BR112021011257A2

BR112021011257A2 - Anticorpo anti-il-17a e uso do mesmo

Info

Publication number: BR112021011257A2
Application number: BR112021011257-0A
Authority: BR
Inventors: Jian Yao; Dan Meng; Hui Feng; Sheng Yao; Hai Wu
Original assignee: Shanghai Junshi Biosciences Co., Ltd.; Suzhou Junmeng Biosciences Co., Ltd.
Priority date: 2018-12-12
Filing date: 2019-12-11
Publication date: 2021-08-31
Also published as: IL283881A; CN113166239B; JP2022513224A; MX2021007028A; AU2019397309A1; US20230159632A1; ZA202104048B; KR20210102946A; EP3896086A1; EP3896086A4; WO2020119707A1; SG11202106128TA; CN113166239A; CA3123124A1; CN111303283A

Abstract

anticorpo anti-il-17a e uso do mesmo. a presente invenção refere-se a um anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo que se liga especificamente à il-17a com alta afinidade. também são fornecidos uma molécula de ácidos nucleicos que codifica o anticorpo ou fragmento funcional do mesmo descrito no presente documento, um vetor de expressão e uma célula hospedeira para expressar o anticorpo ou fragmento funcional do mesmo descrito no presente documento e um método para preparar o anticorpo ou fragmento funcional do mesmo descrito no presente documento. a presente invenção também fornece uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo ou fragmento funcional do mesmo descrito no presente documento e o uso do anticorpo ou fragmento funcional do mesmo descrito no presente documento para o tratamento de uma doença de disfunção imune.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICOR- PO ANTI-IL-17A E USO DO MESMO".

CAMPO TÉCNICO

[0001] A presente invenção refere-se a um anticorpo e a um frag- mento de ligação a antígeno do mesmo que se liga especificamente à IL-17A. A presente invenção refere-se particularmente a anticorpos e fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos que inibem a bioativi- dade mediada por IL-17A e composições que contêm os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno e métodos para o tratamento de do- enças relacionadas. A presente invenção refere-se, mais particular- mente, ao uso de anticorpos anti-IL-17A e fragmentos de ligação a an- tígeno dos mesmos no tratamento de doenças patológicas imunes, incluindo doenças autoimunes e inflamatórias, tais como artrite reuma- toide, psoríase, espondilite anquilosante, esclerose múltipla, lúpus eri- tematoso sistêmico (SLE), nefrite lúpica ou doença pulmonar obstruti- va crônica, asma, granuloma infeccioso, fibrose cística ou câncer.

ANTECEDENTES

[0002] A interleucina 17 (IL-17), também conhecida como CTLA-8 ou IL-17A, desempenha um papel fundamental no sistema imune. À família IL-17 inclui seis membros, isto é, IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL- 17D, IL-17E e IL-17F, todos os quais contêm 4 resíduos de cisteína altamente conservados que são cruciais. No entanto, os efeitos bioló- gicos destes membros variam muito. Dentre eles, IL-17A e I|L-17F têm a homologia e funções biológicas mais similares e são estudadas mais profundamente no momento. A IL-17A expressa in vivo tem um peptí- deo sinalizador N-terminal que consiste em 23 aminoácidos, o qual é clivado para gerar IL-17A madura. A IL-17A madura é ligada por dis- sulfureto e é, tipicamente, secretada e está presente como um homo- dímero. Algumas vezes, ela também se liga à IL-17F para formar um heterodímero IL-17AF. Em geral, IL-17A ou IL-17 refere-se à proteína homodimérica IL-17A que é produzida predominantemente por células T auxiliares 17 (T auxiliares 17 ou Th17) e também pode ser sintetiza- da e secretada por outras células imunes, tais como células yóT, célu- las indicadoras de tecido linfoide (LTi), células linfoides inatas (ILCs) e células T assassinas naturais (NKT) (Cua D.J., Tato C.M., Nature revi- ews. 2010, 10: 479-489). A regulação da expressão de IL-17A é muito complicada. Descobriu-se que, quando citocinas como IL-6, IL-18 e TGFRB induzem as células T CD4 * iniciais a se diferenciarem em Th17, as células Th1i7 secretam uma pequena quantidade de IL-17A em vir- tude de sua fraca estabilidade e têm o efeito de dano tecidual fraco. A 11-23, quando presente, causa surto inflamatório e dano tecidual ao promover a estabilidade das células Thi7 para sua secreção contínua de IL-17A, regulando positivamente a expressão de fatores pró- inflamatórios (IL-22, CSF-2 e IFN -y) e regulação negativa da expres- são de fatores anti-inflamatórios (IL-2, IL-27 e IL-12) e outras formas (McGeachy M.J., et al., Nature immunology. 2009, 10: 314-324). Por- tanto, a via da IL-17A desempenha um papel crítico no dano tecidual quando a IL-23 é anormalmente expressa nos tecidos.

[0003] A IL-17 é geralmente secretada em um local específico e atua nos tecidos locais ao se ligar ao receptor de IL-17 (IL-17R) sobre a superfície das células-alvo. A família IL-17R inclui cinco membros, os quais são IL-17RA, IL-17RB, IL-17RC, IL-17RD e IL-17RE, que são amplamente expressos em várias membranas celulares (Iwakura Y,, et al., Immunity. 2011; 34: 149-162). A IL-17 exerce efeitos principalmen- te pela ligação ao complexo IL-17RA/IL-17RC sobre a superfície de células de origem não hematopoiética (tais como células epiteliais e células mesenquimais) (Ishigame H., et al., Immunity. 2009; 30: 108- 119) e danificam os tecidos ao promover a secreção de citocinas (tais como IL-6, G-CSF, GM-CSF, I1L-10, TGF-B e TNF-a), quimiocinas (in- cluindo IL-8, CXCL1 e MCP-1) e prostaglandina (por exemplo, PGE2)

pelas células, induzindo à agregação de neutrófilos e macrófagos e liberando espécies reativas de oxigênio (ROS) (Stark M.A., et al, Immunity. 2005; 22: 285-294).

[0004] Doenças autoimunes, tais como psoríase, artrite reumatoi- de, espondilite anquilosante, doença de Crohn e esclerose múltipla, representam uma séria ameaça à saúde humana. Descobriu-se que a dissecretose de IL-17 está intimamente relacionada à ocorrência e ao desenvolvimento destas doenças. Os anticorpos que têm como alvo a IL-17 são eficazes no alívio dos sintomas de doenças autoimunes ao inibir a via de sinalização IL-17-IL-17R (Sarah L., et al.,, Nat Rev Immunol. 2014, 14 (9): 585-600). O Cosentyx (secuquinumabe), de- senvolvido pela Novartis, é o primeiro anticorpo monoclonal contra a IL-17 do mundo. Suas indicações aprovadas incluem psoríase em pla- cas moderada a grave, constituindo uma importante opção de trata- mento biológico de primeira linha para a vasta população com psoría- se. No entanto, é urgente e significativo desenvolver anticorpos anti-IL- 17 com propriedades diferentes, tais como estruturas diferentes, me- lhor eficácia e faixas de indicação mais amplas para o tratamento de doenças autoimunes relacionadas, tais como psoríase, artrite reuma- toide e espondilite anquilosante, bem como outras doenças relaciona- das à IL-17.

BREVE SUMÁRIO

[0005] A presente invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga especificamente à IL-17A humana que compreende pelo menos uma sequência de região de- terminante de complementaridade (CDR) selecionada a partir de SEQ ID NOs: 1-24 e 60-65.

[0006] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende pelo menos um domínio de CDR de cadeia pesada selecionado a partir de

SEQ ID NOs: 1-3, 4-6, 7-9, 10-12 e 60-62 e/ou pelo menos um domí- nio de CDR de cadeia leve selecionado a partir de SEQ ID NOs: 13- 15, 16-18, 19-21, 22-24 e 63-65.

[0007] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende uma região variável de cadeia pesada (VH), em que a VH compreende uma HCDR1 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 1, 4, 7, 10 e 60, uma HCDR?2 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 2, 5, 8, 11 e 61 e uma HCDR3 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 3, 6, 9, 12 e 62.

[0008] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende uma região variável de cadeia pesada (VH), em que a VH compreende um conjunto de sequências de aminoácidos de HCDR1, HCDR2 e HCDR3 selecionadas a partir de qualquer um dos conjuntos A a E: [ ssanNo | seaInNOS | sato Nos | [| P ssenvon | ssaiNo1 | saio Nora |

[0009] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende uma região variável de cadeia leve (VL), em que a VL compreende uma LCDR1 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 13, 16, 19, 22 e 63, uma LCDR?2 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 14, 17, 20, 23 e 64 e uma LCDR3 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 15, 18, 21, 24 e 65.

[0010] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende uma região variável de cadeia leve (VL), em que a VL compreende um con- junto de sequências de aminoácidos de LCDR1, LCDR2 e LCDR3 se-

[0012] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e/ou uma região variável de cadeia leve (VL), em que a VH tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 25, 26, 27, 28, 33, 35, 388 e 40 e/ou a VL tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de

SEQ ID NOs: 29, 30, 31, 32, 34, 36, 38, 39 e 41.

[0013] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que as regiões variáveis têm um conjunto de sequências de aminoácidos selecionadas a partir de qualquer um dos conjuntos 1 a: E snNo sea nNo-ranso |

[0014] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende uma cadeia leve (LC) e/ou uma cadeia pesada (HC), em que a HC tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 42, 44, 46 e 49 e/ou a LC tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 43, 45, 47, 48 e 50.

[0015] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento compreende uma cadeia leve (LC) e uma cadeia pesada (HC), em que a LC tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43 e a HC tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 ou 44; a LC tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 45 e a HC tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; a LC tem uma sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO. 47 ou 48 e a HC tem uma sequência de ami-

noácidos apresentada em SEQ ID NO: 46; ou a LC tem uma sequên- cia de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50 e a HC tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

[0016] Em uma modalidade, o anticorpo descrito no presente do- cumento é um anticorpo intacto, de preferência IgG e, mais preferivel- mente, IgG4.

[0017] Em uma modalidade específica, o anticorpo descrito no presente documento é 1F8, 2B2, 2F5, ch1, ch2, ch16, hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 ou hu250.

[0018] Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento é caracterizado por: a) ligação específica à IL-17A homodimérica e IL-17AF heterodi- mérica; b) bloquear a ligação de IL-17A ao seu receptor; e/ou c) inibir a bioatividade mediada por IL-17A.

[0019] Em uma modalidade, a IL-17A, IL-17AF ou IL-17F descrita no presente documento é selecionada a partir de um ou mais de ma- caco cynomolgus, camundongo e ser humano.

[0020] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento não se liga es- pecificamente a a) qualquer um ou mais da IL-17F homodimérica hu- mana, IL-17B homodimérica humana, IL-17C homodimérica humana, IL-17D homodimérica humana e IL-17E homodimérica humana e/ou b) qualquer um ou mais de IL-17F homodimérica de macaco cynomolgus e IL-17F homodimérica de camundongo.

[0021] Em outro aspecto, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento tem a função de inibir a ligação de IL-17A ao seu receptor e/ou reduzir a transdução de sinal celular e/ou bioatividade mediada por IL-17A.

[0022] Em uma modalidade, o anticorpo ou a proteína de ligação a antígeno do mesmo descrita no presente documento é capaz de impe-

dir que a IL-17A induza à secreção de CXCL1 por células epiteliais quando avaliada quanto à atividade in vitro.

[0023] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento é capaz de im- pedir que a IL-17A induza à secreção de CXCL1 em camundongos quando avaliada quanto à atividade in vivo.

[0024] Em uma modalidade, o anticorpo ou a proteína de ligação a antígeno do mesmo descrita no presente documento é capaz de resis- tir ao início da psoríase induzida por imiquimode no modelo de ca- mundongo e reduzir a pontuação clínica do início da psoríase em ca- mundongos e o grau de inchaço da orelha dos camundongos quando avaliada quanto à atividade in vivo.

[0025] Em uma modalidade, o anticorpo isolado ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento é capaz de inibir o inchaço da articulação do joelho em modelos de artrite indu- zida por antígeno, tal como o modelo AIA em macaco cynomolgus, quando avaliada in vivo.

[0026] A presente invenção também fornece o uso do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo (de preferência hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 ou hu250) como um medicamento, de prefe- rência como um medicamento para o tratamento de doenças patológi- cas mediadas por IL-17A e/ou tratáveis pela inibição da transdução de sinal à IL-17A.

[0027] Em uma modalidade específica, a doença patológica medi- ada por IL-17A é um transtorno ou condição inflamatória, tal como ar- trite, artrite reumatoide, psoríase, espondilite anquilosante, doença pulmonar obstrutiva crônica, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), nefrite lúpica, asma, esclerose múltipla ou fibrose cística.

[0028] A presente invenção fornece um método para o tratamento de doenças patológicas mediadas por IL-17A que compreende admi-

nistrar uma quantidade eficaz do anticorpo isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento, de pre- ferência o anticorpo hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 ou hu250, de modo a aliviar a condição.

[0029] A presente invenção refere-se também a um método para produzir o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento. Tais métodos incluem moléculas de ácido nucleico isoladas que codificam pelo menos a região variável de cadeia pesada e/ou leve de um anticorpo ou uma proteína descrita no presente documento, ou um vetor de clonagem/expressão que com- preende tais ácidos nucleicos, particularmente recombinante, em uma célula hospedeira para produzir o anticorpo ou a proteína descrita no presente documento, por exemplo, hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 ou hu250.

[0030] A presente invenção refere-se também a um ou mais veto- res de clonagem e uma célula hospedeira que compreende os vetores de expressão e um método para produzir o anticorpo ou a proteína que compreende o fragmento de ligação a antígeno do mesmo des- crito no presente documento, especificamente o anticorpo hu31, hu43, hu44, huS59, hu60 ou hu250, em que o método compreende cultura da célula hospedeira e purificação e isolamento do anticorpo ou da prote- ina.

[0031] Em uma modalidade, o anticorpo isolado ou a proteína que compreende um fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento é conjugado à outra porção ativa.

[0032] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento pode ser um anticorpo monoclonal ou um fragmento de ligação a antígeno do mes- mo, de preferência um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado ou um anticorpo humano ou uma porção do mesmo.

[0033] Em um aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo ou a proteína que compreende o fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades da presente invenção, em combinação com um ou mais excipientes, diluentes ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

[0034] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compre- ende um ou mais ingredientes ativos adicionais.

[0035] Em uma modalidade específica, a composição farmacêutica é um pó liofiizado. Em outra modalidade específica, a composição farmacêutica é uma formulação líquida estável que compreende uma quantidade terapeuticamente aceitável do anticorpo ou da molécula descrita no presente documento.

[0036] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se ao uso do anticorpo ou do fragmento de ligação a antígeno do mesmo para a preparação de um medicamento para o tratamento de qualquer um dos transtornos patológicos mediados por IL-17A.

[0037] A presente invenção fornece uma molécula de ácidos nu- cleicos isolada que codifica o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo, um vetor de expressão ou um vetor recombinante que compreende a molécula de ácidos nucleicos e uma célula hospe- deira transformada com o vetor.

[0038] A presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, a molécula de ácidos nucleicos, o vetor ou a célula hospedei- ra e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0039] A presente invenção fornece o uso do anticorpo ou frag- mento de ligação a antígeno do mesmo, da molécula de ácidos nuclei- cos, do vetor ou da célula hospedeira ou da composição farmacêutica para a preparação de um medicamento para o tratamento e/ou pre-

venção de doenças ou transtornos mediados por IL- 17A.

[0040] Em algumas modalidades, o medicamento é um medica- mento para o tratamento de artrite, artrite reumatoide, psoríase, es- pondilite anquilosante, doença pulmonar obstrutiva crônica, lúpus eri- tematoso sistêmico (SLE), nefrite lúpica, asma, esclerose múltipla ou fibrose cística.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0041] A Figura 1 mostra o eletroferograma de SDS-PAGE da pro- teína IL-17A-mFc humana recombinante.

[0042] A Figura 2 mostra a ligação de IL-17A-mFc humana à |IL- 17RA em células 293F testadas por FACS (MFI representa a intensi- dade média de fluorescência; grupo de tratamento vs. grupo de contro- le: 7695 vs. 308).

[0043] A Figura 3 mostra o efeito do anticorpo de hibridoma sobre o bloqueio da bioatividade mediada por IL-17A in vivo testada por ELI- SA. O anticorpo de hibridoma impede, de forma significativa, que a IL- 17A induza à expressão de CXCL1 em camundongos.

[0044] A Figura 4 mostra a ligação de anticorpos quiméricos à IL- 17A humana testado por ELISA. Os anticorpos quiméricos ch1, ch2, ch4, ch7 e ch16 se ligam à IL-17A humana com maior especificidade, com os valores de ECso sendo 6,62 ng/mL, 5,17 ng/mL, 88,48 ng/mL, 39,96 ng/mL e 15,42 ng/mL, respectivamente.

[0045] A Figura 5 mostra o efeito de anticorpos quiméricos sobre o bloqueio da ligação de IL-17A humana ao IL-17RA em células 293F testado por FACS. Os anticorpos quiméricos ch1, ch2, ch7 e ch16 blo- queiam a ligação de forma eficiente, com os valores de IC5so sendo 4,46 upg/mL, 3,145 po/mL, 1,220 ug/mL e 1,445 pg/mL, respectivamente.

[0046] A Figura 6 mostra a ligação de anticorpos humanizados à IL-17A humana testado por ELISA. Os anticorpos hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 e hu250 se ligam à IL-17A humana com maior especifici-

dade, com os valores de ECso sendo 8,13 ng/mL, 8,64 ng/mL, 6,764 ng/mL, 6,102 ng/mL, 5,776 ng/mL e 6,351 ng/mL, respectivamente.

[0047] A Figura 7 mostra o efeito de anticorpos humanizados so- bre o bloqueio da ligação de IL-17A humana ao IL-17RA em células 293F testado por FACS. Os anticorpos hu31, hu43, hu44, hu59, hu6ê0 e hu250 bloqueiam a ligação de forma eficiente, com os valores de ICso sendo 867,6 ng/mL, 780,8 ng/mL, 828,5 ng/mL, 467,4 ng/mL, 482,8 ng/mL e 577,8 ng/mL, respectivamente.

[0048] A Figura 8 mostra o efeito de anticorpos humanizados so- bre o bloqueio da secreção mediada por IL-17A de CXCL1 por células epiteliais testado por ELISA. Os anticorpos hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 e hu250 todos impedem que a IL-17A induza à expressão de CXCL1 em células epiteliais de forma eficiente e têm um efeito de blo- queio mais forte do que o anticorpo de controle.

[0049] A Figura 9 mostra o efeito de anticorpos humanizados so- bre o bloqueio da bioatividade mediada por IL-17A in vivo testado por ELISA. Os anticorpos hu31, hu43, hu44, hu60 e hu250 impedem que a IL-17A induza à expressão de CXCL1 em camundongos de forma efi- ciente e têm um efeito de bloqueio mais forte do que o anticorpo de controle.

[0050] A Figura 10-1 mostra o efeito da administração de anticor- pos humanizados sobre a pontuação clínica da psoríase induzida por imiquimode em camundongos. A administração de hu31 e hu44 pode inibir significativamente a descamação cutânea, endurecimento, incha- ço e outras condições da psoríase induzida por inimiquimode no mo- delo de camundongo, ou seja, diminuir a pontuação clínica (* P < 0,05 vs. KLH).

[0051] A Figura 10-2 mostra o efeito de anticorpos humanizados sobre o grau de inchaço da orelha de camundongos com psoríase in- duzida por imiquimode. A administração de hu31 e hu44 pode melho-

rar significativamente o grau de inchaço da orelha. (* P < 0,05 vs. KLH, ** P<0,01 vs. KLH).

[0052] A Figura 11-1 mostra o efeito de anticorpos humanizados sobre o peso corporal de macacos cynomolgus fêmeas com artrite in- duzida por colágeno de tipo Il. hu31 e hu59 melhoram a perda de peso induzida pela artrite até certo ponto (** P < 0,01, **** P < 0,0001, com- parado com "G2: grupo de veículo"; ANOVA/Dunnett unilateral).

[0053] A Figura 11-2 mostra o efeito de anticorpos humanizados sobre a pontuação de artrite induzida por colágeno de tipo |l em maca- cos cynomolgus fêmeas. hu31 inibe significativamente a tendência crescente na pontuação clínica de artrite em macacos cynomolgus (*** P < 0,001, HP < 0,05, comparado com G2: grupo de veículo; ANO- VA/Dunnett unilateral).

[0054] A Figura 12 mostra o efeito de anticorpos humanizados so- bre o inchaço das articulações induzido por células NIH3T3-IL-17 em camundongos.

[0055] A Figura 13 mostra o efeito de anticorpos humanizados so- bre o modelo de bolsa de ar de inflamação induzida por células NIH3T3-IL-17 em camundongos.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0056] A presente invenção refere-se a um anticorpo que se liga especificamente à IL-17A humana e bloqueia a bioatividade mediada por IL-17A. A presente invenção refere-se a um anticorpo IgG de com- primento total e um fragmento de ligação a antígeno do mesmo, des- crito mais abaixo.

Definições

[0057] A menos que indicado de outra forma, as modalidades da presente invenção empregarão técnicas convencionais de biologia mo- lecular (incluindo técnicas recombinantes), microbiologia, citobiologia, bioquímica e imunologia, as quais estão todas dentro da habilidade na técnica.

[0058] A fim de facilitar a compreensão da presente invenção, al- guns termos técnicos e científicos são definidos especificamente como segue. A menos que definido especificamente de outra forma no pre- sente documento, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por aqueles versados na técnica à qual a presente invenção pertence. Para definições e terminologia na técnica, aqueles versados na técnica podem referir-se especificamente a Current Protocolsin Mo- lecular Biology (Ausubel). As abreviaturas para resíduos de aminoáci- dos são códigos padrão de 3 letras e/ou 1 letra usados na técnica para denotar um dos 20 L-aminoácidos comumente usados.

[0059] As formas no singular usadas no presente documento (in- cluindo reivindicações) incluem suas formas no plural, a menos que especificado de outra forma no contexto explicitamente.

[0060] IL-17 ou IL-17A é interleucina-17. Salvo indicação em con- trário, IL-17 refere-se, em geral, à I.-17A humana.

[0061] IL-17A expressa in vivo, seu número de acesso NCBI NP-

443104.1, tem um peptídeo sinalizador N-terminal que consiste em 23 aminoácidos, a qual é clivada para gerar IL-17A madura. Em uma mo- dalidade específica, a IL-17A descrita no presente documento refere- se à IL-17A madura, a qual não compreende um peptídeo sinalizador N-terminal, com uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 66 e uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 67.

[0062] IL-17F expressa in vivo, seu número de acesso NCBI NP-

443104.1, tem um peptídeo sinalizador N-terminal que consiste em 30 aminoácidos, a qual é clivada para gerar IL-17F madura. Em uma mo- dalidade específica, a IL-17F descrita no presente documento refere- se à IL-17F madura, a qual não compreende um peptídeo sinalizador

N-terminal, com uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 68.

[0063] IL-17AF descrita no presente documento é um heterodíme- ro de uma subunidade IL-17A e uma subunidade IL-17F, conforme en- tendido por aqueles versados na técnica.

[0064] O termo "resposta imune" refere-se à ação, por exemplo, de linfócitos, células apresentadoras de antígeno, fagócitos, granulóci- tos e macromoléculas solúveis produzidas pelas células acima ou o fígado (incluindo anticorpos, citocinas e complementos) que resulta em dano seletivo, destruição ou eliminação do corpo humano de patóge- nos invasores, células ou tecidos infectados com patógenos, células cancerosas ou, em casos de autoimunidade ou inflamação patológica, células ou tecidos humanos normais.

[0065] O termo "via de transdução de sinal" ou "atividade de trans- dução de sinal" refere-se a uma relação causal bioquímica geralmente iniciada por uma interação proteína-proteína, tal como a ligação de um fator de crescimento a um receptor, resultando na transmissão de um sinal de uma parte de uma célula para outra parte de uma célula. Em geral, a transmissão envolve fosforilação específica de um ou mais resíduos de tirosina, serina ou treonina em uma ou mais proteínas na série de reações que causam a transdução de sinal. O penúltimo pro- cesso normalmente envolve um evento nuclear, resultando em uma mudança na expressão do gene.

[0066] No que se refere ao anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento, o termo "ativida- de" ou "bioatividade", ou o termo "propriedade biológica" ou "caracte- rística biológica", podem ser usados indistintamente e incluem, porém sem limitações, afinidade e especificidade por epítopo/antígeno, a ca- pacidade para neutralizar ou antagonizar a atividade de IL-17A, in vivo ou in vitro, IC5so, estabilidade in vivo do anticorpo e as propriedades imunogênicas do anticorpo. Outras propriedades ou características biológicas identificáveis do anticorpo conhecidas na técnica incluem, por exemplo, reatividade cruzada (isto é, reatividade cruzada com ho- mólogos não humanos do peptídeo alvo ou com outras proteínas ou tecidos em geral) e a capacidade para manter um alto nível de expres- são da proteína em células de mamíferos. As propriedades ou caracte- rísticas supracitadas são observadas, determinadas ou avaliadas usando métodos bem conhecidos na técnica incluindo, porém sem |i- mitações, ELISA, FACS ou análise de ressonância plasmática BIA- CORE, ensaios de neutralização in vitro ou in vivo ilimitados, ligação a receptor, produção e/ou secreção de citocina ou fator de crescimento, transdução de sinal e imuno-histoquímica de seções teciduais de dife- rentes origens (incluindo ser humano, primata ou qualquer outra ori- gem).

[0067] Um "anticorpo" refere-se a qualquer forma de anticorpo que tem uma bioatividade desejada. Assim, ele é usado no sentido mais amplo e inclui especificamente, porém sem limitações, anticorpos mo- noclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anti- corpos biespecíficos), anticorpos humanizados, anticorpos totalmente humanos, anticorpos quiméricos e anticorpos com um único domínio camelizados.

[0068] Um "anticorpo isolado" refere-se ao estado purificado de um conjugado e, neste caso, significa que a molécula é substancial- mente isenta de outras biomoléculas, tais como ácidos nucleicos, pro- teínas, lipídios, açúcares ou outras substâncias, tais como resíduos celulares e meio de crescimento. O termo "isolado" não significa a au- sência completa de tais substâncias ou a ausência de água, tampões Ou sais, a menos que estejam presentes em quantidades que interferi- rão significativamente com o uso experimental ou terapêutico dos con-

jugados descritos no presente documento.

[0069] Um "anticorpo monoclonal" refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticor- pos, isto é, os anticorpos que compreendem a população são idênti- cos, exceto quanto a possíveis mutações de ocorrência natural que possam estar presentes em pequenas quantidades. Um anticorpo mo- noclonal é altamente específico e tem como alvo um único epítopo an- tigênico. Em contraste, as preparações de anticorpos convencionais (policlonais) incluem, tipicamente, um grande número de anticorpos que têm como alvo (ou específicos para) diferentes epítopos. O modi- ficador "monoclonal" indica a característica de um anticorpo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como produção do anticorpo através de qualquer método particular.

[0070] Um "anticorpo de comprimento total" refere-se a uma molé- cula de imunoglobulina que compreende quatro cadeias peptídicas quando presentes naturalmente, incluindo duas cadeias pesadas (H) (cerca de 50-70 kDa de comprimento no total) e duas cadeias leves (L) (cerca de 25 kDa comprimento no total) ligadas entre si através de |i- gações de dissulfureto. Cada cadeia pesada consiste em uma região variável de cadeia pesada (abreviada no presente documento como VH) e uma região constante de cadeia pesada (abreviada no presente documento como CH). A região constante de cadeia pesada consiste em 3 domínios CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve consiste em uma região variável de cadeia leve (abreviada no presente documento co- mo VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve consiste em um domínio CL. As regiões VH e VL podem ser ainda divididas em regiões determinantes de complementaridade (CDRs) com alta variabilidade e regiões mais conservativas denomi- nadas regiões estruturais (FRs) que são espaçadas pelas CDRs. Cada região VH ou VL consiste em 3 CDRs e 4 FRs na seguinte ordem, a partir do terminal amino para o terminal carboxila: FR1, CDR1, FR2, CDR?2, FR3, CDR3, FRA4. As regiões variáveis das cadeias pesadas e leves contêm domínios de ligação que interagem com os antígenos. As regiões constantes de um anticorpo podem mediar a ligação de imunoglobulinas aos tecidos ou fatores do hospedeiro, incluindo a liga- ção de várias células do sistema imune (por exemplo, células efetoras) ao primeiro componente (C1qg) do sistema clássico de complemento.

[0071] Um "fragmento de ligação a antígeno" de um anticorpo ("anticorpo precursor") inclui um fragmento ou um derivado do anticor- po, geralmente incluindo pelo menos um fragmento de uma região de ligação a antígeno ou região variável (por exemplo, uma ou mais CDRs) de um anticorpo precursor que retém pelo menos parte da es- pecificidade de ligação do anticorpo precursor. Exemplos de fragmen- tos de ligação de um anticorpo incluem, porém sem limitações, frag- mentos Fab, Fab', F(ab') e Fv; um diacorpo; um anticorpo linear; uma molécula de anticorpo com uma única cadeia, tal como sc-Fv; e um nanocorpo e um anticorpo multiespecífico formado por fragmentos do anticorpo. Um fragmento de ligação ou um derivado geralmente retém pelo menos 10 % de sua atividade de ligação a antígeno quando a ati- vidade de ligação a antígeno está presente em uma base de concen- tração molar. De preferência, o fragmento de ligação ou derivado re- tém pelo menos 20 %, 50 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % ou mais da afinidade de ligação a antígeno do anticorpo precursor. Con- sidera-se também que um fragmento de ligação a antígeno de um an- ticorpo pode incluir substituições conservativas ou não conservativas de aminoácidos que não alteram significativamente sua bioatividade (denominadas como "variantes conservativas" ou "variantes conserva- tivas de função" do anticorpo). O termo "conjugado" refere-se a um anticorpo e a um fragmento de ligação do mesmo.

[0072] Um anticorpo "Fv com uma única cadeia" ou "scFv" refere- se a um fragmento de anticorpo que compreende os domínios VH e VL de um anticorpo, onde estes domínios estão presentes em uma única cadeia polipeptídica. Em geral, um polipeptídeo Fv também compre- ende um ligante polipeptídico entre os domínios VH e VL que permite que o scFv forme a estrutura desejada para ligação ao antígeno.

[0073] Um "anticorpo de domínio" é um fragmento de imunoglobu- lina imunofuncional que contém apenas a região variável de cadeia pesada ou de cadeia leve. Em determinados casos, duas ou mais re- giões VH são covalentemente ligadas a um ligante peptídico para for- mar um anticorpo de domínio bivalente. As 2 regiões VH do anticorpo de domínio bivalente podem ter como alvo os mesmos antígenos ou antígenos diferentes.

[0074] Um "anticorpo bivalente" compreende 2 sítios de ligação a antígeno. Em determinados casos, os 2 sítios de ligação têm a mesma especificidade antigênica. No entanto, um anticorpo bivalente pode ser biespecífico.

[0075] Um "diacorpo" refere-se a um pequeno fragmento de anti- corpo que tem dois sítios de ligação a antígeno que compreende um domínio variável de cadeia pesada (VH) ligado a um domínio variável de cadeia leve (VL) na mesma cadeia polipeptídica (VH-VL ou VL-VH). Ao usar um ligante que é muito curto para emparelhar entre dois do- mínios em uma cadeia, os domínios são forçados a emparelhar com os domínios complementares da outra cadeia para formar dois sítios de ligação a antígeno.

[0076] Um "anticorpo quimérico" é um anticorpo que tem os domí- nios variáveis de um primeiro anticorpo e os domínios constantes de um segundo anticorpo, em que os primeiro e segundo anticorpos são de espécies diferentes. Normalmente, o domínio variável é obtido a partir de um anticorpo de um animal experimental, tal como um roedor

("anticorpo precursor") e a sequência de domínio constante é obtida a partir de um anticorpo humano, de modo que seja menos provável que o anticorpo quimérico resultante induza a uma resposta imune adversa em um ser humano comparado com o anticorpo precursor de roedor.

[0077] Um "anticorpo humanizado" refere-se a uma forma de anti- corpo que contém sequências de anticorpos humanos e não humanos (tais como de camundongo e rato). Em geral, um anticorpo humaniza- do compreende substancialmente todos de pelo menos um e normal- mente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as alças hipervariáveis correspondem àquelas de uma imuno- globulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões estruturais (FRs) são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado pode compreender opcionalmente pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina humana (Fc).

[0078] Um "anticorpo totalmente humano" refere-se a um anticorpo que compreende apenas sequências de imunoglobulina humana. Um anticorpo totalmente humano pode conter glicocadeias de camundon- go se produzido em camundongos, células de camundongo ou hibri- domas derivados de células de camundongo. Da mesma forma, um "anticorpo de camundongo" refere-se a um anticorpo que compreende apenas sequências de imunoglobulina de camundongo. Alternativa- mente, um anticorpo totalmente humano pode conter glicocadeias de rato se produzido em ratos, células de rato ou hibridomas derivados de células de rato. Da mesma forma, um "anticorpo de rato" refere-se a um anticorpo que compreende apenas sequências de imunoglobulina de rato.

[0079] "Isotipo" refere-se ao tipo de anticorpos (por exemplo, IgM, IgE, IgG, tal como IgG1 ou IgG4) fornecidos pelos genes da região constante da cadeia pesada. O isotipo também inclui formas modifica-

das de um destes tipos em que modificações foram feitas para alterar a função Fc, por exemplo, para aumentar ou atenuar a função efetora ou ligação a receptores Fc.

[0080] O termo "ácido nucleico" ou "polinucleotídeo" refere-se ao ácido desoxirribonucleico (DNA) ou ácido ribonucleico (RNA) e seus polímeros na forma de fita simples ou dupla. A menos que explicita- mente limitado, o termo abrange ácidos nucleicos que contêm análo- gos conhecidos de nucleotídeos naturais que têm propriedades de |i- gação similares àquelas do ácido nucleico de referência e são metabo- lizados de uma maneira similar aos nucleotídeos de ocorrência natural (consulte Patente Norte-Americana Nº 8.278.036 para Kariko et al., a qual descreve uma molécula de mRNA onde a uridina é substituída por pseudouridina, um método para sintetizar a molécula de mMRNA e um método para distribuir proteínas terapêuticas in vivo). Métodos de mMRNA modificado podem ser usados, por exemplo, aqueles descritos na Patente Norte-Americana Nº 8.278.036 para Kariko et al. e no Pe- dido de Patente Nº WO02013/090186A1 para a Moderna. A menos que especificado de outra forma, uma sequência de ácidos nucleicos parti- cular também inclui implicitamente suas variantes modificadas de for- ma conservativa (por exemplo, substituições de códons degenerados), alelos, ortólogos, SNPs e sequências complementares, bem como a sequência explicitamente indicada. Especificamente, as substituições de códons degenerados podem ser alcançadas através da geração de sequências nas quais a terceira posição de um ou mais códons seleci- onados (ou todos) é substituída por bases mistas e/ou resíduos de de- soxi-inosina (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19: 5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260: 2605-2608 (1985); e Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8: 91-98 (1994)).

[0081] Uma "construção" refere-se a qualquer molécula de polinu- cleotídeos recombinante (tal como plasmídeo, cosmídeo, vírus, molé-

cula de polinucleotídeos de replicação autônoma, fago ou DNA linear ou circular fita simples ou dupla ou molécula de polinucleotídeos de RNA), derivada de qualquer fonte, capaz de integração genômica ou replicação autônoma, que compreende uma molécula de polinucleotí- deos onde uma ou mais moléculas de polinucleotídeos foram ligadas de uma maneira funcionalmente operativa (isto é, operativamente liga- das). A construção recombinante compreenderá, tipicamente, um poli- nucleotídeo da presente invenção operativamente ligado a sequências reguladoras de início de transcrição que controlarão a transcrição do polinucleotídeo em uma célula hospedeira. Promotores heterólogos e não heterólogos (isto é, endógenos) podem ser usados para controlar a expressão dos ácidos nucleicos da presente invenção.

[0082] Um "vetor" refere-se a qualquer construção polinucleotídica recombinante que pode ser usada para fins de transformação (isto é, a introdução de DNA heterólogo em uma célula hospedeira). Um tipo de vetor é um "plasmídeo", o qual refere-se a uma alça de DNA fita dupla na qual segmentos de DNA adicionais podem ser ligados. Outro tipo de vetor é um vetor viral, no qual segmentos de DNA adicionais podem ser ligados ao genoma viral. Determinados vetores são capazes de replicação autônoma em uma célula hospedeira na qual são introduzi- dos (por exemplo, vetores bacterianos com uma origem de replicação bacteriana e vetores epissomais de mamíferos). Após a introdução em uma célula hospedeira, outros vetores (por exemplo, vetores de mamí- feros não epissomais) são integrados ao genoma da célula hospedeira e são, portanto, replicados juntamente com o genoma do hospedeiro. Além disso, determinados vetores são capazes de controlar a expres- são de genes operativamente ligados. Tais vetores são denominados no presente documento como "vetores de expressão".

[0083] O termo "vetor de expressão", conforme usado no presente documento, refere-se a uma molécula de ácidos nucleicos capaz de se replicar e expressar um gene alvo quando transformada, transfectada ou transduzida em uma célula hospedeira. O vetor de expressão com- preende um ou mais marcadores selecionáveis fenotípicos e uma ori- gem de replicação para assegurar a manutenção do vetor e permitir amplificação no hospedeiro, se necessário.

[0084] Conforme usado no presente documento, o termo "antago- nista de IL-17A" ou "bloqueador de IL-17A" refere-se a um anticorpo ou uma proteína de ligação a antígeno do mesmo que inibe a atividade de transdução de sinal de IL-17A induzida por IL-17R, deste modo, reduzindo ou neutralizando a atividade de IL-17A. Isto pode ser de- monstrado em ensaios para células humanas, tais como ensaios de produção de CXCL1 dependente de IL-17A para células humanas. Es- tes ensaios são descritos em mais detalhes nos exemplos abaixo.

[0085] A menos que de outra forma ou explicitamente especificado no contexto, "ativação", "estimulação" e "tratamento" para uma célula ou um receptor podem ter o mesmo significado. Por exemplo, a célula ou o receptor é ativado, estimulado ou tratado com um ligante. "Ligan- tes" incluem ligantes naturais e sintéticos, tais como citocinas, varian- tes de citocinas, análogos, proteínas mutantes e compostos de ligação derivados de anticorpos. "Ligantes" também incluem pequenas molé- culas, tais como peptidomiméticos de citocinas e peptidomiméticos de anticorpos. "Ativação" pode referir-se à ativação de uma célula regula- da por mecanismos internos, bem como por fatores externos ou ambi- entais. "Resposta/reação", por exemplo, uma resposta de uma célula, um tecido, um órgão ou um organismo, inclui mudanças nos compor- tamentos bioquímicos ou fisiológicos (por exemplo, concentração, densidade, adesão ou migração, taxa de expressão gênica ou estado de diferenciação dentro um compartimento biológico), onde as altera- ções estão associadas a uma ativação, estimulação ou tratamento, ou estão associadas a um mecanismo interno, tal como programação ge-

nética.

[0086] Conforme usado no presente documento, o termo "tratar", "tratando" ou "tratamento" de qualquer doença ou transtorno refere-se, em uma modalidade, a melhorar a doença ou transtorno (isto é, retar- dar ou interromper ou reduzir a progressão da doença ou pelo menos um de seus sintomas clínicos). Em outra modalidade, "tratar", "tratan- do" ou "tratamento" refere-se a aliviar ou melhorar pelo menos um pa- râmetro físico, incluindo aqueles parâmetros físicos que podem não ser discerníveis pelo paciente. Em outra modalidade, "tratar", "tratan- do" ou "tratamento" refere-se à modulação da doença ou transtorno fisicamente (por exemplo, estabilização de sintomas discerníveis), fisi- ologicamente (por exemplo, estabilização de parâmetros físicos) ou ambos. A menos que explicitamente descrito no presente documento, métodos para avaliar o tratamento e/ou prevenção de uma doença são geralmente conhecidos na técnica.

[0087] Um "indivíduo" inclui qualquer animal humano ou não hu- mano. O termo "animal não humano" inclui todos os vertebrados, por exemplo, mamíferos e não mamíferos, tais como primatas não huma- nos, ovelhas, cães, gatos, cavalos, gado, galinhagens, anfíbios e rép- teis. Conforme usado no presente documento, o termo "cyno" refere-se a um macaco cynomolgus.

[0088] "Quantidade terapeuticamente eficaz", "dose terapeutica- mente eficaz" e "quantidade eficaz", conforme usado no presente do- cumento, referem-se a uma quantidade do anticorpo IL-17A ou frag- mento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente docu- mento que é eficaz para prevenir ou melhorar um ou mais sintomas de uma doença ou condição ou o desenvolvimento da doença ou condi- ção quando administrado sozinho ou em combinação com outros agentes terapêuticos a uma célula, tecido ou indivíduo. A dose tera- peuticamente eficaz refere-se também a uma quantidade do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo suficiente para causar uma melhora nos sintomas, por exemplo, uma quantidade para tratar, curar, prevenir ou melhorar uma condição relacionada ou promover o tratamento, cura, prevenção ou melhora de tal condição. Quando um ingrediente ativo é administrado a um indivíduo sozinho, uma dose te- rapeuticamente eficaz refere-se à quantidade do ingrediente. Quando uma combinação é administrada, uma dose terapeuticamente eficaz refere-se à quantidade combinada de ingredientes ativos que produz um efeito terapêutico, independentemente destes ingredientes ativos serem administrados em combinação, sequencial ou simultaneamente. Uma quantidade eficaz do agente terapêutico levará a um aumento em um índice ou parâmetro diagnóstico em pelo menos 10 %, geralmente pelo menos 20 %; de preferência pelo menos cerca de 30 %, mais pre- ferivelmente pelo menos 40 %, ainda mais preferivelmente pelo menos 50 %. Produção de Anticorpos

[0089] Qualquer método adequado para a produção de anticorpos pode ser empregado para produzir o anticorpo descrito no presente documento. Qualquer forma adequada de IL-17A humana pode ser usada como um imunogênio (antígeno) para a produção de anticorpos. A título de exemplo e não de limitação, qualquer isotipo de IL-17A hu- mana ou um fragmento da mesma pode ser usado como um imunogê- nio. Exemplos incluem, porém sem limitações, IL-17A humana madura natural (que tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 66), conforme descrito no presente documento.

[0090] Em uma modalidade preferida, as células de hibridoma que produzem anticorpos monoclonais de murino anti-IL-17A humana po- dem ser produzidas por meio de métodos bem conhecidos na técnica. Estes métodos incluem, porém sem limitações, técnicas de hibridoma originalmente desenvolvidas por Kohler et al. (1975) (Nature 256: 495-

497). De preferência, esplenócitos de camundongo são isolados e fun- didos a uma linhagem de células de mieloma de camundongo usando PEG ou através de eletrofusão de acordo com esquemas padrão. Os hibridomas resultantes que produzem anticorpos específicos para o antígeno podem, então, ser rastreados. Por exemplo, no caso de PEG a 50 %, uma única suspensão de células de linfócitos esplênicos deri- vada de um camundongo imunizado pode ser fundida a 1/6 do número de células de mieloma de camundongo SP20 (ATCC). As células po- dem ser semeadas em uma placa de microtitulação de fundo plano a cerca de 2 x 105 células/mL, seguido por 2 semanas de incubação em meio completo que contém soro fetal bovino a 20 % e meio de seleção que contém 1 x HAT (Sigma; HAT adicionado 24 h após a fusão). Após 2 semanas, as células podem ser cultivadas em meio com HAT substituído por HT. As cavidades podem, então, ser rastreadas por ELISA quanto a anticorpos IgG monoclonais anti-IL-17A humana. Em geral, após 10-14 dias do crescimento em grande escala dos hibrido- mas, o meio pode ser observado. Os anticorpos secretores de hibri- domas podem ser semeados e rastreados novamente. Se os hibrido- mas resultantes permanecerem positivos para IgG humana, os hibri- domas do anticorpo monoclonal anti-IL-17A humana podem ser sub- clonados pelo menos duas vezes através de diluição limitativa. Os subclones estáveis podem, então, ser cultivados in vitro para produzir pequenas quantidades de anticorpos em meio tecidual para caracteri- zação.

[0091] Em uma modalidade preferida, as células de hibridoma mo- noclonais obtidas na presente invenção são 1F8, 2F5 e 2B2, as quais secretam anticorpos que se ligam à IL-17A com alta especificidade, bloqueando a ligação de IL-17A ao IL-17RA e inibindo a bioatividade mediada por IL-17A, tal como inibição da secreção de CXCL1.

[0092] Em uma modalidade preferida, as sequências de DNA das regiões variáveis de imunoglobulina de células de hibridoma candida- tas 1F8, 2F5 e 2B2 são determinadas usando PCR com base em inici- ador degenerado na presente invenção. A célula de hibridoma 1F8 produz dois genes de cadeia leve de anticorpo e um gene de cadeia pesada de anticorpo e 2F5 produz dois genes de cadeia pesada de anticorpo e um gene de cadeia leve de anticorpo. Portanto, os anticor- pos secretados por 1F8 e 2F5 podem incluir, cada um, dois anticorpos mistos intactos. No presente documento, os anticorpos secretados por 1F8 são codificados como 1F8-1 e 1F8-2 e os anticorpos secretados por 2F5 são codificados como 2F5-1 e 2F5-2. Tabela 1: Sequências de aminoácidos de regiões variáveis de anticor- pos de hibridoma 1F8-1 SEQIDNO: 2 SEQTIDNO:25 1F8-2 2B2 2F5-1 SEQTID NO: 3? SEQIDNO: 20 2F5-2 SEQID NO: 3?

[0093] Os anticorpos derivados de roedores (por exemplo, camun- dongo) podem induzir à imunogenicidade indesejada dos anticorpos quando usados como agentes terapêuticos in vivo. O uso repetido des- tes anticorpos induz a uma resposta imune no corpo humano aos anti- corpos terapêuticos. Estas respostas imunes resultam em pelo menos uma perda de eficácia terapêutica e, no máximo, uma reação alérgica potencialmente letal. Um método para reduzir a imunogenicidade de anticorpos de roedor inclui a produção de anticorpos quiméricos, nos quais a região variável de camundongo é fundida à região constante humana (Liu et a/., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-43). No entanto, a preservação da região variável de roedor intacta em anti- corpos quiméricos ainda pode induzir à imunogenicidade deletéria em pacientes. A enxertia das alças da região determinante de complemen- taridade (CDR) do domínio variável de roedor na região estrutural hu- mana (isto é, humanização) tem sido usada para minimizar ainda mais as sequências de roedores (Jones et al., (1986) Nature 321: 522; Ve- rhoeyen et a/., (1988) Science 239: 1534).

[0094] Em algumas modalidades, os anticorpos quiméricos ou humanizados descritos no presente documento podem ser preparados com base nas sequências dos anticorpos de hibridoma monocionais de murino preparados. O DNA que codifica as cadeias pesada e leve de imunoglobulina pode ser obtido a partir de um hibridoma de murino de interesse e manipulado para compreender sequências de imuno- globulina que não são de murino (por exemplo, humanas) usando téc- nicas de biologia molecular padrão.

[0095] Em algumas modalidades, para os anticorpos quiméricos descritos no presente documento, a cadeia pesada quimérica e a ca- deia leve quimérica podem ser obtidas ao ligar operativamente a ca- deia pesada de imunoglobulina e as regiões variáveis de cadeia leve de origem do hibridoma a regiões constantes de IgG humana, respec- tivamente, usando métodos conhecidos na técnica (consulte, por exemplo, Patente Norte-Americana Nº 4.816.567 para Cabilly etal.). À IgG humana pode ser selecionada a partir de qualquer subtipo, tal co- mo IgG1, IgG2, I9G3, IgG4, de preferência I9G4.

[0096] Em uma modalidade específica, os anticorpos quiméricos descritos no presente documento podem ser obtidos através de "mistu- ra e correspondência" de um plasmídeo de expressão de cadeia leve quimérica com um plasmídeo de expressão de cadeia pesada quiméri- ca para transfectar células de expressão. A ligação de tais anticorpos "mistos e combinados" à IL-17A pode ser testada usando o teste de ligação acima e outros testes de ligação convencionais (por exemplo, ELISA). As ch1, ch2, ch4, ch7 e ch16 preferidas têm ligação e ativida- de de bloqueio ideal e suas sequências de aminoácidos da região va- riável são mostradas na Tabela 2. Tabela 2: Sequências de aminoácidos de regiões variáveis de anticor- pos quiméricos Anticorpo Região variável de cadeia | Região variável de ca-

[0097] Os limites precisos da sequência de aminoácidos das CDRs da região variável nos anticorpos descritos no presente docu- mento podem ser determinados usando qualquer um dos esquemas bem conhecidos, incluindo o esquema de Kabat descrito por Kabat et al., (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5º edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (Es- quema de numeração de "Kabat") e o esquema IMGT descrito por Le- franc M.-P. et al., (1999 Nucleic Acids Research, 27: 209-212). Em al- gumas modalidades, os esquemas de definição de CDR específicas e sequências de aminoácidos das regiões variáveis de anticorpos de murino preferidas descritos no presente documento são mostrados na Tabela 3. Tabela 3: Definições de CDR de região variável de anticorpos de mu- rino

[0098] Em algumas modalidades, para os anticorpos humanizados descritos no presente documento, regiões CDR de murino podem ser inseridas em regiões estruturais de linhagem germinativa humana usando métodos conhecidos na técnica. Consulte Patente Norte-Ame- ricana Nº 5.225.539 para Winter et al. e Patentes Norte-Americanas Nº*

5.530.101; 5.585.089; 5.693.762 e 6.180.370 para Queen et al. Resumi- damente, genes de IgG de linhagem germinativa humana homólogos à sequência de cDNA das regiões variáveis de anticorpo de murino foram recuperados no banco de dados de genes de imunoglobulina humana do NCBI (http://www .ncbi.nlm.nih.gov/igblast/) pelo inventor e, em princí- pio, a humanização é alcançada através de enxertia das CDRs seleci- onadas. No entanto, a troca da alça de CDR ainda falha em produzir uniformemente um anticorpo com as mesmas propriedades de ligação do anticorpo inicial. Em anticorpos humanizados, alterações nos resí- duos da região estrutural (FRs) (resíduos envolvidos no suporte da al- ça de CDR) são frequentemente necessárias para manter a afinidade de ligação ao antígeno. Kabat et a/., (1991) J. Immunol. 147: 1709. Resumidamente, a humanização compreende as seguintes etapas: A.

As sequências do gene dos anticorpos candidatos são comparadas com a sequência do gene do anticorpo da linhagem germinativa hu- mana para selecionar sequências com alta homologia; B. Através de análise de afinidade HLA-DR, uma sequência estrutural da linhagem germinativa humana com baixa afinidade é selecionada; e C. As se- quências de aminoácidos estruturais das regiões variáveis e sua peri- feria são analisadas por meio de simulação computadorizada e anco- ragem molecular e o arranjo espacial e estéreo é verificado. Os ami- noácidos-chave individuais que interagem com IL-17A e mantêm a es- trutura espacial na sequência do gene dos anticorpos candidatos são analisados calculando-se a força eletrostática, força de Van der Waals, hidrofilia e hidrofobicidade e valor de entropia e enxertados na região estrutural do gene de linhagem germinativa humana. As posições de aminoácidos das regiões estruturais que devem ser retidas são mape- adas. Em seguida, os anticorpos humanizados são sintetizados.

[0099] Em algumas modalidades, os anticorpos humanizados pre- feridos obtidos na presente invenção são hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 e hu250.

[00100] As regiões variáveis de anticorpos humanizados hu31, hu43, hu44, huS59, hu60 e hu250 e suas sequências de aminoácidos de CDR correspondentes são mostradas na Tabela 4. Tabela 4: Regiões variáveis e sequências de CDR de anticorpos hu- manizados NO: 33 NO: 35 NO: 35 NO: 37 NO: 37 NO: 40 NO: 34 NO: 34 NO: 36 NO: 38 NO: 39 NO: 41 NO: 1 NO: 1 NO: 1 NO: 10 NO: 10 NO: 60

HCDR3 SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID NO: 3 NO: 3 NO: 3 NO: 12 NO: 12 NO: 62 LCDR1 SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID NO: 13 NO: 13 NO: 13 NO: 22 NO: 22 NO: 63 LCDR2 SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID NO: 14 NO: 14 NO: 14 NO: 23 NO: 23 NO: 64 LCDR3 SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID NO: 15 NO: 15 NO: 15 NO: 24 NO: 24 NO: 65

[00101] As sequências de aminoácidos e de nucleotídeos das ca- deias leve/pesada de anticorpos humanizados hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 e hu250 são mostradas na Tabela 5. Tabela 5: Sequências de aminoácidos/nucleotídeos de anticorpos hu- manizados xo Jo Teias [ão [toma] Anticorpo . Sequência de Sequência de Sequência de Sequência de humanizado

[00102] Os outros anticorpos descritos no presente documento in- cluem aqueles que têm uma sequência de aminoácidos que sofreu mutação através de eliminação, inserção ou substituição de aminoáci- dos, mas ainda tem pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade com os anticorpos acima (particularmente nas regiões CDR apresen- tadas nas sequências acima). Em algumas modalidades, o anticorpo descrito no presente documento é um mutante de qualquer um de hu31, hu43, hu44, huS59, hu60 e hu250, em que o mutante compreen-

de uma sequência de aminoácidos mutante em que não mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos sofreram mutação através de eliminação, inserção ou substituição de aminoácidos em uma região CDR quando comparado com as regiões CDR apresentadas nas sequências acima.

[00103] Os outros ácidos nucleicos que codificam o anticorpo des- crito no presente documento incluem aqueles que sofreram mutação através de eliminação, inserção ou substituição de nucleotídeos, mas ainda têm pelo menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 100 % de identidade com as regiões codificadoras de CDR correspondentes apresentadas nas sequências acima. Expressão de Anticorpos

[00104] Em algumas modalidades, a presente invenção refere-se a um ou mais vetores de expressão ou uma célula hospedeira que com- preende os vetores de expressão e um método para produzir o anti- corpo ou fragmento de ligação a antígeno descrito no presente docu- mento, em que o método compreende cultura da célula hospedeira e purificação e isolamento do anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno do mesmo.

[00105] Os anticorpos descritos no presente documento podem ser produzidos em células de expressão hospedeiras usando, por exem- plo, uma combinação de técnica de DNA recombinante e método de transfecção gênica bem conhecido na técnica (por exemplo, Morrison, S. 1985, Science 229: 1202). Por exemplo, para expressão de um an- ticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo, o DNA que codifica ca- deias leves e pesadas parciais ou de comprimento total pode ser obti- do usando técnicas de biologia molecular ou bioquímicas padrão (por exemplo, síntese química de DNA, amplificação por PCR ou clonagem de cDNA usando hibridomas que expressam um anticorpo de interes- se) e o DNA pode ser inserido em um vetor de expressão de modo que os genes estejam operativamente ligados a sequências de contro-

le de transcrição e tradução.

No presente relatório descritivo, o termo "operativamente ligado" significa que os genes do anticorpo estão |i- gados a um vetor de modo que as sequências de controle de transcri- ção e tradução no vetor executem suas funções pretendidas de regular a transcrição e tradução dos genes do anticorpo.

Um vetor de expres- são e sequências de controle de expressão que podem ser compatí- veis com a célula hospedeira de expressão usada são selecionados.

O gene da cadeia leve do anticorpo e o gene da cadeia pesada do anti- corpo podem ser inseridos em vetores diferentes ou, mais tipicamente, ambos os genes são inseridos no mesmo vetor de expressão.

Um ge- ne de anticorpo é inserido em um vetor de expressão através de mé- todos padrão (por exemplo, ligação do fragmento do gene do anticorpo e sítios de restrição complementares no vetor ou ligação de extremi- dade cega se nenhum sítio de restrição estiver presente). Genes de anticorpos de comprimento total de qualquer isotipo de anticorpo po- dem ser obtidos ao inserir as regiões variáveis de cadeias leve e pe- sada do anticorpo descrito no presente documento em um vetor de expressão que já codifica as regiões constantes de cadeias pesada e leve do isotipo desejado para permitir a ligação operativa dos segmen- tos VH aos segmentos CH no vetor e a ligação operativa dos segmen- tos VL aos segmentos CL no vetor.

Adicional ou alternativamente, o vetor de expressão recombinante pode codificar um peptídeo sinaliza- dor (também denominado como uma sequência líder) que facilita a se- creção de uma cadeia de anticorpo a partir de uma célula hospedeira.

O gene da cadeia do anticorpo pode ser clonado em um vetor de mo- do que o peptídeo sinalizador esteja ligado ao terminal amino do gene da cadeia do anticorpo no mesmo quadro de leitura.

O peptídeo sinali- zador pode ser um peptídeo sinalizador de imunoglobulina ou um pep- tídeo sinalizador heterólogo (isto é, um peptídeo sinalizador de uma proteína diferente de imunoglobulina).

[00106] Células hospedeiras de mamífero para expressão dos anti- corpos recombinantes descritos no presente documento incluem várias linhagens de células imortalizadas disponíveis a partir da American Type Culture Collection (ATCC). Estas incluem, em particular, células de ovário de hamster Chinês (CHO), células NSO, células SP2/0, célu- las HeLa, células de rim de hamster bebê (BHK), células de rim de macaco (COS), células de carcinoma hepatocelular humano, células ABA49, células 293T e muitas outras linhagens de células. Células hos- pedeiras de mamíferos incluem células humanas, de camundongo, de rato, de cachorro, de macaco, de porco, de cabra, de vaca, de cavalo e de hamster. Linhagens de células particularmente preferidas são se- lecionadas ao determinar qual linhagem de células tem alto nível de expressão.

[00107] Quando um vetor de expressão recombinante que codifica uma cadeia pesada ou um fragmento de ligação a antígeno da mes- ma, ou um fragmento da mesma, uma cadeia leve e/ou um fragmento de ligação a antígeno da mesma é introduzido em uma célula hospe- deira de mamífero, um anticorpo é produzido por meio de cultura da célula hospedeira durante um período de tempo suficiente para permi- tir que o anticorpo seja expresso na célula hospedeira ou, mais prefe- rivelmente, secretando o anticorpo em um meio no qual a célula hos- pedeira é cultivada. O anticorpo pode ser isolado do meio usando mé- todos padrão de purificação de proteínas.

[00108] É provável que os anticorpos expressos por diferentes |i- nhagens de células ou em animais transgênicos tenham glicosilações diferentes entre si. No entanto, todos os anticorpos codificados pelas moléculas de ácidos nucleicos fornecidas no presente documento ou que compreendem as sequências de aminoácidos fornecidas no pre- sente documento são partes integrantes da presente invenção, inde- pendentemente da glicosilação do anticorpo. Da mesma forma, em determinadas modalidades, anticorpos não fucosilados são vantajosos porque têm, em geral, eficácia mais potente in vitro e in vivo do que suas contrapartes fucosiladas e é improvável que sejam, uma vez que suas estruturas de glicano são componentes normais da IgG sérica humana natural. Uso Médico

[00109] O anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mes- mo descrito no presente documento tem usos diagnósticos e terapêu- ticos in vitro e in vivo. De preferência, o anticorpo humanizado hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 ou hu250 é útil para o tratamento de doenças ou transtornos relacionados à IL-17A.

[00110] Em um aspecto, o anticorpo isolado ou o fragmento de liga- ção a antígeno do mesmo descrito no presente documento é capaz de resistir ao início da psoríase induzida por imiquimode no modelo de camundongo e reduzir a pontuação clínica do início de psoríase em camundongos e o grau de inchaço da orelha de camundongos quando avaliado quanto à atividade in vivo.

[00111] Em uma modalidade específica, no modelo de psoríase in- duzida por imiquimode, os anticorpos humanizados hu31 e hu44 po- dem resistir significativamente ao início em camundongos e reduzir a pontuação clínica do início de psoríase em camundongos e o grau de inchaço da orelha dos camundongos.

[00112] Emum aspecto, o anticorpo isolado ou o fragmento de liga- ção a antígeno do mesmo descrito no presente documento é capaz de inibir o inchaço da articulação do joelho em modelos de artrite induzida por antígeno, tal como o modelo AIA de macaco cynomolgus, quando avaliado in vivo.

[00113] Em uma modalidade específica, no modelo AIA de macaco cynomolgus, o anticorpo humanizado hu31 inibe significativamente a tendência crescente na pontuação clínica de artrite em macacos cynomolgus.

[00114] Em um aspecto da presente invenção, é fornecido um mé- todo para o tratamento de doenças patológicas mediadas por IL-17A que compreende administrar uma quantidade eficaz do anticorpo iso- lado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a presente invenção, especificamente hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 ou hu250, de modo a aliviar o transtorno.

[00115] Em uma modalidade, o anticorpo isolado ou a proteína que compreende um fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento é conjugado à outra porção ativa.

[00116] Em uma modalidade, o anticorpo isolado ou a proteína que compreende o fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento pode ser um anticorpo monoclional ou um frag- mento de ligação a antígeno do mesmo, de preferência um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado ou um anticorpo humano ou uma porção do mesmo.

[00117] Em aspectos da presente invenção, é fornecida uma com- posição farmacêutica que compreende o anticorpo ou a proteína que compreende o fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com as modalidades descritas no presente documento em combinação com um ou mais excipientes, diluentes ou carreadores farmaceutica- mente aceitáveis.

[00118] Nas modalidades, a composição farmacêutica compreende um ou mais ingredientes ativos adicionais.

[00119] Em uma modalidade específica, a composição farmacêutica é um pó liofiizado. Em outra modalidade específica, a composição farmacêutica é uma formulação líquida estável que compreende uma quantidade terapeuticamente aceitável do anticorpo ou da molécula descrita no presente documento.

[00120] Em particular, a presente invenção fornece um método para o tratamento de transtornos relacionados à IL-17A e/ou transtornos autoimunes e inflamatórios. Em determinadas modalidades, o método compreende administrar a um indivíduo que precisa o anticorpo isola- do ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a presente invenção.

[00121] A presente invenção também fornece um método para ate- nuar ou inibir uma resposta de transdução de sinal induzida por IL-17A ou IL-17AF em uma célula ou tecido alvo através de contato de uma célula com uma composição que compreende uma dose terapeutica- mente eficaz do anticorpo descrito no presente documento.

[00122] Na presente invenção, o termo "doença mediada por |IL- 17A" ou "transtorno relacionado à IL-17A" inclui todas as doenças e condições nas quais a IL-17A ou IL-17AF desempenham um papel (seja direta ou indiretamente), incluindo a causa, desenvolvimento, progressão, persistência ou patologia da doença ou condição. Assim, estes termos incluem condições associadas ou caracterizadas por um nível anormal de IL-17A ou IL-17AF e/ou doenças ou condições que podem ser tratadas pela atenuação ou inibição da atividade induzida por IL-17A/AF (por exemplo, CXCL1) em uma célula ou tecido alvo. Estas doenças ou condições incluem condições inflamatórias e doen- ças autoimunes, tais como artrite, artrite reumatoide, espondilite anqui- losante, esclerose múltipla ou psoríase. Estas doenças também inclu- em alergias e condições alérgicas, reações de hipersensibilidade, do- ença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose cística e rejeição de trans- plante de órgão ou tecido.

[00123] Conforme usado no presente documento, "inibir" ou "tratar" ou "tratamento" inclui o retardo no desenvolvimento dos sintomas as- sociados a um transtorno e/ou redução da gravidade dos sintomas de tais transtornos. O termo também inclui melhora de sintomas existen- tes não controlados ou prejudiciais, a prevenção de outros sintomas e melhora ou prevenção das causas subjacentes de tais sintomas. As- sim, o termo indica que um resultado benéfico foi conferido a um indi- víduo vertebrado que sofre ou tem probabilidade de sofrer de um transtorno, doença ou condição.

[00124] Os termos "quantidade terapeuticamente eficaz", "dose te- rapeuticamente eficaz" e "quantidade eficaz", conforme usado no pre- sente documento, referem-se a uma quantidade de um conjugado de IL-17 descrito no presente documento que é eficaz para prevenir ou melhorar um ou mais sintomas de uma doença ou condição ou o de- senvolvimento da doença ou condição quando administrado individu- almente ou em combinação com outros agentes terapêuticos a uma célula, tecido ou indivíduo. Dose terapeuticamente eficaz refere-se também a uma quantidade do conjugado suficiente para causar uma melhora nos sintomas, por exemplo, uma quantidade para tratar, curar, prevenir ou melhorar uma condição relacionada ou promover o trata- mento, cura, prevenção ou melhora de tal condição. Quando um in- grediente ativo é administrado a um indivíduo sozinho, uma dose tera- peuticamente eficaz refere-se à quantidade do ingrediente. Quando uma combinação é administrada, uma dose terapeuticamente eficaz se refere à quantidade combinada de ingredientes ativos que produz um efeito terapêutico, independentemente destes ingredientes ativos serem administrados em combinação, sequencial ou simultaneamente. Uma quantidade eficaz do agente terapêutico resultará em um aumen- to em um índice ou parâmetro diagnóstico de pelo menos 10 %, ge- ralmente pelo menos 20 %; de preferência pelo menos cerca de 30 %, mais preferivelmente pelo menos 40 %, ainda mais preferivelmente pelo menos 50 %. Artrite Reumatoide (RA)

[00125] ARA é uma doença sistêmica progressiva caracterizada por inflamação das articulações sinoviais que afeta aproximadamente

0,5 % da população global. Consulte Emery, (2006) BMJ 332: 152-

155. A inflamação das articulações pode causar deformidade, dor, rigi- dez e inchaço e, por fim, degeneração irreversível das articulações. As articulações afetadas incluem joelhos, cotovelos, pescoço e extremi- dades. Os tratamentos convencionais incluem o tratamento sintomáti- co com NSAIDs, seguido por tratamento com medicamentos anti- reumáticos modificadores da doença (DMRDs), tais como ouro, penici- lamina, sulfassalazina e metotrexato. Avanços recentes incluem o tra- tamento com inibidores de TNF-a, incluindo anticorpos monoclionais, tais como infliximabe, adalimumabe e golimumabe, e proteínas de fu- são de receptor, tal como etanercepte. O tratamento com estes inibido- res de TNF-alfa reduz significativamente o dano estrutural em virtude da doença.

[00126] Os anticorpos anti-IL-17A descritos no presente documento podem ser usados para tratar RA em um indivíduo que precisa de tal tratamento. Os anticorpos anti-IL-17A descritos no presente documen- to também podem ser combinados com outros tratamentos para RA, tais como metotrexato, azatioprina, ciclofosfamida, micofenolato de etila, NSAIDs ou inibidores de TNF-a. Psoríase

[00127] A pele é uma importante barreira entre o ambiente interno e externo, evitando o contato com antígenos potencialmente nocivos. No caso de invasão de antígeno/patógeno, células T, células polimorfonu- cleares, macrófagos e assim por diante no local de contato com a pele infiltram-se localmente e uma resposta inflamatória é iniciada para eli- minar o antígeno (consulte, por exemplo, Williams e Kupper, (1996) Life Sci., 58: 1485-1507). Em geral, esta resposta inflamatória desen- cadeada por patógeno está sob estrito controle e é encerrada quando o patógeno é eliminado. Em alguns casos, tal resposta inflamatória ocorre sem irritação externa e sem controle adequado, resultando em inflamação da pele. A presente invenção fornece um método para tra- tar e diagnosticar tal inflamação da pele. A inflamação da pele (uma consequência da infiltração celular mencionada e citocinas secretadas pelas células) inclui várias condições inflamatórias, tais como penfigoi- de cicatricial, esclerodermia, hidradenite supurativa, necrólise epidér- mica tóxica, acne, osteíte, doença enxerto contra hospedeiro (GVHD), piroderma gangrenoso e síndrome de Behçet (consulte, por exemplo, Williams e Griffiths, (2002) Clin. Exp. Dermatol., 27: 585-590). A infla- mação da pele mais comum é a psoríase.

[00128] A psoríase é caracterizada por hiperproliferação de querati- nócitos mediada por células T com infiltração inflamatória. A doença tem algumas manifestações compartilhadas, incluindo lesões crônicas em placas, erupção cutânea e lesões pustulares (consulte, por exem- plo, Gudjonsson et al., (2004) Clin. Exp. Immunol. 135: 1-8). Cerca de % dos pacientes com psoríase podem desenvolver artrite. A doen- ça tem uma predisposição genética forte e complicada com 60 % de identidade em gêmeos monozigóticos.

[00129] Lesões psoriáticas típicas são placas vermelhas com borda clara coberta por espessas escamas prateadas. A inflamação e a hi- perproliferação do tecido psoriático estão associadas a diferentes per- fis histológicos, antigênicos e de citocinas comparado com a pele nor- mal. As citocinas associadas à psoríase são: TNF-a, IL-19, IL-18, IL- 15, I1L-12, IL-7, IFN-y, IL-17A e 11-23 (consulte Gudjonsson et al., Su- pra).

[00130] Os anticorpos anti-IL-17A descritos no presente documento, individualmente ou em combinação com outros agentes, também po- dem ser usados para prevenir, tratar, diagnosticar e prever o início da psoríase.

[00131] Para preparar uma composição farmacêutica ou estéril do anticorpo anti-IL-17A descrito no presente documento, o anticorpo é misturado com um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitá- vel. Consulte, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences e US Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984).

[00132] As seguintes formas de dosagem de agentes terapêuticos e diagnósticos podem ser preparadas ao misturar o anticorpo com um carreador, excipiente ou estabilizante aceitável: um pó liofilizado, uma pasta, uma solução aquosa ou uma suspensão. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-17A descrito no presente documento é diluído para uma concentração apropriada por uma solução de acetato de sódio (pH de 5-6) e NaCl ou sacarose adicionada para ajustar a osmolalida- de. Outras substâncias (por exemplo, polissorbato 20 ou polissorbato 80) podem ser adicionadas para melhorar a estabilidade.

[00133] O regime de dosagem depende de vários fatores, incluindo renovação sérica ou tecidual do anticorpo terapêutico, gravidade dos sintomas, imunogenicidade do anticorpo terapêutico e acessibilidade das células-alvo na matriz biológica. De preferência, o regime de do- sagem fornece uma quantidade suficiente de anticorpo terapêutico pa- ra atingir uma melhora no estado patológico-alvo, ao mesmo tempo em que minimiza os efeitos colaterais adversos. Assim, a quantidade de produtos biológicos administrados depende, em parte, do anticorpo terapêutico particular e da gravidade da condição a ser tratada. Orien- tação sobre as seleções de dosagens adequadas para anticorpos te- rapêuticos está disponível. As dosagens apropriadas podem ser de- terminadas pelo médico, por exemplo, usando parâmetros ou fatores conhecidos na técnica ou suspeitos de afetarem o tratamento. Em ge- ral, a dosagem começa com uma quantidade ligeiramente menor do que a dose ideal e será aumentada em pequenos incrementos depois disso até que o efeito desejado ou ideal seja alcançado em relação a quaisquer efeitos colaterais negativos. Métodos diagnósticos importan-

tes incluem, por exemplo, métodos diagnósticos com base em sinto- mas inflamatórios ou níveis de citocinas inflamatórias produzidas. De preferência, são usados produtos biológicos derivados da mesma es- pécie que o animal para a terapia-alvo, deste modo, minimizando as respostas inflamatórias, autoimunes ou proliferativas ao agente. Por exemplo, no caso de seres humanos, são preferidos anticorpos quimé- ricos, humanizados e totalmente humanos.

[00134] A presente invenção inclui quaisquer combinações das mo- dalidades específicas descritas. Outras modalidades da presente in- venção e o escopo completo de aplicabilidade se tornarão evidentes a partir da descrição detalhada fornecida abaixo. No entanto, deve ser entendido que a descrição detalhada e os exemplos específicos, em- bora indiquem modalidades preferidas da presente invenção, são for- necidos apenas a título de ilustração, uma vez que diversas mudanças e modificações dentro do espírito e escopo da presente invenção se tornarão evidentes para aqueles versados na técnica a partir da des- crição detalhada. Todas as publicações, patentes e pedidos de paten- tes citados no presente documento, incluindo as citações, são incorpo- rados ao presente documento a título de referência na íntegra para todas as finalidades.

EXEMPLOS Exemplo 1. Proteína IL-17A-mFc Humana Recombinante

[00135] O plasmídeo HG12047-G que contém a sequência de CDNA que codifica IL-17A humana de comprimento total (Nº de acesso NCBI NP 002181.1) foi adquirido a partir da Sino Biological, Inc. e um fragmento maduro de IL-17A humana (aminoácidos 24-155 de Nº de acesso NCBI NP 002181.1, sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 66, sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 67) foi amplificado por meio de técnicas convencionais de PCR. O fragmento amplificado foi digerido por BSPQI e foi clonado em um sistema de plasmídeo de expressão eucariota (MXT1-Fc, que contém o domínio Fc de cadeia pesada de IgG de murino) construído internamente, deste modo, ge- rando um plasmídeo de expressão para a proteína de fusão recombi- nante IL-17A-mFc. O plasmídeo verificado foi transfectado na célula de expressão 293F através de técnicas convencionais e a proteína |IL- 17A-mFc humana recombinante foi adquirida após expressão e purifi- cação. A Figura 1 mostra o eletroferograma de SDS-PAGE da proteína IL-17A-mFc humana recombinante. Exemplo 2. Construção de Linhagens de Células 293F Estáveis que Expressam |IL-17RA Humano

[00136] O plasmídeo HG10895-G que contém a sequência de CDNA que codifica IL-17RA humano de comprimento total foi adquirido a partir da Sino Biological, Inc. e a sequência de DNA que codifica o IL-17RA humano de comprimento completo foi amplificada por PCR convencional (SEQ ID NO: 69). Os fragmentos amplificados foram clo- nados em um sistema de plasmídeo de expressão eucariota (HXP) construído internamente que contém um sistema de triagem de puro- micina através de técnicas convencionais de clonagem. O plasmídeo de expressão recombinante verificado para IL-17RA foi transfectado em células 293F (ATCC). 24 h após a transfecção, as células foram selecionadas por puromicina (2 ug/mL) até que células IL-17RA 293F estáveis fossem geradas. Os clones individuais foram isolados através de métodos convencionais, por exemplo, por meio de clonagem atra- vés de diluição limitativa, e transferidos para placas com 96 cavidades a 0,8 células por cavidade. 15 dias depois, os monoclones IL-17RA- 293F foram selecionados e passados para dar linhagens de células 293F estáveis para IL-17RA. Todos os clones foram rastreados por FACS ou similar e clones com nível de expressão superior foram sele- cionados através de um ensaio de ligação FACS quanto a anticorpos monoclonais de hibridoma ou para uso em ensaios funcionais.

Exemplo 3. Ligação da Proteína IL-17A-mFc Recombinante a Linha- gens de Células 293F Estáveis para IL-17RA

[00137] A especificidade de ligação da proteína IL-17A-mFc recom- binante ao IL-17RA em células 293F foi determinada por FACS. Re- sumidamente, as células (linhagens de células 293F estáveis para IL- 17RA) foram preparadas em suspensões de células a 1 x 106mL e adicionadas a placas com 96 cavidades a 20 ul/cavidade, com um número real de células de 2 x 10*/cavidade. A proteína recombinante IL-17A-mFc (3 ug/mL, 20 uL/cavidade; grupo de tratamento) ou BSA a 1 % (20 ulL/cavidade; grupo de controle negativo) foi misturada com a suspensão de células e, após uma incubação a 37 ºC durante 30 mi- nutos, as células foram lavadas com tampão de FACS 3 vezes. Foi adicionada IgG anti-camundongo (1:200) e as células foram incubadas em temperatura ambiente durante 30 minutos. As células foram lava- das 3 vezes com tampão de FACS e detectadas por um citômetro de fluxo para comparar a intensidade média de fluorescência (MFI) dos grupos. Conforme mostrado na Figura 2, a proteína I|L-17A-mFc re- combinante pode se ligar especificamente ao IL-17RA em células 293F. Exemplo 4. Preparação e Triagem de Anticorpos de Hibridoma

[00138] Os anticorpos de hibridoma foram produzidos usando técni- cas de biologia molecular padrão. Resumidamente, a proteína IL-17A humana nativa adquirida a partir da HumanZyme como um antígeno foi misturada com uma quantidade igual de um imunoadjuvante. 5 ca- mundongos FVB fêmeas com 6 semanas de idade foram imunizados. Uma imunização de reforço foi realizada semanalmente após a imuni- zação primária, totalizando sete imunizações. Após a última imuniza- ção de reforço, os camundongos com titulações elevadas de anticor- pos anti-IL-17A no soro foram selecionados para fusão celular. As cé- lulas do baço foram isoladas e fundidas com as células de mieloma de murino SP2/0 (ATCC) através de técnicas de hibridoma padrão. As células fundidas foram ressuspensas em meio completo RPMI-1640 que contém HAT e colocadas em cavidades com uma camada de ali- mentação de células peritoneais.

[00139] Os sobrenadantes secretores de hibridoma monoclionais foram identificados com base nas características de ligação anticor- po/antígeno inicialmente desejadas (tal como afinidade de ligação pela IL-17A, capacidade de bloquear a ligação de IL-17A ao seu receptor, reatividade cruzada e capacidade de bloquear efeitos biológicos medi- ados pela IL-17A in vitro). Os anticorpos no sobrenadante dos hibri- domas 1F8, 2B2, 2F5, 2F2, 2H1 e 2H5 foram usados para caracteriza- ção adicional. Exemplo 5. Efeitos de Anticorpos de Hibridoma Sobre o Bloqueio da Bioatividade de IL-17A /n Vivo

[00140] “Um grande número de pesquisas mostra que a IL-17A pro- move a expressão e liberação da citocina CXCL1 in vivo. Assim, a al- teração da expressão de CXCL1 no soro de camundongo pode ser detectada quantitativamente por meio de ELISA, de modo a determinar a influência de um anticorpo de hibridoma sobre a bioatividade media- da por IL-17A em camundongos. Resumidamente, 40 camundongos Balb/c fêmeas com 10 semanas de idade foram selecionados e dividi- dos em 8 grupos de 5 camundongos cada. 4 dias antes da administra- ção, o soro foi coletado e a expressão de CXCL1 foi medida como a linha de base. No dia da administração, anticorpos de hibridoma can- didatos, solução salina (controle) ou anticorpo de referência mAb3 17 (anticorpo anti-IL-17A comercialmente disponível da R&D) foram ad- ministrados intracardialmente em uma dose de 1 mg/kg. 1 hora após a administração, IL-17A humana nativa (HumanZyme) foi injetada por via subcutânea em uma dose de 150 ug/Kkg; 2 horas após a adminis- tração de IL-17A humana, o soro foi coletado e a concentração de

CXCL1 no sangue foi medida e comparada com a linha de base. A fold change (média + erro padrão (média + SEM)) na concentração de CXCL1 antes e após a administração foi calculada para cada grupo. À análise comparativa entre os grupos de tratamento e o grupo de con- trole é considerada significativamente diferente quando P é < 0,05 em um t-teste de Student, * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001.

[00141] Conforme mostrado na Figura 3, os anticorpos de hibrido- ma obtidos no Exemplo 4 e o anticorpo comercial mAb317 podem im- pedir, de forma significativa, que a IL-17A induza à expressão de CXCL1 em camundongos. Exemplo 6. Aquisição de Sequências de Região Variável de Anticor- pos Candidatos

[00142] As sequências de DNA das regiões variáveis do anticorpo expressas pelos hibridomas 1F8, 2B2 e 2F5 foram determinadas usando PCR com base em iniciador degenerado. Resumidamente, as linhagens de células de hibridoma 1F8, 2B2 e 2F5 foram expandidas e coletadas por meio de centrifugação a 1000 rpm. O RNA total foi extra- ído com Trizol. Usando o RNA total como modelo, uma primeira fita de CDNA foi sintetizada. As sequências de DNA das regiões variáveis correspondentes foram amplificadas por PCR usando o cDNA da pri- meira fita como modelo subsequente. Os iniciadores de PCR usados foram com base em um conjunto de iniciadores de lg. Os produtos de PCR foram coletados, purificados, sequenciados e analisados para dar as sequências da região variável das cadeias pesada e leve dos anti- corpos de hibridoma candidatos. A célula de hibridoma 1F8 produziu duas sequências do gene da região variável de cadeia leve do anticor- po e uma sequência do gene da região variável de cadeia pesada do anticorpo e 2F5 produziu duas sequências do gene da região variável de cadeia pesada do anticorpo e uma sequência do gene da região variável de cadeia leve do anticorpo. Portanto, os anticorpos secreta-

dos por 1F8 e 2F5 podem incluir, cada um, dois anticorpos intactos, em que os anticorpos secretados por 1F8 foram codificados como 1F8-1 e 1F8-2 e os anticorpos secretados por 2F5 foram codificados como 2F5-1 e 2F5-2.

[00143] As sequências de aminoácidos das regiões variáveis das cadeias pesada e leve dos anticorpos expressos por 1F8, 2F5, 2B2 são mostradas na Tabela 1 (consulte DESCRIÇÃO DETALHADA). Exemplo 7. Construção de Vetores de Expressão de Anticorpo Quimé- rico Recombinante

[00144] O fragmento Fc da região constante da cadeia pesada de IgG4 humana e a região constante capa da cadeia leve foram clona- dos a partir de células sanguíneas humanas (Beijing Blood Institute) e ligado ao plasmídeo pCDNA3.1 para manipulação. Os fragmentos da sequência da região variável de cadeia pesada e da cadeia leve foram sintetizados pela GenScript. As cadeias pesadas e leves foram cliva- das por Bspq | e depois ligadas a um plasmídeo pCDNA3.1 modificado de forma correspondente. Os plasmídeos de expressão da cadeia pe- sada (ch-HC) ou da cadeia leve (ch-LC) quiméricas de I9gG4 foram ve- rificados por sequenciamento. Os plasmídeos de expressão para as diferentes cadeias pesadas e leves quiméricas foram emparelhados para transfectar células de expressão, produzindo 16 anticorpos qui- méricos numerados de ch1 a ch16 (consulte Tabela 6). Todos os ma- teriais experimentais subsequentes foram fornecidos pelas células de expressão transfectadas com estes plasmídeos. Tabela 6. Fonte de cadeia leve/pesada de anticorpo quimérico

Exemplo 8. Especificidade de Ligação de Anticorpos Quiméricos à |L- 17A Humana

[00145] A especificidade de ligação dos anticorpos quiméricos à IL- 17A humana foi determinada por meio de ELISA convencional. A sa- ber, 0,5 ug/mL de IL-17A-mFc humana foram imobilizados em uma placa com 96 cavidades e incubados durante 60-90 minutos a 37 ºC. À solução nas cavidades foi, então, descartada e as cavidades foram lavadas 3 vezes com tampão de lavagem e bloqueadas durante 60 minutos com PBS que contém BSA a 2 %. A placa foi lavada 3 vezes com tampão de lavagem e anticorpos quiméricos diluídos em diferen- tes concentrações adicionados. Os anticorpos foram incubados a 37 ºC durante 60 minutos. A placa foi, então, lavada 3 vezes com tampão de lavagem e anticorpo anti-lgG4 biotinilado diluído 10000 vezes adi- cionado. O sistema foi incubado a 37 ºC durante 1 hora, lavado três vezes com tampão de lavagem, HRP-Strep 10000 vezes diluído com tampão de lavagem adicionado e incubado em temperatura ambiente durante 1 hora. Após 3 lavagens com tampão de lavagem, 100 uL de substrato TMB foram adicionados para revelação da cor. O sistema foi incubado em temperatura ambiente durante 30 minutos e a reação foi encerrada com 100 uL de solução de ácido clorídrico a 2M. A absor- bância a 450 nm foi medida por um leitor de placas.

[00146] “Conforme mostrado na Figura 4, os anticorpos quiméricos ch1, ch2, ch4, ch7 e ch16 se ligam à IL-17A humana com maior espe- cificidade, com a ECs5o dos anticorpos quiméricos sendo 6,62 ng/mL, 5,17 ng/mL, 88,48 ng/mL, 39,96 ng/mL e 15,42 ng/mL, respectivamente. Exemplo 9. Bloqueio da Ligação de IL-17A Humana ao IL-17RA por Anticorpos Quiméricos

[00147] O bloqueio da ligação de IL-17A ao IL-17RA em células foi detectado por um ensaio de citometria de fluxo com base em células competitivo (FACS). Resumidamente, diluições de anticorpos quiméri-

cos de diferentes concentrações (diluídos 3 vezes a partir de 10 vpg/mL) foram misturados com a IL-17A-mFC humana pré-biotinilada (3 vpg/mL) obtida no Exemplo 1 e incubados em temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi, então, coincubada com uma sus- pensão de células (linhagens de células 293F estáveis para IL-17RA obtidas no Exemplo 2, 1,5 x 10º células/cavidade) a 37 ºC durante 15 minutos. Após 3 lavagens com PBS, 5 ug/mL de IgG anti-camundongo foram adicionados e o sistema foi incubado em temperatura ambiente durante 30 minutos. Após 3 lavagens com PBS, os anticorpos quiméri- cos foram analisados por meio de citometria de fluxo quanto à inibição da ligação de IL-17A ao IL-17RA na superfície de células 293F.

[00148] Conforme mostrado na Figura 5, os anticorpos quiméricos ch1, ch2, ch7 e ch16 podem inibir significativamente a ligação de IL-17 humana ao IL-17RA na superfície de células 293F. Combinando outros resultados experimentais, ch1 e ch16 foram selecionados para huma- nização adicional. Exemplo 10. Humanização de Anticorpos

[00149] Para humanização de anticorpos, genes de IgG humana homólogos à sequência de cDNA das regiões variáveis de anticorpos de murino foram recuperados no banco de dados de genes de imuno- globulina humana do NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/). As sequências de aminoácidos das CDRs das regiões variáveis e seus limites foram, então, determinados de acordo com o sistema de nume- ração de Kabat ou o sistema de numeração IMGT. IGVH e IGVk hu- manos com alta homologia com as regiões variáveis do anticorpo de murino foram selecionados como modelos para humanização e foram humanizados através de enxertia de CDR. Resumidamente, a humani- zação compreende as seguintes etapas: A. As sequências do gene dos anticorpos candidatos foram comparadas com a sequência do ge- ne do anticorpo de linhagem germinativa humana para selecionar se-

quências com alta homologia; B. Através de análise de afinidade HLA- DR, foi selecionada uma sequência de região estrutural de linhagem germinativa humana com baixa afinidade; e C. As sequências de ami- noácidos estruturais das regiões variáveis e sua periferia foram anali- sadas por meio de simulação computadorizada e ancoragem molecu- lar e o arranjo espacial e estéreo foi verificado. Os aminoácidos-chave individuais que interagem com IL-17A e mantêm a estrutura espacial na sequência do gene dos anticorpos candidatos foram analisados calculando-se a força eletrostática, força de Van der Waals, hidrofilici- dade e hidrofobicidade e valor de entropia e enxertados na região es- trutural do gene da linhagem germinativa humana. As posições de aminoácidos das regiões estruturais que devem ser retidas foram ma- peadas. Em seguida, os anticorpos humanizados foram sintetizados.

[00150] O esquema de definição das CDRs da região variável de anticorpos de murino e suas sequências de aminoácidos são mostra- dos na Tabela 3 da DESCRIÇÃO DETALHADA.

[00151] Com base nos resultados supracitados, os anticorpos qui- méricos ch1 e ch16 foram selecionados para humanização. Após uma triagem primária de uma série de propriedades de ligação anticor- po/antígeno (tais como afinidade de ligação à IL-17A, capacidade de bloquear a ligação de IL-17A ao seu receptor), anticorpos humaniza- dos hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 e hu250 foram selecionados para subsequente validação.

[00152] As regiões variáveis dos anticorpos humanizados hu31, hu43, hu44, huS59, hu60 e hu250 e suas sequências de aminoácidos de CDRs são mostradas na Tabela 4 da DESCRIÇÃO DETALHADA. Exemplo 11. Especificidade de Ligação de Anticorpos Humanizados à IL-17A Humana

[00153] A especificidade de ligação dos anticorpos humanizados à IL-17A humana foi determinada por meio de ELISA convencional. O método e os procedimentos são descritos no Exemplo 8. Conforme mostrado na Figura 6, anticorpos humanizados hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 e hu250 se ligaram especificamente à IL-17A. A ECsofoi de 8,13 ng/mL, 8,64 ng/mL, 6,76 ng/mL, 6,10 ng/mL, 5,78 ng/mL e 6,35 ng/mL, respectivamente. Exemplo 12. Bloqueio da Ligação de IL-17A Humana ao IL-17RA por Anticorpos Humanizados

[00154] O bloqueio da ligação de IL-17A ao IL-17RA em células foi detectado por meio de um ensaio competitivo de citometria de fluxo com base em células (FACS). O método e os procedimentos são des- critos no Exemplo 9. Conforme mostrado na Figura 7, os anticorpos humanizados hu31, hu43, hu44, hu59, hu60 e hu250 impediram signi- ficativamente a ligação especifica de IL-17A ao IL-17RA nas células. A IC5o foi de 867,6 ng/mL, 780,8 ng/mL, 828,5 ng/mL, 467,4 ng/mL, 482,8 ng/mL e 577,8 ng/mL, respectivamente. Exemplo 13. Antagonismo da Expressão de CXCL1 Induzida por |L- 17A em Células Epiteliais por Anticorpos Humanizados

[00155] A IL-17A pode estimular a expressão e liberação de uma citocina CXCL1 em várias células epiteliais e outras células. A mudan- ça no nível de expressão de CXCL1 no sobrenadante celular pode ser quantificada por ELISA para determinar a influência dos anticorpos humanizados sobre as bioatividades mediadas por IL-17A nas células.

[00156] Células HT-29 (células epiteliais de adenocarcinoma color- retal humano, ATCC) foram incubadas em um meio de cultura/ensaio em frascos tratados com culturas teciduais de acordo com técnicas padrão. As células HT-29 foram crescidas em frascos tratados com culturas teciduais até atingirem uma confluência de 50-80 % no dia do ensaio. No dia do ensaio, as células foram lavadas com PBS e libera- das do frasco com tripsina + EDTA para preparar uma suspensão de células. Diluições (diluição em série de 3 vezes a partir de 55 ug/mL)

de anticorpos humanizados hu31, hu59, hu60, hu250 ou um anticorpo de referência (secuquinumabe, Novartis) foram misturados com IL-17A humana (1 pug/mL), transferidos para placas com 96 cavidades e incu- badas durante 1 h. 100 ul de suspensões (2 x 10º células) de células HT-29 (ATCC, células epiteliais de adenocarcinoma colorretal huma- no) foram adicionados a cada cavidade e incubados a 37 ºC/7 % de CO,» durante 48 h. As células foram centrifugadas a 500 x g durante 5 min e o sobrenadante foi transferido para novas placas com 96 cavi- dades. A expressão de CXCL1 foi determinada por um kit ELISA.

[00157] Conforme mostrado na Figura 8, os anticorpos humaniza- dos hu31, hu59, hu60 e hu250 demonstraram antagonismo mais po- tente à estimulação da liberação de CXCL1 mediada pela IL-17A em células epiteliais do que o anticorpo de referência secuquinumabe. Exemplo 14. Antagonismo Induzido por I|L-17A da Expressão de CXCL1 em Camundongos por Anticorpos Humanizados

[00158] O efeito dos anticorpos humanizados sobre a bioatividade mediada por IL-17A in vivo foi determinado medindo as alterações nos níveis séricos de CXCL1 de camundongo, conforme descrito no Exemplo 5. Resumidamente, 40 camundongos Balb/c fêmeas com 10 semanas de idade foram selecionados e divididos em 8 grupos de 5 ca- mundongos cada. 4 dias antes da administração, o soro foi coletado e a expressão de CXCL1 foi medida como a linha de base. No dia da admi- nistração, os anticorpos candidatos (anticorpos humanizados hu31, hu43, hu44, hu60 e hu250) ou um controle de isotipo IgG4 (hlgG) foram admi- nistrados intracardialmente em uma dose de 1 mg/kg. 1 hora após a administração, IL-17A humana foi injetada por via subcutânea na dose de 150 ug/Kkg; 2 horas após a administração de IL-17A humana, o soro foi coletado e a concentração de CXCL1 no sangue foi medida e com- parada com a linha de base. A fold change (média + erro padrão (mé- dia + SEM)) na concentração de CXCL1 antes e após a administração foi calculada para cada grupo. A análise comparativa entre os anticor- pos candidatos e o controle de isotipo IgG4 é considerada significati- vamente diferente quando P é < 0,05 em um t-teste de Student, * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001.

[00159] Conforme mostrado na Figura 9, os anticorpos humaniza- dos candidatos hu31, hu43, hu44, hu60 e hu250 demonstraram anta- gonismo mais potente à estimulação da liberação de CXCL1 pela |IL- 17A em células epiteliais do que o controle de isotipo I9G4. Exemplo 15. Estudo de Eficácia de Anticorpos Humanizados na Me- lhora da Psoríase Induzida por Imiquimode em Camundongos

[00160] O imiquimode administrado na orelha e na pele posterior de um camundongo pode induzir a características patológicas similares à psoríase, incluindo hiperproliferação de queratinócitos, agregação de células inflamatórias, hiperplasia vascular papilar dérmica e assim por diante, deste modo, construindo um modelo de camundongo com pso- ríase. A eficácia dos anticorpos em camundongos com psoríase foi determinada por parâmetros de avaliação, tais como pontuações clíni- cas, graus de inchaço da orelha e assim por diante.

15.1. Metodologia

[00161] Foram selecionados 48 camundongos fêmeas C57BL/6 com idades entre 6-8 semanas (adquiridos a partir do Model Animal Research Center da Universidade de Nanjing, Certificado nº 201605578). Os pelos das costas dos camundongos foram raspados e os camundongos, ex- ceto o grupo com cirurgia simulada, foram sensibilizados dois dias de- pois. Dois dias antes da sensibilização, os camundongos foram ran- domizados em 5 grupos (8 em cada): o grupo | era o grupo com cirur- gia simulada; o grupo Il foi o grupo com PBS, o grupo Ill foi o grupo de controle KLH (isotipo IgG) que recebeu KLH; o grupo IV foi o grupo de tratamento com hu31; o grupo V foi o grupo de tratamento com hu43; o grupo VI foi o grupo de tratamento com hu44. A dose para todos os grupos foi de 50 mg/kg e os grupos acima receberam os medicamen- tos correspondentes intraperitonealmente uma vez no dia O e no dia 3. No dia da sensibilização (dia 1), os camundongos do grupo II-VI rece- beram aproximadamente 62,5 mg de creme de imiquimode (Aldara, 5 %, 3M Health Care Limited) na orelha direita e pele dorsal durante 4 dias consecutivos.

15.2. Avaliação

[00162] A espessura da orelha direita do camundongo foi medida diariamente por um micrômetro a partir do dia da sensibilização. Com a espessura da orelha no dia 1 como a linha de base, a espessura do inchaço da orelha foi registrada. Os camundongos foram pesados diariamente, observados quanto à descamação cutânea, endurecimen- to e eritema e classificados por uma escala de 4 pontos: 0, nenhum; 1, leve; 2, moderado; 3, grave; 4, sério. Os resultados foram registrados em média + erro padrão (média + SEM). As diferenças entre os grupos foram identificadas através de análise de variância (ANOVA) unilateral e validadas pelo t-teste de Student, com um P < 0,05 indicando dife- rença significativa.

[00163] Conforme mostrado na Figura 10-1, a administração dos anticorpos candidatos descritos no presente documento pode inibir significativamente a descamação cutânea, endurecimento, inchaço e outras condições de psoríase induzida por imiquimode no modelo de camundongo, demonstrando pontuações diminuídas.

[00164] Conforme mostrado na Figura 10-2, o creme de imiquimode administrado à orelha direita dos camundongos a partir do dia da sen- sibilização induziu a inchaço grave e aumento da espessura da orelha direita, enquanto que o anticorpo humanizado da presente invenção melhorou significativamente o inchaço da orelha.

[00165] — No modelo de camundongo com psoríase induzida por imi- quimode, o anticorpo humanizado descrito no presente documento po-

de obviamente resistir à morbidade em camundongos, demonstrando reduções na pontuação clínica dos camundongos e no grau de incha- ço da orelha. Exemplo 16. Estudo de Eficácia de Anticorpo Humanizado na Melhora da Artrite Induzida por Colágeno de Tipo |l em Macaco Cynomolqus Fêmea

[00166] Animais com artrite induzida por colágeno de tipo Il são modelos comumente usados em estudos de artrite reumatoide (RA). Estes modelos têm características histopatológicas similares à RA humana e são caracterizados por inflamação nas articulações e ero- são progressiva nas cartilagens e ossos. As macromoléculas biológi- cas humanas/humanizadas que incluem anticorpos geralmente têm melhor reatividade cruzada com antígenos de macaco cynomolgus. Assim, o modelo de macaco cynomolgus com artrite é um sistema efi- caz para analisar a eficácia anti-reumatismo do anticorpo humanizado anti-IL-17A descrito no presente documento. O experimento avaliou a eficácia dos anticorpos candidatos em um modelo de macaco cynomo- Igus com artrite.

16.1. Metodologia

[00167] —Colágeno bovino de tipo II (CIl, Sichuan University) foi dis- solvido em ácido acético (CATH 10000218; Sinopharm, Shanghai, Chi- na), agitado durante a noite em um refrigerador a 4 ºC e emulsificado com um volume igual de adjuvante de Freund completo (CAT F5881, Sigma-Aldrich, EUA) para dar uma emulsão de colágeno com uma concentração final de 2 mg/mL. No dia O, os animais foram anestesia- dos com Zoletil (1,5-5 mg/kg, im) e administrados com a emulsão de colágeno em múltiplos locais no dorso e na cauda, com isoflurano a 1,5 % -5 % para manter o efeito anestésico, conforme necessário. Os animais receberam novamente colágeno 3 semanas depois (dia 21) com o mesmo método anterior. Os animais foram, então, divididos em

4 grupos. G1 era o grupo normal sem indução de artrite; G2 era o gru- po de controle com veículo; G3 era o grupo de tratamento com anti- corpo hu31; e G4 era o grupo de tratamento com anticorpo hu59. Os animais com uma pontuação de 5 % da pontuação clínica máxima (192 x 5 % = 10) foram sequencialmente divididos nos grupos até que todos os animais que atendessem aos requisitos fossem alocados. Após a alocação, o tratamento foi administrado na dose de 7,5 mg/kg através de uma bomba de infusão em 30 minutos, uma vez por sema- na durante 5 semanas.

16.2. Avaliação

[00168] Peso corporal: O peso corporal dos animais foi medido no dia anterior à indução da artrite e depois uma vez por semana até ao final do estudo.

[00169] Pontuação da artrite: Os macacos foram classificados quanto à inflamação nos dias 0 e 21 e uma vez por semana após o dia 21 até o final do estudo (se início precoce ocorreu, a pontuação semanal de- ve começar de acordo). Os critérios de pontuação são apresentados na Tabela 2. Foram avaliadas 15 articulações em cada pata: 5 articu- lações metacarpofalangianas (MCP), 4 articulações interfalangianas proximais (PIP), 5 articulações interfalangianas distais (DIP), 1 articu- lação do punho e 1 articulação do tornozelo. Também é desejável ava- liar a gravidade das lesões nas articulações do joelho/cotovelo nas ex- tremidades. A soma das pontuações das articulações individuais foi a pontuação da artrite para o animal, com uma pontuação máxima de 192 (16 x 3 x 4). Critérios de pontuação para artrite: O, normal; 1, artri- te leve, com lesão leve, mas distinguível; 2, edema moderado; 3, artri- te grave, com inchaço grave ou deformidade articular óbvia.

[00170] Os dados experimentais são apresentados em média + erro padrão (média + SEM). As diferenças nos parâmetros entre o grupo de controle com veículo, grupo com o medicamento de referência e grupo com o artigo de teste foram resumidas, com p < 0,05 indicando estatis- ticamente diferente (ANOVA/Dunnett unilateral).

[00171] Conforme mostrado na Figura 11-1, os pesos corporais dos macacos cynomolgus no grupo normal (G1) eram estáveis; para os macacos cynomolgus com artrite induzida, o peso médio no grupo de controle com veículo (G2) diminuiu continuamente e as diminuições em macacos que receberam os anticorpos hu31 e hu59 foram controladas. Assim, sob as condições deste estudo, hu31 e hu59 melhoram a perda de peso causada pela artrite até certo ponto (** P < 0,01, **** P < 0,0001, comparado com "G2: grupo com veículo"; ANOVA unilateral/Dunnett).

[00172] Conforme mostrado na Figura 11-2, as pontuações clínicas da artrite de animais no grupo normal permaneceram O após a aloca- ção; a pontuação da artrite dos animais no grupo de controle com veí- culo (G2) aumentou progressivamente, enquanto que os anticorpos de teste hu31 e hu59 inibiram significativamente a tendência de aumento da pontuação clínica da artrite. Assim, os anticorpos hu31 e hu59 de- monstraram efeitos inibidores da progressão de artrite e hu31 inibiu significativamente a tendência crescente na pontuação clínica da artri- te em macacos cynomolgus (*** P < 0,001, tfP < 0,05, comparado com G2: grupo com veículo; ANOVA/Dunnett unilateral). Exemplo 17. Eficácia de Anticorpos Humanizados no Inchaço da Arti- culação de Camundongo Induzido por Células NIH3T3-IL-17

1. Animais:

[00173] C57BL/6, fêmea, 6-8 semanas, Beijing Vital River Labora- tory Animal Technology Co., Ltda.

2. Células:

[00174] Células NIH3T3, células NIH3T3 que expressam IL-17 hu- mana.

3. Agrupamento e Regime de Dosagem: Grupo com NIH3T3;

Grupo com NIH3T3-IL-17 + anticorpo IgG de referência (30 mg/kg); Grupo com NIH3T3-IL-17 + alta dose de anticorpo de tratamento (hu31, 3 mg/kg); Grupo com NIH3T3-IL-17 + dose média de anticorpo de tratamento (hu31, 10 mg/kg); Grupo com NIH3T3-IL-17 + baixa dose de anticorpo de tratamento (hu31, 30 mg/kg); Grupo com NIH3T3-IL-17 + medicamento positivo (Cosentyx, 10 mg/kg).

4. Modelagem e Administração:

[00175] Células NIH3T3-IL-17 e células de controle NIH3T3 (2,5 x 10º células/camundongo, com um volume de injeção de 25 uL) foram injetadas na cavidade do tornozelo direito dos camundongos.

[00176] As injeções intraperitoneais do anticorpo hu31 (3, 10, 30 mg/kg) e Cosentyx (10 mg/kg) foram administradas uma vez a cada 3 dias, começando 1 dia antes da seleção do modelo. A eficácia da injeção de anticorpo hu31 no modelo de camundongo com artrite foi examinada.

5. Detecção:

[00177] A espessura do tornozelo foi medida por um paquímetro e a extensão do inchaço foi calculada.

6. Resultados:

[00178] Conforme mostrado na Figura 12, após as células NIH3T3 que expressam hllL-17 serem injetadas na cavidade articular de ca- mundongos, grave inchaço da articulação dos camundongos foi obser- vado no dia seguinte.

[00179] A taxa de inibição do inchaço foi calculada de acordo com a espessura do tornozelo dos camundongos, em que a fórmula de cálcu- lo é a seguinte: taxa de inibição (%) = (espessura do tornozelo do gru- po com NIH3T3-IL-17 IgG - espessura do tornozelo do grupo de trata- mento)/(espessura do tornozelo do grupo com NIH3T3-IL-17 IgG - es-

pessura do tornozelo do grupo com NIH3T3) x 100. Os resultados mostraram que, no dia 2 após a administração, inibição do inchaço do tornozelo em camundongos foi observada em todos os grupos de tra- tamento até o final do estudo e um efeito inibidor máximo foi observa- do no dia 6 após a administração. No dia 10, as taxas de inibição do anticorpo hu31 a 3, 10 e 30 mg/kg foram 49,4 %, 65,9 % e 74,1 %, respectivamente. A taxa de inibição do inchaço pelo Cosentyx (10 mg/kg) foi de 67,1 %. As taxas de inibição médias foram calculadas em dias diferentes nos grupos de tratamento e os resultados mostra- ram que as taxas de inibição médias foram de 45,2 %, 57,0 % e 73,9 % para os grupos de tratamento de 3, 10 e 30 mg/kg, respectivamente. A taxa média de inibição do inchaço pelo Cosentyx (10 mg/kg) foi de 60,4 %. Os resultados sugerem que o anticorpo hu31 pode inibir o in- chaço do tornozelo induzido por IL-17 em camundongos dependendo da dose e a eficácia a 10 mg/kg é equivalente àquela de um medica- mento positivo Cosentyx (10 mg/kg). A eficácia a 30 mg/kg é superior àquela do medicamento de referência Cosentyx (10 mg/kg). Exemplo 18. Eficácia de Anticorpos Humanizados em Modelo de Bolsa de Ar de Inflamação Induzida por Células NIH3T3-1L-17 em Camun- dongos

1. Animais:

[00180] C57BL/6, macho, 6-8 semanas, adquirido a partir dae Bei- jing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltda.

2. Células:

[00181] Células NIH3T3, células NIH3T3 que expressam IL-17 hu- mana.

3. Reagente:

[00182] —Anticorpo Gr1-FITC, BioLegend

4. Agrupamento e Regime de Dosagem: Grupo com NIH3T3

Grupo com NIH3T3-IL-17 + anticorpo IgG de referência (30 mg/kg); Grupo com NIH3T3-IL-17 + alta dose de anticorpo de tratamento (hu31, 30 mg/kg); Grupo com NIH3T3-IL-17 + dose média de anticorpo de tratamento (hu31, 10 mg/kg); Grupo com NIH3T3-IL-17 + baixa dose de anticorpo de tratamento (hu31, 3 mg/kg); Via de administração:

[00183] Intraperitoneal.

5. Modelagem:

[00184] Bolsa de ar: Os camundongos foram injetados com 2,5 mL de ar nas costas nos dias O e 3. A partir do dia 5, as células foram inje- tadas na bolsa de ar. Cada camundongo recebeu 2 x 10º células/500 ul de PBS. Os camundongos foram alocados em grupos, cada um contendo 8 camundongos.

6. Detecção:

[00185] Os leucócitos migraram para a bolsa de ar. As células no fluido de lavagem foram contadas e a proporção de células Gr1* foi determinada por meio de citometria de fluxo para calcular o número de neutrófilos.

Contagem de neutrófilos = contagem total de células x proporção de células Gr1*

7. Resultados

[00186] Conforme mostrado na Figura 13, após os camundongos com bolsas de ar terem recebido células NIH3T3 que expressam hliL- 17A, comparado com o grupo com NIH3T3, o número de leucócitos infiltrantes na bolsa de ar do grupo com NIH3T3-IL-17 aumentou signi- ficativamente e a proporção e o número de células Gr1* também foram significativamente elevados, indicando uma seleção de modelo bem- sucedida. No dia da modelagem, o anticorpo hu31 (a 3, 10 e 30 mg/kg)

foi administrado através da via intraperitoneal.

A taxa de inibição foi calculada de acordo com a contagem total de células infiltrantes e a contagem de células Gr1*, em que a fórmula de cálculo é a seguinte: taxa de inibição (%) = (contagem de células do grupo com NIH3T3-IL- 17-l1g9G - contagem de células do grupo de tratamento)/(contagem de células do grupo com NIH3T3-IL-17-Ig9G - contagem de células do gru- po com NIH3T3) x 100. Os resultados mostraram que a contagem total de células infiltrantes nos grupos de tratamento com anticorpo hu31 (3, e 30 mg/kg) foi inibida em 50,0 %, 56,7 % e 78,3 %, respectivamen- te.

A taxa de inibição da contagem de células Gr1* foi calculada, de- monstrando que: as taxas médias de inibição de células Gr1* de todo o grupo de tratamento com o anticorpo hu31 (3, 10 e 30 mg/kg) foram 59,1 %, 54,5 % e 81,8 %, respectivamente.

O anticorpo hu31 pode ini- bir a infiltração de células totais induzida por IL-17 e a infiltração de células inflamatórias em camundongos de uma maneira dependente da dose.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga especificamente à IL-17A caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos uma região determinante de comple- mentaridade (CDR) selecionada a partir de SEQ ID NOs: 1-24 e 60-65.

2. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que com- preende pelo menos um domínio de CDR de cadeia pesada selecio- nado a partir de SEQ ID NOs: 1-3, 4-6, 7-9, 10-12 e 60-62 e/ou pelo menos um domínio de CDR de cadeia leve selecionado a partir de SEQ ID NOs: 13-15, 16-18, 19-21, 22-24 e 63-65.

3. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que com- preende uma região variável de cadeia pesada (VH), em que a VH compreende uma HCDR1 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 1, 4,7, e 60, uma HCDR?2 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 2, 5, 8, 11 e 61 e uma HCDR3 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 3, 6,9, 12 e

62.

4. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que com- preende uma região variável de cadeia pesada (VH), em que a VH compreende um conjunto de sequências de aminoácidos de HCDR1, HCDR?2 e HCDR3 selecionadas a partir de qualquer um dos conjuntos AakE: [| 5 [| SEGDNoa | seaDRoS | ssainços | 2 | ssannoro | ssannor1 | solo nota |

5. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 ou 3, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia leve (VL), em que a VL compreende uma LCDR1 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 13, 16, 19, 22 e 63, uma LCDR?2 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 14, 17, 20, 23 e 64 e uma LCDR3 selecionada a partir de SEQ ID NOs: 15, 18, 21,24 e 65.

6. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia leve (VL), em que a VL compreende um conjunto de sequências de aminoácidos de LCDR1, LCDR?2 e LCDR3 selecionadas a partir de qualquer um dos conjuntos Fad: | 1 | seaDNO22 | sEQIDNO-23 | sEQIDNO: 2 |

7. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que com- preende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região va- riável de cadeia leve (VL), em que as regiões variáveis compreendem um conjunto de 6 sequências de aminoácidos de CDR selecionadas a partir de qualquer um dos conjuntos | a VI: [| er Noz os nora [nos [nos NO: 1 NO: 2 NO: 3 NO: 13 | NO: 14 | NO: 15 [Nor Noz Nos |noro | nor [nora NO: 1 NO: 2 NO: 3 NO: 16 | NO: 17 | NO: 18 [Les Nos os [tous [toa [nos NO: 4 NO: 5 NO: 6 NO: 19 | NO:20 | NO: 21

NO: 7 NO: 8 NO: 9 NO: 22 | NO: 23 | NO: 24 NO: 10 | NO: 11 NO: 12 | NO: 22 | NO:23 | NO: 24 NO: 60 | NO: 61 NO: 62 | NO: 63 | NO:64 | NO: 65

8. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que com- preende uma região variável de cadeia pesada (VH) que tem uma se- quência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 25, 26, 27, 28, 33, 35, 37 e 40 e/ou uma região variável de cadeia leve (VL) que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 29, 30, 31, 32, 34, 36, 38, 39 e 41.

9. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que com- preende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região va- riável de cadeia leve (VL), em que as regiões variáveis compreendem sequências de aminoácidos selecionadas a partir de qualquer um dos conjuntos 1 a 7: [| 6 | sean | seQmNO 80 |

10. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mes- mo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é um anticor- po de murino, um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado ou um anticorpo totalmente humano.

11. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mes- mo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo intacto e o fragmento de ligação a antígeno é selecionado a partir de um anticorpo com uma única cadeia, um anti- corpo Fab, um anticorpo Fab', um anticorpo (Fab')> e um anticorpo bi- específico (multiespecífico).

12. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mes- mo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é de qualquer subtipo de IgG, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4.

13. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mes- mo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada (HC) que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 42, 44, 46 e 49 e/ou uma cadeia leve (LC) que tem uma sequência de aminoácidos seleci- onada a partir de SEQ ID NOs: 43, 45, 47, 48 e 50.

14. Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mes- mo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID No: 43 e a cadeia pesada tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 42 ou 44; a cadeia leve tem uma se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 45 e a cadeia pesada tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 44; a cadeia leve tem uma sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 47 ou 48 e a cadeia pesada tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46; ou a cadeia leve tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 50 e a cadeia pesada tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 49.

15. Molécula de ácidos nucleicos isolada caracterizada pelo fato de que codifica o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, um vetor de expressão ou um vetor recombinante que compreende a mo- lécula de ácidos nucleicos e uma célula hospedeira transformada com o vetor.

16. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, a molécula de ácidos nucleicos, o vetor ou a célula hospedeira como de- finida na reivindicação 15 e um carreador ou excipiente farmaceutica- mente aceitável.

17. Uso do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, da molécula de ácidos nucleicos, vetor ou célula hospedeira como defini- da na reivindicação 15 ou da composição farmacêutica como definida na reivindicação 16 caracterizado pelo fato de que é para a prepara- ção de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de doen- ças ou transtornos mediados por IL-17A.

18. Uso, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o medicamento é um medicamento para o tratamento de artrite, artrite reumatoide, psoríase, espondilite anquilosante, doen- ça pulmonar obstrutiva crônica, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), ne- frite lúpica, asma, esclerose múltipla ou fibrose cística.