BR112020015264A2 - Aparelho para processar um líquido compreendendo uma substância alvo - Google Patents

Abstract

aparelho para processar um líquido compreendendo uma substância alvo, preferivelmente uma biomolécula, é provido. o aparelho compreende pelo menos um primeiro e um segundo meios para realizar uma operação unitária, cada um dos meios para realizar uma operação unitária compreendendo uma alimentação para um líquido em conexão fluida com a entrada de um controlador de fluxo compreendendo uma válvula de entrada de fluxo variável e uma saída, em que pelo menos um dos meios para realizar uma operação unitária compreende alimentações para pelo menos dois líquidos, as alimentações estando em conexão fluida com as entradas de um controlador de fluxo de múltiplas entradas compreendendo duas ou mais válvulas de entrada de fluxo variável para dosar os pelo menos dois líquidos, o controlador de fluxo também compreendendo uma saída; uma alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo em conexão fluida com a saída do controlador de fluxo para permitir deste modo a combinação da alimentação com um líquido compreendendo a substância alvo com os líquidos de bioprocessamento misturados para produzir uma alimentação do dispositivo; um dispositivo para se obter uma operação de processamento compreendendo uma entrada do dispositivo e uma saída do dispositivo, a entrada do dispositivo estando em conexão fluida com a alimentação do dispositivo; e um dos meios para comunicar fluxo através do controlador de fluxo e da alimentação para a matéria-prima líquida através do dispositivo de processamento por intermédio da entrada do dispositivo; e em que a alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo para o segundo meio para realizar uma operação unitária compreende a saída do primeiro meio para realizar uma operação unitária.

Description

“APARELHO PARA PROCESSAR UM LÍQUIDO COMPREENDENDO UMA SUBSTÂNCIA ALVO”

[0001] A presente invenção se refere a métodos e aparelho para processar líquidos — compreendendo uma substância alvo, particularmente líquidos compreendendo uma biomolécula e especialmente polipeptídeos recombinantes.

[0002] Muitas biomoléculas, especialmente polipeptídeos recombinantes e ácidos nucléicos, tais como plasmídeos (pDNA), têm atraído muita atenção em particular para aplicações terapêuticas. Tais biomoléculas são habitualmente produzidas cultivando- se células hospedeiras recombinantes que foram engenheiradas para expressar a biomolécula desejada. A biomolécula é depois recuperada do meio de cultura pelos métodos tipicamente compreendendo várias operações unitárias. Estas operações unitárias habitualmente incluem uma ou mais purificações cromatográficas, inativação viral, filtração (incluindo filttação viral, profunda e absoluta), redobra e ultrafiltração/diafiltração.

[0003] O aparelho para processar uma solução compreendendo uma substância alvo é conhecido na técnica. Entretanto, o aparelho para o uso na fabricação comercial de tais compostos é extremamente volumoso e requer espaço físico e infraestrutura extensivos. Adicionalmente, embora algumas comunalidades do aparelho possam ser obtidas para diversas das operações unitárias, os projetos de aparelho para certas operações unitárias, tais como a inativação viral e/ou ultrafiltração diferem substancialmente daqueles para, por exemplo, purificação cromatográfica. Isto significa que mais espaço é requerido para acomodar dois ou mais conjuntos de aparelho ou que a interoperabilidade e controle do aparelho para os estágios são imoderadamente complexos. Adicionalmente, os operadores requerem treinamento em cada um dos diferentes tipos de aparelho utilizado. Consequentemente, aparelho simplificado e amplamente aplicável seria desejável. Também seria desejável identificar aparelho que permitisse que etapas múltiplas de processamento fossem realizadas utilizando um caminho de fluxo comum.

[0004] De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, é provido aparelho para processar um líquido compreendendo uma substância alvo, o dito aparelho compreendendo pelo menos um primeiro e um segundo meios para realizar uma operação unitária cada meio para realizar uma operação unitária compreendendo: (i) uma alimentação para um líquido em conexão fluida com a entrada de um controlador de fluxo compreendendo uma válvula de entrada de fluxo variável e uma saída, em que pelo menos um dos meios para realizar uma operação unitária compreende alimentações para pelo menos dois líquidos, as alimentações estando em conexão fluida com as entradas de um controlador de fluxo de múltiplas entradas compreendendo duas ou mais válvulas de entrada de fluxo variável para dosar os pelo menos dois líquidos, o controlador de fluxo também compreendendo uma saída; (ii) uma alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo em conexão fluida com a saída do controlador de fluxo para permitir deste modo a combinação da alimentação para um líquido compreendendo a substância alvo com os líquidos de bioprocessamento misturados para produzir uma alimentação do dispositivo; (iii) um dispositivo para se obter uma operação de processamento compreendendo uma entrada do dispositivo e uma saída do dispositivo, a entrada do dispositivo estando em conexão fluida com a alimentação do dispositivo; e (iv) um meio para comunicar fluxo através do controlador de fluxo e a partir da alimentação para a matéria-prima líquida através do dispositivo de processamento por intermédio da entrada do dispositivo; em que a alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo para os segundos meios para realizar uma operação unitária compreende a saída dos primeiros meios para realizar uma operação unitária.

[0005] Em algumas modalidades, o aparelho compreende dois meios para realizar uma operação unitária. Em outras modalidades, o aparelho compreende três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais meios para realizar uma operação unitária, preferivelmente cada um tendo os traços descritos acima para o primeiro e segundo meios. Em muitas modalidades preferidas, os meios para realizar uma operação unitária são conectados em série, com a alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo para um dos meios subsequentes para realizar uma operação unitária compreendendo a saída dos meios precedentes para realizar uma operação unitária. Em muitas modalidades altamente preferidas, cada operação unitária difere das outras operações unitárias.

[0006] Em certas modalidades, cada meio para realizar uma operação unitária compreende substancialmente o mesmo caminho de fluxo.

[0007] Meios para comunicar fluxo dos líquidos são bem conhecidos na técnica e incluem a aplicação de pressão de gás ao líquido, especialmente um gás inerte, tal como nitrogênio ou hélio. Preferivelmente os meios para comunicar fluxo do líquido compreende uma ou mais bombas. As bombas que podem ser utilizadas incluem bombas peristálticas, de diafragma, de lóbulo e centrífugas. Projetos de bomba tanto descartáveis quanto reutilizáveis podem ser utilizados. Em muitas modalidades preferidas, uma única bomba é utilizada para cada um dos meios de realizar uma operação unitária, localizada a jusante da conexão fluida entre a conexão entre as matérias-primas e a saída do controlador de fluxo. O mais preferivelmente a bomba está localizada a montante do biodispositivo de processamento. O tipo e tamanho da bomba selecionada é habitualmente dependente da capacidade de fluxo e perfil de pressão apropriado para os parâmetros de escala e projeto do aparelho. Em certas modalidades altamente preferidas, a bomba é uma bomba de diafragma quaternário.

[0008] O controlador de fluxo compreende fluxo variável, preferivelmente fluxo intermitente, válvulas de entrada que regulam o fluxo de líquido através do controlador de fluxo. O controlador de fluxo de múltiplas entradas compreende pelo menos 2 válvulas de entrada e em muitos casos compreende até 8, tal como 3, 4, 5, 6 ou 7, válvulas de entrada. As válvulas de entrada podem cada uma ter as mesmas dimensões ou uma ou mais das válvulas de entrada podem ter dimensões diferentes. Em certas modalidades preferidas, o volume medido de cada válvula de entrada para a saída do controlador de fluxo é o mesmo para cada entrada e é altamente preferido que tanto o volume quanto o comprimento do caminho medido a partir de cada válvula de entrada até a saída do controlador de fluxo é o mesmo para cada entrada. Em muitas modalidades, cada um dos meios para realizar uma operação unitária preferivelmente compreende um controlador de fluxo de múltiplas entradas.

[0009] O controlador de fluxo utilizado na presente invenção também compreende pelo menos uma saída e embora duas ou mais saídas possam estar presentes, é preferido que uma única saída seja utilizada.

[0010] As válvulas de fluxo variável podem regular o fluxo entre uma primeira taxa de fluxo, relativamente baixa em que o líquido permanece capaz de fluir e pelo menos uma segunda taxa de fluxo, mais alta. Em modalidades preferidas, a válvula de fluxo variável é uma válvula de fluxo intermitente, que impede o fluxo em uma primeira posição, mas permite fluxo em pelo menos uma segunda posição. O mais preferivelmente, todas as válvulas são válvulas de fluxo intermitente. As válvulas podem compreender atuadores conhecidos na técnica, tais como atuadores pneumáticos ou, preferivelmente, atuadores solenoides.

[0011] Preferivelmente as válvulas de fluxo variável são controladas, mais preferivelmente por uma unidade de controle programável, para regular a abertura e fechamento das válvulas de modo a obter as quantidades relativas requeridas dos líquidos de entrada fluindo através do controlador de fluxo de múltiplas entradas. Isto é preferivelmente obtido através da ciclagem, com um período de tempo predeterminado ou taxa de ciclo, através das válvulas de entrada no controlador de fluxo e regulando a abertura ou fechamento da válvula de acordo com a proporção requerida do tempo de ciclo para gerar a composição desejada. A taxa de ciclo pode ser constante ou variada. O mais preferivelmente, válvulas de entrada de fluxo intermitente são utilizadas e são controladas tal que em operação, apenas uma válvula é aberta em qualquer tempo dado. Em muitas modalidades, a taxa de ciclo do controlador de fluxo de múltiplas entradas é mantida como uma constante e as quantidades relativas desejadas dos líquidos de entrada permanecem consistentes.

[0012] Em muitas modalidades, ciclos múltiplos são utilizados. O número de ciclos utilizados dependerá de numerosos fatores tais como a duração do processo, o volume de líquido sendo processado, a taxa de fluxo e a pressão máxima de operação do aparelho. Em certas modalidades, pelo menos 10 ciclos, tais como pelo menos 50, 100, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 3000, 5000, 7500, 10000 ou mais ciclos podem ser utilizados.

[0013] Será reconhecido que uma faixa de frequências de ciclo pode ser utilizada. Em muitos casos, a frequência é menor do que 100 Hz, tipicamente menor do que 50 Hz, habitualmente menor do que 10 Hz e preferivelmente menor do que 5 Hz. Em certas modalidades preferidas, a frequência é de 2 Hz ou menos, o mais preferivelmente 1 Hz ou menos, tal como de 0,05 a 0,5 Hz.

[0014] Embora mistura possa ser obtida simplesmente combinando-se os fluxos da alimentação alvo e a saída do controlador de fluxo, opcionalmente em combinação com a ação de uma bomba, em muitas modalidades preferidas, o aparelho compreende adicionalmente um misturador em linha, preferivelmente uma câmara de mistura, preferiveeimente compreendendo um misturador estático, o mais preferivelmente um misturador estático de fluxo dividido com retardo de tempo. Em muitas modalidades, o misturador em linha está localizado a jusante de uma bomba e a montante do dispositivo para se obter a operação de bioprocessamento. Em algumas modalidades preferidas, o misturador em linha também compreende um borbulhador.

[0015] As operações unitárias que podem ser realizadas pelo dispositivo para se obter uma operação de processamento são mais preferivelmente operações de bioprocessamento. As operações de bioprocessamento incluem cromatografia, inativação viral, filtração, redobra, ultrafitração, diafilttação, microfiltração, condicionamento em linha e redobra.

[0016] As operações de cromatografia que podem ser realizadas usando o aparelho da presente invenção incluem cromatografia de afinidade, cromatografia de troca de íon (cada uma ou a troca tanto de ânion quanto de cátion), cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), cromatografia de fase reversa, cromatografia de leito expandido, cromatografia de modo misto, cromatografia de membrana e cromatografia de exclusão por tamanho (SEC). Em muitas modalidades, a cromatografia de afinidade com a proteína A compreende pelo menos uma das operações unitárias. Dispositivos para realizar as operações de cromatografia compreendem o aparelho de cromatografia apropriado, tal como uma membrana,

monólito de fibra ou coluna. O número e sequência das operações unitárias cromatográficas serão selecionados de acordo com a natureza da biomolécula alvo.

[0017] As operações unitárias de inativação viral que podem ser realizadas usando o aparelho da presente invenção habitualmente compreendem o vaso de armazenagem no qual o líquido compreendendo a biomolécula alvo pode ser armazenada sob condições quanto ao tempo de residência suficiente para inativar os vírus. Em certas modalidades a saída e a entrada do dispositivo podem ser fluidicamente conectadas para gerar um circuito de recirculação. Em uma tal modalidade o aparelho é adaptado com um vaso ou bolsa fluidicamente conectados entre a entrada do “dispositivo” e a saída do “dispositivo” e uma das saídas do aparelho é fluidicamente conectada a uma das múltiplas entradas do controlador de fluxo de entrada. O vaso ou bolsa entre a “entrada” e “saída” do dispositivo sendo fluidicamente conectados à entrada da matéria-prima líquida são cheios por um dos meios para comunicar fluxo, tipicamente uma bomba ou condicionados com pelo menos um outro líquido através de pelo menos uma das outras entradas do controlador de fluxo de múltiplas entradas. Em certas modalidades o vaso ou bolsa é um vaso ou bolsa de mistura. O líquido de processo é recirculado através da entrada do controlador de fluxo de múltiplas entradas para o vaso ou bolsa e de volta para a entrada do controlador de fluxo de múltiplas entradas conforme a solução compreendendo uma substância alvo é condicionada por pelo menos um líquido adicional fluidicamente conectado a pelo menos uma outra entrada no controlador de fluxo de múltiplas entradas.

[0018] As operações unitárias de filtração que podem ser realizadas incluem filtração viral, profunda e absoluta, ultrafiltração, diafiltração e microfiltração. Em muitas modalidades, a operação unitária de filtração compreende um módulo de filtração entre a entrada do dispositivo e a saída do dispositivo. O módulo de filtração é fluxado e módulo usando pelo menos duas alimentações líquidas acopladas às entradas do controlador de fluxo de múltiplas entradas e a solução compreendendo uma molécula alvo é fluidicamente conectada à entrada das matérias-primas . O processamento de líquido através do filtro é obtido através de um dos meios de comunicar fluidez de fluxo conectado ao e posicionado a jusante da saída do controlador de fluxo de múltiplas entradas e entrada da matéria-prima e a montante do módulo de filtração. Os módulos de filtração habitualmente utilizam configurações que são bem conhecidas na técnica do bioprocessamento.

[0019] A filtração viral, filtração profunda e filtração absoluta são operações unitárias que são bem conhecidas na técnica e podem ser realizadas usando o aparelho da presente invenção habitualmente utilizando dispositivos de filtração, que são bem conhecidos na técnica do bioprocessamento. Em muitas modalidades o dispositivo ou dispositivos de filtração são colocados entre a entrada e a saída do dispositivo, de modo a executar uma operação unitária específica. Em outras modalidades o dispositivo de filtração é posicionado a jusante da saída do aparelho, que em certas modalidades permite que o aparelho execute uma operação unitária principal, tal como cromatografia, inativação viral, filtração de fluxo tangencial, filtração viral ou filtração profunda, seguida por uma operação de filtração secundária.

[0020] As operações unitárias de filtração de fluxo tangencial (“TFF”) que podem ser realizadas usando o aparelho da presente invenção incluem TFF recirculantes convencionais e TFF de passagem única. Em certas modalidades a saída e a entrada do aparelho podem estar fluidicamente conectadas para geral um circuito de recirculação, um exemplo sendo a filtração de fluxo tangencial recirculante. Em uma modalidade, como conhecido na técnica, o aparelho é adaptado com um módulo TFF compreendendo chapa plana, fibra oca ou membranas enroladas em espiral entre a entrada do dispositivo e saída do dispositivo e o retido do módulo de TFF é direcionado de uma das saídas do aparelho para uma entrada fluidicamente conectada a um vaso ou bolsa, contendo pelo menos uma entrada e uma saída. A saída do vaso ou bolsa é fluidicamente conectada à entrada de matéria-prima líquida. O vaso ou bolsa são mantidos em um nível constante usando um dos meios auxiliares para suprir as matérias-primas ou líquido dentro do vaso ou bolsa por estarem fluidicamente conectados a uma segunda entrada no vaso ou bolsa. Em uma outra modalidade, o aparelho é adaptado com um módulo de TFF compreendendo chapa plana, fibra oca ou membranas enroladas em espiral entre a entrada do dispositivo e a saída do dispositivo e o retido do módulo de TFF é fluidicamente conectado a partir de uma das saídas do aparelho de volta para uma das válvulas de entrada do controlador de fluxo de múltiplas entradas. Em certas modalidades o circuito de recirculação da saída do aparelho para a sua entrada contém um vaso ou bolsa de ruptura. Uma solução compreendendo uma substância alvo ou um líquido é puxada dentro do circuito de recirculação através da entrada de matéria-prima líquida por um dos meios para comunicar fluxo, tipicamente uma bomba. O retido é recirculado através do módulo de TFF, preferivelmente através de uma das entradas do controlador de fluxo de múltiplas entradas. O controlador de fluxo de múltiplas entradas pode ser utilizado para misturar o retido com pelo menos um outro líquido. A operação de recirculação de TFF é bem conhecida na técnica e é controlada através do ajuste de uma taxa de fluxo cruzado e pressão de transmembrana.

[0021] Em certas modalidades a TFF de passagem única pode ser configurada com um módulo de TFF compreendendo chapa plana, fibra oca ou membranas enroladas em espiral entre a entrada do dispositivo e saída do dispositivo por exemplo, como no caso de TFF d passagem única como descrito na WO2017/118835.

[0022] Em algumas modalidades um híbrido de passagem única e TFF recirculante podem ser utilizados, onde o retido gerado usando uma válvula de fluxo variável a jusante do módulo de TFF é retornado para o vaso de alimentação.

[0023] Aparelho de acordo com a presente invenção habitualmente adicionalmente compreende um ou mais de borbulhadores, sensores de pressão, sensores de temperatura, sensores de pH, sensores de taxa de fluxo, sensores de condutividade, sensores de ar e sensores de uv, tal como um sensor de comprimento de onda múltiplo uv/visível. Um ou mais de cada um dos precedentes podem estar presentes.

[0024] Em uma modalidade particular da presente invenção, é provido aparelho para processar um líquido compreendendo uma substância alvo, o dito aparelho compreendendo: (i) alimentações para pelo menos dois líquidos; (ii) um controlador de fluxo de múltiplas entradas compreendendo duas ou mais válvulas de entrada de fluxo variável para misturar pelo menos dois líquidos, o controlador de fluxo também compreendendo uma saída única; (iii) uma alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo em conexão fluida com a saída do controlador de fluxo; (iv) um meio para comunicar fluxo, tipicamente pelo uso de uma bomba, através do controlador de fluxo e da alimentação para a matéria-prima líquida através do aparelho de processamento por intermédio das entradas de alimentação; (v) um dispositivo para a mistura dos pelo menos dois líquidos; (vi) um dispositivo para aprisionar bolhas de ar dos líquidos de processo (vii) um caminho de fluxo comum para se obter uma operação de processamento compreendendo uma entrada do dispositivo e uma saída do dispositivo, a entrada do dispositivo estando em conexão fluida com as entradas de alimentação; (viii) a entrada do dispositivo e saída estando em conexão fluida com os módulos usados para cromatografia, filtração (incluindo filtração viral), filtração de fluxo tangentcial, filtração de fluxo tangencial de passagem única, redobra e inativação viral; (ix) um dos meios para desviar a entrada e saída do dispositivo; (x) um dos meios a jusante da saída do dispositivo para regular a pressão; (xi) vários sensores apropriados para monitorar a operação de processamento a montante e a jusante da entrada do dispositivo e saída do dispositivo; e (xii) pelo menos uma saída em conexão fluida com as entradas de alimentação.

[0025] O aparelho de acordo com a presente invenção preferivelmente compreende um dos meios para pressurização adicional do dispositivo de processamento localizado a jusante do dispositivo. Os meios para melhorar a pressão são conhecidos na técnica e incluem válvulas de estrangulamento, válvulas de diafragma, especialmente válvulas de diafragma de posição variável.

[0026] Em muitas modalidades, o dispositivo para misturar os líquidos e o dispositivo para aprisionar bolhas de ar compreende um único dispositivo.

[0027] Em certas modalidades o aparelho compreende um caminho de fluxo de multiuso construído a partir de materiais, tais como aço inoxidável, que permite número significante de reutilização antes que a substituição seja requerida.

[0028] Em certas modalidades o aparelho compreende um caminho de fluxo de uso único construído de materiais, tais como plásticos, que são projetados com uma vida útil limitada e utilizada como um consumível descartável.

[0029] Em muitas modalidades, cada operação unitária é operada sob o controle de uma unidade de controle programável, preferiveimente um computador. Em algumas modalidades, uma única unidade de controle controla duas ou mais operações unitárias. Em outras modalidades, cada operação unitária está sob o controle de uma unidade de controle separada. Nestas outras modalidades, preferivelmente cada unidade de controle utiliza uma linguagem de programação comum, que permite comunicação simplificada entre as unidades de controle.

[0030] De acordo com um segundo aspecto da presente invenção, é provido aparelho para preparar uma mistura líquida, o dito aparelho compreendendo: (i) alimentações para pelo menos dois líquidos; (ii) um controlador de fluxo de múltiplas entradas compreendendo duas ou mais válvulas de entrada de fluxo variável para dosar pelo menos dois líquidos, o controlador de fluxo também compreendendo uma saída; (iii) uma bomba para comunicar fluxo através do controlador de fluxo e da alimentação para a matéria-prima líquida através do aparelho de bioprocessamento por intermédio das entradas de alimentação; (iv) um misturador estático para a mistura em linha dos pelo menos dois líquidos; e (v) uma saída para a mistura líquida; em que a bomba está a montante do dispositivo para a mistura em linha e tanto a bomba quanto o dispositivo para a mistura em linha estão localizados a jusante do fluxo de múltiplas entradas.

[0031] As alimentações para líquidos, controladores de fluxo de múltiplas entradas, bombas e misturadores estáticos que podem ser utilizados no segundo aspecto são como descritos acima com respeito ao primeiro aspecto da presente invenção.

[0032] O aparelho do segundo aspecto pode ser utilizado para a preparação de misturas líquidas, preferivelmente soluções, tais como soluções tampão, tais como misturando-se soluções ácidas e/ou salinas, habitualmente para o uso nas operações de processamento e especialmente operações de bioprocessamento. As soluções podem ser armazenadas antes do uso, por exemplo em uma operação de processamento, especialmente uma operação de bioprocessamento ou podem ser usadas diretamente, por exemplo conectando-se fluidicamente a saída para a mistura líquida ao dispositivo usando a mistura.

[0033] O aparelho do segundo aspecto da presente invenção pode compreender elementos adicionais como descritos acima para o primeiro aspecto da presente invenção, especialmente um ou mais de borbulhadores, sensores de pressão, sensores de temperatura, sensores de pH, sensores de taxa de fluxo, sensores de condutividade, sensores de ar e sensores de uv, tais como um sensor de comprimento de onda múltiplo uv/visível. Um ou mais de cada um dos precedentes podem estar presentes.

[0034] O aparelho do segundo aspecto da presente invenção preferivelmente compreende uma única bomba. Em certas modalidades altamente preferidas, a bomba é uma bomba de diafragma quaternário.

[0035] O misturador estático utilizado no aparelho do segundo aspecto da presente invenção, é preferivelmente um misturador estático de fluxo dividido com retardo de tempo.

[0036] Em muitas modalidades, o aparelho do segundo aspecto da presente invenção é operado sob o controle de uma unidade de controle programável, preferivelmente um computador.

[0037] O aparelho do segundo aspecto da presente invenção pode vantajosamente ser operado sem a necessidade de incorporar mecanismos complexos de retroalimentação para regular a composição do líquido que é produzido.

[0038] Os líquidos que podem ser utilizados com o aparelho da presente invenção incluem aqueles conhecidos na técnica para realizar a operação unitária de processamento apropriada. Os exemplos incluem soluções ácida, neutra e básica, tais como aquelas tendo um pH na faixa de 2,5 a 14, por exemplo soluções de hidróxido de sódio, potássio ou amônio, soluções de ácido fosfórico, sulfúrico, clorídrico ou acético; soluções salinas, tais como soluções tendo uma concentração salina de até cerca de 3M, incluindo sais de sódio, cálcio, potássio e amônio, por exemplos sais de fosfato, cloreto, acetato, citrato e sulfato; soluções tampões, os exemplos dos quais são bem conhecidos na técnica; redutores (por exemplo, DTT e TCEP); aminoácidos (por exemplo, histidina, arginina, glicina); detergentes (por exemplo Tween 20, Triton- X100) e solventes miscíveis em água tais como polióis, por exemplo glicerol e PEG; e misturas de um ou mais dos precedentes.

[0039] As biomoléculas que podem ser processadas usando a presente invenção incluem, por exemplo pDNA; terapias celulares, vacinas, tais como vacinas virais, produto de terapia de gene, açúcares, corpos de inclusão, particularmente corpos de inclusão — compreendendo — polipeptídeos; e especialmente —polipeptídeos recombinantes.

[0040] O pDNA pode estar em uma ou mais de múltiplas formas, tais como superespiralado, isoformas lineares e circulares abertas (isto é, entalhado ou relaxado)a isoforma de PpDNA superespiralado tem uma forma circular covalentemente fechada e o pDNA é negativamente superespiralado na célula hospedeira pela ação dos sistemas de enzima hospedeiros. Na isoforma circular aberta, um filamento do pDNA duplex é quebrado em um ou mais locais.

[0041] Os métodos para a produção de pDNA são bem conhecidos na técnica. O PDNA pode ser natural ou artificial, por exemplo, vetores de clonagem portando insertos de DNA estranhos. Em muitas modalidades, o pDNA está na faixa de tamanho de 1 quilobase a 50 quilobases. Por exemplo pDNA codificando RNA interferente expresso está tipicamente na faixa de tamanho de 3 quilobases a 4 quilobases.

[0042] Polipeptídeos, especialmente polipeptídeos recombinantes, incluem proteínas e peptídeos terapêuticos, incluindo citocinas, fatores de crescimento, anticorpos, fragmentos de anticorpo, polipeptídeos semelhantes a imunoglobulina, enzina, vacinas, hormônios peptídicos, quimiocinas, receptores, fragmentos de receptor, quinases, fosfatases, isomerases, hidrolases, fatores de transcrição e polipeptídeos de fusão.

[0043] Os anticorpos incluem anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpo tendo atividade biológica, incluindo formas multivalentes e/ou multiespecíficas de qualquer um dos precedentes.

[0044] Os anticorpos que ocorrem naturalmente tipicamente compreendem quatro cadeias de polipeptídeo, duas cadeias pesadas (H) idênticas e duas cadeias leves (L) idênticas interconectadas pelas ligações de dissulfeto. Cada cadeia pesada compreende uma região variável (VH) e uma região constante (Cr), a região Cr compreendendo na sua forma nativa três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve compreende uma região variável (V.) e uma região constante compreendendo um domínio, Cr.

[0045] As regiões Vnr e VL podem ser adicionalmente subdivididas em regiões de hipervariabilidade, chamadas de regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, chamadas de regiões de estrutura (FR). Cada Vr e V.L é composta de três CDRs e quatro FRs, arranjadas a partir do terminal amino para o terminal carbóxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR?2, FR3, CDR3, FRA4.

[0046] Os fragmentos de anticorpo que podem ser expressos compreendem uma porção de um anticorpo intacto, a dita porção tendo uma atividade biológica desejada. Os fragmentos de anticorpo geralmente incluem pelo menos um sítio de ligação de antígeno. Os exemplos de fragmentos de anticorpo incluem: (i) fragmentos Fab tendo os domínios V., CL, Vr e Cn1; (ii) derivados de Fab, tais como um fragmento Fab' tendo um ou mais resíduos de cisteína no terminal C do domínio CH1, que podem formar fragmentos bivalentes pelas ligações em ponte de dissulfeto entre dois derivados de Fab; (ili) fragmento Fd tendo os domínios VH e Cr1; (iv) derivados de Fd, tais como derivados de Fd tendo um ou mais resíduos de cisteína no terminal C do domínio CH1; (v) fragmentos Fv tendo os domínios Vi e VH de um único braço de um anticorpo; (vi) moléculas de anticorpo de cadeia única tais como anticorpos de Fv de cadeia única (scFv) nos quais os domínios Vi e VH são covalentemente ligados; (vii) polipeptídeo dos domínios VH ou VL sem os domínios da região constante ligados a um outro domínio variável (um polipeptídeo de domínio VH ou V.) que esteja com ou sem os domínios da região constante, (por exemplo, VH-VH, Vu-VL ou VL-VL) (viii) fragmentos de anticorpo de domínio, tais como fragmentos consistindo de um domínio VH ou um domínio V. e fragmentos de ligação de antígeno dos domínios VH ou V., tais como regiões de CDR isoladas; (ix) os chamados “diacorpos” compreendendo dois sítios de ligação de antígeno, por exemplo um domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (V.), na mesma cadeia de polipeptídeo; e (x) os chamados anticorpos lineares compreendendo um par de segmentos Fd em tandem que, junto com os polipeptídeos de cadeia leve complementares, formam um par de regiões de ligação a antígeno.

[0047] Os corpos de inclusão incluem agregados insolúveis formados no citoplasma de células bacterianas tais como E. coli, o mais habitualmente compreendendo polipeptídeo e especialmente polipeptídeo recombinante.

[0048] Os métodos para processar uma biomolécula, tal como um polipeptídeo recombinante e mais especialmente purificar ou isolar um polipeptídeo recombinante, formam aspectos adicionais da presente invenção.

[0049] Uma modalidade do aparelho de acordo com a presente invenção está descrita com referência à Figura 1. Um primeiro dispositivo para realizar uma operação de bioprocessamento compreende uma alimentação para um líquido compreendendo uma biomolécula alvo, 1 e alimentações para seis tampões diferentes, 2a a 2f, mais água para injeção, 2g são providas. Cada alimentação é adaptada com uma válvula, tal como válvula de diafragma reta, 3 e 3a a 3g para permitir que o fluxo seja comutado liga desliga. Na modalidade mostrada, as alimentações de tampão 2a e 2b, 2c e 2b e 2d e 2e são combinadas a jusante das válvulas, 3a a 3f respectivamente, para formar linhas de alimentação de três tampões, que são fluidicamente conectadas, junto com a alimentação de água para injeção, 2g para diferentes entradas em um controlador de fluxo de múltiplas entradas, 4, compreendendo um tubo de distribuição com quatro válvulas com uma única saída tendo um atuador solenóide de atuação rápida.

Por esta configuração e pela abertura e fechamento apropriados das válvulas 3a e 3b, 3c e 3d e 3e e 3f, permite a seleção entre os tampões 2a e 2b, 2c e 2d ou 2e e 2f, aumentando deste modo a flexibilidade de operação do aparelho.

A saída do controlador de fluxo de múltiplas entradas, 4, está em conexão fluida com a alimentação para um líquido compreendendo uma biomolécula alvo, 1, em 5, a montante de uma bomba, 6, que comunica fluxo das alimentações combinadas através de um misturador estático adaptado com um borbulhador, 8 e para a entrada da primeira coluna de cromatografia, 12. A linha que alimenta a saída da bomba, 6, à coluna de cromatografia, 12, é adaptada com um sensor de pressão, 7, sensor de ar, 9, um medidor de fluxo, 10, tal como um medidor de fluxo ultrassônico e um sensor de temperatura e condutividade combinadas, 11. Em algumas modalidades, a bomba, 6, é controlada por intermédio de uma unidade de controle programável em resposta a um sinal de retroalimentação, 29, a partir do medidor de fluxo, 10. Em algumas modalidades, opcionalmente, o controlador de fluxo de múltiplas entradas, 4, é controlado por intermédio de uma unidade de controle programável em resposta a um sinal de retroalimentação, 28, a partir do sensor de condutividade e temperatura, 11. A linha de saída da coluna de cromatografia, 12, é provida com sensor de pressão, 13, um sensor de temperatura e condutividade combinadas, 14, um detector de uv, tal como um detector de comprimento de onda múltiplo uv/visível, 15, um medidor de pH, 16 e uma válvula de posição variável, 30, que pode ser utilizada para regular a pressão e para impor retropressão se desejado.

Preferivelmente, a operação da bomba, 6 e da válvula de posição variável, 30 e deste modo a regulagem da pressão no aparelho, são controladas por intermédio de uma unidade de controle programável em resposta aos sinais de retroalimentação, 26 e 27, a partir dos sensores de pressão, 7 e 13. A linha de saída passa através de uma série de válvulas, 17, 19 e 20, que permitem que o fluxo seja controlado entre uma alimentação de saída, 18, uma alimentação para refugo, 21 ou uma alimentação de saída, 22, por exemplo permitindo coleta ou amostragem.

O aparelho é adaptado adicionalmente com válvulas, 23a e 23b, que permitem que o fluxo seja desviado para desviar da coluna, 12, se requerido durante a operação e válvulas adicionais, 24 e 25, que permitem que o fluxo através da coluna seja interrompido. A alimentação de saída, 18, pode depois ser utilizada como a linha de alimentação compreendendo uma biomolécula alvo em um segundo dispositivo para realizar uma operação de bioprocessamento, configurado como ilustrado na Figure 1, mas onde preferivelmente a coluna de cromatografia, 12, é substituída com um dos meios diferentes para realizar uma operação unitária, tal como um tipo diferente de cromatografia ou uma operação unitária não cromatográfica e em que no segundo dispositivo para realizar uma operação unitária, a alimentação, 1, compreende a alimentação de saída, 18, a partir dos primeiros meios para realizar uma operação unitária.

[0050] Em um método de operação, a válvula 3 é aberta, enquanto as válvulas 3a a 3g são fechadas e o líquido compreendendo a biomolécula é alimentado pela bomba, 6, à coluna, 12, para carregar a coluna com a biomolécula, por exemplo onde a biomolécula é um anticorpo monoclonal, uma coluna compreendendo resina de afinidade de Proteína A, tal que o anticorpo monoclional seletivamente se liga à resina de Proteína A. Na conclusão da carga desejada, a válvula 3 é fechada e uma ou mais das válvulas 3a a 3g é aberta, para permitir que um ou mais dos líquidos de bioprocessamento 2a a 2g sejam bombeados através da coluna, 12. Em algumas modalidades, inicialmente apenas a válvula 3a é aberta e a válvula de múltiplas entradas 4 é operada de modo a abrir a válvula de entrada para que o tampão 2a, que pode ser um tampão de lavagem, seja suprido, tal que a coluna carregada seja lavada com o tampão, 2a. Na conclusão do estágio de lavagem desejado, uma ou mais das válvulas 3b a 3g podem ser abertas, com a válvula 3a que permanece aberta ou fechada. As válvulas de entrada na válvula de múltiplas entradas, 4 são abertas de modo a permitir que os líquidos de bioprocessamento 2b a 2g ou misturas dos mesmos sejam bombeadas através da coluna, 12. Controlando-se a abertura e fechamento das válvulas na válvula de múltiplas entradas, 4, e/ou as válvulas 3a a 3g, a composição do líquido de bioprocessamento alimentado à coluna pode ser alterada e controlada como desejado. Por exemplo, onde as válvulas 3b, 3c e 3e são abertas,

mudando a válvula de entrada que é aberta no controlador de fluxo de múltiplas entradas, 4 e fechando as outras, permite que a composição do líquido alimentado seja mudada na maneira escalonada. Em um outro exemplo, duas ou mais das válvulas de entrada do controlador de fluxo de múltiplas entradas, 4 pode ser aberto e fechado em uma dada frequência e durante um período escolhido de tempo para permitir que uma dada mistura dos líquidos de bioprocessamento seja alimentada à coluna, 12. O ajuste dos tempos e/ou frequência que as válvulas de entrada na válvula de múltiplas entradas, 4, são abertas ou fechadas, permite que a composição do líquido alimentado à coluna seja alterada. Onde os tempos e/ou frequência são alterados na maneira escalonada, a composição também muda em uma maneira escalonada. Onde os tempos e/ou frequência são alterados gradualmente durante um período de tempo, a composição também muda gradualmente, permitindo a aplicação de um gradiente à coluna, 12. Qualquer que seja o método desejado, a composição do líquido alimentado à coluna é mudada para uma composição que faça com que a biomolécula elua a partir da coluna. Antes da elução, os líquidos que saem da coluna, 12 são coletados por intermédio da saída, 22 ou enviado para o refugo, 21 e as válvulas 17, 19 e 20 são ajustadas consequentemente. Para a elução da biomolécula, as válvulas 19 e 20 são fechadas e a válvula 17, aberta, permitindo que a biomolécula passe para a segunda operação unitária, 18.

[0051] A operação do segundo meio para realizar uma operação unitária pode ser substancialmente como descrita acima com respeito à primeira operação unitária. Será reconhecido que a biomolécula que sai do segundo meio para realizar uma operação unitária através da linha de saída equivalente à linha de saída do primeiro meio para realizar uma operação unitária, 18, pode ser recuperada e usada como tal ou pode ser submetida a uma ou mais operações unitárias adicionais. Tais operações unitárias adicionais podem utilizar aparelho convencional ou aparelho adicional de acordo com a configuração ilustrada na Figura 1 ou de outro modo de acordo com a presente invenção.

[0052] O presente pedido é ilustrado sem limitação pelo seguinte exemplo.

[0053] Em uma operação de processo de cromatografia, uma proteína é ligada à resina de cromatografia, lavada com tampões de concentração salina diferente e depois removida (eluida) usando-se um tampão de alta concentração salina.

Como um exemplo, a Lactoferrina recombinante foi ligada a e eluida de uma coluna de resina de troca de cátion POROS-XS de 2,3 L usando tampões de fosfato de sódio no pH 7,5 com concentrações de cloreto de sódio de O a 1 M.

Isto foi realizado em uma única unidade autônoma com um caminho de fluxo totalmente descartável que conteve os traços descritos na Figura 1, exceto que a válvula 23b foi substituída por uma conexão fluida simples.

As soluções de estoque foram acopladas às entradas na seguinte ordem: cloreto de sódio 2 M foi acoplado à entrada 2a; fosfato de sódio dibásico 0,1 M foi acoplado à entrada 2c; fosfato de sódio monobásico 0,01 M foi acoplado à entrada 2e; água foi acoplada à entrada 2g; e a alimentação de proteína foi acoplada à entrada de amostra, 1. Os tampões foram gerados através da seleção proporcional de cada uma das soluções de estoque para produzir a composição de tampão desejada através da ação do controlador de fluxo de múltiplas entradas, 4 e da bomba a jusante, 6 e do misturador estático, 8. Durante o estabelecimento da composição de tampão correta, a coluna, 12, foi desviada através da válvula 23a, com as válvulas 24 e 25 fechadas, o tampão não desejado sendo direcionado para o refugo, 21. Uma vez que o tampão foi homogêneo, como indicado por uma leitura constante a partir do sensor de condutividade a montante, 11, o tampão foi suprido à coluna de cromatografia, 12, através das válvulas de abertura 24 e 25 e fechando a linha de desvio na válvula 23a.

As condições de processo foram monitoradas usando os sensores de condutividade, UV e pH, 14, 15 e 16, a jusante da coluna, 12. Durante o condicionamento da coluna antes da ligação da proteína à coluna e enxague com água após o uso o líquido foi direcionado para o refugo, 21. Uma vez condicionada, a resina de cromatografia foi carregada com proteína puxada através da entrada de amostra, 1, pela ação da bomba, 6, empurrada através do misturador estático, 8, dentro da coluna, 12. O fluxo direto da coluna foi coletado através da alimentação de saída, 18, enquanto que a primeira lavagem com tampão de sal baixo foi coletada através da alimentação de saída, 22 e a segunda lavagem de tampão de sal médio foi coletada através da alimentação de saída, 18. Finalmente, a proteína foi recuperada da coluna usando o tampão de elução de sal alto e coletado através da alimentação de saída, 22.

[0054] Três tampões de processamento foram gerados a partir das 4 soluções de estoque acopladas ao sistema: fosfato de sódio 25 mM pH 7,5 + 0,1 (sal baixo); fosfato de sódio 25 mM, cloreto de sódio 0,5 M pH 7,5 + 0,1 (sal médio) e fosfato de sódio 25 mM, 1,0 M de cloreto de sódio pH 7,5 + 0,1 (sal alto) usando razões específicas de sal, ácido, base e água como listado na Tabela 1. A coluna de cromatografia foi carregada (sal alto), equilibrada (sal baixo), lavada (sal baixo e sal médio) e eluida (sal alto) a 31L/h, usando os quatro concentrados de estoque. 3 L de Lactoferrina a 0,8 g/L em fosfato de sódio 25 mM pH 7,5 foram carregados dentro da coluna e o módulo com 2 L de fosfato de sódio 25 mM pré-fabricado a 15 L/h. Os resultados da condução são mostrados nas Figuras 2 a 4. A Figura 2 mostra as leituras do sensor para condutividade, pH e absorbância a A280 para a condução inteira, incluindo os blocos de preparação de tampão quando a coluna foi colocada no desvio. A Figura 3 mostra a condutividade dos tampões bombeados para dentro da coluna, indicando que o condicionamento de tampão em linha funciona com êxito. A Figura 4 mostra a condutividade, pH e absorbância a A280 após a coluna. A Figura 4 mostra que houve uma expulsão residual esperada do tampão a partir do desvio para os sensores e uma demora antes que o novo tampão passasse através da coluna, dada pelo aumento acentuado da condutividade e quedas escalonadas. O estágio crítico é a etapa de elução, onde as transições de coluna das lavagens com o sal alto e remove com êxito a proteína ligada. Isto demonstra uma vantagem do sistema; o mesmo pode gerar os tampões corretos usando condicionamento em linha em tempo real a partir de soluções de estoque para suprir em uma operação unitária. Neste exemplo, o sistema executou com êxito uma rodada de cromatografia de ligação-elução típica usada para purificar proteínas com soluções de estoque, sem a exigência para pré-fabricar todos os tampões de processamento diferentes.

Tabela 1. Condutividade e valores de pH para tampões condicionados em linha

LE sódio 2 M [sódio dibásico sódio (%) (mMS/cm)

(%) 0,1M monobásico (%) 0,01 M % osfato de sódio osfato de sódio 125 mM, cloreto de sódio 0,5 M pH 25 23 22 30 37,2 7,48 7,5 osfato de sódio 125 mM, cloreto de sódio 1,0 M pH 50 24 14 12 62,3 7,42 7,5

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES

1. Aparelho para processar um líquido compreendendo uma substância alvo, caracterizado pelo fato de que o dito aparelho compreende pelo menos um primeiro e um segundo meios para realizar uma operação unitária, cada um dos meios para realizar uma operação unitária compreendendo: (i) uma alimentação para um líquido em conexão fluida com a entrada de um controlador de fluxo compreendendo uma válvula de entrada de fluxo variável e uma saída, em que pelo menos um dos meios para realizar uma operação unitária compreende alimentações para pelo menos dois líquidos, as alimentações estando em conexão fluida com as entradas de um controlador de fluxo de múltiplas entradas compreendendo duas ou mais válvulas de entrada de fluxo variável para dosar os pelo menos dois líquidos, o controlador de fluxo também compreendendo uma saída; (ii) uma alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo em conexão fluida com a saída do controlador de fluxo para permitir deste modo combinação da alimentação para um líquido compreendendo a substância alvo com os líquidos de bioprocessamento misturados para produzir uma alimentação do dispositivo; (iii) um dispositivo para se obter uma operação de processamento compreendendo uma entrada do dispositivo e uma saída do dispositivo, a entrada do dispositivo estando em conexão fluida com a alimentação do dispositivo; e (iv) um meio para comunicar fluxo através do controlador de fluxo e da alimentação para a matéria-prima líquida através do dispositivo de processamento por intermédio da entrada do dispositivo; em que a alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo para o segundo meio para realizar uma operação unitária compreende a saída do primeiro meio para realizar uma operação unitária.

2. Aparelho de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as operações unitárias são selecionadas de cromatografia, inativação viral, filtração, ultrafiltração, diafiltração, microfiltração, condicionamento em linha e redobra, em cada caso onde a substância alvo compreende um polipeptídeo recombinante.

3. Aparelho de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 2, caracterizado pelo fato de que os meios para comunicar fluxo compreendem uma única bomba, localizada a jusante da conexão fluida entre a conexão entre as matérias-primas e a saída do controlador de fluxo.

4, Aparelho de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a bomba está localizada a montante do dispositivo para se obter uma operação de bioprocessamento.

5. Aparelho de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 4, caracterizado pelo fato de que os meios para realizar uma operação unitária são conectados em série, com a alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo para um dos meios subsequentes para realizar uma operação unitária compreendendo a saída dos meios precedentes para realizar uma operação unitária.

6. Aparelho de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que cada operação unitária difere das outras operações unitárias.

7. Aparelho de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que cada um dos meios para realizar uma operação unitária compreende substancialmente o mesmo caminho de fluxo.

8. Aparelho de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) alimentações para pelo menos dois líquidos; (ii) um controlador de fluxo de múltiplas entradas compreendendo duas ou mais válvulas de entrada de fluxo variável para misturar pelo menos dois líquidos, o controlador de fluxo também compreendendo uma única saída; (iii) uma alimentação para uma matéria-prima líquida compreendendo a substância alvo em conexão fluida com a saída do controlador de fluxo; (iv) um meio para comunicar fluxo, tipicamente pelo uso de uma bomba, através do controlador de fluxo e a partir da alimentação para a matéria-prima líquida através do aparelho de bioprocessamento por intermédio das entradas de alimentação; (v) um dispositivo para garantir mistura homogênea dos pelo menos dois líquidos; (vi) um dispositivo para aprisionar bolhas de ar dos líquidos de processo (vii) um caminho de fluxo comum para se obter uma operação de bioprocessamento compreendendo uma entrada do dispositivo e uma saída do dispositivo, a entrada do dispositivo estando em conexão fluida com as entradas de alimentação; (viii) a entrada e saída do dispositivo estando em conexão fluida com os módulos usados para cromatografia, filtração (incluindo filtração viral), filtração de fluxo tangencial, filtração de fluxo tangencial de passagem única, redobra e inativação viral; (ix) um meio para desviar a entrada e saída do dispositivo; (x) um meio a jusante da saída do dispositivo para regular a pressão; (xi) vários sensores apropriados para monitorar a operação de bioprocessamento a montante e a jusante da entrada do dispositivo e saída do dispositivo; e (xii) pelo menos uma saída em conexão fluida com as entradas de alimentação.

9. Aparelho para preparar uma mistura líquida, caracterizado pelo fato de que o dito aparelho compreende: (i) alimentações para pelo menos dois líquidos; (ii) um controlador de fluxo de múltiplas entradas compreendendo duas ou mais válvulas de entrada de fluxo variável para dosar pelo menos dois líquidos, o controlador de fluxo também compreendendo uma saída; (iii) uma bomba para comunicar fluxo através do controlador de fluxo e da alimentação para a matéria-prima líquida através do aparelho de bioprocessamento por intermédio das entradas de alimentação; (iv) um misturador estático para a mistura em linha dos pelo menos dois líquidos; e (v) uma saída para a mistura líquida; em que a bomba está a montante do dispositivo para a mistura em linha e tanto a bomba quanto o dispositivo para a mistura em linha estão localizados a jusante do fluxo de entrada múltipla.

10. Aparelho de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que compreende uma única bomba.

11. Aparelho de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 ou 10, caracterizado pelo fato de que o misturador estático é um misturador estático de fluxo divido, com retardo de tempo.

12. Processo para preparar uma solução tampão, caracterizado pelo fato de que compreende misturar líquidos, preferivelmente soluções ácidas e/ou salinas, usando o aparelho como definido em qualquer uma das reivindicações 9 a 11.

13. Processo para preparar uma biomolécula, caracterizado pelo fato de que compreende processar a biomolécula usando o aparelho como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11.

14. Processo de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a biomolécula é um polipeptídeo recombinante.