BR112020017184A2 - Disruptores de dímero egfr e uso dos mesmos - Google Patents

Abstract

a presente invenção se refere a compostos que modulam egfr e métodos de uso dos mesmos, por exemplo, para tratar câncer.

Description

“DISRUPTORES DE DÍMERO EGFR E USO DOS MESMOS” ANTECEDENTES

[001] Os inibidores de tirosina quinase de pequenas moléculas de EGFR (TKI's) erlotinibe, gefitinibe e afatinibe têm sido mais bem- sucedidos como agentes únicos no tratamento de adenocarcinomas de pulmão que têm mutações somáticas (como L858R ou deleção no éxon 19, ou seja, E746-A750) que conferem sensibilidade a essa classe de medicamentos, que ocorre em 7 a 20% dos pacientes, dependendo da etnia e do sexo (19). Infelizmente, as respostas raramente duram mais de um ano porque praticamente todos os pacientes desenvolvem resistência à terapia (20). Um inibidor irreversível de terceira geração, osimertinibe (AZD9291), é eficaz no tratamento de pacientes virgens de tratamento e pacientes que adquiriram resistência aos TKIs de primeira ou segunda geração (7). No entanto, dentro de um ano de tratamento com osimertinibe, a maioria dos pacientes desenvolve outra mutação no domínio da quinase EGFR (C797S), que é o local de ligação do medicamento (12, 21, 22). Embora várias abordagens para direcionar o EGFR resistente ao osimertinibe tenham sido relatadas (12, 13, 23), até o momento nenhuma opção de tratamento com TKI existe para esses pacientes com esta mutação C797S. A quimioterapia é a única opção.

[002] Em vista do exposto, existe a necessidade de um agente terapêutico contra o câncer que tenha como alvo o EGFR de uma maneira diferente da inibição da atividade da tirosina quinase do EGFR. Também existe a necessidade de um agente terapêutico que trate o câncer sem desenvolver resistência aos medicamentos após o uso inicial.

SUMÁRIO

[003] São fornecidos neste documento compostos e métodos para modular EGFR. Mais particularmente, são fornecidos moduladores de EGFR e os usos de tais moduladores no tratamento ou prevenção de doenças ou distúrbios associados à atividade aberrante de EGFR,

por exemplo, câncer.

[004] Em um aspecto, a divulgação fornece compostos, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, de Fórmula I: (I), em que X é O-C0-6alquileno, S-C0-6alquileno ou NR3-C0- 6alquileno, e o dito alquileno é X é O-C0-6alquileno, S-C0-6alquileno ou NR3-C0- 6alquileno, e o dito alquileno é opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados a partir de halo, N(R3)2 e OR3; Y é C0- 6alquileno, e o dito alquileno é opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados a partir de halo, N(R3)2 e OR3; A é C6-10 arila ou heteroarila de 5 a 10 membros tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, e a dita arila ou heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R4; B é C6-10 arila, heteroarila de 5 a 10 membros tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, anel de cicloalquila de 3 a 8 membros, ou heteroarila de 3 a 12 membros tendo 1 a 3 anéis de heteroátomos selecionados a partir de O, S e N, e a dita arila, heteroarila, cicloalquila ou heterocicloalquila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5; R1 e R2 são, cada um independentemente, C1-6 alquila, ou R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel de cicloalquila ou heterocicloalquila de 4 a 8 membros, em que o anel de heterocicloalquila tem 1 ou 2 heteroátomos de anel selecionados a partir de O, S e N, e em que o dito anel de cicloalquila ou anel heterocicloalquila é opcionalmente substituído por 1 a 2 R6; cada R3 é independentemente H ou C1-6 alquila; cada R4 e R5 é independentemente C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo ou C1-6 alcóxi; e R6 é C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, (C=O)R3, (C=O)OR3, CON(R3)2, C0-3alquileno-C3-8cicloalquila, C0-3alquileno-C6-

10arila, ou C0-3alquileno-(heteroarila de 5 a 10 membros tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S), em que a arila ou heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5.

[005] Além disso, são fornecidos no presente documento métodos de uso dos compostos divulgados para modular o EGFR. Outros aspectos da divulgação incluem métodos de uso dos compostos divulgados para inibir a dimerização de EGFR e métodos de uso dos compostos divulgados para induzir a degradação de EGFR.

[006] Outros aspectos da divulgação incluem um composto conforme divulgado neste documento para uso na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença ou distúrbio associado à atividade aberrante de EGFR em um sujeito e o uso de um composto conforme divulgado neste documento em um método de tratamento ou a prevenção de uma doença ou distúrbio associado à atividade aberrante de EGFR em um sujeito.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[007] A Figura 1 mostra (esquerda) um tratamento com um pequeno peptídeo que inibe o tumor afetado pela dimerização do EGFR (marcado com *) específico mais comparado com o tecido normal adjacente; e (direita) um esquema para degradação de EGFR. EGFR é mostrado por um domínio extracelular conectado por uma porção transmembrana a um domínio quinase bilobular (pequena bolha = n-lóbulo, grande bolha = c-lóbulo) e uma cauda C-terminal flexível. A ligação de EGF promove a formação de dímero ativo (assimétrico) entre os domínios extracelulares e/ou entre os lóbulos n- e c- de dois monômeros. O EGFR em tal conformação permanece estável e induz a fosforilação da cauda C-terminal, que promove a progressão do tumor inibidores da Tirosina quinase (por exemplo, osimertinibe), inibem o recrutamento de ATP e promovem a dimerização inativa (simétrica) entre n-lóbulos de dois monômeros. EGFR nesta conformação permanece na conformação quinase- inativa, mas a estabilidade da proteína é mantida. A inativação da atividade do

EGFR se correlaciona com a inibição do crescimento do tumor. O ciclo entre o hélice C e 4-folhas do lóbulo c- e da hélice h do lóbulo n de EGFR participam na formação de dímero ativo induzida por EGF. Esse modelo assume que Disruptin ou Composto 8C se liga a essa bolsa e interfere na formação de dímero ativo induzida por EGF. O ligante e Composto 8C monômero de EGFR ligado se degrada rapidamente. A perda da proteína EGFR se correlaciona com a morte celular. A espessura da seta mostra o efeito do Composto 8C em células tumorais vs. células normais.

[008] A Figura 2 mostra (A) um diagrama esquemático de um dímero ativo assimétrico de EGFR. Um monômero ligado a EGF de EGFR é suficiente para induzir a dimerização. Um modelo de Disruptin ligado ao lóbulo c de EGFR (Código PDB: 2RFD) é mostrado na inserção e (B) interação hipotética entre o domínio de quinase EGFR purificado e Disruptin.

[009] A Figura 3 mostra (A) o efeito do tratamento com Disruptin na dimerização induzida por EGF em células NCI-H1975; (B) o efeito de Disruptin em seu EGFR alvo em xenoenxertos NCI-H1975; (C) a eficácia de Disruptin in vivo; e (D) o efeito a longo prazo do tratamento na histologia do tumor, expressão de EGFR e índice mitótico (medido pela pontuação do Ki-67).

[0010] A Figura 4 mostra (A) o processo de pré-seleção de compostos de chumbo e as estruturas de dois compostos de pré-chumbo, C95 e C67; (B) o SAR resultante combinado com a estabilidade microssomal (mostrada na caixa azul), bem como a estrutura da molécula mais seletivamente eficaz, denominada Composto 8C; (C) o efeito de duas pré-derivações e Composto 8C na dimerização de EGFR estimulada por EGF em uma linha celular de câncer de pulmão NCI-H1975 resistente a erlotinib conforme descrito na Figura 3A (lisados foram preparados e imunotransferidos com anticorpos anti- EGFR); e (D) o efeito de três moléculas principais selecionadas (1 µM) na proteína EGFR de estado estacionário conforme avaliado em 24 horas pós- tratamento.

[0011] A Figura 5 mostra (A) o Composto 8C que compete com Disruptin pela ligação de EGFR; (B) o efeito do Composto 8C na estabilidade térmica do EGFR purificado, conforme confirmado pelo ensaio de estabilidade térmica; e (C) o efeito da concentração do Composto 8C na estabilidade térmica de EGFR a 44 C na presença de 0 a 10 µM de Composto 8C.

[0012] A Figura 6 mostra o (A) efeito do Composto 8C na estabilidade térmica do EGFR em um lisado de célula inteira de células Ba/F3- AZD. (B) a potência do Composto 8C conforme determinado contra células Ba/F3 resistentes a osimertinibe que expressam mutações EGFR específicas; (C) o efeito do Composto 8C na dimerização de EGFR induzida por EGF, conforme descrito na Figura 3A; (C-D). Efeito do tratamento com Composto 8C no dímero induzido por EGFR e no nível de proteína EGFR; (E) valores de IC50 em resposta ao erlotinibe, osimertinib e Composto 8C conforme tabelado a partir de duas linhas de células Ba/F3 resistentes a osimertinibe.

[0013] A Figura 7 mostra (A) a especificidade e potência do Composto 8C determinada contra um painel de células resistentes ao osimertinibe e comparada com fibroblastos pulmonares normais (MRC5) usando o ensaio de sobrevivência clonogênica; (B) o efeito da concentração do Composto 8C na dimerização de EGFR induzida por EGF em células PC9 resistentes ao osimertinibe, conforme descrito na Figura 6; (C) o efeito do tratamento com Composto 8C no dímero induzido por EGFR e no nível de proteína EGFR em células PC9-AZR.

[0014] A Figura 8 mostra (A) a farmacocinética de uma única dose de 100 mg/kg de Composto 8C administrado por via intraperitoneal em camundongos nus portadores de xenoenxertos de tumor NCI-H1975 humano (> 150 mm3); e (B) a farmacocinética de uma única dose de 100 mg/kg de Composto 8C administrado por gavagem oral em camundongos nus com xenoenxertos de tumor NCI-H1975 humano (> 150 mm3).

[0015] A Figura 9 mostra (A) a bioluminescência basal e o efeito do composto pré-chumbo 95 em diferentes pontos de tempo em camundongos com xenoenxerto NCI-H1975; e (B) a mudança quantificada e plotada em bioluminescência.

[0016] A Figura 10 mostra a mudança no volume médio do tumor com o tempo de camundongos nus portadores de UMSCC74B, um modelo de tumor da cabeça e pescoço (aproximadamente 100 mm2) e tratados com o Composto 8C (30 mg/kg, diariamente durante uma semana) ou com veículo (DMSO a 5% em PBS). Cada grupo tinha pelo menos 5 camundongos. O volume do tumor e o peso corporal foram registrados de 3 a 4 vezes por semana e são plotados. A perda média de peso corporal durante o tratamento foi inferior a 10%. A barra de erro representa o erro padrão da média.

[0017] A Figura 11 mostra o efeito do Composto 8C em um modelo de tumor resistente ao osimertinibe. Camundongos nus com tumor de ascite Ba/F3 resistente ao osimertinibe foram tratados com carreadores, osimertinibe ou Composto 8C. O efeito do tratamento em EGFR, pEGFR e outras moléculas foi determinado por imunotransferência.

[0018] A Figura 12 mostra a avaliação patológica de PDXs de pulmão em FFPE em um tumor primário, 1o e 2o xenoenxerto de UMLCA7 e análise da expressão da proteína EGFR usando IHC em dois outros PDXs. Observe a expressão abundante de EGFR no carcinoma de células escamosas (UMLT16), mas não na amostra PDX de carcinoma de células grandes (UMLT14) (20X).

[0019] A Figura 13 mostra que o tratamento de um modelo de câncer pancreático de camundongo com o Composto 8C mostrou propensão significativamente reduzida para o desenvolvimento de PanIn (Neoplasia Intraepitelial Pancreática), um tipo de lesão do ducto pancreático. A- o exame histológico do tecido pancreático mostra significativamente menos envolvimento da lesão em camundongos tratados em comparação com um controle, que é quantificado em B.

[0020] A Figura 14 mostra que as xenografias de camundongo com o modelo de tumor de cabeça e pescoço UMSCC74B, tratado com Composto 8C, exibiram tumores significativamente menores em comparação com camundongos de controle que receberam carreadores de tratamento ou cetuximabe.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0021] Embora a inibição das atividades quinase de proteínas oncogênicas usando pequenas moléculas e anticorpos tenha sido um dos pilares dos esforços de desenvolvimento de drogas anticâncer, resultando em várias terapias contra o câncer aprovadas pela FDA, a eficácia clínica dos agentes direcionados à quinase tem sido inconsistente (22, 24). Foi demonstrado que o EGFR exibe funções de suporte, além de sua atividade tirosina quinase (24-36). Isso é demonstrado pela expressão de um mutante de quinase inativa (KD) de EGFR (por exemplo, K745A, V741G e Y740F) ou pela expressão de ErbB3 (que não tem atividade de quinase) em células Ba/F3 que não expressam esses receptores (37-39). A expressão desses mutantes com defeito na quinase promove a sobrevivência celular, indicando que esses receptores ainda podem transmitir um sinal de sobrevivência talvez pela formação de dímeros, sugerindo que o EGFR tem funções além da atividade da quinase (39).

[0022] Dímeros de EGFR são conhecidos por serem relativamente estáveis quando comparados aos monômeros (40). Os dímeros são capazes de gerar sinalização mitogênica a jusante (41). Sem estar limitado pela teoria, é hipotetizado que o bloqueio da dimerização do EGFR aceleraria a degradação do EGFR e que esta abordagem seria eficaz contra tumores que são impulsionados por EGFR resistente a TKI (14, 24, 27). Resumidamente, foi demonstrado que a estabilidade da proteína EGF ligada a EGF (que é EGFR fosforilado, prevalente na maioria dos tumores) é regulada pela formação de dímeros através de um segmento dentro do domínio quinase de EGFR que se encontra entre a hélice αC e folhas β4 do lóbulo c e hélice h do lóbulo n do domínio da quinase EGFR (15, 42). A estabilidade da proteína EGFR em células normais não é regulada primariamente por essa interface de dímero porque, na ausência de EGF, EGFR não forma um dímero assimétrico (43). Essa diferença entre células tumorais e normais fornece uma nova interação alvo proteína- proteína.

[0023] Para testar essa ideia, foram gerados mais de uma dúzia de peptídeos que imitam essa superfície de ligação. O peptídeo mais eficaz, contendo os seis aminoácidos da alça αC-β4 do EGFR, foi denominado Disruptin (17). Disruptin é capaz de inibir a dimerização de EGFR induzida por EGF. Este peptídeo se liga diretamente ao EGFR, e esta ligação não é afetada significativamente com lavagens repetidas de HEPES em comparação com um peptídeo de controle (embaralhado). Embora Disruptin seja eficaz em um modelo de xenoenxerto de pulmão resistente a um inibidor da tirosina quinase (TKI) (14), a entrega de peptídeos em seres humanos continua sendo um desafio (44).

[0024] São fornecidos no presente documento compostos que modulam EGFR, por exemplo, compostos que bloqueiam a dimerização de EGFR, induzem a degradação de EGFR e exterminam células conduzidas por EGFR. Estes compostos são úteis na prevenção ou tratamento de uma variedade de doenças e distúrbios, por exemplo, no tratamento de câncer.

[0025] Como tal, são fornecidos no presente documento compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, que têm a estrutura de Fórmula I: (I), em que X é O-C0-6alquileno, S-C0-6alquileno ou NR3-C0-6alquileno, e o dito alquileno é opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados a partir de halo, N(R3)2 e OR3; Y é C0-6alquileno, e o dito alquileno é opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados a partir de halo, N(R3)2 e OR3; A é C6-10 arila ou heteroarila de 5 a 10 membros que tem 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S e a dita arila ou heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R4; B é C6-10 arila, heteroarila de 5 a 10 membros que tem 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, anel de cicloalquila de 3 a 8 membros ou heterocicloalquila de 3 a 12 membros que tem 1 a 3 heteroátomos de anel selecionados a partir de O, S e N, e a dita arila, heteroarila, cicloalquila ou heterocicloalquila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5; R1 e R2 são, cada um independentemente, C1-6 alquila ou R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual os mesmos são ligados formam um anel de cicloalquila ou heterocicloalquila de 4 a 8 membros, em que o anel de heterocicloalquila tem 1 ou 2 heteroátomos de anel selecionados a partir de O, S e N, e em que o dito anel de cicloalquila ou anel de heterocicloalquila é opcionalmente substituída por 1 a 2 R6; cada R3 é, independentemente, H ou C1-6 alquila; cada R4 e R5 são, independentemente, C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo ou C1-6 alcóxi; e R6 é C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, (C=O)R3, (C=O)OR3, CON(R3)2, C0-3alquileno-C3-8cicloalquila, C0-3alquileno-C6-10arila ou C0- 3alquileno-(heteroarila de 5 a 10 membros que tem 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S), em que a arila ou a heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5.

[0026] Em várias modalidades, R1 e R2 são, cada um independentemente, C1-6 alquila. Em algumas modalidades, R1 e R2 são, cada um, metila.

[0027] Em várias modalidades, R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel de cicloalquila ou heterocicloalquila de 4 a 8 membros. Em algumas modalidades, R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel de cicloalquila ou heterocicloalquila de 5 ou 6 membros. Em algumas modalidades, R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel ciclohexila.

[0028] Em várias modalidades, R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel de heterocicloalquila com a estrutura: , em que * indica o ponto de ligação ao resto do composto de Fórmula I. Em algumas modalidades, R6 é C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, (C=O)R3, (C=O)OR3, CON(R3)2, C0-3alquileno-C3-8cicloalquila, C0-3alquileno-C6- 10arila ou C0-3alquileno-(heteroarila de 5 a 10 membros tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S), em que a arila ou heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5. Em algumas modalidades, R6 é C1-6 alquila, (C=O)R3, (C=O)OR3 ou CON(R3)2. Em algumas modalidades, R6 é C1-6 alquila. Em algumas modalidades, R6 é metila, etila, propila, isopropila, isobutila ou isopentila. Em algumas modalidades, R6 é metila. Em algumas modalidades, R6 é deuterado. Em algumas modalidades, R6 é C1-6 haloalquila. Em algumas modalidades, R6 é 3,3,3-trifluoropropila. Em algumas modalidades, R6 é C0-3 alquileno-C3-8 cicloalquila. Em algumas modalidades, R6 é ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila. Em algumas modalidades, R6 é ciclobutila ou ciclopentila. Em algumas modalidades, R6 é C0-3 alquileno-C6-10 arila. Em algumas modalidades, R6 é benzila. Em algumas modalidades, R6 é C0-3 alquileno-(heteroarila de 5 a 10 membros tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S), em que a heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5. Em algumas modalidades, R6 é C1 alquileno-(heteroarila de 5 a 10 membros tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S), em que a heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5. Em algumas modalidades, R6 é C0-3 alquileno-(heteroarila com 5 a 10 membros tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S), em que a heteroarila é substituída por 1 a 3 R5. Em algumas modalidades, R6 é C0-3 alquileno-(heteroarila de 5 a 10 membros tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S), em que a heteroarila é não substituída. Em algumas modalidades, R6 é .

[0029] Em várias modalidades, A é C6-10 arila. Em algumas modalidades, A é fenila.

[0030] Em várias modalidades, B é C6-10 arila. Em algumas modalidades, B é fenila. Em várias modalidades, B é heteroarila de 5 a 10 membros com 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S. Em algumas modalidades, B é piridinila. Em algumas modalidades, B é quinolinila. Em várias modalidades, B é cicloalquila de 3 a 8 membros. Em algumas modalidades, B é cicloalquila de 5 ou 6 membros. Em várias modalidades, B é heterocicloalquila de 3 a 12 membros com 1 a 3 heteroátomos de anel selecionados a partir de O, S e N.

[0031] Em algumas modalidades, A é substituído por um R4. Em algumas modalidades, A tem a estrutura: . Em algumas modalidades, A é substituído por dois R4. Em algumas modalidades, pelo menos um R4 é C1-6 alquila. Em algumas modalidades, pelo menos um R4 é metila. Em algumas modalidades, pelo menos um R4 é halo. Em algumas modalidades, R4 é bromo. Em algumas modalidades, pelo menos um R4 é C1-6 alcóxi. Em algumas modalidades, pelo menos um R4 é metóxi.

[0032] Em algumas modalidades, B é substituído por um R5. Em algumas modalidades, B é substituído por dois R5. Em algumas modalidades, B tem a estrutura . Em algumas modalidades, pelo menos um R5 é halo. Em algumas modalidades, pelo menos um R5 é flúor ou cloro. Em algumas modalidades, um R5 é flúor e o outro R5 é cloro. Em algumas modalidades, pelo menos um R5 é C1-6 alcóxi. Em algumas modalidades, pelo menos um R5 é metóxi. Em algumas modalidades, um R5 é halo e o outro R5 é C1-6 alcóxi. Em algumas modalidades, um R5 é cloro e o outro R5 é metóxi.

[0033] Em algumas modalidades, cada R4 e R5 são independentemente C1-6 alquila, halo ou C1-6 alcóxi. Em algumas modalidades, R6 é C1-6 alquila, (C=O)R3, (C=O)OR3 ou CON(R3)2.

[0034] Em várias modalidades, X é alquileno O-C0-6 ou alquileno S-C0-6. Em algumas modalidades, X é alquileno S-C0-6. Em algumas modalidades, X é O, S, O-CH2- ou S-CH2-. Em várias modalidades, Y é alquileno C0-2. Em algumas modalidades, Y é nulo ou CH2. Em algumas modalidades, X é NR3-CH2, O-CH2- ou S-CH2-, e Y é nulo. Em algumas modalidades, X é NR3- CH2, O-CH2- ou S-CH2-, e Y é CH2. Em algumas modalidades, R3 é H.

[0035] Os compostos específicos contemplados incluem aqueles listados na Tabela 1, Tabela 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: TABELA 1 ID # ESTRUTURA ID # ESTRUTURA 13 14

ID # ESTRUTURA ID # ESTRUTURA

15 21

16

22

17

23 18

24 19

25 20

ID # ESTRUTURA ID # ESTRUTURA

26 8B

27 8C

28 8D

29 8E

8A 8F

ID # ESTRUTURA ID # ESTRUTURA

8G 31

32 10

3 11

4 12

5

30

TABELA 2 ID# Estrutura ID# Estrutura 33a 33b 33c 33d 33e 33f 33g 33h

N N N N O NH

S Br

ID# Estrutura ID# Estrutura 33i 33j

33k 33l

34a 34b

34c 34d

34e 34f

ID# Estrutura ID# Estrutura 35a 35b 35c 35d

N N N N O NH S

F Cl 35e 35f 35g 35h 35i

[0036] Em alguns casos, o composto é um composto listado na Tabela 1, ou um sal do mesmo.

[0037] O composto 8C mostrou uma melhora significativa nas propriedades farmacológicas, bem como na atividade biológica (meia-vida microssomal durante 46 minutos, IC50 submicromolar no ensaio celular clonogênico). O composto 8C inibe a dimerização de EGFR induzida por EGF, liga-se diretamente ao EGFR purificado e é seletivamente ativo em linhas de células resistentes a osimertinibe dirigidas por EGFR e em modelos de xenoenxerto.

DEFINIÇÕES

[0038] Conforme usado no presente documento, "alquila" se refere a grupos hidrocarbonetos saturados de cadeia linear e ramificada que contêm um a trinta átomos de carbono, por exemplo, um a vinte átomos de carbono ou um a dez átomos de carbono. O termo Cn significa que o grupo alquila tem “n” átomos de carbono. Por exemplo, C4 alquila se refere a um grupo alquila que tem 4 átomos de carbono. C1-C7 alquila se refere a um grupo alquila que tem um número de átomos de carbono abrangendo toda faixa (por exemplo, 1 a 7 átomos de carbono), bem como todos os subgrupos (por exemplo, 1 a 6, 2 a 7, 1 a 5, 3 a 6, 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7 átomos de carbono). Os exemplos não limitativos de grupos alquila incluem metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, sec-butila (2-metilpropila), t-butila (1,1-dimetiletila), 3,3- dimetilpentila e 2-etil-hexila. Salvo quando indicado de outro modo, um grupo alquila pode ser um grupo alquila não substituído ou um grupo alquila substituído.

[0039] O termo "alquileno" utilizado no presente documento se refere a um grupo alquila tendo um substituinte. Por exemplo, o termo "alquileno- halo" se refere a um grupo alquila substituído por um grupo halo. Por exemplo, um grupo alquileno pode ser -CH2CH2- ou -CH2-. O termo Cn significa que o grupo alquileno tem “n” átomos de carbono. Por exemplo, C1-6 alquileno se refere a um grupo alquileno tendo um número de átomos de carbono abrangendo toda a faixa, bem como todos os subgrupos, conforme descrito anteriormente para grupos "alquila". Salvo indicação ao contrário, um grupo alquileno pode ser um grupo alquileno não substituído ou um grupo alquileno substituído.

[0040] Conforme usado neste documento, o termo "cicloalquila" se refere a um grupo hidrocarboneto cíclico alifático contendo três a oito átomos de carbono (por exemplo, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 átomos de carbono). O termo Cn significa que o grupo cicloalquila tem “n” átomos de carbono. Por exemplo, cicloalquila C5 se refere a um grupo cicloalquila que tem 5 átomos de carbono no anel. Cicloalquila C6-C8 se refere a grupos cicloalquila com um número de átomos de carbono abrangendo toda a faixa (por exemplo, 6 a 8 átomos de carbono), bem como todos os subgrupos (por exemplo, 6 a 7, 7 a 8, 6, 7, e 8 átomos de carbono). Exemplos não limitativos de grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila e ciclooctila. A menos que indicado de outra forma, um grupo cicloalquila pode ser um grupo cicloalquila não substituído ou um grupo cicloalquila substituído. Os grupos cicloalquila descritos no presente documento podem ser isolados ou fundidos a outro grupo cicloalquila, um grupo heterocicloalquila, um grupo arila e/ou um grupo heteroarila. Quando um grupo cicloalquila é fundido a outro grupo cicloalquila, então cada um dos grupos cicloalquila pode conter três a oito átomos de carbono, a menos que especificado de outra forma. Salvo indicação em contrário, um grupo cicloalquila pode ser não substituído ou substituído.

[0041] Conforme usado neste documento, o termo "heterocicloalquila" é definido de forma semelhante a cicloalquila, exceto que o anel contém um a três heteroátomos selecionados independentemente a partir de oxigênio, nitrogênio e enxofre. Em particular, o termo “heterocicloalquila" se refere a um anel contendo um total de três a doze átomos (por exemplo, 3 a 8, 5 a 8, 3 a 6, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12), dos quais 1, 2 ou 3 dos átomos do anel são heteroátomos independentemente selecionados do grupo que consiste em oxigênio, nitrogênio e enxofre, e os átomos restantes no anel são átomos de carbono. Exemplos não limitativos de grupos heterocicloalquila incluem piperdina, pirazolidina, tetra- hidrofurano, tetra-hidropirano, di-hidrofurano, morfolina e semelhantes.

[0042] Os grupos cicloalquila e heterocicloalquila podem ser sistemas de anéis saturados ou parcialmente insaturados opcionalmente substituídos por, por exemplo, um a três grupos, alquila, alquileno OH, C(O)NH2, NH2, oxo(=O), arila, alquilenohalo, halo e OH. Grupos heterocicloalquila opcionalmente podem ser ainda N-substituídos por alquila (por exemplo, metila ou etila), alquileno-OH, alquilenearila e alquileno-heteroarila. Os grupos heterocicloalquila descritos neste documento podem ser isolados ou fundidos a outro grupo heterocicloalquila, um grupo cicloalquila, um grupo arila e/ou um grupo heteroarila. Quando um grupo heterocicloalquila é fundido a outro grupo heterocicloalquila, então cada um dos grupos heterocicloalquila pode conter três a doze átomos no anel total e um a três heteroátomos. Salvo indicação em contrário, um grupo heterocicloalquila pode ser não substituído ou substituído.

[0043] Conforme usado neste documento, o termo "arila" se refere a um grupo aromático monocíclico ou bicíclico, com 6 a 10 átomos no anel. A menos que indicado de outra forma, um grupo arila pode ser não substituído ou substituído por um ou mais e, em particular, um a quatro grupos independentemente selecionados a partir de, por exemplo, halo, alquila, alquenila, OCF3, NO2, CN, NC, OH, alcóxi, amino, CO2H, CO2alquila, arila e heteroarila. Os grupos arila podem ser isolados (por exemplo, fenila) ou fundidos a outro grupo arila (por exemplo, naftila, antracenila), um grupo cicloalquila (por exemplo, tetraidronaftila), um grupo heterocicloalquila e/ou um grupo heteroarila.

[0044] Tal como utilizado no presente documento, o termo "heteroarila" se refere a um anel aromático monocíclico ou bicíclico com 5 a 10 átomos no anel total e contendo um a quatro heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio e átomo de enxofre no anel aromático. A menos que indicado de outra forma, um grupo heteroarila pode ser não substituído ou substituído por um ou mais, e em particular um a quatro, substituintes selecionados a partir de, por exemplo, halo, alquila, alquenila, OCF3, NO2, CN, NC, OH, alcóxi, amino, CO2H, CO2 alquila, arila e heteroarila. Em alguns casos, o grupo heteroarila é substituído por um ou mais grupos alquila e alcóxi. Exemplos de grupos heteroarila incluem, porém sem limitação, tienila, furila, piridila, pirrolila, oxazolila, triazinila, triazolila, isotiazolila, isoxazolila, imidazolila, pirazinila, pirimidinila, tiazolila e tiadiazolila.

[0045] Conforme usado neste documento, o termo "alcóxi" ou “alcoxila", conforme usado neste documento, se refere a um grupo "-O-alquila". O grupo alcoxi ou alcoxila pode ser não substituído ou substituído.

[0046] Tal como utilizado no presente documento, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade de um composto ou combinação de compostos terapeuticamente ativos que melhora, atenua ou elimina um ou mais sintomas de uma doença ou condição específica (por exemplo, câncer), ou previne ou retarda o início de um ou mais sintomas de uma doença ou condição específica.

[0047] Conforme usado neste documento, os termos "paciente" e "sujeito" podem ser usados indistintamente e significam animais, como cães, gatos, vacas, cavalos e ovelhas (por exemplo, animais não humanos) e seres humanos. Pacientes ou sujeitos específicos são mamíferos (por exemplo, seres humanos).

[0048] Conforme usado neste documento, o termo "farmaceuticamente aceitável" significa que a substância referenciada, tal como um composto da presente divulgação, ou uma formulação contendo o composto, ou um excipiente específico, é segura e adequada para administração a um paciente ou sujeito. O termo "excipiente farmaceuticamente aceitável" se refere a um meio que não interfere com a eficácia da atividade biológica do ingrediente (ou ingredientes) ativo e não é tóxico para o hospedeiro ao qual é administrado.

[0049] Os compostos divulgados no presente documento podem ser como um sal farmaceuticamente aceitável. Como utilizado no presente documento, o termo “sal farmaceuticamente aceitável” se refere a sais de um composto que são, dentro do escopo de um julgamento médico saudável, adequados para uso em contato com os tecidos de humanos e animais inferiores sem efeitos colaterais indevidos, tal como toxicidade, irritação, resposta alérgica e similares e são proporcionais a uma razão benefício/risco razoável. Sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, S. M. Berge et al. descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhes em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1 a 19, incorporado ao presente documento a título de referência. Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção incluem os derivados de bases e ácidos inorgâncos e orgânicos adequados. Exemplos de sais de adição de ácido não tóxico farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo amino formado com ácidos inorgânicos, como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos, como ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou usando outros métodos usados na técnica, tais como troca iônica. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforossulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, glicerossulfonato, glucoafosfato de glucocerissulfonato, glicerossulfonato, glucocerissulfonato, glucocerissulfonato, glucocerissulfonato, heptanoato, hexanoato, hidroiodeto, 2-hidroxi-etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persultato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p-toluenossulfonato, undecanoato, sais de valerato e semelhantes. Sais de compostos contendo um ácido carboxílico ou outro grupo funcional ácido podem ser preparados por reação com uma base adequada. Tais sais incluem, porém sem limitação, metal alcalino, metal alcalino-terroso, sais de alumínio, amônio, sais N+(C1-4alquila)4 e sais de bases orgânicas, como trimetilamina, trietilamina, morfolina, piridina, piperidina, picolina, diciclohexilamina, N,N'-dibenziletilenodiamina, 2-hidroxietilamina, bis-(2-

hidroxietil)amina, tri-(2-hidroxietil)amina, procaína, dibenzilpiperidina, desidroabietilamina, N,N'-bis-desidroabietilamina, glucamina, N-metilglucamina, colidina, quinina, quinolina e aminoácidos básicos como lisina e arginina. Esta invenção também prevê a quaternização de quaisquer grupos contendo nitrogênio básicos dos compostos divulgados no presente documento. Produtos solúveis ou dispersíveis em água ou óleo ou podem ser obtidos por essa quaternização. Sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos representativos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio e semelhantes. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, quando apropriado, cátions de amônio, amônio quaternário e amina não tóxicos formados utilizando contraíons, tal como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquila sulfonato inferior e arila sulfonato.

[0050] Conforme usado neste documento, os termos "tratando", "tratar" ou "tratamento" e semelhantes incluem o tratamento preventivo (por exemplo, profilático) e paliativo.

[0051] Conforme usado neste documento, o termo "excipiente" significa qualquer aditivo, carreador, diluente, adjuvante ou outro ingrediente farmaceuticamente aceitável, diferente do ingrediente farmacêutico ativo (API).

SÍNTESE DE COMPOSTOS DA DIVULGAÇÃO

[0052] Os compostos divulgados neste documento podem ser preparados de uma variedade de maneiras usando materiais de partida disponíveis comercialmente, compostos conhecidos na literatura ou a partir de intermediários prontamente preparados, empregando métodos sintéticos padrão e procedimentos conhecidos pelos versados na técnica, ou à luz dos ensinamentos no presente documento. A síntese dos compostos divulgados neste documento pode ser alcançada geralmente seguindo os esquemas sintéticos conforme descrito na seção de Exemplos, com modificação para substituintes desejados específicos.

[0053] Os métodos e procedimentos sintéticos convencionais para a preparação de moléculas orgânicas e transformações de grupo funcional e manipulações podem ser obtidos prontamente a partir da literatura científica relevante ou de livros didáticos padrão no campo. Embora não se limitando a qualquer uma ou várias fontes, textos clássicos, como Smith, MB, março, J., March' s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5ª edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 2001; e Greene, TW, Wuts, PGM, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ª edição, John Wiley & Sons: New York, 1999, são manuais de referência úteis e reconhecidos de síntese orgânica conhecidos pelos especialistas na técnica. As seguintes descrições de métodos sintéticos são projetadas para ilustrar, mas não para limitar, os procedimentos gerais para a preparação de compostos da presente divulgação.

[0054] Os processos sintéticos divulgados no presente documento podem tolerar uma ampla variedade de grupos funcionais; portanto, vários materiais de partida substituídos podem ser usados. Os processos geralmente fornecem o composto final desejado ou próximo ao final do processo geral, embora possa ser desejável em certos casos converter ainda mais o composto em um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0055] Em geral, os compostos de Fórmula (I) podem ser sintetizados de acordo com o Esquema 1. ESQUEMA 1

[0056] Os compostos com estrutura c podem ser sintetizados usando o procedimento mostrado no Esquema 1. A reação de um derivado de 2,5-di- hidroimidazol substituído a com um composto de amida b em um solvente apropriado, por exemplo, acetonitrila, produz compostos como descrito no presente documento, isto é, compostos de Fórmula (I) tendo a estrutura c. O composto amida b compreende um grupo de saída LG adequado escolhido com base na natureza do grupo Q, por exemplo, um halogênio ou tosilato. Outras reações de derivatização apropriadas de compostos com estrutura c podem ser selecionadas com base na natureza dos substituintes R1, R2, A, Y e B.

[0057] O acoplamento dos compostos a e b pode ser catalisado por reagentes apropriados selecionados com base na natureza precisa dos compostos a e b. Por exemplo, quando o LG do composto b é um halogênio (por exemplo, quando LG é cloro), o acoplamento dos compostos a e b pode ser catalisado por uma base, por exemplo, carbonato de sódio ou carbonato de potássio.

Ocasionalmente, a reação de acoplamento pode não exigir um catalisador.

[0058] Ocasionalmente, antes do acoplamento com um composto tendo a estrutura b, um composto a tendo Q selecionado a partir de O, S e NR3 pode ser transformado em um composto tendo Q selecionado a partir de um membro diferente do grupo que consiste em O, S e NR3 por tratamento com um reagente apropriado. Por exemplo, um composto que tem uma estrutura a com Q = O pode ser transformado em um composto que tem uma estrutura a com Q = S por tratamento com um reagente de tiação, por exemplo, reagente de Lawesson ou pentassulfeto de fósforo. Tal composto pode então ser acoplado a um composto com a estrutura b para produzir um composto descrito no presente documento, isto é, um composto de Fórmula (I) com a estrutura c.

[0059] Compostos de a e b podem ser adquiridos comercialmente ou preparados por uma variedade de métodos a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis. Por exemplo, os compostos de amida com estrutura b podem ser preparados pela reação de, por exemplo, um cloreto de acila com uma amina.

[0060] Outras reações de derivatização para transformar compostos com estrutura c em outros compostos divulgados neste documento podem ser selecionadas com base na natureza dos substituintes R1, R2, A, Y e B no composto c e na funcionalidade desejada no composto derivado. Por exemplo, R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados podem formar um anel de heterociclagem, por exemplo, um anel de piperidina, que pode ser ainda derivatizado por métodos conhecidos na técnica (por exemplo, metilação, adição de grupos de proteção, etc.) para formar uma variedade de outros compostos de Fórmula (I) descritos no presente documento. FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS, DOSAGEM E VIAS DE

ADMINISTRAÇÃO

[0061] Além disso, são fornecidas formulações farmacêuticas compreendendo um composto como descrito no presente documento (por exemplo, compostos de Fórmula I, ou sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos) e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0062] Os compostos descritos no presente documento podem ser administrados a um sujeito em uma quantidade terapeuticamente eficaz (por exemplo, em uma quantidade suficiente para prevenir ou aliviar os sintomas de uma doença ou distúrbio associado a EGFR aberrante). Os compostos podem ser administrados sozinhos ou como parte de uma composição ou formulação farmaceuticamente aceitável. Além disso, os compostos podem ser administrados todos de uma vez, várias vezes, ou administrados de maneira substancialmente uniforme ao longo de um período de tempo. É também notado que a dose do composto pode variar ao longo do tempo.

[0063] Um regime de administração particular para um sujeito particular dependerá, em parte, do composto, da quantidade de composto administrado, da via de administração e da causa e extensão de quaisquer efeitos colaterais. A quantidade de composto administrado a um sujeito (por exemplo, um mamífero, como um ser humano) de acordo com a divulgação deve ser suficiente para efetuar a resposta desejada em um período de tempo razoável. A dosagem normalmente depende da via, do tempo e da frequência de administração. Consequentemente, o clínico titula a dosagem e modifica a via de administração para obter o efeito terapêutico ideal, e as técnicas convencionais de determinação de limites são conhecidas por aqueles versados na técnica.

[0064] A título meramente ilustrativo, o método compreende a administração, por exemplo, de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg de um composto conforme divulgado no presente documento, dependendo dos fatores mencionados acima. Em outras modalidades, a dosagem varia de 1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg; ou 5 mg/kg até cerca de 100 mg/kg; ou 10 mg/kg até cerca de 100 mg/kg. Algumas condições requerem tratamento prolongado, o que pode ou não implicar a administração de doses mais baixas do composto em administrações múltiplas. Se desejado, uma dose do composto é administrada como duas, três, quatro, cinco, seis ou mais subdoses administradas separadamente em intervalos apropriados ao longo do dia, opcionalmente, em formas de dosagem unitária. O período de tratamento dependerá da condição específica e pode durar de um dia a vários meses.

[0065] Métodos adequados de administração de uma composição fisiologicamente aceitável, tal como uma composição farmacêutica compreendendo os compostos divulgados no presente documento (por exemplo, compostos de Fórmula (I)), são bem conhecidos na técnica. Embora mais de uma via possa ser usada para administrar um composto, uma via particular pode fornecer uma reação mais imediata e mais eficaz do que outra via. Dependendo das circunstâncias, uma composição farmacêutica compreendendo o composto é aplicada ou instilada nas cavidades corporais, absorvida através da pele ou membranas mucosas, ingerida, inalada e/ou introduzida na circulação. Por exemplo, em certas circunstâncias, será desejável administrar uma composição farmacêutica compreendendo o agente por via oral, por meio de injeção ou por um dos seguintes meios: intravenoso, intraperitoneal, intracerebral (intra-parenquimatoso), intracerebroventricular, intramuscular, intra-ocular, intra-arterial, intraportal, intralesional, intramedular, intratecal, intraventricular, transdérmico, subcutâneo, intraperitoneal, intranasal, enteral, tópico, sublingual, uretral, vaginal ou retal. O composto pode ser administrado por sistemas de liberação sustentada ou por dispositivos de implantação.

[0066] Para facilitar a administração, o composto é, em vários aspectos, formulado em uma composição fisiologicamente aceitável compreendendo um carreador (por exemplo, veículo, adjuvante ou diluente). O carreador particular utilizado é limitado apenas por considerações físico-químicas, como solubilidade e falta de reatividade com o composto, e pela via de administração. Carreadores fisiologicamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. As formas farmacêuticas ilustrativas adequadas para uso injetável incluem soluções ou dispersões aquosas estéreis e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis (por exemplo, consultar patente no US 5.466.468). As formulações injetáveis são ainda descritas em, por exemplo, Pharmaceutics and Pharmacy Practice, JB Lippincott Co., Philadelphia. Pa., Banker e Chalmers, eds., páginas 238- 250 (1982), e ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4ª ed., páginas 622-630 (1986)). Uma composição farmacêutica compreendendo o composto é, em um aspecto, colocada dentro de recipientes, juntamente com o material de embalagem que fornece instruções sobre o uso de tais composições farmacêuticas. Geralmente, tais instruções incluem uma expressão tangível que descreve a concentração do reagente, bem como, em certas modalidades, quantidades relativas de ingredientes excipientes ou diluentes (por exemplo, água, solução salina ou PBS) que podem ser necessários para reconstituir a composição farmacêutica.

[0067] As composições adequadas para injeção parentérica podem compreender soluções aquosas ou não aquosas estéreis fisiologicamente aceitáveis, dispersões, suspensões ou emulsões e pós estéreis para reconstituição em soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Exemplos de carreadores, diluentes, solventes ou veículos aquosos e não aquosos adequados incluem água, etanol, polióis (propilenoglicol, polietilenoglicol, glicerol e semelhantes), misturas adequadas dos mesmos, óleos vegetais (como azeite) e ésteres orgânicos injetáveis tal como oleato de etila. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento, tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula exigido, no caso de uma dispersão, e pelo uso de tensoativos.

[0068] Essas composições também podem conter adjuvantes, tais como agentes conservantes, umectantes, emulsificantes e dispersantes. A contaminação por microrganismos pode ser evitada adicionando vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e semelhantes. Também pode ser desejável incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, cloreto de sódio e semelhantes. Uma absorção prolongada das composições injetáveis pode ser conseguida pela utilização de agentes que retardam a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.

[0069] Formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Em tais formas de dosagem sólidas, o composto ativo é misturado com pelo menos um excipiente inerte habitual (ou carreador), como citrato de sódio ou fosfato dicálcico ou (a) enchimentos ou extensores, como por exemplo, amidos, lactose, sacarose, manitol e ácido silícico; (b) ligantes, como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose e acácia; (c) humectantes, como, por exemplo, glicerol; (d) agentes desintegrantes, como, por exemplo, ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos complexos e carbonato de sódio; (a) retardadores de solução, como, por exemplo, parafina; (f) aceleradores de absorção, como, por exemplo, compostos de amônio quaternário; (g) agentes umectantes, como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol; (h) adsorventes, como, por exemplo, caulino e bentonita; e (i) lubrificantes, como, por exemplo, talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, laurilsulfato de sódio ou suas misturas. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem também podem compreender agentes tamponantes. Composições sólidas de um tipo semelhante também podem ser empregadas como enchimentos em cápsulas de gelatina mole e dura, usando excipientes tais como lactose ou açúcar de leite, bem como polietileno glicóis de alto peso molecular e similares.

[0070] As formas de dosagem sólidas de comprimidos, drageés, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e cascas, tal como revestimentos entéricos e outros revestimentos, bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. As formas de dosagem sólidas também podem conter agentes opacificantes. Além disso, as formas de dosagem sólidas podem ser composições de incorporação, de modo que elas liberem o composto ou compostos ativos em uma certa parte do trato intestinal de uma maneira retardada. Exemplos de composições de incorporação que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. Os compostos ativos também podem estar na forma microencapsulada com um ou mais excipientes, como observado acima.

[0071] As formas de dosagem líquidas para administração oral incluem, mas não estão limitadas a, emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Além dos compostos ativos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comumente usados na técnica, tal como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsificantes, tal como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3- butileno glicol, dimetilformamida, óleos, em particular, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, germe, azeitona, mamona e gergelim, glicerol, álcool tetra- hidrofurfurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácidos graxos de sorbitano e misturas dos mesmos.

[0072] Além de tais diluentes inertes, a composição também pode incluir adjuvantes, como agentes umectantes, agentes emulsificantes e suspensores, agentes adoçantes, aromatizantes e perfumantes. As suspensões, além do composto ativo, podem conter agentes de suspensão, como por exemplo, álcoois isoestearílicos etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, ágar-ágar e tragacanto, ou misturas dessas substâncias, e o mesmo.

[0073] Após a formulação, as soluções serão administradas de uma maneira compatível com a formulação de dosagem e em uma quantidade que seja terapeuticamente eficaz. As formulações são facilmente administradas em uma variedade de formas de dosagem, como soluções injetáveis, cápsulas de liberação de drogas e semelhantes. Para administração parenteral em uma solução aquosa, por exemplo, a solução deve ser adequadamente tamponada se necessário e o diluente líquido primeiro tornado isotônico com solução salina ou glicose suficiente. Estas soluções aquosas particulares são especialmente adequadas para administração intravenosa, intramuscular, subcutânea e intraperitoneal.

[0074] Em jurisdições que proíbem o patenteamento de métodos praticados no corpo humano, o significado de "administração" de uma composição a um sujeito humano deve ser restrito à prescrição de uma substância controlada que um sujeito humano irá se autoadministrar por qualquer técnica (por exemplo, por via oral, inalação, aplicação tópica, injeção, inserção, etc.). Pretende-se a interpretação mais ampla e razoável que seja consistente com as leis ou regulamentos que definem o assunto patenteável. Em jurisdições que não proíbem o patenteamento de métodos que são praticados no corpo humano, a “administração” de composições inclui tanto os métodos praticados no corpo humano quanto as atividades anteriores.

MÉTODOS DE USO

[0075] Os compostos descritos no presente documento podem modular o EGFR. Em algumas modalidades, os compostos inibem a dimerização de EGFR. Em várias modalidades, os compostos induzem degradação de EGFR.

[0076] Embora o EGFR tenha sido claramente identificado como um oncogene e um importante alvo molecular no câncer, ainda há uma grande necessidade e oportunidade para uma abordagem melhorada para modular a atividade desse oncogene. Usando um peptídeo de penetração celular que bloqueia a dimerização (Disruptin) ou siRNA, foi demonstrado que a degradação do EGFR tem um profundo efeito na sobrevivência celular, mesmo em células resistentes a TKI (14, 23, 25, 26) . Sem estar limitado pela teoria, é hipotetizado que a degradação do EGFR ativo (abundante em tumores) por uma pequena molécula que inibe a dimerização, é seletivo, uma vez que a maioria das células normais não expressam altos níveis de EGF/EGFR e, portanto, formam dímeros simétricos que não se espera que sejam afetados pelo Composto 8C. Esta abordagem é eficaz mesmo em células tumorais resistentes a TKI porque a interface do dímero nos tumores resistentes a TKI permanece intacta (consultar Figuras 1A e 1B). A abordagem descrita aqui é única em comparação com as terapias aprovadas atualmente. Ao degradar a proteína EGFR em vez de simplesmente inibir sua atividade quinase, um amplo espectro de atividades foi demonstrado em modelos pré-clínicos, melhorando a capacidade de direcionar o tecido tumoral devido ao fato de que este agente afeta apenas o EGFR ligado ao EGF, que é abundante em células tumorais em comparação com o tecido normal, melhorando assim o perfil de segurança e a janela terapêutica.

[0077] A abordagem de degradar o EGFR ao invés de simplesmente inibir sua atividade quinase supera a resistência ao osimertinibe que invariavelmente se desenvolve em pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas. Embora o foco deste aplicativo seja nos cânceres de pulmão, oportunidades clínicas adicionais e importantes também existem em outros cânceres que são impulsionados por EGFR, como cabeça e pescoço, colorretal e glioblastoma. A degradação seletiva direcionada de uma oncoproteína em tumores, portanto, representa um novo mecanismo além da inibição da atividade da quinase e esta abordagem pode ser aplicável a outras proteínas oncogênicas (22, 25, 26, 46).

[0078] Os compostos divulgados no presente documento são particularmente vantajosos para o tratamento ou prevenção de doenças ou distúrbios causados pela atividade aberrante de EGFR.

[0079] Tal como utilizado no presente documento, "atividade EGFR aberrante" se refere à atividade associada à mutação e superexpressão do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR). Tal mutação e superexpressão estão associadas ao desenvolvimento de uma variedade de cânceres (Shan et al., Cell 2012, 149 (4) 860-870).

[0080] Dada a importância dos papéis biológicos do EGFR, os compostos das presentes divulgações são úteis para uma série de aplicações em uma variedade de configurações. Por exemplo, e de forma mais simples, os agentes ativos das presentes divulgações são úteis para inibir a dimerização de EGFR em uma célula. A este respeito, as presentes divulgações fornecem um método para inibir a dimerização de EGFR em uma célula. O método compreende o contato da célula com um composto das presentes divulgações, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em uma quantidade eficaz para inibir a dimerização. Em alguns aspectos, a célula é parte de uma cultura de células in vitro ou ex vivo ou amostra de tecido in vitro ou ex vivo. Em alguns aspectos, a célula é uma célula in vivo. Em certas modalidades, o método se destina a fins de pesquisa e, em outras modalidades, o método se destina a fins terapêuticos.

[0081] A inibição da dimerização do EGFR leva a um aumento na degradação do EGFR. Consequentemente, as presentes divulgações fornecem ainda um método para aumentar a degradação de EGFR em uma célula. O método compreende o contato da célula com um composto das presentes divulgações, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em uma quantidade eficaz para aumentar a degradação. Em alguns aspectos, a célula é parte de uma cultura de células in vitro ou ex vivo ou amostra de tecido in vitro ou ex vivo. Em alguns aspectos, a célula é uma célula in vivo. Em certas modalidades, o método se destina a fins de pesquisa e, em outras modalidades, o método se destina a fins terapêuticos.

[0082] Como mostrado aqui, um composto que inibe a dimerização de EGFR aumenta a morte de células tumorais. Assim, as presentes divulgações fornecem um método para aumentar a morte de células tumorais em um sujeito. O método compreende a administração ao sujeito de um composto da presente divulgação, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em uma quantidade eficaz para aumentar a morte de células tumorais.

[0083] De acordo com o anterior, as presentes divulgações fornecem ainda um método de tratamento de um câncer em um sujeito. O método compreende a administração ao sujeito de um composto das presentes divulgações, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em uma quantidade eficaz para tratar o câncer no sujeito.

[0084] Conforme usado neste documento, o termo "tratar", bem como palavras relacionadas ao mesmo, não implica necessariamente 100% ou tratamento completo. Em vez disso, existem vários graus de tratamento, que um perito na arte reconhece como tendo um potencial benefício ou efeito terapêutico. A este respeito, os métodos de tratamento do câncer das presentes divulgações podem fornecer qualquer quantidade ou qualquer nível de tratamento do câncer. Além disso, o tratamento fornecido pelo método das presentes divulgações pode incluir o tratamento de uma ou mais condições ou sintomas do câncer a ser tratado. Além disso, o tratamento fornecido pelos métodos das presentes divulgações pode abranger o retardamento da progressão do câncer. Por exemplo, os métodos podem tratar o câncer em virtude da redução do tumor ou do crescimento do câncer, redução da metástase de células tumorais, aumento da morte celular de células tumorais ou cancerosas e semelhantes.

[0085] O câncer tratável pelos métodos divulgados neste documento pode ser qualquer câncer, por exemplo, qualquer crescimento maligno ou tumor causado por divisão celular anormal e não controlada que pode se espalhar para outras partes do corpo através do sistema linfático ou corrente sanguínea. Em algumas modalidades, o câncer é um câncer no qual um EGFR é expresso pelas células do câncer. Em alguns aspectos, o câncer é um câncer em que uma proteína EGFR é superexpressada, o gene que codifica EGFR é amplificado e/ou uma proteína mutante EGFR (por exemplo, EGFR truncado, EGFR com mutação pontual) é expressa.

[0086] O câncer em alguns aspectos é um selecionado do grupo que consiste em câncer linfocítico agudo, leucemia mieloide aguda,

rabdomiossarcoma alveolar, câncer ósseo, câncer cerebral, câncer de mama, câncer do ânus, canal anal ou anorreto, câncer do olho, câncer do ducto biliar intra-hepático, câncer das articulações, câncer do pescoço, vesícula biliar ou pleura, câncer do nariz, cavidade nasal ou ouvido médio, câncer da cavidade oral, câncer da vulva, leucemia (por exemplo, leucemia linfocítica crônica), câncer mieloide crônico, câncer de cólon, câncer de esôfago, câncer cervical, tumor carcinoide gastrointestinal, linfoma de Hodgkin, câncer de hipofaringe, câncer de rim, câncer de laringe, câncer de fígado, câncer de pulmão, mesotelioma maligno, melanoma, mieloma múltiplo, câncer de nasofaringe, Linfoma não Hodgkin, câncer de ovário, câncer de pâncreas, peritônio, omento e câncer de mesentério, câncer de faringe, câncer de próstata, câncer retal, câncer renal (por exemplo, carcinoma de células renais (RCC)), câncer de intestino delgado, câncer de tecidos moles, câncer de estômago, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer de ureter e câncer de bexiga urinária. Em aspectos particulares, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: câncer de cabeça e pescoço, ovário, cervical, bexiga e esofágico, câncer pancreático, gastrointestinal, gástrico, de mama, endometrial e colorretal, carcinoma hepatocelular, glioblastoma, bexiga, câncer de pulmão, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), carcinoma bronquioloalveolar. Em aspectos particulares, o câncer é um câncer resistente ao osimertinibe. Em alguns casos, o câncer é câncer pancreático, câncer de cabeça e pescoço, melanoma, câncer de cólon, câncer renal, leucemia ou câncer de mama. Em alguns casos, o câncer é melanoma, câncer de cólon, câncer renal, leucemia ou câncer de mama.

[0087] Usos dos compostos divulgado aqui na preparação de um medicamento para modular EGFR, ou para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio associado à atividade aberrante de EGFR também são fornecidas aqui.

[0088] A divulgação aqui será entendida mais facilmente a título de referência aos exemplos a seguir, abaixo.

[0089] Em vista das muitas modalidades possíveis às quais os princípios da divulgação podem ser aplicados, deve-se reconhecer que as modalidades ilustradas são apenas exemplos e não devem ser tomadas como limitantes do escopo da invenção.

EXEMPLOS Exemplo 1: Procedimento Geral A:

[0090] A uma solução de 3-(4-bromofenil)-8-metil-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-3-eno-2-tiona 6 em acetonitrila anidra foi adicionada acetamida 7A-G (1 equiv.). A mistura de reação foi aquecida a 40 °C. Em seguida, foi adicionada solução aquosa de carbonato de potássio 2 M (1 equiv.) a mistura de reação. A reação foi mantida a 40 °C até que TLC mostrou perda de materiais de partida e novo ponto Rf (tipicamente 2-6 horas). Uma vez que a reação foi concluída por TLC, ela foi elaborada. A mistura de reação bruta foi vertida para um funil de separação e foram adicionados acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada e depois lavada com salmoura (1 x). A camada orgânica foi, em seguida, secou-se sobre MgSO4 anidro, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida proporcionar o produto em bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash. O produto bruto foi carregado em uma coluna de sílica usando uma quantidade mínima de acetato de etila. A coluna da coluna foi colocada no topo de outra coluna de sílica pré- equilibrada. Um gradiente de acetato de etila em heptano (1-100%) ou metanol em diclorometano (0-10%) foi tipicamente usado para eluir o produto. As frações do produto foram concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto desejado. Exemplo 2 - Síntese do Composto 8A (2-((3-(4-bromofenil)-8- metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(6-metoxipiridin-3-il)acetamida)

[0091] O procedimento geral A foi seguido, usando acetamida 7A. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash com eluição ocorrendo em solução de metanol/diclorometano a 10% para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400MHz, DMSO-d6) δ 10,30 (s, 1H), 8,31 (d, J=2,29 Hz, 1H), 7,74-7,86 (m, 5H), 6,78 (d, J=8,87 Hz, 1H), 4,14 (s, 2H), 3,79 (s, 3H), 2,50-2,67 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,55-1,75 (m, 4H); MS (ESI + m/z 503,10, ESI-m/z 501,10); TLC: (90:10:0,5, DCM:MeOH:NH4OH) Rf =0,56. Exemplo 3 - Síntese do Composto 8B (2-((3-(4-bromofenil)-8- metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(6-cloropiridin-3-il)acetamida)

[0092] O procedimento geral A foi seguido usando acetamida 7B. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash com eluição ocorrendo em solução de metanol/diclorometano a 10% para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,72 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,10 (br d, J = 9,15 Hz, 1H), 7,85 (q, J = 8,23 Hz, 4H), 7,53 (d, J = 8,60 Hz, 1H), 4,24 (s, 2H), 2,56-2,81 (m, 4H), 2,27 (br s, 3H), 1,55-1,85 (m, 4H); MS (ESI + m/z 507,95, ESI- m/z 505,95); TLC: (95: 5: 0,5, DCM: MeOH: NH4OH) Rf = 0,17. Exemplo 4 - Síntese do Composto 8C (2-((3-(4-bromofenil)-8- metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida)

[0093] O procedimento geral A foi seguido usando acetamida 7C. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash com eluição ocorrendo em solução de metanol/diclorometano a 10% para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,89 (br s, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,96 (br d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,92 (br d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,78-7,87 (m, 4H), 7,52-7,72 (m, 2H), 4,29 (s, 2H), 2,43-2,52 (m, 4 H), 2,18 (br s, 3H), 1,55-1,85 (m, 4H); MS (ESI + m/z 523,05, ESI- m/z 521,00); TLC: (90: 10: 0,5, DCM: MeOH:NH4OH) Rf = 0,47. Exemplo 5 - Síntese do Composto 8D (2-((3-(4-bromofenil)-8- metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(piridin-4-il)acetamida)

[0094] O procedimento geral A foi seguido usando acetamida 7D. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash com eluição ocorrendo em solução de metanol/diclorometano a 13% para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,66 (s, 1H), 8,41 (br d, J = 6,13 Hz, 2H), 7,78 (q, J = 8,51 Hz, 4H), 7,52 (d, J = 6,04 Hz, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,50-2,73 (m, 4H), 2,19 (br s, 3H), 1,28-1,91 (m, 4H); MS (ESI + m/z 473,05, ESI- m/z 471,05); TLC: (90: 10: 0,5, DCM: MeOH: NH4OH) Rf = 0,24. Exemplo 6 - Síntese do Composto 8E (2-((3-(4-bromofenil)-8- metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-ciclohexilacetamida)

[0095] O procedimento geral A foi seguido, usando acetamida

7E. Seguindo o procedimento de processamento no procedimento geral A proporcionou o composto do título sem purificação em coluna. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,04 (br d, J = 7,78 Hz, 1H), 7,78 (q, J = 8,63 Hz, 4H), 3,89 (s, 2H), 3,45- 3,55 (m, 1H), 2,50-2,71 (m, 4 H), 2,29 (s, 3H), 1,58-1,80 (m, 7H), 1,51 (br d, J = 12,44 Hz, 1H), 1,05-1,28 (m, 6 H); MS (ESI + m/z 478,90, ESI-m/z 476,90); TLC: (90: 10: 0,5, DCM: MeOH: NH4OH) Rf = 0,60. Exemplo 7 - Síntese do Composto 8F (2-((3-(4-bromofenil)-8- metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-ciclopentilacetamida)

[0096] O procedimento geral A foi seguido usando acetamida 7F. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash com eluição ocorrendo em solução de metanol/diclorometano a 10% para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,15 (br d, J = 6,77 Hz, 1H), 7,79 (q, J = 8,42 Hz, 4H), 3,92-4,01 (m, 1H), 3,91 (s, 2H), 2,50-2,71 (m, 4 H), 2,32 (s, 3H), 1,58-1,82 (m, 8H), 1,45-1,54 (m, 2H), 1,38 (td, J = 6,27, 12,35 Hz, 2H); MS (ESI + m/z 464,10, ESI- m/z 462,15); TLC: (90: 10: 0,5, DCM: MeOH: NH4 OH) Rf = 0,62. Exemplo 8- Síntese do Composto 8G (N-benzil-2-((3-(4- bromofenil)-8-metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)acetamida)

[0097] O procedimento geral A foi seguido usando acetamida 7G. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash com eluição ocorrendo em solução de metanol/diclorometano a 10% para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,65 (t br, J = 5,81 Hz, 1H), 7,73-7,82 (m, 4H), 7,17-7,30 (m, 5H), 4,27 (d, J = 5,95 Hz, 2H), 3,99 (s, 2H), 2,50-2,73 (m, 5H), 2,28 (s, 3H), 1,66 (br s, 3H); MS (ESI + m/z 486,00, ESI- m/z 484,10); TLC: (90: 10: 0,5, DCM: MeOH: NH4OH) Rf = 0,59. Exemplos 9-11 - Síntese dos Compostos 3-5 Exemplo 9 - Síntese do Composto 3 (terc-butil 4-(2-((3-cloro-4- metoxifenil)amino)-2-oxoetil)-2-(4-metoxifenil)-3-oxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1- eno-8-carboxilato)

[0098] A uma solução de terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3-oxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato, 1 em DMF anidro foi adicionado hidreto de sódio (2 equiv.). A mistura de reação foi aquecida a 40 °C durante trinta minutos. A seguir, cloridrato de 2-cloro-N-(3-cloro-4-metoxifenil)acetamida, 2 (1,76 equiv.) Foi adicionado à mistura de reação. A mistura de reação foi mantida a 40 °C e agitada sob um fluxo de N2. Após cinco horas, a reação foi purificada embora TLC indicasse que o material de partida permanecia. A mistura de reação bruta foi resfriada à temperatura ambiente e então carregada em sílica. O material carregado a seco foi colocado em uma coluna de carga seca e embalado. A coluna de carga seca foi colocada no topo de uma coluna de sílica pré-equilibrada (1% de acetato de etila em heptano). O produto em bruto foi purificado usando cromatografia flash eluindo com um gradiente de 1-100% de acetato de etila em heptano. As frações desejadas (eluição com 50% de acetato de etila) foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,67 (s, 1H), 8,46 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 2,56 Hz, 1H), 7,27-7,39 (m, 1H), 6,99 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 8,87 Hz, 1H), 4,01-4,22 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 3,39 (m, 2H), 2,21 (dt, J = 4,80, 12,69 Hz, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,19-1,40 (m, 4H); MS (ESI + m/z 501, ESI - m/z 556,15); TLC: (50:50 EA: HEP) Rf = 0,21. Exemplo 10 - Síntese do Composto 4 (N-(3-cloro-4-metoxifenil)- 2-(3-(4-metoxifenil)-2-oxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-3-en-1-il)cloridrato de acetamida)

[0099] Para uma solução de 3, terc-butil 4-(2-((3-cloro-4- metoxifenil)amino)-2-oxoetil)-2-(4-metoxifenil)-3-oxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1- eno-8-carboxilato em dioxano anidro foi adicionado HCl 4 M em dioxano (3,3 equiv.). Após uma hora, nenhuma reação foi observada por TLC, então uma porção adicional de HCl 4M em dioxano (3,3 equiv.) Foi adicionada. Após uma hora, um novo ponto (linha de base) foi observado, mas o material de partida permaneceu. Uma porção adicional de HCl 4 M em dioxano (3,3 equiv.) Foi adicionada e a mistura de reação foi agitada a 40 °C durante a noite. Durante a noite, um precipitado amarelo formou-se na mistura de reação. O sólido foi filtrado em um funil com frita e enxaguado com excesso de dioxano. O sólido foi transferido para um frasco e seco sob pressão reduzida para produzir o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,48 (s, 1H), 9,22 (br d, J = 9,70 Hz, 1H), 8,93 (br d, J = 10,70 Hz, 1H), 8,39 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 2,47 Hz, 1H), 7,45 (dd, J = 2,52, 9,01 Hz, 1H), 7,07-7,14 (m, 3H), 4,98 (br s, 2H), 4,25 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,39-3,48 (m, 2H), 3,25-3,39

(m, 2H), 1,55 (d largo, J = 13,45 Hz, 2H); MS (ESI + m/z 457,10, ESI - m/z 455,10); TLC: (95: 5: 0,5, DCM: MeOH: NH4 OH) Rf = 0,03. Exemplo 11 - Síntese do Composto 5 (N-(3-cloro-4-metoxifenil)- 2-(3-(4-metoxifenil)-8-metil-2-oxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-3-en-1-il)acetamida)

[00100] A uma solução de 4, N-(3-cloro-4-metoxifenil)-2-(3-(4- metoxifenil)-2-oxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-3-en-1-il) cloridrato de acetamida em metanol foi adicionado formaldeído aquoso (solução a 37% em peso, 7 equiv.). A mistura de reação foi agitada durante 5 minutos, em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3 equiv.). A mistura de reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Na manhã seguinte, TLC (95:5:0,5, DCM:MeOH:NH4OH) mostrou que a reação estava completa com um novo ponto de Rf mais alto. A reação bruta foi vertida para um funil de separação. Ao funil de separação foi adicionado diclorometano. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 aquoso saturado (1 x), seguido de salmoura (1 x). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,15 (s, 1H), 8,34 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 7,74 (d, J = 2,47 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 2,56, 8,97 Hz, 1H), 7,03-7,12 (m, 3H), 4,24 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,78 (br s, 2H), 2,29 (br s, 3H), 2,15-2,26 (m, 2H) 1,13 -1,33 (m, 3H); MS (ESI + m/z 471,10); TLC: (95:5:0,5, DCM:MeOH:NH4OH) Rf = 0,23 Exemplos 12-14-Síntese dos Compostos 10, 11 e 12 Exemplo 12 - Síntese do Composto 10 (terc-Butil 2-(4- metoxifenil)-3-((2-((6-metoxipiridin-3-il)amino)-2-oxoetil)tio)-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato)

[00101] A uma solução de terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3-oxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato, 1 em THF anidro foi adicionado o reagente de Lawesson (1 equiv.). A mistura de reação foi deixada a agitar durante 48 horas à temperatura ambiente antes do produto em bruto ser purificado por cromatografia flash. A mistura de reação em bruto foi carregada a seco em sílica. O material carregado a seco foi colocado em uma coluna de carga seca e embalado. A coluna de carga seca foi colocada no topo de uma coluna de sílica pré-equilibrada (2% de acetato de etila em heptano). O produto em bruto foi purificado utilizando cromatografia flash eluindo com um gradiente de 2-100% de acetato de etila em heptano. As frações desejadas (eluição com 50% de acetato de etila) foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para dar um sólido em bruto. O sólido foi triturado com uma mistura de heptano, diclorometano e acetato de etila (3:2:1 v/v) e filtrado em um funil com frita para proporcionar 9 terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. MS (ESI + m/z 376,9, ESI- m/z 374,9); TLC: (95:0,5:0,5, DCM:MeOH:NH4 OH) Rf = 0,68.

[00102] Em seguida, a uma solução de cloridrato de 2-(4- metoxifenil)-3-tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato, 9 em acetonitrila anidro foi adicionado 2-cloro-N-(3-cloro-4-metoxifenil)acetamida de terc-butila, 2 (1 equiv.). A mistura de reação foi aquecida a 40 °C. Em seguida, foi adicionada solução aquosa de carbonato de potássio 2M (2 equiv.) a mistura de reação. A reação continuou a 40 °C durante a noite até que TLC mostrou perda de materiais de partida e dois novos pontos Rf mais baixos foram observados. A mistura de reação em bruto foi vertida para um funil de separação. Ao funil foi adicionado acetato de etila e água. Separar a camada orgânica e depois lavar com salmoura (1 x). A camada orgânica foi, em seguida, secou-se sobre MgSO4 anidro, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida proporcionar o produto em bruto. O produto bruto foi carregado em uma coluna de sílica usando uma quantidade mínima de diclorometano. A coluna foi colocada no topo de outra coluna de sílica pré-equilibrada. Um gradiente de acetato de etila em heptano (1-35%) foi usado para eluir o produto por cromatografia flash. As frações do produto foram concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,30 (s, 1H), 8,32 (d, J = 2,38 Hz, 1H), 7,84-7,91 (m, 3H), 7,12 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 4,15 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,63-3,72 (m, 2H), 3,47-3,56 (m, 2H), 1,72 (br t, J = 8,78 Hz, 2H), 1,42 (br s, 11H); MS (ESI + m/z 540,20, ESI- m/z 538,15); TLC: (50:50, EA: Hep) Rf = 0,29. Exemplo 13 - Síntese do Composto 11 (2-((3-(4-metoxifenil)- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(6-metoxipiridin-3-il) cloridrato de acetamida)

[00103] Para uma solução de 10, terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3- ((2-((6-metoxipiridin-3-il)amino)-2-oxoetil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato em dioxano anidro foi adicionado HCl 4M em dioxano (3 equiv.). Após duas horas, nenhum material de partida foi observado por TLC, e um novo ponto (linha de base) foi formado. Um precipitado amarelo formou-se na mistura de reação. O sólido foi filtrado em um funil com frita e enxaguado com excesso de dioxano. O sólido era impuro, então foi carregado em uma coluna de sílica usando uma quantidade mínima de diclorometano. Um gradiente de metanol em diclorometano (0- 15%) foi usado para eluir o produto por meio de cromatografia flash. As frações do produto foram concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,40 (s, 1H), 8,45-8,60 (br s, 1H), 8,25- 8,43 (m, 1H), 7,85-7,93 (m, 3H), 7,12 (d, J = 8,87 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 8,78 Hz, 2H), 4,18 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,22-3,56 (m, 4H), 1,84-2,01 (m, 2H), 1,60- 1,75 (m, 2H); MS (ESI + m/z 440,10, ESI- m/z 438,10); TLC: (50:50, EA: Hep) Rf = 0,25 Exemplo 14 - Síntese do Composto 12 (2-((3-(4-metoxifenil)-8- metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(6-metoxipiridin-3-il)acetamida)

[00104] Para uma solução de 11, 2-((3-(4-metoxifenil)-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(6-metoxipiridina-3-il)cloridrato de acetamida em 95:5 diclorometano:metanol foi adicionado formaldeído aquoso (solução a 37% em peso, 7 equiv.). A mistura de reação foi agitada durante uma hora, em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3 equiv.). A mistura de reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Na manhã seguinte, TLC (95:5:0,5, DCM:MeOH:NH4OH) mostrou que a reação estava completa com um novo ponto de Rf mais alto. A reação bruta foi vertida para um funil de separação. Ao funil de separação foi adicionado diclorometano e água. A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura (1 x). A camada orgânica foi seca sobre anidro Na2SO4, filtrou- se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter o produto em bruto. O produto bruto era impuro, então foi carregado em uma coluna de sílica usando uma quantidade mínima de diclorometano. Um gradiente de metanol em diclorometano (0- 10%) foi usado para eluir o produto por meio de cromatografia flash. As frações do produto foram concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6)  10,33 (s, 1H), 8,35 (d, J = 2,38 Hz, 1H), 7,85-7,91 (m, 3H), 7,12 (d, J = 8,02 Hz, 2H), 6,81 (d, J = 9,06 Hz, 1H), 4,16 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 2,53-2,81 (m, 4H), 2,15-2,40 (m, 2H), 1,92 (s, 3H), 1,50-

1,80 (m, 2H); MS (ESI + m/z 454,10, ESI- m/z 452,10); TLC: (95: 5: 0,5, DCM: MeOH: NH4OH) Rf = 0,22. Exemplos 15 a 28: Síntese dos Compostos 33a - 33l

[00105] Condições gerais de reação para (i): A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-oxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) em THF (0,1 M) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em sílica gel e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato.

[00106] Condições gerais de reação para (ii): A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) em DCM (0,1 M) foi 2-bromo-N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) e trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi seca, concentrada e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc- butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato.

[00107] Condições gerais de reação para (iii): A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado 4 M HCL em dioxano (2 equiv.) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF (0,1 M) e trietilamina (5 equiv) e o eletrófila apropriado (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc)3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas em temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% de MeOH em DCM) para fornecer o produto desejado. Exemplos 15-28

[00108] Composto 33a 2-((3-(4-bromofenil)-8-isopropil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,81 (s, 1H), 8,97 - 8,90 (m, 1H), 8,00 - 7,95 (m, 1H), 7,95 - 7,90 (m, 1H), 7,89 - 7,83 (m, 2H), 7,83 - 7,77 (m, 2H), 7,71 - 7,63 (m, 1H), 7,62 - 7,55 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 2,73 - 2,60 (m, 4H), 1,88- 1,71 (m, 2H), 1,62-1,40 (m, 2H), 0,90 (s, 3H), 0,88 (s, 3H).

[00109] Composto 33b 2-((3-(4-bromofenil)-8-isopentil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,99 - 7,94 (m, 1H), 7,94 - 7,90 (m, 1H), 7,88- 7,83 (m, 2H), 7,83 - 7,78 (m, 2H), 7,69 - 7,62 (m, 1H), 7,62 - 7,54 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,48- 3,36 (m, 4H), 2,67 - 2,56 (m, 2H), 2,31 - 2,12 (m, 2H), 1,62 - 1,38 (m, 2H), 1,28- 1,15 (m, 2H), 0,81 (d, J = 6,5 Hz, 6H).

[00110] Composto 33c 2-((8-benzil-3-(4-bromofenil)-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,17 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,25 - 7,19 (m, 1H), 7,12 - 7,02 (m, 3H), 6,96 - 6,87 (m, 3H), 6,85 - 6,78 (m, 1H), 6,43 - 6,30 (m, 3H), 6,30 - 6,17 (m, 2H), 3,42 - 3,34 (m, 2H), 2,76 - 2,60 (m, 4H), 2,10 - 1,95 (m, 2H), 1,95 - 1,78 (m, 2H).

[00111] Composto 33d 2-((3-(4-bromofenil)-8-etil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,82 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,69 - 7,63 (m, 1H), 7,62 - 7,53 (m, 1H), 4,27 (s, 2H), 2,66 (s, 4H), 2,48- 2,33 (m, 2H), 1,90-1,40 (m, 2H), 1,02 - 0,91 (m, 3H).

[00112] Composto 33e 2-((3-(4-bromofenil)-8-propil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,99 - 7,95 (m, 1H), 7,93 (dd, J = 8,1, 1,5 Hz, 1H), 7,88- 7,83 (m, 2H), 7,83 - 7,78 (m, 2H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,8, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,2, 6,9, 1,3 Hz, 1H), 4,26 (s,

2H), 2,67 - 2,55 (m, 4H), 2,29 - 2,16 (m, 2H), 1,90 - 1,69 (m, 2H)), 1,63 - 1,41 (m, 2H), 1,40 - 1,29 (m, 2H), 0,79 (t, J = 7,3 Hz, 3H).

[00113] Composto 33f 2-((3-(4-bromofenil)-8-isobutil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida 1H R (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,95 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,00 - 7,94 (m, 1H), 7,94 - 7,90 (m, 1H), 7,87 - 7,83 (m, 2H), 7,83 - 7,78 (m, 2H), 7,69 - 7,62 (m, 1H), 7,62 - 7,54 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 2,65 - 2,52 (m, 4H), 2,06 - 1,93 (m, 2H), 1,92 - 1,75 (m, 2H), 1,72 - 1,37 (m, 3H), 0,80 (d, J = 6,5 Hz, 6H).

[00114] Composto 33g 2-((3-(4-bromofenil)-8-(3,3,3- trifluoropropil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,00 - 7,95 (m, 1H), 7,95 - 7,91 (m, 1H), 7,88- 7,83 (m, 2H), 7,83 - 7,78 (m, 2H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,1, 6,9, 1,3 Hz, 1H), 4,28 (s, 2H), 2,68- 2,54 (m, 6H), 1,96-1,40 (m, 6H).

[00115] Composto 33h 2-((3-(4-bromofenil)-8-ciclopentil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,82 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,03-7,90 (m, 2H), 7,90- 7,77 (m, 4H), 7,73-7,63 (m, 1H), 7,62-7,54 (m, 1H), 4,25 (s, 2H), 2,77-2,23 (m, 5H), 2,03-0,83 (m, 12H).

[00116] Composto 33i 2-((3-(4-bromofenil)-8-ciclobutil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,81 (s, 1H), 8,96(d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,00 - 7,96 (m, 1H), 7,95 - 7,90 (m, 1H), 7,88- 7,83 (m, 2H), 7,83 - 7,77 (m, 2H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,2, 6,9, 1,4 Hz, 1H), 4,25 (s, 2H), 2,67 - 2,54 (m, 1H), 2,49 - 2,28 (m, 1H), 1,91 - 1,61 (m, 5H), 1,63 - 1,10 (m, 4H).

[00117] Composto 33 j 2-((3-(4-bromofenil)-8-((1-metil-1H- pirazol-4-il)metil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3- dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3- il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ 9,88 (s, 1H), 8,85 - 8,76 (m, 1H), 8,65 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,11 - 8,02 (m, 1H), 7,87 - 7,77 (m, 3H), 7,70 - 7,61 (m, 3H), 7,56 (ddd, J = 8,1, 6,9, 1,2 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 4,00 (s, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,62 (s, 2H), 3,04 - 2,72 (m, 4H), 2,40 - 2,07 (m, 2H), 1,78 (s, 2H).

[00118] Composto 33k 2-((3-(4-bromofenil)-8-((1-isopropil-1H- pirazol-4-il)metil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3- il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 9,89 (s, 1H), 8,80 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,66 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,08- 7,98 (m, 1H), 7,87 - 7,76 (m, 3H), 7,69 - 7,63 (m,

3H), 7,56 (ddd, J = 8,2, 6,9, 1,2 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 4,50 (p, J = 6,7 Hz, 1H), 4,01 (s, 2H), 3,62 (s, 2H), 3,09 - 2,76 (m, 4H), 2,40 - 2,12 (m, 2H), 1,74 (d, J = 35,2 Hz, 2H), 1,53 (d, J = 6,7 Hz, 5H).

[00119] Composto 33l 2-((3-(4-bromofenil)-8-(metil-d2)-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,97 (dd, J = 8,3, 1,1 Hz, 1H), 7,93 (dd, J = 8,1, 1,4 Hz, 1H), 7,89 - 7,83 (m, 2H), 7,83 - 7,78 (m, 2H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,1, 6,9, 1,3 Hz, 1H), 4,28 (s, 2H), 2,74 - 2,54 (m, 5H), 1,98- 1,36 (m, 4H). Exemplos 29-34: Síntese dos Compostos 34a-34f

[00120] Síntese do Composto 34a 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-4-il)acetamida

[00121] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado 2-bromo-N-(quinolin-4-il)acetamida (1 equiv) e trietilamina (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 10 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram combinados, secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0- 100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo-2- (quinolin-6-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,65 (s, 1H), 8,80 (dd, J = 4,2, 1,7 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,33 - 8,27 (m, 1H), 8,04 - 7,92 (m, 1H), 7,92 - 7,76 (m, 5H), 7,49 (dd, J = 8,3, 4,2 Hz, 1H), 4,27 (s, 2H), 3,70 - 3,58 (m, 2H), 3,57 - 3,46 (m, 2H), 1,74 (d, J = 12,6, 8,4, 3,9 Hz, 2H), 1,56-1,44 (m, 2H), 1,37 (s, 9H).

[00122] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-6-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM foi adicionado 4 M HCL em dioxano (2 equiv) e a mistura de reação foi deixada a agitar durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e formaldeído (5 equiv) e trietilamina (5 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc)3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% de MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-6-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,67 (s, 1H), 8,80 (dd, J = 4,2, 1,7 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,89 - 7,77 (m, 5H), 7,49 (dd, J = 8,3, 4,2 Hz, 1H), 4,26 (s, 2H), 2,67 - 2,54 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,85-1,40 (m, 4H).

[00123] Síntese do Composto 34b 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-6-il)acetamida

[00124] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado 2-bromo-N-(quinolin-6-il)acetamida (1 equiv) e trietilamina (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 10 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram combinados, secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0- 100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo-2- (quinolin-6-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,65 (s, 1H), 8,80 (dd, J = 4,2, 1,7 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,33 - 8,27 (m, 1H), 8,04 - 7,92 (m, 1H), 7,92 - 7,76 (m, 5H), 7,49 (dd, J = 8,3, 4,2 Hz, 1H), 4,27 (s, 2H), 3,70 - 3,58 (m, 2H), 3,57 - 3,46 (m, 2H), 1,74 (d, J = 12,6, 8,4, 3,9 Hz, 2H), 1,56-1,44 (m, 2H), 1,37 (s, 9H).

[00125] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-6-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM foi adicionado 4 M HCL em dioxano (2 equiv) e a mistura de reação foi deixada a agitar durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e formaldeído (5 equiv) e trietilamina (5 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc)3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% de MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-6-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz,

DMSO-d6) δ 10,67 (s, 1H), 8,80 (dd, J = 4,2, 1,7 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,89 - 7,77 (m, 5H), 7,49 (dd, J = 8,3, 4,2 Hz, 1H), 4,26 (s, 2H), 2,67 - 2,54 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,85-1,40 (m, 4H).

[00126] Síntese do Composto 34c 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-5-il)acetamida

[00127] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado 2-bromo-N-(quinolin-5-il)acetamida (1 equiv) e trietilamina (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 10 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram combinados, secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0- 100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo-2- (quinolin-5-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato.

[00128] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-5-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv) e a mistura de reação foi deixada a agitar durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e formaldeído (5 equiv) e trietilamina (5 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc)3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% de MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-5-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,41 (s, 1H), 8,93 (dd, J = 4,2, 1,6 Hz, 1H), 8,52 (ddd, J = 8,6, 1,7, 0,9 Hz, 1H), 7,96 - 7,71 (m, 7H), 7,57 (dd, J = 8,6, 4,2 Hz, 1H), 4,36 (s, 2H), 2,75 - 2,56 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 1,89 - 1,59 (m, 4H).

[00129] Síntese do Composto 34d 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-7-il)acetamida

[00130] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado 2-bromo-N-(quinolin-7-il)acetamida (1 equiv) e trietilamina (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 10 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram combinados, secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-

100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo-2- (quinolin-7)-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato.

[00131] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-7-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv) e a mistura de reação foi deixada a agitar durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e formaldeído (5 equiv) e trietilamina (5 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc)3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-7-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,69 (s, 1H), 8,85 (dd, J = 4,2, 1,8 Hz, 1H), 8,40 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,91 - 7,84 (m, 2H), 7,83 - 7,77 (m, 2H), 7,73 (dd, J = 8,8, 2,1 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 8,2, 4,2 Hz, 1H), 4,28 (s, 2H), 2,67 - 2,55 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 1,91 - 1,38 (m, 4H).

[00132] Síntese do Composto 34e 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-8-il)acetamida

[00133] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado 2-bromo-N-(quinolin-8-il)acetamida (1 equiv) e trietilamina (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 10 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram combinados, secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0- 100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo-2- (quinolin-8)-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato.

[00134] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-8-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv) e a mistura de reação foi deixada a agitar durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e formaldeído (5 equiv) e trietilamina (5 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc)3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% de MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-8-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,65 (s, 1H), 8,85 (dd, J = 4,2, 1,7 Hz, 1H), 8,60 (dd, J = 7,6, 1,3 Hz, 1H), 8,42 (dd, J = 8,3, 1,7 Hz, 1H), 7,90 - 7,79 (m, 4H), 7,69 (dd, J = 8,3, 1,4 Hz, 1H), 7,64 (dd, J = 8,3, 4,2 Hz, 1H), 7,62 - 7,56 (m, 1H), 4,34 (s, 2H), 2,50 - 2,37 (m, 4H), 2,07 (s, 3H), 1,86 - 1,17 (m, 4H).

[00135] Síntese do Composto 34f 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-metil-N-(quinolin-3-il)acetamida

[00136] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado 2-bromo-N-metil-N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv) e trietilamina (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 10 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram combinados, secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2- (metil(quinolin-3-il)) amino)-2-oxoetil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato.

[00137] A uma solução de terc-butil 2-(4-bromofenil)-3-((2- (metil (quinolin-3-il) amino)-2-oxoetil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato (1 equiv) em DCM foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv) e a mistura de reação foi deixada a agitar durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e formaldeído (5 equiv) e trietilamina (5 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc)3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(4-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-metil-N-(quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,03 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,10 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,00 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,89 - 7,63 (m, 6H), 4,01 (s, 2H), 3,37 (s, 3H), 3,30 (s, 3H), 2,65 - 2,16 (m, 7H), 1,89-1,18 (m, 4H).

Exemplos 35-43: Síntese dos Compostos 35a-35i Síntese do Composto 35a 2-((3-(4-fluorofenil)-8-metil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida

[00138] Amino(4-fluorofenil)acetato de metila HCl foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml/g) por 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-(4-fluorofenil)acetamida como um precipitado branco que foi coletado via filtração e usado sem purificação adicional. A uma solução de 2-amino- 2-(4-fluorofenil)acetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado terc-butil 4-oxo- 1-piperidinocarboxilato (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a refluxo por 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N- bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-fluorofenil)-3-oxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,28 (s, 1H), 8,48 – 8,37 (m, 2H), 7,41 – 7,31 (m, 2H), 3,71 – 3,50 (m, 4H), 1,79 – 1,69 (m, 2H), 1,68 – 1,56 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).

[00139] Para uma solução de terc-butil 2-(4-fluorofenil)-3-oxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em THF (0,1 M) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em sílica gel e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-fluorofenil)-3-tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1- eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,60 (s, 1H), 8,38 (dd, J = 8,5, 5,7 Hz, 2H), 7,34 (t, J = 8,7 Hz, 2H), 3,80 - 3,70 (m, 2H), 3,60 - 3,45 (m, 2H), 1,86 - 1,67 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

[00140] Para uma solução de terc-butil 2-(4-fluorofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi 2-bromo-

N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) e trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-fluorofenil)-3-((2-oxo-2- (quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato.

[00141] A uma solução de terc-butil 2-(4-fluorofenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv.) em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(4-fluorofenil)-8-metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien- 2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,74 - 8,64 (m, 1H), 7,99 - 7,95 (m, 1H), 7,95 - 7,92 (m, 1H), 7,91 - 7,88 (m, 2H), 7,70 - 7,51 (m, 4H), 4,27 (s, 2H), 3,34 (s, 3H), 2,64 - 2,55 (m, 4H), 2,26 - 2,11 (m, 2H), 1,91-1,42 (m, 4H).

[00142] Síntese do Composto 35b 2-((8-metil-3-fenil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida

[00143] O cloridrato de metil 2-amino-2-fenilacetato foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml/g) durante 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-fenilacetamida como um precipitado branco que foi coletado por filtração e usado sem mais purificação. A uma solução de 2-amino-2- fenilacetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado 4-oxo-1- piperidinocarboxilato de terc-butila (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a refluxo durante 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N-bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 3-oxo-2-fenil-1,4,8-

triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,26 (s, 1H), 8,47 - 8,23 (m, 2H), 7,61 - 7,48 (m, 3H), 3,70 - 3,50 (m, 4H), 1,80 - 1,68 (m, 2H), 1,68- 1,58 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).

[00144] A uma solução de terc-butil 3-oxo-2-fenil-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em THF (0,1 M) foi adicionado o reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em gel de sílica e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-fenil-3-tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,58 (s, 1H), 8,30 - 8,23 (m, 2H), 7,60 - 7,46 (m, 3H), 3,81 - 3,70 (m, 2H), 3,60 - 3,44 (m, 2H), 1,86 - 1,62 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

[00145] Para uma solução de terc-butil 2-fenil-3-tioxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi 2-bromo-N- (quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) E trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-((2-oxo-2-(quinolin-3- ilamino)etil)tio)-3-fenil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato.

[00146] Para uma solução de terc-butil 2-((2-oxo-2-(quinolin-3- ilamino)etil)tio)-3-fenil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) E a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% de MeOH em DCM) para fornecer 2-((8-metil-3-fenil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N- (quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,81 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,02 - 7,90 (m, 4H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,1, 6,8, 1,3 Hz, 1H), 7,49 - 7,39 (m, 2H), 4,28 (s, 2H), 2,75 - 2,56 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,99 - 1,40 (m, 4H).

[00147] Síntese do Composto 35c 2-((3-(4-cloro-3-fluorofenil)-

8-metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida

[00148] O cloridrato de metil 2-amino-2-(4-cloro-3- fluorofenil)acetato foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml/g) por 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-(4-cloro-3-fluorofenil)acetamida como um precipitado branco que foi coletado por meio de filtração e usado sem purificação adicional. A uma solução de 2-amino-2-(4-cloro-3-fluorofenil)acetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado terc-Butil 4-oxo-1-piperidinocarboxilato (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecido ao refluxo durante 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N-bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3-oxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,37 (s, 1H), 8,29 (dd, J = 10,4, 1,8 Hz, 1H), 8,20 (ddd, J = 8,4, 1,8, 0,8 Hz, 1H), 7,78 (dd, J = 8,4, 7,7 Hz, 1H), 3,69 - 3,52 (m, 4H), 1,73 (d, J = 6,8 Hz, 4H), 1,44 (s, 9H).

[00149] A uma solução de terc-butil 2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3- oxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em THF (0,1 M) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em gel de sílica e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3-tioxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,58 (s, 1H), 8,30 - 8,23 (m, 2H), 7,60 - 7,46 (m, 3H), 3,81 - 3,70 (m, 2H), 3,60 - 3,44 (m, 2H), 1,86 - 1,62 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

[00150] A uma solução de terc-butil 2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3- tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi 2- bromo-N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) E trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-cloro-3- fluorofenil)-3-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3- dieno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,78 (s, 1H), 8,91 (d, J = 2,5

Hz, 1H), 8,71 - 8,61 (m, 1H), 8,00 - 7,95 (m, 1H), 7,95 - 7,91 (m, 1H), 7,90 - 7,83 (m, 2H), 7,81 - 7,76 (m, 1H), 7,67 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,2, 6,9, 1,3 Hz, 1H), 4,29 (s, 2H), 3,70 - 3,58 (m, 2H), 3,58- 3,45 (m, 2H), 1,82 - 1,65 (m, 2H), 1,60 - 1,43 (m, 2H), 1,38 (s, 9H).

[00151] A uma solução de terc-butil 2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3- ((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato (1 equiv.) em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% MeOH em DCM) para proporcionar 2-((3-(4-cloro-3-fluorofenil)-8-metil-1,4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,99 - 7,95 (m, 1H), 7,93 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,89 - 7,82 (m, 2H), 7,80 - 7,75 (m, 1H), 7,66 (ddd, J = 8,5, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,1, 6,8, 1,3 Hz, 1H), 4,29 (s, 2H), 2,63 - 2,55 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 1,93 - 1,38 (m, 4H).

[00152] Síntese do Composto 35d 2-((3-(3-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida

[00153] Metil 2-amino-2-(3-bromofenil)acetato foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml/g) durante 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-(3-bromofenil)acetamida como um precipitado branco que foi coletado por meio de filtração e usado sem purificação adicional. A uma solução de 2-amino-2-(3-bromofenil)acetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado terc- butil 4-oxo-1-piperidinocarboxilato (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecida ao refluxo por 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N-bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(3-bromofenil)-3-oxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,33 (s,

1H), 8,54 - 8,48 (m, 1H), 8,39 - 8,25 (m, 1H), 7,80 (d, J = 8,0, 2,1, 1,1 Hz, 1H), 7,57 - 7,44 (m, 1H), 3,60 (d, J = 19,5 Hz, 4H), 1,73 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 1,69 - 1,55 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).

[00154] Para uma solução de terc-butil 2-(3-bromofenil)-3-oxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em THF (0,1 M) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em sílica gel e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(3-bromofenil)-3-tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec- 1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,63 (s, 1H), 8,51 - 8,42 (m, 1H), 8,27 (dt, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H), 7,77 (ddd, J = 8,0, 2,1, 1,1 Hz, 1H), 7,51 - 7,44 (m, 1H), 3,82 - 3,68 (m, 2H), 3,61 - 3,43 (m, 2H), 1,86 - 1,66 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

[00155] Para uma solução de terc-butil 2-(3-bromofenil)-3- tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi 2- bromo-N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) e trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(3-bromofenil)- 3-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,78 (s, 1H), 8,91 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,70 - 8,59 (m, 1H), 8,05 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 8,00 - 7,95 (m, 1H), 7,95 - 7,90 (m, 2H), 7,84 (ddd, J = 8,1, 2,1, 1,0 Hz, 1H), 7,67 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,61 - 7,54 (m, 2H), 4,28 (s, 2H), 3,71 - 3,58 (m, 2H), 3,57 - 3,46 (m, 2H), 1,80 - 1,68 (m, 2H), 1,60 - 1,42 (m, 2H), 1,38 (s, 9H).

[00156] A uma solução de terc-butil 2-(3-bromofenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv.) em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% MeOH em

DCM) para fornecer 2-((3-(3-bromofenil)-8-metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien- 2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,79 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,03 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 7,99 - 7,93 (m, 1H), 7,93 - 7,88 (m, 2H), 7,83 (ddd, J = 8,1, 2,1, 1,0 Hz, 1H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,62 - 7,54 (m, 2H), 4,28 (s, 2H), 2,59 (s, 4H), 2,21 (s, 3H), 1,94-1,48 (m, 4H).

[00157] Síntese do Composto 35e 2-((8-metil-3-(naftaleno-2- il)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolina-3-il)acetamida

[00158] O cloridrato de metila metilamino(2-naftil)acetato foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml/g) por 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-(naftalen-2-il)acetamida como um precipitado branco que foi coletado por meio de filtração e usado sem purificação adicional. A uma solução de 2-amino-2-(naftalen-2-il)acetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado terc- butil 4-oxo-1-piperidinocarboxilato (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecida ao refluxo por 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N-bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(naftalen-2-il)-3-oxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,35 (s, 1H), 9,18- 9,11 (m, 1H), 8,28 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1H), 8,12 - 7,96 (m, 3H), 7,68- 7,57 (m, 2H), 3,77 - 3,64 (m, 2H), 3,64 - 3,51 (m, 1H), 1,86 - 1,73 (m, 2H), 1,73 - 1,62 (m, 2H), 1,45 (s, 9H).

[00159] A uma solução de terc-butil 2-(naftalen-2-il)-3-oxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em THF (0,1 M) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em gel de sílica e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(naftalen-2-il)-3-tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1- eno-8-carboxilato.

[00160] A uma solução de terc-butil 2-(naftalen-2-il)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) era 2- bromo-N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) e trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(naftalen-2-il)- 3-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,93 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,73 - 8,64 (m, 1H), 8,59 - 8,52 (m, 1H), 8,17 - 8,09 (m, 2H), 8,09 - 7,88 (m, 4H), 7,74 - 7,63 (m, 3H), 7,62 - 7,55 (m, 1H), 4,32 (s, 2H), 3,68 (s, 2H), 3,61 - 3,46 (m, 2H), 1,88- 1,71 (m, 2H), 1,57-1,43 (m, 1H), 1,39 (s, 9H).

[00161] Para uma solução de terc-butil 2-(naftalen-2-il)-3-((2- oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) E a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% MeOH em DCM) para fornecer 2-((8-metil-3-(naftalen-2-il)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien- 2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,79 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,99 - 7,95 (m, 1H), 7,95 - 7,91 (m, 1H), 7,91 - 7,85 (m, 2H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,1, 6,8, 1,3 Hz, 1H), 7,16 - 7,10 (m, 2H), 4,26 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,32 (s, 3H), 2,65 - 2,53 (m, 4H), 2,24 - 2,15 (m, 2H), 1,89 - 1,29 (m, 4H).

[00162] Síntese do Composto 35f 2-((3-(4-metoxifenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida

[00163] cloridrato de metil amino(4-metoxifenil)acetato foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml/g) durante 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-(4-metoxifenil)acetamida como um precipitado branco que foi coletado via filtração e usado sem purificação adicional. A uma solução de 2-amino-2-(4-metoxifenil)acetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado terc- butil 4-oxo-1-piperidinocarboxilato (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecida ao refluxo por 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N-bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3-oxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,20 (s, 1H), 8,39 - 8,29 (m, 2H), 7,11 - 7,01 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,71 - 3,48 (m, 4H), 1,78- 1,67 (m, 2H), 1,67 - 1,54 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).

[00164] Para uma solução de terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3-oxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em THF (0,1 M) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em gel de sílica e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3-tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec- 1-eno-8-carboxilato.

[00165] Para uma solução de terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3- tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi 2- bromo-N-(quinolin-3-il acetamida (1 equiv.) E trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(4-metoxifenil)- 3-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,77 (s, 1H), 8,92 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,70 - 8,61 (m, 1H), 7,99 - 7,93 (m, 1H), 7,93 - 7,87 (m, 2H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,1, 6,8, 1,3 Hz, 1H), 7,20 - 7,08 (m, 2H), 4,27 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,73 - 3,57 (m, 2H), 3,57 - 3,42 (m, 2H), 1,81 - 1,67 (m, 2H), 1,50-1,40 (m, 2H), 1,37 (s, 9H).

[00166] A uma solução de terc-butil 2-(4-metoxifenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) E a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos,

concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(4-metoxifenil)-8-metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien- 2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,79 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,99 - 7,95 (m, 1H), 7,95 - 7,91 (m, 1H), 7,91 - 7,85 (m, 2H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,1, 6,8, 1,3 Hz, 1H), 7,16 - 7,10 (m, 2H), 4,26 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,65 - 2,53 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 1,89 - 1,29 (m, 4H).

[00167] Síntese do Composto 35g 2-((3-(2-bromofenil)-8-metil- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida

[00168] metil 2-amino-2-(2-bromofenil)acetato foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml/g) por 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-(2-bromofenil)acetamida como um precipitado branco que foi coletado por meio de filtração e usado sem purificação adicional. A uma solução de 2-amino- 2-(2-bromofenil)acetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado terc-butil 4-oxo- 1-piperidinocarboxilato (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecida ao refluxo por 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N- bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(2-bromofenil)-3-oxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,23 (s, 1H), 7,82 - 7,74 (m, 1H), 7,64 - 7,40 (m, 3H), 3,73 - 3,49 (m, 4H), 1,78- 1,68 (m, 4H), 1,44 (s, 9H).

[00169] Para uma solução de terc-butil 2-(2-bromofenil)-3-oxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) em THF (0,1 M) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em sílica gel e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(2-bromofenil)-3-tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec- 1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,55 (s, 1H), 7,73 (dt, J = 7,8, 0,9 Hz, 1H), 7,53 - 7,40 (m, 3H), 3,85 - 3,72 (m, 2H), 3,55 - 3,43 (m, 2H), 1,90-1,70 (m, 4H), 1,44 (s, 9H).

[00170] Para uma solução de terc-butil 2-(2-bromofenil)-3- tioxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi 2-

bromo-N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) e trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(2-bromofenil)- 3-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,78 (s, 1H), 8,90 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,65 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,01 - 7,91 (m, 2H), 7,83 (dd, J = 8,2, 1,2 Hz, 1H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,63 - 7,47 (m, 4H), 4,23 (s, 2H), 3,68- 3,53 (m, 4H), 1,83- 1,68 (m, 2H), 1,68-1,54 (m, 2H), 1,40 (s, 9H).

[00171] A uma solução de terc-butil 2-(2-bromofenil)-3-((2-oxo- 2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) E a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% de MeOH em DCM) para fornecer 2-((3-(2-bromofenil)-8-metil-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien- 2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,79 (s, 1H), 8,91 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,66 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,95 (ddd, J = 12,8, 8,2, 1,3 Hz, 2H), 7,88- 7,76 (m, 1H), 7,66 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,62 - 7,46 (m, 4H), 4,22 (s, 2H), 2,72 - 2,53 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,94 - 1,64 (m, 4H).

[00172] Síntese do Composto 35h 2-((8-metil-3-(4- (trifluorometil)fenil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3- il)acetamida

[00173] Cloridrato de 2-amino-2-[4-(trifluorometil)fenil]acetato de metila foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml / g) durante 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-(4-(trifluorometil)fenil)acetamida como um precipitado branco que foi coletado por meio de filtração e usado sem purificação adicional. A uma solução de 2-amino-2-(4-(trifluorometil)fenil)acetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado terc-butil 4-oxo-1-piperidinocarboxilato (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecido ao refluxo durante 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N-bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 3-oxo-2-(4-(trifluorometil)fenil)-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,36 (s, 1H), 8,53 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,91 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 3,72 - 3,52 (m, 4H), 1,85 - 1,60 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

[00174] A uma solução de terc-butil 3-oxo-2-(4- (trifluorometil)fenil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em THF (0,1 M) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em gel de sílica e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)- 3-(4-(trifluorometil)fenil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,66 (s, 1H), 8,58 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,27 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,83 - 3,71 (m, 2H), 3,61 - 3,45 (m, 2H), 1,89 - 1,66 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

[00175] A uma solução de terc-butil 3-tioxo-2-(4- (trifluorometil)fenil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) era 2-bromo-N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) e trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-3-(4-(trifluorometil)fenil)- 1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,97 - 8,88 (m, 1H), 8,79 - 8,58 (m, 1H), 8,19 - 8,08 (m, 1H), 8,08- 7,86 (m, 4H), 7,77 - 7,52 (m, 2H), 4,29 (s, 2H), 3,72 - 3,46 (m, 4H), 1,82 - 1,67 (m, 2H), 1,61-1,43 (m, 2H), 1,38 (s, 9H).

[00176] A uma solução de terc-butil 2-((2-oxo-2-(quinolin-3- ilamino)etil)tio)-3-(4-(trifluorometil)fenil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8- carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% de MeOH em DCM) para fornecer 2-((8-metil-3-(4-(trifluorometil)fenil)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca- 1,3-dien-2-il)tio)-N-(quinolin-3-il)acetamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,09 (t, J = 1,2 Hz, 1H), 8,01 - 7,91 (m, 2H), 7,91 - 7,83 (m, 2H), 7,67 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,59 (ddd, J = 8,1, 6,8, 1,3 Hz, 1H), 4,29 (s, 2H), 2,70 - 2,57 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,98- 1,46 (m, 4H).

[00177] Síntese do Composto 35i terc-butil 2-(3,4-diclorofenil)- 3-((quinolin-3-ilcarbamoil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato

[00178] O cloridrato de metil 2-amino-2-(3,4- diclorofenil)acetato foi agitado em solução de hidróxido de amônio a 28% (5 ml/g) durante 96 horas, resultando na formação de 2-amino-2-(3,4-diclorofenil)acetamida como um precipitado branco que foi coletado por meio de filtração e usado sem purificação adicional. A uma solução de 2-amino-2-(3,4-diclorofenil)acetamida (1 equiv) em etanol (0,1 M) foi adicionado 4-oxo-1-piperidinocarboxilato de tert-Butila (1 equiv) e a mistura de reação foi aquecida ao refluxo por 12 horas. A mistura de reação foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (0,1 M) e N-bromossuccinimida (1 equiv) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 8 horas e foi adicionado bicarbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com DCM. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por FCC (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(3,4-diclorofenil)-3-oxo-1,4,8-triazaespiro[4,5]dec- 1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,37 (s, 1H), 8,55 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,29 (dd, J = 8,4, 1,9 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,70 - 3,51 (m, 4H), 1,81-1,58 (m, 4H), 1,44 (s, 9H).

[00179] A uma solução de terc-butil 2-(3,4-diclorofenil)-3-oxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em THF (0,1 M) foi adicionado reagente de Lawesson (0,6 equiv) e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C até a reação estar completa por TLC. A mistura de reação foi concentrada em gel de sílica e purificada por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(3,4-diclorofenil)-3-tioxo-1,4,8- triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,66 (s, 1H), 8,58 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,27 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,83 - 3,71 (m, 2H), 3,61 - 3,45 (m, 2H), 1,89 - 1,66 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

[00180] A uma solução de terc-butil 2-(3,4-diclorofenil)-3-tioxo- 1,4,8-triazaespiro[4,5]dec-1-eno-8-carboxilato (1 equiv.) Em DCM (0,1 M) era 2- bromo-N-(quinolin-3-il)acetamida (1 equiv.) e trietilamina (3 equivalentes). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. As camadas orgânicas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna flash (0-100% de EtOAc em hexanos) para fornecer terc-butil 2-(3,4- diclorofenil)-3-((2-oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3- dieno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,97 - 8,88 (m, 1H), 8,79 - 8,58 (m, 1H), 8,19 - 8,08 (m, 1H), 8,08- 7,86 (m, 4H), 7,77 - 7,52 (m, 2H), 4,29 (s, 2H), 3,72 - 3,46 (m, 4H), 1,82 - 1,67 (m, 2H), 1,61-1,43 (m, 2H), 1,38 (s, 9H).

[00181] A uma solução de terc-butil 2-(3,4-diclorofenil)-3-((2- oxo-2-(quinolin-3-ilamino)etil)tio)-1,4,8-triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato (1 equiv) em DCM (0,1 M) foi adicionado HCl 4 M em dioxano (2 equiv.) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em THF e trietilamina (5 equiv) e formaldeído (3 equiv) foram adicionados seguidos por NaBH(OAc) 3 (3 equiv) e a mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada, retomada em EtOAc e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. Os orgânicos foram secos, concentrados e purificados por cromatografia em coluna flash (0-30% MeOH em DCM) para fornecer terc-butil 2-(3,4-diclorofenil)-3-((quinolin-3-ilcarbamoil)tio)-1, 4,8- triazaespiro[4,5]deca-1,3-dieno-8-carboxilato. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,80 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,09 (t, J = 1,2 Hz, 1H), 8,01 - 7,91 (m, 2H), 7,91 - 7,83 (m, 2H), 7,67 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,59 (ddd, J = 8,1, 6,8, 1,3 Hz, 1H), 4,29 (s, 2H), 2,70 - 2,57 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,98- 1,46 (m, 4H).

[00182] Estudos Farmacocinéticos Exemplo 44 - Interação entre o domínio EGFR quinase purificado e Disruptin

[00183] O domínio da quinase WT-EGFR (aa696-1022, quinase ativa) foi expresso e purificado a partir de células de inseto SF9. 100 ng de EGFR puro foram incubados com Disruptin conjugada com biotina, e o EGFR ligado foi capturado usando esferas de CaptAvidin após lavagem com tampão citrato. A especificidade desta interação foi confirmada pela coincubação desta reação com uma quantidade crescente de Disruptin não biotinilada. A proteína EGFR ligada foi liberada em tampão Laemmli e resolvida por página SDS. O EGFR ligado à Disruptin foi quantificado usando o software ImageJ e mostrado abaixo da mancha. A inibição competitiva da ligação de Disruptin-EGFR por Disruptin fria indica que Disruptin se liga diretamente a EGFR (consultar Figura 2B). Exemplo 45 - Efeito do tratamento com Disruptin na dimerização induzida por EGF em células NCI-H1975

[00184] As células NCI-H1975 foram tratadas por 1 hora com Disruptin 10 μM e mais 30 minutos com EGF (30 ng/ml) e 30 minutos com suberato de disuccinimidil (DSS, 150 μM) para reticular proteínas de interação. Os lisados foram preparados e imunotransferidos com anticorpos anti-EGFR. (consultar Figura 3A). Exemplo 46 - Efeito da Disruptin em seu EGFR alvo em xenoenxertos NCI-H1975

[00185] Os camundongos com xenoenxertos NCI-H1975 foram injetados com Disruptin (10 mg/kg, ip) nos dias 1 e 2. No dia 3, os tumores foram removidos e preparados para imunotransferência (consultar Figura 3B). O efeito de Disruptin em xenoenxertos NCI-H1975 foi avaliado após o tratamento com injeções de Disruptin (10 mg/kg, ip) em dois dias consecutivos (segunda a terça-feira) durante duas semanas. O volume do tumor foi traçado para cada condição de tratamento. O peptídeo embaralhado foi usado como controle (consultar Figura 3C). O efeito de longo prazo do tratamento na histologia do tumor, expressão de EGFR e índice mitótico (medido pela pontuação Ki-67) foi avaliado por imunocoloração dos tumores após 2 semanas de tratamento (consultar Figura 3D). Exemplo 47 - Desenvolvimento do Composto 8C e confirmação da atividade biológica

[00186] Disruptin mostrou ser eficaz contra um modelo de xenoenxerto NCI-H1975 resistente a TKI (erlotinibe) (consultar Figuras 3A-D) (14). No entanto, devido à PK fraca e outros desafios no desenvolvimento de drogas peptídicas, um programa de descoberta de drogas foi realizado para desenvolver uma pequena molécula que tem um mecanismo de ação semelhante, mas farmacocinética superior (consultar Figuras 4A-D). Com base na interface de dímero EGFR ativa, usando uma tela virtual, aquisição de biblioteca comercial e síntese personalizada, uma nova série de moléculas foi desenvolvida que inclui compostos pré-chumbo 95 (C95) e 67 (C67) (consultar Figuras 4A-D). Ambas as moléculas pré-condutor são ativas in vivo contra o modelo de xenoenxerto NCI-H1975 resistente a erlotinibe. Para testar a atividade in vivo da inibição do dímero EGFR, foram utilizadas células repórter NCI-H1975 EGFR resistentes a TKI. Esses xenoenxertos tumorais mostram indução de bioluminescência após a perda da atividade de EGFR (47). Uma única injeção de 100 mg/kg de C95 levou a uma indução de 2,5 vezes do repórter EGFR que durou 48 horas (consultar Figura 9). Foi confirmado que o efeito do tratamento com C95 na redução do nível de EGFR se correlaciona com a mudança na bioluminescência. Esses dados indicam que os agentes que podem induzir a degradação de EGFR podem ser eficazes em tumores resistentes a TKI.

[00187] O composto 8C é aproximadamente 20 vezes mais estável em comparação com sua pré-chumbo (C95) em microssomas de fígado de camundongo e humano. Teste de eficácia do Composto 8C em UMSCC74B, um modelo de tumor agressivo dirigido por EGFR da cabeça e pescoço. Os camundongos com tumor foram tratados com uma dose de 30 mg/kg diariamente (segunda a sexta-feira) durante uma semana. Esta dose foi selecionada com base no perfil de PK de dose única (consultar Figura 8A). Este tratamento foi seguro e produziu um atraso significativo no crescimento do tumor (consultar Figura 10).

[00188] As células Ba/F3 resistentes ao osimertinibe mediadas por ascite (via injeção ip de células) e modelos de tumor sólido (via injeção s.c. de células) em camundongos nus também foram usados para estudos de eficácia. Os estudos iniciais foram realizados no modelo de ascite e o efeito do Composto 8C foi comparado a uma dose igual de osimertinib (30 mg/kg). Embora o tratamento tenha sido iniciado apenas após a carga tumoral ter se tornado alta, uma dose única de 30 mg/kg de Composto 8C prolongou a vida nesses camundongos em comparação com o grupo tratado com osimertinibe (p = 0,072, dados não mostrados). O efeito do tratamento no EGFR foi confirmado nas células coletadas do mesmo camundongo antes do tratamento, 18 horas e 24 horas após o tratamento (consultar Figura 11). Exemplo 48- interação direta entre o domínio da quinase EGFR e Composto 8C

[00189] Para determinar se o Composto 8C compete pelo mesmo local de ligação no EGFR, grânulos acoplados a Biotina-Disruptin-Avidina foram incubados com EGFR purificado na presença ou ausência do Composto 8C por 15 minutos a 37 °C. Os grânulos de agarose foram centrifugados e a proteína não específica removida por lavagem em tampão citrato. A proteína ligada foi liberada em tampão Laemmli e resolvida por página SDS. A inibição competitiva da ligação Disruptin-EGFR pelo Composto 8C sugere um mecanismo de ação semelhante desta molécula (consultar Figura 5A).

[00190] O efeito do Composto 8C na estabilidade térmica do EGFR purificado foi confirmado por ensaio de estabilidade térmica. 100 ng de EGFR purificado foram incubados com DMSO ou Composto 8C (10 µM) durante 30 minutos a 4 °C. As amostras foram submetidas à inativação por calor (20 a 44 °C) por 3 minutos. A fração solúvel foi separada do agregado por centrifugação a 13.000 RPM a 4 °C por 10 minutos. Cerca de 20 ng de proteína solúvel foi resolvido em 4-12% bis- tris gel e manchado com anticorpos anti-EGFR. A intensidade da banda EGFR conforme quantificada pelo software ImageJ e plotada (consulte a Figura 5B). O efeito da concentração do Composto 8C na estabilidade térmica do EGFR a 44 °C foi determinado na presença de 0 a 10 µM do Composto 8C. A fração solúvel de EGFR foi quantificada e plotada conforme descrito acima (consultar Figura 5C).

[00191] Os dados preliminares mostram que o Composto 8C provavelmente se ligam ao mesmo local na molécula de EGFR que a Disruptin (consultar Figura 5A) e pode estabilizar termicamente o EGFR de tipo selvagem, bem como resistente ao osimertinibe (C797S). Como mostrado nas Figuras 5B e 5C, a incubação do Composto 8C com o domínio da quinase EGFR de tipo selvagem purificado muda a curva de fusão, sugerindo uma interação entre o EGFR e o Composto 8C. Para determinar o efeito do Composto 8C no mutante EGFR resistente ao osimertinibe, foi usado um ensaio baseado em células. Osimertinib ou Composto 8C foi incubado com o lisado de célula inteira preparado a partir de células Ba/F3 (C797S-EGFR). As alíquotas foram aquecidas a diferentes temperaturas na presença de DMSO, osimertinib 10 µM ou Composto 8C. Após o resfriamento, as amostras foram centrifugadas e a fração de proteína solúvel foi coletada e resolvida usando imunotransferência com anticorpos anti-EGFR (consultar Figura 6A). O osimertinib foi eficaz na alteração da temperatura de fusão do WT-EGFR purificado (consultar Figura 5B), mas teve um efeito mínimo na proteína EGFR mutada C797S (consultar Figura 6A). Como esperado, o Composto 8C foi eficaz na mudança da temperatura de fusão de EGFR resistente ao osimertinibe. Estes dados sugerem uma interação potencial entre o Composto 8C com EGFR, mesmo em EGFR-C797S.

[00192] Com base nesses dados, foi hipotetizado que o Composto 8C permanecerá eficaz nas células que adquiriram resistência ao osimertinibe devido à mutação C797S. Usando esses tipos de células 6-Ba/F3 isogênicas (que incluem células TKI sensíveis e resistentes, Tabela I), foi demonstrado que o Composto 8C permanece ativo na faixa nanomolar em cada linha celular. Isso é esperado desta classe de agentes, pois sua ação é independente das mutações da quinase EGFR. O efeito do Composto 8C na inibição da dimerização do EGFR induzida por EGF e na expressão da proteína também foi confirmado em todas estas células. Os dados mostrados são das células Ba/F3 resistentes ao osimertinibe com uma mutação C797S (consultar Figuras 6B-6E). Exemplo 49 - Validação da atividade seletiva do Composto 8C em linhas de células de câncer de pulmão

[00193] Para testar a seletividade do Composto 8C, as linhas de células de câncer de pulmão resistentes ao osimertinibe (PC9-AZR e HCC827- AZR), juntamente com fibroblastos de pulmão normais (MRC5), foram tratadas com diferentes concentrações e a sobrevivência celular foi determinada usando um ensaio de sobrevivência clonogênica (consultar Figura 7A e a Tabela 3, abaixo). Estes dados preliminares sugerem que o Composto 8C mata seletivamente as células cancerosas que são conduzidas por EGFR. Foi determinado se a resposta ao Composto 8C se correlaciona com a inibição da dimerização induzida por EGF e degradação de EGFR. Para isso, as células PC9-AZR foram tratadas por 1 hora com 1 μM de Composto 8C e mais 30 minutos com EGF (30 ng/ml) e 30 minutos com suberato de disuccinimidil (DSS, 150 μM) para reticular proteínas de interação. Os lisados foram preparados e imunotransferidos com anticorpos anti-EGFR. A Figura 7B mostra que 1 µM de Composto 8C pode inibir a dimerização de EGFR e induzir a degradação de EGFR. No geral, esses resultados confirmam os achados das células Ba/F3. Exemplo 50 - Ensaio de viabilidade

[00194] A viabilidade das células após o tratamento foi avaliada pelo reagente CellTiter-Blue® seguindo o protocolo do fabricante em Células RKO, UM10B, UM1, MCR5 e UMCC92. Resumidamente, 10.000 células foram plaqueadas em placas de 96 poços em quádruplos. Um dia após a sementeira, as células foram tratadas com uma gama de concentrações (0,1 a 30 micromolar). 3 dias após o tratamento, as células foram incubadas com o reagente CellTiter-Blue® durante 4 horas. Apenas as células viáveis convertem o corante redox (reszurina) em um produto fluorescente (resofurina). A emissão de fluorescência (excitação 560 nM) foi medida a 590 nM.

O valor de IC50 foi calculado como a concentração média de compostos necessários para a proliferação de células de inibição como medido pela fluorescência a 590 nm por 50 por cento em comparação com os controles tratados com veículo.

Os resultados são apresentados na Tabela 3 e na Tabela 4, abaixo.

TABELA 3 Cell Titer Blue IC50 clonogênico (µM) % Célula viável Conc.

ID # RKO UM10B UM1 MCR5 UMCC92 (24 horas) (µM) 13 59,4 30 25,2 6,9 335 14 99,7 30 465 28 15 119 30 50,7 17,2 37,0 16 122 30 43,9 38,0 1.316 17 109 30 44,0 61,0 18 48 30 6,7 2,5 25,9 19 68 7,5 3,1 2,6 4,1 20 54 15 1,8 4,0 2,4 21 73 15 85 4,3 0,3 22 55 7,5 0,8 0,3 2,3 0,2 23 103 30 2,2 5,3 5,4 24 72 30 5,4 4,3 7,6 25 78 30 3,7 2,6 69,3 2,1 26 88 30 2,6 1,1 1,3 27 76 30 19 8,8 4,1 28 15 15 6,5 1,0 1,3 29 89 30 1,4 0,7 3,3 8A 58 30 8,8 1,0 8B 50 15 5,3 0,8 8C 68 3,75 1,6 0,5 18,6 0,2 8D 64 7,5 7,3 0,8 8E 84 30 14,1 1,9 8F 62 30 17,4 1,0 8G 40 30 8,5 1,6 10 81 30 21,8 1,7

Cell Titer Blue IC50 clonogênico (µM) % Célula viável Conc. ID # RKO UM10B UM1 MCR5 UMCC92 (24 horas) (µM) 11 52 30 26 1,3 12 78 30 34 1,2 30 112 30 6,5 73 31 99 30 7,7 7,8 32 104 30 8 4 15 3 70 30 9,8 7,8 4 61 15 7,6 1,0 5 60 15 11,6 0,9 34 Tabela 4 ID # BAF3-EGRF ID # BAF3-EGRF LTC IC50 µM LTC IC50 µM 33A 0,45 34C 6,50 33B 0,82 34D 1,42 33C 0,79 34E 4,80 33D 0,71 34F 0,70 33E 0,61 35A 0,56 33F 0,50 35B 0,80 33G 2,6 35C 0,55 33H 0,85 35D 0,28 33I 1,75 35E 1,13 33J 1,95 35F 2,55 33K 2,20 35G 5,95 33L 2,85 35H 1,85 34A 2,00 35I 1,57 34B 2,60 Exemplo 51 - Farmacocinética in vivo do Composto 8C em tumor e plasma

[00195] Um estudo de PK de curto prazo administrando o agente por injeção i.p. revelou que o Composto 8C se acumula seletivamente no tumor, apesar do fato de ser rapidamente eliminado do plasma (consultar Figuras 8A e 8B). A concentração máxima de Composto 8C alcançada no tumor (69,7 ± 15,68 µM por ≥ 7 horas) é muito maior do que a concentração necessária para matar 99% das células tumorais resistentes a TKI. O IC50 e IC90 para PC9-AZR e HCC827-AZR variam de ~ 1,5 a ~ 4 µM (consultar Figura 7A). É interessante notar que a concentração plasmática de pico foi de 5,4 ± 1,5 µM por 30 minutos. A meia-vida plasmática do Composto 8C é de 7,96 horas, mas a meia-vida no tumor é muito maior do que 24 horas (consultar Figura 8A). O acúmulo prolongado de drogas em tumores, apesar da rápida depuração sistêmica, é ideal para uso terapêutico. Os dados no ponto de tempo de 24 horas indicam que o agente pode ser adequado para administração diária. Depois de observar a acumulação seletiva do Composto 8C em tumores injetados i.p., foi determinado se o Composto 8C está disponível por via oral. Para administração oral, o Composto 8C foi formulado em 20% tween80 em PBS (v/v) após breve sonicação. Os camundongos receberam 100 mg/kg por gavagem oral. As concentrações do Composto 8C em amostras de tumor e plasma às 7 horas, 15 horas e 24 horas foram determinadas e estão representadas graficamente na Figura 8B.

[00196] Para injeção intraperitoneal, o Composto 8C foi formulado a 10 mg/ml em PBS com DMSO a 5% ajustando o pH a 5,5. Para administração oral, uma suspensão homogênea foi preparada em 20% tween 80 após breve sonicação. Inicialmente, uma dose única de 100 mg/kg de Composto 8C foi dada i.p. (Figura 8A) ou gavagem em camundongos nus portadores de xenoenxertos de tumor NCI-H1975 humano (> 150 mm3) (Figura 8B). Os camundongos foram sacrificados no tempo 0, 30 minutos, 1 hora, 3 horas, 7 horas, 15 horas e 24 horas. Amostras de tumor e plasma foram coletadas. No caso de camundongos administrados por sonda oral, as amostras de plasma e tumor foram coletadas apenas às 7 horas, 15 horas e às 24 horas. A concentração do Composto 8C no plasma e tumor foi determinada e os dados resultantes são representados graficamente em termos de concentração molar. Exemplo 52 - Validação de repórter EGFR in vivo

[00197] Esta abordagem foi validada com o composto C95. Resumidamente, uma vez que os tumores atingiram o tamanho de cerca de 100 mm3, os camundongos foram fotografados para obter a bioluminescência basal e o efeito do composto pré-chumbo 95 em diferentes pontos de tempo (consultar Figura 9A). Mudança na bioluminescência foi quantificada e plotada (consultar Figura 9B). Finalmente, o efeito do tratamento no nível de proteína EGFR foi confirmado por imunotransferência após 48 horas de tratamento. Exemplo 53 - Atividade in vivo do Composto 8C

[00198] Camundongos nus portando UMSCC74B (~ 100 mm2) foram tratados com (30 mg/kg, diariamente por uma semana) ou com veículo (DMSO a 5% em PBS). Cada grupo tinha pelo menos 5 camundongos. O volume do tumor e o peso corporal foram registrados 3 a 4 vezes por semana, e a mudança no volume médio do tumor com o tempo é traçada. A perda média de peso corporal durante o tratamento foi inferior a 10%. A barra de erro representa o erro padrão da média.

[00199] Para o grupo de tratamento do Composto 8C, o dia 0 é definido como o primeiro dia de tratamento. Em camundongos de controle de veículo, o dia 0 foi definido como o dia em que o volume do tumor estava mais próximo do volume médio do tumor nos grupos de tratamento do Composto 8C no dia de início do tratamento. Para avaliar se as taxas de crescimento do volume do tumor diferiam por tratamento, modelos de efeitos mistos foram ajustados com termos de interceptação aleatória nos níveis de camundongo para contabilizar resultados correlacionados ao longo do tempo dentro de um tumor e entre 2 tumores em um camundongo. A monoterapia provocou uma redução significativa na taxa de crescimento do tumor após uma semana de dosagem (consultar Figura 10). As taxas de crescimento do tumor foram significativamente menores no grupo de tratamento com Composto 8C em comparação com o grupo de controle pareado no tempo (p = 0,013) e o grupo de controle geral (p <0,001). Exemplo 54 - Efeito do Composto 8C em um modelo de tumor resistente ao osimertinibe.

[00200] Para testar a atividade do Composto 8C contra tumores impulsionados por EGFR resistentes a osimertinibe, um modelo de tumor de ascite foi desenvolvido usando células Ba/F3-AZR (L858R + T790M + C797S-EGFR) como relatado anteriormente (65). 5 milhões de células BA/F3-AZR foram injetadas via injeção i.p. em camundongos nus fêmeas de 6 semanas de idade. Os camundongos desenvolveram um tumor ascítico e foi observado um tempo médio de sobrevivência de 20 dias. Para testar a eficácia do Composto 8C em comparação com osimertinib, 15 camundongos injetados foram injetados com células Ba/F3-AZR. 18 dias após a injeção de células tumorais, os camundongos foram randomizados em três grupos. Os camundongos foram tratados com veículo, uma dose oral única de 30 mg/kg de osimertinib ou 30 mg/kg de Composto 8C via injeção i.p. A saúde dos camundongos foi monitorada e os camundongos foram sacrificados de acordo com as diretrizes de estágio final da ULAM. Embora o tratamento tenha sido iniciado após a carga tumoral ter se tornado alta, uma dose única de 30 mg/kg de Composto 8C prolongou a vida nesses camundongos em comparação com o grupo tratado com osimertinibe. Não houve diferença observada entre o controle do veículo e o grupo de tratamento com osimertinibe. A diferença entre osimertinib e Composto 8C foi calculada usando o teste log-rank (p = 0,072). Para testar o efeito do tratamento no alvo, as células tumorais foram coletadas de um camundongo antes do tratamento, 18 horas e 24 horas após o tratamento. As células foram lavadas em PBS e processadas conforme descrito na Figura 3, e os resultados de imunotransferência que mostram o efeito do tratamento em EGFR, pEGFR e outras moléculas são dados na Figura 11. Exemplo 55 - Teste de segurança preliminar do Composto 8C em um modelo de camundongo.

[00201] Um teste preliminar sobre a segurança de uma dose diária de 30 mg/kg por uma semana foi realizado usando camundongos C57BL6. A saúde geral e o peso de um grupo de 6 camundongos foram monitorados durante o tratamento. Foi observada uma perda modesta de 3,5 ± 2,4% do peso corporal após uma semana de tratamento, mas os camundongos recuperaram totalmente o peso 2 dias após a cessação do tratamento. Exemplo 56: tela de linha celular NCI 60

[00202] A atividade do Composto 8C foi testada contra 60 diferentes linhas de células tumorais humanas no National Cancer Institute, usando o protocolo de triagem NCI 60 padrão. A percentagem de inibição do crescimento para as linhas celulares de melhor desempenho é dada na Tabela 5, abaixo. TABELA 5 Crescimento Painel Linha celular percentual Melanoma SK-MEL-5 -96,2 Câncer de colo HCT-116 -90,7 Melanoma M14 -83,8 Câncer renal 786-0 -81,7 Melanoma UACC-62 -78,9 Melanoma LOX IMVI -78,5 Câncer de colo COLO 205 -76,2

Melanoma MALME-3M -75,5 Melanoma SK-MEL-28 -70,1 Câncer de colo HT29 -67,1 Leucemia K-562 -61,5 Melanoma UACC-257 -61,2 Câncer de colo HCC-2998 -51,3 Câncer de mamaMDA-MB-468 -43,8 Câncer de mamaMCF7 -42,7 Leucemia HL-60 (TB) -40,7 Câncer de mamaMDA-MB-231/ATCC -40,5 Exemplo 57: Efeito do Composto 8C em um modelo de tumor pancreático

[00203] Camundongos KC de 6 semanas de idade foram tratados com Composto 8C via gavagem oral (30 mg/kg de peso corporal, diariamente). O efeito resultante nos níveis de PanIn foi observado em comparação com os camundongos de controle que não receberam o Composto 8C. Os camundongos tratados com o Composto 8C mostraram propensão significativamente reduzida para o desenvolvimento de PanIn (Pancreatic Intraepitelial Neoplasia), um tipo de lesão do ducto pancreático, como mostrado na Figura 13. Exemplo 58: Efeito do Composto 8C em um modelo de tumor de cabeça e pescoço

[00204] Xenografias de camundongo de UMSCC74B, uma linha de células tumorais de cabeça e pescoço, foram tratadas com Composto 8C via gavagem oral (30 mg/kg de peso corporal, duas vezes por semana). O efeito resultante no volume do tumor foi observado em comparação com camundongos de controle que não receberam o Composto 8C e camundongos de controle que receberam cetuximabe. Os camundongos tratados com Composto 8C mostraram volume tumoral significativamente reduzido em comparação com ambos os controles, como mostrado na Figura 14.

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Claims (60)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que tem a estrutura de Fórmula I: (I), em que X é O-C0-6alquileno, S-C0-6alquileno ou NR3-C0-6alquileno, e o dito alquileno é opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados a partir de halo, N(R3)2 e OR3; Y é C0-6alquileno, e o dito alquileno é opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados a partir de halo, N(R3)2 e OR3; A é C6-10 arila ou heteroarila de 5 a 10 membros que tem 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S e a dita arila ou heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R4; B é C6-10 arila, heteroarila de 5 a 10 membros que tem 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, anel de cicloalquila de 3 a 8 membros ou heterocicloalquila de 3 a 12 membros que tem 1 a 3 heteroátomos de anel selecionados a partir de O, S e N, e a dita arila, heteroarila, cicloalquila ou heterocicloalquila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5; R1 e R2 são, cada um independentemente, C1-6 alquila ou R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual os mesmos são ligados formam um anel de cicloalquila ou heterocicloalquila de 4 a 8 membros, em que o anel de heterocicloalquila tem 1 ou 2 heteroátomos de anel selecionados a partir de O, S e N, e em que o dito anel de cicloalquila ou anel de heterocicloalquila é opcionalmente substituída por 1 a 2 R6; cada R3 é, independentemente, H ou C1-6 alquila; cada R4 e R5 são, independentemente, C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, halo ou C1- 6 alcóxi; e R6 é C1-6 alquila, C1-6 haloalquila, (C=O)R3, (C=O)OR3, CON(R3)2, C0- 3alquileno-C3-8cicloalquila, C0-3alquileno-C6-10arila ou C0-3alquileno-(heteroarila de 5 a 10 membros que tem 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S), em que a arila ou a heteroarila é opcionalmente substituída por 1 a 3 R5.

2. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 são, cada um independentemente, C1-6 alquila.

3. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 são, cada um, metila.

4. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel de cicloalquila ou heterocicloalquila de 4 a 8 membros.

5. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel de cicloalquila ou heterocicloalquila de 5 ou 6 membros.

6. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel de ciclohexila.

7. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel de heterocicloalquila que tem a estrutura: , em que * indica o ponto de ligação ao resto do composto de Fórmula I.

8. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que cada R4 e R5 são, independentemente, C1-6 alquila, halo ou C1-6 alcóxi.

9. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que R6 é C1-6 alquila, (C=O)R3, (C=O)OR3 ou CON(R3)2.

10. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 9, caracterizado pelo fato de que R6 é C1-6 alquila.

11. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que R6 é metila.

12. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que A é C6-10 arila.

13. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 12,

caracterizado pelo fato de que A é fenila.

14. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que B é C6-10 arila.

15. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que B é fenila.

16. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que B é heteroarila de 5 a 10 membros que tem 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S.

17. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que B é piridinila.

18. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que B é quinolinila.

19. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que B é cicloalquila de 3 a 8 membros.

20. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que B é cicloalquila de 5 ou 6 membros.

21. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que B é heterocicloalquila de 3 a 12 membros que tem de 1 a 3 heteroátomos de anel selecionados a partir de O, S e N.

22. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que A é substituído por um R4.

23. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que A tem a estrutura: .

24. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que A é substituído por dois R4.

25. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R4 é C1-6 alquila.

26. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R4 é metila.

27. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R4 é halo.

28. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 27,

caracterizado pelo fato de que R4 é bromo.

29. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R4 é C1-6 alcóxi.

30. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que R4 é metóxi.

31. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que B é substituído por um R5.

32. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que B é substituído por dois de R5.

33. Composto, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que B tem a estrutura .

34. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R5 é halo.

35. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R5 é flúor ou cloro.

36. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 30 ou 33, caracterizado pelo fato de que um R5 é flúor e o outro R5 é cloro.

37. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R5 é C1-6 alcóxi.

38. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R5 é metóxi.

39. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 30 ou 33, caracterizado pelo fato de que um R5 é halo e o outro R5 é C1-6 alcóxi.

40. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que um R5 é cloro e o outro R5 é metóxi.

41. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, caracterizado pelo fato de que X é O-C0-6alquileno ou S-C0- 6alquileno.

42. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que X é S-C0-6alquileno.

43. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que X é O, S, O-CH2- ou S-CH2-.

44. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado pelo fato de que Y é C0-2alquileno.

45. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que Y é nulo ou CH2.

46. Composto, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que X é NR3-CH2, O-CH2- ou S-CH2-, e Y é nulo.

47. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que X é NR3-CH2, O-CH2- ou S-CH2-, e Y é CH2.

48. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 47, caracterizado pelo fato de que R3 é H.

49. Composto caracterizado pelo fato de que é conforme recitado na Tabela 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

50. Composto caracterizado pelo fato de que é conforme recitado na Tabela 2 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

51. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende o composto ou sal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50 e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

52. Método de modulação de EGFR caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um sujeito em necessidade do mesmo, uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou sal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50.

53. Método, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que a modulação compreende inibir a dimerização de EGFR.

54. Método, de acordo com a reivindicação 52 ou 53, caracterizado pelo fato de que a modulação compreende induzir a degradação de EGFR.

55. Método para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio associado à atividade de EGFR aberrante caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um sujeito em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou sal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50.

56. Método, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que a doença ou distúrbio é câncer.

57. Método, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir de câncer de pulmão, câncer colorretal, glioblastoma e câncer de cabeça e pescoço.

58. Método, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado pelo fato de que o câncer é melanoma, câncer de cólon, câncer renal, leucemia ou câncer de mama.

59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 56 a 58, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer resistente a osimertinibe.

60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 59, caracterizado pelo fato de que o sujeito é um ser humano.