BR112019020353A2

BR112019020353A2 - estatina para prevenção/redução de dano relacionado à isquemia

Info

Publication number: BR112019020353A2
Application number: BR112019020353A
Authority: BR
Inventors: Vilahur Garcia Gemma; Badimon Maestro Lina
Original assignee: Fundacio Inst De Recerca De Lhospital De La Santa Creu I Sant Pau; Gendiag S L
Priority date: 2017-03-31
Filing date: 2018-03-29
Publication date: 2020-04-28
Also published as: RU2019134491A3; RU2019134491A; MX2019011567A; EP3600278B1; ES2877646T3; CN110494134A; PL3600278T3; EP3600278A1; WO2018178275A1; RU2768889C2; US20200030288A1; DK3600278T3; CA3058250A1

Abstract

a presente invenção refere-se, em geral, à prevenção e/ou redução de dano relacionado à isquemia. mais especificamente, a presente invenção refere-se aos compostos para uso na prevenção e/ou redução de dano relacionado à isquemia. os compostos são estatinas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “ESTATINA PARA PREVENÇÃO/REDUÇÃO DE DANO RELACIONADO À ISQUEMIA”.

CAMPO DA INVENÇÃO [1] A presente invenção refere-se, em geral, à prevenção e/ou redução de dano relacionado à isquemia. Mais especificamente, a presente invenção refere-se aos compostos para uso na prevenção e/ou redução de dano relacionado à isquemia.

ANTEDEDENTES DA INVENÇÃO [2] A isquemia ocorre quando o fluxo sanguíneo para uma área das células é insuficiente para suportar a sua atividade metabólica regular. Como consequência, o tecido ou órgão afetado pode sofrer grave dano. A restrição do fluxo sanguíneo leva ao acúmulo de produtos residuais metabólicos e à insuficiência de energia celular, o que resulta na degradação das funções celulares e, eventualmente, na necrose celular. Além disso, a isquemia induz à apoptose e inflamação local e sistêmica, resultando em dano adicional ao tecido [3] A reperfusão (isto é, a restauração do fornecimento de sangue ao órgão ou tecido afetado após um período de isquemia) leva a mais danos devido à inflamação e ao estresse oxidativo (o assim chamado dano de reperfusão). Desse modo, embora a reperfusão recupere tecido isquêmico que de outro modo morrería devido ao acúmulo de danos isquêmicos, a restauração do fluxo sanguíneo para o tecido afetado exacerba a lesão em comparação com o dano no início da reperfusão, aumentando assim o tamanho final do infarto. O tamanho final do infarto é determinado tanto pelo dano induzido durante a isquemia quanto pelo dano produzido durante a reperfusão que, por sua vez, está associado à isquemia. No entanto, para limitar o dano isquêmico durante o período de restrição do fluxo sanguíneo, é imperativa a intervenção imediata e medidas que garantam a reperfusão do órgão ou

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2/110 tecido isquêmico.

[4] Um exemplo de isquemia é a perfusão prejudicada do tecido cardíaco. Isto resulta na perda da capacidade do coração de funcionar adequadamente, à medida que o tecido se torna privado de oxigênio e energia. A lesão cardíaca está diretamente relacionada à duração do período isquêmico. As intervenções atuais para melhorar o fluxo sanguíneo no tecido cardíaco danificado são principalmente invasivas, incluindo intervenções coronárias percutâneas com ou sem colocação de stent, cirurgia de revascularização do miocárdio, angioplastia e endarterectomia. No entanto, existem altos riscos associados a esses procedimentos invasivos.

[5] Em um nível molecular, a contínua deficiência de oxigênio durante a isquemia desloca o metabolismo cardíaco para a glicólise anaeróbica, que produz uma diminuição no pH celular. Para amortecer este acúmulo de íons de hidrogênio, o permutador de Na⁺/H⁺ excreta os íons de hidrogênio em excesso, o que produz um grande influxo de íons de sódio e sobrecarga de Ca2⁺. A isquemia também esgota a ATP celular que inativa ATPases (por exemplo, Na⁺/K⁺ ATPase), reduz o efluxo ativo de Ca2⁺, e limita a recaptação de cálcio pelo retículo endoplasmático (ER), produzindo assim sobrecarga de cálcio na célula. Estas alterações são acompanhadas pela abertura do poro de transição da permeabilidade mitocondrial (MPT), que dissipa o potencial da membrana mitocondrial e prejudica ainda mais a produção de ATP e também desencadeia a morte celular. Assim, no coração, estas alterações celulares são acompanhadas pela ativação de proteases intracelulares (por exemplo, calpeínas) que danificam as miofibrilas e produzem hipercontração e necrose da banda de contratura. Estas alterações e, desse modo, o grau de lesão tecidual variam em extensão, dependendo da magnitude e da duração do período isquêmico.

[6] Há uma interação entre o dano isquêmico e o dano de re

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3/110 perfusão. Quanto maior o dano isquêmico, maior o impacto no dano de reperfusão. Por exemplo, durante a isquemia há uma diminuição do pH intracelular, que ativa o sistema de permuta Na⁺/H⁺ com extrusão de H⁺ da célula na permuta por Na⁺. Isso leva a um aumento do sódio intracelular, que continua durante a reperfusão. O sistema normal de Na⁺/K⁺ ATPase, que extrusa sódio, é inibido neste meio ácido. Isso resulta na ativação do permutador de Na⁺/Ca2⁺ levando ao acúmulo de cálcio intracelular e, eventualmente, à morte celular. Outros eventos bioquímicos que ocorrem durante a isquemia e também contribuem para o dano isquêmico/reperfusão são a indução de uma resposta inflamatória sistêmica e local e um aumento na suscetibilidade à ativação plaquetária. A resposta inflamatória que ocorre após a reperfusão é uma interação coordenada entre os leucócitos circulantes (principalmente neutrófilos) e o endotélio vascular, bem como os macrófagos e mastócitos residentes no coração. A reintrodução do O2 resulta em um fenômeno de explosão respiratória com a produção de radicais livres tóxicos derivados do oxigênio, tal como 0 ânion superóxido (02 ), H2O2 e 0 radical hidroxila (OH ). Essa geração de oxidantes em excesso da capacidade dos sistemas endógenos de eliminação resulta em ativação complementar, produção de leucotrieno (LT)B4 e fator de ativação plaquetária (PAF), mobilização de P-selectina dos corpos de Weibel-Palade, bem como síntese de E-selectina e molécula de adesão intracelular (ICAM)-1 através da ativação de fatores de transcrição nuclear (por exemplo, NF-κΒ). Há também uma alteração na composição iônica do citoplasma com aumento do cálcio. Por exemplo, nos miócitos cardíacos há desacoplamento da fosforilação oxidativa e geração de tensão devido a mecanismos de desperdício de energia, como aumento da ativação do transporte de cálcio na membrana mitocondrial interna e retículo sarcoplasmático. Isto cria um ciclo vicioso onde 0 cálcio causa um aumento na xantina oxidase, promovendo a

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4/110 produção de radicais de oxigênio, resultando em maior influxo de cálcio. A efusão de citocinas, PAF3 e LTB4 promove o recrutamento de leucócitos levando à inflamação local e eventualmente sistêmica.

[7] Apesar de uma melhor compreensão da fisiopatologia dos eventos moleculares que ocorrem durante a isquemia, ainda não estão disponíveis terapias eficazes para prevenir ou minimizar o dano relacionado à isquemia. Assim, há uma necessidade não atendida de melhores formas de prevenir ou reduzir o dano relacionado à isquemia, principalmente na medida em que o dano relacionado à isquemia é dano de isquemia. Além disso, há necessidade de formas de prevenir/reduzir o dano relacionado à isquemia que sejam menos arriscadas para o paciente, menos dispendiosas e/ou resultem em menos dano relacionado à isquemia, em particular no que diz respeito ao tamanho do infarto causado pela isquemia, dano tecidual devido à morte celular (necrose e/ou apoptose) desencadeada por isquemia, dano tecidual causado pela reação inflamatória que ocorre durante a isquemia dentro do tecido/órgão isquêmico, dano causado pela resposta inflamatória sistêmica desencadeada por isquemia e/ou formação de cicatriz no tecido pós-isquêmico. Além disso, há necessidade de formas de prevenir/reduzir dano relacionado à isquemia que sejam menos arriscadas para o paciente, menos dispendiosas e/ou resultem em menos dano relacionado à isquemia, em particular no que diz respeito aos danos às miofibrilas causados pelas proteases intracelulares. Em particular, há uma necessidade de meios que permitam alcançar vários destes objetivos simultaneamente por um único tratamento.

[8] A presente invenção atende a estas necessidades acima e resolve os problemas acima descritos pelos diferentes aspectos e modalidades descritas abaixo.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [9] Antes da presente invenção ser descrita em maiores deta

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5/110 lhes abaixo, deve-se entender que esta invenção não está limitada à metodologia particular, protocolos e reagentes descritos aqui visto que estes podem variar. Deve-se também entender que a terminologia usada aqui serve apenas para descrever as modalidades particulares, e não se destina a limitar o escopo da presente invenção, que será limitado apenas pelas reivindicações anexas. A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm os mesmos significados que são comumente entendidos por alguém versado na técnica. Para os propósitos da presente invenção, todas as referências aqui citadas são incorporadas por referência em sua totalidade.

[10] Além disso, as seguintes modalidades podem, sempre que tal não induza à contradições lógicas, ser combinadas entre si sem restrições. Desse modo, a presente invenção deve abranger, mesmo que não explicitamente especificada a seguir, qualquer combinação viável das modalidades descritas a seguir. Além disso, as modalidades relativas a um aspecto da presente invenção podem, sempre que tal não induza às contradições lógicas, ser combinadas com outro aspecto da presente invenção sem restrições.

[11] Os autores da presente invenção descobriram que a administração intravenosa de uma estatina (por exemplo, atorvastatina ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina) após o início da isquemia reduz o dano relacionado à isquemia. Em particular, eles encontraram em modelos animais pequenos e grandes (roedores e suínos) que a administração deste regime de tratamento logo após a isquemia miocárdica induz à proteção cardíaca, limitando o dano relacionado à isquemia.

[12] Como pode ser observado a partir dos exemplos fechados, A infusão intravenosa da atorvastatina de estatina logo após o início da isquemia em um modelo suíno de oclusão de balão coronário de

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6/110 tórax fechado limitou o dano miocárdico induzido pela isquemia, reduziu a execução da morte celular no miocárdio isquêmico e limitou a resposta inflamatória dentro do tecido miocárdico infartado. Embora os inventores não queiram ser limitados por qualquer teoria, as observações feitas por eles sugerem que os efeitos protetores podem envolver inibição da RhoA e ativação da AMPK (proteína cinase ativada por AMP). Estas observações em um modelo suíno que se assemelha muito à fisiologia humana têm um alto potencial translacional a ser implementado em pacientes humanos com o objetivo de prevenir/reduzir dano relacionado à isquemia pela administração intravenosa de estatina logo após o início da isquemia.

[13] Preferivelmente, a presente invenção é definida como segue:

[14] [1] Um composto para uso na prevenção e/ou redução de dano relacionado à isquemia em um indivíduo, em que o referido composto é uma estatina, em que o referido composto deve ser administrado ao indivíduo por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia.

[15] [2] O composto para uso de acordo com [1], em que dano relacionado à isquemia é o dano causado por isquemia durante o período isquêmico após o início da isquemia, porém antes da reperfusão.

[16] [3] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] ou [2], em que o composto deve ser administrado em uma dose única.

[17] [4] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] to [3], em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia, preferivelmente não mais do que 45 minutos após o início da isquemia, mais preferivelmente não mais do que 30 minutos após o início da isquemia, mais preferivelmen

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7/110 te não mais do que 20 minutos após o início da isquemia, mais preferivelmente não mais do que 15 minutos após o início da isquemia.

[18] [5] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [4], em que o composto deve ser administrado pelo menos 15 minutos antes da reperfusão, preferivelmente pelo menos 20 minutos antes da reperfusão, mais preferivelmente pelo menos 30 minutos antes da reperfusão, mais preferivelmente pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[19] [6] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [5], em que o composto é selecionado dos compostos listados na Tabela 1, em que, preferivelmente, o composto é selecionado do grupo que consiste em atorvastatina, a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina, sinvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina e rosuvastatina, em que, mais preferivelmente, o composto é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina de fórmula II, em que, mais preferivelmente, o composto é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina de fórmula III:

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[20] [7] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [6], em que o composto deve ser administrado em uma dosagem na faixa de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal, preferivelmente de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal.

[21] [8] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [7], em que a isquemia é produzida em um tecido ou órgão selecionado do grupo que consiste em coração, cérebro, rim, intestino, pâncreas, fígado, pulmão, músculo esqueletal e combinação dos mesmos, em que, preferivelmente, a isquemia é produzida no coração.

[22] [9] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [8], em que dano relacionado à isquemia é devido a uma isquemia causada por aterosclerose, trombose, tromboembolia, embolia lipídica, sangramento, stent, cirurgia, angioplastia, cirurgia de bypass, transplante de órgãos, cardiomiopatia induzida por estresse (síndrome de Takotsubo), vasoconstrição, infarto do miocárdio com ST elevado, infarto do miocárdio com ST não elevado, angina instável ou uma combinação de dois ou mais, em que, preferencialmente, a isquemia está relacionada ao infarto do miocárdio com ST elevado, infarto do miocárdio com ST não elevado ou angina instável.

[23] [10] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [9], em que o dano relacionado à isquemia compreende ou consiste em (preferivelmente consiste em) pelo menos um dano selecionado do grupo que consiste em morte celular do miócito (preferi

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9/110 velmente através de necrose e apoptose, mais preferivelmente através de necrose), dano causado por adicificação de pH intracelular devido à isquemia e/ou dano causado por uma resposta inflamatória devido à isquemia que, preferivelmente, é desencandeada por isquemia (e preferivelmente também ampliada durante a reperfusão), em que, mais preferivelmente, o referido dano relacionado à isquemia consiste em dano causado por adicificação de pH intracelular devido à isquemia.

[24] [11] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [10], em que o dano relacionado à isquemia compreende ou consiste em (preferivelmente consiste em) dano às miofibrilas causado por proteases intracelulares (que causa hipercontração e/ou necrose da banda de contratura).

[25] [12] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [11], em que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia compreende ou consiste em uma redução do tamanho do infarto causado por isquemia, preferivelmente uma redução de dano miocárdico.

[26] [13] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [12], em que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia induz a uma redução de dano ao tecido devido à morte celular desencandeada por isquemia/reperfusão, preferivelmente devido à morte celular desencandeada por isquemia.

[27] [14] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [13], em que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia compreende ou consiste em uma prevenção ou redução da resposta inflamatória no tecido/órgão isquêmico.

[28] [15] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [14], em que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia compreende ou consiste na redução da resposta inflamatória em células sanguíneas, preferivelmente em leucócitos, desencandea

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10/110 da por isquemia e/ou reperfusão, preferivelmente desencandeada por isquemia.

[29] [16] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [15], em que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia compreende ou consiste em uma redução no tamanho da cicatriz no tecido pós-isquêmico, preferivelmente em tecido cardíaco pósisquêmico.

[30] [17] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [16], em que o indivíduo é um humano.

[31] [18] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [17], em que o indivíduo sofre de dislipidemia, em que, preferivelmente, a referida dislipidemia é hypercholesterolemia.

[32] [19] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [18], em que a estatina não é administrada em e/ou após reperfusão.

[33] [20] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [19], em que a estatina não é administrada durante a reperfusão.

[34] [21] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [20], em que o composto deve ser administrado pelo menos 15, preferivelmente pelo menos 20 minutos, mais preferivelmente pelo menos 30 minutos, ainda mais preferivelmente pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[35] [22] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [21], em que a administração reduz o nível de pelo menos um marcador relacionado ao dano cardíaco selecionado do grupo que consiste em IMA (albumina modificada isquêmica), CFABP (proteína de ligação de ácido graxo cardíaco) e mioglobina, em que, preferivelmente, a administração reduz o nível dos marcadores relacionados ao dano cardíaco IMA (albumina modificada isquêmica), CFABP (proteína

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11/110 de ligação de ácido graxo cardíaco) e mioglobina.

[36] [23] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [22], em que a referida administração resulta em um tamanho reduzido de infarto do miocárdio.

[37] [24] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [23], em que a estatina inibe a ativação de RhoA.

[38] [25] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [24], em que a referida administração ativa AMPK (por fosforilação de proteína cinase ativada por AMP).

[39] [26] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [25], em que a referida administração resulta em uma redução no nível celular de p53 fosforilado (ativo).

[40] [27] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [26], em que a referida administração resulta em uma redução no nível celular de caspase-3 clivada (ativada).

[41] [28] O composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [27], em que a referida administração resulta em uma redução no nível celular de MCP-1/CCL2 no mRNA e/ou no nível de proteína.

[42] [29] Uma composição farmacêutica compreendendo o composto para uso de acordo com qualquer um dentre [1] a [28] e um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável [43] Para uso na prevenção/redução de dano relacionado à isquemia em um indivíduo.

[44] Em modalidades preferidas da referida composição farmacêutica, o referido composto, a referida prevenção/redução, o referido dano relacionado à isquemia e/ou o referido indivíduo são como definidos em qualquer um dentre [2] a [28].

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12/110 [45] [30] Uso de um composto para a fabricação de um medicamento para a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia em um indivíduo, em que o referido composto é uma estatina, em que o referido composto deve ser administrado ao indivíduo por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, e em que o referido composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia.

[46] Em modalidades preferidas do referido uso, o referido composto é como definido em qualquer um dentre [2] a [28].

[47] [31] Um método de tratamento compreendendo a etapa de administração a um indivíduo sofrendo de dano relacionado à isquemia de uma quantidade farmaceuticamente aceitável de um composto, em que o referido composto é uma estatina, em que o referido composto é administrado ao indivíduo por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, e em que o referido composto é administrado o mais rápido possível após o início da isquemia.

[48] Em modalidades preferidas do o referido método de tratamento, o referido composto é como definido em qualquer um dentre [2] a [28],

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [49] A Figura 1 é um fluxograma que mostra protocolo experimental subjacente ao Exemplo 1. Ml: infarto do miocárdio. Sac: Sacrifício; PBMC: células mononucleares sanguíneas periféricas (um tipo de leucócito); atorva: atorvastatina [50] A Figura 2 mostra os dados obtidos de um experimento que trata a questão se a administração intravenosa de atorvastatina

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13/110 logo após o início da oclusão coronariana protege contra dano relacionado à isquemia, estudando os efeitos sobre os marcadores relacionados à lesão cardíaca durante um período isquêmico de 90 minutos. A. IMA: Albumina modificada isquêmica; B. CFABP: Proteína de ligação de ácido graxo cardíaco; C. Mioglobina. D. Porcentagem total de redução vs. controle. Os resultados são expressos como níveis de aumento vs linha de referência. *p<0,05 vs Controle e ao longo do tempo; tp<0,05 vs Controle. N=7 animais/grupo.

[51] A Figura 3 são dados que mostram que a atorvastatina inibe a ativação de RhoA (translocação para a membrana celular) no miocárdio isquêmico. A. Expressão total de RhoA. B. Inibição de RhoA expressa como a relação entre RhoA detectada no citoplasma (cyt; forma inativa) vs. RhoA detectado na membrana (mb; forma ativa). *P<0,05 vs controle; isq: miocárdio isquêmico.

[52] A Figura 4 são dados de um modelo de camundongo de ligação coronária que mostra os efeitos cardioprotetores exercidos por diferentes tipos de estatinas (atorvastatina e β-ΟΗ-sinvastatina) e um inibidor específico de RhoA (CCG1423). (A) Ligação arterial coronariana e indução de isquemia avaliadas por EGC. (B) Análise histológica do tamanho do infarto. (C) Análise histológica do dano oxidativo por coloração com 8-hidróxi guanosina (marcador de dano oxidativo do DNA). *p<0,05 vs Controle. VE: ventrículo esquerdo; Atorva: atorvastatina; β-ΟΗ-simva: forma de ácido beta-hidróxi de sinvastatina; RhoA inib.: inibidor de RhoA.

[53] A Figura 5 mostra o efeito de atorvastatina sobre (A) níveis de transcrição miocárdica das moléculas cardioprotetivas AMPK e eNOS (óxido nítrico sintetatse endotelial) e (B) marcadores relacionados à apoptose p53 e Caspase-3. Isq: miocárdio isquêmico; Não Isq: miocárdio não isquêmico/remoto.

[54] A Figura 6 mostra o efeito de atorvastatina sobre a expres

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14/110 são/ativação de proteína e como pode ser observado na figura, a atorvastatina ativa (fosforila) a AMPK (A) enquanto a atorvastatina também não realça a ativação de eNOS induzida por isquemia (B). *p<0,05 vs não isq; tp<0,05 vs Controle; Atorva: atorvastatina. Isq: miocárdio isquêmico; Não Isq: miocárdio não isquêmico/remoto.

[55] A Figura 7 são dados de um experimento que mostram que a administração de um inibidor de AMPK (isto é, composto C) antes da administração de atorvastatina anular os efeitos cardioprotetores relacionados à atorvastatina. (A) Efeitos sobr o tamanho do infarto. (B) Efeitos sobre dano oxidativo. *p<0,05 vs Controle e AMPK inib+atorvastatina; IS: tamanho do infarto; atorva: atorvastatina.

[56] Figura 8 mostra dados de que administração intravenosa de atorvastatina reduz a execução de apoptose avaliada por ativação de p53 (P-p53; Figura 8A) e caspase3 (caspase3 clivada; Figura 8B) no miocárdio isquêmico. *p<0,05 vs grupo controle-lsq; n=7 animais/grupo. Atorva: atorvastatina; Isq: miocárdio isquêmico; Não Isq: não miocárdio isquêmico. Casp3: caspase3; T-Casp3: total caspase3.

[57] A Figura 9 mostra que a administração intravenosa de atorvastatina atenua a expressão de MCP-1/CCL2 miocárdica.*p<0,05 vs Controle-lsq; n=7 animais/grupo. Atorva: atorvastatina; Isq: miocárdio isquêmico; Não Isq: não miocárdio isquêmico.

[58] A Figura 10 mostra dados que fornecem evidência de que os efeitos anti-inflamatórios de atorvastatina se expandem para a circulação sistêmica prevenindo a indução de MCP-1/CCL2 relacionada à isquemia PBMC. *p<0,05 vs antes de isquemia; tp<0,05 vs Controle pós isquemia; Atorva: animais tratados com atorvastatina; Isq: isquemia.

[59] A Figura 11 mostra os dados a partir de um modelo de rato de infarto do miocárdio por ligação coronária persistente (Figura 11 A) que trata a questão de se uma única dose intravenosa de atorvastatina

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15/110 precoce após isquemia reduz a formação de cicatriz miocárdica medida 30 dias após indução de isquemia (Figura 11B).

[60] A Figura 12 mostra os dados obtidos de um experimento em suínos hipercolesterolêmicos que tratam a questão de se administração intravenosa de atorvastatina imediatamente após o início da oclusão coronária protege contra o dano isquêmico mesmo na presença de hipercolesterolemia estudando os efeitos sobre os marcadores relacionados ao dano cardíaco durante um período isquêmico de 90 minutos. (A) IMA: Isquêmica modificada por albumina; (B) CFABP: Proteína de ligação de ácido graxo cardíaco; (C) Mioglobina; (D) Quantificação de redução vs. controle. *p<0,05 vs Controle e ao longo do tempo; t p<0,05 vs controle.

[61] A Figura 13 mostra que a administração intravenosa de atorvastatina aos suínos hipercolesterolêmicos imediatamente após o início de oclusão coronário (isquemia) reduz infiltração de neutrófilos no miocárdio isquêmico. *p<0,05 vs Grupo de controle.

[62] A Figura 14 mostra em um modelo de porco de isquemia e reperfusão que a administração intravenosa de uma estatina (β-ΟΗSinvastatina) durante a isquemia protégé o coração contra o dano de reperfusão associado ao dano isquêmico induzindo a uma redução global de tamanho do infarto (A), e, dentro do miocárdio isquêmico, um decréscimo na ativação de caspase-3 (B), infiltração de neutrófilos (C), dano relacionado ao estresse oxidativo (D), e uma alta preservação na membrane miticondrial potencial (atividade de JC-1; E).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Definições [63] A fim de facilitar o entendimento do presente pedido de patente, o significado de alguns termos e expressões no contexto da presente invenção será explicado abaixo.

[64] O termo isquemia, como usado aqui, refere-se a uma

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16/110 condição que pode ocorrer em qualque órgão ou tecido que está sofrendo uma ausência de fornecimento de oxigênio e/ou fornecimento de metabólitos. Isto ocorre quando existe um desequilíbrio entre o fornecimento de oxigênio e demanda, devido à perfusão inadequada (isto é, fornecimento sanguíneo). Fornecimento de oxigênio insuficiente pode ser causado pela formação de um trombo, pela presença de lesões ateroscleróticas estenóticas, reestenose, anemia, acidente vascular cerebral, artérias coaguladas, vasoconstrição e/ou disfunção endotelial da microvasculatura (síndrome de Takotsubo).

[65] Os termos dano por isquemia e dano isquêmico são usados sinonimamente aqui. Estes termos referem-se ao dano ao órgão ou tecido causado devido a um fornecimento insuficiente de sangue ao órgão ou tecido durante um período de isquemia antes do início de reperfusão (isto é, dano por isquemia é o dano causado por isquemia durante o período entre o início de isquemia e o início de reperfusão). A manifestação típica e patognomônica do dano isquêmico é que a zona isquêmica torna-se pálida. Ao contrário, dentro da reperfusão, o tecido isquêmico não necrótico recupera sua cor fisiológica.

[66] Bioquimicamente, o dano isquêmico é caracterizado por alterações no pH (acidificação), alterações na concentração de ATP, aumento da suscetibilidade das plaquetas de serem ativadas, aumento da reatividade inflamatória tanto localmente no tecido isquêmico quanto sistemicamente no sangue (leucócitos, particularmente PBMCs).

[67] O dano de isquemia pode, por exemplo, ser causado por aterosclerose, trombose, tromboembolismo, embolismo lipídico, sangramento, stent, cirurgia, angioplastia, desvio durante a cirurgia, transplante de órgãos, isquemia total, infarto do miocárdio, vasoconstrição, disfunção microvascular e/ou uma combinação de dois ou mais destes. Preferencialmente, a isquemia se deve à ruptura da placa aterosclerótica com sobreposição de um trombo (isto é, infarto do mio-

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17/110 cárdio).

[68] O referido dano de isquemia pode envolver morte de células miocitárias (preferencialmente por necrose e/ou apoptose, mais preferencialmente por necrose), dano causado por acidificação do pH intracelular devido à isquemia e/ou dano causado por uma resposta inflamatória que é desencadeada por isquemia e ampliada ainda mais durante a reperfusão. Preferencialmente, o dano de isquemia consiste no dano causado pela acidificação do pH intracelular devido à isquemia. Por exemplo, esta acidificação do pH intracelular pode ser uma acidose abaixo do pH 6,7, que causa um efeito prejudicial no miocárdio (por exemplo, falha contrátil). Preferencialmente, a acidificação intracelular do pH devido à isquemia tem um efeito prejudicial no miocárdio, causando falha contrátil.

[69] Durante a isquemia, prevalece o metabolismo anaeróbico, que produz uma diminuição do pH celular. Para amortecer esse acúmulo de íons de hidrogênio, o permutador Na⁺/H⁺ excreta os íons de hidrogênio em excesso, que produzem um grande influxo de íons de sódio (veja, por exemplo, a Figura 6.1 da publicação de Kalogeris et aí., Int Rev Cell Mol Biol. 2012; 298: 229-317, que resume os principais eventos patológicos que contribuem para os componentes de isquemia e reperfusão da lesão tecidual). A isquemia também exaure a ATPTP celular que inativa as ATPases (por exemplo, Na⁺/K⁺ ATPase), reduz o efluxo ativo de Ca2⁺ e limita a recaptação de cálcio pelo retículo endoplasmático (ER), produzindo, desse modo, a sobrecarga de cálcio na célula. Estas alterações são acompanhadas pela abertura do poro de transição da permeabilidade mitocondrial (MPT), que dissipa o potencial da membrana mitocondrial e prejudica ainda mais a produção de ATP. No coração, estas alterações celulares são acompanhadas pela ativação de proteases intracelulares (por exemplo, calpaínas) que danificam as miofibrilas e produzem a hipercontração e necrose da

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18/110 banda de contratura. Estas alterações e, portanto, o grau de lesão tecidual varia em extensão com a magnitude da diminuição do suprimento sanguíneo e com a duração do período isquêmico (Kalogeris et al., Int Rev Cell Mol Biol. 2012; 298: 229-317).

[70] Os danos de isquemia podem envolver os sintomas desconforto no peito, falta de ar, desconforto em outras áreas do tronco, sensação de doença e/ou ansiedade.

[71] O termo reperfusão, como usado aqui, refere-se à restauração do fluxo sanguíneo para o tecido isquêmico. Apesar do benefício inequívoco da reperfusão de sangue para um tecido isquêmico, sabese que a própria reperfusão pode provocar uma cascata de reações adversas que paradoxalmente ferem o tecido.

[72] Durante a isquemia miocárdica aguda, o pH intracelular diminui para menos de 7,0, enquanto que na reperfusão, o pH fisiológico é rapidamente restaurado pelo washout do lactato e pela ativação do permutador de Na⁺-H⁺ e do sincronizador de Na⁺-HCO-. Este deslocamento abrupto do pH contribui para a morte cardiomiocitária da lesão letal da reperfusão miocárdica, permitindo a abertura da MPTP (poro de transição da permeabilidade mitocondrial) e a hipercontração do rigor cardiomiocitário nos primeiros minutos de reperfusão. A reperfusão de corações de animais isquêmicos com tampão ácido pode reduzir o tamanho da IM (infarto do miocárdio) (Hausenloy DJ and Yellon DM, J Clin Invest. 2 de Janeiro de 2013; 123(1): 92-100).

[73] O termo dano de reperfusão, como aqui usado, refere-se aos danos em órgãos ou tecidos causados quando o suprimento de sangue retorna para o órgão ou tecido após um período de isquemia. Desse modo, dano de reperfusão é o dano causado durante o período entre o início da reperfusão e o final da reperfusão (normalmente a maior parte desse dano será causada durante os primeiros minutos de reperfusão). Os mecanismos subjacentes à lesão de reperfusão são

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19/110 complexos, multifatoriais e envolvem (1) geração de espécies reativas de oxigênio (EROs) que é alimentada pela reintrodução de oxigênio molecular quando o fluxo sanguíneo é restabelecido, (2) sobrecarga de cálcio, (3) abertura do poro do MPT, (4) disfunção endotelial, (5) aparecimento de fenótipo protrombogênico e (6) respostas inflamatórias pronunciadas (Yellon and Hausenloy, New England Journal of Medicine (2007), 13 de Setembro; 357(11):1121 -35). A ausência de oxigênio e nutrientes do sangue durante o período isquêmico cria uma condição em que a restauração da circulação resulta em inflamação e dano oxidativo através da indução de estresse oxidativo ao invés da restauração da função normal. O estresse oxidativo associado à reperfusão pode causar danos aos tecidos ou órgãos afetados. O dano de reperfusão é caracterizado bioquimicamente por uma depleção de oxigênio durante um evento isquêmico seguido de reoxigenação e geração concomitante de espécies reativas de oxigênio durante a reperfusão. A lesão que ocorre com a reperfusão é o resultado da interação entre as substâncias que se acumulam durante a isquemia e aquelas que são entregues na reperfusão. A pedra fundamental destes eventos é o estresse oxidativo, definido como o desequilíbrio entre os radicais de oxigênio e o sistema de eliminação endógena. O resultado é lesão celular e morte, que é inicialmente localizada, porém eventualmente se torna sistêmica se a reação inflamatória não for controlada.

[74] O dano de reperfusão, caracterizado principalmente por uma explosão de oxigênio e resposta inflamatória, e consequente dano tecidual, pode ocorrer após a revascularização do tecido infartado (isquêmico) (por exemplo, coração). Ele está associado ao comprometimento do potencial da membrana mitocondrial, execução de apoptose adicional, arritmias relacionadas à reperfusão, atordoamento cardíaco e aumento geral do tamanho do infarto induzido pela isquemia. Consequentemente, o tamanho final do infarto (dano tecidual)

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20/110 depende tanto do dano de isquemia (o dano tecidual causado durante o período isquêmico per se), quanto, em menor grau, do dano tecidual causado pela reperfusão.

[75] Os danos de reperfusão podem ser causados, por exemplo, por um evento mecânico (por exemplo, restauração do fluxo sanguíneo após um infarto do miocárdio), ou por um ou mais procedimentos cirúrgicos ou outras intervenções terapêuticas que restauram o fluxo sanguíneo para um tecido ou órgão que tenha sido submetido a um fornecimento de sangue reduzido (por exemplo, durante o transplante). Tais procedimentos cirúrgicos incluem, por exemplo, cirurgia de revascularização do miocárdio, angioplastia coronária, cirurgia de transplante de órgãos e similares (por exemplo, cirurgia de circulação extracorpórea). Em uma modalidade particular, o dano de reperfusão é devido ao tratamento do processo isquêmico devido à ruptura/erosão da placa aterosclerótica com a sobreposição de um trombo (infarto do miocárdio), tromboembolismo, embolismo lipídico, sangramento, stent, cirurgia, angioplastia, cirurgia de bypass, transplante de órgãos, isquemia total, vasoconstrição ou disfunção microvascular ou combinações dos mesmos.

[76] O dano de reperfusão pode envolver dano oxidativo e dano devido a uma reação inflamatória que, embora fraca, é desencadeada durante a isquemia e torna-se pronunciada na reperfusão e/ou morte de células miocitárias. Preferencialmente, o dano de reperfusão envolve dano oxidativo, dano devido a reação inflamatória e morte de células miocitárias. Mais preferencialmente, o dano de reperfusão envolve dano oxidativo, dano devido à reação inflamatória e morte de células miocitárias, porém não devido à acidificação do pH intracelular.

[77] O dano de reperfusão pode envolver palpitações dos sintomas, desconforto respiratório agudo, fadiga e/ou edemas.

[78] O termo dano relacionado à isquemia, como usado aqui,

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21/110 refere-se à soma do dano induzido durante a isquemia (o dano de isquemia) e o dano produzido durante a reperfusão que está associado ao dano à isquemia (o dano de reperfusão). Desse modo, o dano relacionado à isquemia é o dano causado durante o período entre o início da isquemia e o final da reperfusão. Nas modalidades mais preferidas da presente invenção, o dano relacionado à isquemia é limitado ao dano de isquemia, ou seja, o dano causado pela isquemia durante o tempo entre o início da isquemia e o início da reperfusão (ou seja, o dano relacionado à isquemia é o dano causado durante o período isquêmico após o início da isquemia, porém antes da reperfusão e, portanto, inclui o dano de isquemia, mas não inclui o dano de reperfusão).

[79] Em uma modalidade preferida, os danos relacionados à isquemia consistem em pelo menos um dano selecionado do grupo que consiste na morte de células miocitárias (preferencialmente por necrose e/ou apoptose, mais preferencialmente por necrose), dano causado pela acidificação do pH intracelular devido à isquemia e/ou dano causado por uma resposta inflamatória devido à isquemia que é, preferencialmente, desencadeada pela isquemia e ampliada ainda mais durante a reperfusão. Em modalidades mais preferidas, o dano relacionado à isquemia consiste na morte de células miocitárias (preferencialmente por necrose e/ou apoptose, preferencialmente por necrose), dano causado pela acidificação do pH intracelular devido à isquemia e dano causado por uma resposta inflamatória devido à isquemia que é, preferencialmente, desencadeada pela isquemia e ampliada ainda mais durante a reperfusão. Em modalidades ainda mais preferidas, o dano relacionado à isquemia consiste no dano causado pela acidificação do pH intracelular devido à isquemia.

[80] A morte de células miocitárias pode ser detectada pela análise molecular de marcadores apoptóticos/necróticos. A acidifi

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22/110 cação do pH pode ser avaliada por espectrometria de RMN. Uma inflamação pode ser detectada pela avaliação sérica de marcadores inflamatórios (por exemplo, IL6, TNFalfa).

[81] Em uma modalidade particularmente preferida, os danos relacionados à isquemia consistem em danos às miofibrilas causados por proteases intracelulares (como calpeínas) que, preferencialmente, causam hipercontração e/ou necrose da banda de contratura. Na modalidade mais preferida, o dano relacionado à isquemia consiste em dano às miofibrilas causado por proteases intracelulares (preferencialmente calpaínas) que causam hipercontração e/ou necrose da banda de contratura.

[82] As alterações ultraestruturais dos miócitos podem ser avaliadas por microscopia eletrônica das biópsias miocárdicas.

[83] O termo prevenção, como usado aqui, por exemplo, no contexto da prevenção de danos relacionados à isquemia, refere-se à capacidade de prevenir, minimizar ou dificultar o início ou o desenvolvimento de uma doença ou condição antes do seu início.

[84] O termo redução, como aqui usado no contexto da redução de danos relacionados à isquemia, refere-se à capacidade de limitar e/ou reduzir uma doença ou condição que já tenha se desenvolvido.

[85] O termo administração ou a afirmação de que um composto é administrado a um indivíduo, como usado aqui, refere-se à liberação de um medicamento farmacêutico a um indivíduo. A rotina adequada para a administração da estatina para uso de acordo com a presente invenção é a administração intravenosa ao indivíduo em necessidade da mesma.

[86] Se o pedido estabelece que um composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia, isto preferivelmente significa que o composto deve ser administrado não mais

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23/110 do que 60 minutos após o início da isquemia. Em uma modalidade preferida, isto significa que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia. Em uma modalidade mais preferida, isto significa que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia. Em uma modalidade mais preferida, isto significa que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia. Em uma modalidade ainda mais preferida, isto significa que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia.

[87] Em algumas modalidades, o composto deve ser administrado pelo menos 15 minutos antes da reperfusão, preferivelmente pelo menos 20 minutos antes da reperfusão, ainda mais preferivelmente pelo menos 30 minutos antes da reperfusão, mais preferivelmente pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[88] Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 15 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 20 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 30 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser adminis

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24/110 trado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[89] Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 15 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 20 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 30 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[90] Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 15 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto

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25/110 deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 20 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 30 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[91] Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 15 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 20 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 30 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 45

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26/110 minutos antes da reperfusão.

[92] Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 15 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 20 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 30 minutos antes da reperfusão. Em algumas modalidades, a afirmação de que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia significa que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia, e o composto deve ser administrado pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.O termo estatina, como usado aqui, refere-se a um inibidor de 3-hidróxi-3-metilglutaril-CoA reductase, isto é, um inibidor da enzima HMG-CoA reductase, que catalisa a etapa limitante da biossíntese do colesterol, por exemplo, a conversão de HMG-CoA em mevalonato. O termo inclui qualquer estatina natural, sintética ou semissintética. A inibição da HMG-CoA reductase por estatinas diminui a biossíntese do colesterol intracelular no fígado e nos tecidos extra-hepáticos.

[93] Recentemente, o âmbito da terapêutica com estatinas expandiu-se com o surgimento de evidências que sugerem que, devido aos efeitos pleiotrópicos das estatinas que não estão diretamente

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27/110 associados à sua regulação dos níveis de colesterol, estas podem revelar-se benéficas para o tratamento de várias doenças. Os efeitos pleiotrópicos associados às estatinas que podem afetar a fisiopatologia da doença incluem a modulação das respostas imunes, o aumento dos processos anti-inflamatórios e as alterações das vias de sinalização que envolvem os intermediários do colesterol. Até o momento, a multiplicidade de doenças ligadas aos efeitos pleiotrópicos das estatinas inclui a esclerose múltipla (EM), doenças inflamatórias intestinais (Dll), artrite reumatoide (AR), lúpus eritematoso sistêmico (LES), doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), câncer, acidente vascular cerebral, doenças de Parkinson e Alzheimer, infecções bacterianas, HIV e intervenção coronária percutânea programada. Estas utilidades têm sido observadas com uma administração crônica ou subcrônica de estatinas (por exemplo, em pacientes submetidos à intervenção coronária percutânea, a redução da lesão miocárdica de procedimento após 7 dias de pré-tratamento com atorvastatina foi paralela à atenuação concomitante do aumento pós-procedimento dos níveis da molécula de adesão celular intercelular-1 (ICAM-1) e E-selectina).

[94] Algumas estatinas podem estar na forma fechada (lactona) ou na forma aberta (ácido hidroxídico). Os hidroxiácidos (forma aberta) podem ser preparados a partir das lactonas correspondentes por hidrólise convencional, por exemplo, com hidróxido de sódio em metanol, hidróxido de sódio em tetra-hidrofurano-água e similares. Na forma aberta (ácido hidroxídico), as estatinas reagem para formar sais com cátions metálicos e aminas farmaceuticamente aceitáveis formados a partir de bases orgânicas ou inorgânicas. Os sais farmaceuticamente aceitáveis das estatinas podem diferir dos ácidos livres correspondentes em algumas características físicas, como a solubilidade e o ponto de fusão. A forma aberta livre (ácido hidroxídico) das estatinas pode ser regenerada a partir da forma de sal, se desejado, por contato

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28/110 do sal com uma solução aquosa diluída de um ácido como o ácido clorídrico e similar. A forma fechada (lactona) das estatinas pode ser regenerada dissolvendo a forma aberta (ácido hidroxídico) em um solvente inerte como, por exemplo, tolueno, benzeno, acetato de etila e similares, a temperaturas compreendidas entre aproximadamente 0 °C e aproximadamente o ponto de ebulição do solvente, tipicamente (embora não necessariamente) com separação simultânea da água resultante e catálise com ácidos fortes, por exemplo, ácido clorídrico e similares.

[95] Como uma pessoa versada estará ciente, a reação de HMG-CoA reductase também é uma etapa da via que leva à formação de geranil-geranil-PP. Geranil-geranil-PP é necessário para a geranilgeranilação do RhoA, uma etapa de na ativação do RhoA. Desse modo, as estatinas tipicamente também têm uma atividade inibitória na translocação da proteína RhoA do citosol para a membrana celular e, portanto, na ativação do RhoA. A estatina de acordo com a presente invenção é preferencialmente um inibidor da HMG-CoA reductase e da ativação da RhoA.

[96] Outras estatinas podem ser obtidas através da formação, por exemplo, de nitroderivados de estatinas conhecidos, tal como descrito no US 7563909 B2, ou através da inclusão de um grupo de lactose (que são rapidamente hidrolisados na presença de água) em uma estatina conhecida. Além disso, outras estatinas podem também ser obtidas como o resultado do metabolismo de uma estatina conhecida por uma enzima celular, de preferência resultando em uma forma ativa do metabólito da estatina ou da estatina. Em uma modalidade particular, o metabólito da estatina está relacionado com a forma de hidroxiácidodo de uma estatina, de acordo com a presente invenção. De preferência, o metabólito de estatina é uma forma ativa de estatina, ou seja, uma forma de estatina que exibe pelo menos 40%, pelo me

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29/110 nos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% da atividade HMG-CoA reductase da estatina a partir da qual é obtida. Como a pessoa competente reconhece, as estatinas são geralmente inativas em sua forma de lactona. Geralmente, a sua forma ativa é o seu metabólito estatina-p-hidróxiácido formado pela hidrólise pela atividade da carboxesterase tanto no plasma/fígado quanto na mucosa intestinal. Em particular, a enzima citocromo P450 (CYP3A4) está envolvida no metabolismo da maioria das estatinas.

[97] O termo sinvastatina, como usado aqui, refere-se ao (1S,3R,7S,8S,8S,8aR)-8-{2-[(2R,4R)-4-hidroxi-6-oxotetrahidro-2H- pi rano-2-i l]eti lo}-3,7-di meti I-1,2,3,7,8,8a hexaidronaftaleno-1 -il-2,2dimetilbutanoato de 2-dimetilbutanoato, um composto que reduz o colesterol amplamente utilizado como um potente inibidor da enzima HMG-CoA reductase para tratar a hipercolesterolemia. A enzima HMG-CoA reductase catalisa a conversão de HMG-CoA em mevalonato, que é uma etapa precoce e limitadora da biossíntese do colesterol. Quimicamente, a sinvastatina é uma lactona inativa que é convertida em 3',5'-di-hidrodiol sinvastatina no fígado pelo citocromo P-450 (CYP) 3 A após administração oral.

[98] Se o presente pedido estabelece que um composto inibe a ativação do RhoA, é um inibidor do RhoA ou é um agente inibidor da translocação do RhoA para a membrana celular, isso está relacionado a uma situação em que este composto inibe ou bloqueia a translocação da proteína RhoA do citosol (forma inativa do RhoA) para a membrana celular (forma ativa do RhoA). O termo RhoA, como usado aqui, também conhecido como Membro da família do gene Ras homólogo A, refere-se a uma pequena proteína GTPase que regula o citoesqueleto de actina na formação de fibras de estresse. O termo RhoA inclui qualquer RhoA de qualquer sujeito (por exemplo, um

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30/110 mamífero). A proteína RhoA humana é codificada pelo gene RHOA (GenelD: 387, sequência nucleotídica de mRNA de 1.926 bp com número de adesão NM 001664 de acordo com o banco de dados de nucleotídeos da NCBI, em 27 de abril de 2014). Similar às outras GTPases, a RhoA contém tanto estados inativos ligados ao PIB como estados ativos ligados ao GTP, estes estados alternam entre os estados ativos e inativos através da troca do PIB por GTP. A RhoA, encontrada principalmente no citoplasma, está envolvida principalmente na organização da actina, manutenção do ciclo celular, desenvolvimento celular e controle transcricional. Um agente inibidor da translocação do RhoA para a membrana celular também pode ter, além de sua própria atividade na translocação da proteína RhoA do citosol para a membrana celular.

[99] O termo sujeito ou indivíduo ou animal ou paciente ou mamífero, significa qualquer indivíduo, particularmente um paciente mamífero, para quem a terapia é desejada. Pacientes mamíferos incluem humanos, animais domésticos, animais de fazenda e zoológicos, esportes ou animais de estimação, tais como cães, gatos, cobaias, coelhos, ratos, camundongos, cavalos, bovinos, vacas e assim por diante. Na modalidade preferida da presente invenção, o paciente é um mamífero. Na modalidade mais preferida da presente invenção, o paciente é um humano.

[100] O termo tratamento, como usado aqui, refere-se tanto às medidas terapêuticas quanto às medidas profiláticas ou preventivas, em que o objetivo é prevenir ou retardar (diminuir) uma alteração ou desordem fisiológica indesejada, como dano isquêmico. Resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, porém não estão limitados a, alívio de sintomas, diminuição da extensão da doença, estado de doença estabilizado (isto é, sem piora), retardo ou diminuição da progressão da doença, melhora ou mitigação do estado de doença, e re

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31/110 missão (parcial ou total), se detectável ou não detectável. O tratamento também pode significar prolongar a sobrevivência em comparação com a sobrevivência esperada se não estiver recebendo tratamento. Aqueles em necessidade de tratamento incluem aqueles que já têm a condição ou distúrbio, bem como aqueles propensos a ter a condição ou distúrbio ou aqueles em que a condição ou distúrbio deve ser prevenido.

2. Uso de uma estatina na prevenção e/ou redução dos danos relacionados à isquemia [101] Em um aspecto, a presente invenção refere-se a um composto para uso na prevenção e/ou redução de danos relacionados à isquemia em um indivíduo, em que esse composto é uma estatina (isto é, um inibidor de 3-hidróxi-3-metil-glutaril-CoA redutase), em que este composto deve ser administrado a este indivíduo por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia.

[102] Desse modo, de acordo com a presente invenção, o composto para uso na prevenção e/ou redução de danos relacionados à isquemia em um indivíduo é uma estatina.

[103] As estatinas são compostos que inibem a enzima HMGCoA reductase, que é a enzima que catalisa a conversão de HMGCoA em mevalonato. Os ensaios para determinar a atividade HMGCoA reductase de um composto são conhecidos pela pessoa versada e incluem, sem limitação, aqueles descritos por Liu (Liu L et al. 2003 J Pharm Biomed Anal 32(1): 107-123), Fang (Fang W et al. 2002 J Clin Lab Anal 16(5): 209-215), ou Mozzicafreddo (Mozzicafreddo M et al. 2010 J Lipid Fies 51(8): 2460-2463), bem como por meio de kits comercialmente disponíveis por, sem limitação, Sigma-Aldrich (Catálogo n^Q CS1090). As estatinas exercem principalmente uma função de

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32/110 inibidores da enzima HMG-CoA reductase. Como é bem conhecido, uma estatina tipicamente também terá uma atividade inibitória na translocação da proteína RhoA do citosol para a membrana celular.

[104] Um primeiro grupo de estatinas compreende estatinas com uma estrutura de anel de descalinização substituída e inclui lovastatina, pravastatina e sinvastatina. Lovastatina, pravastatina e sinvastatina são lactonas inativas que devem ser metabolizadas em suas formas ativas de hidroxiácido para inibir a enzima HMG-CoA reductase. Portanto, as estatinas do primeiro grupo exercem a sua função quando convertidas em sua forma de hidroxiácido da estatina. Um segundo grupo de estatinas inclui estatinas, em que o grupo butirila, tal como nas estatinas do primeiro grupo, é substituído por um grupo fluorofenila, que é responsável pelas interações polares adicionais que causam uma ligação mais estreita à enzima. Este segundo grupo de estatinas inclui fluvastatina, cerivastatina, atorvastatina e rosuvastatina, que são estatinas na forma de hidroxiácido ativa.

[105] As estatinas são compostos que podem ser obtidos pela pessoa competente por métodos conhecidos na técnica, incluindo, sem limitação, aqueles descritos no US20110223640 A1, US8471045 B2, W02009133089 A1 e EP1015600 A1. As estatinas também estão comercialmente de diversos fornecedores, incluindo, sem limitação, Pfizer e Bayer.

[106] Exemplos de estatinas que podem ser usadas na presente invenção são descritos abaixo (Tabela 1).

Estatina e fórmula da mesma Outras estatinas relacionadas

Atorvastatina

atorvastatina beta-oxidada, atorvastatina betaoxidada insaturada, atorvastatina hidróxi betaoxidada, 4-hidróxi atorvastatina para-hidróxi atorvastatina ácida, atorvastatina lactona, atorvastatina acil glucuronida, 2-hidróxi atorvastatina orto-hidróxi atorvastatina ácida, 4-hidróxi atorvastatina acil glucuronida, 4-hidróxi atorvastatina lactona e 2-hidróxi atorvastatina lactona.

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Cerivastatina ..--χ. ,.ΟΗ r ' n ÕH Ò	6-0-glucuronida, cerivastatina 3-0-glucuronida, cerivastatina 4-0-glucuronida, M22, cerivastatina lactona, m5, m1, m4, m10, m9, m11, m20, m17, m32, m29, m21, m30, m16, m15, m18, m19, m26, m23, m28, m24 e m25.
Fluvastatina HÇX Λ. η· CQOH L ..x-η k Xxv ^z M \\ //	5-hidróxi fluvastatina, 6-hidróxi fluvastatina e Ndeisopropil fluvastatina.
Lovastatin a HQ. -0 X r X A ü Y ‘Air	Lovastatina ácida, 3'-hidroxilovastatina, 6'exometilenolovastatina e 6'-beta- hidroxilovastatina e 33-hidroxilovastatina.
xp í' X .11 ^! Mevastatina ^HO °
Pitavastatina a a Νκ, ,A χ-χ x\ ,,ΟΗ i r t π À OH OH O	Pitavastatina lactona, 3-ceto pitavastatina, pitavastatina ceto lactona, m1, m18, m12, m9, hidróxi pitavastatina lactona, 3-desidróxi pitavastatina O-glucuronida, 5-ceto pitavastatina acil glucuronida, 5-ceto pitavastatina Oglucuronida e 3-desidróxi pitavastatina acil glucuronide
Pravastatin a HO^,J ,x A J ^Tr+V	3(S)-hidroxitetranorpravastatina, 3'-alfa-5',6'epóxi-isopravastatina, 3'-alfa-7-hidroxi- isopravastatina, 3'-cetopravastatina-5,6-diol, 3(S)-hidroxipravastatina, 3'-alfa- isopravastatina, 3'-alfa-5'-beta, 6'-beta-trihidroxipravastatina, 6'-epipravastatina, pravastatina glucuronida, desecilpravastatina, 4'-alfa5'-beta-epoxipravastatina, conjugado de pravastatina 4a'alfa-glutationa, pravastatina lactona, sulfato de pravastatina, M9 e M8.

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Rosuvastatina H.,C< f ’ 'Ç ^^5H 9 À .J-χ Ν' N V i ;; i 0=SL < /TOs ?	Rosuvastatina - Rosuvastatina lactona, Ndemetilrosuvastatina e rosuvastatin acil glucuronida.
Sinvastatina Q V A. > Λ θ H f ,...CU	3',5'-di-hidrodiolsinvastatina, 6'-beta- hidroximetilsinvastatina, 6'beta- carboxisinvastatina, 6'-beta-hidroxisinvastatina, 6'-exometilenossinvastatina, terivastatina ácida de sinvastatina, glucuronida ácida de sinvastatina e 3'-hidroxisinvastatina.

[107] Preferivelmente, a estatina de acordo com a presente invenção é selecionada do grupo que consiste em (em parênteses, exemplos de nomes comerciais sob os quais a estatina é vendida): atorvastatina (Lipitor®, Torvast®), cerivastatina (Lipobay®, Baycol®), fluvastatina (Lescol®), lovastatina (Mecavor®, Altocor®, Altoprev®), mevastatina (Compactin®), pitavastatina (Livalo®, Pitava®), pravastatina (Pravachol®, Selektine®, Lipostat®), rosuvastatina (Crestor®), sinvastatina (Zocor®, Lipex®) e a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina.

[108] Ainda mais preferivelmente, a estatina é selecionada do grupo que consiste em atorvastatina (veja, fórmula I) e a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (veja, fórmula II). Mais preferida é a estatina atorvastatina.

[109] As propriedades farmacocinéticas das estatinas são orquestradas por diversos fatores, incluindo sua forma ativa ou de lactona, sua taxa lipofílica/hidrofílica, e sua absorção e metabolism. As propriedades farmacológicas da estatina, incluindo doses administradas como as formas de ácido e lactona abertas, são conhecidas pela pesssoa versada e mostrada, por exemplo, na Tabela 1 como em Gazerro P et al. 2012 Pharmacol Rev 64(1): 102- 146.

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35/110 [110] O termo sal farmaceuticamente aceitável ou sal fisiologicamente aceitável refere-se a um sal formado com um ácido fisiologicamente tolerado, isto quer dizer sais de um composto com ácidos inorgânicos ou orgânicos que são fisiologicamente tolerados - especialmente se usados em mamíferos, preferivelmente em seres humanos - ou com pelo menos um cátion, preferivelmente inorgânico, que são fisiologicamente tolerados, especialmente, se usados em mamíferos, preferivelmente em seres humanos. Desse modo, um sal farmaceuticamente aceitável é uma entidade molecular que é fisiologicamente tolerável e que normalmente não causa uma reação alérgica ou reação adversa similar, tal como desconforto gástrico, tontura e similares, quando ele é administrado a um mamífero, preferivelmente um ser humano. Preferivelmente, como usado nesta invenção, o termo farmacêuticamente aceitável significa aprovado por uma agência regulatória governamental ou listada na farmacopeia Norte Americana ou outra farmacopeia geralmente reconhecida para uso em mamíferos, e mais particularmente em humanos. Exemplos não limitantes de sais farmaceuticamente aceitáveis de ácidos específicos incluem sais de ácido clorídrico, ácido hidrobrómico, ácido sulfúrico, brometo de hidrogênio, mono-hidrobrometo, mono-hidrocloreto ou cloridrato, metiodeto, ácido metanossulfônico, ácido fórmico, ácido acético, ácido oxálico, ácido sucínico, ácido málico, ácido tartárico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido glutâmico, ácido hippúrico, ácido picrico e ácido aspártico. Exemplos de sais fisiologicamente tolerados de bases específicas são os sais de metais alcalinos e metais alcalinos terrosos e com NH4. Solvatos, sais e profármacos dos compostos de fórmula (I) ou (II) podem ser preparados por métodos conhecidos no estado da técnica.

[111] Em uma modalidade particular da presente invenção, a estatina para uso de acardo com a presente invenção na prevenção e/ou

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36/110 redução de dano relacionado à isquemia em um indivíduo é sinvastatina ou a estatina relacionada à sinvastatina tal como, por exemplo, um derivado de oxima de sinvastatina que mostra solubilidade aquosa aumentada (Gupta A et al. 2011 Asian J Pharmac Clin Res 5(1): 5052), 3',5'-di-hidrodiol sinvastatina, 6'beta-hidroximetil sinvastatina, 6'beta-carbóxi sinvastatina, 6'beta-hidróxi sinvastatina, 6'-exometleno sinvastatina, terivastatina de ácido sinvastatina, glucuronida de ácido sinvastatina e 3'-hidróxi sinvastatina. Em uma modalidade mais particular, o derivado de sinvastatina é um derivado de beta-hidróxi de sinvastatina de fórmula (III):

[112] Em particular, o derivado de sinvastatina é um derivado de beta-hidróxi de sinvastatina é de fórmula (III):

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L O H [113] De acordo com algumas modalidades, a estatina inibe a ativação de RoA. Métodos moleculares para medir a translocação de citosol-membrana de RhoA, que é um sinal de ativação de RhoA, foram descritos na técnica por Keller (Keller J et al. 1997 FEBS Lett 403(3): 299-302). A determinação de frações de membrane citosólicas e totais de RhoA de acordo com a presente invenção foi descrita por

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37/110 alguns autores (por exemplo, Vilahur G et al. 2009 Atherosclerosis 206:95-101).

[114] O termo quantidade terapeuticamente aceitável, como usado aqui em relação ao composto para uso de acordo com a presente invenção, refere-se a uma quantidade do referido composto que fornece o efeito desejado, por exemplo, uma prevenção, cura, retardo, redução apreciável da gravidade ou melhora de um ou mais sintomas derivados de dano relacionado à isquemia. A quantidade terapeuticamente aceitável de um composto será geralmente determinada levando em consideração os diferentes aspectos tais como, por exemplo, as características do próprio produto e o efeito terapêutico a ser obtido, as particularidades do indivíduo a ser tratado, a gravidade da lesão sofrida pelo referido indivíduo, a forma de dosagem escolhida, etc. Para esta razão, as doses mencionadas aqui devem ser consideradas apenas como guias pela pessoa versada na técnica, que deve ajustar as doses dependendo das variáveis anteriormente mencionadas. Em uma modalidade, a quantidade terapeuticamente aceitável do composto é uma quantidade que previne, reduz, melhora, atenua ou elimina um ou mais sintomas de dano de isquemia no indivíduo tratado.

[115] Mesmo que as necessidades individuais variem, a determinação de faixas ideais para quantidades terapeuticamente eficazes dos compostos para uso de acordo com a presente invenção pertence à experiência comum daqueles versados na técnica. Em geral, a dosagem necessária para fornecer um tratamento eficaz, que pode ser ajustado por alguém versado na técnica, variará dependendo da idade, saúde, aptidão, sexo, dieta, peso, grau de alteração do receptor, frequência do tratamento, natureza e condição da lesão, natureza e extensão da deficiência ou doença, condição médica do indivíduo, rotina de administração, considerações farmacológicas, tais como ativid-

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38/110 ade, eficácia, perfil farmacocinético e toxicológico do composto específico usado, se estiver usando um sistema de administração de medicamentos, e se o composto for administrado como parte de uma combinação de fármacos. A quantidade do composto para uso de acordo com a presente invenção que é terapeuticamente eficaz na prevenção e/ou tratamento de danos de reperfusão em um indivíduo pode ser determinada por técnicas clínicas convencionais (veja, por exemplo, The Physician's Desk Reference, Medical Economics Company, Inc., Oradell, NJ, 1995, e Drug Facts and Comparisons, Inc., St. Louis, MO, 1993).

[116] O regime de dosagem do composto para uso de acordo com a presente invenção pode variar. Em uma modalidade particular, o composto para uso de acordo com a presente invenção deve ser administrado como uma perfusão a ser iniciada o mais rápido possível após o início da isquemia e interrompida antes da reperfusão. Na modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção deve ser administrado em uma única dose (ou seja, pela administração em bolus).

[117] Preferivelmente, a dosagem do referido composto varia de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal, mais preferivelmente de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal, mais preferivelmente de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[118] Em uma modalidade particular, o referido composto para uso é atorvastatina ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina de fórmula (II) e o composto deve ser administrado ao indivíduo em uma dose única. Em outra modalidade, o referido composto para uso é atorvastatina ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina de fórmula (II) e o composto deve ser administrado ao indivíduo em uma dose única, em que a dosagem do composto varia de 0,1 a 1 mg/kg de peso

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39/110 corporal, mais preferivelmente de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal, mais preferivelmente de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[119] Os termos excipiente farmaceuticamente aceitável ou veículo farmaceuticamente aceitável, referem-se a qualquer composto ou combinação de compostos que é essencialmente não tóxico ao indivíduo na dosagem e concentração empregadas, e é compatíveis com os outros componentes de uma composição farmacêutica. Desse modo, um excipiente é uma substância inativa formulada juntamente com o ingrediente ativo (isto é, o composto a ser usado de acordo com a presente invenção, que é uma estatina) de uma composição farmacêutica, para propósitos de composição encorpante que contenha os referidos ingredientes ativos. A encorpação permite a dispensa conveniente e precisa de uma substância medicamentosa quando da produção de uma forma de dosagem. Os excipientes também podem servir para vários propósitos de realce terapêutico, tais como facilitar a absorção ou solubilidade de compostos (fármacos), ou outras considerações farmacocinéticas. Os excipientes também podem ser úteis no processo de fabricação para ajudar no manuseio da substância ativa envolvida, por exemplo, facilitando a fluidez do pó ou as propriedades antiaderentes, além de contribuírem para a estabilidade in vitro, como a prevenção da desnaturação durante o prazo de validade previsto. A seleção dos excipientes adequados depende da rotina de administração e da forma de dosagem, bem como do ingrediente ativo e de outros fatores. Um excipiente pode ser um sólido não tóxico, semissólido ou líquido de enchimento, diluente, material encapsulate ou auxiliar de formulação de qualquer tipo convencional. Exemplos ilustrativos, não limitativos, de excipientes ou veículos incluem água, sal (salina), soluções, álcool, dextrose, óleos vegetais, polietilenoglicóis, gelatina, lactose, amilose, estearato de magnésio, talco, tensoativos, ácido silícico, parafina viscosa, óleo de perfume,

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40/110 monoglicéridos e diglicéridos de ácidos graxos, ésteres de ácidos graxos, petroetrais, hidroximetilcelulose, polivinilpirrolidona e similares.

[120] O composto para uso de acordo com a presente revelação deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia, mas antes da reperfusão. A pessoa versada está ciente de como reconhecer a isquemia. A isquemia miocárdica, por exemplo, é reconhecida pelo surgimento súbito de sintomas característicos: dor torácica intensa na região precordial, falta de ar quando se está fisicamente ativo, batimentos cardíacos acelerados, mal-estar geral, fadiga, tontura, náuseas e sudorese. A dor pode se estender para o braço esquerdo, mandíbula, ombro, costas ou pescoço. Mais tarde, a isquemia miocárdica pode ser confirmada por métodos como eletrocardiograma (ECG), ecocardiograma.

[121] Ao administrar o composto o mais rapidamente possível após o início da isquemia, pode-se garantir que o período isquêmico antes da administração do composto seja minimizado, enquanto a proporção do período isquêmico após a administração do composto comparado ao tempo total sob isquemia (ou seja, comparado ao tempo total desde o início da isquemia até o início da reperfusão) é maximizado.

[122] Em algumas modalidades preferidas, a estatina não é administrada em e/ou após reperfusão.

[123] Em algumas modalidades preferidas, a estatina não é administrada durante a reperfusão.

[124] A estatina deve ser administrada por administração intravenosa. Esta pode ser obtida por procedimentos padrão conhecidos pela pessoa versada na técnica. Os presents inventores observaram que para os propósitos da presente invenção é importante que a estatina alcance o tecido isquêmico tão logo quanto possível após o início da isquemia, e administração intravenosa tornou-se vantajosa neste sen

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41/110 tido, em comparação, por exemplo, com administração oral.

[125] Em uma modalidade particular, a composição farmacêutica contendo o composto para uso na presente invenção é uma composição farmacêutica para administração intravenosa. Tipicamente, composições farmacêuticas para administração intravenosa são soluções em tampão aquoso isotônico estéril. Geralmente, os ingredients são fornecidos separadamente ou misturados entre si em forma de dosagem unitária, por exemplo, como um pó liofilizado seco ou concentrado livre de água em um recipient hermeticamente selado tais como uma ampola ou sachê indicando a quantidade de ingrediente ativo. Onde a composição farmacêutica deve ser administrada por infusão, ela pode ser aplicada com uma garrafa de infusão contend água ou salina de grau farmacêutico.

[126] Aqueles versados na técnica são familiares com os princípios e procedimentos descritos em fontes amplamente conhecidas e disponíveis como Remington's Pharmaceutical Science (/7- Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985), Goodman e Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics (8th Ed., Pergamon Press, Elmsford, N.Y., 1990) e Tratado of Farmacia Galenica, C. Fauli of Trillo, Luzan 5, S.A. de Ediciones, 1993 e em Remington<'>s Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, Ed.), 20- edition, Williams & Wilkins PA, USA (2000), que são incorporados aqui por referência.

[127] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula

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I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[128] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula

II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão.

[129] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão.

[130] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão,

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43/110 o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão.

[131] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[132] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão.

[133] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão.

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44/110 [134] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão.

[135] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[136] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão.

[137] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser

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45/110 administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão.

[138] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão.

[139] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[140] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão.

[141] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula

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II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão.

[142] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão.

[143] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão.

[144] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão.

[145] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão,

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47/110 o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão.

[146] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão.

[147] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por

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48/110 administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[148] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[149] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando

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49/110 de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, ο composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[150] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por

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50/110 administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[151] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[152] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos

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51/110 antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[153] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de

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52/110 peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[154] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

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53/110 [155] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[156] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de

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54/110 acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[157] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou

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55/110 a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[158] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[159] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β

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56/110 hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[160] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado

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57/110 por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[161] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia,

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58/110 porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[162] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[163] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da

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59/110 reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[164] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do

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60/110 que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[165] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos

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61/110 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[166] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[167] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos

Petição 870190097120, de 27/09/2019, pág. 100/165

62/110 antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[168] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de

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63/110 peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[169] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

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64/110 [170] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[171] Em algumas modalidades, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, o composto para uso de

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65/110 acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[172] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos

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66/110 antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[173] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente in

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67/110 venção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[174] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o

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68/110 início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[175] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[176] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão,

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69/110 o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[177] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser

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70/110 administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[178] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da

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71/110 isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[179] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da

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72/110 reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 45 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[180] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à

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73/110 isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[181] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intra

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74/110 venosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[182] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

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75/110 [183] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 30 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[184] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula

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II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[185] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem varian

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77/110 do de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[186] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β

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78/110 hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[187] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos

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79/110 antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 20 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[188] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente in

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80/110 venção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 15 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[189] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o

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81/110 início da isquemia e pelo menos 20 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[190] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 30 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[191] Em algumas modalidades, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão,

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82/110 o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de βhidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal. Em uma modalidade mais preferida, dano relacionado à isquemia é o dano que surge após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, o composto para uso de acordo com a presente invenção é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina (fórmula II) e deve ser administrado por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado não mais do que 15 minutos após o início da isquemia e pelo menos 45 minutos antes da reperfusão em uma dosagem variando de 0,3 a 0,6 mg/kg de peso corporal.

[192] O composto para uso de acordo com a presente invenção pode ser administrado sozinho ou em combinação com outros fármacos, contanto que pelo menos um dos fármacos seja um composto para uso de acordo com a presente invenção.

[193] Infarto refere-se a uma área localizada de morte celular isquêmica produzida por hipóxia após oclusão do suprimento arterial

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83/110 ou drenagem venosa de um tecido ou órgão. Mais particularmente, um infarto do miocárdio (IM), comumente conhecido como ataque cardíaco, está relacionado a um evento pelo qual o sangue para de fluir adequadamente para parte do coração, e o músculo cardíaco é lesado devido ao não fornecimento de oxigênio e nutrientes suficientes. Normalmente, um infarto é o resultado de bloqueio ou oclusão de uma das artérias coronárias devido à ruptura ou erosão de uma placa aterosclerótica e à sobreposição de um trombo. Fatores de risco importantes que podem contribuir para a apresentação do infarto do miocárdio incluem um evento cardiovascular prévio, níveis elevados de colesterol total, níveis altos de colesterol LDL e triglicerídeos, níveis baixos de colesterol HDL, velhice, tabagismo, diabetes, hipertensão arterial, falta de atividade física, obesidade, doença renal crônica, consumo excessivo de álcool e uso de cocaína e anfetaminas. Métodos para determinar se um indivíduo sofreu de infarto são conhecidos na técnica e incluem, sem limitação, rastrear sinais elétricos no coração por um eletrocardiograma (ECG), e testar uma amostra de sangue quanto às substâncias associadas à lesão muscular cardíaca, incluindo creatina cinase (CK-MB) e troponina. O teste de ECG é usado para diferenciar entre dois tipos de infarto do miocárdio com base na forma do traçado. Uma seção ST do traçado mais alta que a linha de base é chamada de IA de elevação ST (STEMI), que geralmente requer tratamento mais agressivo. Métodos para determinar o tamanho do infarto são conhecidos pela pessoa versada e incluem a medição de marcadores séricos incluindo creatina cinase (CK)-MB em uma amostra sérica (Grande P et al. 1982 Circulation 65: 756-764), manchamento tecidual com cloreto de trifenil tetrazólio (Fishbein MC et al. 1981 Am Heart J 101(5): 593-600), tomografia computadorizada de emissão mono fótons de tecnécio (Tc) 99m sestamibi (SPECT), perfusão miocárdica e ressonância magnética (RM) (Gibbons RJ et al. 2004 J Amer

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Coll Cardiol 44(8): 1533-1542). Aqueles biomarcadores de dano cardíaco aumentam após algumas horas, enquanto que marcadores como IMA, CFABP e mioglobina aumentam logo após a isquemia.

[194] Inflamação, ou resposta inflamatória, refere-se a um conjunto de mudanças que ocorrem em um tecido que sofre inflamação. Em particular, a inflamação refere-se à resposta biológica a estímulos nocivos, incluindo patógenos, células danificadas ou lisadas ou irritantes. Métodos para determinar a inflamação são conhecidos na técnica e incluem, sem limitação, a medida da taxa de sedimentação eritrocitária (VHS), onde uma VHS mais alta é indicativa de inflamação, medida de proteína C reativa (PCR), onde um nível mais alto de PCR é indicativo de inflamação, e contagem de leucócitos (aumentada na inflamação).

[195] A inflamação local de um tecido isquêmico, por exemplo, miocárdio isquêmico, pode ser determinada pela análise molecular (expressão genética e proteíca) de marcadores inflamatórios relacionados à imunidade adquirida e inata. Particularmente, é de interesse medir as quimiocinas e citocinas envolvidas na ativação de leucócitos e recrutamento para a área danificada.

[196] A inflamação sistêmica devido à isquemia pode afetar todos os órgãos. A análise do sangue de marcadores inflamatórios (citocinas e quimiocinas) pelo uso de kits ELISA pode fornecer uma análise rápida do grau/nível de inflamação sistêmica.

[197] O dano oxidativo está relacionado ao dano biomolecular que pode ser causado pelo ataque direto de espécies reativas de oxigênio durante a restauração de oxigênio. O dano oxidativo pode envolver peroxidação lipídica, dano ao DNA oxidativo e dano oxidativo às proteínas. Os métodos para determinar a peroxidação lipídica incluem, sem limitação, a determinação do MDA (malondialdeído)-TBA (ácido tiobarbitúrico) por HPLC e a quantificação de isoprostanos (que

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85/110 são produtos finais específicos da peroxidação de ácidos graxos polinsaturados) por espectrometria de massa. Os métodos para determinar o dano oxidativo do DNA incluem, sem limitação, a medida de 8hidróxi-2'-desoxiganosina (8-OH-dG). Os métodos para determinar os danos oxidativos às proteínas incluem, sem limitação, a quantificação de produtos individuais de oxidação de aminoácidos, incluindo cinureninas (de triptofano), bitirosina (que parece ser metabolicamente estável e pode ser detectada na urina), hidróxidos de valina e leucina, L-di-hidroxifenilalanina (L-DOPA), ortotirosina, 2-oxo-histidina, semialdeído glutamato e semialdeído adípico, bem como o ensaio de carbonila (envolvendo a medição de grupos carbonila de proteínas). O potencial de membrana mitocondrial (Δψιη) relaciona-se com o potencial de membrana na forma de gradiente de prótons através da membrana interna mitocondrial. Métodos de avaliação do dano potencial da membrana mitocondrial são conhecidos pela pessoa versada e incluem o uso de sondas fluorescentes para monitorar o potencial da membrana, incluindo o corante JC1 (Cell Technology) e a medida da fluorescência geral na excitação e comprimentos de onda de emissão permitindo a quantificação da fluorescência verde (485 nm e 535 nm) e vermelha (550 nm e 600 nm). Sabe-se que a isquemia prolongada de qualquer tecido ou órgão induz à lesões potenciais da membrana mitocondrial.

[198] A apoptose está relacionada a uma rede regulada de eventos bioquímicos que levam a uma forma seletiva de suicídio celular, e é caracterizada por fenômenos morfológicos e bioquímicos facilmente observáveis, como a fragmentação do ácido desoxirribonucleico (DNA), condensação da cromatina, que pode ou não estar associada à atividade de endonuclease, migração cromossómica, marginação nos núcleos celulares, formação de corpos apoptóticos, inchaço mitocondrial, alargamento dos cristais mitocondriais, abertura

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86/110 dos poros de transição da permeabilidade mitocondrial e/ou dissipação do gradiente do próton mitocondrial. Os métodos para determinar a apoptose celular são conhecidos pela pessoa versada e incluem, sem limitação, ensaios que medem a fragmentação do DNA (incluindo manchamento do DNA cromossômico após a permeabilização celular), ensaios que medem a ativação de caspases como a caspase 3 (incluindo ensaios de atividade protease), ensaios que medem produtos de divagem de caspase (incluindo detecção de PARP e degradação de citoqueratina 18), ensaios que examinam cromatografia de cromatina (incluindo manchamento de DNA cromossômico), ensaios para medir quebras (nicks) e fragmentação de cadeias de DNA (extremidades de DNA escalonadas) (incluindo a marcação ativa de translação de nick celular ou ISNT e a marcação ativa de células por marcação final ou TUNEL), ensaios para detectar a fosfatidilserina na superfície de células apoptóticas (incluindo a detecção de componente de membrana translocada), ensaios para medir danos/fuga de membrana plasmática (incluindo ensaio de exclusão azul de tripano e ensaio de exclusão de iodeto de propídio). Os ensaios exemplares incluem a análise de parâmetros de dispersão de células apoptóticas por citometria de fluxo, a análise do teor de ADN por citometria de fluxo (incluindo a coloração de DNA em um asolução fluorocromática como o iodeto de propídio), a marcação fluorocromática de quebras da fita de DNA por desoxinucleótidil transferase terminal ou ensaio TdT, a análise da ligação de anexina-V por citometria de fluxo e o ensaio TUNEL.

[199] Cicatriz refere-se a qualquer marca deixada em um tecido após a cicatrização de uma ferida ou lesão. Particularmente, este termo está relacionado com as marcas deixadas no tecido isquêmico. No contexto da presente invenção, a formação de cicatrizes é derivada do dano relacionado à isquemia [200] De acordo com a presente invenção, a isquemia que causa

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87/110 a prevenção/redução dos danos relacionados à isquemia de acordo com a presente invenção ocorre em um órgão ou tecido selecionado do grupo que consiste em cérebro, coração, rins, fígado, intestino grosso, pulmão, pâncreas, intestino delgado, estômago, músculos, bexiga, bexiga, baço, ovários e testículos. Em uma modalidade particular, o órgão/tecido é selecionado a partir do grupo compreendendo coração, cérebro, rim, intestino, pâncreas, fígado, pulmão e músculo esquelético. Em uma modalidade mais particular, o órgão é o coração.

[201] O dano relacionado à isquemia a ser prevenido/reduzido ocorre tipicamente no tecido onde ocorre a isquemia com ou sem reperfusão. Além disso, o dano por isquemia pode levar a mais danos relacionados à isquemia em outros tecidos, como implícito pela resposta inflamatória sistêmica desencadeada pela isquemia.

[202] De acordo com a presente invenção, o dano relacionado à isquemia a ser prevenido/reduzido de acordo com a presente invenção ocorre em um órgão ou tecido selecionado do grupo que consiste em cérebro, coração, rins, fígado, intestino grosso, pulmões, pâncreas, intestino delgado, estômago, músculos, bexiga, baço, ovários, testículos e células sanguíneas. Em uma modalidade particular, o órgão/tecido é selecionado a partir do grupo que inclui coração, cérebro, rim, intestino, pâncreas, fígado, pulmão, músculo esquelético e células sanguíneas. Em uma modalidade mais particular, o dano de isquemia a ser prevenido e/ou reduzido de acordo com a presente invenção ocorre no coração.

[203] Em algumas modalidades, os danos relacionados com a isquemia a serem prevenidos/reduzidos de acordo com a presente invenção ocorrem no coração e nas células sanguíneas (por exemplo, por efeitos inflamatórios sistêmicos). Em algumas modalidades, os danos relacionados à isquemia a serem prevenidos/reduzidos de acordo com a presente invenção ocorrem no miocárdio e nas PBMCs (células

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88/110 mononucleares do sangue periférico).

[204] Como a pessoa versada na técnica reconhece, existem diferentes causas que podem causar isquemia e, portanto, danos relacionados à isquemia. Em algumas modalidades, o dano isquêmico é devido a aterosclerose, trombose, trombose, tromboembolismo, embolia lipídica, sangramento, stent, cirurgia, angioplastia, cirurgia de bypass, transplante de órgãos, isquemia total, compressão vascular por tumor, infarto do miocárdio, vasoconstrição, disfunção microvascular ou suas combinações. Em algumas modalidades, o dano relacionado à isquemia é produzido durante a reperfusão do vaso afetado.

[205] A aterosclerose está relacionada a qualquer enrijecimento de artérias secundárias ao ateroma ou acúmulo na íntima parede arterial de lipídios, células inflamatórias (principalmente macrófagos/células espumosas) e detritos celulares que estão carregados com lipídios, e células musculares lisas vasculares que migraram dos meios. A parede da artéria engrossa como um resultado do acúmulo de cálcio e materiais gordurosos tais como colesterol e triglicerídeos. A elasticidade das paredes da artéria é reduzida e pode se projetar para o lúmen vascular que reduz o fluxo de sangue. Também pode tornar-se vulnerável à ruptura e desencadear a formação de trombos (evento isquêmico).

[206] Trombose refere-se à formação de um trombo de sangue dentro de um vaso sanguíneo devido à ativação da cascata de coagulação e ativação/agregação plaquetária. O trombo consequentemente obstrui o fluxo de sangue através do sistema circulatório. Tromboembolismo refere-se à formação em um vaso sanguíneo de um coágulo (trombo) que se solta e é transportado pela corrente sanguínea para obstruir outro vaso. O coágulo pode ligar um vaso nos pulmões (embolia pulmonar), cérebro (acidente vascular cerebral), trato gastrointestinal, rins ou pernas.

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89/110 [207] Embolismo lipídico ou embolia gordurosa refere-se à presença frequentemente assintomática de glóbulos de gordura no parênquima pulmonar e circulação periférica após trauma de osso longo ou outro trauma grave.

[208] Sangramento refere-se ao processo de perda de sangue ou ter defeitos hemostáticos, especialmente cirurgicamente. Em particular, a hemorragia interna ocorre quando há dano a uma artéria ou veia, permitindo que o sangue escape do sistema circulatório e se acumule no interior do corpo. A hemorragia interna pode ocorrer nos tecidos, órgãos ou em cavidades do corpo.

[209] Stenf refere-se a um dispositivo como um tubo inserido em uma passagem/conduto natural no corpo para prevenir ou neutralizar uma doença induzida, constrição localizada do fluxo.

[210] Por cirurgia ou tratamento cirúrgico entende-se qualquer procedimento terapêutico que envolva ação metódica da mão ou manualmente com um instrumento, sobre o corpo de um humano ou outro mamífero, para produzir um curativo ou remédio.

[211] A angioplastia refere-se a uma técnica de alargamento mecânico de artérias estreitadas ou obstruídas, sendo esta última tipicamente o resultado de aterosclerose. Um balão vazio e colapsado em um fio guia, conhecido como cateter balão, é passado para os locais estreitados e em seguida inflado para um tamanho fixo usando pressões de água de 75 a 500 vezes a pressão arterial normal (6 a 20 atmosferas). O balão força a expansão dos depósitos internos de placa de glóbulos brancos/coágulos sanguíneos e da parede muscular circundante, abrindo o vaso sanguíneo para melhorar o fluxo, e o balão é em seguida esvaziado e retirado. Um stent pode ou não ser inserido no momento do balonamento para assegurar que o vaso permaneça aberto.

[212] A cirurgia de bypass refere-se a uma classe de cirurgias

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90/110 que envolve o reencaminhamento de uma parte do corpo tubular e inclui a circulação extracorpórea, a cirurgia de bypass ileal parcial, a circulação ileojunal, a circulação gástrica e a circulação vascular, como a cirurgia de bypass da artéria coronária. A circulação extracorpórea (CEC) assume temporariamente a função do coração e dos pulmões durante a cirurgia, mantendo a circulação do sangue e o conteúdo de oxigênio do corpo. A cirurgia de bypass ileal parcial é um procedimento cirúrgico que envolve encurtar o íleo para encurtar o comprimento total do intestino delgado. O bypass ileojejunal é uma cirurgia concebida como remédio para a obesidade mórbida. Um bypass vascular é um procedimento cirúrgico realizado por inadequação ou perda do fluxo sanguíneo para uma região do corpo. Em particular, a cirurgia de revascularização do miocárdio, também conhecida como cirurgia de revascularização do miocárdio (CRM), é um procedimento cirúrgico realizado para aliviar a angina e reduzir o risco de morte por doença arterial coronária.

[213] Por transplante entende-se um procedimento cirúrgico através do qual uma célula, tecido ou órgão é transferido de um dador para um indivíduo receptor ou de uma parte do corpo para outra no mesmo indivíduo. O doador é o indivíduo que fornece sangue, células, tecidos ou um órgão a outro indivíduo através de transfusão de sangue ou de um transplante de órgãos. O doador é um ser humano ou outro mamífero. O indivíduo receptor é o indivíduo do ensaio que recebe sangue, células, tecidos ou um órgão de outro indivíduo do ensaio através de transfusão de sangue ou de um transplante de órgãos. O indivíduo receptor é um ser humano ou outro mamífero. Os tecidos transplantados incluem, porém não estão limitados a, tecido ósseo, tendões, tecido córneo, válvulas cardíacas, veias e medula óssea. Os órgãos transplantados compreendem, entre outros, coração, pulmão, fígado, rim, pâncreas e intestino. O procedimento cirúrgico específico

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91/110 de transplantação em que o dador e o receptor são membros geneticamente não idênticos da mesma espécie é conhecido como alotransplantação. Desse modo, o termo alotransplante (também conhecido como aloenxerto, transplante alogênico ou homoenxerto) está relacionado com o transplante de células, tecidos ou órgãos provenientes de um membro geneticamente não idêntico da mesma espécie que o receptor. O termo alotransplantável refere-se aos órgãos ou tecidos que são transplantados com relativa frequência ou rotineiramente. Exemplos de órgãos alotransplantáveis incluem coração, pulmão, fígado, pâncreas, rim e intestino. O procedimento cirúrgico específico de transplante em que o dador e o receptor são membros de diferentes espécies é conhecido como xenotransplantação. Desse modo, o termo xenotransplante (também conhecido por xenotransplante, transplante xenogênico ou heteroenxerto) está relacionado com o transplante de células, tecidos ou órgãos provenientes de um doador para um receptor, em que doador e receptor são membros de espécies diferentes.

[214] Isquemia total refere-se à isquemia em que o fornecimento de sangue arterial e/ou venoso está completamente ocluído (sem fluxo). Em uma modalidade mais particular, o dano relacionado à isquemia é devido à obstrução coronariana (infarto do miocárdio). Em outra modalidade, o dano relacionado à isquemia é devido à reperfusão em relação ao dano isquêmico.

[215] O infarto do miocárdio (IM) envolve uma necrose isquêmica de parte do miocárdio devido à obstrução de uma ou várias artérias coronárias ou suas ramificações. O infarto do miocárdio é caracterizado pela perda/morte de cardiomiócitos funcionais, sendo o tecido miocárdico irreversivelmente danificado. O miocárdio, ou músculo cardíaco, sofre um infarto quando existe doença coronária avançada, em um caso particular, isto ocorre quando uma placa ateromatosa localizada

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92/110 dentro de uma artéria coronária úlcera ou rompe, desencadeando a formação de trombos e uma obstrução aguda desse vaso, resultando em isquemia.

[216] De acordo com a presente invenção, o indivíduo é qualquer indivíduo para o qual os danos relacionados com a isquemia a um órgão ou tecido devem ser prevenidos e/ou reduzidos. Em uma modalidade particular, o indivíduo é um mamífero, incluindo seres humanos, animais domésticos, animais de fazenda e zoológicos, esportes ou animais de estimação como cães, gatos, cobaias, coelhos, ratos, camundongos, cavalos, bovinos, vacas, e assim por diante. Em uma modalidade mais preferida da presente invenção, o indivíduo é um ser humano.

[217] Em uma modalidade particular, o indivíduo sofre de dislipidimia. Na modalidade mais preferida da invenção (no que diz respeito ao grupo de pacientes), o indivíduo sofre de hipercolesterolemia. A hipercolesterolemia está relacionada com uma patologia caracterizada pela presença de níveis elevados de colesterol no sangue, nomeadamente de colesterol total e de LDL. Como aqui utilizado, o termo colesterol total refere-se à soma das subtrações do colesterol LDL (lipoproteína de baixa densidade), HDL (lipoproteína de alta densidade) e VLDL (lipoproteína de muito baixa densidade). A pessoa habilitada na técnica conhece os valores de referência dos níveis sanguíneos de colesterol total e LDL, que variam de acordo com diferentes circunstâncias como idade, sexo, etc., e sabe como determinar em cada caso se um indivíduo sofre de hipercolesterolemia.

[218] De acordo com a presente invenção, considera-se que um indivíduo sofre de dislipidimia quando o indivíduo apresenta uma quantidade anormal de lipídios (por exemplo, triglicerídeos, colesterol e/ou fosfolipídios gordos) no sangue. Nos países desenvolvidos, a maioria das dislipidemias são hiperlipidemias, ou seja, uma elevação de lip

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93/110 ídios no sangue. As hiperlipidemias são divididas em subtipos primário e secundário. A hiperlipidemia primária é geralmente devida a causas genéticas (como uma mutação em uma proteína receptora), enquanto a hiperlipidemia secundária surge devido a outras causas subjacentes, como diabetes, doenças que envolvem a interseção da genética e problemas de estilo de vida.

[219] De acordo com a presente publicação, um indivíduo é considerado como sofrendo de hipercolesterolemia se os níveis de colesterol total forem acima de 200mg/dl_ e/ou se o colesterol lipoproteico de baixa densidade for acima de 10Omg/dL.

3· Uso para a fabricação de um medicamento [220] Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se ao uso de um composto na fabricação de um medicamento para a prevenção/redução de danos relacionados com a isquemia em um indivíduo, em que este composto é uma estatina, em que o referido composto deve ser administrado a este indivíduo por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, e em que o referido composto deve ser administrado o mais rápido possível após o início da isquemia.

[221] Em algumas modalidades, o referido composto, a referida prevenção/redução, a referida isquemia, o referido dano de isquemia, o referido dano de reperfusão, o referido dano relacionado à isquemia, o referido indivíduo, a referida estatina e/ou a referida administração são como definidos acima.

4. Métodos de tratamento [222] Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método de tratamento que compreende a etapa de administrar a um indivíduo que sofre de isquemia uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto, em que este composto é uma estatina, em que o referido composto é administrado a este indivíduo por admi

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94/110 nistração intravenosa após o início da isquemia, mas antes da reperfusão, e em que este composto é administrado o mais cedo possível após o início da isquemia.

[223] Em algumas modalidades, o referido composto, a referida isquemia, o referido dano de isquemia, o referido dano de reperfusão, o referido dano relacionado à isquemia, a referida quantidade farmaceuticamente efetiva, o referido indivíduo, a referida estatina e/ou a referida administração é como definida acima.

[224] A invenção é detalhada abaixo por meio dos seguintes exemplos, que são meramente ilustrativos e não limitam o escopo da presente invenção.

EXEMPLOS [225] Todos os protocolos de estudo foram aprovados pelo comitê de ética institucional (CSIC-ICCC) e todos os procedimentos em animais foram realizados em estrita conformidade com as diretrizes da Directive 2010/63/EU of the European Parliament sobre a proteção dos animais usados para fins científicos ou com as diretrizes do National Institute of Health (NIH) (Publicação NIH n.^Q 85-23, revista em 1996). Além disso, seguimos as diretrizes ARRIVE e nos comprometemos com os 3Rs da pesquisa em animais de laboratório.

Exemplo 1

Modelo de suíno para isquemia [226] Experimentos com modelo suíno de isquemia miocárdica imitando o infarto do miocárdio foram realizados como mostrado na Figura 1.

[227] A isquemia foi induzida experimentalmente em suínos alimentados com ração normal (~ 40 kg) por indução de infarto do miocárdio em tórax fechado. Para tal finalidade, os animais foram sedados e a anestesia foi mantida com isofluorano durante todo o procedimento experimental. Ritmo cardíaco, oximetria arterial e pressão arterial fo

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95/110 ram continuamente monitorados durante o procedimento. Pouco antes do início do procedimento, iniciou-se a perfusão de amiodarona e lidocaína como profilaxia para as arritmias malignas do ventrículo esquerdo. Todos os animais do estudo foram submetidos ao mesmo método farmacológico antiarrítmico, permitindo uma comparação direta entre os grupos. Por via percutânea e orientação fluoroscópica, a isquemia foi induzida por oclusão completa do balão coronariano da artéria coronária descendente anterior médio-esquerda. Foram realizadas angiografias de contraste para garantir a oclusão coronariana total.

[228] Após 15 minutos de isquemia, os animais receberam uma infusão intravenosa de atorvastatina (0,3 mg/kg) ou veículo. As dosagens dos medicamentos foram determinadas com base na dose de carga (80 mg) no cenário de síndrome coronariana aguda e/ou ICP anterior (intervenção coronária percutânea) e foram convertidas para a dose de porco de acordo com a área de superfície corporal. Os animais de controle receberam placebo intravenoso (soro fisiológico) aos 15 minutos de isquemia.

[229] Amostras de sangue (soro) para avaliação posterior dos biomarcadores de dano cardíaco foram tiradas na linha de base (isto é, antes da indução do IM ou no tempo = 0 min), e em 30 min, 60 min e 90 min após a indução do IM (isquemia).

[230] Amostras de sangue também foram coletadas em EDTA na linha de base (antes da isquemia) e após 90 minutos de isquemia da artéria femoral para isolamento PBMC pelo método Ficoll.

[231] Na coleta da amostra de sangue de 90 minutos, os suínos foram sacrificados sem reperfusão para obtenção de tecido miocárdico para estudos moleculares e histológicos.

Exemplo 2 [232] Neste exemplo, foi testado se a administração intravenosa

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96/110 de uma dose única de atorvastatina após o início da oclusão coronariana protege contra danos relacionados à isquemia (desenho no Exemplo 1). O experimento foi realizado em 7 animais por grupo (tratado com atorvastatina vs. Controle-veículo).

[233] A concentração de IMA (Albumina Isquêmica Modificada), CFABP (Proteína Ligante de Ácido Graxo Cardíaco) e Mioglobina foi determinada pelos respectivos kits ELISA de suínos nas amostras de sangue coletadas 30 min, 60 min e 90 min após a indução da IM e comparada aos seus valores basais (antes da indução de isquemia). Estas proteínas foram escolhidas com base no raciocínio de que são marcadores precoces para avaliação de danos cardíacos devido à isquemia.

[234] Como mostrado no exemplo, em todos os três momentos examinados, a administração intravenosa de atorvastatina reduziu significativamente os níveis sanguíneos de IMA (Figura 2A), CFABP (Figura 2B) e Mioglobina (Figura 2C) em comparação aos controles. Os painéis esquerdos claramente refletem a redução geral nos três marcadores de dano cardíaco em animais tratados com atorvastatina versus controles ao combinar os três pontos de tempo. Finalmente, como visto na Figura 2D, houve uma redução geral de mais de 50% nos níveis de IMA e mais de 75% para CFABP e níveis de mioglobina nos animais tratados com atorvastatina em comparação com a ausência de tratamento.

[235] Desse modo, este exemplo demonstra que a administração intravenosa de atorvastatina de estatina logo após a indução da isquemia reduz significativamente os níveis de marcadores de dano isquêmico em comparação com indivíduos não tratados com a estatina.

Exemplo 3 [236] Neste exemplo, foi testado se a administração intravenosa

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97/110 de atorvastatina de estatina tem efeito sobre a ativação do RhoA no miocárdio isquêmico dos suínos descritos nos Exemplos 1 e 2.

[237] Após o período isquêmico, os corações dos animais foram parados com cloreto de potássio e rapidamente excisados. As amostras de tecido obtidas do miocárdio isquêmico de todos os animais foram pulverizadas e homogeneizadas em tampão de lise para isolamento de proteínas e avaliação de RhoA total. Além disso, a separação da membrana e das frações citosólicas foi realizada por meio da modificação do protocolo de tampão de lise. Resumidamente, o pó tecidual foi homogeneizado (1 mol/L de NaCI, 20 mmol/L de Tris pH 7,4, 1 mmol/L de DTT e inibidores de protease) e centrifugado. O sobrenadante foi coletado (referido como fração citosólica) e as péletes foram ressuspensas, e as proteínas da membrana foram extraídas por incubação em 500 mmol/L de Tris-HCI pH 7,4, 20% de sulfato de sódio dodecil, 100 mmol/L de ortoovanadato de sódio e inibidores de protease. O extrato foi centrifugado e o sobrenadante coletado como fração de membrana.

[238] A concentração de proteínas (no tecido miocárdico total, na fração de citoplasma e na fração de membrana) foi quantificada pelo método Pierce. A RhoA (Santa Cruz) foi determinada nas frações totais e citosólica e de membrana do tecido cardíaco isquêmico de todos os animais pelo método Western Blot. A intensidade das bandas do Western Blot foi detectada com Chemi-Doc (Bio-Rad) e quantificada com o Software Quantity One (Bio-Rad). As intensidades são expressas em unidades arbitrárias (AU).

[239] Como pode ser visto na Figura 3, a quantidade total de proteína RhoA no miocárdio isquêmico não foi afetada pelo tratamento com estatina após o início da isquemia (Figura 3A). No entanto, o tratamento com estatina afetou significativamente a ativação de RhoA. Como tal, os animais controle não tratados mostraram uma menor re

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98/110 lação RhoAcyt/mb indicativa de maior RhoA ligado à membrana (forma ativa) (Figura 3B). Em contraste, em animais tratados com estatinas, a RhoA foi localizada principalmente no citoplasma (inativa).

[240] Desse modo, este exemplo indica que uma dose única de estatina (por exemplo, atorvastatina) após o início da isquemia inibe a ativação da RhoA no miocárdio isquêmico de suínos infartados.

Exemplo 4 [241] Neste exemplo, foi testado se os efeitos cardioprotetores associados ao tratamento com estatina envolvem a inibição de RhoA.

[242] O experimento foi realizado com um modelo de camundongo para isquemia miocárdica, em que a isquemia foi causada por ligadura coronariana (Figura 4A).

[243] A ligadura completa da artéria coronária LAD foi realizada como segue. Camundongos CH3, machos foram intubados e anestesiados (8 a 10 semanas de idade, pesando 25 a30 g) com uma mistura de 02/isoflurano e ventilados mecanicamente (frequência de 90 respirações/min, volume corrente 0,1 ml). A temperatura retal foi monitorada continuamente durante toda a cirurgia e mantida entre 37 a 38 °C com almofada térmica e lâmpada de calor. Uma toracotomia anterior foi realizada; exposição do coração e oclusão da artéria coronária LAD com ponto intramural (sutura 7-0 de seda; ligadura consistente da artéria coronária esquerda ao emergir sob 0 átrio esquerdo) durante 45 minutos. O sucesso da ligadura coronária completa foi verificado pela visualização eletrocardiográfica do padrão IM de elevação ST que foi monitorado por ultrassonografias de alta frequência com 0 Vevo2100 da Visualsonics e pela visualização de um ventrículo hipocinético pálido, distai ao local de oclusão.

[244] 15 minutos após a ligadura coronariana (isto é, 15 minutos após 0 início da isquemia), uma dose única de atorvastatina (0,3 mg/kg; n=6), β-ΟΗ-simvastatina (0,3 mg/kg; n=6), 0 inibidor específico

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99/110 de RhoA CCG1423 (Sigma; 0,15 mg/kg; n=6) ou volume de PBS para veículos/controles (n=6) foram administrados intraperitonealmente. A isquemia foi mantida durante mais 30 minutos após a administração da dose única (isto é, 45 minutos de isquemia), depois, os camundongos foram sacrificados e o coração foi cuidadosamente excisado para análise do tamanho do infarto.

[245] O tamanho do infarto foi determinado pela análise morfométrica. Para este propósito, todos os corações de camundongos foram imersos em solução fixadora (paraformaldeído 4%), embebidos em composto OCT e seccionados transversalmente da ápice para a base (cortes de 10 pm de espessura a 200 pm de distância). Os cortes foram manchados com hematoxilina e eosina e a análise do tamanho do infarto morfométrico foi determinada pelo software de análise de imagens (Imaged, NIH). O tamanho do infarto foi calculado pela soma das áreas de infarto do miocárdio entre os cortes e expresso como uma porcentagem da parede total do VE. Três medidas por secção foram determinadas.

[246] Além disso, o dano oxidativo miocárdico também foi avaliado. Para finalidade, o tecido miocárdico isquêmico foi cortado em fatias de 5 pm, espessas para manchamento de 8-OH-dG (Abeam ab48508), uma medida indicativa de dano ao DNA induzido por estresse oxidativo. O manchamento foi calculado por um único observador cego a partir de uma média de 5 campos/animal como % da área manchada. As imagens foram capturadas pelo microscópio Nikon Eclipse 80i e digitalizadas pela Fast camera Retiga 1300i.

[247] Como pode ser visto nas imagens histológicas da Figura 4B, o tamanho do infarto foi claramente reduzido em cerca de 50% pelas estatinas (atorvastatina e β-ΟΗ-sinvastatina) desse modo como para o inibidor de RhoA CCG1423 em comparação com o controle do veículo.

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100/110 [248] A administração de estatina e CCG1423 também foi associada ao menor dano oxidativo (redução de 70%) no miocárdio isquêmico (Figura 4C).

[249] Desse modo, este exemplo mostra que os efeitos cardioprotetores das estatinas são mediados, em parte, pela inibição da RhoA.

Exemplo 5 [250] Neste exemplo, foi determinado o efeito da administração intravenosa de uma estatina durante a isquemia nos níveis de RNAm de proteínas celulares cardioprotetoras [AMPK (proteína cinase ativada por AMP) e eNOS (óxido nítrico sintase endotelial)] e marcadores relacionados à apoptose p53 e caspase-3, tanto no miocárdio isquêmico quanto no não isquêmico. O estudo foi realizado em amostras de miocárdio obtidas de suínos, conforme descrito nos Exemplos 1 e 2.

[251] Para esta finalidade, as mostras de tecido obtidas do miocárdio isquêmico e do miocárdio não isquêmico de todos os animais foram pulverizadas e homogeneizadas em Tripure (Roche) para isolamento de RNA. Realizamos análise transcriptômica para avaliar por PCR em tempo real a expressão gênica de AMPK, eNOS, P53 e caspase-3. Os valores do ciclo limiar foram determinados e normalizados para o housekeeping gene 18SrRNA.

[252] Como mostrado na Figura 5, a atorvastatina não exerceu nenhuma alteração nos níveis de RNAm de AMPK, eNOS, p53 e caspase-3 tanto no miocárdio isquêmico quanto não isquêmico em relação aos controles.

[253] Desse modo, o tratamento com atorvastatina logo após o insulto isquêmico não modifica os níveis de RNAm dos marcadores cardioprotetores e apoptóticos avaliados aos 90 minutos pós-isquemia. Exemplo 6

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101/110 [254] Neste exemplo, foi examinado o efeito da administração intravenosa de uma estatina logo após o início da isquemia na ativação da AMPK e da eNOS (proteínas conhecidas por exercer efeitos cardioprotetores).

[255] O estudo foi realizado em amostras miocárdicas de suínos, como descrito nos Exemplos 1 e 2.

[256] Para estes propósitos, amostras de tecido obtidas do miocárdio isquêmico e do miocárdio não isquêmico de todos os animais foram pulverizadas e homogeneizadas em tampão de lise. Foram avaliados AMPK, AMPK fosforilado em Thr172 (P-AMPK) ou AMPK ativado, eNOS e eNOS fosforilado em Ser1177 (P-eNOS) ou eNOS ativado. O grau de ativação de AMPK e eNOS foi avaliado pela avaliação da relação P-AMPK para AMPK total e P-eNOS para eNOS total, respectivamente. A intensidade das bandas foi calculada por densitometria e expressa como unidades arbitrárias (AU).

[257] Como pode ser visto na Figura 6A, os níveis de P-AMPK foram significativamente aumentados no miocárdio isquêmico de animais tratados com atorvastatina em comparação aos controles. Não houve alteração observada no P-AMPK no tecido cardíaco não isquêmico entre animais tratados com atorvastatina e controles mostrando níveis de proteína comparáveis àqueles encontrados no miocárdio isquêmico de animais tratados com atorvastatina. Não foram detectadas alterações no conteúdo proteíco total de AMPK no coração inteiro em ambos os grupos de animais. Consequentemente, a relação de P-AMPK/AMPK aumentou significativamente nos animais tratados com atorvastatina. Estas observações são apresentadas nas bandas de Western blot representativas.

[258] Como pode ser observado na Figura 6B, o tratamento com atorvastatina também não realçou (porém também não diminuiu) a ativação da eNOS induzida por isquemia. Novamente, é fornecida uma

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102/110 imagem representativa das bandas de West blot.

[259] Desse modo, já uma dose única da atorvastatina de estatina administrada logo após o início da isquemia preserva a ativação da proteína cardioprotetora AMPK, enquanto não afeta o estado de ativação da eNOS.

Exemplo 7 [260] A fim de determinar se a ativação da AMPK relacionada à atorvastatina estava envolvida nos efeitos cardioprotetores fornecidos pela estatina, realizamos um experimento em um modelo de isquemia miocárdica em camundongo. O modelo animal de ligadura coronariana está detalhado no Exemplo 4 e na Figura 4.

[261] Neste caso, um inibidor de AMPK (composto C; 30 mg/kg; dissolvido em DMSO) foi administrado intraperitonealmente antes da administração de atorvastatina (0,3 mg/kg) para bloquear qualquer efeito potencial da estatina na ativação da AMPK. A atorvastatina foi administrada aos 15 minutos de isquemia e após 30 minutos (período isquêmico total de 45 minutos), os camundongos foram sacrificados e os corações foram processados para o tamanho do infarto do miocárdio e avaliação oxidativa, como detalhado no Exemplo 4.

[262] A análise histológica do tamanho do infarto (Figura 7A) revelou que o bloqueio da ativação da AMPK pelo Composto C anulou as propriedades de redução do tamanho do infarto obtidas pela administração de atorvastatina logo após a indução da isquemia. Além disso, a Figura 7B indica que a ativação da AMPK também protegeu contra danos oxidativos [avaliada pelo manchamento de 8hidroxiguanosina (8-OHdG)] visto que a administração do Composto C anulou estes efeitos protetores.

[263] Desse modo, os efeitos cardioprotetores da atorvastatina contra lesão isquêmica (incluindo menor tamanho do infarto e dano oxidativo) são parcialmente mediados pela ativação da AMPK.

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Exemplo 8 [264] Este exemplo foi realizado para tratar a questão de se a administração de atorvastatina durante a isquemia impede a execução da apoptose no miocárdio isquêmico de suínos.

[265] O tecido miocárdico de todos os suínos incluídos nos Exemplos 1 e 2 foi obtido, pulverizado e processado com tampão de lise para isolamento de proteínas, como detalhado no Exemplo 6. A proteína foi quantificada pelo método Pierce e a análise Western Blot foi realizada para avaliar os níveis de p53 fosforilada (Ser15), p53 total, caspase-3 clivada e caspase-3 total. As relações de p53 fosforilada/p53 total e Casp3 clivada/caspase3 total foram calculadas para determinar a quantidade de proteína ativada.

[266] A partir dos dados da Figura 8A, pode-se observar que a administração de atorvastatina logo após a isquemia reduziu a ativação da p53 no miocárdio isquêmico e não exerceu efeitos na ativação da p53 no miocárdio não isquêmico. Não houve alteração observada nos níveis totais de p53 em todo o miocárdio. Desse modo, a relação de P-p53/p53 foi significativamente reduzida no miocárdio isquêmico de suínos tratados com atorvastatina.

[267] Em relação ao impacto do tratamento com atorvastatina na ativação da caspase-3, como observado na Figura 8B, a administração de atorvastatina reduziu os níveis de caspase 3 clivada (ativa) no miocárdio isquêmico. Visto que não houve alteração relacionada quanto à caspase-3 total, a atorvastatina consequentemente reduziu a relação de caspase-3 total/caspase-3 clivada, como pode ser observado nas bandas representativas de Western Blot da Figura 8B.

[268] Desse modo, a administração de atorvastatina logo após a isquemia reduz os níveis de execução de apoptose no miocárdio isquêmico avaliado pela diminuição dos níveis tanto da fosforilação p53 quanto da caspase 3 clivada.

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Exemplo 9 [269] Este exemplo investigou se a administração de atorvastatina logo após a indução de isquemia exerce efeitos anti-inflamatórios sobre o miocárdio. Para este propósito, o efeito da atorvastatina na expressão da proteína-1 quimiotática monocitária (MCP-1/CCL2) foi avaliado no nível de mRNA e níveis de proteína, visto que a MCP-1 é uma das principais quimiocinas que regulam a migração e infiltração de leucócitos (particularmente, monócitos). A migração de monócitos da corrente sanguínea através do endotélio vascular ocorre logo após um insulto isquêmico.

[270] O miocárdio de suínos incluídos nos Exemplos 1 e 2 foi obtido, pulverizado e processado com Tripure ou tampão de lise para o mRNA e isolamento de proteínas como detalhado nos Exemplos 5 e 6, respectivamente. Os níveis de mRNAm e a expressão proteica da MCP-1 foram avaliados. Os valores do ciclo do limiar (Ct) foram determinados e normalizados para o housekeeping gene 18SrRNA para ajustar para quantidades iguais de RNA, enquanto a β-actina foi usada como controle de carga proteica.

[271] Como pode ser observado na Figura 9, o tratamento com atorvastatina reduziu significativamente a expressão do mRNAm de MCP-1 e proteína no miocárdio isquêmico em comparação com suínos não tratados.

[272] Não houve alteração observada na expressão da MCP-1 no tecido miocárdico não isquêmico.

[273] Desse modo, a administração intravenosa de atorvastatina logo após a indução da isquemia tem efeitos anti-inflamatórios sobre o tecido cardíaco isquêmico.

Exemplo 10 [274] Neste exemplo, a questão tratada foi se os efeitos antiinflamatórios miocárdicos da atorvastatina também se estendem

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105/110 sistemicamente aos leucócitos circulantes, especialmente às células mononucleares periféricas do sangue (PBMC).

[275] Para esta finalidade, 20 ml de sangue foram coletados em tubos EDTA em três pontos de tempo testados (0, 30 e 90 min) em todos os animais. Todas as amostras de sangue foram imediatamente submetidas à centrifugação por gradiente de densidade Ficl-paque Plus (Amersham Biosciences) para isolar PBMCs. As amostras foram contadas e em seguida congeladas diretamente em nitrogênio líquido e armazenadas a -80^QC até o mRNA e o isolamento da proteína, como descrito no Exemplo 5 e Exemplo 6. O nível de expressão de mRNA dos marcadores inflamatórios relacionados à imunidade inata TLR4 (receptor semelhante a dobre de sino 4) e MCP-1, bem como TF (fator tecidual) foram determinados por análises de PCR em tempo real, enquanto a expressão de proteína de MCP-1 também foi avaliada. Os valores do ciclo do limiar (Ct) foram determinados e normalizados para o housekeeping gene 18SrRNA para ajustar para quantidades iguais de RNA, enquanto o vermelho Ponceau foi usado para o controle da carga proteica.

[276] Como mostrado na Figura 10A, o tratamento com atorvastatina não modificou a expressão de TLR4 ou TF PBMC nem antes (tempo 0 min) nem depois (tempo 90 min) da indução isquêmica. Ao contrário, a atorvastatina acentuou marcadamente o aumento desencadeado pela isquemia na expressão de MCP-1 tanto em níveis gênicos e proteicos.

[277] Desse modo, este exemplo mostra que os efeitos antiinflamatórios da atorvastatina se estendem além do tecido isquêmico e também se estendem à circulação sistêmica, prevenindo a indução de MCP-1/CCL2 relacionada à isquemia em PBMCs circulantes.

Exemplo 11 [278] Neste exemplo, a questão tratada foi se uma única dose

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106/110 intravenosa de atorvastatina logo após a isquemia reduz a formação de cicatriz miocárdica avaliada 30 dias após a indução da isquemia. O experimento foi realizado com um modelo de rato para isquemia, no qual a isquemia miocárdica foi causada por ligadura persistente da artéria coronária (Figura 11 A).

[279] O estudo foi realizado em ratos SD machos (8 a 10 semanas de idade, pesando 250 a 300 g; Jackson Laboratory). A IM foi induzida por ligadura da artéria coronária LAD durante 45 minutos. Após 15 min de isquemia, os ratos foram submetidos aleatoriamente à injeção intraperitoneal de 0,3 mg/kg de atorvastatina ou volume igual de PBS para veículos/controles (n=6). Trinta minutos após a administração de atorvastatina (45 min de isquemia), os animais foram liberados para recuperação e mantidos durante 30 dias e depois sacrificados. Em seguida, os corações foram cuidadosamente excisados para avaliação morfométrica do tamanho do infarto.

[280] Os resultados deste experimento são mostrados na Figura 11B. Como pode ser observado pelos dados, a dose única de atorvastatina 15 min após o início da isquemia resultou em uma redução significativa de 60% no tamanho da cicatriz avaliada 30 dias após a indução de isquemia em comparação com os controles-veículo.

[281] Desse modo, a administração de atorvastatina logo após a indução de isquemia exerce efeitos protetores que se traduzem em cicatrização miocárdica inferior 1 mês após a indução de isquemia.

Exemplo 12 [282] Neste exemplo, a questão a ser tratada foi se uma única dose intravenosa de atorvastatina logo após a indução da isquemia reduz o dano miocárdico na presença de condições comórbidas como a hipercolesterolemia, o fator de risco cardiovascular mais comum encontrado em pacientes com infarto do miocárdio.

[283] Para este propósito, 14 suínos foram alimentados durante

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107/110 dias com dieta hipercolesterolêmica tipo Ocidental [20% de gordura saturada (sebo bovino), 2% de colesterol, 1% de ácido cólico]. Essa dieta hiperlipidêmica contém 24,82% de proteínas, 64,20% de carboidratos, 10,98% de gorduras e 16.834,7kJ. A ingestão desta dieta rica em gordura durante 10 dias eleva o colesterol a níveis comparáveis àqueles encontrados em humanos dislipidêmicos e induz à disfunção endotelial.

[284] Após este período de 10 dias de dieta, os animais foram submetidos a uma oclusão de balão coronário descendente anterior médio-esquerdo (LAD) de 90 minutos em tórax fechado e o mesmo desenho experimental descrito no Exemplo 1. Resumidamente, 15 minutos após a indução da isquemia, os animais (n=7 animais/grupo) receberam atorvastatina intravenosa (0,3 mg/kg) e em seguida o sangue foi tirado aos 30, 60 e 90 minutos de isquemia para determinar os marcadores precoces de dano cardíaco (IMA, MFABP, mioglobina).

[285] Como pode ser observado pelos dados, uma dose única de atorvastatina 15 minutos após o início da isquemia resultou em uma redução significativa em todos os três marcadores relacionados ao dano miocárdico. Como tal, a administração intravenosa de atorvastatina resultou em uma redução significativa da IMA (Figura 12A), CFABP (Figura 12B) e Mioglobina (Figura 12C) já observada em 30 min após indução de isquemia (15 min após administração de atorvastatina). A percentagem de redução foi de cerca de 60 a 75% para todos os três marcadores (Figura 12D).

[286] Desse modo, este experimento fornece evidências de que a administração intravenosa de atorvastatina logo após a indução da isquemia protege o miocárdio contra danos isquêmicos, mesmo na presença de níveis elevados de colesterol.

Exemplo 13 [287] Neste exemplo, a questão a ser tratada foi se uma única

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108/110 dose intravenosa de atorvastatina logo após a isquemia reduz o recrutamento de neutrófilos para a área isquêmica lesada em suínos hipercolesterolêmicos.

[288] Para esta finalidade, tecido miocárdico isquêmico foi obtido de todos os suínos hipercolesterolêmicos incluídos no Exemplo 12, embutido em OCT e manchado para detecção de neutrófilos (antiNeutrofilo Elastase; Abeam). O manchamento foi calculada por um único observador cego a partir de uma média de 5 campos/animal como % da área corada. As imagens foram capturadas pelo microscópio Nikon Eclipse 80i e digitalizadas pela Fast camera Retiga 1300i.

[289] Como pode ser observado a partir dos dados (Figura 13), uma única dose intravenosa de atorvastatina 15 minutos após o início da isquemia resultou em uma redução significativa na infiltração miocárdica neutrófila (redução de 57%) em relação aos controles.

[290] Desse modo, a administração intravenosa de atorvastatina em suínos logo após a indução da isquemia limita o recrutamento de neutrófilos para o miocárdio isquêmico danificado na presença de dislipidemia.

Exemplo 14 [291] Neste exemplo, a questão a ser tratada foi se a administração de estatina durante o insulto isquêmico limita os danos de reperfusão associados à isquemia, reduzindo desse modo o dano cardíaco total.

[292] Os suínos foram alimentados com dieta hipercolesterolêmica como no Exemplo 11. Após este período de 10 dias de dieta, os animais foram submetidos a uma oclusão de balão coronário com o tórax fechado de 90 minutos, descendente anterior médio-esquerdo (LAD). Após 75 min de isquemia, os animais foram randomizados para infusão intravenosa (veia femoral) de um derivado ativo de β-hidróxi

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109/110 ácido de sinvastatina (β-ΟΗ-S; 0,3 mg/kg; n=12) ou veículo (0,9% NaCI; n=12). No minuto 90, o balão foi esvaziado para atingir a reperfusão arterial coronariana. Os animais foram reperfundidos durante 2,5 h. O tamanho do infarto foi determinado morfometricamente pelo manchamento azul de Evan. Para tal finalidade, 2,5 h pós-reperfusão, o corante Azul de Evan foi injetado nos suínos anestesiados através do átrio esquerdo para delinear a área em risco (AAR), após as quais os corações dos animais foram parados com cloreto de potássio e rapidamente excisados. Os corações foram seccionados em 6 fatias transversais paralelas ao anel atrioventricular. Os cortes consecutivos foram alternativamente coletados para análise do tamanho do infarto (cloreto de trifenil tetrazólio) e estudos moleculares do miocárdio isquêmico e não isquêmico. As amostras de tecido obtidas do miocárdio isquêmico e não isquêmico de todos os animais foram pulverizadas e homogeneizadas em Tripure® ou tampão de lise para isolamento de RNA e proteína, respectivamente. Os níveis de proteína dos marcadores de apoptose (caspase-3 truncada) foram avaliados. O tecido miocárdico isquêmico embutido em parafina de todos os animais foi cortado em fatias com 5 pm de espessura para manchamento com 8hidroxiganosina (Abeam ab48508), uma medida indicativa de dano ao DNA induzido por estresse oxidativo, e o tecido miocárdico isquêmico embutido em OCT de todos os animais foi manchado para detecção de neutrófilos (anti-Neutrofila Elastase; Abeam). O manchamento foi calculado por um observador simples cego a partir de uma média de 5 campos/animal como % da área manchada. As imagens foram capturadas pelo microscópio Nikon Eclipse 80i e digitalizadas pela Fast camera Retiga 1300i. Além disso, o potencial de membrana mitocondrial (ΔΨπί) foi medido no miocárdio isquêmico de todos os animais por citometria de fluxo usando o corante ratiométrico iodeto de carbocianina de 5,5',6,6'-tetracloro-1,T,3,3'-tetraetilbenzimidazol (JC-1; Molecular

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Probes). Os valores foram expressos como atividade de fluorescência vermelha. Mitocôndrias isoladas tratadas com valinomicina (Sigma), que diminui ΔΨιτι, foram usadas como controle (dados não mostrados).

[293] Como mostrado na Figura 14, a infusão de β-ΟΗ-S durante a isquemia resultou na diminuição do dano miocárdico (dano isquêmico + dano por reperfusão) avaliado em 2,5 h após a reperfusão (Figura 14A). Além disso, a infusão de β-ΟΗ-S durante a isquemia reduziu significativamente a expressão da caspase-3 clivada (Figura 14B), limitou o recrutamento de neutrófilos (Figura 14C), diminuiu o estresse oxidativo (Figura 14D) e preservou o potencial mitocondrial (Figura 14E) no tecido miocárdico isquêmico de todos os animais tratados com atorvastatina.

[294] Desse modo, a infusão de β-ΟΗ-S durante a isquemia diminui o dano de reperfusão relacionado à isquemia, limitando o dano miocárdico em geral.

Claims

REMNDÊCAÇÕES

1. Composto para uso na prevenção e/ou redução de dano relacionado à isquemia em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que o referido composto é uma estatina, em que o referido composto deve ser administrado ao referido indivíduo por administração intravenosa após o início da isquemia, porém antes da reperfusão, em que o composto deve ser administrado tão logo quanto possível após o início da isquemia.
2. Composto para uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado peto fato de que dano relacionado à isquemia é o dano causado por isquemia durante o período isquêmico após o início da isquemia, porém antes da reperfusão.
3. Composto para uso de acordo com areivindicação 1 ou 2, caracterizado peto fato de que o composto deve ser administrado em uma dose única.
4. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o composto deve ser administrado não mais do que 60 minutos após o início da isquemia, preferivelmente não mais do que 45 minutos após o início da isquemia, mais preferivelmente não mais do que 30 minutos após o início da isquemia, mais preferivelmente não mais do que 20 minutos após o início da isquemia, mais preferivelmente não mais do que 15 minutos após o início da isquemia.
5. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o composto deve ser administrado pelo menos 15 minutos antes da reperfusão, preferivelmente pelo menos 20 minutos antes da reperfusão, mais preferivelmente pelo menos 30 minutos antes da reperfusão, mais preferivelmente pelo menos 45 minutos antes da reperfusão,
6. Composto para uso de acordo com qualquer uma das

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2/4 reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado dos compostos listados na Tabela 1 em que, preferivelmente, o composto é selecionado do grupo que consiste ematorvastatina, a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina, sinvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina e rosuvastatina, em que, mais preferivelmente, o composto é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hídroxiácido de sinvastatina de fórmula II, em que, mais preferivelmente, o composto é atorvastatina (fórmula I) ou a forma de β-hidroxiácido de sinvastatina de fórmula III:
7. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o composto deve ser administrado em uma dosagem na faixa de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal, preferivelmente de 0,2 a 0,8 mg/kg de peso corporal.
8. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a isquemia é produzida em um tecido ou órgão selecionado do grupo que consiste em

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3/4 coração, cérebro, rim, intestino, pâncreas, fígado, pulmão, músculo esquelético e combinações dos mesmos, em que, preferivelmente, a isquemia é produzida no coração.
9. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que dano relacionado à isquemia é devido a uma isquemia causada por aterosclerose, trombose, tromboembolismo, embolismo lipídico, sangramento, stent, cirurgia, angioplastia, cirurgia de bypass, transplante de órgãos, cardiomiopatia induzida por estresse (síndrome de Takotsubo), vasoconstrição, infarto do miocárdio elevado por ST, infarto do miocárdio não elevado por TS, angina instável, ou uma combinação de dois ou mais destes, em que, preferivelmente, a isquemia está relacionada ao infarto do miocárdio elevado por ST, infarto do miocárdio não elevado por TS, angina instável.
10. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o dano relacionado à isquemia consiste em pelo menos um dano selecionado do grupo que consiste em morte de células miocítárias (preferencialmente por necrose e/ou apoptose, preferencialmente por necrose), dano causado pela acidificação do pH intracelular devido à isquemia e/ou dano causado por uma resposta inflamatória devido à isquemia que é desencadeada pela isquemia e também amplificada durante a reperfusão .
11. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o dano relacionado à isquemia compreende ou consiste em dano às miofibrilas causado por proteases intracelulares que causam hipercontração e/ou necrose da banda de contratura.
12. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia compreende ou consiste

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4/4 em uma redução do tamanho do infarto causado por ischemia, preferivelmente, uma redução do dano miocárdico, e/ou em que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia induz a uma redução de dano tecidual devido à morte celular desencadeada por isquemia/reperfusão, preferencialmente devido à morte celular desencadeada por isquemia, e/ou em que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia compreende ou consiste em uma prevenção ou redução da resposta inflamatória no tecido/órgão isquêmico e/ou em que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia compreende ou consiste na redução da resposta inflamatória nas células sanguíneas, preferencialmente nos leucócitos, desencadeada por isquemia e/ou reperfusão, preferencialmente desencadeada por isquemia.
13. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que a prevenção/redução de dano relacionado à isquemia compreende ou consiste na redução do tamanho da cicatriz no tecido pós-isquêmico, preferencialmente no tecido cardíaco pós-isquêmico.
14. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um humano.
15. Composto para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o indivíduo sofre de dislipidemia, em que, preferivelmente, a referida dislipidemia é hipercolesterolemia.