BR112021002630A2

BR112021002630A2 - método para tratar câncer pancreático

Info

Publication number: BR112021002630A2
Application number: BR112021002630-4A
Authority: BR
Inventors: Marla L. Weetall; Liangxian Cao; Thomas W. Davis; Melissa Dumble; Jaime A. Eberle-Singh; Kenneth P. Olive
Original assignee: Ptc Therapeutics, Inc.; The Trustees Of Columbia University In The City Of New York
Priority date: 2018-08-17
Filing date: 2019-08-17
Publication date: 2021-05-11
Also published as: MX2021001870A; TW202021961A; AU2019340402A2; WO2020055544A3; EP3836932A2; US20210236492A1; CA3109386A1; WO2020055544A2; CN113164479A; IL280800A; AU2019340402A1; JP2021535198A

Abstract

A presente invenção refere-se a um método para tratar câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um composto inibidor de polimerização de tubulina. Mais particularmente, é descrito no presente documento um método para tratar adenocarcinoma ductal pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um composto inibidor de polimerização de tubulina de pirimidina reversa substituída por si só ou em combinação com outros agentes quimioterápicos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER PANCREÁTICO".

INTRODUÇÃO

[0001] É aqui descrito um método para tratar câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, que compreende admi- nistrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um composto inibidor de polimerização de tubulina. É aqui descrito, mais particularmente, um método para tratar adenocarcinoma ductal pancreático em um indiví- duo com necessidade do mesmo, que compreende administração ao indivíduo uma quantidade eficaz de um composto inibidor de polimeri- zação de tubulina de pirimidina reversa substituída por si só ou em combinação com outros agentes quimioterápicos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] Estima-se que 55.440 americanos serão diagnosticados com câncer pancreático em 2018, a quinta causa mais comum de mor- talidade relacionada ao câncer; prevê-se que esses números aumen- tem na próxima década. O adenocarcinoma ductal pancreático (PDA) é um câncer altamente quimioresistente responsável para mais de

45.000 mortes anualmente, sendo responsável por aproximadamente 93% dos tumores pancreáticos. Apesar de algum progresso mensurá- vel nos últimos anos, o PDA continua sendo um câncer amplamente intratável, com uma sobrevida média de menos de seis meses e uma taxa de sobrevida de 5 anos de apenas 8,7%.

[0003] Diversos fatores contribuem a este prognóstico ruim. À maioria dos pacientes (85%) apresenta doença avançada, impossibili- tando-os de uma intervenção eficaz: a ressecção cirúrgica. No entanto, mesmo entre aqueles com doença confinada localmente que fizeram ci- rurgia, as taxas de sobrevida de 5 e 10 anos são de apenas 25% e 8%, respectivamente, devido às altas taxas de recorrência (A. Richter et al., World J Surg 27, 324, março de 2003). Para os 85% restantes dos paci-

entes, assim como aqueles com doença recorrente, há poucos tratamen- tos disponíveis. A terapia padrão de tratamento nacional, gemcitabina, estende modestamente a sobrevida em algumas semanas, aprovada principalmente para melhorar os indicadores de qualidade de vida (H. A. Burris, 3rd et al., J Clin Oncol 15, 2403, junho de 1997). O único outro agente aprovado pela FDA para PDA avançado é o Tarceva, que fornece em média apenas 10 dias de benefício adicional quando combinado com a gemcitabina. Apesar de mais de 60 ensaios clínicos de diferentes agentes e combinações (H. Q. Xiong, K. Carr, J. L. Abbruzzese, Drugs 66, 1059, 2006), nenhuma outra terapia eficaz foi identificada.

[0004] Entre as características mais marcantes do PCA está a presença de um estroma desmoplásico expansivo que condiciona o microambiente local, gerando alta pressão do fluido intersticial, pouca vascularização e diminuição da perfusão e difusão do tecido. Conse- quentemente, a administração de drogas aos tumores pancreáticos é menos eficiente do que os tecidos normais, contribuindo para a ampla quimiorresistência primária que caracteriza essa doença. A ampla re- sistência do PDA à terapia citotóxica surge em parte dessa barreira biofísica à liberação do fármaco.

[0005] Testes pré-clínicos de agentes quimioterápicos no modelo de camundongo geneticamente modificado KPC (KrasLSL.G12D/+; p53R172H/+; PdxCretg/+) sugerem que os esforços de desenvolvi- mento de fármacos para PDA devem se concentrar em agentes com meia-vida longa e um grande índice terapêutico (a faixa de concentra- ções entre eficácia e toxicidade) como meio de melhorar a exposição ao fármaco. Também, a estabilidade da droga e a retenção dentro das células do tumor também devem ser consideradas no projeto de novos regimes para PDA.

[0006] Infelizmente, a maioria de agentes citotóxicos tradicionais são liberados rapidamente da circulação, são agudamente tóxicos aos tecidos de proliferação normais, são metabolizados rapidamente, ou são exportados ativamente a partir das células do tumor. Um contra- exemplo informativo é o nab-paclitaxel (Abraxane, Celgene), uma for- ma ligada à albumina do agente de estabilização de microtúbulos pa- clitaxel que é aprovado pela FDA em combinação com gemcitabina para pacientes com câncer pancreático metastático. Nab-paclitaxel tem uma meia-vida terminal de 27 horas na circulação e é menos tóxi- co do que paclitaxel não modificado. O sucesso desse regime ajudou a validar a importância da farmacologia no desenvolvimento de fármacos contra o câncer pancreático e demonstrou o benefício da combinação da gemcitabina (um análogo da desoxicitidina) com um agente direcio- nado aos microtúbulos.

[0007] Consequentemente, permanece uma necessidade de agen- tes quimioterápicos que superem a barreira biofísica do PDA para pro- duzir biodistribuição eficaz em tecidos tumorais, que tenham as propri- edades farmacodinâmicas necessárias e se combinem sinergicamente com outros agentes quimioterápicos para tratar o câncer pancreático.

SUMÁRIO

[0008] O composto 1 é um agente anticâncer de molécula peque- na, útil para inibir a polimerização da tubulina e a função da proteína BMI-1 (vide WO2014/081906), referido como 5-fluoro-2-(6-fluoro-2- metil-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-N4-[4-(trifluorometil)fenil]pirimidina-4,6- diamina, que tem a estrutura de Fórmula (1):

HAN F F e 2 k, F

SONAO

H AN Formula (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo.

[0009] O Composto 1 demonstrou propriedades farmacológicas, incluindo uma meia-vida de circulação longa e falta de atividade do substrato da glicoproteína P (PGP) e biodistribuição eficaz nos tecidos tumorais. Além disso, o Composto 1 mostrou induzir parada mitótica e apoptose em múltiplas linhagens celulares de PDA.

[0010] Por meio de estudos mecanísticos, sem limitação em relação a qualquer teoria específica, o Composto 1 demonstrou funcionar como um inibidor de polimerização de microtúbulos. Além disso, o composto 1 combina-se sinergicamente com regimes clínicos padrão tais como o um ou outro gemcitabina e nab-paclitaxel para melhorar a eficácia em mode- los de xenoenxerto derivados de paciente - (PDX) que rendem a regres- são potente e durável do câncer. Adicionalmente, o composto 1 demons- trou eficácia em combinação com a gemcitabina no modelo de camun- dongo KPC PDA geneticamente altamente quimioresistente.

[0011] Estes dados e um perfil de segurança demonstrado como um agente anticâncer no desenvolvimento clínico demonstram a justi- ficativa clara para o desenvolvimento do Composto 1 em combinação com a quimioterapia do tratamento padrão para PDA.

DESCRIÇÃO

[0012] Um aspecto aqui descrito inclui um método para tratar cân- cer pancreático em um indivíduo com necessidade, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do Composto 1, 5- fluoro-2-(6-fluoro-2-metil-1H-benzo[d]imidazol|-1-il)-N4-[4-(trifluorometil) fenil]pirimidina-4,6-diamina, que tem a estrutura de Fórmula (1): ef : Fm F

DONO

OS dA Formula (|), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo.

[0013] Outro aspecto inclui um método para tratar adenocarcinoma ducal pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, que compreende, administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do Com- posto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farma- cêutica do mesmo.

[0014] Um aspecto aqui descrito inclui um método para tratar cân- cer pancreático em um indivíduo com necessidade, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo em combinação com uma quantidade eficaz de um ou mais agentes quimioterápicos.

[0015] Outro aspecto inclui um método para o tratamento de ade- nocarcinoma ducal pancreático em um indivíduo com necessidade, que compreende, administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo em combinação com uma quantidade eficaz de um ou mais agentes quimioterápicos.

[0016] Um aspecto aqui descrito inclui um método para tratar ade- nocarcinoma ductal pancreático em um indivíduo com necessidade, que compreende, administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo em combinação com uma quantidade eficaz de um ou ambos gemcitabina e nab-paclitaxel.

[0017] Outro aspecto inclui um método para tratamento adenocar- cinoma ducal pancreático em um indivíduo com necessidade, que compreende, administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do Com- posto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farma- cêutica do mesmo em combinação com uma quantidade eficaz de um ou ambos gemcitabina e nab-paclitaxel.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0018] A Figura 1a é um gráfico da viabilidade relativa das células Aspc1 ao longo do tempo após o tratamento com veículo ou Composto 1 (0,1 uM ou 1,0 uM). Os resultados mostram em relação ao veículo que o Composto 1 demonstra uma diminuição dependente da dose e do tempo na viabilidade das células PDA humanas.

[0019] A Figura 1b representa histogramas representativos de teor de DNA, medido por citometria de fluxo para fluorescência 7-AAD, de células Aspc1 tratadas com veículo ou Composto 1 (0,1 uM ou 1,0 uM).

[0020] A Figura 1c é um gráfico da porcentagem de células Aspc1 na fase GO0/G1, fase S e fase G2/M após 24 horas após o tratamento com veículo (DMSO), Composto 1 (0,1 uM, 1,0 uM), ou Nocodazol 0,1 UM (NOC, controle positivo).

[0021] A Figura 1d é uma plotagem da porcentagem de células Aspc1 em mitose (teor de DNA PH3*/4N) após o tratamento por 24 horas com DMSO, Composto 1 (0,1 uM ou 1,0 uM) ou nocodazol a 0,1 UM (NOC). As Figuras 1b, 1c e 1d mostram que o Composto 1 de- monstra um efeito dependente da dose e do tempo na parada do ciclo celular em células de PDA humanas.

[0022] A Figura 2a representa histogramas representativos do teor de DNA medido por fluorescência DAPI em células Aspc1 tratadas com veículo ou Composto 1 (1,0 uM) em pontos de tempo de 24 ho- ras, 48 horas e 72 horas.

[0023] A Figura 2b é um gráfico da porcentagem de células Aspc1 com teor de DNA > 4N após o tratamento com DMSO ou Composto 1 (0,1 UM ou 1,0 uM) em pontos de tempo de 24 horas, 48 horas, 72 ho- ras. As Figuras 2a e 2b mostram que o Composto 1 demonstra um aumento dependente da dose e do tempo na quantidade de células de PDA humanas afetadas pela poliploidia.

[0024] A Figura 3a representa gráficos de dispersão de citometria de fluxo representativos que mostram a indução de apoptose em célu- las Aspc1 após tratamento com DMSO por 24 horas, ou Composto 1 1,0 UuM em 72 horas. As células não fixadas foram coradas para cas- pase 3 ativa e DAPI para distinguir células viáveis (parte inferior es- querda) da apoptose precoce (parte superior esquerda), apoptose tar- dia (parte superior direita) e necrose (parte inferior direita).

[0025] A Figura 3b é um gráfico de células apoptóticas Aspc1 to- tais (caspase 3* ativa) quantificadas para DMSO ou Composto em pontos de tempo de 24 horas, 48 horas e 72 horas. As Figuras 3a e 3b mostram em relação ao veículo que o Composto 1 demonstra um au- mento dependente do tempo nos biomarcadores celulares que indicam um aumento correspondente na apoptose celular.

[0026] A Figura 4a é um gráfico dos níveis plasmáticos do Com- posto 1 em camundongos medidos por espectrometria de massa na linha de base, ou 2, 4, 7, 24 ou 48 horas após uma dose oral única do Composto 1 (10 mg/kg). A Figura 4a demonstra que o Composto 1 tem uma meia-vida plasmática longa e penetra no SNC e se distribui nos tecidos cerebrais.

[0027] A Figura 4b é uma plotagem da razão dos valores de CCs5o para o tratamento de células MDCK-P-gp versus MDCK-WT com Composto 1, Composto 2, clorpromazina, puromicina, vinblastina, do- xorrubicina, paclitaxel e vincristina. A Figura 4b mostra que, em com- paração com outros agentes quimioterápicos que causam a interrup- ção do ciclo celular, o Composto 1, o Composto 2 e a clorpromazina não funcionam como um substrato de PGP.

[0028] A Figura 5a é uma plotagem das concentrações do Com- posto 1 no plasma, quadríceps e tecidos PDA dos camundongos KPC, 24 horas após uma dose oral única do Composto 1 (10 mg/kg), sozi- nho ou em combinação com gemcitabina (100 mg/kg). A Figura 5a mostra que a eficácia melhorada da combinação não é devido a uma interação fármaco-fármaco farmacocinética.

[0029] A Figura 5b é um western blot para CYCLIN B1 em tumores de camundongos KPC tratados com 10 mg/kg do Composto 1. Amos- tras de biópsia tumoral (Bx) foram adquiridas 48 horas antes da primei- ra dose e comparadas com amostras adquiridas na necropsia (Nx) 24 horas após a terceira dose.

[0030] A Figura 5c é um gráfico que quantifica CYCLIN B1 (CycB1) da Figura 5b, normalizada para VINCULIN (Vinc). A Figura 5a mostra que o Composto 1 se distribui em tecidos PDA; e, as Figuras 5b e 5c mostram que o Composto 1 demonstra redução consistente na Ciclina B1 em relação à Vinculina, sugerindo uma diminuição na pro- gressão mitótica das células PDA induzida pela redução na Ciclina B1 em relação à apoptose induzida pela Vinculina.

[0031] A Figura 6a é uma plotagem dos pesos corporais ao longo do tempo de camundongos KPC tratados com uma combinação do Composto 1 e gemcitabina.

[0032] A Figura 6b é uma plotagem de sobrevida ao longo do tem- po de camundongos KPC tratados com veículo (VEH), gemcitabina (GEM, 100 mg/kg duas vezes por semana), Composto 1 (Cpd 1, 17 mg/kg duas vezes por semana) ou uma combinação do Composto 1 e gemcitabina (Cpd/GEM).

[0033] A Figura 6c é uma plotagem dos cálculos da taxa de cres- cimento tumoral calculada a partir dos volumes tumorais longitudinais em camundongos KPC tratados com veículo (VEH), gemcitabina (GEM), Composto 1 (Cpd 1) ou uma combinação de Composto 1 e gemcitabina (Cpd/GEM).

[0034] A Figura 6d é uma plotagem da quantificação de imuno- histoquímica para células de Histona H3 (PH3) fosforiladas mostrando células positivas médias por campo de 40X em 10 campos por tumor após necropsia em camundongos KPC tratados com veículo (VEH), gemcitabina (GEM), Composto 1 (Cpd 1), ou uma combinação de Composto 1 e gemcitabina (Cpd/GEM).

[0035] A Figura 6e é uma plotagem da quantificação de imuno- histoquímica para células Caspase-3 clivadas fosforiladas (CC3) mos- trando células positivas médias por campo de 40X sobre 10 campos por tumor seguintes à necropsia em camundongos KPC tratados com veículo (VEH), gemcitabina (GEM), Composto 1 (Cpd 1), ou uma com- binação de Composto 1 e gemcitabina (Cpd 1/GEM). As Figuras 6a, 6b, 6c, 6d, e 6e mostram que o Composto 1 em combinação com gemcitabina sinergicamente aumenta a sobrevida geral no modelo de camundongo KPC; em que, a Figura 6a mostra que o Composto 1 em combinação com gemcitabina mantém o peso corporal relativo do ca- mundongo KPC; a Figura 6b mostra em relação ao veículo, gemcitabi- na por si só ou Composto 1 por si só, que o Composto 1 em combina- ção com gemcitabina diminui simultaneamente o volume do tumor en- quanto aumenta sinergicamente a sobrevida geral em relação a cada agente por si só; as Figuras 6c, 6d e 6e mostram em relação ao veícu- lo, gemcitabina por si só ou Composto 1 por si só, que o Composto 1 em combinação com gemcitabina demonstra uma redução geral na taxa de crescimento de células PDA e certos biomarcadores celulares.

[0036] A Figura 7a é uma plotagem dos volumes tumorais medidos por ultrassom 3D de alta resolução para camundongos KPC tratados com veículo (veh) ou Composto 1 (Cpd 1).

[0037] A Figura 7b é uma plotagem dos volumes tumorais medidos por ultrassom 3D de alta resolução para camundongos KPC tratados com veículo (veh) ou uma combinação do Composto 1 e gemcitabina (Cpd 1/gem). A Figura 7a mostra em relação ao veículo que o Com- posto 1 demonstra uma diminuição dependente do tempo no volume tumoral de PDA do modelo de camundongo KPC; e, a Figura 7b mos-

tra, em relação à gemcitabina por si só ou Composto 1 por si só, que o Composto 1 em combinação com gemcitabina demonstra uma dimi- nuição dependente do tempo aditiva no volume tumoral de PDA do camundongo KPC.

[0038] A Figura 8a é um gráfico do crescimento tumoral medido por alteração do volume percentual ao longo de 7 dias em camundon- gos KPC tratados com veículo (VEH), Composto 1 (Cpd 1), gemcitabi- na (GEM), ou uma combinação do Composto 1 and gemcitabina (Cpd 1/GEM).

[0039] A Figura 8b é uma plotagem do percentual de camundon- gos que tem metástase no fígado em camundongos KPC tratados com veículo (V), Composto 1 (Cpd 1+V), gemcitabina (G), ou uma combi- nação do Composto 1 e gemcitabina (Cpd 1+G). A figure 8a mostra em relação ao veículo, gemcitabina por si só ou Composto 1 por si só, que o Composto 1 em combinação com gemcitabina demonstra uma redução no crescimento tumoral PDA do camundongo KPC e, a Figura 8b mostra, em relação ao veículo e gemcitabina por si só, que o Com- posto 1 em combinação com gemcitabina demonstra uma redução na metástase do fígado acionada por PDA em camundongos KPC.

[0040] A Figura 9a é uma seção do tumor corada a partir de ca- mundongos KPC tratados com gemcitabina (GEM).

[0041] A Figura 9a é uma imagem de uma seção do tumor corada a partir de camundongos KPC tratados com a combinação do Com- posto 1 e gemcitabina (Cpd 1/GEM). A figure 9a mostra a população de célula apoptótica induzida por gemcitabina; e, a Figura 9b mostra a população de célula apoptótica induzida pelo Composto 1 em combi- nação com gemcitabina; em que o Composto 1 em combinação com gemcitabina demonstra uma população de célula apoptótica marca- damente aumentada, sugerindo um aumento sinergético na indução apoptótica.

[0042] A Figura 10a é uma série de western blots mostrando níveis de IMC-1 em células Aspc1, MiaPaCa-2, e PANC1 tratadas por 24 ho- ras com veículo (VEH), nocodazol a 0,1 uM (NOC), Composto 1 a 0,1 UM (0,1), ou Composto 1 (1,0) a 1,0 uM em relação ao controle de car- regamento de vinculina (VINC). A Figura 10a mostra em relação ao veículo e expressão de Vinculina que o Composto 1 demonstra uma redução consistente na expressão da proteína BMI-1 em vários tipos de células.

[0043] A Figura 10b é um gráfico da viabilidade relativa das células J1002VEH e J1002TAM tratadas com veículo (VEH), Composto 1 a 0,1 UM (Composto 1), ou Composto 1 a 1,0 uM (Comp 1) ao longo de 96 horas. A Figura 10b mostra em relação ao veículo e à presença de J1002 que o Composto 1 demonstra uma diminuição dependente da dose e do tempo na viabilidade das células dependentes da expressão da proteína BMI-1.

[0044] A Figura 10c é um gráfico de curvas de resposta de dose para células J1002VEH e J1002TAM tratadas com Composto 1 duran- te 72 horas. A Figura 10c mostra em relação às células tratadas com o veículo que o Composto 1 demonstra atividade sub-UuM para redução na expressão da proteína IMC-1 na presença de J1002.

[0045] A Figura 10d representa histogramas de DNA representati- vos para células J1002VEH tratadas por 24 horas com veículo (VEH) ou Composto 1 a 1,0 uM (Cpd 1).

[0046] A Figura 10e é um gráfico da porcentagem de células J1002VEH na fase G0/G1, fase S, e fase G2/M após 24 horas após o tratamento com veículo (VEH) ou Composto 1 a 1,0 uM (Cpd 1).

[0047] A Figura 10f representa histogramas de DNA representati- vos para Células J1002TAM tratadas por 24 horas com veículo (VEH) ou Composto 1 a 1,0 uM (Cpd 1).

[0048] A Figura 109 é um gráfico da porcentagem de células

J1002TAM na fase G0/G1, fase S, e fase G2/M, após 24 horas de tra- tamento com veículo (VEH) ou Composto 1 a 1,0 uM (Cpd 1). As Figu- ras 10d, 10e, 10f, e 10g mostram em relação ao veículo e à presença de J1002 que o Composto 1 demonstra um aumento dependente da dose e do tempo na quantidade de células dependentes BMI-1 afeta- das por poliploidia; em que, os dados tomados como um todo sugerem que o Composto 1 induz a hiperfosforilação de IMC-1 indiretamente como um resultado da parada mitótica.

[0049] A Figura 11a é uma plotagem de genes expressos diferen- cialmente medidos por RNA-seq em células Aspc1 tratadas com DMSO ou Composto 1 a 1 uM (Cpd 1), integradas ao longo dos pontos de tempo de 8, 16, e 24 horas.

[0050] A Figura 11b é um western blot mostrando tubulina livre a partir de células Aspc1 tratadas com veículo (VEH), Composto 1 a 3,0 UM (Cpd 1), colchicina a 1,0 uM (COL) ou paclitaxel a 1,0 uM (TAX) por 2 horas. Após o tratamento, lisados celulares foram fracionados por centrifugação para separar a tubulina livre dos microtúbulos. LSP = Pélete de Baixa Velocidade (1.000 x g, 5 min), HSP = Pélete de Alta Velocidade (100.000 x g, 1 hora), HSS = Sobrenadante de Alta Veloci- dade (100.000 x g, 1 hora). As Figuras 11a e 11b mostram em relação ao veículo, COL (carboplatina) e TAX (tamoxifeno) que o Composto 1 demonstra um aumento significativa de mudança de vezes na preven- ção da formação de tubulina.

[0051] A Figura 11c é uma imagem de tubulina e DAPI em células Aspc1 tratadas com veículo (VEH) por 24 horas.

[0052] A Figura 11d é uma imagem de tubulina e DAPI em células Aspc1 tratadas com Composto 1 (Cpd 1) por 24 horas. As Figuras 11c e 11d mostram em relação ao veículo que o Composto 1 demonstra uma redução significativa na formação de tubulina.

[0053] A Figura 11e é um gráfico do ensaio de polimerização de tubulina ao longo do tempo para células tratadas com veículo (DMS), tamoxifeno (TAX), carboplatina (COL) e Composto 1 (0,12 UM, 0,37 UM, 1,11 uM, 3,33 UM, e 10 UM).

[0054] A Figura 11f é um gráfico de unidades de fluorescên- cia/minuto representado na Figura 11e. As Figuras 11e e 11f mostram em relação ao veículo, COL (carboplatina) e TAX (tamoxifeno) que o Composto 1 demonstra uma diminuição dependente da dose na poli- merização de tubulina; em que, os dados tomados como um todo su- gerem que o Composto 1 inibe diretamente a formação de microtúbu- los.

[0055] A Figura 12a é um gráfico de volumes tumorais médios ao longo do tempo de xenoenxertos derivados de pacientes subcutâneos derivados de um PDA humano tratado com veículo (veh), gemcitabina (gem), nab-paclitaxel (nabP), uma combinação de gemcitabina e nab- paclitaxel (gm/nabP), Composto 1 (Cpd 1), uma combinação de Com- posto 1 e gemcitabina (Cpd 1/gem), uma combinação do Composto 1 e nab-paclitaxel (Cpd 1/nabP), e uma combinação do Composto 1, gemcitabina e nab-paclitaxel (Cpd 1/gem/nabP).

[0056] A Figura 12b é um gráfico do peso corporal ao longo do tempo de camundongos tratados com veículo (veh), gemcitabina (gem), nab-paclitaxel (nabP), uma combinação de gemcitabina e nab- paclitaxel (gm/NABP), Composto 1 (Cpd 1), uma combinação do Com- posto 1 e gemcitabina (Cpd 1/gem), uma combinação do Composto 1 e nab-paclitaxel (Cpd 1/nabP), e uma combinação do Composto 1, gemcitabina e nab-paclitaxel (Cpd 1/gem/nabP).

[0057] A Figura 12c representa as constantes de crescimento e decaimento para tumores tratados com gemcitabina (gem), nab-pacli- taxel (nabP) e Composto 1 (Cpd 1).

[0058] A Figura 12d é uma plotagem da resposta tumoral de cada camundongo tratado com o veículo (veh), gemcitabina (gem), nab-

paclitaxel (nabP), uma combinação de gemcitabina e nab-paclitaxel (gm/nabP), Composto 1 (Cpd 1), uma combinação do Composto 1 e gemcitabina (Cpd 1/gem), uma combinação do Composto 1 e nab- paclitaxel (Cpd 1/nabP), e uma combinação do Composto 1, gemcita- bina, e nab-paclitaxel (Cpd 1/gem/nabP). As Figuras 12a, 12b, 12c, e 12d mostram que o Composto 1 em uma ou ambas combinação dupla com nab-paclitaxel e combinação tripla com gemcitabina e nab- paclitaxel diminui sinergicamente o volume do tumor e o crescimento tumoral total em um modelo de xenoenxerto derivado de humanos de PDA; em que, a Figura 12a mostra em relação ao veículo, gemcitabina por si só, Composto 1 por si só, nab-paclitaxel por si só, gemcitabina em combinação com nab-paclitaxel e gemcitabina em combinação com Composto 1 que o Composto 1 em um ou ambas combinação dupla com nab-paclitaxel e combinação tripla com gemcitabina e nab- paclitaxel diminui sinergicamente o volume do tumor; a figure 12b mos- tra em relação ao veículo, gemcitabina por si só, Composto 1 por si só, nab-paclitaxel por si só, gemcitabina em combinação com nab- paclitaxel e gemcitabina em combinação com o Composto 1, Compos- to 1 em combinação com nab-paclitaxel e Composto 1 em combinação tanto com gemcitabina quanto com nab-paclitaxel que todas as combi- nações sinergicamente mantém o peso corporal do camundongo KPC relativo; a Figura 12c mostra em relação à presença ou ausência de qualquer um dentre gemcitabina, Composto 1 e nab-paclitaxel que o Composto 1 em combinação com um ou ambos gemrcitabina e nab- paclitaxel diminui significativamente a taxa total de crescimento tumo- ral enquanto aumenta a taxa de decaimento do volume do tumor; e, a figure 12d mostra em relação à presença ou ausência de qualquer um dentre gemcitabina, Composto 1 e nab-paclitaxel que o Composto 1 em combinação com um ou ambos gemcitabina e nab-paclitaxel dimi- nui significativamente o volume inicial do tumor.

DEFINIÇÕES

[0059] Conforme usado neste documento, o termo "cerca de" sig- nifica uma faixa em torno de um determinado valor em que o valor re- sultante é substancialmente o mesmo que o valor expressamente reci- tado. Em um aspecto, "cerca de" significa dentro de 25% de um dado valor ou faixa. Por exemplo, a frase "cerca de 70% em peso" compre- ende pelo menos todos os valores de 52% a 88% em peso. Em outro aspecto, o termo "cerca de" significa dentro de 10% de um dado valor ou faixa. Por exemplo, a frase "cerca de 70% em peso" compreende pelo menos todos os valores de 63% a 77% em peso. Em outro aspec- to, o termo "cerca de" significa dentro de 7% de um dado valor ou fai- xa. Por exemplo, a frase "cerca de 70% em peso" compreende pelo menos todos os valores de 65% a 75% em peso.

[0060] Concentrações, quantidades, contagens de células, porcen- tagens e outros valores numéricos podem ser apresentados neste do- cumento em um formato de faixa. Deve ser entendido que esse forma- to de faixa é usado meramente para conveniência e brevidade e deve ser interpretado de forma flexível para incluir não apenas os valores numéricos explicitamente citados como os limites da faixa, mas tam- bém para incluir todos os valores numéricos individuais ou subfaixas englobadas dentro dessa faixa, como se cada valor numérico e subfai- xas fosse explicitamente recitado.

[0061] Como usado neste documento, os termos "terapias" e "te- rapia" podem referir-se a qualquer protocolo(s), modo(s), composi- ções, formulações, e/ou agente(s) que pode ser usado na prevenção, tratamento, gestão ou melhoria de uma condição ou distúrbio ou um ou mais sintomas dos mesmos (por exemplo, câncer pancreático ou um ou mais sintomas ou uma ou mais condições associadas ao mes- mo).

[0062] Em certos aspectos, os termos "terapias" e "terapia" refe-

rem-se à terapia medicamentosa, como quimioterapia, terapia adju- vante, radiação, cirurgia, terapia biológica, terapia de suporte, terapia antiviral e/ou outras terapias úteis no tratamento, gerenciamento, pre- venção ou melhoria de uma condição ou distúrbio ou um ou mais sin- tomas dos mesmos (por exemplo, câncer pancreático ou um ou mais sintomas ou uma ou mais condições associadas ao mesmo). Em cer- tos aspectos, o termo "terapia" refere-se a uma terapia diferente do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo. Em aspectos específicos, uma "terapia adici- onal" e "terapias adicionais" referem-se a uma terapia diferente de um tratamento usando o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente acei- tável ou composição farmacêutica do mesmo. Em um aspecto especí- fico, uma terapia inclui o uso do Composto 1 como uma terapia adju- vante. Por exemplo, o uso do Composto 1 em conjunto com uma tera- pia medicamentosa, como quimioterapia, terapia biológica, cirurgia, terapia de suporte, terapia antiviral e/ou outras terapias úteis no trata- mento, gerenciamento, prevenção, ou melhoria de uma condição ou distúrbio ou um ou mais de seus sintomas (por exemplo, câncer pan- creático ou um ou mais sintomas ou uma ou mais condições associa- das ao mesmo).

[0063] Como usado no presente documento, o termo "humano be- bê" refere-se a um ser humano recém-nascido até 1 ano de idade.

[0064] Como usado no presente documento, o termo "humano cri- ança pequena" refere-se a um ser humano de 1 ano a 3 anos de ida- de.

[0065] Como usado no presente documento, o termo "humano cri- ança" refere-se a um ser humano que tem de 1 ano a 18 de anos de idade.

[0066] Como usado no presente documento, o termo "humano adulto" refere-se a um ser humano que tem 18 anos ou mais.

[0067] Como usado no presente documento, o termo "humano de meia-idade" refere-se a um ser humano entre as idades de 30 e 64.

[0068] Como usado no presente documento, o termo "humano idoso" refere-se a um ser humano de 65 anos ou mais.

[0069] Como usado no presente documento, o termo "indivíduo" refere-se a um indivíduo ao qual uma terapia conforme descrito neste documento é administrada. Em um aspecto específico, o indivíduo é um ser humano.

[0070] Como usado no presente documento, o termo "câncer pan- creático" refere-se ao câncer pancreático em geral como descrito aqui. Em um aspecto específico, o termo geral câncer pancreático pode se referir a um adenocarcinoma ductal pancreático (PDA) sem usar espe- cificamente o termo.

[0071] Como usado no presente documento, o termo "quantidade eficaz" no contexto de administração do Composto 1 a um indivíduo que tem um câncer pancreático refere-se à dose do Composto 1 que resulta em um efeito benéfico ou terapêutico. Em aspectos especiífi- cos, uma "quantidade eficaz" do Composto 1 refere-se a uma quanti- dade do Composto 1 que é suficiente para conseguir pelo menos um, dois, três, quatro ou mais dos efeitos benéficos ou terapêuticos a se- guir: (i) inibição de um câncer pancreático; (ii) regressão do câncer pancreático; (ili) erradicação, remoção, ou completa remissão do cân- cer pancreático; (iv) prevenção do desenvolvimento ou aparecimento de um ou mais sintomas associados ao câncer pancreático; (v) redu- ção ou melhoria da gravidade de um ou mais sintomas associados ao câncer pancreático; (vi) redução no número de um ou mais sintomas associados ao câncer pancreático; (vii) melhoria da gravidade de um ou mais sintomas associados ao câncer pancreático; (viii) redução na duração de um ou mais sintomas associados ao câncer pancreático; (ix) prevenção da recorrência de proliferação ou um ou mais sintomas associados ao câncer pancreático; (x) uma redução na mortalidade; (xi) um aumento na taxa de sobrevida dos indivíduos; (xii) um aumento na sobrevida livre de recidiva; (xiii) um aumento no número de indiví- duos com câncer pancreático em remissão; (xiv) redução na hospitali- zação de um indivíduo; (xv) redução do tempo de internação; (xvi) uma diminuição na taxa de hospitalização; (xvii) um aumento na sobrevida de um indivíduo; (xviii) um aumento na sobrevida livre de sintomas de um indivíduo com câncer pancreático; (xix) um aumento no compri- mento de um período de remissão de um câncer pancreático em um indivíduo; (xx) melhoria na qualidade de vida (QOL) como avaliado por métodos bem conhecidos na técnica, por exemplo, questionários de QOL e similares; (xxi) uma redução na proliferação da administração do Composto 1 antes do tratamento com outro agente quimioterápico; (xxii) uma redução na proliferação da administração do Composto 1 após o tratamento com outro agente quimioterápico; (xxiii) uma redu- ção na proliferação em uma terapia de combinação a partir da admi- nistração do Composto 1 com outro agente quimioterápico; (xxiv) um efeito antiproliferativo aditivo em uma terapia de combinação da admi- nistração do Composto 1 com outro agente quimioterápico; (xxv) um efeito antiproliferativo sinérgico em uma terapia de combinação a partir da administração do Composto 1 com outro agente quimioterápico; (xxvi) uma redução na proliferação da administração do Composto 1 antes da terapia com radiação; (xxvii) uma redução na proliferação da administração do Composto 1 após a terapia com radiação; (xxviii) uma redução na proliferação da administração do Composto 1 em uma terapia de combinação com radiação; (xxix) uma redução na prolifera- ção da administração do Composto 1 antes do tratamento com cirur- gia; ox) uma redução na proliferação da administração do Composto 1 em um tratamento de combinação com cirurgia; (xxxi) intensificação ou melhoria do efeito terapêutico da administração do Composto 1 com uma terapia paliativa; (xxxii) uma diminuição na concentração plasmática de IMC-1 em um indivíduo que tem um câncer pancreático; ECoxiii) uma diminuição na circulação de células proliferativas no plas- ma de um indivíduo que tem um câncer pancreático; (xxxiv) uma alte- ração (por exemplo, uma redução ou aumento) na concentração plas- mática de um biomarcador de câncer pancreático em um indivíduo que tem um câncer pancreático (por exemplo, BMI-1, tubulina de polimeri- zação, marcadores apoptóticos ou tecido e similares); poxv) redução na concentração de BMI-1 em um espécime biológico (por exemplo, plasma, soro, urina, ou quaisquer outros fluidos biológicos) a partir de um indivíduo que tem um câncer pancreático; (xxxvi) contagem de cé- lula proliferativa é mantida após a administração de uma terapia como descrito aqui como medido por métodos convencionais disponíveis pa- ra uma pessoa versada na técnica, como imageamento por ressonân- cia magnético (MRI), MRI aprimorado por contraste dinâmico (DCE- MRI), raio X, exame de tomografia computadorizada (CT), exame de tomografia por emissão de pósitrons (PET), fluorescência 7-AAD ou fluorescência DAPI; (oxvii) contagem de célula proliferativa é reduzida após administração de uma terapia como descrito aqui como medido por métodos convencionais disponíveis para uma pessoa versada na técnica, como imageamento por ressonância magnético (MRI), MRI aprimorado por contraste dinâmico (DCE-MRI), raio X, exame de to- mografia computadorizada (CT) ou um exame de tomografia por emis- são de pósitrons (PET), fluorescência 7-AAD ou fluorescência DAPI OU, (xxxviii) a contagem de células proliferativas não aumenta ou au- menta menos do que o esperado após a administração de uma tera- pia, conforme descrito neste documento, conforme medido por méto- dos convencionais disponíveis para uma pessoa versada na técnica, como imageamento por ressonância magnético (MRI), MRI aprimorado por contraste dinâmico (DCE-MRI), raio X, exame de tomografia com-

putadorizada (CT) ou um exame de tomografia por emissão de pósi- trons (PET), fluorescência 7-AAD ou fluorescência DAPI.

[0072] Como usado no presente documento, o termo "em um pe- ríodo de 24 horas" refere-se a um período de tempo durante o qual uma condição é mantida; por exemplo, a quantidade eficaz do Com- posto 1 é identificada quando a concentração plasmática média do Composto 1 é alcançada e mantida por uma pluralidade de períodos de 24 horas. Em outras palavras, a concentração plasmática média do Composto 1 pode ser alcançada em um tempo adequado, que pode ser mais ou menos do que 24 horas.

[0073] Como usado no presente documento, o termo "uma terapia como descrita no presente documento" refere-se a um método de uso para o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou compo- sição farmacêutica do mesmo como um inibidor da função de BMI-1 pelo direcionamento da inibição da polimerização de tubulina no trata- mento ou melhoria de um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo que compreende, administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do Composto 1.

[0074] Em um aspecto, o câncer pancreático é um adenocarcino- ma ductal pancreático. Em um outro aspecto da terapia descrita no presente documento, o método de uso para o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo compreende uma combinação com outros agentes quimioterápicos que tem atividade sinérgica antiproliferativa. Em um aspecto, o outro agente quimioterápico inibe a atividade funcional do BMI-1. Em outro aspecto, o outro agente quimioterápico inibe a polimerização de tubuli- na.

[0075] Como usado no presente documento, o termo "sal farma- ceuticamente aceitável (sais farmaceuticamente aceitáveis)" refere-se a um sal preparado a partir de um ácido ou base não tóxico farmaceu-

ticamente aceitável, incluindo um ácido e base inorgânicos e um ácido e base orgânicos; vide, por exemplo, Remington Pharmaceutical Sci- ences, 18º ed., Mack Publishing, Easton PA (1990) ou Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19º ed., Mack Publishing, Easton PA (1995).

[0076] Como usado no presente documento, o termo "Composto 1" geralmente refere-se a um composto de 5-fluoro-2-(6-fluoro-2-metil- 1H-benzo[d]imidazol|-1-il)-N4-[4-(trifluorometil)fenil]pirimidina-4,6- diamina e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. O "composto 1" pode ser substancialmente puro (por exemplo, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 99,9% puro). Em vários aspectos, o termo "Composto 1" refere-se ao Composto 109 descrito na Publicação Internacional Nº. WO2014/081906, que é incorporada em sua totalidade a título de referência no presente documento.

MÉTODO DE USO

[0077] Como demonstrado aqui, o Composto 1 ou um sal farma- ceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo é um inibidor de polimerização da tubulina e de função BMI-1 para uso no tratamento ou melhoria de um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente acei- tável ou composição farmacêutica do mesmo.

[0078] Em um aspecto, o câncer pancreático é um adenocarcino- ma ductal pancreático.

[0079] Em outro aspecto, o método de uso para o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo compreende, uma combinação do Composto 1 ou um sal far- maceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo com um ou mais outros agentes quimioterápicos, em que a combina- ção demonstra atividade antiproliferativo sinérgica. Em um aspecto, o outro agente quimioterápico inibe a atividade funcional do BMI-1. Em outro aspecto, o outro agente quimioterápico inibe a polimerização da tubulina. No entanto, não existem inibidores conhecidos ou aprovados de qualquer um ou ambos da atividade funcional do BMI-1 ou polimeri- zação da tubulina para uso no tratamento de cânceres pancreáticos. Consequentemente, a atividade potente e seletiva, as propriedades farmacêuticas favoráveis e a extensa experiência clínica sugerem que o Composto 1 é um agente útil para o tratamento de um câncer pan- creático.

[0080] Em um aspecto, os métodos para inibir ou reduzir a polime- rização da tubulina e a função de BMI-1 para induzir a parada do ciclo celular em uma célula ou linhagem celular em proliferação são descri- tos neste documento.

[0081] Em outro aspecto, um método para inibir ou reduzir a poli- merização da tubulina e a função do BMI-1 para induzir a parada do ciclo celular em uma célula ou linhagem celular em proliferação com- preende o contato do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente acei- tável ou composição farmacêutica do mesmo com uma célula ou li- nhagem celular em proliferação, cuja célula ou linhagem celular em proliferação pode ser virgem de tratamento ou mostrou ser afetada pe- la inibição ou redução da polimerização de tubulina e função do BMI-1.

[0082] Em outro aspecto, exemplos não limitantes dessas células ou linhagens celulares são selecionados a partir de células HL60, He- La, HT1080, HCT116, HEK293, NCI H460, U87MG, ASPC-1, PL-45, HPAF2, PC3, MDA-MB-231, MDA-MB-468, A431, SNU-1, AGS, Kato Ill, A5S49, Calu-6, A375, SY5Y, SKOV3, Capan-1, sNF96.2, TIVE-L1, TIVE-L2, LNCaP e similares. Em um aspecto mais específico, a célula ou linhagem celular pode ser uma célula de câncer pancreático.

[0083] Em um aspecto, um método para inibir ou reduzir a polime- rização da tubulina e a função do BMI-1 em um indivíduo com câncer pancreático com necessidade do mesmo compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente acei- tável ou composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, conforme descrito no presente documento.

[0084] Em um aspecto específico, o indivíduo é diagnosticado com um câncer pancreático capaz de ser tratado pela inibição ou redução da polimerização da tubulina e função do BMI-1.

[0085] Em um aspecto específico, um método para inibir ou reduzir a polimerização da tubulina e a função do BMI-1, conforme descrito no presente documento, inibe ou reduz a polimerização da tubulina e a função do BMI-1 em cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 100% em relação à polimerização da tubulina e função do IMC-1 antes da admi- nistração do Composto 1 ao indivíduo, conforme avaliado por métodos bem conhecidos na técnica.

[0086] Em um aspecto específico, um método para inibir ou reduzir a polimerização da tubulina e a função do BMI-1, conforme descrito no presente documento, inibe ou reduz a polimerização da tubulina e a função do BMI-1 em uma faixa de cerca de 5% a cerca de 20%, 10% 30%, 15% a 40%, 15% a 50%, 20% a 30%, 20% a 40%, 20% a 50%, 30% a 60%, 30% a 70%, 30% a 80%, 30% a 90%, 30% a 95%, 30% a 99%, ou de cerca de 40% a cerca de 100%, ou qualquer faixa entre eles, em relação à polimerização da tubulina e função do BMI-1 antes da administração do Composto 1 ao indivíduo, conforme avaliado por métodos bem conhecidos na técnica.

[0087] Em um aspecto específico, um método para inibir ou reduzir a polimerização da tubulina e a função do BMI-1 como descrito no pre- sente documento inibe a proliferação ou reduz uma célula ou linhagem celular em proliferação in vitro ou in vivo ou população da linhagem celular em cerca de 5%, 10%, 15%, 20% , 25%, 30%, 35%, 40%, 45%,

50%, 55%, 60%, 65%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 100%, em relação à população da célula ou linhagem celular em proliferação antes in vitro ou in vivo antes da administração do Composto 1 ao indivíduo, con- forme avaliado por métodos bem conhecidos na técnica.

[0088] Em um aspecto específico, um método para inibir ou reduzir a polimerização da tubulina e a função do BMI-1, como descrito no presente documento, inibe a proliferação ou reduz uma população da célula ou linhagem celular em proliferação in vitro ou in vivo em uma faixa de cerca de 5% a cerca de 20%, 10% a 30%, 15% a 40%, 15% a 50%, 20% a 30%, 20% a 40%, 20% a 50%, 30% a 60%, 30% a 70%, 30% a 80%, 30% a 90%, 30% a 95%, 30% a 99%, ou de cerca de 40% a cerca de 100%, ou qualquer faixa entre eles, em relação à popula- ção da célula ou linhagem celular em proliferação in vitro ou in vivo antes de administrar o Composto 1 ao indivíduo, como avaliado pelos métodos bem conhecidos na técnica.

[0089] Em vários aspectos, um método para inibir ou reduzir a po- limerização da tubulina e a função do BMI-1, como descrito no presen- te documento, reduz a concentração plasmática de BMI-1 em um indi- víduo, conforme avaliado por métodos bem conhecidos na técnica, por exemplo, ELISA.

[0090] Em um aspecto, um método para prevenir, tratar ou melho- rar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo compreende a administração de uma quantidade do Composto 1 eficaz para inibir ou reduzir a polimerização da tubulina e a função do BMI-1 no indivíduo é aqui descrito.

[0091] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, como descrito no presente documento, inibe ou reduz a polimerização da tubulina e a função do BMI-1 em cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25 %, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 80%,

85%, 90%, 95% ou 100% em relação à polimerização de tubulina e função do IMC-1 antes da administração do Composto 1 ao indivíduo, conforme avaliado por métodos bem conhecidos na técnica.

[0092] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, como descrito no presente documento, inibe ou reduz a polimerização de tubulina e a função do BMI-1 em uma faixa de cerca de 5% a cerca de 20%, 10% a 30%, 15% a 40%, 15% a 50%, 20% a 30%, 20% a 40%, 20% a 50%, 30% a 60%, 30% a 70%, 30% a 80 %, 30% a 90%, 30% a 95%, 30% a 99%, ou de cerca de 40% a cerca de 100%, ou qualquer faixa entre eles, em relação à polimerização de tu- bulina e função do BMI-1 antes de administrar o Composto 1 ao indiví- duo, conforme avaliado por métodos bem conhecidos na técnica.

[0093] Em vários aspectos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, como descrito no presente documento, reduz a concentração de BMI1 em um indivíduo, conforme avaliado por métodos bem co- nhecidos na técnica, por exemplo, ELISA.

[0094] Em um aspecto, um método para prevenir, tratar ou melho- rar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compre- ende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 para inibir a proliferação ou reduzir uma população de célula ou linhagem celular em proliferação in vitro ou in vivo no indivíduo é descrito aqui.

[0095] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, como descrito no presente documento, inibe a proliferação ou reduz uma população de célula ou de linhagem celular em prolife- ração in vitro ou in vivo no indivíduo em cerca de 5%, 10 %, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 100% em relação à proliferação ou população de células ou linha de células em proliferação in vitro ou in vivo no indivíduo antes da administração do Composto 1 ao indivíduo, conforme avaliado por métodos bem conhecidos na técnica.

[0096] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, como descrito no presente documento, inibe a proliferação ou reduz uma população de célula ou de linhagem celular em prolife- ração in vitro ou in vivo no indivíduo em uma faixa de cerca de 5% a cerca de 20%, 10% a 30%, 15% a 40%, 15% a 50%, 20% a 30%, 20% a 40%, 20% a 50%, 30% a 60%, 30 % a 70%, 30% a 80%, 30% a 90%, 30% a 95%, 30% a 99%, ou de cerca de 40% a cerca de 100%, ou qualquer faixa entre elas, em relação à proliferação ou população da célula ou linhagem celular in vitro ou in vivo ao indivíduo antes da administração do Composto 1 ao indivíduo, conforme avaliado por mé- todos bem conhecidos na técnica.

[0097] Em vários aspectos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, como descrito no presente documento, inibe a proliferação ou reduz uma população de célula ou de linhagem celular em proliferação in vitro ou in vivo em um indivíduo, conforme avaliado por métodos bem conhecidos na técnica, por exemplo, ELISA.

[0098] Em um aspecto, um método para prevenir, tratar ou melho- rar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compre- ende administrar uma quantidade do Composto 1 eficaz para inibir a proliferação ou reduzir uma população de célula ou de linhagem celu- lar em proliferação in vitro ou in vivo no indivíduo em combinação com outra terapia (por exemplo, uma ou mais terapias adicionais que não compreendem o Composto 1, ou que compreendem um agente anti- proliferativo diferente) para um indivíduo com necessidade do mesmo é descrito no presente documento.

[0099] Tais métodos podem envolver a administração do Compos- to 1 antes, simultaneamente ou subsequentemente à administração da terapia adicional. Em certos aspectos, tais métodos têm um efeito adi- tivo ou sinérgico.

[00100] Em um aspecto específico, é apresentado neste documento um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade, que compreende administrar a um indivíduo com necessidade de uma quantidade eficaz do Composto 1 e uma quantidade eficaz de outra terapia.

[00101] Exemplos específicos de cânceres que podem ser preveni- dos, tratados ou melhorados de acordo com os métodos fornecidos neste documento incluem, sem limitação, cânceres pancreáticos, tais como, sem limitação, o adenocarcinoma ductal pancreático.

[00102] Em certos aspectos, os cânceres pancreáticos que podem ser prevenidos, tratados ou melhorados de acordo com os métodos fornecidos neste documento são selecionados a partir de adenocarci- noma ductal pancreático.

[00103] Em um aspecto, é apresentado aqui um método para pre- venir, tratar ou melhorar um câncer pancreático, que compreende: (a) administrar a um indivíduo com necessidade uma ou mais doses do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo, uma composição farmacêutica do mesmo; e (b) monitorar a concentração de certos biomarcadores, antes e/ou após a etapa (a).

[00104] Em um aspecto específico, a etapa de monitoramento (b) é realizada antes e/ou após um certo número de doses (por exemplo, 1, 2,4,6,8, 10, 12, 14, 15 ou 29 doses, ou mais doses; 2a 4,2a8,2a ou 2 a 30 doses) ou um determinado período de tempo (por exem- plo, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias; ou 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 45, 48 ou 50 semanas) de administração do Composto 1 ou um sal farmaceu-

ticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo.

[00105] Em um aspecto específico, um ou mais desses parâmetros de monitoramento são detectados antes da administração do Compos- to 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêu- tica do mesmo ao indivíduo.

[00106] Em um aspecto específico, uma diminuição na proliferação de uma população de célula ou linhagem celular em proliferação in vi- tro ou in vivo ou após a administração do Composto 1 ou um sal far- maceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo in- dica que o curso de tratamento é eficaz para prevenir, tratar ou melho- rar o câncer pancreático.

[00107] Em um aspecto específico, uma mudança na proliferação de uma população de célula ou de linhagem celular em proliferação in vitro ou in vivo após a administração do Composto 1 ou um sal farma- ceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo pode indicar que a dosagem, frequência e/ou duração da administração do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo pode ser ajustada (por exemplo, aumentada, reduzida ou mantida).

[00108] Em um aspecto específico, a concentração de certos bio- marcadores em espécimes biológicos de um indivíduo é monitorada antes, durante e/ou após um curso de tratamento para um câncer pan- creático envolvendo a administração do Composto 1 ou de um sal far- maceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo.

[00109] A dosagem, frequência e/ou duração da administração do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo a um indivíduo pode ser modificada como re- sultado da proliferação de uma população de célula ou de linhagem celular em proliferação in vitro ou in vivo. Alternativamente, as mudan-

ças nestes parâmetros de monitoramento (por exemplo, concentração de certos biomarcadores) podem indicar que o curso de tratamento envolvendo a administração do Composto 1 ou um sal farmaceutica- mente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo é eficaz na prevenção, tratamento ou melhoria do câncer pancreático.

[00110] A concentração de certos biomarcadores em um indivíduo pode ser detectada por qualquer técnica conhecida por uma pessoa versada na técnica. Em certos aspectos, o método para detectar a concentração de certos biomarcadores de um indivíduo compreende obter uma amostra biológica (por exemplo, amostra de tecido ou flui- do) do indivíduo e detectar a concentração dos biomarcadores na amostra biológica (por exemplo, de plasma, soro, urina ou qualquer outro biofluido), que foi submetido a certos tipos de tratamento (por exemplo, centrifugação) e detecção pelo uso de técnicas imunológi- cas, como ELISA.

[00111] Em um aspecto específico, um ensaio ELISA, conforme descrito neste documento, pode ser usado para detectar a concentra- ção dos biomarcadores em uma amostra biológica (por exemplo, de plasma, soro, urina ou qualquer outro biofluido) que foi submetido a certos tipos de tratamento (por exemplo, centrifugação). Outras técni- cas conhecidas na técnica que podem ser usadas para detectar a con- centração dos biomarcadores em uma amostra biológica incluem en- saios de multiplexação ou proteômicos.

[00112] Em aspectos específicos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos aliviam ou geren- ciam um, dois ou mais sintomas associados ao câncer pancreático. O alívio ou gerenciamento de um, dois ou mais sintomas do câncer pan- creático pode ser usado como um ponto final clínico para a eficácia do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo para prevenir, tratar ou melhorar o câncer pancreático. Em alguns aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar o câncer pancreático aqui fornecidos reduzem a duração e/ou gravidade de um ou mais sintomas associados ao câncer pan- creático. Em alguns aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou me- lhorar o câncer pancreático aqui fornecidos inibem o início, progressão e/ou recorrência de um ou mais sintomas associados ao câncer pan- creático. Em alguns aspectos, os métodos para tratar o câncer pan- creático fornecidos neste documento reduzem o número de sintomas associados ao câncer pancreático.

[00113] Em certos aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos prolongam ou atra- sam a fase G1/S ou fase G1/S tardia do ciclo celular (ou seja, o perío- do entre o ponto de verificação tardio (repouso ou fase de síntese de pré-DNA) e a fase de síntese de DNA precoce). Em outros aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos prolongam ou atrasam a fase S ou G2/M do ciclo celu- lar (isto é, o período entre a síntese de DNA e a fase de divisão inicial).

[00114] Em alguns aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos reduzem, melhoram ou aliviam a gravidade do câncer pancreático e/ou um ou mais sinto- mas do mesmo. Em outros aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos reduzem a hospi- talização (por exemplo, a frequência ou duração da hospitalização) de um indivíduo diagnosticado com câncer pancreático.

[00115] Em certos aspectos, os métodos fornecidos neste docu- mento aumentam a sobrevida de um indivíduo diagnosticado com cân- cer pancreático. Em aspectos específicos, os métodos aqui fornecidos aumentam a sobrevida de um indivíduo diagnosticado com câncer pancreático em cerca de 6 meses ou mais, cerca de 7 meses ou mais, cerca de 8 meses ou mais, cerca de 9 meses ou mais, ou cerca de 12 meses ou mais.

[00116] Em aspectos específicos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos inibem ou reduzem a progressão do câncer pancreático, ou um ou mais sintomas associa- dos aos mesmos. Em aspectos específicos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos aumentam ou melhoram o efeito terapêutico de outra terapia (por exemplo, um agente anticâncer, radiação, terapia medicamentosa, tal como quimio- terapia, terapia antiandrogênica ou cirurgia). Em certos aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos envolvem o uso do Composto 1 ou um sal farmaceutica- mente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo como uma terapia adjuvante.

[00117] Em aspectos específicos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos reduzem a morta- lidade de indivíduos diagnosticados com câncer pancreático. Em cer- tos aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos aumentam o número de indivíduos em re- missão ou diminuem a taxa de hospitalização. Em outros aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos evitam o desenvolvimento, início ou progressão de um ou mais sintomas associados ao câncer pancreático.

[00118] Em aspectos específicos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos aumentam a so- brevida livre de sintomas de indivíduos com câncer pancreático. Em alguns aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos não curam o câncer pancreático nos indivíduos, mas evitam a progressão ou agravamento da doença. Em alguns aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos melhoram a qualidade de vida do indivíduo.

[00119] Em certos aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos aumentam a taxa de sobrevida livre de câncer de indivíduos diagnosticados com o câncer. Em alguns aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos aumentam a sobrevida livre de re- cidiva. Em certos aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melho- rar um câncer pancreático aqui fornecidos aumentam o número de in- divíduos em remissão. Em outros aspectos, os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático aqui fornecidos aumentam a extensão da remissão nos indivíduos.

POPULAÇÃO DE TRATAMENTO

[00120] Em alguns aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos no presente docu- mento é um ser humano que tem ou é diagnosticado com um câncer pancreático. Em outros aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos no presente docu- mento é um ser humano predisposto ou susceptível a um câncer pan- creático. Em alguns aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos no presente docu- mento é um ser humano em risco de desenvolver um câncer pancreá- tico.

[00121] Em um aspecto, um indivíduo tratado para um câncer pan- creático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento é um humano bebê. Em outro aspecto, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento é um humano criança pequena. Em outro aspecto, um in- divíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os méto- dos fornecidos no presente documento é um humano criança. Em ou- tro aspecto, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acor-

do com os métodos fornecidos no presente documento é um humano adulto. Em outro aspecto, um indivíduo tratado para um câncer pan- creático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento é um humano de meia-idade. Em outro aspecto, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento é um humano idoso.

[00122] Em certos aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos no presente docu- mento tem um câncer pancreático em metástase para outras áreas do corpo, como os ossos, pulmão e fígado. Em certos aspectos, um indi- víduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento está em remissão do câncer pan- creático. Em alguns aspectos, o indivíduo tratado para um câncer pan- creático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento tiveram uma recidiva do câncer pancreático. Em certos aspectos, um indivíduo tratado de acordo com os métodos fornecidos no presente documento está experimentando a recidiva de um ou mais sintomas associados ao câncer pancreático.

[00123] Em certos aspectos, um indivíduo tratado para câncer pan- creático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento é um ser humano que tem cerca de 1 a cerca de 5 anos, cerca de 5a anos, cerca de 10 a cerca de 18 anos, cerca de 18 a cerca de 30 anos, cerca de 25 a cerca de 35 anos, cerca de 35 a cerca de 45 anos, cerca de 40 a cerca de 55 anos, cerca de 50 a cerca de 65 anos, cerca de 60 a cerca de 75 anos, cerca de 70 a cerca de 85 anos, cerca de 80 a cerca de 90 anos, cerca de 90 a cerca de 95 anos ou cerca de 95 a cerca de 100 anos, ou qualquer idade entre elas.

[00124] Em um aspecto específico, um indivíduo tratado para cân- cer de pâncreas de acordo com os métodos fornecidos no presente documento é um ser humano que tem 18 anos ou mais. Em um aspec-

to específico, um indivíduo tratado para câncer de pâncreas de acordo com os métodos fornecidos neste documento é uma criança humana com idade entre 1 ano e 18 anos. Em um certo aspecto, um indivíduo tratado para um câncer de pâncreas de acordo com os métodos forne- cidos neste documento é um ser humano que tem entre 12 e 18 anos de idade. Em um certo aspecto, o indivíduo é um ser humano homem. Em outro aspecto, o indivíduo é um ser humano mulher. Em um as- pecto, o indivíduo é uma mulher que não está grávida ou amamentan- do. Em um aspecto, o indivíduo é uma mulher que está grávida ou vai/pode ficar grávida ou está amamentando.

[00125] Em aspectos específicos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos neste do- cumento é um ser humano que está em um estado imunocomprometi- do ou imunossuprimido. Em certos aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos neste documento é um ser humano que está recebendo ou se recuperando de terapia imunossupressora. Em certos aspectos, um indivíduo trata- do para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos neste documento é um humano que tem ou está em risco de ter um câncer pancreático. Em certos aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos neste do- cumento é um humano que é, irá ou foi submetido a cirurgia, terapia medicamentosa, como quimioterapia, terapia hormonal e/ou radiotera- pia.

[00126] Em alguns aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos neste documento é administrado com o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel ou composição farmacêutica do mesmo, ou uma terapia de combi- nação antes de que quaisquer efeitos adversos ou intolerância a tera- pias diferentes do Composto 1 se desenvolvam. Em alguns aspectos,

um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento é um indivíduo refratário. Em certos aspectos, um indivíduo refratário é um indivíduo refratário a uma terapia padrão (por exemplo, cirurgia, radiação e/ou terapia medi- camentosas, como quimioterapia). Em certos aspectos, um indivíduo com um câncer pancreático é refratário a uma terapia quando o câncer pancreático não foi significativamente erradicado e/ou um ou mais sin- tomas não foram significativamente aliviados. A determinação de se um indivíduo refratário pode ser feito in vivo ou in vitro por qualquer método conhecido na técnica para avaliar a eficácia de um tratamento de câncer pancreático, usando significados aceitos na técnica de "re- fratário" neste contexto.

[00127] Em alguns aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos neste documento é um humano que se provou refratário a outras terapias que não o tra- tamento com o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo, mas não está mais nessas tera- pias. Em certos aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pan- creático de acordo com os métodos fornecidos neste documento é um humano que já está recebendo uma ou mais terapias anticâncer con- vencionais, como cirurgia, terapia medicamentosa, como quimiotera- pia, terapia antiandrogênica ou radiação. Entre esses indivíduos estão indivíduos refratários, indivíduos que são muito jovens para terapias convencionais e indivíduos com câncer pancreático recorrente apesar do tratamento com as terapias existentes.

[00128] Em alguns aspectos, um indivíduo tratado para câncer pan- creático de acordo com os métodos fornecidos no presente documento é um ser humano suscetível a reações adversas a terapias convencio- nais. Em alguns aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pan- creático de acordo com os métodos fornecidos neste documento é um humano que não recebeu uma terapia, por exemplo, terapia medica- mentosa, como quimioterapia, cirurgia, terapia antiandrogênica ou ra- dioterapia, antes da administração do Composto 1 ou um sal farma- ceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo. Em outros aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos neste documento é um humano que recebeu uma terapia antes da administração do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo. Em alguns aspectos, um indivíduo tratado para um câncer pancreático de acordo com os métodos fornecidos neste documento é um humano que experimentou efeitos colaterais adversos à terapia anterior ou a terapia anterior foi descontinuada devido a níveis inacei- táveis de toxicidade para o ser humano.

DOSAGEM E ADMINISTRAÇÃO

[00129] De acordo com os métodos para prevenir, tratar ou melho- rar um câncer pancreático fornecidos neste documento, o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo pode ser administrado a um indivíduo com necessidade por uma variedade de rotas em quantidades que resultam em um efeito benéfico ou terapêutico. O Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo pode ser administra- do oralmente a um indivíduo com necessidade de acordo com os mé- todos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático forneci- dos no presente documento. A administração oral do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo pode facilitar os indivíduos com necessidade de tal tratamento em conformidade com um regime para tomar o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo. Assim, em um aspecto específico, o Composto 1 ou um sal farmaceu- ticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo é adminis-

trado por via oral a um indivíduo com necessidade do mesmo. Em ou- tro aspecto, o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo fornecido no presente documento pode ser administrado por via oral, com ou sem comida ou água.

[00130] Outras rotas de administração incluem, sem limitação, in- travenosa, intradérmica, intratecal, intramuscular, subcutânea, intrana- sal, inalação, transdérmica, tópica, transmucosal, intracraniana, epidu- ral e intrassinovial. Em um aspecto, o Composto 1 ou um sal farma- ceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo é ad- ministrado sistemicamente (por exemplo, parenteralmente) a um indi- víduo com necessidade do mesmo. Em um aspecto, o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo é administrado por uma via que permite que o Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo atravesse a barreira hematoencefálica (por exemplo, oralmen- te).

[00131] De acordo com os métodos para prevenir, tratar ou melho- rar um câncer pancreático fornecidos neste documento que envolvem a administração do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel ou composição farmacêutica do mesmo em combinação com uma ou mais terapias adicionais, o Composto 1 ou um sal farmaceutica- mente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adicionais podem ser administradas pela mesma via ou uma via de administração diferente.

[00132] A dosagem e frequência de administração do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo para um indivíduo com necessidade do mesmo de acordo com os métodos para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreá- tico fornecidos no presente documento serão eficazes enquanto mini- mizam quaisquer efeitos colaterais. A dosagem e frequência de admi-

nistração exatas do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel ou composição farmacêutica do mesmo podem ser determinadas por um médico, à luz de fatores relacionados ao indivíduo que requer tratamento.

[00133] Os fatores que podem ser levados em consideração inclu- em a gravidade do estado da doença, saúde geral do indivíduo, idade, peso e sexo do indivíduo, dieta, tempo e frequência de administração, combinação (combinações) de fármacos, sensibilidades de reação e tolerância/resposta à terapia. A dosagem e frequência de administra- ção do Composto 1 ou de um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo podem ser ajustadas ao longo do tempo para fornecer uma quantidade eficaz de Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo ou para manter o efeito desejado.

[00134] Conforme descrito neste documento, os métodos para pre- venir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade apresentados aqui compreendem, administrar ao indiví- duo uma quantidade eficaz do Composto 1 ou um sal farmaceutica- mente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo, em que a quantidade eficaz é uma dose administrada ao indivíduo duas vezes por semana em dias diferentes, em que a segunda dose em uma se- mana segue a primeira em três dias, e em que a primeira dose em uma semana seguinte segue a segunda dose em uma semana anteri- or em quatro dias.

[00135] Em um aspecto específico, a quantidade eficaz é uma dose administrada ao indivíduo que pode ser aumentada ou diminuída de- pendendo da resposta do indivíduo.

[00136] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dose selecio- nada a partir de uma dose em uma faixa de cerca de 50 mg a cerca de 200 mg, de cerca de 100 mg a cerca de 200 mg, de cerca de 150 mg a cerca de 200 mg e similares, ou qualquer faixa entre elas, administra- da por via oral duas vezes por semana.

[00137] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo compreende a administração de uma quantidade eficaz do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo para o indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dose selecionada de cerca de 50 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg ou cerca de 200 mg e semelhantes, ou qualquer faixa entre elas, administrado por via oral duas vezes por semana.

[00138] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dose de cerca de 50 mg administrada por via oral duas vezes por semana.

[00139] Em alguns aspectos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dosagem que é expressa em mg por metro quadrado (mg/m?). A mg/m? para o Composto 1 pode ser determinada, por exemplo, multiplicando um fator de conversão para um animal por uma dose animal em mg por quilograma (mg/kg) para obter a dose em mg/m? para equivalente de dose humana. Para fins regulatórios, os seguintes fatores de conversão podem ser usados: Camundongo = 3,

Hamster = 4,1, Rato = 6, Porquinho da Índia = 7,7 (com base em Frei- reich et al., Cancer Chemother. Rep. 50(4):219 a 244 (1966)). A altura e o peso de um humano podem ser usados para calcular a área de superfície do corpo humano aplicando a Fórmula de Boyd para a Área de Superfície Corporal. Em aspectos específicos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma quantidade na faixa de cerca de 0,1 mg/m? a cerca de 1.000 mg/m?, ou qualquer faixa entre elas.

[00140] Em um aspecto, um método para prevenir, tratar ou melho- rar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compre- ende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma com- posição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dosagem que atinge uma concentração plasmática média alvo do Composto 1 em um indivíduo com câncer pancreático ou um modelo animal com câncer pancreático pré-estabelecido.

[00141] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dosagem que atinge uma concentração plasmática média do Composto 1 em um período de 24 horas em uma faixa de aproximadamente 3 h:ug/ml a aproximadamente 70 h:ug/ml, de aproximadamente 3 h:ug/ml a aproximadamente 60 h:ug/ml, de aproximadamente 3 h:ug/ml a aproximadamente 50 h:ug/ml, de apro- ximadamente 3 h:ug/ml a aproximadamente 40 h:ug/ml, de aproxima- damente 3 h:ug/ml a aproximadamente 30 h-ug/ml , de aproximada- mente 3 h:ug/ml a aproximadamente 20 h:ug/ml, de aproximadamente 3 h:ug/ml a aproximadamente 10 h:ug/ml e similares, ou qualquer faixa entre elas, em um indivíduo com o câncer pancreático ou um modelo animal com câncer pancreático pré-estabelecido.

[00142] Em um aspecto específico, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dosagem que atinge uma concentração plasmática média do Composto 1 em um período de 24 horas de apro- ximadamente 3 h ug/ml, aproximadamente 10 h:ug/ml, aproximada- mente 20 h:ug/ml, aproximadamente 30 h:ug/ml, aproximadamente 40 h ug/ml, aproximadamente 50 h pg/ml, aproximadamente 60 h pg/ml, aproximadamente 70 h ug/ml e semelhantes, ou qualquer faixa entre elas, em um indivíduo com câncer pancreático ou um modelo animal com um câncer pancreático pré-estabelecido.

[00143] Para atingir tais concentrações plasmáticas, uma dose des- crita no presente documento do Composto 1 ou uma composição far- macêutica do mesmo pode ser administrada. Em certos aspectos, as doses subsequentes do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo podem ser ajustadas de acordo com as concentrações plasmáticas médias do Composto 1 alcançadas com uma dose do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo administrada ao indivíduo.

[00144] Em aspectos específicos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dosagem que atinge uma concentração plasmática média alvo reduzida de um ou mais biomarcadores em um indivíduo com câncer pancreático ou um modelo animal com um cân- cer pancreático pré-estabelecido.

[00145] Em aspectos específicos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz é uma dosagem que atinge o tecido desejado para as razões de concentração de plasma médias do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo, conforme determinado, por exemplo, por quaisquer técnicas de imagem conhecidas na técnica, em um indivíduo com câncer pancreático ou um modelo animal com um câncer pancreático pré-estabelecido.

[00146] Em alguns aspectos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ao indivíduo, em que a quantidade eficaz pode ou não ser a mesmo para cada dose. Em as- pectos específicos, uma primeira dose (ou seja, inicial) do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo é administrada a um indi- víduo com necessidade por um primeiro período de tempo, seguido por uma segunda dose (ou seja, carregamento) do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo é administrada ao indivíduo por um segundo período de tempo e, subsequentemente, uma terceira dose (isto é, de manutenção) do Composto 1 ou uma composição far- macêutica do mesmo é administrada ao indivíduo por um terceiro perí- odo de tempo. A primeira dose pode ser maior do que a segunda do- se, ou a primeira dose pode ser menor do que a segunda dose. De maneira semelhante, a terceira dose do Composto 1 ou uma composi- ção farmacêutica do mesmo pode ser maior ou menor do que a se- gunda dose e maior ou menor do que a primeira dose.

[00147] Em alguns aspectos, as quantidades de dosagem descritas no presente documento referem-se às quantidades totais administra-

das; isto é, se mais de um Composto for administrado, então, em al- guns aspectos, as dosagens correspondem à quantidade total admi- nistrada. Em um aspecto específico, as composições orais contêm cerca de 5% a cerca de 95% do Composto 1 em peso.

[00148] O período de tempo durante o qual um indivíduo com ne- cessidade é administrado com o Composto 1 ou uma composição far- macêutica do mesmo, de acordo com um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessida- de, será o período de tempo que é determinado pela sobrevida livre de câncer ou ausência de sintomas. Em certos aspectos, um método para tratar um câncer pancreático apresentado no presente documento compreende administrar o Composto 1 ou uma composição farmacêu- tica do mesmo por um período de tempo até que a gravidade e/ou o número de um ou mais sintomas associados com o câncer pancreático diminua.

[00149] Em alguns aspectos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende a administração do Composto 1 ou uma composição far- macêutica do mesmo por até 48 semanas. Em outros aspectos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo por até 4 semanas, 8 semanas, 12 semanas, 16 semanas, 20 semanas, 24 semanas, 26 semanas (0,5 ano), 52 semanas (1 ano), 78 semanas (1,5 anos), 104 semanas (2 anos) ou 130 semanas (2,5 anos) ou mais.

[00150] Em certos aspectos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar o Composto 1 ou de uma composição farma- cêutica do mesmo por um período indefinido de tempo. Em alguns as- pectos, um método para tratar um câncer pancreático apresentado no presente documento compreende administrar o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo por um período de tempo seguido por um período de repouso (ou seja, um período em que o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo não é administrado) antes da administração do Composto 1 ou uma composição farmacêu- tica do mesmo ser retomada.

[00151] Em aspectos específicos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende administrar o Composto 1 ou uma composição farmacêu- tica do mesmo em ciclos, por exemplo, ciclos de 1 semana, ciclos de 2 semanas, ciclos de 3 semanas, ciclos de 4 semanas, ciclos de 5 se- manas, ciclos de 6 semanas, ciclos de 8 semanas, ciclos de 9 sema- nas, ciclos de 10 semanas, ciclos de 11 semanas ou ciclos de 12 se- manas. Em tais ciclos, o Composto 1 ou uma composição farmacêuti- ca do mesmo pode ser administrado uma ou duas vezes por semana. Em um aspecto específico de um ciclo semanal, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo pode ser administrado duas ve- zes por semana. Em um aspecto específico de tal ciclo semanal, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo pode ser administrado uma vez por dia.

[00152] Em aspectos específicos, o período de administração do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo pode ser ditado por um ou mais parâmetros de monitoramento, por exemplo, concentração de certos biomarcadores.

[00153] Em aspectos específicos, o período de tempo de adminis- tração do Composto 1 ou de uma composição farmacêutica do mesmo pode ser ajustado com base em um ou mais parâmetros de monitora- mento, por exemplo, concentração de biomarcadores.

[00154] Em certos aspectos, de acordo com um método para pre- venir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo é administrado a um indivíduo com necessidade antes, simul- taneamente ou após uma refeição (por exemplo, café da manhã, al- moço ou jantar). Em aspectos específicos, de acordo com os métodos para o tratamento de um câncer pancreático apresentados no presente documento, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mes- mo é administrado a um indivíduo com necessidade pela manhã (por exemplo, entre 5h e 12h).

[00155] Em certos aspectos, de acordo com um método para pre- venir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo, o Composto 1 ou uma composição farmacêu- tica do mesmo é administrado a um indivíduo em necessidade do mesmo ao meio-dia (ou seja, às 12 horas). Em aspectos específicos, de acordo com os métodos para o tratamento de um câncer pancreáti- co apresentados no presente documento, o Composto 1 ou uma com- posição farmacêutica do mesmo é administrado a um indivíduo com necessidade do mesmo à tarde (por exemplo, entre 12 he 17 h), à noi- te (por exemplo, entre 17 h e hora de dormir) e/ou antes de dormir.

[00156] Em um aspecto específico, uma dose do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo é administrada a um indiví- duo uma vez por dia e duas vezes por semana.

TERAPIAS DE COMBINAÇÃO

[00157] São apresentadas no presente documento terapias de combinação para o tratamento de um câncer pancreático que envol- vem a administração do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo em combinação com uma ou mais terapias adicionais a um indivíduo com necessidade do mesmo. Em um aspecto específico, são apresentadas no presente documento terapias de combinação para o tratamento de um câncer pancreático que envolvem a administração de uma quantidade eficaz do Composto 1 ou uma composição farma-

cêutica do mesmo em combinação com uma quantidade eficaz de ou- tra terapia a um indivíduo com necessidade do mesmo.

[00158] “Como usado no presente documento, o termo "em combi- nação" refere-se, no contexto da administração do Composto 1 ou de uma composição farmacêutica do mesmo, à administração do Com- posto 1 ou de uma composição farmacêutica do mesmo antes, simul- taneamente ou subsequentemente à administração de uma ou mais terapias adicionais (por exemplo, agentes, cirurgia ou radiação) para uso no tratamento de um câncer pancreático. O uso do termo "em combinação" não restringe a ordem em que um ou mais agentes tera- pêuticos e uma ou mais terapias adicionais são administrados a um indivíduo. Em aspectos específicos, o intervalo de tempo entre a ad- ministração do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e a administração de uma ou mais terapias adicionais pode ser de cerca de 1 a 5 minutos, 1 a 30 minutos, 30 minutos a 60 minutos, 1 hora, 1 a 2 horas, 2 a 6 horas, 2 a 12 horas, 12 a 24 horas, 1 a 2 dias, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 15 semanas, 20 semanas, 26 semanas, 52 semanas, 11 a 15 semanas, 15 a 20 semanas, 20 a 30 semanas, 30 a 40 semanas, 40 a 50 semanas, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 4 meses 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 1 ano, 2 anos, ou qualquer período de tempo entre eles. Em certos aspectos, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adicionais são administrados em menos de 1 dia, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, um mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 1 ano, 2 anos ou 5 anos de interva- lo.

[00159] Em alguns aspectos, as terapias de combinação fornecidas no presente documento envolvem administrar o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo diariamente e a administração de uma ou mais terapias adicionais uma vez por semana, uma vez a cada 2 semanas, uma vez a cada 3 semanas, uma vez a cada 4 semanas, uma vez por mês, uma vez a cada 2 meses (por exemplo, aproxima- damente 8 semanas), uma vez a cada 3 meses (por exemplo, aproxi- madamente 12 semanas) ou uma vez a cada 4 meses (por exemplo, aproximadamente 16 semanas). Em certos aspectos, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adi- cionais são administrados ciclicamente a um indivíduo. A terapia de ciclagem compreende a administração do Composto 1 ou de uma composição farmacêutica do mesmo por um período de tempo, segui- da pela administração de uma ou mais terapias adicionais por um pe- ríodo de tempo e repetição desta administração sequencial. Em certos aspectos, a terapia cíclica também pode incluir um período de repouso em que o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ou a terapia adicional não é administrada por um período de tempo (por exemplo, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 1 semana, 2 se- manas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 10 semanas, 20 sema- nas, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 2 anos ou 3 anos). Em um aspecto, o número de ciclos administrados é de 1 a 12 ciclos, de 2 a 10 ciclos ou de 2 a 8 ciclos.

[00160] Em alguns aspectos, um método para prevenir, tratar ou melhorar um câncer pancreático em um indivíduo com necessidade compreende a administração do Composto 1 ou uma composição far- macêutica do mesmo como um único agente por um período de tempo antes de administrar o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo em combinação com uma terapia adicional. Em certos as- pectos, os métodos para o tratamento de um câncer pancreático for- necidos neste documento compreendem a administração de uma tera-

pia adicional sozinha por um período de tempo antes da administração do Composto 1 ou de uma composição farmacêutica do mesmo em combinação com a terapia adicional.

[00161] Em alguns aspectos, a administração do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adi- cionais de acordo com os métodos aqui apresentados têm um efeito aditivo em relação à administração do Composto 1 ou uma composi- ção farmacêutica do mesmo ou dita uma ou mais terapias adicionais por si só. Em alguns aspectos, a administração do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adi- cionais de acordo com os métodos aqui apresentados têm um efeito sinérgico em relação à administração do Composto 1 ou uma compo- sição farmacêutica do mesmo ou dita uma ou mais terapias adicionais por si só.

[00162] “Como usado, o termo "sinérgico" refere-se ao efeito da ad- ministração do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo em combinação com uma ou mais terapias adicionais (por exemplo, agentes), cuja combinação é mais eficaz do que os efeitos aditivos de qualquer duas ou mais terapias únicas (por exemplo, agen- tes).

[00163] Em um aspecto específico, um efeito sinérgico de uma te- rapia de combinação permite o uso de dosagens mais baixas (isto é, doses subideais) do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ou uma terapia adicional e/ou administração menos frequente do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ou uma terapia adicional a um indivíduo.

[00164] Em certos aspectos, a capacidade de usar dosagens mais baixas do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ou de uma terapia adicional e/ou administrar o Composto 1 ou uma com- posição farmacêutica do mesmo ou a dita terapia adicional reduz com menos frequência a toxicidade associada à administração do Compos- to 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo ou da dita terapia adicional, respectivamente, a um indivíduo sem reduzir a eficácia do Composto 1 ou de uma composição farmacêutica do mesmo ou da referida terapia adicional, respectivamente, no tratamento de um cân- cer pancreático.

[00165] Em alguns aspectos, um efeito sinérgico resulta na eficácia melhorada do Composto 1 ou de uma composição farmacêutica do mesmo e cada uma das ditas terapias adicionais no tratamento de um câncer pancreático. Em alguns aspectos, um efeito sinérgico de uma combinação do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adicionais evita ou reduz os efeitos colaterais adversos ou indesejados associados ao uso de qualquer terapia única.

[00166] A combinação do Composto 1 ou uma composição farma- cêutica do mesmo e uma ou mais terapias adicionais podem ser admi- nistradas a um indivíduo na mesma composição farmacêutica. Alterna- tivamente, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adicionais podem ser administrados simulta- neamente a um indivíduo em composições farmacêuticas separadas. O Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adicionais podem ser administrados sequencialmente a um indivíduo em composições farmacêuticas separadas. O Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo e uma ou mais terapias adicionais também podem ser administrados a um indivíduo pelas mesmas ou diferentes vias de administração.

[00167] As terapias de combinação fornecidas no presente docu- mento envolvem a administração a um indivíduo com necessidade do mesmo Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo em combinação com terapias convencionais ou conhecidas para o trata-

mento de um câncer pancreático. Outras terapias para um câncer pancreático ou uma condição associada a elas têm como objetivo con- trolar ou aliviar um ou mais sintomas. Consequentemente, em alguns aspectos, as terapias de combinação fornecidas no presente docu- mento envolvem a administração a um indivíduo com necessidade de um analgésico ou outras terapias destinadas a aliviar ou controlar um ou mais sintomas associados a um câncer pancreático ou uma condi- ção associada a ele.

[00168] Exemplos específicos de agentes anticâncer que podem ser usados em combinação com Composto 1 ou uma composição far- macêutica do mesmo para o tratamento de um câncer pancreático in- cluem: um agente hormonal (por exemplo, inibidor de aromatase, mo- dulador seletivo do receptor de estrogênio (SERM) e antagonista do receptor de estrogênio), agente quimioterápico (por exemplo, bloquea- dor de dissociação de microtúbulos, antimetabólito, inibidor de topiso- merase e agente de reticulação de DNA ou agente de dano), agente antiangiogênico (por exemplo, antagonista de VEGF, antagonista de receptor, antagonista de integrina, agente de direcionamento vascular (VTA)/agente de ruptura vascular (VDA)), radioterapia e cirurgia con- vencional.

[00169] “Exemplos não limitantes de agentes hormonais que podem ser usados em combinação com o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo para o tratamento de um câncer pancreático incluem inibidores da aromatase, SERMs e antagonistas do receptor de estrogênio. Os agentes hormonais que são inibidores da aromatase podem ser esteroidais ou não esteroidais. Exemplos não limitantes de agentes hormonais não esteroidais incluem letrozol, anastrozol, ami- noglutetimida, fadrozol e vorozol. Exemplos não limitantes de agentes hormonais esteroidais incluem aromasin (exemestano), formestano e testolactona. Exemplos não limitantes de agentes hormonais que são

SERM;s incluem tamoxifeno (com a marca/comercializada como Nol- vadexO), afimoxifeno, arzoxifeno, bazedoxifeno, clomifeno, femarelle, lasofoxifeno, ormeloxifeno, raloxifeno e toremifeno. Exemplos não limi- tantes de agentes hormonais que são antagonistas do receptor de es- trogênio incluem fulvestrant. Outros agentes hormonais incluem, sem limitação abiraterona e lonaprisan.

[00170] Exemplos não limitantes de agentes quimioterápicos que podem ser usados em combinação com Composto 1 ou uma composi- ção farmacêutica do mesmo para o tratamento de câncer incluem blo- queador de desmontagem de microtúbulos, antimetabólito, inibidor de topoisomerase e agente de reticulação ou dano de DNA.

[00171] Os agentes quimioterápicos que são bloqueadores de des- montagem de microtúbulos incluem, sem limitação, taxenos (por exemplo, paclitaxel (com a marca/comercializado como TAXOLO), do- cetaxel, nab-paclitaxel (nanopartícula de paclitaxel ligada à albumina, com a marca/comercializada como ABRAXANEO), larotaxel , ortataxel e tesetaxel); epotilonas (por exemplo, ixabepilona); e alcaloides da vinca (por exemplo, vinorelbina, vinblastina, vindesina e vincristina (com marca/comercializada como ONCOVINO)).

[00172] Os agentes quimioterápicos que são antimetabólitos inclu- em, sem limitação, antimetabólitos de folato (por exemplo, metotrexa- to, aminopterina, pemetrexedo, raltitrexed); antimetabólitos de purina (por exemplo, cladribina, clofarabina, fludarabina, mercaptopurina, pentostatina, tioguanina); antimetabólitos de pirimidina (por exemplo, B-fluorouracil, capcitabina, gemcitabina (GEMZARO), citarabina, deci- tabina, floxuridina, tegafur); e antimetabólitos desoxirribonucleotídicos (por exemplo, hidroxiureia).

[00173] Os agentes quimioterápicos que são inibidores da topoiso- merase incluem, sem limitação, inibidores da topoisomerase classe | (camptoteca) (por exemplo, topotecano (com a marca/comercializado como HYCAMTINO) irinotecano, rubitecano e belotecano); inibidores da topoisomerase de classe Il (podophyllum) (por exemplo, etoposídeo ou VP-16 e teniposídeo); antraciclinas (por exemplo, doxorrubicina, epirrubicina, Doxil, aclarubicina, amrubicina, daunorrubicina, idarrubi- cina, pirarrubicina, valrubicina e zorrubicina); e antracenedionas (por exemplo, mitoxantrona e pixantrona).

[00174] Os agentes quimioterápicos que são reticuladores de DNA (ou agentes danificadores de DNA) incluem, sem limitação, agentes alquilantes (por exemplo, ciclofosfamida, mecloretamina, ifosfamida (com a marca/comercializada como IFEXO), trofosfamida, clorambucil, melfalano, prednimustina, bendamustina, uramustina, estramustina, carmustina (com a marca/comercializada como BICNUG), lomustina, semustina, fotemustina, nimustina, ranimustina, estreptozocina, busul- fan, mannosulfan, treosulfan, carboquona, N,N'N”- trietilenotiofosforamida, triaziquelamida); agentes do tipo alquilante (por exemplo, carboplatina (com a marca/comercializada como PARA- PLATINO), cisplatina, oxaliplatina, nedaplatina, tetranitrato de triplati- na, satraplatina, picoplatina); reticuladores de DNA não clássicos (por exemplo, procarbazina, dacarbazina, temozolomida (com a mar- ca/comercializada como TEMODARO), altretamina, mitobronitol); e agentes intercalantes (por exemplo, actinomicina, bleomicina, mitomi- cina e plicamicina).

[00175] Exemplos não limitantes de agentes antiangiogênicos que podem ser usados em combinação com Composto 1 ou uma composi- ção farmacêutica do mesmo para o tratamento de um câncer pancreá- tico incluem antagonistas de VEGF, antagonistas de receptor, antago- nistas de integrina (por exemplo, vitaxina, cilengitide e S247) e VTAs/VDAs (por exemplo, fosbretabulina). Os antagonistas de VEGF incluem, mas não são para, anticorpos anti-VEGF (por exemplo, be- vacizumab (com a marca/comercializado como AVASTINO) e ranibi-

zumab (com a marca/comercializado como LUCENTISO)), armadilhas de VEGF (por exemplo, aflibercept), antisenso de VEGF ou siRNA ou miRNA e aptâmeros (por exemplo, pegaptanib (com a mar- ca/comercializado como MACUGENO)). Os agentes antiangiogênicos que são antagonistas do receptor incluem, sem limitação, anticorpos (por exemplo, ramucirumab) e inibidores da quinase (por exemplo, su- nitinibe, sorafenibe, cediranibe, panzopanibe, vandetanibe, axitinibe e AG-013958), como inibidores da tirosina quinase. Outros exemplos não limitantes de agentes antiangiogênicos incluem ATN-224, acetato de anecortave (com a marca/comercializado como RETAANEOGO), inibi- dor de despolimerização de microtúbulos, como pró-fármaco combre- tastatina de A4, e proteína ou fragmento de proteína, como colágeno 18 (endostatina).

[00176] Exemplos não limitantes de outras terapias que podem ser administradas a um indivíduo em combinação com o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo para o tratamento de um câncer pancreático incluem:

[00177] (1) uma estatina como a lovostatina (por exemplo, com a marca/comercializada como MEVACORO);

[00178] (2) um inibidor de MTOR, como sirolimus, que também é conhecido como Rapamicina (por exemplo, com a marca/comerciali- zada como RAPAMUNEO), temsirolimus (por exemplo, com a mar- ca/comercializada como TORISELO), evorolimus (por exemplo, com a marca/comercializada como AFINITORO), e deforolimus;

[00179] (3) um agente inibidor da farnesiltransferase, tal como tipi- farnib (por exemplo, com a marca/comercializado como ZARNES- TRAGO);

[00180] (4) um agente antifibrótico como a pirfenidona;

[00181] (5) um interferon peguilado tal como PEG-interferon alfa-2b;

[00182] (6) um estimulante do SNC, como metilfenidato (com a marca/comercializado como RITALINGO);

[00183] (7) um antagonista HER-2, como o anticorpo anti-HER-2 (por exemplo, trastuzumab) e inibidor de quinase (por exemplo, lapati- nib);

[00184] (8) um antagonista de IGF-1, como um anticorpo anti-IGF-1 (por exemplo, AVE 1642 e IMC-A11) ou um inibidor de IGF-1 quinase;

[00185] (9) antagonista de EGFR/HER-1, tal como um anticorpo an- ti-EGFR (por exemplo, cetuximabe, panitumamabe) ou inibidor de qui- nase EGFR (por exemplo, erlotinibe (por exemplo, com a mar- ca/comercializada como TARCEVAG), gefitinibe);

[00186] (10) antagonista SRC, como bosutinibe;

[00187] (11) inibidor da quinase dependente de ciclina (CDK), como seliciclibe;

[00188] (12) inibidor das Janus quinase 2, como lestaurtinibe;

[00189] (13) inibidor da proteassoma, como bortezomibe;

[00190] (14) inibidor da fosfodiesterase, como anagrelida;

[00191] (15) inibidor da inosina monofosfato desidrogenase, como tiazofurina;

[00192] (16) inibidor da lipoxigenase, como masoprocol;

[00193] (17) antagonista da endotelina;

[00194] (18) antagonista do receptor de retinoide, como tretinoína ou alitretinoína;

[00195] — (19) modulador imunológico, tal como lenalidomida, pomali- domida ou talidomida (por exemplo, com a marca/comercializada co- mo THALIDOMIDO);

[00196] (20) inibidor da quinase (por exemplo, tirosina quinase), como imatinibe (por exemplo, com a marca/comercializado como GLEEVECO), dasatinibe, erlotinibe, nilotinibe, gefitinibe, sorafenibe, suni- tinibe (por exemplo, com a marca/comercializado como SUTENTO), la- patinibe, AEE788, ou TG100801;

[00197] (21) anti-inflamatório não esteroidal, como celecoxibe (com marca/comercializado como CELEBREXO);

[00198] (22) fator estimulador de colônia de granulócitos humanos (G-CSF), como filgrastim (com a marca/comercializada como NEU- POGENO);

[00199] (23) ácido folínico ou leucovorina cálcica;

[00200] (24) antagonista da integrina, tal como um antagonista da integrina a5B1 (por exemplo, JSM6427);

[00201] (25) antagonista do fator nuclear kappa beta (NF-KB), como OT-551, que também é um antioxidante;

[00202] (26) inibidor de ouriço, como CURG61414, ciclopamina, GDC-0449 ou anticorpo antiouriço;

[00203] (27) inibidor da histona desacetilase (HDAC), como SAHA (também conhecido como vorinostat (com a marca/comercializado como ZOLINZAG)), PCI-24781, SB939, CHR-3996, CRA-024781, ITF2357, JNJ-26481585 ou PCl- 24781;

[00204] (28) retinoide, como isotretinoína (por exemplo, com a mar- ca/comercializada como ACCUTANEGO);

[00205] (29) antagonista do fator de crescimento de hepatóci- tos/fator de dispersão (HGF/SF), tal como anticorpo monoclional HGF/SF (por exemplo, AMG 102);

[00206] (30) produto químico sintético, como antineoplaston;

[00207] (31) antidiabéticos, como maleato de rosiglitazona (por exemplo, com a marca/comercializado como AVANDIAG);

[00208] (32) fármaco antimalárico e amebicida, tal como cloroquina (por exemplo, com a marca/comercializada como ARALENO);

[00209] (33) bradicinina sintética como RMP-7;

[00210] (34) inibidor do receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas, como SU-101;

[00211] (35) inibidores do receptor tirosina quinase de FIk-1/KDR/

VEGFR2, FGFR1 e PDGFR beta, tais como SU5416 e SU6668;

[00212] (36) agente anti-inflamatório, tal como sulfassalazina (por exemplo, com a marca/comercializada como AZULFIDINEGO); e

[00213] (37)terapia antisenso com TGF-beta.

[00214] Exemplos não limitantes de outras terapias que podem ser administradas a um indivíduo em combinação com o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo para o tratamento de um câncer pancreático incluem: um análogo sintético não peptídico do hormônio liberador de gonadotrofina de ocorrência natural, tal como acetato de leuprolida (com a marca/comercializado como LUPRONO); um não esteroide, antiandrogênio, como flutamida (com a mar- ca/comercializada como EULEXINO) ou nilutamida (com a mar- ca/comercializada como NILANDRONO); um inibidor do receptor de androgênio não esteroidal, como bicalutamida (marca/comercialização como CASODEXO); hormona esteroide como a progesterona; agente antifúngico como Cetoconazol (com a marca/comercializada como NI- ZORALO); glucocorticoides como prednisona; fosfato de estramustina sódico (com a marca/comercializado como EMCYTO); e bisfosfonato, como pamidronato, alendronato e risedronato.

[00215] Exemplos específicos adicionais de terapias que podem ser usadas em combinação com o Composto 1 ou uma composição far- macêutica do mesmo para o tratamento de um câncer pancreático in- cluem, sem limitação, agentes associados à imunoterapia contra o câncer (por exemplo, citocinas, interleucinas e vacinas contra o cân- cer).

[00216] Exemplos específicos de agentes que aliviam os efeitos co- laterais associados a um câncer pancreático que podem ser usados como terapias em combinação com o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo incluem, sem limitação: antieméticos, por exemplo, cloridrato de Ondansetron (com a marca/comercializado co-

mo ZOFRAN 6&), cloridrato de Granisetron (com a marca/comerciali- zado como KYTRILO), Lorazepam (com a marca/comercializado como ATIVANO) e dexametasona (com a marca/comercializada como DE- CADRONO).

[00217] Em certos aspectos, as terapias de combinação fornecidas no presente documento para o tratamento de um câncer de pâncreas compreendem a administração do Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo em combinação com um ou mais agentes usados para tratar e/ou controlar um efeito colateral, como sangramen- to (geralmente transitório, epistaxe de baixo grau), trombose arterial e venosa, hipertensão, cicatrização retardada de feridas, proteinúria as- sintomática, perfuração do septo nasal, síndrome de leucoencefalopa- tia posterior reversível em associação com hipertensão, tontura, ata- xia, cefaleia, rouquidão, náusea, vômito, diarreia, erupção cutânea, hemorragia subungueal, síndromes mielodisplásicas, mielossupres- são, fadiga, hipotireoidismo, prolongamento do intervalo do QT ou in- suficiência cardíaca.

[00218] Em certos aspectos, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo não é usado em combinação com um fármaco que é principalmente metabolizado por CYP2D6 (como um antidepres- sivo (por exemplo, um antidepressivo tricíclico, um inibidor seletivo da recaptação da serotonina e similares), um antipsicótico, um bloqueador do receptor beta-adrenérgico ou certos tipos de antiarrítmicos) para tratar um câncer pancreático.

KITS

[00219] É fornecido no presente documento um pacote ou Kkit far- macêutico que compreende um ou mais recipientes cheios com o Composto 1 ou uma composição farmacêutica do mesmo. Além disso, uma ou mais outras terapias úteis para o tratamento de um câncer pancreático ou outros agentes relevantes também podem ser incluídos no pacote ou kit farmacêutico. Também é fornecido neste documento um pacote ou kit farmacêutico que compreende um ou mais recipien- tes cheios com um ou mais dos ingredientes das composições farma- cêuticas descritas neste documento. Opcionalmente associado a tais kits pode estar um aviso na forma prescrita por uma agência governa- mental que regulamenta a fabricação, uso ou venda de produtos far- macêuticos ou biológicos, que reflete a aprovação pela agência de fa- bricação, uso ou venda para administração humana.

[00220] Sem levar em consideração se um documento citado neste documento foi especificamente e individualmente indicado como sendo incorporado por referência, todos os documentos aqui referidos são incorporados por referência no presente pedido para todos e quaisquer fins na mesma medida como se cada referência individual fosse total- mente estabelecida no presente documento.

[00221] Tendo agora descrito completamente a matéria das reivin- dicações, será entendido por aqueles versados na técnica que o mes- mo pode ser realizado dentro de uma ampla faixa de equivalentes sem afetar o escopo da matéria ou aspectos descritos no presente docu- mento. Pretende-se que as reivindicações anexas sejam interpretadas para incluir todos esses equivalentes.

EXEMPLOS

[00222] Os exemplos a seguir pretendem ilustrar os vários métodos da invenção, mas de forma alguma limitam o escopo da invenção.

[00223] Os materiais e métodos usados nos exemplos a seguir es- tavam disponíveis em fontes comerciais ou foram obtidos por métodos conhecidos pelos versados na técnica seguindo procedimentos conhe- cidos ou procedimentos descritos nas referências indicadas.

[00224] O Composto 1 foi preparado de acordo com o procedimento descrito na Publicação Internacional No. WO2014/081906.

[00225] O Composto 2 refere-se a 6-(5,6-difluoro-2-metil-1H-benzo

[d]imidazo]-1-il)-N-(4-(trifluorometil)fenil )pirazin-2-amina, um inibidor conhecido da função BMI-1, preparado de acordo com o procedimento descrito na Publicação Internacional No. WO2015/076800. LINHAGENS CELULARES, CULTURA CELULAR E ENSAIOS DE

VIABILIDADE

[00226] Linhagens celulares humanas autenticadas foram adquiri- das da ATCC, usadas dentro de 30 passagens cumulativas da compra inicial. Linhagens de KPC de murinos foram geradas e usadas em 30 passagens cumulativas. As células J1002 foram geradas a partir de camundongos KPBBR e usadas em 15 passagens cumulativas. Todas as linhagens celulares tiveram resultados consistentemente negativos para micoplasma ao longo do período de experimentação usando o kit de detecção MycoAlert Mycoplas-ma (Lonza; LTO07-318). As células foram mantidas em condições padrão a 37 ºC e 5% de CO,» e foram cultivadas em DMEM (Life Technologies, 12430-054) suplementado com penicilina e estreptomicina (Corning, 30-003-CI) e 10% de FBS (Life Technologies, 10438-034).

[00227] Paraas curvas de proliferação, as células foram semeadas em placas de 96 poços (Corning, 3603) e semeadas durante a noite. Placas replicadas foram plaqueadas para cada ponto de tempo, uma vez que as medições de viabilidade eram um procedimento de ponto final. No dia seguinte, as células foram tratadas com Composto nas concentrações indicadas e tratadas com DMSO na concentração mais alta usada (sempre abaixo de 0,003%). As células foram tratadas du- rante 96 horas e a viabilidade foi determinada a cada 24 horas usando o reagente AlamarBlue (BioRad, BUFO012B). Resumidamente, 10 ul de AlamarBlue foram adicionados a cada poço (100 ul), misturados bre- vemente e deixados incubar a 37 ºC e 5% de CO,» por 4 horas. Após a incubação, a fluorescência foi medida em um leitor de microplacas multimodo Promega. Para análise, os níveis de base foram subtraídos dos resultados brutos, que foram então normalizados para serem re- presentados como uma fold change em comparação com as células tratadas com DMSO no Dia O. Todos os ensaios foram realizados pelo menos em triplicatas com 4-8 réplicas técnicas por grupo de tratamen- to, por experimento. (Figura 1a e Figura 10b).

[00228] Para as curvas de resposta à dose, as células foram seme- adas em placas de 96 poços (Corning, 3603) e semeadas durante a noite. No dia seguinte, as células foram tratadas com o Composto 1. As curvas de resposta à dose começaram em 10 uM, foram diminuí- das em incrementos de 3-vezes e terminaram com DMSO na concen- tração mais alta usada (sempre abaixo de 0,03%). As células foram tratadas por 72 horas e a viabilidade foi determinada usando o rea- gente AlamarBlue (BioRad, BUFO012B). Resumidamente, 10 ul de Ala- marBlue foram adicionados a cada poço (100 ul), misturados breve- mente e deixados incubar a 37 ºC e 5% de CO,» por 4 horas. Após a incubação, a fluorescência foi medida em um leitor de microplacas multimodo Promega. Para análise, os níveis de base foram subtraídos dos resultados brutos, que foram então normalizados para serem re- presentados como uma porcentagem das células tratadas com DMSO. Todos os ensaios foram realizados pelo menos em triplicata com 4 a 8 réplicas técnicas por experimento. (Figura 10c)

ANÁLISES DO CICLO CELULAR

[00229] As células foram semeadas em placas de 12 ou 6 poços, de modo que 16 horas depois, elas seriam aproximadamente 30 a 50% confluentes. As células foram então tratadas durante 24 horas com DMSO (<0,003%), Composto 1 (100 nM ou 1 uM) ou nocodazol 100 nM (Sigma, M1404). Após o tratamento, as células foram coleta- das e fixadas em etanol 70% gelado por um período mínimo de uma hora. Após a fixação, as células foram ressuspensas em PBS + 2% FBS + 3 uM DAPI (BioLegend, 422801) ou 0,25 ug 7-AAD (BD Phar-

mingen, 559925) e analisadas em um MACSQuant& Analyzer 10 (Mil- tenyi Biotec) ou BD LSR II"Y, Para experimentos de curso de tempo de análise do ciclo celular, as células foram preparadas como descrito acima, exceto tratadas por 24, 48 ou 72 horas. Os dados foram anali- sados usando o software FlowJo. Populações percentuais em G2/M foram identificadas usando a plataforma de ciclo celular univariada ofe- recida pelo software FlowJo. Populações percentuais > 4N foram de- terminadas pelo bloqueio acima da população 4N de células tratadas com DMSO. (Figura 1b, Figura 1c, Figura 2a, Figura 2b, Figura 10e e Figura 109).

CITOMETRIA DE FLUXO PARA PROTEÍNAS INTRACELULARES

[00230] Para a coloração de fosfo-histona H3 (PH3), as células fo- ram fixadas e permeabilizadas de acordo com as instruções do fabri- cante usando o Conjunto de Tampão de Manchamento de Fator de Transcrição eBios-cience Foxp3 (ThermoFisher, 00-5523-00). As célu- las foram bloqueadas com Bloco Fc (BD Biosciences, 564220) e cora- das usando um anticorpo PH3 (Ser10) (BioLegend, 650805) com 5 ul por milhão de células (45 min, temperatura ambiente, escuro). As amostras foram analisadas em um BD FortessaTM e analisadas pelo software FlowJo. (Figura 1d e Figura 3a)

[00231] Paraa coloração com Caspase-3 ativa (ActCasp3), o Kit de manchamento FITC Caspase 3 (ativo) (Abcam, ab65613) foi usado de acordo com as instruções do fabricante. As células foram semeadas em placas de 12 poços, de modo que —16 horas depois, elas seriam aproximadamente 50-60% confluentes. As células foram então trata- das com fármacos nas concentrações indicadas, ou veículo DMSO, por 24 horas, momento em que foram coletadas, coradas com FITC- DEVD-FMK (1 ul/amostra, 1 hora, temperatura ambiente, escuro), la- vadas e, em seguida, coradas com DAPI para análise. As amostras foram analisadas em um BD LSR IITM e analisadas pelo software

FlowdJo. (Figura 3a e Figura 3b).

WESTERN BLOTTING

[00232] Western blotting foi realizado em lisados isolados de células tratadas. As células foram lisadas usando tampão RIPA (50 mM Tris, pH 7,4, 150 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 0,1% SDS, 0,5% desoxicola- to) suplementado com Coquetel Inibidor de Protease livre de EDTA cOmplete'Y (Sigma, 11836170001) e Coquetel Inibidor de Fosfatase Halt"M (ThermoFisher, 78420). Os lisados foram quantificados usando o Pierce BCA Protein Assay Kit (ThermoFisher, 23227), diluídos em tampão de amostra SDS, resolvidos por SDS-PAGE (15 a 30 vpg/amostra) e transferidos para membranas de PVDF. As membranas foram bloqueadas com 5% p/v de leite em pó desnatado em TBS-T (0,1% Tween20) e os anticorpos primários foram incubados durante a noite a 4 ºC, diluídos em 5% de BSA em TBS-T nas concentrações indicadas. Os anticorpos secundários conjugados com HRP foram in- cubados em tampão de bloqueio por 1 hora à temperatura ambiente antes da detecção usando solução de substrato Super Digital-ECLTM (Kindle Biosciences, R1002). (Figura 5b, Figura 10a e Figura 11b) ANTICORPOS DO WESTERN BLOT:

[00233] Bmi1l: Sinalização Celular, %5856, 1:1.000

[00234] Vinculina: Sinalização Celular, 46508, 1:1.000

[00235] Beta-tubulina: Sinalização Celular, %t2146S, 1:1.000 EXPERIMENTO DA ATIVIDADE DO SUBSTRATO DE P-GLICOPRO-

TEÍNA

[00236] Células MDCKIl-mdri e MDCKll-wt foram adquiridas do Netherlands Cancer Institute, NKI-AVL. As células foram cultivadas em meio essencial modificado de Dulbecco (DMEM), suplementadas com 10% de FBS e 1% de Penn-Strep, e usadas entre as passagens 3-9. As células foram semeadas a uma densidade de 3 x 103 células/poço em placas tratadas com cultura de tecidos de 96 poços. Após 4 horas para permitir a ligação das células, as células foram tratadas com o composto teste na presença ou ausência do inibidor da glicoproteína P Valspodar. As placas foram incubadas a 37 ºC, 5% CO» por 72 horas e o ATP foi medido por luminescência com o reagente CellTiter-Glo& (Promega). (Figura 4b)

SEQUENCIAMENTO DE RNA

[00237] Aproximadamente 1,75 ug de RNA total por amostra foi submetido a pull-down de poli-A para enriquecimento de mRNA, que foi então usado como entrada para o kit de preparação de RNA Tru- Seq da lllumina. As amostras foram preparadas para a plataforma Illumina HiSeq 4000 usando um Beckmann-Coulter Roboter e SPRI- works Fragment Library Kit |. Foi realizado PCR usando o kit de ampli- ficação KAPA PCR. As bibliotecas foram então sequenciadas pelo Co- lumbia Genome Center para gerar 30 milhões de leituras de extremi- dade única com comprimento de 100 bp. (Figura 11a)

ANÁLISE DA SEQ DE RNA

[00238] As leituras foram mapeadas para o genoma de referência humano (NCBlI/build 37.2) usando o alinhador STAR (versão 2.4.2) (Dobin A, Davis CA, Schlesinger F, et al. STAR: Ultrafast Universal RNA-Segq Aligner, Bioinformatics 2013; 29: 15 a 21) e foram quantifi- cadas no nível do gene usando a função sumarizarOverlaps do pacote R 'GenomicA-lignments' (Lawrence M, Huber W, Pages H, et al. Sof- tware para cálculo e anotação de intervalos genômicos, PLoS Compu- tational Biology 2013; 9: e1003118) com informações sobre anotações de genes do pacote R 'TxDb.Hsapiens.UCSC.hg19.knownGene' (Carl- son M, Maintainer BP. TxDb.Hsapiens.UCSC.hg19.knownGene: Anno- tation Package for TxDb Object(s). 2015). Os dados de RNA-seq foram depositados em GEO (ID: GSE118441). (Figura 11a) EXPRESSÃO DE GENE DIFERENCIAL (DEG)

[00239] A análise da expressão diferencial do gene entre as condi-

ções indicadas foi realizada usando as estruturas voom-limma imple- mentado o pacote R "limma" (Ritchie ME, Phipson B, Wu D, et al. Limma powers differential expression analyses for RNA-sequencing and microarray studies, Nucleic Acids Research 2015;43:e47). O efeito geral do tratamento do Composto 1 em comparação com o DMSO foi avaliado usando uma contabilidade de projeto multivariada para trata- mento e ponto de tempo.

ENRIQUECIMENTO DO CONJUNTO DE GENE

[00240] A implementação R de amostra única GSEA: análise de variação de conjunto de genes com parâmetros padrão foi usada (Hanzelmann S, Castelo R, Guinney J. GSVA: gene set variation analysis for microarray and RNA-seg data, BMC Bioinformatics 2013;14:7). As contagens brutas do sequenciamento de RNA foram normalizadas pa- ra contabilizar diferentes tamanhos de biblioteca e a variância foi esta- bilizada ajustando a dispersão a uma distribuição binomial negativa conforme implementado no pacote DESeg2 R (Love MI, Huber W, An- ders S. Moderated estimation of fold change and dispersion for RNA- seq data with DESeg2, Genome Biol 2014;15:550). Os conjuntos de genes foram recuperados dos módulos MSigDb v6.0 HALLMARK, vias canônicas C2 e assinaturas oncogênicas C6 (Subramanian A, Tamayo P, Mootha VK, et al. Gene set enrichment analysis: a knowledge-based approach for interpreting genome-wide expression profiles, Proc Natl Acad Sci U S A 2005;102:15545-50 and Liberzon A, Subramanian A, Pinchback R, et al. Molecular signatures database (MSigDB) 3.0, Bioinformatics 2011;27:1739 a 1740). A análise de enriquecimento di- ferencial desses conjuntos de genes entre DMSO e o tratamento com Composto 1 foi realizada usando o pacote limma R (Ritchie ME, Phip- son B, Wu D, et al. limma powers differential expression analyses for RNA-sequencing and microarray studies, Nucleic Acids Res 2015;43: e 47) e uma taxa de descoberta falsa (FDR) < 0,1 foi considerada signifi-

cativa. Os resultados de enriquecimento de amostra única para trajetó- rias selecionadas foram descritos em um mapa de calor usando o pa- cote pheatmap R (htto:/CRAN R-project org/package= pheatmap R package version 2017;1:2). (Figura 11a) ASSINATURAS DO CONJUNTO DE GENE: REACTOME APC C CDC20 MEDIATED DEGRADATION REACTO- Fase analógica tardia ME CONVERSION FROM APC C CDC20 TO APC C CDH1 IN REACTOME APC CDC20 MEDIATED DEGRADATION Desenrolamento — de

ENSAIO DE POLIMERIZAÇÃO DE TUBULINA LIVRE DE CÉLULA

[00241] Os ensaios foram realizados de acordo com as recomenda- ções do fabricante usando o kit de ensaio de polimerização de tubulina à base de fluorescência da Cytoskeleton (tt! BK011P) que usa > 99% de tubulina pura de cérebro suíno. Todos os medicamentos usados foram dissolvidos em DMSO e, em seguida, diluídos em água ultrapu- ra até a concentração final de 10X. A porcentagem final de DMSO foi mantida constante para todas as amostras. A tubulina foi preparada por ressuspensão a 2 mg/ml em PIPES a 80 mM pH 6,9, MgCl2 a 2,0 MM, EGTA a 0,5 mM, GTP a 1,0 mM, glicerol a 15% e repórter fluo-

rescente a 10 uM. Todas as amostras de fármacos (10X) foram adicio- nadas a uma placa de 96 poços de meia área pré-aquecida (Corning Costar, 3686) em duplicata e, em seguida, aquecida a 37 ºC por 1 min. A seguir, foi adicionada Tubulina (50 ul/poço) em todos os poços e a placa colocada em um leitor de placas pré-aquecido a 37 ºC. A placa foi misturada por meio, agitação orbital por 5 segundos, e a fluores- cência medida a cada 60 segundos por 90 minutos (Ex: 340 a 360 +/- nm, Em: 410 a 460 nm +/- 20 nm) em um leitor de placas BioTek Synergy 2. As taxas de polimerização (unidades de fluorescên- cia/minuto) foram determinadas medindo a inclinação máxima (por re- gressão linear) da porção linear da fase de crescimento da curva de polimerização. (Figura 11e e Figura 11f)

ANÁLISE DO TEOR DE TUBULINA LIVRE

[00242] A tubulina de heterodímero livre foi separada da tubulina incorporada em microtúbulos de acordo com as recomendações do fabricante usando o Microtubule/Tubulin in vivo Assay Biochem Kit (Cytoskeleton, %BKO038). As células foram semeadas em placas de 12 poços, de modo que —16 horas depois, elas seriam aproximadamente 50 a 60% confluentes. As células foram tratadas com fármacos nas concentrações indicadas, ou veículo DMSO, por 2 horas, momento em que foram lavadas uma vez com PBS e coletadas. Todas as etapas deste ensaio foram realizadas a 37 ºC, para preservar a massa dos microtúbulos. As células foram lisadas em Tampão de Estabilização de Microtúbulos e Lise da Cytoskeleton (LMS01) suplementado com GTP a 0,1 MM, ATP a 1,0 mM e coquetel de inibidor de protease 1X (ft PICO02). As amostras foram centrifugadas a 1.000 x g por 5 minutos a 37 ºC. O sobrenadante foi cuidadosamente coletado para ultracentifu- gação e o pélete de baixa velocidade (LSP) foi suspenso em tampão de amostra SDS (SDS01) e congelado a -20 ºC para posterior análise por western blot. O sobrenadante de baixa velocidade foi centrifugado a 100.000 x g por 60 minutos a 37 ºC. O sobrenadante (sobrenadante de alta velocidade, HSS) foi cuidadosamente coletado, ressuspenso em tampão de amostra SDS e congelado a -20 ºC para análise poste- rior por western blot. O pélete (pélete de alta velocidade, HSP) foi pri- meiro dissolvido em tampão de despolimerização de microtúbulos 1X (BUFO1) por 15 minutos, ressuspenso em tampão de amostra SDS e congelado a -20 ºC para análise posterior por western blot. (Figura 11b)

IMUNOCITOQUÍMICA

[00243] As células foram semeadas em lamelas de vidro em placas de 12 poços. As lamelas foram preparadas por imersão em HCl a IN (60 ºC, 6 horas), lavagem em etanol 70% e revestimento com poli-l- lisina (Sigma, P5899) de acordo com as instruções do fabricante. As células foram semeadas de forma que ficassem —-50% confluentes no dia seguinte. As células foram então tratadas com veículo (DMSO, < 0,003%) ou Composto 1 a 1 uM e incubadas por 24 horas. Após o tra- tamento, as células foram lavadas com TBS e a tubulina livre foi extra- ída com Tampão Brinkley 1980 (PIPES 80 mM pH 6,8, MgCl2 a 1 mM, EGTA a 1 mM) suplementadas com EGTA a 4 mM e Triton-X a 0,5% (30 segundos). Após a extração, as células foram fixadas por 20 minu- tos em 4% de formaldeído diluído em tampão da Cytoskeleton (MES a mM pH 6,1, KCI a 138 mM, MgCl2 a 3 mM, EGTA a 2 mM) suple- mentado com sacarose a 0,32 M. Seguindo a fixação, as células foram lavadas com TBS e então bloqueadas em TBS-T (0,1% Triton-X) + 2% BSA + 22,52 mg/ml de glicina por 30 minutos. O anticorpo beta- tubulina foi incubado durante a noite a 4 ºC (Abcam179513, 1:1000), seguido por incubação com anticorpo secundário por uma hora em temperatura ambiente usando um anticorpo secundário anti-coelho de cabra 594 (Life Technologies, A11012) a 1:500. Todas as lavagens foram feitas com TBS-T e todas as incubações de bloqueio e de anti-

corpo foram feitas em TBS-T (0,1% Triton-X) + 2% BSA + 22,52 mg/ml de glicina. Após a coloração, as células foram incubadas com DAPI (BioLegend, 422801) a 300 nM durante 5 min, lavadas e montadas com ProLong Diamond Antifade Mountant (Invitrogen, P36965). As là- minas foram deixadas secar por 24 horas em temperatura ambiente e a seguir armazenadas a 4 ºC no escuro até a aquisição das imagens.

[00244] A imagem confocal foi realizada usando um anexo confocal de varredura a laser Al em um suporte de microscópio Eclipse Ti usando uma objetiva de imersão em óleo ApoTIRF 60x/1,49 e lasers padrão e conjuntos de filtros (Nikon Instruments, Melville, NY). O diâ- metro do orifício foi definido para 1 unidade Airy, e seções ópticas úni- cas foram adquiridas perto da superfície basal das células para maxi- mizar a detecção de microtúbulos. Todas as condições de imagem fo- ram mantidas constantes. As imagens foram visualizadas, analisadas e preparadas para publicação usando a distribuição Fiji de ImageJ (Schindelin J, Arganda-Carreras |, Frise E, et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nature Methods 2012;9:676 a 682). (Figura 10d e Figura 10f)

REPRODUÇÃO E GONOTIPAGEM ANIMAL

[00245] “Modelos geneticamente modificados foram gerados por cruzamento das seguintes cepas modificadas, de origens genéticas misturadas:

[00246] Kras!St8612P — Relatada em Tuveson DA, Shaw AT, Willis NA, et al. Endogenous oncogenic K-ras(G12D) stimulates proliferation and widespread neoplastic and developmental defects, Cancer Cell 2004;5:375 a 87.

[00247] Tp53!S-Ri72H — Relatada em Olive KP, Tuveson DA, Ruhe ZC, et al. Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li- Fraumeni syndrome, Cell 2004;119:847 a 60.

[00248] “Pdx1-Cre"? — Relatada em Hingorani SR, Petricoin EF, Mai-

tra A, et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse, Cancer Cell 2003;4:437 a 450.

[00249] Tp53Fº* — Relatada em Jonkers J, Meuwissen R, van der Gulden H, et al. Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer, Nat Genet 2001;29:418 a 425.

[00250] — KrasFSF.612P Jackson Laboratory, Estoque Nº. 008653.

[00251] “Tp53R!7?H — Esta cepa foi gerada pelo cruzamento da cepa Tp53!S--R1724 com um Deleter-Cre para induzir a recombinação da linha germinativa, e em seguida deletando o alelo Cre. Esta recombinação induzida do cassete Lox-STOP-LOX no alelo Tp53!S--R172H, resultando em um alelo Tp53R'7?H de linha germinativa com um site de LoxP exó- geno único no íntron 1.

[00252] — Pdx1-FIpO'!! — O promotor proximal 6kb do transgene Pdx1- Cre foi fundido com o códon de partida do códon de mamífero otimiza- do, recombinase Flp termoestável (FIDO), com subsequente fusão da extremidade 5' do quadro de leitura aberto FIDO para a sequência de sinal de poliadenilação hGH.

[00253] Bmi1Fºx — Descrito em Mich JK, Signer RA, Nakada D, et al. Prospective identification of functionally distinct stem cells and neuros- phere-initiating cells in adult mouse forebrain, Elife 2014;3:e02669.

[00254] Rosa26ºeFRT2 — Descrito em Ventura A, Kirsch DG, McLa- ughlin ME, et al. Restoration of p53 function leads to tumour regression in vivo, Nature 2007;445:661 a 665.

[00255] — Camundongos KrastSt6120/+: pó3LsL.612D+: pax1-Cre'* (KPC) e modelos relacionados foram usados como descrito em Hingorani SR, Wang L, Multani AS, et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic duc- tal adenocarcinoma in mice, Cancer Cell 2005;7:469 a 483. As células J1002 foram derivadas de um tumor pancreático autóctono em um camundongo KrasFSF.612D+; pogRITAH*+: Pax1-FIDO!*; Bmi1lF/FI; Ro- sa26º"eERT2!+ (KPFBR) que surgiu após o tratamento cerúleo (para ace- lerar o desenvolvimento do tumor), mas antes do tratamento com ta- moxifeno. A genotipagem foi realizada pela Transnetyx (Cordova, TN). Os estudos usaram animais do sexo masculino e feminino. Os animais receberam ração padrão e foram alojados sob um ciclo claro/escuro de 12 horas.

GERAÇÃO DE LINHAGENS CELULARES DO TUMOR PRIMÁRIO DE KPFBR

[00256] Um pequeno pedaço de tumor (-30 mg) foi mecanicamente dissociado por corte com tesoura estéril por um mínimo de cinco minu- tos em tampão de digestão de tumor resfriado em gelo (5 ml/amostra). O tampão de digestão do tumor consistia em 75 pg/ml de DNase | (ThermoScientific, ENO521), 80 pg/ml de Dispase Il (ThermoFisher, 17105041) e 1 mg/ml de Colagenase V (Sigma Aldrich, C9263) diluído em PBS estéril. Após o corte, o tumor dissociado foi incubado em tam- pão de digestão a 37 ºC por 20 minutos. Após a digestão, 40 ml de PBS gelado foram usados para diluir o tumor digerido e os 45 ml intei- ros foram filtrados através de um filtro de malha estéril de 70 um. À suspensão de célula única foi centrifugada (300 x g, 5 min), lavada uma vez com PBS, ressuspensa em meio ductal sem soro (SFDM, re- ceita abaixo) e semeada em 1 a 2 poços de uma placa de 6 poços re- vestidos com colágeno (Corning, 354400). As células foram expandi- das em SFDM em placas revestidas com colágeno e transicionadas para DMEM padrão (10% FBS, 1% Pen-Strep, 1% L-glutamina) e pla- cas de cultura de tecidos padrão (sem colágeno). RECEITA DE SFDM:

[00257] Meio DMEM/F-12 (ThermoFisher, 12634010)

[00258] 1,22 mg/ml de nicotinamida (Sigma, N3376)

[00259] 5 mg/ml de glucose (Sigma, G6152)

[00260] 5% I1ITS+ (BD Biosciences, 354352)

[00261] 2,5 ug/mlde Amfotericina B (ThermoFisher, 15290018)

[00262] 5% Nu-serum IV (Corning, 392-0321)

[00263] 25 ug/mlde Extrato Pituitário Bovino (Sigma, 1476)

[00264] 20 ng/mlde EGF (ThermoFisher, PMG8041)

[00265] 50 nM de 3,3'5-Triiodo-L-tironina (Sigma, 564605)

[00266] 1uM de Dexametasona (Sigma, D1756)

[00267] 100 ng/ml de toxina colérica (Quadratech, 100) AVALIAÇÃO DA DELEÇÃO DE BMI1

[00268] Para avaliar a recombinação do alelo Bmi1 condicional em células J1002, o PCR foi realizado no DNA isolado por extração com fenol-clorofórmio-álcool isoamílico. As células foram digeridas durante a noite a 55 ºC em tampão de lise (Tris a 10 mM pH 7,5, EDTA a 10 MM, NaCl a 10 mM e sarcosila a 0,5%) suplementado com 1 mg/ml de Proteinase K (New England BioLabs, P8107S). No dia seguinte, o DNA foi isolado combinando os lisados com uma mistura de 50% de fenol, 48% de clorofórmio e 2% de álcool isoamílico e centrifugação a

16.000 x g por 30 minutos. A camada superior contendo DNA foi re- movida e precipitada e lavada com 2,5 volumes de etanol a 100%. As concentrações de DNA foram medidas usando um espectrofotômetro ThermoScientificTM NanoDrop 2000. As reações de PCR foram reali- zadas usando GoTag€6 Green Master Mix (Promega, M712B), 1 ng de DNA e 250 nM de cada iniciador ("primer"). Três iniciadores ("primers") foram usados (DN437, DN438, DN946) que amplificam o Bmi1 de tipo selvagem (Bmi1"""), Bmi1 com sítios loxP inseridos (Bmi1”º) e Bmi1 recombinado (Bmi1º) em uma única reação. Após o PCR, o DNA am- plificado foi resolvido em um gel de agarose a 2% suplementado com SYBRTY Safe DNA Gel Stain (Thermo-Fisher, S33102) e visualizado usando uma luz UV.

INICIADORES:

[00269] —DNA437: gctagcattectagttttac

[00270] —“DN438: ggcacagtgatgaggtattg

[00271] —“DN946: cacgaggtgcttctttecte CONDIÇÕES DE CICLAGEM:

[00272] 1.95ºC,2min

[00273] 2.95ºC,15seg

[00274] 3.51.4ºC,15seg

[00275] 4.68ºC,45 seg

[00276] (Etapas repetidas 2-4 30 vezes)

[00277] 5.68ºC,5min

[00278] 6.4ºC,sempre AMPLICONS ESPERADOS:

[00279] —Bmi1 do tipo selvagem (Bmi1Y"") = 400 bp

[00280] Bmif Floxed (Bmi1"”!) = 500 bp

[00281] — Bmi1 recombinado (Bmi1 º) = 300 bp

ESTUDO DE INTERVENÇÃO DO MODELO DE PDX

[00282] “Fragmentos de tumor de passagem precoce do modelo Champions CTG-1462 foram implantados por via subcutânea em ca- mundongos nu/nu e, em seguida, randomizados para um braço de tra- tamento uma vez que os tumores atingiram 150 a 300 mmº?. Camun- dongos (n = 5/grupo) foram tratados em um dos sete braços: veículo, gemcitabina (50 mg/kg, q.w., IP), nab-paclitaxel (10 mg/kg, IV, q.w. x3), Composto 1 (12,5 mg/kg, duas vezes por semana x4, PO), ou combinações de dose completa de gemcitabina + nab-paclitaxel, gemcitabina + Composto 1, nab-paclitaxel + Composto 1 ou gemcita- bina + nab-paclitaxel + Composto 1. Os pontos finais foram quando um tumor atingiu 1.500 mmº ou após 90 dias de estudo. Os diâmetros de comprimento (L) e largura (W) dos tumores foram medidos usando pa- químetros digitais e os camundongos foram pesados duas vezes por semana. O volume do tumor foi calculado como (L x W2)/2. (Figura 12a e Figura 12b) ESTUDO DE INTERVENÇÃO/SOBREVIDA DE KPC

[00283] A formação de tumor em camundongos KPC foi monitorada por palpação semanal até a detecção de uma massa. Após palpação positiva, a massa foi monitorada por ultrassom duas vezes por semana até que o tumor atingisse um tamanho inscrito de 4 a 7 mm de diâme- tro médio. Uma vez inscritos, os camundongos KPC foram inscritos aleatoriamente em um braço de tratamento do estudo de intervenção. Os camundongos foram tratados com veículo, Composto 1 (17 mg/kg, PO, duas vezes por semana), gemcitabina por si só (100 mg/kg, |P, duas vezes por semana) ou Composto 1 + gemcitabina. Os camun- dongos que receberam o Composto 1 também receberam o veículo de gemcitabina (solução salina, IP, duas vezes por semana) em um vo- lume (ul) de 50X o peso corporal (g). Os camundongos que receberam gencitabina também receberam veículo do Composto 1 (0,5% de hi- droxipropilmetilcelulose com 0,1% de Tween80 (p/v), PO, duas vezes por semana) em um volume (ul) de 5,7X do peso corporal (g). Todas as combinações de fármaco e veículo foram administradas simultane- amente. MEDIÇÃO DOS NÍVEIS DO COMPOSTO 1 EM AMOSTRAS DO

PLASMA E TECIDO

[00284] “Amostras de plasma e tecido sanguíneo a serem usadas para análise foram imediatamente congeladas em gelo seco e arma- zenadas a -80 ºC até a análise. As concentrações do Composto 1 nas amostras foram quantificadas usando cromatografia líquida de alto de- sempenho com espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS). O Composto 1 e seu padrão interno (Composto 1 deuterado) foram recu- perados por extração por precipitação de proteína a partir de amos- tras.

[00285] Para o estudo de curso de tempo farmacocinético do plas- ma, uma curva padrão foi feita para cobrir concentrações entre 0,001 ug/ml e 3,0 ug/ml. O limite inferior de quantificação (LLOQ) para o Composto 1 (qualquer uma das versões) no plasma foi 0,001 ug/ml. (Figura 4a)

[00286] Parao estudo farmacocinético que avaliou plasma, músculo do quadríceps e tecido tumoral após uma única dose do Composto 1, as condições de ensaio foram as seguintes (Figura 5a):

[00287] Plasma: Uma curva padrão foi feita para cobrir concentra- ções entre 0,002 ug/ml e 6,0 ug/ml. O LLOQ para o Composto 1 (qual- quer versão) no plasma foi de 0,001 pg/ml.

[00288] “Músculo quadríceps: Uma curva padrão foi feita para cobrir concentrações entre 0,001 ug/g do tecido úmido e 3,0 ug/g de tecido úmido. O LLOQ para o Composto 1 (qualquer das versões) foi de 0,01 vg/g de tecido úmido.

[00289] “Tecido tumoral: Uma curva padrão foi feita para cobrir con- centrações entre 0,001 ug/g de tecido úmido e 3,0 ug/g de tecido úmi- do. O LLOQ para o Composto 1 (qualquer das versões) foi de 0,02 vg/g de tecido úmido.

ULTRASSOM

[00290] Ultrassonografia tumoral e quantificação de volume foram realizadas conforme descrito em Sastra SA, Olive KP, Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound, Methods Mol Biol 2013;980:249-66. (Figura 7a e Figura 7b) IMUNO-HISTOQUÍMICA

[00291] Para preparar amostras para imuno-histoquímica, os teci- dos foram primeiro fixados durante a noite em 10% de formalina tam- ponada com fosfato e, em seguida, armazenados em 70% de etanol para armazenamento a longo prazo. Os tecidos fixados foram então submetidos a um protocolo de desidratação padrão e incluídos em blocos de cera de parafina. Os tecidos foram seccionados com 5 um de espessura usando um micrótomo Leica RM 2235, montado em lâ- minas de vidro carregadas positivamente e cozidos a 60 ºC por 30 mi- nutos. Para se preparar para a coloração, as lâminas foram primeiro desparafinadas em xileno e depois reidratadas em uma série de eta- pas de etanol, antes de enxaguar em água destilada. Em seguida, a recuperação do antígeno foi realizada em um tampão de recuperação do antígeno específico de anticorpo determinado experimentalmente (geralmente citrato a 10 mM, pH 6,0 ou Tris a 10 mM, pH 10,0). O tampão de recuperação de antígeno foi aquecido até a ebulição em uma panela de pressão, momento em que lâminas foram introduzidas por 5 minutos. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, as lâminas foram imersas em peróxido de hidrogênio 3% em PBS por 20 minutos para extinguir as peroxidases endógenas.

[00292] As lâminas foram então bloqueadas por uma hora à tempe- ratura ambiente em TBS-T (0,1% Tween20) + 1,5% de soro de cavalo normal (Vector Laboratories, S-2000) + Animal Free Blocker a 2% (Vector Laboratories, SP- 5030). Os anticorpos primários foram diluí- dos em solução de bloqueio e incubados durante a noite a 4ºC nas concentrações indicadas. No dia seguinte, a incubação secundária do anticorpo foi realizada à temperatura ambiente por 30 minutos usando O kit de Detecção de Polímero (Vector Laboratories, MP-7401) do IgG Anti-Coelho HRP IMmMPRESS (Peroxidase). A detecção foi realizada com substrato IMMPACT DAB peroxidase (HRP) (Vector Laboratories, SK-4105) e as lâminas foram subsequentemente contrastadas com hematoxilina, desidratadas em xileno e cobertas com uma lamela com Permount (Fisher, S70104). (Figura 6d e Figura 6e) ANTICORPOS IHC:

[00293] PH3: Sinalização Celular, 9701, 1:100

[00294] — CC3: Sinalização Celular, tt9664S, 1:100

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para tratar câncer pancreático em um indivíduo com necessidade do mesmo caracterizado pelo fato de que com- preende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de 5-fluoro-2- (6-fluoro-2-metil-1H-benzo[d]imidazol|-1-il)-N4-[4-(trifluorometil )fenil]piri- midina-4,6-diamina, que tem a estrutura de Fórmula (I): F F e Ok. F

POSA O

OX

N Fórmula (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de 5-fluoro-2-(6-fluoro-2-metil-1H-benzo[d]imi- dazol-1-il)-N4-[4-(trifluorometil )'fenil]pirimidina-4,6-diamina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma em combinação com uma quantidade eficaz de um ou mais agentes quimioterápicos.

3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o agente quimioterápico é selecionado dentre gem- citabina, nab-paclitaxel e uma combinação dos mesmos.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer pancreático é adenocarcinoma ductal pan- creático.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de 5-fluoro-2-(6-fluoro-2-metil-1H-benzo[d]imi- dazol-1-il)-N4-[4-(trifluorometil )'fenil]pirimidina-4,6-diamina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma na forma de uma composição farmacêutica.