BR112021001403A2 - usos de composições de curcuminoide - Google Patents

Abstract

"USOS DE COMPOSIÇÕES DE CURCUMINOIDE". A presente invenção refere-se a métodos e usos de composições que compreendem curcumina; em particular, métodos e usos relacionados à melhoria da bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "USOS DE COMPOSIÇÕES DE CURCUMINOIDE". Campo da Invenção

[0001] A presente invenção refere-se a métodos e usos de com- posições que compreendem curcumina; em particular métodos e usos relacionados à melhoria da bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioe- ficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos. Antecedentes da Invenção

[0002] A listagem ou discussão de um documento aparentemente publicado anteriormente no presente relatório descritivo não deve ne- cessariamente ser considerada como um reconhecimento de que o documento é parte do estado da técnica ou de conhecimento geral em comum.

[0003] A cúrcuma e os compostos isolados da cúrcuma, tais como os curcuminoides, incluindo a curcumina, têm sido usados há muito tempo para tratar uma variedade de doenças e condições.

[0004] Os curcuminoides são pigmentos laranja-amarelo naturais e polifenóis hidrofóbicos derivados do rizoma da erva Curcuma longa. Eles são comumente isolados do tempero e do agente corante alimen- tício cúrcuma.

[0005] O extrato de cúrcuma contém aproximadamente 75-80 % de curcumina, 15-20 % de desmetoxicurcumina (DMC) e 0-10 % de bisdemetoxicurcumina (BDMC). Os curcuminoides têm uma estrutura conjugada única, uma B-dicetona bis-a,B-insaturada (comumente de- nominada de diferuloilmetano), a qual exibe tautomerismo ceto-enol com uma forma ceto predominante em soluções ácidas e neutras e forma enol estável em meio alcalino (consulte Figura 1) (Hoehle S.|., Pfeiffer E., Sólyom A.M., Metzler M. Metabolism of Curcuminoids in Tissue Slices and Subcellular Fractions From Rat Liver. J Agric Food Chem. 08 de fevereiro de 2006; 54(3): 756-64).

[0006] A curcumina é uma molécula altamente pleiotrópica que foi demonstrado exibir atividade antibacteriana pela primeira vez em

1949. Desde então, foi mostrado que este polifenol tem atividades anti- inflamatórias, hipoglicêmicas, antioxidantes, cicatrizantes e antimicro- bianas. Extensos estudos pré-clínicos e ensaios clínicos nas últimas três décadas indicaram o potencial terapêutico da curcumina contra uma ampla variedade de doenças humanas (Gupta S.C., Sung B., Kim J.H., Prasad S., Li S., Aggarwal B.B. Multitargeting by Turmeric, The Golden Spice: From Kitchen to Clinic. Mol Nutr Food Res. Setembro de 2013; 57(9): 1510-28).

[0007] Embora a curcumina tenha mostrado eficácia contra vários transtornos humanos, ela também é conhecida por ter biodisponibili- dade limitada em virtude da má absorção, metabolismo rápido e elimi- nação sistêmica rápida.

[0008] Níveis séricos baixos, bem como distribuição tecidual limi- tada e metabolismo rápido, foram relatados quando a curcumina é administrada por via oral. Por exemplo, foi demonstrado que, mesmo após doses orais de até 12 g, os níveis séricos de curcumina não ex- cederam o baixo nível micromolar. Em um estudo clínico com 4—8 g de curcumina, a concentração sérica máxima observada foi 1,3 ug/mL, enquanto que vários outros estudos clínicos e animais relataram níveis séricos na faixa abaixo de nanogramas por mililitro (Anand P, Kunnu- makkara A.B., Newman R.A., Aggarwal B.B. Bioavailability of Curcumin: Problems and Promises. Mol Pharm. Nov-Dez de 2007; 4(6): 807-18).

[0009] Descobriu-se que a curcumina é pouco solúvel em água. Por exemplo, a solubilidade máxima da curcumina em tampão aquoso (pH de 5,0) foi relatada como sendo tão baixa quanto 11 ng/ml (Tgnnesen et al., 2002).

[0010] A curcumina é relativamente estável em pH ácido, mas se decompõe rapidamente em pH acima do neutro e forma ácido ferúlico e feruloilmetano, o último fornecendo, então, a vanilina (FAO 2004. CURCUMIN Chemical and Technical Assessment (CTA) Primeiro esboço preparado por Ivan Stankovic. Chemical and Technical As- sessment 61st JECFA).

[0011] A curcumina também exibe absorção intestinal muito baixa. Descobriu-se que os coeficientes de permeabilidade aparente da cur- cumina eram extremamente baixos em um modelo de células intesti- nais humanas in vitro (valor de Papp: 0,1 x 108 cm/s), o que poderia prever, de acordo com a correlação dos valores de Papp determinados em células Caco-2 in vitro com absorção humana in vivo, uma baixa absorção (0-20 %) em seres humanos (Dempe J.S., Scheerle R.K,, Pfeiffer E., Metzler M. Metabolism and Permeability of Curcumin in Cul- tured Caco-2 Cells. Mol Nutr Food Res. Setembro de 2013; 57(9): 1543-9).

[0012] Uma vez absorvida, a curcumina sofre metabolismo de fase | e fase Il (consulte Figura 2).

[0013] No metabolismo de fase |, a curcumina e seus dois congê- neres demetóxi sofrem redução sucessiva em seus metabólitos di- hidro-, tetra-hidro-, hexa-hidro- e octa-hidro- no fígado, bem como na mucosa intestinal. No metabolismo de fase Il, a curcumina e seus me- tabólitos redutores são conjugados com ácido glucurônico e sulfato e formam metabólitos de fase |l.

[0014] A redução e a conjugação parecem ser vias metabólicas gerais dos curcuminoides, ocorrendo nos tecidos hepático e intestinal de ratos e seres humanos. Assim, os efeitos biológicos provocados pela curcumina em outros tecidos além do trato gastrointestinal são considerados mais prováveis em virtude dos metabólitos da curcumina por vários autores.

[0015] Também foi demonstrado que a curcumina é metabolizada por micro-organismos intestinais (consulte Figura 3).

[0016] Descobriu-se que o metabolismo microbiano da curcumina compreende uma redução em duas etapas, com a curcumina sendo convertida sucessivamente em di-hidrocurcumina e, em seguida, tetra- hidrocurcumina por uma curcumina/di-hidrocurcumina redutase de- pendente de NADPH (CurA) (Hassaninasab A, Hashimoto Y, Tomita- Yokotani K, Kobayashi M. Discovery of the Curcumin Metabolic Pathway Involving a Unique Enzyme in an Intestinal Microorganism. Proc Natl Acad Sci U S A. 19 de Abril de 2011; 108(16): 6615-20).

[0017] Um estudo recente também relatou que a tetra-hidroxicur- cumina, mas não a curcumina, pode se acumular no tecido de ratos, sugerindo que a microbiota também pode ser considerada um ator po- tencial no metabolismo e na biodisponibilidade da curcumina (Neyrinck A.M,, Alligier M., Memvanga P.B., Névraumont E., Larondelle Y., Préat V., Cani P.D., Delzenne N.M. Curcuma longa Extract Associated with White Pepper Lessens High Fat Diet-Induced Inflammation in Subcu- taneous Adipose Tissue. PLoS One. 19 de novembro de 2013; 8(11): e81252).

[0018] O metabolismo rápido, baixa solubilidade em água, instabi- lidade em pH neutro e após exposição à luz e/ou oxigênio e má absor- ção pelos tecidos limita drasticamente a utilidade potencial dos curcu- minoides, incluindo a curcumina, no tratamento de doenças, tal como o câncer.

[0019] Em virtude da baixa solubilidade em água e características de absorção, solventes orgânicos tipicamente são usados para dissol- ver a curcumina, tal como sulfóxido de dimetila (DMSO). No entanto, embora o uso de tais solventes ajude a solubilizar a curcumina e a me- lhorar a disponibilidade, o uso de solventes orgânicos como veículo é controverso e indesejável, especialmente em uma época em que há uma crescente demanda do consumidor por ingredientes naturais.

[0020] Outra possibilidade de auxiliar a solubilidade da curcumina em água é por meio da emulsificação. No entanto, os emulsificantes de grau orgânico natural são raros e tanto os emulsificantes sintéticos, como o polissorbato 80, quanto os emulsificantes naturais, como os emulsificantes com base em amido são, tipicamente, capazes de dis- persar baixos níveis (< 7 %) de curcumina em água.

[0021] Outras estratégias que foram exploradas a fim de abordar as deficiências acima e melhorar a eficácia terapêutica da curcumina incluem nanopartículas poliméricas, micelas poliméricas e enxertia de curcumina em um polímero hidrofílico.

[0022] A presente invenção busca abordar os problemas supraci- tados associados aos curcuminoides, tal como a baixa solubilidade da curcumina em água, e melhorar a bioacessibilidade, biodisponibilida- de, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos ao fornecer os métodos e usos a seguir. Descrição da Invenção

[0023] Os presentes inventores descobriram, surpreendentemente, que a bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioativida- de de curcuminoides em mamíferos podem ser aprimoradas pela ad- ministração dos ditos curcuminoides na forma de uma composição que compreende (i) curcuminoides, (ii) Quillaja e (iii) amido modificado e/ou goma arábica. Métodos e usos

[0024] A presente invenção fornece um método para melhorar a bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos que compreende administrar os ditos curcuminoides na forma de uma composição que compreende (i) cur- cuminoides, (ii) um extrato obtenível ou obtido a partir de Quillaja e (iii) amido modificado e/ou goma arábica.

[0025] Em particular, a presente invenção fornece um método para melhorar a bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioa-

tividade de curcuminoides em mamíferos que compreende administrar os ditos curcuminoides na forma de uma composição que compreende (i) curcuminoides, (ii) um extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja e (iii) amido modificado ou goma arábica.

[0026] Tais métodos podem, daqui em diante, ser denominados como o "método da invenção".

[0027] Algumas composições usadas no método da invenção não compreendem feno-grego, por exemplo, algumas composições da in- venção não compreendem fibra de feno-grego (isto é, fibra obtenível ou obtida a partir de feno-grego).

[0028] As composições usadas no método da invenção podem compreender pequenas quantidades de polióis e/ou açúcares de baixo peso molecular, de preferência com 1 ou 2 unidades monossacarídi- cas, tal como menos de 5 % em peso da composição ou menos de 2,5 % em peso da composição. Alternativamente, a composição da inven- ção pode ser isenta de polióis e/ou açúcares de baixo peso molecular, tais como aqueles com 1 ou 2 unidades monossacarídicas, ou seja, algumas composições não contêm quaisquer polióis e/ou açúcares de baixo peso molecular, tais como aqueles com 1 ou 2 unidades monos- sacarídicas.

[0029] A presente invenção também fornece o uso de uma com- posição que compreende (i) curcuminoides, (ii) um extrato obtenível ou obtido a partir de Quillaja e (iii) amido modificado e/ou goma arábica para melhorar a bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos.

[0030] A composição usada nos métodos/usos descritos no pre- sente documento pode estar na forma de uma emulsão ou a composi- ção da invenção pode estar na forma de um sólido, por exemplo, na forma de um pó.

[0031] Conforme usado no presente documento, o termo "emul-

são" se refere a um tipo de coloide que é formado pela combinação de dois líquidos que geralmente não se misturam. Tipicamente, um dos líquidos conterá uma dispersão do outro líquido.

[0032] Algumas vezes, os termos "coloide" e "emulsão" são usa- dos indistintamente, porém, conforme usado no presente documento, o termo emulsão se aplica quando ambas as fases de uma mistura são líquidas. As partículas em um coloide podem ser qualquer fase da matéria. Portanto, uma emulsão é um tipo de coloide, porém, nem to- dos os coloides são emulsões.

[0033] Uma solução coloidal, ocasionalmente identificada como suspensão coloidal, é uma mistura na qual as substâncias são regu- larmente suspensas em um fluido.

[0034] Estes usos podem ser denominados, daqui em diante, co- mo o "uso da invenção".

[0035] No método ou uso da invenção, os curcuminoides na com- posição podem ser obtidos a partir de qualquer fonte. No entanto, é preferido que os curcuminoides sejam obtidos a partir de uma fonte natural, isto é, os curcuminoides não são sintéticos e são com base em plantas.

[0036] Na composição usada nos métodos / usos aqui descritos no presente documento, a composição pode compreender partículas que têm um diâmetro médio de cerca de 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1000 nm, 1100 nm, 1200 nm, 1300 nm, 1400 nm ou 1500 nm a cerca de 9000 nm, 8000 nm, 7000 nm, 6000 nm, 5000 nm, 4000 nm, 3000 nm ou 2000 nm, tal como cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm. As partículas também podem ter um di- âmetro médio de cerca de 200 nm a cerca de 600 nm ou de cerca de 300 nm a cerca de 500 nm ou cerca de 400 nm.

[0037] Por exemplo, na composição usada nos métodos/usos des- critos no presente documento, a composição pode compreender partí-

culas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm, tal como a partir de cerca de 200 nm a cerca de 600 nm ou a partir de cerca de 300 nm a cerca de 500 nm ou cerca de 400 nm.

[0038] Por exemplo, a composição pode compreender partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 550 nm a cerca de 700 nm e partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 250 nm, dando um diâmetro médio de cerca de 400 nm.

[0039] Por exemplo, onde a composição está na forma de uma emulsão, a composição pode, por exemplo, compreender partículas que têm um diâmetro médio de cerca de 550 nm a cerca de 7/00 nm e partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 250 nm, dando um diâmetro médio de cerca de 400 nm.

[0040] Onde a composição está na forma de um sólido, tal como um pó, a composição pode, por exemplo, compreender partículas que têm um diâmetro médio de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm, tal como de cerca de 2000 nm a cerca de 4000 nm.

[0041] As partículas na composição podem estar na forma de mi- celas.

[0042] Na composição da invenção, por exemplo, quando a com- posição está na forma de um sólido, as partículas podem ser formadas usando métodos conhecidos na técnica, tal como secagem por pulve- rização.

[0043] Após a formação das partículas (por exemplo, após seca- gem, tal como secagem por pulverização), as partículas podem ser trituradas e/ou moídas (tal como moagem a esferas) para fornecer um tamanho mais uniforme.

[0044] O tamanho e a morfologia da micela de curcumina carrega- da foram analisados por meio de dispersão dinâmica de luz (Dynamic Light Scattering, DLS) e o potencial zeta (potencial Z) e microscopia de varredura eletrônica (Scanning Electron Microscopy, SEM). Para análi- ses DLS e do potencial zeta, um Zetasizer Nano ZS (NanoZS90, Mal- vern Instrument Ltda., Reino Unido) com um laser de He/Ne (A = 633 nm) em um ângulo de dispersão fixo de 90º em uma temperatura de (25 + 0,1 ºC). Por exemplo, o tamanho das partículas pode ser medido por meio do método CQ-MO-304, conforme definido nos Exemplos abaixo.

[0045] Na composição, os curcuminoides podem ser obtidos a par- tir de qualquer fonte. No entanto, é preferível que os curcuminoides sejam obtidos a partir de uma fonte natural, ou seja, os curcuminoides não são sintéticos, mas sim com base em plantas.

[0046] A composição pode compreender pelo menos cerca de 2,5 % de curcuminoides em peso da composição.

[0047] Tipicamente, na composição usada nos métodos/usos des- critos no presente documento, os curcuminoides podem estar presen- tes em uma quantidade a partir de cerca de 2,5 % a cerca de 60 %, tal como a partir de cerca de 5 % a cerca de 50 % ou a partir de cerca de % a cerca de 45 % ou a partir de cerca de 15 % a cerca de 40 % em peso da composição.

[0048] Os curcuminoides podem ser fornecidos por meio de extra- ção e opcionalmente purificação da raiz (rizoma) de cúrcuma (Curcu- ma longa), raiz de oleorresina de cúrcuma, oleorresina de raiz de cúr- cuma desengordurada e misturas dos mesmos, ou seja, (i) os curcu- minoides podem estar na forma de um extrato ou extrato purificado de cúrcuma que compreende a partir de cerca de 30 % a cerca de 100 % de curcuminoides, tal como de cerca de 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 % ou 90 % a cerca de 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, TO %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 % ou 45 % de cur- cuminoides com base na porcentagem de curcuminoides totais no ex- trato.

[0049] Onde os curcuminoides são fornecidos como um extrato de cúrcuma, a cúrcuma pode ser extraída usando um solvente de extra- ção com base em álcool, tal como uma mistura de água/álcool ou um álcool. Por exemplo, o solvente de extração com base em álcool pode ser água/metanol (ou seja, uma mistura de água e metanol) ou água/etanol (ou seja, uma mistura de água e etanol) ou metanol ou etanol.

[0050] Quando o solvente de extração compreende uma mistura de água/álcool, a proporção de água para álcool pode ser a partir de cerca de 25:75 a cerca de 1:99, tal como a partir de cerca de 20:80 a cerca de 5:95 ou cerca de 10:90. Por exemplo, o solvente de extração pode ser água/etanol em uma proporção a partir de cerca de 25:75 a cerca de 1:99, tal como a partir de cerca de 20:80 a cerca de 5:95 ou cerca de 10:90.

[0051] O extrato de cúrcuma pode, então, ser adicionalmente puri- ficado para fornecer um extrato de curcuminoides que compreende a partir de cerca de 30 % a cerca de 100 % de curcuminoides, tal como cerca a partir de 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 % ou 90 % a cerca de 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 % ou 45 % de curcuminoides com base na porcentagem de curcuminoides totais no extrato.

[0052] A purificação do extrato pode ser realizada usando métodos conhecidos na técnica. Tipicamente, o extrato é purificado usando um solvente com base em álcool, tal como metanol a 100 % ou etanol a 100 %.

[0053] O extrato de cúrcuma pode ser opcionalmente seco para remover qualquer excesso de solvente.

[0054] Onde os curcuminoides são fornecidos na forma de um ex- trato de cúrcuma, conforme definido anteriormente, a composição po- de compreender a partir de cerca de 2,5 % a cerca de 50 % de extrato de cúrcuma, tal como a partir de cerca de 5 % a cerca de 40 % ou cer- ca de 35 % em peso da composição. Por exemplo, a composição pode compreender a partir de cerca de 8 % a cerca de 40 % de extrato de cúrcuma em peso da composição, onde o extrato de cúrcuma compre- ende a partir de cerca de 65 % a cerca de 95 % de curcuminoides em peso do extrato de cúrcuma, fornecendo uma composição que com- preende a partir de cerca de 6 % a cerca de 38 % de curcuminoides em peso da composição ou a composição pode compreender a partir de cerca de 8 % a cerca de 15 % de extrato de cúrcuma em peso da composição, onde o extrato de cúrcuma compreende cerca de 95 % de curcuminoides em peso do extrato de cúrcuma, fornecendo uma composição que compreende a partir de cerca de 6 % a cerca de 13,5 % de curcuminoides.

[0055] Os curcuminoides podem ser fornecidos como um líquido ou um pó, tal como um pó. Por exemplo, um extrato de cúrcuma em pó.

[0056] Conforme usado no presente documento, o termo "curcu- minoides" inclui curcumina, demetoxicurcumina (DMC) e bisdemetoxi- curcumina (BDMC). Por exemplo, o extrato de cúrcuma pode compre- ender a partir de cerca de 70 % a cerca de 85 % de curcumina (tal como a partir de cerca de 75 % a cerca de 80 %), a partir de cerca de % a cerca de 25 % de DMC (tal como a partir de cerca de 15%a cerca de 20 %) e a partir de cerca de 0 % a cerca de 10 % de BDMC.

[0057] Se presente, o amido modificado na composição pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 30 % a cerca de 90 % em peso da composição, tal como a partir de cerca de 40 % a cerca de 80 % em peso.

[0058] Conforme usado no presente documento, o termo "amido modificado" inclui amidos que foram física, enzimática ou quimicamen- te tratados, mas não inclui amidos modificados com uma estrutura cí-

clica, tal como a ciclodextrina. Os amidos modificados que podem ser usados nas composições descritas no presente documento incluem, porém sem limitações, maltodextrina.

[0059] A goma arábica na composição da invenção pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 40 % a cerca de 65 % em peso da composição, tal como a partir de cerca de 50 a cerca de 60 % em peso da composição ou cerca de 58 % em peso da composi- ção.

[0060] O extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja na compo- sição pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 0,1 % a cerca de 5 % em peso do extrato, tal como a partir de cerca de 0,5 % a cerca de 3 % em peso da composição.

[0061] O extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja na compo- sição da invenção pode compreender pelo menos 50 % de saponinas, tal como pelo menos 60 % de saponinas ou pelo menos 65 % de sa- poninas em peso do extrato de Quillaja. Por exemplo, a Quillaja usada na composição da invenção pode compreender a partir de cerca de 50 % a cerca de 80 % ou a partir de cerca de 60 % a cerca de 75 % de saponinas em peso do extrato de Quillaja.

[0062] O extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja usado no processo da invenção pode estar em qualquer forma, tal como um lí- quido ou um sólido. Por exemplo, o extrato de Quillaja pode ser usado na forma de um sólido, tal como um pó.

[0063] A composição pode compreender opcionalmente um óleo de planta e/ou vegetal. Por exemplo, a composição da invenção pode compreender óleos de planta e/ou vegetais selecionados a partir do grupo que consiste em óleo de coco, óleo de milho, óleo de semente de algodão, azeite, óleo de palma, óleo de amendoim (óleo de noz), óleo de colza, incluindo óleo de canola, óleo de cártamo, óleo de ger- gelim, óleo de soja, óleo de girassol e misturas dos mesmos.

[0064] O óleo de planta e/ou vegetal presente na composição po- de estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 1 % a cerca de 20 % de óleo de planta e/ou vegetal, tal como a partir de cerca de 2,5 % a cerca de 10 % ou cerca de 5 % em peso da composição.

[0065] Salvo indicação em contrário no presente documento, as percentagens em peso listadas são com base no peso total da compo- sição(seca) obtida.

[0066] Para evitar dúvidas, preferências, opções, características particulares e assim por diante indicadas para um determinado aspec- to, característica ou parâmetro da invenção devem, a menos que o contexto indique o contrário, ser consideradas como tendo sido descri- tas em combinação com qualquer e todas as outras preferências, op- ções, características particulares e assim por diante, conforme indica- do para o mesmo ou outros aspectos, características e parâmetros da invenção.

[0067] O termo "cerca de", conforme usado no presente documen- to, por exemplo, quando de referência a um valor mensurável (tal co- mo uma quantidade ou peso de um componente específico na mistura de reação), se refere a variações de + 20 %, + 10 %, + 5%, + 1 %, + 0,5 % ou, particularmente, + 0,1 % em relação à quantidade especifi- cada. Por exemplo, uma variação de + 0,5 % em relação à porcenta- gem de um componente na composição da invenção significa uma va- riação de 0,5 % em relação à porcentagem dada, ou seja, + 0,5 % de % significaria uma variação a partir de 9,5 % a 10,5 %.

[0068] A composição da invenção pode ser fornecida na forma só- lida ou líquida, de preferência na forma sólida, tal como um pó. Na forma sólida, está implícito que o composto pode ser fornecido como um sólido amorfo ou como um sólido cristalino ou parcialmente crista- lino.

[0069] A composição da invenção é, tipicamente, altamente solú-

vel em água e/ou estável em um pH de 4 ou mais, tal como um pH a partir de cerca de 4 a cerca de 7.

[0070] Pelo termo solúvel em água entenda-se que pelo menos cerca de 50 %, tal como pelo menos cerca de 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou 95 % da composição dissolverão em água em temperatura ambien- te, ou seja, uma temperatura de cerca de 25 “ºC.

[0071] Nos métodos ou usos descritos no presente documento, a melhoria na bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bi- oatividade de curcuminoides em mamíferos pode ser em virtude da composição que confere um aumento da resistência gastrointestinal dos curcuminoides e/ou um aumento da absorção de curcuminoides pelas células intestinais e/ou a circulação sanguínea.

[0072] Como tal, os métodos ou usos descritos no presente docu- mento podem ser usados para aumentar a resistência gastrointestinal dos curcuminoides e/ou aumentar a absorção de curcuminoides pelas células intestinais e/ou a circulação sanguínea.

[0073] Nos métodos ou usos descritos no presente documento, a melhoria na biodisponibilidade, biodisponibilidade, biodisponibilidade e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos pode ser em virtude da composição que confere um aumento da solubilidade em água e/ou um aumento da estabilidade em um pH a partir de cerca de 4 a cerca de 7.

[0074] Assim, a presente invenção fornece um método para me- lhorar a solubilidade em água e/ou estabilidade de pH de curcuminoi- des, em que o método compreende administrar os ditos curcuminoides na forma de uma composição da invenção, conforme anteriormente definido.

[0075] A presente invenção também fornece o uso de uma com- posição conforme anteriormente definido para melhorar a solubilidade em água e/ou estabilidade de pH de curcuminoides.

[0076] Nos métodos ou usos descritos no presente documento, os curcuminoides podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em curcumina e seus metabólitos de fase | ou fase Il, demetoxicurcu- mina e seus metabólitos de fase | ou fase Il, bisdemetoxicurcumina e seus metabólitos de fase | ou fase |l e misturas dos mesmos. Por exemplo, os metabólitos de fase | e / ou de fase Il podem ser selecio- nados a partir do grupo que consiste em glucuronídeo de curcumina, sulfato de curcumina, glicuronídeo de DMC, sulfato de DMC, glicuroní- deo de BDMC, sulfato de BDMC, tetra-hidrocurcumina (THC), glucuro- nídeo de THC, sulfato de THC, hexa-hidrocurcumina (HHC), glucuro- nídeo de HHC, sulfato de HHC e misturas dos mesmos.

[0077] Nas composições, métodos ou usos aqui no presente do- cumento, os curcuminoides podem estar em sua forma não metaboli- zada (isto é, forma livre), por exemplo, as formas de curcumina, DMC e BDMC que não sofreram adição de glucuronídeo ou sulfato.

[0078] Nos métodos e usos descritos no presente documento, o mamífero pode ser um ser humano.

[0079] Conforme usado no presente documento, o termo "biodis- ponibilidade" pode ser definido como a fração do componente ingerido disponível no local de ação para uso em funções fisiológicas normais e é determinado por meio de ensaios in vivo (Guerra A., Etienne-Mesmin L., Livrelli V. et al. (2012) Relevance and Challenges in Modeling Hu- man Gastric and Small Intestinal Digestion. Trends Biotechnol 30: 591-—600). A biodisponibilidade é o resultado de três etapas principais: digestibilidade e solubilidade do elemento no trato gastrointestinal; ab- sorção do elemento pelas células intestinais e transporte para a circu- lação; e incorporação, a partir da circulação, da entidade funcional ou alvo (Wienk K.J.H., Marx J.J.M., Beynen A.C. (1999) The Concept of Iron Bioavailability and lts Assessment. Eur J Nutr 38: 51—75; Etche- verry P., Grusak M.A., Fleige L.E. (2012) Application of /n Vitro Bioac-

cessibility and Bioavailability Methods for Calcium, Carotenoids, Folate, Iron, Magnesium, Polyphenols, Zinc and Vitamins B6, B12, D and E. Front Physiol 3:1-21).

[0080] Conforme usado no presente documento, o termo "bioaces- sibilidade" pode ser definido como a fração de um composto que é li- berada de sua matriz alimentícia dentro do trato gastrointestinal e, por- tanto, torna-se disponível para absorção intestinal (tipicamente estabe- lecida a partir de procedimentos in vitro). Ela inclui a sequência de eventos que ocorrem durante a digestão dos alimentos para transfor- mação em material potencialmente bioacessível, mas exclui a absor- ção/assimilação através do tecido epitelial e do metabolismo pré- sistêmico (intestinal e hepático). (Alegria A., Garcia-Llatas G., Cilla A. (2015) Static Digestion Models: General Introduction em: Verhoeckx K. et al. (eds) The Impact of Food Bioactives on Health. Springer, Cham).

[0081] Conforme usado no presente documento, o termo "bioativi- dade" pode ser definido como a forma como o nutriente ou composto bioativo é transportado e atinge o tecido alvo, como ele interage com biomoléculas, o metabolismo ou biotransformação que pode experi- mentar e a geração de biomarcadores e as respostas fisiológicas indu- zidas (Alegria A., Garcia-Llatas G., Cilla A. (2015) Static Digestion Mo- dels: General Introduction em: Verhoeckx K. et al. (eds) The Impact of Food Bioactives on Health. Springer, Cham).

[0082] Nos métodos/usos descritos no presente documento, a composição pode ser administrada ou usada para fornecer curcumi- noides em uma quantidade a partir de cerca de 100 mg/dia a cerca de 2000 mg/dia ou a partir de cerca de 500 mg/dia a cerca de 1500 mg/dia ou cerca de 1000 mg/dia, tal como a partir de cerca de 300 mg/dia a cerca de 1000 mg/dia. Por exemplo, a composição pode for- necer curcuminoides em uma quantidade a partir de cerca de 1 a cer- ca de 10 mg/kg de peso corporal, tal como a partir de cerca de 2,5 a cerca de 7,5 mg/kg de peso corporal ou cerca de 5 mg/kg. Composições e Administração

[0083] De acordo com a presente invenção, a composição usada nos métodos e usos descritos no presente documento pode ser forne- cida na forma de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou ra- ções para animais de estimação ou um alimento, bebidas, rações para animais ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um herbicida, um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológi- ca ou cosmética ou pode fazer parte de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebi- das, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estima- ção), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética.

[0084] Por exemplo, a presente invenção fornece uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, ali- mentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavori- zante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética que consiste essencialmente em (ou seja, pelo menos 90 % p/p da formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tal como fórmulas alimen- tícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou vete- rinária, uma formulação enológica ou cosmética é a composição da invenção, tal como pelo menos 95 % ou 99 % ou 99,5 %) ou que com- preende a composição da invenção.

[0085] A presente invenção também fornece o uso de uma com- posição da invenção em uma formulação nutracêutica, um produto die- tético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmu- las alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêu- tica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética.

[0086] Onde a composição da invenção está na forma de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para se- res humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de es- timação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um herbicida, um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou vete- rinária, uma formulação enológica ou cosmética ou pode fazer parte de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tal como uma fórmula alimentícia funcio- nal, isto é, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou alimentos, bebidas, rações ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrân- cia ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética, pode opcionalmente compreender ainda ingredientes aceitáveis em farmacêutica/veterinária, tais como excipientes ou veículos ou ingredientes (função) aceitáveis para ali- mentos e misturas dos mesmos, conforme apropriado.

[0087] Para evitar dúvidas, no presente relatório descritivo, quando usamos o termo "que compreende(m)" ou "compreende", entenda-se que o extrato ou composição que está sendo descrita deve conter o(s) ingrediente(s) listado(s), porém, pode opcionalmente conter ingredien- tes adicionais. Quando usamos o termo "que consiste(m) essencial- mente em" ou "consiste(m) essencialmente em", entenda-se que o ex- trato ou composição que está sendo descrita deve conter o(s) ingredi- ente(s) listado(s) e também pode conter um pouco (por exemplo, até 5 % em peso ou até 1 % ou 0,1 % em peso) de outros ingredientes, con- tanto que quaisquer ingredientes adicionais não afetem as proprieda- des essenciais do extrato ou composição. Quando usamos o termo "que consiste(m) em" ou "que consiste(m)", entenda-se que o extrato ou composição descrita deve conter apenas o(s) ingrediente(s) lista- do(s).

[0088] Pretende-se também que os termos "compreende" ou "compreendem" ou "que compreende(m)" possam ser substituídos por "consiste(m)" ou "que consiste(m)" ou "que consiste(m) essencialmen- te em" em todo o pedido, conforme necessário.

[0089] Conforme usado no presente documento, referências a ex- cipientes farmaceuticamente aceitáveis podem se referir a adjuvantes, diluentes e/ou veículos farmaceuticamente aceitáveis, conforme co- nhecido por aqueles versados na técnica.

[0090] Ingredientes alimentícios aceitáveis incluem aqueles co- nhecidos na técnica (incluindo aqueles também denominados no pre- sente documento como excipientes farmaceuticamente aceitáveis) e que podem ser naturais ou não naturais, isto é, sua estrutura pode ocorrer na natureza ou não. Em determinados casos, eles podem se originar de compostos naturais e ser posteriormente modificados (por exemplo, maltodextrina).

[0091] Por "nutracêutica/farmaceuticamente aceitável" entenda-se que os componentes adicionais da composição são estéreis e apiro- gênicos. Tais componentes também devem ser "aceitáveis" no sentido de serem compatíveis com a composição da invenção e não prejudici- ais para aqueles que vão receber a mesma. Assim, "farmaceuticamen- te aceitável" inclui qualquer/quaisquer composto(s) usado(s) na forma- ção de uma parte da formulação que se destina a atuar meramente como um excipiente, ou seja, não se destina a ter atividade biológica em si. Assim, o excipiente farmaceuticamente aceitável é geralmente seguro, não tóxico e nem biologicamente nem de outra forma indese- jável.

[0092] Onde a composição da invenção faz parte de uma formula- ção nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres hu- manos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavori- zante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética, a composição da invenção está presente na formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para se- res humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, isto é, alimento, bebida, alimentos ou rações ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formula- ção farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmé- tica em uma quantidade a partir de cerca de 1 a cerca 99 % em peso da formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de es-

timação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrân- cia ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética, tal como cerca de 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou 90 % a cerca de 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 % ou 20 % em peso da formulação nutracêu- tica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou ani- mais (tal como fórmulas alimentícias funcionais, isto é, alimentos, be- bidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou alimentos, bebidas, alimentos para animais ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formu- lação enológica ou cosmética.

Administração

[0093] Aqueles versados na técnica entenderão que, nos métodos e usos descritos no presente documento, a composição da invenção, seja onde a composição está na forma de formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebi- da, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formula- ção farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmé- tica ou onde a formulação nutracêutica, um produto dietético ou ali- mentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentí- cias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, alimentos para animais ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suple- mento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética compreende a composição da invenção, a formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebi- das, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estima- ção), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética pode ser administrada a um paciente ou indivíduo (por exemplo, um paciente ou ser humano ou animal) através de qualquer via adequada, tal como através da via oral, retal, nasal, pulmonar, bu- cal, sublingual, transdérmica, intracisternal, intraperitoneal e parentéri- ca (incluindo subcutânea, intramuscular, intratecal, intravenosa e intra- dérmica).

[0094] Em particular, nos métodos e/ou usos descritos no presente documento, as composições ou composição na forma ou que forma parte de formulações nutracêuticas, um produto dietético ou alimentí- cio para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, isto é, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para ani- mais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos ali- mentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética que compreende a composi- ção da invenção pode ser administrada por via oral. Em tais casos, as composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção po- dem ser formuladas especificamente para administração por via oral.

[0095] As formulações farmacêuticas para administração oral in- cluem formas de dosagem sólidas, tais como cápsulas duras ou mo- les, comprimidos, trociscos, drágeas, pílulas, pastilhas, pós e grânulos. Quando apropriado, elas podem ser preparadas com revestimentos, tais como revestimentos entéricos, ou podem ser formuladas de modo a fornecer liberação controlada do ingrediente ativo, tal como liberação sustentada ou prolongada, de acordo com métodos bem conhecidos na técnica.

[0096] As formas de dosagem líquidas para administração oral in- cluem soluções, emulsões, suspensões aquosas com base em óleo/oleosas, xaropes e elixires.

[0097] Formulações nutracêuticas, um produto dietético ou alimen- tício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para ani- mais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos ali- mentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética descrita no presente docu- mento, tal como aquelas destinadas à administração oral, podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, tal como ao misturar os componentes da composição.

[0098] Tal formulação nutracêutica, produto alimentício ou dietéti- co para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para ani- mais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos ali- mentícios para animais de estimação), suplemento nutricional, fra- grância ou flavorizante, formulação farmacêutica ou veterinária, formu- lação enológica ou cosmética conforme descrito no presente docu- mento pode conter um ou mais componentes adicionais selecionados a partir do grupo que consiste em ingredientes alimentícios, tais como agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agen- tes conservantes. Os comprimidos podem conter o(s) ingrediente(s) ativo(s) em mistura com excipientes (ou ingredientes) farmaceutica- mente aceitáveis não tóxicos que são adequados para a fabricação de comprimidos. Estes excipientes (ou ingredientes) podem ser, por exemplo: diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho, maltodex- trina ou ácido algínico; agentes aglutinantes, por exemplo, amido, ge- latina ou acácia; e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por meio de técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e, assim, fornecer uma ação sustentada por um período mais longo. Por exemplo, um material de retardo de tempo, tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila, pode ser empregado.

[0099] Veículos farmacêuticos adequados incluem diluentes ou materiais de enchimento sólidos inertes, soluções aquosas estéreis e vários solventes orgânicos. Exemplos de veículos sólidos são lactose, terra alba, sacarose, ciclodextrina, maltodextrina, talco, gelatina, ágar, pectina, acácia, estearato de magnésio, ácido esteárico, goma arábica, amido modificado e éteres alquílicos inferiores de celulose. Exemplos de veículos líquidos são xarope, óleo de amendoim, azeite, fosfolipí- dios, ácidos graxos, aminas de ácidos graxos, polietileno e água. Além disso, o veículo ou diluente pode incluir qualquer material de liberação sustentada conhecido na técnica, tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila, individualmente ou misturado com uma ce- ra.

[00100] Dependendo do transtorno e do paciente a ser tratado, bem como da via de administração, as composições da invenção podem ser administradas em doses variáveis (isto é, doses terapeuticamente eficazes, conforme administrado a um paciente que precisa das mes- mas). A este respeito, o especialista reconhecerá que a dose adminis- trada a um mamífero, particularmente um ser humano, no contexto da presente invenção deve ser suficiente para obter uma resposta tera-

pêutica no mamífero ao longo de um período de tempo razoável. Aqueles versados na técnica reconhecerão que a seleção da dose e formulação exatas e o regime de distribuição mais apropriado também serão influenciados, inter alia, pelas propriedades farmacológicas da formulação, a natureza e a gravidade da condição a ser tratada e a condição física e acuidade mental do receptor, bem como a potência do composto específico, a idade, condição, peso corporal, sexo e res- posta do paciente a ser tratado e o estágio/gravidade da doença.

[00101] Tipicamente, a composição ou a formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebi- das, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estima- ção), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética da invenção é administrada para fornecer curcuminoides em uma quantidade a partir de cerca de 100 mg/dia a cerca de 2000 mg/dia ou a partir de cerca de 500 mg/dia a cerca de 1500 mg/dia ou cerca de 1000 mg/dia, tal como a partir de cerca de 300 mg/dia a cer- ca de 1000 mg/dia. Por exemplo, a composição ou a formulação nu- tracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimen- tos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento, uma fragrância ou flavorizante, uma for- mulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética pode fornecer curcuminoides em uma quantidade a partir de cerca de 1 a cerca de 10 mg/kg de peso corporal, tal como a partir de cerca de 2,5 a cerca de 7,5 mg/kg de corpo peso ou cerca de 5 mg/kg.

[00102] Em qualquer caso, o médico ou outro especialista será ca-

paz de determinar rotineiramente a dosagem real que será mais ade- quada para um paciente individual. As dosagens supracitadas são exemplificativas do caso médio; evidentemente, pode haver casos in- dividuais em que faixas de dosagem mais altas ou mais baixas são consideradas e estas estão dentro do âmbito da presente invenção. Processo Para a Preparação de Composições da Invenção

[00103] A presente invenção fornece um processo para a prepara- ção de uma composição da invenção conforme definido anteriormente, em que o processo compreende as etapas de: (i) preparar uma solução aquosa de curcuminoides; (ii) misturar a solução aquosa de (i) com uma solução aquosa de goma arábica e extrato obtido ou obtenível a partir de Quil- laja e, opcionalmente, o óleo de planta e/ou vegetal, para fornecer uma emulsão; e opcionalmente (iii) secar o produto de (ii) para fornecer uma composição que compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 10000 nm, tal como a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm ou a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm.

[00104] Por exemplo, a presente invenção fornece um processo pa- ra a preparação de uma composição da invenção conforme definido anteriormente, em que o processo compreende as etapas de: (i) preparar uma solução aquosa de curcuminoides; (ii) misturar a solução aquosa de (i) com uma solução aquosa de goma arábica e extrato obtido ou obtenível a partir de Quil- laja e, opcionalmente, um óleo de planta e/ou vegetal para fornecer uma emulsão; e (iii) secar o produto de (ii) para fornecer uma composição que compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm, tal como a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm ou a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm.

[00105] Tais processos são, daqui em diante, denominados como o processo da invenção.

[00106] No processo da invenção, a solução aquosa de goma ará- bica pode ser misturada com a solução aquosa de curcuminoides an- tes de misturar com o óleo de planta e/ou vegetal e extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja, ou seja, o processo da invenção pode compreender: (i) preparar uma solução aquosa de curcuminoides; (ii) misturar a solução aquosa de (i) com uma solução aquosa de goma arábica; (iii) misturar o extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja e opcionalmente um óleo de planta e/ou vegetal com o produto de (ii) para fornecer uma emulsão; e opcionalmente (iv) secar o produto de (iii) (tal como por meio de secagem por pulverização) para fornecer uma composição que compreende par- tículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cer- ca de 700 nm.

[00107] Após a secagem (tal como secagem por pulverização), as partículas podem ser trituradas e/ou moídas (tal como moagem a esfe- ras) para fornecer um tamanho mais uniforme.

[00108] No processo da invenção, as partículas podem ter um diâ- metro médio a partir de cerca de 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1000 nm, 1100 nm, 1200 nm, 1300 nm, 1400 nm ou 1500 nm a cerca de 9000 nm, 8000 nm, 7000 nm, 6000 nm, 5000 nm, 4000 nm, 3000 nm ou 2000 nm, tal como a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm. As partículas também po- dem ter um diâmetro médio a partir de cerca de 200 nm a cerca de 600 nm ou a partir de cerca de 300 nm a cerca de 500 nm ou cerca de

400 nm.

[00109] Por exemplo, a composição pode compreender partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 550 nm a cerca de 700 nm e partículas que têm um diâmetro médio de cerca de 100 nm a cerca de 250 nm, dando um diâmetro médio de cerca de 400 nm.

[00110] Por exemplo, onde a composição da invenção está na for- ma de uma emulsão (ou seja, antes da etapa de secagem), a compo- sição pode compreender partículas que têm um diâmetro médio a par- tir de cerca de 550 nm a cerca de 700 nm e partículas que têm um di- âmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 250 nm, forne- cendo um diâmetro médio de cerca de 400 nm.

[00111] “Quando a composição está na forma de um sólido, tal como um pó (isto é, após a etapa de secagem), a composição pode compre- ender partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm, tal como a partir de cerca de 2000 nm a cerca de 4000 nm.

[00112] As partículas na composição podem estar na forma de mi- celas.

[00113] No processo da invenção, os curcuminoides presentes na solução aquosa de curcuminoides podem ser provenientes de qual- quer fonte, conforme previamente definido em relação à composição da invenção.

[00114] Tipicamente, no processo da invenção, os curcuminoides podem ter uma pureza (com base nos curcuminoides totais) a partir de cerca de 5 % a cerca de 100 % em peso da fonte de curcuminoides, ou seja, o extrato de cúrcuma ou curcuminoides pode compreender a partir de cerca de 30 % a cerca de 100 % de curcuminoides, tal como a partir de cerca de 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 % ou 90 % a cerca de 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 % ou 45 % de curcuminoides com base na porcentagem de curcuminoides totais no extrato.

[00115] No processo da invenção, os curcuminoides podem ser misturados com água em uma proporção em peso a partir de cerca de 2:1 (curcuminoides:água) a cerca de 4:1, tal como cerca de 3:1, para fornecer a solução aquosa de curcuminoides.

[00116] Tipicamente, no processo da invenção, a concentração em peso de curcuminoides na solução aquosa pode ser a partir de cerca de 1 % a cerca de 95 %, tal como a partir de cerca de 5 % a cerca de 80 % ou a partir de cerca de 7 % a cerca de 40 %.

[00117] No processo da invenção, a solução aquosa de goma ará- bica pode ser preparada ao misturar goma arábica com água em uma proporção de goma arábica:água a partir de cerca de 2:1 a cerca de 4: 1, tal como cerca de 3:1.

[00118] A solução aquosa de goma arábica pode ter uma concen- tração em peso de goma arábica a partir de cerca de 30 % a cerca de 7O %, tal como a partir de cerca de 40 % a cerca de 60 %.

[00119] Tipicamente, a solução aquosa de curcuminoides e a solu- ção aquosa de goma arábica são misturadas usando agitação.

[00120] No processo da invenção, o óleo de planta e/ou vegetal po- de ser de qualquer fonte de planta e/ou vegetal. Por exemplo, o óleo de planta e/ou vegetal pode ser óleo de girassol.

[00121] Tipicamente, no processo da invenção, o óleo de planta e/ou vegetal pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 1 % a cerca de 10 % de óleo de planta e/ou vegetal, tal como a par- tir de cerca de 2,5 % a cerca de 7,5 % ou cerca de 5 %.

[00122] No processo da invenção, o extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja pode ser conforme anteriormente definido em relação à composição da invenção.

[00123] O extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja usado no processo da invenção pode estar em qualquer forma, tal como um lí-

quido ou um sólido. Por exemplo, o extrato de Quillaja pode ser usado na forma de um sólido, tal como um pó.

[00124] Tipicamente, no processo da invenção, a Quillaja pode es- tar presente em uma quantidade a partir de cerca de 0,5 % a cerca de % de Quillaja, tal como a partir de cerca de 1 % a cerca de 3 % ou cerca de 2 %.

[00125] No processo da invenção, o óleo de planta e/ou vegetal e o extrato de Quillaja podem ser misturados usando agitação.

[00126] A mistura da solução aquosa de curcuminoides, solução aquosa de goma arábica, óleo de planta e/ou vegetal e Quillaja con- forme definido acima fornece uma emulsão.

[00127] A emulsão resultante pode ser seca usando métodos co- nhecidos na técnica para fornecer uma composição que compreende micelas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1000 nm, 1100 nm, 1200 nm, 1300 nm, 1400 nm ou 1500 nm a cerca de 9000 nm, 8000 nm, 7000 nm, 6000 nm, 5000 nm, 4000 nm, 3000 nm ou 2000 nm, tal como de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm. As partí- culas também podem ter um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm ou a partir de cerca de 200 nm a cerca de 600 nm, tal como a partir de cerca de 300 nm a cerca de 500 nm ou cerca de 400 nm. Tipicamente, a emulsão é seca por pulverização.

[00128] O processo da invenção pode, opcionalmente, incluir uma etapa adicional de remoção de solvente, conforme necessário, a fim de fornecer um produto substancialmente seco, isto é, um produto on- de pelo menos 90 %, tal como pelo menos 95 % ou 99 % da água pre- sente foram removidos. Breve Descrição das Figuras

[00129] Figura 1 - Estruturas químicas dos curcuminoides da cúr- cuma.

[00130] Figura 2-Metabólitos de curcumina de fase | e fase |l.

[00131] Figura 3-Metabólitos bacterianos da curcumina.

[00132] Figura 4- Atividade de LDH medida no sobrenadante api- cal coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de in- cubação, dados do extrato padrão de curcumina. As barras represen- tam a média + SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: es- tômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, com- parado com TB + cólon48h.

[00133] Figura 5 - Atividade de LDH medida no sobrenadante api- cal coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de in- cubação, dados do extrato de curcumina padrão com dados normali- zados para a amostra TB + cólon48h (100 %). As barras representam a média + SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estôma- go; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às signifi- câncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00134] Figura 6 - Atividade de LDH medida no sobrenadante api- cal coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de in- cubação, dados da formulação de fitossoma de cúrcuma. As barras representam a média + SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (“*) e (“**) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00135] Figura 7 - Atividade de LDH medida no sobrenadante api- cal coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de in-

cubação, dados da formulação de fitossoma de cúrcuma com dados normalizados para a amostra TB + cólon 48h (100 %). As barras re- presentam a média + SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (“*) e (“**) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00136] Figura8- Atividade de LDH medida no sobrenadante api- cal coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de in- cubação, dados da formulação com base em Quillaja. As barras repre- sentam a média + SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, com- parado com TB + cólon48h.

[00137] Figura 9 - Atividade de LDH medida no sobrenadante api- cal coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes de diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de in- cubação, dados da formulação com base em Quillaja com dados nor- malizados para a amostra TB + cólon48h (100 %). As barras represen- tam a média + SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: es- tômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, com- parado com TB + cólon48h.

[00138] Figura 10 - Evolução da ingestão dietética ao longo dos períodos de aclimatação e habituação de grupos de camundongos sa- crificados no mesmo momento. Ingestão dietética média diária (g) dos diferentes grupos experimentais durante os períodos de aclimatação (JO-J7) e habituação (J8-J14).

[00139] Figura 11- Evolução do peso corporal ao longo dos perío- dos de aclimatação e habituação de grupos de camundongos sacrifi-

cados no mesmo momento. Peso corporal médio (g) dos diferentes grupos experimentais durante os mesmos períodos. Os dados são re- presentados como média + SEM.

[00140] Figura 12 - Curso de tempo dos níveis totais de curcumi- noides (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) em plasma de camundongo após uma única dose oral de formulação de fitossoma de cúrcuma versus extrato de cúrcuma padrão que contém 300 mg/kg de curcumi- noides. *, **, ***: A formulação de fitossoma de cúrcuma significativa- mente diferente (t-teste post-hoc) em cada ponto de tempo do extrato de cúrcuma padrão (p < 0,05, p < 0,01, p < 0,001 respectivamente).

[00141] Figura 13 - Curso de tempo dos níveis totais de curcumi- noides (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) em plasma de camundongo após uma única dose oral da composição conforme usada nos méto- dos/usos da invenção versus extrato de cúrcuma padrão que contém 300 mg/kg de curcuminoides. *, **, ***: A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção significativamente diferente (t-teste post-hoc) em cada ponto de tempo do extrato de cúrcuma padrão (p < 0,05, p < 0,01, p < 0,001 respectivamente).

[00142] Figura 14: Curcuminoides e metabólitos totais (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuro- nídeo e sulfato de HHC) (ppm) em função do tempo (h) após o consu- mo das diferentes formulações (n = 72 por formulação). -, ==: fitossoma de cúrcuma significativamente diferente do extrato padrão de cúrcuma (p < 0,05, p < 0,01, respectivamente); *, **, ***: A composição confor- me usada nos métodos/usos da invenção significativamente diferente do extrato de cúrcuma padrão (p < 0,05, p < 0,01, p < 0,001 respecti- vamente).

[00143] Figura 15- Área sob a curva AUC (0-8h) correspondente das diferentes formulações.

[00144] Figura 16 - Área sob a curva AUC (0-%) correspondente das diferentes formulações.

[00145] Figura 17 - Cmax (concentração em Tmax) das diferentes formulações.

[00146] Figura 18- O efeito do pH sobre a cor da composição da invenção dissolvida em água desmineralizada (0,4 %).

[00147] Figura 19- O perfil de DLS da composição carregada da invenção.

[00148] Figura 20 - O potencial Z da composição da invenção e componentes individuais da composição em diferentes pHs.

[00149] Figura 21-lImagem de microscopia de varredura eletrônica (SEM) da composição da invenção a x300.

[00150] Figura 22-Imagem de microscopia de varredura eletrônica (SEM) da composição da invenção a x1300.

[00151] Figura 23-lImagem de microscopia de varredura eletrônica (SEM) da composição da invenção a x9200.

[00152] Figura 24 - Representação gráfica da dose normalizada de AUC0-241 para a população ITT.

[00153] Figura 25 - Representação gráfica da dose normalizada de AUCo-81 para a população ITT.

[00154] Figura 26 - Representação gráfica da dose normalizada de AUC»r.- para a população ITT.

[00155] Figura 27 - Representação gráfica da AUCo-24n para a popu-

lação ITT.

[00156] Figura 28 - Representação gráfica da AUCo-8n para a popu- lação ITT.

[00157] Figura 29 - Representação gráfica da AUC º.- para a popu- lação ITT.

[00158] Figura 30 - Representação gráfica da Cmax normalizada para a população ITT.

[00159] Figura 31- Representação gráfica da Cmax para a popula- ção ITT.

[00160] Figura 32 - Representação gráfica da biodisponibilidade relativa entre O e 24 horas para a população ITT.

[00161] Figura 33 - Representação gráfica da biodisponibilidade relativa entre O e 8 horas para a população ITT.

[00162] Figura 34 - Representação gráfica da biodisponibilidade relativa entre O e infinito para a população ITT.

[00163] Figura 35 - Representação gráfica da meia-vida para a po- pulação ITT.

[00164] Figura 36- Representação gráfica da constante da taxa de eliminação terminal para a população ITT.

[00165] Figura 37 - Representação gráfica de Tmax para a popula- ção ITT.

[00166] Figura 38 - llustração de gráficos de caixa e whiskers para os parâmetros de AUC.

Exemplos

[00167] Apresente invenção será ainda descrita com referência aos exemplos não limitativos a seguir.

Exemplo 1 - Testagem do efeito de uma composição da invenção pa- ra aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides em um modelo in vivo do trato gastrointestinal humano e células absorventes intestinais

[00168] O trato gastrointestinal (GIT) humano é uma das principais portas de entrada do corpo humano. Após a ingestão oral de alimen- tos, bebidas ou medicamentos, o intestino é o primeiro local de contato entre os produtos ingeridos e o hospedeiro. Para exercer sua atividade biológica, os compostos têm primeiro de passar pelo estômago, onde o ambiente ácido e a presença de enzimas digestivas podem levar a modificações químicas ou enzimáticas. Depois de deixar o estômago, os compostos ingeridos chegam ao intestino delgado, no qual a maior parte das enzimas metabólicas do hospedeiro é secretada, possivel- mente levando a outras modificações enzimáticas. O composto, na sua forma original ou modificada, pode ser subsequentemente absor- vido e entrar na circulação ou pode ainda passar pelo intestino. Aqui, os compostos alimentícios podem ter uma atividade biológica local ao entrar em contato com a complexa comunidade microbiana presente no leo terminal (última porção do intestino delgado) e no cólon (Ale- gria et al., 2015).

[00169] Os estudos em seres humanos são certamente uma das formas mais representativas de estudar os diferentes processos intes- tinais. No entanto, eles demandam muito trabalho e tempo, são muito caros e não permitem estudos mecanísticos.

[00170] Em seres humanos, o intestino pode ser considerado uma caixa preta que permite quantificar a entrada e a saída, mas investigar os processos intestinais subjacentes em seus diferentes compartimen- tos é difícil em virtude de questões de amostragem. Além disso, as restrições éticas limitam a aplicação geral de testes em seres huma- nos.

[00171] — Portanto, tecnologias de simulação in vitro bem projetadas constituem uma alternativa muito útil para estudos em seres humanos e animais. Por serem representativos de processos específicos, tais modelos permitem estudos aprofundados reproduzíveis destes pro- cessos sem restrições éticas. A configuração e amostragem mais fá-

ceis permitem estudos de rendimento médio a alto com custos mais baixos. No entanto, a falta de um ambiente hospedeiro fisiológico é a limitação mais importante destes modelos. No entanto, o uso de cultu- ras de células in vitro padronizadas usando linhagens de células de origem humana constitui uma maneira rápida e reproduzível de estu- dar os efeitos finais dos compostos na mucosa intestinal. Além disso, uma extensa investigação in vitro permite projetar cuidadosamente es- tudos subsequentes em animais ou seres humanos, economizando tempo e dinheiro.

[00172] Abordagens in vitro de simulação GIT cuidadosamente pro- jetadas constituem uma excelente configuração de rastreio de alto rendimento para avaliar o destino metabólico putativo de ingredientes alimentícios selecionados em diferentes concentrações. Estes ingredi- entes podem ser modificados ou modificar a comunidade bacteriana no intestino e, portanto, atingir a mucosa intestinal intactos ou na for- ma de um subproduto modificado. A biodisponibilidade oral de com- postos dietéticos é definida como a fração da dose administrada capaz de ser absorvida pelas células intestinais e que está disponível para uso ou armazenamento.

[00173] A biodisponibilidade dos compostos dietéticos depende de muitos fatores, particularmente o estado nutricional e fisiológico do in- divíduo, a conjugação do composto com outros nutrientes e/ou sais biliares, a degradação enzimática do composto por enzimas digestivas e a capacidade das bactérias associadas ao intestino de metabolizá- los. O modelo gastrointestinal in vitro oferece a possibilidade de ras- trear um grande conjunto de moléculas de forma rápida e econômica em experimentos de curto prazo.

[00174] A abordagem a seguir permite avaliar rapidamente o desti- no intestinal de compostos dietéticos após a digestão e fermentação no cólon. Isto, associado a modelos celulares in vitro que mimetizam o epitélio intestinal humano, permitem investigar a biodisponibilidade dos compostos intactos e modificados, aumentando a produção científica e a relevância comercial.

[00175] Primeiramente, ensaios de rastreio de curto prazo foram realizados como uma ferramenta para avaliar o destino digestivo de formulações com base em curcumina, com diferentes propriedades de solubilidade.

[00176] Os resultados destes experimentos foram, então, aplicados a células Caco-2 in vitro para investigar a fração biodisponível das di- ferentes formulações comparado com suas formas não modifica- das/não digeridas.

[00177] Além disso, a toxicidade celular foi medida a fim de compa- rar os efeitos citotóxicos putativos das diferentes frações digestivas.

[00178] Os ensaios de rastreio de curto prazo consistiram na incu- bação sequencial (estômago, intestino delgado, cólon) de (uma) do- se(s) representativa(s) dos principais compostos selecionados sob condições simuladas para o intestino grosso com um inóculo bacteria- no representativo.

[00179] Uma suspensão intestinal coletada do compartimento de cólon ascendente do Simulator of the Human Intestinal Microbial Ecosystem (SHIME) foi usada (Van de Wiele et a/l., 2015).

[00180] Este inóculo consiste em uma comunidade microbiana es- tável que se adapta, tanto em estrutura quanto em atividade, às condi- ções ambientais presentes no cólon proximal.

[00181] As seguintes formulações/composição com base em cur- cumina foram avaliadas:

1. Um extrato de curcumina padrão (Curcuma longa) - que contém uma mistura de 3 curcuminoides (curcumina - 75 %, desmetoxicurcu- mina (DMC) - 15 a 20 % e bidemetoxicurcumina (BDMC) - 5 a 10 %).

2. Uma formulação de controle (produto de fitossoma de cúrcuma

Thorne com Meriva&, cuja formulação compreende 18-22 % de cur- cuminoides, onde a curcumina e a lecitina de soja presentes são for- muladas em uma proporção em peso de 1:2 (fitossoma) e duas partes de celulose microcristalina são, então, adicionadas para melhorar a fluidez, com um teor geral de curcumina no produto final de cerca de %).

3. Uma composição conforme usada nos métodos/usos da invenção que compreende 8,6 % de extrato de cúrcuma (com mais de 6 % de curcuminoides), 15,9 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de Quillaja e 73,5 % de amido modificado) (também denominada como Forma |).

[00182] O ensaio de rastreio de curto prazo consistiu na incubação sequencial das três formulações sob condições do estômago, intestino delgado e cólon.

[00183] As formulações/composições foram testadas para atingir uma concentração de curcuminoides de 0,5 g/L no compartimento do estômago (a quantidade real em mg foi calculada com base na % de curcuminoides dentro de cada produto - conforme mostrado na Tabela 1).

[00184] As diferentes formulações/composições foram, então, incu- badas durante 1 hora (h) a 37 ºC, pH de 2,0, na presença de pepsina.

[00185] O intestino delgado foi, então, simulado pela adição de en- zimas pancreáticas e sais biliares e as amostras foram incubadas a 37 ºC durante um período total de 3h.

[00186] Finalmente, no terceiro estágio de incubação, o cólon foi simulado pela adição de um inóculo fecal representativo coletado do SHIME e um meio nutritivo rico. As incubações do cólon foram realiza- das a 37 ºC, sob agitação e anaerobiose, com duração total de 48h.

[00187] Cada formulação/composição foi testada em triplicata para controlar a variabilidade biológica.

[00188] Observe que estes experimentos foram planejados para respeitar os tempos de residência específicos dos ingredientes alimen- tícios no trato gastrointestinal. Considerando os volumes dentro de ca- da compartimento, a concentração de curcuminoides testados foi: 0,5 g/L no estômago, 0,35 g/L no intestino delgado e 0,1 g/L no cólon. Pa- ra os experimentos de transporte de células, estas amostras foram di- luídas 10 vezes mais. Tabela 1: Formulações/composições com base em curcumina testa- das e a respectiva percentagem de curcuminoides na formula- ção/composição. A porcentagem de curcuminoides foi considerada para o cálculo da quantidade em mg a ser adicionada ao compartimen- to do estômago. Em negrito está representada a forma nativa. Extrato de pó de cúrcuma padrão Fitossoma de cúrcuma (produto Uma composição conforme usada nos métodos/usos da invenção que compreende extrato de cúrcuma, | 5,50 0,77 0,08 6,35 óleo de girassol, extrato de Quillaja

[00189] Amostras para cada formulação/composição foram coleta- das nos seguintes pontos de tempo: - Estômago: 30 min e 60 min - Intestino delgado: 60, 120 e 180 min - Dois pontos: 2, 4, 6, 24 e 48 horas

[00190] As amostras foram, então, analisadas quanto ao seu teor de curcuminoides (curcumina, DMC e BDMC) usando cromatografia de líquido de alta pressão (HPLC) acoplada à espectrometria de mas- sa.

[00191] Uma curva de calibração foi preparada na faixa de 2-1000 ng/mL para cada 3 curcuminoides (Phytolab, Vestenbergsgreuth, Ale- manha) adicionando 54 ppb de curcumina-d6 (TLC Pharmachem, On- tário, Canadá) como um padrão interno para assegurar a estabilidade do tempo de retenção e variação de correção do instrumento. Acetoni- trila foi usada como diluente para cada solução. Para a determinação de curcuminoide livre, exatamente 450 uL de solução de padrão inter- no (60 ng/mL) foram carregados em 50 ul de amostra de plasma na placa com 96 cavidades Captiva (ND lipídios da Agilent). Depois de misturar e filtrar, o eluato está pronto para ser injetado no sistema de LC/MS. As placas Captiva ND Lipid são projetadas para remover efi- cazmente os fosfolipídios do plasma. Para a determinação dos meta- bólitos de curcuminoides conjugados totais (metabólitos de glucuroní- deo e sulfato), 100 ul da amostra de plasma foram misturados com 100 uL de solução de enzima (1000 unidades/mL de glucuronidase, Sigma tG7017; ou sulfatase, Sigma tS9626, 100 unidades/mL) duran- te 2 horas a 37 ºC. Após esta etapa de hidrólise, 50 uL da solução são misturados com 450 uL de acetonitrila na placa com 96 cavidades Captiva também. O procedimento da amostra é o mesmo que para os curcuminoides livres, misturando e filtrando antes da injeção.

[00192] As condições de LC/MS foram, então, as seguintes. O amostrador automático (5 ºC) e o sistema de LC usado foi um sistema integrado Agilent Infinity 1290. O espectrômetro de massa Agilent 6420 com quadrupolo triplo foi usado durante o estudo, com ionização por eletropulverização. Os metabólitos foram eluídos da coluna BEH Shield RP 18 (100x2,1, 1,7 um; Waters) com uma fase móvel que con- siste em ácido fórmico a 0,1 % em água de grau para HPLC (solvente A) e ácido fórmico a 0,1 % em acetonitrila (solvente B), em uma vazão de 0,5 mL/min. A eluição foi em gradiente de 40-80 % de B a 0-6 min. O volume de injeção foi de 2 ul para padrão e amostras. Para cada composto de referência, uma transição relevante dos íons precursores para produto foi detectada com o uso do modo de monitoramento de reações múltiplas (Multiple Reaction Monitoring, MRM). Para cada um dos 3 analitos foi determinado em testes de varredura completa MS1 e os íons de produto em experimentos de MS/MS.

As transições de MRM de cada analito foram otimizadas usando infusão direta e solu- ção de software de estação de trabalho Optimizer B.08.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA). Consulte a Tabela 2 para as condições ideais selecionadas.

Os parâmetros do espectrômetro de massa foram definidos da seguinte forma: fonte de ESI tanto no modo negativo quanto positivo; vazão do gás de secagem (N>2), 10 Limin; temperatura do gás, 350 ºC; nebulizador, 40 psi; e capilar, 4,0kV.

O sistema de MS foi totalmente calibrado antes de funcionar de acordo com as orientações do fabricante.

A análise de dados foi realizada no Agilent MassHunter Quantitative/Qualitative Analysis B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA).

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[00194] Surpreendentemente, as concentrações após a digestão no estômago após 60 min e no intestino delgado após 120 min e 180 min para a composição usada nos métodos/usos da invenção foram supe- riores àquelas obtidas para o extrato de cúrcuma em pó padrão, de- monstrando uma melhor resistência à digestão para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com o ex- trato padrão. Além disso, as concentrações após a digestão no estô- mago após 60 min e no intestino delgado após 120 min e 180 min para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foram maiores do que aquelas da formulação de fitossoma de cúrcuma com- parativa, demonstrando uma melhor resistência à digestão para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção compara- do com o fitossoma da cúrcuma comparativo.

[00195] A Tabela 4 mostra a porcentagem de curcuminoides que permaneceram nos compartimentos intestinais após a digestão de acordo com as concentrações iniciais (0,5 g/| ou 500 mg/l de curcumi- noides no compartimento do estômago no início dos experimentos). Os resultados mostram claramente que, surpreendentemente, os cur- cuminoides provenientes da composição usada nos métodos/usos da invenção tinham uma resistência muito melhor à digestão no estômago e intestino delgado comparado com os curcuminoides provenientes do extrato de cúrcuma padrão e a composição usada nos métodos/usos da invenção são mais protegidas da degradação durante a digestão após o consumo oral do que os curcuminoides do extrato padrão ou a formulação de fitossoma de cúrcuma e que há muito mais curcuminoi- des acessíveis para absorção no compartimento do intestino delgado após o consumo oral da composição conforme usada nos méto- dos/usos da invenção do que o consumo oral do extrato padrão ou a formulação de fitossoma de cúrcuma.

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[00199] O pH das amostras a serem aplicadas às células foi ajusta- do para 6,5 antes de uso.

[00200] As células Caco-2 são amplamente usadas como modelo celular para a função intestinal, pois são capazes de se diferenciar es- pontaneamente em células de tipo enterócitos em cultura. Quando culti- vadas em suportes semipermeáveis, estas células se desenvolvem em uma monocamada polarizada funcional que se assemelha ao epitélio in- testinal, com a presença de enzimas da borda pilosa apical e microvilosi- dades. Portanto, por adquirirem em cultura características morfológicas e funcionais de enterócitos maduros, são consideradas o modelo "pa- drão ouro" para experimentos de transporte (Sambuy et a/., 2002).

[00201] As células Caco-2 (ATCC) foram semeadas em inserções de 12 Transwell (0,4 um) em uma densidade de 0,9x10º células/cm?, correspondendo a 1x10º células/inserção. As células foram deixadas se diferenciar até que uma monocamada funcional fosse alcançada (21 dias); os meios apical (600 uL) e basolateral (1500 uL) foram rea- bastecidos três vezes por semana. No dia do experimento, a função de barreira foi avaliada ao medir a resistência elétrica transepitelial (Tran- sEpithelial Electrical Resistance, TEER) da monocamada. As células foram lavadas com HBSS para remover vestígios de meio e 2 mL de tampão de transporte (Transport Buffer, TB) foram adicionados no lado basolateral. As amostras coletadas nos experimentos de curto prazo foram diluídas em tampão de transporte na proporção de 1:10 (v/v) e administradas apicalmente às células (600 uL). Todos os produtos também foram testados não processados e os pós diluídos em TB em uma concentração de 0,025 mg/mL (as concentrações teóricas finais de curcuminoides testadas para todas as formulações podem ser vis- tas na Tabela 2). Estas diluições foram preparadas a partir de solu- ções de estoque (250 mg/mL) preparadas em HBSS, exceto quanto ao extrato padrão de cúrcuma, o qual foi dissolvido em DMSO, em virtude de sua baixa solubilidade. Como cavidades de controle, usamos amos- tras de cólon (incubação de 48h) diluídas a 1:10 (v/v) em TB obtido nas passagens durante os experimentos de curto prazo um branco (sem curcumina). O tampão de transporte (TB) consistia em HBSS (pH de 7,4) suplementado com HEPES a 10 mM, D-glicose a 25 mM e 1X antibiótico-antimicótico. As células foram incubadas durante um perío- do total de 4h a 37 ºC.

[00202] As seguintes amostras foram coletadas:

1. Amostras diluídas que foram usadas para estimular as células (500 uL). Estas correspondem a um ponto de tempo 0h, uma vez que contêm as amostras diluídas antes de serem administradas às células, formulações não processadas diluídas em TB na concentra- ção de 0,025 mg/mL também foram enviadas.

2. Amostras do lado apical coletadas após 2h e 4h de incu- bação (250 uL cada).

3. Amostras do lado basolateral coletadas após 2h (800 uL) e 4h (1000 uL) de incubação.

4. Amostras das células após 4h de incubação. Estas cor- respondem à fração que foi absorvida dentro das células. Resumida- mente, 1X PBS gelado foi adicionado às células para terminar o trans- porte. Em seguida, as células foram lavadas mais uma vez com 1X PBS para remover vestígios do produto não internalizado e as células foram permeabilizadas com uma solução de 1X PBS que contém eta- nol a 20 % e Tween-20 a 0,1 % (600 uL); após 20 minutos nesta solu- ção, as células foram coletadas em um tubo de 1,5 mL e rompidas e homogeneizadas com o auxílio de uma seringa e agulha de 21G. Os tubos foram centrifugados e o sobrenadante transferido para um novo tubo (450 uL).

[00203] Todas as amostras foram armazenadas a -20 “ºC até a aná- lise por HPLC.

[00204] Afim de avaliar a citotoxicidade das diferentes amostras aplicadas às células Caco-2, a lactato desidrogenase (LDH) liberada pelas células Caco-2 no lado apical (após 4h de incubação) foi avalia- da usando um kit LDH-Activity. A LDH é liberada no sobrenadante pe- las células após lesão da membrana e, portanto, é um marcador de morte celular.

[00205] A análise estatística foi feita usando uma ANOVA unilateral seguido por um teste de comparação múltipla post-hoc de Dunnett. (*), (**) e (*) correspondem às significâncias em p < 0,05, p <0,01 ep< 0,001, respectivamente.

[00206] “Conforme mostrado na Figura 4, as cavidades de controle (TB + cólon 48h) mostram uma atividade de LDH em torno de 1,0. Conforme é possível observar, para todos os produtos, tanto a forma não digerida quanto as amostras de estômago coletadas após 60 min apresentaram a maior atividade de LDH quando comparado com o controle.

[00207] Em contraste, as amostras do intestino delgado e do cólon mostram níveis comparáveis ou inferiores ao controle. Estes resulta- dos demonstraram que, exceto quanto a amostras provenientes do estômago, todas as amostras não exibiram toxicidade em células Ca- co-2 e os resultados dos ensaios que testam o transporte e a biodis- ponibilidade de curcuminoides das amostras em células Caco-2 po- dem ser explorados e julgados como válidos, uma vez que foram obti- dos a partir de células viáveis.

[00208] — Amostras dos compartimentos apical, basolateral e intrace- lular de células Caco-2 incubadas com produtos não digeridos ou com amostras provenientes do intestino delgado (120 min ou 180 min) fo- ram posteriormente analisadas quanto ao seu teor de curcuminoides (curcumina, DMC e BDMC) e seus teor relativo de metabólitos (sulfato de curcumina, glucuronídeo de curcumina, sulfato de DMC e glucuro-

nídeo de DMC, sulfato de BDMC e glucuronídeo de BDMC), uma vez que as células Caco-2 são conhecidas por expressar UDP-glucurono- siltransferases e sulfotransferases (Siissalo S., Zhang H., Stilgenbauer E., Kaukonen A.M., Hirvonen J., Finel M. The Expression of Most UDP- Glucuronosyltransferases (Ugts) Is Increased Significantly During Ca- co-2 Cell Differentiation, Whereas UGT1AG6 Is Highly Expressed Also in Undifferentiated Cells. Drug Metab Dispos. Novembro de 2008; 36(11): 2331-6) sendo, portanto, capazes de metabolizar a curcumina, DMC e BDMC em seus metabólitos glucuronídeo ou sulfato (Dempe J.S., Scheerle R.K., Pfeiffer E., Metzler M. Metabolism and Permeability of Curcumin in Cultured Caco-2 Cells. Mol Nutr Food Res. Setembro de 2013; 57(9): 1543-9).

[00209] Os valores do coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) para a transição apical para basolateral foram calculados de acordo com Artursson e Karlsson usando a fórmula: Papo [cm/s] =(Fapi/(A = 8) * (Cbaso/Capi) onde Vapi é o volume do compartimento apical (0,6 mL), A é a área de superfície da monocamada (1,131 cm?), t é o(s) tempo(s), Cbaso é a concentração (ppm) dos curcuminoides totais e seus metabólitos no compartimento basolateral (soma do composto original e metabólitos) e Capi é a concentração inicial (ppm) de curcuminoides totais no com- partimento apical.

[00210] A Tabela 5 representa os valores de Par, para diferentes intervalos de tempo após a exposição apical de células Caco-2 ao ex- trato padrão ou as 2 formulações diferentes (fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção). Tabela 5: Valores de Pap, de curcuminoides totais e seus metabólitos (expressos como 10” cm/s) calculados para diferentes intervalos de tempo após a exposição apical de células Caco-2 ao extrato padrão ou às 2 formulações diferentes

A composição conforme usada nos to de Quillaja e amido modificado

[00211] Os dados mostram média + SD. A fold change no Parr em relação ao extrato padrão é mostrada entre parênteses ( ). A fold change no Papp em relação à formulação de fitossoma de cúrcuma é mostrada entre colchetes [ ].

[00212] Conforme mostrado na Tabela 5, os valores do coeficiente de permeabilidade aparente (Pap) para a transição apical para basola- teral foram surpreendentemente mais altos para a composição usada nos métodos/usos da invenção do que para o extrato de cúrcuma pa- drão, com um aumento de 19,3 vezes e 20,3 no valor de Pap, em rela- ção ao extrato padrão de cúrcuma, respectivamente, em 2h e 4h.

[00213] O valor do coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) para a transição apical para basolateral também foi maior para a for- mulação de fitossoma de cúrcuma, a qual foi usada como um controle positivo para uma formulação com biodisponibilidade aprimorada, em seguida, para o extrato de cúrcuma padrão, com um aumento de 4,7 e 4,8 no Pap, em relação ao extrato de cúrcuma padrão, respectivamen- te, em 2h e 4h. Porém, os resultados mostram que a absorção de cur- cuminoides por células absortivas Caco-2 foi maior para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção (valor de Papp 4,1 ve- zes e 4,2 vezes maior em 2h e 4h, respectivamente) comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma comparativa.

[00214] A Tabela6 representa os valores de Papp após a exposição apical de células Caco-2 às amostras de digestão do intestino delgado (120 ou 180 min) do extrato padrão ou as 2 formulações diferentes (fi- tossoma de cúrcuma ou a composição usada nos métodos/usos da invenção) usando as concentrações quantificadas de curcuminoides nos compartimentos do intestino delgado em 120 min ou 180 min co- mo Capi. Ele reflete a capacidade de absorção dos curcuminoides da formulação digerida pelas células. Quando o extrato padrão ou as for- mulações foram digeridos nos compartimentos do estômago e do in- testino delgado e, portanto, as amostras provenientes do intestino del- gado (120 min ou 180 min) são usadas para medir a absorção de cur- cuminoides pelas células Caco-2, demonstramos que a absorção de curcuminoides por células absortivas Caco-2 foi maior para a compo- sição conforme usada nos métodos/usos da invenção (valor de Paprp 1,8 vezes e 16,4 vezes maior para a amostra de intestino delgado em 120 min ou 180 min, respectivamente) comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00215] A Tabela7 representa os valores de Papvp após a exposição apical de células Caco-2 às amostras de digestão do intestino delgado (120 ou 180 min) do extrato padrão ou as 2 formulações diferentes (fi- tossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos méto- dos/usos da invenção) usando as concentrações teóricas de curcumi- noides nos compartimentos do intestino delgado em 120 min ou 180 min como Capi, a fim de levar em consideração não apenas a capaci- dade de absorção das células, mas também a resistência ao processo digestivo. Demonstramos, a partir destes dados, que o nível de curcu- minoides que podem atingir o compartimento basolateral (que imita a circulação sanguínea) após digestão gastrointestinal e absorção pelas células Caco-2 durante 120 min e 180 min são muito maiores para a composição usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma padrão (valor de Pap, 2,0 vezes e 1,8 vezes maior para a amostra de intestino delgado em 120 min ou 180 min, respecti- vamente) e comparado com a formulação de fitossoma (valor de Paprp 3,4- e 7,1 vezes maior para a amostra de intestino delgado em 120 min ou 180 min, respectivamente). Tabela 6: Valores de Pap, de curcuminoides totais e seus metabólitos após exposição apical de células Caco-2 às amostras de digestão do intestino delgado (120 ou 180 min) do extrato padrão ou as 2 formula- ções diferentes Após 2h de incubação de Papp (x 10º cm/s) Amostras de digestão | Amostras de digestão SI 120 min SI 180 min Extrato de cúrcuma em pó padrão 2,42 + 1,09 7,19 +7,70 Fitossoma de cúrcuma (produto Thorne . 0,59 + 0,08 0,19 + 0,06 com Meriva&) A composição conforme usada nos mé- todos/usos da invenção com extrato de 1,08 + 0,54 (1,8) 3,08 + 1,03 (16,4) cúrcuma, óleo de girassol, extrato de Quillaja e amido modificado

[00216] Os dados mostram média + SD. A fold change no Parr em relação à formulação de fitossoma de cúrcuma é mostrada entre pa- rênteses ( ). Os valores de Papp São calculados usando as concentra- ções quantificadas de curcuminoides nos compartimentos do intestino delgado em 120 min ou 180 min como Capi. Tabela 7: Valores de Pap, de curcuminoides totais e seus metabólitos após a exposição apical de células Caco-2 às amostras de digestão do intestino delgado (120 ou 180 min) do extrato padrão ou as 2 formula- ções diferentes Após 2h de incubação de Papo (x 10-º cm/s) Amostras de Amostras de digestão SI digestão SI 120 min 180 min Extrato de cúrcuma em pó padrão 2,59 + 0,80 6,90 + 0,74 Fitossoma de cúrcuma (produto Thorne com Meriva€&) 1,54 + 0,04 1,79 + 0,02 A composição conforme usada nos métodos/usos da 5,30 + 2,44 12,65 + 0,36 invenção com extrato de cúrcuma, óleo de girassol, (2,0) [3,4] (8) 17,1] extrato de Quillaja e amido modificado ' ' ' '

[00217] Os dados mostram média + SD. A fold change no Parr em relação ao extrato padrão é mostrada entre parênteses ( ). A fold change no Papp em relação à formulação de fitossoma de cúrcuma é mostrada entre colchetes [ ]. Os valores de Pap, São calculados usando as concentrações teóricas de curcuminoides nos compartimentos do intestino delgado em 120 min ou 180 min como Capi. Exemplo 2 - Teste do efeito de uma composição da invenção para aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides por meio de es- tudos farmacocinéticos comparativos in vivo em camundongos

[00218] Tendo em vista os resultados obtidos no modelo in vitro que demonstraram que a composição usada nos métodos/usos da inven- ção exibiram melhor resistência à digestão gastrointestinal e melhor absorção pelas células intestinais, acredita-se que a composição usa- da nos métodos/usos da invenção (ou seja, uma composição que compreende 8,6 % de extrato de cúrcuma (que compreende mais de 6 % de curcuminoides), 15,9 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de Quillaja e 73,5 % de amido modificado), melhorará a biodisponibilidade de curcuminoides comparado com um extrato de cúrcuma padrão em camundongos.

[00219] Portanto, um estudo farmacocinético comparativo foi con- duzido em camundongos.

[00220] — Camundongos C57BI/6J Rj machos adultos da Janvier Labs (St-Berthevin, França), com 5 semanas de idade quando de recebi- mento, foram alojados coletivamente em gaiolas de plástico padrão (n = 4/gaiola). Todos os animais tiveram acesso ad libitum à água e ração em pelotas padrão (Pellet AO4; SAFE, Villemoisson-sur-Orge, França), e foram mantidos em um ambiente com temperatura- (24,0 a 26,0 ºC) e umidade- (40,0 a 50,0 %) controladas em um ciclo de luz de 12 ho- ras (07:00 - 07:00)/escuro de 12 horas.

[00221] Todos os animais foram aclimatados ao novo ambiente du- rante uma semana após o recebimento. Para assegurar uma aclimata- ção correta e uma curva de crescimento padrão, a ingestão dietética global e o peso corporal dos animais foram avaliados duas vezes por semana. Após este período de aclimatação, os camundongos foram habituados a receber uma administração per os diária de veículo (sal de sódio de carboximetilcelulose a 1 % (p/v) dissolvido em água desti- lada em temperatura ambiente, CMC; Ref. tºC4888, número de lote: SLBB5612V, SIGMA ALDRICH, St. Quentin Fallavier, FRANÇA) du- rante seis dias antes do tratamento. Durante este período de habitua- ção, a ingestão dietética global e o peso corporal dos animais foram medidos diariamente. Estas medidas permitiram ter certeza de uma habituação ideal dos animais aos procedimentos de injeção e à mani- pulação pelos experimentadores.

[00222] “Durante os períodos de aclimatação e habituação, os ca- mundongos tiveram acesso ad libitum a uma quantidade pré-pesada de pelotas de ração fresca (Pellet AO4; SAFE, Villemoisson-sur-Orge, França). O restante da comida foi pesado no dia seguinte da medição. Usando uma balança de precisão (THB-600G, PMC Millot; precisão + 0,01 g), a ingestão dietética global por gaiola (08:40-09:20 da manhã) foi determinada subtraindo o restante da ração da quantidade de ração pré-pesada. A ingestão dietética média diária foi obtida ao dividir este valor pelo número de dias que separam as duas medições e pelo nú- mero de animais de cada gaiola. Em cada medição de peso corporal, os camundongos foram pesados pela manhã (08:40-09:20 da manhã).

[00223] No dia anterior ao tratamento (último dia do período de ha- bituação), 120 camundongos jejuaram à noite (17:40-18:20 da tarde). No dia seguinte, os camundongos (n = 40 por formulação) receberam um tratamento agudo por sonda oral (30 ml/kg) de manhã (08:00-09:50 da manhã) com um extrato de cúrcuma em pó padrão, a formulação de fitossoma de cúrcuma como um comparativo ou a composição con- forme usada nos métodos/usos da invenção (ou seja, uma composição que compreende 8,6 % de extrato de cúrcuma (com mais de 6 % de curcuminoides), 15,9 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de Quillaja e 73,5 % de amido modificado).

[00224] Um volume apropriado de Veículo (CMC a 1 % dissolvida em água destilada) foi adicionado em um recipiente adequado sob agi- tação e o pH foi ajustado para 5,5. Uma quantidade apropriada de formulação pré-pesada foi gradualmente adicionada ao veículo sob agitação constante. Uma vez homogênea, o pH da suspensão obtida foi medido e ajustado para 5,5 se necessário. Para evitar qualquer de- gradação dos curcuminoides, a suspensão final foi administrada sis- tematicamente 1h após a preparação. As doses foram calculadas para animais alimentados com 300 mg/kg de curcuminoides totais (consulte Tabela 8). Esta dosagem em camundongos é equivalente a 21,37 mg/kg em seres humanos e 1282 mg assumindo uma pessoa humana de 60 kg (U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volun- teers. 2005); Dose Humana Equivalente (mg/kg) = dose animal em mg/kg x (peso animal em kg/peso do ser humano em kg)º*3: As doses foram ajustadas ao peso corporal medido imediatamente antes do je- jum. A fim de evitar qualquer impacto do comportamento de alimenta- ção e bebida na absorção intestinal após ingestão oral com a formula- ção, os animais foram privados de água e alimentos durante as primei- ras 12 horas após o tratamento.

Tabela 8: Teor de curcuminoides do extrato de cúrcuma padrão e as 2 formulações e a respectiva concentração da suspensão usada para administração do produto a camundongos a 300 mg/kg de peso corpo- ral de curcuminoides no primeiro estudo in vivo [remate jinsacmantom Formulação noides (9g/100g) (mg de formulação/ml) Extrato de cúrcuma em pó padrão

[remásção jnstiaa fingamántam Formulação noides (9g/100g) (mg de formulação/ml) Fitossoma de cúrcuma (produto same e nos métodos/usos da invenção com extrato de cúrcuma, óleo de | 6,345 157,60 girassol, extrato de Quillaja e amido modificado

[00225] O sangue foi coletado em 0,5-, 1h-, 2h-, 4h-, 6h-, 8h-, 12h- ou 24h após a dosagem através de punção cardíaca em camundongos anestesiados (n = 5/ponto de tempo/formulação). A anestesia foi reali- zada por meio de injeção intraperitoneal de uma mistura de Cetami- na/Xilazina (100 mg/kg e 15 mg/kg, respectivamente). Para a punção cardíaca, uma seringa de 26G foi inserida entre a oitava e a décima costela esternal, com um ângulo de 45º com o eixo longitudinal forma- do pelo corpo do animal para penetrar diretamente no ventrículo es- querdo do coração. O sangue foi, então, cuidadosamente coletado pa- ra obter um volume final de 0,6-1 ml. Para interesse do método bioa- nalítico, o sangue foi posteriormente transferido para um tubo de Ep- pendorf, misturado com sulfato de heparina (200 Ul/ml de sangue) e agitado suavemente. Todas as amostras foram centrifugadas durante minutos a 3000 g e 4 ºC em 30 minutos após a coleta de sangue para isolar o plasma. O plasma (sobrenadante) foi transformado em alíquotas em um novo tubo de Eppendorf de 0,5 ml. As alíquotas de plasma foram congeladas a -80 ºC em 1 hora após a centrifugação.

[00226] As dosagens plasmáticas de curcuminoides precursores (curcumina, DMC ou BDMC) e seus metabólitos relativos (glucuroní- deo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuroní- deo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) foram realizadas através de um méto- do de LC-MS-MS. Uma curva de calibração foi preparada na faixa de

2-1000 ng/mL para cada 5 curcuminoides (Phytolab, Vestenbergs- greuth, Alemanha) adicionando 54 ppb de curcumina-d6 (TLC Phar- machem, Ontário, Canadá) como um padrão interno para assegurar a estabilidade do tempo de retenção e variação de correção do instru- mento. Acetonitrila foi usada como diluente para cada solução. Para a determinação de curcuminoide livre, exatamente 450 uL de solução de padrão interno (60 ng/mL) foram carregados em 50 ul de amostra de plasma na placa com 96 cavidades Captiva (ND Lipids da Agilent). Depois de misturar e filtrar, o eluato está pronto para ser injetado no sistema de LC/MS. As placas Captiva ND Lipid são projetadas para remover eficazmente os fosfolipídios do plasma. Para determinação dos metabólitos de curcuminoides conjugados totais (metabólitos glu- curonídeo e sulfato), 100 ul de amostra de plasma foram misturados com 100 yuL de solução enzimática (1000 unidades/mL de glucuronida- se, Sigma %G7017; ou sulfatase, Sigma tS9626, 100 unidades/ml) du- rante 2 horas a 37 ºC. Após esta etapa de hidrólise, 50 ul da solução são misturados com 450 uL de acetonitrila na placa com 96 cavidades Captiva também. O procedimento da amostra é o mesmo que para os curcuminoides livres, misturando e filtrando antes da injeção.

[00227] As condições de LC/MS foram, então, as seguintes. O amostrador automático (5 ºC) e o sistema de LC usado foram um sis- tema integrado Agilent Infinity 1290. O espectrômetro de massa Agi- lent 6420 com quadrupolo triplo foi usado durante o estudo, com ioni- zação por eletropulverização. Os metabólitos foram eluídos da coluna BEH Shield RP 18 (100x2,1, 1,7 um; Waters) com uma fase móvel que consiste em ácido fórmico a 0,1 % em água de grau para HPLC (sol- vente A) e ácido fórmico a 0,1 % em acetonitrila (solvente B), em uma vazão de 0,5 mL/min. A eluição foi em gradiente de 40-80 % de B a O- 6 min. O volume de injeção foi de 2 ul para padrão e amostras. Para cada composto de referência, uma transição relevante dos íons pre-

cursores para produto foi detectada com o uso do modo de monitora- mento de reações múltiplas (MRM). Para cada um dos 5 analitos foi determinado em testes de varredura completa MS1 e os íons de pro- duto em experimentos de MS/MS. As transições de MRM de cada ana- lito foram otimizadas usando infusão direta e solução de software da estação de trabalho Optimizer B.08.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA). Consulte a Tabela 9 para as condições ideais seleci- onadas. Os parâmetros do espectrômetro de massa foram definidos da seguinte forma: fonte ESI tanto no modo negativo quanto positivo; vazão do gás de secagem (N2), 10 L/min; temperatura do gás, 350 ºC; nebulizador, 40 psi; e capilar, 4,0 kV. O sistema de MS foi totalmente calibrado antes de funcionar de acordo com as orientações do fabri- cante. A análise de dados foi realizada no Agilent MassHunter Quanti- tative/Qualitative Analysis B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA).

[00228] Para as três formulações/composições testadas, a cinética da concentração plasmática de cada composto curcuminoide foi de- terminada entre 0,5 e 12h pós-tratamento, calculando a concentração plasmática média + SEM em cada ponto de tempo de coleta de san- gue. Os parâmetros farmacocinéticos T1/2 (meia-vida), Cmax, Tmax, AUC (0-12h) e AUC (0-%) foram determinados a partir da cinética de 0- 12h através de uma análise não compartimental usando o PKSolver. O PKSolver é um programa add-in orientado por menu para o Microsoft Excel escrito em Visual Basic for Applications (VBA) para resolver pro- blemas em farmacocinética (Zhang et al., 2010).

[00229] “Todos os dados são representados como a média + SEM. As análises estatísticas foram realizadas com os programas Statview

5.0.1 (software Statview, Cary, NC, EUA) e Excel 2013. Os dados fo- ram analisados por um t-teste de Student em cada momento. O risco à foi fixado em 0,05.

no 8 8 elo o o 2 3 E) 3 8 < E [| Ss & = SS 3 go $ | a e E s E E TZ lv lo | = la leo le fio la de la Jo T 5 w || |2 | [2 2 [2 | [8 2 [88 E > o SC 3 = 8 o CT lolol aloe o lol o lo o 8 QD E [PP EE TE ET se E o

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2. Fr & E |. 8 |. a. o o 2 o E o 2/8 lolo É E 2 2 WC o > a E) E 3 = = vv O 8 E E) FE -) g o n 8 o So 2 3 & a e) 8 |º Fr OZ

[00230] Durante os dois períodos sucessivos de aclimatação (J1 a J7) e habituação (J8 a J14), a ingestão dietética de 24 horas e o peso corporal dos camundongos foram medidos regularmente a fim de as- segurar uma aclimatação correta e uma curva de crescimento padrão antes do tratamento. Para o presente estudo, os camundongos foram alojados em quatro por gaiola, cada um deles sendo usado para amos- tragem de sangue no mesmo momento após o tratamento com uma das três formulações. Como uma consequência, os dados de ingestão dietética e peso corporal foram primeiro analisados por grupo de 15 camundongos que foram sacrificados no mesmo ponto de tempo (8 grupos; 5 camundongos/ponto de tempo/formulação). As Figuras 10 e 11 representam, respectivamente, a ingestão dietética e o peso corpo- ral dos camundongos durante o período de aclimatação e habituação antes de administração do tratamento; os diferentes grupos apresenta- ram curva clássica de peso corporal e ingestão dietética antes de tra- tamento. Deve ser observado que a forte diminuição no peso corporal observada em todos os grupos no J15 (Figura 11) resultou do jejum noturno realizado na noite anterior ao tratamento. Estes resultados confirmaram que todos os camundongos usados neste experimento tiveram o mesmo comportamento e puderam ser comparados confor- me o esperado.

[00231] A Figura 12 representa o perfil farmacocinético com a con- centração dos curcuminoides totais (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glu- curonídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) obtido em cada ponto de tempo nos camundongos após administração oral (300 mg/kg pc de curcuminoides) da formulação de fitossoma de cúrcuma e a formulação de extrato padrão. A concentração plasmática de curcuminoides totais para o extrato de cúrcuma padrão atingiu ape-

nas um máximo de 12,9 ppm em 1h e estava abaixo de 10 ppm em todos os outros pontos de tempo, enquanto que a formulação de fitos- soma de cúrcuma permitiu que a concentração plasmática de curcu- minoides totais atingisse 41,5 ppm (ug/ml) após 30 min e foi significati- vamente superior àquela obtida para o padrão em cada ponto de tem- po, exceto 24h. O fitossoma de cúrcuma demonstrou um aumento de 3,2 vezes na Cmax dos curcuminoides totais, um aumento de 3,9 ve- zes na AUC comparado com o extrato de cúrcuma padrão. Estes re- sultados validaram o uso da formulação de fitossoma de cúrcuma para aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides e como um controle positivo e validaram a relevância de nosso modelo in vivo para testar a capacidade de diferentes formulações de aumentar a biodisponibilida- de de curcuminoides contra um extrato de cúrcuma padrão.

[00232] Uma tabela que contém os valores médios + SEM para ca- da ponto de tempo é mostrada na Tabela 10. Os números entre parên- teses localizados ao lado destes valores indicam o número de amos- tras que apresentaram valor positivo em relação ao número total de amostras. O resultado das comparações estatísticas também é mos- trado na mesma tabela. A Tabela 11 contém os parâmetros PK obtidos a partir de análise não compartimental usando o software PKSolver. À porcentagem de variação entre os grupos também é indicada (% Varº). Os dados são representados como média + SEM. Níveis plasmáticos de curcuminoides totais - Média t SEM | [ [re sh UA 971 4156 — (5/9) NASA ITS a ERESEAETER o | 00022 | eh | 7110 2156 — (4/4 INST) III ah | 433 +156 (4/4 FERIADO) 0.0003 | CON 322 1156 — (5/5) NNE INTRA BTT o E] ooo | Br TESTA Do 00177 | ah ESET E 08709 )

[HFitossoma de cúrcumaliH] = vor | Pein a A os so |

49.29857342 393.3323

[00233] Tabelas 10 e 11: Valores médios + SEM e parâmetros PK obtidos a partir da análise não compartimental usando o software PKSolver para cada ponto de tempo mostrado na Figura 12.

[00234]

[00235] A Figura 13 representa o perfil farmacocinético com a con- centração dos curcuminoides totais (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glu- curonídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) obtido em cada ponto de tempo para os camundongos após adminis- tração por via oral (300 mg/kg de peso corporal de curcuminoides) da mistura que compreende a curcumina, Quillaja, óleo e amido modifica- do (Exemplo 2, forma 1) e a formulação de extrato padrão. Os resulta- dos mostraram que a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção pode aumentar significativamente a concentração total de curcuminoides de 0,5h a 24h comparado com o extrato de cúrcuma padrão. A composição usada nos métodos/usos da invenção demons- trou um aumento de 1,8 vezes na Cmax dos curcuminoides totais e um aumento de 2,2 vezes na AUC.

[00236] Uma tabela que contém os valores médios + SEM para ca- da ponto de tempo é apresentada na Tabela 12. Os números entre pa- rênteses localizados ao lado destes valores indicam o número de amostras que apresentaram valor positivo em relação ao número total de amostras. O resultado das comparações estatísticas também é mostrado na mesma tabela. Uma tabela que contém os parâmetros PK obtidos a partir de análise não compartimental usando o software PKSolver é apresentada na Tabela 13. A porcentagem de variação entre os grupos também é indicada (% Varº). Os dados são represen- tados como média + SEM.

[Fomuação dese EI] FP po.sh 9.71 +1.56 — (5/5) 18.90 2.45 = (5/5) 0.0133 | ph “OO FECESETEENEIA) 2290 2245 (5/5) 0.0171 | ah A“ A 7.10 + 1.56 — (4/4) 19.90 +2.45 — (5/5) 0.0093 | jah “OO 4.33 + 1.56 — (4/4) 8.49 2245 (5/5) 0.0302 | éh AO 3.22 + 1.56 — (5/5) 8.67 2245 (5/5) 0.0012 | ph 2.63 + 1.56 — (5/5) 5.11 2245 (5/5) 0.1123 | E 0.55 + 1.56 — (4/4) 186 245 (5/5) 0.324! | aah 1.30 + 1.56 (4/4) 3.36 +2.45 [4/4 H /2 (h) 2.688208 100.713 Pra RP oo | Cmax (ppm) [AUC 0-t (ppm x h) 49.29857342 109.8465993 222819 |AUC 0-int (ppm x h) 51.41308527 117.1097277 227.7819

[00237] Tabelas 12 e 13: Valores médios + SEM e parâmetros PK obtidos a partir de análise não compartimental usando o software PKSolver para cada ponto de tempo mostrado na Figura 13.

[00238] Ao olhar para os compostos precursores especificamente (curcumina, DMC e BDMC em sua forma nativa, ou seja, não metabo- lizado), conforme mostrado na Tabela 14 que fornece a concentração plasmática de curcuminoides precursores para cada ponto de tempo após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção, a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foi a única para a qual fomos capazes de quantificar uma quantidade detectável de curcuminoides precurso- res durante as primeiras 4h após dosagem e, portanto, calcular a AUC (0-12h) e AUC (0-%) (Tabela 15). Um aumento de 10,9 vezes na Cmax para curcuminoides precursores foi obtido para a composição confor- me usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma padrão.

[00239] Ao olhar para a curcumina precursora especificamente (curcumina em sua forma nativa, ou seja, não metabolizada), conforme mostrado na Tabela 16 que fornece a concentração plasmática da cur- cumina precursora para cada ponto de tempo após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides provenientes do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos méto- dos/usos da invenção, a composição conforme usada nos méto- dos/usos da invenção foi a única para a qual fomos capazes de quanti- ficar uma quantidade detectável de curcumina precursora durante as primeiras 4h pós-dosagem e, portanto, calcular a AUC (0-12h) e AUC (0-%) (Tabela 16). Um aumento de 521,8 vezes na Cmax para a cur- cumina precursora foi obtido para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma pa- drão. Além disso, a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção induziu um nível plasmático mais alto de curcumina precur- sora do que a formulação de fitossoma de cúrcuma (aumento de 1,8 vezes na Cmax).

[00240] — Pode-se concluir, a partir deste primeiro experimento in vi- vo, que a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção com mais de 6 % de curcuminoides, obtida com 8,6 % de extrato de cúrcuma, 15,9 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de Quillaja e 73,5 % amido modificado e preparada de acordo com a Forma 1, é capaz de aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides totais e seus me- tabólitos, mas também a biodisponibilidade de compostos precursores comparado com um extrato de cúrcuma padrão.

[00241] — Pode-se concluir também que a composição conforme usa- da nos métodos/usos da invenção poderia melhorar mais a biodisponi-

bilidade da curcumina nativa do que a formulação de fitossoma de cúr- cuma.

[00242] A composição conforme usada nos métodos/usos da inven- ção, portanto, representa uma maneira atraente de aumentar a biodis- ponibilidade da curcumina precursora sem usar lecitina derivada de soja na formulação em oposição à formulação de fitossoma de cúrcu- ma. Além disso, uma vez que a curcumina é considerada como um dos ativos mais poderosos da cúrcuma comparado com DMC e BDMC e seus metabólitos reduzidos relativos glucuronídeo ou sulfato (Ireson C., Orr S., Jones D.J., Verschoyle R., Lim C.K., Luo J.L., Howells L., Plummer S., Jukes R., Williams M., Steward W.P., Gescher A. Charac- terization of Metabolites of the Chemopreventive Agent Curcumin in Human and Rat Hepatocytes and in the Rat In Vivo and Evaluation of Their Ability to Inhibit Phorbol Ester-Induced Prostaglandin E2 Produc- tion. Cancer Res. 01 de fevereiro de 2001; 61(3): 1058-64; Anand P., Thomas S.G., Kunnumakkara A.B., Sundaram C., Harikumar K.B., Sung B., Tharakan S.T., Misra K., Priyadarsini 1.K., Rajasekharan K.N,, Aggarwal B.B. Biological Activities of Curcumin and lts Analogues (Congeners) Made by Man and Mother Nature. Biochem Pharmacol. 01 de dezembro de 2008; 76(11): 1590-611; Pal A., Sung B., Bhanu Prasad B.A., Schuber P.T. Jr, Prasad S., Aggarwal B.B., Bornmann W.G. Curcumin Glucuronides: Assessing The Proliferative Activity Aga- inst Human Cell Lines. Bioorg Med Chem. 01 de janeiro de 2014; 22(1): 435-9), a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção representa uma boa solução para melhorar a eficácia bioló- gica da curcumina para diferentes condições de saúde, tais como saú- de articular, inflamação, artrite, aterosclerose, esteatose hepática, fi- brose hepática, diabetes, cognição, comprometimento cognitivo leve, síndrome do intestino irritável.

Tabela 14: Concentração de curcuminoides precursores (soma de curcumina, DMC e BDMC) para cada ponto de tempo após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos méto- dos/usos da invenção no primeiro estudo in vivo A composição conforme Extrato padrão Fitossoma de usada nos métodos/usos eereuma da invenção [55 [55 ASAS ESSAS sSES [Ir otosonos Tonosena TAS) ssss6sSTmS [Fono Toon fosso — [FF otosontos Tosa anatAS) [sss2ssT9 [emos ocozanatas) fomos |

[00243] Os números entre parênteses localizados ao lado destes valores indicam o número de amostras que apresentaram um valor positivo em relação ao número total de amostras Tabela 15: Parâmetros PK obtidos a partir da análise não comparti- mental usando o software PKSolver para curcuminoides precursores após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir de extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição usada nos métodos/usos da invenção no primeiro estudo in vivo Extrato Fitossoma A composição conforme usada Tabela 16: Concentração de curcumina precursora para cada ponto de tempo após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir do ex-

trato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição con- forme usada nos métodos/usos da invenção no primeiro estudo in vivo cúrcuma nos métodos/usos da invenção [55 [020502075 [SSOTSIES]] TT [Gr ossos ns | ooosenntas | sssssats [a eoosons onosanatos | ossos [A osso cas | Gracas [or ocosono 5 | moema | oosomtas

[00244] Os números entre parênteses localizados ao lado destes valores indicam o número de amostras que apresentaram um valor positivo em relação ao número total de amostras Tabela 17: Parâmetros PK obtidos a partir da análise não comparti- mental usando o software PKSolver para curcumina após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos méto- dos/usos da invenção no primeiro estudo in vivo Extrato | Fitossoma | A composição conforme usada

[00245] Dados os resultados obtidos no primeiro estudo in vivo em camundongos, os quais mostram melhor biodisponibilidade de curcu- minoides totais e curcuminoides precursores e curcumina, decidimos testar uma formulação otimizada com maior teor de curcuminoides (12 % de curcuminoides) preparada de acordo com a Forma 2 com 14,4 % de extrato de cúrcuma, 26,8 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de

Quillaja e 56,8 % de amido modificado, quanto à sua capacidade de melhorar a biodisponibilidade de curcuminoides comparado com um extrato de cúrcuma padrão em um segundo estudo farmacocinético comparativo em camundongos.

[00246] A mesma metodologia (alojamento de camundongos, perí- odo de aclimatação, período de habituação, curcuminoides e quantifi- cação de seus metabólitos usando o método de LC/MS) foi usada con- forme descrito anteriormente neste exemplo, mas com um número maior de animais por grupo e tempo (n = 12/ponto de tempo/formula- ção) e o sangue foi coletado em 0,25, 0,5, 0,75, 1h, 2h ou 8h pós- dosagem, a fim de especificar o perfil cinético durante a fase inicial após o consumo oral (300 mg/kg pc) de curcuminoides provenientes de um extrato de cúrcuma padrão (com 79,5, 15,0 e 3,0 g/100 g de curcumina, DMC e BDMC, respectivamente, e um total de 97,5 g de curcuminoides/100 g), uma formulação de fitossoma de cúrcuma (com 18,6, 2,6 e 0,2 g/100 g de curcumina, DMC e BDMC, respectivamente, e um total de 21,5 g de curcuminoides/100 g) ou a composição con- forme usada nos métodos/usos da invenção preparada de acordo com a Forma 2 (com 9,8, 1,6 e 0,2 g/100 g de curcumina, DMC e BDMC, respectivamente, e um total de 11,6 g de curcuminoides/100 g).

[00247] A Figura 14 representa a concentração total de curcuminoi- des e metabólitos em função do tempo após o consumo das diferentes formulações (n = 72 por formulação). Os resultados mostraram clara- mente um aumento significativo da concentração de curcuminoides e metabólitos para o fitossoma de cúrcuma e a composição usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma pa- drão. A concentração total de curcuminoides foi maior 0,5h e 0,75h após o consumo da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma, mostrando surpreendentemente o melhor desempenho da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma em termos de melhoria da bio- disponibilidade total de curcuminoides e metabólitos.

[00248] Isto foi confirmado durante o cálculo da área sob a curva AUC (0-8h), AUC (0-%) e Cmax correspondentes (Figuras 15, 16 e 17, respectivamente) as quais foram 280 % maiores, 300 % maiores e 337 % maiores para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato padrão, respectivamente, e 6,5 % maior, 30 % maior e 63 % maior para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com a formulação de fitos- soma de cúrcuma, respectivamente (Tabela 18). Também mostramos que os curcuminoides e metabólitos da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foram absorvidos mais rapidamente com uma redução de 1,5 vezes no Tmax comparado com o extrato padrão (0,5h versus 0,75h) e uma redução de 2 vezes no Tmax com- parado com a formulação de fitossoma de cúrcuma (0,5h versus 1h), respectivamente (Tabela 18). Os resultados também mostraram sur- preendentemente que os curcuminoides e metabólitos da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foram menos rapida- mente excretados, com uma meia-vida mais longa (3,8h versus 2,8h) comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00249] Ao olhar para os compostos precursores especificamente (curcumina, DMC e BDMC em sua forma nativa, ou seja, não metabo- lizado), conforme mostrado na Tabela 19, a qual fornece os parâme- tros PK dos curcuminoides precursores após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma da cúrcu- ma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção, a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foi, sur- preendentemente, a única para a qual puderam calcular a AUC (0-8h) para a curcumina precursora. Um aumento de 3,2 vezes na Cmax para a curcumina original foi obtido para a composição conforme usada nos mé- todos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma padrão. Nenhuma Cmax pôde ser calculada para a curcumina, uma vez que ne- nhuma curcumina precursora pôde ser encontrada nas amostras de plasma após o consumo da formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00250] — Pode-se concluir, a partir deste segundo experimento in vi- vo, que a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção com um maior teor de curcuminoides (12 % de curcuminoides) prepa- rada de acordo com a Forma 2 com 14,4 % de extrato de cúrcuma, 26,8 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de Quillaja e 56,8 % de amido modificado é, inesperadamente, capaz de aumentar a biodispo- nibilidade de curcuminoides totais e seus metabólitos, mas também a curcumina precursora comparado com um extrato de cúrcuma padrão e com a formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00251] A composição conforme usada nos métodos/usos da inven- ção representa, portanto, uma maneira atraente de aumentar a biodis- ponibilidade de curcuminoides sem usar lecitina derivada de soja na formulação em oposição à formulação de fitossoma de cúrcuma. Tabela 18: Parâmetros PK obtidos a partir da análise não comparti- mental usando o software PKSolver para curcuminoides e metabólitos totais após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção no segundo estudo in vivo Extrato Fitossoma de A composição conforme usada

[00252] A fold change na AUC ou Cmax em relação ao extrato pa-

drão é mostrada entre parênteses ( ). A fold change na AUC ou Cmax em relação à formulação de fitossoma de cúrcuma é mostrada entre colchetes []. Tabela 19: Parâmetros PK obtidos a partir da análise não comparti- mental usando software PKSolver para curcuminoides precursores após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides de extrato de cúrcu- ma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção no segundo estudo in vivo Extrato padrão Compostos precursores (ppb) Parâmet Compostos precur- Bove seres tias a t1/2 h Ausente Ausente — Ausente Ausente Tmax h 0,25 0,25 0,25 0,25 Cmax ppb 5,55 25,03 64,43 114,65 AUC 0-t Pppb*h Ausente Ausente 16,82 29,37 AUC 0- ; ppb*h Ausente Ausente — Ausente Ausente inf obs —— Compostos precur- Bove seres tias a t1/2 h Ausente Ausente — Ausente Ausente Tmax h Ausente Ausente — Ausente Ausente Cmax ppb Ausente Ausente — Ausente Ausente AUC 0-t Pppb*h Ausente Ausente — Ausente Ausente AUC o ppb*h Ausente Ausente — Ausente Ausente inf obs Compostos precursores (ppb) Compostos precur- à sores totais (ppb: t1/2 h Ausente Ausente — Ausente Ausente Tmax h 0,25 0,25 0,25 0,25 Cmax ppb 17,94 11,13 6,34 60,45 AUC 0-t Pppb*h 10.8778375 Ausente Ausente 32,13 AUC o ppb*h Ausente Ausente — Ausente Ausente inf obs Exemplo 3 - Um estudo farmacocinético comparativo em voluntá- rios saudáveis para avaliar a capacidade de uma composição da invenção de aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides

[00253] Este estudo teve dois objetivos:

1. Objetivo Primário

[00254] Avaliar o perfil das concentrações plasmáticas de curcumi- noides totais (curcumina, desmetoxicurcumina (DMC), bisdemetoxicur- cumina (DBMC) e seus metabólitos) em um período de 24 horas após o consumo de uma dose única de 300 mg da composição da invenção (formulação de curcuminoides Turmipure GOLD'Y 30 %) comparado com 1500 mg de extrato de cúrcuma em pó padrão com 95 % de cur- cuminoides.

2. Objetivos Secundários

[00255] Avaliar os perfis de concentrações plasmáticas dos seguin- tes parâmetros, após o consumo de uma única dose de cinco produtos estudados que contêm 1425 mg (extrato de cúrcuma em pó padrão com 95 % de curcumindoides, complexo de curcumina C3 California Gold Nutrition), 200 mg (Curcuma Platinum MannaVital), 90 mg (de uma composição da invenção (Turmipure GOLDTY 30 % de curcumi- noides)) ou 60 mg (Curcumina Cell''nnov) da substância ativa: e Curcuminoides totais; e Compostos precursores (curcumina, DMC, BDMC) e seus metabólitos: curcumina, glucuronídeo e sulfato; glucuronídeo e sulfato de DMC; glucuronídeo e sulfato de BDMC; tetra-hidrocurcumina (THC) nativa, glucuronídeo e sulfato; hexa-hidrocurcumina (HHC) nativa, glu- curonídeo e sulfato.

[00256] O estudo foi um ensaio clínico monocêntrico, randomizado, cruzado e aberto.

[00257] O estudo começou com uma visita de rastreio/inclusão (VO) seguida por 5 sessões experimentais (V1 a V5) durante as quais os produtos estudados foram consumidos pelos indivíduos (um produto diferente em cada sessão para cada indivíduo randomizado). A visita

V1 ocorreu no máximo 3 semanas após a VO e também pode constituir a visita de randomização.

[00258] Cada sessão experimental (V1 a V5) foi separada por 1 semana no mínimo e 2 semanas no máximo. Durante cada sessão ex- perimental, os indivíduos foram submetidos à coleta cinética de san- gue durante períodos de 8 horas. A última amostra cinética de sangue foi retirada no dia seguinte a cada sessão experimental, 24 horas após o início da cinética. A coleta de urina também foi realizada durante es- tas visitas para fins de armazenamento em um biobanco.

[00259] A primeira micção do indivíduo foi coletada na manhã de cada visita experimental (totalidade desta primeira micção), com cole- tas adicionais de O a 8 horas durante a coleta cinética de sangue no local e de 8 a 24 horas quando eles voltaram para casa. A última cole- ta de urina foi trazida de volta no dia seguinte à visita experimental (quando eles voltaram para a última amostra de sangue, T24H, da amostra cinética de sangue).

[00260] Refeições padrão foram fornecidas aos voluntários para jantar antes de cada sessão experimental e durante toda a duração de cada cinética (café da manhã, almoço e colação da tarde).

[00261] O final do estudo foi no dia seguinte à última sessão expe- rimental V5 (V5-24H).

[00262] mW8w 30 indivíduos foram recrutados para este estudo, de acordo com os seguintes critérios principais de inclusão e exclusão:

[00263] NI: Idade entre 18 e 45 anos (limites incluídos);

[00264] MNI2:IMC entre 19 e 25 kg/m? (limites incluídos);

[00265] mNNI3: Peso estável, dentro de + 3 kg nos últimos três meses;

[00266] mNwI4: Com valores rotineiros da química do sangue dentro da faixa normal;

[00267] MNNIS: Para mulheres: não menopáusicas com a mesma con- tracepção confiável desde pelo menos 3 ciclos antes do início do estu-

do e concordando em mantê-la durante toda a duração do estudo (preservativo com gel espermicida e contracepção combinada de es- trogênio/progesterona aceita) ou menopausa sem ou com terapia de reposição hormonal (excluída a terapia de reposição estrogênica inici- ada há menos de 3 meses);

[00268] WI6: Não fumar ou com consumo de tabaco < 5 cigar- ros/dia e concordar em não fumar durante toda a sessão experimental (V1 a V5);

[00269] MW 1I7: Concordar em não consumir alimentos, bebidas e condimentos que contêm curcumina ou outros curcuminoides (DMC, BDMC) durante toda a duração do estudo;

[00270] mWNI8: Boa saúde geral e mental na opinião do investigador: nenhuma anormalidade clinicamente significativa e relevante da histó- ria médica ou exame físico;

[00271] WE: Sofrendo de um transtorno metabólico ou endócrino, tal como diabetes, transtorno tireoidiano não controlado ou controlado ou outro transtorno metabólico;

[00272] mWwE2: Sofrendo de uma doença crônica grave (por exemplo, câncer, HIV, insuficiência renal, transtornos hepáticos ou biliares em curso, doença digestiva inflamatória crônica, artrite ou outro problema respiratório crônico, etc.) ou transtornos gastrointestinais considerados inconsistentes com a conduta de o estudo do investigador (por exem- plo, doença celíaca);

[00273] mNwE3: Sofrendo de doenças hepáticas;

[00274] WwE4: Doenças atuais contra-indicadas para indivíduos com suplementação dietética: diarreia crônica, constipação ou dor abdomi- nal, doenças inflamatórias intestinais (doença de Crohn ou colite ulce- rativa), cirrose, uso crônico de laxantes...;

[00275] NES: Sofrendo de Síndrome do Cólon Irritável (IBS) diag- nosticada por médico e tratada com medicação crônica;

[00276] MW E6: Ter histórico médico de patologia atual que possa afetar os resultados do estudo ou expor o indivíduo a um risco adicio- nal de acordo com o investigador;

[00277] WwE7: Gastroenterite recente ou doença de origem alimentí- cia, tal como intoxicação alimentícia confirmada (menos de 1 mês);

[00278] WE8: Quem fez doação de sangue nos 3 meses anteriores à consulta VO ou pretende fazê-lo nos 3 meses anteriores;

[00279] WEI Com capital venoso baixo não permitindo a realiza- ção de cinética de amostras de sangue na opinião do investigador;

[00280] mWNwEI0: Com uma alergia alimentar conhecida ou suspeita ou intolerância ou hipersensibilidade a qualquer um dos ingredientes dos produtos do estudo e/ou das refeições padrão (intolerância ao glú- ten, doença celíaca, etc.);

[00281] mw E1I1: Mulheres grávidas ou amamentando ou com inten- ção de engravidar nos próximos 3 meses;

[00282] mwEI2: Exposição de dependência de álcool ou drogas;

[00283] mw E1I3: Sob qualquer tratamento crônico com medicamen- tos (por exemplo anticoagulante, tratamento anti-hipertensivo, trata- mento da tiroide, tratamento da asma, ansiolíticos, antidepressivos, tratamento de redução de lipídios, corticosteroides, flebotômicos, ve- notônicos, fármacos que têm impacto sobre a circulação sanguínea...), exceto contraceptivos orais e locais;

[00284] MN E14: Atualmente tomando (e durante os últimos 3 meses) qualquer suplementação de origem botânica;

[00285] WEISS: Ter consumido suplementos alimentícios que con- têm curcumina (curcumina, cúrcuma e curry) ou alimentos (curcumina, cúrcuma, E100 e curry) definidos pelo menos 3 vezes por semana e por 2 semanas antes do teste;

[00286] mNwE27: Registro de controle (glicemia, GGT, ASAT, ALAT, ureia, creatinina e hemograma completo) com anormalidade clinica-

mente significativa de acordo com o investigador.

[00287] Cinco produtos, os quais são suplementos dietéticos em forma de cápsulas, foram testados como parte deste estudo:

1. Extrato de cúrcuma em pó padrão com 95 % curcuminoi- des, 1500 mg consumidos na forma de cápsulas (4 cápsulas; 375 mg de pó por cápsula) (STE),

2. C3 Complex& com 95 % curcuminoides (1500 mg) + Bi- oPerine& com 95 % de piperina (15 mg) consumido como produto co- mercial Curcumina C3 Complex California Gold Nutrition (3 cápsulas; 500 mg complexo C3 em pó + 5 mg de bioperina em pó por cápsula) (TEP),

3. Meriva& (1000 mg) consumido como produto comercial Curcuma Platinum Mannavital com 20 % curcuminoides (2 cápsulas; 500 mg de pó por cápsula) (PHYT),

4. Novasol& (1000 mg) consumido como produto comercial Curcumin Cell Innov com 6 % curcuminoides (2 cápsulas; 500 mg de líquido por cápsula) (NOV),

5. Uma composição conforme definida no presente docu- mento, compreendendo extrato de cúrcuma, óleo de girassol, extrato de Quillaja e goma arábica, consumido como cápsula (1 cápsula; 300 mg de pó por cápsula) (TURMIPURE GOLD).

[00288] Afim de assegurar o estado saudável dos indivíduos e veri- ficar os critérios de elegibilidade, uma amostra de sangue foi coletada durante a visita VO para análise de registro de controle e teste de gra- videz para mulheres não menopáusicas (dosagem de BhCG).

[00289] A amostra foi retirada após exame físico e verificação dos critérios de elegibilidade. Um máximo de 10 mL foi coletado.

[00290] A medida da pressão arterial foi realizada a cada consulta durante o exame físico com um monitor eletrônico de pressão arterial (Carescape Dinamap& V100). Também foram avaliadas a Frequência

Cardíaca (FC, em bpm), Pressão Arterial Sistólica (PAS, em mmHg) e Pressão Arterial Diastólica (PAD, em mmHg).

[00291] Todos os indivíduos compareceram em jejum de 12 horas.

[00292] Na preparação para as visitas V1 a V5, após o exame clíni- co, um cateter venoso foi colocado na dobra do cotovelo do indivíduo. Este cateter permitiu a coleta de sangue para a cinética sem quaisquer punções adicionais.

[00293] A amostra cinética durou aproximadamente 8 horas, com todos os indivíduos hospedados no centro de investigação clínica. Dez (10) amostras de sangue foram coletadas de acordo com o seguinte cronograma: - T-10 (linha de base), - T15 > T30 > T45 > T60 > T90 > T120 > T240 > T360 > T480,

[00294] “Uma margem de + 30s foi autorizada para T15, + 1 min pa- ra T30 e T45, + 2 min para T60 e T90, + 5 min para T120 a T480.

[00295] O ponto de tempo TO corresponde ao consumo do produto sob estudo.

[00296] O voluntário foi autorizado a consumir seu almoço padrão cerca de 4 horas após o consumo do produto sob estudo (logo após no ponto de tempo T240) e a refeição da tarde padrão cerca de 8 ho- ras após o consumo do produto sob estudo. O almoço foi consumido em no máximo 30 minutos. A água não foi permitida 1h antes e 1h após a administração do produto. O cateter foi removido após o último ponto de tempo, T480.

[00297] Os voluntários foram, então, solicitados a comparecer no- vamente ao centro de investigação clínica, em jejum de 12 horas, no dia seguinte à visita para a última coleta de sangue cinética, em T24H. Foi usado material clássico para amostragem de sangue venoso (pun- ção única). Os parâmetros biológicos serão avaliados com estas amostras que serão analisadas no plasma; portanto, apenas tubos de EDTA serão usados (5 mL por amostra). População de Análise

[00298] mNw População ITT: Todos os indivíduos randomizados no estudo que consumiram pelo menos uma dose dos produtos (n = 30)

[00299] MN População PP: Indivíduos incluídos na população ITT que concluíram o estudo sem apresentar desvios de protocolo impor- tantes (n = 30). Os seguintes indivíduos foram excluídos da população PP:

[00300] MNindivíduo SNO01-040 - V5 para todos os parâmetros

[00301] mw Populaçãode SEGURANÇA: Todos os indivíduos ran- domizados no estudo que consumiram pelo menos uma dose dos pro- dutos (n = 30) Mulheres/homens 16 (53,3) / 14 (46,7) Idade (anos) 33,6 (6,79) Peso (kg) (VO) 64,5 (11,09) IMC (kg/m?) (VO) 22,1 (2,13) Tabela 20: Descrição da população de estudo no início do estudo, mostrando a média e desvio padrão Ambiente de Software

[00302] MW As análises estatísticas foram realizadas pela Biofortis usando o software SASG& versão 9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). NE Nível de significância

[00303] MN Paratodos os testes estatísticos (biconfigurados), o nível de significância de 0,05 foi usado para justificar a afirmação de um efeito estatisticamente significativo.

[00304] mw Métodos de tratamento de dados perdidos para ciné- tica

[00305] MW Se maisde 2 valores ou 2 valores consecutivos estive- rem faltando na cinética, o cálculo de AUC não pode ser realizado e a cinética foi considerada como ausente nas análises estatísticas (ne- nhuma substituição de dados faltantes foi realizada);

[00306] MN Se um dado estiver faltando no ponto de tempo T-10, o cálculo da AUC não pode ser realizado e a cinética foi considerada como ausente nas análises estatísticas (nenhuma substituição de da- dos faltantes foi realizada);

[00307] mNwSeum valor (exceto o valor da linha de base e o valor do último momento) faltar na cinética, ele é substituído pelo valor obtido por meio do método CopyMean desenvolvido por Genolini (Genolini, 2013);

[00308] MN Se um valor no último momento (T1440 = T24h) da ciné- tica estiver faltando, nenhuma substituição de dados faltantes foi reali- zada.

[00309] MN No caso de cinética incompleta após o tratamento de da- dos ausentes, a AUC não pode ser calculada.

[00310] > Este método foi aplicado em populações ITT e PP. Variáveis Derivadas

[00311] 8 Curcuminoides totais = Curcumina + DMC + BDMC + THC + HHC + glucuronídeo de curcumina + glucuronídeo de DMC + glucuronídeo de BDMC + glucuronídeo de THC + glucuronídeo de HHC + sulfato de curcumina + sulfato de DMC + sulfato de BDMC + sulfato de THC + sulfato de HHC

[00312] Se todos estes 15 elementos estiverem faltando, os curcu- minoides totais não podem ser calculados. Se pelo menos um destes elementos for quantificado, os curcuminoides totais foram calcula- dos.

[00313] NM Compostos precursores totais = soma de curcumina + DMC + BDMC

[00314] MN Compostos precursores totais e seus metabólitos relati- vos sulfato e glucuronídeo = Curcumina + glucuronídeo de curcumina + sulfato de curcumina + DMC + glucuronídeo de DMC + sulfato de DMC + BDMC + glucuronídeo de BDMC + sulfato de BDMC

[00315] MN Curcumina e seus metabólitos relativos sulfato e glucuroní- deo = Curcumina + glucuronídeo de curcumina + sulfato de curcumina

[00316] MW DMC e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo = DMC + glucuronídeo de DMC + sulfato de DMC

[00317] NBDMC e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo = BDMC + glucuronídeo de BDMC + sulfato de BDMC

[00318] MN Curcumina e todos os seus metabólitos relativos = Cur- cumina + glucuronídeo de curcumina + sulfato de curcumina + THC + glucuronídeo de THC + sulfato de THC + HHC + glucuronídeo de HHC + sulfato de HHC

[00319] MN Biodisponibilidade relativa entre O a 24 horas = proporção da AUCO-24h normalizada por dose para as diferentes formulações testadas para AUC0-24h normalizada por dose obtida para o produto de referência (extrato de cúrcuma com 95 % de curcuminoides)

[00320] MN Biodisponibilidade relativa entre O a 8 horas = proporção da AUCO-8h normalizada por dose para as diferentes formulações tes- tadas para AUCO-8h normalizada por dose obtida para o produto de referência (extrato de cúrcuma com 95 % de curcuminoides)

[00321] mw Biodisponibilidade relativa entre O e infinito = proporção da AUCO0-- normalizada por dose para as diferentes formulações tes- tadas para o AUCO0-- normalizada por dose obtida para o produto de referência (extrato de cúrcuma com 95 % de curcuminoides). Tratamento de Dados de Valores Abaixo do Limite de Detecção (LOD)

[00322] MN Alguns valores abaixo do limite de detecção (Limit Of De- tection, LOD) foram identificados para a curcumina (nativa, glucuroní-

deo e sulfato) expressos como «0,62» no banco de dados.

[00323] > O número ea porcentagem dos valores sob o LOD fo- ram fornecidos para cada parâmetro e visita. Produção de Representações Gráficas

[00324] MN Variável quantitativa nas médias observadas: gráficos de caixa e whiskers para os parâmetros de AUC (ilustrados na Figura 38): Verificação de Suposições de Testes Estatísticos

[00325] MW Os pressupostos de normalidade e homocedasticidade foram investigados por meio de representações gráficas de resíduos produzidos por modelos estatísticos. Em caso de forte desvio da nor- malidade e/ou homocedasticidade, a transformação log (log10) dos resultados do estudo foi considerada. Nota para a produção de resultados:

[00326] mNSTE=extrato de cúrcuma em pó padrão com 95 % de curcuminoides, 1500 mg

[00327] WNTEP= complexo de curcumina C3 California Gold Nutri- tion (1500 mg de C3 ComplexO)

[00328] MN NOV = Curcumin Cell'Innov (1000 mg NovasolO)

[00329] —mNPHYT=Curcuma Platinum MannaVital (1000 mg Meriva€&)

[00330] mM Turmipure GOLD'Y = Turmipure Gold com 30 % de cur- cuminoides, 300 mg Metodologia Estatística

[00331] mw Parâmetro primário: AUC normalizada para a dose entre O e 24 horas foi analisada usando o seguinte modelo misto para medi- ções repetidas (SAS& PROC MIXED, modelo estatístico nº 1): Y = Produto + Visita + Linha de Base + IndivíduOateatório com:

[00332] mWwY:AUC normalizada para a dose entre O e 24 horas da concentração plasmática do analito;

[00333] mm Produto: Turmipure Gold'Y, STE, TEP, NOV, PHYT;

[00334] MN Visita: Visitas ViaV5;

[00335] mM Linhade base: valor do parâmetro no ponto de tempo T- (TO para cálculo da AUC);

[00336] MN Indivíducdaeatório: fator aleatório.

[00337] MW 8Se efeito da visita significativo (p < 0,05): análise secun- dária realizada no primeiro período (visita) para avaliar o efeito do pro- duto.

[00338] mM Comparação entre produtos de interesse > Turmipure Gold!" comparado com STE Análise Adicional: Investigação do Efeito do Sexo

[00339] MO efeito do sexo foi investigado neste estudo usando o seguinte modelo misto para medições repetidas (SAS& PROC MIXED, modelo estatístico nº 2): Y = Produto + Visita + Sexo + Produto * Sexo + Linha de Base + Indi- VÍduOaleatório Com:

[00340] mNmY:Parâmetro;

[00341] mw Produto: Turmipure Gold'!Y, STE, TEP, NOV, PHYT;

[00342] MN Visita: Visitas Vi a V5;

[00343] MN Sexo: Feminino ou Masculino;

[00344] MN Produto * Sexo: interação entre o produto e o sexo;

[00345] MN Linha de base: valor do parâmetro no ponto de tempo T- 10 (TO para cálculo da AUC);

[00346] MN IndivíduOdaeatório: fator aleatório.

[00347] MN Comparações entre produtos de interesse;

[00348] MN Turmipure GOLD'!Y comparado com STE;

[00349] mMNTEP comparado com STE;

[00350] — à NOV comparado com STE;

[00351] mw PHYT comparado com STE;

[00352] MN TEP comparado com Turmipure GOLDTY;

[00353] “mM NOV comparado com Turmipure GOLD'Y;

[00354] mm PHYT comparado com Turmipure GOLDTY.

[00355] MN Se efeito da visita significativo (p < 0,05): análise secundá- ria realizada no primeiro período (visita) para avaliar o efeito do produto.

[00356] MW Se efeito da interação Produto * Sexo significativo (p < 0,05): efeito de tratamento investigado em homens e mulheres sepa- radamente (com produção de estatísticas descritivas e representações gráficas)

[00357] MW Se efeito da interação Produto * Sexo significativo (p > 0,05): efeito do tratamento investigado globalmente (mulheres e ho- mens juntos) Metodologia Estatística Para Parâmetros Secundários (Exceto Pa- ra Biodisponibilidade Relativa)

[00358] MW Os parâmetros secundários foram analisados usando o seguinte modelo misto para medições repetidas (SAS& PROC MIXED, modelo estatístico nº 1): Y = Produto + Visita + Linha de Base + IndivíduOateatório

[00359] MN Se efeito da visita significativo (p < 0,05): análise secundá- ria realizada no primeiro período (visita) para avaliar o efeito do produto. = Comparação entre produtos de interesse:

[00360] MN Turmipure GOLDTY comparado com STE;

[00361] mMNTEP comparado com STE;

[00362] MN NOV comparado com STE;

[00363] mw PHYT comparado com STE;

[00364] mNTEP comparado com Turmipure GOLDTY;

[00365] — À NOV comparado com Turmipure GOLD'Y;

[00366] mm PHYT comparado com Turmipure GOLDTY.

= Metodologia Estatística Para Biodisponibilidade Relativa

[00367] MW Os parâmetros secundários foram analisados usando o seguinte modelo misto para medições repetidas (SAS& PROC MIXED, modelo estatístico nº 1): Y = Produto + Visita + IndivíduOaleatório

[00368] MN Se efeito da visita significativo (p < 0,05): análise secun- dária realizada no primeiro período (visita) para avaliar o efeito do pro- duto. Nm Comparação entre produtos de interesse:

[00369] “MN TEP comparado com Turmipure GOLDTY;

[00370] MN NOV comparado com Turmipure GOLD'VY;

[00371] mm PHYT comparado com Turmipure GOLDTY, Sumário dos Resultados dos Parâmetros Primários Tabelas 21 e 22: Análise inicial das populações ITT e PP = População ITT a A nãiss cnre grupos DMA [ee sa TEN Tunmipura GOLD'Y ya STE (primary endpcint) O 1mone>sTE TEP IS STE o) Dote-nommaszada de e NOVIS STE O nov>sTe Sbronmedo: fria PHYT IS STE O amos fusos TEP vs Turmipura GOLDY O 1 < Temos Yog-ransformadios) NOV 5 Tumipure GOLO" O nov tumors PHYT vs Tumipure GOLO"Y 8) PT <Tumipuro = População PP : AA: erre grupos DMA Etepato comparação entre proautos eme síditos Tumipurs GOLD” 15 STE O tempao >sTE TEPuSTE W MME o + == Es fics TEP 1a Tummipure GOLO” O Ter < Tumipure Jog-ransformados) NOV 15 Turmípuro GOLDO"Y O nov Tempore PHYT vs Tormigure GOLD" O Prom <Tumigure

Tabelas 23 e 24: Análise Adicional das Populações ITT e PP (investi- gação do efeito do sexo) = População ITT A: erra ros III : L Nor aaNo eo Conpaisio ente ARNO 0o aaa 0a Eeea IoredoE JUROS Turmipure GOLD'Y vs STE O Tmpue>sTe Dots-normalizada TERIA STE » os NOVGSSTE O& novosTe aco 2IN SS SN curcumincidas PHYT E STE O rm>sTe totais TEP vs Turmípure GOLD" O ter <TUmpure (dados. NOV vs Turmipure GOLD"Y & Nov>Tumpure Jog-ransfonmados) PHYT vs Turmipure GOLD7 & Pv < Tumaure «= População PP AA: err ros TI Parâmetro Parâmetro] — OIEIZIO SA Vet fm adia - L «scontagenar rs Cds Wonitcância estatstes Turmipure GOLD'Y vs STE O Ttemoue>ste TEPvys STE Doss-normaiizada = o NOV vs STE & NOV>STE AUCO-24h da curcuminçides. - PHYT vs STE o PHYT > STE totais TEP vs Turmipure GOLD'Y & TP <Tumpure ol Ante orASoo) NOV vs Turmipure GOLD O nov Tumipure PHYT vs Turmipure GOLD ) PHT < Turmipure OD p-valor < 0,05 (estatisticamente significativo); » p-valor > 0,05 (estatisticamente não significativo); Produto Produto Produto — Produto — Produto Turmi urmipure Variável Estatísticas STE TEP NOV PHYT sr n =30) n =30) n = 30) n = 30) ín=30) (n=30) (n=30) (n=30) n=30 AUC0-244 de curcu- N 30 30 30 29 30 minoides totais com — N faltante o o o 1 o dose normalizada — 1. (sD) 370175) 3.2(169) 136.1(37.40) 13.0 (9.65) 72.9 (25,49 na.himL/m: Média (SD) 3,7(1,75) 3,2 (1,69) 136,1 (37,40) 13,0 (9,65) 72,9 (25,49) (Mín, Máx) — (0,7;9,7) (0,8;8,7) (69,8;220,8) (1,7;42,0) (16,4;139,6) Mediana (Q1; 3,7(2,5; 3,0(21; 141,8(105,6; 10,7(6,2: 69,7(55,2; 03) 4,3) 41) 157,8) 17,0) 87,8) Tabela 25: Dose normalizada de AUC0-24n de curcuminoides totais

[00372] A partir da análise acima, concluiu-se que, para a popula- ção ITT: Análise entre grupos (todos os sexos considerados juntos)

[00373] MN Nenhuma visita significativa é identificada (p = 0,2245) >

Consequentemente, a análise foi realizada em todas as visitas.

[00374] MN Efeito significativo do produto (p < 0,0001):

[00375] MW Parâmetro primário: Há uma diferença estatisticamente significativa entre Turmipure GOLD'!Y e STE (p < 0,0001 ajustado; dif.

[IC95 % ajustado] = 1,32 [1,18; 1,46]).

[00376] MN Outrascomparações:

[00377] mNMTEPvsSTE (p=0,6948 ajustado)

[00378] mWNwNOV vsSTE (p<0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado = 1,62 [1,48; 1,76]) > NOV > STE

[00379] mNwPHYTvsSTE (p<0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado = 0,48 [0,34; 0,62]) > PHYT > STE

[00380] mm TEP vs Turmipure GOLD!Y (p < 0,0001 ajustado; dif.

[IC95 % ajustado] = -1,39 [-1,53; -1,25]) 3 TEP < Turmipure GOLDTY

[00381] mw NOV vs Turmipure GOLDTY (p < 0,0001 ajustado; dif.

[IC95 % ajustado] = 0,29 [0,15; 0,43]) > NOV > Turmipure GOLDTY

[00382] mm PHYT vs Turmipure GOLDTY (p < 0,0001 ajustado; dif.

[IC95 % ajustado] = -0,84 [-0,99; -0,70]) > PHYT < Turmipure GOL- pTv MN Análise Adicional: Investigação do Efeito do Sexo

[00383] mM Nenhum efeito significativo na visita (po = 0,2456) e na interação Produto * Sexo (p = 0,3804): análise realizada em todos os sexos em conjunto e em todas as visitas.

[00384] MN Efeito significativo do produto (p < 0,0001):

[00385] mMNTEPvsSTE (p ajustado =0,7091)

[00386] mNwNOV vsSTE (p<0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 1,61 [1,47; 1,75]) 3 NOV > STE

[00387] mNwPHYTvsSTE (p<0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 0,48 [0,34; 0,62]) > PHYT > STE

[00388] mM Turmipure GOLD!" vs STE (p <0,0001 ajustado; dif.

[IC95 % ajustado] = 1,32 [1,18; 1,46]) > Turmipure GOLDTYM> STE

[00389] mm TEP vs Turmipure GOLD!"Y (p <0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = -1,39 [-1,52; -1,25]) > TEP < Turmipure GOLDTV

[00390] mM NOV vs Turmipure GOLDTY (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 0,29 [0,15; 0,43]) 3 NOV > Turmipure GOLDTY

[00391] m PHYT vs Turmipure GOLD'Y (p < 0,0001 ajustado; dif. [CI95 % ajustado] = -0,84 [-0,98; -0,70]) > PHYT < Turmipure GOL-

DTV

[00392] Paraa população PP: Mm Análise Entre Grupos (Todos os Sexos Juntos)

[00393] MW Os resultados são similares aos resultados observados na população ITT. Mm Análise Adicional: Investigação do Efeito do Sexo

[00394] MW Os resultados são similares aos resultados observados na população ITT. Sumário dos Resultados dos Parâmetros Secundários

[00395] Os resultados dos parâmetros secundários são mostrados nas tabelas abaixo para ambas as populações ITT (Tabelas 26 a 42) e PP (Tabelas 43 a 59), respectivamente. Os resultados são representa- dos graficamente nas Figuras 24 a 37.

[00396] A seguinte chave se aplica a cada tabela, indicando a signi- ficância estatística de cada resultado.

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Eventos Adversos Graves:

[00397] MN Indivíduo SNO01-009: Dor cervical/acidente rodoviário en- tre as visitas VO e V1 (sem produto sob estudo) (sistema corporal lo- comotor/reumatológico, evento não relacionado a um histórico médico, intensidade moderada, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, evento não relacionado à pesquisa e ao produto sob estudo, evento não associado a tratamentos corretivos, recuperação sem sequelas). = Tratamento de AEs Emergentes Com Intensidade Severa:

[00398] MN Indivíduo SNO01-007: Lumbago entre as visitas V2 e V3 (sob o produto Turmipure GOLD'Y) (sistema corporal locomo- tor/reumatológico, evento não relacionado a um histórico médico, in- tensidade grave, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, evento não relacionado à pesquisa e o produto sob estudo, evento não asso- ciado a tratamentos corretivos, recuperação sem sequelas). Nm AEs Relacionados aos Produtos Sob Estudo:

[00399] MN Indivíduo SNO01-008: Dor de cabeça no dia da visita V3 (sob o produto Turmipure GOLDTY) (sistema corporal neurológi- co/psiquiátrico, evento não relacionado a um histórico médico, intensi- dade moderada, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, possível evento relacionado à pesquisa e o produto sob estudo, evento associ- ado a um tratamento corretivo (paracetamol), recuperação sem seque- las).

[00400] MN Indivíduo SNO01-030: Dor de cabeça no dia da visita V1 (sob o produto Turmipure GOLDTY) (sistema corporal neurológi- co/psiquiátrico, evento não relacionado a um histórico médico, intensi- dade leve, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, possível evento relacionado à pesquisa e o produto sob estudo, evento associado a um tratamento corretivo (paracetamol), recuperação sem sequelas).

[00401] mN Indivíduo SNO01-032: Dor de cabeça no dia da consulta V2 (sob o produto NOV) (sistema corporal neurológico/psiquiátrico,

evento não relacionado a um histórico médico, intensidade leve, ne- nhuma ação sobre o produto sob estudo, possível evento relacionado à pesquisa e ao produto sob estudo, evento não associado a tratamen- tos corretivos, recuperação sem sequelas).

[00402] Os resultados observados na população PP são similares àqueles da população ITT.

[00403] A média+SD para os curcuminoides totais (população ITT) é mostrada abaixo. EEN TT IS IS INS o 'AUC(0-24h) normalizada para dose (ng.tmLimg) 37075) 320169) 1361 37.40) 130065) 72.9 (25.49) AUCIO-245) (ng.tvmlma) SOSGRA0TEO) 43M23(232843) BSIBA(23A594) 2327I(I727T6I) — 65197 (228033) "AUC(0-8h) normalizada para dose (ng.himl/mg) 16081) 120052) 818(1917) 41683) 38.1 (1274) AUCIO-SH) (ng.tmUma) Z22042(111103) 1725772346) SI226(120241) 7376060644) — 34100(113065) AAUC(O infinito) normalizada para dose (ngivmbima) — 53680) 22060) 149406499) | 14600502) 7836782) 'AUC(O infinito) (ng:tvmLma) TArI2(T00OB2) ATOS (AAIT2A) O3GOI3(AOTAIO) 2618260004) — 70011 (338263) Cmax normalizada (ng/mLUMg) 030014) 03(010) 281(723) 12080) 76(3.06) CT) aMTOM20) — 3T2GGAITO) — 1TRO(ASSTA — 2001(M441O) — 678027325) Biodisponibilidade relativa entre 0 e 24h 10000) 1679 7679 12415 24201548) Biodisponibilidade relativa entre 0 e sh 10000) 11007 122 (6868) 29250) 206 (20.00) Biodisponibilidade relativa entre 0 e infinito 10600) 10675 3677 2761) 22911520) Meiavida minutos) Tes4CiA3O) — SOS2(26535) — 337307883) — GO1GON12) — 383015444) jConsíanie de taxa de eliminação terminal 100 0100 02009 1005 02000) Tempo até pico (minutos) 256.5 (181,69) 330.3 (341.21) 61.0(1845) 375.0 (24939) 189.5 (147.52) Tabela 60: Média + SD para curcuminoides totais (população ITT) Conclusão

[00404] Os resultados demonstram que há poucas diferenças entre a biodisponibilidade dos compostos encontrados em TEP e STE (ape- nas 5 diferenças).

[00405] —“Descobriu-se que a composição dentro do escopo da pre- sente invenção (Turmipure GOLDTY) confere melhor biodisponibilidade de compostos do que STE, TEP e PHYT, e foi capaz de conferir uma biodisponibilidade similar para NOV, apesar de ser administrada em uma dose mais baixa (300 mg comparado com 1000 mg) e usando fontes naturais dos compostos curcuminoides.

[00406] Mais especificamente, o Novasol foi usado a 1000 mg, en- quanto que a composição da presente invenção (Turmipure GOLDTV) era a 300 mg. Uma vez que o Turmipure produz um efeito de 6520 a

300 mg, se fosse usado na mesma dosagem que o Novasol (1000 mg), produziria um efeito de 21733, o qual é muito maior do que o efei- to do Novasol na mesma dosagem (8539). Exemplo 4 - Preparação geral de uma composição conforme em- pregado nos métodos/usos descritos no presente documento

[00407] Uma mistura de curcuminoides em água foi preparada usando um extrato de curcuminoides purificado orgânico (pelo menos a 10 %, porém, de preferência, a 95 % de pureza (curcuminoides to- tais)) em água destilada (3 volumes em peso de pó/água).

[00408] “Uma mistura de goma arábica a 58 % (substrato) foi prepa- rada usando água destilada (3 volumes em peso de pó/água). 500 ml da solução aquosa de goma arábica foram adicionados a 500 ml da solução curcuminoides preparada no Exemplo 1 sob agitação (5000 rpm) e à mesma foram adicionados 5 % de óleo de girassol orgânico e 2 % de quillaja orgânico padronizado em saponinas.

[00409] A mistura resultante foi agitada a 5000 rpm durante dez mi- nutos. A emulsão resultante foi, então, seca por pulverização. Exemplo 5 - Caracterização de uma composição da invenção

[00410] O tamanho e a morfologia da composição da invenção fo- ram analisados por meio de dispersão dinâmica de luz (DLS) e poten- cial zeta (potencial Z) e microscopia de varredura eletrônica (SEM). Para análises DLS e de potencial zeta, um Zetasizer Nano ZS (Na- noZS90, Malvern Instrument Ltda., Reino Unido) com um laser de He/Ne (A = 633 nm) em um ângulo de dispersão fixo de 90º em tempe- ratura de (25 + 0,1 ºC) foi usado.

[00411] As amostras usadas estavam na forma de emulsão líquida (última etapa antes da secagem). As amostras foram suspensas em água desmineralizada na concentração em volume de 0,4 % e 1 minu- to de ultrassom foi aplicado. A análise DLS foi realizada imediatamente nestas amostras (tempo de medição = 60 segundos). A análise do po-

tencial zeta foi realizada em uma ampla faixa de pH (de 2 a 11).

[00412] As amostras foram preparadas e analisadas em diferentes pHs como segue usando soluções de HCI a 0,1 Me NaOH a 0,1 M. As amostras (pH = 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 e 11) obtidas foram armaze- nadas em temperatura ambiente (23 ºC) (Figura 4).

[00413] “Conforme mostrado na Figura 18, a cor da composição da invenção em água é determinada pelo pH. A forma cetônica (amarela) é a forma predominante presente em solução quando o pH varia de áci- do a neutro (de 2 a 7). Em um pH de 8 e 9, a cor da solução muda para laranja e, em um pH de 10 e 11, uma cor avermelhada translúcida é pre- dominante. A mudança de cor se deve à desprotonação sequencial de grupos hidroxila da molécula de curcumina impulsionada pelo aumento do pH, o que dá uma maior solubilidade e instabilidade à curcumina.

[00414] Os resultados da análise DLS são mostrados na Figura 19. Há dois grupos de indivíduos com tamanho de partícula. Um centrali- zado em 616 + 160 nm (20,8 % do total de indivíduos) e o mais inte- ressante centralizado em 188 + 42nm (79,2 % do total de indivíduos).

[00415] O tamanho médio de partícula hidrodinâmica de curcumina carregada em solução aquosa (pH de 5,4) foi de 476,5 nm com um índice de polidispersidade (PolyDispersity Index, PDI) de 0,337.

[00416] A Figura 20 mostra o potencial Z da composição da inven- ção em diferentes pHs (de 2 a 11). Quanto maior o potencial Z, mais instável é a mistura. A composição da invenção tem um potencial Z negativo entre um pH de 2 e um pH de 11. As partículas são negati- vamente carregadas na fase aquosa. Em um pH de 2, o potencial Z está próximo de O (ponto isoelétrico: pH para o qual o potencial é ze- ro), onde temos uma zona de instabilidade das emulsões. Entre um pH de 2 e um pH de 4, o potencial Z é relativamente baixo (< 25 mV) e, em um pH maior ou igual a 4, a amostra entra em uma zona de estabi- lidade. Esta estabilidade é fortemente confirmada a partir de um pH de

5. Uma rápida mudança no ponto isoelétrico foi observada em um pH de 8,0, o potencial zeta da curcumina carregada foi surpreendente- mente maior na faixa de um pH de 2 a 7. Na fase aquosa em pHs < 4,0, a curcumina carregada geralmente está em seu estado de energia superficial mais baixo. Em um pH de 8,0, a curcumina carregada pro- vavelmente orientará seu lado de baixa carga eletrônica para a goma arábica e exporá seu lado de alta carga eletrônica para interagir com a água, o que leva a um potencial zeta elevado.

[00417] A Figura 20 mostra claramente que a composição reivindi- cada é estável quando dispersa em uma solução aquosa em um pH acima de 4. Exemplo 6 - Distribuição de tamanho de partícula (PSD) de uma composição da invenção usando CQ-MO-304 Materiais e Reagentes Material - Mastersizer 3000 da Malvern Instrument ou equivalente; - Unidade de dispersão de amostras Hydro 2000SM ou equivalente (para fase líquida); - Unidade de dispersão de amostras Malvern AERO S ou equivalente (para fases sólidas). Reagente - Água Procedimento Parâmetros Analíticos - tempo de fundo: 10 segundos - tempo de medição (Q 10 segundos - Índice de refração da água destilada: 1,33 - cálculo do resultado: finalidade geral - velocidade da bomba/agitação: 1800 RPM - dispersante líquido: água

- dispersante sólido: ar ambiente Parâmetros Específicos - 100705 (índice de refração: 1, adsorção: 1) - 100019 (índice de refração: 1, adsorção: 2) - 3CAAOO75 e 3CAAOO76 (Composição da invenção)

[00418] Uma amostra da composição da invenção foi misturada com água destilada e uma amostra foi testada usando uma unidade Hydro 2000SM ou Mastersizer 3000 (usando uma unidade Scirocco 2000). Resultados

[00419] Vários lotes da composição da invenção, obtidos após se- cagem e moagem, foram testados de acordo com o método supracita- do. Os resultados são fornecidos na Tabela 1 abaixo. Tabela 61: Distribuição do tamanho de partícula da composição da invenção (onde (D90) corresponde a 90 % da população de tamanho de partícula e (D4:3) corresponde à média do momento em volume da população de tamanho de partícula). Referência do moinho|Nome do Produto = E = SE de esferas emum Jemum I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera

Referência PS (D90)PS (D4:3) |do moinho|wNome do Produto emum lemum de esferas enbm jemum I3CAAOO76 |Turmipure Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera I3COAO004 |Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - Moída em esfera Exemplo 7 - Morfologia da composição da invenção (através de microscopia de varredura eletrônica, SEM)

[00420] Paraa análise SEM, as amostras foram preparadas como segue: A composição da invenção na forma de pó foi depositada no porta-amostras simplesmente pulverizando. Seguiu-se a metalização dos depósitos de platina/paládio e, em seguida, observação e disparo por um microscópio de varredura eletrônica equipado com detector de raios X em dispersão de energia.

[00421] As imagens de SEM mostradas nas Figuras 21, 22 e 23 fornecem a visualização da composição da invenção.

[00422] A composição da invenção mostra conjugado auto-montado em micelas esféricas com um tamanho de +/- 170 nm. A morfologia aproximadamente esférica na análise SEM corroborou a análise de medição de tamanho feita pela técnica de dispersão dinâmica de luz.

A partir de SEM, pode ser visto que as partículas na composição da invenção mostraram claramente o revestimento externo de quitosana que estava ausente nas nanopartículas de lecitina não revestidas.

Descobriu-se que a curcumina está bem dispersa no núcleo de lecitina das nanopartículas.

Medições por SEM também corroboraram evidên- cias de geometria aproximadamente esférica e a rugosidade da super- fície indica a absorção da superfície.

Isto sugere que a força motriz deste tipo de adsorção é a interação eletrostática direta ou a interação íon-íon.

Claims (10)

REIVINDICAÇÕES

1. Método para melhorar a bioacessibilidade, biodisponibili- dade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos, caracterizado pelo fato de que compreende administrar os ditos cur- cuminoides na forma de uma composição que compreende (i) curcu- minoides, (ii) Quillaja e (iii) amido modificado e/ou goma arábica.

2. Uso de (i) curcuminoides, (ii) Quillaja e (ili) amido modifi- cado e/ou goma arábica, caracterizado pelo fato de que é na prepara- ção de uma composição para melhorar a bioacessibilidade, biodispo- nibilidade, bioeficácia e/ou biodisponibilidade de curcuminoides em mamíferos.

3. Método ou uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a melhoria na bioacessibilidade, biodis- ponibilidade, bioeficácia e/ou biodisponibilidade de curcuminoides em mamíferos se deve ao aumento da resistência gastrointestinal dos cur- cuminoides e/ou aumento da absorção de curcuminoides pelas células intestinais e/ou aumento da circulação sanguínea.

4. Método ou uso, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que os curcuminoides são selecionados a partir do grupo que consiste em curcumina e seus me- tabólitos de fase | ou fase Il, demetoxicurcumina e seus metabólitos de fase | ou fase Il, bisdemetoxicurcumina e seus metabólitos de fase | ou fase || e misturas dos mesmos.

5. Método ou uso, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o mamífero é um ser humano.

6. Método ou uso, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que os curcuminoides estão na forma livre.

7. Composição, caracterizada pelo fato de que compreen-

de: (i) curcuminoides; (ii) Quillaja; e (ili) amido modificado e/ou goma arábica.

8. Composição, de acordo com a reivindicação 7, caracteri- zada pelo fato de que o extrato de Quillaja está presente em uma quantidade a partir de cerca de 0,1 a cerca de 5% em peso da com- posição.

9. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 7 e 8, caracterizada pelo fato de que a goma arábica está pre- sente em uma quantidade a partir de cerca de 40 % a cerca de 60 % em peso da composição.

10. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 7 a 9, caracterizada pelo fato de que os curcuminoides podem estar presentes em uma quantidade a partir de cerca de 2,5 % a cerca de 60 %, tal como a partir de cerca de 5 % a cerca de 50 % ou a partir de cerca de 10 % a cerca de 45 % ou a partir de cerca de 15 % a cer- ca de 40 % em peso da composição.