X)⁴

Аминокислотное положение 749 (например, L749P)²¹

Аминокислотное положение 792 (например, P792fs)⁶

Δ Аминокислотного положения 795-797⁶

Аминокислотное положение 809 (например, I809L)²⁷

Аминокислотное положение 814 (например, K814N)²⁸

Аминокислотное положение 833 (например, R833Q²⁷, R833W⁴¹)

Аминокислотное положение 835 (например, K835Rfs*36)³⁵

Аминокислотное положение 845 (например, K845fs)²⁵

Аминокислотное положение 849 (например, R849Q)²⁴

Аминокислотное положение 853 (например, F853S, F853fs)⁶

Аминокислотное положение 867 (например, R867C¹, R867fs⁶, R867H²³)

Аминокислотное положение 885 (например, K885T)⁴¹

Аминокислотное положение 888 (например, T888T)⁴¹

Аминокислотное положение 892 (например, G892R)⁶

Аминокислотное положение 912 (например, G912R)³⁵

Аминокислотное положение 921 (например, S921S)⁴¹

Аминокислотное положение 924 (например, Y924C)²⁸

Аминокислотное положение 930 (например, R930X⁶, R930Q²⁸)

Аминокислотное положение 941 (например, R941X)³⁵

Аминокислотное положение 946 (например, R946T)⁴¹

Аминокислотное положение 952 (например, R952Q^5,9,15, R952X⁶)

Аминокислотное положение 958 (например, N958fs)⁶

Аминокислотное положение 960 (например, A960A)⁴¹

Δ Аминокислотного положения 971⁴³

Аминокислотное положение 976 (например, A976E⁴¹, A976A⁴³)

Аминокислотное положение 981 (например, E981K)²⁰

Аминокислотное положение 994 (например, S994R)⁴

Аминокислотное положение 1011 (например, L1011fs*18)³³

Аминокислотное положение 1012 (например, S1012I)¹⁰

Аминокислотное положение 1014 (например, R1014X)^6,11

Аминокислотное положение 1015 (например, F1015L)²⁷

Аминокислотное положение 1023 (например, Q1023fs)⁶

Аминокислотное положение 1040 (например, G1040R)^1,6

Аминокислотное положение 1044 (например, S0144L)³⁴

Аминокислотное положение 1047 (например, L1047fs)⁶

Аминокислотное положение 1050 (например, I1050K)³¹

Аминокислотное положение 1052 (например, L1052R)²⁸

Аминокислотное положение 1095 (например, W1095X)¹¹

Аминокислотное положение 1098 (например, V1098X)³⁵

Аминокислотное положение 1131 (например, Q1131X)⁴⁴

Аминокислотное положение 1142 (например, A1142Tfs*35)⁴³

Аминокислотное положение 1144 (например, Y1144Y)⁴³

Аминокислотное положение 1150 (например, I1150T)⁴¹

Аминокислотное положение 1152 (например, A1152T)³⁰

Аминокислотное положение 1159 (например, P1159P)^25,43

Аминокислотное положение 1164 (например, R1164X)⁶

Аминокислотное положение 1193 (например, R1193fs*39)³³

Аминокислотное положение 1197 (например, V1197L)⁴¹

Аминокислотное положение 1208 (например, A1208fs)⁶

Аминокислотное положение 1209 (например, Y1209Lfs*28)⁴

Аминокислотное положение 1211 (например, F1211L)²⁷

Аминокислотное положение 1219 (например, D1219H⁵, D1219G²⁷)

Аминокислотное положение 1223 (например, S1223S)⁴¹

Аминокислотное положение 1233 (например, P1233P)⁴¹

Аминокислотное положение 1241 (например, G1241fs)⁶

Аминокислотное положение 1248 (например, T1248T)⁴³

Мутация сайта сплайсинга IVS3+1_+3delGTG⁶

Мутация сайта сплайсинга IVS3-2A>G⁶

IVS6+5T>G^17,25

Мутация сайта сплайсинга IVS8+1G>T⁶

IVS9-G>A²⁶

IVS12+1G>A²⁵

Мутация сайта сплайсинга IVS17-1G>A⁶

Мутация сайта сплайсинга IVS18+2T>C⁶

Мутация сайта сплайсинга IVS20-4CT>AA

Мутация сайта сплайсинга IVS21+5G>A⁶

Мутация сайта сплайсинга IVS23-3C>A⁶

Мутация сайта сплайсинга IVS26+2T>A⁶

g.24774-42062del⁴

c.-4C>G⁴¹

c.145C>T¹²

c.181-72G>A⁹

c.182-5T>A⁴¹

c.182-72G>A⁴¹

c.246A>G⁹

c.239G>A³⁹

c.279+1_279+3delGTG⁴⁶

c.280-2A>G⁴⁶

c.625_62715delinsACAGTAAT⁴⁶

c.554+122C>T⁹

c.555-3T>C²⁷

c.625+5 G>T⁴

Аминокислотное положение 209 (например, P209T) и c.625+5 G>T⁴

c.628-30G>A⁴¹

c.628-31C>T⁴¹

c.698+1G>T⁴⁶

c.698+20C>T⁴¹

c.782-1G>A⁴⁶

c.782-34G>A⁴¹

Δ795-797¹⁴

c.782 -1G>A⁴

c.852A>C²⁷

c.941-1G>A⁴⁶

c.1014C>T⁹

c.1029+35G>A⁹

c.1221-8C.G⁴¹

1226delA¹⁶

c.1429+1G>A⁴⁶

c.1429+2T>G¹³

c.1429+49G>A⁴¹

c.1430-42A>G⁴¹

c.1493T>C¹²

c.1587_1589delCTT⁴⁶

c.1630+2T>G²⁷

c.1631-10T>A⁴¹

c.1637-37T>C⁴¹

1660 G>A¹⁴

1798 C>T¹⁴

1799 G>A¹⁴

c.1819-39_41delAA⁹

c.1819+1G>A³¹

c.1820-27G>A⁴¹

c.1918+8C>T²⁷

c.1933-1G>AK46

c.2097+2T>C³²

c.2097+60T>G⁴¹

c.2097+89T>C⁴¹

c.2097+97T>G⁴¹

c.2210-114T>C⁹

2210delA¹⁶

c.2210-45_50dupATAAAA⁹

c.2285+29C.T⁴¹

c.2285+32A>G⁴¹

c.2286-4_2286-3delinsAA⁴⁶

c.2418+5G>A⁴⁶

c.2707+3G>C²⁷

c.2707+9T>G⁴¹

c.2707+43A>G⁴¹

c.2709-59T>C⁴¹

c.2931+9A>G⁴¹

c.2931+59T>A⁴¹

c.2932-3C>A⁴⁶

c.2932+59T>A⁹

c.2937A>C²⁷

c.3016-9C>A³¹

c.3033-3034del¹⁹

3122delTCCTA/
insACATCGATGTTGATGTTAGG⁴⁵

3318 G>A¹⁴

c.3400+2T>A⁴⁶

c.3401-175C>T⁹

c.3401-167C>T⁹

c.3401-108C>T⁹

c.3531+8G>T^9,15

c.3532-15C>T⁹

Δ Phe ex 15⁴

Ex1_Ex13del⁶

Ex2_Ex6del³³

Ex12_Ex14del²⁷

Пропущенный экзон 24⁴⁵

del5’UTR-ex18¹¹

c.*11C>T⁴¹

c.*1101 + 366G > A⁷

g.92918del565³¹

GC предшествующие экзону 16 (например, являщиеся результатом делеции 4 п.о.)⁴²

Сдвиг рамки считывания на 5’ конце экзона 16⁴²

5’ 1,4 тыс. п.о. делеция⁴⁶

Таблица 3. Избранные мутации ATP8B1, ассоциированные с PFIC-1

Аминокислотное положение 23 (например, P23L)⁵

Аминокислотное положение 78 (например, H78Q)¹⁹

Аминокислотное положение 93 (например, A93A)⁶

Аминокислотное положение 96 (например, A96G)²⁷

Аминокислотное положение 127 (например, L127P)⁶

Аминокислотное положение 205 (например, N205fs)⁶

Аминокислотное положение 308 (например, G308V^1,6)

Аминокислотное положение 446 (например, G446R)⁴

Аминокислотное положение 456 (например, T456M)^3,6

Δ Аминокислотное положение 529⁶

Аминокислотное положение 535 (например, H535L)⁶

Аминокислотное положение 554 (например, D554N)^1,6

Аминокислотное положение 600 (например, R600W)⁴

Аминокислотное положение 661 (например, I661T)^4,6

Δ Аминокислотных положений 645-699⁴

Аминокислотное положение 672 (например, K672fs)⁶

Аминокислотных положений 78 и 674 (например, H78Q/M674T)¹⁹

Аминокислотное положение 694 (например, I694N)¹⁷

Аминокислотное положение 709 (например, K709fs)⁶

Аминокислотное положение 867 (например, R867fs)⁶

Аминокислотное положение 930 (например, R930X⁶, R952Q¹⁵)

Аминокислотное положение 952 (например, R952X)⁶

Мутация в сайте сплайсинга IVS3+1_+3delGTG⁶

Мутация в сайте сплайсинга IVS3-2A>G⁶

IVS6+5T>G¹⁷

Мутация в сайте сплайсинга IVS8+1G>T⁶

IVS9-G>A²⁶

Мутация в сайте сплайсинга IVS17-1G>A⁶

Мутация в сайте сплайсинга IVS18+2T>C⁶

Мутация в сайте сплайсинга IVS21+5G>A⁶

g.24774-42062del⁴

c.145C>T¹²

c.239G>A³⁹

c.625+5 G>T⁴

c.782 -1G>A⁴

c.1493T>C¹²

c.1630+2T>G²⁷

1660 G>A¹⁴

c.2707+3G>C²⁷

c.2097+2T>C³²

c.3033-3034del¹⁹

3318 G>A¹⁴

c.3158+8G>T¹⁵

Δ Phe ex 15⁴

Ex1_Ex13del⁶

Ex2_Ex6del³³

Ex12_Ex14del²⁷

del5’UTR-ex18¹¹

c.*1101 + 366G > A⁷

^A Мутация в «X» обозначает ранний стоп-кодон

Список литературы для таблиц 2 и 3

¹ Folmer et al., Hepatology. 2009, vol. 50(5), p. 1597-1605.

² Hsu et al., Hepatol Res. 2009, vol. 39(6), p. 625-631.

³ Alvarez et al., Hum Mol Genet. 2004, vol. 13(20), p. 2451-2460.

⁴ Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.

⁵ Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958.

⁶Klomp et al., Hepatology 2004, vol. 40(1), p. 27-38.

⁷ Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.

⁸ Dixon et al., Scientific Reports 2017, vol. 7, 11823.

⁹ Painter et al., Eur J Hum Genet. 2005, vol. 13(4), p. 435-439.

¹⁰ Deng et al., World J Gastroenterol. 2012, vol. 18(44), p. 6504-6509.

¹¹ Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.

¹² Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S180. Abstract Number: OP284.

¹³ Togawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 67, Supp. Supplement 1, pp. S363. Abstract Number: 615.

¹⁴ Miloh et al., Gastroenterology 2006, vol. 130, No. 4, Suppl. 2, pp. A759-A760. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/107th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Los Angeles, CA, USA. May 19.

¹⁵ Dröge et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2015, vol. 53, No. 12. Abstract Number: A3-27. Meeting Info: 32. Jahrestagung der Deutschen Arbeitsgemeinschaft zum Studium der Leber. Dusseldorf, Germany. 22 Jan 2016-23 Jan 2016

¹⁶ Mizuochi et al., Clin Chim Acta. 2012, vol. 413(15-16), p. 1301-1304.

¹⁷ Liu et al., Hepatology International 2009, vol. 3, No. 1, p. 184-185. Abstract Number: PE405. Meeting Info: 19th Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver. Hong Kong, China. 13 Feb 2009-16 Feb 2009

¹⁸ McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32.v2

¹⁹ Hasegawa et al., Orphanet J Rare Dis. 2014, vol. 9:89.

²⁰Stone et al., J Biol Chem. 2012, vol. 287(49), p. 41139-51.

²¹ Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]

²² Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107.

²³ Uegaki et al., Intern Med. 2008, vol. 47(7), p. 599-602.

²⁴ Goldschmidt et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(4), p. 306-311.

²⁵ Liu et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 50(2), p. 179-183.

²⁶ Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458.

²⁷Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol. 75, No. 1C. Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.

²⁸ Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p. 1195-1204.

²⁹ Ivashkin et al., Hepatology International 2016, vol. 10, No. 1, Supp. SUPPL. 1, pp. S461. Abstract Number: LBO-38. Meeting Info: 25th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2016. Tokyo, Japan. 20 Feb 2016-24 Feb 2016

³⁰ Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p. 159-161.

³¹ Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 488-493.

³² Squires et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2017, vol. 64(3), p. 425-430.

³³ Hayshi et al., EBioMedicine. 2018, vol. 27, p. 187-199.

³⁴ Nagasaka et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 45(1), p. 96-105.

³⁵ Wang et al., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.

³⁶ Narchi et al., Saudi J Gastroenterol. 2017, vol. 23(5), p. 303-305.

³⁷ Alashkar et al., Blood 2015, vol. 126, No. 23. Meeting Info.: 57th Annual Meeting of the American-Society-of-Hematology. Orlando, FL, USA. December 05 -08, 2015. Amer Soc Hematol.

³⁸ Ferreira et al., Pediatric Transplantation 2013, vol. 17, Supp. SUPPL. 1, pp. 99. Abstract Number: 239. Meeting Info: IPTA 7th Congress on Pediatric Transplantation. Warsaw, Poland. 13 Jul 2013-16 Jul 2013.

³⁹ Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357.

⁴⁰ Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2015, vol. 60(3), p. 368-374.

⁴¹ van der Woerd et al., PLoS One. 2013, vol. 8(11): e80553.

⁴² Copeland et al., J Gastroenterol Hepatol. 2013, vol. 28(3), p. 560-564.

⁴³ Dröge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264.

⁴⁴ Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124.

⁴⁵ Jirsa et al., Hepatol Res. 2004, vol. 30(1), p. 1-3.

⁴⁶ van der Woerd et al., Hepatology 2015, vol. 61(4), p. 1382-1391.

В некоторых воплощениях мутация ATP8B1 выбрана из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X и G1040R.

Каноническая последовательность белка ABCB11 (SEQ ID NO: 3)- Uniprot ID O95342

MSDSVILRSI KKFGEENDGF ESDKSYNNDK KSRLQDEKKG DGVRVGFFQL FRFSSSTDIW LMFVGSLCAF LHGIAQPGVL LIFGTMTDVF IDYDVELQEL QIPGKACVNN TIVWTNSSLN QNMTNGTRCG LLNIESEMIK FASYYAGIAV AVLITGYIQI CFWVIAAARQ IQKMRKFYFR RIMRMEIGWF DCNSVGELNT RFSDDINKIN DAIADQMALF IQRMTSTICG FLLGFFRGWK LTLVIISVSP LIGIGAATIG LSVSKFTDYE LKAYAKAGVV ADEVISSMRT VAAFGGEKRE VERYEKNLVF AQRWGIRKGI VMGFFTGFVW CLIFLCYALA FWYGSTLVLD EGEYTPGTLV QIFLSVIVGA LNLGNASPCL EAFATGRAAA TSIFETIDRK PIIDCMSEDG YKLDRIKGEI EFHNVTFHYP SRPEVKILND LNMVIKPGEM TALVGPSGAG KSTALQLIQR FYDPCEGMVT VDGHDIRSLN IQWLRDQIGI VEQEPVLFST TIAENIRYGR EDATMEDIVQ AAKEANAYNF IMDLPQQFDT LVGEGGGQMS GGQKQRVAIA RALIRNPKIL LLDMATSALD NESEAMVQEV LSKIQHGHTI ISVAHRLSTV RAADTIIGFE HGTAVERGTH EELLERKGVY FTLVTLQSQG NQALNEEDIK DATEDDMLAR TFSRGSYQDS LRASIRQRSK SQLSYLVHEP PLAVVDHKST YEEDRKDKDI PVQEEVEPAP VRRILKFSAP EWPYMLVGSV GAAVNGTVTP LYAFLFSQIL GTFSIPDKEE QRSQINGVCL LFVAMGCVSL FTQFLQGYAF AKSGELLTKR LRKFGFRAML GQDIAWFDDL RNSPGALTTR LATDASQVQG AAGSQIGMIV NSFTNVTVAM IIAFSFSWKL SLVILCFFPF LALSGATQTR MLTGFASRDK QALEMVGQIT NEALSNIRTV AGIGKERRFI EALETELEKP FKTAIQKANI YGFCFAFAQC IMFIANSASY RYGGYLISNE GLHFSYVFRV ISAVVLSATA LGRAFSYTPS YAKAKISAAR FFQLLDRQPP ISVYNTAGEK WDNFQGKIDF VDCKFTYPSR PDSQVLNGLS VSISPGQTLA FVGSSGCGKS TSIQLLERFY DPDQGKVMID GHDSKKVNVQ FLRSNIGIVS QEPVLFACSI MDNIKYGDNT KEIPMERVIA AAKQAQLHDF VMSLPEKYET NVGSQGSQLS RGEKQRIAIA RAIVRDPKIL LLDEATSALD TESEKTVQVA LDKAREGRTC IVIAHRLSTI QNADIIAVMA QGVVIEKGTH EELMAQKGAY YKLVTTGSPI S

Каноническая последовательность ДНК ABCB11 (SEQ ID NO: 4)

ATG TCT GAC TCA GTA ATT CTT CGA AGT ATA AAG AAA TTT GGA GAG GAG AAT GAT GGT TTT GAG TCA GAT AAA TCA TAT AAT AAT GAT AAG AAA TCA AGG TTA CAA GAT GAG AAG AAA GGT GAT GGC GTT AGA GTT GGC TTC TTT CAA TTG TTT CGG TTT TCT TCA TCA ACT GAC ATT TGG CTG ATG TTT GTG GGA AGT TTG TGT GCA TTT CTC CAT GGA ATA GCC CAG CCA GGC GTG CTA CTC ATT TTT GGC ACA ATG ACA GAT GTT TTT ATT GAC TAC GAC GTT GAG TTA CAA GAA CTC CAG ATT CCA GGA AAA GCA TGT GTG AAT AAC ACC ATT GTA TGG ACT AAC AGT TCC CTC AAC CAG AAC ATG ACA AAT GGA ACA CGT TGT GGG TTG CTG AAC ATC GAG AGC GAA ATG ATC AAA TTT GCC AGT TAC TAT GCT GGA ATT GCT GTC GCA GTA CTT ATC ACA GGA TAT ATT CAA ATA TGC TTT TGG GTC ATT GCC GCA GCT CGT CAG ATA CAG AAA ATG AGA AAA TTT TAC TTT AGG AGA ATA ATG AGA ATG GAA ATA GGG TGG TTT GAC TGC AAT TCA GTG GGG GAG CTG AAT ACA AGA TTC TCT GAT GAT ATT AAT AAA ATC AAT GAT GCC ATA GCT GAC CAA ATG GCC CTT TTC ATT CAG CGC ATG ACC TCG ACC ATC TGT GGT TTC CTG TTG GGA TTT TTC AGG GGT TGG AAA CTG ACC TTG GTT ATT ATT TCT GTC AGC CCT CTC ATT GGG ATT GGA GCA GCC ACC ATT GGT CTG AGT GTG TCC AAG TTT ACG GAC TAT GAG CTG AAG GCC TAT GCC AAA GCA GGG GTG GTG GCT GAT GAA GTC ATT TCA TCA ATG AGA ACA GTG GCT GCT TTT GGT GGT GAG AAA AGA GAG GTT GAA AGG TAT GAG AAA AAT CTT GTG TTC GCC CAG CGT TGG GGA ATT AGA AAA GGA ATA GTG ATG GGA TTC TTT ACT GGA TTC GTG TGG TGT CTC ATC TTT TTG TGT TAT GCA CTG GCC TTC TGG TAC GGC TCC ACA CTT GTC CTG GAT GAA GGA GAA TAT ACA CCA GGA ACC CTT GTC CAG ATT TTC CTC AGT GTC ATA GTA GGA GCT TTA AAT CTT GGC AAT GCC TCT CCT TGT TTG GAA GCC TTT GCA ACT GGA CGT GCA GCA GCC ACC AGC ATT TTT GAG ACA ATA GAC AGG AAA CCC ATC ATT GAC TGC ATG TCA GAA GAT GGT TAC AAG TTG GAT CGA ATC AAG GGT GAA ATT GAA TTC CAT AAT GTG ACC TTC CAT TAT CCT TCC AGA CCA GAG GTG AAG ATT CTA AAT GAC CTC AAC ATG GTC ATT AAA CCA GGG GAA ATG ACA GCT CTG GTA GGA CCC AGT GGA GCT GGA AAA AGT ACA GCA CTG CAA CTC ATT CAG CGA TTC TAT GAC CCC TGT GAA GGA ATG GTG ACC GTG GAT GGC CAT GAC ATT CGC TCT CTT AAC ATT CAG TGG CTT AGA GAT CAG ATT GGG ATA GTG GAG CAA GAG CCA GTT CTG TTC TCT ACC ACC ATT GCA GAA AAT ATT CGC TAT GGC AGA GAA GAT GCA ACA ATG GAA GAC ATA GTC CAA GCT GCC AAG GAG GCC AAT GCC TAC AAC TTC ATC ATG GAC CTG CCA CAG CAA TTT GAC ACC CTT GTT GGA GAA GGA GGA GGC CAG ATG AGT GGT GGC CAG AAA CAA AGG GTA GCT ATC GCC AGA GCC CTC ATC CGA AAT CCC AAG ATT CTG CTT TTG GAC ATG GCC ACC TCA GCT CTG GAC AAT GAG AGT GAA GCC ATG GTG CAA GAA GTG CTG AGT AAG ATT CAG CAT GGG CAC ACA ATC ATT TCA GTT GCT CAT CGC TTG TCT ACG GTC AGA GCT GCA GAT ACC ATC ATT GGT TTT GAA CAT GGC ACT GCA GTG GAA AGA GGG ACC CAT GAA GAA TTA CTG GAA AGG AAA GGT GTT TAC TTC ACT CTA GTG ACT TTG CAA AGC CAG GGA AAT CAA GCT CTT AAT GAA GAG GAC ATA AAG GAT GCA ACT GAA GAT GAC ATG CTT GCG AGG ACC TTT AGC AGA GGG AGC TAC CAG GAT AGT TTA AGG GCT TCC ATC CGG CAA CGC TCC AAG TCT CAG CTT TCT TAC CTG GTG CAC GAA CCT CCA TTA GCT GTT GTA GAT CAT AAG TCT ACC TAT GAA GAA GAT AGA AAG GAC AAG GAC ATT CCT GTG CAG GAA GAA GTT GAA CCT GCC CCA GTT AGG AGG ATT CTG AAA TTC AGT GCT CCA GAA TGG CCC TAC ATG CTG GTA GGG TCT GTG GGT GCA GCT GTG AAC GGG ACA GTC ACA CCC TTG TAT GCC TTT TTA TTC AGC CAG ATT CTT GGG ACT TTT TCA ATT CCT GAT AAA GAG GAA CAA AGG TCA CAG ATC AAT GGT GTG TGC CTA CTT TTT GTA GCA ATG GGC TGT GTA TCT CTT TTC ACC CAA TTT CTA CAG GGA TAT GCC TTT GCT AAA TCT GGG GAG CTC CTA ACA AAA AGG CTA CGT AAA TTT GGT TTC AGG GCA ATG CTG GGG CAA GAT ATT GCC TGG TTT GAT GAC CTC AGA AAT AGC CCT GGA GCA TTG ACA ACA AGA CTT GCT ACA GAT GCT TCC CAA GTT CAA GGG GCT GCC GGC TCT CAG ATC GGG ATG ATA GTC AAT TCC TTC ACT AAC GTC ACT GTG GCC ATG ATC ATT GCC TTC TCC TTT AGC TGG AAG CTG AGC CTG GTC ATC TTG TGC TTC TTC CCC TTC TTG GCT TTA TCA GGA GCC ACA CAG ACC AGG ATG TTG ACA GGA TTT GCC TCT CGA GAT AAG CAG GCC CTG GAG ATG GTG GGA CAG ATT ACA AAT GAA GCC CTC AGT AAC ATC CGC ACT GTT GCT GGA ATT GGA AAG GAG AGG CGG TTC ATT GAA GCA CTT GAG ACT GAG CTG GAG AAG CCC TTC AAG ACA GCC ATT CAG AAA GCC AAT ATT TAC GGA TTC TGC TTT GCC TTT GCC CAG TGC ATC ATG TTT ATT GCG AAT TCT GCT TCC TAC AGA TAT GGA GGT TAC TTA ATC TCC AAT GAG GGG CTC CAT TTC AGC TAT GTG TTC AGG GTG ATC TCT GCA GTT GTA CTG AGT GCA ACA GCT CTT GGA AGA GCC TTC TCT TAC ACC CCA AGT TAT GCA AAA GCT AAA ATA TCA GCT GCA CGC TTT TTT CAA CTG CTG GAC CGA CAA CCC CCA ATC AGT GTA TAC AAT ACT GCA GGT GAA AAA TGG GAC AAC TTC CAG GGG AAG ATT GAT TTT GTT GAT TGT AAA TTT ACA TAT CCT TCT CGA CCT GAC TCG CAA GTT CTG AAT GGT CTC TCA GTG TCG ATT AGT CCA GGG CAG ACA CTG GCG TTT GTT GGG AGC AGT GGA TGT GGC AAA AGC ACT AGC ATT CAG CTG TTG GAA CGT TTC TAT GAT CCT GAT CAA GGG AAG GTG ATG ATA GAT GGT CAT GAC AGC AAA AAA GTA AAT GTC CAG TTC CTC CGC TCA AAC ATT GGA ATT GTT TCC CAG GAA CCA GTG TTG TTT GCC TGT AGC ATA ATG GAC AAT ATC AAG TAT GGA GAC AAC ACC AAA GAA ATT CCC ATG GAA AGA GTC ATA GCA GCT GCA AAA CAG GCT CAG CTG CAT GAT TTT GTC ATG TCA CTC CCA GAG AAA TAT GAA ACT AAC GTT GGG TCC CAG GGG TCT CAA CTC TCT AGA GGG GAG AAA CAA CGC ATT GCT ATT GCT CGG GCC ATT GTA CGA GAT CCT AAA ATC TTG CTA CTA GAT GAA GCC ACT TCT GCC TTA GAC ACA GAA AGT GAA AAG ACG GTG CAG GTT GCT CTA GAC AAA GCC AGA GAG GGT CGG ACC TGC ATT GTC ATT GCC CAT CGC TTG TCC ACC ATC CAG AAC GCG GAT ATC ATT GCT GTC ATG GCA CAG GGG GTG GTG ATT GAA AAG GGG ACC CAT GAA GAA CTG ATG GCC CAA AAA GGA GCC TAC TAC AAA CTA GTC ACC ACT GGA TCC CCC ATC AGT TGA

Таблица 4 Примерные мутации ABCB11

Аминокислотное положение 1 (например, M1V)⁹

Аминокислотное положение 4 (например, S4X)^A,64

Аминокислотное положение 8 (например, R8X)⁸⁸

Аминокислотное положение 19 (например, G19R)⁵⁶

Аминокислотное положение 24 (например, K24X)³⁵

Аминокислотное положение 25 (например, S25X)^5,14

Аминокислотное положение 26 (например, Y26Ifs*7)³⁸

Аминокислотное положение 36 (например, D36D)²⁷

Аминокислотное положение 38 (например, K38Rfs*24)⁷³

Аминокислотное положение 43 (например, V43I)⁵⁷

Аминокислотное положение 49 (например, Q49X)⁷³

Аминокислотное положение 50 (например, L50S, L50W)⁵⁷

Аминокислотное положение 52 (например, R52W²⁶, R52R²⁸)

Аминокислотное положение 56 (например, S56L)⁵⁸

Аминокислотное положение 58 (например, D58N)⁶²

Аминокислотное положение 62 (например, M62K)⁹

Аминокислотное положение 66 (например, S66N)¹⁷

Аминокислотное положение 68 (например, C68Y)⁴¹

Аминокислотное положение 50 (например, L50S)^5,7

Аминокислотное положение 71 (например, L71H)⁷³

Аминокислотное положение 74 (например, I74R)⁷¹

Аминокислотное положение 77 (например, P77A)⁷³

Аминокислотное положение 87 (например, T87R)⁶⁷

Аминокислотное положение 90 (например, F90F)^7,27

Аминокислотное положение 93 (например, Y93S¹³, Y93X⁸⁸)

Аминокислотное положение 96 (например, E96X)⁸⁸

Аминокислотное положение 97 (например, L97X)³⁹

Аминокислотное положение 101 (например, Q101Dfs*8)⁹

Аминокислотное положение 107 (например, C107R)³⁶

Аминокислотное положение 112 (например, I112T)⁹

Аминокислотное положение 114 (например, W114R)^2,9

Аминокислотное положение 123 (например M123T)⁶⁷

Аминокислотное положение 127 (например, T127Hfs*6)⁵

Аминокислотное положение 129 (например, C129Y)²⁵

Аминокислотное положение 130 (например, G130G)⁷⁷

Аминокислотное положение 134 (например, I134I)²⁸

Аминокислотное положение 135 (например, E135K^7,13, E135L¹⁷)

Аминокислотное положение 137 (например, E137K)⁷

Аминокислотное положение 157 (например, Y157C)⁵

Аминокислотное положение 161 (например, C161X)³⁹

Аминокислотное положение 164 (например, V164Gfs*7³⁰, V164I⁸⁵)

Аминокислотное положение 167 (например, A167S⁴, A167V⁷, A167T^9,17)

Аминокислотное положение 181 (например, R181I)³⁵

Аминокислотное положение 182 (например, I182K)⁹

Аминокислотное положение 183 (например, M183V⁸, M183T⁹)

Аминокислотное положение 185 (например, M185I)⁷³

Аминокислотное положение 186 (например, E186G)^2,7,22

Аминокислотное положение 188 (например, G188W)⁷³

Аминокислотное положение 194 (например, S194P)⁷

Аминокислотное положение 198 (например, L198P)⁷

Аминокислотное положение 199 (например, N199Ifs*15X)⁸⁸

Аминокислотное положение 206 (например, I206V)²⁸

Аминокислотное положение 212 (например, A212T)⁷³

Аминокислотное положение 217 (например, M217R)⁸⁸

Аминокислотное положение 225 (например, T225P)⁵⁷

Аминокислотное положение 226 (например, S226L)⁹

Аминокислотное положение 232 (например, L232Cfs*9)⁹

Аминокислотное положение 233 (например, L233S)⁸⁶

Аминокислотное положение 238 (например, G238V)^2,7

Аминокислотное положение 242 (например, T242I)^5,7

Аминокислотное положение 245 (например, I245Tfs*26)⁵⁷

Аминокислотное положение 256 (например, A256G)⁹

Аминокислотное положение 260 (например, G260D)⁷

Аминокислотное положение 269 (например, Y269Y)²⁷

Аминокислотное положение 277 (например, A277E)⁷⁷

Аминокислотное положение 283 (например, E283D)⁷³

Аминокислотные положения 212 и 283 (например, A212T+E283D)⁷³

Аминокислотное положение 284 (например, V284L^7,39, V284A⁷, V284D²³)

Аминокислотное положение 297 (например, E297G^1,2,5,7, E297K⁷)

Аминокислотное положение 299 (например, R299K)²⁸

Аминокислотное положение 303 (например, R303K⁸, R303M⁶³R303fsX321⁸³)

Аминокислотное положение 304 (например, Y304X)²⁶

Аминокислотное положение 312 (например, Q312H)⁷

Аминокислотное положение 313 (например, R313S)^5,7

Аминокислотное положение 314 (например, W314X)⁵⁷

Аминокислотное положение 318 (например, K318Rfs*26)²⁹

Аминокислотное положение 319 (например, G319G)⁷

Аминокислотное положение 327 (например, G327E)^5,7

Аминокислотное положение 330 (например, W330X)²⁴

Аминокислотное положение 336 (например, C336S)^2,7

Аминокислотное положение 337 (например, Y337H)^21,27

Аминокислотное положение 342 (например, W342G)⁵⁰

Аминокислотное положение 354 (например, R354X)⁹

Аминокислотное положение 361 (например, Q361X⁵⁷, Q361R⁷⁴)

Аминокислотное положение 366 (например, V366V²⁸, V366D⁵⁷)

Аминокислотное положение 368 (например, V368Rfs*27)⁵

Аминокислотное положение 374 (например, G374S)³

Аминокислотное положение 380 (например, L380Wfs*18)⁵

Аминокислотное положение 382 (например, A382G)⁸⁸

Δ аминокислотных положений 382-388⁵

Δ аминокислотных положений 383-389⁵⁷

Аминокислотное положение 387 (например, R387H)⁹

Аминокислотное положение 390 (например, A390P)^5,7

Аминокислотное положение 395 (например, E395E)²⁸

Аминокислотное положение 404 (например, D404G)⁹

Аминокислотное положение 410 (например, G410D)^5,7

Аминокислотное положение 413 (например, L413W)^5,7

Аминокислотное положение 415 (например, R415X)⁴²

Аминокислотное положение 416 (например, I416I)²⁷

Аминокислотное положение 420 (например, I420T)⁹

Аминокислотное положение 423 (например, H423R)¹³

Аминокислотное положение 432 (например, R432T)^1,2,7

Аминокислотное положение 436 (например, K436N)⁴⁰

Аминокислотное положение 440 (например, D440E)⁸⁸

Аминокислотное положение 444 (например, V444A)²

Аминокислотное положение 454 (например, V454X)⁴⁹

Аминокислотное положение 455 (например, G455E)⁹

Аминокислотное положение 457 (например, S457Vfs*23)⁸⁸

Аминокислотное положение 461 (например, K461E)^2,7

Аминокислотное положение 462 (например, S462R)⁸⁸

Аминокислотное положение 463 (например, T463I)^5,7

Аминокислотное положение 466 (например, Q466K)^5,7

Аминокислотное положение 470 (например, R470Q^5,7, R470X⁹)

Аминокислотное положение 471 (например, Y472X)⁵

Аминокислотное положение 472 (например, Y472C^5,27, Y472X¹⁴)

Аминокислотное положение 473 (например, D473Q³⁵, D473V⁸⁸)

Аминокислотное положение 475 (например, C475X)²⁹

Аминокислотное положение 481 (например, V481E)^5,7

Аминокислотное положение 482 (например, D482G)^2,5,7

Аминокислотное положение 484 (например, H484Rfs*5)⁹

Аминокислотное положение 487 (например, R487H², R487P⁵)

Аминокислотное положение 490 (например, N490D)^5,7

Аминокислотное положение 493 (например, W493X)⁸

Аминокислотное положение 496 (например, D496V)⁸⁸

Аминокислотное положение 498 (например, I498T)^2,7

Аминокислотное положение 499 (например, G499E)⁷³

Аминокислотное положение 501 (например, V501G)⁶⁸

Аминокислотное положение 504 (например, E504K)⁷⁹

Аминокислотное положение 510 (например, T510T)⁷

Аминокислотное положение 512 (например, I512T)^5,7

Аминокислотное положение 515 (например, N515T^5,7, N515D⁶⁴)

Аминокислотное положение 516 (например, I516M)¹⁷

Аминокислотное положение 517 (например, R517H)^5,7

Аминокислотное положение 520 (например, R520X)⁵

Аминокислотное положение 523 (например, A523G)¹³

Аминокислотное положение 528 (например, I528Sfs*21⁵, I528X⁹, I528T⁷³)

Аминокислотное положение 535 (например, A535A⁷, A535X⁸⁹)

Аминокислотное положение 540 (например, F540L)⁴⁶

Аминокислотное положение 541 (например, I541L^5,7, I541T^5,17)

Аминокислотное положение 546 (например, Q546K³⁹, Q546H⁷³)

Аминокислотное положение 548 (например, F548Y)^5,7

Аминокислотное положение 549 (например, D549V)⁹

Аминокислотное положение 554 (например, E554K)²¹

Аминокислотное положение 556 (например, G556R)⁶⁷

Аминокислотное положение 558 (например, Q558H)²³

Аминокислотное положение 559 (например, M559T)⁵⁷

Аминокислотное положение 562 (например, G562D^5,7, G562S⁷³)

Аминокислотное положение 570 (например, A570T^2,5,7, A570V²⁶)

Аминокислотное положение 575 (например, R575X^2,5, R575Q²¹)

Аминокислотное положение 580 (например, L580P)⁵⁷

Аминокислотное положение 586 (например, T586I)⁷

Аминокислотное положение 587 (например, S587X)⁷³

Аминокислотное положение 588 (например, A588V^5,7, A588P⁷³)

Аминокислотное положение 591 (например, N591S)^2,7

Аминокислотное положение 593 (например, S593R)^2,7

Аминокислотное положение 597 (например, V597V⁹, V597L¹³)

Аминокислотное положение 603 (например, K603K)⁵⁵

Аминокислотное положение 609 (например, H609Hfs*46)²⁶

Аминокислотное положение 610 (например, I610Gfs*45⁹, I610T⁵⁷)⁹

Аминокислотное положение 615 (например, H615R)²⁶

Аминокислотное положение 616 (например, R616G²⁸, R616H⁷³)

Аминокислотное положение 619 (например, T619A)²⁸

Аминокислотное положение 623 (например, A623A)²⁸

Аминокислотное положение 625 (например, T625Nfs*5)²⁶

Аминокислотное положение 627 (например, I627T)⁷

Аминокислотное положение 628 (например, G628Wfs*3)⁷⁰

Аминокислотное положение 636 (например, E636G)²

Аминокислотное положение 648 (например, G648Vfs*6⁵, G648V⁵⁰)

Аминокислотное положение 655 (например, T655I)⁷

Аминокислотное положение 669 (например, I669V)²⁶

Аминокислотное положение 676 (например, D676Y)¹¹

Аминокислотное положение 677 (например, M677V)^7,13

Аминокислотное положение 679 (например, A679V)⁵⁸

Аминокислотное положение 685 (например, G685W)⁶⁰

Аминокислотное положение 696 (например, R696W²⁷, R696Q⁵⁸)

Аминокислотное положение 698 (например, R698H^7,9, R698K⁶¹, R698C⁸⁸)

Аминокислотное положение 699 (например, S699P)⁹

Аминокислотное положение 701 (например, S701P)⁵⁸

Аминокислотное положение 702 (например, Q702X)⁸⁹

Аминокислотное положение 709 (например, E709K)⁷

Аминокислотное положение 710 (например, P710P)⁷

Аминокислотное положение 712 (например, L712L)²⁸

Аминокислотное положение 721 (например, Y721C)⁸⁸

Аминокислотное положение 729 (например, D724N)³⁹

Аминокислотное положение 731 (например, P731S)²³

Аминокислотное положение 740 (например, P740Qfs*6)⁷³

Аминокислотное положение 758 (например, G758R)⁵

Аминокислотное положение 766 (например, G766R)^5,24

Аминокислотное положение 772 (например, Y772X)⁵

Аминокислотное положение 804 (например, A804A)⁷

Аминокислотное положение 806 (например, G806D⁴⁴, G806G⁵⁵)

Аминокислотное положение 809 (например, S809F)⁸¹

Аминокислотное положение 817 (например, G817G)⁸⁸

Аминокислотное положение 818 (например, Y818F)⁷

Аминокислотное положение 824 (например, G824E)⁴²

Аминокислотное положение 825 (например, G825G)⁷³

Аминокислотное положение 830 (например, R830Gfs*28)⁷³

Аминокислотное положение 832 (например, R832C^7,26, R832H⁴¹)

Аминокислотное положение 842 (например, D842G)²

Аминокислотное положение 848 (например, D848N)⁷³

Аминокислотное положение 855 (например, G855R)¹¹

Аминокислотное положение 859 (например, T859R)^5,7

Аминокислотное положение 865 (например, A865V)²⁷

Аминокислотное положение 866 (например, S866A)⁵⁷

Аминокислотное положение 868 (например, V868D)⁷³

Аминокислотное положение 869 (например, Q869P)⁷³

Аминокислотное положение 875 (например, Q875X)⁷³

Аминокислотное положение 877 (например, G877R)⁵⁶

Аминокислотное положение 879 (например, I879R)⁸⁸

Аминокислотное положение 893 (например, A893V)⁵⁷

Аминокислотное положение 901 (например, S901R¹⁷, S901I⁷³)

Аминокислотное положение 903 (например, V903G)⁵⁷

Δ Аминокислотное положение 919¹²

Аминокислотное положение 923 (например, T923P)^2,7

Аминокислотное положение 926 (например, A926P)^2,7

Аминокислотное положение 928 (например, R928X¹⁵, R928Q⁴⁰)

Аминокислотное положение 930 (например, K930X⁵, K930Efs*79^5,10, K930Efs*49²⁶)

Аминокислотное положение 931 (например, Q931P)²⁷

Аминокислотное положение 945 (например, S945N)⁵⁷

Аминокислотное положение 948 (например, R948C)^5,7,26

Аминокислотное положение 958 (например, R958Q)²⁸

Аминокислотное положение 969 (например, K969K)⁸⁸

Δ аминокислотных положений 969-972⁵

Аминокислотное положение 973 (например, T973I)⁵⁷

Аминокислотное положение 976 (например, Q976R⁵⁸, Q976X⁸⁸)

Аминокислотное положение 979 (например, N979D)^5,7

Аминокислотное положение 981 (например, Y981Y)²⁸

Аминокислотное положение 982 (например, G982R)^2,5,7

Аминокислотные положения 444 and 982 (например, V444A+G982R)³⁸

Аминокислотное положение 995 (например, A995A)²⁸

Аминокислотное положение 1001 (например, R1001R)⁹

Аминокислотное положение 1003 (например, G1003R)²⁴

Аминокислотное положение 1004 (например, G1004D)^2,7

Аминокислотное положение 1027 (например, S1027R)²⁶

Аминокислотное положение 1028 (например, A1028A^7,10,88, A1028E⁸⁸)

Аминокислотное положение 1029 (например, T1029K)⁵

Аминокислотное положение 1032 (например, G1032R)¹²

Аминокислотное положение 1041 (например, Y1041X)⁹

Аминокислотное положение 1044 (например, A1044P)⁸⁸

Аминокислотное положение 1050 (например, R1050C)^2,7,57

Аминокислотное положение 1053 (например, Q1053X)⁵⁷

Аминокислотное положение 1055 (например, L1055P)³⁶

Аминокислотное положение 1057 (например, R1057X², R1057Q⁵⁸)

Аминокислотное положение 1058 (например, Q1058Hfs*38⁹, Q1058fs*38¹⁷, Q1058X⁷³)

Аминокислотное положение 1061 (например, I1061Vfs*34)⁹

Аминокислотное положение 1083 (например, C1083Y)⁴⁷

Аминокислотное положение 1086 (например, T1086T)²⁸

Аминокислотное положение 1090 (например, R1090X)^2,5

Аминокислотное положение 1099 (например, L1099Lfs*38)²⁶

Аминокислотное положение 1100 (например, S1100Qfs*38)¹³

Аминокислотное положение 1110 (например, A1110E)^5,7

Аминокислотное положение 1112 (например, V1112F)⁷⁰

Аминокислотное положение 1116 (например, G1116R⁷, G1116F^9,17, G1116E³⁶)

Аминокислотное положение 1120 (например, S1120N)⁸⁸

Аминокислотное положение 1128 (например, R1128H^2,7, R1128C^5,7,13)

Аминокислотное положение 1131 (например, D1131V)²⁷

Аминокислотное положение 1144 (например, S1144R)⁷

Аминокислотное положение 1147 (например, V1147X)⁵

Аминокислотное положение 1153 (например, R1153C^2,5,7, R1153H⁵)

Аминокислотное положение 1154 (например, S1154P)^5,7

Аминокислотное положение 1162 (например, E1162X)³⁹

Δ Аминокислотное положение 1165⁸⁸

Аминокислотное положение 1164 (например, V1164Gfs*7)

Аминокислотное положение 1173 (например, N1173D)⁵⁷

Аминокислотное положение 1175 (например, K1175T)⁵⁸

Аминокислотное положение 1186 (например, E1186K)⁷

Аминокислотное положение 1192 (например, A1192Efs*50)⁹

Аминокислотное положение 1196 (например, Q1196X)⁸⁸

Аминокислотное положение 1197 (например, L1197G)⁷

Аминокислотное положение 1198 (например, H1198R)²⁷

Аминокислотное положение 1204 (например, L1204P)⁸⁸

Аминокислотное положение 1208 (например Y1208C)⁷³

Аминокислотное положение 1210 (например, T1210P^5,7, T1210F⁵⁷)

Аминокислотное положение 1211 (например, N1211D)⁷

Аминокислотное положение 1212 (например, V1212F)³⁶

Аминокислотное положение 1215 (например, Q1215X)⁵

Аминокислотное положение 1221 (например, R1221K)⁵³

Аминокислотное положение 1223 (например, E1223D)⁷

Аминокислотное положение 1226 (например, R1226P)⁷³

Аминокислотное положение 1228 (например, A1228V)⁷

Аминокислотное положение 1231 (например, R1231W^5,7, R1231Q^5,7)

Аминокислотное положение 1232 (например, A1232D)¹⁷

Аминокислотное положение 1235 (например, R1235X)^5,12

Аминокислотное положение 1242 (например, L1242I)^5,7

Аминокислотное положение 1243 (например, D1243G)⁶⁷

Аминокислотное положение 1249 (например, L1249X)⁷³

Аминокислотное положение 1256 (например, T1256fs*1296)⁸³

Аминокислотное положение 1268 (например, R1268Q)^2,7

Аминокислотное положение 1276 (например, R1276H)³⁰

Аминокислотное положение 1283 (например, A1283A²⁸, A1283V⁸⁸)

Аминокислотное положение 1292 (например, G1292V)⁷³

Аминокислотное положение 1298 (например, G1298R)⁵

Аминокислотное положение 1302 (например, E1302X)⁵

Аминокислотное положение 1311 (например, Y1311X)⁵⁷

Аминокислотное положение 1316 (например, T1316Lfs*64)¹⁵

Аминокислотное положение 1321 (например, S1321N)⁵⁷

Интрон 4 ((+3)A>C)¹

IVS4-74A>T⁸⁹

Мутация в сайте сплайсинга 3’ Интрон 5 c.3901G>A⁵

Мутация в сайте сплайсинга 5; Интрон 7 c.6111G>A⁵

Мутация в сайте сплайсинга IVS7+1G>A¹⁴

IVS7+5G>A⁴⁰

IVS8+1G>C⁷⁶

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 9 c.9081delG⁵

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 9 c.9081G>T⁵

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 9 c.9081G>A⁵

Мутация в сайте сплайсинга IVS9+1G>T¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга 3’ Интрон 13 c.143513_1435–8del⁵

Мутация в сайте сплайсинга IVS13del-13^-8¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга 3’ Интрон 16 c.20128T>G⁵

Мутация в сайте сплайсинга IVS16-8T>G¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 18 c.21781G>T⁵

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 18 c.21781G>A⁵

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 18 c.21781G>C⁵

Мутация в сайте сплайсинга 3’ Интрон 18 c.21792A>G⁵

Мутация в сайте сплайсинга IVS18+1G>A¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 19 c.2343+1G>T⁵

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 19 c.2343+2T>C⁵

Мутация в сайте сплайсинга IVS19+2T>C¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга IVS19+1G>A²²

Мутация в сайте сплайсинга 3’ Интрон 21 c.26112A>T⁵

IVS22+3A>G⁸⁹

IVS 23-8 G-A³⁶

IVS24+5G>A⁵¹

Мутация в сайте сплайсинга 5’ Интрон 24 c.32131delG⁵

IVS35-6C>G⁸⁹

Предполагаемая мутация сплайсинга 1198-1G>C¹⁷

Предполагаемая мутация сплайсинга 1810-3C>G¹⁷

Предполагаемая мутация сплайсинга 2178+1G>A¹⁷

Предполагаемая мутация сплайсинга 2344-1G>T¹⁷

Предполагаемая мутация сплайсинга c.2611-2A>T³⁹

Предполагаемая мутация сплайсинга 3213+1_3213+2delinsA¹⁷

c.-24C>A^44,78

c.76 13 G>T⁹

c.77-19T>A⁵²

c.90_93delGAAA¹⁸

c.124G>A⁶⁹

c.150 +3 A>C¹⁰

174C>T⁵⁴

c.245T>C⁸⁷

c.249_250insT¹⁸

270T>C⁵⁴

402C>T⁵⁴

585G>C⁵⁴

c.611+1G>A⁷⁰

c.611+4A>G³⁶

c.612-15_-6del10bp⁵⁵

c.625A>C³¹

c.627+5G>T³¹

c.625A>C/ c.627+5G>T³¹

696G>T⁵⁴

c. 784+1G>C⁴⁹

807T>C⁵⁴

c.886C>T³¹

c.890A>G⁵⁹

c.908+1G>A⁵⁷

c.908+5G>A⁵⁵

c.908delG⁵⁹

c.909-15A>G⁶⁶

957A>G⁵⁴

c.1084-2A>G⁵⁷

1145 1bp deletion⁹⁰

1281C>T^54,57

c.1309-165C > T¹⁹

c.1434 + 174G > A¹⁹

c.1434 + 70C > T¹⁹

c.1530C>A⁵⁷

c.1587-1589delCTT³¹

c.1621A>C^33,59

c.1638+32T>C⁶⁶

c.1638+80C>T⁶⁶

1671C>T⁵⁴

1791G>T⁵⁴

1939delA¹⁴

c.2075+3A>G⁵³

c.2081T>A³¹

c.2093G>A⁶⁵

2098delA¹⁶

c.2138-8T>G⁶⁷

2142A>G⁵⁴

c.2178+1G>T^36,39

c.2179-17C>A⁶⁶

c.2344-157T>G⁶⁶

c.2344-17T>C⁶⁶

c.2417G>A⁷⁸

c.2541delG⁸⁷

c.2620C>T^32,33

c.2815-8A>G⁵⁵

c.3003A>G³⁷

c.3084A>G^48,54

c.3213 +4 A>G^9,37

c.3213 +5 G>A⁹

c.3268C>T⁷⁵

3285A>G⁵⁴

c.3382C>T⁷⁵

3435A>G⁵⁴

c.3491delT⁷²

c.3589C>T⁵⁷

c.3765(+1 +5)del5⁴²

c.3766-34A>G⁶⁶

c.3767-3768insC⁶

c.3770delA⁶⁷

c.3826C>T⁷²

c.3846C>T⁵⁷

c.3929delG⁶⁷

c.*236A>G⁶⁶

1145delC⁸

Ex13_Ex17del⁸²

Таблица 5. Избранные мутации ABCB11, связанные с PFIC-2

Аминокислотное положение 1 (например, M1V)⁹

Аминокислотное положение 4 (например, S4X)⁶⁴

Аминокислотное положение 25 (например, S25X)¹⁴

Аминокислотное положение 50 (например, L50S)^7,57

Аминокислотное положение 52 (например, R52W)²⁶

Аминокислотное положение 62 (например, M62K)⁹

Аминокислотное положение 93 (например, Y93S)¹³

Аминокислотное положение 135 (например, E135K¹³, E135L¹⁷)

Аминокислотное положение 167 (например, A167V⁷, A167T^9,17)

Аминокислотное положение 242 (например, T242I)⁷

Аминокислотное положение 260 (например, G260D)⁵⁷

Аминокислотное положение 284 (например, V284L)⁷

Аминокислотное положение 297 (например, E297G)^2,7

Аминокислотное положение 303 (например, R303K⁸, R303M⁶³, R303fsX321⁸³)

Аминокислотное положение 313 (например, R313S)⁷

Аминокислотное положение 327 (например, G327E)⁷

Аминокислотное положение 330 (например, V330X)²⁴

Аминокислотное положение 337 (например, Y337H)²¹

Аминокислотное положение 361 (например, Q361X)⁵⁷

Аминокислотное положение 366 (например, V366D)⁵⁷

Аминокислотное положение 386 (например, G386X)³⁴

Δ аминокислотных положений 383-389⁵⁷

Аминокислотное положение 390 (например, A390P)⁷

Аминокислотное положение 410 (например, G410D)⁷

Аминокислотное положение 413 (например, L413W)⁷

Аминокислотное положение 463 (например, T463I)⁷

Аминокислотное положение 466 (например, Q466K)⁷

Аминокислотное положение 470 (например, R470Q⁷, R470X⁹)

Аминокислотное положение 472 (например, Y472X¹⁴, Y472C²⁷)

Аминокислотное положение 481 (например, V481E)⁷

Аминокислотное положение 482 (например, D482G)^2,7

Аминокислотное положение 487 (например, R487H², R487P⁸⁴)

Аминокислотное положение 490 (например, N490D)⁷

Аминокислотное положение 498 (например, I498T)⁷

Аминокислотное положение 512 (например, I512T)⁷

Аминокислотное положение 515 (например, N515T⁷, N515D⁶⁴)

Аминокислотное положение 517 (например, R517H)⁷

Аминокислотное положение 520 (например, R520X)⁵⁷

Аминокислотное положение 528 (например, I528X)⁹

Аминокислотное положение 541 (например, I541L⁷, I541T¹⁷)

Аминокислотное положение 548 (например, F548Y)⁷

Аминокислотное положение 562 (например, G562D)⁷

Аминокислотное положение 570 (например, A570T⁷, A570V²⁶)

Аминокислотное положение 575 (например, R575X², R575Q²¹)

Аминокислотное положение 588 (например, A588V)⁷

Аминокислотное положение 591 (например, N591S)^9,17

Аминокислотные положения 591 and 597 (например, N591S+V597V)⁹

Аминокислотное положение 610 (например, I610Gfs*45)⁹

Аминокислотное положение 636 (например, E636G)²

Аминокислотное положение 698 (например, R609H)⁹

Аминокислотные положения 112 и 698 (например, I112T+R698H)⁹

Аминокислотное положение 766 (например, G766R)²⁴

Аминокислотное положение 806 (например, G806G)⁵⁵

Аминокислотное положение 842 (например, D842G)²

Аминокислотное положение 859 (например, T859R)⁷

Аминокислотное положение 865 (например, A865V)⁴⁵

Аминокислотное положение 901 (например, S901R)¹⁷

Δ Аминокислотного положения 919¹²

Аминокислотное положение 928 (например, R928X)^15,21

Аминокислотное положение 930 (например, K930Efs*79¹⁰, K930Efs*49²⁶)

Аминокислотное положение 948 (например, R948C)^7,26

Аминокислотное положение 979 (например, N979D)⁷

Аминокислотное положение 982 (например, G982R)^2,7

Аминокислотное положение 1028 (например, A1028A)¹⁰

Аминокислотное положение 1050 (например, R1050C)⁵⁷

Аминокислотное положение 1057 (например, R1057X)²

Аминокислотное положение 1058 (например, Q1058Hfs*38⁹, Q1058fs*38¹⁷)

Аминокислотное положение 1090 (например, R1090X)²

Аминокислотное положение 1110 (например, A1110E)⁷

Аминокислотное положение 1128 (например, R1128C)^7,13

Аминокислотное положение 1153 (например, R1153C^2,7, R1153H^7,26)

Аминокислотное положение 1154 (например, S1154P)⁷

Аминокислотное положение 1210 (например, T1210P⁷, T1210F⁵⁷)

Аминокислотное положение 1231 (например, R1231W⁷, R1223Q⁷)

Аминокислотное положение 1235 (например, R1235X)¹²

Аминокислотное положение 1242 (например, L1242I)⁷

Аминокислотное положение 1302 (например E1302X)⁵⁷

Интрон 4 ((+3)A>C)¹

Мутация в сайте сплайсинга IVS7+1G>A¹⁴

IVS8+1G>C⁷⁶

Мутация в сайте сплайсинга IVS9+1G>T¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга IVS13del-13^-8¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга IVS16-8T>G¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга IVS18+1G>A¹⁴

Мутация в сайте сплайсинга IVS19+2T>C¹⁴

IVS 23-8 G-A³⁶

IVS24+5G>A⁵¹

Предполагаемая мутация сплайсинга 1198-1G>C¹⁷

Предполагаемая мутация сплайсинга 1810-3C>G¹⁷

Предполагаемая мутация сплайсинга 2178+1G>A¹⁷

Предполагаемая мутация сплайсинга 2344-1G>T¹⁷

c.-24C>A⁷⁸

c.76 13 G>T⁹

c.77-19T>A⁵²

c.90_93delGAAA¹⁸

c.124G>A⁶⁹

c.150 +3 A>C¹⁰

c.249_250insT¹⁸

c.611+1G>A⁸⁴

c.611+4A>G³⁶

c.612-15_-6del10bp⁵⁵

c.625A>C³¹

c.627+5G>T³¹

c.625A>C/ c.627+5G>T³¹

c.886C>T³¹

c.890A>G⁵⁹

c.908+1G>A⁵⁷

c.908+5G>A⁵⁵

c.908delG⁵⁹

1273 делеция 1 п.о.⁹¹

c.1084-2A>G⁵⁷

c.1445A>G⁵⁹

c.1587-1589delCTT³¹

c.1621A>C⁵⁹

1939delA¹⁴

c.2081T>A³¹

2098delA¹⁶

c.2343+1 G>T⁸⁰

c.2178+1G>T³⁶

c.2417G>A⁷⁸

c.2620C>T³²

c.2815-8A>G⁵⁵

c.3003A>G³⁷

c.3213 +4 A>G^9,37

c.3213 +5 G>A⁹

c.3268C>T⁷⁵

c.3382C>T⁷⁵

c.3765(+1 +5)del5⁴²

c.3767-3768insC⁶

1145delC⁸

Ex13_Ex17del⁸²

^AМутация в «X» обозначает ранний стоп-кодон

Список литературы для таблиц 4 и 5

¹ Noe et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(3), p. 536-543.

² Lam et al., Am J Physiol Cell Physiol. 2007, vol. 293(5), p. C1709-16.

³ Stindt et al., Liver Int. 2013, vol. 33(10), p. 1527-1735.

⁴ Gao et al., Shandong Yiyao 2012, vol. 52(10), p. 14-16.

⁵Strautnieks et al., Gastroenterology. 2008, vol. 134(4), p. 1203-1214.

⁶Kagawa et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2008, vol. 294(1), p. G58-67.

⁷Byrne et al., Hepatology. 2009, vol. 49(2), p. 553-567.

⁸ Chen et al., J Pediatr. 2008, vol. 153(6), p. 825-832.

⁹ Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.

¹⁰ Dröge et al., Sci Rep. 2016, vol. 6: 24827.

¹¹ Lang et al., Pharmacogenet Genomics. 2007, vol. 17(1), p. 47-60.

¹² Ellinger et al., World J Gastroenterol. 2017, vol. 23(29), p. :5295-5303.

¹³ Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958.

¹⁴ Knisely et al., Hepatology. 2006, vol. 44(2), p. 478-86.

¹⁵ Ellis et al., Hepatology. 2018, vol. 67(4), p. 1531-1545.

¹⁶Lam et al., J Hepatol. 2006, vol. 44(1), p. 240-242.

¹⁷ Varma et al., Hepatology 2015, vol. 62(1), p. 198-206.

¹⁸ Treepongkaruna et al., World J Gastroenterol. 2009, vol. 15(34), p. 4339-4342.

¹⁹Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.

²⁰ Hayashi et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(2), p. 192-200.

²¹ Guorui et al., Linchuang Erke Zazhi 2013, vol. 31(10), 905-909.

²² van Mil et al., Gastroenterology. 2004, vol. 127(2), p. 379-384.

²³ Anzivino et al., Dig Liver Dis. 2013, vol. 45(3), p. 226-232.

²⁴ Park et al., World J Gastroenterol. 2016, vol. 22(20), p. 4901-4907.

²⁵ Imagawa et al., J Hum Genet. 2018, vol. 63(5), p. 569-577.

²⁶ Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.

²⁷ Hu et al., Mol Med Rep. 2014, vol. 10(3), p. 1264-1274.

²⁸ Lang et al,. Drug Metab Dispos. 2006, vol. 34(9), p. 1582-1599.

²⁹ Masahata et al., Transplant Proc. 2016, vol. 48(9), p. 3156-3162.

³⁰ Holz et al., Hepatol Commun. 2018, vol. 2(2), p. 152-154.

³¹ Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S180. Abstract Number: OP284.

³² Francalanci et al., Laboratory Investigation 2011, vol. 91, Supp. SUPPL. 1, pp. 360A. Abstract Number: 1526.

³³ Francalanci et al., Digestive and Liver Disease 2010, vol. 42, Supp. SUPPL. 1, pp. S16. Abstract Number: T.N.5.

³⁴ Shah et al., J Pediatr Genet. 2017, vol. 6(2), p. 126-127.

³⁵ Gao et al., Hepatitis Monthly 2017, vol. 17(10), e55087/1-e55087/6.

³⁶ Evason et al., Am J Surg Pathol. 2011, vol. 35(5), p. 687-696.

³⁷ Davit-Spraul et al., Mol Genet Metab. 2014, vol. 113(3), p. 225-229.

³⁸ Maggiore et al., J Hepatol. 2010, vol. 53(5), p. 981-6.

³⁹ McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32.v2

⁴⁰ Liu et al., Pediatr Int. 2013, vol. 55(2), p. 138-144.

⁴¹ Waisbourd-Zinman et al., Ann Hepatol. 2017, vol. 16(3), p. 465-468.

⁴² Griffin, et al., Canadian Journal of Gastroenterology and Hepatology 2016, vol. 2016. Abstract Number: A200. Meeting Info: 2016 Canadian Digestive Diseases Week, CDDW 2016. Montreal, QC, United States. 26 Feb 2016-29 Feb 2016

⁴³ Qiu et al., Hepatology 2017, vol. 65(5), p. 1655-1669.

⁴⁴ Imagawa et al., Sci Rep. 2017, 7:41806.

⁴⁵ Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]

⁴⁶ Takahashi et al., Eur J Gastroenterol Hepatol. 2007, vol. 19(11), p. 942-6.

⁴⁷ Shimizu et al., Am J Transplant. 2011, vol. 11(2), p. 394-398.

⁴⁸ Krawczyk et al., Ann Hepatol. 2012, vol. 11(5), p. 710-744.

⁴⁹ Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107.

⁵⁰ Sattler et al., Journal of Hepatology 2017, vol. 66, No. 1, Suppl. S, pp. S177. Meeting Info.: International Liver Congress / 52nd Annual Meeting of the European-Association-for-the-Study-of-the-Liver. Amsterdam, NETHERLANDS. April 19 -23, 2017. European Assoc Study Liver.

⁵¹ Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458.

⁵² Sciveres. Digestive and Liver Disease 2010, vol. 42, Supp. SUPPL. 5, pp. S329. Abstract Number: CO18. Meeting Info: 17th National Congress SIGENP. Pescara, Italy. 07 Oct 2010-09 Oct 2010

⁵³ Sohn et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2019, vol. 22(2), p. 201-206.

⁵⁴ Ho et al., Pharmacogenet Genomics. 2010, vol. 20(1), p. 45-57.

⁵⁵ Wang et al., Hepatol Res. 2018, vol. 48(7), p. 574-584.

⁵⁶ Shaprio et al., J Hum Genet. 2010, vol. 55(5), p. 308-313.

⁵⁷ Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol. 75, No. 1C. Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.

⁵⁸ Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p. 1195-1204.

⁵⁹ Jankowska et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2014, vol. 58(1), p. 92-95.

⁶⁰ Kim. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2016, vol. 62, Supp. SUPPL. 1, pp. 620. Abstract Number: H-P-045. Meeting Info: 49th Annual Meeting of the European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2016. Athens, Greece. 25 May 2016-28 May 2016.

⁶¹ Pauli-Magnus et al., Hepatology 2003, vol. 38, No. 4 Suppl. 1, pp. 518A. print. Meeting Info.: 54th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases. Boston, MA, USA. October 24-28, 2003. American Association for the Study of Liver Diseases.

⁶² Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S362. Abstract Number: PP0347. Meeting Info: 26th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2017. Shanghai, China. 15 Feb 2017-19 Feb 2017.

⁶³ Rumbo et al., Transplantation 2018, vol. 102, No. 7, Supp. Supplement 1, pp. S848. Abstract Number: P.752. Meeting Info: 27th International Congress of The Transplantation Society, TTS 2018. Madrid, Spain. 30 Jun 2018-05 Jul 2018.

⁶⁴ Lee et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2017, vol. 20(2), p. 114-123.

⁶⁵ Sherrif et al., Liver international: official journal of the International Association for the Study of the Liver 2013, vol. 33, No. 8, pp. 1266-1270.

⁶⁶Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p. 159-161.

⁶⁷ Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 488-493.

⁶⁸ Lin et al., Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2018, vol. 20(9), p. 758-764.

⁶⁹ Harmanci et al., Experimental and Clinical Transplantation 2015, vol. 13, Supp. SUPPL. 2, pp. 76. Abstract Number: P62. Meeting Info: 1st Congress of the Turkic World Transplantation Society. Astana, Kazakhstan. 20 May 2015-22 May 2015.

⁷⁰ Herbst et al., Mol Cell Probes. 2015, vol. 29(5), p. 291-298.

⁷¹Moghadamrad et al., Hepatology. 2013, vol. 57(6), p. 2539-2541.

⁷² Holz et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2016, vol. 54, No. 8. Abstract Number: KV275. Meeting Info: Viszeralmedizin 2016, 71. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft fur Gastroenterologie, Verdauungs- und Stoffwechselkrankheiten mit Sektion Endoskopie - 10. Herbsttagung der Deutschen Gesellschaft fur Allgemein- und Viszeralchirurgie. Hamburg, Germany. 21 Sep 2016-24 Sep 2016.

⁷³ Wang et al., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.

⁷⁴ Hao et al., International Journal of Clinical and Experimental Pathology 2017, vol. 10(3), p. 3480-3487.

⁷⁵ Arnell et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 494-499.

⁷⁶ Sharma et al., Indian Journal of Gastroenterology 2017, vol. 36, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. A99. Abstract Number: M-20. Meeting Info: 58th Annual Conference of the Indian Society of Gastroenterology, ISGCON 2017. Bhubaneswar, India. 14 Dec 2017-17 Dec 2017.

⁷⁷ et al., Can J Gastroenterol. 2011, vol. 25(6), p. 311-314.

⁷⁸ Imagawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2016, vol. 63, Supp. Supplement 2, pp. S51. Abstract Number: 166. Meeting Info: World Congress of Pediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition 2016. Montreal, QC, Canada. 05 Oct 2016-08 Oct 2016.

⁷⁹ Peng et al., Zhonghua er ke za zhi (Chinese journal of pediatrics) 2018, vol. 56, No. 6, pp. 440-444.

⁸⁰ Tibesar et al., Case Rep Pediatr. 2014, vol. 2014: 185923.

⁸¹Ng et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 66, Supp. Supplement 2, pp. 860. Abstract Number: H-P-127. Meeting Info: 51st Annual Meeting European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2018. Geneva, Switzerland. 09 May 2018-12 May 2018.

⁸² Wong et al., Clin Chem. 2008, vol. 54(7), p. 1141-1148.

⁸³ Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357.

⁸⁴ Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 60, vol. 3, p. 368-374.

⁸⁵ Scheimann et al., Gastroenterology 2007, vol. 132, No. 4, Suppl. 2, pp. A452. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/108th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Washington, DC, USA. May 19 -24, 2007. Amer Gastroenterol Assoc; Amer Assoc Study Liver Dis; Amer Soc Gastrointestinal Endoscopy; Soc Surg Alimentary Tract.

⁸⁶ Jaquotot-Haerranz et al., Rev Esp Enferm Dig. 2013, vol. 105(1), p. 52-54.

⁸⁷ Khosla et al., American Journal of Gastroenterology 2015, vol. 110, No. Suppl. 1, pp. S397. Meeting Info.: 80th Annual Scientific Meeting of the American-College-of-Gastroenterology. Honolulu, HI, USA. October 16 -21, 2015.

⁸⁸ Dröge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264.

⁸⁹ Liu et al., Liver International 2010, vol. 30(6), p. 809-815.

⁹⁰Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124.

⁹¹ Пат. США №9295677

В некоторых воплощениях мутация в ABCB11 выбрана из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.

Предлагаются способы лечения PFIC (например, PFIC-1 и PFIC-2) у объекта, которые включают выполнение анализа образца, полученного из объекта, чтобы определить, есть ли у объекта мутация, связанная с PFIC (например, ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 или мутации Myo5b), и введение (например, специфическое или селективное введение) терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли объекту, у которого определена ассоциированная мутация с PFIC. В некоторых воплощениях мутация представляет собой мутацию ATP8B1 или ABCB11. Например, мутация, представленная в любой из таблиц 1-4. В некоторых воплощениях мутация ATP8B1 выбрана из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X и G1040R. В некоторых воплощениях мутация в ABCB11 выбрана из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.

Также предлагаются способы лечения PFIC (например, PFIC-1 и PFIC-2) у объекта, нуждающегося в этом, способ, включающий: (а) обнаружение мутации, связанной с PFIC (например, ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, Мутация NR1H4 или Myo5b) у объекта; и (b) введение объекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях способы лечения PFIC могут включать введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли объекту, имеющему мутацию, связанную с PFIC (например, ATP8B1, ABCB11, ABCB4, мутация TJP2, NR1H4 или Myo5b). В некоторых воплощениях мутация представляет собой мутацию ATP8B1 или ABCB11. Например, мутация, представленная в любой из Таблиц 1-4. В некоторых воплощениях мутация ATP8B1 выбрана из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X и G1040R. В некоторых воплощениях мутация в ABCB11 выбрана из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.

В некоторых воплощениях изобретения определяется, что у объекта есть мутация, связанная с PFIC, у объекта или в образце биопсии из объекта с помощью любых признанных в данной области тестов, включая секвенирование следующего поколения (NGS). В некоторых воплощениях изобретения у объекта определяется наличие мутации, связанной с PFIC, с использованием одобренного регулирующим органом, например, одобренного FDA теста или анализа для идентификации мутации, связанной с PFIC, у объекта или образца биопсии из объекта, либо путем выполнения любой из неограничивающих примеров анализов, описанных в данном документе. Дополнительные способы диагностики PFIC описаны в Gunaydin, M. et al., Hepat Med. 2018, vol. 10, p. 95-104, полностью включено в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях лечение PFIC (например, PFIC-1 или PFIC-2) снижает уровень желчных кислот в сыворотке у объекта. В некоторых воплощениях уровень желчных кислот в сыворотке определяется, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано у Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% уровня желчных кислот в сыворотке до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях лечение PFIC включает лечение зуда.

Поскольку LBAT экспрессируется на гепатоцитах, LBAT и вещества с двойным ингибитором ASBT/LBAT должны иметь хотя бы некоторую биодоступность и свободную фракцию в крови. Поскольку соединения-ингибиторы LBAT должны выживать только из кишечника в печень, ожидается, что относительно низкая системная экспозиция таких соединений будет достаточной, тем самым минимизируя потенциальный риск любых побочных эффектов в остальной части тела. Ожидается, что ингибирование LBAT и ASBT будет иметь, по меньшей мере, аддитивный эффект в снижении концентрации внутрипеченочных желчных кислот. Также ожидается, что двойной ингибитор ASBT/LBAT может снижать уровни желчных кислот, не вызывая диареи, как это иногда наблюдается с ингибиторами ASBT.

Ожидается, что соединения, обладающие высокой эффективностью ингибирования LBAT и достаточной биодоступностью, будут особенно подходящими для лечения гепатита. Ожидается, что соединения, обладающие двойной активностью ингибирования ASBT/LBAT и достаточной биодоступностью, будут особенно подходящими для лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH).

NASH - это распространенное и серьезное хроническое заболевание печени, которое напоминает алкогольную болезнь печени, но встречается у людей, которые пьют мало или совсем не употребляют алкоголь. У пациентов с NASH накопление жира в печени, известное как неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD) или стеатоз, и другие факторы, такие как высокий уровень холестерина ЛПНП и инсулинорезистентность, вызывают хроническое воспаление в печени и могут привести к прогрессирующему рубцеванию ткани, известному как фиброз и цирроз, за которыми в конечном итоге следует печеночная недостаточность и смерть. Было обнаружено, что у пациентов с NASH общие концентрации желчных кислот в сыворотке крови значительно выше, чем у здоровых объектов в условиях голодания (увеличение NASH в 2,2-2,4 раза) и во всех временных точках после приема пищи (увеличение NASH в 1,7-2,2 раза). Они вызваны повышенным содержанием первичных и вторичных желчных кислот, конъюгированных с таурином и глицином. Пациенты с NASH демонстрировали большую вариабельность профиля желчных кислот натощак и после приема пищи. Эти результаты показывают, что пациенты с NASH имеют более высокое воздействие желчных кислот натощак и после приема пищи, включая более гидрофобные и цитотоксические вторичные виды. Повышенное воздействие желчных кислот может быть связано с повреждением печени и патогенезом NAFLD и NASH (Ferslew et al., Dig Dis Sci. 2015, vol. 60, p. 3318-3328). Следовательно, вероятно, что ингибирование ASBT и/или LBAT будет полезным для лечения NASH.

NAFLD характеризуется стеатозом печени без вторичных причин стеатоза печени, включая чрезмерное употребление алкоголя, другие известные заболевания печени или длительный прием стеатогенных медикаментов (Chalasani et al., Hepatology 2018, vol. 67(1), p. 328-357). NAFLD можно разделить на неалкогольную жировую болезнь печени (NAFL) и неалкогольный стеатогепатит (NASH). Согласно Chalasani et al., NAFL определяется как наличие ≥5% стеатоза печени без признаков гепатоцеллюлярного повреждения в виде баллонирования гепатоцитов. NASH определяется как наличие ≥5% стеатоза печени и воспаления с повреждением гепатоцитов (например, баллонирование), с фиброзом печени или без него. NASH также часто связан с воспалением и фиброзом печени, который может прогрессировать до цирроза, терминальной стадии заболевания печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Хотя фиброз печени не всегда присутствует при NASH, тяжесть фиброза, если она присутствует, может быть связана с долгосрочными результатами.

Существует множество подходов, используемых для оценки наличия у объекта NAFLD и, в случае наличия, степени тяжести заболевания, включая определение того, является ли NAFLD NAFL или NASH. В некоторых воплощениях степень тяжести NAFLD можно оценить с помощью NAS. В некоторых воплощениях обработку NAFLD можно оценить с помощью NAS. В некоторых воплощениях NAS может быть определен, как описано в Kleiner et al., Hepatology. 2005, 41(6):1313-1321, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой. См., например, таблицу 6, где представлена упрощенная схема NAS, адаптированная из Kleiner.

Таблица 6. Пример оценки активности NAFLD (NAFLD) со стадией фиброза

Признак	Степень	Балл
Стеатоз	<5%	0
	5-33%	1
	>33-66%	2
	>66%	3
Лобулярное воспаление	Без очагов	0
	<2 очагов/200x	1
	2-4 очага/200x	2
	>4 очагов/200x	3
Баллонирующая дегенерация	Нет	0
	Незначительно	1
	Много клеток/Выраженное баллонирование	2

Фиброз	Нет	0
	перисинусоидальный или перипортальный	1
	перисинусоидальный & портальный/ перипортальный	2
	Мостовидный фиброз	3
	Цирроз	4

В некоторых воплощениях NAS определяется неинвазивно, например, как описано в публ. заявки США №2018/0140219, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях NAS определяется для образца от объекта до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях NAS определяется в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях более низкий балл NAS в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с периодом до введения соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NAFLD (например, NASH). Например, уменьшение NAS на 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 указывает на лечение NAFLD (например, NASH). В некоторых воплощениях NAS после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В некоторых воплощениях NAS после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше.

Дополнительные подходы к оценке и оценке NASH у объекта включают определение одного или нескольких из них: стеатоз печени (например, накопление жира в печени); воспаление печени; биомаркеры, указывающие на одно или несколько из поражения печени, воспаления печени, фиброза печени и/или цирроза печени (например, маркеры и панели сыворотки). Дополнительные примеры физиологических показателей NASH могут включать морфологию печени, жесткость печени и размер или массу печени объекта.

В некоторых воплощениях NASH у объекта подтверждается накоплением печеночного жира и обнаружением биомаркера, указывающего на повреждение печени. Например, повышенный уровень ферритина в сыворотке и низкие титры аутоантител в сыворотке могут быть общими признаками NASH.

В некоторых воплощениях способы оценки NASH включают магнитно-резонансную томографию либо с помощью спектроскопии, либо с помощью фракции жира по плотности протонов (MRI-PDFF) для количественной оценки стеатоза, транзиентной эластографии (FIBROSCAN®), градиента венозного давления в печени (HPVG), измерения жесткости печени с помощью MRE для диагностики значительного фиброза и/или цирроза печени и оценки гистологических особенностей биопсии печени. В некоторых воплощениях изобретения магнитно-резонансная томография используется для обнаружения одного или нескольких из стеатогепатита (NASH-МРТ), фиброза печени (фибро-МРТ) и стеатоза. См., например, публ. заявок США №2016/146715 и 2005/0215882, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях лечение NASH может включать уменьшение одного или нескольких симптомов, связанных с NASH; уменьшение степени стеатоза печени; снижение NAS; уменьшение воспаления печени; снижение уровня биомаркеров, указывающих на одно или несколько повреждений печени, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени; и уменьшение фиброза и/или цирроза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза, или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза у объекта после введения одной или нескольких доз соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых воплощениях лечение NASH включает уменьшение одного или нескольких симптомов, связанных с NASH, у объекта. Типичные симптомы могут включать один или несколько из следующих симптомов: увеличение печени, усталость, боль в правом верхнем углу живота, вздутие живота, увеличение кровеносных сосудов непосредственно под поверхностью кожи, увеличение молочных желез у мужчин, увеличение селезенки, красные ладони, желтуха и зуд. В некоторых воплощениях у объекта нет симптомов. В некоторых воплощениях общая масса тела объекта не увеличивается. В некоторых воплощениях общая масса тела пациента уменьшается. В некоторых воплощениях индекс массы тела (body mass index, BMI) объекта не увеличивается. В некоторых воплощениях индекс массы тела (BMI) у объекта снижается. В некоторых воплощениях соотношение талии и бедер (Waist To Hip, WTH) объекта не увеличивается. В некоторых воплощениях соотношение талии и бедер (WTH) объекта уменьшается.

В некоторых воплощениях лечение NASH можно оценить путем измерения стеатоза печени. В некоторых воплощениях изобретения лечение NASH включает уменьшение стеатоза печени после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, как описано в данном документе. В некоторых воплощениях стеатоз печени определяется одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из ультрасонографии, компьютерной томографии (CT), магнитно-резонансной томографии, магнитно-резонансной спектроскопии (MRS), магнитно-резонансной эластографии (MRE), транзиентной эластографии (TE) (например, FIBROSCAN®), измерение размера или веса печени или с помощью биопсии печени (см., например, Di Lascio et al., Ultrasound Med Biol. 2018, vol. 44(8), p. 1585-1596; Lv et al., J Clin Transl Hepatol. 2018, vol. 6(2), p. 217-221; Reeder et al., J Magn Reson Imaging. 2011, vol. 34(4), spcone; и de Lédinghen V, et al., J Gastroenterol Hepatol. 2016, vol. 31(4), p. 848-855, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). Объект с диагнозом NASH может иметь стеатоз печени более чем около 5%, например, от около 5% до около 25%, от около 25% до около 45%, от около 45% до около 65% или более чем около 65% стеатоза печени. В некоторых воплощениях изобретения у объекта со стеатозом печени от более чем около 5% до около 33% имеется стеатоз печени 1 стадии, у объекта со стеатозом печени от около 33% до около 66% имеется стеатоз печени 2 стадии и у объекта со стеатозом печени более чем около 66% стеатоза печени имеет стеатоз печени 3 стадии.

В некоторых воплощениях степень стеатоза печени определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень стеатоза печени определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение степени стеатоза печени в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли указывает на лечение NASH. Например, уменьшение степени стеатоза печени от около 1% до около 50%, от около 25% до около 75% или от около 50% до около 100% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение степени стеатоза печен на около 5%, около 10%, около 15%, около 20%, около 25%, около 30%, около 35%, около 40%, около 45%, около 50%, около 55%, около 60%, около 65%, около 70%, около 75%, около 80%, около 85%, около 90% или около 95% указывают на лечение NASH.

В некоторых воплощениях наличие воспаления печени определяют одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из биомаркеров, указывающих на воспаление печени, и образца(-ов) биопсии печени из объекта. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют по образцу(-ам) биопсии печени из объекта. Например, воспаление печени в образце биопсии печени можно оценить, как описано в Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p. 1313-1321 и Brunt et al., Am J Gastroenterol 1999, vol. 94, p. 2467-2474, каждый из которых включен в данный документ ссылкой полностью. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение тяжести воспаления печени в течение временного периода или после временного периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или ее фармацевтически приемлемой соли указывает на лечение NASH. Например, уменьшение тяжести воспаления печени от около 1% до около 50%, от около 25% до около 75% или от около 50% до около 100% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение тяжести воспаления печени около на 5%, около 10%, около 15%, около 20%, около 25%, около 30%, около 35%, около 40%, около 45%, около 50%, около 55%, около 60%, около 65%, около 70%, около 75%, около 80%, около 85%, около 90% или около 95% указывают на лечение NASH.

В некоторых воплощениях изобретения лечение NASH включает лечение фиброза и/или цирроза, например, уменьшение тяжести фиброза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза печени или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза. В некоторых воплощениях наличие фиброза и/или цирроза определяется одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из транзиентной эластографии (например, FIBROSCAN®), неинвазивных маркеров фиброза печени и гистологических характеристик биопсии печени. В некоторых воплощениях степень тяжести (например, стадия) фиброза определяется одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из транзиентной эластографии (например, FIBROSCAN®), системы оценок фиброза, биомаркеров фиброза печени (например, не- инвазивные биомаркеры) и градиент печеночного венозного давления (HVPG). Неограничивающие примеры систем оценок фиброза включают систему оценок фиброза NAFLD (см., например, Angulo et al., Hepatology 2007, vol. 45 (4), стр. 846-54), систему оценок фиброза в Brunt et al., Am. J. Gastroenterol. 1999, vol. 94, p. 2467-2474, систему оценок фиброза в Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p. 1313-1321, и систему оценок фиброза ISHAK (см. Ishak et al., J. Hepatol. 1995, vol. 22, p. 696-699), содержание каждого из которых полностью включено в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение степени тяжести фиброза в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях уменьшение тяжести фиброза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяется с использованием системы оценки, такой как любая из систем оценки фиброза, описанных в данном документе, например, оценка может указывать на стадию фиброза, например, стадию 0 (без фиброза), стадию 1, стадию 2, стадию 3 и стадию 4 (цирроз) (см., например, Kleiner et al). В некоторых воплощениях снижение стадии фиброза представляет собой уменьшение степени тяжести фиброза. Например, уменьшение на 1, 2, 3 или 4 стадии - это уменьшение степени тяжести фиброза. В некоторых воплощениях уменьшение стадии, например, от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3. к стадии 1, от стадии 3 к стадии 0, от стадии 2 к стадии 1, от стадии 2 к стадии 0 или от стадии 1 к стадии 0 указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от 4 до 3, от 4 до 2, от 4 до 1, от 4 до 0, от 3 до 2, от 3 до 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, по сравнению с предыдущими к введению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от 4 до 3, от 4 до 2, от 4 до 1, от 4 до 0, от 3 до 2, от 3 до 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 в течение периода времени введения соединения формулы (I) или фармацевтически приемлемой соли их по сравнению с предшествующим введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от 4 до 3, от 4 до 2, от 4 до 1, от 4 до 0, от 3 до 2, от 3 до 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0, или от стадии 1 до стадии 0 после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли их по сравнению с предшествующим введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых воплощениях присутствие NASH определяется одним или несколькими биомаркерами, указывающими на один или несколько из следующих признаков: повреждение, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени или их системы оценок. В некоторых воплощениях степень тяжести NASH определяется одним или несколькими биомаркерами, указывающими на один или несколько из следующих признаков: повреждение, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени или их системами оценок. Уровень биомаркера можно определить, например, путем измерения, количественной оценки и мониторинга уровня экспрессии гена или мРНК, кодирующей биомаркер и/или пептид или белок биомаркера. Неограничивающие примеры биомаркеров, указывающих на одно или несколько из поражения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени и/или их системы оценок, включают индекс соотношения аспартатаминотрансферазы (AST) и тромбоцитов (APRI); соотношение аспартатаминотрансферазы (AST) и аланинаминотрансферазы (ALT) (AAR); оценка FIB-4, которая основана на уровнях APRI, аланинаминотрансферазы (ALT) и возрасте объекта (см., например, McPherson et al., Gut 2010, vol. 59(9), p. 1265-9, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой); гиалуроновая кислота; провоспалительные цитокины; панель биомаркеров, состоящая из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина A1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) в сочетании с возрастом и полом объекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панель биомаркеров, состоящая из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина в сочетании с возрастом и полом объекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873), и панель биомаркеров, состоящая из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); панель биомаркеров, состоящая из тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (TIMP-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (HA) (например, оценки генерализованного фиброза печени (ELF), см., например, Lichtinghagen R и др., J. Hepatol. 2013 Aug; 59 (2): 236-42, который полностью включен в настоящий документ ссылкой). В некоторых воплощениях наличие фиброза определяется по одному или нескольким показателям FIB-4, панели биомаркеров, состоящей из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина A1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) в сочетании с возрастом и полом объекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панели биомаркеров, состоящей из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина в сочетании с возрастом и полом объекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873) и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (HA) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)).

В некоторых воплощениях уровень аспартатаминотрансферазы (AST) не увеличивается. В некоторых воплощениях уровень аспартатаминотрансферазы (AST) снижается. В некоторых воплощениях уровень аланинаминотрансферазы (ALT) не увеличивается. В некоторых воплощениях уровень аланинаминотрансферазы (ALT) снижается. В некоторых воплощениях «уровень» фермента относится к концентрации фермента, например, в крови. Например, уровень AST или ALT может быть выражен в единицах/л.

В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяется одним или несколькими из числа оценки FIB-4, панели биомаркеров, состоящей из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина A1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) в сочетании с возрастом и полом объекта для создания меры фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панели биомаркеров, состоящей из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина в сочетании с возрастом и полом объекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873, который полностью включен в настоящий документ ссылкой), и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (HA) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)).

В некоторых воплощениях изобретения воспаление печени определяется уровнем биомаркеров воспаления печени, например, провоспалительных цитокинов. Неограничивающие примеры биомаркеров, указывающих на воспаление печени, включают интерлейкин-(IL) 6, интерлейкин- (IL)1β, фактор некроза опухоли (TNF)-α, трансформирующий фактор роста (TGF)-β, хемотаксический белок моноцитов (MCP)-1, С-реактивный белок (CRP), PAI-1 и изоформы коллагена, такие как Col1a1, Col1a2 и Col4a1 (см., например, Neuman, et al., Can. J. Gastroenterol. Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618 и Пат. США №9872844, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). Воспаление печени также можно оценить по изменению инфильтрации макрофагами, например, по изменению уровня экспрессии CD68. В некоторых воплощениях изобретения воспаление печени может быть определено путем измерения или мониторинга уровней в сыворотке или циркулирующих уровней одного или нескольких из числа: интерлейкина-(IL) 6, интерлейкина-(IL)1β, фактора некроза опухоли (TNF)-α, трансформирующего фактора роста (TGF)-β, хемотаксического белка моноцитов (MCP)-1 и C-реактивного белка (CRP).

В некоторых воплощениях уровень одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, определяется для образца от объекта до введения соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях уровень одного или нескольких биомаркеров, указывающих на один или несколько из следующих признаков: повреждение, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени, определяется в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях снижение уровня одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из поражения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с предшествующим введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. Например, снижение уровня одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, по меньшей мере, около на 5%, по меньшей мере, около на 10%, по меньшей мере, около на 15%., по меньшей мере, около 20%, по меньшей мере, около 25%, по меньшей мере, около 30%, по меньшей мере, около 35%, по меньшей мере, около 40%, по меньшей мере, около 45%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или по меньшей мере около 99% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение уровня одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, составляет по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере, около 45%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 55%, по меньшей мере, около 60%, по меньшей мере, около 65%, по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере, около 75%, по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или по меньшей мере около 99%. В некоторых воплощениях уровень одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере, около 45%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 55%, по меньшей мере, около 60%, по меньшей мере, около 65%, по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере, около 75%, по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере, около 85%, по меньшей мере, около 90%, по меньшей мере, около 95% или, по меньшей мере, около 99%. В некоторых воплощениях уровень одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере, около 45%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 55%, по меньшей мере, около 60%, по меньшей мере, около 65%, по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере, около 75%, по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере, около 85%, по меньшей мере, около 90%, по меньшей мере, около 95% или, по меньшей мере, около 99%.

В некоторых воплощениях лечение NASH снижает уровень желчных кислот в сыворотке у объекта. В некоторых воплощениях уровень желчных кислот в сыворотке определяется, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано у Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% уровня желчных кислот в сыворотке до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях NASH представляет собой NASH с сопутствующим холестазом. При холестазе выделение желчи, в том числе желчных кислот, из печени блокируется. Желчные кислоты могут вызывать повреждение гепатоцитов (см., например, Perez MJ, Briz O. World J. Gastroenterol. 2009, vol. 15(14), p. 1677-1689), вероятно, приводя или увеличивая прогрессирование фиброза (например, цирроза) и увеличивая риск гепатоцеллюлярной карциномы (см., например, Sorrentino P et al., Dig. Dis. Sci. [нечеткое совпадение]2005, т. 50(6), p. 1130-1135 и Satapathy SK and Sanyal AJ. Semin. Liver Dis. 2015, vol. 35(3), p. 221-235, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). В некоторых воплощениях лечение NASH включает лечение зуда. В некоторых воплощениях лечение NASH с сопутствующим холестазом включает лечение зуда. В некоторых воплощениях у объекта с NASH с сопутствующим холестазом наблюдается зуд.

Типичные биомаркеры NASH представлены в таблице 7.

Таблица 7. Типичные биомаркеры NASH

Биомаркеры фиброза печени

Индекс соотношения аспартатаминотрансферазы (AST) и тромбоцитов (APRI)

Соотношение аспартатаминотрансферазы (AST) и аланинаминотрансферазы (ALT) (AAR)

Рейтинг FIB-4¹

Гиалуроновая кислота

Провоспалительные цитокины

Панель, включающая α2-макроглобулин, гаптоглобин, аполипопротеин A1, билирубин, гамма-глутамилтранспептидазу (GGT) в сочетании с возрастом и полом объекта для определения показателя фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®)

Панель, включающая билирубин, гамма-глутамилтрансферазу, гиалуроновую кислоту, α2-макроглобулин в сочетании с возрастом и полом объекта (например, HEPASCORE®2)

Панель, включающая тканевый ингибитор металлопротеиназ-1, гиалуроновую кислоту и α2-макроглобулин (например, FIBROSPECT®)

Панель, включающая тканевой ингибитор металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевой пропептид проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновую кислоту (HA) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)³)

Биомаркеры воспаления печени^4,5

Интерлейкин-(IL)6

Интерлейкин-(IL)1β

Фактор некроза опухоли (TNF)-α

Трансформирующий фактор роста (TGF)-β

Хемотаксический белок моноцитов (MCP)-1

С-реактивный белок (CRP)

PAI-1

Изоформы коллагена (например, Col1a1, Col1a2 и Col4a1)

Изменение инфильтрации макрофагов (например, изменение уровня экспрессии CD68)

Список литературы для таблицы 7

¹ McPherson et al., Gut. 2010, vol. 59(9), p. 1265-1269.

² Adams, et al. Clin Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873.

³ Lichtinghagen, et al. J Hepatol. 2013, vol. 59(2), p. 236-242.

⁴Neuman, et al. Can J Gastroenterol Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618.

⁵ Пат. США №9872844

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь более высокую свободную фракцию в плазме. В некоторых воплощениях свободная фракция составляет более чем около 0,2%, например, более чем около 0,4%, например, более чем около 0,6%, например, более чем около 0,8%, например, более чем около 1,0%, например, больше чем около 1,25%, например, более чем около 1,5%, например, более чем около 1,75%, например, более чем около 2,0%, например, более чем около 2,5%, например, более чем около 3%, например, более чем около 4%, например, более чем около 5%, например, более чем около 7,5%, например, более чем около 10%, или, например, более чем около 20%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут выделяться с мочой. В некоторых воплощениях доля соединения, которая выводится с мочой, составляет более чем около 0,2%, например, более чем около 0,4%, например, более чем около 0,6%, например, более чем около 0,8%, например, более чем около 1,0%, например, более чем около 2%, например, более чем около 3%, например, более чем около 5%, например, более чем около 7,5%, например, более чем около 10%, например, более чем около 15%, например, более чем около 20%, например, более чем около 30% или, например, более чем около 50%.

После абсорбции из кишечника некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут циркулировать через энтерогепатическую циркуляцию. В некоторых воплощениях доля соединения, которая циркулирует через энтерогепатическую циркуляцию, составляет более чем около 0,1%, например, более чем около 0,2%, например, более чем около 0,3%, например, более чем около 0,5%, например, более чем около 1,0%, например, более чем около 1,5%, например, более чем около 2%, например, более чем около 3%, например, более чем около 5%, например, более чем около 7%, например, более чем около 10%, например, более чем около 15%, например, более чем около 20%, например, более чем около 30% или, например, более чем около 50%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вызывать почечную экскрецию солей желчных кислот. В некоторых воплощениях доля циркулирующих желчных кислот, которая выводится почечным путем, составляет более чем около 1%, например, более чем около 2%, например, более чем около 5%, например, более чем около 7%, например, более чем около 10%, например, более чем около 15%, например, более чем около 20% или, например, более чем около 25%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут показывать улучшенную или оптимальную проницаемость. Проницаемость может быть измерена в клетках Caco2, и значения даны как значения Papp (кажущаяся проницаемость) в см/с. В некоторых воплощениях проницаемость больше, чем, по меньшей мере, около 0,1×10^-6 см/с, например, больше, чем около 0,2×10-6 см/с, например, больше, чем около 0,4×10^-6 см/с, например, как больше чем около 0,7×10^-6 см/с, например, больше чем около 1,0×10^-6 см/с, например, как больше чем около 2×10^-6 см/с, например, больше чем около 3×10^-6 см/с, например, более чем около 5×10^-6 см/с, например, более чем около 7×10^-6 см/с, например, более чем около 10×10^-6 см/с, например, более чем около 15×10^-6 см/с.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут показывать улучшенную или оптимальную биодоступность. В некоторых воплощениях пероральная биодоступность составляет более чем около 5%, например, более чем около 7%, например, более чем около 10%, например, более чем около 15%, например, более чем около 20%, например, более чем около 30%, например, более чем около 40%, например, более чем около 50%, например, более чем около 60%, например, более чем около 70% или, например, более чем около 80%. В других воплощениях пероральная биодоступность составляет от около 10 до около 90%, например, от около 20 до около 80%, например, от около 30 до около 70% или, например, от около 40 до около 60%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут быть субстратом для соответствующих переносчиков в почках.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вызывать повышение концентраций желчных кислот в кишечнике, печени и сыворотке, которые не вызывают неблагоприятных желудочно-кишечных эффектов.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут снижать концентрацию желчных кислот в печени, не вызывая желудочно-кишечных расстройств, таких как диарея.

Используемые в данном документе термины «лечение», «проводить лечение» и «лечить» относятся к обращению вспять, облегчению, отсрочке начала или ингибированию развития заболевания или расстройства, или одного или нескольких их симптомов, описанных в данном документе. В некоторых воплощениях лечение можно проводить после развития одного или нескольких симптомов. В других воплощениях лечение можно проводить при отсутствии симптомов. Например, лечение может быть назначено восприимчивому индивиду до появления симптомов (например, в свете симптомов в анамнезе и/или в свете генетических или других факторов восприимчивости). Лечение также может быть продолжено после исчезновения симптомов, например, для предотвращения или отсрочки их повторения.

Подходящей фармацевтически приемлемой солью соединения изобретения является, например, основно-аддитивная соль соединения изобретения, которая является достаточно кислой, такой как соль щелочного металла (например, соль натрия или калия), соль щелочноземельного металла (например, соль кальция или магния), соль аммония или соль с органическим основанием, которое дает физиологически приемлемый катион, например, соль с метиламином, диметиламином, триметиламином, пиперидином, морфолином или трис-(2-гидроксиэтил)амином.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь хиральные центры и/или геометрические изомерные центры (E- и Z-изомеры). Следует понимать, что изобретение охватывает все такие оптические изомеры, диастереоизомеры и геометрические изомеры, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT. Изобретение также охватывает любые и все таутомерные формы соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT. Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в несольватированных, а также в сольватированных формах, таких как, например, гидратированные формы. Следует понимать, что изобретение охватывает все такие сольватированные формы, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT.

В другом аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей. Наполнители могут, например, включают наполнители, связующие, разрыхлители, скользящие вещества и смазки. Как правило, фармацевтические композиции могут быть приготовлены обычным способом с использованием обычных наполнителей.

Примеры подходящих наполнителей включают, без ограничения указанным, дикальций фосфат дигидрат, сульфат кальция, лактозу (например, моногидрат лактозы), сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, сухой крахмал, гидролизованный крахмал и прежелатинизированный крахмал. В некоторых воплощениях наполнитель представляет собой маннит и/или микрокристаллическую целлюлозу.

Примеры подходящих связующих включают, без ограничения указанным, крахмал, прежелатинизированный крахмал, желатин, сахара (такие как сахароза, глюкоза, декстроза, лактоза и сорбитол), полиэтиленгликоль, воски, натуральные и синтетические камеди (такие как камедь акации и трагакантовая камедь), альгинат натрия, производные целлюлозы (такие как гидроксипропилметилцеллюлоза (или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлоза и этилцеллюлоза) и синтетические полимеры (например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкилметакрилата, сополимеры полиакриловой кислоты/полиметакриловой кислоты и поливинилпирролидон (повидон)). В некоторых воплощениях связующее представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу (гипромеллозу).

Примеры подходящих разрыхлителей включают, без ограничения указанным, сухой крахмал, модифицированный крахмал (такой как (частично) прежелатинизированный крахмал, гликолят крахмала натрия и карбоксиметилкрахмал натрия), альгиновую кислоту, производные целлюлозы (такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, гидроксипропилцеллюлоза и низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза (L-HPC)) и перекрестно-сшитые полимеры (такие как кармеллоза, кроскармеллоза натрия, кармеллоза кальция и перекрестно-сшитый PVP (кросповидон)). В некоторых воплощениях разрыхлитель представляет собой натрий кроскармеллозу.

Примеры подходящих глидантов и лубрикантов включают, без ограничения указанным, тальк, стеарат магния, стеарат кальция, стеариновую кислоту, глицерил бегенат, коллоидный диоксид кремния, водный диоксид кремния, синтетический силикат магния, тонкодисперсный оксид кремния, крахмал, лаурилсульфат натрия, борная кислота, оксид магния, воски (такие как карнаубский воск), гидрогенизированное масло, полиэтиленгликоль, бензоат натрия, полиэтиленгликоль и минеральное масло. В некоторых воплощениях глидант или лубрикант представляет собой стеарат магния или коллоидный диоксид кремния.

Фармацевтическая композиция может быть обычно покрыта одним или несколькими покровными слоями. Также рассматриваются слои энтеросолюбильного покрытия или слои покрытия для замедленного или целевого высвобождения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей. Слои покрытия могут содержать один или несколько агентов покрытия и необязательно могут содержать пластификаторы и/или пигменты (или красители).

Примеры подходящих покрывающих агентов включают, без ограничения указанным, полимеры на основе целлюлозы (такие как этилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза (или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлоза, фталат ацетата целлюлозы, сукцинат ацетата целлюлозы, сукцинат ацетата гидроксипропилметилцеллюлозы и сукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы) полимеры на основе (например, поливиниловый спирт) и полимеры на основе акриловой кислоты и ее производных (например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкилметакрилата, сополимеры полиакриловой кислоты и полиметакриловой кислоты). В некоторых воплощениях покрывающий агент представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу. В других воплощениях покрывающий агент представляет собой поливиниловый спирт.

Примеры подходящих пластификаторов включают, без ограничения указанным, триэтилцитрат, глицерилтриацетат, трибутилцитрат, диэтилфталат, ацетилтрибутилцитрат, дибутилфталат, дибутилсебацинат и полиэтиленгликоль. В определенных воплощениях пластификатор представляет собой полиэтиленгликоль.

Примеры подходящих пигментов включают, без ограничения указанным, диоксид титана, оксиды железа (такие как желтые, коричневые, красные или черные оксиды железа) и сульфат бария.

Фармацевтическая композиция может быть в форме, подходящей для перорального введения, для парентеральной инъекции (включая внутривенную, подкожную, внутримышечную и внутрисосудистую инъекцию), для местного введения или для ректального введения. В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция находится в форме, подходящей для перорального введения, такой как таблетка или капсула.

Дозировка, необходимая для терапевтического или профилактического лечения, будет зависеть от пути введения, тяжести заболевания, возраста и массы пациента и других факторов, обычно рассматриваемых лечащим врачом при определении подходящего режима и уровня дозировки для конкретного пациента.

Количество вводимого соединения будет варьировать для пациента, которого лечат, и может варьировать от около 1 мкг/кг массы тела до около 50 мг/кг массы тела в день. Форма стандартной дозы, такая как таблетка или капсула, обычно будет содержать от около 1 до около 250 мг активного ингредиента, например, от около 1 до около 100 мг, или от около 1 до около 50 мг, или от около 1 до около 20 мг, например, около 2,5 мг, или около 5 мг, или около 10 мг или около 15 мг. Суточная доза может вводиться как разовая доза или может быть разделена на одну, две, три или более стандартных доз. Суточная доза модулятора желчной кислоты, вводимая перорально, предпочтительно составляет от около 0,1 до около 250 мг, более предпочтительно от около 1 до около 100 мг, например, от около 1 до около 5 мг, например, от около 1 до около 10 мг, например, от около 1 до около 15 мг или от около 1 до около 20 мг.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве медикамента. Изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в качестве медикамента.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения при лечении или профилактике любого из заболеваний, перечисленных в данном документе. Изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики любого из заболеваний, перечисленных в данном документе. Изобретение также относится к способу лечения или профилактики любого из перечисленных в данном документе заболеваний у объекта, такого как человек, включающему введение объекту, нуждающемуся в таком лечении или профилактике, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли.

Комбинированная терапия

В одном аспекте изобретения соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводятся в комбинации по меньшей мере с одним другим терапевтически активным агентом, например, с одним, двумя, тремя или более другими терапевтически активными агентами. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль и по меньшей мере один другой терапевтически активный агент можно вводить одновременно, последовательно или раздельно. Терапевтически активные агенты, которые подходят для комбинации с соединениями формулы (I), включают, без ограничения указанным, известные активные агенты, которые полезны при лечении любого из вышеупомянутых состояний, нарушений и заболеваний.

В одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с другим ингибитором ASBT. Подходящие ингибиторы ASBT описаны в WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449., WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, DE 19825804, EP 864582, EP 489423, EP 549967, EP 573848, EP 624593, EP 624594, EP 624595, EP 624596, EP 0864582, EP 1173205 и EP 1535913, все из которых полностью включены в настоящий документ ссылкой.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании со связующим желчных кислот (также называемым секвестрантом желчных кислот или смолой), таким как колесевелам, холестирамин или холестипол. В предпочтительном воплощении такой комбинации связующее желчных кислот составлено для высвобождения из толстой кишки. Примеры таких составов раскрыты, например, в WO 2017/138877, WO 2017/138878, WO 2019/032026 и WO 2019/032027, все из которых полностью включены в настоящий документ ссылкой.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором DPP-IV, включая глиптины, такие как ситаглиптин, вилдаглиптин, саксаглиптин, линаглиптин, гемиглиптин, анаглиптин, тенелиглиптин, трелаглиптин, аллоглиптин. омариглиптин, эвоглиптин, гозоглиптин и дутоглиптин или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором HMG CoA редуктазы, таким как флувастатин, ловастатин, правастатин, симвастатин, аторвастатин, питавастатин, церивастатин, мевастатин, розувастатин, бервастатин или далвастатин или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором абсорбции холестерина, таким как эзетимиб, или его фармацевтически приемлемая соль.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводятся в комбинации с агонистом PPAR-альфа, включая фибраты, такие как клофибрат, безафибрат, ципрофибрат, клинофрибрат, клофибрид, фенофибрат, гемфиброзил, ронифибрат и симфрибрат, или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с гамма-агонистом PPAR, включая тиазолидиндионы, такие как пиоглитазон, розиглитазон и лобеглитазон, или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом PPAR альфа/гамма, включая глитазары, такие как сароглитазар, алеглитазар, мураглитазар или тесаглитазар, или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом альфа/дельта PPAR, таким как элафибранор.

В еще одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с панагонистом PPAR (т.е. агонистом PPAR, который обладает активностью во всех подтипах: α, γ и δ), таким как IVA337.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с модуляторами рецептора фарнезоида X (FXR), включая агонисты FXR, такие как кафестол, хенодезоксихолевая кислота, 6α-этилхенодезоксихолевая кислота (обетихолевая кислота; INT-747), фексарамин, тропифексор, цилофексор и MET409.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с модулятором рецептора TGR5, включая агонисты TGR5, такие как 6α-этил-23 (S)-метилхолевая кислота (INT-777).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с двойным агонистом FXR/TGR5, таким как INT-767.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с урсодезоксихолевой кислотой (UDCA). В еще одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с норурсодезоксихолевой кислотой (нор-UDCA).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с модулятором FGF19, таким как NGM282.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом FGF21, таким как BMS-986036.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором интегрина, таким как PLN-74809 и PLN-1474.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором CCR2/CCR5, таким как ценикривирок.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором протеазы каспазы, таким как эмриказан.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором галектина-3, таким как GR-MD-02.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором стеароил-CoA десатуразы (SCD), таким как арамхол (арахидиламидохолановая кислота).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором киназы 1 (ASK1), регулирующим сигнал апоптоза, таким как селонсертиб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором LOXL2, таким как симтузумаб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором ACC, таким как GS-0976.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом рецептора тироидного гормона-β, таким как MGL3196.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом GLP-1, таким как лираглутид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойными агонистами глюкагоноподобного пептида и рецептора глюкагона, такими как SAR425899.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором митохондриального носителя пирувата, таким как MSDC-0602K.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антиоксидантным агентом, таким как витамин Е.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором SGLT1, ингибитором SGLT2 или двойным ингибитором SGLT1 и SGLT2. Примерами таких соединений являются дапаглифлозин, сотаглифлозин, канаглифлозин, эмпаглифлозин, LIK066 и SGL5213.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором диацилглицерин-O-ацилтрансферазы 2 (DGAT2), таким как DGAT2RX и PF-06865571.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором синтазы жирных кислот (FASN), таким как TVB-2640.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с активатором AMP-активированной протеинкиназы (AMPK), таким как PXL-770.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора глюкокортикоидов (GR), антагонистом рецептора минералокортикоидов (MR) или двойным антагонистом GR/MR. Примерами таких соединений являются MT-3995 и CORT-118335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антагонистом каннабиноидного рецептора 1 (CB1), таким как IM102.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с Klothoβ (KLB) и активатором рецептора фактора роста фибробластов (FGFR), таким как MK-3655 (ранее известный как NGM-313).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором хемокинового (c-c-мотив) лиганда 24 (CCL24), таким как CM101.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антагонистом A3, таким как PBF-1650.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антагонистом рецептора P2x7, таким как SGM 1019.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистами рецептора P2Y13, такими как CER-209.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с сульфатированным оксистеролом, таким как Dur-928.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора лейкотриена D4 (LTD4), таким как MN-001.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором Т-клеток-естественных киллеров 1 типа (NKT1) , таким как GRI-0621.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антилипополисахаридным (LPS) соединением, таким как IMM-124E.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором VAP1, таким как BI1467335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом аденозинового рецептора A3, таким как CF-102.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с активатором SIRT-1, таким как NS-20.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом рецептора 1 никотиновой кислоты, таким как ARI-3037MO.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антагонистом TLR4, таким как JKB-121.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором кетогексокиназы, таким как PF-06835919.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом рецептора адипонектина, таким как ADP-335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором аутотаксина, таким как PAT-505 и PF8380.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом хемокинового (c-c-мотив) рецептора 3 (CCR3), таким как бертилимумаб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании со стимулятором хлоридных каналов, таким как кобипростон и любипростон.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором белка теплового шока 47 (HSP47), таким как ND-L02-s0201.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором фактора транскрипции белка, связывающегося с регуляторным элементом стерола (SREBP), таким как CAT-2003 и MDV-4463.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с бигуанидином, таким как метформин.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с инсулином.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором гликогенфосфорилазы и/или ингибитором глюкозо-6-фосфатазы.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с сульфонилмочевиной, такой как глипизид, глибенкламид и глимепирид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с меглитинидом, таким как репаглинид, натеглинид и ормиглитинид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором глюкозидазы, таким как акарбоза или миглитол.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором скваленсинтазы, таким как TAK-475.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором PTPB1, таким как тродускемин, эртипротафиб, JTT-551 и кларамин.

Получение соединений

Соединения по настоящему изобретению можно получить в виде свободной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли способами, описанными ниже. В последующем описании таких способов понятно, что, где это уместно, подходящие защитные группы будут добавлены и впоследствии удалены из различных реагентов и промежуточных продуктов способом, который будет легко понят специалистам в области органического синтеза. Обычные процедуры применения таких защитных групп, а также примеры подходящих защитных групп описаны, например, в книге Greene's Protective Groups in Organic Synthesis P.G.M Wutz и T.W. Greene, 4th Edition, John Wiley & Sons, Hoboken, 2006.

Общие способы

Все использованные растворители были аналитической чистоты. Для реакций обычно использовались коммерчески доступные безводные растворители. Исходные материалы были доступны из коммерческих источников или были получены в соответствии с описанными в литературе процедурами. 3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксид может быть получен, как описано в WO 03/022286 (способ 24). Комнатная температура относится к 20-25°C. Составы смеси растворителей даны в объемных процентах или объемных соотношениях.

LCMS

Название прибора - Agilent 1290 infinity II.

Способ A. Подвижная фаза. A: 0,1% HCOOH в H2O: ACN (95: 5), B: ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: ZORBAX XDB C-18 (50×4,6 мм) 3,5 мкМ.

Способ B. Подвижная фаза. A: 10 мМ NH4HCO3 в воде, B: ACN; скорость потока: 1,2 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50×4,6 мм), 3,5 мкМ.

Способ C. Подвижная фаза. A: 0,1% HCOOH в воде: ACN (95: 5), B: ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: ATLANTIS dC18 (50×4,6 мм), 5 мкМ.

Способ D. Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4OAc в воде, B: ACN; скорость потока: 1,2 мл/мин; колонка: Zorbax Extend C18 (50×4,6 мм) 5 мкМ.

Способ E. Подвижная фаза. A: 0,1% TFA в воде: ACN (95: 5), B: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; Колонка: XBridge C8 (50×4,6 мм), 3,5 мкМ.

Способ F. Подвижная фаза. A: 0,1% TFA в воде, B: 0,1% TFA в ACN; Скорость потока: 0,8 мл/мин; колонка: ZORBAX ECLIPSE PLUS C18 (50×2,1 мм), 1,8 мкМ.

Способ G. Подвижная фаза. A: 0,1% TFA в воде, B: 0,1% TFA в ACN; Скорость потока: 0,8 мл/мин; колонка: Acquity UPLC BEH C18 (2,1×50 мм), 1,7 мкм.

CHPLC

Название прибора: Water Acquity I Class.

Способ A. Подвижная фаза. A: 0,1% HCOOH в воде, B: 0,1% HCOOH в ACN; Скорость потока: 0,8 мл/мин; Колонка: Acquity UPLC HSS T3 (2,1×50) мм; 1,8 мкм.

HPLC

Название прибора - приборы серии Agilent 1260 Infinity II с использованием процента с УФ-детектированием (maxplot).

Способ A. Подвижная фаза. A: 10 мМ NH4HCO3 в воде, B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Способ B. Подвижная фаза. A: 0,1% TFA в воде, B: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 2,0 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Способ C. Подвижная фаза. A: 10 мМ NH4OAc в воде milli-q, B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: Phenomenex Gemini C18 (150×4,6 мм, 3,0 мкм).

Способ D. Подвижная фаза. A: 0,1% TFA в воде, B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: ATLANTIS dC18 (250×4,6 мм, 5,0 мкм).

Хиральная HPLC

Название прибора - Agilent 1260 Infinity II

Способ A. Подвижная фаза. A: 0,1% TFA в н-гексане; B: этанол, поток: 1,0 мл/мин; Колонка: CHIRALPAK IA (250×4,6 мм, 5,0 мкм).

Хиральная SFC

Название прибора - PIC SFC 10 (аналитический)

Соотношение CO2 и сорастворителя составляет от 60:40 до 80:20.

Способ A. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SA (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ B. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralpak AD-H (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ C. Подвижная фаза: 20 мМ аммиак в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ D. Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux A1 (250 х 4,6 мм, 5 мкм).

Способ Е. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: Люкс C4.

Способ F. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC.

Способ G. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Люкс А1.

Способ Н. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux A1 (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ I. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ J. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC AD-H (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ К. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 4 мл/мин; колонка: (R, R)-Whelk-01 (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ L: подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralcel OX-H (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ М. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250×4,6 мм, 5 мкм).

Способ N. Подвижная фаза: метанол, скорость потока: 5 мл/мин; колонка: Chiralcel OX-H (250×4,6 мм, 5 мкм).

Препаративная HPLC

Название прибора - Agilent 1290 Infinity II

Способ A. Подвижная фаза. A: 0,1% TFA в воде; мобильная фаза; B: 0,1% TFA в CAN; скорость потока: 2,0 мл/мин; колонка: X-Bridge C8 (50×4,6 мм, 3,5 мкМ).

Способ B. Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4OAc в воде; B: ACN; скорость потока: 35 мл/мин; столбец: X выберите C18 (30×150 мм, 5 мкм).

Способ C. Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4HCO3 в воде; B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Способ D. Подвижная фаза: A: 0,1% HCOOH в воде; B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: X-select C18 (30×150 мм, 5 мкм).

Хиральная препаративная SFC

Название прибора - PIC SFC 100 и PSC SFC 400

Способ A. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SA (250×30 мм, 5 мкм).

Способ B. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralpak AD-H (250×30 мм, 5 мкм).

Способ C. Подвижная фаза: 20 мМ аммиак в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250×30 мм, 5 мкм).

Способ D. Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250×30 мм, 5 мкм).

Способ E. Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux A1 (250×30 мм, 5 мкм).

Способ F. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux A1 (250×30 мм, 5 мкм).

Способ G. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250×30 мм, 5 мкм).

Способ Н. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA, скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SC (250×30 мм, 5 мкм).

Способ J. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralcel OX-H (250×30 мм, 5 мкм).

Способ К. Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250×30 мм, 5 мкм).

Способ L. Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: Chiralcel OX-H (250×30 мм, 5 мкм).

Хиральная препаративная HPLC

Название прибора - Agilent 1260 Infinity II

Способ A. Подвижная фаза: A: 0,1% TFA в н-гексане; B: этанол; скорость потока: 15 мл/мин; колонка: CHIRALPAK IA (250×19 мм, 5,0 мкм).

Сокращения

ACN	ацетонитрил
DCM	дихлорметан
DMAP	4-диметиламинопиридин
DMF	диметилформамид
IPA	изопропиловый спирт
LCMS	жидкостная хроматография - масс-спектрометрия
HPLC	высокоэффективная жидкостная хроматография
PE	петролейный эфир
SFC	сверхкритическая жидкостная хроматография
TFA	трифторуксусная кислота
THF	тетрагидрофуран
TLC	тонкослойная хроматография
UPLC	сверхэффективная жидкостная хроматография

Теперь изобретение будет описано с помощью следующих примеров, которые никоим образом не ограничивают изобретение. Все процитированные документы и источники включены ссылкой.

Примеры

Промежуточное соединение 1

Этил-3-((3,3-дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5 -бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропаноат

К перемешиваемой суспензии 3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (12 г, 21,1 ммоль) в этилакрилате (80 мл) при комнатной температуре, добавляли DMAP (257 мг, 2,11 ммоль). Реакционную смесь нагревали в запаянной пробирке 72 часа при 100°C. За ходом реакции следили с помощью TLC, которая указала на неполное превращение (~40%) исходного материала. Реакционную смесь упаривали и сушили в вакууме, получая неочищенное указанное в заголовке соединение, которое отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 15 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).

LCMS: (способ A) 669,3 (M ++ H), Rt. 3,66 мин, 36,45% (макс.).

Промежуточное соединение 2

3-((3,3-Дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5- бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота

Получение 1

К перемешиваемому раствору этил-3-((3,3-дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропаноата (промежуточное соединение 1; 40 г, 59,79 ммоль) в 1,4-диоксане (200 мл) при комнатной температуре, по каплям добавляли HCl (6 н., 200 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 80°C. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (500 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×200 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и упаривали в вакууме. Полученный неочищенный материал очищали колоночной флэш-хроматографией (элюент: 20-70% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 39% (15 г, коричневое смолистое вещество).

LCMS: (способ E) 641,3 (M ++ H), Rt. 2,93 мин, 75,38% (макс.).

Получение 2

К перемешиваемой суспензии 3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (500 мг, 0,88 ммоль) в THF (5 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (99 мг, 0,88 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляли β-пропиолактон (76 мг, 1,05 ммоль) при 0°C и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь подкисляли 1,5 н. HCl при 0°C, и водный слой экстрагировали EtOAc (2×10 мл). Объединенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и упаривали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (элюент: 10-50% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 53% (300 мг, белое твердое вещество).

LCMS: (способ D) 641,3 (M + + H), Rt. 3,48 мин, 96,63% (макс.).

Промежуточное соединение 3

Этил 2-аминобутаноат гидрохлорид

К перемешиваемому раствору 2-аминобутановой кислоты (100 г, 0,97 моль) в этаноле (750 мл) добавляли тионилхлорид (78 мл, 1,07 моль) при 0°C. Затем реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 80°C. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали под вакуумом с получением сырого указанного в заголовке соединения, которое использовали как таковое на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 93% (152 г, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 8,66 (шир. С, 3H), 4,25-4,16 (м, 2H), 3,98-3,85 (м, 1H), 1,84 (т, J=7,2 Гц, 2H), 1,23. (т, J=6,8 Гц, 3H), 0,92 (т, J=7,6 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 4

Этил (E)-2-(бензилиденамино) бутаноат

К перемешиваемому раствору гидрохлорида этил 2-аминобутаноата (промежуточное соединение 3; 152 г, 0,91 моль) в DCM (900 мл) добавляли триэтиламин (152 мл, 1,09 моль) при 0°C в течение 30 минут. К реакционной смеси порциями добавляли сульфат магния (98 г, 0,82 моль) при 0°C. Затем к реакционной смеси добавляли бензальдегид (84 мл, 0,82 моль) при 0°C в течение 20 минут и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали под вакуумом. Полученный сырой продукт растворяли в петролейном эфире (1000 мл) и снова фильтровали через целит. Затем фильтрат концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Этот неочищенный материал в таком виде направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 90% (180 г, бледно-коричневая жидкость).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 8,40 (с, 1H), 7,79-7,76 (м, 2H), 7,49-7,47 (м, 3H), 4,16-4,10 (м, 2H), 3,98-3,95 (м, 1H), 1,92-1,89 (м, 1H), 1,79-1,74 (м, 1H), 1,19 (т, J=7,2 Гц, 3H), 0,85 (т, J=7,2 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 5

Этил (E)-2-(бензилиденамино)-2-этилгексаноат

К перемешиваемому раствору NaH (60%; 32,8 г, 0,82 моль) в DMF (100 мл) при 0°C медленно добавляли в течение 30 минут этил (E)-2-(бензилиденамино) бутаноат (промежуточное соединение 4; 180 г, 0,82 моль) в DMF (800 мл). Затем реакционную смесь перемешивали 1,5 часа при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли н-бутилиодид (93 мл, 0,82 моль) при 0°C и смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили 2-пропанолом (100 мл) при 0°C, а затем разбавляли водой (1000 мл). Водный слой экстрагировали петролейным эфиром (1000 мл). Органический слой промывали рассолом (200 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали под вакуумом, и полученный неочищенный материал отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 88% (200 г, желтая жидкость).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 8,34 (с, 1H), 7,80-7,77 (м, 2H), 7,47-7,44 (м, 3H), 4,16 (кв, J=7,0 Гц, 2H), 2,51-1,79 (м, 4H), 1,31-1,18 (м, 7H), 0,88-0,84 (м, 6H).

Промежуточное соединение 6

Этил 2-амино-2-этилгексаноат

К перемешиваемому раствору этил (Е)-2-(бензилиденамино)-2-этилгексаноата (промежуточное соединение 5; 200 г, 0,73 моль) в петролейном эфире (500 мл) добавляли разбавленную HCl (1000 мл, 1,5 н.) при 0°C, и реакционную смесь интенсивно перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) органический слой отделяли, а водный слой промывали EtOAc (2×100 мл). Затем водный слой подщелачивали (pH~8,5), используя твердый бикарбонат натрия (200 г), и экстрагировали EtOAc (2×200 мл). Органический слой промывали водой (2×15 мл). Объединенную органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Неочищенный материал в таком виде направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 80% (110 г, бледно-желтая жидкость).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 4,08 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 1,68-1,00 (м, 13H), 0,85 (т, J=7,2 Гц, 3H), 0,77 (т, J=7,4 Гц, 3H).

Промежуточное соединение 7

2-амино-2-этил-N-фенилгексанамид

К перемешиваемому раствору анилина (48,3 мл, 534 ммоль) в THF (250 мл) при -78°C по каплям в течение 30 минут добавляли н-BuLi (2,6 М в гексане; 205 мл, 534 ммоль). и перемешивали реакционную смесь в течение 45 минут при температуре от -25°C до -30°C. Затем к реакционной смеси добавляли этил 2-амино-2-этилгексаноат (промежуточное соединение 6; 50 г, 267 ммоль) в THF (250 мл) при -78°C и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при -78°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили водой (500 мл) при -78°C. Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2×250 мл), и органический слой промывали водой (2×15 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом, получая указанное в заголовке соединение в виде неочищенного вещества. Неочищенный продукт растворяли в петролейном эфире (1000 мл). Органическую часть промывали 30% метанолом в воде (2 х 250 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали под вакуумом, и полученное неочищенное вещество направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 66 г (сырая, коричневая жидкость).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,64 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,30 (т, J=7,4 Гц, 2H), 7,05 (т, J=7,4 Гц, 1H), 6,55 (д, J=8,5 Гц, 1H), 1,76-1,07 (м, 10H), 0,86-0,77 (м, 6H).

Промежуточное соединение 8

2-этил-N1-фенилгексан-1,2-диамин

К перемешиваемому раствору 2-амино-2-этил-N-фенилгексанамида (промежуточное соединение 7; 66 г, 0,28 моль) в THF (600 мл) добавляли диметилсульфид борана (2M в THF, 253 мл, 0,51 моль) при 0°C, и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 70°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили метанолом (300 мл) при 0°C. Затем реакционную смесь нагревали в течение 2 часов при 70°C. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, и полученный остаток растворяли в EtOAc (1000 мл). Органический слой промывали водой (2×150 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40% EtOAc в гексане; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 82% (50 г, коричневая жидкость).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,04 (т, J=7,2 Гц, 2H), 6,61 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,49 (т, J=7,2 Гц, 1H), 5,15 (т, J=4,8 Гц, 1H), 2,79 (д, J=5,6 Гц, 2H), 1,39-1,17 (м, 10H), 0,88-0,79 (м, 6H).

Промежуточное соединение 9

1,2-бис (2,4-дибром-5-метоксифенил) дисульфан

К перемешиваемому раствору 3-метоксибензолтиола (100 г, 0,7 моль) в метаноле (1000 мл) по каплям добавляли бром (73 мл, 1,4 моль) при 0°C и перемешивали реакционную смесь в течение 24 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали в вакууме, и полученный неочищенный продукт разбавляли EtOAc (2000 мл) и промывали водой (2×500 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом. Полученный сырой продукт растворяли в ледяной уксусной кислоте (600 мл), по каплям добавляли бром (20 мл) при комнатной температуре и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. Полученное твердое вещество отфильтровывали, растирали с DCM и сушили в вакууме с получением чистого указанного в заголовке соединения. Выход: 37% (78 г, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,69 (с, 2H), 7,17 (с, 2H), 3,84 (с, 6H).

Промежуточное соединение 10

2,4-дибром-5-метоксибензолсульфонилхлорид

К перемешиваемой суспензии 1,2-бис (2,4-дибром-5-метоксифенил) дисульфана (промежуточное соединение 9; 20,0 г, 33,67 ммоль) и нитрата калия (17,02 г, 168,35 ммоль) в ацетонитриле (200 мл) по каплям добавляли сульфурилхлорид (13,6 мл, 168,35 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали 24 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь выливали в колотый лед и полученное твердое вещество отфильтровывали. Твердое вещество промывали водой и сушили под вакуумом с получением чистого указанного в заголовке соединения. Выход: 91% (22,5 г, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 8,05 (с, 1H), 7,66 (с, 1H), 4,01 (с, 3H).

Промежуточное соединение 11

2,4-Дибром-5-метокси-N-(3-((фениламино) метил) гептан-3-ил) бензолсульфонамид

К перемешиваемому раствору 2-этил-N1-фенилгексан-1,2-диамина (промежуточное соединение 8; 4,9 г, 22,34 ммоль) в THF (10 мл) добавляли 2,4-дибром-5-метоксибензолсульфонилхлорид (промежуточное соединение 10; 10,5 г, 28,91 ммоль) и триэтиламина (9,3 мл, 67,02 ммоль) при 0°C, и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь разбавляли EtOAc (50 мл). Органический слой промывали водой (2×15 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали под вакуумом и полученный сырой продукт очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 59% (7,2 г, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 8,01 (с, 1H), 7,60 (с, 1H), 7,50 (с, 1H), 7,03 (т, J = 8,1 Гц, 2H), 6,54-6,46 (м, 3H), 4,80 (т, J=5,1 Гц, 1H), 3,86 (с, 3H), 3,07-2,96 (м, 2H), 1,66-1,41 (м, 4H), 1,15-0,95 (м, 4H), 0,78-0,69 (м, 6H).

Промежуточное соединение 12

7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксид

К перемешиваемому раствору 2,4-дибром-5-метокси-N-(3-((фениламино)метил) гептан-3-ил)бензолсульфонамида (промежуточное соединение 11; 7,2 г, 13,1 ммоль) в DMF (50 мл) добавляли карбонат калия (3,62 г, 26,2 ммоль) и порошок меди (834 мг, 13,1 ммоль), и нагревали реакционную смесь в течение 24 часов при 150°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь фильтровали через целит и промывали EtOAc (25 мл). Органическую часть концентрировали под вакуумом и полученный сырой продукт очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 83% (5,1 г, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,43-7,30 (м, 4H), 7,15-7,13 (м, 2H), 7,03-7,01 (м, 2H), 4,00-3,60 (м, 5H), 1,62-1,34 (м, 4H), 1,08-0,95 (м, 4H), 0,74-0,71 (м, 6H). LCMS: (способ A) 467,0 (M +), Rt. 3,06 мин., 95,31% (макс.).

Промежуточное соединение 13

7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-2-(4-метоксибензил)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксид

К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 12; 20,0 г, 42,7 ммоль) в N-метил-2-пирролидоне (100 мл) добавляли Cs2CO3 (27,8 г, 85,5 ммоль) и п-метоксибензилбромид (7,98 мл, 39,5 ммоль) при 0°C и перемешивали реакционную смесь 1 час при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь разбавляли EtOAc (200 мл) и органический слой промывали водой (2×50 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 64% (16 г, белое твердое вещество).

LCMS: (способ A) 587,2 (M +), Rt. 3,51 мин., 92,94% (макс.).

Промежуточное соединение 14

3-Бутил-3-этил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксид

К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-2-(4-метоксибензил)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 13; 16,0 г, 27,2 ммоль) в DMF (120 мл), добавляли тиометоксид натрия (9,5 г, 136,1 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 60°C. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь разбавляли EtOAc (200 мл) и органический слой промывали водой (2×50 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄, затем концентрировали в вакууме и полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 65% (9,2 г, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,37 (шир. С, 1H), 7,31-7,22 (м, 5H), 7,01-6,65 (м, 6H), 4,32-4,13 (м, 2H), 4,10-3,90 (м, 2H), 3,74 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 1,62-1,34 (м, 4H), 1,08-0,98 (м, 4H), 0,74-0,65 (м, 6H). LCMS: (способ E) 541,2 (M + + H), Rt. 2,86 мин., 93,67% (макс.).

Промежуточное соединение 15

3-((3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2, 5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота

К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 14; 1 г, 1,85 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (208 мг, 1,85 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (148 мг, 2,03 ммоль) в THF (2 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл), а затем разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2×20 мл), и объединенный органический слой промывали водой (20 мл) и рассолом (20 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали, концентрировали под вакуумом и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 35% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 48% (550 мг, белое твердое вещество).

LCMS: (способ A) 613,3 (M ++ H), Rt. 3,04 мин, 91,99% (макс.).

Промежуточное соединение 16

Метил 3-((3,3-дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5 -бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат

К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (500 мг, 0,87 ммоль) в DMF (10 мл), добавляли Cs2CO3 (0,57 г, 1,76 ммоль) и метил-2,3-эпоксипропаноат (0,18 г, 1,76 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 12 часов при 50°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили водой (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×15 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 33% (200 мг, бесцветное смолистое вещество).

LCMS: (способ A) 671,2 (M ++ H), Rt. 3,32 мин, 44,28% (макс.).

Промежуточное соединение 17

3-((3,3-Дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5- бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота

К раствору метил-3-((3,3-дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 16; 200 мг, 0,31 ммоль) в 1,4-диоксане (3 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 3 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 80°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (5 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал отправляли на следующую стадию как таковой без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 200 мг (неочищенная бесцветное смолистое вещество).

LCMS: (способ A) 657,2 (M + + H), Rt. 3,0 мин, 36,70% (макс.).

Промежуточное соединение 18

Метил-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат

К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (0,63 г, 0,002 ммоль) в DMF (9 мл) добавляли Cs2CO3 (0,92 г, 0,003 ммоль) и метил-2,3-эпоксипропаноат (1,28 г, 0,0126 ммоль; добавляли порциями в 3 равных количествах через 72 часа), и реакционная смесь перемешивали 72 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 20 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×50 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл) и рассолом (20 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 25% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 28% (220 мг, белое твердое вещество).

LCMS: (способ E) 550,8 (M + + H), Rt. 3,22 мин, 92,74% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 6,15 мин, 94,48% (макс.).

Промежуточное соединение 19

Метил (S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8 -ил)окси)-2-гидроксипропаноат и метил (R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат

Два энантиомера рацемического метил 3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 18; 216 мг, 0,39 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (способ A). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.

Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3×5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного энантиомера указанного в заголовке соединения.

Энантиомер 1. Выход: 46% (100 мг, бесцветное смолистое вещество). LCMS: (способ E) 551,2 (M ++ H), Rt. 2,77 мин, 98,09% (макс.). Хиральная SFC: (способ A) Rt. 3,58 мин, 99,10% (макс.).

Энантиомер 2. Выход: 41% (90 мг, бесцветное смолистое вещество). LCMS: (способ E) 551,1 (M⁺+ H), Rt. 2,77 мин, 91,29% (макс.). Хиральная SFC: (способ A) Rt. 4,59 мин, 99,24% (макс.)

Промежуточное соединение 20

3-((3,3-Дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5- бензотиадиазепин-8-ил)окси)бутановая кислота

К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (300 мг, 0,52 ммоль) в THF (10 мл), добавляли трет-бутоксид калия (65 мг, 0,58 ммоль) и β-бутиролактон (68 мг, 0,79 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 60°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 72% (250 мг, бесцветное смолистое вещество).

LCMS: (способ E) 655,3 (M + + H), Rt. 3,03 мин, 89,11% (макс.).

Промежуточное соединение 21

Этил 2-аминогексаноат гидрохлорид

К перемешиваемому раствору DL-норлейцина (100 г, 0,76 моль) в этаноле (1 л) добавляли тионилхлорид (60,8 мл, 0,84 моль) при 0°C и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 80°C. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали под вакуумом с получением сырого указанного в заголовке соединения, которое использовали как таковое на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 97% (145 г, коричневое смолистое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,80 (с, 3H), 4,33-4,23 (м, 2H), 4,09-4,07 (м, 1H), 2,09-2,04 (м, 2H), 1,61-1,56 (м, 1H), 1,48-1,33 (м, 6H), 1,03-0,88 (м, 3H).

Промежуточное соединение 22

Этил(E)-2-(бензилиденамино)гексаноат

К перемешиваемому раствору гидрохлорида этил 2-аминогексаноата (промежуточное соединение 21; 145 г, 0,74 моль) в DCM (1,5 л) добавляли триэтиламин (124 мл, 1,2 моль) при 0°C в течение 30 минут. Затем к реакционной смеси при 0°C порциями добавляли сульфат магния (89,2 г, 0,74 моль). Затем к реакционной смеси добавляли бензальдегид (75,6 мл, 0,74 моль) при 0°C в течение 20 минут и затем реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт растворяли в петролейном эфире (1000 мл), снова фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Этот неочищенный материал в таком виде направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 98% (180 г, коричневая жидкость).

1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,30 (с, 1H), 7,82-7,80 (м, 2H), 7,47-7,42 (м, 3H), 4,26-4,20 (м, 2H), 3,99-3,95 (м, 1H), 2,06-2,00 (м, 1H), 1,96-1,89 (м, 1H), 1,40-1,24 (м, 7H), 0,95-0,91 (м, 3H).

Промежуточное соединение 23

Этил (E)-2-(бензилиденамино)-2-бутилгексаноат

К перемешиваемому раствору NaH (60%, 29,1 г, 0,73 моль) в DMF (250 мл) при 0°C медленно добавляли раствор этил (E)-2-(бензилиденамино)гексаноата (промежуточное соединение 22; 180 г, 0,73 моль) в DMF (250 мл) в течение 30 минут. Реакционную смесь перемешивали 1,5 часа при комнатной температуре. Затем добавляли раствор н-бутилиодида (82,7 мл, 0,73 моль) в DMF (250 мл) при 0°C и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь разбавляли водой (1000 мл) и водный слой экстрагировали петролейным эфиром (1000 мл). Органический слой промывали рассолом (200 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали под вакуумом, и полученный неочищенный материал отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 95% (210 г, коричневая жидкость).

Промежуточное соединение 24

Этил 2-амино-2-бутилгексаноат

К перемешиваемому раствору этил (Е)-2-(бензилиденамино)-2-бутилгексаноата (промежуточное соединение 23; 210 г, 0,76 моль) в петролейном эфире (1000 мл) добавляли разбавленную HCl (1000 мл, 1,5 н.) при 0°C, и реакционную смесь интенсивно перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) органический слой отделяли и промывали EtOAc (2×100 мл). Затем водный слой подщелачивали (pH ~ 10), используя раствор гидроксида натрия, и экстрагировали DCM (2×1000 мл). Объединенную органическую часть промывали водой (2×1000 мл), рассолом (1000 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме, получая указанное в заголовке соединение, которое отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 52% (85 г, коричневая жидкость).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 4,11-4,04 (м, 2H), 1,78-1,61 (м, 4H), 1,60-1,51 (м, 3H), 1,50-1,22 (м, 7H), 1,20-0,99 (м, 3H), 0,95-0,75 (м, 6H).

Промежуточное соединение 25

2-амино-2-бутил-N-фенилгексанамид

К перемешиваемому раствору анилина (19,1 мл, 209 ммоль) в THF (250 мл) при -78°C по каплям в течение 30 минут добавляли n-BuLi (2,6 M в гексане, 250,7 мл, 627 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 45 минут при температуре от -25°C до -30°C. Затем к реакционной смеси добавляли раствор этил 2-амино-2-бутилгексаноата (промежуточное соединение 24; 45 г, 209 ммоль) в THF (200 мл) при -78°C и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при этой температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили при -78°C изопропанолом (100 мл), а затем ледяной водой (500 мл), и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 1 часа при температуре комнатная температура. Водную часть экстрагировали EtOAc (2×250 мл), и объединенный органический слой промывали водой (2×50 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом, получая указанное в заголовке соединение в виде неочищенного вещества. Полученный неочищенный материал растворяли в петролейном эфире (1000 мл), промывали 30% метанолом в воде (2×250 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали под вакуумом, и полученное неочищенное вещество направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 60 г (неочищенное вещество, коричневая жидкость).

LCMS: (способ A) 263,3 (M +), Rt. 1,29 мин, 95,84% (макс).

Промежуточное соединение 26

2-бутил-N1-фенилгексан-1,2-диамин

К перемешиваемому раствору 2-амино-2-бутил-N-фенилгексанамида (промежуточное соединение 25; 100 г, 0,38 моль) в THF (1 л) добавляли комплекс диметилсульфида и борана (2 М в THF, 476 мл, 0,95 моль) при 0°C, и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 70°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили метанолом (300 мл) при 0°C и нагревали реакционную смесь в течение 2 часов при 70°C. Затем реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Полученный остаток растворяли в EtOAc (1000 мл), и органический слой промывали водой (2×300 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 0-25% EtOAc в гексане; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 39% (37 г, коричневая жидкость).

Промежуточное соединение 27

2,4-дихлор-5-метоксибензолсульфоновая кислота

К перемешиваемому раствору хлорсульфоновой кислоты (60 мл) при 0°C порциями добавляли 2,4-дихлоранизол (20 г, 113 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 часов при температуре от 0 до 10°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь выливали на колотый лед при интенсивном перемешивании и полученное твердое вещество отфильтровывали. Твердое вещество промывали несколько раз ледяной водой (50 мл), петролейным эфиром (50 мл), а затем сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 70% (19 г, грязно-белое твердое вещество).

LCMS: (способ A) 255,0 (M + -H), Rt. 2,66 мин, 96,06% (макс.).

Промежуточное соединение 28

2,4-Дихлор-5-метокси-N-(5-((фениламино) метил) нонан-5-ил) бензолсульфонамид

Раствор 2,4-дихлор-5-метоксибензолсульфоновой кислоты (промежуточное соединение 27; 10 г, 41,5 ммоль) в SOCl2 (20 мл) нагревали в течение 12 часов при 70°C. После полного расходования исходного материала реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученный остаток растворяли в THF (50 мл). Раствор триэтиламина (17 мл, 124,7 ммоль) в THF (100 мл), а затем добавляли 2-бутил-N1-фенилгексан-1,2-диамин (промежуточное соединение 26; 12,4 г, 49,9 ммоль) при 0°C и перемешивали реакционную смесь 4 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили ледяной водой (30 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×100 мл). Объединенный органический слой промывали водой (100 мл) и рассолом (100 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 25-35% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 40% (8 г, грязно-белое твердое вещество).

LCMS: (способ E) 487,1 (M + + H), Rt. 2,93 мин, 43,66% (макс.).

Промежуточное соединение 29

3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксид

К перемешиваемому раствору 2,4-дихлор-5-метокси-N-(5-((фениламино)метил)нонан-5-ил)бензолсульфонамида (промежуточное соединение 28; 4 г, 8,21 ммоль) в DMF (20 мл), добавляли безводный K2CO3 (2,26 г, 16,42 ммоль) и порошок меди (0,52 г, 8,21 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 120°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали DCM (10 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 2-20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 24% (900 мг, твердое вещество грязно-белого цвета).

LCMS: (способ E) 451,1 (M ++ H), Rt. 2,96 мин, 34,15% (макс.).

Промежуточное соединение 30

3,3-дибутил-7-хлор-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксид

К раствору 3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 29; 0,9 г 1,2 ммоль) в DCM (4 мл) при -78°C, добавляли BBr3 (1 M в DCM; 4 мл, 4 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 ч при температуре от -10°C до 0°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили ледяной водой (10 мл). Органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 22% (195 мг, желтое смолистое вещество).

LCMS: (способ E) 437,1 (M + + H), Rt. 2,80 мин, 53,01% (макс.).

Промежуточное соединение 31

5-(4-бромфенил)-3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1, 1-диоксид

К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (3 г, 5,27 ммоль) в DMF (18 мл) при 0°C добавляли раствор N-бромсукцинимида (1,03 г, 5,80 ммоль) в DMF (12 мл), и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь выливали в ледяную воду (20 мл), перемешивали и фильтровали. Полученное твердое вещество очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 25% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 82% (2,8 г, белое твердое вещество).

LCMS: (способ B) 648,2 (M ++ 2), Rt. 4,65 мин, 67,27% (макс.).

Промежуточное соединение 32

3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-5-(4-метоксифенил)-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1, 1-диоксид

К раствору 5-(4-бромфенил)-3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,2, 5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 31; 2,0 г, 3,09 ммоль) в DMF (20 мл) при 0°C, добавляли бромид меди (44 мг, 0,31 ммоль), а затем свежеприготовленный раствор метоксида натрия (приготовлен in situ путем добавления натрия (0,35 г, 15,4 ммоль) к сухому метанолу (10 мл)). Затем реакционную смесь нагревали в течение 24 часов при 100°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 10 мл) и водный слой экстрагировали смесью EtOAc и PE (1: 1) (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 81% (1,5 г, бледно-желтое твердое вещество).

LCMS: (способ E) 599,3 (M ++ H), Rt. 3,38 мин, 99,50% (макс.).

Промежуточное соединение 33

3-((3,3-Дибутил-2-(4-метоксибензил)-5-(4-метоксифенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота

К раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-5-(4-метоксифенил)-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 32; 1,5 г, 2,64 ммоль) в THF (20 мл), добавляли трет-бутоксид калия (326 мг, 2,9 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 10 минут при 0°C. Затем добавляли β-пропиолактон (209 мг, 2,9 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 20 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (30 мл) и рассолом (30 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 0-70% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 48% (850 мг, белое твердое вещество).

LCMS: (способ E) 670,8 (M + + H), Rt. 3,37 мин, 94,99% (макс.).

Промежуточное соединение 34

3-((3,3-Дибутил-5-(4-метоксифенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота

К раствору 3-((3,3-дибутил-2-(4-метоксибензил)-5-(4-метоксифенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты (промежуточное соединение 33; 850 мг, 1,27 ммоль) в толуоле (10 мл) добавляли трифениламин (621 мг, 2,54 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 10 минут при 0°C. Затем добавляли TFA (1,9 мл, 25,4 ммоль) и реакционной смеси давали возможность перемешиваться в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 0-5% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 92% (650 мг, твердое вещество грязно-белого цвета).

LCMS: (способ E) 550,8 (M + + H), Rt. 3,24 мин, 94,98% (макс.).

Промежуточное соединение 35

Изопропил-3-((3,3-дибутил-5-(4-гидроксифенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропаноат

К раствору 3-((3,3-дибутил-5-(4-метоксифенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты (промежуточное соединение 34; 300 мг, 0,54 ммоль) в DCM (10 мл) при -78°C, добавляли BBr3 (1,1 мл, 1,09 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при -30°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь гасили изопропиловым спиртом и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 0-5% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 150 мг (грязно-белое твердое вещество).

LCMS: (способ A) 578,8 (M + + H), Rt. 2,88 мин, 83,38% (макс.).

(Примечание: во время гашения изопропиловым спиртом наблюдается продукт этерификации желаемого соединения, на что указывает LCMS)

Промежуточное соединение 36

3-Бутил-7-(диметиламино)-3-этил-8-метокси-2-(4-метоксибензил)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксид

К дегазированному раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-2-(4-метоксибензил)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 13; 3,5 г, 6,34 ммоль) в 1,4-диоксане (35 мл) добавляли трет-бутоксид натрия (1,2 г, 12,6 ммоль), ксантфос (0,073 г, 0,13 ммоль) и Pd2dba3 (0,058 г, 0,06 ммоль), и раствор дегазировали в течение 10 минут в атмосфере N2. Добавляли N, N-диметиламин (3,5 мл, 31,7 ммоль), и нагревали реакционную смесь в течение 48 часов при 100°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь концентрировали и полученный остаток разбавляли EtOAc (75 мл). Органический слой промывали водой (2×75 мл) и рассолом (75 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом. Полученный сырой продукт очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 30% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 40% (1,4 г, коричневое смолистое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34-7,28 (м, 5H), 7,11-7,02 (м, 3H), 6,84 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,28 (с, 1H), 4,50. (шир. с, 2H), 4,12 (шир. с, 2H), 3,92 (с, 3H), 3,81 (с, 3H), 2,68 (с, 6H), 1,42-1,25 (м, 2H), 1,19-1,05 (м, 2H), 0,95-0,81 (м, 4H), 0,73-0,58 (м, 6H). LCMS: (способ E) 552,1 (M + + H), Rt. 2,80 мин., 81,8% (макс.).

Промежуточное соединение 37

3-Бутил-7-(диметиламино)-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксид

К перемешиваемому раствору 3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-8-метокси-2-(4-метоксибензил)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 36; 0,7 г, 1,22 ммоль) в DMF (10 мл), добавляли метоксид натрия (0,5 г, 6,32 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 100°C. По завершении реакции (контролировали с помощью TLC и LCMS) реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученный остаток разбавляли EtOAc (20 мл). Органический слой промывали водой (2×20 мл) и рассолом (20 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом. Полученный сырой продукт очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 70% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 60% (0,4 г, грязно-белое твердое вещество).

LCMS: (способ E) 418,2 (M + + H), Rt. 2,14 мин, 88,9% (макс).

Промежуточное соединение 38

Метил тритилсеринат

К перемешиваемому раствору гидрохлорида метилсерината (0,65 г, 0,5 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли триэтиламин (2 мл, 1,50 ммоль) и реакционную смесь охлаждали до 0°C. Затем добавляли тритилхлорид (1,67 г, 0,6 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили водой (10 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2×10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 7% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 33% (0,7 г, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,54-7,50 (м, 6H), 7,32-7,27 (м, 6H), 7,24-7,20 (м, 3H), 3,74-3,72 (м, 1H), 3,62-3,51 (м, 2H), 3,33 (с, 3H), 3,00 (шир. с., 1H), 2,33 (шир. с., 1H).

Промежуточное соединение 39

Метил O-(3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)-N-тритилсеринат.

К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5 бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 14; 400 мг, 0,74 ммоль) в толуоле (10 мл) при 0°C, добавляли трифенилфосфин (388 мг, 1,48 ммоль) и метилтритилсеринат (промежуточное соединение 38; 333 мг, 0,88 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут, затем по каплям добавляли DIAD (225 мг, 1,11 ммоль) при 0°C и нагревали реакционную смесь в течение 3 часов при 120°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Полученный остаток разбавляли водой (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-25% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 99% (660 мг, твердое вещество грязно-белого цвета).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ. 7,45-7,44 (м, 7H), 7,32-7,26 (м, 11H), 7,20-7,17 (м, 3H), 7,06 (с, 1H), 6,91-6,89 (м, 4H), 4,25 (с, 2H), 3,75 (с, 3H), 3,74 (д, J=0,4 Гц, 2H), 3,19 (т, J=0,4 Гц, 4H), 3,15 (с, 2H), 2,11 (с, 3H), 1,24-1,23 (м, 3H), 1,21-1,13 (м, 2H), 0,99 (с, 3H), 0,66 (с, 6H).

Промежуточное соединение 40

Метил O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил) серинат

К перемешиваемому раствору метил-О-(3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)-N-тритилсерината (промежуточное соединение 39; 300 мг, 0,44 ммоль) в толуоле (5 мл) при 0°C, добавляли трифениламин (166 мг, 0,67 ммоль) и TFA (774 мг, 6,78 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь выливали в ледяную воду (10 мл), и водный слой экстрагировали EtOAc (2×10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Затем органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 25% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 79% (140 мг, зеленое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,36-7,29 (м, 4H), 7,20-7,14 (м, 2H), 7,02-6,98 (м, 1H), 6,52 (с, 1H), 4,42 (с, 1H), 4,33 (с, 2H), 3,78-3,72 (м, 5H), 2,08 (с, 3H), 1,40-1,35 (м, 2H), 1,28-1,24 (м, 2H), 1,20-1,15 (м, 3H), 1,13-1,08 (м, 3H), 1,04-0,97 (м, 6H). LCMS: (способ E) 522,3 (M + + H), Rt. 2,51 мин, 92,42% (макс.).

Пример 1

3-((3,3-Дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота

К перемешиваемому раствору 3-((3,3-дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты (промежуточное соединение 2; 15 г, 23,41 ммоль) в сухом DCM (150 мл) при 0°C, добавляли TFA (45 мл) и триэтилсилан (45 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (25 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2×100 мл). Объединенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и упаривали в вакууме. Полученный неочищенный материал очищали препаративной HPLC (способ D) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 47% (5,8 г, грязно-белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,44 (шир. С, 1H), 7,29-7,19 (м, 4H), 7,18-7,02 (м, 2H), 6,98-6,89 (м, 1H), 6,58-6,54 (м, 1H), 4,22 (т, J=5,6 Гц, 2H), 3,95-3,72 (м, 2H), 2,70 (т, J=6,0 Гц, 2H), 2,08 (с, 3H), 1,53-1,24 (м, 6H), 1,08-1,01 (м, 6H), 0,77-0,73 (м, 6H). LCMS: (способ D) 521,3 (M + + H), Rt. 2,92 мин, 99,24% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 6,22 мин, 98,91% (макс.).

Пример 2

3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановая кислота

К перемешиваемому раствору 3-((3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (промежуточное соединение 15; 550 мг, 0,9 ммоль) в DCM (6 мл), добавляли TFA (2 мл) и триэтилсилан (2 мл) и перемешивали смесь 3 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20-60% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 67% (300 мг, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, CD3OD): δ 7,34-7,30 (м, 3H), 7,17 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,02 (т, J=7,6 Гц, 1H), 6,62 (с, 1H), 4,30 (т, J=6,4 Гц, 2H), 3,89 (с, 2H), 2,81 (т, J=6,4 Гц, 2H), 2,10 (с, 3H), 1,85-1,58 (м, 2H), 1,56-1,41 (м, 2H), 1,40-1,25 (м, 1H), 1,23-0,95 (м, 3H), 1,07-0,79 (м, 6H). LCMS: (способ A) 493,2 (M + + H), Rt. 2,65 мин, 94,21% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 5,62 мин, 94,00% (макс.).

Примеры 3 и 4

(S)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота

Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (300 мг, 0,61 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (способ F). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.

Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3×15 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного энантиомера указанного в заголовке соединения.

Энантиомер 1. Выход: 25% (75 мг, бледно-коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,42 (с, 1H), 7,28-7,20 (м, 4H), 7,09-7,07 (м, 1H), 6,93 (т, J=6,8 Гц, 1H), 6,59. (с, 1H), 4,23 (т, J=5,6 Гц, 2H), 3,78 (ш.с, 2H), 2,77-2,69 (м, 2H), 2,09 (с, 3H), 1,73-1,59 (м, 1H), 1,56-1,47 (м, 1H), 1,41-1,32 (м, 2H), 1,12-1,28 (м, 2H), 1,10-0,97 (м, 3H), 0,76 (т, J=7,2 Гц, 6H). LCMS: (способ E) 493,2 (M + + H), Rt. 2,54 мин, 95,95% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 5,62 мин, 95,16% (макс.). Хиральная SFC: (способ H) Rt. 5,11 мин, 98,47% (макс.).

Энантиомер 2. Выход: 33% (100 мг, бледно-коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,39 (с, 1H), 7,27-7,19 (м, 4H), 7,06 (д, J=6,0 Гц, 2H), 6,92 (т, J=6,8 Гц, 1H ), 6,58 (с, 1H), 4,22 (т, J=5,6 Гц, 2H), 3,78 (шир. с, 2H), 2,70 (т, J=6,0 Гц, 2H), 2,08 (с, 3H), 1,71-1,57 (м, 1H), 1,56-1,45 (м, 1H), 1,44-1,31 (м, 2H), 1,29-1,17 (м, 1H), 1,14-0,88 (м, 3H), 0,75-0,71 (м, 6H). LCMS: (способ E) 493,2 (M + + H), Rt. 2,54 мин, 93,60% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 5,62 мин, 92,78% (макс.). Хиральная SFC: (способ H) Rt. 5,91 мин, 97,35% (макс.).

Пример 5

3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота

К перемешиваемому раствору 3-((3,3-дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты (промежуточное соединение 17; 200 мг, 0,3 ммоль) в DCM (10 мл), добавляли TFA (0,6 мл, 3 объема) и триэтилсилан (0,6 мл, 3 объема) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили ледяной водой (5 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2×5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали, концентрировали под вакуумом и полученный неочищенный материал очищали препаративной HPLC (способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 11% (18 мг, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,29-7,21 (м, 4H), 7,19-7,01 (м, 2H), 6,93 (т, J=7,2 Гц, 1H), 6,58 (с, 1H), 4,35-4,17 (м, 1H), 4,03-3,91 (м, 2H), 3,51-3,35 (м, 2H), 2,10 (с, 3H), 1,56-0,97 (м, 12H), 0,75 (т, J=6,4 Гц, 6Н). LCMS: (способ A) 537,3 (M ++ H), Rt. 2,73 мин, 94,57% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 5,79 мин, 96,65% (макс.).

Примеры 6 и 7

(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота и (R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота

К перемешиваемому раствору энантиомера 1 метил-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 19; 90 мг, 0,16 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 3 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 16 ч при 75°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали, концентрировали под вакуумом и полученный неочищенный материал растирали с петролейным эфиром, получая энантиомер 1 указанного в заголовке соединения.

Энантиомер 2 указанного в заголовке соединения получали с помощью той же процедуры, исходя из 80 мг энантиомера 2 промежуточного соединения 19. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.

Энантиомер 1. Выход: 79% (70 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,74 (шир. с, 1H), 7,26-7,22 (м, 4H), 7,13-7,11 (м, 2H), 6,95 (т, J=6,8 Гц, 1H), 6,56. (с, 1H), 4,35-4,33 (м, 1H), 4,24-4,15 (м, 2H), 3,78 (шир. с, 2H), 2,09 (с, 3H), 1,53-1,51 (м, 2H), 1,41-1,33 (м, 2H), 1,31-1,20 (м, 2H), 1,19-0,95 (м, 6H), 0,75 (т, J=6,4 Гц, 6H). LCMS: (способ D) 537,2 (M + + H), Rt. 2,86 мин, 93,83% (макс.). HPLC: (способ A) Rt. 5,43 мин, 93,28% (макс.). Хиральная SFC: (способ H) Rt. 3,34 мин, 100% (макс.).

Энантиомер 2. Выход: 64% (50 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,30-7,22 (м, 4H), 7,13-7,11 (м, 2H), 6,97-6,95 (м, 1H), 6,56 (с, 1H), 4,27-4,22 (м, 2H), 4,16-4,12 (м, 1H), 3,83 (шир. с, 2H), 2,09 (с, 3H), 1,53-1,51 (м, 2H), 1,41-1,33 (м, 2H), 1,31-1,20 (м, 2H), 1,19-0,95 (м, 6H), 0,75 (т, J=6,8 Гц, 6H). LCMS: (способ D) 537,2 (M + + H), Rt. 2,86 мин, 96,22% (макс.). HPLC: (способ A) Rt. 5,45 мин, 95,09% (макс.). Хиральная SFC: (способ H) Rt. 1,85 мин, 100% (макс.).

Пример 8

3-((3,3-Дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)бутановая кислота

К перемешиваемому раствору 3-((3,3-дибутил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты (промежуточное соединение 20; 250 мг, 0,38 ммоль) в DCM (10 мл), добавляли TFA (0,75 мл, 3 объема) и триэтилсилан (0,75 мл, 3 объема), и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили ледяной водой (5 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2×5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали, концентрировали под вакуумом и полученный неочищенный материал очищали препаративной HPLC (способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 24% (50 мг, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34-7,18 (м, 4H), 7,15-7,05 (м, 2H), 6,97-6,88 (м, 1H), 6,53 (с, 1H), 4,75-4,72 (м, 1H), 3,80 (с, 2H), 2,55-2,50 (м, 2H), 2,06 (с, 3H), 1,62-1,45 (м, 2H), 1,44-1,34 (м, 2H), 1,32-1,28 (м, 5H), 1,25-0,90 (м, 6H), 0,75-0,72 (м, 6H). LCMS: (способ A) 535,3 (M + + H), Rt. 2,95 мин, 98,47% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 6,29 мин, 96,34% (макс.).

Пример 9

3-((3,3-дибутил-7-хлор-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановая кислота

К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-7-хлор-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 30; 200 мг, 0,45 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (56 мг, 0,5 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (32 мг, 0,45 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 6 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 2 мл), а затем разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2×5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 3% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 20% (45 мг, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,30 (шир. С, 1H), 7,62-7,43 (м, 1H), 7,40-7,27 (м, 3H), 7,26-7,12 (м, 2H), 7,09-6,98 (м, 1H), 6,80 (с, 1H), 4,25 (т, J=5,6 Гц, 2H), 3,87 (шир. с, 2H), 2,72 (т, J=6,0 Гц, 2H), 1,56-1,45 (м, 2H ), 1,44-1,31 (м, 2H), 1,29-1,19 (м, 2H), 1,15-0,91 (м, 6H), 0,89-0,72 (м, 6H). LCMS: (способ E) 509,1 (M + + H), Rt. 2,78 мин, 96,38% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 6,18 мин, 96,38% (макс.).

Пример 10

3-((3,3-дибутил-5-(4-гидроксифенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота

К раствору изопропил-3-((3,3-дибутил-5-(4-гидроксифенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропаноата (промежуточное соединение 35; 120 мг, 0,20 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 4 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 12 часов при 70°C. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (5 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40-50% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 54% (60 мг, белое твердое вещество).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,37 (с, 1H), 9,30 (с, 1H), 7,39 (с, 1H), 7,09-7,06 (м, 3H), 6,76 (д, J=8,8 Гц., 2H), 6,26 (с, 1H), 4,16 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,87 (с, 2H), 2,67 (т, J=6,0 Гц, 2H), 2,00 (с, 3H), 1,59-1,35 (м, 4H), 1,33-1,07 (м, 4H), 1,06-0,81 (м, 4H), 0,74 (т, J=6,8 Гц, 6H). LCMS: (способ E) 537,2 (M + + H), Rt. 2,37 мин, 98,62% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 5,22 мин, 98,80% (макс.).

Пример 11

3-((3-Бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота

К перемешиваемому раствору 3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 37; 600 мг, 1,43 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (177 мг, 1,58 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (103 мг, 1,43 ммоль) в THF (2 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2×20 мл), объединенный органический слой промывали водой (20 мл) и рассолом (20 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 3-5% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) и полученный материал повторно очищали препаративной HPLC (способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 6% (42 мг, твердое вещество грязно-белого цвета).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,41 (с, 1H), 7,25 (т, J=8,0 Гц, 2H), 7,14-6,97 (м, 4H), 6,90 (т, J=6,8 Гц, 1H ), 6,23 (с, 1H), 4,16 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,79 (с, 2H), 2,79-2,72 (м, 2H), 2,52 (с, 6H), 1,71-1,47 (м, 2H), 1,46-1,33 (м, 2H), 1,32-1,17 (м, 2H), 1,11-0,97 (м, 2H), 0,76-0,67 (м, 6H). LCMS: (способ E) 490,2 (M + + H), Rt. 2,41 мин, 98,92% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 4,28 мин, 99,05% (макс.).

Примеры 12 и 13

(S)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановая кислота

Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты (Пример 11; 65 мг, 0,13 ммоль) разделяли хиральной SFC (способ I). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.

Энантиомер 1. Выход: 6% (5 мг, твердое вещество грязно-белого цвета). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,40 (с, 1H), 7,25 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,15 (с, 1H), 7,08-7,02 (м, 3H), 6,91 (т, J=7,2 Гц, 1H), 6,23 (с, 1H), 4,16 (т, J=5,6 Гц, 2H), 3,80 (шир. с, 2H), 2,79-2,71 (м, 2H), 2,58 (с, 6H), 1,71-1,59 (м, 1H), 1,58-1,45 (м, 1H), 1,44-1,32 (м, 2H), 1,29-1,15 (м, 1H), 1,14-0,91 (м, 3H), 0,79-0,69 (м, 6Н). LCMS: (способ E) 490,1 (M + + H), Rt. 2,39 мин, 98,52% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 4,32 мин, 98,57% (макс.). Хиральная SFC: (способ M) Rt. 3,09 мин, 98,77% (макс.).

Энантиомер 2. AS0649: Выход: 5% (7 мг, твердое вещество грязно-белого цвета). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,40 (с, 1H), 7,25 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,15 (с, 1H), 7,08-7,03 (м, 3H), 6,91 (т, J=7,2 Гц, 1H), 6,24 (с, 1H), 4,16 (т, J=5,6 Гц, 2H), 3,80 (шир. с, 2H), 2,79-2,71 (м, 2H), 2,58 (с, 6H), 1,71-1,59 (м, 1H), 1,58-1,45 (м, 1H), 1,44-1,31 (м, 2H), 1,29-1,14 (м, 1H), 1,14-0,91 (м, 3H), 0,79-0,69 (м, 6Н). LCMS: (способ E) 489,9 (M + + H), Rt. 2,38 мин, 99,66% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 4,28 мин, 98,43% (макс.). Хиральная SFC: (способ M) Rt. 4,25 мин, 97,61% (макс.).

Пример 14

О-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил) серин

К перемешиваемому раствору метил-O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)серината (промежуточное соединение 40; 140 мг, 0,27 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли гидроксид лития (23 мг, 0,53 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем TLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2×5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 28% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 31% (42 мг, твердое вещество грязно-белого цвета).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,85 (с, 2H), 7,29 (т, J=6,4 Гц, 3H), 7,11 (д, J=6,0 Гц, 2H), 6,97 (т, J=6,8 Гц, 1H), 6,56 (с, 1H), 4,37-4,34 (м, 1H), 4,20 (т, J=8,0 Гц, 1H), 3,89 (с, 1H), 3,63 (с, 1H), 3,10-3,05 (м, 1H), 2,10 (с, 3H), 1,63-1,63 (м, 8H), 1,05-0,72 (м, 6H). LCMS: (способ E) 508,3 (M + + H), Rt. 2,39 мин, 98,34% (макс.). HPLC: (способ B) Rt. 4,58 мин, 97,26 с % (макс.).

Биологические анализы

Протокол анализа IBAT (ч/м)

10000 клеток (клетки со сверхэкспрессией IBAT человека или мыши) высевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 200 мкл среды MEM-alpha (Gibco 12571-063) с добавлением 10% FBS (Gibco 10438026), содержащего пуромицин (Gibco A1113803). (10 мкг/мл) и инкубировали при 37°C в 5% CO2 в течение 48 часов. После инкубации среду сливали из лунок и клетки дважды промывали 300 мкл основной среды MEM-альфа (без FBS). После декантации базальной среды МЕМ-альфа каждый раз планшеты постукивали о бумажное полотенце, чтобы гарантировать максимальное удаление остаточной среды.

Разведения тестируемого ингибитора (максимальная тестовая концентрация - 10 мкМ, 3-кратное серийное разведение, 10 точек), приготовленные в ДМСО (Sigma D2650), добавляли в инкубационную смесь (поддерживая конечную концентрацию ДМСО 0,2%), содержащую 0,25 мкМ 3H-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 5 мкМ холодной таурохолевой кислоты (Sigma T4009). Затем в лунки добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей ингибиторы теста (в двух экземплярах), и планшеты инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с CO2 при 37°C. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты в смеси со смесью ледяной воды в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-буферированном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7,4). Планшеты постукивали о бумажное полотенце после каждой промывки, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и оставляли на ночь при комнатной температуре перед считыванием показаний планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT ™ от PerkinElmer по протоколу 3H Test (время считывания на лунку установлено 120 секунд).

Протокол анализа LBAT (ч/м)

20000 клеток (клетки со сверхэкспрессией LBAT человека или мыши) засевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 100 мкл среды MEM-alpha (Gibco 12571-063) с добавлением 10% FBS (Gibco 10438026), содержащего генетицин (Gibco 10131-027) (1 мг/мл) и инкубировали при 37°C в 5% CO2 в течение 24 часов. После инкубации среду сливали из лунок и клетки дважды промывали 300 мкл основной среды MEM-альфа (без FBS). После декантации базальной среды МЕМ-альфа каждый раз планшеты постукивали о бумажное полотенце, чтобы гарантировать максимальное удаление остаточной среды.

Для человеческого LBAT инкубационная смесь была приготовлена путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в ДМСО (Sigma D2650), 10 точек) в MEM-alpha (без FBS), содержащем 0,3 мкМ 3H-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368). и 7,5 мкМ холодной таурохолевой кислоты (Sigma T4009) (поддерживая конечную концентрацию ДМСО 0,2%). Для LBAT мышей инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в ДМСО, 10 точек) в MEM-альфа (без FBS), содержащем 0,3 мкМ 3H-таурохолевой кислоты и 25 мкМ холодной таурохолевой кислоты с сохранением конечной 0,2% концентрации ДМСО).

Затем в лунки добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей ингибиторы теста (в двух экземплярах), и планшеты инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с CO2 при 37°C. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты в смеси со смесью ледяной воды в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-буферированном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7,4). Планшеты постукивали о бумажное полотенце после каждой промывки, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и оставляли на ночь при комнатной температуре перед снятием показаний с планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3H Test (время считывания на лунку составляло 120 секунд, с нормальной ориентацией планшета).

Двунаправленный анализ проницаемости (клетки Caco-2)

Клетки Caco-2 (Evotec) высевали при плотности 70000 клеток/лунку в 24-луночные планшеты для культивирования клеток Millicell® со вставками и выдерживали в инкубаторе (37°C, 5% CO2, 95% RH) в течение 21 дня со сменой среды через день.

Исходные растворы (10 мМ) тестируемых соединений, атенолола (маркер низкой проницаемости), пропранолола (маркер высокой проницаемости) и дигоксина (субстрат для пути транспорта P-gp) были приготовлены в диметилсульфоксиде (ДМСО). Промежуточный основной раствор (1 мМ) получали разбавлением 10 мкл 10 мМ основного раствора 90 мкл чистого ДМСО. Рабочий исходный раствор (10 мкМ) готовили разбавлением 50 мкл 1 мМ 4950 мкл буфера FaSSIF. После добавления соединений к FaSSIF образцы подвергали обработке ультразвуком в течение 2 часов и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 30 минут при 37°C. 4 мл полученной надосадочной жидкости использовали непосредственно в анализе. Конечная концентрация ДМСО в экспериментах переноса составляла 1%.

В день анализа монослои Caco-2 дважды промывали буфером для переноса (HBSS, pH 7,4) и предварительно инкубировали в течение 30 минут (37°C, 5% CO2, 95% RH) в инкубаторе. Электрическое сопротивление монослоев измеряли с помощью системы Millicell® - ERS. Для анализа были выбраны монослои со значениями трансэпителиального электрического сопротивления (TEER) более 350 Ом ⋅ см2.

Анализ проводили в направлении абсорбции (A2B) и в направлении секреции (B2A). Эксперименты по переносу инициировали добавлением транспортного буфера для анализа (буфер FaSSIF, приготовленного в HBSS), состоящего из соединений, в донорный отсек (апикальная камера A-B; базолатеральная камера B-A) в дублированных (n = 2) лунках. Не содержащий лекарственное средство буфер HBSS (pH 7,4), содержащий 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA), вводили в отсеки приемника (A-B-базолатеральный; B-A-апикальный). Объемы апикального и базолатерального отделов составляли 0,4 и 0,8 мл соответственно. После добавления дозируемого раствора планшеты инкубировали в инкубаторе в течение 120 минут при 37°C. Через 120 минут образцы донора и получателя собирали и сопоставляли матрицу (1:1, 30 мкл исследуемого образца + 30 мкл пустого буфера) с противоположным буфером. Матрица дозируемых образцов приводилась в соответствие (1: 1, 30 мкл исследуемого образца + 30 мкл пустого буфера) с противоположным буфером. Образцы обрабатывали, добавляя ацетонитрил, содержащий внутренний стандарт (60 мкл исследуемого образца + 200 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт - толбутамид, 500 нг/мл). Образцы встряхивали и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут. Полученную надосадочную жидкость (100 мкл) разбавляли 100 мкл воды и переносили в свежие 96-луночные планшеты. Концентрацию соединений в образцах анализировали методом тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией (ЖХ-МС/МС) с использованием биоаналитического метода исследовательского уровня, если применимо.

Средняя кажущаяся проницаемость (Papp, ×10^-6 см/сек) тестируемых соединений, атенолола, пропранолола и дигоксина рассчитывалась следующим образом:

,

где dq/dt = скорость переноса (скорость переноса соединения в приемном отделении), C0 = начальная концентрация в донорном отделении, A = площадь поверхности эффективной мембраны фильтра.

Протокол анализа на основе HepaRG

Криоконсервированный флакон с дифференцированными клетками HepaRG (Biopredic International HPR116080) размораживали в среде HepaRG Thawing/Plating/General Purpose Medium (Biopredic International ADD670C) с добавлением 200 мМ глутамакса (Gibco 35050061) в соответствии с протоколом, предоставленным Biopredic International. 70 000 клеток на лунку высевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 100 мкл среды HepaRG для размораживания/посева/общего назначения с добавлением 200 мМ глутамакса и инкубировали при 37°C в 5% CO2 в течение 24 часов. После инкубации посевную среду заменяли средой для поддержания/метаболизма HepaRG (Biopredic International ADD620C) и инкубировали в течение 6 дней со свежей средой для поддержания/метаболизма HepaRG каждые 48 часов. Через 7 дней инкубации после посева инкубационную среду сливали из лунок и клетки промывали два раза 250 мкл базальной среды William's E (Gibco 12551032). Каждый раз после декантации базальной среды William's E планшеты простукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление остаточной среды.

Инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в ДМСО (Sigma D2650)) в среду William's E (базальную), содержащую 0,3 мкМ 3H-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 7,5 мкМ холодной таурохолевой кислоты (Sigma T4009) (поддерживая конечную концентрацию 0,2% ДМСО). Затем в лунки (в двух экземплярах) добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей ингибиторы теста, и планшеты инкубировали в течение 30 минут в инкубаторе с 5% CO2 при 37°C. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты в смеси со смесью ледяной воды в течение 2-3 минут, а затем смесь для инкубации полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-забуференном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7,4). После каждой промывки планшеты простукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре перед снятием показаний с планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3H Test (время считывания на лунку составляло 120 секунд, с нормальной ориентацией планшета).

Приготовление разведений тестируемого соединения

Все тестируемые соединения были предоставлены в форме порошка при комнатной температуре. Готовили 10 мМ исходных тестовых соединений в ДМСО, разделяли на аликвоты и хранили при -20°C. Из исходного 10 мМ ДМСО соединений готовили 3-кратное серийное разведение в ДМСО, чтобы получить в общей сложности 10 разведений тестируемых соединений. 0,5 мкл этого разведения в ДМСО добавляли к 250 мкл базальной среды без FBS, содержащей 3H-таурохолевую кислоту и холодную таурохолевую кислоту, для приготовления инкубационной смеси.

Исследования биодоступности

Использовали мышей-самцов (C57BL/6 или CD1) или крыс Wistar в возрасте 8-9 недель. Для каждого тестируемого соединения использовали две группы по 3 животных в каждой. Одной группе вводили однократную внутривенную дозу 1 мг/кг (носитель 100% ДМСО) через хвостовую вену, а другой группе вводили однократную пероральную дозу 10 мг/кг через желудочную иглу. Группа, которой вводили пероральную дозу, не кормили в течение ночи. Образцы крови собирали через 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после внутривенного введения и через 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после перорального введения. Кровь брали из подкожной вены. В качестве антикоагулянта использовали 0,2% EDTA. Образцы были проанализированы с помощью биоаналитического метода открытой степени, разработанного для оценки тестируемого соединения в плазме с использованием системы ЖХ-МС/МС.

Результаты

Биологические данные для соединений примеров показаны в таблице 8 ниже.

Таблица 8

Пример	hLBAT IC₅₀ (нМ)	hIBAT IC₅₀ (нМ)	Проницаемость (Caco-2)		Биодоступность (%)
Пример	hLBAT IC₅₀ (нМ)	hIBAT IC₅₀ (нМ)	P_app A2B (×10^-6 см/с)	ER	Биодоступность (%)
1	2908	7	9,2	0,9	34 (C57BL/6) 59 (CD1) 98 (Na⁺ соль; крыса)
2	736	4
3	283	23
4	3654	2	7,6	2,4	45 (CD1) 90 (крыса)
5	1882	5	1,0	4,2
6	3658	14
7	2225	2	0,4	1,9
8	2633	12	9,5	0,5
9	1617	21	10,0	0,5
10	7205	2	2,1	3,1
11	1175	3	13,1	1,2
12	2222	3	14,2	1,1
13	2222	15
14	342	6	0,0

Модель ФД: оценка влияния тестируемого соединения на уровни общих желчных кислот у самцов мышей C57BL/6.

Мышей C57BL/6N Tac в возрасте 8-9 недель использовали для изучения влияния модуляторов желчных кислот на уровни желчных кислот. После завершения периода карантина и акклиматизации животных рандомизировали по массе тела на x экспериментальных групп: (i) контрольная, носитель, и (ii) тестируемое соединение y мг/кг перорально один раз в день. Животных обрабатывали тестируемым соединением в течение 7 дней. На 5 день исследования животных по отдельности помещают в свежие клетки. На 7 день из каждой клетки собирали фекалии с последующим забором крови у каждого животного ретроорбитальным путем. Животных умерщвляли, чтобы забрать печень и терминальную часть подвздошной кишки у каждого животного для дальнейшего анализа. Массу тела и потребление пищи измеряли два раза в неделю. Липидные профили сыворотки анализировали в образцах сыворотки на 7 день. Общее количество желчных кислот в сыворотке измеряется в образцах сыворотки на 7 день. Фекальное выделение желчи измеряется в образце кала на 7 день. Экспрессия CYP7A1 и SHP в печени количественно оценивается в образцах печени на 7 день. Триглицериды печени и общий холестерин анализировали в образцах печени на 7 день.

Модель желчных кислот в моче: оценка тестируемых соединений на уровни желчных кислот в моче у самцов мышей C57BL/6.

Мышей C57BL/6N Tac в возрасте 8-9 недель использовали для изучения влияния модуляторов желчных кислот на уровни желчных кислот. После завершения периода карантина и акклиматизации животных рандомизировали по массе тела на x экспериментальных групп: (i) контрольная, носитель, и (ii) тестируемое соединение y мг/кг перорально один раз в день. Животных обрабатывали тестируемым соединением в течение 7 дней. На 6 день исследования животных переводят в метаболическую клетку. На 7 день из каждой метаболической клетки собирают фекалии и мочу с последующим забором крови у каждого животного ретроорбитальным путем. Животных умерщвляли, чтобы забрать почки у каждого животного для дальнейшего анализа. Массу тела измеряется два раза в неделю. Общее количество желчных кислот в сыворотке измеряется в образцах сыворотки на 7 день. Экскреция желчных кислот с калом измеряется в образце кала на 7 день. Выведение желчных кислот с мочой измеряется в образце на 7 день. Почечная экспрессия ASBT, OSTa, OSTAb и MRP2 количественно определяется в образцах на 7 день.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ALBIREO AB

<120> СОЕДИНЕНИЯ БЕНЗОТИАДИАЗЕПИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ

МОДУЛЯТОРОВ

ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ

<130> NP0461WO

<150> IN 201911004690

<151> 2019-02-06

<150> SE 1950464-6

<151> 2019-04-12

<150> IN 201911049981

<151> 2019-12-04

<160> 4

<170> версия PatentIn 3.5

<210> 1

<211> 1251

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Ser Thr Glu Arg Asp Ser Glu Thr Thr Phe Asp Glu Asp Ser Gln

1 5 10 15

Pro Asn Asp Glu Val Val Pro Tyr Ser Asp Asp Glu Thr Glu Asp Glu

20 25 30

Leu Asp Asp Gln Gly Ser Ala Val Glu Pro Glu Gln Asn Arg Val Asn

35 40 45

Arg Glu Ala Glu Glu Asn Arg Glu Pro Phe Arg Lys Glu Cys Thr Trp

50 55 60

Gln Val Lys Ala Asn Asp Arg Lys Tyr His Glu Gln Pro His Phe Met

65 70 75 80

Asn Thr Lys Phe Leu Cys Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Ala Asn Asn Ala

85 90 95

Ile Lys Thr Tyr Lys Tyr Asn Ala Phe Thr Phe Ile Pro Met Asn Leu

100 105 110

Phe Glu Gln Phe Lys Arg Ala Ala Asn Leu Tyr Phe Leu Ala Leu Leu

115 120 125

Ile Leu Gln Ala Val Pro Gln Ile Ser Thr Leu Ala Trp Tyr Thr Thr

130 135 140

Leu Val Pro Leu Leu Val Val Leu Gly Val Thr Ala Ile Lys Asp Leu

145 150 155 160

Val Asp Asp Val Ala Arg His Lys Met Asp Lys Glu Ile Asn Asn Arg

165 170 175

Thr Cys Glu Val Ile Lys Asp Gly Arg Phe Lys Val Ala Lys Trp Lys

180 185 190

Glu Ile Gln Val Gly Asp Val Ile Arg Leu Lys Lys Asn Asp Phe Val

195 200 205

Pro Ala Asp Ile Leu Leu Leu Ser Ser Ser Glu Pro Asn Ser Leu Cys

210 215 220

Tyr Val Glu Thr Ala Glu Leu Asp Gly Glu Thr Asn Leu Lys Phe Lys

225 230 235 240

Met Ser Leu Glu Ile Thr Asp Gln Tyr Leu Gln Arg Glu Asp Thr Leu

245 250 255

Ala Thr Phe Asp Gly Phe Ile Glu Cys Glu Glu Pro Asn Asn Arg Leu

260 265 270

Asp Lys Phe Thr Gly Thr Leu Phe Trp Arg Asn Thr Ser Phe Pro Leu

275 280 285

Asp Ala Asp Lys Ile Leu Leu Arg Gly Cys Val Ile Arg Asn Thr Asp

290 295 300

Phe Cys His Gly Leu Val Ile Phe Ala Gly Ala Asp Thr Lys Ile Met

305 310 315 320

Lys Asn Ser Gly Lys Thr Arg Phe Lys Arg Thr Lys Ile Asp Tyr Leu

325 330 335

Met Asn Tyr Met Val Tyr Thr Ile Phe Val Val Leu Ile Leu Leu Ser

340 345 350

Ala Gly Leu Ala Ile Gly His Ala Tyr Trp Glu Ala Gln Val Gly Asn

355 360 365

Ser Ser Trp Tyr Leu Tyr Asp Gly Glu Asp Asp Thr Pro Ser Tyr Arg

370 375 380

Gly Phe Leu Ile Phe Trp Gly Tyr Ile Ile Val Leu Asn Thr Met Val

385 390 395 400

Pro Ile Ser Leu Tyr Val Ser Val Glu Val Ile Arg Leu Gly Gln Ser

405 410 415

His Phe Ile Asn Trp Asp Leu Gln Met Tyr Tyr Ala Glu Lys Asp Thr

420 425 430

Pro Ala Lys Ala Arg Thr Thr Thr Leu Asn Glu Gln Leu Gly Gln Ile

435 440 445

His Tyr Ile Phe Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Gln Asn Ile Met

450 455 460

Thr Phe Lys Lys Cys Cys Ile Asn Gly Gln Ile Tyr Gly Asp His Arg

465 470 475 480

Asp Ala Ser Gln His Asn His Asn Lys Ile Glu Gln Val Asp Phe Ser

485 490 495

Trp Asn Thr Tyr Ala Asp Gly Lys Leu Ala Phe Tyr Asp His Tyr Leu

500 505 510

Ile Glu Gln Ile Gln Ser Gly Lys Glu Pro Glu Val Arg Gln Phe Phe

515 520 525

Phe Leu Leu Ala Val Cys His Thr Val Met Val Asp Arg Thr Asp Gly

530 535 540

Gln Leu Asn Tyr Gln Ala Ala Ser Pro Asp Glu Gly Ala Leu Val Asn

545 550 555 560

Ala Ala Arg Asn Phe Gly Phe Ala Phe Leu Ala Arg Thr Gln Asn Thr

565 570 575

Ile Thr Ile Ser Glu Leu Gly Thr Glu Arg Thr Tyr Asn Val Leu Ala

580 585 590

Ile Leu Asp Phe Asn Ser Asp Arg Lys Arg Met Ser Ile Ile Val Arg

595 600 605

Thr Pro Glu Gly Asn Ile Lys Leu Tyr Cys Lys Gly Ala Asp Thr Val

610 615 620

Ile Tyr Glu Arg Leu His Arg Met Asn Pro Thr Lys Gln Glu Thr Gln

625 630 635 640

Asp Ala Leu Asp Ile Phe Ala Asn Glu Thr Leu Arg Thr Leu Cys Leu

645 650 655

Cys Tyr Lys Glu Ile Glu Glu Lys Glu Phe Thr Glu Trp Asn Lys Lys

660 665 670

Phe Met Ala Ala Ser Val Ala Ser Thr Asn Arg Asp Glu Ala Leu Asp

675 680 685

Lys Val Tyr Glu Glu Ile Glu Lys Asp Leu Ile Leu Leu Gly Ala Thr

690 695 700

Ala Ile Glu Asp Lys Leu Gln Asp Gly Val Pro Glu Thr Ile Ser Lys

705 710 715 720

Leu Ala Lys Ala Asp Ile Lys Ile Trp Val Leu Thr Gly Asp Lys Lys

725 730 735

Glu Thr Ala Glu Asn Ile Gly Phe Ala Cys Glu Leu Leu Thr Glu Asp

740 745 750

Thr Thr Ile Cys Tyr Gly Glu Asp Ile Asn Ser Leu Leu His Ala Arg

755 760 765

Met Glu Asn Gln Arg Asn Arg Gly Gly Val Tyr Ala Lys Phe Ala Pro

770 775 780

Pro Val Gln Glu Ser Phe Phe Pro Pro Gly Gly Asn Arg Ala Leu Ile

785 790 795 800

Ile Thr Gly Ser Trp Leu Asn Glu Ile Leu Leu Glu Lys Lys Thr Lys

805 810 815

Arg Asn Lys Ile Leu Lys Leu Lys Phe Pro Arg Thr Glu Glu Glu Arg

820 825 830

Arg Met Arg Thr Gln Ser Lys Arg Arg Leu Glu Ala Lys Lys Glu Gln

835 840 845

Arg Gln Lys Asn Phe Val Asp Leu Ala Cys Glu Cys Ser Ala Val Ile

850 855 860

Cys Cys Arg Val Thr Pro Lys Gln Lys Ala Met Val Val Asp Leu Val

865 870 875 880

Lys Arg Tyr Lys Lys Ala Ile Thr Leu Ala Ile Gly Asp Gly Ala Asn

885 890 895

Asp Val Asn Met Ile Lys Thr Ala His Ile Gly Val Gly Ile Ser Gly

900 905 910

Gln Glu Gly Met Gln Ala Val Met Ser Ser Asp Tyr Ser Phe Ala Gln

915 920 925

Phe Arg Tyr Leu Gln Arg Leu Leu Leu Val His Gly Arg Trp Ser Tyr

930 935 940

Ile Arg Met Cys Lys Phe Leu Arg Tyr Phe Phe Tyr Lys Asn Phe Ala

945 950 955 960

Phe Thr Leu Val His Phe Trp Tyr Ser Phe Phe Asn Gly Tyr Ser Ala

965 970 975

Gln Thr Ala Tyr Glu Asp Trp Phe Ile Thr Leu Tyr Asn Val Leu Tyr

980 985 990

Thr Ser Leu Pro Val Leu Leu Met Gly Leu Leu Asp Gln Asp Val Ser

995 1000 1005

Asp Lys Leu Ser Leu Arg Phe Pro Gly Leu Tyr Ile Val Gly Gln

1010 1015 1020

Arg Asp Leu Leu Phe Asn Tyr Lys Arg Phe Phe Val Ser Leu Leu

1025 1030 1035

His Gly Val Leu Thr Ser Met Ile Leu Phe Phe Ile Pro Leu Gly

1040 1045 1050

Ala Tyr Leu Gln Thr Val Gly Gln Asp Gly Glu Ala Pro Ser Asp

1055 1060 1065

Tyr Gln Ser Phe Ala Val Thr Ile Ala Ser Ala Leu Val Ile Thr

1070 1075 1080

Val Asn Phe Gln Ile Gly Leu Asp Thr Ser Tyr Trp Thr Phe Val

1085 1090 1095

Asn Ala Phe Ser Ile Phe Gly Ser Ile Ala Leu Tyr Phe Gly Ile

1100 1105 1110

Met Phe Asp Phe His Ser Ala Gly Ile His Val Leu Phe Pro Ser

1115 1120 1125

Ala Phe Gln Phe Thr Gly Thr Ala Ser Asn Ala Leu Arg Gln Pro

1130 1135 1140

Tyr Ile Trp Leu Thr Ile Ile Leu Ala Val Ala Val Cys Leu Leu

1145 1150 1155

Pro Val Val Ala Ile Arg Phe Leu Ser Met Thr Ile Trp Pro Ser

1160 1165 1170

Glu Ser Asp Lys Ile Gln Lys His Arg Lys Arg Leu Lys Ala Glu

1175 1180 1185

Glu Gln Trp Gln Arg Arg Gln Gln Val Phe Arg Arg Gly Val Ser

1190 1195 1200

Thr Arg Arg Ser Ala Tyr Ala Phe Ser His Gln Arg Gly Tyr Ala

1205 1210 1215

Asp Leu Ile Ser Ser Gly Arg Ser Ile Arg Lys Lys Arg Ser Pro

1220 1225 1230

Leu Asp Ala Ile Val Ala Asp Gly Thr Ala Glu Tyr Arg Arg Thr

1235 1240 1245

Gly Asp Ser

1250

<210> 2

<211> 3756

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 2

atgagtacag aaagagactc agaaacgaca tttgacgagg attctcagcc taatgacgaa

60

gtggttccct acagtgatga tgaaacagaa gatgaacttg atgaccaggg gtctgctgtt

120

gaaccagaac aaaaccgagt caacagggaa gcagaggaga accgggagcc attcagaaaa

180

gaatgtacat ggcaagtcaa agcaaacgat cgcaagtacc acgaacaacc tcactttatg

240

aacacaaaat tcttgtgtat taaggagagt aaatatgcga ataatgcaat taaaacatac

300

aagtacaacg catttacctt tataccaatg aatctgtttg agcagtttaa gagagcagcc

360

aatttatatt tcctggctct tcttatctta caggcagttc ctcaaatctc taccctggct

420

tggtacacca cactagtgcc cctgcttgtg gtgctgggcg tcactgcaat caaagacctg

480

gtggacgatg tggctcgcca taaaatggat aaggaaatca acaataggac gtgtgaagtc

540

attaaggatg gcaggttcaa agttgctaag tggaaagaaa ttcaagttgg agacgtcatt

600

cgtctgaaaa aaaatgattt tgttccagct gacattctcc tgctgtctag ctctgagcct

660

aacagcctct gctatgtgga aacagcagaa ctggatggag aaaccaattt aaaatttaag

720

atgtcacttg aaatcacaga ccagtacctc caaagagaag atacattggc tacatttgat

780

ggttttattg aatgtgaaga acccaataac agactagata agtttacagg aacactattt

840

tggagaaaca caagttttcc tttggatgct gataaaattt tgttacgtgg ctgtgtaatt

900

aggaacaccg atttctgcca cggcttagtc atttttgcag gtgctgacac taaaataatg

960

aagaatagtg ggaaaaccag atttaaaaga actaaaattg attacttgat gaactacatg

1020

gtttacacga tctttgttgt tcttattctg ctttctgctg gtcttgccat cggccatgct

1080

tattgggaag cacaggtggg caattcctct tggtacctct atgatggaga agacgataca

1140

ccctcctacc gtggattcct cattttctgg ggctatatca ttgttctcaa caccatggta

1200

cccatctctc tctatgtcag cgtggaagtg attcgtcttg gacagagtca cttcatcaac

1260

tgggacctgc aaatgtacta tgctgagaag gacacacccg caaaagctag aaccaccaca

1320

ctcaatgaac agctcgggca gatccattat atcttctctg ataagacggg gacactcaca

1380

caaaatatca tgacctttaa aaagtgctgt atcaacgggc agatatatgg ggaccatcgg

1440

gatgcctctc aacacaacca caacaaaata gagcaagttg attttagctg gaatacatat

1500

gctgatggga agcttgcatt ttatgaccac tatcttattg agcaaatcca gtcagggaaa

1560

gagccagaag tacgacagtt cttcttcttg ctcgcagttt gccacacagt catggtggat

1620

aggactgatg gtcagctcaa ctaccaggca gcctctcccg atgaaggtgc cctggtaaac

1680

gctgccagga actttggctt tgccttcctc gccaggaccc agaacaccat caccatcagt

1740

gaactgggca ctgaaaggac ttacaatgtt cttgccattt tggacttcaa cagtgaccgg

1800

aagcgaatgt ctatcattgt aagaacccca gaaggcaata tcaagcttta ctgtaaaggt

1860

gctgacactg ttatttatga acggttacat cgaatgaatc ctactaagca agaaacacag

1920

gatgccctgg atatctttgc aaatgaaact cttagaaccc tatgcctttg ctacaaggaa

1980

attgaagaaa aagaatttac agaatggaat aaaaagttta tggctgccag tgtggcctcc

2040

accaaccggg acgaagctct ggataaagta tatgaggaga ttgaaaaaga cttaattctc

2100

ctgggagcta cagctattga agacaagcta caggatggag ttccagaaac catttcaaaa

2160

cttgcaaaag ctgacattaa gatctgggtg cttactggag acaaaaagga aactgctgaa

2220

aatataggat ttgcttgtga acttctgact gaagacacca ccatctgcta tggggaggat

2280

attaattctc ttcttcatgc aaggatggaa aaccagagga atagaggtgg cgtctacgca

2340

aagtttgcac ctcctgtgca ggaatctttt tttccacccg gtggaaaccg tgccttaatc

2400

atcactggtt cttggttgaa tgaaattctt ctcgagaaaa agaccaagag aaataagatt

2460

ctgaagctga agttcccaag aacagaagaa gaaagacgga tgcggaccca aagtaaaagg

2520

aggctagaag ctaagaaaga gcagcggcag aaaaactttg tggacctggc ctgcgagtgc

2580

agcgcagtca tctgctgccg cgtcaccccc aagcagaagg ccatggtggt ggacctggtg

2640

aagaggtaca agaaagccat cacgctggcc atcggagatg gggccaatga cgtgaacatg

2700

atcaaaactg cccacattgg cgttggaata agtggacaag aaggaatgca agctgtcatg

2760

tcgagtgact attcctttgc tcagttccga tatctgcaga ggctactgct ggtgcatggc

2820

cgatggtctt acataaggat gtgcaagttc ctacgatact tcttttacaa aaactttgcc

2880

tttactttgg ttcatttctg gtactccttc ttcaatggct actctgcgca gactgcatac

2940

gaggattggt tcatcaccct ctacaacgtg ctgtacacca gcctgcccgt gctcctcatg

3000

gggctgctcg accaggatgt gagtgacaaa ctgagcctcc gattccctgg gttatacata

3060

gtgggacaaa gagacttact attcaactat aagagattct ttgtaagctt gttgcatggg

3120

gtcctaacat cgatgatcct cttcttcata cctcttggag cttatctgca aaccgtaggg

3180

caggatggag aggcaccttc cgactaccag tcttttgccg tcaccattgc ctctgctctt

3240

gtaataacag tcaatttcca gattggcttg gatacttctt attggacttt tgtgaatgct

3300

ttttcaattt ttggaagcat tgcactttat tttggcatca tgtttgactt tcatagtgct

3360

ggaatacatg ttctctttcc atctgcattt caatttacag gcacagcttc aaacgctctg

3420

agacagccat acatttggtt aactatcatc ctggctgttg ctgtgtgctt actacccgtc

3480

gttgccattc gattcctgtc aatgaccatc tggccatcag aaagtgataa gatccagaag

3540

catcgcaagc ggttgaaggc ggaggagcag tggcagcgac ggcagcaggt gttccgccgg

3600

ggcgtgtcaa cgcggcgctc ggcctacgcc ttctcgcacc agcggggcta cgcggacctc

3660

atctcctccg ggcgcagcat ccgcaagaag cgctcgccgc ttgatgccat cgtggcggat

3720

ggcaccgcgg agtacaggcg caccggggac agctga

3756

<210> 3

<211> 1321

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Met Ser Asp Ser Val Ile Leu Arg Ser Ile Lys Lys Phe Gly Glu Glu

1 5 10 15

Asn Asp Gly Phe Glu Ser Asp Lys Ser Tyr Asn Asn Asp Lys Lys Ser

20 25 30

Arg Leu Gln Asp Glu Lys Lys Gly Asp Gly Val Arg Val Gly Phe Phe

35 40 45

Gln Leu Phe Arg Phe Ser Ser Ser Thr Asp Ile Trp Leu Met Phe Val

50 55 60

Gly Ser Leu Cys Ala Phe Leu His Gly Ile Ala Gln Pro Gly Val Leu

65 70 75 80

Leu Ile Phe Gly Thr Met Thr Asp Val Phe Ile Asp Tyr Asp Val Glu

85 90 95

Leu Gln Glu Leu Gln Ile Pro Gly Lys Ala Cys Val Asn Asn Thr Ile

100 105 110

Val Trp Thr Asn Ser Ser Leu Asn Gln Asn Met Thr Asn Gly Thr Arg

115 120 125

Cys Gly Leu Leu Asn Ile Glu Ser Glu Met Ile Lys Phe Ala Ser Tyr

130 135 140

Tyr Ala Gly Ile Ala Val Ala Val Leu Ile Thr Gly Tyr Ile Gln Ile

145 150 155 160

Cys Phe Trp Val Ile Ala Ala Ala Arg Gln Ile Gln Lys Met Arg Lys

165 170 175

Phe Tyr Phe Arg Arg Ile Met Arg Met Glu Ile Gly Trp Phe Asp Cys

180 185 190

Asn Ser Val Gly Glu Leu Asn Thr Arg Phe Ser Asp Asp Ile Asn Lys

195 200 205

Ile Asn Asp Ala Ile Ala Asp Gln Met Ala Leu Phe Ile Gln Arg Met

210 215 220

Thr Ser Thr Ile Cys Gly Phe Leu Leu Gly Phe Phe Arg Gly Trp Lys

225 230 235 240

Leu Thr Leu Val Ile Ile Ser Val Ser Pro Leu Ile Gly Ile Gly Ala

245 250 255

Ala Thr Ile Gly Leu Ser Val Ser Lys Phe Thr Asp Tyr Glu Leu Lys

260 265 270

Ala Tyr Ala Lys Ala Gly Val Val Ala Asp Glu Val Ile Ser Ser Met

275 280 285

Arg Thr Val Ala Ala Phe Gly Gly Glu Lys Arg Glu Val Glu Arg Tyr

290 295 300

Glu Lys Asn Leu Val Phe Ala Gln Arg Trp Gly Ile Arg Lys Gly Ile

305 310 315 320

Val Met Gly Phe Phe Thr Gly Phe Val Trp Cys Leu Ile Phe Leu Cys

325 330 335

Tyr Ala Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Ser Thr Leu Val Leu Asp Glu Gly

340 345 350

Glu Tyr Thr Pro Gly Thr Leu Val Gln Ile Phe Leu Ser Val Ile Val

355 360 365

Gly Ala Leu Asn Leu Gly Asn Ala Ser Pro Cys Leu Glu Ala Phe Ala

370 375 380

Thr Gly Arg Ala Ala Ala Thr Ser Ile Phe Glu Thr Ile Asp Arg Lys

385 390 395 400

Pro Ile Ile Asp Cys Met Ser Glu Asp Gly Tyr Lys Leu Asp Arg Ile

405 410 415

Lys Gly Glu Ile Glu Phe His Asn Val Thr Phe His Tyr Pro Ser Arg

420 425 430

Pro Glu Val Lys Ile Leu Asn Asp Leu Asn Met Val Ile Lys Pro Gly

435 440 445

Glu Met Thr Ala Leu Val Gly Pro Ser Gly Ala Gly Lys Ser Thr Ala

450 455 460

Leu Gln Leu Ile Gln Arg Phe Tyr Asp Pro Cys Glu Gly Met Val Thr

465 470 475 480

Val Asp Gly His Asp Ile Arg Ser Leu Asn Ile Gln Trp Leu Arg Asp

485 490 495

Gln Ile Gly Ile Val Glu Gln Glu Pro Val Leu Phe Ser Thr Thr Ile

500 505 510

Ala Glu Asn Ile Arg Tyr Gly Arg Glu Asp Ala Thr Met Glu Asp Ile

515 520 525

Val Gln Ala Ala Lys Glu Ala Asn Ala Tyr Asn Phe Ile Met Asp Leu

530 535 540

Pro Gln Gln Phe Asp Thr Leu Val Gly Glu Gly Gly Gly Gln Met Ser

545 550 555 560

Gly Gly Gln Lys Gln Arg Val Ala Ile Ala Arg Ala Leu Ile Arg Asn

565 570 575

Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Met Ala Thr Ser Ala Leu Asp Asn Glu

580 585 590

Ser Glu Ala Met Val Gln Glu Val Leu Ser Lys Ile Gln His Gly His

595 600 605

Thr Ile Ile Ser Val Ala His Arg Leu Ser Thr Val Arg Ala Ala Asp

610 615 620

Thr Ile Ile Gly Phe Glu His Gly Thr Ala Val Glu Arg Gly Thr His

625 630 635 640

Glu Glu Leu Leu Glu Arg Lys Gly Val Tyr Phe Thr Leu Val Thr Leu

645 650 655

Gln Ser Gln Gly Asn Gln Ala Leu Asn Glu Glu Asp Ile Lys Asp Ala

660 665 670

Thr Glu Asp Asp Met Leu Ala Arg Thr Phe Ser Arg Gly Ser Tyr Gln

675 680 685

Asp Ser Leu Arg Ala Ser Ile Arg Gln Arg Ser Lys Ser Gln Leu Ser

690 695 700

Tyr Leu Val His Glu Pro Pro Leu Ala Val Val Asp His Lys Ser Thr

705 710 715 720

Tyr Glu Glu Asp Arg Lys Asp Lys Asp Ile Pro Val Gln Glu Glu Val

725 730 735

Glu Pro Ala Pro Val Arg Arg Ile Leu Lys Phe Ser Ala Pro Glu Trp

740 745 750

Pro Tyr Met Leu Val Gly Ser Val Gly Ala Ala Val Asn Gly Thr Val

755 760 765

Thr Pro Leu Tyr Ala Phe Leu Phe Ser Gln Ile Leu Gly Thr Phe Ser

770 775 780

Ile Pro Asp Lys Glu Glu Gln Arg Ser Gln Ile Asn Gly Val Cys Leu

785 790 795 800

Leu Phe Val Ala Met Gly Cys Val Ser Leu Phe Thr Gln Phe Leu Gln

805 810 815

Gly Tyr Ala Phe Ala Lys Ser Gly Glu Leu Leu Thr Lys Arg Leu Arg

820 825 830

Lys Phe Gly Phe Arg Ala Met Leu Gly Gln Asp Ile Ala Trp Phe Asp

835 840 845

Asp Leu Arg Asn Ser Pro Gly Ala Leu Thr Thr Arg Leu Ala Thr Asp

850 855 860

Ala Ser Gln Val Gln Gly Ala Ala Gly Ser Gln Ile Gly Met Ile Val

865 870 875 880

Asn Ser Phe Thr Asn Val Thr Val Ala Met Ile Ile Ala Phe Ser Phe

885 890 895

Ser Trp Lys Leu Ser Leu Val Ile Leu Cys Phe Phe Pro Phe Leu Ala

900 905 910

Leu Ser Gly Ala Thr Gln Thr Arg Met Leu Thr Gly Phe Ala Ser Arg

915 920 925

Asp Lys Gln Ala Leu Glu Met Val Gly Gln Ile Thr Asn Glu Ala Leu

930 935 940

Ser Asn Ile Arg Thr Val Ala Gly Ile Gly Lys Glu Arg Arg Phe Ile

945 950 955 960

Glu Ala Leu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Pro Phe Lys Thr Ala Ile Gln

965 970 975

Lys Ala Asn Ile Tyr Gly Phe Cys Phe Ala Phe Ala Gln Cys Ile Met

980 985 990

Phe Ile Ala Asn Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Gly Gly Tyr Leu Ile Ser

995 1000 1005

Asn Glu Gly Leu His Phe Ser Tyr Val Phe Arg Val Ile Ser Ala

1010 1015 1020

Val Val Leu Ser Ala Thr Ala Leu Gly Arg Ala Phe Ser Tyr Thr

1025 1030 1035

Pro Ser Tyr Ala Lys Ala Lys Ile Ser Ala Ala Arg Phe Phe Gln

1040 1045 1050

Leu Leu Asp Arg Gln Pro Pro Ile Ser Val Tyr Asn Thr Ala Gly

1055 1060 1065

Glu Lys Trp Asp Asn Phe Gln Gly Lys Ile Asp Phe Val Asp Cys

1070 1075 1080

Lys Phe Thr Tyr Pro Ser Arg Pro Asp Ser Gln Val Leu Asn Gly

1085 1090 1095

Leu Ser Val Ser Ile Ser Pro Gly Gln Thr Leu Ala Phe Val Gly

1100 1105 1110

Ser Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Ser Ile Gln Leu Leu Glu Arg

1115 1120 1125

Phe Tyr Asp Pro Asp Gln Gly Lys Val Met Ile Asp Gly His Asp

1130 1135 1140

Ser Lys Lys Val Asn Val Gln Phe Leu Arg Ser Asn Ile Gly Ile

1145 1150 1155

Val Ser Gln Glu Pro Val Leu Phe Ala Cys Ser Ile Met Asp Asn

1160 1165 1170

Ile Lys Tyr Gly Asp Asn Thr Lys Glu Ile Pro Met Glu Arg Val

1175 1180 1185

Ile Ala Ala Ala Lys Gln Ala Gln Leu His Asp Phe Val Met Ser

1190 1195 1200

Leu Pro Glu Lys Tyr Glu Thr Asn Val Gly Ser Gln Gly Ser Gln

1205 1210 1215

Leu Ser Arg Gly Glu Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile

1220 1225 1230

Val Arg Asp Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala

1235 1240 1245

Leu Asp Thr Glu Ser Glu Lys Thr Val Gln Val Ala Leu Asp Lys

1250 1255 1260

Ala Arg Glu Gly Arg Thr Cys Ile Val Ile Ala His Arg Leu Ser

1265 1270 1275

Thr Ile Gln Asn Ala Asp Ile Ile Ala Val Met Ala Gln Gly Val

1280 1285 1290

Val Ile Glu Lys Gly Thr His Glu Glu Leu Met Ala Gln Lys Gly

1295 1300 1305

Ala Tyr Tyr Lys Leu Val Thr Thr Gly Ser Pro Ile Ser

1310 1315 1320

<210> 4

<211> 3966

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 4

atgtctgact cagtaattct tcgaagtata aagaaatttg gagaggagaa tgatggtttt

60

gagtcagata aatcatataa taatgataag aaatcaaggt tacaagatga gaagaaaggt

120

gatggcgtta gagttggctt ctttcaattg tttcggtttt cttcatcaac tgacatttgg

180

ctgatgtttg tgggaagttt gtgtgcattt ctccatggaa tagcccagcc aggcgtgcta

240

ctcatttttg gcacaatgac agatgttttt attgactacg acgttgagtt acaagaactc

300

cagattccag gaaaagcatg tgtgaataac accattgtat ggactaacag ttccctcaac

360

cagaacatga caaatggaac acgttgtggg ttgctgaaca tcgagagcga aatgatcaaa

420

tttgccagtt actatgctgg aattgctgtc gcagtactta tcacaggata tattcaaata

480

tgcttttggg tcattgccgc agctcgtcag atacagaaaa tgagaaaatt ttactttagg

540

agaataatga gaatggaaat agggtggttt gactgcaatt cagtggggga gctgaataca

600

agattctctg atgatattaa taaaatcaat gatgccatag ctgaccaaat ggcccttttc

660

attcagcgca tgacctcgac catctgtggt ttcctgttgg gatttttcag gggttggaaa

720

ctgaccttgg ttattatttc tgtcagccct ctcattggga ttggagcagc caccattggt

780

ctgagtgtgt ccaagtttac ggactatgag ctgaaggcct atgccaaagc aggggtggtg

840

gctgatgaag tcatttcatc aatgagaaca gtggctgctt ttggtggtga gaaaagagag

900

gttgaaaggt atgagaaaaa tcttgtgttc gcccagcgtt ggggaattag aaaaggaata

960

gtgatgggat tctttactgg attcgtgtgg tgtctcatct ttttgtgtta tgcactggcc

1020

ttctggtacg gctccacact tgtcctggat gaaggagaat atacaccagg aacccttgtc

1080

cagattttcc tcagtgtcat agtaggagct ttaaatcttg gcaatgcctc tccttgtttg

1140

gaagcctttg caactggacg tgcagcagcc accagcattt ttgagacaat agacaggaaa

1200

cccatcattg actgcatgtc agaagatggt tacaagttgg atcgaatcaa gggtgaaatt

1260

gaattccata atgtgacctt ccattatcct tccagaccag aggtgaagat tctaaatgac

1320

ctcaacatgg tcattaaacc aggggaaatg acagctctgg taggacccag tggagctgga

1380

aaaagtacag cactgcaact cattcagcga ttctatgacc cctgtgaagg aatggtgacc

1440

gtggatggcc atgacattcg ctctcttaac attcagtggc ttagagatca gattgggata

1500

gtggagcaag agccagttct gttctctacc accattgcag aaaatattcg ctatggcaga

1560

gaagatgcaa caatggaaga catagtccaa gctgccaagg aggccaatgc ctacaacttc

1620

atcatggacc tgccacagca atttgacacc cttgttggag aaggaggagg ccagatgagt

1680

ggtggccaga aacaaagggt agctatcgcc agagccctca tccgaaatcc caagattctg

1740

cttttggaca tggccacctc agctctggac aatgagagtg aagccatggt gcaagaagtg

1800

ctgagtaaga ttcagcatgg gcacacaatc atttcagttg ctcatcgctt gtctacggtc

1860

agagctgcag ataccatcat tggttttgaa catggcactg cagtggaaag agggacccat

1920

gaagaattac tggaaaggaa aggtgtttac ttcactctag tgactttgca aagccaggga

1980

aatcaagctc ttaatgaaga ggacataaag gatgcaactg aagatgacat gcttgcgagg

2040

acctttagca gagggagcta ccaggatagt ttaagggctt ccatccggca acgctccaag

2100

tctcagcttt cttacctggt gcacgaacct ccattagctg ttgtagatca taagtctacc

2160

tatgaagaag atagaaagga caaggacatt cctgtgcagg aagaagttga acctgcccca

2220

gttaggagga ttctgaaatt cagtgctcca gaatggccct acatgctggt agggtctgtg

2280

ggtgcagctg tgaacgggac agtcacaccc ttgtatgcct ttttattcag ccagattctt

2340

gggacttttt caattcctga taaagaggaa caaaggtcac agatcaatgg tgtgtgccta

2400

ctttttgtag caatgggctg tgtatctctt ttcacccaat ttctacaggg atatgccttt

2460

gctaaatctg gggagctcct aacaaaaagg ctacgtaaat ttggtttcag ggcaatgctg

2520

gggcaagata ttgcctggtt tgatgacctc agaaatagcc ctggagcatt gacaacaaga

2580

cttgctacag atgcttccca agttcaaggg gctgccggct ctcagatcgg gatgatagtc

2640

aattccttca ctaacgtcac tgtggccatg atcattgcct tctcctttag ctggaagctg

2700

agcctggtca tcttgtgctt cttccccttc ttggctttat caggagccac acagaccagg

2760

atgttgacag gatttgcctc tcgagataag caggccctgg agatggtggg acagattaca

2820

aatgaagccc tcagtaacat ccgcactgtt gctggaattg gaaaggagag gcggttcatt

2880

gaagcacttg agactgagct ggagaagccc ttcaagacag ccattcagaa agccaatatt

2940

tacggattct gctttgcctt tgcccagtgc atcatgttta ttgcgaattc tgcttcctac

3000

agatatggag gttacttaat ctccaatgag gggctccatt tcagctatgt gttcagggtg

3060

atctctgcag ttgtactgag tgcaacagct cttggaagag ccttctctta caccccaagt

3120

tatgcaaaag ctaaaatatc agctgcacgc ttttttcaac tgctggaccg acaaccccca

3180

atcagtgtat acaatactgc aggtgaaaaa tgggacaact tccaggggaa gattgatttt

3240

gttgattgta aatttacata tccttctcga cctgactcgc aagttctgaa tggtctctca

3300

gtgtcgatta gtccagggca gacactggcg tttgttggga gcagtggatg tggcaaaagc

3360

actagcattc agctgttgga acgtttctat gatcctgatc aagggaaggt gatgatagat

3420

ggtcatgaca gcaaaaaagt aaatgtccag ttcctccgct caaacattgg aattgtttcc

3480

caggaaccag tgttgtttgc ctgtagcata atggacaata tcaagtatgg agacaacacc

3540

aaagaaattc ccatggaaag agtcatagca gctgcaaaac aggctcagct gcatgatttt

3600

gtcatgtcac tcccagagaa atatgaaact aacgttgggt cccaggggtc tcaactctct

3660

agaggggaga aacaacgcat tgctattgct cgggccattg tacgagatcc taaaatcttg

3720

ctactagatg aagccacttc tgccttagac acagaaagtg aaaagacggt gcaggttgct

3780

ctagacaaag ccagagaggg tcggacctgc attgtcattg cccatcgctt gtccaccatc

3840

cagaacgcgg atatcattgc tgtcatggca cagggggtgg tgattgaaaa ggggacccat

3900

gaagaactga tggcccaaaa aggagcctac tacaaactag tcaccactgg atcccccatc

3960

agttga

3966

<---

Claims

1. Соединение формулы (I)

где каждый из R¹ и R² независимо представляет собой C_1-4 алкил;

R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C_1-4 алкила, С_1-4 галогеналкила, С_1-4 алкокси, С_1-4 галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(С_1-4 алкил) амино, N,N-ди(С_1-4алкил)амино и N-(арил-С_1-4алкил)амино;

n представляет собой целое число 1, 2 или 3;

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C_1-4алкила, С_3-6 циклоалкила, С_1-4 алкокси, С_3-6 циклоалкилокси, С_1-4 алкилтио, С_3-6циклоалкилтио, амино, N-(С_1-4алкил) амино и N,N-ди(С_1-4алкил) амино;

R⁶ выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-4 алкила;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где R¹ представляет собой н-бутил.

3. Соединение по п. 1 или 2, где R² представляет собой н-бутил.

4. Соединение по п. 1 или 2, где R² представляет собой этил.

5. Соединение по любому из пп. 1-4, где R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино, циано, С_1-4 галогеналкила, С_1-4алкокси и С_1-4 галогеналкокси.

6. Соединение по любому из пп. 1-5, где R⁴ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, циано, C_1-4 алкила, C_1-4 алкокси, C_1-4 алкилтио, амино, N-(C_1-4 алкил) амино и N,N-ди(C_1-4 алкил) амино.

7. Соединение по любому из пп. 1-6, где каждый из R^5A и R^5B независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и метила.

8. Соединение по любому из пп. 1-7, где R⁶ представляет собой водород или метил.

9. Соединение по п. 1, выбранное из группы, состоящей из:

(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2- гидроксипропановой кислоты;

(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)-2- гидроксипропановой кислоты;

(R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин- 8-ил)окси) пропановой кислоты; и

O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)серина;

или его фармацевтически приемлемой соли.

10. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибирования апикального натрийзависимого транспортера желчных кислот (ASBT) и/или транспорта желчных кислот в печени (LBAT), где указанная композиция содержит терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-9 и один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей.

11. Применение соединения по любому из пп. 1-9 в качестве лекарственного средства, обладающего активностью ингибирования апикального натрийзависимого транспортера желчных кислот (ASBT) и/или транспорта желчных кислот в печени (LBAT).

12. Применение по п. 11, где лекарственное средство предназначено для лечения или профилактики сердечно-сосудистого заболевания или нарушения метаболизма жирных кислот или нарушения утилизации глюкозы, такого как гиперхолестеринемия; нарушения обмена жирных кислот; сахарного диабета 1 и 2 типа; осложнений диабета, в том числе катаракты, микро- и макрососудистых заболеваний, ретинопатии, нейропатии, нефропатии и замедленного заживления ран, ишемии тканей, диабетической стопы, артериосклероза, инфаркта миокарда, острого коронарного синдрома, нестабильной стенокардии, стабильной стенокардии, инсульта, окклюзионного заболевания периферических артерий, кардиомиопатии, сердечной недостаточности, нарушений сердечного ритма и рестеноза сосудов; заболеваний, связанных с диабетом, таких как инсулинорезистентность (нарушение гомеостаза глюкозы), гипергликемия, гиперинсулинемия, повышенный уровень жирных кислот или глицерина в крови, ожирение, дислипидемия, гиперлипидемия, включая гипертриглицеридемию, метаболический синдром (синдром X), атеросклероз и гипертензия; и для повышения уровня липопротеинов высокой плотности.

13. Применение по п. 11, где лекарственное средство предназначено для лечения или профилактики желудочно-кишечного заболевания или расстройства, такого как запор (включая хронический запор, функциональный запор, хронический идиопатический запор (CIC), периодический/спорадический запор, запор на фоне сахарного диабета, запор на фоне инсульта, запор на фоне хронического заболевания почек, запор на фоне рассеянного склероза, запор на фоне болезни Паркинсона, запор на фоне системного склероза, запор, вызванный лекарствами, синдром раздраженного кишечника с запором (IBS-C), синдром раздраженного кишечника смешанный (IBS-M), детский функциональный запор и запор, вызванный опиоидами); Болезнь Крона; первичная мальабсорбция желчных кислот; синдром раздраженного кишечника (IBS); воспалительное заболевание кишечника (IBD); воспаление подвздошной кишки; и рефлюксная болезнь и ее осложнения, такие как пищевод Барретта, желчный рефлюксный эзофагит и желчный рефлюксный гастрит.

14. Применение по п. 11, где лекарственное средство предназначено для лечения или профилактики заболевания или нарушения печени, такого как: наследственное нарушение метаболизма печени; врожденные нарушения синтеза желчной кислоты; врожденные аномалии желчных протоков; атрезия желчевыводящих путей; пост-касайская билиарная атрезия; посттрансплантационная атрезия желчных путей; неонатальный гепатит; неонатальный холестаз; наследственные формы холестаза; церебротехнический ксантоматоз; вторичный дефект синтеза ЖК; синдром Зеллвегера; заболевание печени, связанное с муковисцидозом; дефицит альфа1-антитрипсина; синдром Алажиля (ALGS); синдром Байлера; первичный дефект синтеза желчной кислоты (ЖК); прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), включая PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, постжелчный отводный PFIC и посттрансплантационный PFIC; доброкачественный рецидивирующий внутрипеченочный холестаз (BRIC), включая BRIC1, BRIC2 и неспецифический BRIC, BRIC после трансплантации желчных путей и BRIC после трансплантации печени; аутоиммунный гепатит; первичный билиарный цирроз (РВС); фиброз печени; неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD); неалкогольный стеатогепатит (NASH); портальная гипертензия; холестаз; холестаз синдрома Дауна; лекарственный холестаз; внутрипеченочный холестаз беременности (желтуха при беременности); внутрипеченочный холестаз; внепеченочный холестаз; холестаз, связанный с парентеральным питанием (PNAC); холестаз, связанный с низким содержанием фосфолипидов; синдром лимфедемного холестаза 1 (LCS1); первичный склерозирующий холангит (PSC); холангит, связанный с иммуноглобулином G4; первичный билиарный холангит; желчекаменная болезнь (желчные камни); желчный литиаз; холедохолитиаз; желчнокаменный панкреатит; болезнь Кароли; злокачественность желчных протоков; злокачественная опухоль, вызывающая непроходимость желчного дерева; стриктуры желчных путей; холангиопатия при СПИДе; ишемическая холангиопатия; кожный зуд из-за холестаза или желтухи; панкреатит; хроническое аутоиммунное заболевание печени, ведущее к прогрессирующему холестазу; стеатоз печени; алкогольный гепатит; острый жировой гепатоз; ожирение печени при беременности; лекарственный гепатит; нарушения перегрузки железом; врожденный дефект синтеза желчных кислот 1-го типа (дефект В AS 1-го типа); лекарственное поражение печени (DILI); фиброз печени; врожденный фиброз печени; цирроз печени; гистиоцитоз из клеток Лангерганса (LCH); неонатальный ихтиоз, склерозирующий холангит (NISCH); эритропоэтическая протопорфирия (ЕРР); идиопатическая дуктопения в зрелом возрасте (IAD); идиопатический неонатальный гепатит (INH); несиндромальная недостаточность междольковых желчных протоков (NS PILBD); цирроз у детей североамериканских индейцев (NAIC); саркоидоз печени; амилоидоз; некротический энтероколит; токсичность сывороточной желчной кислоты, включая нарушения сердечного ритма (например, фибрилляцию предсердий) при аномальном профиле желчных кислот сыворотки, кардиомиопатию, связанную с циррозом печени («холекардию»), и истощение скелетных мышц, связанное с холестатической болезнью печени; вирусный гепатит (включая гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D и гепатит Е); гепатоцеллюлярную карциному (гепатому); холангиокарциному; рак желудочно-кишечного тракта, связанный с желчными кислотами; и холестаз, вызванный опухолями и новообразованиями печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы; или применение в усилении терапии кортикостероидами при заболевании печени.

15. Применение по п. 11, где лекарственное средство предназначено для лечения или профилактики синдромов гиперабсорбции (включая абеталипопротеинемию, семейную гипобеталипопротеинемию (FHBL), болезнь задержки хиломикронов (CRD) и ситостеролемию); гипервитаминоза и остеопетроза; гипертонии; клубочковой гиперфильтрации; и кожного зуда при почечной недостаточности; или для применения для защиты от поражения почек, связанного с заболеванием печени или метаболическим заболеванием.