BR112020001617A2 - composição sob forma de uma solução aquosa injetável, e, processo de obtenção da insulina humana a21g - Google Patents

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Abstract

RESUMO COMPOSIÇÃO SOB FORMA DE UMA SOLUÇÃO AQUOSA INJETÁVEL, E, PROCESSO DE OBTENÇÃO DA INSULINA HUMANA A21G A invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,4 compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e, pelo menos, um supressor de glucagon com ação prandial. Em uma modalidade, o supressor de glucagon com ação prandial é escolhido no grupo constituído de um análogo da amilina ou um agonista do receptor da amilina ou um análogo do GLP-1 ou um agonista do receptor de GLP-1 (GLP-1 RA). Em uma modalidade, o supressor de glucagon com ação prandial é análogo da amilina ou um agonista do receptor da amilina. Em uma modalidade, o peptídeo supressor de glucagon com ação prandial é o pramlintide. Ela refere-se igualmente a um processo de obtenção da insulina humana A21G compreendendo, pelo menos, uma etapa consistindo em fazer reagir a insulina humana A21G, B31R, B32R (insulina glargine) com a carboxipeptidase B de rato a uma razão insulina/carboxipeptidase compreendida entre 500 e 2000, a um pH compreendido de 7,5 a 8,5 e a uma temperatura compreendida de 20 a 30°C durante 10 a 20 horas.

Description

“COMPOSIÇÃO SOB FORMA DE UMA SOLUÇÃO AQUOSA INJETÁVEL, E, PROCESSO DE OBTENÇÃO DA INSULINA HUMANA A21G”
[001] A invenção refere-se às terapias por injeção de composição compreendendo, pelo menos, insulina humana A21G, com ação prandial, e um supressor de glucagon, em particular com ação prandial, para tratar o diabetes e permitir melhorar o controle das hiperglicemias pós-pandriais.
[002] O diabetes de tipo 1 é uma doença autoimune conduzindo à destruição das células beta do pâncreas. Essas células são conhecidas como produzindo insulina, cujo papel principal é regular a utilização de glicose nos tecidos periféricos (Gerich 1993 Control of glycaemia). Consequentemente, os pacientes diabéticos de tipo 1 sofrem de hiperglicemia crônica e precisam auto-administrar insulina exógena a fim de limitar essa hiperglicemia. A insulinoterapia permitiu mudar drasticamente a expectativa de vida desses pacientes.
[003] Até o momento, os pacientes diabéticos de tipo 1 utilizam dois tipos de insulina, as insulinas prandiais com ação curta para controlar sua glicemia na hora das refeições e as insulinas basais, de ação prolongada, para controlar sua glicemia durante todo o dia e a noite. Vários tipos de insulina de ação curta existem caracterizados por seu início de ação. Por exemplo, a insulina humana, dita regular, tem uma ação retardada em comparação com as insulinas análogas, ditas rápidas, como a insulina lispro (Humalog®, ELI LILLY) ou insulina aspart (Novorapid®, NOVO NORDISK). Assim, a insulina humana deve ser administrada em média 30 minutos antes da refeição, enquanto que as insulinas análogas podem ser administradas 15 minutos antes da refeição ou no momento da refeição. Além disso, é admitido que as insulinas análogas conduzem a um melhor controle da glicemia pós-prandial do que a insulina humana, o que explica por que a grande maioria dos pacientes na Europa e nos Estados Unidos utiliza, atualmente, insulinas análogas rápidas cuja ação é mais curta do que a da insulina humana.
[004] No entanto, o controle da glicemia após o consumo de uma refeição assegurado por essas insulinas prandiais exógenas não é ótimo, mesmo no caso de insulinas análogas rápidas. Isso está associado, em parte, ao fato de que esses pacientes, ao contrário de pessoas saudáveis, produzem glucagon após o consumo de uma refeição, o que conduz à remoção de uma parte da glicose armazenada no fígado. Essa produção de glicose mediada pelo glucagon agrava o problema de hiperglicemia pós-prandial desses pacientes e conduz a uma utilização excessiva da insulina.
[005] Esta problemática de regulação da glicemia pós-prandial é bastante similar para pacientes diabéticos de tipo 2 tratados com insulina, nos casos em que sua doença resultou em uma perda muito significativa de sua capacidade de produção de insulina e de amilina.
[006] Foi demonstrado que os supressores de glucagon, em particular peptídeos e/ou hormônios, são susceptíveis de inibir a produção de glucagon após o consumo de uma refeição, o que conduz a uma melhora significativa do controle da glicemia pós-prandial. Por exemplo, a amilina, um hormônio produzido pelas células beta do pâncreas, e cuja produção é igualmente deficiente em pacientes diabéticos de tipo 1, desempenha um papel chave na regulação da glicemia pós-prandial. A amilina, também conhecida sob o nome em inglês de "islet amyloid polypeptide" ou IAPP, é um peptídeo de 37 aminoácidos que é co-armazenado e co-secretado com a insulina (Schmitz 2004 Amylin Agonists). Este peptídeo é descrito como bloqueando a produção de glucagon pelas células alfa do pâncreas. Assim, a insulina e a amilina têm papéis complementares e sinergísticos, uma vez que a insulina permite reduzir a concentração de glicose no sangue, enquanto que a amilina permite reduzir a entrada de glicose endógena no sangue, ao inibir a produção, ou secreção, de glucagon endógeno.
[007] No entanto, a amilina humana tem propriedades que não são compatíveis com as exigências farmacêuticos em termos de solubilidade e estabilidade (Goldsbury CS, Cooper GJ, Goldie KN, Muller SA, Saafi EL, Gruijters WT, Misur MP, Engel A, Aebi U, Kistler J.: Polymorphic fibrillar assembly of human amylin, J. Struct Biol 119: 17–27, 1997). A amilina é conhecida por formar fibras amilóides, que conduzem à formação de placas que são insolúveis em água. Consequentemente, foi necessário desenvolver um análogo a fim de resolver esses problemas de solubilidade.
[008] A empresa Amylin desenvolveu um análogo da amilina, o pramlintide, para compensar a falta de estabilidade física da amilina humana. Este produto, comercializado sob o nome de Symlin®, foi aprovado em 2005 pelo FDA para o tratamento de diabetes de tipo 1 e de tipo 2, como um complemento à insulinoterapia. Ele deve ser administrado por via subcutânea três vezes ao dia, na hora precedendo a refeição, a fim de melhorar o controle da glicemia pós-prandial, levando em conta sua meia-vida relativamente curta de algumas horas. Este peptídeo é formulado a pH 4,0 e foi descrito para fibrilar quando o pH da solução é superior a 5,5. Variantes de análogos são descritas na patente US 5.686.411.
[009] Os análogos de amilina ou os agonistas do receptor de amilina ditos como "prandiais" ou "de ação curta" reproduzem os efeitos da amilina, enquanto apresentando uma meia-vida mais longa. Esses derivados da amilina, permitindo controlar a glicemia no momento da refeição, podem apresentar uma meia-vida inferior a 8 h. Essa meia-vida é a meia-vida aparente de eliminação após injeção subcutânea em humanos. A meia-vida destes análogos de amilina ou dos agonistas do receptor de amilina pode ser inferior a 5 horas, notadamente inferior a 4 horas e até mesmo inferior a 3 horas.
[0010] No entanto, as composições compreendendo amilina ou um análogo de amilina e, em particular, o pramlintide podem induzir certos efeitos indesejáveis nos pacientes. Em particular, essas composições podem causar náuseas em pacientes.
[0011] O GLP-1, um outro peptídeo fisiológico, é igualmente descrito para desempenhar um papel similar ao da amilina em termos de supressão da secreção de glucagon após o consumo de uma refeição. O GLP-1 é também conhecido por seu papel de insulina secretagogo e é, portanto, particularmente eficaz como um complemento à insulina, em particular em pacientes diabéticos de tipo 2. Essas ações são glicodependentes, o que minimiza o risco de hipoglicemia. Até agora, os GLP-1 RA foram aprovados apenas para pacientes diabéticos de tipo 2.
[0012] Do mesmo modo, o GLP-1 humano não pode ser utilizado como tratamento terapêutico devido à sua meia-vida extremamente curta. Diferentes derivados do GLP-1, agonistas do receptor do GLP-1, ditos GLP-1 RA, ou análogos do GLP-1, reproduzem os efeitos do GLP-1, apresentando, ao mesmo tempo, uma meia-vida mais longa. Esses derivados do GLP-1 podem ser distribuídos em três grupos, dependendo de sua respectiva meia-vida: aqueles com ação curta, ou prandial, para controlar a glicemia na hora das refeições (meia-vida inferior a 8 h), aqueles com ação quotidiana, para cobrir as necessidades no decorrer do dia (meia- vida superior a 8 h, ou mesmo 10 h) e aquelas com ação semanal, para cobrir as necessidades durante a semana (meia-vida superior a 48 h ) A nível de GLP-1 RA com ação prandial, os dois peptídeos aprovados até agora são o exenatide (Byetta®, ASTRA-ZENECA, duas administrações por dia) e lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI, uma administração por dia). Estes dois GLP-1 RA são formulados a um pH próximo de 4 e devem ser administrados na hora anterior à refeição, como o pramlintide.
[0013] Uma das principais dificuldades para os pacientes insulinodependentes utilizar esses diferentes compostos de ação curta supressores de glucagon está ligada ao número de injeções suplementares, podendo ir de 1 a 3 injeções diárias além das 2 a 4 injeções de insulina. Assim, é primordial poder combinar, em solução, uma insulina prandial com um supressor de glucagon com ação prandial, a fim de permitir a utilização desses compostos complementares à insulina sem complicar o tratamento para os pacientes. Além disso, isto permitiria imitar a fisiologia mais finamente, pois esses hormônios são, ambos, secretados em resposta a uma refeição, a fim de melhorar o controle da glicemia pós-prandial, em particular um melhor controle das hiperglicemias pós-prandiais e, portanto, melhor tratar o diabetes.
[0014] Ora, as insulinas prandiais e esses peptídeos de interesse não são compatíveis em solução aquosa. De fato, as insulinas prandiais têm uma estabilidade química ótima a um pH próximo a 7, enquanto que os derivados da amilina ou do GLP-1 não são estáveis fisicamente e quimicamente a um pH próximo do pH fisiológico.
[0015] Esta dificuldade conduziu ao projeto de uma bomba contendo dois reservatórios permitindo manter separadas a insulina prandial do derivado da amilina. O pedido de patente USUS2016/001002 da empresa ROCHE descreve uma tal bomba, a fim de tornar possível a coadministração da amilina e de uma insulina prandial com um único dispositivo médico. No entanto, seria preferível poder misturar, em solução aquosa, esses hormônios, a fim de empregar dispositivos médicos existentes, mais simples e/ou apresentando um risco reduzido de falha no funcionamento.
[0016] Outra solução para este problema de mistura desses hormônios em uma solução aquosa consiste em substituir a água por um solvente orgânico. O pedido de patente WO2013067022 da empresa XERIS descreve composições que compreendem amilina e insulina em solução em um solvente orgânico. No entanto, a utilização de um solvente orgânico, como o DMSO, levanta questões de segurança para o paciente no tratamento de uma doença crônica como o diabetes. Além disso, os solventes orgânicos podem ser problemáticos com relação aos dispositivos de injeção, notadamente ao solubilizar alguns certos componentes dos mesmos. Portanto, é desejável desenvolver essas combinações sob a forma de uma solução aquosa.
[0017] O problema de estabilidade em solução aquosa foi igualmente contornado preparando as misturas no estado sólido. O pedido de patente EP2060268 de NOVO NORDISK descreve formulações de insulina e de pramlintide sob forma de um pó atomizado para aplicação nasal. No entanto, a via de administração preferível e a mais utilizada até agora é a via subcutânea para a qual a obtenção de soluções aquosas prontas para usar é necessária.
[0018] Outra abordagem consiste em combinar uma insulina prandial a um derivado da amilina no pH em que esse derivado da amilina é fisicamente estável. O pedido de patente US20090192075 da empresa Biodel descreve uma composição líquida compreendendo insulina humana, o pramlintide e um quelante de zinco a pH 4,0. Este pedido descreve uma ação rápida da insulina humana devido à presença de um quelante de zinco. No entanto, a insulina humana é conhecida por não ser quimicamente estável em pH ácido, esta técnica não deveria permitir atender aos critérios da Farmacopeia EP e/ou US.
[0019] Uma abordagem alternativa consiste em modificar a estrutura das insulinas prandiais para melhorar sua estabilidade em pH ácidos. O pedido WO2007104786 exemplifica composições compreendendo as insulinas análogas rápidas A21G, B28D, desB30 e A21G, B28E, desB30 que são solúveis em pH ácido.
[0020] O pedido WO2007104786 apresenta igualmente composições de insulina rápidas, notadamente B28D (insulina aspart) a pH neutro e na presença de um tensoativo, e em particular de derivado de glicerofosfato, mais particularmente dimiristoil glicerofosfoglicerol (DMPG), conduzindo a estabilidades medidas por ThT bem superiores às das composições de insulinas análogas rápidas A21G, B28D, desB30 e A21G, B28E desB30 de pH ácido.
[0021] As composições da técnica anterior compreendendo em associação uma insulina prandial e o pramlintide descrevem, na maioria das vezes, os diferentes tipos de insulinas prandiais; no entanto, seus exemplos são dirigidos para composições compreendendo insulinas análogas prandiais ditas rápidas, estas últimas sendo consideradas como mais eficazes que a insulina humana.
[0022] De modo surpreendente, a requerente demonstrou que uma composição contendo a insulina humana A21G, dita "regular", isto é, uma insulina diferindo da insulina humana unicamente pela substituição do resíduo asparagina em posição 21 na cadeia A por um resíduo glicina, menos rápido que os análogos de insulina ditos "rápidos", em associação com um supressor de glucagon com ação prandial a um pH indo de 3,5 a 4,4 em uma solução aquosa, permitia obter um melhor controle da glicemia pós-prandial do que com um análogo de insulina prandial dito rápido.
[0023] Além disso, a requerente demonstrou, de modo surpreendente, que a dita composição contendo a insulina humana A21G, em associação com um supressor de glucagon de ação prandial a um pH indo de 3,5 a 4,4 em solução aquosa apresentava uma estabilidade física e química compatível com as exigências farmacêuticas e superior às soluções propostas na técnica anterior.
[0024] A obtenção de uma composição, sob forma de solução aquosa injetável apresentando um melhor controle das hiperglicemias pós-pandriais e das propriedades de estabilidades física e química melhoradas em relação às descritas na técnica anterior, é notável porque é bem conhecido do versado na arte que, no caso de combinações, as farmacocinéticas dos produtos em associações e as propriedades de estabilidade física e química são muito difíceis de prever.
[0025] Além disso, também é procurada uma composição que permita diminuir, ou até mesmo suprimir, no todo ou em parte, os efeitos adversos que podem ser gerados pelos princípios ativos.
[0026] A invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,4, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G dita regular e, pelo menos, um supressor de glucagon com ação prandial.
[0027] De acordo com uma modalidade, o supressor de glucagon com ação prandial é um análogo da amilina ou um agonista do receptor da amilina, um análogo do GLP-1 ou um agonista do receptor GLP-1, ainda chamado GLP-1 RA.
[0028] A requerente observou que a formulação de acordo com a invenção, a um pH compreendido de 3,5 a 4,4, possui propriedades farmacocinéticas compatíveis com uma utilização no momento das refeições e permite um melhor controle da glicemia pós-prandial.
[0029] Além disso, a requerente demonstrou que estas formulações conduziriam a uma absorção mais lenta de pramlintide. Isto é notadamente caracterizado por um pico plasmático (tmax) de pramlintide significativamente retardado e/ou por uma exposição plasmática ao pramlintide precoce (AUC0-30min) significativamente diminuída em relação à administração de pramlintide sozinha.
[0030] Esta desaceleração permite diminuir, ou até mesmo suprimir, os efeitos indesejáveis de pramlintide, em particular no que se refere às náuseas.
[0031] A invenção refere-se igualmente à utilização de uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,4 compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um supressor de glucagon,
em particular com ação prandial, para melhorar o controle da glicemia pós-prandial.
[0032] A invenção refere-se igualmente a uma composição de acordo com a invenção destinada a ser utilizada em um método de tratamento do diabetes, caracterizada em que ela é administrada em bolus antes das refeições.
[0033] A invenção refere-se igualmente a uma composição de acordo com a invenção destinada a ser utilizada em um método de tratamento do diabetes, caracterizada em que ela é administrada para melhorar o controle da glicemia pós- prandial.
[0034] A invenção refere-se igualmente a uma composição de acordo com a invenção destinada a ser utilizada em um método de tratamento do diabetes, caracterizada em que ela é administrada para melhorar o controle da glicemia pós- prandial e para diminuir os efeitos indesejáveis de pramlintide.
[0035] A invenção refere-se igualmente a uma composição de acordo com a invenção destinada a ser utilizada em um método de tratamento do diabetes, caracterizada em que ela permite diminuir o consumo de alimentos induzido pela insulina.
[0036] De acordo com uma modalidade, a diminuição do consumo de alimentos refere-se ao período indo da injeção até 4 horas após a injeção.
[0037] De acordo com uma modalidade, a diminuição do consumo de alimentos refere-se ao período indo da injeção até 3 horas após a injeção.
[0038] De acordo com uma modalidade, a diminuição do consumo de alimentos refere-se ao período indo da injeção até 2 horas após a injeção.
[0039] De acordo com uma modalidade, a diminuição do consumo de alimentos refere-se ao período indo da injeção até 1 horas após a injeção.
[0040] A invenção refere-se igualmente a formulações farmacêuticas estáveis compreendendo tais composições.
[0041] As exigências permitindo obter uma formulação farmacêutica injetável para o tratamento do diabetes são notadamente: - uma formulação líquida aquosa estável fisicamente e quimicamente pelo menos durante duas semanas, ou mesmo um mês a 30°C (usos múltiplos) e, pelo menos, um ano, ou mesmo 2 anos a 5°C, - uma compatibilidade com os conservantes antimicrobianos.
[0042] Do mesmo modo, as formulações de insulina humana A21G com um análogo do GLP-1 ou um agonista do receptor GLP-1, ainda chamado GLP-1 RA, por exemplo, exenatide ou lixisenatide, a um pH compreendido de 3,5 a 4,4 têm uma estabilidade física e química permitindo o desenvolvimento de uma formulação líquida estável pelo menos duas semanas, ou mesmo um mês a 30°C e, pelo menos, um ano, ou mesmo 2 anos, a 5°C.
[0043] Tratando-se da estabilidade, o método clássico para medir as estabilidades das proteínas ou peptídeos consiste em medir a formação de fibrilas com a ajuda de Tioflavina T, ainda chamada THT. Este método permite medir, sob condições de temperatura e de agitação, permitindo uma aceleração do fenômeno, o tempo de latência antes da formação de fibrilas, por medida do aumento da fluorescência. As composições de acordo com a invenção têm um tempo de latência antes da formação de fibrilas que é nitidamente superior aos descritos na literatura. As composições de acordo com a invenção apresentam uma estabilidade física e química bem superior às descritas na técnica anterior usando insulinas prandiais comerciais.
[0044] Em uma modalidade, as formulações de acordo com a invenção apresentam um tempo de latência medido por ThT pelo menos igual a 8 horas.
[0045] Em uma modalidade, as formulações de acordo com a invenção apresentam um tempo de latência medido por ThT pelo menos igual a 10 horas.
[0046] Em uma modalidade, as formulações de acordo com a invenção apresentam um tempo de latência medido por ThT pelo menos igual a 15 horas.
[0047] Em uma modalidade, as formulações de acordo com a invenção apresentam um tempo de latência medido por ThT pelo menos igual a 20 horas.
[0048] Em uma modalidade, as formulações de acordo com a invenção apresentam um tempo de latência medido por ThT pelo menos igual a 25 horas.
[0049] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,4,
compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um agonista do receptor de amilina ou um análogo de amilina. De acordo com uma modalidade, trata-se de pramlintide.
[0050] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,2, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um agonista do receptor de amilina ou um análogo de amilina. De acordo com uma modalidade, trata-se de pramlintide.
[0051] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,8 a 4,2, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um agonista do receptor de amilina ou um análogo de amilina. De acordo com uma modalidade, trata-se de pramlintide.
[0052] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH é 4,0, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um agonista do receptor de amilina ou um análogo de amilina. De acordo com uma modalidade, trata-se de pramlintide.
[0053] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,4, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um agonista do receptor de GLP-1 ou um análogo do GLP-1. De acordo com uma modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o exenatide. De acordo com uma outra modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o lixisenatide.
[0054] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,2, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um agonista do receptor de GLP-1 ou um análogo do GLP-1. De acordo com uma modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o exenatide. De acordo com uma outra modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o lixisenatide.
[0055] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,8 a 4,2, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um agonista do receptor de GLP-1 ou um análogo do GLP-1. De acordo com uma modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o exenatide. De acordo com uma outra modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o lixisenatide.
[0056] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH é 4,0, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G e um agonista do receptor de GLP-1 ou um análogo do GLP-1. De acordo com uma modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o exenatide. De acordo com uma outra modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o lixisenatide.
[0057] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,4, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G, um agonista do receptor de amilina ou um análogo de amilina, e um agonista do receptor de GLP-1 ou um análogo do GLP-1. De acordo com uma modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o exenatide. De acordo com uma outra modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o lixisenatide. De acordo com ainda outra modalidade, o dito agonista do receptor de amilina ou análogo de amilina é o pramlintide.
[0058] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,2, compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G, pelo menos um agonista do receptor de amilina ou um análogo de amilina, e, pelo menos, um agonista do receptor de GLP-1 ou um análogo do GLP-1. De acordo com uma modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o exenatide. De acordo com uma outra modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o lixisenatide. De acordo com ainda outra modalidade, o dito agonista do receptor de amilina ou análogo de amilina é o pramlintide.
[0059] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,8 a 4,2,
compreendendo, pelo menos, a insulina humana A21G, pelo menos um agonista do receptor de amilina ou um análogo de amilina, e, pelo menos, um agonista do receptor de GLP-1 ou um análogo do GLP-1. De acordo com uma modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o exenatide. De acordo com uma outra modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é lixisenatide. De acordo com ainda outra modalidade, o dito agonista do receptor de amilina ou análogo de amilina é o pramlintide.
[0060] Em uma modalidade, a invenção refere-se a uma composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH é 4,0, compreendendo, pelo menos, de a insulina humana A21G, pelo menos um agonista do receptor de amilina ou um análogo de amilina, e, pelo menos, um agonista do receptor de GLP-1 ou um análogo do GLP-1. De acordo com uma modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é o exenatide. De acordo com uma outra modalidade, o dito agonista do receptor de GLP-1 é lixisenatide. De acordo com ainda outra modalidade, o dito agonista do receptor de amilina ou análogo de amilina é o pramlintide.
[0061] É particularmente interessante de combinar, em solução aquosa, a insulina humana A21G com um análogo da amilina, um agonista do receptor de amilina ou o GLP-1 e com um análogo do GLP-1, ou um agonista do receptor de GLP-1, porque esta combinação dita “tripla” permite notadamente potencializar os efeitos de cada hormônio e reduzir as doses de cada um dos mesmos.
[0062] As composições sob forma de uma solução aquosa injetável, de acordo com a invenção, são soluções límpidas. Entende-se por «solução límpida», composições que atendem aos critérios descritos nas farmacopeias americana e europeia com relação a soluções injetáveis. Na farmacopeia americana, as soluções são definidas na parte <1151> fazendo referência à injeção (<1>) (fazendo referência a <788 > segundo USP 35 e definido em < 788> segundo USP 35 e em < 787>, <788> e <790> USP 38 (a partir de 1º. de agosto de 2014), segundo USP 38). Na farmacopeia europeia, as soluções injetáveis devem atender aos critérios dados na seções 2.9.19 e 2.9.20.
[0063] No presente pedido, a amilina, como mencionada, faz referência aos compostos descritos nas patentes US 5.124.314 e US 5.234.906. Entende-se por “análogo”, quando ele é utilizado por referência a um peptídeo ou uma proteína, em que um ou vários resíduos de aminoácidos constitutivos da sequência primária foram substituídos por outros resíduos de aminoácidos e/ou em que um ou vários resíduos de aminoácidos constitutivos foram suprimidos e/ou em que um ou vários resíduos de aminoácidos constitutivos foram adicionados. A porcentagem de homologia admitidos pela presente definição de um análogo é de 50 %. No caso da amilina, um análogo pode ser derivado, por exemplo, da sequência de aminoácido primária da amilina substituindo um ou vários aminoácidos naturais ou não naturais ou peptidomiméticos.
[0064] O exenatide e o lixisenatide, respectivamente descritos nos pedidos US2004/0023871 e WO0104156, são geralmente considerados como agonistas do receptor de GLP-1. Em uma modalidade, o supressor de glucagon com ação prandial é o pramlintide (Symlin®) comercializado pela empresa ASTRAZENECA AB.
[0065] Em uma modalidade, os GLP-1, análogos de GLP-1, ou GLP-1 RA são ditos “de ação curta” ou “prandiais”. Entende-se por “de ação curta” ou “prandiais”, GLP-1, análogos de GLP-1, ou GLP-1 RA, cuja meia-vida aparente de eliminação após injeção subcutânea no homem é inferior 8 horas, em particular inferior a 5 horas, de preferência inferior a 4 horas ou então ainda inferior a 3 horas, como por exemplo o exenatide e o lixisenatide.
[0066] Em uma modalidade, os GLP-1, os análogos de GLP-1, ou os GLP-1 RA são escolhidos no grupos constituído pelo exenatide (Byetta®, ASTRAZENECA), o lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI), seus análogas ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
[0067] Em uma modalidade, o GLP-1, análogo de GLP-1, ou GLP-1 RA é o exenatide ou Byetta*', seus análogas ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
[0068] Em uma modalidade, GLP-1, análogo de GLP-1, ou GLP-1 RA é o lixisenatide ou Lyxumia®, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
[0069] Em uma modalidade, a concentração de insulina humana A21G está compreendida de 240 a 3000 μΜ ou 40 a 500 U/mL.
[0070] Em uma modalidade, a concentração de insulina humana A21G é 600 μΜ ou 100 U/mL.
[0071] Em uma modalidade, a concentração de insulina humana A21G é 1200 μΜ ou 200 U/mL.
[0072] Em uma modalidade, a concentração de insulina humana A21G é 1800 μΜ ou 300 U/mL.
[0073] Em uma modalidade, a concentração de insulina humana A21G é 2400 μΜ ou 400 U/mL.
[0074] Em uma modalidade, a concentração de insulina humana A21G é 3000 μΜ ou 500 U/mL.
[0075] No presente pedido 100 U/mL de insulina humana A21G corresponde a 3,5 mg/ml.
[0076] Em uma modalidade, a concentração de pramlintide está compreendida de 0,32 a 5 mg/mL.
[0077] Em uma modalidade, a concentração de pramlintide está compreendida de 0,4 a 3 mg/mL.
[0078] Em uma modalidade, a concentração de pramlintide está compreendida de 0,5 a 2 mg/mL.
[0079] Em uma modalidade, a concentração de pramlintide está compreendida de 0,5 a 1,5 mg/mL.
[0080] Em uma modalidade, a concentração de pramlintide está compreendida de 0,6 a 1 mg/mL.
[0081] Em uma modalidade, a concentração de pramlintide é 1,0 mg/ml.
[0082] Em uma modalidade, a concentração de pramlintide é 0,6 mg/ml.
[0083] Em uma modalidade, a concentração de exenatide está compreendida de 10 a 1000 µg/l.
[0084] Em uma modalidade, a concentração de exenatide está compreendida de 10 a 500 µg/ml.
[0085] Em uma modalidade, a concentração de exenatide está compreendida de 20 a 400 µg/l.
[0086] Em uma modalidade, a concentração de exenatide está compreendida de 20 a 300 µg/ml.
[0087] Em uma modalidade, a concentração de exenatide está compreendida de 30 a 300 µg/ml. Em uma modalidade, a concentração de exenatide está compreendida de 30 a 150 µg/ml.
[0088] Em uma modalidade, a concentração de exenatide está compreendida de 40 a 150 µg/ml.
[0089] Em uma modalidade, a concentração de exenatide está compreendida de 40 a 80 µg/ml.
[0090] Em uma modalidade, a concentração de exenatide é 50 µg/ml.
[0091] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide está compreendida de 20 a 1000 µg/ml.
[0092] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide está compreendida de 20 a 800 µg/ml.
[0093] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide está compreendida de 40 a 600 µg/ml.
[0094] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide está compreendida de 60 a 600 µg/ml.
[0095] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide está compreendida de 60 a 300 µg/ml.
[0096] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide está compreendida de 80 a 300 µg/ml.
[0097] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide está compreendida de 80 a 160 µg/ml.
[0098] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide é de 100 µg/ml.
[0099] Em uma modalidade, a concentração de exenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis está compreendida em um intervalo de 0,01 a 1,0 mg por 100 U de insulina.
[00100] Em uma modalidade, a concentração de exenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,01 a 0,5 mg por 100 U de insulina.
[00101] Em uma modalidade, a concentração de exenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,02 a 0,4 mg por 100 U de insulina.
[00102] Em uma modalidade, a concentração de exenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,03 a 0,3 mg por 100 U de insulina.
[00103] Em uma modalidade, a concentração de exenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,03 a 0,2 mg por 100 U de insulina.
[00104] Em uma modalidade, a concentração de exenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,03 a 0, 15 mg por 100 U de insulina.
[00105] Em uma modalidade, a concentração de exenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,05 mg por 100 U de insulina.
[00106] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis está compreendida em um intervalo de 0,01 a 1 mg por 100 U de insulina.
[00107] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,01 a 0,5 mg por 100 U de insulina.
[00108] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,02 a 0,4 mg por 100 U de insulina.
[00109] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,03 a 0,3 mg por 100
U de insulina.
[00110] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,04 a 0,2 mg por 100 U de insulina.
[00111] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,04 a 0,15 mg por 100 U de insulina.
[00112] Em uma modalidade, a concentração de lixisenatide, seus análogos ou derivados e seus sais farmaceuticamente aceitáveis é de 0,1 mg por 100 U de insulina.
[00113] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção são realizadas por mistura de soluções, de análogas de amilina ou de agonistas do receptor da amilina, e de soluções de GLP-1, de análogo de GLP-1 ou de agonista do receptor de GLP-1 RA em razões por volume compreendidas em um intervalo de 10/90 a 90/10.
[00114] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda sais de zinco a uma concentração compreendida de 0 a 800 μΜ por 100 U de insulina.
[00115] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda sais de zinco a uma concentração compreendida de 0 a 500 μΜ por 100 U de insulina.
[00116] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda sais de zinco a uma concentração compreendida de 100 a 500 μΜ por 100 U de insulina.
[00117] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda sais de zinco a uma concentração compreendida de 200 a 400 μΜ por 100 U de insulina.
[00118] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda sais de zinco a uma concentração de 300 μΜ por 100 U de insulina.
[00119] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda tampões.
[00120] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem um tampão escolhido no grupo constituído por um tampão acetato de sódio e Tris.
[00121] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda conservantes.
[00122] Em uma modalidade, os conservantes são escolhidos no grupo constituído pelo m-cresol e o fenol, sozinhos ou em mistura.
[00123] Em uma modalidade, a concentração dos conservantes está compreendida de 10 a 50 mM.
[00124] Em uma modalidade, a concentração dos conservantes está compreendida de 10 a 40 mM.
[00125] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda um tensoativo.
[00126] Em uma modalidade, o tensoativo é escolhido no grupo constituído pelo Poloxamer 188, o Tween® 20, ainda chamado como Polysorbate 20, e o Tween® 80, ainda chamado Polysorbate 80.
[00127] Em uma modalidade, a concentração de Tween® 20 varia de 5 a 50 µg/ml.
[00128] Em uma modalidade, a concentração de Tween® 20 varia de 5 a 25 µg/ml.
[00129] Em uma modalidade, a concentração de Tween® 20 é de 10 μΜ.
[00130] As composições de acordo com a invenção podem compreender ainda aditivos, como os agentes de tonicidade.
[00131] Em uma modalidade, os agentes de tonicidade são escolhidos no grupo constituído pela glicerina, o cloreto de sódio, o manitol e a glicina.
[00132] Em uma modalidade, as composições de acordo com a invenção compreendem ainda um antioxidante.
[00133] Em uma modalidade, o antioxidante é a metionina.
[00134] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende, ainda, pelo menos, um promotor de absorção escolhido entre os promotores de absorção, os promotores de difusão ou os agentes vasodilatadores, sozinhos ou em mistura.
[00135] Os promotores de absorção incluem, mas sem limitação, os tensoativos, por exemplo, os sais biliares, os sais de ácidos graxos ou os fosfolipídeos; os agentes nicotínicos, como nicotinamidas, os ácidos nicotínicos, a niacina, a niacinamida, vitamina B3 e seus sais; os inibidores de tripsina pancreática; os sais de magnésio; os ácidos graxos poliinsaturados; a fosfatidilcolina didecanoíla; os aminopolicarboxilatos; a tolmetina; o caprato de sódio; o ácido salicílico; o ácido oleico; o ácido linoleico; o ácido eicosapentaenóico (EPA); o ácido docosahexaenóico (DHA); o ácido benzílico; os doadores de monóxido de nitrogênio, por exemplo, a 3-(2-hidroxi-1-(1-metiletil)-2-nitroso-hidrazino)-1- propanamina, a N-etil-2-(1-etil-hidroxi-2-1-nitroso-hidrazino)-etanamina, ou S-nitroso- N-acetilpenicilamina; os ácidos biliares, a glicina na sua forma conjugada a um ácido biliar; o ascorbato de sódio, o ascorbato de potássio; o salicilato de sódio, o salicilato de potássio, o ácido acetilsalicílico, o ácido salicilossalicílico, o acetilsalicilato de alumínio, o salicilato de colina, a salicilamida, o acetilsalicilato de lisina; a exalamida; o diflunisal; a etenzamida; EDTA; sozinhos ou em uma mistura.
[00136] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende, ainda, pelo menos um promotor de difusão. Exemplos de promotor de difusão incluem, mas sem limitação, as glicosaminoglicanases, por exemplo, a hialuronidase.
[00137] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende, ainda, pelo menos um agente vasodilatador.
[00138] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende, ainda, pelo menos um agente vasodilatador provocando uma hiperpolarização ao bloquear os canais iônicos de cálcio.
[00139] Em uma modalidade, o agente vasodilatador provocando uma hiperpolarização ao bloquear os canais iônicos de cálcio é a adenosina, um agente hiperpolarizante derivado do endotélio, um inibidor da fosfodiesterase de tipo 5 (PDE5), um agente de abertura dos canais potássicos ou qualquer combinação destes agentes.
[00140] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende, ainda, pelo menos um agente vasodilatador com mediação por AMPc.
[00141] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende, ainda, pelo menos um agente vasodilatador com mediação por GMPc.
[00142] Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende, ainda, pelo menos um agente vasodilatador escolhido no grupo compreendendo os agentes vasodilatadores que atuam provocando uma hiperpolarização ao bloquear os canais iônicos de cálcio, os agentes vasodilatadores com mediação por AMPc, e os agentes vasodilatadores com mediação por GMPc.
[00143] O pelo menos um agente vasodilatador é escolhido no grupo compreendendo os doadores de monóxido de nitrogênio, por exemplo, nitroglicerina, o dinitrato de isossorbida, o mononitrato de isossorbida, o nitrato de amila, a eritritila, o tetranitrato e o nitroprussiato; a prostaciclina e seus análogos, por exemplo, o epoprostenol de sódio, o iloprost, o epoprostenol, o treprostinil ou o selexipag; a histamina, a 2-metil-histamina, a 4-metil-histamina; a 2- (2-piridil) etilamina, a 2-(2- tiazolil) etilamina; a papaverina, o cloridrato de papaverina; o minoxidil; a dipiridamol; a hidralazina; a adenosina, o trifosfato de adenosina; o trifosfato de uridina; o GPLC; a L-carnitina; a arginina; a prostaglandina D2; os sais de potássio; e em alguns casos, os antagonistas dos receptores α1 e α2, por exemplo, a prazosina, a fenoxibenzamina, a fentolamina, a dibenamina, o cloridrato de moxissilito e a tolazolina), o betazol, o dimaprit; os agonistas dos receptores β2, por exemplo, o isoproterenol, o dobutamina, o albuterol, a terbutalina, a aminofilina, a teofilina, a cafeína; o alprostadil, o ambrisentano; a cabergolina; o diazóxido; o mesilato de di- hidralazina; o cloridrato de diltiazem; a enoximona; o cloridrato de flunarizina; o extrato de ginkgo biloba; o levosimendan; a molsidomina; o oxalato de ácido de naftidrofuril; o nicorandil; a pentoxifilina; o cloreto de fenoxibenzamina; a base de piribedil; o mesilato de piribedil; a regadenosona monoidratada; o riociguat; o citrato de sildenafil, a tadalafil, o cloridrato de vardenafil triidratado; o cloridrato de trimetazidina; a trinitrina; o cloridrato de verapamil; os antagonistas do receptor de endotelina, o a por exemplo, a avanafil e bosentran monoidratado; e os inibidores dos canais cálcicos, por exemplo, a amlodipina, a aranidipina, a azelnidipina, a barnidipina, a benidipina, a cilnidipina, a clevidipina, a isradipina, a efonidipina, o a felodipina, a lacidipina, a lercanidipina, a manidipina, a nicardipina, a nifedipina, a nilvadipina, a nimodipina, a nisoldipina, a nitrendipina, a prandipina, sozinhas ou em mistura.
[00144] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém de 3,5 mg/mL a 10,5 mg/mL de insulina humana A21G, 0,6 mg/mL a 3 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda de 300 a 900 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular de 8 a 10 μΜ, e o mais particularmente de 8 μΜ.
[00145] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 3,5 mg/mL de insulina humana A21G, 0,6 a 1 mg/mL de pramlintide, 25 a 30 mM de m-cresol, 150 a 200 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 300 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular de 8 a 10 μΜ, e o mais particularmente de 8 μΜ.
[00146] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 3,5 mg/mL de insulina humana A21G, 0,6 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 300 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 10 μΜ.
[00147] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 3,5 mg/mL de insulina humana A21G, 0,6 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 300 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 8 μΜ.
[00148] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 3,5 mg/mL de insulina humana A21G, 1,0 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 300 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 8 μΜ.
[00149] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 7,0 mg/mL de insulina humana A21G, de 1,2 a 2,0 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 150 a 200 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 600 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular de 8 a 10 μΜ, e o mais particularmente de 8 μΜ.
[00150] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 7,0 mg/mL de insulina humana A21G, 1,2 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 600 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 10 μΜ.
[00151] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 7,0 mg/mL de insulina humana A21G, 1,2 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m -cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 600 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 8 μΜ.
[00152] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 7,0 mg/mL de insulina humana A21G, 2,0 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 600 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 8 μΜ.
[00153] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 10,5 mg/mL de insulina humana A21G, 1,8 a 3 mg/m L de pramlintide, 25 mM de m -cresol, 150 a 200 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 900 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular de 8 a 10 μΜ, e o mais particularmente de 8 μΜ.
[00154] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 10,5 mg/mL de insulina humana A21G, 1,8 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 900 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 10 μΜ.
[00155] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 10,5 mg/mL de insulina humana A21G, 1,8 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 900 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 8 μΜ.
[00156] Em uma modalidade, a composição de acordo com a invenção contém 10,5 mg/mL de insulina humana A21G, 3 mg/m L de pramlintide, 25 mM de m-cresol, 184 mM de glicerina, a um pH de 4,0. Esta composição pode conter ainda 900 μΜ de zinco. Esta composição pode compreender ainda polissorbato 20, em particular 8 μΜ.
[00157] As composições de acordo com a invenção podem compreender ainda todos os excipientes em conformidade com as Farmacopeias, notadamente EP e/ou US, e compatíveis com as insulinas usadas nas concentrações de uso.
[00158] De acordo com uma modalidade, a composição pode estar sob forma sólida ou liofilizada. Esta composição pode então servir para reconstituir uma solução ou uma formulação.
[00159] Os modos de administração visados são por via intravenosa, subcutânea, intradérmica ou intramuscular.
[00160] De acordo com uma modalidade particular, o modo de administração é a via subcutânea.
[00161] As vias de administração transdérmica, oral, nasal, vaginal, ocular, bucal, pulmonar são igualmente visadas.
[00162] A invenção refere-se igualmente a uma bomba, implantável ou transportável, compreendendo uma composição de acordo com a invenção.
[00163] A invenção refere-se ainda à utilização de uma composição de acordo com a invenção destinada a ser colocada na bomba, implantável ou transportável.
[00164] A invenção refere-se igualmente às formulações unidoses.
[00165] Em uma modalidade, as formulações estão sob a forma de uma solução injetável.
[00166] A preparação de uma composição de acordo com a invenção apresenta a vantagem de poder ser realizada por simples mistura de uma solução aquosa, de um análogo de amilina ou de um agonista do receptor de amilina, e de insulina humana A21G, em solução aquosa ou sob forma liofilizada.
[00167] Se necessário, a composição da mistura é ajustada em excipientes tais como glicerina, m-cresol, cloreto de zinco, e polissorbato 20 (Tween® 20). Esta adição pode ser efetuada por adição de soluções concentradas dos ditos excipientes.
[00168] Em uma modalidade, as composições são caracterizadas em que as ditas composições apresentam uma solubilidade a um pH de 4,0 e uma estabilidade física medida por ThT superior à de uma composição de referência compreendendo um análogo de amilina ou um agonista do receptor de amilina e uma insulina prandial comercial.
[00169] A ThT é medida segundo o protocolo descrito nos exemplos.
[00170] Em uma modalidade, as composições são caracterizadas em que as ditas composições apresentam uma solubilidade a um pH de 4,0 e uma estabilidade física medida por ThT superior à de uma composição de referência compreendendo um GLP-1, um análogo de GLP-1 ou um agonista do receptor de GLP-1 e uma insulina prandial comercial.
[00171] A insulina e as insulinas análogas podem ser obtidas pelos métodos de tecnologias de DNA recombinantes em bactérias, como a Escherichia coli ou em leveduras tal como a Saccharomyces Cerevisiae (ver por exemplo G. Walsh Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005, 67, 151 -159). Geralmente, uma proinsulina é produzida que é, então, digerida pelas enzimas como a tripsina e a carboxipeptidase B para obter a sequência análoga desejada.
[00172] Para a fabricação de insulina humana A21G, a proinsulina é codificada de modo que a glicina está em A21 e, após digestão pela tripsina e carboxipetidase B, a insulina desejada é obtida. Um modo operatório é descrito por Kohn e al., em Peptides 2007, 28, 935-948.
[00173] A invenção refere-se igualmente ao processo de obtenção da insulina humana A21G compreendendo, pelo menos, uma etapa consistindo em fazer reagir a insulina humana A21G, B31 R, B32R (insulina glargine) com a carboxipeptidase B de rato a um razão insulina/carboxipeptidase compreendida entre 500 e 2000, a um pH compreendido de 7,5 a 8,5 e a uma temperatura compreendida de 20 a 30°C durante 10 a 20 horas. O produto pode ser, em seguida, purificado. Esta purificação pode ser efetuada por cromatografia líquida.
[00174] A insulina humana A21G pode ser, então, obtida removendo as duas argininas da insulina glargine por digestão com uma carboxipeptidase B. Após a digestão enzimática, a insulina humana A21G é purificada por cromatografia depois isolada por liofilização ou por cristalização pelos métodos clássicos. Descrição das figuras: Figura 1: Determinação gráfica do tempo de latência de fibrilação.
[00175] Na figura 1 é representada a determinação gráfica do tempo de latência de fibrilação em um exemplo virtual. Em abscissa, aparece o tempo em minutos, em ordenada aparece a fluorescência ThT em unidade arbitrária (u.a.) e LT indica o tempo de latência, ou “lag time”. Figura 2: Concentrações de pramlintide e insulina plasmática após administração da formulação A21-8 (média ± erro padrão)
[00176] Os quadrados representam a concentração de insulina e os triângulos a concentração de pramlintide.
[00177] Em abscissa, aparece o tempo em minutos após a injeção, em ordenada à esquerda a concentração de insulina em pmol/l e em ordenada a concentração de pramlintide em pmol/l corrigidos da linha de base, ou “baseline”. Figura 3: Glicemia após administração da formulação A21-8 (média ± erro padrão).
[00178] Em abscissa, o tempo em minutos após a injeção, e em ordenada a glicemia em % do nível basal. Figura 4: Concentrações de pramlintide após administração de formulação A21-9 (curva traçada com os quadrados) e PRA (curva traçada com os triângulos) (média ± erro padrão).
[00179] Em abscissa, o tempo em minutos após a injeção, e em ordenada as concentrações de pramlintide corrigidas da linha de base, ou “baseline” (concentrações pré-doses subtraídas individualmente), em pmol/L. Exemplos Exemplo 1. Preparação da insulina humana A21G
[00180] 5 g de insulina glargine (Gan & Lee Pharmaceuticals) são misturados com a enzima carboxipeptidase B (Referência 08039852001; Sigma- AIdrich) a pH 8,0 (pH ajustado por adição de tampão Tris) e deixados a 25°C durante 17 horas, a concentração de insulina glargine sendo de cerca de 4 mg/mL. A razão enzima /glargine é de 1/500. A mistura é em seguida purificada por cromatografia líquida, dialisada contra o ácido clorídrico 0,01N depois liofilizada. Obtém-se a insulina humana A21G com uma pureza de 98% e um rendimento de cerca de 90%. A massa molar da insulina medida por espectrometria de massa (Maldi-Tof) é de 5752 Da. A insulina humana A21G também pode ser obtida a partir da tecnologia recombinante como descrito por Kohn e al. (Peptides 2007, 28, 935- 948). Exemplo 2. Composições de insulinas prandiais e de pramlintide, de exenatide ou de lixisenatide a pH ácido. Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/mL (3,5 mg/ml) e de pramlintide 1 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e cloreto de zinco (300 μΜ) a pH ácido de 3,5 ou 4,0.
[00181] Uma solução concentrada de excipientes (m -cresol, glicerina) é adicionada a uma solução de insulina humana A21G concentrada (300 U/mL a pH 3,5). Uma solução de pramlintide (Ambiopharm) concentrada (10 mg/mL a pH 4) e uma solução de concentrada de cloreto de zinco são adicionadas a esta solução concentrada de insulina humana A21G e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final, seja 3,5 ou 4,0, é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 μm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/mL e de pramlintide 0,6 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e cloreto de zinco (300 μΜ) a pH ácido de 4,0.
[00182] Esta solução é preparada do mesmo modo que a solução apresentada acima. Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/mL e de pramlintide 1 mg/mL contendo m-cresol (25 mM) e de glicerina (184 mM) a pH ácido de 4,0.
[00183] Uma solução concentrada de excipientes (m -cresol, glicerina) é adicionada a uma solução de insulina humana A21G concentrada (800 U/mL a pH 3,5). Uma solução de pramlintide concentrada (10 mg/mL a pH 4) é adicionada a esta solução concentrada de insulina humana e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final, seja 4,0, é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 μm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/mL e de pramlintide 1 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e Tween 20 (10 µg/ml) a pH 4.
[00184] Uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, glicerina) é adicionada a uma solução de insulina humana A21G concentrada (300 U/mL a pH 3,5). Uma solução de pramlintide concentrada (10 mg/mL a pH 4) e uma solução de Tween 20 concentrada são adicionadas a esta solução concentrada de insulina humana A21G e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 µm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/mL e de pramlintide 1 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM), cloreto de zinco (300 μΜ) e Tween 20 (10 µg/ml) a pH 4.
[00185] Uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, glicerina é adicionada a uma solução de insulina humana A21G concentrada (300 U/mL a pH 3,5). Uma solução de pramlintide concentrada (10 mg/mL a pH 4), uma solução de cloreto de zinco concentrada e uma solução de Tween 20 concentrada são adicionadas a esta solução concentrada de insulina humana A21G e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 µm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/ mL e de exenatide 50 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e cloreto de zinco (300 μΜ) a pH ácido.
[00186] Uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, glicerina)) é adicionada a uma solução de insulina humana A21G concentrada (300 U/mL a pH 3,5). Uma solução de exenatide (Bachem) concentrada (10,5 mg/mL a pH 4) e uma solução concentrada de cloreto de zinco são adicionadas a esta solução concentrada de insulina humana A21G e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final 4,0 é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 µm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/mL e de lixisenatide 100 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e cloreto de zinco (300 μΜ) a pH ácido.
[00187] Uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, glicerina) é adicionada a uma solução de insulina humana A21G concentrada (230 U/mL a pH
3,5). Uma solução de lixisenatide (Ambiopharm) concentrada (10,5 mg/mL a pH 4) e uma solução concentrada de cloreto de zinco são adicionadas a esta solução concentrada de insulina humana A21G e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final 4,0 é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 μm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/mL, de exenatide 50 mg/mL e de pramlintide 0,6 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e Tween 20 (10 µg/ml) a pH ácido de 4,0.
[00188] Uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, glicerina) é adicionada a uma solução de insulina humana A21G concentrada (300 U/mL a pH 3,5). Uma solução de pramlintide (Ambiopharm) concentrada (10 mg/mL a pH 4). Uma solução de exenatide (Bachem) concentrada (10,5 mg/mL a pH 4) e uma solução de Tween 20 concentrada são adicionadas a esta solução concentrada de insulina humana A21G e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final 4,0, é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 μm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina humana 100 U/mL e de pramlintide 1 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e cloreto de zinco (300 μΜ) a pH ácido de 3,5 ou 4,0.
[00189] Uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, glicerina) é adicionada a uma solução de insulina humana (Amphastar Pharmaceuticals) concentrada (800 U/mL a pH 3,5). Uma solução de pramlintide concentrada (10 mg/mL a pH 4) e uma solução concentrada de cloreto de zinco são adicionadas a esta solução concentrada de insulina humana e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final, seja 3,5 ou 4,0, é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 µm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina aspart 100 U/mL e de pramlintide 1 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e cloreto de zinco (300 μΜ) a pH ácido de 3,5 ou 4,0.
[00190] Uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, glicerina) é adicionada a uma solução de insulina aspart (HEC Pharmaceuticals) concentrada (500 U/mL a pH 3). Uma solução de pramlintide concentrada (10 mg/mL a pH 4) e uma solução concentrada de cloreto de zinco são adicionadas a esta solução concentrada de insulina aspart e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final, seja 3,5 ou 4,0, é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI.
[00191] A solução ajustada a pH 4,0 é turva desde o ajuste de pH. A solução ajustada a pH 3,5 é límpida. Esta é filtrada sobre 0,22 µm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina Eispro 100 U/mL e de pramlintide 1 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM) e cloreto de zinco (300 μΜ) a pH ácido de 3,5 ou 4,0.
[00192] Uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, glicerina) é adicionada a uma solução de insulina lispro (Gan and Lee Pharmaceuticals) concentrada (650 U/mL a pH 3). Uma solução de pramlintide concentrada (10 mg/mL a pH 4) e uma solução concentrada de cloreto de zinco são adicionadas a esta solução concentrada de insulina lispro e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final, seja 3,5 ou 4,0, é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, esta é filtrada sobre 0,22 µm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Preparação de uma solução de insulina glulisine 100 U/mL e de pramlintide 1 mg/mL contendo os excipientes do produto comercial Apidra® (29 mM m-cresol, 50 mM de Tris, 86 mM de cloreto de zinco e 8,15 μΜ de Tween 20 a pH ácido de 3,0, 3,5 ou 4,0.
[00193] O pH da solução comercial de insulina glulisine, Apidra®, é ajustado a pH 2,5 por adição de uma solução aquosa de HCI. Esta solução é adicionada a pramlintide sob a forma de pó de modo a obter uma solução contendo 100 U/mL de insulina e 1 mg/mL de pramlintide. O pH final é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. As soluções ajustadas a pH 3,5 e 4,0 são turvas desde o ajuste de pH. A solução ajustada a pH 3,0 é límpida. Esta é filtrada sobre 0,22 µm e armazenada nos cartuchos de vidro (1 mL de solução por cartucho). Após algumas horas de armazenamento, a solução é turva e heterogênea. Preparação de uma solução de pramlintide 1 mg/mL contendo m-cresol (20 mM), mannitol (236 mM) e tampão ácido acético/acetato de sódio (30 mM) a pH 4,0.
[00194] Uma solução de pramlintide concentrada a 10 mg/mL é preparada por dissolução de pramlintide sob forma de pó adquirido junto a Ambiopharm. Esta solução é adicionada a uma solução concentrada de excipientes (m-cresol, mannitol, tampão ácido acético/acetato de sódio) de modo a obter a composição final visada. O pH final é ajustado a 4,0 ± 0,2 por adição de NaOH/HCI. Preparação de uma solução de insulina humana A21G 100 U/mL e de pramlintide 0,6 mg/mL contendo m-cresol (25 mM), glicerina (184 mM), tampão ácido acético/acetato de sódio (18 mM) e Tween 20 (8 μΜ) a pH 4.
[00195] Soluções concentradas de glicerina e m-cresol são adicionadas a uma solução de insulina humana A21G concentrada em um tampão ácido acético/acetato de sódio a pH 4 (300 U/mL a pH 4). Uma solução de pramlintide (Ambiopharm) concentrada (10 mg/mL a pH 4) e uma solução concentrada de Tween 20 são por fim adicionadas a esta solução concentrada de insulina humana A21G e de excipientes de modo a obter a composição final visada. O pH final é ajustado ao valor desejado por adição de uma solução aquosa de NaOH ou de HCI. A solução obtida é límpida e homogênea, ela é filtrada sobre 0,22 µm.
[00196] As composições preparadas acima são apresentadas na tabela 1 abaixo.
Composições Tipo insulina Pram pH Zinco Tween GLP-1 Outros exci 20 (U/ml) lintide (µM) (µg/ RA pientes (mg/ml) ml) A21-1 Insulina 1,0 4,0 300 0 0 m-cresol (25 mM) humana A21G glicerol (184 mM) (100) A21-2 Insulina 1,0 4,0 0 0 0 m-cresol (25 mM) humana A21G glicerol (184 mM) (100) A21-3 Insulina 1,0 3,5 300 0 0 m-cresol (25 mM) humana A21G glicerol (184 mM) (100) A21-4 Insulina 1,0 4,0 0 10 0 m-cresol (25 mM) humana A21G glicerol (184 mM) (100) A21-5 Insulina 1,0 4,0 300 10 0 m-cresol (25 mM) humana A21G glicerol (184 mM) (100) A21-6 Insulina 0 4,0 300 0 exenatid m-cresol (25 mM) e humana A21G glicerol (184 mM) 50 (100) µg/mL A21-7 Insulina 0 4,0 300 0 lixisenati m-cresol (25 mM) de humana A21G 100 glicerol (184 mM) (100) µg/mL A21-8 Insulina 0,6 4,0 300 0 0 m-cresol (25 mM) humana A21G glicerol (184 mM) (100) RHI-1 Insulina 1,0 4,0 300 0 0 m-cresol (25 mM) humana glicerol (184 mM) (100) RHI-2 Insulina 1,0 3,5 300 0 0 m-cresol (25 mM) humana glicerol (184 mM) (100) ASP-1 Insulina aspart 1,0 4,0 300 0 0 m-cresol (25 mM) (100) glicerol (184 mM) ASP-2 Insulina aspart 1,0 3,5 300 0 0 m-cresol (25 mM) (100) glicerol (184 mM) GLU-1 Insulina 1,0 4,0 300 10 0 m-cresol (29 mM) glulisine Tris (50 mM) (100) NaCl (86 mM) GLU-2 Insulina 1,0 3,5 10 0 m-cresol (29 mM glulisine Tris (50 mM) (100) NaCl (86 mM) GLU-3 Insulina 1,0 3,0 10 0 m-cresol (29 mM) glulisine Tris (50 mM) (100) NaCl (86 mM) LIS-1 Insulina lispro 1,0 4,0 300 0 0 m-cresol (25 mM) (100) glicerol (184 mM) LIS-2 Insulina lispro 1,0 3,5 300 0 0 m-cresol (25 mM) (100) glicerol (184 mM) PRAM - 1,0 4,0 - - 0 m-cresol (20 mM) mannitol (236 mM)
Composições Tipo insulina Pram pH Zinco Tween GLP-1 Outros exci 20 (U/ml) lintide (µM) (µg/ RA pientes (mg/ml) ml) acetato (30 mM) A21-9 Insulina 0,6 4,0 - 10 0 m-cresol (25 mM) humana A21G glicerol (184 mM) (100) acetato (18 mM) A21-10 Insulina 0,6 4,0 - 10 exenati m-cresol (25 mM) humana A21G de glicerol (184 mM) (100) 50 µg/mL Tabela 1: Composições de insulina e/ou de supressores de glucagon Exemplo 3. Estudo de compatibilidade das insulinas prandiais com o pramlintide em pH ácido. Aspecto visual das soluções de insulina e de pramlintide a pH ácido.
[00197] A observação é realizada em temperatura ambiente após 2 a 3 horas de estabilização da solução armazenada em cartuchos. A Tabela 2 apresenta o aspecto visual de soluções de insulina e de pramlintide descritas previamente. Composição Aspecto visual A21-1 Límpida A21-2 Límpida A21-3 Límpida RHI-1 Límpida RHI-2 Límpida ASP-1 Turva ASP-2 Límpida GLU-1 Turva GLU-2 Turva GLU-3 Turva LIS-1 Límpida LIS-2 Límpida Tabela 2: Aspecto visual das soluções de insulina e de pramlintide
[00198] Entre as insulinas avaliadas, somente a insulina humana, a insulina lispro e a insulina humana A21G permitem obter uma formulação homogênea e límpida com o pramlintide a pH 4, confirmando da solubilidade das espécies. As insulinas aspart e glulisine não são convenientes para obter uma formulação límpida com o pramlintide a pH 4,0.
Exemplo 4. Estudo do tempo de latência de fibrilação. Princípio
[00199] A estabilidade pobre de um peptídeo pode conduzir à formação de fibrilas amilóides definidas como estruturas macromoleculares ordenadas. Estas podem eventualmente conduzir à formação de um gel dentro da amostra.
[00200] O teste de monitoramento da fluorescência da tioflavina T (ThT) é utilizado para analisar a estabilidade física das formulações. A tioflavina T é uma pequena molécula sonda que tem uma assinatura de fluorescência característica quando se liga a fibrilas de tipos amilóides (Naiki e al. (1989) Anal. BioChem. 177, 244-249; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274-284).
[00201] Esse método permite monitorar a formação de fibrilas em baixas concentrações de ThT em formulações não diluídas. Esse monitoramento é realizado em condições de estabilidade aceleradas: sob agitação e a 37°C. Condições experimentais
[00202] As amostras foram preparadas imediatamente antes do início da medição. A preparação de cada composição é descrita no exemplo associado. A tioflavina T foi adicionada à composição a partir de uma solução-mãe concentrada, de modo a induzir uma diluição negligenciável da composição. A concentração de tioflavina T na composição é 40 µM. Um volume de 150 µL da composição foi introduzido em uma cavidade de uma placa de 96 cavidades. Cada composição foi analisada em triplicata dentro da mesma placa. A placa foi selada com filme transparente para evitar a evaporação da composição.
[00203] Esta placa foi, então, colocada no recinto de um leitor de placas (EnVision 2104 Multilabel, Perkin Elmer). A temperatura é regulada em 37°C, sendo imposta uma agitação lateral de 960 rpm com uma amplitude de 1 mm.
[00204] Uma leitura da intensidade de fluorescência em cada cavidade é realizada com um comprimento de onda de excitação de 442 nm e um comprimento de onda de emissão de 482 nm ao longo do tempo.
[00205] O processo de fibrilação se manifesta por um forte aumento da fluorescência após um atraso chamado tempo de atraso.
[00206] Para cada cavidade, este atraso foi determinado graficamente como a interseção entre a linha de base do sinal de fluorescência e a inclinação da curva de fluorescência em função do tempo, que é determinada durante o forte aumento inicial da fluorescência, como mostrado na Figura 1. O valor do tempo de latência traçado corresponde à média dos tempos de latência de 3 cavidades.
[00207] As soluções de pramlintide e de insulina límpidas a pH 3,5 e 4,0 de exemplo precedente são em seguida submetidas ao teste de fibrilação em presença de ThT.
[00208] O tempo de latência mostrado na Tabela 3 corresponde à média de 3 medições, o intervalo de incerteza corresponde ao desvio médio entre estes 3 resultados.
Composição Tempo de latência (h) A21-1 13,7 +/- 0,8 A21-2 10,4 +/- 1,8 A21-3 15,6 +/- 5,3 RHI-1 5,0 +/- 0,7 RHI-2 1,7 +/- 0 ASP-2 2,0 +/- 0 LIS-1 1,8 +/- 0,1 LIS-2 4,3 +/-0,4 Tabela 3: Tempos de latência das soluções de insulina e de pramlintide.
[00209] De modo inesperado, as formulações contendo a insulina humana A21G apresentam tempos de latência de fibrilação bem superiores aos das insulinas comerciais testadas a pH 3,5 ou a pH 4,0, em particular às insulinas análogas rápidas, lispro e aspart. Exemplo 5. Estudo do tempo de latência de fibrilação em presença de Tween 20
[00210] Na Tabela 4 são apresentados os tempos de latência de soluções de insulina humana A21G e de pramlintide a pH 4 em presença de Tween 20.
Composição Tempo de latência (h) A21-4 38,1 +/-8,8 A21-5 48,3 +/-9,2 Tabela 4: Tempo de latência das soluções de insulina humana A21G e de pramlintide em presença de Tween 20.
[00211] A estabilidade física é, portanto, melhorada em presença de Tween 20 a 10 Mg/mL Exemplo 6. Estabilidade física das formulações a 30°C em condição estática
[00212] Cartuchos de vidro cheios com 1 mL de composição são colocados em uma estufa mantida 30°C. Estes cartuchos são inspecionados visualmente a fim de detectar o aparecimento de partículas visíveis ou de turvação.
[00213] Esta inspeção é realizada de acordo com as recomendações da Farmacopeia Europeia (EP 2.9.20): os cartuchos são submetidos a uma iluminação de, pelo menos, 2000 lux e são observados face a um fundo branco e um fundo preto. Esses resultados estão de acordo com a farmacopeia US (USP <790>). Composição Aparência visual após 4 semanas A21-4 Límpida A21-5 Límpida A21-2 Límpida A21-1 Límpida A21-3 Límpida ASP-2 Turva Tabela 5: Estabilidade física das soluções de insulina e de Pramlintide a 30°C em condições estáticas
[00214] A insulina aspart formulada com o pramlintide a pH 3,5 é menos estável que a insulina humana A21G formulada com pramlintide a pH 3,5 ou 4,0. Exemplo 7. Estudo de estabilidade física da insulina humana A21G com o exenatide e o lixisenatide.
[00215] As formulações A21-6 e A21-7 são colocadas em cartuchos depois colocadas a 30°C durante 4 semanas. Os tempo de latência de fibrilação são medidos para as formulações extemporaneamente preparadas e apresentados na Tabela 6.
Composição Tempo de latência (h) Aparência visual após 4 semanas a 30 °C A21-6 18, 1 +/- 5, 6 Límpida A21-7 33, 0 +/- 9, 7 Límpida Tabela 6: Tempo de latência e estabilidade física a 30°C em condição estática das soluções de insulina humana A21G e de exenatide ou de lixisenatide. Exemplo 8. Estabilidade química de uma formulação de insulina humana A21G e de pramlintide
[00216] Todas as formulações estão a pH 4,0 ou a pH 3,5 e contém 100 U/mL de insulina humana A21G, 1 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m -cresol e 184 mM de glicerina. As formulações são armazenadas nos cartuchos de vidro e colocadas a 30°C em condição estática. A insulina humana A21G e o pramlintide são dosados por cromatografia líquida (HPLC) em fase inversa. As medições são apresentadas na Tabela 7. Composição Concentração Concentração no tempo inicial após 4 semanas (a) (b) (a) (b) A21-1 105 1,05 103 1,02 A21-2 105 1,02 106 1,03 A21-3 101 1,12 105 1,03 RHI-1 101 1,6 76 1,03 RHI-2 99 1,02 62 1,03 LIS-1 105 1,07 89 1,03 LIS-2 106 1,05 82 1,04 ASP-2 104 1,05 55 1,02 Tabela 7: Evolução das concentrações de insulina (a) em U/mL e de pramlintide (b) em mg/mL
[00217] As formulações contendo a insulina humana A21G e o pramlintide apresentam uma boa estabilidade química após 4 semanas a 30°C. As formulações de pramlintide com as insulinas comerciais degradam rapidamente a pH 4,0, e ainda mais rápido a pH 3,5. Exemplo 9. Estudos de farmacocinética e farmacodinâmica em cachorros
[00218] Estudo de farmacocinética e farmacodinâmica em cachorros da composição insulina humana A21G (100 U/mL, isto é, 3,5 mg/ml) e pramlintide (0,6 mg/ml). A formulação testada está a pH 4,0 e contém 25 mM de m-cresol e 184 mM de glicerina (Formulação A21 -8).
[00219] Quatro animais que jejuaram por aproximadamente 18 horas receberam injeções por via subcutânea no pescoço na dose de 0,2 U/kg de insulina e 0,12 µg/kg de pramlintide. Na hora anterior à injeção, são coletadas uma ou mais amostras de sangue para determinar o nível basal de glicose, insulina e pramlintide. As amostras de sangue são, então, realizadas durante as 5 horas após a administração da formulação. A glicemia é determinada por meio de um glicosímetro. Os níveis plasmáticos de insulina e de pramlintide são determinados por um teste ELISA.
[00220] Os parâmetros farmacocinéticos da formulação A21-8 são estimados a partir das concentrações plasmáticas de insulina e pramlintide corrigidas pelos valores basais. Uma análise não compartimental padrão é realizada com a ajuda do software Phoenix WinNonlin (versão 7, Certara). Os valores dos parâmetros (média ± desvio padrão) são apresentados nas tabelas 8 e 9 abaixo: Formulação Tmax insulina Cmax insulina AUC0-insulina último (min) (pmol/L) (min*pmol/L) A21-8 38 ± 26 218 ± 141 16165 ± 4160 Tabela 8: Parâmetros de PK do análogo da insulina total Formulação Tmax Cmax AUC0-último pramlintide pramlintide pramlintide (min) (pmol/L) (min*pmol/L) A21-8 20 ± 8 104 ± 39 5121 ± 2961 Tabela 9: Parâmetros de PK de pramlintide
[00221] Os perfis farmacocinéticos (PK) médios da insulina total (quadrados) e de pramlintide (triângulos ) no plasma são apresentados na Figura 2.
[00222] Os perfis de glicemias médias expressos em porcentagens do nível basal são representados na Figura 3.
[00223] Foi constatado que o pramlintide e a insulina humana A21G possuem, ambos, cinéticas de absorção prandial, dando origem a uma atividade hipoglicêmica precoce seguida de um retorno a um nível próximo da glicemia basal após 5 horas após administração. Estes resultados farmacocinéticos e farmacodinâmicos indicam claramente que a Formulação A21-8 é compatível com a utilização na hora das refeições. Exemplo 10: Estudos de farmacocinética de pramlintide em suínos
[00224] Estudo de farmacocinética em suínos da composição de insulina humana A21G (3,5 mg/mL equivalente a 100 U/mL de insulina) e pramlintide (0,6 mg/ml).
[00225] Porcos domésticos pesando com cerca de 50 kg, previamente cateterizados a nível da jugular, foram mantidos em jejum por 2,5 horas antes do início do experimento. Durante a hora anterior à injeção de insulina, foram realizadas 3 amostras de sangue para determinar o nível basal de glicose e de insulina.
[00226] A injeção das formulações de insulina humana A21G combinada com pramlintide (A21-9) ou pramlintide (PRAM) na dose de 0,2 U de insulina/kg e 1,2 µg de pramlintide/kg é realizada por via subcutânea a nível do flanco do animal com a ajuda de uma caneta de insulina (Novo, Sanofi ou Eli Lilly) equipada com uma agulha 31 G.
[00227] A fim de determinar as concentrações plasmáticas de pramlintide, as amostras de sangue são coletadas nos seguintes tempos: 4, 8, 12, 16, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 100, 120, 150 e 180 minutos. Após cada retirada, o cateter é lavado com uma solução diluída de heparina.
[00228] Resultados de farmacocinética da solução de insulina humana A21G e de pramlintide A21-9 e da solução de pramlintide PRAM em porcos
[00229] Os resultados de três estudos realizados na mesma coorte de porcos são reunidos para comparar as farmacocinéticas de pramlintide entre a formulação A21-9 e a formulação PRAM. Os parâmetros farmacocinéticos das formulações A21-9 e PRAM são estimados com base nas concentrações plasmáticas de pramlintide corrigidas dos valores basais. Uma análise não compartimental padrão é realizada com a ajuda do software Phoenix WinNonlin (versão 7, Certara). Os valores dos parâmetros (média ± desvio padrão) são traçados na tabela a seguir. Formulação Peptídeos N tmax AUC0-30min AUC0-t (mg/ml) pramlintide pramlintide pramlintide (min) (min*pmol/L) (min*pmol/L) A21-9 Insulina humana 34 42,1 ± 22,4 2461 ± 1467 13642 ± 5934 A21G (3,5) pramlintide (0,6) PRAM Pramlintide (0,6) 34 23,2 ± 15,0 4357 ± 3127 14806 ± 7872 Valor p Comparação 34 0,0004 0,0007 0,8018 (significante A21-9 versus se p < 0,05) PRAM Tabela 10: Parâmetros de PK de pramlintide de composições A21-9 e
PRAM
[00230] Com tmax = tempo necessário para observar a concentração plasmática máxima AUC0-30min = área sob a curva das concentrações plasmáticas em função do tempo entre 0 e 30 min após a injeção; AUC0-t = área sob a curva das concentrações plasmáticas versus o tempo entre 0 e a última concentração quantificável após a injeção
[00231] Os resultados farmacocinéticos de pramlintide obtidos com as formulações A21-9 e PRAM são apresentados na Figura 4. A análise desses perfis e dos parâmetros indica que a combinação da insulina humana A21G e da pramlintide (formulação A21-9, curva traçada com quadrados) conduz a uma desaceleração significativa da absorção de pramlintide em comparação com pramlintide sozinho (formulação PRAM, curva traçada com triângulos). A formulação A21-9 conduz a um pico plasmático (tmax) que é significativamente atrasado (cerca de 18 min, p <0,05) e a uma exposição plasmática precoce em pramlintide (AUC0-30min), que diminui significativamente (cerca de 43%, p <0,05) em relação com a formulação PRAM. Por outro lado, a exposição plasmática total a pramlintide (AUC0-t) parece ser similar entre as duas formulações, sugerindo biodisponibilidades comparáveis. Exemplo 11. Estudo do consumo de alimentos em ratos após injeção de composições de controle e de composições compreendendo insulina humana A21G e/ou pramlintide
[00232] Este estudo foi efetuado em uma população de 40 ratos machos Sprague Dawley com pelo menos 6 semanas de idade.
[00233] Os ratos tiveram livre acesso a comida e água, exceto por um período de jejum de 6 horas anterior à injeção subcutânea das composições descritas na tabela abaixo. ® Composição Controle Humulin PRAM A21-9 [Pramlintide] - - 1 0.6 (mg/ml) Dose de Pramlintide - - 60 60 (µg/kg) Tipo de insulina - 100 humana - A21G [Insulina] (U/mL) 100 humana Dose de insulina - 10 - 10 (U/kg) Número de ratos 10 10 10 10 Tabela 11: Composições injetadas em ratos e número de ratos tratados
[00234] A composição de controle é uma solução salina, isto é, uma solução aquosa compreendendo 150 mM de NaCl.
[00235] A composição Humulin® R é uma solução comercial de insulina humana comercializada por ELI LILLY. Este produto é uma insulina humana a 100 U/mL. Os excipientes de Humulin® R são glicerol, meta-cresol, hidróxido de sódio e ácido clorídrico para ajuste do pH (pH 7,0-7,8) e água.
[00236] Em t0, imediatamente após a injeção, o alimento é distribuído (cerca de 100 g por rato). O consumo de alimentos (média acumulada) é medido uma, duas e três horas após t0, ou t + 1 h, t + 2 h e t + 3 h.
[00237] Os resultados são apresentados na seguinte tabela: Composições Controle Humulin PRAM A21-9 Consumo de alimentos a t + 1 h (g) 3,8 4,7 1,5 3,2 Consumo de alimentos a t + 2 h (g) 4,4 5,3 3,3 4,4 Consumo de alimentos a t + 3 h (g) 5,9 6,9 4,2 5,3 Tabela 12: Consumo de alimentos 1, 2 e 3 horas após a injeção
[00238] Estes resultados mostram que a composição A21-9, combinando insulina A21G e pramlintide, permite não apenas diminuir o consumo de alimentos induzido pela injeção de insulina, mas ela também limitar o consumo de alimentos a um nível inferior ou igual ao nível do grupo controle tendo sofrido uma injeção da composição Controle (solução salina).

Claims (21)

REIVINDICAÇÕES
1. Composição sob forma de uma solução aquosa injetável, cujo pH está compreendido de 3,5 a 4,4, caracterizada pelo fato de que compreende, pelo menos, a insulina humana A21G dita regular e, pelo menos, um supressor de glucagon com ação prandial.
2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o supressor de glucagon com ação prandial é escolhido no grupo constituído de um análogo da amilina ou um agonista do receptor da amilina ou um análogo do GLP-1 ou um agonista do receptor GLP-1 (GLP-1 RA).
3. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que o supressor de glucagon com ação prandial é análogo da amilina ou um agonista do receptor da amilina.
4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que o peptídeo supressor de glucagon com ação prandial é o pramlintide.
5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que o peptídeo supressor de glucagon com ação prandial é o exenatide.
6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que o peptídeo supressor de glucagon com ação prandial é o lisixenatide.
7. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a concentração de insulina humana A21G está compreendida de 2 a 20 mg/mL.
8. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a concentração de insulina humana A21G é de 3,5 mg/mL.
9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a concentração de peptídeo supressor de glucagon com ação prandial está compreendida de 0,01 a 10 mg/mL.
10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que o pH da solução está compreendido de
3,8 a 4,2.
11. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que o pH da solução é de 4,0.
12. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que ela compreende, além disso, um sal de zinco.
13. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que ela compreende, além disso, o m- cresol.
14. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que ela compreende, ainda, um excipiente polissorbato (Tween® 20)
15. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que ela compreende, além disso, um excipiente Poloxamer 188.
16. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que ela compreende, além disso, a metionina.
17. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, destinada a ser utilizada em um método de tratamento do diabetes, caracterizada em que ela é administrada em bolus antes das refeições.
18. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, destinada a ser utilizada em um método de tratamento do diabetes, caracterizada em que ela é administrada para melhorar o controle da glicemia pós-prandial.
19. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, destinada a ser utilizada em um método de tratamento do diabetes, caracterizada em que ela é administrada para melhorar o controle da glicemia pós-prandial e para diminuir os efeitos indesejáveis de pramlintide.
20. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, destinada a ser utilizada em um método de tratamento do diabetes, caracterizada pelo fato de que ela permite diminuir o consumo de alimentos induzido pela insulina.
21. Processo de obtenção da insulina humana A21G, caracterizado pelo fato de que compreende, pelo menos, uma etapa consistindo em fazer reagir a insulina humana A21G, B31R, B32R (insulina glargine) com a carboxipeptidase B de rato a uma razão insulina/carboxipeptidase compreendida entre 500 e 2000, a um pH compreendido de 7,5 a 8,5 e a uma temperatura compreendida de 20 a 30°C durante 10 a 20 horas.
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