BR112019021787A2 - lipopeptídeo para inibição potente do hiv, seu derivado, composição farmacêutica e uso do mesmo - Google Patents

lipopeptídeo para inibição potente do hiv, seu derivado, composição farmacêutica e uso do mesmo Download PDF

Info

Publication number
BR112019021787A2
BR112019021787A2 BR112019021787A BR112019021787A BR112019021787A2 BR 112019021787 A2 BR112019021787 A2 BR 112019021787A2 BR 112019021787 A BR112019021787 A BR 112019021787A BR 112019021787 A BR112019021787 A BR 112019021787A BR 112019021787 A2 BR112019021787 A2 BR 112019021787A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
polypeptide
hiv
sequence
lipopeptide
derivative
Prior art date
Application number
BR112019021787A
Other languages
English (en)
Inventor
Chong Huihui
Zhu Yuanmei
He Yuxian
Original Assignee
Inst Pathogen Biology Cams
Shanxi Kangbao Biological Product Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inst Pathogen Biology Cams, Shanxi Kangbao Biological Product Co Ltd filed Critical Inst Pathogen Biology Cams
Publication of BR112019021787A2 publication Critical patent/BR112019021787A2/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/55—IL-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
    • C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
    • C07K14/162—HIV-1 ; HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, CD4-Binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

o presente pedido se refere a um lipopeptídeo para inibir potentemente o hiv, um derivado do mesmo ou uma composição farmacêutica do mesmo, e uso do mesmo. o lipopeptídeo é o a) ou b) que se segue: a) um lipopeptídeo formado por ligação de um polipeptídeo com atividade antiviral a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila do polipeptídeo; ou b) um lipopeptídeo formado por ligação de um polipeptídeo com uma atividade antiviral a um grupo protetor terminal e um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila do polipeptídeo, em que o grupo protetor terminal é um grupo protetor terminal amino e/ou um grupo protetor terminal carboxila, o polipeptídeo tem uma sequência de 28 resíduos de aminoácidos, correspondendo a aminoácidos nas posições 127-154 da sequência de gp41 da cepa hxb2 do hiv-1. a atividade anti-hiv do lipopeptídeo da presente invenção é maior que a de t-20 em várias milhares de vezes ou até dezenas de milhares de vezes, e também é significativamente maior que a dos lipopeptídeos anti-hiv, como c34- chol, lp-19 e similares.

Description

LIPOPEPTÍDEO PARA INIBIÇÃO POTENTE DO HIV, SEU DERIVADO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E USO DO MESMO
CAMPO TÉCNICO [001] A presente invenção se refere a um lipopeptídeo para inibição potente do HIV, seu derivado ou composição farmacêutica, e seu uso no campo da biomedicina.
ANTECEDENTES DA TÉCNICA [002] A síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) é uma doença infecciosa que prejudica seriamente a saúde humana e o desenvolvimento social atualmente. O vírus da imunodeficiência humana que causa a AIDS é dividido em dois tipos: HIV-1 e HIV-2. Existem cerca de 36 milhões de pessoas infectadas pelo HIV no mundo, e o HIV-1 é o principal patógeno (www.unaids .org). Atualmente, não existe uma vacina eficaz contra a AIDS disponível e os medicamentos que bloqueiam a replicação do vírus em diferentes estágios desempenham um papel importante no tratamento e na prevenção da infecção por HIV. Atualmente, os medicamentos empregados no tratamento clínico incluem principalmente inibidores da transcriptase reversa nucleosídica, inibidores da transcriptase reversa não nucleosídica, inibidores de protease, inibidores da entrada viral e inibidores da integrase (www.fda.gov). Um regime de tratamento antiviral altamente eficaz que tem sido amplamente empregado clinicamente, ou seja, a chamada terapia de coquetel consiste principalmente em 3-4 inibidores da transcriptase reversa e inibidores de protease. Devido à persistência da infecção pelo HIV, é necessário administrar medicamentos aos pacientes por um longo período de tempo, levando facilmente à resistência aos medicamentos, o que afeta seriamente o efeito do tratamento clínico [1]. Consequentemente, o desenvolvimento de novos medicamentos anti-HIV sempre foi uma estratégia importante para prevenir e controlar a AIDS.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 8/93
2/65 [003] Ao contrário de outros tipos de fármacos, os inibidores da entrada do HIV funcionam nos estágios iniciais da replicação do vírus e agem impedindo a entrada do vírus nas células-alvo, como se “o inimigo fosse impedido de entrar”, portanto os inibidores da entrada do HIV têm vantagens óbvias em tratamento e prevenção. No entanto, atualmente apenas dois inibidores da entrada do HIV foram aprovados para aplicação clínica: o primeiro é o enfuvirtida, inibidor da fusão da membrana do HIV (também conhecido como T-20), que é um medicamento polipeptídico com 36 aminoácidos derivados da proteína de fusão gp41 do HIV, e o segundo é um antagonista do co-receptor CCR5 Maraviroc. Devido ao desenvolvimento bem-sucedido dos dois inibidores da entrada do HIV, novos meios para o tratamento clínico da AIDS são adicionados. Infelizmente, é necessário administrar T-20 em grande dose todos os dias (injeção subcutânea de 90 mg duas vezes ao dia) devido à sua atividade relativamente baixa, e o T-20 facilmente leva à resistência aos medicamentos, e o Maraviroc é seletivamente contra o vírus trópico CCR5 sendo ineficaz contra o vírus trópico CRCR4 [2], [004] A entrada do HIV nas células alvo é mediada por sua glicoproteína envelope de superfície (Env), que é formada por ligação de uma subunidade superficial gp120 a uma subunidade transmembranar gp41 através de uma ligação não covalente e é uma estrutura trimérica em estado natural [3]. Primeiramente, a ligação sequencial da gp120 ao receptor celular CD4 e ao co-receptor (tal como CCR5 ou CXCR4) desencadeia uma cascata de alterações conformacionais na gp120, expõe ainda mais a gp41 e ativa a função de fusão da membrana da gp41. Gp41 é estruturalmente dividida em três partes: uma região extramembrana, uma região transmembranar (TM) e uma região intramembrana, em que a região extramembrana inclui ainda várias regiões funcionais importantes, como a região do peptídeo de fusão hidrofóbica terminal N (FP), a região de repetição heptada do terminal N (NHR), região de repetição heptada terminal C (CHR) e região externa
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 9/93
3/65 proximal da membrana (MPER) (Figura 1). Desde 1997, analisando a estrutura cristalina de um complexo do polipeptideo N36 derivado de NHR e do polipeptideo C34 derivado de CHR, é encontrada uma estrutura de feixe α-hélice de seis cadeias (6-HB), na qual três NHRs formam um trímero helicoidal localizado centralmente por interação de aminoácidos nas posições a e d, e os aminoácidos nas posições e e g são expostos ao redor do lado externo do trímero central e interagem com as três hélices CHR na posição a e d [4], As três hélices CHR são respectivamente combinadas em uma ranhura formada por três hélices NHR em uma orientação antiparalela, semelhante a uma estrutura em grampo empilhada em três. Com base na estrutura 6-HB, o mecanismo de fusão da membrana do HIV é profundamente compreendido, o peptídeo de fusão da gp41 exposto é primeiramente inserido na membrana da célula-alvo, depois a CHR é ligada reversamente à NHR, a membrana viral é aproximada à membrana da célula alvo para resultar na fusão pela formação de 6-HB estável, pelo que o material genético do HIV entra na célula alvo eventualmente. A estrutura 6-HB também revela que existe uma bolsa profunda hidrofóbica distinta formada no terminal C das hélices do NHR, enquanto os três aminoácidos no terminal N de CHR, ou seja, o chamado domínio de ligação ao bolso (PBD), são inseridos na bolso hidrofóbico do NHR, em que a interação entre eles desempenha um papel importante na estabilização da estrutura 6-HB e, portanto, é necessária para a infecção pelo HIV. Por um longo período de tempo, o bolso hidrofóbico do NHR foi reconhecida como um alvo importante para medicamentos anti-HIV, e o motivo PBD do CHR é a chave para projetar inibidores de peptídeos anti-HIV [5,6], [005] Estudos anteriores mostraram que os polipeptídeos derivados do gp41 CHR ou NHR têm atividade anti-HIV significativa, se ligam principalmente competitivamente ao NHR ou CHR correspondente para impedir a formação da própria estrutura viral de 6-HB, bloqueando assim a fusão do vírus e da membrana
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 10/93
4/65 celular [6]. Tipicamente, a atividade antiviral de um protótipo de polipeptídeo CHR é significativamente maior que um protótipo de polipeptídeo NHR. O fármaco T-20 pertence a um dos polipeptídeos CHR e sua sequência é mostrada na Figura 1, que corresponde à sequência de aminoácidos nas posições 127 a 162 da gp41 da cepa HXB2 do HIV-1. Uma das características estruturais da sequência do T-20 é que ela possui um motivo rico em triptofano hidrofóbico (TRM: WASLWNWF) em seu terminal C, porém não possui uma sequência PBD (WMEWDREI) em seu terminal N. Foi descoberto por estudos que o TRM do T-20 media a ligação do polipeptídeo ao lipídeo da membrana celular e, portanto, é considerado um domínio de ligação lipídica (LBD), e essa propriedade é importante para a atividade antiviral de T-20. Devido a defeitos óbvios do T-20 na aplicação clínica, a pesquisa e o desenvolvimento de uma nova geração de inibidores da fusão da membrana do HIV sempre foram um tema internacional, porém a maioria dos estudos se baseia no polipeptídeo CHR C34, contendo 34 aminoácidos como modelo, e o uso do T-20 como modelo raramente é relatado. Isso pode ocorrer por que: 1) C34 é usado para a análise da estrutura do 6-HB no início e corresponde à sequência de aminoácidos nas posições 117-150 da gp41, que é considerada a sequência central do CHR; 2) C34 contém uma importante sequência de PBD no terminal N e C34 possui uma atividade de ligação ao NHR e atividade antiviral superior a T-20; e 3) C34 aumentou significativamente a atividade inibidora contra cepas de vírus resistentes a T-20. Inibidores de fusão de membrana de HIV recentemente desenvolvidos, como T2635, SC35EK, SC29EK, Sifuvirtide (SFT), Albuvirtide (ABT), C34-Chol e similares, são todos obtidos por otimização e/ou modificação da sequência de C34 [6,7 ], e eles também têm melhor atividade inibitória e estabilidade do que o T-20.
[006] Recentemente, a descoberta da estrutura “gancho M-T” dos polipeptídeos CHR forneceu uma nova abordagem para projetar inibidores de fusão de membrana de HIV altamente ativos [8-10]. Foi demonstrado por estudos que a
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 11/93
5/65 adição de dois resíduos de aminoácidos (Met115 e Thr116) que podem formar uma estrutura de gancho MT na frente do PBD do polipeptideo CHR pode aumentar significativamente a atividade de ligação a uma sequência alvo e atividade antiviral de inibidores, aumentam especialmente a atividade dos inibidores contra cepas resistentes ao T-20 e aumentam significativamente a barreira genética para a resistência dos inibidores aos fármacos [11, 12], A estrutura de gancho MT também possibilita o design de peptídeos curtos direcionados à bolsa hidrofóbica do NHR, como o MT-SC22EK com 24 aminoácidos e HP23 e 2P23 com 23 aminoácidos [1315]. Esses peptídeos curtos exibem maior atividade antiviral e atividade de ligação à sequência alvo do que outros polipeptídeos de sequência longa. 2P23 não é apenas eficaz contra suas cepas resistentes ao HIV-1 e T-20, porém também muito eficaz contra o HIV-2 e o vírus da imunodeficiência símia (SIV), e, portanto, 2P23 é um inibidor de fusão de membrana viral de amplo espectro [13].
[007] O domínio lipídico da membrana celular é rico em colesterol e esfingomielina, além de muitas proteínas e receptores transmembranares (por exemplo, receptor CD4 do HIV), e desempenha um papel importante na entrada e infecção do vírus. Por outro lado, uma estrutura de membrana de bicamada lipídica viral envolvida derivada da membrana celular também é rica em colesterol e esfingomielina e está envolvida na manutenção da estrutura e função normais das proteínas do envelope viral [16,17], Durante a entrada do HIV em uma célula alvo, o domínio lipídico e os lipídeos (por exemplo, colesterol e esfingomielina) nela contidos fornecem uma plataforma adequada para a interação entre a gp120 do vírus e o receptor celular CD4 ou coreceptor. Estudos mostram que, ao ancorar um inibidor de fusão de membrana viral (por exemplo, peptídeos, proteínas, anticorpos etc.) na superfície da membrana celular, a concentração local do inibidor na membrana celular pode ser aumentada, aumentando significativamente sua atividade antiviral [18-20]. De fato, os inibidores da fusão da membrana do HIV com
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 12/93
6/65 base no polipeptídeo CHR, como T-20, T-1249 e Sifuvirtide, esses polipeptídeos têm a capacidade de interagir com a membrana celular [21-23]. Peisajovich e outros revelaram o importante papel do TRM na interação entre o TRM do T-20 e a membrana celular para exibir função antiviral por análise mutacional dos resíduos de aminoácidos do TRM do T-20 e modificação do grupo funcional lipofílico no terminal C do mesmo [24] . A expressão de T-20 na superfície da membrana celular por uma técnica de construção recombinante também pode aumentar significativamente sua atividade inibitória contra o vírus [25, 26]. Estudos recentes também mostraram que a modificação química do polipeptídeo pelo uso de lipídeos, os chamados lipopeptídeos, pode aumentar a capacidade de atingir a membrana celular e a atividade antiviral do polipeptídeo e melhorar significativamente a estabilidade e a meia-vida biológica do polipeptídeo [18-20, 27], Estudos sobre inibidores da fusão da membrana do HIV mostraram que o aumento da atividade dos polipeptídeos CHR depende da modificação do terminal C, enquanto a modificação do terminal N é adequada para os polipeptídeos NHR, o que é consistente com a estrutura do 6-HB e o mecanismo de fusão de membrana viral. Ou seja, a ancoragem do terminal C é benéfica para um polipeptídeo CHR por se ligar ao NHR do vírus. Em contraste, para um polipeptídeo NHR, a ancoragem da membrana celular no terminal N é mais benéfica para a ligação ao CHR do vírus [19, 28, 29], Assim como no design de polipeptídeos CHR não modificados, o design de lipopeptídeos como inibidores da fusão da membrana do HIV se concentrou no uso do C34 contendo PBD como modelo. Um exemplo representativo é o lipopeptídeo C34-Chol (vide a Figura 1) projetado por Ingallinella e outros em 2009, é obtido por ligação do colesterol ao terminal C do C34 por meio de um ligante flexível e cisteina e, com base nos resultados antivirais, é considerado um inibidor da fusão da membrana do HIV com a atividade mais alta e sua meia-vida metabólica em animais também é significativamente prolongada [20]. No laboratório dos inventores, três compostos
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 13/93
7/65 lipídicos, ácido palmítico (C16), colesterol e diidrosfingosina, são usados para modificar os peptídeos curtos HP23 e HP23L visando bolsos de NHR, respectivamente, para preparar um grupo de lipopeptídeos com alta atividade, em que a estabilidade in vivo do LP-11 também é bastante aprimorada [18]. Recentemente, no laboratório dos inventores, o lipopeptídeo LP-19 modificado com ácido palmítico é obtido com base em um peptídeo curto anti-HIV 2P23 de amplo espectro, que possui maior atividade antiviral e capacidade de drenagem [30]. Esses avanços nos estudos estabeleceram uma base teórica sólida e rotas técnicas para o design de novos inibidores de fusão da membrana do HIV.
REFERÊNCIAS:
1. Flexner C. HIV drug development: the next 25 years. Nat Rev Drug Discov 2007,6:959-966.
2. Este JA, Telenti A. HIV entry inhibitors. Lancet 2007,370:81-88.
3. Eckert DM, Kim PS. Mechanisms of viral membrane fusion and its inhibition. Annu Rev Biochem 2001,70:777-810.
4. Chan DC, Fass D, Berger JM, Kim PS. Core structure of gp41 from the HIV envelope glycoprotein. Cell 1997,89:263-273.
5. Chan DC, Chutkowski CT, Kim PS. Evidence that a prominent cavity in the coiled coil of HIV type 1 gp41 é an attractive drug target. Proc Natl Acad Sci U S A 1998,95:15613-15617.
6. He Y. Synthesized peptide inhibitors of HIV-1 gp41-dependent membrane fusion. Curr Pharm Des 2013,19:1800-1809.
7. Eggink D, Berkhout B, Sanders RW. Inhibition of HIV-1 by fusion inhibitors. Curr Pharm Des 2010,16:3716-3728.
8. Chong H, Yao X, Sun J, Qiu Z, Zhang M, Waltersperger S, et al. The MT hook structure é critical for design of HIV-1 fusion inhibitors. J Biol Chem 2012,287:34558-34568.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 14/93
8/65
9. Chong H, Qiu Z, Su Y, He Y. The N-Terminal T-T Motif of a ThirdGeneration HIV-1 Fusion Inhibitor é Not Required for Binding Affinity and Antiviral Activity. J Med Chem 2015,58:6378-6388.
10. Chong H, Yao X, Qiu Z, Qin B, Han R, Waltersperger S, et al. Discovery of critical residues for viral entry and inhibition through structural Insight of HIV-1 fusion inhibitor CP621-652. J Biol Chem 2012,287:20281-20289.
11. Chong H, Yao X, Qiu Z, Sun J, Qiao Y, Zhang M, et al. The M-T hook structure increases the potency of HIV-1 fusion inhibitor sifuvirtide and overcomes drug resistance. J Antimicrob Chemother 2014,69:6759.
12. Chong H, Qiu Z, Sun J, Qiao Y, Li X, He Y. Two M-T hook residues greatly improve the antiviral activity and resistance profile of the HIV-1 fusion inhibitor SC29EK. Retrovirology 2014,11:40.
13. Xiong S, Borrego P, Ding X, Zhu Y, Martins A, Chong H, et al. A helical short-peptide fusion inhibitor with highly potent activity against human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1), HIV-2, and simian immunodeficiency virus. J Virol 2017,91 :e01839-16.
14. Chong H, Qiu Z, Su Y, Yang L, He Y. Design of a highly potent HIV-1 fusion inhibitor targeting the gp41 pocket. AIDS 2015,29:13-21.
15. Chong H, Yao X, Qiu Z, Sun J, Zhang M, Waltersperger S, et al. Shortpeptide fusion inhibitors with high potency against wild-type and enfuvirtide-resistant HIV-1. FASEB J 2013,27:1203-1213.
16. Brugger B, Glass B, Haberkant P, Leibrecht I, Wieland FT, Krausslich HG. The HIV lipidome: a raft with an unusual composition. Proc Natl Acad Sci U S A 2006,103:2641-2646.
17. Ono A, Freed EQ. Plasma membrane rafts play a critical role in HIV-1 assembly and release. Proc Natl Acad Sci U S A 2001,98:13925-13930.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 15/93
9/65
18. Chong H, Wu X, Su Y, He Y. Development of potent and long-acting HIV1 fusion inhibitors. AIDS 2016,30:1187-1196.
19. Wexler-Cohen Y, Shai Y. Membrane-anchored HIV-1 N-heptad repeat peptides are highly potent cell fusion inhibitors via an altered mode of action. PLoS Pathog 2009,5:e1000509.
20. Ingallinella P, Bianchi E, Ladwa NA, Wang YJ, Hrin R, Veneziano M, et al. Addition of a cholesterol group to an HIV-1 peptide fusion inhibitor dramatically increases its antiviral potency. Proc Natl Acad Sci U S A 2009,106:5801-5806.
21. Matos PM, Castanho MA, Santos NC. HIV-1 fusion inhibitor peptides enfuvirtide and T-1249 interact with erythrocyte and lymphocyte membranes. PLoS One 2010,5:e9830.
22. Franquelim HG, Loura LM, Santos NC, Castanho MA. Sifuvirtide screens rigid membrane surfaces, establishment of a correlation between efficacy and membrane domain selectivity among HIV fusion inhibitor peptides. J Am Chem Soc 2008,130:6215-6223.
23. Veiga AS, Santos NC, Loura LM, Fedorov A, Castanho MA. HIV fusion inhibitor peptide T-1249 é able to insert ou adsorb to lipidic bilayers. Putative correlation with improved efficiency. J Am Chem Soc 2004,126:14758-14763.
24. Peisajovich SG, Gallo SA, Blumenthal R, Shai Y. terminal C octylation rescues an inactive T20 mutant: implications for the mechanism of HIV/SIMIAN immunodeficiency virus-induced membrane fusion. J Biol Chem 2003,278:2101221017.
25. Hildinger M, Dittmar MT, Schult-Dietrich P, Fehse B, Schnierle BS, Thaler S, et al. Membrane-anchored peptide inhibits human immunodeficiency virus entry. J Virol 2001,75:3038-3042.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 16/93
10/65
26. Egelhofer M, Brandenburg G, Martinius H, Schult-Dietrich P, Melikyan G, Kunert R, et al. Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 entry in cells expressing gp41-derived peptides. J Virol 2004,78:568-575.
27. Ashkenazi A, Viard M, Unger L, Blumenthal R, Shai Y. Sphingopeptides: dihydrosphingosine-based fusion inhibitors against wild-type and enfuvirtide-resistant HIV-1. FASEB J 2012,26:4628-4636.
28. Wexler-Cohen Y, Shai Y. Demonstrating the terminal C boundary of the HIV 1 fusion conformation in a dynamic ongoing fusion process and implication for fusion inhibition. FASEB J 2007,21:3677-3684.
29. Wexler-Cohen Y, Ashkenazi A, Viard M, Blumenthal R, Shai Y. Virus-cell and cell-cell fusion mediated by the HIV-1 envelope glycoprotein é inhibited by short gp41 terminal N membrane-anchored peptides lacking the critical pocket domain. FASEB J 2010,24:4196-4202.
30. Chong H,Xue J, Xiong S,Cong Z,Ding X,Zhu Y,Liu Z,Chen T,Feng Y,He L,Guo Y,Wei Q,Zhou Y,Qin C,He Y. A lipopeptide HIV-1/2fusion inhibitor with highly potent in vitro, ex vivo and in vivo antiviral activity.J Virol 2017, 91: e0028817.
REVELAÇÕES DA PRESENTE INVENÇÃO [008] O problema técnico a ser resolvido pela presente invenção se refere a como inibir potentemente o HIV.
[009] Para resolver o problema técnico acima, a presente invenção fornece um potente inibidor de fusão da membrana do HIV. O potente inibidor de fusão da membrana do HIV fornecido pela presente invenção é um lipopeptídeo com uma atividade inibidora potente contra o HIV, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo, em que o lipopeptídeo é o seguinte a) ou b):
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 17/93
11/65
a) um lipopeptídeo formado ligando um polipeptideo que possui uma atividade antiviral a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila do polipeptideo;
b) um lipopeptídeo formado por ligação de um polipeptideo com uma atividade antiviral a um grupo protetor terminal e um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila do polipeptideo, em que o grupo protetor terminal é um grupo protetor terminal amino e/ou um grupo protetor terminal carboxílico;
em a) e b), o polipeptideo é qualquer um de P1 a P5;
o P1 tem uma sequência conforme mostrado na Fórmula I a seguir,
Fórmula I:
Xi X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11 Xi 2X13X14X15X16X17X18X19X20X21X22X23X24X25X26
X27X28 na Fórmula I,
Xi a X28 são cada um resíduo de aminoácido, X1 é W, L ou Y, X2 é E ou T, X3 é Q, A ou S, X4 é K, N ou L, X5 é I ou L, X6 é E, D, K, R ou A, X7 é E, D, K, R ou A, Xs é L ou I, X9 é L ou I, X10 é K, R, E, D ou A, X11 é K, R, E, D ou A, X12 é A ou
S, X13 é E, D, K, R ou A, Xu é E, D, K, R ou A, X15 é Q, X16 é Q, X17 é K, R, E, Dou
A, Xis é K, R, E, D ou A, X19 é N, X20 é E ou D, e X21 é E, D, K, R ou A, X22 é E,D,
K, R ou A, X23 é L ou I, X24 é K, R, E, D ou A, X25 é K, R, E, D ou A, X26 é L ouI,
X27 é E ou D, X28 é K ou R;
ο P2 é um polipeptideo obtido por exclusão de 1 a 4 resíduosde aminoácidos no terminal amino do P1 (ou seja, 1 a 4 dos quatro resíduosde aminoácidos de Xi, X2, X3 e X4 na Fórmula I);
ο P3 é um polipeptideo obtido pela exclusão de 1 a 3 resíduosde aminoácidos no terminal carboxila de P1 (isto é, 1 a 3 dos três resíduosde aminoácidos de X26, X27 e X28 na Fórmula I);
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 18/93
12/65 ο P4 é um polipeptideo obtido pela adição de um resíduo de cisteína ao terminal carboxila do P1;
ο P5 tem uma sequência, como mostrado na Fórmula II a seguir,
Fórmula II:
X5X6X7X8X9X10X11 Xi 2X13X14X15X16X17X18X19X20X21X22X23X24X25 na Fórmula II, as definições de X5 a X25 são as mesmas da Fórmula I;
polipeptideo possuindo uma atividade antiviral contra qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
v1: HIV-1,
HIV-2 e SIV;
v2: HIV-1 e HIV-2;
v3: HIV-1 e SIV;
v4: HIV-2 e SIV;
v5: HIV-1;
v6: HIV-2; e v7: SIV.
[010] Foi provado experimentalmente que ο P5 acima é uma sequência central do lipopeptídeo da presente invenção. A atividade antiviral da sequência central é efetivamente melhorada adicionando 1 a 4 resíduos de aminoácidos no seu terminal N e/ou adicionando 1-3 resíduos de aminoácidos no seu terminal C.
[011] No lipopeptídeo acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um derivado do mesmo, 0 lipopeptídeo possui atividade antiviral mais alta que a LP19 e/ou T-20 e/ou C34-Chol.
[012] O P1 tem uma sequência, como mostrado na seguinte sequência:
X1X2X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
ο P2 é P2-1, P2-2, P2-3 ou P2-4, em que:
ο P2-1 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 19/93
13/65
X2X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
ο Ρ2-2 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
ο P2-3 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
ο P2-4 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir: IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
ο P3 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
X1X2X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKK;
ο P4 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
X1X2X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEKC;
no P1, P2-1, P2-2, P2-3, P2-4, P3 e P4, as definições de Xi, X2, X3, X4, X9 e X12 são as mesmas que aquelas da Fórmula I.
[013] No lipopeptídeo acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um derivado deste, exceto Xn (n é um número natural dentre 1 a 28) nas sequências do polipeptídeo, cada uma das letras maiúsculas é uma abreviação de um aminoácido, em que a abreviação de um aminoácido tem os significados bem conhecidos na técnica, por exemplo: Y é tirosina, T é treonina, S é serina, L é leucina, I é isoleucina, E é ácido glutâmico, K é lisina, Q é glutamina, N é asparagina, A é alanina e W é triptofano. Todos os aminoácidos nas sequências dos polipeptídeos podem ser aminoácidos da forma L e um ou mais (por exemplo, 2-5, 24 ou 2-3) aminoácidos dos quais também podem ser substituídos por aminoácidos de forma D, aminoácidos modificados artificialmente, aminoácidos raros presentes na natureza, etc., para melhorar a biodisponibilidade, estabilidade e/ou atividade antiviral dos polipeptídeos, em que 0 aminoácidos na forma D se refere a um aminoácido correspondente a um aminoácido na forma L que constitui uma proteína; 0 aminoácido modificado artificialmente se refere a um aminoácido na forma de L
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 20/93
14/65 comum que constitui uma proteína e é modificado por meio de metilação, fosforilação ou semelhante; e o aminoácido raro presente na natureza inclui aminoácidos incomuns que constituem uma proteína e um aminoácido que não constitui uma proteína, por exemplo, 5-hidroxilisina, metil-histidina, ácido gamaaminobutírico, homoserina, etc.
[014] No lipopeptídeo acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo, o P1 é P-80/84/85/52, P-87/51 ou P50, em que o P80/84/85/52 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 1 na listagem de sequências (ou seja, o polipeptídeo representado pelos resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 28 do LP-80, LP-84, LP-85 ou LP-52 na Figura 2), o P-87/51 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 2 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado por resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 28 do LP-87 ou LP-51 na Figura 2), e ο P50 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 3 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado por resíduos de aminoácidos nas posições de 1-28 do LP-50 na Figura 2). Ο P2-1 é P-88/62, em que o P-88/62 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 4 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado pelos resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 27 do LP-88 ou LP-62 na Figura 2). Ο P2-2 é P63 ou P60, em que o P63 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 5 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado por resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 26 do LP- 63 na Figura 2) e ο P60 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 6 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado por resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 26 do LP-60 na Figura 2) Ο P2-3 é P-89/64, em que o P-89/64 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 7 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado pelos resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 25 do LP-89 ou
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 21/93
15/65
LP-64 na Figura 2). Ο P2-4 é P-90/65 ou P61, em que o P-90/65 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 8 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado por resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 24 do LP-90 ou LP-65 na Figura 2); e ο P61 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 9 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado por resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 24 do LP-61 na Figura 2). Ο P3 é P-91/55, em que o P-91/55 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 10 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado pelos resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 25 do LP-91 ou LP-55 na Figura 2). Ο P4 é um P83 ou P86, em que ο P83 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 11 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado pelos resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 29 do LP-83 na Figura 2), e ο P86 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 12 na listagem de sequências (isto é, o polipeptídeo representado por resíduos de aminoácidos nas posições de 1 a 29 do LP-86 na Figura 2 ) [015] No lipopeptídeo acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um derivado do mesmo, o composto lipofílico pode ser um ácido graxo contendo 8 a 20 átomos de carbono, colesterol (Choi), diidrossfingosina (DHS), vitamina E (tocoferol, Toe), etc.
[016] No lipopeptídeo acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou um derivado deste, o ácido graxo contendo 8 a 20 átomos de carbono pode ser ácido palmítico (também conhecido como ácido hexadecanóico) (C16) ou ácido esteárico (C18).
[017] No lipopeptídeo acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou um derivado deste, o composto lipofílico pode estar ligado à cadeia lateral do aminoácido terminal ou pode estar diretamente ligado à cadeia peptídica. A modificação com um ácido graxo, diidrosfingosina ou vitamina E como um composto
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 22/93
16/65 lipofílico ligado ao terminal C pode ser realizada por uma reação de amidação do mesmo com o grupo amino da cadeia lateral da lisina (Lys) no final do polipeptídeo, e a modificação com colesterol pode ser realizado enxertando o colesterol na cadeia polipeptídica por meio de uma reação de formação de tioéter com uma alta seletividade química que é realizada entre um grupo tiol de cadeia lateral de cisteína (Cys) no final do polipeptídeo e bromoacetato de colesterila.
[018] No lipopeptídeo acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado deste, o lipopeptídeo pode ser qualquer um dos 12 lipopeptídeos a seguir LP-80/84/85/52, LP-90/65, LP-87/51, LP -88/62, LP-50, LP-83, LP-91/55, LP86, LP-63, LP-89/64, LP-60 e LP-61.
[019] O LP-80/84/85/52 é LP-80/84/85/52a ou LP-80/84/85/52b, em que o LP-80/84/85/52a é formado por ligação do P-80/84/85/52 a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila do P-80/84/85/52; o LP-80/84/85/52b é formado ligando o LP-80/84/85/52a ao grupo protetor terminal; no LP-80/84/85/52a e LP80/84/85/52b, o composto lipofílico é ácido esteárico, diidrosfingosina, vitamina E ou ácido palmítico.
[020] O LP-90/65 é LP-90/65a ou LP-90/65b, em que o LP-90/65a é formado por ligação do P-90/65 a um composto lipofílico vinculado ao terminal carboxila do P90/65; o LP-90/65b é formado ligando o LP-90/65a ao grupo protetor terminal; no LP-90/65a e LP-90/65b, o composto lipofílico é ácido esteárico ou ácido palmítico.
[021] O LP-87/51 é LP-87/51 a ou LP-87/51 b, em que o LP-87/51 a é formado por ligação do P-87/51 a um composto lipofílico vinculado ao terminal carboxila do P87/51; o LP-87/51 b é formado ligando o LP-87/51 a ao grupo protetor terminal; no LP-87/51 a e LP-87/51 b, o composto lipofílico é diidrosfingosina ou ácido palmítico.
[022] O LP-88/62 é LP-88/62a ou LP-88/62b, em que o LP-88/62a é formado por ligação do P-88/62 a um composto lipofílico vinculado ao terminal carboxila do P88/62; o LP-88/62b é formado ligando o LP-88/62a ao grupo protetor terminal; no
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 23/93
17/65
LP-88/62a e LP-88/62b, o composto lipofílico é ácido esteárico ou ácido palmítico.
[023] O LP-50 é LP-50a ou LP-50b, em que o LP-50a é formado por ligação do P-50 ao ácido palmítico ligado ao terminal carboxila do P-50; o LP-50b é formado ligando o LP-50a ao grupo protetor de terminal.
[024] O LP-83 é LP-83a ou LP-83b, em que o LP-83a é formado por ligação do P-83 ao colesterol ligado ao terminal carboxila do P-83; o LP-83b é formado ligando o LP-83a ao grupo protetor do terminal.
[025] O LP-91/55 é LP-91/55a ou LP-91/55b, em que o LP-91/55a é formado por ligação do P-91/55 a um composto lipofílico vinculado ao terminal carboxila do P91/55; o LP-91/55b é formado ligando o LP-91/55a ao grupo protetor terminal; no LP-91/55a e LP-91/55b, o composto lipofílico é ácido esteárico ou ácido palmítico.
[026] O LP-86 é LP-86a ou LP-86b, em que o LP-86a é formado por ligação do P-86 ao colesterol ligado ao terminal carboxila do P-86; o LP-86b é formado ligando o LP-86a ao grupo protetor do terminal. O LP-63 é LP-63a ou LP-63b, em que o LP-63a é formado por ligação do P-63 ao ácido palmítico ligado ao terminal carboxila do P-63; o LP-63b é formado ligando o LP-63a ao grupo protetor do terminal. O LP-89/64 é LP-89/64a ou LP-89/64b, em que o LP-89/64a é formado por ligação do P-89/64 a um composto lipofílico vinculado ao terminal carboxila do P89/64; o LP-89/64b é formado ligando o LP-89/64a ao grupo protetor terminal; no LP-89/64a e LP-89/64b, o composto lipofílico é ácido esteárico ou ácido palmítico.
[027] O LP-60 é LP-60a ou LP-60b, em que o LP-60a é formado por ligação do P-60 ao ácido palmítico ligado ao terminal carboxila do P-60; o LP-60b é formado ligando o LP-60a ao grupo protetor do terminal. O LP-61 é LP-61a ou LP-61b, em que o LP-61 a é formado por ligação do P-61 ao ácido palmítico ligado ao terminal carboxila do P-61; o LP-61 b é formado ligando o LP-61 a ao grupo protetor do terminal.
[028] No lipopeptídeo acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 24/93
18/65 ou um derivado do mesmo, o lipopeptídeo da presente invenção pode conter um grupo protetor do terminal N no terminal amino, em que o grupo protetor do terminal N pode ser qualquer um selecionado a partir do grupo que consiste em acetila, amino, maleila, succinila, t-butoxicarbonila, benzilóxi, outro grupo hidrofóbico e grupo transportador macromolecular; o lipopeptídeo da presente invenção pode conter um grupo protetor do terminal C no terminal carboxila, em que o grupo protetor do terminal C pode ser qualquer um selecionado do grupo que consiste em amino, amida, carboxila, t-butoxicarbonila, outro grupo hidrofóbico e grupo transportador macromolecular.
[029] Qualquer polipeptídeo selecionado do grupo que consiste em P1 a P4 acima, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo também está dentro do escopo da presente invenção.
[030] O derivado do polipeptídeo pode ser especificamente pelo menos um selecionado do grupo que consiste nos seguintes 1) a 5):
1) um derivado obtido por ligação de um grupo protetor do terminal N ao terminal amino do polipeptídeo e/ou por ligação de um grupo protetor do terminal C ao terminal carboxila do polipeptídeo;
2) um derivado obtido por ligação de um oligopeptídeo ou de um composto lipofílico ao terminal carboxila do polipeptídeo;
3) um derivado obtido por ligação de um oligopeptídeo ou de um composto lipofílico ao terminal amino do polipeptídeo;
4) um derivado obtido por ligação de um oligopeptídeo ou de um composto lipofílico ao terminal carboxila e ao terminal amino do polipeptídeo; e
5) um derivado obtido pela modificação do polipeptídeo com uma proteína, um polietilenoglicol ou uma maleimida.
[031] O multímero de PM1 ou PM2 também está dentro do escopo da presente invenção, em que
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 25/93
19/65 ο ΡΜ1 é um multímero formado pelo lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado deste; e ο PM2 é um multímero formado pelo polipeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo.
[032] A composição a seguir também está dentro do escopo da presente invenção. Uma composição compreendendo C1) e C2), em que
C1) é C11), C12) e/ou C13), o C11) é o lipopeptídeo, um derivado ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, o C12) é o polipeptídeo, um seu derivado, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, o C13) é o multímero;
o C2) é um veículo ou adjuvante farmaceuticamente aceitável;
a composição possui pelo menos uma função das seguintes funções F1) F5):
F1) possui atividade contra vírus;
F2) tratamento e/ou prevenção e/ou tratamento adjuvante de uma doença causada por uma infecção por vírus;
F3) inibição da fusão de vírus e células;
F4) inibir a entrada do vírus na célula; e
F5) inibição da replicação do vírus;
em F1)-F5), o vírus é qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
v1: HIV-1, HIV-2 e SIV;
v2: HIV-1 e HIV-2;
v3: HIV-1 e SIV;
v4: HIV-2 e SIV;
v5: HIV-1;
v6: HIV-2; e v7: SIV.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 26/93
20/65 [033] O uso de C11), C12), C13) e/ou C14) na fabricação de pelo menos um produto selecionado do grupo que consiste em E1)-E5) também está dentro do escopo da presente invenção, em que o C14) é a composição;
ο E1) é um produto contra vírus, como um medicamento ou uma vacina;
ο E2) é um produto, como um medicamento ou uma vacina, para tratamento e/ou prevenção e/ou tratamento adjuvante de uma doença causada por uma infecção por vírus, como AIDS;
ο E3) é um produto para inibir a fusão de vírus e células, como um medicamento ou uma vacina;
ο E4) é um produto para inibir a entrada de vírus na célula, como um medicamento ou uma vacina; e ο E5) é um produto para inibir a replicação de vírus, como um medicamento ou uma vacina;
no E1)-E5), o vírus é qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
v1: HIV-1, HIV-2 e SIV;
v2: HIV-1 e HIV-2;
v3: HIV-1 e SIV;
v4: HIV-2 e SIV;
v5: HIV-1;
v6: HIV-2; e v7: SIV.
[034] A presente invenção fornece um composto farmacêutico.
[035] O composto farmacêutico fornecido pela presente invenção é o C11), o C12) ou o C13).
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 27/93
21/65 [036] No composto farmacêutico acima, o composto farmacêutico tem pelo menos um dos seguintes usos U1)-U5):
U1) uso contra vírus
U2) uso para tratamento e/ou prevenção e/ou tratamento adjuvante de uma doença causada por uma infecção por vírus (como AIDS);
U3) uso para inibir a fusão de vírus e células;
U4) uso para inibir a entrada de vírus na célula; e
U5) uso para inibir a replicação de vírus;
em U1)-U5), o vírus é qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
v1: HIV-1, HIV-2 e SIV;
v2: HIV-1 e HIV-2;
v3: HIV-1 e SIV;
v4: HIV-2 e SIV;
v5: HIV-1;
v6: HIV-2; e v7: SIV.
[037] Um método de tratamento e/ou prevenção de uma infecção causada por um vírus em um animal também está dentro do escopo de proteção da presente invenção.
[038] O método de tratamento e/ou prevenção de uma infecção causada por um vírus em um animal compreende administrar a um animal em questão o C11), o C12), o C13) e/ou o C14) para inibira infecção viral no animal, em que o C14 ) é a composição; e o vírus é qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
v1: HIV-1, HIV-2 e SIV;
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 28/93
22/65 v2: HIV-1 e HIV-2;
v3: HIV-1 e SIV;
v4: HIV-2 e SIV;
v5: HIV-1;
v6: HIV-2; e v7: SIV.
[039] O sal farmaceuticamente aceitável do lipopeptídeo e o sal farmaceuticamente aceitável do polipeptídeo de acordo com a presente invenção incluem acetato, lactobionato, benzenossulfonato, laurato, benzoato, malato, bicarbonate, maleato, bissulfato, mandelato, bitartarato, mesilato, borato, metilbrometo, brometo, metilnitrato, edetato de cálcio, metilssulfato, camsilato, mucato, carbonato, napsilato, cloreto, nitrato, clavulanato, N-metilglucamina, citrato, sal de amônio, dicloridrato, oleato, edetato, oxalato, edisilato, pamoato, embonato, palato, estolato esilato, pantotenato, fumarato, fosfato/difosfato, gluceptado, poligalacturonato, gluconato, salicilato, glutamato, estearato, glicolilarsanilato, sulfato, hexilresorcinato, subacetato, hidrabamina, succinato, bromidrato, tanato, hidrocloreto de hidrocloreto de cloridrato, cloridrato de cloridrato de cloridrato de tetrato triiodeto, lactato e valerato etc. Dependendo do uso, o sal farmaceuticamente aceitável pode ser formado a partir de cátions como sódio, potássio, alumínio, cálcio, lítio, magnésio, zinco e bismuto, ou pode ser formado a partir de uma base como amônia, etilenodiamina, N-metil-glutamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N'dibenzil-etileno-diamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, dietilamina, piperazina, tris (hidroximetilaminometano) e hidróxido de tetrametilamônio. Estes sais podem ser preparados por métodos padrão, por exemplo, por uma reação de um ácido livre com uma base orgânica ou inorgânica. Na presença de um grupo básico (por exemplo, um grupo amino), um sal ácido como um cloridrato, um bromidrato, um acetato, um pamoato ou semelhante pode ser usado como uma
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 29/93
23/65 forma de um medicamento; na presença de um grupo ácido (por exemplo, -COOH) ou um grupo álcool, um éster farmaceuticamente aceitável, como acetato, maleato, pivaloiloximetila e um éster conhecido nas literaturas para melhorar a solubilidade e a hidrolisabilidade pode ser usado como um forma defármaco ou pró-fármaco de liberação sustentada.
[040] Na presente invenção, a atividade antiviral também pode ser referida como atividade inibidora contra vírus, especificamente, inibindo a fusão de vírus e célula e/ou inibindo a entrada de vírus na célula e/ou inibindo a replicação de vírus. Um efeito antiviral de ação significativamente longa é exibido em primatas não humanos (macacos).
[041] O lipopeptídeo ou polipeptideo, seu derivado, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, o multímero, a composição ou o composto farmacêutico fornecido pela presente invenção, pode ser usado para tratar a infecção por HIV (HIV-1 e/ou HIV-2) e/ou infecção por SIV, incluindo vários estágios da infecção pelo HIV e/ou infecção por SIV, como o estágio inicial, estágio simpático e estágios assintomáticos da AIDS. O lipopeptídeo ou polipeptideo, seu derivado, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, o multímero, a composição ou o composto farmacêutico fornecido pela presente invenção, também podem ser utilizados para prevenir a infecção por HIV (HIV-1 e/ou HIV-2) e/ou infecção por SIV, incluindo préexposição ou após exposição suspeita, como transfusão de sangue, transplante de órgãos, troca de fluidos corporais, mordida, picadas acidentais na agulha ou exposição ao sangue do paciente durante a cirurgia.
[042] Na prática, o lipopeptídeo ou polipeptideo, seu derivado, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, o multímero, a composição ou o composto farmacêutico de acordo com a presente invenção podem ser administrados a um paciente como um medicamento diretamente ou em mistura com um veículo ou excipiente adequado para o tratamento e/ou prevenção da infecção pelo HIV. O
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 30/93
24/65 veículo no presente documento inclui, porém não está limitado a, veículo solúvel em água (por exemplo, polietileno glicol, polivinilpirrolidona, ácido orgânico, etc.), veículo pouco solúvel (por exemplo, etilcelulose, estearato de colesterol, etc.), veículo solúvel entérico (por exemplo, ftalato de acetato de celulose, carboximetil celulose, etc.), em que o veículo solúvel em água é preferido. Ao usar esses materiais, várias formas de preparação podem ser usadas, incluindo, entre outras, comprimidos, cápsulas, gotas, aerossol, pílula, pó, solução, suspensão, emulsão, grânulo, lipossoma, agente transdérmico, comprimido bucal, supositório, congelamento, pó seco para injeção e similares, em que o supositório pode ser um supositório vaginal, um anel vaginal ou uma pomada, creme ou gel adequado para aplicação vaginal. A forma de preparação pode ser uma preparação comum, uma preparação de liberação prolongada, uma preparação de liberação controlada e vários sistemas de liberação de partículas. A fim de obter uma forma de preparação unitária em um comprimido, pode ser usada uma grande variedade de veículos conhecidos na técnica. Exemplos de veículos são, por exemplo, diluente e absorvente, como amido, dextrina, sulfato de cálcio, lactose, manitol, sacarose, cloreto de sódio, glicose, ureia, carbonato de cálcio, caulino, celulose microcristalina e silicato de alumínio; umectante e aglutinante, como água, glicerol, polietileno glicol, etanol, propanol, pasta de amido, dextrina, xarope, mel, solução de glicose, goma arábica, pasta de gelatina, carboximetilcelulose de sódio, goma-laca, metilcelulose, fosfato de potássio e polivinilpirrolidona; desintegrante, como amido seco, alginato, ágar em pó, amido de algas marrom, bicarbonate de sódio e ácido cítrico, carbonato de cálcio, polioxietileno, éster de ácido graxo sorbitol, dodecilsulfato de sódio, metil celulose e etil celulose; inibidor de desintegração, como sacarose, triestearato de gliceril, manteiga de cacau, óleo hidrogenado e similares; promotores de absorção, tais como sais de amônio quaternário e lauril sulfato de sódio; lubrificante, como talco, silica, amido de milho, estearato, ácido bórico, parafina líquida e polietileno glicol. O
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 31/93
25/65 comprimido também pode ser ainda formulado em um comprimido revestido, como comprimido revestido de açúcar, comprimido revestido por película, comprimido revestido entérico ou comprimido de camada dupla ou múltipla. A fim de obter uma forma de preparação unitária em uma pílula, pode ser usada uma grande variedade de veículos conhecidos na técnica. Exemplos de veículos são, por exemplo, diluente e absorvente, como glicose, lactose, amido, manteiga de cacau, óleo vegetal hidrogenado, polivinilpirrolidona, Gelucire, caulino e talco; aglutinante, como goma arábica, tragacanto, gelatina, etanol, mel, açúcar líquido, pasta de arroz e pasta de farinha; desintegrante, como pó de ágar, amido seco, alginato, dodecilsulfato de sódio, metil celulose e etil celulose. A fim de obter uma forma de preparação unitária em um supositório, pode ser usada uma grande variedade de veículos conhecidos na técnica. Exemplos do veículo são, por exemplo, polietilenoglicol, lecitina, manteiga de cacau, álcool superior, éster de álcool superior, gelatina e glicerídeo semissintético. Para formular uma preparação unitária em uma preparação para injeção, como uma solução, uma emulsão, um pó liofilizado e uma suspensão, todos os diluentes convencionais podem ser usados, por exemplo, água, etanol, polietileno glicol, 1,3-propanodiol, álcool isoestearílico etoxilado, álcool isoestearílico polioxilado, éster de ácido graxo polioxietileno sorbitano, etc. e tampão convencional de co-solvente, agente de ajuste de pH também pode ser adicionado. Além disso, se necessário, corante, conservante, perfume, sabor, adoçante e outro material podem opcionalmente ser adicionados à preparação farmacêutica.
[043] As formas de preparação acima podem ser administradas por injeção, incluindo injeção subcutânea, injeção intravenosa, injeção intramuscular e injeção intraperitoneal, injeção ou infusão intracisternal etc., administração intraluminal, como administração transretal, vaginal e sublingual, administração respiratória, como administração nasal; e administração da mucosa. Entre as vias de
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 32/93
26/65 administração acima, é preferida a administração por injeção e uma via de injeção preferida é uma injeção subcutânea.
[044] A dose de administração do lipopeptídeo ou polipeptídeo, seu derivado, seu sal farmaceuticamente aceitável, o multímero, a composição ou o composto farmacêutico da presente invenção depende de vários fatores, por exemplo, a natureza e gravidade de uma doença a ser prevenida ou tratado, o sexo, idade, peso e resposta individual de um paciente ou animal, um ingrediente ativo específico usado, uma via de administração e uma frequência de administração etc. A dose acima pode ser administrada em uma forma de dosagem unitária única ou múltipla - (por exemplo, duas, três ou quatro) formas de dosagem unitárias.
[045] Um nível de dose terapeuticamente eficaz específico para qualquer paciente em particular dependerá de vários fatores, incluindo transtorno sendo tratado e a gravidade do mesmo; a atividade do ingrediente ativo específico usado; uma composição particular usada; a idade, peso, estado geral de saúde, sexo e dieta de um paciente; um tempo de administração, uma via de administração e uma taxa de excreção de um ingrediente ativo específico usado; uma duração de tratamento; um medicamento usado em conjunto com o ingrediente ativo específico usado em combinação ou simultaneamente; e fatores similares bem conhecidos na área médica. Por exemplo, é prática comum na arte começar com uma dosagem de um ingrediente ativo em um nível abaixo do necessário para alcançar um efeito terapêutico desejado e aumentar gradualmente a dosagem até que o efeito desejado seja alcançado. Em geral, o lipopeptídeo, seu derivado, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, o multímero, a composição ou o composto farmacêutico da presente invenção podem ser administrados a um mamífero, particularmente um humano, em uma dosagem entre 0,001 e 1.000 mg/kg de peso corporal/dia, como entre 0,01 e 100 mg/kg de peso corporal/dia e entre 0,1 e 10 mg/kg de peso corporal/dia e com uma frequência de 1 -2 vezes/dia, 1 vez/2 dias, 1
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 33/93
27/65 vez/3 dias, 1 vez/4 dias, 1 vez/5 dias, 1 vez/6 dias ou 1 vez/7 dias, preferencialmente 1 vez/1 -2 dias ou 1 -2 vezes/semana.
[046] O lipopeptídeo ou polipeptídeo, seu derivado, ou seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, o multímero, a composição ou o composto farmacêutico da presente invenção pode ser usado diretamente sozinho para o tratamento ou prevenção de pacientes infectados pelo HIV, ou pode ser usado em combinação com um ou mais medicamentos anti-HIV, simultaneamente ou em intervalos para obter um efeito terapêutico geral melhorado. Os medicamentos antiHIV incluem, porém não estão limitados aos inibidores da transcriptase reversa, inibidores de protease, inibidores de entrada, inibidores de integração, inibidores de maturação e similares. O inibidor da transcriptase reversa acima pode ser um ou mais inibidores da transcriptase reversa de nucleosídeo, por exemplo, Zidovudina (AZT), Lamivudina (3TC), Didanosina (ddl), Zalcitabina (ddC), Stavudina (d4T), Tenofovir (TDF), Abacavir ( ABC), entricitabina (FTC) etc., e também pode ser um ou mais inibidores da transcriptase reversa não-nucleosídicos, por exemplo, Nevirapina (NVP), Efavirenz (EFV), Delavirdina (DLV), Etravirina (ETR), etc. Os inibidores de protease acima podem ser um ou mais inibidores selecionados do grupo que consiste em Saquinavir (SQV-HGC), Indinavir (IDV), Ritonavir (RTV), Amprenavir (APV), Lopinavir e Ritonavir (LPV/RTV), Nelfinavir (NFV)), Fosamprenavir cálcio (FPV), Reyataz (ATV), Prezista e similares. Os inibidores de integração acima podem ser um ou mais inibidores selecionados do grupo que consiste em Raltegravir, Dolutegravir, Elvitegravi e similares. Os inibidores de invasão acima podem ser um ou mais de Maraviroc, T-20, TAK-779, T2635, VIRIP (VIR-576), Sifuvirtida, Albuvirtide, proteína CD4 solúvel e seu análogo, anticorpo contra o coreceptor CCR5 (por exemplo, PRO140) , anticorpo monoclonal contra gp120/gp41 (por exemplo, VRC01 e 10E8), anticorpo monoclonal contra o receptor CD4 (por exemplo, TNX-355) e similares.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 34/93
28/65 [047] A estratégia para projetar o lipopeptídeo da presente invenção é que: a sequência TRM de terminal C de 8 aminoácidos (WASLWNWF) do polipeptídeo T-20 é substituída por um composto lipofílico, como um ácido graxo de cadeia longa (por exemplo, ácido palmítico ou ácido esteárico), colesterol, diidrossfingosina ou vitamina E para produzir um lipopeptídeo compreendendo uma sequência polipeptídica correspondente aos 28 primeiros aminoácidos de T-20, ou seja, correspondendo aos aminoácidos nas posições 127-154 da gp41 do HIV- 1 cepa HXB 2; além disso, os resíduos de aminoácidos EE ** KK que contribuem para a formação dos pares de íons são introduzidos por mutação do aminoácido na superfície de ligação não NHR (ou seja, o aminoácido correspondente nas posições de b, c e f, g) da sequência polipeptídica e os resíduos de aminoácidos correspondentes do HIV-2 e/ou SIV são introduzidos pela mutação do aminoácido na superfície de ligação do NHR (isto é, o aminoácido correspondente nas posições de a e d) da sequência de polipeptídeo. Além disso, a sequência de terminal C e/ou terminal N do lipopeptídeo produzido é truncada para produzir um conjunto de lipopeptídeos com menos de 28 aminoácidos, ou seja, contendo 24 a 27 aminoácidos, e a sequência correspondente aos aminoácidos nas posições de 5 a 25 do T-20, ou seja, correspondendo aos aminoácidos nas posições de 131 a 151 da gp41 da cepa HXB2, é determinada como a sequência central (isto é, a sequência P5) dos potentes inibidores de HIV da presente invenção. Os polipeptídeos da presente patente têm uma característica estrutural de sequência pendente, um medicamento químico com um composto lipofílico ligado ao terminal C e uma capacidade notavelmente aprimorada de se ligar a uma sequência alvo, uma atividade inibidora extremamente forte contra o HIV (HI -1 e/ou HIV-2) e/ou SIV, e capacidade altamente potente de inibir a fusão célula-célula, entrada de vírus e infecção medicada pela proteína do envelope do HIV (Env). A atividade anti-HIV do lipopeptídeo da presente invenção é maior que a do T-20 em várias milhares de
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 35/93
29/65 vezes ou até dezenas de milhares de vezes, e também é significativamente maior que a do lipopeptídeo anti-HIV com uma atividade mais alta tais como C34-Chol, LP11, LP-19 e similares. Entretanto, o lipopeptídeo da presente invenção tem muitas vantagens, como efeito estável de ação prolongada, síntese fácil e baixo custo. O lipopeptídeo da presente invenção possui atividade inibidora muito forte contra vários subtipos de HIV-1 (como subtipos A, B, C, A/E e B/C), cepas resistentes a T20, cepas de HIV-2 e vírus de imunodeficiência símia (SIV).
DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [048] A Figura 1 mostra a estrutura e a função da proteína de fusão gp41 de HIV e um inibidor de fusão de membrana com base em polipeptídeo. Em que FP se refere a um peptídeo de fusão gp41; NHR se refere a uma sequência de repetição no terminal N; CHR se refere a uma sequência de repetição no terminal C; e TM se refere a uma região transmembranar. A posição indicada pela seta é a posição “gancho M-T” ou a posição motivo rico em triptofano (TRM). As sequências N36 e N39 do polipeptídeo NHR estão acima do diagrama esquemático dos locais resistentes a gp41 e T-20 e sítios hidrofóbicos de formação de bolsos são marcados respectivamente, e a sequência de CHR e a sequência de um inibidor com base na sequência de CHR estão abaixo do diagrama esquemático da gp41, em que as sequências M-T e PBD estão sublinhadas, a sequência TRM é indicada em itálico e os aminoácidos mutados das sequências polipeptídicas da presente invenção são indicados em negrito. Os aminoácidos de todos os polipeptídeos ou lipopeptídeos na figura tem uma modificação de acetilação no terminal amino (Ac), e uma modificação de amidação na extremidade do término cadrboxila (-NH2).
[049] A Figura 2 mostra as estruturas de sequência dos inibidores da fusão da membrana do HIV e sua atividade antiviral. Onde a sequência TRM do T-20 é indicada em itálico, as sequências gancho de M-T e PBD estão sublinhadas. No ramificação de ligação do polipeptídeo, 0 AHX se refere ao ácido 6-aminocapróico,
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 36/93
30/65
AEEA significa ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanóico, PEG4, PEG8 e PEG12 se referem a polietileno glicóis com comprimentos diferentes, em que PEG4 é Fmoc-NH-PEG4CH2CH2COOH, PEG 8 é Fmoc-NH-PEG8-CH2CH2COOH, e PEG 12 é Fmoc-NHPEGI2-CH2CH2COOH. C16 representa ácido palmítico, C18 representa ácido esteárico, Chol representa colesterol, DHS representa dihidrossfingosina, Toc representa vitamina E, C12 representa ácido dodecanóico (ácido láurico) e C8 representa ácido octanóico (ácido caprílico). O pseudovirus NL4-3 é um mutante da gp41 com D36G. A experiência é repetida três vezes e 0 valor médio da IC50 é calculado. Alguns dos lipopeptídeos potentes estão marcados em negrito. A fusão de células HXB2 representa os resultados experimentais da inibição da fusão celular mediada por um HIV-1, a entrada de NL4-3 representa os resultados experimentais da inibição da entrada celular mediada por um pseudovirus do HIV-1 e a Replicação do JRCSF representa os resultados da inibição da replicação do HIV-1.
[050] A Figura 3 mostra 0 efeito inibitório dos inibidores de fusão da membrana do HIV em vários subtipos da cepa do HIV-1. A experiência é repetida três vezes e 0 valor médio da IC50 é calculado.
[051] A Figura 4 mostra 0 efeito inibidor dos inibidores de fusão da membrana do HIV em cepas mutantes resistentes a T-20, cepas de HIV-2 e cepas de SIV. As cepas mutantes resistentes a T-20 e as cepas de SIV são pseudovirus, e as cepas de HIV-2 são uma cepa infecciosa de ROD. A experiência é repetida três vezes e 0 valor médio da IC50 é calculado.
[052] A Figura 5 mostra a atividade antiviral no soro do macaco após a injeção de inibidores da fusão da membrana do HIV. Na figura, M248, M249, M250, M252, M253 e M254 são os números de série do macaco. Na Figura 5, A mostra a atividade antiviral no soro de macaco após a injeção de T-20; B mostra a atividade antiviral no soro de macaco após injeção de LP-19; C mostra a atividade antiviral no
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 37/93
31/65 soro do macaco após injeção de LP-51; D mostra a atividade antiviral no soro de macaco após injeção de LP-52; E mostra a atividade antiviral no soro de macaco após injeção de LP-80; F mostra o resultado da comparação da atividade antiviral dos inibidores no soro.
[053] A Figura 6 mostra os resultados da análise de dicroísmo circular da interação entre inibidores da fusão da membrana do HIV e NHR. As estruturas de sequência dos inibidores são as mesmas da Figura 2 da presente invenção, em que os lipopeptídeos potentes da presente invenção estão marcados em negrito. Os inibidores e o polipeptídeo N39 são dissolvidos em solução salina tamponada com fosfato (PBS) a pH 7,2 para chegar a uma concentração final de 10 μΜ.
[054] Figura 7 mostra os resultados da análise de dicroísmo circular da interação entre NHR e T-20 ou lipopeptídeos representativos. Na Figura 7, A mostra os resultados da digitalização do CD; B mostra os resultados da varredura de temperatura.
[055] A Figura 8 mostra os resultados da análise da estrutura secundária do T-20 e dos próprios lipopeptídeos representativos. Na Figura 8, A e B mostram os resultados de varredura de CD e varredura de temperatura dos inibidores a 10 μΜ, respectivamente; C e D mostram os resultados da varredura de CD e varredura de temperatura dos inibidores a 20 μΜ, respectivamente; e E e F mostram os resultados da varredura de CD e varredura de temperatura dos inibidores a 40 μΜ, respectivamente.
[056] A Figura 9 mostra os resultados da análise farmacocinética do LP-80 em ratos. Na Figura 9, A mostra os resultados de detecção das concentrações séricas de fármacos de LP-80 após a administração; B mostra os parâmetros cinéticos metabólicos do LP-80, em que T1/2 se refere à meia-vida terminal, Cmax se refere à concentração do pico, Tmax se refere ao tempo até o pico, AUC (0-216 h) se refere para a área sob a curva (0-216 h), Vz se refere ao volume aparente de
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 38/93
32/65 distribuição, CL se refere à depuração, MRT se refere ao tempo médio de permanência e Fabs é biodisponibilidade absoluta.
[057] A Figura 10 mostra o efeito terapêutico de LP-80 em um modelo de infecção de macaco.
Modo ideal para a realização da presente invenção [058] As modalidades da presente invenção serão descritas em detalhes abaixo com referência aos exemplos, porém um versado na técnica entenderá que os exemplos a seguir são apenas para ilustrar a presente invenção e não devem ser interpretados como limitative do escopo da presente invenção. Quando as condições não são indicadas nos Exemplos, os Exemplos são realizados em condições convencionais ou as condições recomendadas pelos fabricantes. Os reagentes ou instrumentos utilizados no presente documento, cujos fabricantes não são indicados, são os produtos convencionais que estão disponíveis comercialmente. Os aminoácidos de todos os polipeptídeos nos exemplos a seguir são aminoácidos do tipo L.
Exemplo 1 - Preparação de lipopeptídeos [059] A fórmula estrutural dos lipopeptídeos fornecidos nesta modalidade foi:
Ac-Xi X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11 Xi 2X13X14X15X21 Xi 7X18X19X20X26X27X28Z-N H2, em que X1-X28 representava uma sequência polipeptídica correspondente a aminoácidos nas posições de 127 a 154 da sequência de gp41 da cepa HIV-1 HXB2 (YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDK), em que X1 correspondeu a Y na posição de 127, e X2 correspondeu a T na posição de 128, X3 correspondeu a S na posição de 129, ... X28 correspondeu a K no posição de 154. Uma nova sequência obtida por um grande número de mutações era um componente de inibidores potentes. Os peptídeos representativos incluem LP-50, LP-51, LP-52, LP-80, LP-83, LP-84, LP85, LP-86 e LP-87, etc. As definições de Xi-X2s foram as mesmas que aquelas na
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 39/93
33/65 fórmula geral I, Z era um composto lipofílico, Ac era um grupo acetila, e NH2 era um grupo amino.
[060] Neste exemplo, os lipopeptídeos ou polipeptídeos, como mostrado na Figura 2, foram sintetizados, em que 0 terminal amino de cada lipopeptídeo ou polipeptideo foi ligado por um grupo acetil como um grupo protetor terminal amino, e 0 terminal carboxila foi ligado por um grupo amino como um grupo protetor do terminal caboxila.
[061] Em que, a modificação do polipeptideo com ácido palmítico (lipopeptídeos modificados com ácido palmítico: LP-40, LP-41, LP-42, LP-43, LP-44, LP-45, LP-50, LP-51, LP -52, LP- 53, LP-54, LP-55, LP-56, LP-57, LP-58, LP-59, LP60, LP-61, LP-62, LP-63, LP-64 , LP-65, LP-66, LP-67, LP-68, LP-69, LP-70, LP-71, LP-72, LP-73, LP-74, LP-75, LP-11, LP-19, C34-C16), ácido esteárico (lipopeptídeos modificados com ácido esteárico: LP-80, LP-88, LP-89, LP-90, LP-91, LP-92), diidrosfingosina (lipopeptídeos modificados com diidrosfingosina: LP -84, LP-87), vitamina E (lipopeptídeo modificado por vitamina E: LP-85), ácido dodecanóico (lipopeptídeo modificado por ácido dodecanóico: LP-81) e ácido octanóico (lipopeptídeo modificado por ácido octanóico: LP-82) , foi realizada por uma reação de amidação com 0 grupo amino da cadeia lateral da lisina (Lys) no terminal C do polipeptideo, vide as Referências 18 e 27 listadas na técnica anterior. Abaixo, 0 LP52 e 0 LP-80 foram tomados como exemplos para ilustrar a síntese dos lipopeptídeos acima.
[062] Os reagentes químicos utilizados, como resina Rink Amide MBHA, vários aminoácidos Fmoc, cloreto de palmitoil, cloreto de estearoil, succinato de vitamina E, D-eritro-diidro-fosfingosina, carbonato de Ν,Ν'-disuccinimidil, N,N'disuccinimidil carbonato, Ν,Ν'-diisopropilcarbodiimida (DIC), 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), ácido trifluoroacético (TFA), etanoditiol (EDT), ninidrina, hexaidropiridina (PIPE), fenol, Ν,Ν'-dimetilformamida (DMF), acetonitrila cromatograficamente pura,
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 40/93
34/65 etc., todos foram adquiridos de fornecedores de reagentes químicos e não foram mais purificados antes do uso.
[063] Síntese do polipeptídeo: foi realizada uma demonstração do terminal C ao terminal N com resina Rink Amide MBHA (constante de substituição de 0,34 mmol/g) como material de partida usando um método manual de reprodução em fase dinâmica Fmoc. O grupo protetor Fmoc na resina Rink foi removido com 25% de hexahidropiridina/DMF (razão de volume) e, em seguida, a resina foi enxertada com 2 equivalentes de Fmoc-Lys (Dde) -OH/HOBt/DIC para introduzir um primeiro resíduo de aminoácido no terminal C. Depois disso, o grupo protetor Fmoc terminal N foi removido com 25% de hexaidropiridina/DMF (razão de volume) novamente para tornar o terminal N um grupo amino livre. Os vários resíduos de aminoácidos foram sequencialmente ligados pelo caminho. Os materiais utilizados e suas quantidades foram os seguintes: Fmoc-Glu (OtBu) -OH (3eq), Fmoc-Leu-OH (3eq), Fmoc-Lys (Boc) -OH (3eq), Fmoc-Lys (Boc) - OH (3eq), Fmoc-Leu-OH (3eq), FmocGlu (OtBu) -OH (3eq), Fmoc-Glu (OtBu) -OH (3eq), Fmoc-Glu (OtBu) -OH (3eq), Fmoc-Asn (Trt) -OH (3eq), Fmoc-Lys (Boc) -OH (3eq), Fmoc-Lys (Boc) -OH (3eq), Fmoc-GIn (Trt) -OH (3eq), Fmoc- Gin (Trt) -OH (3eq), Fmoc-Glu (OtBu) -OH (3eq), Fmoc-Glu (OtBu) -OH (3eq), Fmoc-Ala-OH (3eq), Fmoc-Lys (Boc) - OH (3 eq), Fmoc-Lys (Boc) -OH (3 eq), Fmoc-Leu-OH (3 eq), Fmoc-Leu-OH (3 eq), Fmoc-Glu (OtBu) -OH (3 eq), Fmoc- Glu (OtBu) -OH (3 eq), Fmoc-lle-OH (3 eq), Fmoc-Lys (Boc) -OH (3eq), Fmoc-GIn (Trt) -OH (3eq), Fmoc-Glu (OtBu ) -OH (3 eq), Fmoc-Trp (Boc) -OH (3 eq). Finalmente, o terminal N foi tampado na extremidade por meio de acetilação (3 equivalentes de Ac2O,6 equivalentes de di-isopropiletilamina) para completar a síntese da cadeia principal. O tempo de reação de cada etapa foi o seguinte: desproteção por 8 minutos, duas vezes; enxerto de aminoácidos comuns por 60 minutos.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 41/93
35/65 [064] Após cada etapa da reação acima, foi necessário lavar a resina com DMF por seis vezes ou mais, e a reação foi controlada pelo teste de Kaiser. Se a reação de condensação de um aminoácido estiver incompleta, a condensação é repetida mais uma vez até que um segmento peptídico de interesse desejado seja obtido.
[065] Modificação do polipeptideo: a resina foi tratada com solução de hidrato de hidrazina a 2%/DMF (proporção de volume) para remover o grupo protetor Dde da cadeia lateral do Lys terminal C e, em seguida, misturada com 3 equivalentes de cloreto de palmitoil ou cloreto de estearoil e 6 equivalente de diisopropiletilamina para realizar uma reação de amidação com o grupo amino da cadeia lateral da Lys terminal C (60 minutos), conseguindo assim a modificação da palmitoilação (LP-52) ou a modificação estearoil (LP-80) do resíduo de Lys do terminal C. A modificação do polipeptideo com diidrosfingosina (LP-84, LP-87) foi realizada adicionando primeiro carbonato de Ν,Ν'-disuccinimidil após a remoção do grupo protetor de Dde da cadeia lateral de Lys, em seguida foi adicionada diidrosfingosina e a reação foi realizada por 48 horas. A modificação do polipeptideo com vitamina E (LP-85) foi realizada por uma amidação do grupo amino da cadeia lateral desprotegida de Lys diretamente com succinato de vitamina E.
[066] Clivagem e desproteção da cadeia lateral: após a síntese de um lipopeptídeo, a resina foi seca ao vácuo. Um reagente de clivagem (ácido trifluoracético: 1,2-etanoditiol: tioanisol: fenoLFhOlriisopropilsilano = 68,5: 10: 10: 5: 3,5: 1, v/v) foi adicionado à resina seca, e a clivagem foi realizada a 30°C durante 3 horas, em que um polipeptideo de interesse foi clivado da resina e o grupo protetor da cadeia lateral foi removido. Foi realizada uma operação de filtração. O filtrado foi adicionado a uma grande quantidade de éter dietílico anidro frio para precipitar o polipeptideo, depois centrifugado, o polipeptideo foi lavado com éter dietílico por várias vezes e seco para obter um produto lipopeptídico bruto.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 42/93
36/65 [067] Purificação e caracterização do lipopeptídeo: a purificação do produto bruto do lipopeptídeo foi realizada em um cromatógrafo líquido de fase reversa e alto desempenho usando uma coluna de 100 χ 250 mm contendo fase reversa de gel de silica C18 ou C4 silica com tamanho de partícula de 10 pm e com um diâmetro de poro de 100 angstroms (Â). As condições de operação cromatográficas: eluição com gradiente linear foram realizadas, em que um eluente consistiu em uma fase móvel A e uma fase móvel B, a fase móvel A era uma solução aquosa contendo 20 mM de acetato de amônio (pH 4,5) e 5% de acetonitrila e a fase móvel B era uma solução aquosa de 80% (concentração percentual em volume) de acetonitrila; a vazão foi de 250 ml/min.; e o comprimento de onda de detecção por ultravioleta foi de 220 nm. Após o solvente ter sido liofilizado, foi obtido um produto puro do polipeptídeo no estado fofo, cuja estrutura química foi caracterizada por espectrometria de massa MALDI-TOF e cuja pureza foi determinada por uma cromatografia líquida analítica de alto desempenho (C18-10 x 250 mm, vazão: 1 mL/min.). Os resultados mostraram que os lipopeptídeos sintetizados tinham uma pureza superior a 95%.
[068] Um método para sintetizar lipopeptídeos modificados com colesterol (LP-83, LP-86, C34-Chol) foi realizado com relação à Referência 18 e à Referência 20 listadas na Técnica Anterior. Primeiro, o bromoacetato de colesterila foi sintetizado de acordo com a rota técnica descrita nas literaturas e depois enxertado em uma cadeia polipeptídica por meio de uma reação de formação de tioéter alta e quimicamente seletiva, realizada entre o grupo tiol da cadeia lateral da cisteína terminal C (Cys) do polipeptídeo e do bromoacetato de colesterila, ou seja, depois que um produto polipeptídico bruto foi sintetizado de maneira convencional, foi dissolvido em DMSO puro, 1 equivalente de bromoacetato de colesterol dissolvido em uma pequena quantidade de ácido trifluoracético (TFA) foi adicionada a ele e, em seguida, foi adicionada diisopropiletilamina pura (DIEA) para ajustar o pH para alcalino. A reação foi seguida por RP-HPLC e foi geralmente concluída em 1 hora. O
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 43/93
37/65 lipopeptídeo foi purificado e caracterizado como acima, e a pureza do lipopeptídeo obtido foi superior a 95%.
Exemplo 2 - Identificação de inibidores potentes de fusão da membrana do HIV
2.1 - Materiais e métodos experimentais [069] Cada um dos lipopeptídeos e polipeptídeos da Figura 2 foi usado como substância de teste e a atividade antiviral foi identificada por um ensaio de inibição da fusão celular, um ensaio de inibição de pseudovirus e um ensaio de inibição da replicação de vírus de acordo com a Referência 18 listada na técnica anterior. O método específico foi o seguinte.
[070] Ensaio de inibição da fusão celular mediada pelo HIV-1: as células efetoras (células HL2/3) e as células-alvo (células TZM-b1) foram fornecidas pelo AIDS Reagent Program of National Institutes of Health (NIH) (números de catálogo: 1294 e 8129, respectivamente). As duas células eram células aderentes e foram cultivadas em um meio de cultura celular DMEM contendo antibióticos duplos de ampicilina/estreptomicina e soro fetal bovino a 10% (FBS). Ο TZM-B1 foi adicionado em primeiro lugar a uma placa de cultura de células de 96 poços (1x104 células/poço), e cultivadas durante a noite a 37°C e 5% de CO2. A substância de teste foi diluída com 0 meio de cultura celular DMEM por 3 vezes e misturou-se com células HL2/3 efetoras (3x104 células/por poço), depois adicionado às células alvo TZM-B1, e a cultura prosseguiu durante 6 horas para totalmente fundida. A atividade da luciferase (unidades de fluorescência relativa, RLU) foi então determinada usando um kit de gene repórter de luciferase da empresa Promega, de acordo com as instruções. Calculou-se a taxa de inibição de cada amostra a cada uma das concentrações, e a concentração inibitória média (valor IC50) foi calculada utilizando GraphPad Prism Software 2.01.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 44/93
38/65 [071] Ensaio de inibição de entrada de células mediada por pseudovirus pelo HIV-1: etapas básicas incluídas: (1) Preparação de pseudovirus para o HIV-1: as células 293T foram co-transfectadas com um plasmídeo que expressa a proteína do envelope (Env) da cepa NL4-3 do HIV-1 (isto é, um plasmídeo de expressão recombinante obtido pela inserção do gene que codifica a proteína do envelope (ENV) do mutante D36G da cepa NL4-3 do HIV-1 na Tabela 2 da Referência 14 listada na Técnica Anterior no vetor pcDNA3. 1 (-)) e o plasmídeo do esqueleto do HIV-1 pSG3Aenv (fornecido pelo AIDS Reagent Program of National Institutes of Health (NIH) número de catálogo: 11051) usando um reagente de transfecção de células, incubado em uma incubadora de células a 37°C e 5% de CO2 durante 6 horas, e, em seguida, 0 meio foi mudado, e as células foram ainda incubadas durante 48 horas. O sobrenadante da cultura de células contendo partículas de pseudovirus foi pipetado e filtrado com um filtro de 0,45 pm para coletar 0 sobrenadante; em seguida, soro fetal bovino a 20% (FBS) foi adicionado a ele, a solução final foi transferida para um tubo de polipropileno e armazenada a -80°C pronto para uso ou diretamente sujeito a titulação de vírus. (2) Titulação do pseudovirus HIV-1: os vírus foram diluídos 5 vezes em uma placa de 96 poços e 4 poços replicados com 8 gradientes foram ajustados para um volume final de 100 microlitros. As células TZM-bl foram tripsinizadas e contadas, e as células foram diluídas até 1 x 105 células/mL com meio DMEM completo; 100 uL de células de diluição (contendo 15 ug/mL de DEAE-dextrano) por poço e foram adicionados cultura a 37°C e 5% de CO2 durante 48 horas. A placa de 96 poços foi então retirada da incubadora de cultura de células. O sobrenadante foi descartado dos poços. A cada poço foram adicionados 20 pl_ de um lisado de célula e após 10 minutos foram adicionados 100 pL de um reagente de detecção de luciferase. 100 μΙ_ do líquifo foram pipetados de cada poço e adicionou-se a uma placa branca de 96 poços correspondente, e os valores de luminescência foram lidos por um fotômetro de
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 45/93
39/65 microplaca. O título do vírus foi calculado pelo método de Reed-Muench. (3) Ensaio de atividade antiviral: a substância em teste foi dissolvida em DMSO e diluída com uma solução de cultura celular por 3 vezes e colocada em uma placa de 96 poços com um volume final de 50 μΙ_. Foram utilizados 50 μΙ_ de meio DMEM no lugar da substância em teste como controle negativo. Para cada poço, 100 uL de solução de células alvo TZM-bl (contendo 15 ug/mL de DEAE-dextrano), a uma concentração de 1 x 105 células/mL foi adicionada, e, em seguida, 50 uL (correspondente a 100 TCIDso por poço) e foi adicionado pseudovirus HIV-1 obtido acima. Após incubação a 37°C e a 5% CO2 durante 48 horas, as unidades de luz relativas (RLU) de cada poço foram determinadas usando um reagente de detecção de luciferase (Promega). Taxa de inibição (%) e valor de IC50 foram calculados.
[072] Ensaio de inibição da replicação do HIV-1: 0 plasmídeo de clonagem molecular pYK-JRCSF que codifica a cepa de HIV-1 JRCSF foi fornecido pelo AIDS Reagent Program of NIH (número de catálogo: 2708). As 293 células T foram transfectadas com 0 PYK-JRCSF usando um reagente de transfecção, e incubadas em uma incubadora celular a 37QC e 5% de CO2 durante 6 horas; depois 0 meio foi trocado e as células foram incubadas por 48 horas. O sobrenadante da cultura de células contendo as partículas virais do JRCSF foi pipetado suavemente e filtrado com um filtro de 0,45 pm para coletar 0 sobrenadante; em seguida, soro fetal bovino a 20% (FBS) foi adicionado a ele e a solução final foi transferida para um tubo de polipropileno e armazenada a -80°C para uso imediato ou diretamente sujeita a titulação de vírus. A titulação do vírus foi igual à titulação acima do pseudovirus do HIV-1. A fim de detectar a atividade antiviral, a substância de teste foi dissolvida em DMSO e diluída com uma solução de cultura celular por 3 vezes e colocada em uma placa de 96 poços com um volume final de 50 μΙ_. Foram utilizados 50 μΙ_ de um meio DMEM no lugar da substância de teste como controle negativo. A cada poço, 100 μΙ_ de solução de células-alvo TZM-bl (com 105 células/ml e contendo 15 pg/mL
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 46/93
40/65 de DEAE-dextrano) foram adicionados e, em seguida, 50 μΙ_ (100 TCID50 por poço) dos vírus obtidos acima foram adicionados. Após incubação a 37°C e a 5%CO2 durante 48 horas, as unidades de luz relativas (RLU) de cada poço foram determinadas utilizando um reagente de detecção de luciferase (Promega).taxa de inibição (%) e valor IC50 foram calculados.
2.2 Resultados e análises experimentais
2.2.1 - O lipopeptídeo à base de T-20 (LP-40) teve uma forte atividade antiviral.
[073] A fim de rastrear e identificar potentes inibidores de fusão da membrana do HIV, a presente invenção apresenta o desenvolvimento de um novo método, no qual um fármaco polipeptídico T-20 que não contém o domínio de ligação ao bolso do NHR (PBD) foi usado como modelo de design. A atividade inibitória de um inibidor contra a fusão celular mediada pelo HIV-1, entrada de pseudovirus e replicação de vírus foi avaliada usando três ensaios antivirais (Figura 2). Primeiro, ao excluir diretamente os 8 aminoácidos no terminal C do T-20, um polipeptídeo T20-TRM que não contém o motivo TRM foi sintetizado e considerado não ter atividade antiviral significativa em uma alta concentração de 2.000 nM, que demonstrou um papel importante da TRM na função do T-20. Além disso, o lipopeptídeo LP-40 foi sintetizado substituindo o TRM de T-20 por ácido palmítico (C16). Surpreendentemente, foi verificado que o LP-40 tinha uma atividade antiviral significativamente melhorada em comparação ao T-20, e que sua atividade inibidora contra a fusão celular mediada por HXB2, a entrada de pseudovirus NL4-3 e a replicação de JRCSF foi de cerca de 59, 21 e 18 vezes como o de T-20, respectivamente, que demonstrou que a substituição de um composto lipofílico por TRM de T-20 podería melhorar significativamente a atividade antiviral do polipeptídeo, e que podería ser uma estratégia importante para projetar um inibidor de fusão de membrana de HIV.
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 47/93
41/65
2.2.2 - A adição de uma ramificação de ligação resultou em redução significativa da atividade antiviral do LP-40 [074] Os presentes inventores projetaram anteriormente um conjunto de lipopeptídeos anti-HIV altamente ativos com base na modificação de um peptídeo curto (HP23 ou 2P23) direcionado para o bolso de NHR, e descobriram que a ligação direta de um composto lipídico C16, colesterol e diidrosfingosina ao terminal C do polipeptídeo resultou em uma diminuição significativa na atividade anti-HIV do polipeptídeo, enquanto a introdução de uma ramificação de ligação entre a sequência polipeptídica e o modificador do composto resultou em um aumento significativo na atividade do polipeptídeo, e a atividade antiviral foi aumentada com o aumento do comprimento da ramificação de ligação (vide referências 18 e 30 listadas na técnica anterior). Os lipopeptídeos de alta atividade finalmente projetados, como LP-11 e LP-19, tinham uma ramificação de ligação PEG8 mais longa, sugerindo que a adição de uma ramificação de ligação facilitou os lipopeptídeos a superar o impedimento estérico para produzir função. Para melhorar ainda mais a atividade do LP-40, cinco lipopeptídeos de LP-41, LP-42, LP-43, LP-44 e LP-45 foram projetados e sintetizados, os quais foram adicionados respectivamente com AHX, AEEA, PEG4, PEG8 e PEG12 como uma ramificação de ligação (Figura 2). Surpreendentemente, a adição do ramificação de ligação resultou em uma diminuição significativa na atividade dos lipopeptídeos, e a diminuição na atividade foi mais significativa com um aumento no comprimento do ramificação de ligação, exatamente oposto aos resultados para o HP23- e Lipopeptídeos à base de 2P23. Esses resultados sugeriram que os lipopeptídeos à base de HP23 e 2P23 tinham diferentes mecanismos de ação em comparação com os lipopeptídeos à base de T-20, e isso pode ser devido aos seus diferentes locais de ligação no NHR.
2.2.3 - A adição de pares de íons resultou em um aumento muito significativo da atividade antiviral do LP-40
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 48/93
42/65 [075] A presente invenção tentou ainda promover a estrutura helicoidal e a atividade antiviral de LP-40 através da introdução de pares de íons. Na presente tecnologia, os resíduos de aminoácidos EE ** KK que contribuem para a formação de uma estrutura de ponte de sal foram introduzidos por mutação de aminoácidos na superfície de ligação não NHR da sequência polipeptídica (ou seja, as posições de b, c e f, g). Como pode ser visto na Figura 1, os 11 aminoácidos na sequência polipeptídica LP-40 foram substituídos por E ou K, assim, três pares de motivos EE ** KK foram introduzidos nas posições de i e i + 4 e o lipopeptídeo sintetizado foi denominado LP-50. A atividade inibitória do LP-50 foi determinada por três ensaios antivirais, e os resultados foram inacreditáveis! Tal como ilustrado na Figura 2, os valores de ICso de LP-50 para inibir a fusão celular, pseudovirus e vírus replicativo foram 21 pM, 19:00 e 23pm, respectivamente, e foram como 1151 vezes, 1345 vezes e 226 vezes como a de T-20, respectivamente, e como 20 vezes, 63 vezes e 12 vezes como a do LP-40. Portanto, a introdução de pares de íons pode aumentar a estabilidade da estrutura helicoidal do lipopeptídeo, formando uma estrutura de ponte de sal, aumentando assim a atividade antiviral do lipopeptídeo. Isto foi confirmado pelos ensaios circulares subsequentes de dicroísmo (vide os resultados experimentais do Exemplo 7 abaixo).
2.2.4 A adição de resíduos de aminoácidos HIV-2/SIV melhorou ainda mais a atividade do LP-50 [076] A fim de melhorar ainda mais a atividade antiviral de LP-50, a presente invenção tentou sintetizar lipopeptídeos LP-51 e LP-52 introduzindo resíduos de aminoácidos correspondentes derivados de HIV-2 e/ou SIV na superfície de ligação ao NHR do polipeptídeo, isto é, as posições de a e d, ou posições adjacentes. Os aminoácidos mutados foram mostrados na Figura 1. As sequências polipeptídicas de LP-51 e LP-52 retinham apenas 10 resíduos de aminoácidos originais da gp41 e eram menos de 28% idênticos à sequência de T-20. Os resultados de ensaios
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 49/93
43/65 antivirais mostraram que a atividade do LP-51 era comparável à do LP-50 e a atividade inibitória do LP-52 contra a fusão celular mediada por HBX2 da cepa HIV1, pseudovirus NL4-3 e replicação do vírus JRCSF foi melhorada ainda mais em cerca de 2 vezes, 2 vezes e 5 vezes, respectivamente. Em comparação com o T-20, a atividade inibidora do LP-52 contra a atividade do HIV em três sistemas de ensaio foi de 1859 vezes, 2353 vezes e 1038 vezes do T-20, respectivamente. Portanto, pode-se concluir que o LP-50, LP-51 e LP-52 eram inibidores de fusão da membrana do HIV extremamente potentes.
2.2.5 Identificação de uma sequência central de lipopeptídeos anti-HIV potentes [077] A sequência polipeptídica do inibidor potente do HIV acima mencionado tinha 28 aminoácidos de comprimento. A fim de identificar a sequência chave e a possibilidade de projetar um lipopeptídeo contendo uma sequência mais curta, na presente invenção, um lipopeptídeo truncado no terminal C LP-53 com base no LP-40 foi sintetizado pela primeira vez e um lipopeptídeo truncado no terminal C LP -54 com base no LP-50 foi sintetizado e verificou-se que a capacidade antiviral do mesmo foi marcadamente reduzida (Figura 2). Além disso, LP-55 e LP56 foram sintetizados usando o LP-52 como modelo, em que o LP-56 continha uma AEEA como ramificação de ligação para substituir os três resíduos de aminoácidos (LEK) no terminal C. Os ensaios antivirais revelaram que, embora as atividades inibitórias de LP-55 e LP-56 contra a fusão de células HXB2 estivessem essencialmente inalteradas, sua atividade inibitória contra a infecção por NL4-3 e JRCSF diminuiu (cerca de 2 vezes). Estes resultados experimentais indicaram que os três resíduos de aminoácidos (LEK) no terminal C do lipopeptídeo desempenham um papel importante na atividade antiviral.
[078] Um conjunto de lipopeptídeos truncados no terminal N (LP-60 a LP-68) foi ainda sintetizado. Os ensaios antivirais revelaram que a atividade de dois
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 50/93
44/65 lipopeptídeos truncados à base de LP-50, isto é, LP-60 e LP-61, também diminuiu significativamente; mas, surpreendentemente, a atividade dos lipopeptídeos truncados à base de LP-52, isto é, LP-62, LP-63 e LP-65, não mudou muito, especialmente a atividade do LP-65 com apenas 24 aminoácidos foi equivalente a do LP-52, e a atividade, particularmente a atividade inibidora contra a fusão celular, do LP-64 contendo 25 aminoácidos diminuiu significativamente. Estudos descobriram que o truncamento de terminal N adicional resultou em uma diminuição significativa na atividade dos lipopeptídeos (LP-66, LP-67) ou mesmo na perda de capacidade antiviral (LP-68). O LP-69 foi sintetizado truncando o LEK do terminal C com base no LP-65. Embora a atividade antiviral do LP-69 tenha diminuído significativamente, ele ainda possui atividade inibidora potente contra os vírus em comparação com um lipopeptídeo com apenas 21 aminoácidos. Os resultados desses estudos mostraram que a sequência IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKK consistindo em 21 aminoácidos era a sequência central dos lipopeptídeos potentes da presente invenção, que correspondiam à sequência de aminoácidos nas posições de 5 a 25 de T-20, isto é, correspondente à sequência de aminoácidos nas posições de 131 a 151 (IHSLIEESQNQQEKNEQELLE) da gp41 da cepa HXB2 do HIV-1. A adição de WEQK (ou LEAN ou YTSL) ao terminal N da sequência central ou a adição de LEK ao terminal C pode aumentar efetivamente a atividade antiviral; se os motivos de aminoácidos fossem retidos nos dois terminais (por exemplo, LP-52), a atividade desse lipopeptídeo podería ser melhorada.
[079] Os resultados também mostraram que a atividade antiviral do LP-57 foi reduzida em cerca de 15 a 150 vezes em comparação à do LP-55, indicando que três aminoácidos terminais LKK do LP-55 eram importantes e não deviam ser adequadamente truncados; a atividade antiviral do LP-66 era cerca de 54 a 158 vezes menor que a do LP-65, indicando que 0 primeiro aminoácido (He) do LP-65 era crítico e não seria adequadamente truncado. Ao mesmo tempo, a diferença entre
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 51/93
45/65 os dois lipopeptídeos truncados LP-65 e LP-61 é apenas um aminoácido (S e A na posição de 8, respectivamente), porém sua atividade diferiu em 5 a 9 vezes, indicando que a substituição de A por S foi muito importante para os lipopeptídeos potentes da presente invenção.
[080] Enquanto isso, para revelar a relação entre a estrutura da sequência e a função dos lipopeptídeos antivirais potentes, na presente invenção, um conjunto de lipopeptídeos estendidos no terminal N (LP-70 a LP-75 na Figura 2) foi projetado e sintetizado, em que o LP-74 continha uma sequência de domínio de ligação ao bolso (PBD), o LP-75 continha tanto a sequência PBD quanto a sequência de formação de gancho M-T. Surpreendentemente, como a sequência polipeptídica se estendeu ao longo do terminal N, a atividade antiviral dos lipopeptídeos não aumentou, porém foi reduzida e, em particular, a atividade do LP-74 e LP-75 foi significativamente reduzida.
2.2.6 - Derivados de lipopeptídeos anti-HIV potentes e sua atividade antiviral [081] Para revelar a sequência e a especificidade estrutural de lipopeptídeos anti-HIV potentes, na presente invenção, lipopeptídeos modificados com diferentes compostos lipofílicos, incluindo ácidos graxos de diferentes comprimentos de cadeia, colesterol, diidrossfingosina e vitamina E continuaram sendo projetados e sintetizados. Os resultados dos ensaios antivirais foram mostrados na Figura 2. A atividade inibitória do LP-80 modificado com ácido esteárico (C18) contra a entrada de NL4-3 e a replicação de JRCSF foi ainda maior que a do LP-52 modificado com C16, porém a atividade inibidora da LP-81 modificada com ácido dodecanóico (C12) e a LP-82 modificada com ácido octanóico (C8) diminuiu significativamente. Estes quatro lipopeptídeos tinham a mesma sequência polipeptídica, porém a atividade inibidora dos lipopeptídeos foi determinada pelo comprimento das cadeias de ácidos graxos. Portanto, ácidos graxos de cadeia longa com um comprimento de cadeia de C18 e C16 foram mais adequados para modificar a sequência polipeptídica. Os
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 52/93
46/65 resultados dos ensaios antivirais também demonstraram que os lipopeptídeos modificados pelo colesterol (LP-83 e LP-86), diidrosfingosina (LP-84 e LP-87) e vitamina E (LP-85) também tiveram fortes efeitos antivirais. Além disso, os lipopeptídeos truncados N terminalmente modificados com C18 LP-88, LP-89 e LP90 também tinham atividade antiviral potente. Curiosamente, o LP-89 com 25 aminoácidos foi menos ativo que o LP-90 com 24 aminoácidos. Esse fenômeno foi semelhante ao dos LP-64 e LP-65 modificados em C16. Por conseguinte, a lisina terminal N (K) não foi necessária para um lipopeptídeo curto potente com base na sequência do núcleo. Para a sequência central de 21 aminoácidos, a atividade dos lipopeptídeos modificados em C16 e C18 (LP-69 e LP-92) foi substancialmente equivalente.
[082] Enquanto isso, na presente invenção, foi determinada a atividade antiviral de vários lipopeptídeos de controle, incluindo LP-11, LP-19, C34-Chol e C34-C16 (vide Figura 2). Observou-se que os lipopeptídeos de controle poderíam efetivamente inibir a fusão, entrada e replicação de células mediadas pelo HIV-1, e a atividade do mesmo era significativamente maior que a de T-20, porém significativamente menor que a de alguns dos lipopeptídeos potentes do presente invenção, tais como LP-52, LP-55 e LP-65 modificados com C16, LP-80, LP-90 e LP-91 modificados com C18 e similares.
Exemplo 3 - Atividade inibitória de inibidores potentes da fusão da membrana do HIV contra diferentes subtipos de AIDS do HIV-1 [083] A AIDS foi causada principalmente pelo HIV-1, e múltiplos subtipos foram gerados devido à variação do vírus, incluindo os subtipos A-D, F-H, J e K e similares. Entre eles, os subtipos A, B e C foram os principais vírus causadores da epidemia de AIDS no mundo, enquanto os vírus recombinantes B/C e A/E foram os principais vírus na China. Para avaliar ainda mais a atividade dos inibidores potentes da fusão da membrana do HIV, na presente invenção, foi preparado um grupo de 35
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 53/93
47/65 pseudovirus do HIV-1, incluindo cepas representativas internacionais e cepas de HIV-1 atualmente epidêmicas na China, em que as cepas incluíam 3 cepas do subtipo A, 8 cepas do subtipo B', 4 cepas do subtipo B', 7 cepas do subtipo C, 1 cepa do subtipo G, 1 cepa A/C recombinante, 5 cepas A/E recombinantes e 6 cepas A/E recombinantes. Entre os plasmídeos de expressão Env usados na preparação de pseudovirais, exceto aqueles plasmídeos de expressão Env usados na preparação de PVO, Du156 e CAP 210.2.00.E8 foram obtidos no AIDS Reagent Program of NIH nos Estados Unidos, outros plasmídeos foram preservados pelo laboratório do Prof. He Yuxian, Institute of Pathogen Biology, Chinese Academy of Medical Sciences, consulte as referências 13, 14 e 18 listadas no Antecedentes da Técnica e nos artigos de Chong e outros (Chong H, Yao X, Zhang C, Cai L, Cui S, Wang Y, He Y. Biophysical property and broad anti-HIV activity of Albuvirtide, a 3maleimimidoproprotionic acid-modified peptide fusion inhibitor. PLoS One, 2012; 7 (3): e 32599). A preparação do pseudovirus e o ensaio antiviral foram os mesmos que no Exemplo 2.1 do Exemplo 2 (ensaio de inibição da entrada de células mediada por pseudovirus por HIV-1). Para comparação e análise, no presente exemplo, foi determinada a atividade inibitória de 12 inibidores, incluindo T-20, LP40, LP-50, LP-51, LP-52, LP-55, LP-65, LP-80, LP-85, LP-90 e lipopeptídeos de controle LP-19, C34-Chol, contra os 35 pseudovirus descritos acima. Conforme mostrado na Figura 3, os valores médios da ICso de T-20, LP-40, LP-50, LP-51, LP52, LP-55, LP-65, LP-80, LP-85 e LP-90 para inibição de vários tipos de pseudovirus do HIV-1 foram 41410 pM, 6369 pM, 41 pM, 33 pM, 16 pM, 34 pM, 52 pM, 6 pM, 44 pM e 14 pM, respectivamente. Observou-se que a atividade inibitória dos lipopeptídeos recém-sintetizados da presente invenção contra diferentes subtipos de HIV-1 era significativamente maior que a de T-20, que era de 7 vezes, 1010 vezes, 1255 vezes, 1255 vezes, 2588 vezes, 1218 vezes, 796 vezes, 6902 vezes, 941 vezes e 2958 vezes do T-20. Entre eles, o LP-80 mostrou a atividade inibidora mais
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 54/93
48/65 forte contra os vírus, e a média de valores ICso para 35 pseudovirus foi de 6 pM e os valores de ICso para muitas cepas foram mesmo inferiores a 1 pM. Os valores médios da ICso do controle LP-19 e C34-Chol para inibição de vários pseudovirus HIV-1 foram de 439 pM e 66 pM, respectivamente, e a sua atividade foi menor que a do LP-50, LP-51, LP -55, LP-65 e LP-85, e foi mais significativamente inferior a do LP-52, LP-80 e LP-90. Através da comparação dos valores de ICso do LP-52 e LP80, LP-65 e LP-90, revelou-se que a atividade antiviral dos lipopeptídeos C18modificados foi superior à dos lipopeptídeos C16-modificados.
Exemplo 4 - Atividade inibidora de inibidores de fusão potentes da membrana do HIV contra cepas resistentes a T-20 [084] T-20 é apenas um inibidor de fusão da membrana do HIV aprovado para uso clínico no momento, porém sua atividade não é apenas menor do que a de uma nova geração de polipeptídeos, porém também induz facilmente mutações de resistência a medicamentos, muitas vezes levando ao fracasso do tratamento clínico. A fim de refletir completamente o amplo espectro antiviral e as vantagens dos lipopeptídeos potentes da presente invenção, pseudovirus NL4-3 portando um sítio comum de mutação de resistência a T-20 do NHR foram preparados neste exemplo (como mostrado na Figura 4, o subscrito do nome da cepa na Figura 4 era o nome da cepa na Tabela 2 na Referência 14 listada em Antecedentes da Técnica). Os métodos para preparação de plasmídeos e pseudovirus e ensaios de atividade antiviral utilizados foram descritos nas literaturas publicadas pelos presentes inventores (consulte as referências 11, 12, 14 e 18 listadas em Antecedentes da Técnica) e nos exemplos 2 e 3 acima. Os resultados são apresentados na Figura 4. Em comparação com o mutante NL4-3,d36g representativo, o tipo selvagem NL43WT mostrou resistência a T-20, e os valores de ICso correspondentes dos mesmos foram 13,65 nM e 152,23 nM, respectivamente. No entanto, a resistência aos medicamentos de cepas contendo mutações simples ou duplas no T-20 aumentou
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 55/93
49/65 significativamente em várias vezes. Os resultados mostraram que a sensibilidade dessas cepas resistentes de T-20 ao LP-4O havia sido melhorada. A partir dos resultados experimentais, verificou-se que a atividade inibidora do lipopeptídeo LP50 projetada pela introdução de pares de ions com base no LP-40 para formar uma estrutura de ponte de sal contra cepas resistentes ao T-20 foi ainda melhorada em centenas ou até milhares de vezes. A capacidade dos lipopeptídeos LP-51, LP-52, LP-80 e LP-85 modificados com a sequência de HIV-2/SIV de superar cepas resistentes foi bastante aprimorada, o que foi milhares a dezenas de milhares de vezes melhor que o de LP-40. Ao comparar LP-52, LP-55 e LP-65, LP-80 e LP-90, verificou-se que: embora o lipopeptídeo truncado no terminal C LP-55 e os lipopeptídeos truncados no terminal N LP-65 e LP-90, que demonstraram ser destacados nos ensaios de atividade antiviral anteriores, tinham atividade inibitória contra um grande número de cepas de HIV-1 que era até comparável à do LP-52 e LP-80, eram muito menos ativos contra cepas mutantes resistentes a T-20 que as LP-52 e LP-80. É digno de ênfase particular que lipopeptídeos representativos como inibidores potentes da presente invenção, incluindo os LP-50, LP-51, LP-52, LP-55, LP-65, LP-80, LP-85 e LP-90, tinham capacidade inibitória significativamente reduzida para a maioria das cepas resistentes ao T-20, porém ainda possuíam forte atividade antiviral, principalmente a atividade do LP-52 e LP-80 ainda era rara no campo. Este exemplo também revelou a partir de um aspecto que a sequência de NHR da gp41 ainda era um alvo principal dos lipopeptídeos potentes da presente invenção.
Exemplo 5 - Atividade inibitória de inibidores de fusão potentes da membrana do HIV contra HIV-2 e SIV [085] Para refletir melhor as vantagens antivirais dos lipopeptídeos potentes da presente invenção, sua atividade inibidora contra o HIV-2 e SIV foi determinada no exemplo. Os métodos de ensaios de atividade antiviral utilizados foram descritos
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 56/93
50/65 nas literaturas publicadas pelos presentes inventores (vide referências 13 e 30 listadas em Antecedentes da Técnica). O plasmídeo de clonagem molecular pROD da cepa HIV-2 ROD (HIV-2ROD) foi gentilmente fornecido pelo professor Nuno Taveira da Universidade de Lisboa, Portugal, e os plasmídeos que expressam a cepa SIV SlVpbj (SIVpbj) eSIV239 proteínas envelope (pSIVpbj-Env e pSIV239, respectivamente) foram gentilmente fornecidas pelo professor Xu Jianqing da Universidade Fudan. A preparação do ROD infeccioso foi a mesma do JRCSF infeccioso na seção 2.1 acima, e os pseudovirus SIVpbj e SIV239 foram preparados por um método igual ao descrito nos exemplos 2 e 3 acima. Os resultados foram mostrados na Figura 4, da qual se observou que a atividade inibitória do T-20 contra as cepas de HIV-2 e SIV era extremamente fraca, enquanto a atividade de LP-40 foi apenas ligeiramente melhorada. Contudo, considerou-se que os lipopeptídeos potentes determinados, incluindo LP-50, LP-51, LP-52, LP-65, LP-80, LP-85 e LP90, tinham atividade inibidora extremamente potente contra ambos HIV-2 e SIV. Por conseguinte, os lipopeptídeos potentes da presente invenção não eram apenas altamente eficazes contra vários subtipos de HIV-1, porém também altamente eficazes contra cepas resistentes a T-20, cepas de HIV-2 e SIV, e tinham atividade antiviral extremamente potente e de amplo espectro. Ao comparar 0 LP-52, LP-55 e LP-65, verificou-se que 0 truncamento dos aminoácidos de terminal N WEQK teve pouco efeito sobre a atividade inibitória contra 0 HIV-2 e SIV, enquanto 0 truncamento de aminoácidos de terminal C LEK afetaram significativamente a atividade.
Exemplo 6 - Atividade antiviral in vivo de inibidores de fusão potentes da membrana do HIV [086] Estudos recentes mostraram que os inibidores da fusão da membrana do HIV com base em lipopeptídeos não apenas apresentaram atividade antiviral melhorada, porém também exibiram metabolismo estável in vivo e, portanto, tiveram
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 57/93
51/65 uma meia-vida mais longa. A fim de demonstrar ainda mais o valor da aplicação e as vantagens de formação de fármacos potentes dos lipopeptídeos da presente invenção, a atividade antiviral in vivo dos lipopeptídeos LP-51, LP-52 e LP-80 foi analisada principalmente neste exemplo, e os métodos foram descritos nas literaturas publicadas pelos inventores (consulte as referências 18 e 30 listadas na técnica anterior), em que um inibidor foi injetado em macacos por via subcutânea, foram coletadas amostras de sangue em diferentes momentos e a atividade antiviral do inibidor foi medida in vitro; pelo método, não apenas a atividade in vivo do inibidor pode ser aprendida, porém também a estabilidade in vivo do mesmo foi refletida indiretamente. Além dos três lipopeptídeos potentes descritos acima, este exemplo incluiu dois controles, T-20 e LP-19, para comparação e análise. O método específico foi o seguinte: foram selecionados 6 macacos experimentais (macacos rhesus), metade macho e metade fêmea, com idades entre 3-4 anos, pesando 3,44,7 kg. T-20, LP-19, LP-51, LP-52 ou LP-80 (todos dissolvidos em água destilada estéril) foi injetado por via subcutânea a 3 mg/kg de peso corporal, e 0,4 mL de amostra de sangue venoso foram coletados antes da injeção (0 h) e 1,2, 4, 6, 8, 12, 18, 24, 36, 48, 60 e 72 horas após a injeção, respectivamente. Para o LP-80, além dos pontos de tempo de coleta de sangue mencionados acima, foram adicionados quatro pontos de tempo de coleta de sangue em 96, 120, 144 e 168 horas após a injeção. O soro foi separado de acordo com um método convencional. O intervalo de injeção de cada inibidor foi superior a 2 semanas para garantir que não houvesse resíduo do analito anterior. A atividade sérica contra a cepa NL4-3 do HIV-1 (NL43d36g) foi medida de acordo com o método experimental do ensaio à base de pseudovirus nos exemplos acima. O soro foi diluído em 3 vezes. Os resultados experimentais foram mostrados na Figura 5. Para a injeção subcutânea do T-20, os picos de inibição ocorreram 2 e 4 horas após a injeção, em que os múltiplos para diluição sérica máxima para inibir 50% da infecciosidade de NL4-3 foram 45 vezes e
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 58/93
52/65 vezes, respectivamente (A da Figura 5); para a injeção subcutânea do LP-19, os picos de inibição ocorreram 6 e 8 horas após a injeção, em que os múltiplos de diluição sérica máxima foram 5.396 vezes e 4.720 vezes, respectivamente (B da Figura 5). No entanto, foi surpreendentemente que: para a injeção subcutânea do LP-51 ou LP-52, os picos de inibição ocorreram 4 e 6 horas após a injeção, os múltiplos máximos de diluição sérica foram 700.482 vezes e 584.381 vezes para LP51 , respectivamente, e os múltiplos de diluição máxima no soro foram 700.802 vezes e 669.112 vezes para o LP-52 (C e D das Figuras 5); e para a injeção subcutânea de LP-80, ocorreram picos de inibição 6 e 8 horas após a injeção, os múltiplos máximos de diluição sérica foram 491.409 vezes e 537.206 vezes, respectivamente (E da Figura 5). Observou-se que o pico de inibição sérica dos lipopeptídeos potentes podería ser de 11678 a 15235 vezes como o pico de inibição sérica do T-20 e de 100 a 130 vezes o pico de inibição sérica do LP-19 (calculado de acordo com os valores mais altos). O resultado mais emocionante foi o efeito da ação in vivo prolongada de três lipopeptídeos, LP-51, LP-52 e LP-80, eles apresentaram um pico de inibição sérica mais alto, mesmo 72 horas (3 dias) após a injeção, respectivamente, os múltiplos de diluição sérica máxima dos quais foram 1122, 182 e 16157 vezes, respectivamente. Em particular, o pico de inibição sérica do LP-80 foi mantido em 1.980 vezes às 96 horas (4 dias) após a injeção, em 211 vezes nas 120 horas (5 dias) após a injeção e em 144 horas (6 dias) após a injeção, e o seu pico de inibição no soro era o mesmo que o do T-20 às 4 horas (46 vezes) (F da Figura 5). Portanto, os lipopeptídeos da presente invenção não eram apenas potentes, porém também eram eficazes e de longa duração.
Exemplo 7 - Interação de potentes inibidores de fusão da membrana do HIV com sequências alvo de NHR [087] De modo a investigar o mecanismo de ação dos lipopeptídeos anti-HIV potentes, uma análise de dicroísmo circular (CD) foi usada para determinar a
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 59/93
53/65 interação entre os inibidores e as sequências alvo de NHR, incluindo a estrutura secundária (α-hélice) e a estabilidade da hélice (Tm) dos complexos formados. O espectrofotômetro de dicroísmo circular foi o Jasco-815 da JASCO Inc., e o método de ensaio foi referido nos trabalhos publicados pelos inventores (vide as referências 18 e 30 listadas em Antecedentes da Técnica). O polipeptídeo da sequência alvo derivado de NHR era N39 (vide Figura 1) e a sua sequência era AcSTMGAASMTLTVQARQLLSGIVQQQNNLLRAIEAQQHLL-NH2,que correspondeu ao sítio alvo no NHR ao qual o T-20 se ligou. Ο N39 e um inibidor foram dissolvidos separadamente em uma solução salina tamponada com fosfato (PBS) para preparar uma solução de PBS (pH 7,2) com uma concentração de 20 μΜ. Ο N39 foi misturado com um inibidor na proporção de volume de 1: 1 (concentração final de 10 pm de cada um), a amostra misturada foi colocada a 37°C durante 30 minutos, para reagir completamente, e, em seguida, o teor de hélice e valor Tm do complexo resultante foram medidos pelo espectrofotômetro de dicroísmo circular. A faixa de comprimento de onda de varredura do dispositivo foi de 195-260 nm, com um intervalo de comprimento de onda de 1 nm, e os valores medidos pela varredura por três vezes foram ponderados. Com base nos sinais de CD, foi determinada a interação entre os polipeptídeos e o conteúdo da hélice. Em seguida, a amostra para medição do sinal de CD foi transferida para a célula de amostra de varredura de temperatura, o programa do dispositivo de CD foi configurado para varredura de temperatura com um comprimento de onda de detecção de 220 nm e faixa de varredura de 20-98°C, e a varredura de programa foi realizada para se obter a curva dos sinais de CD vs temperatura, com base em qual valor de Tm. tiver sido calculado. Com base no valor Tm, a estabilidade da estrutura helicoidal formada do inibidor e N39 foi avaliada.
[088] Os resultados do ensaio de CD foram mostrados na Figura 6. Pode ser visto que o T-20 podería interagir com ο N39, e o complexo resultante tinha um teor
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 60/93
54/65 de hélice de 48,6% e um valor de Tm de 43,9°C; no entanto, a interação entre ο T20TRM e ο N39 foi extremamente fraca, e, assim, o valor Tm não foi detectável pelo dispositivo, o que demonstra ainda mais o papel importante do TRM em T20. A interação entre o lipopeptídeo de LP-40 e a N39 foi significativamente melhorada, e o complexo resultante tinha um teor de hélice de 57,7% e um valor de Tm de 51,3°C. A adição de uma ramificação de ligação resultou em um decréscimo no conteúdo de hélice, porém a maioria das ramificações de ligação teve pouco efeito sobre o valor de Tm, e apenas o LP-45 com o ramificação de ligação mais longa (PEG12) teve um valor Tm significativamente reduzido. Surpreendentemente, a introdução do par iônico EE ** KK melhorou substancialmente a estabilidade de ligação dos lipopeptídeos, que se refletiu pelo fato de que o valor de Tm do complexo LP-50/N39 aumentou para 63,3°C; e a adição dos aminoácidos do VIH-2/VIS poderia aumentar ainda mais a capacidade de ligação dos lipopeptídeos, e os valores de Tm dos complexos de LP-51 N39 e LP-52/N39 foram de 72°C e 79,1 °C, respectivamente, que foram significativamente aumentados em comparação com os valores de Tmdos complexos T-20 e LP-40, como mostrado na Figura 7. Consequentemente, os três lipopeptídeos antivirais potentes foram capazes de formar uma estrutura helicoidal extremamente estável com a sequência alvo, particularmente o LP-52. Além disso, o complexo LP-52/N39 também apresentou o maior conteúdo de hélice (63,8%).
[089] Neste exemplo, verificou-se que o truncamento do terminal C ou terminal N de lipopeptídeos poderia afetar sua capacidade de ligação dos lipopeptídeos em extensões variadas, e alguns dos lipopeptídeos mostraram uma redução no valor de Tm, e alguns exibiram uma redução no conteúdo em hélice e valor de Tm. O valor de Tm dos lipopeptídeos de terminal C truncado (LP-53 e LP-59) foi significativamente reduzido, indicando a importância do papel dos três aminoácidos (LEK) na extremidade terminal C na ligação de lipopeptídeos ao NHR. Foi interessante notar que os valores de Tm de LP-55 e LP-56 com uma atividade
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 61/93
55/65 antiviral potente foram também diminuídos significativamente (79,1-63,1 °C), porém as os valores de Tm foram muito mais elevados do que aqueles de LP-53, LP-54, LP57, LP-58 e LP-59. Em particular, os valores de Tm de LP-58 e LP-59 não puderam ser determinados devido ao teor de hélice inferior. Os valores de Tm dos lipopeptídeos truncados de terminais N (LP-60 e LP-68) foram também significativamente reduzidos. A truncagem de terminal N com base em LP-52 afetou a estabilidade de ligação dos lipopeptídeos (LP-62 e LP-65), porém, os valores de Tm dos complexos correspondentes foram ainda maiores do que 70°C, o que indica que os lipopeptídeos ainda possuíam uma forte capacidade de ligação, e essa pode ser a razão pela qual eles mantiveram fortes capacidades antivirais. Foi interessante notar que o lipopeptídeo LP-65, que tinha uma sequência de 24 aminoácidos também tinha um maior teor de hélice (63%) e valor Tm (72,1 °C), enquanto a truncagem adicional afetou gravemente a capacidade de ligação de lipopeptídeos correspondentes, como o LP-66, LP-67 e LP-68, o que foi consistente com a atividade antiviral dos mesmos. Em comparação, o efeito da remoção dos 3 aminoácidos (LEK) do terminal C na estabilidade de ligação (valor Tm) foi mais significativa do que o efeito da remoção dos aminoácidos 1-4 (WEQK) no Terminal N, indicando que o terminal C dos lipopeptídeos desempenhou um papel mais importante na ligação a um alvo. No entanto, o lipopeptídeo de LP-69 da sequência de núcleo com a remoção de aminoácidos tanto no terminal C quanto no terminal N teve uma estabilidade de ligação significativamente reduzida e um valor Tm de 51 °C, que foi menor que o do LP-52 em 28,1 °C.
[090] Outro fenômeno interessante foi que os lipopeptídeos de terminal N estendidos tiveram um aumento do valor de Tm, tal como o desempenho do LP-70 e LP-75, que era incompatível com a atividade antiviral reduzida destes. Deve ser observado que o LP-74 e o LP-75 continham o domínio de ligação de bolso do NHR
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 62/93
56/65 (PBD) e o motivo do gancho M-T, o que tornou impossível combinar perfeitamente ο N39.
[091] Os resultados do exemplo mostraram também que o lipopeptídeo LP80 modificado com ácido esteárico (C18) também tive um forte estabilidade de ligação ao N39 (valor de Tm = 79°C). No entanto, os lipopeptídeos modificados com um ácido graxo de cadeia curta, por exemplo, o LP-81 modificado com um ácido graxo C12 e o LP-82 modificado com um ácido graxo C8, tiveram um conteúdo de hélice e capacidade de ligação significativamente reduzidos, os valores Tm dos mesmos foram de 74,1 QC e 65,1 QC, respectivamente, e sua atividade antiviral diminuiu mais significativamente (vide Figura 2). Os lipopeptídeos modificados com colesterol LP-83 e LP-86, lipopeptídeo modificado com vitamina E LP-85, lipopeptídeos modificados com diidrosfingosina LP-84 e LP-87 tinham uma forte estabilidade de ligação helicoidal, o que era consistente com sua atividade antiviral. Da mesma forma, o lipopeptídeos truncados no terminal N com base em LP-80 (LP88, LP-89, LP-90) também tiveram uma forte capacidade de ligação e um valor de Tm de 76,5QC, 70QC e 71,1QC, respectivamente. No entanto, o lipopeptídeo LP-91 com a remoção de LEK do terminal Ceo lipopeptídeo LP-92 de sequência de núcleo com truncagem em ambos os terminais tinham uma estabilidade significativamente reduzida de hélice, e um valor de Tm de 61QC e 55,1 QC, respectivamente.
[092] Este exemplo revelou a correlação entre a estrutura da sequência, a estabilidade de ligação e a atividade antiviral dos inibidores por um grande número de resultados experimentais e forneceu informações importantes para a compreensão do mecanismo de ação dos lipopeptídeos potentes da presente invenção. Embora a capacidade de ligação de certos inibidores foi, por vezes, insuficientemente consistente com a atividade antiviral dos mesmos, em geral, os lipopeptídeos potentes da presente invenção apresentaram valores de Tm
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 63/93
57/65 extremamente altos. Este exemplo também demonstrou que a atividade antiviral de tais lipopeptídeos dependia de suas sequências polipeptídicas e também das propriedades dos compostos lipofílicos.
Exemplo 8 - Análise da estrutura secundária de inibidores de fusão potentes da membrana do HIV [093] De modo a investigar o mecanismo de ação dos lipopeptídeos anti-HIV potentes, uma análise de dicroísmo circular (CD) foi usada para analisar as características estruturais secundárias de T-20 e dos lipopeptídeos representativos em solução, através de uma maneira que foi a mesma que a descrita no Exemplo 7. Para facilitar a análise, o teor da α-hélice e o valor de Tm dos inibidores foram medidos em concentrações de 10 uM, 20 uM e 40 uM (solução de PBS), respectivamente. Os resultados foram mostrados na Figura 8. O T-20 exibiu uma estrutura de desordem irregular em três concentrações, o LP-40 exibiu uma pequena quantidade de estrutura helicoidal em 20 μΜ e 40 μΜ e os quatro lipopeptídeos potentes (LP-50, LP -51, LP-52, LP-80) exibiram uma estrutura helicoidal distinta, entre as quais o LP-80 teve o maior conteúdo de hélice e valor de Tm. Portanto, os lipopeptídeos potentes da presente invenção podem formar uma estrutura helicoidal típica, que era significativamente diferente do T-20.
Exemplo 9 - Análise farmacocinética do lipopeptídeo potente LP-80 em ratos [094] Os resultados da pesquisa acima mostraram que o LP-80 era um lipopeptídeo com uma atividade antiviral in vivo mais alta e era muito estável entre os lipopeptídeos potentes da presente invenção. Neste exemplo, o LP-80 foi usado como representante para analisar suas características farmacocinéticas em ratos SD. Foram utilizados 12 ratos SD, com idades entre 5 e 8 semanas, pesando 182219 gramas, divididos em grupo intravenoso e grupo de injeção subcutânea, cada grupo de 6 animais, metade macho e metade fêmea. A dose do LP-80 foi de 6 mg/kg de peso corporal (mg/kg) e o LP-80 foi dissolvido em água destilada estéril. Para os
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 64/93
58/65 animais de cada grupo, as amostras de soro foram coletadas no momento anterior à administração e aos 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 120 horas, 168 horas e 216 horas após a administração. A concentração do LP-80 no soro de rato foi quantitativamente determinada por uma espectrometria de massa por cromatografia líquida (LC-MS/MS), e o limite inferior foi quantificado em 1 ng/mL (ng/mL). Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados usando um modelo de análise não compartimental (ANC). Os resultados experimentais foram mostrados na Figura 9. A meia-vida média terminal (T1/2) do LP-80 no grupo intravenoso e no grupo de injeção subcutânea foi de 6,04 horas e 6,28 horas, respectivamente. No entanto, vale ressaltar que a concentração do LP-80 no soro aos 3 dias (72 horas) após injeção intravenosa e subcutânea foi de 7,75 ng/mL e 6,86 ng/mL, respectivamente, ou seja, uma concentração molar de 2021,12 pM e 1789,02 pM, e a concentração foi como 1010,56 vezes e 894,51 vezes como 0 valor IC50 (2 pM) do LP-80 para a inibição de HIV-1 NL4-3 e cepas JRCSF, respectivamente. Este resultado confirmou ainda a capacidade antiviral potente e duradoura do LP-80 no Exemplo 6 acima, nos macacos do ponto de vista da farmacocinética.
Exemplo 10 - Avaliação do efeito terapêutico dos lipopeptídeos potentes LP80 no modelo de AIDS de macaco [095] No exemplo, 0 efeito terapêutico do LP-80 no modelo de infecção pelo HIV em macacos foi investigado mais detalhadamente e, quanto à rota técnica, consulte 0 método usado pelos inventores para avaliar 0 LP-19 (isto é, a Referência 30 listada em Antecedentes da Técnica). Seis macacos rhesus chineses adultos (numerados de A a F, metade machos e metade fêmeas) foram utilizados no teste, e os anticorpos para SIV, herpesvirus B e vírus linfotrópico T símio foram determinados como negativos. A cepa SHIV SF162P3 foi fornecida pelo AIDS Reagent Program of NIH nos Estados Unidos e foi amplificada em células
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 65/93
59/65 mononucleares do sangue periférico (PBMC) dos macacos, e o TCID50 foi determinado. Os macacos foram inoculados por via intravenosa com 1.000 TCID50 do vírus SF162P3, e as alterações na carga viral plasmática (número de cópias de RNA/mL) nos macacos foram medidas periodicamente. No 197° dia após macacos serem infectados com 0 SF162P3, 0 LP-80 (dissolvido em água destilada estéril) foi administrado por via subcutânea, e 0 LP-80 foi administrado a 2 mg por kg de peso do corpo (2 mg/kg), uma vez por dia durante 2 semanas e depois uma vez por 4 dias durante 4 semanas. As amostras de plasma foram isoladas de sangue de macaco coletado em momentos pré-determinados e a carga viral plasmática (número de cópias de RNA/mL) foi determinada por reação quantitativa em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real (qRT-PCR). O RNA plasmático foi extraído por um método convencional e as amostras de DNAc foram sintetizadas por reação de transcrição reversa. Os iniciadores de PCR foram direcionados para 0 gag477 do SIV (0 iniciador a montante era GCAGAGGAGGAAATTACCCAGTAC, 0 iniciador a jusante era CAATTTTACCCAGGCATTTAATGTT e a sonda de detecção era FAMACCTGCCATTAAGCCCGA-MGB). O dispositivo de PCR utilizado foi 0 PE ABI7500. A sensibilidade do ensaio foi de 100 cópias de RNA por mililitro de amostra de plasma.
[096] Os resultados experimentais foram mostrados na Figura 10. A carga viral em três dos seis macacos no quarto dia após 0 tratamento diminuiu abaixo da linha de nível detectável; a carga viral em cinco macacos não foi detectada no oitavo dia após 0 tratamento; e a carga viral em todos os seis macacos não foi detectada no dia 14 após 0 tratamento. A carga viral em todos os macacos foi controlada abaixo da linha de nível detectável durante 0 tratamento subsequente com administração do medicamento uma vez a cada 4 dias. O vírus não apresentou rebote no 4Q dia após a administração do fármaco ser terminada; houve uma recuperação do vírus em um dos macacos (macaco A) no décimo dia após a
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 66/93
60/65 interrupção da administração do medicamento; houve uma recuperação de vírus em outros 5 macaco,, exceto o macaco C no 17Q dia após a administração do fármaco ter terminado; e houve uma recuperação da carga viral em todos os macacos no 24 dia após a administração do fármaco ser parada. Os resultados demonstraram o poderoso efeito terapêutico antiviral do LP-80.
Aplicabilidade Industrial [097] Os lipopeptídeos potentes, seus derivados ou sais farmaceuticamente aceitáveis, os multímeros, as composições ou os compostos farmacêuticos fornecidos pela presente invenção podem ser usados para tratar e/ou prevenir o HIV (HIV-1 e/ou HIV-2) e/ou infecções por SIV. Em aplicações práticas, os lipopeptídeos, seus derivados ou sais farmaceuticamente aceitáveis, os multímeros, as composições ou os compostos farmacêuticos de acordo com a presente invenção podem ser administrados diretamente como um medicamento a um paciente ou misturados com um veículo ou excipiente adequado e administrados a um paciente, com o objetivo de tratar e/ou prevenir a infecção pelo HIV.
Listagem de Sequências <110> Institute of Pathogen Biology, Chinese Academy of Medical Sciences <120> LIPOPEPTÍDEO PARA INIBIÇÃO POTENTE DO HIV, SEU DERIVADO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E USO DO MESMO <160> 12 <170> Patent In version 3.5 <210> 1 <211> 28 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 67/93
61/65 <400> 1
Trp Glu Gin Lys He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin
5 10 15
Lys Lys Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys
25 <210> 2 <211> 28 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 2
Leu Glu Ala Asn He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin
5 10 15
Lys Lys Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys
25 <210> 3 <211> 28 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 3
Tyr Thr Ser Leu He Glu Glu Leu He Lys Lys Ser Glu Glu Gin Gin
10 15
Lys Lys Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys
25 <210> 4
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 68/93
62/65 <211> 27 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 4
Glu Gin Lys He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin Lys
5 10 15
Lys Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys
25 <210> 5 <211> 26 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 5
Gin Lys He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin Lys Lys
10 15
Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys
25 <210> 6 <211> 26 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 69/93
63/65 <400> 6
Ser Leu He Glu Glu Leu He Lys Lys Ser Glu Glu Gin Gin Lys Lys
10 15
Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys
25 <210> 7 <211> 25 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 7
Lys He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin Lys Lys Asn
5 10 15
Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys
25 <210> 8 <211> 24 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 8
He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin Lys Lys Asn Glu
10 15
Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 70/93
64/65 <210> 9 <211> 24 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 9
He Glu Glu Leu He Lys Lys Ser Glu Glu Gin Gin Lys Lys Asn Glu
5 10 15
Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys <210> 10 <211> 25 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 10
Trp Glu Gin Lys He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin
5 10 15
Lys Lys Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys
25 <210> 11 <211> 29 <212> PRT <213> Sequência Artificial
Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 71/93
65/65 <220>
<223>
<400> 11
Trp Glu Gin Lys He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin
5 10 15
Lys Lys Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys Cys
25 <210> 12 <211> 29 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220>
<223>
<400> 12
Leu Glu Ala Asn He Glu Glu Leu Leu Lys Lys Ala Glu Glu Gin Gin
5 10 15
Lys Lys Asn Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Lys Cys
25

Claims (5)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado deste, CARACTERIZADO pelo fato de que o lipopeptídeo é o a) ou b) a
    a) um lipopeptídeo formado por ligação de um polipeptídeo com atividade antiviral a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila do polipeptídeo;
    b) um lipopeptídeo formado por ligação de um polipeptídeo com uma atividade antiviral a um grupo protetor terminal e um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila do polipeptídeo, em que o grupo protetor terminal é um grupo protetor terminal amino e/ou um grupo protetor terminal carboxílico;
    em a) e b), o polipeptídeo é qualquer um de P1 a P5;
    o P1 tem uma sequência conforme mostrado na Fórmula I a seguir,
    Fórmula I:
    Xi X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11 Xi 2X13X14X15X16X17X18X19X20X21X22X23X24X25X26
    X27X28 na Fórmula I,
    Xi a X28 são cada um resíduo de aminoácido, X1 é W, L ou Y, X2 é E ou T, X3 é Q, A ou S, X4 é K, N ou L, X5 é I ou L, X6 é E, D, K, R ou A, X7 é E, D, K, R ou A, Xs é L ou I, X9 é L ou I, X10 é K, R, E, D ou A, X11 é K, R, E, D ou A, X12 é A ou
    S, X13 é E, D, K, R ou A, Xu é E, D, K, R ou A, X15 é Q, X16 é Q, X17 é K, R, E, Dou
    A, Xis é K, R, E, D ou A, X19 é N, X20 é E ou D, e X21 é E, D, K, R ou A, X22 é E,D,
    K, R ou A, X23 é L ou I, X24 é K, R, E, D ou A, X25 é K, R, E, D ou A, X26 é L ouI,
    X27 é E ou D, X28 é K ou R;
    ο P2 é um polipeptídeo obtido por exclusão de 1 a 4 resíduos de aminoácidos no terminal amino do P1;
    ο P3 é um polipeptídeo obtido pela exclusão de 1 a 3 resíduos de aminoácidos no terminal carboxila de P1;
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 73/93
    2/11 ο P4 é um polipeptídeo obtido pela adição de um resíduo de cisteína ao terminal carboxila do P1;
    ο P5 tem uma sequência, como mostrado na Fórmula II a seguir,
    Fórmula II:
    X5X6X7X8X9X10X11 Xi 2X13X14X15X16X17X18X19X20X21X22X23X24X25 na Fórmula II, as definições de X5 a X25 são as mesmas da Fórmula I;
    0 polipeptídeo possuindo uma atividade antiviral contra qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
    v1: HIV-1, HIV-2 e SIV;
    v2: HIV-1 e HIV-2;
    v3: HIV-1 e SIV;
    v4: HIV-2 e SIV;
    v5: HIV-1;
    v6: HIV-2; e v7: SIV.
    2. Lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que:
    0 lipopeptídeo possui uma atividade antiviral superior à do LP-19 e/ou T-20 e/ou C34-Chol;
    0 derivado do lipopeptídeo é obtido substituindo um ou mais dos resíduos de aminoácidos do polipeptídeo do lipopeptídeo por aminoácidos da forma L ou da forma D, aminoácidos modificados artificialmente e/ou aminoácidos raros presentes na natureza, e possui uma biodisponibilidade, estabilidade e/ou atividade antiviral superior à do polipeptídeo.
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 74/93
    3/11
    3. Lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que:
    o P1 possui uma sequência como mostrada na sequência que se segue:
    X1X2X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
    ο P2 é P2-1, P2-2, P2-3 ou P2-4, em que:
    ο P2-1 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
    X2X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
    ο P2-2 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
    X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
    ο P2-3 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
    X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
    ο P2-4 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir: IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEK;
    ο P3 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
    X1X2X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKK;
    ο P4 possui uma sequência conforme mostrada na sequência a seguir:
    X1X2X3X4IEELX9KKX12EEQQKKNEEELKKLEKC;
    no P1, P2-1, P2-2, P2-3, P2-4, P3 e P4, as definições de Xi, X2, X3, X4, X9 e X12 são as mesmas que aquelas da Fórmula I.
    4. Lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que:
    P1 é P-80/84/85/52, P-87/51 ou P50, em que P-80/84/85/52 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 1 na listagem de sequências, 0 P-87/51 é um polipeptídeo representado pela sequência de SEQ ID
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 75/93
    4/11
    NO: 2 na listagem de sequências, e ο P50 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 3 na listagem de sequências;
    ο P2-1 é P-88/62, em que o P-88/62 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 4 na listagem de sequências;
    ο P2-2 é P63 ou P60, em que ο P63 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 5 na listagem de sequências e ο P60 é um polipeptídeo representado pela sequência de SEQ ID NO: 6 na listagem de sequências;
    ο P2-3 é P-89/64, em que o P-89/64 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 7 na listagem de sequências;
    ο P2-4 é P-90/65 ou P61, em que o P-90/65 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 8 na listagem de sequências; e ο P61 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 9 na listagem de sequências;
    ο P3 é P-91/55, em que o P-91/55 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 10 na listagem de sequências; e ο P4 é um P83 ou P86, em que ο P83 é um polipeptídeo representado pela sequência da SEQ ID NO: 11 na listagem de sequências e ο P86 é um polipeptídeo representado pela sequência de SEQ ID NO: 12 na listagem de sequências.
    5. Lipopeptídeo, um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou um seu derivado de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto lipofílico é um ácido graxo contendo 8 a 20 átomos de carbono, colesterol, diidroesfingosina ou vitamina E.
    6. Lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato de que o ácido graxo contendo 8 a 20 átomos de carbono é ácido esteárico ou ácido palmítico.
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 76/93
    5/11
    7. Lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que:
    o lipopeptídeo é qualquer um dos 12 lipopeptídeos que se seguem LP80/84/85/52, LP-90/65, LP -87/51, LP-88/62, LP-50, LP-83, LP-91/55, LP-86, LP-63, LP-89/64, LP-60 e LP-61;
    o LP-80/84/85/52 é LP-80/84/85/52a ou LP-80/84/85/52b, em que o LP80/84/85/52a é formado por ligação de um polipeptideo denominado como P80/84/85/52 a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila do P-80/84/85/52; o LP-80/84/85/52b é formado ligando o LP-80/84/85/52a ao grupo protetor de terminal; no LP-80/84/85/52a e LP-80/84/85/52b, o P-80/84/85/52 é o polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 1 na listagem de sequências, e o composto lipofílico é ácido esteárico, diidrosfingosina ou vitamina E;
    o LP-90/65 é LP-90/65a ou LP-90/65b, em que o LP-90/65a é formado por ligação de um polipeptideo denominado P-90/65 a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila de o P-90/65; o LP-90/65b é formado ligando o LP-90/65a ao grupo protetor terminal; no LP-90/65a e LP-90/65b, o P-90/65 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 8 na listagem de sequências, e o composto lipofílico é ácido esteárico ou ácido palmítico;
    o LP-87/51 é LP-87/51a ou LP-87/51b, em que o LP-87/51a é formado por ligação de um polipeptideo denominado P-87/51 a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila de o P-87/51; o LP-87/51 b é formado ligando o LP-87/51 a ao grupo protetor terminal; no LP-87/51 a e LP-87/51 b, o P-87/51 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 2 na listagem de sequências, e o composto lipofílico é diidrosfingosina ou ácido palmítico;
    o LP-88/62 é LP-88/62a ou LP-88/62b, em que o LP-88/62a é formado por ligação de um polipeptideo denominado P-88/62 a um composto lipofílico vinculado
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 77/93
    6/11 ao terminal carboxila de o P-88/62; o LP-88/62b é formado ligando o LP-88/62a ao grupo protetor terminal; no LP-88/62a e LP-88/62b, o P-88/62 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 4, e o composto lipofílico é ácido esteárico ou ácido palmítico;
    o LP-50 é LP-50a ou LP-50b, em que o LP-50a é formado por ligação de um polipeptideo chamado P50 ao ácido palmítico ligado ao terminal carboxila do P50; o LP-50b é formado ligando o LP-50a ao grupo protetor terminal; no LP-50a e LP-50b, ο P50 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 3 na listagem de sequências;
    o LP-83 é LP-83a ou LP-83b, em que o LP-83a é formado por ligação de um polipeptideo denominado P83 ao colesterol ligado ao terminal carboxila do P83; o LP-83b é formado ligando o LP-83a ao grupo protetor terminal; no LP-83a e LP-83b, ο P83 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 11 na listagem de sequências;
    o LP-91/55 é LP-91/55a ou LP-91/55b, em que o LP-91/55a é formado por ligação de um polipeptideo denominado P-91/55 a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila de o P-91/55; o LP-91/55b é formado ligando o LP-91/55a ao grupo protetor terminal; no LP-91/55a e LP-91/55b, o P-91/55 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 10 e o composto lipofílico é ácido esteárico ou ácido palmítico;
    o LP-86 é LP-86a ou LP-86b, em que o LP-86a é formado por ligação de um polipeptideo denominado como P86 ao colesterol ligado ao terminal carboxila do P86; o LP-86b é formado ligando o LP-86a ao grupo protetor terminal; no LP-86a e LP-86b, ο P86 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 12 na listagem de sequências;
    o LP-63 é LP-63a ou LP-63b, em que o LP-63a é formado por ligação de um polipeptideo denominado P63 ao ácido palmítico ligado ao terminal carboxila do
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 78/93
    7/11
    P63; o LP-63b é formado ligando o LP-63a ao grupo protetor terminal; no LP-63a e LP-63b, ο P63 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 5 na listagem de sequências;
    o LP-89/64 é LP-89/64a ou LP-89/64b, em que o LP-89/64a é formado por ligação de um polipeptideo denominado P-89/64 a um composto lipofílico ligado ao terminal carboxila de o P-89/64; o LP-89/64b é formado ligando o LP-89/64a ao grupo protetor terminal; no LP-89/64a e LP-89/64b, o P-89/64 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 7 na listagem de sequências e o composto lipofílico é ácido esteárico ou ácido palmítico;
    o LP-60 é LP-60a ou LP-60b, em que o LP-60a é formado por ligação de um polipeptideo denominado P60 ao ácido palmítico ligado ao terminal carboxila do P60; o LP-60b é formado ligando o LP-60a ao grupo protetor terminal; no LP-60a e LP-60b, ο P60 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 6 na listagem de sequências; e o LP-61 é LP-61 a ou LP-61 b, em que o LP-61 a é formado por ligação de um polipeptideo chamado P61 ao ácido palmítico ligado ao terminal carboxila do P61; o LP-61 b é formado ligando o LP-61 a ao grupo protetor terminal; no LP-61 a e LP-61 b, ο P61 é um polipeptideo representado pela sequência da SEQ ID NO: 9 na listagem de sequências.
    8. Polipeptideo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo, CARACTERIZADO pelo fato de que o polipeptideo é um polipeptideo definido na reivindicação 1.
    9. Polipeptideo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o derivado do polipeptideo é pelo menos um selecionado do grupo que consiste em 1) a 5) que se seguem:
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 79/93
    8/11
    1) um derivado obtido por ligação de um grupo protetor do terminal N ao terminal amino do polipeptídeo e/ou por ligação de um grupo protetor do terminal C ao terminal carboxila do polipeptídeo;
  2. 2) um derivado obtido por ligação de um oligopeptídeo ou de um composto lipofílico ao terminal carboxila do polipeptídeo;
  3. 3) um derivado obtido por ligação de um oligopeptídeo ou de um composto lipofílico ao terminal amino do polipeptídeo;
  4. 4) um derivado obtido por ligação de um oligopeptídeo ou de um composto lipofílico ao terminal carboxila e ao terminal amino do polipeptídeo; e
  5. 5) um derivado obtido pela modificação do polipeptídeo com uma proteína, um polietilenoglicol ou uma maleimida.
    10. Multimetro de PM1 ou PM2, CARACTERIZADO pelo fato de que:
    ο PM1 é um multímero formado pelo lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 1; e ο PM2 é um multímero formado pelo lipopeptídeo, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um derivado do mesmo, de acordo com a reivindicação 8.
    11. Composição compreendendo C1) e C2), CARACTERIZADA pelo fato de que:
    o C1) é C11), C12) e/ou C13), em que o C11) é o lipopeptídeo, um derivado ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1; o C12) é o polipeptídeo, um derivado do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 8; o C13) é o multímero de acordo com a reivindicação 10;
    o C2) é um veículo ou adjuvante farmaceuticamente aceitável;
    a composição possui pelo menos uma função das seguintes funções F1) F5):
    F1) possui atividade contra vírus;
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 80/93
    9/11
    F2) trata e/ou previne e/ou fornece tratamento adjuvante de uma doença causada por uma infecção por vírus;
    F3) inibe a fusão de vírus e células;
    F4) inibe a entrada do vírus na célula; e
    F5) inibe a replicação do vírus;
    em F1)-F5), o vírus é qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
    v1: HIV-1, HIV-2 e SIV;
    v2: HIV-1 e HIV-2;
    v3: HIV-1 e SIV;
    v4: HIV-2 e SIV;
    v5: HIV-1;
    v6: HIV-2; e v7: SIV.
    12. Uso de C11), C12), C13) e/ou C14) na fabricação de pelo menos um produto selecionado do grupo que consiste em E1)-E5), CARACTERIZADO pelo fato de que:
    o C11) é o lipopeptídeo, um derivado ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1; o C12) é o polipeptídeo, um derivado do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 8; o C13) é o multímero de acordo com a reivindicação 10; e o C14) é a composição de acordo com a reivindicação 11;
    ο E1) é um produto contra vírus;
    ο E2) é um produto para o tratamento e/ou prevenção e/ou tratamento adjuvante de uma doença causada por uma infecção por vírus;
    ο E3) é um produto para inibir a fusão de vírus e células;
    ο E4) é um produto para inibir a entrada de vírus nas células; e
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 81/93
    10/11 ο Ε5) é um produto para inibir a replicação de vírus;
    em E1) -E5), o vírus é qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
    v1: HIV-1, HIV-2 e SIV;
    v2: HIV-1 e HIV-2;
    v3: HIV-1 e SIV;
    v4: HIV-2 e SIV;
    v5: HIV-1;
    v6: HIV-2; e v7: SIV.
    13. Composto farmacêutico, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto farmacêutico é C11), o C12) ou o C13), em que:
    o C11) é o lipopeptídeo, um derivado ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1; o C12) é o polipeptídeo, um derivado do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 8; e o C13) é o multímero de acordo com a reivindicação 10.
    14. Composto farmacêutico de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto farmacêutico tem pelo menos um dos seguintes usos U1) -U5):
    U1) usado contra o vírus
    U2 ) usado para tratar e/ou prevenir e/ou tratar de forma adjunta uma doença causada por uma infecção por vírus;
    U3) usado para inibir a fusão de vírus e células;
    U4) usado para inibir a entrada de vírus na célula; e
    U5) usado para inibir a replicação de vírus;
    em U1)-U5), o vírus é qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
    Petição 870190104744, de 17/10/2019, pág. 82/93
    11/11 v1: HIV-1, HIV-2 e SIV;
    v2: HIV-1 e HIV-2;
    v3: HIV-1 e SIV;
    v4: HIV-2 e SIV;
    v5: HIV-1;
    v6: HIV-2; e v7: SIV.
    15. Método para tratamento e/ou prevenção de uma infecção causada por um virus em um animal, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administração a um animal em questão de C11), C12), C13) e/ou C14) para inibir a infecção viral no animal, em que:
    o C11) é o lipopeptídeo, um derivado ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1; o C12) é o polipeptideo, um derivado do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 8; o C13) é o multímero de acordo com a reivindicação 10; e o C14) é a composição de acordo com a reivindicação 11;
    o vírus é qualquer vírus selecionado do grupo que consiste nos seguintes v1-v7:
BR112019021787A 2017-04-18 2017-04-18 lipopeptídeo para inibição potente do hiv, seu derivado, composição farmacêutica e uso do mesmo BR112019021787A2 (pt)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/CN2017/080860 WO2018191858A1 (zh) 2017-04-18 2017-04-18 强效抑制hiv的脂肽、其衍生物、其药物组合物及其用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR112019021787A2 true BR112019021787A2 (pt) 2020-05-05

Family

ID=63856164

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112019021787A BR112019021787A2 (pt) 2017-04-18 2017-04-18 lipopeptídeo para inibição potente do hiv, seu derivado, composição farmacêutica e uso do mesmo

Country Status (10)

Country Link
US (1) US11680086B2 (pt)
EP (1) EP3613762A4 (pt)
JP (1) JP7057822B2 (pt)
KR (1) KR102389792B1 (pt)
AU (1) AU2017410525B2 (pt)
BR (1) BR112019021787A2 (pt)
CA (1) CA3058930A1 (pt)
RU (1) RU2741123C1 (pt)
WO (1) WO2018191858A1 (pt)
ZA (1) ZA201907588B (pt)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3058930A1 (en) * 2017-04-18 2018-10-25 Institute Of Pathogen Biology, Chinese Academy Of Medical Sciences Lipopeptide for potently inhibiting hiv, derivative thereof, pharmaceutical composition thereof and use thereof
CN108659105B (zh) * 2018-05-23 2021-11-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抗病毒多肽及其药物组合物和用途
CN108822190B (zh) * 2018-05-23 2021-11-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 多肽及其药物组合物和用途
KR102311987B1 (ko) 2021-04-12 2021-10-12 이훈 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003029284A1 (fr) 2001-09-27 2003-04-10 Nobutaka Fujii Agent anti-vih
WO2008050830A1 (fr) 2006-10-25 2008-05-02 Kyoto University Agent anti-vih
WO2009155064A1 (en) 2008-05-28 2009-12-23 New York Blood Center Bifunctional molecules for inhibiting hiv entry
CA2734081A1 (en) 2008-08-13 2010-02-18 New York Blood Center Combination therapy of hiv fusion/entry inhibitors targeting gp41
ES2911752T3 (es) * 2009-03-10 2022-05-20 Baylor Res Institute Anticuerpos contra CD40
WO2010113157A1 (en) 2009-04-01 2010-10-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Lipopeptide inhibitors of hiv-1
CN102247590A (zh) 2010-05-18 2011-11-23 天津市扶素生物技术有限公司 用于预防或治疗hiv感染的药物组合及其应用
US20140323392A1 (en) 2011-03-28 2014-10-30 University Of Utah Research Foundation Methods and compositions related to inhibition of viral entry
EP2511295A1 (en) * 2011-04-15 2012-10-17 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Compositions for preventing and/or treating an infection by an HIV-1 virus
WO2013127300A1 (zh) 2012-02-28 2013-09-06 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 用于抑制hiv的多肽、其药物组合物及其用途
US20150045291A1 (en) 2012-04-04 2015-02-12 Yeda Research And Development Co., Ltd. Lipopeptide conjugates comprising sphingolipid and hiv gp41 derived peptides
CA3058930A1 (en) 2017-04-18 2018-10-25 Institute Of Pathogen Biology, Chinese Academy Of Medical Sciences Lipopeptide for potently inhibiting hiv, derivative thereof, pharmaceutical composition thereof and use thereof
CN111944025B (zh) 2017-04-18 2022-06-07 中国医学科学院病原生物学研究所 艾滋病病毒膜融合抑制剂脂肽及药物用途

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017410525B2 (en) 2022-04-21
ZA201907588B (en) 2021-08-25
AU2017410525A1 (en) 2019-10-31
RU2741123C1 (ru) 2021-01-22
KR20200002923A (ko) 2020-01-08
WO2018191858A1 (zh) 2018-10-25
JP2020517741A (ja) 2020-06-18
EP3613762A1 (en) 2020-02-26
KR102389792B1 (ko) 2022-04-22
US20210277068A1 (en) 2021-09-09
US11680086B2 (en) 2023-06-20
JP7057822B2 (ja) 2022-04-20
CA3058930A1 (en) 2018-10-25
EP3613762A4 (en) 2020-10-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4682251B2 (ja) 改善された生物学的特性を有するｈｉｖ融合阻害剤ペプチド
CN108727475B (zh) 强效抑制hiv的脂肽、其衍生物、其药物组合物及其用途
CN111643656B (zh) 广谱冠状病毒膜融合抑制剂及其抗艾滋病病毒的应用
US11680086B2 (en) Lipopeptide for potently inhibiting HIV, derivative thereof, pharmaceutical composition thereof and use thereof
Lu et al. HIV-1 variants with a single-point mutation in the gp41 pocket region exhibiting different susceptibility to HIV fusion inhibitors with pocket-or membrane-binding domain
KR20100016142A (ko) 항바이러스 펩티드 치료제 전달용 신규 제제
CN106749558B (zh) 广谱抑制hiv的脂肽、其衍生物、其药物组合物及其用途
EP2291392B1 (en) Bifunctional molecules for inhibiting hiv entry
WO2018141089A1 (zh) 广谱抑制hiv的脂肽、其衍生物、其药物组合物及其用途
WO2007068163A1 (fr) Peptides inhibiteurs de la fusion du vih et leur utilisation
CN115724919B (zh) 强效抑制艾滋病病毒及其耐药毒株的新型膜融合抑制剂及其药物用途
OA19487A (en) Potent HIV inhibiting lipopeptide, derivative thereof, pharmaceutical composition thereof and use thereof.
CA2766417A1 (en) Stabilized therapeutic small helical antiviral peptides

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]
B06W Patent application suspended after preliminary examination (for patents with searches from other patent authorities) chapter 6.23 patent gazette]