BR112021012449A2 - Agente para promoção da função de advilina, derivado de amina cíclica, e, medicamento - Google Patents

Abstract

agente para promoção da função de advilina, derivado de amina cíclica, e, medicamento. um objetivo da presente invenção é prover um agente para promoção da função de advilina que compreende um composto de baixo peso molecular e que é útil para o tratamento de lesão axonal. a presente invenção provê um agente para promoção da função de advilina, compreendendo um derivado de amina cíclica tipicamente representado pela seguinte fórmula química, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo.

Description

1 / 70 AGENTE PARA PROMOÇÃO DA FUNÇÃO DE ADVILINA, DERIVADO DE AMINA CÍCLICA, E, MEDICAMENTO Campo Técnico

[001] A presente invenção se refere a um derivado de amina cíclica como um agente para promoção da função de advilina, e um novo derivado de amina cíclica e um uso farmacêutico do mesmo. Fundamentos da Técnica

[002] A advilina se expressa principalmente nos nervos periféricos e desempenha um papel significativo na extensão do axônio (Literatura Não Patentária 1 e 2). Um camundongo com deficiência de advilina apresenta disfunção da extensão do axônio na regeneração do circuito neural e tem axônio mais curto (Literatura Não Patentária 2). Além disso, se a lesão axonal for induzida em um camundongo com deficiência de advilina por ligadura de nervo, um tratamento anticâncer ou semelhante, os sintomas relacionados à lesão axonal são agravados em comparação com um camundongo normal (Literatura Não Patentária 2 e 3). Por outro lado, em neurônios nos quais a advilina é superexpressada, o número e o comprimento das neuritas, incluindo os axônios, são aumentados (Literatura Não Patentária 3). Em outras palavras, sabe-se que a advilina tem um efeito de promoção da extensão do axônio na regeneração do nervo.

[003] Para estender um axônio, é necessário regular normalmente a polimerização do monômero de actina e despolimerizar o filamento de actina (doravante referida como a renovação do filamento de actina) no cone de crescimento na ponta do axônio (Literatura Não Patentária 4). Sabe-se que a advilina está presente no cone de crescimento na ponta de um axônio (Literatura Não Patentária 3). Também é conhecido que a advilina tem uma função, como uma proteína de aglutinação à actina, para regular a renovação do filamento de actina (Literatura Não Patentária 5).

[004] A lesão axonal de um nervo periférico também é designada

2 / 70 como uma lesão do nervo periférico, é causada por uma operação cirúrgica, uma substância tóxica, distúrbio da circulação sanguínea, uma ferida externa causada por acidente de trânsito ou semelhante, radioterapia ou semelhante, e causa paralisia motora, anestesia ou falha dos nervos autônomos ou semelhantes. A regeneração axonal é conhecida por ocorrer após a lesão axonal de um nervo periférico, mas a recuperação funcional incompleta, incluindo anormalidades, ocorre em muitos casos. Uma das causas é a seguinte: a regeneração axonal real leva tempo, durante o qual os tecidos ao redor do axônio e um tecido-alvo a ser unido a uma extremidade do axônio são degenerados. Portanto, o final do axônio não pode ser reunido com precisão ao tecido ou célula alvo e, portanto, a reinervação efetiva e normal não pode ser realizada. A reunião imprecisa ocorre não apenas entre um nervo e um tecido alvo, como um tecido muscular, mas também entre os nervos sensoriais e entre os nervos motores, e resulta em percepção anormal quando ocorre entre os nervos sensoriais e movimento anormal involuntário quando ocorre entre os nervos motores (Literatura Não Patentária 6). Em particular, não se pode esperar que a neurotmese, na qual um axônio e uma bainha nervosa se rompam, seja recuperada espontaneamente e não haja um agente terapêutico eficaz. Portanto, um tratamento cirúrgico como reparo de nervo ou cirurgia reconstrutiva de função é empregado, mas tal tratamento é desvantajoso devido a uma grande carga de um paciente (Literatura Não Patentária 7). Consequentemente, existe um desejo de um agente terapêutico eficaz para promoção da extensão do axônio a ser usado para tratar e prevenir a recuperação funcional incompleta, incluindo anormalidade após lesão axonal de um nervo periférico.

[005] As Literatura Patentárias 1 e 2 descrevem que derivados de amina cíclica têm ação analgésica e podem tratar ou prevenir neuropatias periféricas, mas não descrevem um efeito de promoção da função de advilina e um efeito de tratamento de lesão axonal. Além disso, não existem

3 / 70 compostos conhecidos que promovam a função de advilina. Lista de Citações Literatura Patentária

[006] Literatura Patentária 1: Publicação Internacional No. WO2016/136944 Literatura Patentária 2: Publicação Internacional No. WO2018/181860. Literatura Não Patentária

[007] Literatura Não Patentária 1: Ravenall et al., European Journal of Neuroscience, 2002, vol. 15, págs. 281-290 Literatura Não Patentária 2: Hasegawa et al., The Journal of Neuroscience, 2007, vol. 27, págs. 14404-14414 Literatura Não Patentária 3: Chuang et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2018, vol. 115, págs. E8557-E8566 Literatura Não Patentária 4: Blanquie et al., Current Opinion in Neurobiology, 2018, vol. 51, págs. 60-69 Literatura Não Patentária 5: Rao et al., The Journal of Clinical Investigation, 2017, vol. 127, págs. 4257-4269 Literatura Não Patentária 6: Nishiwaki et al., The Japanese Journal of Rehabilitation Medicine, 2002, vol. 39, págs. 257-266 Literatura Não Patentária 7: Kanaya, The Japanese Journal of Rehabilitation Medicine, 2014, vol. 51, págs. 52-60 Sumário da Invenção Problema Técnico

[008] Consequentemente, um objetivo da presente invenção é prover um agente para promoção da função de advilina que compreende um composto de baixo peso molecular e que é útil para o tratamento de lesão axonal.

4 / 70 Solução para o Problema

[009] Como resultado de estudos intensivos para atingir o objetivo acima descrito, os presentes inventores verificaram que um derivado de amina cíclica ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem um efeito de promoção da função de advilina.

[0010] Especificamente, a presente invenção provê um agente para promoção da função de advilina, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela seguinte fórmula geral (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo. [Fórmula 1] em que o carbono marcado com * representa carbono assimétrico e A representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral (IIa) ou (IIb): [Fórmula 2] em que R1 representa um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2-metoxietila, um grupo 2-etoxietila, um grupo difluorometila ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila, R2 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de flúor ou um átomo de cloro, cada um de R3 representa, independentemente, um grupo metila ou um grupo etila, e X representa -O- ou -N(R3)-.

[0011] No derivado de amina cíclica descrito acima, é preferível que

5 / 70 A seja o grupo representado pela fórmula geral (IIa), em que R1 é de um modo mais preferido um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2-metoxietila, ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila.

[0012] No derivado de amina cíclica descrito acima, é preferível que A seja o grupo representado pela fórmula geral (IIb), em que X é de um modo mais preferido -N (R3), e R1 é ainda de um modo preferido um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2-metoxietila ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila.

[0013] No derivado de amina cíclica acima descrito, R2 é de um modo mais preferido um átomo de hidrogênio ou um átomo de cloro.

[0014] No derivado de amina cíclica descrito acima, a configuração estereoquímica do carbono assimétrico marcado com * é de um modo mais preferido S.

[0015] O efeito de promoção da função de advilina pode ser ainda mais intensificado definindo como mencionado acima.

[0016] A presente invenção provê um agente para promoção da função de advilina, para promoção da função de advilina por aglutinação à advilina e/ou um a complexo de advilina, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como um ingrediente ativo.

[0017] A presente invenção também provê um agente para promoção da função de advilina, para melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo.

[0018] A presente invenção também provê um agente para promoção da função de advilina, para promoção da extensão do axônio, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo.

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[0019] A presente invenção provê ainda um agente para promoção da função de advilina, para melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina e promover a extensão do axônio por aglutinação à advilina e/ou um a complexo de advilina, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo.

[0020] A presente invenção também provê um agente para promoção da função de advilina, que é um agente terapêutico para lesão axonal, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo.

[0021] A presente invenção também provê um derivado de amina cíclica que é um composto selecionado do grupo que consiste em 3-hidroxi-3- (1-metil-1H-imidazol-2-il)-1-(4-morfolinopiperidin-1-il)propan-1-ona, 1-(4- (dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-propil-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan- 1-ona, 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-isopropil-1H-imidazol-2-il)-3- hidroxipropan-1-ona, 3-(5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2-il)-1-(4- (dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona, 1-(4-(dimetilamino) piperidin-1-il)-3-(1-(2-metoxietil)-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona e 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-(3,3,3-trifluoropropil)-1H-imidazol-2- il)-3-hidroxipropan-1-ona ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0022] A presente invenção também provê um medicamento que compreende, como ingrediente ativo, um derivado de amina cíclica que é um composto selecionado a partir do grupo que consiste em 3-hidroxi-3-(1-metil- 1H-imidazol-2-il)-1-(4-morfolinopiperidin-1-il)propan-1-ona, 1-(4- (dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-propil-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan- 1-ona, 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-isopropil-1H-imidazol-2-il)-3- hidroxipropan-1-ona, 3-(5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2-il)-1-(4-

7 / 70 (dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona, 1-(4-(dimetilamino) piperidin-1-il)-3-(1-(2-metoxietil)-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona e 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-(3,3,3-trifluoropropil)-1H-imidazol-2- il)-3-hidroxipropan-1-ona ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0023] A presente invenção também provê uma composição farmacêutica para o tratamento de lesão axonal, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável ou semelhante.

[0024] A presente invenção também provê um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de lesão axonal.

[0025] A presente invenção também provê o uso de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para o tratamento de lesão axonal.

[0026] A presente invenção também provê o uso de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na produção de um medicamento para o tratamento de lesão axonal.

[0027] A presente invenção também provê um método para o tratamento de lesão axonal, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um paciente em necessidade de tratamento.

[0028] A presente invenção também provê um método para o tratamento de lesão axonal, compreendendo o contato de uma quantidade eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I)

8 / 70 acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo com neurônios.

[0029] A presente invenção também provê um método para o tratamento de lesão axonal, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo em necessidade da mesma.

[0030] Exemplos de uma causa de lesão axonal incluem, mas não estão limitados a: operação cirúrgica, uma substância tóxica, distúrbio da circulação sanguínea, uma ferida externa causada por acidente de trânsito ou semelhante e radioterapia.

[0031] A presente invenção também provê uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença relacionada a lesão axonal, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável ou semelhante.

[0032] A presente invenção também provê um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de uma doença relacionada a lesão axonal.

[0033] A presente invenção também provê o uso de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para o tratamento de uma doença relacionada a lesão axonal.

[0034] A presente invenção também provê o uso de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na produção de um medicamento para o tratamento de uma doença relacionada à lesão axonal.

[0035] A presente invenção também provê um método para o tratamento de uma doença relacionada a lesão axonal, compreendendo a

9 / 70 administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um paciente em necessidade de tratamento.

[0036] A presente invenção também provê um método para o tratamento de uma doença relacionada a lesão axonal, compreendendo o contato de uma quantidade eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo com neurônios.

[0037] A presente invenção também provê um método para o tratamento de uma doença relacionada a lesão axonal, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo em necessidade da mesma.

[0038] A presente invenção também provê uma composição farmacêutica para promoção da função de advilina, melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina ou promover a extensão do axônio, compreendendo um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um excipiente farmaceuticamente aceitável ou semelhante.

[0039] A presente invenção também provê um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso na promoção da função de advilina, melhorando a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina ou promovendo a extensão do axônio.

[0040] A presente invenção também provê o uso de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para promoção da função de advilina, melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina ou

10 / 70 promover a extensão do axônio.

[0041] A presente invenção também provê o uso de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na produção de um medicamento para promoção da função de advilina, melhorando a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina ou promovendo a extensão do axônio.

[0042] A presente invenção também provê um método para promoção da função de advilina, melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina ou promover a extensão do axônio, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um medicamento farmaceuticamente aceitável sal do mesmo a um paciente em necessidade do mesmo.

[0043] A presente invenção também provê um método para promoção da função de advilina, melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina ou promover a extensão do axônio, compreendendo o contato de uma quantidade eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável com neurônios.

[0044] A presente invenção também provê um método para promoção da função de advilina, melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina ou promover a extensão do axônio, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável a um indivíduo em necessidade da mesma. Efeitos Vantajosos da Invenção

[0045] O derivado de amina cíclica da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode promoção da função da advilina que é uma das moléculas reguladoras para a renovação do filamento de actina

11 / 70 e pode ser usado como um medicamento para uma doença relacionada à lesão axonal.

[0046] Esta descrição inclui a descrição e/ou desenhos descritos no Pedido de Patente Japonesa No. 2018-243042, que são literaturas prioritárias do presente pedido. Breve Descrição dos Desenhos

[0047] [Figura 1] A Figura 1 é um diagrama que ilustra a função de advilina contra um filamento de actina.

[0048] [Figura 2] A Figura 2 é um diagrama que ilustra aglutinações específicas de um composto do Exemplo 7 a frações de membrana preparadas a partir de vários tecidos de um rato.

[0049] [Figura 3] A Figura 3 é um diagrama que ilustra um efeito do composto do Exemplo 7 de melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina em um modelo de ligadura de nervo espinhal de rato.

[0050] [Figura 4] A Figura 4 são imagens que ilustram um efeito de extensão de axônio do composto do Exemplo 7 em células de cultura primária de gânglio da raiz dorsal de rato com lesão axonal induzida, como uma mudança de uma forma celular.

[0051] [Figura 5] A Figura 5 é um diagrama que ilustra o efeito de promoção da extensão do axônio do composto do Exemplo 7 em células cultivadas em cultura primária do gânglio da raiz dorsal de rato com lesão axonal induzida. Descrição das Modalidades

[0052] Os seguintes termos usados na especificação são, a menos que especificado de outra forma, definidos como segue.

[0053] É distinguido pelo fato de que o derivado de amina cíclica de acordo com uma modalidade da presente invenção é representado pela seguinte fórmula geral (I):

12 / 70 [Fórmula 3] em que o carbono marcado com * representa carbono assimétrico e A representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral (IIa) ou (IIb): [Fórmula 4] em que R1 representa um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2-metoxietila, um grupo 2-etoxietila, um grupo difluorometila ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila, R2 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de flúor ou um átomo de cloro, cada um de R3 representa, independentemente, um grupo metila ou um grupo etila, e X representa -O- ou -N(R3)-.

[0054] No derivado de amina cíclica descrito acima, é preferível que A seja o grupo representado pela fórmula geral (IIa), em que R1 é de um modo preferido um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2-metoxietila, ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila.

[0055] No derivado de amina cíclica descrito acima, é preferível que A seja o grupo representado pela fórmula geral (IIb), em que X é de um modo preferido -N(R3), e R1 é de um modo preferido um grupo metila, um n- grupo propil, um grupo isopropila, um grupo 2-metoxietila ou um grupo 3,3,3- trifluoropropila.

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[0056] No derivado de amina cíclica acima descrito, R2 é de um modo preferido um átomo de hidrogênio ou um átomo de cloro.

[0057] No derivado de amina cíclica descrito acima, a configuração estereoquímica do carbono assimétrico marcado com * é de um modo preferido S.

[0058] Em uma modalidade do derivado de amina cíclica da presente invenção, A é um grupo representado pela fórmula geral (IIa), R1 é um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2-metoxietila ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila, R2 é um átomo de hidrogênio ou um átomo de cloro e R3 é um grupo metila ou um grupo etila. Na presente modalidade, a configuração estereoquímica do carbono assimétrico marcado com * é de um modo preferido S.

[0059] Em uma modalidade do derivado de amina cíclica da presente invenção, A é um grupo representado pela fórmula geral (IIb), X é -N(R3)-, R1 é um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2- metoxietila, ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila, R2 é um átomo de hidrogênio ou um átomo de cloro, e R3 é um grupo metila ou um grupo etila. Na presente modalidade, a configuração estereoquímica do carbono assimétrico marcado com * é de um modo preferido S.

[0060] Em uma modalidade do derivado de amina cíclica da presente invenção, A é um grupo representado pela fórmula geral (IIb), X é -O-, R1 é um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2- metoxietila, ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila, R2 é um átomo de hidrogênio ou um átomo de cloro, e R3 é um grupo metila ou um grupo etila. Na presente modalidade, a configuração estereoquímica do carbono assimétrico marcado com * é de um modo preferido S.

[0061] O derivado de amina cíclica de acordo com uma modalidade da presente invenção é um composto selecionado do grupo que consiste em 3- hidroxi-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-1-(4-morfolinopiperidin-1-il)propan-1-

14 / 70 ona, 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-propil-1H-imidazol-2-il)-3- hidroxipropan-1-ona, 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-isopropil-1H- imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona, 3-(5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2-il) -1 -(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona, 1-(4-(dimetilamino) piperidin-1-il)-3-(1-(2-metoxietil)-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona e 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-(3,3,3-trifluoropropil)-1H-imidazol-2 -il)-3-hidroxipropan-1-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0062] Exemplos específicos de um composto preferível como um derivado de amina cíclica representado pela fórmula geral (I) acima (doravante, referido como um derivado de amina cíclica (I)) serão mostrados nas Tabelas 1 e 2, mas a presente invenção não está limitada aos mesmos. [Tabela 1] Fórmula Estrutural Fórmula Estrutural Fórmula Estrutural

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[Tabela 2] Fórmula Estrutural Fórmula Estrutural Fórmula Estrutural

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[0063] Quando o derivado de amina cíclica (I) tem isômeros, tais como enantiômeros e estereoisômeros, qualquer um dos isômeros e misturas destes são incluídos no derivado de amina cíclica (I). Além disso, quando o derivado de amina cíclica (I) tem isômeros, tais como enantiômeros e estereoisômeros, o derivado de amina cíclica (I) pode ser uma mistura compreendendo qualquer um dos isômeros ou misturas destes. Além disso, quando o derivado de amina cíclica (I) tem isômeros conformacionais, o derivado de amina cíclica (I) inclui qualquer um dos isômeros e misturas destes. Um isômero desejado pode ser obtido por um método conhecido ou um método semelhante. Por exemplo, quando um enantiômero do derivado de amina cíclica (I) está presente, o enantiômero separado do derivado de amina cíclica (I) também está incluído no derivado de amina cíclica (I).

[0064] Um enantiômero desejado pode ser obtido por um meio conhecido (por exemplo, um intermediário sintético opticamente ativo é usado ou a mistura racêmica do produto final é submetida a um método conhecido ou a um método semelhante (por exemplo, resolução óptica)).

[0065] Um pró-fármaco de um derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo também está incluído. O pró-fármaco do derivado de amina cíclica (I) se refere a um composto, que é enzimaticamente ou quimicamente convertido no derivado de amina cíclica (I) in vivo. A forma ativa de um pró-fármaco do derivado de amina cíclica (I) é o derivado de amina cíclica (I); no entanto, um pró-fármaco do próprio derivado de amina cíclica (I) pode ter atividade.

[0066] Como pró-fármaco do derivado de amina cíclica (I), por exemplo, pode ser mencionado um composto obtido por alquilação, fosforilação ou boração de um grupo hidroxila do derivado de amina cíclica (I). Cada um destes compostos pode ser sintetizado a partir do derivado de

17 / 70 amina cíclica (I) de acordo com um método conhecido.

[0067] Um pró-fármaco do derivado de amina cíclica (I) pode ser convertido no derivado de amina cíclica (I) em condições fisiológicas descritas em literaturas conhecidas (“Development of pharmaceutical products”, Hirokawa-Shoten Ltd., vol. 7, págs. 163 a 198, 1990 e Progress in Medicine, vol. 5, págs. 2157 a 2161, 1985).

[0068] O derivado de amina cíclica (I) pode ser marcado com um isótopo. Exemplos de isótopos para uso na marcação incluem 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 15O e/ou 18O.

[0069] Como o sal farmaceuticamente aceitável do derivado de amina cíclica (I), por exemplo, um sal inorgânico como um cloridrato, um sulfato, um fosfato e um bromidrato; ou sal orgânico, como um oxalato, um malonato, um citrato, um fumarato, um lactato, um malato, um succinato, um tartarato, um acetato, um trifluoroacetato, um maleato, um gluconato, um benzoato, um salicilato, um xinafoato, um pamoato, um ascorbato, um adipato, um metanossulfonato, um p-toluenossulfonato e um cinamato podem ser mencionados.

[0070] O derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo inclui um hidrato e um solvato do mesmo.

[0071] Quando o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem polimorfos cristalinos, o derivado de amina cíclica (I) ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo inclui todos os polimorfos cristalinos e misturas destes.

[0072] O derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser sintetizado de acordo com um método descrito em uma literatura conhecida (Publicação Internacional No. WO2016/136944), por exemplo.

[0073] O termo “advilina” abrange uma isoforma, um análogo, uma variante, um fragmento e um derivado funcional. Advilina é um produto

18 / 70 transcricional do gene advilina, também é designado como p92 ou AVIL, e é um membro da família gelsolina. Em um ser humano, advilina é uma proteína com duas isoformas e consiste em 819 aminoácidos ou 821 aminoácidos.

[0074] “Advilina” é uma molécula que atua sobre um filamento de actina e tem a função de cortar o filamento de actina com estrutura em dupla hélice.

[0075] O termo “para promoção da função de advilina” se refere a reter, sustentar ou intensificar a função biológica da advilina e/ou normalizar a função biológica deteriorada. A promoção da função de advilina pode ser a melhora e/ou normalização da anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina. Consequentemente, se os filamentos de actina aumentaram devido a lesão axonal do nervo periférico, a promoção da função de advilina diminui os filamentos de actina e aumenta uma quantidade relativa de monômeros de actina. A promoção da função de advilina também inclui a promoção da extensão do axônio.

[0076] O termo “complexo de advilina” se refere a uma agregação formada por advilina e uma molécula de uma proteína ou semelhante que interage com e/ou se aglutina a advilina.

[0077] Pode ser avaliada, por exemplo, por purificação de afinidade usando FG Beads (marca registrada) que são partículas finas magnéticas descritas em uma literatura conhecida (Aono et al., 2018, Biochemical and Biophysical Research Communications, vol. 505, págs. 1203- 1210), que o derivado de amina cíclica (I) se aglutina a advilina e/ou um complexo de advilina. Alternativamente, pode ser avaliado analisando a interação entre moléculas, empregando não apenas imunoprecipitação ou purificação por afinidade usando um anticorpo que reconhece advilina e/ou o complexo de advilina, mas também ressonância plasmônica de superfície (SPR).

[0078] O termo “renovação do filamento de actina” se refere ao processo de renovação bidirecional através da polimerização do monômero de

19 / 70 actina e despolimerização do filamento de actina.

[0079] O termo “anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina” se refere ao equilíbrio entre a polimerização de actina e a despolimerização do filamento de actina na “renovação do filamento de actina” para tornar o processo unidirecional dominante.

[0080] O termo “para melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina” significa que o estado onde o processo monodirecional é dominante na “anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina” é normalizado ou aproximado de um estado normal. Especificamente, isso significa que a quantidade de filamentos de actina e uma razão entre a quantidade de filamentos de actina e a quantidade de monômeros de actina são normalizadas ou tornadas mais próximas do normal.

[0081] Pode ser avaliada, usando células (tais como neurônios do gânglio da raiz dorsal humana cultivados primários, neurônios cultivados primários do gânglio da raiz dorsal derivados de um mamífero, como um rato ou um camundongo, células PC12 derivadas de feocromocitoma adrenal de rato ou células F11 derivadas do gânglio da raiz dorsal do rato) para medir a quantidade de filamentos de actina nas células, que o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem um efeito de melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina. Como um método para medir a quantidade de filamentos de actina nas células, a medição pode ser realizada por, por exemplo, coloração fluorescente usando a aglutinação de faloidina marcada com fluorescência a filamentos de actina (Carlson et al., Neuro Toxicology, 2001, vol. 22, págs. 819-827).

[0082] O termo “efeito de diminuir os filamentos de actina intracelulares” significa um efeito de diminuir a quantidade de filamentos de actina intracelulares em comparação com um caso onde um tratamento para diminuir a quantidade de filamentos de actina intracelulares não é realizado e,

20 / 70 neste efeito, a quantidade de filamentos de actina intracelulares os filamentos de actina diminuem de um modo preferido em 5% ou mais, 10% ou mais, 20% ou mais, 30% ou mais, 40% ou mais, 50% ou mais, 60% ou mais, 70% ou mais, 80% ou mais, 90% ou mais, ou 100% em comparação com o caso em que o tratamento para diminuir a quantidade de filamentos de actina intracelulares não é realizado.

[0083] Além disso, pode ser avaliado, usando uma amostra de uma doença relacionada à anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina, como um tecido de um paciente sofrendo de lesão axonal ou modelo animal de lesão axonal, para medir uma razão entre a quantidade de filamentos de actina e a quantidade de monômeros de actina, que o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem o efeito de melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina. Como modelo animal de lesão axonal, por exemplo, pode ser mencionado um modelo de ligadura de nervo espinhal de rato (Kim et al., Pain, 1992, vol. 50, págs. 355-363). A razão entre a quantidade de filamentos de actina e a quantidade de monômeros de actina pode ser calculada separando os filamentos de actina e os monômeros de actina por ultracentrifugação de um tecido ou homogenato de célula e determinando quantitativamente as quantidades destes por Western blotting (Kim et al., The journal of Physiology, 2015, vol. 593, págs. 1873-1886).

[0084] O termo “axônio” se refere a uma longa projeção que se estende do corpo da célula do neurônio e também é designado como neurita. Axônio forma fibras nervosas. Uma extremidade de um axônio é ramificada para ser unida a um próximo neurônio ou tecido alvo para transmitir a excitação neuronal.

[0085] O termo “lesão axonal” se refere a um estado em que um axônio é parcial ou completamente destruído ou cortado, e uma porção do axônio na lateral do tecido do local danificado é degenerada ou perdida.

21 / 70

[0086] O termo “extensão de axônio” se refere à extensão de um axônio de um neurônio. Espera-se que a promoção da extensão do axônio reúna um tecido-alvo ao axônio e/ou reconstrua o circuito neural após a lesão axonal.

[0087] Exemplos de uma causa de lesão axonal incluem, mas não estão limitados a: operação cirúrgica, uma substância tóxica, distúrbio da circulação sanguínea, uma ferida externa causada por acidente de trânsito ou semelhante, ou terapia de radiação.

[0088] Como substância tóxica, podem ser citadas, por exemplo, neurotoxinas exógenas e endógenas. Como neurotoxina exógena, por exemplo, podem ser mencionadas tetrodotoxina, batracotoxina, maurotoxina, agitoxina, caribdotoxina, margatoxina, slotoxina, cilatoxina, hefutoxina, calciseptina, taicatoxina ou calcicludina. Como neurotoxina endógena, podem ser mencionados, por exemplo, ácido glutâmico, ácido N-metil-D-aspártico (NMDA) ou ácido cainico. Além disso, um gás (como o monóxido de carbono), um metal (como o mercúrio), o metanol ou o etanol podem ser mencionados. Como outras substâncias tóxicas, por exemplo, produtos químicos agrícolas de herbicidas e inseticidas (como rotenona e paraquat) podem ser mencionados. Além disso, uma lista de substâncias tóxicas e deletérias é publicada como substâncias tóxicas prejudiciais ao corpo humano pela Lei de Controle de Substâncias Venenosas e Deletérias (Poisonous and Deleterious Substances Control Law) do Japão, e as substâncias tóxicas listadas nela podem ser mencionadas como a substância tóxica.

[0089] Exemplos da doença relacionada à lesão axonal (incluindo uma doença causada por ela) incluem, mas não estão limitados a, síndrome do túnel do carpo, síndrome do pronador, paralisia do nervo interósseo anterior, síndrome do túnel ulnar (síndrome do túnel de Guyon), síndrome do túnel cubital, posterior paralisia do nervo interósseo, paralisia do nervo radial, síndrome do desfiladeiro torácico, paralisia do nervo axilar, paralisia do nervo

22 / 70 supraescapular, síndrome do músculo piriforme, paralisia do plexo lombar, síndrome do túnel do tarso, paralisia do nervo femoral, paralisia do nervo ciático, paralisia do nervo tibial, paralisia do nervo fibular comum paralisia do nervo fibular (síndrome do túnel do tarso anterior), paralisia do nervo safeno (síndrome do túnel de Hunter), estenose do canal espinhal cervical, estenose do canal espinhal lombar, paralisia facial, paralisia oculomotora, paralisia do nervo troclear, paralisia do nervo abducente, arterite de células gigantes, arterite de Takayasu, poliarterite nodosa, doença de Kawasaki, granulomatose com poliangiíte (granulomatose de Wegener), poliangeíte microscópica, greosinofílica anulomatose com poliangiite (angiite granulomatosa alérgica, síndrome de Churg-Strauss), crioglobulinemia, vasculite por IgA (púrpura de Henoch-Schonlein), vasculite leucocitoclástica cutânea, lúpus eritematoso sistêmico, síndrome de Sjogren, doença escleromiose, artrite reumatoide mista, artrite reumatóide, dermatomiosite mista, tecido conjuntivo Doença de Behçet, paralisia de Bell, síndrome de Ramsay Hunt, doenças infecciosas bacterianas/virais (como doença de Lyme, doença infecciosa do HIV e lepra), sarcoidose e tumores malignos.

[0090] A avaliação pode acontecer, usando um tecido no qual um axônio de um neurônio humano foi ferido, modelo animal de lesão axonal ou um neurônio (como um neurônio derivado do córtex cerebral ou uma célula derivada do gânglio da raiz dorsal) para medir o comprimento, densidade ou semelhantes de neuritas tendo sido estendidos, que o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem o efeito de promoção da extensão do axônio (Yang et al., Free Radical Biology and Medicine, 2018, vol. 120, págs. 13-24).

[0091] O derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser usado como um medicamento para o tratamento ou prevenção de lesão axonal em um mamífero (por exemplo, camundongo, rato, hamster, coelho, gato, cachorro, vaca, ovelha, macaco ou humano), e

23 / 70 especialmente para um humano.

[0092] Quando o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é usado como um medicamento, o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo diretamente ou em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável pode ser administrado por via oral ou parenteral.

[0093] Como a forma de dosagem quando um medicamento compreendendo o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo é administrado por via oral, por exemplo, comprimidos (incluindo comprimidos revestidos com açúcar e revestidos com filme), pílulas, grânulos, pós, cápsulas (incluindo cápsulas moles e microcápsulas), xaropes, emulsões e suspensões podem ser mencionados. Como a forma de dosagem quando um medicamento compreendendo o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo é administrado parenteralmente, por exemplo, injeções, infusões, gotas, supositórios, linimentos endérmicos e emplastros adesivos podem ser mencionados. É ainda eficaz preparar uma formulação de liberação sustentada usando o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em combinação com uma base apropriada (por exemplo, um polímero de ácido butírico, um polímero de ácido glicólico, um ácido butírico copolímero de ácido glicólico, misturas de um polímero de ácido butírico e um polímero de ácido glicólico ou um éster de ácido graxo de poliglicerol).

[0094] As formulações com as formas de dosagem acima mencionadas podem ser preparadas de acordo com métodos de produção conhecidos no campo da formulação de fármacos. Neste caso, se necessário, a produção pode ser feita pela adição de um excipiente, um aglutinante, um lubrificante, um agente desintegrante, um agente adoçante, um tensoativo, um agente de suspensão ou um agente emulsificante, que é geralmente usado no

24 / 70 campo da formulação de fármaco.

[0095] Os comprimidos podem ser preparados, por exemplo, adicionando um excipiente, um aglutinante, um agente desintegrante ou um lubrificante. Os comprimidos e grânulos podem ser preparados adicionando, por exemplo, um excipiente, um aglutinante ou um agente desintegrante. Pós e cápsulas podem ser preparados adicionando, por exemplo, um excipiente. Os xaropes podem ser preparados adicionando, por exemplo, um agente adoçante. As emulsões ou suspensões podem ser preparadas adicionando, por exemplo, um tensoativo, um agente de suspensão ou um emulsificante.

[0096] Como excipiente, por exemplo, lactose, glicose, amido, sacarose, celulose microcristalina, glicirriza em pó, manitol, hidrogenocarbonato de sódio, fosfato de cálcio e sulfato de cálcio podem ser mencionados.

[0097] Como aglutinante, por exemplo, uma solução de pasta de amido, uma solução de goma arábica, uma solução de gelatina, uma solução de tragacanto, uma solução de carboximetilcelulose, uma solução de alginato de sódio e glicerina podem ser mencionadas.

[0098] Como agente desintegrante, por exemplo, o amido e o carbonato de cálcio podem ser mencionados.

[0099] Como lubrificante, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico, estearato de cálcio e talco purificado podem ser mencionados.

[00100] Como agente edulcorante podem ser mencionados, por exemplo, glucose, frutose, açúcar invertido, sorbitol, xilitol, glicerina e xarope simples.

[00101] Como o tensoativo, por exemplo, podem ser mencionados laurilsulfato de sódio, polissorbato 80, éster monogorduroso de sorbitano e ácido esteárico polioxil 40.

[00102] Como agente de suspensão podem ser mencionados, por exemplo, goma arábica, alginato de sódio, carboximetilcelulose de sódio,

25 / 70 metilcelulose e bentonita.

[00103] Como emulsificante, por exemplo, podem ser mencionados goma arábica, tragacanto, gelatina e polissorbato 80.

[00104] Quando um medicamento compreendendo o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo é preparado nas formas de dosagem acima mencionadas, um agente corante, um agente conservante, uma fragrância, um agente aromatizante, um estabilizador ou um espessante em geral usados no campo da formulação de medicamentos podem ser adicionados.

[00105] A dose por dia de um medicamento que compreende o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo varia dependendo, por exemplo, do estado ou peso corporal do paciente ou do tipo ou via de administração de um composto, mas para exemplo, na administração oral a um adulto (peso: cerca de 60 kg), é preferível que a quantidade do derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo servindo como ingrediente ativo esteja dentro da faixa de 1 a 1000 mg é administrado em 1 a 3 doses divididas, e na administração parenteral a um adulto (peso: cerca de 60 kg) como injeções, é preferível que a quantidade do derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo servindo como um ativo ingrediente que cai na faixa de 0,01 a 100 mg por peso corporal (1 kg) é administrado por injeção intravenosa.

[00106] O derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser misturado com outros agentes medicinais em uma razão apropriada ou usado em combinação com outros agentes medicinais para suplementar ou aumentar um efeito terapêutico ou profilático ou reduzir a dose. O derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado concomitantemente com outros agentes medicinais ou pode ser administrado

26 / 70 continuamente com eles por uma ordem arbitrária. Como os outros agentes medicinais, por exemplo, mas não estão limitados a, agentes terapêuticos para o tratamento de lesão axonal podem ser mencionados. Exemplos

[00107] Daqui em diante, a presente invenção será especificamente descrita em detalhes abaixo com referência aos Exemplos, Exemplos Comparativos e Exemplo de Referência, mas a presente invenção não está limitada aos mesmos.

[00108] Na descrição a seguir, os nomes dos solventes mostrados nos dados de RMN representam os solventes usados na medição. Os espectros de RMN de 400 MHz foram medidos usando espectrômetro de ressonância magnética nuclear JNM-AL série 400 (fabricado por JEOL, Ltd.). Os desvios químicos são expressos por δ (unidade: ppm) usando tetrametilsilano como referência, e os respectivos sinais, respectivamente, têm os seguintes significados: s (singuleto), d (dupleto), t (tripleto), q (quarteto), quint (quinteto), sept (septeto), m (multipleto), br (largo), dd (duplo dupleto), dt (duplo tripleto), ddd (duplo duplo dupleto), dq (duplo quarteto), td (triplo dupleto) e tt (triplo tripleto). Os espectros ESI-MS foram medidos usando Agilent Technologies 1200 Series, G6130A (fabricado pela Agilent Technology). Produtos comercialmente disponíveis foram usados para todos os solventes. Para cromatografia em coluna de vaporização rápida, foi usado YFLC W-prep2XY (fabricado por YAMAZEN Corporation).

[00109] Matérias-primas e intermediários do derivado de amina cíclica (I) foram sintetizados pelos métodos descritos nos Exemplos de Referência dados abaixo. Observe que os produtos disponíveis comercialmente foram usados para os compostos que foram usados na síntese dos compostos dos Exemplos de Referência e cujos métodos de síntese não são descritos abaixo. (Exemplo de referência 1) Síntese de benzil (S)-2-(3-(4- dimetilamino)piperidin-1-il)-1-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3-

27 / 70 oxopropoxi)acetato: [Fórmula 5]

[00110] Hidreto de sódio (55%, 0,0202 mg, 0,464 mmol) foi adicionado a uma solução de (S)-1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3- hidroxi-3-(1-metil-1H- imidazol-2-il) propan-1-ona (0,100 g, 0,357 mmol) em tetra-hidrofurano (0,800 mL) a 0ºC. O resultante foi agitado à mesma temperatura durante 10 minutos e bromoacetato de benzila (0,0620 mL, 0,390 mmol) foi adicionado ao líquido reacional resultante, seguido de agitação durante mais 15 horas em temperatura ambiente. Uma solução aquosa de cloreto de amónio foi adicionada ao líquido reacional e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter benzil (S)-2-(3-(4- dimetilamino)piperidin-1-il)-1-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3- oxopropoxi)acetato (0,568 g, 0,133 mmol, 37%) como um óleo incolor. 1

[00111] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,30-1,57 (2H, m), 1,73-1,90 (2H, m), 2,24-2,37 (7H, m), 2,48-2,58 (1H, m), 2,95-3,13 (2H, m), 3,28-3,36 (1H, m), 3,70 (3H, d, J = 1,6 Hz), 3,93-4,17 (3H, m), 4,48-4,54 (1H, m), 5,12- 5,14 (2H, m), 5,30-5,36 (1H, m), 6,80 (1H, s), 6,96 (1H, s), 7,31-7,39 (5H, m). ESI-MS: m/z = 429 (M + H)+.

28 / 70 (Exemplo de Referência 2) Síntese de etil 1-metil-1H-imidazol-2-carboxilato: [Fórmula 6]

[00112] Trietilamina (3,40 mL, 24,4 mmol) e cloroformato de etila (2,34 mL, 24,4 mmol) foram adicionados a uma solução de 1-metil-1H- imidazol (1,00 g, 12,2 mmol) em acetonitrila (4,0 mL) a 0ºC, e o líquido reacional resultante foi agitado em temperatura ambiente durante 16 horas. O líquido da reação foi filtrado através de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia por vaporização rápida (sílica gel, hexano/acetato de etila) para obter etil 1-metil-1H-imidazol- 2-carboxilato (1,50 g, 9,73 mmol, 80%) como um sólido branco. 1

[00113] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,42 (3H, t, J = 7,2 Hz), 4,01 (3H, s), 4,40 (2H, q, J = 7,2 Hz), 7,01-7,03 (1H, m), 7,13-7,15 (1H, m). ESI-MS: m/z= 155 (M+H)+. (Exemplo de referência 3) Síntese de etil 3-(1-metil-1H-imidazol-2-il) -3- oxopropanoato: [Fórmula 7]

[00114] Uma solução aquosa de hidróxido de sódio (1,0 N, 14,6 mL, 14,6 mmol) foi adicionada a uma solução de etil 1-metil-1H-imidazol-2- carboxilato (1,50 g, 9,73 mmol) em metanol (15,0 mL) em temperatura ambiente, e o líquido de reação resultante foi agitado à mesma temperatura durante 3 horas. O líquido de reação foi resfriado a 0ºC. Foi adicionado ácido

29 / 70 clorídrico (1,0 N) ao líquido de reação para neutralização e o líquido de reação resultante foi concentrado sob pressão reduzida. Um azeótropo foi formado com tolueno e etanol foi adicionado ao mesmo. O precipitado assim obtido foi filtrado através de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Acetonitrila (7,0 mL) e carbonil diimidazol (1,54 g, 9,52 mmol) foram adicionados ao produto em bruto assim obtido em temperatura ambiente, e o líquido de reação resultante foi agitado à mesma temperatura durante 2,5 horas (líquido de reação A). Separadamente, cloreto de magnésio (0,997 g, 10,5 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (7,0 mL) e malonato de etil potássio (1,70 g, 9,99 mmol) e trietilamina (2,98 mL, 21,4 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente, e o resultante O líquido reacional foi agitado à mesma temperatura durante 2,5 horas (líquido reacional B). O líquido de reação A foi adicionado ao líquido de reação B em temperatura ambiente e o líquido de reação resultante foi agitado a 80°C durante 2 horas. O líquido da reação foi resfriado em temperatura ambiente. Foi adicionado ácido clorídrico (1,0 N) ao líquido reacional e o resultante foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia por vaporização rápida (sílica gel, hexano/acetato de etila) para obter 3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3- oxopropanoato de etila (0,721 g, 3,67 mmol, 38%) como um sólido branco. 1

[00115] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,27 (3H, t, J = 7,2 Hz), 4,01 (3H, s), 4,13 (2H, s), 4,21 (2H, q, J = 7,2 Hz), 7,05 -7,07 (1H, m), 7,15-7,17 (1H, m).

[00116] ESI-MS: m/z = 197 (M + H)+. (Exemplo de Referência 4) Síntese de 4-(morfolin-4-il) piperidina: [Fórmula 8]

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[00117] Morfolina (0,792 g, 9,09 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,93 g, 9,09 mmol) e ácido acético (0,0460 g, 0,758 mmol) foram adicionados a uma solução de 1-terc-butoxicarbonil-4-piperidinona (1,51 g, 7,58 mmol) em diclorometano (25,0 mL) a 0ºC, seguido por agitação em temperatura ambiente durante 16 horas. O líquido de reação resultante foi resfriado a 0ºC. Uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio foi adicionada ao líquido de reação e o resultante foi extraído com diclorometano. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em ácido clorídrico (1,0 N) e o resultante foi extraído com acetato de etila. A camada aquosa foi tornada básica pela adição de uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 48% e o resultante foi extraído com diclorometano. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (25,0 mL) e ácido clorídrico concentrado (5,0 mL) foi adicionado ao mesmo, seguido por agitação a 40ºC durante 12 horas. O líquido de reação resultante foi concentrado até a secura e o resultante foi dissolvido em água destilada. O resultante foi tornado básico pela adição de uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 48% e o resultante foi extraído com diclorometano. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Assim, 4-(morfolin-4-il)piperidina (1,52 g, 5,63 mmol, 74%) foi obtida como um sólido amarelo. 1

[00118] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,34 (2H, dd, J = 12,0, 4,0 Hz), 1,40 (2H, dd, J = 12,0, 4,0 Hz), 1,85 (2H, d, J = 12,4 Hz), 2,28 (1H, tt, J =

31 / 70 11,2, 4,0 Hz), 3,53-3,63 (6H, m), 3,15 (2H, d, J = 12,4 Hz), 3,73 (4H, t, J = 4,4 Hz).

[00119] ESI-MS: m/z = 171 (M + H)+ (Exemplo de referência 5) Síntese de 1-(1-metil-1H-imidazol-2-il) -3-(4- morfolinopiperidin-1-il) propan-1,3-diona: [Fórmula 9]

[00120] 4-(Morfolin-4-il)piperidina (0,158 g, 0,928 mmol) foi adicionada a uma solução de etil 3- (1-metil-1H-imidazol-2-il) -3- oxopropanoato (0,200 g, 1,02 mmol) em tolueno (0,460 mL) em temperatura ambiente e o líquido de reação resultante foi agitado a 110°C durante 16 horas. O líquido da reação foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia por vaporização rápida (sílica gel, clorofórmio/metanol) para obter 1-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3-(4- morfolinopiperidin-1-il)propan-1,3- diona (0,285 g, 0,890 mmol, 96%) como um óleo incolor. 1

[00121] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,40-1,64 (2H, m), 1,82-1,92 (2H, m), 2,37-2,47 (1H, m), 2,52-2,58 (4H, m), 3,05-3,15 (1H, m), 3,69-3,76 (5H, m), 3,82-3,90 (1H, m), 4,01 (3H, s), 4,16-4,31 (2H, m), 4,58-4,65 (1H, m), 7,04 -7,06 (1H, m), 7,13-7,15 (1H, m).

[00122] ESI-MS: m/z = 321 (M + H)+. (Exemplo de Referência 6) Síntese de 1-propil-1H-imidazol-2-carbaldeído: [Fórmula 10]

32 / 70

[00123] 1-Iodopropano (1,22 mL, 12,5 mmol) e carbonato de potássio (2,16 g, 15,6 mmol) foram adicionados a uma solução de 1H-imidazol-2- carbaldeído (1,00 g, 10,4 mmol) em N,N-dimetilformamida (10,0 mL), seguido por agitação a 60°C durante 3 horas. Adicionou-se água ao líquido reacional resultante e o resultante foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel, hexano/acetato de etila) para obter 1-propil-1H-imidazol-2-carbaldeído (0,786 g, 5,69 mmol, 55%) como um óleo amarelo. 1

[00124] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 0,93 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,77- 1,85 (2H, m), 4,37 (2H, t, J = 7,2 Hz), 7,16 (1H, s), 7,28 (1H, s), 9,82 (1H, s). (Exemplo de Referência 7) Síntese de 1-isopropil-1H-imidazol-2-carbaldeído: [Fórmula 11]

[00125] 2-iodopropano (1,26 mL, 12,5 mmol) e carbonato de potássio (2,16 g, 15,6 mmol) foram adicionados a uma solução de 1H-imidazol-2-

33 / 70 carbaldeído (1,00 g, 10,4 mmol) em N,N-dimetilformamida (10 mL), seguido por agitação a 60°C durante 3 horas. Adicionou-se água ao líquido reacional resultante e o resultante foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel, hexano/acetato de etila) para obter 1-isopropil- 1H-imidazol-2-carbaldeído (0,703 g, 5,09 mmol, 49%) como um óleo amarelo. 1

[00126] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,47 (6H, t, J = 6,6 Hz), 5,48 (1H, q, J = 6,6 Hz), 7,30 (1H, s), 7,33 (1H, s), 9,83 (LH, s). (Exemplo de Referência 8) Síntese de 5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2- carbaldeído: [Fórmula 12]

[00127] O reagente de Dess-Martin (1,04 g, 2,46 mmol) foi adicionado a uma solução de (5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2-il) metanol (0,300 g, 2,05 mmol) em diclorometano (20,0 mL) a 0ºC, seguido de agitação à mesma temperatura durante 3 horas. Uma solução aquosa a 10% de tiossulfato de sódio e uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio foram adicionadas ao líquido de reação resultante e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi

34 / 70 purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel, hexano/acetato de etila) para obter 5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2-carbaldeído (0,235 g, 1,62 mmol, 79%) como um sólido branco. 1

[00128] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 3,98 (3H, s), 7,24 (1H, s), 9,70 (1H, s). (Exemplo de Referência 9) Síntese de 1-(2-metoxietil)-1H-imidazol-2- carbaldeído: [Fórmula 13]

[00129] Éter 2-bromoetilmetílico (1,20 mL, 12,5 mmol), carbonato de potássio (2,16 g, 15,6 mmol) e iodeto de sódio (0,468 g, 3,12 mmol) foram adicionados a uma solução de 1H-imidazol-2-carbaldeído (1,00 g, 10,4 mmol) em N,N-dimetilformamida (10,0 mL), seguido por agitação a 60°C durante 3 horas. Adicionou-se água ao líquido reacional resultante e o resultante foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel, hexano/acetato de etila) para obter 1-(2-metoxietil)-1H-imidazol-2- carbaldeído (0,535 g, 3,47 mmol, 33%) como um sólido branco. 1

[00130] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 3,32 (3H, s), 3,67 (2H, t, J = 5,0 Hz), 4,59 (2H, t, J = 5,0 Hz), 7,23-7,30 (2H, m), 9,81 (1H, s). (Exemplo de Referência 10) Síntese de 1-(3,3,3-trifluoropropil)-1H-imidazol- 2-carbaldeído:

35 / 70 [Fórmula 14]

[00131] 1,1,1-Trifluoro-3-iodopropano (0,710 mL, 6,24 mmol) e carbonato de potássio (1,08 g, 7,81 mmol) foram adicionados a uma solução de 1H-imidazol-2-carbaldeído (0,500 g, 5,20 mmol) em N,N- dimetilformamida (5,20 mL), seguida de agitação a 60°C durante 5 horas. Adicionou-se água ao líquido reacional resultante e o resultante foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel, hexano/acetato de etila) para obter 1-(3,3,3-trifluoropropil)-1H-imidazol-2- carbaldeído (0,0863 g, 0,449 mmol, 8,6%) como um óleo incolor. 1

[00132] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 2,60-2,72 (2H, m), 4,61 (2H, t, J = 6,8 Hz), 7,18 (1H, s), 7,32 (1H, s), 9,83 (1H, s). (Exemplo de Referência 11) Síntese de 1-(4-dimetilamino) piperidin-1- il)etanona: [Fórmula 15]

[00133] Piridina (0,922 mL, 9,75 mmol) e anidrido acético (0,946 mL,

36 / 70 11,7 mmol) foram adicionados a uma solução de 4-dimetilaminopiperidina (1,00 g, 7,79 mmol) em diclorometano (7,8 mL) a 0ºC, e o líquido de reação resultante foi agitado em temperatura ambiente durante 16 horas. Uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio foi adicionada ao líquido de reação resultante e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)etanona (0,869 g, 6,78 mmol, 87%) como um óleo incolor. 1

[00134] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,30-1,47 (2H, m), 1,79-1,92 (2H, m), 2,10 (3H, s), 2,25-2,40 (7H, m), 2,53-2,63 (1H, m), 3,01-3,11 (1H, m), 3,81-3,90 (1H, m), 4,58-4,66 (1H, m).

[00135] ESI-MS: m/z = 171 (M + H)+. (Exemplo de Referência 12) Síntese de 4-(1-metilpiperazin-4-il)piperidina: [Fórmula 16]

[00136] 1-Metilpiperazina (0,905 g, 9,03 mmol), ácido acético (0,497 g, 8,28 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,92 g, 9,03 mmol) foram adicionados a uma solução de 1-terc-butoxicarbonil-4-piperidinona (1,50 g, 7,53 mmol) em diclorometano (25,0 mL) a 0ºC, e o líquido de reação resultante foi agitado em temperatura ambiente durante 16 horas. O líquido de reação foi resfriado a 0ºC. Uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio foi adicionada ao líquido de reação e o resultante foi extraído com

37 / 70 diclorometano. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em ácido clorídrico (1,0 N) e o resultante foi extraído com acetato de etila. A camada aquosa foi tornada básica pela adição de uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 48% e o resultante foi extraído com diclorometano. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (25,0 mL) e ácido clorídrico concentrado (5,0 mL) foi adicionado ao mesmo, seguido por agitação a 40ºC durante 12 horas. O líquido de reação resultante foi concentrado sob pressão reduzida e o resultante foi dissolvido em água destilada. O resultante foi tornado básico pela adição de uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 48% e o resultante foi extraído com diclorometano. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 4-(1-metilpiperazin-4-il)piperidina (0,826 g, 4,51 mmol, 60%) como um sólido branco. 1

[00137] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,35 (2H, dd, J = 12,0, 3,6 Hz), 1,41 (2H, dd, J = 12,0, 3,6 Hz), 1,85 (2H, d, J = 12,8 Hz), 1,96-2,06 (2H, br), 2,28 (3H, s), 2,32 (1H, tt, J = 11,6, 3,6 Hz), 3,37-3,70 (8H, m), 3,14 (2H, d, J = 12,8 Hz).

[00138] ESI-MS: m/z = 169 (M + H)+. (Exemplo de Referência 13) Síntese de 4-dietilaminopiperidina bruta: [Fórmula 17]

[00139] Dietilamina (0,276 mL, 2,68 mmol), ácido acético (0,0120

38 / 70 mL, 0,214 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,681 g, 3,22 mmol) foram adicionados a uma solução de benzil 4-oxopiperidina-1-carboxilato (0,500 g, 2,14 mmol) em diclorometano (12,0 mL) a 0ºC, e o líquido de reação resultante foi agitado em temperatura ambiente durante 16 horas. O líquido de reação foi resfriado a 0ºC. Uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio foi adicionada ao líquido de reação e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol). O produto purificado em bruto assim obtido foi dissolvido em metanol (8,0 mL) e paládio/carbono (10% húmido, 0,180 g, 0,169 mmol) foi adicionado ao mesmo em temperatura ambiente, seguido de agitação sob uma atmosfera de hidrogénio durante 16 horas. O líquido de reação resultante foi filtrado através de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um produto bruto de 4-dietilaminopiperidina. (Exemplo de referência 14) Síntese de 1-(4-(dimetilamino) piperidin-1-il)-3- (1-metil-1H-imidazol-2-il)propan-1,3-diona: [Fórmula 18]

[00140] Uma solução de di-isopropilamida de lítio em tetra- hidrofurano (2,0 M, 7,05 mL, 14,1 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 1- (4-(dimetilamino)piperidin-1-il)etanona (1,00 g, 5,87 mmol) em tetra-hidrofurano (20 mL) a -78ºC, seguido por agitação à mesma temperatura durante 1 hora. Uma solução de etil 1-metil-1H-imidazol-2-carboxilato (1,09

39 / 70 g, 7,05 mmol) em tetra-hidrofurano (9,0 mL) foi adicionada ao líquido de reação resultante na mesma temperatura, e o resultante foi agitado durante 1 hora, e em seguida, a 0ºC por mais 1 hora. Uma solução aquosa de cloreto de amónio foi adicionada ao líquido reacional e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, hexano/acetato de etila) para obter 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3- (1-metil-1H-imidazol-2-il)propan-1,3-diona (0,990 g, 3,56 mmol, 61%) como um óleo incolor. 1

[00141] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,32-1,5 (2H, m), 1,80-1,94 (2H, m), 2,22-41 (7H, m), 2,60-2,70 (1H, m), 3,03-3,13 (1H, m), 3,80-3,89 (1H, m), 4,01 (3H, s), 4,23 (2H, dd, J = 15,6, 36,8 Hz), 4,55-4,67 (1H, m), 7,05 (1H, s), 7,14 (1H, s).

[00142] ESI-MS: m/z = 279 (M + H)+. (Exemplo de referência 15) Síntese de 1- (1-metil-1H-imidazol-2-il) -3- (4- (4-metilpiperazin-1-il) piperidin-1-il) propan-1,3-diona: [Fórmula 19]

[00143] 4-(1-Metilpiperazin-4-il)piperidina (0,170 g, 0,927 mmol) foi adicionada a uma solução de etil 3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3- oxopropanoato (0,200 g, 1,02 mmol) em tolueno (0,46 mL) em temperatura ambiente e o líquido de reação resultante foi agitado a 110°C durante 16 horas. O líquido da reação foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi

40 / 70 purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 1-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3-(4-(4- metilpiperazin-1-il) piperidina-1-il)propan-1,3-diona (0,290 g, 0,870 mmol, 94%) como um óleo incolor. 1

[00144] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,38-1,60 (2H, m), 1,82-1,90 (2H, m), 1,95-2,10 (1H, m), 2,27 (3H, s), 2,36-2,68 (9H, m), 3,02-3,12 (1H, m), 3,79-3,88 (1H, m), 3,98 (3H, s), 4,13-4,28 (2H, m), 4,57-4,90 (1H, m), 7,02-7,04 (1H, m), 7,11-7,13 (1H, m). ESI-MS: m/z = 334 (M + H)+. (Exemplo de referência 16) Síntese de 1-(4-(dietilamino) piperidin-1-il)-3-(1- metil-1H-imidazol-2-il)propan-1,3-diona: [Fórmula 20]

[00145] 4-dietilaminopiperidina em bruto (0,143 g, 0,917 mmol) foi adicionada a uma solução de etil 3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3- oxopropanoato (0,150 g, 0,765 mmol) em tolueno (0,38 mL) em temperatura ambiente, e o líquido de reação resultante foi agitado a 110°C durante 10 horas. O líquido da reação foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (Sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 1-(4-(dietilamino)piperidin-1-il)-3-(1- metil-1H-imidazol-2-il) propano-1,3-diona (0,0750 g, 0,245 mmol, 32%) como um óleo incolor. 1

[00146] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,02 (6H, t, J = 6,8 Hz), 1,37- 1,58 (2H, m), 1,73-1,98 (2H, m), 2,48-2,78 (6H, m), 3,01-3,11 (1H, m), 3,80- 3,88 (1H, m), 4,00 (3H, s), 4,14-4,28 (2H, m), 4,60-4,70 (1H, m), 7,03-7,05

41 / 70 (1H, m ), 7,12-7,14 (1H, m).

[00147] ESI-MS: m/z = 307 (M + H)+. (Exemplo de Referência 17) Síntese de 1-(4-(dimetilamino) piperidin-1-il)-3- hidroxi-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)propan-1-ona: [Fórmula 21]

[00148] Uma solução de di-isopropilamida de lítio em tetra- hidrofurano (2,0 M, 0,162 mL, 0,323 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)etanona (0,0500 g, 0,294 mmol) em tetra-hidrofurano (0,8 mL) a -78ºC, seguido por agitação à mesma temperatura durante 1 hora. Uma solução de 1-metil-1H-imidazol-2- carbaldeído (0,0390 g, 0,352 mmol) em tetra-hidrofurano (0,4 mL) foi adicionada ao líquido de reação resultante na mesma temperatura e o resultante foi agitado por 1 hora, e então a 0ºC por mais 1 hora. Uma solução aquosa de cloreto de amónio foi adicionada ao líquido reacional e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel, clorofórmio/metanol) para obter 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxi- 3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)propan-1-ona (0,0220 g, 0,0785 mmol, 27%) como um óleo incolor. 1

[00149] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,32-1,53 (2H, m), 1,82-1,92 (2H, m), 2,27-2,41 (7H, m), 2,60-2,72 (1H, m), 2,98-3,23 (3H, m), 3,77 (3H, s), 3,99-4,08 (1H, m), 4,58-4,82 (2H, m), 5,18-5,26 (1H, m), 6,86 (1H, s),

42 / 70 6,93 (1H, s).

[00150] ESI-MS: m/z = 363 (M + H)+. (Exemplo 1) Síntese de 3-hidroxi-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il) -1-(4- morfolinopiperidin-1-il)propan-1-ona: [Fórmula 22]

[00151] Boro-hidreto de sódio (0,0370 g, 0,979 mmol) foi adicionado a uma solução de 1-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3-(4-morfolinopiperidin-1-il) propan-1,3-diona (0,285 g, 0,890 mmol) em metanol (4,50 mL) em temperatura ambiente e o líquido de reação resultante foi agitado à mesma temperatura durante 3 horas. Uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio foi adicionada ao líquido de reação e o resultante foi concentrado sob pressão reduzida. Água destilada foi adicionada ao resíduo e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia por vaporização rápida (sílica gel, clorofórmio/metanol) para obter 3-hidroxi-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il) -1- (4-morfolinopiperidin-1-il)propan-1-ona (0,0711 g, 0,221 mmol, 25%) (doravante, referido como o composto do Exemplo 1) como um óleo incolor. 1

[00152] H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,08-1,50 (7H, m), 1,60- 1,76 (2H, m), 2,36-2,46 (5H, m), 2,75-3,05 (3H, m), 3,64 (3H, s), 3,92-4,02 (1H, m), 4,32-4,42 (1H, m), 4,99-5,08 (1H, m), 5,34-5,49 (1H, m), 6,70-6,72 (1H, m), 7,01-7,03 (1H, m).

[00153] ESI-MS: m/z = 323 (M + H)+.

43 / 70 (Exemplo 2) Síntese de 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3- (1-propil-1H- imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona: [Fórmula 23]

[00154] Uma solução de di-isopropilamida de lítio em tetra- hidrofurano (2,0 M, 0,162 mL, 0,323 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)etanona (0,0500 g, 0,294 mmol) em tetra-hidrofurano (0,8 mL) a -78ºC, seguido por agitação à mesma temperatura durante 1 hora. Uma solução de 1-propil-1H-imidazol-2- carbaldeído (0,292 g, 2,12 mmol) em tetra-hidrofurano (2,8 mL) foi adicionada ao líquido de reação resultante na mesma temperatura e o resultante foi agitado por 1 hora, e então a 0ºC por mais 1 hora. Uma solução aquosa de cloreto de amónio foi adicionada ao líquido reacional e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (Sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3- (1-propil-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona (0,296 g, 0,960 mmol, 55%) (doravante, referido como o composto do Exemplo 2) como um óleo incolor. 1

[00155] H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 0,85 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,00-1,40 (2H, m), 1,61-1,80 (4H, m), 2,10-2,33 (7H, m), 2,45-2,59 (1H, m), 2,73-2,88 (1H, m), 2,93-3,13 (2H, m), 3,86-4,00 (3H, m), 4,25-4,35 (1H, m),

44 / 70 4,98-5,05 (1H, m), 5,34-5,40 (1H, m), 6,72 (1H, s), 7,07 (1H, s).

[00156] ESI-MS: m/z = 309 (M + H)+. (Exemplo 3) Síntese de 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3- (1-isopropil-1H- imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona: [Fórmula 24]

[00157] Uma solução de di-isopropilamida de lítio em tetra- hidrofurano (2,0 M, 0,969 mL, 1,94 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 1-(4-dimetilaminopiperidin-1-il) etanona (0,300 g, 1,76 mmol) em tetra-hidrofurano (6,00 mL) em -78ºC, seguido de agitação à mesma temperatura durante 1 hora. Uma solução de 1-isopropil-1H-imidazol-2- carbaldeído (0,292 g, 2,12 mmol) em tetra-hidrofurano (2,8 mL) foi adicionada ao líquido de reação resultante na mesma temperatura, e o resultante foi agitado por 1 hora, e então a 0ºC por mais 1 hora. Uma solução aquosa de cloreto de amónio foi adicionada ao líquido reacional e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (Sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3- (1-isopropil-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona (0,302 g, 0,979 mmol, 56%) (doravante, referido como o composto do Exemplo 3) como um óleo incolor. 1

[00158] H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,04-1,41 (8H, m), 1,62- 1,80 (2H, m), 2,16 (6H, s), 2,25-2,34 (1H, m), 2,48-2,59 (2H, m), 2,76-2,88

45 / 70 (1H, m), 2,95-3,16 (2H, m), 3,90-4,00 (1H, m), 4,27-4,38 (1H, m), 5,05-5,12 (1H, m), 5,36-5,42 (1H, m), 6,77 (1H, s), 7,20 (1H, s).

[00159] ESI-MS: m/z = 309 (M + H)+. (Exemplo 4) Síntese de 3-(5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2-il)-1-(4- (dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona: [Fórmula 25]

[00160] Uma solução de di-isopropilamida de lítio em tetra- hidrofurano (2,0 M, 0,745 mL, 1,49 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 1-(4-dimetilaminopiperidin-1-il)etanona (0,231 g, 1,36 mmol) em tetra-hidrofurano (5,10 mL) em -78ºC, seguido de agitação à mesma temperatura durante 1 hora. Uma solução de 5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2- carbaldeído (0,235 g, 1,63 mmol) em tetra-hidrofurano (1,70 mL) foi adicionada ao líquido de reação resultante na mesma temperatura, e o resultante foi agitado por 1 hora, e então a 0ºC por mais 1 hora. Uma solução aquosa de cloreto de amónio foi adicionada ao líquido reacional e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 3-(5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2-il) -1- (4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona (0,159 g, 0,505 mmol, 37%) (doravante, referido como o composto do Exemplo 4) como um óleo incolor. 1

[00161] H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,04-1,21 (1H, m), 1,28-

46 / 70 1,40 (1H, m), 1,64-1,80 (2H, m), 2,15 (6H, s), 2,24-2,35 (1H, m), 2,44-2,60 (1H, m), 2,78-2,88 (1H, m), 2,95-3,11 (2H, m), 3,59 (3H, s), 3,90-3,98 (1H, m), 4,27 -4,35 (1H, m), 5,00-5,10 (1H, m), 5,50-5,58 (1H, m), 6,85 (1H, s). ESI-MS: m/z = 315 (M + H)+. (Exemplo 5) Síntese de 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-(2-metoxietil) -1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona: [Fórmula 26]

[00162] Uma solução de di-isopropilamida de lítio em tetra- hidrofurano (2,0 M, 0,969 mL, 1,94 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 1-(4-dimetilaminopiperidin-1-il)etanona (0,300 g, 1,76 mmol) em tetra-hidrofurano (6,00 mL) em -78ºC, seguido de agitação à mesma temperatura durante 1 hora. Uma solução de 1-(2-metoxietil)-1H-imidazol-2- carbaldeído (0,292 g, 2,12 mmol) em tetra-hidrofurano (2,8 mL) foi adicionada ao líquido de reação resultante na mesma temperatura e o resultante foi agitado por 1 hora, e então a 0ºC por mais 1 hora. Uma solução aquosa de cloreto de amónio foi adicionada ao líquido reacional e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (Sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3- (1-isopropil-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona (0,302 g, 0,979 mmol, 56%) (doravante, referido como o composto do Exemplo 3) como um óleo incolor.

47 / 70 1

[00163] H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,04-1,40 (2H, m), 1,62- 1,80 (2H, m), 2,10-2,35 (7H, m), 2,46-2,59 (1H, m), 2,80 -2,90 (1H, m), 2,95- 3,10 (2H, m), 3,24 (3H, s), 3,61 (2H, t, J = 5,5 Hz), 3,90-4,00 (1H, m), 4,10- 4,38 (3H, m), 5,05-5,11 (1H, m), 5,38-5,42 (1H, m), 6,73 (1H, s), 7,07 (1H, s).

[00164] ESI-MS: m/z = 325 (M + H)+. (Exemplo 6) Síntese de 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-(3,3,3- trifluoropropil)-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona: [Fórmula 27]

[00165] Uma solução de di-isopropilamida de lítio em tetra- hidrofurano (2,0 M, 0,246 mL, 0,492 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 1-(4-dimetilaminopiperidin-1-il)etanona (0,0760 g, 0,448 mmol) em tetra-hidrofurano (1,80 mL) em -78ºC, seguido de agitação à mesma temperatura durante 1 hora. Uma solução de 1-(3,3,3-trifluoropropil)-1H- imidazol-2-carbaldeído (0,0860 g, 0,448 mmol) em tetra-hidrofurano (0,70 mL) foi adicionada ao líquido de reação resultante na mesma temperatura, e o produto resultante foi agitado durante 1 hora e, em seguida, a 0°C durante mais 1 hora. Uma solução aquosa de cloreto de amónio foi adicionada ao líquido reacional e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para

48 / 70 obter 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-(3,3,3-trifluoropropil)-1H- imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona (0,0845 g, 0,233 mmol, 52%) (doravante, referido como o composto do Exemplo 6) como um óleo incolor. 1

[00166] H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,03-1,40 (2H, m), 1,63- 1,79 (2H, m), 2,10-2,33 (7H, m), 2,47-2,59 (1H, m), 2,78 -2,90 (3H, m), 2,95- 3,13 (2H, m), 3,90-3,98 (1H, m), 4,21-4,36 (3H, m), 5,03-5,10 (1H, m), 5,49- 5,54 (1H, m), 6,77 (1H, s), 7,17 (1H, s).

[00167] ESI-MS: m/z = 363 (M + H)+. (Exemplo 7) Síntese de (S)-1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il) -3-hidroxi-3- (1-metil-1H-imidazol-2-il)propan-1-ona: [Fórmula 28]

[00168] 1-(4-(Dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxi-3-(1-metil-1H- imidazol-2-il)propan-1-ona (3,32 g) foi opticamente resolvido por purificação por HPLC, e o eluato foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter (S)-1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)- 3-hidroxi-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)propan-1-ona (0,467 g, > 99% ee) (doravante, referido como o composto do Exemplo 7) como um sólido branco.

[00169] Tempo de retenção de HPLC: 8,4 min, aparelho: sistema LC- 10ADvp, fabricado pela Shimadzu Corporation, coluna: CHIRALCEL OZ-H, 4,6 x 250 mm (fabricado pela Daicel Corporation), solvente: 0,01% de metanol contendo etilenodiamina (v/v), vazão: 0,5 mL/min, método de detecção: UV 220 nm, temperatura da coluna: 40ºC

49 / 70 1

[00170] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,32-1,53 (2H, m), 1,82-1,92 (2H, m), 2,27-2,41 (7H, m), 2,60-2,72 (1H, m), 2,98-3,23 (3H, m), 3,77 (3H, s), 3,99-4,08 (1H, m), 4,58-4,82 (2H, m), 5,18-5,26 (1H, m), 6,86 (1H, s), 6,93 (1H, s).

[00171] ESI-MS: m/z = 363 (M + H)+. (Exemplo 8) Síntese de 3-hidroxi-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il) -1- (4- (4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il)propan-1-ona: [Fórmula 29]

[00172] Boro-hidreto de sódio (0,0360 g, 0,957 mmol) foi adicionado a uma solução de 1-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-3-(4-(4-metilpiperazin-1-il) piperidin-1-il)propan-1,3-diona (0,290 g, 0,870 mmol) em metanol (4,4 mL) em temperatura ambiente, e o líquido de reação resultante foi agitado à mesma temperatura durante 3 horas. Uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio foi adicionada ao líquido de reação resultante e o resultante foi concentrado sob pressão reduzida. Água destilada foi adicionada ao resíduo e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 3- hidroxi-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-1-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1- il)propan-1-ona (0,140 g, 0,417 mmol, 48%) (doravante, referido como o composto do Exemplo 8) como um óleo incolor. 1

[00173] H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,45-1,66 (4H, m), 1,87-

50 / 70 1,95 (2H, m), 2,26-2,30 (3H, s), 2,38-2,70 (8H, m), 2,98 -3,23 (3H, m), 3,77 (3H, s), 4,00-4,10 (1H, m), 4,60-4,70 (2H, m), 5,17-5,25 (1H, m), 6,85-6,88 (1H, m), 6,92-6,95 (1H, m).

[00174] ESI-MS: m/z = 336 (M + H)+. (Exemplo 9) Síntese de 1-(4-(dietilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxi-3-(1-metil- 1H-imidazol-2-il) propan-1-ona: [Fórmula 30]

[00175] Boro-hidreto de sódio (0,0109 g, 0,287 mmol) foi adicionado a uma solução de 1-(4-dietilamino)piperidin-1-il)-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il) propan-1,3-diona (0,0800 g, 0,261 mmol) em metanol (1,3 mL) em temperatura ambiente, e o líquido de reação resultante foi agitado à mesma temperatura durante 3 horas. Uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio foi adicionada ao líquido de reação resultante e o resultante foi concentrado sob pressão reduzida. Água destilada foi adicionada ao resíduo e o resultante foi extraído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de vaporização rápida (sílica gel de NH, clorofórmio/metanol) para obter 1- (4- (dietilamino) piperidin-1-il) -3-hidroxi-3- (1-metil-1H-imidazol-2 -il) propan- 1-ona (0,0561 g, 0,182 mmol, 70%) (doravante, referido como o composto do Exemplo 9) como um óleo incolor. 1

[00176] H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 0,94 (6H, t, J = 6,8 Hz),

51 / 70 1,05-1,75 (5H, m), 2,42-3,10 (8H, m), 3,64 (3H, s), 3,93-4,02 (1H, m), 4,32- 4,43 (1H, m), 5,00-5,08 (1H, m), 5,34-5,42 (1H, m), 6,69-6,71 (1H, m), 7,01- 7,03 (1H, m).

[00177] ESI-MS: m/z = 309 (M + H)+. (Exemplo 10) Avaliação da aglutinação do derivado de amina cíclica (I) às frações de membrana preparadas a partir de vários tecidos de rato:

[00178] Uma propriedade de aglutinação de um derivado de amina cíclica (I) marcado com 3H a cada uma das frações de membrana preparadas a partir de vários tecidos de um rato foi avaliada e, assim, um tecido contendo um alvo molecular do derivado de amina cíclica (I) foi clarificado.

[00179] Como derivado de amina cíclica (I), foi utilizado o composto do Exemplo 7.

[00180] Foram utilizados ratos SD machos (fabricados por Charles River Laboratories Japan, Inc.) de 7 semanas de idade. Os ratos foram anestesiados com isoflurano e sacrificados por exsanguinação da aorta abdominal usando uma seringa com uma parede interna tratada com uma injeção de heparina de sódio (fabricada por AY Pharmaceuticals Co., Ltd.). Dentro de 60 minutos após o sacrifício por exsanguinação, o cérebro, o cerebelo, o tronco cerebral, o tronco cerebral, a medula espinhal, o gânglio da raiz dorsal, o nervo ciático, a pele, o coração, o músculo, o fígado, o rim e o intestino delgado foram extirpados. Assim como o cérebro, foram coletados os hemisférios cerebrais direito e esquerdo. O cerebelo foi coletado de todo o cérebro. O tronco cerebral foi coletado após a remoção do cérebro e do cerebelo de todo o cérebro. A medula espinhal foi coletada pela excisão de uma parte da medula espinhal torácica e da medula espinhal lombar, retirando a dura-máter e removendo as raízes nervosas remanescentes. Assim como o gânglio da raiz dorsal, os gânglios lombares direito e esquerdo (L3 a L6) foram coletados. O nervo ciático foi coletado pela excisão dos nervos ciáticos direito e esquerdo e pela remoção de tecidos aderentes, como gordura. Como

52 / 70 a pele, uma parte da pele de uma porção da pata de um membro anterior ou posterior foi coletada. Como o coração, todo o coração excisado foi coletado. Assim como o músculo, uma parte do quadríceps foi coletada. Assim como o fígado, o lobo lateral esquerdo foi coletado. Assim como o rim, todo o rim excisado foi coletado. Assim como o intestino delgado, o conteúdo foi lavado, e uma porção com cerca de 5 cm de comprimento foi coletada ao redor do duodeno e jejuno. Os tecidos assim coletados foram imediatamente congelados em gelo seco e armazenados a -80ºC. Quanto a cada gânglio da raiz dorsal, nervo ciático, músculo e pele, tecidos coletados de dez indivíduos foram misturados para serem tratados como uma única amostra. Como para cada um dos outros tecidos, tecidos coletados de três ratos foram misturados para serem tratados como uma amostra.

[00181] Uma amostra de homogeneizado de cada tecido assim coletado foi preparada, usando um homogeneizador, adicionando um tampão de homogeneização (sacarose (1 M), Tris-HCl (0,5 M) e 1 x coquetel de inibidor de protease (fabricado por Sigma Aldrich), pH 7,6) ao tecido coletado. Cada amostra de homogenato foi centrifugada a 1.000 x g a 4ºC por 10 minutos para remover uma porção não rompida do tecido. O sobrenadante resultante foi ultracentrifugado a 100.000 x g a 4ºC por 60 minutos, e o precipitado assim obtido foi suspenso em tampão bicarbonato Krebs-Ringer (fabricado por Sigma Aldrich) para determinar quantitativamente a quantidade de proteína usando um kit de ensaio de proteína BCA (fabricado por Thermo Fisher Scientific KK).

[00182] Uma reação entre uma fração de membrana e o composto marcado com 3H do Exemplo 7 foi realizada em um microtubo, todos usando tampão bicarbonato de Krebs-Ringer. As amostras, cada uma obtida pela adição de uma solução do composto do Exemplo 7 (não marcada, 400 µM, 100 µL) a uma solução de proteína de uma fração de membrana de cada tecido (0,2 mg/mL, 200 µL) foram designadas como um grupo de amostra A,

53 / 70 e as amostras obtidas pela adição de tampão bicarbonato de Krebs-Ringer (100 µL) foram designadas como um grupo de amostra B.

[00183] O composto marcado com 3H do Exemplo 7 contendo octil-β- D-tioglucopiranosídeo (0,4% (p/v)) (80 nM, 100 µL) foi adicionado a cada uma das amostras dos grupos de amostra A e B, e o resultante foi rapidamente transferido para uma incubadora a 37ºC para iniciar a reação. Após incubação por 1 hora, o resultante foi resfriado em gelo por 5 minutos ou mais para interromper a reação. Cada um dos líquidos de reação resultantes foi adicionado a um filtro de vidro (fabricado por Perkin Elmer Co., Ltd.) imerso em uma solução de polietilenoimina a 0,05% com antecedência, e a pressão foi rapidamente reduzida para filtração por sucção para fazer com que a fração de membrana fosse adsorvida no filtro de vidro. O filtro de vidro foi lavado com tampão bicarbonato de Krebs-Ringer seis vezes, 10 mL de Hionic-Fluor (fabricado por Perkin Elmer Co., Ltd.) foram adicionados ao resultante, e a radioatividade do composto marcado com 3H assim aglutinado do Exemplo 7 foi medido como uma taxa de desintegração (doravante, referida como dpm) por cintilação líquida. Uma aglutinação específica (dpm/µg) foi calculada como um valor (dpm/µg) obtido dividindo, pela quantidade de proteína, uma diferença entre uma média dos valores medidos do dpm do grupo de amostra B e uma média de valores medidos do dpm do grupo de amostra A.

[00184] As frações de membrana preparadas a partir dos respectivos tecidos dos ratos e os resultados da avaliação da propriedade de aglutinação do composto marcado com 3H do Exemplo 7 são ilustrados na Figura 2. O eixo geométrico vertical da Figura 2 indica a aglutinação específica (dpm/µg) (média, duas amostras de cada grupo). O eixo geométrico horizontal indica as frações de membrana preparadas a partir dos tecidos do cérebro, cerebelo, tronco cerebral, medula espinhal, gânglio da raiz dorsal, nervo ciático, coração, fígado, rim, intestino delgado, músculo, e a pele da esquerda.

54 / 70

[00185] Como resultado, a aglutinação específica do composto do Exemplo 7 a cada fração de membrana preparada a partir dos respectivos tecidos foi significativa na fração de membrana preparada a partir do gânglio da raiz dorsal. Em segundo lugar, a aglutinação específica à fração de membrana preparada a partir do nervo ciático foi de 42% da aglutinação específica à fração de membrana preparada a partir do gânglio da raiz dorsal. A aglutinação específica à fração de membrana preparada a partir da medula espinhal foi de 23% da aglutinação específica à fração de membrana preparada a partir do gânglio da raiz dorsal. A aglutinação específica à fração de membrana preparada a partir do tronco cerebral foi de 4,2% da aglutinação específica à fração de membrana preparada a partir do gânglio da raiz dorsal, e as aglutinações específicas às frações de membrana preparadas a partir de outros tecidos, incluindo o cérebro foram inferiores a 1% da aglutinação específica à fração de membrana preparada a partir do gânglio da raiz dorsal. O composto do Exemplo 7 foi assim especificamente aglutinado às frações de membrana preparadas a partir dos nervos periféricos, como o gânglio da raiz dorsal e o nervo ciático ou a medula espinhal e, assim, verificou-se que o alvo molecular do composto do Exemplo 7 está presente nos nervos periféricos ou na medula espinhal, e que o derivado de amina cíclica (I) atua aglutinando-se a uma membrana presente nos nervos periféricos ou na medula espinhal.

[00186] (Exemplo 11) Identificação da molécula de aglutinação do derivado de amina cíclica (I) ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

[00187] A fim de identificar uma molécula de aglutinação do derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, purificação por afinidade usando grânulos FG imobilizados com o derivado de amina cíclica (I) e identificação abrangente foram realizadas.

[00188] A fim de imobilizar, através de uma ligação de amida, o derivado de amina cíclica (I) com grânulos FG possuindo um ligante de grupo amino, foi sintetizado um derivado de amina cíclica possuindo um grupo

55 / 70 carboxila.

[00189] Como o derivado de amina cíclica com um grupo carboxila, ácido acético (S)-2-(3-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-1-(1-metil-1H- imidazol-2-il)-3- oxopropoxi) (doravante, referido como um composto para imobilizar grânulos) representado pela seguinte fórmula química foi utilizado para realizar a síntese como segue: Síntese do composto para imobilizar grânulos: [Fórmula 31]

[00190] Paládio-carbono (10% úmido, 14,0 mg) foi adicionado a uma solução de benzil (S)-2-(3-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-1-(1-metil-1H- imidazol-2-il)-3-oxopropoxi) acetato (0,0550 g, 0,128 mmol) em etanol (2,50 mL) em temperatura ambiente, seguido por agitação durante 6 horas sob uma atmosfera de hidrogênio. O líquido de reação resultante foi filtrado através de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter ácido acético (S)-2-(3-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-1-(1-metil-1H-imidazol-2- il)-3-oxopropoxi) (0,0404 g, 0,119 mmol, 93%) como um óleo incolor. 1

[00191] H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 1,30-1,69 (2H, m), 1,88-2,10 (2H, m), 2,40-2,63 (7H, m), 2,88-3,20 (3H, m), 3,21-3,41 (1H, m), 3,74-3,98 (5H, m), 4,09-4,27 (1H, m), 4,63-4,78 (1H, m), 5,20-5,26 (1H, m), 6,84 (1H, s), 6,95 (LH, s).

[00192] ESI-MS: m/z = 339 (M + H)+.

[00193] O composto para imobilizar grânulos foi fixado em grânulos de NH2 (5 mg, fabricado por Tamagawa Seiki Co., Ltd.). Primeiro, uma solução do composto para imobilizar grânulos (20 mM, 200 µL), uma solução

56 / 70 de succinimida (200 mM, 20 µL) e uma solução de 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (200 mM, 20 µL) foram adicionados a N,N- dimetilformamida (160 µL) e a mistura resultante foi reagida usando um misturador de microtubo em temperatura ambiente por 2 horas para preparar uma solução ativada do composto para imobilizar grânulos. Subsequentemente, N,N-dimetilformamida (900 µL) e a solução ativada do composto para imobilizar grânulos (100 µL) foram adicionados a grânulos de NH2 e o resultante foi reagido usando um misturador de microtubos em temperatura ambiente durante a noite. O resultante foi lavado com N,N- dimetilformamida (500 µL) três vezes, anidrido acético foi adicionado ao mesmo para obter uma concentração de 20% e o resultante foi reagido usando um misturador de microtubos em temperatura ambiente por 2 horas. Por fim, o resultante foi lavado com metanol a 50% (500 µL) três vezes para obter grânulos imobilizados com o derivado de amina cíclica.

[00194] Uma solução de proteína a ser reagida com os grânulos imobilizados com o derivado de amina cíclica foi preparada a partir de gânglios da raiz dorsal de rato. Os gânglios da raiz dorsal foram separados de ratos SD machos de 6 semanas de idade (fabricados por Charles River Laboratories Japan, Inc.). Os ratos foram anestesiados com uretano e sacrificados por exsanguinação da aorta abdominal. Após a incisão da parte dorsal, a coluna vertebral foi excisada e resfriada em gelo. O lado dorsal da coluna vertebral foi cortado e a medula espinhal foi removida do lado ventral da coluna vertebral. Em seguida, os gânglios da raiz dorsal (T11 a T13 e L3 a 6, esquerdo e direito) com feixes de fibras nervosas foram excisados com pinça de precisão. Os gânglios da raiz dorsal excisados foram mergulhados em meio L-15 de Leibovitz gelado (fabricado pela Thermo Fisher Scientific), e os feixes de fibras nervosas foram removidos sob um microscópio estereoscópico para separar os gânglios da raiz dorsal. Os gânglios da raiz dorsal separados foram congelados com nitrogênio líquido para serem

57 / 70 armazenados a -80ºC. Assim como os gânglios da raiz dorsal, tecidos coletados de 21 indivíduos foram misturados para serem tratados como uma amostra.

[00195] Os gânglios da raiz dorsal foram homogeneizados em um tampão de ensaio (NaCl (140 mM), KCl (5 mM), CaCl2⋅2H2O (1,2 mM), MgCl2⋅6H2O (2 mM), D(+)-glicose (14 mM), Hepes (10 mM) e coquetel de inibidor de protease (fabricado por Sigma Aldrich), pH 7,4) usando um homogeneizador Dounce para preparar um homogenato de gânglio da raiz dorsal. Um tensoativo n-Dodecil-β-D-Maltopiranosídeo (fabricado pela Sigma Aldrich) foi adicionado ao homogenato do gânglio da raiz dorsal para obter uma concentração de 1% e o resultante foi incubado a 4ºC por 1 hora. O resultante foi centrifugado a 20.400 x g durante 30 minutos, e o sobrenadante resultante foi diluído 40 vezes, e o resultante foi concentrado com Amicon Ultra 3kDa (fabricado por Merck Millipore Ltd.).

[00196] Os grânulos imobilizados com o derivado de amina cíclica e a solução de proteína foram misturadas para reagir a 4°C durante a noite. As grânulos resultantes foram lavadas com o tampão de ensaio três vezes, depois lavadas com PBS(-) uma vez e suspensas em PBS(-). As proteínas que se aglutinam aos grânulos foram amplamente identificadas por proteômica aleatória (LC-MS/MS).

[00197] As proteínas que não se aglutinam aos grânulos não imobilizados com o composto, mas que se aglutinam aos grânulos imobilizados com o derivado de amina cíclica, são mostrados na Tabela 3. Os IDs de entrada (ratos) e os nomes das proteínas são citados no banco de dados de proteínas Uniprot (http://www.uniprot.org/). Uma proteína com uma entrada ID F1LTJ5 é, no entanto, listada como Proteína não caracterizada no banco de dados Uniprot, mas é mostrada como um ortólogo da proteína central de proteoglicano de sulfato de heparano específico da membrana basal no Sistema de Classificação PANTHER e, portanto, o nome desta proteína é

58 / 70 mostrado na Tabela 3 como proteína de núcleo de proteoglicano de sulfato de heparano específica da membrana basal. [Tabela 3] ID de entrada Nome da Proteína (uniprot) F1LTJ5 Núcleo de proteína de heparano sulfato específico da membrana basal F1LTJ5 M0RCA6 Advilina Q9QYF3 Miosina-Va não convencional P19139 Subunidade da caseína quinase II α D3ZN27 Membro C13 da família de proteínas de choque térmico DnaJ (Hsp40) Q925G1 Proteína relacionada ao fator de crescimento derivado de hepatoma 2 F1LPD0 Proteína semelhante a cadeia de colágeno alfa-1 (XV) P47853 Biglicano

[00198] Entre as oito moléculas assim identificadas, a advilina é relatada como altamente expressa em um tecido nervoso periférico em comparação com a de outros tecidos (Ravenall et al., European Journal of Neuroscience, 2002, vol. 27, págs.14404-14414). Uma vez que é revelado, no Exemplo 10, que o alvo molecular do composto do Exemplo 7 é uma molécula presente em uma grande quantidade em um nervo periférico, sugere-se que o alvo molecular do derivado de amina cíclica (I) pode ser possivelmente advilina.

[00199] Também é relatado que a advilina forma um complexo com a miosina identificada neste exemplo (Chuang et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2018, vol. 115, págs. E8557-E8566). Consequentemente, é sugerido que o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode se aglutinar a advilina e/ou um complexo de advilina contendo uma proteína identificada neste exemplo ou semelhante, e regular a função de advilina. (Exemplo 12) Efeito da diminuição dos filamentos de actina intracelular na

59 / 70 linha celular de neurônios do gânglio da raiz dorsal de rato:

[00200] Foi examinado o efeito do derivado de amina cíclica (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na quantidade de filamentos de actina intracelulares em células F11 (linha celular de neurônio do gânglio da raiz dorsal de rato).

[00201] Como compostos de teste, foram usados os compostos dos Exemplos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 e 9.

[00202] Como compostos de exemplos comparativos, 1-(4- (dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-etil-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1- ona (doravante, referido como o composto do Exemplo Comparativo 1), 1- (4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxi-3-(1-(2,2,2-trifluoroetil)-1H- imidazol-2-il)propan-1-ona (doravante, referido como o composto do Exemplo Comparativo 2), 1-((R)-3-(dimetilamino)pirrolidin-1-il)-3-hidroxi-3- (1-metil-1H-imidazol-2-il)propan-1-ona (doravante, referido como o composto do Exemplo Comparativo 3), e 1-((R)-3-(3-(dimetilamino) piperidin-1-il)-3-hidroxi-3-(1-metil-1H-imidazol-2-il)propan-1-ona (doravante, referido como o composto do Exemplo Comparativo 4) mostrado na Tabela 4 foram usados. Os compostos dos Exemplos Comparativos 1, 2, 3 e 4 foram sintetizados de acordo com métodos descritos na literatura conhecida (Publicação Internacional No. WO2016/136944). [Tabela 4] Composto Fórmula Estrutural Composto do Exemplo Comparativo 1 Composto do Exemplo Comparativo 2 Composto do Exemplo Comparativo 3

60 / 70 Composto do Exemplo Comparativo 4

[00203] Para retirar as células F11 de um frasco de cultura, 0,25% de Tripsina/EDTA (fabricado por Thermo Fisher Scientific KK) foi adicionado às células, seguido de incubação em temperatura ambiente por vários minutos. Em seguida, foi adicionado meio DMEM contendo soro fetal bovino a 10% (fabricado por Thermo Fisher Scientific KK) para suspensão, e o resultante foi centrifugado a 1.500 rpm durante 1 minuto. Depois de remover o sobrenadante centrífugo resultante, 0,5% de meio DMEM contendo soro fetal bovino foi adicionado ao mesmo para suspender as células, e o resultante foi semeado em uma placa de 96 poços revestida com poli-D-lisina (fabricada por BD Biosciences) revestida com laminina (2 µg/cm2, fabricado pela Sigma Aldrich) para ser cultivado a 37ºC em um ambiente de 5% de CO2. Duas horas após a semeadura das células, N,N-dibutiladenosina 3’,5’-fosfato (concentração final 1mM, fabricado por Sigma Aldrich) e GDNF de rato recombinante (concentração final 50 ng/mL, fabricado por PeproTech) foram adicionados à cultura as células a 37ºC sob um ambiente de 5% de CO2 por 7 dias para diferenciação.

[00204] Sete dias após o início da cultura, o meio foi trocado por meio DMEM contendo 0,5% de soro fetal bovino contendo oxaliplatina (concentração final 15 µM), e o resultante foi cultivado por 5 dias para induzir lesão axonal. Cada um dos compostos dos Exemplos e Exemplos Comparativos foi contido no meio (concentração final de 10 µM) para tratamento da mesma maneira que a oxaliplatina.

[00205] Cinco dias após o tratamento com oxaliplatina e cada um dos compostos, as células resultantes foram lavadas com PBS(-) três vezes, um tampão paraformaldeído-fosfato a 4% (fabricado por Wako Pure Chemical Industries Ltd.) foi adicionado a mesmas, e o resultante foi deixado em repouso em temperatura ambiente por 10 minutos para fixar as células.

61 / 70 Adicionou-se acti-stain 670 phalloidin (fabricado por Cytoskeleton Inc.) e o resultante foi incubado em temperatura ambiente durante 30 minutos para corar os filamentos de actina. Uma imagem das células foi adquirida usando IN Cell Analyzer 2200 (fabricado pela GE Healthcare), e a imagem foi analisada usando IN Cell Investigator Developer Toolbox. A quantidade de filamentos de actina intracelulares foi indicada pela quantidade de fluorescência (densidade) da faloidina marcada com fluorescência que se aglutina aos filamentos de actina.

[00206] Em um grupo tratado apenas com oxaliplatina (doravante referido como grupo tratado com oxaliplatina sozinha), a quantidade de filamentos de actina intracelulares aumentou 5% em comparação com um grupo não tratado com oxaliplatina. Uma vez que a quantidade aumentou estatisticamente significativamente, foi confirmado que a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina foi induzida (p < 0,05, teste t de Student). Foi calculada uma taxa de diminuição dos filamentos de actina intracelulares, causada por cada composto, em comparação com a quantidade de filamentos de actina intracelulares do grupo tratado com oxaliplatina sozinha.

[00207] Os efeitos da diminuição dos filamentos de actina intracelular dos respectivos compostos nas células F11 são mostrados na Tabela 5. Em “Taxa diminuição de filamentos de actina intracelulares” da tabela, uma razão (%) da quantidade de filamentos de actina intracelulares diminuída pelo tratamento com cada composto, em comparação com a quantidade de filamentos de actina intracelulares do grupo tratado apenas com oxaliplatina é mostrado (valor médio, cada grupo incluindo cinco amostras, assumindo que uma amostra corresponde a um poço). No “Composto de Teste” da tabela, um grupo tratado com composto tratado com um dos compostos correspondente é mostrado. [Tabela 5]

62 / 70 Taxa de Diminuição do Filamento de Composto de Teste Actina Intracelular (%) Composto do Exemplo 1 5,2 Composto do Exemplo 2 11,8 Composto do Exemplo 3 9,9 Composto do Exemplo 4 8,5 Composto do Exemplo 5 9,6 Composto do Exemplo 6 6,7 Composto do Exemplo 7 9,6 Composto do Exemplo 8 6,4 Composto do Exemplo 9 17,5 Composto do Exemplo Comparativo 1 2,1 Composto do Exemplo Comparativo 2 4,5 Composto do Exemplo Comparativo 3 2,4 Composto do Exemplo Comparativo 4 3,8

[00208] Em comparação com o grupo tratado com solvente, a quantidade de filamentos de actina intracelular diminuiu 5% ou mais pelos compostos dos Exemplos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 e 9. Por outro lado, as taxas de diminuição dos filamentos de actina intracelulares dos compostos dos Exemplos Comparativos 1, 2, 3 e 4 foram de 5% ou menos. (Exemplo 13) Efeito de melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina no modelo de ligadura do nervo espinhal de rato:

[00209] O efeito do derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em uma razão entre a quantidade de filamentos de actina e a quantidade de monômeros de actina no nervo ciático de um modelo de ligadura de nervo espinhal de rato foi examinado.

[00210] Foram utilizados ratos SD machos (fabricados por Charles River Laboratories Japan, Inc.) com 6 semanas de idade. Cada modelo de ligadura do nervo espinhal de rato foi produzido pela ressecção do arco

63 / 70 vertebral da coluna vertebral por incisão da parte inferior das costas direita sob anestesia por inalação de isoflurano, aglutinando completamente as raízes nervosas L5 e L6 do nervo espinhal e, em seguida, suturando a camada muscular e a pele. Como um controle negativo (grupo de operação simulada), os nervos L5 e L6 direitos foram expostos e, em seguida, a camada muscular e a pele foram suturadas de forma semelhante, sem ligadura. Uma semana após a ligadura do nervo, os ratos foram usados para realizar a seguinte experiência.

[00211] O composto do Exemplo 7 foi administrado oralmente a cada modelo de ligadura do nervo espinhal de rato em qualquer uma das três doses de 6, 20 e 60 mg/kg uma vez por dia durante 2 dias. Três horas após a última administração, o nervo ciático foi coletado sob anestesia com isoflurano e o rato foi sacrificado. O nervo ciático coletado foi congelado e armazenado a - 80ºC. Como controles, um grupo de operação simulada de ratos administrado com um solvente de água destilada e um grupo de ratos modelo de ligadura do nervo espinhal administrado com água destilada (grupo de administração de água destilada) foram providos, e os ratos de ambos os grupos foram submetidos ao mesmo tratamento para coleta dos nervos ciáticos e depois sacrificados.

[00212] Para a determinação quantitativa de filamentos de actina e monômeros de actina, foi usado o kit de ensaio in vivo G-actina/F-actina (fabricado pela Cytoskeleton Inc.). Os tecidos congelados foram homogeneizados com um inibidor de protease e ATP (1 mM) contendo lise e tampão de estabilização de F-actina (fabricado por Cytoskeleton Inc.) foi adicionado aos mesmos. O homogenato assim obtido foi incubado a 37ºC por 10 minutos, e o resultante foi centrifugado a 350 x g por 5 minutos. O sobrenadante resultante foi centrifugado a 100.000 x g a 37°C durante 1 hora. Um sobrenadante obtido após a centrifugação foi usado como uma amostra de monômero de actina, e um precipitado foi usado como uma amostra de

64 / 70 filamento de actina. A amostra de filamento de actina foi incubada em gelo por 1 hora e pipetada uma vez a cada 15 minutos. A quantidade de actina em cada amostra de monômero de actina e na amostra de filamento de actina foi medida por Western blotting. Cada uma da amostra de monômero de actina e a amostra de filamento de actina foi submetida a tratamento de desnaturação por calor com tampão de amostra SDS adicionado a mesma, e o resultante foi aplicado em gel pré-moldado SDS-PAGE (fabricado por Bio-Rad) para eletroforese para separar a proteína. A proteína contida no gel foi movida eletricamente para/fixada em uma membrana de PVDF para preparar um manchamento (membrana de manchamento) (Trans-blot Turbo Blotting System, fabricado pela Bio-Rad). Após a membrana de manchamento ter sido bloqueada (Block One, fabricado por Nacalai Tesque, Inc.), um anticorpo contra a actina (anticorpo policlonal de coelho anti-actina) foi adicionado a mesma, seguido por incubação em temperatura ambiente por 1 hora. Após a lavagem da membrana de manchamento resultante, foi adicionado um anticorpo secundário anticoelho marcado com HRP (fabricado por GE Healthcare), seguido de incubação em temperatura ambiente durante 30 minutos. Após a lavagem da membrana de manchamento resultante, um reagente de detecção (ECL Prime, fabricado pela GE Healthcare) foi adicionado ao mesmo para detectar a quimioluminescência usando um CCD Imager (fabricado pela Bio-Rad). A intensidade da luminescência de uma banda correspondente à actina foi determinada quantitativamente usando o software Image Lab (fabricado pela Bio-Rad).

[00213] Os resultados da avaliação do composto do Exemplo 7 em uma razão filamento de actina/monômero de actina no nervo ciático do modelo de ligadura do nervo espinhal de rato são ilustrados na Figura 3. A Figura 3a ilustra imagens, detectadas por Western blotting, da proteína actina presente em amostras de filamento de actina (imagens superiores) e amostras de monômero de actina (imagens inferiores) isoladas do nervo ciático. A

65 / 70 intensidade de luminescência de cada banda da proteína actina foi determinada quantitativamente, e uma razão dos filamentos de actina para os monômeros de actina (doravante, referida como a razão filamento de actina/monômero de actina) foi calculada para ser ilustrada na Figura 3b. O eixo geométrico vertical da Figura 3b indica a razão filamento de actina/monômero de actina (média ± desvio padrão). “Operação de simulação de água destilada” no eixo geométrico horizontal indica o grupo de operação simulada (6 amostras), “Água destilada” indica o grupo de administração de água destilada dos ratos modelo de ligadura do nervo espinhal (7 amostras), “Composto do Exemplo 7” indica o grupo de ratos modelo de ligadura do nervo espinhal administrado com o composto do Exemplo 7, “6” indica o grupo de ratos modelo de ligadura do nervo espinhal administrado com o composto do Exemplo 7 a 6 mg/kg (6 amostras), “20 “Indica o grupo de ratos modelo de ligadura do nervo espinhal administrado com o composto do Exemplo 7 a 20 mg/kg (6 amostras), e” 60 “indica o grupo de ratos modelo de ligadura do nervo espinhal administrado com o composto do Exemplo 7 a 60 mg/kg (7 amostras). Neste desenho, “#” indica que há uma diferença estatisticamente significativa (#: p < 0,05, teste t de Student) em comparação com o grupo de operação simulada, e “*” indica que há uma diferença estatisticamente significativa (*: p 0,025, comparação múltipla de Williams, unilateral) em comparação com o grupo de administração de água destilada de ratos modelo de ligadura do nervo espinhal.

[00214] No grupo de modelo de ligadura do nervo espinhal de rato administrado com água destilada (grupo de administração de água destilada), a razão filamento de actina/monômero de actina aumentou significativamente em comparação com o grupo de operação simulada. Nos grupos administrados com o composto do Exemplo 7, a razão filamento de actina/monômero de actina foi reduzida conforme a dose do composto do Exemplo 7 foi aumentada, e foi significativamente reduzida no grupo

66 / 70 administrado a 60 mg/kg em comparação com aquele no grupo de administração de água destilada. Especificamente, foi revelado que o composto do Exemplo 7 tem o efeito de melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina do nervo ciático causada pela ligadura do nervo espinhal.

[00215] Como a função de advilina, isto é, um dos alvos moleculares do derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo descrito no Exemplo 11, uma função de regulação da renovação do filamento de actina via aglutinação à actina foi relatada (Hasegawa et al, The Journal of Neuroscience, 2007, vol. 27, págs. 14404-14414). Consequentemente, foi revelado, com base nos Exemplos 11, 12 e 13, que o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem, além de um efeito de aglutinação à advilina e/ou um a complexo de advilina, um efeito de promoção da função de advilina e/ou um complexo de advilina para melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina. (Exemplo 14) Avaliação do efeito da promoção da extensão do axônio em células cultivadas primárias do gânglio da raiz dorsal de rato:

[00216] Foi examinado o efeito do derivado de amina cíclica (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na extensão da neurita em células de cultura primária do gânglio da raiz dorsal de rato.

[00217] Foram utilizados ratos SD machos (fabricados por Charles River Laboratories Japan, Inc.) de 4 a 7 semanas de idade. Cada rato foi anestesiado pela administração intraperitoneal de uretano. Depois de confirmar que o rato estava anestesiado, o rato foi rapidamente sacrificado por exsanguinação da aorta abdominal. Após a incisão da parte dorsal, a coluna vertebral foi excisada e resfriada em gelo. O lado dorsal da coluna vertebral foi cortado e a medula espinhal foi removida do lado ventral da coluna vertebral para expor os gânglios da raiz dorsal no lado ventral da coluna

67 / 70 vertebral. Os gânglios da raiz dorsal (L3 a 6, direito e esquerdo) foram excisados com uma pinça e mergulhados em meio L-15 de Leibovitz gelado (fabricado pela Thermo Fisher Scientific) e os feixes de fibras nervosas foram removidos sob um microscópio estereoscópico. Os gânglios da raiz dorsal a partir dos quais os feixes de fibras nervosas foram removidos, foram feitos cortes finos com tesouras oftálmicas para serem usados como pedaços de gânglios da raiz dorsal.

[00218] Os pedaços de gânglio da raiz dorsal foram mergulhados em cerca de 3 mL de uma solução de colagenase A (fabricada por Roche Molecular Systems, Inc.), seguido de incubação a 37ºC por 20 minutos. Após a incubação, o resultante foi centrifugado a 200 x g a 25ºC por 5 minutos para remover uma solução de colagenase A correspondente ao sobrenadante. Cerca de 1 mL de uma solução de tripsina foi adicionada ao mesmo, seguido por incubação a 37°C por 5 minutos. Posteriormente, cerca de 3 mL de DMEM (fabricado pela Thermo Fisher Scientific KK) contendo 10% de soro fetal bovino foram adicionados ao resultante, o resultante foi centrifugado a 200 x g em temperatura ambiente por 5 minutos e, em seguida, o sobrenadante foi removido. Após a remoção do sobrenadante, cerca de 5 mL de meio Neurobasal-A (doravante, referido como o meio de cultura, fabricado por Thermo Fisher Scientific KK) contendo 2% de suplemento B27 foi adicionado ao precipitado, e o precipitado foi disperso com uma micropipeta. Um filtro de células de 70 µM (fabricado pela BD Falcon) foi usado para coletar as células com os resíduos removidos, e os resíduos restantes no filtro de células foram lavados com 5 mL do meio de cultura para coletar as células. As células assim coletadas foram centrifugadas a 200 x g em temperatura ambiente durante 5 minutos para remover o sobrenadante.

[00219] Após a remoção do sobrenadante, 5 mL do meio de cultura foram adicionados para suspender os pelotas de células. A suspensão de células assim obtida foi semeada em uma placa de 96 poços revestida com

68 / 70 poli-D-lisina (fabricada por BD Biosciences) revestida com laminina (6 µg/cm2, fabricada por Sigma Aldrich) por 100 µL para ser cultivada em incubadora de CO2 a 37ºC e CO2 a 5%.

[00220] Duas horas após o início da cultura, o meio foi trocado por um meio de cultura contendo oxaliplatina (concentração final 3 µM), e o resultante foi cultivado por 7 dias para induzir lesão axonal. O composto do Exemplo 7 foi levado a ser contido no meio de cultura (concentração final de 10, 30 ou 100 µM) para tratamento ao mesmo tempo que a oxaliplatina.

[00221] Uma semana após o início da cultura, as células resultantes foram lavadas com PBS(-) três vezes e tratadas com um tampão paraformaldeído-fosfato a 4% durante 10 minutos. O resultante foi lavado com PBS(-) três vezes e tratado com Blocking One a 20% (fabricado por Nacalai Tesque, Inc.) e Triton X-100 a 0,1%/PBS(-) durante 1 hora. Após a lavagem com PBS(-) uma vez, o resultante foi tratado a 4ºC durante a noite com um anticorpo monoclonal de camundongo anti-tubulina βIII (fabricado pela Promega Corporation) diluído 500 vezes com Triton X-100 a 0,1%/PBS(-) contendo Blocking One a 5%. Após o tratamento durante a noite, o resultante foi lavado com PBS(-) três vezes, e foi tratado em temperatura ambiente por 1 hora com um anticorpo secundário (anticorpo de burro IgG anti-camundongo CF488A, fabricado pela Biotium) diluído com de Triton X- 100 a 0,1%/PBS(-) contendo Blocking One a 5%. Posteriormente, o resultante foi lavado com PBS(-) três vezes, tratado por 5 minutos com DAPI (fabricado por Dojindo Laboratories) diluído 1000 vezes com PBS(-), e lavado com PBS(-) três vezes.

[00222] Uma imagem das células resultantes foi adquirida usando IN Cell Analyzer 2200 (fabricado pela GE Healthcare), e a imagem foi analisada usando IN Cell Investigator Developer Toolbox. Como resultado da análise, um valor obtido pela divisão do comprimento de uma região identificada como neurita (comprimento da fibra) pelo número de neurônios foi mostrado

69 / 70 como o comprimento de uma neurita por célula e um efeito de aumento do comprimento de uma neurita foi avaliada como efeito de extensão do axônio.

[00223] A Figura 4 ilustra imagens de exemplos de células médias, obtidas nas respectivas condições, de um grupo sem tratamento (tratado com água destilada), um grupo tratado com oxaliplatina sozinha e um grupo tratado com oxaliplatina e 100 µM do composto do Exemplo 7. Conforme ilustrado na Figura 4, foi observada uma imagem na qual o comprimento de uma neurita foi reduzido pelo tratamento com oxaliplatina sozinha, e verificou-se que o comprimento de uma neurita foi aumentado pelo tratamento com o composto do Exemplo 7 (100 µM) em comparação com o grupo tratado com oxaliplatina sozinha.

[00224] Os resultados da análise do comprimento das neuritas nas respectivas imagens são ilustrados na Figura 5. O eixo geométrico vertical da Figura 5 indica o comprimento de uma neurita (µm/neurônio) (média ± desvio padrão, cada grupo consistindo em 5 amostras). “Água destilada” mostrado no eixo geométrico horizontal indica o grupo não tratado, “Oxaliplatina + Água Destilada” indica o grupo tratado com oxaliplatina sozinha, “Oxaliplatina + Composto do Exemplo 7” indica o grupo administrado com oxaliplatina e o composto do Exemplo 7, “10” indica o grupo tratado com oxaliplatina e 10 µM do composto do Exemplo 7, “30” indica o grupo tratado com oxaliplatina e 30 µM do composto do Exemplo 7 e “100” indica o grupo tratado com oxaliplatina e 100 µM do composto do Exemplo 7. Neste desenho, “#” indica que há uma diferença estatisticamente significativa em comparação com o grupo não tratado (#: p < 0,05, teste t de Student) e “*” indica que há uma diferença estatisticamente significativa em comparação com o grupo tratado apenas com oxaliplatina (*: p < 0,025, comparação múltipla de Williams, unilateral).

[00225] Conforme ilustrado na Figura 5, enquanto o comprimento de uma neurita foi significativamente reduzido pelo tratamento com oxaliplatina

70 / 70 sozinha, verificou-se que o comprimento de uma neurita aumentava pelo tratamento com o composto (10, 30 ou 100 µM) do Exemplo 7 conforme a dose do composto do Exemplo 7 foi aumentada em comparação com aquela no grupo tratado com oxaliplatina sozinha. No grupo tratado com 100 µM do composto do Exemplo 7, verificou-se que o comprimento aumentou significativamente em comparação com o do grupo tratado com oxaliplatina sozinha. Por outras palavras, foi revelado que o composto do Exemplo 7 tem um efeito de promoção da extensão do axônio em células de cultura primária do gânglio da raiz dorsal de rato com lesão axonal induzida com oxaliplatina.

[00226] Como a função de advilina, isto é, um dos alvos moleculares do derivado de amina cíclica (I) descrito no Exemplo 11, uma função de extensão de um axônio foi relatada (Hasegawa et al, The Journal of Neuroscience, 2007, vol. 27, págs. 14404-14414). Consequentemente, foi revelado, com base nos Exemplos 11 e 14, que o derivado de amina cíclica (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem, além do efeito de aglutinação a advilina e/ou a um complexo de advilina, um efeito de promoção de extensão de axônio.

[00227] Com base nestes resultados, foi revelado que o derivado de amina cíclica (I) que se enquadra no âmbito da presente invenção tem o efeito de promoção da função de advilina. Aplicabilidade Industrial

[00228] O derivado de amina cíclica ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a presente invenção tem o efeito de promoção da função de advilina e, portanto, pode ser usado como um medicamento contra uma doença relacionada com lesão axonal.

[00229] Todas as publicações, patentes e pedidos de patentes citados neste documento são incorporados neste documento por referência em suas totalidades.

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES

1. Agente para promoção da função de advilina, caracterizado pelo fato de que compreende um derivado de amina cíclica representado pela seguinte fórmula geral (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo: [Fórmula 1] em que o carbono marcado com * representa carbono assimétrico, e A representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral (IIa) ou (IIb): [Fórmula 2] em que R1 representa um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2-metoxietila, um grupo 2-etoxietila, um grupo difluorometila ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila, R2 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de flúor ou um átomo de cloro, cada um de R3 representa, independentemente, um grupo metila ou um grupo etila, e X representa -O- ou -N(R3)-.

2. Agente para promoção da função de advilina de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que A é o grupo representado pela fórmula geral (IIa).

3. Agente para promoção da função de advilina de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que A é o grupo representado pela fórmula geral (IIb).

4. Agente para promoção da função de advilina de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que X é -N(R3)-.

5. Agente para promoção da função de advilina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R1 é um grupo metila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo 2- metoxietila ou um grupo 3,3,3-trifluoropropila.

6. Agente para promoção da função de advilina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R2 é um átomo de hidrogênio ou um átomo de cloro.

7. Agente para promoção da função de advilina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que uma configuração estereoquímica do carbono assimétrico marcado com * é S.

8. Agente para promoção da função de advilina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para promoção da função de advilina por aglutinação à advilina e/ou um a complexo de advilina.

9. Agente para promoção da função de advilina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de ser para melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina.

10. Agente para promoção da função de advilina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de ser para promoção da extensão do axônio.

11. Agente para promoção da função de advilina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser para melhorar a anormalidade na regulação da renovação do filamento de actina e promover a extensão do axônio pela aglutinação à advilina e/ou um complexo de advilina.

12. Agente para promoção da função de advilina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de ser um agente terapêutico para lesão axonal.

13. Derivado de amina cíclica, caracterizado pelo fato de ser um composto selecionado do grupo que consiste em 3-hidroxi-3-(1-metil-1H- imidazol-2-il)-1-(4-morfolinopiperidin-1-il) propan-1-ona, 1-(4- (dimetilamino)piperidin-1-il)-3- (1-propil-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan- 1-ona, 1-(4-(dimetilamino) piperidin-1-il)-3-(1-isopropil-1H-imidazol-2-il)-3- hidroxipropan-1-ona, 3-(5-cloro-1-metil-1H-imidazol-2-il)-1-(4- (dimetilamino)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona, 1-(4- (dimetilamino)piperidin-1-il)-3-(1-(2-metoxietil)-1H-imidazol-2-il)-3- hidroxipropan-1-ona e 1-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il) -3-(1-(3,3,3- trifluoropropil)-1H-imidazol-2-il)-3-hidroxipropan-1-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

14. Medicamento, caracterizado pelo fato de que compreende o derivado de amina cíclica ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como definido na reivindicação 13 como ingrediente ativo.

Aglutinação específica

Petição 870210056634, de 23/06/2021, pág. 84/88 Cérebro

Cerebelo

Tronco cerebral

Medula espinhal

Advilina Gânglio da raiz dorsal 1/4

Nervo ciático

Coração Filamento de Actina

Fígado

Rim

Intestino Delgado Cortado por Advilina Aglutinação de Advilina

Músculo

Pele Monômero de Actina

Ligadura do Nervo Espinhal

Composto do Água Exemplo 7 Destilada de Operação Água Simulada Destilada

Filamento de Actina

Monômero de Actina Razão Filamento de Actina/Monômero de Actina

Água Água Destilada Destilada de Operação Simulada Composto do Exemplo 7 (Administração oral mg/kg)

Ligadura do Nervo Espinhal

Tratamento com Água Destilada

Tratamento com Oxaliplatina Sozinha

Tratamento com Oxaliplatina + Composto do Exemplo 7 100µM

Comprimento de neurita (µm/neurônio)

Água Água Destilada Destilada

Composto do Exemplo 7

Oxaliplatina