BR112020023459A2 - terapia combinada com proteínas de ligação a icos e inibidores de arginina metiltransferase - Google Patents

terapia combinada com proteínas de ligação a icos e inibidores de arginina metiltransferase Download PDF

Info

Publication number
BR112020023459A2
BR112020023459A2 BR112020023459-1A BR112020023459A BR112020023459A2 BR 112020023459 A2 BR112020023459 A2 BR 112020023459A2 BR 112020023459 A BR112020023459 A BR 112020023459A BR 112020023459 A2 BR112020023459 A2 BR 112020023459A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
optionally substituted
icos
type
inhibitor
protein
Prior art date
Application number
BR112020023459-1A
Other languages
English (en)
Inventor
Andrew Mark Fedoriw
Susan KORENCHUK
Helai MOHAMMAD
Christian S. Sherk
Original Assignee
Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited filed Critical Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited
Publication of BR112020023459A2 publication Critical patent/BR112020023459A2/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/4155—1,2-Diazoles non condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

TERAPIA COMBINADA COM PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO A ICOS E INIBIDORES DE ARGININA METILTRANSFERASE. A presente invenção fornece um método de tratar câncer em um ser humano em necessidade do mesmo, o método compreendendo administrar ao ser humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e administrar ao ser humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação a ICOS (CD278, Coestimulador de célula T induzível) ou porção de ligação a antígeno da mesma.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “TERAPIA COMBINADA COM PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO A ICOS E INIBIDO- RES DE ARGININA METILTRANSFERASE”.
CAMPO DE INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a um método de tratar câncer em um mamífero e a combinações úteis em tal tratamento. Em particu- lar, a presente invenção refere-se a combinações de inibidores da pro- teína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e anticorpos anti- ICOS.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] O tratamento eficaz de distúrbios hiperproliferativos, inclu- indo câncer, é uma meta contínua no campo da oncologia. Geralmente, o câncer resulta da desregulação dos processos normais que controlam a divisão celular, diferenciação e morte celular por apoptose e é carac- terizado pela proliferação de células malignas com potencial para cres- cimento ilimitado, expansão local e metástase sistêmica. A desregula- ção de processos normais inclui anormalidades nas vias de transdução de sinal e resposta a fatores que diferem daqueles encontrados em cé- lulas normais.
[003] A metilação da arginina é uma modificação pós-tradução im- portante em proteínas envolvidas em uma ampla gama de processos celulares, como regulação gênica, processamento de RNA, resposta a danos no DNA e transdução de sinal. Proteínas contendo argininas me- tiladas estão presentes em frações nucleares e citosólicas, sugerindo que as enzimas que catalisam a transferência de grupos metila para argininas também estão presentes em todos esses compartimentos subcelulares (revisado em Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Lee, Y. H. & Stallcup, M. R. Minireview:
protein arginine methylation of nonhistone proteins in transcriptional re- gulation. Mol Endocrinol 23, 425-433, doi:10.1210/me.2008-0380 (2009). Em células de mamíferos, a arginina metilada existe em três for- mas principais: 𝜔-NG-monometil-arginina (MMA), dimetil arginina ω- NG,NG-assimétrica (ADMA) ou dimetil arginina ω-NG,NG-simétrica (SDMA). Cada estado de metilação pode afetar as interações proteína- proteína de maneiras diferentes e, portanto, tem o potencial de conferir consequências funcionais distintas para a atividade biológica do subs- trato (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)).
[004] A metilação da arginina ocorre amplamente no contexto de motivos ricos em glicina e arginina (GAR) por meio da atividade de uma família de Proteína Arginina Metiltransferases (PRMTs) que transferem o grupo metila de S-adenosil-L-metionina (SAM) para a cadeia lateral de arginina do substrato produzindo S-adenosil-homocisteína (SAH) e arginina metilada. Esta família de proteínas é composta por 10 mem- bros, dos quais 9 demonstraram ter atividade enzimática (Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)). A família PRMT é categorizada em quatro subtipos (Tipo I-IV), depen- dendo do produto da reação enzimática. As enzimas do tipo IV metilam o nitrogênio guanidino interno e só foram descritas em leveduras (Fisk, J. C. & Read, L. K. Protein arginine methylation in parasitic protozoa. Eukaryot Cell 10, 1013-1022, doi:10.1128/EC.05103-11 (2011)); as en- zimas dos tipos I-III geram monometil-arginina (MMA, Rme1) por meio de um único evento de metilação. O intermediário de MMA é conside- rado um intermediário de abundância relativamente baixa, no entanto, substratos selecionados da atividade primariamente Tipo III de PRMT7 podem permanecer monometilados, enquanto enzimas Tipos I e II ca- talisam a progressão de MMA para dimetil-arginina assimétrica (ADMA,
Rme2a) ou dimetil arginina simétrica (SDMA, Rme2s) respectivamente. As PRMTs Tipo II incluem PRMT5 e PRMT9, no entanto, PRMT5 é a enzima primária responsável pela formação de dimetilação simétrica. As enzimas do tipo I incluem PRMT1, PRMT3, PRMT4, PRMT6 e PRMT8. PRMT1, PRMT3, PRMT4 e PRMT6 são expressas de forma ubíqua, en- quanto PRMT8 é amplamente restrita ao cérebro (revisado em Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009).
[005] A má regulação e a superexpressão de PRMT1 foram asso- ciadas a uma série de cânceres sólidos e hematopoiéticos (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Yoshimatsu, M. et al. Dysregulation of PRMT1 and PRMT6, Type I arginine methyltransfera- ses, is involved in various types of human cancers. Int J Cancer 128, 562-573, doi:10.1002/ijc.25366 (2011)). A ligação entre PRMT1 e biolo- gia do câncer tem sido amplamente considerada através da regulação da metilação de resíduos de arginina em substratos relevantes. Em vá- rios tipos de tumor, PRMT1 pode conduzir a expressão de programas oncogênicos aberrantes através da metilação de histona H4 (Takai, H. et al. 5-Hydroxymethylcytosine plays a critical role in glioblastomagene- sis by recruiting the CHTOP-methylosome complex. Cell Rep 9, 48-60, doi:10.1016/j.celrep.2014.08.071 (2014); Shia, W. J. et al. PRMT1 inte- racts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and proge- nitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Zhao, X. et al. Methylation of RUNX1 by PRMT1 abrogates SIN3A binding and potentiates its trans- criptional activity. Genes Dev 22, 640-653, doi:10.1101/gad.1632608 (2008), bem como por meio de suas atividades sobre substrates não histona (Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine methylation of non-histone proteins and its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014)). Consequentemente, foi reco- nhecido que um inibidor de PRMT1 deve ser valioso como agente anti- proliferativo para uso no tratamento de distúrbios hiperproliferativos.
[006] As imunoterapias são outra abordagem para tratar distúrbios hiperproliferativos. Aumentar a função das células T antitumorais e in- duzir a proliferação de células T é uma abordagem nova e poderosa para o tratamento do câncer. Três anticorpos imuno-oncológicos (por exemplo, imunomoduladores) são atualmente comercializados. Acre- dita-se que anti-CTLA-4 (YERVOY®/ipilimumab) aumente as respostas imunológicas no ponto de iniciação das células T e os anticorpos anti- PD-1 (OPDIVO®/nivolumab e KEYTRUDA®/pembrolizumab) atuam no microambiente tumoral local, ao aliviar um ponto de verificação inibitório em células T específicas de tumor que já foram preparadas e ativadas.
[007] ICOS é um receptor coestimulador de células T com relação estrutural e funcional com a superfamília CD28/CTLA-4-Ig (Hutloff, et al., "ICOS is an inducible T-cell co-stimulator structurally and functionally related to CD28", Nature, 397: 263-266 (1999)). A ativação de ICOS ocorre através da ligação por ICOS-L (B7RP-1/B7-H2). Nem B7-1 nem B7-2 (ligandos para CD28 e CTLA4) se ligam ou ativam ICOS. No en- tanto, foi demonstrado que ICOS-L se liga fracamente a CD28 e CTLA- 4 (Yao S et al., “B7-H2 is a costimulatory ligand for CD28 in human”, Immunity, 34(5); 729-40 (2011)). A expressão de ICOS parece estar res- trita às células T. Os níveis de expressão de ICOS variam entre os dife- rentes subconjuntos de células T e no status de ativação das células T. A expressão de ICOS foi mostrada em células TH17 em repouso, T fo- liculares auxiliares (TFH) e T reguladoras (Treg); no entanto, ao contrá- rio de CD28; não é altamente expresso em populações de células T efetoras TH1 e TH2 puras (Paulos CM et al., “The inducible costimulator (ICOS) is critical for the development of human Th17 cells”, Sci Transl
Med, 2(55); 55ra78 (2010)). A expressão de ICOS é altamente induzida em células T efetoras CD4+ e CD8+ após a ativação por meio de envol- vimento de TCR (Wakamatsu E, et al., “Convergent and divergent ef- fects of costimulatory molecules in conventional and regulatory CD4+ T cells”, Proc Natal Acad Sci USA, 110(3); 1023-8 (2013)). A sinalização coestimulatória através do receptor ICOS ocorre apenas em células T que recebem um sinal de ativação de TCR simultâneo (Sharpe AH and Freeman GJ. “The B7-CD28 Superfamily”, Nat. Rev Immunol, 2(2); 116- 26 (2002)). Em células T específicas para antígenos ativados, ICOS re- gula a produção de citocinas TH1 e TH2, incluindo IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-4, IL-13 e outras. ICOS também estimula a proliferação de células T efetoras, embora em menor extensão do que CD28 (Sharpe AH and Freeman GJ. “The B7-CD28 Superfamily”, Nat. Rev Immunol, 2(2); 116- 26 (2002)).
[008] Um crescente corpo de literatura apoia a ideia de que a ati- vação de ICOS em células T efetoras CD4+ e CD8+ tem potencial anti- tumoral. Uma proteína de fusão ICOS-L-Fc causou atraso no cresci- mento do tumor e erradicação completa do tumor em camundongos com SA-1 (sarcoma), Meth A (fibrossarcoma), EMT6 (mama) e P815 (mas- tocitoma) e EL-4 (plasmocitoma) tumores singênicos, enquanto ne- nhuma atividade foi observada no modelo de tumor B16-F10 (mela- noma) que é conhecido por ser pouco imunogênico (Ara G et al., “Potent activity of soluble B7RP-1-Fc in therapy of murine tumors in syngeneic hosts”, Int. J Cancer, 103(4); 501-7 (2003)). A atividade antitumoral de ICOS-L-Fc era dependente de uma resposta imune intacta, uma vez que a atividade foi completamente perdida em tumores cultivados em ca- mundongos nus. A análise de tumores de camundongos tratados com ICOS-L-Fc demonstrou um aumento significativo na infiltração de célu- las T CD4+ e CD8+ em tumores responsivos ao tratamento, apoiando o efeito imunoestimulador de ICOS-L-Fc nesses modelos.
[009] Outro relatório usando camundongos ICOS-/- e ICOS-L-/- de- monstrou a necessidade de sinalização de ICOS na mediação da ativi- dade antitumoral de um anticorpo anti-CTLA4 no modelo de tumor sin- gênico de melanoma B16/Bl6 (Fu T et al., “The ICOS/ICOSL pathway is required for optimal antitumor responses mediated by anti-CTLA-4 the- rapy”, Cancer Res, 71(16); 5445-54 (2011)). Camundongos sem ICOS ou ICOS-L diminuíram significativamente a sobrevivência taxas em comparação com camundongos de tipo selvagem após tratamento com anticorpo anti-CTLA4. Em um estudo separado, as células tumorais B16/Bl6 foram transduzidas para superexpressar ICOS-L murino recom- binante. Esses tumores foram considerados como sendo significativa- mente mais sensíveis ao tratamento anti-CTLA4 em comparação com células tumorais B16/Bl6 transduzidas com uma proteína de controle (Allison J et al., “Combination immunotherapy for the treatment of can- cer”, WO2011/041613 A2 (2009)). Esses estudos fornecem evidências do potencial antitumoral de um agonista ICOS, tanto sozinho quanto em combinação com outros anticorpos imunomoduladores.
[010] Novos dados de pacientes tratados com anticorpos anti- CTLA4 também apontam para o papel positivo das células T efetoras ICOS+ na mediação de uma resposta imune antitumoral. Pacientes com melanoma metastático (Giacomo AMD et al., “Long-term survival and immunological parameters in metastatic melanoma patients who res- pond to ipilimumab 10 mg/kg within an expanded access program”, Can- cer Immunol Immunother., 62(6); 1021-8 (2013)); urotelial (Carthon BC et al., “Preoperative CTLA-4 blockade: Tolerability and immune monito- ring in the setting of a presurgical clinical trial” Clin Cancer Res., 16(10); 2861-71 (2010)); mama (Vonderheide RH et al., “Tremelimumab in com- bination with exemestane in patients with advanced breast cancer and treatment-associated modulation of inducible costimulator expression on patient T cells”, Clin Cancer Res., 16(13); 3485-94 (2010)); e câncer de próstata que aumentaram as contagens absolutas de células T CD4+ ICOS+ e CD8+ ICOS+ circulantes e infiltrantes de tumor após o trata- mento com ipilimumab têm resultados relacionados ao tratamento sig- nificativamente melhores do que os pacientes onde pouco ou nenhum aumento é observado. É importante ressaltar que o ipilimumab altera a razão de efetora T ICOS+: Treg, revertendo uma abundância de pré- tratamento de Tregs para uma abundância significativa de efetoras T vs. Tregs após o tratamento (Liakou CI et al., “CTLA-4 blockade increases IFN-gamma producing CD4+ICOShi cells to shift the ratio of effector to regulatory T cells in cancer patients”, Proc Natl Acad Sci USA. 105(39); 14987-92 (2008)) e (Vonderheide RH et al., Clin Cancer Res., 16(13); 3485-94 (2010)). Portanto, as células efetoras T positivas para ICOS são um biomarcador preditivo positivo da resposta de ipilimumab, o que aponta para a vantagem potencial de ativar essa população de células com um anticorpo agonista ICOS.
[011] Embora tenha havido muitos avanços recentes no trata- mento do câncer, permanece a necessidade de um tratamento mais efi- caz e/ou aprimorado de um indivíduo que sofre os efeitos do câncer.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[012] FIG. 1: Tipos de metilação em resíduos de arginina. De Yang, Y. & Bedford, M.T. Protein arginine methyltransferases and can- cer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi: 10.1038/nrc3409 (2013).
[013] FIG. 2: Classes funcionais de substratos de PRMT1 rele- vantes para câncer. Substratos conhecidos de PRMT1 e sua associa- ção à biologia relacionada ao câncer Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011- 04-347476 (2012); Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine methylation of non-histone proteins and its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014); Boisvert, F. M., Rhie, A., Richard, S. & Doherty, A. J. The GAR motif of 53BP1 is arginine me- thylated by PRMT1 and is necessary for 53BP1 DNA binding activity. Cell Cycle 4, 1834-1841, doi:10.4161/cc.4.12.2250 (2005); Boisvert, F. M., Dery, U., Masson, J. Y. & Richard, S. Arginine methylation of MRE11 by PRMT1 is required for DNA damage checkpoint control. Genes Dev 19, 671-676, doi:10.1101/gad.1279805 (2005); Zhang, L. et al. Cross- talk between PRMT1-mediated methylation and ubiquitylation on RBM15 controls RNA emenda. Elife 4, doi:10.7554/eLife.07938 (2015); Snijders, A. P. et al. Arginine methylation and citrullination of emenda factor proline- and glutamine-rich (SFPQ/PSF) regulates its association with mRNA. RNA 21, 347-359, doi:10.1261/rna.045138.114 (2015); Liao, H. W. et al. PRMT1-mediated methylation of the EGF receptor re- gulates signaling and cetuximab response. J Clin Invest 125, 4529-4543, doi:10.1172/JCI82826 (2015); Ng, R. K. et al. Epigenetic dysregulation of leukaemic HOX code in MLL-rearranged leukaemia mouse model. J Pathol 232, 65-74, doi:10.1002/path.4279 (2014); Bressan, G. C. et al. Arginine methylation analysis of the emenda-associated SR protein SFRS9/SRP30C. Cell Mol Biol Lett 14, 657-669, doi:10.2478/s11658- 009-0024-2 (2009)).
[014] FIG. 3: Avaliação de metilscan de linhagens de células tratadas com Composto D. A porcentagem de proteínas com altera- ções de metilação (independente da direcionalidade da alteração) são categorizadas por grupo funcional, conforme indicado.
[015] FIG. 4: Modo de inibição contra PRMT1 por Composto A. Os valores de IC50 foram determinados após uma reação de PRMT1 por 18 minutos e ajustando os dados a uma equação de resposta à dose de 3 parâmetros. (A) Experimento representativo mostrando os valores de IC50 do Composto A esquematizados como uma função de [SAM]/Kmapp ajustado a uma equação para C50 = Ki/(1+ (Km/[S]) de inibição não com- petitiva). (B) Experimento representativo mostrando valores de IC50 es- quematizados como uma função de [Peptídeo]/Kmapp. A inserção mostra dados adequados a uma equação para inibição mista para avaliar a ini- bição do Composto A de PRMT1 em relação ao substrato do peptídeo H4 1-21 ((v = Vmax * [S] / (Km * (1+[I]/Ki) + [S] * (1+[I]/K’))). Um valor alfa (α = Ki’/Ki) >0,1 mas <10 é indicativo de um inibidor misto.
[016] FIG. 5: Potência do Composto A contra PRMT1. A ativi- dade de PRMT1 foi monitorada usando um ensaio radioativo executado em condições equilibradas (concentrações de substrato iguais a Kmapp) medindo a transferência de 3H de SAM para um peptídeo H4 1-21. Os valores de IC50 foram determinados ajustando os dados a uma equação de resposta à dose de 3 parâmetros. (A) Valores IC50 esquematizados como uma função de PRMT1: SAM: Tempo de pré-incubação do Com- posto A-tri-HCl. Círculos abertos e preenchidos representam dois expe- rimentos independentes (0,5 nM PRMT1). A inserção mostra uma curva IC50 representativa para a inibição do Composto A-tri-HCl da atividade de PRMT1 após 60 minutos de pré-incubação de PRMT1: SAM: Com- posto A-tri-HCl. (B) Inibição do Composto A de PRMT1 categorizada pela forma de sal. Os valores de IC50 foram determinados após PRMT1: SAM: pré-incubação de 60 minutos e uma reação de 20 minutos.
[017] FIG. 6: A estrutura cristalina foi resolvida em 2,48Å para PRMT1 no complexo com Composto A (laranja) e SAH (roxo). A in- serção revela que o composto está ligado ao bolso de ligação do peptí- deo e faz interações importantes com cadeias laterais PRMT1.
[018] FIG. 7: Inibição de ortólogos PRMT1 pelo Composto A. A atividade de PRMT1 foi monitorada usando um ensaio radioativo exe- cutado em condições equilibradas (concentrações de substrato iguais a Kmapp) medindo a transferência de 3H de SAM para um peptídeo H4 1-
21. Os valores de IC50 foram determinados ajustando os dados a uma equação de resposta à dose de 3 parâmetros. (A) Valores de IC50 es- quematizados como uma função de PRMT1: SAM: Tempo de pré-incu- bação do Composto A para ortólogos de rato (○) e cachorro (●). (B) Va- lores de IC50 representados em função da concentração de PRMT1 em rato (○), cão (●) ou humano (□). (C) Os valores de IC50 foram determi- nados após uma pré-incubação de PRMT1: SAM: Composto A de 60 minutos e uma reação de 20 minutos. Os dados são uma média do teste de múltiplas formas de sal do Composto A. Os valores de Ki*app foram calculados com base na equação Ki = IC50/(1+(Km/[S])) para um inibidor não competitivo e a suposição de que a determinação de IC50 foi repre- sentante da conformação ESI *.
[019] FIG. 8: Potência do Composto A contra membros da fa- mília PRMT. A atividade de PRMT foi monitorada usando um ensaio radioativo executado em condições equilibradas (concentrações de substrato em Kmapp) após uma pré-incubação de PRMT:SAM:Composto A de 60 minutos. Os valores de IC50 para o Composto A foram determi- nados ajustando os dados a uma equação de resposta à dose de 3 pa- râmetros. (A) Os dados são uma média do teste de múltiplas formas de sal do Composto A. O valor Ki*app foi calculado com base na equação Ki = IC50/(1+(Km/[S])) para um inibidor não competitivo e a suposição de que a determinação de IC50 foi representativa da conformação ESI*. (B) Valores IC50 esquematizados como uma função de PRMT3 (●), PRMT4 (○), PRMT6 (■) ou PRMT8 (□):SAM:Tempo de pré-incubação do Com- posto A.
[020] FIG. 9: MMA em células western. As células RKO foram tratadas com Composto A-tri-HCl, Composto A-mono-HCl, Com- posto A-base livre e Composto A-di-HCl por 72 horas. As células foram fixadas, coradas com anti-Rme1GG para detectar MMA e antitu- bulina para normalizar o sinal e fotografadas usando o sistema de ima-
gem Odyssey. MMA em relação à tubulina foi traçado contra a concen- tração de composto para gerar um ajuste de curva (A) no GraphPad usando uma equação de ajuste de curva bifásica. Resumo de EC50 (pri- meira inflexão), desvio padrão e N são mostrados em (B).
[021] FIG. 10: Expressão de PRMT1 em tumores. Os níveis de expressão de mRNA foram obtidos de cBioPortal for Cancer Genomics. Os níveis de ACTB e TYR são mostrados para indicar a expressão do nível correspondente a um gene que é expresso de forma ubitíqua ver- sus um que tem expressão restrita, respectivamente.
[022] FIG. 11: Atividade antiproliferativa do Composto A em cultura de células. 196 linhagens de células de câncer humano foram avaliadas quanto à sensibilidade ao Composto A em um ensaio de cres- cimento de 6 dias. Os valores gIC50 para cada linhagem de células são mostrados como gráficos de barras com a exposição humana prevista, conforme indicado em (A). Ymin -T0, uma medida de citotoxicidade, é traçada como um gráfico de barras em (B), no qual os valores de gIC100 para cada linhagem de células são mostrados como pontos vermelhos. O Cave calculado a partir do rato MTD de 14 dias (150 mg/kg, Cave = 2,1 µM) é indicado como uma linha tracejada vermelha.
[023] FIG. 12: Curso de tempo de efeitos do Composto A nas marcas de metilação de arginina em células cultivadas. (A) Mudan- ças em ADMA, SDMA e MMA em células Toledo DLBCL tratadas com Composto A. Mudanças na metilação são mostradas normalizadas em relação à tubulina ± SEM (n = 3). (B) Western Blots representativos de marcas de metilação de arginina. As regiões quantificadas são indica- das por barras pretas à direita do gel.
[024] FIG. 13: Resposta à dose do Composto A na metilação da arginina. (A) Imagens de western blot representativas de MMA e ADMA da resposta à dose do Composto A na linhagem de células
U2932. As regiões quantificadas para (B) são denotadas por barras pre- tas à esquerda dos géis. (B) Concentração mínima eficaz do Composto A necessária para 50% da indução máxima de MMA ou 50% da redução máxima de ADMA em 5 linhagens de células de linfoma após 72 horas de exposição ± desvio padrão (n = 2). Os valores de gIC50 correspon- dentes no ensaio de crescimento e morte de 6 dias são indicados em vermelho.
[025] FIG. 14: Durabilidade de marcas de metilação de arginina em resposta ao Composto A em células de linfoma. (A) Estabilidade de alterações em ADMA, SDMA e MMA na linhagem de células Toledo DLBCL cultivada com Composto A. As alterações na metilação são mostradas normalizadas em relação à tubulina ± SEM (n = 3). (B) Wes- tern blots representativos de marcas de metilação de arginina. As regi- ões quantificadas para (A) são denotadas por barras pretas na lateral do gel.
[026] FIG. 15: Curso de proliferação de linhagens de células de linfoma. O crescimento celular foi avaliado ao longo de um período de 10 dias nas linhagens de células Toledo (A) e Daudi (B) (n = 2 por linha- gem de células). Dados representativos para uma única réplica biológica são mostrados.
[027] FIG. 16: Efeitos antiproliferativos do Composto A em li- nhagens de células de linfoma em 6 e 10 dias. (A) Valores médios de gIC50 de ensaios de proliferação de 6 dias (azul claro) e 10 dias (azul escuro) em linhagens de células de linfoma. (B) Ymin-T0 em 6 dias (azul claro) e 10 dias (azul escuro) com gIC100 correspondente (pontos ver- melhos).
[028] FIG. 17: Efeitos antiproliferativos do Composto A em li- nhagens de células de linfoma classificadas por subtipo. (A) Os va- lores de gIC50 para cada linhagem de células são mostrados como grá- ficos de barras. Ymin-T0, uma medida de citotoxicidade, é traçado como um gráfico de barras em (B), no qual os valores de gIC100 para cada linhagem de células são mostrados como pontos vermelhos. As infor- mações do subtipo foram coletadas dos repositórios de linhagem de cé- lulas ATCC ou DSMZ.
[029] FIG. 18: Análise FACS de iodeto de propídio do ciclo ce- lular em linhagens de células de linfoma humano. Três linhagens de células de linfoma, Toledo (A), U2932 (B) e OCI-Ly1 (C) foram tratadas com 0, 1, 10, 100, 1000 e 10.000 nM de Composto A por 10 dias com amostras tomadas nos dias 3, 5, 7, 10 pós-tratamento. Os dados repre- sentam a média ± SEM de réplicas biológicas, n = 2.
[030] FIG. 19: Ativação de caspase-3/7 em linhagens de célu- las de linfoma tratadas com Composto A. A apoptose foi avaliada ao longo de um período de 10 dias nas linhagens de células Toledo (A) e Daudi (B). A ativação de caspase 3/7 é mostrada como indução dobrada em relação às células tratadas com DMSO. Duas réplicas independen- tes foram realizadas para cada linhagem de células. Dados representa- tivos são mostrados para cada um.
[031] FIG. 20: Eficácia do Composto A em camundongos por- tadores de xenoenxertos de Toledo. Camundongos foram tratados QD (37,5, 75, 150, 300, 450 ou 600 mg/kg) com Composto A por via oral ou BID com 75 mg/kg (B) ao longo de um período de 28 (A) ou 24 (B) dias e o volume do tumor foi medido duas vezes por semana.
[032] FIG. 21: Efeito do Composto A em linhagens de células AML em 6 e 10 dias. (A) Valores médios de gIC50 de ensaios de proli- feração de 6 dias (azul claro) e 10 dias (azul escuro) em linhagens de células AML. (B) Ymin-T0 em 6 dias (azul claro) e 10 dias (azul escuro) com gIC100 correspondente (pontos vermelhos).
[033] FIG. 22: Curso de tempo de proliferação in vitro de cines ccRCC com Composto A. (A) Crescimento em relação ao controle (DMSO) para 2 linhagens de células ccRCC. Curvas representativas de uma única réplica são mostradas. (B) Resumo de gIC50 e % de inibição de crescimento para linhagens de células ccRCC durante o período (Média ± DP; n = 2 para cada linhagem).
[034] FIG. 23: Eficácia do Composto A em xenoenxertos de ACHN. Camundongos foram tratados diariamente com Composto A oralmente durante um período de 28 dias e o volume do tumor foi me- dido duas vezes por semana.
[035] FIG. 24: Efeitos antiproliferativos do Composto A em li- nhagens de células de câncer de mama. Gráficos de barras de gIC50 e inibição de crescimento (%) (círculos vermelhos) para linhagens de células de câncer de mama traçadas com Composto A no ensaio de proliferação de 6 dias. As linhagens de células que representam o cân- cer de mama triplo negativo (TNBC) são mostradas em laranja; outros subtipos estão em azul.
[036] FIG. 25: Efeito do Composto A em linhagens de células de câncer de mama aos 7 e 12 Dias. Valores de inibição de cresci- mento médio (%) de ensaios de proliferação de 7 dias (azul claro) e 10 dias (azul escuro) em linhagens de células de câncer de mama com gIC50 correspondente (pontos vermelhos). O aumento na potência e ini- bição percentual observada em ensaios de proliferação de longo prazo com câncer de mama, mas não linfoma ou linhagens de células AML, sugere que certos tipos de tumor requerem uma exposição mais longa ao Composto A para revelar completamente a atividade antiproliferativa.
[037] FIG. 26: Atividade sinérgica de anticorpo agonista de ICOS anticamundongo em combinação com Composto D em mo- delos de tumor singênico. Camundongos imunocompetentes com alo- enxertos subcutâneos de CT26 (cólon) ou EMT6 (mama) foram tratados com 5 mg/kg de anti-ICOS (Icos17G9-GSK) e 300 mg/kg de Composto D sozinho e em combinação. Curvas de sobrevivência para CT26 (A) e EMT6 (B): a combinação do Composto D e anti-ICOS teve benefício de sobrevivência significativo neste estudo em relação a qualquer agente único (teste de Grehan-Breslow-Wilcoxon). (C) Curvas de crescimento tumoral individuais de ambos os estudos de eficácia comparando veí- culo, anti-ICOS, Composto D e a combinação anti-ICOS/Composto D.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[038] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de tratar câncer em um ser humano em necessidade do mesmo, o método compreendendo administrar ao ser humano uma quantidade terapeuti- camente eficaz de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e administrar ao ser humano uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de uma proteína de ligação a ICOS ou porção de liga- ção a antígeno da mesma.
[039] Em um aspecto, a presente invenção fornece um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma para uso no tratamento de câncer em um ser humano em necessidade do mesmo.
[040] Em um aspecto, a presente invenção fornece o uso de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e pro- teína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma para a fabricação de um medicamento para tratar o câncer.
[041] Em um aspecto, a presente invenção fornece o uso de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e pro- teína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma para o tratamento de câncer.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO DEFINIÇÕES
[042] Tal como aqui utilizado, "inibidor de proteína arginina metil- transferase tipo I" ou "inibidor de PRMT tipo I" significa um agente que inibe qualquer um ou mais dos seguintes: inibidor de proteína arginina metiltransferase 1 (PRMT1), proteína arginina metiltransferase 3 (PRMT3), proteína arginina metiltransferase 4 (PRMT4), proteína argi- nina metiltransferase 6 (PRMT6) e proteína arginina metiltransferase 8 (PRMT8). Em algumas modalidades, o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de molécula pequena. Em algumas modalidades, o inibidor de PRMT Tipo I inibe seletivamente qualquer um ou mais dos seguintes: inibidor de proteína arginina metiltransferase 1 (PRMT1), proteína argi- nina metiltransferase 3 (PRMT3), proteína arginina metiltransferase 4 (PRMT4), proteína arginina metiltransferase 6 (PRMT6) e proteína argi- nina metiltransferase 8 (PRMT8). Em algumas modalidades, o inibidor de PRMT Tipo I é um inibidor seletivo de PRMT1, PRMT3, PRMT4, PRMT6 e PRMT8.
[043] Arginina metiltransferases são alvos atraentes para modula- ção devido ao seu papel na regulação de diversos processos biológicos. Verificou-se agora que os compostos aqui descritos e os sais e compo- sições farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são eficazes como inibidores de arginina metiltransferases.
[044] Definições de grupos funcionais específicos e termos quími- cos são descritos em mais detalhes abaixo. Os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica dos Elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75a Ed., Capa interna, e gru- pos funcionais específicos são geralmente definidos como nela descri- tos. Além disso, os princípios gerais da química orgânica, bem como porções funcionais específicas e reatividade, são descritos em Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith e March, March's Advanced Organic Chemistry, 5ª Edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., Nova Iorque, 1989; e Car- ruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3ª Edição, Cam- bridge University Press, Cambridge, 1987.
[045] Os compostos aqui descritos podem compreender um ou mais centros assimétricos e, portanto, podem existir em várias formas isoméricas, por exemplo, enantiômeros e/ou diastereômeros. Por exem- plo, os compostos descritos aqui podem estar na forma de um enantiô- mero individual, diastereômero ou isômero geométrico, ou podem estar na forma de uma mistura de estereoisômeros, incluindo misturas racê- micas e misturas enriquecidas em um ou mais estereoisômeros. Os isô- meros podem ser isolados de misturas por métodos conhecidos pelos versados na técnica, incluindo cromatografia líquida de alta pressão qui- ral (HPLC) e a formação e cristalização de sais quirais; ou isômeros preferidos podem ser preparados por sínteses assimétricas. Vide, por exemplo, Jacques et ah, Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wi- ley Interscience, Nova Iorque, 1981); Wilen et ah, Tetrahedron 33: 2725 (1977); Eliel, Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); e Wilen, Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. Of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972). A presente divulgação abrange adicionalmente compostos descritos neste documento como isômeros individuais substancialmente livres de outros isômeros e, alternativamente, como misturas de vários isômeros.
[046] Deve ser entendido que os compostos da presente invenção podem ser descritos como diferentes tautômeros. Também deve ser en- tendido que quando os compostos têm formas tautoméricas, todas as formas tautoméricas devem ser incluídas no escopo da presente inven- ção, e a nomenclatura de qualquer composto aqui descrito não exclui qualquer forma de tautômero.
[047] A menos que indicado de outra forma, as estruturas aqui re- presentadas também devem incluir compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, os compostos com as presentes estruturas, exceto para a 19 substituição de hidrogênio por deutério ou trítio, substituição de F por 18 F ou a substituição de um carbono por um carbono enriquecido com 13 C ou 14C estão dentro do escopo da divulgação. Esses compostos são úteis, por exemplo, como ferramentas analíticas ou sondas em ensaios biológicos.
[048] Quando um intervalo de valores é listado, a intenção é abran- ger cada valor e subintervalo dentro do intervalo. Por exemplo, "C1-6 al- quila" pretende abranger C1; C2, C3, C4, C5, C6, C1-6, C1-5, C1-4, C1-3, C1- 2, C2-6, C2-5, C2-4, C2-3, C3-6, C3-5, C3-4, C4-6, C4-5, e C5-6 alquila.
[049] "Radical" refere-se a um ponto de ligação em um determi- nado grupo. Radical inclui radicais divalentes de um determinado grupo.
[050] "Alquila" refere-se a um radical de um grupo hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada tendo de 1 a 20 átomos de car- bono (“C1-20 alquila”). Em algumas modalidades, um grupo alquila tem 1 a 10 átomos de carbono (“C1-10 alquila”). Em algumas modalidades, um grupo alquila tem 1 a 9 átomos de carbono (“C1-9 alquila”). Em algumas modalidades, um grupo alquila tem 1 a 8 átomos de carbono (“C1-8 al- quila”). Em algumas modalidades, um grupo alquila tem 1 a 7 átomos de carbono (“C1-7 alquila”). Em algumas modalidades, um grupo alquila tem 1 a 6 átomos de carbono (“C1-6 alquila”). Em algumas modalidades,
um grupo alquila tem 1 a 5 átomos de carbono (“C1-5 alquila”). Em algu- mas modalidades, um grupo alquila tem 1 a 4 átomos de carbono (“C1-4 alquila”). Em algumas modalidades, um grupo alquila tem 1 a 3 átomos de carbono (“C1-3 alquila”). Em algumas modalidades, um grupo alquila tem 1 a 2 átomos de carbono (“C1-2 alquila”). Em algumas modalidades, um grupo alquila tem 1 carbon atom (“C1 alquila”). Em algumas modali- dades, um grupo alquila tem 2 to 6 átomos de carbono (“C2-6 alquila”). Exemplos de grupos C1-6 alquila incluem metila (C1), etila (C2), n-propila (C3), isopropila (C3), n-butila (C4), terc-butila (C4), sec-butila (C4), iso- butila (C4), n-pentila (C5), 3-pentanila (C5), amila (C5), neopentila (C5), 3- methil-2-butanila (C5), amila terciária (C5), e n-hexila (C6). Exemplos adi- cionais de grupos alquila incluem n-heptila (C7), n-octila (C8) e seme- lhantes. Em certas modalidades, cada ocorrência de um grupo alquila é independentemente opcionalmente substituída, por exemplo, não subs- tituído (uma "alquila não substituída") ou substituído (uma "alquila subs- tituída") por um ou mais substituintes. Em certas modalidades, o grupo alquila é C1-10 alquila não substituída (por exemplo, -CH3). Em certas modalidades, o grupo alquila é C1-10 alquila substituída.
[051] Em algumas modalidades, um grupo alquila é substituído por um ou mais halogênios. "Perhaloalquila" é um grupo alquila substituído como aqui definido, em que todos os átomos de hidrogênio são substi- tuídos independentemente por um halogênio, por exemplo, flúor, bromo, cloro ou iodo. Em algumas modalidades, a porção alquila tem de 1 a 8 átomos de carbono (“C1-8 perhaloalquila”). Em algumas modalidades, a porção alquila tem 1 a 6 átomos de carbono (“C1-6 perhaloalquila”). Em algumas modalidades, a porção alquila tem 1 a 4 átomos de carbono (“C1-4 perhaloalquila”). Em algumas modalidades, a porção alquila tem 1 a 3 átomos de carbono (“C1-3 perhaloalquila”). Em algumas modalida- des, a porção alquila tem 1 a 2 átomos de carbono (“C1-2 perhaloal- quila”). Em algumas modalidades, todos os átomos de hidrogênio são substituídos por flúor. Em algumas modalidades, todos os átomos de hidrogênio são substituídos por cloro. Exemplos de grupos perhaloal- quila incluem CF3, -CF2CF3, -CF2CF2CF3, -CCl3, -CFCl2, -CF2Cl, e se- melhantes.
[052] "Alquenila" refere-se a um radical de um grupo hidrocarbo- neto de cadeia linear ou ramificada tendo de 2 a 20 átomos de carbono e uma ou mais ligações duplas carbono-carbono (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 ligações duplas) e, opcionalmente, uma ou mais ligações triplas (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 ligações triplas) ("C2-20 alquenila"). Em algu- mas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 9 átomos de carbono (“C2-9 alquenila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 8 átomos de carbono (“C2-8 alquenila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 7 átomos de carbono (“C2-7 alquenila”) Em algu- mas modalidades, um grupo alquenila tem 2 to 6 átomos de carbono (“C2-6 alquenila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 5 átomos de carbono (“C2-5 alquenila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 4 átomos de carbono (“C2-4 alquenila”). Em al- gumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 3 átomos de carbono (“C2-3 alquenila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 átomos de carbono (“C2 alquenila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 átomos de carbono ("C2 alquenila"). As uma ou mais ligações duplas carbono-carbono podem ser internas (como em 2- butenila) ou terminais (como em 1-butenila). Exemplos de grupos C2-4 alquenila incluem etenila (C2), 1-propenila (C3), 2-propenila (C3), 1-bute- nila (C4), 2-butenila (C4), butadienila (C4) e semelhantes. Exemplos de grupos C2-6 alquenila incluem os grupos C2-4 alquenila acima menciona- dos, bem como pentenila (C5), pentadienila (C5), hexenila (C6) e seme- lhantes. Exemplos adicionais de alquenila incluem heptenila (C7), octe- nila (C8), octatrienila (C8) e semelhantes. Em certas modalidades, cada ocorrência de um grupo alquenila é independentemente opcionalmente substituída, por exemplo, não substituído (uma "alquenila não substitu- ída") ou substituído (uma "alquenila substituída") por um ou mais subs- tituintes. Em certas modalidades, o grupo alquenila é C2-10 alquenila não substituída. Em certas modalidades, o grupo alquenila é C2-10 alquenila substituída.
[053] "Alquinila" refere-se a um radical de um grupo hidrocarbo- neto de cadeia linear ou ramificada com 2 a 20 átomos de carbono e uma ou mais ligações triplas carbono-carbono (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 ligações triplas) e, opcionalmente, uma ou mais ligações duplas (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 ligações duplas) ("alquinila C2-20"). Em certas modalidades, a alquinila não compreende ligações duplas. Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 10 átomos de carbono (“C2-10 alquinila"). Em algumas modalidades, um grupo alquinila tem 2 a 9 áto- mos de carbono (“C2-9 alquinila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 8 átomos de carbono (“C2-8 alquinila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 7 átomos de carbono (“C2-7 alquinila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 6 áto- mos de carbono (“C2-6 alquinila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 5 átomos de carbono (“C2-5 alquinila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 4 átomos de carbono (“C2-4 alquinila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 a 3 áto- mos de carbono (“C2-3 alquinila”). Em algumas modalidades, um grupo alquenila tem 2 átomos de carbono (“C2 alquinila”). As uma ou mais li- gações triplas carbono-carbono podem ser internas (como em 2-buti- nila) ou terminais (como em 1-butinila). Exemplos de grupos C2-4 al- quinila incluem, sem limitação, etinila (C2), 1-propinila (C3), 2-propinila (C3), 1-butinila (C4), 2-butinila (C4) e semelhantes. Exemplos de grupos C2-6 alquinila incluem os grupos C2-4 alquinila acima mencionados, bem como pentinila (C5), hexinila (C6) e semelhantes. Exemplos adicionais de alquinila incluem heptinila (C7), octinila (C8) e semelhantes. Em cer- tas modalidades, cada ocorrência de um grupo alquinila é independen- temente opcionalmente substituída, por exemplo, não substituído (uma "alquinila não substituída") ou substituído (uma "alquinila substituída") por um ou mais substituintes. Em certas modalidades, o grupo alquinila é alquinila C2-10 não substituída. Em certas modalidades, o grupo al- quinila é alquinila C2-10 substituída.
[054] "Fundido" ou "orto-fundido" são usados indistintamente neste documento e referem-se a dois anéis que têm dois átomos e uma ligação em comum, por exemplo, naftaleno
[055] "Em ponte" refere-se a um sistema de anel contendo (1) um átomo cabeça de ponte ou grupo átomos que conecta duas ou mais posições não adjacentes do mesmo anel; ou (2) um átomo cabeça de ponte ou grupo átomos que conectam duas ou mais posições de dife- rentes anéis de um sistema de anéis e não forma, assim, um anel orto- fundido, por exemplo,
[056] "Espiro" ou "Espiro-fundido" refere-se a um grupo átomos que se conectam ao mesmo átomo de um sistema de anel carbocíclico ou heterocíclico (ligação geminal), formando assim um anel, por exem- plo,
[057] A fusão espiro em um átomo cabeça de ponte também é con- templada.
[058] "Carbociclila" ou "carbocíclico" refere-se a um radical de um grupo hidrocarboneto cíclico não aromático com 3 a 14 átomos de car- bono no anel ("C3-14 carbociclila") e zero heteroátomos no sistema de anel não aromático. Em certas modalidades, um grupo carbociclila re- fere-se a um radical de um grupo hidrocarboneto cíclico não aromático tendo de 3 a 10 átomos de carbono no anel (“C3-10 carbociclila") e zero heteroátomos no sistema de anel não aromático. Em algumas modali- dades, um grupo carbociclila tem 3 a 8 átomos de carbono no anel ("C3- 8 carbociclila"). Em algumas modalidades, um grupo carbociclila tem 3 a 6 átomos de carbono no anel ("C3-6 carbociclila"). Em algumas moda- lidades, um grupo carbociclila tem 3 a 6 átomos de carbono no anel ("C3- 6 carbociclila"). Em algumas modalidades, um grupo carbociclila tem 5 a 10 átomos de carbono no anel ("C5-10 carbociclila"). Grupos carboci- clila C3-6 exemplares incluem, sem limitação, ciclopropila (C3), ciclopro- penila (C3), ciclobutila (C4), ciclobutenila (C4), ciclopentila (C5), ciclopen- tenila (C5), ciclohexila (C6), ciclohexenila (C6), ciclohexadienila (C6) e se- melhantes. 8 grupos carbociclila incluem, sem limitação, os grupos car- bociclila C3-6 acima mencionados, bem como cicloheptila (C7), ciclohep- tenila (C7), cicloheptadienila (C7), cicloheptatrienila (C7), ciclo-octila (C8), ciclo-octenila (C8), biciclo [2.2.1] heptanila (C7), biciclo[2.2.2]octanila (C8) e semelhantes. Grupos C3-10 carbociclila exemplares incluem, sem limitação, os grupos C3-8 carbociclila acima mencionados, bem como ci- clononila (C9), ciclononenila (C9), ciclodecila (C10), ciclodecenila (C10), octa-hidro-1H-indenila (C9), decahidronaftalila (C10), espiro[4.5]decanila
(C10) e semelhantes. Como os exemplos anteriores ilustram, em certas modalidades, o grupo carbociclila é monocíclico ("carbociclila monocí- clico") ou é um sistema de anel fundido, em ponte ou espiro-fundível, tal como um sistema bicíclico ("carbociclila bicíclico") e pode ser saturado ou parcialmente insaturado. "Carbociclila" também inclui sistemas de anel em que o anel carbociclila, conforme definido acima, é fundido com um ou mais grupos arila ou heteroarila em que o ponto de ligação está no anel carbociclila e, em tais casos, o número de carbonos continua a designar o número de carbonos no sistema de anel carbocíclico. Em certas modalidades, cada ocorrência de um grupo carbociclila é inde- pendentemente opcionalmente substituída, por exemplo, não substitu- ído (uma "carbociclila não substituída") ou substituído (uma "carbociclila substituída") por um ou mais substituintes. Em certas modalidades, o grupo carbociclila é C3-10 carbociclila não substituída. Em certas moda- lidades, o grupo carbociclila é uma C3-10 carbociclila substituída.
[059] Em algumas modalidades, "carbociclila" é um grupo carboci- clila saturado monocíclico com 3 a 14 átomos de carbono no anel ("C3- 14 cicloalquila"). Em algumas modalidades, "carbociclila" é um grupo car- bociclila saturado monocíclico tendo 3 a 10 átomos de carbono no anel ("C3-10 cicloalquila"). Em algumas modalidades, um grupo cicloalquila tem de 3 a 8 átomos de carbono no anel ("C3-8 cicloalquila"). Em algu- mas modalidades, um grupo cicloalquila tem de 3 a 6 átomos de car- bono no anel ("C3-6 cicloalquila"). Em algumas modalidades, um grupo cicloalquila tem 5 a 6 átomos de carbono no anel ("C5-6 cicloalquila"). Em algumas modalidades, um grupo cicloalquila tem 5 a 10 átomos de carbono no anel ("C5-10 cicloalquila"). Exemplos de grupos C5-6 cicloal- quila incluem ciclopentila (C5) e ciclohexila (C5). Exemplos de grupos C3- 6 cicloalquila incluem os grupos C5-6 cicloalquila acima mencionados, bem como ciclopropila (C3) e ciclobutila (C4). Exemplos de grupos C3-8 cicloalquila incluem os grupos C3-6 cicloalquila acima mencionados, bem como cicloheptila (C7) e ciclo-octila (C8). Em certas modalidades, cada ocorrência de um grupo cicloalquila é independentemente não substitu- ída (uma "cicloalquila não substituída") ou substituído (uma "cicloalquila substituída") por um ou mais substituintes. Em certas modalidades, o grupo cicloalquila é C3-10 cicloalquila não substituída. Em certas modali- dades, o grupo cicloalquila é C3-10 cicloalquila substituída.
[060] "Heterociclila" ou "heterocíclico" refere-se a um radical de um sistema de anel não aromático de 3 a 14 membros tendo átomos de carbono no anel e 1 a 4 heteroátomos no anel, em que cada heteroá- tomo é independentemente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre (“heterociclila de 3-14 membros). Em certas modalidades, he- terociclila ou heterocíclico refere-se a um radical de um sistema de anel não aromático de 3-10 membros tendo átomos de carbono no anel e 1- 4 heteroátomos no anel, em que cada heteroátomo é independente- mente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heterocí- clico de 3 a 10 membros"). Em grupos heterociclila que contêm um ou mais átomos de nitrogênio, o ponto de ligação pode ser um átomo de carbono ou nitrogênio, conforme a valência permitir. Um grupo hetero- ciclila pode ser monocíclico ("heterociclila monocíclico") ou um sistema de anel fundido, em ponte ou espiro-fundido, como um sistema bicíclico ("heterociclila bicíclico") e pode ser saturado ou pode ser parcialmente insaturado. Os sistemas de anéis heterocíclicos bicíclicos podem incluir um ou mais heteroátomos em um ou ambos os anéis. "Heterociclila" também inclui sistemas de anel em que o anel heterociclila, conforme definido acima, é fundido com um ou mais grupos carbociclila em que o ponto de ligação está no anel carbociclila ou heterociclila, ou sistemas de anel em que o anel heterociclila, conforme definido acima, é fundido com um ou mais grupos arila ou heteroarila, em que o ponto de ligação está no anel heterociclila e, em tais casos, o número de membros do anel continua a designar o número de membros do anel no sistema de anel heterocíclico. Em certas modalidades, cada ocorrência de hetero- ciclila é independentemente opcionalmente substituída, por exemplo, não substituído (uma "heterociclila não substituída") ou substituído (uma "heterociclila substituída") por um ou mais substituintes. Em certas mo- dalidades, o grupo heterociclila é heterociclila não substituída de 3-10 membros. Em certas modalidades, o grupo heterociclila é heterociclila de 3-10 membros substituída.
[061] Em algumas modalidades, um grupo heterociclila é um sis- tema de anel não aromático de 5-10 membros tendo átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel, em que cada heteroátomo é inde- pendentemente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heterociclila de 5-10 membros") Em algumas modalidades, um grupo heterociclila é um sistema de anel não aromático de 5-8 membros tendo átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel, em que cada heteroátomo é independentemente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heterociclila de 5-8 membros"). Em algumas moda- lidades, um grupo heterociclila é um sistema de anel não aromático de 5-6 membros tendo átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel, em que cada heteroátomo é independentemente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heterociclila de 5-6 membros"). Em algumas modalidades, a heterociclila de 5-6 membros tem 1-3 he- teroátomos no anel selecionados independentemente a partir de nitro- gênio, oxigênio e enxofre. Em algumas modalidades, a heterociclila de 5-6 membros tem 1-2 heteroátomos no anel selecionados independen- temente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em algumas modali- dades, a heterociclila de 5-6 membros tem um heteroátomo de anel se- lecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre.
[062] Grupos heterociclila de 3 membros exemplares contendo um heteroátomo incluem, sem limitação, azirdinila, oxiranila e tiorenila. Gru- pos heterociclila de 4 membros exemplares contendo um heteroátomo incluem, sem limitação, azetidinila, oxetanila e tietanila. Grupos hetero- ciclila de 5 membros exemplares contendo um heteroátomo incluem, sem limitação, tetra-hidrofuranila, di-hidrofuranila, tetra-hidrotiofenila, di- hidrotiofenila, pirrolidinila, di-hidropirrolila e pirrolil-2,5-diona. Grupos he- terociclila de 5 membros exemplares contendo dois heteroátomos in- cluem, sem limitação, dioxolanila, oxasulfuranila, dissulfuranila e oxazo- lidin-2-ona. Grupos heterociclila de 5 membros exemplares contendo três heteroátomos incluem, sem limitação, triazolinila, oxadiazolinila e tiadiazolinila. Grupos heterociclila de 6 membros exemplares contendo um heteroátomo incluem, sem limitação, piperidinila, tetra-hidropiranila, di-hidropiridinila e tianila. Grupos heterociclila de 6 membros exempla- res contendo dois heteroátomos incluem, sem limitação, piperazinila, morfolinila, ditianila e dioxanila. Grupos heterociclila de 6 membros exemplares contendo três heteroátomos incluem, sem limitação, triazi- nanila. Grupos heterociclila de 7 membros exemplares contendo um he- teroátomo incluem, sem limitação, azepanila, oxepanila e tipanila. Gru- pos heterociclila de 8 membros exemplares contendo um heteroátomo incluem, sem limitação, azocanila, oxecanila e tiocanila. Grupos hetero- ciclila de 5 membros exemplares fundidos a um anel C6 arila (também referido aqui como um anel heterocíclico 5,6-bicíclico) incluem, sem li- mitação, indolinila, isoindolinila, dihidrobenzofuranila, dihidrobenzotie- nila, benzoxazolinonila e semelhantes. Grupos heterociclila de 6 mem- bros exemplares fundidos a um anel arila (também referido aqui como um anel heterocíclico 6,6-bicíclico) incluem, sem limitação, tetrahidro- quinolinila, tetrahidroisoquinolinila e semelhantes.
[063] "Arila" refere-se a um radical de um sistema de anel aromá- tico 4n+2 monocíclico ou policíclico (por exemplo, bicíclico ou tricíclico) (por exemplo, tendo 6, 10 ou 14 elétrons π compartilhados em uma ma- triz cíclica) tendo 6-14 átomos de carbono no anel e zero heteroátomos fornecidos no sistema de anel aromático ("C6-14 arila"). Em algumas mo- dalidades, um grupo arila tem seis átomos de carbono no anel ("C6 arila"; por exemplo, fenila). Em algumas modalidades, um grupo arila tem dez átomos de carbono no anel ("C10 arila"; por exemplo, naftila, tal como 1-naftila e 2-naftila). Em algumas modalidades, um grupo arila tem quatorze átomos de carbono no anel ("C14 arila"; por exemplo, antracila). "Arila" também inclui sistemas de anel em que o anel arila, como defi- nido acima, é fundido com um ou mais grupos carbociclila ou heteroci- clila em que o radical ou ponto de ligação está no anel arila e, em tais casos, o número de átomos de carbono continua para designar o nú- mero de átomos de carbono no sistema de anel arila. Em certas moda- lidades, cada ocorrência de um grupo arila é independentemente opci- onalmente substituída, por exemplo, não substituído (uma "arila não substituída") ou substituído (uma "arila substituída") por um ou mais substituintes. Em certas modalidades, o grupo arila é arila C6-14 não substituída. Em certas modalidades, o grupo arila é arila C6-14 substitu- ída.
[064] "Heteroarila" refere-se a um radical de um sistema de anel aromático 4n+2 monocíclico ou policíclico de 5-14 membros (por exem- plo, bicíclico ou tricíclico) (por exemplo, tendo 6 ou 10 elétrons π com- partilhados em uma matriz cíclica) tendo átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos de anel fornecidos no sistema de anel aromático, em que cada heteroátomo é independentemente selecionado a partir de ni- trogênio, oxigênio e enxofre ("heteroarila de 5-14 membros"). Em certas modalidades, heteroarila refere-se a um radical de um sistema de anel aromático 4n+2 monocíclico ou bicíclico de 5-10 membros tendo átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel fornecidos no sistema de anel aromático, em que cada heteroátomo é independentemente se- lecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heteroarila de 5-10 membros"). Em grupos heteroarila que contêm um ou mais átomos de nitrogênio, o ponto de ligação pode ser um átomo de carbono ou nitro- gênio, conforme a valência permitir. Os sistemas de anéis heteroarila bicíclicos podem incluir um ou mais heteroátomos em um ou em ambos os anéis. "Heteroarila" inclui sistemas de anel em que o anel heteroarila, conforme definido acima, é fundido com um ou mais grupos carbociclila ou heterociclila em que o ponto de ligação está no anel heteroarila e, em tais casos, o número de membros do anel continua a designar o número de membros do anel no sistema de anel heteroarila. "Hetero- arila" também inclui sistemas de anel em que o anel heteroarila, como definido acima, é fundido com um ou mais grupos arila em que o ponto de ligação está no anel arila ou heteroarila, e em tais casos, o número de membros do anel designa o número de membros do anel no sistema de anel fundido (arila/heteroarila). Grupos heteroarila bicíclicos em que um anel não contém um heteroátomo (por exemplo, indolila, quinolinila, carbazolila e semelhantes), o ponto de ligação pode estar em qualquer um dos anéis, por exemplo, tanto o anel com um heteroátomo (por exemplo, 2-indolila) ou o anel que não contém um heteroátomo (por exemplo, 5-indolila).
[065] Em algumas modalidades, um grupo heteroarila é um sis- tema de anel aromático com 5-14 membros tendo átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel fornecidos no sistema de anel aro- mático, em que cada heteroátomo é independentemente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heteroarila de 5-14 membros"). Em algumas modalidades, um grupo heteroarila é um sistema de anel aromático de 5-10 membros tendo átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel fornecidos no sistema de anel aromático, em que cada heteroátomo é independentemente selecionado a partir de nitro- gênio, oxigênio e enxofre ("heteroarila de 5-10 membros"). Em algumas modalidades, um grupo heteroarila é um sistema de anel aromático de 5-8 membros tendo átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel fornecidos no sistema de anel aromático, em que cada heteroá- tomo é independentemente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heteroarila de 5-8 membros"). Em algumas modalidades, um grupo heteroarila é um sistema de anel aromático de 5-6 membros tendo átomos de carbono do anel e 1-4 heteroátomos do anel fornecidos no sistema de anel aromático, em que cada heteroátomo é independente- mente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre ("hetero- arila de 5-6 membros”). Em algumas modalidades, a heteroarila de 5-6 membros tem 1-3 heteroátomos no anel selecionados independente- mente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em algumas modalida- des, a heteroarila de 5-6 membros tem 1-2 heteroátomos no anel sele- cionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em algumas modalidades, a heteroarila de 5-6 membros tem 1 hetero- átomo no anel selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Em certas modalidades, cada ocorrência de um grupo heteroarila é inde- pendentemente opcionalmente substituída, por exemplo, não substitu- ído ("heteroarila não substituída") ou substituída ("heteroarila substitu- ída") por um ou mais substituintes. Em certas modalidades, o grupo he- teroarila é heteroarila não substituída com 5-14 membros. Em certas modalidades, o grupo heteroarila é heteroarila de 5-14 membros subs- tituída.
[066] Grupos heteroarila de 5 membros exemplares contendo um heteroátomo incluem, sem limitação, pirrolila, furanila e tiofenila. Grupos heteroarila de 5 membros exemplares contendo dois heteroátomos in- cluem, sem limitação, imidazolila, pirazolila, oxazolila, isoxazolila, ti- azolila e isotiazolila. Grupos heteroarila de 5 membros exemplares con- tendo três heteroátomos incluem, sem limitação, triazolila, oxadiazolila e tiadiazolila. Grupos heteroarila de 5 membros exemplares contendo quatro heteroátomos incluem, sem limitação, tetrazolila. Grupos hetero- arila de 6 membros exemplares contendo um heteroátomo incluem, sem limitação, piridinila.
Grupos heteroarila de 6 membros exemplares con- tendo dois heteroátomos incluem, sem limitação, piridazinila, pirimidinila e pirazinila.
Grupos heteroarila de 6 membros exemplares contendo três ou quatro heteroátomos incluem, sem limitação, triazinila e tetrazinila, respectivamente.
Grupos heteroarila de 7 membros exemplares con- tendo um heteroátomo incluem, sem limitação, azepinila, oxepinila e ti- pinila.
Grupos heteroarila 6,6-bicíclicos exemplares incluem, sem limita- ção, naftiridinila, pteridinila, quinolinila, isoquinolinila, cinolinila, quinoxa- linila, ftalazinila e quinazolinila.
Grupos heteroarila 5,6-bicíclicos exem- plares incluem, sem limitação, qualquer uma das seguintes fórmulas:
[067] Em qualquer um dos grupos heteroarila monocíclicos ou bi- cíclicos, o ponto de ligação pode ser qualquer átomo de carbono ou ni- trogênio, conforme a valência permitir.
[068] "Parcialmente insaturado" refere-se a um grupo que inclui pelo menos uma ligação dupla ou tripla. O termo "parcialmente insatu- rado" destina-se a abranger anéis tendo múltiplos sítios de insaturação, mas não se destina a incluir grupos aromáticos (por exemplo, grupos arila ou heteroarila) como aqui definidos. Da mesma forma, "saturado" refere-se a um grupo que não contém uma ligação dupla ou tripla, ou seja, contém todas as ligações simples.
[069] Em algumas modalidades, os grupos alquila, alquenila, al- quinila, carbociclila, heterociclila, arila e heteroarila, conforme definidos neste documento, são opcionalmente substituídos (por exemplo, grupo alifático "substituído" ou "não substituído", alquila “substituída” ou “não substituída”, alquenila "substituído” ou “não substituído”, alquinila “subs- tituída” ou “não substituída”, carbociclila “substituída” ou “não substitu- ída”, heterociclila “substituída” ou “não substituída”, arila “substituída” ou “não substituída” ou heteroarila “substituída” ou “não substituída”). Em geral, o termo "substituído", seja precedido pelo termo "opcionalmente" ou não, significa que pelo menos um hidrogênio presente em um grupo (por exemplo, um átomo de carbono ou nitrogênio) é substituído por um substituinte permissível, por exemplo, um substituinte que após a subs- tituição resulta em um composto estável, por exemplo, um composto que não sofre transformação espontaneamente, tal como por rearranjo, ciclização, eliminação ou outra reação. A menos que indicado de outra forma, um grupo "substituído" tem um substituinte em uma ou mais po- sições substituíveis do grupo, e quando mais de uma posição em qual- quer estrutura é substituída, o substituinte é o mesmo ou diferente em cada posição. O termo "substituído" é contemplado para incluir a subs- tituição com todos os substituintes permissíveis de compostos orgâni- cos, incluindo qualquer um dos substituintes descritos neste documento que resulta na formação de um composto estável. A presente divulga- ção contempla qualquer e todas essas combinações a fim de chegar a um composto estável. Para os fins desta divulgação, heteroátomos, como nitrogênio, podem ter substituintes de hidrogênio e/ou qualquer substituinte adequado, conforme descrito neste documento, que satis- faça as valências dos heteroátomos e resulte na formação de uma por- ção estável.
[070] Substituintes exemplares de átomos de carbono incluem, mas não estão limitados a, halogênio, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -S03H, - OH, -ORaa, -ON(Rbb)2, -N(Rbb)2, -N(Rbb)3 +X, -N(ORcc)Rbb, -SH, -SRaa, - SSRCC, -C(=O)Raa, -CO2H, -CHO, -C(ORcc)2, -CO2Raa, -OC(=O)Raa, - OCO2Raa, -C(=O)N(Rbb)2, -OC(=O)N(Rbb)2, -NRbbC(=O)Raa, - NRbbCO2Raa, - NRbbC(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRbb)ORaa, - OC(=NRbb)Raa, -OC(=NRbb)ORaa, - C(=NRbb)N(Rbb)2, - OC(=NRbb)N(Rbb)2, -NRbbC(=NRbb)N(Rbb)2, -C(=O)NRbbSO2Raa, - NRbbSO2Raa, -SO2N(Rbb)2, -SO2Raa, -SO2ORaa, -OSO2Raa, -S(=O)Raa, - OS(=O)Raa, - Si(Raa)3, -OSi(Raa)3 -C(=S)N(Rbb)2, -C(=O)SRaa, - C(=S)SRaa, -SC(=S)SRaa, -SC(=O)SRaa, -OC(=O)SRaa, -SC(=O)ORaa, - SC(=O)Raa, -P(=O)2Raa, -OP(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, - OP(=O)(Raa)2, - OP(=O)(ORcc)2, -P(=O)2N(Rbb)2, -OP(=O)2N(Rbb)2, -P(=O)(NRbb)2, - OP(=O)(NRbb)2, -NRbbP(=O)(ORcc)2, -NRbbP(=O)(NRbb)2, -P(RCC)2, -
P(RCC)3, -OP(Rcc)2, - OP(Rcc)3, -B(Raa)2, -B(ORcc)2, -BRaa(ORcc), C1-10 al- quila, C1-10 perhaloalquila, C2-10 alquenila, C2-10 alquinila, C3-10 carboci- clila, heterociclila de 3-14 membros, C6-14 arila, e heteroarila de 5-14 membros, em que cada alquila, alquenila, alquinila, carbociclila, hetero- ciclila, arila, e heteroarila é independentemente substituída por 0, 1, 2, 3, 4, ou 5 grupos Rdd;
[071] ou dois hidrogênios geminais sobre um átomo de carbono são substituídos pelo grupo =O, =S, =NN(Rbb)2, =NNRbbC(=O)Raa, =NNRbbC(=O)ORaa, =NNRbbS(=O)2Raa, =NRbb, ou =NORcc; cada caso de Raa é, independentemente, selecionado a partir de C1-10 alquila, C1-10 perhaloalquila, C2-10 alquenila, C2-10 alquinila, C3-10 carbociclila, hetero- ciclila de 3-14 membros, C6-14 arila, e heteroarila de 5-14 membros, ou dois grupos Raa são unidos para formar uma heterociclila de 3-14 mem- bros ou heteroarila de 5-14 membros no anel, em que cada alquila, al- quenila, alquinila, carbociclila, heterociclila, arila, e heteroarila é inde- pendentemente substituída por 0, 1, 2, 3, 4, ou 5 grupos Rdd;
[072] cada caso de Rbb é, independentemente, selecionado a partir de hidrogênio, -OH, -ORaa, - N(RCC)2, -CN, -C(=O)Raa, -C(=O)N(Rcc)2, - CO2Raa, -S02Raa, -C(=NRcc)ORaa, - C(=NRCC)N(RCC)2, -SO2N(Rcc)2, - SO2Rcc, -SO2ORcc, -SORaa, -C(=S)N(RCC)2, -C(=O)SRcc, - C(=S)SRCC, - P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)2N(Rcc)2, -P(=O)(NRcc)2, C1-10 alquila, C1- 10 perhaloalquila, C2-10 alquenila, C2-10 alquinila, C3-10 carbociclila, hete- rociclila de 3-14 membros, C6-14 arila, e heteroarila de 5-14 membros, ou dois Rbb grupos são unidos para formar uma heterociclila de 3-14 mem- bros ou heteroarila de 5-14 membros no anel, em que cada alquila, al- quenila, alquinila, carbociclila, heterociclila, arila, e heteroarila é inde- pendentemente substituída por 0, 1, 2, 3, 4, ou 5 grupos Rdd;
[073] cada caso de Rcc é, independentemente, selecionado a partir de hidrogênio, C1-10 alquila, C1-10 perhaloalquila, C2-10 alquenila, C2-10 al- quinila, C3-10 carbociclila, heterociclila de 3-14 membros, C6-14 arila, e heteroarila de 5-14 membros, ou dois Rcc grupos são unidos para formar uma heterociclila de 3-14 membros ou heteroarila de 5-14 membros no anel, em que cada alquila, alquenila, alquinila, carbociclila, heterociclila, arila, e heteroarila é independentemente substituída por 0, 1, 2, 3, 4, ou 5 grupos Rdd;
[074] cada caso de Rdd é, independentemente, selecionado a partir de halogênio, -CN, -NO2, -N3, - SO2H, -SO3H, -OH, -ORee, -ON(Rff)2, - N(Rff)2, -N(Rff)3 +X, -N(ORee)Rff, -SH, -SRee, - SSRee, -C(=O)Ree, -CO2H, -CO2Ree, -OC(=O)Ree, -OCO2Ree, -C(=O)N(Rff)2, - OC(=O)N(Rff)2, - NRffC(=O)Ree, -NRffCO2Ree, -NRffC(=O)N(Rff)2, -C(=NRff)ORee, - OC(=NRff)Ree, -OC(=NRff)ORee, -C(=NRff)N(Rff)2, -OC(=NRff)N(Rff)2, - NRffC(=NRff)N(Rff)2,-NRffSO2Ree, -SO2N(Rff)2, -SO2Ree, -S02ORee, - OS02Ree, -S(=O)Ree, -Si(Ree)3, -OSi(Ree)3, -C(=S)N(Rff)2, -C(=O)SRee, - C(=S)SRee, -SC(=S)SRee, -P(=O)2Ree, - P(=O)(Ree)2, -OP(=O)(Ree)2, - OP(=O)(ORee)2, C1-6 alquila, C1-6 perhaloalquila, C2-6 alquenila, C2-6 al- quinila, C3-10 carbociclila, heterociclila de 3-10 membros, C6-10 arila, he- teroarila de 5-10 membros, em que cada alquila, alquenila, alquinila, carbociclila, heterociclila, arila, e heteroarila é independentemente subs- tituída por 0, 1, 2, 3, 4, ou 5 Rgg groups, ou dois geminal Rdd substituintes podem ser unidos para formar =O ou =S;
[075] cada caso de Ree é, independentemente, selecionado a partir de C1-6 alquila, C1-6 perhaloalquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C3-10 car- bociclila, C6-10 arila, heterociclila de 3-10 membros, e heteroarila de 3- 10 membros, em que cada alquila, alquenila, alquinila, carbociclila, he- terociclila, arila, e heteroarila é independentemente substituída por 0, 1, 2, 3, 4, ou 5 grupos Rgg;
[076] cada caso de Rff é, independentemente, selecionado a partir de hidrogênio, C1-6 alquila, C1-6 perhaloalquila, C2-6 alquenila, C2-6 al- quinila, C3-10 carbociclila, heterociclila de 3-10 membros, C1-6 arila e he- teroarila de 5-10 membros, ou dois Rff grupos são unidos para formar uma heterociclila de 3-14 membros ou heteroarila de 5-14 membros no anel, em que cada alquila, alquenila, alquinila, carbociclila, heterociclila, arila, e heteroarila é independentemente substituída por 0, 1, 2, 3, 4, ou 5 grupos Rgg; e
[077] cada caso de Rgg é, independentemente, halogênio, -CN, - NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, - OH, -O1-6 alquila, -ON(C1-6 alquila)2, -N(C1-6 alquila)2, -N(C1-6 alquil)3 +X-, -NH(C1-6 alquil)2 +X-, -NH2(C1-6 alquil) +X-, - NH3 +X, -N(OC1-6 alquil)(C1-6 alquila), -N(OH)(C1-6 alquila), -NH(OH), - SH, -S1-6 alquila, -SS(C1-6 alquila), -C(=O)(C1-6 alquila), -CO2H, -CO2(C1- 6 alquila), -OC(=O)(C1-6 alquila), -OCO2(C1-6 alquila), -C(=O)NH2, - C(=O)N(C1-6 alquila)2, - OC(=O)NH(C1-6 alquila), -NHC(=O)(C1-6 alquila), -N(C1-6 alquil)C(=O)(C1-6 alquila), - NHCO2(C1-6 alquila), -NHC(=O)N(C1- 6 alquila)2, -NHC(=O)NH(C1-6 alquila), -NHC(=O)NH2, -C(=NH)O(C1-6 al- quil),-OC(=NH)(C1-6 alquila), -OC(=NH)OC1-6 alquila, -C(=NH)N(C1-6 al- quila)2, -C(=NH)NH(C1-6 alquila), -C(=NH)NH2, -OC(=NH)N(C1-6 al- quila)2, - OC(NH)NH(C1-6 alquila), -OC(NH)NH2, -NHC(NH)N(C1-6 al- quila)2, -NHC(=NH)NH2, - NHSO2(C1-6 alquila), -SO2N(C1-6 alquila)2, - SO2NH(C1-6 alquila), -SO2NH2,-SO2 C1-6 alquila, - SO2OC1-6 alquila, - OSO2C1-6 alquila, -SOC1-6 alquila, -Si(C1-6 alqu ila)3, -OSi(C1-6 alquil)3 - C(=S)N(C1-6 alquila)2, C(=S)NH(C1-6 alquila), C(=S)NH2, -C(=O)S(C1-6 alquila), -C(=S)SC1-6 alquila, -SC(=S)SC1-6 alquila, -P(=O)2(C1-6 alquila), -P(=O)(C1-6 alquila)2, -OP(=O)(C1-6 alquila)2, - OP(=O)(OC1-6 alquila)2, C1-6 alquila, C1-6 perhaloalquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C3-10 carbo- ciclila, C6-10 arila, heterociclila de 3-10 membros, heteroarila 5-10 mem- bros; ou dois substituintes Rgg geminais podem ser unidos para formar =O ou =S; em que X é um contraíon.
[078] Um "contraíon" ou "contraíon aniônico" é um grupo carre- gado negativamente associado a um grupo amino quaternário catiônico para manter a neutralidade eletrônica. Contraíons exemplares incluem íons haleto (por exemplo, F-, CI-, Br-, I-), NO3 -, ClO4 -, OH-, H2PO4-, HSO4-
, íons de sulfonato (por exemplo, metanossulfonato, trifluorometanossul- fonato, p-toluenossulfonato, benzenossulfonato, 10-canforossulfonato, naftaleno-2-sulfonato, ácido-5-sulfonato naftaleno-1-sulfônico, ácido-2- sulfonato etan-1-sulfônico e semelhantes) e íons de carboxilato (por exemplo, acetato, etanoato, propanoato, benzoato, glicerato, lactato, tartarato, glicolato e semelhantes).
[079] "Halo" ou "halogênio" refere-se a flúor (flúor, -F), cloro (cloro, -Cl), bromo (bromo, -Br) ou iodo (iodo, -I).
[080] Os átomos de nitrogênio podem ser substituídos ou não substituídos conforme a valência permite e incluem átomos de nitrogê- nio primários, secundários, terciários e quaternários. Substituintes exemplares de átomos de nitrogênio incluem, mas não estão limitados a, hidrogênio, --OH, -ORaa, -N(RCC)2, -CN, - C(=O)Raa, -C(=O)N(Rcc)2, - CO2Raa, -SO2Raa, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRcc)ORaa, - C(=NRCC)N(RCC)2, - SO2N(Rcc)2, -SO2Rcc, -SO2ORcc, -SORaa, -C(=S)N(RCC)2, -C(=O)SRcc, - C(=S)SRCC, -P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)2N(Rcc)2, -P(=O)(NRcc)2, C1-10 alquila, C1-10 perhaloalquila, C2-10 alquenila, C2-10 alquinila, C3-10 carbociclila, heterociclila de 3-14 membros, C6-14 arila, e heteroarila de 5-14 membros, ou dois grupos Rcc ligados a um átomo de nitrogênio são unidos para formar um anel heteroarila de 3-14 membros ou heteroarila de 5-14 membros, em que cada alquila, alquenila, alquinila, carbociclila, heterociclila, arila e heteroarila são independentemente substituídas por 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 grupos Rdd, e em que Raa, Rbb, Rcc e Rdd são conforme definidos acima.
[081] Em certas modalidades, o substituinte presente em um átomo de nitrogênio é um grupo protetor de nitrogênio (também referido como um grupo protetor de amino). Grupos protetores de nitrogênio in- cluem, mas não estão limitados a, -OH, -ORaa, -N(RCC)2, -C(=O)Raa, - C(=O)N(Rcc)2, -CO2Raa, -SO2Raa, -C(=NRcc)Raa, -C(=NRcc)ORaa, - C(=NRCC)N(RCC)2, -SO2N(Rcc)2, -SO2Rcc, - SO2ORcc, -SORaa, -
C(=S)N(RCC)2, -C(=O)SRcc, -C(=S)SRCC, C1-10 alquila {por exemplo, aral- quila, heteroaralquila), C2-10 alquenila, C2-10 alquinila, C3-10 carbociclila, heterociclila de 3-14 membros, C6-14 arila, e grupos heteroarila de 5-14 membros, em que cada alquila, alquenila, alquinila, carbociclila, hetero- ciclila, aralquila, arila, e heteroarila é independentemente substituída por 0, 1, 2, 3, 4, ou 5 grupos R, e em que Raa, Rbb, Rcc, e Rdd são como definidos aqui. Os grupos protetores de nitrogênio são bem conhecidos na técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts, 3a edição, John Wiley & Sons, 1999, aqui incorporado por referência.
[082] Grupos protetores de nitrogênio amida (por exemplo, - C(=O)Raa) incluem, mas não estão limitados a, formamida, acetamida, cloroacetamida, tricloroacetamida, trifluoroacetamida, fenilacetamida, 3-fenilpropanamida, picolinamida, 3-piridilcarboxamida, derivado de N- benzoilfenilalanila, benzamida, p-fenilbenzamida, o-nitofenilacetamida, o- nitrofenoxiacetamida, acetoacetamida, (N'-ditiobenziloxiacila- mino)acetamida, 3-{p-hidroxifenil)propanamida, 3-(o-nitrofenil)propana- mida, 2-metil-2-(o-nitrofenóxi)propanamida, 2-metil-2-(o-fenilazofe- nóxi)propanamida, 4-clorobutanamida, 3-metil-3-nitrobutanamida, o-ni- trocinnamida, N-acetilmetionina, o-nitrobenzamida, e o-(benzoiloxime- til)benzamida.
[083] Grupos protetores de nitrogênio carbamato (por exemplo, - C(=O)ORaa) incluem, mas não estão limitados a, carbamato de metila, carbamato de etila, carbamato de 9-fluorenilmetila (Fmoc), carbamato de 9-(2-sulfo)fluorenilmetila, carbamato de 9-(2,7-dibromo)fluoroenilme- tila, carbamato de 2,7-di-t-butil-[9-(10,10-dioxo-10,10,10,10-tetrahidro- tioxantil)]metila (DBD-Tmoc), carbamato de 4-metoxifenacila (Fenoc), carbamato 2,2,2-tricloroetila (Troc), carbamato de 2-trimetilsililetila (Teoc), carbamato de 2-feniletila (hZ), carbamato de 1-(1-adamantil)-1- metiletila (Adpoc), carbamato de 1,1-dimetil-2-haloetila, carbamato de
1,1-dimetil-2,2-dibromoetila (DB-t-BOC), carbamato de 1,1-dimetil- 2,2,2-tricloroetila (TCBOC), carbamato de 1-metil-1-(4-bifenilil)etila (Bpoc), carbamato de 1-(3,5-di-t-butilfenil)-1-metiletila (t-Bumeoc), car- bamato de 2-(2’- e 4’-piridil)etila (Pyoc), carbamato de 2-{N,N-diciclohe- xilcarboxamido)etila, carbamato de t-butila (BOC), carbamato de 1-ada- mantila (Adoc), carbamato de vinila (Voc), carbamato de alila (Alloc), carbamato de 1-isopropilalila (Ipaoc), carbamato de cinamila (Coc), car- bamato de 4-nitrocinamila (Noc), carbamato de 8-quinolila, carbamato de N-hidroxipiperidinila, carbamato de alquilditio, carbamato de benzila (Cbz), carbamato de p-metoxibenzila (Moz), carbamato de p-nitoben- zila, carbamato de p-bromobenzila, carbamato de p-clorobenzila, carba- mato de 2,4-diclorobenzila, carbamato de 4-metilsulfinilbenzila (Msz), carbamato de 9-antrilmetila, carbamato de difenilmetila, carbamato de 2-metiltioetila, carbamato de 2-metilsulfoniletila, carbamato de 2-(p-tolu- enossulfonil)etila, carbamato de [2-(1,3-ditianil)]metila (Dmoc), carba- mato de 4-metiltiofenila (Mtpc), carbamato de 2,4-dimetiltiofenila (Bmpc), carbamato de 2-fosfonioetila (Peoc), carbamato de 2-trifenilfos- fonioisopropila (Ppoc), carbamato de 1,1-dimetil-2-cianoetila, carbamato de m-cloro-p-aciloxibenzila, carbamato de p-(dihidroxiboril)benzila, car- bamato de 5-benzisoxazolilmetila, carbamato de 2-(trifluorometil)-6-cro- monilmetila(Tcroc), carbamato de m-nitrofenila, carbamato de 3,5-dime- toxibenzila, carbamato de o-nitrobenzila, carbamato de 3,4-dimetóxi-6- nitrobenzila, carbamato de fenil(o-nitrofenil)metila, carbamato de t- amila, tiocarbamato de S-benzila, carbamato de p-cianobenzila, carba- mato de ciclobutila, carbamato de ciclohexila, carbamato de ciclopentila, carbamato de ciclopropilmetila, carbamato de p-deciloxibenzila, carba- mato de 2,2-dimetoxiacilvinila, carbamato de o-(N,N-dimetilcarboxa- mido)benzila, carbamato de 1,1-dimetil-3-(N,N-dimetilcarboxamido)pro- pila, carbamato de 1,1-dimetilpropinila, carbamato de di(2-piridil)metila, carbamato de 2-furanilmetila, carbamato de 2-iodoetila, carbamato de isoborinila, carbamato de isobutila, carbamato de isonicotinila, carba- mato de p-(p'-metoxifenilazo)benzila, carbamato de 1-metilciclobutila, carbamato de 1-metilciclohexila, carbamato de 1-metil-1-ciclopropilme- tila, carbamato de 1-metil-1-(3,5-dimetoxifenil)etila, carbamato de 1-me- til-1-(p-fenilazofenil)etila, carbamato de 1-metil-1-feniletila, carbamato de 1-metil-1-(4-piridil)etila, carbamato de fenila, carbamato de p-(feni- lazo)benzila, carbamato de 2,4,6-tri-t-butilfenila, carbamato de 4-(trime- tilamônio)benzila, e carbamato de 2,4,6-trimetilbenzila.
[084] Grupos protetores de nitrogênio sulfonamida (por exemplo, - S(=O)2Raa) incluem, mas não são limitados a, p-toluenossulfonamida (Ts), benzenossulfonamida, 2,3,6,-trimetil-4-metoxibenzenossulfona- mida (Mtr), 2,4,6-trimetoxibenzenossulfonamida (Mtb), 2,6-dimetil-4- metoxibenzenossulfonamida (Pme), 2,3,5,6-tetrametil-4- metoxibenze- nossulfonamida (Mte), 4-metoxibenzenossulfonamida (Mbs), 2,4,6- tri- metilbenzenossulfonamida (Mts), 2,6-dimetóxi-4-metilbenzenossulfona- mida (iMds), 2,2,5,7,8-pentametilchroman-6-sulfonamida (Pmc), metha- nesulfonamida (Ms), β-trimetilsililethanesulfonamida (SES), 9-anthrace- nesulfonamida, 4-(4' ,8'-dimetoxinaftilmetil)benzenossulfonamida (DNMBS), benzilsulfonamida, trifluorometilsulfonamida, e phenacilsulfo- namida.
[085] Outros grupos protetores de nitrogênio incluem, mas não são limitados a, fenotiazinil-(10)-acila derivado de, N'-p-toluenossulfonilami- noacila derivado de, derivado de N'-fenilaminotioacila, derivado de N- benzoilfenilalanila, derivado de N-acetilmetionina, 4,5-difenil-3-oxazolin- 2-ona, N-ftalimida, N-ditiasuccinimida (Dts), N-2,3-difeniAMLleimida, N- 2,5-dimetilpirrol, aduto de N-1,1,4,4-tetrametildisililazaciclopentano (STABASE), 1,3-dimetil-l,3,5-triazaciclohexan-2-ona 5-substituído, 1,3- dibenzil-1,3,5-triazaciclohexan-2-ona 5-substituído, 3,5-dinitro-4-piri- dona 1-substituído, N-metilamina, N-alilamina, N-[2-(trimetilsi-
lil)etóxi]metilamina (SEM), N-3-acetoxipropilamina, N-(1-isopropil-4-ni- tro-2-oxo-3-pyroolin-3-il)amina, sais de amônio quaternário, N-benzila- mina, N-di(4-metoxifenil)metilamina, N-5-dibenzosuberilamina, N-trife- nilmetilamina (Tr), N-[(4-metoxifenil)difenilmetil] amina (MMTr), N-9- fe- nilfluorenilamina (PhF), N-2,7-dicloro-9-fluorenilmetileneamina, N-ferro- cenilmetilamino (Fcm), N-2-picolilamino N'-óxido, N-1,1- dimetiltiometi- leneamina, N-benzilidenoamina, N-p-metoxibenzilidenoamina, N-difenil- metileneamina, N-[(2-piridil)mesitil]metileneamina, N-(N',N'- dimetilami- nometilene)amina, N,N '-isopropilidenediamina, N-p-nitrobenzilidenoa- mina, N-salicilideneamina, N-5-clorosalicilideneamina, N-(5-cloro-2-hi- droxifenil)fenilmetileneamina, N-ciclohexilideneamina, N-(5,5-dimetil-3- oxo-1-ciclohexenil)amina, derivado de N-borano, Derivado de ácido N- difenilborínico, N-[fenil(penta-acilcrômio- ou tungstênio)acil]amina, Que- lato de N-cobre, Quelato de N-zinco, N-nitroamina, N-nitrosoamina, N- óxido de amina, difenilfosfinamida (Dpp), dimetiltiofosfinamida (Mpt), di- feniltiofosfinamida (Ppt), fosforamidatos de dialquila, fosforamidato de dibenzila, fosforamidato de difenila, benzenossulfenamida, o-nitroben- zenossulfenamida (Nps), 2,4-dinitrobenzenossulfenamida, pentacloro- benzenossulfenamida, 2-nitro-4-metoxibenzenossulfenamida, trifenil- metilsulfenamida, e 3-nitropiridinassulfenamida (Npys).
[086] Em certas modalidades, o substituinte presente em um átomo de oxigênio é um grupo protetor de oxigênio (também referido como um grupo protetor de hidroxila). Os grupos protetores de oxigênio incluem, mas não estão limitados a, -Raa, -N(Rbb)2, -C(=O)SRaa, - C(=O)Raa, -C O 2Raa, - C(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRbb)ORaa, - C(=NRbb)N(Rbb)2, -S(=O)Raa, -SO2 Raa, - Si(Raa)3, -P(RCC)2, -P(RCC)3, - P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)(ORcc)2, -P(=O)2N(Rbb)2, e - P(=O)(NRbb)2, em que Raa, Rbb, e Rcc são conforme definidos aqui. Os grupos protetores de oxigênio são bem conhecidos na técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Organic Synthe- sis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts, 3 edição, John Wiley & Sons, 1999, aqui incorporado por referência.
[087] Grupos protetores de oxigênio exemplares incluem, mas não estão limitados a, metila, metoxilmetila (MOM), metiltiometila (MTM), t- butiltiometila, (fenildimetilsilil)metoximetila (SMOM), benziloximetila (BOM), p- metoxibenziloximetila (PMBM), (4-metoxifenóxi)metila (p- AOM), guaiacolmetila (GUM), t-butoximetila, 4-penteniloximetila (POM), siloximetila, 2-metoxietoximetila (MEM), 2,2,2-tricloroetoximetila, bis(2- cloroetóxi)metila, 2-(trimetilsilil)etoximetila (SEMOR), tetrahidropiranila (THP), 3- bromotetrahidropiranila, tetrahidrotiopiranila, 1-metoxiciclohe- xila, 4-metoxitetrahidropiranila (MTHP), 4-metoxitetrahidrotiopiranila, 4- metoxitetrahidrotiopiranila S,S-dióxido, 1-[(2-cloro-4-metil)fenil]-4- meto- xipiperidin-4-ila (CTMP), 1,4-dioxan-2-ila, tetrahidrofuranila, tetrahidroti- ofuranila, 2,3,3a,4,5,6,7,7a-octahidro-7,8,8-trimetil-4,7-metanobenzofu- ran-2-ila, 1-etoxietila, 1-(2-cloroetóxi)etila, 1-metil-1-metoxietila, 1-metil- 1-benziloxietila, 1- metil-1-benzilóxi-2-fluoroetila, 2,2,2-tricloroetila, 2-tri- metilsililetila, 2-(fenilselenil)etila, t-butila, alila, p-clorofenila, p-metoxife- nila, 2,4-dinitrofenila, benzila (Bn), p-metoxibenzila, 3,4-dimetoxibenzila, o-nitrobenzila, p-nitrobenzila, p- halobenzila, 2,6-diclorobenzila, p-ciano- benzila, p-fenilbenzila, 2-picolila, 4-picolila, 3- metil-2-picolila N-oxido, difenilmetila, p,p '-dinitrobenzhydrila, 5-dibenzosuberila, trifenilmetila, α- naftildifenilmetila, p-metoxifenildifenilmetila, di(p-metoxifenil)fenilmetila, tri(p-metoxifenil)metila, 4-(4'-bromofenaciloxifenil)difenilmetila, 4,4',4"- tris(4,5-diclorophthalimidofenil)metila, 4,4',4"-tris(levulinoiloxifenil)me- tila, 4,4',4"- tris(benzoiloxifenil)metila, 3-(imidazol-1-il)bis(4',4"-dimetoxi- fenil)metila, 1,1- bis(4-metoxifenil)- 1’-pirenilmetila, 9-anthrila, 9-(9-fe- nil)xanthenila, 9-(9-fenil- 10-oxo)anthrila, 1,3-benzodisulfuran-2-ila, ben- zisothiazolila S,S-dioxido, trimetilsilila (TMS), trietilsilila (TES), triisopro- pilsilila (TIPS), dimetilisopropilsilila (IPDMS), dietilisopropilsilila (DEIPS),
dimetilthexilsilila, t-butildimetilsilila (TBDMS), t-butildifenilsilila (TBDPS), tribenzilsilila, tri-p-xililsilila, trifenilsilila, difenilmetilsilila (DPMS), t-butil- metoxifenilsilila (TBMPS), formiato, benzoilformiato, acetato, cloroace- tato, dicloroacetato, tricloroacetato, trifluoroacetato, metoxiacetato, trife- nilmetoxiacetato, fenoxiacetato, p-clorofenoxiacetato, 3-fenilpropionato, 4-oxopentanoato (levulinato), 4,4-(etileneditio)pentanoato (levulinoilditi- oacetal), pivaloato, adamantoato, crotonato, 4-metoxicrotonato, benzo- ato, p- fenilbenzoato, 2,4,6-trimetilbenzoato (mesitoato), carbonato de t- butila (BOC), carbonato de alquil metila, carbonato de 9-fluorenilmetila (Fmoc), carbonato de alquil etila, carbonato de alquil 2,2,2-tricloroetila (Troc), carbonato de 2-(trimetilsilil)etila (TMSEC), carbonatode 2-(fe- nilsulfonil)etila (Psec), carbonato de 2-(trifenilfosfonio)etila (Peoc), car- bonato de alquil isobutila, carbonato de alquil vinila, carbonato de alquil alila, carbonato de alquil p-nitrofenila, carbonato de alquil benzila, car- bonato de alquil p-metoxibenzila, carbonato de alquil 3,4-dimetoxiben- zila, carbonato de alquil o-nitrobenzila, carbonato de alquil p-nitroben- zila, tiocarbonato de alquil S-benzila, carbonato de 4-etóxi-1-naftila, diti- ocarbonato de metila, 2-iodobenzoato, 4-azidobutirato, 4-nitro-4-metil- pentanoato, o-(dibromometil)benzoato, 2-formilbenzenossulfonato, 2- (metiltiometóxi)etila, 4-(metiltiometóxi)butirato, 2-(metiltiometoxime- til)benzoato, 2,6-dicloro-4-metilfenoxiacetato, 2,6-dicloro- 4-(1,1,3,3-te- trametilbutil)fenoxiacetato, 2,4-bis(1,1-dimetilpropil)fenoxiacetato, cloro- difenilacetato, isobutirato, monosuccinoato, (E)-2-metil-2-butenoato, o- (metoxiacil)benzoato, a-naftoato, nitrato, Ν,Ν,Ν’,Ν’- tetrametilfosforodia- midato de alquila, N-fenilcarbamato de alquila, borato, dimetilfosfino- tioila, 2,4-dinitrofenilsulfenato de alquila, sulfato, metanossulfonato (me- silato), benzilsulfonato, e tosilato (Ts).
[088] Em certas modalidades, o substituinte presente em um átomo de enxofre é um grupo protetor de enxofre (também referido como um grupo protetor de tiol). Os grupos protetores de enxofre in- cluem, mas não estão limitados a, -Raa, -N(Rbb)2, -C(=O)SRaa, - C(=O)Raa, -CO 2Raa, - C(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRbb)ORaa, - C(=NRbb)N(Rbb)2, -S(=O)Raa, -SO2 Raa, - Si(Raa)3 -P(RCC)2, -P(RCC)3, - P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)(ORcc)2, -P(=O)2N(Rbb)2, e - P(=O)(NRbb)2, em que Raa, Rbb, e Rcc são como definidos aqui. Os gru- pos protetores de enxofre são bem conhecidos na técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Organic Synthe- sis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts, 3ª edição, John Wiley & Sons, 1999, aqui incorporado por referência.
[089] "Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais que são, dentro do escopo do bom julgamento médico, adequados para uso em contato com os tecidos de humanos e outros animais sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e semelhantes, e são compatíveis com uma relação benefício/risco razoável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, Berge et al. descreve sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhes em J. Phar- maceutical Sciences (1977) 66:1-19. Os sais farmaceuticamente acei- táveis dos compostos descritos neste documento incluem aqueles deri- vados de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos adequados. Exemplos de sais de adição de ácido não tóxico farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo amino formado com ácidos inorgânicos, como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido per- clórico ou com ácidos orgânicos, como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou usando outros métodos usados na técnica, como troca iô- nica. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, algi- nato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, bo- rato, butirato, canforato, canforossulfonato, citrato, ciclopentanopropio- nato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, heptanossulfonato,
glicerossulfonato, glicerossulfonato, glicerossulfonato, glucoptanoato, gluco-fosfato, glucofosfato, hexanoato, hidroiodeto, 2-hidróxi-etanossul- fonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, ma- lonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, ole- ato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tarta- rato, tiocianato, p-toluenossulfonato, undecanoato, sais de valerato e semelhantes. Os sais derivados de bases apropriadas incluem sais de metal alcalino, metal alcalino-terroso, amônio e N+(C1-4 alquila)4. Sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos representativos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio e semelhantes. Outros sais farmaceutica- mente aceitáveis incluem, quando apropriado, sais quaternários.
[090] A presente invenção fornece inibidores de PRMT Tipo I. Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de Fórmula (I): ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,
[091] em que
[092] X é N, Z é NR4, e Y é CR5; ou
[093] X é NR4, Z é N, e Y é CR5; ou
[094] X é CR5, Z é NR4 , e Y é N; ou
[095] X é CR5, Z é N, e Y é NR4;
[096] RX é C1-4 alquila opcionalmente substituída ou C3-4 cicloal- quila opcionalmente substituída;
[097] L1 é uma ligação, -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S- , -C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, -
NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, - C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, - C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, - N(RB)SO2-, -SO2N(RB)-, ou uma cadeia hidrocarboneto saturada ou in- saturada C1-6 opcionalmente substituída, em que uma ou mais unida- des metileno da cadeia hidrocarboneto é opcionalmente e independen- temente substituída por -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, - C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, - NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, - C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, - C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, - N(RB)SO2-, ou -SO2N(RB)-;
[098] cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alquenila opcionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, carboci- clila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, um grupo protetor de oxigênio quando anexado ao átomo de oxigênio, e um grupo protetor de enxofre quando anexado a um átomo de enxofre;
[099] cada RB é independentemente selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alquenila opcionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, carboci- clila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, e um grupo protetor de nitrogênio, ou um RB e RW no mesmo átomo de nitrogênio pode ser tomado junto com o nitrogênio de intervenção para formar um anel heterocíclico opcionalmente substituído;
[100] RW é hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alquenila opcionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, carboci- clila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída,
arila opcionalmente substituída, ou heteroarila opcionalmente substitu- ída; desde que quando L1 for uma ligação, RW não será hidrogênio, arila opcionalmente substituída, ou heteroarila opcionalmente substituída;
[101] R3 é hidrogênio, C1-4 alquila, ou C3-4 cicloalquila;
[102] R4 é hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C2-6 alquenila opcionalmente substituída, C2-6 alquinila opcionalmente subs- tituída, C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclila opcio- nalmente substituída de 4- a 7-membros; ou C1-4 alquil-Cy opcional- mente substituída;
[103] Cy é C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída de 4 a 7 membros, arila opcionalmente subs- tituída, ou heteroarila opcionalmente substituída; e
[104] R5 é hidrogênio, halo, -CN, C1-4 alquila opcionalmente subs- tituída, ou C3-4 cicloalquila opcionalmente substituída. Em um aspecto, R3 é a C1-4 alquila. Em um aspecto, R3 é metila. Em um aspecto, R4 é hidrogênio. Em um aspecto, R5 é hidrogênio. Em um aspecto, L1 é uma ligação.
[105] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é um com- posto de Fórmula (I) em que -L1-RW é carbociclila opcionalmente subs- tituída.
[106] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é um com- posto de Fórmula (V)
V ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que anel A é carbociclila opcionalmente substituída, heterociclila opcional-
mente substituída, arila opcionalmente substituída, ou heteroarila opci- onalmente substituída. Em um aspecto, anel A é carbociclila opcional- mente substituída. Em um aspecto, R3 é a C1-4 alquila. Em um aspecto, R3 é metila. Em um aspecto, Rx é C1-4 alquila não substituída. Em um aspecto, Rx é metila. Em um aspecto, L1 é uma ligação.
[107] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é um com- posto de Fórmula (VI)
VI ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em um aspecto, anel A é carbociclila opcionalmente substituída. Em um as- pecto, R3 é a C1-4 alquila. Em um aspecto, R3 é metila. Em um aspecto, Rx é C1-4 alquila não substituída. Em um aspecto, Rx é metila.
[108] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é um com- posto de Fórmula (II): ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em um aspecto, -L1-RW é carbociclila opcionalmente substituída. Em um as- pecto, R3 é a C1-4 alquila. Em um aspecto, R3 é metila. Em um aspecto, Rx é C1-4 alquila não substituída. Em um aspecto, Rx é metila. Em um aspecto, R4 é hidrogênio.
[109] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é Composto A:
(A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Com- posto A e métodos de preparar o Composto A são divulgados em PCT/US2014/029710, pelo menos na página 171 (Composto 158) e página 266, parágrafo [00331].
[110] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é Composto A-tri-HCl, uma forma de sal tri-HCl do Composto A. Em outra modali- dade, o inibidor de PRMT Tipo I é Composto A-mono-HCl, uma forma de sal mono-HCl do Composto A. Em ainda outra modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é Composto A de base livre, uma forma de base livre do Composto A. Em ainda outra modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é Composto A-di-HCl, uma forma de sal di-HCl do Composto A.
[111] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é Composto D: (D) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo
[112] Inibidores de PRMT Tipo I são adicionalmente divulgados em PCT/US2014/029710, que é aqui incorporado por referência. Inibidores PRMT Tipo I exemplares são divulgados na Tabela 1A e Tabela 1B de PCT/US2014/029710, e métodos para fazer os inibidores PRMT Tipo I são descritos pelo menos na página 226, parágrafo [00274] à página 328, parágrafo [00050] de PCT/US2014/029710.
[113] "Proteína de Ligação a Antígeno (ABP)" significa uma prote- ína que se liga a um antígeno, incluindo anticorpos ou moléculas proje- tadas que funcionam de maneiras semelhantes aos anticorpos. Esses formatos de anticorpos alternativos incluem triacorpo, tetracorpo, mini- anticorpo e um minicorpo. Também estão incluídos arcabouços alterna- tivos nos quais uma ou mais CDRs de quaisquer moléculas de acordo com a divulgação podem ser dispostas em um arcabouço ou esqueleto de proteína não imunoglobulina adequada, tal como um afficorpo, um arcabouço SpA, um domínio de classe A de receptor de LDL, um aví- mero (vide, por exemplo, Publicação de Pedido de Patente US Nos. 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301) ou um domínio EGF. Uma ABP também inclui fragmentos de ligação a antígeno de tais anti- corpos ou outras moléculas. Além disso, uma ABP pode compreender as regiões VH da invenção formatadas em um anticorpo de compri- mento completo, um fragmento (Fab')2, um fragmento Fab, uma molé- cula biespecífica ou biparatópica ou equivalente (tal como scFV, bi-tri- ou tetracorpos, Tandabs, etc.), quando emparelhados com uma cadeia leve apropriada. A ABP pode compreender um anticorpo que é IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4; ou IgM; IgA, IgE ou IgD ou uma variante modificada dos mesmos. O domínio constante de cadeia pesada do anticorpo pode ser selecionado em conformidade. O domínio constante de cadeia leve pode ser um domínio constante kapa ou lambda. A ABP também pode ser um anticorpo quimérico do tipo descrito em WO86/01533, que com- preende uma região de ligação a antígeno e uma região não imunoglo- bulina. Os termos "ABP", "proteína de ligação a antígeno" e "proteína de ligação" são usados indistintamente neste documento.
[114] Tal como aqui utilizado, "ICOS" significa qualquer proteína coestimuladora de células T induzível. Pseudônimos para ICOS (esti- mulador de células T induzíveis) incluem AILIM; CD278; CVID1, JTT-1 ou JTT-2, MGC39850 ou 8F4. ICOS é uma molécula coestimuladora da superfamília de CD28 que é expressa em células T ativadas. A proteína codificada por este gene pertence à família de receptores de superfície celular CD28 e CTLA-4. Forma homodímeros e desempenha um papel importante na sinalização célula-célula, respostas imunes e regulação da proliferação celular. A sequência de aminoácidos de ICOS humano (isoforma 2) (No de Acesso: UniProtKB - Q9Y6W8-2) é mostrada abaixo como SEQ ID NO: 9. MKSGLWYFFLFCLRIKVLTGEINGSANYEMFIFHNGGVQILCKY- PDIVQQFKMQLLKGG-
QILCDLTKTKGSGNTVSIKSLKFCHSQLSNNSVSFFLYNLDHSHANYY FCNLSIFDPPPFKVTLTGGYLHIYESQLCCQLKFWLPIGCAAFVVVCIL- GCILICWLTKKM (SEQ ID NO:9)
[115] A sequência de aminoácidos de ICOS humano (isoforma 1) (No de Acesso: UniProtKB - Q9Y6W8-1) é mostrada abaixo como SEQ ID NO: 10.
MKSGLWYFFL FCLRIKVLTG EINGSANYEM FIFHNGGVQI LCKYPDIVQQ FKMQLLKGGQ ILCDLTKTKG SGNTVSIKSL KFCHSQLSNN SVSFFLYNLD HSHANYYFCN LSIFDPPPFK VTLTG-
GYLHI YESQLCCQLK FWLPIGCAAF VVVCILGCIL ICWLTKKKYS SSVHDPNGEY MFMRAVNTAK KSRLTDVTL (SEQ ID NO: 10)
[116] Ativação de ICOS ocorre através da ligação por ICOS-L (B7RP-1/B7-H2). Nem B7-1 nem B7-2 (ligandos para CD28 e CTLA4) se ligam ou ativam ICOS. No entanto, foi demonstrado que ICOS-L se liga fracamente a CD28 e CTLA-4 Yao S et al., “B7-H2 é a costimulatory ligand for CD28 in human”, Immunity, 34(5); 729-40 (2011))). A expres- são de ICOS parece estar restrita às células T. Os níveis de expressão de ICOS variam entre os diferentes subconjuntos de células T e no sta- tus de ativação das células T. A expressão de ICOS foi mostrada em células TH17 em repouso, T foliculares auxiliares (TFH) e T reguladoras (Treg); no entanto, ao contrário do CD28; não é altamente expresso em populações de células T efetoras TH1 e TH2 puras (Paulos CM et al., “The inducible costimulator (ICOS) é critical for the development of hu- man Th17 cells”, Sci Transl Med, 2(55); 55ra78 (2010)). A expressão de ICOS é altamente induzida em células T efetoras CD4+ e CD8+ após a ativação por meio de envolvimento de TCR (Wakamatsu E, et al., “Con- vergent e divergent effects of costimulatory molecules in conventional e regulatory CD4+ T cells”, Proc Natl Acad Sci USA, 110(3); 1023-8 (2013)). A sinalização coestimulatória através do receptor ICOS ocorre apenas em células T que recebem um sinal de ativação de TCR simul- tâneo (Sharpe AH e Freeman GJ. “The B7-CD28 Superfamily”, Nat. Rev Immunol, 2(2); 116-26 (2002)). Em células T específicas para antígenos ativados, ICOS regula a produção de citocinas TH1 e TH2, incluindo IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-4, IL-13 e outras. ICOS também estimula a pro- liferação de células T efetoras, embora em menor extensão do que CD28 (Sharpe AH e Freeman GJ. “The B7-CD28 Superfamily”, Nat. Rev Immunol, 2(2); 116-26 (2002)). Os anticorpos para ICOS e métodos de uso no tratamento de doenças são descritos, por exemplo, em WO 2012/131004, US20110243929 e US20160215059. US20160215059 é aqui incorporado por referência. CDRs para anticorpos murinos para ICOS humano tendo atividade agonista são mostrados em PCT/EP2012/055735 (WO 2012/131004). Os anticorpos para ICOS também são divulgados em WO 2008/137915, WO 2010/056804, EP 1374902, EP1374901 e EP1125585. Os anticorpos agonistas para ICOS ou proteínas de ligação a ICOS são divulgados em WO2012/13004, WO2014/033327, WO2016/120789, US20160215059 e US20160304610. Anticorpos exemplares em US2016/0304610 in- cluem 37A10S713. As sequências de 37A10S713 são reproduzidas abaixo como SEQ ID NOS: 11-18. Região variável de cadeia pesada 37A10S713:
EVQLVESGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA
PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSL- RAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS (SEQ. ID NO: 11) Região variável de cadeia leve 37A10S713: DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQK-
PGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K (SEQ. ID NO: 12) 37A10S713 VH CDR1: GFTFSDYWMD (SEQ.ID NO: 13) 37A10S713 VH CDR2: NIDEDGSITEYSPFVKG (SEQ. ID NO: 14) 37A10S713 VH CDR3: WGRFGFDS (SEQ. ID. NO: 15) 37A10S713 VL CDR1: KSSQSLLSGSFNYLT (SEQ. ID NO: 16) 37A10S713 VL CDR2: YASTRHT (SEQ. ID NO: 17) 37A10S713 VL CDR3: HHHYNAPPT (SEQ. ID NO: 18)
[117] Por "agente dirigido a ICOS" entende-se qualquer composto químico ou molécula biológica capaz de se ligar a ICOS. Em algumas modalidades, o agente dirigido a ICOS é uma proteína de ligação a ICOS. Em algumas outras modalidades, o agente dirigido a ICOS é um agonista de ICOS.
[118] O termo "proteína de ligação a ICOS", tal como aqui utilizado, refere-se a anticorpos e outros construtos de proteína, como domínios, que são capazes de se ligar a ICOS. Em alguns casos, o ICOS é ICOS humano. O termo "proteína de ligação a ICOS" pode ser usado alterna- damente com "proteína de ligação a antígeno ICOS". Assim, como é entendido na técnica, anticorpos anti-ICOS e/ou proteínas de ligação a antígeno ICOS seriam considerados proteínas de ligação a ICOS. Tal como aqui utilizado, "proteína de ligação a antígeno" é qualquer prote- ína, incluindo, mas não se limitando a anticorpos, domínios e outros construtos aqui descritos, que se liga a um antígeno, como ICOS. Tal como aqui utilizado, "porção de ligação a antígeno" de uma proteína de ligação a ICOS incluiria qualquer porção da proteína de ligação a ICOS capaz de se ligar a ICOS, incluindo, mas não se limitando a, um frag- mento de anticorpo de ligação a antígeno.
[119] Em uma modalidade, os anticorpos ICOS da presente inven- ção compreendem qualquer um ou uma combinação das seguintes CDRs: CDRH1: DYAMH (SEQ ID NO: 1) CDRH2: LISIYSDHTNYNQKFQG (SEQ ID NO: 2) CDRH3: NNYGNYGWYFDV (SEQ ID NO: 3) CDRL1: SASSSVSYMH (SEQ ID NO: 4) CDRL2: DTSKLAS (SEQ ID NO: 5) CDRL3: FQGSGYPYT (SEQ ID NO: 6)
[120] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-ICOS da pre- sente invenção compreendem uma região variável de cadeia pesada com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 7. Adequadamente, as proteínas de ligação a ICOS da presente invenção podem compreender uma região variável de cadeia pesada com cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com SEQ ID NO:
7. Região variável (H2) de cadeia pesada humanizada (VH):
[121] QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYAMHWVRQA PGQGLEWMGL ISIYSDHTNY NQKFQGRVTI TAD- KSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCGRNN YGNYGWYFDV WGQG- TTVTVS S (SEQ ID NO:7)
[122] Em uma modalidade da presente invenção, o anticorpo ICOS compreende CDRL1 (SEQ ID NO: 4), CDRL2 (SEQ ID NO: 5) e CDRL3 (SEQ ID NO: 6) na região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8. As proteínas de ligação a ICOS da presente invenção compreendendo a região variável de cadeia leve humanizada estabelecida em SEQ ID NO: 8 são designadas como
"L5". Assim, uma proteína de ligação a ICOS da presente invenção com- preendendo a região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 7 e a região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 8 pode ser designada como H2L5 neste documento.
[123] Em algumas modalidades, as proteínas de ligação a ICOS da presente invenção compreendem uma região variável de cadeia leve com pelo menos 90% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8. Adequadamente, as pro- teínas de ligação a ICOS da presente invenção podem compreender uma região variável de cadeia leve com cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 8. Região variável (L5) de cadeia leve humanizada (VL) EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCSASSSVS YMHWYQQKPG QAPR-
LLIYDT SKLASGIPAR FSGSGSGTDY TLTISSLEPE DFAVYYCFQG SGYPYTFGQG TKLEIK (SEQ ID NO:8)
[124] CDRs ou unidades mínimas de ligação podem ser modifica- das por pelo menos uma substituição, deleção ou adição de aminoácido, em que a proteína de ligação a antígeno variante retém substancial- mente as características biológicas da proteína não modificada, como um anticorpo compreendendo SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8.
[125] Será apreciado que cada uma das CDR H1, H2, H3, L1, L2, L3 pode ser modificada sozinha ou em combinação com qualquer outra CDR, em qualquer permutação ou combinação. Em uma modalidade, uma CDR é modificada pela substituição, deleção ou adição de até 3 aminoácidos, por exemplo 1 ou 2 aminoácidos, por exemplo 1 aminoá- cido. Normalmente, a modificação é uma substituição, particularmente uma substituição conservadora, por exemplo, como mostrado na Tabela 1 abaixo. Tabela 1
Cadeia lateral Membros Hidrofóbico Met, Ala, Val, Leu, Ile Hidrofílico neutro Cys, Ser, Thr Ácido Asp, Glu Básico Asn, Gln, His, Lys, Arg Resíduos que influenciam orientação de cadeia Gly, Pro Aromático Trp, Tyr, Phe
[126] A subclasse de um anticorpo em parte determina funções efetoras secundárias, tais como ativação do complemento ou ligação ao receptor Fc (FcR) e citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) (Huber, et al., Nature 229 (5284): 419-20 (1971); Brunhouse, et al., Mol Immunol 16 (11): 907-17 (1979)). Na identificação do tipo ideal de anticorpo para uma aplicação particular, as funções efetoras dos an- ticorpos podem ser levadas em consideração. Por exemplo, os anticor- pos hIgG1 têm uma meia-vida relativamente longa, são muito eficazes na fixação do complemento e se ligam a FcγRI e FcγRII. Em contraste, os anticorpos IgG4 humanos têm uma meia-vida mais curta, não fixam o complemento e têm uma afinidade menor para as FcRs. A substituição de serina 228 por uma prolina (S228P) na região Fc de IgG4 reduz a heterogeneidade observada com hIgG4 e estende a meia-vida sérica (Kabat, et al., “Sequences of protein of immunological interest” 5a.sup. Edição (1991); Angal, et al., Mol Immunol 30 (1): 105-8 (1993)). Uma segunda mutação que substitui a leucina 235 por um ácido glutâmico (L235E) elimina a ligação FcR residual e as atividades de ligação ao complemento (Alegre, et al., J Immunol 148 (11): 3461-8 (1992)). O an- ticorpo resultante com ambas as mutações é referido como IgG4PE. A numeração dos aminoácidos hIgG4 foi derivada da referência de nume- ração EU: EdeAMLn, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969). PMID: 5257969. Em uma modalidade da presente invenção, o anticorpo ICOS é um isótipo IgG4. Em uma modalidade, o anticorpo
ICOS compreende uma região Fc de IgG4 compreendendo a substitui- ção S228P e L235E pode ter a designação IgG4PE.
[127] Conforme usado neste documento, "ICOS-L" e "Ligando de ICOS" são usados indistintamente e referem-se ao ligando natural li- gado à membrana de ICOS humano. O ligando ICOS é uma proteína que em humanos é codificada pelo gene ICOSLG. ICOSLG também foi designado como CD275 (cluster de diferenciação 275). Os pseudôni- mos para ICOS-L incluem B7RP-1 e B7-H2.
[128] Tal como aqui utilizado, um "imunomodulador" ou "agente imunomodulador" refere-se a qualquer substância, incluindo anticorpos monoclonais que afetam o sistema imunológico. Em algumas modalida- des, o imunomodulador ou agente imunomodulador regula positiva- mente o sistema imunológico. Os imunomoduladores podem ser usados como agentes antineoplásicos para o tratamento do câncer. Por exem- plo, os imunomoduladores incluem, mas não estão limitados a, anticor- pos anti-PD-1 (Opdivo/nivolumab e Keytruda/pembrolizumab), anticor- pos anti-CTLA-4 como ipilimumab (YERVOY) e anticorpos anti-ICOS.
[129] Tal como aqui utilizado, o termo "agonista" refere-se a uma proteína de ligação a antígeno incluindo, mas não se limitando a um anticorpo, que após contato com um receptor de cossinalização causa um ou mais dos seguintes (1) estimula ou ativa o receptor, (2) melhora, aumenta ou promove, induz ou prolonga uma atividade, função ou pre- sença do receptor e/ou (3) melhora, aumenta, promove ou induz a ex- pressão do receptor. A atividade agonista pode ser medida in vitro por vários ensaios conhecidos na técnica, tais como, mas não se limitando a, medição de sinalização celular, proliferação celular, marcadores de ativação de células imunes, produção de citocinas. A atividade agonista também pode ser medida in vivo por vários ensaios que medem pontos finais substitutos, tais como, mas não se limitando à medição da prolife- ração de células T ou produção de citocinas.
[130] Tal como aqui utilizado, o termo "antagonista" refere-se a uma proteína de ligação a antígeno incluindo, mas não se limitando a um anticorpo, que após o contato com um receptor de cossinalização causa um ou mais dos seguintes (1) atenua, bloqueia ou inativa o re- ceptor e/ou bloqueia a ativação de um receptor por seu ligando natural, (2) reduz, diminui ou encurta a atividade, função ou presença do recep- tor e/ou (3) reduz, diminui, anula a expressão do receptor. A atividade do antagonista pode ser medida in vitro por vários ensaios conhecidos na técnica, tais como, mas não se limitando a, medição de um aumento ou diminuição na sinalização celular, proliferação celular, marcadores de ativação de células imunes, produção de citocinas. A atividade do antagonista também pode ser medida in vivo por vários ensaios que medem pontos finais substitutos, tais como, mas não se limitando à me- dição da proliferação de células T ou produção de citocinas.
[131] O termo "anticorpo" é usado aqui no sentido mais amplo para se referir a moléculas com um domínio do tipo imunoglobulina (por exemplo, IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE) e inclui monoclonal, recombinante, policlonal, quimérico, humano, humanizado, anticorpos multiespecífi- cos, incluindo anticorpos biespecíficos e anticorpos heteroconjugados; um domínio variável único (por exemplo, VH, VHH, VL, anticorpo de do- mínio (dAbTM)), fragmentos de anticorpo de ligação a antígeno, Fab, F(ab’)2, Fv, Fv ligado por dissulfeto, Fv de cadeia única, scFv ligado por dissulfeto, diacorpos, TANDABS™, etc. e versões modificadas de qual- quer um dos anteriores (para um resumo de formatos de "anticorpos" alternativos, vide, por exemplo, Holliger e Hudson, Nature Biotechno- logy, 2005, Vol 23, No. 9, 1126-1136).
[132] Formatos de anticorpos alternativos incluem arcabouços al- ternativos nos quais as uma ou mais CDRs da proteína de ligação a antígeno podem ser dispostas em um arcabouço ou esqueleto de pro-
teína não imunoglobulina adequado, tal como um afficorpo, um arca- bouço SpA, um domínio de classe A de receptor de LDL, um avímero (vide, por exemplo, Publicações de Pedido de Patente US Nos. 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301) ou um domínio EGF.
[133] O termo "domínio" refere-se a um arcabouço de proteína desdobrada que retém sua estrutura terciária independente do resto da proteína. Geralmente os domínios são responsáveis por propriedades funcionais discretas de proteínas e em muitos casos podem ser adicio- nados, removidos ou transferidos para outras proteínas sem perda de função do restante da proteína e/ou do domínio.
[134] O termo "domínio variável único" refere-se a um domínio po- lipeptídico desdobrado que compreende sequências características de domínios variáveis de anticorpo. Portanto, inclui domínios variáveis de anticorpos completos, como VH, VHH e VL e domínios variáveis de an- ticorpos modificados, por exemplo, em que um ou mais loops foram substituídos por sequências que não são características de domínios variáveis de anticorpos, ou domínios variáveis de anticorpos que foram truncados ou compreendem extensões N- ou C-terminal, bem como fra- gmentos desdobrados de domínios variáveis que retêm pelo menos a atividade de ligação e especificidade do domínio de comprimento com- pleto. Um domínio variável único é capaz de se ligar a um antígeno ou epítopo independentemente de uma região ou domínio variável dife- rente. Um “anticorpo de domínio” ou “dAb(TM)” pode ser considerado o mesmo que um “domínio variável único”. Um domínio variável único pode ser um domínio variável único humano, mas também inclui domí- nios variáveis únicos de outras espécies, como dAbsTM de tubarão-en- fermeiro roedor e Camelídeo VHH. Camelídeos VHH são polipeptídeos de domínio variável único de imunoglobulina que são derivados de es- pécies incluindo camelo, lhama, alpaca, dromedário e guanaco, que pro-
duzem anticorpos de cadeia pesada naturalmente desprovidos de ca- deias leves. Tais domínios VHH podem ser humanizados de acordo com técnicas padrão disponíveis na área, e tais domínios são considerados "domínios variáveis únicos". Como usado aqui, VH inclui domínios VHH de camelídeo.
[135] Um fragmento de ligação a antígeno pode ser fornecido por meio do arranjo de uma ou mais CDRs em arcabouços de proteína não anticorpo. "Arcabouços de proteína", tal como aqui utilizado inclui, mas não está limitado a um arcabouço de imunoglobulina (Ig), por exemplo, uma arcabouço de IgG, que pode ser um anticorpo de quatro ou duas cadeias, ou que pode compreender apenas a região Fc de um anticorpo, ou que podem compreender uma ou mais regiões constantes de um anticorpo, cujas regiões constantes podem ser de origem humana ou primata, ou que podem ser uma quimera artificial de regiões constantes humanas e primatas.
[136] O arcabouço de proteína pode ser um arcabouço de Ig, por exemplo, um arcabouço de IgG ou IgA. O arcabouço de IgG pode com- preender alguns ou todos os domínios de um anticorpo (ou seja, CH1, CH2, CH3, VH, VL). A proteína de ligação a antígeno pode compreender um arcabouço de IgG selecionado a partir de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ou IgG4PE. Por exemplo, o arcabouço pode ser IgG1. O arcabouço pode consistir em, ou compreender, a região Fc de um anticorpo, ou é uma parte dele.
[137] Afinidade é a força de ligação de uma molécula, por exem- plo, uma proteína de ligação a antígeno da invenção, a outra, por exem- plo, seu antígeno alvo, em um único sítio de ligação. A afinidade de li- gação de uma proteína de ligação a antígeno ao seu alvo pode ser de- terminada por métodos de equilíbrio (por exemplo, ensaio imunoabsor- vente ligado a enzima (ELISA) ou radioimunoensaio (RIA)) ou cinética (por exemplo, análise de BIACORETM).
[138] A avidez é a soma total da força de ligação de duas molécu- las uma à outra em vários sítios, por exemplo, levando em consideração a valência da interação.
[139] Por "isolada" entende-se que a molécula, como uma proteína de ligação a antígeno ou ácido nucleico, é removida do ambiente em que pode ser encontrada na natureza. Por exemplo, a molécula pode ser purificada de substâncias com as quais ela normalmente existiria na natureza. Por exemplo, a massa da molécula em uma amostra pode ser 95% da massa total.
[140] O termo "vetor de expressão", tal como aqui utilizado, signi- fica um ácido nucleico isolado que pode ser usado para introduzir um ácido nucleico de interesse em uma célula, tal como uma célula euca- riótica ou célula procariótica, ou um sistema de expressão livre de célu- las onde a sequência de ácido nucleico de interesse é expressa como uma cadeia peptídica, tal como uma proteína. Tais vetores de expressão podem ser, por exemplo, cosmídeos, plasmídeos, sequências virais, transposons e ácidos nucleicos lineares compreendendo um ácido nu- cleico de interesse. Uma vez que o vetor de expressão é introduzido em uma célula ou sistema de expressão livre de células (por exemplo, li- sado de reticulócito), a proteína codificada pelo ácido nucleico de inte- resse é produzida pela maquinaria de transcrição/tradução. Os vetores de expressão dentro do escopo da divulgação podem fornecer elemen- tos necessários para a expressão eucariótica ou procariótica e incluem vetores direcionados ao promotor viral, tais como vetores direcionados ao promotor CMV, por exemplo, pcDNA3.1, pCEP4 e seus derivados, expressão do baculovírus vetores, vetores de expressão de Drosophila e vetores de expressão que são conduzidos por promotores de genes de mamíferos, tais como promotores de genes de Ig humana. Outros exemplos incluem vetores de expressão procarióticos, tais como veto-
res acionados pelo promotor T7, por exemplo, pET41, vetores aciona- dos pelo promotor da lactose e vetores acionados pelo promotor do gene da arabinose. Os versados na técnica reconhecerão muitos outros vetores de expressão e sistemas de expressão adequados.
[141] O termo "célula hospedeira recombinante", tal como aqui uti- lizado, significa uma célula que compreende uma sequência de ácido nucleico de interesse que foi isolada antes de sua introdução na célula. Por exemplo, a sequência de ácido nucleico de interesse pode estar em um vetor de expressão, enquanto a célula pode ser procariótica ou eu- cariótica. Células eucarióticas exemplares são células de mamíferos, tais como, mas não se limitando a, COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, HepG2, 653, SP2/0, NS0, 293, HeLa, mieloma, células de linfoma ou qualquer derivado das mesmas. Mais preferivelmente, a cé- lula eucariótica é uma célula HEK293, NS0, SP2/0 ou CHO. E. coli é uma célula procariótica exemplar. Uma célula recombinante de acordo com a divulgação pode ser gerada por transfecção, fusão celular, imor- talização ou outros procedimentos bem conhecidos na técnica. Uma se- quência de ácido nucleico de interesse, tal como um vetor de expressão, transfectada em uma célula pode ser extracromasomal ou integrada de forma estável no cromossomo da célula.
[142] Um "anticorpo quimérico" refere-se a um tipo de anticorpo projetado que contém uma região variável de ocorrência natural (cadeia leve e cadeias pesadas) derivada de um anticorpo doador em associa- ção com regiões constantes de cadeia leve e pesada derivadas de um anticorpo aceitador.
[143] Um "anticorpo humanizado" refere-se a um tipo de anticorpo manipulado tendo suas CDRs derivadas de uma imunoglobulina de do- ador não humano, as partes restantes derivadas de imunoglobulina da molécula sendo derivadas de uma ou mais imunoglobulinas humanas. Além disso, os resíduos de suporte de estrutura podem ser alterados para preservar a afinidade de ligação (vide, por exemplo, Queen et al. Proc. Natl Acad Sci USA, 86: 10029-10032 (1989), Hodgson, et al., Bio/Technology, 9: 421 (1991)). Um anticorpo aceitador humano ade- quado pode ser um selecionado a partir de uma base de dados conven- cional, por exemplo, a base de dados KABAT™, a base de dados Los Alamos e a base de dados Swiss Protein, por homologia com as se- quências de nucleotídeos e aminoácidos do anticorpo doador. Um anti- corpo humano caracterizado por uma homologia com as regiões estru- turais do anticorpo doador (com base em aminoácidos) pode ser ade- quada para fornecer uma região constante de cadeia pesada e/ou uma região estrutural variável de cadeia pesada para inserção das CDRs do- adoras. Um anticorpo aceitador adequado capaz de doar regiões estru- turais constantes ou variáveis de cadeia leve pode ser selecionado a partir de uma maneira semelhante. Deve-se notar que as cadeias pesa- das e leves do anticorpo aceitador não precisam se originar do mesmo anticorpo aceitador. O estado da técnica descreve várias maneiras de produzir tais anticorpos humanizados - vide, por exemplo, EP-A- 0239400 e EP-A-054951.
[144] O termo "anticorpo totalmente humano" inclui anticorpos tendo regiões variáveis e constantes (se presentes) derivadas de se- quências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Os anti- corpos de sequência humana da invenção podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados por sequências de imunoglobulina da li- nhagem germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou específica de sítio in vitro ou por mutação so- mática in vivo). Anticorpos totalmente humanos compreendem sequên- cias de aminoácidos codificadas apenas por polinucleotídeos que são, em última instância, de origem humana ou sequências de aminoácidos que são idênticas a tais sequências. Como aqui indicado, os anticorpos codificados por DNA codificador de imunoglobulina humana inserido em um genoma de camundongo produzido em um camundongo transgê- nico são anticorpos totalmente humanos, uma vez que são codificados por DNA que é, em última análise, de origem humana. Nesta situação, o DNA que codifica a imunoglobulina humana pode ser rearranjado (para codificar um anticorpo) dentro do camundongo, e também podem ocorrer mutações somáticas. Anticorpos codificados por DNA original- mente humano que sofreu tais mudanças em um camundongo são an- ticorpos totalmente humanos como aqui referido. O uso de tais camun- dongos transgênicos torna possível selecionar anticorpos totalmente humanos contra um antígeno humano. Como é entendido na técnica, anticorpos totalmente humanos podem ser feitos usando tecnologia de exibição de fago em que uma biblioteca de DNA humano é inserida no fago para geração de anticorpos compreendendo a sequência de DNA da linhagem germinativa humana.
[145] O termo "anticorpo doador" refere-se a um anticorpo que contribui com as sequências de aminoácidos de suas regiões variáveis, CDRs ou outros fragmentos funcionais ou análogos dos mesmos para um primeiro parceiro de imunoglobulina. O doador, portanto, fornece a região de codificação da imunoglobulina alterada e o anticorpo alterado expresso resultante com a especificidade antigênica e a atividade neu- tralizante característica do anticorpo do doador.
[146] O termo "anticorpo aceitador" refere-se a um anticorpo que é heterólogo ao anticorpo doador, que contribui com todas (ou qualquer porção) das sequências de aminoácidos que codificam suas regiões es- truturais da cadeia pesada e/ou leve e/ou suas regiões constantes da cadeia pesada e/ou leve para o primeiro parceiro de imunoglobulina. Um anticorpo humano pode ser o anticorpo aceitador.
[147] Os termos "VH" e "VL" são usados neste documento para se referir à região variável de cadeia pesada e região variável de cadeia leve, respectivamente, de uma proteína de ligação a antígeno.
[148] "CDRs" são definidas como as sequências de aminoácidos da região determinante de complementaridade de uma proteína de liga- ção a antígeno. Estas são as regiões hipervariáveis de cadeias pesadas e leves de imunoglobulina. Existem três CDRs de cadeia pesada e três de cadeia leve (ou regiões CDR) na porção variável de uma imunoglo- bulina. Assim, "CDRs", tal como aqui utilizado, refere-se a todas as três CDRs de cadeia pesada, todas as três CDRs de cadeia leve, todas as CDRs de cadeias pesada e leve ou pelo menos duas CDRs.
[149] Ao longo desta especificação, os resíduos de aminoácidos em sequências de domínio variável e sequências de anticorpos de com- primento completo são numerados de acordo com a convenção de nu- meração de Kabat. Da mesma forma, os termos “CDR”, “CDRL1”, “CDRL2”, “CDRL3”, “CDRH1”, “CDRH2”, “CDRH3” usados nos Exem- plos seguem a convenção de numeração de Kabat. Para mais informa- ções, consulte Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological In- terest, 5ª Ed., Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA, Institutos Nacionais de Saúde (1991).
[150] Será evidente para os versados na técnica que existem con- venções de numeração alternativas para resíduos de aminoácidos em sequências de domínio variável e sequências de anticorpo de compri- mento completo. Existem também convenções de numeração alternati- vas para sequências de CDR, por exemplo, aquelas estabelecidas em Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883. A estrutura e o desdobra- mento da proteína do anticorpo podem significar que outros resíduos são considerados parte da sequência de CDR e seriam assim conside- rados por um versado.
[151] Outras convenções de numeração para sequências de CDR disponíveis para um versado incluem os métodos “AbM” (University of Bath) e de “contato” (University College London). A região de sobrepo- sição mínima usando pelo menos dois dos métodos Kabat, Chothia,
AbM e de contato pode ser determinada para fornecer a "unidade mí- nima de ligação". A unidade de ligação mínima pode ser uma subporção de uma CDR.
[152] Em um aspecto, é fornecido um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma para uso no tratamento de câncer em um ser humano em necessidade do mesmo.
[153] Em outro aspecto, um método de tratar câncer em um ser humano em necessidade do mesmo, o método compreendendo admi- nistrar ao ser humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e ad- ministrar ao ser humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma, é fornecido.
[154] Em ainda outro aspecto, uso de um inibidor de proteína argi- nina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e da proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma para a fabricação de um medicamento para tratar o câncer é fornecido.
[155] Em outro aspecto, uso de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma para o tratamento de câncer é fornecida.
[156] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma composi- ção farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e uma segunda composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma.
[157] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma compo- sição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma.
[158] Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece uma combinação de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de liga- ção a antígeno da mesma.
[159] Em outro aspecto, um produto contendo um inibidor de PRMT Tipo I e um anticorpo anti-ICOS ou fragmento de ligação a antí- geno do mesmo como uma preparação combinada para uso no trata- mento de câncer em um objeto humano é fornecido.
[160] Em uma modalidade, a proteína de ligação a ICOS ou frag- mento de ligação a antígeno da mesma é um anticorpo anti-ICOS ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em outra modalidade, a proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma é um agonista de ICOS. Em uma modalidade, a proteína de li- gação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma compre- ende uma ou mais de: CDRH1 como estabelecida em SEQ ID NO: 1; CDRH2 como estabelecida em SEQ ID NO: 2; CDRH3 como estabele- cida em SEQ ID NO: 3; CDRL1 como estabelecida em SEQ ID NO: 4; CDRL2 como estabelecida em SEQ ID NO: 5 e/ou CDRL3 como esta- belecida em SEQ ID NO: 6 ou um equivalente direto de cada CDR em que um equivalente direto não tem mais do que duas substituições de aminoácidos na referida CDR. Em outra modalidade, a proteína de liga- ção a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende um domínio VH compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo me- nos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 7 e/ou um domínio VL compreendendo uma sequência de aminoá- cidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos definida em SEQ ID NO: 8 em que a referida proteína de ligação a ICOS se liga especificamente a ICOS humano. Em uma modalidade, a proteína de ligação a ICOS compreende uma região variável de cadeia pesada com- preendendo SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; e SEQ ID NO: 3 e uma região variável de cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6. Em uma modalidade, a proteína de ligação a ICOS com- preende um domínio VH compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 7 e um domínio VL compreendendo a se- quência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8. Em outra mo- dalidade, a proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende um arcabouço selecionado a partir do isótipo IgG1 humano e isótipo IgG4 humano. Em outra modalidade, a proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compre- ende um arcabouço de hIgG4PE. Em uma modalidade, a proteína de ligação a ICOS é um anticorpo monoclonal. Em outra modalidade, a pro- teína de ligação a ICOS é um anticorpo monoclonal humanizado. Em uma modalidade, a proteína de ligação a ICOS é um anticorpo mono- clonal totalmente humano.
[161] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é um inibidor de proteína arginina metiltransferase 1 (PRMT1), um inibidor de prote- ína arginina metiltransferase 3 (PRMT3), um inibidor de proteína argi- nina metiltransferase 4 (PRMT4), um inibidor de proteína arginina metil- transferase 6 (PRMT6), ou um inibidor de proteína arginina metiltrans- ferase 8 (PRMT8). Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de Fórmula I, II, V ou VI. Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A. Em outra modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto D.
[162] Em um aspecto, a presente invenção fornece um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma para uso no tratamento de câncer em um ser humano em necessidade do mesmo, em que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o fragmento de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma ou mais de: CDRH1 como estabelecida em SEQ ID NO: 1; CDRH2 como estabelecida em SEQ ID NO: 2; CDRH3 como estabelecida em SEQ ID NO: 3; CDRL1 como estabelecida em SEQ ID NO: 4; CDRL2 como estabelecida em SEQ ID NO: 5 e/ou CDRL3 como estabelecida em SEQ ID NO: 6 ou um equivalente direto de cada CDR em que um equivalente direto não tem mais do que duas substituições de aminoá- cidos na referida CDR.
[163] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma para uso no tratamento de câncer em um ser humano em necessidade do mesmo, em que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e a proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende um domínio VH compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 7 e/ou um domínio VL compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8, em que a referida proteína de ligação a ICOS se liga especificamente a ICOS humano.
[164] Em um aspecto, um método de tratar câncer em um ser hu- mano em necessidade do mesmo é fornecido, o método compreen- dendo administrar ao ser humano uma quantidade terapeuticamente efi- caz de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e administrar ao ser humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, em que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o fragmento de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compre- ende uma ou mais de: CDRH1 como estabelecida em SEQ ID NO: 1; CDRH2 como estabelecida em SEQ ID NO: 2; CDRH3 como estabele- cida em SEQ ID NO: 3; CDRL1 como estabelecida em SEQ ID NO: 4; CDRL2 como estabelecida em SEQ ID NO: 5 e/ou CDRL3 como esta- belecida em SEQ ID NO: 6 ou um equivalente direto de cada CDR em que um equivalente direto não tem mais do que duas substituições de aminoácidos na referida CDR.
[165] Em outro aspecto, um método de tratar câncer em um ser humano em necessidade do mesmo é fornecido, o método compreen- dendo administrar ao ser humano uma quantidade terapeuticamente efi- caz do inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e administrar ao ser humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, em que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e a proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende um do- mínio VH compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 7 e/ou um domínio VL compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8 em que a referida proteína de ligação a ICOS se liga especificamente a ICOS humano.
[166] Em uma modalidade, o câncer é um tumor sólido ou um cân- cer hematológico. Em uma modalidade, o câncer é melanoma, linfoma ou câncer de cólon.
[167] Em uma modalidade, o câncer é selecionado a partir de cân- cer de cabeça e pescoço, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de cólon, câncer de ovário, câncer de próstata, gliomas, glioblastoma,
astrocitomas, glioblastoma multiforme, síndrome de Bannayan-Zonana, doença de Cowden, doença de Lhermitte-Duclos, câncer de mama in- flamatório, tumor de Wilm, sarcoma de Ewing, Rabdomiossarcoma, ependimoma, meduloblastoma, câncer de rim, câncer de fígado, mela- noma, câncer de pâncreas, sarcoma, osteossarcoma, tumor de células gigantes de osso, câncer de tireoide, leucemia de células T linfoblástica, leucemia mielogênica crônica, Leucemia linfocítica crônica, Leucemia de células pilosas, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielogênica aguda, AML, Leucemia neutrofílica crônica, Leucemia linfoblástica aguda de células T, plasmocitoma, Leucemia imunoblástica de células grandes, Leucemia de células do manto, leucemia megacarioblástica de mieloma múltiplo, leucemia megacariocítica aguda de mieloma múltiplo, leucemia megacariocítica aguda de mieloma múltiplo, leucemia promi- elocítica, Eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma de Hodgkins, linfoma não hodgkins, linfoma linfoblástico de células T, linfoma de Burkitt, lin- foma folicular, neuroblastoma, câncer de bexiga, câncer urotelial, cân- cer vulval, câncer cervical, câncer endometrial, câncer renal, mesoteli- oma, câncer esofágico, câncer de glândula salivar, câncer hepatocelu- lar, câncer gástrico, câncer nasofaringeal, câncer bucal, câncer de boca, GIST (tumor estromal gastrointestinal) e câncer testicular.
[168] Em uma modalidade, o ser humano tem um tumor sólido. Em uma modalidade, o tumor é selecionado a partir de câncer de cabeça e pescoço, câncer gástrico, melanoma, carcinoma de células renais (RCC), câncer de esôfago, carcinoma de pulmão de células não peque- nas, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer de ovário e câncer de pâncreas. Em outra modalidade, o humano tem um tumor líquido, tal como linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), mieloma múltiplo, leucemia linfomblástica crônica (CLL), linfoma folicular, leucemia mie- loide aguda e leucemia mielogênica crônica.
[169] A presente divulgação também refere-se a um método para tratar ou diminuir a gravidade de um câncer selecionado a partir de: cé- rebro (gliomas), glioblastomas, síndrome de Bannayan-Zonana, doença de Cowden, doença de Lhermitte-Duclos, mama, câncer de mama infla- matório, tumor de Wilm, sarcoma de Ewing, Rabdomiossarcoma, epen- dimoma, meduloblastoma, cólon, cabeça e pescoço, rim, pulmão, fí- gado, melanoma, ovário, pâncreas, próstata, sarcoma, osteossarcoma, tumor de células gigantes de osso, tireóide, leucemia mielóide linfoblás- tica crônica, leucemia linfocítica crônica, leucemia de células pilosas, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielogênica aguda, leucemia neutrofílica crônica, leucemia linfoblástica aguda de células T, plasmo- citoma, leucemia imunoblástica de grandes células, leucemia de células do manto, leucemia megacarioblástica aguda de mieloma múltiplo, leu- cemia megacariocítica aguda de mieloma múltiplo, leucemia promielo- cítica, eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma de Hodgkin, linfoma não hodgkin, linfoma de célula T linfoblástica, linfoma de Burkitt, linfoma fo- licular, neuroblastoma, câncer de bexiga, câncer urotelial, câncer de pul- mão, câncer vulvar, câncer cervical, câncer endometrial, câncer renal, mesotelioma, câncer esofágico, câncer de glândula salivar, câncer he- patocelular, câncer gástrico, câncer nasofarangeano, câncer oral, cân- cer da boca, GIST (tumor estromal gastrointestinal) e câncer testicular.
[170] Pelo termo "tratar" e suas variações gramaticais, como aqui utilizado, significa terapia terapêutica. Em referência a uma condição particular, tratar significa: (1) melhorar a condição de uma ou mais das manifestações biológicas da condição, (2) interferir com (a) um ou mais pontos na cascata biológica que leva a ou é responsável pela condição ou (b) uma ou mais das manifestações biológicas da condição, (3) para aliviar um ou mais dos sintomas, efeitos ou efeitos colaterais associados à condição ou tratamento da mesma, ou (4) para retardar a progressão da condição ou uma ou mais das manifestações biológicas da condição. A terapia profilática também é contemplada nesse sentido. O versado na técnica apreciará que "prevenção" não é um termo absoluto. Em me- dicina, "prevenção" é entendida como referindo-se à administração pro- filática de uma droga para diminuir substancialmente a probabilidade ou gravidade de uma condição ou manifestação biológica da mesma, ou para retardar o início de tal condição ou manifestação biológica da mesma. A terapia profilática é apropriada, por exemplo, quando um ob- jeto é considerado de alto risco para desenvolver câncer, como quando um objeto tem um forte histórico familiar de câncer ou quando um objeto foi exposto a um carcinógeno.
[171] Tal como aqui utilizado, os termos "câncer", "neoplasma" e "tumor" são usados indistintamente e, no singular ou no lural, referem- se a células que sofreram uma transformação maligna que as torna pa- tológicas para o organismo hospedeiro. As células cancerosas primárias podem ser facilmente distinguidas das células não cancerosas por téc- nicas bem estabelecidas, particularmente o exame histológico. A defini- ção de uma célula cancerosa, tal como aqui utilizada, inclui não apenas uma célula cancerosa primária, mas qualquer célula derivada de um an- cestral de uma célula cancerosa. Isso inclui células cancerosas com me- tástase e culturas in vitro e linhagens de células derivadas de células cancerosas. Quando refere-se a um tipo de câncer que normalmente se manifesta como um tumor sólido, um tumor "clinicamente detectável" é aquele que é detectável com base na massa tumoral; por exemplo, por procedimentos como tomografia computadorizada (TC), ressonância magnética (MRI), raio-X, ultrassom ou palpação no exame físico e/ou que é detectável por causa da expressão de um ou mais antígenos es- pecíficos do câncer em uma amostra obtida de um paciente. Os tumores podem ser um câncer hematopoiético (ou hematológico ou relacionado ao hematológico ou sangue), por exemplo, cânceres derivados de célu- las sanguíneas ou células do sistema imunológico, que podem ser refe-
ridos como "tumores líquidos". Exemplos específicos de condições clí- nicas com base em tumores hematológicos incluem leucemias, tais como leucemia mielocítica crônica, leucemia mielocítica aguda, leuce- mia linfocítica crônica e leucemia linfocítica aguda; malignidades de cé- lulas plasmáticas, como mieloma múltiplo, MGUS e macroglobulinemia de Waldenstrom; linfomas, como linfoma não Hodgkin, linfoma de Hod- gkin; e semelhantes.
[172] O câncer pode ser qualquer câncer no qual um número anor- mal de células blásticas ou proliferação de células indesejadas está pre- sente ou que é diagnosticado como um câncer hematológico, incluindo malignidades linfóides e mieloides. As malignidades mieloides incluem, mas não estão limitadas a, leucemia mieloide aguda (ou mielocítica ou mielogênica ou mieloblástica) (indiferenciada ou diferenciada), leucemia aguda promielóide (ou promielocítica ou promielogênica ou promielo- blástica), leucemia mielomonocítica aguda (ou mielomonoblástica), leu- cemia monocítica aguda (ou monoblástica), eritroleucemia e leucemia megacariocítica (ou megacarioblástica). Essas leucemias podem ser re- feridas como leucemia mieloide aguda (ou mielocítica ou mielogênica) (AML). As malignidades mieloides também incluem distúrbios mielopro- liferativos (MPD) que incluem, mas não estão limitados a, leucemia mi- elogênica crônica (ou mielóide) (CML), leucemia mielomonocítica crô- nica (CMML), trombocitemia essencial (ou trombocitose) e policitemia vera (PCV). As neoplasias mieloides também incluem mielodisplasia (ou síndrome mielodisplásica ou MDS), que pode ser referida como anemia refratária (RA), anemia refratária com excesso de blastos (RAEB) e ane- mia refratária com excesso de blastos em transformação (RAEBT); bem como mielofibrose (MFS) com ou sem metaplasia mielóide agnogênica.
[173] Cânceres hematopoiéticos também incluem malignidades linfoides, que podem afetar os gânglios linfáticos, baços, medula óssea, sangue periférico e/ou sítios extranodais. Os cânceres linfóides incluem doenças malignas de células B, que incluem, mas não estão limitadas a, linfomas não Hodgkin de células B (B-NHLs). B-NHLs podem ser in- dolentes (ou de baixo grau), de grau intermediário (ou agressivo) ou de alto grau (muito agressivo). Os linfomas indolentes de células B incluem linfoma folicular (FL); linfoma linfocítico pequeno (SLL); linfoma de zona marginal (MZL) incluindo MZL nodal, MZL extranodal, MZL esplênico e MZL esplênico com linfócitos vilosos; linfoma linfoplasmocitário (LPL); e linfoma do tecido linfóide associado à mucosa (MALT ou zona marginal extranodal). B-NHLs de grau intermediário incluem linfoma de células do manto (MCL) com ou sem envolvimento leucêmico, linfoma difuso de grandes células (DLBCL), linfoma folicular de grandes células (ou grau 3 ou 3B) e linfoma mediastinal primário (PML). B-NHLs de alto grau in- cluem linfoma de Burkitt (BL), linfoma do tipo Burkitt, linfoma de peque- nas células não clivadas (SNCCL) e linfoma linfoblástico.
Outros B- NHLs incluem linfoma imunoblástico (ou imunocitoma), linfoma de efu- são primária, linfomas associados ao HIV (ou relacionados à AIDS) e distúrbio linfoproliferativo pós-transplante (PTLD) ou linfoma.
As malig- nidades de células B também incluem, mas não estão limitadas a, leu- cemia linfocítica crônica (CLL), leucemia prolinfocítica (PLL), macroglo- bulinemia de Waldenstrom (WM), leucemia de células pilosas (HCL), leucemia de linfócitos granulares grandes (LGL), linfóide aguda (ou leu- cemia linfocítica ou linfoblástica) e doença de Castleman.
NHL também pode incluir linfoma não Hodgkin de células T (T-NHLs), que incluem, mas não estão limitados a linfoma não Hodgkin de células T não espe- cificado de outra forma (NOS), linfoma não Hodgkin de células T perifé- rico (PTCL), anaplásico linfoma de células grandes (ALCL), distúrbio lin- fóide angioimunoblástico (AILD), linfoma de células assassinas naturais nasais (NK)/células T, linfoma gama/delta, linfoma cutâneo de células T, micose fungóide e síndrome de Sezary.
[174] Cânceres hematopoiéticos também incluem linfoma de Hod- gkin (ou doença), incluindo o clássico linfoma de Hodgkin, linfoma de Hodgkin esclerosante nodular, linfoma de Hodgkin de celularidade mista, linfoma de Hodgkin predominante de linfócitos (LP), linfoma de Hodgkin LP nodular e linfoma de Hodgkin de depleção de linfócitos. Os cânceres hematopoiéticos também incluem doenças de células plasmá- ticas ou cânceres, como mieloma múltiplo (MM), incluindo MM latente, gamopatia monoclonal de significado indeterminado (ou desconhecido ou pouco claro) (MGUS), plasmocitoma (osso, extramedular), linfoma linfoplasmocitário (LPL), macroglobulinemia de Waldenström, leucemia de células plasmáticas e amiloidose primária (AL). Cânceres hemato- poiéticos também podem incluir outros cânceres de células hematopoié- ticas adicionais, incluindo leucócitos polimorfonucleares (ou neutrófilos), basófilos, eosinófilos, células dendríticas, plaquetas, eritrócitos e células assassinas naturais. Os tecidos que incluem células hematopoiéticas aqui referidas como "tecidos de células hematopoiéticas" incluem me- dula óssea; sangue periférico; timo; e tecidos linfóides periféricos, tais como baço, nódulos linfáticos, tecidos linfóides associados à mucosa (tais como tecidos linfóides associados ao intestino), amígdalas, placas de Peyer e apêndice, e tecidos linfóides associados a outra mucosa, por exemplo, os revestimentos brônquicos.
[175] Em uma modalidade, um ou mais componentes de uma com- binação da invenção são administrados por via intravenosa. Em uma modalidade, um ou mais componentes de uma combinação da invenção são administrados por via oral. Em outra modalidade, um ou mais com- ponentes de uma combinação da invenção são administrados por via intratumoral. Em outra modalidade, um ou mais componentes de uma combinação da invenção são administrados sistemicamente, por exem- plo, por via intravenosa, e um ou mais outros componentes de uma com-
binação da invenção são administrados intratumoralmente. Em qual- quer uma das modalidades, por exemplo, neste parágrafo, os compo- nentes da invenção são administrados como uma ou mais composições farmacêuticas.
[176] Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I ou a proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma é ad- ministrado ao paciente em uma via selecionada a partir de: simultânea, sequencial, em qualquer ordem, sistêmica, oral, intravenosa e intratu- moralmente. Em uma modalidade, o inibidor de PRMT Tipo I é adminis- trado por via oral. Em outra modalidade, a proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma é administrada por via intravenosa.
[177] Em uma modalidade, os métodos da presente invenção adi- cionalmente compreendem a administração de pelo menos um agente neoplástico ao referido humano. Os métodos da presente invenção tam- bém podem ser empregados com outros métodos terapêuticos de trata- mento do câncer.
[178] Normalmente, qualquer agente antineoplásico que tem ativi- dade contra um tumor suscetível a ser tratado pode ser coadministrado no tratamento de câncer na presente invenção. Exemplos de tais agen- tes podem ser encontrados em Cancer Principles and Practice of Onco- logy por V.T. Devita, T.S. Lawrence e S.A. Rosenberg (editores), 10ª edição (5 de dezembro de 2014), Lippincott Williams & Wilkins Publis- hers. Um versado na técnica seria capaz de discernir quais combina- ções de agentes seriam úteis com base nas características particulares das drogas e do câncer envolvido. Os agentes antineoplásicos típicos úteis na presente invenção incluem, mas não estão limitados a, agentes antimicrobianos ou antimitóticos, tais como diterpenóides e alcalóides da vinca; complexos de coordenação de platina; agentes alquilantes,
tais como mostardas de nitrogênio, oxazafosforinas, alquilsulfonatos, ni- trosoureias e triazenos; agentes antibióticos, tais como actinomicinas, antraciclinas e bleomicinas; inibidores da topoisomerase I, tais como camptotecinas; inibidores da topoisomerase II, tais como epipodofiloto- xinas; antimetabolitos, tais como análogos de purina e pirimidina e com- postos antifolato; hormônios e análogos hormonais; inibidores da via de transdução de sinal; inibidores da angiogênese da tirosina quinase não receptores; agentes imunoterapêuticos; agentes pró-apoptóticos; inibi- dores de sinalização do ciclo celular; inibidores de proteassoma; inibi- dores de proteínas de choque térmico; inibidores do metabolismo do câncer; e agentes de terapia gênica de câncer, tais como células T ge- neticamente modificadas.
[179] Exemplos de um outro ingrediente ou ingredientes ativos para uso em combinação ou coadministrado com os presentes métodos ou combinações são agentes antineoplásicos. Exemplos de agentes an- tineoplásicos incluem, mas não estão limitados a, agentes quimiotera- pêuticos; agentes imunomoduladores; imunomoduladores; e adjuvantes imunoestimuladores.
EXEMPLOS
[180] Os exemplos seguintes ilustram vários aspectos não limitati- vos desta invenção. Exemplo 1 Metilação de arginina e PRMTs
[181] A metilação da arginina é uma modificação pós-tradução im- portante em proteínas envolvidas em uma ampla gama de processos celulares, como regulação gênica, processamento de RNA, resposta a danos no DNA e transdução de sinal. Proteínas contendo argininas me- tiladas estão presentes nas frações nucleares e citosólicas, sugerindo que as enzimas que catalisam a transferência de grupos metila para argininas também estão presentes em todos esses compartimentos subcelulares (revisado em Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine metiltransferases e cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Lee, Y. H. & Stallcup, M. R. Minireview: protein arginine metilation of nonhistone proteins in transcriptional regu- lation. Mol Endocrinol 23, 425-433, doi:10.1210/me.2008-0380 (2009)). Em células de mamíferos, a arginina metilada existe em três formas principais: ω-NG-monometil-arginina (MMA), ω-NG,NG-dimetil arginina assimétrica (ADMA) ou ω-NG,N'G-dimetil arginina simétrica (SDMA) Cada estado de metilação pode afetar as interações proteína-proteína de maneiras diferentes e, portanto, tem o potencial de conferir conse- quências funcionais distintas para a atividade biológica do substrato (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine metiltransferases e cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)).
[182] A metilação da arginina ocorre amplamente no contexto de motivos ricos em glicina e arginina (GAR) por meio da atividade de uma família de Proteína Arginina Metiltransferases (PRMTs) que transferem o grupo metila de S-adenosil-L-metionina (SAM) para o cadeia lateral de arginina do substrato produzindo S-adenosil-homocisteína (SAH) e arginina metilada (FIG. 1). Esta família de proteínas é composta por 10 membros, dos quais 9 demonstraram ter atividade enzimática (Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine metilation in mammals: who, what, e why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)). A família PRMT é categorizada em quatro subtipos (Tipo I-IV), depen- dendo do produto da reação enzimática (FIG. 1). As enzimas do tipo IV metilam o nitrogênio guanidino interno e só foram descritas em levedu- ras (Fisk, J. C. & Read, L. K. Protein arginine metilation in parasitic pro- tozoa. Eukaryot Cell 10, 1013-1022, doi:10.1128/EC.05103-11 (2011)); as enzimas dos tipos I-III geram monometil-arginina (MMA, Rme1) por meio de um único evento de metilação. O intermediário MMA é consi-
derado um intermediário de abundância relativamente baixa, no en- tanto, substratos selecionados da atividade primariamente Tipo III de PRMT7 podem permanecer monometilados, enquanto enzimas Tipos I e II catalisam a progressão de MMA para dimetil-arginina assimétrica (ADMA, Rme2a) ou dimetil arginina simétrica (SDMA, Rme2s) respecti- vamente. As PRMTs Tipo II incluem PRMT5 e PRMT9, no entanto, PRMT5 é a enzima primária responsável pela formação de dimetilação simétrica. As enzimas Tipo I incluem PRMT1, PRMT3, PRMT4, PRMT6 e PRMT8. PRMT1, PRMT3, PRMT4 e PRMT6 são expressas de forma ubíqua, enquanto PRMT8 é amplamente restrita ao cérebro (revisado em Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine metilation in mam- mals: who, what, e why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.mol- cel.2008.12.013 (2009)).
[183] PRMT1 é a enzima primária Tipo 1 capaz de catalisar a for- mação de MMA e ADMA em vários substratos celulares (Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine metilation in mammals: who, what, e why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)). Em muitos casos, a modificação ADMA dependente de PRMT1 é necessá- ria para a atividade biológica e o tráfego de seus substratos (Nicholson, T. B., Chen, T. & Richard, S. The physiological e pathophysiological role of PRMT1-mediated protein arginine metilation. Pharmacol Res 60, 466- 474, doi:10.1016/j.phrs.2009.07.006 (2009)), e a atividade de PRMT1 é responsável por ~ 85% dos níveis de ADMA celular (Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine metiltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013); Pawlak, M. R., Scherer, C. A., Chen, J., Roshon, M. J. & Ruley, H. E. Arginine N-metiltransferase 1 é required for early postimplantation mouse development, but cells deficient in the enzyme are viable. Mol Cell Biol 20, 4859-4869 (2000)). O nocaute completo de PRMT1 resulta em um aumento profundo em MMA em vários substratos, sugerindo que a principal função biológica para PRMT1 é converter MMA em ADMA, enquanto outras PRMTs podem estabelecer e manter MMA (Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine metiltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013)). Além disso, os níveis de SDMA aumen- tam após a perda de PRMT1, provavelmente uma consequência da perda de ADMA e do aumento correspondente de MMA que pode servir como substrato para PRMTs Tipo II geradoras de SDMA. A inibição de PRMTs Tipo I pode levar à alteração da função do substrato por meio da perda de ADMA, aumento de MMA ou, alternativamente, uma mu- dança para o padrão de metilação distinto associado com SDMA (Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine metiltransferase PRMT1 cau- ses substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013)).
[184] A interrupção do locus Prmt1 em camundongos resulta em letalidade embrionária precoce e embriões homozigotos não conse- guem se desenvolver além de E6.5 indicando um requisito para PRMT1 no desenvolvimento normal (Pawlak, M. R., Scherer, C. A., Chen, J., Roshon, M. J. & Ruley, H. E. Arginine N-metiltransferase 1 é required for early postimplantation mouse development, but cells deficient in the enzyme are viable. Mol Cell Biol 20, 4859-4869 (2000); Yu, Z., Chen, T., Hebert, J., Li, E. & Richard, S. A mouse PRMT1 null allele defines an essential role for arginine metilation in genome maintenance e cell pro- liferation. Mol Cell Biol 29, 2982-2996, doi:10.1128/MCB.00042-09 (2009)). O nocaute condicional ou específico do tecido será necessário para entender melhor o papel de PRMT1 no adulto. Fibroblastos embri- onários de camundongo derivados de camundongos nulos Prmt1 so- frem parada de crescimento, poliploidia, instabilidade cromossômica e danos espontâneos de DNA em associação com hipometilação da pro- teína de resposta a danos ao DNA, MRE11, sugerindo um papel para
PRMT1 na manutenção do genoma e proliferação celular (Yu, Z., Chen, T., Hebert, J., Li, E. & Richard, S. A mouse PRMT1 null allele defines an essential role for arginine metilation in genome maintenance e cell pro- liferation. Mol Cell Biol 29, 2982-2996, doi:10.1128/MCB.00042-09 (2009)). A proteína PRMT1 e o mRNA podem ser detectados em uma ampla variedade de tecidos embrionários e adultos, de acordo com sua função como enzima responsável pela maioria da metilação celular da arginina. Embora as PRMTs possam sofrer modificações pós-traducio- nais e estejam associadas a proteínas regulatórias em interação, PRMT1 retém a atividade basal sem a necessidade de modificação adi- cional (revisado em Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine metil- transferases e cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)). PRMT1 e Câncer
[185] Uma má regulação e superexpressão de PRMT1 foram as- sociadas a uma série de cânceres sólidos e hematopoiéticos (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine metiltransferases e cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Yoshimatsu, M. et al. Dysregulation of PRMT1 e PRMT6, Type I arginine metiltransferases, é involved in various types of human cancers. Int J Cancer 128, 562-573, doi:10.1002/ijc.25366 (2011)). A ligação entre PRMT1 e biologia do cân- cer tem sido amplamente através da regulação da metilação de resíduos de arginina encontrados em substratos relevantes (FIG. 2). Em vários tipos de tumor, PRMT1 pode conduzir a expressão de programas onco- gênicos aberrantes através da metilação da histona H4 (Takai, H. et al. 5-Hidroximetilcytosine plays a critical role in glioblastomagenesis by re- cruiting the CHTOP-metilosome complex. Cell Rep 9, 48-60, doi:10.1016/j.celrep.2014.08.071 (2014); Shia, W. J. et al. PRMT1 inte- racts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation e progeni- tor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-
2011-04-347476 (2012); Zhao, X. et al. Metilation of RUNX1 by PRMT1 abrogates SIN3A binding e potentiates its transcriptional activity. Genes Dev 22, 640-653, doi:10.1101/gad.1632608 (2008)), bem como pela sua atividade em substratos não histonas (Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine metilation of non-histone proteins e its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014)). Em muitos desses sistemas experimentais, a interrupção da modificação ADMA dependente de PRMT1 de seus substratos diminui a capacidade proliferativa das células cancerosas (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine metiltransferases e cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)).
[186] Vários estudos relacionaram PRMT1 ao desenvolvimento de tumores hematológicos e sólidos. PRMT1 está associada ao desenvol- vimento de leucemia por meio da metilação de condutores-chave, como MLL e fusões AML1-ETO, levando à ativação de vias oncogênicas (Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its trans- criptional activation e progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Cheung, N. et al. Targeting Aberrant Epigenetic Networks Mediated by PRMT1 e KDM4C in Acute Myeloid Leukemia. Cancer Cell 29, 32-48, doi:10.1016/j.ccell.2015.12.007 (2016)). A destruição de PRMT1 em cé- lulas da medula óssea derivadas de AML1-ETO que expressam camun- dongos suprimiu a clonogenicidade, demonstrando um requisito crítico para PRMT1 na manutenção do fenótipo leucêmico deste modelo (Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptio- nal activation e progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953- 4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012)). PRMT1 também é um componente de complexos de fusão MLL, promove ativação trans- cricional aberrante em associação com metilação de H4R3 e knockdown de PRMT1 pode suprimir a transformação mediada por MLL-EEN de células-tronco hematopoiéticas (Cheung, N., Chan, L.
C., Thompson, A., Cleary, M.
L. & So, C.
W.
Protein arginine-metiltransferase-dependent oncogenesis.
Nat Cell Biol 9, 1208-1215, doi:10.1038/ncb1642 (2007)). Em pacientes com câncer de mama, a alta expressão de PRMT1 foi encontrada para se correlacionar com a sobrevida livre de doença mais curta e com tumores de grau histológico avançado (Matioudaki, K. et al.
Clinical evaluation of PRMT1 gene expression in breast cancer.
Tumour Biol 32, 575-582, doi:10.1007/s13277-010-0153-2 (2011)). Para este fim, PRMT1 foi implicada na promoção de metástases e invasão de cé- lulas cancerosas (Gao, Y. et al.
The dual function of PRMT1 in modula- ting epithelial-mesenchymal transition e cellular senescence in breast cancer cells through regulation of ZEB1. Sci Rep 6, 19874, doi:10.1038/srep19874 (2016); Avasarala, S. et al.
PRMT1 é a Novel Regulator of Epithelial-Mesenchymal-Transition in Non-small Cell Lung Cancer.
J Biol Chem 290, 13479-13489, doi:10.1074/jbc.M114.636050 (2015)) e a metilação mediada por PRMT1 do receptor de estrogênio α (ERα) podem potencializar as vias de transdução de sinal promotoras de crescimento.
Este mecanismo impulsionado por metilação pode for- necer uma vantagem de crescimento para células de câncer de mama, mesmo na presença de antiestrogênios (Le Romancer, M. et al.
Regu- lation of estrogen rapid signaling through arginine metilation by PRMT1. Mol Cell 31, 212-221, doi:10.1016/j.molcel.2008.05.025 (2008)). Além disso, PRMT1 promove a estabilidade do genoma e a resistência a agentes que danificam o DNA por meio da regulação de ambas a re- combinação homóloga e vias de reparo de DNA de junção de extremi- dade não homóloga (Boisvert, F.
M., Rhie, A., Richard, S. & Doherty, A.
J.
The GAR motif of 53BP1 é arginine metilated by PRMT1 e é neces- sary for 53BP1 DNA binding activity.
Cell Cycle 4, 1834-1841, doi:10.4161/cc.4.12.2250 (2005); Boisvert, F.
M., Dery, U., Masson, J.
Y. & Richard, S.
Arginine metilation of MRE11 by PRMT1 é required for
DNA damage checkpoint control. Genes Dev 19, 671-676, doi:10.1101/gad.1279805 (2005)). Portanto, a inibição de PRMT1 pode sensibilizar cânceres para agentes que danificam o DNA, particular- mente em tumores onde a maquinaria de reparo de DNA pode estar comprometida por mutações (como BRCA1 em cânceres de mama) (O'Donovan, P. J. & Livingston, D. M. BRCA1 e BRCA2: breast/ovarian cancer susceptibility gene products e participants in DNA double-strand break repair. Carcinogenesis 31, 961-967, doi:10.1093/carcin/bgq069 (2010)). Juntas, essas observações demonstram papéis chave para PRMT1 em aspectos clinicamente relevantes da biologia tumoral e su- gerem uma justificativa para explorar combinações com terapias como aquelas que promovem danos ao DNA.
[187] Proteínas de ligação de RNA e maquinaria de emenda são uma classe principal de substratos de PRMT1 e têm sido implicadas na biologia do câncer por meio de sua função biológica, bem como muta- ções recorrentes em leucemias (Bressan, G. C. et al. Arginine metilation analysis of the splicing-associated SR protein SFRS9/SRP30C. Cell Mol Biol Lett 14, 657-669, doi:10.2478/s11658-009-0024-2 (2009); Sveen, A., Kilpinen, S., Ruusulehto, A., Lothe, R. A. & Skotheim, R. I. Aberrant RNA splicing in cancer; expression changes e driver mutations of spli- cing factor genes. Oncogene 35, 2413-2427, doi:10.1038/onc.2015.318 (2016); Hsu, T. Y. et al. The spliceosome é a therapeutic vulnerability in MYC-driven cancer. Nature 525, 384-388, doi:10.1038/nature14985 (2015)). Em um estudo recente, PRMT1 demonstrou metilar a proteína de ligação de RNA, RBM15, na leucemia megacariocítica aguda (Zhang, L. et al. Cross-talk between PRMT1-mediated metilation e ubiquitylation on RBM15 controls RNA splicing. Elife 4, doi:10.7554/eLife.07938 (2015)). A metilação mediada por PRMT1 de RBM15 regula sua expres- são; consequentemente, a superexpressão de PRMT1 em linhagens de células AML mostrou bloquear a diferenciação por regulação negativa de RBM15, evitando assim sua capacidade de se ligar a regiões intrôni- cas de pré-mRNA de genes importantes para a diferenciação. Para identificar substratos de PRMT1 putativos, uma abordagem proteômica (Methylscan, Cell Signaling Technology) foi utilizada para identificar pro- teínas com mudanças nos estados de metilação da arginina em res- posta a uma ferramenta do inibidor de PRMT1, Composto D. Fragmen- tos de proteína de extratos de células tratadas com Composto D e DSMO foram imunoprecipitados usando anticorpos específicos de metil arginina (ADMA, MMA, SDMA), e os peptídeos foram identificados por espectrometria de massa. Enquanto muitas proteínas sofrem alterações na metilação da arginina, a maioria dos substratos identificados era re- gulador da transcrição e proteínas de processamento de RNA em linha- gens de células AML tratadas com o composto ferramenta (FIG. 3).
[188] Em suma, o impacto de PRMT1 nas vias relevantes do cân- cer sugere que a inibição pode levar à atividade antitumoral, fornecendo um novo mecanismo terapêutico para o tratamento de AML, linfoma e indicações de tumor sólido. Conforme descrito na literatura emergente, vários mecanismos suportam uma justificativa para o uso de um inibidor de PRMT1 em tumores hematológicos e sólidos, incluindo: inibição de oncogênese conduzida por AML-ETO em leucemia, inibição da transdu- ção de sinal de promoção de crescimento em câncer de mama e modu- lação de emenda através da metilação de proteínas de ligação de RNA e maquinaria de spliceossomo. A ibição de PRMTs Tipo I incluindo PRMT1 representa uma estratégia tratável para suprimir a proliferação e sobrevivência de células cancerosas aberrantes.
BIOQUÍMICA
[189] Estudos bioquímicos in vitro detalhados foram conduzidos com o Composto A para caracterizar a potência e o mecanismo de ini- bição contra PRMTs Tipo I. Mecanismo de Inibição
[190] O mecanismo inibitório do Composto A para PRMT1 foi ex- plorado por meio de experimentos de competição de substrato. A mo- dalidade do inibidor foi examinada traçando os valores de IC50 do Com- posto A como uma função da concentração de substrato dividido por seu Kmapp e comparando os gráficos resultantes com a relação de Cheng-Prusoff para inibição competitiva, não competitiva e não compe- titiva (Copeland, R. A. Evaluation of enzyme inhibitors in drug discovery. A guide for medicinal chemists e pharmacologists. Methods Biochem Anal 46, 1-265 (2005)). Os valores de IC50 do Composto A diminuíram com o aumento da concentração de SAM, indicando que a inibição de PRMT1 pelo Composto A era não competitiva em relação a SAM com um valor Kiapp de 15 nM quando ajustado a uma equação para inibição não competitiva (FIG. 4A). Nenhuma tendência de modalidade clara foi observada quando os valores de IC50 do Composto A foram esquemati- zados como uma função do peptídeo H4 1-21 (FIG. 4B) sugerindo inibi- ção de tipo misto. Uma análise adicional foi realizada usando uma aná- lise global resultando em um valor α de 3,7 confirmando o mecanismo do peptídeo como misto e rendendo um valor Kiapp de 19 nM (FIG. 4B, inserção). Dependência e Reversibilidade de Tempo
[191] O Composto A foi avaliado quanto à inibição dependente de tempo medindo os valores de IC50 seguindo SAM: PRMT1: Tempo de pré-incubação do Composto A e uma reação de 20 minutos. Um meca- nismo inibitório que não é competitivo com SAM implica que a geração do complexo SAM: PRMT1 é necessária para suportar a ligação do Composto A, portanto, SAM (mantido em Kmapp) foi incluído durante a pré-incubação. O Composto A demonstrou inibição dependente de tempo de metilação de PRMT1 evidente por um aumento na potência com tempo de pré-incubação mais longo (FIG. 5A). Uma vez que foi observada inibição dependente de tempo, outras determinações de IC50 incluíram uma pré-incubação de SAM: PRMT1: Composto A de 60 mi- nutos e um tempo de reação de 40 minutos para fornecer uma repre- sentação melhor da potência do composto. Estas condições produzem um IC50 de 3,1 ± 0,4 nM (n = 29) que é > 10 vezes acima do limite teórico de ligação forte (0,25 nM) do ensaio. O exame dos valores de IC50 em concentrações variáveis de PRMT1 revelou que o limite de ligação forte real seria significativamente menor do que 0,25 nM, potencialmente de- vido a uma fração ativa baixa (FIG. 5B). A forma de sal do Composto A não afetou significativamente o valor IC50 determinado contra PRMT1 (FIG. 5B).
[192] Duas explicações para a inibição dependente de tempo são a inibição reversível de ligação lenta e a inibição irreversível. Para dis- tinguir entre esses dois mecanismos, a espectrometria de massa de se- leção de afinidade (ASMS) foi usada para examinar a ligação do Com- posto A a PRMT1. ASMS primeiro separa o ligando ligado do não ligado e, em seguida, detecta o ligando ligado reversivelmente por MS. Uma pré-incubação de 2 horas de PRMT1: SAM com Composto A foi usada para garantir que o complexo dependente de tempo (ESI*) fosse total- mente formado com base no perfil mostrado na FIG. 5A em que a po- tência máxima foi observada após 20 minutos de pré-incubação. Nes- sas condições, o Composto A foi detectado usando ASMS. Isso sugere que o mecanismo primário é reversível por natureza, uma vez que ASMS seria incapaz de detectar o Composto A ligado de forma irrever- sível. Estudos de reversibilidade definitiva, incluindo a análise da taxa de desaceleração, ainda não foram realizados e validariam o meca- nismo. Cristalografia
[193] Para determinar o modo de ligação do inibidor, a estrutura do cocristal do Composto A ligado a PRMT1 e SAH foi determinada (re- solução de 2,48 Å) (FIG. 6). SAH é o produto formado após a remoção do grupo metila de SAM por PRMT1; portanto, SAH e SAM devem ocu- par a mesma bolsa de PRMT1. O inibidor se liga na fenda normalmente ocupada pelo peptídeo substrato diretamente adjacente à bolsa SAH e sua cadeia lateral de diamina ocupa o sítio putativo do substrato de ar- ginina. A metilamina terminal forma uma ligação de hidrogênio com o resíduo de cadeia lateral Glu162 que é 3,6 Å do tioéter de SAH e a bolsa de ligação de SAH é ligada ao Composto A por Tyr57 e Met66. O Com- posto A liga PRMT1 através da formação de uma ligação de hidrogênio entre o próton do nitrogênio do pirazol do Composto A e a cadeia lateral ácida de Glu65; a porção ciclohexila ramificada em dietóxi fica ao longo da superfície exposta ao solvente em um sulco hidrofóbico formado por Tyr57, Ile62, Tyr166 e Tyr170. A separação espacial entre a SAH e a ligação do inibidor, bem como as interações com resíduos como Tyr57, poderiam suportar o mecanismo não competitivo de SAM revelado nos estudos enzimáticos. A descoberta de que o Composto A está ligado à bolsa do peptídeo do substrato e que a cadeia lateral da diamina pode imitar as aminas do resíduo de arginina do substrato implica que a mo- dalidade do inibidor pode ser competitiva com o peptídeo. Os estudos de modo bioquímico de inibição suportam que o Composto A é um ini- bidor misto em relação ao peptídeo (FIG. 4B). O comportamento depen- dente de tempo do Composto A, bem como o potencial para a ligação do exosito do peptídeo do substrato fora da fenda do peptídeo podem ambos resultar em um modo de inibição que não é competitivo com o peptídeo, explicando a diferença na modalidade sugerida pela estrutura e estudos bioquímicos. Ortólogos
[194] Para facilitar a interpretação dos estudos de toxicologia, a potência do Composto A foi avaliada contra os ortólogos de rato e ca- chorro de PRMT1. Tal como acontece com PRMT1 humano, o Com- posto A revelou inibição dependente de tempo contra PRMT1 de rato e cão com valores de IC50 diminuindo com o aumento da pré-incubação (FIG. 7A). Além disso, nenhuma mudança na potência do Composto A foi observada em uma faixa de concentrações de enzima (0,25-32 nM), sugerindo que os valores de IC50 medidos não se aproximam do limite de ligação forte do ensaio para humanos, ratos ou cães (FIG. 7B). Os valores de IC50 foram determinados usando condições equivalentes às usadas para avaliar PRMT1 humano e revelaram que a potência do Composto A variou <2 vezes em todas as espécies (FIG. 7C). Seletividade
[195] A seletividade do Composto A foi avaliada através de um pai- nel de membros da família PRMT. Os valores de IC50 foram determina- dos contra membros da família representativos dos Tipos I (PRMT3, PRMT4, PRMT6 e PRMT8) e II (PRMT5/MEP50 e PRMT9) após uma SAM de 60 minutos: Enzima: Composto A. O Composto A inibiu a ativi- dade de todos as PRMTs Tipo I testadas com potências variáveis, mas falhou em inibir os membros da família Tipo II (FIG. 8A). A caracteriza- ção adicional das PRMTs Tipo I revelou que o Composto A era um ini- bidor dependente de tempo de PRMT4, PRMT6 e PRMT8 devido ao aumento na potência observada após o aumento da Enzima: SAM: tem- pos de pré-incubação do Composto A; ao passo que PRMT3 não apre- sentou comportamento dependente de tempo (FIG. 8B).
[196] Para caracterizar ainda mais a seletividade do Composto A, a inibição de vinte e uma metiltransferases foi avaliada a uma única con- centração do Composto A (10 µM, Biologia de Reação). O maior grau de inibição, 18%, foi observado contra PRDM9. No geral, o Composto A mostrou inibição mínima das metiltransferases testadas, sugerindo que é um inibidor seletivo de PRMTs Tipo I (Tabela 2). Ensaios de se- letividade adicionais são descritos nas seções de Segurança. Tabela 2 Metiltransferases testadas para inibição pelo Composto A. As enzimas foram testadas a uma concentração fixa de
SAM (1 µM) independente do valor Km de de SAM. Metiltransferase Substrato % de Inibição Média PRDM9 Histona H3 17,99 NSD2 Nucleossomas 14,97 Complexo MLL3 Histona núcleo 13,67 Complexo EZH1 Histona núcleo 11,97 SMYD2 Histona H4 9,26 PRMT3 Histona H4 9,01 Complexo EZH2 Histona núcleo 8,17 Complexo MLL2 Histona núcleo 6,21 Complexo SET1B Histona núcleo 5,96 NSD1 Nucleossomas 3,81 G9a Histona H3 (1-21) 3,72 SET7 Histona núcleo 3,47 SETD2 Nucleossomas 3,15 Dot1L Nucleossomas 2,75 GLP Histona H3 (1-21) 1,86 Complexo MLL4 Histona núcleo 0,27 Complexo MLL1 Nucleossomas 0,27 SUV420H1-tv2 Nucleossomas 0,00 SUV39H1 Histona H3 0,00 SET8 Nucleossomas 0,00 SUV39H2 Histona H3 0,00
[197] Em suma, o Composto A é um inibidor potente, reversível e seletivo dos membros da família PRMT Tipo I, mostrando potência bio- química equivalente contra PRMT1, PRMT6 e PRMT8 com valores de IC50 variando entre 3-5 nM. A estrutura cristalina de PRMT1 no com- plexo com o Composto A revela que o Composto A se liga na bolsa do peptídeo e tanto a estrutura cristalina quanto os estudos enzimáticos são consistentes com um mecanismo SAM não competitivo.
BIOLOGIA Efeitos Mecanísticos Celulares
[198] Prevê-se que a inibição de PRMT1 resulte em uma diminui- ção de ADMA em substratos de PRMT1 celulares, incluindo arginina 3 de histona H4 (H4R3me2a), com aumentos concomitantes em MMA e SDMA (Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine metiltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013)). Para avaliar o efeito do Composto A na metilação da arginina, a resposta à dose associada ao aumento de MMA foi avaliada em um ensaio de western em célula usando um anticorpo para detectar MMA e o EC50 mecanístico celular de 10,1 + 4,4 nM foi determinado (FIG. 9). A resposta à dose pareceu bifásica, possivel- mente devido à atividade diferencial entre as PRMTs Tipo I ou potência diferencial em relação a um subconjunto particular de substratos. Uma equação que descreve uma curva bifásica foi usada para ajustar os da- dos e, uma vez que não havia nenhum platô óbvio associado à segunda inflexão ao longo da faixa de concentrações testadas, a primeira inflexão foi relatada. Várias formas de sal foram testadas neste formato de en- saio e todas demonstraram valores de EC50 semelhantes e são, por- tanto, consideradas intercambiáveis para todos os estudos de biologia (FIG. 9). Estudos adicionais foram realizados para examinar o tempo, durabilidade e impacto em outros estados de metilação em tipos de tu- mor selecionados, conforme indicado abaixo. A potência do Composto A na indução de MMA indica que o Composto A pode ser usado para investigar o mecanismo biológico associado à inibição de PRMTs Tipo 1 em células. Expressão de PRMT Tipo I em Câncer
[199] A análise de dados de expressão gênica de vários tipos de tumor coletados de > 100 estudos de câncer por meio do Atlas do Ge- noma do Câncer (TCGA) e outras bases de dados de tumor primário representadas em cBioPortal indica que PRMT1 é altamente expressa g no câncer, com níveis mais altos no linfoma (linfoma de células B grande difuso, DLBCL) em relação a outras malignidades sólidas e he- matológicas (FIG. 10). Expressão de ACTB, um gene de manutenção comum e TYR, um gene expresso seletivamente na pele, também foram pesquisados para caracterizar a faixa associada à alta expressão ubí- qua ou expressão restrita a tecidos, respectivamente. A alta expressão no linfoma entre outros cânceres fornece confiança adicional de que o alvo da inibição do Composto A está presente em tumores primários que correspondem a linhagens de células avaliadas em estudos pré-clíni- cos. As PRMTs 3, 4 e 6 também são expressas em uma variedade de tipos de tumor, enquanto a expressão de PRMT8 parece mais restrita conforme previsto, dada sua expressão específica de tecido (Lee, J., Sayegh, J., Daniel, J., Clarke, S. & Bedford, M. T. PRMT8, a new mem- brane-bound tissue-specific member of the protein arginine metiltrans- ferase family. J Biol Chem 280, 32890-32896, doi:10.1074/jbc.M506944200 (2005)). Efeitos Fenotípicos Celulares
[200] O Composto A foi analisado quanto à sua capacidade de ini- bir o crescimento da linhagem de células tumorais cultivadas em um ensaio de crescimento-morte de 6 dias usando Cell Titer Glo (Promega) que quantifica ATP como um substituto do número de células. O cresci- mento de todas as linhagens de células foi avaliado ao longo do tempo em uma ampla gama de densidades de semeadura para identificar as condições que permitiram a proliferação ao longo de todo o ensaio de 6 dias. As células foram plaqueadas na densidade de semeadura ideal e após incubação durante a noite, uma titulação de 2 vezes de 20 pontos do composto foi adicionada e as placas foram incubadas por 6 dias. Uma placa de replicação de células foi colhida no momento da adição do composto para quantificar o número inicial de células (T0). Os valo- res obtidos após o tratamento de 6 dias foram expressos como uma função do valor T0 e esquematizados contra a concentração do com- posto. O valor de T0 foi normalizado para 100% e representa o número de células no momento da adição do composto. Os dados foram ajus- tados com uma equação de 4 parâmetros para gerar uma curva de res- posta à concentração e o IC50 de crescimento (gIC50) foi determinado. O gIC50 é o ponto médio da "janela de crescimento", a diferença entre o número de células no momento da adição do composto (T0) e o número de células após 6 dias (DMSO controle). O ensaio de crescimento-morte pode ser usado para quantificar a mudança líquida da população, defi- nindo claramente a morte celular (citotoxicidade) como menos células em comparação com o número no momento da adição do composto (T0). Um valor Ymin-T0 negativo é indicativo de morte celular, enquanto um valor gIC100 representa a concentração de composto necessária para 100% de inibição do crescimento. O efeito inibidor do crescimento do Composto A foi avaliado usando este ensaio em 196 linhagens de células de câncer humano que representam malignidades sólidas e he- matológicas (FIG. 11).
[201] O Composto A induziu a inibição do crescimento quase total ou total na maioria das linhagens de células, com um subconjunto mos- trando respostas citotóxicas, conforme indicado por um valor negativo de Ymin-T0 (FIG. 11B). Este efeito foi mais pronunciado em linhagens de células de câncer de linfoma e AML, onde 50 e 54% das linhagens de células mostraram respostas citotóxicas, respectivamente. AUC total ou exposição (Cave) calculada a partir do MTD de 14 dias do rato (150 mg/kg, Cave = 2,1 µM) foi usada como uma estimativa de uma concen- tração clinicamente relevante do Composto A para avaliação da sensi- bilidade. Enquanto as linhagens de células de linfoma mostraram cito- toxicidade com valores de gIC100 abaixo de 2,1 µM, muitas linhagens de células em todos os tipos de tumor avaliados mostraram valores de gIC50 <2,1 µM, sugerindo que as concentrações associadas à atividade antitumoral podem ser alcançadas em pacientes. O MTD de 21 dias do cão foi ligeiramente superior (25 mg/kg; AUC total ou Cave = 3,2 µM), portanto, a concentração mais baixa do rato fornece um alvo mais con- servador para avaliar a sensibilidade da linhagem de células. As linha- gens de células de linfoma foram altamente sensíveis à inibição de PRMT Tipo I, com uma mediana de gIC50 de 0,57 μM e citotoxicidade observada em 54%. Entre os tipos de tumor sólido, a atividade antipro- liferativa potente do Composto A foi observada em melanoma e linha- gens de células de câncer de rim (representando principalmente carci- noma renal de células claras), no entanto, as respostas foram predomi- nantemente citostáticas neste formato de ensaio (FIG. 11, Tabela 3). Tabela 3 Sumário da proliferação do Composto A em 6 dias. gIC50 ≤ 2,1 µM foi usado como alvo com base na concentração alcançada no MTD de 14 dias de rato (150 mg/kg, Cave = 2,1 µM).
Total AML Linfoma Bexiga Mama Cólon Rim NSCLC Mela-noma Próstata Mediana gIC50 (µM) 2,12 0,54 0,57 5,32 5,95 5,51 1,66 2,81 0,28 1,86 Mediana gIC100 (µM) 29,33 16,72 21,62 29,33 29,36 29,33 29,35 29,33 29,33 29,34 % Citotóxico 23% 50% 54% 0% 10% 3% 0% 16% 0% 0% % gIC50<2 µM 49% 80% 69% 28% 41% 29% 60% 28% 71% 75% % gIC100<2 µM 4% 0% 14% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% Linhagens de células totais 196 10 59 18 29 34 10 25 7 4
[202] A avaliação dos efeitos antiproliferativos do Composto A in- dica que a inibição de PRMT1 resulta em atividade antitumoral potente através de linhagens de células que representam uma gama de malig- nidades sólidas e hematológicas. Juntos, esses dados sugerem que o desenvolvimento clínico em malignidades sólidas e hematológicas é ga- rantido. As indicações priorizadas incluem: • Linfoma: citotoxicidade em 54% das linhagens de células • AML: citotoxicidade em 50% das linhagens de células
• Carcinoma de células renais: gIC50 ≤ 2,1 µM em 60% das células linhas • Melanoma: gIC50 ≤ 2,1 µM em 71% das linhagens de células • Câncer de mama incluindo TNBC: gIC50 ≤ 2,1 µM em 41% das linhagens de células Biologia do Linfoma Efeitos Mecanistas Celulares
[203] Para avaliar o efeito do Composto A na metilação da arginina no linfoma, uma linhagem de células DLBCL humana (Toledo) foi tra- tada com 0,4 µM do Composto A ou veículo por até 120 horas após o que os lisados de proteína foram avaliados por análise ocidental usando anticorpos para vários estados de metilação de arginina. Como previsto, a metilação de ADMA diminuiu enquanto o MMA aumentou após a ex- posição ao composto (FIG. 12). Um aumento nos níveis de SDMA tam- bém foi observado, sugerindo que o aumento no MMA pode ter resul- tado em acúmulo no agrupamento de substratos potenciais para PRMT5, o principal catalisador da formação de SDMA. Dada a detecção de vários substratos com cinética variável e a variabilidade dos níveis de ADMA entre as amostras tratadas com DMSO, tanto a via completa quanto uma banda proeminente de 45 kDa foram caracterizadas para avaliar o ADMA. Os aumentos no MMA foram aparentes às 24 horas e quase máximos às 48 horas, enquanto as diminuições na banda ADMA de 45 kDa necessitaram de 72-96 horas para atingir o efeito máximo. Os aumentos em SDMA foram aparentes após 48 horas de exposição ao composto e continuaram a aumentar ao longo de 120 horas, consis- tente com a troca potencial de conversão de MMA em ADMA por PRMTs Tipo I para SDMA por PRMTs Tipo II (FIG. 12).
[204] A resposta à dose associada aos efeitos do Composto A na metilação da arginina (MMA, ADMA, SDMA) foi determinada em um pai- nel de linhagens de células de linfoma (FIG. 13). As diminuições de
ADMA foram medidas em toda a faixa e na banda única de 45 kDa que diminuiu para níveis indetectáveis em todas as linhagens de células ava- liadas. No geral, as concentrações necessárias para atingir 50% do efeito máximo foram semelhantes em todas as linhagens de células e não corresponderam ao gIC50 no ensaio de morte de crescimento de 6 dias, sugerindo que a falta de sensibilidade não é explicada pelo fraco engajamento do alvo.
[205] Para determinar a durabilidade das mudanças globais na metilação da arginina em resposta ao Composto A, os níveis de ADMA, SDMA e MMA foram avaliados em células tratadas com o Composto A após lavagem do composto (FIG. 14). As células de Toledo foram culti- vadas com 0,4 µM de Composto A durante 72 horas para estabelecer efeitos robustos nas marcas de metilação da arginina. As células foram então lavadas, cultivadas em meio livre de Composto A, as amostras foram coletadas diariamente durante 120 horas e os níveis de metilação da arginina foram examinados por análise Western. Os níveis de MMA diminuíram rapidamente, retornando à linha de base 24 horas após a lavagem do Composto A, enquanto ADMA e SDMA retornaram à linha de base em 24 e 96 horas, respectivamente. Notavelmente, a recupera- ção da banda ADMA de 45 kDa pareceu atrasada em relação à maioria das outras espécies nos western blots de ADMA, sugerindo que a dura- bilidade das alterações de metilação da arginina pelo Composto A pode variar de acordo com o substrato. O SDMA pareceu continuar a aumen- tar mesmo após 6 horas de lavagem. Isto é consistente com o aumento contínuo observado ao longo de 120 horas sem qualquer platô óbvio (FIG. 12) juntamente com o aumento durável em MMA que ainda não retornou à linha de base após a eliminação. A durabilidade de cada mo- dificação geralmente refletiu a cinética das mudanças de metilação da arginina provocadas pelo Composto A, com o MMA sendo o mais rá- pido.
Efeitos Fenotípicos Celulares
[206] Para avaliar o curso de tempo associado à inibição do cres- cimento pelo Composto A, um ensaio de crescimento-morte de duração estendida foi realizado em um subconjunto de linhagens de células de linfoma. Semelhante ao ensaio de proliferação de 6 dias descrito ante- riormente, a densidade de semeadura foi otimizada para garantir o cres- cimento ao longo da duração do ensaio e o número de células foi avali- ado por CTG em pontos de tempo selecionados começando nos dias 3-
10. A inibição do crescimento foi observada logo em 6 dias e foi máxima em 8 dias nas linhagens de células de linfoma Toledo e Daudi (FIG. 15).
[207] Um conjunto maior de linhagens de células foi avaliado nos dias 6 e 10 para medir os efeitos da exposição prolongada ao Composto A e determinar se as linhagens de células que exibiram uma resposta citostática no ensaio de 6 dias podem sofrer citotoxicidade em pontos de tempo posteriores. O tempo prolongado de exposição ao Composto A teve efeitos mínimos na potência (gIC50) ou citotoxicidade (Ymin-T0) através das linhagens de células de linfoma avaliadas (FIG. 16), indi- cando que a avaliação da proliferação em 6 dias pode ser utilizada para avaliação da sensibilidade.
[208] Dado que a inibição do crescimento foi aparente no dia 6 e a exposição prolongada teve impacto mínimo na potência ou inibição per- centual, um amplo painel de linhagens de células de linfoma represen- tando subtipos de Hodgkin e não Hodgkin foi avaliado no formato de ensaio de morte de crescimento de 6 dias (FIG. 17). Todos os subtipos pareceram igualmente sensíveis neste formato e muitas linhagens de células sofreram citotoxicidade (conforme indicado por Ymin-T0 nega- tivo), independentemente da classificação, sugerindo que o Composto A tem efeitos antitumorais em todos os subtipos de linfoma avaliados.
[209] Os resultados do ensaio de proliferação sugerem que a ini- bição de PRMT1 induz citotoxicidade aparente em um subconjunto de linhagens de células de linfoma. Para melhor elucidar este efeito, a dis- tribuição do ciclo celular em linhagens de células de linfoma tratadas com Composto A foi avaliada usando coloração com iodeto de propídio seguido de citometria de fluxo. As linhagens de células que mostraram uma gama de valores de Ymin-T0 e gIC50 no ensaio de proliferação de 6 dias foram semeadas em baixa densidade para permitir o crescimento logarítmico ao longo da duração do ensaio e tratadas com concentra- ções variáveis do Composto A. Consistente com os resultados de en- saio de crescimento-morte, um acúmulo de células em sub-G1 (<G1), indicativo de morte celular, foi observado em células Toledo de uma ma- neira dependente de tempo e de dose começando após 3 dias de trata- mento com concentrações de Composto A ≥ 1000 nM (FIG. 18). No dia 7, um aumento na população sub-G1 era aparente em concentrações ≥ 100 nM. Em U2932 e OCI-Ly1, linhagens de células que sofreram inibi- ção de crescimento citostático aparente no ensaio de proliferação de 6 dias, este efeito foi apenas evidente em 10 µM de Composto A. Nenhum efeito profundo em qualquer outra fase do ciclo celular foi revelado neste formato de ensaio.
[210] Para confirmar a análise FACS do ciclo celular, a avaliação da clivagem da caspase foi realizada como uma medida adicional de apoptose durante um curso de tempo de 10 dias. A densidade de seme- adura foi otimizada para garantir um crescimento consistente ao longo da duração do ensaio, e a ativação da caspase foi avaliada usando um ensaio Caspase-Glo 3/7 luminescente (Promega). O sinal da caspase- Glo 3/7 foi normalizado para o número de células (avaliado por CTG) e mostrado como indução por desdobramento em relação às células de controle (tratadas com DMSO). A atividade da caspase 3/7 foi monito- rada ao longo de um período de 10 dias em linhagens de células DLBCL mostrando respostas citotóxicas (Toledo) e citostáticas (Daudi) ao Com-
posto A (FIG. 19). Consistente com o perfil observado no ensaio de cres- cimento-morte, a linhagem de células Toledo mostrou ativação robusta da caspase concomitante com diminuições no número de células em todos os pontos de tempo, enquanto a indução da atividade da caspase na linhagem de células Daudi foi menos pronunciada e limitada às mai- ores concentrações de Composto A.
[211] Juntamente com os perfis do ciclo celular, estes dados indi- cam que o Composto A induz apoptose mediada por caspase na linha- gem de células DLBCL de Toledo, sugerindo que a citotoxicidade ob- servada em outras linhagens de células de linfoma pode refletir a ativa- ção de vias apoptóticas pelo Composto A. Efeitos Antitumorais em Xenoenxertos de Camundongo
[212] O efeito do Composto A no crescimento do tumor foi avaliado em um modelo de xenoenxerto Toledo (DLBCL humano). Camundon- gos SCID fêmeas portadores de tumores subcutâneos Toledo foram pe- sados, os tumores foram medidos com compassos de calibre e os ca- mundongos foram randomizados de acordo com o tamanho do tumor em grupos de tratamento de 10 camundongos cada. Os camundongos foram doseados oralmente com veículo ou Composto A (150 mg/kg-600 mg/kg) por 28 dias diariamente. Ao longo do estudo, os camundongos foram pesados e as medições do tumor foram feitas duas vezes por se- mana. Inibição significativa do crescimento tumoral (TGI) foi observada em todas as doses e regressões foram observadas em doses > 300 mg/kg (FIG. 20, Tabela 5). Não houve perda significativa de peso cor- poral em qualquer grupo dose.
[213] Dado que TGI completo foi observado em todas as doses avaliadas, um segundo estudo foi realizado para testar o efeito antitu- moral do Composto A em doses mais baixas, bem como para comparar a dosagem duas vezes ao dia (BID) em relação à dosagem diária (QD). Neste segundo estudo, os camundongos foram dosados por via oral com veículo ou Composto A (37,5 mg/kg-150 mg/kg) por 24 dias QD ou 75 mg/kg BID. Neste estudo, a administração BID de 75 mg/kg resultou no mesmo TGI de 150 mg/kg (95% e 96%, respectivamente), enquanto ≤75 mg/kg QD resultou em TGI parcial (≤79%) (FIG. 20, Tabela 5). Ne- nhuma perda significativa de peso corporal foi observada em qualquer grupo de dose. Esses dados sugerem que a dosagem BID ou QD com a mesma dose diária total deve resultar em eficácia semelhante. Tipos de Tumores Adicionais
AML
[214] Além das linhagens de células de linfoma, o Composto A ti- nha atividade citotóxica potente em um subconjunto de linhagens de cé- lulas AML examinadas no ensaio de proliferação de 6 dias (Tabela 3). Oito das 10 linhagens de células tinham valores de gIC50 <2μM e citoto- xicidade induzida pelo Composto A em 5 linhagens de células. Embora PRMT1 interaja com a característica de fusão AML-ETO do subtipo M2 AML (Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation e progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012)), as linha- gens de células que transportam esta proteína de fusão (Kasumi-1 e SKNO-1) não foram as únicas linhagens que mostram sensibilidade ao Composto A conforme medido por gIC50 ou que sofreram citotoxicidade (Tabela 4, FIG. 21), portanto, a presença desta proteína de fusão onco- gênica não prediz exclusivamente a sensibilidade de linhagens de célu- las AML ao Composto A. Tabela 4 Sumário da atividade do Composto A em linha- gens de células AML Linhagem gIC50 (μM) gIC100 (μM) Ymin-T0 Subtipo de célula HL-60 0,02 ± 0,01 6,38 ± 12,83 -33,4 M3 MV-4-11 0,12 ± 0,08 14,55 ± 4,27 565,6 M5 MOLM-13 0,21 ± 0,01 8,64 ± 0,39 -100,0 M5
SKM-1 0,22 ± 0,11 11,61 ± 5,52 -19,1 M5 KASUMI-1 0,36 ± 0,25 18,88 ± 10,55 -17,7 M2 MOLM-16 0,65 ± 0,01 9,69 ± 10,58 -68,6 M0 OCI-AML3 0,87 ± 0,14 29,33 ± 0,00 523,2 M4 TF-1 1,67 ± 0,36 29,33 ± 0,00 788,1 M6 NOMO-1 3,85 ± 2,10 29,33 ± 0,00 259,1 M5 SHI-1 4,29 ± 3,52 29,33 ± 0,02 292,0 M5
[215] Semelhante a estudos em linfoma, um conjunto de linhagens de células foi avaliado nos dias 6 e 10 para medir os efeitos da exposi- ção prolongada ao Composto A e determinar se as linhagens de células AML que exibiram uma resposta citostática no ensaio de 6 dias podem sofrer citotoxicidade em pontos de tempo posteriores. Consistente com o resultado de linfoma, prolongar o tempo de exposição ao Composto A teve efeitos mínimos na potência (gIC50) ou citotoxicidade (Ymin-T0) atra- vés das linhagens de células AML avaliadas (FIG. 21). Carcinoma de Células Renais
[216] As linhagens de células de carcinoma de células renais ti- nham entre o gIC50 mediano mais baixo em comparação com outros tipos de tumor sólido. Embora nenhuma das linhagens testadas tenha mostrado uma resposta citotóxica após o tratamento com Composto A, todas mostraram inibição completa do crescimento e 6 de 10 tiveram valores de gIC50 ≤2 μM (Tabela 5). 7 das 10 linhagens perfiladas repre- sentam carcinoma renal de células claras (ccRCC), o principal subtipo clínico de câncer renal. Tabela 5 Sumário dos efeitos antiproliferativos do Com- posto A em células de carcinoma de células renais Linhagem de célula gIC50 (μM) Ymin-T0 Subtipo ACHN 0,10 ± 0,05 96,5 ccRCC CAKI-1 0,28 ± 0,23 178,7 ccRCC G-401 0,35 ± 0,04 353,7 Wilm's 786-O 0,59 ± 0,41 643,7 ccRCC
SK-NEP-1 1,43 ± 0,86 25,3 Wilm's 769-P 1,89 ± 0,82 119,0 ccRCC A498 2,73 ± 2,81 313,4 ccRCC G-402 2,89 ± 2,05 92,6 Leiomioblastoma SW156 3,51 ± 2,01 346,7 ccRCC CAKI-2 4,23 ± 1,51 169,6 ccRCC
[217] Para avaliar o curso de tempo de inibição do crescimento em linhagens de células de carcinoma renal pelo Composto A, o cresci- mento das células foi avaliado por CTG em um painel de 4 linhagens de células ccRCC nos dias 3,4,5 e 6 (FIG. 22). A maior mudança na ativi- dade ocorreu entre os dias 3 e 4, onde todas as linhagens de células mostraram valores decrescentes de gIC50 e aumentaram a inibição do crescimento. A potência do Composto A (avaliada por gIC50) foi máxima em 4 dias em 3 de 4 linhagens e não mudou mais ao longo da duração do ensaio de 6 dias. Além disso, a inibição percentual do crescimento atingiu 100% em todas as linhagens de células avaliadas. Portanto, a inibição máxima do crescimento em linhagens de células ccRCC estava aparente dentro da janela de crescimento de 6 dias utilizada na estraté- gia de triagem de linhagem de células.
[218] A ativação da caspase foi avaliada durante o tempo de proli- feração e, consistente com a falta de citotoxicidade evidente, conforme indicado pelos valores de Ymin-T0, a clivagem da caspase ocorreu ape- nas na concentração mais alta (30 µM), indicando que a apopotose pode ter uma contribuição mínima para o total efeito inibidor do crescimento induzido pelo Composto A em linhagens de células ccRCC.
[219] O efeito do Composto A no crescimento do tumor foi avaliado em camundongos portadores de xenoenxertos de carcinoma de células renais humanas (ACHN). Camundongos SCID fêmeas com tumores da linhagem de células ACHN subcutâneos foram pesados e os tumores foram medidos por compassos de calibre e blocos randomizados de acordo com o tamanho do tumor em grupos de tratamento de 10 ca- mundongos cada. Os camundongos foram doseados oralmente com ve- ículo ou Composto A (150 mg/kg - 600 mg/kg) por até 59 dias diaria- mente. Ao longo do estudo, os camundongos foram pesados e as me- dições do tumor foram feitas duas vezes por semana. Inibição significa- tiva do crescimento tumoral foi observada em todas as doses e regres- sões foram observadas em doses ≥ 300 mg/kg. Perda de peso corporal significativa foi observada em animais tratados com 600 mg/kg por dia e, portanto, esse grupo de dosagem foi encerrado no dia 31 (FIG. 23, Tabela 6). Tabela 6 Eficácia do Composto A in vivo Linhagem Diferença de de célula Dose TGI peso corporal (Tipo de tumor) (mg/kg) (Regressão) Dia (vs. veículo) 150 QD 99%* -4% 300 QD 100%* (37%) -3% Toledo (DLBCL) 28 450 QD 100%* (58%) -8% 600 QD 100%* (62%) -7% 37,5 QD 63%* -5% 75 QD 79%* -5% Toledo (DLBCL) 25 75 BID 95%* -4% 150 QD 96%* -7% 150 QD 98%* -3% 300 QD 100%* (2%) -4%
ACHN 59 (ccRCC) 450 QD 100%* (15%) -7% 600 QD** 100%* (6%) -17% * p <0,05, teste t bicaudal ** O braço de 600 QD do estudo de eficácia de ACHN foi encerrado no dia 31
[220] Juntos, esses dados sugerem que 100% de TGI podem ser alcançados em doses semelhantes em xenoenxertos subcutâneos de tumores sólidos e hematológicos humanos.
Câncer de Mama
[221] As linhagens de células de câncer de mama exibiram uma gama de sensibilidades ao Composto A e, em muitos casos, mostraram inibição parcial do crescimento no ensaio de proliferação de 6 dias (FIG. 24). As linhagens de células que representam o câncer de mama triplo negativo (TNBC) tiveram valores medianos gIC50 ligeiramente mais bai- xos em comparação com as linhagens de células não TNBC (3,6 μM e 6,8 μM para TNBC e não TNBC, respectivamente). Uma vez que o efeito na proliferação pelo Composto A foi citostático e não resultou na inibição completa do crescimento na maioria das linhagens de células de câncer de mama, um ensaio de crescimento-morte de duração prolongada foi realizado para determinar se a sensibilidade ao Composto A aumentaria com a exposição prolongada. Em 7/17 linhagens de células testadas, houve um aumento na inibição máxima percentual em ≥ 10% e uma diminuição ≥ 2 vezes em gIC50 (FIG. 25). No ensaio de exposição pro- longada, 11/17 linhagens de células tiveram gIC50 ≤ 2 µM (65%) en- quanto 7/17 (41%) preencheram este critério no formato de ensaio de 7 dias. Melanoma
[222] Entre os tipos de tumor sólido, o Composto A teve o efeito antiproliferativo mais potente em linhagens de células de melanoma (FIG. 11). Seis das 7 linhagens avaliadas tinham valores de gIC50 inferi- ores a 2 μM (Tabela 7). O efeito do Composto A foi citostático em todas as linhagens de melanoma, independentemente do valor de gIC50. Tabela 7 Sumário da Atividade do Composto A em Linha- gens de Células de Melanoma Linhagem de célula gIC50 (μM) gIC100 (μM) Ymin-T0 A375 0,05 ± 0,03 29,33 ± 0,00 91,9
SK-MEL-5 0,09 ± 0,03 27,09 ± 3,92 31,8 IGR-1 0,27 ± 0,14 29,33 ± 0,00 507,0 SK-MEL-2 0,28 ± 0,14 22,37 ± 12,11 35,9 COLO741 0,43 ± 0,37 28,55 ± 1,40 12,5 HT144 3,46 ± 2,68 29,33 ± 0,00 124,9 MDA-MB-435S 29,36 ± 0,00 29,33 ± 0,00 19,1 Exemplo 2 Atividade sinergística do agonismo de ICOS em combi- nação com inibição de PRMTs Tipo I em modelos de câncer singê- nico
[223] Explora-se se a combinação da inibição de PRMT tipo I pelo Composto D poderia aumentar a eficácia de um anticorpo anti-ICOS em modelos de tumor imunocompetente. O Composto D foi administrado sozinho e em combinação com um anticorpo agonista anti-ICOS (Icos17G9-GSK). Em ambos os modelos de tumor CT26 e EMT6, a combinação proporcionou benefício de sobrevivência significativo em relação a qualquer agente único (FIG. 26A, FIG. 26B). Durante o perí- odo de dosagem de 3 semanas, o retardo do crescimento do tumor in- dividual foi observado em grupos de combinação em ambos os modelos (FIG. 26C).
[224] Os resultados descritos no Exemplo 2 foram obtidos usando os seguintes materiais e métodos: Camundongos, desafio tumoral e tratamento
[225] Camundongos BALB/c fêmeas de 7 semanas de idade (BALB/cAnNCrl, Charles River) foram utilizados para estudos in vivo em conformidade com o USDA Laboratory Animal Welfare Act, em uma ins- talação AAALAC totalmente certificada (Charles River Laboratories). 3 x 105 (CT26) ou 5 x 106 (EMT6) células foram inoculadas por via subcu- tânea no flanco direito.
Os tumores foram medidos com calibradores duas vezes por semana em duas dimensões, e o volume do tumor foi calculado usando a fórmula: 0,5 X Comprimento X Largura2. Os camun- dongos (n = 10/grupo tratamento) foram randomizados quando os tu- mores atingiram 100 a 150 mm3 e receberam solução salina (uma vez ao dia, administração oral), 300 mg/kg de Composto D (uma vez ao dia, administração oral), 5 mg/kg de anti-ICOS (17G9; duas vezes por se- mana por meio de injeção intraperitoneal), ou a combinação do Com- posto D e anti-ICOS.
Para todos os estudos, o Composto D foi adminis- trado durante 3 semanas; modelos CT26 e EMT6 receberam 3 ou 4 do- ses de anticorpo anti-ICOS, respectivamente.
A medição do tumor de mais de 2.000 mm3 para um camundongo individual e/ou desenvolvi- mento de ulcerações abertas resultou na remoção dos camundongos do estudo.

Claims (30)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de tratar câncer em um ser humano em necessi- dade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a adminis- tração ao ser humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e a administração ao ser humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antí- geno da mesma.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é um inibidor de proteína arginina metiltransferase 1 (PRMT1), um inibidor de proteína arginina metiltransferase 3 (PRMT3), um inibidor de proteína arginina metiltrans- ferase 4 (PRMT4), um inibidor de proteína arginina metiltransferase 6 (PRMT6) ou um inibidor de proteína arginina metiltransferase 8 (PRMT8).
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de Fórmula (I): ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é N, Z é NR4, e Y é CR5; ou X é NR4, Z é N, e Y é CR5; ou X é CR5, Z é NR4, e Y é N; ou X é CR5, Z é N, e Y é NR4;
RX é C1-4 alquila opcionalmente substituída ou C3-4 cicloal- quila opcionalmente substituída; L1 é uma ligação, -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S- , -C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, - NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, - C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, - C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, - N(RB)SO2-, -SO2N(RB)-, ou uma cadeia hidrocarboneto saturada ou in- saturada C1-6 opcionalmente substituída, em que uma ou mais unida- des metileno da cadeia hidrocarboneto é opcionalmente e independen- temente substituída por -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, - C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, - NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, - C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, - C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, - N(RB)SO2-, ou -SO2N(RB)-; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alquenila opcionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, carboci- clila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, um grupo protetor de oxigênio quando anexado ao átomo de oxigênio, e um grupo protetor de enxofre quando anexado a um átomo de enxofre; cada RB é independentemente selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alquenila opcionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, carboci- clila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, e um grupo protetor de nitrogênio, ou um RB e RW no mesmo átomo de nitrogênio pode ser tomado junto com o nitrogênio de intervenção para formar um anel heterocíclico opcionalmente substituído; RW é hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alquenila opcionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, carboci- clila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, ou heteroarila opcionalmente substitu- ída; desde que quando L1 for uma ligação, RW não será hidrogênio, arila opcionalmente substituída, ou heteroarila opcionalmente substituída; R3 é hidrogênio, C1-4 alquila, ou C3-4 cicloalquila; R4 é hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C2-6 alquenila opcionalmente substituída, C2-6 alquinila opcionalmente subs- tituída, C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclila opcio- nalmente substituída de 4- a 7-membros; ou C1-4 alquil-Cy opcional- mente substituído; Cy é C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída de 4 a 7 membros, arila opcionalmente subs- tituída, ou heteroarila opcionalmente substituída; e R5 é hidrogênio, halo, -CN, C1-4 alquila opcionalmente subs- tituída, ou C3-4 cicloalquila opcionalmente substituída
4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de Fórmula (II): ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
5. Método, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracteri- zado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de
Fórmula (I) ou (II) em que -L1-RW é carbociclila opcionalmente substitu- ído.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é o Com- posto A: (A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS é um anticorpo anti-ICOS ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS é um agonista de ICOS.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende uma ou mais de: CDRH1 como estabelecida em SEQ ID NO: 1; CDRH2 como estabele- cida em SEQ ID NO: 2; CDRH3 como estabelecida em SEQ ID NO: 3; CDRL1 como estabelecida em SEQ ID NO: 4; CDRL2 como estabele- cida em SEQ ID NO: 5 e/ou CDRL3 como estabelecida em SEQ ID NO: 6 ou um equivalente direto de cada CDR em que um equivalente direto não tem mais do que duas substituições de aminoácidos na referida CDR.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende um domínio VH compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idên- tica à sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 7 e/ou um domínio VL compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8 em que a referida proteína de ligação a ICOS se liga especifi- camente a ICOS humano.
11. Método de tratar câncer em um ser humano em necessi- dade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a adminis- tração ao ser humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e a administração ao ser humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, em que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A: (A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o frag- mento de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma ou mais de: CDRH1 como estabelecida em SEQ ID NO: 1; CDRH2 como estabelecida em SEQ ID NO: 2; CDRH3 como estabelecida em SEQ ID NO: 3; CDRL1 como estabelecida em SEQ ID NO: 4; CDRL2 como estabelecida em SEQ ID NO: 5 e/ou CDRL3 como estabelecida em SEQ ID NO: 6 ou um equivalente direto de cada CDR em que um equivalente direto não tem mais do que duas substituições de aminoácidos na referida CDR.
12. Método de tratar câncer em um ser humano em necessi- dade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a adminis- tração ao ser humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz do inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e a administração ao ser humano de uma quantidade terapeuticamente efi- caz de uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antí- geno da mesma, em que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A: (A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e a pro- teína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende um domínio VH compreendendo uma sequência de amino- ácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabele- cida em SEQ ID NO: 7 e/ou um domínio VL compreendendo uma se- quência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de ami- noácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8, em que a referida proteína de ligação a ICOS se liga especificamente a ICOS humano.
13. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de liga- ção a antígeno da mesma, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de câncer em um ser humano com necessidade do mesmo.
14. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é um inibidor de proteína arginina metiltransferase 1 (PRMT1), um inibidor de proteína arginina metiltransferase 3 (PRMT3), um inibidor de proteína arginina metiltrans- ferase 4 (PRMT4), um inibidor de proteína arginina metiltransferase 6 (PRMT6) ou um inibidor de proteína arginina metiltransferase 8 (PRMT8).
15. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno, de acordo com a reivindicação 13 ou 14, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de Fórmula (I):
I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é N, Z é NR4 e Y é CR5; ou X é NR4, Z é N e Y é CR5; ou X é CR5, Z é NR4 e Y é N; ou X é CR5, Z é N e Y é NR4; RX é C1-4 alquila opcionalmente substituída ou C3-4 cicloal- quila opcionalmente substituída; L1 é uma ligação, O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, - C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, - NRBC(O)N(RB)-, - NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, -C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, - C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, -C(S)-, -C(S)N(RB)-, - NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, -N(RB)SO2-, -SO2N(RB)-, ou uma cadeia de hidrocarboneto opcionalmente substituída C1-6 satu- rada ou insaturada, em que uma ou mais unidades de metileno da ca- deia de hidrocarboneto é opcionalmente e independentemente substitu- ída por O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, -C(O)N(RB)-, -
C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, -NRBC(O)N(RB)- , -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, -C(=NRB)-, -C(=NNRB)- ,-C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, -C(S)-, -C(S)N(RB)-, - NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, -N(RB)SO2-, ou - SO2N(RB)-; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alque- nila opcionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, car- bociclila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substi- tuída, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente subs- tituída, um grupo protetor de oxigênio quando ligado a um átomo de oxigênio, e um grupo protetor de enxofre quando ligado a um átomo de enxofre; cada RB é independentemente selecionado a partir do grupo con- sistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alquenila op- cionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, carboci- clila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, e um grupo protetor de nitrogênio, ou um RB e RW no mesmo átomo de nitrogênio pode ser tomado junto com o nitrogênio de intervenção para formar um anel heterocíclico opcionalmente substituído; RW é hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, alquenila op- cionalmente substituída, alquinila opcionalmente substituída, carboci- clila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, ou heteroarila opcionalmente substitu- ída; desde que quando L1 é uma ligação, RW não será hidrogênio, arila opcionalmente substituída, ou heteroarila opcionalmente substituída; R3 é hidrogênio, C1-4 alquila, ou C3-4 cicloalquila; R4 é hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C2-6 alque- nila opcionalmente substituída,
C2-6 alquinila opcionalmente substituída, C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclila opcionalmente substituída de 4- a 7-membros; ou C1-4 alquil-Cy opcionalmente substituído; Cy é C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclila op- cionalmente substituída de 4 a 7 membros, arila opcionalmente substi- tuída, ou heteroarila opcionalmente substituída; e R5 é hidrogênio, halo, -CN, C1-4 alquila opcionalmente subs- tituída, ou C3-4 cicloalquila opcionalmente substituída.
16. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 15, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de Fórmula (II): ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
17. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 e 16, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é um composto de Fórmula (I) ou (II) em que -L1-RW é carbociclila opcional- mente substituída.
18. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 17, ca- racterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A:
(A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
19. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 18, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS é um anticorpo anti-ICOS ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo.
20. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 19, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS é um agonista de ICOS.
21. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmentos de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 20, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende uma ou mais de: CDRH1 como estabelecida em SEQ ID NO: 1; CDRH2 como estabele- cida em SEQ ID NO: 2; CDRH3 como estabelecida em SEQ ID NO: 3; CDRL1 como estabelecida em SEQ ID NO: 4; CDRL2 como estabele- cida em SEQ ID NO: 5 e/ou CDRL3 como estabelecida em SEQ ID NO: 6 ou um equivalente direto de cada CDR em que um equivalente direto não tem mais do que duas substituições de aminoácidos na referida CDR.
22. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 21, ca- racterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende um domínio VH compreen- dendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à se- quência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 7 e/ou um domí- nio VL compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8 em que a referida proteína de ligação a ICOS se liga especificamente a ICOS humano.
23. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, caracterizado pelo fato de que é para uso no trata- mento de câncer em um ser humano com necessidade do mesmo, em que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A: (A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o frag- mento de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma ou mais de: CDRH1 como estabelecida em SEQ ID NO: 1; CDRH2 como estabelecida em SEQ ID NO: 2; CDRH3 como estabelecida em SEQ ID NO: 3; CDRL1 como estabelecida em SEQ ID NO: 4; CDRL2 como estabelecida em SEQ ID NO: 5 e/ou CDRL3 como estabelecida em SEQ ID NO: 6 ou um equivalente direto de cada CDR em que um equivalente direto não tem mais do que duas substituições de aminoácidos na referida CDR.
24. Inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, caracterizado pelo fato de que é para uso no trata- mento de câncer em um ser humano em necessidade do mesmo, em que o inibidor de PRMT Tipo I é o Composto A: (A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e a pro- teína de ligação a ICOS ou porção de ligação a antígeno da mesma compreende um domínio VH compreendendo uma sequência de amino- ácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos estabele- cida em SEQ ID NO: 7 e/ou um domínio VL compreendendo uma se- quência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de ami- noácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8, em que a referida proteína de ligação a ICOS se liga especificamente a ICOS humano.
25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 24, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I ou a proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma é ad- ministrado ao paciente em uma via selecionada a partir de: simultânea, sequencial, em qualquer ordem, sistêmica, oral, intravenosa e intratu- moralmente.
26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 25, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PRMT Tipo I é administrado por via oral.
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 26, caracterizado pelo fato de que a proteína de ligação a ICOS ou frag- mento de ligação a antígeno da mesma é administrado por via intrave- nosa.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 27, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir de o grupo que consiste em câncer colorretal (CRC), gástrico, esofágico, cervical, bexiga, mama, cabeça e pescoço, ovário, melanoma, carcinoma de cé- lulas renais (RCC), células escamosas EC, carcinoma de pulmão de cé- lulas não pequenas, mesotelioma, pancreático, câncer de próstata e lin- foma.
29. Uso de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para tratar câncer.
30. Uso de um inibidor de proteína arginina metiltransferase Tipo I (PRMT Tipo I) e uma proteína de ligação a ICOS ou fragmento de ligação a antígeno da mesma, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de câncer.
BR112020023459-1A 2018-05-31 2019-05-24 terapia combinada com proteínas de ligação a icos e inibidores de arginina metiltransferase BR112020023459A2 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862678356P 2018-05-31 2018-05-31
US62/678,356 2018-05-31
PCT/IB2019/054344 WO2019229613A1 (en) 2018-05-31 2019-05-24 Combined therapy with icos binding proteins and argininemethyltransferase inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR112020023459A2 true BR112020023459A2 (pt) 2021-02-23

Family

ID=67139776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112020023459-1A BR112020023459A2 (pt) 2018-05-31 2019-05-24 terapia combinada com proteínas de ligação a icos e inibidores de arginina metiltransferase

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20210260033A1 (pt)
EP (1) EP3801615A1 (pt)
JP (1) JP2021525271A (pt)
CN (1) CN112469441A (pt)
BR (1) BR112020023459A2 (pt)
CA (1) CA3101561A1 (pt)
WO (1) WO2019229613A1 (pt)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113456818B (zh) * 2021-07-01 2022-02-22 首都医科大学附属北京儿童医院 Prmt3蛋白的用途和调控hiv转录的方法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57106673A (en) 1980-12-24 1982-07-02 Chugai Pharmaceut Co Ltd Dibenzo(b,f)(1,4)oxazepin derivative
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
JP4210454B2 (ja) 2001-03-27 2009-01-21 日本たばこ産業株式会社 炎症性腸疾患治療剤
JP3871503B2 (ja) 1999-08-30 2007-01-24 日本たばこ産業株式会社 免疫性疾患治療剤
JP4212278B2 (ja) 2001-03-01 2009-01-21 日本たばこ産業株式会社 移植片拒絶反応抑制剤
US20050089932A1 (en) 2001-04-26 2005-04-28 Avidia Research Institute Novel proteins with targeted binding
US20050053973A1 (en) 2001-04-26 2005-03-10 Avidia Research Institute Novel proteins with targeted binding
EP1675878A2 (en) 2003-10-24 2006-07-05 Avidia, Inc. Ldl receptor class a and egf domain monomers and multimers
CN101861168B (zh) 2007-05-07 2014-07-02 米迪缪尼有限公司 抗-icos抗体及其在治疗肿瘤、移植和自身免疫病中的应用
CA2743469C (en) 2008-11-12 2019-01-15 Medimmune, Llc Antibody formulation
US8709417B2 (en) 2009-09-30 2014-04-29 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Combination immunotherapy for the treatment of cancer
CN101898945B (zh) 2010-07-27 2013-05-08 大连理工大学 盐析萃取发酵液中丙酮和丁醇的方法
WO2012131004A2 (en) 2011-03-31 2012-10-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies directed against icos and uses thereof
EP2892928B1 (en) 2012-09-03 2018-05-30 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies directed against icos for treating graft-versus-host disease
WO2014153214A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-25 Epizyme, Inc. Arginine methyl transferase inhibtors and uses thereof
BR112015022785A2 (pt) * 2013-03-14 2017-07-18 Epizyme Inc composto; composição farmacêutica; kit ou artigo farmacêutico embalado; método de inibição de uma arginina metil transferase (rmt); método de modulação da expressão genética; método de modulação da transcrição; e método de tratamento de um distúrbio mediado por rmt
MA41414A (fr) * 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos
CN107530428B (zh) 2015-03-23 2022-05-13 震动疗法股份有限公司 Icos的抗体

Also Published As

Publication number Publication date
EP3801615A1 (en) 2021-04-14
CN112469441A (zh) 2021-03-09
WO2019229613A1 (en) 2019-12-05
CA3101561A1 (en) 2019-12-05
JP2021525271A (ja) 2021-09-24
US20210260033A1 (en) 2021-08-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2016331190A1 (en) Combination therapy of bromodomain inhibitors and checkpoint blockade
US20230094076A1 (en) Combination therapy
CA3045243A1 (en) Combination therapy
JP2019518006A (ja) Ｍｙｄ８８変異型疾患における治療標的としてのｈｃｋ
JP2023075286A (ja) 癌を治療するためのｉｉ型タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ阻害剤及びｉｃｏｓ結合タンパク質の組合せ
JP2023052400A (ja) 併用療法
BR112020023459A2 (pt) terapia combinada com proteínas de ligação a icos e inibidores de arginina metiltransferase
US20190350931A1 (en) Combination therapy
WO2021023609A1 (en) Combination of a type i protein arginine methyltransferase (type i prmt) inhibitor and a methionine adenosyltransferase ii alpha (mat2a) inhibitor

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]
B08F Application dismissed because of non-payment of annual fees [chapter 8.6 patent gazette]

Free format text: REFERENTE A 5A ANUIDADE.

B08K Patent lapsed as no evidence of payment of the annual fee has been furnished to inpi [chapter 8.11 patent gazette]

Free format text: REFERENTE AO DESPACHO 8.6 PUBLICADO NA RPI 2776 DE 19/03/2024.