BR112019026270A2 - inibidores de mpo para uso em medicina - Google Patents

Abstract

A presente divulgação refere-se a usos terapêuticos de inibidores de MPO e métodos de tratamento envolvendo os mesmos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORES DE MPO PARA USO EM MEDICINA”.

[001] O presente pedido é direcionado a compostos para uso no tratamento da infertilidade masculina e métodos de tratamento da infertilidade masculina.

[002] A listagem ou discussão de um documento aparentemente anteriormente publicado no presente relatório descritivo não deve ser necessariamente considerada como um reconhecimento de que o documento é parte do estado da técnica ou é conhecimento geral comum.

[003] A infertilidade afeta aproximadamente 15% dos casais em idade reprodutiva que tentam conceber em todo o mundo; isso equivale aproximadamente a cerca de 48,5 milhões de casais. A infertilidade masculina é um fator contribuinte em 50% dos problemas de infertilidade e é relatada como sendo a única causa de infertilidade em cerca de 20 a 30% de todos os casos. Esses números poderiam ser uma sub- representação, pois a avaliação e o relato de infertilidade masculina provavelmente são sub-relatados em muitos países.

[004] A infertilidade masculina pode ser causada por várias afecções, algumas das quais podem ser facilmente identificadas e corrigidas, tais como obstrução ductal e hipogonadismo hipogonadotrófico. Outras afecções não são reversíveis, tais como atrofia testicular bilateral secundária a orquite viral. No caso de homens que não têm uma causa identificável, mas exibem um perfil anormal do sêmen na análise, como é o caso em muitos pacientes, a afecção é denominada infertilidade masculina idiopática. Foram definidos critérios padrão da OMS para amostras de sêmen que são rotineiramente aplicados durante a avaliação de homens submetidos a investigações de infertilidade (Tabela 1). A infertilidade por fator masculino é comumente definida como uma alteração na concentração e/ou motilidade e/ou morfologia espermáticas em pelo menos uma amostra de duas análises de espermatozoides, coletadas com 1 e 4 semanas de intervalo. Até 90% dos casos de infertilidade masculina são devidos a anormalidades na concentração, morfologia ou função dos espermatozoides sem causa identificável; isso às vezes é denominado oligoastenoteratozoospermia idiopática. Nesta coorte, acredita-se que o estresse oxidativo seja um fator significativo que contribui para o dano espermático. A Figura 1 apresenta esquematicamente o papel do estresse oxidativo na infertilidade masculina.

[005] O estresse oxidativo (EO) reflete um desequilíbrio entre a geração de espécies reativas de oxigênio (ERO) e antioxidantes endógenos e, quando um excesso de ERO está presente, podem ocorrer danos às células e tecidos. Dados epidemiológicos dos EUA sugerem que quantidade excessiva de ERO é uma das principais causas de infertilidade por fator masculino; 30 a 40% dos homens inférteis têm níveis elevados de ERO no plasma seminal. Os espermatazoides são particularmente vulneráveis ao EO, pois suas membranas celulares são ricas em ácidos graxos poli-insaturados (AGPIs), tornando-os suscetíveis à peroxidação lipídica. Isso leva a uma rápida perda de trifosfato de adenosina (ATP, do inglês "adenosine tri- phosphate") intracelular, causando dano axonemal, diminuição da viabilidade espermática e aumento dos defeitos morfológicos espermáticos da peça intermediária, todos os quais contribuem para uma redução da motilidade espermática. Além disso, os espermatozoides têm deficiências inerentes em relação à proteção enzimática antioxidante intracelular e, diferentemente da maioria dos tipos de células, os espermatozoides têm uma capacidade limitada para detecção e reparo de danos ao DNA.

Tabela 1. Critérios da OMS para análise do sêmen Análise de líquido seminal normal (Organização Mundial da Saúde, 2002) e Volume >2 ml e Concentração espermática > 20 milhões /ml e Motilidade espermática > 50% progressiva ou >25% rapidamente progressiva e Morfologia (critérios rígidos) > 15% formas normais e Glóbulos brancos do sangue <1 milhão /ml e Teste de reação de antiglobulina mista ou imunoesferas < 10% revestidos *Testes para a presença de anticorpos revestindo os espermatozoides

[006] As ERO são produzidas pelos próprios espermatozoides e por leucócitos polimorfonucleares (PMNs), tais como neutrófilos que se colocalizam com espermatozoides nos testículos e epidídimo durante a espermatogênese e são comumente encontrados no plasma seminal originário da glândula prostática e das vesículas seminais. Os PMNs podem produzir e liberar cerca de 1000 vezes mais ERO que os espermatozoides e, portanto, provavelmente são a principal fonte de EO na infertilidade masculina idiopática. Os espermatozoides coincubados com neutrófilos ativados mostram uma redução na motilidade relacionada à concentração com um número crescente de neutrófilos. Os neutrófilos representam cerca de 60% da população de PMNs encontrada no trato genital masculino e, quando ativados, geram superóxido e peróxido de hidrogênio como parte de sua explosão oxidativa. Além disso, os neutrófilos contêm grandes quantidades da enzima heme mieloperoxidase (MPO) que utiliza o peróxido de hidrogênio gerado, para produzir ácido hipocloroso e outros oxidantes altamente reativos. Esses oxidantes são prejudiciais às células humanas e, portanto, podem danificar os espermatozoides e alterar sua viabilidade e função. Níveis elevados de mieloperoxidase seminal foram associados a concentração espermática reduzida em homens jovens e saudáveis. Além disso, foi demonstrado que a mieloperoxidase desempenha um papel fundamental na formação da armadilha extracelular de neutrófilos (NET, do inglês "neutrophil extracellular trap") durante a NETose. Os espermatozoides humanos podem induzir a liberação de NETs por neutrófilos, que então ficam firmemente presos aos espermatozoides, imobilizando-os. O tratamento de neutrófilos com hidrazida do ácido 4-aminobenzoico, um inibidor de MPO usado como ferramenta pré-clínica, demonstrou reduzir significativamente a formação de NETs induzida por espermatozoides. Até onde sabemos, nenhum estudo do uso de um inibidor de MPO para o tratamento de homens inférteis foi realizado até o momento.

[007] O atual regime de tratamento para homens com infertilidade idiopática começa com conselhos sobre estilo de vida, como parar de fumar, abstinência de álcool, otimização de peso, minimizar a exposição dos testículos ao calor e toxinas ambientais. Está disponível uma seleção de suplementos orais a base de vitaminas e anti-oxidantes, vendidos sem receita. Vários ensaios clínicos foram realizados para avaliar a eficácia dessas terapias. No entanto, muitos deles eram pequenos, juntos exibem acentuada heterogeneidade metodológica e clínica e, em geral, apresentaram resultados mistos. Uma metanálise recente concluiu que o uso de antioxidantes orais em homens inférteis poderia melhorar a qualidade espermática e as taxas de gravidez. No entanto, são necessários ensaios robustos adequadamente desenvolvidos de antioxidantes individuais e combinações de antioxidantes para orientar a prática clínica. Se, apesar dessas medidas, OS casais ainda não conseguem conceber, são utilizadas técnicas de reprodução — assistida, como injeção intracitoplasmática de espermatozoide (IICE) ou fertilização in vitro. Essas técnicas são invasivas, caras e não estão disponíveis universalmente.

[008] Portanto, há uma clara necessidade de novas opções para o tratamento da infertilidade masculina e, em particular, da infertilidade idiopática masculina. Isso é particularmente evidente à luz da atual terapia "off label", para a qual a eficácia não foi estabelecida. É um objetivo da presente patente fornecer novas terapias para o tratamento da infertilidade masculina.

[009] Tendo em vista a alta prevalência de estresse oxidativo na infertilidade masculina idiopática, o papel da mieloperoxidase na geração de oxidantes potentes mediada por neutrófilos e os dados emergentes que mostram o papel da MPO na NETose induzida por espermatozoides, acreditamos que os inibidores de MPO podem ter utilidade como agentes terapêuticos para o tratamento ou profilaxia da infertilidade masculina e, em particular, para o tratamento da infertilidade idiopática masculina.

[0010] Por conseguinte, em um primeiro aspecto, a presente patente fornece um inibidor de mieloperoxidase (MPO) para uso no tratamento ou profilaxia da infertilidade masculina. O inibidor de MPO para uso pode ser utilizado para o tratamento da infertilidade idiopática masculina. O inibidor de MPO para uso pode ser usado profilaticamente em um sujeito identificado como sendo disposto à infertilidade idiopática masculina devido à identificação de níveis elevados de espécies reativas de oxigênio em uma amostra de seu líquido seminal e/ou disfunção espermática atribuível como secundária ao estresse oxidativo.

[0011] Em um segundo aspecto, a presente patente fornece um método de tratamento ou profilaxia da infertilidade em um paciente masculino com necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de MPO. O paciente masculino com necessidade será tipicamente um paciente com infertilidade idiopática masculina ou será um sujeito identificado como sendo disposto à infertilidade idiopática masculina.

[0012] Em um terceiro aspecto, a presente patente fornece um inibidor de mieloperoxidase, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, para uso na fabricação de um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infertilidade masculina.

[0013] Em um quarto aspecto, a presente patente fornece uma composição — farmacêutica — compreendendo um inibidor de mieloperoxidase ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, para uso no tratamento ou profilaxia da infertilidade masculina, em particular para uso na infertilidade idiopática masculina.

[0014] Em um quinto aspecto, é fornecido um kit compreendendo uma composição farmacêutica compreendendo um inibidor de mieloperoxidase ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, e instruções para uso da composição farmacêutica para o tratamento ou profilaxia da infertilidade idiopática masculina.

[0015] Em aspectos preferenciais descritos aqui e acima, o paciente masculino com necessidade é o paciente com infertilidade idiopática masculina ou, no caso de profilaxia, um paciente identificado como sendo disposto à infertilidade idiopática masculina.

[0016] Em aspectos preferenciais descritos aqui e acima, o paciente masculino é humano. A presente invenção também fornece o uso de um inibidor de mieloperoxidase para o tratamento da infertilidade masculina em mamíferos terrestres não humanos, por exemplo, em membros das famílias Canidae, Felidae, Bovidae, Equidae, Suidae, Camelini e Cervidae.

[0017] Em modalidades dos aspectos apresentados acima, os inibidores de mieloperoxidase para uso, para uso em métodos de tratamento, para uso na fabricação de um medicamento ou fornecidos em uma composição farmacêutica são aplicados para inibir a NETose induzida por espermatozoides. Em tais modalidades, o paciente pode ter sido rastreado para tratamento pela análise de uma amostra de seu esperma e observado como exibindo evidências de danos induzidos por estresse oxidativo em espermatozoides, por exemplo, uma baixa contagem/concentração espermática, motilidade espermática reduzida, evidência de fragmentação de DNA de espermatozoides, presença de leucocitospermia estéril no contexto de infertilidade masculina idiopática ou alto grau de NETose seminal.

[0018] Em modalidades dos aspectos apresentados acima, os inibidores de mieloperoxidase para uso, para uso em métodos de tratamento, para uso na fabricação de um medicamento ou fornecidos em uma composição farmacêutica são aplicados para inibir o estresse oxidativo através da inibição da produção de espécies reativas de oxigênio e/ou produtos posteriores mediados por espécies reativas de oxigênio. Assim, o inibidor de MPO para uso, ou para uso em um método de tratamento, pode ser usado para inibir a produção de ácidos hipo- halosos de espécies reativas de oxigênio, como o ácido hipocloroso, bem como outros produtos mediados por MPO, incluindo, mas não se limitando a, 3-clorotirosina e 3-nitrotirosina.

[0019] Adicional ou alternativamente, o paciente com necessidade de tratamento pode ter sido diagnosticado como tendo infertilidade idiopática masculina, por exemplo, após falha em conceber em parceria com um parceiro fértil por um período de 6 meses ou mais. No caso de intervenção profilática, o paciente com necessidade da mesma pode ter sido analisado quanto à propensão a sofrer de infertilidade idiopática masculina pela análise de suas características espermáticas ou outros parâmetros fisiológicos, por exemplo, um paciente com um determinado perfll de marcadores/características em uma amostra de espermatozoides indicando disfunção espermática induzida por estresse oxidativo, ou níveis anormalmente altos de estresse oxidativo seminal (como redução da capacidade antioxidante total, nível elevado de espécies reativas de oxigênio ou aumento da peroxidação lipídica)

ou leucocitospermia seminal (por definição da OMS) no contexto de fertilidade masculina subnormal ou um alto grau de NETose seminal.

[0020] Em modalidades dos aspectos apresentados acima, é fornecido um método de restauração da fertilidade em um sujeito masculino identificado como paciente de infertilidade idiopática com necessidade do mesmo, envolvendo a dosagem de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de MPO. Em uma modalidade, o método de tratamento da infertilidade idiopática masculina ou método de restauração da fertilidade em um paciente de infertilidade idiopática masculina, — envolvendo a dosagem de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de MPO para inibir danos induzidos por estresse oxidativo em espermatozoides e prevenir NETose induzida por espermatozoides.

[0021] Os inibidores de mieloperoxidase para uso, para uso em métodos de tratamento, para uso na fabricação de um medicamento ou fornecidos em uma composição farmacêutica podem ser selecionados a partir de qualquer inibidor de MPO conhecido. Em modalidades preferenciais dos aspectos acima, o inibidor de MPO é selecionado a partir dos inibidores de MPO descritos em WO 2006062465 A1, WO 2008152420 A1 e/ou WO 2016087338 A1.

[0022] Em modalidades, o inibidor de mieloperoxidase é 3-[[((2R)- tetra-hidrofuran-2-il]metil]|-2-tioxo-7 H-purin-6-ona (AZD5904), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo.

[0023] Em modalidades, o inibidor de mieloperoxidase é 1-(2- isopropoxietil)-2-tiox0-2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo.

[0024] Em modalidades, o inibidor de mieloperoxidase é um composto da Fórmula (1)

o s n em que R' é H, F, Cl ou CF3; R? é H, CH3 ou CaoHs; e R? é H, CH3, CoHs, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclobutila, ciclobutilmetila ou ciclopentila; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo.

[0025] Em uma modalidade, o composto da Fórmula (|) é selecionado de:

[0026] 1-(2-[[1R)-1-aminopropil]-4-clorobenzil)-2-tioxo-1,2,3,5- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-0na;

[0027] 1-[2-(1-aminoetil)-4-clorobenzil]-2-tioxo-1,2,3,5-tetra-hidro- 4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona;

[0028] 1-(2-[(1R)-1-aminoetil]-4-clorobenzil)-2-tiox0-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-0na;

[0029] 1-(2-[(18S)-1-aminoetil]-4-clorobenzil)-2-tioxo-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona;

[0030] 1-f4-cloro-2-[1-(metilamino)etil]benzil)-2-tioxo-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona;

[0031] 1-f4-cloro-2-[(etilamino)metil]benzil)-2-tiox0-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-0na;

[0032] 1-[2-(aminometil)-4-clorobenzil]-2-tioxo-1,2,3,5-tetra-hidro- 4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin4-ona;

[0033] 1-f4-cloro-2-[(metilamino)metil]benzil)-2-tioxo-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-0na;

[0034] 1-(2f[(ciclobutilmeti)amina]metil)benzil)-2-tioxo-1,2,3,5- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona;

[0035] 1-(2-[(ciclobutilamino)metil]|benzil)-2-tioxo-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-0na;

[0036] 1-(2-[(ciclopentilamino)metil]benzil)-2-tioxo-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona;

[0037] 1-(2K[(2-metilpropil)amino]metil)benzil)-2-tioxo-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona;

[0038] 1-(2-[(propan-2-ilamino)metil]benzil|)-2-tioxo-1,2,3,5-tetra- hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-0na;

[0039] 1-[2-(aminometil)-4-(trifluorometil)benzil]-2-tioxo-1,2,3,5- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona;

[0040] 1-(2-[(metilamino)metil]-4-(trifluorometil)benzil)-2-tioxo- 1,2,3,5-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-0na; e

[0041] sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

[0042] No caso em que a configuração absoluta (R ou S) de um único enantiômero do composto de fórmula (1) for especificado na lista de compostos da Fórmula (1) acima, é o átomo de carbono ao qual R? está ligado que é o estereocentro (centro quiral) em questão.

[0043] A hidrazida do ácido 4-aminobenzoico para uso no tratamento da infertilidade masculina, em métodos de tratamento da infertilidade masculina, em métodos de fabricação de um medicamento para o tratamento da infertilidade masculina ou em composições farmacêuticas para o tratamento da infertilidade masculina, conforme descritos aqui e acima, é especificamente renunciada a todos os aspectos e modalidades aqui descritos.

[0044] O termo "farmaceuticamente aceitável" é usado para especificar que um objeto (por exemplo um sal, solvato, forma de dosagem, diluente ou veículo) é adequado para uso em pacientes. Uma lista exemplificativa de sais farmaceuticamente aceitáveis pode ser encontrada no Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl e C. G. Wermuht, editores, Weinheim/Zurique: Wiley-VCH/VHCA, 2002.

[0045] Os compostos e sais descritos na presente patente podem existir em formas solvatadas e formas não solvatadas. Por exemplo, uma forma solvatada pode ser uma forma hidratada, tal como um hemi- hidrato, um mono-hidrato, um di-hidrato, um tri-chidrato ou uma quantidade alternativa dos mesmos. A invenção abrange todas essas formas solvatadas e não solvatadas de inibidores de mieloperoxidase, por exemplo, compostos da Fórmula (1).

[0046] É pretendido que o termo "terapia" tenha o seu significado normal de lidar com uma doença para aliviar, total ou parcialmente, um, alguns ou todos os seus sintomas, ou para corrigir ou compensar a patologia subjacente. O termo "terapia" também inclui "profilaxia", salvo se existirem indicações específicas em contrário Os termos "terapêutico" e "terapeuticamente" devem ser interpretados de modo correspondente.

[0047] É pretendido que o termo "profilaxia" tenha o seu significado normal e inclua profilaxia primária, para evitar o desenvolvimento da doença, e profilaxia secundária, em que a doença já se desenvolveu e o paciente é temporária ou permanentemente protegido contra exacerbação ou agravamento da doença ou o desenvolvimento de novos sintomas associados à doença. Um sujeito identificado como sendo disposto à infertilidade idiopática masculina e, portanto, indicado para tratamento profilático (isto é, um sujeito com necessidade de profilaxia) de acordo com a presente patente, geralmente é considerado um paciente identificado como tendo níveis elevados de espécies reativas de oxigênio em uma amostra de seu líquido seminal e/ou disfunção espermática atribuível como secundária ao estresse oxidativo. Em algumas modalidades, a identificação de uma disposição para a infertilidade idiopática masculina pode ser derivada de uma análise de uma combinação de fatores de estilo de vida, como tabagismo, consumo de álcool, peso e exposição de testículos ao calor e a toxinas ambientais.

[0048] O termo "tratamento" é usado de forma sinônima com "terapia". Similarmente, o termo "tratar" pode ser considerado como "aplicação de uma terapia", onde "terapia" é tal como aqui definida.

[0049] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" se refere a uma quantidade de um inibidor de mieloperoxidase como descrito em qualquer uma das modalidades no presente documento, que é eficaz em proporcionar "terapia" em um sujeito, ou "tratar" uma doença ou transtorno em um sujeito.

[0050] Os inibidores de mieloperoxidase, e sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem ser administrados como composições farmacêuticas, compreendendo um ou mais diluentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[0051] Portanto, em uma modalidade, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo um inibidor de mieloperoxidase, por exemplo 3-[[(2R)-tetra-hidrofuran-2-il]metil]-2-tioxo-7H-purin-6-ona, 1- (2-isopropoxietil)-2-tioxo-2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)- ona ou um composto da Fórmula (|) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo e pelo menos um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. As composições podem estar em uma forma adequada para uso oral (por exemplo como comprimidos, pastilhas, cápsulas duras ou moles, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pós ou grânulos dispersíveis, xaropes ou elixires), para uso tópico (por exemplo como cremes, pomadas, géis ou soluções ou suspensões aquosas ou oleosas), para administração por inalação (por exemplo como um pó finamente dividido ou um aerossol líquido), para administração por insuflação (por exemplo como um pó finamente dividido) ou para administração parenteral (por exemplo como uma solução aquosa ou oleosa estéril para dosagem intravenosa, subcutânea ou intramuscular) ou como um supositório para dosagem retal. As composições podem ser obtidas por procedimentos convencionais usando excipientes farmacêuticos convencionais, bem conhecidos na técnica. Assim, as composições destinadas a uso oral podem conter, por exemplo, um ou mais agentes corantes, adoçantes, aromatizantes e/ou conservantes. Em algumas modalidades preferenciais, o inibidor de MPO deve ser administrado por via oral. Em algumas modalidades preferenciais, o inibidor de MPO deve ser administrado como uma forma de liberação prolongada, por exemplo uma forma de liberação prolongada oral ou uma forma de liberação prolongada subcutânea.

[0052] Em uma modalidade, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo um inibidor de mieloperoxidase, por exemplo, um composto da Fórmula (1), 3-[[((2R)-tetra-hidrofuran-2- illmetil])-2-tioxo-7H-purin-6-ona/ (AZD5904) ou 1-(2-isopropoxietil)-2- tioxo-2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo e, pelo menos, um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento da infertilidade masculina.

[0053] O inibidor de mieloperoxidase será normalmente administrado a um animal de sangue quente a uma dose unitária na faixa de 2,5 a 5000 mg/m? de área corporal do animal, ou aproximadamente de 0,05 a 100 mg/kg, e esta fornece normalmente uma dose terapeuticamente eficaz. Uma forma de dose unitária tal como um comprimido ou cápsula conterá habitualmente, por exemplo, 0,1 a 500 mg de ingrediente ativo. A dose diária irá necessariamente variar dependendo do hospedeiro tratado, da via de administração particular, de quaisquer terapias que estejam a ser coadministradas, e da gravidade da doença que está a ser tratada. Assim, o profissional que está a tratar qualquer paciente particular pode determinar a dosagem ótima.

[0054] Para testar a hipótese de que os inibidores de MPO podem ser adequados para o tratamento da infertilidade idiopática masculina, um conjunto de estudos ex-vivo foi realizado em amostras andrológicas de diagnóstico coletadas com o consentimento de pacientes atendidos na unidade de concepção assistida (ACU, do inglês "assisted conception unit") do Ninewells Hospital, em Dundee, conforme detalhado abaixo. Foram realizados experimentos para avaliar vários parâmetros de motilidade e função espermática, conforme descrito abaixo.

[0055] Para que a invenção possa ser melhor compreendida, é feita referência às seguintes Figuras:

[0056] A Figura 1 mostra esquematicamente o papel do estresse oxidativo na infertilidade masculina.

[0057] A Figura 2 é uma Tabela que ilustra um breve resumo das informações da linha de base relacionadas à andrologia disponíveis na clínica sobre cada paciente testado (idade, infertilidade primária/secundária e duração da infertilidade). Os números da contagem são milhões por mL (M/mL), os valores de referência da OMS são Concentração 15 M/mL, progressivo 32%, morfologia 4%, leucócitos 1 M/mL).

[0058] A Figura 3a é um gráfico de barras que mostra as diferenças percentuais entre as medições de CASA no tempo zero e após 24 horas de incubação para motilidade, motilidade progressiva, motilidade rápida, velocidade média de percurso (VAP), velocidade em linha reta (VSL), velocidade curvilínea (VCL) e deslocamento lateral da cabeça (ALH)

para o conjunto de dados completo (n = 29). Três condições foram medidas; somente espermatozoides como o controle (coluna da esquerda, a), controle de espermatozoides com neutrófilos ativados (razão 3:1) com o veículo (coluna do meio, b) e espermatozoides com neutrófilos ativados (razão 3:1) mais AZD5904 3 uM (coluna da direita, c). O teste de Kruskal-Wallis mostra uma tendência positiva para AZD5904, que não atinge significância estatística para cada parâmetro medido (P> 0,1). As barras de erro representam o erro padrão da média.

[0059] A Figura 3b é um diagrama de linhas que mostra a mudança absoluta da motilidade espermática geral em relação à linha de base para 2 h e 24 horas após a incubação nos 11 primeiros sujeitos (destacados em azul na Figura 2) que apresentaram anormalidades mais pronunciadas nos parâmetros espermáticos em relação à linha de base do que os próximos 18 sujeitos estudados. Três condições foram medidas; somente espermatozoides como o controle (a), controle de espermatozoides com neutrófilos ativados (razão 3:1) com o veículo (b) e espermatozoides com neutrófilos ativados (razão 3:1) mais AZD5904 3 UM (c). Um teste t de Student bicaudal entre AZD5904 e grupos tratados com o veículo mostrou uma tendência estatística: P = 0,09.

[0060] A Figura 4 mostra os resultados cumulativos do ensaio de penetração de Kremer para o conjunto de dados completo (n = 29) com os resultados expressos como uma razão em relação ao controle (somente espermatozoides). As barras de erro representam o erro padrão da média. A análise do teste T de Student mostra que foram encontrados significativamente mais espermatozoides a 1 cm no grupo de tratamento com AZD5904 do que no grupo sem fármaco. P = 0,02

[0061] A Figura 5 mostra exemplos de dados do teste de penetração de Kremer no ponto temporal de 2 horas para quatro sujeitos "respondedores". Os dados são expressos como uma razão em relação ao controle (somente espermatozoides). Os valores acima das barras referem-se às contagens reais de espermatozoides a 1 cm; o número superior refere-se à condição de teste (veículo ou AZD5904) enquanto o número entre parênteses é a contagem de controle. Os números R ao longo do eixo X referem-se aos números de pacientes anônimos. Uma mudança de pelo menos 0,25 é considerada uma diferença significativa nos indivíduos.

[0062] A Figura 6 mostra a marcação média de MDA de 29 pacientes e por condição de tratamento in vitro: somente espermatozoides (a), controle de espermatozoides + neutrófilos + o veículo (b), espermatozoides + neutrófilos + AZD5904 (fármaco) (c) e espermatozoides + H2O02 4 mM (d). Os resultados para espermatozoides com H2O02 4 mM tiveram marcação significativamente maior do que as outras condições (P< 0,01). As barras de erro representam o erro padrão da média. Materiais e métodos Desenho experimental

[0063] Uma série de 5 testes foi realizada em cada amostra de sêmen adquirida (Figura 2). Esta abordagem foi usada para avaliar vários parâmetros de motilidade e função espermáticas. Os métodos foram validados antes da coleta de dados para garantir confiabilidade e repetibilidade dos resultados. Sujeitos do estudo/coleta de amostras

[0064] Amostras andrológicas de diagnóstico excessivas (N = 29) foram coletadas com o consentimento de homens atendidos na unidade de concepção assistida (ACU) do Ninewells Hospital em Dundee. Materiais

[0065] Meio que não promove capacitação (pH 7,4): CaCl2 1,8 MM, KCI 5,4 MM, MgSO4.7H20 0,8 mM, NaCl 116,4, NaH2PO4.2H20 1 MM, D-glicose 5,55 mM, piruvato de sódio 2,73 mM, lactato de sódio 41,75 MM, HEPES 25 mM, 0,3% de BSA.

[0066] Meio de capacitação (pH 7,4): CaCl2 1,8 mM, KCI 5,4 mM, MgSO2.7H20 0,8 mM, NaCl 116,4 MM, NaH2PO2.2H20 1 mM, D- glicose 5,55 mM, piruvato de sódio 2,73 mM, lactato de sódio 25 mM, bicarbonato de sódio 26 mM, 0,3% de BSA.

[0067] sEBSS (pH 7,4): NaH2PO, 1,01 MM, KCI 5,4 MM, MgSOa.7H20 0,8 mM, CsH1206 5,5 mM, piruvato de sódio 2,5 mM, lactato de sódio 19 mM, bicarbonato de sódio 25 mM, HEPES 15 mM, CaCl2.2H20 1,8 mM, NaCl 118,4 mM, 0,3% de BSA. Preparação da amostra de sêmen

[0068] Amostras de sêmen foram coletadas por masturbação em recipientes plásticos estéreis após um período mínimo de 2 dias e um máximo de 7 dias de abstinência sexual. As amostras de sêmen foram produzidas no local da ACU e permitidas se liquefazerem por 30 minutos (37ºC). Antes da preparação das amostras, foram coletados 20 uL de sêmen original de cada amostra e 10 ul destes usados para preparar esfregaços de sêmen em lâminas de vidro limpas (exame de leucócitos). Duas lâminas foram preparadas por amostra, embrulhadas em papel alumínio e armazenadas em um congelador a -20ºC até serem necessárias. As amostras de sêmen foram então preparadas por centrifugação em gradiente de densidade (DGC, do inglês "Density Gradient Centrifugation") de Percoll, conforme previamente descrito (Tardif S, Madamidola OA, Brown SG, Frame L, Lefievre L, Wyatt PG, et al. Human Reproduction 2014; 29:10 2123-2135). Então, um máximo de 2 mL por gradiente de sêmen original foi cuidadosamente colocado como camada em cima. O gradiente foi então centrifugado a 300 g por min. A camada superior que continha apenas sêmen foi coletada em um tubo Eppendorf de 1,5 mL. Esta camada foi então centrifugada a 17 x 1086 x g durante 20 min para peletizar quaisquer células e detritos na camada de sêmen de modo que só o líquido seminal seria coletado. O sobrenadante foi então coletado e centrifugado novamente a 17.000 x g por 20 min. O sobrenadante foi coletado e armazenado em um congelador a -20ºC até ser necessário. O pélete da fração de DGC de 80% foi coletado e lavado em 4 mL de meio que não promove capacitação por 10 minutos a 300 g. O sobrenadante foi então descartado. O pélete foi coletado, ressuspenso em 1 mL de solução sEBSS e incubado (37ºC) para análise da função espermática. Isolamento de neutrófilos

[0069] Amostras de sangue foram coletadas de doadores voluntários em um vacutainer contendo EDTA para impedir coagulação (Zambrano F, Carrau T, Garner U, Seipp A, Taubert A, Felmer R, et al. Fertility and Sterility 2016; 106(5):1053-1060). O sangue foi misturado com Histopaque 1119 (Sigma, Reino Unido) a uma razão de 1:1,2 em um tubo falcon de 15 mL (Zambrano et al, 2016). Este foi então centrifugado a 800 g durante 20 min. Depois disso, o sobrenadante foi descartado e o pélete foi transferido para um tubo falcon novo. Este tubo foi então preenchido até 15 mL com solução salina tamponada de fosfato (PBS, do inglês "phosphate-buffered saline") e centrifugado a 300 g por 10 minutos. Os gradientes de Percoll foram preparados primeiramente adicionando-se 2 mL de PBS 10X a 18 mL de Percoll para criar um estoque de 100%. Este foi então diluído com PBS 1X para criar cinco estoques de gradiente de Percoll de 4 mL em concentrações de 65%, 70%, 75%, 80% e 85%. Em seguida, 2 mL de cada concentração de gradiente foram colocados como camada uma em cima da outra em um tubo falcon de 15 mL com 85% no fundo do tubo e 65% no topo. Após a centrifugação de 10 min, o sobrenadante foi novamente descartado e o pélete foi ressuspenso em 4 mL com PBS. Em seguida, 2 mL de sangue foram cuidadosamente colocados como camada em cima dos gradientes de densidade e centrifugados a 800 g por 20 minutos. A camada superior foi descartada e as camadas de 70 a 80% foram coletadas e transferidas para um tubo falcon novo. O tubo foi então preenchido até 15 mL com PBS e centrifugado por 10 min a 300 g. O sobrenadante foi descartado e o pélete foi coletado e lavado em 2 mL de tampão de lise de glóbulos vermelhos. Esta etapa foi repetida até o pélete não ter mais cor vermelha, com o sobrenadante descartado cada vez. Finalmente, o pélete foi ressuspenso em 1 mL de sEBSS e colocado numa incubadora de 37ºC. Tratamento de espermatozoides com AZD5904 ou o veículo

[0070] Uma solução de estoque de 10 mM do fármaco foi preparada em DMSO a 100%. Esta foi, em seguida, diluídas em série para uma concentração de trabalho de 3 u M usando sSEBSS como o diluente e armazenada a 4ºC. O fármaco ou veículo foi então adicionado aos neutrófilos e colocado em um banho de água a 37ºC durante 10 min. Os neutrófilos foram então adicionados aos espermatozoides em tubos de fundo redondo de poliestireno de 5 mL seguros para espermatozoides (Falcon) a uma razão de cerca de 1:3. Adicionou-se zimosano a uma concentração final de 1 ug/mL para ativar os neutrófilos e incubou-se por duas horas a 37ºC. Foram preparadas quatro condições para as avaliações de motilidade, citometria de fluxo e ensaios de Kremer: somente espermatozoides, espermatozoides + neutrófilos + o veículo, espermatozoides + neutrófilos + AZD5904 (fármaco) e espermatozoides + 4 mM (concentração final) de peróxido de hidrogênio (H2O>2; controle positivo para danos). Avaliação da Motilidade

[0071] A motilidade espermática foi avaliada usando o sistema CASA da Hamilton-Thorn. Para cada condição, um total de 200 células foram contadas em pelo menos quatro campos de visão diferentes. Quando uma amostra tinha motilidade muito baixa, pelo menos 100 células foram contadas. Os parâmetros de motilidade foram avaliados no início da coincubação com neutrófilos (tempo 0), após duas horas e após 24 horas. A motilidade foi expressa como uma diferença percentual entre o tempo O e após duas horas e a diferença percentual após o tempo O e após 24 h para cada ponto temporal para cada amostra. Ensaio de Penetração de Kremer

[0072] O teste de penetração de Kremer avalia a capacidade de uma célula espermática de penetrar e nadar através de meios viscosos. Esse teste também é conhecido como o teste de penetração espermática em muco cervical. Um substituto do muco cervical foi constituído por metilcelulose a 1% dissolvida em meio de capacitação. A solução foi gaseificada numa incubadora de 37ºC de 5% de CO> durante 20 min. Em seguida, tubos capilares planos (Rectangle Boro Tubing, CM Scientific) foram colocados na solução de metilcelulose por mais 20 minutos para permitir que o meio fluísse pelos tubos capilares. Após a incubação de duas horas, 100 ul de cada condição foram aliquotados em um tubo seguro para espermatozoides novo. Uma extremidade de cada tubo foi então obturada usando plasticina e, em seguida, um tubo foi colocado com a extremidade aberta primeiro em cada condição de teste. Cada tubo seguro para espermatozoides contendo um tubo capilar foi incubado por uma hora a 37ºC com 5% de CO». Após uma hora, os tubos capilares foram removidos e o número de células na marca de 1 cm foi contado manualmente. Os resultados foram expressos como uma razão em relação ao controle (somente espermatozoides). Citometria de Fluxo

[0073] Após a incubação de duas horas com neutrófilos ativados, foram retiradas alíquotas de 50 ul de todas as 4 condições e transferidas para tubos Eppendorf de 1,5 mL. H2O> foi utilizado como um controle positivo. Uma alíquota extra para um controle de somente secundário foi retirada do tubo de somente espermatozoides. As células (exceto o tubo de somente secundário) foram incubadas por 0,5h a

37ºC com um anticorpo anti-malondialdeído (MDA) (ab27642, abcam, Cambridge) a uma razão de trabalho de 1:50 (Moazamian R, Polhemus A, Connaughton H, Fraser B, Whiting S, Gharagozloo P, Aitken RJ. Mol Hum Reprod 2015;21(6):502-15). Os tubos foram então centrifugados a 300 g por 5 min para peletizar as células e o sobrenadante foi descartado. As células foram então lavadas duas vezes com sEBSS e o sobrenadante foi descartado cada vez. Um anticorpo secundário anti- coelho de cabra marcado com fluorescência (Thermofisher, Reino Unido) foi então adicionado a todas as condições a uma razão de 1:50 e os tubos foram incubados por 10 min a 37ºC. As células foram peletizadas e lavadas duas vezes como descrito acima. Após a lavagem final, os péletes foram ressuspensos em 250 ul de solução de sSEBSS e transferidos para tubos seguros para espermatozoides novos. O nível de marcação de MDA em cada condição foi então avaliado em 10.000 células usando um programa de citometria de fluxo pré-validado em um analisador de células BD LSRFortessa. Devido a um erro técnico, uma amostra não pôde ser avaliada por citometria de fluxo.

Contagem de Leucócitos

[0074] As lâminas de esfregaço de sêmen foram removidas do congelador e colocadas em cubas de coplin preenchidas com solução de May-Grúnwald Giemsa (diluída 1:20 em água destilada) durante 5 minutos. As lâminas foram então lavadas em PBS por 1,5 min. Em seguida, as lâminas foram colocadas em May-Grúnwald Giemsa fresca durante 20 minutos, depois lavadas com água destilada. Foram deixadas secar ao ar antes da contagem. Foi feita uma contagem média das duas lâminas por amostra. O número de leucócitos contados no mesmo campo que 400 espermatozoides foi registrado e a concentração de leucócitos da amostra foi calculada usando a concentração de espermatozoides de acordo com os métodos recomendados pela OMS 2010 (Cooper TG, Noonan E, von Eckardstein

S, Augur J, Baker HWG, Behre HM, et al. Human Reproduction Update, 2010; 16(3):231-245). Resultados Dados demográficos dos pacientes

[0075] A Tabela da Figura 2 representa o breve resumo das informações da linha de base relacionadas à andrologia disponíveis na clínica sobre cada paciente testado (idade, infertilidade primária/secundária e duração da infertilidade). Os parâmetros de espermatozoides originais e preparados também foram registrados, bem como as contagens de leucócitos.

[0076] Mais detalhadamente, a tabela mostra as idades, o tempo que o casal está tentando conceber (duração da infertilidade) e o status de infertilidade do paciente (primário ou secundário). Os parâmetros do sêmen foram medidos antes (original) e após (Prep) centrifugação em gradiente de densidade usando o sistema CASA da Hamilton-Thorne, com exceção da contagem original que foi avaliada por um andrologista manualmente seguindo o manual da OMS (Organização Mundial da Saúde). (2010). WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen, 5º ed. Genebra: Organização Mundial da Saúde). O texto em vermelho refere-se a qualquer amostra que apresentou parâmetros abaixo do normal, de acordo com a OMS 2010. A contagem de leucócitos refere-se à concentração de leucócitos encontrados na amostra de sêmen não preparado. Os números R referem-se aos números de pacientes anônimos. Avaliação da Motilidade

[0077] Amostras de sêmen foram coletadas dos pacientes no dia de suas investigações andrológicas e os parâmetros de motilidade foram registrados. Cada amostra teve três condições de teste medidas durante 24 horas; somente espermatozoides, controle de espermatozoides com neutrófilos a uma razão de 3:1 mais o veículo e espermatozoides com neutrófilos a uma razão de 3:1 mais AZD5904 3 uM. A motilidade foi medida no tempo zero, após duas horas de incubação e após 24 horas. A Figura 3a representa as diferenças percentuais entre os parâmetros do sêmen no tempo zero e após 24 horas de incubação. Um teste de Kruskal-Wallis mostrou que houve uma tendência não significativa em direção a um tamanho de efeito relativo benéfico de aproximadamente 30% para o tratamento com AZD5904 na redução do comprometimento da motilidade espermática geral (p>0,01 para cada parâmetro medido). Para visualizar as diferenças de motilidade ao longo do tempo, os dados de motilidade total, motilidade rápida e progressiva também foram plotados como gráficos de linha para os 11 primeiros sujeitos estudados, que apresentaram anormalidades mais pronunciadas nos parâmetros espermáticos da linha de base. A Figura 3b mostra as diferenças ao longo do tempo para a motilidade dos pacientes testados (N = 11). Ensaio de penetração de Kremer

[0078] A amostra de espermatozoides de cada sujeito do estudo também foi avaliada quanto à capacidade de penetrar em meio viscoso usando o teste de penetração de Kremer (N = 29). A Figura 4 mostra os resultados médios da coorte para os espermatozoides com neutrófilos ativados mais o veículo e espermatozoides com neutrófilos ativados mais AZD5904. Os resultados mostraram uma melhora na penetração espermática através de um meio viscoso para as amostras tratadas com AZD5904 vs o controle de veículo. A análise do teste T de Student mostra —“que foram encontrados significativamente — mais espermatozoides a 1 cm no grupo de tratamento com o fármaco do que no grupo sem fármaco (p=0,02). Houve variação na resposta individual ao tratamento com AZD5904 com 15 dos 29 sujeitos demonstrando o que é considerado uma melhora clinicamente relevante na penetração espermática após AZD5904. Quatro exemplos de respondedores positivos ao tratamento com AZD5904 são mostrados na Figura 5.

Citometria de fluxo

[0079] Após uma incubação de 2 horas, os níveis de MDA foram medidos usando citometria de fluxo (N=29). Quatro condições foram medidas após uma incubação de duas horas; somente espermatozoides (controle), controle de espermatozoides com neutrófilos a uma razão de 3:1 mais o veículo, espermatozoides com neutrófilos a uma razão de 3:1 mais AZD5904 3 UM (Fármaco) e espermatozoides com H2O02 4 mM. A Figura 6 mostra a marcação média de MDA para todas as 4 condições. Una ANOVA de uma via mostrou que os espermatozoides com H2O02> 4 mM apresentaram marcação significativamente maior do que as outras condições testadas (P<0,01). Análise de Resultados

[0080] AZD5904 foi escolhido como um inibidor de MPO representativo, devido ao seu extenso perfil clínico anterior no homem e ao bom perfil de segurança nele observado. Espera-se que os resultados obtidos com este inibidor de MPO representativo também sejam obtidos com outros inibidores potentes e seletivos de MPO, tais como, mas sem limitação, os compostos descritos em WO 2006062465 A1l (que revela 1-(2-isopropoxietil)-2-tioxo-2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-4(5H)-ona (também conhecida como AZD3241)) WO 2008152420 A1 e/ou WO 2016087338 A1 (que descreve os compostos da Fórmula (l) aqui especificamente revelados).

[0081] Em mais detalhes, AZD5904 é um inibidor irreversível potente (Clso de 140 nM) da MPO humana com uma potência similar em camundongo e rato. É 10 a 19 vezes seletivo em comparação com a lactoperoxidase e a peroxidase da tireoide intimamente relacionadas; >70 vezes com um painel amplo de outras enzimas, canais iônicos e receptores. Em neutrófilos humanos isolados, 1 uM inibiu HOCI estimulado por PMA em >90%. Em ratos, uma concentração plasmática de —-5 uM diminuiu a formação in vivo de glutationa sulfonamida (um produto da reação de HOCI com glutationa) por neutrófilos do peritônio ativados por zimosano in situ. AZD5904 foi administrado por via oral a voluntários saudáveis em doses únicas de até 1200 mg (1400 mg com formulação de liberação prolongada, LP) e doses múltiplas de até 325 mg TID (600 mg BID por 10 dias com formulação LP). No total, 181 sujeitos foram dosados em cinco estudos de Fase 1. Ainda não foi identificado nenhum evento adverso evidente relacionado ao fármaco.

[0082] Os resultados obtidos nos testes descritos no presente pedido relacionados à atividade de um inibidor de MPO nas propriedades espermáticas apresentados nas figuras anexas ilustram os efeitos de um inibidor de MPO representativo (AZD5904) em espermatozóides obtidos de sujeitos que sofrem de infertilidade idiopática masculina. No total, as amostras de espermatozoides de 29 sujeitos foram testadas. Embora os resultados individuais mostrem um grau de variabilidade, cumulativamente, e apesar do pequeno tamanho da amostra (estudo piloto), os dados mostram uma tendência positiva para melhora na motilidade geral dos espermatozoides 24 horas após a administração de AZD5904 a uma coincubação de espermatozoides humanos com neutrófilos humanos ativados vs o veículo.

[0083] O teste de penetração de Kremer é um teste particularmente útil para avaliar a influência de um fármaco na motilidade espermática. Isso ocorre porque avalia a capacidade dos espermatozoides de penetrar e nadar através de meios com viscosidade similar à encontrada no trato feminino, pelo qual os espermatozoides nadariam naturalmente in vivo (Ivic A, Onyeaka H, Girling A, Brewis IA, Ola B, Hammadieh H. et al, Human Reproduction 2002; 17(1):143-149). O teste de penetração espermática fornece informações objetivas, quantitativas e reprodutíveis sobre o estado funcional de espermatozoides e mostrou ser um valioso marcador de fertilidade, especialmente na infertilidade por fator masculino (ver Eggert-Krause W, Gerhard |, Tilgen W,

Runnebaum B. Fertil Steril 1989; 52: 1032-1040; Eggert-Krause W, Leinhos G, Gerhard |, Tilgen W, Runnebaum B. Fertil Steril 1989; 51: 317-323; Polansky FF e Lamb EuJ. Fertil Steril 1989; 51(2): 215-28; Ola B, Afnan M, Papaioannou S, Sharif K, Bjorndahl L, Coomarasamy A. Hum Reprod 2003; 18(5): 1037-46). O substituto de muco cervical usado no estudo, criado com metilcelulose e meio de capacitação, demonstrou ser um substituto adequado para o muco cervical humano (lvic et al, 2002; Tang S, Garrett C, Baker HW. Human Reprod 1999; 14(11): 2812- 7). Os resultados deste estudo preliminar mostraram que, após 2 horas de tratamento de espermatozoides coincubados com neutrófilos ativados, foi obtida uma melhora estatisticamente significativa na penetração espermática com o tratamento com AZD5904 versus o veículo (p=0,02). Em um nível de sujeito individual, o AZD5904 proporcionou um efeito benéfico clinicamente relevante em pouco mais de 50% dos pacientes testados (15 respondedores dos 29 pacientes avaliados), enquanto outros 8 sujeitos apresentaram uma melhora menor. Foram feitas tentativas para identificar fatores fenotípicos ou demográficos que foram associados a uma resposta positiva ao tratamento com AZD5904, mas o tamanho da amostra era muito pequeno para permitir isso. Trabalhos adicionais envolvendo um número maior de sujeitos estão em andamento.

[0084] Enquanto um mecanismo preciso de efeito através do qual a inibição de MPO proporciona uma melhora nas propriedades espermáticas ainda não foi estabelecido, as diferenças nos testes de motilidade foram mais evidentes após a incubação de 24 horas.

[0085] Em suma, os resultados de uma investigação preliminar do potencial de inibidores de MPO para o tratamento da infertilidade idiopática masculina revelados acima mostram que o tratamento in vitro de espermatozoides humanos com um inibidor de MPO está associado a uma forte tendência a um efeito benéfico na proteção de espermatozoides contra danos mediados por neutrófilos no que diz respeito a melhorias na motilidade espermática geral após 24 horas e penetração espermática após apenas duas horas.

Em 15 de 29 sujeitos, a melhora no teste de penetração de Kremer foi considerada clinicamente importante, e o tratamento geral com o inibidor de MPO levou a uma melhora estatisticamente significativa na penetração espermática no teste de Kremer.

Esses resultados fornecem forte apoio à proposição de que inibidores de MPO, tais como AZD5904, podem ser úteis para o tratamento da infertilidade idiopática masculina.

Estudos expandidos para confirmar os resultados obtidos nesses estudos iniciais estão em andamento.

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES

1. Inibidor de mieloperoxidase, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento ou profilaxia da infertilidade masculina.

2. Método de tratamento da infertilidade masculina em um paciente masculino com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de MPO.

3. Método de profilaxia da infertilidade masculina em um paciente masculino identificado como necessitando do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de MPO.

4. Inibidor de mieloperoxidase, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para uso na fabricação de um medicamento para o tratamento ou profilaxia da infertilidade masculina.

5. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um inibidor de mieloperoxidase para uso no tratamento ou profilaxia da infertilidade masculina.

6. Inibidor de mieloperoxidase para uso, método de tratamento ou profilaxia, ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o uso, método ou composição é para um paciente que sofre de infertilidade idiopática masculina.

7. Inibidor de mieloperoxidase para uso, método de tratamento ou profilaxia, ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o uso, método ou composição é para um paciente humano.

8. Inibidor de mieloperoxidase para uso, método de tratamento ou profilaxia, ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o uso, método ou composição é para um mamífero terrestre não humano.

9. Inibidor de mieloperoxidase para uso, método de tratamento ou profilaxia, ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o uso, método ou composição é para inibir danos espermáticos induzidos por estresse oxidativo e/ou prevenir NETose induzida por espermatozoides no contexto da infertilidade idiopática masculina.

10. Inibidor de mieloperoxidase para uso, método de tratamento ou profilaxia, ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o inibidor de mieloperoxidase é 1-(2-isopropoxietil)-2-tioxo-2,3-di-hidro- 1H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato da mesma.

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11. Inibidor de mieloperoxidase para uso, método de tratamento ou profilaxia, ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o inibidor de mieloperoxidase é 3-[[(2R)-tetra-hidrofuran-2-il]metil])-2- tioxo-7H-purin-6-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato da mesma.

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12. Inibidor de mieloperoxidase para uso, método de tratamento ou profilaxia, ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o inibidor de mieloperoxidase é um composto da Fórmula (I)

O

AA em que R' é H, F, Cl ou CF3; R? é H, CH3 ou CaHs; e R? é H, CH3, CoHs, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, ciclopropila, ciclopropilmetila, —ciclobutila, ciclobutilmetila ou ciclopentila; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo.

13. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende uma composição — farmacêutica — compreendendo um inibidor de mieloperoxidase ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, e instruções para uso da composição farmacêutica para o tratamento ou profilaxia da infertilidade idiopática masculina.

14. Kit, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o inibidor de MPO é como definido em qualquer uma das reivindicações 10, 11 ou 12.

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