BR112020022016A2 - processo para preparação de um composto de tiazol potente, formulação farmacêutica e seus usos - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida. A presente invenção refere-se ainda a uma formulação farmacêutica e ao uso da referida formulação farmacêutica consistindo em N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis como composto ativo para o tratamento e prevenção de doenças e doenças autoimunes que envolvem a imunologia da pele doenças autoimunes de pele e distúrbios de pigmentação.

Description

“PROCESSO PARA PREPARAÇÃO DE UM COMPOSTO DE TIAZOL POTENTE, FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA E SEUS USOS” Campo da invenção

[0001] A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de N-[2- [2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. A presente invenção refere-se ainda a uma formulação farmacêutica e ao uso da referida formulação farmacêutica consistindo em N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida como ingrediente activo para o tratamento e prevenção de doenças e doenças autoimunes que envolvem a imunologia da pele, doenças autoimunes da pele e distúrbios de pigmentação. Fundamentos da invenção

[0002] O sistema imunológico é uma coleção de células e produtos químicos que faceiam agentes causadores de infecção tais como bactérias e vírus. Ocorre um distúrbio autoimune quando o sistema imunológico de uma pessoa ataca erroneamente suas próprias células e tecidos do corpo. Os distúrbios autoimunes são amplamente agrupados em duas categorias - específicas de órgão, significando que apenas um órgão é afetado, enquanto que nos distúrbios sistêmicos, órgãos múltiplos ou sistemas de corpo podem ser afetados. Exemplos de doenças autoimunes incluem, mas não se limitam a, diabetes tipo I, artrite reumatóide, lúpus, doença celiac, artrite psoriática, esclerose múltipla, anemia perniciosa, Síndrome de Sjogren, doença de graves, doença Inflamatória intestinal.

[0003] As doenças autoimunes são caracterizadas por uma resposta imune anormal envolvendo células ou anticorpos, que são em ambos os casos dirigidos contra tecidos autólogos normais. Tanto a resposta imunológica adaptativa, que compreende a imunidade mediada por células T e a resposta imunológica humoral, envolvendo a imunidade mediada por anticorpos, está envolvida no desencadeamento e disseminação de doenças autoimunes.

[0004] Observou-se que a maioria das terapias existentes para distúrbios autoimunes objetivam prover apenas benefício sintomático a pacientes, já que há pouca por meio de terapia direcionada e eficaz. A administração de esteróides é uma das abordagens mais comuns para o tratamento. Entretanto, a natureza não específica e os efeitos colaterais associados com o uso esteróide de longo prazo limitam sua utilidade.

[0005] Um órgão imunologicamente ativo no corpo que é continuamente exposto a estressores externos devido a sua localização como barreira entre o ambiente externo e interno é a pele. As doenças da pele podem surgir devido à desregulação de vias fisiológicas de "órgão" bem como " sistêmicas ". A acessibilidade da pele faz a identificação fenotípica das perturbações fáceis e, portanto, acredita-se que a pele é uma reflexão da saúde interna. A atividade imune na pele é fortemente coordenada através de interações entre células de pele diferentes (melanócitos, ceratinócitos e fibroblastos) e variedade de células imunes dependentes de pele e circulatórias. Esta coordenação permite que a pele seja patogênica enquanto mantém a tolerância a auto-antígenos. No entanto, uma decomposição desta rede resulta em doenças autoimunes incluindo, mas não limitadas a vitiligo, psoríase, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, bolhosa, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite, alopecia areata, dermatite atópica e eczema.

[0006] Como um exemplo, vitiligo é uma doença autoimune onde a desregulação das funções imunes ocorre com níveis aumentados de citocinas inflamatórias na lesão. Portanto, os corticosteróides tópicos tornam-se a terapia de primeira linha mais comum. Os pacientes também são avisados para expor a luz solar a fim de aumentar a síntese de melanina. Fototerapia (laser de Banda Estreita ou laser de 311 nm) é geralmente incluída com esteroides tópicos para conseguir melhores resultados. Análogos de vitamina D3 e antioxidantes tópicos são também recomendados.

[0007] Os pacientes recalcitrantes à primeira linha de terapia são sugeridos PUVA (psoralens + UVA) ou KUVA (khellin + UVA). Laser de excímero monocromático ou laser de hélio de hélio também produz melhores resultados em a1guns pacientes. Neste regime, são também incluídos os corticosteroides sistêmicos e inibidores de calcineurina. Como um fotosensibilizador alternativo, a L-fenilalanina é usada. L- fenilalanina também é usada em suplementação oral. Os antioxidantes orais E tópicos, tais como a vitamina C, a vitamina E/K, o ácido alfa lipóico, os extratos de ginkgo biloba, são usados para proteger os melanócitos da destruição induzida por estresse oxidativo.

[0008] Os tratamentos cirúrgicos são também conhecidos para o tratamento de tais doenças. Entretanto, um tratamento cirúrgico é recomendado apenas para aqueles pacientes em que vitiligo é estável. Estes procedimentos incluem enxertos de bolhas, enxerto de espessura dividida, enxerto de punção ou melanócitos autólogos ou transplante de queratinócitos + queratinócitos

[0009] Os pacientes com vitiligo progressivo podem optar por sofrer despigmentação completa para a obtenção de uma cor homogénea da pele. Camuflage como auxílio cosmético e psicoterapia é sugerida cada estágio do tratamento.

[0010] Vários estudos implicaram recentemente o papel de perturbações de função ER (retículo endoplásmico) e estresse de ER crónico na patofisiologia E manutenção de doenças crónicas, que variam de doenças metabólicas, neurodegenerativas, mediadas por imunologia. A tensão ER também desempenha um papel crucial no desencadeamento de autoimunidade contra auto-antígenos. Por exemplo, o estresse ER em células beta pancreáticas precede o início clínico de diabetes tipo-I, uma doença autoimune. Em um estudo recente, foi descrita uma pequena molécula denominada N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida que melhora a Capacidade funcional do ER pelo aumento da Saída de dobragem da proteína ER, ao mesmo tempo em que induz cronicamente a expressão chaperona. Tratamento de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida, a sensibilidade à insulina, a tolerância à glicose e a função da célula b em múltiplos modelos pré-clínicos de camundongos obesos-diabéticos. N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida foi também eficaz na prevenção da morte de células que expressaram um mutante de rhodopsen identificado em retinite dominante autossômica e queda de proteína associada e estresse ER. A propriedade única de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida para restaurar a Homeostase ER pode representar uma oportunidade terapêutica contra distúrbios envolvendo a desregulação da função ER, particularmente doenças autoimunes e doenças que envolvem a imunologia da pele,

doenças autoimunes da pele e distúrbios de pigmentação. Estes incluem, mas não se limitam a, vitiligo, psoríase, dermatite atópica e eczema, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, louro, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite, alopecia areata. Objetivo da invenção

[0011] O objetivo principal da presente invenção é fornecer as aplicações terapêuticas da fórmula I: N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, por meio de composições, formulações e como parte de qualquer tratamento terapêutico ou profilático.

[0012] Ainda um outro objetivo da presente invenção é fornecer novos e inventivos processos para a obtenção do composto de fórmula N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida junto com seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[0013] Um outro objetivo da presente invenção é o de prover várias aplicações terapêuticas através de todos os possíveis modos de administração, em que a formulação ou a composição utilizado compreende o composto N-[2-[2-(4-clorofenil)- 4-tiazolil] etil]-butanamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, como o ingrediente ativo em uma quantidade terapeuticamente eficaz.

[0014] Um objetivo adicional da presente invenção é o de prover o tratamento de doenças e doenças autoimunes que envolvem A imunologia da pele, doenças autoimunes da pele e distúrbios de pigmentação que incluem doenças que incluem, mas não se limitam A vitiligo, psoríase, dermatite atópica e eczema, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, pastoso, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite e alopecia areata.

[0015] Outro objetivo da invenção é fornecer o método de tratamento de doenças autoimunes particularmente doenças autoimunes da pele administrando-se N-[2-[2- (4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida por meio de uma formulação ou composição ou qualquer outra aplicação terapêutica.

[0016] Ainda um outro objetivo da invenção é fornecer a aplicação de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida como um medicamento e por meio de formulações e composições, no tratamento de doenças autoimunes, particularmente doenças autoimunes de pele e distúrbios de pigmentação incluindo, mas não limitado a doenças tais como vitiligo, psoríase, dermatite atópica e eczema, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, pastoso, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico dermatomiosite e alopecia areata. Sumário da invenção

[0017] A presente invenção refere-se a novas formulações do composto de fórmula N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida.

[0018] A presente invenção também se refere ao processo de preparação de N- [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida conforme representado pela fórmula I:

[0019] A presente invenção refere-se ainda à aplicação terapêutica do composto de fórmula N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida no tratamento de doenças e doenças autoimunes envolvendo imunologia de pele incluindo mas não limitada a doenças autoimunes de pele e distúrbios de pigmentação tais como vitiligo, psoríase, dermatite atópica e eczema, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, bolhosa, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite e alopecia areata.

[0020] A presente invenção também refere-se ao novo e inventivo uso do composto de fórmula 1: N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida no tratamento de doenças e doenças autoimunes envolvendo imunologia de pele, doenças autoimunes de pele e distúrbios de pigmentação. Descobriu-se que o composto da fórmula 1: N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida tem um efeito inesperado e utilidade na redução da morte de melanócito no vitiligo. Estudos demonstram que N- [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida foi observada para prevenir a morte celular mediada por estresse do melanócito. Além disso, N-[2-[2-(4-clorofenil)-4- tiazolil] etil]-butanamida melhorou a função de melanocito, conforme medido por aumento de teor de melanina e atividade de tirosinase de melanoócitos tratados com N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida. Descrição detalhada

[0021] A pele forma uma interface entre o interior e o ambiente exterior do corpo. A localização estratégica da pele expõe a mesma a numerosas ameaças ambientais e necessita de sua função como um importante tecido de barreira, protegendo o corpo contra patógenos, processos e eventos. Enquanto as células epiteliais residentes que constituem ceratinócitos constituem a barreira física e química, a pletora de células imunes no compartimento dérmico e epidérmico constitui uma barreira imunológica ativa. Os melanócitos, células presentes na camada epitelial basal, funcionam para produzir melanina que dá a pele de sua cor característica. A homeostase da pele é uma interação complexa entre estes diferentes tipos de células e também requer comunicação constante com os sistemas imunes, neural e endócrinos sistêmicos. Qualquer desregulação desta rede pode se manifestar como doenças da pele. A categoria particularmente importante e comum de doenças da pele são doenças autoimunes, um tipo de condição em que o sistema imunológico do corpo começa a atacar e terminar células saudáveis e tecidos dentro da pele.

[0022] As terapias atuais para doenças autoimunes da pele incluem esteróides, fototerapia, vitamina D3 e imunomoduladores. Estes tratamentos trabalham parcialmente e apenas em uma pequena subpopulação os pacientes e, portanto, há a necessidade de desenvolver terapias mais eficazes. Uma doença autoimune comum que afeta A pigmentação da pele é vitiligo, onde A morte celular mediada por imunização de melanócitos ocorre. De forma interessante, os melanócitos presentes na margem da lesão desordenada em vitiligo demonstram morfologia alterada de ER, sugerindo o envolvimento de estresse ER em espalhamento de doenças. A via molecular subjacente levando a estresse de melanoócitos seguido por sua morte foi utilizada na formulação de um caminho para o possível tratamento de distúrbios autoimunes. Os inventores teoriza que o direcionamento desta via pode contribuir para a redução da morte celular mediada por auto-imunização de melanócitos. A molécula selecionada e estudada na presente invenção tem sido mostrada por impacto desta etapa e recuperação de melanócitos de morte induzida por estresse e, portanto, tem a capacidade de auxiliar na redução de vitiligo e outras doenças autoimunes em pacientes.

[0023] Os inventores resolveram um composto após uma maior experimentação que exibe a capacidade de melhorar a capacidade funcional do ER Pelo aumento da saída de dobragem da proteína ER, ao mesmo tempo em que induz cronicamente a expressão chaperona. Tratamento de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida, a sensibilidade à insulina, a tolerância à glicose e a função da célula b em múltiplos modelos pré-clínicos de camundongos obesos-diabéticos. N-[2-[2-(4-clorofenil)-4- tiazolil] etil]-butanamida foi também eficaz na prevenção da morte de células que expressaram um mutante de rhodopsen identificado em retinite dominante autossômica e queda de proteína associada e estresse ER. A propriedade única de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida para restaurar a Homeostase ER foi entendida como representando uma oportunidade terapêutica contra distúrbios envolvendo a desregulação de função ER, particularmente doenças autoimunes e doenças que envolvem a imunologia da pele, doenças autoimunes da pele e distúrbios de pigmentação. Estes incluem Vitiligo, psoríase, dermatite Atópica e eczema, liquen- planus, escleroderma, pênfigo, Pastoso, Epidermólise bolosa, Lúpus eritematoso Sistêmico, dermatomiosite, Alopecia areata.

[0024] Os termos como refletidos na presente invenção são definidos como segue.

[0025] O termo "farmaceuticamente aceitável" aqui usado refere-se a uma substância que é utilizável no campo farmacêutico e é inofensivo a um produto ou mamífero, ou uma substância tem uma proporção razoável ou aceitável de efeito/risco.

[0026] A referida atmosfera de argônio (Ar/N2) refere-se a Argônio ou nitrogénio.

[0027] A frase "sal de chrochelle" tem o significado de tetrahidrato de tartarato de sódio.

[0028] A expressão de 10% de Pd/C de Paládio e 10% de paládio.

[0029] As abreviações usadas na presente invenção são bem conhecidas por aqueles versados na técnica e têm o significado como definido abaixo.

[0030] A abreviação "DIPEA" refere-se a diisopropiletilamina.

[0031] A abreviação "DCM" refere-se a diclorometano.

[0032] A abreviação "DMF" refere-se a dimetil formamida.

[0033] A abreviação de cloreto de Metilsulfonila refere-se a cloreto de

Metilsulfonila.

[0034] A abreviação "TLC" refere-se a cromatografia de camada fina.

[0035] A abreviação "HN R" refere-se à ressonância magnética nuclear de prótons.

[0036] A abreviação "TPP" refere-se à trifenil fosfina.

[0037] A abreviação "DIBAL-H" refere-se a hidreto de diisobutil alumínio.

[0038] A abreviação "THF" refere-se a tetra-hidro furano.

[0039] A abreviação "SERT" refere-se à temperatura ambiente.

[0040] A abreviação "EDTA" refere-se a ácido etilenodiamina tetra acético.

[0041] A abreviação "API" refere-se ao ingrediente farmacêutico ativo.

[0042] A abreviação "rapamycin" refere-se a lenticamicina.

[0043] a cromatografia de reagente de Bradford Significaria o reagente comercialmente disponível usado para a estimativa de proteína f0.

[0044] A abreviação "MBTH" refere-se a hidrato cloridrato de 3-metil-2- benzotiazolinona hidrazona.

[0045] Este Ensaio de MTT Se refere ao uso de brometo de MTT (Brometo de 3- (4 5-dimetiltiazol-2-il)-2 5-difeniltetrazólio) para estimativa de viabilidade celular.

[0046] A abreviação "DMSO" refere-se a sulfóxido de dimetila.

[0047] A frase "Triton X -100" refere-se a um tensoativo não iônico.

[0048] A abreviação "PBS" refere-se a solução salina tamponada com fosfato.

[0049] A abreviação "F-DOPA" refere-se a F -3, 4-dihidro-hidroxifenilalanina.

[0050] A abreviação "NESEM" refere-se a melanócitos epidérmicos humanos normais.

[0051] A abreviação "FDH" refere-se à lactato desidrogenase.

[0052] A sua atividade de tirosinase refere-se à atividade enzimática da tirosinase de melanoócitos, uma enzima necessária para a síntese do pigmento melanina.

[0053] O efeito de titunicamicina se refere à indução de estresse ER por Tratamento de Tm seguido por redução na viabilidade celular.

[0054] O controle de VC, conforme refletido na Figura 3 (no eixo X-abscissa) é o controle do veículo.

[0055] Na Figura 4 - Coquetel de citocinas inflamatórias - Citocinas inflamatórias causam inflamação no sistema e são implicadas para a patologia vitiligo. O coquetel de citocinas inflamatórias inclui fator-alfa de necrose tumoral (TNFα), interleucina-1 beta (IE -1 b) e interferon gama (IFNγ) em uma concentração final de 10 ng/ml cada.

[0056] “PG” propileno glicol.

[0057] “kolliphor® RH40” se refere a óleo de mamona hidrogenado de polioxil 40.

[0058] “Solução de HPMC a 1%” se refere à hidro-xipropil metil celulose.

[0059] Os termos "opcional" ou "opcionalmente" significam que o evento ou circunstância subsequentemente descrito pode ou não ocorrer, e que a descrição inclui casos onde o referido evento ou circunstância ocorre e casos onde não é.

[0060] O termo "indivíduo" pode ser um vertebrado, tal como um mamífero, um peixe, um pássaro, um réptil, ou um anfíbio. Assim, o indivíduo dos métodos aqui apresentados pode ser um humano, primata não humano, cavalos, porco, coelho, cachorro, ovelha, cabra, vaca, gato, porquinho-da-índia ou roedor. O termo não denota uma idade ou sexo particular. Assim, indivíduos adultos e recém-nascidos, bem como fetos, sejam masculinos ou femininos, destinam-se a ser cobertos. Em um aspecto, o indivíduo é um mamífero. Um paciente refere-se a um indivíduo afligido com uma doença ou distúrbio. O termo "paciente" inclui indivíduos humanos e veterinários.

[0061] O termo "tratamento" refere-se à administração médica de um paciente com a intenção de curar, melhorar, estabilizar, ou prevenir uma doença, condição patológica ou distúrbio. Este termo inclui tratamento ativo, isto é, tratamento direcionado especificamente no sentido da melhora de uma doença, condição patológica, ou distúrbio, e também inclui tratamento causal, isto é, tratamento dirigido para a remoção da causa da doença associada, condição patológica, ou distúrbio. Além disso, este termo inclui tratamento paliativo, isto é, tratamento projetado para o alívio de sintomas ao invés da cura da doença, condição patológica, ou distúrbio; tratamento preventivo, isto é, tratamento direcionado para minimizar ou parcial ou completamente inibir o desenvolvimento da doença associada, condição patológica, ou distúrbio; e tratamento de suporte, isto é , tratamento empregado para suplementar outra terapia específica direcionada para o melhoramento da doença associada,

condição patológica, ou distúrbio. Em vários aspectos, o termo cobre qualquer tratamento de um indivíduo, incluindo um mamífero (por exemplo, um ser humano), e inclui: (i) prevenir que a doença ocorra em um indivíduo que possa estar predisposto à doença, mas ainda não tenha sido diagnosticada como tendo a mesma; (ii) inibição da doença, isto é, , interrompendo seu desenvolvimento; ou (iii) alívio da doença, isto é, causando regressão da doença. Em um aspecto, o indivíduo é um mamífero, tal como um primata, e, em um outro aspecto, o indivíduo é um ser humano. O termo "indivíduo" também inclui animais domesticados (por exemplo, gatos, cães, etc), animais de criação (por exemplo, gado, cavalos, porcos, ovelhas, cabras, etc), e animais de laboratório (por exemplo, rato, coelho, rato, porquinho-da-índia, volante de fruta, etc).

[0062] Os termos "quantidade eficaz" e "quantidade eficaz" referem-se a uma quantidade que é suficiente para se obter o resultado desejado ou ter um efeito sobre uma condição indesejada. Por exemplo, uma "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade que é suficiente para atingir o resultado terapêutico desejado ou ter um efeito sobre os sintomas indesejados, mas é geralmente insuficiente para causar efeitos colaterais adversos.

[0063] O nível de dose terapeuticamente eficaz específico para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo o distúrbio sendo tratado e a severidade do distúrbio; a composição específica empregada; a idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do paciente; o tempo de administração; a via de administração; a taxa de excreção do composto específico empregado; a duração do tratamento ; fármacos usados em combinação ou coincidentes com o composto específico empregado e fatores semelhantes bem conhecidos nas técnicas médicas.

[0064] O termo "farmaceuticamente aceitável" descreve um material que não é biologicamente ou de outro modo indesejável, isto é, sem causar um nível inaceitável de efeitos biológicos indesejáveis ou interagindo de uma maneira deletéria.

[0065] A presente invenção pode ser entendida mais prontamente com referência à seguinte descrição detalhada da invenção e dos exemplos aqui incluídos.

[0066] Antes que os presentes compostos, formulações, composições e/ou métodos sejam descritos e descritos, deve ser entendido que a terminologia aqui usada tem a finalidade de descrever aspectos específicos apenas e não se destina a ser limitativa. Embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles aqui descritos possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais exemplares são agora descritos.

[0067] A presente invenção refere-se ao processo de preparação de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida conforme representado pela fórmula I:

[0068] A presente invenção refere-se ainda à preparação de formulações e composições compreendendo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus derivados seus sais farmaceuticamente aceitáveis para o uso no tratamento de doenças autoimunes da pele. A presente invenção ainda se refere ao uso de N-[2-[2- (4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida em aplicações terapêuticas para o tratamento de doenças autoimunes da pele.

[0069] O composto N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida é um composto ativo que pode ser utilizado em modelos terapêuticos para o tratamento de doenças autoimunes particularmente doenças autoimunes da pele. A presente invenção refere- se ao uso de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida como composto ativo no tratamento de doenças autoimunes da pele incluindo vitiligo.

[0070] A presente invenção refere-se ainda ao processo de preparação de N-[2- [2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida conforme representado pela fórmula I: Procedimento de Preparação I 1) 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) acetato de etila

Procedimento

[0071] 4-Clorobenzotioamida (1g) foi dissolvida em etanol (15ml) em atmosfera inerte em temperatura ambiente. 4-Cloroacetoacetato de etila (0,9 ml) foi então adicionado e refluxado. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após o término da reação, ela foi resfriada à temperatura ambiente e concentrada para remover o etanol utilizando-se um agitador. O composto foi extraído utilizando acetato de etila, lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio, água e finalmente com solução saturada de salmoura. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio e concentrou-se ainda através de um rotavapor.

[0072] O composto foi purificado utilizando cromatografia de coluna e caracterizado por 1H NMR. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (dt, J = 9 Hz, 2,2 Hz, 2H), 7,59 (s, IH), 7,59-7,53 (m, 2H), 4,14 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,91 (s, 2H), 1, 22 (t, J = 6,9 Hz, 3H). Rendimento: 1,3 g (81%). 2) 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etan-1-ol Procedimento

[0073] 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) acetato de etila (1 g) foi adicionado em etanol (15ml) sob atmosfera de nitrogênio. Ela foi resfriada e então boroidreto de sódio foi adicionado lentamente a 0° C, a reação foi mantida sob agitação durante a noite a partir de 0° C até a temperatura ambiente. O progresso da reação foi monitorado por TLC e depois de completamento da reação, ela foi resfriada e extinta pela adição de

1N HCl lentamente. O composto foi extraído com acetato de etila, lavado com acetato de etila com água e solução saturada de salmoura. A camada orgânica foi ainda secada sobre sulfato de sódio e concentrada através de um rotavapor. O composto foi caracterizado pela utilização de 1H NMR. NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,23 (dt, J = 9 Hz, 2,2 Hz, 2H), 7,85-7,83 (m, 2H), 7,41 (s, 1H), 4,71 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,77 (q, J = 6,2 Hz, 2H), 2,92 (t, J = 6,9 Hz, 2H). Rendimento - 0,71 g (84%). 3) 4-(2-Azidoetil)-2-(4-clorofenil) tiazol Procedimento

[0074] 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etan-1-ol (1g) foi adicionado em DCM sob atmosfera de Nitrogénio, então DIPEA e cloreto de metilsulfonila foram adicionados à mesma, respectivamente, a reação foi mantida sob agitação durante 3 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC.

[0075] Após a conclusão da reação, ela foi resfriada por adição de uma solução de bicarbonato de sódio lentamente saturada. O composto foi extraído utilizando acetato de etila e a camada orgânica foi lavada com água e solução saturada de salmoura. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio e concentrou-se, concentrou-se, obtendo-se cru. A este DMF adicionado bruto em atmosfera inerte (Ar/N2). Então, Foi adicionado ao mesmo seguido por NaN3 e a reação foi mantida sob agitação durante a noite na ausência de luz. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Depois de completamento da reação, água foi adicionada ao mesmo e então o composto foi extraído com acetato de etila, lavado com uma camada orgânica lavada com água e solução saturada de salmoura e a camada orgânica seca sobre sulfato de sódio e concentrada utilizando-se um rotovapor.

[0076] O composto final foi purificado utilizando cromatografia de coluna e caracterizado por 1H NMR.

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (dt, J = 9 Hz, 2,2 Hz, 2H), 7,55-7,53 (m, 2H), 7,41 (s, 1H), 2,8 (t, 2H), 2,1 (t, J = 6,9 Hz, 2H). Rendimento -0,40 g (49%). 4 ) N-(2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etil) butiramida Procedimento

[0077] (a) 4-(2-azidoetil)-2-(4-clorofenil) tiazol (1g) foi adicionado em metanol (lOml) em atmosfera Inerte (Ar/N2). Trimetilamina (TPP, 7,4 g) foi adicionada a ela e foi aquecida até o refluxo. O término da reação foi monitorado por TLC. A massa de reação foi resfriada e o solvente foi removido sob pressão reduzida para obter a amina bruta. O composto amino foi purificado usando recristalização (metanol e clorofórmio).

[0078] (b) 4-(2-azidoetil)-2-(4-clorofenil) tiazol (1g) foi adicionado em etanol (8 ml) em seguida água foi adicionada sob agitação. A esta solução cloreto de amónio (0,4 g) e zinco (0,36 g) foi adicionado e a reação foi refluxada, o término da reação Foi monitorado por TLC, após o término da reação, foi resfriado e então adicionado aq. A amónia e o acetato de etila, a camada lavada de acetato de etila com água e uma solução saturada de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e foi então concentrada. O composto amino foi purificado usando recristalização.

[0079] A este composto de amina DCM (lOml) e trietil amina (4 ml) a 0° C, resfriou- se então cloreto de butirila (2 ml). O término da reação foi monitorado por TLC depois de completamento do composto de extrato de massa de reação concentrado de reação utilizando acetato de etila, lavado com água e solução de salmoura, a camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio e em seguida concentrada. O composto final foi purificado utilizando cromatografia de coluna caracterizado por NMR. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (d, 2H), 7,88 (s,1H), 7,57 (d, 2H), 7,41 (s, 1H), 3,42 (t, 2H), 2,89 (t, 2H), 2,03 (t, 2H), 1,54-1,45 (m, 2H), 0,83 (t, 3H) MS: 309 (M + H), 331 (M + Na). Rendimento de 0,4 g (35%).

Procedimento de preparação II 1) 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) acetato de Etila Procedimento

[0080] 4-Clorobenzaatioamida (1g) foi adicionado em etanol sob uma atmosfera inerte à temperatura ambiente, 3-bromo-2-oxopropanoato de etila (0,25 g) foi adicionado a esta solução e aquecido até o refluxo. O término da reação foi monitorado por TLC. Após o término da reação, a massa de reação foi resfriada à temperatura ambiente e em seguida concentrada. O composto foi extraído utilizando acetato de etila, lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio, em seguida com água e finalmente com solução saturada de salmoura. Além disso, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada.

[0081] O composto foi purificado utilizando cromatografia de coluna e composto foi caracterizado por NMR. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (dt, J = 9 Hz, 2,2 Hz, 2H), 7,59 (s, 1H), 7,59-7,53 (m, 2H), 4,14 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,91 (s, 2H), 1,22 (t, J = 6,9 Hz, 3H). Rendimento: 1,1 g (68%). 2) 2-(4-clorofenil) tiazol-4-carbaldeído Procedimento

[0082] 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) acetato de etila (1g) foi dissolvido em DCM (10 ml) e resfriado a -78° C. um frasco separado foi carregado com DIBAL-H (em 10 ml De DCM) e também resfriado a -78° C. a solução de DIBAL-H (0, 55g) foi adicionada durante 20-25 min, em seguida agitada a -78° C por 1 hora. A mistura de reação foi extinta pela adição de metanol (10 mL) e agitada a -78° C por 15 minutos A solução fria foi transferida para um outro frasco contendo uma solução de sal de Rochelle saturada (10 ml) e agitada por 3,5 h. A fase aquosa foi separada e extraída adicionalmente com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em sulfato de sódio e concentradas

[0083] O composto foi purificado utilizando cromatografia de coluna e caracterizado por 1H NMR. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,75 (s, 1H), 8,5 (s, 1H), 8,02 (d, 2H), 7,53 (d, 2H) Rendimento de 0,51 (64%). 3) 2-(4-clorofenil)-4-(2-nitrovinil) tiazol Procedimento

[0084] 2-(4-clorofenil) tiazol-4-carbaldeído (1g) foi dissolvido em THF sob uma atmosfera inerte. Nitrometano (0, 73ml), pirrolidina (0,037) e ácido acético foram adicionados à temperatura ambiente. A reação foi mantida sob agitação durante 1 a 1,5 hora, a reação monitorada por TLC, e depois de completamento da reação foi concentrada até 85-90%. Além disso, ela foi agitada por adição de água, filtrada do sólido através de funil de buckner e foi lavada com água e seca. O composto foi caracterizado por 1H NMR. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,29 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 8,01 (d, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,59 (d, 2H), Rendimento-1,1 g 4) 2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etano-1-amina Procedimento

[0085] 10% de Pd/C sob uma atmosfera de N2 a uma solução resfriada (banho de gelo) de 2-(4-clorofenil)-4-(2-nitrovinil) tiazol (1g) em MeOH. O frasco foi evacuado repetidamente e lavado com gás H2. A mistura resultante foi deixada aquecer para RT e deixada agitar durante 72 horas sob H2. O vaso foi subsequentemente purgado com gás N2. O recipiente foi resfriado (banho de gelo) e adicionou-se 10% de Pd/C adicional. O frasco foi evacuado repetidamente e lavado com H2. A mistura foi deixada aquecer em Temperatura Ambiente e agitada por 6 horas sob H2. O vaso foi purgado com N2 e a mistura de reação bruta foi filtrada através de um pequeno plugue de celite. O vaso de reação e celite foram enxaguados com MeOH. Os filtrados combinados foram concentrados. O composto final foi purificado por recristalização e caracterizado por 1H NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,25 (s, 2H), 7,95 (d, 2H), 7,59 (s, 1H), 7,56 (d, 2H), 3,17 (s, 4H), MS: 239 (M+H). Rendimento: 0,56 g (62%). 5 ) N-(2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etil) butiramida Procedimento

[0086] 2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etano-1-amina (1g) foi dissolvido em DCM sob atmosfera inerte. Nesta solução, trietil amina (0,6 ml) e cloreto de butirila (2 ml) foram adicionados em temperatura resfriada a gelo. O término da reação foi monitorado por TLC e depois o término da reação foi concentrado e extraído com o uso de acetato de etila, lavado com água e solução de salmoura, camada orgânica seca sobre sulfato de sódio e concentrada. O composto final foi purificado utilizando cromatografia de coluna e adicionalmente caracterizado por 1H NMR. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (d, 2H), 7,88 (s, 1H), 7,57 (d, 2H), 7,41 (s, 1H), 3,42 (t, 2H), 2,89 (t, 2H), 2,03 (t, 2H), 1,54 – 1,45 (m, 2H), 0,83 (t, 3H). MS: 309 (M+H), 331 (M+Na). Rendimento de 0,4 g (35%).

[0087] A presente invenção refere-se também a formulações compreendendo N-

[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados no tratamento de doenças autoimunes da pele tais como vitiligo.

[0088] Por exemplo, é adequado para administração oral, parenteral, tópica, transdérmica, intravenosa, retal, sublingual e nasal. Contempla-se ainda que no tratamento de doenças autoimunes, N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis por meio de uma formulação ou composição, também pode ser administrada via administração intramuscular, subcutânea, intravenosa e peridural

[0089] N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis compreendendo composições se destinam a ser administrados por qualquer via adequada, incluindo oralmente, parenteralmente, retalmente, topicamente e localmente. Elas podem ser tipicamente formuladas e administradas em formas de dosagem unitária como comprimidos, cápsulas, pílulas, pós, grânulos, soluções ou suspensões parenterais estéreis, e soluções ou suspensões orais e emulsões óleo-água contendo quantidades adequadas do ingrediente ativo ou formas de dosagem múltipla.

[0090] Preparações farmacêuticas adequadas podem também ser preparadas como soluções, suspensões, comprimidos, comprimidos dispersíveis, pílulas, cápsulas, pós, formulações de libertação prolongada ou elixires, para administração oral ou em soluções ou suspensões estéreis para administração parenteral, bem como preparação de emplastro transdérmico e inaladores de pó seco.

[0091] A presente invenção refere-se ainda a uma dose terapeuticamente eficaz de todas as preparações compreendendo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis para o tratamento eficaz de doenças e doenças autoimunes envolvendo a imunologia da pele, doenças autoimunes da pele e distúrbios de pigmentação que incluem, mas não se limitam a doenças tais como vitiligo, psoríase, dermatite atópica e eczema, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, bolhosa, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite e alopecia areata.

[0092] A presente invenção contempla preparações farmacêuticas Compreendendo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis em uma quantidade eficaz pode ser utilizada em todos os tipos de formulações e composições em aplicações terapêuticas para o tratamento de doenças e doenças autoimunes que envolvem a imunologia da pele, doenças autoimunes da pele e distúrbios de pigmentação incluindo mas não limitado a doenças tais como viti1go, psoríase , dermatite atópica e eczema, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, bolhosa, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite e alopecia areata.

[0093] A presente invenção também refere-se a formulações compreendendo N- [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis para administração tópica na forma de um gel, creme, qualquer composição espalhável, unguento ou loção. Sem limitar o escopo da invenção, a1gumas formulações exemplares compreendendo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida, conforme a descrição da presente invenção, foram providas.

[0094] Em uma forma de realização da presente invenção, as formulações para uso na administração tópica podem ter excipientes que são adequados ao fármaco N- [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida farmaceuticamente ativo: em que a resistência da resistência do composto ativo na formulação tópica é de 0,1% a 90% e para ser mais específica de 0,1% a 20%.

[0095] A formulação como considerada pela presente invenção pode ainda compreender uma quantidade farmaceuticamente aceitável e terapeuticamente aceitável dos seguintes excipientes.

[0096] Agente de endurecimento/agente de endurecimento/base de unguento crucial como os materiais formadores de estrutura principal para dosagem semi-sólida podem ser adicionados na formulação. Exemplos dos mesmos compreendem álcool cetílico, cera de éster cetílico, cera emulsificante, lanolina hidratada, lanolina, álcoois de lanolina, cera microcristalina, parafina, petrolato, polietileno glicol, ácido esteárico, álcool estearílico, cera branca.

[0097] O agente emulsificante/agente solubilizante usado como tensoativos a fim de reduzir a tensão interfacial para estabilizar as emulsões e para melhorar o umedecimento e a solubilidade de materiais hidrofóbicos pode ser adicionado na formulação. Exemplos dos mesmos compreendem polissorbato 20, polissorbato 80, polissorbato 60, poloxâmero, cera emulsificante, monoestearato de sorbitano, monooleato de sorbitano, lauril sulfato de sódio, monoestearato de propileno glicol, éter monoetílico de dietileno glicol, docusato de sódio.

[0098] Um agente espessante/gelificante pode ser selecionado a partir de um grupo que compreende carbômero, metil celulose, carbóxi metil celulose sódica, carragenano, dióxido de silício coloidal, goma guar, hidroxipropil celulose, hidro- xipropil metil celulose, gelatina, óxido de polietileno, ácido a1gínico, a1ginato de sódio.

[0099] Umectantes (polióis) podem ser adicionados à formulação e podem ser selecionados a partir de um grupo que compreende glicerina, propileno glicol, polietileno glicol, solução de sorbitol,1,2,6 hexanotriol.

[00100] Os conservantes são também adicionados na formulação. Eles podem ser selecionados a partir de um grupo que compreende ácido benzóico, propil parabeno, metil parabeno, ácido sórbico, sorbato de potássio, cloreto de benzalcônio, acetato fenilmercúrico, clorobutanol, fenoxietanol.

[00101] Um intensificador de permeação é também também adicionado à formulação. Pode ser selecionado a partir de um grupo que compreende propileno glicol, etanol, álcool isopropílico, ácido oléico, polietileno glicol.

[00102] Um antioxidante é adicionado à formulação pode ser selecionado a partir de hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado.

[00103] Agentes quelantes também podem ser adicionados na formulação e podem ser EDTA.

[00104] Um tampão pode ser selecionado A partir de ácido cítrico, ácido fosfórico, hidróxido de sódio, fosfato de sódio monobásico, trietanolamina.

[00105] Além disso, qualquer solvente para facilitar a dispersão ou dissolução do ingrediente ativo pode ser selecionado a partir de um grupo que compreende água purificada, hexileno glicol, propileno glicol, álcool oleílico, carbonato de propileno.

[00106] A presente invenção também apresenta um novo e inovador método de chegada a N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida.

[00107] A presente invenção refere-se ainda ao uso do composto ativo de Fórmula I para a fabricação de um medicamento para o tratamento de doenças que envolvem a imunologia da pele, doenças autoimunes da pele e distúrbios de pigmentação que incluem doenças tais como vitiligo, psoríase, dermatite atópica e eczema, liquen- planus, escleroderma, pênfigo, pênis, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite e alopecia areata.

[00108] A presente invenção também refere-se a formulações compreendendo N- [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida para o tratamento de distúrbios de pigmentação e doenças autoimunes de pele incluindo vitiligo.

[00109] Os presentes inventores descobriram uma utilidade inesperada de N-[2-[2- (4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na redução da morte de melanócito no vitiligo. Estudos demonstram que N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis impede a morte celular mediada por estresse de melanoócitos. Além disso, ela melhora a função de melanocito, conforme medido pelo aumento de teor de melanina e atividade de tirosinase dos melanócitos tratados por N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida. De forma interessante, a formulação tópica de N-[2-[2-(4-clorofenil)- 4-tiazolil] etil]-butanamida é claramente capaz de prevenir a disseminação de despigmentação em modelo de porquinho-da-índia de vitiligo.

[00110] A invenção também refere-se a uma composição compreendendo N-[2-[2- (4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, um agente farmacêutico adicional, como uma preparação combinada para utilização simultânea, separada ou sequencial no tratamento ou prevenção de doenças autoimunes particularmente doenças autoimunes da pele. O composto ativo, N-[2-[2- (4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida, por meio de uma formulação ou composição, pode ser utilizado nas aplicações terapêuticas para o tratamento de doenças autoimunes da pele através de todos os modos de administração incluindo administração oral, parenteral, tópica, transdérmica, intravenosa, retal, sublingual e nasal, retalmente e local.

[00111] A presente invenção contempla ainda todas as formulações que podem ser preparadas para aplicações terapêuticas De N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida para o tratamento de distúrbios de pigmentação e doenças autoimunes da pele.

[00112] A invenção é ilustrada pelos seguintes exemplos que se destinam apenas a exemplificar a invenção e, por meio do qual não se destinam a limitá-la.

[00113] Preparação de formulações de creme e gel diferentes compreendendo N- [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida preparada com diversos excipientes. Procedimentos para a preparação de creme para quantidade de 1 g são fornecidos aqui: Excipientes Formulações em gel/creme (%) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Composto 10 10 10 5 5 5 5 5 3 1 0,3 Ativo Etanol 10 15 15 15 15 15 15 - 20 20 20 Propileno 25 5 5 5 5 5 5 30 10 10 10 glicol Parafina 7 6 - - - - - - líquida Cremophor A- - 1 - - 1 1 - 1 25 Kolliphor RH- - 1 - - 1 1 - 1 40 Monoestearato 5 - - 3 - - - - de glicerol Álcool 12 12 - 7 12 12 - 12 cetoestearílico Cera de - - - 2 - - - - abelha Carpobol 934 - - 2 - - - 1 - 2 2 2

Trietanolamina - - 0,5 0,2 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,2% de - - - 62,8 - - - - carbopol em água 1% de - - - - - 60,5 73,5 50,5 hidroxipropil metil celulose em água Água 31 50 67,5 - 60,5 - - - 64,5 66,5 67,2 Formulação 1: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (100 mg) foi dissolvida em etanol (100 mg), seguido pela adição de 250 mg de propileno glicol (PG) à solução etanólica acima. Preparação de fase oleosa (B): álcool cetoestearílico (120 mg), monoestearato de glicerol (50 mg) foi pesado em um bécher de vidro e mantido A 80° C em uma placa quente para liquefazer. Subsequentemente, parafina líquida (70 mg) foi adicionada à fase oleosa acima.

[00114] A fase de fármaco foi misturada em fase oleosa com agitação constante e imediatamente mantida em temperatura ambiente. Finalmente, 310 mg de água morna foram adicionados com agitação para produzir um creme. Formulação 2: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (100 mg) foi pesada e dissolvida em etanol (150 mg), seguido por adição de PG (50 mg) à solução etanólica acima. Preparação de fase oleosa (B): álcool cetoestearílico (120 mg), cremophor a -25 (10 mg) foi pesado em um bécher de vidro e mantido a 80° C em uma placa quente para liquefazer. Subsequentemente, kliphor ® RH40 (10 mg) e parafina líquida (60 mg) foram adicionados à fase oleosa acima.

[00115] A fase de fármaco foi misturada em fase oleosa com agitação constante e imediatamente mantida em temperatura ambiente. Finalmente, 500 mg de água morna foram adicionados com agitação para produzir um creme. Formulação 3: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (100 mg) foi dissolvida em etanol (150 mg), seguido pela adição De PG (50 mg) à solução etanólica acima. Preparação de fase de gel (B): Carbopol 934 (20 mg) foi pesado e embebido em 675 mg de água durante 15 minutos para produzir a fase de gel.

[00116] A fase de fármaco foi misturada com agitação até a fase gel acima. Finalmente, 5 mg de trietanolamina foram adicionados à mistura com agitação para produzir um gel. Formulação 4: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (50 mg) foi dissolvida em etanol (150 mg), seguido pela adição de 50 mg De PG à solução etanólica acima. Preparação de fase oleosa (B): sulfato de cetosearila (70 mg), monoestearato de glicerol (30 mg) e cera de abelha (20 mg) foram pesados em um béquer de vidro e mantidos a 80° C em uma placa quente para liquefazer.

[00117] A fase de fármaco foi misturada à fase oleosa. Subsequentemente, uma solução a 0,2% p/v de carbapol 934 (628 mg) em água foi adicionada à mistura acima.

[00118] Finalmente, a trietanolamina (2 mg) foi adicionada com agitação à mistura acima para produzir creme. Formulação 5: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (50 mg) foi dissolvida em etanol (150 mg), seguido pela adição De PG (50 mg) à solução etanólica acima. Preparação de fase oleosa (B): sulfato de cetosearílico (120 mg), o creme a -25 (10 mg) foi pesado em um bécher de vidro e Mantido a 80° C em uma placa quente para liquefazer. Subsequentemente, kolliphor ® RH40 Foi adicionado à fase oleosa.

[00119] A fase de fármaco foi misturada à fase oleosa com agitação e imediatamente mantida em temperatura ambiente. Água morna (605 mg) foi adicionada à mistura acima com agitação.

[00120] Finalmente, a trietanolamina (5 mg) foi adicionada com agitação para produzir creme. Formulação 6: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (50 mg) foi dissolvida em etanol (150 mg), seguido pela adição De PG (50 mg) à solução etanólica acima. Preparação de fase oleosa (B): sulfato de cetoestearílico (120 mg), o creme a -25 (10 mg) foi pesado em um bécher de vidro e mantido A 80° C em uma placa quente para liquefazer. Subsequentemente, kolliphor ® RH40 Foi adicionado à fase oleosa.

[00121] A fase de fármaco foi misturada à fase oleosa com agitação e imediatamente mantida em temperatura ambiente. Solução de HPMC a 1% (605 mg) foi adicionada à mistura de fármaco e fase oleosa com agitação. Finalmente, a trietanolamina (5 mg) foi adicionada com agitação para produzir creme. Formulação 7: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (50 mg) foi dissolvida em etanol (150 mg), seguido pela adição De PG (50 mg) à solução etanólica acima. Preparação de fase de gel (B): Carbopol 934 (10 mg) foi pesado e embebido em solução de HPMC a 1% em água (735 mg) por 15 minutos para produzir a fase de gel.

[00122] A fase de fármaco foi misturada com agitação até a fase gel acima. Finalmente, 5 mg de trietanolamina foram adicionados à mistura com agitação para produzir um gel.

[00123] Formulação 8: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (50 mg) foi dissolvida Em PG (300 mg). Preparação de fase oleosa (B): sulfato de cetoestearílico (120 mg), o creme a -25 (10 mg) foi pesado em um bécher de vidro e mantido A 80° C em uma placa quente para liquefazer. Subsequentemente, kolliphor ® RH40 Foi adicionado à fase oleosa.

[00124] A fase de fármaco foi misturada à fase oleosa com agitação e imediatamente mantida em temperatura ambiente. Solução de HPMC a 1% (505 mg) foi adicionada à mistura de fármaco e fase oleosa com agitação. Finalmente, a trietanolamina (5 mg) foi adicionada com agitação para produzir creme. Formulação 9: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (30 mg) foi dissolvida em etanol (200 mg), seguido pela adição De PG (100 mg) à solução etanólica acima. Preparação de fase de gel (B): Carbopol 934 (20 mg) foi pesado e embebido em 645 mg de água durante 15 minutos para produzir a fase de gel.

[00125] A fase de fármaco foi misturada com agitação até a fase gel acima. Finalmente, 5 mg de trietanolamina foram adicionados à mistura com agitação para produzir um gel. Formulação 10: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (10 mg) foi dissolvida em etanol (200 mg), seguido pela adição De PG (100 mg) à solução etanólica acima. Preparação de fase de gel (B): Carbopol 934 (20 mg) foi pesado e embebido em 665 mg de água durante 15 minutos para produzir a fase de gel. A fase de fármaco foi misturada com agitação até a fase gel acima. Finalmente, 5 mg de trietanolamina foram adicionados à mistura com agitação em gel produzia. Formulação 11: Preparação de fase de fármaco (A): Quantidade precisamente pesada de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida (3 mg) foi dissolvida em etanol (200 mg), seguido pela adição De PG (100 mg) à solução etanólica acima. Preparação de fase de gel (B): Carbopol 934 (20 mg) foi pesado e embebido em 672 mg de água durante 15 minutos para produzir a fase de gel.

[00126] A fase de fármaco foi misturada com agitação até a fase gel acima. Finalmente, 5 mg de trietanolamina foram adicionados à mistura com agitação para produzir um gel.

[00127] A presente invenção refere-se ainda ao uso de aplicações do composto N- [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida no tratamento de doenças autoimunes.

[00128] Particularmente, descobriu-se que o N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida, conforme obtido pelos processos reivindicados, é eficaz nas aplicações terapêuticas para o tratamento de doenças autoimunes, particularmente doenças autoimunes de pele e distúrbios de pigmentação tais como vitiligo conforme descrito aqui abaixo: Exemplos Teste 1

[00129] Os melanoócitos B 16-F10 Foram Semeados (5000 células por cavidade) em placas de 96 poços por 24 h. as células foram então tratadas em quadruplicata com concentração indicada de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida por 6 h. todas as Diluições de compostos foram feitas em DMSO E a concentração do veículo (DMSO) foi mantida Constante (0,1%) em cada poço. As células foram então tratadas com 300 ng/ml de tunicamicina para causar Estresse ER e após 72 horas de tratamento, as células foram observadas sob microscópio e foram capturadas imagens. O ensaio MTT Foi realizado para medir a viabilidade celular. Resumidamente, MTT (0,5 mg/ml) foi adicionado a cada cavidade e também incubado por 1 h meio de Cultura Foi removido e o MTT Reduzido (formzen) foi dissolvido em DMSO (100 Pl por cavidade) e medido a 570 nm. O crescimento celular no controle do veículo foi calculado como 100% e o efeito dos compostos foi calculado de acordo Resultado

[00130] A figura 1 ilustra graficamente a viabilidade celular com diferentes dosagens de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida.

[00131] N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida protege os melanoócitos da morte celular induzida por tunicamicina em uma maneira dependente da dose. Teste 2

[00132] As células B 16-F10 Foram semeadas em placas de 24 poços (20000 células por cavidade) por 24 h. as células foram então tratadas com concentrações indicadas de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida. Depois de 6 horas de tratamento com N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida, foi adicionada triacetamicina (300 ng/ml) aos poços indicados. Após 72 horas de tratamento, as células foram lavadas com PBS e lisadas em tampão fosfato (pH 6,8) contendo EDTA 1 mM e Triton X -100 a 01% O lisado foi limpo por centrifugação (12000 A g) durante 10 minutos e o lisato claro (20 pl) foi usado para o ensaio de tirosinase. As concentrações finais de mistura de ensaio de tirosinase foram como segue: tampão fosfato (50 mM, pH 6,8), L-DOPA (1 mM), MBTH (6 mM), DMF (2%). A atividade de tirosinase foi medida medindo-se o complexo colorido formado a 492 nm. A atividade de tirosinase foi normalizada para as proteínas celulares totais medidas pelo Reagente de Bradford e representada como % de controle do veículo. Resultado

[00133] A figura 2 representa graficamente a atividade de tirosinase em diferentes concentrações de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida. Observa-se que N- [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida aumenta a atividade de tirosinase e inverte o efeito de tunicamicina Teste 3

[00134] As células foram tratadas conforme indicado por 72 horas Após a incubação, o sobrenadante da cultura celular foi usado para a estimativa da melanina secretada. A melanina secretada foi medida a 405 nm contra o meio de cultura celular como branco. Os níveis de melanina foram normalizados para as proteínas celulares totais e representados como % de controle. Resultado

[00135] Fig. 3 reflete o efeito de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida em secreção de melanina. Observa-se que N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida aumenta os níveis de melanina e inverte o efeito de tunicamicina. Teste 4

[00136] As células B 16-F10 Foram semeadas em placas de 24 poços (80000 células por cavidade) por 24 h. as células foram então tratadas com concentrações indicadas de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida. Após 6 horas de tratamento com N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida, um coquetel de citocinas inflamatórias (TNFa, IL1 b, IFNy-10 ng/ml cada) foi adicionada a poços indicados. Após 72 horas de tratamento, as células foram lavadas com PBS e lisadas em tampão de fosfato (pH 6,8) contendo EDTA a 1 mM e o lisato Triton X -100. a 01% foi liberado por centrifugação (12.000 a g) durante 10 minutos e lisado claro (20 pl) foi usado para o ensaio de tirosinase. As concentrações finais de mistura de ensaio de tirosinase foram como segue: tampão fosfato (50 mM, pH 6. 8 , L-DOPA (1 mM), MBTH (6 mM), DMF (2%). A atividade de tirosinase levou à conversão de L-DOPA em dopachrome que se liga a MBTH e forma um complexo de cor que é lido a 492 nm. A atividade de tirosinase foi normalizada para as proteínas celulares totais medidas pelo Reagente de Bradford e representada como % de controle do veículo. Resultado

[00137] A figura 4 reflete a atividade de tirosinase quando as células em questão são tratadas com um coquetel de citoquinas. Observa-se que N-[2-[2-(4-clorofenil)-4- tiazolil] etil]-butanamida nega o efeito induzido por inflamação em melanócitos Teste 5

[00138] O NHEM (melanócitos epiteliais humanos normais), o Melanoma A375, o melanoma De B 16-F10 e os fibroblastos NIH -3 T3 foram semeadas em placas de 96 poços durante 24 horas. As células foram então tratadas com VC (DMSO, 0,1%) ou com concentrações indicadas de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida por 24 horas. Após o período de incubação, A citotoxicidade foi medida como % de LDH total liberada no meio de cultura. Resultado:

[00139] A figura 5 reflete as medições de citotoxicidade quando N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida é utilizada para tratar células em questão. Observa-se que N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida não mostra citotoxicidade em uma variedade de linhagens celulares. Teste 6:

[00140] Formulação tópica (1% em peso/peso de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida) foi preparada. Similarmente, foi também preparada uma formulação de placebo que foi exatamente similar à formulação de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil]

etil]-butanamida exceto o composto ativo. O modelo animal de vitiligo foi desenvolvido em porquinhos-da-índia pretos e as formulações de placebo e N-[2-[2-(4-clorofenil)-4- tiazolil] etil]-butanamida foram aplicadas nas orelhas esquerda e direita respectivamente. Após o período de tratamento (4 semanas), as alças tratadas com a formulação de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida apresentaram uma maior pigmentação em comparação com as espigas tratadas com placebo. Resultado

[00141] A figura 6 mostra o efeito da aplicação de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida. Observa-se que N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida tem uma potência para causar a repigmentação no modelo animal de vitiligo

[00142] E assim estabelecido que N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são compostos seguros que não apresentam citotoxicidade.

[00143] Os compostos ativos conforme apresentados na presente invenção impedem os melanócitos contra as condições de estresse e inflamação que são observadas nos pacientes vitiligo, portanto podem ser usados para o tratamento de vitiligo.

[00144] Os melanócitos são perdidos em pacientes vitiligo, enquanto a sua sobrevivência é aumentada por N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis sob condições de estresse causadas por tunicamicina.

[00145] A atividade da enzima tirosinase e os níveis de melanina são reduzidos no emplastro viligo dos pacientes. N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis aumenta a atividade da enzima tirosinase e os níveis de melanina e, portanto, pode ser útil para os pacientes vitiligo. Análise de resultados

[00146] Os resultados como refletidos nos dados experimentais estabelecem claramente que os N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis são eficazes no tratamento de distúrbios de pigmentação e doenças autoimunes de pele e podem ser usados com segurança em aplicações terapêuticas dirigidas à mesma.

[00147] A presente invenção também refere-se a uma formulação compreendendo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida para aplicação tópica para o tratamento de distúrbios de pigmentação e doenças autoimunes da pele como vitiligo.

[00148] Acredita-se, portanto, que N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida é um composto seguro que não mostrou citotoxicidade.

[00149] Ela impede os melanócitos de condições de estresse e inflamação que são observadas nos pacientes vitiligo, portanto podem ser usados para tratar vitiligo.

[00150] Os melanócitos são perdidos em pacientes vitiligo, enquanto a sua sobrevivência é aumentada por N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida sob condições de estresse causadas por tunicamicina. A atividade da enzima tirosinase e os níveis de melanina são reduzidos no emplastro viligo dos pacientes. N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida aumenta a atividade da enzima tirosinase e os níveis de melanina e, portanto, pode ser útil para os pacientes vitiligo.

[00151] A presente invenção apresenta claramente a utilidade inesperada de N-[2- [2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida para o tratamento e afogamento de vitiligo, uma doença autoimune da pele e um distúrbio de pigmentação. Os inventores demonstram claramente a eficácia de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida para tratar vitiligo e prevenir a morte celular de melanócito.

[00152] Considera-se que o N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou sua formulação sozinha ou em combinação com outro tratamento pode ser usado para o tratamento de vitiligo. Também pode ser utilizada para o tratamento de doenças que incluem, mas não se limitam a, dermatite atópica, eczema, psoríase, alopecia, melasma, prurido, etc.

Claims (19)

REIVINDICAÇÕES

1. Processo para preparação de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida, compreendendo as etapas de: a. refluxo de 4-clorobenzotioamida de refluxo com um reagente adequado para a esterificação; b. redução do éster como obtido; c. reação do intermediário reduzido (álcool ou aldeído) com um reagente adequado para obter um tiazol; d. opcionalmente redução do intermediário como obtido com um agente redutor ou reação do dito intermediário com um reagente adequado para obter [2-[2- (4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida.

2. Processo para preparação de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (1) refluxo de 4-clorobenzotioamida com a adição de cloroacetoacetato para obter 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) acetato de etila; (2) redução de 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) acetato de etila com a adição de boroidreto de sódio para obter 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etan-1-ol; (3) reação de 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etan-1-ol como obtido na etapa (2) com cloreto de metilsulfonila e em seguida com NaN3 para obter 4-(2-azidoetil)-2- (4-clorofenil) tiazol; e (4) redução de 4-(2-azidoetil)-2-(4-clorofenil) tiazol conforme obtido na etapa (4) com trifenil fosfina para obter [2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida.

3. Processo para preparação de N-[2-[2-(4-clorofenil)-4-tiazolil] etil]- butanamida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (1) refluxo de 4-clorobenzotioamida com a adição de 3-bromo-2- oxopropanoato de etila para obter 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) acetato de etila; (2) redução de 2-(2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) acetato de etila como obtido na etapa (1) com a adição de solução de DIBAL-H para obter 2-(4-clorofenil) tiazol-4-

carbaldeído; (3) reação de 2-(4-clorofenil) tiazol-4-carbaldeído como obtido na etapa (2) foi então reagida com nitrometano, pirrolidina e ácido acético, respectivamente; (4) redução do 2-(4-clorofenil)-4-(2-nitrovinil) tiazol obtido da etapa (3) com Pd para obter-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etano-1-aminen; (5) reação de 2-(4-clorofenil) tiazol-4-il) etano-1-aminen como obtido na etapa (4) trietil amina e adicionalmente com cloreto de butirila para obter [2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida.

4. Formulação farmacêutica compreendendo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4- tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, caracterizada por ser como o composto ativo em que a resistência do dito composto ativo está na faixa de 0,1% a 90% junto com excipientes adequados em uma faixa aceitável.

5. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que a resistência do composto ativo ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, está, preferencialmente, na faixa de 0,1% a 20%, junto com excipientes adequados em uma faixa aceitável.

6. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por ser para aplicação tópica compreendendo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4- tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na faixa de 0,1 a 40% em peso, dissolvida em um solvente adicionado em uma quantidade na faixa de 8-25% em peso, junto com um agente gelificante em uma quantidade na faixa de 45- 65% em peso e um intensificador de permeação que está em uma quantidade na faixa de 10-25% em peso.

7. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por compreender opcionalmente um agente de endurecimento, agente emulsificante, agente de gelificação, umectante, conservante, antioxidante, agente quelante, tampão e um solvente adequado.

8. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o solvente é selecionado de um grupo consistindo em água purificada, hexileno glicol, propileno glicol, álcool oleílico e carbonato de propileno.

9. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o agente gelificante é selecionado a partir de um grupo consistindo em carbômero, metil celulose, carboxil metil celulose de sódio, carragenano, dióxido de silício coloidal, goma guar, hidroxipropil celulose, hidroxipropil metil celulose, gelatina, óxido de polietileno, ácido a1gínico e a1ginato de sódio.

10. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o intensificador de permeação é selecionado a partir de um grupo consistindo em propileno glicol, etanol, álcool isopropílico, ácido oléico e polietileno glicol.

11. Formulação compreendendo composto ativo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4- tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, caracterizada por ser para uso como um medicamento para o tratamento de doenças autoimunes de pele e distúrbios de pigmentação incluindo, mas não limitado a vitiligo, psoríase, dermatite atópica e eczema, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, pastoso, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite e alopecia areata.

12. Formulação compreendendo composto ativo N-[2-[2-(4-clorofenil)-4- tiazolil] etil]-butanamida, caracterizada por ser para uso como um medicamento para o tratamento de vitiligo.

13. Formulação, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por ser administrada por meio de administração oral, parenteral, tópica, transdérmica, intravenosa, retal, sublingual, nasal, retal e local.

14. Formulação, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por estar na forma de dosagem de uma solução, gel, unguento, creme, loção, spray ou espuma.

15. Método para tratamento de doenças autoimunes em um mamífero diagnosticado com a doença, o método caracterizado por compreender a etapa de administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de N-[2-[2-(4- clorofenil)-4-tiazolil] etil]-butanamida ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é identificado como estando em risco de desenvolver uma doença autoimune de pele incluindo, mas não limitada a vitiligo, psoríase, dermatite atópica e eczema, liquen-planus, escleroderma, pênfigo, pastoso, epidermólise bolosa, lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite e alopecia areata.

17. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma ou mais áreas de pele despigmentadas, e o composto é aplicado topicamente a pelo menos uma das áreas de pele despigmentadas.

18. Método para o tratamento de doenças autoimunes, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o tratamento inclui tratamentos profiláticos e terapêuticos.

19. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado tanto em combinação como de forma adjuntiva com um segundo tratamento terapêutico ou agente ativo.