BR112019021812A2 - Molécula receptora de il4/il13 para uso veterinário - Google Patents
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Abstract
a presente invenção refere-se a polipeptídeos contíguos il13r/il4r derivados de espécies de animais de companhia e que se ligam a il13 e/ou il4. tais polipeptídeos contíguos podem ser usados nos métodos para tratar condições induzidas por il13 e/ou il4 em animais de companhia, tais como caninos, felinos e equinos.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MOLÉCULA RECEPTORA DE IL4/IL13 PARA USO VETERINÁRIO. REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido Provisório dos EUA No. 62/488.509, depositado em 21 de abril de 2018, que é incorporado por referência aqui em sua totalidade para qualquer finalidade.
CAMPO
[0002] A presente invenção refere-se a polipeptídeos contíguos compreendendo fragmentos de receptor de interleucina 4 e de receptor de interleucina 13 derivados de espécies de animais de companhia que se ligam a IL4 e/ou IL13 de uma espécie de animal de companhia, por exemplo, IL4 canina, IL13 canina. Esta invenção também se refere a métodos de utilizar os polipeptídeos contíguos, por exemplo, para tratar condições induzidas por IL4 e/ou IL13 ou reduzir a atividade de sinalização de IL4 e/ou IL13 em células, por exemplo, em animais de companhia, tais como caninos, felinos e equinos.
ANTECEDENTES
[0003] Interleucina 4 (IL4) é uma citocina que promove a diferenciação de células T auxiliares naive em células Th2. A interleucina 13 (IL13) tem efeitos similares sobre células imunológicas. Tanto a IL4 como a IL13 desempenham papéis importantes nas respostas imunológicas mediadas por células T que estão diretamente associadas à alergia, por exemplo, dermatite atópica e asma. Entende-se geralmente que IL4 pode formar um complexo de sinalização com receptores heterodiméricos, subunidade a e yc do receptor de IL4 (IL4R) ou subunidade alfa-1 do receptor de IL4R e IL13 (IL13R). IL13 pode formar um complexo de sinalização com os receptores heterodiméricos IL4Ra e IL13Ra1. Domínios extracelulares de IL4Ra ou IL13Ra1 podem se ligar a IL4 e/ou IL13 e reduzir as concentrações livres de citocinas, diminuindo assim os sinais e sintomas
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2/55 clínicos associados à dermatite, asma e outros distúrbios.
[0004] Espécies de animais de companhia, tais como gatos, cães e cavalos, sofrem de muitas doenças alérgicas semelhantes às doenças alérgicas humanas, incluindo dermatite atópica e asma. Permanece a necessidade, portanto, por métodos e compostos que possam ser utilizados especificamente para ligar IL4 e/ou IL13 a animais de companhia para tratar condições induzidas por IL4/IL13 e para reduzir a atividade de sinalização de IL4/IL13.
SUMÁRIO
[0005] Em algumas modalidades, é fornecido um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, que compreende um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R e um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R, em que os polipeptídeos IL13R e IL4R são derivados de uma espécie de animal de companhia.
[0006] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende a fórmula (I) IL13R-L1-IL4R-L2-FP ou a fórmula (II) IL4R-L1-IL13R-L2-FP, em que:
a. IL13R é um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R derivado de espécies de animais de companhia,
b. IL4R é um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R derivado de espécies de animais de companhia,
c. L1 é um primeiro ligante opcional,
d. L2 é um segundo ligante opcional, e
e. FP é um parceiro de fusão.
[0007] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R se liga a IL13 de uma espécie de animal de companhia com uma constante de dissociação (Kd) inferior a 5 x 10-6 M, inferior a 1 x 10 6 M, inferior a 5 x 10-7 M, inferior a 1 x 10-7 M, inferior a 5 x 10-8 M, inferior a 1 x 10’8 M, inferior a 5 x 10-9 M, inferior a 1 x 10-9 M, inferior a 5 x 10 10 M, inferior a 1 x 10 10 M, inferior a 5 x 10-11 M, inferior a 1 x 10-11 M,
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3/55 inferior a 5 x 10-12 M, ou inferior a 1 x 10-12 M, conforme medido por interferometria de biocamada.
[0008] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R se liga a IL4 de uma espécie de animal de companhia com uma constante de dissociação (Kd) inferior a 5 x 10-6 M, inferior a 1 x 10 6 M, inferior a 5 x 10-7 M, inferior a 1 x 10-7 M, inferior a 5 x 10-8 M, inferior a 1 x 10’8 M, inferior a 5 x 10-9 M, inferior a 1 x 10-9 M, inferior a 5 x 10 10 M, inferior a 1 x 10 10 M, inferior a 5 x 10-11 M, inferior a 1 x 10-11 M, inferior a 5 x 10-12 M, ou inferior a 1 x 10-12 M, conforme medido por interferometria de biocamada.
[0009] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R reduz a sinalização de IL13 e/ou IL4 nas espécies de animais de companhia.
[0010] Em algumas modalidades, a espécie de animal de companhia é canina, felina ou equina.
[0011] Em algumas modalidades, o domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R é pelo menos 85% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R é pelo menos 90% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R é pelo menos 95% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R é pelo menos 98% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36.
[0012] Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo
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4/55
IL13R compreende uma cisteína em uma posição correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 22, correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 24, ou correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, o domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R compreende uma cisteína na posição 18 de SEQ ID NO: 22, na posição 18 de SEQ ID NO: 24, na posição 18 de SEQ ID NO: 26, na posição 15 de SEQ ID NO: 32, na posição 15 de SEQ ID NO: 34, ou na posição 15 de SEQ ID NO: 36. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 e SEQ ID NO: 36. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24 e SEQ ID NO: 26.
[0013] Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R é pelo menos 85% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R é pelo menos 90% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R é pelo menos 95% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R é pelo menos 98% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, e SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R compreende
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5/55 uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, e SEQ ID NO: 27.
[0014] Em algumas modalidades, L1 e L2, se presentes, cada um compreende, independentemente, uma sequência de aminoácidos selecionada de G, GG, GGG, S, SS, SSS, GS, GSGS (SEQ ID NO: 38), GSGSGS (SEQ ID NO: 39), GGS, GGSGGS (SEQ ID NO: 40), GGSGGSGGS (SEQ ID NO: 41), GGGS (SEQ ID NO: 42), GGGSGGGS (SEQ ID NO: 43), GGGSGGGSGGGS (SEQ ID NO: 44), GSS, GSSGSS (SEQ ID NO: 45), GSSGSSGSS (SEQ ID NO: 46), GGSS (SEQ ID NO: 47), GGSSGGSS (SEQ ID NO: 48), e GGSSGGSSGGSS (SEQ ID NO: 49).
[0015] Em algumas modalidades, o parceiro de fusão é selecionado a partir de um Fc, albumina e um fragmento de ligação a albumina. Em algumas modalidades, o Fc é (a) uma região constante de cadeia pesada canina selecionada a partir de uma região constante de IgG-A, IgG-B, IgG-C, e IgG-D; (b) uma região constante de cadeia pesada felina selecionada a partir de lgG1, lgG2a, e lgG2b; ou (c) uma região constante de cadeia pesada equina selecionada a partir de uma região constante de IgG 1, lgG2, lgG3, lgG4, lgG5, lgG6 e lgG7.
[0016] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende a sequência selecionada de SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, e SEQ ID NO: 31.
[0017] Em algumas modalidades, é fornecido um ácido nucleico isolado, que codifica um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R descrito acima. Em algumas modalidades, é fornecida uma célula hospedeira, que compreende um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R descrito acima. Em algumas modalidades, é fornecido um método de produção de um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, que compreende cultivar
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6/55 uma tal célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, descrito acima, e isolar o polipeptídeo contíguo. Em algumas modalidades, é fornecida uma composição farmacêutica, que compreende um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, descrito aqui, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0018] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de uma espécie de animal de companhia tendo uma condição induzida por IL13 ou IL4, compreendendo administrar à espécie de animal de companhia uma quantidade terapeuticamente eficaz de um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, descrito aqui, ou uma composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, descrito aqui. Em algumas modalidades, a espécie de animal de companhia é canina, felina ou equina. Em algumas modalidades, a condição induzida por IL13 e/ou IL4 é uma condição pruriginosa ou alérgica, tal como dermatite atópica, prurido, asma, psoríase, escleroderma ou eczema.
[0019] Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou a composição farmacêutica é administrado de forma parenteral. Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou a composição farmacêutica é administrado por uma via intramuscular, uma via intraperitoneal, uma via intracérebroespinhal, uma via subcutânea, uma via intra-arterial, uma via intrassinovial, uma via intratecal, ou uma via de inalação.
[0020] Em algumas modalidades, o método compreende ainda a administração de um inibidor de Jak, um inibidor de P13K, um inibidor de AKT, ou um inibidor de MAPK. Em algumas modalidades, o método compreende ainda a administração de um ou mais anticorpos selecionados de um anticorpo anti-IL17, um anticorpo anti-IL31, um anticorpo anti-TNFa, um anticorpo antiCD20, um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-CD25, um anticorpo anti-IL4, um anticorpo anti-IL13, um anticorpo anti-IL23, um anticorpo anti-lgE, um anticorpo anti-CD11a, um
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7/55 anticorpo anti-IL6R, um anticorpo anti-a4-lntergrina, um anticorpo antiIL12, um anticorpo anti-IL1 β, e um anticorpo anti-BlyS.
[0021] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de redução da atividade de sinalização de IL13 e/ou IL4 em uma célula, compreendendo expor a célula a um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou composição farmacêutica, descrita aqui, sob condições permissivas para a ligação do polipeptídeo contíguo a IL13 e/ou IL4, desse modo (a) reduzir a ligação de IL4 e/ou IL13 ao receptor de IL13 nativo e/ou receptor de IL4 nativo, e reduzir a sinalização mediada por IL13 e/ou IL4. Em algumas modalidades, a célula é exposta ao polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou à composição farmacêutica ex vivo. Em algumas modalidades, a célula é exposta ao polipeptídeo contíguo ou à composição farmacêutica in vivo. Em algumas modalidades, a célula é uma célula canina, uma célula felina ou uma célula equina.
[0022] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos para detectar IL13 ou IL4 em uma amostra de uma espécie de animal de companhia, compreendendo contatar a amostra com um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou uma composição farmacêutica descrita aqui sob condições permissivas para ligação do polipeptídeo contíguo a IL13 e/ou IL4, e detectar se um complexo é formado entre o polipeptídeo contíguo e IL13 e/ou IL4 na amostra. Em algumas modalidades, a amostra é uma amostra biológica obtida de um canino, felino ou equino. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0023] A FIG. 1 é um gráfico da ligação sequencial de IL4R-IL13RFc canino a IL4 e IL13 caninas ou IL13 e IL4 caninas usando concentrações de 30 pg/mL de IL4 e IL13 em PBS.
[0024] A FIG. 2 é um gráfico da ligação sequencial de IL13R-IL4RFc a IL4 e IL13 caninas ou IL13 e IL4 caninas usando concentrações de 30 pg/mL de IL4 e IL13 em PBS.
[0025] A FIG. 3 é um gráfico da atividade de IL4 canina neutralizante
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8/55 de IL4R-IL13R-Fc canino em um ensaio de proliferação de células TF1.
No ensaio foi utilizada IL4 canina (50 ng/mL ou 3,85 nM).
DESCRIÇÃO DAS SEQUÊNCIAS
[0026] A Tabela 1 fornece uma listagem de certas sequências aqui referenciadas.
| Tabela 1: Descrição das Sequências | ||
| SEQ ID NO: | SEQUÊNCIAS | DESCRIÇÃO |
| 1 | MGLTSQLIPTLVCLLALTSTFVHGHNFNITIKEIIKMLNIL- TARNDSCMELTVDVFTAP- KNTSDKEIFCRAATVLRQIYTHNCSNRYLRGLYRNLSSMANKT CSMNEIKKSTLKDFLERLKVIMQKKYYRH | Canis lupus precursor de interleucina-4 |
| 2 | MDLTSQLIPALVCLLAFTSTFVHGQNFNNTLKEIIKTLNIL- TARNDSCMELTMDVLAAP- KNTSDKEIFCRATTVLRQIYTHHNCSTKFLKGLDRNLSSMANR TCSVNEVKKCTLKDFLERLKAIMQKKYSKH | Fells catus precursor de interleucina-4 |
| 3 | MGLTYQLIPALVCLLACTSNFIQGCKYDITLQEIIKTLNNLT- DGKGKNSCMELTVADAFAG- PKNTDGKEICRAAKVLQQLYKRHDRSLIKECLSGLDRNLKGMA NGTCCTVNEAKKSTLKDFLERLKTIMKEKYSKC | Equus caballus precursor de interleucina-4 |
| 4 | MALWLTVVIALTCLGGLASPSPVTPSPTLKELI- EELVNITQNQASLCNGSMVWSVNLTAGMY- CAALESLINVSDCSAIQRTQRMLKALCSQKPAAGQISSERSRD TKIEVIQLVKNLLTYVRGVYRHGNFR | Canis lupus precursor de interleucina-13 |
| 5 | MWFLDSTRQSGDQGGRRHTWPIKATARGQGHK- PLSLGQPTCPLLAPPVLALGSMALWLTVVI- ALTCLGGLASPGPHSRRELKELIEELVNITQNQVSLCNGSMVW SVNLTTGMYCAALESLINVSDCTAIQRTQRMLKALCTQKPSA- GQTASERSRDTKIEVIQLVKNLLNHLRRNFRHGNFK | Fells catus precursor de interleucina-13 |
| 6 | MALWLTAVIALACLGGLASPAPLPSS- MALKELIKELVNITQNQAPLCNGSMVWSVNLTADTY- CRALESLSNVSTCSAIQNTRKMLTKLCPHQLSAGQVSSERAR DTKIEVIVLVKDLLKNLRKIFHGGKHVDA | Equus caballus precursor de interleucina-13 |
| 7 | MGRLCSGLTFPVSCLVLVWVASSGSVKVLHEPSCFSDYISTSVCQWKMDHPTNCSAELRL- SYQLDFMGSENHTCVPENREDSVCVCSMPIDDAVEADVYQLD LWAGQQLLWSGSFQPSKHVKPRTPGN- LTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHL- HSELTYMVNVSNDNDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGA SYSARVRAWAQTYNSTWSDWSPSTTWLNYYEP- WEQHLPLGVSIS- CLVILAICLSCYFSIIKIKKGWWDQIPNPAHSPLVAIVIQDSQVSL WGKRSRGQEPAKCPHWKTCLTKLL- PCLLEHGLGREEESPKTAKNGPLQGPGKPAW- CPVEVSKTILWPESISVVQCVELSEAPVDNEEEEEVEEDKRSL CPSLEGSGGSFQEGREGIVARL- TESLFLDLLGGENGGFCPQGLEESCLPPPSGSVGAQMP- WAQFPRAGPRAAPEGPEQPRRPESALQASPTQSAGSSAFPE PPPVVTDNPAYRSFGSFLGQSSDPGDGDSDPELADRPGEADPGIPSAPQPPEP- PAALQPEPESWEQILRQSVLQHRAAPAPGPGPGSGYREFTCA | Canis lupus subunidade alfa do receptor de interleucina-4 |
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| VKQGSAPDAGGPGFGPSGEAGYKAFCSLLPG- GATCPGTSGGEAGSGEGGYKPFQSLTPGCP- GAPTPVPVPLFTFGLDTEPPGSPQDSLGAGSSPEHLGVEPAG KEEDSRKTLLAPEQATDPLRDDLASSIVYSALTCH- LCGHLKQWHDQEERGKAHIVP- SPCCGCCCGDRSSLLLSPLRAPNVLPGGVLLEASLSPASLVPS GVSKEGKSSPFSQPASSSAQSSSQTPKKLAVLSTEPTCMSAS | ||
| 8 | MGRLCSGLTFPVSCLILMWAAGSGSVKVLRAPTCFSDYF- STSVCQWNMDAPTNCSAELRL- SYQLNFMGSENRTCVPENGEGAACACSMLMDDFVEADVYQL HLWAGTQLLWSGSFKPSSHVKPRAPGN- LTVHPNVSHTWLLRWSNPYPPENHL- HAELTYMVNISSEDDPTDVSVCASGFLCHLLGLRRVETGAPGA RLPPWLCAPRPRRVPGSQCAVISCCRWVLIALTSRG- GRWRLTPGLRSQTRYVSVAEGLF- GATPRVLCPGTQAGLASAAREQMSPDPSAFHSIDYEPWEQHL PLGVSISCLVILAVCLSCYLSVIKIKKEWWDQIP- NPAHSHLVAIVIQDPQVSLWGKRS- RGQEPAKCPHWKTCLRKLLPCLLEHGMERKEDPSKIARNGPS QCSGKSAWCPVEVSKTILWPESISVVRCVELLEAPVE- SEEEEEEEEDKGSFCP- SPVNLEDSFQEGREGIAARLTESLFMDLLGVEKGGFGPQGSL ESWFPPPSGSAGAQMPWAEFPGPGPQEA- SPQGKEQPFDPRSDPLATLPQSPAS- PTFPETPPVVTDNPAYRSFGTFQGRSSGPGECDSGPELAGRL GEADPGIPAAPQPSEPPSALQPEAETWEQILRQRVLQHR- GAPA- PAPGSGYREFVCAVRQGSTQDSGVGDFGPSEEAGYKAFSSL LTSGAVCPESGGEAGSGDGGYKPFQSLTPGCP- GAPAPVPVPLFTFGLDAEPPHCPQD- SPLPGSSPEPAGKAQDSHKTPPAPEQAADPLRDDLASGIVYS ALTCHLCGHLKQCHGQEEGGEAHPVASPCCGCCCGDRS- SPLVSPLRAPDPLPGGVPLEASLSPASPAPLAVSEEGPPSLCF QPALSHAHSSSQTPKKVAMLSPEPTCTMAS | Felis catus subunidade alfa do receptor de interleucina-4 |
| 9 | MGCLCPGLTLPVSCLILVWAAGSGSVKVLHLTACFSDYISASTCEWKMDRPTNCSAQLRL- SYQLNDEFSDNLTCIPENREDEVCVCRMLMDNIVSEDVYELDL WAGNQLL- WNSSFKPSRHVKPRAPQNLTVHAISHTWLLTWSNPYPLK- NHLWSELTYL- VNISKEDDPTDFKIYNVTYMDPTLRVTASTLKSRATYSARVKAR AQNYNSTWSEWSPSTTWHNYYEQPLEQRLPLGVSISCVVI- LAICLSCYFSIIKIKKEW- WDQIPNPAHSPLVAIVLQDSQVSLWGKQSRGQEPAKCPRWK TCLTKLLPCLLEHGLQKEEDSSKTVRNGPFQSPGKSAWHT- VEVNHTILRPEIIS- VVPCVELCEAQVESEEEEVEEDRGSFCPSPESSGSGFQEGR EGVAARLTESLFLGLLGAENGALGESCLLPPLGSAHMP- WARISSAGPQE- AASQGEEQPLNPESNPLATLTQSPGSLAFTEAPAVVADNPAY RSFSNSLSQPRGPGELDSDPQLAEHLGQVDPSIP- SAPQPSEPPTALQPEPET- WEQMLRQSVLQQGAAPAPASAPTGGYREFAQAVKQGGGAA GSGPSGEAGYKAFSSLLAGSAVCPGQSGVEASSGEG- GYRPYESPDP- GAPAPVPVPLFTFGLDVEPPHSPQNSLLPGGSPELPGPEPTV KGEDPRKPLLSAQQATDSLRDDLGSGIVYSALTCH- LCGHLKQCHGQEE- HGEAHTVASPCCGCCCGDRSSPPVSPVRALDPPPGGVPLEA GLSLASLGSLGLSEERKPSLFFQPAPGNAQSSSQTPLTVAMLSTGPTCTSAS | Equus caballus subunidade alfa do receptor de interleucina-4 |
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| 10 | MERPAR- LCGLWALLLCAAGGRGGGVAAPTETQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWDPPEGASP- NCTLRYFSHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCS TNESDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVWHNL- SYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYY- WHSSLGKILQCEDIYREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIV VKDNAGKIRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNS- QTETNDIFYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTV RIRVRTNKLCYEDDKLWSNWSQAMSIGENTDPTFY- ITMLLATPVIVAGAIIVLLLYLKRL- KIIIFPPIPDPGKIFKEMFGDQNDDTLHWRKYDIYEKQTKEETDS VVLIENLKKASQ | Canis lupus subunidade alfa-1 do receptor de interleucina-13 |
| 11 | MMTKCSSDRNVFKRKWFLF- PASQYTFRPIHQARPCEVPAVHLEPSPPWEV- GLGLLNLESEFRKLGLRGRRLAAAPPDSRAEAASQTQPPVTN LSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYFSHFDNKQDK- KIAPETHRSKEVPLNER- ICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVW HNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYYWHSSLGKILQCENI- YREGQHIGCSFALTNLKDSS- FEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQN GNLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETHDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGILPDTLNTVRIRVRTNK LCYEDDRLWSNWSQAMSIGENTDPTFYITMLLATPVIVAGAII- VLLLYLKRL- KIIIFPPIPDPGKIFKEMFGDQNDDSLHWKKYDIYEKQTKEETDS VVLIENASQ | Felis catus subunidade alfa-1 do receptor de interleucina-13 |
| 12 | MYFLCLIWTESQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWNPPEGVSP- NCSLWYFSHFGNKQDK- KIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCISP PEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWLPGKNASPDTNY- TLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTEVKDSIFEQHSVQIMVKDNAGK IRPFFNIVPLTSHVKPDPPHIKKLFFQNGDLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETR- DIFSVEEAKCQNPEFEGDLEGTICFMVPGVLPDTVNTVRIRVKT NKLCYEDDKLWSNWSQAMSIGKKADPTFYIAMLLIIPVIVAGAIIVLLLYLKRLKIIM- FPPIPDPGKIFKEMFGDQNDDTLHWKKYDIYEKQTKEETDSVV LIENLKRASQ | Equus caballus subunidade alfa-1 do receptor de interleucina-13 |
| 13 | TETQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPL- NERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQ CVWHNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALT- NLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIK RLFFQNGNLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSIGENTDPTGGGSGSGSVKVLHEP- SCFSDYISTSVCQWKMDHPT- NCSAELRLSYQLDFMGSENHTCVPENREDSVCVCSMPIDDAV EADVYQLDLWAGQQLLWSGSFQPSKHVKPRTPGN- LTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHL- HSELTYMVNVSNDNDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGA SYSARVRAWAQTYNSTWSDWSPSTTWLNYYEPKREN- GRVPRPPDCPKCPAPEMLGG- PSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDG KQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCK- | Canis lupus IL13R-IL4R-FC (sem sequência de sinal) |
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| VNN- KALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLI KDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLD- EDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVM- HEALHNHYTQESLSHSPGK | ||
| 14 | SGSVKVLHEPSCFSDYISTSVCQWKMDHPTNCSAELRL- SYQLDFMGSENHTCVPEN- REDSVCVCSMPIDDAVEADVYQLDLWAGQQLLWSGSFQPSK HVKPRTPGNLTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHL- HSELTYMVNVSND- NDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGASYSARVRAWAQTY NSTWSDWSPSTTWLNYYEPGGGSGTETQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWDPPEGASPNCT- LRYFSHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNE SDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWL- PGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGK IRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSI- GENTDPTFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDIL- RITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQ QFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLP- SPIERTISKARGRAHKPSVYVLPP- SPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRM TPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVM- HETLQNHYTDLSLSHSPGK | Canis lupus IL4R-IL13R-lgGA (sem sequência de sinal) |
| 15 | SGSVKVLHEPSCFSDYISTSVCQWKMDHPTNCSAELRL- SYQLDFMGSENHTCVPEN- REDSVCVCSMPIDDAVEADVYQLDLWAGQQLLWSGSFQPSK HVKPRTPGNLTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHL- HSELTYMVNVSND- NDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGASYSARVRAWAQTY NSTWSDWSPSTTWLNYYEPGGGSGTETQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWDPPEGASPNCT- LRYFSHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNE SDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWL- PGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGK IRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSIGENTDPTPKREN- GRVPRPPDCPKCPAPEMLGG- PSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDG KQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNN- KALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLI KDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLD- EDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVM- HEALHNHYTQESLSHSPGK | Canis lupus IL4R-IL13R-lgGB (sem sequência de sinal) |
| 16 | SGSVKVLHEPSCFSDYISTSVCQWKMDHPTNCSAELRL- SYQLDFMGSENHTCVPEN- REDSVCVCSMPIDDAVEADVYQLDLWAGQQLLWSGSFQPSK HVKPRTPGNLTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHL- HSELTYMVNVSND- NDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGASYSARVRAWAQTY NSTWSDWSPSTTWLNYYEPGGGSGTETQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWDPPEGASPNCT- LRYFSHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNE | Canis lupus IL4R-IL13R-lgGC (sem sequência de sinal) |
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| SDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGK IRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSI- GENTDPTAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGG- PSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDS KQVQTANTQPREEQSNGTYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEE- IISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEID VEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLD- EDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVM- HEALHNHYTQISLSHSPGK | ||
| 17 | SGSVKVLHEPSCFSDYISTSVCQWKMDHPTNCSAELRL- SYQLDFMGSENHTCVPEN- REDSVCVCSMPIDDAVEADVYQLDLWAGQQLLWSGSFQPSK HVKPRTPGNLTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHL- HSELTYMVNVSND- NDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGASYSARVRAWAQTY NSTWSDWSPSTTWLNYYEPGGGSGTETQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWDPPEGASPNCT- LRYFSHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNE SDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWL- PGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGK IRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSIGENTDPTPKESTCKCIS- PCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDIL- RITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQ QFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLP- SPIERTISKARGQAHQPSVYVLPP- SPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHT TAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVM- HEALQNHYTDLSLSHSPGK | Canis lupus IL4R-IL13R-lgGD (sem sequência de sinal) |
| 18 | SGSVKVLRAPTCFSDYFSTSVCQWNMDAPTNCSAELRL- SYQLNFMGSENRTCVPENGE- GAACACSMLMDDFVEADVYQLHLWAGTQLLWSGSFKPSSHV KPRAPGNLTVHPNVSHTWLLRWSNPYPPENHL- HAELTYMVNISSEDDPTDVSVCASGFLCHLLGLRRVETGAPGA RLPPWLCAPRPRRVPGSQCAVISCCRWVLIALTSRG- GRWRLTPGLRSQTRYVSVAEGLF- GATPRVLCPGTQAGLASAAREQMSPDPSAFHSIDYEPGGGS GSQTQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDK- KIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPP PEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNY- TLYYWHSSLGKILQCENI- YREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIV PLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQWKNPQNFYSR- CLSYQVEVNNSQTETHDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGILPDTLNTVRIRVRTNK LCYEDDRLWSNWSQAMSIGENTDPT | Felis catus IL4R-IL13R (sem sequência de sinal) |
| 19 | SGSVKVLHLTACFSDYISASTCEWKMDRPTNCSAQLRL- SYQLNDEFSDNLTCIPEN- REDEVCVCRMLMDNIVSEDVYELDLWAGNQLLWNSSFKPSR HVKPRAPQNLTVHAISHTWLLTWSNPYPLKNHLWSELTYL- | Equus caballus IL4R-IL13R (sem sequência de sinal) |
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| VNISKEDDPTDFKI- YNVTYMDPTLRVTASTLKSRATYSARVKARAQNYNSTWSEWS PSTTWHNYYEQPGGGSGTESQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWNPPEGVSPNCSLWYF- SHFGNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNESDN PSILVEKCISPPEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWL- PGKNASPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTEVKDSIFEQHSVQIMVKDNAGK IRPFFNIVPLTSHVKPDPPHIKKLFFQNGDLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETR- DIFSVEEAKCQNPEFEGDLEGTICFMVPGVLPDTVNTVRIRVKT NKLCYEDDKLWSNWSQAMSIGKKADPT | ||
| 20 | MAVLGLLFCLVTFPSCVLSTETQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNESDNP SILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWL- PGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGK IRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSIGENTDPTGGGSGSGSVKVLHEP- SCFSDYISTSVCQWKMDHPT- NCSAELRLSYQLDFMGSENHTCVPENREDSVCVCSMPIDDAV EADVYQLDLWAGQQLLWSGSFQPSKHVKPRTPGN- LTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHL- HSELTYMVNVSNDNDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGA SYSARVRAWAQTYNSTWSDWSPSTTWLNYYEPKREN- GRVPRPPDCPKCPAPEMLGG- PSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDG KQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNN- KALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLI KDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLD- EDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVM- HEALHNHYTQESLSHSPGK | Canis lupus IL13R-IL4R-lgGB (com sequência de sinal) |
| 21 | MAVLGLLFCLVTFPSCVLSSGSVKVLHEPSCFSDY- ISTSVCQWKMDHPTNCSAELRLSYQLD- FMGSENHTCVPENREDSVCVCSMPIDDAVEADVYQLDLWAG QQLLWSGSFQPSKHVKPRTPGN- LTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHLHSELTYMVNVSND- NDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGASYSARVRAWAQTY NSTWSDWSPSTTWLNYYEPGGGSGTETQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWDPPEGASPNCT- LRYFSHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNE SDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWL- PGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGK IRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSIGENTDPTPKREN- GRVPRPPDCPKCPAPEMLGG- PSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDG KQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNN- KALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLI KDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLD- EDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVM- HEALHNHYTQESLSHSPGK | Canis lupus IL4R-IL13R-lgGB (com sequência de sinal) |
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14/55
| 22 | TETQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPL- NERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQ CVWHNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALT- NLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIK RLFFQNGNLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSIGENTDPT | Canis lupus Domínio extracelular de IL13R (sem sequência de sinal) |
| 23 | SGSGSVKVLHEPSCFSDYISTSVCQWKMDHPTNCSAELRL- SYQLDFMGSENHTCVPEN- REDSVCVCSMPIDDAVEADVYQLDLWAGQQLLWSGSFQPSK HVKPRTPGNLTVHPNISHTWLLMWTNPYPTENHL- HSELTYMVNVSND- NDPEDFKVYNVTYMGPTLRLAASTLKSGASYSARVRAWAQTY NSTWSDWSPSTTWLNYYEP | Canis lupus Domínio extracelular de IL4R (sem sequência de sinal) |
| 24 | SQTQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPL- NERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQ CVWHNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCENIYREGQHIGCSFALT- NLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIK RLFFQNGNLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETHDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGILPDTLNTVRIRVRTNK LCYEDDRLWSNWSQAMSIGENTDPT | Felis catus Domínio extracelular de IL13R (sem sequência de sinal) |
| 25 | SGSVKVLRAPTCFSDYFSTSVCQWNMDAPTNCSAELRL- SYQLNFMGSENRTCVPENGE- GAACACSMLMDDFVEADVYQLHLWAGTQLLWSGSFKPSSHV KPRAPGNLTVHPNVSHTWLLRWSNPYPPENHL- HAELTYMVNISSEDDPTDVSVCASGFLCHLLGLRRVETGAPGA RLPPWLCAPRPRRVPGSQCAVISCCRWVLIALTSRG- GRWRLTPGLRSQTRYVSVAEGLF- GATPRVLCPGTQAGLASAAREQMSPDPSAFHSIDYEP | Felis catus Domínio extracelular de IL4R (sem sequência de sinal) |
| 26 | TESQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWNPPEGVSPNCSLWYF- SHFGNKQDKKIAPETHRSKEVPL- NERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCISPPEGDPESAVTELQ CVWHNLSYMKCTWLPGKNASPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTEV- KDSIFEQHSVQIMVKDNAGKIRPFFNIVPLTSHVKPDPPHIKKLF FQNGDLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETR- DIFSVEEAKCQNPEFEGD- LEGTICFMVPGVLPDTVNTVRIRVKTNKLCYEDDKLWSNWSQ AMSIGKKADPT | Equus caballus Domínio extracelular de IL13R (sem sequência de sinal) |
| 27 | SGSVKVLHLTACFSDYISASTCEWKMDRPTNCSAQLRL- SYQLNDEFSDNLTCIPEN- REDEVCVCRMLMDNIVSEDVYELDLWAGNQLLWNSSFKPSR HVKPRAPQNLTVHAISHTWLLTWSNPYPLKNHLWSELTYL- VNISKEDDPTDFKI- YNVTYMDPTLRVTASTLKSRATYSARVKARAQNYNSTWSEWS PSTTWHNYYEQP | Equus caballus Domínio extracelular de IL4R (sem sequência de sinal) |
| 28 | SQTQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPL- NERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQ CVWHNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCENIYREGQHIGCSFALT- NLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIK RLFFQNGNLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETHDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGILPDTLNTVRIRVRTNK | Felino IL13R-IL4R-lgG2 (sem sequência de sinal) |
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15/55
| LCYEDDRLWSNWSQAMSI- GENTDPTGGGSGSSGSVKVLRAPTCFSDYF- STSVCQWNMDAPT- NCSAELRLSYQLNFMGSENRTCVPENGEGAACACSMLMDDF VEADVYQLHLWAGTQLLWSGSFKPSSHVKPRAPGN- LTVHPNVSHTWLLRWSNPYPPENHL- HAELTYMVNISSEDDPTDVSVCASGFLCHLLGLRRVETGAPGA RLPPWLCAPRPRRVPGSQCAVISCCRWVLIALTSRG- GRWRLTPGLRSQTRYVSVAEGLF- GATPRVLCPGTQAGLASAAREQMSPDPSAFHSIDYEPSPKTA STIESKTGECPKCPVPEIPGAPSVFIFPPKPKD- TLSISRTPEVTCLVVDLGPDDSNVQIT- WFVDNTEMHTAKTRPREEQFNSTYRVVSVLPILHQDWLKGKE FKCKVNSKSLPSAMERTISKAKGQPHE- PQVYVLPPTQEELSENKVSVTCLIKGFHPPDIA- VEWEITGQPEPENNYQTTPPQLDSDGTYFLYSRLSVDRSHWQ RGNTYTCSVSHEALHSHHTQKSLTQSPGK | ||
| 29 | SGSVKVLRAPTCFSDYFSTSVCQWNMDAPTNCSAELRL- SYQLNFMGSENRTCVPENGE- GAACACSMLMDDFVEADVYQLHLWAGTQLLWSGSFKPSSHV KPRAPGNLTVHPNVSHTWLLRWSNPYPPENHL- HAELTYMVNISSEDDPTDVSVCASGFLCHLLGLRRVETGAPGA RLPPWLCAPRPRRVPGSQCAVISCCRWVLIALTSRG- GRWRLTPGLRSQTRYVSVAEGLF- GATPRVLCPGTQAGLASAAREQMSPDPSAFHSIDYEPGGGS GSSQTQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDK- KIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPP PEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNY- TLYYWHSSLGKILQCENI- YREGQHIGCSFALTNLKDSSFEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIV PLTSHVKPDPPHIKRLFFQNGNLYVQWKNPQNFYSR- CLSYQVEVNNSQTETHDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGILPDTLNTVRIRVRTNK LCYEDDRLWSNWSQAMSI- GENTDPTSPKTASTIESKTGECPKCPVPEIP- GAPSVFIFPPKPKDTLSISRTPEVTCLVVDLGPDDSNVQITWFV DNTEMHTAKTRPREEQFNSTYRVVSVLPI- LHQDWLKGKEFKCKVNSKSLPSA- MERTISKAKGQPHEPQVYVLPPTQEELSENKVSVTCLIKGFHP PDIAVEWEITGQPEPENNYQTTPPQLDSDGTY- FLYSRLSVDRSHWQRGNTY- TCSVSHEALHSHHTQKSLTQSPGK | Felino IL4R-IL13R-lgG2 (sem sequência de sinal) |
| 30 | TESQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWNPPEGVSPNCSLWYF- SHFGNKQDKKIAPETHRSKEVPL- NERICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCISPPEGDPESAVTELQ CVWHNLSYMKCTWLPGKNASPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTEV- KDSIFEQHSVQIMVKDNAGKIRPFFNIVPLTSHVKPDPPHIKKLF FQNGDLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETR- DIFSVEEAKCQNPEFEGD- LEGTICFMVPGVLPDTVNTVRIRVKTNKLCYEDDKLWSNWSQ AMSIGKKADPTGGGSGSSGSVKVLHLTACFSDYISA- STCEWKMDRPTNCSAQLRL- SYQLNDEFSDNLTCIPENREDEVCVCRMLMDNIVSEDVYELDL WAGNQLL- WNSSFKPSRHVKPRAPQNLTVHAISHTWLLTWSNPYPLK- NHLWSELTYL- VNISKEDDPTDFKIYNVTYMDPTLRVTASTLKSRATYSARVKAR AQNYNSTWSEWSPSTTWHNYYEQPDMSKCPKCPAPELLGG- PSVFIFPPNPKDTLMIS- RTPVVTCVVVNLSDQYPDVQFSWYVDNTEVHSAITKQREAQF NSTYRVVSVLPIQHQDWLSGKEFKCSVTNVGVPQPIS- | Equino IL13R-IL4R-lgG2 (sem sequência de sinal) |
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| RAISRGKGPSRVPQVYVLP- PHPDELAKSKVSVTCLVKDFYPPDISVEWQSNRWPELEGKYS TTPAQLDGDGSYFLYSKLSLETSRWQQVESFTCAVM- HEALHNHYTKTDISESLGK | ||
| 31 | SGSVKVLHLTACFSDYISASTCEWKMDRPTNCSAQLRL- SYQLNDEFSDNLTCIPEN- REDEVCVCRMLMDNIVSEDVYELDLWAGNQLLWNSSFKPSR HVKPRAPQNLTVHAISHTWLLTWSNPYPLKNHLWSELTYL- VNISKEDDPTDFKI- YNVTYMDPTLRVTASTLKSRATYSARVKARAQNYNSTWSEWS PSTTWHNYYEQPGGGSGSTESQPPVTNLSVSVEN- LCTVIWTWNPPEGVSPNCSLWYF- SHFGNKQDKKIAPETHRSKEVPLNERICLQVGSQCSTNESDN PSILVEKCISPPEGDPESAVTELQCVWHNLSYMKCTWL- PGKNASPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTEVKDSIFEQHSVQIMVKDNAGK IRPFFNIVPLTSHVKPDPPHIKKLFFQNGDLYVQW- KNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETR- DIFSVEEAKCQNPEFEGDLEGTICFMVPGVLPDTVNTVRIRVKT NKLCYEDDKLWSNWSQAMSIGK- KADPTDMSKCPKCPAPELLGGPSVFIFPPNPKDTLMIS- RTPVVTCVVVNLSDQYPDVQFSWYVDNTEVHSAITKQREAQF NSTYRVVSVLPIQHQDWLSGKEFKCSVTNVGVPQPIS- RAISRGKGPSRVPQVYVLP- PHPDELAKSKVSVTCLVKDFYPPDISVEWQSNRWPELEGKYS TTPAQLDGDGSYFLYSKLSLETSRWQQVESFTCAVM- HEALHNHYTKTDISESLGK | Equino IL4R-IL13R-lgG2 (sem sequência de sinal) |
| 32 | QPPVTNLSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNER- ICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVW HNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTNLKDSS- FEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQN GNLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETNDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGVLPDTLNTVRIRVRTN KLCYEDDKLWSNWSQAMSI | ECDde IL13Rde pequeno canino |
| 33 | KVLHEPSCFSDYISTSVCQWKMDHPTNCSAELRLSYQLD- FMGSENHTCVPENREDSVCVCSM- PIDDAVEADVYQLDLWAGQQLLWSGSFQPSKHVKPRTPGNLT VHPNISHTWLLMWTNPYPTENHLHSELTYMVNVSND- NDPEDFKVYNVTYMGPT- LRLAASTLKSGASYSARVRAWAQTYNS | ECDde IL4Rde pequeno canino |
| 34 | QPPVTNLSVSVENLCTVIWTWDPPEGASPNCTLRYF- SHFDNKQDKKIAPETHRSKEVPLNER- ICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCTPPPEGDPESAVTELQCVW HNLSYMKCTWLPGRNTSPDTNYTLYYWHSSLGKILQCENI- YREGQHIGCSFALTNLKDSS- FEQHSVQIVVKDNAGKIRPSFNIVPLTSHVKPDPPHIKRLFFQN GNLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETHDI- FYVEEAKCQNSEFEGNLEGTICFMVPGILPDTLNTVRIRVRTNK LCYEDDRLWSNWSQAMSI | ECDde IL13Rde pequeno felino |
| 35 | KVLRAPTCFSDYFSTSVCQWNMDAPTNCSAELRL- SYQLNFMGSENRTCVPENGE- GAACACSMLMDDFVEADVYQLHLWAGTQLLWSGSFKPSSHV KPRAPGNLTVHPNVSHTWLLRWSNPYPPENHL- HAELTYMVNISSEDDPTDVSVCASGFLCHLLGLRRVETGAPGA RLPPWLCAPRPRRVPGSQCAVISCCRWVLIALTSRG- GRWRLTPGLRSQTRYVSVAEGLF- GATPRVLCPGTQAGLASAAREQMSPDPSAFHSIDYEP | ECDde IL4Rde pequeno felino |
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| 36 | QPPVTNLSVSVENLCTVIWTWNPPEGVSPNCSLWYF- SHFGNKQDKKIAPETHRSKEVPLNER- ICLQVGSQCSTNESDNPSILVEKCISPPEGDPESAVTELQCVW HNLSYMKCTWLPGKNASPDTNYTLYYWHSSLG- KILQCEDIYREGQHIGCSFALTEVKDSIF- EQHSVQIMVKDNAGKIRPFFNIVPLTSHVKPDPPHIKKLFFQNG DLYVQWKNPQNFYSRCLSYQVEVNNSQTETR- DIFSVEEAKCQNPEFEGD- LEGTICFMVPGVLPDTVNTVRIRVKTNKLCYEDDKLWSNWSQ AMSI | ECDde IL13Rde pequeno equino |
| 37 | KVLHLTACFSDYISASTCEWKMDRPTNCSAQLRL- SYQLNDEFSDNLTCIPENREDEVCVCRM- LMDNIVSEDVYELDLWAGNQLLWNSSFKPSRHVKPRAPQNLT VHAISHTWLLTWSNPYPLKNHLWSELTYLVNISKEDDPTDFKI- YNVTYMDPTLRVTASTLKS- RATYSARVKA RAQN YN STWSEWSPSTTW Η N YYEQP | ECDde IL4Rde pequeno equino |
DESCRIÇÃO DAS MODALIDADES
[0027] São fornecidos polipeptídeos contíguos que se ligam a IL13 e/ou IL4 canina, IL13 e/ou IL4 felina, e/ou IL13 e/ou IL4 equina. Em algumas modalidades, os polipeptídeos contíguos compreendem um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R e um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R. São fornecidos também métodos de produção ou purificação de polipeptídeos contíguos. São fornecidos métodos de tratamento usando polipeptídeos contíguos para ligação a IL13 e/ou IL4 e inibição da sinalização mediada por IL13 e/ou IL4. Tais métodos incluem, porém não são limitados a, métodos de tratamento das condições induzidas por IL13 e/ou IL4 em espécies de animais de companhia. São fornecidos também métodos de detecção de IL13 e/ou IL4 em uma amostra de uma espécie de animal de companhia.
[0028] Para a conveniência do leitor, são fornecidas as seguintes definições dos termos utilizados aqui.
[0029] Conforme utilizado aqui, os termos numéricos como Kd são calculados com base em medições científicas e, portanto, estão sujeitos a um erro de medição apropriado. Em alguns exemplos, um termo numérico pode incluir valores numéricos que são arredondados à figura significativa mais próxima.
[0030] Conforme usado aqui, “um” ou “uma” significa “pelo menos
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18/55 um” ou “um ou mais”, a menos que de outro modo especificado. Conforme usado aqui, o termo “ou” significa “e/ou”, a menos que especificado de outro modo. No contexto de uma reivindicação dependente múltipla, o uso de “ou”, ao se referir a outras reivindicações, refere-se apenas àquelas reivindicações da alternativa.
Polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R
[0031] São fornecidos novos polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R, por exemplo, polipeptídeos contíguos que se ligam a IL13 e/ou IL4 canina, IL13 e/ou IL4 felina, e/ou IL13 e/ou IL4 equina.
[0032] “Sequência de aminoácidos” significa uma sequência de resíduos de aminoácidos em um peptídeo ou proteína. Os termos “polipeptídeo” e “proteína” são usados alternadamente para se referir a um polímero de resíduos de aminoácidos e não se limitam a um comprimento mínimo. Tais polímeros de resíduos de aminoácidos podem conter resíduos de aminoácidos naturais ou não naturais e incluem, porém não se limitam a, peptídeos, oligopeptídeos, dímeros, trímeros, e multímeros de resíduos de aminoácidos. Tanto as proteínas de comprimento completo como os seus fragmentos são abrangidos pela definição. Os termos também incluem modificações pós-expressão do polipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação, fosforilação e similares. Além disso, para fins da presente descrição, um “polipeptídeo” referese a uma proteína que inclui modificações, tais como deleções, adições e substituições (geralmente de natureza conservadora), à sequência nativa, desde que a proteína mantenha a atividade desejada. Estas modificações podem ser deliberadas, como através de mutagênese dirigida ao local, ou podem ser acidentais, tais como através de mutações de hospedeiros que produzem as proteínas ou erros devido à amplificação por PCR.
[0033] O termo “polipeptídeo contíguo” aqui é utilizado para significar uma sequência ininterrupta de aminoácidos. Um polipeptídeo contíguo é
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19/55 tipicamente traduzido a partir de uma única sequência contínua de DNA. Isso pode ser feito por engenharia genética, por exemplo, removendo o códon de parada da sequência de DNA da primeira proteína e, em seguida, anexando a sequência de DNA da segunda proteína na estrutura, de modo que a sequência de DNA seja expressa como uma única proteína. Tipicamente, isto é realizado por clonagem de um cDNA em um vetor de expressão da estrutura com um gene existente.
[0034] “IL4R”, conforme usado aqui, é um polipeptídeo compreendendo a totalidade ou um fragmento da subunidade alfa do receptor de IL4 que se liga a IL-4.
[0035] Por exemplo, “IL4R” refere-se a um polipeptídeo IL4R de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos como primatas (por exemplo, humanos e macacos cynomolgus), roedores (por exemplo, camundongos e ratos), e animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e equinos), a menos que de outro modo indicado. Em algumas modalidades, IL4R é um fragmento de domínio extracelular que se liga a IL4. Em algumas tais modalidades, o IL4R pode ser referido como um domínio extracelular (ECD) de IL4R. Em algumas modalidades, IL4R compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37.
[0036] “IL13R”, conforme utilizado aqui, é um polipeptídeo compreendendo a totalidade ou uma parte da subunidade alfa-1 do receptor de IL13 que se liga a IL-13.
[0037] Por exemplo, “IL13R” refere-se a um polipeptídeo IL13R de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos como primatas (por exemplo, humanos e macacos cynomolgus), roedores (por exemplo, camundongos e ratos), e animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e equinos), a menos que de outro modo indicado. Em algumas modalidades, IL13R é um fragmento de domínio extracelular que se liga a IL13.
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Em algumas tais modalidades, o IL13R pode ser referido como um domínio extracelular (ECD) de IL13R. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL13R compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36.
[0038] O termo “espécie de animal de companhia” refere-se a um animal adequado para ser um companheiro para seres humanos. Em algumas modalidades, uma espécie de animal de companhia é um pequeno mamífero, como um canino, felino, cão, gato, cavalo, coelho, furão, porquinho da índia, roedor, etc. Em algumas modalidades, uma espécie de animal de companhia é um animal de fazenda, tal como um cavalo, vaca, porco, etc.
[0039] Um “domínio extracelular” (“ECD”) é a porção de um polipeptídeo que se estende além do domínio transmembranar para o espaço extracelular. O termo “domínio extracelular”, conforme usado aqui, pode compreender um domínio extracelular completo ou pode compreender um domínio extracelular truncado, com falta de um ou mais aminoácidos, que se liga ao seu ligante. A composição do domínio extracelular pode depender do algoritmo utilizado para determinar quais aminoácidos estão na membrana. Diferentes algoritmos podem prever, e diferentes sistemas podem expressar, diferentes domínios extracelulares para uma dada proteína.
[0040] Um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R pode compreender um domínio extracelular completo ou um domínio extracelular de IL4R truncado que se liga a IL4. Conforme usado aqui, os termos “domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R”, “ECD de IL4R”, e termos similares, referem-se a um polipeptídeo IL4R que não compreende um domínio transmembranar ou domínio citoplasmático, mesmo que o termo siga uma palavra de transição aberta, tal como “compreendendo”,
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21/55 “compreende” e similares. Em algumas modalidades, um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R é um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R derivado de uma espécie de animal de companhia. Por exemplo, em algumas modalidades, um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R é derivado de IL4R canino, IL4R felino, ou IL4R equino. Em algumas modalidades, um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25 ou SEQ ID NO: 27, ou qualquer seu fragmento. Em algumas modalidades, um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37, ou qualquer seu fragmento.
[0041] Um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R pode compreender um domínio extracelular completo ou um domínio extracelular de IL13R truncado que se liga a IL13. Conforme usado aqui, os termos “domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R,” “ECD de IL13R” e termos similares, referem-se a um polipeptídeo IL13R que não compreende um domínio transmembranar ou domínio citoplasmático, mesmo que o termo siga uma palavra de transição aberta, tal como “compreendendo”, “compreende” e similares. Em algumas modalidades, um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R é um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R derivado de uma espécie de animal de companhia. Por exemplo, em algumas modalidades, um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R é derivado de IL13R canino, IL13R felino, ou IL13R equino. Em algumas modalidades, um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24 ou SEQ ID NO: 26, ou qualquer seu fragmento. Em algumas modalidades, um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36, ou qualquer seu fragmento.
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[0042] Os termos “polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R” e “polipeptídeo contíguo IL4R/IL13R” são usados alternadamente para se referir a um polipeptídeo contíguo compreendendo um polipeptídeo IL13R e um polipeptídeo IL4R, em que os termos não são indicativos da ordem na qual os polipeptídeos IL13R e IL4R aparecem no polipeptídeo contíguo, a menos que a ordem seja indicada de outra forma. Por exemplo, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou um polipeptídeo contíguo IL4R/IL13R pode se referir a um polipeptídeo IL4R precedido em sequência ou seguido em sequência por um polipeptídeo IL13R. Além disso, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou um polipeptídeo contíguo IL4R/IL13R pode se referir a um polipeptídeo IL13R precedido em sequência ou seguido em sequência por um polipeptídeo IL4R.
[0043] Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende um polipeptídeo IL13R unido a um polipeptídeo IL4R no terminal C do polipeptídeo IL13R ou no terminal N do polipeptídeo IL13R. Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende um polipeptídeo IL4R unido a um polipeptídeo IL13R no terminal C do polipeptídeo IL4R ou no terminal N do polipeptídeo IL4R.
[0044] O polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R da invenção pode compreender um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R e/ou um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R, em que os polipeptídeos são derivados de uma espécie de animal de companhia. Por exemplo, um polipeptídeo contíguo pode compreender um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R de um cão, gato, ou cavalo, e/ou pode compreender um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R de um cão, gato ou cavalo.
[0045] “Tipo selvagem” refere-se a uma versão não mutada de um polipeptídeo que ocorre na natureza, ou um seu fragmento. Um polipeptídeo do tipo selvagem pode ser produzido recombinantemente. Um
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23/55 “ECD de IL13R do tipo selvagem” ou um “ECD de IL4R do tipo selvagem” refere-se a uma proteína que tem uma sequência de aminoácidos que é idêntica à mesma porção de um domínio extracelular de um IL13R ou IL4R que ocorre na natureza.
[0046] Uma “variante” é uma molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo que difere de uma referente molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo por substituições, deleções, e/ou adições de aminoácidos únicos ou múltiplos, e mantém substancialmente pelo menos uma atividade biológica da referente molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo.
[0047] Uma entidade “biologicamente ativa” ou uma entidade com “atividade biológica”, é uma entidade tendo qualquer função relacionada ou associada a um processo metabólico ou fisiológico e/ou tendo funções estruturais, reguladoras ou bioquímicas de uma molécula ocorrendo naturalmente. Fragmentos de polinucleotídeos biologicamente ativos são aqueles que exibem atividade similar, porém não necessariamente idêntica, a uma atividade de um polinucleotídeo da presente invenção. Um polipeptídeo biologicamente ativo ou seu fragmento inclui um polipeptídeo que pode participar de uma reação biológica, incluindo, porém não se limitando a, uma interação ligante-receptor ou ligação antígeno-anticorpo. A atividade biológica pode incluir uma atividade desejada melhorada, ou uma atividade indesejável reduzida. Uma entidade pode demonstrar atividade biológica quando participa de uma interação molecular com outra molécula, tal como hibridização, quando tem valor terapêutico no alívio de uma condição de doença, quando tem valor profilático na indução de uma resposta imune, quando tem valor diagnóstico e/ou prognóstico na determinação da presença de uma molécula, tal como um fragmento biologicamente ativo de um polinucleotídeo que pode ser detectado como único para a molécula de polinucleotídeos e quando pode ser usado como um iniciador em uma reação em cadeia da polimerase (PCR).
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[0048] Conforme usado aqui, “identidade de sequência de aminoácidos percentual (%)” e “homologia”, com respeito a uma sequência de moléculas de ácido nucleico ou polipeptídeos, são definidas como a porcentagem de resíduos de nucleotídeos ou aminoácidos em uma referente sequência que é idêntica a dos resíduos de nucleotídeos ou aminoácidos na específica sequência de moléculas de ácido nucleico ou polipeptídeos, após alinhar as sequências e introduzir intervalos, se necessário, para obter a identidade de sequência percentual máxima e não considerar quaisquer substituições conservadoras como parte da identidade de sequência. O alinhamento para fins de determinação da identidade de sequência percentual pode ser obtido de várias maneiras dentro do conhecimento da técnica, por exemplo, usando software de computador disponível ao público, tal como software BLAST, BLAST-2, ALIGN, ou MEGALINE™ (DNASTAR). Aqueles versados na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para medir o alinhamento, incluindo quaisquer algoritmos necessários para obter o alinhamento máximo ao longo de todo o comprimento das sequências sendo comparadas.
[0049] Em algumas modalidades, uma variante tem pelo menos cerca de 50% de identidade de sequência com a referente molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo após alinhamento das sequências e introdução de intervalos, se necessários, para obter a identidade de sequência percentual máxima e não considerar quaisquer substituições conservadoras como parte da identidade de sequência. Tais variantes incluem, por exemplo, polipeptídeos nos quais um ou mais resíduos de aminoácidos são adicionados, deletados, no terminal N ou C do polipeptídeo. Em algumas modalidades, uma variante tem pelo menos cerca de 50% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 60% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 65% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 70% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 75% de identidade de sequência, pelo menos cerca de
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80% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 85% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 90% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 95% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 98% de identidade de sequência com a sequência do referente ácido nucleico ou polipeptídeo.
[0050] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R com pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36. Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R com pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37.
[0051] Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R compreendendo uma cisteína em uma posição correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 22, em uma posição correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 24, ou em uma posição correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R compreendendo uma cisteína na posição 18 de SEQ ID NO: 22, na posição 18 de SEQ ID NO: 24, na posição 18 de SEQ ID NO: 26, na posição 15 de SEQ ID NO: 32, na posição 15 de SEQ ID NO: 34, ou na posição 15 de SEQ ID NO: 36.
[0052] Uma “mutação pontual” é uma mutação que envolve um único resíduo de nucleotídeo ou aminoácido. A mutação pode ser a perda de um nucleotídeo ou aminoácido, a substituição de um resíduo
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26/55 de nucleotídeo ou aminoácido por outro, ou a inserção de um resíduo de nucleotídeo ou aminoácido adicional.
[0053] Uma substituição de aminoácido pode incluir, porém não se limita à substituição de um aminoácido em um polipeptídeo por outro aminoácido. Substituições exemplares são mostradas na Tabela 2. As substituições de aminoácidos podem ser introduzidas em uma molécula de interesse e os produtos selecionados para uma atividade desejada, por exemplo, ligação ao antígeno retida/melhorada, imunogenicidade reduzida, ou ADCC ou CDC melhoradas ou farmacocinéticas aprimoradas.
Tabela 2
| Resíduo Original | Substituições Exemplares |
| Ala (A) | Vai; Leu; He |
| Arg (R) | Lys; Gin; Asn |
| Asn (N) | Gin; His; Asp; Lys; Arg |
| Asp (D) | Glu; Asn |
| Cys (C) | Ser; Ala |
| Gin (Q) | Asn; Glu |
| Glu (E) | Asp; Gin |
| Giy (G) | Ala |
| His (H) | Asn; Gin; Lys; Arg |
| e (D | Leu; Vai; Met; Ala; Phe; Norleucina |
| Leu (L) | Norleucina; He; Vai; Met; Ala; Phe |
| Lys (K) | Arg; Gin; Asn |
| Met (M) | Leu; Phe;He |
| Phe (F) | Trp; Leu; Vai; He; Ala; Tyr |
| Pro (P) | Ala |
| Ser (S) | Thr |
| Thr (T) | Vai; Ser |
| Trp (W) | Tyr; Phe |
| Tyr (Y) | Trp; Phe; Thr; Ser |
| Vai (V) | He; Leu; Met; Phe; Ala; Norleucina |
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[0054] Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com propriedades comuns da cadeia lateral:
(1) hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Vai, Leu, lie;
(2) hidrofílico neutro: Cys, Ser, Thr, Asn, Gin;
(3) ácido: Asp, Glu;
(4) básico: His, Lys, Arg;
(5) resíduos que influenciam a orientação de cadeia: Gly, Pro;
(6) aromático: Trp Tyr, Phe.
[0055] Substituições não conservadoras implicarão na troca de um membro de uma dessas classes por outra classe.
[0056] Um “parceiro de fusão”, conforme usado aqui, refere-se a um componente adicional de um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, tal como um polipeptídeo adicional, como albumina, um fragmento de ligação à albumina, ou um fragmento de uma molécula de imunoglobulina. Um parceiro de fusão pode compreender um domínio de oligomerização, tal como um domínio Fc de uma imunoglobulina de cadeia pesada. [0057] Um “polipeptídeo de fragmento cristalizável (Fc)” é a porção de uma molécula de anticorpo que interage com moléculas e células efetoras. Compreende as porções terminais C das cadeias pesadas de imunoglobulina. Como usado aqui, um polipeptídeo Fc compreende um fragmento do domínio Fc com uma ou mais atividades biológicas de um polipeptídeo Fc inteiro. Uma “função efetora” do polipeptídeo Fc é uma ação ou atividade realizada no todo ou em parte por qualquer anticorpo em resposta a um estímulo e pode incluir fixação de complemento ou indução por ADCC (citotoxicidade celular dependente de anticorpo).
[0058] O termo “IgX” ou “IgX Fc” significa que a região Fc é derivada de um isótipo de anticorpo particular (por exemplo, IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, etc.), em que “X” indica o isótipo de anticorpo. Assim, “IgG” ou “IgG Fc” indica a região Fc de uma cadeia γ, “IgA” ou “IgA Fc” indica a região Fc de uma cadeia a, “IgD” ou “IgD Fc” indica a região Fc de uma cadeia
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28/55 δ, “IgE” ou “IgE Fc” indica a região Fc de uma cadeia ε, “IgM” ou “IgM Fc” indica a região Fc de uma cadeia μ, etc. Em algumas modalidades, a região IgG Fc compreende CH1, articulação, CH2, CH3 e CL1. “IgXN” ou “IgXN Fc” indica que a região Fc é derivada de uma subclasse particular de isótipo de anticorpo (tal como a subclasse A, B, C ou D de IgG canino; subclasse 1,2a, ou 2b de IgG felino; ou subclasse lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, lgG5, lgG6, ou lgG7, etc. de IgG equino), em que “N” indica a subclasse.
[0059] Em algumas modalidades, as regiões IgX ou IgXN são derivadas de um animal de companhia, tal como um cão, um gato ou um cavalo. Em algumas modalidades, as regiões IgG são isoladas de cadeias pesadas caninas γ, tais como IgGA, IgGB, IgGC ou IgGD. Em alguns exemplos, as regiões IgG Fc são isoladas de cadeias pesadas felinas γ, tais como lgG1, lgG2a ou lgG2b. Em outros exemplos, as regiões IgG são isoladas de cadeias pesadas de equinos γ, tais como IgG 1, lgG2, lgG3, lgG4, lgG5, lgG6 ou lgG7. Os polipeptídeos compreendendo uma região Fc de IgGA, IgGB, IgGC ou IgGD podem prover níveis de expressão mais elevados em sistemas de produção de recombinação.
[0060] Uma “sequência de sinal” refere-se a uma sequência de resíduos de aminoácidos ou polinucleotídeos que os codificam, o que facilita a secreção de um polipeptídeo de interesse e é tipicamente clivada na exportação do polipeptídeo para o exterior da membrana da superfície celular.
[0061] Um “ligante” refere-se a um ou mais resíduos de aminoácidos que conectam um primeiro polipeptídeo a um segundo polipeptídeo. [0062] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante não estrutural rico em glicina, rico em serina, ou rico em Gs flexível. Em algumas modalidades, um ligante compreende os aminoácidos G (Gly) e/ou S (Ser). Por exemplo, um ligante pode compreender G ou uma repetição
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29/55 de G (por exemplo, GG, GGG, etc.); Gs ou uma repetição de GS (por exemplo, GSGS (SEQ ID NO: 38), GSGSGS (SEQ ID NO: 39), etc.); GGS ou uma repetição de GGS (por exemplo, GGSGGS (SEQ ID NO: 40), GGSGGSGGS (SEQ ID NO: 41), etc.); GGGS (SEQ ID NO: 42) ou uma repetição de GGGS (SEQ ID NO: 42) (por exemplo, GGGSGGGS (SEQ ID NO: 43), GGGSGGGSGGGS (SEQ ID NO: 44), etc.); GSS ou uma repetição de GSS (por exemplo, GSSGSS (SEQ ID NO: 45), GSSGSSGSS (SEQ ID NO: 46), etc.); ou GGSS (SEQ ID NO: 47) ou uma repetição de GGSS (SEQ ID NO: 47) (por exemplo, GGSSGGSS (SEQ ID NO: 48), GGSSGGSSGGSS (SEQ ID NO: 49), etc.).
[0063] Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende pelo menos um parceiro de fusão e/ou pelo menos um ligante. Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende uma sequência de sinal opcional, um parceiro de fusão opcional, e pelo menos um ligante opcional. Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R não compreende uma sequência de sinal, um parceiro de fusão, ou um ligante. Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R é traduzido com uma sequência de sinal, porém a sequência de sinal é clivada a partir do polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R.
[0064] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R compreende:
Fórmula (I): IL13R-L1-IL4R-L2-FP ou
Fórmula (II): IL4R-L1-IL13R-L2-FP, em que IL13R é um polipeptídeo de domínio extracelular (ECD) de IL13R derivado de uma espécie de animal de companhia, IL4R é um polipeptídeo de ECD de IL4R derivado de uma espécie de animal de companhia, L1 é um primeiro ligante opcional, L2 é um segundo ligante opcional, e FP é um parceiro de fusão opcional.
[0065] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo
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IL13R/IL4R compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31.
Expressão e Produção do Polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R
[0066] São fornecidas sequências polinucleotídicas que codificam todo ou parte (por exemplo, o domínio extracelular) de um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R com ou sem uma sequência de sinal. Se uma sequência de sinal homóloga (isto é, uma sequência de sinal de IL-4R ou IL13R nativos) não for usada na construção da molécula de ácido nucleico, então outra sequência de sinal pode ser utilizada, por exemplo, qualquer uma das sequências de sinal descritas no PCT US06/02951.
[0067] Tipicamente, a sequência nucleotídica que codifica o polipeptídeo de interesse, tal como um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, é inserida em um vetor de expressão adequado para expressão em uma célula hospedeira selecionada.
[0068] Um “vetor” é um plasmídeo que pode ser usado para transferir sequências de DNA de um organismo para outro ou para expressar um gene de interesse. Um vetor inclui tipicamente uma origem de replicação e sequências reguladoras que regulam a expressão do gene de interesse e podem ou não portar um gene marcador seletivo, tal como um gene de resistência a antibióticos. Um vetor é adequado para a célula hospedeira na qual deve ser expresso. Um vetor pode ser denominado de “vetor recombinante” quando o gene de interesse está presente no vetor.
[0069] Uma “célula hospedeira” refere-se a uma célula que pode ser ou foi um receptor de um vetor ou polinucleotídeo isolado. As células hospedeiras podem ser células procarióticas ou células eucarióticas. As células eucarióticas exemplares incluem células de mamíferos, tais
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31/55 como células animais primatas ou não primatas; células de fungos, como leveduras; células de plantas; e células de insetos. As células de mamíferos exemplares não limitantes incluem, porém não se limitam a, células NSO, células PER.C6® (Crucell), células 293 e células CHO, e seus derivados, tais como células 293-6E, DG44, CHO-S e CHO-K. As células hospedeiras incluem a progênie de uma única célula hospedeira, e a progênie pode não ser necessariamente completamente idêntica (na morfologia ou no complemento de DNA genômico) à célula progenitora original devido à mutação natural, acidental ou deliberada. Uma célula hospedeira inclui células transfectadas in vivo com polinucleotídeo(s) que codifica uma(s) sequência(s) de aminoácidos fornecida aqui.
[0070] O termo “isolado”, conforme usado aqui, refere-se a uma molécula que foi separada de pelo menos algum dos componentes com os quais é normalmente encontrada na natureza ou produzida. Por exemplo, um polipeptídeo é referido como “isolado” quando é separado de pelo menos algum dos componentes da célula em que foi produzido. Quando um polipeptídeo é secretado por uma célula após a expressão, separar fisicamente o sobrenadante contendo o polipeptídeo da célula que o produziu é considerado estar “isolando” o polipeptídeo. Da mesma forma, um polinucleotídeo é referido como “isolado” quando não faz parte do polinucleotídeo maior (tal como, por exemplo, DNA genômico ou DNA mitocondrial, no caso de um polinucleotídeo de DNA) no qual é normalmente encontrado na natureza, ou é separado de pelo menos algum dos componentes da célula em que foi produzido, por exemplo, no caso de um polinucleotídeo de RNA. Assim, um polinucleotídeo de DNA que está contido em um vetor dentro de uma célula hospedeira pode ser referido como “isolado”.
[0071] Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R é isolado usando cromatografia, tal como cromatografia de exclusão por tamanho, cromatografia de troca iônica, cromatografia em
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32/55 coluna de proteína A, cromatografia de interação hidrofóbica, e cromatografia CHT.
[0072] Os termos “marcador” e “marcador detectável” significam um componente ligado a um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R para tornálo detectável. Em algumas modalidades, o marcador é um marcador detectável que pode produzir um sinal detectável por meios visuais ou instrumentais, por exemplo, incorporação de um aminoácido radiorotulado ou ligação a um polipeptídeo com porções de biotinila que podem ser detectadas por avidina marcada (por exemplo, estreptavidina contendo um marcador fluorescente ou atividade enzimática que pode ser detectada por métodos ópticos ou colorimétricos). Exemplos de marcadores para polipeptídeos incluem, porém não se limitam aos seguintes: radioisótopos ou radionuclídeos (por exemplo, 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111 In, 125l, 1311, 177Lu, 166Ho, ou 153Sm); cromogênios, marcadores fluorescentes (por exemplo, FITC, rodamina, fósforos de lantanídeos), marcadores enzimáticos (por exemplo, peroxidase de rábano silvestre, luciferase, fosfatase alcalina); marcadores quimioluminescentes; grupos biotinila; predeterminados epítopos de polipeptídeo reconhecidos por um repórter secundário (por exemplo, sequências de pares de zíperes de leucina, sítios de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, marcadores de epítopo); e agentes magnéticos, tais como quelatos de gadolínio. Exemplos representativos de marcadores comumente empregados em imunoensaios incluem componentes que produzem luz, por exemplo, compostos de acridínio, e componentes que produzem fluorescência, por exemplo, fluoresceína. A este respeito, o próprio componente não pode ser marcado de forma detectável, mas pode se tornar detectável após a reação com outro componente.
Polipeptídeos Contíguo IL13R/IL4R como Armadilhas para Receptores Decoy
[0073] Os polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R da invenção podem
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33/55 funcionar como receptores decoy (chamariz) para capturar IL13 ou IL4 e inibir sua interação com IL13R e IL4R em superfícies celulares. Os receptores decoy, tais como os da invenção, reconhecem seus ligantes com alta afinidade e especificidade, porém são estruturalmente incapazes de sinalizar. Eles competem com os receptores do tipo selvagem pela ligação ao ligante e participam nas interações ligante/receptor, modulando assim a atividade ou o número de receptores em funcionamento e/ou a atividade celular a jusante dos receptores. Os receptores decoy podem atuar como armadilhas moleculares para ligantes agonistas e, desse modo, inibir a ativação do receptor induzido por ligantes.
[0074] “IL13”, conforme usado aqui, refere-se a qualquer IL13 nativa que resulte da expressão e processamento de IL13 em uma célula. O termo inclui IL13 de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tal como primatas (por exemplo, humanos e macacos cynomolgus), e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), e animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e equinos), a menos que de outro modo indicado. O termo também inclui variantes de IL13 ocorrendo naturalmente, por exemplo, variantes de combinação ou variantes alélicas.
[0075] Em algumas modalidades, uma IL13 canina compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, uma IL13 felina compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, uma IL13 equina compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6.
[0076] “IL4”, conforme usado aqui, refere-se a qualquer IL4 nativa que resulte da expressão e processamento de IL4 em uma célula. O termo inclui IL4 de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tal como primatas (por exemplo, humanos e macacos cynomolgus), e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), e animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e equinos), a menos que de outro modo indicado. O termo também inclui variantes de IL4 ocorrendo naturalmente,
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34/55 por exemplo, variantes de combinação ou variantes alélicas.
[0077] Em algumas modalidades, uma IL4 canina compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, uma IL4 felina compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, uma IL4 equina compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.
[0078] A invenção provê polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R como agentes terapêuticos. Os polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R da invenção se ligam a IL13 e/ou IL4, descritos em mais detalhes aqui, que demonstraram estar associados a doenças alérgicas. Em várias modalidades, os polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R podem se ligar a IL13 e IL4 com afinidade muito elevada. Em várias modalidades, os polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R podem interferir na sinalização de IL13 e IL4.
[0079] O termo “afinidade” significa a força da soma total de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um receptor) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um ligante). A afinidade de uma molécula X por seu parceiro Y pode ser geralmente representada pela constante de dissociação (Kd). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, tais como, por exemplo, immunoblot, ELISA KD, KinEx A, interferometria de biocamada (BLI), ou dispositivos de ressonância plasmônica de superfície. [0080] Os termos “Kd,” “Kd,” “Kd ou valor de “Kd, conforme usados alternadamente aqui, referem-se à constante de dissociação de equilíbrio de uma interação fusão - ligante de receptor. Em algumas modalidades, a Kd da molécula de fusão ao seu ligante é medida usando ensaios de interferometria de biocamada empregando um biossensor, tal como um Octet® System (Pall ForteBio LLC, Fremont, CA) de acordo com as instruções do fornecedor. Resumidamente, antígeno biotinilado é ligado à ponta do sensor e a associação da molécula de fusão é monitorada por noventa segundos e a dissociação é monitorada por 600
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35/55 segundos. O tampão para diluições e etapas de ligação é fosfato 20 mM, NaCI 150 mM, pH 7,2. Uma curva em branco do tampão é subtraída para corrigir qualquer desvio. Os dados são ajustados a um modelo de ligação 2:1 usando o software de análise de dados ForteBio para determinar a constante da taxa de associação (kon), a constante da taxa de dissociação (kOff), e a Kd. A constante de dissociação de equilíbrio (Kd) é calculada como a razão de kOff/kOn. O termo “kon” refere-se à constante de taxa para associação de uma molécula X ao seu parceiro Y, e o termo “kOff” refere-se à constante de taxa para dissociação de uma molécula X ou parceiro Y do complexo molécula X / parceiro Y.
[0081] O termo “liga” a uma substância é um termo que é bem entendido na técnica, e os métodos para determinar tal ligação também são bem conhecidos na técnica. Diz-se que uma molécula exibe “ligação” se ela reage, associa-se com, ou tem afinidade por uma célula ou substância em particular, e a reação, associação ou afinidade é detectável por um ou mais métodos conhecidos na técnica, tais como, por exemplo, immunoblot, ELISA KD, KinEx A, interferometria de biocamada (BLI), dispositivos de ressonância plasmônica de superfície, ou etc.
[0082] “Ressonância plasmônica de superfície” indica um fenômeno óptico que permite a análise de interações bioespecíficas em tempo real pela detecção de alterações nas concentrações de proteína dentro de uma matriz biossensora, por exemplo, usando o sistema BIAcore™ (BlAcore International AB, uma empresa GE Healthcare, Uppsala, Suécia e Piscataway, N.J.). Para mais descrições, veja Jonsson et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26.
[0083] “Interferometria de biocamada” refere-se a uma técnica óptica analítica que analisa o padrão de interferência da luz refletida a partir de uma camada de proteína imobilizada em uma ponta de biossensor e uma camada de referência interna. As alterações no número de moléculas ligadas à ponta do biossensor causam mudanças no padrão de
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36/55 interferência, que pode ser medido em tempo real. Um dispositivo exemplar não limitante para interferometria de biocamada é um sistema Octet® (Pall ForteBio LLC). Veja, por exemplo, Abdiche etal., 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277.
[0084] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R se liga a IL13 e/ou IL4 canina, IL13 e/ou IL4 felina, ou IL13 e/ou IL4 equina com uma constante de dissociação (Kd) inferior a 5 x 10 6 M, inferior a 1 x 10-6 M, inferior a 5 x 10-7 M, inferior a 1 x 10-7 M, inferior a 5 x 10-8 M, inferior a 1 x 10-8 M, inferior a 5 x 10-9 M, inferior a 1 x 10-9 M, inferior a 5 x 10 10 M, inferior a 1 x 10 10 M, inferior a 5x 10-11 M, inferior a 1 x 10-11 M, inferior a 5 x 10-12 M, ou inferior a 1 x 10-12 M, conforme medido por interferometria de biocamada. Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R se liga a IL13 e/ou IL4 canina, IL13 e/ou IL4 felina, ou IL13 e/ou IL4 equina com uma Kd entre 5 x 10-6 M e 1 x 10’6 M, entre 5 x 10-6 M e 5 x 10-7 M, entre 5 x 10-6 M e 1 x IO 7 M, entre 5 x 10-6 M e 5 x 10-8 M, 5 x 10-6 M e 1 x 10-8 M, entre 5 x 10’6 M e 5 x 10’9 M, entre 5 x 10-6 M e 1 x 10-9 M, entre 5 x 10-6 M e 5 x 10’1° M, entre 5 x 10’6 M e 1 x 10’1° M, entre 5 x 10’6 M e 5 x 10’11 M, entre 5 x 10-6 M e 1 x 10-11 M, entre 5 x 10-6 M e 5 x 10-12 M, entre 5 x 10-6 M e 1 x 10-12 M, entre 1 x 10-6 M e 5 x 10-7 M, entre 1 x10'6Me1 x IO 7 M, entre 1 x 10-6 M e 5 x 10-8 M, 1 x 10-6 M e 1 x 10-8 M, entre 1 x
10-6 M e 5 x 10-9 M, entre 1 x 10-6 M e 1 x 10-9 M, entre 1 x 10-6 M e 5 x 10’1° M, entre 1 x 10’6 M e 1 x 10’1° M, entre 1 x 10’6 M e 5 x 10’11 M, entre 1 x 10-6 M e 1 x 10-11 M, entre 1 x 10-6 M e 5 x 10-12 M, entre 1 x 10 6 M e 1 x 10-12 M, entre 5 x 10-7 M e 1 x 10-7 M, entre 5 x 10-7 M e 5 x
10-8 M, 5 x IO 7 M e 1 x 10-8 M, entre 5 x 10-7 M e 5 x 10-9 M, entre 5 x IO 7 M e 1 x 10’9 M, entre 5 x 10-7 M e 5 x 10 10 M, entre 5 x 10-7 M e 1 x 10 10 M, entre 5 x 10-7 M e 5 x 10-11 M, entre 5x 10'7M e 1 x 10-11 M, entre 5x10'7Me5x 10-12 M, entre 5 x 10-7 M e 1 x 10-12 M, entre 1 x 10’7 M e 5 x 10’8 M, 1 x 10’7 M e 1 x 10’8 M, entre 1 x 10’7 M e 5 x 10’9
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M, entre 1 χ 10-7 Μ e 1 χ 10-9 Μ, entre 1 χ 10-7 Μ e 5 χ 10-10 Μ, entre 1 χ ΙΟ 7 Μ e 1 χ 10 10 Μ, entre 1 χ 10-7 Μ e 5 χ 1Ο-11 Μ, entre 1 χ 10-7 Μ e 1 χ 1Ο’11 Μ, entre 1 χ 10’7 Μ e 5 χ 10’12 Μ, entre 1 χ 10’7 Μ e 1 χ 10’12 Μ, entre 5 χ 10-8 Μ e 1 χ 10-8 Μ, entre 5 χ 10-8 Μ e 5 χ 10-9 Μ, entre 5x10’ 8 Μ e 1 χ 10’9 Μ, entre 5 χ 10-8 Μ e 5 χ 10-10 Μ, entre 5 χ 10-8 Μ e 1 χ 10 10 Μ, entre 5 χ 10-8 Μ e 5 χ 10-11 Μ, entre 5 χ 10-8 Μ e 1 χ 10-11 Μ, entre χ 10’8 Μ e 5 χ 10’12 Μ, entre 5 χ 10’8 Μ e 1 χ 10’12 Μ, 1 χ 10’8 Μ e 5 χ
10-9 Μ, entre 1 χ 10-8 Μ e 1 χ 10-9 Μ, entre 1 χ 10-8 Μ e 5 χ 10 10 Μ, entre 1 χ 10’8 Μ e 1 χ 1Ο’10 Μ, entre 1 χ 10’8 Μ e 5 χ 10’11 Μ, entre 1 χ 10’8 Μ e 1 χ 10’11 Μ, entre 1 χ 10’8 Μ e 5 χ 10’12 Μ, entre 1 χ 10’8 Μ e 1 χ 10’12
Μ, entre 5 χ 10-9 Μ e 1 χ 10-9 Μ, entre 5 χ 10-9 Μ e 5 χ 10-10 Μ, entre 5 χ 10-9 Μ e 1 χ 10 10 Μ, entre 5 χ 10-9 Μ e 5 χ 10-11 Μ, entre 5 χ 10-9 Μ e 1 χ 10’11 Μ, entre 5 χ 10’9 Μ e 5 χ 10’12 Μ, entre 5 χ 10’9 Μ e 1 χ 10’12 Μ, entre 1 χ 10-9 Μ e 5χ 10 10 Μ, entre 1 χ 10-9 Μ e 1 χ 10 10 Μ, entre 1 χ 10-9 Μ e 5 χ 10-11 Μ, entre 1 χ 10-9 Μ e 1 χ 10-11 Μ, entre 1 χ 10-9 Μ e 5 χ 10’12 Μ, entre 1 χ 10’9 Μ e 1 χ 10’12 Μ, entre 5 χ 1Ο’10 Μ e 1 χ 1Ο’10 Μ, entre 5 χ 1Ο’10 Μ e 5 χ 10’11 Μ, entre, 1 χ 1Ο’10 Μ e 5 χ 10’11 Μ, 1 χ 1Ο’10 Μ e 1 χ 10 11 Μ, entre 1 χ 1Ο’10 Μ e 5 χ 10’12 Μ, entre 1 χ 1Ο’10 Μ e 1 χ 10’12 Μ, entre 5 χ 10’11 Me 1 χ 10’12 Μ, entre 5 χ 10’11 Μ e 5 χ 10’12 Μ, entre 5 χ 10 11 Μ e 1 χ 10-12 Μ, entre 1 χ 10-11 Μ e 5 χ 10-12 Μ, ou entre 1 χ 10-11 Μ e 1 χ 10-12 Μ, conforme medido por interferometria de biocamada. Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R se liga a IL13 e/ou IL4 canina, IL13 e/ou IL4 felina, e/ou IL13 e/ou IL4 equina.
[0085] Para “reduzir” ou “inibir” significa diminuir, reduzir ou interromper uma atividade, função ou quantidade em comparação a uma referência. Em algumas modalidades, por “reduzir” ou “inibir” significa a capacidade de causar uma diminuição geral de 20% ou mais. Em algumas modalidades, por “reduzir” ou “inibir” significa a capacidade de causar uma diminuição geral de 50% ou mais. Em algumas modalidades,
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38/55 por “reduzir” ou “inibir” significa a capacidade de causar uma diminuição geral de 75%, 85%, 90%, 95%, ou mais. Em algumas modalidades, a quantidade observada acima é inibida ou diminuída durante um período de tempo em relação a uma dose de controle (tal como um placebo) durante o mesmo período de tempo. Uma “referência”, conforme usada aqui, refere-se a qualquer amostra, padrão ou nível utilizado para fins de comparação. Uma referência pode ser obtida de uma amostra saudável ou não doente. Em alguns exemplos, uma referência é obtida a partir de uma amostra não doente ou não tratada de um animal de companhia. Em alguns exemplos, é obtida uma referência de um ou mais animais saudáveis de uma espécie particular, que não são o animal que está sendo testado ou tratado.
[0086] O termo “substancialmente reduzido”, conforme usado aqui, indica um grau de redução suficientemente alto entre um valor numérico e um valor numérico de referência, de modo que uma pessoa versada na técnica considere a diferença entre os dois valores como sendo de significância estatística dentro do contexto da característica biológica medida por esses valores. Em algumas modalidades, os valores numéricos substancialmente reduzidos são reduzidos em mais do que cerca de 10%, 15% 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou 100% em comparação ao valor de referência.
[0087] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R pode reduzir a sinalização de IL13 e/ou IL4 em uma espécie de animal de companhia por pelo menos 10%, por pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, ou por 100% em comparação à sinalização de IL13 e/ou IL4 na ausência da molécula de fusão. Em algumas modalidades, a sinalização é medida por uma redução na proliferação celular de TF-1 dependente de IL4. Em algumas
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39/55 modalidades, a redução na sinalização de IL13 e/ou IL4 ou a redução na proliferação é entre 10% e 15%, entre 10% e 20%, entre 10% e 25%, entre 10% e 30%, entre 10% e 35%, entre 10% e 40%, entre 10% e 45%, entre 10% e 50%, entre 10% e 60%, entre 10% e 70%, entre 10% e 80%, entre 10% e 90%, entre 10% e 100%, entre 15% e 20%, entre 15% e 25%, entre 15% e 30%, entre 15% e 35%, entre 15% e 40%, entre 15% e 45%, entre 15% e 50%, entre 15% e 60%, entre 15% e 70%, entre 15% e 80%, entre 15% e 90%, entre 15% e 100%, entre 20% e 25%, entre 20% e 30%, entre 20% e 35%, entre 20% e 40%, entre 20% e 45%, entre 20% e 50%, entre 20% e 60%, entre 20% e 70%, entre 20% e 80%, entre 20% e 90%, entre 20% e 100%, entre 25% e 30%, entre 25% e 35%, entre 25% e 40%, entre 25% e 45%, entre 25% e 50%, entre 25% e 60%, entre 25% e 70%, entre 25% e 80%, entre 25% e 90%, entre 25% e 100%, entre 30% e 35%, entre 30% e 40%, entre 30% e 45%, entre 30% e 50%, entre 30% e 60%, entre 30% e 70%, entre 30% e 80%, entre 30% e 90%, entre 30% e 100%, entre 35% e 40%, entre 35% e 45%, entre 35% e 50%, entre 35% e 60%, entre 35% e 70%, entre 35% e 80%, entre 35% e 90%, entre 35% e 100%, entre 40% e 45%, entre 40% e 50%, entre 40% e 60%, entre 40% e 70%, entre 40% e 80%, entre 40% e 90%, entre 40% e 100%, entre 45% e 50%, entre 45% e 60%, entre 45% e 70%, entre 45% e 80%, entre 45% e 90%, entre 45% e 100%, entre 50% e 60%, entre 50% e 70%, entre 50% e 80%, entre 50% e 90%, entre 50% e 100%, entre 60% e 70%, entre 60% e 80%, entre 60% e 90%, entre 60% e 100%, entre 70% e 80%, entre 70% e 90%, entre 70% e 100%, entre 80% e 90%, entre 80% e 100%, ou entre 90% e 100%.
Composições Farmacêuticas
[0088] Os termos “formulação farmacêutica” e “composição farmacêutica” referem-se a uma preparação que permite que a atividade bio
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40/55 lógica do(s) ingrediente(s) ativo(s) seja eficaz e que não contenha componentes adicionais que sejam inaceitavelmente tóxicos a um paciente ao qual a formulação seria administrada.
[0089] Um “veículo farmaceuticamente aceitável” refere-se a um sólido não tóxico, semissólido, ou carga líquida, diluente, material encapsulate, auxiliar de formulação, ou veículo convencional na técnica para uso com um agente terapêutico que, em conjunto, compreende uma “composição farmacêutica” para administração a um paciente. Um veículo farmaceuticamente aceitável não é tóxico aos receptores nas dosagens e concentrações empregadas e é compatível com outros ingredientes da formulação. O veículo farmaceuticamente aceitável é apropriado para a formulação empregada. Exemplos de veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem alumina; estearato de alumínio; lecitina; proteínas séricas, tais como albumina sérica humana, canina ou outra albumina animal; tampões, tais como tampões fosfato, citrato trometamina ou HEPES; glicina; ácido sórbico; sorbato de potássio; misturas parciais de glicerídeo de ácidos graxos saturados de vegetais; água, sais ou eletrólitos, como sulfato de protamina, fosfato hidrogenado dissódico, fosfato hidrogenado potássico, cloreto de sódio, sais de zinco, silica coloidal, ou trissilicato de magnésio; polivinilpirrolidona, substâncias à base de celulose; polietilenoglicol; sacarose; manitol; ou aminoácidos, incluindo, porém não se limitando a, arginina.
[0090] A composição farmacêutica pode ser armazenada na forma liofilizada. Assim, em algumas modalidades, o processo de preparação inclui uma etapa de liofilização. A composição liofilizada pode então ser reformulada, tipicamente como uma composição aquosa adequada para administração parenteral, antes da administração ao cão, gato ou cavalo. Em outras modalidades, particularmente onde a molécula de fusão é altamente estável à desnaturação térmica e oxidativa, a composição farmacêutica pode ser armazenada como um líquido, isto é, como
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41/55 uma composição aquosa que pode ser administrada diretamente, ou com diluição apropriada, ao cão, gato ou cavalo. Uma composição liofilizada pode ser reconstituída com água para injeção estéril (WFI). Reagentes bacteriostáticos, como álcool benzílico, podem ser incluídos. Assim, a invenção provê composições farmacêuticas na forma sólida ou líquida.
[0091] O pH das composições farmacêuticas pode ser na faixa de cerca de pH 5 a cerca de pH 8, quando administrado. As composições da invenção são estéreis se forem usadas para fins terapêuticos. A esterilidade pode ser obtida por qualquer um dos diversos meios conhecidos na técnica, incluindo filtração através de membranas de filtração estéreis (por exemplo, membranas de 0,2 microns). A esterilidade pode ser mantida com ou sem agentes antibacterianos.
Utilizações de Polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R e Composições Farmacêuticas
[0092] Os polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R ou composições farmacêuticas compreendendo os polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R da invenção podem ser úteis para o tratamento de uma condição induzida por IL13 e/ou IL4. Conforme utilizado aqui, uma condição induzida por “IL13 ou IL4” significa uma doença associada com, causada por, ou caracterizada por, níveis elevados ou distribuição alterada de IL13 ou IL4. Tais condições induzidas por IL13 e/ou IL4 incluem, porém não se limitam a, uma doença pruriginosa ou alérgica. Em algumas modalidades, a condição induzida por IL13 e/ou IL4 é dermatite atópica, prurido, asma, psoríase, escleroderma ou eczema. Uma condição induzida por IL13 ou IL4 pode ser exibida em um animal de companhia, incluindo, porém não se limitando a, caninos, felinos ou equinos.
[0093] Conforme utilizado aqui, “tratamento” é uma abordagem para obter resultados clínicos benéficos ou desejados. “Tratamento”, como utilizado aqui, abrange qualquer administração ou aplicação de um terapêutico
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42/55 para a doença em um mamífero, incluindo um animal de companhia. Para fins desta descrição, os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, porém não se limitam a, qualquer um ou mais de: alívio de um ou mais sintomas, redução da extensão da doença, prevenção ou retardo da propagação da doença, prevenção ou atraso da recorrência da doença, retardo ou atraso da progressão da doença, melhoria do estado da doença, inibição da doença ou da progressão da doença, inibição ou retardo da doença ou de sua progressão, interrupção de seu desenvolvimento, e remissão (se parcial ou total). Também abrangida pelo “tratamento” é a redução da consequência patológica de uma doença proliferativa. Os métodos fornecidos aqui consideram qualquer um ou mais desses aspectos de tratamento. De acordo com o exposto acima, o termo tratamento não requer a remoção de cem por cento de todos os aspectos do distúrbio.
[0094] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou composição farmacêutica compreendendo-o pode ser utilizado de acordo com os métodos descritos aqui para tratar condições induzidas por IL13 ou IL4. Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou composição farmacêutica é administrado a um animal de companhia, como um canino, felino ou equino, para tratar uma condição induzida por IL13 e IL4.
[0095] Uma “quantidade terapeuticamente eficaz” de uma substância/molécula, agonista ou antagonista, pode variar de acordo com fatores, tais como o tipo de doença a ser tratada, o estado da doença, a gravidade e curso da doença, o tipo de objetivo terapêutico, alguma terapia anterior, a história clínica, a resposta ao tratamento anterior, critério do veterinário atendente, idade, sexo e peso do animal, e a capacidade da substância/molécula, agonista ou antagonista, de provocar uma resposta desejada no animal. Uma quantidade terapeuticamente eficaz também é aquela em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais
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43/55 da substância/molécula agonista ou antagonista são superados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser suprida em uma ou mais administrações. Uma quantidade terapeuticamente eficaz refere-se a uma quantidade efetiva, em dosagens e por períodos de tempo necessários para alcançar o resultado terapêutico ou profilático desejado.
[0096] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo contíguo de IL13R/IL4R é administrado de forma parenteral, por administração subcutânea, infusão intravenosa, ou injeção intramuscular. Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R é administrado como uma injeção de bolo ou por infusão contínua durante um período de tempo. Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R é administrado por via intramuscular, intraperitoneal, intra-cérebro-espinhal, subcutânea, intraarterial, intrassinovial, intratecal ou por uma inalação.
[0097] Um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R descrito aqui pode ser administrado em uma quantidade na faixa de 0,1 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, a fusão anti-1L13/IL4 pode ser administrada em uma quantidade na faixa de 0,5 mg/kg de peso corporal a 50 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, a fusão anti-IL13/IL4 pode ser administrada em uma quantidade na faixa de 1 mg/kg de peso corporal a 10 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, a molécula de fusão pode ser administrada em uma quantidade na faixa de 0,5 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 1 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 5 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 10 mg/kg de
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44/55 peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 20 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 50 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 1 mg/kg de peso corporal a 10 mg/kg de peso corporal, na faixa de 5 mg/kg de peso corporal a 10 mg/kg de peso corporal, na faixa de 0,5 mg/kg de peso corporal a 10 mg/kg de peso corporal, ou na faixa de 5 mg/kg de peso corporal a 50 mg/kg de peso corporal.
[0098] Um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R pode ser administrado a um animal de companhia de uma vez ou durante uma série de tratamentos. Por exemplo, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um IL13R e IL4R pode ser administrado pelo menos uma vez, mais do que uma vez, pelo menos duas vezes, pelo menos três vezes, pelo menos quatro vezes ou pelo menos cinco vezes.
[0099] Em algumas modalidades, a dose é administrada uma vez por semana por pelo menos duas ou três semanas consecutivas e, em algumas modalidades, este ciclo de tratamento é repetido duas ou mais vezes, opcionalmente intercalado com uma ou mais semanas sem tratamento. Em outras modalidades, a dose terapeuticamente eficaz é administrada uma vez por dia por dois a cinco dias consecutivos e, em algumas modalidades, este ciclo de tratamento é repetido duas ou mais vezes, opcionalmente intercalado com um ou mais dias ou semanas sem tratamento.
[0100] A administração “em combinação com” um ou mais agentes terapêuticos” adicionais inclui administração simultânea (concomitante) e consecutiva ou sequencial em qualquer ordem. O termo “simultaneamente” é usado aqui para se referir à administração de dois ou mais agentes terapêuticos, em que pelo menos parte da administração sobrepõe no tempo ou em que a administração de um agente terapêutico
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45/55 cai dentro de um curto período de tempo em relação à administração do outro agente terapêutico. Por exemplo, os dois ou mais agentes terapêuticos são administrados com um intervalo de tempo não superior a cerca de um número especificado de minutos. O termo “sequencialmente” é usado aqui para se referir à administração de dois ou mais agentes terapêuticos em que a administração de um ou mais agente(s) continua após a interrupção da administração de um ou mais outro(s) agente(s), ou em que a administração de um ou mais agente(s) começa antes da administração de um ou mais outro(s) agente(s). Por exemplo, a administração dos dois ou mais agentes terapêuticos é administrada com um intervalo de tempo superior a cerca de um número especificado de minutos. Conforme usado aqui, “em combinação com” se refere à administração de uma modalidade de tratamento além de outra modalidade de tratamento. Como tal, “em combinação com” se refere à administração de uma modalidade de tratamento antes, durante ou após a administração da outra modalidade de tratamento ao animal.
[0101] Em algumas modalidades, o método compreende administrar em combinação com um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, um inibidor de Jak, inibidor de PI3K, um inibidor de AKT, ou um inibidor de MAPK. Em algumas modalidades, o método compreende administrar em combinação com um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, um anticorpo anti-IL17, um anticorpo anti-TNFa, um anticorpo CD20, um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-CD25, um anticorpo anti-IL31, um anticorpo anti-IL23, um anticorpo anti-lgE, um anticorpo anti-CD11a, um anticorpo anti-IL6R, anticorpo anti-a4-lntergrina, um anticorpo anti-IL12, um anticorpo anti-IL1 β, ou um anticorpo anti-BlyS.
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[0102] São fornecidos aqui métodos de expor a uma célula um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R sob condições permissivas para ligação a IL13 ou IL4. Em algumas modalidades, a célula é exposta ao polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou à composição farmacêutica ex vivo. Em algumas modalidades, a célula é exposta ao polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou à composição farmacêutica in vivo. Em algumas modalidades, a célula é exposta ao polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R. Em algumas modalidades, a célula é exposta ao polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou à composição farmacêutica sob condições permissivas para ligação da molécula de fusão a IL13 ou IL4 extracelular. Em algumas modalidades, uma célula pode ser exposta in vivo ao polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou à composição farmacêutica por qualquer um ou mais dos métodos de administração descritos aqui, incluindo, porém não se limitando a, injeção intraperitoneal, intramuscular, intravenosa ao paciente. Em algumas modalidades, uma célula pode ser exposta ex vivo ao polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R ou à composição farmacêutica pela sua exposição a um meio de cultura compreendendo a molécula de fusão ou a composição farmacêutica. Em algumas modalidades, a permeabilidade da membrana celular pode ser afetada empregando-se qualquer número de métodos compreendidos por aqueles versados na técnica (tal como eletroporação das células ou exposição das células a uma solução contendo cloreto de cálcio) antes de expor a célula a um meio de cultura compreendendo a molécula de fusão ou a composição farmacêutica.
[0103] Em algumas modalidades, a exposição resulta em uma redução da função de sinalização de IL13 ou IL4 pela célula. Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R pode reduzir a sinalização de IL13 ou IL4 em uma célula por pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos
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35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, ou 100% em comparação com a função de sinalização de IL13 ou IL4 na ausência do polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R. Em algumas modalidades, a redução na sinalização de IL13 ou IL4, ou a redução na proliferação de TF-1 é entre 10% e 15%, entre 10% e 20%, entre 10% e 25%, entre 10% e 30%, entre 10% e 35%, entre 10% e 40%, entre 10% e 45%, entre 10% e 50%, entre 10% e 60%, entre 10% e 70%, entre 10% e 80%, entre 10% e 90%, entre 10% e 100%, entre 15% e 20%, entre 15% e 25%, entre 15% e 30%, entre 15% e 35%, entre 15% e 40%, entre 15% e 45%, entre 15% e 50%, entre 15% e 60%, entre 15% e 70%, entre 15% e 80%, entre 15% e 90%, entre 15% e 100%, entre 20% e 25%, entre 20% e 30%, entre 20% e 35%, entre 20% e 40%, entre 20% e 45%, entre 20% e 50%, entre 20% e 60%, entre 20% e 70%, entre 20% e 80%, entre 20% e 90%, entre 20% e 100%, entre 25% e 30%, entre 25% e 35%, entre 25% e 40%, entre 25% e 45%, entre 25% e 50%, entre 25% e 60%, entre 25% e 70%, entre 25% e 80%, entre 25% e 90%, entre 25% e 100%, entre 30% e 35%, entre 30% e 40%, entre 30% e 45%, entre 30% e 50%, entre 30% e 60%, entre 30% e 70%, entre 30% e 80%, entre 30% e 90%, entre 30% e 100%, entre 35% e 40%, entre 35% e 45%, entre 35% e 50%, entre 35% e 60%, entre 35% e 70%, entre 35% e 80%, entre 35% e 90%, entre 35% e 100%, entre 40% e 45%, entre 40% e 50%, entre 40% e 60%, entre 40% e 70%, entre 40% e 80%, entre 40% e 90%, entre 40% e 100%, entre 45% e 50%, entre 45% e 60%, entre 45% e 70%, entre 45% e 80%, entre 45% e 90%, entre 45% e 100%, entre 50% e 60%, entre 50% e 70%, entre 50% e 80%, entre 50% e 90%, entre 50% e 100%, entre 60% e 70%, entre 60% e 80%, entre 60% e 90%, entre 60% e 100%, entre 70% e 80%, entre 70% e 90%, entre 70% e 100%, entre 80% e 90%, entre 80% e 100%, ou entre 90% e 100%.
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[0104] São fornecidos aqui métodos de utilização de polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R, polipeptídeos e polinucleotídeos para detecção, diagnóstico e monitoramento de uma condição induzida por IL13- ou IL4-. São fornecidos aqui métodos para determinar se um animal de companhia responderá à terapia com polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R. Em algumas modalidades, o método compreende detectar se o animal tem células que expressam IL13 ou IL4 usando um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R. Em algumas modalidades, o método de detecção compreende contatar a amostra com um anticorpo, polipeptídeo, ou polinucleotídeo e determinar se o nível de ligação difere daquele de uma amostra de referência ou comparação (tal como um controle). Em algumas modalidades, o método pode ser útil para determinar se os polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R, descritos aqui, são um tratamento apropriado para o animal em questão.
[0105] Em algumas modalidades, a amostra é uma amostra biológica. O termo “amostra biológica” significa uma quantidade de uma substância de um ser vivo ou de um ser anteriormente vivo. Em algumas modalidades, a amostra biológica é uma célula ou lisado célula/tecido. Em algumas modalidades, a amostra biológica inclui, porém não se limita a, sangue (por exemplo, sangue total), plasma, soro, urina, fluido sinovial, e células epiteliais.
[0106] Em algumas modalidades, as células ou o lisado célula/tecido são contatados com um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R e a ligação entre o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R e a célula é determinada. Quando as células de teste mostram a atividade de ligação em comparação com uma célula de referência do mesmo tipo de tecido, isso pode indicar que o paciente se beneficiaria do tratamento com polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R. Em algumas modalidades, as células de teste são de tecido de um animal de companhia.
[0107] Vários métodos conhecidos na técnica para detectar ligação
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49/55 específica de anticorpo-antígeno podem ser utilizados. Imunoensaios exemplares que podem ser realizados incluem: imunoensaio de fluorescência polarizada (FPIA), imunoensaio de fluorescência (FIA), imunoensaio enzimático (EIA), imunoensaio de inibição nefelométrico (NIA), ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA), e radioimunoensaio (RIA). Um componente indicador, ou grupo de marcadores, pode ser fixado aos anticorpos do paciente e é selecionado para atender às necessidades de várias utilizações do método que são frequentemente ditadas pela disponibilidade de equipamento de ensaio e procedimentos de imunoensaios compatíveis. Os marcadores apropriados incluem, sem limitação, radionuclídeos (por exemplo, 125l, 1311, 35S, 3H, ou 32P), enzimas (por exemplo, fosfatase alcalina, peroxidase de rábano silvestre, luciferase, ou p-galactosidade), componentes ou proteínas fluorescentes (por exemplo, fluoresceína, rodamina, ficoeritrina, GFP ou BFP), ou componentes luminescentes (por exemplo, nanopartículas Qdot™ supridas por Quantum Dot Corporation, Paio Alto, Califórnia). As técnicas gerais a serem usadas na realização dos vários imunoensaios mencionados acima são conhecidas daqueles versados na técnica.
[0108] Para fins de diagnóstico, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R pode ser marcado com um componente detectável incluindo, porém não se limitando a, radioisótopos, marcadores fluorescentes, e vários marcadores de substrato enzimático conhecidos na técnica. Os métodos de conjugação de marcadores com polipeptídeos são conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R não precisa ser marcado, e a sua presença pode ser detectada, por exemplo, usando um anticorpo que se liga ao polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R. Em algumas modalidades, o polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R pode ser empregado em qualquer método de ensaio conhecido, tal como ensaios de ligação competitiva, ensaios intercalados di
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50/55 retos e indiretos, e ensaios de imunoprecipitação. Zola, Anticorpos Monoclonais: A Manual of Techniques, págs. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987). Os anticorpos e polipeptídeos IL13 e IL4 também podem ser usados em ensaios de diagnósticos in vivo, como imageação in vivo. Geralmente, o anticorpo ou o polipeptídeo é marcado com um radionuclídeo (tal como 1111n, Tc, 14C, 131l, 125l, 3H, ou qualquer outro marcador de radionuclídeo, incluindo aqueles descritos aqui), de modo que as células ou tecidos de interesse possam ser localizados empregando-se imunocintilografia. O polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R também pode ser usado como reagente de coloração em patologia usando técnicas bem conhecidas na técnica.
[0109] Em algumas modalidades, um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R é usado para um diagnóstico e um polipeptídeo contíguo IL13R/IL4R é usado como um terapêutico. Em algumas modalidades, o primeiro e o segundo polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R são diferentes.
[0110] Os seguintes exemplos ilustram aspectos particulares da descrição e não pretendem de modo algum limitar a descrição.
EXEMPLOS
Exemplo 1
Expressão e purificação de IL4 e IL13 canina
[0111] Uma sequência nucleotídica que codifica a proteína IL13 canina (SEQ ID NO: 4) foi sintetizada com etiqueta poli-His na extremidade terminal C e clonada em um vetor de expressão de mamífero e transfectada em células 293 ou CHOS. O mesmo método foi utilizado para clonar e expressar uma sequência nucleotídica que codifica a proteína IL4 canina (SEQ ID NO: 1) com uma etiqueta poli-His na extremidade terminal C.
[0112] O sobrenadante contendo a proteína IL13 canina foi coletado e filtrado. A IL13 canina foi purificada por afinidade usando a coluna Ni
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NTA (CaptivA® Protein A Affinity Resin, Repligen). O mesmo método foi utilizado para purificar IL4 canina.
Exemplo 2
Domínios extracelulares de IL13R e/ou IL4R
[0113] Os domínios extracelulares de IL4R canino, felino e equino, que são responsáveis pela ligação de IL4 e/ou IL13 canina, felina e equina, foram identificados e os limites foram definidos. Os domínios extracelulares de comprimento total de IL4R canino, IL4R felino, e IL4R equino foram identificados como SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25 e SEQ ID NO: 27, respectivamente. Fragmentos de domínio extracelular de IL4R canino, IL4R felino, e IL4R equino, postulados para manter a atividade biológica, foram identificados como SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 e SEQ ID NO: 37, respectivamente.
[0114] Os domínios extracelulares de IL13R canino, felino e equino, que são responsáveis pela ligação de IL4 e/ou IL13 canina, felina e equina, foram identificados e os limites foram definidos. Os domínios extracelulares de comprimento total de IL13R canino, IL13R felino, e IL13R equino foram identificados como SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24 e SEQ ID NO: 26, respectivamente. Fragmentos de domínio extracelular de IL13R canino, IL13R felino, e IL13R equino, postulados para manter a atividade biológica, foram identificados como SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 e SEQ ID NO: 36, respectivamente.
[0115] Uma cisteína não emparelhada (Cis) no IL13R canino (na posição 18 de SEQ ID NO: 22), IL13R felino (na posição 18 de SEQ ID NO: 24), e IL13R equino (na posição 18 de SEQ ID NO: 26) foi identificada informaticamente e determinada como incorporada (não exposta) com base na modelagem 3-D. É improvável que a cisteína não emparelhada forme ligações dissulfeto e a probabilidade de agregação é baixa. Assim, a mutagênese dirigida ao local deste resíduo Cis não foi introduzida.
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Exemplo 3
Expressão e Purificação de polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R de Células CHO
[0116] As sequências nucleotídicas que codificam polipeptídeos contíguos IL13R/IL4R caninos ligados a FC IgGB foram projetadas com uma sequência de sinal. Quanto ao polipeptídeo contíguo “IL13R-IL4RIgGB” (SEQ ID NO: 20), o domínio extracelular de IL13R (SEQ ID NO: 22) precede o domínio extracelular de IL4R (SEQ ID NO: 23). Quanto ao polipeptídeo contíguo IL4R-IL13R-lgGB (SEQ ID NO: 21), o domínio extracelular de IL4R precede o domínio extracelular de IL13R.
[0117] As sequências nucleotídicas foram sintetizadas quimicamente e inseridas em um vetor de expressão adequado para transfecção em uma célula hospedeira CHO. Após a transfecção em células CHO, as proteínas de fusão foram secretadas a partir da célula. Por exemplo, a proteína de fusão foi purificada por cromatografia em coluna de Proteína A de etapa única.
[0118] Cada um de IL13R-IL4R-lgGB e IL4R-IL13R-lgGB pode ser expresso e purificado em uma única etapa com uma coluna de proteína A ou outros métodos cromatográficos, tais como cromatografia em coluna de troca iônica, cromatografia em coluna de interação hidrofóbica, cromatografia em coluna de modo misto, tal como CHT, ou cromatografia em coluna de modo multimodal, tal como CaptoMMC. Pode ser aplicado baixo pH ou outras etapas de inativação viral e remoção viral. A proteína purificada pode ser misturada com excipientes e esterilizada por filtração para preparar a composição farmacêutica da invenção. A composição farmacêutica pode ser administrada a um cão com dermatite atópica ou asma em uma quantidade suficiente para ligar e/ou inibir IL13 e/ou IL4.
[0119] Os vetores foram, em seguida, utilizados para realizar transfecção em escala-piloto em células CHO-S usando o reagente de transfecção
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FreestyleMax™ (Life Technologies). O sobrenadante foi colhido esclarecendo os meios condicionados. A proteína foi purificada com uma etapa de cromatografia de Proteína A de passagem única e usada para investigação adicional.
Exemplo 4
Demonstração da Atividade de Ligação de IL13 e IL4
[0120] Este exemplo demonstra que tanto IL13R-IL4R-lgGB (SEQ ID NO: 20) como IL4R-IL13R-lgGB (SEQ ID NO: 21) ligam IL4 e IL13 caninas com cinéticas necessárias para a atividade terapêutica.
[0121] A análise de ligação foi realizada usando um biossensor Octet como a seguir. Resumidamente, a IL4 canina (produzida usando células 293) foi biotinilada. A biotina livre que não reagiu foi removida da IL4 biotinilada por diálise extensiva. A IL4 canina biotinilada foi capturada nas pontas do sensor de estreptavidina. A associação de IL4 com várias concentrações (12, 16 e 44 nM) de IL13R-IL4R-lgGB (SEQ ID NO: 20) foi monitorada por noventa segundos. A dissociação foi monitorada por 600 segundos. Uma curva em branco do tampão foi subtraída para corrigir qualquer desvio. Os dados foram ajustados a um modelo de ligação 1:1 usando o software de análise de dados ForteBio™ para determinar kon, kOft e a kd. O tampão para diluições e todas as etapas de ligação foi: fosfato 20 mM, NaC1150 mM, pH 7,2. A Kd para IL13R-IL4RIgGB e ligante IL4 foi de 8 x 10’11.
[0122] A associação IL4 canina com várias concentrações (40,7 e 140 nM) de IL4R-IL13R-lgGB (SEQ ID NO: 21) foi monitorada por noventa segundos. A dissociação foi monitorada por 600 segundos. Uma curva em branco do tampão foi subtraída para corrigir qualquer desvio. Os dados foram ajustados a um modelo de ligação 1:1 usando o software de análise de dados ForteBioTM para determinar kon, kOft e a kd. O tampão para diluições e todas as etapas de ligação foi: fosfato 20 mM, NaCI 150 mM, pH 7,2. A Kd para IL4R-IL13R-lgGB e ligante IL4 foi de
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1,1 x 10’11.
[0123] IL4 canina e IL13 canina com etiqueta poli-His terminal C foram expressas e purificadas a partir de células 293. EZ-Link NHS-LCbiotina foi obtido da Thermo Scientific (Cat.#21336), e biossensores de estreptavidina foram obtidos da ForteBio (Cat. #18-509).
[0124] Foram realizados experimentos de ligação sequencial de IL4 e IL13 com IL13R-IL4R-lgGB (SEQ ID NO: 20). O IL13R-IL4R-lgGB canino biotinilado foi capturado nas pontas do sensor de estreptavidina. O IL13R-IL4R-lgGB canino foi exposto a (1) IL4 canina seguida por IL13 ou (2) IL13 canina seguida por IL4 usando concentrações de 30 pg/mL de IL4 e IL13 em PBS (Figura 1). Os experimentos demonstraram que, uma vez que IL13R-IL4R-lgGB se liga a IL13, ele não pode se ligar a IL4, e que, uma vez ligado a IL4, sua capacidade de ligar-se a IL13 é reduzida.
[0125] Foram realizados experimentos de ligação sequencial de IL4 e IL13 com IL4R-IL13R-lgGB (SEQ ID NO: 21). O IL4R-IL13R-lgGB canino biotinilado foi capturado nas pontas do sensor de estreptavidina. O IL4R-IL13R-lgGB canino foi exposto a (1) IL4 canina seguida por IL13 ou (2) IL13 canina seguida por IL4 usando concentrações de 30 pg/mL de IL4 e IL13 em PBS (Figura 1). Esses experimentos demonstraram que, uma vez que IL4R-IL13R-lgGB se liga a IL13, ele não pode se ligar a IL4, e que, uma vez ligado a IL4, sua capacidade de ligar-se a IL13 é reduzida.
[0126] Imagina-se que a forte ligação de IL13R-IL4R-lgGB e IL4RIL13R-lgGB com IL4 ou IL13 seja devido à simultâneas contribuições de ligações feitas tanto por IL4R como por IL13R.
Exemplo 5
Atividade funcional celular de IL4-IL13R-Fc canino (SINK)
[0127] Células TF1 (ATCC cat# CRL-2003), uma linhagem celular Eritroleucêmica humana que expressa receptores endógenos de interleucina
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55/55 na superfície celular, foram usadas em um ensaio de proliferação. Foram usadas para o ensaio células cultivadas em RPMI1640 (Gibco, Cat#11875) suplementadas com Soro Bovino Fetal a 10%, inativadas por calor (Sigma, Cat#2868) e GM-CSF humana 2 nM/ml (R&D System, Cat# 215-GM-010) em fase de crescimento exponencial. As células foram lavadas com PBS duas vezes e ressuspensas no meio acima sem GM-CSF. 20.000 células por poço foram disseminadas em uma placa de 96 poços (Corning, Cat# 3610). Adicionou-se IL4R-IL13R- Fc canino (SINK) a uma série de diluições, seguido por adição de IL4 canina (Sino Biological Inc, Cat# 70021-DNAE-5) a 50 ng/ml. As células foram incubadas a 37°C, 5% de CO2 por 48 horas em um volume total de 100 μΙ. No final da incubação, as células foram resfriadas à temperatura ambiente e analisadas quanto à proliferação/variabilidade, medindo-se 0 teor de ATP celular usando 0 Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® (Promega, Cat# G7570).
[0128] Neste ensaio, 100 μΙ de reagente pré-misturado A e B foram adicionados a cada poço. Após agitação em um agitador orbital por 2 minutos, as células foram lisadas. A mono-oxigenação de luciferina foi catalisada pela luciferase na presença de Mg2+ e ATP que se apresentavam nas células, resultando na geração de um sinal luminescente proporcional à quantidade de ATP nas células. A quantidade de ATP é diretamente proporcional ao número de células presentes na cultura. A placa foi incubada à temperatura ambiente por 10 minutos para estabilizar 0 sinal luminescente, e a luminescência foi detectada usando um leitor de microplacas Synergy HT (Biotek, Winooski, VT).
[0129] Os dados foram analisados usando ajuste logístico de 4 parâmetros e IC50 é de 2,0 nM. Observe a figura 3.
Claims (41)
- REIVINDICAÇÕES1. Polipeptídeo contíguo, caracterizado pelo fato de que compreende um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13 e um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4, em que os polipeptídeos IL13R e IL4R são derivados de uma espécie de animal de companhia.
- 2. Polipeptídeo contíguo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a fórmula (I) IL13R-L1-IL4RL2-FP ou a fórmula (II) IL4R-L1-IL13R-L2-FP, em que:a. IL13R é um domínio extracelular de um polipeptídeo IL13R derivado de uma espécie de animal de companhia,b. IL4R é um domínio extracelular de um polipeptídeo IL4R derivado de uma espécie de animal de companhia,c. L1 é um primeiro ligante opcional,d. L2 é um segundo ligante opcional, ee. FP é um parceiro de fusão.
- 3. Polipeptídeo contíguo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo contíguo se liga a IL13 de uma espécie de animal de companhia com uma constante de dissociação (Kd) inferior a inferior a 5 x 10-6 M, inferior a 1 x 10-6 M, inferior a 5 x IO 7 M, inferior a 1 x 10-7 M, inferior a 5 x 10-8 M, inferior a 1 x 10-8 M, inferior a 5 x 10-9 M, inferior a 1 x 10-9 M, inferior a 5 x 10-10 M, inferior a 1 x 10 10 M, inferior a 5 x 10-11 M, inferior a 1 x 10-11 M, inferior a 5 x 10-12 M, ou inferior a 1 x 10-12 M, conforme medido por interferometria de biocamada.
- 4. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo contíguo se liga a IL4 de uma espécie de animal de companhia com uma constante de dissociação (Kd) inferior a 5 x 10-6 M, inferior a 1 x 10-6 M,Petição 870190104900, de 17/10/2019, pág. 175/1872/8 inferior a 5 x 10-7 M, inferior a 1 x 10-7 M, inferior a 5 x 10-8 M, inferior a 1 x 10’8 M, inferior a 5 x 10-9 M, inferior a 1 x 10-9 M, inferior a 5 x 10-1° M, inferior a 1 x 10 10 M, inferior a 5 x 10-11 M, inferior a 1 x 10-11 M, inferior a 5 x 10-12 M, ou inferior a 1 x 10-12 M, conforme medido por interferometria de biocamada.
- 5. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo contíguo reduz a sinalização de IL13 e/ou IL4 na espécie de animal de companhia.
- 6. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a espécie de animal de companhia é a canina, felina ou equina.
- 7. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R é pelo menos 85 % idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36.
- 8. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R é pelo menos 90 % idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36.
- 9. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R é pelo menos 95 % idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36.
- 10. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R é pelo menos 98 % idêntico à sequência dePetição 870190104900, de 17/10/2019, pág. 176/1873/8 aminoácidos de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 36.
- 11. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R compreende uma cisteína em uma posição correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 22, correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 24, ou correspondente à posição 18 de SEQ ID NO: 26.
- 12. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o domínio extraceIular do polipeptídeo IL13R compreende uma cisteína na posição 18 de SEQ ID NO: 22, na posição 18 de SEQ ID NO: 24, na posição 18 de SEQ ID NO: 26, na posição 15 de SEQ ID NO: 32, na posição 15 de SEQ ID NO: 34, ou na posição 15 de SEQ ID NO: 36.
- 13. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, e SEQ ID NO: 36.
- 14. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL13R compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, e SEQ ID NO: 26.
- 15. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R é pelo menos 85 % idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37.
- 16. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R é pelo menos 90 % idêntico à sequência dePetição 870190104900, de 17/10/2019, pág. 177/1874/8 aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37.
- 17. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R é pelo menos 95% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37.
- 18. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R é pelo menos 98% idêntico à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 37.
- 19. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, e SEQ ID NO: 37.
- 20. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que o domínio extracelular do polipeptídeo IL4R compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, e SEQ ID NO: 27.
- 21. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 20, caracterizado pelo fato de que L1 e L2, se presentes, cada um independentemente compreende uma sequência de aminoácidos selecionada de G, GG, GGG, S, SS, SSS, GS, GSGS (SEQ ID NO: 38), GSGSGS (SEQ ID NO: 39), GGS, GGSGGS (SEQ ID NO: 40), GGSGGSGGS (SEQ ID NO: 41), GGGS (SEQ ID NO: 42), GGGSGGGS (SEQ ID NO: 43), GGGSGGGSGGGS (SEQ ID NO: 44), GSS, GSSGSS (SEQ ID NO: 45), GSSGSSGSS (SEQ ID NO: 46), GGSS (SEQ ID NO: 47), GGSSGGSS (SEQ ID NO: 48), e GGSSGGSSGGSS (SEQ ID NO: 49).Petição 870190104900, de 17/10/2019, pág. 178/1875/8
- 22. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 21, caracterizado pelo fato de que o parceiro de fusão é selecionado de um Fc, albumina e um fragmento de ligação a albumina.
- 23. Polipeptídeo contíguo de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o Fc é (a) uma região constante de cadeia pesada canina selecionada a partir de uma região constante de IgG-A, IgG-B, IgG-C, e IgG-D; (b) uma região constante de cadeia pesada felina selecionada a partir de lgG1, lgG2a, e lgG2b; ou (c) uma região constante de cadeia pesada equina selecionada a partir de uma região constante de IgG 1, lgG2, lgG3, lgG4, lgG5, lgG6 e lgG7.
- 24. Polipeptídeo contíguo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo contíguo compreende a sequência selecionada de SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, e SEQ ID NO: 31.
- 25. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que codifica o polipeptídeo contíguo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 24.
- 26. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende o ácido nucleico como definido na reivindicação 25.
- 27. Método de produção de um polipeptídeo contíguo, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar a célula hospedeira como definida na reivindicação 26 e isolar o polipeptídeo contíguo.
- 28. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o polipeptídeo contíguo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 24 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
- 29. Método de tratamento de uma espécie de animal de companhia tendo uma condição induzida por IL13 e/ou IL4, caracterizadoPetição 870190104900, de 17/10/2019, pág. 179/1876/8 pelo fato de que compreende administrar à espécie de animal de companhia uma quantidade terapeuticamente eficaz do polipeptídeo contíguo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 24, ou da composição farmacêutica como definida na reivindicação 28.
- 30. Método de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que a espécie de animal de companhia é a canina, felina ou equina.
- 31. Método de acordo com a reivindicação 29 ou 30, caracterizado pelo fato de que a condição induzida por IL13 e/ou IL4 é uma condição pruriginosa ou alérgica, tal como dermatite atópica, prurido, asma, psoríase, escleroderma ou eczema.
- 32. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 29 a 31, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo contíguo ou a composição farmacêutica é administrado de forma parenteral.
- 33. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 29 a 32, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo contíguo ou a composição farmacêutica é administrado por uma via intramuscular, uma via intraperitoneal, uma via intracerebroespinhal, uma via subcutânea, uma via intra-arterial, uma via intrassinovial, uma via intratecal, ou uma via de inalação.
- 34. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 29 a 33, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda a administração de um inibidor de Jak, um inibidor de P13K, um inibidor de AKT, ou um inibidor de MAPK.
- 35. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 29 a 34, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda a administração de um ou mais anticorpos selecionados de um anticorpo anti-IL17, um anticorpo anti-IL31, um anticorpo anti-TNFa, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-CD25, um anticorpo anti-IL4, um anticorpo anti-IL13, um anticorpo anti-IL23, um anticorpo anti-Petição 870190104900, de 17/10/2019, pág. 180/1877/8IgE, um anticorpo anti-CD11a, um anticorpo anti-IL6R, um anticorpo anti-a4-lntergrina, um anticorpo anti-IL12, um anticorpo anti-IL1 β, e um anticorpo anti-BlyS.
- 36. Método de redução da atividade de sinalização de IL13 e/ou IL4 em uma célula, caracterizado pelo fato de que compreende expor a célula ao polipeptídeo contíguo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 24, ou à composição farmacêutica como definida na reivindicação 28, sob condições permissivas para a ligação do polipeptídeo contíguo a IL13 e/ou IL4, e desse modo (a) reduzir a ligação de IL4 e/ou IL13 ao receptor de IL13 nativo e/ou receptor de IL4 nativo, e reduzir a sinalização mediada por IL13 e/ou IL4.
- 37. Método de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a célula é exposta ao polipeptídeo contíguo ou à composição farmacêutica ex vivo.
- 38. Método de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a célula é exposta ao polipeptídeo contíguo ou à composição farmacêutica in vivo.
- 39. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 36 a 38, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula canina, uma célula felina ou uma célula equina.
- 40. Método para detectar IL13 ou IL4 em uma amostra de uma espécie de animal de companhia, caracterizado pelo fato de que compreende contatar a amostra com o polipeptídeo contíguo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 24, ou à composição farmacêutica como definida na reivindicação 28, sob condições permissivas para ligação do polipeptídeo contíguo a IL13 e/ou IL4, e detectar se um complexo é formado entre o polipeptídeo contíguo e IL13 e/ou IL4 na amostra.
- 41. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadoPetição 870190104900, de 17/10/2019, pág. 181/1878/8 pelo fato de que a amostra é uma amostra biológica obtida de um canino, felino ou equino.
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