BR112020010542A2

BR112020010542A2 - moléculas de ácido nucleico, vetor, composição, proteínas, usos dos anteriores, e vacinas

Info

Publication number: BR112020010542A2
Application number: BR112020010542-2A
Authority: BR
Inventors: Jian Yan; Anna SLAGER; Bradley GARMAN; Neil COOCH
Original assignee: Inovio Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2017-12-13
Filing date: 2018-12-13
Publication date: 2020-12-01
Also published as: KR102560562B1; CA3204873A1; CA3084135A1; EP3723812A1; JP7441169B2; KR20230116955A; CN111741772A; WO2019118764A1; KR20230116954A; US20190175708A1; US11235044B2; KR20200096958A; MX2022015822A; EP3723812A4; MX2022015820A; CA3084135C; US20220111026A1; KR20230116957A; JP2024023358A; RU2021118706A

Abstract

A presente invenção refere-se a moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico que codificam um antígeno de MUC16 de consenso modificado. São divulgados vetores, composições e vacinas compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos que codificam um antígeno de MUC16 de consenso modificado. São divulgados métodos para tratar um sujeito com um tumor expressando MUC16 e métodos para prevenir um tumor expressando MUC16. É divulgado o antígeno de MUC16 de consenso modificado.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MOLÉCULAS DE ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, COMPOSIÇÃO, PROTEÍNAS, USOS DOS ANTERIORES, E VACINAS".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica prioridade e benefício dos Pedidos de Patente Provisórios dos Estados Unidos 62/598.314 depositado em 13 de dezembro de 2017 e 62/599.513 depositado em 15 de dezembro de 2017, cujas descrições são incorporadas aqui por referência em sua totalidade.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[002] Este pedido contém uma Listagem de sequências, que foi submetida eletronicamente no formato ASCII e está incorporada por meio deste a título de referência em sua totalidade. A cópia ASCII, criada em 12 de dezembro de 2018 é denominada 104409 000446 sequence listing.txt e tem 54.027 bytes de tamanho.

CAMPO TÉCNICO

[003] A presente invenção refere-se a antígenos de MUC16 e moléculas de ácido nucleico que codificam os mesmos. A presente invenção também se refere a vacinas, incluindo tais antígenos de MUC16 e/ou moléculas de ácido nucleico. A presente invenção refere- se ainda a métodos de uso de vacinas para indução de respostas imunes e prevenção e/ou tratamento de sujeitos com células cancerígenas que expressam MUC16.

FUNDAMENTOS

[004] O câncer continua sendo uma das principais causas de morte nos EUA e no mundo. O mercado de vacinas contra o câncer está crescendo rapidamente. As vacinas eficazes contra tumores podem ser úteis para impedir o crescimento do tumor e/ou podem ser úteis como uma alternativa mais eficaz e menos tóxica aos tratamentos padrão para pacientes com câncer avançado. Um antígeno associado ao câncer e, portanto, um alvo para vacinas anti-tumorais é MUC16.

[005] MUC16 é um membro da família das mucinas das glicoproteínas de alto peso molecular. As mucinas são expressas por células epiteliais especializadas ao redor da superfície luminal de vários órgãos do trato respiratório, gastrointestinal e reprodutivo. O MUC16 tem papéis diretos e indiretos na manutenção da integridade epitelial e na lubrificação e proteção de superfícies epiteliais.

[006] O domínio de repetição em tandem de MUC16 contém um epítopo peptídico repetitivo, CA125, que se tornou o biomarcador padrão- ouro para vários cenários clínicos que ocorrem durante o diagnóstico e tratamento do câncer de ovário, incluindo: 1) triagem para detecção precoce, 2) distinguir entre doença benigna e maligna em mulheres na pré e pós-menopausa que apresentam massas pélvicas e 3) monitorar a resposta à terapia. Além disso, estudos funcionais demonstraram que MUC16 contribui para a transformação e metástase de tumores ovarianos.

[007] Devido à sua alta expressão na maioria dos cânceres de ovário, bem como ao seu suposto papel na potencialização da tumorigênese, o MUC16 é um alvo atraente da vacina terapêutica contra o câncer. No entanto, o projeto do antígeno é impactado por seu grande tamanho, perfil de glicosilação complexo e expressão em tecido epitelial saudável.

[008] As vacinas para o tratamento e prevenção do câncer são de grande interesse. As vacinas existentes direcionadas a antígenos de células tumorais são geralmente limitadas por expressão de antígeno deficiente in vivo. Por conseguinte, permanece uma necessidade na técnica para o desenvolvimento de vacinas seguras e eficazes que são aplicáveis a tumores que expressam MUC16, fornecendo assim tratamento e promovendo a sobrevivência de sujeitos afetados por esses cânceres.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[001] São aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2.

[002] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1.

[003] São aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2.

[004] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 1; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 1. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 1.

[005] São aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4.

[006] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55-1926 da SEQ

ID Nº: 3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento — inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-1926 de SEQ ID Nº: 3.

[007] São aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4.

[008] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 3; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 3. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 3.

[009] São aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6.

[0010] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento — inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5.

[0011] São aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6.

[0012] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 5; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 5. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 5.

[0013] São aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19- 642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8.

[0014] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico que compreendem uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55-1926 e 1948- 4023 da SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos

55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº:7.

[0015] São fornecidas aqui moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácidos nucleicos que codifica os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8.

[0016] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico que compreendem uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento — inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7.

[0017] São aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8.

[0018] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 7. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 7.

[0019] Uma ou ais das moléculas de ácido nucleico aqui descritas podem ser incorporadas em um vetor, como um plasmídeo ou vetor viral. Uma ou mais das moléculas de ácido nucleico aqui descritas podem ser incorporadas em um vetor, como um plasmídeo ou vetor viral. Em algumas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; e (d)

uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2. Em certas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55- 4470 da SEQ ID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1. Em outras modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2. Em ainda outras modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 1; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 1. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 1.

[0020] Em outras modalidades, o vetor compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácidos nucleicos que codifica os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 de SEQ ID Nº: 4. Em certas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3. Em algumas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ

ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4. Em outras modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 3; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 3. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº:

3.

[0021] Em algumas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6. Em certas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55-

2130 da SEQ ID Nº: 5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5. Em outras modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6. Em ainda outras modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 5; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 5. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 5.

[0022] Em outras modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19- 642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8. Em certas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7. Em outras modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8. Em certas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: nucleotídeos 55- 4023 da SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7. Em algumas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8. Em algumas modalidades, o vetor compreende moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 7. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 7.

[0023] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos aqui descritos estão operacionalmente ligados a um elemento regulador. Em algumas modalidades, o elemento regulador é um promotor e/ou um sinal de poliadenilação. Em outras modalidades, o promotor é um promotor imediato do citomegalovírus humano (promotor do hCMV). Em ainda outras modalidades, o sinal de poli-adenilação é um sinal de poli- adenilação do hormônio de crescimento bovino (bGH poli A).

[0024] Também são fornecidas aqui composições que compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico, como aqui descrito. Em algumas modalidades, as composições compreendem um transportador farmaceuticamente aceitável.

[0025] São ainda fornecidas proteínas antigênicas MUC1I6 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntico aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2.

[0026] São ainda fornecidas proteínas antigênicas MUC16 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 2; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e (c) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2. Em algumas modalidades, a proteína compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 2.

[0027] São ainda fornecidas proteínas antigênicas MUC16 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntico aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4.

[0028] São ainda fornecidas proteínas antigênicas MUC1I6 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 4; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e (c) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4. Em algumas modalidades, a proteína compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 2.

[0029] São ainda fornecidas proteínas antigênicas MUC16 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntico aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6.

[0030] São ainda fornecidas proteínas antigênicas MUC16 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 6; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e (c) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6. Em algumas modalidades, a proteína compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 6.

[0031] São ainda fornecidas proteínas antigênicas de MUC16 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 e 650- 1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntico aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8.

[0032] São ainda fornecidas proteínas antigênicas MUC16 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%

idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8.

[0033] São ainda fornecidas proteínas antigênicas de MUC16 compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 8; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e (c) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8. Em algumas modalidades, a proteína compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 8.

[0034] Vacinas compreendendo um antígeno de MUC16, em que o antígeno compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 2 também são fornecidas. Em algumas modalidades, o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 1.

[0035] Vacinas compreendendo um antígeno de MUC16, em que o antígeno compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 4 também são fornecidas. Em algumas modalidades, o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 3.

[0036] Vacinas compreendendo um antígeno de MUC16, em que o antígeno compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 6 também são fornecidas. Em algumas modalidades, o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 5.

[0037] Vacinas compreendendo um antígeno de MUC16, em que o antígeno compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 8 também são fornecidas. Em algumas modalidades, o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 7.

[0038] São fornecidas ainda vacinas compreendendo uma molécula de ácido nucleico em que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de ácido nucleico estabelecida em SEQ ID Nº: 1. São divulgadas ainda vacinas compreendendo uma molécula de ácido nucleico em que a molécula de ácido nucleico codifica um antígeno de MUC16 compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 2.

[0039] São fornecidas ainda vacinas compreendendo uma molécula de ácido nucleico em que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de ácido nucleico estabelecida em SEQ ID Nº: 3. São divulgadas ainda vacinas compreendendo uma molécula de ácido nucleico em que a molécula de ácido nucleico codifica um antígeno de MUC16 compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 4.

[0040] São fornecidas ainda vacinas compreendendo uma molécula de ácido nucleico em que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de ácido nucleico estabelecida em SEQ ID Nº: 5. São divulgadas ainda vacinas compreendendo uma molécula de ácido nucleico em que a molécula de ácido nucleico codifica um antígeno de MUC16 compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 6.

[0041] São fornecidas ainda vacinas compreendendo uma molécula de ácido nucleico em que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de ácido nucleico estabelecida em SEQ ID Nº: 7. São divulgadas ainda vacinas compreendendo uma molécula de ácido nucleico em que a molécula de ácido nucleico codifica um antígeno de MUC16 compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 8.

[0042] Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico pode compreender um vetor de expressão. As vacinas podem ainda compreender um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, as vacinas podem ainda compreender um adjuvante. Em certas modalidades, o adjuvante é IL-12, IL-15, 11-28 ou RANTES.

[0043] Também são fornecidas neste documento vacinas compreendendo um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 2. Em algumas modalidades, o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 1.

[0044] São ainda fornecidas vacinas compreendendo um peptídeo, em que o peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos cerca de 90% de identidade ao longo de um comprimento inteiro da sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 2.

[0045] Também aqui são fornecidas vacinas compreendendo um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 4. Em algumas modalidades, o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 3.

[0046] São ainda fornecidas vacinas compreendendo um peptídeo, em que o peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos cerca de 90% de identidade ao longo de um comprimento inteiro da sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 4.

[0047] Também aqui são fornecidas vacinas compreendendo um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 6. Em algumas modalidades, o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 5.

[0048] São ainda fornecidas vacinas compreendendo um peptídeo, em que o peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos cerca de 90% de identidade ao longo de um comprimento inteiro da sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 6.

[0049] Também aqui são fornecidas vacinas compreendendo um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 8. Em algumas modalidades, o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 7.

[0050] São ainda fornecidas vacinas compreendendo um peptídeo, em que o peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos cerca de 90% de identidade ao longo de um comprimento inteiro da sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 8.

[0051] São fornecidos ainda métodos de tratamento de um sujeito com uma célula cancerígena que expressa MUC16, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma vacina aqui descrita. Em algumas modalidades, a administração inclui uma etapa de eletroporação. Em outras modalidades, a administração ocorre em um ou mais sítios no sujeito.

[0052] Também são fornecidos métodos de vacinação de um indivíduo contra uma célula cancerígena que expressa MUC16. Em algumas “modalidades, a administração inclui uma etapa de eletroporação. Em outras modalidades, a administração ocorre em um ou mais sítios no sujeito.

[0053] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2 para uso como medicamento.

[0054] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4 para uso como medicamento.

[0055] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6 para uso como medicamento.

[0056] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8 para uso como medicamento.

[0057] Em algumas modalidades, as moléculas de ácido nucleico aqui descritas são para uso como um medicamento no tratamento de câncer. Em algumas modalidades, as moléculas de ácido nucleico aqui descritas são para uso na preparação de um medicamento. Em algumas modalidades, as moléculas de ácido nucleico aqui descritas são para uso na preparação de um medicamento para o tratamento de câncer.

[0058] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 1; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 1 para uso como medicamento.

[0059] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à

SEQ ID Nº: 3; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 3 para uso como medicamento.

[0060] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 5; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 5 para uso como medicamento.

[0061] Também são aqui fornecidas moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 7 para uso como medicamento.

[0062] Em algumas modalidades, as moléculas de ácido nucleico aqui descritas são para uso como um medicamento no tratamento de câncer. Em algumas modalidades, as moléculas de ácido nucleico aqui descritas são para uso na preparação de um medicamento. Em algumas modalidades, as moléculas de ácido nucleico aqui descritas são para uso na preparação de um medicamento para o tratamento de câncer.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0063] A Figura 1 ilustra a estrutura MUC16 humana nativa. As regiões direcionadas para construtos de vacina MUC16 são indicadas.

[0064] A Figura 2 representa uma análise filogenética das repetições em tandem central da MUC16 nativa humana.

[0065] A Figura 3 ilustra sequências de repetição MUC16 nativas individuais a partir das quais cada micro-consenso de repetição MUC16 (RMC) foi derivado e sua identidade de sequência percentual entre si (GenBank: AAL65133.2).

[0066] A Figura 4 mostra a sequência de aminoácidos do domínio carbóxi terminal MUC16. A região sublinhada (NFSPLARRVDR) é um sítio potencial de clivagem, a região sublinhada em negrito é o domínio transmembranar e a cauda citoplasmática é indicada por sublinhado duplo. A sequência não especificada a montante do domínio transmembranar é o ectodomínio extracelular. Caixas indicam sítios potenciais de fosforilação S/T/Y. Os sítios de N e O-glicosilação são indicados com um X e O, respectivamente.

[0067] A Figura 5 ilustra um alinhamento do ectodomínio de MUC16 de consenso modificado e domínio transmembranar e ectodomínio de MUC16 nativa humana e domínio transmembranar. As alterações de consenso estão sombreadas em cinza.

[0068] As Figuras 6A-6B ilustram a estratégia para montar RMCs, repetições nativas e ectodomínio de MUC16 de consenso modificado e domínio transmembranar para reduzir a probabilidade de epítopos fora do alvo. A Figura 6A mostra como um imunógeno de MUC16 sintético preliminar foi gerado pela incorporação das estratégias de projeto de repetição em tandem central e domínio carbóxi-terminal. No entanto, quando a junção RMCA4-R61 (os últimos 11 aminoácidos do RMC4 e os primeiros 11 aminoácidos do R61 nativo) foi alinhada a todas as junções de repetição nativas do MUC16 (os últimos 11 aminoácidos e os 11 aminoácidos iniciais das repetições nativas vizinhas), a identidade de sequência mais alta foi de apenas 76,2%, sugerindo que epítopos indesejados poderiam ser introduzidos nessa junção. A Figura 6B mostra que uma estratégia para evitar a junção RMC4-R61 era adicionar um R59 nativo entre RMC4 e R61.

[0069] A Figura 7 é uma representação esquemática dos quatro imunógenos de MUC16 de consenso sintético codificados pelos plasmídeos pGX1435, pGX1436, pGX1437, pGX1438 e pGX1439.

[0070] As Figuras 8A-8C representam uma avaliação de tamanho e modelagem comparativa do domínio de repetição em tandem central de IRC de MUC16 de consenso sintético e nativa humana. A Figura 8A é um diagrama esquemático de MUC16 nativa (baseado no GenBank AAL65133.2) e MUC16 IRC de consenso sintético. A Figura 8B mostra modelagem comparativa para ilustrar as diferenças de tamanho entre o projeto de IRC de MUC16 nativa (esquerda) e de MUC16 de consenso sintético (direita). A Figura 8C é um modelo comparativo da região de repetição de IRC de MUC16 de consenso sintético mostrada no formato cpk. As sequências de micro-consenso de repetição RMC1 a RMC4 são indicadas em cinza claro, o sítio de clivagem de furina projetado e as sequências de repetição nativas R61 a R63 são cinza escuro.

[0071] A Figura 9 é uma representação esquemática da espinha dorsal pyAX1 modificado (pGX0001).

[0072] A Figura 10 é uma representação esquemática da espinha dorsal pGX0003.

[0073] A Figura 11 é uma representação esquemática do plasmídeo pGX1435 e do consenso sintético MUC16 IRC + R59.

[0074] A Figura 12 é uma representação esquemática do plasmídeo pGX1436 e do consenso sintético MUC16 RMC.

[0075] A Figura 13 é uma representação esquemática do plasmídeo pGX1437 e do consenso sintético MUC16 NRC.

[0076] A Figura 14 é uma representação esquemática do plasmídeo pGX1438 e do consenso sintético MUC16 RMC e do consenso sintético MUC16 NRC.

[0077] A Figura 15 é uma representação esquemática do plasmídeo pGX1439 e do consenso sintético MUC16 IRC.

[0078] A Figura 16 ilustra a expressão de construtos de MUC16 de consenso sintético por imunotransferência.

[0079] A Figura 17 é uma representação esquemática dos conjuntos de peptídeos contidos nos peptídeos correspondentes às proteínas de antígeno de MUC16 de consenso sintético usadas nas modalidades da descrição.

[0080] As Figuras 18A-18D ilustram respostas IFNy por ELISpot da imunização de CB6F1 fêmea 3 vezes, com 3 semanas de intervalo com as quantidades de doses indicadas de MUC16 de consenso sintético (PDGX1435 (Figura 18A), pGX1438 (Figura 18B) e pGX1439 (Figura 18C), n = 8/grupo) ou pGX0001 (vetor vazio, n = 8). Também são indicadas respostas detectáveis ao epítopo R59 único (grupo de peptídeos 6) induzido por pGX1435 (Figura 18D).

[0081] As Figuras 19A-19D ilustram resultados da imunização de CB6F1 fêmea 3 vezes, com 3 semanas de intervalo com as quantidades de doses indicadas de MUC16 de consenso sintético (pbGX1436 (Figura 19A) e pbGX1437 (Figura 19C), n = 8/grupo) ou pGX0001 (vetor vazio, n = 8). Respostas IFNy específicas de MUC16 de consenso sintético por ELISpot em quantidades de dose indicadas de pGX1436 e pGX1437, bem como comparação de respostas imunes a construtos de comprimento total (Figura 19B e Figura 19D).

[0082] A Figura 20 ilustra a estratégia de bloqueio da citometria de fluxo usada nas modalidades da descrição.

[0083] As Figuras 21A-21C ilustram a frequência relativa de células T CD4* induzida por construtos de comprimento completo de MUC16 de consenso sintético PpGX1435 (Figura 21A), pGX1438 (Figura 21B) e pGX1439 (Figura 21C).

[0084] As Figuras 22A-22C ilustram o potencial citolítico de células T CD4* específicas para MUC16 de consenso sintético e perfil de citocinas induzido por pGX1435 (Figura 22A), PGX1438 (Figura 22B) e pGX1439 (Figura 22C).

[0085] As Figuras 23A-23C ilustram respostas imunes celulares induzidas por pGX1435 (Figura 23A), pGX1438 (Figura 23B) e pGX1439 (Figura 23C) no compartimento de células T CD8*.

[0086] As Figuras 24A-24C ilustram as respostas imunes citolíticas e o perfil de citocinas induzido por pGX1435 (Figura 24A), pGX1438 (Figura 24B) e pGX1439 (Figura 24C) no compartimento de células T CD8*.

[0087] As Figuras 25A-25B ilustram respostas imunes celulares induzidas por pGX1436 no compartimento de células T CD4* (Figura 25A) e as respostas imunes citolíticas e perfil de respostas de células T CD4* específicas para o construto de comprimento parcial pGX1436 (Figura 25B).

[0088] As Figuras 26A-26B ilustram respostas imunes celulares induzidas por pGX1437 no compartimento de células T CD4* (Figura 26A) e as respostas imunes citolíticas e perfil de respostas de células T CD4* específicas para o construto de comprimento parcial pGX1437 (Figura 26B).

[0089] As Figuras 27A-27B ilustram respostas imunes celulares induzidas por pGX1436 no compartimento de células T CD8* (Figura 27A) e respostas imunes citolíticas e perfil de respostas de células T CD8* específicas para construtos de comprimento parcial (Figura 27B).

[0090] As Figuras 28A-28B ilustram respostas imunes celulares induzidas por pGX1437 no compartimento de células T CD8* (Figura 28A) e as respostas imunes citolíticas e perfil de respostas de células T CD8* específicas para construtos de comprimento parcial (Figura 28B).

[0091] As Figuras 29A-29B ilustram uma comparação de respostas imunes celulares induzidas por pGX1436 (Figura 29 A) e pGX1437 (Figura 29B) contra construtos de comprimento total nos compartimentos de células T CD4* e CD8* T e o perfil de citocina de respostas de células CD4* e CD8* T.

[0092] As Figuras 30A-30C fornecem um resumo dos dados das células IFNy (Figura 30A), CD4* (Figura 30B) e CD8* T (Figura 30C) para construtos de comprimento total aqui divulgadas.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0093] A presente invenção refere-se a vacinas compreendendo um antígeno MUC16. MUC16 é expresso em muitos tumores. Consequentemente, as vacinas fornecem tratamento para um câncer ou tumor que expressa MUC16. A vacina da invenção pode proporcionar qualquer combinação de antígenos de câncer particulares para a prevenção ou tratamento particular do câncer de um sujeito que necessite de tratamento.

[0094] Uma maneira de projetar o ácido nucleico e sua sequência de aminoácidos codificada do antígeno de câncer recombinante é através da introdução de mutações que alteram aminoácidos particulares na sequência geral de aminoácidos do antígeno de câncer nativo. A introdução de mutações não altera tanto o antígeno do câncer que ele não possa ser universalmente aplicado em um mamífero e, de preferência, em humanos ou cães, mas altera o suficiente para que a sequência de aminoácidos resultante quebre a tolerância ou seja considerada um antígeno estranho para gerar uma resposta imune. Outra maneira pode ser criar um antígeno de câncer recombinante de consenso que tenha pelo menos 85% e até 99% de identidade de sequência de aminoácidos em relação ao seu antígeno de câncer nativo correspondente; preferencialmente pelo menos 90% e até 98% de identidade de sequência; mais preferencialmente pelo menos 93% e até 98% de identidade de sequência; ou ainda mais preferencialmente pelo menos 95% e até 98% de identidade de sequência. Em alguns casos, o antígeno de câncer recombinante tem identidade de sequência de aminoácidos de 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de seu antígeno de câncer nativo correspondente. O antígeno de câncer nativo é o antígeno normalmente associado ao tumor específico de câncer ou câncer. Dependendo do antígeno de câncer, a sequência de consenso do antígeno de câncer pode ser através de espécies de mamíferos ou dentro de subtipos de uma espécie ou através de cepas virais ou sorotipos. Alguns antígenos de câncer não variam muito da sequência de aminoácidos do tipo selvagem do antígeno de câncer. Alguns antígenos de câncer têm sequências de ácidos nucleicos/aminoácidos que são tão divergentes entre as espécies, que uma sequência de consenso não pode ser gerada. Nesses casos, é gerado um antígeno recombinante do câncer que rompe a tolerância e gera uma resposta imune que possui pelo menos 85% e até 99% de identidade de sequência de aminoácidos ao seu antígeno de câncer nativo correspondente; preferencialmente pelo menos 90% e até 98% de identidade de sequência; mais preferencialmente pelo menos 93% e até 98% de identidade de sequência; ou ainda mais preferencialmente pelo menos 95% e até 98% de identidade de sequência. Em alguns casos, o antígeno de câncer recombinante tem identidade de sequência de aminoácidos de 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de seu antígeno de câncer nativo correspondente. As abordagens acima mencionadas podem ser combinadas de modo a que o antígeno de câncer recombinante final tenha uma porcentagem de similaridade com a sequência de aminoácidos de antígeno de câncer nativo, como discutido acima.

[0095] O antígeno mucin-16 ("MUC16") pode ser um antígeno de consenso MUC16 derivado, em parte, das sequências de MUC16 de diferentes espécies ou de diferentes isoformas dentro de uma espécie e, portanto, o antígeno de consenso MUC16 não é nativo.

[0096] O antígeno MUC16 também pode compreender uma seleção de sequências de repetição de micro-consenso (RMC) ou repetição nativa (R) derivadas de sequências nativas de RMC ou R. Em algumas modalidades, são fornecidos construtos de ácido nucleico nas quais duas ou mais sequências RMC e/ou R são ligadas entre si por sítios de clivagem proteolítica. Um sítio de clivagem proteolítica de furina é um exemplo de um sítio de clivagem proteolítica que pode ligar os domínios RMC e/ou R em uma proteína de fusão expressa por um construto.

[0097] Outras modificações no antígeno MUC16 podem incluir mutações de resíduos de asparagina nos ectodomínio e domínios transmembranares e a adição de sequências líderes a montante de Kozak e/ou IgE ao N-terminal do antígeno MUC16.

[0098] O MUC16 recombinante pode induzir respostas de anticorpos de células T específicas de antígeno e/ou de altos níveis, induzindo ou provocando assim uma resposta imune que é dirigida ou reativa contra o câncer ou tumor que expressa o antígeno. Em algumas modalidades, a resposta imune induzida ou provocada pode ser uma resposta imune celular, humoral ou tanto celular quanto humoral. Em algumas modalidades, a resposta imune celular induzida ou provocada pode incluir indução ou secreção de interferon gama (IFN-g) e/ou fator de necrose tumoral alfa (TNF-a). Em outras modalidades, a resposta imune induzida ou provocada pode reduzir ou inibir um ou mais fatores de imunossupressão que promovem o crescimento do tumor ou câncer que expressa o antígeno, por exemplo, mas não limitados a fatores que suprarregulam a apresentação de MHC, fatores que suprarregulam as células T reguladoras específicas de antígeno (Tregs), PD-L1, FasL,citocinas, como IL-10 e TFG-b, macrófagos associados a tumores, fibroblastos associados a tumores, fatores solúveis produzidos por células imunossupressoras, CTLA-4, PD-1, MDSCs, MCP-1 e uma molécula de ponto de verificação imunológico.

[0099] A vacina pode ser combinada ainda mais com anticorpos para inibidores do ponto de verificação, como PD-1 e PDL-1, para aumentar a estimulação das respostas imunes celular e humoral. O uso de anticorpos anti-PD-1 ou anti-PDL-1 impede que PD-1 ou PDL-1 suprimam as respostas das células T e/ou das células B. Em geral, ao projetar os antígenos do câncer a serem reconhecidos pelo sistema imunológico, ajuda a superar outras formas de supressão imunológica pelas células tumorais, e essas vacinas podem ser usadas em combinação com terapias de supressão ou inibição (como terapias de anticorpo anti-PD-1 e anti-PDL-1) para aumentar ainda mais as respostas das células T e/ou das células B. Definições

[00100] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado compreendido comumente por versados na técnica. Em caso de conflito, o presente documento, incluindo as definições, controlará. Métodos e materiais preferidos são descritos a seguir, embora métodos e materials semelhantes ou equivalentes aos descritos neste documento possam ser usados na prática ou no teste da presente invenção. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências mencionadas neste documento estão incorporadas por referência em suas totalidades. Os materiais, métodos e exemplos descritos neste documento são ilustrativos apenas e não se destinam a ser um fator limitante. A terminologia usada neste documento tem a finalidade de descrever modalidades particulares apenas e não se destina a ser limitante da invenção.

[00101] Os termos "compreende(m)", "incluifem)", "tendo", "tem", "pode", "contém(êm)", e as variantes destes, conforme usado neste documento, destinam-se a ser frases de transição em aberto, termos ou palavras que não excluem a possibilidade de atos ou estruturas adicionais. As formas singulares "uma", "um" e "a/o0" incluem referências no plural, a menos que o contexto claramente indique de outra forma. À presente — descrição também contempla outras modalidades

"compreendendo", "consistindo em" e "consistindo essencialmente em", as modalidades ou elementos aqui apresentados, explicitamente estabelecidos ou não.

[00102] Para arecitação de faixas numéricas neste documento, cada valor intermediário tendo o mesmo grau de precisão que a faixa recitada mínima e máxima é explicitamente contemplado. Por exemplo, para a faixa de 6-9, os números 7 e 8 são contemplados além de 6 e 9, e para a faixa de 6,0-7,0, os números 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, e 7,0 são contemplados explicitamente.

[00103] "“Adjuvante", conforme utilizado neste documento, significa qualquer molécula adicionada às vacinas aqui descritas para aumentar a imunogenicidade dos antígenos de MUC16 e/ou as moléculas de ácido nucleico que codificam os antígenos, como aqui descritos.

[00104] "“Anticorpo", como utilizado neste documento, significa um anticorpo das classes IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE, ou fragmentos ou derivativos dos mesmos, includindo Fab, F(ab')2, Fd, e anticorpos de cadeia única, bivalentes, anticorpos biespecíficos, anticorpos bifuncionais e derivados dos mesmos. O anticorpo pode ser um anticorpo isolado da amostra de soro de um mamífero, um anticorpo policlonal, um anticorpo purificado de afinidade ou qualquer mistura dos mesmos, que apresenta especificidade suficiente de ligação a um epítopo desejado ou a uma sequência derivada destes.

[00105] "“Antígeno MUC16" refere-se a proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; aminoácidos 19-642 e 650- 1341 da SEQ ID Nº: 8; SEQ ID Nº: 2; SEQ ID Nº: 4; SEQ ID Nº: 6; SEQ ID Nº: 8; fragmentos de comprimentos dos mesmos estabelecidos neste documento, variantes, isto é, proteínas com sequências tendo identidade com a SEQ ID Nº: 2, SEQ ID Nº: 4, SEQ ID Nº: 6 ou SEQ ID Nº: 8, conforme estabelecido neste documento, fragmentos de variantes com comprimentos estabelecido aqui de SEQ ID Nº: 2, SEQ ID Nº: 4, SEQ ID Nº: 6 ou SEQ ID Nº: 8; fragmentos de comprimentos dos mesmos estabelecidos neste documento, variantes, isto é, proteínas com sequências que têm identidade com SEQ ID Nº: 2, SEQ ID Nº: 4, SEQ ID Nº: 6 ou SEQ ID Nº: 8, conforme estabelecido neste documento, fragmentos de variantes com comprimentos aqui estabelecidos e combinações dos mesmos. Os antígenos podem opcionalmente incluir peptídeos de sinal, como os de outras proteínas.

[00106] "Sequência codificante" ou "ácido nucleico codificador", como usado aqui, significa os ácidos nucleicos (molécula de RNA ou de DNA) que compreendem uma sequência de nucleotídeos que codifica uma proteína. A sequência codificante pode ainda incluir sinais de iniciação e terminação operacionalmente ligados a elementos regulatórios, incluindo um promotor e um sinal de poliadenilação capaz de direcionar a expressão nas células de um sujeito ou mamífero ao qual o ácido nucleico é administrado.

[00107] "Complemento" ou "complementar", como utilizado neste documento, significa que um ácido nucleico pode significar uma base de Watson-Crick (por exemplo, A-T/U e C-G) ou de Hoogsteen pareando entre os nucleotídeos ou análogos de nucleotídeos das moléculas de ácido nucleico.

[00108] "Consenso" ou "sequência de consenso", como utilizado neste documento, significa uma sequência polipeptídica que é baseada na análise de um alinhamento de múltiplas sequências para o mesmo gene de diferentes organismos. As sequências de ácidos nucleicos que codificam uma sequência consenso polipeptídica podem ser preparadas. As vacinas compreendendo as proteínas que compreendem as sequências consenso e/ou as moléculas de ácido nucleico que codificam tais proteínas podem ser usadas para induzir ampla imunidade contra um antígeno.

[00109] "Corrente constante", como aqui utilizado descreve uma corrente que é recebida ou experimentada por um tecido, ou células que definem o referido tecido, durante a duração de um pulso elétrico administrado ao mesmo tecido. O pulso elétrico é administrado a partir dos dispositivos de eletroporação aqui descritos. Esta corrente permanece com uma amperagem constante no referido tecido durante a vida de um pulso elétrico, porque o dispositivo de eletroporação aqui fornecido possui um elemento de realimentação, preferivelmente tendo realimentação instantânea. O elemento de feedback pode medir a resistência do tecido (ou células) durante toda a duração do pulso e fazer com que o dispositivo de eletroporação altere sua produção de energia elétrica (por exemplo, aumente a tensão), de modo que a corrente no mesmo tecido permaneça constante durante todo o pulso elétrico (ligado a ordem dos microssegundos) e de pulso para pulso. Em algumas modalidades, o elemento de feedback compreende um controlador.

[00110] “Feedback de corrente" ou "feedback", conforme utilizado neste documento, podem ser usados de forma intercambiável e pode significar a resposta ativa dos dispositivos de eletroporação fornecidos, que compreendem medir a corrente no tecido entre os eletrodos e alterar a saída de energia fornecida pelo dispositivo EP de acordo, para manter a corrente em um nível constante. Esse nível constante é predefinido pelo usuário antes do início de uma sequência de pulsos ou tratamento elétrico. O feedback pode ser realizado pelo componente de eletroporação, por exemplo, controladori do dispositivo de eletroporação, pois o circuito elétrico nele é capaz de monitorar continuamente a corrente no tecido entre os eletrodos e comparar essa corrente monitorada (ou corrente no tecido) com uma corrente predefinida e continuamente faz ajustes na produção de energia para manter a corrente monitorada em níveis predefinidos. O loop de feedback pode ser instantâneo, pois é um feedback de loop fechado analógico.

[00111] "Corrente descentralizada, como utilizado neste documento, pode significar o padrão de correntes elétricas entregues dos vários arranjos de eletrodos de agulha dos dispositivos de eletroporação aqui descritos, em que os padrões minimizam, ou preferivelmente eliminam, a ocorrência de estresse térmico relacionado à eletroporação em qualquer área do tecido eletroporado.

[00112] "“Eletroporação", "eletropermeabilização," ou "potenciamento eletrocinético" ("EP"), tal como utilizado permutavelmente aqui, significa a utilização de um pulso de campo elétrico transmembrana para induzir caminhos microscópicos (poros) em uma biomembrana; sua presença permite que biomoléculas como plasmídeos, oligonucleotídeos, siRNA, drogas, íons e água passem de um lado da membrana celular para o outro.

[00113] "Fragmento", como utilizado neste documento com relação às sequências de ácidos nucleicos, significa uma sequência de ácido nucleico ou uma porção do mesmo, que codifica um polipeptídeo capaz de provocar uma resposta imune em um mamífero que reage cruzadamente com um antígeno divulgado aqui. Os fragmentos podem ser fragmentos de molécula de ácido nucleico selecionados de, pelo menos, uma das diversas sequências de nucleotídeos que codificam os fragmentos de proteína definidos abaixo. Os fragmentos podem compreender pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% de um comprimento inteiro de uma ou mais das sequências de ácido nucleico descritas aqui, excluindo um peptídeo sinal heterólogo adicionado. Em algumas modalidades, os fragmentos podem compreender pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% do comprimento inteiro de uma ou mais das sequências de ácido nucleico estabelecidas abaixo, excluindo qualquer peptídeo sinal heterólogo adicionado.

[00114] Em algumas modalidades, os fragmentos podem ser pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica a uma ou mais das sequências de ácidos nucleicos aqui descritas, excluindo qualquer peptídeo sinal heterólogo. Em algumas modalidades, os fragmentos podem ser pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticos a uma ou mais das sequências de ácidos nucleicos estabelecidas abaixo, excluindo qualquer peptídeo sinal heterólogo adicionado.

[00115] Em outras modalidades, os fragmentos podem adicionalmente opcionalmente compreender a sequência que codifica um peptídeo de sinal heterólogo que não está incluído no cálculo da identidade percentual. Os fragmentos também podem compreender sequências de codificação para um peptídeo sinal, como um peptídeo sinal de imunoglobulina, por exemplo, um peptídeo sinal IgE ou IgG. À sequência de codificação que codifica uma metionina e/ou peptídeo de sinal do terminal N pode ser ligada a um fragmento da sequência de codificação.

[00116] Em algumas modalidades, os fragmentos podem compreender pelo menos 1700 nucleotídeos ou mais, 1750 nucleotídeos ou mais, 1800 nucleotídeos ou mais, 1850 nucleotídeos ou mais, 1900 nucleotídeos ou mais, 1950 nucleotídeos ou mais, 2000 nucleotídeos ou mais, 2050 nucleotídeos ou mais, 2100 nucleotídeos ou mais, 2150 nucleotídeos ou mais, 2200 nucleotídeos ou mais, 2250 nucleotídeos ou mais, 2300 nucleotídeos ou mais, 2350 nucleotídeos ou mais, 2400 nucleotídeos ou mais, 2450 nucleotídeos ou mais, 2500 nucleotídeos ou mais, 2550 nucleotídeos ou mais, 2600 nucleotídeos ou mais, 2650 nucleotídeos ou mais, 2700 nucleotídeos ou mais, 2750 nucleotídeos ou mais, 2800 nucleotídeos ou mais, 2850 nucleotídeos ou mais, 2900 nucleotídeos ou mais, 2950 nucleotídeos ou mais, 3000 nucleotídeos ou mais, 3050 nucleotídeos ou mais, 3100 nucleotídeos ou mais, 3150 nucleotídeos ou mais, 3200 nucleotídeos ou mais, 3250 nucleotídeos ou mais, 3300 nucleotídeos ou mais, 3350 nucleotídeos ou mais, 3400 nucleotídeos ou mais, 3450 nucleotídeos ou mais, 3500 nucleotídeos ou mais, 3550 nucleotídeos ou mais, 3600 nucleotídeos ou mais, 3650 nucleotídeos ou mais, 3700 nucleotídeos ou mais, 3750 nucleotídeos ou mais, 3800 nucleotídeos ou mais, 3850 nucleotídeos ou mais, 3900 nucleotídeos ou mais, 3950 nucleotídeos ou mais, 4000 nucleotídeos ou mais, 4050 nucleotídeos ou mais, 4100 nucleotídeos ou mais, 4150 nucleotídeos ou mais, 4200 nucleotídeos ou mais, 4250 nucleotídeos ou mais, 4300 nucleotídeos ou mais, 4350 nucleotídeos ou mais, 4400 nucleotídeos ou mais, 4450 nucleotídeos ou mais, 4500 de pelo menos uma das sequências de ácidos nucleicos estabelecidas abaixo.

[00117] "Fragmento" ou "fragmento imunogênico" com relação às sequências polipeptídicas significa um polipeptídeo capaz de provocar uma resposta imune em um mamífero que reage cruzadamente com um antígeno divulgado aqui. Os fragmentos podem ser fragmentos de polipeptídeo selecionados de pelo menos uma das várias sequências de aminoácidos aqui descritas. Os fragmentos de proteínas consenso podem compreender pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% de um comprimento inteiro de uma proteína consenso, excluindo qualquer peptídeo sinal heterólogo adicionado. Em algumas modalidades, o fragmento pode compreender pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% do comprimento de uma ou mais das sequências de amino estabelecidas abaixo, excluindo qualquer peptídeo sinal heterólogo adicionado.

[00118] Em algumas modalidades, os fragmentos podem ser pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica a uma ou mais das sequências de aminoácidos aqui descritas, excluindo qualquer peptídeo sinal heterólogo. Em algumas modalidades, os fragmentos podem ser pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticos a uma ou mais das sequências de aminoácidos estabelecidas abaixo, excluindo qualquer peptídeo sinal heterólogo adicionado.

[00119] Em outras modalidades, os fragmentos podem adicionalmente opcionalmente compreender a sequência que codifica um peptídeo de sinal heterólogo que não está incluído no cálculo da identidade percentual. Os fragmentos podem ainda compreender um peptídeo sinal, como um peptídeo sinal de imunoglobulina, por exemplo, um peptídeo sinal IgE ou IgG.

[00120] Em algumas modalidades, fragmentos de proteínas de consenso podem compreender 550 aminoácidos ou mais, 600 aminoácidos ou mais, 650 aminoácidos ou mais, 700 aminoácidos ou mais, 750 aminoácidos ou mais, 800 aminoácidos ou mais, 850 aminoácidos ou mais, 900 aminoácidos ou mais, 950 aminoácidos ou mais, 1000 aminoácidos ou mais, 1050 aminoácidos ou mais, 1100 aminoácidos ou mais, 1150 aminoácidos ou mais, 1200 aminoácidos ou mais, 1250 aminoácidos ou mais, 1300 aminoácidos ou mais, 1350 de uma sequência de proteínas aqui divulgada.

[00121] Como utilizado neste documento, o termo "construto genético" refere-se às moléculas de DNA ou RNA que compreendem uma sequência de nucleotídeos que codificam uma proteína. À sequência de codificação inclui sinais de iniciação e de terminação ligados de forma operável a elementos regulatórios, incluindo um promotor e um sinal de poliadenilação capaz de direcionar a expressão nas células do sujeito ao qual a molécula de ácido nucleico é administrada. Como utilizado neste documento, o termo "forma expressável" se refere a um construto de gene que contêm os elementos regulatórios necessários operavelmente ligados a uma sequência de codificação que codifica uma proteína, de tal modo que quando presente na célula de um sujeito, a sequência de codificação será expressa.

[00122] O termo "homólogo", tal como aqui utilizado, refere-se ao grau de ccomplementaridade. Pode haver uma homologia parcial ou uma homologia completa (isto é, identidade). Uma sequência parcialmente complementar que pelo menos parcialmente inibe uma sequência completamente complementar da hibridação com um ácido nucleico alvo é referida usando o termo funcional "substancialmente homólogo". Quando usado em referência a uma sequência de ácido nucleico de fita dupla, como um cDNA ou clone genômico, o termo "substancialmente homólogo" como utilizado neste documento, refere- se a uma sonda que pode hibridar com uma fita da sequência de ácido nucleico de fita dupla sob condições de baixa estringência. Quando usado em referência a uma sequência de ácidos nucleicos de fita única, o termo "substancialmente homólogo", como utilizado neste documento, refere-se a uma sonda que pode hibridizar para (isto é, é o complemento de) uma sequência modelo de ácido nucleico de fita simples sob condições de baixa estringência.

[00123] "“Idêntico" ou "identidade", tal como aqui utilizado no contexto de dois ou mais ácidos nucleicos ou sequências polipeptídicas, podem significar que as sequências têm uma porcentagem especificada de resíduos que são as mesmas ao longo de uma região especificada. A porcentagem pode ser calculada por alinhamento ótimo das duas sequências, comparando as duas sequências sobre a região especificada, determinando o número de posições em que o resíduo idêntico ocorre em ambas as sequências para produzir o número de posições "correspondentes, dividindo o número de posições correspondentes pelo número total de posições na região especificada, e multiplicando o resultado por 100 para produzir a porcentagem de identidade da sequência. Em casos em que as duas sequências são de comprimentos diferentes ou em que o alinhamento produz uma ou mais extremidades espaçadas e a região especificada de comparação inclui apenas uma única sequência, os resíduos da sequência única são incluídos no denominador, mas não no numerador do cálculo. Ao comparar o DNA e o RNA, timina (T) e uracil (U) podem ser considerados equivalentes. A identidade pode ser executada manualmente ou usando um algoritmo de sequência de computador, como o BLAST ou BLAST 2.0.

[00124] —A"impedância", conforme usada neste documento, pode ser usada ao discutir o mecanismo de feedback e pode ser convertida em um valor atual de acordo com a lei de Ohm, permitindo comparações com a corrente predefinida.

[00125] “Resposta imune", tal como aqui utilizado, significa a ativação de um sistema imunológico do hospedeiro, por exemplo, o de um mamífero, em resposta à introdução de antígeno. A resposta imune pode estar na forma de uma resposta celular ou humoral, ou ambas.

[00126] "Ácido nucleico" ou "oligonucleotídeo" ou "polinucleotídeo", como usado neste documento, significa pelo menos dois nucleotídeos covalentemente ligados entre si. A representação de uma fita simples também define a sequência da fita complementar. Assim, um ácido nucleico também engloba a fita complementar de uma fita simples representada. Muitas variantes de um ácido nucleico podem ser usadas para a mesma finalidade que um determinado ácido nucleico. Assim, um ácido nucleico também engloba substancialmente ácidos nucleicos idênticos e complementos dos mesmos. Uma fita única fornece uma sonda que pode hibridizar a uma sequência-alvo sob condições restritivas de hibridização. Assim, um ácido nucleico também engloba uma sonda que se hibridiza sob condições de hibridização rigorosas.

[00127] Os ácidos nucleicos podem ser de fita única ou de fita dupla, ou podem conter porções das sequências de fita dupla ou de fita única. O ácido nucleico pode ser o DNA, genômico e cDNA, RNA ou um híbrido, onde o ácido nucleico pode conter combinações de deoxirribo- e ribo-nucleotídeos e combinações de bases incluindo uracila, adenina, timina, citosina, guanina, inosina, xantina hipoxantina, isocitosina e isoguanina. Os ácidos nucleicos podem ser obtidos por métodos de síntese química ou por métodos recombinantes.

[00128] "“Operacionalmente ligado", como usado aqui, significa que a expressão de um gene está sob o controle de um promotor com o qual ele está espacialmente conectado. Um promotor pode ser posicionado 5' (a montante) ou 3' (a jusante) de um gene sob seu controle. À distância entre o promotor e um gene pode ser aproximadamente a mesma que a distância entre aquele promotor e o gene que ele controla no gene do qual o promotor é derivado. Como é conhecido na técnica, a variação desta distância pode ser ajustada sem perda da função do promotor.

[00129] Um "peptídeo", "proteína" ou "polipeptídeo", como utilizado neste documento, pode significar uma sequência de aminoácidos ligados e pode ser natural, sintético ou uma modificação ou combinação de natural e sintético.

[00130] "Promotor", como utilizado neste documento, significa uma molécula sintética ou naturalmente derivada que é capaz de conferir, ativar ou potencializar a expressão de um ácido nucleico em uma célula. Um promotor pode compreender uma ou mais sequências regulatórias transcricionais específicas para potencializar ainda mais a expressão e/ou para alterar a expressão espacial e/ou expressão temporal de um ácido nucleico em uma célula. Um promotor também pode compreender elementos acentuadores distais ou repressores, que podem ser localizados, tanto quanto milhares de pares de base, a partir do sítio de início da transcrição. Um promotor pode ser derivado de fontes que incluem vírus, bactérias, fungos, plantas, insetos e animais. Um promotor pode regular a expressão de um componente de gene constitutivamente, ou diferencialmente em relação à célula, ao tecido ou ao órgão em que a expressão ocorre ou, em relação ao estágio de desenvolvimento em que a expressão ocorre, ou em resposta a estímulos externos, tais como estresses fisiológicos, patogênicos, íons metálicos, ou agentes de indução. Exemplos representativos de promotores incluem o promotor do bacteriófago T7, promotor do bacteriófago T3, promotor SP6, promotor operador lac, promotor tac, promotor SV40 tardio, promotor SV40 precoce, promotor RSV-LTR, promotor IE de CMV, promotor SV40 precoce ou promotor SV40 tardio, promotor CMV IE e promotor imediato do citomegalovírus humano (hOCMV). Em certas modalidades, o promotor é um promotor de hoMV.

[00131] "“Peptídeo sinal" e "sequência líder" são usados de forma intercambiável neste documento e se referem a uma sequência de aminoácido que pode ser ligada no amino terminal de uma proteína estabelecida neste documento. Peptídeos sinal/sequências líderes normalmente direcionam a localização de uma proteína. Peptídeos sinal/sequências principais usados neste documento preferencialmente facilitam a secreção da proteína a partir da célula em que são produzidos. Peptídeos sinal/sequências líderes são frequentemente clivados do restante da proteína, frequentemente referidos como a proteína madura, mediante a secreção da célula. Os peptídeos sinal/sequências líderes estão ligados no terminal amino (isto é, terminal N) da proteína.

[00132] "Condições restritivas de hibridização", tal como aqui utilizado, significa que as condições sob as quais uma primeira sequência de ácido nucleico (por exemplo, sonda) irá hibridizar para uma segunda sequência de ácido nucleico (por exemplo, alvo), tal como em uma mistura complexa de ácidos nucleicos. Condições restritivas são dependentes da sequência e serão diferentes em diferentes circunstâncias. As condições restritivas podem ser selecionadas para ser de cerca de 5 a 10ºC menor que o ponto de fusão térmica (Tm) para a sequência específica a um pH de força iônica definido. A Tm pode ser a temperatura (força iônica, pH e concentração nucleica definidos) à qual 50% das sondas complementares ao alvo hibridizam para a sequência alvo em equilíbrio (como as sequências alvo estão presentes em excesso, a Tm, 50% das sondas estão ocupadas em equilíbrio). Condições restritivas podem ser aquelas em que a concentração de sal é inferior a cerca de 1,0 M de íon de sódio, tal como uma concentração de aproximadamente 0,01-1,0 M de íons de sódio (ou outros sais) a um pH de 7,0 a 8,3, e a temperatura é pelo menos cerca de 30ºC para sondas curtas (por exemplo, aproximadamente 10-50 nucleotídeos) e pelo menos cerca de 60ºC para sondas longas (por exemplo, maior do que cerca de 50 nucleotídeos). As condições restritivas também podem ser alcançadas com a adição de agentes desestabilizantes, como a formamida. Para a hibridização seletiva ou específica, um sinal positivo pode ser hibridização de fundo pelo menos de 2 a 10 vezes. Exemplos de condições restritivas de hibridização incluem o seguinte: formamida a 50%, SSC 5x e SDS a 1%, incubando a 42ºC, ou SSC 5x, SDS a 1%,

incubando a 65ºC, com lavagem em SSC 0,2x e 0,1% De SDS a 65ºC.

[00133] "Sujeito", tal como aqui utilizado pode significar um mamífero que deseja ou que possui necessidade de ser imunizado com a vacina descrita aqui. O mamífero pode ser um humano, um primata não humano, como um chimpanzé, um cachorro, um gato, um cavalo, uma vaca, um camundongo ou um rato.

[00134] "“Substancialmente complementar", como utilizado neste documento, significa que uma primeira sequência é pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica ao complemento de uma segunda sequência sobre uma região de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540 ou mais nucleotídeos ou aminoácidos, ou que as duas sequências hibridizam sob condições rigorosas de hibridação.

[00135] "Substancialmente idêntico(a)", tal como aqui utilizado, significa que a primeira e a segunda sequências são pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idênticas a uma região de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540, ou mais nucleotídeos ou aminoácidos, ou em relação a ácidos nucleicos, se a primeira sequência for substancialmente complementar ao complemento da segunda sequência.

[00136] "Tratar", "tratamento" ou "tratando", como aqui utilizado, pode significar proteger um animal de uma doença através de meios de prevenir, suprimir, reprimir ou eliminar completamente a doença. Prevenir a doença envolve administrar uma vacina da presente invenção a um animal antes da aparição da doença. Suprimir a doença envolve administrar uma vacina da presente invenção a um sujeito após a indução da doença, mas antes de seu aparecimento clínico. Reprimir a doença envolve administrar uma vacina da presente invenção a um animal após aparecimento clínico da doença.

[00137] "Variante", como utilizado neste documento com relação a um ácido nucleico, significa (i) uma porção ou fragmento de uma sequência de nucleotídeos referenciada; (ii) o complemento de uma sequência de nucleotídeos referenciada ou parte da mesma; (iii) um ácido nucleico que é substancialmente idêntico a um ácido nucleico referenciado ou ao complemento deste; ou (iv) um ácido nucleico que hibridiza sob condições restritivas para o ácido nucleico referenciado, seu complemento ou uma sequência substancialmente idêntica ao mesmo.

[00138] "Variante", como aqui utilizado em relação a um peptídeo ou polipeptídeo, significa um peptídeo ou polipeptídeo que difere na sequência de aminoácidos pela inserção, exclusão ou substituição conservadora de aminoácidos, mas retém pelo menos uma atividade biológica. Variante também pode significar uma proteína com uma sequência de aminoácidos que é substancialmente idêntica a uma proteína referenciada com uma sequência de aminoácidos que retém pelo menos uma atividade biológica. Uma substituição conservativa de um aminoácido, isto é, a substituição de um aminoácido por um aminoácido diferente de propriedades semelhantes (por exemplo, hidrofilia, grau e distribuição das regiões carregadas) é reconhecida na técnica como normalmente envolvendo uma pequena alteração. Estas pequenas alterações podem ser identificadas, em parte, considerando o Índice hidropático de aminoácidos, como entendido na técnica. Kyte et al, J. Mol. Biol. 157: 105-132 (1982). O índice hidropático de um aminoácido é baseado em uma consideração de sua hidrofobicidade e carga. É conhecido na técnica que os aminoácidos de índices hidropáticos semelhantes podem ser substituídos e ainda manter a função proteica. Em um aspecto, os aminoácidos tendo índices hidropáticos de +2 são substituídos. A hidrofilia dos aminoácidos também pode ser usada para revelar substituições que resultariam em proteínas que mantêm a função biológica. Uma consideração da hidrofilia dos aminoácidos no contexto de um peptídeo permite o cálculo da maior hidrofilia média local desse peptídeo, uma medida útil que foi relatada por se correlacionar bem com a antigenicidade e imunogenicidade. Patente U.S. 4.554.101, incorporada aqui integralmente por referência. A substituição de aminoácidos com valores de hidrofilia semelhantes pode resultar em peptídeos que retêm a atividade biológica, por exemplo, imunogenicidade, como é entendido na técnica. As substituições podem ser realizadas com aminoácidos com valores de hidrofilia dentro de + 2 um do outro. O índice de hidrofobicidade e o valor de hidrofilia dos aminoácidos são influenciados pela cadeia lateral particular desse aminoácido. Consistente com essa observação, as substituições de aminoácidos que são compatíveis com a função biológica são compreendidas como dependentes da semelhança relativa dos aminoácidos e, particularmente, das cadeias laterais desses aminoácidos, conforme revelado pela hidrofobicidade, hidrofilia, carga, tamanho e outras propriedades.

[00139] Uma variante pode ser uma sequência de ácido nucleico que é substancialmente idêntica ao longo do comprimento total da sequência de gene total ou um fragmento do mesmo. A sequência de ácido nucleico pode ser 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica ao longo de toda a extensão da sequência do gene ou de um fragmento da mesma. Uma variante pode ser uma sequência de aminoácido que é substancialmente idêntica ao longo do comprimento total da sequência de aminoácido ou um fragmento do mesmo. À sequência de ácidos nucleicos pode ser de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica ao longo do comprimento total da sequência de aminoácido ou um fragmento do mesmo.

[00140] "Vetor", tal como aqui utilizado, significa uma sequência de ácido nucleico, que contém uma origem de replicação. Um vetor pode ser um vetor viral, bacteriófago, cromossomo artificial bacteriano ou cromossomo artificial de levedura. Um vetor pode ser um vetor de DNA ou RNA. Um vetor pode ser um vetor extracromossômico autorreplicante e, de preferência, é um plasmídeo de DNA. O vetor pode conter ou incluir uma ou mais sequências de ácido nucleico heterólogas. Vacina São fornecidas aqui vacinas compreendendo um antígeno de MUC16 ou uma molécula de ácido nucleico que codifica um antígeno de MUC16, como aqui descrito. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que codificam um antígeno de MUC16 como descrito aqui. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650- 1341 da SEQ |D Nº: 8. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8.

[00141] Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem os nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº 1; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem os nucleotídeos 55- 1926 da SEQ ID Nº: 3; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem os nucleotídeos 55- 2130 da SEQ ID Nº: 5; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem os nucleotídeos 55- 1926 e 1948-4023 SEQ ID Nº: 7; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº 7; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem nucleotídeos 55-4023 SEQ ID Nº: 7; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7.

[00142] Emalgumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica a SEQ ID Nº: 2; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento da SEQ ID Nº: 2; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica a SEQ ID Nº: 4; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento da SEQ ID Nº: 4; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica a SEQ ID Nº: 6; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento da SEQ ID Nº: 6; uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 8; uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento da SEQ ID Nº: 8;

uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e/ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8.

[00143] Emalgumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem SEQ ID Nº: 1; um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 1; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 1; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 1. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem SEQ ID Nº: 3; um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 3; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 3; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 3. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem SEQ ID Nº: 5; um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 5; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 5; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 5. Em algumas modalidades, as vacinas compreendem uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem SEQ ID Nº: 7; um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 7; um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 7; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 7.

[00144] Em algumas modalidades, as vacinas compreendem um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende os aminoácidos 19- 1490 da SEQ ID Nº: 2; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2 uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19- 1490 da SEQ ID Nº: 2.

[00145] Em algumas modalidades, a vacina compreende um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende a SEQ ID Nº: 2; um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento da SEQ ID Nº: 2; uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 2.

[00146] Em algumas modalidades, as vacinas compreendem um antígeno de MUC16, em que o antígeno compreende os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 da SEQ |D Nº: 4; uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19- 642 da SEQID Nº: 4.

[00147] Em algumas modalidades, a vacina compreende um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende a SEQ ID Nº: 4; um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento da SEQ

ID Nº: 4; uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 4.

[00148] Em algumas modalidades, as vacinas compreendem um antígeno de MUC16, em que o antígeno compreende os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; e/um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6.

[00149] Em algumas modalidades, a vacina compreende um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende a SEQ ID Nº: 6; um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento da SEQ ID Nº: 6; uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 6.

[00150] Em algumas modalidades, a vacina compreende um antígeno MUC16, em que o antígeno compreende os aminoácidos 19- 642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8.

[00151] Em algumas modalidades, a vacina compreende um antígeno de MUC16, em que o antígeno compreende os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8.

[00152] Em algumas modalidades, a vacina compreende um antígeno de MUC16, em que o antígeno compreende a SEQ ID Nº: 8; um fragmento compreendendo pelo menos 90% do comprimento da SEQ ID Nº: 8; uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e/ou um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 8.

[00153] As vacinas podem ser capazes de gerar em um sujeito uma resposta imune contra o antígeno. A resposta imune pode ser uma resposta imune terapêutica ou profilática. As vacinas podem ser usadas para proteger contra o câncer, por exemplo, um câncer ou tumor expressando MUC16. As vacinas podem ser usadas para prevenir e/ou tratar um tumor que expressa MUC16 em um sujeito em necessidade do mesmo. As vacinas podem induzir respostas celulares e/ou anticorpos contra MUC16 e contra tumores que expressam MUC16. Em uma modalidade, as vacinas podem ser usadas para proteger, prevenir e/ou tratar ou induzir uma resposta celular e/ou anticorpo contra células cancerígenas do ovário que expressam MUC16, especificamente células epiteliais de câncer de ovário que expressam MUC16, mais especificamente células de câncer de ovário seroso que expressam MUC16.

[00154] O desenvolvimento de uma vacina contra o câncer, como descrito aqui, compreende identificar um antígeno do câncer, por exemplo, MUC16, que não é reconhecido pelo sistema imunológico e é um autoantígeno expresso aberrante. O antígeno de câncer é alterado de um autoantígeno para um antígeno estrangeiro, a fim de ser reconhecido pelo sistema imunológico. O redesenho do ácido nucleico e da sequência de aminoácidos do antígeno de câncer recombinante de um antígeno para um antígeno estrangeiro, quebra a tolerância do antígeno pelo sistema imunológico. Para quebrar a tolerância, várias medidas de redesenho podem ser aplicadas ao antígeno de câncer como descrito abaixo.

[00155] O antígeno de câncer recombinante da vacina não é reconhecido como auto, quebrando, portanto, a tolerância. A quebra da tolerância pode induzir respostas de anticorpos de células T específicas de antígeno e/ou de altos níveis, induzindo ou provocando assim uma resposta imune que é dirigida ou reativa contra o câncer ou tumor que expressa o antígeno. Em algumas modalidades, a resposta imune induzida ou provocada pode ser uma resposta imune celular, humoral ou tanto celular quanto humoral. Em algumas modalidades, a resposta imune celular induzida ou provocada pode incluir indução ou secreção de interferon gama (IFN-g) e/ou fator de necrose tumoral alfa (TNF-a). Em outras modalidades, a resposta imune induzida ou provocada pode reduzir ou inibir um ou mais fatores de imunossupressão que promovem o crescimento do tumor ou câncer que expressa o antígeno, por exemplo, mas não limitados a fatores que suprarregulam a apresentação de MHC, fatores que suprarregulam as células T reguladoras específicas de antígeno (Tregs), PD-L1, FasL, citocinas, como IL-10 e TFG-B, macrófagos associados a tumores, fibroblastos associados a tumores, fatores solúveis produzidos por células imunossupressoras, CTLA-4, PD-1, MDSCs, MCP-1 e uma molécula de ponto de verificação imunológico.

[00156] A vacina pode ser uma vacina de DNA. As vacinas de DNA são divulgadas nas Patentes U.S. 5.593.972, 5.739.118, 5.817.637,

5.830.876, 5.962.428, 5.981.505, 5.580.859, 5.703.055 e 5.676.594, que são aqui incorporadas totalmente por referência. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico pode compreender um vetor de expressão. A vacina de DNA pode compreender adicionalmente elementos ou reagentes que a inibem de integrar o cromossomo.

[00157] A vacina pode incluir um RNA que codifica o antígeno do câncer. A vacina de RNA pode ser introduzida na célula.

[00158] A vacina pode ser uma vacina viva atenuada, uma vacina que usa vetores recombinantes para administrar vacinas de antígeno, subunidades e glicoproteínas, por exemplo, mas não limitadas, às vacinas descritas nas Patentes U.S.: 4.510.245; 4.797.368; 4.722.848;

4.790.987; 4.920.209; 5.017.487; 5.077.044; 5.110.587; 5.112.749;

5.174.993; 5.223.424; 5.225.336; 5.240.703; 5.242.829; 5.294.441;

5.294.548; 5.310.668; 5.387.744; 5.389.368; 5.424.065; 5.451.499;

5.453.364; 5.462.734; 5,470,734; 5.474.935; 5.482.713; 5.591.439;

5.643.579; 5.650.309; 5.698.202; 5.955.088; 6.034.298; 6.042.836;

6.156.319 e 6.589.529, que são aqui incorporadas por referência.

[00159] Em algumas modalidades, a vacina de ácido nucleico pode ainda compreender um adjuvante molecular; em alguns casos, o adjuvante molecular pode ser IL-12, IL-15, IL-28, 11-28, IL-31, 11-33 e/ou RANTES, e em alguns casos, o adjuvante molecular é um inibidor do ponto de verificação, incluindo antígeno linfocitário T anticitotóxico 4 (CTLA-4), antirreceptor de morte programada 1 (PD-1) e gene de ativação antilinfócito (LAG-3). A sequência de codificação para IL-12, IL- 15, I1L-28, e/ou RANTES pode ser incluída em uma ou mais moléculas de ácido nucleico que compreendem a sequência de codificação para um ou mais antígenos. A sequência de codificação para IL-12, IL-15, IL- 28, 11-31, 11-33 e/ou RANTES pode ser codificada pela vacina de ácido nucleico, como no mesmo plasmídeo, ou elas podem ser incluídas em moléculas de ácido nucleico, como um plasmídeo separado.

[00160] A vacina da presente invenção pode ter características requeridas das vacinas eficazes, tais como sendo seguras, de forma que a própria vacina não causa doença ou morte; sendo protetora contra doença; induzindo o anticorpo de neutralização; induzindo respostas de célula T de proteção; e fornecendo facilitação da administração, poucos efeitos colaterais, estabilidade biológica e baixo custo por dose. À vacina pode realizar algumas ou todas essas características, contendo o antígeno de câncer, como discutido abaixo.

[00161] A vacina pode ainda compreender um ou mais inibidores de uma ou mais moléculas de ponto de verificação imune (isto é, um inibidor de ponto de verificação imune). As moléculas do ponto de verificação imune são descritas abaixo em mais detalhes. O inibidor de ponto de verificação imune é qualquer ácido nucleico ou proteína que impeça a supressão de qualquer componente no sistema imunológico, tais como apresentação de classe de MHC, apresentação e/ou diferenciação de células T, apresentação e/ou diferenciação de células B e citocina, quimiocina ou sinalização para proliferação e/ou diferenciação de células imunes. Como também descrito abaixo em mais detalhes, a vacina pode ser combinada ainda mais com anticorpos para inibidores do ponto de verificação, como PD-1 e PDL-1, para aumentar a estimulação das respostas imunes celulares e humorais. O uso de anticorpos anti-PD-1 ou anti-PDL-1 impede que PD-1 ou PDL-1 suprimam as respostas das células T e/ou das células B. Antígeno

[00162] Como descrito acima, a vacina pode compreender um antígeno ou uma molécula de ácido nucleico que codifica um antígeno. O antígeno pode ser MUC16, um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação dos mesmos. MUC16 é um membro da família das mucinas das glicoproteínas de alto peso molecular. As mucinas são expressas por células epiteliais especializadas ao redor da superfície luminal de vários órgãos do trato respiratório, gastrointestinal e reprodutivo. As mucinas têm papéis diretos e indiretos na manutenção da integridade epitelial e na lubrificação e proteção de superfícies epiteliais.

[00163] “MUCI16 foi associado à formação de tumores ou câncer. O domínio de repetição em tandem de MUC16 contém um epítopo peptídico repetitivo, CA125, que se tornou o biomarcador padrão-ouro para vários cenários clínicos que ocorrem durante o diagnóstico e tratamento do câncer de ovário, incluindo: 1) triagem para detecção precoce, 2) distinguir entre doença benigna e maligna em mulheres na pré e pós-menopausa que apresentam massas pélvicas e 3) monitorar a resposta à terapia. Além disso, estudos funcionais demonstraram que MUC16 contribui para a transformação e metástase de tumores ovarianos.

[00164] —Porconseguinte, a vacina pode ser usada para tratar sujeitos que sofrem de câncer ou tumores que expressam MUC-16. Em algumas modalidades, o câncer é câncer de ovário. O antígeno de MUC16 pode diferir da MUC16 nativa "normal" e, portanto, fornecer terapia ou profilaxia contra um tumor que expressa o antígeno de MUC16. Por conseguinte, são fornecidas aqui sequências de antígeno de MUC16 que diferem da sequência de MUC16 nativa e moléculas de ácido nucleico que codificam essas sequências de antígeno de MUC16 (isto é, genes ou sequências recombinadas ou mutadas de MUC16).

[00165] Moléculas de ácido nucleico isoladas compreendendo as sequências heterólogas descritas acima são fornecidas. São fornecidas moléculas de ácido nucleico que consistem nas sequências heterólogas descritas acima. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55-4470 da SEQ ID Nº: 1; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que está em pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55- 4470 da SEQ ID Nº: 1. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que seja pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 1; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº:

1. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 1.

[00166] Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%,

93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 da SEQ ID Nº: 3. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 3; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 3. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 3.

[00167] Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; (c) um fragmento que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que está em pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55-2130 da SEQ ID Nº: 5. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de todo um comprimento de SEQ ID Nº: 5; (c) um fragmento que seja pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 5. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 5.

[00168] Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento — inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 da SEQ ID Nº:

7. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-4023 SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99 um comprimento inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo os nucleotídeos 55-4023 de SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos nucleotídeos 55-4023 da SEQ ID Nº: 7. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que seja pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 7. Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 7

[00169] São fornecidas aqui sequências de ácidos nucleicos que codificam antígenos de MUC16. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de todo um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica ao amino 19-1490 da SEQ ID Nº: 2. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 2 são fornecidas.

[00170] Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de um proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica ao amino 19-642 da SEQ ID Nº: 4. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 4 são fornecidas.

[00171] Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de um proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica ao amino 19-710 da SEQ ID Nº: 6. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de SEQ ID NO 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 6 são fornecidas.

[00172] Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19- 642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de um proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95%, 96%,

97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8. Em algumas modalidades, moléculas de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica a SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 8 são fornecidas.

[00173] “Moléculas de ácido nucleico isoladas compreendendo as sequências heterólogas descritas acima podem ser incorporadas em vetores como plasmídeos, vetores virais e outras formas de moléculas de ácido nucleico, como descrito abaixo.

[00174] Moléculas de proteína compreendendo as sequências de aminoácidos heterólogos descritas acima são fornecidas. São fornecidas moléculas de proteína que consistem nas sequências de aminoácidos heterólogos descritas acima. São aqui fornecidas proteínas e polipeptídeos que possuem as sequências descritas acima. As proteínas e o polipeptídeo podem ser referidos como antígenos de MUC16 e imunógenos de MUC16. Os antígenos de MUC16 são capazes de provocar uma resposta imune contra os tumores que expressam um antígeno de MUC16. Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-1490 da SEQ ID Nº: 2. Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 2; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e (c) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 2. Em algumas modalidades, a proteína compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 2.

[00175] Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-642 da SEQ ID Nº: 4. Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 4; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e (c) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que seja pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 4. Em algumas modalidades, a proteína compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº:

4.

[00176] Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-710 da SEQ ID Nº: 6. Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 6; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e (c) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 6. Em algumas modalidades, a proteína compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 6.

[00177] Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 da SEQ ID Nº: 8. Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo os aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico aos aminoácidos 19-1341 da SEQ ID Nº: 8. Em algumas modalidades, proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: (a) SEQ ID Nº: 8; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro da SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e (c) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácidos que seja pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntico à SEQ ID Nº: 8. Em algumas modalidades, a proteína compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº:

8.

[00178] Em um aspecto, é desejável que o antígeno de consenso forneça transcrição e tradução aprimoradas, incluindo um ou mais dos seguintes itens: sequência líder de baixo teor de GC para aumentar a transcrição; estabilidade do MRNA e otimização do códon; e, na medida do possível, eliminação dos motivos de sequência de ação cis (isto é, caixas-TATA internas).

[00179] Oantígeno MUC16 pode ser uma sequência de antígeno de consenso (ou imunógeno) derivada de duas ou mais espécies. Em algumas modalidades, o antígeno de consenso pode compreender um ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16. O antígeno de consenso de MUC16 pode compreender uma ou mais mutações no ectodomínio e/ou domínio transmembranar. As uma ou mais mutações podem incluir uma substituição de um ou mais dos aminoácidos envolvidos na N-glicosilação. As uma ou mais mutações podem compreender uma substituição de asparagina por alanina. Por conseguinte, em algumas modalidades, as uma ou mais mutações podem substituir 1, 2 ou 3 aminoácidos no ectodomínio e/ou no domínio transmembranar de MUC16.

[00180] Em algumas modalidades, o antígeno MUC16 pode ainda compreender qualquer combinação de uma ou mais sequências repetidas de micro-consenso (RMC) derivadas de sequências nativas de RMC, por exemplo, RMC1, RMC2, RMC3 e/ou RMCA4. Em algumas modalidades, o antígeno de MUC16 pode compreender qualquer combinação de uma ou mais sequências de repetição nativa (R), por exemplo, R59, R61, R62 e/ou R63. Em algumas modalidades, o antígeno de MUC16 compreende sequências RMC1, RMC2, RMC3,

RMC4, R61, R62 e R63. Em algumas modalidades, o antígeno de MUC16 compreende sequências RMC1, RMC2, RMC3, RMCA4, R59, R61, R62 e R63. Em algumas modalidades, o antígeno de MUC16 compreende sequências RMC1, RMC2, RMC3 e RMC4. Em algumas modalidades, o antígeno de MUC16 compreende sequências R61, R62 e R63.

[00181] OantígenodeMUC16 pode compreender modificações para melhorar a expressão. A modificação pode incluir otimização de códon, otimização de RNA, adição de uma sequência Kozak (por exemplo, GCC ACC) para aumentar a iniciação da tradução e/ou a adição de uma sequência líder de imunoglobulina para aumentar a imunogenicidade do antígeno de MUC16. O antígeno de MUC16 pode compreender um peptídeo sinal, como um peptídeo sinal de imunoglobulina, por exemplo, mas não limitado a, um peptídeo sinal imunoglobulina E (IgE) ou imunoglobulina G (IgG).

[00182] OantígenodeMUC16 pode compreender modificações para otimização do epítopo. Em algumas modalidades, um sítio de clivagem tal pode ser inserido entre sequências RMC, entre sequências R ou na interface de sequências RMC ou R. O sítio de clivagem pode ser um sítio de clivagem de furina. Em certas modalidades, um sítio de clivagem de furina pode ser inserido entre RMCA4 e R61. Vacina Combinada com o Inibidor do Ponto de Verificação Imune

[00183] A vacina pode ainda compreender um ou mais inibidores de uma ou mais moléculas de ponto de verificação imune (isto é, um inibidor de ponto de verificação imune). As moléculas do ponto de verificação imune são descritas abaixo em mais detalhes. O inibidor de ponto de verificação imune é qualquer ácido nucleico ou proteína que impeça a supressão de qualquer componente no sistema imunológico, tais como apresentação de classe de MHC, apresentação e/ou diferenciação de células T, apresentação e/ou diferenciação de células

B e citocina, quimiocina ou sinalização para proliferação e/ou diferenciação de células imunes.

[00184] Um tal inibidor pode ser uma sequência de ácido nucleico, uma sequência de aminoácidos, uma molécula pequena ou uma combinação das mesmas. A sequência de ácido nucleico pode ser DNA, RNA, cDNA, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. O ácido nucleico também pode incluir sequências adicionais que codificam sequências de ligantes ou de etiquetas que estão ligadas ao inibidor do ponto de verificação imune por uma ligação peptídica. A molécula pequena pode ter um baixo peso molecular, por exemplo, menos de 800 Daltons, composto orgânico ou inorgânico que pode servir como substrato enzimático, ligando (ou análogo do mesmo) ligado por uma proteína ou ácido nucleico, ou regulador de um processo biológico. A sequência de aminoácido pode ser uma proteína, um peptídeo, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos.

[00185] Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune pode ser uma ou mais sequências de ácido nucleico que codificam um anticorpo, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. Em outras modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune pode ser um anticorpo, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. a. Molécula do Ponto de Verificação Imune

[00186] O inibidor de uma molécula de ponto de verificação imune pode ser uma sequência de ácido nucleico, uma sequência de aminoácidos, uma molécula pequena ou uma combinação dos mesmos. A sequência de ácido nucleico pode ser DNA, RNA, cDNA, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. O ácido nucleico também pode incluir sequências adicionais que codificam sequências de ligantes ou de etiquetas que estão ligadas ao inibidor do ponto de verificação imune por uma ligação peptídica. À molécula pequena pode ter um baixo peso molecular, por exemplo, menos de 800 Daltons, composto orgânico ou inorgânico que pode servir como substrato enzimático, ligando (ou análogo do mesmo) ligado por uma proteína ou ácido nucleico, ou regulador de um processo biológico. A sequência de aminoácido pode ser uma proteína, um peptídeo, uma variante dos mesmos, um fragmento dos mesmos ou uma combinação dos mesmos. (1) PD-1 e PD-L1

[00187] A molécula do ponto de verificação imune pode programar a proteína de morte celular 1 (PD-I), ligando de morte celular programada (PD-L1), um fragmento do mesmo, uma variante do mesmo ou uma combinação dos mesmos. PD-1 é uma proteína de superfície celular codificada pelo gene PDCD1. PD-1 é um membro da superfamília da imunoglobulina e é expressa em células T e células pró-B e, portanto, contribui para o destino e/ou diferenciação dessas células. Em particular, PD-1 é uma proteína de membrana tipo 1 da família de reguladores de células T CD28/CTLA-4 e regula negativamente os sinais do receptor de células T (TCR), regulando negativamente as respostas imunes. PD-1 pode regular negativamente as respostas das células T CD8+ e, assim, inibir a citotoxicidade mediada por CD8 e aumentar o crescimento do tumor.

[00188] PD-1tem dois igandos, PD-L1 e PD-L2, que são membros da família B7. PD-L1 é regulada em excesso em macrófagos e células dendríticas (DCs) em resposta ao tratamento com LPS e GM-CSF e em células T e células B mediante sinalização de receptores de células B e TCR. PD-L1 é expressa por muitas linhagens de células tumorais, incluindo mielomas, mastocitomas e melanomas.

77/I158 b. Anticorpo da Molécula do Ponto de Verificação Anti-Imune

[00189] “Como descrito acima, o inibidor do ponto de verificação imune pode ser um anticorpo. O anticorpo pode se ligar ou reagir com um antígeno (isto é, a molécula do ponto de verificação imune descrita acima). Por conseguinte, o anticorpo pode ser considerado um anticorpo da molécula de ponto de verificação anti-imune ou um anticorpo da molécula de ponto de verificação imune. O anticorpo pode ser codificado por uma sequência de ácido nucleico contida nele

[00190] O anticorpo pode incluir um polipeptídeo de cadeia pesada e um polipeptídeo de cadeia leve. O polipeptídeo de cadeia pesada pode incluir uma região variável de cadeia pesada (VH) e/ou pelo menos uma região constante de cadeia pesada (CH). A pelo menos uma região constante da cadeia pesada pode incluir uma região constante da cadeia pesada 1 (CH1), uma região constante da cadeia pesada 2 (CH2) e uma região constante da cadeia pesada 3 (CH3) e/ou uma região de dobradiça.

[00191] Em algumas modalidades, o polipeptídeo de cadeia pesada pode incluir uma região VH e uma região CH1. Em outras modalidades, o polipeptídeo de cadeia pesada pode incluir uma região VH, uma região CH1, uma região de dobradiça, uma região CH2 e uma região CH3.

[00192] O polipeptídeo de cadeia pesada pode incluir um conjunto de regiões determinantes de complementaridade ("CDR"). O conjunto de CDR pode conter três regiões hipervariáveis da região VH. Procedendo do terminal N do polipeptídeo da cadeia pesada, essas CDRs são denotadas "CDR1", "CDR2" e "CDR3", respectivamente. CDR1, CDR2 e CDR3 do polipeptídeo da cadeia pesada podem contribuir para a ligação ou reconhecimento do antígeno.

[00193] O polipeptídeo de cadeia leve pode incluir uma região de cadeia leve variável (VL) e/ou uma região de cadeia leve constante (CL). O polipeptídeo de cadeia leve pode incluir um conjunto de regiões determinantes de complementaridade ("CDR"). O conjunto de CDR pode conter três regiões hipervariáveis da região VL. Continuando do terminal N do polipeptídeo da cadeia leve, essas CDRs são denotadas "CDR1", "CDR2" e "CDR3", respectivamente. CDR1, CDR2 e CDR3 do polipeptídeo da cadeia leve podem contribuir para a ligação ou reconhecimento do antígeno.

[00194] O anticorpo pode compreender um conjunto de regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada e cadeia leve ("CDR"), interposto respectivamente entre um conjunto de cadeia pesada e uma estrutura de cadeia leve ("FR") que fornece suporte às CDRs e define a relação espacial das CDRs uma em relação à outra. O conjunto de CDR pode conter três regiões hipervariáveis de uma região V de cadeia pesada ou leve. Continuando do terminal N de uma cadeia pesada ou leve, essas regiões são indicadas como "CDR1", "CDR2" e "CDR3", respectivamente. Um sítio de ligação ao antígeno, portanto, pode incluir seis CDRs, compreendendo o conjunto de CDR de cada região V de cadeia pesada e leve.

[00195] O anticorpo pode ser uma imunoglobulina (Ig). A Ig pode ser, por exemplo, IgA, IgM, IgD, IgE e IgG. A imunoglobulina pode incluir o polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve. O polipeptídeo de cadeia pesada da imunoglobulina pode incluir uma região VH, uma região CH1, uma região de dobradiça, uma região CH2 e uma região CH3. O polipeptídeo de cadeia leve da imunoglobulina pode incluir uma região VL e uma região CL.

[00196] Adicionalmente, a enzima proteolítica papaína cliva preferivelmente as moléculas de IgG para produzir vários fragmentos, dois dos quais (os fragmentos F (ab)) compreendem cada um heterodímero covalente que inclui um sítio de ligação ao antígeno intacto. A enzima pepsina é capaz de clivar moléculas de IgG para fornecer vários fragmentos, incluindo o fragmento F (ab')2, que compreende os dois sítios de ligação ao antígeno. Por conseguinte, o anticorpo pode ser o Fab ou F(ab')2. O Fab pode incluir o polipeptídeo de cadeia pesada e o polipeptídeo de cadeia leve. O polipeptídeo de cadeia pesada do Fab pode incluir a região VH e a região CH1. A cadeia leve do Fab pode incluir a região VL e a região CL.

[00197] O anticorpo pode ser um anticorpo policlonal ou monoclional. O anticorpo pode ser um anticorpo quimérico, um anticorpo de cadeia única, um anticorpo amadurecido por afinidade, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado ou um anticorpo totalmente humano. O anticorpo humanizado pode ser um anticorpo de uma espécie não humana que se liga ao antígeno desejado com uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs) da espécie não humana e regiões estruturais de uma molécula de imunoglobulina humana. (1) Anticorpo PD-1

[00198] O anticorpo da molécula de ponto de verificação anti-imune pode ser um anticorpo anti-PD-1 (também aqui referido como "anticorpo PD-1"), uma variante do mesmo, um fragmento do mesmo ou uma combinação dos mesmos. O anticorpo PD-1 pode ser o Nivolumabe. O anticorpo anti-PD-1 pode inibir a atividade de PD-1, induzindo, provocando ou aumentando uma resposta imune contra um tumor ou câncer e diminuindo o crescimento do tumor. (2) Anticorpo PD-L1

[00199] O anticorpo da molécula de ponto de verificação anti-imune pode ser um anticorpo anti-PD-L1 (também aqui referido como "anticorpo PD-L1"), uma variante do mesmo, um fragmento do mesmo ou uma combinação dos mesmos. O anticorpo anti-PD-L1 pode inibir a atividade de PD-L1, induzindo, provocando ou aumentando uma resposta imune contra um tumor ou câncer e diminuindo o crescimento do tumor.

Vetor

[00200] A vacina pode compreender um ou mais vetores que incluem um ácido nucleico heterólogo que codifica o antígeno de MUC16. Os um ou mais vetores podem ser capazes de expressar o antígeno em uma quantidade eficaz para provocar uma resposta imune no mamífero. O vetor pode compreender ácido nucleico heterólogo que codifica o antígeno. O vetor pode ter uma sequência de ácido nucleico contendo uma origem de replicação. O vetor pode ser um plasmídeo, bacteriófago, cromossomo artificial bacteriano ou cromossomo artificial de levedura. O vetor pode ser um vetor cromossômico extra de autorreplicação ou um vetor que se integra ao genoma do hospedeiro.

[00201] Os um ou mais vetores podem ser um construto de expressão, que geralmente é um plasmídeo usado para introduzir um gene específico em uma célula-alvo. Uma vez que o vetor de expressão esteja dentro da célula, a proteína que é codificada pelo gene é produzida pelos complexos ribossômicos das máquinas de transcrição e tradução celulares. O plasmídeo é frequentemente engenheirado para conter sequências “reguladoras que atuam como regiões intensificadoras e promotoras e levam à transcrição eficiente do gene transportado no vetor de expressão. Os vetores da presente invenção expressam grandes quantidades de RNA mensageiro estável e, portanto, proteínas.

[00202] Os vetores podem ter sinais de expressão como um promotor forte, um códon de terminação forte, ajuste da distância entre o promotor e o gene clonado e a inserção de uma sequência de terminação de transcrição e uma PTIS (sequência de iniciação de tradução portátil).

[00203] Os vetores podem compreender sequências de ácidos nucleicos operacionalmente ligadas a um elemento regulador selecionado de um promotor e um sinal de poliadenilação. Em algumas modalidades, o promotor é um promotor imediato do citomegalovírus humano (promotor do hCMV). Em algumas modalidades, o sinal de poliadenilação é um sinal de poliadenilação do hormônio do crescimento bovino (bGH poli A).

[00204] O vetor pode ser um plasmídeo circular ou um ácido nucleico linear. O plasmídeo circular e o ácido nucleico linear são capazes de direcionar a expressão de uma sequência nucleotídica específica em uma célula em questão apropriada. O vetor pode ter um promotor operacionalmente ligado à sequência nucleotídica que codifica o antígeno, que pode estar operacionalmente ligada aos sinais de terminação. O vetor também pode conter sequências necessárias para a tradução adequada da sequência nucleotídica, bem como sequências para clonar e subclonar o vetor e fragmentos dos mesmos. O vetor compreendendo a sequência nucleotídica de interesse pode ser quimérico, significando que pelo menos um de seus componentes é heterólogo em relação a pelo menos um de seus outros componentes. A expressão da sequência nucleotídica no cassete de expressão pode estar sob o controle de um promotor constitutivo ou de um promotor induzível, que inicia a transcrição apenas quando a célula hospedeira é exposta a algum estímulo externo específico. No caso de um organismo multicelular, o promotor também pode ser específico para um tecido ou órgão ou estágio de desenvolvimento específico.

[00205] O vetor pode ser um plasmídeo. O plasmídeo pode ser útil para transfectar células com ácido nucleico que codifica o antígeno, no qual as células hospedeiras transformadas são cultivadas e mantidas sob condições em que a expressão do antígeno ocorre.

[00206] O plasmídeo pode compreender uma sequência de ácido nucleico que codifica um ou mais dos vários antígenos divulgados acima, incluindo sequências de codificação que codificam antígeno de consenso sintético capaz de provocar uma resposta imune contra um antígeno, fragmentos dessas proteínas, variantes dessas proteínas, fragmentos de variantes ou proteínas de fusão que são constituídos por combinações de proteínas de consenso e/ou fragmentos de proteína de consenso e/ou variantes de proteína de consenso e/ou fragmentos de proteínas de consenso de variantes.

[00207] Em algumas modalidades, um plasmídeo pode ainda compreender a sequência de codificação que codifica o CCR20 sozinho ou como parte de um desses plasmídeos. Da mesma forma, os plasmídeos podem ainda compreender sequências de codificação para IL-12, I1L-15 e/ou 1L-28.

[00208] O plasmídeo pode ainda compreender um códon de iniciação, que pode estar a montante da sequência de codificação, e um códon de parada, que pode estar a jusante da sequência de codificação. O códon de iniciação e terminação pode estar in frame com a sequência de codificação.

[00209] O plasmídeo também pode compreender um promotor que está operacionalmente ligado à sequência de codificação. O promotor operacionalmente ligado à sequência de codificação pode ser um promotor do vírus símio 40 (SV40), um promotor do vírus do tumor mamário do camundongo (MMTV), um vírus da imunodeficiência humana (HIV ), como o promotor de repetição terminal longa (LTR) do vírus da imunodeficiência bovina (BIV), um promotor do vírus Moloney, um promotor do vírus da leucose aviária (ALV), um promotor do citomegalovírus (CMV), como o promotor imediato do CMV (promotor hCMV), vírus Epstein Barr (EBV) ou um promotor do vírus do sarcoma de Rous (RSV). O promotor também pode ser um promotor de um gene humano, como actina humana, miosina humana, hemoglobina humana, creatina muscular humana ou metalotioneína humana. O promotor também pode ser um promotor específico de tecido, tal como um promotor específico de músculo ou pele, natural ou sintético. Exemplos de tais promotores são descritos na publicação do pedido de patente dos EUA Nº US20040175727, cujo conteúdo é aqui incorporado na sua totalidade.

[00210] O plasmídeo também pode compreender um sinal de poliadenilação, que pode estar a jusante da sequência de codificação. O sinal de poliadenilação pode ser um sinal de poliadenilação SV40, sinal de poliadenilação LTR, sinal de poliadenilação de hormônio de crescimento bovino (bGH), sinal de poliadenilação do hormônio do crescimento humano (hGH) ou sinal de poliadenilação de B-globina humana ou um sinal de poliadenilação do hormônio de crescimento bovino (bGH poli A). O sinal de poliadenilação SV40 pode ser um sinal de poliadenilação de um plasmídeo pCEP4 (Invitrogen, San Diego, CA).

[00211] O plasmídeo também pode compreender um potenciador a montante da sequência de codificação. O intensificador pode ser actina humana, miosina humana, hemoglobina humana, creatina muscular humana ou um intensificador viral como um de CMV, FMDV, RSV ou EBV. Os intensificadores da função de polinucleotídeo são descritos nas Patentes U.S. 5.593.972, 5.962.428 e WOS94/016737, cujos conteúdos está totalmente incorporado por referência.

[00212] O plasmídeo também pode compreender uma origem de replicação em mamíferos, a fim de manter o plasmídeo extracromossômica e produzir várias cópias do plasmídeo em uma célula. O plasmídeo pode ser p V AXI, pCEP4 ou pREP4 da Invitrogen (San Diego, CA), que pode compreender a origem de replicação do vírus Epstein-Barr e da região de codificação EBNA-1 do antígeno nuclear, que pode produzir replicação epissômica de alta cópia sem integração. A espinha dorsal do plasmídeo pode ser pA V0242. O plasmídeo pode ser um plasmídeo de adenovírus do tipo 5 (Ad5) com defeito de replicação.

[00213] O plasmídeo também pode compreender uma sequência reguladora, que pode ser bem adequada para a expressão genética em uma célula na qual o plasmídeo é administrado. A sequência de codificação pode compreender um códon que pode permitir a transcrição mais eficiente da sequência de codificação na célula hospedeira.

[00214] Asequência de codificação também pode compreender uma sequência líder de imunoglobulina (Ig). A sequência líder pode estar 5" da sequência de codificação. Os antígenos de consenso codificados por esta sequência podem compreender um líder de Ig do terminal N seguido por uma proteína de antígeno de consenso. O líder de lg do terminal N pode ser IgE ou IgG.

[00215] O plasmídeo pode ser pSE420 (Invitrogen, San Diego, Califórnia), que pode ser usado para a produção de proteína em Escherichia coli (E.coli. O plasmídeo também pode ser pYES2 (Invitrogen, San Diego, Calif.), que pode ser utilizado para produção de proteínas em cepas de levedura de Saccharomyces cerevisiae O plasmídeo também pode ser o sistema de expressão baculovírus completo MAXBAC"Y (Invitrogen, San Diego, Califórnia), que pode ser usado para a produção de proteína em células de insetos. O plasmídeo também pode ser pcDNA | ou pcDNA3 (Invitrogen, San Diego, Califórnia), que pode ser usado para a produção de proteína em células de mamíferos, tais como células de ovário de hamster chinês (CHO). O plasmídeo também pode ser pGX001 (Inovio), que é modificado a partir de pvAX1 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA).

[00216] O vetor pode ser circular, o que pode transformar uma célula alvo por integração no genoma celular ou existir extracromossômica (por exemplo, plasmídeo replicador autônomo com origem de replicação).

[00217] O vetor pode ser pVAX, pcDNA3.0 ou provax ou qualquer outro vetor de expressão capaz de expressar DNA que codifica o antígeno e permitir que uma célula traduza a sequência em um antígeno que seja reconhecido pelo sistema imunológico.

[00218] Também é aqui fornecida uma vacina linear de ácido nucleico, ou cassete de expressão linear ("LEC"), que é capaz de ser distribuída de maneira eficiente a um sujeito por eletroporação e expressar um ou mais antígenos desejados. O LEC pode ser qualquer DNA linear desprovido de qualquer espinha dorsal de fosfato. O DNA pode codificar um ou mais antígenos. O LEC pode conter um promotor, um íntron, um códon de parada e/ou um sinal de poliadenilação. À expressão do antígeno pode ser controlada pelo promotor. O LEC não pode conter nenhum gene de resistência a antibióticos e/ou uma espinha dorsal de fosfato. O LEC pode não conter outras sequências de ácidos nucleicos não relacionadas à expressão genética de antígeno desejada.

[00219] OLEC pode ser derivado de qualquer plasmídeo capaz de ser linearizado. O plasmídeo pode ser capaz de expressar o antígeno. O plasmídeo pode ser pNP (Puerto Rico/34) ou pM2 (New Caledonia/99). O plasmídeo pode ser WLVOO9, pVAX, pcDNA3.0 ou provax ou qualquer outro vetor de expressão capaz de expressar DNA que codifica o antígeno e permitir que uma célula traduza a sequência em um antígeno que seja reconhecido pelo sistema imunológico.

[00220] OLEC pode ser pcrM2. O LEC pode ser perNP. O pcerNP e o pcrMR podem ser derivados de pNP (Puerto Rico/34) e pM2 (New Caledonia/99), respectivamente.

[00221] O vetor pode ter um promotor. Um promotor pode ser qualquer promotor que seja capaz de dirigir a expressão genética e regular a expressão do ácido nucleico isolado. Esse promotor é um elemento de sequência de ação cis necessário para a transcrição via RNA polimerase dependente de DNA, que transcreve a sequência de antígeno aqui descrita. A seleção do promotor usado para direcionar a expressão de um ácido nucleico heterólogo depende da aplicação particular. O promotor pode ser posicionado aproximadamente na mesma distância do início da transcrição no vetor, uma vez que é a partir do local de início da transcrição em seu cenário natural. No entanto, a variação nessa distância pode ser acomodada sem perda da função do promotor.

[00222] O promotor pode ser operacionalmente ligado à sequência de ácido nucleico que codifica o antígeno e os sinais necessários para a poliadenilação eficiente do transcrito, dos sítios de ligação ao ribossomo e da terminação da tradução.

[00223] O promotor pode ser um promotor de CMV, promotor precoce de SV40, promotor posterior de SV40, promotor de metalotioneína, promotor de vírus de tumor mamário murino, promotor de vírus de sarcoma Rous, promotor de poliedrina ou outro promotor mostrado eficaz para expressão em células eucarióticas.

[00224] O vetor pode incluir um intensificador e um íntron com sítios funcionais de doador e aceitador de emenda. O vetor pode conter uma região de terminação de transcrição a jusante do gene estrutural para proporcionar uma terminação eficiente. A região de terminação pode ser obtida do mesmo gene que a sequência do promotor ou pode ser obtida de genes diferentes. Métodos de Preparação do Vetor

[00225] São aqui fornecidos métodos para preparar o vetor que compreende a molécula de ácido nucleico que codifica o antígeno de MUC16 discutido aqui. O vetor, após a etapa final de subclonagem no plasmídeo de expressão de mamíferos, podem ser usados para inocular uma cultura de células em um tanque de fermentação em larga escala, usando métodos conhecidos na técnica.

[00226] O vetor para uso com os dispositivos de eletroporação, que são descritos abaixo em mais detalhes, pode ser formulado ou fabricado usando uma combinação de dispositivos e técnicas conhecidas, mas de preferência eles são fabricados usando uma técnica otimizada de fabricação de plasmídeo, descrita em uma Publicação UJS. 2009/0047 16, depositada em 23 de maio de 2008. Em alguns exemplos, os plasmídeos de DNA usados nestes estudos podem ser formulados em concentrações maiores ou iguais a 10 mg/mL. As técnicas de fabricação também incluem ou incorporam vários dispositivos e protocolos que são comumente conhecidos pelos versados na técnica, além dos descritos em U.S. 60/939792, incluindo os descritos em uma Patente U.S. 7.238.522, emitida em 3 de julho de 2007. A publicação e a patente acima mencionadas, Publicação U.S. 2009/004716 e Patente U.S. 7.238.522, respectivamente, são aqui incorporadas na sua totalidade.

Excipientes e Outros Componentes da Vacina

[00227] A vacina pode ainda compreender um excipiente farmaceuticamente —* aceitável... O transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser moléculas funcionais, tais como veículos, transportadores, ou diluentes. O excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser um agente facilitador de transfecção, que pode incluir agentes ativos de superfície, tais como complexos imunoestimulantes (ISCOMS), adjuvante incompleto de Freund, análogo de LPS incluindo lipídeo A de monofosforil, peptídeos muramil, análogos de quinona, vesículas, tais como esqualeno e esqualeno, ácido hialurônico, lipídeos, lipossomas, íons de cálcio, proteínas virais, poliânions, policátions, ou nanopartículas, ou outros agentes facilitadores de transfecção conhecidos.

[00228] O agente facilitador da transfecção é um poliânion, um cátion, incluindo o poli-L-glutamato (LGS) ou lipídeo. O agente facilitador da transfecção é o poli-L-glutamato, e o poli-L-glutamato pode estar presente na vacina a uma concentração inferior a 6 mg/ml. O agente facilitador de transfecção também pode incluir agentes ativos de superfície, tals como os complexos imunoestimulantes (ISCOMS), adjuvante incompleto de Freunds, análogos de LPS incluindo o lipídeo A de monofosforil, peptídeos muramil, análogos da quinona e vesículas, tais como esqualeno e esqualeno, e o ácido hialurônico pode ser administrado em conjunto com o construto genético. As vacinas de plasmídeo de DNA também podem incluir um agente facilitador da transfecção, como lipídios, lipossomos, incluindo lipossomos de lecitina ou outros lipossomos conhecidos na técnica, como uma mistura DNA- lipossomo (ver, por exemplo, W09324640), íons cálcio, proteínas virais, poliânions, policátions ou nanopartículas ou outros agentes facilitadores da transfecção conhecidos. O agente facilitador da transfecção é um poliânion, um cátion, incluindo o poli-L-glutamato (LGS) ou lipídeo. À concentração do agente de transfecção na vacina é de menos de 4 mg/ml, menos de 2 mg/ml, menos de 1 mg/ml, menos de 0,750 mg/ml, menos de 0,500 mg/ml, menos de 0,250 mg/ml, menos de 0,100 mg/ml, menos de 0,050 mg/ml, ou menos de 0,010 mg/ml.

[00229] O excipiente farmaceuticamente aceitável pode ser um ou mais adjuvantes. Os adjuvantes podem ser outros genes que são expressos em um plasmídeo alternativo ou são distribuídos como proteínas em combinação com o plasmídeo acima na vacina. Os um ou mais adjuvantes podem ser selecionados do grupo que consiste em: CCL?20, interferon a (IFN-a), interferon b (IFN-b), interferon g, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), TNFa, TNRb, GM-CSF, fator de crescimento epidérmico (EGF), quimiocina cutânea que atrai células T (CTACK), quimiocina epitelial expressa em timo (TECK), quimiocina epitelial associada a mucosas (MEC), IL-12, IL-15, 11-28, IL- 31, I1L-33, MHC, CD80, CD86, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, I1L-6, 11-10, 11-18, MCP-1, MIP-1a, MIP-1-, IL-8, L-selectina, P-selectina, E-selectina, CD34, GIyÕyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM,

ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, formas mutantes de I1L-18, CD40, CD40L, fator de crescimento vascular, fator de crescimento de fibroblastos, IL-7, fator de crescimento de nervos, fator de crescimento endotelial vascular, Fas, receptor de TNF, FIt, Apo- 1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DRA4, DRS, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, Caspase ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap- 1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAFS6, IKB, NIK inativo, SAP K, SAP-1, JNK, genes de resposta a interferon, NFKB, Bax, TRAIL, TRAlLrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK LIGAND, Ox40, Ox40 LIGAND, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2B, NKG2E, NKG2F, TAPI, TAP2, IL-1 5 tendo a sequência de sinal ou sequência de codificação que codifica a sequência de sinal excluída e, opcionalmente, incluindo um peptídeo de sinal diferente, como o IgE, ou a sequência de codificação que codifica um peptídeo de sinal diferente, como o de IgE, e fragmentos funcionais dos mesmos, ou uma combinação dos mesmos. O adjuvante pode ser |L-12, I1L-15, 11-28, CTACK, TECK, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), TNFa, TNFP, GM-CSF, fator de crescimento epidérmico (EGF), IL-, IL- 2, IL-4, IL-5, IL-6, 11-10, 11-12, IL-18 ou uma combinação dos mesmos.

[00230] Em algumas modalidades, o adjuvante pode ser uma ou mais proteínas e/ou moléculas de ácido nucleico que codificam proteínas selecionadas do grupo que consiste em: CCL-20, IL-12, IL-15, I1L-28, CTACK, TECK, MEC ou RANTES. Exemplos de construtos e sequências de IL-12 são divulgados no pedido PCT no. PCT/US 1997/019502 e Pedido US 08/956.865, e Pedido Provisório U.S. 61/569600 depositado em 12 de dezembro de 2011, cada um aqui incorporado por referência. Exemplos de construtos e sequências de IL- são divulgados no pedido PCT PCT/US04/18962 e Pedido U.S. correspondente 10/560.650 e no pedido PCT PCT/US07/00886 e Pedido U.S. correspondente 12/160.766, e no pedido PCT

PCT/US10/048827, que são, cada um, aqui incorporados por referência. Exemplos de construtos e sequências de |L-28 são divulgados no pedido PCT PCT/US09/039648 e Pedido U.S. correspondente 12/936.192, que são aqui incorporados por referência. Exemplos de RANTES e outros construtos e sequências são divulgados no pedido PCT Nº PCT/US1999/004332 e Pedido U.S. correspondente 09/622.452, que são aqui incorporados por referência. Outros exemplos de construtos e sequências RANTES são divulgados no pedido PCT PCT/US11/024098, que é aqui incorporado por referência. Exemplos de RANTES e outros construtos e sequências são divulgados no pedido PCT Nº. PCT/US1999/004332 e Pedido U.S. correspondente 09/622.452, que são aqui incorporados por referência. Outros exemplos de construtos e sequências RANTES são divulgados no pedido PCT PCT/US11/024098, que é aqui incorporado por referência. Exemplos de quimiocinas construtos e sequências CTACK, TECK e MEC são divulgados no pedido PCT PCT/US2005/042231 e Pedido UJS. correspondente 11/719.646, que são, cada um, aqui incorporados por referência. Exemplos de OX40 e outros imunomoduladores são divulgados no Pedido U.S. 10/560.653, que é aqui incorporado por referência. Exemplos de DR5 e outros imunomoduladores são divulgados no Pedido U.S. 09/622.452, que é aqui incorporado por referência.

[00231] Outros genes que podem ser úteis como adjuvantes incluem os que codificam: MCP-1, MIP-1a, MIP-1p, IL-8, RANTES, L-selectina, P-selectina, E-selectina, CD34, GIÕYCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M- CSF, G-CSF, I1L-4, formas mutantes de 11-18, CD40, CD40L, fator de crescimento vascular, fator de crescimento do fibroblasto, IL- 7, 11-22, fator de crescimento do nervo, fator de crescimento endotelial vascular, Fas, receptor do TNF, FIt, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3,

AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, Caspase ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, NIK inativa, SAP K, SAP-1, JNK, genes de resposta interferon, NFKB, Bax, TRAIL, TRAIlLrec, TRAILrecDRC 5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, Ligante RANK, Ox40, Ligante Ox40, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAP1, TAP2 e fragmentos funcionais dos mesmos.

[00232] A vacina pode ainda compreender um agente facilitador de vacina genético como descrito em U.S. 021.579 depositado em 1 de abril de 1994, o qual é totalmente incorporado por referência.

[00233] A vacina pode compreender o vetor que codifica o antígeno em quantidades de cerca de 1 nanograma a 100 miligramas; cerca de 1 micrograma a cerca de 10 miligramas; ou preferivelmente cerca de 0,1 micrograma a cerca de 10 miligramas; ou mais preferivelmente cerca de 1 miligrama a cerca de 2 miligramas. Em algumas modalidades preferidas, a vacina de acordo com a presente invenção compreende cerca de 5 nanogramas a cerca de 1.000 microgramas de ácido nucleico. Em algumas modalidades preferidas, a vacina pode conter cerca de 10 nanogramas a cerca de 800 microgramas de ácido nucleico. Em algumas modalidades preferidas, a vacina pode conter cerca de 0,1 a cerca de 500 microgramas de ácido nucleico. Em algumas modalidades preferidas, a vacina pode conter cerca de 1 a cerca de 350 microgramas de ácido nucleico. Em algumas modalidades preferidas, a vacina pode conter cerca de 25 a cerca de 250 microgramas, de cerca de 100 a cerca de 200 microgramas, de cerca de 1 nanograma a 100 miligramas; de cerca de 1 micrograma a cerca de 10 miligramas; de cerca de 0,1 micrograma a cerca de 10 miligramas; de cerca de 1 miligrama a 2 miligramas, de cerca de 5 nanogramas a cerca de 1.000 microgramas, de cerca de 10 nanogramas a cerca de 800 microgramas, de cerca de 0,1 a cerca de 500 microgramas, de cerca de 1 a 350 microgramas, de cerca de 25 a cerca de 250 microgramas, de cerca de 100 a cerca de 200 microgramas do antígeno ou plasmídeo do mesmo.

[00234] A vacina pode ser formulada de acordo com o modo de administração a ser utilizado. Uma vacina injetável pode ser estéril, livre de pirogênio e livre de partículas. Uma formulação ou solução isotônica pode ser usada. Os aditivos para isotonicidade podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol e lactose. A vacina pode compreender um agente de vasoconstrição. As soluções isotônicas podem incluir solução salina tamponada com fosfato. A vacina pode ainda compreender estabilizantes, incluindo gelatina e albumina. Os estabilizantes podem permitir que a formulação seja estável à temperatura da sala ou ambiente por longos períodos de tempo, incluindo LGS ou policátions ou poliânions.

Composições Farmacêuticas da Vacina

[00235] A vacina pode estar na forma de uma composição farmacêutica. A composição farmacêutica pode compreender a vacina. As composições farmacêuticas podem compreender cerca de 5 nanogramas (ng) até cerca de 10 miligramas (mg) da molécula de ácido nucleico da vacina, Em algumas modalidades, composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção compreendem cerca de 25 ng a cerca de 5 mg da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 50 ng para cerca de 1 mg da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 0,1 a cerca de 500 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 1 a cerca de 350 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 5 a cerca de 250 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 10 a cerca de 200 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 15 a cerca de 150 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de a cerca de 100 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 25 a cerca de 75 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 30 a cerca de 50 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 35 a cerca de 40 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas contêm cerca de 100 a cerca de 200 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendem cerca de 10 microgramas a cerca de 100 microgramas de DNA da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendem cerca de 20 microgramas a cerca de 80 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendem cerca de 25 microgramas a cerca de 60 microgramas de DNA da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendem cerca de 30 ng a cerca de 50 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendem cerca de 35 ng a cerca de 45 microgramas de DNA da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades preferidas, as composições farmacêuticas contêm cerca de 0,1 a cerca de 500 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

Em algumas modalidades preferidas, as composições farmacêuticas contêm cerca de 1 a cerca de 350 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades preferidas, as composições farmacêuticas contêm cerca de 25 a cerca de 250 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades preferidas, as composições farmacêuticas contêm cerca de 100 a cerca de 200 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina.

[00236] Emalgumas modalidades, as composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção compreendem pelo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 ng de DNA da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas podem compreender pelo menos 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95.100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675, 680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885, 890,

895. 900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 975, 980, 985, 990, 995 ou 1000 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode compreender pelo menos 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 mg ou mais da molécula de ácido nucleico da vacina.

[00237] Em outras modalidades, a composição farmacêutica pode compreender até e incluindo 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 ng da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode compreender até e incluindo 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95,100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675, 680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885, 890, 895, 900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 975, 980, 985, 990, 995, ou 1000 microgramas da molécula de ácido nucleico da vacina. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode compreender até e incluindo 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5,4,4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 ou 10 mg da molécula de ácido nucleico da vacina.

[00238] A composição farmacêutica pode compreender adicionalmente outros agentes para fins de formulação, de acordo com o modo de administração a ser usado. Nos casos em que composições farmacêuticas são composições farmacêuticas injetáveis, elas são estéreis, livres de pirogênio e livres de material particulado. Uma formulação isotônica é preferencialmente usada. Em geral, aditivos para isotonicidade podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol e lactose. Em alguns casos, soluções isotônicas, tal como tampão fosfato-salino, são preferenciais. Estabilizadores incluem gelatina e albumina. Em algumas modalidades, um agente de vasoconstrição é adicionado à formulação.

[00239] A composição farmacêutica pode ainda compreender um excipiente farmaceuticamente aceitável, conforme fornecido acima. Por exemplo, o excipiente farmaceuticamente aceitável pode compreender as moléculas funcionais, veículos, adjuvantes, transportadores, diluentes ou agentes facilitadores da transfecção, conforme fornecido acima. Métodos de Vacinação

[00240] São aqui fornecidos métodos para o tratamento e/ou prevenção do câncer que expressa MUC16, como, sem limitação, o câncer de ovário, utilizando as formulações farmacêuticas descritas acima. Também são descritos aqui métodos para usar as formulações farmacêuticas descritas acima no tratamento e/ou prevenção de câncer que expressa MUC16, tal como, mas não limitado a câncer de ovário, em um sujeito. Também são aqui descritos métodos de vacinar um sujeito. Também são aqui descritos métodos de administração das formulações farmacêuticas aqui descritas a um sujeito em necessidade das mesmas. Os métodos aqui descritos coletivamente referidos como métodos de tratamento utilizando as formulações farmacêuticas aqui descritas podem compreender administrar uma ou mais vacinas como aqui descritas a um sujeito em necessidade das mesmas para induzir uma resposta imune terapêutica e/ou profilática. A vacina pode ser administrada a um sujeito para modular a atividade do sistema imune do sujeito e intensificar a resposta imune. A administração da vacina pode ser a transfecção dos antígenos de câncer como divulgado aqui como uma molécula de ácido nucleico que é expressa na célula e distribuída à superfície da célula, em que o sistema imunológico reconhece e induz uma resposta celular, humoral, ou celular e humoral. A administração da vacina pode ser usada para induzir ou provocar uma resposta imune em indivíduos contra MUC16, administrando ao indivíduo a vacina como discutido aqui.

[00241] A vacina pode ser administrada a um sujeito para modular a atividade do sistema imunológico do sujeito, aumentando assim a resposta imune. Em algumas modalidades, o sujeito é um mamífero. Após a administração da vacina ao mamífero e, portanto, a introdução do vetor para as células do mamífero, as células transfectadas expressam e segregam um ou mais dos antígenos de câncer como aqui divulgados. Estas proteínas secretadas, ou antígenos sintéticos, serão reconhecidos como estrangeiros pelo sistema imune, que ajustarão uma resposta imune que pode incluir: anticorpos produzidos contra um ou mais antígenos de câncer e uma resposta de célula T especificamente contra um ou mais antígenos de câncer. Em alguns exemplos, um mamífero vacinado com as vacinas aqui discutidas terá um sistema imunológico iniciado e quando desafiado com um ou mais antígenos de câncer como divulgado aqui, o sistema imunológico imunizado permitirá a limpeza rápida de antígenos de câncer subsequentes, conforme divulgado aqui, seja através das respostas imunes humoral, celular, ou ambas celular e humoral.

[00242] Os métodos de administração da molécula de ácido nucleico de uma vacina são descritos nas Patentes U.S. 4.945.050 e 5.036.006, ambas as quais são aqui incorporadas na sua totalidade por referência.

[00243] A vacina pode ser administrada a um mamífero para provocar uma resposta imune em um mamífero. O mamífero pode ser humano, primata não humano, vaca, porco, ovelha, cabra, antílope, bisonte, búfalo de água, bovídeos, veados, ouriços, elefantes, lhama, alpaca, camundongos, ratos e, de preferência humano, vaca ou porco. A vacina também pode ser administrada a um sujeito não mamífero, por exemplo, um frango, para provocar uma resposta imune.

[00244] —Adose da vacina pode estar entre 1 micrograma e 10 mg de componente ativo por quilograma (kg) de peso corporal ao longo do tempo (componente/kg de peso corporal/tempo) e pode ser de 20 microgramas a 10 mg de componente/kg de peso corporal/tempo. À vacina pode ser administrada a cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 ou 31 dias. O número de doses da vacina para tratamento eficaz pode ser 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 ou mais doses. Método de Geração de uma Resposta Imune com a Vacina

[00245] A vacina fornecida pode ser usada para gerar uma resposta imune em um sujeito mamífero ou não mamífero, incluindo respostas imunes terapêuticas e profiláticas. A resposta imune pode gerar anticorpos e/ou células T assassinas que são dirigidas para um ou mais antígenos de câncer, como aqui divulgado. Esses anticorpos e as células T podem ser isolados.

[00246] Algumas modalidades fornecem métodos para gerar respostas imunes contra um ou mais dos antígenos do câncer, conforme divulgado neste documento, modalidades que compreendem administrar a vacina a um sujeito. Algumas modalidades fornecem métodos de vacinação profilática de um sujeito contra um câncer ou tumor expressando um ou mais dos antígenos de MUC16, como descrito acima, cujas modalidades compreendem administrar a vacina. Algumas modalidades proporcionam métodos de vacinação terapêutica de um sujeito que vem sofrendo de câncer de ovário ou tumor que expressa MUC16, cujas modalidades compreendem administrar a vacina. O diagnóstico do câncer de ovário ou tumor que expressa um ou mais antígenos de MUC16, como divulgado aqui antes da administração da vacina, pode ser feito rotineiramente. Método de Tratamento de Câncer com a Vacina

[00247] A vacina pode ser usada para gerar ou desencadear uma resposta imune em um mamífero que é reativo ou direcionado ao câncer que expressa MUC16, como, mas não limitado a câncer de ovário, mais particularmente câncer de ovário epitelial, mais particularmente câncer de ovário seroso. A resposta imune provocada pode prevenir o câncer de ovário ou o crescimento do tumor.

[00248] A resposta imune provocada pode prevenir e/ou reduzir a metástase de células cancerígenas ou tumorais em um sujeito com câncer de ovário. Por conseguinte, a vacina pode ser utilizada num método que trata e/ou previne o câncer ou tumores no mamífero ou sujeito com câncer que é administrado com a vacina.

[00249] Em algumas modalidades, a vacina administrada pode mediar a eliminação ou impedir o crescimento de células tumorais induzindo (1) a imunidade humoral por meio de respostas de células B para gerar anticorpos que bloqueiam a produção de proteína-1 quimiotática de monócitos (MCP-1), assim retardando as células supressoras derivadas de mieloides (MDSCs) e suprimindo o crescimento do tumor; (2) aumentar o linfócito T citotóxico, como CD8* (CTL) para atacar e matar células tumorais; (3)aumentar as respostas das células T auxiliares; (4) e aumentar as respostas inflamatórias via IFN-y e TFN-a ou, preferencialmente, todas as anteriormente mencionadas. A vacina pode aumentar a sobrevida livre de tumor em 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44% e 45%. A vacina pode reduzir a massa tumoral em 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44 %, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% e 60% após a imunização. A vacina pode prevenir e bloquear o aumento da proteína quimioatraente de monócitos 1 (MCP-1), uma citocina secretada por células supressoras mieloides. A vacina pode aumentar a sobrevida do tumor por 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, e 60%.

[00250] Em algumas modalidades, a resposta imune pode gerar uma resposta imune humoral e/ou uma resposta de linfócito T citotóxico específico (CTL) que não causa danos ou inflamação de vários tecidos ou sistemas (por exemplo, sistema cerebral ou neurológico, etc.) no sujeito administrado com a vacina.

[00251] Em algumas modalidades, a vacina pode ser administrada na periferia (conforme descrito em mais detalhes abaixo) para estabelecer uma resposta imune específica de antígeno que as células ou tecidos cancerígenos ou tumorais para liberar ou eliminar o câncer ou tumor que expressa um ou mais antígenos de câncer sem danificar ou causar doença ou morte no sujeito administrado com a vacina.

[00252] A vacina administrada pode aumentar uma resposta imune celular no sujeito em cerca de 50 vezes a cerca de 6000 vezes, cerca de 50 vezes a cerca de 5500 vezes, cerca de 50 vezes a cerca de 5000 vezes, cerca de 50 vezes cerca de 4500 vezes, cerca de 100 vezes a cerca de 6000 vezes, cerca de 150 vezes a cerca de 6000 vezes, cerca de 200 vezes a cerca de 6000 vezes, cerca de 250 vezes a cerca de 6000 vezes, ou cerca de 300 vezes a cerca de 6000 vezes. Em algumas modalidades, a vacina administrada pode aumentar a resposta imune celular no sujeito em cerca de 50 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 250 vezes, 300 vezes, 350 vezes, 400 vezes, 450 vezes, 500 vezes, 550 vezes, 600 vezes, 650 vezes, 700 vezes, 750 vezes, 800 vezes, 850 vezes, 900 vezes, 950 vezes, 1000 vezes, 1100 vezes, 1200 vezes, 1300 vezes, 1400 vezes, 1500 vezes, 1600 vezes, 1700 vezes, 1800 vezes, 1900 vezes, 2000 vezes, 2100 vezes, 2200 vezes, 2300 vezes, 2400 vezes, 2500 vezes, 2600 vezes, 2700 vezes, 2800 vezes, 2900 vezes, 3000 vezes, 3100 vezes, 3200 vezes, 3300 vezes, 3400 vezes, 3500 vezes, 3600 vezes, 3700 vezes, 3800 vezes, 3900 vezes, 4000 vezes, 4100 vezes, 4200 vezes, 4300 vezes, 4400 vezes, 4500 vezes, 4600 vezes, 4700 vezes, 4800 vezes, 4900 vezes, 5000 vezes, 5100 vezes, 5200 vezes, 5300 vezes, 5400 vezes, 5500 vezes, 5600 vezes,

5700 vezes, 5800 vezes, 5900 vezes ou 6000 vezes em comparação com a resposta imune celular no sujeito não administrado com a vacina.

[00253] A vacina administrada pode aumentar os níveis de interferon gama (IFN-y) no sujeito em cerca de 50 vezes a cerca de 6000 vezes, cerca de 50 vezes a cerca de 5500 vezes, cerca de 50 vezes a cerca de 5000 vezes 50 vezes cerca de 4500 vezes, cerca de 100 vezes a cerca de 6000 vezes, cerca de 150 vezes a cerca de 6000 vezes, cerca de 200 vezes a cerca de 6000 vezes, cerca de 250 vezes a cerca de 6000 vezes, ou cerca de 300 vezes a cerca de 6000 vezes. Em algumas modalidades, a vacina administrada pode aumentar os níveis de IFN-y no sujeito em cerca de 50 vezes, 100 vezes, 150 vezes, 200 vezes, 250 vezes, 300 vezes, 350 vezes, 400 vezes, 450 vezes, 500 vezes, 550 vezes, 600 vezes, 650 vezes, 700 vezes, 750 vezes, 800 vezes, 850 vezes, 900 vezes, 950 vezes, 1000 vezes, 1100 vezes, 1200 vezes, 1300 vezes, 1400 vezes, 1500 vezes, 1600 vezes, 1700 vezes, 1800 vezes, 1900 vezes, 2000 vezes, 2100 vezes, 2200 vezes, 2300 vezes, 2400 vezes, 2500 vezes, 2600 vezes, 2700 vezes, 2800 vezes, 2900 vezes, 3000 vezes, 3100 vezes, 3200 vezes, 3300 vezes, 3400 vezes, 3500 vezes, 3600 vezes, 3700 vezes, 3800 vezes, 3900 vezes, 4000 vezes, 4100 vezes, 4200 vezes, 4300 vezes, 4400 vezes, 4500 vezes, 4600 vezes, 4700 vezes, 4800 vezes, 4900 vezes, 5000 vezes, 5100 vezes, 5200 vezes, 5300 vezes, 5400 vezes, 5500 vezes, 5600 vezes, 5700 vezes, 5800 vezes, 5900 vezes ou 6000 vezes em comparação com os níveis de IFN-y no sujeito não administrado com a vacina.

[00254] —Adose da vacina pode estar entre 1 micrograma e 10 mg de componente ativo por quilograma (kg) de peso corporal ao longo do tempo (componente/kg de peso corporal/tempo) e pode ser de 20 microgramas a 10 mg de componente/kg de peso corporal/tempo. À vacina pode ser administrada a cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, ou

31 dias. O número de doses da vacina para tratamento eficaz pode ser 1,2,3,4,5,6,7,8,9, 10 ou mais doses. Vias de Administração

[00255] A vacina ou composição farmacêutica pode ser administrada por diferentes vias, incluindo via oral, parenteral, sublingual, transdérmica, retal, transmucosa, tópica, via inalação, via administração bucal, intrapleural, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, subcutânea, — intramuscular, —intranasal intratecal' e/ou intra- articularmente, ou combinações dos mesmos. Para uso veterinário, a composição pode ser administrada como uma formulação devidamente aceitável em conformidade com a prática veterinária normal. O veterinário pode prontamente determinar o regime de dosagem e a via de administração que é a mais apropriada para um animal particular. À vacina pode ser administrada por seringas tradicionais, dispositivos de injeção sem agulha, biobalística ("microprojectile bombardment gene guns") ou outros métodos físicos, tal como eletroporação ("EP"), "método hidrodinâmico”", ou ultrassom.

[00256] O vetor da vacina pode ser administrado ao mamífero por várias tecnologias conhecidas, incluindo injeção de DNA (também conhecida como vacinação de DNA) com e sem eletroporação in vivo, transfecção mediada por lipossomas, transfecção facilitada por nanopartículas e uso de vetores recombinantes, como adenovírus recombinantes, vírus associado a adenovírus recombinante e vaccinia recombinante. O um ou mais antígenos de câncer da vacina podem ser administrados via injeção de DNA junto com eletroporação in vivo. Eletroporação

[00257] —Avacina ou composição farmacêutica pode ser administrada por eletroporação. A administração da vacina através de eletroporação pode ser realizada usando os dispositivos de eletroporação que podem ser configurados para distribuir a um tecido desejado de um mamífero um pulso de energia eficaz para fazer com que poros reversíveis se tornem em membranas de célula, e preferivelmente o pulso de energia é um similar atual constante a uma entrada corrente predeterminada por um usuário. O aparelho de eletroporação pode compreender um componente de eletroporação e um conjunto de eletrodo ou conjunto de manuseio. O componente de eletroporação pode incluir e incorporar um ou mais dos diversos elementos dos dispositivos de eletroporação, incluindo: controlador, gerador de forma de onda de corrente, testador de impedância, registrador de forma de onda, elemento de entrada, elemento de relatório de status, porta de comunicação, componente de memória, fonte de energia e interruptor. A eletroporação pode ser realizada usando um dispositivo de eletroporação in vivo, por exemplo, sistema CELLECTRAS EP (Inovio Pharmaceuticals, Inc., Blue Bell, PA) ou eletroporador Elgen (Inovio Pharmaceuticals, Inc.) para facilitar a transfecção de células pelo plasmídeo.

[00258] Exemplos de dispositivos de eletroporação e métodos de eletroporação que podem facilitar a administração das vacinas de DNA da presente invenção incluem aqueles descritos na Patente U.S.

7.245.963 por Draghia-Akli, et al, Pub. de Patente U.S. 2005/0052630 apresentado por Smith, et al., cujos conteúdos estão aqui incorporados por referência na sua totalidade. Outros dispositivos de eletroporação e métodos de eletroporação que podem ser utilizados para facilitar a administração das vacinas de DNA incluem os fornecidos no Pedido de Patente U.S. copendente e coproprietário, 11/874072, depositado em 17 de outubro de 2007, que reivindica o benefício em 35 USC 119 (e) a Pedidos Provisórios U.S. 60/852.149, depositado em 17 de outubro de 2006, e 60/978.982, depositado em 10 de outubro de 2007, todos incorporados neste documento em sua totalidade.

[00259] A Patente U.S.7.245.963 de Draghia-Akli, et al. descreve sistemas de eletrodo modulares e seu uso para facilitar a introdução de uma biomolécula em células de um tecido selecionado em um corpo ou uma planta. Os sistemas de eletrodo modular podem compreender uma pluralidade de eletrodos de agulha; uma agulha hipodérmica; um conector elétrico que fornece uma ligação condutora de um controlador de pulso de corrente constante programável para a pluralidade de eletrodos de agulha; e uma fonte de energia. Um operador pode segurar a pluralidade de eletrodos de agulha que são montados em uma estrutura de suporte e firmemente inseri-los no tecido selecionado em um corpo ou uma planta. Em seguida, as biomoléculas são administradas por meio de agulha hipodérmica no tecido selecionado. O controlador de pulso de corrente constante programável é ativado e pulso elétrico de corrente constante é aplicada à pluralidade de eletrodos de agulha. O pulso elétrico de corrente constante aplicado facilita a introdução da biomolécula na célula, entre a pluralidade de eletrodos. Todo o conteúdo da Patente U.S. 7.245.963 é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

[00260] A Pub. de Patente U.S. 2005/0052630 apresentada por Smith, et al. descreve um dispositivo de eletroporação que pode ser usado para facilitar efetivamente a introdução de uma biomolécula nas células de um tecido selecionado em um corpo ou planta. O aparelho de eletroporação compreende um dispositivo eletro-cinético ("dispositivo EKD"), cuja operação é especificada pelo software ou firmware. O dispositivo EKD produz uma série de padrões de pulso de corrente constante programáveis entre eletrodos em uma disposição com base no controle de usuário e na entrada dos parâmetros de pulso e permite o armazenamento e a aquisição de dados de forma de onda corrente. O aparelho de eletroporação também compreende um disco de eletrodo substituível tendo uma disposição de eletrodos de agulha, um canal de injeção central para uma agulha de injeção e um disco de guia removível. Todo o conteúdo da Pub. de Patente U.S. 2005/0052630 é totalmente aqui incorporado por referência.

[00261] Os arranjos e métodos de eletrodo descritos na Patente U.8.7.245.963 e Pub. de Patente U.S. 2005/0052630 podem ser adaptados para penetração profunda não apenas nos tecidos tal como o músculo, mas também outros tecidos ou órgãos. Por causa da configuração da matriz de eletrodo, a agulha de injeção é também inserida completamente no órgão-alvo e a injeção é administrada perpendicular ao fator alvo, na área que é previamente delineada por eletrodos. Os eletrodos descritos na Patente U.S. 7.245.963 e Pub. de Patente U.S. 2005/005263 têm preferivelmente 20 mm de comprimento e calibre 21.

[00262] Além disso, contemplado em algumas modalidades que incorporam dispositivos de eletroporação e usos dos mesmos, existem dispositivos de eletroporação descritos nas seguintes patentes: Patente U.S. 5.273.525 emitida em 28 de dezembro de 1993, Patentes U.S.

6.110.161 emitidas em 29 de agosto de 2000, 6.261.281 emitida em 17 de julho de 2001 e 6.958.060, emitida em 25 de outubro de 2005, e patente U.S. 6.939.862, emitida em 6 de setembro de 2005. Além disso, as patentes que cobrem o assunto em questão fornecido na patente U.S.

6.697.669, emitida em 24 de fevereiro de 2004, que diz respeito à administração de DNA usando qualquer um de uma variedade de dispositivos, e a Patente U.S. 7.328.064, emitida em 5 de fevereiro de 2008, desenhada para o método de injeção de DNA, são contempladas aqui. As patentes anteriores são incorporadas por referência na sua totalidade. Métodos de Preparação da Vacina

[00263] São fornecidos aqui métodos para preparar os plasmídeos de DNA discutidos aqui. Os plasmídeos de DNA, após a etapa final de subclonagem no plasmídeo de expressão de mamíferos, podem ser usados para inocular uma cultura de células em um tanque de fermentação em larga escala, usando os métodos conhecidos na técnica.

[00264] Os plasmídeos de DNA para uso com os dispositivos de eletroporação da presente invenção podem ser formulados ou fabricados usando uma combinação de dispositivos e técnicas conhecidas, mas preferencialmente são fabricados usando uma técnica de fabricação de plasmídeo otimizada descrita em um pedido publicado US no. 20090004716, depositado em 23 de maio de 2007. Em alguns exemplos, os plasmídeos de DNA usados nestes estudos podem ser formulados em concentrações maiores ou iguais a 10 mg/mL. As técnicas de fabricação também incluem ou incorporam vários dispositivos e protocolos que são comumente conhecidos pelos versados na técnica, além dos descritos em U.S. 60/939792, incluindo os descritos em uma patente licenciada Patente U.S. 7.238.522, emitida em 3 de julho de 2007. O pedido e a patente acima mencionados, U.S. 60/939.792 e Patente U.S 7.238.522, respectivamente, são aqui incorporados na sua totalidade.

[00265] Apresente invenção tem múltiplos aspectos, ilustrados pelos seguintes exemplos não limitativos.

EXEMPLOS

[00266] A presente invenção é ilustrada adicionalmente pelos seguintes exemplos. Deve ser entendido que estes exemplos, enquanto indicando modalidades preferenciais da invenção, são providos a título de ilustração apenas. A partir da discussão anterior e nestes exemplos, um versado na técnica pode avaliar as características essenciais da presente invenção e, sem fugir de seu espírito e escopo, pode fazer várias alterações e modificações da invenção para adaptá-la para vários usos e condições. Assim, várias modificações da invenção, além das mostradas e descritas no presente documento, serão evidentes para os versados na técnica a partir da descrição anteriormente mencionada. Tais modificações pretendem ser abrangidas pelo escopo das reivindicações anexas.

Exemplo 1: Estratégia de Projeto de Domínio de Repetição Central em Tandem de MUC16

[00267] A MUC1I6 humana nativa é uma proteína grande e fortemente glicosilada com 22.152 aminoácidos de comprimento. É composta por 3 domínios: o domínio N-terminal, o domínio de repetição central em tandem e o domínio carbóxi terminal. Como o domínio N- terminal de MUC1I6 humana nativa é muito grande (12.068 aminoácidos) e carece de sequência repetitiva, apenas os domínios de repetição central em tandem e carbóxi terminal foram direcionados (Figura 1). Diferentes estratégias de projeto foram aplicadas aos domínios de repetição em tandem e carbóxi terminal.

[00268] O domínio de repetição central em tandem da MUC16 humana nativa, que tem 9.799 aminoácidos de comprimento, é uma série de 63 repetições homólogas que são cada 156 aminoácidos, exceto a última repetição, que é de apenas 127 aminoácidos. Devido ao seu comprimento e falta de homologia entre várias espécies, as sequências de repetição de micro-consenso (RMC) foram derivadas de várias sequências de repetição nativas humanas, a fim de potencialmente provocar células T reativas cruzadas contra a maioria das repetições nativas humanas. Resumidamente, depois de excluir sequências de repetição humanas nativas de baixa qualidade, as 34 sequências de repetição humanas nativas restantes foram usadas para realizar análise filogenética (Figura 2 e Figura 3). O resultado indicou que essas sequências poderiam ser agrupadas em quatro grupos de repetições que compartilham > 80% de identidade entre si. Com base na experiência anterior no desenvolvimento de vacinas baseadas em células T, cada sequência de micro-consenso deve ser derivada de sequências que compartilham > 80% de identidade de sequência entre si, a fim de obter respostas de células T reativas cruzadas contra as repetições nativas usadas para gerar este micro-consenso. Como resultado, quatro sequências RMC foram geradas.

[00269] Entre as repetições que não foram agrupadas em nenhum desses quatro grupos, apenas três outras repetições nativas (R61-63) compartilharam < 80% de identidade de sequência com todas as quatro sequências de repetição de micro-consenso (RMC) geradas (Tabela 1). A Tabela 1 mostra a identidade percentual da sequência de todas as sequências individuais de repetição de MUC16 nativa não agrupadas (R14, RI, R55, R56, R21, R58, R22, R59, R60, R61, R63 e R62) com RMC1-4. Fonte em negrito indica que as demais sequências de repetição nativas não agrupadas compartilham > 80% por cento de identidade com pelo menos um RMC, exceto R61, R62 e R63 (GenBank: AAL65133.2). Tabela 1 fue os (uu os [na [ue Jar Jos ufor Jar 1a] mem fas [ue [ur [us [us [us [ur [us fue [x To ss] [me [ns [ro [ua [n6 [us [no [ur [us [7 [ns [56 [57]

[00270] Afimde potencialmente aumentar a amplitude das respostas de células T induzidas por vacina, essas três repetições foram incluídas no projeto do domínio de repetição central em tandem de MUC16 como elementos individuais. O restante das repetições nativas (R1, R14, R55, R56, R21, R58, R22, R59 e R60) compartilham > 80% de identidade de sequência com pelo menos um RMC e devem estar cobertas por pelo menos uma das quatro sequências RMC.

[00271] Em resumo, uma abordagem de projeto de consenso sintético não foi usada para atingir o domínio de repetição central em tandem. Em vez disso, foram geradas 4 sequências RMC, derivadas de múltiplas sequências de repetição nativas humanas, a fim de potencialmente provocar células T reativas cruzadas contra a maioria das repetições nativas humanas. Cada RMC foi derivado de sequências repetidas que compartilham > 80% de identidade de sequência entre si. As repetições nativas R61, R62 e R63, que compartilham < 80% de identidade de sequência com todas as 4 sequências RMC, também foram incluídas no projeto de domínio de repetição central em tandem de MUC16, como elementos individuais, a fim de aumentar potencialmente a amplitude das respostas de células T induzidas por vacina. Exemplo 2: Estratégia de Projeto de Domínio de Carbóxi-terminal de MUC16

[00272] O domínio carbóxi terminal de MUC16 humana nativa tem 284 aminoácidos de comprimento e consiste em um ectodomínio extracelular, um domínio transmembranar e uma cauda citoplasmática curta. Ao contrário do domínio de repetição central em tandem, o domínio carbóxi terminal é bem conservado entre muitas espécies. No entanto, a cauda citoplasmática de MUC16 contém múltiplos sítios potenciais de fosforilação S/T/Y, sugerindo o envolvimento de MUC16 nas vias de transdução de sinal (Figura 4). Na Figura 4, as caixas representam potenciais sítios de fosforilação S/T/Y. Os sítios de N e O- glicosilação são indicados com um X e O, respectivamente. O'Brien, TJ et al. Tumour biology: Journal of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine 22, 348-366 (2001). Para evitar o desencadeamento indesejado da sinalização a jusante, a cauda citoplasmática (aminoácidos 254-284 do domínio carbóxi-terminal natural) não foi incluída em nenhum dos imunógenos MUC16. Geração de Ectodomínio e Domínio Transmembranar de MUC16 de Consenso

[00273] Um domínio carbóxi-terminal de MUC16 de consenso humano sem a cauda citoplasmática foi construído usando 21 sequências de ectodomínios de MUC16 e domínio transmembranar do

GenBank (www.ncbi.nIm.nih.gov/genbank/). Os números de acessão do GenBank dessas sequências são: AAL65133.2, CR 004059993.1, CR 014197952.1, XP 003914869.1, XP 007993338.1, XP OI

1739103.1, XP 011932759.1, CR 011810358.1, XP 015296314.1, CR 010387164.1, XP 008985417.1, XP 01 0347904.1, CR 0122912411, XP 0112877991, CR 003354138.3, CR 0144102711, XP 01 5096370.1, XP 011373099.1, XP 011226599.1, XP 008703704.1, e XP 012496675.1.

[00274] A sequência de consenso foi gerada usando o pacote de software DNASTARº Lasergene (versão 13.0.0.357). As sequências de ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 foram importadas para o MegAlign e alinhadas usando o programa de alinhamento de múltiplas sequências ClustalW. Determinou-se que a sequência de ectodomínio e de domínio transmembranar de MUC16 resultante compartilhava 96,0% -96,4% de identidade com o ectodomínio de MUC16 humana nativa e o domínio transmembranar. Fundamentação da Introdução de Mutações no Domínio Carbóxi Terminal para Abolir a Função Biológica de MUC16

[00275] Após a geração do ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 de consenso, três mutações de asparagina (N) para alanina (A) (N -> A) foram introduzidas para abolir a função biológica da proteína de ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 de consenso resultante. Essas três mutações foram introduzidas porque o ectodomínio carboxi-terminal de MUC16 foi implicado na promoção da tumorigênese, invasão tumoral e metástase. Rao, T. D. et al. PloS one (2015). Rao et al. mostraram que a introdução dessas três mutações N-> A no ectodomínio de MUC16 para abolir a glicosilação de N reduziu drasticamente a fosforilação de ERK1/2 e AKT e o crescimento tumoral in vivo em camundongos nus atímicos enxertados com células de fibroblastos 3T3 transfectadas. A abolição da função biológica após a introdução das mutações 3 N-> A nos construtos de MUC16 de consenso sintético não foi avaliada in vitro ou in vivo. Sumário do Projeto de Domínio Carbóxi-terminal de MUC16

[00276] Foi gerado um ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 de consenso e três mutações (N-> A) foram introduzidas para abolir a N-glicosilação (Figura 5) O ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 de consenso modificado compartilha 95,3% de identidade com o ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 A Tabela 2 mostra a porcentagem de homologia de sequência do ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 gerado com o ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 humana nativa. Tabela 2

CCOILOTLGLEFAA

LI o õ EN 1 = ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 de consenso 2 = ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 nativa humana Exemplo 3: Estratégia para Montar RMCs, Repetições Nativas e Ectodomínio e Domínio Transmembranar (CTD) de MUC16 de Consenso Sintético para Reduzir a Probabilidade de Introdução de Epítopos Fora do Alvo

[00277] Oselementosa serem incluídos no projeto MUC16 incluíram quatro RMCs, três repetições nativas e um ectodomínio e domínio transmembranar de MUC16 de consenso sintético domínio (CTD). À estratégia inicial do projeto era gerar um imunógeno de MUC16 (imunógeno preliminar de MUC16 sintético) incorporando os elementos como mostrado nas FIGs. 6A-6B. No entanto, como o ectodomínio e o domínio transmembranar de MUC16 de consenso sintético de RMC1 e RMC3, RMC2-RMC3, RMC3-RMCA4, RMC4-R61 e R63 e as junções de domínio transmembranar de MUC16 neste imunógeno não ocorrem na sequência nativa de MUC16, é possível que epítopos não relevantes e fora do alvo possam ser introduzidos potencialmente se essas junções não compartilharem alta identidade de sequência com pelo menos uma junção de repetição de MUC16 nativa. Para determinar a identidade sequencial das junções de imunógeno sintético com todas as junções de repetição nativas de MUC16, os últimos 11 aminoácidos e os 11 aminoácidos iniciais de todas as repetições nativas vizinhas foram alinhados com os últimos 11 aminoácidos e com 11 aminoácidos iniciais de todas as junções de imunógeno sintético vizinhas (RMC1-RMC?2, RMC2-RMC3, RMC3-RMC4, RMC4-R61 e CTD de consenso sintético R63). O resultado da análise indicou que todas as junções de imunógeno sintético compartilhavam > 95,2% de identidade de sequência com pelo menos uma junção de repetição nativa, exceto a junção de imunógeno sintética RMC4-R61, que compartilhava apenas até 76,2% de identidade de sequência com todas as junções de repetição nativas (Figura 6A ).

[00278] Afim de reduzir a probabilidade de epítopos fora do alvo serem introduzidos na sequência de junção RMCA4-R61, a repetição nativa MUC16 59 (R59) foi inserida entre RMC4 e R61 (IRC de consenso sintético + imunógeno R59) (Figura 6B) A análise de sequência mostrou que as junções RMC4-R59 e R59-R61 compartilhavam identidades mais altas com junções de repetição nativas (85,7% e 90,9%, respectivamente) em comparação com uma junção RMCA4-R61. Além disso, a predição de epítopos de MHC classe |, usando o Immune Epitope Database Resource Resource (// tools. ledb.org/mhci/), não predizia aglutinantes fortes do haplótipo HLA- A*02:01 nas junções RMC4-R59 e R59-R61.

[00279] Estratégias adicionais para evitar a introdução de uma junção RMC4-R61 também foram utilizadas, incluindo: utilizar dois plasmídeos (um para expressar um imunógeno RMC1-RMCA4 e o outro para expressar um imunógeno R61, R62, R63 e CTD de MUC16 de consenso sintético), adicionar um sítio de clivagem de furina entre RMCA4 e R61 nativo do imunógeno sintético preliminar e utilizar um vetor de expressão de promotor duplo com um promotor (hCMV) induzindo a expressão do imunógeno RMC1-RMC4 e outro promotor (SCMV) induzindo a expressão de R61, R62, R63 e imunógeno de CTD de MUC16 de consenso sintético.

Como resultado, cinco plasmídeos de DNA de MUC16 de consenso sintético diferentes foram gerados, como mostrado na Tabela 3. Representações esquemáticas dos imunógenos de MUC16 de consenso sintético são mostradas na Figura 7. Tabela 3 ID Plasmídeo | Esp.

Dorsal Nome de Imunógeno(s) PGX1435 pGX0001 Consenso sintético IRC + R59: Integrated MUC16 IRC + R59 Repeats and Synthetic Consensus Carboxy Terminal Domain + Native Repeat 59 PGX1436 pGX0001 Consenso sintético RMC: Repeat Micro- MUC16 RMC Consensus pGX1437 pGX0001 Consenso sintético NRC: Native Repeats MUC16 NRC and Synthetic Consensus Carboxy Terminal Domain pGX1438 pGX0001 Consenso sintético IRC: Integrated Repeats MUC16 IRC & Synthetic Consensus Carboxy Terminal Domain pGX1439 pGX0003 Consenso sintético Ver acima (promotor duplo) | MUC16 RMC & Consenso sintético MUC16 NRC

[00280] Paraterum nível de expressão mais alto, as sequências líder a montante de Kozak e IgE foram adicionadas ao N-terminal de todos os quatro imunógenos de MUC16 de consenso sintético. Yang, J. S. et al., The Journal of infectious diseases 184, 809-816 (2001). Além disso, o uso de códons das sequências de DNA que codificam esses imunógenos foi adaptado ao viés de códons dos genes do Homo sapiens. Andre, S. et al. Journal of virology 72, 1497-1503 (1998); Deml, L. et al. Journal of virology 75, 10991-11001 (2001).

[00281] Além disso, a otimização do RNA também foi realizada: regiões com teor de GC muito alto (> 80%) ou muito baixo (<30%) bem como os motivos de sequência de ação cis como caixas TATA internas, sítios chi e sítios de entrada ribossômicos foram evitadas. Schneider, R., et al, Journal of virology 71, 4892-4903 (1997); Muthumani, K. et al. Virology 314, 134-146 (2003). Os imunógenos sintéticos sintetizados de MUC16 foram digeridos com BamHlI e Xhol (pbGX1435-pGX1438) ou Pmel e Xhol ou Sall e Mlul (pGX1439) e clonados no vetor de expressão do Inovio pGX0001 (promotor do pGX1435-38) ou no vetor de expressão duplo do Inovio pGX0003 (pGX1439). Para todo os plasmídeos de MUC16 de consenso sintético, o sequenciamento de comprimento completo foi realizado e, em seguida, analisado e confirmado por dois analistas como correto.

[00282] Um modelo comparativo representativo da região de repetição central em tandem de imunógenos de MUC16 de consenso sintético, com base na sequência IRC de MUC16 de consenso sintético, é mostrado nas Figuras 8A-8C. A Figura 8A é um diagrama esquemático de MUC16 nativa (baseado no GenBank AAL65133.2) e MUC16 IRC de consenso sintético. Existem diferenças claras no tamanho entre as duas moléculas, e a sequência nativa contém domínios adicionais não presentes na versão de consenso sintético. Tanto o MUC16 nativo quanto o consenso sintético MUC16 IRC contêm uma série de repetições do tipo Sea Urchin Sperm Protein, Enterokinase e Agrin (SEA) e um domínio transmembranar. No IRC de MUC16 de consenso sintético, as sequências de repetição são baseadas no protocolo de sequência de micro-consenso descrito na seção Estratégia de Projeto de Repetição Central em Tandem. Como mostrado na Figura 8B, a modelagem comparativa ilustra as diferenças de tamanho entre o projeto de IRC de MUC16 nativa e MUC16 de consenso sintético. Os módulos de repetição tipo SEA foram modelados para IRC de MUC16 nativa e MUC16 de consenso sintético. Devido ao tamanho da sequência nativa, a modelagem foi realizada apenas em baixa resolução e fornecida para transmitir informações de tamanho relativo. A Figura 8C mostra um modelo comparativo da região de repetição de IRC de MUC16 de consenso sintético mostrada no formato cpk. À grande região N-terminal de MUC16, assim como a região C-terminal, não contêm sequências com modelos parentais confiáveis, e é por isso que não puderam ser modelados.

[00283] A sequência nucleotídica (SEQ ID Nº: 1) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID Nº: 2) para o consenso sintético MUC16 IRC + R59 aparecem na Tabela 21 e Tabela 22, respectivamente. A sequência nucleotídica (SEQ ID Nº: 3) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID Nº: 4) para o consenso sintético MUC16 RMC aparecem na Tabela 23 e Tabela 24, respectivamente. A sequência nucleotídica (SEQ ID Nº: 5) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID Nº: 6) para o consenso sintético MUC16 NRC aparecem na Tabela 25 e Tabela 26, respectivamente. À sequência nucleotídica (SEQ ID Nº: 7) e a sequência de aminoácidos (SEQ ID Nº: 8) para o consenso sintético MUC16 IRC aparecem na Tabela 27 e Tabela 28, respectivamente. Uma anotação dos elementos de SEQ ID Nº: 2, SEQ ID Nº: 4, SEQID Nº 6 e SEQID Nº: Be as posições de aminoácidos correspondentes é fornecida na Tabela 4.

Tabela 4 Descrição Posição aminoácido IgE sequência líder 1-18 Repetição Microconsenso1 19-174 Repetição Nativo 62 955-1110 | Repetição Nativo 63 | 1111-1237 Consenso sintético MUC16 Domínio Carbóxi-terminal 1238-1490 Mutações para abolir N-glicosilação N1408A N1431A N1437A Descrição Posição aminoácido IgE sequência líder 1-18 Repetição Microconsenso1 19-174 Repetição Microconsenso4 487-642 SEQ ID Nº: 6 Anotação (consenso sintético MUC16 NRC) [eesementarão [e

Consenso sintético MUC16 Domínio Carbóxi-terminal 458-710 Mutações para abolir N-glicosilação N628A N651A N657A IgE sequência líder 1-18 Sítio clivagem furina 643-649 Repetição Nativo 62 806-961 Repetição Nativo 63 962-1088 Consenso sintético MUC16 Domínio carbóxi-terminal 1089-1341 Mutações para abolir N-glicosilação N1259A N1282A N1288A

[00284] As diferenças entre imunógenos de MUC16 de consenso sintético e as sequências nativas estão resumidas na Tabela 5. Como o tamanho do domínio de repetição central em tandem varia entre as espécies (humano: 63 repetições, rhesus: 4 repetições; camundongo: repetições), e o tamanho das repetições individuais varia muito entre as espécies, é um desafio alinhar com precisão as sequências de imunógeno de MUC16 sintético de comprimento completo com sequências nativas específicas da espécie.

Portanto, para o domínio de repetição central em tandem, apenas as regiões do domínio Sea Urchin Sperm Protein, Enterokinase e Agrin (SEA) dos construtos sintéticos foram comparadas às sequências nativas de humanos, camundongos e rhesus do domínio SEA, uma vez que essa região é a região mais conservada da sequência de repetição.

Tabela 5 Consenso | Consenso | Consenso | Consenso | Consenso | Consenso | Consenso sintético sintético sintético sintético sintético sintético sintético MUC16 MUC16 MUC16 MUCI6 | MUCIS- | MUCIS- | MUCIS- IRC + R59 RMC NRC IRC SEA SEA Domínio Characteristics Domínios Domínios Carbóxi- de RMC1-4 de R61- terminal R63 Identidade para 51,5%- MUC16 100% 95,3% 100% humano nativo Identidade para 200%a | 174%a MUC16 rhesus 95,7% 89,7% 93,9% nativo Identidade para MUC16 26%a | 151%a 75,1% camundongo TII% 718% nativo Número de mutações de 1 aminoácidos (vs humano nativo) Número de mutações inseridas (não 3 3 3 3 derivadas de consenso) Peso molecular 1492 aa 644 aa(71 | 712aa(78 1343 aa (164 Kda) Kda) Kda) (148 Kda) Comprimento de sequência 4476 1932 2136 4029 de codificação (bp)

Exemplo 4: Construção e Estrutura do Plasmídeo pGX0001

[00285] —Aespinha dorsal do vetor pGX0001 é um vetor de expressão pVAXI modificado com 2998 pb sob o controle do promotor imediato- precoce do citomegalovírus humano (promotor hCMV). O pVAX1 original foi obtido da Thermo Fisher Scientific. A espinha dorsal pGX0001 inclui o gene de resistência à canamicina (KanR) e a origem da replicação do plasmídeo (pUC ori) para fins de produção. Esses elementos não são funcionais nas células eucarióticas. O mapa e a descrição do vetor de expressão modificado pVAX1 (pGX0001) são mostrados na Figura 9 e Tabela 6, respectivamente.

Tabela 6 somem TO ramsassae Promotor CMV: 137-724 Sítio promotor/iniciação T7 664-683 Sítio de clonagem múltipla 696-811 Sinal de poliadenilação GH bovino 829-1053 Gene de resistência a kanamicina 1226-2020 Origem puC 2319-2992

[00286] Foram introduzidas modificações no pvVAX1 para criar o pGX0001. Essas modificações estão listadas na Tabela 7 e não foram detectados problemas com relação à amplificação do plasmídeo e à transcrição e tradução do antígeno. Não foram observadas alterações adicionais na sequência de pGX0001 em nenhum dos produtos plasmídicos na plataforma usando pGX0001 como espinha dorsal. Os pares de base 2, 3 e 4 foram alterados de ACT para CTG na estrutura principal, a montante do promotor de CMV.

Tabela 7 c>T 1158 Espinha dorsal, a jusante do sinal de poliadenilação do hormônio de crescimento bovino (bGH poliA) A>- 2092 Espinha dorsal, a jusante do gene de resistência a kanamicina G>C 2969 Em cada extremidade de pUC Ori a montante do sítio RNASeH pGX0003

[00287] A espinha dorsal do vetor pPGX0003 é um plasmídeo de expressão eucariótica de 4596 pares de bases com dois sítios de clonagem múltiplos para insertos sob o controle de dois promotores: o promotor hcMV com um sinal poli A SV40 e o promotor SCMV com um sinal poli A bGH. Essa espinha dorsal também inclui KanR e pUC ori. O mapa e a descrição de pGX0003 são mostrados na Figura 10 e Tabela 8, respectivamente. Tabela 8 [momentos paesaetasa | Promotor hoMV: 3548-4373 Sinal de poliadenilação Virus 40 de símio 4391-4596 Sinal de poliadenilação GH Bovino 2290-2528 Gene de resistência a kanamicina 298-1059 Origem puUC 1227-1900

PGX1435

[00288] [00288] O pGX1435 foi produzido clonando a sequência de DNA de MUC16 de consenso sintético (consenso sintético MUC16 IRC + R59) em pGX0001 nos sítios BamHI e Xhol. A produção de MRNA relacionada é conduzida por um promotor de CMV humano (promotor de hoMV) e terminada pelo sinal de poli-adenilação da extremidade 3' do hormônio de crescimento bovino (bGH poli A). A espinha dorsal pGX0001 inclui o gene de resistência à canamicina (KanR) e a origem da replicação do plasmídeo (pUC ori) para fins de produção. Esses elementos não são funcionais nas células eucarióticas. Um diagrama esquemático de pGX1435 e consenso sintético MUC16 IRC + R59 é apresentado na Figura 11, e os elementos do plasmídeo e os pares de bases correspondentes são apresentados na Tabela 9. Tabela 9 [momentos Trmesanesss | Promotor hoMV: 1387-724 Consenso sintético MUC16 IRC + Sequência de 742-5217 Codificação R59: PoIliA bGH: 5261-5485 Resistência a canamicina (KanR): 5658-6452 pUC Ori: 6751-7424 pGX1436

[00289] O pGX1436 foi produzido clonando a sequência de DNA de micro-consenso de MUC16 sintético (consenso sintético MUC16 RMC) em pGX0001 nos sítios BamHI e Xhol. A produção de MRNA relacionada é conduzida por um promotor de CMV humano (promotor de hoMV) e terminada pelo sinal de poli-adenilação da extremidade 3' do hormônio de crescimento bovino (bGH poli A). A espinha dorsal pGX0001 inclui o gene de resistência à canamicina (KanR) e a origem da replicação do plasmídeo (pUC ori) para fins de produção. Esses elementos não são funcionais nas células eucarióticas. Um diagrama esquemático do pGX1436 e do consenso sintético MUC16 RMC é apresentado na Figura 12, e os elementos do plasmídeo e pares de bases correspondentes são apresentados na Tabela 10.

Tabela 10 [semen Trmesasõmss:| Promotor hoMV: 137-724 Consenso Sintético MUC16 Sequência de 742-2673 Codificação RMC: PoliA bGH: 2717-2941 Resistência a canamicina (KanR): 3114-3908 pUC Ori: 4207-4880 pGX1437

[00290] [00290] O pGX1437 foi produzido clonando a sequência de DNA de MUC16 de consenso sintético (consenso sintético MUC16 NRC) em pGX0001 nos sítios BamHI e Xhol. A produção de MRNA relacionada é conduzida por um promotor de CMV humano (promotor de hoMV) e terminada pelo sinal de poli-adenilação da extremidade 3' do hormônio de crescimento bovino (bGH poli A). A espinha dorsal pGX0001 inclui o gene de resistência à canamicina (KanR) e a origem da replicação do plasmídeo (pUC ori) para fins de produção. Esses elementos não são funcionais nas células eucarióticas. Um diagrama esquemático do pGX1437 e do consenso sintético MUC16 NRC é apresentado na Figura 13, e os elementos do plasmídeo e pares de bases correspondentes são apresentados na Tabela 11.

Tabela 11 [amenas pgaseas | pGX1438

[00291] O pGX1438 foi produzido clonando a sequência de DNA de MUC16 de consenso sintético (consenso sintético MUC16 IRC) em pGX0001 nos sítios BamHI e Xhol. A produção de mRNA relacionada é conduzida por um promotor de CMV humano (promotor de hcMV) e terminada pelo sinal de poli-adenilação da extremidade 3' do hormônio de crescimento bovino (bGH poli A). A espinha dorsal pGX0001 inclui o gene de resistência à canamicina (KanR) e a origem da replicação do plasmídeo (pUC ori) para fins de produção. Esses elementos não são funcionais nas células eucarióticas. Um diagrama esquemático do pGX1438 e do consenso sintético MUC16 IRC é apresentado na Figura 14, e os elementos do plasmídeo e pares de bases correspondentes são apresentados na Tabela 12. Tabela 12 [ementas Temsaetas]

pGX1439

[00292] O pGX1439 foi produzido clonando a sequência de DNA de MUC16 RMC de consenso sintético em pGX0003 nos sítios Sall e Mlul e a sequência de DNA de MUC16 NRC de consenso sintético nos sítios Pmel e Xhol.

[00293] pGX1439 é um plasmídeo de DNA de promotor duplo, no qual a produção de mRNA relacionado ao RMC de MUC16 de consenso sintético é conduzida por um promotor de CMV humano (promotor hCMV) e é encerrado pelo sinal de poliadenilação do vírus simiano 40 (SV40 poli A) e em que a produção de mRNA relacionado ao NRC de MUC16 de consenso sintético é conduzida por um promotor de símios do CMV (Promotor SCMV) e é terminada pelo sinal de poliadenilação do hormônio do crescimento bovino (bGH poli A). A espinha dorsal pGX0003 inclui o gene de resistência à canamicina (KanR) e a origem da replicação do plasmídeo (pUC ori) para fins de produção. Esses elementos não são funcionais nas células eucarióticas.

[00294] [00294] Um diagrama esquemático de pGX1439 e consenso sintético MUC16 RMC e consenso sintético MUC16 NRC é apresentado na Figura 15, e os elementos do plasmídeo e os pares de bases correspondentes são apresentados na Tabela 13. Tabela 13 BRR OO Teestsbaa

Exemplo 5: Expressão do Antígeno In Vitro

[00295] Aexpressão da proteína antigênica por pGX1435, pGX 1436, pGX1437, pGX1438 e pGX1439 foi confirmada por Western bloting. As células de rabdomiossarcoma humano (RD) (ATCC, CCL-136) mantidas em meio DMEM com 10% de FBS (ThermoFisher) foram transfectadas com pGX1435, pGX1436, pGX1437, pGX1438, pEX1439 ou pGX0001 (6 ug/10cm? prato) utilizando Turbofectin 8 (Origene). Quarenta e oito horas após a transfecção, as células foram lisadas usando tampão de lise celular RIPA (ThermoFisher) e o lisado celular foi coletado. Após um ensaio de BCA (ThermoFisher) para determinar a concentração total de proteínas, 15 ug de lisado celular foram submetidos a eletroforese em gel de SDS-PAGE 4-12% (ThermofFisher) e a detecção foi realizada usando um anticorpo anticMUC16 (Abeam, clone EPSISR23-96, abl68360) e visualizado com IgG anti-coelho conjugada com peroxidase de rábano silvestre (HRP) (Santa Cruz Biotech, tftsc- 2004) utilizando um sistema de análise de western blot ECL (GE Amersham). Como controle de carregamento, as transferências foram novamente sondadas quanto à expressão de actina usando um anticorpo monoclonal antiactina (Santa Cruz Biotech, clone, C4).

[00296] Foi detectada uma banda de proteína do peso molecular esperado para o MUC16 de consenso sintético (-162,5 kD), bem como bandas de proteína para a Região 1 (-68,2 kDa) e a Região 2 (-77,2 kDa) (Figura 16). Não foram detectadas bandas de proteínas na faixa de pGX0001, indicando que as bandas de proteínas eram específicas para o MUC16 de consenso sintético. As bandas antiactina foram detectadas com intensidades semelhantes, indicando que quantidades iguais de proteína foram carregadas em cada faixa. Verificou-se que pGX1435 e pGX1438 expressam sua respectiva proteína antigênica e verificou-se que pGX1436, pGX1437 e pGX1439 expressam suas respectivas regiões de proteína antigênica.

Exemplo 6: Imunogenicidade dos Construtos de Vacina de Mesotelina de Consenso Sintético Animais e imunizações

[00297] —“Camundongos fêmeas CB6F1 de 8 semanas de idade foram comprados da Jackson Laboratories. Todos os animais foram alojados em uma instalação com ciclo de luz e temperatura controlada na BTS Research (San Diego, CA). O cuidado com os animais foi realizado de acordo com as diretrizes dos Institutos Nacionais de Saúde e a Proposta de Cuidado e Uso de Animais (ACUP) (BTS ACUP * 15-091). Os camundongos foram divididos em dezesseis grupos, conforme detalhado na Tabela 14. Tabela 14 fe ee o 2 fe ess | fe es | TRA E fe es OR TRA E fe es OR TRA e fe es O TRA Po fe es O TRA E fee o TRA E fee a TORA fe e TRA nm fe es Efe ese o [e fe fsenee | 22 [6 de Jsemes | O 2 22 e fe fem O [16 Te pen [a TR

[00298] Os camundongos nos grupos imunizados foram vacinados com as doses indicadas de pGX0001 ou pGX1435, pGX1436, pGX1437, pGX1438, pGX1439 de acordo com SOP R20-003147 CELLECTRAS 3P Mouse Treatment. Resumidamente, os plasmídeos foram formulados em água estéril para injeção (VetOne) de modo que a dose indicada foi distribuída por injeção intramuscular no músculo tibial anterior em um volume de injeção de 30 ul. Cada injeção intramuscular foi imediatamente seguida por eletroporação (EP) usando o Dispositivo de Eletroporação por Corrente Constante Adaptável CELLECTRA? 2000 com uma matriz 3P (Inovio Pharmaceuticals). O dispositivo foi configurado para distribuir dois pulsos de 0,1 Amp de 52 ms de largura de pulso espaçados por um 1 segundo de atraso. Devido ao grande número de camundongos e grupos, metade dos camundongos de cada grupo recebeu 3 imunizações, com 3 semanas de intervalo. Esses camundongos foram sacrificados uma semana após a última imunização e os baços colhidos para leituras imunes celulares. A outra metade dos camundongos em cada grupo recebeu 3 imunizações, com 3 semanas de intervalo. Os camundongos foram sacrificados uma semana após a última imunização e os baços colhidos para leituras imunes celulares. Nenhum outro tecido foi coletado.

Isolamento de Linfócitos Esplênicos

[00299] Os esplenócitos foram isolados assepticamente e colocados em 5 mL de meio R10 (meio 1640 do Rosewell Park Memorial Institute suplementado com soro fetal bovino a 10% e antibiótico-antimicótico a 1%). Os esplenócitos foram isolados por interrupção mecânica do baço usando uma máquina Stomacher (Seward Laboratory Systems Inc.), e o produto resultante foi filtrado usando um filtro de células de 40 horas (BD Falcon). O produto resultante foi centrifugado e o sedimento foi tratado por 5 min com tampão de lise ACK (Lonza) para lise de hemácias. Os esplenócitos foram então centrifugados, lavados em PBS e depois ressuspensos em meio R10 e imediatamente usados para análises posteriores.

IFNy ELISpot

[00300] Oensaio!FNy ELISpot de camundongo foi realizado usando um kit da MabTech (MabTech, f3321-4APW-10) para avaliar as respostas celulares específicas do antígeno. Noventa e seis placas de poço pré-revestidas com anticorpo anti-|FNy de camundongo (mAh AN18) foram lavadas em PBS e bloqueadas por duas horas em temperatura ambiente com meio R10 e, em seguida, plaqueadas (em triplicados) com um número de células de entrada de 2 x 105 células por poço. Um conjunto de peptídeos foi sintetizado (GenScript), cada um contendo 15 resíduos de aminoácidos sobrepostos por 11 aminoácidos representando toda a sequência de proteínas de MUC16 de consenso sintético para cada construto. Estes conjuntos de peptídeos foram ressuspensos em DMSO (Sigma) e reunidos a uma concentração de — 2 ug /ml de peptídeo em seis conjuntos de peptídeo. Os conjuntos de peptídeos continham os peptídeos correspondentes à proteína antigênica de MUC16 de consenso sintético, como indicado no esquema fornecido na Figura 17. A concavalina A (Sigma) a 5ug/ml foi utilizada como controle positivo e o meio de cultura completo foi usado como controle negativo. As placas foram incubadas por 18 horas a 37ºC, em uma incubadora de atmosfera de 5% de C02. Em seguida, foi adicionado um anticorpo biotinilado de detecção de IFNy anti- camundongo (MabTech, mAh R4-6A2) e as placas foram incubadas por duas horas em temperatura ambiente. As placas foram lavadas e o anticorpo Streptavidin-ALP (MabTech) foi adicionado e as placas incubadas por uma hora em temperatura ambiente. A detecção do ponto foi concluída usando o substrato BCIP/NBT de acordo com as instruções do fabricante do kit (MabTech). As manchas nas placas foram contadas usando um leitor ELISPOT automatizado (Cellular

Technology). O número médio de unidades formadoras de pontos (SFU) foi ajustado para 1 x 106 esplenócitos para exibição de dados.

[00301] —Asrespostas específicas do antígeno pelo IFNy ELISpot são relatadas como o número de unidades formadoras de mancha IFNy (SFU) por 1 x 10º esplenócitos maiores que a SFU no controle apenas de meio.

[00302] A imunogenicidade do construto de MUC16 de consenso sintético foi avaliada em três quantidades de dose (10 ug, 30 ug e 50 ug) por IFNy ELISpot e citometria de fluxo (n = 8/grupo). Os camundongos foram imunizados com a espinha dorsal do plasmídeo vazio (pGX0001) como controle negativo (n = 4/grupo). A vacinação com construtos sintéticos de comprimento total MUC16 (pGX1435, pGX1438 e pGX1439) induziu respostas imunes celulares excepcionalmente robustas em comparação com camundongos vacinados com controle negativo.

[00303] A magnitude da produção de IFNy para o MUC16 de consenso sintético induzido por pGX1435, conforme determinado por ELISpot, dependia da dose (Figura 18A). Especificamente, a SFU de IFNy de MUC16 pGX1435 de consenso sintético foi 1564 + 661, 3858 + 2767 e 5407 + 1959 nas quantidades de 10 ug, 30 ug e 50 yo, respectivamente. As respostas de IFNy de MUC16 de consenso sintético induzidas por pGX1435 foram significativamente maiores que pureza nas doses de 10 ug (p = 0,002), 30 ug (p = 0,028) e 50 ug (p = 0,001) de pGX1435. Também são indicadas respostas detectáveis ao epítopo R59 único (grupo de peptídeos 6) induzido por pGX1435 na Figura 18D.

[00304] A magnitude da produção de IFNy específico de MUC16 de consenso sintético induzida pelo construto pGX1438, conforme determinado por ELISpot, era independente da dose, com as doses mais baixas induzindo uma resposta mais robusta (Figura 18B).

Especificamente, a SFU de IFNy de MUC16 pGX1438 de consenso sintético foi 5628 + 3144, 7668 + 3371 e 6005 + 3472 nas doses de 10 ug, 30 ug e 50 ug, respectivamente. As respostas de IFNy de MUC16 de consenso sintético induzidas por pGX1438 foram significativamente maiores que pureza nas doses de 10 ug (p = 0,008), 30 ug (p = 0,002) e 50 ug (p = 0,009) de pGX1435.

[00305] A magnitude da produção de IFNy específico de MUC16 de consenso sintético induzida pelo construto pGX1438, conforme determinado por ELISpot, também era independente da dose, com as quantidades de doses mais baixas induzindo uma resposta mais robusta (Figura 18C). Especificamente, a SFU de IFNy de MUC16 pGX1439 de consenso sintético foi 3180 + 1377, 6138 + 2696 e 4862 + 2069 nas quantidades de 10 ug, 30 ug e 50 ug, respectivamente. As respostas de IFNy de MUC16 pGX1439 de consenso sintético foram significativamente maiores do que pureza nas quantidades de dose 10 ug (p = 0,002), 30 ug (p = 0,002) e 50 ug (p = 0,002) de pGX1435.

[00306] As respostas de IFNy para os construtos de comprimento total estão resumidas na Tabela 15.

Tabela 15 Consenso Sintético Fusão Muc16 (pbGX1435) IFNy ELISpot Média SFU + Código Produto Grupo Quant, Dose valor p Desv, Padr. ug 1564 + 661 0,002 pGX1435 Imunizado 30 ug 3858 + 2767 0,028 50 ug 5407 + 1959 0,001 Significância estatística assumida em p<0,05, valores p reportados são relativos à pureza (pGX0001 camundongos imunizados). Consenso Sintético Clivagem Furina Muc16 (pGX1438) IFNy ELISpot Código Média SFU + Grupo valor p Produto Quant, Dose | Desv, Padr, pGX0001 puro 30 ug 7+8 10 pg 5628 + 3144 0,008 pGX1438 Imunizado | 30 ug 7668 + 3371 0,002 50 pg 6005 + 3472 0,009 Significância estatística assumida em p<0,05, valores p reportados são relativos à pureza (pDGX0001 camundongos imunizados). Consenso Sintético Promotor Duplo Muc16 (pbGX1439) IFNy ELISpot Média SFU + Desv. . Grupo valor p Código Produto Quant, Dose Padr. 3180 + 1377 0,002 pGX1439 Imunizado 6138 + 2696 0,002 ass212000 | 00002 Significância estatística assumida em p<0,05, valores p reportados são relativos à pureza (pbGX0001 camundongos imunizados).

[00307] A vacinação com construtos sintéticos de comprimento parcial MUC16 (pGX1436 e pGX1437) também induziu respostas imunes celulares excepcionalmente robustas em comparação com camundongos vacinados com controle negativo.

[00308] A magnitude da produção de IFNy específico de MUC16 de consenso sintético contra a região 1 induzida pelo construto pGX1436, conforme determinado por ELISpot, dependia da dose (Figura 19A). Especificamente, a SFU de IFNy de MUC16 de consenso sintético induzida por pGX1436 foi 3609 + 1377, 4711 + 2365 e 5565 + 3496 nas quantidades de 10 ug, 30 ug e 50 ug, respectivamente. As respostas de IFNy de MUC16 de consenso sintético elicitadas por pGX1436 foram significativamente maiores que pureza nas doses de 10 ug (p = 0,001), ug (p = 0,004) e 50 ug (p = 0,014) de pGX1436. Ao comparar as respostas de IFNy à Região 1 induzidas por todos os construtos de MUC16, as respostas induzidas por pGX1435 são significativamente menores que pGX1438 (Figura 19B).

[00309] A magnitude da produção de IFNy específico para MUC16 de consenso sintético contra a região 2 induzida pelo construto pGX1437, conforme determinado por ELISpot, também era dependente da dose (Figura 19C). Especificamente, a SFU de IFNy de MUC16 pGX1437 de consenso sintético foi de 835 + 428, 1893 + 1291 e 2399 + 1245 nas quantidades de 10 ug, 30 ug e 50 ug, respectivamente. As respostas de IFNy de MUC16 pGX1437 de consenso sintético foram significativamente maiores que pureza nas doses de 10 ug (p = 0,005), 30 ug (p = 0,022) e 50 ug (p = 0,005) de pGX1437. Houve uma tendência para uma produção de IFNy mais robusta contra a Região 2 com pGX1438 (Figura 19D).

[00310] As respostas de IFNy para os construtos de comprimento parcial estão resumidas na Tabela 16.

Tabela 16 Consenso Sintético Muc16 "Região 1" (pGX1436) IFNy ELISpot Código Quant, Média SFU + Grupo valor p Produto Dose Desv. Padr. ug 3609 + 1377 0,001 pGX1436 Imunizado 30 ug 4711 + 2365 0,004 50 pg 5565 + 3496 0,014 Significância estatística assumida em p<0,05, valores p reportados são relativos à pureza (pGX0001 camundongos imunizados). Consenso Sintético Muc16 "Região 2" (pGX1437) IFNy ELISpot Código Quant, Média SFU + Grupo valor p Produto Dose Desv. Padr. 10 ug 835 + 428 0,005 pGX1437 Imunizado 30 ug 1893 + 1291 0,022 50 ug 2399 + 1245 0,005 Significância estatística assumida em p<0,05, valores p reportados são relativos à pureza (pGX0001 camundongos imunizados). Citometria de Fluxo

[00311] As respostas imunes celulares induzidas por MUC16 de consenso sintético foram ainda caracterizadas por citometria de fluxo. 2 x 10º esplenócitos de camundongos vacinados e ingênuos foram imediatamente estimulados após o isolamento com os peptídeos de MUC16 de consenso sintético por 6 horas na presença de Brefeldin À

(BD Biosciences), Monensin (BD Biosciences) e anticorpo anti-CD107a anti-camundongo FITC (BD Biosciences). Após estimulação com peptídeos, os esplenócitos foram centrifugados e ressuspensos em 20 pl por poço da solução de BD Fc Block (BD Biosciences) de camundongo. O bloco Fc é utilizado a uma diluição inicial de 1:40 em PBS e incubado a 4ºC por 5 minutos.

[00312] Após a incubação, os anticorpos extracelulares restantes (em PBS) são adicionados a 30 pL por poço e deixados a incubar a 4ºC por 30 minutos. Após a adição da mancha extracelular, o volume final em cada poço é de 50 pL, consistindo em Bloco Fc na diluição final de 1:100 e os anticorpos extracelulares nas suas diluições de trabalho apropriadas. As células foram então coradas com corante de viabilidade (Vivid, Thermo-Fisher) e os seguintes anticorpos extracelulares: CD4 anticamundongo PerCP-Cy5.5 (BD Biosciences, clone RM4-5) e CD8a anticamundongo APC (BD Biosciences, clone 63-6,7). As citocinas intracelulares foram subsequentemente coradas com os seguintes anticorpos: IFNy anticamundongo BV605, IL-2 anticamundongo APC- R700 e TNF-a anti-ccamundongo PE (BD Biosciences). As células foram fixadas e permeabilizadas (BD Biosciences, tt 554714) por 20 minutos a 4ºC. A coloração intracelular foi subsequentemente concluída com os seguintes anticorpos: CD3e anti-APC-Cy7 anticcamundongo (BD Biosciences, clone 145-2C11) IFNy BV605 anti-camundongo IFNy BD Biosciences, clone XMG1.2), IL-2 anticcamundongo APC-R700 (BD Biosciences, clone JES6-5H4) e PE anticcamundongo TNF-a (BD Biosciences, clone MP6-XT22).

[00313] Os dados do ICS foram coletados no FACS CANTO de 10 cores (BD Biosciences) e a análise foi concluída usando o software FlowJo. A estratégia de bloqueio da citometria de fluxo é mostrada na Figura 20. Para que uma célula seja chamada de antígeno específico por citometria de fluxo, a frequência do parâmetro relatado deve exceder a do controle somente de meio. Para que uma célula seja identificada como produtora de CD 107a específico de antígeno, a célula também deve ser identificada como positiva para a produção específica de antígeno de IFNy e/ou IL-2 e/ou TNFa, conforme identificado pela porta booleana.

[00314] O MUC16 de consenso sintético de comprimento completo provocou fortes respostas no compartimento de células T CD4*, com pGX1438 sendo o mais robusto (Figuras 21A-21C). O MUC16 de consenso sintético induziu frequências de respostas de células T CD4* específicas de antígeno que foram significativamente mais robustas do que pureza (0,29% + 0,23%) nos grupos de níveis de dose de 10 ug, 30 ug, e 50 ug para pPGX1435, pGX1438 e pGX1439 (Figuras 21A-21C).

[00315] A magnitude de células T CD4* específicas do construto MUC16 pGX1435 de consenso sintético era dependente da dose (Figura 21A). Especificamente, as células T CD4* de MUC16 pGX1435 de consenso sintético foram 1,34% + 0,45%, 2,27% + 1,38% e 3,12% t 1,45% nas doses de 10 ug, 30 ug, e 50 ug, respectivamente. As células T CD4*de MUC1I6 pGX1435 de consenso sintético foram significativamente maiores do que pureza nas doses de 10 ug (p<0,001), 30 ug (p=0,020) e 50 ug (p=0,004) de dose de pGX1435. As respostas de células T CD4* específicas para MUC16 pGX1435 de consenso sintético consistiram principalmente em células T CD4*T produtoras IFNy*IL-2*TNFa*, IFNy*IL-2TNFa* ou IFNy*IL-2TNFa-.

[00316] A magnitude de células T CD4+ específicas do construto MUC16 pGX1438 de consenso sintético também era dependente da dose (Figura 21B). Especificamente, as células T CD4* de MUC16 pGX1438 de consenso sintético foram 3,12% + 1,19%, 3,73% t+ 1,48% e 4,06% + 1,87% nas quantidades de 10 pg, 30 ug e 50 yo, respectivamente. As células T CD4* de MUC16 pGX1438 de consenso sintético foram significativamente maiores do que pureza nas doses de ug (p=0,001), 30 ug (p = 0,01) e 50 ug (p = 0,003) de dose de pGX1438. As respostas de células T CD4* específicas para MUC16 pGX1438 de consenso sintético consistiam principalmente em células CD4* produtoras de IFNy+IL-2+TNFa+t, IFNy+IL-2-TNFa+ ou IFNy*1L"2- TNFa.

[00317] A magnitude de células T CD4* específicas do construto MUC16 pGX1439 de consenso sintético era dependente da dose (Figura 21C). Especificamente, as células T CD4* de MUC16 pGX1439 de consenso sintético foram 1,99% + 0,99%, 2,71% + 0,51% e 3,25% t+ 1,29% nas doses de 10 ug, 30 ug e 50 ug, respectivamente. As células T CD4+ de MUC1I6 pGX1439 de consenso sintético foram significativamente maiores do que pureza nas doses de 10 ug (p = 0,007), 30 ug (p0,001) e 50 ug (p = 0,001) de doses de pPGX1439. As respostas de células T CD4* específicas para MUC16 pGX1439 de consenso sintético consistiam principalmente em células CD4+ produtoras de IFNy+IL-2+TNFar+t, IFNy+IL-2-TNFa+ ou IFNy"IL-2TNFo-. A frequência de células T CD4* específicas de antígeno é mais detalhada na Tabela 17.

[00318] Todas as quantidades de doses de construtos de comprimento total de MUC16 de consenso sintético induziram uma frequência de células TCD4*CD107a* maior que pureza (0,08% + 0,04%), mas apenas o construto pGX1438 em todas as doses foi significativamente mais robusto.

[00319] Especificamente, a frequência de células T CD4*CD107a* específicas de antígeno pGX1435 foi de 0,27% + 0,14%, 0,32% + 0,37% e 0,64% + 0,34% nos grupos de quantidades de dose 10 ug (p = 0,01), ug ( p = 0,297) e 50 ug (p = 0,008), respectivamente (Figura 21A). O perfil de citocina das células T CD4*CD107a* específicas para pGX1435 foi semelhante nos grupos de quantidade de dose e foi composto principalmente por células IFNy*IL-2*TNFa* e IFNy*IL-2-TNFa* (Figura 22A).

[00320] A frequência de células T CD4+CD107a+ específicas de antígeno pGX1438 foi de 0,40% + 0,18%, 0,54% + 0,36% e 0,53% + 0,25% nos grupos de quantidades de dose 10 ug (p = 0,004), 30 ug (p = 0,029) e 50 ug (p = 0,004), respectivamente (Figura 21B). O perfil de citocina das células T CD4*CDI07a* específicas para pGX1438 foi semelhante nos grupos de quantidade de dose e foi composto principalmente por células IFNy*IL-2*TNFa* e IFNy*IL-2TNFa* (Figura 22B).

[00321] A frequência de células T CD4+CD107a+ específicas de antígeno pGX1439 foi de 0,26% + 0,18%, 0,36% + 0,18% e 0,50% + 0,25% nos grupos de dose 10 ug (p = 0,069), 30 ug (p = 0,008) e 50 ug (p = 0,006), respectivamente (Figura 22C). O perfil de citocina das células T CD4*CDI07a* específicas para pGX1439 foi semelhante nos grupos de dose e foi composto principalmente por células IFNy*IL- 2*TNFa* e IFNyY*IL-2TNFO* (Figura 22C). A frequência de células T CD4* específicas de antígeno com potencial citolítico é mais detalhada na Tabela 17.

Tabela 17 % % Cód.

Quant. | % CD4* + | %CD4* | CD4*CD107a* | CD4*CD10 Prod.

Grupo Dose Desv.

Padr. | valor p + Desv.

Padr. 7a* valor p Significância estatística assumida em p<0,05. valores p relatados relativos à pureza (pGX0001 camundongos imunizados). Consenso Sintético Muc16 Consenso Sintético Muc16 Clivagem de Furina (pGX1438) células T CD4* e CD4*'CD107a* % % Cód.

Quant. | %CD4* + | %CD4* | CD4*CD107a* | CD4*CD107a* Prod.

Grupo Dose | Desv.Padr. | valorp | + Desv.

Padr. valor p pGX0001 30Ug | 0,29+0,23 0,08 +0,04 na 10ug | 3,12+1,19 | 0001 | 0,40 + 0,18 0,004 pGX1438 | Imunizado | 30Ug | 3,7383148 | 0,001 0,54 + 0,36 0,029 50Ug | 406+1,87 | 0,003 0,53 + 0,25 0,004 Significância estatística assumida em p<0.05. valores p relatados relativos à pureza (pDGX0001 camundongos imunizados). Consenso Sintético Muc16 Promotor Duplo (pGX1439) Células T CD4* e CD4*CD107a* % % Cód.

Quant. %CD4* + | %CD4* | CD4CD1I07a* | CD4*CD107a* Prod.

Grupo Dose Desv.

Padr. | valorp | + Desv.

Padr. valor p pGX0001 304g | 0,298+0,23 na 0,08 +0,04 10pg | 1,99+0,99 | 0,007 0,26 + 0,18 0,069 pGX1439 | Imunizado 30pg | 2,71+0,51 <0,001 0,36 + 0,18 0,008 50Ug | 3,25+1,29 0,001 0,50 + 0,25 0,006 Significância estatística assumida em p<0,05. valores p relatados relativos à pureza (pGX0001 camundongos imunizados).

[00322] A frequência de células T CD8* específicas de antígeno induzidas por construtos de comprimento completo de MUC16 de consenso sintético aumentou sobre o controle (0,13% + 0,15%) em todos os grupos de doses para todas os construtos (Figuras 23A-23C). Especificamente, a frequência de respostas T CD8* específicas de antígeno nos grupos imunizados com 10 ug (0,65% + 0,28%, p = 0,007), ug (0,82% + 0,46%, p = 0,022) e 50 ug (1,60 + 1,08%, p = 0,034) de pGX1435 foi significativamente mais robusta em comparação com pureza. As respostas das células T CD8* específicas de MUC16 pGX1435 de consenso sintético eram dependentes da dose e consistiam principalmente em células T CD8* produtoras de IFNy*IL-2" TNFa' e IFNy"IL-2TNFa* (Figura 23 A).

[00323] A frequência de respostas T CD8* específicas de antígeno nos grupos imunizados com 10 ug (1,30% + 0,79%, p = 0,024), 30 ug (1,33% + 0,87%, p = 0,034) e 50 ug (1,36% + 0,71%, p = 0,010) de pGX1438 também foi significativamente mais robusta em comparação com pureza. As respostas das células T CD8* específicas para MUC16 pGX1438 do consenso sintético eram independentes da dose, com muito pouca diferença entre as doses, e consistiam principalmente em células CD8* produtoras de IFNy*IL-2TNFa- e IFNy*IL-2TNFa* (Figura 23B).

[00324] A frequência de respostas T CD8* específicas de antígeno nos grupos imunizados com 10 ug (1,36% + 0,62%, p = 0,004), 30 ug (2,07% + 1,77%, p = 0,089) e 50 ug (1,19% + 0,69%, p = 0,020) de pGX1439 foi mais robusta em comparação com pureza. As respostas de células T CD8* específicas de MUC16 pGX1439 de consenso sintético eram independentes da dose e consistiam principalmente em células T CD8* produtoras de IFNy*IL-2TNFa e IFNy"IL-2TNFO* (Figura 23C). A frequência de células CD8* específicas de antígeno é mais detalhada na Tabela 18.

[00325] Semelhante ao padrão das células T CD8* específicas de antígeno, os construtos de comprimento total de MUC16 de consenso sintético induziram uma mudança significativa na frequência de células T CD8*CD107a* entre todos os grupos comparada com pureza (0,05% + 0,04%), com exceção de pGX1439 na quantidade de dose de 30 ug (Figuras 24A-24C). Especificamente, a frequência de células T CD8*CD107a* específicas de antígeno foi de 0,47 + 0,23%, 0,59 + 0,34% e 1,19 + 0,90% nos grupos de quantidade de dose 10 ug (p = 0,005), 30 ug (p = 0,013) e 50 ug (p = 0,043) de pGX1435, respectivamente (Figura 24A). O perfil de citocina das células T CD8*CD107a* T específicas de pGX1435 foi semelhante entre os grupos de quantidade de doses e a maioria foi composta por células IFNy*IL-2-TNFo' e IFNy*IL-2-TNFa* (Figura 23 A).

[00326] A frequência de células T CD8*CD107a* T específicas do antígeno foi de 0,80% + 0,48%, 1,05% + 0,77% e 1,05% + 0,65% nos grupos de quantidade de dose 10 ug (p = 0,016), 30 ug (p = 0,039), e 50 ug (p = 0,016) de pGX1438, respectivamente (Figura 23B). O perfil de citocina das células T CD8'CD107a* específicas de pGX1438 foi semelhante nos grupos de quantidade de dose e foi composto principalmente por células IFNy*IL-2-TNFa' e IFNy*IL-2TNFa* (Figura 246).

[00327] A frequência de células T CD8*CD107a* específicas de antígeno foi de 1,04% + 0,65%, 1,68% + 1,54% e 0,93% + 0,68% nos grupos de quantidade de dose 10 ug (p = 0,018), 30 ug (p = 0,094), e 50 ug (p = 0,038) de pGX1439, respectivamente (Figura 23C). O perfil de citocina das células T CD8*CD107a* específicas de pGX1439 foi semelhante entre os grupos de quantidade de doses e a maioria era composta por células IFNy*IL-2-TNFa e IFNy*IL-2-TNFa* (Figura 24C). A frequência de células T CD8* específicas de antígeno com potencial citolítico é mais detalhada na Tabela 18.

Tabela 18 Consenso Sintético Fusão Muc16 (pGX1435) células T CD8* e CD8*CD107a* Cód.

Quant. %CD8* + | %CD8* | %CDBE'CDIO7a*+ | % CD8'CD107a* Prod.

Grupo Dose Desv.

Padr. valorp Desv.

Padr. valor p ug 0,65 + 0,28 0,007 0,47 + 0,23 0,005 pGX1435 | Imunizado | 30 ug 0,82 + 0,46 0,022 0,59 + 0,34 0,013 50 ug 1,60 + 1,08 0,034 1,19 + 0,90 0,043 Significância estatística assumida em p<0,05. valores p relatados relativos à pureza (pGX0001 camundongos imunizados). Consenso Sintético Muc16 Clivagem de Furina (pGX1438) células T CD8* e CD8*CD107a* Cód.

Quant. %CD8* + % CD8* % CD8*CD107a* | % CD8*CD107a* Prod.

Grupo Dose Desv, Padr. valor p + Desv.

Padr. valor p pGX0001 puro 30 ug 0,13 +0,15 0,05 + 0,04 na pGX1438 | Imunizado 30 pq 1,33 + 0,87 0,034 1,05 + 0,77 0,039 Significância estatística assumida em p<0,05. valores p relatados relativos à pureza (pGX0001 camundongos imunizados), Consenso Sintético Muc16 Promotor Duplo (pGX1439) células T CD8* e CD8:CD107a* Quant. %CD8 + %CD8* | % CD8*CD107a* | % CD8*CD107a* Cód, Prod.

Grupo Dose Desv, Padr. valor p + Desv.

Padr. valor p pGX0001 puro 30 ug 0,13 +0,15 na 0,05 + 0,04 10 ug 1,36 + 0,62 0,004 1,04 + 0,65 0,018 PGX1439 | Imunizado | 3919 | 2074177 0,089 1,68 + 1,54 0,094 1,19 + 0,69 0,020 0,93 + 0,68 0,038 Significância estatística assumida em p<0,05. valores p relatados relativos à pureza (pDGX0001 camundongos imunizados).

[00328] Os construtos de comprimento parcial de MUC16 de consenso sintético suscitaram fortes respostas no compartimento de células T CD4* (Figuras 25A-25B e Figuras 26A-26B). A magnitude de células T CD4* específicas de construto MUC16 pGX1436 de consenso sintético era independente da dose (Figura 25 A). Especificamente, as células T CD4* de MUC16 pGX1436 de consenso sintético foram 1,74% + 0,79%, 2,18% + 1,15% e 1,32% + 1,74% nas quantidades de dose de 10 ug, 30 ug e 50 ug, respectivamente. As células T CD4* de MUC16 pGX1436 de consenso sintético foram significativamente maiores do que pureza (0,17% + 0,10%) nas quantidades de doses de 10 ug (p = 0,003) e 30 ug (p = 0,007), mas não na quantidade de dose de 50 ug (p = 0,359) de pGX1436. As respostas de células T CD4* específicas de MUC16 pGX1436 de consenso sintético consistiram principalmente em células CD4* produtoras de IFNyY*IL-2*TNFO*, IFNYIL-2TNFO*! ou IFNy*IL-2TNFo". A frequência de células T CD4*CD107a* específicas de antígeno pGX1436 foi de 0,45% + 0,28%, 0,31% + 0,26% e 0,23% + 0,30% nos grupos de quantidade de dose ug (p = 0,020), 30 ug (p = 0,080) e 50 ug (p = 0,369), respectivamente (Figura 25B). O perfil de citocina das células T CD4*CDI07a* específicas para pGX1436 foi semelhante nos grupos de quantidade de dose e foi composto principalmente por células IFNy"IL-2*TNFa* e IFNy*IL-2" TNFa* (Figura 25B). A frequência de células T CD4* específicas de antígeno com potencial citolítico é mais detalhada na Tabela 19.

[00329] [00329] A magnitude de células T CD4'* específicas do construto MUC16 pGX1437 de consenso sintético era dependente da dose (Figura 26A). Especificamente, as células T CD4+ de MUC16 pGX1437 de consenso sintético foram de 0,56% + 0,38%, 1,14% + 0,36% e 1,87% + 1,05% nas quantidades de dose de 10 ug, 30 ug e 50 ug, respectivamente. As células T CD4+ de MUC16 pGX1437 de consenso sintético foram significativamente maiores do que pureza (0,21% + 0,14%) na quantidade de dose de 30 ug (p0,001) e 50 ug (p=0.011) mas não em 10 ug (p=0,063) de pGX1437. As respostas de células T CD4+ específicas de MUC16 pGX1437 de consenso sintético consistiram principalmente em células T CD4* produtoras de IFNy*IL- 2*TNFo*, IFNy*IL-2TNFO* ou IFNyIL-2TNFa*. A frequência de células T CD4*CD107a* específicas de antígeno PGX1437 foi de 0,09% + 0,09%, 0,21% + 0,05% e 0,36% + 0,21% nos grupos de quantidade de dose de 10 ug (p = 0,335), 30 ug (p<0,001) e 50 ug (p = 0,016), respectivamente (Figura 26B). O perfil de citocina das células T CD4*CD107a* T específicas de pGX1437 foi semelhante nos grupos de quantidade de dose e foi composto principalmente por células of IFNy"*IL-2*TNFa* e IFNy"IL-2" TNFa* (Figura 26B). A frequência de células T CD4* específicas de antígeno com potencial citolítico é mais detalhada na Tabela 19. Tabela 19 [cn | em [6 [aura [Cs [Sara [| Cód. Prod. Grupo Dose Desv. Padr. valor p + Desv. Padr. valor p Significância estatística assumida em p<0.05. valores p relatados relativos à pureza

ARMADA Prod. Grupo Dose Desv. Padr. | valorp Desv. Padr. valorp PGX1437 | Imunizado 30 uq 1,14 + 0,36 Significância estatística assumida em p<0,05. valores p relatados relativos à pureza

[00330] —Construtos de comprimento parcial de MUC16 de consenso sintético provocaram respostas robustas no compartimento de células T CD8* (Figuras 27A-27B e Figuras 28A-28B). A magnitude de células T CD8* específicas de construto MUC16 pGX1436 de consenso sintético era independente da dose (Figura 27 A). Especificamente, as células T CD8* de MUC16 pGX1436 de consenso sintético foram 1,76% + 0,73%, 2,17% + 0,81% e 1,92% + 2,13% nas quantidades de dose de 10 ug, 30 ug e 50 ug, respectivamente. As células T CD8* de MUC16 pGX1436 de consenso sintético foram significativamente maiores do que pureza (0,06% + 0,08%) nas quantidades de doses de 10 ug (p = 0,002) e 30 Hg (p = 0,001), mas não na quantidade de dose de 50 ug (p = 0,192) de pGX1436. As respostas de células T CD8* específicas de MUC16 pGX1436 de consenso sintético consistiram principalmente em células T CD8+ IFNy*IL-2TNFa or IFNy*IL-2 TNFat*. A frequência das células Tc CD8*CD107a* específicas de antígeno pGX1436 foi de 1,55% + 0,64%, 1,86% + 0,73% e 1,72% + 1,95% nos grupos de quantidade de dose de 10 ug (p = 0,001), 30 ug (p = 0,001) e 50 ug (p = 0,93) e, respectivamente (Figura 26B). O perfil de citocina das células T CD8*CD107a* específicas para pGX1436 foi semelhante nos grupos de quantidade de dose e foi composto principalmente por células IFNy*IL- 2 TNFa' e IFNy*IL-2-TNFa* (Figura 27B). Globalmente, as respostas das células T CD8'à Região 1 induzidas por pGX1435 são significativamente mais baixas que pGX1436 (Figura 29 A). A frequência de células T CD8* específicas de antígeno com potencial citolítico é mais detalhada na Tabela 20.

[00331] A magnitude de células T CD8* específicas do construto MUC16 pGX1437 de consenso sintético era dependente da dose (Figura 28A). Especificamente, as células T CD8* de MUC16 pGX1437 de consenso sintético eram 0,26% + 0,14%, 0,77% + 0,47% e 0,89% + 0,37% nas quantidades de dose de 10 ug, 30 ug e 50 yo,

respectivamente.

As células T CD8* de MUC16 pGX1437 de consenso sintético foram significativamente maiores do que pureza (0,07% + 0,07%) na quantidade de dose de 30 ug (p=0,025) e 50 ug (p=0,001) mas não na dose de 10 ug (p=0,069) de pGX1437. As respostas de células T CD8* específicas de MUC16 pGX1437 de consenso sintético consistiram principalmente em células T CD8* produtoras de IFNy*IL-2" TNFa* ou IFNy*IL-2TNFa.

A frequência de células T CD8*CD107a* específicas de antígeno pPGX1437 foi de 0,16% + 0,10%, 0,58% + 0,40% e 0,89% + 0,37% nos grupos de quantidade de dose de 10 ug (p= 0,022), 30 ug (p = 0,030) e 50 ug (p = 0,002), respectivamente (Figura 28B). O perfil de citocina das células T CD8*CD107a* T específicas de pGX1437 foi semelhante nos grupos de quantidade de dose e foi composto principalmente por células IFNy"IL-2TNFa e IFNy"IL-2" TNFa* (Figura 28B). Globalmente, as respostas das células T CD8* à Região 2 induzidas por pGX1435 e pGX1438 são significativamente mais baixas que pGX1437 (Figura 29B). A frequência de células T CD8* específicas de antígeno com potencial citolítico é mais detalhada na Tabela 20.

Tabela 20 Muc16 de consenso sintético "Região 1" (pDGX1436) Células T CD8' e CD8*CD107a* T | Consenso Sintético Muc16 "Região 1" (pGX1436) células T CD8* e CD8*CD107a* Cód. Quant. | %CD8* + %CD8: | %CD8'CDI07a* | % CD8:CD107a* Significância estatística assumida em p<0,05. valores p relatados relativos à pureza (pDGX0001 camundongos Cód. Quant. | %CD8º + %CD8* | %CDB'CD107a' | % CD8:CD107a* Significância estatística assumida em p<0,05. valores p relatados relativos à pureza (pGX0001 camundongos Análise Estatística

[00332] A análise estatística foi concluída usando o IBM SPSS Statistics 22 (IBM Corporation). A análise entre os grupos foi realizada usando uma ANOVA com Diferença Significativa Honesta post-hoc de Tukey (HSD) para ajustar as comparações múltiplas. A homogeneidade da variância foi confirmada usando a estatística F antes de comparações múltiplas. Para todas as análises estatísticas, um valor de p de 0,050 foi considerado significativo.

Conclusão

[00333] “Nodgeral, os construtos de MUC16 de pGX1438 (clivagem de furina) e pGX1439 (promotor duplo) induzem respostas imunes mais robustas em comparação com pGX1435 (fusão) (Figuras 30A-C). Comparado ao pGX1435, o pGX1438 induziu respostas significativamente mais robustas pelo IFNy ELISpot nas quantidades de dose de 10 e 30 ug. Além disso, no compartimento de células T CD4*, o pGX1438 provocou respostas significativamente mais robustas em comparação com o pGX1435 na quantidade de dose de 10 ug. Não houve outras diferenças significativas na magnitude da resposta induzida pelos três construtos de MUC16 de comprimento total, no entanto, houve uma tendência para respostas mais robustas das células T CD8* induzidas por pGX1438 e pGX1439.

[00334] Além disso, pGX1438 e pGX1439 induziram respostas à Região 1 equivalentes a pGX1436 e induziram respostas à Região 2 equivalentes a pGX1437, conforme determinado por IFNy ELISpot e no compartimento de células T CD4*. Apenas pGX1439 induziu respostas equivalentes a pGX1437 no compartimento de células T CD8*.

[00335] Entende-se que a descrição detalhada citada acima e exemplos anexos são meramente ilustrativos e não devem ser considerados como limitações sobre o escopo da invenção, que é exclusivamente definida pelas reivindicações anexas e seus equivalentes.

[00336] Várias mudanças e modificações nas modalidades divulgadas serão evidentes para os especialistas na técnica. Tais alterações e modificações nas modalidades divulgadas, incluindo, sem limitação, aquelas relacionadas às estruturas químicas, substituintes, derivados, intermediários, sínteses, composições, formulações ou métodos de uso da invenção, podem ser feitas sem se afastar do espírito e escopo da mesma.

Tabela 21: Sequência de codificação de DNA de consenso sintético MUC16 IRC + R59 1 atggactgga cctggattet gttectagta gcagcagecaa cecegegtgca ctecacagea gcaggacctce tactagtacc atteacectg aactttacca teacaaatet gcagtacgag gaggatatgc accacccagg cagcagaaag tteaacacca cagagagggt gctacagage ctgctgggac caatgtttaa gaataccagc gtaggcetgc tatattcegg atacaggcta acactgctgc gctecgagaa ggacggagca gcaacceggeg tagatgaccat ctgtacacac aggctggacc craagagecce tagectagat caggagcage tatactggga gctgteccag ctgaccaacg gcatcaagga gctgggececece tacacactag accegcaacag ccetgtatgtg aatggcttta cccaceggag ctecgtgcca aataccagca cacceggcac ctecacagtg gatctgggca cctecggcac accatetage ctgcettete caacegecage aggaccacta ctggtacctt teacactgaa ctttaccatt accaatctgc agtatgaaga ggacatgagg catcctggca gcagaaagtt caacacgaca gagagagtgac tacaaggccet gctgaageca ctgatttaaga atacctctgt gggcececetg tatagtaget gtagactgac actgctacge Cccegaaaaag atggcegeegc cactggagte gacgccatet gtacacacag actggacece aagtctecog gectgaacag agaacagcetg tattgggaac tagagcaaget gaccaatage atcacagagc tagggccctta caccetggac agaaactetc tatatatgaa taggcttcace cacaggacat ctgtgcctac cacaagcace ccaggcaccet cceacegtega tetaggcace agcggcacac cttttageet gecateeect accacegecg gaccactgct ggtacectte accctgaact ttaccataac caatctgcag tatgaggagg acatgcaceg geceggcage agaaagttca acactacaga gagagtactg cagggcctgt tatcccctat ctttaagaat tectetgtag geccactgta cagcggatgc aggctgacct ctetgeggec cgaaaaagac ggagcagcaa caggaataga tgcegtgtac ctagtaccacc caaaceccaa gaggecagge ctagategog agcagetata ttgggageta agecagetga cccacaatat cacagageto ggaccccetact ctetagacag ggatagecta tatgtgaacg getteaceca ccagaattec gtgcccacca catetacacc tagcaccage acagtgtact gggccaccac aggcacecet agctccettte caggacacac agcacctaga ccactgctga teccattcac cetgaacttt accattacaa atctgcacta tgaggagaac atgcagcacc ceggcagecg caagttcaat accacagagc gggtactgca aggcctactg aagccgctat ttaagaacac cagegtggga cetetgtact ctggctatog cetgacacta ctgcggeceg agaagcatgg cgcageaace ggcgtagacg ctatttgcac ccacagactg gaccctaagg geccaggcct ggatagggag cgcctatatt gggaactgatc teagetgacco aattetatca cagagetagg accatacace ctggacaggg attctetgta cgtgaacggc tteaatecac ggtetagegt geccaceaca agcacccetg gcacetecac agtgcaceta gecacetetg gcacacecte ctetetgect ggacacaccg caagecceccet getagtacta ttcacaatca actttaccat tactaatcto agatacgagg agaacatgca ccaccecetggce tecagaaagt teaatactac cgaaagggta ctgcaaggcc tactgegecce agigtitaag aacacttecg taggecceect gtatagegge tgtaggctga cactgctgeg ccccaagaag gatggegeag caaccaaggt egacgctate tgtacataca ggccegaccece taaatececa ggectagace gggagcagcet gtattaggag ctatetcago tgacecacte cattaccgaa ctgggaccet acaccctaga cagagattce ctgtacgtga atggcttcac acagaggagc tecgtgceta ccacatccat cccaggaace cetacagtgg acctgggcac ctecggaace ccagtateta agccaggacc atetgcegea agccacctgc tgatcctatt caccctgaac tttaccataa cgaatctgcg gtacgaggag aacatgtgagc caggctecog gaagtteaat actaccgaga gagtgctgca aggcctgcta aggcctetgt ttaagaacac tagegtgggc ccactgtatt ceggceteteg getgacectg ctgcggecog aaaaagatgg agaggccaca ggcgtggatg ccatctgcac ccacagacct gacccaacag gacctggect ggacagggag cagctgtacc tagagetate acagctgact cactccatta ccgagctagg ceccetatact ctagatagag actecetgta cgteaacgge ttcacccacc ggtetagegt gccaaccaca tetacaggeg tagtaagega ggaaccette accctgaact traccatcaa caatctgagg tacatagcag acatgggaca gccaggctet ctgaagttca acatcacega taatgtgatg aagcacetge tgageccetet gttteagegg agcagcctgg gagcaaggta caccggatgc cgcgtgatcg cectacggte cgtgaagaac ggagcagaga cacgggtaga cctgctgtgc acatatctgc agcetetgag cagaccagge ctgcccatca agcaggtatt ccacgagctg teteagcaga cccacggaat cacaaggctg ggaccctact ccetggacaa ggattctetg tacctgaacg gctataatga gcctggecta gacgagccecce ctaceacace caagectgee accacattte taccacecet gagegaggea accacagcaa tgggatacca cctgaagacce ctgacactga acttcaccat cagcaatctg cagtattccc cegatataggg caagggctet gecaccttta acagcacaga gggegtacta cagcacctgc tacggceccect gttecagaag agetecatgg goeccttttta cctaggetae cagctgatct ccctgaggec tgaaaaagat ggagcagcaa ceggagitgga taccacatgt acataccacc cagaccecgt gggaccaggc ctagatatcc agcagetata ctaggaacta teccagetga cteacggegt gacacagetga ggcttetacg tactagaceg cgatteceta tttatcaacg getacgecoc teagaatetg tetatecgggy gegagtatca gatcaactte cacatcgtga actggaatct gagcaatcet gacecaaccet ctagegagta categeceta ctgegegaca tccaggataa ggtgaccaca ctgtataagg gcteccaget gcacgacace ttccgagtttt gcctagtgac caacctgaca atggattcta tactagtgac agtgaaggec ctattctoct ctaacctgga ccecagecta gtagageagg tatttetaga taagacccta aatgccaget cecactagget gggctecace taccagetag tagacatoeca cgtgacagag atggagccaa gegtatacca geccaccetet agetecteta cacagcactt ctacctgaac tttaccataa ctaatctgcc ctatagecag gatategece agectageac cacaaactac cagcggaaca agagaaatat cgaggacgcc ctgaaccagc tattcagaaa tagctecate aagtcctatt tetetgatta ccaggtgagce acctttaggt cegtacetaa tteteacecac acaggcgtag actcectata cgccettttet ccactaggcaa ggagagtaga tagggtagca atctacgagg agttcctgag gatgaccege geeggaacac agctgcaggc ctttacecta gacagatcta gcgtgctagt ggatggctat agccctaaca ggaatgagec actgacegge aactcegacc tgccecttetg ggccatceate ctgatetgte tagcaggcect gctaggecta atcacctgcc tgatctgtag ctttetagta tgataa

Tabela 22: Sequência de proteína do consenso sintético MUC 16 IRC + R59 SEQ | SEQUÊNCIA ID Nº.

2 MDWTWILFLVAAATRVHSTAAGPLLVPFTLNFTITNLOYEEDMHHPGSRKFNTTERVLQ

GLLGPMFKNTSVGLLYSGCRLTLLRSEKDGAATGVDAICTHRLDPKSPGLDREQLYWEL SQLTNGIKELGPYTLDRNSLYVNGFTHRSSVPNTSTPGTSTVDLGTSGTPSSLPSPTAAG PLLVPFTLNFTITNLOYEEDMRHPGSRKFNTTERVLOGLLKPLFKNTSVGPLYSGCRLTLL RPEKDGAATGVDAICTHRLDPKSPGLNREQLYWELSKLTNGITELGPYTLDRNSLYVNG FTHRTSVPTTSTPGTSTVDLGTSGTPFSLPSPTTAGPLLVPFTLNFTITNLOYEEDMHRP GSRKFNTTERVLOGLLSPIFKNSSVGPLYSGCRLTSLRPEKDGAATGMDAVCLYHPNPK RPGLDREQLYWELSQLTHNITELGPYSLDRDSLYVNGFTHOQNSVPTTSTPGTSTVYWAT TGTPSSFPGHTAPGPLLIPFTLNFTITNLHYEENMQHPGSRKFNTTERVLOGLLKPLFKNT SVGPLYSGCRLTLLRPEKHGAATGVDAICTHRLDPKGPGLDRERLYWELSQLTNSITELG PYTLDRDSLYVNGFNPRSSVPTTSTPGTSTVHLATSGTPSSLPGHTASPLLVLFTINFTIT NLRYEENMHHPGSRKFNTTERVLOGLLRPVFKNTSVGPLYSGCRLTLLRPKKDGAATKV DAICTYRPDPKSPGLDREQLYWELSQLTHSITELGPYTLDRDSLYVNGFTQRSSVPTTSI PGTPTVDLGTSGTPVSKPGPSAASHLLILFTLNFTITNLRYEENMWPGSRKFNTTERVLO GLLRPLFKNTSVGPLYSGSRLTLLRPEKDGEATGVDAICTHRPDPTGPGLDREQLYLELS QLTHSITELGPYTLDRDSLYVNGFTHRSSVPTTSTGVVSEEPFTLNFTINNLRYMADMGQ PGSLKFNITDONVMKHLLSPLFORSSLGARYTGCRVIALRSVKNGAETRVDLLCTYLQPLS GPGLPIKQVFHELSQQTHGITRLGPYSLDKDSLYLNGYNEPGLDEPPTTPKPATTFLPPL SEATTAMGYHLKTLTLNFTISNLOYSPDMGKGSATFNSTEGVLQHLLRPLFOKSSMGPF YLGCQLISLRPEKDGAATGVDTTCTYHPDPVGPGLDIQQLYWELSALTHGVTALGFYVL DRDSLFINGYAPQNLSIRGEYQINFHIVNWNLSNPDPTSSEYIALLRDIQDKVTTLYKGSQ LHDTFRFCLVTNLTMDSMLVTVKALFSSNLDPSLVEQVFLDKTLNASSHWLGSTYQLVDI HVTEMEPSVYQPTSSSSTQHFYLNFTITNLPYSQDIAQPGTTNYQRNKRNIEDALNQLFR NSSIKSYFSDCQVSTFRSVPNSHHTGVDSLCAFSPLARRVDRVAIYEEFLRMTRAGTQL QAFTLDRSSVLVDGYSPNRNEPLTGNSDLPFWAIILICLAGLLGLITCLICGFLV

Tabela 23: Sequência de codificação de DNA de consenso sintético MUC16 RMC ID Nº.

3 atggattgga cttagattct gttectagte gcegecgcaa ctegagtaca ttetactgct gctgggecac tgctggtgcc tittacactg aacttcacca teacaaatet gcagtacgag gaggacatgc accaccctgg cteteggaag tteaacacca cagagagagt getacaggge ctgctgggcc caatgatitaa gaataccage gtgggcctac tatattecgg ataceggcta acactgctga gatccgagaa ggacggagca gcaaceggag tagataccat ctgtacacac aggctggacc caaagtecee aggcectagat agagagcagc tgtactagga gcetateteag ctgaccaacg gcatcaagga gctgggeecce tacacactgg accggaacag cetgtatatg aatggcttta cccacagaag ctcegtgcca aataccagea cacecggcac ctecacagta gatctgggca cetetggcac accettetage ctgceaagec ctacegeage aggaccacta ctagtgcect teacactgaa ctttaccatt accaatetgc agtatgaaga ggacatgagg cacccaggct ccegcaagtt caacactacc gagegggtgc tacaaggcct gctgaagect ctgtttaaga atacctctgt gggcecactg tatagtggct gccggcetgac actgctacag cccgaaaaag acggagcage aaceggcegtg gatgactattt gcacccacag getagacece aagagcccag gectgaaceg cgaacagetg tattgggage tatecaaget gaccaatage atcacagagc tagggccecceta cacectggac agaaattecce tatacgtgaa tagctteace caccgcacat ctgtgectac cacaageace craggceacet ccacagigga tetgggcace tccggcacac ccettttecet gecateteca accacagceag gaccetetgcet ggtaccatte accctgaact ttaccattac taatctgcag tatgaagaag acatgcacag gectagcetet cgcaagttca acactactga gagggtgctg cagggcctat taagcccaat ctttaagaat tectetgtgg gecctetata ttecggatge aggcetgacct ctetgcgecc agaaaaagat ggagcagcaa caggaatgga tgccegtatac ctgtaccacc ctaacccaaa geggecegge ctggacaggg agcagctgta ttgggaactg agccagctga cccacaatat cacagagcto ggcccttact ctetggaceg cgatagectg tatgtgaacg gcettcaceca cceagaattec gtgcccacca catetacacc tagcaccage acagtgtact gggccaccac aggcacecee agctccttte ctggacacac agcaccagga cetetgetga tecectteac cetgaacttt accataacaa atctgcacta tgaggagaac atgcagcacc ctggcagcag gaagttcaat accacagagc gegtactgca aggcctacta aagecgcetat ttaagaacac cagegtagga ccactgtaca geggctgcag gctgaceceta ctgegecectg agaagcatgg cgcegecace ggacgtggatg ctatctgcac acatagactg gaccccaagg gacctggcect ggatagggag agactgtact gggaactgtc ccagetgacc aactcaatta cagagctggg cccatacace ctggacceggg attctetgta cgtgaacggce tteaatecaa gatctagegt cectaccaca tctacccectg ggacaagtac cgtgcatctg gctacaageg gaactecttc aagtetgceet ggacactgat aa

Tabela 24: Sequência de proteína de consenso sintético MUC16 RMC SEQ | SEQUÊNCIA

ID Nº.

4 MDWTWILFLVAAATRVHSTAAGPLLVPFTLNFTITNLQY EEDMHHPGSR

KFNTTERVLQGLLGPMFKNTSVGLLYSGCRLTLLRSEKDGAATGVDAIC THRLDPKSPGLDREQLY WELSQLTNGIKELGPYTLDRNSLY VNGFTHRSS VPNTSTPGTSTVDLGTSGTPSSLPSPTAAGPLLVPFTLNFTITNLQYEEDM RHPGSRKFNTTERVLQGLLKPLFKNTSVGPLYSGCRLTLLRPEKDGAAT GVDAICTHRLDPKSPGLNREQLY WELSKLTNGITELGPYTLDRNSLYVN GFTHRTSVPTTSTPGTSTVDLGTSGTPFSLPSPTTAGPLLVPFTLNFTITNL QYEEDMHRPGSRKFNTTERVLQGLLSPIFKNSSVGPLYSGCRLTSLRPEK DGAATGMDAVCLYHPNPKRPGLDREQLY WELSQLTHNITELGPYSLDR DSLYVNGFTHQNSVPTTSTPGTSTVYWATTGTPSSFPGHTAPGPLLIPFTL NFTITNLHY EENMQHPGSRKFNTTERVLQGLLKPLFKNTSVGPLYSGCRL TLLRPEKHGAATGVDAICTHRLDPKGPGLDRERLY WELSQLTNSITELGP

YTLDRDSLY VNGFNPRSSVPTTSTPGTSTVHLATSGTPSSLPGH Tabela 25: Sequência de codificação de DNA de consenso sintético MUC16 NRC SEQ | SEQUÊNCIA

ID Nº.

atggactgga cttggattct gttectagte gctgcegeca cecgegtgca tagtgcegeca tctcacctgac tgattctgtt caccctgaac tteaccatca caaatctgcg gtacgaggag aacatgtggc caggcagecg caagttcaat accacagagc gggtactaca gggectacta cggccecctgt ttaagaacac ctecgtggge cecetgtatt ctggcageag getgacecta ctgcgcecag agaaggacgg agaggcaaca ggcgtggatg ccatetgcac ccacaggccet gacccaacag gaccaggcect ggatagggag cagctgtace tagagetgag ccagctgace cactccatca cagagctggg accatacacc ctggacagag attccectgta tataaacgge tttacccaca gaagctecgt geccacceaca tetacaggeg tagtgagega ggagecette accctgaact teaccatcaa caatctgagg tacatggcag acatgggaca gccaggcage ctgaagttca acatcacega taatgtgatg aagcacctgc tatecectet gttteagegg tctagectgg gagcaaggta caceggcetge agagtgateg cectgaggte cgtgaagaac ggagcagaga cacgggtaga cetactatac acatatetac agcetetgag cagaccagge ctgcctatca agcaggtatt ccacgagctg teteagcaga cccacggaat cacacgecta ggaccttact ccctagacaa ggattctetg tacctgaacg gctataatga gccaggecta gacgageccec ctaccacace caagectgec acceacattte taccacecet gagegaggeca accacagcaa tgggatacca cctgaagace ctgacactga acttcaccat cagcaateta cagtattccc cegatatagg caagggcetet gecaccettta atagcacaga gggcgtacta cagcacctgc tgaggcctet gttecagaag tectetatag gecectteta cctaggatge cagctgatct ccetgegece tgagaaggac ggagcagcaa ceggagitgaga taccacatgt acataccacc cagaccecgt gggaccaggc ctagatatec agcagetata ttaggaacta teccagetga cceacggegt gacacagetg ggcttetata tactagaceg ggatteteta tttatcaacg gctacgcececec teagaatetg agcateagag gegagtatca gatcaactte cacatcgtga actggaatct gtctaatcct gatecaacca getecgagta categeceta ctgcgggaca tecaggataa ggtgaccaca ctgtataagg gcagccaget gcacgacace ttcagatttt gtetggtgac caacctgaca atggattcca tactagtgac agtgaaggec ctgatteteta gcaacctaga cecttetetg gtagageagg tatttetaga taagaccecta aatgccetect cteactgget gagetetace taccagetag tagacatcca cgtgacagag atggagccaa gegtgtatca geccaccage tectetagea cacagcactt ctacctgaac tttaccatca caaatctgcc ctatagecag gatategece agectageac cacaaactac cagaggaaca agcgcaatat cgaggacgcc ctgaaccagc tatteaggaa ttectetatc aagtcctatt tetetgattg ccaggtgagce accttteget cegtgccaaa tteteaceac acaggcgtag actcceetata caccttttet cecectggcac ggagagtaga tagggtagea atctacgagg agttcctgcg gatgaccaga gceggcacac agetgcaggc ctttacecta gacaggagct ccgtactagt ggatggctat agccctaacc gcaatgagec actgacagge aattcegacce tgccecetteta ggecateate ctgatttace tagetagact gctagggeta attacctgtc taatttatag gttcctagta tgataa

Tabela 26: Sequência de proteína de consenso sintético MUC16 NRC SEQ | SEQUÊNCIA ID Nº.

6 MDWTWILFLVAAATRVHSTAAGPLLVPFTLNFTITNLQY EEDMHHPGSRKFNT

TERVLQGLLGPMFKNTSVGLLYSGCRLTLLRSEKDGAATGVDAICTHRLDPKS PGLDREQLY WELSQLTNGIKELGPYTLDRNSLY VNGFTHRSSVPNTSTPGTSTV DLGTSGTPSSLPSPTAAGPLLVPFTLNFTITNLQY EEDMRHPGSRKFNTTERVLQ GLLKPLFKNTSVGPLYSGCRLTLLRPEKDGAATGVDAICTHRLDPKSPGLNRE QLYWELSKLTNGITELGPYTLDRNSLY VNGFTHRTSVPTTSTPGTSTVDLGTSG TPFSLPSPTTAGPLLVPFTLNFTITNLQY EEDMHRPGSRKFNTTERVLQGLLSPIF KNSSVGPLYSGCRLTSLRPEKDGAATGMDAVCLYHPNPKRPGLDREQLY WEL SQLTHNITELGPYSLDRDSLY VNGFTHONSVPTTSTPGTSTVYWATTGTPSSFP GHTAPGPLLIPFTLNFTITNLHY EENMQHPGSRKFNTTERVLQGLLKPLFKNTS VGPLYSGCRLTLLRPEKHGAATGVDAICTHRLDPKGPGLDRERLY WELSQLTN

SITELGPYTLDRDSLY VNGFNPRSSVPTTSTPGTSTVHLATSGTPSSLPGH Tabela 27: Sequência de codificação de DNA de consenso sintético MUC16 IRC

SEQ SEQUENCE ID Nº.

7 atggactgga cctggattct gttectggtg gcagcagcaa ccagggtagca ctecacagca gcaggacctc tactggtacc attcacectg aactttacca teacaaatet gcagtacgag gaggatatgc accacceegg cagecgcaag tteaacacca cagagegagt gcetacaggge ctgctgggac ctatgtttaa gaataccagc gtgggcctac tatattecgg atacaggcta acactgctgc gctecgagaa ggacggagca gcaaceggeog tagatgccat ctgtacacac aggctggacc caaagtetec cagectagat cgcgagcagce tatactggga gctgagecag ctgaccaacg gcatcaagga gctgggeecce tacacactgg aceggaacag cetgtatgta aatggcttca cccacagaag ctecegtgeca aataccteca cacceggcac ctetacagtg gatctgggca ccetetggcac acceetetage ctgcctagec caacegeage aggaccacta ctggtgcctt teacactgaa ctttaccatt accaatctgc agtatgaaga ggacatgcgg cacccetggca gcagaaagtt caacactacc gagegegtac tacaaggcct getgaageca ctgtttaaga atacctctgt gggcceececta tatagtggct gtagactgac actgctacge cctgaaaaag atggegeege cactagagte gacgctattt gcacccacag gctggacece aagtccccag gectgaacag agaacagcetg tattaggage tatetaaget gaccaatgge atcacagagc tgggcccata caccetggac aggaactete tatacgteaa tagetteace caccgcacaa gegtgceetac cacatecace ccaggcacet ctacegtega tetgggeace agcggcacac cattttecct gecatetect accacegeceg gaccactact ggtacectte accctgaact ttaccataac caatctgcag tatagaggagg acatgcaceg gececeggcetet agaaagttca acactactga acgggtgctg caaggcctat taagcecctat ctttaagaat tectetgtag geccactata cageggatge aggetgacct ctetgeggee cgaaaaagac ggagcagcaa caggaatgga tgcegtgtagc ctgtaccace caaaceceaa gaggectage ctggacagag agcagctgta ttgggaactg teccagetga cccacaatat cacagageto ggccecctaca gectagacag agattecectga tatgtgaacg getteaceca ceagaattet gtgcccacca caageacace tageaccetec acagtgtact gggecaceac aggcacecet agctecttte caggacacac agcaccetgga ccactgctga tecettteac cetgaacttt accattacaa atctgcacta tgaggagaac atgcagcacc caggcagcag aaagttcaat accacagaga gggtgctgca aggcctgcta aagccegcetat ttaagaacac cagegtggga cetetgtact ctggctateg ccetgacactg ctgcggecog agaagcatgg cacageaace ggcgtagacg ctatttacac teatagactg gaccccaagg gacctggect ggatagagag agactgtact gggaactgtc teagcetgacc aattecatta cagagctggg cecttacace ctggacceggg acagectgta cgteaacgge tteaatccaa gatctagegt geccaccaca tcecacecetg gcaccetetac agtgcacetg gccaccageg gaacacccete ctetetgect ggacacaggg gaaggaageg gagaagegec geateceace tgcetgatect gtteacecta aactttacca taacgaatct gagatacgag gagaacatgt ggcctggcte cegcaagtte aatactaccg aacgggtact gcagggccta ctgcggceccc tatttaagaa cacttecgta ggacccecctat attetagcag caggcetgace ctgctgcgec cagagaagga cagagaggca acaggcgtag atgccatctg cacccacagg ccegacecta caggaccagg cetagataga gagcagctat acctggagct gtcccagetg actcactcaa ttaccegaact gggaccttac accctggaca gggatagtect gtacgtgaat ggctteacec ategeagete egtgeceaace acatctacag gcgtggtgag cgaggaaccc ttcacectga acttcaccat caacaatctg aggtacatgg ccgacatggg ccagecaggc tecetgaagt teaacateac cgataatgtg atgaagcacc tagctgtetec cetattteag aggtetagec taggageaag gtacacegga tgcagagtga tegecetgag gtecgtgaag aacggageag agacacggat ggacctacta tgcacatatc tgcagectet gageggaccea ggectgeeca teaageagat gttecacgag ctgtcccage agacccacgg aatcacaagg ctaggacctt actecetaga caaggattet ctgtacctga acggctataa tgagccaggc ctggacgage cecetaceac aceaaagece gccaccacat ttetgccace cetgagegag gcaaccacag caatgggata ccacctgaag acccetgacac tgaactticac catcagcaat ctgcagtatt ccccegatat gggcaaggge tetgecacct ttaacageac agagagegta ctgcageace tgctgcggecs tetaticeag aagtccteta taggccecectt ctacetagga tgccagetga tetecetgeg gecegaaaag gatggagcag caaccggagt ggataccaca tgtacatacec accetgacec agtgggacea ggcctggata tccagcaatt atattgggaa ctgagtcagc tgacccacggy cgtygacacag ctgggcttct atgtactaga cagggatagc ctgatttatca acggctacge cecacagaat ctgtccatce geggegagta teagateaac ttecacateg tgaactggaa tetgagcaat ccegacecta ceagetecega gtacategec ctactgaggg acatccagga taaggtgace acactgtata agggctccca getgcacgac acettecgcet tttacetggt gaccaaccta acaatggatt ctatgctggt gacagtgaag gcccetattet ctageaacet ggacecccage ctagtagagc agatatttet ggataagacc ctgaatgcet ceteteacta getaggcage acctaccagc tggtggacat ccacgtgaca gagatggagc catcegtata teageceace agctceteta gcacacagca cttetacetg aactttacca taactaatct gccctatage caggatatcg cccagectgg caccacaaac taccagegga acaagagaaa tategaggac gccctgaace agetattccg gaattecetet ateaagtett attteagega ttgccaggta tecacctita gatctgtgcc aaatagecac cacacaggeg tagactecet gtacgecttt tetecectgg caaggagggt ggataggagtag gcaatctacg aggagttect gaggatgace cgcgceggaa cacagcetaca ggaccetttace ctagacegga getecgatact gatagatage tattccccta acagaaatga gccactgaca ggcaacteta acctgcccett ctaggecate atcctgatct gtctggcagg cctgctgggc ctgateacet gectgateta tagcttteta gtgtgataa

Tabela 28: Sequência de proteína do consenso sintético MUC 16 IRC Nº.

MDWTWILFLVAAATRVHSTAAGPLLVPFTLNFTITNLOYEEDMHHP GSRKFNTTERVLOGLLGPMFKNTSVGLLYSGCRLTLLRSEKDGAA TGVDAICTHRLDPKSPGLDREQLYWELSQLTNGIKELGPYTLDRNS LYVNGFTHRSSVPNTSTPGTSTVDLGTSGTPSSLPSPTAAGPLLVP FTLNFTITNLOYEEDMRHPGSRKFNTTERVLQGLLKPLFKNTSVGP LYSGCRLTLLRPEKDGAATGVDAICTHRLDPKSPGLNREQLYWEL SKLTNGITELGPYTLDRNSLYVNGFTHRTSVPTTSTPGTSTVDLGT SGTPFSLPSPTTAGPLLVPFTLNFTITNLOYEEDMHRPGSRKFNTT ERVLQGLLSPIFKNSSVGPLYSGCRLTSLRPEKDGAATGMDAVCL YHPNPKRPGLDREQLYWELSQLTHNITELGPYSLDRDSLYVNGFT HQNSVPTTSTPGTSTVYWATTGTPSSFPGHTAPGPLLIPFTLNFTIT NLHYEENMQHPGSRKFNTTERVLOGLLKPLFKNTSVGPLYSGCRL TLLRPEKHGAATGVDAICTHRLDPKGPGLDRERLYWELSQLTNSIT ELGPYTLDRDSLYVNGFNPRSSVPTTSTPGTSTVHLATSGTPSSLP GHRGRKRRSAASHLLILFTLNFTITNLRYEENMWPGSRKFNTTERV LQGLLRPLFKNTSVGPLYSGSRLTLLRPEKDGEATGVDAICTHRPD PTGPGLDREQLYLELSQLTHSITELGPYTLDRDSLYVNGFTHRSSV PTTSTGVVSEEPFTLNFTINNLRYMADMGQPGSLKFNITDNVMKHL LSPLFQORSSLGARYTGCRVIALRSVKNGAETRVDLLCTYLQPLSGP GLPIKQVFHELSQQOTHGITRLGPYSLDKDSLYLNGYNEPGLDEPPT TPKPATTFLPPLSEATTAMGYHLKTLTLNFTISNLQYSPDMGKGSA TFNSTEGVLQHLLRPLFQKSSMGPFYLGCQLISLRPEKDGAATGV DTTCTYHPDPVGPGLDIQQOLYWELSQLTHGVTQLGFYVLDRDSLFI NGYAPQNLSIRGEYQINFHIVNWNLSNPDPTSSEYIALLRDIQDKVT TLYKGSQLHDTFRFCLVTNLTMDSMLVTVKALFSSNLDPSLVEQVF LDKTLNASSHWLGSTYQLVDIHVTEMEPSVYQPTSSSSTQHFYLN FTITNLPYSQDIAQPGTTNYQRNKRNIEDALNQLFRNSSIKSYFSDC QVSTFRSVPNSHHTGVDSLCAFSPLARRVDRVAIYEEFLRMTRAG TQLQAFTLDRSSVLVDGYSPNRNEPLTGNSDLPFWAIILICLAGLLG LITCLICGFLV

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica aminoácidos 19-1490 de SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19-1490 de SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 de SEQ ID Nº: 2; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19- 1490 de SEQ ID Nº: 2.

2. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-4470 de SEQ ID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento — inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo nucleotídeos 55-4470 de SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-4470 de SEQ ID Nº: 1; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-4470 de SEQ ID Nº: 1.

3. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 2; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQID Nº: 2; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2.

4. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQID Nº: 1; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 1; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº 1;e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 1.

5. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica aminoácidos 19-642 de SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19-642 de SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 de SEQ ID Nº: 4;e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 de SEQ ID Nº: 4.

6. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-1926 de SEQ ID Nº: 3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento — inteiroê de uma molécula de ácido nucleico compreendendo nucleotídeos 55-1926 de SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 de SEQ ID Nº: 3; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-1926 de SEQ ID Nº: 3.

7. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 4; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e

(d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4.

8. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQID Nº:3; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 3; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 3;e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 3.

9. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica aminoácidos 19-710 de SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19-710 de SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 de SEQIDNº6;e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19- 710 de SEQID Nº: 6.

10. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-2130 de SEQ ID Nº: 5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento — inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo nucleotídeos 55-2130 de SEQ ID Nº: 5; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-2130 de SEQID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-2130 de SEQ ID Nº: 5.

11. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 6; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQID Nº: 6; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6.

12. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQIDNº:5; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 5;

(c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 5; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 5.

13. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica aminoácidos 19-642 e 650-1341 de SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19-642 e 650-1341 de SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650- 1341 de SEQID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19- 642 e 650-1341 de SEQ ID Nº: 8.

14. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento — inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 de SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 de SEQ ID Nº: 7; e

(d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-1926 e 1948-4023 de SEQ ID Nº: 7.

15. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica aminoácidos 19-1341 de SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19-1341 de SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 de SEQ ID Nº:8;e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19- 1341 de SEQ ID Nº: 8.

16. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) nucleotídeos 55-4023 SEQ ID Nº: 7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento — inteiro de uma molécula de ácido nucleico compreendendo nucleotídeos 55-4023 de SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico aos nucleotídeos 55-4023 de SEQ ID Nº: 7; e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica aos nucleotídeos 55-4023 de SEQ ID Nº: 7.

17. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica SEQ ID Nº: 8; (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8.

18. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos selecionadas do grupo que consiste em: (a) SEQID Nº:7; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 7; (c) um fragmento que é pelo menos 95% idêntico à SEQ ID Nº: 7;e (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de ácido nucleico que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 7.

19. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucleico, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18, ou a molécula de ácido nucleico, como definida em qualquer uma das reivindicações 5 a 8 e a molécula de ácido nucleico, como definida em qualquer uma das reivindicações 9 a 12; opcionalmente em que a molécula de ácido nucleico está operavelmente ligada a um elemento regulador selecionado de um promotor e um sinal de poliadenilação; opcionalmente em que o promotor é um promotor imediato-precoce de citomegalovírus humano (promotor de hCMV); opcionalmente em que o sinal de poliadenilação é um sinal de poliadenilação do hormônio de crescimento bovino (bGH poli A); e opcionalmente em que o vetor é um plasmídeo ou um vetor viral.

20. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais moléculas de ácido nucleico, como definidas em qualquer uma das reivindicações 1 a 18 ou um ou mais vetores, como definidos na reivindicação 19; opcionalmente em que a composição compreende ainda um veículo farmaceuticamente aceitável.

21. Proteína, caracterizada pelo fato de que compreende a sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-1490 de SEQ |D Nº: 2; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19- 1490 de SEQ ID Nº: 2; (c) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 de SEQ ID Nº: 2; (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1490 de SEQ ID Nº: 2; (e) SEQID Nº: 2;

(f) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 2; (9) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2; e (h) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 2.

22. Proteína, caracterizada pelo fato de que compreende a sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-642 de SEQ ID Nº: 4; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19- 642 de SEQ ID Nº: 4; (c) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 de SEQ ID Nº: 4; (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 de SEQ ID Nº: 4; (e) SEQID Nº: 2; (f) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 4; (g) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4; e (h) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 4.

23. Proteína, caracterizada pelo fato de que compreende a sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-710 de SEQ ID Nº: 6; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19- 710 de SEQ ID Nº: 6; (c) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 de SEQ ID Nº: 6; (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-710 de SEQ ID Nº: 6; (e) SEQID Nº 6; (f) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 6; (9) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6; e (h) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 6.

24. Proteína, caracterizada pelo fato de que compreende a sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em: (a) aminoácidos 19-642 e 650-1341 de SEQ ID Nº: 8; (b) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19- 642 e 650-1341 de SEQ ID Nº: 8; (c) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 de SEQ ID Nº: 8; (d) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-642 e 650-1341 de SEQ ID Nº: 8; (e) aminoácidos 19-1341 de SEQ ID Nº: 8; (f) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma proteína compreendendo aminoácidos 19- 1341 de SEQ ID Nº: 8;

(9) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 de SEQ ID NO:8; (h) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica aos aminoácidos 19-1341 de SEQ ID Nº: 8; () SEQIDNº:8; (])) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de SEQ ID Nº: 8; (k) uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8; e (1) um fragmento compreendendo pelo menos 90% de um comprimento inteiro de uma sequência de aminoácido que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID Nº: 8.

25. Vacina, caracterizada pelo fato de que compreende um antígeno, em que o antígeno compreende a sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 2, a sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 4, a sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 6, ou a sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 8, opcionalmente em que o antígeno é codificado pela SEQ ID Nº: 1, SEQ ID Nº: 3, SEQ ID Nº: 5, ou SEQ ID Nº: 7.

26. Vacina, caracterizada pelo fato de que compreende um peptídeo, em que o peptídeo compreende uma sequência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 90% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 2, SEQ ID Nº: 4, SEQ ID Nº: 6, ou SEQ ID Nº: 8.

27. Vacina, caracterizada pelo fato de que compreende uma molécula de ácido nucleico, em que a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID Nº: 1; SEQ ID Nº: 3; SEQ ID Nº: 5; ou SEQ ID Nº: 7, ou em que a molécula de ácido nucleico codifica um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 95% de identidade através de um comprimento inteiro da sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID Nº: 2, SEQ ID Nº: 4, SEQ ID Nº: 6, ou SEQ ID Nº: 8, opcionalmente em que a molécula de ácido nucleico compreende um vetor de expressão, opcionalmente em que a vacina compreende ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável, e opcionalmente em que a vacina compreende ainda um adjuvante, preferencialmente em que o adjuvante é I|L-12, IL-15, IL-28 ou RANTES.

28. Uso da proteína, como definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 24, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de um sujeito com uma célula cancerosa expressando MUC16.

29. Uso da molécula de ácido nucleico, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18, ou do vetor, como definido na reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de um indivíduo com uma célula cancerosa expressando MUC16, opcionalmente em que o medicamento é preparado para administração por eletroporação e opcionalmente em que o medicamento é preparado para administração em um ou mais locais no indivíduo.

30. Uso da molécula de ácido nucleico, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18, do vetor, como definido na reivindicação 19, ou da proteína, como definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 24, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para vacinar um indivíduo contra uma célula cancerosa expressando MUC16, em que o medicamento é para ser administrado ao indivíduo em uma quantidade eficaz para induzir uma resposta imune humoral, opcionalmente em que o medicamento é preparado para administração por eletroporação e opcionalmente em que o medicamento é preparado para administração em um ou mais locais no indivíduo.