BR112020002994A2 - novos anticorpos de ligação a nicotina - Google Patents

Abstract

São descritos novos anticorpos de ligação a nicotina e métodos para usá-los no tratamento de vício de nicotina e/ou na facilitação de cessação de fumar, ou para o tratamento de overdose de nicotina ou envenenamento de nicotina.

Description

NOVOS ANTICORPOS DE LIGAÇÃO A NICOTINA

PEDIDOS RELACIONADOS Este pedido reivindica prioridade de acordo com 35 U.S.C. § 119(e) do Pedido Provisório US 62/545.696, depositado em 15 de agosto de 2017, cujo conteúdo total do qual é incorporado aqui por referência.

CAMPO A presente divulgação se refere geralmente ao campo de terapêuticos de anticorpos, especificamente anticorpos que ligam à nicotina. Os anticorpos de ligação a nicotina divulgados podem ser usados em métodos para auxiliar a cessação do tabagismo e métodos para tratar toxicidade de nicotina, incluindo envenenamento por nicotina e overdose de nicotina.

ANTECEDENTES A discussão a seguir é fornecida meramente para ajudar o leitor a compreender a divulgação e não se admite que descreva ou constitua uma técnica anterior para a mesma.

Nicotina é um composto de alcaloide parassimpaticomimético de sabor amargo que ocorre naturalmente em grandes quantidades nas folhas das plantas de tabaco. Nicotina é um agonista do receptor da acetilcolina nicotínica (nAChR) e funciona fisiologicamente como um estimulante. Nicotina é tanto viciante quanto tóxica e sua ingestão e inalação têm sido associadas a doenças cardiovasculares, potenciais defeitos de nascimento e envenenamento.

Tabagismo é um problema de saúde global, em grande parte devido à dependência de nicotina. A Organização Mundial da Saúde estima que há 1,3 bilhão de fumantes em todo o mundo hoje e quase cinco milhões de mortes relacionadas ao tabaco a cada ano. Se os atuais padrões de tabagismo continuarem, o tabagismo causará cerca de 10 milhões de mortes a cada ano até 2020. De acordo com o Centro de Controle de Doenças (CDC) dos EUA, o consumo de tabaco é a única causa de morte evitável nos EUA, responsável por aproximadamente 438.000 mortes a cada ano. Além disso, estima-se que o fumo resulte em um custo econômico anual relacionado à saúde de aproximadamente US $ 157 bilhões. O CDC estima que, entre os 45 milhões de fumantes adultos nos EUA, 70% querem parar de fumar, mas menos de cinco por cento daqueles que tentam parar de fumar continuam livres do fumo depois de 12 meses.

A dependência da nicotina em cigarros e outros produtos de tabaco torna difícil para os indivíduos pararem de fumar ou usar produtos de tabaco. Nicotina é uma molécula pequena que, mediante inalação ou ingestão no corpo, passa rapidamente para a corrente sanguínea e, subsequentemente, atinge o cérebro atravessando a barreira hematoencefálica. Uma vez no cérebro, a nicotina se liga aos receptores nicotínicos, o que resulta na liberação de estimulantes, como a dopamina, ativando o sistema de recompensa e fornecendo ao fumante uma experiência de reforço positiva e prazerosa, que leva ao vício.

Envenenamento por nicotina, que resulta da ingestão ou inalação de nicotina em excesso, é outro problema de saúde relacionado à nicotina. A LD 50 da nicotina é de 50 mg/kg para ratos e 3 mg/kg para camundongos. Uma dose tão baixa quanto 30 a 60 mg (0,5 a 1,0 mg/kg) pode ser letal para humanos adultos, enquanto crianças podem ficar doentes após a ingestão de um cigarro, e a ingestão de mais do que isso pode fazer com que uma criança fique gravemente doente. Por outro lado, algumas evidências sugerem que uma dose letal pode chegar a 500 mg ou mais (1,0 a 7,1 mg/kg) para um humano adulto. Em ambos os casos, o envenenamento agudo por nicotina geralmente ocorre em crianças que acidentalmente mastigam chicletes ou adesivos de nicotina ou ingerem o “e-líquido” dos cigarros eletrônicos. Em casos raros, também é sabido que as crianças adoecem após a ingestão de cigarros. Existem centenas de casos de envenenamento por nicotina aguda relatados todos os meses nos Estados Unidos.

Sintomas de envenenamento por nicotina podem incluir cólicas abdominais, agitação, inquietação ou excitação, sensação de queimação na boca, dor de cabeça, vômito, contração muscular, desmaios, respiração e ritmo cardíaco rápidos e fraqueza, bem como complicações mais sérias, tal como convulsões e convulsões, coma e potencialmente morte. A perspectiva final para uma pessoa depende da quantidade de nicotina em questão e da rapidez com que o tratamento é recebido. Quanto mais rápido uma pessoa receber ajuda médica, maior a chance de recuperação.

Tipicamente, o tratamento inicial do envenenamento por nicotina pode incluir a administração de carvão ativado para tentar reduzir a absorção gastrointestinal, enquanto o tratamento adicional pode abordar os sintomas que resultam do envenenamento por nicotina.

Assim, permanece uma necessidade de agentes, composições e métodos eficazes para ajudar a cessaão de fumar e tratar o envenenamento por nicotina.

SUMÁRIO São descritos aqui anticorpos que ligam à nicotina, composições compreendendo os anticorpos e métodos que os utilizam para auxiliar a cessação do tabagismo e o tratamento da toxicidade da nicotina, incluindo envenenamento por nicotina e overdose de nicotina.

Em um aspecto, a presente divulgação fornece anticorpos de ligação a nicotina ou fragmentos de ligação a nicotina dos mesmos, compreendendo as regiões determinantes de complementaridade (CDRs), as regiões variáveis, ou a cadeia pesada e a cadeia leve completas das sequências selecionadas de: a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 1 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 2; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 3 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 4; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 5 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 6; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 7 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 8; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 9 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 10; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 11 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 12; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 14; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 15 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 16; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 18; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 19 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 20; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 21 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 22; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 23 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 24; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 25 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 26; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 27 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 28; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 29 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 30; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 31 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 32; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 33 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 34; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 35 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 36; a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 37 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 38; e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 39 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 40.

Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento pode ser um IgG4 ou derivado de um IgG4 e, em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento pode compreender uma substituição S228P em seu domínio Fc.

Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento pode ser uma variante de ação prolongada, tal como um anticorpo ou fragmento que é conjugado com polietileno glicol (“PEG”; isto é, o anticorpo ou fragmento é PEGuilado).

Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento tem uma K D para a S-(-)-nicotina de menos que cerca de 100 nM. Por exemplo, em algumas modalidades, a KD para a S-(-)-nicotina pode ser menor que cerca de 60 nM, menor que cerca de 30 nM, menor que cerca de 10 nM, ou menor que cerca de 5 nM.

Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento é substancialmente não reativo cruzado com cotinina ou outras moléculas não nicotina. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento é substancialmente não reativo cruzado com um ou mais compostos relacionados à nicotina selecionados de cotinina, nicotinamida, dinucleotídeo de adenina B-nicotinamida e nornicotina. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento é substancialmente não reativo cruzado com uma ou mais drogas de cessação de fumar selecionadas de bupropiona, vareniclina e citosina. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento é substancialmente não reativo cruzado com mais um ou mais neurotransmissores selecionados de cloreto de acetilcolina, 3-hidroxitiramina (dopamina), serotonina e norepinefrina.

Em outro aspecto, a presente divulgação fornece composições farmacêuticas compreendendo um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades acima ou divulgadas aqui e um transportador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode ser formulada para injeção ou infusão.

Em outro aspecto, a presente divulgação fornece métodos para tratar vício em nicotina ou facilitar cessação de fumar compreendendo administrar a um sujeito mamífero em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo de com qualquer uma das modalidades acima ou divulgadas aqui, ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo. Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz é eficaz para reduzir níveis de nicotina no plasma e/ou reduzir níveis de nicotina localizada no cérebro. Em algumas modalidades, o sujeito é um ser humano. Em algumas modalidades, a dependência de nicotina está associada ao consumo de um produto de nicotina selecionado de produtos de tabaco e cigarros eletrônicos. Em algumas modalidades, pelo menos um sintoma de retirada de nicotina é reduzido, melhorado ou eliminado.

Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina é administrado por uma rota de administração selecionada do grupo consistindo em intravenosamente, subcutaneamente, intramuscularmente, intraperitonealmente, oralmente, nasalmente, pulmonarmente, ocularmente, vaginalmente ou retalmente.

Em outro aspecto, a presente divulgação fornece usos de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das modalidades acima ou divulgadas aqui, na fabricação de um medicamento para o tratamento de vício em nicotina ou na facilitação de cessação de fumar.

Em outro aspecto, a presente divulgação fornece anticorpos de ligação a nicotina ou fragmentos de ligação a nicotina dos mesmos, de acordo com qualquer uma das modalidades acima ou divulgadas aqui, para uso no tratamento de vício em nicotina ou na facilitação de cessação de fumar.

Em outro aspecto, a presente divulgação fornece métodos para tratar overdose de nicotina ou envenenamento por nicotina compreendendo administrar a um sujeito mamífero em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo de com qualquer uma das modalidades acima ou divulgadas aqui, ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo. Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz é eficaz para reduzir níveis de nicotina no plasma e/ou reduzir níveis de nicotina localizada no cérebro. Em algumas modalidades, o sujeito é um mamífero selecionado do grupo que consiste em caninos, felinos, equinos, bovinos e humanos. Por exemplo, em algumas modalidades, o sujeito é uma criança humana.

Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a nicotina é administrado por uma rota de administração selecionada do grupo consistindo em intravenosamente, subcutaneamente, intramuscularmente, intraperitonealmente, oralmente, nasalmente, pulmonarmente, ocularmente, vaginalmente ou retalmente.

Em algumas modalidades, os métodos de tratamento de envenenamento ou toxicidade de nicotina podem ainda compreender a administração de um segundo composto para tratar overdose de nicotina ou envenenamento por nicotina, tal como carvão ativado.

Em outro aspecto, a presente divulgação fornece usos de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das modalidades acima ou divulgadas aqui, na fabricação de um medicamento para o tratamento de overdose de nicotina ou envenenamento por nicotina.

Em outro aspecto, a presente divulgação fornece anticorpos de ligação a nicotina ou fragmentos de ligação a nicotina dos mesmos, de acordo com qualquer uma das modalidades acima ou divulgadas aqui, para uso no tratamento de overdose de nicotina ou envenenamento por nicotina.

A descrição geral anterior e a descrição detalhada a seguir são exemplificativas e explicativas e se destinam a fornecer uma explicação adicional da invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS Figs. 1A e 1B mostram os resultados de um estudo farmacocinético da nicotina em ratos. Fig 1A mostra a concentração sérica de nicotina em ratos que foram pré-tratados com os anticorpos divulgados como uma porcentagem dos níveis séricos em ratos de controle que não foram tratados com anticorpo. Fig. 1B mostra a concentração de nicotina nos cérebros de ratos que foram pré-tratados com os anticorpos divulgados como uma porcentagem dos níveis cerebrais de ratos controle que não foram tratados com anticorpo.

Figs. 2A e 2B mostram os resultados de um estudo de resposta à dose de anticorpos de ligação a nicotina exemplares em ratos. Fig. 2A mostra a concentração sérica de nicotina (ng/ml) de ratos que foram pré-tratados com os anticorpos divulgados numa dose de 10, 20 ou 40 mg/kg. Fig. 2B mostra a concentração de nicotina nos cérebros (ng/g) de ratos que foram pré-tratados com os anticorpos divulgados nas mesmas doses.

Figs. 3A e 3B mostram os resultados de um estudo de resposta à dose dos anticorpos de ligação a nicotina exemplares em ratos. Fig 3A mostra a concentração sérica de nicotina como uma porcentagem dos níveis séricos em ratos de controle que não foram tratados com anticorpo. Fig. 3B mostra a concentração de nicotina no cérebro como uma porcentagem dos níveis cerebrais em ratos de controle que não foram tratados com anticorpo.

Figuras 4A e 4B mostram o impacto de múltiplas doses de nicotina - simulando um fumante pesado - após pré-tratamento com anticorpos de ligação a nicotina divulgados. Quando pré-tratados com 8D1-IgG4, os ratos mostraram um aumento em níveis séricos de nicotina após 5 doses de nicotina (Fig. 4A) e uma diminuição nos níveis cerebrais de nicotina (Fig. 4B).

Fig. 5 mostra que o tratamento com anticorpos de ligação a nicotina divulgados reduz a autoadministração de nicotina em ratos. Quando ratos foram tratados com 8D1-IgG4, o número médio (±SEM) de infusões autoadministradas durante as últimas três sessões antes (Linha de base) foi significativamente mais alto que o número de infusões durante o tratamento de anticorpo em cada dose unitária de nicotina.

Fig. 6 mostra a farmacocinética de dose única de 8D1-IgG4 em ratos quando administrada numa dose de 20 mg/kg.

Fig. 7 mostra a farmacocinética de dosagem repetida de 8D1-IgG4 em ratos durante um período de tempo prolongado. Ratos foram administrados com uma dose de 40 mg/kg, uma vez por semana por 4 semanas.

DESCRIÇÃO DETALHADA São aqui descritos anticorpos de ligação de nicotina, composições compreendendo os anticorpos e métodos que os utilizam, incluindo para tratamento de vício em nicotina facilitaação da cessação de nicotina (por exemplo, cessação de fumar) e tratamento de toxicidade de nicotina, incluindo envenenamento de nicotina e overdose de nicotina.

Definições Como usado na descrição da invenção e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma” e “o/a” são usadas de forma intercambiável e se destinam a incluir também as formas plurais e se encaixam em cada significado, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Além disso, como usado aqui, “e/ou” se refere e abrange todas e quaisquer combinações possíveis de um ou mais dos itens listados, assim como a falta de combinações quando interpretadas na alternativa (“ou”).

Conforme usado no presente documento, “cerca de" será entendido por aqueles versados na técnica e variará até certo ponto dependendo do contexto no qual é usado. Se houver usos do termo que não forem claros aos versados na técnica dado o contexto de uso, "cerca de" significará até mais ou menos 10% do termo em questão.

Como aqui usado, as frases “quantidade terapeuticamente eficaz” e “nível terapêutico” significam que a dosagem de droga ou a concentração plasmática em um sujeito que fornece o efeito farmacológico específico para o qual a droga é administrada em um sujeito em necessidade de tal tratamento, isto é, para reduzir, melhorar, ou eliminar os sintomas ou efeitos de envenenamento de nicotina ou overdose de e/ou tratar vício em nicotina e/ou facilitar a cessação de fumar. É enfatizado que uma quantidade terapeuticamente eficaz ou nível terapêutico de uma droga nem sempre será eficaz no tratamento das condições aqui descritas, muito embora tal dosagem seja considerada uma quantidade terapeuticamente eficaz por aqueles versados na técnica. Por conveniência apenas, dosagens exemplares, quantidades de distribuição de droga, quantidades terapeuticamente eficazes e níveis terapêuticos são fornecidos abaixo. Aqueles versados na técnica podem ajustar tais quantidades de acordo com as práticas padrão conforme necessário para tratar um sujeito e/ou uma condição específica. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar com base na rota de administração e na forma de dosagem, na idade e no peso do sujeito e/ou na condição do sujeito, incluindo a quantidade de nicotina ingerida e/ou os níveis de nicotina no plasma do sujeito no momento do tratamento e/ou a quantidade de nicotina localizada no cérebro no momento do tratamento.

Os termos “tratamento” ou “tratar” como aqui usados com referência a toxicidade de nicotina, envenenamento por nicotina e overdose de nicotina se referem a reduzir, melhorar ou eliminar um ou mais sintomas ou efeitos de nicotina e/ou reduzir os níveis de nicotina no plasma e/ou reduzir a quantidade de nicotina localizada em tecidos específicos do sujeito (por exemplo, cérebro/sistema nervoso central, coração e vasculatura, etc.).

Alternativamente, os termos “tratamento” ou “tratar” como aqui usados com referência ao vício em nicotina ou cessação de fumar se referem a um ou mais de: reduzir, melhorar ou eliminar um ou mais sintomas ou efeitos da retirada da nicotina; reduzir o número diário de cigarros ou a quantidade diária de nicotina consumida por um sujeito; e/ou reduzir os níveis de nicotina no plasma do sujeito e/ou reduzir a quantidade de nicotina localizada em tecidos específicos do sujeito (por exemplo, cérebro/sistema nervoso central, coração e vasculatura, etc.).

Os termos “indivíduo”, “sujeito” e “paciente” são aqui usados indiferentemente e se referem a qualquer indivíduo mamífero, por exemplo, bovino, canino, felino, equino ou ser humano.

Como aqui usado, “criança” se refere a um sujeito humano de 0 a cerca de 18 anos de idade. Uma criança pode ser um sujeito que inicia um curso de tratamento antes de completar cerca de 18 anos de idade, mesmo que o sujeito continue o tratamento além dos 18 anos de idade.

Nicotina, Vício e Toxicidade A nicotina é um composto químico que contém nitrogênio produzido por vários tipos de plantas, incluindo tabaco e outros membros da família nightshade (cultivadas durante à noite). Quando humanos, mamíferos e a maioria dos outros tipos de animais são expostos à nicotina, aumentam a frequência cardíaca, a taxa de consumo de oxigênio no músculo cardíaco e o volume cardíaco. O consumo de nicotina também está ligado ao estado de alerta elevado, euforia e sensação de estar relaxado. No entanto, a nicotina é altamente viciante.

Ao ligar-se aos receptores nicotínicos de acetilcolina no cérebro, a nicotina induz seus efeitos psicoativos e aumenta os níveis de vários neurotransmissores em várias estruturas cerebrais. A nicotina tem uma maior afinidade pelos receptores nicotínicos no cérebro do que aqueles no músculo esquelético, embora em doses tóxicas possa induzir contrações e paralisia respiratória. Acredita-se que a seletividade da nicotina seja devido a uma diferença específica de aminoácidos nesses subtipos de receptores. A estrutura da nicotina é mostrada na Fórmula I abaixo.

Fórmula I As pessoas que consomem regularmente a nicotina e, de repente, interrompem, experimentam os sintomas de abstinência, que podem incluir desejos, uma sensação de vazio, ansiedade, depressão, mau humor, irritabilidade e desatenção. A American Heart Association afirma que a nicotina (do fumo de tabaco) é uma das substâncias mais difíceis de renunciar - pelo menos tão difícil quanto a heroína.

Os métodos aqui descritos úteis no tratamento de vício de nicotina e/ou na facilitação da cessação de fumar (ou na cessação do uso de outros produtos de tabaco ou nicotina) em um sujeito mamífero em necessidade dos mesmos, usam anticorpos de ligação a nicotina, que ligam a nicotina e a impedem de interagir com receptores de acetilcolina nicotínicos.

Envenenamento por nicotina ou overdose de nicotina pode ocorrer quando um indivíduo consome tabaco solto, cigarros, goma de nicotina, emplastros ou o “e-líquido” de cigarros eletrônicos (por exemplo, o líquido contendo nicotina que é usado em cigarros eletrônicos e outros dispositivos de vaporização). De fato, um estudo recente mostrou que a incidência de envenenamento por nicotina pela exposição a cigarros eletrônicos aumentou 1492,9% entre janeiro de 2012 e abril de 2015 (Kamboj et al. PEDIATRICS 137 (6): e20160041 (2016)). Embora a exposição possa ocorrer através da inalação de fumaça de tabaco (primária ou de segunda mão), envenenamento por nicotina ou overdose de nicotina ocorre mais comumente quando um indivíduo (geralmente uma criança) ingere nicotina, por exemplo, mastigando ou ingerindo goma de nicotina, ingerindo cigarros ou outros produtos de tabaco, produtos foliares, ingerindo adesivos de nicotina ou ingerindo e-líquido. Além disso, a nicotina pode ser absorvida dermicamente e, portanto, o envenenamento por nicotina pode resultar de níveis tóxicos de nicotina que entram em contato direto com a pele.

O envenenamento por nicotina pode produzir sintomas neurológicos (convulsões, coma, depressão, confusão, desmaios, cefaleia), sintomas cardiovasculares (batimentos cardíacos acelerados, pressão alta), sintomas respiratórios (dificuldade respiratória, respiração rápida), sintomas gastrointestinais (aumento da salivação, cólicas abdominais, vômitos) e sintomas musculoesqueléticos (espasmos musculares, fraqueza), bem como a morte.

Os métodos aqui descritos para tratar toxicidade de nicotina, incluindo envenenamento por nicotina e overdose de nicotina, usam um anticorpo que liga nicotina, desse modo sequestrando-a e impedindo a nicotina de ligar a um receptor cognato ou atravessar a barreira hematoencefálica. Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica compreendendo esse anticorpo é administrada em uma quantidade terapeuticamente eficaz, tal como uma quantidade eficaz para reduzir níveis plasmáticos de nicotina e/ou reduzir níveis de nicotina localizada no cérebro.

Anticorpos de Ligação a Nicotina Em algumas modalidades, os métodos divulgados compreendem administrar a um sujeito mamífero em necessidade dos mesmos uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de ligação a nicotina, um fragmento de ligação a nicotina do mesmo, um construto relacionado capaz de ligar a nicotina ou uma composição farmacêutica compreendendo os mesmos. Por conveniência, estes agentes são referidos aqui coletivamente como “anticorpos de ligação a nicotina”.

Anticorpos antinicotina foram desenvolvidos anteriormente, principalmente com o objetivo de facilitar a cessação de fumar. Ver, por exemplo, WO 2002/058635; WO 2000/032239; WO 2003/082329; Publicação de Pedido de Patente US 2006/111271; Patente US 8.344.111; Patente US

8.232.072; Patente US 6.232.082; Patente US 7.547.712; Patente US

7.446.205; e Carrera et al., “Investigations using immunization to atenuate the psyactive effects of nicotine”, Bioorg Med Chem 12(3):563-70 (2004). Estas patentes, estes pedidos e a literatura não patente são aqui incorporados por referência na medida em que eles se refiram a anticorpos antinicotina e construtos relacionadas, incluindo fragmentos de anticorpo de ligação a nicotina. No entanto, os anticorpos aqui divulgados são novos e podem ser utilizados não apenas para facilitar a cessação de fumar, mas também para tratar toxicidade de nicotina.

Nicotina é uma molécula haptênica pequena e tipicamente é acoplada a um transportador imunogênico, tal como uma proteína imunogênica, para elicitar uma resposta imune e induzir a produção de anticorpos de ligação a nicotina. Técnicas gerais para fazer anticorpos podem ser empregadas. Ver, por exemplo, Kohler e Milstein, Eur. J. Immunol., 5: 511-519 (1976); Harlow and Lane (eds.), ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL, CSH Press (1988); C.A. Janeway et al. (eds.), IMMUNOBIOLOGY, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001).

Anticorpos antinicotina úteis nos métodos aqui descritos podem ser obtidos por qualquer meio, inclusive via fontes in vitro (por exemplo, um hibridoma ou uma linhagem celular que produz um anticorpo de forma recombinante) e fontes in vivo (por exemplo, roedores, coelhos, humanos etc.). Anticorpos humanos, parcialmente humanizados, totalmente humanizados e quiméricos podem ser feitos por métodos conhecidos na técnica, tal como usando um animal transgênico (por exemplo, um camundongo) em que um ou mais genes de imunoglobulina endógena são substituídos por um ou mais genes de imunoglobulina humana. Exemplos de camundongos transgênicos em que genes de anticorpos endógenos são efetivamente substituídos por genes de anticorpos humanos incluem, mas sem limitação, o HUMAB- MOUSE™, o Kirin TC MOUSE™ e o KM-MOUSE™ (ver, por exemplo, Lonberg, Nat. Biotechnol., 23(9): 1117-25 (2005), e Lonberg, Handb. Exp. Pharmacol., 181: 69-97 (2008)).

Os anticorpos de ligação a nicotina utilizados nos métodos aqui divulgados serão geralmente monoclonais e/ou recombinantes. Anticorpos monoclonais (mAbs) podem ser obtidos por métodos conhecidos na técnica, por exemplo, fundindo células produtoras de anticorpos com células imortalizadas para obter um hibridoma e/ou gerando mAbs de mRNA extraído de medula óssea, células B e/ou células do baço de animais imunizados usando tecnologia de biblioteca de anticorpo combinatória e/ou isolando anticorpos monoclonais do soro de sujeitos imunizados com um antígeno de nicotina. Anticorpos recombinantes podem ser obtidos por métodos conhecidos na técnica, por exemplo, utilizando tecnologias de exibição de fagos, tecnologias de exibição de superfície de leveduras (Chao et al., Nat. Protoc., 1(2): 755-68 (2006)), tecnologias de exibição de superfície de célula de mamífero (Beerli et al., PNAS, 105(38): 14336-41 (2008) e/ou expressando ou coexpressando polipeptídeos de anticorpo. Outras técnicas para fazer anticorpos são conhecidas na técnica e podem ser usadas para obter anticorpos usados nos métodos aqui descritos.

Tipicamente, um anticorpo consiste em quatro polipeptídeos: duas cópias idênticas de um polipeptídeo de cadeia pesada (H) e duas cópias de um polipeptídeo de cadeia leve (L). Tipicamente, cada cadeia pesada contém uma região variável N-terminal (VH) e três regiões constantes C-terminal (CH1, CH2 e CH3), e cada cadeia leve contém uma região variável N-terminal (VL) e uma região constante C-terminal (CL). As regiões variáveis de cada par de cadeias leves e pesadas formam o sítio de ligação ao antígeno de um anticorpo.

Os termos “fragmento de anticorpo” e “fragmento de ligação a nicotina”, conforme aqui usados, se referem a uma ou mais porções de um anticorpo de ligação a nicotina que exibe a capacidade de ligar a nicotina. Exemplos de fragmentos de ligação incluem (i) fragmentos Fab (fragmentos monovalentes consistindo nos domínios VL, VH, CL e CH1); (ii) fragmentos F(ab’)2 (fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça); (iii) fragmentos Fd (compreendendo os domínios VH e CH1); (iv) fragmentos Fv (compreendendo os domínios V L e VH de um único braço de um anticorpo), (v) fragmentos dAb (compreendendo um domínio VH); e (vi) regiões determinantes de complementaridade isoladas (CDR), por exemplo, VH CDR3. Outros exemplos incluem construtos Fv de cadeia simples (scFv). Ver, por exemplo, Bird et al., Science, 242:423-26 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879-83 (1988). Outros exemplos incluem proteínas de fusão de imunoglobulina do domínio de ligação a nicotina compreendendo (i) um polipeptídeo do domínio de ligação a nicotina (tal como uma região variável de cadeia pesada, uma região variável de cadeia leve ou uma região variável de cadeia pesada fundida a uma região variável de cadeia leve via um peptídeo ligante) fundida a um polipeptídeo de região de dobradiça de imunoglobulina, (ii) uma região de constante C H2 de cadeia pesada de imunoglobulina fundida na região de dobradiça e (iii) uma região constante CH3 de cadeia pesada de imunoglobulina fundida com a região constante CH2 onde a região de dobradiça pode ser modificada substituindo um ou mais resíduos de cisteína por, por exemplo, resíduos de serina, para evitar dimerização. Ver, por exemplo, Pedido de Patente US 2003/0118592; Pedido de Patente US 2003/0133939.

Em algumas modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina, como aqui divulgado, é um anticorpo IgG1 humano ou um anticorpo IgG4 humano. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é mamífero, humano, humanizado ou quimérico.

Em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina, como aqui divulgados, compreendem uma ou mais mutações que tornam o anticorpo mais adequado em um contexto terapêutico.

Sequências de cadeia pesada e leve de novos anticorpos de ligação a nicotina IgG1 exemplares são divulgadas na Tabela 1 abaixo. Sequências de cadeia pesada e leve de novos anticorpos de ligação a nicotina IgG4 exemplares são divulgadas na Tabela 2 abaixo.

Tabela 1 - Sequências de Cadeia Pesada e Leve de Anticorpos de Ligação a Nicotina IgG1 Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 8D1 QVRLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGGSIYSSNWWTWVRQPPGKG 1 Pesada LEWVGEIHIRGTTYYNPSLNSRVTISLDKSNNQVSLRLTSVTAADSAV

YYCVSQEVGGPDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW

QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 8D1 NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSGGSIATYYVQWYQQRPGSAPT 2 Leve NVIYKYDQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQS

YDNNIQVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLIS DFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPE

QWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 12F5 QLQLQESGPGLVKPSETLSLICTVSGGSIRKNNEWWAWIRQAPGKG 3 Pesada LEWIGSLSYTGRTVYNPSLKSRVTISTDTSETQFSLKVNSVTAADTAV

YYCARLSPFVGAAWWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTC PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 12F5 EVVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSRYLAWYQQKPGQAP 4 Leve RLLIYGASSRAIGTPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYA

YSPPAITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKA DYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 7A8 QLQLQESGPGLLKPSETLSLTCTVSGGSVTTSPDWWAWLRQSPGK 5 Pesada GLEWIGSVSYTGRTVYNPSLKSRVTISLDTSKNHLSLRMTSATAADT

AVFYCARLTPIDRFSADYYVLDIWGQGATVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED PEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK

LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 7A8 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSISSNLAWFQHKPGQAPRLL 6 Leve IFRSSTRATGTPPRFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYFCQHYSYW

PPLITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY

EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 5D1 QLQLRESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKG 7 Pesada LEWIGSIYYTGRTYYNPSLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAV

YYCAGLHYSWSALGGYYFYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 5D1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSRDLVWYQQKPGQAPR 8 Leve LLIYGASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQKYGS

SPPRITFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD

YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 5G4 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSISSSSYYWGWSRQSPGK 9 Pesada GLEWIASIYYSGSTYYNPSLKSRVTIFIDTSKNQFSLKLSSVTAADTAI

YYCARVGTSAMSRAFDMWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEY KCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 5G4 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLQSNGYNYLDWYLQKPG 10 Leve QSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYFC

MQALQIPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCL LNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL

SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 5H1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISRRNDYWAWIRQSPGKD 11 Pesada LEWIGTISFSGSTFYNPSLKSRVTISADTFNNHFSLRLDAVAAADTAV

YYCARLSPFVGAAWWFDPWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTC PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 5H1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLSSNYLGWYQQKPGQAPR 12 Leve LLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFGVYYCQRYG

RSPPAITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKA

DYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 15A4 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTASGGSITNNIDYWVWIRQPPGRGL 13 Pesada EWIGTIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSNNQFSLNLNSMSAADTAVY

YCARLRYYYDSNGYLPYWIDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTH TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNG KEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 15A4 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSYLGWYQQKPGQAPRL 14 Leve LIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFCQLYRRS

PPRLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 2E11 QLQLQESGPGLVKPSESLSLTCTVSGGSIISNDYYWAWIRQSPGKGL 15 Pesada EWIGSINYRGSTFYSPSLNSRVTTSVDTSKNQFFLKLTSVTAADTAM

YFCTRLHGRYRGVGRLAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTH TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNG KEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 2E11 DIQMTQSPSTLSASVGDIVTITCRASQSIGDWLAWYQQKPGKAPKLLI 16 Leve YKASNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQSDDFATYYCQQYDSY

SVTFGQGTKVEIKGTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE

KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 13F7 QVQLQEAGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINTRNYYWGWVRQPPGK 17 Pesada GLEWIASVYYTGSTFYDPSLRSRVTISIDTPRNQFSLRVSSVDAGDM

GVYYCVRLDGGYNNGYYYYGMDVWGQGTSVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF

LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 13F7 GVQMTQSPSTLSASVGERVTVTCRASRPISNWLSWYQQKPGRAPK 18 Leve LLIYGTSTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTITNLQPDDFATYYCQEHNL

YTITFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE

KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 8H5 QLQLQESGPGLVKPSETLSLSCAVSGASIRSNTYYWGWIRQPPGRG 19 Pesada LEWIGSISHRGDAHYSPSLKSPVTISVDTSKNEFSLKATSVTAADTAV

YYCVSLAYSFSWNTYYFYGMDVWGHGITVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED PEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 8H5 DIVLTQSPGTLSLSPGEGATLSCRASQSVNSGYLAWYQQKPGQPPR 20 Leve LLVFAASSRATGIADRFRGSGSGTDFTLTITRLEPEDFAVYYCQLYG

HSPARITFGQGTRLETKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSK

ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC As regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de cadeia pesada e leve são mostradas em negrito e sublinhado. A anotação de CDR foi feita de acordo com a numeração IMGT. Regiões constantes são denotadas em itálico sublinhado.

Tabela 2 - Sequências de Cadeia Pesada e Leve de Anticorpos de Ligação a Nicotina IgG4 Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 5G4-IgG4 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSISSSSYYWGWSRQSPGK 21 Pesada GLEWIASIYYSGSTYYNPSLKSRVTIFIDTSKNQFSLKLSSVTAADTAI

YYCARVGTSAMSRAFDMWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSR STSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPP CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK

SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 5G4-IgG4 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLQSNGYNYLDWYLQKPG 22 Leve QSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYFC

MQALQIPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCL LNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL

SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 7A8-IgG4 QLQLQESGPGLLKPSETLSLTCTVSGGSVTTSPDWWAWLRQSPGK 23 Pesada GLEWIGSVSYTGRTVYNPSLKSRVTISLDTSKNHLSLRMTSATAADT

AVFYCARLTPIDRFSADYYVLDIWGQGATVTVSSASTKGPSVFPLAP CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPP CPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPE VQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLT

VDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 7A8-IgG4 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSISSNLAWFQHKPGQAPRLL 24 Leve IFRSSTRATGTPPRFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYFCQHYSYW

PPLITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 12F5-IgG4 QLQLQESGPGLVKPSETLSLICTVSGGSIRKNNEWWAWIRQAPGKG 25 Pesada LEWIGSLSYTGRTVYNPSLKSRVTISTDTSETQFSLKVNSVTAADTAV

YYCARLSPFVGAAWWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSR STSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPP CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK

SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 12F5-IgG4 EVVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSRYLAWYQQKPGQAP 26 Leve RLLIYGASSRAIGTPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYA

YSPPAITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKA

DYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 8D1-IgG4 QVRLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGGSIYSSNWWTWVRQPPGKG 27 Pesada LEWVGEIHIRGTTYYNPSLNSRVTISLDKSNNQVSLRLTSVTAADSAV

YYCVSQEVGGPDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEF LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQ

EGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 8D1-IgG4 NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSGGSIATYYVQWYQQRPGSAPT 28 Leve NVIYKYDQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQS

YDNNIQVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLIS DFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPE

QWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 5D1-IgG4 QLQLRESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKG 29 Pesada LEWIGSIYYTGRTYYNPSLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAV

YYCAGLHYSWSALGGYYFYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPL APCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYG PPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSR LTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 5D1-IgG4 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSRDLVWYQQKPGQAPR 30 Leve LLIYGASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQKYGS

SPPRITFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD

YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 5H1-IgG4 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISRRNDYWAWIRQSPGKD 31 Pesada LEWIGTISFSGSTFYNPSLKSRVTISADTFNNHFSLRLDAVAAADTAV

YYCARLSPFVGAAWWFDPWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSR STSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPP CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK

SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 5H1-IgG4 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLSSNYLGWYQQKPGQAPR 32 Leve LLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFGVYYCQRYG

RSPPAITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKA

DYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 15A4-IgG4 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTASGGSITNNIDYWVWIRQPPGRGL 33 Pesada EWIGTIYYSGSTFYNPSLKSRVTISVDTSNNQFSLNLNSMSAADTAVY

YCARLRYYYDSNGYLPYWIDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPC SRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPC PPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEV QFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV

DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 15A4-IgG4 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSYLGWYQQKPGQAPRL 34 Leve LIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFCQLYRRS

PPRLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 2E11-IgG4 QLQLQESGPGLVKPSESLSLTCTVSGGSIISNDYYWAWIRQSPGKGL 35 Pesada EWIGSINYRGSTFYSPSLNSRVTTSVDTSKNQFFLKLTSVTAADTAM

YFCTRLHGRYRGVGRLAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPC SRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPC PPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEV QFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV

DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 2E11-IgG4 DIQMTQSPSTLSASVGDIVTITCRASQSIGDWLAWYQQKPGKAPKLLI 36 Leve YKASNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQSDDFATYYCQQYDSY

SVTFGQGTKVEIKGTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE

KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 13F7-IgG4 QVQLQEAGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINTRNYYWGWVRQPPGK 37 Pesada GLEWIASVYYTGSTFYDPSLRSRVTISIDTPRNQFSLRVSSVDAGDM

GVYYCVRLDGGYNNGYYYYGMDVWGQGTSVTVSSASTKGPSVFP LAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYG PPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSR

LTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 13F7-IgG4 GVQMTQSPSTLSASVGERVTVTCRASRPISNWLSWYQQKPGRAPK 38 Leve LLIYGTSTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTITNLQPDDFATYYCQEHNL

YTITFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE

KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 8H5-IgG4 QLQLQESGPGLVKPSETLSLSCAVSGASIRSNTYYWGWIRQPPGRG 39 Pesada LEWIGSISHRGDAHYSPSLKSPVTISVDTSKNEFSLKATSVTAADTAV

YYCVSLAYSFSWNTYYFYGMDVWGHGITVTVSSASTKGPSVFPLAP CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPP CPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPE VQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLT VDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

Cadeia de SEQ Sequência de Aminoácido Anticorpo ID NO: 8H5-IgG4 DIVLTQSPGTLSLSPGEGATLSCRASQSVNSGYLAWYQQKPGQPPR 40 Leve LLVFAASSRATGIADRFRGSGSGTDFTLTITRLEPEDFAVYYCQLYG

HSPARITFGQGTRLETKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSK

ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC As regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de cadeia pesada e leve são mostradas em negrito e sublinhado. A anotação de CDR foi feita de acordo com a numeração IMGT. Regiões constantes são denotadas em itálico sublinhado.

Também abrangidos pela presente divulgação são anticorpos de ligação a nicotina e fragmentos de ligação a nicotina dos mesmos compreendendo as mesmas sequências CDR e/ou as mesmas sequências de região framework e/ou as mesmas sequências de região variável que um ou mais dos novos anticorpos divulgados nas Tabelas 1 e 2. A este respeito, embora os novos anticorpos de ligação a nicotina divulgados nas Tabelas 1 e 2 sejam anticorpos IgG1 e IgG4, respectivamente, outros anticorpos de ligação a nicotina dentro do escopo desta divulgação podem ser IgG2, IgG3, IgA1, IgA2, IgE, IgH, ou IgM, por exemplo.

Os anticorpos IgG4 da imunoglobulina humana são bons candidatos à terapia baseada em anticorpo quando, como aqui, são desejáveis funções efetoras reduzidas. No entanto, anticorpos IgG4 são moléculas dinâmicas capazes de sofrer um processo conhecido como troca de braço de Fab (FAE). Ver, por exemplo, Labrijn et al., Therapeutic IgG4 antibodies engage in Fab- arm exchange with endogenous human IgG4 in vivo, NATURE BIOTECH 27(8): 767-71 (2009). Isto resulta em anticorpos biespecíficos funcionalmente monovalentes (bsAbs) com especificidade desconhecida e, daí, potencialmente, eficácia terapêutica reduzida. FAE pode ser prevenida introduzindo uma mutação S228P na região de dobradiça do anticorpo. Assim, em algumas modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina, como aqui divulgado, compreende uma substituição S228P. Os novos anticorpos divulgados na Tabela 2 compreendem essa substituição S228P. Em outras modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina, como aqui divulgado, não compreende uma substituição S228P.

Em algumas modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina, como divulgado neste documento, compreende uma ou mais substituições, inserções ou deleções adicionais ou alternativas além da substituição S228P acima mencionada. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina da presente divulgação compreende cadeias pesadas e leves com pelo menos cerca de 85%, cerca de 86%, cerca de 87%, cerca de 88%, cerca de 89%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99% ou cerca de 100% de identidade para uma ou mais das sequências de cadeia pesada e leve divulgados nas Tabelas 1 e 2, respectivamente. Em algumas modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina da presente divulgação compreende cadeias pesadas e leves com pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade para uma ou mais das sequências de cadeia pesada e leve divulgadas nas Tabelas 1 e 2, respectivamente.

Em algumas modalidades, os anticorpos aqui divulgados ligam a nicotina com uma alta afinidade. Como mostrado na Tabela 3 abaixo, os novos anticorpos das Tabelas 1 e 2 podem ligar a S-nicotina livre com uma KD na faixa nanomolar. Os valores de KD reportados abaixo foram determinadas por Biossensor de Ressonância de Plásmon de Superfície. Outra metodologia para determinar afinidade de ligação também pode ser usada, tal como diálise de equilíbrio.

Tabela 3 - Afinidade de Ligação a Nicotina

Anticorpo KD (nM) (S-Nicotina; 25°C)

8D1 5 12F5 29 7A8 30 5D1 30 5G4 31 5H1 37 15A4 40 2E11 61 13F7 62 8H5 67 5G4 IgG4 31 7A8 IgG4 30 12F5 IgG4 20 8D1 IgG4 5 Assim, em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina ou fragmentos dos mesmos aqui divulgados têm uma K D inferior a 100 nM.

Por exemplo, em alguma modalidade, os anticorpos de ligação a nicotina ou fragmentos dos mesmos têm uma KD para nicotina menor que cerca de 1,5x10- 7, menor que cerca de 1,0x10-7, menor que cerca de 0,5x10-7, menor que cerca de 9,5x10-8, menor que cerca de 9,0x10-8, menor que cerca de 8,5x10-8, menor que cerca de 8,0x10-8, menor que cerca de 7,5x10-8, menor que cerca de 7,0x10-8, menor que cerca de 6,5x10-8, menor que cerca de 6,0x10-8, menor que cerca de 5,5x10-8, menor que cerca de 5,0x10-8, menor que cerca de 4,5x10-8, menor que cerca de 4,0x10-8, menor que cerca de 3,5x10-8, menor que cerca de 3,0x10-8, menor que cerca de 2,5x10-8, menor que cerca de 2,0x10-8, menor que cerca de 1,5x10-8, menor que cerca de 1,0x10-8, menor que cerca de 0,5x10-8, menor que cerca de 9,5x10-9, menor que cerca de 9,0x10-9, menor que cerca de 8,5x10-9, menor que cerca de 8,0x10-9, menor que cerca de 7,5x10-9, menor que cerca de 7,0x10-9, menor que cerca de 6,5x10-9, menor que cerca de 6,0x10-9, menor que cerca de 5,5x10-9, menor que cerca de 5,0x10-9, menor que cerca de 4,5x10-9, menor que cerca de 4,0x10-9, menor que cerca de 3,5x10-9, menor que cerca de 3,0x10-9, menor que cerca de 2,5x10-9, menor que cerca de 2,0x10-9, menor que cerca de 1,5x10-9, menor que cerca de 1,0x10-9, menor que cerca de 0,5x10-9, menor que cerca de 9,5x10-10, menor que cerca de 9,0x10-10, menor que cerca de 8,5x10-10, ou menor que cerca de 8,0x10-10 M. Em alguma modalidade, os anticorpos de ligação a nicotina ou fragmentos dos mesmos têm uma KD para nicotina menor que cerca de 1,5x10-7, menor que 1,0x10-7, menor que 0,5x10-7, menor que 9,5x10-8, menor que 9,0x10-8, menor que 8,5x10-8, menor que 8,0x10-8, menor que 7,5x10-8, menor que 7,0x10-8, menor que 6,5x10-8, menor que 6,0x10-8, menor que 5,5x10-8, menor que 5,0x10-8, menor que 4,5x10-8, menor que 4,0x10-8, menor que 3,5x10-8, menor que 3,0x10-8, menor que 2,5x10-8, menor que 2,0x10-8, menor que 1,5x10-8, menor que 1,0x10-8, menor que 0,5x10-8, menor que 9,5x10-9, menor que 9,0x10-9, menor que 8,5x10-9, menor que 8,0x10-9, menor que 7,5x10-9, menor que 7,0x10-9, menor que 6,5x10-9, menor que 6,0x10-9, menor que 5,5x10-9, menor que 5,0x10-9, menor que 4,5x10-9, menor que 4,0x10-9, menor que 3,5x10-9, menor que 3,0x10-9, menor que 2,5x10-9, menor que 2,0x10-9, menor que 1,5x10-9, menor que 1,0x10-9, menor que 0,5x10-9, menor que 9,5x10-10, menor que 9,0x10-10, menor que 8,5x10-10, ou menor que 8,0x10-10 M.

Em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina divulgados ou fragmentos dos mesmos têm uma K D para nicotina entre 100 nM e 0,01 nM, entre 90 nM e 0,05 nM, entre 80 nM e 0,1 nM, entre 70 nM e 0,5 nM, entre 70 nM e 1,0 nM, entre 60 nM e 30 nM, ou qualquer valor intermediário. Por exemplo, em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina ou fragmentos dos mesmos divulgados têm uma K D para nicotina de menos de 100 nM, menos de 60 nM, menos de 30 nM, menos de 10 nM, menos de 5 nM, ou menos de 1 nM.

A nicotina tem dois enantiômeros: S-(-)-nicotina e R-(+)-nicotina, com o S-enantiômero conhecido por ser o mais fisiologicamente ativo. Em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina divulgados exibem seletividade para um enantiômero sobre o outro. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina liga seletivamente à S-(-)- nicotina com uma afinidade mais alta do que ele liga a R-(+)-nicotina, enquanto em algumas modalidades um anticorpo de ligação a nicotina pode ligar a S-(-)- nicotina e substancialmente não ligar a R-(+)-nicotina. Por exemplo, 8D1-IgG4 e 12F5-IgG4 ligam preferencialmente a S-(-)- nicotina. A este respeito, 8D1- IgG4 tem uma KD para a R-(+)-nicotina de 92 nM e 12F5-IgG4 tem uma KD para a R-(+)-nicotina de 1,2 µM. Estes anticorpos divulgados exibem maior afinidade de ligação e seletividade para S-(-)-nicotina do que foi relatado anteriormente para anticorpos de ligação a nicotina descritos anteriormente, tal como o Nic12 mAb, que é divulgado em US 8.344.111 e Tars et al., J. Mol. Bio., 415: 118-127 (2012).

Alternativamente, em algumas modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina pode ligar seletivamente a R-(+)-nicotina com uma afinidade mais alta do que ele liga a S-(-)-nicotina, embora em algumas modalidades um anticorpo de ligação a nicotina possa ligar a R-(+)-nicotina e substancialmente não ligar a S-(-)-nicotina.

Em algumas modalidades, um anticorpo de ligação a nicotina pode ligar a ambos os enantiômeros de nicotina com afinidade comparável.

Em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina divulgados têm uma forte afinidade de ligação a nicotina (um ou ambos os enantiômeros) e uma afinidade de ligação comparativamente fraca para outras moléculas que podem estar presentes em um sujeito sendo tratado, incluindo moléculas que são quimicamente e/ou estruturalmente relacionadas a nicotina, metabólitos ou subprodutos da nicotina (por exemplo, cotinina), moléculas que são ligandos ou que ligam a receptores nicotínicos, drogas (por exemplo, drogas de pequenas moléculas) usadas para auxiliar na cessação de fumar (por exemplo, bupropiona, vareniclina e citisina) e/ou tratar o vício em nicotina e/ou a toxicidade de nicotina e/ou outras moléculas endógenas ou exógenas que podem estar presentes no sangue de um sujeito, incluindo neurotransmissores e outras moléculas que podem ser administradas para diagnosticar ou tratar uma condição no sujeito ou para manter ou apoiar a fisiologia normal. Em outras palavras, em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina divulgados não reagem de maneira cruzada com moléculas que não são nicotina, isto é, “compostos fora do alvo”.

A porcentagem de reatividade cruzada (% de reatividade cruzada para mAb (IC50, Nicotina/IC50, Composto x 100%)) dos anticorpos divulgados contra várias moléculas exemplares é mostrada na Tabela 4 abaixo. Destas, cotinina, nicotinamida, dinucleotídeo de B-nicotinamida adenina e nornicotina são moléculas relativas a nicotina; bupropiona, vareniclina e citisina são drogas de cessação de fumar e cloreto de acetilcolina, 3-hidroxitiramina (dopamina), serotonina e norepinefrina são neurotransmissores. Uma reatividade cruzada inferior a 0,1%, inferior a 0,05%, inferior a 0,01% ou inferior a 0,005% ou inferior a 0,001% ou inferior a 0,0005% ou inferior a 0,0001% é considerada substancialmente não reativa cruzada.

Tabela 4 - Reatividade Cruzada de Anticorpos Exemplares

Composto 8D1 12F5 7A8 5G4

KD de afinidade de S- 5 29 30 31 nicotina (nM) S-Nicotina 100 100 100 100 Cotinina NCR* NCR 0,0938 0,0352 Cloreto de Acetilcolina NCR NCR NCR NCR Nicotinamida NCR NCR NCR 0,0004

3-HidroxitiraminaHCl 0,0003 NCR NCR NCR (Dopamina HCl) Cloridrato de Serotonina NCR NCR NCR NCR (+/-)-Norepinefrina (+)-Sal 0,0005 0,0296 0,0020 0,0015 Bitartarato Nornicotina NCR NCR 0,0558 0,1971 Bupropiona NCR NCR NCR 0,0106 Citisina 0,0001 NCR NCR NCR

Tartarato de vareniclina 0,0002 NCR NCR 0,0018 Dinucleotídeo de B- 0,0002 NCR 0,0036 0,0037 Nicotinamida Adenina *NCR = nenhuma reatividade cruzada detectada Os valores estão mostrados como percentagem de reatividade cruzada, o que foi calculado utilizando a equação: (IC50, nicotina/IC50, Composto x 100%)

A afinidade de ligação para nicotina sobre cotinina é particularmente vantajosa, porque cotinina é o principal metabólito humano de nicotina e tem uma meia-vida mais longa que nicotina, assim ela frequentemente acumula em altas concentrações em relação à nicotina em fumantes e outros indivíduos que consomem produtos à base de nicotina. De fato, esta é a razão que cotinina é usada para testes para determinar se alguém é um fumante. Dado os altos níveis de cotinina circulante encontrados em indivíduos que consomem produtos à base de nicotina (por exemplo, cigarros, cigarros eletrônicos, tabaco sem fumaça, etc.), um anticorpo de ligação a nicotina que também exibe afinidade de ligação substancial para cotinina seria menos eficaz para tratar envenenamento por nicotina ou facilitar a cessação de fumar, uma vez que o anticorpo ligaria a cotinina, assim como a nicotina, limitando sua eficácia na ligação (e sequestro) a nicotina. Assim, a seletividade de ligação dos anticorpos específicos aqui divulgados é uma propriedade vantajosa significativa que suporta sua eficácia em aplicações clínicas.

A afinidade de ligação para nicotina sobre bupropiona, vareniclina e/ou citisina também é vantajosa, porque essas drogas são comumente usadas para cessação de fumar. A seletividade de ligação dos anticorpos específicos aqui divulgados e sua falta de afinidade de ligação para bupropiona, vareniclina e citisina indicam que eles poderiam ser usados em combinação com bupropiona, vareniclina e/ou cisteína, uma vez que os anticorpos não ligariam essas drogas. Assim, em algumas modalidades, os métodos aqui divulgados incluem administrar um anticorpo como aqui divulgado que não exibe afinidade de ligação para bupropiona, vareniclina e/ou citisina (tal como qualquer dos anticorpos estabelecidos na Tabela 4) em uma terapia de combinação com uma droga de cessação de fumar (tal como, bupropiona, vareniclina e/ou citisina), em que os anticorpos e as drogas podem ser administrados substancialmente simultaneamente ou sequencialmente em qualquer ordem. Tais modalidades podem ser particularmente vantajosas em métodos para facilitar a cessação de fumar, deixar de fumar (ou deixar de usar outros produtos de nicotina), manter abstinência de fumar (ou usar outros produtos de nicotina) ou diminuir o consumo de produtos de nicotina.

Os dados mostrados na Tabela 4 também indicam que os anticorpos divulgados não ligam a neurotransmissores. Este tipo de seletividade de ligação é vantajoso porque ele indica que os anticorpos divulgados provavelmente não interferem na fisiologia/farmacologia cerebral normal.

Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento é uma variante de longa ação que foi modificada a fim de prolongar a sua meia vida in vivo (após administração). Várias técnicas são conhecidas na técnica para prolongar a meia vida circulante de peptídeos, tal como anticorpos. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo carrega mutações na região Fc com reciclagem mediada por FcRn aprimorada, tal como “YTE" (M252Y/S254T/T256E), ver, por exemplo, Dall'Acqua et al., J Biol Chem., 281:23514-24 (2006), ou mutações de domínio Fc “Xtend” de Xencor (US 2014/0056879 A1). Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento do mesmo é conjugado com polietileno glicol (PEG; isto é, o anticorpo é PEGuilado) ou um polímero semelhante que prolonga a meia vida. Em algumas modalidades, o anticorpo é fundido a um peptídeo de ligação a albumina, um domínio de proteína de ligação a albumina, albumina de soro humano ou um polipeptídeo inerte. Polipeptídeos inertes exemplares que foram usados para aumentar a semivida de peptídeos em circulação incluem, mas não estão limitados a, XTEN® (também conhecido como PEG recombinante ou “rPEG”), um polímero de homoaminoácido (HAP; HAPilação), um polímero de serina de prolina-alanina (PAS; PASilação) ou um peptídeo do tipo elastina (ELP; ELPilação). Como aqui utilizado, “fundido a” inclui fusão genética, diretamente ou através de um ligante, resultando em um único polipeptídeo que contém múltiplos domínios, a menos que especificado de outro modo.

O anticorpo de ligação a nicotina ou um fragmento de ligação a nicotina do mesmo pode ser formulado em uma composição farmacêutica adequada para administração ao sujeito alvo pela via de administração pretendida, como discutido em mais detalhes abaixo.

Composições Farmacêuticas Composições farmacêuticas adequadas para uso nos métodos aqui descritos podem incluir os anticorpos de ligação a nicotina divulgados ou fragmentos dos mesmos e um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

A composição pode ser formulada para administração intravenosa, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular, oral, nasal, pulmonar, ocular, vaginal ou retal. Em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina são formulados para administração intravenosa, subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular, tal como em uma solução, suspensão, emulsão, a formulação de lipossoma, etc. A composição farmacêutica pode ser formulada para ser de uma composição de liberação imediata, composição de liberação prolongada, composição de liberação retardada, etc., utilizando técnicas conhecidas na técnica.

Transportadores farmacologicamente aceitáveis para várias formas de dosagem são conhecidos na técnica. Por exemplo, são conhecidos excipientes, lubrificantes, aglutinantes e desintegrantes para preparações sólidas; solventes, agentes solubilizantes, agentes de suspensão, agentes de isotonicidade, tampões e agentes calmantes para preparações líquidas são conhecidos. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas incluem um ou mais componentes adicionais, tais como um ou mais conservantes, antioxidantes, corantes, agentes edulcorantes/aromatizantes, agentes adsorventes, agentes umectantes e semelhantes.

Em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina divulgados ou fragmentos dos mesmos podem ser formulados para administração por injeção ou infusão. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento do mesmo é formulado para administração por uma rota não oral, pois o envenenamento por nicotina pode induzir vômito, limitando assim a eficácia da administração oral para essa indicação particular.

Métodos para Tratar Envenenamento por Nicotina Como observado acima, em alguns aspectos, os métodos para tratar overdose de nicotina ou envenenamento por nicotina aqui descritos compreendem administrar a um sujeito mamífero em necessidade dos mesmos, um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação dos mesmos como aqui divulgado, ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo. Em algumas modalidades, os métodos compreendem administrar um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo a um sujeito que ingeriu ou consumiu uma quantidade tóxica de nicotina. Em algumas modalidades, os métodos podem compreender administrar tanto um anticorpo de ligação a nicotina quanto fragmento de ligação a nicotina do mesmo e outro composto que é útil para tratar envenenamento por nicotina, tal como carvão ativado. Em tais modalidades, o anticorpo ou fragmento e o segundo composto (por exemplo, carvão ativado) podem ser administrados sequencialmente ou simultaneamente, da mesma composição ou de composições diferentes. Assim, o tratamento pode incluir a administração de carvão ativado e/ou outros tratamentos de suporte para abordar os sintomas e/ou efeitos do envenenamento por nicotina.

Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento do mesmo é eficaz para reduzir os níveis plasmáticos de nicotina e/ou reduzir os níveis de nicotina localizados no cérebro e/ou reduzir, melhorar ou eliminar um ou mais sintomas ou efeitos de envenenamento ou overdose de nicotina. A quantidade específica administrada pode depender de uma ou mais da idade e/ou peso do indivíduo, da quantidade de nicotina que se acredita ter sido ingerida e/ou do nível de nicotina no plasma do indivíduo no momento do tratamento, e/ou do nível de nicotina no cérebro do sujeito no momento do tratamento.

Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado em uma dose de cerca de 50 a cerca de 1.000 mg/kg, cerca de 150 mg/kg a cerca de 850 mg/kg, cerca de 250 mg/kg a cerca de 750 mg/kg, cerca de 350 mg/kg a cerca de 650 mg/kg, ou cerca de 450 mg/kg a cerca de 550 mg/kg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado em uma dose de 50 a 1.000 mg/kg, 150 mg/kg a 850 mg/kg, 250 mg/kg a 750 mg/kg, 350 mg/kg a 650 mg/kg ou 450 mg/kg a 550 mg/kg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação à nicotina é administrado a uma dose de cerca de 50 mg/kg, cerca de 100 mg/kg, cerca de 150 mg/kg, cerca de 200 mg/kg, cerca de 250 mg/kg, cerca de 300 mg/kg, cerca de 350 mg/kg, cerca de 400 mg/kg, cerca de 450 mg/kg, cerca de 500 mg/kg, cerca de 550 mg/kg, cerca de 600, cerca de 650 mg/kg, cerca de 700 mg/kg, cerca de 750 mg/kg, cerca de 800 mg/kg, cerca de 850 mg/kg, cerca de 900 mg/kg, cerca de 950 mg/kg ou cerca de 1.000 mg/kg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado numa dose de 50 mg/kg, 100 mg/kg, 150 mg/kg, 200 mg/kg, 250 mg/kg, 300 mg/kg, 350 mg/kg, 400 mg/kg, 450 mg/kg, 500 mg/kg, 550 mg/kg, 600, 650 mg/kg, 700 mg/kg, 750 mg/kg, 800 mg/kg, 850 mg/kg, 850 mg/kg, 900 mg/kg, 950 mg/kg ou 1.000 mg/kg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado a uma dose de cerca de 3.000 mg, cerca de 3.500 mg, cerca de 4.000 mg, cerca de 4.500 mg, cerca de 5.000 mg, cerca de 5.500 mg, cerca de 6.000, cerca de 6.500 mg, cerca de 7.000 mg, cerca de 7.500 mg, cerca de 8.000 mg, cerca de 8.500 mg, cerca de 9.000 mg, cerca de 9.500 mg, cerca de 10.000 mg, cerca de 10.500 mg, cerca de 11.000 mg, cerca de 11.500 mg, ou cerca de 12.000 mg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado na dose de 3.000 mg, 3.500 mg, 4.000 mg, 4.500 mg, 5.000 mg, 5.500 mg, 6.000, 6.500 mg, 7.000 mg, 7.500 mg, 8.000 mg, 8.500 mg, 9.000 mg, 9.500 mg, 10.000 mg,

10.500 mg, 11.000 mg, 11.500 mg ou 12.000 mg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado em uma dose de até cerca de 10 g. Quando outros construtos relacionados a anticorpos são usados, tal como fragmentos de anticorpos, eles podem ser usados em doses comparáveis ajustadas para seus diferentes pesos moleculares e/ou afinidades de ligação. Por exemplo, a dose de um fragmento pode ser escolhida para atingir parâmetros de Cmax e/ou AUC comparáveis como o anticorpo de comprimento total correspondente, ou para obter ligação de uma quantidade comparável de nicotina.

Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado como uma dose com base na razão molar de anticorpo para nicotina. Por exemplo, em algumas modalidades, a razão de anticorpo:nicotina é de 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 ou 1:10. Os anticorpos de ligação a nicotina divulgados possuem dois sítios de ligação a nicotina por anticorpo, enquanto um Fab dos anticorpos de ligação a nicotina divulgados pode ter apenas um sítio de ligação a nicotina. Por conseguinte, a dose pode ser ajustada com base no número de sítios de ligação a nicotina por molécula. Por exemplo, se alguém assumir que o MW para um anticorpo de comprimento total é de 150 KD e 50 KD para um Fab, uma “quantidade de dose equimolar” ajustada para o número de sítios de ligação a nicotina seria equivalente a uma quantidade de dose 50% mais alta (em mg/kg) para o anticorpo de comprimento total versus o Fab. Estas quantidades são baseadas na suposição de que o perfil farmacocinético é substancialmente o mesmo entre o anticorpo de comprimento total e o Fab; se não for esse o caso, os especialistas na técnica podem ajustar as quantidades conforme necessário, no caso de os perfis farmacocinéticos serem diferentes.

Em algumas modalidades, o método compreende administrar uma dose única de uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo de ligação a nicotina ou um fragmento de ligação a nicotina, ou uma dose única de uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo de ligação a nicotina ou um fragmento de ligação a nicotina do mesmo e outro composto. Em outras modalidades, o método compreende administrar doses repetidas da(s) composição(ões) farmacêutica(s) até que os sintomas ou efeitos de envenenamento por nicotina ou overdose de nicotina sejam reduzidos, melhorados ou eliminados. Por exemplo, um sujeito com envenenamento ou overdose de nicotina pode ser avaliado quanto à presença e/ou severidade de sinais e sintomas associados a envenenamento por nicotina, incluindo, mas não se limitando a, convulsões, coma, falta de ar e aumento da frequência cardíaca e tratado com uma ou mais composições farmacêuticas, conforme descrito aqui, até que um ou mais dos sinais/sintomas sejam reduzidos, melhorados ou eliminados após tratamento. Em algumas modalidades, são coletadas amostras para monitorar os níveis de nicotina no plasma ou cérebro do sujeito. Em algumas modalidades, o tratamento é repetido com doses adicionais da(s) composição(ões) farmacêutica(s) se sinais/sintomas/efeitos persistirem e/ou se os níveis plasmáticos ou cerebrais de nicotina permanecerem elevados e pode ser continuado (repetido) até que um ou mais sintomas ou efeitos de envenenamento ou overdose de nicotina sejam reduzidos, melhorados ou eliminados e/ou até que os níveis plasmáticos e/ou os níveis cerebrais sejam reduzidos.

Em algumas modalidades, o tratamento de um sujeito com envenenamento ou overdose de nicotina pode compreender desintoxicação extracorpórea do sangue do sujeito. Por exemplo, os anticorpos de ligação a nicotina divulgados ou os fragmentos de ligação à nicotina do mesmo podem ser fixados a uma coluna de afinidade através da qual o sangue do sujeito pode ser circulado. Este processo pode remover a nicotina circulante do sangue do sujeito.

Métodos para Auxiliar na Cessação de Fumar Como observado acima, os anticorpos descritos aqui são úteis em métodos para tratar vício em nicotina e/ou facilitar cessação de fumar (ou a cessação do uso de outros produtos de nicotina) em um sujeito mamífero em necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, o sujeito é um sujeito humano viciado em nicotina ou desejando parar de fumar (ou parar de usar outros produtos de nicotina) ou manter abstinência de fumar ou do consumo de outros produtos de nicotina.

Conforme divulgado na seção de Exemplos abaixo, em algumas modalidades, os anticorpos de ligação a nicotina divulgados ou os fragmentos de ligação à nicotina dos mesmos atenuam os efeitos da nicotina e não induzem sintomas de retirada em doses terapêuticas preditas e demonstraram ajudar na cessação de fumar e na manutenção de abstinência em estudos pré- clínicos. Os resultados foram dignos de nota, pois as consequências afetivas negativas da retirada precoce da nicotina são reconhecidas como contribuintes significativos para a recaída de fumar tabaco durante as tentativas de parar e a manutenção do uso compulsivo da nicotina. Além disso, a intensificação pela nicotina do valor da recompensa de outros estímulos de recompensa ambiental é considerado crítico na manutenção da dependência da nicotina. Assim, o bloqueio da intensificação da recompensa induzida pela nicotina sem induzir fortes efeitos de retirada são propriedades desejáveis dos anticorpos de ligação a nicotina e fragmentos de ligação a nicotina dos mesmos como medicamentos antifumo putativos que podem desempenhar um papel importante na prevenção de recaídas no processo de parar e na manutenção da abstinência.

Além disso, a abordagem de ligação a ligante dos anticorpos de ligação a nicotina divulgados e dos fragmentos de ligação a nicotina dos mesmos é complementar aos mecanismos farmacodinâmicos das farmacoterapias não nicotina, tal como vareniclina e bupropiona. Sem estar limitado pela teoria, o mecanismo dos anticorpos e fragmentos divulgados pode ser que, quando um fumante para e então, desliza ou recai, a atenuação dos efeitos reforçadores da nicotina ajuda a impedir a retomada do fumo regular. Além disso, em experimentos clínicos, foi feito um número maior de tentativas de parar pelo sujeito no grupo de alto anticorpo, em comparação com o placebo, consistente com este mecanismo de prevenção de recaída postulado.

Os métodos envolvem geralmente administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo como aqui descrito (ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo) ao sujeito. No entanto, em algumas modalidades, os métodos compreendem administrar um ácido nucleico codificando o anticorpo de ligação a nicotina em um construto que expressa o anticiorpo in vivo. Por exemplo, em tais modalidades, o ácido nucleico pode ser fornecedo em um vetor adequado, tal como um vetor de transferência de gene de vírus adenoassociado (AAV). Outros vetores exemplares que são adequados para uso em tais métodos são conhecidos na técnica. Consulte, por exemplo, Lukashev e Zamyatnin, Biochem. 81 (7): 700 a 708 (2016)). Vetores exemplificativos podem incluir um ou mais estimuladores (por exemplo, um potenciador de citomegalovírus (CMV)), promotores (por exemplo, promotor de β-actina de galinha) e/ou outros elementos que melhoram as propriedades do cassete de expressão. Os métodos de produção de vetores adequados e métodos gerais de uso de vetores de expressão in vivo são conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, (ver Hicks et al., Sci. Transl. Med., 4 (140): 140ra87 (2012)).

Em algumas modalidades, um indivíduo que necessita de tratamento para dependência de nicotina ou facilitação de cessação de fumar é um sujeito humano que consome produtos de nicotina, tais como tabaco para fumar, tabaco para mascar, cigarros eletrônicos e/ou outros dispositivos de fornecimento de nicotina. Tal sujeito pode ou não ser fisicamente dependente de nicotina e/ou psicologicamente dependente do consumo de produtos de nicotina. Sujeitos típicos em necessidade de tratamento para cessação de fumar fumam ou usam tabaco ou outros produtos de nicotina diariamente, tal como fumar pelo menos 1 ou mais cigarros por dia, tal como pelo menos cerca de 5, pelo menos cerca de 10, pelo menos cerca de 15, pelo menos cerca de 20 ou mais cigarros por dia, incluindo menos de 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40 ou 40 ou mais (ou o uso equivalente de outros produtos de tabaco ou nicotina).

Em algumas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de ligação a nicotina é uma quantidade eficaz para reduzir os níveis de nicotina no plasma, para reduzir os níveis de nicotina localizada no cérebro, ou ambos.

A nicotina exerce muitos dos seus efeitos significativos depois de cruzar a barreira hematoencefálica. Em algumas modalidades, os métodos e usos aqui descritos reduzem ou impedem que a nicotina atravesse a barreira hematoencefálica. Assim, em algumas modalidades, a administração de um anticorpo de ligação a nicotina como aqui descrito liga ou sequestra a nicotina que circula na corrente sanguínea do sujeito, desse modo, reduzindo ou impedindo a nicotina de cruzar a barreira hematoencefálica. Assim, em algumas modalidades, os métodos aqui descritos reduzem ou previnem os efeitos fisiológicos e psicológicos da nicotina que se originam no cérebro. Como o sujeito experimentará uma diminuição ou cessação desses efeitos, ele perderá o desejo de consumir produtos de nicotina. Adicionalmente ou alternativamente, o anticorpo de ligação a nicotina divulgado pode exercer um efeito afetando a capacidade de a nicotina estimular o sistema nervoso periférico.

A quantidade específica de um anticorpo de ligação a nicotina ou o fragmento de ligação a nicotina do mesmos que é administrada pode depender de uma ou mais de idade e/ou peso do sujeito, quantidade de nicotina consumida rotineiramente (por exemplo, fumada, mastigada ou inalada) e/ou nível de nicotina no cérebro ou plasma do sujeito no momento do tratamento.

Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado em uma dose de cerca de 50 a cerca de 1.000 mg/kg, cerca de 150 mg/kg a cerca de 850 mg/kg, cerca de 250 mg/kg a cerca de 750 mg/kg, cerca de 350 mg/kg a cerca de 650 mg/kg, ou cerca de 450 mg/kg a cerca de 550 mg/kg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado em uma dose de 50 a 1.000 mg/kg, 150 mg/kg a 850 mg/kg, 250 mg/kg a 750 mg/kg, 350 mg/kg a 650 mg/kg ou 450 mg/kg a 550 mg/kg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação à nicotina é administrado a uma dose de cerca de 50 mg/kg, cerca de 100 mg/kg, cerca de 150 mg/kg, cerca de 200 mg/kg, cerca de 250 mg/kg, cerca de 300 mg/kg, cerca de 350 mg/kg, cerca de 400 mg/kg, cerca de 450 mg/kg, cerca de 500 mg/kg, cerca de 550 mg/kg, cerca de 600, cerca de 650 mg/kg, cerca de 700 mg/kg, cerca de 750 mg/kg, cerca de 800 mg/kg, cerca de 850 mg/kg, cerca de 900 mg/kg, cerca de 950 mg/kg ou cerca de 1.000 mg/kg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado numa dose de 50 mg/kg, 100 mg/kg, 150 mg/kg, 200 mg/kg, 250 mg/kg, 300 mg/kg, 350 mg/kg, 400 mg/kg, 450 mg/kg, 500 mg/kg, 550 mg/kg, 600, 650 mg/kg, 700 mg/kg, 750 mg/kg, 800 mg/kg, 850 mg/kg, 850 mg/kg, 900 mg/kg, 950 mg/kg ou 1.000 mg/kg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado a uma dose de cerca de 3.000 mg, cerca de 3.500 mg, cerca de 4.000 mg, cerca de 4.500 mg, cerca de 5.000 mg, cerca de 5.500 mg, cerca de 6.000, cerca de 6.500 mg, cerca de 7.000 mg, cerca de 7.500 mg, cerca de 8.000 mg, cerca de 8.500 mg, cerca de 9.000 mg, cerca de 9.500 mg, cerca de 10.000 mg, cerca de 10.500 mg, cerca de 11.000 mg, cerca de 11.500 mg, ou cerca de 12.000 mg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado na dose de 3.000 mg, 3.500 mg, 4.000 mg, 4.500 mg, 5.000 mg, 5.500 mg, 6.000, 6.500 mg, 7.000 mg, 7.500 mg, 8.000 mg, 8.500 mg, 9.000 mg, 9.500 mg, 10.000 mg,

10.500 mg, 11.000 mg, 11.500 mg ou 12.000 mg. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação a nicotina é administrado em uma dose de até cerca de 10 g. Quando outros construtos relacionados a anticorpos são usados, tal como fragmentos de anticorpos, eles podem ser usados em doses comparáveis ajustadas para seus diferentes pesos moleculares e/ou afinidades de ligação. Por exemplo, a dose de um fragmento pode ser escolhida para atingir parâmetros de Cmax e/ou AUC comparáveis como o anticorpo de comprimento total correspondente, ou para obter ligação de uma quantidade comparável de nicotina.

Em algumas modalidades, os métodos compreendem administrar uma única dose de anticorpo(s) de ligação a nicotina ou fragmento(s) de ligação a nicotina do(s) mesmo(s) (ou composição que compreende os mesmos). Em algumas modalidades, o método compreende administrar doses repetidas, tal como por um período predeterminado de tempo até que os sintomas ou efeitos da dependência de nicotina sejam reduzidos, melhorados ou eliminados ou até que o sujeito tenha deixado de fumar ou, de outro modo, consumir nicotina. Em algumas modalidades, o tratamento é repetido com doses adicionais da variante (ou variantes) se os sinais/sintomas/efeitos persistirem ou se o indivíduo continuar a ter desejos de nicotina ou experimentá-los de novo.

Em algumas modalidades, os métodos compreendem a administração de anticorpo(s) de ligação a nicotina ou fragmento(s) de ligação a nicotina do(s) mesmo(s) (ou composição que compreende a mesma) três ou mais vezes por dia, duas vezes por dia ou uma vez por dia. Em algumas modalidades, os métodos compreendem administrar anticorpo(s) de ligação a nicotina ou fragmento(s) de ligação a nicotina do(s) mesmo(s) (ou composição que compreende a mesma) uma vez em dias alternados, três vezes por semana, duas vezes por semana, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez por mês ou com menos frequência. Em tais modalidades, a variante de enzima de degradação de nicotina pode ser um anticorpo de ligação a nicotina como descrito acima.

Em algumas modalidades, o tratamento pode continuar durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 21 ou mais dias; 1,

2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18 ou semanas de meses; ou 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 ou mais meses; ou 1, 2 ou 3 ou mais anos, ou até que o indivíduo não experimente por muito tempo os desejos de nicotina ou outros sintomas de abstinência de nicotina, ou tenha parado de fumar ou de usar outros produtos de tabaco.

Como observado acima, em algumas modalidades, os métodos aqui divulgados incluem administrar um anticorpo como aqui divulgado que não exibe afinidade de ligação à droga de cessação de fumar (tal como bupropiona, vareniclina e/ou citisina) em uma terapia de combinação com uma droga de cessação de fumar (tal como, bupropiona, vareniclina e/ou citisina, respectivamente), em que os anticorpos e as drogas podem ser administrados substancialmente simultaneamente ou sequencialmente em qualquer ordem. Tais modalidades podem ser particularmente vantajosas em métodos para facilitar a cessação de fumar, deixar de fumar (ou deixar de usar outros produtos de nicotina), manter abstinência de fumar (ou usar outros produtos de nicotina) ou diminuir o consumo de produtos de nicotina. Um versado na técnica apreciará prontamente que a presente divulgação está bem adaptada para realizar os objetos e obter os fins e vantagens mencionados, bem como aqueles inerentes aos mesmos. Modificações e outros usos ocorrerão aos versados na técnica. Essas modificações estão incluídas no espírito da divulgação.

Os exemplos seguintes ilustram a invenção. Deve ser entendido, no entanto, que a invenção não está limitada às condições específicas ou aos detalhes específicos descritos nestes exemplos. Todas as publicações impressas aqui mencionadas são especificamente incorporadas por referência.

Exemplos Exemplo 1 - Tratamento de um Paciente Pediátrico com um Anticorpo Antinicotina Este exemplo ilustra métodos usando anticorpos antinicotina no tratamento de envenenamento por nicotina ou overdose de nicotina.

A uma criança conhecida por ter ou suspeita de ter ingerido nicotina é administrada uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo de ligação a nicotina, por injeção intravenosa, intramuscular ou subcutânea. A criança é avaliada quanto à presença e/ou gravidade dos sinais e sintomas associados ao envenenamento por nicotina, incluindo, mas não se limitando a, convulsões, coma, falta de ar e aumento da frequência cardíaca, e a criança é tratada até que um ou mais sinais/sintomas sejam reduzidos, melhorados ou eliminados. Opcionalmente, outra dose da composição farmacêutica é administrada se os sinais/sintomas persistirem e/ou se os níveis plasmáticos de nicotina permanecerem elevados.

Exemplo 2 - Tratamento de Vício em Nicotina e/ou Facilitação da Cessação de Fumar Este exemplo ilustra métodos de uso de uma variante como aqui descrita para tratar vício de nicotina e/ou facilitar a cessação de fumar em um humano adulto.

A um sujeito humano adulto que fuma regularmente cigarros, mas deseja parar, é administrada uma quantidade terapeuticamente eficaz de composições farmacêuticas compreendendo um anticorpo de ligação a nicotina (por exemplo, os anticorpos divulgados nas Tabelas 1 e 2, ou uma versão de ação prolongada dos mesmos) por injeção intravenosa, intramuscular ou subcutânea. O sujeito é avaliado quanto aos níveis de nicotina que circulam no plasma, bem como quanto à presença e/ou gravidade dos sinais e sintomas associados à abstinência de nicotina, como dor de cabeça, irritabilidade,

ansiedade e insônia, bem como o número de cigarros fumados em um dado dia. O sujeito é tratado com administrações repetidas do anticorpo até níveis de nicotina circulando no plasma atingirem um nível alvo (reduzido) e/ou até que um ou mais sinais/sintomas de retirada de nicorina sejam reduzidos, melhorados ou eliminados, e/ou até que o sujeito tenha reduzido o nível de consumo de produtos de nicotina (por exemplo, está fumando menos cigarros por dia) e/ou até que o sujeito tenha cessado o consumo de produtos de nicotina (por exemplo, parou de fumar).

Exemplo 3 - Estudos Cinéticos In Vivo Foi realizado um estudo farmacocinético de nicotina de dose única em ratos (N=8). Ratos foram pré-tratados com 20 mg/kg de 5G4 IgG4, 7A8 IgG4, 12F5 IgG4, ou 8D1 IgG4 e, então, 0,03 mg/kg de nicotina foi administrado intravenosamente. A dose de nicotina foi administrada em menos de 10 segundos (leva aproximadamente 10 minutos para fumar um cigarro. Três minutos depois, os animais foram sacrificados e a quantidade de nicotina no sangue e nos cérebros deles foi quantificada.

Figs. 1A e 1B mostram as concentrações no sangue e no cérebro, respectivamente, como uma porcentagem de níveis em ratos de controle não pré-tratados com anticorpo. Cada anticorpo reduziu os níveis de nicotina no cérebro em comparação com os animais de controle que não foram pré- tratados com anticorpo. Por exemplo, o anticorpo 8D1 IgG4 produziu uma diminuição de 80% no nível de nicotina localizada no cérebro.

Exemplo 4 - Estudos de Dose-Resposta In Vivo Foi realizado um estudo de dose-resposta de nicotina de dose única em ratos (N=8). Ratos foram usados, uma vez que o metabolismo da nicotina é geralmente semelhante a humanos em taxa e faixa de metabólitos. Ratos foram pré-tratados com 10, 20 ou 40 mg/kg de 12F5 IgG4 ou 8D1 IgG4. Subsequentemente, 0,03 mg/kg de nicotina foi administrado intravenosamente em menos de 10 segundos. Três minutos depois, os animais foram sacrificados e a quantidade de nicotina no soro e nos cérebros deles foi quantificada.

Figs. 2A e 2B mostram as concentrações séricas e cerebrais, respectivamente. Embora ambos os anticorpos reduziram os níveis de nicotina no cérebro, uma dose de 40 mg/kg do anticorpo 8D1 IgG4 diminuiu a quantidade de nicotina localizada no cérebro em mais de 95%. As Figuras 3A e 3B mostram os mesmos dados, mas como uma percentagem de níveis em ratos de controle não pré-tratados com anticorpo.

A dose de 0,03 mg/kg de nicotina é equivalente a 2 cigarros (base de mg/kg) e foi administrada como um bolus rápido (10s) em contraste com 5 a 10 minutos para fumar um cigarro. Os níveis séricos de anticorpo foram medidos usando ELISA e ratos que tinham menos de 5 µg/mL de nível de anticorpo sérico (devido à administração incompleta) foram excluídos das análises. Os animais excluídos tinham um nível de anticorpo sérico médio de 0,73 µg/mL, enquanto os ratos incluídos na análise tinham um nível de anticorpo sérico médio de 302 µg/mL. Em comparação com um nível sérico de controle de 21 ng/mL de nicotina, doses únicas de 10, 20 e 40 mg/kg de 8D1-IgG4 produziram níveis de nicotina séricos de 226, 351 e 470 ng/mL, correspondendo respectivamente a 11, 17 e 22 vezes o nível de controle (p=0,0057 por ANOVA de uma via com correção Bonferroni para comparações múltiplas). Em comparação com um nível cerebral de controle de 139 ng/g de nicotina, doses únicas de 10, 20 e 40 mg/kg de 8D1-IgG4 produziram níveis de nicotina cerebral de 68, 22 e 4 ng/g, correspondendo respectivamente a 49%, 16% e 3% do nível de controle (p=0,0045).

Exemplo 5 - Estudo de Estabilidade Acelerada Para determinar a estabilidade relativa de anticorpos de ligação a nicotina exemplares, os anticorpos 8D1-IgG4 e 12F5 IgG4 foram formulados em salina de tampão fosfato (PBS) a uma concentração de aproximadamente 10 mg/ml e incubados a 40°C ou 5°C. As amostras foram colhidas após 2 semanas e 4 semanas para análise por Cromatografia de Exclusão de Tamanho e ensaio funcional (ligação direta a conjugado de nicotina). Os resultados dos estudos de estabilidade são mostrados na Tabela 5 abaixo.

Tabela 5 - Estabilidade de Anticorpos de Ligação a Nicotina Exemplares Ponto no Área de ID da Condição de % de % de tempo de Pico amostra armazenamento Agregados Fragmentos estabilidade Principal 5°C 461,532 0 0 2 semanas 40°C 523,855 1,2 0 12F5-IgG4 5°C 524,356 0 0 4 semanas 40°C 611,147 2,7 0 5°C 500,715 0,98 0 2 semanas 40°C 523,434 2,9 0 8D1-IgG4 5°C 476,309 0 0 4 semanas 40°C 586,613 4,0 0 No geral, a estabilidade dos anticorpos de ligação a nicotina foi aceitável, com uma quantidade semelhante de perda de monômero na semana 4 para ambos os anticorpos que foram testados. Os ensaios funcionais (ELISA) mostraram ligação funcional idêntica a um conjugado de nicotina após 2 semanas de armazenamento.

Exemplo 6 - Estudo In Vivo de Fumo Intenso Agudo

Para testar os efeitos de 8D1-IgG4 em um cenário simulado de fumo intenso, ratos (N=10; ratos SD 5 machos e 5 fêmeas) pré-tratados com 8D1- IgG4 ou IgG de controle receberam uma série de 5 doses de nicotina intravenosas repetidas espaçadas 10 minutos (Fig 4). A nicotina sérica total aumentou em função da dosagem de nicotina acumulada e de maneira dependente da dose de 8D1-IgG4 (Fig. 4A). Após a quinta dose de nicotina, os níveis de nicotina no cérebro foram reduzidos em mais de 90% no nível de dose de 80 mg/kg de 8D1-IgG4 e em 51% mais moderados no nível de dose de 40 mg/kg, em comparação com IgG de controle (Fig. 4B). Em comparação com um nível de soro de controle médio de 60 ng/ml de nicotina em seguida à 5ª de dose de nicotina, doses únicas de 40 e 80 mg/kg de 8D1-IgG4 produziram níveis de nicotina no soro totais de 1.130 e 1.987 ng/ml (< 2% de nicotina livre, ver abaixo), correspondendo, respectivamente, a 19 e 33 vezes o nível de controle (p<0,0001 por ANOVA de uma via com correção Bonferroni). Em comparação com um nível cerebral de controle médio de 298 ng/g de nicotina em seguida à 5ª dose de nicotina, doses únicas de 40 e 80 mg/kg de 8D1-IgG4 produziram níveis cerebrais de 146 e 23 ng/g, correspondendo respectivamente a 49% e 8% do nível de controle (p=0,0006 por ANOVA de uma via com correção Bonferroni). Estes dados indicam que 8D1-IgG4 é bem mantido em taxas de dosagem de nicotina simulando fumo muito intenso (10 cigarros durante 40 minutos).

Exemplo 7 - Estudo In Vivo sobre Autoadministração de Nicotina Para avaliar se 8D1-IgG4 poderia reduzir autoadministração, ratos foram treinados inicialmente para autoadministração de nicotina (NSA) usando uma dose unitária de nicotina de 0,03 mg/kg sob uma programação de proporção fixa (FR) 3 durante sessões de 2 horas. Após NSA estável ser estabelecida, a dose unitária foi reduzida para 0,015 mg/kg, o que resulta em concentrações de nicotina séricas mais semelhantes aa fumar em humanos. Após NSA estabilizada nesta dose unitária, ratos receberam infusões i.v, duas vezes por semana de 160 mg/kg de 8D1-IgG4 (N=7) ou 160 mg/kg de Gammagard (mAb de controle, N=7) 30 minutos antes da sessão, enquanto ratos continuaram na dose de 0,015 mg/kg por 10 sessões consecutivas. Então, a dose de nicotina unitária foi reduzida para 0,0075 mg/kg por outras 10 sessões consecutivas enquanto o tratamento com mAb continuava. Fig. 5 mostra o número médio (±SEM) de infusões durante as últimas três sessões antes (Linha de base) e durante o tratamento com mAb em cada dose de nicotina unitária. Os ratos que receberam 8D1-IgG4 exibiram uma diminuição significativa em NSA em ambas as doses unitárias em comparação com os respectivos ratos de linha de base e de controle. Estas conclusões demonstram que 8D1-IgG4 reduz os efeitos reforçadores da nicotina. Embora a dose de 8D1-IgG4 seja alta, a dose eficaz para cessação de fumar em humanos provavelmente será muito mais baixa porque as pessoas serão motivadas a parar. Como ponto de referência, a potência de vareniclina foi consideravelmente mais alta em experimentos clínicos para cessação de fumar do que ela foi em estudos de autoadministração de nicotina pré-clínicos em ratos. Rollema, H. et al., Neuropharmacology, 52: 985-994 (2007).

Exemplo 8 - Estudos Farmacocinéticos In Vivo A farmacocinética de 8D1-IgG4 foi testada em ratos após uma dose única (20 mg/kg; Fig 6) e doses repetidas (40 mg/kg; Fig 7) de 8D1-IgG4 doseadas semanalmente por 4 semanas em ratos (N=6) As concentrações residuais de mAb foram medidas em vários pontos no tempo após dosagem i.v. O ensaio de detecção ELISA empregado depende da ligação ao conjugado de nicotina ácido 3'Am-S-(-)Nic-poliglutâmico e, assim, reflete os níveis funcionais de mAb ligando S-(-)-nicotina no soro. Os parâmetros estimados por análise não compartimental das concentrações de 8D1-IgG4 incluem uma meia vida de fase de eliminação de 131 h, depuração de 0,10 mL/min./kg e um estado estacionário VD=79,2 mL/kg, respectivamente. Ensaios de PK de roedores de mAb’s nem sempre são preditivos de PK em humanos, mas são frequentemente usados como uma medida de “adequação in vivo " no processo de seleção de guia. Embora não visto para 8D1-IgG4, uma depuração de anticorpo anormalmente rápida pode ser um sinal de interações não específicas indesejadas, assim, estes ensaios são usados para identificar anticorpos com PK de alta disposição não específica. No final deste estudo, os ratos foram dosados com 0,03 mg/kg de nicotina i.v. e sacrificados 3 minutos mais tarde e amostras foram analisadas para avaliar a quantidade de nicotina não ligada antes e após ultrafiltração. Todas as amostras tinham <2% de nicotina não ligada (dados não mostrados).

Exemplo 9 - Estudo de Toxicidade In Vivo Para avaliar a toxicidade de altas doses de 8D1-IgG4, foi realizado um estudo toxicológico de alta dose repetido de 4 semanas 8D1-IgG4, não GLP, com e sem administração simultânea de nicotina em ratos para avaliar se foram observados quaisquer sinais significativos de toxicidade. Foram testados quatro grupos de 16 ratos por grupo (8 machos e 8 fêmeas): controle de veículo, apenas 8D1-IgG4, apenas nicotina e 8D1-IgG4 mais nicotina - este último para avaliar a segurança do complexo nicotina: anticorpo. 8D1-IgG4 foi administrado i.v. uma vez por semana a 200 mg/kg. Nicotina foi dosada continuamente via bomba de infusão para o espaço subcutâneo (1 mg/kg/dia por 28d).

A avaliação da toxicidade foi baseada na mortalidade, observações clínicas e peso corporal durante o curso do estudo de 28 dias, e nos pesos de órgãos no final do estudo, patologia anatômica bruta, hematologia, química clínica sérica e coagulação foram realizados. A histopatologia de tecidos selecionados (coração, fígado, pulmão, rim, baço, músculo esquelético, cérebro, cólon, estômago, ovário e testículos) está pendente. Os tecidos foram fixados imediatamente em formalina e processados para incorporação em parafina, coloração com H&E e revisão por um patologista veterinário.

8D1-IgG4 foi bem tolerado, sem nenhuma patologia óbvia nos grupos de tratamento.

Todos os animais receberam a dose completa e nenhuma mortalidade foi induzida em qualquer animal.

Observações clínicas diárias não encontraram mudanças comportamentais observáveis ou modificações na alimentação ou higiene em qualquer grupo.

O peso corporal foi monitorado duas vezes por semana pela duração do estudo e não foram encontradas diferenças significativas entre grupos de tratamento.

No final do estudo, os animais foram necropsiados e os principais órgãos (fígado, pulmão, baço, coração, rins, testículos ou ovários) foram isolados e pesados.

Não foram observados achados patológicos brutos e não foram encontradas mudanças estatisticamente significativas no peso dos órgãos.

Sangue foi coletado e o hemograma completo foi realizado para determinar quaisquer mudanças em parâmetros hematológicos.

Embora animais ocasionais tivessem valores fora da faixa normal (por exemplo, linfócitos ou hemoglobina ligeiramente diminuídos), não foram encontradas mudanças ou tendências significativas em nenhum grupo.

Houve uma tendência a ter leve policromasia em alguns dos animais que receberam nicotina.

A química clínica do soro de 23 analitos diferentes e a coagulação plasmática não encontraram mudanças notáveis entre os grupos de tratamento.

Claims (35)

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de uma sequência de cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve selecionadas de: a. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 1 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 2; b. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 3 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 4; c. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 5 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 6; d. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 7 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 8; e. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 9 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 10; f. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 11 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 12; g. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 14; h. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 15 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 16; i. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 18; j. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 19 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 20; k. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 21 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 22; l. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 23 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 24;

m. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 25 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 26; n. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 27 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 28; o. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 29 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 30; p. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 31 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 32; q. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 33 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 34; r. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 35 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 36; s. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 37 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 38; ou t. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 39 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 40.

2. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda as regiões variáveis da sequência de cadeia pesada e da sequência de cadeia leve selecionadas de: a. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 1 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 2; b. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 3 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 4; c. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 5 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 6; d. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 7 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 8;

e. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 9 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 10; f. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 11 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 12; g. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 14; h. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 15 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 16; i. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 18; j. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 19 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 20; k. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 21 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 22; l. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 23 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 24; m. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 25 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 26; n. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 27 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 28; o. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 29 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 30; p. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 31 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 32; q. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 33 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 34; r. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 35 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 36; s. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 37 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 38; ou t. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 39 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 40.

3. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende a sequência de cadeia pesada e a sequência de cadeia leve de: a. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 1 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 2; b. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 3 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 4; c. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 5 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 6; d. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 7 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 8; e. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 9 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 10; f. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 11 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 12; g. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 14; h. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 15 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 16; i. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 18; j. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 19 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 20; k. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 21 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 22; l. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 23 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 24;

m. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 25 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 26; n. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 27 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 28; o. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 29 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 30; p. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 31 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 32; q. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 33 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 34; r. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 35 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 36; s. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 37 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 38; ou t. a sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 39 e a sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 40.

4. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento é uma IgG4.

5. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento compreende a substituição S228P.

6. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento é uma variante de ativação longa.

7. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento é PEGuilado.

8. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento tem uma K D para S-(-)-nicotina inferior a cerca de 100 nM.

9. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento tem uma K D para S-(-)-nicotina inferior a cerca de 60 nM.

10. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento tem uma K D para S-(-)-nicotina inferior a cerca de 30 nM.

11. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento tem uma K D para S-(-)-nicotina inferior a cerca de 10 nM.

12. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento tem uma K D para S-(-)-nicotina inferior a cerca de 5 nM.

13. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento é substancialmente não reativo cruzado com cotinina.

14. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento é substancialmente não reativo cruzado com um ou mais compostos relativos a nicotina selecionados de cotinina, nicotinamida, dinucleotídeo B-nicotinamida adenina e nornicotina.

15. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento é substancialmente não reativo cruzado com uma ou mais drogas de cessão de fumar selecionadas de bupropiona, vareniclina e citosina.

16. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento é substancialmente não reativo cruzado com mais um ou mais neurotransmissores selecionados de cloreto de acetilcolina, 3- hidroxitiramina (dopamina), serotonina e norepinefrina.

17. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 16 e um transportador farmaceuticamente aceitável.

18. Composição, de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo fato de que a composição é formulada para injeção ou infusão.

19. Método para tratar vício em nicotina ou facilitar cessação de fumar, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um sujeito mamífero em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 16.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que a quantidade terapeuticamente eficaz é eficaz para reduzir níveis de nicotina no plasma e/ou reduzir níveis de nicotina localizada no cérebro.

21. Método, de acordo com as reivindicações 19 ou 20, caracterizado pelo fato de que o sujeito é um humano.

22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 19 a 21, caracterizado pelo fato de que o vício em nicotina é associado ao consumo de um produto de nicotina selecionado dentre produtos de tabaco e cigarros eletrônicos.

23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 19-22, caracterizado pelo fato de que o anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina é administrado por uma rota de administração selecionada do grupo consistindo em intravenosamente, subcutaneamente, intramuscularmente, intraperitonealmente, oralmente, nasalmente, pulmonarmente, ocularmente, vaginalmente ou retalmente.

24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 19 a 23, caracterizado pelo fato de que pelo menos um sintoma de retirada de nicotina é reduzido, melhorado ou eliminado.

25. Uso de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de vício em nicotina ou na facilitação de cessação de fumar.

26. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de vício em nicotina ou na facilitação de cessação de fumar.

27. Método para tratar overdose de nicotina ou envenenamento de nicotina, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um sujeito mamífero em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1 a 16.

28. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a quantidade terapeuticamente eficaz é eficaz para reduzir níveis de nicotina no plasma e/ou reduzir níveis de nicotina localizada no cérebro.

29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 ou 28, caracterizado pelo fato de que o sujeito é um mamífero selecionado do grupo que consiste em caninos, felinos, equinos, bovinos e humanos.

30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 29, caracterizado pelo fato de que o sujeito é uma criança humana.

31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 30, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a nicotina é administrado por uma rota de administração selecionada do grupo consistindo em intravenosamente, subcutaneamente, intramuscularmente, intraperitonealmente, oralmente, nasalmente, pulmonarmente, ocularmente, vaginalmente ou retalmente.

32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 31, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administração de um segundo composto para tratar overdose de nicotina ou envenenamento de nicotina.

33. Método, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o segundo composto compreende carvão ativado.

34. Uso de um anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo de qualquer uma das reivindicações 1-16, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de overdose de nicotina ou envenenamento de nicotina.

35. Anticorpo de ligação a nicotina ou fragmento de ligação a nicotina do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de overdose de nicotina ou envenenamento de nicotina.