BR112021009168A2 - alna de ácido nucleico artificial reticulado - Google Patents

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BR112021009168A2
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Hiroaki Sawamoto
Shinji Kumagai
Hiroyuki Furukawa
Tomo ARAKI
Masayuki UTSUGI
Satoshi Obika
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Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation
Osaka University
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Abstract

ALNA DE ÁCIDO NUCLEICO ARTIFICIAL RETICULADO. A presente invenção refere-se a um ácido nucleico artificial em ponte e um oligômero contendo o mesmo que um monômero. A presente invenção fornece especificamente um Composto representado por fórmula geral (I) (em que cada símbolo é o mesmo que o definido na especificação) ou sais do mesmo; bem como um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula geral (I ') (em que cada símbolo é igual ao definido na especificação) ou sais do mesmo.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ALNA DE ÁCIDO NUCLEICO ARTIFICIAL RETICULADO".
CAMPO TÉCNICO
[001] A presente invenção refere-se a um monômero de amino LNA, e um oligômero o mesmo.
TÉCNICA ANTECEDENTE
[002] Um método terapêutico para doenças com medicamento de ácido nucleico inclui um método antissenso, um método de antígeno, um método com aptâmero, e um método com siRNA, e assim em dian- te. Entre eles, o método antissenso é um método no qual uma doença é tratada ou prevenida introduzindo com um oligonucleotídeo (fita an- tissenso) complementar ao mRNA relacionado com a doença ou RNA não codificante do exterior para formar uma cepa dupla, e consequen- temente, ajustando a função de RNA envolvida na doença para tratar ou prevenir a doença.
[003] Embora vários ácidos nucleicos artificiais tenham sido de- senvolvidos como materiais para o medicamento de ácido nucleico, problemas tais como evitar a toxicidade em órgãos onde os medica- mentos de ácido nucleico são prováveis de se acumularem, tal como no fígado ou nos rins após administração sistêmica, e desenvolver su- ficiente eficácia medicinal suficiente permanecem, existe ainda ainda não existe nenhuma molécula que seja uma carta de trunfo. Um 2'- amino LNA que foi desenvolvido por Wengel et al., em 1998 (a seguir, descrito como "ALNA") (Documento de Patente 1, e Documento de Não Patente 1) pode sintetizar vários ácidos nucleicos artificiais por modificação do substituinte na posição 2' e assim em diante, e muitos derivados de ALNA foram sintetizados até agora, principalmente inclu- indo derivados de alquila ou acila (Documentos de Patente 2 a 4, e Documento de Não Patente 2 a 11), e uma distribuição de tecido ca- racterística após administração sistêmica foi reportada (Documento de
Não Patente 12), entretanto, é insuficiente em termos de atividade farmacológica e consequentemente, os derivados não foram aplicados aos produtos farmacêuticos até agora.
[004] Foi aplicado o método de síntese eficaz de GuNA que des- cobrimos anteriormente (Documento de Patente 5 e Documento de Não Patente 13) sintetizar uma variedade ampla de novos derivados de ALNA, e realizar avaliação especializada em avaliação da atividade farmacológica, e consequentemente, descobriu-se um novo ácido nu- cleico artificial tendo excelente atividade farmacológica in vitro e in vivo em comparação com o ALNA existente, e completou a invenção do presente pedido.
LISTA DE CITAÇÃO DOCUMENTO DE PATENTE
[005] Documento de Patente 1: WO 99/014226 panfleto
[006] Documento de Patente 2: WO 2013/013068 panfleto
[007] Documento de Patente 3: WO 2014/124952 panfleto
[008] Documento de Patente 4: WO 2016/128583 panfleto
[009] Documento de Patente 5: WO 2017/047816 panfleto
DOCUMENTO DE NÃO PATENTE
[0010] Documento de Não Patente 1: S.K. Singh et al., J. Org. Chem. 1998, 63, 6078-6079
[0011] Documento de Não Patente 2:M. D. Sorensen et al., Chem. Commun. 2003, 2130
[0012] Documento de Não Patente 3: B. R. Babu et al., Chem. Commun. 2005,13, 1705-1707
[0013] Documento de Não Patente 4: T. Bryld et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids 2007, 26,1645-1647
[0014] Documento de Não Patente 5: M. Kalek et al., J. Am. Chem. Soc. 2007,129,9392-9400
[0015] Documento de Não Patente 6:T. Umemoto et al., Org. Bio-
mol. Chem. 2009, 7, 1793-1797
[0016] Documento de Não Patente 7: M. W. Johannsen et al., Org. Biomol. Chem. 2011, 9, 243-252
[0017] Documento de Não Patente 8: A. S. Jφrgensen et al., Chem. Commun. 2013,49,10751-10753
[0018] Documento de Não Patente 9: I. K. Astakhova et al., Acc. Chem. Res. 2014, 47, 1768-1777
[0019] Documento de Não Patente 10: C. Lou et al., Chem. Commun. 2015, 51, 4024-4027
[0020] Documento de Não Patente 11: A. Ries et al., J. Org. Chem. 2016, 81, 10845-10856
[0021] Documento de Não Patente 12: K. Fluiter et al., Chem. Bio. Chem. 2005, 6, 1104-1109
[0022] Documento de Não Patente 13: H. Sawamoto et al., Org. Lett. 2018, 20, 1928-1931
SUMÁRIO DA INVENÇÃO (PROBLEMAS A SEREM SOLUCIONADOS)
[0023] A presente invenção refere-se a um novo ácido nucleico artificial em ponte, bem como monômero contendo o mesmo como um monômero. (MÉTODOS PARA SOLUCIONAR OS PROBLEMAS)
[0024] A fim de solucionar os problemas acima mencionados a se- rem solucionados, os inventores têm intensivamente estudado para encontrar um novo 2'-amino LNA e sais do mesmo, bem como oligô- mero contendo o mesmo como um monômero, desse modo completa- ram a presente invenção.
[0025] Isto é, a presente invenção inclui os seguintes Itens [1] a
[33], que não devem ser limitados a isso.
[0026] Item [1] Um composto representado por fórmula geral I:
[em que B representa uma porção de base de ácido nucleico em que a porção de base pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do ou- tro um átomo de hidrogênio, ou um grupo C1-6 alquila que pode ser op- cionalmente substituído com um ou mais substituintes; R5 e R6 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo de proteção para grupo hidróxi, ou um grupo fosfato que pode ser opcionalmente substituído com substituin- tes; m é um número inteiro de 1 ou 2; X representa um grupo representado pela seguinte fórmula (II-1), (II-2) ou (II-3):
; os símbolos:
que são descritos na fórmula (II-1), (II-2) ou (II-3) representam um pon- to de ligação ao grupo 2'-amino;
R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquenila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromático que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes; A representa um grupo aromático; M representa um grupo sulfonila que é substituído com um substituinte selecionado do grupo consistindo em um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes e um grupo aromático que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.] ou sais dos mesmos (a seguir, o composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo é referido como "Present composto" ou "Composto da presente inven- ção").
[0027] [2] O composto de acordo com [1] ou sal do mesmo em que B representa um grupo adeninila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo guaninila que po- de ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo citosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo -5-metilcitosinila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo uracilila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0028] [3] O composto de acordo com [1] ou [2] ou sais do mesmo em que R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio; e m é um número inteiro de 1.
[0029] [4] O composto de acordo com qualquer um de [1] a [3] ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromático que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0030] [5] O composto de acordo com [4] ou sais do mesmo em que R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, ou um grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0031] [6] O composto de acordo com [5] ou sais do mesmo em que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio, e o outro do mesmo representa um grupo metila.
[0032] [7] O composto de acordo com [5] ou sais do mesmo em que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio, e o outro do mesmo representa um grupo isopropila.
[0033] [8] O composto de acordo com qualquer um de [1] a [3] ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionados do grupo con- sistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxo- fre, que podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais subs- tituintes.
[0034] [9] O composto de acordo com [8] ou sais do mesmo em que A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis membros con- tendo dois ou três heteroátomos selecionados do grupo consistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxofre, con- tanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio sejam incluídos, que podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes,
e os substituintes são selecionados independentemente um do outro, um grupo consistindo em um grupo C1-3 alquila que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, um átomo de halogênio, e um grupo amino que podem ser opcionalmente substi- tuídos com um ou mais grupo C1-3 alquila.
[0035] [10] O composto de acordo com [9] ou sais do mesmo em que o grupo heteroarila de cinco ou seis membros representa um gru- po consistindo em um grupo triazolila, um grupo oxadiazolila, um grupo tiadiazolila, um grupo pirimidinila, e um grupo pirazinila, cada pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0036] [11] O composto de acordo com [10] ou sais do mesmo em que o grupo triazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3-ila.
[0037] [12] O composto de acordo com [10] ou sais do mesmo em que o grupo oxadiazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 5-metil-1,2,4-oxadiazol-3- ila.
[0038] [13] O composto de acordo com [10] ou sais do mesmo em que o grupo tiadiazol que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-ila.
[0039] [14] O composto de acordo com qualquer um de [1] a [3] ou sais do mesmo em que
[0040] X representa um grupo representado por fórmula (II-3); e
[0041] M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo arila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0042] [15] O composto de acordo com [14] ou sais do mesmo em que M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo metila e um grupo fenila.
[0043] [16] O composto de acordo com de acordo com qualquer uma das reivindicações [1] a [15] ou sais do mesmo em que R6 repre- senta um átomo de hidrogênio ou grupo DMTr, e R5 representa um átomo de hidrogênio ou -P(O(CH2)2CN)(N(ipr)2).
[0044] [17] Um composto selecionado do grupo consistindo em 3-[[(1R,4R,6R,7S)-4-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-6-(5-metil- 2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-metilsulfonil-5-oxa-2-azabiciclo[2,2,1]heptan- 7-il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 1); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 2); [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 3); N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-purin-6-il]benzamida (Presente composto 4); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopronilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 5); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil)óxi-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
(Presente composto 6); (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente compos- to 7); (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carboxamida (Presente composto 8); [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(metilcarbamoil)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 9); (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carboxamida (Presente composto 10); (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin- 1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente com- posto 11); (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxopirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)fenil-metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 12); [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(isopropilcarbamoil)-2-oxa- 5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 13); (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-
metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil- 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 14); (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N,N-dimetil-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin- 1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente com- posto 15); (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N,N-dimetil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 16); 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 7-il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 17); 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 18); N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N-dimetil-6- formamidina (Presente composto 19); N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida (Presente composto 20); 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 7-il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto
21); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 22); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2-il]-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 23); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2- il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 24); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(5- chloropirimidin-2-il)-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 25); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(5- chloropirimidin-2-il)-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-2- oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-4-il]benzamida (Pre- sente composto 26); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[6- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamina)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 27); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetoxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[(6-dimetilamino)pirimidin-4- il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 28); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[2-
(dimetilamino)pirimidin-4-il]-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di-isopropilamino)oxipropanonitrila (Presente composto 29); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[2-(dimetilamino)pirimidin-4- il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 30); 3-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-pirazin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7- il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 31); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirazina-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 32); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 33); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 34); N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N- dimetilformamidina (Presente composto 35); N-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida (Presente composto 36); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 37); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 38); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 39); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)- 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 40); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]dihidropirimidin-2-ona (Presente composto 41); N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N- dimetilformamidina (Presente composto 42); N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-2-metilpropanoamida (Presente composto 43); e N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-
il]-2-metilpropano amida (Presente composto 44). (Oligonucleotídeo)
[0045] [18] Um composto de oligonucleotídeo compreendendo um ou mais nucleosídeos representados por fórmula geral (I'): [em que, B representa uma porção de base de ácido nucleico em que a porção de base pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do ou- tro um átomo de hidrogênio, ou um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes; m é um número inteiro de 1 ou 2; X representa um grupo representado pela seguinte fórmula (II'-1), (II'-2), ou (II'-3): ; os símbolos:
que são descritos na fórmula (II'-1), (II'-2) ou (II'-3) representam um ponto de ligação ao grupo 2'-amino; A representa um grupo aromático contendo um ou mais he- teroátomos selecionados do grupo consistindo em átomo de nitrogê- nio, átomo de oxigênio e átomo de enxofre, que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes; M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo aromático que pode ser opcionalmente subs- tituído com um ou mais substituintes.] ou sais dos mesmos (a seguir, o composto representado por fórmula (I') ou sais do mesmo é referido como "Presente composto de oligonucleotídeo" ou "Compos- to de oligonucleotídeo da presente invenção").
[0046] [19] O composto de acordo com [18] ou sais do mesmo em que B representa um grupo adeninila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo guaninila que po- de ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo citosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo -5-metilcitosinila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes ou um grupo uracilila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0047] [20] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [18] ou [19] ou sais do mesmo em que R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do ou- tro um átomo de hidrogênio; e m é um número inteiro de 1.
[0048] [21] (Composto de ureia) O composto de oligonucleotídeo de acordo com qualquer um de [18] a [20] ou sais do mesmo, em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromá- tico que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes.
[0049] [22] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [21] ou sais do mesmo em que R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0050] [23] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [22] ou sais do mesmo em que um de R7 e R8 representa um átomo de hi- drogênio, e o outro do mesmo representa um grupo metila.
[0051] [24] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [23] ou sais do mesmo em que um de R7 e R8 representa um átomo de hi- drogênio, e o outro do mesmo representa um grupo isopropila.
[0052] [25] (Composto do tipo arila) O composto de oligonucleo- tídeo de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 20 ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionados do grupo con- sistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxo- fre, que podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais subs- tituintes.
[0053] [26] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [25] ou sais do mesmo em que A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo dois ou três heteroátomos selecionados de átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio, e átomo de enxofre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio são incluídos, que podem ser opcio- nalmente substituídos com um ou mais substituintes, e o substituinte é selecionado independentemente um do outro de um grupo consistindo em um grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, um átomo de halogênio, e um grupo amino que podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais grupos C1-3 alquila.
[0054] [27] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [26] ou sais do mesmo em que o grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros é selecionado do grupo consistindo em um grupo triazolila, um grupo oxadiazolila, um grupo tiadiazolila, um grupo pirimidinila, e um grupo pirazinila, cada pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0055] [28] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [27] ou sais do mesmo em que o grupo triazolila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-ila.
[0056] [29] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [27] ou sais do mesmo em que o grupo oxadiazolila que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 5-metil-1,2,4-oxadiazol-5-ila.
[0057] [30] O composto de oligonucleotídeo de acordo com [27] ou sais do mesmo em que o grupo tiadiazolila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 3- metil-1,2,4-tiadiazol-3-ila.
[0058] [31] (Composto do tipo de sulfonamida) O composto de oligonucleotídeo de acordo com qualquer um de [18] a [20] ou sais do mesmo, em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-3); e
M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo arila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
[0059] [32] O composto de acordo com qualquer um de [18] a [31] ou sais do mesmo em que M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo con- sistindo em um grupo metila e um grupo fenila.
[0060] [33] O composto de oligonucleotídeo de acordo com qual- quer um de [1] a [32] ou sais do mesmo em que uma ou mais ligações de fosfato entre nucleotídeos representam uma ligação de fosforotioa- to. (EFEITO DA INVENÇÃO)
[0061] De acordo com a presente invenção, novo 2'-amino LNA (a seguir, é abreviado como "ALNA") e oligômero compreendendo este ALNA como um monômero (a seguir, é abreviado como "oligômero de ALNA") podem ser preparados. O oligômero de ALNA da presente in- venção tem uma inibição funcional de um microRNA alvo in vitro, ou uma atividade de nocaute de gene alvo potencial, e quando adminis- trado a um corpo vivo, tem uma atividade de nocaute de gene alvo po- tencial em muitos orgãos (tal como, músculo), que adequadamente pode ser esperado que use como novo medicamento de ácido nuclei- co.
MODO PARA REALIZAR A INVENÇÃO
[0062] A seguir, a presente invenção é também explicada em deta- lhes. Todas as publicações citadas aqui são incorporadas aqui por re- ferência. (Definição)
[0063] Primeiro, as definições dos termos como usados aqui são descritas.
[0064] O termo de "C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substi- tuído com um ou mais substituintes" como usado aqui abrange qual- quer grupo alquila de cadeia linear tendo 1 a 6 átomos de carbono (C1- 6), preferivelmente 1 a 4 átomos de carbono (C1-4), mais preferivelmen- te 1 a 3 átomos de carbono (C1-3), qualquer grupo alquila de cadeia ramificada tendo 3 a 6 átomos de carbono em que as cadeias ramifi- cadas idênticas ou diferentes são contidas, qualquer grupo alquila cí- clico tendo 3 a 6 átomos de carbono, e quaisquer combinações dos mesmos que têm 4 a 6 átomos de carbono. Exemplos específicos do grupo alquila de cadeia linear tendo 1 a 6 átomos de carbono incluem metila, etila, normal (que é abreviado como "n")-propila, iso (que é abreviado como "i")-propila, n-butila, n-pentila, e n-hexila. Exemplos específicos do grupo alquila de cadeia ramificada tendo 3 a 6 átomos de carbono em que as cadeias ramificadas idênticas ou diferentes são contidas incluem i-propila, i-butila, terc (que é abreviado como "t")- butila, sec (que é abreviado como "s")- butila, neopentila, isopentila, e os outros, e também exemplos do grupo alquila cíclico tendo 3 a 6 átomos de carbono incluem preferivelmente um grupo cicloalquila mo- nocíclico de 3 a 6 membros, e exemplos específicos dos mesmos in- cluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, e os outros, que não são limitados a isso. Exemplos dos substituintes incluem um ou mais (ou preferivelmente um a três) grupos idênticos ou diferentes selecionados do grupo consistindo em um grupo hidróxi, um átomo de halogênio, um grupo nitro, um grupo ciano, um grupo C1-6 alquila, um grupo C2-6 alquenila, um grupo C2-6 alquinila, um grupo C1-6 alcóxi, um grupo arila, um grupo arilóxi, um grupo amino que pode ser opcional- mente substituído com grupo C1-3 alquila, um grupo oxo, um grupo tio- xo, e um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, e quaisquer grupos não sendo afetados sob uma condição de reação para oligomerização são prefe- rivelmente incluídos.
[0065] O termo de "grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes" como usado aqui representa metila, etila, n-propila, ou i-propila, cada pode ser substituído com um ou mais halogênios, como definido no termo acima de "grupo C1-3 al- quila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes". Exemplos específicos dos mesmos incluem perfluoroalquila (tais como, trifluorometila, pentafluoroetila, ou heptafluoropropila) e os outros.
[0066] O termo de "C2-6 alquenila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes" como usado aqui abrange qualquer grupo alquenila de cadeia linear tendo 2 a 6 átomos de car- bono (C2-6), preferivelmente tendo 2 a 4 átomos de carbono (C2-4), mais preferivelmente tendo 2 a 3 átomos de carbono (C2-3), qualquer grupo alquenila de cadeia ramificada tendo 3 a 6 átomos de carbono em que as cadeias ramificadas idênticas ou diferentes são contidas, qualquer grupo alquenila cíclico tendo 3 a 6 átomos de carbono, e quaisquer combinações dos mesmos que têm 4 a 6 átomos de carbo- no. Exemplos específicos do grupo alquenila de cadeia linear tendo 2 a 6 átomos de carbono incluem etenila, 1-propenila, 2-propenila, 1- butenila, 2-butenila, 1-pentenila, 2-pentenila, 3-pentenila, 4-pentenila, 1-hexenila, e os outros. Exemplos específicos do grupo alquenila de cadeia ramificada tendo 3 a 6 átomos de carbono em que as cadeias ramificadas idênticas ou diferentes são contidas incluem isopropenila, 1-metil-1-propenila, 1-metil-2-propenila, 2-metil-1-propenila, 2-metil-2- propenila, 1-metil-2-butenila e os outros, e também exemplos do grupo alquenila cíclico tendo 3 a 6 átomos de carbono incluem um grupo ci- cloalquenila monocíclico de três a seis membros, e exemplos específi- cos dos mesmos incluem ciclopropenila, ciclobutenila, ciclopentenila,
ciclo-hexenila, e os outros. Exemplos dos substituintes incluem um ou mais (ou preferivelmente um a três) grupos idênticos ou diferentes se- lecionados do grupo consistindo em um grupo hidróxi, um átomo de halogênio, um grupo nitro, um grupo ciano, um grupo C1-6 alquila, um grupo C2-6 alquenila, um grupo C2-6 alquinila, um grupo C1-6 alcóxi, um grupo arila, um grupo arilóxi, um grupo amino que pode ser opcional- mente substituído com grupo C1-3 alquila, um grupo oxo, um grupo tio- xo, e um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, e quaisquer grupos não sendo afetados sob uma condição de reação para oligomerização são prefe- rivelmente incluídos.
[0067] O termo de "uma C2-6 alquinila que pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes" como usado aqui abrange qualquer grupo alquinila de cadeia linear tendo 2 a 6 átomos de carbo- no (C2-6), preferivelmente qualquer grupo alquinila de cadeia linear tendo 2 a 4 átomos de carbono (C2-4), mais preferivelmente qualquer grupo alquinila de cadeia linear tendo 2 a 3 átomos de carbono (C2-3), qualquer grupo alquinila de cadeia ramificada tendo 3 a 6 átomos de carbono que têm as cadeias ramificadas idênticas ou diferentes, qual- quer grupo alquinila cíclico tendo 3 a 6 átomos de carbono, e quais- quer combinações dos mesmos que têm 4 a 6 átomos de carbono. Exemplos específicos do grupo alquinila de cadeia linear tendo 2 a 6 átomos de carbono incluem etinila, 1-propinila, 2-propinila, 1-butinila, 2-butinila, 1-pentinila, 2-pentinila, 3-pentinila, 4-pentinila, 1-hexinila e os outros. Exemplos específicos do grupo alquinila de cadeia ramifi- cada tendo 3 a 6 átomos de carbono em que as cadeias ramificadas idênticas ou diferentes são contidas incluem isopropinila, 1-metil-1- propinila, 1-metil-2-propinila, 2-metil-1-propinila, 2-metil-2-propinila, 1- metil-2-butinila, e os outros, e também exemplos do grupo alquinila cíclico tendo 3 a 6 átomos de carbono incluem preferivelmente um grupo cicloalquinila monocíclico de três a seis membros, e exemplos específicos dos mesmos incluem ciclobutinila, ciclopentinila, ciclo- hexinila e os outros, que não são limitados a isso. Exemplos dos substituintes incluem um ou mais (ou preferivelmente um a três) gru- pos idênticos ou diferentes selecionados do grupo consistindo em um grupo hidróxi, um átomo de halogênio, um grupo nitro, um grupo ciano, um grupo C1-6 alquila, um grupo C2-6 alquenila, um grupo C2-6 alquinila, um grupo C1-6 alcóxi, um grupo arila, um grupo arilóxi, um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com grupo C1-3 alquila, um grupo oxo, um grupo tioxo, e um grupo C1-6 alquila que pode ser opci- onalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, e quais- quer grupos não sendo afetados sob uma condição de reação para oligomerização são preferivelmente incluídos.
[0068] O termo de "um grupo aromático que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes" como usado aqui significa abrangir ambos de um grupo arila e um grupo heteroarila. O grupo arila e o grupo heteroarila podem ser independentemente um do outro substituídos com um ou mais substituintes. Exemplos dos subs- tituintes incluem um ou mais (ou preferivelmente um a três) grupos idênticos ou diferentes selecionados do grupo consistindo em um gru- po hidróxi, um átomo de halogênio, um grupo nitro, um grupo ciano, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquenila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquini- la que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes, um grupo hidróxi, um grupo C1-6 alcóxi, um grupo arilóxi, um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais gru- pos C1-3 alquila, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, e um grupo arila, preferivelmente um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila, e um átomo de halogênio, e mais preferivelmente um grupo trifluorometi- la, um grupo dimetilamino, um átomo de cloro e os outros, e quaisquer grupos sendo afetados sob uma condição de reação para oligomeriza- ção são preferivelmente incluídos.
[0069] O termo de "arila (grupo)" como usado aqui representa um grupo funcional ou um grupo substituinte que é derivatizado de grupo hidrocarboneto aromático e abrange um grupo composto de uma plu- ralidade de ciclos, e especificamente, representa um grupo monova- lente tendo 6 a 14 átomos de carbono em que um átomo de hidrogênio é excluído de átomo de hidrocarboneto aromático, consistindo em um ou mais anel de cinco membros e/ou seis membros, e inclui, por exemplo, fenila, indenila, naftila, fenantrenila, antracenila e os outros. Também exemplos dos substituintes para o grupo arila incluem um ou mais (ou preferivelmente um a três) grupos idênticos ou diferentes se- lecionados do grupo consistindo em um grupo hidróxi, um átomo de halogênio, um grupo nitro, um grupo ciano, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquenila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquinila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C1-6 alcóxi, um grupo arilóxi, um grupo amino, um grupo amino que pode ser opci- onalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila, e um grupo arila, preferivelmente um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais substituintes, um grupo amino que po- de ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila, e um átomo de halogênio, e mais preferivelmente um grupo trifluoro- metila, um grupo dimetilamino, um átomo de cloro e os outros, e quaisquer grupos sendo afetados sob uma condição de reação para oligomerização são preferivelmente incluídos.
[0070] Exemplos específicos do grupo arila que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes incluem 2- metilfenila, 3-metilfenila, 4-metilfenila, 2,6-dimetilfenila, 2,4- dimetilfenila, 2-clorofenila, 3-clorofenila, 4-clorofenila, 2,4-diclorofenila, 2,5-diclorofenila, 2,6-diclorofenila, 2-bromofenila, 4-metoxifenila, 4- clorofenila, 2-nitrofenila, 4-nitrofenila, 2-nitrofenila, 2,6-dinitrofenila, 2- trifluorometilfenila, 3-trifluorometilfenila, 4-trifluorometilfenila, 2- dimetilaminofenila, 3-dimetilaminofenila, 4-dimetilaminofenila, e bifenila e os outros. Exemplos preferidos do grupo arila incluem um grupo fe- nila que é substituído com átomo de halogênio, grupo C1-6 alcóxi ou grupo nitro, ou um grupo fenila não substituído.
[0071] O termo de "heteroarila (grupo)" como usado aqui represen- ta um grupo monovalente em que um átomo de hidrogênio é excluído de composto heteroaromático opcional contendo um ou mais heteroá- tomos (tais como, átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio, e/ou átomo de enxofre) em uma estrutura de anel e tendo 5 a 12 átomos de car- bono, consistindo em um ou mais anel de cinco membros e/ou seis membros, e preferivelmente grupo heteroarila de cinco membros cícli- co ou seis membros cíclico. Exemplos específicos do grupo heteroari- la incluem um grupo heteroarila cíclico de cinco membros selecionado de pirrolila, furila, tienila, pirazolila, imidazolila, triazolila, tetrazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, oxadiazolila, e tiadiazolila; um grupo heteroarila cíclico de seis membros selecionado de piridila, piridazinila, pirimidinila, e pirazinila, e preferivelmente grupo triazolila, oxadiazolila, tiadiazolila, pirimidinila ou pirazinila. Também exemplos dos substituintes para o grupo heteroarila incluem um ou mais (ou pre- ferivelmente um a três) grupos idênticos ou diferentes selecionados do grupo consistindo em um grupo hidróxi, um átomo de halogênio, um grupo nitro, um grupo ciano, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcio-
nalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 al- quenila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais subs- tituintes, um grupo C2-6 alquinila que pode ser opcionalmente substituí- do com um ou mais substituintes, um grupo C1-6 alcóxi, um grupo ariló- xi, um grupo amino, um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila, e um grupo arila, pre- ferivelmente um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substi- tuído com um ou mais substituintes, um grupo amino que pode ser op- cionalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila, e um átomo de halogênio, e mais preferivelmente um grupo trifluorometila, um grupo dimetilamino, um átomo de cloro e os outros, e quaisquer grupos sendo afetados sob uma condição de reação para oligomeriza- ção são preferivelmente incluídos.
[0072] Exemplos específicos do grupo heteroarila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes incluem 1,2,4-triazolila, 1,5-dimetil-1,2,4-triazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 5-metil- 1,2,4-oxadiazol-3-ila, 1,2,4-tiadiazolila, 3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-ila, 1,3- pirimidinila, 1,5-pirimidinila, 4-trifluorometila, 1,5-pirimidinila, 4- dimetilamino-2,4-pirimidinila, 3-dimetilamino-2,4-pirimidinila, 3-cloro- 1,5-pirimidinila, e 1,4-piridazinila, e preferivelmente 1,5-dimetil-1,2,4- triazol-3-ila, 1,2,4-oxadiazolila, 3-metil-1,2,4-tiadiazol-3-ila, 1,5- pirimidinila, 4-trifluorometila, 1,5-pirimidinila, 4-dimetilamino-2,4- pirimidinila, 3-dimetilamino-2,4-pirimidinila, 3-cloro-1,5-pirimidinila, e 1,4-piridazinila, e mais preferivelmente 1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3-ila, 1,2,4-oxadiazol-3-ila, e 3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-ila.
[0073] Exemplos do termo de "grupo heteroarila de cinco ou seis membros contendo um ou mais heteroátomos selecionados do grupo consistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxofre, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes" como usado aqui incluem um grupo heteroarila de cinco membros cíclico ou seis membros cíclico que pode opcionalmente ser substituído com um ou mais substituintes, que são definidos no termo mencionado acima de "grupo heteroarila".
[0074] O termo de "grupo heteroarila de cinco ou seis membros contendo dois ou três heteroátomos selecionados de átomo de nitro- gênio, átomo de oxigênio, e átomo de enxofre, contanto que pelo me- nos dois átomos de nitrogênio sejam incluídos, que podem ser opcio- nalmente substituídos com um ou mais substituintes" como usado aqui representa triazolila, oxadiazolila, tiadiazolila, pirimidinila, e piridazinila, cada pode ser substituído com um ou mais substituintes, que são defi- nidos no termo mencionado acima de "grupo heteroarila".
[0075] O termo de " grupo sulfonila que é substituído com um substituinte selecionado do grupo consistindo em um grupo C1-6 alqui- la que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes e um grupo aromático que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes" representa um grupo sulfonila (S(O)2) que é substituído com um substituinte dos mesmos. O grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, ou o grupo aromático que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes são como definido acima, e exemplos específicos dos substituintes incluem metila, trifluorometila, fenila, 4-metifenila, e os outros, preferivelmente metila e fenila.
[0076] O termo de " grupo C1-6 alcóxi " como usado aqui represen- ta um grupo monovalente em que a C1-6 alquila liga-se a um átomo de oxigênio, e representa um grupo C1-6 alquil-O. Exemplos específicos dos mesmos incluem metóxi, etóxi, n-propóxi, i-propóxi, n-butóxi, t- butóxi, s-butóxi, 3-metilbutóxi, e os outros, que não são limitados a is- so.
[0077] O termo de "arilóxi (grupo)" como usado aqui representa um grupo monovalente em que o grupo arila é ligado a um átomo de oxigênio. Exemplos específicos dos mesmos incluem fenóxi, p-tolila e os outros, que não são limitados a isso.
[0078] O termo de "grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila " como usado aqui re- presenta um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de hidrogênio que podem ser opcionalmente subs- tituídos com um grupo C1-3 alquila. Exemplos específicos dos mesmos incluem metilamino, etilamino, isopropilamino, dimetilamino, dietilami- no, metiletilamino, e os outros, que não são limitados a isso.
[0079] Exemplos do termo de "halogênio (átomo)" como usado aqui incluem átomo de flúor (flúor), átomo de cloro (cloro), átomo de bromo (bromo), e átomo de iodo (iodo), e átomo de flúor ou átomo de cloro é preferido.
[0080] Aqui, quando o composto da presente invenção, um com- posto intermediário, ou um material de partida e os outros têm um gru- po funcional (tais como, um grupo hidróxi, um grupo amino, um grupo carboxila e os outros), o grupo funcional pode ser protegido com um grupo de proteção que é usualmente usado em uma química sintética orgânica de acordo com o método descrito em Theodora W. Greene, Peter G. M. Wuts, "Protective Groupss in Organic Synthesis" 4a. ed., John Wiley & Sons, Inc. 1999, e após a reação, o grupo de proteção pode ser em seguida removido para obter o composto desejável. Exemplos do grupo de proteção incluem o grupo de proteção que é usualmente usado em uma química sintética orgânica como descrito no mesmo documento, e é também usualmente usado em uma quími- ca sintética orgânica, e exemplos de cada do grupo de proteção de- pendendo do grupo funcional são descritos abaixo.
[0081] O termo de "grupo de proteção" descrito em termos de "um grupo de proteção para grupo hidróxi", "um grupo de proteção para grupo amino", "um grupo de proteção para grupo fosfato", ou "um gru-
po de proteção para grupo mercapto" como usado aqui não é particu- larmente limitado a qualquer grupo contanto que ele possa proteger grupo amino, grupo hidróxi, grupo fosfato ou grupo mercapto estavel- mente durante uma síntese de ácido nucleico.
Exemplos específicos dos mesmos incluem um grupo de proteção que é estável sob condi- ção acídica ou neutra e também podem ser clivados por um método químico, tais como, uma hidrogenólise, uma hidrólise, uma eletrólise, e uma fotólise.
Exemplos do grupo de proteção incluem um grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono; um grupo alquenila tendo 2 a 6 áto- mos de carbono; um grupo alquinila tendo 2 a 6 átomos de carbono; um grupo acila; um grupo tetraidropiranila ou um grupo tetraidrotiopi- ranila; um grupo tetraidrofuranila ou um grupo tetraidrotiofuranila; um grupo silila; um grupo metila substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono; um grupo metila substituído com grupo alcóxi ten- do 1 a 6 átomos de carbono, referido grupo alcóxi sendo substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono; um grupo metila substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono, referido grupo alcóxi sendo substituído com átomo de halogênio; um grupo eti- la substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono; um grupo etila substituído com átomo de halogênio; um grupo metila subs- tituído com um a três grupos arila; um grupo metila substituído com um a três grupos arila, referidos grupos arila sendo substituídos com grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono, grupo alquenila tendo 2 a 6 átomos de carbono, grupo alquinila tendo 2 a 6 átomos de carbono, grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono, átomo de halogênio, e/ou grupo ciano; um grupo carbonila substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono; um grupo arila substituído com átomo de ha- logênio, grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono e/ou grupo nitro; um grupo carbonila substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono, referido grupo alcóxi sendo substituído com átomo de ha-
logênio e/ou grupo silila substituído com grupo alquila tendo 1 a 6 áto- mos de carbono; um grupo alqueniloxicarbonila; um grupo aralquiloxi- carbonila que pode ser opcionalmente substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono e/ou grupo arila substituído com grupo nitro; e os outros.
[0082] O termo de "grupo de proteção para grupo hidróxi" repre- senta um grupo de proteção que é usualmente usado em uma química sintética orgânica (em particular, síntese de ácido nucleico), e inclui, por exemplo, um grupo acila alifático; um grupo acila aromático; um grupo aminocarbonila que pode ser substituído; um grupo alcoxicarboí- la que pode ser substituído; um grupo sulfonila alifático; um grupo sul- fonila aromático; um grupo metila substituído com um a três grupos arila; um grupo metila substituído com um a três grupos arila, referido grupo arila sendo substituído com grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono, grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono, átomo de halo- gênio e/ou grupo ciano; ou um grupo silila. Exemplos específicos dos mesmos incluem benzila (Bn), 4,4'-dimetoxitritila (DMTr), 4- metoxitritila, trifenilmetila, 2-naftilmetila, difenilaminocarbonila (DPC), cianoetoxicarbonila, tetraidropiranila, trimetilsilila, trietilsilila, triisopropi- lsilila, t-butildimetilsilila, t-butildifenilsilila, trifenilsilila, 4-metoxibenzila (p-metoxibenzila), 3,4-dimetoxibenzila, 2,6-dimetoxibenzila, p- fenilbenzila, metanossulfonila, trifluorometansulfonila, metoximetila, benzoíla (Br), fenoxiacetila, e acetila e os outros, que não devem ser limitados a isso. Benzila (Bn), 4,4'-dimetoxitritila (DMTr), t- butildimetilsilila, t-butildifenilsilila, trimetilsilila (TMS), difenilaminocar- bonila (DPC), metanossulfonila, e trifluorometansulfonila são preferi- velmente incluídos, e 4,4'-dimetoxitritila (DMTr) é mais preferivelmente incluído.
[0083] O termo de "grupo fosfato que pode ser opcionalmente substituído" como usado aqui representa um fosfato, um fosfito, ou um hidrofosfito, cada dos quais pode ter opcionalmente substituinte (que abrange grupo de proteção). O termo abrange um grupo fosfato repre- sentado por uma fórmula de -P(RP1)RP2, em que RP1 e RP2 represen- tam independentemente um do outro um grupo hidróxi, um grupo hi- dróxi que é protegido com um grupo de proteção para síntese de ácido nucleico, um grupo mercapto, um mercapto que é protegido com um grupo de proteção para síntese de ácido nucleico, um grupo amino, um grupo alcóxi tendo 1 a 5 átomos de carbono, um grupo alquiltio tendo 1 a 6 átomos de carbono, um grupo cianoalcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono, ou um grupo amino que é substituído com grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono. Aqui, os grupos da fórmula acima mencionada em que RP1 representa ORP1a e RP2 representa NRP2a são referidos como "grupo fosforamidita", que é um exemplo preferido. O RP1a representa um grupo alquila tendo 1 a 5 átomos de carbono ou um grupo cianoalquila tendo 1 a 6 átomos de carbono, e o RP2a representa um grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono. Exemplos específicos de " grupo fosforamidita " incluem um grupo re- presentado por uma fórmula de -P(O(CH2)2CN)(N(iPr)2), ou um grupo representado por uma fórmula de -P(OCH3)(N(iPr)2) e os outros, que não são limitados a isso. O grupo representado por - P(O(CH2)2CN)(N(iPr)2) é preferivelmente incluído. Aqui, "iPr" represen- ta um grupo isopropila.
[0084] O termo de " grupo fosfato que pode ser opcionalmente substituído com substituintes" como usado aqui pode formar um auxili- ar quiral contendo um átomo de fósforo. Exemplos específicos do auxi- liar quiral contendo um átomo de fósforo incluem uma oxazafosfolidina bicíclica ativa óptica, que é descrita em documento de não patente, N. Oka et al., J. AM. CHEM. SOC. 2008, 130, 16031, e um 2-tio-1,3,2- oxa-tiafosfarano ativo óptico contendo cinco átomo de fósforo valente, que é descrito em documento de não patente, K. W. Knouseet al., Sci-
ence 10. 1126/science. aau3369 (2018), que não é limitado a isso.
[0085] O termo de "grupo de proteção para grupo amino" repre- senta um grupo de proteção que é usualmente usado em uma química sintética orgânica (em particular, síntese de ácido nucleico), e inclui, por exemplo, um grupo acila alifático; um grupo acila aromático; um grupo alcoxicarboíla que pode ser opcionalmente substituído; um gru- po metila substituído com um a três grupos arila; e um grupo metila substituído com grupos arila, referido grupo arila sendo substituído com átomo de halogênio e/ou grupo ciano. Exemplos específicos dos mesmos incluem acetila (Ac), fenoxiacetila (Pac), grupo t- butilfenoxiacetila (Tac), grupo p-isopropil fenoxiacetila (iPc-Pac), trifluo- roacetila, grupo propionila, isobutirila, benzoíla (Bz), metoxicarbonila, etoxicarbonila, t-butoxicarbonila (Boc), trimetilsililetoxicarbonila (Teoc), cianoetoxicarbonila (Ceoc), benziloxicarbonila (Cbz), aliloxicarbonila, 9-fluorenilmetoxicarbonila (Fmoc), dimetilaminometilenila, 2,2,2- tricloroetoxicarbonila, t-amiloxicarbonila, 4-metoxibenzila, trifenilmetila, 2-nitrobenzenossulfonila, 2,4-dinitrobenzenossulfonila ou 2- (trimetilsilil)etoximetila e os outros, que não são limitados a isso. Pre- ferivelmente, isobutirila, benzoíla (Bz), t-butoxicarbonila (Boc), e trime- tilsililetoxicarbonila (Teoc) são incluídos.
[0086] O termo de "grupo de proteção para um grupo fosfato" re- presenta um grupo de proteção que é usualmente usado em uma quí- mica sintética orgânica (em particularmente, síntese de ácido nuclei- co), e exemplos dos mesmos incluem um grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono e/ou um grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de car- bono substituído com grupo ciano; um grupo aralquila; um grupo aral- quila substituído com grupo arila, referido grupo arila sendo substituído com grupo nitro e/ou átomo de halogênio; um grupo arila substituído com grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono, átomo de halogê- nio, ou grupo nitro; grupo 2-cianoetila; grupo 2,2,2-tricloroetila; grupo benzila; grupo 2-clorofenila; e grupo 4-clorofenila, e os outros, que não são limitados a isso.
[0087] O termo de "grupo de proteção para grupo mercapto" re- presenta um grupo de proteção que é usualmente usado em uma quí- mica sintética orgânica (em particularmente, síntese de ácido nuclei- co), e inclui, por exemplo, um grupo acila alifático, um grupo acila aro- mático, um grupo benzoíla (Bz), e os outros, que não são limitados a isso.
[0088] O termo de "grupo de saída" como usado aqui representa um substrato parcial tendo pares de elétron que são criados quando o substrato é clivado por uma clivagem de heterólise durante rea- ção(oes), e abrange um átomo de halogênio (tais como, átomo de flú- or, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de iodo), e "um grupo de saída para hidróxi". Exemplos do grupo de saída para hidroxila inclu- em um grupo sulfonilóxi (tais como, paratoluenossulfonilóxi, mesilóxi, e trifluorometanossulfonilóxi), um grupo acilóxi (preferivelmente, grupo acilóxi saturado ou insaturado tendo 1 a 8 átomos de carbono, por exemplo, grupo arila representado por RL-C(=O)-O- em que a RL re- presenta um grupo arila que pode ser opcionalmente substituído com grupo alquila (o número total de átomo de carbono é preferivelmente 6 a 8, por exemplo, fenila, ou p-tolila), um grupo arilóxi que pode ser op- cionalmente substituído com grupo alquila (o número total de átomo de carbono é preferivelmente 6 a 8, por exemplo, fenóxi, ou p-tolilóxi), um grupo aralquila (o número total de átomo de carbono é preferivelmente 7 a 9, por exemplo, benzila), um grupo arilalquenila (o número total de átomo de carbono é preferivelmente 8 ou 9, por exemplo, cinamila), um grupo aralquilóxi (o número total de átomo de carbono é 7 a 15, por exemplo, benzilóxi, ou 9-fluorenilmetilóxi), um grupo alcóxi (um grupo alcóxi de cadeia ramificada ou cadeia linear, por exemplo, metó- xi, etóxi, t-butóxi), e exemplos específicos do grupo de saída incluem iodo, bromo, cloro, flúor, mesilóxi, metanossulfoniló- xi,trifluorometanossulfonilóxi, etanossulfonilóxi, 2,2,2- trifluoroetanossulfonilóxi, propanossulfonilóxi, iso-propanossulfonilóxi, butanossulfonilóxi, nonafluorobutanossulfonilóxi, heptafluoropropan-1- sulfonilóxi, pentanossulfonilóxi, pentafluoroetanossulfonilóxi, pentanos- sulfonilóxi, ciclopentanossulfonilóxi, hexanossulfonilóxi, ciclo- hexanossulfonilóxi, o-toluenossulfonilóxi, m-toluenossulfonilóxi, p- toluenossulfonilóxi, benzenossulfonilóxi, o-bromobenzenossulfonilóxi, m-bromobenzenossulfonilóxi, p-bromobenzenossulfonilóxi, o- nitrobenzenossulfonilóxi, m-nitrobenzenossulfonilóxi, e p- nitrobenzenossulfonilóxi, e os outros, que não são limitados a isso. Exemplos preferidos do grupo de saída incluem metanossulfonilóxi (mesilóxi; Ms-O-), trifluorometanossulfonilóxi e p-toluenossulfonilóxi.
[0089] Exemplos do termo de " grupo acila " como usado aqui in- cluem um grupo acila alifático e grupo acila aromático. Exemplos es- pecíficos do grupo acila alifático incluem um grupo alquilcarbonila, tais como, formila, acetila, propionila, butirila, isobutirila, pentanoíla, piva- loíla, valerila, isovalerila, octanoíla, nonanoíla, decanoíla, 3- metilnonanoíla, 8-metilnonanoíla, 3-etiloctanoíla, 3,7-dimetiloctanoíla, undecanoíla, dodecanoíla, tridecanoíla, tetradecanoíla, pentdecanoíla, hexadecanoíla, 1-metilpentdecanoíla, 14-metilpentadecanoíla, 13,13- dimetiltetradecanoíla, heptadecanoíla, 15-metilhexadecanoíla, octade- canoíla, 1-metilheptadecanoíla, nonadecanoíla, eicosanoíla, e henai- cosanoíla; um grupo ariloxialquicarbonila, tais como, fenoxiacetila (pac); um grupo alquilcarbonila carboxilado, tais como, succinoíla, glu- taroíla, e adipoíla; um grupo carbonila que é substituído com grupo al- quila tendo 1 a 6 átomos de carbono, referido grupo alquila sendo substituído com átomo de halogênio, tais como, grupo cloroacetila, di- cloroacetila, tricloroacetila, trifluoroacetila; um grupo alcoxialquilcarbo- nila tendo 1 a 6 átomos de carbono, tais como, metoxiacetila; e um grupo alquilcarbonila insaturado, tais como, (E)-2-metil-2-butenoíla. Também, exemplos do grupo acila aromático incluem um grupo aril- carbonila, tais como, benzoíla, α-naftoíla, e β-naftoíla; um grupo halo- genoarilcarbonila, tais como, 2-bromobenzoíla e 4-clorobenzoíla; um grupo arilcarbonila que é substituído com grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono, tais como, 2,4,6-trimetilbenzoíla, e 4-toluoíla; um grupo arilcarbonila que é substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono, tais como, 4-anisoíla; um grupo arilcarbonila car- boxilado, tais como, 2-carboxibenzoíla, 3-carboxibezoíla, e 4- carboxibenzoíla; um grupo arilcarbonila nitrolado, tais como, 4- nitrobenzolila e 2-nitrobenzoíla; um grupo arilcarbonila carbonilado que é substituído com grupo alcóxi tendo 1 a 6 átomos de carbono, tais como, 2-(metoxicarbonil)benzoíla; e um grupo arilcarbonila arilado, tais como, 4-fenilbenzoíla, que não são limitados a isso.
[0090] O termo de " grupo aralquila " como usado aqui representa um grupo alquila de 1 a 6 átomos de carbono, preferivelmente 1 a 4 átomos de carbono, mais preferivelmente 1 a 3 átomos de carbono, referido grupo alquila sendo substituído com grupo hidrocarboneto aromático (tais como, grupo hidrocarboneto aromático monocíclico, bicíclico, ou tricíclico de 6 a 14 membros). Exemplos específicos dos mesmos incluem benzila, phenetila, 1-naftilmetila, 2-naftilmetila, e os outros, porém, que não são limitados a isso.
[0091] Exemplos do termo de " grupo silila " como usado aqui in- cluem um grupo silila que é substituído com grupo alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono, tais como, trimetilsilila, trietilsilila, isopropildimetil- silila, t-butildimetilsilila, metildi-isopropilsilila, metil di-t-butilsilila, triiso- propilsilila; um grupo silila que é substituído com um ou dois grupos arila e também três grupos alquila tendo 1 a 6 átomos de carbono, tais como, t-butildifenilsilila, difenilmetilsilila, butildifenilbutilsilila, difeniliso- propilsilila, e fenildi-isopropilsilil; e trifenilsilila, porém, que não são limi-
tados a isso.
[0092] O termo de "forma β" como usado aqui representa um composto tendo uma estereoquímica em que a direção de substituição da porção de base substituída de ácido nucleico na posição 1' de uma ribose de ácido nucleico e a direção de substituição da cadeia lateral de posição 5`substituída na posição 4' de uma ribose de ácido nucleico são a mesma direção da substituição. Para um 2',4'-LNA de ácido nu- cleico artificial em ponte, a forma β representa o composto tendo a es- tereoconfiguração em que a direção de substituição da porção de base substituída de ácido nucleico na posição 1' de uma ribose de ácido nu- cleico e a direção de substituição da cadeia lateral de posição 5`substituída que não é usada para fazer a ponte substituída na posi- ção 4' de ribose de ácido nucleico são a mesma direção da substitui- ção.
[0093] O termo de "β seletivo" como usado aqui representa que uma forma β pode ser obtida.
[0094] A "uma porção de base de ácido nucleico" no termo de "uma porção de base de ácido nucleico que pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes" como usado aqui inclui, por exemplo, uma porção de base de ácido nucleico natural, e uma porção de base de ácido nucleico não natural, que contém um heterociclo aromático, e abrange um anel monocíclico, um anel bicíclico, e um anel tricíclico. Aqui, deve ser claramente entendido que porções de base de vários ácidos nucleicos que foram agora considerados "não naturais" a uma pessoa versada na técnica, podem ser encontradas na natureza a seguir. Desse modo, "porção de base de ácido nucleico" inclui não somente qualquer heterociclo contido em purina e pirimidina publicamente conhecidas, porém, também seus análogos heterocícli- cos e tautômeros. Exemplos específicos da porção de base de ácido nucleico incluem adenina, guanina, timina, citosina, uracila, purina,
xantina, diaminopurina, 8-oxo-N6-metiladenina, 7-deazaxantina, 7- deazaguanina, N4,N4-etanocitosina, N6,N6-etano-2,6-diaminopurina, 5- metilcitosina, 5-(C3-C6)-alquinilcitosina, 5-fluorocitosina, 5- bromouracila, pseudoisocitosina, 2-hidróxi-5-metil-4-triazolopiridina, isocitosina, isoguanina, inosina, N6-arilpurina, N6-acilpurina, N6- benzilpurina, N6-halopurina, N6-vinilpurina, N6-acetilenicpurina, N6- acilpurina, N6-hidroxialquilpurina, N6-tioalquilpurina, N2-alquilpurina, N6- alquilpirimidina, N4-acilpirimidina, N4-benzilpurina, N4-halopirimidina, N4-vinilpirimidina, N4-acetilenicpirimidina, N4-acetilpirimidina, N4- hidroxialquilpirimidina, N6-tioalquilpirimidina, 6-azapirimidina, 6- azacitosina, 2-e/ou 4-mercaptopirimidina, uracila, C5-alquilpirimidina, C5-benzilpirimidina, C5-halopirimidina, C5-vinilpirimidina, C5 - acetilenicpirimidina, C5-acilpirimidina, C5-hidroxialquilpurina, C5- amidopirimidina, C5-cianopirimidinila, C5-nitropirimidina, C5- aminopirimidina, N2-alquilpurina, N2-alquil-6-tiopurina, 5-citidinila, 5- azauracilila, trazolopiridinila, imidazolopiridinila, pirrolopirimidinila, pira- zolopirimidinila, e os outros, que não são limitados a isso.
Exemplos preferidos da porção de base de ácido nucleico incluem adenina, gua- nina, 2,6-diaminopurina, timina, 2-tiotimina, citosina, 5-metilcitosina, uracila, 5-fluorocitosina, xantina, 6-aminopurina, 2-aminopurina, 6- cloro-2-aminopurina, e 6-cloropurina, e particulares exemplos preferi- dos da porção de base de ácido nucleico incluem adenina, guanina, citosina, 5-metilcitosina, timina, e uracila.
A porção de base do ácido nucleico pode ser também substituída com um ou mais substituintes, e exemplos dos substituintes incluem grupo hidróxi, grupo C1-6 alcóxi, grupo mercapto, grupo C1-6alquiltio, grupo amino, grupo amino substi- tuído com grupo C1-6 alquila, grupo C1-6 alquila, grupo C1-6 alquinila, grupo oxo, grupo tioxo, e átomo de halogênio.
Se necessário ou se desejável, o átomo de oxigênio funcional, átomo de enxofre e átomo de nitrogênio sobre a porção de base podem ser protegidos e/ou des-
protegidos. O apropriado grupo de proteção é bem conhecido a uma pessoa versada na técnica, e abrange, por exemplo, o acima mencio- nado grupo de proteção para grupo hidróxi e grupo de proteção para grupo amino, e inclui grupo difenilaminocarbonila, grupo silila (tais co- mo, grupo trimetilsilila, grupo dimetilhexilsilila, grupo t-butildimetilsilila, e grupo t-butildifenilsilila), grupo tritila, grupo alquila, grupo acila (tais como, grupo acetila, grupo propionila, grupo isobutirila, grupo benzoíla (Bz), grupo fenoxiacetila (Pac)), grupo alcoxicarboíla (tais como, grupo t-butoxicarbonila (Boc), grupo benziloxicarbonila (Cbz), grupo difenila- minocarbonila (DPC), grupo cianoetoxicarbonila (Ceoc)), grupo sulfoni- la (tais como, grupo metanossulfonila, e grupo p-toluenossulfonila), grupo dimetilaminometilenila, e os outros, que não são limitados a is- so.
[0095] O termo de " ácido nucleico artificial " como usado aqui abrange nucleosídeo artificial, nucleotídeo artificial (aqui, um nucleosí- deo ou nucleotídeo é algumas vezes referido como um monômero) ou oligonucleotídeo artificial. Estes ácidos nucleicos artificiais não são ácidos nucleicos naturais, porém, ácidos nucleicos que podem ser produzidos somente artificialmente. Exemplos destes ácidos nucleicos artificiais incluem aqueles em que a porção de base de ácido nucleico contém uma base não natural, aqueles tendo um açúcar em que a porção de açúcar é modificada, e/ou aqueles contendo um grupo fos- fato não natural como uma porção de fosfato, e os ácidos nucleicos artificiais como usado aqui representam aqueles em que a porção de açúcar contém uma açúcar não natural, em particular, aqueles conten- do uma (deóxi) ribose em que os átomos de carbono na posição 2' e posição 4' estão em ponte.
[0096] O termo de " oligonucleotídeo artificial " como usado aqui representa uma substância em que dois ou mais dos " nucleotídeos artificiais " idênticos ou diferentes são ligados com cada outro por meio de uma ligação de fosfodiéster ou uma ligação de tiofosfodiéster e similares, e inclui uma substância em que preferivelmente 2 a 100, mais preferivelmente 5 a 50, mais preferivelmente 10 a 30 nucleotí- deos artificiais são ligados, ou uma substância em que os nucleotídeos juntamente com estas fitas complementares formam uma fita dupla. Aqui, um oligonucleotídeo em que dois ou mais nucleotídeos são liga- dos com cada outra é algumas vezes referido como oligômero.
[0097] As modalidades dos compostos da presente invenção são descritas. Composto representado por fórmula geral I
[0098] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto representado por fórmula geral I: [em que B representa uma porção de base de ácido nucleico em que a porção de base pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do ou- tro um átomo de hidrogênio, ou um C1-6 grupo alquila que pode ser op- cionalmente substituído com um ou mais substituintes; R5 e R6 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo de proteção para grupo hidróxi, ou um grupo fosfato que pode ser opcionalmente substituído com substituin-
tes; m é um número inteiro de 1 ou 2; X representa um grupo representado pela seguinte fórmula (II-1), (II-2) ou (II-3): ; os símbolos: que são descritos na fórmula (II-1), (II-2) ou (II-3) representam um pon- to de ligação ao grupo 2'-amino; R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um C1-6 grupo alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquenila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromático que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes; A representa um grupo aromático; M representa um grupo sulfonila que é substituído com um substituinte selecionado do grupo consistindo em um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes e um grupo aromático que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.] ou sais dos mesmo é fornecido.
[0099] De acordo com uma modalidade do presente pedido, o composto representado por fórmula geral (I) ou sais do mesmo repre- senta um composto representado por fórmula geral I-a:
ou sais do mesmo é preferivelmente incluído (em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, B, X e m são os mesmos como definido na fórmula geral (I)).
[00100] De acordo com uma modalidade do presente pedido, o composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que um anel B na fórmula (I) representa um grupo adeninila que pode ser op- cionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo gua- ninila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes, um grupo citosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo 5-metilcitosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes ou um grupo uracilila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes é fornecido.
[00101] De acordo com uma modalidade do presente pedido, o composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que na fórmula (I), um anel B representa um grupo 5-metilcitosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes ou um grupo 5-uracilila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes é fornecido.
[00102] De acordo com uma modalidade do presente pedido, o composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que na fórmula (I), R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, e m é um número inteiro de 1 é forne-
cido.
[00103] De acordo com uma modalidade do presente pedido, o composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que na fórmula (I), R6 representa um átomo de hidrogênio ou DMTr grupo, e R5 representa um átomo de hidrogênio ou -P(O(CH2)2CN)(N(ipr)2).
[00104] De acordo com uma modalidade do presente pedido, o composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que na fórmula (I), R6 representa grupo DMTr, e R5 representa um átomo de hidrogênio ou -P(O(CH2)2CN)(N(ipr)2).
[00105] De acordo com uma modalidade do presente pedido, o composto representado por fórmula (I) é aproximadamente dividido na fórmula (II-1), (II-2) ou (II-3).
[00106] Primeiro, o composto em que na fórmula (I), X representa um grupo representado por fórmula (II-1) (a seguir, referido como "composto do tipo ureia") é incluído.
[00107] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula geral (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromá- tico que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes é fornecido.
[00108] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula geral (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-3 alquila que pode ser opcional-
mente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromá- tico que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes é fornecido.
[00109] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula geral (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo metila, um grupo isopropila, ou um grupo fenila é fornecido.
[00110] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula geral (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e uma combinação de R7 e R8 representa uma combinação em que ambos de R7 e R8 representam um átomo de hidrogênio; uma combinação em que ambos de R7 e R8 representam um grupo metila; uma combinação em que R7 representa um átomo de hidrogênio e R8 representa um grupo metila; uma combinação em que R7 representa um átomo de hidrogênio e R8 representa um grupo isopropila; ou uma combinação em que R7 representa um átomo de hidrogênio e R8 re- presenta um grupo fenila é fornecido.
[00111] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e uma combinação de R7 e R8 representa uma combinação em que ambos de R7 e R8 representam um átomo de hidrogênio; uma combinação em que ambos de R7 e R8 representam um grupo metila; uma combinação em que um de R7 e R8 representa um átomo de hi- drogênio e o outro do mesmo representa um grupo metila; uma combi-
nação em que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio e o outro do mesmo representa um grupo isopropila; ou uma combinação em que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio e o outro do mesmo representa um grupo fenila é fornecido.
[00112] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio, e o ou- tro do mesmo representa um grupo metila, é fornecido.
[00113] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que
[00114] X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio, e o ou- tro do mesmo representa um grupo isopropila, é fornecido.
[00115] Também, o composto em que na fórmula (I), X representa um grupo representado por fórmula (II-2) (a seguir, referido como "he- terocomposto do tipo arila") pode ser incluído.
[00116] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionados do grupo con- sistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxo- fre, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes, é fornecido.
[00117] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que
X representa um grupo representado por fórmula (II-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo dois ou três heteroátomos selecionados de átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio, e átomo de enxofre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio são incluídos, que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00118] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionados do grupo con- sistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxo- fre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio são incluídos, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e o substituinte é selecionado independentemente um do outro de um grupo consistindo em um grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais átomos de halogênio, um átomo de ha- logênio, e um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupo C1-3 alquila, é fornecido.
[00119] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou sseis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionados do grupo con- sistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxo- fre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio são incluídos, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e o substituinte é selecionado independentemente um do outro de um grupo consistindo em um grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais átomos de halogênio, um átomo de ha- logênio, e um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupo C1-3 alquila, é fornecido.
[00120] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um Composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); e o grupo heteroarila de cinco ou seis membros como um grupo é selecionado do grupo consistindo em um grupo triazolila, um grupo oxadiazolila, um grupo tiadiazolila, um grupo pirimidinila, e um grupo pirazinila, cada pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00121] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um grupo representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); e o grupo tiazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 1,5-dimetil-1,2,4- tiadiazol-5-ila, é fornecido.
[00122] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um grupo representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); e o grupo oxadiazolila que pode ser opcionalmente substituí- do com um ou mais substituintes representa grupo 5-metil-1,2,4- oxadiazol-3-ila, é fornecido.
[00123] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um grupo representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); e o grupo tiadiazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 3-metil-1,2,4-tiadiazol-
3-ila, é fornecido.
[00124] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um grupo representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um substituinte selecionado de um grupo C1-6 alquila que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo arila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00125] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um grupo representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um substituinte selecionado do grupo consistindo em um grupo metila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo fenila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00126] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um grupo representado por fórmula (I) ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo metila e um grupo fenila, é fornecido.
[00127] De acordo com uma modalidade do presente pedido, como exemplos específicos do composto representado por fórmula (I) ou sais do mesmo, um ou mais compostos selecionados dos seguintes compostos ou sais dos mesmos são fornecidos.
[00128] Os compostos selecionados do grupo consistindo nos se- guintes compostos: 3-[[(1R,4R,6R,7S)-4-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-6-(5-metil-
2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-metilsulfonil-5-oxa-2-azabiciclo[2,2,1]heptan- 7-il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 1); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 2); [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 3); N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-purin-6-il]benzamida (Presente composto 4); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopronilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 5); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil)óxi-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 6); (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente compos- to 7); (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-
carboxamida (Presente composto 8); [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(metilcarbamoil)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 9); (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carboxamida (Presente composto 10); (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin- 1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente com- posto 11); (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxopirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)fenil-metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 12); [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(isopropilcarbamoil)-2-oxa- 5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 13); (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil- 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 14); (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N,N-dimetil-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin- 1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente com- posto 15); (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4-
metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N,N-dimetil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 16); 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 7-il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 17); 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 18); N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N-dimetil-6- formamidina (Presente composto 19); N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida (Presente composto 20); 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 7-il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 21); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 22); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2-il]-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di-
isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 23); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2- il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 24); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(5- cloropirimidin-2-il)-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 25); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(5- cloropirimidin-2-il)-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-2-oxa- 5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 26); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[6- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamina)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 27); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[(6-dimetilamino)pirimidin-4- il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 28); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[2- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di-isopropilamino)oxipropanonitrila (Presente composto 29); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[2-(dimetilamino)pirimidin-4- il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 30); 3-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil-
2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-pirazin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7- il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 31); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirazina-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 32); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 33); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 34); N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N- dimetilformamidina (Presente composto 35); N-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida (Presente composto 36); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 37); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-
il]benzamida (Presente composto 38); 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 39); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)- 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 40); N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]di-hidropirimidin-2-ona (Presente composto 41); N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N- dimetilformamidina (Presente composto 42); N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-2-metilpropano amida (Presente composto 43); e N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2- il]-2-metilpropano amida (Presente composto 44). Oligonucleotídeo Composto representado por fórmula geral (I')
[00129] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo compreendendo um ou mais nucleosí- deos representados por fórmula geral (I'):
[em que, B representa uma porção de base de ácido nucleico em que a porção de base pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do ou- tro um átomo de hidrogênio, ou um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes; m é um número inteiro de 1 ou 2; X representa um grupo representado pela seguinte fórmula (II'-1), (II'-2), ou (II'-3):
; os símbolos:
que são descritos na fórmula (II'-1), (II'-2) ou (II'-3) representam um ponto de ligação ao grupo 2'-amino; A representa um grupo aromático contendo um ou mais he-
teroátomos selecionados do grupo consistindo em átomo de nitrogê- nio, átomo de oxigênio e átomo de enxofre, que podem ser opcional- mente substituídos com um ou mais substituintes; M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo aromático que pode ser opcionalmente subs- tituído com um ou mais substituintes.] ou sais dos mesmos, é fornecido.
[00130] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula ()') ou sais do mesmo em que na fórmula (I'), o anel B representa um grupo adeninila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo guaninila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo citosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo 5-metilcitosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes ou um grupo uracilila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00131] De acordo com uma modalidade do presente pedido, em que na fórmula (I'), o anel B representa um grupo 5- metilcitosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes ou um grupo 5- uracilila que pode ter um ou mais grupos de proteção, é fornecido.
[00132] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que na fórmula (I'), R1, R2, R3 e R4 representam independente- mente um do outro um átomo de hidrogênio, e m é um número inteiro de 1, é fornecido.
[00133] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que na fórmula (I'), uma ou mais ligações de fosfato entre nu- cleotídeos representam uma ligação de fosforotioato, e é/são sulfuri- zados, é fornecido.
[00134] O composto em que na fórmula (I'), X representa um grupo representado por fórmula (II'-1) (a seguir, referido como "composto do tipo ureia" pode ser incluído.
[00135] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromático que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00136] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-6 alquila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromá-
tico que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes, é fornecido.
[00137] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo C1-3 alquila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromá- tico que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes, é fornecido.
[00138] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo metila, um grupo isopropila, ou um grupo fenila, é fornecido.
[00139] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e uma combinação de R7 e R8 representa uma combinação em que ambos de R7 e R8 representam um átomo de hidrogênio; uma combinação em que ambos de R7 e R8 representam um grupo metila; uma combinação em que R7 representa um átomo de hidrogênio e R8 representa um grupo metila; uma combinação em que R7 representa um átomo de hidrogênio e R8 representa um grupo isopropila; ou uma combinação em que R7 representa um átomo de hidrogênio e R8 re- presenta um grupo fenila, é fornecido.
[00140] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e uma combinação de R7 e R8 representa uma combinação em que ambos de R7 e R8 representam um átomo de hidrogênio; uma combinação em que ambos de R7 e R8 representam um grupo metila; uma combinação em que um de R7 e R8 representa um átomo de hi- drogênio e o outro do mesmo representa um grupo isopropila; uma combinação em que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogê- nio e o outro do mesmo representa um grupo isopropila; ou uma com- binação em que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio e o outro do mesmo representa um grupo fenila, é fornecido.
[00141] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio e o outro do mesmo representa um grupo metila, é fornecido.
[00142] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio e o outro do mesmo representa um grupo isopropila,
é fornecido.
[00143] Também, um composto em que na fórmula (I'), X represen- ta um grupo representado por fórmula (II'-2) (a seguir, referido como "heterocomposto do tipo arila") pode ser incluído.
[00144] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionados do grupo con- sistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxo- fre, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes, é fornecido.
[00145] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo dois ou três heteroátomos selecionados de átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio, e átomo de enxofre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio sejam incluídos, que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00146] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionados de átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio, e átomo de enxofre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio sejam incluídos, que pode ser opcio-
nalmente substituído com um ou mais substituintes, e o substituinte é selecionado independentemente um do outro de um grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, um átomo de halogênio, e um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila, é for- necido.
[00147] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionados de átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio, e átomo de enxofre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio sejam incluídos, que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes, e o substituinte é selecionado independentemente um do outro de um grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, um átomo de halogênio, e um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila, é for- necido.
[00148] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e o grupo heteroarila de cinco ou seis membros como um grupo é selecionado do grupo consistindo em um grupo triazolila, um grupo oxadiazolila, um grupo tiadiazolila, um grupo pirimidinila, e um grupo pirazinila, cada pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00149] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e o grupo triazol que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- ila, é fornecido.
[00150] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e o grupo oxadiazolila que pode ser opcionalmente substituí- do com um ou mais substituintes representa grupo 5-metil-1,2,4- oxadiazol-3-ila, é fornecido.
[00151] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e o grupo tiadiazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa grupo 3-metil-1,2,4-tiadiazol- 5-ila, é fornecido.
[00152] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um substituinte selecionado do grupo consistindo em um grupo C1-6 alqui- la que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituin- tes e um grupo arila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00153] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um substituinte selecionado do grupo consistindo em um grupo metila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo fenila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, é fornecido.
[00154] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo metila e um grupo fenila, é fornecido.
[00155] De acordo com uma modalidade do presente pedido, um composto de oligonucleotídeo representado por fórmula (I') ou sais do mesmo em que X representa um grupo representado por fórmula (II'-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo metila e um grupo fenila, é fornecido.
[00156] De acordo com uma modalidade do presente pedido, o oli- gonucleotídeo ou sais do mesmo é preparado ligando dois ou mais nucleotídeos, e preferivelmente contém 2 a 100 nucleotídeos, mais preferivelmente 5 a 50 nucleotídeos, e particularmente preferivelmente aqueles em que 10 a 30 nucleotídeos artificiais são ligados ou são combinados juntos com estas fitas complementares formam uma fita dupla.
[00157] O termo de "sal" na expressão de "sais de composto" usa- dos aqui, sais de metal de álcali, tais como, sal de sódio, sal de potás- sio, sal de lítio; sais de metal alcalino terroso, tais como, sal de cálcio, e sais de magnésio; sais de metal, tais como, sal de alumínio, sal de ferro, sal de zinco, sal de cobre, sal de níquel, e sal de cobalto; sais inorgânicos, tais como, sal de amônio; sais de amina, por exemplo, sais orgânicos, tais como, sal de t-octilamina, sal de dibenzilamina, sal de morfolina, sal de glucosamina, sal de alquil éster de fenilglisina, sal de etilenodiamina, sal de N-metilglucamina, sal de guanidina, sal de dietilamina, sal de trietilamina, sal de hexilamina, sal de diciclo- hexilamina, sal de N,N'-dibenziletilenodiamina, sal de cloroprocaína, sal de procaína, sal de dietanolamina, sal de N-benzilfenetilamina, sal de piperazina, sal de tetrametilamônio, e sal de tris(hidroximetil)aminometano; sais de ácido inorgânico, por exemplo, ácidos hidroálicos (tais como, ácido hidrofluórico, ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, e ácido hidroiódico), sal de nitrato, sal de ácido perclórico, sal de sulfato, e sal de fosfato; sais de ácido alcanossulfô- nico tendo um a seis átomos de carbono, tais como, sal de metanos- sulfonato, sal de trifluoro metanossulfonato, sal de etanossulfonato; sais de ácido arilsulfônico, tais como, sal de benzeno sulfonato, e sal de p-tolueno sulfonato; sais de ácido orgânico, tais como, sal de aceta- to, sal de malato, sal de fumarato, sal de succinato, sal de citrato, sal de tartrato, sal de oxalato, e sal de maleato; e sais de aminoácido, tais como, sal de glicina, sal de lisina, sal de arginina, sal de ornitina, sal de ácido glutâmico, e sal de ácido aspártico, que não devem ser limi- tados a isso. Os sais são abrangidos por sais farmaceuticamente acei- táveis.
[00158] Cada composto representado por fórmula geral (I) descrito aqui abrange forma de enantiômero, forma de diastereômero, ou mis- turas dos mesmos. Por exemplo, uma estereo configuração de porção de açúcar na estrutura de cada composto abrange forma α e forma β, contudo, forma β é preferida. Quando os acima mencionados compos- tos representados pela fórmula acima (I) são obtidos na forma de dias- tereômero ou enantiômero, eles podem ser separados por métodos bem conhecidos em síntese orgânica (por exemplo, síntese de açú- car), tais como, método de cromatografia ou método de cristalização fracional. Por exemplo, o composto 2Td representado pela seguinte fórmula: tem forma β como uma estereo configuração de porção de açúcar.
[00159] Cada composto representado por fórmula geral I descrito aqui abrange os compostos marcados com isótopos (tais como, 3H, 13 C, 14C, 15N, 18F, 32P, 35S ou 125I) e transformadores deuterados.
[00160] O oligonucleotídeo ou análogos dos mesmos descritos aqui podem ser misturados com agentes auxiliares que são usualmente usados na formulação de produtos farmacêuticos, tais como, excipien- tes, aglutinantes, preservativos, antioxidantes, desintegrantes, lubrifi- cantes, e aromatizantes, para preparar formulação parenteralmente administrada ou formulações de lipossoma. Também, o oligonucleotí- deo ou análogos do mesmo é misturado com veículos farmacêuticos que são usualmente usados nas técnicas farmacêuticas para formular em formulações tópicas, tais como, soluções, cremes e unguentos. (Método de preparação)
[00161] A seguir, o método de preparação do composto da presente invenção é descrito.
[00162] Substâncias opticamente ativas tendo configuração absolu- ta em cada composto representado pelos materiais de partida abaixo mencionados e compostos intermediários podem ser preparadas usando como substância(s) opticamente ativa(s) de material de partida ou separando os isômeros que se criaram nos estágios de intermediá- rio para síntese. Também, a base de reação de ácido nucleico de substituição abaixo mencionada em que base de ácido nucleico é substituída pode prosseguir uma transglicosilação β-seletiva efetiva- mente, e o composto obtido representado por fórmula geral I pode ser obtido como um formador β desejado seletivamente.
[00163] O composto da presente invenção ou sais farmaceutica- mente aceitáveis do mesmo pode ser preparado de acordo com o se- guinte método, porém, que não deve ser limitado a isso.
[00164] Para materiais de partida, a menos que processos específi- cos dos mesmos sejam estabelecidos, eles podem ser usados como comercialmente disponíveis, ou podem ser preparados de acordo com o método publicamente conhecido ou um método similar a isso.
[00165] Os símbolos abreviados como usado aqui significam os se- guintes significados respectivamente. THF: tetraidrofurano DMSO: sulfóxido de dimetila MsCl: cloreto de metanossulfonila DMAP: N,N-dimetil-4-aminopiridina iPr2NEt, DIPEA: N,N-di-isopropiletilamina BSA: N,O-bis(trimetilsilil)acetamida TMSOTf: trimetilsililtrifluoro-metanossulfonato TBSOTf: t-butildimetilsilil trifluoro metanossulfonato Bn: benzila TMS: trimetilsilila TBDPS: terc-butildifenilsilila
Ac: acetila MOE: metoxietila CH2Cl2: diclorometano MeCN: acetonitrila DMTr: 4,4'-dimetoxitritila Primeiro, o sumário de um método de preparação para o composto da presente invenção (monômero) é descrito. (Composto do tipo de sulfonamida)
[00166] O método de preparação do composto da presente inven- ção representado por fórmula geral I em que X representa um grupo representado por fórmula (II-3), assim chamado composto do tipo de sulfonamida é descrito. O exemplo típico do esquema de preparação é descrito, e não é limitado a isso. Esquema de reação 1 (Etapa 1)
[00167] Um grupo de proteção para grupo hidróxi é introduzido co-
mo grupo R5 na fórmula geral (I) usando um material de partida 1 (por exemplo, que pode ser preparado de acordo com o processo descrito em WO 2017/047816 A1) que é um composto de açúcar, de acordo com um método publicamente conhecido para preparar um composto intermediário 2. Alternativamente, uma porção básica de ácido nuclei- co no material de partida 1 (abreviado como "B") é submetida a uma reação de permuta de base de ácido nucleico com outra porção básica de ácido nucleico que pode ser opcionalmente protegida (abreviada como "B'") e um grupo de proteção para grupo hidróxi é também intro- duzido ao mesmo tempo como a reação de permuta de base de ácido nucleico para preparar um composto intermediário 2.
[00168] Esta introdução do grupo de proteção para grupo hidróxi pode ser conduzida sob uma condição de reação que é conhecida em química sintética orgânica (por exemplo, síntese de ácido nucleico) dependendo de um tipo de grupo de proteção. Por exemplo, quando um grupo de proteção para grupo hidróxi for um grupo de proteção do tipo silila (tal como, TMS), um agente silila (tais como, BSA, hexametila disilazano, cloreto de TMS) pode ser usado. Na reação, ácido de Le- wis (tais como, TMSOTf, TBSOTf, e cloreto de estanho) pode ser adi- cionado.
[00169] O agente de sililação pode ser usado em cerca de 1 a cerca de 20 equivalente(s) molar(es), e o ácido de Lewis pode ser usado em uma quantidade catalítica (cerca de 0,05 equivalentes molares) a cer- ca de 2 equivalentes molares em oposição a 1 mol dos substratos de reação.
[00170] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tais como, THF; hidrocarbo- netos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e cloro- fórmio; hidrocarbonetos, tais como, benzeno e tolueno; acetonitrila;
água; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferivelmente a 0 ºC a temperatura elevada, e particularmente prefe- rivelmente em temperatura ambiente a cerca de 60 ºC.
[00171] Além disso, de acordo com uma reação de permuta de áci- do nucleico (reação de transglicosilação), uma porção de base de pi- rimidina de base de ácido nucleico, tais como, grupo timina (T) e grupo uracila (U) pode ser substituída com outra porção de base de ácido nucleico (por exemplo, adenina (A), guanina (G), uracila (U), timina (T), citosina (C), ou 5-metilcitosina (MeC) para obter um composto interme- diário 2 em que a porção de base de ácido nucleico é substituída. A reação de permuta de base pode ser realizada, por exemplo, na pre- sença de ácido de Lewis (tais como, TMSOTf e TBSOTf), e a reação pode ser facilitada por reação com o agente de sililação. (Etapa 2)
[00172] Em seguida, usando o composto intermediário 2 como um material de partida, um haleto de alquil sulfonila ou um haleto de sulfo- nila aromático pode ser reagido com o composto intermediário 2 de acordo com um método publicamente conhecido para passar por uma sulfonamidação em um átomo de aminonitrogênio, resultando na pre- paração de um composto intermediário 3.
[00173] Exemplos do reagente de amidação de sulfona usado em uma reação de amidação de sulfona incluem um reagente de haleto de alquil sulfonila (tais como, cloreto de metano sulfonila (MsCl)), um rea- gente de anidrido de alquila sulfônico (tais como, anidrido metano sul- fônico), um reagente de haleto de sulfonila aromático (tais como, clore- to de benzeno sulfonila), ou um anidrido sulfônico aromático (tais co- mo, anidrido benzeno sulfônico), e estes reagentes podem ser usados na presença de uma base (tais como, trietil amina e DIPEA).
[00174] O reagente de sulfonamidação pode ser usado em aproxi- madamente equivalentes molares a um pouco em excesso de equiva-
lentes molares (por exemplo, cerca de 1,0 equivalente molar) em opo- sição a 1 mol dos substratos de reação.
[00175] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tais como, THF; hidrocarbo- netos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e cloro- fórmio; hidrocarbonetos, tais como, benzeno e tolueno; acetonitrila; água; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferivelmente a -25 ºC a temperatura ambiente, e particularmente preferivelmente a 0 ºC a temperatura ambiente. (Etapa 3)
[00176] Em seguida, os grupos de proteção para grupo hidróxi que é introduzido na etapa 1 são deprotegidos usando o composto inter- mediário 3 como um material de partida de acordo com um método publicamente conhecido para preparar um composto intermediário 4.
[00177] A presente reação de desproteção pode ser realizada em condição de reação apropriada (por exemplo, reagentes a serem usa- dos) dependendo dos tipos do grupo de proteção. Por exemplo, quan- do um grupo de proteção para grupo hidróxi (abreviado como "RPRO") for um grupo de proteção do tipo silila (tal como, TMS), a reação pode ser realizada por hidrólise sob condição acídica (tais como, ácido acé- tico-THF-água) ou por tratamento com um reagente de doador de íon de fluoreto (tal como, TBAF).
[00178] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em um solvente apropriado (por exemplo, éteres, tais como, THF, átomos de hidrocarboneto halogenado, tais como, diclorometano, água, ou sol- ventes mistos dos mesmos).
[00179] A reação pode prosseguir preferivelmente a -25 ºC a 100 ºC, particularmente preferivelmente a 0 ºC a 50 ºC como a temperatura de reação. (Etapa 4)
[00180] Além disso, o composto intermediário 4 como um material de partida é submetido a uma reação de fosforamiditação sob condi- ções de reação que foram generalmente conhecidas em síntese orgâ- nica (em particular, síntese de ácido nucleico) (por exemplo, em ter- mos de reagente(s)) para preparar um composto desejado da presente invenção como um composto de tipo de sulfona amida.
[00181] Exemplos do reagente de fosforamiditação incluem agentes pela seguinte fórmula: que não devem ser limitados a isso.
[00182] A reação de fosforamiditação pode ser conduzida na pre- sença de bases apropriadas (tal como, DIPEA) ou apropriados ácidos (tais como, tetrazolida de di-isopropil amônio, e 4,5-dicianoimidazol).
[00183] O reagente de fosforamiditação pode ser usado em 1 a cer- ca de 10 equivalente(s) molar(es), preferivelmente 1 a cerca de 5 equivalente(s) molar(es) (tais como, 3 equivalentes molares) em opo- sição a 1 mol dos substratos de reação.
[00184] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tais como, THF; hidrocarbo- netos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e cloro- fórmio; acetonitrila; água; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferivelmente a -25 ºC a 60 ºC, e particularmente preferivelmente a 0 ºC a temperatura ambiente.
[00185] Aqui, em qualquer estágio, desde o momento anterior à etapa 1 acima até o momento posterior à etapa 4 acima, um substituin-
te sobre o anel da base de ácido nucleico pode ser apropriadamente modificado (por exemplo, uma reação de benzoilação ou uma reação de acetilação sobre um substituinte amino on um anel de citosina).
[00186] Além disso, entre a etapa (1) acima a etapa (4), uma plura- lidade de etapas (por exemplo, etapa (1) e etapa (2), e etapa (2) e eta- pa (3)) pode ser realizada sucessivamente. (Composto do tipo ureia)
[00187] Um método para preparar um composto da presente inven- ção representado por fórmula geral I em que X representa um grupo representado por fórmula (II-1), que é assim chamado composto do tipo ureia, é descrito. Exemplos típicos do esquema de preparação são indicados no seguinte esquema de reação 2, que não devem ser limitados a isso. Esquema de reação 2 (Etapa 1)
[00188] Antes de sofrer uma reação para conversão em uma ureia de acordo com um método publicamente conhecido, similarmente ao esquema de reação acima 1 usando o composto de partida acima 1 como um material de partida, uma porção básica de ácido nucleico no composto de partida 1 (abreviado como "B") é submetida a uma rea- ção de permuta de base de ácido nucleico com outra porção básica de ácido nucleico que pode ser opcionalmente protegida (abreviada como "B'"), e a seguir, a reação para converter em uma ureia pode ser reali- zada. Além disso, similarmente ao esquema de reação acima, após a reação de permuta de base de ácido nucleico ser realizada, um grupo de proteção para grupo hidróxi pode ser introduzido apropriadamente.
[00189] Em uma reação de permuta de ácido nucleico (reação de transglicosilação), de acordo com um método publicamente conhecido, a porção de base de pirimidina de base de ácido nucleico, tais como, grupo timina (T) e grupo uracila (U) pode ser substituída com outra porção de base de ácido nucleico (por exemplo, adenina (A), guanina (G), uracila (U), timina (T), citosina (C), ou 5-metilcitosina (MeC) para obter um composto intermediário 5 em que a porção de base de ácido nucleico é substituída. A reação de permuta de base pode ser realiza- da, por exemplo, na presença de ácido de Lewis (tais como, TMSOTf e TBSOTf), e a reação pode ser facilitada por reação com o agente de sililação (tal como, BSA).
[00190] Esta introdução do grupo de proteção para grupo hidróxi pode ser conduzida sob uma condição de reação que é conhecida em química sintética orgânica (por exemplo, síntese de ácido nucleico) dependendo de um tipo de grupo de proteção. Por exemplo, quando um grupo de proteção para grupo hidróxi é um grupo de proteção de tipo silila (tal como, TMS), um agente silila (tais como, BSA, hexametila disilazano, cloreto de TMS) pode ser usado. Na reação, ácido de Le- wis (tais como, TMSOTf, TBSOTf, e cloreto de estanho) pode ser adi- cionado.
[00191] O agente de sililação pode ser usado em cerca de 1 a cerca de 20 equivalente(s) molar(es), e o ácido de Lewis pode ser usado em uma quantidade catalítica (cerca de 0,05 equivalentes molares) a cer- ca de 2 equivalentes molares em oposição a 1 mol dos substratos de reação.
[00192] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; hidrocarbone- tos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e clorofór- mio; hidrocarbonetos, tais como, benzeno e tolueno; acetonitrila; água; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferi- velmente a 0 ºC a temperatura elevada, e particularmente preferivel- mente em temperatura ambiente a cerca de 60 ºC. (Etapa 2)
[00193] Em seguida, usando o composto de partida 1 ou o compos- to intermediário 5 como um material de partida, de acordo com um mé- todo publicamente conhecido, o reagente para converter em ureia é reagido com o composto de partida 1 ou o composto intermediário 5 para sofrer uma reação de conversão para uma ureia no átomo de aminonitrogênio, resulta na preparação de um composto intermediário
6.
[00194] Exemplos do reagente para converter em ureia usado na reação para converter em ureia incluem isocianato, reagente de haleto de alquil carbamoíla (tais como, cloreto de N-metilcarbamoíla) ou rea- gente de haleto de N,N-dialquil carbamoíla (tais como, cloreto de N,N- dialquil carbamoíla), e estes reagentes podem ser usados na presença ou ausência de uma base (tal como, DIPEA).
[00195] O reagente para converter em ureia pode ser usado em equivalentes molares aproximadamente para equivalentes molares de algum excesso (por exemplo, cerca de 1,0 equivalente molar) em opo- sição a 1 mol dos substratos de reação.
[00196] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; hidrocarbone- tos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e clorofór- mio; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir pre- ferivelmente a -25 ºC a temperatura ambiente, e particularmente prefe- rivelmente a 0 ºC a temperatura ambiente. (Etapa 3)
[00197] Em seguida, como necessário, quando um grupo de prote- ção para grupo hidróxi é introduzido na etapa 1 acima mencionada, usando o composto intermediário 6 como um material de partida, de acordo com um método publicamente conhecido, o grupo de proteção introduzido para grupo hidróxi é desprotegido para preparar um com- posto intermediário 7.
[00198] A presente reação de desproteção pode ser realizada em condição de reação apropriada (por exemplo, reagentes a serem usa- dos) dependendo dos tipos do grupo de proteção. Por exemplo, quan- do um grupo de proteção para grupo hidróxi (abreviado como "RPRO") for um grupo de proteção de tipo silila (tal como, TMS), a reação pode ser realizada por hidrólise sob condição acídica (tais como, ácido acé- tico-THF-água) ou por tratamento com um reagente de doador de íon de fluoreto (tal como, TBAF).
[00199] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em um solvente apropriado (por exemplo, éteres, tal como, THF, átomos de hidrocarboneto halogenado, tais como, diclorometano, água, ou sol- ventes mistos dos mesmos).
[00200] A reação pode prosseguir preferivelmente a -25 ºC a 100 ºC, particularmente preferivelmente a 0 ºC a 50 ºC como uma tempera- tura de reação. (Etapa 4)
[00201] Além disso, similarmente à etapa 4 do esquema de reação 1 acima mencionado, o composto intermediário 6 ou o composto in- termediário 7 como um material de partida é submetido a uma reação de fosforamiditação de acordo com um método publicamente conheci- do para preparar um tipo de ureia desejado (por exemplo, tipo de ureia de metila, e tipo de ureia de isopropila) do presente composto.
[00202] Exemplos do reagente de fosforamiditação incluem 2- cianoetil-N,N-di-isopropilclorofosforamidita, e o reagente pode ser usa- do na presença de uma base (tais como, trietilamina, DIPEA).
[00203] O reagente de fosforamiditação pode ser usado em 1 a cer- ca de 10 equivalente(s) molar(es), preferivelmente 1 a cerca de 5 equivalente(s) molar(es) (tais como, 3 equivalentes molares) em opo- sição a 1 mol dos substratos de reação.
[00204] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; hidrocarbone- tos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e clorofór- mio; acetonitrila; água; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferivelmente a -25 ºC a 60 ºC, e particularmente preferivelmente a 0 ºC a temperatura ambiente.
[00205] Além disso, entre a etapa (1) acima a etapa (4), uma plura- lidade de etapas (por exemplo, etapa (1) e etapa (2), etapa (2) e etapa (3), e etapa (1) a etapa (3)) pode ser realizada sucessivamente.
[00206] Aqui, em qualquer estágio, desde o momento anterior à etapa 1 acima até o momento posterior à etapa 4 acima, um substituin- te sobre o anel da base de ácido nucleico pode ser apropriadamente modificado (por exemplo, uma reação de benzoilação ou uma reação de acetilação sobre um substituinte amino sobre um anel de citosina). (Composto do tipo arila)
[00207] Um método de preparação do composto representado por fórmula I em que X representa fórmula (II-2), assim chamado um tipo arila do presente composto é descrito. Exemplos do esquema de pre- paração são mostrados no seguinte esquema de reação 3. Esquema de reação 3 (Etapa 1)
[00208] Antes de sofrer uma reação de arilação de acordo com um método publicamente conhecido, similarmente ao esquema de reação acima 1 usando o composto de partida acima 1 como um material de partida, uma porção básica de ácido nucleico no composto de partida 1 (abreviado como "B") é submetida a uma reação de permuta de base de ácido nucleico com outra porção básica de ácido nucleico que pode ser opcionalmente protegida (abreviada como "B'"), e a seguir, a rea- ção de arilação pode ser realizada.
[00209] Em uma reação de permuta de ácido nucleico (reação de transglicosilação), de acordo com um método publicamente conhecido, a porção de base de pirimidina de base de ácido nucleico, tais como, grupo timina (T) e grupo uracila (U) pode ser substituída com outra porção de base de ácido nucleico (por exemplo, adenina (A), guanina (G), uracila (U), timina (T), citosina (C), ou 5-metilcitosina (MeC) para obter um composto intermediário 8 em que a porção de base de ácido nucleico é substituída. A reação de permuta de base pode ser realiza- da, por exemplo, na presença de ácido de Lewis (tais como, TMSOTf e TBSOTf), e a reação pode ser facilitada por reação com o agente de sililação (tal como, BSA).
[00210] Esta introdução do grupo de proteção para grupo hidróxi pode ser conduzida sob uma condição de reação que é conhecida em química sintética orgânica (por exemplo, síntese de ácido nucleico) dependendo de um tipo de grupo de proteção. Por exemplo, quando um grupo de proteção para grupo hidróxi for um grupo de proteção de tipo silila (tal como, TMS), um agente silila (tais como, BSA, hexametila disilazano, cloreto de TMS) pode ser usado. Na reação, ácido de Le- wis (tais como, TMSOTf, TBSOTf, e cloreto de estanho) pode ser adi- cionado.
[00211] O agente de sililação pode ser usado em cerca de 1 a cerca de 20 equivalente(s) molar(es), e o ácido de Lewis pode ser usado em uma quantidade catalítica (cerca de 0,05 equivalentes molares) a cer- ca de 2 equivalentes molares em oposição a 1 mol dos substratos de reação.
[00212] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; hidrocarbone- tos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e clorofór- mio; hidrocarbonetos, tais como, benzeno e tolueno; acetonitrila; água; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferi- velmente a 0 ºC a temperatura elevada, e particularmente preferivel- mente em temperatura ambiente a cerca de 60 ºC. (Etapa 2)
[00213] Em seguida, usando o composto de partida 1 ou o compos- to intermediário 8 como um material de partida, de acordo com um mé- todo publicamente conhecido, o reagente de arilação é reagido com o composto de partida 1 ou o composto intermediário 8 para sofrer uma reação de aromatização sobre o átomo de aminonitrogênio, resulta na preparação de um composto intermediário 9.
[00214] Exemplos do reagente de arilação usado na reação de ari- lação incluem um composto de haleto de arila desejado (tais como, cloropirimidina, dicloropirimidina, fluoropirazina, clorotriazol, clorooxa- diazol, ou clorotiadiazol), e estes reagentes podem ser usados na pre- sença de uma base (tal como, DIPEA).
[00215] O reagente de arilação pode ser usado em cerca de um a cerca de cinco equivalente(s) molar(es) (por exemplo, três equivalen- tes molares) em oposição a 1 mol dos substratos de reação.
[00216] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; hidrocarbone- tos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e clorofór- mio; solventes polares apróticos, tal como, DMSO; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferivelmente em tempera- tura ambiente a temperatura elevada, e particularmente preferivelmen- te em temperatura elevada (tais como, 120 a 130 ºC). (Etapa 3)
[00217] Além disso, similarmente à etapa 4 do esquema de reação acima mencionado 1, o composto intermediário 9 ou o composto in- termediário 8 como um material de partida é submetido a uma reação de fosforamiditação de acordo com um método publicamente conheci- do para preparar um tipo de arila desejado (por exemplo, tipo aromáti- co ou tipo heteroarila) do presente composto.
[00218] Exemplos do reagente de fosforamiditação incluem 2- cianoetil-N,N-di-isopropilclorofosforamidita, e os reagentes podem ser usados na presença de uma base (tais como, trietilamina, DIPEA).
[00219] O reagente de fosforamiditação pode ser usado em cerca de 1 a cerca de 10 equivalente(s) molar(es), e preferivelmente 1 a cer- ca de 5 equivalente(s) molar(es) (tais como, 1 a 3 equivalente(s) mo- lar(es)) em oposição a 1 mol dos substratos de reação.
[00220] Os solventes podem ser quaisquer um a menos que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; hidrocarbone- tos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e clorofór- mio; acetonitrila; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferivelmente a -25 ºC a 60 ºC, e particularmente preferi- velmente a 0 ºC a temperatura ambiente.
[00221] Além disso, entre a etapa (1) acima a etapa (3), uma plura- lidade de etapas (por exemplo, etapa (1) e etapa (2)) pode ser realiza- da sucessivamente.
[00222] Aqui, em qualquer estágio, desde o tempo anterior à etapa 1 acima até o tempo após a etapa 3 acima, um substituinte sobre o anel da base de ácido nucleico pode ser apropriadamente modificado (por exemplo, uma reação de benzoilação ou uma reação de acetila- ção sobre um substituinte amino sobre um anel de citosina), ou os substituintes sobre o anel aromático do grupo arila introduzido podem ser modificados (por exemplo, uma transformação do grupo cloro em um grupo amino), ou ambos destes substituintes podem ser modifica- dos. (Método de preparação alternativo de reação de permuta de base de ácido nucleico)
[00223] Em vez da reação de permuta de base de ácido nucleico descrita na etapa 1, a transformação parcial de base de ácido nucleico pode ser realizada usando uma série de reação como mostrado no seguinte esquema de reação 4. A série de reação pode ser realizada de acordo com o método descrito na literatura (por exemplo, C.H.Kim. et al., J. Med. Chem. 1987, 330, 862).
Esquema de reação 4 Etapa A Etapa B Composto intermediário 9' composto intermediário A composto intermediário B Etapa C composto intermediário C (Etapa A)
[00224] O composto intermediário 9' em que a porção de base de ácido nucleico representa a timina (tais como, o composto intermediá- rio 2 obtido na etapa 2 acima ) como um material de partida é reagido com um reagente de acetilação (tal como, anidrido acético) na presen- ça de uma base (tal como, piridina) para preparar um composto inter- mediário A em que um grupo hidróxi é acilado. Como necessário, uma quantidade catalítica de DMAP pode ser adicionada como um rea- gente de ativação de reação.
[00225] O reagente de acetilação pode ser usado em cerca de 1 a 3 equivalente(s) molar(es) (tal como, cerca de 1,5 equivalente molar) em oposição a 1 mole dos substratos de reação.
[00226] Os solventes podem ser quaisquer um a não ser que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; ou piridina usado as a base). A reação pode prosseguir preferivelmente a 0 ºC a temperatura elevada (tal como, temperatura ambiente). (Etapa B)
[00227] Em seguida, após a porção de timina ser ativada com um Reagente de cloração tal como, cloreto de fosforila, o composto inter- mediário A como um material de partida é reagido com 1,2,4-triazol na presença de uma base (tal como, DIPEA) para preparar um composto intermediário B em que a porção de base de ácido nucleico é substitu- ída por grupo 1,2,4-triazol.
[00228] O 1,2,4-triazol pode ser usado em excesso de equivalentes molares (por exemplo, cerca de cinco a cerca de 20 equivalentes mo- lares, incluindo cerca de 9 a 10 equivalentes molares).
[00229] Os solventes podem ser quaisquer um a não ser que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; hidrocarbone- tos halogenados, tais como, diclorometano, dicloroetano, e clorofór- mio; acetonitrila; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferivelmente a -25 ºC a temperatura ambiente, e particu- larmente preferivelmente a 0 ºC a temperatura ambiente. (Etapa C)
[00230] Além disso, o composto intermediário B como um material de partida é reagido com uma base (tal como, água de amônia) para remover o grupo acetila que é introduzido na etapa A acima, e o grupo 1,2,4-triazol que é modificado na etapa B, para preparar um composto intermediário C em que a porção de base de ácido nucleico é 5- metilcitosina.
[00231] A água de amônia (tal como, 28 % de água de amônia) po- de ser usada em excesso de equivalentes molares em oposição a 1 mole dos substratos de reação.
[00232] Os solventes podem ser quaisquer um a não ser que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF; acetonitrila; ou solventes mistos dos mesmos). A reação pode prosseguir preferi- velmente a 0 ºC a temperatura ambiente, e particularmente preferivel- mente em temperatura ambiente.
[00233] Usando o composto C intermediário obtido como um mate-
rial de partida, como necessário, o substituinte no anel de base de áci- do nucleico é modificado (por exemplo, benzoilação ou acetilação de substituinte de amino do anel citosina), ou o substituinte no anel aro- mático do grupo arila introduzido é modificado (por exemplo, uma transformação de um grupo cloro em um grupo amino), e a seguir, o substituinte é submetido a uma reação de fosforamidação para prepa- rar um tipo de arila desejado (por exemplo, tipo aromático, e tipo hete- roarila) do presente composto. (Método de preparação 1 alternativo para aromatização)
[00234] Além disso, em vez de uma reação de aromatização com um reagente arila como descrito na etapa 2, uma série de reação co- mo mostrado na seguinte reação etapa 5 pode ser usada para uma reação de aromatização. Esquema de reação 5 (Etapa D)
[00235] O material de partida 1 acima mencionado é reagido com n reagebte para se converter em tioureia (tal como, 1,1-tiocarbonila imi- dazol), seguido por tratamento com água de amônia, para preparar um composto intermediário D em que um grupo no átomo de aminonitro- gênio é convertido em uma tioureia.
[00236] O reagente para se converter em tioureia podem ser usado em cerca de 1 a 5 equivalente(s) molar(es), particularmente cerca de 2 equivalentes molares, em oposição a 1 mole dos substratos de reação.
[00237] Os solventes podem ser quaisquer um a não ser que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF). A reação pode prosseguir preferivelmente a 0 ºC a temperatura ambiente (por exemplo, temperatura ambiente). (Etapa E)
[00238] Em seguida, o composto intermediário D como um material de partida é reagido com reagente de metilação (tal como, iodeto de metila) para preparar um composto intermediário tendo porção ou gru- po S-metiado e carboimidado e porção ou grupo carboimidado.
[00239] O reagente de metilação pode ser usado em cerca de 1 a 5 equivalente(s) molar(es), particularmente, 3 equivalentes molares, em oposição a 1 mole dos substratos de reação.
[00240] Os solventes podem ser quaisquer um a não ser que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF). A reação pode prosseguir preferivelmente a 0 ºC a temperatura ambiente, (por exemplo, temperatura ambiente). (Etapa F)
[00241] Além do composto intermediário E como um material de partida ser reagido com um reagente de acetilação (tal como, anidrido acético) na presença de uma base (tal como, piridina) para preparar um composto intermediário F tendo acilação em um grupo carbodiimi- da grupo e um grupo hidróxi. como necessário, uma quantidade cata- lítica de DMAP pode ser adicionado como um reagente de ativação de reação.
[00242] O reagente de acetilação pode ser usado em cerca de 1 a 5 equivalente(s) molar(es) (por exemplo, cerca de 3 equivalente(s) mo-
lar(es)) em oposição a 1 mole dos substratos de reação.
[00243] Os solventes podem ser quaisquer um a não ser que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, éteres, tal como, THF, ou piridina usado como uma base). A reação pode prosseguir preferivelmente a 0ºC a temperatura ambiente, (por exemplo, temperatura ambiental). (Etapa G)
[00244] Além do composto intermediário F como um material de partida ser submetido a uma reação de fechamento de anel com metil hidrazina para preparar um composto intermediário G em que um anel 1,2,4-triazol é formado.
[00245] A metil hidrazina pode ser usada em excesso de equivalen- te molar (por exemplo, cerca de 5 a 20 equivalentes molares (tal como, cerca de 10 equivalentes molares)) em oposição a 1 mole de um subs- trato de reação.
[00246] Os solventes podem ser quaisquer um a não ser que eles afetem a reação adversamente, e a reação pode ser realizada em sol- ventes apropriados (por exemplo, álcoois tal como, etanol). A reação pode prosseguir preferivelmente a 0 ºC a temperatura elevada (por exemplo, temperatura ambiente).
[00247] Usando um composto intermediário G obtido como um ma- terial de partida, como necessário, o substituinte no anel de base de ácido nucleico é modificado (por exemplo, benzoilação ou as outras de substituinte de amino do anel citosina), ou o substituinte no anel aro- mático do grupo arila introduzido é modificado (por exemplo, uma transformação de um grupo cloro em um grupo amino), e a seguir, o substituinte é submetido a uma reação de fosforamidação para prepa- rar um tipo de arila desejado (por exemplo, tipo aromático, e tipo hete- roarila) do presente composto. (Método de preparação de oligômero)
[00248] O presente composto ou sais do mesmo pode ser usado como um material de partida de monômero para a preparação de oli- gonucleotídeo. O oligonucleotídeo pode ser sintetizado submetendo à reação de oligomerização do composto representado pela fórmula ge- ral (I) ou sais do mesmo, como necessário seguido por desproteção do grupo de proteção para grupo amino e o grupo de proteção para grupo hidróxi.
[00249] Por exemplo, a oligomerização não está limitada a qualquer método contanto que ele seja o método que foi geralmente conhecido na química sintética (em particular, síntese de ácido nucleico), e possa ser usado por um método de fosforamidita. O método de fosforamidita pode ser conduzido, por exemplo, de acordo com o método descrito no WO 2014/046212 A1.
[00250] Usando esta oligomerização, oligonucleotídeo contendo um ou mais nucleotídeos representados pela fórmula geral (I) podem ser preparados.
[00251] Isto é, o método para a preparação de oligonucleotídeo re- presentado pela fórmula geral (I') compreende a seguinte etapa. a) a etapa de oligomerização do composto representado pela fórmula geral (I) ou sais do mesmo, se necessário, seguido por desproteção de um grupo de proteção para grupo amino, e um grupo de proteção para grupo hidróxi.
[00252] Além disso, o método para a preparação do composto re- presentado pela fórmula geral (I) ou sais do mesmo pode compreender pelo menos uma das seguintes etapas entre as etapas descritas aqui. a etapa de preparação do Presente composto ou sais do mesmo; a etapa de fosforamididação do composto intermediário 4 acima mencionado 4, 7 ou 9 ou sais do mesmo para preparar um Composto representado pela fórmula geral (I') ou sais do mesmo; e a etapa de preparação de um grupo de proteção para grupo hidróxi no composto intermediário 3 ou 6 para preparar o acima men- cionado composto intermediário 4, 7 ou 9. (Método de preparação de oligômero de fosforotioato)
[00253] Na síntese de oligonucleotídeo por fosforamidação, um agente oxidante é usado em uma reação de conversãode um grupo fosfito em um grupo fosfato. DDTT (((dimetilaminometilideno)amino)- 3H-1,2,4-ditiazazolina-3-ona) ou reagente Beaucage (3H-1,2- benzoditiol-3-ona-1,1-dióxido) é usado em vez do agente oxidante se- paradamente e o agente oxidante usado na reação para obter um oli- gômero de fosforotioato tendo um grupo de proteção em que um áto- mo de oxigênio em P=O do grupo fosfato é substituído por um átomo de enxofre como P=S para formar um grupo tiofosfato.
EXEMPLOS
[00254] A seguir, a presente invenção é também especificamente descrita por exemplos, entretanto, a presente invenção não está limi- tada a isso. A identificação do composto foi realizada por espectro de massa, espectro de massa de cromatografia líquida de alto desempe- nho; LCMS, espectro de RMN, cromatografia líquida de alto desempe-
nho (HPLC) e similares. Em espectro de RMN, para ressonância magnética protonuclear (1H-RMN), um aparato com 400 MHz da fre- quência de ressonância foi usado, e para ressonância magnética nu- clear de fósforo (31P-RMN), um aparato com 161,8 MHz da frequência de ressonância foi usado. Como símolos usados em espectro de RMN, "s" é "singleto", "d" é "dubleto", "dd" é "dupla de dubletot", "t" é "tripleto", "td" é "dupla de tripleto ", "q" é "quarteto", "quin" é "quinteto", "sept" é "septeto", "m" é "multipleto", "br" é "amplo", "brs" é "singleto amplo", "brd" é "dubleto amplo ", "brt" é "tripleto amplo", e "J" é "cons- tante de acoplamento ".
[00255] A estrutura e abreviação de cada ácido nucleico artificial (a seguir, como necessário, descritas por abreviação) é mostrada na se- guinte fórmula estrutural. Estrutura e Abreviação de cada ácido nucleico artificial
Síntese de ALNA[Ms]-T Exemplo 1 Síntese de Composto 2Ta 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-2,4- diona
[00256] A uma solução mista de 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-2,4-diona (1a) (que foi preparada de acordo com o método descrito em WO 2017/047816 A1) (12,35 g, 21,61 mmol) em diclorometano foi adicionado BSA (13 mL, 53,17 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 8 horas. A isso, foram adicionados BSA (5,2 mL, 21 mmol) e TMSOTf (200 μL, 1,0 mmol), e a mistura foi agitada novamente em temperatura ambiente durante 15 horas. À solução de reação foi adicionada água de bicarbonato de sódio a 5% (50 mL), e a mistura foi agitada, e extra- ída com diclorometano. A camada aquosa foi misturada com dicloro- metano (61 mL), e extraída, e a camada orgânica de diclorometano foi combinada. Após o solvente ser evaporado da camada orgânica, o re- síduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofór- mio/metanol, 100/0 a 98/2)) para obter um Composto 2Ta (10,49 g, produção de 75%).
[00257] MS (ESI): m/z = 644 (M+H)+ Exemplo 2 - Síntese de Composto 2Tb 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5- metilsulfonil-7-trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2,4-diona
[00258] A uma solução mista de composto 2Ta (10,19 g, 15,83 mmol) em diclorometano (50 mL) foi adicionado DIPEA (5,4 mL, 31 mmol), e a isso foi adicionado cloreto de mesila (1,4 mL, 18 mmol) sob banho de gelo, e a mistura foi agitada em banho de gelo durante 1,5 horas. À solução de reação foi adicionada água de bicarbonato de só- dio a 5% (20 mL), e a mistura foi agitada, e extraída com diclorometa- no. A camada aquosa foi misturada com diclorometano (20 mL), e ex- traída, e combinada e misturada com a camada orgânica de dicloro- metano. Após o solvente ser evaporado da camada orgânica, o resí- duo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofór- mio/metanol, 100/0 a 98/2)) para obter um Composto 2Tb (6,56 g, pro- dução de 57%).
[00259] MS (ESI): m/z = 720 (M-H)- Exemplo 3 Síntese de Composto 2Tc 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-5- metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-2,4- diona
[00260] A uma solução mista de composto 2Tb (3,02 g, 4,13 mmol) em tetraidrofurano (15 mL) foi adicionado TBAF (1,35 mL, 4,58 mmol, solução de tetraidrofurano a 1 M) em banho de gelo, e a mistura foi agitada durante 30 minutos. À solução de reação foram adicionados solução de cloreto de amônio aquosa a 10% (20 mL) e diclorometano (20 mL), e a mistura foi agitada, e extraída com diclorometano. A ca- mada aquosa foi misturada com diclorometano (20 mL), extraída, e a camada orgânica de diclorometano foi misturada. Após o solvente ser evaporado da camada orgânica, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 98/2) para obter um Composto 2tc (2,47 g, produção de 92 %).
[00261] MS (ESI): m/z = 648 (M-H)- Exemplo 4 Síntese de Composto 2Td 3-[[(1R,4R,6R,7S)-4-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-6-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-metilsulfonil-5-oxa-2-azabiciclo[2,2,1]heptan- 7-il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 1)
[00262] A uma solução do composto 2Tc (2,47 g, 3,80 mmol) em diclorometano (12,5 mL) foram adicionados DIPEA (2,00 mL, 12,0 mmol), e 2-cianoetil N,N-di-isopropilclorofosforamidita (2,10 mL, 9,40 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 5 ho- ras. Em seguida, a isso foram adicionados solução de hidrocarbonato de sódio aquosa a 5% (15 mL) e diclorometano (10 mL) sob resfria- mento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente, e em seguida extraída com diclorometano. A camada aquosa foi extraída com diclo- rometano (10 mL), e combinada e misturada com a camada orgânica de diclorometano. Após o solvente ser evaporado da mistura sob pres- são reduzida, a mistura foi purificada por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 60/40 a 40/60) para obter um Composto 2Td como o presente composto 1 (2,13 g, produção de 66 %).
[00263] MS (ESI): m/z = 850 (M+H)+ 31
[00264] P-RMN (CDCl3) δ: 150,30, 149,12
Síntese de ALNA[Ms]-mC Exemplo 5 Síntese de Composto 2mCc N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida
[00265] A uma solução de suspensão do composto 1a (10,33 g, 18,1 mmol) e N-(5-metil-2-oxo-1H-pirimidin-4-il) benzamida (12,42 g, 54,2 mmol) em solução de tolueno (180 ml) foi adicionado BSA (44 mL, 180 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente du- rante 15 minutos. A isso foi adicionado TMSOTf (0,52 mL, 2,71 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. A solução de reação foi adicionada a uma solução mista de IPE (100 mL), água de bicarbonato de sódio saturado (50 mL) e água (50 mL), e a mistura foi agitada durante 10 minutos, e materiais insolúveis foram removidos através de Celite (TM). A camada aquosa foi removida dos filtrados, e a camada orgânica foi lavada com água (50 mL) e salmoura saturada (50 mL) sucessivamente. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e o solvente foi evaporado. O resí- duo foi solubilizado com diclorometano (90 mL), e a isso, foram adicio- nados trietilamina (5,0 mL, 36,0 mmol) e anidrido metano sulfônico (3.463 mg, 19,9 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambi- ente durante 40 minutos. A isso, foi adicionado anidrido metano sulfô-
nico (944 mg, 5,42 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura am- biente durante 30 minutos. A isso foi adicionado mais anidrido metano sulfônico (944 mg, 5,42 mmol) e trietilamina (1,3 mL, 9,06 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi diluída com acetato de etila (80 mL), e a isso, foram adicio- nados água (40 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (40 mL), e a mistura foi agitada. A camada aquosa foi removida, e a camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL), e em seguida passada através de um separador de fase, e um solvente foi evapora- do, e a mistura resultante foi secada sob vácuo. Um resíduo foi adicio- nado por THF (90 mL) para preparar uma solução, e a isso foi adicio- nado TBAF (0,1 M, solução de THF, 21,7 mL, 21,7 mmol) sob resfria- mento, e a mistura foi agitada sob resfriamento durante 15 minutos. A mistura foi diluída com acetato de etila (90 mL), e a isso, foi adicionada solução de cloreto de amônio aquosa (40 mL) e água (40 mL), e a mis- tura foi agitada. A camada aquosa foi removida e a camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e o solvente foi evapo- rado. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 95/5) para obter um Composto 2mCc (5702 mg, produção sobre três etapas 38 %).
[00266] MS (ESI): m/z = 753 (M+H)+ Exemplo 6 Síntese de Composto 2mCd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 2)
[00267] O composto 2mCd como o presente composto 2 (6809 mg, produção de 72 %) foi obtido do composto 2mCc (8099 mg, 9,89 mmol) similarmente ao Exemplo 4.
[00268] MS(APCI): m/z = 954 (M+H)+
Síntese de ALNA[Ms]-G Exemplo 7 Síntese de Composto 2Ga [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2- metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N-difenilcarbamato
[00269] A uma solução do composto 1a (5040 mg, 8,817 mmol) e uma solução de [2-(2-metilpropanoilamino)-9H-purin-6-il]N,N-difenil carbamato (5400 mg, 12,97 mmol) em 1,2-dicloroetano (24,7 mL) foi adicionado BSA (14,8 mL, 60,46 mmol), e a mistura foi agitada a 64 ºC durante 1 hora. Sucessivamente, a isso foi adicionado TMSOTf (0,167 ml, 0,864 mmol) gradualmente enquanto mantendo a temperatura in- terna a 60 ºC, e a mistura foi agitada durante 1 hora. Após deixar des- cansar para resfriar, a solução de reação foi adicionada gradualmente a uma solução mista de clorofórmio (40 mL) e solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada (40 mL), que foi preparada sepa- radamente, e a mistura foi agitada. Após filtração por sucção de mate- riais insolúveis, os filtrados foram extraídos com acetato de etila (50 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL), e em seguida secada sobre sulfato de sódio. Sucessivamente, após os filtrados serem evaporados sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol,
100/0 a 97/3) para obter um Composto 2Ga (6350 mg, produção de 79%).
[00270] MS (ESI): m/z = 935 (M+H)+ Exemplo 8 Síntese de Composto 2Gb [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5- metilsulfonil-7-trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2- metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N-difenilcarbamato
[00271] A uma solução do composto 2Ga (2370 mg, 2,537 mmol) em diclorometano(24,9 mL) foi adicionada trietilamina (0,692 mL, 4,984 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 5 minutos. Sucessivamente, a isso foi adicionado cloreto de metanos- sulfonila (0,193 mL, 2,488 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agi- tada durante 1 hora. À solução de reação foram adicionados cloreto de metileno (30 mL) e solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquo- sa saturada (30 mL) sob resfriamento, e a mistura foi separada com um funil separatório. A camada orgânica foi lavada com salmoura satu- rada (30 mL), e em seguida secada sobre sulfato de sódio. Sucessi- vamente, após os filtrados serem evaporados sob pressão reduzida, a mistura resultante foi purificada por cromatografia de sílica-gel (hexa- no/acetato de etila, 67/33 a 50/50) para obter um Composto 2Gb (2210 mg, produção de 88 %).
[00272] MS (ESI): m/z = 1013 (M+H)+ Exemplo 9 Síntese de Composto 2Gc [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-5- metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2- metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N-difenilcarbamato
[00273] A uma solução do composto 2Gb (2200 mg, 2,173 mmol) em THF (11 mL) foi adicionado TBAF (2,4 mL, 3,407 mmol) sob resfri- amento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. À solução de reação foram adicionados acetato de etila (30 mL) e solução de cloreto de amônio aquosa (30 mL) sob resfriamento, e a mistura foi filtrada e separada com um funil separatório. A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (30 mL), e em seguida se- cada sobre sulfato de sódio. Sucessivamente, após os filtrados serem evaporados sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 60/40 a 50/50). A fim de remover materiais crus, a mistura foi purificada nova- mente por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 97/3) para obter um Composto 2Gc (1070 mg, produção de 52 %).
[00274] MS (ESI): m/z = 941 (M+H)+ Exemplo 10 Síntese de Composto 2Gd [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 3)
[00275] A uma solução do composto 2Gc (1070 mg, 1,139 mmol) em diclorometano (5,690 mL) foram adicionados DIPEA (0,590 mg, 3,407 mmol) e 2-cianoetil-N,N-di-isopropilclorofosforamidita (0,510 mL, 2,282 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 22 horas. À solução de reação foram adicionados diclorometano (20 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (20 mL) sob resfriamento, e a mistura foi separada com um funil separató- rio. A camada aquosa foi removida, e a camada orgânica foi passada através de um separador de fase. Após os filtrados serem evaporados sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromato- grafia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 50/50 a 40/60) para obter um Composto 2Gd como o presente composto 3 (548 mg, produção de 42 %).
[00276] MS (ESI): m/z = 1141 (M+H)+
Síntese de ALNA[Ms]-A Exemplo 11 Síntese de Composto 2Ac N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-purin-6- il]benzamida
[00277] A uma suspensão do composto 1a (10,0 g, 17,6 mmol) e N- (9H-purin-6-il)benzamida (5,04 g, 21,1 mmol) em tolueno (176 mL) foi adicionado gota a gota BSA (30 mL, 123 mmol), e a mistura foi aque- cida para 60 ºC, e agitada durante 30 minutos. A isso foi adicionado TMSOTf (1,03 mL, 5,34 mmol) e a mistura foi agitada a 60 ºC durante 15 minutos. A solução de reação foi adicionada à solução de mistura de IPE (100 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (100 mL) enquanto agitando sob resfriamento, e a mistura foi agitada durante 20 minutos, e os materiais insolúveis foram filtrados. Após o resíduo filtra- do ser lavado com Et2O (20 mL) duas vezes, os filtrados foram sepa- rados com um funil separatório, e lavados com salmoura saturada (50 mL). Após a mistura ser passada através de um separador de fase, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi solubiliza- do com diclorometano (24,9 mL), e a isso, foram adicionados piridina (4,57 mL, 56,5 mmol) e anidrido metano sulfônico (3614 mg, 20,75 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. A isso, foram adicionados solução de carbonato de hidrogê-
nio de sódio aquosa saturada (50 mL) e água (50 mL), e a mistura foi agitada, e separada com um funil separatório. Após a camada orgâni- ca ser lavada com salmoura saturada (50 mL), a mistura foi passada através de um separador de fase, e o solvente foi evaporado sob pres- são reduzida. O resíduo foi adicionado por THF (88 mL) para preparar uma solução, e a isso foi adicionado TBAF (solução a 1 M de THF, 21,1 mL, 21,1 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada sob res- friamento durante 30 minutos. A mistura foi diluída com acetato de etila (80 mL), e a isso, foram adicionados solução de cloreto de amônio aquosa (50 mL) e água (50 mL), e a mistura foi agitada em temperatu- ra ambiente. A mistura foi separada com um funil separatório, e a ca- mada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL), e em se- guida passada através de um separador de fase, e o solvente foi eva- porado. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica- gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 95/5) para um Composto 2Ac (10,6 g, produção sobre três etapas 75 %).
[00278] MS (ESI): m/z = 763 (M+H)+ Exemplo 12 Síntese de Composto 2Ad N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-purin-6-il]benzamida (Presente composto 4)
[00279] A uma solução do composto 2Ac (5,60 mg, 7,01 mmol em diclorometano (40 mL) foram adicionados DIPEA (4,8 mL, 28,0 mmol) e 2-cianoetil-N,N-di-isopropilclorofosforamidita (4,7 mL, 21,0 mmol) em resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. A isso foi adicionado etanol (1,2 mL, 21,0 mmol) sob resfria- mento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 5 mi- nutos. A mistura foi colocada novamente sob resfriamento, e a isso, foram adicionados água de bicarbonato de sódio saturado (20 mL), e salmoura saturada (20 mL), e a mistura foi agitada, e a camada orgâ- nica foi passada através de um separador de fase. Após os filtrados serem evaporados sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi puri- ficado por cromatografia de sílica-gel(hexano/acetato de etila, 67/33 a 10/90) para obter um Composto 2Ad como o presente composto 4 (5,44 g, produção de 77 %).
[00280] MS (ESI): m/z = 964 (M+H)+ Síntese de ALNA[Bs]-T Exemplo 13 Síntese de Composto 3Tb 1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-7-trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]- 5-metil-pirimidin-2,4-diona
[00281] Um composto 2Ta (1,00 g, 1,56 mmol) foi azeotropado com tolueno. Ao resíduo foram adicionados diclorometano (5 mL) e trietila- mina (0,43 mL, 3,1 mmol), e a mistura foi solubilizada completamente. A solução de mistura foi resfriada sob resfriamento, e a isso foi adicio- nado cloreto de benzensufonila (0,21 mL, 1,6 mmol), e a mistura foi agitada sob resfriamento durante 4 horas. À solução de reação foi adicionada solução de carbonato de potássio a 5% (20 mL), e a mistu- ra foi agitada, e extraída com diclorometano (5 mL). A camada aquosa foi misturada com diclorometano (5 mL), extraída, e os extratos foram combinados e misturados com a camada orgânica de diclorometano. Após o solvente ser evaporado da camada orgânica, o resíduo resul-
tante foi purificado por cromatografia de sílica-gel(hexano/acetato de etila, 40/60 a 20/80) para obter um Composto 3Tb (0,78 g, produção de 64 %).
[00282] MS (ESI): m/z = 782 (M-H)- Exemplo 14 Síntese de Composto 3Tc 1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2,4-diona
[00283] Um composto 3Tc (0,59 g, produção de 84 %) foi sintetiza- do do composto 3Tb (0,78 g, 0,99 mmol) similarmente ao Exemplo 3.
[00284] MS (ESI): m/z = 710 (M-H)- Exemplo 15 Síntese de Composto 3Td 3-[[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopronilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 5)
[00285] A uma solução do composto 3Tc (599 mg, 0,765 mmol) em acetonitrila (3 mL) foram adicionados tetrazolida de di-isopropilamônio (171 mg, 0,996 mmol), 2-cianoetil N,N,N',N'- tetraisopropilfosfordiamidita (0,36 mL, 1,1 mmol), e a mistura foi agita- da em temperatura ambiente durante 19 horas. À solução de reação foram adicionados acetato de etila (10 mL) e água (5 mL), e após a mistura ser agitada, a camada aquosa foi separada. À camada aquosa foi adicionado acetato de etila (10 mL), e após a mistura ser misturada, a camada orgânica foi separada. A camada orgânica foi combinada e misturada com camada orgânica acima, e a mistura foi concentrada a 40 ºC sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 67/33 a 10/90) pa- ra obter um Composto 3Td como o presente composto 5 (0,65 g, pro- dução de 86 %).
[00286] MS (ESI): m/z = 912 (M+H)+ 31
[00287] P-RMN (CDCl3) δ: 149,68, 149,22 Síntese de ALNA[Bs]-mC Exemplo 16 Síntese de Composto 3Cb N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-7-trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]- 5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00288] Um composto 3mCb (0,85 g, produção de 71%) foi sinteti- zado do composto 1b (1,00 g, 1,34 mmol) que foi sintetizado de acordo com o método descrito em WO 2017/047816 A1 similarmente ao Exemplo 13.
[00289] MS (ESI): m/z = 887 (M+H)+ Exemplo 17 Síntese de Composto 3mCb N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil- 2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00290] Um composto 3mCc (0,78 g, produção de 99%) foi sinteti- zado do composto 3mCb (0,85 g, 0,96 mmol) similarmente ao Exemplo
14.
[00291] MS (ESI): m/z = 813 (M+H)+ Exemplo 18 Síntese de Composto 3mCd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4-metoxifenil)-
fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil)óxi-2-oxa- 5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 6)
[00292] Um composto 3mCd (0,53 g, produção de 55%) como o presente composto 6 foi sintetizado do composto 3mCc (0,78 g, 0,89 mmol) similarmente ao Exemplo 15.
[00293] MS (ESI): m/z = 1015 (M+H)+ 31
[00294] P-RMN (CDCl3) δ: 149,94, 149,34 Síntese de ALNA[mU]-T Exemplo 19 Síntese de Composto 4Tc (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N- metil-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00295] Um composto 1a (1,20 g, 2,10 mmol) foi azeotropado com tolueno, e à solução de mistura do resíduo em tetraidrofurano (6 mL) foi adicionado N-di-isopropiletilamina (0,61 mL, 3,5 mmol), e a isso foi adicionada uma solução de cloreto de N-metilcarbamoíla (0,20 g, 2,2 mmol) em tetraidrofurano (1 mL) em banho de gelo, e a mistura foi agi- tada durante 3 horas em banho de gelo. À solução de reação foram adicionados água de bicarbonato de sódio a 5% (20 mL) e acetato de etila (10 mL), e a mistura foi agitada, e a mistura foi extraída com ace- tato de etila. A camada aquosa (10 mL) foi extraída com acetato de etila (10 mL) duas vezes, e os extratos foram combinados e mistura- dos com a camada orgânica. Após o solvente ser evaporado da cama- da orgânica, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 97/3) para obter um Composto
4Tc (1,28 g, produção de 97 %).
[00296] MS (ESI): m/z = 627 (M-H)- Exemplo 20 Síntese de Composto 4Td (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)- 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 7)
[00297] Um composto 4Td (0,56 g, produção de 37%) como o pre- sente composto 7 foi sintetizado do composto 4Tc (1,16 g, 1,8 mmol) similarmente ao Exemplo 15.
[00298] MS (ESI): m/z = 828 (M-H)- 31
[00299] P-RMN (CDCl3) δ: 149,31, 147,44 Síntese de ALNA[mU]-mC Exemplo 21 Síntese de Composto 4mCa 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-pirimidin-2-ona
[00300] A uma solução mista do composto 1a (105,0 g, 184 mmol), 5-metilcitosina (69,0 g, 551 mmol) e 1,2-dicloroetano (918 mL) foi adi- cionado gota a gota BSA (584 mL, 2390 mmol) durante 18 minutos. A mistura foi aquecida para 60 ºC, e agitada durante 20 minutos. Após uma temperatura interna ser resfriada para 19,5 ºC sob resfriamento, a isso foi adicionado TMSOTf (10 mL, 55,2 mmol), e a mistura foi aque-
cida para 60 ºC. Após a mistura ser agitada durante 40 minutos, a so- lução de reação foi resfriada sob resfriamento, e a isso foi adicionada gota a gota solução de hidrocarbonato de sódio aquosa a 5% (525 mL). Em seguida, a isso, foram adicionados clorofórmio (1050 mL) e solução de cloreto de sódio a 15% aquosa (525 mL). Após a suspen- são resultante ser filtrada através de Celite, o resíduo filtrado foi lavado com clorofórmio (525 mL) para obter um resíduo 1 e um filtrado 1. Ao resíduo 1 foram adicionados acetato de etila (2100 mL) e água (2100 mL), e a mistura foi agitada durante 1 hora. Após a mistura ser filtrada através de Celite, o resíduo foi lavado com acetato de etila (1050 mL) para obter os filtrados 2. Os filtrados 2 foram separados com um funil separatório, e a camada orgânica lavada com água (525 mL) duas ve- zes. Por outro lado, os filtrados 1 foram separados com um funil sepa- ratório, e a camada aquosa foi extraída com clorofórmio (525 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, e lavadas com água 1.050 mL duas vezes. A camada orgânica resultante foi concentrada sob pres- são reduzida para obter sólidos amarelos pálidos (125,6 g). A isso foi adicionado THF (550 mL), e a mistura foi agitada, e a isso foi adicio- nada solução de TBAF/THF a 1 M (276 mL, 276 mmol). Após a mistu- ra ser agitada em temperatura ambiente durante 3 horas, a solução de reação foi interrompida bruscamente com água (550 mL), e a isso foi adicionado clorofórmio (550 mL), e a mistura foi separada com um funil separatório. A camada aquosa foi extraída com clorofórmio (275 mL) novamente, e as camadas orgânicas foram combinadas. A camada orgânica foi lavada com água, e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de síli- ca-gel (clorofórmio/metanol, 20/1 a 4/1) para obter um Composto 4mCa (69,62 g, produção de 62 %).
[00301] MS (ESI): m/z = 593(M+Na)+ (M+Na)+ Exemplo 22 Síntese de Composto 4mCb
(1R,3R,4R,7S)-3-(4-amino-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N-metil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00302] O composto 4mCa (1,00 g, 1,75 mmol) foi azeotropado com tolueno, e à solução de mistura do resíduo em tetraidrofurano (5 mL) foi adicionada trietilamina (0,49 mL, 3,5 mmol), e a isso foi adicionada uma solução de cloreto de N-metilcarbamoíla (0,17 g, 1,8 mmol) em tetraidrofurano (1 mL) sob resfriamento, e a mistura foi agitada durante 3 horas em banho de gelo. À solução de reação foram adicionados água de torneira (15 mL), acetato de etila (1 mL) e clorofórmio (15 mL), e a mistura foi agitada, e extraída com solvente orgânico. A camada aquosa foi extraída com clorofórmio (5 mL), e as camadas orgânicas foram combinadas e misturadas. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, e os sólidos foram filtrados. Os solventes foram evaporados dos filtrados para obter um Composto 4mCb (1,18 g, quant. de produção). O resíduo foi usado para a reação seguinte sem purificação.
[00303] MS (ESI): m/z = 627 (M-H)- Exemplo 23 Síntese de Composto 4mCc (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N-metil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00304] O composto 4mCb (1,18 g) foi azeotropado com tolueno, e a uma solução de mistura do resíduo em tetraidrofurano (5 mL) foram adicionados anidrido benzoico (0,51 g, 2,27 mmol) e metanol (0,01 mL, 0,25 mmol) em temperatura ambiente, e a mistura foi agitada a 70 ºC como uma temperatura do banho externo durante 4 horas. A isso, fo- ram adicionados água de bicarbonato de sódio a 5%(10 mL) e acetato de etila (10 mL), e a mistura foi agitada, e extraída com solvente(s) or- gânico(s). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (15 mL),
e as camadas orgânicas foram combinadas e misturadas. Após o sol- vente ser evaporado da camada orgânica, o resíduo resultante foi puri- ficado por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 97/3) para obter um Composto 4mCc (0,99 g, produção de 77 %).
[00305] MS (ESI): m/z = 731 (M-H)- Exemplo 24 Síntese de Composto 4mCd (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carboxamida (Presente composto 8)
[00306] Um composto 4mCd (0,96 g, produção de 77 %) como o presente composto 8 foi sintetizado do composto 4mCc (0,98 g, 1,34 mmol) similarmente ao Exemplo 15.
[00307] MS (ESI): m/z = 933 (M+H)+ Síntese de ALNA[mU]-G Exemplo 25 Síntese de Composto 4Ga [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2- metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N-difenilcarbamato
[00308] A uma suspensão do composto 1a (30,5 g, 53,4 mmol) e [2- (2-metilpropanoilamino)-9H-purin-6-il]N,N-difenilcarbamato (26,7 g,
64,1 mmol) em tolueno (267 mL) foi adicionado gota a gota BSA (91 mL, 372 mmol) durante cerca de 20 minutos, e a mistura foi aquecida para 60 ºC, e agitada durante 5 minutos. A isso foi adicionado mais tolueno (100 mL), e a mistura foi agitada a 60 ºC durante mais 10 mi- nutos. A isso foi adicionado TMSOTf (1,03 mL, 5,34 mmol) e a mistura foi agitada a 60 ºC durante 20 minutos. A solução de reação foi adicio- nada a uma solução de mistura de IPE (100 mL), água de bicarbonato de sódio saturado (50 mL) e água (50 mL) enquanto agitando sob res- friamento, e a mistura foi agitada durante 2 horas, e materiais insolú- veis foram filtrados. Após o resíduo ser lavado com Et2O (20 mL) duas vezes, o filtrado foi separado com um funil separatório, e a camada orgânica foi lavada com água (50 mL) e salmoura saturada (50 mL) sucessivamente. A mistura foi passada através de um separador de fase, concentrada sob pressão reduzida, e secada sob vácuo para Composto 4Ga como produto bruto (48,67 g).
[00309] MS (ESI): m/z = 954 (M+H)+ Exemplo 26 Síntese de Composto 4Gc [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi-N- metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2- metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N-difenilcarbamato
[00310] O composto 4Ga (17,4 g, 18,6 mmol) foi solubilizado por THF (100 mL), e a isso, foram adicionados DIPEA (4,87 mL, 28,0 mmol), e cloreto de N-metilcarbamoíla (1830 mg, 19,6 mmol) sob res- friamento, e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A isso, foram adicionados água de bicarbonato de sódio saturado (100 mL) e aceta- to de etila (100 mL) sucessivamente, e a mistura foi agitada em tempe- ratura ambiente durante 5 minutos. Após a mistura ser separada com um funil separatório, a camada orgânica foi lavada com água (50 mL) e salmoura saturada (50 mL) sucessivamente, e a mistura foi passada através de um separador de fase, e o solvente foi evaporado, e secado sob vácuo. O resíduo foi adicionado por THF (90 mL) para preparar uma solução, e a isso foi adicionado TBAF (solução a 1 M de THF, 4,54 mL, 4,54 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada sob res- friamento durante 20 minutos. A mistura foi diluída com acetato de etila (100 mL), e a isso, foram adicionados solução de cloreto de amônio aquosa (50 mL) e água (50 mL), e a mistura foi agitada em temperatu- ra ambiente durante 5 minutos. A mistura foi separada com um funil separatório, e a camada orgânica foi passada através de um separa- dor de fase e os solventes foram evaporados. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel(clorofórmio/metanol, 100/0 a 95/5) para obter um Composto 4Gc (9030 mg, produção sobre três etapas 54 %).
[00311] MS (ESI): m/z = 919 (M+H)+ Exemplo 27 Síntese de Composto 4Gd [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(metilcarbamoil)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 9)
[00312] Um composto 4Dc como o presente composto 9 (8700 mg, produção de 79 %) foi sintetizado do composto 4Gc (9020 mg, 9,82 mmol) similarmente ao Exemplo 12.
[00313] MS (ESI): m/z = 1197 (M+H)+ Síntese de ALNA[mU]-A
Exemplo 28 Síntese de Composto 4Aa N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida
[00314] A uma suspensão do composto 1a (30,0 g, 52,5 mmol) e N- (9H-purin-6-il)benzamida (15,0 g, 62,7 mmol) em tolueno (500 mL) foi adicionado gota a gota BSA (90 mL, 368 mmol), e a mistura foi aque- cida para 80 ºC, e agitada durante 20 minutos. A isso foi adicionado TMSOTf (1,0 mL, 5,17 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada a 60 ºC durante 20 minutos. A uma solução mista de IPE (200 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (200 mL) foi adicionada a solu- ção de reação sob resfriamento enquanto agitando, e a mistura foi agi- tada durante 20 minutos, e os materiais insolúveis foram filtrados. Após os resíduos serem lavados com Et2O (40 mL) duas vezes, os filtrados foram separados com um funil separatório, e lavados com salmoura saturada. Após a camada orgânica ser secada sobre sulfato de sódio, os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida, e secados sob vácuo para obter um Composto 4Aa como um produto bruto (40,5 g).
[00315] MS (ESI): m/z = 757 (M+H)+ Exemplo 29 Síntese de Composto 4Ab (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1[[bis(4-metoxifenil)-
fenilmetóxi]metil]-N-metil-7-trimetilsililóxi-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00316] O produto bruto 4Aa (8,20 g) foi solubilizado por THF (87 mL), e a isso, foram adicionados DIPEA (3,00 mL, 17,2 mmol), e clore- to de N-metil carbamoíla (970 mg, 10,4 mmol) sucessivamente em temperatura ambiente, e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A isso, foram adicionados acetato de etila (100 mL), água de bicarbonato de sódio saturado (50 mL) e água (50 mL), e a mistura foi separada com um funil separatório, e a camada orgânica foi em seguida lavada com salmoura saturada (50 mL), e passada através de um separador de fase e os solventes foram evaporados, e secados sob vácuo para obter um produto bruto 4Ab (8,70 g).
[00317] MS (ESI): m/z = 813 (M-H)- Exemplo 30 Síntese de Composto 4Ac (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1[[bis(4- metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N-metil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00318] O produto bruto 4Ab (8,00 g) foi adicionado por THF (100 mL) para preparar uma solução, e a isso foi adicionado TBAF (solução a 1 M de THF, 5,00 mL, 5,00 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada sob resfriamento durante 1 hora. A mistura foi diluída com ace- tato de etila (80 mL), e a isso, foram adicionados solução de cloreto de amônio aquosa (50 mL), e água (50 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente. A mistura foi separada com um funil separató- rio, a camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL), e passada através de um separador de fase, e os solventes foram eva- porados. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica- gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 97/3) para obter um Composto 4Ac (6100 mg, produção sobre três etapas 84 %).
[00319] MS (ESI): m/z = 742 (M+H)+
Exemplo 31 Síntese de Composto 4Ad (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carboxamida (Presente composto 10)
[00320] Um composto 4Ad como o presente composto 10 (3830 mg, produção de 48 %) foi obtido do composto 4Ac (6100 mg, 8,20 mmol) similarmente ao Exemplo 12.
[00321] MS (APCI): m/z = 942 (M+H)+ Síntese de ALNA[ipU]-T Exemplo 32 Síntese de Composto 5Tc (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N- isopropil-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00322] A uma solução do composto 1a (1500 mg, 2,624 mmol) em diclorometano (26 mL) foi adicionado 2-isocianatopropano (0,27 mL, 2,7 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A isso, foram adicionados uma solução mista de acetato de etila (10 mL) e solução de bicarbonato saturada (20 mL), e a mistura foi separada com um funil separatório, e a camada aquosa foi em seguida extraída com acetato de etila 10 mL duas vezes, e a camada orgânica combinada foi lavada com salmoura saturada 10 mL. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, e filtra- da, e os solventes foram em seguida evaporados. A mistura foi purifi- cada por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 50/50 a 0/100) para obter um Composto 5tc (1904 mg, quant. de produção).
[00323] MS (ESI): m/z = 656 (M-H)- Exemplo 33 Síntese de Composto 5Td (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin- 1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente com- posto 11)
[00324] Um composto 5td como o presente composto 11 (1272,9 mg, produção de 52 %) foi obtido do composto 5Tc (2020 mg, 2,85 mmol) similarmente ao Exemplo 4.
[00325] MS (ESI): m/z = 855 (M-H)- Síntese de ALNA[ipU]-mC Exemplo 34 Síntese de Composto 5mCc (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N-isopropil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00326] Um composto 5mCc (1168 mg, produção de 93 %) foi obti- do do composto 1c (1300 mg, 1,657 mmol) que foi sintetizado de acor- do com o método descrito em WO 2017/047816 A1.
[00327] MS (ESI): m/z = 761 (M+H)+ Exemplo 35 Síntese de Composto 5mCd (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 12)
[00328] Um composto 5mCd como o presente composto 12 (1002,8 mg, produção de 75 %) foi obtido do composto 5mCc (1168 mg, 1,137 mmol) similarmente ao Exemplo 4.
[00329] MS (ESI): m/z = 961 (M+H)+ Síntese de ALNA[ipU]-G Exemplo 36 Síntese de Composto 5Gc N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi- 5-(isopropilcarbamoil)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2- metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N-difenilcarbamato
[00330] A uma solução do composto 1d que foi sintetizado de acor- do com o método descrito em exemplos de trabalho de WO 2017/047816 A1 (2,42 g, 2,81 mmol) em diclorometano (28 mL) foi adicionado isocianato de isopropila (0,31 mL, 3,09 mmol) sob resfria- mento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante três horas. À solução de reação foi adicionada água de bicarbonato de só- dio saturado, e a mistura foi agitada, passada através de um separa- dor de fase, e os solventes foram em seguida evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 50/50 a 20/80) para obter um Composto 5Gc (1,41 g, produção de 53 %).
[00331] MS (ESI): m/z = 948 (M+H)+ Exemplo 37 Síntese de Composto 5Gd [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(isopropilcarbamoil)-2-oxa- 5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato (Presente composto 13)
[00332] Um composto 5Gd como o presente composto 13 (1,20 g, produção de 70 %) foi obtido do composto 5Gc (1,41 g, 1,49 mmol)
similarmente ao Exemplo 4.
[00333] MS (ESI): m/z = 1148 (M+H)+ 31
[00334] P-RMN (CDCl3) δ: 149,42, 149,39 Síntese de ALNA[ipU]-A Exemplo 38 Síntese de Composto 5Ac (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N-isopropil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-carboxamida
[00335] A uma suspensão do composto 1a (10,0 g, 17,5 mmol) e N- (9H-purin-6-il)benzamida (5,0 g, 21,0 mmol) em tolueno (175 mL) foi adicionado gota a gota BSA (30 mL, 122 mmol), e a mistura foi aque- cida para 60 ºC e agitada durante 10 minutos, e a isso foi adicionado TMSOTf (0,34 mL, 1,8 mmol), e a mistura foi agitada a 60 ºC durante 15 minutos. A solução de reação foi adicionada a uma solução mista do IPE (100 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (100 mL) sob resfriamento enquanto agitando, e a mistura foi agitada durante 20 minutos, e os materiais insolúveis foram filtrados. Após o resíduo filtra- do ser lavado com Et2O (10 mL), os filtrados foram separados com um funil separatório, e lavados com salmoura saturada. A camada orgâni- ca foi secada sobre sulfato de sódio, e os materiais insolúveis foram em seguida filtrados, e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi solubilizado por diclorometano (162 mL), e a isso foi adicionado isocianato de isopropila (1,8 mL, 18 mmol) em temperatura ambiente, e a mistura foi agitada durante 60 minutos. A isso, foram adicionados acetato de etila (100 mL), água de bicarbonato de sódio saturado (50 mL) e água (50 mL), e a mistura foi separada com um funil separatório, e a camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL), seca- da sobre sulfato de sódio, filtrada, e os solventes foram em seguida evaporados. O resíduo foi adicionado por THF (162 mL) para preparar uma solução, e a isso foi adicionado TBAF (solução a 1 M de THF, 2,39 mL, 8,11 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em tem- peratura ambiente durante 24 horas. A mistura foi diluída com acetato de etila (80 mL), e a isso, foram adicionados solução de cloreto de amônio aquosa (50 mL) e água (50 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente. A mistura foi separada com um funil separató- rio, e a camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL), e em seguida secada sobre sulfato de sódio, filtrada, e os solventes fo- ram evaporados. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 50/50 a 0/100) para obter um Composto 5Ac (10,1 g, produção sobre três etapas 77 %).
[00336] MS (ESI): m/z = 770 (M+H)+ Exemplo 39 Síntese de Composto 5Ad (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N- isopropil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 14)
[00337] Um composto 5d como o presente composto 14 (4,6 g, pro- dução de 51 %) foi obtido do composto 5c (7,0 g, 9,09 mmol) similar- mente ao Exemplo 4.
[00338] MS (ESI): m/z = 970 (M+H)+ 31
[00339] P-RMN (CDCl3) δ: 149,4 Síntese de ALNA[dmU]-T
Exemplo 40 Síntese de Composto 6Tc (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N,N- dimetil-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00340] A uma solução do composto 1a (1512 mg, 2,645 mmol) em tetraidrofurano (26 mL) foi adicionado di-isopropiletilamina (0,483 mL, 2,773 mmol) e a mistura foi resfriada sob resfriamento, e a isso foi adi- cionado cloreto de N,N-dimetil carbamoíla (0,255 mL, 2,77 mmol). A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente, e a isso foi em se- guida adicionado N,N-dimetil formamida (1 mL, 12,9 mmol), e a mistu- ra foi agitada durante 4 horas. A isso foi adicionada uma solução mista de acetato de etila (10 mL) e água de bicarbonato saturada (20 mL), e a mistura foi agitada, e a mistura foi separada com um funil separató- rio, e a camada aquosa foi em seguida extraída com acetato de etila 10 mL duas vezes, e as camadas orgânicas foram combinadas, e as camadas orgânicas combinadas foram em seguida lavadas com sal- moura saturada 10 mL. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e os solventes foram evaporados. A mistura foi purificada por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 50/50 a 0/100) para obter um Composto 6Tc1 (1705 mg, quant. de produção).
[00341] MS (ESI): m/z = 642 (M-H)- Exemplo 41 Síntese de composto 6Td (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi- (di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N,N-dimetil-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin- 1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente com-
posto 15)
[00342] Um composto 6Td como o presente composto 15 (1565 mg, produção de 68 %) foi obtido do composto 6Tc (1758 mg, 2,735 mmol) similarmente ao Exemplo 4.
[00343] MS (ESI): m/z = 842 (M-H)- Síntese de ALNA[dmU]-mC Exemplo 42 Síntese de Composto 6mCc (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-N,N-dimetil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida
[00344] A uma solução do composto 1c (1300 mg, 1,657 mmol) em tetraidrofurano (16,6 mL) foi adicionado N,N-di-isopropil etil amina (0,317 mL, 1,820 mmol), e a mistura foi resfriada sob resfriamento, e a isso foi adicionado cloreto de N,N-dimetil carbamoíla (0,168 mL, 1,83 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 10 minutos. Após a mistura ser aquecida sob refluxo durante 2 horas, a isso foi adicionada uma solução mista de acetato de etila (10 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (20 mL) em temperatura ambi- ente, e a mistura foi separada com um funil separatório, a camada aquosa foi extraída com acetato de etila 10 mL duas vezes, e as ca- madas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada 10 mL. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, e filtrada, e os solventes foram em seguida evaporados. A mistura foi purificada por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 70/30 a 30/70) para obter um Composto 6mCc (1705 mg, produção de 79 %).
[00345] MS (ESI): m/z = 747 (M+H)+ Exemplo 43 Síntese de Composto 6mCd (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N,N-dimetil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida (Presente composto 16)
[00346] Um composto 6mCd como o presente composto 16 (936,5 mg, produção de 76 %) foi obtido do composto 6mCc (1019 mg, 1,312 mmol) similarmente ao Exemplo 4.
[00347] MS (ESI): m/z = 947 (M+H)+ Síntese de ALNA[2Pim]-T Exemplo 44 Síntese de Composto 7Tc 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-5- pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-2,4- diona
[00348] Uma mistura do composto 1a (2,00 g, 3,50 mmol), 2- cloropirimidina (1,20 g, 10,5 mmol), DIPEA (3,05 mL, 17,5 mmol), e DMSO (17,5 mL) foi agitada a 130 ºC sob atmosfera de nitrogênio du- rante 6 horas. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolú- veis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados sob pressão re- duzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2:clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 7Tc (1,74 g, produção de 77 %).
[00349] HRMS (MALDI): valor calculado como C36H35N5O7[M+Na]+:
672,2429, valor medido: 672,2427 Exemplo 45 Síntese de Composto 7Td 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil2,4- dioxo-pirimidin-1-il)-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7- il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 17)
[00350] A uma mistura do composto 7Tc (1,73 g, 2,66 mmol), diclo- rometano (13 mL), e DIPEA (1,39 mL, 7,98 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropil clorofosforoamidita (1,19 mL, 5,32 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob at- mosfera de nitrogênio durante a noite. A solução de carbonato de hidro- gênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 60/40 a 10/90, Diol: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80, NH: clorofórmio/metanol= 100/0 a 95/5) para obter um Composto 7Td como o presente composto 17 (1,53 g, produção de 68 %).
[00351] HRMS (FAB): valor calculado como C45H52N7O8P [M+H]+: 850,3693, valor medido: 850,3699 31
[00352] P-RMN (CDCl3) δ: 148,72, 148,83 Síntese de ALNA[2Pim]-mC
Exemplo 46 Síntese de Composto 7mCa [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil-2,4- dioxo-pirimidin-1-il)-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7- il]acetato
[00353] A uma mistura do composto 7Ta (3,68 g, 5,67 mmol), DMAP (69,3 mg, 0,567 mmol), e piridina (28 mL) foi adicionado anidri- do acético (0,804 mL, 8,51 mmol), e a mistura foi agitada em tempera- tura ambiente durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidro- gênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A camada or- gânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis são filtrados, e concentrados sob pressão reduzida. Piridina foi azeotropada com acetato de etila, e a mistura foi triturada com éter di-isopropílico para obter o composto 7mCa (3,49 g, produção de 89 %).
[00354] HRMS (FAB): valor calculado como C38H38N5O8 [M+H]+: 692,2720, valor medido: 692,2713 Exemplo 47 Síntese de Composto 7mCb [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-3-[5-metil-2- oxo-4-(1,2,4-triazol-1-il)pirimidin-1-il]-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00355] A uma mistura do composto 7mCa (3,46 g, 5,00 mmol), 1,2,4-triazol (3,11 g, 45,0 mmol), DIPEA (8,71 mL, 50,0 mmol) e ace- tonitrila (50 mL) foi adicionado cloreto de fosforila (0,792 mL, 8,50 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambi- ente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura satu- rada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidro- so, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram con-
centrados sob pressão reduzida. A mistura foi triturada com éter di- isopropílico para obter um Composto 7mCb1 (3,40 g, produção de 92 %).
[00356] HRMS (FAB): valor calculado como C40H38N8O7 [M+H]+: 743,2942, valor medido: 743,2945 Exemplo 48 Síntese de Composto 7mCc 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- hidróxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2-ona
[00357] A uma mistura do composto 7mCb (3,40 g, 4,58 mmol) e acetonitrila (46 mL) foi adicionada água de amônia a 28% (31 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 dias. Água foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofór- mio. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidro- so, e os materiais insolúveis foram filtrados, e concentrados sob pres- são reduzida. A mistura foi triturada com éter di-isopropílico e peque- nas quantidades de acetato de etila para obter um Composto 7mCc (2,65 g, produção de 89 %).
[00358] HRMS (FAB): valor calculado como C36H36N6O6 [M+H]+: 649,2775, valor medido: 649,2766 Exemplo 49 Síntese de Composto 7mCd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi- 5-pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida
[00359] A uma mistura do composto 7mCc (2,62 g, 4,04 mmol), e DMF (20 mL) foi adicionado anidrido benzoico (959 mg, 4,24 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de rea- ção, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, água, e salmoura saturada. A camada orgâni-
ca foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, os materiais insolú- veis foram filtrados, e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna(SiO2:clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter o composto 7mCd (1,42 g, produção de 47 %).
[00360] HRMS (FAB): valor calculado como C43H40N6O7 [M+H]+: 753,3037, valor medido: 753,3035 Exemplo 50 Síntese de Composto 7mCe N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 18)
[00361] A uma mistura do composto 7mCd (1,40 g, 1,86 mmol), di- clorometano (9 mL), e DIPEA (0,972 mL, 5,58 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita di- isopropilclorofosforamidita (0,830 mL, 3,72 mmol), e a mistura foi agi- tada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. À solução de reação foi adicionada solução de carbonato de hi- drogênio de sódio aquosa saturada, e a mistura foi extraída com cloro- fórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2:hexano/acetato de etila = 80/20 a 30/70, NH: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 7mCe como o presente composto 18 (1,01 g, produção de 57 %).
[00362] HRMS (FAB): valor calculado como C52H57N8O8P [M+Na]+: 975,3935, valor medido: 975,3931 : 31
[00363] P-RMN (CDCl3) δ: 149,17, 149,23 Síntese de ALNA[2Pim]-G
Exemplo 51 Síntese de Composto 7Gc N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-5- pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]- N,N-dimetil-formamidina
[00364] A uma solução do composto 1d (3,00 g, 3,50 mmol) em me- tanol (20 mL) e THF (20 mL) foi adicionada água de amônia a 28% (40 mL). A isso, foram adicionados metanol (20 mL) e THF (20 mL), e a mistura foi deixada descansar em temperatura ambiente durante 16 horas. A isso foi adicionada uma solução de metil amina a 40 % em metanol (40 mL), e a mistura foi deixada descansar em temperatura ambiente durante 4 horas. Após os solventes serem evaporados, o resíduo foi azeotropado com tolueno, e secado sob pressão reduzida. O resíduo foi solubilizado com DMSO (35 mL), e a isso, foram adicio- nados DIPEA (4,8 mL, 28,0 mmol), e 2-fluoropirimidina (0,66 mL, 10,5 mmol), e a mistura foi agitada a 80 ºC durante 2 horas, e em seguida agitada a 100 ºC durante mais 2 horas. A isso foram adicionados 2- fluoropirimidina (0,22 mL, 3,5 mmol) e DIPEA (1,6 mL, 9,3 mmol) adi- cionalmente, e a mistura foi agitada a 100 ºC durante 2 horas. À solu- ção de reação foi adicionado N,N-dimetil formamidadimetilacetal (2,3 mL, 17,0 mmol) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente.
Após 1 hora, a isso, foram adicionados acetato de etila (200 mL), água de bicarbonato de sódio saturado (20 mL) e água (80 mL), e a mistura foi separada com um funil separatório. A camada orgânica foi lavada com água (50 mL) três vezes, e em seguida lavada com salmoura sa- turada. Após a mistura ser secada sobre sulfato de sódio, os materiais insolúveis foram filtrados, e os solventes foram evaporados sob pres- são reduzida. A camada aquosa na separação com um funil separató- rio foi também extraída com clorofórmio (100 mL) três vezes, seguida por lavagem com água (100 mL) e salmoura saturada. A camada de clorofórmio foi secada sobre sulfato de sódio, e os materiais insolúveis foram em seguida filtrados, e os solvents foram evaporados dos filtra- dos sob pressão reduzida, e o resíduo foi combinado com os extratos acima, e a mistura foi purificada por cromatografia de sílica-gel (cloro- fórmio/metanol, 100/0 a 92/8) para obter um Composto 7Gc (1,66 g, produção sobre três etapas 65 %).
[00365] MS (ESI): m/z = 731 (M+H)+ Exemplo 52 Síntese de Composto 7Gd N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N-dimetil-6- formamidina (Presente composto 19)
[00366] Um composto 7Gd como o presente composto 19 (1,07 g, produção de 53 %) foi obtido do composto 7Gc (1,58 g, 2,16 mmol) similarmente ao Exemplo 4.
[00367] MS (ESI): m/z = 931 (M+H)+ Síntese de ALNA[2Pim]-A
Exemplo 53 Síntese de Composto 7Aa N-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-5- pirimidin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida
[00368] Uma mistura do composto 1e que foi sintetizado de acordo com o método descrito em WO 2017/047816 A1 (500 mg, 0,730 mmol), 2-fluoropirimidina (215 mg, 2,19 mmol), DIPEA (0,509 mL, 2,92 mmol) e DMSO (7 mL) foi agitada a 130 ºC sob atmosfera de nitrogê- nio durante 7 horas. Acetato de etila foi adicionado à solução de rea- ção, e a mistura foi lavada com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, e os materiais in- solúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados por evapo- ração dos solventes sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna(SiO2:hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 7Aa (207 mg, produção de 37 %).
[00369] HRMS (FAB): valor calculado como C43H38N8O6 [M+Na]+: 785,2807, valor medido: 785,2807 Exemplo 54 Síntese de Composto 7Ab N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida (Presente composto 20)
[00370] A uma mistura do composto 7Aa (126 mg, 0,165 mmol), diclorometano (3 mL) e DIPEA (86,2 μL, 0,495 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropil clorofosporoamidita (73,6 μL, 0,330 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante 5 horas. Solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de coluna (NH: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100, SiO2: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100, diol: hexa- no/acetato de etila = 60/40 a 10/90) para obter um Composto 7Ab co- mo o presente composto 20 (110 mg, produção de 69 %).
[00371] HRMS (FAB): valor calculado como C52H55N10O7P [M+Na]+: 985,3885, valor medido: 985,3878 31
[00372] P-RMN (CDCl3) δ: 149,33, 149,47 Síntese de ALNA[4Pim]-T Exemplo 55 Síntese de Composto 8Ta 1-[(1R,3R,4R,7S)-7-benzilóxi-1-(benzilóxi-metil)-5-(6-cloropirimidin-4- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-pirimidin-2,4-diona
[00373] Uma mistura do composto 1f que foi sintetizado de acordo com o método descrito em WO 2017/047816 A1 (1,00 g, 2,22 mmol), 4,6-dicloropirimidina (398 mg, 2,66 mmol), DIPEA (1,16 mL, 6,66 mmol) e EtOH (20 mL) (2 bateladas) foi agitada a 120 ºC sob irradia- ção de micro-ondas durante 5 horas para cada batelada. As bateladas foram combinadas e os materiais insolúveis das soluções de reação foram coletados por filtração, lavados com EtOH, e secados por sob pressão reduzida para obter um Composto 8Ta (1,54 g, produção de 62 %).
[00374] HRMS (FAB): valor calculado como C29H28ClN5O5 [M+H]+: 562,1857, valor medido: 562,1859 Exemplo 56 - Síntese de Composto 8Tb 1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(6-cloropirimidin-4-il)-7-hidroxi1-(hidroximetil)-2- oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-pirimidin-2,4-diona
[00375] A uma mistura do composto 8Ta (3,49 g, 6,21 mmol) e di- clorometano (62 mL) foi adicionado tricloroborano (1,0 mol/L de solu- ção de diclorometano, 62 mL, 62,1 mmol) a -78ºC sob atmosfera de nitrogênio, e a mistura foi aquecida para a temperatura ambiente gra- dualmente durante a noite. MeOH (62 mL) foi adicionado à solução de reação lentamente sob resfriamento, e a mistura foi agitada por um tempo. A solução de reação foi concentrada, e o resíduo foi em segui- da triturado com acetato de etila para obter um Composto 8Tb (3,28 g) como um produto bruto.
[00376] HRMS (FAB): valor calculado como C15H16ClN5O5 [M+H]+: 382,0918, valor medido: 382,0919 Exemplo 57 Síntese de Composto 8Tc 1-[(1R,3R,4R,7S)-7-hidróxi-1-(hidroximetil)-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-pirimidin-2,4-diona
[00377] A uma mistura do composto 8Tb (3,28 g, 6,21 mmol, produ- to bruto) e MeOH (62 mL) foi adicionado hidróxido de paládio a 20% (654 mg, 20 peso%), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. Água (31 mL) foi adicio- nada à solução de reação para dissolver os materiais insolúveis, e pa- ládio foi filtrado através de Celite. Os filtrados foram concentrados, e água foi azeotropada com tolueno. O resíduo foi triturado com MeOH para obter um Composto 8Tc (1,75 g, produção sobre duas etapas 81
%).
[00378] HRMS (FAB): valor calculado como C15H17N5O5 [M+H]+: 348,1302, valor medido: 348,1308 Exemplo 58 Síntese de Composto 8Td 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-5- pirimidin-4-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-2,4- diona
[00379] A uma mistura do composto 8Tc (444 mg, 1,28 mmol) e pi- ridina (13 mL) foi adicionado cloreto de 4,4'-dimetoxitritila (520 mg, 1,54 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa satura- da foi adicionada gota a gota à solução de reação sob resfriamento, e a isso foi adicionado acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, água e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfa- to de sódio anidroso, e concentrada. Piridina foi azeotropada com ace- tato de etila, e o resíduo foi triturado com éter di-isopropílico para obter um Composto 8Td (652 mg, produção de 78 %).
[00380] HRMS (FAB): valor calculado como C36H35N5O7 [M+H]+: 650,2609, valor medido: 650,2600 Exemplo 59 Síntese de Composto 8Te 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil-2,4- dioxopirimidin-1-il)-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7- il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 21)
[00381] A uma mistura do composto 8Td (300 mg, 0,462 mmol), di- clorometano (5 mL) e DIPEA (322 μL, 1,85 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamita (309 μL, 1,39 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob at- mosfera de nitrogênio durante a noite. Solução de carbonato de hi-
drogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de rea- ção, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram eva- porados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10, diol: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 8Te como o presente com- posto 21 (263 mg, produção de 67 %).
[00382] HRMS (FAB): valor calculado como C45H52N7O8 [M+H]+: 850,3693, valor medido: 850,3685 31
[00383] P-RMN (CDCl3) δ: 148,93,149,47 Síntese de ALNA[4Pim]-mC Exemplo 60 - Síntese de Composto 8Ca [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil-2,4- dioxopirimidin-1-il)-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7- il]acetato
[00384] A uma mistura do composto 8Td (234 mg, 0,360 mmol), DMAP (4,4 mg, 0,0360 mmol) e piridina (3,6 mL) foi adicionado anidri- do acético (51,1 μL, 0,540 mmol), e a mistura foi agitada em tempera- tura ambiente durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de sulfato de cobre aquosa a 5%, água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca-
da sobre sulfato de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi triturado com éter di-isopropílico para obter um Composto 8Ca (219 mg, produção de 88 %).
[00385] HRMS (FAB): valor calculado como C38H27N5O8 [M+H]+: 692,2720, valor medido: 692,2720 Exemplo 61 - Síntese de Composto 8Cb [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-3-[5-metil-2- oxo-4-(1,2,4-triazol-1-il)pirimidin-1-il)-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00386] A uma mistura do composto 8Ca (201 mg, 0,291 mmol), 1,2,4-triazol (181 mg, 2,62 mmol), DIPEA (507 μL, 2,91 mmol) e ace- tonitrila (3 mL) foi adicionado cloreto de fosforila (46,1 μL, 0,494 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A ca- mada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e con- centrada. A mistura foi triturada com éter di-isopropílico para obter um Composto 8Cb (211 mg, produção de 98 %).
[00387] HRMS (FAB): valor calculado como C40H38N8O7 [M+H]+: 743,2942, valor medido: 743,2939 Exemplo 62 - Síntese de Composto 8Cc 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- hidróxi-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2-ona
[00388] A uma mistura do composto 8Cb (613 mg, 0,825 mmol) e acetonitrila (8,3 mL) foi adicionada água de amônia a 28% (5,5 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Aceto- nitrila da solução de reação foi concentrada. Materiais insolúveis foram coletados por filtração, e lavados com água. O produto bruto foi tritura-
do com acetato de etila para obter um Composto 8Cc (380 mg, produ- ção de 71 %).
[00389] HRMS (FAB): valor calculado como C36H36N6O6 [M+H]+: 649,2775, valor medido: 649,2773 Exemplo 63 - Síntese de Composto 8Cd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi- 5-pirimidin-4-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida
[00390] A uma mistura do composto 8Cc (378 mg, 0,583 mmol), e piridina (6 mL) foi adicionado anidrido benzoico (198 mg, 0,875 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 dias. A so- lução de reação foi concentrada, e o resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna (diol:0,5% trietilaminaclorofórmio /metanol = 100/0 a 90/10, SiO2: 0,55% de trietilaminaclorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 8Cd (247 mg, produção de 56 %).
[00391] HRMS (FAB): valor calculado como C43H40N6O7 [M+H]+: 753,3037, valor medido: 753,3040 Exemplo 64 Síntese de Composto 8Ce N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 22)
[00392] A uma mistura do composto 8Cd (135 mg, 0,179 mmol), diclorometano (2 mL), e DIPEA (125 μL, 0,716 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamida(120 μL, 0,537 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante 2 dias. Solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna(SiO2:hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100, diol: hexano/acetato de etila = 60/40 a 10/90, NH: he- xano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 8Ce como o presente composto 22 (61,9 mg, produção de 36 %).
[00393] HRMS (FAB): valor calculado como C52H57N8O8 [M+H]+: 953,4115, valor medido: 953,4109 31
[00394] P-RMN (CDCl3) δ: 149,65, 150,24 Síntese de ALNA[4-CF3-2Pim]-T Exemplo 65 - Síntese de Composto 9Ta 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi-5-[4- (trifluorometil)pirimidin-2-il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2,4-diona
[00395] Uma mistura do composto 1a (500 mg, 0,875 mmol), 2- cloro-4-(trifluorometil)pirimidina (239 mg, 1,31 mmol), DIPEA (457 μL, 2,63 mmol) e EtOH (4,4 mL) foi agitada a 120 ºC sob irradiação de mi- cro-ondas durante 30 minutos. 2-Cloro-4-(trifluorometil)pirimidina (239 mg, 1,31 mmol) e DIPEA (457 μL, 2,63 mmol) foram adicionados adi- cionalmente à solução de reação, e a mistura foi agitada a 120 ºC sob irradiação de micro-ondas durante 1 hora. A solução de reação foi concentrada, e a isso foi adicionado acetato de etila, e a mistura foi lavada com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi puri- ficado por cromatografia de coluna(SiO2:clorofórmio/metanol＝100/0 a 95/5) para obter um Composto 9Ta (545 mg, produção de 87 %).
[00396] HRMS (FAB): valor calculado como C37H34F3N5O7 [M+H]+:
718,2489, valor medido: 718,2491 Exemplo 66 - Síntese de Composto 9Tb 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2-il]-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 23)
[00397] A uma mistura do composto 9Ta (527 mg, 0,734 mmol), di- clorometano (7 mL) e DIPEA (384 μL, 2,20 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamita (328 μL, 1,47 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob at- mosfera de nitrogênio durante a noite. Solução de carbonato de hi- drogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de rea- ção, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram eva- porados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2:hexano/acetato de etila = 80/20 a 30/70, diol: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80) para obter um Composto 9Tb como o presente composto 23 (530 mg, produção de 79 %).
[00398] HRMS (FAB): valor calculado como C46H51F3N7O8P [M+H]+: 918,3567, valor medido: 918,3568 31
[00399] P-RMN (CDCl3) δ: 149,04, 149,12, 149,20, 149,47 Síntese de ALNA[4-CF3-2Pim]-mC
Exemplo 67 - Síntese de Composto 9Ca 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- hidróxi-5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2-il]-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-2-ona
[00400] Uma mistura do composto 4Ca (500 mg, 0,876 mmol), 2- cloro-4-(trifluorometil)pirimidina (317 μL, 2,63 mmol), DIPEA (610 μL, 3,50 mmol), e EtOH (4,4 mL) foi agitada a 150 ºC sob irradiação de micro-ondas durante 1 hora. A solução de reação foi concentrada, e a isso foi adicionado acetato de etila, e a mistura foi lavada com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna(SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para ob- ter um Composto 9Ca (186 mg, produção de 30 %).
[00401] HRMS (FAB): valor calculado como C37H35F3N6O6 [M+H]+: 717,2648, valor medido: 717,2651 Exemplo 68 - Síntese de Composto 9Cb N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-hidróxi- 5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2-il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00402] A uma mistura do composto 9Ca (395 mg, 0,551 mmol), e DMF (5,5 mL) foi adicionado anidrido benzoico (131 mg, 0,579 mmol),
e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Ace- tato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, água, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfa- to de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol= 100/0 a 95/15) para obter um Composto 9Cb (335 mg, produção de 74 %).
[00403] HRMS (FAB): valor calculado como C44H39F3N6O7 [M+H]+: 821,2911, valor medido: 821,2932 Exemplo 69 - Síntese de Composto 9Cc N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2- il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 24)
[00404] A uma mistura do composto 9Cb (316 mg, 0,385 mmol), diclorometano (4 mL), e DIPEA (201 μL, 1,16 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (172 μL, 0,770 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. Solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2:hexano/acetato de etila = 100/0 a 50/50, Diol: hexano/acetato de etila = 100/0 a 50/50) para ob- ter um Composto 9Cc como o presente composto 24 (227 mg, produ- ção de 58%).
[00405] HRMS (FAB): valor calculado como C53H56F3N8O8P [M+H]+: 1021,3989, valor medido: 1021,3993 31
[00406] P-RMN (CDCl3) δ: 149,15, 149,28, 149,36, 149,60 Síntese de ALNA[5-Cl-2Pim]-T
Exemplo 70 - Síntese de Composto 10Ta 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-(5- cloropirimidin-2-il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2,4-diona
[00407] Uma mistura do composto 1a (500 mg, 0,875 mmol, 2,5- dicloropirimidina (196 mg, 1,31 mmol), DIPEA (457 μL, 2,63 mmol) e EtOH (4,4 mL) foi agitada a 150 ºC sob irradiação de micro-ondas du- rante 1 hora. Os materiais insolúveis das soluções de reação foram solubilizados com clorofórmio, e a mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol= 100/0 a 90/10) para obter um Composto 10Ta (263 mg, produção de 44 %).
[00408] HRMS (FAB): valor calculado como C36H34ClN5O7 [M+H]+: 684,2225, valor medido: 684,2226 Exemplo 71 - Síntese de Composto 10Tb 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-(5- cloropirimidin-2-il)-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 25)
[00409] A uma mistura do composto 10Ta (240 mg, 0,351 mmol), diclorometano (3,5 mL) e DIPEA (183 μL, 1,05 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (157 μL, 0,702 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob at- mosfera de nitrogênio durante 4 dias. A solução de carbonato de hi- drogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada às soluções de rea-
ção, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram eva- porados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80, diol: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80) para obter um Composto 10Tb (201 mg, produção de 65 %).
[00410] HRMS (FAB): valor calculado como C45H51ClN7O8P [M+H]+: 884,3304, valor medido: 884,3303 31
[00411] P-RMN (CDCl3) δ: 149,12 Síntese de ALNA[5-Cl-2Pim]-mC Exemplo 72 - Síntese de Composto 10mCa 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-(5- cloropirimidin2-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2-ona
[00412] Uma mistura do composto 4Ca (500 mg, 0,876 mmol), 2,5- dicloropirimidina (391 mg, 2,63 mmol), e DIPEA (610 μL, 3,50 mmol) e EtOH (4,4 mL) (2 bateladas) foi agitada a 150 ºC sob irradiação de mi- cro-ondas durante 1 hora para cada batelada. A solução de reação foi concentrada, e água foi adicionada a isso, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica combinada foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi pu-
rificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 10mCa (381 mg, produção de 32 %).
[00413] HRMS (FAB): valor calculado como C36H35ClN6O6 [M+H]+: 683,2385, valor medido: 683,2389 Exemplo 73 - Síntese de Composto 10mCb N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-(5- cloropirimidin-2-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00414] A uma mistura do composto 10mCa (375 mg, 0,549 mmol) e DMF (5,5 mL) foi adicionado anidrido benzoico (130 mg, 0,576 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noi- te. À solução de reação foi adicionado anidrido benzoico (24,8 mg, 0,110 mmol) adicionalmente, e a mistura foi mais agitada em tempera- tura ambiente durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidro- gênio de sódio aquosa saturada, água, e salmoura saturada. A cama- da orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e concen- trada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: cloro- fórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 10mCb (422 mg, produção de 98 %).
[00415] HRMS (MALDI): valor calculado como C43H39ClN6O7 [M+Na]+: 809,2461, valor medido: 809,2463 Exemplo 74 - Síntese de Composto 10mCc N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-(5- cloropirimidin-2-il)-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-2-oxa- 5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 26)
[00416] A uma mistura do composto 10mCb (409 mg, 0,520 mmol), diclorometano (5 mL), e DIPEA (272 μL, 1,56 mmol) foi adicionado 2-
cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (232 μL, 1,04 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 100/0 a 50/50, diol: hexano/acetato de etila = 100/0 a 50/50) para obter um Composto 10mCc como o presente composto 26 (264 mg, produ- ção de 51 %).
[00417] HRMS (MALDI): valor calculado como C52H56ClN8O8 [M+Na]+: 1009,3540, valor medido: 1009,3521 31
[00418] P-RMN (CDCl3) δ: 149,28 Síntese de ALNA[6-NMe2-4Pim]-T Exemplo 75 - Síntese de Composto 11Ta 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-(6- cloropirimidin-4-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2,4-diona
[00419] Uma mistura do composto 1a (1,00 g, 1,75 mmol), 4,6- dicloropirimidina (391 mg, 2,63 mmol), DIPEA (914 μL, 5,25 mmol) e EtOH (18 mL) foi agitada a 120 ºC sob irradiação de micro-ondas du-
rante 1 hora. A reação foi concentrada, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 11Ta (1,00 g, produção de 84 %).
[00420] HRMS (FAB): valor calculado como C36H34ClN5O7 [M+H]+: 684,2225, valor medido: 684,2214 Exemplo 76 - Síntese de Composto 11Tb 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-[6- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metilpirimidin-2,4-diona
[00421] A uma mistura do composto 11Ta (500 mg, 0,731 mmol), DIPEA (637 μL, 3,66 mmol), e EtOH (5 mL) foi adicionado cloridrato de dimetil amina (179 mg, 2,19 mmol), e a mistura foi agitada a 150 ºC sob irradiação de micro-ondas durante 30 minutos. Os materiais inso- lúveis foram coletados por filtração, e secados sob pressão reduzida para obter um Composto 11Tb (386 mg, produção de 76 %).
[00422] HRMS (FAB): valor calculado como C38H40N6O7 [M+H]+: 693,3037, valor medido: 693,3030 Exemplo 77 - Síntese de Composto 11Tc 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-[6- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamina)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 27)
[00423] A uma mistura do composto 11Tb (335 mg, 0,484 mmol), diclorometano (5 mL), DIPEA (253 μL, 1,45 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita 216 μL, 0,968 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob at- mosfera de nitrogênio durante a noite. DMF (2 mL) foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. À solução de reação fo- ram adicionados DIPEA (253 μL, 1,45 mmol), e 2-cianoetil N,N-di-
isopropilclorofosporoamidita (216 μL, 0,968 mmol) adicionalmente, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante 2 dias. Acetato de etila foi adicionado à solução de rea- ção, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10,Diol: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 11Tc como o presente composto 27 (189 mg, produção de 44 %).
[00424] HRMS (FAB): valor calculado como C47H57N8O8P [M+H]+: 893,4115, valor medido: 893,4115 31
[00425] P-RMN (CDCl3) δ: 148,83, 148,99 Síntese de ALNA[6-NMe2-4Pim]-mC Exemplo 78 - Síntese de Composto 11mCa 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-(6- cloropirimidin-4-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2-ona
[00426] Uma mistura do composto 4mCa1 (2,00 mg, 3,50 mmol), 4,6-dicloropirimidina (626 mg, 4,20 mmol), DIPEA (1,83 mL, 10,5 mmol) e EtOH (17,5 mL) foi agitada a 100 ºC durante 4 horas. A solu-
ção de reação foi concentrada, e água foi adicionada a isso, e a mistu- ra foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada atra- vés de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O re- síduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofór- mio/metanol= 100/0 a 90/10) para obter um Composto 11mCa (1,34 g, produção de 56%).
[00427] HRMS (FAB): valor calculado como C36H35ClN6O6 [M+H]+: 683,2385, valor medido: 683,2384 Exemplo 79 - Síntese de Composto 11mCb 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-5-[8- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metilpirimidin-2-ona
[00428] Uma mistura do composto 11mCa (1,12 g, 1,64 mmol), di- metilamina (solução aquosa a 50 %, 863 μL, 8,20 mmol), e EtOH (1 mL) foi agitada a 150 ºC sob irradiação de micro-ondas durante 30 mi- nutos. A reação foi concentrada, e o resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna (NH: clorofórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 11mCb (1,09 g, produção de 96 %).
[00429] HRMS (MALDI): valor calculado como C38H41N7O6 [M+H]+: 714,3011, valor medido: 714,3003 Exemplo 80 - Síntese de Composto 11mCc N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[6- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00430] A uma mistura do composto 11mCb (1,08 g, 1,56 mmol) e DMF (8 mL) foi adicionado anidrido benzoico (389 mg, 1,72 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Acetato de etila foi adicionado às soluções de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, água, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfa-
to de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 11Cc (1,02 g, produção de 82 %).
[00431] HRMS (MALDI): valor calculado como C45H45N7O7 [M+H]+: 796,3453, valor medido: 796,3466 Exemplo 81 - Síntese de Composto 11mCd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[(6-dimetilamino)pirimidin-4- il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 28)
[00432] A uma mistura do composto 11mCc (972 mg, 1,22 mmol), diclorometano (12 mL) e DIPEA (637 μL, 3,66 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (545 μL, 2,44 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100, NH: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 11mCd como o presente composto 28 (788 mg, produ- ção de 65 %).
[00433] HRMS (MALDI): valor calculado como C54H62N9O8P [M+H]+: 996,4532, valor medido: 996,4513 31
[00434] P-RMN (CDCl3) δ: 149,06, 149,17 Síntese de ALNA[2-NMe2-4Pim]-T
Exemplo 82 - Síntese de Composto 12Ta 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(2- cloropirimidin-4-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2,4-diona
[00435] Uma mistura do composto 1a (2,00 g, 3,50 mmol), 2,4- dicloropirimidina (782 mg, 5,25 mmol), DIPEA (1,83 mL, 10,5 mmol), e EtOH (17,5 mL) foi agitada a 100 ºC durante 4,5 horas. As soluções de reação foram concentradas, e água foi adicionada a isso, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 12Ta (1,86 g, produção de 78 %).
[00436] HRMS (FAB): valor calculado como C36H34ClN5O7 [M+H]+: 684,2225, valor medido: 684,2223 Exemplo 83 - Síntese de Composto 12Tb 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[2- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metilpirimidin-2,4-diona
[00437] A uma mistura do composto 12Ta (500 mg, 0,731 mmol), DIPEA (637 μL, 3,66 mmol), e EtOH (5 mL) foi adicionado cloridrato de dimetil amina (179 mg, 2,19 mmol), e a mistura foi agitada a 150 ºC sob irradiação de micro-ondas durante 30 minutos. As soluções de re- ação foram concentradas, e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 95/5). A mistura foi tri- turada com éter di-isopropílico para obter um Composto 12Tb (648 mg) como um produto bruto.
[00438] HRMS (FAB): valor calculado como C38H40N6O7 [M+H]+: 693,3037, valor medido: 693,3041 Exemplo 84 - Síntese de Composto 12Tc 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[2- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di-isopropilamino)oxipropanonitrila (Presente composto 29)
[00439] A uma mistura do composto 12Tb (638 mg, 0,731 mmol, produto bruto), diclorometano (7 mL) e DIPEA (382 μL, 2,19 mmol) foi adicionado 2-cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (326 μL, 1,46 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob at- mosfera de nitrogênio durante 5 dias. A solução de carbonato de hi- drogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada às soluções de rea- ção, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram eva- porados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10, diol: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 12Tc como o presente com- posto 29 (304 mg, produção de 47 % sobre duas etapas).
[00440] HRMS (FAB): valor calculado como C47H57N8O8P [M+H]+: 893,4115, valor medido: 893,4128 31
[00441] P-RMN (CDCl3) δ: 148,91, 149,33 Síntese de ALNA[2-NMe2-4Pim]-mC
Exemplo 85 Síntese de Composto 12mCa 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5- (2-cloropirimidin-4-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2-ona
[00442] Uma mistura do composto 4mCa (2,00 g, 2,50 mmol), 2,4- dicloropirimidina (627 mg, 4,20 mmol), DIPEA (1,83 mL, 10,5 mmol) e EtOH (17,5 mL) foi agitada a 100 ºC durante 3 horas. A solução de re- ação foi concentrada, e água foi adicionada a isso, e a mistura foi ex- traída com clorofórmio. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 12mCa (1,28 g, produção de 54 %).
[00443] HRMS (MALDI): valor calculado como C36H35ClN6O6 [M+Na]+: 705,2199, valor medido: 705,2199 Exemplo 86 Síntese de Composto 12mCb 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[2- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metilpirimidin-2-ona
[00444] Uma mistura do composto 12mCa (941 mg, 1,38 mmol), dimetil amina (solução a 50% aquosa, 725 μL, 6,90 mmol), e EtOH (14 mL, 0,1 M) foi agitada a 150 ºC sob irradiação de micro-ondas durante 30 minutos. A solução de reação foi concentrada, e o resíduo foi purifi-
cado por cromatografia de coluna (NH: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 12mCb (784 mg, produção de 82 %).
[00445] HRMS (MALDI): valor calculado como C38H41N7O6 [M+H]+: 692,3191, valor medido: 692,3167 Exemplo 87 - Síntese de Composto 12mCc N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-[2- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00446] A uma mistura do composto 12mCb (754 mg, 1,09 mmol) e DMF (5,5 mL) foi adicionado anidrido benzoico (271 mg, 1,20 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Aceta- to de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, água, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfa- to de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 12mCc (731 mg, produção de 84 %).
[00447] HRMS (MALDI): valor calculado como C45H45N7O7 [M+H]+: 796,3453, valor medido: 796,3440 Exemplo 88 - Síntese de Composto 12mCd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[2-(dimetilamino)pirimidin-4- il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 30)
[00448] A uma mistura do composto 12mCc (709 mg, 0,891 mmol), diclorometano (9 mL) e DIPEA (466 μL, 2,67 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (397μL, 1,78 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2:hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100, NH: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 12mCd como o presente composto 30 (482 mg, produ- ção de 54 %).
[00449] HRMS (MALDI): valor calculado como C54H62N9O8P [M+H]+: 996,4532, valor medido: 996,4526 31
[00450] P-RMN (CDCl3) δ: 149,19, 149,46, 149,65 Síntese de ALNA[Prz]-T Exemplo 89 Síntese de Composto 13Ta [1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi-5- pirazina-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-pirimidin-2,4- diona
[00451] Uma mistura do composto 1a (500 mg, 0,875 mmol), 2- fluoropirazina (201 μL, 2,63 mmol), DIPEA (610 μL, 3,50 mmol) e DMSO (8,8 mL) foi agitada a 140 ºC durante 1,5 horas e a 150 ºC du- rante 4,5 horas sob atmosfera de nitrogênio. Acetato de etila foi adici- onado às soluções de reação, e a mistura foi lavada com água, e sal- moura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de mag- nésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromato- grafia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol 100/0 a 90/10, SiO2: hexa- no/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 13Ta (227 mg, produção de 40 %).
[00452] HRMS (MALDI): valor calculado como C36H35N5O7 [M+Na]+: 672,2429, valor medido: 672,2409
Exemplo 90 Síntese de Composto 13Tb 3-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-pirazina-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 7-il]óxi-(di-isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 31)
[00453] A uma mistura do composto 13Ta (214 mg, 0,329 mmol), diclorometano (6,6 mL), e DIPEA (172 μL, 0,987 mmol) foi adicionado 2-cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (147 μL, 0,658 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100, NH: acetato de etila/metanol = 100/0 a 90/10) para ob- ter um Composto 13Tb como o presente composto 31 (204 mg, produ- ção de 73 %).
[00454] HRMS (MALDI): valor calculado como C45H52N7O8P [M+Na]+: 872,3507, valor medido: 872,3507 31
[00455] P-RMN (CDCl3) δ: 149,12, 149,31 Síntese de ALNA[Prz]-mC Exemplo 91 Síntese de Composto 13mCb
[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil-2,4- dioxopirimidin-1-il)-5-pirazin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7- il]acetato
[00456] A uma mistura do composto 13Ta (746 mg, 1,15 mmol), DMAP (14,0 mg, 0,115 mmol) e piridina (5,8 mL) foi adicionado anidri- do acético (163 μL, 1,73 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e concentrada. Piridi- na foi azeotropada com acetato de etila, e o resíduo foi triturado com éter di-isopropílico para obter um Composto 13MCb (712 mg, produ- ção de 90%).
[00457] HRMS (MALDI): valor calculado como C38H37N5O8 [M+Na]+: 714,2534, valor medido: 714,2520 Exemplo 92 Síntese de Composto 13mCc [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil-2- oxo-(4-1,2,4-triazol-1-il)pirimidin-1-il]-5-pirazin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00458] A uma mistura do composto 13mCb (692 mg, 1,00 mmol), 1,2,4-triazol (622 mg, 9,00 mmol), DIPEA (1,74 mL, 10,0 mmol) e ace- tonitrila (10 mL), foi adicionado cloreto de fosforila (158 μL, 1,70 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio durante 1 hora. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A ca- mada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e con- centrada para obter um Composto 13mCc (753 mg) como um produto bruto.
[00459] HRMS (MALDI): valor calculado como C40H38N8O7 [M+Na]+:
765,2756, valor medido: 765,2750 Exemplo 93 - Síntese de Composto 13mCd 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7- hidróxi-5-pirazin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2-ona
[00460] A uma mistura do composto 13mCc (744 g, 1,00 mmol, produto bruto) e acetonitrila (10 mL) foi adicionada água de amônia a 28% (6,7 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente duran- te a noite. Água foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e concentrada para obter um Composto 13mCd (638 mg, produção sobre duas etapas 98 %).
[00461] HRMS (MALDI): valor calculado como C36H36N6O6 [M+Na]+: 671,2589, valor medido: 671,2591 Exemplo 94 Síntese de Composto 13mCe N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-pirazin-2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida
[00462] A uma mistura do composto 13mCd (625 mg, 0,963 mmol) e DMF (4,8 mL) foi adicionado anidrido de benzoíla (327 mg, 1,44 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noi- te. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa satu- rada, água, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 13mCe (245 mg, produção de 34 %).
[00463] HRMS (MALDI): valor calculado como C43H40N6O7 [M+Na]+: 775,2851, valor medido: 775,2845 Exemplo 95 - Síntese de Composto 13mCf
N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirazin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida (Presente composto 32)
[00464] A uma mistura do composto 13mCe (565 mg, 0,751 mmol), diclorometano (7,5 mL) e DIPEA (392 μL, 2,25 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (335 μL, 1,50 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80, NH: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 13mCf como o presente composto 32 (369 mg, produ- ção de 52 %).
[00465] HRMS (MALDI): valor calculado como C50H44N6O8 [M+Na]+: 975,3929, valor medido: 975,3923 31
[00466] P-RMN (CDCl3) δ: 149,25, 149,49 Síntese de ALNA[Trz]-T Exemplo 96 Síntese de Composto 14Ta (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi-3-(5- metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-
carbotioamida
[00467] A uma mistura do composto 1a (2,00 g, 3,50 mmol) e THF (17,5 mL) foi adicionado 1,1-tiocarbonil diimidazol (1,25 g, 7,00 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Água de amônia a 28% (17,5 mL) foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A solu- ção de reação foi concentrada, e os materiais insolúveis foram filtra- dos. Os materiais insolúveis foram lavados com água para obter um Composto 14Ta (2,35 g) como um produto bruto.
[00468] HRMS (MALDI): valor calculado como C33H34N4O7 [M+Na]+: 653,2040, valor medido: 653,2026 Exemplo 97 Síntese de Composto 14Tb metil(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi-3- (5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carboxiimidotioato
[00469] A uma mistura do composto 14ta (2,35 g, 3,50 mmol, pro- duto bruto) e THF (17,5 mL), foi adicionado iodeto de metila (654 μL, 10,5 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa satura- da foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 80/20) para obter um Composto 14Tb (1,88 g, produção sobre duas etapas 83 %).
[00470] HRMS (MALDI): valor calculado como C34H36N4O7 [M+H]+: 645,2377, valor medido: 645,2374 Exemplo 98 - Síntese de Composto 14Tc [(1R,3R,4R,7S)-5-[(Z)-N-acetil-C-metilsulfanil-carbamimidoil]-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-
5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00471] A uma mistura do composto 14Tb (1,87 g, 2,90 mmol, DMAP (35,4 mg, 0,290 mmol) e piridina (14,5 mL) foi adicionado anidrido acéti- co (822 μL, 8,70 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambien- te durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de sulfato de cobre aquosa a 5%, água, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram em seguida concentrados sob pressão reduzida para ob- ter um Composto 14Tc (2,11 g, produção de 100 %).
[00472] HRMS (MALDI): valor calculado como C38H40N4O9S [M+Na]+: 751,2408, valor medido: 751,2398 Exemplo 99 Síntese de Composto 14Td 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]- 5-metilpirimidin-2,4-diona
[00473] A uma mistura do composto 14Tc (1,66 g, 2,28 mmol) e EtOH (23 mL) foi adicionado metil hidrazina (1,20 mL, 22,8 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A solu- ção de reação foi concentrada, e o resíduo foi purificado por cromato- grafia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 14td (985 mg, produção de 65%).
[00474] HRMS (MALDI): valor calculado como C36H38N6O7 [M+Na]+: 689,2694, valor medido: 689,2684 Exemplo 100 - Síntese de Composto 14Te 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 33)
[00475] A uma mistura do composto 14Td (576 mg, 0,864 mmol),
diclorometano (8,6 mL) e DIPEA (451 μL, 2,59 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (385 μL, 1,73 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogê- nio durante 2 dias. Solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquo- sa saturada foi adicionada às soluções de reação, e a mistura foi extraí- da com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um se- parador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100, diol: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 14Te como o presente composto 33 (517 mg, produção de 69 %).
[00476] HRMS (MALDI): valor calculado como C45H55N8O8P [M+Na]+: 889,3773, valor medido: 889,3778 31
[00477] P-RMN (CDCl3) δ: 148,40, 148,45 Síntese de ALNA[Trz]-mC Exemplo 101 - Síntese de Composto 14Ca [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5-dimetil- 1,2,4-triazol-3-il)-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00478] A uma mistura do composto 14Td (918 mg, 1,38 mmol), DMAP (16,9 mg, 0,138 mmol) e piridina (6,9 mL) foi adicionado anidri- do acético (196 μL, 2,07 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, água, e salmoura saturada. A camada or- gânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram em seguida concentra- dos sob pressão reduzida para obter um Composto 14Ca (955 mg, produção de 98 %).
[00479] HRMS (MALDI): valor calculado como C38H40N6O8 [M+Na]+: 731,2800, valor medido: 731,2791 Exemplo 102 - Síntese de Composto 14Cb [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5-dimetil- 1,2,4-triazol-3-il)-3-(5-metil-2-oxo-4-(1,2,4-triazol-1-il)pirimidin-1-il]-2- oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00480] A uma mistura do composto 14Ca (915 mg, 1,29 mmol), 1,2,4-triazol (802 mg, 11,6 mmol), DIPEA (2,25 mL, 12,9 mmol) e ace- tonitrila (12,9 mL) foi adicionado cloreto de fosforila (204 μL, 2,19 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambi- ente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura satu- rada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidro- so, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram con- centrados sob pressão reduzida para obter um Composto 14Cb (1,08 g) como um produto bruto.
[00481] HRMS (MALDI): valor calculado como C40H41N9O7 [M+Na]+: 782,3021, valor medido: 782,3019 Exemplo 103 - Síntese de Composto 14Cc 4-amino-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]- 5-metilpirimidin-2-ona
[00482] A uma mistura do composto 14Cb (1,07 g, 1,29 mmol), pro- duto bruto e acetonitrila (12,9 mL) foi adicionada água de amônia a 28% (8,6 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente duran- te a noite. Água foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os filtrados foram concentrados para obter um Composto 14Cc (748 mg, produção sobre duas etapas 87 %).
[00483] HRMS (MALDI): valor calculado como C36H39N7O6 [M+Na]+: 688,2854, valor medido: 688,2857 Exemplo 104 - Síntese de Composto 14Cd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]- 5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00484] A uma mistura do composto 14Cc (733 mg, 1,10 mmol) e piridina (5,5 mL) foi adicionado anidrido benzoico (374 mg, 1,64 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Uma solução de hidróxido de sódio aquosa a 2 N (5,5 mL) foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofór- mio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 14Cd (744 mg, produção de 88 %).
[00485] HRMS (MALDI): valor calculado como C43H43N7O7 [M+Na]+: 792,3116, valor medido: 792,3111 Exemplo 105 - Síntese de Composto 14Ce N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2-
cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 34)
[00486] A uma mistura do composto 14Cd (730 mg, 0,948 mmol), diclorometano (9,5 mL) e DIPEA (0,495 mL, 2,84 mmol) foi adicionado 2-cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (0,423 mL, 1,90 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de rea- ção, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram eva- porados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100, NH: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 14Ce como o presente com- posto 34 (672 mg, produção de 73 %).
[00487] HRMS (MALDI): valor calculado como C52H60N9O8P [M+H]+: 992,4195, valor medido: 992,4186 31
[00488] P-RMN (CDCl3) δ: 148,50, 148,58 Síntese de ALNA[Trz]-G
Exemplo 106 - Síntese de Composto 14Ga (1R,3R,4R,7S)-3-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-il)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carbotioamida
[00489] A uma solução do composto 1g que foi sintetizado de acor- do com o método descrito em WO 2017/047816 A1 (55,0 g, 58,9 mmol) em THF (270 mL) foi injetado 1,1-tiocarbonil diimidazol (21,0 g, 118 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Água de amônia a 28% (270 mL) foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos, seguida por agitação a 50 ºC durante 46 horas. Clorofórmio (700 mL) foi adicionado à solução de reação, e após agitação durante um tempo, a camada orgânica foi separada com um funil separatório, e secada sobre sulfato de sódio anidroso. Os materiais insolúveis fo- ram filtrados, e os solventes foram em seguida evaporados sob pres- são reduzida, e o resíduo resultante foi quase purificado por cromato- grafia de sílica-gel (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10). O resí- duo resultante foi solubilizado em acetato de etila (250 mL), e a isso foi adicionado tolueno (250 mL). Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida a cerca de 300 mL (sólidos foram precipitados), e às suspensões resultantes foi adicionado di-isopropil éter (IPE) (50 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. Os materiais precipitados foram coletados por filtração, e os materiais fil- trados foram lavados com IPE (50 mL), e em seguida secados sob pressão reduzida para obter um Composto 14Ga (27,9 g, produção de 72 %).
[00490] MS (ESI): m/z = 656 [M+H]+ Exemplo 107 - Síntese de composto 14Gb metil(1R,3R,4R,7S)-3-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi-2-oxa-5-
azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxiimidotioato
[00491] A uma solução do composto 14Ga (27,9 g, 42,5 mmol) em THF (400 mL) foi adicionado gota a gota iodeto de metila (4,24 mL, 68,1 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 24 horas. A solução de reação foi adicionada a uma solução mista de água de bicarbonato de sódio (que foi preparada de água de bicarbonato de sódio saturado (400 mL) e água (400 mL)) e clorofórmio (1400 mL) enquanto agitando. Após agitação durante um tempo, a camada orgânica foi separada com um funil separatório, e secada sobre sulfato de sódio anidroso. A mistura foi filtrada através de Celite, e os filtrados foram azeotropados com tolueno para obter um Composto 14Gb (26,9 g, produção de 82 %).
[00492] MS (ESI): m/z = 670 [M+H]+ Exemplo 108 - Síntese de Composto 14Gc [(1R,3R,4R,7S)-5-(N-acetil-C-metilsulfanilcarboxi-imidoil)-3-(2-amino- carboxiimidoil)-3-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-il)-1-[[bis(4-metoxifenil)- fenil-metóxi]metil]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00493] A uma mistura do composto 14Gb (26,9 g, 34,7 mmol) em piridina (100 mL) foram adicionados anidrido acético (9,83 mL, 104 mmol) e DMAP (424 mg, 3,47 mmol), e a mistura foi agitada em tem- peratura ambiente durante 4 horas. À solução de reação foram adicio- nados acetato de etila (400 mL) e água de bicarbonato de sódio satu- rado (200 mL), e a mistura foi agitada vigorosamente durante 20 minu- tos, e a camada orgânica foi separada com um funil separatório. A camada orgânica foi lavada com água (2 × 200 mL) e salmoura satu- rada (200 mL), e em seguida secada sobre sulfato de sódio anidroso. Após os materiais insolúveis serem filtrados, os solventes foram eva- porados sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi azeotropado com tolueno para obter um Composto 14Gc (30,5 g). O produto foi usado no estado em que se encontrava sem purificação em uma se-
guinte etapa.
[00494] MS (ESI): m/Z = 754 [M+H]+ Exemplo 109 - Síntese de Composto 14Gd N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]- 6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N-dimetilformamidina
[00495] A uma solução do composto 14Gc (30,5 g, 35,9 mmol) em 1,4-dioxano (300 mL) foi adicionado metil hidrazina (18,9 mL, 359 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 ho- ras, seguida por agitação a 50 ºC durante 3 horas. Água (100 mL) foi adicionada às soluções de reação, a mistura foi evaporada sob pres- são reduzida. Clorofórmio (250 mL) foi adicionado a isso, e após agi- tação durante um tempo, a mistura foi passada através de um separa- dor de fase, e a camada orgânica foi separada com um funil separató- rio. Após os solventes serem evaporados, os solventes foram azeotro- pados com tolueno. O resíduo resultante foi suspenso com IPE (100 mL), a mistura foi colocada em banho ultrassônico durante 20 minutos, e os materiais precipitados foram em seguida coletados por filtração, e os materiais filtrados foram secado ao ar seguidos por secagem sob pressão reduzida.
[00496] À solução do resíduo resultante em DMF (75 mL, 970 mmol) foi adicionado N,N-dimetil formamidadimetilacetal (50 mL, 375 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 ho- ras. Os solventes de reação foram evaporados sob pressão reduzida, e o resíduo concentrado resultante foi quase purificado por cromato- grafia de sílica-gel (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10, SiO2: acetato de etila/metanol = 90/10 a 72/28). Os produtos brutos foram lavados por suspensão em acetato de etila (200 mL), e coletados por filtração, e os materiais filtrados foram secados sob pressão reduzida para um Composto 14Gd (11,2 g, produção de 40 %).
[00497] MS (ESI): m/Z = 748 [M+H]+ Exemplo 110 - Síntese de Composto 14Ge N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N- dimetilformamidina (Presente composto 35)
[00498] A uma solução do composto 14Gd (6,00 g, 7,60 mmol) em diclorometano (60 mL) foi adicionado DIPEA (5,30 mL, 30,6 mmol) sob resfriamento, seguido por adição gota a gota de 2-cianoetil N,N-di- isopropilclorofosporoamidita (5,12 mL, 23,0 mmol), e a mistura foi agi- tada em temperatura ambiente durante 6 horas. A solução de reação foi resfriada sob resfriamento, e a isso, foram adicionados água de bi- carbonato de sódio saturado (120 mL) e clorofórmio (160 mL), e a mis- tura foi agitada vigorosamente durante 15 minutos, e a camada orgâ- nica foi em seguida separada com um funil separatório, e secada so- bre sulfato de sódio anidroso. Após os materiais insolúveis serem fil- trados, os solventes foram evaporados sob pressão reduzida, e o resí- duo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (SiO2: ace- tato de etila/metanol = 100/0 a 84/16) para obter um Composto 14Ge como o presente composto 35 (5,59 g, produção de 74 %).
[00499] MS (ESI): m/Z = 948 [M+H]+ 31
[00500] P-RMN (CDCl3) δ: 148,52, 148,59 Síntese de ALNA[Trz]-A
Exemplo 111 - Síntese de Composto 14Aa Benzotriazol-1-il(Benzotriazol-2-il)metanoimina
[00501] A uma solução of benzotriazol (7,70 g, 64,6 mmol) em EtOH (135 mL) foi adicionada gota a gota uma solução de cianogen- brometo (3,41 g, 32,2 mmol) em acetona (15 mL) lentamente sob res- friamento, seguida por adição gota a gota de uma solução de hidróxido de sódio a 2 N (16,2 mL, 32,4 mmol) lentamente. Após a mistura ser agitada durante 30 minutos sob resfriamento, os materiais precipitados foram coletados por filtração, e os materiais filtrados foram lavados com etanol frio (80 mL). A mistura foi secada ao ar seguida por seca- gem sob pressão reduzida para fornecer um Composto 14Aa (5,14 g, produção de 61 %). 1
[00502] H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 6,92 - 6,98 (m, 1 H) 7,46- 7,55 (m, 2 H), 7,58 - 7,65 (m, 1 H), 7,77 (ddd, J = 8,35, 7,06, 1,03 Hz, 1 H), 8,17- 8,22 (m, 1 H), 8,22- 8,27 (m, 1 H), 8-31- 8,37 (m, 1 H), 9,67 (s, 1 H)
[00503] MS (ESI): Não detectado Exemplo 112 - Síntese de Composto 14Ae (1R,3R,4R,7S)-3-(6-aminopurin-9-il)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-7-ol
[00504] A uma suspensão de N-(9H-purin-6-il)benzamida (5,15 g, 21,5 mmol) em tolueno (200 mL) foi injetado o composto 1a (10,3 g, 17,9 mmol) porção a porção, seguido por adição de BSA (38 mL, 120 mmol), e a mistura foi agitada vigorosamente a 60 ºC durante 30 minu- tos. A isso foi adicionado TMSOTf (0,324 mL, 179 mmol) na mesma temperatura, e a mistura foi agitada a 60 ºC durante 15 minutos. As soluções de reação foram resfriadas sob resfriamento, e as soluções de reação foram adicionadas vigorosamente enquanto agitando a uma solução mista de IPE (100 mL), água (100 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (100 mL) que foi resfriada sob resfriamento. Após a mistura ser agitada vigorosamente durante 20 minutos, os materiais insolúveis foram filtrados por Celite. A camada orgânica dos filtrados foram separados com um funil separatório, lavados com salmoura sa- turada (200 mL) e em seguida secados sobre sulfato de sódio anidro- so, e os solventes foram evaporados para obter o resíduo do compos- to cru 14Gb.
[00505] À solução do resíduo cru resultante em THF (200 mL) foi adicionado o composto 14Aa (4,72 g, 17,9 mmol), e a mistura foi agi- tada em temperatura ambiente durante 92 horas, e mais agitada a 50 ºC durante 9 horas. À solução de reação foram adicionados acetato de etila (400 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (200 mL), e após agitação durante 20 minutos, a camada orgânica foi separada com um funil separatório. A camada orgânica foi lavada com água (300 mL) e salmoura saturada (100 mL), e em seguida secada sobre sulfato de sódio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os solventes foram evaporados para obter o resíduo do composto cru 14Gc.
[00506] A uma solução do resíduo resultante em piridina (65 mL) foram adicionados anidrido acético (5,08 mL, 53,8 mmol) e DMAP (219 mg, 1,79 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente du- rante 3 horas. Às soluções de reação foram adicionados acetato de etila (400 mL) e água de bicarbonato de sódio saturado (200 mL), e após agitação durante 20 minutos, a camada orgânica foi separada com um funil separatório. A camada orgânica foi lavada com água (300 mL) e salmoura saturada (100 mL) e em seguida secada sobre sulfato de sódio anidroso. Após os materiais insolúveis serem filtrados, os solventes foram evaporados sob pressão reduzida, e o resíduo foi azeotropado com tolueno para obter o resíduo de composto cru 14Gd.
[00507] Á solução do resíduo resultante em 1,4-dioxano (100 mL) foi adicionado gota a gota metil hidrazina (9,44 mL, 179 mmol) sob res- friamento usando água fria, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi aquecida para 50 ºC, e agitada durante 10 horas. Água (100 mL) foi adicionada às soluções de rea- ção, e os solventes foram em seguida evaporados sob pressão redu- zida da mistura, e o resíduo foi extraído com clorofórmio (2 × 150 mL) usando um funil separatório. As camadas orgânicas foram combina- das, a mistura foi lavada com salmoura saturada (100 mL), e em se-
guida secada sobre sulfato de sódio anidroso. Após os materiais inso- lúveis serem filtrados, os solventes foram evaporados sob pressão re- duzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica- gel (sílica de NH: clorofórmio/metanol = 100/0 a 99/1) para obter um Composto 14Ae (4,91 g, produção de 41 %).
[00508] MS (ESI): m/Z = 675 [M-H]- Exemplo 113 - Síntese de Composto 14Af N-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3- il]purin-6-il]benzamida
[00509] A uma mistura do composto 14Ae (4,80 g, 7,10 mmol) e piridina (10 mL) foi adicionado cloreto de benzoíla (2,48 mL, 21,3 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada sob resfriamento du- rante 3 horas. Às soluções de reação foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio a 2 N (25 mL, 50 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. As soluções de reação foram lavadas com clorofórmio (50 mL) quatro vezes, e a camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e secada sobre sulfato de sódio anidroso. As soluções foram filtradas através de Celite e con- centradas. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 93/7) para obter um Composto 14Af (4,60 g, produção de 83 %).
[00510] MS (ESI): m/Z = 781 [M+H]+ Exemplo 114 - Síntese de Composto 14Ag N-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida (Presente composto 36)
[00511] A uma mistura do composto 14Af (4,26 g, 5,46 mmol) e di- clorometano (50 mL) foram adicionados DIPEA (3,78 mL, 21,8 mmol) e
2-cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (3,66 mL, 16,4 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente du- rante 2 horas. A solução de reação foi resfriada sob resfriamento, e solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada (100 mL) foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio (100 mL). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, e os materiais insolúveis foram em seguida filtrados, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromato- grafia de coluna (SiO2: acetato de etila/etanol= 100/0 a 94/6, sílica de NH: acetato de etila/metanol = 100/0 a 93/7) para obter um Composto 14Ag como o presente composto 36 (3,88 g, produção de 67 %).
[00512] MS (ESI): m/Z = 980 [M+H]+ 31
[00513] P-RMN (CDCl3) δ: 148,84, 149,04 Síntese de ALNA[Oxz]-T Exemplo 115 - Síntese de Composto 15Ta 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi-5- (5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-2,4-diona
[00514] A uma mistura do composto 14Tc (2,10 g, 2,88 mmol) e EtOH (14,4 mL) foi adicionado hidroxil amina (solução aquosa a 50 %, 1,90 mL, 28,8 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. A solução de reação foi concentrada, e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 15Ta (1,34 g, produção de 71 %).
[00515] HRMS (MALDI): valor calculado como C35H35N5O8 [M+Na]+:
676,2378, valor medido: 676,2363 Exemplo 116 -Síntese de Composto 15Tb 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 37)
[00516] A uma mistura do composto 15Ta (300 mg, 0,459 mmol), diclorometano (4,6 mL) e DIPEA (240 μL, 1,38 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (205 μL, 0,918 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante 5 dias. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 60/40 a 10/90, Diol: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80, NH: cloro- fórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 15Tb como o presente composto 37 (214 mg, produção de 55 %).
[00517] HRMS (MALDI): valor calculado como C44H52N7O9P [M+Na]+: 876,3456, valor medido: 876,3441 31
[00518] P-RMN (CDCl3) δ: 148,83, 149,09 Síntese de ALNA[Oxz]-mC
Exemplo 117 - Síntese de Composto 15Ca [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil-2,4- dioxopirimidin-1-il)-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00519] A uma mistura do composto 15Ta (999 mg, 1,53 mmol), DMAP (18,7 mg, 0,153 mmol) e piridina (7,7 mL) foi adicionado anidri- do acético (217 μL, 2,30 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, água, e salmoura saturada. A camada or- gânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e concentrados sob pressão reduzida para obter um Composto 15Ca (1,10 g, a reação foi procedida quantitativa- mente).
[00520] HRMS (MALDI): valor calculado como C37H37N5O9 [M+Na]+: 718,2483, valor medido: 718,2470 Exemplo 118 - Síntese de Composto 15Cb [(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5-(5-metil- 1,2,4-oxadiazol-3-il)-3-[5-metil-2-oxo-4-(1,2,4-triazol-1-il)pirimidin-1-il]- 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00521] A uma mistura do composto 15Ca (1,05 g, 1,51 mmol), 1,2,4-triazol (939 mg, 13,6 mmol), DIPEA (2,63 mL, 15,1 mmol) e ace- tonitrila (15 mL) foi adicionado cloreto de fosforila (239 μL, 2,57 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A ca- mada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida para obter um Composto 15Cb (1,32 g) como um produto bruto.
[00522] HRMS (MALDI): valor calculado como C39H38N8O8 [M+Na]+: 769,2705, valor medido: 769,2707 Exemplo 119 - Síntese de Composto 15Cc 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7- hidróxi-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metil-pirimidin-2-ona
[00523] A uma mistura do composto 15Cb (1,30 g, 1,51 mmol, pro- duto bruto) e acetonitrila (15,1 mL) foi adicionada água de amônia a 28% (10,1 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente du- rante a noite. Água foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e concentrada para obter um Composto 15Cc (0,96 g, produção sobre 2 etapas 97 %).
[00524] HRMS (MALDI): valor calculado como C35H36N6O7 [M+Na]+: 675,2538, valor medido: 675,2539 Exemplo 120 - Síntese de Composto 15Cd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00525] A uma mistura do composto 15Cc (0,93 g, 1,42 mmol) e piridina (7,1 mL) foi adicionado anidrido benzoico (482 mg, 2,13 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. À solução de reação foi adicionada solução de hidróxido de sódio aquo- sa a 2 N (7,1 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofór- mio/metanol= 100/0 a 90/10) para obter um Composto 15Cd (958 mg, produção de 89 %).
[00526] HRMS (MALDI): valor calculado como C42H40N6O8 [M+Na]+: 779,2800, valor medido: 779,2794 Exemplo 121 - Síntese de Composto 15Ce N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3- il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 38)
[00527] A uma mistura do composto 15Cd (949 mg, 1,25 mmol), diclorometano (12,5 mL) e DIPEA (0,653 mL, 3,75 mmol) foi adiciona- do 2-cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (0,559 mL, 2,50 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambi- ente sob atmosfera de nitrogênio durante a noite. A solução de carbo- nato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgâni- ca foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 80/20 a 30/70, NH: hexano/acetato de etila = 50/50 a 0/100) para obter um Composto 15Ce como o presente composto 38 (834 mg, produção de 70 %).
[00528] HRMS (MALDI): valor calculado como C51H57N8O9P [M+Na]+: 979,3878, valor medido: 979,3876 31
[00529] P-RMN (CDCl3) δ: 148,98, 149,27 Síntese de ALNA[Tdz]-T
Exemplo 122 - Síntese de Composto 16Ta 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi-5- (3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metil-pirimidin-2,4-diona
[00530] Uma mistura do composto 1a (3,00 g, 5,25 mmol), 5-cloro- 3-metil-1,2,4-tiadiazol (848 mg, 6,30 mmol), DIPEA (2,72 mL, 15,7 mmol) e DMSO (26 mL) foi agitada a 120 ºC durante 2 horas. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfa- to de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi puri- ficado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 95/5) para obter um Composto 16Ta (3,30 g, produção de 94 %).
[00531] MS (ESI): m/z = 670 (M+H)+ Exemplo 123 - Síntese de Composto 16Tb 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil- 2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila (Presente composto 39)
[00532] A uma mistura do composto 16Ta (2,26 g, 3,37 mmol), di- clorometano (17 mL), DIPEA (1,75 mL, 10,1 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (1,51 mL, 6,77 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80, Diol: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80) para ob- ter um Composto 16Tb como o presente composto 39 (2,45 g, produ-
ção de 84 %).
[00533] MS (ESI): m/z = 870 (M+H)+ 31
[00534] P-RMN (CDCl3) δ: 149,23, 149,51 Síntese de ALNA[Tdz]-mC Exemplo 124 Síntese de Composto 16mCa [[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-(5-metil-2,4- dioxopirimidin-1-il)-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00535] A uma mistura do composto 16Ta (5,92 g, 8,84 mmol), DMAP (120 mg, 0,982 mmol) e piridina (18 mL) foi adicionado anidrido acético (1,25 mL, 13,2 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A solução de reação foi concentrada, e ace- tato de etila foi adicionado ao resíduo, e a mistura foi lavada com solu- ção de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados para obter um Composto 16mCa (5,69 g, produção de 90 %).
[00536] MS (ESI): m/z = 712 (M+H)+ Exemplo 125 - Síntese de Composto 16mCb [[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3-[5-metil-2- oxo-4-(1,2,4-tiadiazol-1-il)pirimidin-1-il]-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-
oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]acetato
[00537] A uma mistura do composto 16mCa (5,52 g, 7,75 mmol), 1,2,4-triazol (4,82 g, 69,8 mmol), DIPEA (13,4 mL, 77,5 mmol) e ace- tonitrila (39 mL) foi adicionado cloreto de fosforila (1,23 mL, 13,2 mmol) sob resfriamento, e a mistura foi agitada em temperatura ambi- ente sob atmosfera de nitrogênio durante 2 horas. Acetato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi extraída com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura sa- turada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio ani- droso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados para obter um Composto 16 mCb como um produto bru- to (6,18 g, contendo impurezas). Exemplo 126 - Síntese de Composto 16mCc 4-amino-1-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7- hidróxi-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3- il]-5-metil-pirimidin-2-ona
[00538] A uma mistura do composto 16 mCb (6,18 g, 7,75 mmol, contendo impurezas) e acetonitrila (39 mL) foi adicionada água de amônia a 28% (39 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambi- ente durante 4 dias. Água foi adicionada à solução de reação, e a mis- tura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados. O resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 16mCc (4,50 g, produção sobre 2 etapas 87 %).
[00539] MS (ESI): m/z = 667 (M-H)- Exemplo 127 - Síntese de Composto 16mCd N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida
[00540] Uma mistura do composto 16mCc (4,37 g, 6,53 mmol), ani- drido benzoico (2,22 g, 9,81 mmol) e piridina (13 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. À solução de reação foi adicio- nada solução de hidróxido de sódio aquosa a 2 N (13 mL, 26 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1,5 horas. Ace- tato de etila foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi lavada com solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e salmoura saturada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio anidroso, e os materiais insolúveis foram filtrados, e os fil- trados foram concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: clorofórmio/metanol = 100/0 a 90/10) para obter um Composto 16mCd (4,76 g, produção de 94 %).
[00541] MS (ESI): m/z = 773 (M+H)+ Exemplo 128 - Síntese de Composto 16mCe N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)- 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida (Presente composto 40)
[00542] A uma mistura do composto 16mCd (4,62 g, 5,98 mmol), diclorometano (12 mL) e DIPEA (3,10 mL, 17,9 mmol) foi adicionado 2- cianoetil N,N-di-isopropilclorofosporoamidita (2,67 mL, 12,0 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio durante a noite. A solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi passada através de um separador de fase, e os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2: hexano/acetato de etila = 80/20 a 30/70, NH: hexano/acetato de etila = 70/30 a 20/80) para obter um Composto 16mCe como o presente composto 40 (3,57 g, produção de 61 %).
[00543] MS (ESI): m/z = 974 (M+H)+ 31
[00544] P-RMN (CDCl3) δ: 149,45, 149,78
[00545] ALNA[Ms]-mC pode ser também sintetizado transformando a porção de base de ácido nucleico de ALNA[Ms]-T nucleosídeo como segue. Síntese de Composto 2Cf Exemplo 129 - Síntese de Composto 2Cd 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5- metilsulfonil-7-trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metil-6-(1,2,4-triazol-1-il)-1,6-di-hidropirimidin-2-ona
[00546] Composto 2Tb (14,1 g, 0,019 mol) foi solubilizado em ace- tonitrila (310 mL), e a isso foi adicionado trietilamina (97,29 mL, 0,961 mol), e a mistura foi agitada a 0 ºC durante 15 minutos. À solução de reação foi adicionado 1,2,4-triazol (30,36 g, 0,439 mol), e a mistura foi agitada a 0 ºC durante 15 minutos, e a isso foi em seguida adicionado cloreto de fosforila (4,44 mL, 0,028 mol), e a mistura foi agitada a 0 ºC durante 15 minutos, e aquecida para a temperatura ambiente durante 2 horas. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e a isso, foram adicionados acetato de etila (200 mL) e água (100 mL), e a mistura foi separada com um funil separatório. A camada orgânica foi lavada com carbonato de sódio (100 mL) duas vezes, secada sobre sulfato de sódio, e concentrada sob pressão reduzida para obter um Composto 2Cd como produto bruto (11,8 g). Exemplo 130 - Síntese de Composto 2Ce 6-amino-3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7- hidróxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil- pirimidin-2-ona
[00547] O composto cru 2Cd (11,8 g) foi solubilizado em 1,4- dioxano (118 mL), e água de amônia a 25% (118 mL) foi adicionada a isso, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resí- duo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorome- tano/metanol, 95/5 a 94/6). A mistura resultante foi agitada em uma solução mista de diclorometano/hexano (10/90), e os materiais precipi- tados foram coletados por filtração para obter um Composto 2Ce (8,3 g, produção sobre duas etapas 64 %).
[00548] MS (ESI): m/z = 649,3 (M+H)+ Exemplo 131 - Síntese de Composto 2Cf N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]di-hidropirimidin-2-ona
[00549] A uma solução do composto 2Ce (8,3 g, 0,012 mol) em DMF (63 mL) foi adicionado anidrido benzoico (2,57 g, 0,011 mol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 24 horas. A solu- ção de reação foi diluída com acetato de etila (200 mL), e a mistura foi lavada com água (100 mL) duas vezes. A camada orgânica foi lavada com água (100 mL) e salmoura saturada (100 mL) sucessivamente, e secada sobre sulfato de sódio. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por croma- tografia de sílica-gel (diclorometano/metanol, 99,5\0,5 a 99/1). A mistu-
ra resultante foi agitada em uma solução mista de diclorometa- no/hexano (10/90), e os materiais precipitados foram coletados por fil- tração para obter o composto 2Cf (4,0 g, produção de 47 %).
[00550] MS (ESI): m/z = 753,1 (M+H)+
[00551] Além disso, ALNA[Ms]-mC nucleosídeo pode ser também sintetizado como segue. Síntese de Composto 2Cj Exemplo 132 - Síntese de Composto 2Cg 1-[(1R,3R,4R,7S)-7-benziloxil-1-(benziloximetil)-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin2-4-diona
[00552] A uma solução mista de 1-[(1R,3R,4R,7S)-7-benzilóxi-1- (benziloximetil)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metilpirimidin- 2,4-diona (1h) (20,00 g, 21,61 mmol), que foi sintetizada de acordo com o método descrito em WO 2017/047816 A1, em diclorometano (200 mL) foi adicionada trietilamina (15,5 mL, 111 mmol), e a isso foi adicionado cloreto de mesila (4,15 mL, 53,4 mmol) em banho de gelo, e a mistura foi agitada em banho de gelo durante 4,5 horas. Água de bicarbonato de sódio a 5% (60 mL) foi adicionada a isso sob resfria- mento, e a mistura foi agitada e separada com um funil separatório. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (40 mL) e os extratos foram combinados e misturados com a camada orgânica de diclorome- tano. A camada orgânica foi lavada com salmoura a 15% (60 mL), e os solventes foram em seguida evaporados. O resíduo concentrado foi lavado com metanol (90 mL) como uma suspensão. Os materiais pre- cipitados resultantes foram coletados por filtração, secados sob vácuo para obter um Composto 2Cg (21,94 g, produção de 94 %).
[00553] MS (ESI): m/z = 528 (M+H)+ Exemplo 133 - Síntese de Composto 2Ch 1-[(1R,3R,4R,7S)-7-benzilóxi-1-(benziloximetil)-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-4-(1,2,4-triazol-1-il)pirimidin-2-ona
[00554] Composto 2Ch (3,4 g) como um produto bruto foi obtido do composto 2Cg (3,0 g, 5,6 mmol) similarmente ao Exemplo 129. Exemplo 134 - Síntese de Composto 2Ci 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-7-benziloxil-(benziloximetil)-5-metilsulfonil- 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-pirimidin-2-ona
[00555] Composto 2Ci (2,6 g, produção de 87 %) foi obtido do com- posto 2Ch (3,4 g, 5,8 mmol) similarmente ao Exemplo 130.
[00556] MS (ESI): m/z = 527,2 (M+H)+ Exemplo 135 - Síntese de Composto 2Cj 4-amino-1-[(1R,3R,4R,7S)-7-hidróxi-1-(hidroximetil)-5-metilsulfonil-2- oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-pirimidin-2-ona
[00557] O composto 2Ci (2,6 g, 4,9 mmol) foi solubilizado em ácido acético (28,6 mL), e a isso foi adicionado paládio/carbono a 20% (0,35 g), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogênio durante 16 horas. Os materiais insolúveis foram filtrados, e os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida. Ao resíduo fo- ram adicionados 1-butanol e IPE, e a mistura foi agitada, e os materi- ais precipitados foram coletados por filtração. Os sólidos resultantes foram recristalizados com metanol para obter um Composto 2Cj (1,0 g,
produção de 58 %).
[00558] MS (ESI): m/z = 346,9 (M+H)+
[00559] ALNA[Ms]-G em que uma porção de guanina é protegida com um grupo dimetilamino metileno pode ser sintetizado como segue. Aqui no caso onde um monômero contendo um tal estilo de proteção é usado em uma síntese de oligômero, é possível controlar uma produ- ção de subprodutos que pode ocorrer quando síntese de oligômero é realizada usando Composto 2Gd em que a posição 6 de guanina é protegida com DPC.
Exemplo 136 - Síntese de Composto 2Ge 2-amino-9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7- hidróxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-1H-purin-6- ona
[00560] A uma solução do composto 2Gc (1000 mg, 1,1 mmol) em tetraidrofurano (10 mL) foi adicionada água de amônia a 28% (5 mL) em temperatura ambiente, a mistura foi agitada em temperatura ambi- ente durante a noite. A isso foi também adicionada água de amônia a 28% (15 mL), e a mistura foi agitada a 70 ºC durante 8 horas. A isso, foram adicionados água e diclorometano em temperatura ambiente, e após agitação da mistura, a camada orgânica foi recuperada, e secada sobre sulfato de sódio. O resíduo foi filtrado, e os solventes foram eva-
porados, e a mistura resultante foi purificada por cromatografia de síli- ca-gel (clorofórmio/metanol, 97/3 a 92/8) para obter um Composto 2Ge (620 mg, produção de 86 %).
[00561] MS (ESI): m/z = 675 (M+H)+ Exemplo 137 - Síntese de Composto 2Gf N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2- il]-N,N-dimetilformamidina
[00562] O composto 2Ge (150 mg, 0,22 mmol) foi solubilizado em tetraidrofurano (2,22 mL), e a isso foi adicionado N,N-dimetil formami- dadimetilacetal (132 mg, 1,11 mmol) em temperatura ambiente, e a mistura foi agitada. Acetato de etila foi adicionado a isso em tempera- tura ambiente, e a mistura foi extraída (2 mL) uma vez. A camada or- gânica resultante foi lavada com salmoura, e secada sobre sulfato de sódio. O resíduo foi filtrado, e os solventes foram evaporados, e o re- síduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol = 99/1, clorofórmio/metanol = 93/7) para obter um Composto 2Gf (145 mg, produção de 89 %).
[00563] MS (ESI): m/z = 728 (M-H)- Exemplo 138 - Síntese de Composto 2Gg N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N- dimetilformamidina
[00564] O composto 2Gf (900 mg, 1,2 mmol) foi solubilizado em di- clorometano (15 mL), e a isso, foram adicionados N,N-di-isopropil eti- lamina (747 mg, 5,8 mmol) e 2-cianoetil N,N-di-isopropilcloro fosforo- amizida (1061 mg, 4,5 mmol) em temperatura ambiente, e a mistura foi agitada durante a noite. A isso, foram adicionados água de bicarbona- to saturada e diclorometano, e a camada orgânica foi separada. A camada orgânica resultante foi secada sobre sulfato de sódio, e o re- síduo foi filtrado. Após os solventes serem evaporados, a mistura re- sultante foi purificada por cromatografia de sílica-gel de amino (cloro- fórmio/metanol, 100/0 a 97/3), seguida por cromatografia de sílica-gel de diol (clorofórmio/metanol, 100/0 a 97/3) para obter um Composto 2Gg (690 mg, produção de 60 %).
[00565] MS (ESI): m/z = 930 (M+H)+
[00566] ALNA[Ms]-G em que uma porção de guanina é protegida com somente um grupo isobutiloíla pode ser sintetizado como segue. Aqui no caso onde um monômero contendo um tal estilo de proteção é usado em uma síntese de oligômero, é possível controlar uma produ- ção de subprodutos que pode ocorrer quando síntese de oligômero é realizada usando Composto 2Gd em que a posição 6 de guanina é protegida com DPC.
Exemplo 139 Síntese de Composto 2Gh N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2- il]-2-metilpropano amida
[00567] O composto 2Ge (100 mg, 0,15 mmol) foi solubilizado em piridina (1,4 mL), e a isso, foram adicionados N,N-dimetil-4- aminopiridina (29 mg, 0,24 mmol), e 2-metil propanoil-2-metil propano- ato (100 μL, 0,6 mmol) em temperatura ambiente, e a mistura foi agi- tada a 100 ºC durante 4 horas. A isso foi adicionado mais 2-metil pro- panoil-2-metil propanoato (100 μL, 0,6 mmol), e a mistura foi agitada a 100 ºC durante 2 horas. A isso, foram adicionados água de bicarbona- to saturada e acetato de sódio em temperatura ambiente, e a camada orgânica foi separada. A camada orgânica resultante foi secada sobre sulfato de sódio. O resíduo foi filtrado, e os solventes foram evapora- dos, e purificados por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 50/50 a 20/80). Outro composto obtido foi solubilizado em tetrai- drofurano (1 mL), e a isso foi adicionada solução de hidróxido de sódi- oa aquosa a 0,1 N (1 mL), e a mistura foi agitada a 0 ºC durante 40 minutos. À solução de reação foram adicionados água e acetato de etila, e a camada orgânica foi separada, e em seguida lavada com so- lução de cloreto de amônio aquosa, e o orgânico foi separado nova- mente. Após a mistura resultante ser secada sobre sulfato de sódio, o resíduo foi filtrado, e os solventes foram evaporados para obter um Composto 2Gh (56 mg, produção de 50 %).
[00568] MS (ESI): m/z = 745 (M+H)+ Exemplo 140 - Síntese de Composto 2Gi N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-2-metilpropano amida
[00569] Peneira molecular 3A foi adicionado ao diclorometano (3,6 mL) e a mistura foi agitada durante 1 hora, e a isso, foram adicionados o composto 2Gh (500 mg, 0,67 mmol), 1-metil imidazol (10,9 mg, 0,1 mol) e tetrazol (84 mg, 1,2 mmol), e Cianoetil N,N,N',N'- Tetraisopropilfosfordiamidita (949 mg, 3,1 mmol) em temperatura am- biente, e a mistura foi agitada durante 6 horas. A isso foi adicionada água de bicarbonato saturada em temperatura ambiente, e a mistura foi extraída com diclorometano duas vezes. A camada orgânica resul- tante foi secada sobre sulfato de sódio, e o resíduo foi filtrado. Após os solventes serem evaporados, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexano/acetato de etila, 50/50 a 25/75) pa- ra obter um Composto 2Gi (500 mg, produção de 79 %).
[00570] MS (ESI): m/z = 946 (M+H)+
[00571] Além disso, monômero de ALNA[Ms]-G em que a porção de guanina é protegida com somente um grupo isobutiloíla pode ser tam- bém sintetizado diretamente por uma transglicosilação do composto 1a como segue.
Exemplo 141 - Síntese de Composto 2Gj N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7- trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]- 2-metilpropano amida
[00572] A uma solução mista do composto 1a (5,0 g, 8,75 mmol) e 2-metilN-(6-oxo-1,9-di-hidropurin-2-il)propano amida (3,87 g, 17,5 mmol) em 1,2-dicloroetano (30 mL) foi adicionado BSA (21,4 mL, 87,5 mmol), e a mistura foi agitada a 60 ºC durante 30 minutos. Sucessi- vamente, a isso foi adicionado TMSOTf (0,254 mL, 1,31 mmol), e a mistura foi agitada durante 1 hora e meia. Após deixar descansar para resfriar, às soluções de reação foram adicionados clorofórmio (50 mL) e solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada (50 mL), e a mistura foi agitada. Após filtração por sucção dos materiais insolúveis, a camada orgânica foi lavada com água e salmoura satura- da, secada sobre sulfato de magnésio, e concentrada. O resíduo resul- tante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 90/10) para obter um Composto 2Gj (3,83 g, produção de 59 %).
[00573] MS (ESI): m/z = 739,5 (M+H)+ Exemplo 142 Síntese de Composto 2Gk N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-5- metilsulfonil-7-trimetilsililóxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo- 1H-purin-2-il]-2-metilpropano amida
[00574] A uma solução do composto 2Gj (1,0 g, 1,35 mmol), piridina (0,327 mL, 4,06 mmol) em diclorometano (7 mL) foi adicionado anidri- do metano sulfônico (284 mg, 1,63 mmol) sob resfriamento, e a mistu- ra foi agitada sob resfriamento durante 45 minutos. A solução de car- bonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada à solu- ção de reação, e a mistura foi extraída com clorofórmio. A camada or- gânica foi passada através de um separador de fase, e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (cloro- fórmio/metanol, 100/0 a 90/10) para obter um Composto 2Gk (657 mg, produção de 59 %).
[00575] MS (ESI): m/z = 817,4 (M+H)+ Exemplo 143 - Síntese de Composto 2Gh N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2- il]-2-metilpropano amida
[00576] A uma solução do composto 2Gk (3,16 g, 3,87 mmol) em THF (8 mL) foi adicionado TBAF (1 mol/L de solução de THF, 4,6 mL, 4,6 mmol) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A solução de reação foi concentrada, e a isso foi adicionado ace- tato de etila, e a camada orgânica foi lavada com água e salmoura sa- turada. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol, 100/0 a 90/10) para obter um Compos- to 2Gh (2,57 g, produção de 89 %).
[00577] MS (ESI): m/z = 745,5 (M+H)+
[00578] Além disso, o composto 2Gh pode ser também sintetizado do composto 2Gb como segue.
Exemplo 144 - Síntese de Composto 2Gh N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-hidróxi- 5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2- il]-2-metilpropano amida
[00579] O composto 2Gb (1010 mg, 1,0 mmol) foi solubilizado em tetraidrofurano (10 mL), e a isso, foram adicionados fluoreto de tetra- butil amônio (1 mol/L de solução de tetraidrofurano, 3 mL, 3,0 mmol) em temperatura ambiente, e a mistura foi agitada a 70 ºC durante 24 horas. Além disso, a isso foi adicionado fluoreto de tetrabutil amônio (1 mol/L de solução de tetraidrofurano, 9 mL, 9,0 mmol) em temperatura ambiente, e a mistura foi agitada a 80 ºC durante 8 horas. Após os sol- ventes serem evaporados, a mistura resultante foi purificada por cro- matografia de sílica-gel (clorofórmio/metanol, 98/2 a 93/7). A mistura resultante foi também purificada por cromatografia de sílica-gel (cloro- fórmio/metanol, 100/0 a 94/6) para obter um Composto 2Gh (570 mg, produção de 77 %).
[00580] MS (ESI): m/z = 745 (M+H)+ Exemplo 145 - Síntese e Purificação de Análogos de Oligonucleotídeo (in vitro)
[00581] Usando cada tipo de amidita obtida nos exemplos acima (Presentes compostos 1 a 44), compostos de análogo de oligonucleo- tídeo indicados nas tabelas 1 a 4 abaixo foram sintetizados por sinteti- zador automático de oligonucleotídeo de DNA/RNA nS-8II (fabricado por GeneDesign, Inc.) usando escala de 0,2 ou 1,0 μmol de CPG ou suporte de poliestireno. Todas as amiditas foram ajustadas para solu- ção de acetonitrila a 0,1 M, e o tempo de acoplamento de tipo não na- tural de nucleosídeo foi 10 minutos, e quaisquer etapas diferentes da etapa foram realizadas sob uma condição padrão de ns-811. Ativador 42 (Sigma-Aldrich) como um ativador, reagente sulfurizante II (Gren Research Corporation) para tionilação foram usados. Ao oligonucleo- tídeo sintetizado foi adicionada água de amônia a 28%, e a mistura foi reagida a 60 a 65 ºC durante 8 horas para realizar uma clivagem de um suporte e uma desproteção de uma porção de base. Amônia foi concentrada e evaporada, e a mistura resultante foi submetida a uma purificação por cromatografia de HPLC de fase reversa. Exemplo 146 - Síntese e Purificação de Análogos de Oligonucleotídeo (in vivo)
[00582] Usando cada tipo de amidita obtida nos exemplos acima (Presentes compostos 1 a 44), compostos de análogo de oligonucleo- tídeo indicados na tabela 5 abaixo foram sintetizados por sintetizador automático de oligonucleotídeo de DNA/RNA AKTA oligopilot plus 10 (fabricado por GE Healthcare Inc.) usando escala de 20 μmol de su- porte de poliestireno. Amidita de DNA foi ajustada para 0,1 M, e amidi- ta não natural foi ajustada para solução de acetonitrila a 0,05 M, e o tempo de reciclo de acoplamento de tipo não natural de nucleosídeo foi 20 minutos, e quando a primeira base foi introduzida em um suporte universal, uma etapa de acoplamento, tiolação, final foi realizada duas vezes em uma sequência respectivamente. Quaisquer etapas diferen- tes da etapa foram realizadas sob uma condição padrão de AKTA oli- gopilot plus 10. Ativador 42 (Sigma-Aldrich) como um ativador, rea- gente sulfurizante II (Gren Research Corporation) para tionilação foram usados. Ao oligonucleotídeo sintetizado foi adicionada água de amônia a 28%, e a mistura foi reagida a 60 a 65 ºC durante 8 horas para reali-
zar uma clivagem de um suporte e uma desproteção de uma porção de base. Amônia foi concentrada e evaporada, e a mistura resultante foi purificada por uma coluna de permuta de ânion. Excesso de sais contidos apóspermuta de ânion foi removido por uma coluna de dessa- linização.
[00583] A purificação e confirmação de pureza dos análogos de oli- gonucleotídeo sintetizados foram realizadas por cromatografia de HPLC de fase reversa sob as seguintes condições.
[00584] HPLC Reversa
[00585] Fase móvel
[00586] solução A: Solução aquosa de acetato de cicloexilamônio a 20 mM
[00587] Solução B: acetonitrila
[00588] Gradiente: A:B = 90:10 →50:50 (40 min.) ou A:B = 90:10 → 40:60 (45 min.)
[00589] Coluna usada:
[00590] Análise: Coluna C18 Waters XBridge@ Composto de oligo- nucleotídeo BEH, 130 Å, 2,5 μm, 4,6 × 50 mm
[00591] Preparação: Coluna Prep. Waters XBridge@ Composto de oligonucleotídeo BEH C18 OBDTM, 130 Å, 2,5 μm, 10 × 50 mm
[00592] Taxa de fluxo:
[00593] Análise: 1 mL/min.
[00594] Preparação: 4 mL/min.
[00595] Temperatura da coluna: 60ºC
[00596] Detecção: UV (260 nm)
[00597] Purificação por permuta de ânion
[00598] Fase móvel
[00599] solução A: solução aquosa de Tris-HCl (pH 8,0) a 20 mM
[00600] Solução B: Tris-HCl (pH8,0) a 20 mM, solução aquosa de NaBr a 1 M
[00601] Coluna usada:
[00602] GE HiTrap CaptQ ImpRes (permute de ânion) 5 mL
[00603] Taxa de fluxo: 5 mL/min.
[00604] Temperatura da coluna: temperatura ambiente
[00605] Detecção: UV (260 nm)
[00606] Coluna de Desalinização
[00607] Fase móvel
[00608] solução A: H2O
[00609] Solução B: H2O
[00610] Coluna usada:
[00611] GE HiPrep 26/10 Dessalinização
[00612] Taxa de fluxo:10 mL/min.
[00613] Temperatura da coluna: temperature ambiente
[00614] O peso molecular dos análogos de oligonucleotídeo sinteti- zado foi determinado por um Waters ZQ sob as condições abaixo mencionadas.
[00615] Fase móvel
[00616] Solução A: 400 mM hexafluoroisopropanol, solução aquosa de trietilamina a 15 mM
[00617] Solução B: metanol
[00618] Gradiente: A:B = 80:20 →70:30 (2,5 min.) ou A:B = 90:10 → 40:60 (45 min.)
[00619] Coluna usada:
[00620] Análise: Coluna C18 Waters ACQUITYUPLC@ Composto de oligonucleotídeo BEH, 130 Å, 1,7 μm, 2,1 × 100 mm
[00621] Taxa de fluxo: 0,2 mL/min.
[00622] Temperatura da coluna: 60ºC
[00623] Detecção: UV (260 nm)
Tabela 1 Resultados de medição do espectro de massa de cada se- quência Tm gcgttT (X) tttgct (SEQ ID No. 1) (em que, caracter pequeno representa cada base de ácido nucleico, T(X) representa cada espécie de ácido nucleico artificial contendo ti- mina, e todas as ligações de fosfato representam fosfodiéster.) Composto de oligonucleotí- Espécies de ácido m/z deo NO. nucleico artificial con- tidas em fita antis- senso Tm-1 (SEQ ID No. 1-1) ALNA [Me] 1223,9 [M-3H]3- Tm-1 (SEQ ID No. 1-2) ALNA [Ms] 1245,3 [M-3H]3- Tm-3 (SEQ ID No. 1-3) ALNA [Bs] 1266,4 [M-3H]3- Tm-4 (SEQ ID No. 1-4) ALNA [mU] 1238,5 [M-3H]3- Tm-5 (SEQ ID No. 1-5) ALNA [ipU] 1247,7 [M-3H]3- Tm-6 (SEQ ID No. 1-6) ALNA [dmU] 1243,1 [M-3H]3- Tm-7 (SEQ ID No. 1-7) ALNA [2Pym] 3736,52 [M-H]1- Tm-8 (SEQ ID No. 1-8) ALNA [4Pym] 3736,49 [M-H]1- Tm-9 (SEQ ID No. 1-9) ALNA [4CF3-2Pym] 3804,51 [M-H]1- Tm-10 (SEQ ID No. 1-10) ALNA [5Cl-2Pym] 3773,37 [M-H]1- Tm-11 (SEQ ID No. 1-11) ALNA [6NMe2-4Pym] 3777,99 [M-H]1- Tm-12 (SEQ ID No. 1-12) ALNA [2NMe2-4Pym] 3779,19 [M-H]1- Tm-13 (SEQ ID No. 1-13) ALNA [Prz] 3737,76 [M-H]1- Tm-14 (SEQ ID No. 1-14) ALNA [Trz] 3752,88 [M-H]1- Tm-15 (SEQ ID No. 1-15) ALNA [Oxz] 3743,19 [M-H]1- Tabela 2 Resultados de medição do espectro de massa de cada se- quência SRB1 (2-10-2) T (X) C (X) agtcatgactT (X) C (X) (SEQ ID No. 2) (em que, caracter pequeno representa cada base de ácido nucleico de DNA, T(X) ou C(X) cada representa espécie de ácido nucleico artificial contendo timina, espécie de ácido nucleico artificial contendo 5- metilcitosina, respectivamente, e todas as ligações de fosfato repre-
sentam fosforotioato.) Tabela 2 Composto de oligonucleotí- Espécies de ácido nu- m/z deo Nº cleico artificial contidas em fita antissenso SRB1-1 (SEQ ID No. 2-1) ALNA[Me] 1152,9 [M-4H]4- SRB1-2 (SEQ ID No. 2-2) ALNA[Ms] 1217,0 [M-4H]4- SRB1-3 (SEQ ID No. 2-3) ALNA[ipU] 1224,1 [M-4H]4- SRB1-4 (SEQ ID No. 2-4) ALNA[2Pym] 4869,28 [M-H]1- SRB1-5 (SEQ ID No. 2-5) ALNA[Prz] 4871,85 [M-H]1- SRB1-6 (SEQ ID No. 2-6) ALNA[Trz] 4937,77 [M-H]1- SRB1-7 (SEQ ID No. 2-7) ALNA[Oxz] 4885,15 [M-H]1- Tabela 3 Resultados de medição do espectro de massa de cada se- quência SRB1 (3-10-3) T(X)T(X)C(X)agtcatgactT(X)C(X)C(X)(SEQ ID No. 3) (em que, caracter pequeno representa cada base de ácido nucleico de DNA, T(X) ou C(X) cada representa espécie de ácido nucleico artificial contendo timina, espécie de ácido nucleico artificial contendo 5- metilcitosina, respectivamente, e todas as ligações de fosfato repre- sentam fosforotioato.) Tabela 3 Composto de oligonucleotí- Espécies de ácido nu- m/z deo Nº cleico artificial contidas em fita antissenso SRB1-8 (SEQ ID No. 3-1) ALNA[Me] 1066,4 [M-5H]5- SRB1-9 (SEQ ID No. 3-2) ALNA[Ms] 1143,3 [M-5H]5- SRB1-10 (SEQ ID No. 3-3) ALNA[ipU] 1151,8 [M-5H]5- SRB1-11 (SEQ ID No. 3-4) ALNA[2Pym] 5718,12 [M-H]1- SRB1-12 (SEQ ID No. 3-5) ALNA[Prz] 5719,86 [M-H]1- SRB1-13 (SEQ ID No. 3-6) ALNA[Trz] 5824,11 [M-H]1- SRB1-14 (SEQ ID No. 3-7) ALNA[Oxz] 5741,47 [M-H]1-
Tabela 4 Resultados de medição do espectro de massa de cada se- quência anti-miR-21 A(m)C(X)atC(X)agtC(X)tgaT(X)aagC(X)tA(m)(SEQ ID No. 4) (em que, A(m) representa 2'-MOE adenosina, caracter pequeno repre- senta cada base de ácido nucleico de DNA, T(X) ou C(X) cada repre- senta espécie de ácido nucleico artificial contendo timina, espécie de ácido nucleico artificial contendo 5-metilcitosina, respectivamente, e todas as ligações de fosfato representam fosforotioato.) Tabela 4 Composto de oligonucleotí- Espécies de ácido nu- m/z deo cleico artificial contidas Nº em fita antissenso anti-miR21-1 ALNA[Me] 1081,4 [M-6H]5- (SEQ ID No. 4-1) anti-miR21-2 ALNA[mU] 1117,6 [M-6H]5- (SEQ ID No. 4-2) anti-miR21-3 ALNA[ipU] 1140,8 [M-6H]5- (SEQ ID No. 4-3) anti-miR21-4 ALNA[dmU] 1129,1 [M-6H]5- (SEQ ID No. 4-4) anti-miR21-5 ALNA[Trz] 6897,87 [M-H]1- (SEQ ID No. 4-5) anti-miR21-6 ALNA[Oxz] 6832,17 [M-H]1- (SEQ ID No. 4-6) Tabela 5 Resultados de medição do espectro de massa de cada se- quência Malat1 G(X)T(X)T(X)cactgaatG(X)C(X) (SEQ ID No. 5) (em que, caracter pequeno representa cada base de ácido nucleico de DNA, T(X),C(X) ou G(X) cada representa espécie de ácido nucleico artificial contendo timina, espécie de ácido nucleico artificial contendo 5-metilcitosina, ou espécie de ácido nucleico artificial contendo guani-
na, respectivamente, e todas as ligações de fosfato representam fos- forotioato.) Tabela 5 Composto de oligonucleo- Espécies de ácido nu- m/z tídeo Nº cleico artificial contidas em fita antissenso Malat1-1 ALNA[Me] 1089,8 [M-4H]4- (SEQ ID No. 5-1) Malat1-2 ALNA[Ms] 1169,3 [M-4H]4- (SEQ ID No. 5-2) Malat1-3 ALNA [2Pim] 4680,86 [M-H]1- (SEQ ID No. 5-3) Exemplo 147 Avaliação de capacidade de ligação a fita alvo e seletivi- dade incompatível
[00624] Cada de uma fita antissenso contendo various espécie de ácido nucleico artificial ( em que a sequência representa gcgttT(X)tttgct (a acima mencionada SEQ ID No. 1), caracter pequeno representa ca- da base de ácido nucleico de DNA, T(X) representa cada espécie de ácido nucleico artificial contendo timina); uma fita de senso, ou seja, fita de DNA tendo uma sequência complementar à fita antissenso ( em que a sequência representa agcaaaaaacgc (SEQ ID No. 6), e caracter pequeno representa cada base de ácido nucleico de DNA); uma fita de RNA tendo uma sequência complementar ( em que a sequência repre- senta AGCAAAAAACGC (SEQ ID No. 7), um caracter grande repre- senta cada base de ácido nucleico.); e uma fita de RNA tendo 3 se- quências complementares contendo 1 base incompatível (em que a sequência representa AGCAAANAACGC (SEQ ID No. 8), um caracter grande representa cada base de ácido nucleico, e cada N representa uracila (U), guanine (G), citosina (C)) foi anelada para formar uma fita dupla, e em seguida o valor Tm que é uma temperature na qual 50% da fita dupla é desviada, foi medida, a capacidade de formação de fita dupla de composto de oligonucleotídeo foi examinada.
[00625] Especificamente, uma solução de amostra (150 μL) que contém solução de cloreto de sódio aquosa 100 mmol/L, tampão de fosfato de sódio (pH 7,4) 10 mmol/L, uma fita de senso 4 μmol/L, e fita antissenso 4 μmol/L foi aquecida para 95 ºC e em seguida resfriada para a temperature ambiente durante 4 horas. Corrente de nitrogênio foi passada por dentro de uma câmara cellular de espetrofotômetro (JASCO, V-730, PAC-743R) de modo a prevenir um fenômeno de condensação de modo a prevenir um fenômeno de condensação, e a solução amostra foi resfriada para 10ºC gradualmente, e ainda manti- da a 10ºC durante 1 minuto, e a medição foi então iniciada. A tempe- ratura foi aquecida para 80ºC em uma taxa de 0,5 ºC por minuto, e a absorção de ultravioleta a 260 nm foi medida em cada momento de elevação de 0,5ºC. Aqui a fim de prevenir uma mudança de concen- tração devido a uma elevação da temperature, a célula com uma tam- pa foi usada. Os resultados de medição são mostrados na Tabela 6. Tabela 6 Resultados de medição de cada valor Tm Tabela 6 Estrutura de Tm (ºC) T(X) em fita an- v.s. v.s. RNA tissenso DNA 5'-AGC AAA NAA CGC-3' 5'- N=A N=U N=G N=C gcgttT(X)tttgct-3' T-A T-U T-G T-C compatibili- incompati- incompati- incompati- dade bilidade bilidade bilidade DNA 51 48 32 42 30 ALNA[Me] 53 51 37 45 38 ALNA[Ms] 51 51 37 45 35 ALNA[Bs] 49 49 35 42 34 ALNA[mU] 51 51 38 44 36 ALNA[ipU] 52 51 38 42 35 ALNA[dmU] 50 50 39 42 35
Estrutura de Tm (ºC) T(X) em fita an- v.s. v.s. RNA tissenso DNA 5'-AGC AAA NAA CGC-3' 5'- N=A N=U N=G N=C gcgttT(X)tttgct-3' T-A T-U T-G T-C compatibili- incompati- incompati- incompati- dade bilidade bilidade bilidade ALNA[2Pym] 48 48 34 42 33 ALNA[4Pym] 52 52 39 43 36 ALNA[4CF3- 47 49 35 42 32 2Pym] ALNA[5Cl- 47 48 34 42 32 2Pym] ALNA[6NMe2- 54 52 38 39 34 4Pym] ALNA[2MNe2- 52 50 38 40 35 4Pym] ALNA[Prz] 50 51 38 43 34 ALNA[Trz] 48 50 36 42 34 ALNA[Oxz] 49 50 36 44 35
[00626] Como claramente mostrado na Tabela 6, a fita antissenso contendo vários ácidos nucleicos artificiais tem a mesma ou maior ca- pacidade de ligação à fita de senso e seletividade de incompatibilidade em comparação com fita antissenso contendo DNA natural e AL- NA[Me] como ALNA conhecido. Exemplo 147 Teste de atividade de nocaute de SR-B1 in vitro
[00627] Células Hepa 1c1c7 foram semeadas a 2,5 × 103 células por cavidade e cultivadas durante 24 horas, e em seguida vários áci- dos oligonucleicos antissenso modificados tendo uma sequência com- plementar a SRB1 foram adicionados em uma concentração final de 100, 20, 4 nmol/L, e após 48 horas, uma PCR quantitative foi realiza- da. As mesmas condições foram realizadas em 3 cavidades cada. Com relação à atividade antissenso, a taxa de inibição de expressão de SRB1 quando o composto antissenso foi adicionado foi estabeleci- da como 100% com base na relação de quantidade de SRB1 para GAPDH em um controle negativo. Os resultados são mostrados na Tabela 7. Tabela 7 Teste de atividade de nocaute in vitro de SRB1 Espécie de ácido nuclei- atividade de nocaute (%) co artificial 3-10-3 2-10-2 ALNA[Me] 36 27 ALNA[Ms] 48 38 ALNA[ipU] 43 29 ALNA[2Pym] 57 19 ALNA[Prz] 40 44 ALNA[Trz] 60 39 ALNA[Oxz] 67 50
[00628] A atividade de nocaute de gene alvo (SRB1) do composto de oligonucleotídeo antissenso contendo cada ácido nucleico artificial nos padrões de sequência de 3-10-3, e 2-10-2 a Gymnosis 100 nM foi mostrada.
[00629] Os dois padrões de disposição são como segue: 3-10-3: T(X)T(X)C(X)agtcatgactT(X)C(X)C(X) (como a SEQ ID No. 3 na Tabela 3 acima) 2-10-2: T(X)C(X)agtcatgactT(X)C(X)(como a SEQ ID No. 2 na Tabela 2 acima)
[00630] Aqui caracter pequeno representa cada base de ácido nu- cleico, cada um de T(X) ou C(X) representa espécie de ácido nucleico artificial contendo timina, ou espécie de ácido nucleico artificial con- tendo 5-metilcitosina, e todas as ligações de fosfato representam fos- forotioato.
[00631] Como claramente mostrado na Tabela 7, ALNA[Ms], AL- NA[ipU], ALNA[2Pym], ALNA[Prz],ALNA[Trz], e ALNA[Oxz] tiveram uma forte atividade de nocaute de gene alvo in vitro em comparação com ALNA[Me] como um ALNA conhecido. Exemplo 148 Teste de atividade inibitória in vitro de miRNA-21
[00632] 3,0 x 106 células/mlof de células HEK293 foram semeadas em uma placa de 10 cm, e as células foram cultivadas durante a noite em uma incubadora de CO2. No dia seguinte, usando o Reagente de Transfecção FuGENE HD, e as células foram transfectadas com 10 μm de plasmídeo reporter no qual a sequência complementar de miR- 21 foi clonada no sítio de multiclonagem de vetor psiCHECK-2 (Pro- mega), e foram cultivadas emu ma incubadora de CO2 durante cerca de 24 horas. Estas células foram recuperadas, e 2,0 × 104 célu- las/cavidade foram ressemeadas em uma placa de 96 cavidades, e um inibidor de miR-21 no qual cada ácido nucleico artificial introduzido foi adicionado. Após as células serem cultivadas em uma incubadora de CO2 durante 96 horas. Usando o Dual-Glo Luciferase Assay System, valores de luminescência de vagalume luciferase intracelular e Renilla luciferase foram detectadas com uma leitora de placa. Para corrigir os efeitos de eficiência de transfecção ou número celular do valor de lu- minescência devido à atividade de Renilla luciferase, a relação para o valor de luminescência devido à atividade de vaga-lume luciferase, a relação ao valor de luminescência devido à atividade de vaga-lume luciferase foi calculada. Além disso, a partir da relação calculada, a relação nas células nas quais o vetor psiCHECK-2 foi introduzido foi estabelecido como 100% da taxa de inibição, e a relação de células nas quais o vetor psiCHECK-2 no qual a sequência complementar miR-21 foi clonada, foi estabelecido como 0%, e cada taxa de inibição foi calculada e a atividade inibidora foi determinada. Os resultados são mostrados na Tabela 8.
Tabela 8 Atividade inibidora in vitro de miRNA-21 Tabela 8 Espécie de ácido nuclei- Taxa de inibição de miR-21 (%) co artificial Gimnose, 1μM Gimnose, 3μM ALNA[Me] 6 19 ALNA[MU] 69 85 ALNA[ipU] 45 61 ALNA[dmU] 42 63 ALNA[Trz] 61 105 ALNA[Oxz] 31 63
[00633] Sequência de oligo antissenso usado é mostrada abaixo. A(m)C(X)atC(X)agtC(X)tgaT(X)aagC(X)tA(m) (como SEQ ID No. 4 na Tabela 4 acima) (em que, A(m) representa 2'-MOE adenosina, caracter pequeno repre- senta cada base de ácido nucleico de DNA, T(X) ou C(X) cada repre- senta espécie de ácido nucleico artificial contendo timina, espécie de ácido nucleico artificial contendo 5-metilcitosina, respectivamente, e todas as ligações de fosfato representam fosforotioato.)
[00634] Como claramente mostrado na Tabela 8, ALNA[mU], AL- NA[ipU], ALNA[dmU], ALNA[Trz], e ALNA[Oxz] tiveram uma forte ativi- dade inibitória de micro RNA in vitro em comparação com ALNA[Me] como um ALNA conhecido. Exemplo 149 Teste de nocaute de MALAT1 in vivo
[00635] Composto de oligonucleotídeos antissenso (10 mg/kg e 50 mg/kg) direcionado a MALAT1 foi preparado com PBS para preparar uma concentração de 10 mg/mL e em seguida diluído com PBS para preparar 5 mL/kg, que foram administrados intravenosamente a ca- mundongos C57BL/6J com 6 semanas de idade foram administrados intravenosamente a camundongos C57BL/6J com 6 semanas de idade (male, Charles River Japan). Após 72 horas, sangue foi coletado da vea cava abdominal do camundongo sob anesthesia de isoflurano (Ja-
pan Pharmacopoeia, fabricado por Pfizer, Inc.) e eutanizado por ex- sanguinação.
O sangue foi coagulado e em seguida centrifugado para preparar soro, que foi em seguida congelado e armazenado (estabele- cido a -80°C) até o momento de avaliação.
Após eutanização por ex- sanguinação, fígado, rim, gordura, músculo esquelético (quadríceps femoral, músculo gastrocnêmio), pulmão, coração, estômago, jejuno, testículos, pele, baço, e cérebro foram coletados e congelados em ni- trogênio líquido.
Um tampão de homogeneização de Maxwell RSC simplesmente Kit de Tecido de RNA foi adicionado a tecido congelado, e o tecido foi rompido usando um instrumente de choque de multi- conta, RNA foi purificado de acordo com o protocol descrito na reação kit.RT e as reações subsequentes foram realizadas duplicadamente, e a quantidade de RNA por reação foi usada em 50 a 500 ng.
Com res- peito à atividade de nocaute, a taxa de inibição de expressão de Ma- lat1 foi estabelecida como 100% com base na relação de quantidade de Malat1 para GAPDH no grupo veículo.
Os resultados são mostra- dos nas Tabelas 9 e 10. Tabela 9 Taxa de nocaute de Malat1 (%) em cada órgão quando 50 mg/kg foram administradas.
Tabela 9 Ácido nu- fígado rim quadrí- músculo cé- pul co- es- jeju- tes- baço gor- cleico arti- ceps gastroc- re- mão ra- tô- no tícu- dura ficial femoral nemius bro ção ma- los go ALNA [Me] 88 56 55 49 4 64 9 37 9 30 51 43 ALNA [Ms] 97 80 67 63 0 80 48 54 56 69 46 82 ALNA 83 46 28 20 0 51 34 0 49 28 26 47 [2Pym] ALNA [ipU] 89 62 0 24 0 82 39 63 60 49 84 57
Tabela 10 Taxa de nocaute de Malat1 (%) em cada órgão quando 10 mg/kg foram administrados Tabela 10 Ácido nu- fígado rim quadri- músculo cé- pul co- estô- je- tes- ba- gor- cleico arti- ceps gastroc- re- mão ra- mago ju- tícu- ço dura ficial femoral nemius bro ção no los ALNA[Me] 47 41 0 21 10 50 12 1 0 0 43 3 ALNA[Ms] 90 66 22 47 0 49 17 32 10 39 19 70 AL- 53 4 0 0 0 1 37 0 27 15 0 18 NA[2Pym] ALNA[ipU] 56 66 0 11 24 75 29 50 33 22 73 47
[00636] Sequência de composto de oligonucleotídeo antissenso é mostrada abaixo. G(X)T(X)T(X)cactgaatG(X)C(X) (o mesmo que SEQ ID No. 5 na Tabela 5 acima) (em que, caracter pequeno representa cada base de ácido nucleico de DNA, T(X), C(X) ou G(X) cada representa espécie de ácido nucleico artificial contendo timina, espécie de ácido nucleico artificial contendo 5-metilcitosina, ou espécie de ácido nucleico artificial contendo guano- sina, respectivamente, e todas as ligações de fosfato representam fos- forotioato.)
[00637] Como claramente mostrado na Tabelas 9 e 10, ALNA[Ms] teve um forte nocaute de gene alvo forte em muitos órgãos (liver, rim, músculo esquelético, pulmão, coração, estômago, jejuno, testículos, gordura) em comparação com ALNA[Me] como um ALNA conhecido. Também ALNA[2Pym] teve um forte nocaute de gene alvo forte em órgãos particulares (coração, jejuno, testículos, gordura) em compara- ção com ALNA[Me] como um ALNA conhecido. Também ALNA[ipU] teve um grau similar de efeito de nocaute de gene alvo em fígado em comparação com ALNA[Me], embora, tivessem um efeito de nocaute de gene acentuadamente mais forte de gene alvo em pulmão e baço do que ALNA[Me]. Visto que várias células imunes são acumuladas no baco, oligos antissenso incluindo ALNA[ipU] podem ser esperados agir sobre células imunes, que são consideradas ter baixa migração com fármacos de ácido nucleico normais. Além disso, ALNA[ipU] pode ser esperado ter um forte efeito de fármaco sobre pulmão ou sistema imune, embora reduza a toxicidade no fígado. Exemplo 150 Teste de atividade de nocaute de MALAT1 em cada teci- do central, fígado, e rim por administração intraventricular
[00638] Camundongos C57BL/6J com 7 semanas de idade (ma- chos, Japan Charles River) foram fixados em um dispositivo estereotá- xico de cérebro sob anesthesia por Isoflurano (fabricado por Pfizer Inc.). Uma incisão foi feita no couro cabeludo embora depositando so- bre uma esteira de insulação térmica para expor o crânio. Após con- firmer a posição da bregma, um orifício foi feito no crânio 1 a 2 mm em torno do ventrículo esquerdo superior (1,0 mm para a esquerda e 0,4 mm atrás da bregma) com uma furadeira elétrica dentária. Uma agulha de caliber 27 foi inserida no ventrículo esquerdo (1,0 mm para a es- querda da bregma, 0,4 mm atrás, 2.3 mm de profundidade), e uma única dose de oligo antissenso (5 μg/10 μL/cabeça) direcionada a MA- LAT1 que foi preparado para 5 μg/10 μL em salina usando uma bomba de microinfusão montada em agulha foram administrados em uma taxa de fluxo de 2 μL/min durante 5 minutos. A seguir, o orifício no crânio foi fechado com o cimento medico Belfast (fabricado por Mutsukagaku Kogyo), a incisão foi suturada, e unguento de gentamicina a 0,1% (fa- bricado por Takata Seiyaku) foi aplicado para prevenir doenças infec- ciosas. Setenta e duas (72) horas após a administração, sangue foi coletado a partir da veia cava abdominal dos camundongos sob anes- thesia de isoflurano e eutanizados por exsanguinação. Sangue foi co- agulado e em seguida centrifugado para preparar soro, que foi em se- guida congelado e armazenado (estabelecido a -30°C) até o momento de avaliação. Após eutanização por exsanguinação, cérebro, medula espinhal, rim, e fígado foram coletados.
Para o cérebro, após eutaná- sia, crânio e espinha foram separados, e em seguida o cérebro foi re- tirado, e usando Brain Matrices (RBM-2000S, fabricado por Bio Rese- arch Center Co., Ltd.), que é um fatiador para fazer seções sagitais, e um cérebro é fatiado a partir da mediana par o lado cerebral esquerdo para uma espessua de cerca de 2 mm, e em seguida um bulbo olfató- rio, cortex cerebral, hipocampo, estriado, um cerebelo foram retirados da seção.
O resto da seção da qual os 5 sítios foram removidos foi também coletado como um sítio complex, tal como o tronco cerebral.
A medulla espinhal foi separada nos limites de T13, e dois sítios foram coletados como uma parte no lado do cérebro a partir de T13 (a se- guir, medulla espinhal proximal), e outra parte a partir de T13 a L5 (a seguir, medulla espinhal distal). Os órgãos coletados foram imersos em RNA posteriormente (Invitrogen) e armazenados a -30ºC.
Os ór- gãos e QIAzol Lysis Reagent (QIAGEN) foram adicionados ao tubo, e o tecido foi rompido usando uma aplicador de choque de multi-conta, e clorofórmio (fabricado por jyunsei chemical) e misturados.
A camada aquosa foi recuperada a partir desta mistura por separação por centrí- fuga.
RNA foi purificado de acordo com o protocol descrito em RNeasy 96 Universal Tissue Kit (QIAGEN). Reação de RT e as reações sub- sequentes foram realizadas usando a quantidade de RNA por reação em 2 a 7 ng.
Com respeito à atividade de nocaute, a taxa de inibição de expressão de Malat1 foi estabelecida como 100% com base na re- lação de quantidade de Malat1 para GAPDH no grupo de veículo.
Erro padrão foi calculado com base em valores individuais.
Tabela 11 Taxa de nocaute de Malat1 (%) em cada tecido central, fí- gado, e rim quando 5 μg/cabeça foram administrados Tabela 11 Ácido nu- Bulbo Córtex hipo- estri- cere- Sítio Medu- Me- rim fíga- cleico mo- olfató- cere- campo ado belo complexo la es- dula do dificado rio bral incluindo pinhal espi- tronco proxi- nhal cerebral mal distal ALNA[Me] -5,0 26,2 11,2 37,1 -27,6 31,8 25,0 2,9 14,0 36,3 ALNA[Ms] 4,7 37,4 35,2 49,5 12,9 46,5 25,0 18,2 34,3 21,1 ALNA[mU] 8,5 29,8 13,3 24,0 -42,6 40,6 23,4 1,1 4,7 17,8 ALNA[Oxz] 8,0 28,2 18,7 33,1 -5,3 44,3 44,9 18,5 11,1 31,5
[00639] Sequência de composto de oligonucleotídeo antissenso é mostrada abaixo. G(X)T(X)T(X)cactgaatG(X)C(X) (o mesmo que SEQ ID No. 5 na Tabela acima 5) (em que, caracter pequeno representa cada base de ácido nucleico de DNA, T(X), C(X) ou G(X) cada representa espécie de ácido nucleico artificial contendo timina, espécie de ácido nucleico artificial contendo 5-metilcitosina, ou espécie de ácido nucleico artificial contendo guano- sina, respectivamente, e todas as ligações de fosfato representam fos- forotioato.)
[00640] Como claramente mostrado na Tabela 11, ALNA[Ms], AL- NA[mU], e ALNA[Oxz] teve atividade mais forte de nocaute de gene alvo em cada tecido cental em comparação com ALNA[Me] como um ALNA conhecido Aplicabilidade Industrial
[00641] Um ácido nucleico artificial em ponte com amino (ALNA) da presente invenção pode ser usado em uma preparação de novo oli- gômero de ácido nucleico artificial. Além disso, um oligômero conten- do o ácido nucleico artificial em ponte com amino da presente inven- ção tem uma forte atividade de nocaute do gene alvo em órgãos parti- culares e pode ser usado como fármacos de ácido nucleico.
Texto Livre de Listagem de Sequências SEQ ID Nos. 1 a 6 mostram oligonucleotídeos de DNA.
SEQ ID Nos. 7 a 8 mostram oligonucleotídeos de RNA.

Claims (33)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, caracterizado pelo fato de que é representado por fórmula geral I: [em que B representa uma porção de base de ácido nucleico, em que a porção de base pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do ou- tro um átomo de hidrogênio, ou um C1-6 grupo alquila que pode ser op- cionalmente substituído com um ou mais substituintes; R5 e R6 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um grupo de proteção para grupo hidróxi, ou um grupo fosfato que pode ser opcionalmente substituído com substituin- tes; m é um número inteiro de 1 ou 2; X representa um grupo representado pela seguinte fórmula (II-1), (II-2) ou (II-3): ; o símbolo:
que é descrito nas fórmulas (II-1), (II-2) ou (II-3) representa um ponto de ligação ao grupo 2'-amino; R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um C1-6 grupo alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquenila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo C2-6 alquinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromático que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes; A representa um grupo aromático; M representa um grupo sulfonila que é substituído com um substituinte selecionado do grupo consistindo em um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes e um grupo aromático que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.] ou sais do mesmo.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B representa um grupo adeni- nila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes, um grupo guaninila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo citosinila que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo -5- metilcitosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo uracilila que pode ser opcionalmente substi- tuído com um ou mais substituintes.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ou sais do mesmo caracterizado pelo fato de que R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio; e m é um número inteiro de 1.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou sais do mesmo caracterizado pelo fato de que X representa um grupo representado por fórmula (II-1); e R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um C1-6 grupo alquila que pode ser opcionalmen- te substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromático que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 4, ou sais do mesmo caracterizado pelo fato de que R7 e R8 representam indepen- dentemente um do outro um átomo de hidrogênio, ou um grupo C1-3 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais subs- tituintes.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, ou sais do mesmo caracterizado pelo fato de que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio, e o outro do mesmo representa um grupo metila.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 5, ou sais do mesmo caracterizado pelo fato de que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio, e o outro do mesmo representa um grupo iso- propila.
8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que X representa um grupo representado por fórmula (II-2); A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionado do grupo consis- tindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxofre, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 8, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que A representa um grupo hetero- arila de cinco ou seis membros contendo dois ou três heteroátomos selecionados do grupo consistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxofre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio são incluídos, que podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes, e o substituinte é selecionado indepen- dentemente um do outro a partir de um grupo consistindo em um gru- po C1-3 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, um átomo de halogênio, e um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos C1-3 alquila.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que o grupo heteroarila de cinco ou seis membros representa um grupo consistindo em um grupo triazolila, um grupo oxadiazolila, um grupo tiadiazolila, um grupo pirimidinila, e um grupo pirazinila, cada pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
11. Composto, de acordo com a reivindicação 10, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que o grupo triazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes represen- ta grupo 1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3-ila.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 10, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que o grupo oxadiazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes re- presenta grupo 5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-ila.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 10, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que o grupo tiadiazol que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes represen- ta grupo 3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-ila.
14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que X representa um grupo representado por fórmula (II-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo C1-6 alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo arila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
15. Composto, de acordo com a reivindicação 14, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que M representa um grupo sul- fonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um grupo metila e um grupo fenila.
16. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 15, ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que R6 re- presenta um átomo de hidrogênio ou grupo DMTr, e R5 representa um átomo de hidrogênio ou -P(O(CH2)2CN)(N(ipr)2).
17. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo consistindo em 3-[[(1R,4R,6R,7S)-4-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 6-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-metilsulfonil-5-oxa-2- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]- 7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida; [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato; N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5- metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-purin-6-il]benzamida; 3-[[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-
5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopronilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-5-(benzenossulfonil)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil)óxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil- 2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida; (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-3-(5-metil-2,4-dioxo- pirimidin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida; (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)- 1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carboxamida; [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7- [2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(metilcarbamoil)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6-il]N,N- difenilcarbamato; (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-metil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5- carboxamida; (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-3-(5-metil-2,4- dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida; (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxopirimidin-1-il)- 1-[[bis(4-metoxifenil)fenil-metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida; [9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(isopropilcarbamoil)-2-
oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-2-(2-metilpropanoilamino)purin-6- il]N,N-difenilcarbamato; (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamidapurin-9-il)-1-[[bis(4- metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N-isopropil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida; (1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2- cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-N,N-dimetil-3-(5-metil-2,4- dioxopirimidin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida; (1R,3R,4R,7S)-3-(4-benzamida-5-metil-2-oxo-pirimidin-1-il)- 1-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-N,N-dimetil-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxamida; 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3- (5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; 1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-7- [2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida; N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin- 2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-N,N- dimetil-6-formamidina; N'-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin- 2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida; 3-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-3- (5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-pirimidin-4-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di-
isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirimidin- 4-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida; 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-5-[4-(trifluorometil)pirimidin-2-il]-2- oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[4- (trifluorometil)pirimidin-2-il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida; 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 5-(5-cloropirimidin-2-il)-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-5-(5-cloropirimidin-2-il)-7-[2-cianoetóxi-(di- isopropilamino)fosfanil]óxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5- metilpirimidin-4-il]benzamida; 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 5-[6-(dimetilamino)pirimidin-4-il]-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2- oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamina)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[(6- dimetilamino)pirimidin-4-il]-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil- 2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida; 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]-
5-[2-(dimetilamino)pirimidin-4-il]-3-(5-metil-2,4-dioxo-pirimidin-1-il)-2- oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-[2- (dimetilamino)pirimidin-4-il]-7-hidróxi-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]benzamida; 3-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-pirazin-2-il-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-pirazina- 2-il-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4- il]benzamida; 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 5-(1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-2-oxa- 5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2- oxo-pirimidin-4-il]benzamida; N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5- dimetil-1,2,4-triazol-3-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H- purin-2-il]-N,N-dimetilformamidina N-[9-(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(1,5-dimetil-1,2,4- triazol-3-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]purin-6-il]benzamida;
3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa- 5-azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(5-metil- 1,2,4-oxadiazol-3-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida; 3-[[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil-metóxi]metil]- 3-(5-metil-2,4-dioxopirimidin-1-il)-5-(3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptan-7-il]óxi-(di- isopropilamino)fosfanil]oxipropanonitrila; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5-(3-metil- 1,2,4-tiadiazol-5-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-5-metil-2-oxo- pirimidin-4-il]benzamida; N-[1-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-hidróxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-5-metil-2-oxo-pirimidin-4-il]di-hidropirimidin-2-ona; N'-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5- metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]- N,N-dimetilformamidina; N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-[2-cianoetóxi-(di-isopropilamino)fosfanil]óxi-5- metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]- 2-metilpropano amida; and N-[9-[(1R,3R,4R,7S)-1-[[bis(4-metoxifenil)-fenil- metóxi]metil]-7-hidróxi-5-metilsulfonil-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan- 3-il]-6-oxo-1H-purin-2-il]-2-metilpropano amida.
18. Composto de oligonucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende um ou mais nucleosídeos representado por fórmu- la geral (I'):
[em que, B representa uma porção de base de ácido nucleico em que a porção de base pode ser opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do ou- tro um átomo de hidrogênio, ou um C1-6 grupo alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes; m é um número inteiro de 1 ou 2; X representa um grupo representado pela seguinte fórmula (II'-1), (II'-2), ou (II'-3):
; os símbolos:
que é descrito na fórmula (II'-1), (II'-2) ou (II'-3) representa um ponto de ligação ao grupo 2'-amino; A representa um grupo aromático contendo um ou mais he- teroátomos selecionado do grupo consistindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxofre, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes; M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um C1-6 grupo alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo aromático que pode ser opcionalmente subs- tituído com um ou mais substituintes ou sais do mesmo.
19. Composto de acordo com a reivindicação 18 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que B representa um grupo adeni- nila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes, um grupo guaninila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo citosinila que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes, um grupo -5- metilcitosinila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes ou um grupo uracilila que pode ser opcionalmente substi- tuído com um ou mais substituintes.
20. Composto de oligonucleotídeo de acordo com reivindi- cação 18 ou 19 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1, R2, R3 e R4 representam independentemente um do ou- tro um átomo de hidrogênio; e m é um número inteiro de 1.
21. Composto de oligonucleotídeo de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 20 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que X representa um grupo representado por fórmula (II'-1); e R7 e R8 representa independentemente um do outro um átomo de hidrogênio, um C1-6 grupo alquila que pode ser opcional- mente substituído com um ou mais substituintes, ou um grupo aromá- tico que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substi- tuintes.
22. Composto de oligonucleotídeo de acordo com a reivin- dicação 21 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogê- nio, um C1-3 grupo alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
23. Composto de oligonucleotídeo de acordo com a reivin- dicação 22 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio, e o outro do mesmo re- presenta um grupo metila.
24. Composto de oligonucleotídeo de acordo com a reivin- dicação 23 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que um de R7 e R8 representa um átomo de hidrogênio, e o outro do mesmo re- presenta um grupo isopropila.
25. Composto de oligonucleotídeo de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 20 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que X representa um grupo representado por fórmula (II'-2); e A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo um ou mais heteroátomos selecionado do grupo consis- tindo em átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio e átomo de enxofre, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
26. Composto de oligonucleotídeo de acordo com a reivin- dicação 25 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que A representa um grupo heteroarila de cinco ou seis mem- bros contendo dois ou três heteroátomos selecionados de átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio, e átomo de enxofre, contanto que pelo menos dois átomos de nitrogênio são incluídos, que pode ser opcio- nalmente substituído com um ou mais substituintes, e o substituinte é selecionadoindependentemente um do outro um grupo consistindo em um C1-3 grupo alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio, um átomo de halogênio, e um grupo amino que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais C1-3 grupo alquilas.
27. Composto de oligonucleotídeo de acordo com a reivin- dicação 26 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que o grupo heteroarila de cinco ou seis membros é selecionado do grupo consis- tindo em um grupo triazolila, um grupo oxadiazolila, um grupo tiadi- azolila, um grupo pirimidinila, e um grupo pirazinila, cada pode ser op- cionalmente substituída com um ou mais substituintes.
28. Composto de oligonucleotídeo de acordo com a reivin- dicação 27 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que o grupo triazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa 1,5-dimetil-1,2,4-triazol-3-ila grupo.
29. Composto de oligonucleotídeo de acordo com a reivin- dicação 27 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que o grupo oxadiazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa 5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-ila grupo.
30. Composto de oligonucleotídeo de acordo com a reivin- dicação 27 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que o grupo tiadiazolila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes representa 3-metil-1,2,4-tiadiazol-5-ila grupo.
31. Composto de oligonucleotídeo de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 20 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que X representa um grupo representado por fórmula (II'-3); e M representa um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em um C1-6 grupo alquila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, e um grupo arila que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes.
32. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 18 a 31 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que M re- presenta um grupo sulfonila que é substituído com um ou mais substi- tuintes selecionados do grupo consistindo em um grupo metila e um grupo fenila.
33. Composto de oligonucleotídeo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32 ou sais do mesmo, caracterizado pelo fato de que um ou mais ligações de fosfato entre nucleotídeos repre- sentam uma ligação de fosforotioato.
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