BR112021007021A2

BR112021007021A2 - composição oral de galactose e uso da mesma

Info

Publication number: BR112021007021A2
Application number: BR112021007021-4A
Authority: BR
Inventors: Oliver Yoa-Pu Hu; Ping Yang; Cheng-Huei Hsiong
Original assignee: Avalon HepaPOC Limited
Priority date: 2018-10-19
Filing date: 2018-10-19
Publication date: 2021-07-13
Also published as: PH12021550610A1; SG11202103490RA; JP2022505270A; WO2020077632A1; KR20210102188A; EP3866762A4; PH12021550776A1; EP3866762A1; AU2023201158A1; CA3115851A1; EA202190761A1; SG11202102697XA; AU2018445495A1

Abstract

A presente invenção refere-se a uma composição oral de galactose contendo galactose, um antioxidante e um tampão. A composição oral de galactose contém 1%-80% em peso de galactose. O antioxidante é selecionado dentre vitamina A, vitamina C, vitamina E, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), bissulfito de sódio, flavonoides, polifenóis, ácido dietilenotriaminopentacético (DTPA) e ácido NTA-nitrilotriacetato (NTA). O tampão é selecionado dentre tampão de ácido ascórbico, tampão de citrato, tampão de fosfato, tampão de acetato, tampão de carbonato e tampão de trietanolamina. A composição oral de galactose pode ser aplicada para detectar a capacidade metabólica individual da galactose para avaliar a função hepática.

Description

“COMPOSIÇÃO ORAL DE GALACTOSE E USO DA MESMA” CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se a uma fórmula oral de galactose capaz de ser empregada na detecção da concentração sanguínea de galactose.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[0002] A galactose é um epímero de glicose e um dos principais componentes da lactose. A galactose é metabolizada principalmente no organismo pelo fígado e pode ser convertida em glicose ou, por sua vez, sintetizada em glicogênio armazenado no fígado. Uma vez que a doença hepática tem um efeito significativo sobre o metabolismo da galactose, a capacidade máxima de eliminação de galactose (GEC) e a concentração sanguínea de ponto único de galactose (GSP) podem ser usadas como indicadores da função hepática quantitativa clínica.

[0003] A GEC tem sido realizada como um teste quantitativo de função hepática humana por anos. No entanto, os testes de GEC requerem uma série de amostras de sangue para estabelecer uma curva padrão, que apresenta dificuldades na aplicação clínica. Há muitos estudos usando GSP para avaliar a função hepática humana. A função hepática inclui estado do fluxo sanguíneo hepático, estado da enzima hepática ou capacidade metabólica da galactose.

[0004] Tang H.S. e Hu O.Y.P. (Digestion 1992; 52: 222-231) revelaram que uma variedade de doenças hepáticas, como hepatite crônica, cirrose hepática e câncer hepático, podem ser identificadas com precisão pelo método de GSP. Além disso, o método GSP pode ser usado para avaliar a função hepática residual. O método GSP é recomendado na referência do Food and Drug Administration (FDA) dos EUA e provou ser um método extremamente simples e viável para avaliar a função hepática residual, que foi verificada por doenças hepáticas comuns em nosso pessoal. Além disso, a GSP se tornou um dos métodos recomendados para uso no teste da função hepática na Orientação para a Indústria publicada pelo FDA.

[0005] No passado, a concentração de galactose no sangue de um sujeito foi medida 60 minutos após injeção intravenosa rápida de 0,5 g/kg de galactose por três minutos em jejum, para obter um valor de GSP (em μg/ml). No entanto, a injeção intravenosa é invasiva, o que traz estresse psicológico para o sujeito e causa dano tecidual, dor ou possíveis complicações. Em particular, muitas vezes são necessárias várias tentativas para fazer uma injeção bem-sucedida em crianças da escola primária e pré-escolares que não são capazes de cooperar e têm vasos sanguíneos mais finos.

[0006] Assim, como projetar uma fórmula de galactose não invasiva que pode ser administrada oralmente aos sujeitos e pode ser detectada com precisão pelo método de GSP tornou-se um tópico importante a ser resolvido pela presente invenção.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0007] O objetivo da presente invenção é fornecer uma composição oral de galactose compreendendo galactose, um tampão e um antioxidante, em que a referida composição oral de galactose varia os valores de pH de 2,0 a 10,0, e em que a referida galactose compreende D-(+)- galactose, L-(-)- galactose, isótopo de galactose estável, anel de galactose ou derivados de galactose.

[0008] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, o referido antioxidante é selecionado do grupo que consiste em vitamina A, vitamina C, vitamina E, bissulfito de sódio, polifenóis, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), ácido dietilenotriaminopentacético (DTPA), flavonoides e ácido NTA-nitrilotriacetato (NTA).

[0009] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, o referido tampão é selecionado de um grupo incluindo pelo menos um dentre tampão de ácido ascórbico, tampão de citrato, tampão de fosfato, tampão de acetato, tampão de carbonato e tampão de trietanolamina.

[0010] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, a referida composição oral de galactose varia os valores de pH de 3,0 a 6,0.

[0011] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, a referida composição oral de galactose é uma composição alimentar e/ou uma composição farmacêutica.

[0012] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, a referida composição oral de galactose inclui ainda pelo menos um dentre emulsificante, corante, agentes aromatizantes, adoçantes, conservantes, excipientes, extensores, estabilizantes e dispersantes.

[0013] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, o referido adoçante é selecionado de um grupo incluindo pelo menos um dentre D-Sorbitol, Solução de D-Sorbitol a 70%, D-Xilitol, Glicirrizina, Glicirrizinato trissódico, D-Manitol, Sacarina, Sacarina Sódica, Ciclomato de Sódio, Ciclomato de Cálcio, Aspartame, Glicosídeo de Esteviol, Extratos de Alcaçuz, Acesulfame de Potássio, Glicirrizina Amoniada, Glicirrizinato de Monoamônio, Maltitol, Xarope de Maltitol (Xarope de Glicose Hidrogenado), Isomalte (Palatinose Hidrogenada), Lactitol, Ácido Monoglicuronil Glicirrético, Taumatina, Eritritol, Sucralose, e Neotame.

[0014] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, o referido tempero é selecionado de um grupo que inclui pelo menos um dentre cereja, limão, lima, mandarina, laranja, tangerina, menta, morango, banana, caramelo, alcaçuz, maracujá, pêssego, framboesa, tutti-frutti, toranja, baunilha, creme, chocolate e uvas.

[0015] Outro objetivo da presente invenção é fornecer um tipo de composição oral de galactose mencionada acima para a preparação de um agente para a detecção do status do fluxo sanguíneo hepático, status da enzima hepática e capacidade metabólica da galactose.

[0016] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, cada dose oral da composição oral de galactose varia de 0,01g/kg a 5g/kg.

[0017] Outro objetivo da presente invenção é fornecer uma composição de galactose, compreendendo galactose, um tampão e um antioxidante; em que a referida composição de galactose varia os valores de pH de 2,0 a 10,0; em que a referida composição de galactose mantém a cor original sob condição de alta temperatura; em que a referida galactose inclui pelo menos um dentre D-(+)- galactose, L-(-)- galactose, isótopo estável de galactose, anel de galactose, e derivados de galactose.

[0018] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, a referida temperatura alta é uma temperatura de 80 °C a 250 °C.

[0019] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, a referida composição de galactose é um adoçante nutricional para diabetes.

[0020] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, a referida composição de galactose pode ser colocada em um alimento, nutrição e leite de fórmula.

[0021] Outro objetivo da presente invenção é fornecer um tipo de composição de galactose mencionada acima para a preparação de um agente para a detecção do status do fluxo sanguíneo hepático, status da enzima hepática e capacidade metabólica da galactose.

[0022] Para alcançar o objetivo acima da presente invenção, cada dose da composição de galactose varia de 0,01g/kg a 5g/kg.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0023] A Figura 1 mostra os resultados do relatório de teste para os produtos de solução oral de galactose.

[0024] A Figura 2 mostra uma vista de distribuição relativa dos resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose e os resultados de OGSP da administração oral de galactose.

[0025] A Figura 3 mostra uma vista de distribuição dos resultados de OGSP da administração oral de galactose para sujeitos com funções hepáticas normais, moderadamente comprometidas e gravemente comprometidas.

[0026] A Figura 4 mostra uma correlação entre os resultados de OGSP da administração oral de galactose e cirrose.

[0027] A Figura 5 mostra uma correlação entre os resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose e cirrose.

[0028] A Figura 6 mostra uma correlação entre os resultados de OGSP da administração oral de galactose e o sistema de pontuação para doença hepática em estágio terminal.

[0029] A Figura 7 mostra uma correlação entre os resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose e o sistema de pontuação para doença hepática em estágio terminal.

[0030] A Figura 8 mostra as alterações de OGSP em vários momentos após a administração oral de galactose a animais com esteato-hepatite não alcoólica (NASH).

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERENCIAIS

[0031] A presente invenção é ilustrada exemplarmente, mas não limitada pelas seguintes modalidades.

[0032] Na presente invenção, vários tipos e concentrações de tampão e antioxidantes são adicionados para ajuste em uma solução oral de galactose em valores de pH diferentes e, em seguida, os testes de estabilidade são realizados para fornecer uma boa fórmula oral de galactose.

[0033] A presente invenção refere-se a uma galactose da presente invenção, incluindo pelo menos um dentre D-(+)- galactose, L-(-)- galactose e isótopo estável de galactose.

[0034] A presente invenção refere-se a um antioxidante da presente invenção, incluindo pelo menos um dentre vitamina C e/ou bissulfito de sódio, vitamina A, vitamina E, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), ácido dietilenotriaminopentacético (DTPA), flavonoides, polifenóis e ácido NTA- nitrilotriacetato (NTA).

[0035] A presente invenção refere-se a um tampão da presente invenção incluindo pelo menos um dentre tampão de citrato, tampão fosfato, tampão acetato, tampão carbonato, tampão de ácido ascórbico e tampão de trietanolamina.

[0036] Preparação da solução oral de galactose:

[0037] 50 litros de água a 45°C são injetados em um barril dispensador e, em seguida, 155g de citrato de sódio são adicionados e agitados até serem completamente dissolvidos. Após ajustar o valor de pH para 4,5±0,5, 500g de bissulfito de sódio são adicionados e agitados até dissolver completamente, e 40kg de D-Galactose são adicionados e agitados até dissolver completamente, e então 36g de citrato de sódio são adicionados e agitados até dissolver completamente. Após ajustar o valor de pH para 4,5±0,5, a água a 45°C é preenchida até que o volume de toda a mistura atinja 100 litros, então agitada por 10 minutos e filtrada com um filtro de tamanho de poro de 0,22 μm. Após misturar uniformemente, a mistura é vertida em um número de garrafas de vidro, cada uma com uma capacidade de 100 ml, então amostrada e vedada imediatamente. Finalmente, as garrafas são colocadas em um pote de vapor de alta pressão a 121°C (1,2 kg/cm2). Após esterilização por 15 minutos, os frascos são retirados e amostrados. A Tabela 1 mostra os resultados dos testes de estabilidade em longo prazo para a solução oral de galactose. É mostrado que a fórmula tem boa estabilidade após 37-148 meses de colocação.

Tabela 1 Estabilidade em longo prazo da solução oral de galactose Duração do armazenamento (mês) 37 60 65 88 126 148 Estado Qualificado Qualificado Qualificado Qualificado Qualificado Qualificado Valor de pH 3,8 3,8 3,5 3,6 3,8 3,9 Turbidez (-) (-) (-) - (-) - Ingrediente (%) 100±5 98,1 103±8 98,8 102±l 99,3 5-hidroximetil 1-furfural - 0,07 - 0,08 - 0,06 (-) indica ausência de crescimento de bactérias e fungos - indica que não há detecção

[0038] O teor de galactose é de 1%-80%. O método é configurar a galactose em alta temperatura como soluções de 1%-80% e, em seguida, diluí-la para o melhor teor de 4%-40% do peso total. Não adicione tampão ou adicione tampão ao peso total de 0,001%-5%. Não adicione antioxidante ou adicione antioxidante ao peso total de 0,001% a 5%. A fórmula de solução oral apropriada pode ser preparada selecionando o tampão e antioxidante e adicionando o conteúdo dos seguintes ingredientes: antioxidante de 0,001M-1M bissulfito de sódio e/ou vitamina C, vitamina A, vitamina E, flavonoides, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), polifenóis, ácido dietilenotriaminopentacético (DTPA), e/ou ácido NTA-nitrilotriacetato (NTA); e/ou tampão de uma das sete soluções, ou seja, 0,001M-1M tampão de citrato, tampão de fosfato, tampão de acetato, tampão de carbonato, tampão de ácido ascórbico e tampão de trietanolamina com ajuste dos valores de pH variando de 4,0-9,0. Uma fórmula de solução oral estável pode ser obtida pela adição de tampão de citrato a 0,01% e bissulfito de sódio a 0,5% com o valor de pH de 4,5.

[0039] De acordo com a solução oral preparada pela fórmula acima, a concentração de galactose é 400mg/ml e o volume da mesma é de 100ml. O produto da solução oral de galactose é então testado e os resultados são mostrados na Figura 1. Com base nos resultados na Figura 1, a cor, os ingredientes principais, o valor de pH, o volume para a solução oral de galactose da presente invenção estão alinhados com o valor padrão. De acordo com as regulamentações da edição USP-XXII, para produtos de decomposição principal de líquido oral de dextrose de 5- hidroximetil-furfural e outras regulamentações relevantes sobre o teor de substâncias relacionadas, o valor de absorbância da água como uma solução de controle em branco não deve exceder 0,25 sob a condição de concentração de dextrose de 1/250g/ml a 284nm de comprimento de onda. O teor de 5-hidroximetil- furfural na solução oral de galactose da presente invenção após a colocação por um longo tempo é de apenas 0,02. Assim, de acordo com os resultados na Figura 1 e Tabela 1, a solução oral de galactose da presente invenção pode ser colocada por um longo tempo e manter a estabilidade. Modalidade 1: Efeitos do antioxidante e do tampão na estabilidade da solução oral de galactose

[0040] Preparando a solução oral de galactose, a concentração de galactose é de 4% e o volume é de 100ml. No estudo de estabilidade, de acordo com os resultados na Tabela 2, todas as fórmulas de adição de vitamina C (0,5M) como um antioxidante mudaram a cor da solução oral após 168 horas sob a condição de 80°C. No entanto, quando o bissulfito de sódio (0,1M, 0,5M) como antioxidante e o valor de pH do mesmo é ajustado para 4,5, não há alteração na cor após colocar a fórmula sob a condição de 80°C por 168 horas.

Tabela 2 Fórmula 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Sol.pH 7,35 7,35 4,5 4,5 7,35 7,35 4,5 4,5 7,35 4,5 Bissulfito(M) 0,5 0,5 0,1 0,1 Vit.C(M) 0,5 0,5 0,1 0,1 ** ***** **** ** *** *** * * Cor após 168 horas *: representa a profundidade da cor; quanto mais “*” mais profunda a cor

[0041] Preparando a solução oral de galactose, a concentração de galactose é de 4% e o volume é de 100ml. No estudo de estabilidade, cinco tampões diferentes com cada um tendo 0,01M de concentração e antioxidantes são adicionados respectivamente para formação, em que o tampão é selecionado do grupo incluindo tampão de citrato, tampão de fosfato, tampão de acetato, tampão de carbonato e tampão de trietanolamina, e os antioxidantes ainda são bissulfito de sódio e vitamina C de 0,01M em concentração. De acordo com os resultados na Tabela 3, todas as fórmulas de adição de vitamina C como antioxidante mudaram de cor após 168 horas, portanto, a estabilidade é fraca. No entanto, em todas as fórmulas de adição de bissulfito de sódio como antioxidante, não importa em qual tampão, não há alteração na cor sob a condição do valor de pH a 7,35 ou 4,5. Ao observar a galactose das fórmulas 1-30 sob a condição do valor de pH a 4,5, com tampão de citrato e antioxidante bissulfito de sódio, a estabilidade é melhor em termos do valor de pH e alteração de cor. Tabela 3 Fórmula 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Citrato 9 9 9 9 Fosfato 9 9 9 9 Acetato 9 9 9 9 Carbonato 9 9 9 9 Trietanolamina 9 9 9 9 pH 4,5 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 7,35 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 Bissulfito 0,1 M 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 Vit.C 0,1 M 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 Cor após 168 horas *** **** ** ** ** ** *** *** *** *** *: representa a profundidade da cor; quanto mais “*” mais profunda a cor; +: representa a quantidade de precipitação

[0042] Preparando a solução oral de galactose, a concentração de galactose é de 4% e o volume é de 100ml. No estudo de estabilidade, cinco tampões diferentes com cada um tendo concentração de 1M e antioxidantes são adicionados respectivamente para formação, em que o tampão é selecionado de um grupo incluindo tampão de citrato, tampão de fosfato, tampão de carbonato e tampão de trietanolamina, e os antioxidantes ainda são bissulfito de sódio ou vitamina C de 0,5M em concentração. De acordo com os resultados na Tabela 4, todas as fórmulas de adição de 0,5M de vitamina C como um antioxidante mudaram de cor após 168 horas, de modo que a estabilidade é fraca. E para as fórmulas parciais em que 0,5M bissulfito de sódio é adicionado como um antioxidante, há alterações na cor após 168 horas sob a condição de 80°C. Além disso, ao armazenar em 1M tampão de carbonato sob a condição do valor de pH a 7,35 e em 1M tampão de trietanolamina sob a condição do valor de pH a 4,5 por uma semana, há alterações na cor. Portanto, sabe-se que a estabilidade da fórmula será reduzida quando a concentração do bissulfito de sódio e do tampão aumentarem juntos. Quando os quatro tampões restantes com alta concentração, ou seja, tampão de citrato, tampão de fosfato, tampão de carbonato e tampão de trietanolamina, são adicionados ao antioxidante com alta concentração de bissulfito de sódio sob a condição do valor de pH em 4,5, eles são mais estáveis, mas melhores no ambiente de tampão de citrato e tampão de acetato. Após colocar as fórmulas 31-50 sob a condição de 80°C por uma semana, não há precipitação.

Tabela 4 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 Citrato (M) 1 1 1 1 Fosfato (M) 1 1 1 1 Acetato (M) 1 1 1 1 Carbonato (M) 1 1 1 1 Trietanolamina 1 1 1 1 (M) pH 4,5 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 7,35 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 Bissulfito (M) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Vit.C. (M) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Cor após uma * ***** ***** * ***** ***** **** ***** ** ***** ***** **** * ***** semana *: representa a profundidade da cor; quanto mais, mais profunda a cor Modalidade 2: Efeitos do valor de pH na estabilidade da solução oral de galactose

[0043] Os testes de estabilidade da solução oral de galactose são realizados com os valores de pH variando de 5,02 a 8,52, em que a concentração de galactose é de 4%, o volume é 100ml e não contém tampões e antioxidantes. Com base nas regulamentações da edição USP-XXII, para os produtos de decomposição principal de líquido oral de dextrose de 5-hidroximetil-furfural e outras regulamentações relevantes sobre o teor de substâncias relacionadas, o valor de absorbância da água como uma solução de controle em branco não deve exceder 0,25 sob a condição de concentração de dextrose 1/250g/ml em 284nm de comprimento de onda. Consequentemente, o valor de absorbância correspondente da concentração de 4% da solução oral de galactose preparada pela invenção não deve exceder 2,5. Como resultado, descobre-se que a variação da fórmula é menor antes e após a esterilização quando o valor de pH é 4,5. Assim, sabe-se que, sob o ambiente de pH baixo, a estabilidade é melhor. Modalidade 3: Efeitos da concentração de antioxidante na estabilidade da solução oral de galactose

[0044] Após a observação sobre a estabilidade da solução oral de galactose que é preparada com diferentes concentrações de antioxidantes, pode-se descobrir que quando a concentração de antioxidante aumenta, tanto o valor de pH quanto o valor de absorbância têm as menores alterações antes e após a esterilização, e a estabilidade na situação em que o antioxidante é adicionado é melhor do que na qual o antioxidante não é adicionado. Em 0,01M tampão de citrato, tanto o valor de pH da solução oral quanto a concentração antioxidante de bissulfito de sódio são ajustados, os resultados indicam que, sob condições ácidas e concentração antioxidante de 1% de bissulfito de sódio, tanto o valor de pH quanto o valor de absorbância têm as menores alterações antes e após a esterilização.

[0045] Em 0,01M tampão fosfato, tanto o valor de pH da solução oral quanto a concentração de antioxidante de bissulfito de sódio são ajustados. Os resultados indicam que, sob condições ácidas e concentração antioxidante de 1% de bissulfito de sódio, tanto o valor de pH e quanto o valor de absorbância têm as menores alterações antes e após a esterilização, e a estabilidade é melhor. Em 0,01M tampão acetato, tanto o valor de pH da solução oral quanto a concentração antioxidante de bissulfito de sódio são ajustados, os resultados indicam que sob a condição de concentração de antioxidante de 1% de bissulfito de sódio, tanto o valor de pH quanto o valor de absorbância têm as menores alterações antes e após a esterilização, e a estabilidade é melhor. Em 0,01M tampão de trietanolamina, tanto o valor de pH da solução oral quanto a concentração de antioxidante de bissulfito de sódio são ajustados, os resultados indicam que, sob a condição de concentração de antioxidante de 1% de bissulfito de sódio, tanto o valor de pH quanto o valor de absorbância têm as menores alterações antes e após a esterilização, e a estabilidade é melhor.

[0046] De acordo com a menor alteração no valor de pH e a menor alteração na cor da solução, a fórmula ideal com tampão de citrato pode ser selecionada como um sistema modelo ideal. Estudo adicional sobre o aumento da concentração da galactose para 40%. Em um ambiente com água pura, a cor amarela da solução aumenta com o aumento da concentração de galactose. Em tampão de citrato ácido, adicionar diferentes concentrações de bissulfito de sódio tem pouco efeito sobre o valor de pH antes e após a esterilização. No entanto, quando a concentração de bissulfito de sódio é maior que 0,5%, a cor da solução oral não é alterada e as alterações mínimas do valor de absorbância também podem ser obtidas. Em tampão de citrato alcalino, não importa quanto a concentração de bissulfito de sódio seja adicionada, a cor da solução oral muda significativamente após o armazenamento por uma semana a 80°C.

[0047] Os açúcares gerais, como sacarose ou galactose, descolorarão em temperaturas elevadas de cerca de 80°C, e a galactose em temperaturas elevadas descolorará se for um sólido ou uma solução. Quando a fórmula da solução oral de galactose da presente invenção é colocada a 80°C para armazenamento ou 121°C para esterilização em alta temperatura, não há alteração na cor. Consequentemente, a fórmula de solução oral de galactose da presente invenção pode ser usada como um suplemento de doçura em alta temperatura, tal como no cozimento. Uma vez que a galactose tem doçura e calorias, mas não afeta o açúcar no sangue, ela também pode ser um adoçante nutricional para diabetes ou para aqueles que precisam controlar o açúcar no sangue.

[0048] A seguir, é ilustrado adicionalmente o estudo de viabilidade da aplicação da fórmula da composição oral da galactose para detectar a concentração da galactose no sangue.

[0049] As condições do objeto de pesquisa

[0050] Critérios de inclusão de sujeitos:

1. Homens ou mulheres entre 20 e 85 anos de idade.

2. Os que concordarem em assinar o consentimento do sujeito e estiverem dispostos a cooperar com todos os procedimentos da pesquisa.

[0051] Critérios de exclusão do sujeito:

1. Pacientes que já tiveram uma reação alérgica à galactose e têm galactosemia.

2. Aqueles que receberam a gastrectomia total ou subtotal, doença celíaca e ressecção intestinal e têm outro histórico médico.

3. Diabetes.

4. Crianças ou pessoas com deficiência.

5. Quaisquer outros motivos relacionados a saúde certificados pelo pesquisador principal são descartados neste teste.

[0052] Métodos de pesquisa, procedimentos e testes relacionados

[0053] (1) Pré-triagem

[0054] Você deve assinar o consentimento do sujeito antes do período de triagem e registraremos seu histórico médico anterior (incluindo histórico de medicamentos) para auxiliar os médicos da pesquisa a qualificá-lo para participar do estudo antes de usar o medicamento do estudo e agrupar seu estudo.

[0055] (2) Iniciando a pesquisa

[0056] Cada sujeito será submetido a dois testes de função hepática adicionais, ou seja, GSP e OGSP, cada um dos quais será estudado ao longo de um período de tempo. O intervalo de tempo entre esses dois testes deve ser de pelo menos 12 horas. É preciso estar em jejum por 6 horas antes do dia do teste.

[0057] Exame OGSP: Os sujeitos beberam 1,25 ml de solução de galactose por kg de peso corporal (400mg de galactose por ml), ou seja, 0,5g/kg de galactose por kg de peso corporal. Após beber solução oral de galactose por 3 a 5 minutos, pelo menos 20ml de água são administrados. Após 60 minutos após o término da administração oral, o sangue é coletado dos dedos para coletar 0,5 ml de sangue total para que pingue lentamente na tira do teste de galactose e, em seguida, o exame é concluído.

[0058] A galactose contém 1% a 80% da quantidade total em peso, preferencialmente, 4% a 40%, contém 0,001% a 5% com ou sem adição de tampão e 0,001% a 5% com ou sem adição do antioxidante. O antioxidante é selecionado dentre um grupo que inclui pelo menos uma dentre vitamina C e/ou bissulfito de sódio, vitamina A, vitamina E, polifenóis, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), ácido dietilenotriaminopentacético (DTPA), flavonoides e/ou ácido NTA-

nitrilotriacetato (NTA). O tampão é selecionado de um grupo incluindo pelo menos um dentre tampão de citrato, tampão de fosfato, tampão de acetato, tampão de carbonato, tampão de ácido ascórbico e tampão de trietanolamina.

[0059] GSP: Os sujeitos são injetados com 1,25 ml de injeção de galactose por kg de peso corporal (400mg de galactose por ml), ou seja, 0,5g/kg de galactose por kg de peso corporal. A injeção de galactose é concluída dentro de 3 a 5 minutos. Após 60 minutos após o término da injeção, o sangue é coletado dos dedos para coletar 0,5ml de sangue total para que pingue lentamente na tira do teste de galactose e, em seguida, o exame é concluído. Modalidade 4: Os resultados de OGSP da administração oral de galactose e os resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose

[0060] As Figuras 2 e 3 são vistas de distribuição relativa dos resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose e os resultados de OGSP da administração oral de galactose para 127 sujeitos (56 em função hepática normal e 71 em função hepática comprometida). De acordo com as recomendações da Digestion 1992; 52: 222-231, os sujeitos foram divididos em 3 grupos com valores de GSP (GSP) de galactose administrada por via intravenosa, em que GSP < 280 μg/ml é definido para indicar que o sujeito está em função hepática normal, 280< GSP <480 μg/ml é definido para indicar que o sujeito está com função hepática moderadamente comprometida, e GSP >480 μg/ml é definido para indicar que o sujeito está com função hepática gravemente comprometida. De acordo com os resultados nas Figuras 2 e 3 , o valor de OGSP para a galactose oral é maior do que para a galactose intravenosa e o valor de OGSP para galactose oral aumenta com a gravidade da função hepática comprometida, e a OGSP e o GSP foram correlacionados positivamente. Os sujeitos no grupo de função hepática normal têm uma OGSP de administração oral de galactose de 318±27 μg/ml (média ± erro padrão SE), com um mínimo de 18 μg/ml e um máximo de 887 μg/ml. Os sujeitos com comprometimento da função hepática leve ou moderado têm uma OGSP de administração oral de galactose de 590±40pg/ml (média ± erro padrão SE), com um mínimo de 294 μg/ml e um máximo de 1282 μg/ml. Os sujeitos com comprometimento grave da função hepática têm uma OGSP de administração oral de galactose de 777±48 μg/ml (média ± erro padrão SE), com um mínimo de 293 μg/ml e um máximo de 1499 μg/ml. A Figura 5 mostra os resultados de OGSP da administração oral de galactose e os resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose para três grupos de sujeitos. Conforme mostrado a partir dos resultados, o valor de OGSP da administração oral de galactose aumenta com a gravidade da função hepática comprometida. Em particular, o valor de OGSP para a galactose oral é maior do que para a galactose intravenosa. De acordo com os resultados nas Figuras 2, 3 e Tabela 5, pode ser determinado que a faixa principal (média ± 2 vezes o erro padrão SE) de OGSP da administração oral de galactose para os sujeitos no grupo de função hepática normal está entre 264 a 372 μg/ml, a faixa principal (média ± 2 vezes o erro padrão SE) de OGSP da administração oral de galactose para os sujeitos no grupo de função hepática levemente ou moderadamente comprometida está entre 510 a 670 μg/ml, e a faixa principal (média ± 2 vezes o erro padrão SE) de OGSP da administração oral de galactose para os sujeitos no grupo de função hepática gravemente comprometida está entre 681 e 873 μg/ml. Mesmo se os resultados do sujeito diferirem de pessoa para pessoa, a OGSP da administração oral de galactose para os sujeitos no grupo de função hepática normal não excede 670 μg/ml e a OGSP para sujeitos com função hepática comprometida pode ser maior que 370 μg/ml. Assim, os sujeitos com OGSP maior que 370 μg/ml devem adquirir detecção adicional da função hepática.

[0061] Tabela 5 Resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose e resultados de OGSP da administração oral de galactose (média ± erro padrão SE) Função hepática levemente ou moderadamente Função hepática Função hepática com gravemente normal prometida comprometida (N = 56) (N = 31) (N = 40) IV GSP (μg/ml) 247±16,5*** 423±26,0*** 630±41,0*** [Digest 1992; 52:222-231]

IV GSP (μg/ml) 174 ± 8*** 359 ± 10*** 667 ± 29*** OGSP (μg/ml) 318 ± 27*** 590 ± 40*** 777 ± 48*** ***P<0,005 (Análise ANOVA e LSD) Modalidade 5: Correlação entre os valores bioquímicos no sangue e os resultados de OGSP da administração oral de galactose, os resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose

[0062] 127 sujeitos (exceto diabéticos) foram divididos em 3 grupos com valores de GSP (GSP) de galactose administrada por via intravenosa, em que GSP < 280 μg/ml é definido para indicar que o sujeito está com função hepática normal, 280 < GSP < 480 μg/ml é definido para indicar que o sujeito está com função hepática moderadamente comprometida, e GSP > 480 μg/ml é definido para indicar que o sujeito está com função hepática gravemente comprometida. A Figura 6 mostra a correlação entre os valores bioquímicos no sangue e os resultados de OGSP da administração oral de galactose, os resultados de GSP da injeção intravenosa de galactose para três grupos de sujeitos. Os resultados mostram que os valores de GSP da galactose intravenosa e os valores de OGSP da galactose oral estão significativamente correlacionados com uma série de índices bioquímicos no sangue, em que AST (aspartato aminotransferase), ALT (alanina aminotransferase) são indicadores de comprometimento hepático, e a correlação entre os valores de OGSP da galactose oral e AST, ALT é maior do que os valores de GSP da galactose intravenosa e AST, ALT.

Tabela 6 Correlação entre os valores bioquímicos no sangue e os valores de GSP da galactose intravenosa ou da galactose oral para sujeitos (exceto diabetes) GSP (n=127) OGSP ( n=127) AST r = 0,431*** r = 0,448*** ALT r = 0,153* r = 0,212* Bilirrubina total r = 0,153*** r = 0,178

PT r = 0,342*** r = 0,129 y-GT r = 0,091 r = 0,290* Albumina r = -0,268* r = -0,141 ALP r = 0,055 r = 0,097 Glicose r = 0,193* r = 0,142 Ácido úrico r = 0,052 r = -0,012 Cr r = 0,112 r = 0,070 BUN r = 0,080 r = -0,130 *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,005.

Modalidade 6: Correlação entre os valores de OGSP da galactose oral, valores de GSP da galactose intravenosa e doença hepática grave

[0063] A análise de GSP é realizada em 42 pacientes com cirrose por administração oral de galactose. A Figura 3 mostra correlação entre os resultados de OGSP da galactose oral e cirrose. Normalmente, o índice de Child Pugh (pontuação de Child Pugh) é clinicamente usado para estimar a gravidade da cirrose. A Figura 4 mostra que o valor de OGSP da galactose oral está positivamente correlacionado com o índice de Child Pugh (r = 0,817, p < 0,005). Em comparação com os resultados de GSP de galactose convencionalmente intravenosa (Figura 5), o valor de OGSP da galactose oral é maior. No entanto, tanto o valor de OGSP da galactose oral quanto o valor de GSP da galactose intravenosa estão positivamente correlacionados com a cirrose. Consequentemente, tanto o valor de OGSP da galactose oral quanto o valor de GSP da galactose intravenosa têm a mesma capacidade de estimar a cirrose.

[0064] MELD (Modelo para doença hepática em estágio terminal) pode prever a mortalidade a curto e médio prazo da doença hepática em estágio terminal de forma eficaz, e seu índice de avaliação é obtido de forma simples, objetiva e fácil de calcular. É amplamente utilizado no diagnóstico e tratamento de doenças hepáticas. A análise de OGSP é realizada em 42 pacientes com cirrose pela administração oral de galactose. A Figura 5 mostra correlação entre os resultados de OGSP da galactose oral e MELD. A Figura 6 mostra que o valor de OGSP da galactose oral está positivamente correlacionado com MELD (r = 0,660 , p < 0,005). Em comparação com os resultados de GSP da galactose convencionalmente intravenosa (Figura 7), o valor de OGSP da galactose oral é maior. No entanto, tanto o valor de OGSP da galactose oral quanto o valor de GSP da galactose intravenosa estão positivamente correlacionados com MELD. Consequentemente, tanto o valor de OGSP da galactose oral quanto o valor de GSP da galactose intravenosa têm a mesma capacidade de estimar MELD. Modalidade 7: Alterações de OGSP da galactose oral para camundongo com NASH (esteato-hepatite não alcoólica)

[0065] A Figura 8 mostra os resultados de OGSP (OGSP) em cada momento após a administração oral de galactose. O camundongo é levado à hepatite não alcoólica (NASH) ao ser alimentado com dietas ricas em gordura. Todos os animais com NASH têm um valor de OGSP maior do que o valor de indivíduos normais dentro de 10 a 90 minutos após a administração oral, em que o valor de OGSP muda muito dentro de 30 a 90 minutos após a administração oral. Os resultados mostram que o valor de GSP da galactose oral tem a capacidade de estimar a NASH e é testado de forma ideal de 30 a 80 minutos após a administração oral da galactose.

[0066] A descrição detalhada acima mencionada visa ilustrar especificamente as modalidades praticáveis da presente invenção, mas as modalidades não são para limitar o escopo de patente da presente invenção e todas as modalidades ou modificações equivalentes feitas sem se afastar do espírito da presente invenção devem estar contidas no escopo de patente da presente invenção.

[0067] A presente invenção tem as seguintes vantagens em relação à técnica anterior:

(1) A composição oral de galactose da presente invenção é uma fórmula de galactose não invasiva e pode ser administrada ao sujeito por via oral para o método de GSP; (2) A fórmula da composição oral de galactose mantém boa qualidade após armazenamento em longo prazo e esterilização em alta temperatura, e tem boa estabilidade e desempenho; e (3) A composição oral de galactose da presente invenção tem a capacidade de detectar o metabolismo de galactose que não é menor que o da galactose intravenosa.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição oral de galactose caracterizada pelo fato de que compreende: galactose; um tampão; e um antioxidante em uma quantidade de cerca de 0 a cerca de 99 por cento em volume; em que a referida composição oral de galactose tem valores de pH variando de 2,0 a 10,0; e em que a referida galactose inclui pelo menos um dentre derivados de D- (+)- galactose, L-(-)- galactose, isótopo de galactose estável, anel de galactose ou derivados de galactose.

2. Composição oral de galactose, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido antioxidante é selecionado do grupo que consiste em vitamina A, vitamina C, vitamina E, bissulfito de sódio, polifenóis, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), flavonoides, ácido dietilenotriaminopentacético (DTPA) e ácido NTA-nitrilotriacetato (NTA).

3. Composição oral de galactose, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido tampão é selecionado do grupo que consiste em tampão de ácido ascórbico, tampão de citrato, tampão de fosfato, tampão de acetato, tampão de carbonato e tampão de trietanolamina.

4. Composição oral de galactose, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição oral de galactose tem um valor de pH variando de 3,0 a 6,0.

5. Composição oral de galactose, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição oral de galactose é uma composição alimentar e/ou uma composição farmacêutica.

6. Composição oral de galactose, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição oral de galactose inclui ainda pelo menos um dentre emulsificante, corante, tempero, agentes aromatizantes,

adoçante, conservantes, excipientes, extensores, estabilizantes, dispersantes, aditivos alimentares aceitáveis ou excipientes farmacêuticos aceitáveis.

7. Composição oral de galactose, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o referido adoçante é selecionado do grupo que consiste em D-Sorbitol, Solução de D-Sorbitol a 70%, D-Xilitol, Glicirrizina, Glicirrizinato Trissódico, D-Manitol, Sacarina, Sacarina Sódica, Ciclamato de sódio, Ciclamato de Cálcio, Aspartame, Glicosídeo de Esteviol, Extratos de Alcaçuz, Acesulfame de Potássio, Glicirrizina Amoniada, Glicirrizinato Monoamônio, Maltitol, Xarope de Maltitol (Xarope de Glicose Hidrogenada), Isomalte (Palatinose Hidrogenada), Lactitol, Ácido Glicirrético Monoglicuronil, Taumatina, Eritritol, Sucralose e Neotame.

8. Composição oral de galactose, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o referido tempero é selecionado do grupo que consiste em cereja, limão, lima, mandarina, laranja, tangerina, hortelã, morango, banana, caramelo, alcaçuz, maracujá, pêssego, framboesa, tutti-frutti, toranja, baunilha, creme, chocolate e uva.

9. Método de avaliação do status do fluxo sanguíneo hepático, status da enzima hepática e capacidade metabólica da galactose em um sujeito, sendo o método caracterizado pelo fato de que compreende: a) administrar, ao referido sujeito, a composição de galactose oral, conforme definida na reivindicação 1; b) coletar uma amostra biológica do referido sujeito; e c) medir a quantidade de galactose na referida amostra biológica para avaliar o status do fluxo sanguíneo hepático, status da enzima hepática e a capacidade metabólica da galactose no referido sujeito.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que cada dose oral da composição oral de galactose varia de 0,01g/kg a 5g/kg.

11. Composição de galactose caracterizada pelo fato de que compreende: galactose; um tampão; e um antioxidante em uma quantidade de cerca de 0 a cerca de 99 por cento por volume; em que a referida composição de galactose tem um valor de pH variando de 2,0 a 10,0; em que a referida composição de galactose mantém a cor original sob condição de alta temperatura; e em que a referida galactose inclui pelo menos um dentre D-(+)- galactose, L-(-)- galactose, isótopo de galactose estável, anel de galactose ou derivados de galactose.

12. Composição de galactose, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a referida temperatura alta é a temperatura de 80 °C a 250 °C.

13. Composição de galactose, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a referida composição de galactose é um adoçante nutricional.

14. Composição de galactose, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a referida composição de galactose pode ser colocada em uma comida, fonte de nutrição e leite de fórmula.

15. Método de avaliação do status do fluxo sanguíneo hepático, status da enzima hepática e capacidade metabólica da galactose em um sujeito, sendo o método caracterizado pelo fato de que compreende: a) administrar, ao referido sujeito, a composição de galactose conforme definida na reivindicação 11; b) coletar uma amostra biológica do referido sujeito; e c) medir a quantidade de galactose na referida amostra biológica para avaliar o status do fluxo sanguíneo hepático, status da enzima hepática e a capacidade metabólica da galactose no referido sujeito.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que cada dose da composição de galactose varia de 0,01g/kg a 5g/kg.