BR112020015915A2 - Usos de um anticorpo anti-pd-1 e um anticorpo anti-ctla4 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, bem como kit para tratamento de um paciente com câncer - Google Patents

Abstract

a presente invenção se refere a métodos para tratar câncer em um paciente que compreende administrar um anticorpo anti-pd-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em quantidades específicas ao paciente em cerca de cada seis semanas, em combinação com a administração de um anticorpo anti-ctla4 ao paciente em cerca de cada seis semanas. em certas modalidades, o antagonista de pd-1 é pembrolizumabe, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. também são fornecidas composições que compreendem uma dosagem de um anticorpo anti-pd-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e uma dosagem de um anticorpo anti-ctla4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e usos dos mesmos para tratar câncer.

Description

USOS DE UM ANTICORPO ANTI-PD-1 E UM ANTICORPO ANTI-CTLA4 OU FRAGMENTOS DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO DOS MESMOS, BEM COMO KIT

PARA TRATAMENTO DE UM PACIENTE COM CÂNCER CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se refere a terapias úteis para o tratamento de câncer. Em particular, a invenção se refere a um método para tratamento de câncer que compreende administrar a um paciente em necessidade do mesmo um anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em combinação com um anticorpo anti-CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, usando os regimes de dosagem especificados na presente invenção.

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[002] Este pedido reivindica o benefício do pedido provisório nº U.S. 62/630.038, depositado em 13 de fevereiro de 2018, pedido provisório nº U.S. 62/732.838, depositado em 18 de setembro de 2018, e pedido provisório nº U.S. 62/740.741, depositado em 3 de outubro de 2018, cujos conteúdos integrais são incorporados através do presente documento a título de referência em sua totalidade.

REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIA SUBMETIDA ELETRONICAMENTE

[003] A listagem de sequência do presente pedido é submetida eletronicamente por EFS-Web como uma listagem de sequência em formato ASCII com um nome de arquivo “24695WOPCT-SEQLIST-06FEB2019.TXT”, data de criação de 6 de fevereiro de 2019, e um tamanho de 56,0 kb. Essa listagem de sequência submetida por EFS-Web é parte do relatório descritivo e é incorporada na presente invenção a título de referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[004] PD-1 é reconhecido como um participante importante na regulação imune e na manutenção de tolerância periférica. PD-1 é moderadamente expressado em células T, B e NKT virgens e regulado de modo ascendente por sinalização de receptor de célula T/B em linfócitos, monócitos e células mieloides (Sharpe et al., a função de morte celular programada 1 e seus ligantes na regulação de autoimunidade e infecção. Nature Immunology (2007); 8:239 a 245).

[005] Dois ligantes conhecidos para PD-1, PD-L1 (B7-H1) e PD-L2 (B7-DC) são expressados em cânceres humanos que surgem em vários tecidos. Em conjuntos de amostra grandes de, por exemplo, cânceres de ovário, renal, colorretal, pancreático, hepático e melanoma, foi demonstrado que a expressão de PD-L1 está correlacionada com prognóstico deficiente e sobrevida global reduzida independentemente de tratamento subsequente (Dong et al., Nat Med. 8(8):793 a 800 (2002); Yang et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 49: 2518 a 2525 (2008); Ghebeh et al. Neoplasia 8:190 a 198 (2006); Hamanishi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104: 3360 a 3365 (2007); Thompson et al., Cancer 5: 206 a 211 (2006) ; Nomi et al., Clin. Cancer Research 13:2151 a 2157 (2007); Ohigashi et al., Clin. Cancer Research 11: 2947 a 2953 (2005); Inman et al., Cancer 109: 1499 a 1505 (2007); Shimauchi et al. Int. J. Cancer 121:2585 a 2590 (2007); Gao et al. Clin. Cancer Research 15: 971 a 979 (2009); Nakanishi J. Cancer Immunol Immunother. 56: 1173 a 1182 (2007); e Hino et al., Cancer 00: 1 a 9 (2010)).

[006] De modo similar, constatou-se que a expressão de PD-1 em linfócitos infiltrantes em tumor marca as células T disfuncionais em câncer de mama e melanoma (Ghebeh et al, BMC Cancer. 2008 8:5714 a 15 (2008); Ahmadzadeh et al., Blood 114: 1537 a 1544 (2009)) e se correlaciona com prognóstico deficiente em câncer renal (Thompson et al., Clinical Cancer Research 15: 1757 a 1761(2007)). Assim, foi proposto que as células tumorais que expressam PD-L1 interagem com células T que expressam PD-1 para atenuar a ativação de célula T e a evasão de monitoramento imunológico, contribuindo assim para uma resposta imunológica prejudicada contra o tumor.

[007] As terapias de pontos de verificação imunológicos que alvejam o eixo geométrico de PD-1 resultaram em aprimoramentos inovadores em resposta clínica em múltiplos cânceres humanos (Brahmer et al., N Engl J Med 2012, 366: 2455 a 65; Garon et al. N Engl J Med 2015, 372: 2018 a 28; Hamid et al., N Engl J Med 2013, 369: 134 a 44; Robert et al., Lancet 2014, 384: 1109 a 17; Robert et al., N Engl J Med 2015, 372: 2521 a 32; Robert et al., N Engl J Med 2015, 372: 320 a 30; Topalian et al., N Engl J Med 2012, 366: 2443 a 54; Topalian et al., J Clin Oncol 2014, 32: 1020 a 30; Wolchok et al., N Engl J Med 2013, 369: 122 a 33). As terapias imunes que alvejam o eixo geométrico de PD-1 incluem anticorpos monoclonais direcionados ao receptor de PD-1 (KEYTRUDA™ (pembrolizumabe), Merck e Co., Inc., Kenilworth, NJ, EUA e OPDIVO™ (nivolumabe), Bristol-Myers Squibb Company, Princeton, NJ, EUA) e também aqueles que se ligam ao ligante de PD-L1 (MPDL3280A; TECENTRIQ™ (atezolizumabe), Genentech, San Francisco, CA, EUA; IMFINZI™ (durvalumabe), AstraZeneca Pharmaceuticals LP, Wilmington, DE, EUA; BAVENCIO™ (avelumabe), Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha). Ambas as abordagens terapêuticas demonstraram efeitos antitumorais em diversos tipos de câncer.

[008] Foi proposto que a eficácia de tais anticorpos pode ser melhorada se administrados em combinação com outras terapias de câncer aprovadas ou experimentais, por exemplo, radiação, cirurgia, agentes quimioterápicos, terapias alvejadas, agentes que inibem outras vias de sinalização que são desreguladas em tumores, e outros agentes melhoradores de sistema imunológico. Tal agente que foi testado em combinação com antagonistas de PD- 1 é um antagonista de antígeno 4 associado ao linfócito T citotóxico (abreviado como CTLA4).

[009] CTLA4 tem uma relação muito próxima com a molécula CD28 na estrutura gênica, localização de cromossomo, homologia de sequência e expressão gênica. Ambos são receptores para a molécula B7 co-estimulatória, principalmente expressada na superfície de células T ativadas. Após a ligação a B7, CTLA4 pode inibir a ativação de células T murinas e humanas, desempenhando um papel de regulação negativo na ativação de células T.

[010] Os mAbs de CTLA4 ou ligantes de CTLA4 podem impedir que CTLA4 se ligue a seus ligantes nativos, bloqueando, por meio disso, a transdução do sinal de regulação negativo de célula T por CTLA4 e melhorando a responsividade de células T a vários antígenos. Nesse aspecto, os resultados de estudos in vivo e in vitro estão substancialmente alinhados. Atualmente, existem alguns mAbs de CTLA4 sendo testados em ensaios clínicos para tratamento de câncer de próstata, câncer de bexiga, câncer colorretal, câncer de trato gastrointestinal, câncer hepático, melanoma maligno, etc. (Grosso et al., CTLA-4 blockade in tumor models: na overview of preclinical and translational research. Cancer Immun. 13:5 (2013)).

[011] Como fatores importantes que afetam a função de células T, os mAbs de CTLA4 e CTLA4 podem produzir efeitos terapêuticos específicos em doenças ao interferir no microambiente imunológico no corpo. Eles possuem alta eficácia e remediam a deficiência da medicação tradicional, abrindo um caminho inovador para terapia gênica. Os mAbs de CTLA4 e CTLA4 estão sendo testados em experimentos e vários estágios de ensaios clínicos. Por exemplo, em doenças autoimunes, eles têm mostrado inibição eficaz de hiper-responsividade de vias aéreas em um modelo animal de asma, prevenção do desenvolvimento de doenças reumáticas, mediação de tolerância imunológica a um aloenxerto no corpo e similares. Por outro lado, embora a terapia gênica biológica não tenha mostrado qualquer efeito adverso em ensaios clínicos de curto prazo, deve-se direcionar a atenção ao efeito potencial após aplicação de longo prazo. Por exemplo, o bloqueio excessivo de sinalização de B7 de CTLA4 por mAbs de CTLA4 pode resultar no desenvolvimento de doenças autoimunes. Posto que os anticorpos podem se ligar especificamente a seus antígenos e incluem a lise de células-alvo ou bloqueiam o progresso de patologia, o desenvolvimento e a utilização de fármacos com base em anticorpos, os anticorpos especialmente humanizados têm significância importante no tratamento clínico de tumores malignos e outras doenças imunes em humanos.

[012] Seria benéfico desenvolver cronogramas de dosagem adicionais que permitem a administração de uma dose segura e eficaz de um anticorpo anti-PD- 1 sozinho, ou em combinação com um anticorpo anti-CTLA4, que seja mais conveniente para pacientes. Seria benéfico desenvolver métodos de tratamento de cânceres refratários de PD-1/PD-L1 ao administrar um anticorpo anti-PD-1 e um anticorpo anti-CTLA4 usando os cronogramas de dosagem fornecidos na presente invenção.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[013] A presente invenção fornece regimes de dosagem alternativos e menos frequentes para tratamento de um paciente com câncer com um anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, nos quais espera-se que o cronograma de dosagem forneça uma dose segura e eficaz do anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. A mesma também fornece regimes de dosagem alternativo e menos frequentes para tratamento de um paciente com câncer com uma combinação de um anticorpo anti-PD-1, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em combinação com um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Especificamente, a invenção fornece um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ao paciente a cada seis semanas, em que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende (a) regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (CDRs) que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8; ou (b) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 11, 12 e 13 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 14, 15 e 16. Em modalidades preferenciais da invenção, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é pembrolizumabe.

[014] Também é fornecido um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ao paciente e cerca de 25 mg, 50 mg, 75 mg ou 100 mg de um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que cada um dentre o anticorpo anti-PD-1 e o anticorpo anti-CTLA4, ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, são administrados ao paciente a cada seis semanas, em que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende (a) regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (CDRs) que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8; ou (b) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 11, 12 e 13 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 14, 15 e 16; e em que o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 41 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38.

[015] Em uma modalidade, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8; e o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 41 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38.

[016] Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 9 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 4; e o anticorpo anti-CTLA4 compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 50 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 49.

[017] Em todas as modalidades supracitadas, a quantidade do anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo administrada ao paciente é de cerca de 350 mg a cerca de 450 mg. Em modalidades adicionais, a quantidade do anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno é cerca de 400 mg. Em modalidades adicionais, a quantidade do anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno é 400 mg.

[018] Em todos os métodos de tratamento, composições e usos supracitados na presente invenção, o anticorpo PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno inibe a ligação de PD-L1 a PD-1, e preferencialmente também inibe a ligação de PD-L2 a PD-1. Em algumas modalidades preferenciais dos métodos de tratamento, composições e usos da invenção, o anticorpo PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo monoclonal, que se liga especificamente a PD-1 e bloqueia a ligação de PD-L1 a PD-1. Em uma modalidade particular, o anticorpo anti-PD-1 compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que as cadeias pesada e leve compreendem as sequências de aminoácidos mostradas na Figura 1 (SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 10). Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-PD-1 compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e em que as cadeias pesada e leve compreendem as sequências de aminoácidos mostradas na Figura 1 (SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 10) e o anticorpo anti-CTLA4 compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que as cadeias pesada e leve compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 57 e 58.

[019] Em algumas modalidades preferenciais dos métodos de tratamento, composição e usos da invenção, o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo monoclonal, que se liga especificamente a CTLA4. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 41 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38. Em uma modalidade particular, o anticorpo anti-CTLA4 compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que as regiões variáveis de cadeias pesada e leve compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO:

50 e 49, respectivamente. Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-CTLA é um anticorpo monoclonal que compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 57 e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 58.

[020] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos de tratamento, composições e usos supracitados, o câncer expressa um ou ambos dentre PD-L1 e PD-L2. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 é elevada no câncer. Em uma modalidade adicional, o câncer é PD-1/ PD-L1 refratário (por exemplo, é um câncer que não foi responsivo a tratamento anterior com um agente anti-PD-1 ou anti-PD-L1). Em uma modalidade adicional, o câncer é melanoma refratário de PD-1/PD-L1.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[021] A Figura 1 mostra sequências de aminoácidos da cadeia leve e da cadeia pesada para um anticorpo monoclonal anti-PD-1 exemplificativo útil da presente invenção (SEQ ID NOs:5 e 10, respectivamente). As regiões variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada são sublinhadas (SEQ ID NOs: 4 e 9) e as CDRs em negrito e circunscritas por uma caixa.

[022] A Figura 2 mostra que Cmax de pembrolizumabe em regime permanente para 400 mg Q6W se enquadra na faixa de 2 mg/kg de Q3W e 200 mg Q3W a 10 mg/kg de Q2W.

[023] A Figura 3 mostra que as exposições a pembrolizumabe (Cavg e Cmin) em regime permanente são similares para 400 mg Q6W em relação a 2 mg/kg de Q3W e 200 mg Q3W.

[024] As Figuras 4A e 4B mostram os perfis farmacocinéticos de pembrolizumabe em regime permanente para o regime de dosagem de 400 mg Q6W em comparação com 200 mg de regime de dosagem fixo (topo) e o regime de dosagem com base em peso de 2 mg/kg de Q3W, fundo). Os resultados são fornecidos para concentrações em escala logarítmica (Figura 4A) e concentrações em escala linear (Figura 4B).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO I. Definições e Abreviaturas

[025] Como usado ao longo do relatório descritivo e reivindicações anexas, as seguintes abreviaturas se aplicam: AE efeito adverso AUCss área sob a curva de concentração-tempo em regime permanente BICR análise central independente às cegas Cavg,ss concentração ponderada por tempo em regime permanente CDR região determinante de complementaridade CI intervalo de confiança Cmax,ss concentrações de pico em regime permanente Cmin,ss concentrações de vale em regime permanente CPS pontuação positiva combinada CTLA4 antígeno 4 associado ao linfócito T citotóxico DOR duração de resposta ECG eletrocardiograma ECOG Eastern Cooperative Oncology Group E-R resposta à exposição (concentração) FFPE embebida em parafina fixa em formalina FR região de estrutura GM média geométrica HCC carcinoma hepatocelular HNSCC câncer de célula escamosa de cabeça e pescoço HL linfoma de Hodgkin

IgG imunoglobulina G IHC imuno-histoquímica IV intravenosa LPS pontuação de proporção de linfoma mAb anticorpo monoclonal MCC carcinoma de célula de Merkel MEL melanoma MMR reparo de pareamento errado MPS pontuação de proporção modificada MRI imageamento por ressonância magnética MSI-H instabilidade alta de microssatélite NCI CTCAE National Cancer Institute – Common Terminology Criteria for Adverse Events NSCLC câncer pulmonar de célula não pequena ORR taxa de resposta objetiva OS sobrevivência total PD doença progressiva PD-1 morte programada 1 (também conhecido como morte celular programada-1 e receptor de morte programada 1) PD-L1 ligante 1 de morte celular programada 1 PD-L2 ligante 2 de morte celular programada 1 PFS sobrevivência livre de progressão PK farmacocinética Q2W uma dose a cada duas semanas Q3W uma dose a cada três semanas Q6W uma dose a cada seis semanas RCC carcinoma de célula renal

SAE efeito adverso grave SC subcutânea TPS pontuação de proporção tumoral VH região variável de cadeia pesada de imunoglobulina VL região variável de cadeia leve de imunoglobulina

[026] Para que a invenção possa ser mais prontamente entendida, certos termos técnicos e científicos são especificamente definidos abaixo. Salvo se especificamente definido em qualquer parte da presente invenção, todos os outros termos técnicos e científicos usados na presente invenção têm o significado comumente entendido por um elemento de conhecimento comum na técnica à qual pertence esta invenção.

[027] A referência a “ou” indica uma ou ambas as possibilidades, salvo se o contexto indicar claramente uma das possibilidades indicadas. Em alguns casos, “e/ou” foi empregado para destacar uma ou ambas as possibilidades.

[028] Como usado na presente invenção, incluindo nas reivindicações anexas, as formas singulares de palavras como “um”, “uma”, “o” e “a” incluem suas referências no plural correspondentes salvo se o contexto indicar claramente de outro modo.

[029] O termo “cerca de”, quando modificador da quantidade (por exemplo, mg) de uma substância ou composição, ou o valor de um parâmetro que caracteriza uma etapa em um método, ou similares, se refere à variação na quantidade numérica que pode ocorrer, por exemplo, através de procedimentos típicos de medição, manuseio e amostragem envolvidos na preparação, caracterização e/ou uso da substância ou composição; através de erro inadvertido nesses procedimentos; através de diferenças na fabricação, fonte ou pureza dos ingredientes empregados para produzir ou usar as composições ou executar os procedimentos; e similares. Em certas modalidades, “cerca de” pode significa uma variação de ± 0,1%, ± 0,5%, ± 1%, ± 2%, ± 3%, ± 4%, ± 5%, ± 6%, ± 7%, ± 8%, ± 9% ou ± 10%. Quando em referência à dosagem de “cerca de 400 mg”, a dosagem pode ser de 360 mg a 440 mg, de 370 mg a 430 mg, de 380 mg a 420 mg, de 390 mg a 410 mg, de 395 mg a 405 mg, de 400 mg a 440 mg ou de 390 mg a 440 mg. Em modalidades alternativas, a dosagem pode ser 360 mg, 365 mg, 370 mg, 375 mg, 380 mg, 385 mg, 390 mg, 395 mg, 400 mg, 405 mg, 410 mg, 415 mg, 420 mg, 425 mg, 430 mg, 435 mg ou 440 mg. Quando em referência à quantidade de tempo entre administrações em um regime de tratamento terapêutico (isto é, quantidade de tempo entre administrações do anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e do anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, por exemplo, “cerca de 6 semanas”, que é usada de modo intercambiável na presente invenção com “aproximadamente a cada seis semanas”), “cerca de” se refere ao tempo estabelecido ± uma variação que pode ocorrer devido ao cronograma e à disponibilidade do paciente/médico em torno da data pretendida de 6 semanas. Por exemplo, “cerca de 6 semanas” pode se referir a 6 semanas ±5 dias, 6 semanas ±4 dias, 6 semanas ±3 dias, 6 semanas ±2 dias ou 6 semanas ±1 dia, ou pode se referir a 5 semanas, 2 dias até 6 semanas, 5 dias.

[030] O “regime permanente” de farmacocinética é um período de tempo durante o qual qualquer acúmulo de concentrações de fármaco pertinentes a múltiplas doses foi maximizado e a exposição a fármaco sistêmica é considerada uniforme após cada dose subsequente administrada; no caso específico de pembrolizumabe, o regime permanente é alcançado em e após ~16 semanas de administração.

[031] AUCss, Cavg,ss e Cmin,ss são medições farmacocinéticas da exposição sistêmica ao fármaco (por exemplo, pembrolizumabe) em humanos após sua administração, e são tipicamente consideradas gatilhos de eficácia de fármaco.

AUCss e Cavg,ss representam a exposição média por um intervalo de dosagem, mas diferem em termos de unidades. “Cmin,ss” representa a concentração de fármaco mínima ou menor (de vale) observada no fim de um intervalo de dosagem, logo antes de a próxima dose ser administrada.

[032] “Cmax,ss” é a concentração de fármaco máxima ou mais alta (de pico) observada logo após sua administração. No caso específico de pembrolizumabe, que é administrado como infusão intravenosa, a concentração de pico ocorre imediatamente após o fim da infusão. Cmax,ss é uma métrica que é tipicamente considerada um acionador de segurança de acionador.

[033] “Administração” e “tratamento”, como aplicado a um animal, humano, indivíduo experimental, célula, tecido, órgão ou fluido biológico, se refere ao contato de um agente exógeno farmacêutico, terapêutico, diagnóstico, ou composição ao animal, humano, indivíduo, célula, tecido, órgão ou fluido biológico. “Tratar” ou “tratamento” de um câncer, como usado na presente invenção, significa administrar um anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno, sozinho ou em combinação com um anticorpo anti-CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, a um indivíduo que tem um câncer, ou diagnosticado com um câncer, para alcançar pelo menos um efeito terapêutico positivo, como, por exemplo, número reduzido de células cancerosas, tamanho tumoral reduzido, taxa reduzida de infiltração de célula cancerosa nos órgãos periféricos ou taxa reduzida de metástase tumoral ou crescimento tumoral. "Tratamento" pode incluir um ou mais dos seguintes: indução/aumento de uma resposta imunológica antitumoral, diminuição do número de um ou mais marcadores tumorais, parada ou atraso do crescimento de um tumor ou câncer sanguíneo ou progressão de doença associada à ligação de PD-1 a seus ligantes PD-L1 e/ou PD-L2 (“doença relacionada a PD-1”) como câncer, estabilização de doença relacionada a PD-1, inibição do crescimento ou sobrevivência de células tumorais, eliminação ou redução do tamanho de uma ou mais lesões cancerosas ou tumores, diminuição do nível de um ou mais marcadores tumorais, melhora ou anulação das manifestações clínicas de doença relacionada a PD-1, redução da gravidade ou duração dos sintomas clínicos de doença relacionada a PD-1 como câncer, prolongamento da sobrevivência de um paciente em relação à sobrevivência esperada em um paciente não tratado similar, e indução de remissão completa ou parcial de uma condição cancerosa ou outra doença relacionada a PD-1.

[034] Os efeitos terapêuticos positivos em câncer podem ser medidos de inúmeras formas (Consulte, W. A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S a 10S (2009)). Por exemplo, em relação à inibição de crescimento tumoral, de acordo com os padrões do NCI, um T/C ≦42% é o nível mínimo de atividade antitumoral. Uma T/C < 10% é considerada um nível alto de atividade antitumoral, com T/C (%) = volume tumoral Mediano do volume tumoral tratado/Mediano do controle ×

100. Em algumas modalidades, o tratamento alcançado por uma quantidade terapeuticamente eficaz é qualquer um dentre sobrevivência livre de progressão (PFS), sobrevivência livre de doença (DFS) ou sobrevivência total (OS). PFS, também chamado de “Tempo para Progressão Tumoral” indica a extensão de tempo durante e após o tratamento na qual o câncer não cresce, e inclui a quantidade de tempo que os pacientes experimentaram uma resposta completa ou uma resposta parcial, assim como a quantidade de tempo que os pacientes experimentaram a doença estável. DFS se refere à extensão de tempo durante e após o tratamento na qual o paciente permanece livre de doença. OS se refere a um prolongamento em expectativa de vida em comparação com indivíduos ou pacientes virgens ou não tratados. Embora uma modalidade dos métodos de tratamento, composições e usos da presente invenção possa não ser eficaz no alcance de um efeito terapêutico positivo em todo paciente, isso deve se aplicar em um número estatisticamente significativo de indivíduos como determinado por qualquer teste estatístico conhecido na técnica como o teste t de Student, o teste chi2, o teste U de acordo com Mann e Whitney, o teste Kruskal-Wallis (teste H), o teste Jonckheere-Terpstra e o teste Wilcoxon.

[035] O termo “paciente” (alternativamente chamado de “indivíduo” ou “elemento” na presente invenção) se refere a um mamífero (por exemplo, rato, camundongo, cão, gato, coelho) capaz de ser tratado com os métodos e as composições da invenção, com máxima preferência, um humano. Em algumas modalidades, o paciente é um paciente adulto. Em outras modalidades, o paciente é um paciente pediátrico.

[036] O termo "anticorpo" se refere a qualquer forma de anticorpo que exibe atividade de ligação ou biológica desejada. Assim, é usado no sentido mais amplo e abrange especificamente, mas não se limita a, anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento completo), anticorpos policlonais, anticorpos humanizados, anticorpos completamente humanos e anticorpos quiméricos. “Anticorpos parentais” são anticorpos obtidos pela exposição de um sistema imunológico a um antígeno antes da modificação dos anticorpos para um uso pretendido, como humanização de um anticorpo para uso como um agente terapêutico humano.

[037] Em geral, a unidade estrutural de anticorpo básica compreende um tetrâmero. Cada tetrâmero inclui dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, cada par tendo uma cadeia “leve” (cerca de 25 kDa) e uma cadeia “pesada” (cerca de 50 a 70 kDa). A porção de terminal amino de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos principalmente responsáveis pelo reconhecimento de antígeno. A porção de terminal carbóxi da cadeia pesada pode definir uma região constante responsável principalmente pela função efetora. Tipicamente, as cadeias leves humanas são classificadas como cadeias leves capa e lambda. Adicionalmente, as cadeia pesadas humanas são tipicamente classificadas como mu, delta, gama, alfa ou épsilon, e definem o isótipo de anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. Dentro das cadeias leve e pesada, as regiões constante e variável são unidas por uma região “J” de cerca de 12 ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada também incluindo uma região “D” de cerca de 10 mais aminoácidos. Consulte em geral, Fundamental Immunology Cap. 7 (Paul, W., ed., 2ª ed. Raven Press, N.Y., EUA (1989)).

[038] As regiões variáveis de cada par de cadeia leve/pesada formam os sítios de ligação a anticorpo. Assim, em geral, um anticorpo intacto tem dois sítios de ligação. Exceto em anticorpos bifuncionais ou biespecíficos, os dois sítios de ligação são, em geral, iguais.

[039] Tipicamente, os domínios variáveis tanto da cadeia pesada quanto da cadeia leve compreendem três regiões hipervariáveis, também chamadas de regiões determinantes de complementaridade (CDRs), que estão localizadas dentro de regiões de estrutura relativamente conservadas (FR). As CDRs são usualmente alinhadas pelas regiões de estrutura, permitindo a ligação a um epítopo específico. Em geral, do terminal N para terminal C, os domínios variáveis tanto de cadeia leve quanto de cadeia pesada compreendem FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. A atribuição de aminoácidos a cada domínio é, em geral, de acordo com as definições de Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md., EUA; 5ª ed.; NIH Publ. nº 91 a 3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1 a 75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609 a 6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196:901 a 917 ou Chothia, et al., (1989) Nature 342:878 a 883.

[040] O termo “região hipervariável” se refere aos resíduos de aminoácido de um anticorpo que são responsáveis pela ligação a antígeno. A região hipervariável compreende resíduos de aminoácido de uma “região determinante de complementaridade” ou “CDR” (isto é, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 no domínio variável de cadeia leve e CDRH1, CDRH2 e CDRH3 no domínio variável de cadeia pesada). Consulte Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md, EUA. (Que define as regiões de CDR de um anticorpo por sequência); consulte também Chothia e Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901 a 917 (que define as regiões CDR de um anticorpo por estrutura). O termo “estrutura” ou resíduos de “FR” se refere àqueles resíduos de domínio variável além dos resíduos de região hipervariável definidos na presente invenção como resíduos de CDR.

[041] Salvo se indicado de outro modo, um “fragmento de anticorpo” ou “fragmento de ligação ao antígeno” se refere a fragmentos de ligação a antígeno de anticorpos, isto é, fragmentos de anticorpo que retêm a capacidade de se ligar especificamente ao antígeno ligado ao anticorpo de comprimento completo, por exemplo, fragmentos que retêm uma ou mais regiões CDR. Os exemplos de fragmentos de ligação a anticorpo incluem, mas sem limitação a, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv.

[042] Um anticorpo que “se liga especificamente a” uma proteína-alvo especificada é um anticorpo que exibe ligação preferencial àquele alvo em comparação com outras proteínas, mas essa especificidade não requer especificidade de ligação absoluta. Um anticorpo é considerado “específico” para seu alvo pretendido se sua ligação for determinante da presença da proteína- alvo em uma amostra, por exemplo, sem produzir resultados indesejados como falsos positivos. Anticorpos, ou fragmentos de ligação dos mesmos, úteis da presente invenção se ligarão à proteína-alvo com uma afinidade que é pelo menos duas vezes maior, preferencialmente pelo menos dez vezes maior, mais preferencialmente pelo menos 20 vezes maior, e com máxima preferência pelo menos 100 vezes maior que a afinidade com as proteínas-não alvo. como usado na presente invenção, sabe-se que um anticorpo se liga especificamente a um polipeptídeo que compreende uma determinada sequência de aminoácidos, por exemplo, a sequência de aminoácidos de um molécula de PD-1 humana ou PD- L1 humana madura, se se ligar a polipeptídeos que compreendem aquela sequência, mas não se ligam a proteínas que carecem daquela sequência.

[043] “Anticorpo quimérico” se refere a um anticorpo no qual uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntica ou homóloga a sequências correspondentes em um anticorpo derivado de uma espécie particular (por exemplo, humano) ou pertencente a uma classe ou subclasse particular de anticorpo, enquanto o restante da cadeia(s) é idêntico ou homólogo a sequências correspondentes em um anticorpo derivado de uma outra espécie (por exemplo, camundongo) ou pertencente a uma outra classe ou subclasse de anticorpo, assim como fragmentos de tais anticorpos, desde que exibam a atividade biológica desejada.

[044] “Anticorpo humano” se refere a um anticorpo que compreende apenas sequências de proteínas de imunoglobulina humana. Um anticorpo humano pode conter cadeias de carboidrato murinas se produzidas em um camundongo, em uma célula de camundongo, ou em um hibridoma derivado de uma célula de camundongo. De modo similar, “anticorpo de camundongo” ou “anticorpo de rato” se refere a um anticorpo que compreende apenas sequências de imunoglobulina de camundongo ou rato, respectivamente.

[045] “Anticorpo humanizado” se refere a formas de anticorpos que contêm sequências de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) assim como anticorpos humanos. Tais anticorpos contêm sequência mínima derivado de imunoglobulina não humana. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos dentre pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, nos quais todas ou substancialmente todas as alças hipervariáveis correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões FR são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado compreenderá também opcionalmente pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. O prefixo “hum”, “hu” ou “h” é adicionado a designações de clone de anticorpo quando necessário para distinguir anticorpos humanizados de anticorpos de roedores parentais. As formas humanizadas de anticorpos de roedores compreenderão em geral as mesmas sequências de CDR dos anticorpos de roedores parentais, embora certas substituições de aminoácido possam ser incluídas para aumentar a afinidade, aumentar a estabilidade do anticorpo humanizado ou por outras razões.

[046] Os termos “câncer”, “canceroso” ou “maligno” se referem a ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos que é tipicamente caracterizada por crescimento celular desregulado. Os exemplos de câncer incluem, mas sem limitação a, carcinoma, linfoma, leucemia, blastoma e sarcoma. Os exemplos mais particulares de tais cânceres incluem, mas sem limitação a, carcinoma de célula escamosa, mieloma, câncer pulmonar de célula pequena, câncer pulmonar de célula não pequena, glioma, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, leucemia mieloide aguda (AML), mieloma múltiplo, câncer gastrointestinal (trato), câncer renal, câncer de ovário, câncer hepático, leucemia linfoblástica, leucemia linfocítica, câncer colorretal, câncer endometrial, câncer nos rins, câncer de próstata, câncer da tireoide, melanoma, condrossarcoma, neuroblastoma, câncer pancreático, glioblastoma multiforme, câncer cervical, cérebro câncer, câncer de estômago, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, carcinoma de cólon e câncer de cabeça e pescoço. Cânceres adicionais que podem ser tratados de acordo com a presente invenção incluem aqueles caracterizados por expressão elevada de um ou ambos dentre PD-L1 e PD-L2 em amostras de tecido testadas.

[047] “Agente bioterapêutico” significa uma molécula biológica, como um anticorpo ou proteína de fusão, que bloqueia a sinalização de ligante/receptor em qualquer via biológica que suporta manutenção e/ou crescimento tumoral ou suprime a resposta imunológica antitumoral.

[048] “CDR” ou “CDRs” significa região(ões) determinante(s) de complementaridade em uma região variável de imunoglobulina, em geral definida usando o sistema de numeração Kabat.

[049] “Quimioterapia contendo platina” (também conhecida como platinas) se refere ao uso de agente(s) quimioterápico(s) usado(s) para tratar câncer que são complexes de coordenação de platina. Os agentes quimioterápicos contendo platina são agentes de alquilação que reticulam DNA, resultando em reparo de pareamento errado de DNA ineficaz e em geral levando à apoptose. Os exemplos de platinas incluem cisplatina, carboplatina e oxaliplatina.

[050] “Agente quimioterápico” é um composto químico útil no tratamento de câncer. As classes de agentes quimioterápicos incluem, mas sem limitação a: agentes de alquilação, antimetabólitos, inibidores de quinase, alcaloides vegetais de veneno do fuso, antibióticos citotóxicos/antitumorais, inibidores de topisomerase, fotossensibilizadores, antiestrogênios e moduladores seletivos do receptor de estrogênio (SERMs), antiprogesteronas, reguladores descendentes de receptor de estrogênio (ERDs), antagonistas do receptor de estrogênio, agonistas do hormônio de liberação do hormônio leutinizante, antiandrógenos, inibidores de aromatase, inibidores de EGFR, inibidores de VEGF, oligonucleotídeos antissenso que inibem a expressão de genes implicada em proliferação de célula ou crescimento tumoral anormal. Os agentes quimioterápicos úteis nos métodos de tratamento da presente invenção incluem agentes citotóxicos e/ou citostáticos.

[051] “Chothia” significa um sistema de numeração de anticorpo descrito em Al-Lazikani et al., JMB 273:927 a 948 (1997).

[052] “Variantes conservativamente modificadas” ou “substituição conservativa” se refere a substituições de aminoácidos em uma proteína com outros aminoácidos que têm características similares (por exemplo, carga, tamanho de cadeia lateral, hidrofobicidade/hidrofilicidade, conformação e rigidez de cadeia principal, etc.), de modo que as alterações possa ser frequentemente feitas sem alterar a atividade biológica ou outra propriedade desejada da proteína, como afinidade e/ou especificidade de antígeno. Os elementos versados na técnica reconhecem que, em geral, substituições de aminoácido simples em regiões não essenciais de um polipeptídeo não alteram substancialmente a atividade biológica (consulte, por exemplo, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., pág. 224 (4ª Ed.)). Além disso, as substituições de aminoácidos funcional ou estruturalmente similares são menos propensas a atrapalhar a atividade biológica. As substituições conservativas exemplificativas são apresentadas na Tabela 1. Tabela 1. Substituições de Aminoácido Conservativas Exemplificativas Resíduo Original Substituição Conservativa Ala (a) Gly; Ser Arg (R) Lys; His Asn (N) Gln; His Asp (D) Glu; Asn Cys (C) Ser; Ala Gln (Q) Asn Glu (E) Asp; Gln Gly (G) Ala

Resíduo Original Substituição Conservativa His (H) Asn; Gln Ile (I) Leu; Val Leu (L) Ile; Val Lys (K) Arg; His Met (M) Leu; Ile; Tyr Phe (F) Tyr; Met; Leu Pro (P) Ala Ser (S) Thr Thr (T) Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr (Y) Trp; Phe Val (V) Ile; Leu

[053] "Consiste essencialmente em” e variações como “consistem essencialmente em” ou “consistindo essencialmente em”, como usado por todo o relatório descritivo e reivindicações, indicam a inclusão de quaisquer elementos ou grupo de elementos mencionados, e a inclusão opcional de outros elementos, de natureza similar ou diferente dos elementos mencionados, que não alteram materialmente as propriedades básicas ou inovadoras do regime de dosagem, método ou composição especificado. como um exemplo não limitante, um fragmento de ligação ao antígeno de PD-1 que consiste essencialmente em uma sequência de aminoácidos mencionada também pode incluir um ou mais aminoácidos, incluindo substituições de um ou mais resíduos de aminoácido, que não afetam materialmente as propriedades do composto de ligação.

[054] “Que compreende” ou variações como “compreendem”, “compreende” ou “compreendidos de” são usados por todo o relatório descritivo e reivindicações em um sentido inclusivo, isto é, para especificar a presença dos recursos estabelecidos mas não exclui a presença ou adição de recursos adicionais que podem melhorar materialmente a operação ou a utilidade de qualquer uma das modalidades da invenção, salvo se o contexto exigir de outro modo devido a linguagem de expressão ou implicação necessária.

[055] “Co-formulados” ou “co-formulação” como usado na presente invenção se refere a pelo menos dois anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos diferentes que são formulados juntos e armazenados como um produto combinado em um único frasco ou vaso (por exemplo, um dispositivo de injeção) em vez de serem formulados e armazenados individualmente e, então, misturados antes da administração ou administrados separadamente. Em uma modalidade, uma co-formulação contém um anticorpo anti-PD-1 e um anticorpo anti-CTLA4.

[056] “Anticorpo monoclonal anti-PD-L diagnóstico” significa um mAb que se liga especificamente à forma madura do PD-L designado (PD-L1 ou PD-L2) que é expressado na superfície de certas células de mamífero. Uma PD-L madura carece da sequência líder pré-secretória, também chamada de peptídeo líder. Os termos “PD-L” e “PD-L madura” são usados de modo intercambiável na presente invenção, e devem ser entendidos por significar a mesma molécula salvo se indicado de outro modo ou prontamente evidente a partir do contexto.

[057] Como usado na presente invenção, um mAb de anti-PD-L1 humana diagnóstico ou um mAb de PD-L1 anti-h se refere a um anticorpo monoclonal que se liga especificamente à PD-L1 humana madura. Uma molécula de PD-L1 humana madura consiste em aminoácidos 19 a 290 da seguinte sequência:

MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYW EMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMIS YGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGK

TTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVI LGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET (SEQ ID NO: 17).

[058] Os exemplos específicos de mAbs de anti-PD-L1 humana diagnósticos úteis como mAbs diagnósticos para deteção de expressão imuno-histoquímica (IHC) de PD-L1 em seções de tecido tumoral embebidas em parafina e fixas em formalina (FFPE) são anticorpo 20C3 e anticorpo 22C3, que são descritos no documento WO 2014/100079. Esses anticorpos compreendem as sequências de aminoácidos de região variável de cadeia leve e cadeia pesada mostradas na Tabela 2 abaixo: Tabela 2. Anticorpos Monoclonais 20C3 e 22C3 Região Variável de Cadeia Leve Madura 20C3

DIVMSQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSLLNSRTRKNYLAWYQQK PGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVY SEQ ID NO: 18

YCQQSYDVVTFGAGTKLELK Região Variável de Cadeia Pesada Madura 20C3

QVQVQQSGAELAEPGASVKMSCKASGYIFTSYWMHWLKQRPG QGLEWIGYINPSSDYNEYSEKFMDKATLTADKASTTAYMQLISLTSE SEQ ID NO: 19

DSAVYYCARSGWLVHGDYYFDYWGQGTTLTVSS Região Variável de Cadeia Leve Madura 22C3

DIVMSQSPSSLAVSAGEKVTMTCKSSQSLLHTSTRKNYLAWYQQK PGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVY SEQ ID NO: 20

YCKQSYDVVTFGAGTKLELK Região Variável de Cadeia Pesada Madura 22C3

QVHLQQSGAELAKPGASVKMSCKASGYTFTSYWIHWIKQRPGQ GLEWIGYINPSSGYHEYNQKFIDKATLTADRSSSTAYMHLTSLTSEDS SEQ ID NO: 21

AVYYCARSGWLIHGDYYFDFWGQGTTLTVSS

[059] Um outro mAb de anti-PD-L1 humana que foi relatado como sendo útil para deteção de expressão de IHC de PD-L1 em seções de tecido FFPE (Chen, B.J. et al., Clin Cancer Res 19: 3462 a 3473 (2013)) é um mAb de anti-PD-L1 humana de coelho publicamente disponível junto à Sino Biological, Inc. (Pequim, P.R. China; número de catálogo 10084-R015).

[060] “Região de estrutura” ou “FR” como usado na presente invenção significa as regiões variáveis de imunoglobulina com exceção das regiões CDR.

[061] “Anticorpo isolado” e “fragmento de anticorpo isolado” se referem ao status de purificação e em tal contexto significam a molécula citada que é substancialmente livre de outras moléculas biológicas como ácidos nucleicos, proteínas, lipídeos, carboidratos, ou outro material como resíduos celulares e meios de crescimento. Em geral, o termo “isolado” não pretende se referir a uma ausência completa de tal material ou a uma ausência de água, tampões ou sais, salvo se estiverem presentes em quantidades que interferem substancialmente no uso experimental ou terapêutico do composto de ligação como descrito na presente invenção.

[062] “Kabat”, como usado na presente invenção, significa um sistema de numeração e alinhamento de imunoglobulina desenvolvido por Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., EUA).

[063] "Anticorpo monoclonal" ou “mAb” ou “Mab”, como usado na presente invenção, se refere a um população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, as moléculas de anticorpo que compreendem a população são idênticas em sequência de aminoácidos exceto pelas possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em quantidades menores. Em contrapartida, as preparações de anticorpo convencionais (policlonais) incluem tipicamente uma multitude de diferentes anticorpos com diferentes sequências de aminoácidos em seus domínios variáveis, particularmente suas CDRs, que são frequentemente específicas para diferentes epítopos. O modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como sendo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, e não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados de acordo com a presente invenção podem ser feitos pelo método de hibridoma primeiramente descrito por Kohler et al. (1975) Nature 256: 495, ou podem ser feitos por métodos de DNA recombinante (consulte, por exemplo, Patente nº US

4.816.567). Os “anticorpos monoclonais” também podem ser isolados de bibliotecas de anticorpo de fago com o uso das técnicas descritas em Clackson et al. (1991) Nature 352: 624 a 628 e Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581 a 597,

por exemplo. Consulte também Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731.

[064] Um “anticorpo anti-CTLA4” útil em qualquer um dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da presente invenção inclui anticorpos monoclonais (mAb), ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, que se ligam especificamente a CTLA4 humano e bloqueiam a interação de CTLA4 com seus ligantes, CD80 (B7.1) e CD 86 (B7.2). Um anticorpo anti-CTLA4 pode ser um anticorpo humano, um anticorpo humanizado ou um anticorpo quimérico, e pode incluir uma região constante humana. Em algumas modalidades, a região constante humana é selecionada a partir do grupo que consiste em regiões constantes de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 e, em modalidades preferenciais, a região constante humana é uma região constante de IgG1 ou IgG4. Em algumas modalidades, o fragmento de ligação ao antígeno é selecionado a partir do grupo que consiste em fragmentos Fab, Fab'-SH, F(ab')2, scFv e Fv.

[065] Um “anticorpo anti-PD-1” útil em qualquer um dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da presente invenção inclui anticorpos monoclonais (mAb), ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, que se ligam especificamente à PD-1 humana. Nomes alternativos ou sinônimos para PD-1 e seus ligantes incluem: PDCD1, PD1, CD279 e SLEB2 para PD-1; PDCD1L1, PDL1, B7H1, B7-4, CD274 e B7-H para PD-L1; e PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc e CD273 para PD-L2. Em qualquer um dos métodos de tratamento, composições e usos da presente invenção nos quais um indivíduo humano está sendo tratado, o anticorpo PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um antagonista de PD-1 que bloqueia a ligação de PD-L1 humana à PD-1 humana, ou bloqueia a ligação tanto de PD-L1 humana quanto de PD-L2 à PD-1 humana. As sequências de aminoácidos de PD-1 humana podem ser encontradas em NCBI Locus nº: NP_005009. As sequências de aminoácidos de PD-L1 e PD-L2 humanas podem ser encontradas em NCBI Locus nº: NP_054862 e NP_079515,

respectivamente. Um anticorpo anti-PD-1 pode ser um anticorpo humano, um anticorpo humanizado ou um anticorpo quimérico, e pode incluir uma região constante humana. Em algumas modalidades, a região constante humana é selecionada a partir do grupo que consiste em regiões constantes de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 e, em modalidades preferenciais, a região constante humana é uma região constante de IgG1 ou IgG4. Em algumas modalidades, o fragmento de ligação ao antígeno é selecionado a partir do grupo que consiste em fragmentos Fab, Fab'-SH, F(ab')2, scFv e Fv.

[066] Expressão de “PD-L1” ou “PD-L2” significa qualquer nível de expressão detectável da proteína PD-L designada na superfície celular ou do mRNA de PD-L designado dentro de uma célula ou tecido, salvo se definido de outro modo. A expressão de proteína PD-L pode ser detectada com um anticorpo de PD-L diagnóstico em um ensaio de IHC de uma seção de tecido tumoral ou por citometria de fluxo. Alternativamente, a expressão de proteína PD-L por células tumorais pode ser detectada por imageamento por PET, usando um agente de ligação (por exemplo, fragmento de anticorpo, aficorpo e similares) que se liga especificamente ao alvo de PD-L desejado, por exemplo, PD-L1 ou PD- L2. As técnicas para detectar e medir expressão de mRNA de PD-L incluem RT- PCR e RT-PCR quantitativa em tempo real.

[067] Diversas abordagens foram descritas para quantificar a expressão de proteína PD-L1 em ensaios de IHC de seções de tecido tumoral. Consulte, por exemplo, Thompson et al., PNAS 101 (49): 17174 a 17179 (2004); Thompson et al., Cancer Res. 66:3381 a 3385 (2006); Gadiot et al., Cancer 117:2192-2201 (2011); Taube et al., Sci Transl Med 4, 127ra37 (2012); e Toplian et al., New Eng. J Med. 366 (26): 2443 a 2454 (2012).

[068] Uma abordagem emprega um ponto de extremidade binário simples de positivo ou negativo para expressão de PD-L1, com um resultado positivo definido em termos da porcentagem de células tumorais que exibem evidência histológica de manchamento de membrana de superfície celular. Uma seção de tecido tumoral que é contada como positiva para expressão de PD-L1 é pelo menos 1%, e preferencialmente 5% do total de células tumorais.

[069] Em uma outra abordagem, a expressão de PD-L1 na seção de tecido tumoral é quantificada nas células tumorais assim como em células imunes infiltrantes, que compreendem predominantemente linfócitos. A porcentagem de células tumorais e células imunes infiltrantes que exibem manchamento de membrana são separadamente quantificadas como < 5%, 5 a 9% e, então, em 10% de aumentos até 100%. Para células tumorais, a expressão de PD-L1 é contada como negativa se a o pontuação for < 5% da pontuação e positiva se a pontuação for ≥ 5%. A expressão de PD-L1 no infiltrado imune é relatada como uma medição semiquantitativa chamada de pontuação de inflamação ajustada (AIS), que é determinada pela multiplicação do percentual de células de manchamento de membrana pela intensidade do infiltrado, que é graduada como nenhuma (0), branda (pontuação de 1, linfócitos raros), moderada (pontuação de 2, infiltração focal de tumor por agregados linfo-histiocíticos) ou grave (pontuação de 3, infiltração difusa). Uma seção de tecido tumoral é contada como positiva para expressão de PD-L1 por infiltrados imunes se o AIS for ≥ 5.

[070] Uma seção de tecido de um tumor foi manchado por IHC com um anticorpo de PD-L1 diagnóstico pode também ser pontuada para expressão de proteína PD-L1 pela avaliação da expressão de PD-L1 tanto nas células tumorais quanto nas células imunes infiltrantes na seção de tecido com o uso de um processo de pontuação. Consulte o documento WO 2014/165422. Um processo de pontuação de PD-L1 compreende examinar cada ninho de tumor na seção de tecido em relação ao manchamento, e atribuir à seção de tecido uma ou ambas dentre uma pontuação H modificada (MHS) e uma pontuação de proporção modificada (MPS). Para atribuir a MHS, quatro porcentagens separadas são estimadas através de todas as células tumorais viáveis e células inflamatórias mononucleares manchadas em todos os ninhos de tumor examinados: (a) células que não têm manchamento (intensidade = 0), (b) manchamento fraco (intensidade =1+), © manchamento moderado (intensidade =2+) e (d) manchamento forte (intensidade =3+). Uma célula precisa ter pelo menos manchamento de membrana parcial para ser incluída nas porcentagens de manchamento fraca, moderada ou forte. As porcentagens estimadas, cuja soma é 100%, são, então, inseridas na fórmula de 1 x (percentual de células com manchamento fraco) + 2 x (percentual de células com manchamento moderado) + 3 x (percentual de células com manchamento forte), e o resultado é atribuído à seção de tecido como a MHS. A MPS é atribuída por estimativa, através de todas as células tumorais viáveis e células inflamatórias mononucleares manchadas em todos os ninhos de tumor examinados, da porcentagem de células que têm pelo menos manchamento de membrana parcial de qualquer intensidade e da porcentagem resultante que é atribuída à seção de tecido como a MPS. Em algumas modalidades, o tumor é designado como positivo para expressão de PD-L1 se a MHS ou a MPS for positiva.

[071] Um outro método para pontuar/quantificar a expressão de PD-L1 em um tumor é a “pontuação positiva combinada” ou “CPS”, que se refere a um algoritmo para determinar uma pontuação de expressão de PD-L1 a partir de uma amostra de tumor de um paciente. A CPS é útil na seleção de pacientes para tratamento com regimes de tratamento particulares incluindo métodos de tratamento que compreendem a administração de um anticorpo anti-PD-1 no qual a expressão de PD-L1 é associada a uma taxa de resposta mais alta em uma população de paciente particular em relação à mesma população de paciente que não expressa PD-L1. A CPS é determinada pela determinação do número de células tumorais positivas para PD-L1 viáveis, do número de células tumorais negativas para PD-L1 viáveis e do número de células inflamatórias mononucleares positivas para PD-L1 viáveis (MIC) em um tecido de tumor de um paciente que tem um tumor e calculando a CPS usando a seguinte fórmula: (nº de células tumorais positivas para PD−L1) + (nº de MIC positiva para PD−L1) x100% (nº de células tumorais positivas para PD−L1) + (células tumorais negativas para PD−L1)

[072] Em modalidades particulares, o método de pontuação de expressão de PD-L1 usado é a “pontuação de proporção de linfoma”. O linfoma é caracterizado por uma população homogênea de células confluentes que apagam a arquitetura dos nódulos linfáticos ou a arquitetura de sítio metastático. A “LPS” ou “pontuação de proporção de linfoma” é a porcentagem dessa população de células que expressam PD-L1. Quando se determina a LPS, não se faz nenhuma tentativa de distinguir as células verdadeiramente neoplásicas das células reativas. A expressão de PD-L1 é caracterizada por intensidade de manchamento de membrana parcial ou completa.

[073] Ainda um outro método de pontuação para expressão de PD-L1 é o “TPS” ou “pontuação de proporção tumoral”, que é a porcentagem de células tumorais que expressam PD-L1 na membrana celular. TPS inclui tipicamente a porcentagem de células neoplásicas que expressam PD-L1 em qualquer intensidade (fraca, moderada ou forte), que pode ser determinada usando um ensaio de imuno-histoquímica usando um mAb diagnóstico de anti-PD-L1 humana, por exemplo, anticorpo 20C3 e anticorpo 22C3, descrito acima. As células são consideradas como expressando PD-L1 se o manchamento de membrana estiver presente, incluindo células com manchamento de membrana parcial.

[074] O nível de expressão de mRNA de PD-L pode ser comparado com os níveis de expressão de mRNA de um ou mais genes de referência que são frequentemente usados em RT-PCR quantitativa, como ubiquitina C.

[075] Em algumas modalidades, um nível de expressão de PD-L1 (proteína e/ou mRNA) por células malignas e/ou por células imunes infiltrantes dentro de um tumor é determinado como sendo “superexpressado” ou “elevado” com base na comparação com o nível de expressão de PD-L1 (proteína e/ ou mRNA) por um controle apropriado. Por exemplo, um nível de expressão de mRNA ou proteína PD-L1 de controle pode ser o nível quantificado em células não malignas do mesmo tipo ou em uma seção de um tecido normal correspondente. Em algumas modalidades preferenciais, a expressão de PD-L1 em uma amostra tumoral é determinada como sendo elevada se a proteína PD-L1 (e/ou mRNA de PD-L1) na amostra for pelo menos 10%, 20%, ou 30% maior que no controle.

[076] “Seção de tecido” se refere a uma parte ou pedaço único de uma amostra de tecido, por exemplo, um fatia fina de tecido cortado de uma amostra de um tecido normal ou de um tumor.

[077] "Tumor" como se aplica a um indivíduo diagnostico com, ou suspeito de ter, um câncer se refere a uma massa de tecido ou neoplasia maligna ou potencialmente maligna de qualquer tamanho, e inclui tumores primários e neoplasias secundárias. Um tumor sólido é um crescimento anormal ou massa de tecido que usualmente não contém cistos ou áreas líquidas. Diferentes tipos de tumores sólidos são classificados para o tipo de células que os mesmos formam. Os exemplos de tumores sólidos são sarcomas, carcinomas e linfomas. As leucemias (cânceres do sangue) em geral não formam tumores sólidos (National Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms).

[078] “Regiões variáveis” ou “região V” como usado na presente invenção significa o segmento de cadeias de IgG que é variável em sequência entre diferentes anticorpos. Isso se estende ao resíduo 109 de Kabat na cadeia leve e 113 na cadeia pesada.

[079] “Critérios de Resposta RECIST 1.1” como usado na presente invenção significa as definições apresentadas em Eisenhauer, E.A. et al., Eur. J. Cancer 45:228 a 247 (2009) para lesões-alvo ou lesões-não alvo, como for adequado com base no contexto no qual a resposta está sendo medida. II. Anticorpos de PD-1 e Fragmentos de Ligação a Antígeno Úteis na Invenção

[080] Os exemplos de mAbs que se ligam a PD-1 humana, úteis nos métodos de tratamento, composições e usos da invenção, são descritos nos documentos US 7.521.051, US 8.008.449 e US 8.354.509. Os mAbs anti-PD-1 humana específicos úteis como o antagonista de PD-1 nos métodos de tratamento, composições e usos da presente invenção incluem: pembrolizumabe (anteriormente conhecido como MK-3475, SCH 900475 e lambrolizumabe), um mAb de IgG4 humanizado com a estrutura descrita em WHO Drug Information, Vol. 27, nº 2, páginas 161 a 162 (2013) e que compreende as sequências de aminoácidos de cadeias pesada e leve mostradas na Figura 1, e os anticorpos humanizados h409A11, h409A16 e h409A17, que são descritos no documento WO 2008/156712 e na Tabela 3.

[081] Em algumas modalidades dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da presente invenção, o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende: (a) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8; ou (b) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 11, 12 e 13 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 14, 15 e 16. Em algumas modalidades da invenção, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo humano. Em outras modalidades, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo humanizado. Em outras modalidades, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo quimérico. Em modalidades específicas, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo monoclonal.

[082] Em outras modalidades dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da presente invenção, o anticorpo PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, se liga especificamente à PD-1 humana e compreende (a) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 9 ou uma variante da mesma, e (b) uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4 ou uma variante da mesma; SEQ ID NO: 22 ou uma variante da mesma; e SEQ ID NO: 23 ou uma variante da mesma.

[083] Uma variante da uma sequência de região variável de cadeia pesada ou sequência de cadeia pesada de comprimento completo é idêntica à sequência de referência exceto pelo fato de ter até 17 substituições de aminoácido conservativas na região de estrutura (isto é, fora das CDRs), e preferencialmente tem menos que dez, nove, oito, sete, seis ou cinco substituições de aminoácido conservativas na região de estrutura. Uma variante da uma sequência de região variável de cadeia leve ou sequência de cadeia leve de comprimento completo é idêntica à sequência de referência exceto pelo fato de ter até cinco substituições de aminoácido conservativas na região de estrutura (isto é, fora das CDRs), e preferencialmente tem menos que quatro, três ou duas substituições de aminoácido conservativas na região de estrutura.

[084] Em uma outra modalidade dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da presente invenção, o anticorpo PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo monoclonal que se liga especificamente à PD-1 humana e compreende (a) uma cadeia pesada que compreende ou consistem em uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 10 ou uma variante da mesma; e (b) uma cadeia leve que compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 5 ou uma variante da mesma; SEQ ID NO: 24 ou uma variante da mesma; ou SEQ ID NO: 25 ou uma variante da mesma.

[085] Ainda em uma outra modalidade dos métodos de tratamento, composições e usos da invenção, o anticorpo PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo monoclonal que se liga especificamente à PD-1 humana e compreende (a) uma cadeia pesada que compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 10 e (b) uma cadeia leve que compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 5.

[086] A Tabela 3 abaixo fornece uma lista das sequências de aminoácidos de mAbs anti-PD-1 para uso nos métodos de tratamento, composições, kits e usos da presente invenção. Tabela 3. Anticorpos anti-PD-1 humana exemplificativos A. Compreende CDRs de cadeias pesada e leve de hPD-1.09A no documento WO2008/156712 (CDRs de cadeias pesada e leve de pembrolizumabe) CDRL1 SEQ ID NO: 1 CDRL2 SEQ ID NO: 2 CDRL3 SEQ ID NO: 3 CDRH1 SEQ ID NO: 6 CDRH2 SEQ ID NO: 7 CDRH3 SEQ ID NO: 8 B. Compreende CDRs de cadeias pesada e leve hPD-1.08A no documento WO2008/156712 CDRL1 SEQ ID NO: 11 CDRL2 SEQ ID NO: 12 CDRL3 SEQ ID NO: 13 CDRH1 SEQ ID NO: 14

CDRH2 SEQ ID NO: 15 CDRH3 SEQ ID NO: 16 C. Compreende a região variável de cadeia pesada madura (VH) de h109A e uma das regiões variáveis de cadeia leve maduras (VL) de K09A no documento WO 2008/156712 Cadeia pesada VH SEQ ID NO: 9 (VH de pembrolizumabe) SEQ ID NO: 4 (VL de pembrolizumabe) Cadeia leve VL ou SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 23 D. Compreende a cadeia pesada madura de 409 e uma das cadeias leves maduras de K09A no documento WO 2008/156712 SEQ ID NO: 10 (cadeia pesada de Cadeia pesada pembrolizumabe) SEQ ID NO: 5 (cadeia leve de Cadeia leve pembrolizumabe) ou SEQ ID NO: 24 ou SEQ ID NO: 25 III. Anticorpos Anti-CTLA4 e Fragmentos de Ligação a Antígeno Úteis na Invenção

[087] Em uma modalidade dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da invenção, o anticorpo anti-CTLA-4 é o anticorpo humano monoclonal 10D1, agora conhecido como ipilimumabe, e comercializado como Yervoy™, que é revelado na Patente US nº 6.984.720 e WHO Drug Information 19(4): 61 (2005). Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-CTLA-4 é tremelimumabe, também conhecido como CP-675,206, que é um anticorpo monoclonal de IgG2 que é descrito na Publicação de Pedido de Patente nº US 2012/263677, ou Publicações de Pedido Internacional PCT nº WO 2012/122444 ou WO 2007/113648 A2.

[088] Em modalidades adicionais dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da presente invenção, o anticorpo anti-CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende: CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 26, 27 e 28 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 29, 30 e 31.

[089] Em outras modalidades dos métodos de tratamento, composições,

kits e usos da presente invenção, o anticorpo anti-CTLA4 é um anticorpo monoclonal, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga a CTLA4 humano e compreende (a) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 32 e (b) uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 33. Anticorpos anti-CTLA4 humana exemplificativos A. Compreende CDRs de cadeias pesada e leve de ipilimumabe CDRL1 RASQSVGSSYLA (SEQ ID NO: 26) CDRL2 GAFSRAT (SEQ ID NO: 27) CDRL3 QQYGSSPWT (SEQ ID NO: 28) CDRH1 SYTMH (SEQ ID NO: 29) FISYDGNNKYYADSVKG (SEQ ID NO: CDRH2 30) CDRH3 TGWLGPFDY (SEQ ID NO: 31) C. Compreende a região variável de cadeia pesada madura e a região variável de cadeia leve madura de ipilimumabe

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGF TFSSYTMHWVRQA

PGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRF VR de cadeia pesada

TISRDNSKNTLY

LQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32)

EIVLTQSPGT LSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQ

QK VR de cadeia leve PGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSG

TDFTLTISRLE

PEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 33) D. Compreende a cadeia pesada madura e a cadeia leve madura de ipilimumabe Cadeia pesada SEQ ID NO: 34 Cadeia leve SEQ ID NO: 35

[090] Em uma modalidade dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da invenção, o anticorpo anti-CTLA-4 é um anticorpo monoclonal que compreende uma cadeia pesada que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 34 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 35. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CTLA4 é um fragmento de ligação ao antígeno de SEQ ID NO: 34 e/ou SEQ ID NO: 35, em que o fragmento de ligação ao antígeno se liga especificamente a CTLA4.

[091] Em uma modalidade dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da invenção, o anticorpo anti-CTLA-4 é qualquer um dos anticorpos anti- CTLA-4, ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, revelados na Publicação de Pedido Internacional nº WO 2016/015675 A1. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CTLA4 é um anticorpo monoclonal que compreende as seguintes CDRs: CDRH1 que compreende a sequência de aminoácidos GFTFSDNW (SEQ ID NO: 36); CDRH2 que compreende a sequência de aminoácidos IRNKPYNYET (SEQ ID NO: 37); CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos TAQFAY (SEQ ID NO: 38;) e/ou CDRL1 que compreende a sequência de aminoácidos ENIYGG (SEQ ID NO: 39); CDRL2 que compreende a sequência de aminoácidos GAT (SEQ ID NO: 40); e CDRL3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de: QNVLRSPFT (SEQ ID NO: 41); QNVLSRHPG (SEQ ID NO: 42); ou QNVLSSRPG (SEQ ID NO: 43).

[092] Em uma modalidade dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da invenção, o anticorpo anti-CTLA4 é 8D2/8D2 (RE) ou uma variante da mesma, 8D2H1L1 ou uma variante da mesma, 8D2H2L2 ou uma variante da mesma, 8D3H3L3 ou uma variante da mesma, 8D2H2L15 ou uma variante da mesma, ou 8D2H2l17 ou uma variante da mesma. Anticorpo VH VL 8D2/8D2 (RE) EVKLDETGGGLVQPGRPMKLSCVASGFTFS DIQMTQSPASLSASVGETVTITCGTSENIY

DNWMNWVRQSPEKGLEWLAQIRNKPYNY GGLNWYQRKQGKSPQLLIFGATNLADG

ETYYSDSVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNNLR MSSRFSGSGSGRQYSLKISSLHPDDVATYY GEDMGIYYCTAQFAYWGQGTLVTVSA (SEQ CQNVLRSPFTFGSGTKLEI (SEQ ID NO: ID NO: 44) 45) 8D2H1L1 EVQLVESGGGLVQPGGSMRLSCAASGFTFS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSENIY

DNWMNWVRQAPGKGLEWLAQIRNKPYN GGLNWYQRKQGKSPKLLIYGATNLASGM

YETYYSDSVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSL SSRFSGSGSGTDYTLKISSLHPDDVATYYC KTEDTGVYYCTAQFAYWGQGTLVTVSS (SEQ QNVLRSPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: ID NO: 46) 47) 8D2H2L2 EVQLVESGGGLVQPGGSMRLSCAASGFTFS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSENIY

DNWMNWVRQAPGKGLEWLAQIRNKPYN GGLNWYQRKPGKSPKLLIYGATNLASGVS

YETYYSASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSL SRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQ KTEDTGVYYCTAQFAYWGQGTLVTVSS (SEQ NVLRSPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 49) ID NO: 48) 8D2H2L2 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSD DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSENIY VARIANTE 1 NWMNWVRQAPGKGLEWLAQIRNKPYNY GGLNWYQRKPGKSPKLLIYGATNLASGVS

ETYYSASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLK SRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQ TEDTGVYYCTAQFAYWGQGTLVTVSS (SEQ NVLRSPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 49) ID NO: 50) 8D3H3L3 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSD DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIY

NWMNWVRQAPGKGLEWVAQIRNKPYNY GGLNWYQQKPGKAPKLLIYGATSLASGV

ETEYAASVKGRFTISRDDSKNSAYLQMNSLK PSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQ TEDTAVYYCTAQFAYWGQGTLVTVSS (SEQ NVLRSPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 52) ID NO: 51) 8D2H2L15 EVQLVESGGGLVQPGGSMRLSCAASGFTFS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSENIY

DNWMNWVRQAPGKGLEWLAQIRNKPYN GGLNWYQRKPGKSPKLLIYGATNLASGVS

YETYYSASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSL SRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQ KTEDTGVYYCTAQFAYWGQGTLVTVSS (SEQ NVLSRHPGFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: ID NO: 53) 54) 8D2H2L17 EVQLVESGGGLVQPGGSMRLSCAASGFTFS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSENIY

DNWMNWVRQAPGKGLEWLAQIRNKPYN GGLNWYQRKPGKSPKLLIYGATNLASGVS

YETYYSASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSL SRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQ KTEDTGVYYCTAQFAYWGQGTLVTVSS (SEQ NVLSSRPGFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 56) ID NO: 55)

[093] Em uma outra modalidade dos métodos de tratamento, composições,

kits e usos da invenção, o anticorpo anti-CTLA4 é uma variante da 8D2/8D2 (RE), uma variante da 8D2H1L1, uma variante da 8D2H2L2, uma variante da 8D2H2L15 ou uma variante da 8D2H2l17, em que a metionina (Met) na posição 18 na sequência de aminoácidos de cadeia de VH é independentemente substituída por um aminoácido selecionado a partir de: Leucina (Leu), Valina (Val), Isoleucina (Ile) ou Alanina (Ala). Em modalidades da invenção, o anticorpo anti-CTLA4 compreende a sequência da variante 1 de 8D2H2L2 como apresentado na tabela acima.

[094] Em uma outra modalidade dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da invenção, o anticorpo anti-CTLA4 é uma variante 1 de 8D2H2L2, que tem a sequência de aminoácidos de cadeia pesada completa apresentada em SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve completa apresentada em SEQ ID NO: 58. Anticorpo Cadeia Pesada Completa Cadeia Leve Completa 8D2H2L2 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDNW DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSENIY

VARIANTE MNWVRQAPGKGLEWLAQIRNKPYNYETYYSASV GGLNWYQRKPGKSPKLLIYGATNLASGVS 1 KGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTGVYYCTAQ SRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQ

FAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG NVLRSPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPP TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV SDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQW LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS

KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK KPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV SFNRGEC (SEQ ID NO: 58)

DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQ VYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES

NGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 57)

[095] Em uma modalidade dos métodos de tratamento, composições, kits e usos da invenção, o anticorpo anti-CTLA4 é qualquer um dos anticorpos anti- CTLA4, ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, descritos como revelados na Publicação de Pedido Internacional nº WO 2018/035710 A1, publicada em 1º de março de 2018. IV. Métodos e Usos da Invenção

[096] A invenção fornece um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada a cerca de seis semanas, em que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (CDRs) que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8; ou (b) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 11, 12 e 13 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 14, 15 e 16. Em modalidades particulares, o anticorpo anti-PD- 1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, é pembrolizumabe.

[097] Também é fornecido um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada seis semanas, em que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (CDRs) que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8; ou (b) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 11, 12 e 13 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 14, 15 e 16; e em que o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (c) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID

NOs: 39, 40 e 41 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37, e 38; (d) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 42 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37, e 38; ou (e) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 43 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38.

[098] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8; e o anticorpo anti- CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 43 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38.

[099] Em algumas modalidades da invenção, o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e o anticorpo anti-CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, são administrados ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas por 12 semanas ou mais. Em outras modalidades, o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno e o anticorpo anti-CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, são administrados ao paciente uma vez a cada seis semanas para 18 semanas ou mais, 24 semanas ou mais, 30 semanas ou mais, 36 semanas ou mais, 42 semanas ou mais, 48 semanas ou mais, 54 semanas ou mais, 60 semanas ou mais, 66 semanas ou mais, 72 semanas ou mais, 78 semanas ou mais, 84 semanas ou mais, ou 90 semanas ou mais. Em uma modalidade, a administração ocorre no mesmo dia. Em uma submodalidade, o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e o anticorpo anti-CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, são administrados no mesmo dia simultaneamente (por exemplo, em uma formulação única ou concomitantemente como formulações separadas). Em uma modalidade alternativa, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo são administrados sequencialmente no mesmo dia (por exemplo, como formulações separadas), em qualquer ordem. Em uma modalidade de administração sequencial no mesmo dia, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é administrado primeiro. Em uma outra modalidade de administração sequencial no mesmo dia, o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é administrado primeiro.

[0100] Em uma primeira modalidade (Modalidade E1), a invenção compreende um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade adicional de (Modalidade 1), a invenção compreende adicionalmente administrar 25 mg, 50 mg, 75 mg ou 100 mg de um anticorpo anti-CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade, 25 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade, 50 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez cada aproximadamente seis semanas. Em uma outra modalidade, 75 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade adicional, 100 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade adicional, o câncer é PD-1/ PD-L1 refratário (por exemplo, é um câncer que não foi responsivo a tratamento anterior com um agente anti-PD-1 ou um anti-PD-L1). Em uma modalidade adicional, o câncer é melanoma refratário de PD-1/PD-L1. O câncer é melanoma, câncer pulmonar de célula não pequena, câncer de cabeça e pescoço, câncer urotelial, câncer de mama, câncer gastrointestinal, mieloma múltiplo, câncer hepatocelular, linfoma não Hodgkin, câncer renal, linfoma de Hodgkin, mesotelioma, câncer de ovário, câncer pulmonar de célula pequena, câncer esofágico, câncer anal, câncer do trato biliar, câncer colorretal, câncer cervical, câncer da tireoide, câncer salivar, câncer pancreático, um tumor do cérebro, glioblastoma, sarcoma, um tumor do osso ou carcinoma de célula de Merkel.

[0101] Em uma segunda modalidade (Modalidade E2), a invenção compreende um método de tratamento de melanoma irressecável ou metastático em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0102] Em uma terceira modalidade (Modalidade E3), a invenção compreende um método de tratamento de câncer pulmonar de célula não pequena (NSCLC) metastático em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0103] Em uma submodalidade da Modalidade E3 (Modalidade E3-A), o paciente tem um tumor com expressão alta de PD-L1 [(pontuação de proporção tumoral (TPS) ≥50%)] e não foi anteriormente tratado com quimioterapia contendo platina.

[0104] Em uma submodalidade adicional da Modalidade E3 (Modalidade E3-B), o paciente tem um tumor com expressão de PD-L1 (TPS ≥1%) e foi anteriormente tratado com quimioterapia contendo platina. Em modalidades específicas da Modalidade E3-B, o paciente teve progressão de doença no ou após o recebimento de quimioterapia contendo platina.

[0105] Em uma outra submodalidade da Modalidade E3 (Modalidade E3-C), o paciente tem um tumor com expressão de PD-L1 (TPS ≥1%) e não foi anteriormente tratado com quimioterapia contendo platina.

[0106] Ainda em uma outra submodalidade da Modalidade E3 (Modalidade E3-D), o tumor do paciente não é testado em relação à expressão de PD-L1. Nessa modalidade, o paciente é tratado com o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, independentemente de expressão de PD-L1. Em modalidades específicas, o paciente não foi anteriormente tratado com quimioterapia contendo platina.

[0107] Em certas modalidades da Modalidade E3 (incluindo Modalidades E3-A, E3-B, e E3-C), a TPS de PD-L1 é determinada por um teste aprovado pelo FDA.

[0108] Em certas modalidades da Modalidade E3 (incluindo Modalidades E3-A, E3-B, E3-C, e E3-D), o tumor do paciente não tem aberrações de aberrações genômicas de EGFR ou ALK.

[0109] Em certas modalidades da Modalidade E3 (incluindo Modalidades E3-A, E3-B, E3-C, e E3-D), o tumor do paciente tem uma aberração genômica de EGFR ou ALK e teve progressão de doença no ou após o recebimento de tratamento para a(s)n aberração(ões) de EGFR ou ALK antes de receber o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

[0110] Em uma quarta modalidade (Modalidade E4), a invenção compreende um método de tratamento de câncer pulmonar de célula não pequena (NSCLC) metastático em um paciente humano que compreende: (1) administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, e (2) administrar pemetrexed e carboplatina ao paciente. Em submodalidades da Modalidade E4, o paciente não foi anteriormente tratado com um agente terapêutico anticâncer antes do início do regime de tratamento em combinação com o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, pemetrexed e carboplatina.

[0111] Em certas modalidades das Modalidades E3 e E4 (incluindo submodalidades das mesmas), o paciente tem câncer pulmonar de célula não pequena não escamosa.

[0112] Em submodalidades da Modalidade E4, pemetrexed é administrado ao paciente em uma quantidade de 500 mg/m2.

[0113] Em submodalidades da Modalidade E4, pemetrexed é administrado ao paciente através de infusão intravenosa a cada 21 dias. Em modalidades específicas, o tempo de infusão é cerca de 10 minutos.

[0114] Em submodalidades da Modalidade E4 (Modalidade E4-A), a invenção compreende adicionalmente administrar cerca de 400 µg a cerca de 1000 µg de ácido fólico ao paciente uma vez por dia, começando cerca de 7 dias antes de administrar pemetrexed ao paciente e continuando até cerca de 21 dias após ser administrada ao paciente a última dose de pemetrexed. Em certas modalidades, o ácido fólico é administrado oralmente.

[0115] Em submodalidades das Modalidades E4 e E4-A (Modalidade E4-B),

a invenção compreende adicionalmente administrar cerca de 1 mg de vitamina B12 ao paciente cerca de 1 semana antes da primeira administração de pemetrexed e cerca de a cada três ciclos de administração de pemetrexed (isto é, aproximadamente a cada 9 semanas). Em certas modalidades, a vitamina B12 é administrada intramuscularmente.

[0116] Em submodalidades das Modalidades E4, E4-A e E4-B (Modalidade E4-C), a invenção compreende adicionalmente administrar cerca de 4 mg de dexametasona ao paciente duas vezes ao dia no dia antes, no dia e no dia após a administração de pemetrexed. Em certas modalidades, a dexametasona é administrada oralmente.

[0117] Em uma quinta modalidade (Modalidade E5), a invenção compreende um método de tratamento de câncer de célula escamosa de cabeça e pescoço (HNSCC) recorrente ou metastático em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0118] Em submodalidades da Modalidade E5, o paciente foi anteriormente tratado com quimioterapia contendo platina. Em certas modalidades, o paciente teve progressão de doença na ou após a quimioterapia contendo platina.

[0119] Em uma sexta modalidade (Modalidade E6), a invenção compreende um método de tratamento de linfoma de Hodgkin clássico refratário (cHL) em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD- 1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0120] Em uma sétima modalidade (Modalidade E7), a invenção compreende um método de tratamento de linfoma de Hodgkin clássico (cHL) em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-

PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, em que o paciente tem recaída após (a) um ou mais linhas de terapia para cHL, (b) 2 ou mais linhas de terapia para cHL, ou (c) 3 ou mais linhas de terapia para cHL.

[0121] Em submodalidades das Modalidades E6 e E7, o paciente é um paciente adulto.

[0122] Em submodalidades alternativas das Modalidades E6 e E7, o paciente é um paciente pediátrico.

[0123] Em uma oitava modalidade (Modalidade E8), a invenção compreende um método de tratamento de carcinoma urotelial localmente avançado ou metastático em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0124] Em submodalidades da Modalidade E8, o paciente não é elegível para quimioterapia contendo cisplatina.

[0125] Em submodalidades da Modalidade E8, o paciente teve progressão de doença durante ou após quimioterapia contendo platina ou dentro de 12 meses de tratamento neoadjuvante ou adjuvante com quimioterapia contendo platina.

[0126] Em submodalidades da Modalidade E8, o tumor do paciente expressa PD-L1 (CPS >10).

[0127] Em uma nona modalidade (Modalidade E9), a invenção compreende um método de tratamento de tumores sólidos irressecáveis ou metastáticos deficientes de instabilidade alta de microssatélite (MSI-H) ou reparo de pareamento errado (MMR) em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe),

ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0128] Em uma submodalidade da Modalidade E9, o paciente teve progressão de doença após tratamento anticâncer anterior.

[0129] Em uma décima modalidade (Modalidade E10), a invenção compreende um método de tratamento de câncer colorretal deficiente de MSI- H ou MMR irressecável ou metastático em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0130] Em uma submodalidade da Modalidade E10, o paciente teve progressão de doença após tratamento anterior com uma fluoropirimidina, oxaliplatina e irinotecano.

[0131] Em uma décima primeira modalidade (Modalidade E11), a invenção compreende um método de tratamento de câncer gástrico localmente avançado ou metastático recorrente em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0132] Em uma décima segunda modalidade (Modalidade E12), a invenção compreende um método de tratamento de localmente avançado ou metastático recorrente adenocarcinoma de junção gastroesofágica em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0133] Em submodalidades das Modalidades E11 e E12, o tumor do paciente expressa PD-L1 [pontuação positiva combinada (CPS) ≥1].

[0134] Em submodalidades das Modalidades E11 e E12, o paciente teve progressão de doença na ou após uma ou mais linhas de terapia anteriores. Em modalidades específicas, as linhas de terapia anteriores incluem fluoropirimidina e quimioterapia contendo platina.

[0135] Em submodalidades das Modalidades E11 e E12, o paciente teve progressão de doença na ou após duas ou mais linhas de terapia anteriores incluindo fluoropirimidina e quimioterapia contendo platina.

[0136] Em submodalidades das Modalidades E11 e E12, o paciente teve progressão de doença na ou após uma ou mais linhas de terapia anteriores incluindo terapia HER2/de alvo neu.

[0137] Em submodalidades das Modalidades E11 e E12, o paciente teve progressão de doença na ou após duas ou mais linhas de terapia anteriores incluindo terapia HER2/de alvo neu.

[0138] Em uma décima terceira modalidade (Modalidade E13), a invenção compreende um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, em que o paciente tem um câncer selecionado a partir do grupo que consiste em: melanoma, câncer pulmonar, câncer de cabeça e pescoço, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer gastrointestinal, mieloma múltiplo, câncer hepatocelular, linfoma, câncer renal, mesotelioma, câncer de ovário, câncer esofágico, câncer anal, câncer do trato biliar, câncer colorretal, câncer cervical, câncer da tireoide e câncer salivar.

[0139] Em uma décima quarta modalidade (Modalidade E14), a invenção compreende um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, em que o paciente tem câncer pulmonar de célula pequena.

[0140] Em uma décima quinta modalidade (Modalidade E15), a invenção compreende um método de tratamento de linfoma não Hodgkin em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0141] Em uma submodalidade da Modalidade E15, o linfoma não Hodgkin é linfoma de grandes células B primário do mediastino (PMBCL). Em algumas modalidades em que o paciente tem PMBCL, o paciente tem PMBCL refratário. Em algumas modalidades, o paciente tem recaída após uma ou mais linhas de terapia anteriores. Em algumas modalidades, o paciente tem recaída após duas ou mais linhas de terapia anteriores. Em algumas modalidades, o paciente não foi anteriormente tratado com uma outra linha de terapia.

[0142] Em uma décima sexta modalidade (Modalidade E16), a invenção compreende um método de tratamento de NSCLC escamosa metastático em um paciente humano que compreende: (1) administrar 400 mg de um anticorpo anti- PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, e (2) administrar (i) carboplatina e paclitaxel ou (ii) carboplatina e nab-paclitaxel ao paciente.

[0143] Em uma décima sétima modalidade (Modalidade E17), a invenção compreende um método de tratamento de carcinoma de célula de Merkel (MCC) em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em submodalidades particulares da Modalidade E17, o câncer é MCC localmente avançado recorrente. Em submodalidades particulares da Modalidade E17, o câncer é MCC metastático.

[0144] Em submodalidades da Modalidade E17, o paciente é um paciente adulto. Em submodalidades alternativas da Modalidade E17, o paciente é um paciente pediátrico.

[0145] Em uma décima oitava modalidade (Modalidade E18), a invenção compreende um método para terapia adjuvante de melanoma em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, a um paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, em que o paciente tem anteriormente teve uma ou mais lesões de melanoma ressecadas. Em submodalidades da Modalidade E18, o método compreende tratamento de melanoma de estágio III em alto risco ressecado.

[0146] Em uma décima nona modalidade (Modalidade E19), a invenção compreende um método de tratamento de carcinoma hepatocelular (HCC) em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti- PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em algumas modalidades de modalidade E19, o paciente foi anteriormente tratado com sorafenib.

[0147] Em uma vigésima modalidade (Modalidade E20), a invenção compreende um método de tratamento de carcinoma de célula renal (RCC) em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti- PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0148] Em submodalidades, da Modalidade E20, o câncer é RCC de célula clara avançado.

[0149] Em submodalidades da Modalidade E20, o paciente tem carcinoma de célula renal (RCC) avançado ou metastático.

[0150] Em submodalidades, da Modalidade E20 (Modalidade E20A), o paciente é ainda tratado com axitinib. Em submodalidades da invenção, axitinib é tomado oralmente.

[0151] Em modalidades particulares da Modalidade E20A, 5 mg de axitinib são tomados pelo paciente aproximadamente a cada 12 horas ou duas vezes ao dia.

[0152] Em modalidades alternativas da Modalidade E20A, a dosagem de axitinib é 2,5 mg, 3 mg, 7 mg ou 10 mg duas vezes ao dia.

[0153] Em uma vigésima primeira modalidade (Modalidade E21), a invenção compreende um método de tratamento de câncer de mama em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD- 1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0154] Em uma submodalidade da Modalidade E21, o câncer de mama é câncer de mama triplo negativo.

[0155] Em uma submodalidade da Modalidade E21, o câncer de mama é câncer de mama ER+/HER2-.

[0156] Em uma vigésima segunda modalidade (Modalidade E22), a invenção compreende um método de tratamento de câncer nasofaríngeo em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD- 1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0157] Em uma vigésima terceira modalidade (Modalidade E23), a invenção compreende um método de tratamento de câncer da tireoide em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1(por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0158] Em uma vigésima quarta modalidade (Modalidade E24), a invenção compreende um método de tratamento de câncer salivar em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0159] Em uma vigésima quinta modalidade (Modalidade E25), a invenção compreende um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: melanoma, câncer pulmonar de célula não pequena, linfoma de Hodgkin clássico refratário ou recorrente, linfoma de grandes células B primário do mediastino, câncer de célula escamosa de cabeça e pescoço, carcinoma urotelial, câncer esofágico, câncer gástrico, câncer cervical, PMBCL, câncer MSI-H, carcinoma hepatocelular e carcinoma de célula de Merkel.

[0160] Em uma vigésima sexta modalidade (Modalidade E26), a invenção compreende um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, em que o câncer é um malignidade hematológica.

[0161] Em uma submodalidade da Modalidade E26, a malignidade hematológica é selecionada a partir do grupo que consiste em: leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), linfoma difuso de grandes células

B (DLBCL), DLBCL positiva para EBV, linfoma de grandes células B primário do mediastino, linfoma de célula B grande rico em célula T/histiócito, linfoma folicular, linfoma de Hodgkin (HL), linfoma de célula do manto (MCL), mieloma múltiplo (MM), proteína de leucemia 1 de célula mieloide (MCL-1), síndrome mielodisplásica (MDS), linfoma não Hodgkin (NHL) e linfoma linfocítico pequeno (SLL).

[0162] Em uma vigésima sétima modalidade (Modalidade E27), a invenção compreende um método de tratamento de câncer em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas, em que o paciente tem um tumor com uma carga de mutação alta.

[0163] Em modalidades específicas, uma carga de mutação alta é pelo menos cerca de 10 mutações por megabase de genoma examinado, pelo menos cerca de 11 mutações por megabase de genoma examinado, pelo menos cerca de 12 mutações por megabase de genoma examinado ou pelo menos cerca de 13 mutações por megabase de genoma examinado.

[0164] Em uma vigésima oitava modalidade (Modalidade E28), a invenção compreende um método de tratamento de câncer esofágico em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas.

[0165] Em submodalidades da Modalidade E28, o paciente progrediu com uma linha anterior de terapia padrão antes de receber o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em uma modalidade adicional, o paciente progrediu com uma ou mais linhas de terapia padrão antes de receber o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em uma outra modalidade, o paciente progrediu com duas ou mais linhas de terapia padrão antes de receber o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em modalidades particulares, a terapia padrão inclui um ou mais dentre: paclitaxel, docetaxel ou irinotecano.

[0166] Em submodalidades da Modalidade E28, o paciente tem adenocarcinoma ou carcinoma de célula escamosa avançado ou metastático do esôfago.

[0167] Em submodalidades da Modalidade E28, o paciente tem avançado ou metastático adenocarcinoma de Siewert tipo I da junção esofagogástrica.

[0168] Em submodalidades da Modalidade E28, o tumor do paciente expressa PD-L1 (pontuação positiva combinada [CPS] ≥10).

[0169] Em uma vigésima nona modalidade (Modalidade E29), a invenção compreende um método de tratamento de câncer de bexiga invasivo não muscular de alto risco (NMIBC) em um paciente humano que compreende administrar 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe), ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em algumas modalidades, o paciente tem NMIBC com carcinoma in situ (CIS) ou CIS mais doença papilar.

[0170] Em uma submodalidade da Modalidade E29, o paciente foi anteriormente tratado com terapia padrão antes de ser tratado com o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, a terapia anterior é terapia de Bacillus Calmette-Guérin (BCG). Em modalidades particulares, o paciente não respondeu à terapia de BCG. Em algumas modalidades, o paciente foi inelegível para cistectomia radical ou escolheu não se submeter à cistectomia radical.

[0171] Em qualquer um dos métodos da invenção descritos acima (incluindo Modalidades E1-E29), o anticorpo PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno é qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno descritos na Seção II da Descrição Detalhada da Invenção “Anticorpos de PD-1 e Fragmentos de Ligação a Antígeno Úteis na Invenção” da presente invenção.

[0172] As modalidades de qualquer um dos métodos da invenção descritos acima (incluindo Modalidades E1-E29) podem compreender adicionalmente administrar cerca de 25 mg, 50 mg, 75 mg ou 100 mg de um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade, 25 mg do anticorpo anti- CTLA4 são administrados uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade, 50 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma outra modalidade, 75 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade adicional, 100 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em uma modalidade, 25 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada seis semanas. Em uma modalidade, 50 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada seis semanas. Em uma outra modalidade, 75 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada seis semanas. Em uma modalidade adicional, 100 mg do anticorpo anti-CTLA4 são administrados uma vez a cada seis semanas. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos acima, o anticorpo anti-CTLA4 e o anticorpo anti-PD-1 são co- administrados. Em outras modalidades, o anticorpo anti-CTLA4 e o anticorpo anti-PD-1 são co-formulados. Em qualquer um dos métodos da invenção descritos acima, o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno é qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno descritos na Seção III da Descrição Detalhada da Invenção “Anticorpos Anti-CLTA4 e Fragmentos de Ligação a Antígeno Úteis na Invenção” da presente invenção.

[0173] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é pembrolizumabe ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ou um anticorpo que compete de forma cruzada com pembrolizumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é uma variante da pembrolizumabe; isto é, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que tem CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8.

[0174] Em qualquer um dos métodos descritos acima, o anticorpo anti-PD- 1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo são administrados ao paciente uma vez a cada aproximadamente seis semanas. Em modalidades particulares, o anti- PD1 anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e o anticorpo anti- CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo são administrados ao paciente a cada seis semanas, a cada seis semanas ±5 dias, ±4 dias, ±3 dias, ±2 dias ou ±1 dia.

[0175] Em modalidades de qualquer um dos métodos da presente invenção, a um paciente é administrada uma infusão intravenosa (IV) de um medicamento que compreende qualquer um dos anticorpos anti-PD-1 ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo, ou qualquer um dos anticorpos anti-CTLA4 ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo, cada um como descrito na presente invenção. Em uma modalidade, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo são administrados por infusão IV simultaneamente (por exemplo, em uma formulação única ou concomitantemente como formulações separadas).

[0176] Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo são administrados por infusão IV sequencialmente no mesmo dia (por exemplo, como formulações separadas), em qualquer ordem. Em uma submodalidade, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é administrado primeiro. Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é administrado primeiro.

[0177] Em modalidades alternativas, ao paciente é administrada (por exemplo, por um médico) ou administra qualquer um dos anticorpos anti-PD-1 ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, ou qualquer um dos anticorpos anti-CTLA4 ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, cada um descrito na presente invenção, por via subscutânea.

[0178] Em qualquer um dos métodos descritos na presente invenção, incluindo as Modalidades E1 a E29, e submodalidades das mesmas, o método pode compreender adicionalmente um ou mais “agentes terapêuticos adicionais” (como usado na presente invenção, “agente terapêutico adicional” se refere a um agente adicional em relação ao antagonista de PD-1 e ao anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo). O agente terapêutico adicional pode ser, por exemplo, um agente quimioterápico além de um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-CTLA4, um agente bioterapêutico (incluindo, mas sem limitação a, anticorpos para VEGF, EGFR, Her2/neu, receptores de VEGF, outros receptores de fator de crescimento, CD20, CD40, CD- 40L, OX-40, 4-1BB e ICOS), um agente imunogênico (por exemplo, células cancerosas atenuadas, antígenos tumorais, células que apresentam antígeno como células dendríticas pulsadas com antígeno ou ácidos nucleicos derivados de tumor, citoquinas imunoestimulantes (por exemplo, IL-2, IFNα2, GM-CSF), e células transfectadas com genes que codificam citoquinas imunoestimulantes como, mas sem limitação a GM-CSF).

[0179] Como observado acima, em algumas modalidades dos métodos da invenção, o método compreende adicionalmente administrar um agente terapêutico adicional. Em modalidades particulares, o agente terapêutico adicional é um anticorpo anti-LAG3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo anti-GITR, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo anti-TIGIT, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo anti-CD27 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um vetor viral da doença de Newcastle que expressa IL-12. Em uma modalidade adicional, o agente terapêutico adicional é dinaciclib.

[0180] Os exemplos de agentes quimioterápicos incluem agentes de alquilação como tiotepa e ciclosfosfamida; sulfonatos de alquila como bussulfano, improssulfano e pipossulfano; aziridinas como benzodopa, carboquona, meturedopa e uredopa; etileniminas e metilamelaminas incluindo altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimetilolomelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina e bulatacinona); um camptotecina (incluindo o análogo sintético topotecano); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189 e CBI-TMI); eleuterobina; pancratistatina; um sarcodictina; espongistatina; mostardas nitrogenadas como clorambucil, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracila; nitrosureias como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos como os antibióticos de enedina (por exemplo,

caliqueamicina, especialmente caliqueamicina gama1I e caliqueamicina phiI1, consulte, por exemplo, Agnew, Chem.

Intl.

Ed.

Engl., 33:183 a 186 (1994); dinemicina, incluindo dinemicina A; bisfosfonatos, como clodronato; uma esperamicina; assim como cromofóro de neocarzinostatina e cromóforos de antibiótico de enedina cromoproteína relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, caminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina (incluindo morfolino- doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina e desoxidoxorrubicina), epirubicina, esorrubicina, idarubicina, marcelulomicina, mitomicinas como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; antimetabólitos como metotrexato e 5-fluorouracila (5-FU); análogos de ácido fólico como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; androgênios como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antiadrenais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; repositor de ácido fólico como ácido frolínico; aceglatona; aldofosfamida glicosídeo; ácido aminolevulínico; eniluracila; amsacrina; bestrabucila; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elformitina; acetato de eliptínio; um epotilona; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinano; lonidamina; maitansinoides como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofílino; 2-etil-hidrazida; procarbazina;

razoxano; rizoxina; sizofurano; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2, 2ʹ,2ʺ-triclorotrietilamina; tricotecenes (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinosídeo (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por exemplo, paclitaxel e doxetaxel; clorambucila; gemcitabina; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platina como cisplatina e carboplatina; vinblastina; platina; etoposídeo (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina; novantrona; teniposídeo; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11; inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides como ácido retinoico; capecitabina; e sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos supracitados. Também são incluídos agentes anti-hormonais que atuam para regular ou inibir a ação de hormônio em tumores como antiestrogênios e moduladores seletivos do receptor de estrogênio (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno, raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, ceoxifeno, LY117018, onapristona e toremifeno (Fareston); inibidores de aromatase que inibem a enzima aromatase, que regula a produção de estrogênio nas glândulas adrenais, como, por exemplo, 4(5)-imidazóis, aminoglutetimida, acetato de megestrol, exemestano, formestano, fadrozol, vorozol, letrozol e anastrozol; e antiandrogênios como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida e goserelina; e sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos supracitados.

[0181] Em algumas modalidades que compreendem uma etapa de administrar um agente terapêutico adicional (isto é, além do anticorpo anti-PD- 1 (por exemplo, pembrolizumabe) ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e do anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo), o agente terapêutico adicional na terapia de combinação pode ser administrado usando o mesmo regime de dosagem (dose, frequência e duração de tratamento) que é tipicamente empregado quando o agente é usado como monoterapia para tratamento do mesmo câncer. Em outras modalidades, o paciente recebe uma quantidade total inferior do agente terapêutico adicional na terapia de combinação que quando aquele agente é usado como monoterapia, por exemplo, doses menores, doses menos frequentes e/ou duração de tratamento mais curta.

[0182] O agente terapêutico adicional em uma terapia de combinação pode ser administrado oral, intratumoral ou parenteralmente, incluindo as vias de administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea, retal, tópica e transdérmica. Por exemplo, o tratamento de combinação pode compreender um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ambos os quais podem ser administrados intravenosa ou por via subscutânea, assim como um agente quimioterápico, que pode ser administrado oralmente.

[0183] Uma terapia de combinação da invenção pode ser usada antes ou após cirurgia para remover um tumor e pode ser usada antes, durante ou após terapia com radiação. Uma terapia de combinação da invenção também pode ser usada quando um tumor do paciente é não ressecável.

[0184] Em algumas modalidades, uma terapia de combinação da invenção é administrada a um paciente que não foi anteriormente tratado com um agente quimioterápico ou bioterapêutico, isto é, que nunca recebeu tratamento. Em outras modalidades, a terapia de combinação é administrada a um paciente que falhou no alcance de uma resposta sustentada após terapia anterior com um agente quimioterápico ou bioterapêutico, isto é, é experimentou tratamento.

[0185] Uma terapia de combinação da invenção pode ser usada para tratar um tumor que é grande o suficiente para ser encontrado por palpação ou por técnicas de imageamento bem conhecidas na técnica, como MRI, ultrassom ou varredura CAT. Em algumas modalidades, uma terapia de combinação da invenção é usada para tratar um tumor de estágio avançado que tem dimensões de pelo menos cerca de 200 mm3, 300 mm3, 400 mm3, 500 mm3, 750 mm3 ou até 1000 mm3.

[0186] Em algumas modalidades, uma terapia de combinação da invenção é administrada a um paciente humano que tem um câncer que expressa PD-L1. Em algumas modalidades, a expressão de PD-L1 é detectada usando um anticorpo anti-PD-L1 humana diagnóstico, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em um ensaio de IHC em uma seção de tecido FFPE ou congelada de uma amostra tumoral removida do paciente. Um médico do paciente pode solicitar um teste de diagnóstico para determinar a expressão de PD-L1 em um tecido de amostra tumoral removido do paciente antes de iniciar o tratamento com o anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, mas contempla-se que o médico poderia solicitar o primeiro ou subsequentes testes de diagnóstico em qualquer tempo após iniciar o tratamento como, por exemplo, após a conclusão de um ciclo de tratamento.

[0187] A seleção de uma dosagem do agente terapêutico adicional depende de vários fatores, incluindo a rotatividade de soro ou tecido da entidade, o nível de sintomas, a imunogenicidade da entidade e a acessibilidade das células-alvo, tecido ou órgão no indivíduo a ser tratado. A dosagem do agente terapêutico adicional deve ser uma quantidade que fornece um nível aceitável de efeitos colaterais. Consequentemente, a quantidade de dose e a frequência de dosagem de cada agente terapêutico adicional (por exemplo, agente quimioterápico ou bioterapêutico) dependerá em parte do agente terapêutico particular, da gravidade do câncer a ser tratado e das características do paciente. A Diretrizes para a seleção de doses apropriadas de anticorpos, citoquinas e moléculas pequenas estão disponíveis. Consulte, por exemplo, Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, Reino Unido; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY, EUA; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY, EUA; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601 a 608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966 a 1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344:783 a 792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613 a 619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24 a 32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594 a 1602; Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57ª Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57ª edição (novembro de 2002). A determinação do regime de dosagem apropriado pode ser feita pelo médico, por exemplo, usando parâmetros ou fatores conhecidos ou suspeitos na técnica que afetam o tratamento ou previstos de afetar o tratamento, e dependerá, por exemplo, do histórico clínico do paciente (por exemplo, terapia anterior), do tipo e do estágio do câncer a ser tratado e biomarcadores de resposta para um ou mais dos agentes terapêuticos na terapia de combinação. V. Composições e Kits

[0188] A invenção também se refere a composições que compreendem uma dosagem de um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, pembrolizumabe) ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável em que a dosagem é cerca de 400 mg. O anticorpo anti-PD-1 pode ser produzido, por exemplo, em células CHO usando tecnologias de cultura de célula e recuperação/purificação convencionais.

[0189] Em modalidades da invenção, a composição compreende adicionalmente tampão de histidina a cerca de pH 5,0 a pH 6,0. Em modalidades particulares, a histidina está presente em uma concentração de cerca de 10 mM.

[0190] Em modalidades da invenção, a composição compreende adicionalmente sacarose. Em modalidades particulares, a sacarose está presente em uma concentração de cerca de 70 mg/ml.

[0191] Em modalidades da invenção, a composição compreende adicionalmente polissorbato 80. Em modalidades particulares, o polissorbato 80 está presente em uma concentração de cerca de 0,2 mg/ml.

[0192] Em algumas modalidades, a composição compreende histidina a 10 mM, pH 5,5, sacarose a 7%, polissorbato 80 a 0,02% e 400 mg do anticorpo anti- PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

[0193] Em modalidades da invenção, a composição é líquida.

[0194] Em modalidades alternativas, a composição é liofilizada.

[0195] Nas composições da invenção, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser qualquer um dos anticorpos e fragmentos de ligação a antígeno descrito na presente invenção, isto é, descrito na Seção II da Descrição Detalhada da Invenção “Anticorpos PD-1 e Fragmentos de Ligação a Antígeno Úteis na Invenção” (por exemplo, pembrolizumabe).

[0196] Em algumas modalidades, uma composição que compreende um anticorpo anti-PD-1 como o antagonista de PD-1 pode ser fornecida como uma formulação líquida ou preparada pela reconstituição de um pó liofilizado com água estéril para injeção antes do uso. O documento WO 2012/135408 descreve a preparação de medicamentos líquidos e liofilizados que compreendem pembrolizumabe que são adequados para uso na presente invenção.

[0197] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CTLA4 é formulado como descrito no documento WO 2018/204343 (PCT/US2018/030420). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CTLA4 e o anticorpo anti-PD-1 são co-formulados como descrito no documento WO 2018/204343.

[0198] A invenção também se refere a um kit para tratamento de um paciente com câncer, o kit compreendendo: (a) 400 mg de um anticorpo anti-PD- 1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e (b) instruções para uso do anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em qualquer um dos métodos para tratamento de câncer descritos na presente invenção.

[0199] A invenção também se refere a um kit para tratamento de um paciente com câncer, o kit compreendendo: (a) cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (b) cerca de 25 mg, 50 mg, 75 mg ou 100 mg de um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e (c) instruções para uso do anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e do anticorpo anti-CTLA ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em qualquer um dos métodos para tratamento de câncer descritos na presente invenção. Em uma modalidade, o kit compreende 25 mg do anticorpo anti-CTLA4. Em uma modalidade, o kit compreende 50 mg do anticorpo anti-CTLA4. Em uma outra modalidade, o kit compreende 75 mg do anticorpo anti-CTLA4. Em uma modalidade adicional, o kit compreende 100 mg do anticorpo anti-CTLA4.

[0200] Em qualquer um dos kits da invenção, o anticorpo PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno pode ser qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno descritos na Seção II da Descrição Detalhada da invenção “Anticorpos PD-1 e Fragmentos de Ligação a Antígeno Úteis na Invenção”. Adicionalmente, em qualquer um dos kits da invenção, o CTLA4 anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno pode ser qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno descrito na Seção III da Descrição Detalhada da Invenção intitulada “Anticorpos Anti-CTLA4 e Fragmentos de Ligação a Antígeno Úteis na Invenção”.

[0201] Os kits da invenção podem fornecer o anticorpo anti-PD-1 ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo e o anti-CTLA4 ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo em recipientes separados juntos com um inserto de embalagem.

Os kits da invenção podem fornecer o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo juntos na mesma formulação (por exemplo, como uma co-formulação). O(s) recipiente(s) dos kits contêm pelo menos uma dose (isto é, cerca de 400 mg) de um medicamento que compreende um anticorpo anti-PD-1, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e pelo menos uma dose (por exemplo, cerca de 25 mg, cerca de 50 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg) de um medicamento que compreende um anticorpo anti- CTLA4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e o inserto de embalagem, ou rótulo, que compreende instruções para tratamento de um paciente com câncer usando o(s) medicamento(s) contido(s) nos mesmos.

O recipiente pode ser compreendido do mesmo ou diferente formato (por exemplo, frascos, seringas e garrafas) e/ou material (por exemplo, plástico ou vidro). O kit pode compreender adicionalmente outros materiais que podem ser úteis na administração dos medicamentos, como diluentes, filtros, bolsas e linhas IV, agulhas e seringas.

Em algumas modalidades preferenciais do kit, as instruções determinam que o medicamento é destinado ao uso no tratamento de um paciente que tem um tumor, em que o tumor expressa PD-L1, por exemplo, por um ensaio de IHC.

Em algumas modalidades, o tumor tem uma pontuação de proporção tumoral (TPS) de >1% de PD-L1. Em uma outra modalidade, o tumor tem uma TPS de >50% de PD-L1. Uma TPS de PD-L1 é o número de células tumorais em uma amostra que expressa PD-L1. Em modalidades adicionais, o tumor tem uma TPS de >5% de PD-L1, >10 PD-L1, >15% de PD-L1, >20% de PD-L1, >25% de PD-L1, >30% de PD-L1, >35% de PD-L1, >40%

de PD-L1 ou >45% de PD-L1. . Em uma outra modalidade, o tumor do paciente expressa PD-L1 com uma CPS de >10%. Em uma outra modalidade, o tumor do paciente expressa PD-L1 com uma CPS de >5%. Em uma outra modalidade, o tumor do paciente expressa PD-L1 com uma CPS de >1%.

[0202] Esses e outros aspectos da invenção, incluindo as modalidades específicas exemplificativas listadas abaixo, serão evidentes a partir dos ensinamentos contidos na presente invenção.

MÉTODOS GERAIS

[0203] Os métodos padrão em biologia molecular são descritos por Sambrook, Fritsch e Maniatis (1982 & 1989 2ª Edição, 2001 3ª Edição) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, EUA; Sambrook e Russell (2001) Molecular Cloning, 3ª ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, EUA; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA, EUA). Os métodos padrão também aparecem em Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1 a 4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, EUA, que descreve a clonagem em células bacterianas e mutagênese de DNA (Vol. 1), clonagem em células de mamífero e levedura (Vol. 2), glicoconjugados e expressão de proteína (Vol. 3), e bioinformática (Vol. 4).

[0204] Os métodos para purificação de proteína que incluem imunoprecipitação, cromatografia, eletroforese, centrifugação e cristalização são descritas (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York, EUA). A análise química, a modificação química, a modificação pós-traducional, produção de proteínas de fusão, glicosilação de proteínas são descritas (consulte, por exemplo, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York, EUA; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, EUA, págs. 16.0.5 a 16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO, EUA; págs. 45 a 89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., EUA, págs. 384 a 391). Produção, purificação e fragmentação de anticorpos monoclonais e policlonais são descritas (Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York, EUA; Harlow e Lane (1999) Using Anticorpos, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, EUA; Harlow e Lane, supra). As técnicas padrão para caracterizar interações de ligante/receptor estão disponíveis (consulte, por exemplo, Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York, EUA).

[0205] Os anticorpos monoclonais, policlonais e humanizados podem ser preparados (consulte, por exemplo, Sheperd e Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY, EUA; Kontermann e Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York, EUA; Harlow e Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, EUA, págs. 139 a 243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371 a 27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:10678 a 10684; Chothia et al. (1989) Nature 342:877 a 883; Foote e Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487 a 499; Patente US 6.329.511).

[0206] Uma alternativa para humanização é usar bibliotecas de anticorpo humano exibidas no fago ou bibliotecas de anticorpo humano em camundongos transgênicos (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14:309 a 314; Barbas (1995) Nature Medicine 1:837 a 839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146 a 156; Hoogenboom e Chames (2000) Immunol. Todia 21:371 a 377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, EUA; Kay et al. (1996) Phage

Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA, EUA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:397 a 399).

[0207] A purificação de antígeno não é necessária para a geração de anticorpos. Os animais podem ser imunizados com células que possuem o antígeno de interesse. Os esplenócitos podem, então, ser isolados dos animais imunizados, e os esplenócitos podem ser fusionados com uma linhagem de células de mieloma para produzir um hibridoma (consulte, por exemplo, Meyaard et al. (1997) Immunidadey 7:283 a 290; Wright et al. (2000) Immunidadey 13:233 a 242; Preston et al., supra; Kaithamana et al. (1999) J. Immunol. 163:5157 a 5164).

[0208] Os anticorpos podem ser conjugados, por exemplo, em moléculas de fármaco pequenas, enzimas, lipossomas, polietileno glicol (PEG). Os anticorpos são úteis para propósitos terapêuticos, de diagnóstico, kit ou outros propósitos, e incluem anticorpos acoplados, por exemplo, a corantes, radioisótopos, enzimas ou metais, por exemplo, ouro coloidal (consulte, por exemplo, Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146:169 a 175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891 a 3898; Hsing e Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804 a -2811; Everts et al. (2002) J. Immunol. 168:883 a 889).

[0209] Os métodos para citometria de fluxo, incluindo classificação celular ativada por fluorescência (FACS), estão disponíveis (consulte, por exemplo, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ, EUA; Givan (2001) Flow Cytometry, 2ª ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ, EUA; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ, EUA). Os reagentes fluorescentes adequados para modificar ácidos nucleicos, incluindo iniciadores e sondas de ácido nucleico, polipeptídeos e anticorpos, para uso, por exemplo, como reagentes de diagnóstico, estão disponíveis (Molecular Probesy (2003) Catalogue, Molecular

Probes, Inc., Eugene, OR, EUA; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO, EUA).

[0210] Os métodos padrão de histologia do sistema imunológico são descritos (consulte, por exemplo, Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY, EUA; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams e Wilkins, Phila, PA, EUA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY, EUA). Os pacotes de software e bases de dados para determinar, por exemplo, fragmentos antigênicos, sequências-líder, enovelamento de proteína, domínios funcionais, sítios de glicosilação e alinhamentos de sequência, estão disponíveis (consulte, por exemplo, GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD, EUA); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA, EUA); DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada, EUA); Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741 a 742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741 a 742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177 a 181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17 a 21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683 a 4690).

[0211] Todas as publicações mencionadas na presente invenção são incorporadas a título de referência para o propósito de descrição e revelação de metodologias e materiais que podem ser usados em conjunto com a presente invenção.

[0212] Mediante a descrição de diferentes modalidades da invenção na presente invenção em referência aos desenhos em anexo, deve ficar entendido que a invenção não é limitada àquelas modalidades precisas, e que várias alterações e modificações podem ser efetuadas nas mesmas por um versado na técnica sem que se afaste do escopo ou do espírito da invenção como definido nas reivindicações anexas.

EXEMPLO 1

[0213] Um cronograma de dosagem seis vezes por semana (Q6W) para pembrolizumabe ao longo de múltiplos tipos de tumor com base em uma avaliação usando modelagem e simulação

[0214] Pembrolizumabe, um inibidor de ponto de verificação anti-PD-1 atualmente aprovado para uso em múltiplas indicações de câncer, tem demonstrado segurança e eficácia quando administrado a uma dose de 200 mg ou 2 mg/kg Q3W. Um regime de dosagem estendido alternativo forneceria os benefícios de conveniência e flexibilidade tanto a pacientes quanto a prescreventes. A caracterização robusta de relações de farmacocinética de pembrolizumabe (PK) e resposta de exposição (concentração) (E-R) tanto para eficácia e segurança permitem o uso de abordagens com base em modelo para sustentar regimes de dosagem alternativos para pembrolizumabe.

[0215] A dose para um cronograma Q6W de pembrolizumabe foi selecionada pela correspondência de exposições com os regimes Q3W aprovados (200 mg e 2 mg/kg) após o regime permanente PK ser alcançado; a eficácia e a segurança entre os regimes foram relacionadas com base no conhecimento de E-R. As exposições PK foram simuladas até 24 semanas de dosagem, para assegurar o regime permanente em todos os indivíduos, usando o modelo de PK de população estabelecido (com eliminação dependente de tempo) de pembrolizumabe que descreveu adequadamente PK através de múltiplos tipos de tumor. A eficácia foi relacionada usando métricas de exposição em regime permanente, AUCss ou concentração média de tempo (Cavg,ss) e concentrações de vale (Cmin,ss), que foram comparadas entre os regimes. O perfil de segurança de pembrolizumabe no cronograma Q6W foi relacionado ao assegurar que as concentrações de pico previstas no regime permanente (Cmax,ss) estejam abaixo daquelas da dose máxima clinicamente administrada e bem tolerada de 10 mg/kg Q2W.

[0216] A PK de pembrolizumabe após administração de 400 mg Q6W é prevista por seguir um perfil similar como a PK nos regimes de dosagem 200 mg Q3W e 2 mg/kg Q3W aprovados (consulte Figura 4). A métrica de exposição em comparação com regimes são resumidos na Tabela 4. O regime de dosagem 400 mg Q6W de pembrolizumabe foi selecionado com base em exposições previstas similares (Cavg,ss ou AUCss, média geométrica (GM) ~1% mais alta) em comparação com aquelas alcançadas a 200 mg Q3W (consulte Figura 3). Menos que 1% dos indivíduos foi previsto como tendo Cmin,ss que são menores em comparação com aquelas em 200 mg Q3W e 2 mg/kg Q3W (Figura 3). As Cmax,ss previstas para 400 mg Q6W estão bem abaixo (GM ~65% inferior) das que as alcançadas com 10 mg/kg Q2W, que demonstraram ter segurança aceitável ao longo de múltiplos tipos de tumor (consulte Figura 2). Em vista dos perfis de exposição similares e as relações de E-R estáveis estabelecidas para pembrolizumabe em doses clinicamente testadas, espera-se que os resultados clínicos alcançados com 400 mg Q6W sejam similares àqueles com 200 mg Q3W ao longo de tipos de tumor.

[0217] Com base na abordagem de modelagem e simulação usada na presente invenção, espera-se que um regime de dosagem de 400 mg Q6W para pembrolizumabe levaria a exposições de PK que são similares aos regimes de dosagem 200 mg Q3W e 2 mg/kg aprovados. As simulações de PK demonstram que, em termos de exposições de pembrolizumabe, a Concentração média pelo intervalo de dosagem (Cavg) (ou área sob a curva [AUC]) a 400 mg Q6W foi similar àquela na dose 200 mg Q3W aprovada, trazendo assim eficácia entre os regimes de dosagem. As concentrações de vale (Cmin) a 400 mg Q6W estiveram em geral dentro da faixa daquelas alcançadas com 2 mg/kg ou 200 mg Q3W na maioria (>99%) dos pacientes. As concentrações de pico (Cmax) a 400 mg Q6W estiveram bem abaixo da Cmax para a dose clinicamente testada mais alta de 10 mg/kg Q2W, sustentando que o perfil de segurança para 400 mg Q6W deve ser comparável com o perfil de segurança estabelecido de pembrolizumabe. A resposta de exposição (E-R) para pembrolizumabe foi demonstrada como sendo estável através de indicações, e as previsões de OS em melanoma e NSCLC demonstram que espera-se que a eficácia a 400 mg Q6W seja similar àquela a 200 mg ou 2 mg/kg Q3W, em vista das exposições similares; assim, espera-se que 400 mg Q6W seja eficaz pelas indicações. Tabela 4. Resumo de Métricas de Exposição PK de Pembrolizumabe para os 400 mg de Regime de Dosagem Q6W com Base em Simulações Regime de Dosagem Alternativo 400 mg Q6W Cavg,ss Em relação a 200 mg Q3W, 0,7% % de diferença em GM em regime permanente Cmin,ss Em relação a 2 mpk Q3W, -12,6% % de diferença em GM em regime permanente % de pacientes abaixo do limite inferior de faixa para 200 mg < 1% e 2 mpk Q3W em regime permanente Cmax,ss Em relação a 10 mpk Q2W, -65,6% % de diferença em GM em regime permanente EXEMPLO 2

[0218] Um Estudo Clínico Aleatorizado de Fase 1 de Pembrolizumabe para Avaliar a Segurança e a Tolerabilidade de Infusão Intravenosa de 400 mg de Pembrolizumabe Q6W em Participantes com Melanoma Avançado

[0219] Esse estudo é projetado para avaliar a farmacocinética (PK), a segurança e a tolerabilidade de pembrolizumabe quando administrado a cada 6 semanas (Q6W). A um coorte de 100 participantes são dados 400 mg de pembrolizumabe Q6W. Os dados de PK, eficácia e segurança são coletados a partir desse coorte de participantes. Os participantes masculinos/femininos de pelo menos 18 anos de idade com melanoma avançado são alistados no estudo. Nenhuma estratificação com base em idade, sexo ou outras características é usada nesse estudo.

[0220] Os participantes recebem infusão IV de 400 mg de pembrolizumabe Q6W dos ciclos 1 a 18. Os dados de PK, eficácia e segurança são coletados a partir desses participantes. Os resultados fornecem dados preliminares de PK, eficácia e segurança de pembrolizumabe quando administrados Q6W. Com base no entendimento robusto de farmacologia clínica de pembrolizumabe e seus perfis de E-R bem estabelecidos, espera-se que tal alteração em cronograma de dosagem produz eficácia e segurança similares em todas as configurações de tratamento em que 200 mg Q3W de pembrolizumabe é aprovado (incluindo monoterapia e em combinação com outros agentes). Assim, um regime de 400 mg Q6W teria um perfil de benefício-risco similar a 200 mg Q3W, como um regime de dosagem menos frequente no uso clínico de pembrolizumabe com base em análises de modelagem e simulação (consulte EXEMPLO 1). Projeto de Estudo:

[0221] O estudo, que é um estudo de pembrolizumabe com segurança aleatorizado, cruzado, com múltiplos centros e aberto ao público em participantes com melanoma avançado, é conduzido em conformidade com as Boas Práticas Clínicas (GCP). Esse estudo de Fase 1 é conduzido em participantes com melanoma irressecável ou metastático. O período de tratamento continua a cada 42 dias por até 18 ciclos (aproximadamente 2 anos). O tratamento continuará desde que os participantes estejam recebendo benefício do tratamento e não tenham progressão de doença ou satisfeito quaisquer critérios para exclusão do estudo. Em maiores detalhes, o estudo consiste em: (1) um período de triagem de até uma duração de 28 dias para assegurar que o participante é elegível para o estudo e (2) um período de intervenção de aproximadamente 104 semanas de tratamento com pembrolizumabe. Os participantes recebem pembrolizumabe via infusão IV por 30 minutos Q6W por até 18 ciclos, e (3) um período de acompanhamento durante o qual os participantes são monitorados para AEs por 30 dias e eventos adversos graves (SAEs) por 90 dias (30 dias se o participante iniciar nova terapia anticâncer). Os participantes com um AE em andamento momento da descontinuação do tratamento são acompanhados até a resolução, estabilização, o evento ser de outro modo explicado, ou o participante ser excluído do acompanhamento.

[0222] Os participantes que descontinuam por razões além da progressão radiográfica de doença tem imageamento de acompanhamento pós-tratamento para status de doença até a progressão de doença ser documentada radiograficamente por RECIST 1.1 e, quando clinicamente apropriado, confirmada pelo local da iRECIST, iniciando um tratamento de câncer sem estudo, consentimento de exclusão, se tornando ausente de acompanhamento ou no fim do estudo. Todos os participantes são acompanhados por telefone para sobrevivência total no período de acompanhamento de sobrevivência até a morte, consentimento de exclusão de participante, se tornando ausente do acompanhamento ou no fim do estudo.

[0223] Todos os participantes alistados nesse estudo terão um diagnóstico de melanoma avançado. Os resultados desse estudo contribuirão para uma compreensão das características de PK de pembrolizumabe quando administrado em um regime de dosagem Q6W. Os parâmetros de segurança comumente usados para avaliar tratamentos anticâncer sistêmicos investigativos são incluídos como pontos de extremidade de segurança incluindo, mas sem limitação a, a incidência de, causalidade e o resultado de eventos adversos (AEs)/eventos adversos graves (SAEs); e alterações em sinais vitais e valores laboratoriais. AEs serão avaliados como definido por National Cancer Institute

Common Terminology Criteria for Adverse Events [NCI CTCAE] Versão 4.0).

[0224] Um objetivo desse ensaio é caracterizar o perfil de PK de pembrolizumabe após administração como uma infusão IV Q6W. Os dados de PK são analisados após todos os participantes completarem o Ciclo 5. Os parâmetros de PK incluem AUC, Cmax e Cmin. A Formação de Anticorpos Antifármaco (ADA) pode potencialmente confundir exposições de fármaco em doses terapêuticas e preparar para toxicidade relacionada à infusão subsequente. A resposta de anticorpo antifármaco a pembrolizumabe no começo de cada um dos Ciclos 1, 2, 4 e 5 é determinada. Qualquer impacto de presença de ADAs em exposição de pembrolizumabe é explorado.

[0225] Esse estudo usa ORR com base em critérios RECIST 1.1 como avaliado por análise central independente às cegas (BICR) como o ponto de extremidade principal. A taxa de resposta objetiva é uma medição aceitável de benefício clínico para um estudo de último estágio que demonstra superioridade de uma nova terapia antineoplásica, especialmente se a amplitude do efeito for grande e a terapia tiver um perfil de risco/benefício aceitável. As imagens são inseridas em um CRO de imageamento (iCRO) e lidas por análise central independente oculta para atribuição de tratamento para minimizar a tendência nas avaliações de resposta.

[0226] A sobrevivência total (OS) é um ponto de extremidade secundário e foi reconhecido como o padrão crucial para a demonstração de superioridade de uma nova terapia antineoplásica em estudos clínicos aleatorizados. RECIST 1.1 é usado pelo BICR quando se avalia imagens em relação a medidas de eficácia e pelo local quando se determina a elegibilidade. RECIST 1.1 modificado para avaliação de terapêuticos de base imune (iRECIST) foi desenvolvido e publicado pelo Grupo de Trabalho RECIST, com entrada de especialistas líderes da indústria e mundo acadêmico, junto com a participação da US Food and Drug

Administration e da European Medicines Agency. A medição unidimensional de lesões-alvo, avaliação qualitativa de lesões-não alvo e categorias de resposta é idêntica a RECIST 1.1, até a progressão ser vista por RECIST 1.1. Entretanto, se um participante estiver clinicamente estável, o imageamento adicional pode ser realizado para confirmar a progressão radiográfica. iRECIST é usado por investigadores para avaliar resposta e progressão tumoral e para realizar decisões de tratamento assim como para análises de eficácia exploratórias onde especificado. Critérios de Inclusão

[0227] Os participantes são elegíveis para serem incluídos no estudo apenas se todos os seguintes critérios se aplicarem: O participante tem diagnóstico histológica ou citologicamente confirmado de melanoma avançado O participante tem melanoma irressecável Estágio III ou Estágio IV, de acordo com o sistema de classificação de estágio American Joint Committee on Cancer (AJCC) não suscetível à terapia local. O participante é não tratado para doença avançada ou metastática exceto pelo seguinte: O melanoma de mutante BRAF V600 pode ter recebido padrão de terapia alvejada em cuidado (por exemplo, inibidor de BRAF/MEK, sozinho ou em combinação) e ser elegível para esse estudo

[0228] Antes de a terapia de melanoma adjuvante ou neoadjuvante se permitida se foi completada pelo menos 4 semanas antes aleatorização e todos os AEs relacionados retornaram para a linha de base ou estabilizaram (resolução de efeito(s) tóxico(s) da terapia mais recente anterior ao Grau 1 ou menos [exceto alopecia]). Se o indivíduo recebeu radioterapia ou cirurgia maior de >30 Gy, os mesmos precisam estar recuperados da toxicidade e/ou complicações da intervenção.

[0229] Uma participante feminina é elegível para participar se ela não estiver grávida, não estiver amamentando e concordar em seguir a diretriz contraceptiva específica durante o período de tratamento e por pelo menos 120 dias ou fornecer consentimento informado.

[0230] Uma participante deve ter um status de desempenho 0 de Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) (completamente ativo, capaz de suportar todo o desempenho pré-doença sem restrição) ou 1 (restrito em atividade fisicamente extenuante, mas ambulatorial e capaz de executar trabalho de uma natureza leve ou sedentária, por exemplo, trabalho doméstico leve, trabalho em escritório) e deve ter função de órgão adequado como definido na Tabela 5. Os espécimes são coletados dentro de 72 horas antes do início de intervenção de estudo. Tabela 5. Valores Laboratoriais de Função de Órgão Adequada Sistema Valor Laboratorial Hematológico Contagem de neutrófilo absoluta ≥ 1500/µl (ANC) Plaquetas ≥ 100000/µl Hemoglobina ≥ 9,0 g/dl ou ≥ 5,6 mmol/l1 Renal Creatinina ou ≤ 1,5 × ULN ou Liberação de creatinina medida ou ≥ 30 ml/min por participante com calculada2 níveis de creatinina >1,5 x ULN (GFR também pode ser usado no institucional lugar de creatinina ou CrCl) Hepática ≤ 1,5 x ULN ou bilirrubina direta ≤ ULN Bilirrubina total para participantes com níveis de bilirrubina total >1,5 x ULN ≤2,5 x ULN (≤5 x ULN para participantes AST (SGOT) e ALT (SGPT) com metástases hepáticas) Coagulação Razão normalizada internacional ≤1,5 x ULN salvo se o participante (INR) ou tempo de protrombina estiver recebendo terapia

(PT) anticoagulante desde que PT ou PTT Tempo de tromboplastina parcial esteja dentro da faixa terapêutica de ativado (aPTT) uso pretendido de anticoagulantes 1 Os critérios precisam ser satisfeitos sem dependência de eritropoietina e sem transfusão de eritrócito concentrado (pRBC) dentro das últimas 2 semanas. 2 Liberação de creatinina (CrCl) deve ser calculada por padrão institucional. ALT (SGPT) = alanina aminotransferase (transaminase pirúvica glutâmica sérica); AST (SGOT) = aspartato aminotransferase (transaminase oxaloacético glutâmica sérica); GFR = taxa de filtração glomerular; ULN = limite superior de normal. Critérios de Exclusão

[0231] Os participantes são excluídos do estudo se qualquer um dos seguintes critérios se aplicarem:

[0232] O participante é uma criança de potencial para engravidar (WOCBP) que tem um teste de gravidez de urina positivo dentro de 72 horas antes da aleatorização ou alocação de tratamento. Se o teste de urina for positivo ou não puder ser confirmado como negativo, um teste de gravidez sérico é exigido.

[0233] O participante tem tratamento sistêmico anterior recebido para melanoma irressecável ou metastático (exceto como observado em critérios de inclusão descritos acima).

[0234] O participante recebeu terapia anterior com um anti-PD-1, anti-PD- L1 ou anti-PD-L2 ou com um agente direcionado para um outro receptores de célula estimulatórios ou coinibitórios (por exemplo, OX-40 e CD137) ou qualquer outro anticorpo ou fármaco que alveja especificamente vias de ponto de verificação além do anti-CTLA-4 que é permitido na configuração adjuvante.

[0235] O participante recebeu radioterapia anterior dentro de 2 semanas de início de tratamento de estudo. Os participantes precisam ter se recuperado de todas as toxicidades relacionadas à radiação, não requer corticosteroides, e não têm pneumonite de radiação.

[0236] O participante recebeu uma vacina viva dentro de 30 dias antes da primeira dose de fármaco de estudo. Os exemplos de vacinas vivas incluem, mas sem limitação a, os seguintes: vacina de sarampo, caxumba, rubéola, varicela/zoster (catapora), febre amarela, raiva, Bacillus Calmette-Guérin (BCG) e tifoide. As vacinas de gripe sazonal para injeção são em geral vacinas com vírus morto e são permitidas; entretanto, vacinas de gripe intranasal (por exemplo, FluMist®) são vacinas atenuadas vidas e não são permitidas.

[0237] O participante está atualmente participando ou participou em um estudo de um agente de investigação ou usou um dispositivo de investigação dentro de 4 semanas antes da primeira dose de intervenção de estudo.

[0238] O participante tem um diagnóstico de imunodeficiência ou está recebendo terapia esteroidal sistêmica crônica (em dosagem que excede 10 mg diários de equivalente de prednisona) ou qualquer outra forma de terapia imunossupressora dentro de 7 dias antes da primeira dose de fármaco de estudo.

[0239] O participante tem uma malignidade adicional conhecida que está progredindo ou exigiu tratamento ativo dentro dos últimos 2 anos. Nota: Os participantes com carcinoma de célula basal da pele, carcinoma de célula escamosa da pele ou carcinoma in situ (por exemplo, carcinoma de mama, câncer cervical in situ) que se submeteram à terapia potencialmente curativa não são excluídos.

[0240] O participante tem metástases de SNC e/ou meningite carcinomatosa ativas conhecidas. Os participantes com metástases de cérebro anteriormente tratadas podem participar desde que sejam radiologicamente estáveis, (isto é, sem evidência de progressão) por pelo menos 4 semanas por imageamento repetido (observa-se que o imageamento repetido deve ser realizado durante a triagem de estudo), clinicamente estável e sem exigência de tratamento esteroidal por pelo menos 14 dias antes da primeira dose de intervenção de estudo.

[0241] O participante tem hipersensibilidade grave (≥ Grau 3) a pembrolizumabe e/ou quaisquer de seus excipientes.

[0242] O participante tem melanoma ocular.

[0243] O participante tem uma doença autoimune ativa que exigiu tratamento sistêmico nos últimos 2 anos (isto é, com o uso de agentes modificadores de doença, corticosteroides ou fármacos imunossupressores). A terapia de substituição (por exemplo, terapia de substituição de tiroxina, insulina ou corticosteroide fisiológico para insuficiência adrenal adrenal ou pituitária) não é considerada uma forma de tratamento sistêmico e é permitida.

[0244] O participante tem um histórico de pneumonite (não infecciosa) que exigiu esteroides ou tem pneumonite atualmente.

[0245] O participante tem uma infecção ativa que requer terapia sistêmica.

[0246] O participante tem um histórico conhecido de infecção por vírus da imunodeficiência humana (HIV).

[0247] O participante tem um histórico conhecido de Hepatite B (definido como reativo a antígeno [HBsAg] de superfície de Hepatite B) ou infecção por vírus da Hepatite C ativo conhecido (definido como RNA de HCV [qualitativa] é detectado).

[0248] O participante tem um histórico ou evidência atual de qualquer condição, terapia ou anormalidade laboratorial que pode confundir os resultados do estudo, interferir na participação do participante por toda a duração do estudo, ou não é de melhor interesse do participante para participar, na opinião do investigador de tratamento.

[0249] O participante tem um transtorno psiquiátrico ou de adicção conhecido que interferiria na cooperação com as exigências do estudo.

[0250] A participante está grávida ou amamentando ou espera engravidar ou ter filhos dentro da duração projetada do estudo, começando com a visita de triagem por 120 dias após a última dose de intervenção de estudo. Descontinuação de Intervenção de Estudo e Exclusão de Participante

[0251] A descontinuação de intervenção de estudo não representa a exclusão do estudo. como certos dados sobre eventos clínicos além da interrupção da intervenção no estudo podem ser importantes para o estudo, eles devem ser coletados até o último acompanhamento agendado do participante, mesmo que o participante tenha interrompido a intervenção de estudo. Portanto, todos os participantes que descontinuarem a intervenção do estudo antes da conclusão do período de tratamento especificado pelo protocolo continuarão a participar do estudo.

[0252] Os participantes podem interromper a intervenção do estudo a qualquer momento por qualquer motivo ou ser retirados da intervenção do estudo, a critério do investigador, caso ocorra algum efeito indesejável. Além disso, um participante pode ser descontinuado da intervenção do estudo pelo investigador, se a intervenção for inadequada, o plano de estudo for violado ou por razões administrativas e/ou outras razões de segurança.

[0253] Um participante deve ser descontinuado da intervenção do estudo, mas continuar sendo monitorado no estudo por qualquer um dos seguintes motivos:

[0254] O participante ou representante legalmente aceitável do participante solicita a interrupção da intervenção do estudo.

[0255] O participante interrompe a administração da intervenção do estudo por mais de 12 semanas consecutivas ou possui 3 doses perdidas cumulativas.

[0256] O participante tem uma condição médica ou circunstância pessoal que, na opinião do investigador, coloca o participante em risco desnecessário devido à administração contínua da intervenção do estudo.

[0257] A participante tem um teste de gravidez sérico positivo confirmado.

[0258] O participante confirmou a progressão da doença radiográfica.

[0259] O participante tem alguma progressão ou recorrência de qualquer malignidade ou qualquer ocorrência de outra malignidade que exija tratamento ativo.

[0260] O participante tem experiências adversas inaceitáveis.

[0261] O participante tem outra doença intercorrente que não outra malignidade, como observado acima, que impede a administração adicional do tratamento.

[0262] O investigador decide interromper o tratamento.

[0263] O participante tem pneumonite recorrente grau 2.

[0264] O participante completou 35 tratamentos (aproximadamente 2 anos) com pembrolizumabe.

[0265] Um participante é excluído do estudo se o participante ou representante legalmente aceitável do participante excluir o consentimento do estudo. Se um participante for excluído do estudo, ele não receberá tratamento de estudo ou ser acompanhado em visitas de protocolo programadas. Consentimento Informado

[0266] O investigador ou designado por médicos qualificados obtém consentimento documentado de cada participante em potencial ou de seu representante legalmente aceitável antes de participar de um estudo clínico. Se nenhuma alteração no status do participante durante o estudo (por exemplo, requisitos de saúde ou idade de maioridade), o investigador ou designado por médicos qualificados assegura que o consentimento apropriado está no local. Eficácia/Avaliações

[0267] As avaliações tumorais incluem todos os sítios de doença suspeita ou conhecida. O imageamento pode incluir tomografia computadorizada (CT) de tórax, abdômen e pélvis ou imageamento por ressonância magnética (MRI) na linha de base e quando a progressão de doença ou metástase cerebral é suspeita. É fortemente preferencial que o imageamento tumoral seja adquirido por CT. Para tórax, abdômen e pélvis, MRI melhorada por contraste pode ser usada quando CT com contraste com iodo é contraindicado ou quando obrigado pela prática local. Para o cérebro, a MRI é a modalidade de imageamento fortemente preferencial.

[0268] A mesma técnica de modalidade de imageamento (idealmente o mesmo escâner, e uso consistente de contraste) é usada em um participante por todo o estudo. O uso consistente de técnicas de imageamento ajudará a otimizar a reprodutibilidade da avaliação de carga tumoral existente e nova, e a aprimorar a precisão da avaliação de resposta ou progressão. Todas as imagens programadas para todos os participantes de estudo são analisadas pelo investigador para progressão de doença. Além disso, as imagens (incluindo aqueles obtidos através de outras modalidades) que são obtidas em um ponto no tempo não programado para determinar a progressão de doença (assim como imageamento obtido por outras razões, mas que capturam a progressão radiológica com base em avaliação de investigador), devem também ser inseridas no local de estudo.

[0269] A confirmação da doença mensurável com base no RECIST 1.1 pelo BICR na triagem será usada para determinar a elegibilidade do participante. É necessária a confirmação pelo BICR de que a imagem do participante mostra pelo menos 1 lesão apropriada para seleção como lesão-alvo de acordo com o RECIST

1.1, antes da alocação do participante. Imageamento de Tumor Inicial

[0270] O imageamento de tumor inicia na triagem é realizada dentro de 28 dias antes da data da primeira dose. Qualquer imageamento obtido após o dia 1 do Ciclo 1 de tratamento não é incluído na avaliação de triagem. A equipe de estudo do local analisa as imagens de triagem para confirmar se o participante tem doença mensurável por RECIST 1.1. Se a imagem cerebral for realizada para documentar a estabilidade das metástases existentes, a ressonância magnética será usada, se possível. Se MRI for medicamente contraindicada, a CT com contraste é uma alternativa aceitável. Imageamento de Tumor durante o Estudo

[0271] A primeira avaliação de imageamento em estudo é realizada em 12 semanas (84 dias ±7 dias]) da data da primeira dose. O imageamento de tumor subsequente é realizado a cada 9 semanas (63 dias ±7 dias) ou mais frequentemente se clinicamente indicado. Após 52 semanas (365 dias ±7 dias), os participantes que permaneceram em tratamento terão imageamento realizado a cada 12 semanas (84 dias ±7 dias).

[0272] A resposta objetiva é confirmada por uma repetição da avaliação por imagem. A imagem tumoral para confirmar PR ou CR é realizada pelo menos 4 semanas após a primeira indicação de uma resposta ser observada. Os participantes retornarão à geração de imagens agendada regularmente, começando com o próximo ponto no tempo da criação de imagens. Os participantes que receberem imagens adicionais para confirmação não precisam se submeter à próxima imagem tumoral programada, se for menos de quatro semanas depois; a imagem do tumor pode recomeçar no momento agendado subsequente da imagem.

[0273] Por iRECIST modificado, a progressão da doença é confirmada no local 4 a 8 semanas após a primeira evidência radiológica de doença progressiva (DP) em participantes clinicamente estáveis. Os participantes que tiverem progressão não confirmada da doença podem continuar o tratamento a critério do investigador até que a progressão seja confirmada pelo site. Os participantes que recebem imagens confirmatórias não precisam se submeter à próxima imagem tumoral programada, se for menos de quatro semanas depois; a imagem do tumor pode recomeçar no momento agendado subsequente da imagem, se clinicamente estável. Os participantes que confirmaram a progressão da doença pelo iRECIST, como avaliado pelo site, interromperão o tratamento de estudo. Fim de Tratamento e Imageamento de Tumor de Acompanhamento

[0274] Para os participantes que descontinuam a intervenção do estudo, a imagem do tumor é realizada no momento da descontinuação do tratamento (janela de ± 4 semanas). Se a imagem anterior foi obtida dentro de 4 semanas antes da data de descontinuação, a imagem na descontinuação do tratamento não é obrigatória. Para participantes que descontinuam a intervenção do estudo devido à progressão documentada da doença, esta é a imagem final do tumor necessária se o investigador optar por não implementar o iRECIST.

[0275] Para participantes que descontinuam a intervenção do estudo sem progressão documentada da doença, devem ser feitos todos os esforços para continuar monitorando o status da doença por imagem de tumor, usando o mesmo esquema de imagem usado durante o tratamento a cada 12 semanas (± 7 dias) até o início de um novo tratamento antineoplásico, progressão da doença, gravidez, morte, retirada do consentimento ou final do estudo, o que ocorrer primeiro. Avaliação de Doença RECIST 1.1

[0276] O RECIST 1.1 é usado como a principal medida para avaliar a resposta do tumor, a data da progressão da doença e como base para todas as diretrizes do protocolo relacionadas ao status da doença (por exemplo, descontinuação da intervenção do estudo). Embora o RECIST 1.1 faça referência a um máximo de 5 lesões-alvo no total e 2 por órgão, este protocolo permite um máximo de 10 lesões-alvo no total e 5 por órgão, se clinicamente relevante para permitir uma amostragem mais ampla da carga tumoral.

Avaliação de Doença iRECIST

[0277] O iRECIST é baseado no RECIST 1.1, mas adaptado para explicar a resposta tumoral única observada com fármaco imunoterapêutico. O iRECIST será usado pelo investigador para avaliar a resposta e a progressão do tumor e tomar decisões de tratamento. Quando clinicamente estáveis, os participantes não são interrompidos até a progressão ser confirmada pelo investigador, trabalhando com radiologia local. Essa permissão para continuar o tratamento, apesar da DP radiológica inicial, leva em consideração a observação de que alguns participantes podem ter um surto de tumor transitório nos primeiros meses após o início da imunoterapia e, em seguida, experimentam a resposta subsequente à doença.

[0278] Qualquer participante considerado clinicamente instável é descontinuado da intervenção do estudo no momento em que a primeira evidência radiológica da DP é avaliada no local e não é necessário que a imagem do tumor seja repetida para confirmação da DP pelo iRECIST. Se o investigador decidir continuar o tratamento, o participante pode continuar recebendo a intervenção do estudo e a avaliação do tumor deve ser repetida 4 a 8 semanas depois para confirmar a DP pelo iRECIST, por avaliação do investigador. Se as imagens de repetição não confirmarem PD por iRECIST, como avaliado pelo investigador, e o participante continua a ser clinicamente estável, a intervenção de estudo continua e segue o cronograma de imageamento regular. Se PD for confirmado, participantes serão descontinuados da intervenção de estudo.

[0279] Se um participante tiver confirmado a progressão radiográfica (iCPD), a intervenção de estudo é descontinuada; no entanto, se o participante alcançar um benefício clinicamente significativo, uma exceção para continuar a intervenção de estudo é considerada. Nesse caso, se intervenção de estudo for continuada, o imageamento de tumor continua a ser realizado. Um resumo de exigências de imagens e tratamento após a primeira evidência radiológica de progressão é fornecido na Tabela 6. Tabela 6 Imageamento e Tratamento após a primeira Evidência Radiológica de Doença Progressiva Clinicamente Estável Clinicamente Instável Imageamento Tratamento Imageamento Tratamento Primeira Pode continuar Repetir evidência o tratamento imageamento Repetir radiológica de estudo na a4a8 imageamento de PD por avaliação do semanas para Tratamento em 4 a 8 RECIST 1.1 investigador e confirmar PD Descontínuo semanas para por após o apenas por confirmar PD avaliação de consentimento critério do investigador do participante investigador.

Pode continuar a intervenção de estudo no Repetir critério do imageamento Primeira Repetir investigador a4a8 evidência imageamento enquanto semanas para Tratamento radiológica em 4 a 8 aguarda as confirmar PD Descontínuo de PD por semanas para imagens de apenas por RECIST 1.1 confirmar PD. tumores critério do confirmatórias investigador. pelo sítio por iRECIST.

A repetição as imagens de tumor Nenhuma Nenhuma confirma PD imagem Tratamento imagem Não (iCPD) por adicional Descontínuo adicional aplicável iRECIST pela necessária. necessária. avaliação do investigador.

A repetição Repetir Continuar a Repetir de imagens imageamento intervenção de imageamento Tratamento de tumor em 4 a 8 estudo no a4a8 Descontínuo mostra iUPD semanas para critério do semanas para

Clinicamente Estável Clinicamente Instável Imageamento Tratamento Imageamento Tratamento por iRECIST confirmar PD. investigador. confirmar PD pela Pode ocorrer apenas por avaliação do na próxima critério do investigador. visita de investigador. imageamento programada de modo regular. Pode reiniciar a intervenção de estudo se a condição tiver aprimorado A repetição e/ou for das imagens clinicamente de tumor Continuar as Continuar a Continuar as estável pelo mostra iSD, avaliações de intervenção de avaliações de critério do iPR ou iCR imagens estudo no imagens investigador. por iRECIST regularmente critério do regularmente As próximas pela programadas. investigador. programadas. imagens de avaliação do tumor investigador. devem ocorrer de acordo com o cronograma de imagens regular. Abreviações: iCPD=iRECIST doença progressiva confirmada; iCR=iRECIST resposta completa; iPR=iRECIST resposta parcial confirmada; iRECIST=Critérios de Avaliação de Resposta Modificados em tumores sólidos

1.1 para terapêutica imunológica; iSD=iRECIST doença estável; iUPD=iRECIST doença progressiva não confirmada; PD=doença progressiva; RECIST

1.1=Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos 1.1; VOP=verificação de progressão Avaliações de Segurança

[0280] As avaliações de segurança incluem a coleta de AEs e SAEs, monitoramento de sinais vitais e avaliações laboratoriais (incluindo testes de gravidez), desempenho de eletrocardiogramas (ECGs) e exames físicos, e verificação de medicamentos concorrentes. Efeitos adversos

[0281] O investigador ou designado qualificado avalia cada indivíduo para avaliar o novo potencial ou a piora de AEs e mais frequentemente se clinicamente indicado. A avaliação de EAs inclui, porém sem limitação, tipo, incidência, gravidade (classificados pelos Critérios de Terminologia Comuns do Instituto Nacional de Câncer para efeitos adversos [NCI CTCAE] Versão 4.0)), tempo, severidade e relação com o fármaco em estudo. Os eventos adversos que ocorrem durante o estudo, incluindo sinais de linha de base e sintomas, são registrados. Exame Físico Completo

[0282] O investigador ou designado qualificado realiza um exame físico completo durante o Período de Triagem. As constatações anormais clinicamente significativas são registradas como histórico médico. Após a primeiro dose de intervenção de estudo, novas constatações anormais clinicamente significativas são registradas como AEs. Exame Físico Direto

[0283] Para ciclos que não exigem um exame físico completo, o investigador ou designado qualificado realiza um exame físico direcionado como clinicamente indicado antes da administração da intervenção de estudo. Novas constatações anormais clinicamente significativas são registradas como AEs. Sinais Vitais

[0284] Os sinais vitais são medidos em uma posição semissupina após 5 minutos de repouso e incluem temperatura, pressão arterial sistólica e diastólica,

taxa respiratória, taxa de pulso e peso. A altura é coletada apenas na triagem. Eletrocardiogramas

[0285] Um ECG padrão de 12 derivações é Realizado usando procedimentos padrão locais. As constatações anormais clinicamente significativas na Triagem são registradas como histórico médico. ECG (ECGs) adicional é realizado no estudo quando clinicamente necessário. As constatações clinicamente significativas observados em ECGs de acompanhamento são registradas como AEs. Avaliações Laboratoriais de Segurança Clínica

[0286] Os testes detalhados na Tabela 7are registrados por um laboratório local. Os testes adicionais podem ser realizados em qualquer momento durante o estudo como determinado necessário pelo investigador. Tabela 7 Avaliações Laboratoriais de Segurança Exigidas pelo Protocolo Avaliações Parâmetros Laboratoriais Contagem de Contagem de Plaquetas WBC com Contagem de Índices de RBC: Diferencial: RBC MCV Neutrófilos Hematologia Hemoglobina MCH Linfócitos % de Reticulocítico Monócitos Hematócrito Eosinófilos Basófilos Bilirubina Total (e bilirrubina Aspartato direta, se a Nitrogênio Aminotransferase bilirrubina Ureico no (AST)/Transaminase Química Potássio total é Sangue Glutâmica- elevada (BUN) Oxaloacética Sérica acima do (SGOT) limite superior de normal)

Albumina Bicarbonato Cloreto Fósforo Alanina Aminotransferase Proteína Creatinina Sódio (ALT)/Transaminase Total Glutâmica-Pirúvica Sérica (SGPT)

TSH T3 Total (ou T3 Glicose Cálcio Fosfatase alcalina livre) T4 Total (ou T4 livre) Gravidade específica Análise de pH, glicose, proteína, sangue, cetonas, [bilirrubina, Urina de urobilinogênio, nitrita, esterase leucocitária] por vareta de Rotina medida Exame microscópico (se o sangue ou a proteína é anormal) Hormônio folículo-estimulante e estradiol (como necessário apenas em mulheres com potencial para não engravidar) [Soro ou urina] [exame de álcool e drogas (para incluir no mínimo: anfetaminas, barbituratos, cocaína, opiáceos, Outros canabinoides e benzodiazepínicos), se aplicável] Testes de Teste de gravidez [soro ou urina] de gonadotrofina coriônica β- Triagem humana (β-hCG) (como necessário para WOCBP) [Sorologia [(anticorpo de HIV, antígeno de superfície da hepatite B [HBsAg] e anticorpo do vírus da hepatite C)]] [ou especifique outros testes] [se aplicável] NOTAS: aT3 e T4 são preferenciais; se não disponíveis, T3 livre e T4 livre podem ser testados. Abreviações: β-hCG=gonadotrofina coriônica β-humana; ALT=alanina transaminase; AST=aspartato transaminase; BUN=nitrogênio ureico no sangue; HBsAg=antígeno de superfície de hepatite B; HIV=vírus da imunodeficiência humana; MCH=hemoglobina corpuscular média; MCV=volume corpuscular médio; RBC=hemácia; SGOT=transaminase oxaloacética glutâmica sérica; SGPT=transaminase pirúvica glutâmica sérica; TSH=hormônio estimulador da tireoide; WBC=glóbulo branco; WOCBP=mulher/mulheres com potencial para engravidar. Período de Tempo e Frequência para Coleta de AE, SAE e Outras

Informações sobre Eventos de Segurança Relatados

[0287] Todos os AEs, SAEs e outros casos de segurança relatados que ocorrem após o formulário de consentimento ser assinado, mas antes da alocação/aleatorização de tratamento devem ser relatados pelo investigador se o participante receber placebo ou outro tratamento de fase de placebo, se o evento faz com que o participante seja excluído do estudo, ou é o resultado de uma intervenção específica de protocolo, incluindo, mas sem limitação, a lavagem ou descontinuação de terapia usual, dieta ou um procedimento. Todos os AEs do tempo de alocação/aleatorização de tratamento por 30 dias seguindo a cessação de intervenção de estudo devem ser relatados pelo investigador.

[0288] Todos os AEs que satisfazem os critérios graves, do tempo de alocação/aleatorização de tratamento por 90 dias após a cessação de intervenção de estudo ou 30 dias após a cessação de intervenção de estudo se o participante inicia nova terapia anticâncer, o que ocorrer primeiro, deve ser relatado pelo investigador. Adicionalmente, qualquer SAE levado ao conhecimento de um investigador em qualquer tempo fora do tempo período especificado acima é relatado imediatamente se o evento for considerado relacionado a fármaco. Métodos estatísticos para Análise de Eficácia

[0289] Taxa de resposta objetiva (ORR) - ORR é calculada como a razão do número de participantes que relataram alcançar um CR ou PR confirmado verificado por BICR, dividido pelo número de participantes incluídos na população de APaT. Participantes na população de análise de APaT sem avaliações de ORR serão contados como não responsivos. Um CI binomial exato de 95% (com base no método Clopper e Pearson,1934) é calculado para o ORR verdadeiro.

[0290] Sobrevivência Livre de Progressão (PFS)- o método de Kaplan-Meier não paramétrico é usado para estimar a distribuição de PFS. 95% de CIs para as estimativas médias de ponto de PFS e PFS em vários tempos de acompanhamento do primeiro dia de tratamento de estudo serão calculados. Visto que a progressão de doença é avaliada periodicamente, PD pode ocorrer a qualquer momento no intervalo de tempo entre a última avaliação em que PD não foi documentada e a avaliação quando PD é documentada. A data verdadeira de PD será aproximada da data da primeira avaliação em que PD é objetivamente documentada com base em RECIST 1.1 por BICR. A morte é sempre considerada como um evento de PFS. Os participantes que não experimentaram um evento de PFS serão censurados na última avaliação da doença. Para a análise de PFS, se os eventos (PD ou morte) ocorrerem imediatamente após mais de uma avaliação de doença perdida, os dados são censurados na última avaliação de doença antes da falta de visitas. Além disso, os dados após nova terapia de anticâncer são censurados na última avaliação de doença antes da iniciação da nova terapia anticâncer. Se um participante satisfaz os múltiplos critérios de censura, os critérios de censura que ocorrem anteriormente serão aplicados.

[0291] Sobrevivência Total (OS)- o método de Kaplan-Meier não paramétrico é usado para estimar a distribuição de OS. 95% de CIs para as estimativas de ponto de OS e OS médio em vários tempos de acompanhamento do primeiro dia de tratamento de estudo são calculados.

[0292] Duração de resposta (DOR) - DOR é resumida de modo descritivo usando o método de Kaplan-Meier não paramétrico. Apenas o subconjunto de participantes que mostram um CR ou PR estão incluídos nessa análise. Estratégia de Análise para Ponto de Extremidade de Eficácia Principal

[0293] A Tabela 8 resume a abordagem de análise primária para pontos de extremidade de eficácia principais. Tabela 8. Estratégia de Análise para Pontos de Extremidade de Eficácia

Principais Ponto de População Abordagem de Método Estatístico Extremidade de Análise Dados Ausente Pontos de Extremidade Primários: Com base no Participantes sem método exato avaliações são Na distribuição considerados ORR por RECIST 1.1 binomial APaT não -responsivos e por BICR (Método de conservativamente Clopper-Pearson incluídos no ) denominador Ponto de Extremidade Secundário Principal Estatísticas de Regra de censura PFS por RECIST 1.1 Resumo APaT primária por BICR usando método Kaplan-Meier Estatísticas de Censurado na Resumo OS APaT última data de usando método validade conhecida Kaplan-Meier Não responsivos são excluídos da Estatísticas de análise. Resumo DOR por RECIST 1.1 Responsivos são usando método APaT por BICR censurados de Kaplan-Meier acordo com as regras de censura Modelos estatísticos são descritos em mais detalhes no texto. Abreviações: APaT=Todos os Participantes como tratado; BICR=análise central independente às cegas; DOR=duração de resposta; ORR=taxa de resposta objetiva; OS=sobrevivência total; PFS=sobrevivência sem progressão; RECIST=Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos Métodos estatísticos para Análise de Segurança

[0294] A segurança e tolerabilidade são avaliadas por análise clínica de todos os parâmetros relevantes incluindo experiências adversas e parâmetros laboratoriais. As categorias de AE amplas que consistem na porcentagem de participantes com qualquer AE, um AE relacionado a fármaco-, um AE grave, um AE que é tanto relacionado a fármaco quanto grave, e que foram descontinuadas devido a um AE são resumidas através estimativas de ponto com 95% de CIs (Tabela 9). Tabela 9. Estratégia de Análise para Parâmetros de Segurança Dentro do Grupo Estatísticas Ponto de Extremidade de Segurança com 95% Descritivas de CI Qualquer AE X X Qualquer AE Grave X X Qualquer AE relacionado a fármaco X X Qualquer AE relacionado a Fármaco e Grave X X Descontinuação devido a AE X X AEs, SOCs ou PDLCs Específicos X Alteração dos Resultados de Linha de Base

X (Labs, Sinais Vitais) Nota: 95% de CIs serão calculados usando o método de Clopper Pearson X = resultados são fornecidos Abreviaturas: SOC=Classe de Órgão de Sistema; PDLC=Limite Pré-definido de Alteração

[0295] Um AE é qualquer ocorrência médica indesejável em um participante de estudo clínico, temporalmente associado ao uso da intervenção de estudo, se ou não considerado relacionado à intervenção de estudo. Um AE pode, portanto, ser qualquer sinal desfavorável e não intencional (incluindo uma constatação laboratorial anormal), sintoma ou doença (nova ou exacerbada) temporalmente associada ao uso do fármaco. Os seguintes são incluídos como AEs:

[0296] Qualquer resultados de teste laboratorial anormais (hematologia, química clínica ou urinálise) ou outras avaliações de segurança (por exemplo, ECG, varreduras radiológicas, medição de sinais vitais), incluindo aqueles que pioram a partir da linha de base, ou são considerados clinicamente significativos no julgamento médico e científico do investigador.

[0297] A exacerbação de uma condição pré-existente intermitente ou crônica incluindo um aumento na frequência e/ou intensidade da condição.

[0298] Novas condições foram detectadas ou diagnosticadas após a administração de intervenção de estudo, embora possam ter sido apresentadas antes do início do estudo.

[0299] Sinais, sintomas ou as sequelas clínicas de uma suspeita de interação de fármaco-fármaco.

[0300] Sinais, sintomas ou as sequelas clínicas de uma dose excessiva suspeita da intervenção de estudo ou um medicamento concomitante.

[0301] A piora dos sinais e sintomas de malignidade durante o estudo é relatada como um AE. A progressão de doença avaliada pela medição de lesões malignas em radiografias ou outros métodos não é relatada como um AE, a menos que o evento resulte em hospitalização ou morte.

[0302] Os seguintes casos não satisfazem a definição de AE para os propósitos desse estudo:

[0303] Procedimento médico ou cirúrgico (por exemplo, endoscopia, apendicectomia): a condição que leva ao procedimento é o AE.

[0304] Situações em que uma ocorrência médica indesejável não ocorreu (admissão social e/ou de conveniência a um hospital).

[0305] Oscilações diárias antecipadas de doença (ou doenças) ou condição (ou condições) pré-existentes presentes ou detectadas no início do estudo que não pioraram.

[0306] Cirurgia planejada antes do consentimento informado para tratar uma condição pré-existente que não piorou.

[0307] Se um evento não é um AE pela definição acima, então, não pode ser um SAE mesmo se condições graves forem satisfeitas. Um SAE é definido como qualquer ocorrência médica indesejável que, em qualquer dose:

[0308] Resulta em morte

[0309] É potencialmente fatal. O termo “potencialmente fatal” na definição de “grave” se refere a um evento em que o participante estava sob risco de morte no tempo do evento. O mesmo não se refere a um evento, que hipoteticamente pode ter causado a morte, se forem mais graves.

[0310] Requer internação hospitalar ou prolongamento da hospitalização existente. Hospitalização é definida como uma admissão hospitalar, independentemente da extensão de permanência, mesmo se a hospitalização for uma medida preventiva para observação contínua. Hospitalização para um procedimento opcional para tratar uma condição pré-existente que não piorou não é um SAE. Uma condição pré-existente é uma condição clínica que é diagnosticada antes do uso de um produto de MSD e é documentada no histórico médico do participante.

[0311] Resulta em deficiência/incapacidade persistente ou significativa. O termo deficiência significa uma interrupção substancial de uma capacidade da pessoa de conduzir funções normais da vida. Essa definição não se destina a incluir experiências de significância médica relativamente menor, como dor de cabeça simples, náusea, vômito, diarreia, influenza e trauma acidental (por exemplo, tornozelo torcido) que podem interferir em ou impedir as funções da vida cotidiana, mas não constituem uma interrupção substancial.

[0312] É um defeito de nascimento/anomalia congênita em descendentes de participantes que tomam o produto, independentemente do tempo para o diagnóstico.

[0313] O julgamento médico ou científico é exercido para decidir se a notificação de SAE é apropriada em outras situações, como eventos médicos importantes que podem não ser imediatamente fatais ou resultar em morte ou hospitalização, mas podem comprometer o participante ou podem exigir intervenção médica ou cirúrgica para impedir um dos outros resultados listados na definição acima. Esses eventos são usualmente considerados graves. Exemplos de tais eventos incluem câncer invasivo ou maligno, tratamento intensivo em pronto-socorro ou em casa para broncoespasmo alérgico, discrasia ou convulsões sanguíneas que não resultam em hospitalização ou desenvolvimento de dependência ou abuso de drogas. Características de Linha de Base e Dados Demográficos

[0314] O número e a porcentagem de indivíduos triados, alocados, as razões primárias para exibir falhas e as razões primárias para descontinuação são exibidos. As variáveis demográficas (por exemplo, idade, gênero), características de linha de base, diagnósticos primários e secundários e terapias anteriores e concomitantes são resumidos por estatísticas descritivas ou tabelas categóricas para todos os participantes. Análise de Subgrupo

[0315] Para determinar se a taxa de resposta é consistente através de vários subgrupos, a estimativa da taxa de resposta (com um 95% de CI nominal) para o ponto de extremidade primário é estimada dentro de cada categoria das seguintes variáveis de classificação: Categoria de idade (<65 vs. ≥65 anos) Sexo (feminino vs. masculino) Raça (branco vs. não branco) Estágio de doença (III vs. IVM1a vs. IVM1b vs IVM1c) Metástase de cérebro (sim vs. não) Situação de ECOG (0 vs. 1) Situação de PD-L1 (positiva vs. negativa)

Tipo selvagem de BRAF versus mutante de BRAF (nenhum tratamento anterior) versus mutante de BRAF (antes do tratamento)

[0316] É produzido um gráfico em floresta, que fornece as estimativas de ponto estimado e CIs para o efeito de tratamento através das categorias de subgrupos listados acima. Qualquer subgrupos específicos que têm menos que 10 participantes são excluídos da análise. EXEMPLO 3

[0317] Administração de 400 mg de Pembrolizumabe de Q6W em combinação com um anticorpo anti-CTLA4 em pacientes com melanoma refratário de PD-1.

[0318] Grupos de Estudo 1 e 2 explorarão a atividade antitumoral de um anticorpo anti-CTLA4 (por exemplo, Variante 1 de anticorpo 8D2H2L2) com ou sem pembrolizumabe em participantes com melanoma avançado que é refratário para anti-PD1/L1.

[0319] Grupo I: No Ciclo 1, Dia 1 e para todos os ciclos subsequentes, os participantes receberão 25 mg de um anticorpo anti-CTLA4 (por exemplo, Variante 1 de anticorpo 8D2H2L2) em combinação com pembrolizumabe em 400 mg. Tanto o anticorpo anti-CTLA4 quanto pembrolizumabe serão gerados em um cronograma de Q6W continuamente para até 2 anos.

[0320] Uma análise interina de segurança será conduzida quando os primeiros 6 participantes avaliáveis de DLT concluíram sua avaliação de DLT. Se a taxa de DLT observada for maior que 25%, a dosagem de pembrolizumabe de Q6W de 400 mg pode ser substituída com 200 mg de pembrolizumabe em Q3W nos participantes recém-inscritos.

[0321] Grupo II (n=até 40) No Ciclo 1, Dia 1 e para todos os ciclos subsequentes, participantes receberão 25 mg de um anticorpo anti-CTLA4 (por exemplo, Variante 1 de anticorpo 8D2H2L2) como monoterapia em um cronograma de Q6W continuamente para até 2 anos.

[0322] Todas as referências citadas na presente invenção são incorporadas a título de referência da mesma forma que se cada publicação de indivíduo, entrada de base de dados (por exemplo, sequências de Genbank ou entradas de GeneID), pedido de patente, ou patente, fosse específico e individualmente indicado como incorporado a título de referência. Essa declaração de incorporação a título de referência é destinada pelos Requerentes, como 37 C.F.R. §1.57(b)(1), para se relacionar a cada e qualquer publicação de indivíduo, entrada de base de dados (por exemplo, sequências de Genbank ou entradas de GeneID), pedido de patente ou patente, cada um dos claramente identificado de acordo com 37 C.F.R. §1.57(b)(2), mesmo se tal citação não é imediatamente adjacente a uma declaração dedicada de incorporação a título de referência. A citação das referências na presente invenção não se destina como uma admissão que a referência é pertinente à técnica anterior, nem constitui qualquer admissão quanto aos conteúdos ou data dessas publicações ou documentos.

Claims (32)

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e cerca de 25 mg, cerca de 50 mg, cerca de 75 mg ou cerca de 100 mg de um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer em um paciente humano, em que o medicamento é formulado para ser usado pelo paciente a cada seis semanas aproximadamente, e em que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (CDRs) que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 1, 2 e 3 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 6, 7 e 8; ou (b) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 11, 12 e 13 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 14, 15 e 16; e em que o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 41 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38; (b) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 42 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38; ou

(c) CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 43 e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 9, ou uma variante da SEQ ID NO: 9; e (b) uma região variável de cadeia leve que compreende: (i) uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 4, ou uma variante da SEQ ID NO: 4, (ii) uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 22, ou uma variante da SEQ ID NO: 22, ou (iii) uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 23, ou uma variante da SEQ ID NO: 23.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 9 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 4.

4. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo monoclonal que compreende: (a) uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 10, ou uma variante da SEQ ID NO: 10; e (b) uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 5, uma variante da SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 24, uma variante da SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, ou uma variante da SEQ ID NO: 25.

5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo monoclonal que compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 10 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 5.

6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo monoclonal que compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 44 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 45; (b) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 46 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 47; (c) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 48 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 49; (d) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 50 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 49; (e) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 51 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 52; (f) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 53 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 54; ou (g) uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 55 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 56.

7. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 50 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 49.

8. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 57 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO:

58.

9. Uso de cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 e cerca de 25 mg, cerca de 50 mg, cerca de 75 mg ou cerca de 100 mg de um anticorpo anti-CTLA4, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer em um paciente humano, em que o medicamento é formulado para ser administrado ao paciente a cada seis semanas aproximadamente, e em que o anticorpo anti-PD-1 compreende: (i) uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 10; e (ii) uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 5, e em que o anticorpo anti- CTLA4 compreende: (iii) uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 57; e (iv) uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO:

58.

10. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o câncer é melanoma refratário de PD-1/PD-L1.

11. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: melanoma, câncer pulmonar de célula não pequena, câncer de cabeça e pescoço, câncer urotelial, câncer de mama, câncer gastrointestinal, mieloma múltiplo, câncer hepatocelular, linfoma não Hodgkin, câncer renal, linfoma de Hodgkin, mesotelioma, câncer de ovário, câncer pulmonar de célula pequena, câncer esofágico, câncer anal, câncer do trato biliar, câncer colorretal, câncer cervical, câncer da tireoide, câncer salivar, câncer pancreático, um tumor do cérebro, glioblastoma, sarcoma, um tumor do osso, ou carcinoma de célula de Merkel.

12. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é administrado ao paciente por administração intravenosa ou subcutânea.

13. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é pembrolizumabe.

14. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 e o anticorpo anti-CTLA4 são coadministrados.

15. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 e o anticorpo anti-CTLA4 são coformulados.

16. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o medicamento compreende 25 mg do anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

17. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o medicamento compreende 50 mg do anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

18. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o medicamento compreende 75 mg do anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

19. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o medicamento compreende 100 mg do anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

20. Kit para tratamento de um paciente com câncer, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo;

(b) cerca de 25 mg, 50 mg, 75 mg ou 100 mg de um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e (c) instruções de uso do anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e do anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

21. Kit de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 é pembrolizumabe.

22. Kit de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é um anticorpo monoclonal que compreende CDRs de cadeia leve que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 39, 40 e 41, e CDRs de cadeia pesada que compreendem uma sequência de aminoácidos como estabelecida nas SEQ ID NOs: 36, 37 e 38.

23. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 22, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é um anticorpo monoclonal que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 50 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 49.

24. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 23, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é um anticorpo monoclonal que compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 57 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecida na SEQ ID NO: 58.

25. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 24, caracterizado pelo fato de que compreende cerca de 25 mg do anticorpo anti-

CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

26. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 25, caracterizado pelo fato de que compreende cerca de 50 mg do anticorpo anti- CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

27. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 25, caracterizado pelo fato de que compreende cerca de 75 mg do anticorpo anti- CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

28. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 25, caracterizado pelo fato de que compreende cerca de 100 mg do anticorpo anti- CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

29. Uso de cerca de 400 mg de um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e de cerca de 25 mg, 50 mg, 75 mg ou 100 mg de um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para preparar o kit definido em qualquer uma das reivindicações 20 a 28 para o tratamento de um indivíduo que sofre de câncer.

30. Uso de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o câncer é melanoma refratário de PD-1/PD-L1.

31. Uso de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o câncer é melanoma, câncer pulmonar de célula não pequena, câncer de cabeça e pescoço, câncer urotelial, câncer de mama, câncer gastrointestinal, mieloma múltiplo, câncer hepatocelular, linfoma não Hodgkin, câncer renal, linfoma de Hodgkin, mesotelioma, câncer de ovário, câncer pulmonar de célula pequena, câncer esofágico, câncer anal, câncer do trato biliar, câncer colorretal, câncer cervical, câncer da tireoide, câncer salivar, câncer pancreático, um tumor do cérebro, glioblastoma, sarcoma, um tumor do osso, ou carcinoma de célula de Merkel.

32. Invenção de produto, processo, sistema, kit ou uso, caracterizada pelo fato de que compreende um ou mais elementos descritos no presente pedido de patente.