BR112021001739A2 - métodos para tratar distúrbios neurodegenerativos - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a tramiprosato e derivados do mesmo, que são fornecidos aqui para tratar distúrbios neurodegenerativos, tal como doença de Alzheimer (AD).

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODOS PARA TRATAR DISTÚRBIOS NEURODEGENERATIVOS". Pedidos Relacionados

[0001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório U.S. 62 / 713.061, depositado em 1 de agosto de 2018, cujo conteúdo intei- ro é incorporado neste documento por referência. Fundamentos

[0002] A doença de Alzheimer (AD) é uma doença degenerativa progressiva do cérebro associada principalmente ao envelhecimento. A magnitude crescente do custo dos cuidados de saúde para a socie- dade devido à AD é sublinhada pelo número de pacientes afetados em regiões geográficas com mais de 5,7 milhões nos EUA (Alzheimer's Association 2018) e 35 milhões em todo o mundo (World Alzheimer Report 2016). A apresentação clínica da AD é caracterizada por perda de memória, cognição, raciocínio, julgamento e orientação. À medida que a doença progride, as habilidades motoras, sensoriais e linguísti- cas também são afetadas até que haja comprometimento global de múltiplas funções cognitivas. Essas perdas cognitivas ocorrem gradu- almente, mas geralmente levam a uma deficiência grave e eventual morte na faixa de quatro a doze anos.

[0003] Atualmente, as duas classes de drogas aprovadas para a AD são os inibidores da colinesterase e a memantina. Ambas as clas- ses são agentes sintomáticos que direcionam as deficiências de neu- rotransmissores secundários observadas na AD. Nenhuma das clas- ses, no entanto, demonstra eficácia além de 6 meses de tratamento em ensaios clínicos e não há evidências dessas classes direcionando a patologia da doença subjacente. Os anticorpos anti-amiloides emer- gentes (por exemplo, aducanumabe) mostram-se promissores como potenciais tratamentos modificadores da doença quando usados nos estágios iniciais da doença. Ver, por exemplo, Lasser et al. Efficacy and Safety of Gantenerumab in Prodromal AD: Results from Scarlet Road—a Global, Multicenter Trial. Alzheimer's Association Internatio- nal Conference (AAIC) 2015 Abstract ID: 5963. No entanto, algumas imunoterapias amiloides foram associadas a um risco dependente da dose de anormalidades de imagem relacionadas à amiloide com ede- ma (ARIA-E), com risco aumentado relatado em portadores de APOEA. Ver, por exemplo, Salloway et al. Two Phase 3 Trials of Bapi- neuzumab in Mild-to-Moderate Alzheimer's Disease. N Engl J Med 2014; 370:322-33; Sevigny et al., The antibody aducanumab reduces Abeta plaques in Alzheimer's disease. Nature 2016; 537:50-6; and Caselli et al. Longitudinal modeling of age-related memory decline and the APOE epsilon4 effect. N Engl J Med 2009; 361:255- 263. Isso re- presenta um desafio de desenvolvimento, uma vez que as doses que mostram a depuração da amiloide e o benefício clínico estão associa- das a uma incidência de aproximadamente 40% de ARIA-E nas duas doses mais altas de aducanumabe. Ver Sevigny et al. Um regime de titulação de dose com aducanumabe ainda mostra aproximadamente 35% de incidência de ARIA-E em portadores de APOE. Ver, por ex- emplo, Viglietta et al., Aducanumab titration dosing regimen: 12-month interim analysis from prime, a randomized double blind, placebo- controlled phase Ib study in patients with prodromal or mild Alzheimer's disease. J Prev Alzheimers Dis 2016; 3, suppl 1:378. Embora ARIA-E possa ser assintomático ou levemente sintomático na maioria dos pa- cientes, alguns pacientes podem desenvolver convulsões ou outros eventos adversos graves. O risco de ARIA-E em pacientes com AD pode requerer monitoramento por MRI, o que é oneroso na população idosa e pode limitar a utilidade dessas drogas na prática clínica.

[0004] Os oligômeros AB42 solúveis de baixo peso molecular são agora reconhecidos como os principais impulsionadores da patogêne- se da AD e o aumento da concentração de oligômeros AB42 se corre-

laciona intimamente com o início e progressão dos sintomas clínicos. Ver, por exemplo, Viglietta et al. Foi demonstrado que os oligômeros AB solúveis causam danos sinápticos, morte neuronal, promovem a fosforilação da tau e conduzem a patologia da tau. Ver, por exemplo, Esparza et al., Amyolid beta oligomerization in Alzheimer's dementia vs. high pathology controls. Ann Neurol 2013; 73(1):104-119; Hashimo- to et al. Apolipoprotein E, especially apolipoprotein E4, increases t pep- tide. J Neurosci. 2012; 32:15181-15192; Ono et al., Low-n oligomers as therapeutic targets of Alzheimers disease. J. Neurochem. 2011;117: 19-28; Townsend et al., Effects of secreted oligomers of amyloid beta-protein on hippocampal synaptic plasticity: a potent role for trimers. J. Physiol.; 2006;572:477-92; and Lambert et al. Diffusible, nontfibrillar ligands derived from A 1-42 are potent central nervous sys- tem neurotoxins. PNAS. 1998; 95:6448—53. É importante ressaltar que os pacientes com APOE 4/4 AD têm demonstrado ter uma carga maior de oligôêômeros amiloides solúveis (Usui et al., Site-specific modification of Alzheimer's peptides by cholesterol oxidation products enhances aggregation energetics and neurotoxicity. PNAS.; 2009; 106:18563-8), que é provavelmente responsável pelo início precoce da doença nesta população.

[0005] Até o momento, apenas os agentes direcionados a oligôme- ros AB, como aducanumabe e ALZ-801 / tramiprosato, mostraram be- nefícios clínicos em pacientes com AD positiva para amiloide. Trami- prosato, ácido 3-amino-1-propanossulfônico (3APS) é um agente anti- agregação amiloide oral que reduz a neurotoxicidade do oligômero be- ta amiloide. Os ensaios de tramiprosato de Fase 3 na AD leve a mode- rada mostraram um excelente perfil de drogas, incluindo a capacidade de retardar a redução do volume do hipocampo cerebral e de melhorar a cognição e função do cérebro em análises de subconjunto. Ver, por exemplo, Gauthier, S. et al. Effect of tramiprosate in patients with mild-

to-moderate Alzheimer's disease: exploratory analyses of the MRI sub- group of the Alphase study. J Nutr Health Aging 13, 550-557 (2009); Saumier, D., Duong, A., Haine, D., Garceau, D. & Sampalis, J. Do- main-specific cognitive effects of tramiprosate in patients with mild to moderate Alzheimer's disease: ADAS-cog subscale results from the Alphase Study. J Nutr Health Aging 13, 808—812 (2009); and Aisen, P. S. et al. Tramiprosate in mild-to-moderate Alzheimer's disease - a ran- domized, double-blind, placebo-controlled, multi-centre study (the Al- phase Study). Arch Med Sci 7, 102—111 (2011).

[0006] ALZ-801 está em desenvolvimento clínico como um inibidor oral de pequenas moléculas da formação de oligômero beta amiloide (AB) para o tratamento da doença de Alzheimer (AD). ALZ-801 é um conjugado de valina de tramiprosato com propriedades farmacocinéti- cas melhoradas e tolerabilidade gastrointestinal. Ver, por exemplo, Hey et al., Clinical Pharmacokinetics and Safety of ALZ-801, a Novel Prodrug of Tramiprosate in Development for the Treatment of Alz- heimer's Disease. Clin Pharmacokinetics 2018; 315-333. O tramiprosa- to, a fração ativa do ALZ-801, inibe a formação de oligômeros AB in vitro. Ver, por exemplo, Kocis et al., Elucidating the Abeta42 Anti- Aggregation Mechanism of Action of Tramiprosate in Alzheimer's Dis- ease: Integrating Molecular Analytical Methods. Pharmacokinetic and Clinical Data. CNS Drugs 2017; 31:495-509. O tramiprosato oral foi avaliado previamente em dois estudos de Fase 3, que incluíram 2.015 pacientes com AD leve a moderada, tratados com 100 mg BID de tra- miprosato, 150 mg BID de tramiprosato ou placebo. Os dados de se- gurança desses estudos de Fase 3 e do estudo de extensão de segu- rança sugerem um perfil de segurança favorável com exposições ao tramiprosato de até 2,5 anos. Ver, por exemplo, Abushakra et al., Clin- ical effects of tramiprosate in APOE 4/4 homozygous patients with mild Alzheimer's disease suggest disease modification potential. J Prev Al-

zheimers Dis 2017; 4:149—56. Em uma análise de subgrupo de indiví- duos com o alelo £4 da apolipoproteína E (APOE4), houve um benefí- cio positivo e clinicamente significativo na cognição. Sumário

[0007] Foi agora descoberto que um metabólito de tramiprosato, ácido 3-sulfopropanoico (3-SPA), está presente no fluido cérebro- espinhal (CSF) humano e no plasma de sujeitos virgens de tratamento. Ver, por exemplo, FIG. 2. Verificou-se que este 3-SPA endógeno inibia a agregação de AB42 em pequenos oligômeros com eficácia compará- vel à do tramiprosato. Ver, por exemplo, FIG. 5 e FIG. 6.

[0008] Além disso, identificamos uma correlação inversa entre a gravidade do comprometimento cognitivo e a concentração de 3-SPA em sujeitos com AD leve a moderada, sugerindo, portanto, que o nível de 3-SPA diminui conforme a gravidade do comprometimento cognitivo aumenta e que a manutenção de níveis mais elevados de 3-SPA pode desempenhar um papel na prevenção ou diminuição do declínio cogni- tivo associado à AD, por exemplo, conforme medido pela pontuação do Mini Exame do Estado Mental ("MMSE"), um método bem docu- mentado para determinar a gravidade da Doença de Alzheimer no su- jeito. Ver, por exemplo, Pangman, et al., Applied Nursing Research. 13 (4): 209-213. O que descobrimos foi que sujeitos com AD com uma pontuação MMSE mais alta (ou seja, menos comprometimento cogniti- vo) possuíam níveis mais elevados de 3-SPA no CSF quando compa- rados a sujeitos com pontuações MMSE mais baixas. Ver, por exem- plo, FIG. 7. Essa correlação nos permitiu determinar a tendência, ou linha de melhor ajuste, entre a pontuação MMSE e a concentração de 3-SPA no CSF para sujeitos na população de teste que sofriam de AD leve a moderada.

[0009] A partir dessas descobertas, hipotetizamos que o aumento dos níveis de 3-SPA no CSF, acima daqueles encontrados em sujeitos com AD com o mínimo comprometimento cognitivo (ou seja, MMSE = 30) (um "nível de limiar de linha de base") e manter tais níveis eleva- dos deve proteger aqueles sujeitos de declínio cognitivo adicional ou reduzir a taxa de declínio cognitivo em comparação com um tratamen- to com placebo. O aumento dos níveis de CSF de 3-SPA acima de tal nível de limiar de linha de base pode ser alcançado pela administração de ALZ-801, tramiprosato ou outra pró-droga ou precursor de trami- prosato (todos os quais, em última análise, produzem 3-SPA), ou uma forma exógena de 3-SPA, incluindo uma pró-droga ou um precursor de 3-SPA.

[0010] Em um aspecto, portanto, são fornecidos aqui métodos pa- ra o tratamento de distúrbios neurodegenerativos, como a doença de Alzheimer (AD) em sujeitos com uma concentração de 3-SPA abaixo de um determinado nível de limiar de linha de base, por exemplo, abaixo do valor de concentração de 3-SPA no CSF (t+ 10%) determi- nado para um MMSE de 30 em um melhor ajuste de uma população aleatória de sujeitos com doença de Alzheimer de comprometimento cognitivo variável.

[0011] Também são fornecidos aqui métodos para o tratamento de sujeitos selecionados com AD definidos por várias gravidades de com- prometimento cognitivo. Por exemplo, em um aspecto, os sujeitos se- lecionados para o tratamento podem ter certas pontuações MMSE in- dicando, por exemplo, uma gravidade de AD de leve ou leve a mode- rada. Em outros aspectos, os sujeitos podem ter certas pontuações MMSE e ter um ou mais do alelo £€4 do gene da apolipoproteína E (APOE) (por exemplo, ser homozigoto para APOE4), um teste de me- mória anormal de Lembrete Seletivo Livre e Cued (FCSR) indicando leve comprometimento cognitivo e uma certa classificação de demên- cia clínica (CDR).

[0012] Além disso, são fornecidos aqui métodos para prevenir a

7I41 demência ou prevenir declínio cognitivo adicional em sujeitos com uma concentração de 3-SPA abaixo de um certo nível limiar de linha de ba- se, por exemplo, abaixo do valor de concentração de 3-SPA no CSF (t+ 10%) determinado para um MMSE de 30 em um melhor ajuste de uma população aleatória de indivíduos que sofrem de declínio cognitivo. Breve Descrição das Figuras

[0013] FIG. 1 ilustra a transformação metabólica de ALZ-801 em ácido 3-sulfopropanoico (3-SPA).

[0014] FIG. 2 é um gráfico que mostra a concentração (ng / ml) de 3-SPA presente no fluido cérebro-espinhal humano (CSF) de sujeitos nãive de drogas que não foram diagnosticados com AD.

[0015] FIG. 3 representa o tempo de deriva da espectrometria de mobilidade de íon-espectrometria de massa (IMS-MS) em função da massa / carga (m / z) após 4 horas de incubação de AR42 com 3-SPA na razão de 1:1000 com o perfil de oligômeros AR42. A detecção de dímeros, trímeros e pentâmeros AR42 nestas condições revela que 4 horas de incubação in vitro não foram suficientes para uma inibição completa da formação de oligômero.

[0016] FIG. 4 representa o tempo de deriva da espectrometria de mobilidade de íon-espectrometria de massa (IMS-MS) em função da massa / carga (m / z) após 24 horas de incubação mostra o perfil de oligôêômeros AR42 com excesso de 1.000 vezes de 3-SPA. Apenas pen- tâmeros foram detectados.

[0017] FIG. 5 é a representação de um experimento de dinâmica molecular mostrando a conformação semicíclica de AR42 na presença de 1.000:1 em excesso de 3-SPA. O resultado funcional do 3-SPA é semelhante aos resultados finais funcionais, ou seja, a inibição da for- mação do oligêômero ARA42, encontrado com o tramiprosato (Kocis et al., Pharmacokinetic and Clinical Data. CNS Drugs 2017; 31:495-509).

[0018] FIG. 6 ilustra uma correlação inversa entre os níveis de 3-

SPA no CSF humano de uma população de sujeitos com AD com pon- tuações MMSE variáveis (gravidade da AD).

[0019] FIG. 7 representa os espectros LC-MS / MS do padrão de referência 3-SPA autêntico (derivatizado com EDC e TFEA).

[0020] FIG. 8 Painel A representa os cromatogramas LC-MS / MS para o padrão 3-SPA.

[0021] FIG. 8 Painel B representa os cromatogramas LC-MS / MS para CSF humano de um único sujeito AD com MMSE 20.

[0022] FIG. 9 mostra as curvas farmacocinéticas médias para do- ses únicas orais e iv de 3-SPA em ratos SD machos (30 mg / kg e 10 mg / kg, respectivamente; n = 3). Os dados mostrados são média + SD.

[0023] FIG. 10 mostra o curso médio do cérebro, CSF e concen- tração plasmática de 3-SPA após uma dose oral única de 30 mg / kg em ratos SD machos (n = 3). Os dados mostrados são média + SD. Descrição Detalhada

[0024] Tramiprosato (homotaurina, ácido 3-amino-1- propanossulfônico (3-APS) ou Alzhemed'Y) é um composto adminis- trado por via oral que se liga a AB solúvel e reduz a agregação amiloi- de e a deposição subsequente. Ver, por exemplo, Gervais et al., Tar- geting soluble Abeta peptide with Tramiprosate for the treatment of brain amyloidosis. Neurobiol Aging. 2007;28:537—47. In vitro, o trami- prosato fornece neuroproteção contra a neurotoxicidade induzida por AB em culturas neuronais e organotípicas do hipocampo de camun- dongo e reverte a inibição da potenciação de longo prazo induzida por AB (LTP) em hipocampo de rato (Krzywkowski et al., Tramiprosate Prevents Amyloid Beta-induced Inhibition of Long-term Potentiation in Rat Hippocampal Slices. 8th International Conference AD/PD; March 14-18, 2007; Salzburg Austria), em parte, por meio da ativação dos receptores do ácido B-aminobutírico A (GABA-A). Ver, por exemplo,

Azzi M, Morissette C, Fallon L. Involvement of both GABA-dependent and -independent pathways in tramiprosate neuroprotective effects against amyloid-beta toxicity. 8th International Conference AD/PD; March 14-18, 2007; Salzburg Austria. O tramiprosato oral foi avaliado previamente em dois estudos de Fase 3, que incluíram 2.015 pacien- tes com AD leve a moderada, tratados com 100 mg BID de tramiprosa- to, 150 mg BID de tramiprosato ou placebo. Os dados de segurança desses estudos de Fase 3 e do estudo de extensão de segurança su- gerem um perfil de segurança favorável com exposições ao tramipro- sato de até 2,5 anos. Ver Abushakra et al., Clinical effects of tramipro- sate in APOE4/4 homozygous patients with mild Alzheimer's disease suggest disease modification potential. J Prev Alzheimers Dis 2017; 4:149—56. Em uma análise de subgrupo de indivíduos com o alelo e4 da apolipoproteína E (APOE4), houve um benefício positivo e clinica- mente significativo na cognição. Ver Abushakra et al., Clinical benefits of tramiprosate in alzheimer's disease are associated with higher num- ber of APOE4alleles: the “APOE4gene-dose effect”. J Prev Alz Dis. 2016;3:219—28.Selkoe DJ, Hardy J. The amyloid hypothesis of Alzhei- mer's disease at 25 years. EMBO Mol Med 2016; 8:595-608.

[0025] ALZ-801 é um conjugado de valina de tramiprosato que foi otimizado para melhorar as propriedades farmacocinéticas e tolerabili- dade gastrointestinal. Os estudos de toxicologia crônica necessários para o avanço do ALZ-801 para a Fase 3 foram concluídos, incluindo a caracterização de segurança não clínica do ALZ-801 e a ponte de se- gurança para a toxicologia não clínica extensa e os dados de seguran- ça do tramiprosato. O ALZ-801 oral foi bem tolerado e exibiu um NOA- EL em estudos em ratos de 1 e 6 meses de 2.000 mg / kg e 1.500 mg / kg, respectivamente. Descobertas de estudos de ADME em animais e humanos mostram que ALZ-801 é rapidamente absorvido após a ad- ministração oral e rapidamente convertido em tramiprosato, resultando em distribuição substancialmente melhorada de tramiprosato no cére- bro. Ver, Hey et al., Clinical Pharmacokinetics and Safety of ALZ-801, a Novel Prodrug of Tramiprosate in Development for the Treatment of Alzheimer's Disease. Clin Pharmacokinetics 2018; 315-333 and Kocis et al., Elucidating the Abeta42 Anti-Aggregation Mechanism of Action of Tramiprosate in Alzheimer's Disease: Integrating Molecular Analyti- cal Methods. Pharmacokinetic and Clinical Data. CNS Drugs 2017; 31:495—509. As exposições plasmáticas de tramiprosato no plasma são comparáveis quando doses equimolares de ALZ-801 e tramiprosa- to são administradas a animais. Tanto o ALZ-801 quanto o tramiprosa- to têm meia-vida de eliminação consistente no plasma entre as espé- cies após doses orais repetidas de ALZ-801, indicando nenhum poten- cial de acumulação após a dosagem crônica. Após a conversão de ALZ-801 em tramiprosato, o tramiprosato é consistentemente metabo- lizado in vivo em um único metabólito principal, ácido 3-sulfopropa- noico (3-SPA), em humanos, camundongos, ratos, cães e porcos pe- quenos. Nenhum metabolismo ou interações CYP adicionais foram observados para o 3-SPA, e a eliminação do tramiprosato, bem como do 3-SPA, ocorre através dos rins em humanos, bem como em ani- mais. Uma representação esquemática é mostrada na FIG. 1.

[0026] Nós agora descobrimos a presença de 3-SPA no fluido cé- rebro-espinhal (CSF) humano e no plasma de sujeitos normais, sem drogas. Ver, por exemplo, FIG. 2. Conforme discutido na seção de Exemplificação abaixo, esses resultados se estendem a sujeitos com deficiência cognitiva (por exemplo, intervalo de MMSE de 15-30). Em estudos in vitro de acompanhamento para avaliar o efeito de 3-SPA na formação de oligômero anti-AB42, observamos que 3-SPA inibe a for- mação de oligômeros AB42 de uma maneira que é qualitativa e quanti- tativamente comparável ao tramiprosato. Ver, por exemplo, FIG. 3, FIG. 4, e Tabela 3. As comparações das interações moleculares de tramiprosato e 3-SPA com AB42 são apresentadas e descritas aqui. Ver, por exemplo, FIG. 5.

[0027] Também identificamos uma correlação inversa entre a con- centração de 3-SPA no CSF e a gravidade do comprometimento cog- nitivo. Por exemplo, à medida que a gravidade da AD diminui (confor- me determinado pelo aumento das pontuações MMSE), concentrações mais altas de 3-SPA foram encontradas no CSF. Ver FIG 6. Tomada em conjunto com a nossa descoberta de que 3-SPA inibe a formação de oligômeros AB42 de uma maneira que é qualitativa e quantitativa- mente comparável ao tramiprosato, esta tendência sugere que o 3- SPA contribui com efeitos protetores contra AD e / ou reduz a probabi- lidade de progressão da doença.

[0028] Portanto, nos casos em que a concentração de 3-SPA em um sujeito está abaixo de um certo nível de limiar de linha de base (tal como abaixo do valor de concentração de 3-SPA no CSF (+ 10%) de- terminado para um MMSE de 30 em um melhor ajuste de um popula- ção de sujeitos com doença de Alzheimer), a distribuição ou reposição de concentrações mais elevadas de 3-SPA fornece uma abordagem terapêutica para prevenir ou minimizar o declínio cognitivo e a pro- gressão da doença neurodegenerativa, por exemplo, AD. Além disso, a manutenção de concentrações mais altas de 3-SPA pode prevenir o declínio cognitivo, por exemplo, prevenir a AD.

[0029] Consequentemente, em uma primeira modalidade, é forne- cido um método de seleção e tratamento de um sujeito que sofre de doença de Alzheimer, compreendendo as etapas de: a) selecionar o sujeito se a concentração de 3-SPA presen- te no sujeito for menor do que um limiar de linha de base predetermi- nado; e b) administrar ao sujeito selecionado uma quantidade eficaz de um composto tendo a Fórmula |:

YW ROD P>on (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R é COOH, ou -CHaNH-(AA')(AA?):-H; AA' e AA? são, cada um, independentemente selecionados de alanina (Ala), cisteína (Cys), ácido aspártico (Asp), ácido glutâmico (Glu), fenilalanina (Phe), glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (lle), lisina (Lys), leucina (Leu), metionina (Met), asparagina (Asn), prolina (Pro), glutamina (Gln), arginina (Arg), serina (Ser), treonina (Thr), vali- na (Val), triptofano (Trp), tirosina (Tyr), B-alanina (B -ALA) e ácido y- aminobutírico (GABA); e q e t são, cada um, independentemente selecionados de O ou 1.

[0030] Em uma segunda modalidade, é fornecido aqui um método de tratamento de um sujeito que sofre de doença de Alzheimer, com- preendendo as etapas de: a) determinar se 3-SPA está presente no sujeito em uma concentração inferior a um limiar de linha de base predeterminado; e b) administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto tendo a Fórmula |:

YW RO P*>on(l), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, apenas se a quantidade do composto endógeno no sujeito estiver abaixo do limiar de linha de base predeterminado; em que: R é COOH, ou -CHANH-(AA')(AA?):-H; AA' and AA? são, cada um, independentemente seleciona- dos de alanina (Ala), cisteína (Cys), ácido aspártico (Asp), ácido glu- tâmico (Glu), fenilalanina (Phe), glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (Ile), lisina (Lys), leucina (Leu), metionina (Met), asparagina (Asn), pro- lina (Pro), glutamina (Gln), arginina (Arg), serina (Ser), treonina (Thr),

valina (Val), triptofano (Trp), tirosina (Tyr), B -alanina (B -ALA) e ácido y7-aminobutírico (GABA); e q e t são, cada um, independentemente selecionados de O ou 1.

[0031] Em uma terceira modalidade, t no composto de fórmula | é Oegé1l.

[0032] Em uma quarta modalidade, AAº* no composto de fórmula | é selecionado de alanina (Ala), isoleucina (lle), leucina (Leu), serina (Ser) e valina (Val). Alternativamente, em uma quinta modalidade, AA* no composto de fórmula | é selecionado de alanina (Ala), isoleucina (Ile), leucina (Leu), serina (Ser) e valina (Val); té 0; e gé 1.

[0033] Em uma sexta modalidade, o composto de Fórmula | é o o N WV HO. VV so — o ou TT” * ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo. Alternativamente, em uma séti- LX, ma modalidade, o composto de Fórmula | é o ; OU um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em outra alternativa, em uma sétima modalidade, o composto de Fórmula lé o ; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0034] Os sujeitos nos presentes métodos podem ser estratífica- dos (isto é, ainda selecionados) por suas pontuações MMSE antes do tratamento. Em uma oitava modalidade, por exemplo, o sujeito a ser tratado nas modalidades aqui descritas (por exemplo, como na primei- ra ou segunda modalidades) tem uma pontuação MMSE maior que 19 (por exemplo, maior que 20, maior que 21, maior que 22, maior que 23, maior que 24, maior que 25 ou maior que 26) antes do tratamento; e, opcionalmente, o composto de Fórmula | pode ser selecionado de qualquer um daqueles descritos na terceira, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidade. Em outro aspecto, o sujeito a ser tratado nas mo- dalidades aqui descritas (por exemplo, como na primeira ou segunda modalidades) tem uma pontuação MMSE de 16 a 30 (por exemplo, uma pontuação MMSE de 22 a 30, uma pontuação MMSE de 22 a 28, uma pontuação MMSE de 16 a 19, uma pontuação MMSE de 18 a 26, uma pontuação MMSE de 20 a 26 ou uma pontuação MMSE de 22 a 26) antes do tratamento; e, opcionalmente, o composto de Fórmula | pode ser selecionado de qualquer um daqueles descritos na terceira, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidade.

[0035] Além da pontuação MMSE, o sujeito também pode ter cer- tos fatores genéticos, como a presença de alelos APOEA4 (por exem- plo, homo ou heterozigoto para APOE4) ou ter outros marcadores ami- loides, como a presença de amiloide cerebral, ou ambos. Os sujeitos aqui descritos também podem ter pelo menos um alelo e4 de APOE. Por exemplo, em uma nona modalidade, o sujeito a ser tratado nas modalidades aqui descritas (por exemplo, como na primeira, segunda ou oitava modalidades) é heterozigoto APOEA4 antes do tratamento; e, opcionalmente, o composto de Fórmula | pode ser selecionado de qualquer um daqueles descritos na terceira, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidade. Alternativamente, em uma décima modalidade, o sujeito a ser tratado nas modalidades aqui descritas (por exemplo, como na primeira, segunda ou oitava modalidades) é homozigoto APOEA4 antes do tratamento; e, opcionalmente, o composto de Fórmu- la | pode ser selecionado de qualquer um daqueles descritos na tercei- ra, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidade. O termo “heterozigoto para APOE4” e “heterozigoto APOE4” são usados indistintamente e referem-se a sujeitos com um alelo APOEA4. O termo “homozigoto para APOE4”, “homozigoto APOE4”, “homozigoto para APOE4/4" e “homo- zigoto APOE4/4" são usados indistintamente e referem-se a sujeitos com dois alelos APOE4. Em um aspecto mais específico da décima modalidade, o sujeito é selecionado para tratamento se ele ou ela for homozigoto APOEA4 e tiver uma pontuação MMSE de 22-28.

[0036] Em uma décima primeira modalidade, é fornecido aqui um método de prevenção da doença de Alzheimer ou declínio cognitivo de um sujeito (por exemplo, um sujeito que tem AD ou demência devido a traumatismo craniano) compreendendo a etapa de administração ao sujeito em necessidade de uma composição farmacêutica que com- DA “om preende um composto da fórmula o ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo; e um transportador farmaceutica- mente aceitável.

[0037] Em uma décima segunda modalidade, o sujeito na décima primeira modalidade precisa de prevenção se um ou mais dos seguin- tes estiverem presentes: a) o nível de 3-SPA no sujeito estiver abaixo de um limiar de linha de base predeterminado; b) o sujeito tem pelo menos um alelo ApoE4; ou c) o sujeito tem um histórico familiar de do- ença de Alzheimer. Alternativamente, o sujeito na décima primeira mo- dalidade precisa de prevenção se um ou mais dos seguintes estiverem presentes: a) o nível de 3-SPA no sujeito estiver abaixo de um limiar de linha de base predeterminado; b) o sujeito tem pelo menos dois ale- los ApoE4; ou c) o sujeito tem um histórico familiar de doença de Al- zheimer.

[0038] Em uma décima terceira modalidade, é fornecido neste do- cumento um método de prevenção de demência em um sujeito (por exemplo, um sujeito que tem AD ou demência devido a traumatismo craniano) compreendendo a etapa de administração ao sujeito em ne- cessidade de uma composição farmacêutica que compreende um o o e or composto da fórmula O , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e um transportador farmaceuticamente aceitável.

[0039] Em uma décima quarta modalidade, a demência na décima terceira modalidade está relacionada a uma lesão na cabeça (por exemplo, trauma na cabeça). O traumatismo craniano ocorre quando uma força externa atinge a cabeça com força suficiente para fazer o cérebro se mover violentamente dentro do crânio. Essa força pode causar tremores, torções, hematomas (contusão) ou mudança repenti- na no movimento do cérebro (concussão). Será entendido que mesmo lesões na cabeça relativamente leves podem causar declínios prolon- gados ou permanentes na cognição.

[0040] Em uma décima quinta modalidade, a demência na décima terceira modalidade está relacionada a um traumatismo craniano e o sujeito na décima terceira modalidade precisa de prevenção se o nível de 3-SPA no sujeito estiver abaixo de um limiar de linha de base pre- determinado.

[0041] Em um aspecto, a concentração de 3-SPA presente no su- jeito dos métodos descritos (por exemplo, como na primeira até a dé- cima, décima segunda e décima quinta modalidades) é determinada a partir de uma amostra de fluido cérebro-espinhal. Assim, em um as- pecto, o limiar de linha de base predeterminado de 3-SPA no sujeito é a concentração de linha de base de 3-SPA no fluido cérebro-espinhal (CSF) do sujeito obtido antes de exibir sintomas de AD e / ou em um momento em que o MMSE do sujeito era 30.

[0042] "Limiar de linha de base predeterminado", "nível de linha de base predeterminado" ou "certo nível de linha de base" nos presentes métodos (por exemplo, como na primeira até a décima, décima segun- da e décima quinta modalidades) são usados indistintamente e refe- rem-se a uma ou mais do seguinte:(1) o valor de concentração de 3-

SPA no CSF (t 10%) determinado para um MMSE de 30 na linha de melhor ajuste entre a concentração de 3-SPA e pontuações de MMSE em uma população aleatória de sujeitos com Doença de Alzheimer de vários graus de gravidade (a “População Aleatória com AD”; (2) a con- centração mais alta de 3-SPA no CSF (t+ 10%) determinada em uma população com AD aleatória para MMSE < 29; (3) a concentração de 3-SPA no CSF do próprio sujeito (+ 5%) determinada antes de exibir quaisquer sintomas de AD; (4) a concentração média de 3-SPA no CSF (t+ 5%) determinada em uma população normal de mesma idade (não AD); (5) para modalidades em que os sujeitos são ainda selecio- nados por estarem dentro de uma faixa de pontuações MMSE, o maior de: (a) o valor da concentração de 3-SPA CSF (+ 10%) determinado para um MMSE de 30 na linha de melhor ajuste entre a concentração das pontuações 3-SPA e MMSE em uma população aleatória com AD; ou (b) a concentração de CSF de 3-SPA mais alta (+ 10%) determina- da em uma População Aleatória com AD para pontuações de MMSE igual ou acima da pontuação de MMSE mais baixa na faixa de seleção (por exemplo, se a seleção requer uma pontuação de MMSE entre 22- 28, então (b) é a concentração mais alta de 3-SPA no CSF (t 10%) determinada em uma População Aleatória com AD para pontuações MMSE iguais ou superiores a 22); (6) o valor de concentração 3-SPA no CSF (t+ 10%) para a pontuação MMSE do sujeito, conforme deter- minado pela linha de melhor ajuste entre a concentração de pontuação 3-SPA e MMSE em uma população aleatória de sujeitos.

Se não for indicado de outra forma, o valor para um limiar de linha de base prede- terminado obtido usando qualquer um dos parâmetros acima pode ser diminuído ou aumentado em até 10% a fim de ser menos ou mais in- clusivo de sujeitos a serem tratados e para reduzir o número de falsos positivos ou falsos negativos.

A população aleatória de sujeitos com doença de Alzheimer é uma amostra selecionada aleatoriamente de pacientes com AD por grau de gravidade de sua doença de Alzheimer (por exemplo, por grau de declínio cognitivo ou por sua pontuação MMSE), idade, peso, saúde geral, sexo, dieta, e semelhantes, e po- dem compreender, por exemplo, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 50, pelo menos 75, pelo menos 100, pelo menos 500, pelo menos 1000 sujeitos. Em um aspecto, no entanto, a população de sujeitos tem uma idade média de 85 anos ou menos. Em outros aspectos, a população de sujeitos tem uma idade média de 65-85 anos. Ainda em outros aspectos, a população de sujei- tos tem uma idade média de 58 anos ou mais. Em alguns aspectos, quando os critérios de seleção incluem adicionalmente o status de ApoE4, a população aleatória de sujeitos com Doença de Alzheimer de vários graus de gravidade a partir da qual derivar a linha de melhor ajuste ou determinar o nível mais alto de concentração de 3-SPA no CSF é limitada àqueles sujeitos com AD com o mesmo status ApoE4 que os critérios de seleção do status ApoE4.

[0043] Em um aspecto, o limiar de linha de base predeterminado de 3-SPA nos presentes métodos (por exemplo, como na primeira até a décima, décima segunda e décima quinta modalidades) é definido como uma concentração de 3-SPA em um sujeito com menos que 25 ng/ml (por exemplo, menos que 20 ng/ml, menos que 15 ng/ml, menos que 12 ng/ml, menos que 10 ng/ml, menos que 8 ng/ml, menos que 6 ng/ml, menos que 5 ng/ml, menos que 4 ng/ml, menos que 3 ng/ml, menos que 2,9 ng/ml, menos que 2,8 ng/ml, menos que 2,7 ng/ml, menos que 2,6 ng/ml, menos que 2,5 ng/ml, menos que 2,4 ng/ml, menos que 2,3 ng/ml, menos que 2,2 ng/ml, menos que 2,1 ng/ml, menos que 2,0 ng/ml). Em outros aspectos, o limiar de linha de base predeterminado de 3-SPA é definido como uma concentração de 3- SPA em um sujeito entre 2,0 ng/ml e 25 ng/mL (por exemplo, entre 7 ng/ml e 25 ng/mL, entre 8 ng/ml e 25 ng/mL, entre 9 ng/ml e 25 ng/mL,

entre 6 ng/ml e 24 ng/mL, ou entre 6 ng/ml e 23 ng/mL.

[0044] Em um aspecto, o limiar de linha de base predeterminado de 3-SPA nos presentes métodos (por exemplo, como na primeira até a décima, décima segunda e décima quinta modalidades) é definido como um sujeito com uma pontuação MMSE de 22-28 ou uma pontua- ção de MMSE de 22-26; e uma concentração de 3-SPA (por exemplo, no CSF) de menos que 5 ng/mL, menos que 4 ng/ml, menos que 3 ng/ml, menos que 2,9 ng/ml, menos que 2,8 ng/ml, menos que 2,7 ng/ml, menos que 2,6 ng/ml, menos que 2,5 ng/ml, menos que 2,4 ng/ml, menos que 2,3 ng/ml, menos que 2,2 ng/ml, menos que 2,1 ng/ml, ou menos 2,0 ng/ml. Em outros aspectos, o limiar de linha de base predeterminado de 3-SPA nos presentes métodos (por exemplo, como na primeira até a décima, décima segunda e décima quinta mo- dalidades) é definido como um sujeito com uma pontuação MMSE de 22-28 ou uma pontuação de MMSE de 22-26 e concentração de 3- SPA (por exemplo, no CSF) de 2-4 ng/mL.

[0045] Em uma décima sexta modalidade, é fornecido neste do- cumento um método para tratar um sujeito que sofre de AD, compre- endendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um compos- to com a Fórmula | , conforme definido neste documento, em que o sujeito tem pontuação MMSE de 30, é homozigoto para APOE4 e tem um teste de memória FOSR anormal indicando MCI. Para a classifica- ção de FOCSR anormal ver, por exemplo, E. Grober, R.B Lipton, C. Hall et al; Neurology 2000; 54: 827-832.

[0046] Em uma décima sétima modalidade, é fornecido aqui um método para tratar um sujeito que sofre de AD, compreendendo admi- nistrar ao sujeito de uma composição farmacêutica que compreende

ENDAOL um composto da fórmula o , ou um sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo; e um transportador farmaceuticamente aceitável, em que o sujeito tem pontuação MMSE de 30, é homozigoto para APOE4 e tem um teste de memória FCSR anormal indicando MCI.

[0047] Em uma décima oitava modalidade, é fornecido neste do- cumento um método para selecionar e tratar um sujeito que sofre de AD, compreendendo: a) selecionar um sujeito com uma pontuação MMSE de 22-28; e b) administrar ao sujeito selecionado uma quantidade efi- o o e or caz de um composto com a fórmula: o , ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo.

[0048] Em uma décima nona modalidade, é fornecido aqui um mé- todo para selecionar e tratar um sujeito que sofre de AD, compreen- dendo: a) selecionar um sujeito que é homozigoto APOEA4 ou he- terozigoto APOEA4; e b) administrar ao sujeito selecionado uma quantidade efi- o o e or caz de um composto com a fórmula: o , ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo.

[0049] Em uma vigésima modalidade, é fornecido aqui um método para selecionar e tratar um sujeito que sofre de AD, compreendendo: a) selecionar um sujeito com uma pontuação MMSE de 22-28 e é APOE4 homozigoto ou APOE4 heterozigoto; e b) administrar ao sujeito selecionado uma quantidade efi- o o Mor caz de um composto com a fórmula: o , ou um sal far-

maceuticamente aceitável do mesmo.

[0050] Em alguns aspectos da décima oitava à vigésima modali- dade, o sujeito é selecionado se o sujeito tiver uma pontuação MMSE de 22-26. Em alguns aspectos da décima oitava à vigésima modalida- des, o sujeito é selecionado se o sujeito for homozigoto APOE4. Em alguns aspectos da décima oitava à vigésima modalidades, o sujeito é selecionado se o sujeito for homozigoto APOEA4 e tiver uma pontuação MMSE de 22-28. Em alguns aspectos da décima oitava à vigésima modalidades, o sujeito é selecionado se o sujeito for homozigoto APOEZA4 e tiver uma pontuação MMSE de 22-26.

[0051] Em uma vigésima primeira modalidade, é fornecido neste documento um método para selecionar e tratar um sujeito que sofre de AD, compreendendo: a) selecionar um sujeito com uma pontuação MMSE maior que 19 (por exemplo, maior que 20, maior que 21, maior que 22, maior que 23, maior que 24, maior que 25 ou maior que 26) antes do tratamento; e administrar ao sujeito selecionado uma quanti- o o e or dade eficaz de um composto com a fórmula: o , OU UM sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em outro aspecto, é for- necido aqui um método para selecionar e tratar um sujeito que sofre de AD, compreendendo: a) selecionar um sujeito com uma pontuação MMSE de 16 a 30 (por exemplo, uma pontuação MMSE de 22 a 30, uma pontuação MMSE de 22 a 28, uma pontuação MMSE de 16 a 19, uma pontuação MMSE de 18 a 26, uma pontuação MMSE de 20 a 26 ou uma pontuação MMSE de 22 a 26) antes do tratamento; e adminis- trar ao sujeito selecionado uma quantidade eficaz de um composto o o Mon com a fórmula: o , Ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel do mesmo.

[0052] Em uma vigésima segunda modalidade, é fornecido neste documento um método para prevenir a AD, que compreende adminis- trar a um sujeito em necessidade de uma quantidade eficaz de um o Mor composto com a fórmula: o , ou um sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo.

[0053] Em uma vigésima terceira modalidade, é fornecido aqui um método para prevenir um declínio na cognição em um sujeito que é assintomático, mas que está em risco de AD ou declínio cognitivo, compreendendo administrar a um sujeito em necessidade do mesmo to AX Dx “or uma quantidade eficaz de um composto com a fórmula : o ; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Os sujeitos que estão em risco incluiriam, por exemplo, a presença de APOE4/4 (ou ambos APOE4 e APOE4/4), idade avançada ou um padrão de declínio cognitivo familiar ou uma combinação de dois ou mais dos itens acima.

[0054] Em termos de prevenção de AD ou prevenção de um declí- nio na cognição em um sujeito que é assintomático, mas que está em risco de AD ou declínio cognitivo, hipotetizamos a partir dos dados mostrados abaixo que o 3-SPA está sempre ativo no cérebro preve- nindo ou inibindo a formação dos oligômeros tóxicos. Portanto, quanto menor a quantidade de 3-SPA, maior a suscetibilidade que um sujeito teria para desenvolver declínio cognitivo, ou para desenvolvê-lo mais cedo. A administração de compostos como os aqui descritos deve produzir mais 3-SPA no cérebro. Isto, por sua vez, deve estabelecer a inibição consistente e / ou intensificada de oligômeros AB e, assim, le- var à prevenção de AD ou um declínio na cognição.

[0055] Os termos "indivíduo" e "paciente" são usados de forma intercambiável. Em um aspecto, o sujeito é um humano. Em alguns aspectos, o sujeito tem 85 anos de idade ou menos. Em outros aspec- tos, o sujeito tem idade humana de 65-85 anos. Em ainda outros as- pectos, o sujeito tem 58 anos de idade ou mais.

[0056] Ácido 3-sulfopropanoico e 3-SPA são usados indistintamen- Ho AS, te e referem-se ao composto tendo a estrutura — O bem como O, ,0 + No *& Éou DE ox as formas de sal mono- ( O ) ou di-iônico (/— O ), em que X* é um contraíon, como sódio.

[0057] Conforme usado neste documento, o termo "tratar", "tratan- do" ou "tratamento" significa reverter, aliviar ou inibir o progresso de uma doença neurodegenerativa, como AD, ou um ou mais sintomas associados a ela.

[0058] Fatores para determinar se um sujeito está sofrendo de AD incluem, por exemplo, uma ou mais das pontuações MMSE do sujeito, a presença de amiloide cerebral (por exemplo, conforme determinado por imagens PET), a pontuação de CDR do sujeito, resultados de teste de memória FCSR consistentes com deficiência cognitiva leve defici- ência, ou a identificação de biomarcadores cerebrais de amiloide no fluido cérebro-espinhal (CSF), como Abeta-40, Abeta-42, proteína tau ou oligômeros Abeta, ou combinações dos mesmos. Por exemplo, um sujeito sofre de AD se 1) o sujeito é homozigoto para APOE4 e tem sintomas cognitivos; 2) o sujeito é homozigoto para APOE4 e tem defi- ciências subjetivas de memória, MCI ou um MMSE de 30, e o sujeito tem um FCSR anormal; 3) o sujeito o sujeito é homozigoto para APOE4 e tem sintomas iniciais de AD, como MCI ou um MMSE de 26- e uma pontuação global de CDR de 0,5; 4) o sujeito é heterozigoto para APOE4 e tem um MMSE inferior a 20; 5) o sujeito é heterozigoto para APOE4 e tem um MMSE de 20 ou mais, e o sujeito tem amiloide cerebral conforme determinado por um ou mais dos métodos aqui descritos (por exemplo, imageamento PET ou biomarcadores CSF se- lecionados de Abeta-40, Abeta- 42 e proteína tau ou para oligômeros Abeta); ou 6) o sujeito é APOE4 negativo e o sujeito tem uma pontua- ção MMSE de 20 ou superior ou uma pontuação MMSE inferior a 20 e o sujeito tem amiloide cerebral conforme determinado por um ou mais dos métodos aqui descritos (por exemplo, imageamento PET ou bio- marcadores de CSF selecionados de Abeta-40, Abeta-42 e proteína tau, ou para oligômeros Abeta). Para a classificação de FOSR anormal ver, por exemplo, E. Grober, R.B Lipton, C. Hall et al; Neurology 2000; 54: 827-832.

[0059] "Quantidade eficaz" ou "dose eficaz" é a quantidade do composto que é suficiente para tratar uma doença neurodegenerativa, como a AD. As quantidades eficazes podem variar, conforme reconhe- cido por um versado na técnica, dependendo, por exemplo, da gravi- dade da doença neurodegenerativa, da via de administração, do sexo, da idade e do estado geral de saúde do paciente, do uso de excipien- te, da possibilidade de co-uso com outros tratamentos terapêuticos, como o uso de outros agentes e o julgamento do médico assistente ou outro provedor médico. Quantidades eficazes exemplificativas dos compostos úteis nos métodos aqui descritos são fornecidos abaixo. Em alguns aspectos, uma quantidade eficaz é uma quantidade que aumenta a concentração de CSF 3-SPA acima do limiar de linha de base predeterminado. Em aspectos mais específicos, uma quantidade eficaz é uma quantidade que aumenta a concentração de CSF 3-SPA para 1,1X, 1,2X, 1,3X, 1,4X, 1,5X, 2X, 2,5X, 3X, 4X, 5X ou mais do que o limiar de linha de base predeterminado.

[0060] O termo "sal farmaceuticamente aceitável" é um sal de um grupo básico (por exemplo, um grupo amino) ou de um grupo acídico (por exemplo, um ácido sulfônico) nos compostos aqui descritos. Sais ilustrativos de um grupo básico incluem, mas não estão limitados, a sais sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloreto, brometo, iodeto, nitrato, bissulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato ácido, tartarato, oleato, tanato, pantotenato, bitartarato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucoronato, sa- carato, formato, benzoato, glutamato, metanossulfonato, etanossulfo- nato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato, canforossulfonato, e pamoato (isto é, 1,1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)). Sais ilustrati- vos de um grupo acídico incluem, mas não estão limitados a sais de lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio, alumínio, cromo, ferro, cobre, Zinco, cádmio, amônio, guanidínio, piridínio e amônio orgânico.

[0061] "Farmaceuticamente aceitável" refere-se a drogas, medi- camentos, ingredientes inertes, etc., que o termo descreve, adequados para uso em contato com os tecidos de humanos e animais inferiores sem toxicidade indevida, incompatibilidade, instabilidade, irritação, resposta alérgica e semelhantes, proporcionais a uma razão benefício | risco razoável. Em um aspecto, farmaceuticamente aceitável se refe- re a um composto ou composição que é aprovado ou aprovável por uma agência regulatória do governo Federal ou estadual ou listado na Farmacopeia dos EUA ou outra farmacopeia geralmente reconhecida para uso em animais e mais particularmente em humanos.

[0062] O termo "transportador farmaceuticamente aceitável" se refere a um transportador, adjuvante ou veículo não tóxico que não destrói a atividade farmacológica do composto com o qual ele é formu- lado. Transportadores farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados nas composições descritas aqui incluem, mas não estão limi- tados a, trocadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, tal como albumina sérica humana, substâncias tam- pão, tal como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, mis- turas de glicerida parciais de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tal como sulfato de protamina, dissódio hidrogênio fosfato, potássio hidrogênio fosfato, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinil pirrolidona, substâncias à base de celulose, polietileno glicol, sódio carboximetilcelulose, polia- crilatos, ceras, polímeros em bloco de polietileno-polioxipropileno, poli- etileno glicol e gordura de lã.

[0063] As composições aqui descritas podem ser administradas por via oral, por via parentérica, por pulverização de inalação, topica- mente, por via retal, nasal, bucalmente, via vaginal ou via um reserva- tório implantado. O termo "parenteral", como usado neste documento, inclui injeção subcutânea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intrassinovial, intraesternal, intratecal, intra-hepática, intralesional e intracraniana ou técnicas de infusão. Formas de dosagem líquidas, preparações injetáveis, formas de dispersão sólida e formas de dosa- gem para administração tópica ou transdérmica de um composto estão incluídas aqui. Em um aspecto, a administração é oral.

[0064] Os métodos de administração podem usar uma quantidade e uma via de administração eficaz para tratar ou diminuir a gravidade de uma doença aqui descrita. A quantidade exata necessária irá variar de sujeito para sujeito, dependendo da espécie, idade e condição geral do sujeito, a gravidade da infecção, o agente particular, seu modo de administração e semelhantes. Os compostos fornecidos são preferen- cialmente formulados na forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. Por exemplo, os compos- tos fornecidos podem ser formulados de modo que uma dosagem en- tre 0,01 - 100 mg / kg de peso corporal / dia do composto possa ser administrada a um paciente que recebe essas composições. A expres- são "forma de dosagem unitária", conforme utilizado neste documento, refere-se a uma unidade fisicamente distinta de agente apropriado pa- ra o paciente a ser tratado. Será compreendido, no entanto, que o uso diário total dos compostos e composições da presente divulgação será decidido pelo médico atendente dentro do escopo do bom julgamento médico. O nível específico da dose eficaz para qualquer paciente ou organismo específico dependerá de uma variedade de fatores incluin- do o distúrbio sendo tratado e a gravidade do distúrbio; da atividade do composto específico empregado; da composição específica emprega- da; da idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do paciente; do tempo de administração, via de administração e taxa de excreção do composto específico empregado; da duração do tratamento; das dro- gas usadas em combinação ou simultâneos ao composto específico empregado, e fatores similares bem conhecidos na técnica médica.

[0065] Também deve ser entendido que uma dosagem específica e um regime de tratamento para qualquer paciente particular depende- rão de uma variedade de fatores, incluindo idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, taxa de excreção, combi- nação de drogas, do julgamento do médico assistente e da gravidade da doença particular sendo tratada. A quantidade de um composto for- necido na composição também dependerá do composto particular na composição. Regimes exemplificativos são fornecidos abaixo.

EXEMPLIFICAÇÃO

1. Métodos Coleta e processamento de amostras de CSF humano

[0066] Amostras individuais de CSF foram obtidas de 64 indiví- duos do sexo masculino e feminino com comprometimento cognitivo (intervalo de MMSE de 15-30) devido a uma variedade de doenças neurogerativas (as características descritivas estão resumidas na Ta- bela 1). Esses pacientes foram encaminhados para o Centro Cognitivo do Departamento de Neurologia da Charles University, da 2º Faculda- de de Medicina e do Motol University Hospital, Praga, República Tche- ca. As 64 amostras foram obtidas de pacientes que foram clinicamente diagnosticados com as seguintes condições: demência de Alzheimer

(demência AD; n = 14), comprometimento cognitivo leve devido à AD (MCI devido à AD, n = 20), demência mista (n = 3), Doença do corpo de Lewy (LBD; n = 1), degeneração lobar frontotemporal (FTLD; n = 18), comprometimento cognitivo leve de outra etiologia (MCI outro; n = 7) e paralisia supranuclear progressiva (n = 3). Doença vascular foi considerada quando alterações vasculares confluentes na MRI esta- vam presentes (escala de Fazekas 2 e 3). 12 ml de CSF foram retira- dos por punção lombar em decúbito dorsal entre o corpo vertebral L3- L5 com agulha atraumática. A punção lombar foi realizada entre 8h e 11h e realizada imediatamente após a coleta do soro. O CSF foi trans- ferido para o laboratório de CSF, localizado no mesmo andar onde foi realizado o giro de 5 minutos a 2.000 RPM em temperatura ambiente. Após a centrifugação, o CSF foi aliquotado em tubos de 0,5 ml e ar- mazenado imediatamente a -80 ºC. Apenas tubos de polipropileno fo- ram usados para retirada e armazenamento do CSF. O tempo de pro- cessamento entre a retirada do CSF, centrifugação e congelamento foi padronizado e no total não ultrapassou 45 minutos.

[0067] As amostras foram retiradas do freezer e enviadas em gelo seco para Nextcea Inc (Woburn, MA) e armazenadas em freezer para manter -80ºC após o recebimento. A coleta e armazenamento do CSF foram realizados após os indivíduos assinarem um consentimento in- formado de acordo com as diretrizes éticas da República Tcheca e bo- as práticas clínicas, e de acordo com o protocolo de consenso ampla- mente reconhecido para a padronização da coleta de CSF e biobancos (Viola et al., Amyloid B oligomers in Alzheimer's disease pathogenesis, treatment, and diagnosis. Acta Neuropathol 2015; 129:183—206; and Vanderstichele et al. Standardization of preanalytical aspects of cere- brospinal fluid biomarker testing for Alzheimer's disease diagnosis: À consensus paper from the Alzheimer's Biomarkers Standardization Ini- tiative. Alzheimers Dement 2012; 8(1):65-73). Kits comerciais de ELI-

SA (Innogenetics NV, Ghent, Bélgica) foram usados para análises de biomarcadores de demência (AB1-42, proteína tau e fosfo-tau) e os valores de corte derivados de um estudo de validação foram usados. As concentrações de 3-SPA no CSF também foram quantificadas em 12 pacientes que receberam a dose de 150 mg BID de tramiprosato na Semana 78 do ensaio de Fase 3 da AD Norte-Americana. Identificação e quantificação de 3-SPA em CSF humano por LC-MS /

MS

[0068] A análise da amostra de CSF foi realizada por Nextcea, uti- lizando os métodos LC-MS e LC-MS / MS. Um total de 64 amostras de CSF humano foi recebido em Nextcea para análise. Derivatização e método LC-MS / MS

[0069] O material de referência 3-SPA e as amostras de CSF hu- mano foram misturados com N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodi- imida (EDC) e 2,2,2-trifluoroetilamina (TFEA). As amostras foram sub- metidas a vórtice e reagiram à temperatura ambiente durante 30 minu- tos. As reações foram centrifugadas a 4500 rom durante 5 minutos. O sobrenadante foi transferido para uma nova placa para análise. 3-SPA foi identificado e caracterizado usando LC-MS e LC-MS / MS. As inje- ções foram feitas em uma coluna Thermo Scientific AQUASIL 5 um, 50 x 21 mm usando um amostrador automático Shimadzu e bomba UPLC. A fase móvel A era 0,1% de ácido trifluoroacético em água (v / v). A fase móvel B era de ácido fórmico a 0,1% em 90/10 de acetonitri- la / água (v / v). A taxa de fluxo foi de 0,35 mL / min. O tempo total de execução por amostra foi de 4 min. Um espectrômetro de massa triplo quadrupolo API 6500 foi usado para detecção. Os dados foram adqui- ridos nos modos LC-MS e LC-MS / MS negativos. Cromatogramas re- presentativos de 3-SPA em material nativo bruto e CSF humano deri- vatizado com EDC e TFEA são mostrados na FIG. 7, FIG. 8 Painel A, e FIG. 8 Painel B. Os dados de LC-MS e LC-MS / MS foram adquiri-

dos usando o software Analyst (AB Sciex, Foster City, CA). LOQ para o método LC-MS / MS foi de 0,1 ng / ml com uma faixa dinâmica de 0,1 a 1000 ng / ml (r = 0,99688 e % CV 5,8% + 2,0; dados em arquivo). 3-SPA foi identificado no CSF humano combinando o tempo de reten- ção cromatográfica e por coeluição dos íons de transição LC-MS / MS com o padrão de referência 3-SPA autêntico (sintetizado por Paraza Pharma, Montreal, Canadá).

Modelagem molecular 3-SPA e simulações de dinâmica molecular

[0070] Toda a modelagem molecular foi realizada usando o con- junto Schrôdinger (Schrôdinger Suite, 2015-3; Schródinger, LLC, New York, NY). Simulações de dinâmica molecular foram executadas usan- do Desmond. Ver Vanderstichele et al. Standardization of preanalytical aspects of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer's disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer's Biomarkers Stand- ardization Initiative. Alzheimers Dement 2012; 8(1):65—73. As simula- ções foram executadas em placas GeForce GTX Titan Black GPU (unidade de processamento gráfico). O campo de força OPLS 3.0 (Po- tencial Otimizado para Simulações Líquidas) (Hort et al., The liquor tau protein and beta amyloid in Alzheimer's disease. Cesk Slov Neurol N 2007; 70(1):30-36) foi usado para modelar todas as interações, e o modelo SPC foi usado para águas. A estrutura 11IYT AB42 NMR do Protein Data Bank (PDB) foi usada como ponto de partida para simu- lações de dinâmica molecular. Esta estrutura é principalmente alfa he- licoidal e é representativa do peptídeo em um ambiente apolar. Uma caixa de água de 20 Angstrom ou uma caixa de solvente misto de 1% 3-SPA em água foi adicionada em torno do peptídeo usando ferramen- tas de configuração do sistema Schrôdinger. Íons foram adicionados para neutralizar a carga de todo o sistema. As simulações foram equi- libradas e executadas sob condições NPT (número constante (N), pressão (P) e temperatura (T) com condições de contorno periódicas.

O termostato Nose-Hoover e o baróstato Martina-Tobias-Klein foram usados para controlar a temperatura e a pressão, respectivamente. As simulações foram executadas em réplicas de 3 por 100 nanossegun- dos cada, e os resultados foram compilados para análise. A análise de componentes principais foi realizada usando ProDy (Shivakumar et al., Improving the Prediction of Absolute Solvation Free Energies Using the Next Generation OPLS Force Field. J. Chem. Theory Comput 2012; 8: 2553-8) e representado usando scripts Python personalizados. Espectrometria de massa de mobilidade iônica (IMS MS)

[0071] As condições usadas para espectrometria de massa, usan- do um Waters Synapt G2-S, foram as seguintes: polaridade positiva no modo de sensibilidade, capilar = 2,5 kV, nebulizador = 2 mbar, tempe- ratura da fonte = 80ºC, temperatura de dessolvatação = 60ºC, configu- ração do cone de amostra = 35 V, configuração do deslocamento da fonte = 60 V e faixa de massa = 500 a 4000 m / z. Essas condições foram mantidas ao longo do estudo para garantir a consistência dos dados e para evitar influenciar a detecção de oligômeros devido às condições de ionização preferenciais.

[0072] As amostras foram infundidas diretamente no espectrôme- tro de massa a uma taxa de fluxo de 10 ul / min usando uma Bomba de seringa Protea PM-1000 e uma seringa Hamilton de 1 mL. A aquisi- ção de dados do peptídeo amiloide foi realizada usando um espectrô- metro de massa de tempo de voo Waters Synapt G2-S quadrupolo (Q- TOF MS) com mobilidade iônica de onda progressiva (Waters Corp., Milford, MA). Os dados foram adquiridos usando o modo de sensibilidade do sistema para permitir a detecção dos oligômeros menos abundantes. As amostras foram infundidas à temperatura ambiente. Os estudos IMS MS foram conduzidos na Protea, Inc. (Morgantown, WV). Preparação da amostra

[0073] 1 mg de peptídeo AR42 humano recombinante de BioLe-

gend (99% de pureza, cat % 843801) foi reconstituído em 200 uL de água grau LC / MS Fisher Optima (cat % W6-1) e agitado vigorosamen- te por 2 minutos para solubilizar o peptídeo criando uma solução de 5 mg / mL. As amostras foram então diluídas para uma concentração final de 22 pmol / uL antes da incubação. As misturas de amostras fo- ram então incubadas à temperatura ambiente durante O, 4 e 24 horas. Após a aquisição das amostras incubadas ter sido concluída, os dados brutos foram analisados usando o Waters MassLynx v2.4 suite com DriftScover v2.7 para visualizar os tempos de deriva para o peptídeo. Caracterização de espécies AB42

[0074] A caracterização das espécies AR42 usando IMS MS foi realizada por infusão direta a 22 pmol / uL em água. O peptídeo foi preparado em água para manter a conformação do estado nativo do peptídeo e a aquisição de dados de mobilidade iônica foi realizada pa- ra detectar e caracterizar as mudanças conformacionais do monômero de estado nativo e quaisquer oligômeros que possam ter se formado durante a incubação. Estudo de ligação de 3-SPA IMS MS

[0075] A aquisição de dados do peptídeo ARA42 foi realizada usan- do um espectrômetro de massa de tempo de voo Waters Synapt G2-S quadrupolo (Q-TOF MS) com mobilidade iônica de onda progressiva (Waters Corp., Milford, MA). Os dados foram adquiridos usando o mo- do de sensibilidade do sistema para permitir a detecção dos oligôme- ros menos abundantes. As amostras foram infundidas à temperatura ambiente como acima.

[0076] 1 mg de 3-SPA foi reconstituído em 1 mL de água grau LC / MS Fisher Optima (cat ft W6-1) e agitado vigorosamente em vórtice por 2 minutos até estar completamente dissolvido. A amostra foi então diluída para criar soluções de 220 pmol / uL e 22.000 pmol / uL para realizar um excesso molar de 100 vezes e 1.000 vezes para os expe-

rimentos de ligação com o peptídeo AB42.

[0077] 1 mg de peptídeo AR42 humano recombinante foi reconsti- tuído em 200 ul de água grau LC / MS Fisher Optima e agitado vigo- rosamente em vórtice para solubilizar em uma solução de 5 mg / mL. As amostras foram então diluídas às suas concentrações finais antes da incubação. As misturas de amostras foram incubadas à temperatu- ra ambiente durante O, 4 e 24 horas, seguido da análise conforme descrito acima. Farmacocinética, absorção oral e exposição cerebral de 3-SPA em ra- tos Spraque-Dawley (SD)

[0078] A farmacocinética oral e iv de 3-SPA foi avaliada em ratos machos Sprague-Dawley em jejum com uma dose de 30 mg / kg e 10 mg / kg, respectivamente (n = 3 por grupos). Os animais foram aloja- dos em instalações padrão, com água e comida ad libitum para o ex- perimento. O 3-SPA foi dissolvido em solução salina, administrado por via oral por gavagem e por via intravenosa em bolus. Amostras de sangue em série (aproximadamente 1,0 mL cada) foram coletadas de cada animal em 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 e 24 horas após a dosagem em tubos contendo K2EDTA e processadas para plasma por centrifuga- ção. As amostras de plasma foram armazenadas a -80 º C até a bioa- nálise.

[0079] Um grupo separado de animais foi administrado oralmente a 30 mg / kg e as amostras de cérebro terminal, CSF e plasma foram coletadas em 1, 2, 6 e 24 horas (3 animais para cada ponto de tempo) para bioanálises de 3-SPA no cérebro e CSF e para estimar a pene- tração cerebral em relação às concentrações plasmáticas. O estudo em vida foi realizado nos Laboratórios Agilux (Worcester, MA) seguin- do padrões de qualidade em linha com as Boas Práticas de Laborató- rio. As bioanálises de plasma, CSF e cérebro de rato foram realizadas usando LC-MS / MS em Nextcea. Antes de processar cérebros de ra-

tos para bioanálise, os cérebros foram perfundidos para remover o sangue acumulado. As análises de dados farmacocinéticos foram con- duzidas usando Winnonlin Professional v5.0.1 (Pharsight, Mountain View, CA).

2. Resultados Identificação e quantificação de 3-SPA no CSF de sujeitos nãive de droga e pacientes com AD tratados com tramiprosato

[0080] 3-SPA foi identificado e quantificado em CSF humano por LC-MS / MS. As amostras foram derivatizadas com EDC e TFEA antes da análise. Os íons de transição LC-MS / MS foram selecionados para monitoramento com base no ácido 2-[(2,2,2-trifluoroetil)carbamoil] eta- no-1-sulfônico, o espectro de íons de produto do padrão de referência 3-SPA derivatizado. O [M-H]- de 3-SPA foi detectado em CSF humano a m/z 234,1 com tempo de retenção de 1,55 min. A combinação estru- tural de 3-SPA no CSF humano com a amostra autêntica como padrão foi realizada combinando o pico molecular do ácido, bem como os pi- cos moleculares do derivado de ácido 2-[(2,2,2-trifluoroetil)-carbamoil] etano-1-sulfônico incluindo o padrão de fragmentação MS-MS monito- rando dois íons de transição LC-MS / MS. Os íons de transição e o tempo de retenção do ácido 3-sulfopropanoico no CSF humano com- binaram com o padrão de referência do ácido 3-sulfopropanoico autên- tico. Os íons de transição do pico molecular do diácido (234,1/80,9) foram selecionados para quantificação. O LLOQ do ensaio LC-MS / MS foi de 0,1 ng / mL para 3-SPA. As concentrações de 3-SPA no CSF humano são fornecidas na Tabela 1. Em uma análise separada, a presença de 3-SPA também foi confirmada por LC-MS / MS em amostras nãive de droga de CSF humano obtidas de Bioreclamation, Westbury, NY (n = 27 e n = 88 respectivamente). Ver FIG. 2

Tabela 1 - Concentrações de 3-SPA no CSF humano em pacientes nãive de droga com déficits de memória Estatísticas descri- | Concentração de Concentração de Concentração de tivas de pacientes | 3-SPA em CSF ng / | 3-SPA em CSF ng / | 3-SPA em CSF ng / com déficits de |ml(nM) ml (nM) ml (nM) memória Gênero Combinado | Masculino Feminino E A gg Diagnóstico clínico- | AD-14 AD-14 AD-10 nº MCI devido a AD-20 | MCI devido a AD-11 | MCI devido a AD-9 MCI (outro)-7 MCI (outro)-2 MCI (outro)-5 FTLD-18 FTLD-9 FTLD-9 Outros Outro-1 Outro-4 Mínimo-Máximo 0,64 - 4,27 (4,15 - [0,85 - 2,8 (5,6 - | 0,64 - 4,27 (42 - 27,7) 18,5) 27,7) *AD-doença de Alzheimer, MCI-comprometimento cognitivo leve, de- generação lobular frontotemporal-FTLD, doença de outros corpos de Lewy, demência vascular, doença mista

[0081] Os níveis de 3-SPA de em pacientes com uma variedade de doenças que prejudicam a cognição, incluindo AD, variaram de 4,15 a 27,7 NM (0,64 - 4,27 ng / ml) (Tabela 1). Quando relacionado às concentrações de monômeros AB42 no CSF em pacientes com AD (0,04 nM a 0,1 nM) (Bakan et al., ProDy: protein dynamics inferred from theory and experiments. Bioinformatics 2011; 27:1575-7; Shaw et al. Assinatura do biomarcador do fluido cérebro-espinhal em sujeitos com iniciativa de neuroimageamento na doença de Alzheimer. Ann Neurol 2009; 65:403—13; Pannee et al. Reference measurement pro- cedure for CSF Abeta1-42 and the CSF Abeta1-42 /Abeta1-40 ratio - a crossvalidation study against Amyloid PET. J. Neurochem 2016; and Lambert et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from A 1-42 are potent central nervous system neurotoxins. PNAS. 1998; 95:6448-53),

há um excesso de aproximadamente 40-700 vezes de 3-SPA em rela- ção aos monômeros AB42 solúveis, que se enquadra na faixa onde a atividade de agregação antioligômero AB parcial pode ocorrer em al- guns pacientes (Tabela 3). Além disso, análises retrospectivas do CSF de um subconjunto de pacientes do ensaio de Fase 3 com tramiprosa- to também foram avaliadas quanto à presença de 3-SPA, o metabólito primário do tramiprosato. A Tabela 2 apresenta resumos descritivos das concentrações de 3-SPA no CSF. As concentrações do metabólito foram quantificadas em 6 pacientes para os quais amostras de CSF na semana 78 estavam disponíveis. A concentração média de 3-SPA no CSF foi de 147 nM (faixa = 114,3 - 235,8 nM), representando assim um aumento de 12,6 vezes em relação aos níveis observados em pa- cientes nãive de drogas. Tabela 2. Concentrações de CSF (ng / mL) de 3-SPA na Semana 78 no ensaio de tramiprosato de Fase 3 Norte Americana Estatística Descritiva Dose de 150 mg BID de tramiprosato, Se- — ae E | Atividade oligomérica anti-AB42 de 3-SPA

[0082] Para abordar a alta flexibilidade conformacional do AR42 e para caracterizar sua interação com 3-SPA, usamos espectrometria de massa de mobilidade iônica (IMS), com um espectrômetro de massa de tempo de voo quadrupolo (Q-TOF MS) com mobilidade iônica de onda viajante. O efeito resultante da modulação do espaço conforma- cional AR é a prevenção da formação de oligômeros. Encontramos não apenas dependência da concentração, mas também dependência do tempo deste efeito oligomérico anti-AR42 de 3-SPA, conforme indicado na FIG. 3 e FIG. 4. O resumo da dependência do excesso de concen- tração de 3-SPA em relação ao ARA42 é apresentado na Tabela 3. O excesso molar de 100 vs 1.000 vezes de 3-SPA em relação ao AR42 resulta em um perfil de subespécie diferente de inibição da formação do oligômero ARA42. A atividade também é comparada com o mesmo excesso de dependência do tramiprosato. A prevenção quase comple- ta da formação de oligômeros ARA42, exceto para pentâmeros, é mos- trada para 3-SPA. Tabela 3 - Comparação da atividade do oligômero anti-AB42 de 3- SPA vs tramiprosato nas razões de excesso de 100:1 e 1.000:1 de composto:proteína Oligômero sozinho |/100:1 100:1 1000:1 1000:1 pres o Fr rw Wo Fe emeo 1 wW y Fe pese O WA Y = sim, presença de espécies de oligômeros; N = nenhuma presença de espécies de oligômero.

[0083] Embora os resultados finais funcionais, ou seja, a inibição da formação do oligôêômero AR42, sejam os mesmos para o tramiprosa- to e seu metabólito, 3-SPA, a paisagem conformacional do processo não é. 3-SPA como diânion sob condições fisiológicas interage com cátions nas cadeias laterais de aminoácidos de AR42 (FIG. 5). Estes são grupos amino protonados de Asp1, Lys16, Lys28, His13,14. Ao mesmo tempo, as forças repulsivas do diânion 3-SPA e dos grupos carboxilato do AR42 estão em ação. Esta interação de interações iôni- cas contribui para mudanças conformacionais significativas de espé- cies de monômero ARA2.

[0084] Ambos os dados de MS de mobilidade iônica e dinâmica molecular (FIGs. 3, 4, 7, 8 Painel A, e 8 Painel B) exibem interação de ligação de múltiplos ligandos de 3-SPA com monômeros ARA42. 3- SPA interage com ARA42 por meio de diferentes interações iônicas que o tramiprosato. Curiosamente, embora empregando diferentes padrões de ligação iônica, nas mesmas condições, os dados do IMS MS e da dinâmica molecular mostram qualitativamente o mesmo resultado oli- gomérico anti-AR42 de ambos os compostos. O tramiprosato mostrou inibição completa da formação de oligômeros AR42 após 24 horas in vitro, enquanto o 3-SPA mostrou os mesmos resultados com exceção da inibição da formação de pentâmeros na mesma escala de tempo. No entanto, uma investigação detalhada do curso do tempo também mostra um curso dependente do tempo da inibição dos oligômeros. Após 4 horas, o 3-SPA inibe a formação de oligômeros com exceção de dímeros, trímeros e pentâmeros. Após exposição sustentada de 24 horas, as únicas espécies oligoméricas não inibidas foram os pentâ- meros de AB42. Estes dados sugerem que o primeiro efeito antioligo- mérico do tramiprosato é seguido pelo segundo efeito antioligomérico do metabólito 3-SPA do tramiprosato.

Farmacocinética e penetração no cérebro de 3-SPA administrado por via oral em ratos

[0085] A concentração plasmática de uma dose única de 3-SPA, dissolvida em solução salina como uma solução límpida, administrada por via oral e intravenosa a ratos a um nível de dose de 30 mg / kg e mg / kg, respectivamente, é mostrada na FIG. 9. Cérebro, CSF e níveis plasmáticos correspondentes após uma dose oral única de dose de 30 mg / kg de 3-SPA a 1, 2, 6 e 24 horas são mostrados na FIG.

10. As curvas PK médias foram usadas para o cálculo dos parâmetros farmacocinéticos. Os parâmetros farmacocinéticos resultantes, biodis- ponibilidade oral e penetração cerebral de 3-SPA em ratos são mos-

trados nas Tabelas 4-6. Tabela 4 - Parâmetros farmacocinéticos de 3-SPA oral em ratos SD machos (n = 3) Tabela 5 - Parâmetros farmacocinéticos de 3-SPA iv em ratos SD machos (n = 3)

Tabela 6 - Penetração cerebral de 3-SPA oral (30 mg / kg) em ratos SD machos [psmenr Pk Tunands [PRema Tesetro Test [TRI O a Sra O Ta

3. Discussão

[0086] A partir de nossos estudos, descobrimos a presença de 3- SPA no fluido cérebro-espinhal (CSF) de sujeitos nãive de droga. Ver, por exemplo, FIG. 2. Além disso, conforme exemplificado acima (ver, por exemplo, a Tabela 1), identificamos a presença de 3-SPA no CSF de 64 pacientes virgens com defeitos cognitivos. A concentração mé- dia de 3-SPA do estudo foi 11,7 + 4,3 nM. Também mostramos que o 3-SPA induz o efeito oligomérico anti-AR42 de maneira dependente do tempo e da concentração. Consulte a seção “Atividade oligomérica an- ti-AR42 de 3-SPA” apresentada acima. Mostramos ainda que o 3-SPA exibe 100% de biodisponibilidade oral e 25% de penetração no cére- bro, indicando que o 3-SPA é bem absorvido e atravessa a barreira hematoencefálica. Ver Tabelas 4-6. Tomados em conjunto, esses da- dos sugerem que as concentrações mais altas no CSF no cérebro hu- mano após a administração oral de ALZ-801 ou tramiprosato resultam da penetração do metabólito 3-SPA no CNS.

[0087] Também identificamos uma correlação inversa entre a con- centração de 3-SPA no CSF e a gravidade do comprometimento cog- nitivo. Por exemplo, à medida que a gravidade da AD diminui, concen- trações mais altas de 3-SPA foram encontradas no CSF. Ver FIG 6. Em contraste, à medida que a gravidade da AD aumenta, concentra- ções mais baixas de 3-SPA foram encontradas no CSF. Ver FIG 6. Es-

ses dados sugerem que os níveis de 3-SPA no cérebro desempenham um papel importante na redução da probabilidade de, ou atraso do iní- cio da progressão da doença. Manter níveis suficientes de 3-SPA ou aumentar os níveis mais baixos de 3-SPA pode, em parte, ser realiza- do por tratamento com AZL-801, tramiprosato, outros precursores de tramiprosato (tais como aqueles na Fórmula |), ou composições farma- cêuticas compreendendo 3- SPA. Como tal, as abordagens terapêuti- cas aqui descritas fornecem novos meios para reduzir a neurotoxicida- de do oligômero beta amiloide e forneceram resultados clinicamente significativos para o tratamento de distúrbios cognitivos, como AD.

[0088] Embora tenhamos descrito uma série de modalidades desta invenção, é evidente que nossos exemplos básicos podem ser altera- dos para fornecer outras modalidades que utilizam os compostos e métodos desta invenção. Portanto, será apreciado que o escopo desta invenção será definido pelas reivindicações anexas em vez de pelas modalidades específicas que foram representadas a título de exemplo.

[0089] O conteúdo de todas as referências (incluindo referências de literatura, patentes expedidas, pedidos de patente publicados e pe- didos de patentes copendentes) que possam ser citados ao longo des- te pedido são por meio deste expressamente incorporados neste do- cumento em suas totalidades por referência. A menos que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados estão de acordo com o significado comumente conhecido pelos versados na técnica.

Claims (23)

REIVINDICAÇÕES

1. Método para selecionar e tratar um sujeito sofrendo de doença de Alzheimer, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) selecionar o sujeito se a concentração de 3-SPA presen- te no sujeito for menor do que um limiar de linha de base predetermi- nado; e b) administrar ao sujeito selecionado uma quantidade eficaz de um composto tendo a Fórmula |:

YW RO Pon), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R é COOH, ou -CHaANH-(AA')(AA?):-H; AA' e AA? são, cada um, independentemente selecionados de alanina (Ala), cisteína (Cys), ácido aspártico (Asp), ácido glutâmico (Glu), fenilalanina (Phe), glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (lle), lisina (Lys), leucina (Leu), metionina (Met), asparagina (Asn), prolina (Pro), glutamina (Gln), arginina (Arg), serina (Ser), treonina (Thr), vali- na (Val), triptofano (Trp), tirosina (Tyr), B-alanina (B-ALA) e ácido y- aminobutírico (GABA); e q e t são, cada um, independentemente selecionados de O ou 1.

2. Método para tratar um sujeito sofrendo de doença de Al- zheimer, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) determinar se 3-SPA está presente no sujeito em uma concentração inferior a um limiar de linha de base predeterminado; e b) administrar ao sujeito uma efetiva de um composto de

YW Fórmula |: RO Pon (1); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, apenas se a concentração de 3-SPA no sujeito estiver abaixo do limiar de linha de base predeterminado; em que: R é COOH, ou -CHaNH-(AA')L(AA?):-H; AA' e AA? são, cada um, independentemente selecionados de alanina (Ala), cisteína (Cys), ácido aspártico (Asp), ácido glutâmico (Glu), fenilalanina (Phe), glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (lle), lisina (Lys), leucina (Leu), metionina (Met), asparagina (Asn), prolina (Pro), glutamina (Gln), arginina (Arg), serina (Ser), treonina (Thr), vali- na (Val), triptofano (Trp), tirosina (Tyr), B-alanina (B-ALA) e ácido y- aminobutírico (GABA); e q e t são, cada um, independentemente selecionados de O ou 1.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que a concentração de 3-SPA no sujeito é a concen- tração de 3-SPA no líquido cefalorraquidiano.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula | é o o LA VW HO. VW OH, o ou O ; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o sujeito é selecionado ou admi- nistrado com um composto de Fórmula | apenas se o sujeito for hete- rozigoto ApoE4.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o sujeito é selecionado ou admi- nistrado com um composto de Fórmula | apenas se o sujeito for homo-

zigoto ApoE4/4.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o sujeito é selecionado ou administrado um composto de Fórmula | apenas se o sujeito tiver uma pontuação MMSE de 22 a 28 antes do tratamento.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o sujeito é selecionado ou administrado um composto de Fórmula | apenas se o sujeito tem uma pontuação MMSE de 22 a 26 antes do tratamento.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o limiar de linha de base prede- terminado é definido como uma concentração de 3-SPA inferior a 25 ng/mL.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o limiar de linha de base predeterminado é definido como uma concentração de 3-SPA entre 6 ng/ml e 25 ng/ml.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o limiar de linha de base predeterminado é definido como uma concentração de 3-SPA inferior a ng/mL.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9 e 11, caracterizado pelo fato de que o limiar de linha de ba- se predeterminado é definido como uma concentração de 3-SPA de 2 ng/ml a 4 ng/mL.

13. Método de prevenção do declínio cognitivo em um sujei- to, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de administrar ao sujeito em necessidade de uma composição farmacêutica compre- HO. xo Won endendo um composto da fórmula O , ou um sal farma-

ceuticamente aceitável do mesmo; e um transportador farmaceutica- mente aceitável.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracteriza- do pelo fato de que o sujeito precisa de prevenção se: a) o nível de 3-SPA no sujeito estiver abaixo de um limiar de linha de base predeterminado; e/ou b) o sujeito tiver pelo menos um alelo ApoE4; e/ou c) o sujeito tiver histórico familiar de doença de Alzheimer.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracteriza- do pelo fato de que o sujeito precisa de prevenção se: a) o nível de 3-SPA no sujeito estiver abaixo de um limiar de linha de base predeterminado; e/ou b) o sujeito tiver pelo menos dois alelos ApoE4.

16. Método de prevenção de demência em um sujeito, ca- racterizado pelo fato de que compreende a etapa de administrar ao sujeito em necessidade de uma composição farmacêutica compreen- Ho. o NE > on dendo um composto da fórmula o , ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo; e um transportador farmaceuticamente aceitável e um transportador farmaceuticamente aceitável.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracteriza- do pelo fato de que o sujeito precisa de prevenção se: a) o nível de 3-SPA no sujeito estiver abaixo de um limiar de linha de base predeterminado; e/ou b) o sujeito tiver pelo menos um traumatismo craniano.

18. Método para selecionar e tratar um sujeito sofrendo de doença de Alzheimer, caracterizado pelo fato de que compreende: a) selecionar o sujeito se: i. 3-SPA está presente em uma amostra de fluido cérebro- espinhal retirada do sujeito a uma concentração de menos que 10 ng/ml; ii. o sujeito tem uma pontuação inicial no MMSE de 22 a 28 e iii. o sujeito tem pelo menos um alelo ApoE4; e b) administrar ao sujeito selecionado uma quantidade eficaz de um composto tendo a fórmula estrutural: oH, o ou O , ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um dos ante- riores.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracteriza- do pelo fato de que a concentração de 3-SPA presente no fluido cére- bro-espinhal do sujeito é de 2 a 4 ng/ml.

20. Método, de acordo com a reivindicação 18 ou 19, carac- terizado pelo fato de que o sujeito é homozigoto ApoE4.

21. Método para tratar um sujeito sofrendo de doença de Alzheimer, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) determinar a concentração de 3-SPA presente no fluido cérebro-espinhal do sujeito; e b) administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto com uma fórmula estrutural: o o LA VW HO. VW OH, o ou O , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, apenas se: i) a concentração de 3-SPA no fluido cérebro-espinhal do sujeito for inferior a 10 ng/ml; e ii) o sujeito tiver uma pontuação MMSE de linha de base de 22 a 30.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracteriza- do pelo fato de que o sujeito recebe uma quantidade eficaz do com- posto apenas se: i) a concentração do composto endógeno no CSF do su- jeito for inferior a 10 ng/ml; ii) o sujeito tiver uma pontuação inicial no MMSE de 22 a 28 e iii) o sujeito tiver dois alelos ApoE4.

23. Método, de acordo com a reivindicação 21 ou 22, carac- terizado pelo fato de que o sujeito é selecionado apenas se a concen- tração de 3-SPA no fluido cérebro-espinhal do sujeito for de 2 a 4 ng/ml.