BR112021012694A2 - Nanopartícula, agente de contraste para imagem de ressonância magnética compreendendo a mesma e composto de ligante zwitteriônico - Google Patents

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Tsuyoshi Mizutani
Ichio Aoki
Hiroyoshi Yamada
Hiroki Toya
Akihiko Fujikawa
Seiji Yoshimura
Shigetoshi Kikuchi
Daigo Miyajima
Toshiaki Takeuchi
Takuzo Aida
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Riken
Astellas Pharma Inc.
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Abstract

nanopartícula, agente de contraste para imagem de ressonância magnética compreendendo a mesma e composto de ligante zwitteriônico. a presente invenção se refere a uma nova nanopartícula, um agente de contraste para imagens de ressonância magnética contendo o mesmo, e um composto de ligante zwitteriônico usado na produção da nanopartícula. o agente de contraste para irm da presente invenção pode ser usado adequadamente como um agente de contraste para irm no campo médico. a nanopartícula e o composto de ligante zwitteriônico da presente invenção são aplicáveis a várias composições farmacêuticas e semelhantes, incluindo um agente de contraste para irm, e podem ser amplamente utilizados nos campos de produtos farmacêuticos, biotecnologia e semelhantes, incluindo vários métodos de diagnóstico e reagentes de exame.

Description

“NANOPARTÍCULA, AGENTE DE CONTRASTE PARA IMAGEM DE RESSONÂNCIA MAGNÉTICA COMPREENDENDO A MESMA E COMPOSTO DE LIGANTE ZWITTERIÔNICO”
[01] Campo técnico:
[02] A presente invenção se refere a uma nova nanopartícula, um agente de contraste para imagem de ressonância magnética contendo a mesma e um composto de ligante zwitteriônico usado para a produção da nanopartícula.
[03] Estado da arte:
[04] A ressonância magnética (RM), que desempenha um papel importante no diagnóstico por imagem clínico, é uma ferramenta importante também no campo da pesquisa biomédica.
[05] A imagem diagnóstica e um agente de contraste usados para a imagem diagnóstica são uma tecnologia usada para o exame de um órgão e tecido vivo. A ressonância magnética, em particular, é uma tecnologia que, com base nas propriedades magnéticas dos átomos, cria uma imagem em corte transversal elaborada e uma imagem tridimensional elaborada de um tecido e de um órgão de um organismo vivo com uso de alta intensidade de campo magnético e um sinal de rádio de alta frequência.
[06] A ressonância magnética é uma técnica eficaz para a obtenção de imagens bidimensionais ou tridimensionais de todos os tecidos e órgãos que contêm água.
[07] Quando os pulsos de ondas eletromagnéticas entram nos núcleos de hidrogênio que são orientados por magnetismo em um tecido alvo, os núcleos de hidrogênio causam ressonância magnética nuclear e, em seguida, retornam sinais como resultado do relaxamento dos prótons. Com base em uma ligeira diferença entre os sinais de vários tecidos, a ressonância magnética pode identificar um órgão e indicar um contraste potencial entre um tecido benigno e um tecido maligno. A ressonância magnética é útil para a detecção de um tumor, uma inflamação, sangramento, edema e semelhantes.
[08] Observe que um "agente de contraste para IRM" se refere a uma medicação que permite a detecção de uma área de lesão ou exame de um fluxo sanguíneo em um vaso sanguíneo, uma função de cada órgão, e semelhantes, por (i) alterar os tempos de relaxamento (T1, T2) de água em um organismo vivo, principalmente pela redução dos tempos de relaxamento (T1, T2) e (ii), aumentando assim o contraste entre os diferentes tecidos.
[09] Espera-se que o agente de contraste para ressonância magnética tenha as seguintes propriedades: que o agente de contraste exiba um efeito de contraste rapidamente após a administração; que o agente de contraste não tenha efeito adverso em um organismo vivo; e que todo o agente de contraste seja eliminado do organismo vivo. O agente de contraste para IRM pode ser distribuído no sangue e no fluido extracelular por, por exemplo, administração intravenosa. A meia-vida do agente de contraste no sangue é preferencialmente dentro de 3 horas, e o agente de contraste é excretado na urina através do rim, mais preferencialmente dentro de 2 horas. O agente de contraste distribuído no fluido extracelular não é, por si só, diretamente capturado por ressonância magnética. O agente de contraste promove relaxamento de prótons nos tecidos na área em que o agente de contraste foi distribuído. Isso é chamado principalmente de efeito de encurtamento de T1 e permite que o agente de contraste exiba um efeito de contraste em uma imagem ponderada em T1 (os sinais são aumentados). O agente de contraste provoca uma mudança no tempo de relaxamento de um tecido ocupado pelo agente de contraste.
[010] No caso em que a concentração do agente de contraste é aumentada para um determinado nível ou mais, o sinal é então atenuado pelos efeitos de redução de T2 e T2*. Como tal, uma concentração ótima para permitir que a intensidade do sinal seja aumentada varia dependendo da finalidade de realizar a imagem.
[011] Graus de efeitos de encurtamento do relaxamento T1 e T2 em um corpo magnético, ou seja, as eficiências no encurtamento dos tempos de relaxamento dos prótons são representados como taxa de relaxamento (R). Uma taxa de relaxamento R 1 e uma taxa de relaxamento R2 são representadas como um recíproco de um tempo de relaxamento longitudinal T1 e um recíproco de um tempo de relaxamento transversal T2, respectivamente, de IRM (R1 = 1/T1, R2 = 1/T2). Uma taxa de relaxamento por unidade de concentração é representada como relaxividade (r). A relaxividade longitudinal é representada como r1 e a relaxividade transversal é representada como r2. Uma razão R1/R2 e uma razão r1/r2 são cada uma usada como um parâmetro para avaliar a relaxividade de um agente de contraste para IRM.
[012] Em particular, um agente de contraste que utiliza relaxamento T1 e é usado com o propósito de intensificar sinais em uma imagem ponderada em T1 é referido como um agente de contraste encurtador T1 ou um agente de contraste positivo. O agente de contraste positivo causa um aumento de sinal nos tecidos ocupados pelo agente de contraste positivo. Um agente de contraste que utiliza relaxamento T2 e é usado com o propósito de atenuar sinais em uma imagem ponderada em T2 é referido como um agente de contraste de encurtamento de T2 ou um agente de contraste negativo. O agente de contraste negativo causa uma diminuição do sinal nos tecidos ocupados pelo agente de contraste negativo. A ressonância magnética ponderada em T1 e a ressonância magnética ponderada em T2 são métodos de imagem comumente usados em diagnósticos médicos. O agente de contraste positivo na ressonância magnética ponderada em T1 é altamente útil no diagnóstico porque, em comparação com o agente de contraste negativo, o agente de contraste positivo não causa perda de tecido devido à diminuição do sinal e pode melhorar o contraste da lesão sem perda das informações do tecido normal, portanto o uso do contraste positivo no diagnóstico por imagem é imprescindível.
[013] Em particular, uma razão r 1/r2 de um agente de contraste é um valor importante para a avaliação do agente de contraste positivo. Uma alta razão r 1/r2 de um agente de contraste positivo fornece uma imagem de RM ponderada em T1 com bom contraste.
[014] Um composto quelato à base de gadolínio (Gd) pode ser usado clinicamente como um agente de contraste positivo e exibe excelente contraste T1 devido a alto r1 e baixo r2 (isto é, uma alta razão r1/r2). No entanto, os compostos à base de Gd são conhecidos por terem uma toxicidade grave para uma pessoa idosa e um paciente com baixa capacidade de excreção do rim (por exemplo, um paciente com insuficiência renal).
[015] Os compostos à base de óxido de ferro, por outro lado, apresentam uma toxicidade extremamente baixa em comparação com os compostos à base de Gd. Como tal, a pesquisa e o desenvolvimento estão sendo conduzidos em nanopartículas à base de óxido de ferro como um material alternativo ao Gd, que é a corrente dominante no mercado (literatura não-patenteada 1).
[016] Até agora, a pesquisa e o desenvolvimento foram conduzidos em nanopartículas para serem aplicadas a usos médicos (por exemplo, para diagnóstico, tratamento e semelhantes). Como uma realização de uma nanopartícula a ser aplicada a um organismo vivo, é conhecida uma nanopartícula incluindo (i) uma partícula no miolo que consiste em um material metálico e (ii) uma molécula de vários tipos (como um polímero) com a qual a superfície da partícula miolo é revestida. Por exemplo, foi relatado (i) um método para a produção de partículas de óxido de ferro (ESIONs, Extremely Small Iron Oxide Nanoparticles, “Nanopartículas de Óxido de Ferro Extremamente Pequenas”) com um tamanho de 4 nm ou menos e (ii) um agente de contraste positivo para IRM cujo agente de contraste positivo contém nanopartículas incluindo (a) ESIONs e (b) fosfato de polietilenoglicol (PO-PEG) com o qual as ESIONs são revestidas (literatura não-patenteada 2). Também foi relatada uma nanopartícula com uma estrutura na qual o sulfonato de dopamina zwitteriônico (ZDS) está ligado a uma superfície de uma nanopartícula de óxido de ferro servindo como uma partícula central (Literatura Não- Patenteada 3 e Literatura Patenteada 1). Propriedades de tais nanopartículas (ZDS-SPIONs), quando usadas como um agente de contraste positivo, também foram relatadas (Literatura de Patentes 2 e Literatura Não-
Patentária 4).
[017] Lista de citações:
[018] Literaturas de patentes:
[019] Literatura de Patentes 1: Publicação internacional nº WO2013/090601, data de publicação: 20 de junho de 2013;
[020] Literatura de Patentes 2: Publicação internacional nº WO2016/044068, data de publicação: 24 de março de 2016;
[021] Literatura Não-Patentária:
[022] Literatura Não-Patentária 1: Corot et al., Advanced Drug Delivery Reviews, 58, 1471-1504, 2006;
[023] Literatura Não-Patentária 2: Byung Hyo Kim et al., J Am. Chem. Sci., 133, 12624-12631, 2011;
[024] Literatura Não-Patentária 3: He Wei et al., Integr. Biol., 5, 108-114, 2013;
[025] Literatura Não-Patentária 4: He Wei et al., Proc. Natr. Acad. Sci., 114 (9), 2325-2330, 2017.
[026] Problema técnico:
[027] Ainda existe uma demanda por (i) uma nova nanopartícula que satisfaça suficientemente as seguintes condições: exibir uma estabilidade comportamental em um organismo vivo enquanto tem uma excelente capacidade de contraste positivo (isto é, r1/r2 alto); ter uma baixa toxicidade para um organismo vivo; e ter uma boa estabilidade de armazenamento e (ii) um composto ligante para revestir a nanopartícula. Além disso, há uma necessidade de desenvolvimento de um agente de contraste para imagem por ressonância magnética contendo a nanopartícula.
[028] Solução para o problema:
[029] A fim de resolver o problema acima, a presente invenção inclui em seu escopo qualquer uma das modalidades abaixo.
[030] Observe que, salvo indicação em contrário, quando um símbolo em uma determinada fórmula química nesta especificação também é usado em outra fórmula química, o mesmo símbolo indica o mesmo significado.
[031] Modalidade 1:
[032] Uma nanopartícula incluindo: pelo menos um ligante zwitteriônico representado por uma fórmula (I); e uma partícula de metal contendo óxido de ferro, tal pelo menos um ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado à partícula de metal:
[033]
[034] Onde:
[035] um de R1 e R2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b), e o outro de R1 e R2 é H, alquil inferior, -O- alquil inferior ou halogênio;
[036]
[037] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[038] X2 é alquileno C1-5 que é opcionalmente substituído com OH ou é - alquileno C1-2-O-alquileno C1-3-, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[039] Ra e Rb são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1-3 ou - alquileno C1-3 -O-alquil C1-2, ou Ra e Rb formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual Ra e Rb estão ligados;
[040] Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-;
[041] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3, -O-alquil C1-3, ou halogênio;
[042] n é um número inteiro de 0 a 2, e,
[043] i) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno juntamente com Ra ou Rb;
[044] ii) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R2 opcionalmente forma metileno juntamente com Ra ou Rb; e
[045] iii) quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R3 opcionalmente forma etileno juntamente com Ra ou Rb, desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), Ra e Rb são metil, X1 é uma ligação, X 2 é alquileno C1-4 e R1, R3 e R4 são H, Y- é HPO3- ou CO2-.
[046] Modalidade 2:
[047] Um composto representado pela seguinte fórmula (I) ou um sal do mesmo:
[048] Onde:
[049] um de R1 e R2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b) abaixo, e o outro de R 1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior, ou halogênio;
[050]
[051] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[052] X2 é alquileno C 1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é alquileno C 1-2-O-alquileno C1-3-, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[053] Ra e Rb são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1-3 ou alquileno C1-3-O-alquil C1-2, ou Ra e Rb formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e Rb estão ligados;
[054] Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-;
[055] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3, -O-alquil C1-3 ou halogênio, n é um número inteiro de 0 a 2; e,
[056] i) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno juntamente com Ra ou Rb;
[057] ii) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R2 forma opcionalmente metileno juntamente com Ra ou Rb, e
[058] iii) quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R3 opcionalmente forma etileno juntamente com Ra ou Rb, desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), Ra e Rb são metil, X 1 é uma ligação, X 2 é alquileno C1-4, e R1, R3 e R4 são H, Y- é HPO3- ou CO2-.
[059] Efeitos Vantajosos da Invenção:
[060] Espera-se que a presente invenção produza um efeito de prover uma nova nanopartícula com boa capacidade de contraste positivo e nenhuma citotoxicidade e um efeito de prover um agente de contraste para Imagem de Ressonância Magnética (IRM) contendo a nanopartícula.
[061] Breve descrição dos desenhos:
[062] (a) da Fig. 1 mostra imagens de um fígado de um camundongo ao qual um agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 6 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes tempos: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[063] (b) Fig. 1 mostra imagens de um rim de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 6 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[064] (c) da Fig. 1 mostra imagens de uma bexiga de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 6 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T 1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[065] (a) da Fig. 2 mostra imagens de um fígado de um camundongo ao qual um agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 6 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo,
respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[066] (b) da Fig. 2 mostra imagens de um rim de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 6 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguinte horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 hora).
[067] (c) da Fig. 2 mostra imagens de uma bexiga de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 6 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM medido ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes tempos: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[068] (a) da Fig. 3 mostra imagens de um fígado de um camundongo ao qual um agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 7 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[069] (b) da Fig. 3 mostra imagens de um rim de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 7 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente no seguinte tempos: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[070] (c) da Fig. 3 mostra imagens de uma bexiga de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 7 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[071] (a) da Fig. 4 mostra imagens de um fígado de um camundongo ao qual um agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 7 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[072] (b) da Fig. 4 mostra imagens de um rim de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 7 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[073] (c) da Fig. 4 mostra imagens de uma bexiga de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 7 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[074] (a) da Fig. 5 mostra imagens de um fígado de um camundongo ao qual um agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 25 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T 1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[075] (b) da Fig. 5 mostra imagens de um rim de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 25 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T 1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[076] (c) da Fig. 5 mostra imagens de uma bexiga de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 3K do Exemplo 25 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T 1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[077] (a) da Fig. 6 mostra imagens de um fígado de um camundongo ao qual um agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 25 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T 1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[078] (b) da Fig. 6 mostra imagens de um rim de um camundongo para o qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 25 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T 1 medida ao longo do tempo, respectivamente nos seguintes momentos: antes da administração (pré),
imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[079] (c) da Fig. 6 mostra imagens de uma bexiga de um camundongo ao qual o agente de contraste contendo partículas purificadas 10K do Exemplo 25 foi administrado, as imagens sendo obtidas como resultado de IRM ponderada em T 1 medida ao longo do tempo, respectivamente, nos seguintes horários: antes da administração (pré), imediatamente após a administração (pós), 0,5 hora após a administração (0,5 hora), 1 hora após a administração (1 hora) e 1,5 horas após a administração (1,5 horas).
[080] A Fig. 7 mostra as dependências do campo magnético na magnetização a 300K de partículas purificadas 3K dos Exemplos 6, 7 e 9. Este gráfico é um gráfico onde o eixo horizontal indica um campo magnético aplicado e o eixo vertical indica magnetização por peso.
[081] Descrição das modalidades:
[082] A descrição abaixo trata de uma modalidade da presente invenção em detalhes.
[083] Definições dos termos:
[084] O termo "alquil inferior" refere-se a alquilas com 1 a 6 carbonos lineares ou ramificados (doravante abreviados como "C1-6"), tais como metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil, sec-butil, terc-butil, n-pentil e n-hexil e semelhantes. Como outra realização, o alquil inferior é alquil C1-4, e como ainda outra realização, o alquil inferior é alquil C1-3, e ainda como outra realização, o alquil inferior é metil, etil ou n-propil,
e ainda outra realização, o alquil inferior é metil. Como uma realização, "alquil C1-3" é metil, etil ou n-propil, e como uma realização, "alquil C1-3" é metil.
[085] "Alquileno C1-5" é alquileno C 1-5 linear ou ramificado, tal como metileno, etileno, trimetileno, tetrametileno, pentametileno, propileno, butileno, metilmetileno, etiletileno, 1,1- dimetiletileno, 2,2-dimetiletileno, 1,2 -dimetiletileno ou 1-metilbutileno e semelhantes. Como uma realização, alquileno C1-5 é alquileno C 1-3, como outra realização, alquileno C 1-5 é alquileno C1-2, e ainda como outra realização, alquileno C 1-5 é metileno, etileno, trimetileno, propileno ou butileno. Cada um de "alquileno C 1-5" e "alquileno C 1-4" é alquileno C 1-3 ou C1-2 e é, como uma realização, metileno ou etileno.
[086] Um "heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros” contendo nitrogênio, que é formado por R a e Rb juntamente com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e Rb estão ligados, é um heterocíclico não aromático com 5 ou 6 membros no anel e contendo um átomo de nitrogênio quaternário como um átomo constituinte do anel. Isto é, o "heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio" é um anel de pirrolidina ou um anel de piperidina. Como uma realização, o heterocíclico saturado contendo nitrogênio de 5 ou 6 membros é um anel de pirrolidina que contém um átomo de nitrogênio quaternário como um átomo constituinte do anel.
[087] O termo "halogênio" significa F, Cl, Br e I. Como outra realização, halogênio é F e Cl, como ainda outra realização, halogênio é F, e ainda como outra realização, halogênio é Cl.
[088] Neste relatório descritivo, o termo
"nanopartícula" se refere a uma partícula com um diâmetro de partícula na ordem de nanômetros ou menor. O termo "nanopartícula" refere-se a uma partícula com um diâmetro de partícula inferior a 100 nm, como outra realização, inferior a 10 nm, como ainda outra realização, inferior a 5 nm, como ainda outra realização, inferior a 3 nm. Ainda como outra realização, o termo "nanopartícula" refere-se a uma partícula com um diâmetro de partícula inferior a 1 nm. Os detalhes do diâmetro da partícula serão discutidos posteriormente em uma seção sobre o diâmetro da partícula.
[089] Neste relatório descritivo, o termo "aglomerado" refere-se a um agregado no qual uma pluralidade de partículas idênticas ou diferentes são coletadas e formadas em um único pedaço. Como outra realização, o termo "agrupamento" refere-se a um agregado de ligantes zwitteriônicos e partículas finas de metal aos quais os ligantes zwitteriônicos estão ligados coordenadamente.
[090] O termo "ligante zwitteriônico" ou "composto de ligante zwitteriônico" refere-se a um composto que (i) tem, em sua molécula, um grupo carregando uma carga positiva e uma carga negativa, (ii) tem outro grupo capaz de formar uma ligação coordenada com um átomo de metal na superfície de uma partícula de metal e (iii) é usado como um modificador na superfície da partícula de metal para permitir que a partícula de metal seja dispersa de forma estável em água. Tal como aqui utilizado, o termo "ligante zwitteriônico" ou "composto de ligante zwitteriônico" refere-se a (i) um caso em que o composto não foi coordenadamente ligado a uma superfície de uma partícula de metal e/ou (ii) um caso em que o composto tem uma estrutura molecular na qual o composto foi coordenadamente ligado a uma superfície de uma partícula de metal.
[091] Tal como aqui utilizado, o termo "sujeito" refere-se a um determinado organismo ao qual um agente de contraste para IRM, uma nanopartícula ou uma composição contendo a nanopartícula da presente invenção pode ser administrado com o propósito de, por exemplo, experimento, diagnóstico, e/ou tratamento. Por exemplo, o sujeito é um humano.
[092] A seguinte descrição irá discutir uma nanopartícula, um agente de contraste para IRM e um composto ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção.
[093] 1. Nano-partícula:
[094] A nanopartícula de acordo com a presente invenção é uma partícula contendo uma partícula de metal contendo óxido de ferro onde pelo menos um ligante zwitteriônico que é representado pela fórmula (I) acima está sendo coordenadamente ligado à partícula de metal. Como outra realização, o ligante zwitteriônico que está coordenadamente ligado será descrito nas seções a seguir.
[095] De acordo com uma modalidade, a nanopartícula da presente invenção é uma partícula em que pelo menos um composto de ligante zwitteriônico está coordenadamente ligado a uma superfície externa da partícula de metal contendo óxido de ferro e a partícula de metal é revestida com pelo menos um composto de ligante zwitteriônico.
[096] De acordo com outra modalidade, a nanopartícula de acordo com a presente invenção é uma partícula que inclui uma partícula de metal em uma parte central (núcleo) da partícula e tem uma estrutura núcleo-revestimento na qual um ou mais compostos de ligante zwitteriônico estão coordenadamente ligados a uma superfície externa da partícula de metal de modo a revestir a partícula de metal.
[097] De acordo com outra modalidade, a nanopartícula da presente invenção é um compósito incluindo (i) pelo menos uma partícula de metal contendo óxido de ferro, pelo menos um ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado a pelo menos uma partícula de metal, e (ii) pelo menos um composto ligante zwitteriônico.
[098] De acordo com outra modalidade, a nanopartícula da presente invenção é um cluster (agregado) incluindo (i) dois ou mais compostos de ligante zwitteriônico e (ii) duas ou mais partículas de metal, cada uma das duas ou mais partículas de metal contendo óxido de ferro, e pelo menos um composto de ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado a cada uma das duas ou mais partículas de metal.
[099] De acordo com outra modalidade, a nanopartícula da presente invenção é um agrupamento em que dois ou mais compostos de ligante zwitteriônico são irregularmente ligados a duas ou mais partículas de metal contendo óxido de ferro em que pelo menos um composto de ligante zwitteriônico está coordenadamente ligado a cada uma das duas ou mais partículas de metal.
[0100] A nanopartícula à qual o composto de ligante zwitteriônico da presente invenção está ligado de forma coordenada permite a prevenção da aglomeração de nanopartículas e exibe propriedades de partícula estáveis, mesmo em, por exemplo, uma solução contendo as nanopartículas em uma concentração elevada. Pode-se esperar que tal nanopartícula (i) assegure baixa magnetização de saturação e, assim, torne possível a obtenção de uma imagem ponderada em T 1 com contraste claro e (ii) facilite a excreção renal e, assim, permita uma boa depuração renal.
[0101] Partícula de metal:
[0102] A partícula de metal contém óxido de ferro. Em uma realização, a partícula de metal é uma partícula de óxido de ferro contendo apenas óxido de ferro. Em outro exemplo, a partícula de metal é uma partícula de metal contendo ferro além de óxido de ferro. O termo "partícula de metal" neste relatório descritivo abrange uma "nanopartícula de óxido de ferro" em uma matéria-prima que é uma "nanopartícula de óxido de ferro na qual um ligante hidrofóbico está coordenadamente ligado a uma superfície da nanopartícula" e abrange uma "partícula de metal contendo óxido de ferro" em que algum tipo de mudança ocorreu a partir de uma nanopartícula de óxido de ferro que é a matéria-prima, como resultado da realização de um método de produção no qual o ligante zwitteriônico da presente invenção está coordenadamente ligado a uma partícula de metal (por exemplo, um método MEAA descrito posteriormente). Aqui, algum tipo de mudança inclui, mas não está limitado a, uma mudança estrutural de uma estrutura de núcleo-revestimento para um composto ou cluster, uma mudança no diâmetro da partícula, uma mudança na composição e semelhantes. Ou seja, o termo "partícula de metal" nesta especificação abrange pelo menos todas as partículas de metal contendo óxido de ferro, que são obtidas pelo método MEAA, um método TMA (OH) (descrito posteriormente) ou um método de catalisador de transferência de fase (descrito posteriormente), em que o ligante zwitteriônico mostrado na Fórmula (I) descrito nesta especificação é coordenado com uma partícula de metal.
[0103] Em uma modalidade da presente invenção, a partícula de metal contendo óxido de ferro pode conter ainda pelo menos um derivado de metal diferente de óxido de ferro. Além disso, a partícula de metal pode conter pelo menos um elemento de metal diferente de ferro (Fe). Como o outro elemento de metal, a partícula de metal pode conter ainda, conforme necessário, pelo menos um elemento selecionado do grupo que consiste em gadolínio (Gd), manganês (Mn), cobalto (Co), níquel (Ni) e zinco (Zn).
[0104] Em ainda outra modalidade da presente invenção, a partícula de metal pode consistir em óxido de ferro sozinho ou pode conter ferrita derivada de óxido de ferro. A ferrita é um óxido representado pela fórmula: MFe2O4 onde M é preferencialmente um metal de transição selecionado de Zn, Co, Mn e Ni.
[0105] Um material conhecido como óxido de ferro super paramagnético (SPIO) também pode ser usado adequadamente. Esse material é representado pela fórmula geral: [Fe2O3]x [Fe2O3(M2+O)]1-x (onde x = 0 ou 1). M pode ser, por exemplo, Fe, Mn, Ni, Co, Zn, magnésio (Mg), cobre (Cu) ou uma combinação dos mesmos. Observe que o material é magnetita (Fe3O4) em um caso onde o íon metálico (M 2+) é um ferro ferroso (Fe2+) e x = 0, e o material é maghemita (γ-Fe2O3) em um caso onde x = 1.
[0106] Em uma modalidade da presente invenção, o óxido de ferro é óxido magnético de ferro e pode ser magnetita (Fe 3O4), maghemita (γ-Fe2O3) ou uma mistura dos mesmos. Uma partícula de metal do óxido de ferro magnético é uma nanopartícula super paramagnética.
[0107] Em ainda outra modalidade da presente invenção, em um caso em que a partícula de óxido de ferro contém derivado(s) de um ou mais elementos de metal diferentes de ferro, o(s) derivado(s) do(s) respectivo(s) elemento s) de metal podem diferir em espécie. Ou seja, a partícula de óxido de ferro pode conter um óxido, um nitreto e semelhantes. Em outra modalidade da presente invenção, uma partícula de núcleo pode conter um derivado (por exemplo, FePt e FeB) de ferro diferente de óxido de ferro, cujo derivado tem um elemento de ferro diferente de óxido de ferro.
[0108] Uma partícula de metal de acordo com uma modalidade da presente invenção pode ser uma partícula de metal produzida por um método bem conhecido, como um método divulgado na Literatura Patenteada 1, Literatura Não-Patenteada 2, Literatura Não-Patenteada 3, ou semelhantes, ou pode ser uma partícula de metal disponível comercialmente. Por exemplo, a partícula de metal pode ser uma partícula de óxido de ferro produzida por um método de coprecipitação ou um método de redução.
[0109] Diâmetro da partícula de metal:
[0110] Conforme usado neste documento, o termo "diâmetro de partícula" refere-se a um "diâmetro médio de partícula", a menos que indicado de outra forma.
[0111] O termo "diâmetro de partícula" de uma partícula de metal significa, por exemplo, um diâmetro de um círculo máximo inscrito de uma forma bidimensional de uma partícula observada com o uso de um microscópio eletrônico de transmissão (TEM). Por exemplo, no caso em que a forma bidimensional da partícula é substancialmente um círculo, o "diâmetro da partícula" significa um diâmetro do círculo. No caso em que a forma bidimensional da partícula é substancialmente uma elipse, o "diâmetro da partícula" significa um eixo menor da elipse. No caso em que a forma bidimensional da partícula é substancialmente um quadrado, o "diâmetro da partícula" significa o comprimento de um lado do quadrado. No caso em que a forma bidimensional da partícula é substancialmente um retângulo, o "diâmetro da partícula" significa um comprimento de um lado curto do retângulo.
[0112] Exemplos de um método para confirmar se um valor de um diâmetro médio de partícula está em uma faixa predeterminada incluem um método de observação de 100 partículas com o uso de um microscópio eletrônico de transmissão (TEM) para medir o diâmetro de partícula de cada partícula e encontrar um valor médio dos diâmetros de partícula das 100 partículas.
[0113] De acordo com uma modalidade da presente invenção, um diâmetro de partícula da partícula de metal medido com TEM (incluindo um diâmetro médio de um cluster ou um composto contendo a partícula de metal) é de preferência 5 nm ou menos, mais preferencialmente 4 nm ou menos, mais preferencialmente 3 nm ou menos, ainda mais preferencialmente 2 nm ou menos, mais preferencialmente 1 nm ou menos. Ter um diâmetro de partícula de 2 nm ou menos torna a partícula de metal mais útil como um agente de contraste positivo para IRM de alto campo magnético de 3 tesla (T) ou mais.
[0114] Além disso, uma partícula de metal com um diâmetro de partícula de 2 nm ou menos, de preferência 1 nm ou menos, permite alcançar uma razão sinal-ruído mais alta quando usada para IRM de alto campo magnético de 7 T ou mais. Isso pode permitir a medição com uma resolução espacial mais alta e em um período de tempo mais curto.
[0115] Em uma modalidade da presente invenção,
as propriedades das nanopartículas contidas como um grupo no agente de contraste para IRM são preferencialmente tão uniformes quanto possível entre as nanopartículas individuais. Consequentemente, é preferível que as partículas de metal que servem como núcleos das respectivas nanopartículas sejam uniformes em tamanho e forma. Como um exemplo, as partículas de metal têm uniformidade dentro de uma faixa de ± 1 nm do diâmetro médio das partículas. Como outro exemplo, as partículas de metal têm uniformidade dentro de uma faixa de ± 0,5 nm do diâmetro médio das partículas.
[0116] Em outra modalidade da presente invenção, como as partículas de metal a serem contidas, pequenas partículas estão preferencialmente contidas tanto quanto possível nas nanopartículas contidas no agente de contraste para IRM. Como um exemplo, uma razão do número de partículas de metal com um tamanho de partícula de 3 nm ou mais para o número total de partículas é 30% ou menos, preferencialmente 10% ou menos, mais preferencialmente 5% ou menos. Como outro exemplo, uma razão do número de partículas de metal com um tamanho de partícula de 2 nm ou mais para o número total de partículas de metal é de 30% ou menos, preferencialmente 10% ou menos, mais preferencialmente 5% ou menos. Como ainda outro exemplo, uma razão do número de partículas de metal com um tamanho de partícula de 1 nm ou mais para o número de todas as partículas de metal é de 30% ou menos, de preferência 10% ou menos, mais preferencialmente 5% ou menos.
[0117] Em ainda outra modalidade, um grupo de nanopartículas contidas no agente de contraste para IRM pode ser heterogêneo nas propriedades das partículas, de modo que as partículas de metal com as quais os ligantes zwitteriônicos são coordenados podem ser não-uniformes em tamanho e forma. Como exemplo, a partícula de metal pode abranger partículas que diferem em tamanho de um diâmetro médio de partícula em 1 nm ou mais.
[0118] Diâmetro de partícula da nanopartícula:
[0119] Infere-se que o diâmetro da partícula da nanopartícula aumenta à medida que aumenta a espessura do ligante zwitteriônico que está ligado, por uma ligação coordenada, à superfície da partícula de metal. Em geral, um diâmetro hidrodinâmico (HD) da nanopartícula medido em uma solução da nanopartícula é empregado como um índice para o tamanho da nanopartícula. Como exemplo, as nanopartículas têm um HD médio de 10 nm ou menos, de preferência 8 nm ou menos. Como outro exemplo, as nanopartículas têm um HD médio de 5 nm ou menos, preferencialmente 4 nm ou menos, preferencialmente 3 nm ou menos, preferencialmente 2 nm ou menos, ainda mais preferencialmente 1 nm ou menos.
[0120] O HD da nanopartícula pode ser medido, por exemplo, observando as partículas por uma técnica de espalhamento de raios-X de pequeno ângulo (SAXS) e calculando a média dos diâmetros das partículas.
[0121] Na medição por SAXS, um instrumento disponível comercialmente pode ser usado, e é preferível usar uma instalação de radiação como o SPring-8 (BL19B2) ou o Centro de Radiação Síncrotron Aichi. Por exemplo, quando SPring-8 (BL19B2) é usado, um comprimento de câmera é definido como 3 m, uma amostra é irradiada com raios-X de 18KeV e um número de onda q é observado em uma faixa de aproximadamente 0,06 nm-1 a 3 nm-1.
[0122] No caso de uma amostra de solução de dispersão, a amostra de solução de dispersão é colocada em um capilar com um diâmetro de 2 mm, um tempo de exposição é apropriadamente definido de tal forma que a radiação espalhada não é saturada e os dados de espalhamento são obtidos. Os dados de espalhamento podem ser submetidos a ajuste com o uso de análise Guinier ou software de análise SAXS apropriado para obter um diâmetro médio de partícula.
[0123] Por exemplo, a cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) pode ser usada como um método para medir um tamanho relativo de nanopartículas.
[0124] SEC é uma técnica de análise na qual (i) uma amostra é feita fluir através de uma coluna preenchida com um transportador com poros e (ii) um tamanho da amostra é estimado com base no tempo necessário para a amostra ser descarregada da coluna. Grandes agregados não entram nos poros do transportador e, portanto, são rapidamente descarregados da coluna. Pequenas nanopartículas passam pelos poros do transportador e, portanto, são lentamente descarregadas da coluna devido a seguir uma rota mais longa antes de serem descarregadas da coluna. Assim, é possível medir um tamanho relativo de nanopartículas com o uso de partículas padrão.
[0125] 2. Composto de ligante zwitteriônico:
[0126] O composto de ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção é um composto representado pela seguinte fórmula (I) ou um sal do mesmo:
[0127]
[0128] Onde:
[0129] um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b), e o outro entre R1 e R2 é H, alquil inferior, -O- alquil inferior, ou halogênio;
[0130]
[0131] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[0132] X2 é alquileno C 1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é alquileno C 1-2-O-alquileno C1-3-, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[0133] Ra e Rb são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1-3 ou alquileno C1-3-O-alquil C1-2, ou Ra e Rb formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros, contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e Rb estão ligados;
[0134] Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-;
[0135] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3, -O-alquil C1-3 ou halogênio;
[0136] n é um número inteiro de 0 a 2; e,
[0137] quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno juntamente com Ra ou Rb.
[0138] i) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R2 forma opcionalmente metileno juntamente com Ra ou Rb; e
[0139] ii) quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R3 opcionalmente forma etileno juntamente com Ra ou Rb;
[0140] desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), Ra e Rb são metil, X 1 é uma ligação, X 2 é alquileno C1-4 e R1, R3 e R4 são H, Y- é HPO3- ou CO2-.
[0141] De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que um de grupo entre R1 e R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e o outro grupo entre R1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio.
[0142] De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção é um composto representado pela seguinte fórmula (o):
[0143]
[0144] (onde os sinais são semelhantes aos da fórmula (I)).
[0145] De acordo com uma modalidade, o composto representado pela fórmula (o) é um ligante zwitteriônico em que R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio. De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou halogênio, X 1 é uma ligação, metileno ou etileno, ou R 2 forma opcionalmente etileno junto com R a ou Rb quando X1 é metileno, X2 é alquileno C2-4, Ra e Rb são metil, e R 3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C1-3 ou halogênio. De acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou halogênio, X 1 é uma ligação ou metileno, ou R 2 forma opcionalmente etileno junto com R a ou Rb quando X1 é metileno, X2 é alquileno C2-4, Ra e Rb são metil, e R 3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C1-3 ou halogênio. De acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou F, X1 é uma ligação, metileno ou etileno, X2 é etileno ou propileno, Ra e Rb são metil, e R 3 e R4 são H. De acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H, X1 é etileno, X2 é etileno ou propileno, R a e Rb são metil, e R3 e R4 são H. De acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou F, X 1 é uma ligação ou etileno, X2 é um grupo etileno ou um grupo propileno, R a e Rb são metil, R3 e R4 são H, e Y- é SO3- ou CO2-. De acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou F, X1 é metileno, X2 é um grupo propileno ou um grupo butileno, Ra e Rb são metil, R3 e R4 são H, e Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-. De acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R 2 é H ou F, X 1 é metileno, X 2 é um grupo propileno ou um grupo butileno, R a e Rb são metil, R3 e R4 são H, e Y- é SO3-.
[0146] De acordo com uma determinada modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (1):
[0147]
[0148] (onde o sinal Y- é semelhante ao da fórmula (I)).
[0149] De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (2):
[0150]
[0151] (em que o sinal Y - é semelhante ao da fórmula (I)).
[0152] De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (3):
[0153]
[0154] (em que o sinal Y - é semelhante ao da fórmula (I)).
[0155] De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (4):
[0156]
[0157] (em que o sinal Y - é semelhante ao da fórmula (I)).
[0158] De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (5):
[0159]
[0160] (em que o sinal Y - é semelhante ao da fórmula (I)).
[0161] Além disso, de acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção é um composto representado pela seguinte fórmula (6):
[0162]
[0163] (onde os sinais são semelhantes aos da fórmula (I)).
[0164] De acordo com uma determinada modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (7):
[0165]
[0166] (onde o sinal Y- é semelhante ao da fórmula (I)).
[0167] De acordo com uma modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico no qual, na fórmula (I) acima, um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado pela fórmula (b-1) abaixo, e o outro entre R1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio:
[0168]
[0169] (onde os sinais são semelhantes aos da fórmula (I)).
[0170] De acordo com uma modalidade, o composto de ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção é um composto representado pela seguinte fórmula (8):
[0171]
[0172] (onde os sinais são semelhantes aos da fórmula (I)).
[0173] De acordo com uma modalidade, o composto representado pela fórmula (8) é um ligante zwitteriônico em que R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio. De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou halogênio, X 1 é uma ligação ou metileno, X 2 é uma ligação ou alquileno C1-3, Ra é metil, e R3 e R4 são os mesmos ou diferentes uns dos outros e representam H, alquil C1-3 ou halogênio. De acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou F, X1 é metileno, X2 é uma ligação ou metileno, R a é metil, R3 e R4 são H, e Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-. De acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou F, X1 é metileno, X2 é uma ligação ou metileno, R a é metil, R3 e R4 são H e Y- é CO2-. Além disso, de acordo com ainda outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico em que R2 é H ou halogênio, X 1 é uma ligação ou metileno, X 2 é alquileno C1-5 ou uma ligação, R a é metil, R3 e R4 são iguais ou diferentes uns dos outros e representam H, alquil C 1-3 ou halogênio, e Y - é SO3- ou CO2-.
[0174] De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (9):
[0175]
[0176] (onde o sinal Y- é semelhante ao da fórmula (I)).
[0177] De acordo com outra modalidade, o composto de ligante zwitteriônico é um ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (10):
[0178]
[0179] (onde o sinal Y- é semelhante ao da fórmula (I)).
[0180] A nanopartícula de acordo com a presente invenção é uma nanopartícula contendo pelo menos um ligante zwitteriônico representado pela fórmula (I) acima e uma partícula de metal contendo óxido de ferro, tal pelo menos um ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado à partícula de metal. Uma modalidade da nanopartícula de acordo com a presente invenção inclui uma nanopartícula contendo (i) o composto ligante zwitteriônico de cada uma das modalidades descritas em [2. Composto de ligante zwitteriônico] e (ii) uma partícula de metal contendo óxido de ferro, o composto de ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado à partícula de metal. Observe que, no caso em que o ligante zwitteriônico é ligado, por uma ligação coordenada, a uma partícula de metal contendo ferro ou óxido de ferro, os oxigênios de dois grupos hidroxila do composto de ligante zwitteriônico são ligados ao átomo de metal sobre uma superfície da partícula de metal por uma ligação coordenada para formar a nanopartícula de acordo com a presente invenção.
[0181] Além disso, a presente invenção também abrange o uso do composto de ligante zwitteriônico para a produção da nanopartícula de acordo com a presente invenção, bem como o próprio composto de ligante zwitteriônico. As modalidades acima descritas em [2. Composto ligante zwitteriônico] também são modalidades do composto ligante zwitteriônico usado nessas características.
[0182] No ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção, um grupo amino tri-substituído é substituído por catecol diretamente ou através de um grupo alquileno para formar um cátion amônio. O ligante zwitteriônico da presente invenção tem uma cadeia molecular mais curta do que a de um ligante convencionalmente conhecido e, consequentemente, uma camada de ligante pode ser mais fina. Além disso, o ligante zwitteriônico da presente invenção é caracterizado por ter uma carga positiva no lado da partícula de metal e uma carga negativa no lado da superfície externa. Como tal, pode-se esperar que as nanopartículas da presente invenção sejam menos propensas a sofrer aglomeração no fluido corporal e, portanto, sejam altamente estáveis. Além disso, a espessura fina da camada de ligante reduz a distância do átomo de metal. Pode-se, portanto, esperar que a nanopartícula da presente invenção exiba uma excelente capacidade de contraste resultante de um aumento no número de moléculas de água afetadas pela partícula de metal e semelhantes.
[0183] O número de moléculas de ligante zwitteriônico (o número de ligantes zwitteriônicos) coordenadas na superfície da partícula de metal varia dependendo do tamanho, da área superficial, e características semelhantes da partícula de metal. O número de ligantes zwitteriônicos por partícula de metal é de 2 a 200 em uma modalidade, 5 a 50 em outra modalidade e 5 a 20 em ainda outra modalidade.
[0184] Composto ligado a partícula de metal diferente de ligante zwitteriônico:
[0185] A nanopartícula da presente invenção pode conter um componente diferente do ligante zwitteriônico da presente invenção. Em uma modalidade da presente invenção, a nanopartícula pode ser (i) uma nanopartícula em que uma partícula de metal em si tem uma propriedade fluorescente ou (ii) uma nanopartícula que contém ainda uma molécula, tal como uma molécula fluorescente ou uma molécula de corante ligada a um superfície da partícula de metal. Em um caso em que a própria partícula de metal tem uma propriedade fluorescente ou em um caso em que uma molécula fluorescente ou uma molécula de corante é introduzida na nanopartícula, a nanopartícula pode ser usada não apenas como um agente de contraste para IRM, mas também como um agente de contraste para uma imagem ótica. Em outra modalidade da presente invenção, é possível empregar um ligante no qual uma molécula fluorescente ou uma molécula de corante está ligada covalentemente ao ligante zwitteriônico da presente invenção, em que a molécula está ligada à partícula de óxido de ferro através do ligante zwitteriônico. Depois que a nanopartícula é injetada em um corpo, a molécula fluorescente está presente na superfície da partícula de óxido de ferro. A molécula fluorescente pode, portanto, ser utilizada para imagens microscópicas e exame de localização da nanopartícula. Exemplos da molécula fluorescente e da molécula de corante incluem rodamina, fluoresceína, nitrobenzoxadiazol (NBD), cianina, proteína verde fluorescente (GFP), cumarina e um derivado destas.
[0186] Em outra modalidade da presente invenção, a nanopartícula da presente invenção pode incluir pelo menos uma substância ligada à superfície da partícula de metal. Exemplos de tal substância incluem, mas não estão limitados a, um peptídeo, um ácido nucleico, uma pequena molécula e semelhantes. Por exemplo, em um caso em que um peptídeo com a propriedade de provocar um efeito terapêutico específico em um tumor está ligado à nanopartícula da presente invenção, a nanopartícula pode ter o efeito terapêutico no tumor.
[0187] Alternativamente, um ligante diferente do ligante zwitteriônico da presente invenção pode ser ligado à superfície da partícula de metal. Por exemplo, em um caso em que um ligante com a propriedade de ser acumulado especificamente em um tumor está ligado à partícula de metal da presente invenção, a nanopartícula pode ter uma propriedade de ligação seletiva ao tumor.
[0188] Conceder tal especificidade de tecido ao agente de contraste é preferível a fim de (i) aumentar um sinal em uma porção que é objeto de medição de IRM e (ii) assim obter informações de uma condição patológica específica ou semelhante. A distribuição do agente de contraste em um organismo vivo depende do diâmetro da partícula, carga, química da superfície, via de administração e via de eliminação.
[0189] Além disso, espera-se que a nanopartícula de acordo com a presente invenção tenha uma toxicidade mais baixa para um organismo vivo porque a nanopartícula contém óxido de ferro como uma partícula de metal. Consequentemente, espera-se que a nanopartícula seja altamente segura e tenha poucas restrições em vários usos.
[0190] 3. Método para produção de ligante zwitteriônico:
[0191] Um método para produzir o ligante zwitteriônico representado pela fórmula (I) da presente invenção não é particularmente limitado. O ligante zwitteriônico pode ser produzido facilmente a partir de um composto de matéria-prima bem conhecido por uma reação bem conhecida por um versado na técnica. Por exemplo, o ligante zwitteriônico pode ser produzido com referência a um método divulgado em Wei H. et al., Nano Lett. 12, 22-25, 2012.
[0192] Como exemplo, um método de síntese descrito nos Exemplos de Produção pode ser adequadamente empregado.
[0193] 4. Método para produção de nanopartículas:
[0194] A descrição a seguir irá discutir um método para produzir a nanopartícula.
[0195] Produção de partícula de metal à qual o ligante hidrofóbico ou ligante hidrofílico como matéria-prima está ligado de forma coordenada:
[0196] A partícula de metal à qual um ligante hidrofóbico ou um ligante hidrofílico, que é uma matéria-prima para a produção de nanopartículas, está ligado coordenadamente pode ser produzida com o uso de um método conhecido. Por exemplo, a partícula de metal pode ser produzida com referência aos métodos divulgados em Byung Hyo Kim et al., J Am. Chem. Soc. 2011, 133, 12624-12631 e Byung Hyo Kim et al., J Am. Chem. Soc. 2013, 135, 2407-2410.
[0197] Por exemplo, uma partícula de metal com uma superfície revestida com um ligante hidrofóbico pode ser sintetizada por (a) fazer com que um sal de metal reaja com um sal de metal alcalino de um ácido graxo para formar um complexo de metal-ácido graxo; e (b) aquecer o complexo juntamente com um surfactante rapidamente a uma temperatura elevada de 200 °C ou mais e, opcionalmente, causar uma reação à temperatura elevada por um certo período de tempo. Além disso, (c) a substituição do ligante pode ser realizada na partícula de metal revestida com o ligante hidrofóbico para formar uma partícula de metal revestida com ácido [2-(2-metoxietoxi)etoxi] acético (MEAA) para obter uma partícula de metal revestida com MEAA capaz de ser disperso em um solvente altamente polar.
[0198] Cada etapa é a seguir descrita em detalhes.
[0199] Etapa (a):
[0200] Um sal de metal e um sal de metal alcalino de um ácido graxo são dispersos em um solvente. Exemplos do sal de metal incluem cloreto de ferro (III) hexa-hidratado (FeCl3·6H2O), exemplos do sal de metal alcalino de um ácido graxo incluem oleato de sódio e exemplos do solvente incluem etanol, água, hexano e uma mistura dos mesmos.
Subsequentemente, uma solução resultante é agitada enquanto é aquecida, de preferência a 70 °C, durante 1 hora a 10 horas, de preferência durante 3 horas a 4 horas, e uma camada orgânica é coletada. A camada orgânica é lavada com água uma ou mais vezes, mais preferencialmente 3 vezes a 4 vezes. Assim, é obtido um complexo metal-ácido graxo. A camada orgânica obtida é opcionalmente seca.
[0201] Etapa (b):
[0202] Por exemplo, em uma atmosfera de um gás inerte selecionado de argônio (Ar) e nitrogênio, os seguintes (i) e (ii) são adicionados ao complexo obtido na etapa (a): (i) pelo menos um surfactante selecionado do grupo consistente em um ácido graxo, álcool alifático e amina alifática e (ii) um solvente selecionado de éter difenílico e éter feniloctílico. Como exemplo, o surfactante pode ser ácido oleico, álcool oleílico, oleilamina ou uma mistura dos mesmos e o solvente pode ser éter difenílico. Subsequentemente, uma mistura assim obtida é rapidamente aquecida desde a temperatura ambiente até uma temperatura de 180 °C a 300 °C e, em seguida, é opcionalmente agitada neste estado durante 10 minutos a várias horas. Como exemplo, a mistura é aquecida de 30 °C até 250 °C a uma taxa de 10 °C/min, e é agitada a 250 °C durante 30 minutos. Como outro exemplo, a mistura é aquecida de 30 °C até 200 °C a uma taxa de 10 °C/min e é agitada a 200 °C durante 30 minutos.
[0203] Uma solução de reação resultante é resfriada até a temperatura ambiente. Em seguida, é adicionada acetona e a mistura resultante é centrifugada para remover o sobrenadante. Esta operação é repetida de 2 a 3 vezes, de preferência 4 vezes a 5 vezes. Uma solução assim obtida é opcionalmente seca. A título de exemplo, a operação de adição de acetona e centrifugação para remoção do sobrenadante é repetida 3 vezes e é obtida uma partícula de metal cuja superfície é revestida com um ligante hidrofóbico, como o ácido oleico.
[0204] Etapa (c):
[0205] Em uma atmosfera de um gás inerte selecionado entre Ar e nitrogênio, as nanopartículas revestidas com o ligante hidrofóbico são dispersas em um solvente e, em seguida, uma reação é causada pela adição de MEAA. Metanol é usado apropriadamente como solvente.
[0206] Uma solução reacional assim obtida é agitada à temperatura ambiente ou enquanto é aquecida, a uma temperatura preferencialmente entre 25 °C e 80 °C durante aproximadamente 1 hora a 15 horas, preferencialmente 5 horas a 10 horas. A título de exemplo, a reação é efetuada agitando a solução reacional a 50 °C durante 7 horas. Como outro exemplo, a reação é realizada agitando a solução de reação a 70 °C durante 10 horas. Ainda como outro exemplo, a reação é realizada agitando a solução de reação a 70 °C durante 5 horas.
[0207] A solução reacional é resfriada até a temperatura ambiente. Em seguida, um solvente selecionado entre acetona e hexano é adicionado, uma mistura resultante é centrifugada para remover um sobrenadante. Esta operação pode ser repetida de 2 a 3 vezes, de preferência de 4 a 5 vezes. Uma solução assim obtida pode ser opcionalmente seca. A título de exemplo, a operação anterior é repetida 3 vezes e, assim, é obtida uma partícula de metal cuja superfície é revestida com MEAA.
[0208] Método para produzir nanopartículas da presente invenção:
[0209] A "nanopartícula contendo partícula de metal contendo óxido de ferro à qual pelo menos um ligante zwitteriônico está coordenadamente ligado", de acordo com a presente invenção, pode ser produzida usando um método conhecido através de uma partícula de metal tendo uma superfície revestida com MEAA (método MEAA), um método usando TMA(OH) (método TMA(OH)), ou um novo método sintético usando um catalisador de transferência de fase.
[0210] A) Método MEAA:
[0211] Neste método de produção, uma partícula de metal com uma superfície revestida com MEAA é induzida a reagir com o composto de ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção para obter a nanopartícula de acordo com a presente invenção. A partícula de metal com uma superfície revestida com MEAA é levada a reagir com o composto de ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção sendo agitada por 1 hora a várias dezenas de horas em uma atmosfera de um gás inerte selecionado entre argônio e nitrogênio e na temperatura ambiente ou durante o aquecimento. Como exemplo, a reação acima é realizada em uma atmosfera de argônio. A temperatura de reação é de 25 °C a 80 °C como um exemplo, e 50 °C a 70 °C como outro exemplo. O tempo de agitação é de 5 horas a 7 horas como um exemplo e 24 horas como outro exemplo. A título de exemplo, a agitação é realizada durante a noite à temperatura ambiente. Subsequentemente, uma solução de reação resultante é resfriada até a temperatura ambiente e um solvente é adicionado. Uma mistura resultante é centrifugada para remover um sobrenadante e, assim, uma nanopartícula é obtida na qual pelo menos um composto de ligante zwitteriônico da presente invenção está ligado coordenadamente. O solvente não é particularmente limitado e pode ser selecionado a partir de acetona, hexano e semelhantes. Como exemplo, o solvente é a acetona. A operação de adicionar o solvente e realizar a centrifugação para remover o sobrenadante pode ser repetida uma pluralidade de vezes. Por exemplo, a operação pode ser repetida de 4 a 5 vezes. A título de exemplo, esta operação é repetida 3 vezes. Subsequentemente, uma solução resultante contendo a nanopartícula revestida com o composto de ligante zwitteriônico da presente invenção pode ser concentrada com o uso de uma coluna de concentração ou semelhante de um ultrafiltro centrífugo ou semelhante. Esta operação de concentração pode ser repetida uma pluralidade de vezes, durante as quais uma solução como PBS pode ser adicionada em algum ponto, e então a operação de concentração pode ser repetida.
[0212] B) Método TMA(OH):
[0213] Uma partícula de óxido de ferro (SNP-OA) revestida com ácido oleico é suspensa em uma solução de hexano. Uma suspensão resultante é misturada com solução aquosa de hidróxido de tetrametilamônio (TMA(OH)) a 1,7% e é agitada vigorosamente. Uma solução resultante é centrifugada para separar uma camada aquosa e acetona é adicionada. Uma mistura resultante é centrifugada a 8000 rpm a 12000 rpm durante 5 minutos a 10 minutos e um sobrenadante é removido para obter um precipitado. 2 mL de solução de TMA(OH) 0,1% são adicionados e dispersos no precipitado, acetona é adicionada novamente em uma quantidade de 10 mL e uma mistura resultante é deixada para precipitação. Esta operação pode ser repetida várias vezes e, de preferência, é repetida 3 a 4 vezes. Uma solução assim obtida é dispersa em solução de 0,1% de
TMA(OH) e armazenada.
[0214] A uma solução de 0,1% de TMA(OH) assim preparada de acordo com o procedimento acima, uma solução do composto de ligante, que foi preparada com o uso de solução de 0,1% a 2% de TMA(OH) de modo a atingir aproximadamente pH 8 a pH 12, é adicionada. A solução resultante é agitada à temperatura ambiente durante 6 horas a 24 horas e é adicionada acetona. Uma mistura resultante é deixada para precipitação e é centrifugada a 8000 rpm a 12000 rpm durante 3 minutos a 10 minutos para remover um sobrenadante. Um precipitado assim obtido é disperso em um tampão de fosfato e uma solução resultante é centrifugada a 7000 rpm a 12000 rpm com o uso de uma coluna de concentração para reduzir uma quantidade da solução. Um tampão de fosfato é adicionado novamente, e a mistura resultante é centrifugada a 7000 rpm a 12000 rpm por 10 minutos a 20 minutos para concentração. Esta operação pode ser repetida várias vezes, de preferência 3 vezes a 4 vezes, mais preferencialmente 5 vezes a 10 vezes. Assim, é obtida uma nanopartícula na qual pelo menos um ligante zwitteriônico da presente invenção está coordenadamente ligado. Uma solução da nanopartícula assim obtida pode ser diluída com PBS e armazenada.
[0215] C) Método do catalisador de transferência de fase:
[0216] Neste método, uma partícula de metal com uma superfície à qual um ligante hidrofóbico (tal como ácido oleico) está coordenadamente ligado é colocada em contato com o composto de ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção na presença de um catalisador de transferência de fase em um solvente bifásico incluindo uma camada orgânica e uma camada aquosa. Assim, é produzida uma nanopartícula na qual pelo menos um ligante zwitteriônico da presente invenção está coordenadamente ligado.
[0217] O "solvente bifásico incluindo uma camada orgânica e uma camada aquosa" é um solvente misto contendo um solvente orgânico e água, que são separados em duas camadas respectivas. O solvente orgânico é um solvente aprótico e, em uma modalidade, o solvente orgânico é selecionado a partir do grupo que consiste em 2-metiltetra- hidrofurano (2-Me-THF), éter ciclopentil metílico (CPME), éter metil terc- butílico (MTBE), clorofórmio, tolueno, xileno, heptano e combinações dos mesmos. Em outra modalidade, o solvente orgânico é selecionado a partir de 2-metiltetra-hidrofurano, clorofórmio e combinações dos mesmos.
[0218] O termo "catalisador de transferência de fase" refere-se a um catalisador de transferência de fase selecionado a partir de sais de amônio quaternário e fosfônio quaternário que são solúveis em um solvente orgânico e em água. Uma modalidade do catalisador de transferência de fase é um sal de amônio quaternário e o sal de amônio quaternário é, por exemplo, selecionado do grupo que consiste em sal de tetrabutilamônio, sal de trioctilmetilamônio e sal de benzildimetiloctadecilamônio. Exemplos de ânions formando sais aqui incluem íons haleto, íons hidróxido, íons hidrogenossulfato e semelhantes. Ainda outra modalidade do catalisador de transferência de fase é o sal de haleto de tetrabutilamônio, e o sal de haleto de tetrabutilamônio é, por exemplo, selecionado de brometo de tetrabutilamônio (TBAB) e fluoreto de tetrabutilamônio (TBAF). Ainda outra modalidade do catalisador de transferência de fase é um hidrato de fluoreto de tetrabutilamônio, por exemplo, fluoreto de tetrabutilamônio tri-hidratado.
[0219] Além disso, opcionalmente, um agente de ajuste de pH pode ser adicionado e, por exemplo, hidrogenocarbonato de sódio, carbonato de sódio, hidrogenocarbonato de potássio, hidrogenocarbonato de amônio ou hidrogenofosfato dipotássico podem ser usados.
[0220] A reação é realizada agitando o composto de ligante zwitteriônico e uma partícula de metal tendo uma superfície à qual um ligante hidrofóbico está coordenadamente ligado. A agitação é realizada em um solvente bifásico incluindo uma camada orgânica e uma camada aquosa na presença de um catalisador de transferência de fase à temperatura ambiente ou enquanto é aquecido em uma atmosfera de gás inerte selecionada entre nitrogênio e argônio. Em uma modalidade, a agitação é executada à temperatura ambiente até 80 °C. Em outra modalidade, a agitação é realizada de 30 °C a 60 °C durante uma hora ou mais. Em uma modalidade, a agitação é realizada durante 1 a 20 horas. Em outra modalidade, a agitação é realizada durante 1 a 15 horas. Em outra modalidade, a agitação é realizada durante 1 a 6 horas. A temperatura de reação e o tempo de reação podem ser apropriadamente ajustados de acordo com a partícula de metal usada na reação e o tipo de ligante zwitteriônico.
[0221] Nesta reação, o ligante zwitteriônico pode ser usado, em relação à partícula de metal, em uma proporção entre massas (m/m) de 1 a 30 m/m (razão de massas), 5 a 20 m/m em uma modalidade, ou 6 a 15 m/m em outra modalidade. O catalisador de transferência de fase pode ser adicionado nas seguintes proporções em relação à partícula de metal: 0,1 a 10 m/m, 0,1 m/m a 6 m/m em uma modalidade, 0,1 m/m a 5 m/m em outra modalidade, 0,5 a 6 m/m em outra modalidade, 0,5 a 3 m/m em outra modalidade e 0,5 m/m a 2 m/m em ainda outra modalidade. Em um caso em que o agente de ajuste de pH é adicionalmente usado, o catalisador de transferência de fase pode ser adicionado em uma razão de 0,1 m/m a 5 m/m, ou 0,5 m/m em 2 m/m em uma modalidade, em relação à partícula de metal.
[0222] O isolamento de uma nanopartícula da solução de reação pode ser realizado usando um método conhecido, como centrifugação, ultrafiltração ou operação de separação de líquido. Por exemplo, o isolamento pode ser realizado repetindo a centrifugação ou filtração usando filtro para ultracentrífuga Amicon Ultra Centrifugal Filter (Merck Millipore), Filtros de seringa Agilent Captiva Premium (celulose regenerada, 15 mm), YMC Duo-Filter ou semelhantes. Uma solução da nanopartícula assim obtida pode ser diluída com PBS e armazenada.
[0223] Em qualquer um dos métodos em que o ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção é usado, em alguns casos, uma nanopartícula é produzida na qual um ligante hidrofóbico na superfície é simplesmente substituído pelo ligante zwitteriônico e, em outros casos, uma nanopartícula (por exemplo, uma partícula purificada 3K mostrada nos Exemplos descritos mais tarde) é produzida em que uma partícula de metal na nanopartícula é menor do que a partícula de metal usada como matéria-prima. Em muitos casos, ambos os tipos são obtidos. Isto parece dever-se ao fato de o ligante zwitteriônico de acordo com a presente invenção ter a propriedade de alterar uma partícula de metal quando o ligante zwitteriônico está coordenadamente ligado à partícula de metal. O tipo de nanopartículas obtido varia dependendo do ligante zwitteriônico. O tipo de nanopartículas obtido também pode variar dependendo das condições de reação e condições de purificação.
[0224] Ajustando o tipo de ligante zwitteriônico a ser usado, as condições de reação e as condições de isolamento, uma nanopartícula tendo uma estrutura núcleo-revestimento e/ou uma nanopartícula (cluster, compósito ou semelhante) tendo uma partícula fina de metal pode ser obtida.
[0225] De acordo com uma modalidade, uma partícula de metal que é revestida com pelo menos um composto de ligante zwitteriônico é produzida em que pelo menos um composto de ligante zwitteriônico é coordenadamente ligado à superfície externa da partícula de metal contendo óxido de ferro.
[0226] De acordo com uma modalidade, uma partícula fina é produzida como um compósito incluindo pelo menos um composto de ligante zwitteriônico e pelo menos uma partícula de metal contendo óxido de ferro, pelo menos um composto de ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado a cada uma das pelo menos uma partícula de metal.
[0227] De acordo com uma modalidade, um cluster que consiste em dois ou mais compostos de ligante zwitteriônico e duas ou mais "partículas de metal contendo óxido de ferro em que pelo menos um composto de ligante zwitteriônico está coordenadamente ligado" é produzido.
[0228] Em qualquer uma das modalidades, a nanopartícula da presente invenção pode ser usada como um agente de contraste para imagens de ressonância magnética.
[0229] Uma modalidade é um método descrito posteriormente nos Exemplos abaixo.
[0230] 5. Agente de contraste para imagem por ressonância magnética (agente de contraste para IRM):
[0231] A presente invenção também fornece um agente de contraste para imagem por ressonância magnética cujo agente de contraste inclui a nanopartícula acima descrita.
[0232] A descrição a seguir discutirá o agente de contraste para IRM em detalhes.
[0233] Vários componentes contidos no agente de contraste para IRM:
[0234] i) Nanopartícula:
[0235] Em uma modalidade da presente invenção, o agente de contraste para IRM da presente invenção é caracterizado por conter pelo menos um tipo da nanopartícula acima descrita. Em outra modalidade da presente invenção, o agente de contraste para IRM da presente invenção pode incluir uma combinação de dois ou mais tipos das nanopartículas descritas acima.
[0236] Além disso, o agente de contraste para IRM pode conter, se necessário, um solvente e um aditivo farmacologicamente aceitáveis além da nanopartícula. Em uma modalidade do agente de contraste para IRM da presente invenção, o agente de contraste pode conter ainda um solvente adequado e/ou pelo menos um selecionado a partir de aditivos, tais como um transportador, um veículo e um complexo.
[0237] ii) Solvente:
[0238] Exemplos do solvente contido no agente de contraste para IRM incluem água, uma solução tampão e semelhantes. Além disso, os exemplos da solução tampão incluem soro fisiológico, tampão de fosfato, tampão de tris [tris(hidroximetil)aminometano], tampão de ácido bórico, solução de Ringer e semelhantes. No caso em que uma forma de dosagem é uma injeção, exemplos de uma solvente comum inclui água, solução de Ringer, soro fisiológico e semelhantes.
[0239] Isto é, o agente de contraste para IRM de acordo com a presente invenção pode ser uma solução obtida suspendendo a nanopartícula de acordo com a presente invenção numa solução com uma composição desejada. Especificamente, o agente de contraste pode estar na forma de uma solução tampão, como tampão fosfato, tampão tris ou tampão de ácido bórico no qual a nanopartícula está suspensa.
[0240] iii) Aditivo:
[0241] Exemplos do aditivo, como um transportador, um complexo e um veículo contido no agente de contraste para IRM, incluem um transportador, um veículo e semelhantes que são geralmente usados nos campos de produtos farmacêuticos e biotecnologia. Exemplos do transportador incluem um polímero, tal como polietilenoglicol, uma partícula fina de metal e semelhantes. Exemplos do complexo incluem ácido dietilenotriaminopentaacético (DTPA), ácido 1,4,7,10- tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacético (DOTA) e semelhantes. Exemplos do veículo incluem cal, carbonato de sódio, silicato de sódio, amido, cola, gelatina, tanino, quebracho e semelhantes.
[0242] O agente de contraste para IRM da presente invenção pode conter ainda um excipiente, um lubrificante, um agente umectante, um emulsionante, uma suspensão, um conservante, um agente de ajuste de pH, um agente de controle de pressão osmótica e semelhantes.
[0243] Forma de dosagem:
[0244] Uma forma de dosagem do agente de contraste para IRM da presente invenção não é particularmente limitada e pode ser líquida, sólida ou semi-sólida ou semilíquida. Estas formas de dosagem podem ser produzidas facilmente de acordo com um método bem conhecido por um especialista na técnica. No caso em que a forma de dosagem é um líquido, o líquido pode ser aquele que é obtido por dispersão, suspensão ou dissolução da nanopartícula de acordo com a presente invenção em, por exemplo, um solvente aquoso de modo que o líquido contenha a nanopartícula. Além disso, o agente de contraste pode estar na forma de um agente liofilizado e ser disperso, suspenso ou dissolvido quando usado.
[0245] Concentração de nanopartículas:
[0246] Uma concentração da nanopartícula no agente de contraste para IRM é determinada conforme apropriado de acordo com um propósito, um tecido a ser visualizado e semelhantes. Por exemplo, uma concentração é selecionada de modo que a concentração selecionada esteja em uma faixa dentro da qual (i) uma capacidade de contraste adequada é exibida e (ii) um grau de influência em um organismo vivo é tolerável.
[0247] A nanopartícula da presente invenção, mesmo quando contida em uma concentração elevada, tem menos probabilidade de se aglomerar e, portanto, é capaz de manter a estabilidade. Consequentemente, espera-se que a nanopartícula da presente invenção mantenha, de forma estável e por um longo período de tempo, uma capacidade de contraste de IRM mais alta do que uma nanopartícula bem conhecida.
[0248] Por exemplo, em um caso em que o agente de contraste para IRM é um líquido que é uma solução aquosa, exemplos de uma concentração da nanopartícula no líquido quando, por exemplo, o líquido é usado como uma injeção geral incluem 0,1 mM de Fe a 1000 mM de Fe, preferencialmente 1,0 mM de Fe a 500 mM de Fe, ainda preferencialmente 5,0 mM de Fe a 100 mM de Fe e, em uma modalidade, 10 mM de Fe a 500 mM de Fe e, em outra modalidade, 5,0 mM de Fe a 50 mM de Fe.
[0249] Alvo de administração:
[0250] Um alvo de administração ao qual o agente de contraste de acordo com a presente invenção é administrado pode ser, por exemplo, um determinado organismo que não é um humano, ou um humano. Exemplos de organismos que não são humanos incluem, mas não estão limitados a, mamíferos (por exemplo, roedores, como camundongos, ratos e coelhos, primatas como macacos, cães, gatos, ovelhas, vacas, cavalos, porcos e semelhantes), pássaros, répteis, anfíbios, peixes, insetos e plantas. Em uma modalidade, o animal pode ser um animal transgênico, um animal geneticamente modificado ou um animal clone. Além disso, o alvo da administração pode ser aquele que não é um organismo vivo, por exemplo, uma amostra de tecido ou um material biológico que inclui uma célula.
[0251] Usos aos quais o agente de contraste para ressonância magnética é aplicado:
[0252] Conforme descrito acima, existem dois tipos de agentes de contraste para ressonância magnética, a saber, um agente de contraste positivo e um agente de contraste negativo.
[0253] Em uma modalidade da presente invenção, o agente de contraste para IRM da presente invenção é um agente de contraste positivo. Em outra modalidade, o agente de contraste é um agente de contraste negativo.
[0254] A presente invenção também abrange um método de imagem de contraste de IRM usando o agente de contraste de IRM acima. Além disso, a presente invenção também envolve imagem de contraste de vários órgãos de um sujeito por um aparelho de IRM usando o agente de contraste para IRM descrito acima. Exemplos de imagens de contraste incluem imagens de contraste de um rim, um fígado e um vaso cerebral. A presente invenção também envolve um método para diagnosticar, por exemplo, a presença ou ausência de uma lesão ou tumor em vários órgãos de um sujeito usando o agente de contraste para IRM descrito acima. Por exemplo, o agente de contraste para IRM pode ser usado adequadamente em um método para diagnosticar uma função renal, um método para diagnosticar um tumor no fígado e semelhantes. Além disso, a presente invenção também envolve um método de visualização de vários órgãos de um sujeito por um aparelho de IRM usando o agente de contraste para IRM acima. Por exemplo, o agente de contraste para IRM pode ser usado adequadamente na visualização de um rim, um fígado, um vaso cerebral e semelhantes. Observe que o aparelho de IRM pode ser qualquer aparelho, e um aparelho de IRM bem conhecido pode ser usado. Um campo magnético a ser aplicado pode ser, por exemplo, 1 T, 1,5 T, 3 T ou 7 T. O método de diagnóstico ou o método de visualização usando o agente de contraste da presente invenção inclui as etapas de: administrar um agente de contraste positivo a um sujeito vivo como um humano; e posteriormente obter uma imagem de IRM de um órgão pretendido do sujeito com o uso de um aparelho de IRM.
[0255] O paramagnetismo ocorre da seguinte forma: quando um campo magnético externo é aplicado a um corpo magnético, um momento dipolar em uma certa orientação é voltado para uma orientação idêntica à do campo magnético aplicado e, assim, o corpo magnético é magnetizado na mesma direção que o campo magnético externo. Tal substância provoca um efeito de encurtamento de T 1 por meio de interação dipolo-dipolo. Um corpo super-paramagnético também gera um momento magnético líquido com um mecanismo semelhante, e tem uma suscetibilidade magnética maior que a de um corpo paramagnético e traz um maior efeito de encurtamento de T2. O agente de contraste da presente invenção é considerado como estando na fronteira entre paramagnetismo e super-paramagnetismo ou exibindo paramagnetismo. Os mecanismos de relaxamento do paramagnetismo e do super-paramagnetismo são considerados como exercendo influência de acordo com a intensidade do campo magnético, e o relaxamento T1, o relaxamento T2 e o relaxamento T2* são produzidos. Em particular, espera-se que o efeito de encurtamento T1 na região do campo magnético prático resulte em um efeito de contraste positivo mais alto.
[0256] É possível confirmar que o agente de contraste está na fronteira entre paramagnetismo e super-paramagnetismo ou exibe paramagnetismo medindo uma dependência do campo magnético da magnetização com o uso de um dispositivo de supercondutor de interferência quântica (SQUID). A Fig. 7 mostra exemplos de medição em 300K. A susceptibilidade magnética é substancialmente proporcional ao campo magnético. A propriedade como substância super-paramagnética parece ser baixa, e o agente de contraste, mesmo na forma de nanopartículas, tem propriedade paramagnética, e espera-se que tenha um excelente efeito de encurtamento de T 1 na região prática do campo magnético.
[0257] Em uma modalidade da presente invenção, o agente de contraste de acordo com a presente invenção tem uma capacidade de contraste representada por uma relaxividade r2 de 2,8 mM-1s- 1 a 6,2 mM-1s-1 e uma relaxividade r 1 de 2,5 mM-1s-1 a 4,4 mM-1s-1, a 37 °C e com um campo magnético de 1,5 T. Em outra modalidade da presente invenção, o agente de contraste de acordo com a presente invenção tem uma capacidade de contraste representada por uma relaxividade r2 de 3,0 mM-1s- 1 a 4,2 mM-1s-1 e uma relaxividade r 1 de 2,7 mM-1s-1 a 3,9 mM-1s-1, a 37 °C e com um campo magnético de 1,5 T.
[0258] A relaxividade depende de vários fatores, como (i) um diâmetro de partícula da partícula de metal na nanopartícula do agente de contraste para IRM, (ii) uma composição da partícula de metal, (iii) uma carga e propriedades da superfície da partícula, (iv) estabilidade da partícula, e (v) aglomeração e uma propriedade de ligação aos tecidos em um organismo vivo. Uma razão de relaxividade r 1/r2 é geralmente usada para quantificação de um tipo de contraste gerado em IRM e pode servir como um índice para o desempenho do agente de contraste.
[0259] Um valor r1/r2 do agente de contraste positivo para IRM de acordo com a presente invenção, deve ser de preferência o mais alto possível para obter um efeito de contraste positivo mais alto para melhorar a capacidade de diagnóstico. Por exemplo, o valor r1/r2 em um caso em que o campo magnético é 1,5 T é de preferência 0,6 ou mais, mais preferencialmente 0,7 ou mais, ainda mais preferencialmente 0,8 ou mais. Em um caso onde o valor de r1/r2 é 0,7 ou mais, o agente de contraste positivo exibe um excelente efeito T 1 (positivo) e, mesmo em medições de IRM com um campo magnético mais alto, exibe um efeito de alto contraste com alta resolução. Do ponto de vista de aumentar significativamente o efeito de contraste e reduzir uma quantidade do agente de contraste positivo para IRM a ser administrado, o valor r 1 r2 é de preferência 0,8 ou mais.
[0260] Na nanopartícula de acordo com a presente invenção, um comprimento de cadeia molecular do ligante zwitteriônico é mais curto do que o de um ligante publicamente conhecido. Isso reduz a distância entre a partícula de metal e uma molécula de água externa e permite que a relaxividade seja exibida com eficiência.
[0261] O agente de contraste para IRM, de acordo com a presente invenção, abrange um agente de contraste para IRM contendo uma nanopartícula com uma partícula de metal cujo diâmetro de partícula (incluindo um diâmetro médio de um cluster ou um compósito contendo as partículas de metal) é de 2 nm ou menos (por exemplo, 1 nm ou menos). Esse agente de contraste para IRM pode ser usado como um agente de contraste positivo em uma imagem ponderada em T 1 obtida por um aparelho de IRM de 7 T ou mais. Como um exemplo, o agente de contraste para IRM da presente invenção abrange um agente de contraste positivo para IRM a ser usado com um aparelho de IRM de 7 T ou menos. Como um exemplo, o agente de contraste para IRM da presente invenção abrange um agente de contraste positivo para IRM a ser usado com um aparelho de IRM de 3 T ou menos.
[0262] Toxicidade e estabilidade:
[0263] O agente de contraste para IRM da presente invenção exibe uma alta estabilidade da nanopartícula. É possível confirmar um grau de aglomeração com um método descrito no Exemplo de Teste 3 (descrito posteriormente), e espera-se que o agente de contraste para IRM seja armazenado em uma solução por um longo período de tempo à temperatura ambiente ou a 4 °C sem sofrer aglomeração. Além disso, o agente de contraste tem baixa toxicidade para os organismos. A partir disso, espera-se a aplicação contínua e a longo prazo do agente de contraste em um organismo vivo.
[0264] 6. Exemplos de modalidades específicas de acordo com a presente invenção:
[0265] A fim de atingir o objetivo, a presente invenção inclui em seu escopo qualquer uma das modalidades abaixo.
[0266] Observe que, salvo indicação em contrário, quando um símbolo em uma determinada fórmula química nesta especificação também é usado em outra fórmula química, o mesmo símbolo indica o mesmo significado.
[0267] Modalidade 1:
[0268] Uma nanopartícula compreendendo: pelo menos um ligante zwitteriônico representado pela fórmula (I); e uma partícula de metal contendo óxido de ferro, tal pelo menos um ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado à partícula de metal:
[0269]
[0270] Onde:
[0271] um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b), e o outro grupo entre R1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio;
[0272] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[0273] X2 é alquileno C 1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é alquileno C 1-2-O-alquileno C1-3-, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[0274] Ra e Rb são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1-3 ou alquileno C1-3-O-alquil C1-2, ou Ra e Rb formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e Rb estão ligados;
[0275] Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-;
[0276] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3, -O-alquil C1-3 ou halogênio;
[0277] n é um número inteiro de 0 a 2; e,
[0278] i) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno juntamente com Ra ou Rb;
[0279] ii) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R2 forma opcionalmente metileno juntamente com Ra ou Rb; e
[0280] iii) quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R3 opcionalmente forma etileno juntamente com Ra ou Rb;
[0281] desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), Ra e Rb são metil, X 1 é uma ligação, X 2 é alquileno C1-4 e R1, R3 e R4 são H, Y- é HPO3- ou CO2-.
[0282] Modalidade 2:
[0283] A nanopartícula descrita na Modalidade 1, na qual:
[0284] no dito pelo menos um ligante zwitteriônico,
[0285] um dos grupos de R1 e R2 é um grupo representado pela fórmula (a) ou fórmula (b), e o outro dos grupos de R1 e R2 é H, alquil inferior ou halogênio;
[0286] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[0287] X2 é alquileno C 1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é alquileno C 1-2-O-alquileno C1-3-, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[0288] Ra e Rb são iguais ou diferentes uns dos outros e representam alquil C 1-3 ou alquileno C 1-3-O-alquil C1-2, ou Ra e Rb formam um anel de pirrolidina juntamente com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e Rb estão ligados;
[0289] Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-;
[0290] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3 ou halogênio;
[0291] n é 1; e,
[0292] quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno em conjunto com Ra ou Rb.
[0293] Modalidade 3:
[0294] A nanopartícula descrita na Modalidade 2, na qual:
[0295] no dito pelo menos um ligante zwitteriônico,
[0296] R1 é um grupo representado pela fórmula (a) ou fórmula (b), e R 2 é H ou halogênio;
[0297] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[0298] X2 é alquileno C1-5, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[0299] Ra e Rb são metil; e
[0300] Y- é SO3- ou CO2-.
[0301] Modalidade 4:
[0302] A nanopartícula descrita na Modalidade 1, em que, no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e o outro grupo entre R1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio.
[0303] Modalidade 5:
[0304] A nanopartícula descrita na Modalidade 4, na qual:
[0305] no dito pelo menos um ligante zwitteriônico; 1) R1 é um grupo representado pela fórmula (a), e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio, ou 2) R1 é H, R2 é um grupo representado pela fórmula (a), R 3 é C1-3 alquil ou halogênio, e R4 é H.
[0306] Modalidade 6:
[0307] A nanopartícula descrita na Modalidade 5, na qual, no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, R 1 é um grupo representado pela fórmula (a) e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio.
[0308] Modalidade 7:
[0309] A nanopartícula descrita na Modalidade 6, na qual:
[0310] no dito pelo menos um ligante zwitteriônico,
[0311] R2 é H ou halogênio;
[0312] X1 é uma ligação, metileno ou etileno;
[0313] X2 é alquileno C2-4;
[0314] Ra e Rb são metil;
[0315] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3 ou halogênio; e,
[0316] quando X1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno juntamente com R a ou Rb.
[0317] Modalidade 8:
[0318] A nanopartícula descrita na Modalidade 7, na qual:
[0319] no dito pelo menos um ligante zwitteriônico,
[0320] R2 é H ou F;
[0321] X2 é etileno ou propileno; e
[0322] R3 e R4 são H.
[0323] Modalidade 9:
[0324] A nanopartícula descrita na Modalidade 8, na qual:
[0325] no dito pelo menos um ligante zwitteriônico,
[0326] R2 é H; e
[0327] X1 é uma ligação ou etileno.
[0328] Modalidade 10:
[0329] A nanopartícula descrita em qualquer um de <4> a <9>, na qual:
[0330] no dito pelo menos um ligante zwitteriônico;
[0331] Y- é SO3- ou CO2-.
[0332] Modalidade 11:
[0333] A nanopartícula descrita na Modalidade 3,
na qual:
[0334] no dito pelo menos um ligante zwitteriônico,
[0335] R1 é um grupo representado pela seguinte fórmula (b-1),
[0336] R2 é H ou halogênio;
[0337] X1 é uma ligação ou metileno;
[0338] X2 é alquileno C1-5 ou uma ligação;
[0339] Ra é metil; e
[0340] Y- é SO3- ou CO2-.
[0341] Modalidade 12:
[0342] A nanopartícula descrita em qualquer uma das Modalidades 1 a 11, em que a partícula de metal contém apenas óxido de ferro.
[0343] Modalidade 13:
[0344] A nanopartícula descrita em qualquer uma das Modalidades 1 a 12, em que: o dito pelo menos um ligante zwitteriônico está coordenadamente ligado a uma superfície externa da partícula de metal contendo óxido de ferro; e a partícula de metal é revestida com pelo menos um ligante zwitteriônico.
[0345] Modalidade 14:
[0346] A nanopartícula descrita em qualquer uma das Modalidades 1 a 12 em que a nanopartícula é um compósito contendo pelo menos um ligante zwitteriônico e a partícula de metal contendo óxido de ferro, o dito pelo menos um ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado à partícula de metal.
[0347] Modalidade 15:
[0348] A nanopartícula descrita em qualquer uma das Modalidades 1 a 12, em que a nanopartícula é um cluster contendo dois ou mais compostos de ligante zwitteriônico e duas ou mais partículas de metal, cada uma das duas ou mais partículas de metal contendo óxido de ferro, e pelo menos um composto de ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado a cada uma das duas ou mais partículas de metal.
[0349] Modalidade 16:
[0350] Um agente de contraste para imagem por ressonância magnética, contendo uma nanopartícula descrita em qualquer uma das Modalidades 1 a 15.
[0351] Modalidade 17:
[0352] O agente de contraste descrito em Modalidade 16, no qual o agente de contraste é um agente de contraste positivo.
[0353] Modalidade 18:
[0354] Uso de um composto de ligante zwitteriônico representado pela seguinte fórmula (I) para a produção da nanopartícula descrita na Modalidade 1:
[0355]
[0356] Onde:
[0357] Um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b) abaixo, e o outro grupo entre R1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio,
[0358] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[0359] X2 é alquileno C1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é alquileno C 1-2-O-alquileno C1-3-, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[0360] Ra e Rb são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1-3 ou alquileno C1-3-O-alquil C1-2, ou Ra e Rb formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e Rb estão ligados;
[0361] Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-;
[0362] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3, -O-alquil C1-3 ou halogênio;
[0363] n é um número inteiro de 0 a 2; e,
[0364] i) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno juntamente com Ra ou Rb;
[0365] ii) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R2 forma opcionalmente metileno juntamente com Ra ou Rb; e
[0366] iii) quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R3 opcionalmente forma etileno juntamente com Ra ou Rb,
[0367] desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), Ra e Rb são metil, X 1 é uma ligação, X 2 é alquileno C1-4 e R1, R3 e R4 são H, Y- é HPO3- ou CO2-.
[0368] Modalidade 19:
[0369] O uso descrito em Modalidade 18, em que, no composto de ligante zwitteriônico, um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e o outro grupo entre R1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio.
[0370] Modalidade 20:
[0371] Um composto representado pela seguinte fórmula (I) ou um sal do mesmo:
[0372]
[0373] Onde:
[0374] um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b) abaixo, e o outro grupo entre R1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio,
[0375]
[0376] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[0377] X2 é alquileno C1-5 que é opcionalmente substituído com OH ou é -alquileno C1-2-O-alquileno C1-3-, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[0378] Ra e Rb são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1-3 ou -alquileno C1-3-O-alquil C1-2, ou Ra e Rb formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e Rb estão ligados;
[0379] Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-;
[0380] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3, -O-alquil C1-3 ou halogênio;
[0381] n é um número inteiro de 0 a 2; e,
[0382] i) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno juntamente com Ra ou Rb;
[0383] ii) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R2 forma opcionalmente metileno juntamente com Ra ou Rb; e
[0384] iii) quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R3 opcionalmente forma etileno juntamente com Ra ou Rb,
[0385] desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), Ra e Rb são metil, X 1 é uma ligação, X 2 é alquileno C1-4 e R1, R3 e R4 são H, Y- é HPO3- ou CO2-.
[0386] Modalidade 21:
[0387] O composto descrito na Modalidade 20 ou um sal do mesmo, em que:
[0388] um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado pela fórmula (a) ou fórmula (b), e o outro grupo entre R1 e R2 é H, alquil inferior ou halogênio,
[0389] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[0390] X2 é alquileno C 1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é -alquileno C1-2-O-alquileno C1-3-, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[0391] Ra e Rb são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1-3 ou -alquileno C1-3-O-alquil C1-2, ou Ra e Rb formam um anel de pirrolidina juntamente com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual Ra e Rb estão ligados;
[0392] Y- é SO3-, HPO3- ou CO2-;
[0393] R3 e R4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1-3 ou halogênio;
[0394] n é 1; e,
[0395] i) quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R2 forma opcionalmente etileno em conjunto com Ra ou Rb.
[0396] Modalidade 22:
[0397] O composto descrito na Modalidade 21 ou um sal do mesmo, em que:
[0398] R1 é um grupo representado pela fórmula (a) ou fórmula (b), e R 2 é H ou halogênio;
[0399] X1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a);
[0400] X2 é alquileno C1-5, ou X2 é opcionalmente uma ligação quando R1 é um grupo representado pela fórmula (b);
[0401] Ra e Rb são metil; e
[0402] Y- é SO3- ou CO2-.
[0403] Modalidade 23:
[0404] O composto descrito na Modalidade 20 ou um sal do mesmo, em que: um grupo entre R1 e R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e o outro de R 1 e R2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior, ou halogênio.
[0405] Modalidade 24:
[0406] O composto descrito na Modalidade 20 ou um sal do mesmo, que é selecionado do grupo que consiste em:
[0407] 4-{[(2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}butano-1-sulfonato;
[0408] 3-{[(6-fluoro-2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}propano-1-sulfonato;
[0409] hidrogênio(3-{[(2,3-dihidroxifenil)metil] (dimetil) azaniumil}propil)fosfonato;
[0410] 5-{[(2,3-dihidroxifenil)metil](dimetil) azaniumil} pentanoato;
[0411] {1-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-1- metilpiperidin-1-io-4-il} acetato;
[0412] 1-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-1- metilpiperidin-1-io-4-carboxilato;
[0413] 4-{[2-(2,3-dihidroxifenil)etil](dimetil) azaniumil} butanoato;
[0414] 2-{[2-(2,3-dihidroxifenil)etil](dimetil) azaniumil}etano-1-sulfonato; e
[0415] 3-[(2,3-di-hidroxifenil)(dimetil)azaniumil] propano-1-sulfonato.
[0416] Modalidade 25:
[0417] O composto descrito na Modalidade 24 ou um sal do mesmo, que é selecionado do grupo que consiste em:
[0418] {1-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-1- metilpiperidin-1-io-4-il} acetato; e
[0419] 2-{[2-(2,3-dihidroxifenil)etil](dimetil) azaniumil}etano-1-sulfonato.
[0420] Modalidade 26:
[0421] O composto descrito na Modalidade 24 ou um sal do mesmo, que é selecionado do grupo que consiste em:
[0422] 4-{[(2,3-dihidroxifenil)metil](dimetil) azaniumil}butano-1-sulfonato; e
[0423] 3-{[(6-fluoro-2,3-dihidroxifenil)metil] (dimetil) azaniumil} propano-1-sulfonato.
[0424] A presente invenção não está limitada a cada uma das modalidades acima, mas pode ser alterada por alguém versado na técnica dentro do escopo das reivindicações. A presente invenção também abrange, em seu escopo técnico, qualquer modalidade derivada da combinação de meios técnicos divulgados em diferentes modalidades. Além disso, é possível formar uma nova característica técnica combinando os meios técnicos divulgados nas respectivas modalidades.
[0425] Exemplos:
[0426] O que se segue irá fornecer Exemplos de Produção e Exemplos para descrever a presente invenção em mais detalhes.
[0427] Nos Exemplos, Exemplos de Produção e Tabelas abaixo, as seguintes abreviações são comumente usadas:
[0428] PEx: Número do exemplo de produção; Ex: Número do exemplo; PSyn: Número do exemplo de produção produzido com um método similar; ESyn: Número do exemplo produzido com um método similar; Str: Fórmula de estrutura química; Me: grupo metil; Et: grupo etil; Data1: Dados físico-químicos no exemplo de produção; NMR- D: Pico característico δ (ppm) em 1H-RMN em DMSO-d6; ESI+: valor m/z em valores de espectrometria de massa (método ionização por “eletrospray” (ESI); indicando (M+H)+ a menos que indicado de outra forma, ou indicando (M+)+ para ESI(M+)+ nas Tabelas abaixo); APCI/ESI(M+)+: valor m/z em valores de espectrometria de massa (métodos de ionização química à pressão atmosférica (APCI) e ESI) (observe que o Exemplo de Produção 27 indica dados de massa de uma porção de ácido oleico excluindo íons de ferro, e ESI dos mesmos indica (M-)-); Data2: Dados físico-químicos do exemplo; SEC (min): Tempo de escoamento da nanopartícula nas condições do Exemplo de Teste 2; 3K: partículas purificadas 3K que foram purificadas com um filtro descrito abaixo; 10K: partículas purificadas 10K que foram purificadas com um filtro descrito abaixo; THF: Tetrahidrofurano; DMF: N,N-dimetilformamida; OA: ácido oleico; MEAA: ácido [2-(2-metoxietoxi)etoxi]acético; TBAF tri-hidratado: fluoreto de tetrabutilamônio tri-hidratado; PBS: solução salina tamponada com fosfato; SNP-OA: Nanopartícula de óxido de ferro à qual ácido oleico está coordenadamente ligado; SNP-MEAA: Nanopartícula de óxido de ferro à qual MEAA está coordenadamente ligado; Br - (na fórmula estrutural): Íon brometo; e I- (na fórmula estrutural): íon iodeto. Na cromatografia em coluna de fase reversa, foi utilizada uma coluna preenchida com sílica gel cuja superfície foi modificada com ODS (grupo octadecilsilil).
[0429] Um filtro Amicon Ultra Centrifugal 3K (Merck Millipore) usado na purificação de uma nanopartícula de óxido de ferro é referido como "filtro Amicon 3K". Além disso, filtros semelhantes para diferentes pontos de corte de peso molecular (MWCO) 10K, 30K, 50K e 100K são referidos como "filtro Amicon 10K", "filtro Amicon 30K", "filtro Amicon 50K" e "filtro Amicon 100K", respectivamente. As partículas purificadas por ultrafiltração nos pontos de corte de peso molecular de 30K, 10K e 3K são referidas como "partículas purificadas 30K", "partículas purificadas 10K" e "partículas purificadas 3K", respectivamente.
[0430] A operação de filtragem de partículas com o uso de filtros de seringa Agilent Captiva Premium (celulose regenerada, 15 mm, tamanho de poro: 0,2 μm) ou YMC Duo-Filter (XQUO15, tamanho de poro: 0,2 μm) é referido como "filtrado com uma membrana (0,2 μm)".
[0431] A linha tracejada nas tabelas de exemplos abaixo representa uma ligação coordenada com o átomo de metal na superfície da partícula de metal.
[0432] Os compostos dos Exemplos de Produção e nanopartículas dos Exemplos mostrados nas Tabelas abaixo foram produzidos como nos Exemplos de Produção e Exemplos abaixo ou de maneiras semelhantes aos Exemplos e Exemplos de Produção.
[0433] Os exemplos de produção mostram exemplos de produção de um composto de ligante zwitteriônico, um complexo ferro-ácido oleico e uma nanopartícula de óxido de ferro revestida com ácido oleico (SNP-OA). Os exemplos mostram exemplos de produção de uma nanopartícula que foi derivada diretamente de SNP-OA ou derivada via SNP-MEAA e à qual o composto de ligante zwitteriônico está coordenadamente ligado.
[0434] Exemplo de produção 1:
[0435] Uma solução aquosa de dimetilamina 9,5 mol/L (7,1 mL) foi adicionada a 6-fluoro-2,3-dimetoxibenzaldeído (2,50 g) e uma mistura resultante foi agitada durante 15 horas à temperatura ambiente. Foi adicionado boro-hidreto de sódio (514 mg) à mistura num banho de água e a mistura resultante foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. Em um banho de gelo, foi adicionado ácido clorídrico concentrado (pH 1-2). Uma camada aquosa foi lavada duas vezes com diclorometano. Uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 1 mol / L foi adicionada à camada aquosa (pH>11). A mistura resultante foi submetida à extração três vezes com diclorometano, e uma substância extraída foi seca com sulfato de sódio anidro. Após filtração, um filtrado resultante foi concentrado, e assim foi obtido 1-(6-fluoro-2,3- dimetoxifenil)-N,N-dimetilmetanamina (2,46 g).
[0436] Exemplo de produção 2:
[0437] Triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,74 g) foi adicionado a uma mistura de 4-fluoro-2,3-dimetoxibenzaldeído (2,50 g), diclorometano (75 mL) e uma solução de 2 mol/L de dimetilamina THF (13,6 mL) em banho-maria, e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Foi adicionada sílica gel básica e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A purificação foi realizada por cromatografia em coluna de sílica gel básica (solvente de desenvolvimento: hexano-clorofórmio), e assim foi obtido 1-(4-fluoro-2,3- dimetoxifenil) -N,N-dimetilmetanamina (2,81 g).
[0438] Exemplo de produção 3:
[0439] Uma mistura de 1-(2,3-dimetoxifenil)-N,N- dimetilmetanamina (3,82 g), 1,2λ6-oxatiolano-2,2-diona (1,89 mL) e acetato de etila (38,2 mL) foi agitada durante 7 dias à temperatura ambiente. 1,2λ6-oxatiolano-2,2-diona (515 μL) foi em seguida adicionado e agitado por 4 horas a 50 °C. Uma mistura resultante foi resfriada até a temperatura ambiente, e uma substância sólida resultante foi tomada por filtração, lavada com acetato de etila e seca sob pressão reduzida. Assim, 3-{[(2,3- dimetoxifenil)metil] (dimetil)azaniumil}propano-1-sulfonato (5,41 g) foi obtido.
[0440] Exemplo de produção 4:
[0441] Uma mistura de 1-(2,3-dimetoxifenil)-N,N- dimetilmetanamina (3,00 g), carbonato de sódio (1,63 g), 2-bromoetano-1- sulfonato de sódio (3,24 g), água (6 mL), e etanol (30 m L) foi agitada durante 3 dias a 75 °C. Adicionou-se ainda 2-bromoetano-1-sulfonato de sódio (3,24 g) e a mistura foi agitada durante 2 dias a 80 °C. Adicionou-se ainda 2-bromoetano-1-sulfonato de sódio (3,24 g) e a mistura foi agitada durante 2 dias a 80 °C. A mistura resultante foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. Água foi adicionada e a purificação foi realizada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) para obter 2 {[(2,3-dimetoxifenil) metil](dimetil)azaniumil} etano-1-sulfonato (3,50 g).
[0442] Exemplo de produção 5:
[0443] Uma mistura de 1-(2,3-dimetoxifenil)-N,N- dimetilmetanamina (2,00 g), 1,2λ6-oxatiano-2,2-diona (1,36 mL) e acetato de etila (20 mL) foi agitada durante 3 horas a 50 °C e depois agitada durante 24 horas a 70 °C. 1,2λ 6-oxatiano-2,2-diona (1,04 mL) foi em seguida adicionado e a mistura foi agitada durante 24 horas a 70 °C. Uma mistura resultante foi resfriada até a temperatura ambiente, e uma substância sólida resultante foi tomada por filtração, lavada com acetato de etila e seca sob pressão reduzida. Assim, foi obtido 4-{[(2,3- dimetoxifenil)metil](dimetil)azaniumil} butano-1-sulfonato (2,28 g).
[0444] Exemplo de produção 6:
[0445] Uma mistura de 2-fluoro-4,5- dimetoxianilina (2,50 g), 1,2λ6-oxatiolano-2,2-diona (1,54 mL) e acetonitrila (63 mL) foi agitada durante 8 horas a 115 °C. 1,2λ6-oxatiolano-
2,2-diona (0,64 mL) foi em seguida adicionado e a mistura foi agitada durante 8 horas a 115 °C. Uma mistura resultante foi resfriada até a temperatura ambiente, e uma substância sólida resultante foi tomada por filtração, lavada com acetonitrila e seca a 50 °C sob pressão reduzida. Assim, foi obtido ácido 3-(2-fluoro-4,5-dimetoxianilino)propano-1- sulfônico (4,00 g).
[0446] Exemplo de produção 7:
[0447] 3,4-dimetoxianilina (1,66 g), iodeto de potássio (1,79 g) e carbonato de potássio (2,49 g) foram adicionados a uma mistura de ácido 3-(2-cloroetoxi)propano-1-sulfônico (1,46 g), dioxano (22 mL) e água (11 mL), e a mistura foi agitada durante a noite a 100 °C. O líquido de reação foi resfriado até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrado, purificado por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) e liofilizado para obter o ácido 3-[2-(3,4-dimetoxianilino)etoxi]propano-1-sulfônico (532 mg).
[0448] Exemplo de produção 8:
[0449] Uma mistura de 2-metoxi-N-(2- metoxietil)etan-1-amina (3,0 mL), 1,2λ 6-oxatiolano-2,2-diona (2,0 mL) e acetonitrila (27 mL) foi agitada durante 4 horas a 80 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada. Éter dietílico foi adicionado à mistura e a mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. Em seguida, uma substância sólida resultante foi tomada por filtração e seca sob pressão reduzida à temperatura ambiente para se obter ácido 3-[bis(2-metoxietil)amino]propano-1-sulfônico (5,00 g).
[0450] Exemplo de produção 9:
[0451] Uma mistura de 1-(2,3-dimetoxifenil)-N,N-
dimetilmetanamina (1,70 g), 3-cloro-2-hidroxipropano-1-sulfonato de sódio (3,42 g), iodeto de potássio (1,73 g), etanol (26 mL) e água (7,7 mL) foi agitada durante a noite a 80 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada, purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) e liofilizada para obter 3-{[(2,3-dimetoxifenil)metil](dimetil)azaniumil}-2- hidroxipropano-1-sulfonato (2,17 g).
[0452] Exemplo de produção 10:
[0453] Uma mistura de 7,8-dimetoxi-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolina (1,80 g), 1,2λ6-oxatiolano-2,2-diona (0,98 mL), carbonato de potássio (1,29 g) e acetonitrila (45 mL) foi agitado durante 8 horas a 100 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi adicionado água. A mistura foi concentrada, purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) e seca por congelamento para obter ácido 3-(7,8- dimetoxi-3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-il)propano-1-sulfônico (1,79 g).
[0454] Exemplo de produção 11:
[0455] Uma mistura de 1-(2,3-dimetoxifenil)-N,N- dimetilmetanamina (1,30 g), dietil(3-bromopropil)fosfonato (1,66 mL) e etanol (6,50 mL) foi agitada durante 6 horas a 80 °C . A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) para obter Brometo de 3-(dietoxifosforil)-N-[(2,3- dimetoxifenil)metil]-N,N-dimetilpropan-1-amínio (2,70 g).
[0456] Exemplo de Produção 12:
[0457] Uma mistura de ácido 3-[bis(2-
metoxietil)amino] propano-1-sulfônico (3,00 g), 1-(clorometil)-2,3- dimetoxibenzeno (4,39 g), carbonato de potássio (1,95 g) e etanol (45 mL) foi agitada durante a noite a 80 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada, purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) e liofilizada para obter 3-{[(2,3-dimetoxifenil)metil]bis(2- metoxietil)azaniumil}propano-1-sulfonato (3,09 g).
[0458] Exemplo de produção 13:
[0459] Uma mistura de dietil(3- bromopropil)fosfonato (2,53 g) e 3,4-dimetoxianilina (3,00 g) foi agitada durante 6 horas a 95 °C numa atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente. Foi adicionado solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e uma mistura resultante foi submetida a extração uma vez com acetato de etila. Uma camada orgânica assim obtida foi lavada uma vez com salmoura e seca com sulfato de magnésio anidro. Após filtração, um filtrado assim obtido foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (solvente de desenvolvimento; hexano-acetato de etila, em seguida acetato de etila-metanol) para obter dietil[3-(3,4-dimetoxianilino)propil]fosfonato (1,74 g).
[0460] Exemplo de produção 14:
[0461] Uma mistura de 1-(2,3-dimetoxifenil)-N,N- dimetilmetanamina (2,00 g) e 4-bromobutanoato de etila (2,60 g) foi agitada durante 3 horas a 80 °C. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: água-acetonitrila) para obter brometo de N-[(2,3-dimetoxifenil)metil]-4-etoxi-N,N-dimetil-4- oxobutan-1-amínio (3,93 g).
[0462] Exemplo de produção 15:
[0463] Uma mistura de 1-(6-fluoro-2,3- dimetoxifenil)-N,N-dimetilmetanamina (1,20 g), 1,2λ6-oxatiolano-2,2- diona (990 μL) e acetato de etila (12 mL) foi agitado durante 18 horas a 50 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, uma substância sólida resultante foi tomada por filtração, lavada com acetato de etila e seca sob pressão reduzida para obter 3-{[(6-fluoro-2,3- dimetoxifenil)metil] (dimetil) azaniumil}propano-1-sulfonato (1,79 g).
[0464] Exemplo de produção 16:
[0465] Uma mistura de 1-(2,3-dimetoxifenil)-N,N- dimetilmetanamina (2,00 g) e 5-bromopentanoato de etila (2,79 g) foi agitada durante 3 horas a 80 °C. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento; água-acetonitrila) para obter brometo de N-[(2,3-dimetoxifenil)metil]-5-etoxi-N,N-dimetil-5- oxopentan-1-amínio (3,91 g).
[0466] Exemplo de Produção 17:
[0467] Uma mistura de ácido 3-(2-fluoro-4,5- dimetoxianilino) propano-1-sulfônico (4,00 g), carbonato de potássio (4,52 g), iodeto de metila (7,7 mL) e metanol (60 mL) foi agitada durante a noite a 50 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada, purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) e liofilizada para obter 3- (2-fluoro-4,5-dimetoxifenil)(dimetil) azaniumil] propano-1-sulfonato (4,34 g).
[0468] Exemplo de produção 18:
[0469] Uma mistura de ácido 3-(3,4-
dimetoxianilino)propano-1-sulfônico (2,00 g), 1,4-diiodobutano (1,04 mL), carbonato de potássio (2,21 g), dioxano (30 mL) e água (15 mL) foi agitada durante a noite a 100 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada, purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) e liofilizada para obter 3-[1-(3,4-dimetoxifenil)pirrolidin-1-io-1-il] propano-1-sulfonato (2,37 g).
[0470] Exemplo de produção 19:
[0471] Uma mistura de ácido 3-(3,4- dimetoxianilino) propano-1-sulfônico (2,00 g), iodeto de etila (2,94 mL), carbonato de potássio (2,41 g) e metanol (30 mL) foi agitada durante a noite a 50 °C . Foi adicionado iodeto de metila (4,1 mL) e a mistura resultante foi então agitada durante a noite a 50 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada, purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) e seca por congelamento para obter 3-[(3,4- dimetoxifenil)(etil)(metil)azaniumil]propano-1-sulfonato (2,14 g).
[0472] Exemplo de produção 20: a. Uma mistura de 3-{[(2,3- dimetoxifenil)metil](dimetil) azaniumil}propano-1-sulfonato (5,41 g) e ácido iodídrico a 57% (24 mL) foi agitada durante 15 horas a 110 °C. Após a mistura ser resfriada até a temperatura ambiente, água (30 mL) foi adicionada e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida mais uma vez. A uma mistura resultante, foi adicionada água (6 mL) para dissolver a mistura, depois foi adicionada acetona (100 mL) e a mistura foi agitada durante 3 minutos num banho de gelo. A mistura resultante foi deixada repousar e, em seguida, o sobrenadante foi removido por decantação. Água (6 mL) e acetona (75 mL) foram ainda adicionadas, e uma operação semelhante foi realizada mais uma vez. Água (6 mL) e acetona (75 mL) foram adicionadas a uma mistura resultante e a mistura foi agitada durante 3 minutos em um banho de gelo. Em seguida, uma substância sólida resultante foi tomada por filtração, lavada com acetona e seca sob pressão reduzida para obter 3-{[(2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil} propano-1-sulfonato (5,02 g).
[0473] Exemplo de produção 21:
[0474] Em uma atmosfera de argônio, uma solução de tribromoborano em diclorometano a 1 mol/L (19,2 mL) foi adicionada gota-a-gota a uma mistura de 3-{[(2,3-dimetoxifenil)metil]bis(2- metoxietil)azaniumil}propano-1-sulfonato (2,59 g) e diclorometano (52 mL) sob resfriamento em banho de gelo seco-acetona, e uma mistura resultante foi lentamente aquecida à temperatura ambiente ao longo de 3 horas e agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. Metanol foi adicionado sob resfriamento com gelo, e uma mistura resultante foi agitada por 30 minutos à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. Metanol foi adicionado ao resíduo e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida novamente. Esta operação foi realizada mais duas vezes, e uma mistura resultante foi purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água) e liofilizada para obter 3-{[(2,3-dihidroxifenil)metil]bis(2- metoxietil)azaniumil}propano-1-sulfonato (674 mg).
[0475] Exemplo de produção 22:
[0476] Uma mistura de 4-{[(2,3-
dimetoxifenil)metil](dimetil) azaniumil}butano-1-sulfonato (2,28 g) e ácido iodídrico a 57% (9,6 mL) foi agitada durante 4 horas a 110 °C. Após a mistura ser resfriada até a temperatura ambiente, foi adicionada água e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida mais uma vez. A uma mistura resultante, foi adicionada água (4 mL) para dissolver a mistura e, em seguida, foi adicionada acetona (80 mL) e a mistura foi agitada. A mistura resultante foi deixada repousar e, em seguida, o sobrenadante foi removido por decantação. Água ultrapura Millipore (4 mL) e acetona (60 mL) foram ainda adicionadas, e uma operação semelhante foi realizada. Água ultrapura (4 mL) e acetona (60 mL) foram adicionadas a uma mistura resultante e a mistura foi agitada. Em seguida, uma substância sólida resultante foi tomada por filtração, lavada com acetona e seca sob pressão reduzida para obter 4-{[(2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}butano-1-sulfonato (2,45 g).
[0477] Exemplo de produção 23:
[0478] Uma mistura de 3-{[(6-fluoro-2,3- dimetoxifenil)metil] (dimetil)azaniumil}propano-1-sulfonato (1,79 g) e ácido iodídrico a 57% (7,5 mL) foi agitada durante 6 horas a 110 °C. Após a mistura ser resfriada até a temperatura ambiente, foi adicionada água e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida mais uma vez. Foi adicionada acetona (70 mL) a uma mistura resultante e a mistura foi agitada sob resfriamento com gelo. A mistura resultante foi deixada durante a noite para precipitar uma substância sólida e agitada durante 1 hora sob resfriamento com gelo. A mistura resultante foi deixada repousar e, em seguida, o sobrenadante foi removido por decantação. Acetona foi adicionada à mistura e, em seguida, uma substância sólida resultante foi tomada por filtração, lavada com acetona e seca sob pressão reduzida para obter 3-{[(6-fluoro-2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}propano-1-sulfonato (1,58 g).
[0479] Exemplo de produção 24:
[0480] Uma mistura de brometo de 3- (dietoxifosforil)-N-[(2,3-dimetoxifenil)metil]-N,N-dimetilpropan-1- amínio (2,80 g) e ácido iodídrico a 57% (8 mL) foi agitada durante 18 horas a 100 °C. Após a mistura ser resfriada até a temperatura ambiente, água e acetona foram adicionadas e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Foi adicionada água a uma mistura resultante e a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. Foi adicionada água a uma mistura resultante, uma matéria insolúvel foi removida por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Foi adicionada acetona a uma mistura resultante e uma substância sólida resultante foi filtrada. A substância sólida foi lavada com acetona e seca sob pressão reduzida para obter iodeto de N- [(2,3-dihidroxifenil)metil]-N,N-dimetil-3-fosfonopropan-1-amínio (571 mg).
[0481] Exemplo de produção 25:
[0482] Uma mistura de brometo de N-[(2,3- dimetoxifenil) metil]-4-etoxi-N,N-dimetil-4-oxobutan-1-amínio (3,91 g) e ácido iodídrico a 57% (22,5 g) foi agitada durante 15 horas a 110 °C. A mistura foi concentrada e foi adicionada água a um resíduo resultante e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida mais uma vez. Foi adicionada acetona à mistura e a mistura foi resfriada num banho de gelo e o sobrenadante foi removido. Foi adicionada acetona à mistura e a mistura foi resfriada num banho de gelo e uma substância sólida resultante foi filtrada. A substância sólida foi lavada com acetona para obter iodeto de 3-carboxi-N-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-N,N- dimetilpropan-1-amínio (2,13 g).
[0483] Exemplo de Produção 26:
[0484] Uma mistura de brometo de N-[(2,3- dimetoxifenil) metil]-5-etoxi-N,N-dimetil-5-oxopentan-1-amínio (3,90 g) e ácido iodídrico a 57% (22,0 g) foi agitada durante 16 horas a 110 °C. A mistura foi concentrada e foi adicionada água a um resíduo resultante, e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida mais uma vez. Adicionou-se acetona à mistura e resfriou-se num banho de gelo e removeu-se o sobrenadante. Foi adicionada acetona à mistura e a mistura foi resfriada num banho de gelo e uma substância sólida resultante foi filtrada. A substância sólida foi lavada com acetona para obter iodeto de 4-carboxi-N-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-N,N-dimetilbutan-1- amínio (1,33 g). Todo o filtrado foi concentrado e um resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de revelação; água-acetonitrila). A acetona foi adicionada à substância sólida gerada pela concentração, e o a substância sólida foi filtrada. A substância sólida foi lavada com acetona para obter iodeto de 4-carboxi-N-[(2,3- dihidroxifenil)metil]-N,N-dimetilbutan-1-amínio (1,29 g).
[0485] Exemplo de Produção 27:
[0486] Cloreto de ferro (III) hexa-hidratado (5,80 g), oleato de sódio (19,5 g), etanol (43 mL), água (33 mL) e hexano (75 mL) foram misturados e a mistura foi aquecida sob refluxo por 4 horas a 70 °C em atmosfera de argônio. Após o resfriamento, a mistura foi colocada em um funil de separação para remover uma camada aquosa. Foram adicionados 50 mL de água e uma camada orgânica foi lavada e recolhida. Esta operação foi repetida mais duas vezes (na segunda vez, foi usado 50%/50% de metanol/água). Uma camada orgânica resultante foi seca com sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para obter um complexo de ácido oleico-ferro (FeOA3, 19,2 g).
[0487] Exemplo de Produção 28:
[0488] Uma mistura de FeOA 3 (6,53 g), álcool oleílico (11,7 g) e éter difenílico (36,4 g) foi agitada durante 2 horas a 90 °C sob pressão reduzida. Em seguida, a pressão foi alterada para a pressão atmosférica normal com o uso de argônio, e a mistura foi aquecida a uma temperatura de banho de 213 °C durante um período de 16 minutos e foi agitada por 30 minutos após uma temperatura interna exceder 200 °C. Após a mistura ser resfriada até a temperatura ambiente, hexano (5 mL) e acetona (150 mL) foram adicionados. A mistura resultante foi centrifugada a 8000 rpm durante 10 minutos a 10 °C e um sobrenadante foi removido. Hexano (24 mL) foi adicionado a um precipitado resultante e acetona (150 mL) foi em seguida adicionada e, posteriormente, uma mistura resultante foi centrifugada a 8000 rpm durante 10 minutos a 10 °C e um sobrenadante foi removido. Esta operação foi repetida mais uma vez e um precipitado resultante foi seco sob pressão reduzida para obter uma nanopartícula de óxido de ferro (SNP-OA, 992 mg) com uma superfície à qual o ácido oleico está coordenadamente ligado.
[0489] Exemplo de produção 33:
[0490] Carbonato de sódio (15,6 g) e 2- bromoetano-1-sulfonato de sódio (23,3 g) foram adicionados a uma mistura de 2-(2,3-dimetoxifenil)-N,N-dimetiletan-1-amina (7,71 g), água (15,4 mL)
e etanol (77 mL), e uma mistura resultante foi agitada durante 18 horas a 80 °C. Foram adicionados 2-bromoetano-1-sulfonato de sódio (11,7 g), carbonato de sódio (7,81 g), etanol (20 mL) e água (4 mL) e a mistura foi agitada durante 1 dia a 80 °C. Uma mistura resultante foi concentrada e, em seguida, purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: água-acetonitrila) para obter 2-{[2-(2,3- dimetoxifenil)etil](dimetil) azaniumil} etano-1-sulfonato (9,00 g).
[0491] Exemplo de produção 35:
[0492] Uma mistura de 2,3-dimetoxianilina (5,61 g), 1,2λ6-oxatiolano-2,2-diona (5,83 g) e acetonitrila (140 mL) foi submetida a refluxo durante 8 horas. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, agitada em um banho de gelo. Uma substância sólida resultante foi tomada por filtração e lavada com acetonitrila resfriada para se obter ácido 3-(2,3-dimetoxianilino)propano-1- sulfônico (5,59 g).
[0493] Exemplo de Produção 38:
[0494] Uma mistura de ácido 3-(2,3- dimetoxianilino)propano-1-sulfônico (5,58 g), carbonato de potássio (6,72 g), iodeto de metila (11,4 mL) e metanol (85 mL) foi agitada por 8 horas a 50 °C. Foi adicionado iodeto de metila (11,4 mL) e a mistura foi agitada durante 24 horas a 50 °C. Uma matéria insolúvel foi filtrada e, em seguida, o filtrado foi concentrado e purificado com SEPABEADS SP207SS. Uma substância sólida obtida por concentração foi dissolvida em etanol enquanto era aquecida. A mistura resultante foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, agitada em um banho de gelo. Uma substância sólida resultante foi filtrada e lavada com etanol resfriado para obter 3-[(2,3-
dimetoxifenil) (dimetil)azaniumil]propano-1-sulfonato (5,40 g).
[0495] Exemplo de produção 43:
[0496] Uma mistura de 3-[(2,3- dimetoxifenil)(dimetil)azaniumil]propano-1-sulfonato (5,40 g) e ácido iodídrico a 57% (40 g) foi submetida a refluxo durante 8 horas. Após a mistura ser resfriada até a temperatura ambiente, foi adicionada água e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida mais duas vezes. A uma mistura resultante, foi adicionada água (3 mL) para dissolver a mistura, depois foi adicionada acetona (50 mL) e a mistura foi agitada durante 30 minutos num banho de gelo. A mistura resultante foi deixada repousar e, em seguida, o sobrenadante foi removido por decantação. Água (3 mL) e acetona (40 mL) foram ainda adicionadas, e uma operação semelhante foi realizada mais uma vez. Água (3 mL) e acetona (40 mL) foram adicionadas a uma mistura resultante e a mistura foi agitada durante 30 minutos em um banho de gelo. Uma substância sólida resultante foi filtrada e lavada com acetona para obter 3-[(2,3-di- hidroxifenil)(dimetil)azaniumil] propano-1-sulfonato (4,35 g).
[0497] Exemplo de produção 50:
[0498] Uma mistura de 2-{[2-(2,3- dimetoxifenil)etil](dimetil)azaniumil}etano-1-sulfonato (9,00 g) e ácido iodídrico a 57% (40 mL) foi agitada durante 15 horas a 100 °C . A mistura foi concentrada e foi adicionada acetona. A mistura foi agitada durante 5 minutos num banho de gelo. Uma substância sólida resultante foi filtrada e lavada com acetona para obter 2-{[2-(2,3- dihidroxifenil)etil](dimetil)azaniumil}etano-1-sulfonato (3,40 g).
[0499] Exemplo de produção 58:
[0500] Uma mistura de monocloridrato de metil(piperidin-4-il)acetato (5,00 g), 1-(clorometil)-2,3-dimetoxibenzeno (5,78 g), carbonato de potássio (4,64 g) e acetonitrila (50 mL) foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica básica (solvente de desenvolvimento: hexano-acetato de etila) para obter acetato de metil {1-[(2,3-dimetoxifenil)metil]piperidin-4-il} (4,90 g).
[0501] Exemplo de produção 59:
[0502] Uma mistura de 2-(2,3-dimetoxifenil)-N,N- dimetiletan-1-amina (10,9 g) e 4-bromobutanoato de etila (8,28 mL) foi agitada durante 3 horas a 80 °C. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento; água-acetonitrila) para obter brometo de N-[2-(2,3-dimetoxifenil)etil]-4-etoxi-N,N-dimetil-4- oxobutan-1-amínio (15,7 g).
[0503] Exemplo de produção 60:
[0504] Uma mistura de 2,3-dimetoxianilina (5,00 g) e 1,2λ6-oxatiano-2,2-diona (5,78 g) foi agitada durante 24 horas a 95 °C. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (solvente de desenvolvimento: acetonitrila-água). Uma substância sólida obtida por concentração foi lavada com acetonitrila para se obter ácido 4- (2,3-dimetoxianilino)butano-1-sulfônico (4,78 g).
[0505] Exemplo de produção 61:
[0506] Uma mistura de 2,3-dimetoxianilina (5,00 g), 5-bromopentanoato de etila (8,19 g) e trietilamina (3,96 g) foi agitada durante 5 dias à temperatura ambiente. Adicionou-se água e a mistura resultante foi submetida a extração uma vez com acetato de etila. Uma camada orgânica foi lavada uma vez com salmoura e seca com sulfato de magnésio anidro. Após a filtração, um filtrado resultante foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (solvente de desenvolvimento; primeira vez: hexano-acetato de etila, segunda vez: clorofórmio-acetato de etila) para obter 5-(2,3-dimetoxianilino) pentanoato de etila (6,26 g).
[0507] Exemplo de produção 62:
[0508] Uma mistura de acetato de metil{1-[(2,3- dimetoxifenil)metil] piperidin-4-il} (4,90 g), iodeto de metila (5,0 mL) e metanol (74 mL) foi agitada durante 4 horas a 50 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel de fase reversa (solvente de desenvolvimento: água-acetonitrila) para obter iodeto de 1- [(2,3dimetoxifenil)metil]-4-(2-metoxi-2-oxoetil)-1-metilpiperidin-1-io (6,54 g).
[0509] Exemplo de produção 63:
[0510] Uma mistura de etil 1-[(2,3- dimetoxifenil)metil] piperidin-4-carboxilato (18,8 g), iodeto de metila (19,1 mL) e etanol (188 mL) foi agitada durante 4 horas a 50 °C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel de fase reversa (solvente de desenvolvimento: água-acetonitrila) para obter iodeto de 1-[(2,3- dimetoxifenil)metil]-4-(etoxicarbonil)-1-metilpiperidin-1-io (25,9 g).
[0511] Exemplo de produção 64:
[0512] Uma mistura de iodeto de 1-[(2,3- dimetoxifenil)metil]-4-(2-metoxi-2-oxoetil)-1-metilpiperidin-1-io (6,54 g)
e ácido iodídrico a 57% (19 mL) foi agitado durante 6 horas a 100 °C. Após a mistura ser resfriada até a temperatura ambiente, foi adicionada água e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida mais duas vezes. Foi adicionada acetona (30 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente e, em seguida, resfriada num banho de gelo e deixada em repouso, e um sobrenadante foi removido por decantação. Acetona foi novamente adicionada, e uma operação semelhante foi realizada mais duas vezes. Foi adicionada acetona (30 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente e, em seguida, resfriada em um banho de gelo, e uma substância sólida resultante foi tomada por filtração para obter iodeto de 4-(carboximetil)-1-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-1-metilpiperidin- 1-io (4,49 g).
[0513] Exemplo de produção 65:
[0514] Uma mistura de iodeto de 1-[(2,3- dimetoxifenil)metil]-4-(etoxicarbonil)-1-metilpiperidin-1-io (25,9 g) e ácido iodídrico a 57% (76 mL) foi agitada durante a noite a 100 °C . Após a mistura ser resfriada até a temperatura ambiente, foi adicionada água e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Esta operação foi repetida mais duas vezes. Foi adicionada acetona e a mistura foi agitada à temperatura ambiente e, em seguida, a mistura resultante foi resfriada num banho de gelo e deixada em repouso, e o sobrenadante foi removido por decantação. Acetona foi novamente adicionada, e uma operação semelhante foi realizada mais uma vez. Foi adicionada acetona e a mistura foi agitada à temperatura ambiente e, em seguida, resfriada em um banho de gelo, e uma substância sólida resultante foi tomada por filtração para obter iodeto de 4-carboxi-1-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-1-metilpiperidin-1-io (10,8 g).
Um filtrado resultante foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel de fase reversa (solvente de desenvolvimento: água- acetonitrila) para obter iodeto de 4-carboxi-1-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-1- metilpiperidin-1-io (12,0 g).
[0515] Exemplo de produção 66:
[0516] Uma mistura de brometo de N-[2-(2,3- dimetoxifenil)etil]-4-etoxi-N,N-dimetil-4-oxobutan-1-amínio (15,7 g) e ácido iodídrico a 57% (52 mL) foi agitada durante 18 horas a 100 °C. A mistura foi concentrada e foi adicionada água a um resíduo resultante, e a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. Foi adicionada acetonitrila à mistura. Uma mistura resultante foi resfriada em um banho de gelo, e uma substância sólida resultante foi precipitada e, em seguida, a mistura foi concentrada. Acetona foi adicionada a esta e a mistura foi agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente e, em seguida, uma substância sólida resultante foi filtrada para obter iodeto de 3-carboxi-N-[2- (2,3-dihidroxifenil)etil]-N,N-dimetilpropan-1-amínio (14,8 g).
[0517] Exemplo 1:
[0518] Uma mistura de SNP-OA (100 mg), MEAA (2,5 mL) e metanol (7,5 mL) foi agitada durante 5 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. Foram adicionados acetona (24 mL) e hexano (96 mL), e uma mistura resultante foi dividida em seis porções, e cada uma das seis porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Esta operação foi repetida mais uma vez para obter SNP-MEAA.
[0519] Uma mistura de 3-{[(2,3-
dihidroxifenil)metil](dimetil) azaniumil}propano-1-sulfonato (1,19 g), DMF (25 mL) e água (17 mL) foi dissolvida enquanto era aquecida, e hidrogenocarbonato de sódio (700 mg) foi adicionado à mistura.
Uma solução DMF (8 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura, e a mistura foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio.
A mistura de reação foi dividida em seis porções com o uso de água (3 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das seis porções, e cada uma das seis porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante.
Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 30K.
Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K.
A série de operações foi realizada mais três vezes.
Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C.
Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K.
A série de operações foi realizada mais duas vezes.
Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C.
Essa operação foi realizada mais sete vezes.
O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (21,2 mg). Um filtrado por lavagem com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 3K.
Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C.
O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (41,3 mg).
[0520] Exemplo 2:
[0521] Uma mistura de SNP-OA (20 mg), MEAA (0,5 mL) e metanol (1,5 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio.
[0522] Depois que a mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, acetona (4 mL) e hexano (16 mL) foram adicionados e uma mistura resultante foi centrifugada a 7800 rpm por 10 minutos a 10 °C, e um sobrenadante foi removido. Essa operação foi repetida três vezes com uso de acetona (1 mL) e hexano (4 mL), obtendo-se assim o SNP-MEAA.
[0523] Hidrogenocarbonato de sódio (53 mg) foi adicionado a uma mistura de 3-[(2-fluoro-4,5-dihidroxifenil)(dimetil) azaniumil]propano-1-sulfonato (266 mg) e água (3,3 mL). Uma solução de DMF (6,6 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura e a mistura foi agitada durante 15 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em duas porções com o uso de água (1,5 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7800 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante.
[0524] Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 100K. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K. A série de operações foi repetida mais três vezes. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais duas vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas de 10K (9,9 mg). Um filtrado obtido através da lavagem realizada primeiro três vezes com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 1 hora a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se ainda água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 1 hora a 10 °C. Essa operação foi realizada mais sete vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (3,2 mg).
[0525] Exemplo 3:
[0526] Uma mistura de SNP-OA (20 mg), MEAA (0,5 mL) e metanol (1,5 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio.
[0527] Depois que a mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, acetona (4 mL) e hexano (16 mL) foram adicionados e uma mistura resultante foi centrifugada a 7800 rpm por 10 minutos a 10 °C, e um sobrenadante foi removido. Essa operação foi repetida três vezes com uso de acetona (1 mL) e hexano (4 mL), obtendo-se assim o SNP-MEAA.
[0528] Hidrogenocarbonato de sódio (53 mg) foi adicionado a uma mistura de 3-(7,8-dihidroxi-2-metil-3,4- dihidroisoquinolin-2-io-2(1H)-il)propano-1-sulfonato (274 mg) e água (6,6 mL). Uma solução de DMF (13,2 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura e a mistura foi agitada durante 17 horas a 50 °C em uma atmosfera de argônio.
[0529] A mistura de reação foi dividida em quatro porções com o uso de água (3 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das quatro porções, e cada uma das quatro porções foi centrifugada a 7800 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante.
[0530] Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 100K. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K. A série de operações foi repetida mais três vezes. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais duas vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (17,3 mg). Um filtrado obtido por lavagem realizada primeiro três vezes com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 1 hora a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 1 hora a 10 °C. Essa operação foi realizada mais sete vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (11,1 mg).
[0531] Exemplo 4:
[0532] Uma mistura de SNP-OA (40 mg), MEAA (1 mL) e metanol (3 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. Acetona (8 mL) e hexano (32 mL) foram adicionados, e uma mistura resultante foi dividida em duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Adicionou-se acetona (6 mL) e hexano (24 mL), e esta operação foi repetida mais uma vez para obtenção do SNP-MEAA.
[0533] Uma mistura de 3-[(2,3- dihidroxifenil)(dimetil) azaniumil]propano-1-sulfonato (500 mg) e água (14,7 mL) foi dissolvida enquanto era aquecida, e hidrogenocarbonato de sódio (130 mg) foi adicionado à mistura. Uma solução DMF (2 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura, e a mistura foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em quatro porções com o uso de água (2 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das quatro porções, e cada uma das quatro porções foi centrifugada a 7000 rpm por 3 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 10 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 50K. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 30K. A série de operações foi realizada mais duas vezes. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais uma vez. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas de 30K (2,1 mg). Um filtrado obtido por lavagem com o filtro Amicon 30K foi centrifugado a 5800 rpm por 30 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 10K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais seis vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas de 10K
(1,9 mg). Um filtrado obtido por lavagem com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais cinco vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (5,0 mg).
[0534] Exemplo 5:
[0535] Uma mistura de SNP-OA (20 mg), MEAA (0,5 mL) e metanol (1,5 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. Depois que a mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, acetona (8 mL) e hexano (32 mL) foram adicionados, e uma mistura resultante foi dividida em duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7300 rpm por 5 minutos a 10 °C para remover o sobrenadante. Essa operação foi repetida duas vezes com uso de acetona (6 mL) e hexano (24 mL), obtendo-se assim o SNP-MEAA.
[0536] Uma solução de 3-{[(3,4- dihidroxifenil)metil](dimetil) azaniumil}propano-1-sulfonato (250 mg), DMF (5 mL) e água (3,3 mL) foi dissolvida enquanto era aquecida, e hidrogenocarbonato de sódio (50 mg) foi adicionado à solução. Uma solução de DMF (1,7 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à solução e a mistura foi agitada durante 21,5 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em duas porções com o uso de água (3 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7300 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 10 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 50K. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K. PBS foi adicionado a este concentrado e uma mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Adicionou-se água a esta mistura resultante e centrifugou-se a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais sete vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (9,3 mg). Um filtrado obtido por lavagem realizada três vezes com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 30 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais cinco vezes. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (2,6 mg).
[0537] Exemplo 6:
[0538] Uma mistura de SNP-OA (100 mg), MEAA (2,5 mL) e metanol (7,5 mL) foi agitada durante 5 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. Foram adicionados acetona (24 mL) e hexano (96 mL), e uma mistura resultante foi dividida em seis porções, e cada uma das seis porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Assim, SNP-MEAA foi obtido.
[0539] Hidrogenocarbonato de sódio (900 mg) foi adicionado a uma mistura de 4-{[(2,3-dihidroxifenil)metil](dimetil) azaniumil}butano-1-sulfonato (1,31 g) e água (40 mL). Uma solução em DMF (8 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura, e a mistura foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio.
A mistura de reação foi dividida em seis porções com o uso de água (3 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das seis porções, e cada uma das seis porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante.
Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 30K.
Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K.
A série de operações foi realizada mais três vezes.
Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C.
Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K.
A série de operações foi realizada mais seis vezes.
Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C.
Essa operação foi realizada mais sete vezes.
O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (117,7 mg). Os filtrados obtidos através da lavagem com o filtro Amicon 10K foram sequencialmente centrifugados a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 3K.
Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C.
O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (53,2 mg). Observe-se que, como resultado da submissão das partículas purificadas 3K à hidrólise ácida com o uso de ácido clorídrico e da análise do hidrolisado ácido com HPLC, a presença de um ligante zwitteriônico, ou seja, 4-[(2,3-dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}butano-1-sulfonato foi confirmada. Assim, foi confirmado que o ligante zwitteriônico foi ligado à partícula 3K purificada por uma ligação coordenada.
[0540] As condições de HPLC foram as seguintes:
[0541] Coluna: YMC Triart C18
[0542] Eluente: hidrogenofosfato dipotássico 10 mM (pH 6,0)/acetonitrila (98:2)
[0543] Exemplo 7:
[0544] Uma mistura de SNP-OA (100 mg), MEAA (2,5 mL) e metanol (7,5 mL) foi agitada durante 5 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. Foram adicionados acetona (24 mL) e hexano (96 mL), e uma mistura resultante foi dividida em seis porções, e cada uma das seis porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Assim, SNP-MEAA foi obtido.
[0545] Hidrogenocarbonato de sódio (650 mg) foi adicionado a uma mistura de 3-{[(6-fluoro-2,3-dihidroxifenil)metil] (dimetil)azaniumil}propano-1-sulfonato (1,32 g) e água (40 mL). Uma solução DMF (8 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura, e a mistura foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em seis porções com o uso de água (3 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das seis porções, e cada uma das seis porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 30K. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K. A série de operações foi realizada mais três vezes. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K. A série de operações foi realizada mais sete vezes. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais quatro vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (102,4 mg). Os filtrados obtidos através da lavagem com o filtro Amicon 10K foram sequencialmente centrifugados a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (41,2 mg).
[0546] Exemplo 8:
[0547] Uma mistura de SNP-OA (20 mg), MEAA (0,5 mL) e metanol (1,5 mL) foi agitada durante 5 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e,
em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. Foram adicionados acetona (8 mL) e hexano (32 mL), e uma mistura resultante foi dividida em duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7000 rpm por 3 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Esta operação foi repetida mais uma vez para obter SNP-MEAA.
[0548] Hidrogenocarbonato de sódio (50 mg) foi adicionado a uma mistura de iodeto de N-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-N,N- dimetil-3-fosfonopropan-1-amínio (263 mg) e água (9,5 mL). Uma solução em DMF (0,5 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à solução e a mistura foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura reacional foi dispersa em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 30K. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K. A série de operações foi realizada mais três vezes. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais duas vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (3,0 mg). Um filtrado obtido por lavagem com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais duas vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (6,0 mg).
[0549] Exemplo 9:
[0550] Uma mistura de SNP-OA (20 mg), MEAA (0,5 mL) e metanol (1,5 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. Depois que a mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, acetona (8 mL) e hexano (32 mL) foram adicionados, e uma mistura resultante foi dividida em duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover o sobrenadante. Esta operação foi repetida uma vez com o uso de acetona (6 mL) e hexano (24 mL), e assim SNP-MEAA foi obtido.
[0551] Hidrogenocarbonato de sódio (122 mg) foi adicionado a uma solução de iodeto de 3-carboxi-N-[(2,3-dihidroxifenil) metil]-N,N-dimetilpropan-1-amínio (347 mg) e água (8 mL) . Uma solução em DMF (2 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura e a mistura foi agitada durante 17 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em duas porções com o uso de água (1 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 30K. PBS foi adicionado a isto e uma mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais uma vez. Os filtrados obtidos através do filtro Amicon 30K foram sequencialmente centrifugados a 5800 rpm por 30-60 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 10K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais 14 vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (23,2 mg). Um filtrado obtido através da lavagem realizada primeiro três vezes com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 30-60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais 13 vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (7,2 mg).
[0552] Exemplo 10:
[0553] Uma mistura de SNP-OA (20 mg), MEAA (0,5 mL) e metanol (1,5 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. Depois que a mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, acetona (8 mL) e hexano (32 mL) foram adicionados, e uma mistura resultante foi dividida em duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover o sobrenadante. Essa operação foi repetida uma vez com uso de acetona (6 mL) e hexano (24 mL), obtendo-se assim o SNP-MEAA.
[0554] Hidrogenocarbonato de sódio (123 mg) foi adicionado a uma solução de iodeto de 4-carboxi-N-[(2,3- dihidroxifenil)metil]-N,N-dimetilbutan-1-amínio (359 mg) e água (8 mL). Uma solução em DMF (2 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura e a mistura foi agitada durante 20 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em duas porções com o uso de água (1 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada uma das duas porções, e cada uma das duas porções foi centrifugada a 7000 rpm por
10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em PBS e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 30K. PBS foi ainda adicionado a isto e uma mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais uma vez. Os filtrados obtidos através do filtro Amicon 30K foram sequencialmente centrifugados a 5800 rpm por 30-60 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 10K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais 13 vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (24,2 mg). Um filtrado obtido por lavagem realizada primeiro quatro vezes com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 30-60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais 11 vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (8,8 mg).
[0555] Exemplo 11:
[0556] Hidrogenocarbonato de sódio (34 mg) foi adicionado a uma mistura de 4-{[(2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}butano-1-sulfonato (275 mg) e água (2,2 mL). Esta solução foi adicionada a uma mistura de SNP-OA (20 mg) e clorofórmio (2,5 mL) e, em seguida, uma mistura de tri-hidrato de TBAF (63 mg) e água (300 μL) foi adicionada e a mistura foi agitada por 16 horas em temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. Uma camada aquosa foi separada e uma camada de clorofórmio foi submetida a extração duas vezes com água. A camada aquosa foi recolhida e dispersa em PBS, colocada num filtro Amicon 30K e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 15 minutos a 10 °C. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K. A série de operações foi realizada mais três vezes. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 15 minutos a 10 °C. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 10K. A série de operações foi realizada mais duas vezes. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais cinco vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (30,3 mg). Os filtrados obtidos através da lavagem com o filtro Amicon 10K foram sequencialmente centrifugados a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com o uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (17,8 mg).
[0557] Exemplo 12:
[0558] 3-{[(6-fluoro-2,3-dihidroxifenil)metil] (dimetil)azaniumil}propano-1-sulfonato (280 mg) foi dissolvido em água (2,2 mL) e foi adicionado hidrogenocarbonato de sódio (38 mg) à solução. Esta solução foi adicionada a uma solução de SNP-OA (20 mg) e clorofórmio (2,5 mL), e uma solução de tri-hidrato de TBAF (65 mg) e água (0,3 mL) foi em seguida adicionada. A mistura resultante foi agitada durante 20 horas à temperatura ambiente em atmosfera de argônio. Filtrou-se um material insolúvel e colocou-se uma camada aquosa num filtro Amicon 30K e centrifugou-se a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. PBS foi adicionado a isto e uma mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Um filtrado obtido por lavagem realizada duas vezes com o filtro Amicon 30K foi centrifugado a 5800 rpm por 30 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 10K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais 12 vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (13,5 mg). Um filtrado obtido por lavagem realizada cinco vezes com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 30-60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais nove vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (7,3 mg).
[0559] Exemplo 13:
[0560] Dissolveu-se iodeto de 3,4-di-hidroxi-N,N- dimetil-N-(3-fosfonopropil)anilínio (265 mg) em água (2,4 mL). A esta solução aquosa, foi adicionada uma solução de hidrogenocarbonato de sódio (100 mg), tri-hidrato de TBAF (67 mg) e água (0,3 mL). Esta solução foi adicionada a uma solução de SNP-OA (20 mg) e clorofórmio (2,5 mL) e enxaguada com água (0,6 mL). A mistura resultante foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente em atmosfera de argônio. Filtrou-se um material insolúvel e colocou-se uma camada aquosa num filtro Amicon 100K e centrifugou-se a 5800 rpm durante 15 minutos a 10 °C. Um filtrado resultante foi centrifugado a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 10K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais oito vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (1,0 mg). Um filtrado obtido por lavagem realizada duas vezes com o filtro Amicon 10K foi centrifugado a 5800 rpm por 30-60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água a esta mistura e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais sete vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas de 3K (1,4 mg).
[0561] Exemplo 18:
[0562] Uma mistura de SNP-OA (150 mg), MEAA (3,75 mL) e metanol (11,25 mL) foi agitada durante 5 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi dividida em seis tubos de centrífuga e acetona (4 mL) e hexano (16 mL) foram adicionados a cada um dos seis tubos de centrífuga, e cada um dos seis tubos de centrífuga foi centrifugado a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Esta operação foi repetida mais uma vez para obter SNP-MEAA.
[0563] Uma mistura de 2-{[2-(2,3- dihidroxifenil)etil](dimetilazaniumil} etano-1-sulfonato (1,97 g), água (25 mL) e hidrogenocarbonato de sódio (370 mg) foi agitada em temperatura ambiente. Uma solução em DMF (12,5 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura, e a mistura foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em seis tubos de centrífuga com o uso de água (3 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada um dos seis tubos de centrífuga, e cada um dos seis tubos de centrífuga foi centrifugado a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover o sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em água e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 30K. Adicionou-se água a esta mistura resultante e centrifugou-se a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais duas vezes. Os filtrados obtidos através do filtro Amicon 30K foram em seguida centrifugados a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 10K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Essa operação foi realizada mais oito vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (16,1 mg). Os filtrados obtidos através do filtro Amicon 10K foram sequencialmente centrifugados a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C.
O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (56,0 mg).
[0564] Exemplo 25:
[0565] Uma mistura de SNP-OA (150 mg), MEAA (3,8 mL) e metanol (11,3 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi dividida em quatro tubos de centrífuga com acetona (28 mL) e hexano (28 mL) foi adicionado a cada um dos quatro tubos de centrífuga, e cada um dos quatro tubos de centrífuga foi centrifugado a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Acetona (7 mL) e hexano (28 mL) foram adicionados, e cada uma das misturas resultantes foi centrifugada a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Esta ação foi repetida mais uma vez para obter SNP-MEAA.
[0566] Uma mistura de iodeto de 4-(carboximetil)- 1-[(2,3-dihidroxifenil)metil]-1-metilpiperidin-1-io (2,77 g) e água (60 mL) foi dissolvida enquanto era aquecida, e hidrogenocarbonato de sódio (1,39 g) foi adicionado à mistura. Uma solução em DMF (15 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura, e a mistura foi agitada durante 42 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em 12 tubos de centrífuga com o uso de água (3 mL), acetona (40 mL) foi adicionada a cada um dos 12 tubos de centrífuga, e cada um dos 12 tubos de centrífuga foi centrifugado a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em água e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 30K. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais uma vez. Adicionou-se água ao líquido concentrado sobre o filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais quatro vezes. Os filtrados resultantes foram colocados sequencialmente num filtro Amicon 10K e cada um deles foi centrifugado a 5800 rpm a 10 °C durante 30 minutos nas primeiras duas vezes e depois durante 60 minutos nas seis vezes subsequentes. Água foi na sequência adicionada ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K, e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais 14 vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (96,0 mg). Os filtrados obtidos com o uso do filtro Amicon 10K foram colocados sequencialmente em um filtro Amicon 3K e cada um deles foi centrifugado a 5800 rpm a 10 °C por 30 minutos na primeira vez e depois por 60 minutos nas 13 vezes subsequentes. Água foi em seguida adicionada ao líquido concentrado no filtro Amicon 3K, e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais sete vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (121 mg).
[0567] Exemplo 26:
[0568] Uma mistura de SNP-OA (150 mg), MEAA (3,8 mL) e metanol (11 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi dividida em quatro tubos de centrífuga com acetona (28 mL) e hexano (28 mL) foi adicionado a cada um dos quatro tubos de centrífuga, e cada um dos quatro tubos de centrífuga foi centrifugado a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Acetona (7 mL) e hexano (28 mL) foram adicionados a cada um destes, e cada uma das misturas resultantes foi centrifugada a 7000 rpm durante 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Esta operação foi repetida mais uma vez para obter SNP- MEAA.
[0569] Uma mistura de iodeto de 4-carboxi-1- [(2,3-dihidroxifenil)metil]-1-metilpiperidin-1-io (2,68 g) e água (60 mL) foi dissolvida enquanto era aquecida, e hidrogenocarbonato de sódio (832 mg) foi adicionado à mistura. Uma solução em DMF (15 mL) do SNP- MEAA acima foi adicionada à mistura e a mistura foi agitada durante 42 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em 12 tubos de centrífuga com o uso de água (3 mL), acetona (40 mL) foi adicionada a cada um dos 12 tubos de centrífuga, e cada um dos 12 tubos de centrífuga foi centrifugado a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover o sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em água e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 30K. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais uma vez. Adicionou-se água ao líquido concentrado no filtro Amicon 30K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais quatro vezes. Os filtrados resultantes foram colocados sequencialmente em um filtro Amicon 10K, e cada um deles foi centrifugado a 5800 rpm a 10 ° C por 30 minutos nas primeiras duas vezes e depois por 60 minutos nas seis vezes subsequentes. Água foi adicionalmente adicionada ao líquido concentrado no filtro Amicon 10K e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais 14 vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (62,5 mg). Os filtrados obtidos com o uso do filtro Amicon 10K foram sequencialmente colocados em um filtro Amicon 3K e cada um deles foi centrifugado a 5800 rpm a 10 °C por 30 minutos no primeiro tempo e depois por 60 minutos nas 13 vezes subsequentes. Água foi na sequência adicionada ao líquido concentrado no filtro Amicon 3K, e a mistura resultante foi centrifugada a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi repetida mais sete vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (74,1 mg).
[0570] Exemplo 27:
[0571] Uma mistura de SNP-OA (150 mg), MEAA (3,75 mL) e metanol (11,25 mL) foi agitada durante 6 horas a 70 °C em uma atmosfera de argônio. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi dividida em seis tubos de centrífuga e acetona (4 mL) e hexano (16 mL) foram adicionados a cada um dos seis tubos de centrífuga, e cada um dos seis tubos de centrífuga foi centrifugado a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Esta operação foi repetida mais uma vez para obter SNP-MEAA.
[0572] Uma mistura de iodeto de 3-carboxi-N-[2- (2,3-di-hidroxifenil)etil]-N,N-dimetilpropan-1-amínio (2,69 g), água (25 mL) e hidrogenocarbonato de sódio (1,24 g ) foi agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. Uma solução em DMF (12,5 mL) do SNP-MEAA acima foi adicionada à mistura e a mistura foi agitada durante 41 horas à temperatura ambiente em uma atmosfera de argônio. A mistura de reação foi dividida em seis tubos de centrífuga com o uso de água (3 mL), acetona (30 mL) foi adicionada a cada um dos seis tubos de centrífuga, e cada um dos seis tubos de centrífuga foi centrifugado a 7000 rpm por 10 minutos a 10 °C para remover um sobrenadante. Um precipitado resultante foi disperso em água e a mistura foi centrifugada a 5800 rpm durante 30 minutos a 10 °C com a utilização de um filtro Amicon 30K. Adicionou-se água a esta mistura resultante e centrifugou-se a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais duas vezes. Os filtrados obtidos através do filtro Amicon 30K foram sequencialmente centrifugados a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 10K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. Esta operação foi realizada mais 10 vezes. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 10K (17,6 mg). Os filtrados obtidos através do filtro Amicon 10K foram sequencialmente centrifugados a 5800 rpm por 60 minutos a 10 °C com uso de um filtro Amicon 3K. Adicionou-se mais água e centrifugou-se a mistura resultante a 5800 rpm durante 60 minutos a 10 °C. O líquido concentrado foi filtrado com uma membrana (0,2 μm) e liofilizado para obter partículas purificadas 3K (116 mg).
[0573] As fórmulas estruturais e os dados físico- químicos dos compostos dos Exemplos de Produção e as nanopartículas dos Exemplos acima são mostrados nas tabelas abaixo.
[0574] Tabela 1
[0575]
[0576] Tabela 2
[0577]
[0578] Tabela 3
[0579]
[0580] Tabela 4
[0581]
[0582] Tabela 5
[0583]
[0584] Tabela 6
[0585]
[0586] Tabela 7
[0587]
[0588] Tabela 8
[0589]
[0590] Tabela 9
[0591]
[0592] Tabela 10
[0593]
[0594] Tabela 11
[0595]
[0596] Tabela 12
[0597]
[0598] Tabela 13
[0599]
[0600] Tabela 14
[0601]
[0602] Tabela 15
[0603]
[0604] Tabela 16
[0605]
[0606] Tabela 17
[0607]
[0608] Tabela 18
[0609]
[0610] Tabela 19
[0611]
[0612] Tabela 20
[0613]
[0614] Em seguida, as nanopartículas da fórmula (I) obtidas nos Exemplos acima foram avaliadas como segue.
[0615] Exemplo de teste 1. Medição avaliativa da relaxividade de RM da nanopartícula:
[0616] Foi avaliada uma relaxividade de partículas purificadas 3K obtidas em cada Exemplo.
[0617] Primeiro, a concentração de nanopartículas foi diluída em série em PBS para preparar as amostras de teste. Para cada amostra, a relaxividade foi medida por RMN de 1,5 T.
[0618] T1 e T2 foram medidos nas seguintes condições:
[0619] Campo magnético de medição: 1,5 T; Temperatura de medição: 37 °C;
[0620] Medição T1 (recuperação de inversão):
[0621] Retardo de reciclagem (RD): Definida para ser 5 vezes ou mais de T1 para cada amostra e para cada concentração. O número de pontos de dados obtidos foi de 8 ou mais, um tempo inicial de pulso de inversão (tempo de inversão) foi fixado em 5 ms e um último tempo de inversão foi definido como idêntico a RD;
[0622] Medição T2 (Carr-Purcell-Meiboom-Gill (CPMG)):
[0623] Retardo de reciclagem (RD): Definido para ser idêntico ao RD de T1. τ = 0,5 ms, e o número de pontos de dados obtidos foi definido de modo que o número de τ x 2 x pontos de dados tornou-se substancialmente idêntico ao RD.
[0624] r1 e r2 de cada amostra foram obtidos medindo respectivamente T1 e T2 em diferentes concentrações, e calculando inclinações com a função SLOPE, onde o eixo X indica a concentração e o eixo Y indica os recíprocos de T1 e T2.
[0625] A tabela abaixo mostra os resultados. Observe-se que "NT" na tabela é uma abreviatura para "Não Testado".
[0626] Tabela 21
[0627]
[0628] O símbolo "*" representa que o valor é indicado como uma faixa de valores obtidos porque a relaxividade foi medida para as nanopartículas que foram repetidamente produzidas uma pluralidade de vezes com um método semelhante ao do Exemplo.
[0629] Os valores de r1/r2 das partículas purificadas 3K foram de 0,86 a 0,93 e 0,90 a 0,95, respectivamente, no Exemplo 6 e no Exemplo 11, que empregaram os ligantes zwitteriônicos idênticos que foram coordenadamente ligados e empregaram métodos diferentes para a produção de nanopartículas. Os valores de r1/r2 das partículas purificadas 3K foram de 0,88 a 0,90 e 0,87 a 0,92, respectivamente, no Exemplo 7 e no Exemplo 12, que empregaram os ligantes zwitteriônicos idênticos que foram coordenadamente ligados e empregaram métodos diferentes para a produção de nanopartículas. A partir deste resultado, foi confirmado que as nanopartículas com boas relaxividades substancialmente equivalentes podem ser obtidas por qualquer um desses métodos de produção.
[0630] As partículas purificadas 3K que continham os mesmos ligantes zwitteriônicos e foram obtidas por uma pluralidade de produções no Exemplo 6 e Exemplo 11 acima tinham valores de relaxividade r1 entre 2,74 e 3,76, e valores de relaxividade r 2 entre 3,06 e 4,18.
[0631] Da mesma forma, as partículas purificadas 3K que continham os mesmos ligantes zwitteriônicos e foram obtidas por uma pluralidade de produções no Exemplo 7 e Exemplo 12 acima tinham valores de relaxividade r 1 entre 3,02 e 3,85, e valores de relaxividade r 2 entre 3,27 e 4,17.
[0632] Além disso, as partículas purificadas 10K que continham os mesmos ligantes zwitteriônicos e foram obtidas por uma pluralidade de produções no Exemplo 6 e Exemplo 11 tinham valores de relaxividade r1 entre 3,19 e 4,15, valores de relaxividade r 2 entre 3,43 e 4,41, e valores r1/r2 entre 0,86-0,94.
[0633] Da mesma forma, as partículas purificadas 10K que continham os mesmos ligantes zwitteriônicos e foram obtidas por uma pluralidade de produções no Exemplo 7 e Exemplo 12 tinham valores de relaxividade r 1 entre 3,38 e 4,84, valores de relaxividade r 2 entre 3,77 e 6,14, e valores de r 1/r2 entre 0,71-0,94.
[0634] Além disso, como resultado da avaliação de uma relaxividade de partículas purificadas 10K do Exemplo 18, um valor de relaxividade r 1 foi de 2,52, um valor de relaxividade r 2 foi de 3,02 e um valor de r1/r2 foi de 0,83.
[0635] Além disso, como resultado da avaliação de uma relaxividade de partículas purificadas 10K do Exemplo 25, os valores de relaxividade r 1 estavam entre 3,72 e 4,04, os valores de relaxividade r 2 estavam entre 4,3 e 4,48 e os valores r 1/r2 estavam entre 0,83-0,94.
[0636] Como resultado da avaliação de uma relaxividade de partículas purificadas 3K do Exemplo 18, os valores de relaxividade r1 estavam entre 2,93 e 2,94, e os valores de relaxividade r 2 estavam entre 3,13 e 4,09.
[0637] Como resultado da avaliação de uma relaxividade de partículas purificadas 3K do Exemplo 25, os valores de relaxividade r1 estavam entre 3,18 e 3,43, e os valores de relaxividade r2 estavam entre 3,30 e 3,52.
[0638] Esses valores são os mais altos entre os valores obtidos com SNPs convencionalmente relatados, incluindo uma partícula de óxido de ferro como núcleo, após a correção da força do campo magnético. Isso indica que as nanopartículas são nanopartículas promissoras para serem utilizadas como agente de contraste positivo.
[0639] Exemplo de teste 2. Teste avaliativo do diâmetro da partícula da nanopartícula:
[0640] Um tamanho relativo de nanopartículas foi medido com cromatografia de exclusão por tamanho (SEC).
[0641] SEC é uma técnica de análise em que (i) faz- se com que uma amostra flua através de uma coluna preenchida com um transportador com poros e (ii) um tamanho da amostra é estimado com base no tempo necessário para que a amostra seja descarregada da coluna. Grandes agregados não entram nos poros do transportador e, portanto, são rapidamente descarregados da coluna. Pequenas nanopartículas passam pelos poros do transportador e, portanto, são lentamente descarregadas da coluna devido a seguir uma rota mais longa antes de serem descarregadas da coluna. Assim, é possível medir um tamanho relativo pelo uso de partículas padrão.
[0642] As nanopartículas purificadas 3K e as nanopartículas purificadas 10K produzidas pelo método MEAA do Exemplo 6, as nanopartículas purificadas 3K e as nanopartículas purificadas 10K do Exemplo 11 que foram produzidas pelo método de catalisador de transferência de fase com uso do mesmo ligante zwitteriônico do Exemplo 6, as nanopartículas purificadas 3K e nanopartículas purificadas 10K produzidas pelo método MEAA do Exemplo 7, e as nanopartículas purificadas 3K e nanopartículas purificadas 10K do Exemplo 12 que foram produzidas pelo método de catalisador de transferência de fase com uso do mesmo ligante zwitteriônico do Exemplo 7 foram submetidas à medição sob as condições da SEC a seguir. A medição foi realizada duas vezes. Da mesma forma, as nanopartículas purificadas 3K e as nanopartículas purificadas 10K produzidas pelo método MEAA dos Exemplos 18, 25 e 26 foram submetidas à medição nas condições SEC a seguir. A medição foi realizada duas vezes.
[0643] Condições SEC:
[0644] Taxa de fluxo: 0,3 mL/min
[0645] Eluente: PBS (pH 7,4)
[0646] Coluna: Shodex KW403-4F (4,6 x 300 mm)
[0647] Detetor: UV 280 nm
[0648] A tabela abaixo mostra os resultados. Observe que o tempo de escoamento da ovalbumina, que é uma amostra autêntica, é de 9,4 a 10,2 minutos.
[0649] Tabela 22:
[0650]
[0651] Dos resultados acima, foi confirmado, a partir dos tempos de fluxo de SEC, que poderiam ser obtidas nanopartículas que tinham diâmetros de partícula substancialmente equivalentes, mesmo com métodos de produção diferentes. A partir do tempo de escoamento e da razão para ovalbumina (tamanho de partícula: 6,1 nm), que é a amostra autêntica, foi confirmado que as nanopartículas obtidas tinham diâmetros de partícula relativamente menores.
[0652] Exemplo de teste 3. Teste de avaliação de estabilidade:
[0653] Para que um agente de contraste contendo nanopartículas exiba um desempenho esperado, é necessário que as nanopartículas sejam dispersas de forma estável em uma solução. Também é desejável que a dispersão das nanopartículas seja mantida por um longo período de tempo, mesmo em um estado onde as nanopartículas estão contidas em uma alta concentração.
[0654] Em geral, uma estabilidade de dispersão de nanopartículas pode ser avaliada pelo uso de cromatografia por exclusão de tamanho (SEC).
[0655] A fim de confirmar a estabilidade das nanopartículas, as nanopartículas obtidas nos Exemplos acima foram liofilizadas e, em seguida, foram dispersas em PBS de modo a atingir uma concentração de íons Fe de aproximadamente 100 mM. Uma solução assim obtida foi usada como amostra de teste. As amostras de teste foram deixadas em repouso a -20 °C, a 4 °C e à temperatura ambiente (20 °C), respectivamente. 2 semanas, 1 mês e 3 meses depois, cada uma das amostras de teste foi submetida a SEC para verificar um grau de aglomeração. As condições de medição de SEC foram semelhantes às descritas no Exemplo de Teste 2.
[0656] Exemplo de teste 4. Imagem de contraste de IRM usando camundongo:
[0657] Os agentes de contraste contendo as nanopartículas obtidas nos Exemplos foram cada um administrado a um camundongo, e as imagens ponderadas em T1 foram obtidas com o uso de um aparelho de IRM de 1 T. As condições de medição foram as seguintes:
[0658] Animal: camundongo C57BL/6j jms, macho, com peso corporal de aproximadamente 25 g;
[0659] Concentração de nanopartículas administradas: 20 mM;
[0660] Quantidade de administração: 100 μL por peso corporal de 20 g;
[0661] Força do campo magnético: 1 T;
[0662] Método de imagem: ponderado em T1 (Figs. 1 a 6), Aparelho usado: ICON disponível da Bruker;
[0663] <ICON disponível da Bruker>;
[0664] Imagem ponderada em T1;
[0665] Sequência de pulso: MSME (Multi Slice Multi Echo), Orientação dos cortes = Axial, TE/TR = 10,464/400 mseg, Campo de visão = 40 × 40 mm 2, tamanho da matriz = 256 × 256, Número de cortes = 15, Espessura do corte = 1 mm, intervalo entre cortes = 2 mm, Número de médias = 8, tempo de rastreamento = 13 min 39 s.
[0666] A imagem foi realizada antes da administração do agente de contraste (pré) e, em seguida, a solução 20 mM do agente de contraste contendo nanopartículas foi administrada por via intravenosa por 100 μL por peso corporal de camundongo de 20 g. A imagem foi realizada em diferentes pontos de tempo decorridos para conduzir a observação de acompanhamento até 1,5 horas após a administração.
[0667] Os resultados são mostrados nas Figs. 1 a 6.
[0668] No camundongo ao qual o agente de contraste contendo as partículas purificadas 3K do Exemplo 6 na Fig. 1 foi administrado, o aumento dos sinais da pelve renal e do córtex renal e o acúmulo de urina contendo o agente de contraste foram observados imediatamente após a administração. Esses fatos sugerem que o agente de contraste foi excretado na urina pelo rim. Mais ainda, a observação dessas mudanças nos sinais sugere que o agente de contraste pode ser potencialmente usado em um teste de função renal.
[0669] No camundongo ao qual o agente de contraste contendo as partículas purificadas 10K do Exemplo 6 na Fig. 2 foi administrado, o aumento dos sinais da pelve renal e do córtex renal e o acúmulo de urina contendo o agente de contraste foram observados imediatamente após a administração. Esses fatos sugerem que o agente de contraste foi excretado na urina pelo rim. Além disso, a observação dessas mudanças nos sinais sugere que o agente de contraste pode ser potencialmente usado em um teste de função renal.
[0670] No camundongo ao qual o agente de contraste contendo as partículas purificadas 3K do Exemplo 7 na Fig. 3 foi administrado, o aumento dos sinais da pelve renal e do córtex renal e o acúmulo de urina contendo o agente de contraste foram observados imediatamente após a administração. Esses fatos sugerem que o agente de contraste foi excretado na urina pelo rim. Além disso, a observação dessas mudanças nos sinais sugeriu que o agente de contraste pode ser potencialmente usado em um teste de função renal.
[0671] No camundongo ao qual o agente de contraste contendo as partículas purificadas 10K do Exemplo 7 na Fig. 4 foi administrado, o aumento dos sinais da pelve renal e do córtex renal e o acúmulo de urina contendo o agente de contraste foram observados imediatamente após a administração. Esses fatos sugerem que o agente de contraste foi excretado na urina pelo rim. Além disso, a observação dessas mudanças nos sinais sugere que o agente de contraste pode ser potencialmente usado em um teste de função renal.
[0672] No camundongo ao qual o agente de contraste contendo as partículas purificadas 3K do Exemplo 25 na Fig. 5 foi administrado, o aumento dos sinais da pelve renal e do córtex renal e o acúmulo de urina contendo o agente de contraste foram observados imediatamente após a administração. Esses fatos sugerem que o agente de contraste foi excretado na urina pelo rim. Além disso, a observação dessas mudanças nos sinais sugeriu que o agente de contraste pode ser potencialmente usado em um teste de função renal.
[0673] No camundongo ao qual o agente de contraste contendo as partículas purificadas 10K do Exemplo 25 na Fig. 6 foi administrado, o aumento dos sinais da pelve renal e do córtex renal e o acúmulo de urina contendo o agente de contraste foram observados imediatamente após a administração. Esses fatos sugerem que o agente de contraste foi excretado na urina pelo rim. Além disso, a observação dessas mudanças nos sinais sugere que o agente de contraste pode ser potencialmente usado em um teste de função renal.
[0674] Exemplo de teste 5. Medição da dependência do campo magnético da magnetização (curva M-H):
[0675] As partículas purificadas 3K obtidas nos Exemplos 6, 7 ou 9 foram colocadas no SQUID, o campo magnético aplicado foi alterado para 3 T, -3 T e 3 T nesta ordem em intervalos de 1000 a 5000 Oe a uma temperatura de 300K e magnetização de partículas em cada ponto foi medida.
[0676] O resultado da medição é mostrado na Fig.
7. O resultado mostrou o seguinte: a susceptibilidade magnética é substancialmente proporcional ao campo magnético. A propriedade como substância super-paramagnética parece ser baixa, e o agente de contraste, mesmo na forma de nanopartículas, tem propriedade paramagnética, e espera-se que tenha um excelente efeito de encurtamento de T1 na região prática do campo magnético.
[0677] Aplicabilidade Industrial:
[0678] O agente de contraste para IRM da presente invenção pode ser usado adequadamente como um agente de contraste para IRM no campo médico. A nanopartícula e o composto de ligante zwitteriônico da presente invenção são aplicáveis a várias composições farmacêuticas e semelhantes, incluindo um agente de contraste para IRM, e podem ser amplamente utilizados nos campos de produtos farmacêuticos, biotecnologia e semelhantes, incluindo vários métodos de diagnóstico e reagentes de exame.

Claims (26)

REIVINDICAÇÕES
1. “NANOPARTÍCULA”, caracterizada por pelo menos um ligante zwitteriônico representado pela fórmula (I); e uma partícula de me tal contendo óxido de ferro, o pelo menos um ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado à partícula de metal: onde: um dos R1 e R2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b), e o outro de R 1 e R 2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio , X 1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo represent ado pela fórmula (a) , X2 é alquileno C1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é -alquileno C 1 - 2 -O- alquileno C 1 - 3 -, ou X 2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b) , R a e R b são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1 - 3 ou -alquileno C 1 - 3 -O-alquil C 1 - 2 , ou R a e R b formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e R b estão ligados , Y - é SO 3 - , HPO 3 - ou CO 2 - , R 3 e R 4 são iguais ou diferentes uns dos outros e representam H, alquil C 1 - 3 , -O-alquil C 1 - 3 ou halogênio, n é um número inteiro de 0 a 2; e, i. quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R 2 forma opcionalmente etileno juntamente com R a ou R b , ii. quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R 2 forma opcionalmente metileno juntamente com R a ou R b , e iii. quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R 3 opcionalmente forma etileno juntamente com R a ou R b , desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), R a e R b são metil, X 1 é uma ligação, X 2 é alquileno C 1 - 4 e R 1 , R 3 e R 4 são H, Y - é HPO 3 - ou CO 2 - .
2. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, um grupo entre R 1 e R 2 ser um grupo representado pela fórmula (a) ou fórmula (b), e o outro grupo entre e R 1 e R 2 ser H, alquil inferior ou halogênio, X 1 ser uma ligação ou metileno, ou X 1 ser opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a), X2 ser alquileno C1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou ser -alquileno C 1 - 2 -O- alquileno C 1 - 3 -, ou X 2 ser opcionalmente uma ligação quan do R 1 for um grupo representado pela fórmula (b), R a e R b serem iguais ou diferentes uns dos outros e representarem alquil C 1 - 3 ou -alquileno C 1 - 3 -O-alquil C 1 - 2 , ou R a e R b formarem um anel de pirrolidina juntamente com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e R b estão ligados, Y - ser SO 3 - , HPO 3 - ou CO 2 - , R 3 e R 4 serem iguais ou diferentes um do outro e representarem H, alquil C 1 - 3 ou halogênio, n ser 1, e, quando R 1 for um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 for metileno, R 2 formar opcionalmente etileno em conjunto com R a ou R b .
3. “NANOPARTÍCULA ”, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, R 1 ser um grupo representado pela fórmula (a) ou fórmula (b), e R 2 ser H ou halogênio, X 1 ser uma ligação ou metileno, ou X 1 ser opcionalmente etileno quando R 1 for um grupo representado pela fórmula (a), X 2 ser alquileno C 1 - 5 , ou X 2 ser opcionalmente uma ligação quando R 1 for um grupo representado pela fórmula (b), R a e R b serem metil, e Y - ser SO 3 - ou CO 2 - .
4. “NANOPARTÍCULA ”, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, um grupo entre R 1 e R 2 ser um grupo representado pela fórmula (a) e o outro grupo entre R 1 e R 2 ser H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio.
5. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, i. R 1 ser um grupo representado pela fórmula (a), e R 2 ser H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio, ou ii. R1 ser H, R2 ser um grupo representado pela fórmula (a), R 3 ser C 1 - 3 alquil ou halogênio, e R 4 ser H.
6. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada por, n o dito pelo menos um ligante zwitteriônico, R 1 ser um grupo representado pela fórmula
(a) e R 2 ser H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio.
7. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, R 2 ser H ou halogênio, X 1 ser uma ligação, metileno ou etileno, X 2 ser alquileno C 2 - 4 , R a e R b serem metil, R 3 e R 4 serem iguais ou diferentes um do outro e representarem H, alquil C 1 - 3 ou halogênio, e, quando X 1 for metileno, R 2 formar opcionalmente etileno juntamente com R a ou R b .
8. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, R 2 ser H ou F, X 2 ser etileno ou propileno, e R 3 e R 4 serem H.
9. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, R 2 ser H, e X 1 ser uma ligação ou etileno.
10. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 9, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, Y - ser SO 3 - ou CO 2 - .
11. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por: no dito pelo menos um ligante zwitteriônico, R 1 ser um grupo representado pela seguinte fórmula (b -1), R 2 ser H ou halogênio, X 1 ser uma ligação ou metileno, X 2 ser alquileno C 1 - 5 ou uma ligação, R a ser metil, e Y - ser SO 3 - ou CO 2 - .
12. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada por a partícula de metal conter apenas óxido de ferro.
13. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada por , o dito pelo menos um ligante zwitteriônico estar coordenadamente ligado a uma superfície externa da partícula de metal contendo óxido de ferro , e a partícula de metal ser revestida com pelo menos um ligante zwitteriônico.
14. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada por , a referida nanopartícula ser um compósito compreendendo pelo menos um ligante zwitteriônico e a partícula de metal contendo óxido de ferro, o dito pelo menos um ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado à partícula de metal.
15. “NANOPARTÍCULA”, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada por a referida nanopartícula ser um grupo compreendendo dois ou mais compostos de ligante zwitteriônico e duas ou mais partículas de metal, cada uma das duas ou mais partículas de metal contendo óxido de ferro, e pelo menos um composto de ligante zwitteriônico sendo coordenadamente ligado a cada uma das duas ou mais partículas de metal.
16. “AGENTE DE CONTRASTE PARA IMAGEM POR RESSONÂNCIA MAGNÉTICA ”, caracterizado por compreender uma nanopartícula citada em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.
17. “AGENTE DE CONTRASTE PARA IMAGEM POR RESSONÂNCIA MAGNÉTICA ”, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por , o referido agente de contraste ser um agente de contraste positivo.
18. “USO DE UM COMPOSTO DE LIGANTE ZWITTERIÔNICO”, caracterizado pela seguinte fórmula (I) para a produção de uma nanopartícula recitada na reivindicação 1:
Onde: um grupo entre R 1 e R 2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b) abaixo, e o outro grupo entre R 1 e R 2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio,
X 1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a), X2 é alquileno C1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é -alquileno C 1 - 2 -O- alquileno C 1 - 3 -, ou X 2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b), R a e R b são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1 - 3 ou -alquileno C 1 - 3 -O-alquil C 1 - 2 , ou R a e R b formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e R b estão ligados, Y - é SO 3 - , HPO 3 - ou CO 2 - , R 3 e R 4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1 - 3 , -O-alquil C 1 - 3 ou halogênio, n é um número inteiro de 0 a 2,e, i. quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R 2 forma opcionalmente etileno juntamente com R a ou R b , ii. quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R 2 forma opcionalmente metileno juntamente com R a ou R b , e iii. quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R 3 opcionalmente forma etileno juntamente com R a ou R b , desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), R a e R b são metil, X 1 é uma ligação, X 2 é C 1 - 4 alquileno e R 1 , R 3 e R 4 são H, Y - é HPO 3 - ou CO 2 - .
19. “USO DE UM COMPOSTO DE LIGANTE ZWITTERIÔNICO”, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por, no composto de ligante zwitteriônico, um grupo entre R 1 e R 2 ser um grupo representado pela fórmula (a) e o outro grupo entre R 1 e R 2 ser H, alquil inferior , -O-inferior alquil ou halogênio.
20. “COMPOSTO”, caracterizado pela seguinte fórmula (I) ou um sal do mesmo:
Onde: um grupo entre R 1 e R 2 é um grupo representado por uma fórmula (a) ou uma fórmula (b) abaixo, e o outro grupo entre R 1 e R 2 é H, alquil inferior, -O-alquil inferior ou halogênio,
X 1 é uma ligação ou metileno, ou X 1 é opcionalmente etileno quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a), X2 é alquileno C1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou é -alquileno C 1 - 2 -O- alquileno C 1 - 3 -, ou X 2 é opcionalmente uma ligação quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (b), R a e R b são iguais ou diferentes um do outro e representam alquil C 1 - 3 ou -alquileno C 1 - 3 -O-alquil C 1 - 2 , ou R a e R b formam um heterocíclico saturado de 5 ou 6 membros contendo nitrogênio em conjunto com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e R b estão ligados, Y - é SO 3 - , HPO 3 - ou CO 2 - ,
R 3 e R 4 são iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1 - 3 , -O-alquil C 1 - 3 ou halogênio, n é um número inteiro de 0 a 2,e, i. quando R 1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R 2 forma opcionalmente etileno juntamente com R a ou R b , ii. quando R1 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é etileno, R 2 forma opcionalmente metileno juntamente com R a ou R b , e iii. quando R2 é um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 é metileno, R 3 opcionalmente forma etileno juntamente com R a ou R b , desde que, quando R 2 é um grupo representado pela fórmula (a), R a e R b são metil, X 1 é uma ligação, X 2 é alquileno C 1 - 4 e R 1 , R 3 e R 4 são H, Y - é HPO 3 - ou CO 2 - .
21. “COMPOSTO”, de acordo com a reivindicação 20 ou um sal do mesmo, caracterizado por: um grupo entre R 1 e R 2 ser um grupo representado pela fórmula (a) ou fórmula (b), e o outro grupo entre R 1 e R 2 ser H, alquil inferior ou halogênio, X 1 ser uma ligação ou metileno, ou X 1 ser opcionalmente etileno quando R 1 for um grupo representado pela fórmula (a), X2 ser alquileno C1-5 que está opcionalmente substituído com OH ou ser -alquileno C 1 - 2 -O-
alquileno C 1 - 3 -, ou X 2 ser opcionalmente uma ligação quando R 1 for um grupo representado pela fórmula (b), R a e R b serem iguais ou diferentes uns dos outros e representarem alquil C 1 - 3 ou -alquileno C 1 - 3 -O-alquil C 1 - 2 , ou R a e R b formarem um anel de pirrolidina juntamente com um átomo de nitrogênio quaternário ao qual R a e R b estão ligados, Y - ser SO 3 - , HPO 3 - ou CO 2 - , R 3 e R 4 serem iguais ou diferentes um do outro e representam H, alquil C 1 - 3 ou halogênio, n ser 1, e, quando R 1 for um grupo representado pela fórmula (a) e X 1 for metileno, R 2 formar opcionalmente etileno em conjunto com R a ou R b .
22. “COMPOSTO”, de acordo com a reivindicação 21 ou um sal do mesmo, caracterizado por: R 1 ser um grupo representado pela fórmula (a) ou fórmula (b), e R 2 ser H ou halogênio, X 1 ser uma ligação ou metileno, ou X 1 ser opcionalmente etileno quando R 1 for um grupo representado pela fórmula (a), X 2 ser alquileno C 1 - 5 , ou X 2 ser opcionalmente uma li gação quando R 1 for um grupo representado pela fórmula (b), R a e R b serem metil, e Y - ser SO 3 - ou CO 2 - .
23. “COMPOSTO”, de acordo com a reivindicação 20 ou um sal do mesmo, caracterizado por um grupo entre R 1 e R 2 ser um grupo representado pela fórmula (a) e o outro grupo entre R 1 e R 2 ser H, alquil inferior, -O-alquil inferior, ou halogênio
24. “COMPOSTO”, de acordo com a reivindicação 20, ou um sal do mesmo, o qual é selecionado a partir do grupo que consiste e m: 4-{[(2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}butano -1-sulfonato, 3-{[(6-fluoro-2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil} propano -1-sulfonato, Hidrogênio (3 -{[(2,3- dihidroxifenil)metil ](dimetil)azaniumil}propil)fosfonato, q5-{[(2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}pentanoato, {1-[(2,3-dihidroxifenil) metil]-1-metilpiperidin -1-io-4- il}acetato, 1-[(2,3-dihidroxifenil)metil ]-1- metilpiperidin -1-io-4-carboxilato, 4-{[2-(2,3- dihidroxifenil)etil](dimetil)azaniumil}butanoato, 2-{[2-(2,3- dihidroxifenil)etil](dimetil)azaniumil} etano -1-sulfonato, e 3-[(2,3- dihidroxifenil)(dimetil)azaniumil]propano -1-sulfonato.
25. “COMPOSTO”, de acordo com a reivindicação 24, ou um sal do mesmo, caracterizado por, ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
{1-[(2,3-dihidroxifenil)metil] -1- metilpiperidin -1-io-4-il}acetato, e 2-{[2-(2,3- dihidroxifenil)etil ](dimetil)azaniumil}etano -1-sulfonato.
26. “COMPOSTO”, de acordo com a reivindicação 24, ou um sal do mesmo, caracterizado por, ser selecionado a partir do grupo que consiste em: 4-{[(2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil}butano -1-sulfonato, e 3-{[(6-fluoro-2,3- dihidroxifenil)metil](dimetil)azaniumil} propano -1-sulfonato.
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