BR112021001405A2

BR112021001405A2 - composições de curcuminoide

Info

Publication number: BR112021001405A2
Application number: BR112021001405-5A
Authority: BR
Inventors: Pascale Elizabeth Renée FANÇA-BERTHON; Leila Denise FALCAO; Mathieu TENON; Maryline Vinal; Simona Birtic
Original assignee: Naturex Sa
Priority date: 2018-08-06
Filing date: 2019-08-05
Publication date: 2021-04-27
Also published as: AU2019320487A1; CO2021002085A2; MX2021000774A; CA3108111A1; CN112566511A; JP2021533750A; ZA202100515B; KR20210041595A; WO2020030611A1; US20220280449A1; EP3833198A1; CL2021000310A1

Abstract

"COMPOSIÇÕES DE CURCUMINOIDE". A presente invenção refere-se a composições que compreendem curcuminoides; em particular, composições que compreendem curcuminoides que são altamente solúveis em água. A presente invenção também se refere a processos para fornecer tais composições e a usos de tais composições.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES DE CURCUMINOIDE". Campo da Invenção

[001] A presente invenção refere-se a composições que compreendem curcuminoides; em particular, composições que compreendem curcuminoides que são altamente solúveis em água. A presente invenção refere-se também a processos para fornecer tais composições e a usos de tais composições. Antecedentes da Invenção

[002] A listagem ou discussão de um documento aparentemente publicado anteriormente no presente relatório descritivo não deve necessariamente ser considerada como um reconhecimento de que o documento é parte do estado da técnica ou de conhecimento geral em comum.

[003] A cúrcuma e os compostos isolados da cúrcuma, tais como os curcuminoides, incluindo a curcumina, têm sido usados há muito tempo para tratar uma variedade de doenças e condições. Os curcuminoides são pigmentos laranja-amarelo naturais e polifenóis hidrofóbicos derivados do rizoma da erva Curcuma longa. Eles são comumente isolados do tempero e do agente corante alimentício cúrcuma.

[004] O extrato de cúrcuma contém aproximadamente 75-80 % de curcumina, 15-20 % de desmetoxicurcumina (DMC) e 0-10 % de bisdemetoxicurcumina (BDMC) (consulte Figura 1). Os curcuminoides têm uma estrutura conjugada única, uma β-dicetona bis-α,β-insaturada (comumente denominada de diferuloilmetano), a qual exibe tautomerismo ceto-enol com uma forma ceto predominante em soluções ácidas e neutras e forma enol estável em meio alcalino (Hoehle S.I., Pfeiffer E., Sólyom A.M., Metzler M. Metabolism of Curcuminoids in Tissue Slices and Subcellular Fractions From Rat Liver. J Agric Food

Chem. 08 de fevereiro de 2006; 54(3): 756-64).

[005] Embora o mecanismo exato pelo qual a curcumina é capaz de transmitir benefícios valiosos à saúde permanece obscuro, o efeito positivo geral sendo bastante pronunciado em alguns casos.

[006] A curcumina é uma molécula altamente pleiotrópica que foi demonstrado exibir atividade antibacteriana pela primeira vez em 1949. Desde então, foi mostrado que este polifenol tem atividades antiinflamatórias, hipoglicêmicas, antioxidantes, cicatrizantes e antimicrobianas. Extensos estudos pré-clínicos e ensaios clínicos nas últimas três décadas indicaram o potencial terapêutico da curcumina contra uma ampla variedade de doenças humanas (Gupta S.C., Sung B., Kim J.H., Prasad S., Li S., Aggarwal B.B. Multitargeting by Turmeric, The Golden Spice: From Kitchen to Clinic. Mol Nutr Food Res. Setembro de 2013; 57(9): 1510-28).

[007] Embora a curcumina tenha mostrado eficácia contra vários transtornos humanos, ela também é conhecida por ter biodisponibilidade limitada em virtude da má absorção, metabolismo rápido e eliminação sistêmica rápida.

[008] Níveis séricos baixos, bem como distribuição tecidual limitada e metabolismo rápido, foram relatados quando a curcumina é administrada por via oral. Por exemplo, foi demonstrado que, mesmo após doses orais de até 12 g, os níveis séricos de curcumina não excederam o baixo nível micromolar. Em um estudo clínico com 4–8 g de curcumina, a concentração sérica máxima observada foi 1,3 µg/mL, enquanto que vários outros estudos clínicos e animais relataram níveis séricos na faixa abaixo de nanogramas por mililitro (Anand P, Kunnumakkara A.B., Newman R.A., Aggarwal B.B. Bioavailability of Curcumin: Problems and Promises. Mol Pharm. Nov-Dez de 2007; 4(6): 807-18).

[009] Descobriu-se que a curcumina é pouco solúvel em água. Por exemplo, a solubilidade máxima da curcumina em tampão aquoso (pH de 5,0) foi relatada como sendo tão baixa quanto 11 ng/ml (Tønnesen H.H., Másson M., Loftsson T. Studies of Curcumin And Curcuminoids. XXVII. Cyclodextrin Complexation: Solubility, Chemical and Photochemical Stability. Int J Pharm. 05 de setembro de 2002; 244(1- 2): 127-35).

[0010] A curcumina é relativamente estável em pH ácido, mas se decompõe rapidamente em pH acima do neutro e forma ácido ferúlico e feruloilmetano, o último fornecendo, então, a vanilina (FAO 2004. CURCUMIN Chemical and Technical Assessment (CTA) Primeiro esboço preparado por Ivan Stankovic. Chemical and Technical Assessment 61st JECFA).

[0011] A curcumina também exibe absorção intestinal muito baixa. Descobriu-se que os coeficientes de permeabilidade aparente da curcumina eram extremamente baixos em um modelo de célula intestinal humana in vitro (valor de Papp: 0,1 x 10-6 cm/s), o que poderia prever, de acordo com a correlação dos valores de Papp determinados em células Caco-2 in vitro com absorção humana in vivo, uma baixa absorção (0-20 %) em seres humanos (Dempe J.S., Scheerle R.K., Pfeiffer E., Metzler M. Metabolism and Permeability of Curcumin in Cultured Caco-2 Cells. Mol Nutr Food Res. Setembro de 2013; 57(9): 1543-9).

[0012] Uma vez absorvida, a curcumina sofre metabolismo de fase I e fase II (consulte Figura 2).

[0013] No metabolismo de fase I, a curcumina e seus dois congêneres demetóxi sofrem redução sucessiva em seus metabólitos di-hidro-, tetra-hidro-, hexa-hidro- e octa-hidro- no fígado, bem como na mucosa intestinal. No metabolismo de fase II, a curcumina e seus metabólitos redutores são conjugados com ácido glucurônico e sulfato e formam metabólitos de fase II.

[0014] A redução e a conjugação parecem ser vias metabólicas gerais dos curcuminoides, ocorrendo nos tecidos hepático e intestinal de ratos e seres humanos. Assim, os efeitos biológicos provocados pela curcumina em outros tecidos além do trato gastrointestinal são considerados mais prováveis em virtude dos metabólitos da curcumina por vários autores.

[0015] Também foi demonstrado que a curcumina é metabolizada por micro-organismos intestinais (consulte Figura 3).

[0016] Descobriu-se que o metabolismo microbiano da curcumina compreende uma redução em duas etapas, com a curcumina sendo convertida sucessivamente em di-hidrocurcumina e, em seguida, tetra- hidrocurcumina por uma curcumina/di-hidrocurcumina redutase dependente de NADPH (CurA) (Hassaninasab et al., 2011).

[0017] Um estudo recente também relatou que a tetra- hidroxicurcumina, mas não a curcumina, pode se acumular no tecido de ratos, sugerindo que a microbiota também pode ser considerada um ator potencial no metabolismo e na biodisponibilidade da curcumina (Neyrinck A.M., Alligier M., Memvanga P.B., Névraumont E., Larondelle Y., Préat V., Cani P.D., Delzenne N.M. Curcuma longa Extract Associated with White Pepper Lessens High Fat Diet-Induced Inflammation in Subcutaneous Adipose Tissue. PLoS One. 19 de novembro de 2013; 8(11): e81252).

[0018] O metabolismo rápido, baixa solubilidade em água, instabilidade em pH neutro e após exposição à luz e/ou oxigênio e má absorção pelos tecidos limita drasticamente a utilidade potencial dos curcuminoides, incluindo o uso potencial de curcuminoides, tal como a curcumina, no tratamento de doenças, tal como o câncer.

[0019] Vários ensaios clínicos de fase I e fase II demonstraram efeitos promissores da administração de curcumina oral em pacientes com neoplasia colorretal, câncer de pâncreas e de mama avançados -

com ou sem quimioterapia adicional. Mais especificamente, a curcumina exibe eficiência antimelanoma tanto in vitro quanto in vivo.

[0020] Apesar do grande potencial terapêutico da curcumina em uma variedade de cânceres (incluindo melanoma), sua aplicação clínica tem sido fortemente impedida em virtude de uma série de características limitativas, incluindo: metabolismo rápido, baixa solubilidade em água, instabilidade em pH neutro e após exposição à luz e/ou oxigênio e má absorção pelos tecidos. As características acima limitam drasticamente a utilidade potencial da curcumina no tratamento de doenças, tal como o câncer.

[0021] Em virtude da baixa solubilidade em água e características de absorção, solventes orgânicos tipicamente são usados para dissolver curcuminoides, tal como a curcumina. Por exemplo, solventes tal como sulfóxido de dimetila (DMSO). No entanto, embora o uso de tais solventes ajude a solubilizar a curcumina e a melhorar a disponibilidade, o uso de solventes orgânicos como veículo é controverso e indesejável, especialmente em uma época em que há uma crescente demanda do consumidor por ingredientes naturais.

[0022] Outra possibilidade de auxiliar a solubilidade da curcumina em água é por meio da emulsificação. No entanto, os emulsificantes de grau orgânico natural são raros e tanto os emulsificantes sintéticos, como o polissorbato 80, quanto os emulsificantes naturais, como os emulsificantes com base em amido são, tipicamente, capazes de dispersar baixos níveis (< 7 %) de curcumina em água.

[0023] Outras estratégias que foram exploradas a fim de abordar as deficiências acima e melhorar a eficácia terapêutica da curcumina incluem o uso de nanopartículas poliméricas, micelas poliméricas e métodos que incluem enxertia de curcumina em um polímero hidrofílico.

[0024] A presente invenção busca abordar os problemas supracitados associados à fraca solubilidade do curcuminoide em água e fornecer uma composição que compreende curcuminoides que é altamente solúvel em água e estável em pH fisiológico. Descrição da Invenção Composição

[0025] Os presentes inventores descobriram, surpreendentemente, que uma composição que compreende pelo menos cerca de 20 % de curcuminoides em peso da composição, goma arábica e um extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja, em que a composição compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 10000 nm, é altamente solúvel em água e estável em pH fisiológico.

[0026] De acordo com a presente invenção, é fornecida uma composição que compreende: (i) pelo menos cerca de 20% de curcuminoides em peso da composição; (ii) goma arábica; e (iii) um extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja, em que a composição compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 10000 nm, tal como a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm ou a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm.

[0027] De acordo com a presente invenção, também é fornecida uma composição que compreende: (iv) pelo menos cerca de 20 % de curcuminoides em peso da composição; (v) goma arábica; e (vi) um extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja, em que a composição compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm.

[0028] Estas composições podem ser denominadas daqui em diante como a "composição da invenção".

[0029] A composição da invenção pode estar na forma de uma emulsão ou a composição da invenção pode estar na forma de um sólido, por exemplo, na forma de um pó.

[0030] Conforme usado no presente documento, o termo "emulsão" se refere a um tipo de coloide que é formado pela combinação de dois líquidos que geralmente não se misturam. Tipicamente, um dos líquidos conterá uma dispersão do outro líquido.

[0031] Algumas vezes, os termos "coloide" e "emulsão" são usados indistintamente, porém, conforme usado no presente documento, o termo emulsão se aplica quando ambas as fases de uma mistura são líquidas. As partículas em um coloide podem ser qualquer fase da matéria. Portanto, uma emulsão é um tipo de coloide, porém, nem todos os coloides são emulsões.

[0032] Uma solução coloidal, ocasionalmente identificada como suspensão coloidal, é uma mistura na qual as substâncias são regularmente suspensas em um fluido.

[0033] Algumas composições da invenção não compreendem feno- grego, por exemplo, algumas composições da invenção não compreendem fibra de feno-grego (isto é, fibra obtida ou obtenível a partir de feno-grego).

[0034] A composição da invenção pode compreender pequenas quantidades de polióis e/ou açúcares de baixo peso molecular, de preferência com 1 ou 2 unidades monossacarídicas, tal como menos de 5% em peso da composição ou menos de 2,5% em peso da composição. Alternativamente, a composição da invenção pode ser isenta de polióis e/ou açúcares de baixo peso molecular, tais como aqueles com 1 ou 2 unidades monossacarídicas, ou seja, algumas composições não contêm quaisquer polióis e/ou açúcares de baixo peso molecular, tais como aqueles com 1 ou 2 unidades monossacarídicas.

[0035] Na composição da invenção, as partículas podem ter um diâmetro médio de cerca de 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1000 nm, 1100 nm, 1200 nm, 1300 nm, 1400 nm ou 1500 nm a cerca de 9000 nm, 8000 nm, 7000 nm, 6000 nm, 5000 nm, 4000 nm, 3000 nm ou 2000 nm, tal como cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm. As partículas também podem ter um diâmetro médio de cerca de 200 nm a cerca de 600 nm ou de cerca de 300 nm a cerca de 500 nm ou cerca de 400 nm.

[0036] Por exemplo, onde a composição está na forma de uma emulsão, a composição pode, por exemplo, compreender partículas que têm um diâmetro médio de cerca de 550 nm a cerca de 700 nm e partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 250 nm, dando um diâmetro médio de cerca de 400 nm.

[0037] Onde a composição está na forma de um sólido, tal como um pó, a composição pode, por exemplo, compreender partículas que têm um diâmetro médio de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm, tal como de cerca de 2000 nm a cerca de 4000 nm.

[0038] As partículas na composição da invenção podem estar na forma de micelas.

[0039] Na composição da invenção, por exemplo, quando a composição está na forma de um sólido, as partículas podem ser formadas usando métodos conhecidos na técnica, tal como secagem por pulverização.

[0040] Após a formação das partículas (por exemplo, após secagem, tal como secagem por pulverização), as partículas podem ser trituradas e/ou moídas (tal como moagem a esferas) para fornecer um tamanho mais uniforme.

[0041] O tamanho e a morfologia da micela de curcumina carregada foram analisados por meio de dispersão dinâmica de luz (Dynamic Light Scattering, DLS) e o potencial zeta (potencial Z) e microscopia de varredura eletrônica (Scanning Electron Microscopy, SEM). Para análises DLS e do potencial zeta, um Zetasizer Nano ZS (NanoZS90, Malvern Instrument Ltda., Reino Unido) com um laser de He/Ne (λ = 633 nm) em um ângulo de dispersão fixo de 90° em uma temperatura de (25 ± 0,1°C). Por exemplo, o tamanho das partículas pode ser medido por meio do método CQ-MO-304, conforme definido nos Exemplos abaixo.

[0042] Na composição da invenção, os curcuminoides podem ser obtidos a partir de qualquer fonte. No entanto, é preferível que os curcuminoides sejam obtidos a partir de uma fonte natural, ou seja, os curcuminoides não são sintéticos, mas sim com base em plantas.

[0043] A composição da invenção pode compreender pelo menos cerca de 25% de curcuminoides ou pelo menos cerca de 30% de curcuminoides em peso da composição.

[0044] Por exemplo, na composição da invenção, os curcuminoides podem estar presentes em uma quantidade de cerca de 20% a cerca de 60%, tal como de cerca de 25% a cerca de 50% ou de cerca de 28% a cerca de 48% em peso da composição.

[0045] Os curcuminoides podem ser fornecidos por meio de extração e opcionalmente purificação da raiz (rizoma) de cúrcuma (Curcuma longa), raiz de oleorresina de cúrcuma, oleorresina de raiz de cúrcuma desengordurada e misturas dos mesmos, ou seja, (i) os curcuminoides podem estar na forma de um extrato ou extrato purificado de cúrcuma que compreende a partir de cerca de 30 % a cerca de 100% de curcuminoides, tal como de cerca de 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55%, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 % ou 90 % a cerca de 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 % ou 45 % de curcuminoides com base na porcentagem de curcuminoides totais no extrato.

[0046] Onde os curcuminoides são fornecidos como um extrato de cúrcuma, a cúrcuma pode ser extraída usando um solvente de extração com base em álcool, tal como uma mistura de água/álcool ou um álcool. Por exemplo, o solvente de extração com base em álcool pode ser água/metanol (ou seja, uma mistura de água e metanol) ou água/etanol (ou seja, uma mistura de água e etanol) ou metanol ou etanol.

[0047] Quando o solvente de extração compreende uma mistura de água/álcool, a proporção de água para álcool pode ser a partir de cerca de 25:75 a cerca de 1:99, tal como a partir de cerca de 20:80 a cerca de 5:95 ou cerca de 10:90. Por exemplo, o solvente de extração pode ser água/etanol em uma proporção a partir de cerca de 25:75 a cerca de 1:99, tal como a partir de cerca de 20:80 a cerca de 5:95 ou cerca de 10:90.

[0048] O extrato de cúrcuma pode, então, ser adicionalmente purificado para fornecer um extrato de curcuminoides que compreende a partir de cerca de 30 % a cerca de 100 % de curcuminoides, tal como cerca a partir de 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75%, 80 %, 85 % ou 90 % a cerca de 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 % ou 45 % de curcuminoides com base na porcentagem de curcuminoides totais no extrato.

[0049] A purificação do extrato pode ser realizada usando métodos conhecidos na técnica. Tipicamente, o extrato é purificado usando um solvente com base em álcool, tal como metanol a 100 % ou etanol a 100%.

[0050] O extrato de cúrcuma pode ser opcionalmente seco para remover qualquer excesso de solvente.

[0051] Onde os curcuminoides são fornecidos na forma de um extrato de cúrcuma, conforme definido anteriormente, a composição pode compreender a partir de cerca de 30 % a cerca de 50 % de extrato de cúrcuma, tal como a partir de cerca de 35 % a cerca de 45 % em peso da composição. Por exemplo, a composição pode compreender a partir de cerca de 35 % (ou seja, 35 %) a cerca de 45 % de extrato de cúrcuma em peso da composição, onde o extrato de cúrcuma compreende a partir de cerca de 85 % a cerca de 95 % de curcuminoides em peso do extrato de cúrcuma, fornecendo uma composição que compreende a partir de cerca de 30 % (isto é, 30 %) a cerca de 43 % de curcuminoides em peso da composição.

[0052] Os curcuminoides podem ser fornecidos como um líquido ou um pó, tal como um pó. Por exemplo, um extrato de cúrcuma em pó.

[0053] Conforme usado no presente documento, o termo "curcuminoides" inclui curcumina, demetoxicurcumina (DMC) e bisdemetoxicurcumina (BDMC). Por exemplo, o extrato de cúrcuma pode compreender a partir de cerca de 70 % a cerca de 85 % de curcumina (tal como a partir de cerca de 75 % a cerca de 80 %), a partir de cerca de 10 % a cerca de 25 % de DMC (tal como a partir de cerca de 15 % a cerca de 20 %) e a partir de cerca de 0 % a cerca de 10 % de BDMC.

[0054] A goma arábica na composição da invenção pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 40 % a cerca de 65 % em peso da composição, tal como a partir de cerca de 50 a cerca de 60 em peso da composição ou cerca de 58% em peso da composição.

[0055] O extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja na composição da invenção pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 0,1 % a cerca de 5 % em peso da composição, tal como a partir de cerca de 0,5 % a cerca de 3 % ou cerca de 2 % em peso da composição.

[0056] Conforme será apreciado por aqueles versados na técnica, conforme usado no presente documento, o termo "obtenível a partir de" significa que o extrato de Quillaja pode ser obtido de uma planta do gênero Quillaja (tal como Quillaja saponaria Molina) ou pode ser isolado da planta do gênero Quillaja ou pode ser obtido a partir de uma fonte alternativa, por exemplo, por meio de síntese química ou produção enzimática. Enquanto que o termo "obtido", conforme usado no presente documento, significa que o extrato é diretamente derivado da planta do gênero Quillaja.

[0057] O extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja na composição da invenção pode compreender pelo menos 50% de saponinas, tal como pelo menos 60 % de saponinas ou pelo menos 65% de saponinas em peso do extrato de Quillaja. Por exemplo, a Quillaja usada na composição da invenção pode compreender a partir de cerca de 50 % a cerca de 80 % ou a partir de cerca de 60 % a cerca de 75 % de saponinas em peso do extrato de Quillaja.

[0058] O extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja usado no processo da invenção pode estar em qualquer forma, tal como um líquido ou um sólido. Por exemplo, o extrato de Quillaja pode ser usado na forma de um sólido, tal como um pó.

[0059] Quando presente na composição da invenção, a água e/ou outro solvente, tal como álcool, podem ser adicionados à Quillaja sólida ou líquida. Por exemplo, a Quillaja pode estar presente na composição da invenção como uma solução aquosa.

[0060] A composição da invenção pode compreender opcionalmente um óleo de planta e/ou vegetal. Por exemplo, a composição da invenção pode compreender óleos de planta e/ou vegetais selecionados a partir do grupo que consiste em óleo de coco, óleo de milho, óleo de semente de algodão, azeite, óleo de palma, óleo de amendoim (óleo de noz), óleo de colza, incluindo óleo de canola, óleo de cártamo, óleo de gergelim, óleo de soja, óleo de girassol e misturas dos mesmos.

[0061] O óleo de planta e/ou vegetal presente na composição da invenção pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 1 % a cerca de 20 % de óleo de planta e/ou vegetal, tal como a partir de cerca de 2,5 % a cerca de 10 % ou cerca de 5 % em peso da composição.

[0062] Salvo indicação em contrário no presente documento, as percentagens em peso listadas são com base no peso total da composição(seca) obtida.

[0063] Para evitar dúvidas, preferências, opções, características particulares e assim por diante indicadas para um determinado aspecto, característica ou parâmetro da invenção devem, a menos que o contexto indique o contrário, ser consideradas como tendo sido descritas em combinação com qualquer e todas as outras preferências, opções, características particulares e assim por diante, conforme indicado para o mesmo ou outros aspectos, características e parâmetros da invenção.

[0064] O termo "cerca de", conforme usado no presente documento, por exemplo, quando de referência a um valor mensurável (tal como uma quantidade ou peso de um componente específico na mistura de reação), se refere a variações de ± 20 %, ± 10 %, ± 5 %, ± 1 %, ± 0,5 % ou, particularmente, ± 0,1 % em relação à quantidade especificada. Por exemplo, uma variação de ± 0,5 % em relação à porcentagem de um componente na composição da invenção significa uma variação de 0,5 % em relação à porcentagem dada, ou seja, ± 0,5 % de 10 % significaria uma variação a partir de 9,5 % a 10,5 %.

[0065] A composição da invenção pode ser fornecida na forma sólida ou líquida, de preferência na forma sólida, tal como um pó. Na forma sólida, está implícito que o composto pode ser fornecido como um sólido amorfo ou como um sólido cristalino ou parcialmente cristalino.

[0066] A composição da invenção é, tipicamente, altamente solúvel em água e/ou estável em um pH de 4 ou mais, tal como um pH a partir de cerca de 4 a cerca de 7.

[0067] Pelo termo solúvel em água entenda-se que pelo menos cerca de 50 %, tal como pelo menos cerca de 60 %, 70 %, 80 %, 90 %

ou 95 % da composição dissolverão em água emà temperatura ambiente, ou seja, uma temperatura de cerca de 25°C. Composições e Administração

[0068] De acordo com a presente invenção, a composição da invenção pode ser fornecida na forma de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebidas, rações para animais ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um herbicida, um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética ou pode fazer parte de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética.

[0069] Por exemplo, a presente invenção fornece uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética que consiste essencialmente em (ou seja, pelo menos 90% p/p da formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tal como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética é a composição da invenção, tal como pelo menos 95% ou 99% ou 99,5%) ou que compreende a composição da invenção.

[0070] A presente invenção também fornece o uso de uma composição da invenção em uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética.

[0071] Onde a composição da invenção está na forma de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um herbicida, um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética ou pode fazer parte de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tal como uma fórmula alimentícia funcional, isto é, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou alimentos, bebidas, rações ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética, pode opcionalmente compreender ainda ingredientes aceitáveis em farmacêutica/veterinária, tais como excipientes ou veículos ou ingredientes (função) aceitáveis para alimentos e misturas dos mesmos, conforme apropriado.

[0072] Para evitar dúvidas, no presente relatório descritivo, quando usamos o termo "que compreende(m)" ou "compreende", entenda-se que o extrato ou composição que está sendo descrita deve conter o(s) ingrediente(s) listado(s), porém, pode opcionalmente conter ingredientes adicionais. Quando usamos o termo "que consiste(m) essencialmente em" ou "consiste(m) essencialmente em", entenda-se que o extrato ou composição que está sendo descrita deve conter o(s) ingrediente(s) listado(s) e também pode conter um pouco (por exemplo, até 5 % em peso ou até 1 % ou 0,1 % em peso) de outros ingredientes, contanto que quaisquer ingredientes adicionais não afetem as propriedades essenciais do extrato ou composição. Quando usamos o termo "que consiste(m) em" ou "que consiste(m)", entenda-se que o extrato ou composição descrita deve conter apenas o(s) ingrediente(s) listado(s).

[0073] Pretende-se também que os termos "compreende" ou "compreendem" ou "que compreende(m)" possam ser substituídos por "consiste(m)" ou "que consiste(m)" ou "que consiste(m) essencialmente em" em todo o pedido, conforme necessário.

[0074] Conforme usado no presente documento, referências a excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem se referir a adjuvantes, diluentes e/ou veículos farmaceuticamente aceitáveis, conforme conhecido por aqueles versados na técnica.

[0075] Ingredientes alimentícios aceitáveis incluem aqueles conhecidos na técnica (incluindo aqueles também denominados no presente documento como excipientes farmaceuticamente aceitáveis) e que podem ser naturais ou não naturais, isto é, sua estrutura pode ocorrer na natureza ou não. Em determinados casos, eles podem se originar de compostos naturais e ser posteriormente modificados (por exemplo, maltodextrina).

[0076] Por "nutracêutica/farmaceuticamente aceitável" entenda-se que os componentes adicionais da composição são estéreis e apirogênicos. Tais componentes também devem ser "aceitáveis" no sentido de serem compatíveis com a composição da invenção e não prejudiciais para aqueles que vão receber a mesma. Assim, "farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer/quaisquer composto(s) usado(s) na formação de uma parte da formulação que se destina a atuar meramente como um excipiente, ou seja, não se destina a ter atividade biológica em si. Assim, o excipiente farmaceuticamente aceitável é geralmente seguro, não tóxico e nem biologicamente nem de outra forma indesejável.

[0077] Onde a composição da invenção faz parte de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética, a composição da invenção está presente na formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, isto é, alimento, bebida, alimentos ou rações ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética em uma quantidade a partir de cerca de 1 a cerca 99% em peso da formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética, tal como cerca de 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou 90 % a cerca de 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 % ou 20 % em peso da formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tal como fórmulas alimentícias funcionais, isto é, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou alimentos, bebidas, alimentos para animais ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética. Administração

[0078] Aqueles versados na técnica entenderão que a composição da invenção, seja onde a composição está na forma de formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética ou onde a formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, alimentos para animais ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética compreende a composição da invenção, a formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética pode ser administrada a um paciente ou indivíduo (por exemplo, um paciente ou ser humano ou animal) através de qualquer via adequada, tal como através da via oral, retal, nasal, pulmonar, bucal, sublingual, transdérmica, intracisternal, intraperitoneal e parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intratecal, intravenosa e intradérmica).

[0079] Em particular, as composições da invenção e formulações nutracêuticas, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, isto é, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética que compreende a composição da invenção pode ser administrada por via oral. Em tais casos, as composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção podem ser formuladas especificamente para administração por via oral.

[0080] As formulações farmacêuticas para administração oral incluem formas de dosagem sólidas, tais como cápsulas duras ou moles, comprimidos, trociscos, drágeas, pílulas, pastilhas, pós e grânulos. Quando apropriado, elas podem ser preparadas com revestimentos, tais como revestimentos entéricos, ou podem ser formuladas de modo a fornecer liberação controlada do ingrediente ativo, tal como liberação sustentada ou prolongada, de acordo com métodos bem conhecidos na técnica.

[0081] As formas de dosagem líquidas para administração oral incluem soluções, emulsões, suspensões aquosas com base em óleo/oleosas, xaropes e elixires.

[0082] Formulações nutracêuticas, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética descrita no presente documento, tal como aquelas destinadas à administração oral, podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, tal como ao misturar os componentes da composição.

[0083] Tal formulação nutracêutica, produto alimentício ou dietético para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), suplemento nutricional, fragrância ou flavorizante, formulação farmacêutica ou veterinária, formulação enológica ou cosmética conforme descrito no presente documento pode conter um ou mais componentes adicionais selecionados a partir do grupo que consiste em ingredientes alimentícios, tais como agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes. Os comprimidos podem conter o(s) ingrediente(s) ativo(s) em mistura com excipientes (ou ingredientes) farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para a fabricação de comprimidos. Estes excipientes (ou ingredientes) podem ser, por exemplo: diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho, maltodextrina ou ácido algínico; agentes aglutinantes, por exemplo, amido, gelatina ou acácia; e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por meio de técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e, assim, fornecer uma ação sustentada por um período mais longo. Por exemplo, um material de retardo de tempo, tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila, pode ser empregado.

[0084] Veículos farmacêuticos adequados incluem diluentes ou materiais de enchimento sólidos inertes, soluções aquosas estéreis e vários solventes orgânicos. Exemplos de veículos sólidos são lactose, terra alba, sacarose, ciclodextrina, maltodextrina, talco, gelatina, ágar, pectina, acácia, estearato de magnésio, ácido esteárico, goma arábica, amido modificado e éteres alquílicos inferiores de celulose. Exemplos de veículos líquidos são xarope, óleo de amendoim, azeite, fosfolipídios, ácidos graxos, aminas de ácidos graxos, polietileno e água. Além disso, o veículo ou diluente pode incluir qualquer material de liberação sustentada conhecido na técnica, tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila, individualmente ou misturado com uma cera.

[0085] Dependendo do transtorno e do paciente a ser tratado, bem como da via de administração, as composições da invenção podem ser administradas em doses variáveis (isto é, doses terapeuticamente eficazes, conforme administrado a um paciente que precisa das mesmas). A este respeito, o especialista reconhecerá que a dose administrada a um mamífero, particularmente um ser humano, no contexto da presente invenção deve ser suficiente para obter uma resposta terapêutica no mamífero ao longo de um período de tempo razoável. Aqueles versados na técnica reconhecerão que a seleção da dose e formulação exatas e o regime de distribuição mais apropriado também serão influenciados, inter alia, pelas propriedades farmacológicas da formulação, a natureza e a gravidade da condição a ser tratada e a condição física e acuidade mental do receptor, bem como a potência do composto específico, a idade, condição, peso corporal, sexo e resposta do paciente a ser tratado e o estágio/gravidade da doença.

[0086] Tipicamente, a composição ou a formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética da invenção é administrada para fornecer curcuminoides em uma quantidade a partir de cerca de 100 mg/dia a cerca de 2000 mg/dia ou a partir de cerca de 500 mg/dia a cerca de 1500 mg/dia ou cerca de 1000 mg/dia, tal como a partir de cerca de 300 mg/dia a cerca de 1000 mg/dia. Por exemplo, a composição ou a formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética pode fornecer curcuminoides em uma quantidade a partir de cerca de 1 a cerca de 10 mg/kg de peso corporal, tal como a partir de cerca de 2,5 a cerca de 7,5 mg/kg de corpo peso ou cerca de 5 mg/kg.

[0087] Em qualquer caso, o médico ou outro especialista será capaz de determinar rotineiramente a dosagem real que será mais adequada para um paciente individual. As dosagens supracitadas são exemplificativas do caso médio; evidentemente, pode haver casos individuais em que faixas de dosagem mais altas ou mais baixas são consideradas e estas estão dentro do âmbito da presente invenção. Processo Para a Preparação de Composições da Invenção

[0088] A presente invenção fornece um processo para a preparação de uma composição da invenção conforme definido anteriormente, em que o processo compreende as etapas de: (i) preparar uma solução aquosa de curcuminoides; (ii) misturar a solução aquosa de (i) com uma solução aquosa de goma arábica e extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja e, opcionalmente, o óleo de planta e/ou vegetal, para fornecer uma emulsão; e opcionalmente (iii) secar o produto de (ii) para fornecer uma composição que compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 10000 nm, tal como a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm ou a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm.

[0089] Por exemplo, a presente invenção fornece um processo para a preparação de uma composição da invenção conforme definido anteriormente, em que o processo compreende as etapas de: (i) preparar uma solução aquosa de curcuminoides; (ii) misturar a solução aquosa de (i) com uma solução aquosa de goma arábica e extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja e, opcionalmente, o óleo de planta e/ou vegetal para fornecer uma emulsão; e (iii) secar o produto de (ii) para fornecer uma composição que compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 10000 nm, tal como a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm ou a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm.

[0090] Tais processos são, daqui em diante, denominados como o processo da invenção.

[0091] No processo da invenção, a solução aquosa de goma arábica pode ser misturada com a solução aquosa de curcuminoides antes de misturar com o extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja e, opcionalmente, óleo de planta e/ou vegetal, ou seja, o processo da invenção pode compreender: (i) preparar uma solução aquosa de curcuminoides; (ii) misturar a solução aquosa de (i) com uma solução aquosa de goma arábica; (iii) misturar o extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja e opcionalmente o óleo de planta e/ou vegetal com o produto de (ii) para fornecer uma emulsão; e opcionalmente (iv) secar o produto de (iii) (tal como por meio de secagem por pulverização) para fornecer uma composição que compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 10000 nm, tal como a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm ou a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm.

[0092] Após a secagem (tal como secagem por pulverização), as partículas podem ser trituradas e/ou moídas (tal como moagem a esferas) para fornecer um tamanho mais uniforme.

[0093] No processo da invenção, as partículas podem ter um diâmetro médio a partir de cerca de 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1000 nm, 1100 nm, 1200 nm, 1300 nm, 1400 nm ou 1500 nm a cerca de 9000 nm, 8000 nm, 7000 nm, 6000 nm, 5000 nm, 4000 nm, 3000 nm ou 2000 nm, tal como a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm. As partículas também podem ter um diâmetro médio a partir de cerca de 200 nm a cerca de 600 nm ou a partir de cerca de 300 nm a cerca de 500 nm ou cerca de 400 nm.

[0094] Por exemplo, onde a composição da invenção está na forma de uma emulsão (ou seja, antes da etapa de secagem), a composição pode compreender partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 550 nm a cerca de 700 nm e partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 250 nm, fornecendo um diâmetro médio de cerca de 400 nm.

[0095] Quando a composição está na forma de um sólido, tal como um pó (isto é, após a etapa de secagem), a composição pode compreender partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm, tal como a partir de cerca de 2000 nm a cerca de 4000 nm.

[0096] As partículas na composição podem estar na forma de micelas.

[0097] No processo da invenção, os curcuminoides presentes na solução aquosa de curcuminoides podem ser provenientes de qualquer fonte, conforme previamente definido em relação à composição da invenção.

[0098] Tipicamente, no processo da invenção, os curcuminoides podem ter uma pureza (com base nos curcuminoides totais) a partir de cerca de 5 % a cerca de 100 % em peso da fonte de curcuminoides, ou seja, o extrato de cúrcuma ou curcuminoides pode compreender a partir de cerca de 30 % a cerca de 100 % de curcuminoides, tal como a partir de cerca de 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 % ou 90 % a cerca de 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 % ou 45 % de curcuminoides com base na porcentagem de curcuminoides totais no extrato.

[0099] No processo da invenção, os curcuminoides podem ser misturados com água em uma proporção em peso a partir de cerca de 2:1 (curcuminoides:água) a cerca de 4:1, tal como cerca de 3:1, para fornecer a solução aquosa de curcuminoides.

[00100] Tipicamente, no processo da invenção, a concentração em peso de curcuminoides na solução aquosa pode ser a partir de cerca de 1 % a cerca de 95 %, tal como a partir de cerca de 5 % a cerca de 80 % ou a partir de cerca de 7 % a cerca de 40 %.

[00101] No processo da invenção, a solução aquosa de goma arábica pode ser preparada ao misturar goma arábica com água em uma proporção de goma arábica:água a partir de cerca de 2:1 a cerca de 4: 1, tal como cerca de 3:1.

[00102] A solução aquosa de goma arábica pode ter uma concentração em peso de goma arábica a partir de cerca de 30 % a cerca de 70 %, tal como a partir de cerca de 40 % a cerca de 60 %.

[00103] Tipicamente, a solução aquosa de curcuminoides e a solução aquosa de goma arábica são misturadas usando agitação.

[00104] No processo da invenção, o óleo de planta e/ou vegetal pode ser de qualquer fonte de planta e/ou vegetal. Por exemplo, o óleo de planta e/ou vegetal pode ser óleo de girassol.

[00105] Tipicamente, no processo da invenção, o óleo de planta e/ou vegetal pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 1 % a cerca de 10 % de óleo de planta e/ou vegetal, tal como a partir de cerca de 2,5 % a cerca de 7,5 % ou cerca de 5 %.

[00106] No processo da invenção, o extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja pode ser conforme anteriormente definido em relação à composição da invenção.

[00107] O extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja usado no processo da invenção pode estar em qualquer forma, tal como um líquido ou um sólido. Por exemplo, o extrato de Quillaja pode ser usado na forma de um sólido, tal como um pó.

[00108] Tipicamente, no processo da invenção, a Quillaja pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 0,5 % a cerca de 5 % de Quillaja, tal como a partir de cerca de 1 % a cerca de 3 % ou cerca de 2 %.

[00109] No processo da invenção, o óleo de planta e/ou vegetal e o extrato de Quillaja podem ser misturados usando agitação.

[00110] A mistura da solução aquosa de curcuminoides, solução aquosa de goma arábica, óleo de planta e/ou vegetal e Quillaja conforme definido acima fornece uma emulsão.

[00111] A emulsão resultante pode ser seca usando métodos conhecidos na técnica para fornecer uma composição que compreende partículas (tais como micelas) que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1000 nm, 1100 nm, 1200 nm, 1300 nm, 1400 nm ou 1500 nm a cerca de 9000 nm, 8000 nm, 7000 nm, 6000 nm, 5000 nm, 4000 nm, 3000 nm ou 2000 nm, tal como de cerca de 1000 nm a cerca de 6000 nm. As partículas também podem ter um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 700 nm ou a partir de cerca de 200 nm a cerca de 600 nm, tal como a partir de cerca de 300 nm a cerca de 500 nm ou cerca de 400 nm. Tipicamente, a emulsão é seca por pulverização.

[00112] O processo da invenção pode, opcionalmente, incluir uma etapa adicional de remoção de solvente, conforme necessário, a fim de fornecer um produto substancialmente seco, isto é, um produto onde pelo menos 90%, tal como pelo menos 95 % ou 99 % da água presente foram removidos. Métodos e Usos

[00113] A elevada solubilidade em água e estabilidade da composição da invenção significa que a composição da invenção pode ser usada para melhorar a bioacessibilidade, a bioeficácia, a biodisponibilidade e/ou a bioatividade de curcuminoides em mamíferos.

[00114] A melhoria da bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides permite que a composição da invenção seja usada para prevenir e/ou tratar doenças onde, no passado, a fraca solubilidade aquosa e estabilidade dos curcuminoides era um problema.

[00115] Assim, a presente invenção fornece um método para melhorar a bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos que compreende administrar os ditos curcuminoides na forma de uma composição da invenção, conforme anteriormente definido.

[00116] O método pode ser denominado daqui em diante como o "método da invenção".

[00117] A presente invenção também fornece o uso de uma composição da invenção, conforme anteriormente definido, para melhorar a bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos.

[00118] O uso pode ser denominado daqui em diante como o "uso da invenção".

[00119] No método ou usos descritos no presente documento, a melhoria na bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos pode ser em virtude da composição que confere resistência gastrointestinal aprimorada dos curcuminoides e/ou absorção aprimorada de curcuminoides por células intestinais e/ou melhor circulação sanguínea.

[00120] Nos métodos ou usos descritos no presente documento, a melhoria da bioacessibilidade, biodisponibilidade bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos pode ser em virtude da composição ter uma melhor solubilidade em água e/ou estabilidade aprimorada em um pH entre cerca de 4 a cerca de 7.

[00121] Assim, a presente invenção fornece um método para melhorar a solubilidade em água e/ou estabilidade de pH de curcuminoides, em que o método compreende administrar os ditos curcuminoides na forma de uma composição da invenção, conforme anteriormente definido.

[00122] A presente invenção também fornece o uso de uma composição, conforme anteriormente definido, para melhorar a solubilidade em água e/ou estabilidade de pH de curcuminoides.

[00123] Nos métodos ou usos descritos no presente documento, os curcuminoides podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em curcumina e seus metabólitos de fase I ou fase II, desmetoxicurcumina e seus metabólitos de fase I ou fase II, bisdemetoxicurcumina e seus metabólitos de fase I ou fase II e misturas dos mesmos. Por exemplo, os metabólitos de fase I e/ou de fase II podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em glucuronídeo de curcumina, sulfato de curcumina, glucuronídeo de DMC, sulfato de DMC, glucuronídeo de BDMC, sulfato de BDMC, tetra-hidrocurcumina (THC), glucuronídeo de THC, sulfato de THC, hexa-hidrocurcumina (HHC), glucuronídeo de HHC, sulfato de HHC e misturas dos mesmos.

[00124] Nas composições, métodos ou usos descritos no presente documento, os curcuminoides podem estar em sua forma não metabolizada, por exemplo, as formas de curcumina DMC e BDMC, as quais não sofreram adição de glucuronídeo ou sulfato.

[00125] Nos métodos e usos descritos no presente documento, o mamífero pode ser um ser humano.

[00126] Conforme usado no presente documento, o termo "biodisponibilidade" pode ser definido como a fração do componente ingerido disponível no local de ação para uso em funções fisiológicas normais e é determinado por meio de ensaios in vivo (Guerra A., Etienne-Mesmin L., Livrelli V. et al. (2012) Relevance and Challenges in Modeling Human Gastric and Small Intestinal Digestion. Trends Biotechnol 30: 591–600). A biodisponibilidade é o resultado de três etapas principais: digestibilidade e solubilidade do elemento no trato gastrointestinal; absorção do elemento pelas células intestinais e transporte para a circulação; e incorporação, a partir da circulação, da entidade funcional ou alvo (Wienk K.J.H., Marx J.J.M., Beynen A.C. (1999) The Concept of Iron Bioavailability and Its Assessment. Eur J Nutr 38: 51–75; Etcheverry P., Grusak M.A., Fleige L.E. (2012) Application of In Vitro Bioaccessibility and Bioavailability Methods for Calcium, Carotenoids, Folate, Iron, Magnesium, Polyphenols, Zinc and Vitamins B6, B12, D and E. Front Physiol 3:1–21).

[00127] Conforme usado no presente documento, o termo "bioacessibilidade" pode ser definido como a fração de um composto que é liberada de sua matriz alimentícia dentro do trato gastrointestinal e, portanto, torna-se disponível para absorção intestinal (tipicamente estabelecida a partir de procedimentos in vitro). Ela inclui a sequência de eventos que ocorrem durante a digestão dos alimentos para transformação em material potencialmente bioacessível, mas exclui a absorção/assimilação através do tecido epitelial e do metabolismo pré- sistêmico (intestinal e hepático). (Alegría A., Garcia-Llatas G., Cilla A. (2015) Static Digestion Models: General Introduction em: Verhoeckx K. et al. (eds) The Impact of Food Bioactives on Health. Springer, Cham).

[00128] Conforme usado no presente documento, o termo "bioatividade" pode ser definido como a forma como o nutriente ou composto bioativo é transportado e atinge o tecido alvo, como ele interage com biomoléculas, o metabolismo ou biotransformação que pode experimentar e a geração de biomarcadores e as respostas fisiológicas induzidas (Alegría A., Garcia-Llatas G., Cilla A. (2015) Static Digestion Models: General Introduction em: Verhoeckx K. et al. (eds) The Impact of Food Bioactives on Health. Springer, Cham). Breve Descrição das Figuras

[00129] Figura 1 - Estruturas químicas dos curcuminoides da cúrcuma.

[00130] Figura 2 - Metabólitos de curcumina de fase I e fase II.

[00131] Figura 3 - Metabólitos bacterianos da curcumina.

[00132] Figura 4 - Efeito do pH sobre a cor da composição da invenção dissolvida em água desmineralizada (0,4 %).

[00133] Figura 5 - O perfil de DLS da composição da invenção.

[00134] Figura 6 - O potencial Z da composição da invenção e componentes individuais da composição em diferentes pHs.

[00135] Figura 7 - Imagem de microscopia de varredura eletrônica (SEM) da composição da invenção a x300.

[00136] Figura 8 - Imagem de microscopia de varredura eletrônica (SEM) da composição da invenção a x1300.

[00137] Figura 9 - Imagem de microscopia de varredura eletrônica (SEM) da composição da invenção a x9200.

[00138] Figura 10 - Atividade de LDH medida no sobrenadante apical coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de incubação, dados do extrato padrão de curcumina. As barras representam a média ± SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00139] Figura 11 - Atividade de LDH medida no sobrenadante apical coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de incubação, dados do extrato de curcumina padrão com dados normalizados para a amostra TB + cólon48h (100 %). As barras representam a média ± SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00140] Figura 12 - Atividade de LDH medida no sobrenadante apical coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de incubação, dados da formulação de fitossoma de cúrcuma. As barras representam a média ± SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00141] Figura 13 - Atividade de LDH medida no sobrenadante apical coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de incubação, dados da formulação de fitossoma de cúrcuma com dados normalizados para a amostra TB + cólon 48h (100 %). As barras representam a média ± SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00142] Figura 14 - Atividade de LDH medida no sobrenadante apical coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes dos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de incubação, dados da formulação com base em Quillaja. As barras representam a média ± SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00143] Figura 15 - Atividade de LDH medida no sobrenadante apical coletado das células Caco-2 tratadas com amostras provenientes de diferentes compartimentos do trato gastrointestinal após 4h de incubação, dados da formulação com base em Quillaja com dados normalizados para a amostra TB + cólon48h (100 %). As barras representam a média ± SEM. PP: produto puro; SI: intestino delgado; ST: estômago; TB: tampão de transporte. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias a p < 0,05, p < 0,01 e p < 0,001, respectivamente, comparado com TB + cólon48h.

[00144] Figura 16 - Evolução da ingestão dietética ao longo dos períodos de aclimatação e habituação de grupos de camundongos sacrificados no mesmo momento. Ingestão dietética média diária (g) dos diferentes grupos experimentais durante os períodos de aclimatação (J0-J7) e habituação (J8-J14).

[00145] Figura 17 - Evolução do peso corporal ao longo dos períodos de aclimatação e habituação de grupos de camundongos sacrificados no mesmo momento. Peso corporal médio (g) dos diferentes grupos experimentais durante os mesmos períodos. Os dados são representados como média ± SEM.

[00146] Figura 18 - Curso de tempo dos níveis totais de curcuminoides (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) em plasma de camundongo após uma única dose oral de formulação de fitossoma de cúrcuma versus extrato de cúrcuma padrão que contém 300 mg/kg de curcuminoides. *, **, ***: A formulação de fitossoma de cúrcuma significativamente diferente (t-teste post-hoc) em cada ponto de tempo do extrato de cúrcuma padrão (p < 0,05, p < 0,01, p < 0,001 respectivamente).

[00147] Figura 19 - Curso de tempo dos níveis totais de curcuminoides (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) em plasma de camundongo após uma única dose oral da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção versus extrato de cúrcuma padrão que contém 300 mg/kg de curcuminoides. *, **, ***: A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção significativamente diferente (t- teste post-hoc) em cada ponto de tempo do extrato de cúrcuma padrão (p < 0,05, p < 0,01, p < 0,001 respectivamente).

[00148] Figura 20: Curcuminoides e metabólitos totais (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) (ppm) em função do tempo (h) após o consumo das diferentes formulações (n = 72 por formulação). ▫, ▫▫: fitossoma de cúrcuma significativamente diferente do extrato padrão de cúrcuma (p < 0,05, p < 0,01, respectivamente); *, **, ***: A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção significativamente diferente do extrato de cúrcuma padrão (p < 0,05, p < 0,01, p < 0,001 respectivamente).

[00149] Figura 21 - Área sob a curva AUC (0-8h) correspondente das diferentes formulações.

[00150] Figura 22 - Área sob a curva AUC (0-ɲ) correspondente das diferentes formulações.

[00151] Figura 23 - Cmax (concentração em Tmax) das diferentes formulações.

[00152] Figura 24 - Representação gráfica da dose normalizada de AUC0-24h para a população ITT.

[00153] Figura 25 - Representação gráfica da dose normalizada de AUC0-8h para a população ITT.

[00154] Figura 26 - Representação gráfica da dose normalizada de AUC0-ɲ para a população ITT.

[00155] Figura 27 - Representação gráfica da AUC0-24h para a população ITT.

[00156] Figura 28 - Representação gráfica da AUC0-8h para a população ITT.

[00157] Figura 29 - Representação gráfica da AUC 0-ɲ para a população ITT.

[00158] Figura 30 - Representação gráfica da Cmax normalizada para a população ITT.

[00159] Figura 31 - Representação gráfica da Cmax para a população ITT.

[00160] Figura 32 - Representação gráfica da biodisponibilidade relativa entre 0 e 24 horas para a população ITT.

[00161] Figura 33 - Representação gráfica da biodisponibilidade relativa entre 0 e 8 horas para a população ITT.

[00162] Figura 34 - Representação gráfica da biodisponibilidade relativa entre 0 e infinito para a população ITT.

[00163] Figura 35 - Representação gráfica da meia-vida para a população ITT.

[00164] Figura 36 - Representação gráfica da constante da taxa de eliminação terminal para a população ITT.

[00165] Figura 37 - Representação gráfica de Tmax para a população ITT.

[00166] Figura 38 – Ilustração dos gráficos de caixa e whiskers para os parâmetros de AUC. Exemplos

[00167] A presente invenção será ainda descrita com referência aos exemplos não limitativos a seguir. Exemplo 1 - Preparação de solução alcalina de curcumina orgânica

[00168] Uma mistura de curcuminoides em água foi preparada usando um extrato de curcuminoides purificado orgânico (pelo menos a

10 %, mas preferivelmente a 95 % de pureza (curcuminoides totais)) em água destilada (3 volumes de peso de pó/água). Exemplo 2 - Preparação de uma composição da invenção

[00169] Uma mistura de goma arábica a 58 % (substrato) foi preparada usando água destilada (3 volumes de peso de pó/água). 500 ml da solução aquosa de goma arábica foram adicionados 500 ml da solução curcuminoide preparada no Exemplo 1 sob agitação (5000 rpm) e à mesma foram adicionados 5 % de óleo de girassol orgânico e 2 % de Quillaja orgânica padronizada em saponinas.

[00170] A mistura resultante foi agitada a 5000 rpm durante dez minutos. A emulsão resultante foi, então, seca por pulverização. Exemplo 3 - Caracterização de uma composição da invenção

[00171] O tamanho e a morfologia da composição da invenção foram analisados por meio de dispersão dinâmica de luz (DLS) e potencial zeta (potencial Z) e microscopia de varredura eletrônica (SEM). Para análises DLS e de potencial zeta, um Zetasizer Nano ZS (NanoZS90, Malvern Instrument Ltda., Reino Unido) com um laser de He/Ne (λ = 633 nm) em um ângulo de dispersão fixo de 90° em temperatura de (25 ± 0,1°C) foi usado.

[00172] As amostras usadas estavam na forma de emulsão líquida (última etapa antes da secagem). As amostras foram suspensas em água desmineralizada na concentração em volume de 0,4 % e 1 minuto de ultrassom foi aplicado. A análise DLS foi realizada imediatamente nestas amostras (tempo de medição = 60 segundos). A análise do potencial zeta foi realizada em uma ampla faixa de pH (de 2 a 11).

[00173] As amostras foram preparadas e analisadas em diferentes pHs como segue usando soluções de HCl a 0,1 M e NaOH a 0,1 M. As 10 amostras (pH = 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 e 11) obtidas foram armazenadas em temperatura ambiente (23 °C) (Figura 4).

[00174] Conforme mostrado na Figura 4, a cor da composição da invenção em água é determinada pelo pH. A forma cetônica (amarela) é a forma predominante presente em solução quando o pH varia de ácido a neutro (de 2 a 7). Em um pH de 8 e 9, a cor da solução muda para laranja e, em um pH de 10 e 11, uma cor avermelhada translúcida é predominante. A mudança de cor se deve à desprotonação sequencial de grupos hidroxila da molécula de curcumina impulsionada pelo aumento do pH, o que dá uma maior solubilidade e instabilidade à curcumina.

[00175] Os resultados da análise DLS são mostrados na Figura 5. Há dois grupos de indivíduos com tamanho de partícula. Um centralizado em 616 ± 160 nm (20,8% do total de indivíduos) e o mais interessante centralizado em 188 ± 42nm (79,2% do total de indivíduos).

[00176] O tamanho médio de partícula hidrodinâmica de curcumina carregada em solução aquosa (pH de 5,4) foi de 476,5 nm com um índice de polidispersidade (PolyDispersity Index, PDI) de 0,337.

[00177] A Figura 6 mostra o potencial Z da composição da invenção em diferentes pHs (de 2 a 11). Quanto maior o potencial Z, mais instável é a mistura. A composição da invenção tem um potencial Z negativo entre um pH de 2 e um pH de 11. As partículas são negativamente carregadas na fase aquosa. Em um pH de 2, o potencial Z está próximo de 0 (ponto isoelétrico: pH para o qual o potencial é zero), onde temos uma zona de instabilidade das emulsões. Entre um pH de 2 e um pH de 4, o potencial Z é relativamente baixo (< 25 mV) e, em um pH maior ou igual a 4, a amostra entra em uma zona de estabilidade. Esta estabilidade é fortemente confirmada a partir de um pH de 5. Uma rápida mudança no ponto isoelétrico foi observada em um pH de 8,0, o potencial zeta da curcumina carregada foi surpreendentemente maior na faixa de um pH de 2 a 7. Na fase aquosa em pHs < 4,0, a curcumina carregada geralmente está em seu estado de energia superficial mais baixo. Em um pH de 8,0, a curcumina carregada provavelmente orientará seu lado de baixa carga eletrônica para a goma arábica e exporá seu lado de alta carga eletrônica para interagir com a água, o que leva a um potencial zeta elevado.

[00178] A Figura 6 mostra claramente que a composição reivindicada é estável quando dispersa em uma solução aquosa em um pH acima de

4. Exemplo 4 - Distribuição de tamanho de partícula (PSD) de uma composição da invenção usando CQ-MO-304 Materiais e Reagentes Material - Mastersizer 3000 da Malvern Instrument ou equivalente; - Unidade de dispersão de amostras Hydro 2000SM ou equivalente (para fase líquida); - Unidade de dispersão de amostras Malvern AERO S ou equivalente (para fases sólidas). Reagente - Água Procedimento Parâmetros Analíticos - tempo de fundo: 10 segundos - tempo de medição @ 10 segundos - índice de refração da água destilada: 1,33 - cálculo do resultado: finalidade geral - velocidade da bomba/agitação: 1800 RPM - dispersante líquido: água - dispersante sólido: ar ambiente Parâmetros Específicos - 100705 (índice de refração: 1, adsorção: 1) - 100019 (índice de refração: 1, adsorção: 2) - 3CAA0075 e 3CAA0076 (Composição da invenção)

[00179] Uma amostra da composição da invenção foi misturada com água destilada e uma amostra foi testada usando uma unidade Hydro 2000SM ou Mastersizer 3000 (usando uma unidade Scirocco 2000). Resultados

[00180] Vários lotes da composição da invenção, obtidos após secagem e moagem, foram testados de acordo com o método supracitado. Os resultados são fornecidos na Tabela 1 abaixo. Tabela 1: Distribuição do tamanho de partícula da composição da invenção (onde (D90) corresponde a 90% da população de tamanho de partícula e (D4:3) corresponde à média do momento em volume da população de tamanho de partícula). Referência do moinho de PS (D90) PS (D4:3) Nome do Produto em µm em µm esferas Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,3 1,7 esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,4 1,6 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,5 2,1 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 2,6 1,6 Moída em esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 2,4 1,4 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,5 1.8 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,2 1,5 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,1 1,5 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 2,7 1,3 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,1 1,5 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,5 1,7 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 2,7 1,4 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 4,4 2.0 esfera

Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,1 1,5 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,4 1,6 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,2 1,6 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,9 1,7 esfera Turmipure Melhorada 30 % - Moída em 3CAA0076 3,9 1.8 esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 2,9 1,4 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,1 1,4 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,1 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,3 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,2 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,4 1,6 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,2 1,6 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,1 1,4 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,2 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 2,9 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,2 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,2 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,1 1,7 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 2,9 1,4 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 2,96 1,41 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,39 1,59 Moída em esfera

Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3,2 1,5 Moída em esfera Turmipure Orgânica Melhorada 30 % - 3COA0004 3 1,4 Moída em esfera Exemplo 5 - Morfologia de uma composição da invenção (através de microscopia de varredura eletrônica, SEM)

[00181] Para a análise SEM, as amostras foram preparadas como segue: A composição da invenção na forma de pó foi depositada no porta-amostras simplesmente pulverizando. Seguiu-se a metalização dos depósitos de platina/paládio e, em seguida, observação e disparo por um microscópio de varredura eletrônica equipado com detector de raios X em dispersão de energia.

[00182] As imagens de SEM mostradas nas Figuras 7, 8 e 9 fornecem a visualização da composição da invenção.

[00183] A composição da invenção mostra conjugado auto-montado em micelas esféricas com um tamanho de +/- 170 nm. A morfologia aproximadamente esférica na análise SEM corroborou a análise de medição de tamanho feita pela técnica de dispersão dinâmica de luz.

[00184] A partir de SEM, pode ser visto que as partículas na composição da invenção mostraram claramente o revestimento externo de quitosana que estava ausente nas nanopartículas de lecitina não revestidas. Descobriu-se que a curcumina está bem dispersa no núcleo de lecitina das nanopartículas. Medições por SEM também corroboraram evidências de geometria aproximadamente esférica e a rugosidade da superfície indica a absorção da superfície. Isto sugere que a força motriz deste tipo de adsorção é a interação eletrostática direta ou a interação íon-íon. Exemplo 6 - Teste do efeito de uma composição da invenção para aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides em um modelo in vivo do trato gastrointestinal humano e células absorventes intestinais

[00185] O trato gastrointestinal (GIT) humano é uma das principais portas de entrada do corpo humano. Após a ingestão oral de alimentos, bebidas ou medicamentos, o intestino é o primeiro local de contato entre os produtos ingeridos e o hospedeiro. Para exercer sua atividade biológica, os compostos têm primeiro de passar pelo estômago, onde o ambiente ácido e a presença de enzimas digestivas podem levar a modificações químicas ou enzimáticas. Depois de deixar o estômago, os compostos ingeridos chegam ao intestino delgado, no qual a maior parte das enzimas metabólicas do hospedeiro é secretada, possivelmente levando a outras modificações enzimáticas. O composto, na sua forma original ou modificada, pode ser subsequentemente absorvido e entrar na circulação ou pode ainda passar pelo intestino. Aqui, os compostos alimentícios podem ter uma atividade biológica local ao entrar em contato com a complexa comunidade microbiana presente no íleo terminal (última porção do intestino delgado) e no cólon (Alegria et al., 2015).

[00186] Os estudos em seres humanos são certamente uma das formas mais representativas de estudar os diferentes processos intestinais. No entanto, eles demandam muito trabalho e tempo, são muito caros e não permitem estudos mecanísticos.

[00187] Em seres humanos, o intestino pode ser considerado uma caixa preta que permite quantificar a entrada e a saída, mas investigar os processos intestinais subjacentes em seus diferentes compartimentos é difícil em virtude de questões de amostragem. Além disso, as restrições éticas limitam a aplicação geral de testes em seres humanos.

[00188] Portanto, tecnologias de simulação in vitro bem projetadas constituem uma alternativa muito útil para estudos em seres humanos e animais. Por serem representativos de processos específicos, tais modelos permitem estudos aprofundados reproduzíveis destes processos sem restrições éticas. A configuração e amostragem mais fáceis permitem estudos de rendimento médio a alto com custos mais baixos. No entanto, a falta de um ambiente hospedeiro fisiológico é a limitação mais importante destes modelos. No entanto, o uso de culturas de células in vitro padronizadas usando linhagens de células de origem humana constitui uma maneira rápida e reproduzível de estudar os efeitos finais dos compostos na mucosa intestinal. Além disso, uma extensa investigação in vitro permite projetar cuidadosamente estudos subsequentes em animais ou seres humanos, economizando tempo e dinheiro.

[00189] Abordagens in vitro de simulação GIT cuidadosamente projetadas constituem uma excelente configuração de rastreio de alto rendimento para avaliar o destino metabólico putativo de ingredientes alimentícios selecionados em diferentes concentrações. Estes ingredientes podem ser modificados ou modificar a comunidade bacteriana no intestino e, portanto, atingir a mucosa intestinal intactos ou na forma de um subproduto modificado. A biodisponibilidade oral de compostos dietéticos é definida como a fração da dose administrada capaz de ser absorvida pelas células intestinais e que está disponível para uso ou armazenamento.

[00190] A biodisponibilidade dos compostos dietéticos depende de muitos fatores, particularmente o estado nutricional e fisiológico do indivíduo, a conjugação do composto com outros nutrientes e/ou sais biliares, a degradação enzimática do composto por enzimas digestivas e a capacidade das bactérias associadas ao intestino de metabolizá-los. O modelo gastrointestinal in vitro oferece a possibilidade de rastrear um grande conjunto de moléculas de forma rápida e econômica em experimentos de curto prazo.

[00191] A abordagem a seguir permite avaliar rapidamente o destino intestinal de compostos dietéticos após a digestão e fermentação no cólon. Isto, associado a modelos celulares in vitro que mimetizam o epitélio intestinal humano, permitem investigar a biodisponibilidade dos compostos intactos e modificados, aumentando a produção científica e a relevância comercial.

[00192] Primeiramente, ensaios de rastreio de curto prazo foram realizados como uma ferramenta para avaliar o destino digestivo de formulações com base em curcumina, com diferentes propriedades de solubilidade.

[00193] Os resultados destes experimentos foram, então, aplicados a células Caco-2 in vitro para investigar a fração biodisponível das diferentes formulações comparado com suas formas não modificadas/não digeridas.

[00194] Além disso, a toxicidade celular foi medida a fim de comparar os efeitos citotóxicos putativos das diferentes frações digestivas.

[00195] Os ensaios de rastreio de curto prazo consistiram na incubação sequencial (estômago, intestino delgado, cólon) de (uma) dose(s) representativa(s) dos principais compostos selecionados sob condições simuladas para o intestino grosso com um inóculo bacteriano representativo.

[00196] Uma suspensão intestinal coletada do compartimento de cólon ascendente do Simulator of the Human Intestinal Microbial Ecosystem (SHIME) foi usada (Van de Wiele et al., 2015).

[00197] Este inóculo consiste em uma comunidade microbiana estável que se adapta, tanto em estrutura quanto em atividade, às condições ambientais presentes no cólon proximal.

[00198] As seguintes formulações/composição com base em curcumina foram avaliadas:

1. Um extrato de curcumina padrão (Curcuma longa) - que contém uma mistura de 3 curcuminoides (curcumina - 75%, desmetoxicurcumina (DMC) - 15 a 20% e bidemetoxicurcumina (BDMC) - 5 a 10 %).

2. Uma formulação de controle (produto de fitossoma de cúrcuma

Thorne com MerivaÒ, cuja formulação compreende 18-22 % de curcuminoides, onde a curcumina e a lecitina de soja presentes são formuladas em uma proporção em peso de 1:2 (fitossoma) e duas partes de celulose microcristalina são, então, adicionadas para melhorar a fluidez, com um teor geral de curcumina no produto final de cerca de 20%).

3. Uma composição conforme usada nos métodos/usos da invenção que compreende 8,6 % de extrato de cúrcuma (com mais de 6 % de curcuminoides), 15,9 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de Quillaja e 73,5 % de amido modificado) (também denominada no presente documento como Forma I).

[00199] O ensaio de rastreio de curto prazo consistiu na incubação sequencial das três formulações sob condições do estômago, intestino delgado e cólon.

[00200] As formulações/composições foram testadas para atingir uma concentração de curcuminoides de 0,5 g/L no compartimento do estômago (a quantidade real em mg foi calculada com base na % de curcuminoides dentro de cada produto - conforme mostrado na Tabela 2).

[00201] As diferentes formulações/composições foram, então, incubadas durante 1 hora (h) a 37°C, pH de 2,0, na presença de pepsina.

[00202] O intestino delgado foi, então, simulado pela adição de enzimas pancreáticas e sais biliares e as amostras foram incubadas a 37 °C durante um período total de 3h.

[00203] Finalmente, no terceiro estágio de incubação, o cólon foi simulado pela adição de um inóculo fecal representativo coletado do SHIME e um meio nutritivo rico. As incubações do cólon foram realizadas a 37°C, sob agitação e anaerobiose, com duração total de 48h.

[00204] Cada formulação/composição foi testada em triplicata para controlar a variabilidade biológica.

[00205] Observe que estes experimentos foram planejados para respeitar os tempos de residência específicos dos ingredientes alimentícios no trato gastrointestinal. Considerando os volumes dentro de cada compartimento, a concentração de curcuminoides testados foi: 0,5 g/L no estômago, 0,35 g/L no intestino delgado e 0,1 g/L no cólon. Para os experimentos de transporte de células, estas amostras foram diluídas 10 vezes mais. Tabela 2: Formulações/composições com base em curcumina testadas e a respectiva percentagem de curcuminoides na formulação/composição. A porcentagem de curcuminoides foi considerada para o cálculo da quantidade em mg a ser adicionada ao compartimento do estômago. Em negrito está representada a forma nativa. % de Teor de curcuminoides Descrição Curcumina DMC BDMC Total Extrato de pó de cúrcuma padrão (95 % de 79,42 14,72 2,03 96,18 curcuminoides) Fitossoma de cúrcuma (produto Thorne 13,43 2,70 0,28 16,40 com MerivaÒ) Uma composição conforme usada nos métodos/usos da invenção que compreende extrato de cúrcuma, óleo de 5,50 0,77 0,08 6,35 girassol, extrato de Quillaja e amido modificado

[00206] Amostras para cada formulação/composição foram coletadas nos seguintes pontos de tempo: - Estômago: 30 min e 60 min - Intestino delgado: 60, 120 e 180 min - Dois pontos: 2, 4, 6, 24 e 48 horas

[00207] As amostras foram, então, analisadas quanto ao seu teor de curcuminoides (curcumina, DMC e BDMC) usando cromatografia de líquido de alta pressão (HPLC) acoplada à espectrometria de massa.

[00208] Uma curva de calibração foi preparada na faixa de 2-1000 ng/mL para cada 3 curcuminoides (Phytolab, Vestenbergsgreuth, Alemanha) adicionando 54 ppb de curcumina-d6 (TLC Pharmachem, Ontário, Canadá) como um padrão interno para assegurar a estabilidade do tempo de retenção e variação de correção do instrumento. Acetonitrila foi usada como diluente para cada solução. Para a determinação de curcuminoide livre, exatamente 450 µL de solução de padrão interno (60 ng/mL) foram carregados em 50 µL de amostra de plasma na placa com 96 cavidades Captiva (ND lipídios da Agilent). Depois de misturar e filtrar, o eluato está pronto para ser injetado no sistema de LC/MS. As placas Captiva ND Lipid são projetadas para remover eficazmente os fosfolipídios do plasma. Para a determinação dos metabólitos de curcuminoides conjugados totais (metabólitos de glucuronídeo e sulfato), 100 µL da amostra de plasma foram misturados com 100 µL de solução de enzima (1000 unidades/mL de glucuronidase, Sigma #G7017; ou sulfatase, Sigma #S9626, 100 unidades/mL) durante 2 horas a 37°C. Após esta etapa de hidrólise, 50 µL da solução são misturados com 450 µL de acetonitrila na placa com 96 cavidades Captiva também. O procedimento da amostra é o mesmo que para os curcuminoides livres, misturando e filtrando antes da injeção.

[00209] As condições de LC/MS foram, então, as seguintes. O amostrador automático (5°C) e o sistema de LC usado foi um sistema integrado Agilent Infinity 1290. O espectrômetro de massa Agilent 6420 com quadrupolo triplo foi usado durante o estudo, com ionização por eletropulverização. Os metabólitos foram eluídos da coluna BEH Shield RP 18 (100x2,1, 1,7 µm; Waters) com uma fase móvel que consiste em ácido fórmico a 0,1 % em água de grau para HPLC (solvente A) e ácido fórmico a 0,1% em acetonitrila (solvente B), em uma vazão de 0,5 mL/min.

A eluição foi em gradiente de 40-80 % de B a 0-6 min.

O volume de injeção foi de 2 µL para padrão e amostras.

Para cada composto de referência, uma transição relevante dos íons precursores para produto foi detectada com o uso do modo de monitoramento de reações múltiplas (Multiple Reaction Monitoring, MRM). Para cada um dos 3 analitos foi determinado em testes de varredura completa MS1 e os íons de produto em experimentos de MS/MS.

As transições de MRM de cada analito foram otimizadas usando infusão direta e solução de software de estação de trabalho Optimizer B.08.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA). Consulte a Tabela 2a para as condições ideais selecionadas.

Os parâmetros do espectrômetro de massa foram definidos da seguinte forma: fonte de ESI tanto no modo negativo quanto positivo; vazão do gás de secagem (N2), 10 L/min; temperatura do gás, 350 °C; nebulizador, 40 psi; e capilar, 4,0kV.

O sistema de MS foi totalmente calibrado antes de funcionar de acordo com as orientações do fabricante.

A análise de dados foi realizada no Agilent MassHunter Quantitative/Qualitative Analysis B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA). Tabela 2a: Tempos de retenção (Tr), transições de monitoramento de reações múltiplas (MRM) e parâmetros de detecção de espectrometria de massa em tandem otimizada (MS/MS) de 3 curcuminoides e padrão interno Prec.

Prod.

Tempo Com- Tr ISTD Íons Íons de De resi- Frag CE Pola- postos (min) ? massa massa dência (V) (V) ridade Q1 (Da) Q3 (Da) (ms) Curcumina 291,1 110 12 3,25 sim 375,2 d6 180,1 110 18 285,1 98 13 Curcumina 3,29 Não 369,1 177,1 98 25 positi- 50 255,1 110 12 vo DMC 3,49 Não 339,1 177,1 110 16 225,1 110 12 BDMC 3,68 Não 309,1 119,1 110 36

[00210] A Tabela 3 mostra a concentração em curcuminoides obtidos entre os compartimentos do trato intestinal durante a digestão.

[00211] Surpreendentemente, as concentrações após a digestão no estômago após 60 min e no intestino delgado após 120 min e 180 min para a composição usada nos métodos/usos da invenção foram superiores àquelas obtidas para o extrato de cúrcuma em pó padrão, demonstrando uma melhor resistência à digestão para a composição conforme usado nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato padrão. Além disso, as concentrações após a digestão no estômago após 60 min e no intestino delgado após 120 min e 180 min para a composição conforme usado nos métodos/usos da invenção foram maiores do que aquelas da formulação de fitossoma de cúrcuma comparativa, demonstrando uma melhor resistência à digestão para a composição conforme usado nos métodos/usos da invenção comparado com o fitossoma da cúrcuma comparativo.

[00212] A Tabela 4 mostra a porcentagem de curcuminoides que permaneceram nos compartimentos intestinais após a digestão de acordo com as concentrações iniciais (0,5 g/l ou 500 mg/l de curcuminoides no compartimento do estômago no início dos experimentos). Os resultados mostram claramente que, surpreendentemente, os curcuminoides provenientes da composição usada nos métodos/usos da invenção tinham uma resistência muito melhor à digestão no estômago e intestino delgado comparado com os curcuminoides provenientes do extrato de cúrcuma padrão e a composição usada nos métodos/usos da invenção são mais protegidas da degradação durante a digestão após o consumo oral do que os curcuminoides do extrato padrão ou a formulação de fitossoma de cúrcuma e que há muito mais curcuminoides acessíveis para absorção no compartimento do intestino delgado após o consumo oral da composição conforme usado nos métodos/usos da invenção do que o consumo oral do extrato padrão ou a formulação de fitossoma de cúrcuma.

Tabela 3: Concentração de curcuminoides nos diferentes compartimentos do trato gastrointestinal durante o processo de digestão para as três formulações Concentra- ção após Fitossoma de cúrcuma (produto Thorne A composição conforme usada nos digestão Extrato de cúrcuma em pó padrão com Meriva®) métodos/usos da invenção (ppm ou mg/l) Curcumina DMC BDMC Total Curcumina DMC BDMC Total Curcumina DMC BDMC Total Inicial 412,915 76,511 10,573 500,000 409,451 82,165 8,384 500,000 433,018 60,678 6,304 500,000 412,915 76,511 10,573 500,000 409,451 82,165 8,384 500,000 433,018 60,678 6,304 500,000

51/136 412,915 76,511 10,573 500,000 409,451 82,165 8,384 500,000 433,018 60,678 6,304 500,000 ST 60 min 239,880 45,610 6,523 292,013 398,600 81,901 11,880 492,381 162,430 31,080 5,108 198,618 345,510 71,428 10,983 427,921 125,390 27,570 4,564 157,524 ND 426,930 88,494 12,595 528,019 Média 175,900 34,753 5,399 216,052 390,347 80,608 11,819 482,774 SD 58,421 9,565 1,011 68,919 41,333 8,606 0,808 50,736 SI 120 min 36,417 8,723 3,772 48,912 107,857 23,464 5,250 136,571 325,371 58,626 11,509 395,506 53,372 11,500 4,407 69,279 108,571 23,957 5,200 137,729 342,014 66,726 10,613 419,353 39,145 9,041 3,940 52,126 109,286 31,286 6,957 147,529 312,314 61,350 9,924 383,588 Média 42,978 9,755 4,040 56,772 108,571 26,236 5,802 140,610 326,567 62,234 10,682 399,482 SD 9,104 1,520 0,329 10,950 0,714 4,380 1,000 6,020 14,886 4,122 0,795 18,211

SI 180 min 36,188 8,150 3,699 48,037 110,000 24,564 5,057 139,621 276,500 54,060 9,117 339,677 34,933 8,500 3,861 47,294 110,714 28,243 5,793 144,750 236,500 46,564 8,105 291,169 40,275 9,211 4,433 53,919 61,329 29,569 6,604 97,501 301,729 58,411 10,343 370,483 Média 37,132 8,620 3,998 49,750 94,014 27,459 5,818 127,291 271,576 53,012 9,188 333,776 SD 2,793 0,541 0,386 3,629 28,309 2,593 0,774 25,926 32,892 5,993 1,121 39,985 Cólon 2h 15,623 11,508 9,989 37,119 7,521 6,810 2,280 16,611 5,248 3,554 1,647 10,449 12,307 9,337 7,965 29,609 8,137 9,334 4,403 21,873 5,783 3,660 1,497 10,939 11,896 11,535 11,990 35,420 6,263 6,628 2,742 15,632 4,820 3,443 1,731 9,994 Média 13,275 10,793 9,981 34,049 7,307 7,590 3,141 18,039 5,284 3,552 1,625 10,461 SD 2,043 1,261 2,013 3,938 0,955 1,512 1,116 3,357 0,482 0,108 0,119 0,473

52/136 Cólon 24h 11,364 5,136 1,785 18,284 7,815 4,405 1,171 13,391 4,408 1,744 0,551 6,703 10,001 4,828 1,820 16,649 7,187 4,392 1,154 12,732 4,427 1,788 0,569 6,783 9,297 4,358 1,249 14,903 0,896 0,734 0,218 1,847 4,073 1,460 0,292 5,824 Média 10,220 4,774 1,618 16,612 5,299 3,177 0,847 9,323 4,303 1,664 0,470 6,437 SD 1,051 0,392 0,320 1,691 3,826 2,116 0,545 6,483 0,199 0,178 0,155 0,532 Cólon 48h 6,469 2,303 0,549 9,320 5,158 2,926 0,727 8,811 2,453 0,870 0,199 3,521 4,992 2,403 0,697 8,091 3,750 2,423 0,614 6,786 2,976 1,197 0,303 4,476 6,383 2,858 0,837 10,077 4,438 2,488 0,609 7,535 3,285 1,192 0,315 4,792 Média 5,948 2,521 0,694 9,163 4,448 2,612 0,650 7,711 2,905 1,086 0,272 4,263 SD 0,829 0,296 0,144 1,002 0,704 0,274 0,067 1,024 0,420 0,188 0,064 0,661 Cada formulação foi testada em triplicata; os resultados apresentam a média e o SD dos 3 experimentos.

DMC: Demetoxicurcumina; BDMC: Bisdemetoxicurcumina; ND: Não determinado; SD: Desvio padrão; ST: Estômago; SI: Intestino Delgado

Tabela 4: Resistência à digestão gastrointestinal (GIT): porcentagem de curcuminoides que permaneceram nos compartimentos intestinais após a digestão de acordo com a concentração inicial Resistência à Extrato de Fitossoma de A composição digestão GIT cúrcuma em pó cúrcuma (produto conforme usada (% da padrão Thorne com MerivaÒ) nos concentração métodos/usos inicial) da invenção Estômago 60 43,21 ± 13,78% ND 96,55 ± 10,15 % min SI 120 min 11,35 ± 2,19 % 28,12 ± 1,20 % 79,90 ± 3,64 % SI 180 min 9,9 5 ± 0,73 % 25,46 ± 5,19 % 66,76 ± 8,00 % Cólon 2h 6,81 ± 0,79 % 3,61 ± 0,67 % 2,09 ± 0,09 % Cólon 24h 3,32 ± 0,34 % 1,86 ± 1,30 % 1,29 ± 0,11 % Cólon 48h 1,83 ± 0,20 % 1,54 ± 0,20 % 0,85 ± 0,13 %

[00213] Os dados mostram a média ± SD da porcentagem da concentração de curcuminoides nos diferentes compartimentos e os diferentes tempos após a digestão comparado com a concentração inicial.

[00214] As seguintes amostras também foram coletadas para os experimentos de transporte em células Caco-2: - Intestino delgado: 120 e 180 min

[00215] O pH das amostras a serem aplicadas às células foi ajustado para 6,5 antes de uso.

[00216] As células Caco-2 são amplamente usadas como modelo celular para a função intestinal, pois são capazes de se diferenciar espontaneamente em células de tipo enterócitos em cultura. Quando cultivadas em suportes semipermeáveis, estas células se desenvolvem em uma monocamada polarizada funcional que se assemelha ao epitélio intestinal, com a presença de enzimas da borda pilosa apical e microvilosidades. Portanto, por adquirirem em cultura características morfológicas e funcionais de enterócitos maduros, são consideradas o modelo "padrão ouro" para experimentos de transporte (Sambuy et al., 2002).

[00217] As células Caco-2 (ATCC) foram semeadas em inserções de 12 Transwell (0,4 μm) em uma densidade de 0,9x105 células/cm2, correspondendo a 1x105 células/inserção. As células foram deixadas se diferenciar até que uma monocamada funcional fosse alcançada (21 dias); os meios apical (600 μL) e basolateral (1500 μL) foram reabastecidos três vezes por semana. No dia do experimento, a função de barreira foi avaliada ao medir a resistência elétrica transepitelial (TransEpithelial Electrical Resistance, TEER) da monocamada. As células foram lavadas com HBSS para remover vestígios de meio e 2 mL de tampão de transporte (Transport Buffer, TB) foram adicionados no lado basolateral. As amostras coletadas nos experimentos de curto prazo foram diluídas em tampão de transporte na proporção de 1:10 (v/v) e administradas apicalmente às células (600 μL). Todos os produtos também foram testados não processados e os pós diluídos em TB em uma concentração de 0,025 mg/mL (as concentrações teóricas finais de curcuminoides testadas para todas as formulações podem ser vistas na Tabela 2a). Estas diluições foram preparadas a partir de soluções de estoque (250 mg/mL) preparadas em HBSS, exceto quanto ao extrato padrão de cúrcuma, o qual foi dissolvido em DMSO, em virtude de sua baixa solubilidade. Como cavidades de controle, usamos amostras de cólon (incubação de 48h) diluídas a 1:10 (v/v) em TB obtido nas passagens durante os experimentos de curto prazo um branco (sem curcumina). O tampão de transporte (TB) consistia em HBSS (pH de 7,4) suplementado com HEPES a 10 mM, D-glicose a 25 mM e 1X antibiótico-antimicótico. As células foram incubadas durante um período total de 4h a 37°C.

[00218] As seguintes amostras foram coletadas:

1. Amostras diluídas que foram usadas para estimular as células (500 μL). Estas correspondem a um ponto de tempo 0h, uma vez que contêm as amostras diluídas antes de serem administradas às células, formulações não processadas diluídas em TB na concentração de 0,025 mg/mL também foram enviadas.

2. Amostras do lado apical coletadas após 2h e 4h de incubação (250 μL cada).

3. Amostras do lado basolateral coletadas após 2h (800 μL) e 4h (1000 μL) de incubação.

4. Amostras das células após 4h de incubação. Estas correspondem à fração que foi absorvida dentro das células. Resumidamente, 1X PBS gelado foi adicionado às células para terminar o transporte. Em seguida, as células foram lavadas mais uma vez com 1X PBS para remover vestígios do produto não internalizado e as células foram permeabilizadas com uma solução de 1X PBS que contém etanol a 20% e Tween-20 a 0,1% (600 μL); após 20 minutos nesta solução, as células foram coletadas em um tubo de 1,5 mL e rompidas e homogeneizadas com o auxílio de uma seringa e agulha de 21G. Os tubos foram centrifugados e o sobrenadante transferido para um novo tubo (450 μL).

[00219] Todas as amostras foram armazenadas a -20°C até a análise por HPLC.

[00220] A fim de avaliar a citotoxicidade das diferentes amostras aplicadas às células Caco-2, a lactato desidrogenase (LDH) liberada pelas células Caco-2 no lado apical (após 4h de incubação) foi avaliada usando um kit LDH-Activity. A LDH é liberada no sobrenadante pelas células após lesão da membrana e, portanto, é um marcador de morte celular.

[00221] A análise estatística foi feita usando uma ANOVA unilateral seguido por um teste de comparação múltipla post-hoc de Dunnett. (*), (**) e (***) correspondem às significâncias em p < 0,05, p < 0,01 e p <

0,001, respectivamente.

[00222] Conforme mostrado nas Figuras 10 a 15, as cavidades de controle (TB + cólon 48h) mostram uma atividade de LDH em torno de 1,0. Conforme é possível observar, para todos os produtos, tanto a forma não digerida quanto as amostras de estômago coletadas após 60 min apresentaram a maior atividade de LDH quando comparado com o controle.

[00223] Em contraste, as amostras do intestino delgado e do cólon mostram níveis comparáveis ou inferiores ao controle. Estes resultados demonstraram que, exceto quanto a amostras provenientes do estômago, todas as amostras não exibiram toxicidade em células Caco- 2 e os resultados dos ensaios que testam o transporte e a biodisponibilidade de curcuminoides das amostras em células Caco-2 podem ser explorados e julgados como válidos, uma vez que foram obtidos a partir de células viáveis.

[00224] Amostras dos compartimentos apical, basolateral e intracelular de células Caco-2 incubadas com produtos não digeridos ou com amostras provenientes do intestino delgado (120 min ou 180 min) foram posteriormente analisadas quanto ao seu teor de curcuminoides (curcumina, DMC e BDMC) e seus teor relativo de metabólitos (sulfato de curcumina, glucuronídeo de curcumina, sulfato de DMC e glucuronídeo de DMC, sulfato de BDMC e glucuronídeo de BDMC), uma vez que as células Caco-2 são conhecidas por expressar UDP- glucuronosiltransferases e sulfotransferases (Siissalo S., Zhang H., Stilgenbauer E., Kaukonen A.M., Hirvonen J., Finel M. The Expression of Most UDP-Glucuronosyltransferases (Ugts) Is Increased Significantly During Caco-2 Cell Differentiation, Whereas UGT1A6 Is Highly Expressed Also in Undifferentiated Cells. Drug Metab Dispos. Novembro de 2008; 36(11): 2331-6) sendo, portanto, capazes de metabolizar a curcumina, DMC e BDMC em seus metabólitos glucuronídeo ou sulfato

(Dempe J.S., Scheerle R.K., Pfeiffer E., Metzler M. Metabolism and Permeability of Curcumin in Cultured Caco-2 Cells. Mol Nutr Food Res. Setembro de 2013; 57(9): 1543-9).

[00225] Os valores do coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) para a transição apical para basolateral foram calculados de acordo com Artursson e Karlsson usando a fórmula: Papp [cm/s] =ሺܸܽ‫݅݌‬Ȁሺ‫ݐ כ ܣ‬ሻሻ ‫ כ‬ሺ‫݋ݏܾܽܥ‬Ȁ‫݅݌ܽܥ‬ሻ onde Vapi é o volume do compartimento apical (0,6 mL), A é a área de superfície da monocamada (1,131 cm²), t é o(s) tempo(s), Cbaso é a concentração (ppm) dos curcuminoides totais e seus metabólitos no compartimento basolateral (soma do composto original e metabólitos) e Capi é a concentração inicial (ppm) de curcuminoides totais no compartimento apical.

[00226] A Tabela 5 representa os valores de Papp para diferentes intervalos de tempo após a exposição apical de células Caco-2 ao extrato padrão ou as 2 formulações diferentes (fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usado nos métodos/usos da invenção). Tabela 5: Valores de Papp de curcuminoides totais e seus metabólitos (expressos como 10-7 cm/s) calculados para diferentes intervalos de tempo após a exposição apical de células Caco-2 ao extrato padrão ou às 2 formulações diferentes Após 2h de Após 4h de Papp (x 10-7 cm/s) incubação incubação Extrato de cúrcuma em pó padrão 2,13 ± 0,23 1,10 ± 0,07 Fitossoma de cúrcuma (produto Thorne com MerivaÒ) 9,94 ± 0,20 (4,7) 5,33 ± 0,25 (4,8) A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção com 41,01 ± 1,37 22,33 ± 0,43 extrato de cúrcuma, óleo de girassol, (19,3) [4,1] (20,3) [4,2] extrato de Quillaja e amido modificado

[00227] Os dados mostram média ± SD. A fold change no Papp em relação ao extrato padrão é mostrada entre parênteses ( ). A fold change no Papp em relação à formulação de fitossoma de cúrcuma é mostrada entre colchetes [ ].

[00228] Conforme mostrado na Tabela 5, os valores do coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) para a transição apical para basolateral foram surpreendentemente mais altos para a composição usada nos métodos/usos da invenção do que para o extrato de cúrcuma padrão, com um aumento de 19,3 vezes e 20,3 no valor de Papp em relação ao extrato padrão de cúrcuma, respectivamente, em 2h e 4h.

[00229] O valor do coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) para a transição apical para basolateral também foi maior para a formulação de fitossoma de cúrcuma, a qual foi usada como um controle positivo para uma formulação com biodisponibilidade aprimorada, em seguida, para o extrato de cúrcuma padrão, com um aumento de 4,7 e 4,8 no Papp em relação ao extrato de cúrcuma padrão, respectivamente, em 2h e 4h. Porém, os resultados mostram que a absorção de curcuminoides por células absortivas Caco-2 foi maior para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção (valor de Papp 4,1 vezes e 4,2 vezes maior em 2h e 4h, respectivamente) comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma comparativa.

[00230] A Tabela 6 representa os valores de Papp após a exposição apical de células Caco-2 às amostras de digestão do intestino delgado (120 ou 180 min) do extrato padrão ou as 2 formulações diferentes (fitossoma de cúrcuma ou a composição usada nos métodos/usos da invenção) usando as concentrações quantificadas de curcuminoides nos compartimentos do intestino delgado em 120 min ou 180 min como Capi. Ele reflete a capacidade de absorção dos curcuminoides da formulação digerida pelas células. Quando o extrato padrão ou as formulações foram digeridos nos compartimentos do estômago e do intestino delgado e, portanto, as amostras provenientes do intestino delgado (120 min ou 180 min) são usadas para medir a absorção de curcuminoides pelas células Caco-2, demonstramos que a absorção de curcuminoides por células absortivas Caco-2 foi maior para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção (valor de Papp 1,8 vezes e 16,4 vezes maior para a amostra de intestino delgado em 120 min ou 180 min, respectivamente) comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00231] A Tabela 7 representa os valores de Papp após a exposição apical de células Caco-2 às amostras de digestão do intestino delgado (120 ou 180 min) do extrato padrão ou as 2 formulações diferentes (fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção) usando as concentrações teóricas de curcuminoides nos compartimentos do intestino delgado em 120 min ou 180 min como Capi, a fim de levar em consideração não apenas a capacidade de absorção das células, mas também a resistência ao processo digestivo. Demonstramos, a partir destes dados, que o nível de curcuminoides que podem atingir o compartimento basolateral (que imita a circulação sanguínea) após digestão gastrointestinal e absorção pelas células Caco-2 durante 120 min e 180 min são muito maiores para a composição usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma padrão (valor de Papp 2,0 vezes e 1,8 vezes maior para a amostra de intestino delgado em 120 min ou 180 min, respectivamente) e comparado com a formulação de fitossoma (valor de Papp 3,4- e 7,1 vezes maior para a amostra de intestino delgado em 120 min ou 180 min, respectivamente). Tabela 6: Valores de Papp de curcuminoides totais e seus metabólitos após exposição apical de células Caco-2 às amostras de digestão do intestino delgado (120 ou 180 min) do extrato padrão ou as 2 formulações diferentes

Após 2h de incubação de Amostras de Amostras de Papp (x 10-8 cm/s) digestão SI 120 digestão SI 180 min min Extrato de cúrcuma em pó padrão 2,42 ± 1,09 7,19 ± 7,70 Fitossoma de cúrcuma (produto 0,59 ± 0,08 0,19 ± 0,06 Thorne com MerivaÒ) A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção com extrato de cúrcuma, óleo de 1,08 ± 0,54 (1,8) 3,08 ± 1,03 (16,4) girassol, extrato de Quillaja e amido modificado

[00232] Os dados mostram média ± SD. A fold change no Papp em relação à formulação de fitossoma de cúrcuma é mostrada entre parênteses ( ). Os valores de Papp são calculados usando as concentrações quantificadas de curcuminoides nos compartimentos do intestino delgado em 120 min ou 180 min como Capi. Tabela 7: Valores de Papp de curcuminoides totais e seus metabólitos após a exposição apical de células Caco-2 às amostras de digestão do intestino delgado (120 ou 180 min) do extrato padrão ou as 2 formulações diferentes Após 2h de incubação de Papp (x 10−9 cm/s) Amostras de Amostras de digestão SI 120 digestão SI 180 min min Extrato de cúrcuma em pó padrão 2,59 ± 0,80 6,90 ± 0,74 Fitossoma de cúrcuma (produto 1,54 ± 0,04 1,79 ± 0,02 Thorne com MerivaÒ) A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção com 5,30 ± 2,44 (2,0) 12,65 ± 0,36 extrato de cúrcuma, óleo de girassol, [3,4] (1,8) [7,1] extrato de Quillaja e amido modificado

[00233] Os dados mostram média ± SD. A fold change no Papp em relação ao extrato padrão é mostrada entre parênteses ( ). A fold change no Papp em relação à formulação de fitossoma de cúrcuma é mostrada entre colchetes [ ]. Os valores de Papp são calculados usando as concentrações teóricas de curcuminoides nos compartimentos do intestino delgado em 120 min ou 180 min como Capi. Exemplo 6 - Teste do efeito de uma composição da invenção para aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides por meio de estudos farmacocinéticos comparativos in vivo em camundongos

[00234] Tendo em vista os resultados obtidos no modelo in vitro que demonstraram que a composição usada nos métodos/usos da invenção exibiram melhor resistência à digestão gastrointestinal e melhor absorção pelas células intestinais, acredita-se que a composição usada nos métodos/usos da invenção (ou seja, uma composição que compreende 8,6 % de extrato de cúrcuma (que compreende mais de 6% de curcuminoides), 15,9 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de Quillaja e 73,5 % de amido modificado), melhorará a biodisponibilidade de curcuminoides comparado com um extrato de cúrcuma padrão em camundongos.

[00235] Portanto, um estudo farmacocinético comparativo foi conduzido em camundongos.

[00236] Camundongos C57Bl/6J Rj machos adultos da Janvier Labs (St-Berthevin, França), com 5 semanas de idade quando de recebimento, foram alojados coletivamente em gaiolas de plástico padrão (n = 4/gaiola). Todos os animais tiveram acesso ad libitum à água e ração em pelotas padrão (Pellet AO4; SAFE, Villemoisson-sur- Orge, França), e foram mantidos em um ambiente com temperatura- (24,0 a 26,0°C) e umidade- (40,0 a 50,0%) controladas em um ciclo de luz de 12 horas (07:00 - 07:00)/escuro de 12 horas.

[00237] Todos os animais foram aclimatados ao novo ambiente durante uma semana após o recebimento. Para assegurar uma aclimatação correta e uma curva de crescimento padrão, a ingestão dietética global e o peso corporal dos animais foram avaliados duas vezes por semana. Após este período de aclimatação, os camundongos foram habituados a receber uma administração per os diária de veículo (sal de sódio de carboximetilcelulose a 1 % (p/v) dissolvido em água destilada em temperatura ambiente, CMC; Ref. #C4888, número de lote: SLBB5612V, SIGMA ALDRICH, St. Quentin Fallavier, FRANÇA) durante seis dias antes do tratamento. Durante este período de habituação, a ingestão dietética global e o peso corporal dos animais foram medidos diariamente. Estas medidas permitiram ter certeza de uma habituação ideal dos animais aos procedimentos de injeção e à manipulação pelos experimentadores.

[00238] Durante os períodos de aclimatação e habituação, os camundongos tiveram acesso ad libitum a uma quantidade pré-pesada de pelotas de ração fresca (Pellet AO4; SAFE, Villemoisson-sur-Orge, França). O restante da comida foi pesado no dia seguinte da medição. Usando uma balança de precisão (THB-600G, PMC Millot; precisão ± 0,01 g), a ingestão dietética global por gaiola (08:40-09:20 da manhã) foi determinada subtraindo o restante da ração da quantidade de ração pré-pesada. A ingestão dietética média diária foi obtida ao dividir este valor pelo número de dias que separam as duas medições e pelo número de animais de cada gaiola. Em cada medição de peso corporal, os camundongos foram pesados pela manhã (08:40-09:20 da manhã).

[00239] No dia anterior ao tratamento (último dia do período de habituação), 120 camundongos jejuaram à noite (17:40-18:20 da tarde). No dia seguinte, os camundongos (n = 40 por formulação) receberam um tratamento agudo por sonda oral (30 ml/kg) de manhã (08:00-09:50 da manhã) com um extrato de cúrcuma em pó padrão, a formulação de fitossoma de cúrcuma como um comparativo ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção (ou seja, uma composição que compreende 8,6 % de extrato de cúrcuma (com mais de 6 % de curcuminoides), 15,9 % de óleo de girassol, 2 % de extrato de Quillaja e 73,5 % de amido modificado).

[00240] Um volume apropriado de Veículo (CMC a 1 % dissolvida em água destilada) foi adicionado em um recipiente adequado sob agitação e o pH foi ajustado para 5,5. Uma quantidade apropriada de formulação pré-pesada foi gradualmente adicionada ao veículo sob agitação constante. Uma vez homogênea, o pH da suspensão obtida foi medido e ajustado para 5,5 se necessário. Para evitar qualquer degradação dos curcuminoides, a suspensão final foi administrada sistematicamente 1h após a preparação. As doses foram calculadas para animais alimentados com 300 mg/kg de curcuminoides totais (consulte Tabela 8). Esta dosagem em camundongos é equivalente a 21,37 mg/kg em seres humanos e 1282 mg assumindo uma pessoa humana de 60 kg (U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers. 2005); Dose Humana Equivalente (mg/kg) = dose animal em mg/kg x (peso animal em kg/peso do ser humano em kg)0,33. As doses foram ajustadas ao peso corporal medido imediatamente antes do jejum. A fim de evitar qualquer impacto do comportamento de alimentação e bebida na absorção intestinal após ingestão oral com a formulação, os animais foram privados de água e alimentos durante as primeiras 12 horas após o tratamento. Tabela 8: Teor de curcuminoides do extrato de cúrcuma padrão e as 2 formulações e a respectiva concentração da suspensão usada para administração do produto a camundongos a 300 mg/kg de peso corporal de curcuminoides no primeiro estudo in vivo

C° da solução de Teor de dosagem Formulação curcuminoides (mg de (g/100g) formulação/ml) Extrato de cúrcuma em pó padrão (95 % de 96,18 10,40 curcuminoides) Fitossoma de cúrcuma (produto Thorne com 16,40 60,98 MerivaÒ) A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção com extrato de cúrcuma, óleo de 6,345 157,60 girassol, extrato de Quillaja e amido modificado

[00241] O sangue foi coletado em 0,5-, 1h-, 2h-, 4h-, 6h-, 8h-, 12h- ou 24h após a dosagem através de punção cardíaca em camundongos anestesiados (n = 5/ponto de tempo/formulação). A anestesia foi realizada por meio de injeção intraperitoneal de uma mistura de Cetamina/Xilazina (100 mg/kg e 15 mg/kg, respectivamente). Para a punção cardíaca, uma seringa de 26G foi inserida entre a oitava e a décima costela esternal, com um ângulo de 45° com o eixo longitudinal formado pelo corpo do animal para penetrar diretamente no ventrículo esquerdo do coração. O sangue foi, então, cuidadosamente coletado para obter um volume final de 0,6-1 ml. Para interesse do método bioanalítico, o sangue foi posteriormente transferido para um tubo de Eppendorf, misturado com sulfato de heparina (200 UI/ml de sangue) e agitado suavemente. Todas as amostras foram centrifugadas durante 15 minutos a 3000 g e 4 °C em 30 minutos após a coleta de sangue para isolar o plasma. O plasma (sobrenadante) foi transformado em alíquotas em um novo tubo de Eppendorf de 0,5 ml. As alíquotas de plasma foram congeladas a -80°C em 1 hora após a centrifugação.

[00242] As dosagens plasmáticas de curcuminoides precursores (curcumina, DMC ou BDMC) e seus metabólitos relativos (glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) foram realizadas através de um método de LC-MS-MS. Uma curva de calibração foi preparada na faixa de 2- 1000 ng/mL para cada 5 curcuminoides (Phytolab, Vestenbergsgreuth, Alemanha) adicionando 54 ppb de curcumina-d6 (TLC Pharmachem, Ontário, Canadá) como um padrão interno para assegurar a estabilidade do tempo de retenção e variação de correção do instrumento. Acetonitrila foi usada como diluente para cada solução. Para a determinação de curcuminoide livre, exatamente 450 µL de solução de padrão interno (60 ng/mL) foram carregados em 50 µL de amostra de plasma na placa com 96 cavidades Captiva (ND Lipids da Agilent). Depois de misturar e filtrar, o eluato está pronto para ser injetado no sistema de LC/MS. As placas Captiva ND Lipid são projetadas para remover eficazmente os fosfolipídios do plasma. Para determinação dos metabólitos de curcuminoides conjugados totais (metabólitos glucuronídeo e sulfato), 100 µL de amostra de plasma foram misturados com 100 µL de solução enzimática (1000 unidades/mL de glucuronidase, Sigma #G7017; ou sulfatase, Sigma #S9626, 100 unidades/ml) durante 2 horas a 37 °C. Após esta etapa de hidrólise, 50 µL da solução são misturados com 450 µL de acetonitrila na placa com 96 cavidades Captiva também. O procedimento da amostra é o mesmo que para os curcuminoides livres, misturando e filtrando antes da injeção.

[00243] As condições de LC/MS foram, então, as seguintes. O amostrador automático (5°C) e o sistema de LC usado foram um sistema integrado Agilent Infinity 1290. O espectrômetro de massa

Agilent 6420 com quadrupolo triplo foi usado durante o estudo, com ionização por eletropulverização. Os metabólitos foram eluídos da coluna BEH Shield RP 18 (100x2,1, 1,7 µm; Waters) com uma fase móvel que consiste em ácido fórmico a 0,1% em água de grau para HPLC (solvente A) e ácido fórmico a 0,1 % em acetonitrila (solvente B), em uma vazão de 0,5 mL/min. A eluição foi em gradiente de 40-80 % de B a 0-6 min. O volume de injeção foi de 2 µL para padrão e amostras. Para cada composto de referência, uma transição relevante dos íons precursores para produto foi detectada com o uso do modo de monitoramento de reações múltiplas (MRM). Para cada um dos 5 analitos foi determinado em testes de varredura completa MS1 e os íons de produto em experimentos de MS/MS. As transições de MRM de cada analito foram otimizadas usando infusão direta e solução de software da estação de trabalho Optimizer B.08.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA). Consulte a Tabela 9 para as condições ideais selecionadas. Os parâmetros do espectrômetro de massa foram definidos da seguinte forma: fonte ESI tanto no modo negativo quanto positivo; vazão do gás de secagem (N2), 10 L/min; temperatura do gás, 350°C; nebulizador, 40 psi; e capilar, 4,0 kV. O sistema de MS foi totalmente calibrado antes de funcionar de acordo com as orientações do fabricante. A análise de dados foi realizada no Agilent MassHunter Quantitative/Qualitative Analysis B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA).

[00244] Para as três formulações/composições testadas, a cinética da concentração plasmática de cada composto curcuminoide foi determinada entre 0,5 e 12h pós-tratamento, calculando a concentração plasmática média ± SEM em cada ponto de tempo de coleta de sangue. Os parâmetros farmacocinéticos T1/2 (meia-vida), Cmax, Tmax, AUC (0-12h) e AUC (0-ɲ) foram determinados a partir da cinética de 0-12h através de uma análise não compartimental usando o PKSolver. O

PKSolver é um programa add-in orientado por menu para o Microsoft Excel escrito em Visual Basic for Applications (VBA) para resolver problemas em farmacocinética (Zhang et al., 2010).

[00245] Todos os dados são representados como a média ± SEM. As análises estatísticas foram realizadas com os programas Statview

5.0.1 (software Statview, Cary, NC, EUA) e Excel 2013. Os dados foram analisados por um t-teste de Student em cada momento. O risco α foi fixado em 0,05. Tabela 9: Tempos de retenção (Tr), transições de monitoramento de reações múltiplas (MRM) e parâmetros de detecção de espectrometria de massa em tandem (MS/MS) otimizados de curcuminoides, tetra- hidrocurcumina e hexa-hidrocurcumina e padrão interno Compos Tr ISTD? Prec. Prod. Tempo Frag. CE Polaridad tos (min) Íons de Íons de de (V) (V) e massa massa residên- Q1 (Da) Q3 (Da) cia (ms) HHC 1,07 Não 373,2 179 200 118 12 negativo THC 2,04 Não 371,1 235,1 200 100 10 negativo 193,2 100 21 Curcu- 3,25 sim 375,2 291,1 50 110 12 positivo mina d6 180,1 110 18 Curcu- 3,29 Não 369,1 285,1 98 13 mina 177,1 98 25 DMC 3,49 Não 339,1 255,1 110 12 177,1 110 16 BDMC 3,68 Não 309,1 225,1 110 12 119,1 110 36

[00246] Durante os dois períodos sucessivos de aclimatação (J1 a J7) e habituação (J8 a J14), a ingestão dietética de 24 horas e o peso corporal dos camundongos foram medidos regularmente a fim de assegurar uma aclimatação correta e uma curva de crescimento padrão antes do tratamento. Para o presente estudo, os camundongos foram alojados em quatro por gaiola, cada um deles sendo usado para amostragem de sangue no mesmo momento após o tratamento com uma das três formulações. Como uma consequência, os dados de ingestão dietética e peso corporal foram primeiro analisados por grupo de 15 camundongos que foram sacrificados no mesmo ponto de tempo (8 grupos; 5 camundongos/ponto de tempo/formulação). As Figuras 16 e 17 representam, respectivamente, a ingestão dietética e o peso corporal dos camundongos durante o período de aclimatação e habituação antes de administração do tratamento; os diferentes grupos apresentaram curva clássica de peso corporal e ingestão dietética antes de tratamento. Deve ser observado que a forte diminuição no peso corporal observada em todos os grupos no J15 (Figura 17) resultou do jejum noturno realizado na noite anterior ao tratamento. Estes resultados confirmaram que todos os camundongos usados neste experimento tiveram o mesmo comportamento e puderam ser comparados conforme o esperado.

[00247] A Figura 18 representa o perfil farmacocinético com a concentração dos curcuminoides totais (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) obtido em cada ponto de tempo nos camundongos após administração oral (300 mg/kg pc de curcuminoides) da formulação de fitossoma de cúrcuma e a formulação de extrato padrão. A concentração plasmática de curcuminoides totais para o extrato de cúrcuma padrão atingiu apenas um máximo de 12,9 ppm em 1h e estava abaixo de 10 ppm em todos os outros pontos de tempo, enquanto que a formulação de fitossoma de cúrcuma permitiu que a concentração plasmática de curcuminoides totais atingisse 41,5 ppm (µg/ml) após 30 min e foi significativamente superior àquela obtida para o padrão em cada ponto de tempo, exceto 24h. O fitossoma de cúrcuma demonstrou um aumento de 3,2 vezes na Cmax dos curcuminoides totais, um aumento de 3,9 vezes na AUC comparado com o extrato de cúrcuma padrão. Estes resultados validaram o uso da formulação de fitossoma de cúrcuma para aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides e como um controle positivo e validaram a relevância de nosso modelo in vivo para testar a capacidade de diferentes formulações de aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides contra um extrato de cúrcuma padrão.

[00248] Uma tabela que contém os valores médios ± SEM para cada ponto de tempo é mostrada na Tabela 10. Os números entre parênteses localizados ao lado destes valores indicam o número de amostras que apresentaram valor positivo em relação ao número total de amostras. O resultado das comparações estatísticas também é mostrado na mesma tabela. A Tabela 11 contém os parâmetros PK obtidos a partir de análise não compartimental usando o software PKSolver. A porcentagem de variação entre os grupos também é indicada (% Var°). Os dados são representados como média ± SEM.

[00249] Tabelas 10 e 11: Valores médios ± SEM e parâmetros PK obtidos a partir da análise não compartimental usando o software PKSolver para cada ponto de tempo mostrado na Figura 18.

[00250] A Figura 19 representa o perfil farmacocinético com a concentração dos curcuminoides totais (soma de curcumina, DMC, BDMC e seus metabólitos relativos glucuronídeo e sulfato de curcumina, glucuronídeo e sulfato de DMC, glucuronídeo e sulfato de BDMC, THC, glucuronídeo e sulfato de THC, HHC, glucuronídeo e sulfato de HHC) obtido em cada ponto de tempo para os camundongos após administração por via oral (300 mg/kg de peso corporal de curcuminoides) da mistura que compreende a curcumina, Quillaja, óleo e amido modificado (Exemplo 2, forma 1) e a formulação de extrato padrão. Os resultados mostraram que a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção pode aumentar significativamente a concentração total de curcuminoides de 0,5h a 24h comparado com o extrato de cúrcuma padrão. A composição usada nos métodos/usos da invenção demonstrou um aumento de 1,8 vezes na Cmax dos curcuminoides totais e um aumento de 2,2 vezes na AUC.

[00251] Uma tabela que contém os valores médios ± SEM para cada ponto de tempo é apresentada na Tabela 12. Os números entre parênteses localizados ao lado destes valores indicam o número de amostras que apresentaram valor positivo em relação ao número total de amostras. O resultado das comparações estatísticas também é mostrado na mesma tabela. Uma tabela que contém os parâmetros PK obtidos a partir de análise não compartimental usando o software PKSolver é apresentada na Tabela 13. A porcentagem de variação entre os grupos também é indicada (% Var°). Os dados são representados como média ± SEM.

[00252] Tabelas 12 e 13: Valores médios ± SEM e parâmetros PK obtidos a partir de análise não compartimental usando o software PKSolver para cada ponto de tempo mostrado na Figura 19

[00253] Ao olhar para os compostos precursores especificamente (curcumina, DMC e BDMC em sua forma nativa, ou seja, não metabolizado), conforme mostrado na Tabela 14 que fornece a concentração plasmática de curcuminoides precursores para cada ponto de tempo após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção, a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foi a única para a qual fomos capazes de quantificar uma quantidade detectável de curcuminoides precursores durante as primeiras 4h após dosagem e, portanto, calcular a AUC (0-12h) e AUC (0-ɲ) (Tabela 15). Um aumento de 10,9 vezes na Cmax para curcuminoides precursores foi obtido para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma padrão.

[00254] Ao olhar para a curcumina precursora especificamente (curcumina em sua forma nativa, ou seja, não metabolizada), conforme mostrado na Tabela 16 que fornece a concentração plasmática da curcumina precursora para cada ponto de tempo após o consumo de 300 mg/kg de extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção, a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foi a única para a qual fomos capazes de quantificar uma quantidade detectável de curcumina precursora durante as primeiras 4h pós-dosagem e, portanto, calcular a AUC (0-12h) e AUC (0-ɲ) (Tabela 16). Um aumento de 521,8 vezes na Cmax para a curcumina precursora foi obtido para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma padrão. Além disso, a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção induziu um nível plasmático mais alto de curcumina precursora do que a formulação de fitossoma de cúrcuma (aumento de 1,8 vezes na Cmax).

[00255] Pode-se concluir, a partir deste primeiro experimento in vivo, que a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção com mais de 6% de curcuminoides, obtida com 8,6% de extrato de cúrcuma, 15,9% de óleo de girassol, 2% de extrato de Quillaja e 73,5% amido modificado e preparada de acordo com a Forma 1, é capaz de aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides totais e seus metabólitos, mas também a biodisponibilidade de compostos precursores comparado com um extrato de cúrcuma padrão.

[00256] Pode-se concluir também que a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção poderia melhorar mais a biodisponibilidade da curcumina nativa do que a formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00257] A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção, portanto, representa uma maneira atraente de aumentar a biodisponibilidade da curcumina precursora sem usar lecitina derivada de soja na formulação em oposição à formulação de fitossoma de cúrcuma.

Além disso, uma vez que a curcumina é considerada como um dos ativos mais poderosos da cúrcuma comparado com DMC e BDMC e seus metabólitos reduzidos relativos glucuronídeo ou sulfato (Ireson C., Orr S., Jones D.J., Verschoyle R., Lim C.K., Luo J.L., Howells L., Plummer S., Jukes R., Williams M., Steward W.P., Gescher A.

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Bioorg Med Chem. 01 de janeiro de 2014; 22(1): 435- 9), a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção representa uma boa solução para melhorar a eficácia biológica da curcumina para diferentes condições de saúde, tais como saúde articular, inflamação, artrite, aterosclerose, esteatose hepática, fibrose hepática, diabetes, cognição, comprometimento cognitivo leve, síndrome do intestino irritável.

Tabela 14: Concentração de curcuminoides precursores (soma de curcumina, DMC e BDMC) para cada ponto de tempo após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção no primeiro estudo in vivo

Níveis plasmáticos dos curcuminoides precursores - Média ±

SEM A composição Fitossoma de conforme usada Extrato padrão cúrcuma nos métodos/usos da invenção 0,5h 13,91 ± 10,05 (4/5) 13,91 ± 10,05 (4/5) 151,20 ± 96,93 (5/5) 1h 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5) 6,95 ± 6,95 (1/5) 2h 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,30 ± 0,30 (1/5) 4h 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5) 2,55 ± 2,55 (1/5) 6h 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5)

[00258] Os números entre parênteses localizados ao lado destes valores indicam o número de amostras que apresentaram um valor positivo em relação ao número total de amostras Tabela 15: Parâmetros PK obtidos a partir da análise não compartimental usando o software PKSolver para curcuminoides precursores após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir de extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição usada nos métodos/usos da invenção no primeiro estudo in vivo Parâmetros PK - curcuminoides precursores A composição conforme Extrato Fitossoma de usada nos métodos/usos padrão cúrcuma da invenção t1/2 (h) / / 0,75 Tmax (h) 0,5 0,5 0,5 Cmax (ppb) 13,9 168,3 151,2 AUC 0-t (ppb xh) / / 83,8 AUC 0-inf (ppb xh) / / 86,5 Tabela 16: Concentração de curcumina precursora para cada ponto de tempo após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção no primeiro estudo in vivo

Níveis plasmáticos de curcumina precursora - Média ± SEM A composição conforme Fitossoma de Extrato padrão usada nos métodos/usos cúrcuma da invenção 0,5h 0,20 ± 0,20 (1/5) 59,30 ± 35,26 (4/5) 104,37 ± 64,37 (5/5) 1h 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5) 5,83 ± 5,83 (1/5) 2h 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,30 ± 0,30 (1/5) 4h 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5) 2,55 ± 2,55 (1/5) 6h 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5) 0,00 ± 0,00 (0/5)

[00259] Os números entre parênteses localizados ao lado destes valores indicam o número de amostras que apresentaram um valor positivo em relação ao número total de amostras Tabela 17: Parâmetros PK obtidos a partir da análise não compartimental usando o software PKSolver para curcumina após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides a partir do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção no primeiro estudo in vivo Parâmetros PK - curcumina precursora A composição conforme Extrato Fitossoma de usada nos métodos/usos padrão cúrcuma da invenção t1/2 (h) / / 0,82 Tmax (h) 0,5 0,5 0,5 Cmax (ppb) 0,2 59,3 104,4 AUC 0-t (ppb xh) / / 59,6 AUC 0-inf (ppb xh) / / 62,6

[00260] Dados os resultados obtidos no primeiro estudo in vivo em camundongos, os quais mostram melhor biodisponibilidade de curcuminoides totais e curcuminoides precursores e curcumina, decidimos testar uma formulação otimizada com maior teor de curcuminoides (12% de curcuminoides) preparada de acordo com a

Forma 2 com 14,4 % de extrato de cúrcuma, 26,8% de óleo de girassol, 2% de extrato de Quillaja e 56,8% de amido modificado, quanto à sua capacidade de melhorar a biodisponibilidade de curcuminoides comparado com um extrato de cúrcuma padrão em um segundo estudo farmacocinético comparativo em camundongos.

[00261] A mesma metodologia (alojamento de camundongos, período de aclimatação, período de habituação, curcuminoides e quantificação de seus metabólitos usando o método de LC/MS) foi usada conforme descrito anteriormente neste exemplo, mas com um número maior de animais por grupo e tempo (n = 12/ponto de tempo/formulação) e o sangue foi coletado em 0,25, 0,5, 0,75, 1h, 2h ou 8h pós-dosagem, a fim de especificar o perfil cinético durante a fase inicial após o consumo oral (300 mg/kg pc) de curcuminoides provenientes de um extrato de cúrcuma padrão (com 79,5, 15,0 e 3,0 g/100 g de curcumina, DMC e BDMC, respectivamente, e um total de 97,5 g de curcuminoides/100 g), uma formulação de fitossoma de cúrcuma (com 18,6, 2,6 e 0,2 g/100 g de curcumina, DMC e BDMC, respectivamente, e um total de 21,5 g de curcuminoides/100 g) ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção preparada de acordo com a Forma 2 (com 9,8, 1,6 e 0,2 g/100 g de curcumina, DMC e BDMC, respectivamente, e um total de 11,6 g de curcuminoides/100 g).

[00262] A Figura 20 representa a concentração total de curcuminoides e metabólitos em função do tempo após o consumo das diferentes formulações (n = 72 por formulação). Os resultados mostraram claramente um aumento significativo da concentração de curcuminoides e metabólitos para o fitossoma de cúrcuma e a composição usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma padrão. A concentração total de curcuminoides foi maior 0,5h e 0,75h após o consumo da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma, mostrando surpreendentemente o melhor desempenho da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma em termos de melhoria da biodisponibilidade total de curcuminoides e metabólitos.

[00263] Isto foi confirmado durante o cálculo da área sob a curva AUC (0-8h), AUC (0-ɲ) e Cmax correspondentes (Figuras 21, 22 e 23, respectivamente) as quais foram 280% maiores, 300% maiores e 337% maiores para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato padrão, respectivamente, e 6,5 % maior, 30% maior e 63% maior para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma, respectivamente (Tabela 18). Também mostramos que os curcuminoides e metabólitos da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foram absorvidos mais rapidamente com uma redução de 1,5 vezes no Tmax comparado com o extrato padrão (0,5h versus 0,75h) e uma redução de 2 vezes no Tmax comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma (0,5h versus 1h), respectivamente (Tabela 18). Os resultados também mostraram surpreendentemente que os curcuminoides e metabólitos da composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foram menos rapidamente excretados, com uma meia-vida mais longa (3,8h versus 2,8h) comparado com a formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00264] Ao olhar para os compostos precursores especificamente (curcumina, DMC e BDMC em sua forma nativa, ou seja, não metabolizado), conforme mostrado na Tabela 19, a qual fornece os parâmetros PK dos curcuminoides precursores após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma da cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção, a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção foi, surpreendentemente, a única para a qual pudemos calcular a AUC (0-8h) para a curcumina precursora. Um aumento de 3,2 vezes na Cmax para a curcumina original foi obtido para a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção comparado com o extrato de cúrcuma padrão. Nenhuma Cmax pôde ser calculada para a curcumina, uma vez que nenhuma curcumina precursora pôde ser encontrada nas amostras de plasma após o consumo da formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00265] Pode-se concluir, a partir deste segundo experimento in vivo, que a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção com um maior teor de curcuminoides (12% de curcuminoides) preparada de acordo com a Forma 2 com 14,4 % de extrato de cúrcuma, 26,8% de óleo de girassol, 2% de extrato de Quillaja e 56,8% de amido modificado é, inesperadamente, capaz de aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides totais e seus metabólitos, mas também a curcumina precursora comparado com um extrato de cúrcuma padrão e com a formulação de fitossoma de cúrcuma.

[00266] A composição conforme usada nos métodos/usos da invenção representa, portanto, uma maneira atraente de aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides sem usar lecitina derivada de soja na formulação em oposição à formulação de fitossoma de cúrcuma. Tabela 18: Parâmetros PK obtidos a partir da análise não compartimental usando o software PKSolver para curcuminoides e metabólitos totais após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides do extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção no segundo estudo in vivo

Parâmetros PK - Curcuminoides e metabólitos totais A composição conforme Extrato Fitossoma de usada nos métodos/usos padrão cúrcuma da invenção t1/2 (h) 3,98 2,76 3,8 Tmax (h) 0,75 1 0,5 Cmax (ppm) 10,83 22,38 36,47 (3,4) [1,6] AUC 0-t (ppbmx h) 31,11 81,74 (2,6) 87,27 (2,8) [1,1] AUC 0-inf (ppm xh) 41,56 95,74 (2,3) 124,36 (3,0) [1,3]

[00267] A fold change na AUC ou Cmax em relação ao extrato padrão é mostrada entre parênteses ( ). A fold change na AUC ou Cmax em relação à formulação de fitossoma de cúrcuma é mostrada entre colchetes [ ]. Tabela 19: Parâmetros PK obtidos a partir da análise não compartimental usando software PKSolver para curcuminoides precursores após o consumo de 300 mg/kg de curcuminoides de extrato de cúrcuma padrão, fitossoma de cúrcuma ou a composição conforme usada nos métodos/usos da invenção no segundo estudo in vivo Extrato padrão Compostos precursores (ppb) Compostos precursores totais Parâmetro PK Unidade curcumina DMC BDMC (ppb) t1/2 h Ausente Ausente Ausente Ausente Tmax h 0,25 0,25 0,25 0,25 Cmax ppb 5,55 25,03 64,43 114,65 AUC 0-t ppb * h Ausente Ausente 16,82 29,37 AUC 0-inf_obs ppb * h Ausente Ausente Ausente Ausente Fitossoma de cúrcuma Compostos precursores (ppb) Compostos precursores totais Parâmetro PK Unidade curcumina DMC BDMC (ppb) t1/2 h Ausente Ausente Ausente Ausente Tmax h Ausente Ausente Ausente Ausente Cmax ppb Ausente Ausente Ausente Ausente AUC 0-t ppb * h Ausente Ausente Ausente Ausente AUC 0-inf_obs ppb * h Ausente Ausente Ausente Ausente A composição conforme usada Compostos precursores (ppb) Compostos nos precursores totais métodos/usos da invenção (ppb) Parâmetro PK Unidade curcumina DMC BDMC t1/2 h Ausente Ausente Ausente Ausente Tmax h 0,25 0,25 0,25 0,25 Cmax ppb 17,94 11,13 6,34 60,45 AUC 0-t ppb * h 10.8778375 Ausente Ausente 32,13 AUC 0-inf_obs ppb * h Ausente Ausente Ausente Ausente Exemplo 7 - Um estudo farmacocinético comparativo em voluntários saudáveis para avaliar a capacidade de uma composição da invenção de aumentar a biodisponibilidade de curcuminoides

[00268] Este estudo teve dois objetivos:

1. Objetivo Primário

[00269] Avaliar o perfil das concentrações plasmáticas de curcuminoides totais (curcumina, desmetoxicurcumina (DMC), bisdemetoxicurcumina (DBMC) e seus metabólitos) em um período de 24 horas após o consumo de uma dose única de 300 mg da composição da invenção (formulação de curcuminoides Turmipure GOLDTM 30 %) comparado com 1500 mg de extrato de cúrcuma em pó padrão com 95 % de curcuminoides.

2. Objetivos Secundários

[00270] Avaliar os perfis de concentrações plasmáticas dos seguintes parâmetros, após o consumo de uma única dose de cinco produtos estudados que contêm 1425 mg (extrato de cúrcuma em pó padrão com 95% de curcumindoides, complexo de curcumina C3 California Gold Nutrition), 200 mg (Curcuma Platinum MannaVital), 90 mg (de uma composição da invenção (Turmipure GOLDTM 30% de curcuminoides)) ou 60 mg (Curcumina Cell'Innov) da substância ativa: · Curcuminoides totais; · Compostos precursores (curcumina, DMC, BDMC) e seus metabólitos: curcumina, glucuronídeo e sulfato; glucuronídeo e sulfato de DMC; glucuronídeo e sulfato de BDMC; tetra-hidrocurcumina (THC) nativa, glucuronídeo e sulfato; hexa-hidrocurcumina (HHC) nativa, glucuronídeo e sulfato.

[00271] O estudo foi um ensaio clínico monocêntrico, randomizado, cruzado e aberto.

[00272] O estudo começou com uma visita de rastreio/inclusão (V0) seguida por 5 sessões experimentais (V1 a V5) durante as quais os produtos estudados foram consumidos pelos indivíduos (um produto diferente em cada sessão para cada indivíduo randomizado). A visita V1 ocorreu no máximo 3 semanas após a V0 e também pode constituir a visita de randomização.

[00273] Cada sessão experimental (V1 a V5) foi separada por 1 semana no mínimo e 2 semanas no máximo. Durante cada sessão experimental, os indivíduos foram submetidos à coleta cinética de sangue durante períodos de 8 horas. A última amostra cinética de sangue foi retirada no dia seguinte a cada sessão experimental, 24 horas após o início da cinética. A coleta de urina também foi realizada durante estas visitas para fins de armazenamento em um biobanco.

[00274] A primeira micção do indivíduo foi coletada na manhã de cada visita experimental (totalidade desta primeira micção), com coletas adicionais de 0 a 8 horas durante a coleta cinética de sangue no local e de 8 a 24 horas quando eles voltaram para casa. A última coleta de urina foi trazida de volta no dia seguinte à visita experimental (quando eles voltaram para a última amostra de sangue, T24H, da amostra cinética de sangue).

[00275] Refeições padrão foram fornecidas aos voluntários para jantar antes de cada sessão experimental e durante toda a duração de cada cinética (café da manhã, almoço e colação da tarde).

[00276] O final do estudo foi no dia seguinte à última sessão experimental V5 (V5-24H).

[00277] n 30 indivíduos foram recrutados para este estudo, de acordo com os seguintes critérios principais de inclusão e exclusão:

[00278] n I1: Idade entre 18 e 45 anos (limites incluídos);

[00279] n I2: IMC entre 19 e 25 kg/m² (limites incluídos);

[00280] n I3: Peso estável, dentro de ± 3 kg nos últimos três meses;

[00281] n I4: Com valores rotineiros da química do sangue dentro da faixa normal;

[00282] n I5: Para mulheres: não menopáusicas com a mesma contracepção confiável desde pelo menos 3 ciclos antes do início do estudo e concordando em mantê-la durante toda a duração do estudo (preservativo com gel espermicida e contracepção combinada de estrogênio/progesterona aceita) ou menopausa sem ou com terapia de reposição hormonal (excluída a terapia de reposição estrogênica iniciada há menos de 3 meses);

[00283] n I6: Não fumar ou com consumo de tabaco ʇ 5 cigarros/dia e concordar em não fumar durante toda a sessão experimental (V1 a V5);

[00284] n I7: Concordar em não consumir alimentos, bebidas e condimentos que contêm curcumina ou outros curcuminoides (DMC, BDMC) durante toda a duração do estudo;

[00285] n I8: Boa saúde geral e mental na opinião do investigador: nenhuma anormalidade clinicamente significativa e relevante da história médica ou exame físico;

[00286] n E1: Sofrendo de um transtorno metabólico ou endócrino, tal como diabetes, transtorno tireoidiano não controlado ou controlado ou outro transtorno metabólico;

[00287] n E2: Sofrendo de uma doença crônica grave (por exemplo, câncer, HIV, insuficiência renal, transtornos hepáticos ou biliares em curso, doença digestiva inflamatória crônica, artrite ou outro problema respiratório crônico, etc.) ou transtornos gastrointestinais considerados inconsistentes com a conduta de o estudo do investigador (por exemplo, doença celíaca);

[00288] n E3: Sofrendo de doenças hepáticas;

[00289] n E4: Doenças atuais contra-indicadas para indivíduos com suplementação dietética: diarreia crônica, constipação ou dor abdominal, doenças inflamatórias intestinais (doença de Crohn ou colite ulcerativa), cirrose, uso crônico de laxantes...;

[00290] n E5: Sofrendo de Síndrome do Cólon Irritável (IBS) diagnosticada por médico e tratada com medicação crônica;

[00291] n E6: Ter histórico médico de patologia atual que possa afetar os resultados do estudo ou expor o indivíduo a um risco adicional de acordo com o investigador;

[00292] n E7: Gastroenterite recente ou doença de origem alimentícia, tal como intoxicação alimentícia confirmada (menos de 1 mês);

[00293] n E8: Quem fez doação de sangue nos 3 meses anteriores à consulta V0 ou pretende fazê-lo nos 3 meses anteriores;

[00294] n E9: Com capital venoso baixo não permitindo a realização de cinética de amostras de sangue na opinião do investigador;

[00295] n E10: Com uma alergia alimentar conhecida ou suspeita ou intolerância ou hipersensibilidade a qualquer um dos ingredientes dos produtos do estudo e/ou das refeições padrão (intolerância ao glúten, doença celíaca, etc.);

[00296] n E11: Mulheres grávidas ou amamentando ou com intenção de engravidar nos próximos 3 meses;

[00297] n E12: Exposição de dependência de álcool ou drogas;

[00298] n E13: Sob qualquer tratamento crônico com medicamentos (por exemplo anticoagulante, tratamento anti-hipertensivo, tratamento da tiroide, tratamento da asma, ansiolíticos, antidepressivos, tratamento de redução de lipídios, corticosteroides, flebotômicos, venotônicos,

fármacos que têm impacto sobre a circulação sanguínea...), exceto contraceptivos orais e locais;

[00299] n E14: Atualmente tomando (e durante os últimos 3 meses) qualquer suplementação de origem botânica;

[00300] n E15: Ter consumido suplementos alimentícios que contêm curcumina (curcumina, cúrcuma e curry) ou alimentos (curcumina, cúrcuma, E100 e curry) definidos pelo menos 3 vezes por semana e por 2 semanas antes do teste;

[00301] n E27: Registro de controle (glicemia, GGT, ASAT, ALAT, ureia, creatinina e hemograma completo) com anormalidade clinicamente significativa de acordo com o investigador.

[00302] Cinco produtos, os quais são suplementos dietéticos em forma de cápsulas, foram testados como parte deste estudo:

1. Extrato de cúrcuma em pó padrão com 95% curcuminoides, 1500 mg consumidos na forma de cápsulas (4 cápsulas; 375 mg de pó por cápsula) (STE),

2. C3 ComplexÒ com 95% curcuminoides (1500 mg) + BioPerineÒ com 95% de piperina (15 mg) consumido como produto comercial Curcumina C3 Complex California Gold Nutrition (3 cápsulas; 500 mg complexo C3 em pó + 5 mg de bioperina em pó por cápsula) (TEP),

3. MerivaÒ (1000 mg) consumido como produto comercial Curcuma Platinum Mannavital com 20% curcuminoides (2 cápsulas; 500 mg de pó por cápsula) (PHYT),

4. NovasolÒ (1000 mg) consumido como produto comercial Curcumin Cell Innov com 6% curcuminoides (2 cápsulas; 500 mg de líquido por cápsula) (NOV),

5. Uma composição conforme definida no presente documento, compreendendo extrato de cúrcuma, óleo de girassol, extrato de Quillaja e goma arábica, consumido como cápsula (1 cápsula;

300 mg de pó por cápsula) (TURMIPURE GOLD).

[00303] A fim de assegurar o estado saudável dos indivíduos e verificar os critérios de elegibilidade, uma amostra de sangue foi coletada durante a visita V0 para análise de registro de controle e teste de gravidez para mulheres não menopáusicas (dosagem de βhCG).

[00304] A amostra foi retirada após exame físico e verificação dos critérios de elegibilidade. Um máximo de 10 mL foi coletado.

[00305] A medida da pressão arterial foi realizada a cada consulta durante o exame físico com um monitor eletrônico de pressão arterial (Carescape DinamapÒ V100). Também foram avaliadas a Frequência Cardíaca (FC, em bpm), Pressão Arterial Sistólica (PAS, em mmHg) e Pressão Arterial Diastólica (PAD, em mmHg).

[00306] Todos os indivíduos compareceram em jejum de 12 horas.

[00307] Na preparação para as visitas V1 a V5, após o exame clínico, um cateter venoso foi colocado na dobra do cotovelo do indivíduo. Este cateter permitiu a coleta de sangue para a cinética sem quaisquer punções adicionais.

[00308] A amostra cinética durou aproximadamente 8 horas, com todos os indivíduos hospedados no centro de investigação clínica. Dez (10) amostras de sangue foram coletadas de acordo com o seguinte cronograma: - T-10 (linha de base), - T15 > T30 > T45 > T60 > T90 > T120 > T240 > T360 > T480,

[00309] Uma margem de ± 30s foi autorizada para T15, ± 1 min para T30 e T45, ± 2 min para T60 e T90, ± 5 min para T120 a T480.

[00310] O ponto de tempo T0 corresponde ao consumo do produto sob estudo.

[00311] O voluntário foi autorizado a consumir seu almoço padrão cerca de 4 horas após o consumo do produto sob estudo (logo após no ponto de tempo T240) e a refeição da tarde padrão cerca de 8 horas após o consumo do produto sob estudo. O almoço foi consumido em no máximo 30 minutos. A água não foi permitida 1h antes e 1h após a administração do produto. O cateter foi removido após o último ponto de tempo, T480.

[00312] Os voluntários foram, então, solicitados a comparecer novamente ao centro de investigação clínica, em jejum de 12 horas, no dia seguinte à visita para a última coleta de sangue cinética, em T24H. Foi usado material clássico para amostragem de sangue venoso (punção única). Os parâmetros biológicos foram avaliados com estas amostras sendo analisadas no plasma; portanto, apenas tubos de EDTA foram usados (5 mL por amostra).

[00313] Uma curva de calibração foi preparada na faixa de 10-600 ng/mL para cada 5 curcuminoides (Phytolab, Vestenbergsgreuth, Alemanha) adicionando 50 ppb de curcuminas marcadas (TLC Pharmachem, Ontário, Canadá) como um padrão interno para assegurar a estabilidade do tempo de retenção e correção de variação do instrumento. Acetonitrila foi usada como diluente para cada solução. Para a determinação de curcuminoides livres, exatamente 500 µL de mistura de metanol gelado:acetonitrila (15:85) que contém solução de padrões internos (50 ng/mL) foram carregados em 100 µL de amostra de plasma na placa com 96 cavidades Captiva (EMR Lipids da Agilent, consulte Figura 18). Após mistura e filtração, as curcuminas foram eluídas com uma mistura de água gelada:acetonitrila (1:4) e o eluato foi injetado no sistema de LC/MS. As placas Captiva EMR Lipid foram concebidas para remover eficazmente os fosfolipídios do plasma. Para a determinação dos metabólitos de curcuminoides conjugados totais (metabólitos glucuronídeo e sulfato), 60 µL de amostra de plasma foram misturados com 60 µL de solução enzimática (glucuronidase a 1 mg/mL, tampão de fosfato a 100 mM, pH de 6,8 ou sulfatase a 10 mg/mL, tampão de acetato a 100 mM, pH de 5,0) durante 1 hora a 37 °C com agitação constante (Eppendorf, Thermomixer C, 400 rpm). Após esta etapa de hidrólise, o protocolo foi o mesmo que para os curcuminoides livres usando placas com 96 cavidades Captiva EMR Lipid.

[00314] O protocolo EMR-Lipid para o tratamento de plasma humano antes da injeção é representado abaixo. Protocolo Captiva EMR-Lipid ▼ Adicionar 500 μl de MeOH GELADO:ACN (15:85) ao cartucho Captiva EMR- Lipid com padrões internos Adicionar 100 μl de amostra* Misturar com os mesmos 350 μl de biohits (x2) Colocar sob baixo vácuo 1 gota/3-5 s Adicionar 200 μl de H2O GELADA:ACN (1:4) Colocar sob vácuo até que todo o volume passe através do cartucho para eluição completa

[00315] As condições de LC/MS foram as seguintes. O amostrador automático (5°C) e o sistema de LC eram um sistema integrado Agilent Infinity II 1290. O espectrômetro de massa Agilent 6420 com quadrupolo triplo foi usado durante o estudo, com ionização por eletropulverização. Os metabólitos foram eluídos da coluna BEH C18 (100x2,1 mm, 1,7 µm; Waters) com uma fase móvel que consiste em ácido fórmico a 0,1% em água de grau para HPLC (solvente A) e ácido fórmico a 0,1 % em acetonitrila (solvente B), em uma vazão de 0,4 mL/min e uma temperatura de coluna de 35 °C. A eluição foi em gradiente de 40-60% de B a 0-3 min. O volume de injeção foi de 2 µL para padrão e amostras. Para cada composto de referência, uma transição relevante dos íons precursores para produto foi detectada com o uso do modo de monitoramento de reações múltiplas (MRM). Cada um dos 5 analitos foi determinado em testes de varredura completa de MS1 e os íons de produto em experimentos de MS/MS.

As transições de MRM de cada analito foram otimizadas usando infusão direta e solução de software de estação de trabalho Optimizer B.08.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA). Consulte a Tabela 20 para obter as condições ideais selecionadas.

Os parâmetros do espectrômetro de massa foram definidos da seguinte forma: fonte de ESI tanto no modo negativo quanto positivo; vazão do gás de secagem (N2), 10 L/min; temperatura do gás, 350 °C; nebulizador, 40 psi; e capilar, 4,0 kV.

A análise de dados foi realizada no Agilent MassHunter Quantitative/Qualitative Analysis B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA). Tabela 20: Tempos de retenção (Tr), transições de monitoramento de reações múltiplas (MRM) e parâmetros de detecção de espectrometria de massa em tandem otimizada (MS/MS) de 5 curcuminoides e padrão interno Prod.

Tempo de Prec.

Íons Tr Íons de Frag CE Nome Cpd ISTD? de Massa Polaridade (min) Massa residência (V) (V) Q1 (Da) (ms) Q3 (Da)

Curcumina 3,05 sim 375,2 180,0 50 65 24 Positivo d6 177,0 50 120 20 Positivo Curcumina 3,05 Não 369,1 145,0 50 120 36 Positivo 117,0 50 120 48 Positivo DMC d7 2,89 sim 346,1 151,0 50 105 32 Positivo 177,0 50 105 20 Positivo DMC 2,89 Não 339,1 147,0 50 105 28 Positivo 91,1 50 105 60 Positivo BDMC d8 2,74 sim 317,1 151,0 50 80 24 Positivo

147,0 50 95 24 Positivo BDMC 2,74 Não 309,1 119,0 50 95 40 Positivo 91,1 50 95 60 Positivo HHC d6 1,34 sim 379,2 182,1 50 110 20 Negativo 193,1 50 100 12 Negativo HHC 1,34 Não 373,1 179,1 50 100 16 Negativo 121,0 50 100 56 Negativo THC d6 2,84 sim 377,1 135,1 50 105 60 Negativo 235,1 50 120 12 Negativo THC 2,84 Não 371,1 193,1 50 120 20 Negativo 135,0 50 120 56 Negativo População de Análise

[00316] n População ITT: Todos os indivíduos randomizados no estudo que consumiram pelo menos uma dose dos produtos (n = 30)

[00317] n População PP: Indivíduos incluídos na população ITT que concluíram o estudo sem apresentar desvios de protocolo importantes (n = 30). Os seguintes indivíduos foram excluídos da população PP:

[00318] n Indivíduo SN01-040 - V5 para todos os parâmetros

[00319] n População de SEGURANÇA: Todos os indivíduos randomizados no estudo que consumiram pelo menos uma dose dos produtos (n = 30) Número de indivíduos Indivíduos incluídos (N=30) Mulheres/homens 16 (53,3) / 14 (46,7) Idade (anos) 33,6 (6,79) Peso (kg) (V0) 64,5 (11,09) 2 IMC (kg/m ) (V0) 22,1 (2,13) Tabela 21: Descrição da população de estudo no início do estudo, mostrando a média e desvio padrão Ambiente de Software

[00320] n As análises estatísticas foram realizadas pela Biofortis usando o software SASÒ versão 9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). n Nível de significância

[00321] n Para todos os testes estatísticos (biconfigurados), o nível de significância de 0,05 foi usado para justificar a afirmação de um efeito estatisticamente significativo. n Métodos de tratamento de dados perdidos para cinética

[00322] n Se mais de 2 valores ou 2 valores consecutivos estiverem faltando na cinética, o cálculo de AUC não pode ser realizado e a cinética foi considerada como ausente nas análises estatísticas (nenhuma substituição de dados faltantes foi realizada);

[00323] n Se um dado estiver faltando no ponto de tempo T-10, o cálculo da AUC não pode ser realizado e a cinética foi considerada como ausente nas análises estatísticas (nenhuma substituição de dados faltantes foi realizada);

[00324] n Se um valor (exceto o valor da linha de base e o valor do último momento) faltar na cinética, ele é substituído pelo valor obtido por meio do método CopyMean desenvolvido por Genolini (Genolini, 2013);

[00325] n Se um valor no último momento (T1440 = T24h) da cinética estiver faltando, nenhuma substituição de dados faltantes foi realizada.

[00326] n No caso de cinética incompleta após o tratamento de dados ausentes, a AUC não pode ser calculada.

[00327] à Este método foi aplicado em populações ITT e PP. Variáveis Derivadas

[00328] n Curcuminoides totais = Curcumina + DMC + BDMC + THC + HHC + glucuronídeo de curcumina + glucuronídeo de DMC + glucuronídeo de BDMC + glucuronídeo de THC + glucuronídeo de HHC + sulfato de curcumina + sulfato de DMC + sulfato de BDMC + sulfato de THC + sulfato de HHC

[00329] Se todos estes 15 elementos estiverem faltando, os curcuminoides totais não podem ser calculados. Se pelo menos um destes 15 elementos for quantificado, os curcuminoides totais foram calculados.

[00330] n Compostos precursores totais = soma de curcumina + DMC + BDMC

[00331] n Compostos precursores totais e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo = Curcumina + glucuronídeo de curcumina + sulfato de curcumina + DMC + glucuronídeo de DMC + sulfato de DMC + BDMC + glucuronídeo de BDMC + sulfato de BDMC

[00332] n Curcumina e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo = Curcumina + glucuronídeo de curcumina + sulfato de curcumina

[00333] n DMC e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo = DMC + glucuronídeo de DMC + sulfato de DMC

[00334] n BDMC e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo = BDMC + glucuronídeo de BDMC + sulfato de BDMC

[00335] n Curcumina e todos os seus metabólitos relativos = Curcumina + glucuronídeo de curcumina + sulfato de curcumina + THC + glucuronídeo de THC + sulfato de THC + HHC + glucuronídeo de HHC + sulfato de HHC

[00336] n Biodisponibilidade relativa entre 0 a 24 horas = proporção da AUC0-24h normalizada por dose para as diferentes formulações testadas para AUC0-24h normalizada por dose obtida para o produto de referência (extrato de cúrcuma com 95% de curcuminoides)

[00337] n Biodisponibilidade relativa entre 0 a 8 horas = proporção da AUC0-8h normalizada por dose para as diferentes formulações testadas para AUC0-8h normalizada por dose obtida para o produto de referência (extrato de cúrcuma com 95% de curcuminoides)

[00338] n Biodisponibilidade relativa entre 0 e infinito = proporção da AUC0-ɲ normalizada por dose para as diferentes formulações testadas para o AUC0-ɲ normalizada por dose obtida para o produto de referência (extrato de cúrcuma com 95% de curcuminoides). Tratamento de Dados de Valores Abaixo do Limite de Detecção (LOD)

[00339] n Alguns valores abaixo do limite de detecção (Limit Of Detection, LOD) foram identificados para a curcumina (nativa, glucuronídeo e sulfato) expressos como «0,62» no banco de dados.

[00340] à O número e a porcentagem dos valores sob o LOD foram fornecidos para cada parâmetro e visita. Produção de Representações Gráficas

[00341] n Variável quantitativa nas médias observadas: gráficos de caixa e whiskers para os parâmetros de AUC (ilustrados na Figura 38). Verificação de Suposições de Testes Estatísticos

[00342] n Os pressupostos de normalidade e homocedasticidade foram investigados por meio de representações gráficas de resíduos produzidos por modelos estatísticos. Em caso de forte desvio da normalidade e/ou homocedasticidade, a transformação log (log10) dos resultados do estudo foi considerada. Nota para a produção de resultados:

[00343] n STE = extrato de cúrcuma em pó padrão com 95 % de curcuminoides, 1500 mg

[00344] n TEP = complexo de curcumina C3 California Gold Nutrition (1500 mg de C3 ComplexÒ)

[00345] n NOV = Curcumin Cell'Innov (1000 mg NovasolÒ)

[00346] n PHYT = Curcuma Platinum MannaVital (1000 mg MerivaÒ)

[00347] n Turmipure GOLDTM = Turmipure Gold com 30% de curcuminoides, 300 mg Metodologia Estatística

[00348] n Parâmetro primário: AUC normalizada para a dose entre 0 e 24 horas foi analisada usando o seguinte modelo misto para medições repetidas (SASÒ PROC MIXED, modelo estatístico n° 1):

Y = Produto + Visita + Linha de Base + Indivíduoaleatório com:

[00349] n Y: AUC normalizada para a dose entre 0 e 24 horas da concentração plasmática do analito;

[00350] n Produto: Turmipure GoldTM, STE, TEP, NOV, PHYT;

[00351] n Visita: Visitas V1 a V5;

[00352] n Linha de base: valor do parâmetro no ponto de tempo T- 10 (T0 para cálculo da AUC);

[00353] n Indivíduoaleatório: fator aleatório.

[00354] n Se efeito da visita significativo (p < 0,05): análise secundária realizada no primeiro período (visita) para avaliar o efeito do produto.

[00355] n Comparação entre produtos de interesse è Turmipure GoldTM comparado com STE Análise Adicional: Investigação do Efeito do Sexo

[00356] n O efeito do sexo foi investigado neste estudo usando o seguinte modelo misto para medições repetidas (SASÒ PROC MIXED, modelo estatístico n° 2): Y = Produto + Visita + Sexo + Produto * Sexo + Linha de Base + Indivíduoaleatório Com:

[00357] n Y: Parâmetro;

[00358] n Produto: Turmipure GoldTM, STE, TEP, NOV, PHYT;

[00359] n Visita: Visitas V1 a V5;

[00360] n Sexo: Feminino ou Masculino;

[00361] n Produto * Sexo: interação entre o produto e o sexo;

[00362] n Linha de base: valor do parâmetro no ponto de tempo T- 10 (T0 para cálculo da AUC);

[00363] n Indivíduoaleatório: fator aleatório.

[00364] n Comparações entre produtos de interesse;

[00365] n Turmipure GOLDTM comparado com STE;

[00366] n TEP comparado com STE;

[00367] n NOV comparado com STE;

[00368] n PHYT comparado com STE;

[00369] n TEP comparado com Turmipure GOLDTM;

[00370] n NOV comparado com Turmipure GOLDTM;

[00371] n PHYT comparado com Turmipure GOLDTM.

[00372] n Se efeito da visita significativo (p < 0,05): análise secundária realizada no primeiro período (visita) para avaliar o efeito do produto.

[00373] n Se efeito da interação Produto * Sexo significativo (p < 0,05): efeito de tratamento investigado em homens e mulheres separadamente (com produção de estatísticas descritivas e representações gráficas)

[00374] n Se efeito da interação Produto * Sexo significativo (p > 0,05): efeito do tratamento investigado globalmente (mulheres e homens juntos) Metodologia Estatística Para Parâmetros Secundários (Exceto Para Biodisponibilidade Relativa)

[00375] n Os parâmetros secundários foram analisados usando o seguinte modelo misto para medições repetidas (SASÒ PROC MIXED, modelo estatístico n° 1): Y = Produto + Visita + Linha de Base + Indivíduoaleatório

[00376] n Se efeito da visita significativo (p < 0,05): análise secundária realizada no primeiro período (visita) para avaliar o efeito do produto. n Comparação entre produtos de interesse:

[00377] n Turmipure GOLDTM comparado com STE;

[00378] n TEP comparado com STE;

[00379] n NOV comparado com STE;

[00380] n PHYT comparado com STE;

[00381] n TEP comparado com Turmipure GOLDTM;

[00382] n NOV comparado com Turmipure GOLDTM;

[00383] n PHYT comparado com Turmipure GOLDTM. n Metodologia Estatística Para Biodisponibilidade Relativa

[00384] n Os parâmetros secundários foram analisados usando o seguinte modelo misto para medições repetidas (SASÒ PROC MIXED, modelo estatístico n° 1): Y = Produto + Visita + Indivíduoaleatório

[00385] n Se efeito da visita significativo (p < 0,05): análise secundária realizada no primeiro período (visita) para avaliar o efeito do produto. n Comparação entre produtos de interesse:

[00386] n TEP comparado com Turmipure GOLDTM;

[00387] n NOV comparado com Turmipure GOLDTM;

[00388] n PHYT comparado com Turmipure GOLDTM. Sumário dos Resultados dos Parâmetros Primários Tabelas 22 e 23: Análise inicial das populações ITT e PP

Tabelas 24 e 25: Análise Adicional das Populações ITT e PP (investigação do efeito do sexo)

Produto Produto STE Produto TEP Produto NOV Produto PHYT Variável Estatísticas Turmipure GOLD™ (n = 30) (n = 30) (n = 30) (n = 30) (n = 30)

AUC0-24H de curcuminoides N 30 30 30 29 30 totais com dose N faltante 0 0 0 1 0 normalizada (ng.h/mL/mg) Média (SD) 3,7 (1,75) 3,2 (1,69) 136,1 (37,40) 13,0 (9,65) 72,9 (25,49)

(Mín, Máx) (0,7; 9,7) (0,8; 8,7) (69,8; 220,8) (1,7; 42,0) (16,4; 139,6)

Mediana (Q1; Q3) 3,7 (2,5; 4,3) 3,0 (2,1; 4,1) 141,8 (105,6; 157,8) 10,7 (6,2; 17,0) 69,7 (55,2; 87,8)

97/136 Tabela 26: Dose normalizada de AUC0-24h de curcuminoides totais

[00389] A partir da análise acima, concluiu-se que, para a população ITT: Análise entre grupos (todos os sexos considerados juntos) n Nenhuma visita significativa é identificada (p = 0,2245) à Consequentemente, a análise foi realizada em todas as visitas. n Efeito significativo do produto (p < 0,0001): n Parâmetro primário: Há uma diferença estatisticamente significativa entre Turmipure GOLDTM e STE (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 1,32 [1,18; 1,46]). n Outras comparações: n TEP vs STE (p = 0,6948 ajustado) n NOV vs STE (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado = 1,62 [1,48; 1,76]) à NOV > STE n PHYT vs STE (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado = 0,48 [0,34; 0,62]) à PHYT > STE n TEP vs Turmipure GOLDTM (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = -1,39 [-1,53; -1,25]) à TEP < Turmipure

GOLDTM n NOV vs Turmipure GOLDTM (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 0,29 [0,15; 0,43]) à NOV > Turmipure GOLDTM n PHYT vs Turmipure GOLDTM (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = -0,84 [-0,99; -0,70]) à PHYT < Turmipure GOLDTM n Análise Adicional: Investigação do Efeito do Sexo n Nenhum efeito significativo na visita (p = 0,2456) e na interação Produto * Sexo (p = 0,3804): análise realizada em todos os sexos em conjunto e em todas as visitas. n Efeito significativo do produto (p < 0,0001): n TEP vs STE (p ajustado = 0,7091)

n NOV vs STE (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 1,61 [1,47; 1,75]) à NOV > STE n PHYT vs STE (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 0,48 [0,34; 0,62]) à PHYT > STE n Turmipure GOLDTM vs STE (p <0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 1,32 [1,18; 1,46]) à Turmipure GOLDTM > STE n TEP vs Turmipure GOLDTM (p <0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = -1,39 [-1,52; -1,25]) à TEP < Turmipure GOLDTM n NOV vs Turmipure GOLDTM (p < 0,0001 ajustado; dif. [IC95 % ajustado] = 0,29 [0,15; 0,43]) à NOV > Turmipure GOLDTM n PHYT vs Turmipure GOLDTM (p < 0,0001 ajustado; dif. [CI95 % ajustado] = -0,84 [-0,98; -0,70]) à PHYT < Turmipure GOLDTM Para a população PP: n Análise Entre Grupos (Todos os Sexos Juntos) n Os resultados são similares aos resultados observados na população ITT. n Análise Adicional: Investigação do Efeito do Sexo n Os resultados são similares aos resultados observados na população ITT. Sumário dos Resultados dos Parâmetros Secundários

[00390] Os resultados dos parâmetros secundários são mostrados nas tabelas abaixo para ambas as populações ITT (Tabelas 27 a 43) e PP (Tabelas 44 a 60), respectivamente. A representação gráfica dos dados é fornecida nas Figuras 24 a 37.

[00391] A seguinte chave se aplica a cada tabela, indicando a significância estatística de cada resultado. p-valor < 0,05 (estatisticamente significativo); p-valor ³ 0,10 (estatisticamente não significativo) *Análise realizada na visita V1 apenas (n=30)

Tabela 27: Análise dos curcuminoides totais (ng/mL) entre os produtos na população ITT.

Tabela 28: Análise de curcumina (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 29: Análise de glucuronídeo de curcumina (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 30: Análise de sulfato de curcumina (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 31: Análise de curcumina e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo (ng/mL) entre os produtos na população ITT.

Tabela 32: Análise de glucuronídeo de DMC (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 33: Análise de sulfato de DMC (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 34: Análise de DMC e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo (ng/mL) entre os produtos na população ITT.

Tabela 35: Análise de glucuronídeo de BDMC (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 36: Análise de sulfato de BDMC (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 37: Análise de BDMC e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo (ng/mL) entre os produtos na população ITT.

Tabela 38: Análise de glucuronídeo de THC (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 39: Análise de sulfato de THC (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 40: Análise de glucuronídeo de HHC (ng/mL) entre os produtos na população ITT.

Tabela 41: Análise de sulfato de HHC (ng/mL) entre produtos na população ITT.

Tabela 42: Análise de curcumina e todos os seus metabólitos relativos (ng/mL) entre os produtos na população ITT.

Tabela 43: Análise de compostos precursores totais e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo (ng/mL) entre os produtos na população ITT.

Tabela 44: Análise dos curcuminoides totais (ng/mL) entre os produtos na população PP.

Tabela 45: Análise de curcumina (ng/mL) entre produtos na população PP.

Tabela 46: Análise de glucuronídeo de curcumina (ng/mL) entre produtos na população PP.

Tabela 47: Análise de sulfato de curcumina (ng/mL) entre produtos na população de PP.

Tabela 48: Análise de curcumina e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo (ng/mL) entre produtos na população PP.

Tabela 49: Análise de glucuronídeo de DMC (ng/mL) entre produtos na população PP.

Tabela 50: Análise de sulfato de DMC (ng/mL) entre produtos na população de PP.

Tabela 51: Análise de DMC e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo (ng/mL) entre produtos na população PP.

Tabela 52: Análise de glucuronídeo de BDMC (ng/mL) entre produtos na população PP.

Tabela 53: Análise de sulfato de BDMC (ng/mL) entre produtos na população de PP.

Tabela 54: Análise de BDMC e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo (ng/mL) entre produtos na população PP.

Tabela 55: Análise de glucuronídeo de THC (ng/mL) entre produtos na população de PP.

Tabela 56: Análise de sulfato de THC (ng/mL) entre produtos na população de PP.

Tabela 57: Análise de glucuronídeo de HHC (ng/mL) entre produtos na população PP.

Tabela 58: Análise de sulfato de HHC (ng/mL) entre produtos na população de PP.

Tabela 59: Análise de curcumina e todos os seus metabólitos relativos (ng/mL) entre os produtos na população PP.

Tabela 60: Análise de compostos precursores totais e seus metabólitos relativos sulfato e glucuronídeo (ng/mL) entre produtos na população PP.

Eventos Adversos Graves:

[00392] n Indivíduo SN01-009: Dor cervical/acidente rodoviário entre as visitas V0 e V1 (sem produto sob estudo) (sistema corporal locomotor/reumatológico, evento não relacionado a um histórico médico, intensidade moderada, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, evento não relacionado à pesquisa e ao produto sob estudo, evento não associado a tratamentos corretivos, recuperação sem sequelas).

[00393] n Tratamento de EAs Emergentes Com Intensidade Severa:

[00394] n Indivíduo SN01-007: Lumbago entre as visitas V2 e V3 (sob o produto Turmipure GOLD™) (sistema corporal locomotor/reumatológico, evento não relacionado a um histórico médico, intensidade grave, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, evento não relacionado à pesquisa e o produto sob estudo, evento não associado a tratamentos corretivos, recuperação sem sequelas).

[00395] n AEs Relacionados aos Produtos Sob Estudo:

[00396] n Indivíduo SN01-008: Dor de cabeça no dia da visita V3 (sob o produto Turmipure GOLD™) (sistema corporal neurológico/psiquiátrico, evento não relacionado a um histórico médico, intensidade moderada, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, possível evento relacionado à pesquisa e o produto sob estudo, evento associado a um tratamento corretivo (paracetamol), recuperação sem sequelas).

[00397] n Indivíduo SN01-030: Dor de cabeça no dia da visita V1 (sob o produto Turmipure GOLD™) (sistema corporal neurológico/psiquiátrico, evento não relacionado a um histórico médico, intensidade leve, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, possível evento relacionado à pesquisa e o produto sob estudo, evento associado a um tratamento corretivo (paracetamol), recuperação sem sequelas).

[00398] n Indivíduo SN01-032: Dor de cabeça no dia da consulta V2 (sob o produto NOV) (sistema corporal neurológico/psiquiátrico, evento não relacionado a um histórico médico, intensidade leve, nenhuma ação sobre o produto sob estudo, possível evento relacionado à pesquisa e ao produto sob estudo, evento não associado a tratamentos corretivos, recuperação sem sequelas).

[00399] Os resultados observados na população PP são similares àqueles da população ITT.

[00400] A média ± SD para os curcuminoides totais (população ITT) é mostrada abaixo.

Tabela 61: Média ± SD para curcuminoides totais (população ITT) Conclusão

[00401] Os resultados demonstram que há poucas diferenças entre a biodisponibilidade dos compostos encontrados em TEP e STE (apenas 5 diferenças).

[00402] Descobriu-se que a composição dentro do escopo da presente invenção (Turmipure GOLDTM) confere melhor biodisponibilidade de compostos do que STE, TEP e PHYT, e foi capaz de conferir uma biodisponibilidade similar para NOV, apesar de ser administrada em uma dose mais baixa (300 mg comparado com 1000 mg) e usando apenas ingredientes naturais sem veículos sintéticos (tal como polissorbato 80).

[00403] Mais especificamente, o Novasol foi usado a 1000 mg, enquanto que a composição da presente invenção (Turmipure GOLDTM) a 300 mg. Uma vez que o Turmipure produz um efeito de 6520 (AUC em ng.h/mL) a 300 mg, se fosse usado na mesma dosagem que o Novasol (1000 mg), produziria um efeito de 21733 (AUC em ng.h/mL), o qual é muito maior do que o efeito do Novasol na mesma dosagem (8539).

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) pelo menos cerca de 20 % de curcuminoides em peso da composição; (ii) goma arábica; e (iii) um extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja, em que a composição compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de entre cerca de 100 nm a cerca de 10000 nm.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que as partículas têm um diâmetro médio a partir de cerca de 1000 nm a cerca de 7000 nm.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que compreende ainda óleo de planta e/ou vegetal.

4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o extrato de Quillaja está presente em uma quantidade a partir de cerca de 0,1 a cerca de 5% em peso da composição.

5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a goma arábica está presente em uma quantidade a partir de cerca de 40 a cerca de 60% em peso da composição.

6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o extrato de Quillaja compreende pelo menos 50% de saponinas.

7. Uso de uma composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que é como uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética.

8. Uso de uma composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de uma formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebidas, rações ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética.

9. Formulação nutracêutica, um produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), um suplemento nutricional, uma fragrância ou flavorizante, uma formulação farmacêutica ou veterinária, uma formulação enológica ou cosmética, caracterizados pelo fato de que consistem em, consistem essencialmente em ou compreendem uma composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que a formulação nutracêutica, produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), suplemento nutricional, fragrâncias ou aromatizantes, formulação farmacêutica ou veterinária, formulação enológica ou cosmética compreende ainda ingredientes veterinária/ farmaceuticamente aceitáveis, tais como veículos ou excipientes ou ingredientes (função) aceitáveis para uso alimentício e misturas dos mesmos, conforme adequado.

11. Formulação nutracêutica, produto dietético ou alimentício para seres humanos ou animais (tais como fórmulas alimentícias funcionais, ou seja, alimentos, bebidas, alimentos ou rações para animais de estimação ou um alimento, bebida, ração ou suplementos alimentícios para animais de estimação), suplemento nutricional, fragrância ou flavorizante, formulação farmacêutica ou veterinária, formulação enológica ou cosmética, como definida na reivindicação 8, caracterizados pelo fato de que compreendem ainda ingredientes veterinária/ farmaceuticamente aceitáveis, tais como excipientes ou veículos ou (função) ingredientes alimentícios aceitáveis e misturas dos mesmos, conforme apropriado.

12. Processo para a preparação de uma composição, como definida nas reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o processo compreende as etapas de: (i) preparar uma solução aquosa de curcuminoides; (ii) misturar a solução aquosa de (i) com uma solução aquosa de goma arábica e extrato obtido ou obtenível a partir de Quillaja e, opcionalmente, um óleo de planta e/ou vegetal para fornecer uma emulsão; e opcionalmente (iii) secar o produto de (ii) fornecer uma composição que compreende partículas que têm um diâmetro médio a partir de cerca de 100 nm a cerca de 10000 nm.

13. Método para melhorar a bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou bioatividade de curcuminoides em mamíferos, caracterizado pelo fato de que compreende administrar os curcuminoides na forma de uma composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6.

14. Uso de uma composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de uma formulação para melhorar a bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou biodisponibilidade de curcuminoides em mamíferos.

15. Método ou uso, de acordo com a reivindicação 13 ou 14, caracterizado pelo fato de que a melhoria na bioacessibilidade, biodisponibilidade, bioeficácia e/ou biodisponibilidade de curcuminoides em mamíferos se deve ao aumento da resistência gastrointestinal dos curcuminoides e/ou aumento da absorção de curcuminoides pelas células intestinais e/ou aumento da circulação sanguínea.

16. Método ou uso, de acordo com a reivindicação 13 ou 14, caracterizado pelo fato de que os curcuminoides são selecionados a partir do grupo que consiste em curcumina e seus metabólitos de fase I ou fase II, demetoxicurcumina e seus metabólitos de fase I ou fase II, bisdemetoxicurcumina e seus metabólitos de fase I ou fase II e misturas dos mesmos.