BR112021005263A2 - compostos de isoxazol carboxamida e usos dos mesmos - Google Patents

Abstract

COMPOSTOS DE ISOXAZOL CARBOXAMIDA E USOS DOS MESMOS. A presente invenção refere-se a um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se mostrou útil para tratar perda auditiva ou distúrbio de equilíbrio: Fórmula (I) em que R1 e Y são conforme definidos no presente documento.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COM- POSTOS DE ISOXAZOL CARBOXAMIDA E USOS DOS MESMOS".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO

[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido de Patente de Pedido Internacional no PCT/CN2018/106939, deposita- do em 21 de setembro de 2018, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A presente revelação refere-se a compostos, composições compreendendo tais compostos, e seu uso para o tratamento de perda de audição ou distúrbio de equilíbrio.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003] As células ciliadas no ouvido interno são essenciais para a audição e o equilíbrio. Se as células ciliadas fossem, de alguma forma, danificadas, os seres humanos sofreriam de perda auditiva ou distúr- bio do equilíbrio. O ouvido interno humano contém apenas cerca de

15.000 células ciliadas por cóclea ao nascimento e, apesar dessas cé- lulas poderem ser perdidas, devido a vários fatores genéticos ou am- bientais, as células perdidas ou danificadas não podem ser substituí- das. No entanto, a superexpressão do fator de transcrição, Atoh1, po- de induzir células ciliadas sensoriais, a partir de células epiteliais no órgão sensorial da cóclea e órgão de Corti (Zheng e Gao, Nat Neuros- ci 2000; 3:580 a 586; Kawamoto et al., J Neurosci 2003; 23:4.395 a

4.400; Izumikawa M et al., Nat Med. 2005; 11: 271-276; Gubbels et al., Nature 2008; 455:537 a 541). Portanto, há uma necessidade de se descobrir composições e métodos terapêuticos que induzem a expres- são de Atoh1 e promovem a regeneração de células ciliadas de mamí- feros.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[004] A presente revelação proporciona compostos, sais farma-

ceuticamente aceitáveis dos mesmos, composições farmacêuticas dos mesmos e combinações dos mesmos, que são úteis para o tratamento da perda auditiva ou distúrbio do equilíbrio. A presente revelação pro- porciona adicionalmente métodos de tratamento da perda auditiva ou distúrbio do equilíbrio, compreendendo administrar a um sujeito com necessidade da mesma uma quantidade eficaz de um composto da presente revelação ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[005] Um aspecto da presente revelação proporciona um com- posto da Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mes- mo: (I); em que: R1 é selecionado de: , e ; Y é selecionado a partir de , , e ; RYA e RYB são independentemente selecionados dentre H, - S(=O)2NH(R2), -(C=O)NH(R2), -NH(C=O)OCH2(C=O)NH(R2), -CH2OH, -CH3 e -OH; RYC e RYD são independentemente selecionados dentre H, - CN, -OH, -(C=O)NH2 e -S(=O)2NH(R2); RYE e RYF são independentemente selecionados dentre H, - CN, -(C=O)NH(R2), -OH e -S(=O)2NH(R2); RYG é selecionado dentre H, -CN, -OH, -F, -(C=O)NH(R2) e -S(=O)2NH(R2);

RYH é selecionado dentre -CH3, -(X1)-(C=O)NH(R2) e -(X1)- S(=O)2NH(R2); RYI é selecionado dentre -H e -(C=O)NH(R2); X1 é C0-2alquileno, opcionalmente substituído por -OH; R2 é independentemente selecionado dentre H, –CH3, - CH(CH3)CN, -CH2CH2CN, e ;e W é O ou CH2.

[006] Outro aspecto da presente revelação fornece uma compo- sição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou subfórmulas do mesmo, e um ou mais carrea- dores farmaceuticamente aceitáveis.

[007] Em ainda outro aspecto da presente revelação, uma com- binação farmacêutica é fornecida, a qual compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou subfórmulas do mesmo e um ou mais agentes terapeuticamente ativos.

[008] Em ainda outro aspecto da presente revelação, é proporci- onado um método de tratamento da perda auditiva ou distúrbio do equilíbrio, que compreende administrar a um sujeito com necessidade da mesma, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou de subfórmulas da mesma.

[009] Em ainda outro aspecto da presente revelação, são propor- cionados processos para a preparação de compostos da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou de subfórmu- las da mesma.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[010] Várias modalidades (enumeradas) da revelação são des- critas no presente documento. Será reconhecido que as características especificadas em cada modalidade podem ser combinadas com outras características especificadas para fornecer modalidades adicionais da presente revelação.

[011] Modalidade 1: Um composto da Fórmula (I) ; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é selecionado de: , e ;

[012] Y é selecionado a partir de , , e ; RYA e RYB são independentemente selecionados dentre H, - S(=O)2NH(R2), -(C=O)NH(R2), -NH(C=O)OCH2(C=O)NH(R2), -CH2OH, -CH3 e -OH; RYC e RYD são independentemente selecionados dentre H, - CN, -OH, -(C=O)NH2 e -S(=O)2NH(R2); RYE e RYF são independentemente selecionados dentre H, - CN, -(C=O)NH(R2), -OH e -S(=O)2NH(R2); RYG é selecionado dentre H, -CN, -OH, -F, -(C=O)NH(R2) e -S(=O)2NH(R2); RYH é selecionado dentre -CH3, -(X1)-(C=O)NH(R2) e -(X1)- S(=O)2NH(R2); RYI é selecionado dentre -H e -(C=O)NH(R2);

X1 é C0-2alquileno, opcionalmente substituído por -OH; R2 é independentemente selecionado dentre H, –CH3, - CH(CH3)CN, -CH2CH2CN,

e ;e W é O ou CH2; em que, quando R1 é:

; Y não é:

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

, ou

; quando R1 é:

; Y não é:

,

,

,

,

,

,

, ou

;e quando R1 é:

; Y não é:

. Modalidade 2: Um composto da Fórmula (I)

(I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é selecionado de:

, e ; Y é selecionado a partir de

, , e ;

RYA e RYB é independentemente selecionada dentre H, - S(=O)2NH(R2), -(C=O)NH(R2), -NH(C=O)OCH2(C=O)NH(R2), -CH2OH, -CH3 e -OH; RYC e RYD é independentemente selecionada dentre H, -CN, -OH, -(C=O)NH2 e -S(=O)2NH(R2); RYE e RYF é independentemente selecionada dentre H, -CN, -(C=O)NH(R2), -OH e -S(=O)2NH(R2); RYG é selecionado dentre H, -CN, -OH, -F, -(C=O)NH(R2) e -S(=O)2NH(R2); RYH é selecionado dentre -CH3, -(X1)-(C=O)NH(R2) e -(X1)- S(=O)2NH(R2); RYI é selecionado dentre -H e -(C=O)NH(R2); X1 é C0-2alquileno, opcionalmente substituído por -OH; R2 é independentemente selecionado dentre H, –CH3, - CH(CH3)CN, -CH2CH2CN,

e ;e W é O ou CH2; em que o composto não é:

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

, ou l.

[013] Modalidade 3: Um composto da reivindicação 1 ou 2 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: RYG é selecionado dentre H, -CN, -OH, -F, -(C=O)NH2 e -S(=O)2NH2; RYH é selecionado dentre -CH3, -(X1)-(C=O)NH2 e -(X1)-S(=O)2NH2; RYI é selecionada dentre -H e -(C=O)NH2; X1 é C1-2alquileno opcionalmente substituído por –OH.

[014] Modalidade 4: Um composto de qualquer uma das modali- dades 1 a 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é: .

[015] Modalidade 5: Um composto de qualquer uma das modali- dades 1 a 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é: .

[016] Modalidade 6: Um composto de qualquer uma das modali- dades 1 a 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é: .

[017] Modalidade 7: Um composto de qualquer uma das modali- dades 1 a 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Yé .

[018] Modalidade 8: Um composto de qualquer uma das modali- dades 1 a 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Yé .

[019] Modalidade 9: Um composto de qualquer uma das modali- dades 1 a 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Yé .

[020] Modalidade 10: Um composto de qualquer uma das moda- lidades 1 a 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Yé

[021] Modalidade 11: Um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a Modalidade 1, selecionado de: N- (5-((3S,4S)-4-carbamoil-3-cianopiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol- 3-carboxamida; N-(5-((3S,4R)-4-ciano-3-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-(N-(oxetan-3- il)sulfamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- (3-(N-(2-cianoetil)sulfamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; (1-(5-(5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamido)pentil)azetidin-

3-il)carbamato de 2-(metilamino)-2-oxoetila; N-(5-(3-sulfamoilpiperidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-sulfamoilpirrolidin- 1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3- carbamoilpirrolidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N- (5-(3-carbamoil-3-(hidroximetil)azetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-3-(hidroximetil)azetidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-3-metilazetidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-3- metilazetidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3- carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-(4-sulfamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol- 3-carboxamida; 5-(4-fluorofenil)-N-(5-(4-sulfamoilpiperidin-1- il)pentil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3R,4R)-4-ciano-3-hidroxipiperidin- 1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-(3-amino-3- oxopropil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- (4-(2-amino-2-oxoetil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-(4-(2-sulfamoiletil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-carbamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen- 2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-3-hidroxiazetidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; 5-(5-fluorotiofen-2-il)-N-(5- (3-(metilcarbamoil)azetidin-1-il)pentil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3- carbamoilazetidin-1-il)pentil)-5-(5-fluorotiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-((1-cianoetil)carbamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-4-metilpiperazin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-carbamoil-4- hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; 5-(4- fluorofenil)-N-(5-(3-(((1S,2R)-2-hidroxiciclopentil)carbamoil)azetidin-1- il)pentil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3R,4S)-4-carbamoil-3- fluoropiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida, e N-(5- ((3S,4S)-4-carbamoil-3-fluoropiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-

carboxamida; N-(5-((3R,4S)-3-carbamoil-4-cianopiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-carbamoil-3-hidroxipiperidin- 1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-carbamoil-3- hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3S,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3S,4R)-3-carbamoil-4- hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3R,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3R,4R)-3-carbamoil-4- hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3S,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-((3R,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3R,4R)-3-carbamoil-4- hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3S,4R)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-((3S,4R)-3-ciano-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida e N-(5-((3S,4S)-3-ciano-4- hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3R,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol- 3-carboxamida e N-(5-((3R,4R)-3-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)- 5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-((4-hidroxitetra-hidrofuran- 3-il)carbamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N- (5-(4-(3-amino-2-hidróxi-3-oxopropil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida.

[022] Modalidade 12: Um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a Modalidade 1, em que o referido composto é selecionado de qualquer um ou mais dos exemplos exem- plificados.

[023] Modalidade 13: Composição farmacêutica compreendendo:

[024] uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) de acordo com qualquer uma das Modalidades 1 a 12 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e

[025] um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

[026] Modalidade 14: Combinação farmacêutica compreendendo:

[027] uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) de acordo com qualquer uma das Modalidades 1 a 12 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e

[028] um ou mais agentes terapeuticamente ativos.

[029] Modalidade 15: Um método de tratamento da perda auditiva ou distúrbio do equilíbrio, compreendendo administrar a um sujeito com necessidade da mesma, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, de acordo com qualquer uma das Modalidades 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[030] Modalidade 16: Um método, de acordo com a Modalidade 15, em que o sujeito tem uma perda parcial ou total da audição.

[031] Modalidade 17: Um método, de acordo com a Modalidade 15 ou 16, em que a perda auditiva é perda auditiva adquirida.

[032] Modalidade 18: Um método, de acordo com qualquer uma das Modalidades 15 a 17, em que a perda auditiva é perda auditiva sensorioneural.

[033] Modalidade 19: Um método, de acordo com qualquer uma das Modalidades 15 a 18, em que a perda auditiva ou distúrbio do equilíbrio está associado com danificação ou perda de células ciliadas sensoriais.

[034] Modalidade 20: Um método, de acordo com qualquer uma das Modalidades 15 a 19, em que a perda auditiva ou distúrbio do equilíbrio é causado pela exposição aguda ou crônica a compostos ototóxicos, exposição aguda ou crônica a barulho, envelhecimento, doença autoimune, trauma físico, inflamação ou vírus.

[035] Modalidade 21: Um método, de acordo com qualquer uma das Modalidades 15 a 20, em que o composto, ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo, promove, estimula ou induz a regenera- ção de células ciliadas sensoriais.

[036] Modalidade 22: Um composto, de acordo com qualquer uma das Modalidades 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso como um medicamento.

[037] Modalidade 23: Um uso de um composto, de acordo com qualquer uma das Modalidades 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na fabricação de um medicamento para o trata- mento da perda auditiva ou distúrbio do equilíbrio.

[038] Outras características da presente revelação devem se tor- nar aparentes no decurso das descrições acima de modalidades exemplificativas, que são dadas para ilustração da revelação e não se destinam a ser limitantes da mesma.

DEFINIÇÕES

[039] Para fins de interpretação do presente relatório descritivo, as seguintes definições serão aplicadas e, sempre que apropriado, os termos usados no singular também incluirão o plural. Os termos usa- dos no relatório descritivo têm os seguintes significados, salvo clara- mente indicado de outro modo pelo contexto.

[040] Todos os métodos descritos no presente documento podem ser realizados em qualquer ordem adequada, exceto se indicado de outro modo no presente documento ou se contradito claramente de outro modo pelo contexto. O uso de qualquer um e de todos os exem- plos, ou linguagem exemplificativa (por exemplo, "tal como"), forneci- dos no presente documento, é destinado meramente a iluminar melhor a presente revelação, e não representa uma limitação no escopo da presente revelação fora isso reivindicada.

[041] O termo "um", "uma", "o/a" e termos similares usados no contexto da presente revelação (especialmente no contexto das reivin-

dicações) são para serem interpretados para abrangerem tanto o sin- gular como o plural, a não ser que de outro modo indicado no presente documento ou claramente contradito pelo contexto.

[042] Como usado no presente documento, o termo "heteroáto- mos" refere-se a átomos de nitrogênio (N), oxigênio (O) ou enxofre (S), em particular nitrogênio ou oxigênio.

[043] Salvo indicado de outro modo, qualquer heteroátomo com valências não satisfeitas é considerado com tendo átomos de hidrogê- nio suficientes para satisfazer as valências.

[044] Como usado no presente documento, o termo "alquila" refe- re-se a um radical hidrocarboneto da fórmula geral CnH2n+1. O radical alcano pode ser linear ou ramificado. Por exemplo, o termo "alquila C1- C6" ou "alquila C1 a C6" refere-se a um grupo alifático monovalente, linear ou ramificado, contendo 1 a 6 átomos de carbono (por exemplo, metila, etila, n-propila, i-propila,

[045] n-butila, i-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, 1-metilbutila, 2- metilbutila, 3-metilbutila, neopentila, 3,3-dimetilpropila, hexila, 2- metilpentila e similares).

[046] O termo "alquileno C0-C6" refere-se a uma ligação (quando o número de átomos de carbono for 0) ou um grupo alquileno divalente (pode ser linear ou ramificado) contendo 1 a 6 átomos de carbono (por exemplo, metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-), n-propileno (- CH2CH2CH2-), iso-propileno (-CH(CH3)CH2-), n-butileno (- CH2CH2CH2CH2-), iso-butileno, terc-butileno, n-pentileno, isopentileno, neopentileno, n-hexileno e similares).

[047] O termo "alcóxi" refere-se a uma alquila ligada a um oxigê- nio, o qual pode também ser representado como –O-R ou -OR, em que o R representa o grupo alquila. "Alcóxi C1-C6" ou "alcóxi C1 a C6" se destina a incluir grupos alcóxi C1, C2, C3, C4, C5 e C6. Exemplos de grupos alcóxi incluem, mas não são limitados a, metóxi, etóxi, propóxi

(por exemplo, n-propóxi e isopropóxi) e t-butóxi. Similarmente, "alquil- tio" ou "tioalcóxi" representa um grupo alquila como definido acima com o número indicado de átomos de carbono ligado através de uma ponte de enxofre; por exemplo, metil-S- e etil-S-.

[048] "Halogênio" ou "halo" pode ser flúor, cloro, bromo ou iodo (halogênios preferenciais como substituintes são flúor e cloro).

[049] "Haloalquila" se destina a incluir grupos hidrocarboneto ali- fáticos saturados, tanto de cadeia ramificada, como de cadeia linear com o número especificado de átomos de carbono, substituídos com um ou mais halogênios. Portanto, "haloalquila C1-C6" ou "haloalquila C1 a C6" se destina a incluir, mas sem limitação, fluorometila, difluorometi- la, trifluorometila, triclorometila, pentafluoroetila, pentacloroetila, 2,2,2- trifluoroetila, heptafluoropropila e heptacloropropila.

[050] "Haloalcóxi" representa um grupo haloalquila como definido acima, com o número indicado de átomos de carbono ligado através de uma ponte de oxigênio. Por exemplo, "haloalcóxi C1-C6" ou "halo- alcóxi C1 a C6" se destina a incluir, mas sem limitação, trifluorometóxi, difluorometóxi, 2,2,2-trifluoroetóxi e pentafluorotóxi. Similarmente, "ha- loalquiltio" ou "tio-haloalcóxi" representa um grupo haloalquila como definido acima, com o número indicado de átomos de carbono ligado através de uma ponte de enxofre; por exemplo, trifluorometil-S- e pen- tafluoroetil-S-.

[051] O termo "cicloalquila" refere-se a um anel carbocíclico não aromático, que é um anel totalmente hidrogenado, incluindo sistemas de anel mono, bi ou policíclico com o número especificado de átomos de carbono. Portanto, "cicloalquila C3-C8" ou "cicloalquila C3 a C8" se destina a incluir, mas sem limitação, ciclopropila, ciclobutila, ciclopenti- la, ciclo-hexila e norbornila.

[052] O termo "arila" refere-se a porções químicas carbocíclicas aromáticas de 6 a 10 membros que têm um sistema de anel único (por exemplo, fenila) ou fundido (por exemplo, naftaleno). Um típico grupo arila é o grupo fenila.

[053] O termo "heteroarila" refere-se a porções químicas aromáti- cas que contêm pelo menos um heteroátomo (por exemplo, oxigênio, enxofre, nitrogênio ou combinações dos mesmos) em um sistema de anel aromático de 5 a 10 membros (por exemplo, pirrolila, piridila, pira- zolila, indolila, indazolila, tienila, furanila, benzofuranila, oxazolila, iso- xazolila, imidazolila, triazolila, tetrazolila, triazinila, pirimidinila, pirazini- la, tiazolila, purinila, benzimidazolila, quinolinila, isoquinolinila, quinoxa- linila, benzopiranila, benzotiofenila, benzoimidazolila, benzoxazolila, 1H-benzo[d][1,2,3]triazolila e similares). A porção química heteroaro- mática pode consistir em um sistema de anel único ou fundido. Um anel heteroarila único típico é um anel de 5 a 6 membros contendo um a três heteroátomos independentemente selecionados de oxigênio, enxofre e nitrogênio e um sistema de anel heteroarila fundido típico é um sistema de anel de 9 a 10 membros, contendo um a quatro hetero- átomos independentemente selecionados de oxigênio, enxofre e nitro- gênio. O sistema de anel heteroarila fundido pode consistir em dois anéis heteroarila fundidos entre si ou uma heteroarila fundida com uma arila (por exemplo, fenila).

[054] O termo "heterociclila" refere-se a um anel ou sistemas de anéis saturados ou parcialmente saturados, mas não aromáticos, que incluem um anel monocíclico, anéis fundidos, anéis com pontes e anéis espirocíclicos com o número especificado de átomos de anel. Por exem- plo, heterociclila inclui, mas sem limitação, heterociclila de 5 a 6 mem- bros, heterociclila de 4 a 10 membros, heterociclila de 4 a 14 membros e heterociclila de 5 a 14 membros. Salvo especificado de outro modo, a heterociclila contém 1 a 7, 1 a 5, 1 a 3 ou 1 a 2 heteroátomos indepen- dentemente selecionados do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre como membros de anel, em que o N e S podem estar também opcionalmente oxidados a vários estados de oxidação. O grupo heterocí- clico pode estar ligado em um heteroátomo ou um átomo de carbono. Exemplos de tais heterociclilas incluem, mas sem limitação, azetidina, oxetano, piperidina, piperazina, pirrolina, pirrolidina, imidazolidina, imi- dazolina, morfolina, tetra-hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, tetra- hidrotiopirano, tetra-hidropirano, 1,4-dioxano, 1,4-oxatiano, hexa- hidropirimidinila, 3-azabiciclo[3.1.0]hexano, azepano, 3- azabiciclo[3.2.2]nonano, deca-hidroisoquinolina, 2-azaspiro[3.3]heptano, 2-oxa-6-azaspiro[3.3]heptano, 2,6-diazaspiro[3.3]heptano, 8-aza- biciclo[3.2.1]octano, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano, 3-Oxa-8-aza- biciclo[3.2.1]octano, 8-Oxa-3-aza-biciclo[3.2.1]octano, 2-Oxa-5-aza- biciclo[2.2.1]heptano, 2,5-Diaza-biciclo[2.2.1]heptano, 1,4-dioxa-8-aza- spiro[4.5]decano, 3-oxa-1,8-diazaspiro[4.5]decano, octa-hidropirrolo[3,2- b]pirrol e similares.

[055] Como usado no presente documento, o termo "substituído" significa que pelo menos um átomo de hidrogênio é substituído por um grupo não hidrogênio, desde que valências normais sejam mantidas e a substituição resulte em um composto estável. Quando um substituin- te for ceto (isto é, =O), então 2 hidrogênios no átomo são substituídos. Substituintes ceto não estão presentes em porções químicas aromáti- cas.

[056] Nos casos em que existem átomos de nitrogênio (por exemplo, aminas) em compostos da presente revelação, esses podem ser convertidos em N-óxidos por tratamento com um agente oxidante (por exemplo, mCPBA e/ou peróxidos de hidrogênio) para fornecer ou- tros compostos da presente revelação. Portanto, os átomos de nitro- gênio mostrados e reivindicados são considerados como englobando tanto o nitrogênio mostrado como o seu derivado N-óxido (NO).

[057] Quando qualquer variável ocorrer mais de uma vez em qualquer constituinte ou fórmula para um composto, sua definição em cada ocorrência é independente da sua definição em cada uma das outras ocorrências. Portanto, por exemplo, se um grupo for mostrado como sendo substituído com 0 a 3 grupos R, então o referido grupo pode não ser substituído ou pode ser substituído com até três grupos R, e, em cada ocorrência, R é selecionado independentemente da de- finição de R.

[058] Quando for mostrado que uma ligação para um substituinte cruza uma ligação, conectando dois átomos em um anel, então tal substituinte pode estar ligado a qualquer átomo no anel. Quando um substituinte for mencionado sem indicar o átomo, através do qual tal substituinte está ligado ao resto do composto de uma dada fórmula, então tal substituinte pode estar ligado através de qualquer átomo em tal substituinte.

[059] Combinações de substituintes e/ou variáveis são permissí- veis apenas se tais combinações resultarem em compostos estáveis.

[060] Como uma pessoa versada na técnica seria capaz de en- tender, por exemplo, um grupo cetona (-CH-C=O) em uma molécula pode sofrer tautomeria para sua forma enol (-C=C-OH). Portanto, a presente revelação se destina a englobar todos os possíveis tautôme- ros até mesmo quando uma estrutura retrate apenas um deles.

[061] A frase "farmaceuticamente aceitável" indica que a subs- tância ou composição tem de ser compatível quimicamente e/ou toxi- cologicamente, com os outros ingredientes compreendendo uma for- mulação e/ou o mamífero sendo tratado com ela.

[062] A menos que seja especificado de outro modo, o termo "compostos da presente revelação" refere-se a compostos da Fórmula (I) e de subfórmulas da mesma, assim como isômeros, tais como este- reoisômeros (incluindo diastereoisômeros, enantiômeros e racematos), isômeros geométricos, isômeros conformacionais (incluindo rotâmeros e atropisômeros), tautômeros, compostos isotopicamente marcados

(incluindo substituições de deutério), e porções químicas inerentemen- te formadas (por exemplo, polimorfos, solvatos e/ou hidratos). Quando uma porção química estiver presente que seja capaz de formar um sal, então, os sais são incluídos também, em particular, sais farmaceuti- camente aceitáveis.

[063] Será reconhecido pelos especialistas na técnica, que os compostos da presente revelação podem conter centros quirais e, desse modo, podem existir em diferentes formas isoméricas. Como usado no presente documento, o termo "isômeros" refere-se a diferen- tes compostos que têm a mesma fórmula molecular, mas que diferem em termos do arranjo e configuração dos átomos.

[064] "Enantiômeros" são um par de estereisômeros que são imagens de espelho não superimposíveis um do outro. Uma mistura de 1:1 de um par de enantiômeros é uma mistura "racêmica". O termo é usado para designar uma mistura racêmica quando apropriado. Quando se designa a estereoquímica para os compostos da presente revelação, um único estereoisômero com configuração relativa e abso- luta conhecida dos dois centros quirais é designado com o uso do sis- tema RS convencional (por exemplo, (1S,2S)); um único estereoisôme- ro com configuração relativa conhecida, mas configuração absoluta desconhecida, é designada com asteriscos (por exemplo, (1R*,2R*)); e um racemato com duas letras (por exemplo, (1RS,2RS) como uma mistura racêmica de (1R,2R) e (1S,2S); (1RS,2SR) como uma mistura racêmica de (1R,2S) e (1S,2R)). "Diastereoisômeros" são estereoisô- meros que possuem pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens em espelho um do outro. A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema de R-S Cahn-lngold-Prelog. Quando um composto é um enantiômero puro, a esterioquímica em cada carbono quiral pode ser especificada por R ou S. Os compostos resolvidos cuja configuração absoluta não é conhecida, podem ser de-

signados (+) ou (–) dependendo da direção (dextro- ou levorrotatória) que eles giram, luz polarizada plana no comprimento de onda da linha D de sódio. Alternativamente, os compostos resolvidos podem ser de- finidos pelos respectivos tempos de retenção para os enantiôme- ros/diastereoisômeros correspondentes através de HPLC quiral.

[065] Determinados compostos descritos no presente documento contêm um ou mais centros ou eixos assimétricos e podem, então, dar origem a enantiômeros, diastereoisômeros e outras formas estere- oisoméricas que podem ser definidas, em termos de estereoquímica absoluta, como (R)- ou (S)-.

[066] Isômeros geométricos podem ocorrer quando um composto contém uma ligação dupla ou outra característica que fornece à molé- cula um certo grau de rigidez estrutural. Se o composto contiver uma ligação dupla, o substituinte pode estar na configuração E ou Z. Se o composto contiver uma cicloalquila dissubstituída, o substituinte ciclo- alquila pode ter uma configuração cis ou trans.

[067] Os isômeros conformacionais (ou conformadores) são isô- meros que podem diferir por rotações em torno de uma ou mais de uma ligação. Rotâmeros são confôrmeros que diferem por rotação, em torno de apenas uma ligação a simples.

[068] O termo "atropisômero" refere-se a um isômero estrutural com base em quiralidade axial ou planar, resultando de rotação res- tringida na molécula.

[069] A menos que seja especificado de outro modo, os compos- tos da presente revelação se destinam a incluir todos os isômeros possíveis, incluindo misturas racêmicas, formas opticamente puras e misturas intermediárias. Isômeros (R) e (S) opticamente ativos podem ser preparados com o uso de síntons quirais ou reagentes quirais, ou resolvidos com o uso de técnicas convencionais (por exemplo, sepa- rados em colunas cromatográficas quirais de SFC ou HPLC, tais como

CHIRALPAK® e CHIRALCEL® disponíveis da DAICEL Corp. ou outras colunas equivalentes, com o uso do solvente ou mistura de solventes adequado para obter boa separação).

[070] Os compostos da presente revelação podem ser isolados em formas opticamente ativas ou racêmicas. Formas opticamente ati- vas podem ser preparadas por resolução de formas racêmicas ou por síntese, a partir de materiais de partida opticamente ativos. Todos os processos usados para preparar compostos da presente revelação e intermediários preparados nos mesmos, são considerados como fa- zendo parte da presente revelação. Quando produtos enantioméricos ou diastereoisoméricos forem preparados, podem ser separados por métodos convencionais, por exemplo, por cromatografia ou cristaliza- ção fracionada.

[071] Dependendo das condições de processo, os produtos finais da presente revelação são obtidos em forma livre (neutra) ou de sal. Tanto a forma livre, como os sais destes produtos finais, estão dentro do escopo da presente revelação. Se assim desejado, uma forma de um composto pode ser convertida em outra forma. Uma base ou ácido livre pode ser convertido em um sal; um sal pode ser convertido no composto livre ou outro sal; uma mistura de compostos isoméricos da presente revelação pode ser separada nos isômeros individuais.

[072] Sais farmaceuticamente aceitáveis são preferenciais. No entanto, outros sais podem ser úteis, por exemplo, em etapas de iso- lamento ou purificação que podem ser empregadas durante a prepara- ção e, portanto, são contemplados dentro do escopo da presente reve- lação.

[073] Como usado no presente documento, "sais farmaceutica- mente aceitáveis" referem-se a derivados dos compostos revelados, em que o composto genitor é modificado pela preparação de sais de ácido ou base do mesmo. Por exemplo, sais farmaceuticamente acei-

táveis incluem, mas sem limitações, forma de sal de acetato, ascorba- to, adipato, aspartato, benzoato, besilato, brometo/bromidrato, bicar- bonate/carbonato, bissulfato/sulfato, camforsulfonato, caprato, clore- to/cloridrato, clorteofilonato, citrato, etandissulfonato, fumarato, glucep- tato, gluconato, glucuronato, glutamato, glutarato, glicolato, hipurato, iodidrato/iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato/hidroximalonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fenilacetato, fosfato/hidrogenofosfato/di- hidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, salicilatos, estearato, succinato, sulfamato, sulfossalicilato, tartrato, tosilato, trifluoroacetato ou xinafoato.

[074] Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis po- dem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos. Ácidos inorgânicos a partir dos quais sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítri- co, ácido fosfórico e similares. Ácidos orgânicos dos quais os sais po- dem ser derivados incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiô- nico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, áci- do succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ben- zoico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido sulfossalicílico e similares.

[075] Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis po- dem ser formados com bases inorgânicas e orgânicas. As bases inor- gânicas das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, sais de amônio e metais as colunas I a XII da tabela periódica. Em de- terminadas modalidades, os sais são derivados de sódio, potássio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, prata, zinco e cobre; sais particular- mente adequados incluem sais de amônio, potássio, sódio, cálcio e magnésio. Bases orgânicas a partir das quais sais podem ser deriva-

dos incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas que incluem aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, resinas de troca iônica básica e similares. De- terminadas aminas orgânicas incluem isopropilamina, benzatina, coli- nato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina e trome- tamina.

[076] Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente revela- ção podem ser sintetizados a partir do composto genitor que contém uma porção química básica ou ácida por métodos químicos convenci- onais. Geralmente, tais sais podem ser preparados por reação das formas ácidas ou básicas, livres destes compostos com uma quantida- de estequiométrica da base ou ácido apropriado em água ou em um solvente orgânico ou em uma mistura dos dois; geralmente, meios não aquosos como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila são preferenciais. Listas de sais adequados são encontradas em Allen, L.V., Jr., ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22a Edição, Pharmaceutical Press, Londres, Reino Unido (2012), a revela- ção dos quais é deste modo incorporada por referência.

[077] Os compostos da presente revelação, que contêm grupos capazes de atuar como doadores e/ou aceptores de ligações de hidro- gênio, podem ser capazes de formar cocristais com formadores de co- cristais adequados. Esses cocristais podem ser preparados a partir de compostos da presente revelação por procedimentos de formação de cocristais conhecidos. Tais procedimentos incluem moagem, aqueci- mento, cossublimação, cofusão ou contato em solução de compostos da presente revelação com o formador de cocristais sob condições de cristalização e isolamento de cocristais assim formados. Os formado- res de cocristal adequados incluem aqueles descritos no documento nº WO 2004/078163. Portanto, a presente revelação fornece adicional- mente cocristais compreendendo um composto da presente revelação.

[078] Qualquer fórmula apresentada no presente documento também se destina a representar formas não marcadas, assim como formas isotopicamente marcadas dos compostos. Os compostos isoto- picamente marcados têm estruturas representadas pelas fórmulas for- necidas no presente documento, exceto por um ou mais átomos serem substituídos por um átomo que tem uma massa atômica ou número de massa selecionado. Exemplos de isótopos que podem ser incorpora- dos em compostos da presente revelação incluem isótopos de hidro- gênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor, cloro e iodo, tais como 2H, 3H, 11 C, 13 C, 14 C, 15 N, 18 F, 31 P, 32 P, 35 S, 36 Cl, 123 I, 124 I, 125 I, respectivamente. A presente revelação inclui diversos compostos iso- topicamente marcados, como definidos no presente documento, por exemplo aqueles nos quais isótopos radioativos, tais como 3H e 14 C, ou aqueles nos quais isótopos não radioativos, tais como 2H e 13 C, es- tão presentes. Tais compostos isotopicamente marcados são úteis em 14 estudos metabólicos (com C), estudos de cinética de reação (com, por exemplo, 2H ou 3H), técnicas de imagiologia ou detecção, tais co- mo tomografia de emissão de pósitron (PET) ou tomografia computa- dorizada de emissão de fóton único (SPECT), que inclui ensaios de distribuição em tecido de fármaco ou substrato, ou em tratamento ra- 18 dioativo de pacientes. Em particular, um F ou composto marcado po- de ser particularmente desejável para estudos de PET ou SPECT.

[079] Adicionalmente, a substituição com isótopos mais pesados, particularmente deutério (isto é, 2H ou D) pode conferir certas vanta- gens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, tempo de meia-vida in vivo aumentado ou requisitos de do- sagem reduzidos ou uma melhora do índice terapêutico. Entende-se que o deutério nesse contexto é considerado como um substituinte de um composto da presente revelação. A concentração de um tal isótopo mais pesado, especificamente deutério, pode ser definida pelo fator de enriquecimento isotópico. O termo "fator de enriquecimento isotópico", conforme usado no presente documento, significa a razão entre a abundância isotópica e a abundância natural de um isótopo especifi- cado. Se um substituinte em um composto da presente revelação for denotado deutério, tal composto tem um fator de enriquecimento iso- tópico para cada átomo de deutério designado de pelo menos 3.500 (52,5% de incorporação de deutério em cada átomo de deutério desig- nado), pelo menos 4.000 (60% de incorporação de deutério) pelo me- nos 4.500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5.000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5.500 (82,5% de in- corporação de deutério), pelo menos 6.000 (90% de incorporação de deutério), pelo menos 6.333,3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6.466,7 (97% de incorporação de deutério), pelo menos 6.600 (99% de incorporação de deutério) ou pelo menos 6.633,3 (99,5% de incorporação de deutério).

[080] Os compostos isotopicamente marcados da presente reve- lação podem geralmente ser preparados por técnicas convencionais conhecidas pelos especialistas na técnica ou por processos revelados nos esquemas ou nos exemplos e preparações descritos abaixo (ou processo análogo aos descritos no presente documento), por substi- tuição de um reagente isotopicamente marcado apropriado ou pronta- mente disponível por um reagente não isotopicamente marcado caso contrário empreguado. Tais compostos têm uma variedade de usos potenciais, por exemplo, como padrões e reagentes na determinação da capacidade de um composto farmacêutico potencial se ligar a pro- teínas ou receptores alvo, ou para a imagiologia de compostos da pre- sente revelação ligados a receptores biológicos in vivo ou in vitro.

[081] O termo "solvato" significa uma associação física entre um composto da presente revelação e uma ou mais moléculas de solven- te, sendo essas orgânicas ou inorgânicas. Essa associação física in-

clui a ligação de hidrogênio. Em determinados casos, o solvato terá capacidade de isolamento, por exemplo, quando uma ou mais molécu- las de solvente forem incorporadas na rede cristalina do sólido cristali- no. As moléculas de solvente no solvato podem estar presentes com um arranjo regular e/ou um arranjo não ordenado. O solvato pode compreender uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica das moléculas de solvente. "Solvato" engloba tanto solvatos de fase de solução como isoláveis. Solvatos exemplificativos incluem, mas sem limitação, hidratos, etanolatos, metanolatos e isopropanolatos. Méto- dos de solvatação são geralmente conhecidos na técnica.

[082] Como usado no presente documento, "polimorfo(s)" se refe- re(m) à(s) forma(s) cristalina(s) que têm a mesma estrutu- ra/composição química, mas diferentes arranjos espaciais das molécu- las e/ou íons formando os cristais. Os compostos da presente revela- ção podem ser fornecidos como sólidos amorfos ou sólidos cristalinos. Liofilização pode ser empregada para fornecer os compostos da pre- sente revelação como um sólido.

[083] O termo "perda auditiva" refere-se a uma redução repentina ou gradual de quão bem um sujeito consegue ouvir.

[084] O termo "distúrbio do equilíbrio" refere-se a uma perturba- ção do labirinto (o órgão do ouvido interno) que controla o sistema de equilíbrio, que permite que um sujeito saiba onde o seu corpo se en- contra no ambiente. Tal perturbação geralmente faz com que o sujeito se sinta desequilibrado e/ou tonto.

[085] O termo "perda auditiva parcial ou completa" refere-se a diferentes graus de uma redução da capacidade de perceber sons.

[086] O termo "perda auditiva adquirida" refere-se à perda de au- dição que ocorre ou se desenvolve em algum momento durante a vida, mas que não está presente ao nascimento.

[087] O termo "perda auditiva sensorioneural" refere-se à perda auditiva causada por danificação às células sensoriais e/ou fibras ner- vosas do ouvido interno.

[088] Como usado no presente documento, o termo "paciente" engloba todas as espécies de mamífero.

[089] Como usado no presente documento, o termo "indivíduo" refere-se a um animal. Tipicamente, o animal é um mamífero. Um indi- víduo também se refere a, por exemplo, primatas (por exemplo, seres humanos), vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ra- tos, camundongos, peixes, pássaros e similares. Em certas modalida- des, o indivíduo é um primata. Em ainda outras modalidades, o indiví- duo é um ser humano. Sujeitos exemplificativos incluem seres huma- nos de qualquer idade com fatores de risco para doença cancerosa.

[090] Conforme usado no presente documento, um indivíduo está "com necessidade de" um tratamento, se tal indivíduo se beneficiar biologicamente, medicamente ou em qualidade de vida de tal trata- mento (de preferência, um ser humano).

[091] Conforme usado no presente documento, o termo "inibir", "inibição" ou "inibindo" se refere à redução ou supressão de uma dada afecção, sintoma ou disorder ou doença, ou uma diminuição significa- tiva na atividade de linha de base de uma atividade ou processo bioló- gico.

[092] Como usado no presente documento, o termo "tratar", "tra- tando" ou "tratamento" de qualquer doença/distúrbio refere-se ao tra- tamento da doença/distúrbio em um mamífero, particularmente em um ser humano, e inclui: (a) melhoria da doença/disfunção (isto é, desaceleração ou paragem ou redução do desenvolvimento da doen- ça/disfunção, ou pelo menos um dos seus sintomas clínicos); (b) alí- vio ou modulação da doença/disfunção (isto é, causando regressão da doença/disfunção, fisicamente (por exemplo, estabilização de um sintoma discernível), fisiologicamente (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico) ou ambos); (c) alívio ou melhoria de pelo menos um parâmetro físico, incluindo aqueles que podem não ser discerní- veis pelo indivíduo; e/ou (d) prevenção ou retardamento da ocorrên- cia de início ou desenvolvimento ou progressão da doença ou disfun- ção em um mamífero, em particular, quando tal mamífero é predis- posto à doença ou disfunção, mas não foi ainda diagnosticado como a tendo.

[093] O termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto da presente revelação refere-se a uma quantidade do com- posto da presente revelação que irá induzir a resposta biológica ou médica de um sujeito, por exemplo, redução ou inibição de uma enzi- ma ou uma atividade proteica ou melhorar os sintomas, aliviar as afec- ções, atrasar ou retardar a progressão da doença ou impedir uma do- ença, etc. Em uma modalidade não limitante, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade do composto da pre- sente revelação que, quando administrada a um sujeito, é eficaz em aliviar, inibir, prevenir e/ou melhorar, pelo menos parcialmente, a perda auditiva e/ou o distúrbio do equilíbrio.

[094] A quantidade eficaz pode variar dependendo de fatores tais como o tamanho e peso do indivíduo, o tipo de doença ou o composto particular da presente revelação. Um especialista na técnica seria ca- paz de estudar os fatores contidos no presente documento e fazer a determinação, em relação à quantidade eficaz dos compostos da pre- sente revelação sem experimentação desnecessária.

[095] O regime de administração poderá afetar o que constitui uma quantidade eficaz. O composto da presente revelação pode ser administrado ao sujeito antes ou após o início da perda auditiva e/ou distúrbio do equilíbrio. Além disso, várias dosagens divididas, assim como dosagens progressivas, podem ser administradas diariamente ou sequencialmente, ou a dose pode ser continuamente infundida, ou pode ser uma injeção de bolus. Além disso, as dosagens do(s) com- posto(s) da presente revelação podem ser proporcionalmente aumen- tadas ou diminuídas, como indicado pelas exigências da situação tera- pêutica ou profilática.

PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS

[096] Os compostos da presente revelação podem ser prepara- dos de várias maneiras conhecidas por um especialista na técnica de síntese orgânica, tendo em vista os métodos, esquemas de reação e exemplos fornecidos no presente documento. Os compostos da pre- sente revelação podem ser sintetizados usando os métodos descritos abaixo, em combinação com métodos sintéticos conhecidos na técnica da química orgânica sintética, ou por variações dos mesmos, como constatado pelos versados na técnica. Métodos preferenciais incluem, mas sem limitação, os descritos abaixo. As reações são realizadas em um solvente ou mistura de solventes, adequado para os reagentes e materiais empregados e adequado para as transformações sendo efe- tuadas. Será entendido por aqueles versados na técnica de síntese orgânica, que a funcionalidade presente na molécula deve ser consis- tente com as transformações propostas. Isso pode às vezes exigir uma decisão em termos de modificar a ordem das etapas sintéticas ou se- lecionar um esquema de processo particular e não outro de modo a obter um composto desejado da revelação.

[097] Os materiais de partida são geralmente disponíveis junto a fontes comerciais como Sigma Aldrich ou outros vendedores comerci- ais, ou são preparados conforme descrito nesta revelação, ou são prontamente preparados usando métodos bem conhecidos por aque- les versados na técnica (por exemplo, preparados por métodos geral- mente descritos em Louis F. Fieser e Mary Fieser, Reagents for Orga- nic Synthesis, v. 1 a 19, Wiley, New York (1967 a 1999 ed.), Larock, R.C., Comprehensive Organic Transformations, 2aedição, Wiley-VCH

Weinheim, Alemanha (1999), ou Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, incluindo suplementos (também disponíveis por meio do banco de dados online de Beilstein)).

[098] Para propósitos ilustrativos, os esquemas de reação repre- sentados abaixo fornecem rotas potenciais para a síntese dos com- postos da presente revelação, assim como intermediários chave. Para uma descrição mais detalhada das etapas de reação individuais, ver a seção de Exemplos abaixo. Os especialistas na técnica constatarão que outras vias de síntese poderão ser usadas para sintetizar os com- postos inventivos. Embora os materiais de partida e reagentes especí- ficos sejam retratados nos esquemas e discutidos abaixo, outros mate- riais de partida e reagentes podem ser facilmente substituídos para fornecer uma variedade de derivados e/ou condições de reação. Além disso, muitos dos compostos preparados pelos métodos descritos abaixo podem ser adicionalmente modificados, tendo em vista a pre- sente revelação com o uso de química convencional bem conhecida pelos especialistas na técnica.

[099] Na preparação dos compostos da presente revelação, pode ser necessária a proteção de funcionalidade remota de intermediários. A necessidade de tal proteção variará dependendo da natureza da funcionalidade remota e das condições dos métodos de preparação. A necessidade de tal proteção é facilmente determinada por um especia- lista na técnica. Para uma descrição geral de grupos protetores e seu uso, ver Greene, T.W. et al., Protecting Groups in Organic Synthesis, 4ª Ed., Wiley (2007). Os grupos protetores incorporados na preparação dos compostos da presente revelação, tais como o grupo protetor triti- la, podem ser mostrados como um regioisômero, mas podem também existir como uma mistura de regioisômeros.

[0100] As seguintes abreviaturas usadas aqui abaixo têm os signi- ficados correspondentes:

CDI di(1H-imidazol-1-il)metanona CH3CN/MeCN acetonitrila CH3MgBr brometo de metilmagnésio CH3NH2 metanamina (COCl)2 dicloreto de oxalila (COOEt)2 oxalato de dietila CuI iodato de cobre(I) DCM/CH2Cl2 diclorometano DIAD azodiformiato de di-isopropila DIEA/DIPEA N-etil-N-isopropilpropan-2-amina DMF dimetilformamida DMP periodinano de Dess-Martin DMSO sulfóxido de dimetila cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-

EDCI etilcarbodi-imida Et3N trietilamina EtOAc acetato de etila EtOH etanol H2 hidrogênio H2O água hexafluorofosfato de 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-

HAUT il)-1,1,3,3-tetrametilurônio HCl ácido clorídrico HOAc ácido acético HOBt 1-hidroxibenzotriazol HPLC cromatografia líquida de alta eficiência K2CO3 carbonato de potássio KI iodeto de potássio LiOH.H2O hidróxido de lítio hidratado m-CPBA ácido 3-cloroperoxibenzoico Me3Al trimetilalumínio MeOH metanol MgSO4 sulfato de magnésio ml mililitro MS espectrômetro de massa MsCl cloreto de metanossulfonila N2 nitrogênio NaBH3CN cianoboro-hidrato de sódio NaB(OAc)3H triacetóxi-hidroborato de sódio NaHCO3 bicarbonato de sódio Na2SO4 sulfato de sódio Na2SO3 sulfito de sódio NH3.H2O/NH4OH amônia NH2OH.HCl cloridrato de hidroxilamina NBS N-bromossuccinimida Pd(OH)2/C hidróxido de paládio em carbono PPh3 trifenilfosfina ta temperatura ambiente t-BuOK terc-butóxido de potássio TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano Métodos de LC/MS Empregados na Caracterização dos Exemplos

[0101] Dados de LC/MS foram registrados usando sistemas de HPLC 1100 da Agilent com Micromassa ZQ da Waters ou UPLC AC- QUITY da Waters com detector SQ da Waters ou com detector AC- QUITY QDa da Waters. RMN Empregado na Caracterização dos Exemplos

[0102] Os espectros de 1H RMN foram obtidos com espectrôme- tros de transformada de Fourier da Bruker, operando nas frequências como se segue: 1H RMN: 400 MHz (Bruker). 13 C RMN: 100 MHz (Bruker). Os dados de espectros são relatados no formato: desvio químico (multiplicidade, número de hidrogênios). Os desvios químicos são especificados em ppm posteriormente a um padrão interno de te- trametilsilano ( unidades, tetrametilsilano = 0 ppm) e/ou referenciados aos picos de solvente, que nos espectros de 1H RMN aparecem em

2,50 ppm para CD3SOCD3, 3,31 ppm para CD3OD, 1,94 para CD3CN, 4,79 para D2O, 5,32 para CD2Cl2 e 7,26 ppm para CDCl 3, e que nos 13 espectros de C RMN aparecem em 39,7 ppm para CD3SOCD3, 49,0 ppm para CD3OD, 1,32 e/ou 118,26 para CD3CN, 53,84 para CD2Cl2 e 13 77,0 ppm para CDCl3. Todos os espectros de C RMN foram decopla- dos em termos de prótons. Métodos empregados na purificação dos exemplos

[0103] A purificação dos intermediários e produtos finais foi reali- zada por cromatografia de fase normal ou reversa. A cromatografia de fase normal foi executada usando cartuchos de SiO2 pré-embalados (por exemplo, RediSep® colunas de Rf da Teledyne Isco, Inc.) eluindo com gradientes de sistemas de solvente apropriados (por exemplo, hexanos e acetato de etila; DCM e MeOH; ou exceto se indicado de outro modo). A HPLC preparativa de fase reversa foi realizada usando os métodos descritos em procedimento experimental exemplificativo individual com informação correspondente sobre a coluna, condição básica/neutra/ácida e faixa de gradiente de acetonitrila. Esquemas Sintéticos Gerais

[0104] Os esquemas 1 a 3 (mostrados abaixo) descrevem vias po- tenciais para preparar os compostos da presente revelação, que inclu- em compostos de Fórmula (I) e subfórmulas da mesma. Os materiais de partida para o esquema de reação abaixo estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados de acordo com métodos conhe- cidos por um especialista na técnica ou por métodos revelados no pre- sente documento. Os compostos da Fórmula (I) podem ser feitos subs- tancialmente opticamente puros com o uso de material de partida substancialmente opticamente puro ou por cromatografia de separa- ção, recristalização ou outras técnicas de separação bem conhecidas na técnica. Para uma descrição mais detalhada, ver a seção de Exem- plos abaixo.

Esquema 1 Legenda: rt= ta; periodinano de Dess-Martin

[0105] Conforme representado no esquema 1, cetona de metila aromática 1 é tratada com base forte (como t-BuOK) e oxalato de dieti- la para produzir éster α-cetílico 2, que cicliza com cloridrato de hidroxi- lamina para proporcionar isoxazol éster 3. A hidrólise subsequente do composto 3 por LiOH fornece ácido 4, que é convertido no cloreto de ácido correspondente por meio de cloreto de oxalila e, então, acopla com 5-aminopentan-1-ol para gerar amida 5. O álcool do composto 5 é adicionalmente oxidado por periodinano de Dess-Martin para proporci- onar aldeído 6, que é submetido à aminação redutiva com várias ami- nas 9 (R' e R'', cada um representa vários substituintes no N da amina 9) na presença de NaCNBH 3 ou NaBH(OAc)3 para gerar amina terciá- ria 7 correspondente. Dependendo da estrutura da amina 9, o compos- to 7 pode passar através de manipulações de grupo de proteção e/ou grupo funcional para fornecer a molécula-alvo 8. Esquema 2

[0106] Alternativamente, no esquema 2, o álcool 5 é convertido no brometo correspondente 10 por meio de NBS, que é submetido à al- quilação com várias aminas 11 na presença de base fraca (como K2CO3) para fornecer a molécula-alvo 8. Esquema 3 Legenda: ta

[0107] Além disso, como mostrado no esquema 3, a amina secun- dária 9 (R' e R'', cada um representa vários substituintes no N da ami- na 9) é submetida à alquilação, na presença de base (como Cs 2CO3) com 2-(5-bromopentil)isoindolina-1,3-diona, ou passa através de rea- ção de acoplamento de três componentes com 2-(but-3-in-1- il)isoindolina-1,3-diona e formaldeído na presença de iodeto de cobre catalítico para formar a amina terciária 12. O composto 12 é desprote- gido com hidrazina para fornecer a amina primária 13, que, então, rea- ge com ácido 4 sob condições de acoplamento de amida gerais (como HATU, EDCI/HOBt, etc.) para fornecer a amina terciária 7. Dependen- do da estrutura da amina 9, o composto 7 pode passar através de ma- nipulações de grupo de proteção e/ou grupo funcional para fornecer a molécula-alvo 8.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E COMBINAÇÕES

[0108] Os compostos da presente revelação são tipicamente usa- dos como uma composição farmacêutica (por exemplo, um composto da presente revelação e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável). Um "carreador farmaceuticamente aceitável (diluente ou excipiente)" se refere a meios geralmente aceitos na técnica para a entrega de agentes biologicamente ativos a animais, em particular, mamíferos, incluindo solventes, meios de dispersão, revestimentos, tensoativos, antioxidantes, conservantes (por exemplo, agentes anti- bacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotônicos, agentes retar- dantes de absorção, sais, conservantes, estabilizadores de fármaco, aglutinantes, agentes de tamponamento (por exemplo, ácido maleico, ácido tartárico, ácido lático, ácido cítrico, ácido acético, bicarbonato de sódio, fosfato de sódio e similares), agentes de desintegração, lubrifi- cantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, corantes e simi- lares e combinações dos mesmos geralmente reconhecidos como se- guros (GRAS), como seria do conhecimento daqueles versados na técnica (consultar, por exemplo, Allen, L.V., Jr. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2 Volumes), 22ª Edição, Pharma- ceutical Press (2012).

[0109] Em um aspecto, a presente revelação fornece uma compo- sição farmacêutica compreendendo um composto da presente revela- ção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade, a composição compreende pelo menos dois carreadores farmaceuticamente aceitá- veis, tais como aqueles descritos no presente documento. Para propó- sitos da presente revelação, a menos que designado de outro modo, solvatos e hidratos são geralmente considerados composições. De preferência, os veículos farmaceuticamente aceitáveis são estéreis. A composição farmacêutica pode ser formulada para vias particulares de administração, tais como administração oral, administração parenteral e administração retal, etc. Além disso, as composições farmacêuticas da presente revelação podem ser constituídas em uma forma sólida (que inclui, sem limitação, cápsulas, comprimidos, pílulas, grânulos, pós ou supositórios), ou em uma forma líquida (que inclui, sem limita- ção, soluções, suspensões ou emulsões). As composições farmacêuti- cas podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais, tais como esterilização e/ou podem conter diluentes inertes convenci- onais, agentes lubrificantes ou agentes tamponantes, assim como ad- juvantes, tais como conservantes, estabilizantes, agentes umectantes, emulsificantes e tampões, etc. Tipicamente, as composições farma- cêuticas são comprimidos ou cápsulas de gelatina compreendendo o ingrediente ativo em combinação com um ou mais de: a) diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose, ma- nitol, sorbitol, celulose e/ou glicina; b) lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico, seu sal de magnésio ou cálcio e/ou polietilenoglicol; para comprimidos também c) aglutinantes, por exemplo, silicato de magnésio alumínio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, carboximetilcelulo- se de sódio e/ou polivinilpirrolidona; se desejado d) desintegrantes, por exemplo, amidos, ágar, ácido algíni- co ou seu sal sódico, ou misturas efervescentes; e e) absorventes, corantes, sabores e adoçantes.

[0110] Os comprimidos podem ser revestidos com filme ou com revestimento entérico, de acordo com métodos conhecidos na técnica.

[0111] As composições adequadas para administração oral inclu- em uma quantidade eficaz de um composto da revelação na forma de comprimidos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grâ- nulos dispersíveis, emulsão, cápsulas duras ou moles ou xaropes ou elixires. As composições destinadas a uso oral são preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas, e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados dentre o grupo que consiste em agen- tes adoçantes, agentes saborizantes, agentes corantes e agentes con- servantes, a fim de fornecer preparações farmaceuticamente elegan- tes e palatáveis. Os comprimidos podem conter o ingrediente ativo em mistura por adição com excipientes não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, que são adequados para a fabricação de comprimidos. Es- ses excipientes são, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbo- nato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegrantes, por exemplo, amido de milho ou ácido algínico; agentes ligantes, por exemplo, amido, gela- tina ou acácia; e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos não são revesti- dos ou são revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desin- tegração e absorção no trato gastrointestinal e assim fornecer uma ação sustentada durante um período mais longo. Por exemplo, pode ser utilizado um material de retardamento, tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila. As formulações para uso oral po- dem ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras, em que o in- grediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exem- plo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina moles, em que o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite de oliva.

[0112] Determinadas composições injetáveis são soluções ou sus- pensões isotônicas aquosas e supositórios são vantajosamente prepa- rados a partir de emulsões ou suspensões graxas. Tais composições podem ser esterilizadas e/ou conter adjuvantes, tais como agentes conservantes, estabilizadores, umectantes ou emulsificantes, promoto- res de solução, sais para regulação da pressão osmótica e/ou tam- pões. Além disso, as mesmas podem conter também outras substân- cias terapeuticamente valiosas. As ditas composições são preparadas de acordo com métodos convencionais de mistura, granulação ou re- vestimento, respectivamente, e contêm cerca de 0,1 a 75%, ou contêm cerca de 1 a 50%, do ingrediente ativo.

[0113] As composições adequadas para aplicação transdérmica incluem uma quantidade eficaz de um composto da revelação com um carreador adequado. Os carreadores adequados para entrega trans- dérmica incluem solventes farmacologicamente aceitáveis absorvíveis para auxiliar a passagem, através da pele do hospedeiro. Por exem- plo, os dispositivos transdérmicos estão na forma de uma bandagem que compreende um membro de reforço, um reservatório que contém o composto opcionalmente com veículos, opcionalmente uma barreira de controle de taxa para administrar o composto da pele do hospedei- ro em uma taxa controlada e predeterminada em um período de tempo prolongado e meios para prender o dispositivo à pele.

[0114] As composições adequadas para aplicação tópica, por exemplo, à pele e aos olhos, incluem soluções aquosas, suspensões, pomadas, cremes, géis ou formulações aspersíveis, por exemplo, para administração por meio de aerossol ou similar. Tais sistemas de admi- nistração tópica serão, em particular, apropriados para aplicação dér- mica, por exemplo, para uso profilático em protetores solares, loções, aerossóis e similares. São, portanto, particularmente apropriados para uso em formulações tópicas, incluindo cosméticas, bem conhecidas na técnica. Essas podem conter solubilizantes, estabilizantes, agentes promotores de tonicidade, tampões e conservantes.

[0115] Conforme usado no presente documento, uma aplicação tópica pode estar relacionada a uma aplicação por inalação ou intra- nasal. Podem ser convenientemente administradas na forma de um pó seco (sozinho, ou como uma mistura, por exemplo, uma mistura seca com lactose ou uma partícula de componente misto, por exemplo, com fosfolipídios) a partir de um inalador de pó seco ou uma apresentação de aspersão de aerossol, a partir de um recipiente pressurizado, bom- ba, aspersor, atomizador ou nebulizador, com ou sem o uso de um propelente apropriado.

[0116] A presente revelação fornece, adicionalmente, composi- ções farmacêuticas anidras e formas de dosagem que compreendem os compostos da presente revelação como ingredientes ativos, já que a água pode facilitar a degradação de determinados compostos.

[0117] As composições farmacêuticas anidras e formas de dosa- gem da revelação podem ser preparadas com o uso de ingredientes anidros ou que contêm baixa umidificação e condições de baixa umidi- ficação ou baixa umidade. Uma composição farmacêutica anidra pode ser preparada e armazenada de tal modo que sua natureza anidra seja mantida. Assim, as composições anidras são embaladas usando mate-

riais que são conhecidos por prevenir a exposição a água, de modo que possam ser incluídas em kits apropriados de fórmulas. Exemplos de embalagens apropriadas incluem, mas sem limitação, folhas metáli- cas hermeticamente seladas, plásticos, recipientes para dose unitária (por exemplo, frascos), blísteres e embalagens de tiras.

[0118] A presente revelação fornece, adicionalmente, composi- ções farmacêuticas e formas de dosagem compreendendo um ou mais agentes que reduzem a taxa pela qual o composto da presente inven- ção como um ingrediente ativo vai se decompor. Tais agentes, que são chamados no presente documento de "estabilizadores" incluem, mas sem limitação, antioxidantes, tais como ácido ascórbico, tampões de pH, ou tampões de sais, etc.

[0119] O composto da presente revelação é tipicamente formulado nas formas de dosagem farmacêutica para fornecer uma dosagem fa- cilmente controlável do fármaco e para dar ao paciente um produto elegante e facilmente manuseável. O regime de dosagem para os compostos da presente revelação irá, obviamente, variar dependendo de fatores conhecidos, tais como as características farmacodinâmicas do agente particular e seu modo e via de administração; a espécie, idade, sexo, saúde, condição médica e peso do recipiente; a natureza e extensão dos sintomas; o tipo de tratamento simultâneo; a frequên- cia de tratamento; a via de administração, a função renal e hepática do paciente e o efeito desejado. Os compostos da presente revelação po- dem ser administrados em uma dose diária única, ou a dosagem diária total pode ser administrada em doses divididas de duas, três ou quatro vezes diariamente.

[0120] A presente revelação proporciona adicionalmente composi- ções farmacêuticas que podem ser administradas topicamente no su- jeito, incluindo administração na forma de sólido, semissólido, líquido, géis e microsferas, etc., no ouvido externo, ouvido médio ou ouvido interno. As composições da presente revelação podem ser administra- das por diversos métodos suficientes para administrar a composição no ouvido interno. Tais métodos incluem, mas sem limitação, adminis- tração auricular (por exemplo, por pavios ou cateteres transtimpâni- cos), administração intra-auricular, administração intratimpânica, admi- nistração intracoclear, administração intravestibular e administração intralabiríntica.

[0121] Como usado no presente documento, o termo "administra- ção auricular" refere-se a um método de uso de um dispositivo de ca- teter ou wick para administrar uma composição através da membrana timpânica ao ouvido interno do sujeito. De modo a facilitar a inserção do wick ou cateter, a membrana timpânica pode ser perfurada usando uma seringa de tamanho apropriado. Os dispositivos também poderi- am ser inseridos usando quaisquer outros métodos conhecidos pelos especialistas na técnica, por exemplo, implantação cirúrgica do dispo- sitivo. Em modalidades particulares, o dispositivo de wick ou cateter pode ser um dispositivo usado sozinho, significando que é inserido no ouvido do sujeito e a composição é então liberada de forma controlada no ouvido interno. Em outras modalidades particulares, o dispositivo de wick ou cateter pode ser ligado ou acoplado a uma bomba ou outro dispositivo que permita a administração de composições adicionais. A bomba pode ser automaticamente programada para administrar uni- dades de dosagem ou pode ser controlada pelo sujeito ou profissional médico.

[0122] Como usado no presente documento, o termo administra- ção "intra-auricular" refere-se à administração de uma composição no ouvido externo, médio ou interno de um sujeito por injeção direta da composição. Administração "intratimpânica" refere-se à injeção ou per- fusão de uma composição, através da membrana timpânica no ouvido médio, de modo que a composição possa se difundir através da mem-

brana da janela redonda no ouvido interno. Administração "intracocle- ar" refere-se à administração direta de uma composição na cóclea. Administração "intravestibular" refere-se à administração direta de uma composição nos órgãos vestibulares. Administração "intralabiríntica" refere-se à administração direta de uma composição no compartimento de fluido do ouvido interno para expor o ouvido interno, incluindo os canais semicirculares, o vestíbulo e a cóclea, à composição.

[0123] Em uma modalidade, um aparelho de seringa e agulha é usado para administrar as composições a um sujeito usando adminis- tração auricular. Uma agulha de tamanho adequado é usada para per- furar a membrana timpânica e um wick ou cateter compreendendo a composição é inserido através da membrana timpânica perfurada e no ouvido médio do sujeito. O dispositivo pode ser inserido de modo que esteja em contato com a janela redonda ou imediatamente adjacente à janela redonda. Dispositivos exemplificativos usados para administra- ção auricular incluem, mas sem limitação, wicks transtimpânicos, cate- teres transtimpânicos, bombas transtimpânicas, microcateteres de ja- nela redonda (cateteres pequenos para administração do medicamen- to na janela redonda) e Microwicks™ de Silverstein (tubo pequeno com um "pavio" através do tubo até à janela redonda, permitindo regu- lação por um sujeito ou profissional médico).

[0124] Em outra modalidade, um aparelho de seringa e agulha é usado para administrar composições a um sujeito no ouvido médio e/ou interno. A formulação pode ser administrada diretamente na membrana da janela redonda através de injeção intratimpânica, ou po- de ser administrada diretamente na cóclea através de injeção intraco- clear, ou diretamente nos órgãos vestibulares através de injeção intra- vestibular, ou diretamente nos canais semicirculares, o vestíbulo e a cóclea através de injeção intralabiríntica.

[0125] Em ainda outra modalidade, o dispositivo de administração pode ser um aparelho projetado para administração de composições no ouvido médio e/ou interno. A título de exemplo apenas: GYRUS Medical Gmbh oferece micro-otoscópios para visualização do, e admi- nistração de fármacos no nicho da janela redonda; Arenberg descre- veu um dispositivo de tratamento médico para a administração de flui- dos em estruturas do ouvido interno nas Patentes U.S. N.os 5.421.818;

5.474.529; e 5.476.446, cada uma das quais é incorporada por refe- rência no presente documento para tal revelação. A Publicação de Pe- dido de Patente U.S. 2007/0167918, que é incorporada no presente documento por referência para tal revelação, descreve adicionalmente um aspirador ótico e distribuidor de medicamento combinados para amostragem de fluido transtimpânico e aplicação de medicamento.

[0126] Em uma modalidade, as composições podem ser topica- mente administradas ao sujeito. Em outra modalidade, as composi- ções podem ser administradas ao sujeito por administração auricular. Em ainda outra modalidade, as composições podem ser administradas ao sujeito por administração intra-auricular. Em ainda outra modalida- de, as composições podem ser administradas ao sujeito por adminis- tração intratimpânica. Em ainda outra modalidade, as composições podem ser administradas ao sujeito por administração intracoclear. Em ainda outra modalidade, as composições podem ser administradas ao sujeito por administração intravestibular. Em ainda outra modalidade, as composições podem ser administradas ao sujeito por administração intralabiríntica.

[0127] Em uma modalidade, as composições compreendem um ou mais componentes que aumentam a disponibilidade dos ingredientes ativos da composição na cóclea e/ou proporcionam liberação prolon- gada ou imediata dos ingredientes ativos da composição no ouvido interno. Em uma modalidade, o um ou mais componentes são veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[0128] Em outra modalidade, as composições compreendem um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, que facilitarão a admi- nistração da composição através de barreiras biológicas que separam o ouvido médio e o ouvido interno, por exemplo, a janela redonda, promovendo, assim, a administração eficaz de uma quantidade tera- peuticamente eficaz da composição no ouvido interno. A administração eficaz na cóclea, órgão de Corti, órgãos vestibulares e/ou espaço dos fluidos perilinfa ou endolinfa do ouvido interno é desejável pois esses tecidos/órgãos alojam as células de sustentação, que promovem a re- generação de células ciliadas sensoriais quando tratadas ou colocadas em contato com composições da presente revelação.

[0129] A administração intratimpânica no ouvido interno pode ser realizada através de injeção ou perfusão da composição no ouvido médio, visando difusão da composição através da membrana da janela redonda no ouvido interno. Sistemas de administração adequados pa- ra administração intratimpânica são bem conhecidos e podem ser en- contrados, por exemplo, em Liu et al., Acta Pharmaceutica Sinica B 2013; 3(2):86-96; Kechai et al., International Journal of Pharmaceutics 2015; 494: 83 a 101; e Ayoob et al., Expert Opinion on Drug Delivery, 2015;12(3): 465 a 479.

[0130] Em certos casos, pode ser vantajoso administrar o compos- to da presente revelação em combinação com um ou mais agentes terapeuticamente ativos, por exemplo, aqueles agentes terapeutica- mente ativos relacionados às trajetórias de desenvolvimen- to/regeneração da célula capilar relevante, incluindo, mas sem limita- ções, sinalização de Notch, sinalização de FGF, sinalização de Wnt, sinalização de Shh, ciclo celular/envelhecimento de célula-tronco, miRNA e regulações epigenéticas.

[0131] O termo "terapia de combinação" refere-se à administração de dois ou mais agentes terapêuticos para tratar uma doença, distúrbio ou afecção terapêutica descrito na presente revelação. Tal administra- ção abrange a coadministração desses agentes terapêuticos de um modo substancialmente simultâneo, tal como em uma cápsula única tendo uma razão fixa de ingredientes ativos. Alternativamente, tal ad- ministração abrange a coadministração em recipientes múltiplos ou separados (por exemplo, cápsulas, pós e líquidos) para cada ingredi- ente ativo. O composto da presente revelação e agentes terapêuticos adicionais podem ser administrados através da mesma via de adminis- tração ou através de vias de administração diferentes. Pós e/ou líqui- dos podem ser reconstituídos ou diluídos até uma dose desejada an- tes da administração. Além disso, tal administração abrange também o uso de cada tipo de agente terapêutico de um modo sequencial, apro- ximadamente ao mesmo tempo ou em diferentes momentos. Em qual- quer um dos casos, o regime de tratamento proporcionará efeitos be- néficos da combinação de fármacos no tratamento das doenças, afec- ções ou distúrbios descritos no presente documento.

[0132] Em uma modalidade, a presente revelação fornece compo- sições farmacêuticas compreendendo pelo menos um composto da presente revelação ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, juntamente com um carreador farmaceuticamente aceitável adequado para administração a um sujeito humano ou animal, isoladamente ou junto com um ou mais outros agentes terapeuticamente ativos relacio- nados às trajetórias de desenvolvimento/regeneração da célula capilar relevante conforme descrito no supracitado.

[0133] Em outra modalidade, a presente revelação fornece méto- dos para tratar um sujeito humano ou animal quanto à perda de audi- ção ou distúrbio de equilíbrio, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente revelação ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, isolada- mente ou em combinação com um ou mais outros agentes terapeuti-

camente ativos relacionados àquelas trajetórias de desenvolvimen- to/regeneração da célula capilar relevante, conforme descrito no su- pracitado.

[0134] Em particular, as composições serão formuladas em con- junto com um terapêutico de combinação ou administradas separada- mente.

[0135] Em terapia de combinação para o tratamento de perda de audição ou distúrbio de equilíbrio, o composto da presente revelação e outro agente (ou agentes) terapeuticamente ativo pode ser administra- do simultânea, concorrente ou sequencialmente, sem limites de tempo específicos, em que tal administração fornece níveis terapeuticamente eficazes dos dois compostos no corpo do sujeito.

[0136] Em uma modalidade preferencial, o composto da presente revelação e o outro agente (ou agentes) terapeuticamente ativo são geralmente administrados sequencialmente em qualquer ordem por infusão, oral ou localmente. O regime de dosagem pode variar depen- dendo da etapa da doença, aptidão física do paciente, perfis de segu- rança dos fármacos individuais e tolerância dos fármacos individuais, bem como outros critérios bem conhecidos do médico assistente e pra- ticante (ou praticantes) médico administrando a combinação. O com- posto da presente revelação e outro agente (ou agentes) terapeutica- mente ativo podem ser administrados a minutos, horas, dias ou até mesmo semanas distantes um do outro, dependendo do ciclo particu- lar sendo usado para o tratamento. Além disso, o ciclo poderia incluir a administração de um fármaco mais frequentemente do que o outro, durante o ciclo de tratamento e em diferentes doses por administração do fármaco.

[0137] Em outro aspecto da presente revelação, é proporcionado um kit compreendendo duas ou mais composições farmacêuticas se- paradas, pelo menos uma das quais contém um composto da presente revelação. Em uma modalidade, o kit compreende meios para reter separadamente as ditas composições, tal como um recipiente, garrafa dividida ou embalagem de papel alumínio. Um exemplo de tal kit é um blíster, como tipicamente usado para a embalagem de comprimidos, cápsulas e similares.

[0138] O kit da presente revelação pode ser usado para adminis- trar diferentes formas de dosagem, por exemplo, oral e parenteral, pa- ra administrar as composições separadas em diferentes intervalos de dosagem, ou para titular as composições separadas umas contra as outras. Para auxiliar a adesão, o kit da presente revelação compreen- de, tipicamente, instruções para administração.

[0139] Nas terapias de combinação da presente revelação, o com- posto da presente revelação e o outro agente terapêutico podem ser fabricados e/ou formulados pelos mesmos fabricantes ou fabricantes diferentes. Além do mais, o composto da presente revelação e o outro terapêutico (ou agente farmacêutico) podem ser combinados em uma terapia de combinação: (i) antes da liberação do produto de combina- ção para médicos (por exemplo, no caso de um kit compreendendo o composto da presente revelação e o outro agente terapêutico); (ii) pelo próprio médico (ou sob a orientação do médico) pouco antes da admi- nistração; (iii) nos próprios pacientes, por exemplo, durante a adminis- tração sequencial do composto da presente revelação e do outro agente terapêutico.

[0140] A composição (ou formulação) farmacêutica para aplicação pode ser empacotada em uma variedade de modos, dependendo do método usado para administração do fármaco. Geralmente, um artigo para distribuição inclui um recipiente tendo depositado nele a formula- ção farmacêutica em uma forma apropriada. Recipientes adequados são bem conhecidos pelos versados na técnica e incluem materiais tais como garrafas (plástico e vidro), sachês, ampolas, sacos de plásti-

co, cilindros de metal e similares. O recipiente pode também incluir uma montagem inviolável para prevenir acesso indiscreto ao conteúdo do pacote. Além disso, o recipiente tem depositado nele um rótulo que descreve o conteúdo do recipiente. O rótulo pode também incluir avi- sos adequados.

[0141] A composição farmacêutica ou combinação da presente revelação pode estar em dosagem unitária de cerca de 1 a 10.000 mg de ingrediente(s) ativo(s) para um sujeito de cerca de 50 a 70 kg, ou cerca de 1 a 500 mg, ou cerca de 1 a 250 mg, ou cerca de 1 a 150 mg, ou cerca de 0,5 a 100 mg, ou cerca de 1 a 50 mg de ingredientes ati- vos. A dosagem terapeuticamente eficaz de um composto, da compo- sição farmacêutica ou das combinações dos mesmos depende da es- pécie do indivíduo, do peso corporal, da idade e condição individual, do distúrbio ou doença ou da gravidade da mesma sendo tratada. Um médico, clínico ou veterinário versado pode prontamente determinar a quantidade eficaz de cada um dos ingredientes ativos necessária para prevenir, tratar ou inibir a progressão do distúrbio ou doença.

[0142] As propriedades de dosagem mencionadas acima são de- monstráveis em testes in vitro e in vivo vantajosamente com o uso de mamíferos, por exemplo, camundongos, ratos, cães, macacos ou ór- gãos isolados, tecidos e preparações dos mesmos. Os compostos da presente revelação podem ser aplicados in vitro na forma de soluções, por exemplo, soluções aquosas, e in vivo seja enteral, parenteral ou intravenosamente, de modo vantajoso, por exemplo, como uma sus- pensão ou em solução aquosa. A dosagem in vitro pode variar entre concentrações de cerca de 10-3 molar e 10-9 molar. Uma quantidade terapeuticamente eficaz in vivo pode estar na faixa, dependendo da via de administração, entre cerca de 0,1 e 500 mg/kg, ou entre cerca de 1 e 100 mg/kg.

FARMACOLOGIA E UTILIDADE

[0143] A presente revelação refere-se em geral a compostos, composições e métodos para tratamento de perda auditiva ou distúrbio do equilíbrio associados com a danificação ou perda de células cilia- das sensoriais no ouvido interno ao aumentar, promover, estimular ou induzir a regeneração de células ciliadas sensoriais no ouvido interno. Portanto, uma breve revisão da anatomia do ouvido pode ser útil para o entendimento da presente revelação.

[0144] A anatomia do ouvido é bem conhecida por aqueles versa- dos na técnica (consultar, por exemplo, Gray's Anatomy, Edição Ame- ricana Revisada (1977), páginas 859 a 867). O ouvido é geralmente dividido em três porções: o ouvido externo, ouvido intermediário e ou- vido interno. O ouvido externo é composto por aurícula (o pavilhão au- ricular), o canal auditivo e a porção voltada para fora da membrana timpânica (tímpano). A função do ouvido externo, em parte, é coletar e direcionar ondas sonoras através do canal auditivo para a membrana timpânica e o ouvido intermediário.

[0145] O ouvido intermediário é uma cavidade preenchida com ar que inclui a cavidade timpânica, três ossos do ouvido (ossículos auditi- vos): o martelo, a bigorna e o estribo, janela oval e janela circular, que conecta o ouvido intermediário ao ouvido interno. Os ossículos auditi- vos são dispostos para fornecer uma ligação mecânica entre a mem- brana timpânica e a janela oval para o ouvido interno preenchido com fluido, em que o som é transformado e transduzido para o ouvido in- terno para processamento adicional.

[0146] O ouvido interno contém órgãos sensoriais para audição e equilíbrio. A cóclea percebe sons; o órgão do equilíbrio inclui os canais semicirculares, que percebem a aceleração angular, e os órgãos otolí- ticos (utrículo e sáculo) que percebem a aceleração linear. A janela redonda que conecta a cóclea ao ouvido médio. Em cada uma dessas porções sensoriais, células ciliadas sensoriais especializadas estão organizadas em uma ou mais camadas de células de sustentação do ouvido interno. As células de sustentação estão subjacentes a, circun- dam pelo menos parcialmente as e dão suporte físico às células cilia- das sensoriais dentro do ouvido interno. Os estereocílios nas células ciliadas sensoriais são fisicamente desviadas em resposta ao som ou movimento, e sua deflexão é transmitida para nervos que mandam im- pulsos nervosos ao cérebro para processamento e interpretação.

[0147] Em particular, a cóclea inclui o órgão de Corti que é prima- riamente responsável pela percepção de sons. O órgão de Corti inclui uma membrana basilar sobre a qual está localizada uma variedade de células de sustentação, incluindo células limitantes, células pilares in- ternas, células pilares externas, células falângicas internas, células de Dieters e células de Hensen. A células de sustentação circundam e separam células ciliadas internas e células ciliadas externas. A mem- brana tectória está disposta acima das células ciliadas internas e célu- las ciliadas externas.

[0148] A perda auditiva e distúrbios do equilíbrio são principalmen- te causados por danificação ou perda das células ciliadas sensoriais na cóclea. Em mamíferos, a perda ou danificação de células ciliadas sensoriais resulta em perda auditiva permanente ou distúrbios do equi- líbrio, pois são geradas apenas durante o desenvolvimento embrioná- rio e não regeneram espontaneamente após danificação ou perda ce- lular durante a vida de um indivíduo. É amplamente aceito que apesar de células capazes de gerarem células ciliadas sensoriais estarem presentes no ouvido interno, a regeneração de células ciliadas senso- riais natural no ouvido interno é baixa (Li et al., Trends Mol. Med., 10, 309 a 315 (2004); Li et al., Nat. Med., 9, 1293-1299 (2003); Rask- Andersen et al., Hear. Res., 203, 180 a 191 (2005)). Como resultado, a perda ou danificação de células ciliadas sensoriais pode não ser ade- quadamente substituída por processos fisiológicos naturais (por exem-

plo, diferenciação celular) e ocorre uma perda de células ciliadas. Em muitos indivíduos, tal perda de células ciliadas sensoriais pode resul- tar, por exemplo, em perda auditiva sensorioneural e distúrbios do equilíbrio. Portanto, estratégias terapêuticas que aumentam o número de células ciliadas sensoriais no ouvido interno beneficiarão um paci- ente com perda ou danificação de células ciliadas sensoriais.

[0149] A determinação do destino de células ciliadas sensoriais no ouvido interno é controlada por genes e vias específicos. O homólogo de proteína atonal 1 (Atoh1 ou atonal) é o regulador mestre do desen- volvimento e regeneração de células ciliadas do ouvido interno. A im- portância de Atoh1 na gênese de células ciliadas é bem documentada. Por exemplo, Math1 (homólogo de Atoh1 em camundongos) é neces- sário para o desenvolvimento de células ciliadas e a diferenciação de células progenitoras do ouvido interno em células de sustentação e/ou células ciliadas sensoriais do ouvido interno (Bermingham et al., Sci- ence, 284:1837-1841, 1999). Além disso, a superexpressão de Math1 mediada por adenovírus na endolinfa na cobaia madura, resulta na diferenciação de células não sensoriais na cóclea madura em células ciliadas imaturas (Kawamoto et al., J. Neurosci., 23:4395-4400, 2003). As implicações desses estudos são duas. Em primeiro lugar, demons- tram que células não sensoriais da cóclea madura retêm a capacidade de se diferenciarem em células sensoriais, por exemplo, células cilia- das sensoriais. Em segundo lugar, demonstram que a superexpressão de Math1 é necessária e suficiente para direcionar a transdiferencia- ção de células de sustentação em células ciliadas. Um estudo posteri- or deu seguimento a essas descobertas, ao demonstrar que a supe- rexpressão de Atoh1 mediada por adenovírus induz a regeneração de células ciliadas sensoriais e melhora substancialmente os níveis de audição em um modelo animal experimentalmente ensurdecido (Izumi- kawa et al., Nat. Med., 11:271-276, 2005).

[0150] Isso sugere que apesar do epitélio sensorial coclear de mamífero ter perdido a capacidade de se regenerar espontaneamente, a atividade molecular necessária para induzir o destino de células cili- adas ainda está presente e funciona em células de sustentação madu- ras. Essas descobertas também sugerem que a ativação da expressão endógena de Atoh1 por intervenção farmacológica poderia ser uma abordagem eficaz para estimular a regeneração de células ciliadas sensoriais para o tratamento de perda auditiva e distúrbios do equilí- brio.

[0151] A presente revelação proporciona compostos, composições e métodos que são capazes de aumentar a expressão e/ou atividade de Atoh1 em um sujeito. A presente revelação também proporciona compostos, composições e métodos que podem aumentar ou promo- ver a regeneração de células ciliadas sensoriais. A presente revelação também proporciona compostos, composições e métodos que podem aumentar o número de células ciliadas sensoriais no ouvido interno do sujeito. Portanto, os compostos, composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para tratar perda auditiva e/ou distúrbio do equilíbrio que resultam da danificação ou perda de células ciliadas sensoriais em um sujeito.

[0152] Os compostos da presente revelação na forma livre, ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável, exibem propriedades far- macológicas valiosas, que podem ser demonstradas pelo menos por uso de qualquer um dos seguintes procedimentos de teste. Os com- postos da presente revelação foram avaliados quanto à sua capacida- de de aumentar a expressão de Atoh1 em células precursoras neurais cerebelares de camundongo. A capacidade dos compostos da presen- te revelação de induzirem nova formação de células ciliadas foi avalia- da em ensaio de indução de células ciliadas ex vivo usando explantes de cóclea de camundongo de 6 dias pós-natais com danificação de células ciliadas.

EXEMPLOS

[0153] Os seguintes Exemplos foram preparados, isolados e ca- racterizados usando os métodos divulgados no presente documento. Os seguintes exemplos demonstram um escopo parcial da revelação e não se destinam a limitar o escopo da revelação.

[0154] Salvo especificado de outro modo, os materiais de partida estão geralmente disponíveis de fontes comerciais não limitantes tais como TCI Fine Chemicals (Japão), Shanghai Chemhere Co., Ltd.(Shanghai, China), Aurora Fine Chemicals LLC (San Diego, CA), FCH Group (Ucrânia), Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee, Wis.), Lan- caster Synthesis, Inc. (Windham, N.H.), Acros Organics (Fairlawn, N.J.), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornualha, Inglaterra), Tyger Scientific (Princeton, N.J.), AstraZeneca Pharmaceuticals (Lon- dres, Inglaterra), Chembridge Corporation (E.U.A.), Matrix Scientific (E.U.A.), Conier Chem & Pharm Co., Ltd (China), Enamine Ltd (Ucrâ- nia), Combi-Blocks, Inc. (San Diego, E.U.A.), Oakwood Products, Inc. (E.U.A.), Apollo Scientific Ltd. (Reino Unido), Allichem LLC. (EUA) e Ukrorgsyntez Ltd (Letônia).

INTERMEDIÁRIOS Intermediário A: Ácido 5-(tiofen-2il)isoxazol-3-carboxílico Etapa 1: 2,4-Dioxo-4-(tiofen-2-il)butanoato de etila

[0155] A uma solução de 1-(tiofen-2-il)etan-1-ona (50 g, 396,2 mmol, 1,0 eq) e (COOEt)2 (72,39 g, 495,3 mmol, 1,25 eq) em THF ani-

dro (2,0 L) foi adicionado t-BuOK (57,8 g, 515,1 mmol, 1,3 eq) em por- ções pequenas a 15 a 25 oC. A mistura foi então agitada à ta durante 2 horas. A mistura foi despejada em água (800 ml), acidificada para pH 2 com HCl 1 N, e depois a mistura foi extraída com acetato de etila (3*500 ml). A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura (1 L), seca sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada para fornecer o produto do título bruto (100 g) como um sólido amarelo que foi usado sem purificação adicional. Etapa 2: 5-(Tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxilato de etila

[0156] A uma solução do composto A-1 (89 g, 393,3 mmol, 1,0 eq) em etanol anidro (2 L) foi adicionado o composto NH 2OH.HCl (54,64 g, 786,7 mmol, 2 eq). A mistura foi agitada a 60 °C durante 16 horas. A mistura de reação foi concentrada. Água (200 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc (3*200 ml). A camada orgânica foi con- centrada sob vácuo para fornecer o produto do título bruto (90 g) que foi usado sem purificação adicional. Etapa 3: Ácido 5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxílico

[0157] A uma solução do composto A-2 (80 g, 358,3 mmol, 1,0 eq) em THF (200 L) foi adicionada uma solução de LiOH.H2O (17,16 g, 716,6 mmol, 2,0 eq) em água (358,3 ml). A mistura resultante foi agi- tada a 15 a 22 oC durante 2 horas. A mistura de reação foi concentra- da sob pressão reduzida para remover o THF. O resíduo foi acidificado para pH 1 com HCl 1 N e extraído com EtOAc (3*300 ml). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob vácuo. O sólido foi tri- turado com EtOAc, filtrado e seco para fornecer o composto do título (42,6 g, rendimento de 60,9%) como um sólido branco. 1H RMN (400M Hz, CDCl3) δ ppm 7,60 - 7,59 (dd, J = 3,6, 1,2 Hz, 1H), 7,54 - 7,52 (dd, J = 4,8, 1,2 Hz, 1H), 7,18 - 7,16 (dd, J = 4,8, 3,6 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H). Intermediário B: N-(5-Oxopentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida Etapa 1: N-(5-Hidroxipentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0158] A uma solução do composto Intermediário A (10 g, 51,23 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 anidro (100 ml) foi adicionado (COCl)2 (19,5 g 13,1 ml, 153,6 mmol, 3,0 eq) em gotas sob proteção de N2, então, uma gota de DMF foi adicionada a 0 °C. A mistura foi agitada à ta durante 2 horas. A mistura foi então concentrada sob o vácuo e o resíduo foi diluído com CH2Cl2 (50 ml), depois a mistura foi adicionada a uma solução de 5- aminopentan-1-ol (7,93 g, 76,85 mmol, 1,5 eq) e Et3N (15,5 g, 153,69 mmol, 3,0 eq) em CH2Cl2 (100 ml) gota a gota a 0 °C. A mistura resultan- te foi agitada à ta durante 1 hora. A reação foi, então, arrefecida brusca- mente com água (50 ml) e extraída com CH2Cl2 (3*50 ml). As camadas orgânicas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob o vácuo para fornecer o composto do título (12,5 g, rendimento de 87,03%) como um sólido branco. MS (ESI) m/z 302,9 [M+Na]+. Etapa 2: N-(5-Oxopentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

Legenda: ta

[0159] A uma solução do composto B-1 (10 g, 35,67 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (200 mL) foi adicionado NaHCO3 (13,48 g, 160,5 mmol, 4,5 eq), seguido por DMP (22,69 g, 53,5 mmol, 1,5 eq). A mistura resultan- te foi agitada à ta durante 3 horas. A mistura foi lentamente despejada em solução aquosa saturada de NaHCO3 (100 ml) e extraída com CH2Cl2 (3*100 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas a vácuo e o re- síduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica eluindo com pe- tróleo/EtOAc de 100/0 a 1/1 para proporcionar o composto do título (4,5 g, 45,3% de rendimento) como um sólido branco. MS (ESI) m/z 300,9 [M+Na]+. Intermediário C: 5-(4-Fluorofenil)-N-(5-oxopentil)isoxazol-3-carboxamida

[0160] O composto do título foi preparado usando um procedimen- to similar àquele do Intermediário de B por subsituição do intermediário A por ácido 5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxílico (que foi feito usando o método similar ao intermediário A) em 28% de rendimento como um sólido branco. MS (ESI) m/z 312,9 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9,81 (t, J = 1,2 Hz, 1H), 7,82 - 7,78 (m, 2H), 7,23 - 7,16 (m, 2H), 6,92 (s, 1H), 3,50 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 2,59 - 2,50 (m, 2H), 1,80 - 1,64 (m, 4H). Intermediário D: Azetidina-3-sulfonamida Etapa 1: 3-(Acetiltio)azetidina-1-carboxilato de benzila

[0161] A uma solução de PPh3 (7,91 g, 30,16 mmol, 1,25 eq) em THF (30 ml) a -78 °C foi adicionado DIAD (5,95 g, 29,44 mmol, 1,22 eq) em THF (20 ml). Após agitação durante 10 min, foi adicionado áci- do tioacético (2,39 g, 2,24 ml, 31,37 mmol, 1,3 eq) em THF (20 ml). Após mais 10 min, foi adicionada uma solução de 3-hidroxiazetidina-1- carboxilato de benzila (5 g, 24,13 mmol, 1,0 eq) em THF (30 ml). A re- ação foi agitada a -78 oC durante 1 hora e depois deixada aquecer até 25 oC durante 14 horas. A mistura de reação foi arrefecida bruscamen- te com salmoura (30 ml). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (3*20 ml). A fase orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada e con- centrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato- grafia de coluna em gel de sílica eluindo com petróleo/EtOAc de 50/1 a 5/1 para proporcionar o composto do título (2,0 g, 31% de rendimento) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,38 - 7,28 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 4,49 - 4,45 (m, 2H), 4,24 - 4,21 (m, 1H), 3,94 - 3,90 (m, 2H), 2,35 (s, 3H). Etapa 2: 3-(Clorossulfonil)azetidina-1-carboxilato de benzila

[0162] A uma solução de composto D-1 (1,1 g, 4,15 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (20 ml) foi adicionada água (5 ml). A mistura foi esfriada até 0 o C e gás cloro foi borbulhado na mesma a 0 a 5 oC com agitação durante 1 hora. As camadas foram separadas e a camada de DCM contendo composto D-2 (4,15 mmol) foi usada diretamente na próxima etapa. Etapa 3: 3-Sulfamoilazetidina-1-carboxilato de benzila

[0163] A uma solução de NH3.H2O (40 ml, 0,34 mol, 28% em peso, 82,7 eq) foi adicionada uma solução de composto D-2 (4,15 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (20 ml) de 0 a 5 °C. A mistura foi agitada a 26 oC durante 14 horas. A fase aquosa foi extraída com CH2Cl2 (2*40 ml). A fase or- gânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada, concentrada. O resí- duo foi purificado por HPLC preparativa ácida (Boston Green ODS 150*30 5u, gradiente: 22 a 32% de B (A = 0,1% de TFA/água), B = CH3CN), taxa de fluxo: 30 ml/min) para fornecer o composto do título (0,35 g, rendimento de 31,2%) como um sólido amarelo claro. MS (ESI) m/z 292,9 [M+23]+. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,36 - 7,31 (m, 5H), 5,13 (s, 2H), 5,10 (s, 2H), 4,32 - 4,22 (m, 4H), 4,02 - 4,00 (m, 1H). Etapa 4: Azetidina-3-sulfonamida

[0164] A uma solução de composto D-3 (0,35 g, 1,29 mmol, 1,0 eq) em MeOH (3 ml) foi adicionado Pd/C (0,1 g, 10% em peso). A mis- tura foi agitada a 25 oC sob atmosfera de hidrogênio (15 psi) durante 4 horas. A mistura foi filtrada e a torta foi lavada com MeOH (2*5 ml). O filtrado foi concentrado para proporcionar o composto do título (160 mg, 90,7% de rendimento) como um sólido amarelo claro. MS (ESI) m/z 136,9 [M+1]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6,90 (s l, 2H), 4,10 - 4,04 (m, 1H), 3,74 - 3,70 (m, 2H), 3,60 - 3,56 (m, 2H). Exemplo 1: N-(5-((3S,4S)-4-carbamoil-3-cianopiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida Etapa 1: 1-benzil-3-hidroxipiperidina-4-carboxilato de metila

[0165] A uma mistura de composto 1-1 (3,7g, 14,96 mmol, 1,0 eq) em EtOH (60 ml) foi adicionado NaBH4 (1,13g, 29,92 mmol, 2,0 eq) em porções a 0 °C. A mistura foi agitada por 2 horas a 0 °C. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. À mistura foi adicionada água (300 ml) e EA (300 ml). A camada de EA foi separada e lavada com sal- moura (100 ml), seca sobre Na 2SO4 e concentrada sob pressão redu- zida para proporcionar o composto do título (3,8 g, bruto) como um óleo amarelo. Etapa 2: 1-benzil-3-((metilsulfonil)óxi)piperidina-4-carboxilato de metila

[0166] A uma mistura do composto 2-2 (1 g, 4,01 mmol, 1,0 eq) em DCM (20 ml) foi adicionado MsCl (918,96 mg, 8,02 mmol, 2,0 eq) em porções a 0 °C. A mistura foi deixada para aquecer a 15 °C e agi- tada por 16 h. À água (200 ml) foi adicionada à mistura. A mistura re- sultante foi extraída com DCM (200 ml). A camada de DCM foi lavada com salmoura, seca sobre Na 2SO4 e concentrada sob pressão reduzi- da para proporcionar o composto do título (1,5 g, bruto) como um óleo amarelo, que foi confirmado por LCMS. LC-MS: [M+H]+ = 328,3. Etapa 3: 1-benzil-3-cianopiperidina-4-carboxilato de metila

[0167] Uma mistura do composto 1-3 (1,5 g, 4,58 mmol, 1,0 eq), TMSCN (681,79 mg, 6,87mmol, 1,5 eq) e TBAF (6,87 ml, 1 M) em MeCN (30 ml) foi agitada por 16 h a 80 °C. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo. O resíduo foi puri-

ficado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE: EA=20:1 a 10:1) para proporcionar o pico 1(350 mg, 90%) e o pico 2 (100 mg, 99% de pureza). O pico 1 foi confirmado por LCMS(C-05663-135- P1B2) e HRMN (C-05663-135-P1A). O pico 2 foi confirmado por LCMS(C-05663-135-P1B3). LC-MS: [M+H]+ = 259,3. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,32 - 7,14 (m, 5H), 3,87 (m, 0,5H), 3,67 (d, J=11,7 Hz, 3H), 3,50 - 3,44 (m, 1H), 3,38 (m, 0,5H), 3,04 - 2,91 (m, 2H), 2,87 (m, 0,5H), 2,61 - 2,45 (m, 1,5H), 2,42 - 2,17 (m, 1H), 2,16 - 1,92 (m, 2,5H), 1,79 - 1,64 (m, 0,5H). Etapa 4: 1-benzil-3-cianopiperidina-4-carboxamida

[0168] A uma mistura do composto 1-4 (pico 1, 300 mg, 1,16 mmol, 1,0 eq) em MeOH (0,5 ml) adicionou-se NH3.H2O (5 ml, 37%) de 10 a 15 °C. A mistura foi agitada por 16 h de 8 a 15 °C. À mistura foi adicionado EA (50 ml) e água (30 ml). A camada aquosa foi extraí- da com EA (20 mlx2). As camadas de EA combinadas foram lavadas com salmoura (50 ml), secas sobre Na2SO4 e concentrada sob pres- são reduzida para proporcionar o composto 5 (230 mg, bruto) como um óleo amarelo. LC-MS: [M+H]+ = 244,1. Etapa 5: 3-cianopiperidina-4-carboxamida

[0169] A uma mistura do composto 1-5 (230 mg, 0,945 mmol, 1,0 eq) em MeOH (4 ml) foi adicionado Pd/C (úmido, 10%, 100 mg) a 15

°C. A mistura foi agitada por 40 horas a 15 °C sob H 2 (0,34 MPa (50 psi)). A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida para proporcionar o composto do título (70 mg, bruto) como um óleo amarelo. Etapa 6: N-(5-((3S,4S)-4-carbamoil-3-cianopiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0170] A uma mistura do composto 1-6 (200 mg, bruto) e do Inter- mediário B (196,23, 705,04 μmol, 0,9 eq) em MeOH (5 ml) foram adici- onados HOAc (47,04 mg, 783,38 μmol, 1,0 eq) e NaHB(OAc)3 (332,06 mg, 1,57 μmol, 2,0 eq) a 25 °C. A mistura foi agitada por 3 h a 25 °C. À mistura foi adicionada H2O (1 ml). A mistura foi filtrada. O filtrado foi purificado por Prep-HPLC (base) e triturado com MeOH (3 ml) para proporcionar o composto do título (25,91 mg, 100% de pureza) como um sólido branco. 1 H RMN (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7,74 - 7,64 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 3,42 (t, J=7,1 Hz, 2H),3,22 (d, J=11,7 Hz, 1H), 3,00 (d, J=11,2 Hz, 1H), 2,56 - 2,35 (m, 3H), 2,23 (dd, J=2,3, 11,6 Hz, 1H), 2,09 (dt, J=3,5,10,8 Hz, 1H), 2,03 - 1,86 (m, 2H), 1,76 - 1,53 (m, 4H), 1,52 - 1,38 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 416,4. Exemplo 2: N-(5-((3S,4R)-4-ciano-3-hidroxipiperidin-1il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0171] Etapa 1: 4-nitrobenzoato de (3R,4S)-1-benzil-4- cianopiperidin-3-ila

[0172] A uma mistura do composto 2-1 (1,1 g, 5,09 mmol, 1,0 eq), composto 2-1A (849,97 mg, 5,09 mmol, 1,0 eq) e PPh3 (1,6 g, 6,10 mmol, 1,2 eq) em THF (10 ml) foi adicionado DIAD (1,23 g, 6,10 mmol, 1,2 eq) a 0 °C. A mistura foi agitada por 3 horas a 30 °C. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. À mistura, foi adicionada água (100 ml) e EA (100 ml). A camada de EA foi seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo. Ao resíduo foi adicionado HCl (1 M, 50 ml) e MTBE (50 ml). A mistura foi filtrada e a torta de filtro foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (1,3 g, bruto) como um sólido bran- co. LC-MS: [M+H]+ = 366,2.

[0173] Etapa 2: (3R,4S)-1-benzil-3-hidroxipiperidina-4-carbonitrila

[0174] A uma mistura de 2-2 (1 g, 2,74 mmol, 1,0 eq) em MeOH (10 ml), foi adicionado K2CO3 (756,5 mg, 5,47 mmol, 2,0 eq) (756,5 mg, 5,47 mmol, 2,0 eq) a 25 °C. A mistura foi agitada por 40 h a 25 °C. À água (100 ml), foi adicionada a mistura e EA (100 ml). A camada or- gânica foi lavada com salmoura (50 ml), seca sobre Na2SO4 e concen- trada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (500 mg, bruto) como um óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,37 - 7,28 (m, 5H), 4,06 - 3,94 (m, 1H), 3,57 - 3,49 (m, 1H), 3,46 - 3,40 (m, 1H), 3,07 (mz, 1H), 2,87 - 2,71 (m, 2H), 2,46 - 2,32 (m, 1H), 2,14 - 1,54 (m, 3H).

[0175] Etapa 3: (3R,4S)-3-hidroxipiperidina-4-carbonitrila

[0176] A uma mistura do composto 2-3 (200 mg, 924,73 umol, 1,0 eq) em MeOH (4 ml) foi adicionado Pd/C (úmido, 100 mg, 10%) a 25 °C. A mistura foi agitada por 2 h a 25 °C sob H2 (0,1 MPa (15 psi)). A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (130 mg, bruto) como um óleo amarelo.

[0177] Etapa 4: N-(5-((3S,4R)-4-ciano-3-hidroxipiperidin-1-il)pentil)- 5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0178] A uma mistura do composto 2-4 (65 mg, bruto) e do Inter- mediário C (92,04 mg, 317,07 μmol, 0,8 eq) em MeOH (2 ml) foram adicionados HOAc (23,8 mg, 396,33 μmol, 1,0 eq) e NaHB(OAc)3 (168,0 mg, 792,67 μmol, 2,0 eq) a 25 °C. A mistura foi agitada por 1 h a 25 °C. A mistura foi filtrada. O filtrado foi purificado por Prep-HPLC (base, então, TFA), e, então, SFC para proporcionar dois picos, ambos como um sólido branco. O composto do título (pico 1) (10,27 mg) foi confirmado por LCMS, HRMN, 2D_RMN e SFC. LCMS: TR=0,950min [M+H]+=401,4; 1H RMN (400MHz, METANOL-d4,C-05763-051-P1B1) δ = 7,89 - 7,75 (m, 2H), 7,18 (t, J=8,8 Hz, 2H), 6,95 (s, 1H), 3,57 - 3,49 (m, 1H), 3,46 - 3,38 (m, 1H), 3,30 (t, J=7,1 Hz, 2H), 3,10 (ddd, J=2,3, 7,3, 9,5 Hz, 1H), 2,99 - 2,91 (m, 1H), 2,80 - 2,69 (m, 1H), 2,64 (dt, J=3,7, 6,1 Hz, 1H), 2,37 (dt, J=7,6, 9,7 Hz, 1H), 2,26 (m, 1H), 2,13 - 2,00 (m, 1H), 1,93 (m, 1H), 1,63 - 1,41 (m, 4H), 1,41 - 1,24 (m, 2H) Exemplo 3: N-(5-(3-(N-(oxetan-3il)sulfamoil)azetidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0179] Etapa 1: 3-(acetiltio)azetidina-1-carboxilato de benzila

[0180] A uma solução de PPh3 (15,82 g, 60,32 mmol, 1,25 eq) em THF (60 ml) a - 78 °C foi adicionado DIAD (11,9 g, 58,87 mmol, 1,22 eq) em THF (40 ml). Após 10 min, o ácido tiolacético (4,78 g, 4,48 ml, 62,73 mmol, 1,3 eq) em THF (40 ml) foi adicionado seguido, após 10 min, pelo composto 3-1 (10 g, 48,26 mmol, 1,0 eq) em THF (60 ml). A mistura foi agitada a - 78 °C por 1 hora e, então, deixada aquecer a 23 °C e agitada por 14 horas. TLC (hexano/EtOAc 3:1) mostrou que a re- ação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente com salmoura (100 ml). As camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (20 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE/EA 20:1 a 5:1) para proporcionar o composto 3-2 (4,0 g, 31,2% de rendimento) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7,37~7,34 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 4,48-4,44 (m, 2H), 4,24-4,21 (m, 1H), 3,93-3,89 (m, 2H), 2,34 (s, 3H).

[0181] Etapa 2: 3-(N-(oxetan-3il)sulfamoil)azetidina-1-carboxilato de benzila

[0182] A uma solução de composto 3-2 (1,5 g, 5,65 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (20 ml) foi adicionada água (5 ml). A mistura foi esfriada até 0 oC e gás cloro foi borbulhado na mesma a 0 ~ 10 oC com agitação durante 3 horas. TLC (éter de petróleo/EtOAc 3:1) mostrou que a rea- ção foi concluída. As camadas foram separadas. A fase orgânica foi lavada com salmoura (20 ml*3). A fase orgânica foi usada diretamente sem purificação adicional na próxima etapa. A esta solução bruta (equivalente a 207 mg, 2,83 mmol, 3 eq) em CH2Cl2 (10 ml), foi adicio- nado Et3N (477 mg, 4,71 mmol, 5 eq) seguido pela adição de oxatano de amino (0,273 g, 0,942 mmol, 1 eq) em CH2Cl2 (10 ml) a 0 °C. A mis-

tura foi agitada a 20 a 24 °C por 14 horas. LCMS mostrou que a rea- ção foi concluída. Os produtos voláteis foram removidos sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por prep-HPLC (Coluna: Xtimate C18 150*25 mm*5 um, gradiente: 20 ~ 50% de B (A= 0,05% de hidróxido de amônia B = CAN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (160 mg, 52,03% de rendimento) como um óleo amarelo claro. LC-MS: [M+Na]+ = 349,1.

[0183] Etapa 3: N-(oxetan-3il)azetidina-3-sulfonamida

[0184] A uma autoclave foi adicionado o composto 3-3 (160 mg, 0,490 mmol, 1 eq) e MeOH (15 ml) seguido pela adição de Pd/C (104 mg, 5% em peso) sob N2. A reação foi agitada de 19 a 23 °C por 18 horas sob H2 (0,1 MPa (15 psi)). LCMS mostrou que o material de par- tida foi consumido. A suspensão foi filtrada através de um bloco de ce- lite e o bloco foi lavado com MeOH (10 ml*4). Os filtrados combinados foram concentrados à secura para proporcionar o produto 3 (92 mg, 97,62% de rendimento) como um óleo incolor. LC-MS: [M+Na]+ = 193,1.

[0185] Etapa 4: N-(5-(3-(N-(oxetan-3-il)sulfamoil)azetidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0186] A uma solução de composto 3-4 (92 mg, 478,58 umol, 1,3 eq) em DCE (5 ml) e MeOH (1 ml) foi adicionado o Intermediário B (100 mg, 0,359 mmol, 1 eq) e HOAc (22 mg, 0,359 mmol, 1,0 eq) se- guidos pela adição de NaBH(OAc) 3 (114 mg, 0,538 mmol, 1,5 eq) a 0 °C, e a reação foi agitada de 16 a 21 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente com água (1 ml) e concentrada. O resíduo foi dissolvido com MeOH (3 ml) e purificado por prep-HPLC (Coluna: Kromasil 150*25mm*10 um, gradi- ente: 25 a 55% de B (A= (0,05% de hidróxido de amônia v/v), B = CH3CN), Taxa de Fluxo (ml/min) 30) para proporcionar o Exemplo 3 (22,8 mg 13,96% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,56 (dd, J = 0,8, 3,6 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 0,8, 5,2 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 3,6, 4,8 Hz, 1H), 6,95 (s l, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 4,92-4,88 (m, 2H), 4,75-4,65 (m, 1H), 4,62-4,57 (m, 2H), 3,95-3,85 (m, 1H), 3,60-3,52 (m, 2H), 3,50-3,42 (m, 2H), 3,40- 3,35 (m, 2H), 2,49-2,46 (m, 2H), 1,68-1,55 (m, 2H), 1,45-1,35 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 455,1. Exemplo 4: N-(5-(3-(N-(2-cianoetil)sulfamoil)azetidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0187] Etapa 1: N-(5-(3-sulfamoilazetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0188] A uma mistura de Intermediário B (200 mg, 0,719 mmol, 1,0 eq) em MeOH (4 ml) foi adicionado o Intermediário D (98 mg, 0,719 mmol, 1,0 eq), HOAc (43 mg, 0,719 mmol, 1,0 eq), NaBH(OAc)3 (305 mg, 1,44 mmol, 2,0 eq) a 12 ~ 16 °C. A mistura foi agitada a 12 ~ 16 °C por 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. Duas rea- ções paralelas com a mesma escala foram executadas. A mistura de reação foi purificada por pre-HPLC básica (Xtimate C18 150*25 mm*5 um, gradiente: 26 a 56% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amô- nia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título. (209,2 mg, 73,1% de rendimento como um sólido branco). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69-7,66 (m, 2H), 7,21 (dd, J = 4,8 Hz, 8,8 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,05-4,03 (m, 1H), 3,65-3,63 (m, 2H), 3,47-3,45 (m, 2H), 3,39-3,37 (m, 2H), 2,56-2,52 (m, 2H), 1,67- 1,60 (m, 2H), 1,42-1,39 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 399,0.

[0189] Etapa 2: N-(5-(3-(N-(2-cianoetil)sulfamoil)azetidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0190] A uma suspensão do composto 4-1 (80 mg, 0,201 mmol, 1 eq) em DMF (4,4 ml) e composto 4-2 (10,7 mg, 0,201 mmol, 1 eq), foi adicionado Cs2CO3 (327 mg, 1,0 mmol, 5 eq) em 8 a 14 °C. O recipien- te de reação foi vedado e aquecido por meio de micro-ondas a 100 °C por 20 min. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi filtrada. O filtrado foi purificado por prep-HPLC (Coluna Xtimate C18 150*25 mm*5 um, gradiente: 26 a 56% de B (A = água (0,05% de hi- dróxido de amônia v/v) B = MeCN), Taxa de Fluxo = 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (13 mg, 14,34% de rendimento) co- mo um sólido esbranquiçado. 1H RMN (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7,71-7,68 (m, 2H), 7,21 (dd, J = 4,0, 5,2 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 4,17- 4,12 (m, 1H), 3,68-3,60 (m, 2H), 3,48-3,31 (m, 6H), 2,66 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 2,57-2,49 (m, 2H), 1,69-1,59 (m, 2H), 1,48-1,37 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 452,1. Exemplo 5: (1-(5-(5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamido)pentil)azetidin- 3-il)carbamato de 2-(metilamino)-2-oxoetila

[0191] Etapa 1: (1-(5-(5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamido)pentil)azetidin-3-il)carbamato de terc-butila

[0192] A uma mistura do composto 5-1A (900 mg, 4,31 mmol, 1,2 eq) em MeOH (20 ml) foi adicionado Et3N (473 mg, 4,67 mmol, 1,3 eq) e o Intermediário B (1,0 g, 3,59 mmol, 1,0 eq). A mistura foi agitada a 26 °C por 1 hora. NaBH3CN (452 mg, 7,19 mmol, 2,0 eq) foi adiciona- do a 0 ~ 5 °C. A mistura foi agitada a 25 °C durante 14 horas. LCMS indicou que a reação foi concluída. A mistura diluiu com CH 2Cl2 (40 ml). A fase orgânica foi lavada com 10 ml de água. As camadas aquo- sas foram extraídas com CH 2Cl2 (20 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado para propor- cionar um resíduo, que foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE/EA 10:1 a 1:1) para proporcionar o composto do título (0,81 g, 51,9% de rendimento) como um sólido amarelo claro. LC-MS: [M+H]+ = 435,1.

[0193] Etapa 2: N-(5-(3-aminoazetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0194] A uma solução de composto 5-2 (0,475 g, 1,09 mmol, 1 eq) em CH2Cl2 (12 ml) foi adicionado TFA (4 ml). A mistura foi agitada a 26 a 35 °C por 18 horas. LCMS indicou que a reação foi concluída. O produto volátil foi removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto 5-3 (bruto, 100% de rendimento), que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. LC-MS: [M+H]+ = 335,1.

[0195] A uma solução de composto 5-3 (100 mg, 0,299 mmol, 1,0 eq) em THF (3 ml) foi adicionado Et 3N (151 mg, 1,50 mmol, 5 eq) e CDI (485 mg, 2,99 mmol, 10,0 eq). A mistura foi agitada a 26 a 35 °C por 1 hora. O composto 5-3C (266 mg, 2,99 mmol, 10,0 eq) foi adicio- nado. A mistura foi agitada a 60 °C por 15 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. O produto volátil foi removido sob pressão redu- zida. O resíduo foi purificado por pre-HPLC básica (Xtimate C18 150*25 mm*5 um, gradiente: 16 a 46% de B (A = água (0,05% de hi- dróxido de amônia v/v) para proporcionar o composto do título (18,3 mg, 13,39% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,71-7,68 (m, 2H), 7,21 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,26-4,25 (m, 1H), 3,71-3,70 (m, 2H), 3,42-3,40 (m, 2H), 3,10-3,04 (m, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,51-2,49 (m, 2H), 1,65-1,63 (m, 2H), 1,44-1,43 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 450,2. Exemplo 6: N-(5-(3-sulfamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol- 3-carboxamida

[0196] Etapa 1: 3-((metilsulfonil)óxi)piperidina-1-carboxilato de benzila

[0197] A uma solução de composto 6-1 (5,0 g, 21,25 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (50 ml) foram adicionados Et 3N (2,37 g, 23,38 mmol, 1,1 eq) e MsCl (2,68 g, 23,38 mmol, 1,10 eq) a 0 °C. Após a adição, a mis- tura de reação foi aquecida a 7 ~ 16 °C lentamente e agitada a 7 ~ 16 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A fase or- gânica foi lavada com NaHCO3 aquoso saturado (30 ml) e salmoura (30 ml), seco sobre Na2SO4 e filtrado. O filtrado foi concentrado para proporcionar o composto do título (5,4 g, bruto) como um óleo marrom. LC-MS: [M+Na]+ = 336,0.

[0198] Etapa 2: 3-(acetiltio)piperidina-1-carboxilato de benzila

[0199] O composto 6-2A (1,97 g, 25,85 mmol, 1,5 eq) foi adiciona-

do a uma suspensão de K2CO3 (4,76 g, 34,46 mmol, 2,0 eq) em DMF (50 ml) a 0 °C, segido por adição do composto 2 (5,40 g, 17,23 mmol, 1,0 eq). A mistura resultante foi aquecida a 55 °C por 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi vertida em água (150 ml) e extraída com EtOAc (200 ml). A camada orgânica foi lavada com água (100 ml*2) e salmoura (100 ml). A camada orgânica foi concen- trada e purificada por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE/EA 50:1 a 1:1) para proporcionar o composto do título (2,1 g) como um óleo marrom. LC-MS: [M+H]+ = 294,1.

[0200] Etapa 3: 3-(clorossulfonil)piperidina-1-carboxilato de benzila

[0201] A uma solução de composto 6-3 (2,1 g, 7,15 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (40 ml), foi adicionada água (8 ml) a 0 °C e a mistura de reação foi borbulhada através de gás de cloro por 3,5 horas. TLC (éter de petróleo/EtOAc 5:1) mostrou que a maioria do composto 6-3 foi consumido. A camada orgânica foi separada e seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi usado para a próxima etapa diretamente como uma solução.

[0202] Etapa 4: 3-sulfamoilpiperidina-1-carboxilato de benzila

[0203] A uma solução de composto 6-4 (7,15 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (40 ml) foi adicionado NH 3.H2O (100 ml) a 0 °C. A mistura de reação foi agitada por 18 horas a 13 ~ 17 °C como monitorado por LCMS. A mistura foi concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em MeOH (90 ml) e purificado por pre-HPLC ácida (Coluna Boston Green ODS 150*30 5u, gradiente: 20 a 50% de B (A= água (0,1% de TFA v/v)

B = CH3CN), Taxa de Fluxo 30 ml/min) para proporcionar o composto do título (210 mg, 41,3% de rendimento) como um sólido amarelo cla- ro. LC-MS: [M+H]+ = 299,0.

[0204] Etapa 5: piperidina-3-sulfonamida

[0205] A uma solução agitada de composto 6-5 (136 mg, 0,456 mmol, 1,0 eq) em MeOH (10 ml) foi adicionado Pd/C (100 mg, 10% em peso, úmido) sob N2. A reação foi agitada a 13 ~ 19 °C por 14 horas sob atmosfera de hidrogênio (0,1 MPa (15 psi)). LCMS mostrou que o material de partida foi consumido. A suspensão foi filtrada através de um bloco de celite, e o bloco foi lavado com MeOH (10 ml*3). O filtrado combinado foi concentrado à secura para proporcionar o composto 6-6 (78 mg) como um sólido branco. LCMS: 5-95AB_220&254 cromatogra- fia (MK RP-18e 25-2mm).

[0206] Etapa 6: N-(5-(3-sulfamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0207] A uma solução de composto 6-6 (78 mg, 0,475 mmol, 1 eq) em MeOH (2 ml) foi adicionado o Intermediário B (132 mg, 0,475 mmol, 1 eq) e HOAc (29 mg, 0,475 mmol, 1,0 eq) seguido pela adição de NaBH(OAc)3 (151 mg, 0,712 mmol, 1,5 eq) a 0 °C e a reação foi aquecida a 8 a 14 °C e, então, foi agitada a 8 a 14 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente com água (1 ml) e concentrada. O resíduo foi diluído com MeOH (2 ml) e purificado por prep-HPLC (Coluna Xtimate C18 150*25 mm*5 um, gradiente: 25 a 55% de B (A= água (0,05% de hidróxido de amônia v/v) B = CAN), Taxa de Fluxo (ml/min) 25) para proporcionar o composto do título (69 mg, 34,06% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,71-7,68 (m, 2H), 7,23 (dd, J = 4,0, 5,2 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 3,43-3,33 (m, 3H), 3,15-3,05 (m, 1H), 2,98-2,94 (m, 1H), 2,49-2,43 (m, 2H), 2,25-2,17 (m, 1H), 2,10 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 1,99-1,90 (m, 1H), 1,88-1,80 (m, 1H), 1,70-1,35 (m, 8H). LC-MS: [M+H]+ = 427,2. Exemplo 7: N-(5-(3-sulfamoilpirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol- 3-carboxamida

[0208] Etapa 1: 3-((metilsulfonil)óxi)pirrolidina-1-carboxilato de benzila

[0209] A uma solução de composto 7-1 (1,0 g, 4,52 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (15 ml) foi adicionado Et3N (572 mg, 5,65 mmol, 1,25 eq) e MsCl (622 mg, 5,42 mmol, 1,20 eq) a 0 ~ 5 °C. A mistura foi agitada a 11 ~ 13 °C por 14 horas. TLC (PE/EA 3:1) mostrou que a reação foi concluída. A fase orgânica foi lavada com salmoura (20 ml*3). A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (1,5 g, 100% de rendimento, 90% em peso) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,30~7,30 (m, 5H), 5,07 (s, 2H), 3,78-3,68 (m, 1H), 3,66-3,58 (m, 3H), 3,57-3,56 (m, 1H), 3,04 (s, 3H), 2,32-2,27 (m, 1H), 2,18-2,15 (m, 1H).

[0210] Etapa 2: 3-(acetiltio)pirrolidina-1-carboxilato de benzila

[0211] A uma solução de composto 7-2 (1,5 g, 4,51 mmol, 1,0 eq) em DM (15 ml) foi adicionado K2CO3 (935 mg, 6,76 mmol, 1,5 eq) e ácido etanotioico (515 mg, 6,76 mmol, 1,5 eq). A mistura resultante foi aquecida a 70 °C por 14 horas. TLC (hexano/EtOAc 3:1) mostrou que a reação foi concluída. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi porcionado entre EtOAc (20 ml) e água (20 ml). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (20 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE/EA 30:1 a 3:1) para proporcionar duas manchas, que têm a mesma HRMN que o óleo marrom chocolate. (Mancha 1 (0,3 g) e mancha 2 (0,2 g), rendi- mento geral: 39,6%). 1H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7,37~7,32 (m, 5H), 5,15 (s, 2H), 4,01-3,98 (m, 1H), 3,87-3,82 (m, 1H), 3,54-3,50 (m, 2H), 3,34-3,31 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,33-2,27 (m, 1H), 1,92-1,89 (m, 1H).

[0212] Etapa 3: 3-(clorossulfonil)pirrolidina-1-carboxilato de benzila

[0213] A uma solução de composto 7-3 (0,5 g, 1,79 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (20 ml) foi adicionada água (5 ml). A mistura foi esfriada até 0 oC e gás cloro foi borbulhado na com agitação durante 3,5 horas. TLC (éter de petróleo/EtOAc 3:1) indicou que a reação foi concluída. A mistura foi lavada com salmoura (20 ml*3). As camadas foram separa- das para proporcionar uma solução amarelo claro contendo o compos- to 4 (1,79 mmol, 100% de rendimento) em CH2Cl2 (20 ml), que foi usa- do na próxima etapa.

[0214] Etapa 4: 3-sulfamoilpirrolidina-1-carboxilato de benzila

[0215] A uma solução de NH3.H2O (50 ml, 0,359 mol, 28% em pe-

so, D = 0,9, 200 eq) foi adicionada uma solução de composto 7-4 (1,79 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (20 ml) a 0 ~ 5 °C. A mistura foi agitada a 16 ~ 22 °C por 48 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. O produto volátil foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purifi- cado por pre-HPLC ácida (Boston Green ODS 150*30 5u, gradiente: 23 a 33% de B (A = água (0,1% de TFA), B = CH3CN), taxa de fluxo: 30 ml/min) para fornecer o composto do título (210 mg, rendimento de 41,3%) como um sólido amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,36~7,33 (m, 5H), 5,14 (s, 2H), 4,92 (s l, 1H), 4,79 (s l, 1H), 3,82- 3,71 (m, 4H), 3,54-3,51 (m, 1H), 3,20-3,10 (m, 1H), 2,35-2,33 (m, 1H). LC-MS: [M+H]+ = 285,0.

[0216] Etapa 5: pirrolidina-3-sulfonamida

[0217] A uma solução de composto 7-5 (0,21 g, 0,738 mmol, 1,0 eq) em MeOH (10 ml) foi adicionado Pd/C (100 mg, 10% em peso, úmido). A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (0,1 MPa (15 psi)) a 4 ~ 9 °C por 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi con- cluída. A mistura foi filtrada, e a torta foi lavada com MeOH (10 ml*2). A fase orgânica combinada foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (100 mg, 90,2% de rendimento) co- mo um sólido branco.

[0218] Etapa 6: N-(5-(3-sulfamoilpirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0219] A uma solução de Intermediário B (0,1 g, 0,359 mmol, 1,0 eq) em MeOH (2 ml) foi adicionado o composto 7-6 (54 mg, 0,359 mmol, 1,0 eq), HOAc (22 mg, 0,359 mmol, 1,0 eq), NaBH(OAc)3 (152,3 mg, 0,718 mmol, 2,0 eq) a 7 ~ 13 °C por 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente por água (0,5 ml). A mistura foi purificada por pre-HPLC básica (Xtimate C18 150*25 mm*5 um, gradiente: 26 a 56% de B (A = água (0,05% de hi- dróxido de amônia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (53,6 mg, 36,1% de rendimento) como um sólido marrom claro. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69-7,66 (m, 2H), 7,21 (dd, J = 4,8 Hz, 8,4 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,20- 3,96 (m, 2H), 3,85-3,75 (m, 1H), 3,67-3,46 (m, 1H), 3,47-3,35 (m, 2H), 3,30-3,20 (m, 3H), 2,70-2,55 (m, 1H), 2,45-2,35 (m, 1H), 1,85-1,80 (m, 2H), 1,75-1,65 (m, 2H), 1,52-1,39 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 413,2. Exemplo 8: N-(5-(3-carbamoilpirrolidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0220] A uma solução de composto 8-1A (75 mg, 0,496 mmol, 1,2 eq) em MeOH (2 ml) foi adicionado Et3N (54 mg, 0,537 mmol, 1,3 eq), seguido pela adição de Intermediário C (120 mg, 0,413 mmol, 1,0 eq) a 5 ~ 11 °C. A mistura foi agitada por 1 hora. NaBH 3CN (52 mg, 0,826 mmol, 2,0 eq) foi adicionado e a reação foi agitada a 5 ~ 11 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefe- cida bruscamente com água (2 ml) e diluída com MeOH (2 ml). A mis- tura foi purificada por prep-HPLC básica (Coluna Kromasil 150*25 mm*10 um, gradiente: 20 a 50% de B (A= (0,05% de hidróxido de amônia v/v) B = CH 3CN), Taxa de Fluxo: 30 ml/min) para proporcionar o composto do título (11,4 mg 7,1% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,95-7,92 (m, 2H), 7,30- 7,26 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 3,42-3,38 (m, 2H), 3,05-2,90 (m, 2H), 2,85-

2,75 (m, 1H), 2,65-2,45 (m, 4H), 2,15-1,95 (m, 2H), 1,70-1,55 (m, 4H), 1,48-1,38 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 389,2. Exemplo 9: N-(5-(3-carbamoil-3-(hidroximetil)azetidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida Etapa 1: 2,2-bis(hidroximetil)malonato de dietila

[0221] A uma mistura de KHCO3 (500 mg, 4,99mmol, 0,08eq) em CH2O aq. (37%, 16 ml) foi adicionado o composto 9-1 (10 g, 62,43 mmol, 1,0 eq) a 0 °C. A mistura foi agitada por 16 horas a 28 °C. À mistura, foi adicionada água (50 ml) e EtOAc (50 ml). A camada orgâ- nica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzi- da para proporcionar o composto do título (13 g, bruto) como um óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4,34 - 4,19 (m, 4H), 4,17 - 4,06 (m, 4H), 1,36 - 1,19 (m, 6H).

[0222] Etapa 2: 1-benzilazetidina-3,3-dicarboxilato de dietila

[0223] A uma mistura do composto 9-2 (8 g, 36,33 mmol, 1,0 eq) em MeCN (160 ml) foi adicionado Tf2O (21,52 g, 76,29 mmol, 2,1 eq) a - 20 °C, seguido por DIEA (23,48 g, 181,64 mmol, 5,0 eq). Após 0,5 h, BnNH2 foi adicionado a - 20 °C. A mistura foi agitada por 2 h a 70 °C. EA (200 ml) e salmoura (100 ml) foram adicionados. A camada orgâni- ca foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida a um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE: EA = 20: 1) para proporcionar o composto do título (2,7 g). LC-MS: [M+H]+ = 292,3.

[0224] Etapa 3: 1-benzil-3-(hidroximetil)azetidina-3-carboxilato de etila

[0225] A uma solução de composto 9-3 (2,5 g, 8,58 mmol, 1,0 eq) em THF (50 ml) foi adicionado LiAlH(Ot-Bu)3 (10,91 g, 42,90 mmol, 5,0 eq) a 0 °C. A mistura foi agitada por 7 h a 30 °C. Ao NH4Cl sat. (500 ml) foi adicionada a mistura e EA (250 ml). A camada aquosa foi extra- ída com EA (100 ml). As camadas de EA combinadas foram lavadas com salmoura (200 ml), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida a um resíduo. O resíduo foi purificado por cro- matografia de coluna em gel de sílica (PE: EA = 10: 1 a 1:1) para pro- porcionar o composto do título (1,2 g, 49% de rendimento) como um óleo amarelo. LC-MS: [M+H]+ = 250,3.

[0226] Etapa 4: 1-benzil-3-(hidroximetil)azetidina-3-carboxamida

[0227] Uma mistura do composto 9-4 (500 mg, 2,21 mmol, 1,0 eq) em NH3/MeOH (15M, 20 ml) em um tubo vedado foi agitada por 16 h a 20 °C e 24 h a 35 °C. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto 5 (500 mg, bruto) como um óleo ama- relo, que foi confirmado por LCMS. LCMS: tR = 0,686 min MS (ESI) m/z 221,3[M+H]+.

[0228] Etapa 5: 3-(hidroximetil)azetidina-3-carboxamida

[0229] A uma mistura do composto 9-5 (500 mg, 2,27 mmol, 1,0 eq) em MeOH (10 ml) foi adicionado Pd/C (200mg, úmido, 10%) a 30 °C. A mistura foi agitada por 4 horas a 30 °C sob H2 (0,1 MPa (15 psi)). A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida para proporcionar o composto do título (300 mg. bruto) como um óleo amarelo.

[0230] Etapa 6: N-(5-(3-carbamoil-3-(hidroximetil)azetidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0231] A uma mistura do composto 9-6 (150 mg, bruto), Intermedi- ário B (213,86 mg, 768,37 umol, 1,0 eq) e AcOH (46,14 mg, 768,37 umol, 1,0 eq) em MeOH (4 ml) foi adicionado NaBH(OAc)3 (325,7 mg, 1,54 mmol, 2,0 eq) a 30 °C. A mistura foi agitada por 3 h a 30 °C. À mistura, foi adicionado NaHCO3 sat. (0,5 ml). A mistura foi filtrada, e o filtrado foi purificado por Prep-HPLC (base) para proporcionar o com- posto do título (108,93 mg, 100% de pureza, 36,1% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,7, 4,9 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 3,88 (s, 2H), 3,44 - 3,36 (m, 4H), 3,34 (m, 2H), 2,51 (t, J=7,1 Hz, 2H), 1,65 (quin, J=7,0 Hz, 2H), 1,50 - 1,30 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 393,3. Exemplo 10: N-(5-(3-carbamoil-3-(hidroximetil)azetidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0232] A uma mistura do composto 9-6 (150 mg, bruto), Intermedi- ário C (223,05 mg, 768,37 umol, 1,0 eq) e AcOH (46,14 mg, 768,37 umol, 1,0 eq) em MeOH (4 ml), foi adicionado NaBH(OAc)3 (325,7 mg, 1,54 mmol, 2,0 eq) a 30 °C. A mistura foi agitada por 3 h a 30 °C. À mistura, foi adicionado NaHCO3 sat. (0,5 ml). A mistura foi filtrada, e o filtrado foi purificado por Prep-HPLC (base) para proporcionar o com- posto do título (85,96mg, 99% de pureza, 27,5% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 8,00 - 7,88 (m, 2H), 7,36 - 7,23 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 3,88 (s, 2H), 3,45 - 3,36 (m, 4H), 3,36 - 3,33 (m, 2H), 2,51 (t, J=7,1 Hz, 2H), 1,66 (m, 2H), 1,51 - 1,31 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 405,4. Exemplo 11: N-(5-(3-carbamoil-3-metilazetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida Etapa 1: 3-metilazetidina-1,3-dicarboxilato de 1-benzil 3-etila

[0233] A uma solução de composto 11-1 (1 g, 4,01 mmol, 1,0 eq) e MeI (1,14 g, 8,02 mmol, 2,0 eq) em THF (20 ml) foi adicionado LiH- MDS (1 M, 8 ml) a - 70 °C. A mistura foi deixada para aquecer a 25 °C e agitada por 16 h. Ao NH4Cl sat. (200 ml) foi adicionada a mistura e EA (150 ml). A camada orgânica foi lavada com salmoura (100 ml), seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida para proporcionar o composto 11-2 (550 mg, bruto) como um óleo amarelo. LCMS: tR = 0,882 min MS (ESI) m/z 264,0 [M+H]+.

[0234] Etapa 2: 3-carbamoil-3-metilazetidina-1-carboxilato de ben- zila

[0235] Ao composto 11-2 (550 mg, 2,09 mmol) foi adicionado NH3/MeOH (7M, 30 ml) a 25 °C. A mistura foi agitada por 16 h a 25 oC e 6 h a 35 oC. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e para proporcionar o composto 11-3 (500 mg, bruto) como um óleo amarelo. LCMS: tR = 0,761 min [M+Na]+ 270,9.

[0236] Etapa 3: 3-metilazetidina-3-carboxamida

[0237] A uma solução de composto 11-3 (500 mg, 20,01 mmol) em MeOH (10 ml) foi adicionado Pd/C (úmido,10%, 1 g) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 ℃ sob H2 a 0,1 MPa (0,1 MPa (15 psi)) por 16 horas. A mistura foi filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida pa- ra proporcionar o composto do título (250 mg, bruto) como um óleo amarelo.

[0238] Etapa 4: N-(5-(3-carbamoil-3-metilazetidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0239] A uma mistura do composto 11-4 (120 mg, bruto) e do In- termediário B (146,3 mg, 525,64 umol, 1,0 eq) em MeOH (3 ml) foram adicionados HOAc (31,57 mg, 525,64 umol, 1,0 eq) e NaHB(OAc)3 (222,81 g, 1,05 mmol, 2,0 eq) a 25 oC. A mistura foi agitada por 3 h a 25 °C. À reação, foi adicionada água (0,5 ml). A mistura foi filtrada e o filtrado foi purificado por pre-HPLC básica (Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um, gradiente: 24 a 54% de B (A = água (0,05% de hi- dróxido de amônia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (43,99 mg, 100%, 22% de rendimen- to) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 3,45 (d, J=8,3 Hz, 2H), 3,40 (t, J=7,0 Hz, 2H), 3,18 (d, J=8,3 Hz, 2H), 2,49 (t l, J=7,2 Hz, 2H), 1,65 (m, 2H), 1,53 (s, 3H), 1,48 - 1,33 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ =

377,4. Exemplo 12: N-(5-(3-carbamoil-3-metilazetidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0240] A uma mistura do composto 11-4 (120 mg, bruto) e do In- termediário C (152,59 mg, 525,64 umol, 1,0 eq) em MeOH (3 ml) foram adicionados HOAc (31,57 mg, 525,64 umol, 1,0 eq) e NaHB(OAc)3 (222,81 g, 1,05 mmol, 2,0 eq) a 25 oC. A mistura foi agitada por 3 h a 25 °C. À reação, foi adicionada água (0,5 ml). A mistura foi filtrada e o filtrado foi purificado por pre-HPLC básica (Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um, gradiente: 26 a 56% de B (A = água (0,05% de hi- dróxido de amônia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (65,5 mg, 100%, 32% de rendimen- to) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,00 - 7,89 (m, 2H), 7,35 - 7,24 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 3,49 - 3,37 (m, 4H), 3,18 (d, J=8,0 Hz, 2H), 2,49 ( t, J=7,2 Hz, 2H), 1,65 (m, 2H), 1,53 (s, 3H), 1,49 - 1,33 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 389,4. Exemplo 13: N-(5-(3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0241] Etapa 1: 3-ciano-4-hidroxipirrolidina-1-carboxilato de terc- butila

[0242] O composto 13-1 em 150 ml de EtOH foi arrefecido a 0 oC. A esta solução foi adicionado NaBH 4 em porções (1,08 g, 28,54 mmol, 2,0 eq). A mistura foi agitada por 30 min a 0 oC. A mistura foi concen-

trada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com EA (100 ml). À mistura, foi adicionada água (50 ml). A camada de EA foi lavada com salmoura (50 ml), seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão re- duzida para proporcionar o composto do título (3,0 bruto). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 4,54 (m, 1H), 3,87 - 3,63 (m, 2H), 3,46 - 3,21 (m, 1H), 3,08 - 2,90 (m, 1H), 2,67 (s, 1H), 1,46 - 1,31 (s, 9H). LC-MS: [M-55]+ = 157,1.

[0243] Etapa 2: 3-carbamoil-4-hidroxipirrolidina-1-carboxilato de terc-butila

[0244] A uma solução de composto 13-2 em uma mistura de Na- OH aq (1N, 20 ml) e MeOH (40 ml), foi adicionado H2O2 a 10 ℃. A mis- tura foi agitada a 10 ℃ por 16 horas. Então, NH4Cl sat. (50 ml) foi adi- cionado à mistura. A mistura resultante foi extraída com EA (500 mlx4). A camada orgânica foi lavada com salmoura (500 ml), seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (1 g, bruto) como um sólido branco. LC-MS: [M+Na]+ = 253,3.

[0245] Etapa 3: 4-hidroxipirrolidina-3-carboxamida

[0246] A uma mistura do composto 13-3 em DCM (15 ml) foi adici- onado TFA (3 ml) a 10 oC. A mistura foi agitada por 16 horas a 10 a 15 o C. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (380 mg, bruto) como um óleo amarelo. LC-MS: [M+H]+ = 131,1.

[0247] Etapa 4: N-(5-(3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-

(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida Legenda: ta

[0248] A uma mistura do composto 13-4 (350 mg, 2,69 mmol, 1,0 eq), Intermediário B (748,51 mg, 2,69 mmol, 1,0 eq) e HOAc (161,5 mg, 2,69 mmol, 1,0 eq) em MeOH (15ml) foi adicionado NaBH(OAc) 3 (1,14 g, 5,38 mmol, 2,0 eq) a 10 oC. A mistura foi agitada por 6 horas a 10 a 15 oC. À mistura foi adicionado NaHCO3 sat. (5 ml). A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep- HPCL (base) (coluna: Phenomenex Gemini C18 250*50 mm*10 um, gradiente: 20 ~ 45% de B (A= água/0,05% de amônia, B= CH3CN, ta- xa de fluxo: 100 ml/min) para proporcionar o composto do título (230 mg, 92% de pureza, 21,7% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ = 7,69 (m, 2H), 7,22 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,53 - 4,42 (m, 1H), 3,41 (m, 2H), 3,15 - 3,05 (m, 1H), 3,05 - 2,80 (m, 2H), 2,76 - 2,70 (m, 1H), 2,63 - 2,39 (m, 3H), 1,73 - 1,53 (m, 4H), 1,51 - 1,36 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 393,4. Exemplo 14: N-(5-(4-sulfamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0249] Etapa 1: 4-sulfamoilpiperidina-1-carboxilato de benzila

[0250] A uma mistura do composto 14-1 (0,5 g, 1,57 mmol, 1,0 eq) em THF (10 ml), foi borbulhado NH3 a 0 oC por 10 min. A mistura foi concentrada. O resíduo foi dissolvido em EA (50 ml). A camada de EA foi lavada com água (50 ml) e salmoura (50 ml). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o com-

posto do título como um sólido branco. LC-MS: [M+Na]+ = 321,1.

[0251] Etapa 2: piperidina-4-sulfonamida

[0252] A mistura do composto 14-2 (480 mg, 1,61 mmol, 1,0 eq) e Pd/C (100 mg, 10%, úmido) em MeOH (10 ml) foi agitada sob H2 a 0,34 MPa (50 psi) por 6 h a 30 oC. LCMS mostrou que a massa dese- jada foi detectada. A mistura foi filtrada e concentrada para proporcio- nar o composto 14-3 (180 mg, bruto) como um sólido branco, que foi usado para a próxima etapa diretamente.

[0253] Etapa 3: N-(5-(4-sulfamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0254] A uma mistura do composto 14-3 (160 mg, 574,86 μmol, 1,0 eq) e do Intermediário B (94,41 mg, 574,86 μmol, 1,0 eq) em MeOH (4 ml) foram adicionados AcOH (34,52, 574,86 μmol, 1,0 eq) e NaBH(OAc)3 (243,67, 1,15 mmol, 2,0 eq) a 10 a 15 oC. A mistura foi agitada por 16 h de 8 a 15 °C. À reação, foram adicionados NaHCO3 sat. (1 ml) e MeOH (50 ml). A mistura foi filtrada e o filtrado foi concen- trado sob pressão reduzida para proporcionar um produto bruto. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC básica (Phenomenex Ge- mini 150*25 mm*10 um, gradiente: 33 a 63% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amônia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) pa- ra proporcionar o composto do título (97,3 mg, 38,6% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ = 8,81 (t, J=5,9 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=1,0, 5,0 Hz, 1H), 7,80 (dd, J=1,1, 3,6 Hz, 1H), 7,28 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,70 (s, 2H), 3,25 (q,

J=6,9 Hz, 2H), 2,95 (d, J=11,0 Hz, 2H), 2,75 (m, 1H), 2,26 (t, J=7,3 Hz, 2H), 1,95 (d, J=10,5 Hz, 2H), 1,86 (t, J=11,9 Hz, 2H), 1,66 - 1,49 (m, 4H), 1,45 (m, 2H), 1,36 - 1,22 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 427,3. Exemplo 15: 5-(4-fluorofenil)-N-(5-(4-sulfamoilpiperidin-1- il)pentil)isoxazol-3-carboxamida Legenda: ta

[0255] A uma mistura de Intermediário C (160 mg, 551,17 μmol, 1,0 eq) e composto 14-3 (90,52 mg, 551,17 μmol, 1,0 eq) em MeOH (4 ml) foram adicionados AcOH (33,10 mg, 551,17 μmol, 1,0 eq) e NaBH(OAc)3 (233,63 mg, 1,10 mmol, 2,0 eq) a 10 a 15 oC. A mistura foi agitada por 16 h de 8 a 15 °C. À reação foi adicionado NaHCO3 sat. (1 ml) e MeOH (20 ml). A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar um produto bruto. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC básica (Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um, gradiente: 35 a 65% de B (A = água (0,05% de hi- dróxido de amônia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (117,66 mg, 48,7% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,82 (t, J=5,8 Hz, 1H), 8,06 - 7,94 (m, 2H), 7,48 - 7,38 (m, 2H), 7,35 (s, 1H), 6,70 (s l, 2H), 3,30 - 3,21 (m, 2H), 2,95 (d, J=11,3 Hz, 2H), 2,82 - 2,70 (m, 1H), 2,26 (t, J=7,2 Hz, 2H), 1,95 (d, J=12,3 Hz, 2H), 1,86 (t, J=11,9 Hz, 2H), 1,68 - 1,50 (m, 4H), 1,49 - 1,39 (m, 2H), 1,36 - 1,23 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 439,3. Exemplo 16: N-(5-((3R,4R)-4-ciano-3-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida Etapa 1: 3-benzil-7-oxa-3-azabiciclo[4.1.0]heptano

[0256] O composto 16-1 (6,60 g, 38,9 mmol, 1,0 eq) foi adicionado em gotas à mistura de ácido triflouroacético (4,34 g, 38,9 mmol, 1,0 eq) e água (70 ml) e agitado a 26 oC. A suspensão resultante foi agita- da por 15 min, NBS (8,81 g, 49,52 mmol, 1,3 eq) foi adicionado em porções à mistura ao longo de 10 min, durante o tempo, a temperatura foi aumentada para 30 a 35 oC. Após ser agitada por 16 h a 26 oC, um NaOH aquoso a 20% (70 ml) foi adicionado em gotas à solução e, en- tão, a mistura foi agitada por 2 h. A mistura de reação foi extraída com EtOAc (200 ml*3) seca sobre Na2SO4, a camada orgânica foi concen- trada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE/EA = 10:1) para proporcionar o composto do título. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,22-7,17 (m, 5H), 3,37 (s, 2H), 3,15-3,11 (m, 2H), 2,92-2,91 (m, 1H), 2,61-2,58 (d, J=13,3 Hz, 1H), 2,28-2,22 (m, 1H), 2,15-2,09 (m, 1H), 1,95-1,90 (m, 2H).

[0257] Etapa 2: 1-benzil-3-hidroxipiperidina-4-carbonitrila

[0258] Uma solução de composto 16-2 (2,0 g, 10,57 mmol, 1,0 eq) e NaCN (1,04 g, 21,14 mmol, 2,0 eq) em EtOH/H2O = 5/1 (24 ml) foi agitada a 30 oC por 16 h. TLC (PE:EA = 2:1) mostrou que os materiais de partida (Rf = 0,6) ainda permaneceram e 2 manchas foram forma- das (Rf = 0,4 e Rf = 0,2). E a suspensão resultante foi agitada por 16 h a 50 oC. TLC (PE:EA = 2:1) mostrou que menos materiais de partida permaneceram, então, a reação foi interrompida. A mistura foi vertida em água (10 ml) e extraída com EA (60 ml), a camada orgânica foi la- vada com salmoura (40 ml), seca sobre Na2SO4. O filtrado foi purifica-

do por cromatografia de coluna de flash em gel de sílica (PE/EA = 10:1) para proporcionar o composto do título como um óleo incolor (550 mg em rendimento de 25%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,3-7,21 (m, 5H), 5,52-5,51, ( d, J=5,99, 1H ), 3,56-3,51 (m, 2H), 2,88- 2,85 (dd, J=10,94, 1H), 2,70-2,67 (m, 2H), 2,47-2,45 (m, 1H), 2,00- 1,97 (m, 1H), 1,89-1,88(m, 1H), 1,74-1,66 (m, 2H).

[0259] Etapa 3: (3R,4R)-3-hidroxipiperidina-4-carbonitrila

[0260] À solução de composto 16-3 (100,0 mg, 0,46 mmol, 1,0 eq) em MeOH (5 ml) foi adicionado Pd/C (10 mg). A mistura foi purgada com gás de H2 (0,34 MPa (50 psi)), e agitada a 25 oC por 16 horas. TLC (PE/EA = 3:1) mostrou que os materiais de partida (Rf = 0,5) desapare- ceram e uma nova mancha (Rf = 0,1) foi formada. A camada orgânica foi filtrada e seca a vácuo para proporcionar um produto bruto (20 mg) em 34% de rendimento, que foi confirmado pela RMN. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3,88-3,84 (m, 1H), 3,26-3,20 (m, 1H), 3,00-2,97 (m, 1H), 2,72-2,69 (m, 2H), 2,15-2,10 (m, 2H), 1,80-1,76(m, 1H).

[0261] Etapa 4: N-(5-((3R,4R)-4-ciano-3-hidroxipiperidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0262] A um tubo de schlenk de 10 ml, o composto 16-4 (40mg, 0,3 mmol, 1,0 eq) e o Intermediário B (88, mg, 0,3 mmol, 1,0 eq), HO- Ac (19,4 mg, 0,3 mmol, 1,0 eq) foram dissolvidos em 3 ml de MeOH, e NaHB(OAc)3 (201 mg, 0,9 mmol, 3,0 eq) foi adicionado à mistura sob 25 oC, agitados por 30 min. TLC (PE/EA = 1:1) mostrou que os materi- ais de partida (Rf = 0,5) desapareceram e uma nova mancha foi for-

mada (Rf = 0,1). LCMS mostrou que a massa desejada foi detectada. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC (condição de base) para pro- porcionar o composto do título como pó branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,70-7,66 (m, 2H), 7,23-7,21 (dd, J=5,01, 1H), 6,91 (s, 1H), 3,75-3,69 (m, 1H), 3,42-3,39 (t, J=7,09, 2H), 3,04 (m, 1H), 2,86 (m, 1H), 2,50-2,39 (m, 3H), 2,14-2,08 (m, 1H), 2,03-1,95 (m, 1H), 1,91- 1,76(m, 2H), 1,70-1,63(m, 2H), 1,61-1,54(m, 2H), 1,45-1,379(m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 389,2. Exemplo 17: N-(5-(4-(3-amino-3-oxopropil)piperazin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0263] Etapa 1: 4-(3-amino-3-oxopropil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila

[0264] A uma mistura do composto 17-1 (200 mg, 1,07 mmol, 1,0 eq) em MeOH (2 ml) foi adicionado o composto 17-1A (99,22 mg, 1,40 mmol, 1,3 eq) e K2CO3 (222,61 mg, 1,61 mmol, 1,5 eq), a mistura de reação foi agitada a 25 oC por 5 h. TLC (DCM:MeOH 10:1) mostrou que A (Rf = 0,5) foi consumido completamente, e uma nova mancha (Rf = 0,55) foi detectad . A mistura foi concentrada a vácuo. Água (10 ml) e EA (10 ml) foram adicionados à mistura, a camada orgânica seca sobre Na2SO4 e concentrada a vácuo para proporcionar o composto do título (150 mg, bruto). Ela foi usada na próxima etapa diretamente. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,81 (s, 1H), 5,59 (s, 1H), 3,50 - 3,43 (t, J=4,8 4H), 2,71 - 2,62 (t, J=5,6, 2H), 2,51 - 2,38 (m, 6H), 1,47 (s, 9H).

[0265] Etapa 2: 3-(piperazin-1-il)propanamida

[0266] A uma solução de composto 17-2 (150 mg, 582,91 umol, 1,0 eq) em DCM (1 ml) foi adicionado TFA (0,2 ml). A mistura foi agita- da a 25 oC por 1 h. TLC (MeOH:DCM=1:10) mostrou que A (RF = 0,55) foi consumido completamente e uma nova mancha (RF = 0) foi detec- tada. A mistura foi concentrada a vácuo. O composto 17-3 (120 mg, bruto) foi obtido como um óleo incolor, que foi confirmado na próxima etapa.

[0267] Etapa 3: N-(5-(4-(3-amino-3-oxopropil)piperazin-1-il)pentil)- 5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0268] A uma mistura do composto 17-3 (120 mg, 763,29 umol, 1,0 eq) em MeOH (1 ml) foi adicionado o Intermediário B (233,69 mg, 839,62 umol, 1,1 eq), NaBH(CH3COO)3 (323,55 mg, 1,53 mmol, 2,0 eq) e CH3COOH (45,84 mg, 763,29 umol, 1,0 eq). A mistura foi agitada a 20 o C por 1 hora. LCMS C-05708-28-P1A1 mostrou que a massa desejada foi detectada. A mistura de reação foi concentrada a vácuo. MeOH (2 ml) e NaHCO3 (0,1 g) foram adicionados à mistura, e ela foi filtrada, o bruto foi purificado por Prep-HPLC (NH3H2O) para proporcionar o com- posto do título (58 mg, 100% de pureza, 18,11% de rendimento) como um sólido branco após ser liofilizado. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,20 (s, 1H), 7,57 (dd, J=1,0, 3,6 Hz, 1H), 7,52 (dd, J=1,0, 5,0 Hz, 1H), 7,17 (dd, J=3,6, 5,0 Hz, 1H), 6,97 - 6,81 (m, 1H), 6,84 (s, 1H),5,31 (s, 1H), 3,48 (m, 2H), 2,74 - 2,32 (m, 14H), 1,72 - 1,66 (m, 2H), 1,60 - 1,52 (m, 2H), 1,49 - 1,38 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 420,4. Exemplo 18: N-(5-(4-(2-amino-2-oxoetil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen- 2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0269] Etapa 1: 4-(2-amino-2-oxoetil)piperazina-1-carboxilato de benzila

[0270] Uma mistura do composto 18-1 (300 mg, 1,36 mmol, 1,0 eq), 2-bromoacetamida (206,69 mg, 1,50 mmol, 1,1 eq), K 2CO3 (282,35 mg, 2,04 mmol, 1,5 eq) e KI (113,05 mg, 680,99 μmmol, 0,5 eq) em DMF (5 ml) foi agitada por 2 horas a 50 oC. A mistura foi vertida em água (50 ml) e extraída com EA (50 mlx2). A fase orgânica combi- nada foi lavada com salmoura (50 ml), seca sobre Na2SO4 e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida ao composto do título (250 mg) como um sólido branco, que foi usado para a próxima etapa diretamente.

[0271] Etapa 2: 2-(piperazin-1-il)acetamida

[0272] Uma mistura do composto 18-2 (0,25 g, 901,49 μmol) e Pd/C (50 mg, úmido, 10%) em MeOH (5 ml) foi agitada por 4 horas sob H2 a 0,1 MPa (15 psi) a 10 a 15 oC. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para proporcionar um produto bruto (140 mg). LC-MS: [M+H]+ = 144,2.

[0273] Etapa 3: N-(5-(4-(2-amino-2-oxoetil)piperazin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0274] A uma mistura do Intermediário B (225 mg, 808,40 μmol, 1,0 eq), o composto 18-3 (115,75 mg, 808,40 μmol, 1,0 eq) e HOAc (48,55 mg, 808,40 μmol, 1,0 eq) em MeOH (5 ml) foi adicionado NaBH(OAc)3 (342,67 mg, 1,62 mmol, 2,0 eq) a 10 oC. A mistura foi agitada por 16 horas a 10 a 15 oC. À mistura foi adicionado Na2CO3 (5 ml) e MeOH (50 ml). A mistura resultante foi filtrada e concentrada para proporcionar um resíduo. O resíduo foi purificad por Prep-HPLC (base) (coluna: Pheno- menex Gemini C18 250*50 mm*10 um, gradiente: 32 ~ 62% de B (A= água/0,05% de amônia, B= CH3CN, taxa de fluxo: 25 ml/min) para pro- porcionar o composto do título (169,21 mg, 49% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,80 (t, J=5,8 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=1,3, 5,0 Hz, 1H), 7,80 (dd, J=1,1, 3,6 Hz, 1H), 7,28 (dd, J=3,5, 5,0 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,10 (s, 2H), 3,25 (q, J=6,8 Hz, 2H), 2,82 (s, 2H), 2,49 - 2,29 (m, 8H), 2,25 (t, J=7,3 Hz, 2H), 1,53 (m, 2H), 1,44 (m, 2H), 1,35 - 1,23 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 406,3. Exemplo 19: N-(5-(4-(2-sulfamoiletil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0275] Etapa 1: etanossulfonamida

[0276] A amônia foi borbulhada através de uma solução de com- posto 19-1 (2,5 g, 15,34 mmol) em THF (40 ml) a 0 °C por 15 min, en- tão, a água (20 ml) foi adicionada à mistura de reação. A solução re- sultante foi extraída com EA (50 ml*4). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (40 ml), seca sobre Na2SO4, filtrada e con- centrada para proporcionar o composto do título (800 mg, bruto) como óleo amarelo. O resíduo foi usado para a próxima etapa sem purifica- ção. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,05 (s, 2H), 6,85 - 6,73 (m, 1H), 5,98 (d, J=16,4 Hz, 1H), 5,83 (d, J=10,0 Hz, 1H).

[0277] Etapa 2: 4-(2-sulfamoiletil)piperazina-1-carboxilato de terc- butila

[0278] A uma solução de composto 19-2 (200 mg, bruto) e compos- to 19-2A (268 mg, 1,44 mmol) em MeOH (4 ml) foi adicionado K2CO3 (298 mg, 2,16 mmol). A mistura de reação foi agitada a 25 oC por 16 horas. TLC (PE:EA = 5:1) mostrou que a maioria do material de partida (Rf = 0,1) foi consumido e uma nova mancha (Rf = 0,5) foi observada, A mistura de reação foi diluída com água (10 ml), extraída com EA (10 ml*5). A fase orgânica foi lavada com salmoura (30 ml), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatogra- fia de coluna (SiO2, PE: EA = 50:1 a 1:1) para proporcionar o composto do título (310 mg, 73% de rendimento) como sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5,26 (s l, 2H), 3,47 - 3,40 (m, 4H), 3,31 - 3,16 (m, 2H), 2,99 - 2,83 (m, 2H), 2,55 - 2,42 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

[0279] Etapa 3: 2-(piperazin-1-il)etano-1-sulfonamida

[0280] A uma mistura do composto 19-3 (300 mg, 1,02 mmol) em DCM (4 ml) foi adicionado TFA (1 ml). A mistura de reação foi agitada a 20 oC por 4 h. TLC (EA) mostrou que o composto 19-3 (Rf = 0,7) foi consumido completamente, e uma nova mancha (Rf = 0,05) foi obser- vada. A mistura de reação foi concentrada para proporcionar o com- posto do título (400 mg, bruto) como óleo amarelo. O resíduo foi usado para a próxima etapa diretamente sem purificação.

[0281] Etapa 4: N-(5-(4-(2-sulfamoiletil)piperazin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0282] A uma mistura do composto 18-4 (400 mg, bruto) e do In- termediário 19 (258 mg, 926 μmol) em MeOH (9 ml), foi adicionado NaBH(OAc)3 (393 mg, 1,85 mmol) e AcOH (56 mg, 926 μmol). A mistu- ra de reação foi agitada a 20 °C por 5 horas. LCMS (C-05668-99- P1A1) mostrou que o composto 19-4 foi quase concluído, o MW dese- jado foi observado. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por água (20 ml), extraída com EA (20 ml*3), a camada orgânica foi lavada com salmoura (40 ml), seca sobre Na 2SO4. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (base) para proporcionar o composto do título (69,98 mg, 16% de rendimento) como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7,57 (d, J=3,20 Hz, 1H), 7,52 (d, J=5,20 Hz, 1H), 7,18 (t, J=4,00 Hz, 1H), 6,88-6,85 (m, 1H), 6,84 (s, 1H), 5,34 (s, 2H), 3,54 - 3,43 (m, 2H), 3,25 (t, J=7,50 Hz, 2H), 2,94 (m, J=6,40 Hz, 2H), 2,76 - 2,39 (m, 8H), 2,36 (t, J=7,20 Hz , 2H), 1,70 - 1,67 (m, 2H), 1,58 - 1,51 (m, 2H), 1,47 - 1,37 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 456,3. Exemplo 20: N-(5-(4-carbamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida Legenda: ta

[0283] A uma solução de composto 20-1 (300 mg, 2,34 mmol, 1,0 eq) e do Intermediário B (651 mg, 2,34 mmol, 1,0 eq) em MeOH (8 ml) foi adicionado HOAc (140 mg, 2,34 mmol, 1,0 eq), NaBH(OAc) 3 (992 mg, 4,68 mmol, 2,0 eq) a 0 oC. A mistura de reação foi agitada a 15 oC por 16 h. LCMS mostrou que a maioria do Intermediário B foi consumi- do e o MW desejado foi observado como um pico principal. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente com NaHCO3 aquoso saturado (20 ml) e extraída com EA (10 ml*3). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por Pre-HPLC (NH3.H2O) para proporcionar o composto do título (161 mg, 18% de rendimento, 99% de pureza) como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,79 (m, 1H), 7,88 (d, J=4,8 Hz, 1H), 7,80 (d, J=2,8 Hz, 1H), 7,29-7,27 (m, 1H), 7,17 (s, 2H), 6,69 (s, 1H), 3,27 – 3,22 (m, 2H), 2,84 (d, J=11,6 Hz, 2H), 2,22 (t, J=6,8 Hz, 2H), 2,02 - 1,92 (m, 1H), 1,81 (t, J=10,4 Hz, 2H), 1,64 (m, 2H), 1,58-1,40 (m, 6H), 1,35-1,16 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 391,3. Exemplo 21: N-(5-(3-carbamoil-3-hidroxiazetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida Etapa 1:

[0284] A uma solução de composto 21-1 (5g, 20,89 mmol, 1,0 eq) e Na2CO3 (8,78 g, 104,47 mmol, 5,0 eq) em DCM (100 ml) foi adicionado Dess-Martin (17,8 g, 41,8 mmol, 2,0 eq) a 0 °C. A mistura pôde aquecer a 30 ℃ e foi agitada por 3 h. A camada orgânica foi separada, seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar um resí- duo, que foi purificado por MPLC para proporcionar o composto do título 21-2 (1,8 g, bruto) como um óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,56 - 7,43 (m, 5H), 7,36 - 7,28 (m, 5H), 4,64 (s, 1H), 4,06 (s, 4H).

[0285] Etapa 2: 1-benzidril-3-((trimetilsilil)óxi)azetidina-3-carbonitrila

[0286] Ao composto 21-2 (200 mg, 842,83 ummol, 1,0 eq) e Et3N

(127,93 mg, 1,26 mmol, 1,5 eq) em DCM (1 ml) foi adicionado TMSCN (209,03 mg, 2,11 mmol, 2,0 eq) a 30 ℃. A mistura foi agitada por 3 h a 30 ℃. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e para proporci- onar o composto do título 21-3 (350 mg, bruto) como um sólido ama- relo. LC-MS: [M+H]+ = 337,3.

[0287] Etapa 3: 1-benzidril-3-hidroxiazetidina-3-carboxamida

[0288] A uma solução de composto 21-3 (350 mg, bruto) em DCM (2 ml) foi adicionado H2SO4 (0,2 ml) a 0 ℃. A mistura pôde aquecer a 30 ℃ e foi agitada por 2 h. À mistura foi adicionado NH 3.H2O a PH =

11. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo, que foi purificado por Prep-HPLC (base) para proporcionar o composto do título (58 mg. 98% de pureza) como sólido branco. LC- MS: [M+H]+ = 283,3.

[0289] Etapa 4: 3-hidroxiazetidina-3-carboxamida

[0290] A uma solução de composto 21-4 (58 mg, 205,43 umol) em MeOH (1 ml) foi adicionado Pd(OH)2 (úmido,10%, 50 mg) a 30 ℃. A mistura foi agitada a 30 ℃ sob H2 a 0,31 MPa (45 psi) por 5 horas. A mistura foi filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o composto 21-5 (20mg, bruto) como um sólido branco.

[0291] A uma mistura do composto 21-5 (20mg, bruto) e do Inter- mediário B (47,94 mg, 172,24 umol, 1,0 eq) em MeOH (1 ml) foram adicionados HOAc (10,34 mg, 172,24 umol, 1,0 eq) e NaHB(OAc)3 (73,01 mg, 344,48 umol, 2,0 eq) a 30 oC. A mistura foi agitada por 16 h a 30 oC. À reação foi adicionado NaHCO3 sat. (1 ml). A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por pre-HPLC básica (base) pa- ra proporcionar o composto do título (18,55 mg, 98,9% de pureza) co- mo um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,71 – 7,67 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,7, 4,9 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 3,63 (d, J=9,3 Hz, 2H), 3,40 (t, J=7,1 Hz, 2H), 3,27 (d, J=9,0 Hz, 2H), 2,57 (t, J=7,2 Hz, 2H), 1,66 (m, 2H), 1,52 - 1,32 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 379,3. Exemplo 22: 5-(5-fluorotiofen-2il)-N-(5-(3-(metilcarbamoil)azetidin-1- il)pentil)isoxazol-3-carboxamida Etapa 1: 5-fluoro-N-metóxi-N-metiltiofeno-2-carboxamida

[0292] A uma solução de composto 22-1 (2,0 g, 13,69 mmol, 1,0 eq.) em THF (150 ml) foi adicionado sal de HCl de MeNHOMe (2,67 g, 27,37 mmol, 2,0 eq), HOBt (1,85 g, 13,69 mmol, 1,0 eq), DIEA (8,84 g, 68,43 mmol, 5,0 eq) sob atmosfera de nitrogênio a 0 oC, seguido pela adição de EDCI (5,25 g, 27,37 mmol, 2,0 eq). A mistura pôde aquecer a 25 oC e foi agitada a 25 oC por 14 horas. TLC (PE/EA 3:1) mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente com 50 ml de NaHCO3 saturado aq. As camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (30 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada. O filtrado foi concentra- do sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (éter de petróleo: EtOAc = 20:1 a 1:1) para produzir o composto de título (2,5 g, 96,5% de rendimento) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,68 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 6,55 (dd, J =1,6 Hz, J = 4,0 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,36 (s, 3H).

[0293] Etapa 2: 1-(5-fluorotiofen-2-il)etan-1-ona

[0294] A uma solução agitada de composto 22-2 (2,5 g, 13,2 mmol, 1,0 eq.) em THF (30 ml) foi adicionado MeMgCl (6,6 ml, 19,8 mmol, 3 M de solução em THF, 1,5 eq) a 0 oC sob atmosfera de N2 ao longo de um período de 20 minutos, enquanto se manteve a tempera- tura interna abaixo de 10 oC. Após a adição, a mistura foi agitada a 25 o C por 2 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura de reação foi vertida into NH 4Cl saturada aq. (30 ml). As camadas fo- ram separadas. A parte aquosa foi extraída com EtOAc (20 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtra- da. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo, que foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (éter de petróleo: EtOAc = 20:1 a 5:1) para proporcionar o com- posto do título (1,6 g, 84,2% de rendimento) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,39 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 6,55 (dd, J = 0,8 Hz, 4,0 Hz, 1H), 2,49 (s, 3H). LC-MS: [M+H]+ = 144,8.

[0295] Etapa 3: 4-(5-fluorotiofen-2-il)-2,4-dioxobutanoato de etila Legenda: ta

[0296] A uma solução de composto 22-3 (1,6 g, 11,1 mmol, 1,0 eq.) em THF (30 ml) foi adicionado t-BuOK (1,49 g, 13,32 mmol, 1,2 eq.) e (CO2Et)2 (1,95 g, 13,32 mmol, 1,2 eq.) a 25 oC. A mistura foi agi- tada a 25 °C durante 3 horas. TLC (PE/EA 5:1) mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente com 1N de HCl pa-

ra ajustar o pH a 1 ~ 2. As camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (20 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzi- da. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de síli- ca (PE/EA 20:1 a 1:1) para proporcionar o composto do título (2,0 g, 73,8% de rendimento) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,57 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,62 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,40 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,42 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

[0297] Etapa 4: 5-(5-fluorotiofen-2-il)isoxazol-3-carboxilato de etila

[0298] A uma solução de composto 22-4 (2,0 g, 8,19 mmol, 1,0 eq.) em EtOH (20 ml) foi adicionado NH 2OH.HCl (683 mg, 9,83 mmol, 1,2 eq.). A mistura foi agitada sob refluxo por 14 horas. LCMS indicou que a reação foi concluída. O solvente foi removido sob pressão redu- zida. O resíduo foi particionado entre NaHCO3 saturado aq. (20 ml) e EtOAc (20 ml). As camadas foram separadas. As camadas aquosas foram extraídas com EtOAc (20 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada. O filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE/EA 20:1 a 3:1) para proporcionar o composto 22-5 (1,6 g, 80,8% de rendimento) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,22 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 6,70 (s, 1H), 6,58 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 4,47 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,43 (t, J = 7,2 Hz, 3H). LC-MS: [M+H]+ = 241,9.

[0299] Etapa 5: ácido 5-(5-fluorotiofen-2-ila)isoxazol-3-carboxílico

[0300] A uma solução de composto 22-5 (1,6 g, 6,63 mmol, 1,0 eq.) em THF (10 ml) foi adicionada uma solução de LiOH.H 2O (557 mg, 13,26 mmol, 2,0 eq.) em água (5 ml). A mistura foi agitada a 25 °C durante 3 horas. TLC (PE/EA 5:1) mostrou que a reação foi concluída. O solvente foi removido. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (20 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio ani- dro, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para pro- porcionar o composto do título (1,2 g, 66,7% de rendimento) como só- lido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,24 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,60 (dd, J = 1,2 Hz, 4,0 Hz, 1H).

[0301] Etapa 6: 5-(5-fluorotiofen-2-il)-N-(5-hidroxipentil)isoxazol-3- carboxamida

[0302] A uma solução de composto 22-6 (0,8 g, 3,75 mmol, 1 eq) em CH2Cl2 (10 ml) foi adicionado cloreto de oxalila (715 mg, 5,63 mmol, 1,5 eq) e 2 gotas de DMF a 25 oC. A mistura foi agitada a 25 °C durante 2 horas. O produto volátil foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em CH 2Cl2 (10 ml), que foi transferido em uma solução de composto 22-6A (774 mg, 7,51 mmol, 1,5 eq) e Et3N (1,9 g, 18,76 mmol, 5,0 eq) em CH2Cl2 (20 ml) a 0 ~ 5 oC em gotas. A mistura foi agitada a 25 °C durante 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente com NaHCO 3 saturado aq. (10 ml). As camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com CH2Cl2 (10 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (1 g, 89,2% de rendimento) como um sólido amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,60 (t, J =3,6 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,73 (dd, J = 2,0 Hz, 4,0 Hz, 1H), 3,56 (t, J

= 6,4 Hz, 2H), 3,39 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,67-1,57 (m, 4H), 1,46-1,44 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 299,0.

[0303] Etapa 7: N-(5-bromopentil)-5-(5-fluorotiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida

[0304] A uma solução de composto 22-7 (1 g, 3,35 mmol, 1 eq) em CH2Cl2 (20 ml) foi adicionado PPh3 (1,06 g, 4,02 mmol, 2,0 eq) e NBS (0,72 g, 4,02 mmol, 2,0 eq) a 0 ~ 5 oC. A mistura pôde aquecer a 25 oC e foi agitada por 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente com NaHCO3 saturado aq. (20 ml). As camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com CH2Cl2 (20 ml*3). A fase orgânica combinada foi seca sobre Na 2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE/EA 30:1 a 5:1) para proporcionar o composto do título (0,85 g, 70,2% de rendi- mento) como um sólido amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7,19 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 6,85 (s l, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,57 (dd, J = 1,6 Hz, 4,4 Hz, 1H), 3,50-3,41 (m, 4H), 1,94-1,90 (m, 2H), 1,67-1,65 (m, 2H), 1,57-1,55 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 360,9, 362,9.

[0305] Etapa 8: 1-(5-(5-(5-fluorotiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamido)pentil)azetidina-3-carboxilato de metila

[0306] A uma suspensão do composto 22-8 (400 mg, 1,11 mmol, 1 eq) in CH3CN (8 ml) foi adicionado K2CO3 (459 mg, 3,32 mmol, 3 eq) e KI (184 mg, 1,11 mmol, 1eq) a 0 oC. Após a adição, 10 min, o compos- to 22-8a (335 mg, 2,21 mmol, 2,0 eq) foi adicionado e agitado a 24 a

30 oC por 18 h. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (CH 2Cl2: MeOH = 50:1 a 10:1) para proporcionar o composto do título (355 mg, 81,07% de rendimento) como um óleo incolor. LC-MS: [M+H]+ = 396,1.

[0307] Etapa 9: ácido 1-(5-(5-(5-fluorotiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamido)pentil)azetidina-3-carboxílico

[0308] A uma solução de composto 22-9 (200 mg, 0,505 mmol, 1,0 eq) em MeOH (5 ml) foi adicionada água (2,5 ml) e LiOH.H2O (64 mg, 1,52 mmol, 3,0 eq) a 0°C. A mistura foi agitada a 17 a 20 oC por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi acidifi- cada com HCl aq. (1,0 M) para ajustar o pH a 3 ~ 4 e remover o THF sob pressão reduzida e o resíduo aquoso foi liofilizado para proporcio- nar composto 22-10 (190 mg, 100% de rendimento) como um sólido amarelo. LC-MS: [M+H]+ = 382,1.

[0309] Etapa 10: 5-(5-fluorotiofen-2-il)-N-(5-(3- (metilcarbamoil)azetidin-1-il)pentil)isoxazol-3-carboxamida

[0310] A uma solução agitada de composto 22-10 (180 mg, 0,471 mmol, 1,0 eq) em DMF (2 ml) foi adicionado DIEA (305 mg, 2,36 mmol, 5 eq) e composto 22-10a (95,6 mg, 1,42 mmol, 3 eq) a 18 a 22 °C. En- tão, a mistura foi agitada por 3 min, HATU (359 mg, 0,943 mmol, 2 eq) foi adicionado. Após a adição, a reação foi agitada a 18 a 22 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi diluída com DMF (3 ml) e purificada por prep-HPLC (Kromasil 150*25 mm*10 um, gradiente: 25 a 55% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amô-

nia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (40 mg, 21,49% de rendimento) com um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,35 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,72 (dd, J = 2,8 Hz, 4,4 Hz, 1H), 3,50-3,49 (m, 2H), 3,36- 3,34 (m, 2H), 3,29-3,22 (m, 3H), 2,70 (s, 3H), 2,48-2,45 (m, 2H), 1,62- 1,59 (m, 2H), 1,38-1,37 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 381,1. Exemplo 23: N-(5-(3-carbamoilazetidin-1-il)pentil)-5-(5-fluorotiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0311] A uma solução de composto 21-9 (150 mg, 0,379 mmol, 1,0 eq) em MeOH (1 ml) foi adicionado NH3.H2O (1 ml) a 0 °C. Então, a mistura pôde aquecer a 17 a 20 oC e foi agitada por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi diluída com MeOH (3 ml) e purificada por prep-HPLC (Xtimate C18 150*25 mm*5 um, gradi- ente: 9 a 39% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amônia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (43 mg, 29,8% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,35 (t, J=4,0 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,75 (dd, J = 2,0 Hz, 4,4 Hz, 1H), 3,56-3,54 (m, 2H), 3,39-3,33 (m, 2H), 3,29- 3,28 (m, 3H), 2,53-2,49 (m, 2H), 1,66-1,63 (m, 2H), 1,42-1,41 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 381,1. Exemplo 24: N-(5-(3-((1-cianoetil)carbamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0312] Etapa 1: 3-((1-metóxi-1-oxopropan-2-il)carbamoil)azetidina- 1-carboxilato de benzila

[0313] A uma solução de composto 24-1 (2,0 g, 8,5 mmol, 1,0 eq) em THF (50 ml) foram adicionados o composto 24-1A (2,37 g, 17 mmol, 2,0 eq), DIEA (5,49 g, 42,5 mmol, 5,0 eq), HATU (6,47 g, 17 mmol, 2,0 eq) a 4 ~ 9 oC. A mistura foi agitada a 4 ~ 9 °C por 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente por 50 ml de NaHCO 3 saturada aquosa. As camadas fo- ram separadas. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (30 ml*3). A fase orgânica combinada foi lavada com HCl aquoso (1M, 50 ml) e salmoura (50 ml). A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (CH2Cl2/MeOH 50:1 a 10:1) para proporcionar o composto do título (2,2 g, 86,8% de rendi- mento) como um sólido amarelo claro. LC-MS: [M+Na]+ = 343,0.

[0314] Etapa 2: 3-((1-amino-1-oxopropan-2-il)carbamoil)azetidina- 1-carboxilato de benzila

[0315] A uma mistura do composto 24-2 (1,0 g, 3,12 mmol, 1,0 eq) em MeOH (15 ml) foi adicionado NH 3.H2O (30 ml, 192,6 mmol, 61,7 eq, 25% em peso) a 7 ~ 14 oC. A mistura foi agitada a 25 ~ 30 oC por 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. O produto volátil foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por pre- HPLC ácida (Agela ASB 150*25 mm*5 um, gradiente: 20 a 40% de B (A = água (0,05% de TFA v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (350 mg, 36,7% de rendimento) como um sólido branco. LC-MS: [M+H]+ = 306,1.

[0316] Etapa 3: 3-((1-cianoetil)carbamoil)azetidina-1-carboxilato de benzila

[0317] A uma mistura do composto 24-3 (168 mg, 0,55 mmol, 1,0 eq) em THF (2 ml) foi adicionado Et3N (78 mg, 0,77 mmol, 1,4 eq) a 1 ~ 8 oC. À mistura foi adicionado TFAA (150,2 mg, 0,715 mmol, 1,3 eq) a 1 ~ 8 oC. A mistura foi agitada a 1 ~ 8 oC por 4 horas. LCMS mostrou que cerca de 55% do produto desejado foi formado e 25% do material de partida permaneceu. A mistura foi arrefecida bruscamente com 10 ml de salmoura. A parte aquosa foi extraída com EtOAc (10 ml*3). A fase or- gânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada. O filtrado foi concen- trado sob pressão reduzida para proporcionar o composto 24-4 (0,3 mmol, bruto) como um sólido amarelo claro. LC-MS: [M+Na]+ = 309,9.

[0318] Etapa 4: N-(1-cianoetil)azetidina-3-carboxamida

[0319] Uma autoclave foi carregada com composto 24-4 (0,3 mmol, bruto), Pd/C (50 mg, 10% em peso, úmido), THF (10 ml) sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada a 3 ~ 8 oC sob atmosfera de hidrogênio (0,1 MPa (15 psi)) durante 4 horas. LCMS mostrou que a maioria do material de partida foi consumido. A mistura foi filtrada, e a torta foi lavada com THF (2 ml*2). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o composto 24-5 (0,3 mmol) como um óleo incolor.

[0320] Etapa 5: N-(5-(3-((1-cianoetil)carbamoil)azetidin-1-il)pentil)- 5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0321] A uma mistura do composto 24-5 (0,3 mmol, 1,0 eq) em MeOH (2 ml) foi adicionado o Intermediário C (100 mg, 0,345 mmol, 1,15 eq), HOAc (18 mg, 0,3 mmol, 1,0 eq), NaBH(OAc) 3 (127,3 mg, 0,6 mmol, 2,0 eq) a 3 ~ 9 oC. A mistura foi agitada a 3 ~ 9 oC por 14 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A reação foi arrefecida bruscamente por água (0,5 ml). A mistura foi purificada por pre-HPLC básica (Kromasil 150*25 mm*10 um, gradiente: 33 a 43% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amônia v/v), B = CH 3CN), taxa de fluxo: 30 ml/min) e pre-HPLC ácida (Boston Green ODS 150*30 5u, gradien- te: 16 a 46% de B (A = água (0,05% de TFA v/v), B = CH 3CN), taxa de fluxo: 30 ml/min) respectivamente para proporcionar o Exemplo 24 (18,4 mg, 14,3% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,95-7,91 (m, 2H), 7,31-7,26 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 4,42-4,38 (m, 2H), 4,20-4,05 (m, 2H), 3,70-3,40 (m, 4H), 3,28-3,25 (m, 2H), 1,80-1,64 (m, 4H), 1,53 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 1,47-1,35 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 428,3. Exemplo 25: N-(5-(3-carbamoil-4-metilpiperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0322] Etapa 1: piperazina-2-carbonitrila

[0323] A uma mistura do composto 25-1 (5,15 g, 85,71 mmol, 1,5 eq) em THF (15 ml) foi adicionado o composto 25-1A (5g, 57,14 mmol, 1,0 eq) em gotas ao longo de 30 min a 0 oC. A mistura foi agitada por 16 horas a 10 a 15 oC. A mistura foi filtrada. O filtrado foi acidificado por 35% de HCl a PH = 4. A mistura foi filtrada e o resíduo foi dissolvi- do em 20% de HCl. A mistura resultante foi vertida em THF (300 ml) e filtrada para proporcionar o composto do título (3,8 g, 57% de rendi- mento) como um sólido branco. 1H RMN: (400 MHz, D2O) δppm 4,83 -

4,75 (m, 1H), 3,74 - 3,52 (m, 2H), 3,49 - 3,21 (m, 4H).

[0324] Etapa 2: 4-benzilpiperazina-2-carbonitrila

[0325] A uma mistura do composto 25-2 (3,5 g, 18,89 mmol, 1,0 eq), BnCl (2,39 g, 18,89 mmol, 1,0 eq) e NaHCO3 (7,14g, 85,02 mmol, 4,5 eq) em EtOH (150 ml) foi aquecida a 85 oC e agitada por 1 hora a 85 oC. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para proporcio- nar um resíduo. O resíduo foi purificado por flash revertido (base) para proporcionar o composto do título (1,5 g, 90% de pureza, 35,5%) como um óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,45 - 7,29 (m, 5H), 3,98 (t, J=3,4 Hz, 1H), 3,67 - 3,60 (d, 1H), 3,59 - 3,51 (d, 1H), 3,26 - 3,24 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 2,88 - 2,81 (m, 1H), 2,74 (d, J=11,0 Hz, 1H), 2,55 - 2,42 (m, 1H), 2,41 - 2,27 (m, 1H), 1,91 (s l, 1H).

[0326] Etapa: 4-benzil-1-metilpiperazina-2-carbonitrila

[0327] A uma solução de composto 25-3 (1,4 g, 6,96 mmol, 1,0 eq), HCHO aq (37%, 6 ml) e AcOH (417,72 mg, 6,96 mmol, 1,0 eq em MeOH (30 ml) foram adicionados NaBH3(CN) (874,25 mg, 13,91 mmol, 2,0 eq) a 10 °C. A mistura foi agitada por 16 h a 10 a 15 ℃. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-HPCL (base) para proporcionar o composto do título (450 mg, 89% de pureza, 26,7% de rendimento) como óleo amarelo. LC-MS: [M+H]+ = 216,3.

[0328] Etapa 4: 4-benzil-1-metilpiperazina-2-carboxamida

[0329] A uma mistura do composto 25-4 (450 mg, 2,09 mmol, 1,0 eq) em t-BuOH (9 ml) foi adicionado t-BuOK (938,17 mg, 8,36 mmol, 4,0 eq) a 30 oC. A mistura foi agitada por 40 h a 30 ℃. À mistura foi adicionado NH4Cl sat. (50 ml) e EA (50 ml). A camada aquosa foi ex- traída com EA (50 ml). As camadas de EA combinadas foram lavadas com salmoura (50 ml), secas sobre Na2SO4 e concentradas para pro- porcionar o composto do título (430 mg, bruto) como um sólido ama- relo. LC-MS: [M+H]+ = 234,3.

[0330] Etapa 5: 1-metilpiperazina-2-carboxamida

[0331] A uma mistura do composto 25-5 (230 mg, 985,82 μmol, 1,0 eq) em MeOH (5 ml) foi adicionado Pd/C (úmido, 10%, 50 mg) a 10 oC. A mistura foi agitada por 48 horas a 10 a 15 oC sob H2 a 0,34 MPa (50 psi). TLC mostrou que o composto 25-5 foi consumido. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para propor- cionar o composto do título (140 mg, bruto) como um óleo amarelo.

[0332] Etapa 6: N-(5-(3-carbamoil-4-metilpiperazin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0333] A uma mistura do composto 25-6 (140 mg, 977,74 μmol, 1,0 eq) e do Intermediário B (244,92 mg, 879,97 μmol, 0,9 eq) em MeOH (5 ml) foram adicionados AcOH (58,72 mg, 977,74 μmol, 1,0 eq) e NaBH(OAc)3 (414,452 mg, 1,96 mmol, 2,0 eq) a 10 a 15 oC. A mistura foi agitada por 16 h de 8 a 15 °C. À mistura, foi adicionado NaHCO3 sat. (1 ml). A mistura foi filtrada. O filtrado foi purificado por Prep-HPLC

(base) (Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um, gradiente: 28 a 58% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amônia v/v), B = CH 3CN), taxa de fluxo: 30 ml/min) para proporcionar o composto do título (130 mg, 98% de pureza, 32% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 3,41 (t, J=7,0 Hz, 2H), 2,97 (d, J=11,0 Hz, 1H), 2,86 (d, J=9,0 Hz, 2H), 2,75 (dd, J=3,1, 10,4 Hz, 1H), 2,45 - 2,38 (m, 2H), 2,37 - 2,29 (m, 1H), 2,29 - 2,21 (m, 4H), 2,18 (t, J=10,9 Hz, 1H), 1,67 (m, 2H), 1,59 (m, 2H), 1,48 - 1,37 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 406,4. Exemplo 26: N-(5-(4-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0334] Etapa 1: 1-benzil-4-hidroxipiperidina-4-carbonitrila

[0335] A uma mistura do composto 25-1 (4 g, 21,14 mmol, 1,0 eq) em NMP (40 ml) foi adicionado TMSCN (4,19 g, 42,27 mmol, 2,0 eq) em gotas a 25 oC. A mistura foi agitada por 4 horas a 25 oC. TLC (PE: EA = 10:1, Rf = 0,35) mostrou que o composto 26-1 foi consumido e um novo ponto apareceu. À mistura foi adicionada água (20 ml) e ex- traída com EA (20 ml*3). A camada orgânica foi seca sobre Na 2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o resí- duo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE: EA = 50: 1 ~ 20:1) para proporcionar o composto do título (2,5 g, 54,7% de rendimento) como um óleo amarelo.

[0336] Etapa 2: 1-benzil-4-hidroxipiperidina-4-carboxamida

[0337] A uma mistura do composto 26-2 (2,0 g, 9,25 mmol, 1,0 eq)

e em H2SO4:H2O (8 ml, v/v = 9:1) a 0 °C. A reação de mistura foi agi- tada a 25 oC por 16 h. Despejou-se a reação de mistura em água (10 ml) e extraiu-se com EA (15 ml*3). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcio- nar o resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE: EA =2: 1 ~ 1:1) para proporcionar o composto do títu- lo (800 mg, puro) como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7,36 - 7,27 (m, 5H), 6,53 (s l, 1H), 5,41 (s l, 1H), 3,55 (s, 2H), 2,85 – 2,77 (m, 2H), 2,67 (s l, 1H), 2,36 - 2,25 (m, 2H), 2,24 - 2,13 (m, 2H), 1,64 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 235,1.

[0338] Etapa 3: 4-hidroxipiperidina-4-carboxamida

[0339] A uma solução de composto 26-3 (650 mg, 2,77 mmol, 1,0 eq) em MeOH (13 ml) foi adicionado Pd/C (130 mg) agitado por 2 h a 25°C. TLC (DCM: MeOH=5:1, Rf = 0,05) mostrou que o composto 26-3 foi consumido e um novo ponto apareceu. A reação de mistura foi fil- trada e concentrada a vácuo ao composto do título (600 mg, bruto) como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm2,97 - 2,83 (m, 4H), 2,05 – 1,95 (m, 2H), 1,54 – 1,44 (m, 2H).

[0340] Etapa 4: N-(5-(4-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0341] A uma solução de composto 26-4 (100 mg, 693,62 umol, 1,0 eq), o Intermediário B (96,53 mg, 346,81 umol, 0,5 eq) em MeOH (2 ml) foi adicionado HOAc (41,65 mg, 693,62 umol, 1,0 eq) em gotas. Então, uma solução de NaBH 4 (52,48 mg, 1,39 mmol, 2,0 eq) foi adici-

onada, a reação de mistura foi agitada por 2 h a 25°C. TLC (DCM: MeOH=5:1, Rf = 0,35) mostrou que o Intermediário B foi consumido e um novo ponto surgiu. A reação de mistura foi adicionada à água (5 ml) e extraído com EA (10 ml*3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (5 ml), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentra- da sob pressão reduzida para proporcionar o resíduo. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC (base) para proporcionar o composto do títu- lo (50,27 mg, 99,5% de pureza) como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,67 (ddd, J=1,0, 4,4, 9,1 Hz, 2H), 7,21 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 3,40 (t, J=7,0 Hz, 2H), 2,85 - 2,80 (m, 2H), 2,48 - 2,35 (m, 4H), 2,20 - 2,10 (m, 2H), 1,70 - 1,55 (m, 6H), 1,46 - 1,35 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ = 407,3. Exemplo 27: 5-(4-fluorofenil)-N-(5-(3-(((1S,2R)-2- hidroxiciclopentil)carbamoil)azetidin-1-il)pentil)isoxazol-3-carboxamida

[0342] Etapa 1: N-((1S,2S)-2-hidroxiciclopentil)acetamida (trans relativo)

[0343] A um material de partida, o composto 27-1 (2,5 g, 24,72 mmol, 1,0 eq) foi suspenso em 24 ml de acetona a 0 oC e, então, 24 ml de 10% de Na2CO3 aquoso foi adicionado e seguido por adição de Ac2O (2,52 g, 24,72 mmol, 1 eq) lentamente. Então, a reação pôde aquecer a 20 a 26 oC ao longo de 1 hora e foi agitada por mais 2 horas, tempo du- rante o qual a solução se tornou homogênea. A reação foi diluída com 10 ml de cada um dentre NaHCO3 (saturado) e NaCl (saturado). A solução, então, foi extraída (5 x 10 ml) de (CH2Cl2: i-PrOH = 9:1). Os extratos or- gânicos combinados foram secos sobre Na2SO4, filtrados e concentrados para proporcionar o composto do título (1,60 g, 45,21% de rendimento) como um óleo incolor. LC-MS: [M+H]+ = 144,1.

[0344] Etapa 2: (3aS,6aR)-2-metil-3a,5,6,6a-tetra-hidro-4H- ciclopenta[d]oxazol (cis relativo)

[0345] A uma solução agitada de composto 27-2 (1,60 g, 11,17 mmol, 1,0 eq) em CH2Cl2 (10 ml) foi adicionado lentamente SOCl 2 puro (5,32 g, 44,7 mmol, 4 eq) a 0 oC. A reação pôde aquecer a 19 a 26 oC ao longo de 1 hora e foi agitada mais 2 horas. A mistura bruta foi con- centrada a vácuo para proporcionar o composto do título (1,4 g, 100% de rendimento) como um óleo marrom. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 5,78-5,75 (m, 1H), 4,87-4,84 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,20-2,10 (m, 1H), 2,00-1,87 (m, 4H), 1,70-1,60 (m, 1H).

[0346] Etapa 3: cloridrato de (1R,2S)-2-aminociclopentan-1-ol (cis relativo)

[0347] A uma solução de composto 27-3 (1,40 g, 9,78 mmol, 1,0 eq) em 15 ml de 1,3N HCl foi agitado a 105°C por 1 hora. A solução arrefecida foi concentrada a vácuo e o resíduo resultante foi dissolvido em 1:1 de MeOH: CH2Cl2 (50 ml) e seco sobre Na2SO4 anidro, filtrado e concentrado ao composto do título (500 mg, 40,85% de rendimento) como um sólido marrom. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,93 (s l, 3H), 5,40 (s l, 1H), 4,09-4,07 (m, 1H), 3,24 (m, 1H), 1,89-1,48 (m, 6H).

[0348] Etapa 4: 5-(4-fluorofenil)-N-(5-(3-(((1S,2R)-2- hidroxiciclopentil)carbamoil)azetidin-1-il)pentil)isoxazol-3-carboxamida

[0349] O composto 27-5 foi preparado de modo similar ao compos- to 22-10 usando um procedimento correspondente ao Exemplo 22, Etapas 6 a 9, mas substituindo o composto 22-6 pelo ácido 5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxílico. A uma solução agitada do Composto 27-5 (200 mg, 0,533 mmol, 1,0 eq) em DMF (3 ml) foi adicionado DIEA (344 mg, 2,66 mmol, 5 eq) e o Composto 27-4 (219,9 mg, 1,60 mmol, 3 eq) a 18 a 22 °C. Então, a mistura foi agitada a 18 a 22 oC por 3 min, HATU (405 mg, 1,07 mmol, 2 eq) foi adicionado. Após a adição, a rea- ção foi agitada a 18 a 22 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi diluída com DMF (2 ml) e purificada por prep-HPLC (Kromasil 150*25 mm*10 um, gradiente: 25 a 55% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amônia v/v), B = CH 3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (89 mg 36,43% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: tR = 0,692 min in 5- 95AB_220&254 cromatografia (MK RP-18e 25-2mm), MS (ESI) m/z 459,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7,93-7,89 (m, 2H), 7,28-7,24 (m, 2H), 7,03 (s, 1H), 4,10-4,07 (m, 1H), 3,97-3,94 (m, 1H), 3,54-3,52 (m, 2H), 3,43-3,39 (m, 2H), 3,37-3,35 (m, 1H), 3,30-3,28 (m, 2H), 2,48-2,47 (m, 2H), 1,87-1,82 (m, 3H), 1,64-1,60 (m, 5H), 1,40-1,38 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ = 459,3. Exemplo 28: N-(5-((3R,4S)-4-carbamoil-3-fluoropiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida (Ex. 28-cis)

[0350] N-(5-((3S,4S)-4-carbamoil-3-fluoropiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida (Ex. 28-trans)

[0351] Etapa 1: 1-benzil-3-fluoropiperidina-4-carboxilato de metila

[0352] A uma mistura do composto 28-1 (5g, 20,06 mmol, 1,0 eq) em DCM (100 ml) foi adicionado DAST (8,08, 50,14 mmol, 2,5 eq) a -

60 oC. A mistura foi deixada para aquecer a 0 °C e agitada por 3 h. A mistura foi agitada por 16 h a 15 oC. Ao NaHCO3 sat. (250 ml) foi adi- cionada a mistura. A camada de DCM foi lavada com salmoura (100 ml). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar um resíduo, que foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE : EA = 50: 1 a 20: 1) ao composto do título (1,1 g, 94% de pureza, 20% de rendimento) como um óleo amarelo. LC-MS: [M+H]+ =252,3.

[0353] Etapa 2: 1-benzil-3-fluoropiperidina-4-carboxamida

[0354] Uma mistura do composto 28-2 (1,1 g, 4,38 mmol, 1,0 eq) e NH3.H2O (25%, 200 ml) em MeOH (20 ml) foi agitada 26 h a 15 oC. A mistura foi extraída com EA (100 mlx2). As camadas de EA foram la- vadas com salmoura (100 ml), secas sobre Na2SO4 e concentradas para proporcionar um resíduo, que foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE : EA = 1: 1) para proporcionar o composto do título (340 mg, 34% de rendimento) como um sólido amarelo. LC- MS: [M+H]+ = 237,2.

[0355] Etapa 3: 3-fluoropiperidina-4-carboxamida

[0356] Uma mistura do composto 28-3 (340mg, 1,44mmol, 1,0 eq) e Pd/C (150 mg, 10%, úmido) em MeOH (6 ml) foi agitada sob H 2 a 0,34 MPa (50 psi) por 6 h a 15 oC. A mistura foi filtrada e concentrada ao composto do título (170 mg, bruto) como um óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,58 - 3,46 (m, 1H), 3,11 - 3,03 (m, 1H),

2,97 - 2,90 (m, 1H), 2,76 - 2,66 (m, 1H), 2,61 - 2,46 (m, 2H), 2,12 (m, 1H), 2,05 - 1,95 (m, 1H).

[0357] Etapa 4: N-(5-(4-carbamoila-3-fluoropiperidin-1-ila)pentila)- 5-(tiofen-2-ila)isoxazol-3-carboxamida

[0358] A uma mistura do composto 28-4 (160 mg, 1,09 mmol, 1,0 eq) e do Intermediário B (274,21 mg, 985,2 μmol, 0,9 eq) em MeOH (5 ml) foram adicionados AcOH (65,74, 1,09 mmol, 1,0 eq) e NaBH(OAc)3 (464,01 mg, 2,19 mmol, 2,0 eq) a 20 oC. A mistura foi agitada por 4 h a 20 oC. À reação foi adicionada H2O (1 ml). A mistura foi filtrada. O filtrado foi purificado por pre-HPLC básica (Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um, gradiente: 25 a 55% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amônia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 30 ml/min) para proporcionar o Exemplo 28-cis (71,74 mg, 99% de pureza) e o Exemplo 28-trans (39,32 mg, 98,6% de pureza), ambos como um sólido branco. O Exemplo 28-cis e o Exemplo 28-trans foram ambos confirmados por LCMS, SFC e HRMN. Exemplo 28-cis: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,72 - 7,65 (m, 2H), 7,22 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,55 - 4,50 (m, 0,5H), 4,43 - 4,38 (m, 0,5H), 3,46 - 3,37 (m, 2H), 3,20 - 3,12 (m, 1H), 3,04 - 2,85 (m, 2H), 2,85 - 2,74 (m, 1H), 2,55 - 2,44 (m, 1H), 2,44 - 2,18 (m, 2H), 2,14 - 1,92 (m, 2H), 1,81 - 1,53 (m, 4H), 1,51 - 1,36 (m, 2H). LC- MS: [M+H]+ =409,3. Exemplo 28-trans: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,80 (t l, J=5,7 Hz, 1H), 7,87 (dd, J=1,1, 5,0 Hz, 1H), 7,80 (dd, J=1,2, 3,7 Hz, 1H), 7,46 (s l, 1H), 7,27 (dd, J=3,7, 4,9 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,95 (s l, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 3,25 (q, J=6,7 Hz, 2H), 3,20 - 3,10 (m, 1H), 2,78 (d, J=8,8 Hz, 1H), 2,39 - 2,18 (m, 3H), 1,95 - 1,69 (m, 3H), 1,61 - 1,37 (m, 5H), 1,36 - 1,19 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =409,3. Exemplo 29: N-(5-((3R,4S)-3-carbamoil-4-cianopiperidin-1-il)pentil)-5-

(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0359] Etapa 1: 1-benzil-4-oxopiperidina-3-carboxilato de metila

[0360] A uma solução de composto 29-1A (19,04 g, 211,36 mmol), t-BuOK (29,65 g, 264,20 mmol) em Tolueno (250 ml) foi adicionado o composto 29-1 (20 g, 105,68 mmol) a 90°C e agitada a 90°C por 2 ho- ras. TLC (PE: EA = 2: 1, Rf = 0,7) mostrou que o composto 29-1 foi consumido. A mistura foi filtrada, as camadas orgânicas foram diluídas com NH4Cl (aq) (300 ml), extraídas com EA (100 ml*3) e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (30 g, bruto), como óleo amarelo. LC-MS: [M+H]+ = 248,3.

[0361] Etapa 2: 1-benzil-4-hidroxipiperidina-3-carboxilato de metila

[0362] A uma solução de composto 28-2 (30 g, 121,32 mmol) em MeOH (300 ml) foi adicionado NaBH4 (6,88 g, 181,97 mmol) a 0 oC e agitada a 0 oC por 1 hora. TLC (PE: EA = 2: 1, Rf = 0,1) indicou que o composto 29-2 foi consumido. A mistura foi arrefecida bruscamente por H2O(100 ml), concentrada a vácuo para remover MeOH, extraída com EA(100 ml*3) e concentrada a vácuo para proporcionar o com- posto do título (16 g, bruto) . LC-MS: [M+H]+ = 250,4.

[0363] Etapa 3: 1-benzil-4-((metilsulfonil)óxi)piperidina-3- carboxilato de metila

[0364] A uma solução de composto 28-3 (15 g, 60,17 mmol) em DCM (150 ml) foi adicionado Et3N (24,35 g, 240,67 mmol), MsCl (13,78 g, 120,33 mmol) a 0 oC e agitada a 25 oC por 16 horas. TLC (PE: EA = 2: 1, Rf = 0,6) indicou que o composto 29-3 foi consumido, a mistura foi lavada com NH4Cl (aq) (100 ml* 5) e concentrada a vácuo para proporcionar composto 29-4 (20 g, bruto) como óleo amarelo, que foi usado para a próxima etapa diretamente.

[0365] Etapa 4: (3S,4R)-1-benzil-4-cianopiperidina-3-carboxilato de metila

[0366] A uma solução de composto 29-4 (20 g, 61,09 mmol) em MeCN (200 ml) foi adicionado TBAF (91,63 ml, 91,63 mmol), TMSCN (9,09 g, 91,63 mmol) e agitada a 80 oC por 16 horas. TLC (PE: EA = 2: 1, Rf = 0,6, 0,4) indicou que o composto 29-4 foi consumido, a mistura foi concentrada a vácuo para proporcionar um resíduo, então, o resí- duo foi diluído com H2O (150 ml), extraído com EA(100 ml* 3), concen- trado a vácuo para proporcionar um resíduo (12 g, bruto). O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (PE: EA = 100: 1 a 10: 1) para proporcionar o composto 29-5A (3,0 g, 16,9% de rendimento, 89% de pureza) e o composto 29-5B (2,5 g, 13,4% de rendimento, 85% de pu- reza).

[0367] Composto 29-5A: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,42- 7,20 (m, 5H), 3,70 (s, 3H), 3,58-3,47 (m, 2H), 3,02 (d, J=3,3 Hz, 1H), 2,97-2,82 (m, 2H), 2,81-2,67 (m, 1H), 2,45-2,19 (m, 2H), 2,17-2,05 (m, 1H), 1,89-1,75 (m, 1H). LC-MS: [M+H]+ =259,2.

[0368] Composto 29-5B: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,38- 7,21 (m, 5H), 3,71 (s, 3H), 3,62-3,49 (m, 2H), 3,37 (m, 1H), 3,10-2,88 (m, 2H), 2,81-2,64 (m, 1H), 2,57-2,26 (m, 2H), 2,12-1,99 (m, 1H), 1,95-

1,83 (m, 1H). LC-MS: [M+H]+ =259,2.

[0369] Etapa 5: (3S,4R)-1-benzil-4-cianopiperidina-3-carboxamida

[0370] Uma solução de composto 29-5A (2,0 g, 7,74 mmol) em MeOH (2 ml) e NH3.H2O (20 ml, 25% de pureza) foi agitada a 25 oC por 16 horas. TLC (PE: EA = 2: 1, Rf = 0,4) indicou que o composto 29-5A foi consumido, a mistura foi extraída com EA (15 ml* 5), concen- trada a vácuo para proporcionar um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (PE: EA = 10: 1 a 0: 1) para proporcionar o composto do título (750 mg, 39,81% de rendimento). LC-MS: [M+H]+ = 244,3. Etapa 6: (3S,4R)-4-cianopiperidina-3-carboxamida

[0371] A uma solução de composto 29-6 (200 mg, 0,822 mmol) em MeOH (2 ml) foi adicionado Pd/C (200 mg, 10% de pureza) e agitada sob H2 (0,1 MPa (15 Psi)) a 25 oC por 5 horas. TLC (DCM: MeOH = 10: 1, Rf = 0,2) indicou que o composto 29-6 foi consumido, a mistura foi filtrada e concentrada a vácuo para proporcionar o composto do título (120 mg, bruto), que foi usado para a próxima etapa diretamente.

[0372] Etapa 7: N-(5-((3R,4S)-3-carbamoil-4-cianopiperidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0373] A uma solução de composto 29-7 (120 mg, 0,783 mmol) em MeOH (2 ml) foi adicionado o Intermediário B (218,04 mg, 0,783 mmol), AcOH (47,04 mg, 0,783 mmol), NaBH(OAc)3 (332,06 mg, 1,57 mmol) e agitado a 25 oC por 16 horas. LCMS mostrou que 38,7% do Intermediário B permaneceu, 21% do Exemplo 29 foi detectado. A mis- tura foi concentrada a vácuo para proporcionar um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (condição de TFA) para proporcionar um resíduo, o resíduo foi diluído com NaHCO 3.aq (10 ml) extraído com EA (10 ml*3), as camadas orgânicas foram concentradas a vácuo para proporcionar o composto do título (53,45 mg, 16,42% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,71-7,63 (m, 2H), 7,21 (t, J=4,5 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 3,39 (t, J=7,0 Hz, 2H), 3,05 (dd, J=11,7 Hz, 1H), 2,97-2,82 (m, 2H), 2,72 (dt, J=3,7, 10,7 Hz, 1H), 2,44-2,36 (m, 2H), 2,16-2,02 (m, 3H), 1,88-1,76 (m, 1H), 1,65 (m, 2H), 1,61-1,51 (m, 2H), 1,46-1,36 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =416,3. Exemplo 30: N-(5-(4-carbamoil-3-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida

[0374] Etapa 1: 1-benzil-3-oxopiperidina-4-carboxilato de metila

[0375] A uma solução de composto 30-1 (14 g, 74 mmol, 1 eq) em 30-1A (100 ml) foi adicionado NaH (7,6 g, 190 mmol, 2,5 eq) a 0 oC, a mistura de reação foi agitada a 75 oC por 1 h. TLC (PE: EA = 1:1) mos- trou que a maioria do material de partida (Rf = 0,7) foi consumido e uma nova mancha (Rf = 0,8, igual ao C-05663-028-P1) foi observada. A mistura de reação foi diluída com água (200 ml) e extraída com EA (30 ml*3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (20 ml), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o composto do título (15 g, bruto, 80% de pureza), foi obtido como óleo escuro e usado para a próxima etapa diretamente. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,38 - 7,28 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,61 (s, 2H), 3,13 (s, 2H), 2,61 (t, J=5,6 Hz, 2H), 2,37 - 2,33 (m, 2H).

[0376] Etapa 2: 1-benzil-3-hidroxipiperidina-4-carboxilato de metila

[0377] A uma solução de composto 30-2 (3 g, 12 mmol, 1,0 eq) em MeOH (20 ml) foi adicionado NaBH4 (229 mg, 6 mmol, 0,5 eq) a 0 °C. A mistura de reação foi agitada a 15 oC por 1 h. TLC (PE:EA = 1:1) mostrou que a maioria do material de partida (Rf = 0,8) foi consumido e uma nova mancha (Rf = 0,4, igual ao C-05663-039-P1) foi observa- da. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por 2M de HCl pa- ra ajustar o pH = 7 e, então, extraída com EA (20 ml*3). A fase orgâni- ca combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para pro- porcionar o composto do título (2,6 g, bruto, 80% de pureza), foi obtido como óleo escuro e usado para a próxima etapa diretamente. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,34 - 7,29 (m, 5H), 3,74 (s, 3H), 3,56 (s, 2H), 3,04 - 2,96 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 2,47 - 2,38 (m, 1H), 2,28 - 2,19 (m, 1H), 2,15 - 1,88 (m, 2H), 1,84 - 1,72 (m, 2H).

[0378] Etapa 3: 1-benzil-3-hidroxipiperidina-4-carboxamida

[0379] A uma mistura do composto 30-3 (2 g, 8 mmol, 1 eq) em MeOH (1 ml) foi adicionado NH3.H2O (20 ml). A mistura de reação foi agitada a 15 oC por 16 h. TLC (DCM: MeOH =10:1) mostrou que a maioria do material de partida (Rf = 0,6) foi consumido e uma nova mancha (Rf = 0,25, igual ao C-05665-022-P1) foi observada. A mistura de reação foi concentrada a vácuo, o resíduo foi diluído com EA (10 ml) e lavado com salmoura (50 ml). A fase orgânica combinada foi se- ca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o composto do título (1,3 g, bruto, 85% de pureza) como óleo amarelo, ele foi usa- do para a próxima etapa diretamente. LC-MS: [M+H]+ =235,4.

[0380] Etapa 4: 3-hidroxipiperidina-4-carboxamida

[0381] A uma mistura do composto 30-4 (1 g, 4,27 mmol, 1,0 eq) em MeOH (8 ml) foi adicionado Pd/C (0,6 g, 10%). A mistura de reação foi agitada sob H2 (0,34 MPa (50 Psi)) a 15 oC por 6 h. TLC (DCM: MeOH =10:1) mostrou que a maioria do material de partida (Rf = 0,25) foi consumido e uma nova mancha (Rf = 0,01, igual ao C-05663-085- P1) foi observada. A mistura de reação foi filtrada e a fase orgânica foi concentrada a vácuo para proporcionar o composto do título (350 mg, bruto, 85% de pureza) como óleo amarelo, ele é usado para a próxima etapa diretamente.

[0382] Etapa 5: N-(5-((3R,4R)-4-carbamoil-3-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida (cis) N-(5-((3S,4R)-4-carbamoil-3-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida (trans)

[0383] A uma mistura do composto 30-5 (300 mg, 2,08 mmol, 1,0 eq) em MeOH(8 ml) foi adicionado o Intermediário B (579 mg, 2,08 mmol, 1,0 eq) e HOAc (125 mg, 2,08 mmol, 1,0 eq), seguido por um adicional de NaBH(OAc)3 (881 mg, 4,16 mmol, 2,0 eq) a 15 °C. A mis- tura de reação foi agitada a 15 oC por 6 h. LCMS (C-05665-047-P1A2)

mostrou que o composto 30-5 foi consumido completamente, o MW desejado foi observado como pico principal. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente por NaHCO3 aquoso saturado (100 ml) e ex- traído com EA (20 ml*3). A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtra- da e concentrada. O resíduo foi purificado por Pre-HPLC(NH3.H2O) para proporcionar os compostos do título (80 mg cis, 16 mg trans) co- mo sólido branco. Exemplo 30 (cis): 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,80 (m, 1H), 7,88 (dd, J=1,2, 5,2 Hz, 1H), 7,80 (dd, J=1,2, 3,6 Hz, 1H), 7,28 (dd, J=3,6, 5,2 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 4,55 (d, J=5,6 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,25 (m, 2H), 2,69 - 2,68 (m, 1H), 2,26 - 2,22 (m, 2H), 2,18 - 2,16 (m, 1H), 2,09 - 2,05 (m, 1H), 1,97 - 1,87 (m, 2H), 1,58 - 1,41 (m, 5H), 1,34 - 1,22 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =407,3. Exemplo 30 (trans): 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,81 (m, 1H), 7,88 (dd, J=1,2, 5,2 Hz, 1H), 7,80 (dd, J=1,2, 3,6 Hz, 1H), 7,28 (dd, J=3,6, 5,2 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 4,79 (d, J=4,4 Hz, 1H), 3,29 - 3,21 (m, 3H), 3,18 (d, 1H), 2,90 (m, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,27-2,21 (m, 2H), 1,95 - 1,85 (m, 1H), 1,76 - 1,62 (m, 2H), 1,60 - 1,53 (m, 2H), 1,50 - 1,43 (m, 2H), 1,41 - 1,25 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =407,3. Exemplo 31: N-(5-(4-carbamoil-3-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0384] A uma solução de composto 30-5 (140 mg, 0,971 mmol, 1eq) em MeOH (3 ml) foi adicionado o Intermediário C (281,89 Mg, 0,971 mmol, 1 eq), AcOH (58,31 mg, 0,971 mmol, 1 eq) e NaBH(OAc)3 (411,62 mg, 1,94 mmol, 2 eq). A mistura foi agitada a 25 oC durante 16 horas. LCMS(C-05664-110-P1A) mostrou que 27% de 3A permane-

ceu, 66% de 4 foi detectado. A reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC (condição básica) para proporcionar os racematos relacionados do composto do título (250 mg, 61,5% de rendimento) como um sólido amarelo separa- do por SFC.

[0385] O Exemplo 31 foi adicionalmente purificado por SFC (colu- na: IC 250 mm*30 mm, 10 um, condição: 0,1%de NH 3H2O MeOH, taxa de fluxo: 70 ml/min) para proporcionar o Exemplo 31-cis e -trans.

[0386] O Exemplo 31-cis foi obtido como um sólido amarelo (126,17 mg, 96,78% de pureza, 48,84% de rendimento). O Exemplo 30-cis foi o pico 2 na IC e o Exemplo 31-trans foi o pico 2 na IC. Pico 1: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,47 (s, 1H), 7,92 (dd, J=5,3, 8,8 Hz, 2H), 7,28 (t, J=8,7 Hz, 2H), 7,06 (s, 1H), 4,03 (s, 1H), 3,51-3,35 (m, 4H), 3,04-2,92 (m, 2H), 2,88-2,58 (m, 2H), 2,42 (s, 1H), 2,11 (d, J=13,2 Hz, 1H), 1,98-1,83 (m, 1H), 1,81-1,64 (m, 3H), 1,73-1,64 (m, 1H), 1,46 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =419,4.

[0387] Pico 2: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,96-7,89 (m, 2H), 7,28 (t, J=8,7 Hz, 2H), 7,05 (s, 1H), 4,10 (s l, 1H), 3,40 (t, J=7,0 Hz, 2H), 3,02-2,87 (m, 2H), 2,50-2,33 (m, 3H), 2,28 (d l, J=11,6 Hz, 1H), 2,23-2,06 (m, 2H), 1,71-1,62 (m, 3H), 1,62-1,54 (m, 2H), 1,42 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =419,4. Exemplo 32: N-(5-(3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida

[0388] Etapa 1: 3-ciano-4-hidroxipirrolidina-1-carboxilato de terc- butila

[0389] A uma mistura do composto 32-1 (3 g, 14,27 mmol, 1,0 eq) em EtOH (60 ml) adicionou-se NaBH4 (1,08 g, 28,54 mmol, 2,0 eq) a 0 °C e agitado por 1 h. A mistura foi concentrada. O resíduo foi dissolvi- do em EA (50 ml). A camada de EA foi lavada com água (50 ml) e salmoura (100 ml). A camada orgânica foi seca sobre Na 2SO4, filtrada e concentrada para proporcionar o composto do título (3,3 g, bruto) como um óleo amarelo. LC-MS: [M+H-56]+ = 157,1.

[0390] Etapa 2: 3-carbamoil-4-hidroxipirrolidina-1-carboxilato de terc-butila

[0391] A uma solução de composto 32-2 (1,5 g, 7,07 mmol, 1,0 eq) em MeOH (30 ml) foram adicionados NaOH aq (15 ml, 1M) e H 2O2 (7,5 ml) a 15 °C e agitados por 6 h. À mistura foram adicionados NH4Cl sat. (200 ml) e EA (150 ml). A camada aquosa foi extraída com EA (150 ml). As camadas de EA combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml), secas sobre Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (800 mg, bruto) como um óleo ama- relo, que foi usado para a próxima etapa diretamente. LC-MS: [M+Na]+ =253,1.

[0392] Etapa 3: 4-hidroxipirrolidina-3-carboxamida

[0393] A uma mistura do composto 32-3 (800 mg, 3,47 mmol, 1,0 eq) em DCM (15 ml) foi adicionado TFA (5 ml) a 15 °C e agitado por 6 h. A mistura foi concentrada para proporcionar o composto 32-4 (1,6 g, bruto) como um óleo amarelo, que foi usado para a próxima etapa di- retamente. LC-MS: [M+H]+ =131,1. Etapa 4:

[0394] A uma mistura do composto 32-4 (800 mg, bruto) e do In- termediário C (446,1 mg, 1,54 mmol, 1,0 eq) em MeOH (15 ml) foram adicionados AcOH (92,28 mg, 1,54 mmol, 1,0 eq) e NaBH(OAc)3 (651,4 mg, 3,07 mmol, 2,0 eq) a 15 °C. A mistura foi agitada por 16 h a 15 oC. À reação, foi adicionado NaHCO 3 sat. (1,5 ml). A mistura foi fil- trada e o filtrado foi purificado por pre-HPLC básica (Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um, gradiente: 22 a 52% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amônia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 30 ml/min) e duas vezes SFC para proporcionar quatro picos do Exemplo 32, todos como um sólido branco. Exemplo 32 (pico 1): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,00 - 7,89 (m, 2H), 7,34 - 7,25 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 4,57 - 4,45 (m, 1H), 3,42 (t, J=7,0 Hz, 2H), 3,17 - 3,07 (m, 1H), 3,06 - 2,92 (m, 3H), 2,66 - 2,52 (m, 3H), 1,76 - 1,55 (m, 4H), 1,51 - 1,36 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =405,3. Exemplo 32 (pico 2): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,93 - 7,73 (m, 2H), 7,27 - 7,10 (m, 2H), 6,95 (s, 1H), 4,46 - 4,32 (m, 1H), 3,31 (t, J=7,0 Hz, 2H), 3,08 - 2,85 (m, 4H), 2,61 - 2,49 (m, 3H), 1,63 - 1,44 (m, 4H), 1,41 - 1,27 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =405,3. Exemplo 32 (pico 3): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,01 - 7,84 (m, 2H), 7,29 (t, J=8,8 Hz, 2H), 7,07 (s, 1H), 4,46 (q, J=4,9 Hz, 1H), 3,42(t, J=7,1 Hz, 2H), 3,10 (t, J=8,8 Hz, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,75 (d, J=5,1 Hz, 2H), 2,65 - 2,37 (m, 3H), 1,74 - 1,52(m, 4H), 1,52 - 1,39 (m,

2H). LC-MS: [M+H]+ =405,3. Exemplo 32 (pico 4): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,01 - 7,84 (m, 2H), 7,39 - 7,20 (m, 2H), 7,07 (s, 1H), 4,47 (q, J=4,7 Hz, 1H), 3,42 (t,J=7,0 Hz, 2H), 3,16 (dd, J=8,3, 9,5 Hz, 1H), 2,88 (m, 1H), 2,81 (d, J=4,9 Hz, 2H), 2,74 - 2,47 (m, 3H), 1,74 -1,54 (m, 4H), 1,52 - 1,36 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =405,3. Exemplo 33 N-(5-(3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida: Legenda: ta

[0395] A uma mistura do composto 32-4 (1,5 g, bruto), Intermediá- rio B (1,5 g, 5,38 mmol, 1,0 eq) e HOAc (323 mg, 5,38 mmol, 1,0 eq) em MeOH (30 ml) foi adicionado NaBH(OAc)3 (2,28 g, 10,76 mmol, 2,0 eq) a 30 °C. A mistura foi agitada por 2 horas a 30 °C. À mistura foi adicionado NaHCO3 sat. (10 ml). A mistura foi concentrada sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por MPLC para proporcionar o Exemplo 33 (1,3 g, 100% de pureza) como um sólido branco, que foi analisado por LCMS e SFC. O produto foi purificado por SFC para proporcionar quatro picos e, então, Prep-HPLC (base) para proporcio- nar o pico 1 (119,34 mg, 100% de pureza), pico 2 (80,94 mg, 100% de pureza), pico 3 (55,48 mg, 100% de pureza) e pico 4 (154,01 mg, 100% de pureza.

[0396] Pico 1: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,50 (dt, J=3,8, 6,1 Hz, 1H), 3,41 (t, J=7,0 Hz, 2H), 3,10 (dd, J=5,6, 10,5 Hz, 1H), 3,05 - 2,89 (m, 3H), 2,63 - 2,50 (m, 3H), 1,75 - 1,53 (m, 4H), 1,52 - 1,37 (m, 2H). LC- MS: [M+H]+ =393,3.

[0397] Pico 2: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H),

7,23 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 4,50 (dt, J=4,0, 5,8 Hz, 1H), 3,42 (t, J=7,1 Hz, 2H), 3,15 - 3,08 (m, 1H), 3,06 - 2,92 (m, 3H), 2,65 - 2,52 (m, 3H), 1,75 - 1,54 (m, 4H), 1,51 - 1,37 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =393,3.

[0398] Pico 3: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 4,50 - 4,41 (m, 1H), 3,41 (t, J=7,1 Hz, 2H), 3,10 (t, J=9,0 Hz, 1H), 2,85 (dt, J=4,6, 8,1 Hz, 1H), 2,74 (d, J=5,6 Hz, 2H), 2,65 - 2,41 (m, 3H), 1,75 - 1,53 (m, 4H), 1,51 - 1,36 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =393,3.

[0399] Pico 4: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,7, 5,1 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 4,51 - 4,40 (m, 1H), 3,41 (t, J=7,1 Hz, 2H), 3,09 (t, J=8,8 Hz, 1H), 2,84 (dt, J=4,6, 8,1 Hz, 1H), 2,78 - 2,69 (m, 2H), 2,64 - 2,38 (m, 3H), 1,76 - 1,52 (m, 4H), 1,51 - 1,36 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =393,3. Exemplo 34:

[0400] N-(5-((3S,4R)-3-ciano-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen- 2-il)isoxazol-3-carboxamida (Exemplo 33-cis)

[0401] N-(5-((3S,4S)-3-ciano-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen- 2-il)isoxazol-3-carboxamida (Exemplo 33-trans)

[0402] Etapa 1: 4-hidroxipirrolidina-3-carbonitrila

[0403] A uma solução de composto 32-2 (1,5 g, 7,07 mmol) em DCM (9 ml) foi adicionado TFA (3 ml) e agitado a 25 oC por 1 hora. TLC (PE: EA = 2: 1, Rf = 0,1) indicou que o composto 32-2 foi consu- mido. A mistura foi concentrada a vácuo para proporcionar o composto do título (2,1 g, bruto), que foi usado na próxima etapa diretamente.

[0404] Etapa 2: N-(5-(3-ciano-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0405] A uma solução de Intermediário B (992,87 mg, 3,57 mmol) em MeOH (15 ml) foi adicionado o composto 34-2 (1,0 g, 8,92 mmol), AcOH (535,56 mg, 8,92 mmol), NaBH(OAc)3 (3,78 g, 17,84 mmol) e agitado a 25 °C por 16 horas. LCMS mostrou que o Intermediário B foi consumido, a mistura foi filtrada e concentrada a vácuo para proporci- onar um resíduo. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC (condição básica) para proporcionar o compostos do título (cis) (94,06 mg, 7,00% de rendimento) e (trans) (193,83 mg, 14,28% de rendimento) como pó branco. Exemplo 34-cis: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,72-7,61 (m, 2H), 7,20 (m, 1H), 6,90 (s, 1H), 4,47-4,38 (m, 1H), 3,43-3,34 (m, 2H), 3,30- 3,25 (m, 1H), 3,11-2,97 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 2,57-2,41 (m, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,55 (m, 2H), 1,42 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =375,3. Exemplo 34-trans: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,58 (m, 2H), 7,13 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 4,40 (s, 1H), 3,31-3,27 (m, 1H), 3,23 (s, 1H), 3,00-2,90 (m, 1H), 2,90-2,77 (m, 2H), 2,65 (m, 1H), 2,50-2,30 (m, 3H), 1,58 (m, 2H), 1,46 (m, 2H), 1,34 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =375,3. Exemplo 35:

[0406] N-(5-((3R,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida (cis)

[0407] N-(5-((3R,4R)-3-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida (trans)

[0408] Etapa 1: 1-benzil-4-oxopiperidina-3-carboxilato de metila

[0409] A uma mistura de carbonato de dimetila (4,76 g, 52,84 mmol, 2,0 eq) e t-BuOK (6,67 g, 29,44 mmol, 2,25 eq) em tolueno (60 ml) foi adicionada uma solução de composto 35-1 (5 g, 26,42 mmol, 1,0 eq) em gotas a 90 °C. A mistura foi agitada por 2 horas a 90 °C. À mistura de reação foi adicionado AcOH (2,35 eq) e água (100 ml). A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura (50 ml). A ca- mada orgânica foi seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão re- duzida para proporcionar o composto do título (7g, bruto) como um óleo amarelo. LC-MS: [M+H]+ =248,2.

[0410] Etapa 2: 1-benzil-4-hidroxipiperidina-3-carboxilato de metila

[0411] A uma mistura do composto 35-2 (2,0 g, 8,09 mmol, 1,0 eq) em MeOH (40 ml) foi adicionado NaBH4 (611,95 mg, 16,18 mmol, 2,0 eq) a 0 °C. A mistura foi agitada por 2 horas a 0 °C. A mistura foi con- centrada sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo. Ao resí- duo foi adicionado EA (50 ml) e água (50 ml). A camada de EA foi la- vada com salmoura (50 ml), seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto 35-3 (1,8 g, bruto) como um óleo amarelo. LC-MS: [M+H]+ =250,3.

[0412] Etapa 3: 1-benzil-4-hidroxipiperidina-3-carboxamida

[0413] Uma mistura do composto 35-3 em NH3/MeOH (7 M, 20 ml) foi agitada por 16 h a 10 °C e por 120 h a 30 °C. LCMS (C-05663-131- P1B4) mostrou que pouco composto 35-3 permaneceu, e a massa de- sejada foi detectada. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (1 g, bruto) como um óleo ama- relo. LC-MS: [M+H]+ =235,3.

[0414] Etapa 4: 4-hidroxipiperidina-3-carboxamida

[0415] A uma mistura do composto 35-4 (1,0 g, 4,27 mmol) em MeOH (20 ml) foi adicionadO Pd/C (úmido, 10%, 200 mg) a 15 °C. A mistura foi agitada por 16 h a 15 °C sob H2 a 0,34 MPa (50 psi). A mis- tura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (600 mg, bruto) como um óleo ama- relo. LC-MS: [M+H]+ =145,1.

[0416] Etapa 5: N-(5-(3-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0417] A uma mistura do composto 35-5 (300 mg, 2,08 mmol, 1,0 eq) e do Intermediário B em MeOH (10 ml) foram adicionados HOAc (112,46 mg, 1,87 mmol, 0,9 eq) e NaHB(OAc)3 (882,03 mg, 4,16 mmol, 2,0 eq) a 10 a 15 °C. A mistura foi agitada por 16 h de 10 a 15 °C. À mistura foi adicionado NaHCO3 sat. (2 ml). A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo. O resíduo foi puri- ficado por Prep-HPLC (base) (Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um, gradiente: 22 a 52% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amô- nia v/v), B = CH3CN), taxa de fluxo: 30 ml/min) para proporcionar os compostos do título (trans) (102,45 mg,) e (cis) (122,73 mg) como pó branco. Exemplo 35-trans: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,7, 4,9 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 3,74 (m, 1H), 3,41 (t, J=7,1 Hz, 2H), 3,08 - 2,91 (m, 2H), 2,48 - 2,36 (m, 3H), 2,21 - 2,06 (m, 2H), 2,01 - 1,89 (m, 1H), 1,74 - 1,53 (m, 5H), 1,49 - 1,35 (m, 2H). LC-MS:

[M+H]+ =407,3. Exemplo 35-cis:1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,15 (s l, 1H), 3,42 (t, J=7,1 Hz, 2H), 2,82 - 2,49 (m, 5H), 2,48 - 2,36 (m, 2H), 1,86 - 1,76 (m, 2H), 1,74 - 1,55 (m, 4H), 1,50 - 1,37 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =407,3. Exemplo 36: N-(5-(3-((4-hidroxitetra-hidrofuran-3-il)carbamoil)azetidin- 1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0418] Etapa 1: 1-(5-(5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamido)pentil)azetidina-3-carboxilato de metila

[0419] A uma suspensão do composto 36-1 (968 mg, 2,82 mmol, 1 eq) in CH3CN (15 ml) foi adicionado K2CO3 (1,17 g, 8,45 mmol, 3 eq) e KI (467 mg, 2,82 mmol, 1eq) a 0 °C. Após a adição, o composto 36-1A (512 mg, 3,38 mmol, 1,2 eq) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 9 a 16 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi con- cluída. A mistura foi filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida e o resíduo foi purificado pela coluna em gel de sílica (DCM:MeOH=50:1 a 10:1) para proporcionar o composto (1,05 g, bru- to) como um óleo amarelo claro. LC-MS: [M+H]+ =378,2.

[0420] Etapa 2: ácido 1-(5-(5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamido)pentil)azetidina-3-carboxílico

[0421] A uma solução agitada de composto 36-2 (1,05 g, 2,78 mmol, 1,0 eq) em H2O/THF (8 ml/16 ml) foi adicionado LiOH.H2O (350 mg, 8,35 mmol, 3,0 eq) a 0 °C. Então, a mistura foi agitada a 12 a 19 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. Acidificou- se a mistura de reação adicionando, com agitação, 1N de HCl para ajustar o pH a 5 ~ 6 e, então, removeu-se o THF sob pressão reduzida e o resíduo aquoso foi liofilizado para proporcionar o composto do títu- lo (2,78 mmol) como uma goma amarela. LC-MS: [M+H]+ =364,1.

[0422] A uma solução agitada de composto 36-3 (110 mg, 0,302 mmol, 1,0 eq) em DMF (1 ml) foi adicionado DIEA (196 mg, 1,51 mmol, 5 eq) e o composto 36-3A (127 mg, 0,908 mmol, 3 eq) a 11 a 14 °C. Então, a mistura foi agitada a 11 a 14 °C por 3 min, HATU (230 mg, 0,605 mmol, 2 eq) foi adicionado. Após a adição, a reação foi agitada a 11 a 14 °C por 18 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi diluída com DMF (1,5 ml) e purificada por prep-HPLC bási- ca (Coluna Xtimate C18 150*25 mm*5 um, gradiente: 22 a 52% de B (A = água (0,05% de hidróxido de amônia v/v) B = CH3CN), taxa de fluxo: 25 ml/min) para proporcionar o composto do título (42 mg, 1 96,06% de pureza) como um sólido branco. H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,69-7,66 (m, 2H), 7,21 (dd, J = 4,0, 4,8 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 4,18-4,09 (m, 2H), 4,07-4,01 (m, 1H), 3,96-3,91 (m, 1H), 3,67- 3,60 (m, 2H), 3,55-3,49 (m, 2H), 3,38 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,29-3,25 (m, 3H), 2,55-2,47 (m, 2H), 1,69-1,57 (m, 2H) 1,45-1,35 (m, 4H). LC-MS: [M+H]+ =449,2. Exemplo 37: N-(5-(4-(3-amino-2-hidróxi-3-oxopropil)piperazin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0423] Etapa 1: 4-(2-hidróxi-3-metóxi-3-oxopropil)piperazina-1- carboxilato de terc-butila

[0424] A uma solução de composto 37-1 (1,0 g, 5,37 mmol) e composto 37-1A (657,75 mg, 6,44 mmol, 1,2 eq) em DMF (10 ml) foi adicionado DIPEA (2,08 g, 16,11 mmol, 3,0 eq) a 20 °C. Então, a rea- ção foi aquecida a 80 °C por 16 horas. TLC (DCM/MeOH=10/1) mos- trou que todo o material de partida foi consumido, e uma nova mancha principal foi encontrada. A reação foi diluída com EA (100 ml), lavada com água (30 ml). A camada orgânica foi concentrada a vácuo para proporcionar o composto 37-2 (1,4 g, bruto) como óleo amarelo. Ele foi usado diretamente para a próxima etapa. 1H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 4,23 (dd, J=4,0, 7,6 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,40 - 3,31 (m, 4H), 2,75 - 2,58 (m, 2H), 2,56 - 2,46 (m, 2H), 2,42 - 2,33 (m, 2H), 1,45 - 1,34 (s, 9H)

[0425] Etapa 2: 4-(3-amino-2-hidróxi-3-oxopropil)piperazina-1- carboxilato de terc-butila

[0426] Uma solução de composto 37-2 (200 mg, 693,63 umol) em NH3.MeOH (10 ml, 4N) foi agitada a 20 °C por 16 horas. LCMS mos- trou que o produto desejado foi encontrado como o pico principal. A reação foi concentrada a vácuo para proporcionar o composto 37-3 (200 mg, bruto) como um sólido branco. O produto bruto foi usado di- retamente para a próxima etapa sem purificação. LC-MS: [M+H]+ =274,3.

[0427] Etapa 3: 2-hidróxi-3-(piperazin-1-il)propanamida

[0428] A uma solução de composto 37-3 (200 mg, 731,72 umol) em DCM (4 ml) foi adicionado TFA (2 ml) a 20 °C, e ela foi agitada a 20 °C por 3 horas. A mistura de reação foi concentrada a vácuo para proporcionar o composto 37-4 (200 mg, bruto) como óleo amarelo. O produto bruto foi usado diretamente para a próxima etapa sem purifi- cação.

[0429] Etapa 4: N-(5-(4-(3-amino-2-hidróxi-3-oxopropil)piperazin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0430] A uma solução de composto 37-4 (200 mg, 742,88 umol), Intermediário B (206,76 mg, 742,88 umol) e AcOH (44,61 mg, 742,88 mg) em MeOH (10 ml) foi adicionado NaBH(OAc)3 (472,34 mg, 2,23 mmol) a 20 °C, e ela foi agitada a 20 °C por 16 horas. LCMS mostrou que todo o material de partida foi consumido, e o produto desejado foi encontrado. A reação foi diluída com EA (20 ml) e água (10 ml). A ca- mada orgânica foi separada e concentrada a vácuo. O resíduo foi puri- ficado por prep-HPLC (base) para proporcionar o Exemplo 37 (16,3 mg, 5,06% de rendimento) como sólido branco.

[0431] 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,71 – 7,68 (m, 2H), 7,23 (dd, J=3,8, 4,9 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,17 (dd, J=3,5, 8,3 Hz, 1H), 3,41 (t, J=7,1 Hz, 2H), 2,78 - 2,47 (m, 10H), 2,45 - 2,35 (m, 2H), 1,75 - 1,54 (m, 4H), 1,48 - 1,36 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =436,4.

[0432] (R)-N-(5-(4-(3-amino-2-hidróxi-3-oxopropil)piperazin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida

[0433] (S)-N-(5-(4-(3-amino-2-hidróxi-3-oxopropil)piperazin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida Exemplo 37-R: 1H RMN (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7,69 (ddd, J=1,0,

4,4, 9,2 Hz, 2H), 7,22 (dd, J=3,8, 5,0 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 4,17 (dd, J=3,6, 8,3 Hz, 1H), 3,41 (t, J=7,1 Hz, 2H), 2,77 - 2,46 (m, 10H), 2,44 - 2,36 (m, 2H), 1,73 - 1,54 (m, 4H), 1,49 - 1,37 (m, 2H). C-05707-094- P2A. LC-MS: [M+H]+ =436,0. Exemplo 37-S: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,57 (ddd, J=1,1, 4,3, 9,2 Hz, 2H), 7,11 (dd, J=3,7, 5,0 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,05 (dd, J=3,6, 8,3 Hz, 1H), 3,29 (t, J=7,0 Hz, 2H), 2,66 - 2,33 (m, 10H), 2,32 - 2,24 (m, 2H), 1,61 - 1,42 (m, 4H), 1,36 - 1,25 (m, 2H). LC-MS: [M+H]+ =436,0. Exemplo 38: Ensaio de indução de Atoh1 em células precursoras neu- rais cerebelares (NPCs) de camundongo

[0434] O ensaio de indução de Atoh1 foi conduzido com células precursoras neurais cerebelares cultivadas in vitro isoladas de camun- dongos Atoh1-GFP transgênicos neonatais. A expressão de Atoh1 é principalmente regulada pelo intensificador, e o GFP nuclear foi indu- zido pela sequência intensificadora clonada em 3’ de Atoh1 que era altamente conservada entre os mamíferos. Assim, a indução de Atoh1 podia ser refletida pela ativação de GFP em células precursoras neu- rais cerebelares (Helms et al., Development 2000;127: 1185-1196; Lumpkin et al., Gene Expression Patterns 2003; 3: 389 a 395). Filhotes de 3 dias pós-natais foram dissecados para isolamento de tecido cere- belar. O tecido cerebelar foi cortado em pedaços pequenos e dissocia- do com Tripsina a 0,05% durante cerca de 10 minutos a 37 °C, e de- pois filtrado com uma peneira celular de 70 uM. As células foram culti- vadas como neuroesferas durante os primeiros 2 dias em placa/placa de poços de adesão ultra baixa com DMEM/F12+1% de N2 e 2% de B27 com 1% de P/E, 20 ng/ml de rhFGF2 e 20 ng/ml de rhEGF(R&D Systems). As esferas foram então plaqueadas em placa de cultura de tecido revestida com matrigel (diluído 1:30 em DMEM/F12) para o cul- tivo de monocamada. Após cultivo por 4,5 a 5,5 dias in vitro (DIV), as células foram dissociadas com tripsina a 0,05% em células individuais e congeladas após cálculo do número de células.

[0435] As células precursoras neurais cerebelares (NPCs) foram redescongeladas a partir do estoque e cultivadas por mais 2 dias antes de serem usadas para o ensaio de indução de Atoh1. No primeiro dia do ensaio, as NPCs foram semeadas em placas de 384 poços revesti- das com matrigel (ViewPlate preta, PE) a 2.500 células/poço. Após cultivo ao longo da noite, as NPCs foram tratadas com compostos re- presentativos da presente revelação com diluições seriadas de 1:2 pa- ra 10 doses, de 50 µM a 200 nM, com DMSO como controle negativo. Após 72 horas de tratamento sem trocar o meio, as células foram fixa- das com formalina a 4% para marcação. As placas de ensaio foram marcadas com anticorpo contra GFP (Abcam, n.º de catálogo 13970, 1:1000) para amplificar o sinal de GFP endógeno e depois lidas por Cellomics. As intensidades médias de GFP em núcleos celulares que são definidos por marcação com DAPI para os compostos testados foram calculadas e comparadas ao controle de DMSO, e a diferença é expressa em formato de diferença em número de vezes de acordo com a equação de (a intensidade média de GFP do composto testa- do)/(controle de DMSO). A diferença máxima em número de vezes pa- ra cada composto testado em relação ao controle de DMSO é descrita na Tabela 1 abaixo (ver a coluna com o título "diferença em n.º de ve- zes"). Note que o valor do controle de DMSO é 1 na equação e qual- quer diferença em número de vezes superior a 5 é considerada uma diferença significativa. Como mostrado na Tabela 1, todos os compos- tos testados da presente revelação demonstraram diferença em núme- ro de vezes significativa em termos da intensidade média de GFP em relação ao controle de DMSO. Portanto, todos os compostos testados eram ativos em relação à ativação de Atoh1 e aumentaram significati- vamente a expressão de Atoh1.

Tabela 1 ativação de Atoh1 por tratamento dos Compostos da presen- te revelação (ensaio de Atoh1-GFP repórter em NPCs cerebelares) Diferença Diferença Diferença Exemplo Exemplo Exemplo Multipli- Multiplicada* Multiplicada* cada* DMSO 1,0 26 16,3 23 24,3 3 11,2 28-trans 16,8 9 24,4 34 cis 11,2 22 16,8 33 pico 3 27,3 2 11,5 5 17,2 35 trans 24,8 28-cis 11,9 7 17,2 32 pico 3 27,6 1 12,7 24 18,3 37 27,6 34 trans 13,1 15 18,9 33 pico 2 35,6 25 13,1 10 19,1 37 R 29,2 27 13,5 6 20,1 13 32,5 36 13,6 18 20,4 33 pico 1 34,8 8 14,6 17 20,4 37 S 31,5 31 14,7 21 20,8 16 32,3 20 14,7 12 22,4 35 cis 33,2 4 18,3 19 16,3 11 33,3 29 15,4 32 pico 4 23,2 33 pico 4 33,7 30 16,1 14 23,8 * A razão de intensidade média_FC de Atoh1-GFP para DMSO_Max

[0436] Ensaio de indução de células ciliadas ex vivo usando ex- plantes de cóclea de camundongo de 6 dias pós-natais com danifica- ção de células ciliadas

[0437] Camundongos Atoh1-GFP P6, de 6 dias pós-natais, a mesma estirpe de camundongo usada para o ensaio de indução de Atoh1 previamente descrito, foram usados no presente ensaio. A cáp- sula ótica foi exposta e as cócleas foram microdissecadas. A membra- na basilar foi separada do órgão de Corti e cultivada in vitro em meio livre de soro (meio de cultura: DMEM/F12 + 1% de N2 + 2% de B27 + 5 μg/ml de ampicilina) a 37 °C sob uma atmosfera de gás padrão de ar umidificado/5% de CO2. As células ciliadas do ouvido interno foram danificadas por tratamento com neomicina 1 mM durante 1,25 h. Após o tratamento com neomicina, os explantes foram cultivados em meio de cultura branco durante 7 dias antes do tratamento de compostos selecionados.

[0438] Para a administração dos compostos, os explantes de có- cleas foram tratados com 3 a 10 µM do composto da presente revela- ção, com DMSO como o controle negativo durante 8 dias com uma troca de meio/composto. Após 8 dias de tratamento, o composto tes- tado foi removido. Os explantes foram cultivados em meio branco du- rante mais 4 dias. As culturas de explantes de cócleas foram fixadas com formalina a 4% p/v e processadas quanto à imunofluorescência de Myo7a (Myo7a é um marcador específico para células ciliadas sen- soriais) usando o anticorpo anti-Myo7a de coelho (Protus Biosci n.º de catálogo 25-6790, diluído 1:250 em PBS contendo 3% de BSA). IgG anti-coelho de cabra marcado com rodamina (Molecular Prob. n.º de catálogo R6394, diluído 1:1000 em PBS contendo 3% de BSA) foi usado como o anticorpo secundário para visualizar as células positivas para Myo7a. As imagens foram coletadas e analisadas usando o sis- tema de imagens EVOS (Thermo-Fisher Scientific). Observou-se que o tratamento com compostos testados aumentou significativamente o número de células positivas para Atoh1-GFP e Myo7a. A identidade de células ciliadas das células ectopicamente formadas foi confirmada por marcação das células com múltiplos marcadores de células ciliadas.

[0439] A eficácia da indução de células ciliadas neste ensaio é re- presentada pela porcentagem de extensão responsiva de células du- plamente positivas para Atoh1 e Myo7a nos explantes inteiros danifi- cados após tratamento com os compostos. A porcentagem de exten- são responsiva foi calculada de acordo com a equação de ((a exten- são do explante com células duplamente positivas para Atoh1 e

Myo7a/extensão total do explante de cóclea) * 100%). Note que o valor do controle de DMSO é 0% devido à danificação total das células cilia- das, e qualquer porcentagem de extensão responsiva superior a 20% é considerada indução significativa de células ciliadas. Como mostrado na Tabela 2, compostos representativos da presente revelação de- monstraram indução significativa de células ciliadas. Tabela 2. Indução de células de Atoh1-GFP/Myo7a em explantes de cochlea por tratamento de compostos da presente revelação (concen- tração final de 10 µM), Média±DP. Razão de resposta Número de células de Concentra- (% de Comprimento Atoh1-GFP/Myo7a em Composto ção de respos- 25% a 50% de compri- ta/comprimento total) mento desde o ápice) DMSO 0±0 0±0 18 10 µM 59,4±5,3 16,1±3,0 33 pico 3 10 µM 54,1±5,3 19,8±1,0 35 trans 10 µM 63,9±5,8 14,2±1,8 32 pico 3 10 µM 56,3±2,8 15,4±0,2 37 10 µM 56,9±8,8 16,3±4,0 33 pico 2 10 µM 66,6±4,0 26,9±0,4 37-R 10 µM 42,2±7,7 13,6±4,0 33 pico 1 10 µM 62,1±11,8 19,4±2,7 37-S 10 µM 50,1±16,8 11,1±3,0 33 pico 4 10 µM 48,3±1,0 13,6±1,1

[0440] Observação: a % de extensão responsiva é uma mé- dia±DP. DP: desvio padrão.

Claims (18)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I) , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na qual R1 é selecionado dentre: , e ; Y é selecionado dentre , , e ; RYA e RYB são independentemente selecionados dentre H, - S(=O)2NH(R2), -(C=O)NH(R2), -NH(C=O)OCH2(C=O)NH(R2), -CH2OH, -CH3 e -OH; RYC e RYD são independentemente selecionados dentre H, - CN, -OH, -(C=O)NH2 e -S(=O)2NH(R2); RYE e RYF são independentemente selecionados dentre H, - CN, -(C=O)NH(R2), -OH e -S(=O)2NH(R2); RYG é selecionado dentre H, -CN, -OH, -F, -(C=O)NH(R2) e -S(=O)2NH(R2); RYH é selecionado dentre -CH3, -(X1)-(C=O)NH(R2) e -(X1)- S(=O)2NH(R2); RYI é selecionado dentre -H e -(C=O)NH(R2); X1 é C0-2alquileno, opcionalmente substituído por -OH; R2 é independentemente selecionado dentre H, –CH3, - CH(CH3)CN, -CH2CH2CN,

e ;e W é O ou CH2; sendo que, quando R1 é:

; Y é diferente de:

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

ou

; quando R1 é:

; Y é diferente de:

,

,

,

,

,

,

ou ;e quando R1 é: ; Y é diferente de: .

2. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I) (I) , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na qual R1 é selecionado dentre: , e ; Y é selecionado dentre , , e ; RYA e RYB são independentemente selecionados dentre H, - S(=O)2NH(R2), -(C=O)NH(R2), -NH(C=O)OCH2(C=O)NH(R2), -CH2OH, -CH3 e -OH; RYC e RYD são independentemente selecionados dentre H, -

CN, -OH, -(C=O)NH2 e -S(=O)2NH(R2); RYE e RYF são independentemente selecionados dentre H, - CN, -(C=O)NH(R2), -OH e -S(=O)2NH(R2); RYG é selecionado dentre H, -CN, -OH, -F, -(C=O)NH(R2) e -S(=O)2NH(R2); RYH é selecionado dentre -CH3, -(X1)-(C=O)NH(R2) e -(X1)- S(=O)2NH(R2); RYI é selecionado dentre -H e -(C=O)NH(R2); X1 é C0-2alquileno, opcionalmente substituído por -OH; R2 é independentemente selecionado dentre H, –CH3, - CH(CH3)CN, -CH2CH2CN,

e ;e W é O ou CH2; sendo que o composto é diferente de:

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

, , , , , , ou .

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: RYG é selecionado dentre H, -CN, -OH, -F, -(C=O)NH2 e - S(=O)2NH2; RYH é selecionado dentre -CH3, -(X1)-(C=O)NH2 e -(X1)- S(=O)2NH2; RYI é selecionado dentre -H e -(C=O)NH2; X1 é C1-2alquileno, opcionalmente substituído por –OH.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica-

ções 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, carac- terizado pelo fato de que: R1 é .

5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, carac- terizado pelo fato de que: R1 é .

6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, carac- terizado pelo fato de que: R1 é .

7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, carac- terizado pelo fato de que Yé .

8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, carac- terizado pelo fato de que: Yé .

9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, carac- terizado pelo fato de que: Yé .

10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, carac- terizado pelo fato de que: Yé .

11. Composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracte- rizado pelo fato de que é selecionado dentre os seguintes: N-(5-((3S,4S)- 4-carbamoil-3-cianopiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-((3S,4R)-4-ciano-3-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-(N-(oxetan-3- il)sulfamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- (3-(N-(2-cianoetil)sulfamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; 2-(metilamino)-2-oxoetil(1-(5-(5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamido)pentil)azetidin-3-il)carbamato; N-(5-(3-sulfamoilpiperidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-sulfamoilpirrolidin- 1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3- carbamoilpirrolidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N- (5-(3-carbamoil-3-(hidroximetil)azetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-3-(hidroximetil)azetidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-3-metilazetidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-3- metilazetidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-

carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-(4-sulfamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol- 3-carboxamida; 5-(4-fluorofenil)-N-(5-(4-sulfamoilpiperidin-1- il)pentil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3R,4R)-4-ciano-3-hidroxipiperidin- 1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-(3-amino-3- oxopropil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- (4-(2-amino-2-oxoetil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-(4-(2-sulfamoiletil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-carbamoilpiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen- 2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-3-hidroxiazetidin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; 5-(5-fluorotiofen-2-il)-N-(5- (3-(metilcarbamoil)azetidin-1-il)pentil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3- carbamoilazetidin-1-il)pentil)-5-(5-fluorotiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-((1-cianoetil)carbamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-carbamoil-4-metilpiperazin-1- il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-carbamoil-4- hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; 5-(4- fluorofenil)-N-(5-(3-(((1S,2R)-2-hidroxiciclopentil)carbamoil)azetidin-1- il)pentil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3R,4S)-4-carbamoil-3- fluoropiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida, e N-(5- ((3S,4S)-4-carbamoil-3-fluoropiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-((3R,4S)-3-carbamoil-4-cianopiperidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-carbamoil-3-hidroxipiperidin- 1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(4-carbamoil-3- hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3S,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3S,4R)-3-carbamoil-4- hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3R,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4- fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3R,4R)-3-carbamoil-4-

hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3S,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-((3R,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-((3R,4R)-3-carbamoil-4- hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3S,4R)-3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3- carboxamida; N-(5-((3S,4R)-3-ciano-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5- (tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida, e N-(5-((3S,4S)-3-ciano-4- hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5- ((3R,4S)-3-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol- 3-carboxamida e N-(5-((3R,4R)-3-carbamoil-4-hidroxipiperidin-1-il)pentil)- 5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N-(5-(3-((4-hidroxitetra-hidrofuran- 3-il)carbamoil)azetidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2-il)isoxazol-3-carboxamida; N- (5-(4-(3-amino-2-hidróxi-3-oxopropil)piperazin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida.

12. Composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a N-(5-(3-carbamoil-4-hidroxipirrolidin-1-il)pentil)-5-(tiofen-2- il)isoxazol-3-carboxamida é selecionada dentre os seguintes: , , e .

13. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.

14. Combinação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, e um ou mais coagentes terapeuticamente ativos.

15. Combinação farmacêutica, de acordo com a reivindica- ção 14, caracterizada pelo fato de que o coagente é selecionado den- tre agentes ativos que regulam sinalização de incisão, sinalização de FGF, sinalização de Wnt, sinalização de Shh, envelhecimento de célu- la tronco/ciclo celular, miRNA e regulações epigenéticas.

16. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pe- lo fato de que é para fabricação de um medicamento para tratar perda auditiva ou um distúrbio de equilíbrio em um indivíduo que necessita do mesmo.

17. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12; (b) uma composição farmacêutica, como definida na reivin- dicação 13; ou (c) uma combinação farmacêutica, como definida na reivin- dicação 14 ou 15; e

(d) instruções para administração.

18. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concreti- zações ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria inici- almente revelada no pedido de patente ou em seus exemplos aqui apresentados.