BR112019017367A2 - detecção precoce de ativação de célula glial em doenças neurodegenerativas ou neuroinflamatórias - Google Patents

detecção precoce de ativação de célula glial em doenças neurodegenerativas ou neuroinflamatórias Download PDF

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Abstract

a divulgação fornece um método para determinar a eficácia do tratamento com um antagonista de sema4d, por exemplo, um anticorpo antagonista de sema4d no tratamento de uma doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos, onde o método fornece medição de captação de glicose diferencial no cérebro, por exemplo, por imagiologia de fdg-pet.

Description

“DETECÇÃO PRECOCE DE ATIVAÇÃO DE CÉLULA GLIAL EM DOENÇAS NEURODEGENERATIVAS OU NEUROINFLAMATÓRIAS”
REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS [001]Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório dos EUA Serial N2 62/461.945, depositado em 22 de fevereiro de 2017, que é incorporado aqui por referência em sua totalidade.
RELATÓRIO DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS [002]Uma listagem de sequências contendo o arquivo denominado 58008_172847_Seq List_ST25.txt que é de 5880 bytes (medido em MS-Windows®) e criada em 20 de fevereiro de 2018, compreende 10 sequências, é fornecida com este por intermédio do sistema EFS de USPTO e é incorporada aqui por referência em sua totalidade.
FUNDAMENTOS [003]Semaforina 4D (SEMA4D), também conhecida como CD100, é uma proteína de transmembrana que pertence à família genética de semaforina. SEMA4D é expressada na superfície da célula como um homodímero, mas durante a ativação celular SEMA4D pode ser liberada da superfície de célula por intermédio de divagem proteolítica para gerar sSEMA4D, uma forma solúvel da proteína, que também é biologicamente ativa. Ver Suzuki et al., Nature Rev. Immunol. 3:159 - 167 (2003); Kikutani etal., Nature Immunol. 9:17 - 23 (2008).
[004]SEMA4D é expressada em níveis altos em órgãos linfoides, incluindo o baço, timo e linfonodos e em órgãos não linfoides, tais como o cérebro, coração e rim. Em órgãos linfoides, SEMA4D é abundantemente expressada em células T latentes mas apenas fracamente expressada em células B latentes e células apresentadoras de antigeno (APCs), tais como células dendríticas (DCs). Sua expressão, entretanto, é supra-regulada nestas células a seguir da ativação por vários estímulos imunológicos. A liberação de SEMA4D solúvel de células imunes também é
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2/95 aumentada por ativação celular.
[005]SEMA4D é implicada em transtornos neurodegenerativos, doenças autoimunes, doenças desmielinizantes e câncer. No sistema nervoso central (CNS), SEMA4D é expressada em, por exemplo, células imunes infiltrantes e células precursoras de oligodendrócito e seus receptores são expressados em, por exemplo, neurônios, oligodentrócitos, astrócitos e células endoteliais (Okuno, T., et al., J. Immunol. /84:1499-1506 (2010)). SEMA4D pode servir como uma molécula de guia axonal (Swiercz et al., Neuron 35:51 - 63 (2002)) e pode mediar o desenvolvimento de sinapse GABAérgica e glutamatérgica (Paradis etal., Neuron 53:217 - 232 (2007)) entre outras atividades.
[006]SEMA4D também mostrou desempenhar um papel na migração e diferenciação de células neuronais e precursoras de oligodendrócito, inflamação e neurodegeneração do SNC. Por exemplo, camundongos deficientes de SEMA4D são resistentes ao desenvolvimento de encefalomielite autoimune experimental (EAE) (Kumanogoh A et al., Immunity 13:621 - 631 (2000)) e a obstrução de SEMA4D pode inibir a ativação microglial e neuroinflamação em EAE (Okuno, T., et al., J. Immunol. /84:1499-1506 (2010)). Similarmente, a estimulação de SEMA4D de células endoteliais pode levar à produção da citocina pró-inflamatória IL-8 (Yang, YH et al., PLoS One 6:e25826 (2011)).
[007]Doença de Huntington (HD) é uma doença neurodegenerativa fatal, herdada resultante da expansão patogênica de um trato de CAG de codificação de poliglutamina no éxon 1 do gene huntingtina (HTT) a 36 ou mais repetições (Huntington’s Disease Collaborative Research Group (HDCRG) Cell 72:971 - 983 (1993)). As 36 ou mais glutaminas (poliQ expandido) em HTT resulta na produção de uma forma alterada, chamada mHTT (HTT mutante) que aumenta a taxa de degeneração de certos tipos de neurônios. A extensão da degeneração é relacionada ao comprimento de poli Q e responde por cerca de 60 % da variação da idade no início
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3/95 e da taxa de progressão dos sintomas de HD. HD é um transtorno genético dominante autossômico, por meio do qual cada pessoa cujo precursor tem HD é nascido com uma chance de 50/50 (em risco) de herdar o único gene de huntingtina mutado (por intermédio dos cromossomos sexuais X ou Y nos quais ele é portado). Qualquer um que herda este gene, em algum ponto na vida, desenvolverá a doença. De acordo com o US National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) existem 30.000 pacientes dos EUA sofrendo de HD a qualquer momento e outros 150.000 indivíduos tendo um risco de 50 % de desenvolver a doença. HD é uma doença terminal complexa e severamente debilitante para a qual não existe cura.
[008]HD é caracterizada por déficits motores e cognitivos e distúrbio psiquiátrico com morte usualmente ocorrendo 15 a 20 anos depois do início. Embora o início da doença, que é clinicamente definido como a apresentação de déficits motores, tipicamente ocorra na meia idade, muitas características de HD podem se apresentar anos a décadas anteriores, incluindo, por exemplo, ativação imune (Bjorkqvist M et a!., J. Exp. Med 205:1869 - 1877 (2008)), atrofia estriada e perda da substância branca cerebral (Tabrizi SJ et al., Lancet Neurol. 8:791 - 801 (2009)). Adicionalmente, a rotatividade severamente reduzida de células da linhagem neuronal e de oligodentrócito dentro do estriado com HD humana pode ocorrer (Ernst A et al., Cell 156:1072 - 1083 (2014)). A desregulação transcricional pode ser uma característica inicial de HD; por exemplo, a expressão de SEMA4D e seu principal receptor do SNC, Plexina-B1, pode ser elevada no estriado e córtex com HD, mas não cerebelo (Hodges etal., Hum. Mol. Genet. /5:965 - 977 (2006)).
[009]A inibição da sinalização de SEMA4D através do tratamento com antiSEMA4D representa um novo método de terapia para HD. Em aspectos particulares, o trabalho com o modelo de camundongo transgênico YAC128 de HD demonstrou que o tratamento com um anticorpo anti-SEMA4D melhorou certos efeitos neuropatológicos, incluindo atrofia estriada, atrofia cortical e atrofia do corpo caloso e
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4/95 degeneração testicular prevenida. Também, um subconjunto de sintomas comportamentais foi melhorado em camundongos YAC128 tratados com um anticorpo anti-SEMA4D, incluindo comportamento semelhante à ansiedade reduzido e resgate de déficits cognitivos. Ver Southwell AL, etal. Neurobiol. Dis. 76:46 - 56 (2015) e U.S. Patente N2 9.249.227, concedida em 2 de fev. de 2016. Dados os longos períodos de tempo envolvidos no desenvolvimento de sintomas de HD mensuráveis e alívio destes sintomas, permanece uma necessidade de um método de detecção reproduzível, precoce de se uma terapia dada, em particular, tratamento com anti-SEMA4D será eficaz em indivíduos geneticamente predispostos a desenvolver HD.
SUMÁRIO [010]Esta divulgação fornece um método para determinar se um antagonista de anticorpo de semaforina 4D (SEMA4D) ou fragmento de ligação a antígeno deste pode ser eficaz em tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios.
[011]Em um aspecto o método inclui administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; medir o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência de captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da administração do antagonista de SEMA4D; e continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
[012]Em um outro aspecto o método inclui medir o nível de valor de referência de captação de glicose no cérebro de um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de
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5/95 desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ao sujeito; medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste; e continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
[013]Em um outro aspecto o método inclui administrar uma dose de partida de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; medir o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência de captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da administração do antagonista de SEMA4D; e ajustar a dose do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado, o ajuste determinado no nível de aumento ou descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada. De acordo com este aspecto o método pode incluir ainda aumentar a dose de anticorpo antagonista de SEMA4D em relação àquele testado na etapa (b) e medir novamente a mudança no nível de captação de glicose em relação a um novo valor de referência em um paciente previamente não tratado diferente ou no mesmo paciente a seguir da retirada do tratamento no mesmo paciente por um período de tempo determinado para permitir o acúmulo de um déficit histórico nesta doença,
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6/95 transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios e ajustar ainda a dose do anticorpo antagonista de SEMA4D se um outro aumento for detectado.
[014]Em um outro aspecto o método inclui medir o nível de valor de referência de captação de glicose no cérebro de um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; administrar uma dose de partida de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno deste ao sujeito; medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste; e ajustar a dose do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado, o ajuste determinado no nível de aumento ou descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada. De acordo com este aspecto o método pode incluir ainda aumentar a dose de anticorpo antagonista de SEMA4D em relação àquele testado na etapa (c) e medir novamente a mudança no nível de captação de glicose em relação a um novo valor de referência em um paciente previamente não tratado diferente ou no mesmo paciente a seguir da retirada do tratamento no mesmo paciente por um período de tempo determinado para permitir o acúmulo de um déficit histórico nesta doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios e ajustar ainda a dose do anticorpo antagonista de SEMA4D se um outro aumento for detectado.
[015]Em um outro aspecto o método inclui administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; medir o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência de captação de glicose
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7/95 no cérebro do sujeito medido antes da administração do antagonista de SEMA4D; e continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
[016]Em um outro aspecto o método inclui medir o nível de valor de referência de captação de glicose no cérebro de um sujeito tendo, determinado a ter ou suspeito de ter uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ao sujeito; medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste; e continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
[017]Em um outro aspecto o método inclui administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; ordenar a medição do nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência de captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da administração do antagonista de SEMA4D; e continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação
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8/95 de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
[018]Em um outro aspecto o método inclui ordenar a medição de um nível de valor de referência de captação de glicose no cérebro de um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ao sujeito; ordenar a nova medição do nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste; e continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
[019]Em um outro aspecto o método inclui medir o nível de valor de referência de captação de glicose no cérebro de um sujeito apresentado como tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; e medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração ou um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ao sujeito por um provedor de saúde; e instruir o provedor de saúde a continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou instruir o provedor de saúde a descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
[020]Em certos aspectos, o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste para o uso no método fornecido inibe a interação de SEMA4D com seu receptor,
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9/95 por exemplo, Plexina-B1, Plexina-B2 ou CD72. Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste inibe a transdução de sinal de PlexinaB1 mediada por SEMA4D.
[021 ]Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste para o uso no método fornecido competitivamente inibe um anticorpo de referência que inclui uma região variável de cadeia pesada (VH) incluindo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e uma região variável de cadeia leve (VL) incluindo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5 de ligar-se a SEMA4D. Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste para o uso no método fornecido se liga ao mesmo epítopo de SEMA4D como um anticorpo de referência que inclui uma VH incluindo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e uma VL incluindo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5.
[022]Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D para o uso no método fornecido tem uma VH e uma VL, onde a VH inclui três regiões determinantes de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2 e HCDR3, onde a VL tem três CDRs LCDR1, LCDR2 e LCDR3 e onde as CDRs incluem as sequências de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, respectivamente exceto para pelo menos uma ou duas substituições de aminoácido conservativas únicas em uma ou mais das CDRs. Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D para o uso no método fornecido tem uma VH e uma VL, onde a VH inclui três regiões determinantes de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2 e HCDR3, onde a VL inclui três CDRs LCDR1, LCDR2 e LCDR3 e onde as CDRs incluem as sequências de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, respectivamente. Em certos aspectos a VH tem uma sequência de aminoácido pelo menos 90 % idêntica à SEQ ID NO: 1 e a VL tem uma sequência de aminoácido pelo menos 90 % idêntica à SEQ ID NO: 5. Em certos aspectos a VH inclui a sequência de aminoácido da SEQ ID
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NO: 1 e a VL inclui a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5.
[023]Em certos aspectos do método fornecido, uma primeira dose do anticorpo antagonista de SEMA4D é administrada e depois o anticorpo antagonista de SEMA4D é administrado pelo menos uma vez a cada semana, pelo menos uma vez a cada duas semanas, pelo menos uma vez a cada três semanas, pelo menos uma vez por mês ou pelo menos uma vez a cada dois meses daí em diante.
[024]Em certos aspectos do método fornecido, a medição do valor de referência da captação de glicose é medida exatamente antes da primeira dose do anticorpo antagonista de SEMA4D. Em certos aspectos do método fornecido, a mudança na captação de glicose em relação ao valor de referência é medida pelo menos uma semana depois da primeira dose, pelo menos duas semanas depois da primeira dose, pelo menos um mês depois da primeira dose, pelo menos dois meses depois da primeira dose, pelo menos três meses depois da primeira dose, pelo menos quatro meses depois da primeira dose, pelo menos cinco meses depois da primeira dose, pelo menos seis meses depois da primeira dose ou qualquer combinação destes.
[025]Em certos aspectos do método fornecido, a captação de glicose no cérebro do sujeito é medida por imagiologia de Tomografia de Emissão Positrônica com 18F-Fluorodesoxiglicose (FDG-PET).
[026]Em certos aspectos do método fornecido, o sujeito é um ser humano. Em certos aspectos do método fornecido, a doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios são doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, síndrome de Down, ataxia, esclerose lateral amiotrófica (ALS), esclerose múltipla, (MS), epilepsia, meningite, edema cerebral, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, demência frontotemporal (FTD), dano cognitivo relacionado a HIV, lúpus do SNC, perda cognitiva leve ou uma combinação destes.
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11/95 [027]Em certos aspectos do método fornecido, a doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios são doença de Huntington (HD). Em certos aspectos o sujeito está em risco de desenvolver HD devido ao histórico familiar de HD ou teste genético, por exemplo, onde o teste genético revela 36 ou mais repetições de CAG no gene HTT do sujeito. Em certos aspectos o sujeito é suspeito de ter HD devido à disfunção motora suave, perda cognitiva leve ou características neuropsiquiátricas suaves. Em certos aspectos o sujeito é diagnosticado como tendo HD devido à atrofia cerebral, uma classificação de Escala de Classificação de Doença de Huntington Uniforme elevada (UHDRS), uma classificação de Batería de Avaliação Cognitiva de Doença de Huntington (HD-CAB) aumentada, uma classificação de Avaliação Motora Quantitativa de Doença de Huntington aumentada ou uma combinação destes. Em certos aspectos o sujeito está no estágio pré-sintomático, pródromo inicial, pródromo tardio, manifesto inicial, manifesto moderado ou manifesto avançado de HD.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS/FIGURAS [028]A FIGURA 1 é uma representação esquemática do plano de tratamento para o Coorte A do estudo clínico de SINAL.
[029]A FIGURA 2 é uma representação esquemática e linha do tempo mostrando os vários “grupos” de pacientes a serem comparados no Coorte A do estudo clínico de SINAL: VV(7-0) é o grupo tratado com VX15 durante a primeira parte cega de seis meses do estudo; PV(7-0) é o grupo tratado com placebo durante a primeira parte cega de seis meses do estudo; VV(12-7) é o grupo tratado com VX15 desde o começo do estudo, avaliado durante o período iniciando com o mês 7 ao mês 11; PV(12-7) é o grupo que recebeu placebo durante os primeiros 6 meses do estudo e depois ultrapassou o começo do mês 7 para receber VX15, avaliado durante o período iniciando com o mês 7 ao mês 11; VV(12-0) é o grupo tratado com VX15 durante o estudo inteiro, avaliado do dia 0 ao mês 11; e PV(12-0) é o grupo que recebeu placebo durante os primeiros 6 meses do estudo e depois ultrapassou o
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12/95 começo do mês 7 para receber VX15, avaliado durante o período iniciando com o dia 0 ao mês 11.
[030]A FIGURA 3A-B Volume MRI: VV(7-0) - PV(7-0): A FIGURA 3A mostra a diferença entre o grupo tratado com VX15 depois de 6 meses (VV(7-0), n=17) e o grupo tratado com placebo depois de 6 meses (PV(7-0), n=19) em mudança média de mínimos quadrados (LS) em volume MRI expressado em mm3 para cada região cerebral de interesse (ROI) durante 6 meses do tratamento com medições separadas para hemisfério esquerdo, hemisfério direito e a média de hemisfério esquerdo e direito para esta região cerebral. As barras que suportam cada ponto são o intervalo de confiança de 95 %. A FIGURA 3B mostra a mudança em volume MRI para os mesmos grupos e regiões cerebrais de interesse como a FIG. 3A, expressada como uma % de valor de referência no início do tratamento para cada grupo.
[031 ]A FIGURA 4A-B, Volume MRI: PV(12-7) - PV(7-0): A FIGURA 4A mostra a diferença entre o grupo tratado com placebo durante os primeiros 6 meses e depois tratado com VX15 por meses 7 a 11, avaliada durante o período iniciando com o mês 7 ao mês 11 (PV(12-7), n=19) e o mesmo grupo quando tratado com placebo durante os primeiros 6 meses, avaliada do dia zero ao final do mês 6 (PV(7-0), n=19), em mudança média de mínimos quadrados (LS) em volume MRI expressado em mm3 para cada região cerebral de interesse (ROI) durante 6 meses do tratamento com medições separadas para o hemisfério esquerdo, hemisfério direito e a média de hemisfério esquerdo e direito. As barras que suportam cada ponto são o intervalo de confiança de 95 %. A FIGURA 4B mostra a mudança em volume MRI para os mesmos grupos e regiões cerebrais de interesse como a FIG. 4A, expressada como uma % de valor de referência no início da avaliação para cada grupo.
[032]FIGURA 5A-B, Volume MRI: VV(12-7) - PV(7-0): A FIGURA 5A mostra a diferença entre o grupo tratado com VX15, avaliada durante o período iniciando com o mês 7 ao mês 11 (VV(12-7), n=17) e grupo tratado com placebo depois de 6 meses,
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13/95 avaliado do dia zero ao final do mês 6 (PV(7-0), n=19), em mudança média de mínimos quadrados (LS) em volume MRI expressado em mm3 para cada região cerebral de interesse (ROI). As barras que suportam cada ponto são o intervalo de confiança de 95 %. A FIGURA 5B mostra a mudança em volume MRI para os mesmos grupos e regiões cerebrais de interesse como a FIG. 5A, expressada como uma % do valor de referência no início da avaliação para cada grupo.
[033]FIGURA 6A-B, Volume MRI: VV(12-0) - PV(12-0): A FIGURA 6A mostra a diferença entre o grupo tratado com VX15, avaliada durante o período iniciando com o dia 0 ao mês 11 (VV(12-0), n=17) e grupo tratado com placebo/cruzamento, avaliada durante o período iniciando com o dia 0 ao mês 11 (PV(12-0), n=19), em mudança média de mínimos quadrados (LS) em volume MRI expressado em mm3 para cada região cerebral de interesse (ROI) para os 11 meses totais do tratamento. As barras que suportam cada ponto são o intervalo de confiança de 95 %. A FIGURA 6B mostra a mudança em volume MRI para os mesmos grupos e regiões cerebrais de interesse como a FIG. 6A, expressada como uma % do valor de referência no início do tratamento para cada grupo.
[034]A FIGURA 7 é uma representação esquemática da ligação entre captação e metabolismo de glutamato e transporte de glicose e glicólise em astrócitos. O transporte de glutamina aos neurônios para a síntese de glutamato completa o ciclo.
[035]FIGURA 8A-B, mudança de sinal de FDG-PET entre VV(7-0) - PV(7-0): A FIGURA 8A mostra a diferença entre o grupo tratado com VX15 depois de 6 meses (VV(7-0), n=11) e o grupo tratado com placebo depois de 6 meses (PV(7-0), n=8) em mudança média de mínimos quadrados (LS) em sinal de FDG-PET expressado em SUV (Valores de Captação Padrão) para cada região cerebral de interesse (ROI) durante 6 meses de tratamento. ROI foram definidas por co-registro de MRI para este sujeito e o sinal de FDG-PET foi calibrado em relação a uma região de referência (haste do cérebro). Para ROI cortical, medições separadas foram feitas para o
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14/95 hemisfério esquerdo, hemisfério direito e a média de hemisfério esquerdo e direito. As barras que suportam cada ponto são o intervalo de confiança de 95 %. A FIGURA 8B mostra a mudança no sinal de FDG-PET para os mesmos grupos e regiões cerebrais de interesse como a FIG. 8A, expressada como uma % de valor de referência no início do tratamento para cada grupo.
[036]FIGURA 9A-B, mudança de sinal de FDG-PET entre PV(12-7) - PV(7-0): A FIGURA 9A mostra a diferença entre o grupo tratado com placebo durante os primeiros 6 meses e depois tratado com VX15 durante os meses 7 a 11, avaliada durante o período iniciando com o mês 7 ao mês 11 (PV(12-7), n=8) e o mesmo grupo quando tratado com placebo durante os primeiros 6 meses, avaliada do dia zero ao final do mês 6 (PV(7-0), n=8), em mudança média de mínimos quadrados (LS) em sinal de FDG-PET para cada região cerebral de interesse (ROI). As barras que suportam cada ponto são o intervalo de confiança de 95 %. A FIGURA 9B mostra a mudança em sinal de FDG-PET para os mesmos grupos e regiões cerebrais de interesse como a FIG. 9A, expressada como uma % do valor de referência no início da avaliação para cada grupo.
[037]FIGURA 10A-B, mudança de sinal de FDG-PET entre VV(12-7) - PV(70): A FIGURA 10A mostra a diferença entre o grupo tratado com VX15, avaliada durante o período iniciando com o mês 7 ao mês 11 (VV(12-7), n=11) e o grupo tratado com placebo depois de 6 meses, avaliada do dia zero ao final do mês 6 (PV(7-0), n=8), em mudança média de mínimos quadrados (LS) em sinal de FDG-PET para cada região cerebral de interesse (ROI). As barras que suportam cada ponto são o intervalo de confiança de 95 %. A FIGURA 10B mostra a mudança em sinal de FDG-PET para os mesmos grupos e regiões cerebrais de interesse como a FIG. 10A, expressada como uma % do valor de referência no início da avaliação para cada grupo.
[038]FIGURA 11A-B, mudança de sinal de FDG-PET entre VV(12-0) - PV(120): A FIGURA 12A mostra a diferença entre o grupo tratado com VX15, avaliada
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15/95 durante o período iniciando com o dia 0 ao mês 11 (VV(12-0), n=11) e o grupo tratado com placebo/cruzamento, avaliada durante o período iniciando com o dia 0 ao mês 11 (PV(12-0), n=8), em mudança média de mínimos quadrados (LS) em sinal de FDGPET para cada região cerebral de interesse (ROI) durante os 11 meses totais do tratamento. As barras que suportam cada ponto são o intervalo de confiança de 95 %. A FIGURA 12B mostra a mudança em sinal de FDG-PET para os mesmos grupos e regiões cerebrais de interesse como FIG. 12A, expressada como uma % do valor de referência no início do tratamento para cada grupo.
[039]A FIGURA 12 mostra uma representação esquemática dos diferentes efeitos de tratamento com VX15 observados por MRI e por FDG-PET.
DESCRIÇÃO DETALHADA
Definições [040]Deve ser observado que o termo “uma” entidade refere-se a uma ou mais desta entidade; por exemplo, “uma molécula de ligação”, é entendida como representando uma ou mais moléculas de ligação. Como tal, os termos “uma”, “uma ou mais”, e “pelo menos uma” podem ser usados permutavelmente aqui.
[041]Além disso, “e/ou” onde usado aqui deve ser tomado como divulgação específica de cada uma das suas características ou componentes específicos com ou sem o outro. Assim, o termo “e/ou” como usado em uma frase tal como “A e/ou B” aqui é intencionado a incluir “A e B”, “A ou B”, “A” (sozinho) e “B” (sozinho). Do mesmo modo, o termo “e/ou” como usado em uma frase tal como “A, B e/ou C” é intencionado a abranger cada uma das modalidades seguintes: A, B e C; A, B ou C; A ou C; A ou B; B ou C; A e C; A e B; B e C; A (sozinho); B (sozinho); e C (sozinho).
[042]A menos que definido de outro modo, termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significando como comumente entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica à qual esta divulgação é relacionada. Por exemplo, o Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2a ed.,
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2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3a ed., 1999, Academic Press; e o Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press, fornecem uma pessoa de habilidade com um dicionário geral de muitos dos termos usados nesta divulgação.
[043]Unidades, prefixos e símbolos são denotados em sua forma aceita pelo Système International de Unites (SI). Faixas numéricas são inclusivas dos números que definem a faixa. A menos que de outro modo indicado, sequências de aminoácido são escritas da esquerda para a direita na orientação amino para carbóxi. Os cabeçalhos fornecidos aqui não são limitações dos vários aspectos ou aspectos da divulgação, que podem ser tidos por referência ao relatório descritivo como um todo. Consequentemente, os termos definidos imediatamente abaixo são mais completamente definidos por referência ao relatório descritivo em sua totalidade.
[044]Sempre que as modalidades são descritas com a linguagem “compreendendo”, modalidades de outro modo análogas descritas em termos de “consistindo em” e/ou “consistindo essencialmente em” também são fornecidas.
[045]Aminoácidos são referidos aqui por seus símbolos de três letras ou pelos símbolos de uma letra comumente conhecidos recomendados pela IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission. Nucleotídeos, do mesmo modo, são referidos por seus códigos de letra única comumente aceitos.
[046]Como usado aqui, o termo “polipeptídeo” é intencionado a abranger um “polipeptídeo” no singular assim como “polipeptídeos” no plural, e refere-se a uma molécula composta de monômeros (aminoácidos) linearmente ligadas por ligações amida (também conhecidas como ligações peptídicas). O termo “polipeptídeo” referese a qualquer cadeia ou cadeias de dois ou mais aminoácidos e não refere-se a um comprimento específico do produto. Assim, peptídeos, dipeptídeos, tripeptídeos, oligopeptídeos, “proteína”, “cadeia de aminoácido” ou qualquer outro termo usado para referir-se a uma cadeia ou cadeias de dois ou mais aminoácidos são incluídos
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17/95 dentro da definição de “polipeptídeo”, e o termo “polipeptídeo” pode ser usado ao invés de ou permutavelmente com qualquer um destes termos. O termo “polipeptídeo” também é intencionado a referir-se aos produtos de modificações pós-expressão do polipeptídeo, incluindo, sem limitação glicosilação, acetilação, fosforilação, amidação e derivação por grupos de proteção/bloqueio conhecidos, divagem proteolítica ou modificação por aminoácidos que não ocorrem naturalmente. Um polipeptídeo pode ser derivado de uma fonte biológica ou produzido por tecnologia recombinante, mas não é necessariamente traduzido de uma sequência de ácido nucléico designada. Ele pode ser gerado em qualquer maneira, incluindo por síntese química.
[047]Um polipeptídeo como divulgado aqui pode ser de um tamanho de cerca de 3 ou mais, 5 ou mais, 10 ou mais, 20 ou mais, 25 ou mais, 50 ou mais, 75 ou mais, 100 ou mais, 200 ou mais, 500 ou mais, 1,000 ou mais ou 2,000 ou mais aminoácidos. Polipeptídeos podem ter uma estrutura tridimensional definida, embora eles não necessariamente têm tal estrutura. Polipeptídeos com uma estrutura tridimensional definida são referidos como enovelados e polipeptídeos que não possuem uma estrutura tridimensional definida, mas, ao invés, podem adotar um grande número de conformações diferentes e são referidos como não enovelados. Como usado aqui, o termo glicoproteína refere-se a uma proteína ligada a pelo menos uma porção carboidrato que é ligada à proteína por intermédio de uma cadeia lateral contendo oxigênio ou uma cadeia lateral contendo nitrogênio de um aminoácido, por exemplo, uma serina ou uma asparagina.
[048]Por um polipeptídeo “isolado” ou um fragmento, variante ou derivado deste é intencionado um polipeptídeo que não está em seu ambiente natural. Nenhum nível particular de purificação é necessário. Por exemplo, um polipeptídeo isolado pode ser removido de seu ambiente nativo ou natural. Polipeptídeos e proteínas recombinantemente produzidos expressados em células hospedeiras são considerados isolados como divulgado aqui, visto que são polipeptídeos nativos ou
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18/95 recombinantes que foram separados, fracionados ou parcial ou substancialmente purificados por qualquer técnica adequada.
[049]Como usado aqui, o termo “um polipeptídeo que não ocorre naturalmente” ou quaisquer variantes gramaticais destes, é uma definição condicional que explicitamente exclui, mas apenas exclui, aquelas formas do polipeptídeo que são ou poderiam ser, determinadas ou interpretadas por um especialista ou um corpo administrativo ou judicial, como sendo “de ocorrência natural”.
[050]0utros polipeptídeos divulgados aqui são fragmentos, derivados, análogos ou variantes dos polipeptídeos precedentes e qualquer combinação destes. Os termos “fragmento”, “variante”, “derivado” e “análogo” como divulgado aqui incluem quaisquer polipeptídeos que mantêm pelo menos algumas das propriedades do anticorpo ou polipeptídeo nativo correspondente, por exemplo, ligando-se especificamente a um antigeno. Fragmentos de polipeptídeos incluem, por exemplo, fragmentos proteolíticos, assim como fragmentos de supressão, além de fragmentos de anticorpo específicos debatidos em qualquer lugar aqui. Variantes de, por exemplo, um polipeptídeo incluem fragmentos como descrito acima e também polipeptídeos com sequências de aminoácido alteradas devido a substituições, supressões ou inserções de aminoácido. Em certos aspectos, variantes podem ser de ocorrência não natural. Variantes que não ocorrem naturalmente podem ser produzidas usando técnicas de mutagênese conhecidas na técnica. Polipeptídeos variantes podem compreender substituições conservatives ou não conservatives, supressões ou adições de aminoácido. Derivados são polipeptídeos que foram alterados de modo a exibir características adicionais não encontradas no polipeptídeo original. Exemplos incluem proteínas de fusão. Polipeptídeos variantes também podem ser referidos aqui como “análogos de polipeptídeo”. Como usado aqui um “derivado” de um polipeptídeo também pode referir-se a um polipeptídeo objeto tendo um ou mais aminoácidos quimicamente derivados por reação de um grupo lateral funcional. Também incluídos
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19/95 como “derivados” são aqueles peptídeos que contêm um ou mais derivados dos vinte aminoácidos padrão. Por exemplo, 4-hidroxiprolina pode ser substituída no lugar de prolina; 5-hidroxilisina pode ser substituída no lugar de lisina; 3-metilhistidina pode ser substituída no lugar de histidina; homosserina pode ser substituída no lugar de serina; e ornitina pode ser substituída no lugar de lisina.
[051]Uma “substituição de aminoácido conservative” é uma em que um aminoácido é substituído com um outro aminoácido tendo uma cadeia lateral similar. Famílias de aminoácidos tendo cadeias laterais similares foram definidas na técnica, incluindo cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais não polares (por exemplo, glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais betaramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Por exemplo, a substituição de uma fenilalanina no lugar de uma tirosina é uma substituição conservativa. Em certas modalidades, substituições conservatives nas sequências dos polipeptídeos e anticorpos da presente divulgação não ab-rogam a ligação do polipeptídeo ou anticorpo contendo a sequência de aminoácido, ao antigeno ao qual a molécula de ligação se liga. Métodos de identificar substituições conservatives de nucleotídeo e aminoácido que não eliminam a ligação a antigeno são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Brummell et al., Biochem. 32: 1180 - 1 187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12(10):879 - 884 (1999); e Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 94:,412- 417 (1997)).
[052]O termo “polinucleotídeo” é intencionado a abranger um ácido nucleico no singular assim como ácidos nucleicos no plural e refere-se a uma molécula de ácido nucleico isolada ou construção, por exemplo, RNA mensageiro (mRNA), cDNA
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20/95 ou DNA plasmídico (pDNA). Um polinucleotídeo pode compreender uma ligação fosfodiéster convencional ou uma ligação não convencional (por exemplo, uma ligação amida, tal como encontrado em ácidos nucleicos peptídicos (PNA)). Os termos “ácido nucleico” ou “sequência de ácido nucleico” referem-se a qualquer um ou mais segmentos de ácido nucleico, por exemplo, fragmentos de DNA ou RNA, presentes em um polinucleotídeo.
[053]Por um ácido nucleico ou polinucleotídeo “isolado” é intencionada qualquer forma do ácido nucleico ou polinucleotídeo que é separada de seu ambiente nativo. Por exemplo, polinucleotídeo purificado por gel ou um polinucleotídeo recombinante que codifica um polipeptideo contido em um vetor seria considerado como sendo “isolado”. Também, um segmento de polinucleotídeo, por exemplo, um produto de PCR, que foi engendrado para ter sítios de restrição para clonagem é considerado como sendo “isolado”. Outros exemplos de um polinucleotídeo isolado incluem polinucleotídeos recombinantes mantidos em células hospedeiras heterólogas ou polinucleotídeos purificados (parcial ou substancialmente) em uma solução não nativa tal como uma solução tampão ou salina. Moléculas de RNA isoladas incluem transcritos de RNA in vivo ou in vitro de polinucleotídeos, onde o transcrito não é um que seria encontrado na natureza. Polinucleotídeos ácidos nucleicos isolados ou outros incluem tais moléculas produzidas sinteticamente. Além disso, polinucleotídeo ou um ácido nucleico pode ser ou pode incluir um elemento regulador tal como um promotor, sítio de ligação a ribossomo ou um terminador de transcrição.
[054]Como usado aqui, o termo “um polinucleotídeo que não ocorre naturalmente” ou quaisquer variantes gramaticais deste, é uma definição condicional que explicitamente exclui, mas apenas exclui, aquelas formas do ácido nucleico ou polinucleotídeo que são ou poderíam ser, determinadas ou interpretadas por um especialista ou um corpo administrativo ou judicial, como sendo “de ocorrência
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21/95 natural”.
[055]Como usado aqui, uma “região de codificação” é uma porção do ácido nucleico que consiste em códons traduzidos em aminoácidos. Embora um “códon de parada” (TAG, TGA ou TAA) não seja traduzido em um aminoácido, ele pode ser considerado como sendo parte de uma região de codificação, mas quaisquer sequências de flanqueamento, por exemplo, promotores, sítios de ligação a ribossomo, terminadores transcricionais, introns e semelhantes, não são parte de uma região de codificação. Duas ou mais regiões de codificação podem estar presentes em uma única construção de polinucleotídeo, por exemplo, em um único vetor ou em construções de polinucleotídeo separadas, por exemplo, em vetores separados (diferentes). Além disso, qualquer vetor pode conter uma única região de codificação ou pode compreender duas ou mais regiões de codificação, por exemplo, um único vetor pode codificar separadamente uma região variável de cadeia pesada de imunoglobulina e uma região variável de cadeia leve de imunoglobulina. Além disso, um vetor, polinucleotídeo ou ácido nucleico pode incluir regiões de codificação heterólogas, fundidas ou não fundidas a uma outra região de codificação. Regiões de codificação heterólogas incluem sem limitação, aquelas que codificam elementos ou motivos especializados, tais como um peptídeo de sinal secretório ou um domínio funcional heterólogo.
[056]Em certas modalidades, o polinucleotídeo ou ácido nucleico é DNA. No caso de DNA, um polinucleotídeo compreendendo um ácido nucleico que codifica um polipeptideo normalmente pode incluir um promotor e/ou outros elementos de controle de transcrição ou tradução operavelmente associados com uma ou mais regiões de codificação. Uma associação operável é quando uma região de codificação para um produto genético, por exemplo, um polipeptideo, é associada com uma ou mais sequências reguladoras em um tal modo como para colocar a expressão do produto genético sob a influência ou controle da(s) sequência(s) reguladora(s). Dois
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22/95 fragmentos de DNA (tais como uma região de codificação de polipeptideo e um promotor associada com esta) são “operavelmente associados” se a indução da função do promotor resulta na transcrição de mRNA que codifica o produto genético desejado e se a natureza da ligação entre os dois fragmentos de DNA não interfere com a capacidade das sequências reguladoras de expressão de conduzir a expressão do produto genético ou interferir com a capacidade do padrão de DNA a ser transcrito. Assim, uma região promotora seria operavelmente associada com um ácido nucleico que codifica um polipeptideo se o promotor foi capaz de efetuar a transcrição deste ácido nucleico. O promotor pode ser um promotor específico de célula que conduz a transcrição substancial do DNA em células predeterminadas. Outros elementos de controle de transcrição, além de um promotor, por exemplo realçadores, operadores, repressores e sinais de terminação de transcrição, podem ser operavelmente associados com o polinucleotídeo para conduzir a transcrição específica de célula.
[057]Uma variedade de regiões de controle de transcrição é conhecida àqueles habilitados na técnica. Estas incluem, sem limitação, regiões de controle de transcrição que funcionam em células de vertebrados, tais como, mas não limitadas a, segmentos promotores e realçadores de citomegalovírus (o promotor precoce imediato, em combinação com íntron-A), vírus símio 40 (o promotor precoce) e retrovirus (tais como vírus do sarcoma de Rous). Outras regiões de controle de transcrição incluem aquelas derivadas de genes de vertebrados tais como actina, proteína de choque térmico, hormônio de crescimento bovino e β-globina de coelho, assim como outras sequências capazes de controlar a expressão do gene em células eucarióticas. Regiões de controle de transcrição adequadas adicionais incluem promotores e realçadores específicos de tecidos assim como promotores induzíveis por linfocina (por exemplo, promotores induzíveis por interferons ou interleucinas).
[058]Similarmente, uma variedade de elementos de controle de tradução é conhecida àqueles de habilidade comum na técnica. Estes incluem, mas não são
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23/95 limitados a sítios de ligação a ribossomo, códons de iniciação e terminação de tradução e elementos derivados de picornavírus (particularmente um sítio interno de entrada do ribossomo ou IRES, também referido como uma sequência de CITE).
[059]Em outras modalidades, um polinucleotídeo pode ser RNA, por exemplo, na forma de RNA mensageiro (mRNA), RNA de transferência ou RNA ribossômico.
[060]Regiões de codificação de polinucleotídeo e ácido nucleico podem ser associadas com regiões de codificação adicionais que codificam peptídeos secretórios ou de sinal, que conduzem a secreção de um polipeptídeo codificado por um polinucleotídeo como divulgado aqui. De acordo com a hipótese de sinal, proteínas secretadas por células mamíferas têm uma sequência líder de peptídeo de sinal ou secretório que é clivada da proteína madura uma vez que a exportação da cadeia proteica crescente através do retículo endoplasmático rugoso foi iniciada. Aqueles de habilidade comum na técnica estão cientes de que polipeptídeos secretados por células de vertebrados podem ter um peptídeo de sinal fundido ao término N do polipeptídeo, que é clivado do polipeptídeo completo ou “de tamanho natural” para produzir uma forma secretada ou “madura” do polipeptídeo. Em certas modalidades, o peptídeo de sinal nativo, por exemplo, um peptídeo de sinal de cadeia pesada ou cadeia leve de imunoglobulina é usado ou um derivado funcional desta sequência que mantém a capacidade de conduzir a secreção do polipeptídeo que é operavelmente associado com a mesma. Alternativamente, um peptídeo de sinal mamífero heterólogo ou um derivado funcional deste, pode ser usado. Por exemplo, a sequência líder do tipo selvagem pode ser substituída com a sequência líder de ativador de plasminogênio tecidual (TPA) humano ou β-glucuronidase de camundongo.
[061]Divulgadas aqui são certas moléculas de ligação ou fragmentos de ligação a antigeno, variantes ou derivados destes. A menos que especificamente referindo-se a anticorpos de tamanho natural, o termo “molécula de ligação” abrange anticorpos de tamanho natural assim como subunidades de ligação a antigeno,
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24/95 fragmentos, variantes, análogos ou derivados de tais anticorpos, por exemplo, moléculas de anticorpo engendradas ou fragmentos que se ligam a antígeno em uma maneira similar a moléculas de anticorpo, mas que usam um andaime diferente.
[062]Como usado aqui, o termo “molécula de ligação” refere-se em seu sentido mais amplo a uma molécula que especificamente se liga a um receptor, por exemplo, um epítopo ou um determinante antigênico. Como descrito ainda aqui, uma molécula de ligação pode compreender um ou mais “domínios de ligação a antígeno” descritos aqui. Um exemplo não limitante de uma molécula de ligação é um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste que mantém a ligação específica de antígeno.
[063]Como usado aqui, os termos “domínio de ligação” ou “domínio de ligação a antígeno” referem-se a uma região de uma molécula de ligação que é necessária e suficiente para especificamente se ligar a um epítopo. Por exemplo, um “Fv”, por exemplo, uma cadeia pesada variável e cadeia leve variável de um anticorpo, como duas subunidades de polipeptideo separadas ou como uma cadeia única, é considerada como sendo um “domínio de ligação”. Outros domínios de ligação incluem, sem limitação, a cadeia pesada variável (VHH) de um anticorpo derivado de uma espécie de camelídeo ou seis regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de imunoglobulina expressadas em um andaime de fibronectina. Uma “molécula de ligação” como descrito aqui pode incluir um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou mais “domínios de ligação a antígeno”.
[064]Os termos “anticorpo” e “imunoglobulina” podem ser usados permutavelmente aqui. Um anticorpo (ou um fragmento, variante ou derivado deste como divulgado aqui) inclui pelo menos o domínio variável de uma cadeia pesada (para a espécie de camelídeo) ou pelo menos os domínios variáveis de uma cadeia pesada e uma cadeia leve. Estruturas de imunoglobulina básicas em sistemas vertebrados são relativamente bem entendidas. Ver, por exemplo, Harlow et al.,
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Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2aed. 1988). A menos que de outro modo estabelecido, o termo “anticorpo” abrange qualquer variação de um pequeno fragmento de ligação a antígeno de um anticorpo a um anticorpo de tamanho natural, por exemplo, um anticorpo de IgG que inclui duas cadeias pesadas completas e duas cadeias leves completas, um anticorpo de IgA que inclui quatro cadeias pesadas completas e quatro cadeias leves completas e opcionalmente inclui uma cadeia J e/ou um componente secretório ou um anticorpo de IgM que inclui dez ou doze cadeias pesadas completas e dez ou doze cadeias leves completas e opcionalmente inclui uma cadeia J.
[065]Como será debatido em mais detalhe abaixo, o termo “imunoglobulina” compreende várias classes amplas de polipeptídeos que podem ser distinguidos bioquimicamente. Aqueles habilitados na técnica avaliarão que cadeias pesadas são classificadas como gama, mi, alfa, delta ou epsilon, (γ, μ, α, δ, ε) com algumas subclasses entre elas (por exemplo, γ1-γ4 ou α1-α2)). É a natureza desta cadeia que determina a “classe” do anticorpo como IgG, IgM, IgA IgG ou IgE, respectivamente. As subclasses de imunoglobulina (isótipos) por exemplo, IgGi, lgG2, IgGa, lgG4, IgAi, lgA2, etc. são bem caracterizadas e são conhecidas como conferindo especialização funcional. Versões modificadas de cada uma destas classes e isótipos são facilmente discerníveis ao técnico habilitado devido à presente divulgação e, consequentemente, estão dentro do escopo desta divulgação.
[066]Cadeias leves são classificadas como capa ou lambda (κ, λ). Cada classe de cadeia pesada pode ser ligada com uma cadeia leve capa ou lambda. Em geral, as cadeias leves e pesadas são covalentemente ligadas entre si e as porções da “cauda” das duas cadeias pesadas são ligadas entre si por ligações dissulfeto covalentes ou ligações não covalentes quando as imunoglobulinas são geradas por hibridomas, células B ou células hospedeiras geneticamente engendradas. Na cadeia pesada, as sequências de aminoácido conduzidas de um término N nas extremidades
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26/95 bifurcadas da configuração Y ao término C no fundo de cada cadeia. A estrutura básica de certos anticorpos, por exemplo, anticorpos de IgG, inclui duas subunidades de cadeia pesada e duas subunidades de cadeia leve covalentemente conectadas por intermédio de ligações dissulfeto para formar uma estrutura “Y”, também referida aqui como uma estrutura “H2L2”.
[067]Tanto as cadeias leves quanto pesadas são divididas em regiões de homologia estrutural e funcional. Os termos “constante” e “variável” são usados funcionalmente. Sob este aspecto, será avaliado que os domínios variáveis tanto das porções de cadeia leve variável (VL) quanto pesada variável (VH) determinam reconhecimento e especificidade do antígeno. Reciprocamente, os domínios constantes da cadeia leve (CL) e da cadeia pesada (CH1, CH2 ou CH3) conferem propriedades biológicas tais como secreção, mobilidade transplacentária, ligação ao receptor Fc, ligação ao complemento e semelhantes. Por convenção a numeração dos domínios de região constante aumenta conforme eles se tornam mais distais do sítio de ligação a antígeno ou término amino do anticorpo. A porção N-terminal é uma região variável e a porção C-terminal é uma região constante; os domínios CH3 (ou CH4 no caso de IgM) e CL realmente compreendem o término carbóxi da cadeia pesada e leve, respectivamente.
[068]Como indicado acima, uma região variável (isto é, o “domínio de ligação”) permite que a molécula de ligação seletivamente reconheça e especificamente se ligue a epítopos em antígenos. Isto é, o domínio VL e o domínio VH ou subconjunto das regiões determinantes de complementaridade (CDRs), de uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo combinam para formar a região variável que define um sítio de ligação a antígeno tridimensional. Mais especificamente, o sítio de ligação a antígeno é definido por três CDRs em cada uma das cadeias VH e VL. Certos anticorpos formam estruturas maiores. Por exemplo, IgA pode formar uma molécula que inclui duas unidades de H2L2, uma cadeia J e um componente secretório, todos
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27/95 covalentemente conectados por intermédio de ligações dissulfeto e IgM podem formar uma molécula pentamérica ou hexamérica que inclui cinco ou seis unidades de H2L2 e opcionalmente uma cadeia J covalentemente conectada por intermédio de ligações dissulfeto.
[069]As seis “regiões determinantes de complementaridade” ou “CDRs” presentes em um domínio de ligação a antígeno de anticorpo são sequências curtas, não contíguas de aminoácidos que são especificamente posicionadas para formar o domínio de ligação conforme o anticorpo assume sua configuração tridimensional em um ambiente aquoso. O restante dos aminoácidos no domínio de ligação, referidos como regiões de “estrutura”, mostram menos variabilidade intermolecular. As regiões de estrutura adotam amplamente uma conformação em folha β e as CDRs formam alças que conectam e em alguns casos formam parte da estrutura em folha β. Assim, regiões de estrutura agem para formar um andaime que proporciona o posicionamento das CDRs em orientação correta por interações não covalentes, intercadeia. O domínio de ligação formado pelas CDRs posicionadas define uma superfície complementar ao epítopo no antígeno imunorreativo. Esta superfície complementar promove a ligação não covalente do anticorpo ao seu epítopo cognato. Os aminoácidos que compõem as CDRs e as regiões de estrutura, respectivamente, podem ser facilmente identificados para qualquer região variável de cadeia pesada ou leve dada por uma pessoa de habilidade comum na técnica, visto que elas foram definidas em vários modos diferentes (ver, “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, Kabat, E., et al., U.S. Department of Health and Human Services, (1983); e Chothia e Lesk, J. Mol. Biol., /96:901 - 917 (1987), que são incorporados aqui por referência em suas totalidades).
[070]No caso onde existem duas ou mais definições de um termo que é usado e/ou aceito dentro da técnica, a definição do termo como usado aqui é intencionada a incluir todos os tais significados a menos que explicitamente estabelecido ao contrário.
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Um exemplo específico é o uso do termo “região determinante de complementaridade” (“CDR”) para descrever os sítios de combinação de antigeno não contíguos encontrados dentro da região variável de polipeptídeos tanto de cadeia pesada quanto leve. Estas regiões particulares foram descritas, por exemplo, por Kabat et al., U.S. Dept, of Health and Human Services, “Sequences of Proteins of Immunological Interest” (1983) e por Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901 - 917 (1987), que são incorporados aqui por referência. As definições de Kabat e Chothia incluem sobreposição ou subconjuntos de aminoácidos quando comparadas entre si. Não obstante, a aplicação de qualquer definição (ou outras definições conhecidas àqueles de habilidade comum na técnica) para referir-se a uma CDR de um anticorpo ou variante deste é intencionada a estar dentro do escopo do termo como definido e usado aqui, a menos que de outro modo indicado. Os aminoácidos apropriados que abrangem as CDRs como definido por cada uma das referências citadas acima são apresentados abaixo na Tabela 1 como uma comparação. Os números exatos de aminoácido que abrangem uma CDR particular variarão dependendo da sequência e tamanho da CDR. Aqueles habilitados na técnica podem determinar rotineiramente que aminoácidos compreendem uma CDR particular dada a sequência de aminoácido de região variável do anticorpo.
Tabela 1 Definições de CDR1__________________
Kabat Chothia
VH CDR1 31 -35 26 - 32
VH CDR2 50-65 52 - 58
VH CDR3 95 - 102 95 - 102
VL CDR1 24 - 34 26 - 32
VL CDR2 50-56 50 - 52
VL CDR3 89-97 91 - 96
1 Numeração de todas as definições de CDR na Tabela 1 está de acordo com
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29/95 as convenções de numeração apresentadas por Kabat etal. (ver abaixo).
[071]Kabat et al. também definiram um sistema de numeração para sequências de domínio variável que é aplicável a qualquer anticorpo. Uma pessoa de habilidade comum na técnica pode designar inequivocamente este sistema de “numeração de Kabat” a qualquer sequência de domínio variável, sem confiança em quaisquer dados experimentais além da sequência propriamente dita. Como usado aqui, “numeração de Kabat” refere-se ao sistema de numeração apresentado por Kabat et al., U.S. Dept, of Health and Human Services, “Sequence of Proteins of Immunological Interest” (1983). A menos que o uso do sistema de numeração de Kabat seja explicitamente observado, entretanto, a numeração consecutiva é usada para todas as sequências de aminoácido nesta divulgação.
[072]Moléculas de ligação, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes incluem, mas não são limitados a, anticorpos policlonais, monoclonais, humanos, humanizados ou quiméricos, anticorpos de cadeia única, fragmentos de ligação a epítopo, por exemplo, Fab, Fab’ e F(ab’)2, Fd, Fvs, Fvs de cadeia única (scFv), anticorpos de cadeia única, Fvs ligados a dissulfeto (sdFv), fragmentos compreendendo um domínio VL ou VH, fragmentos produzidos por uma biblioteca de expressão de Fab. Moléculas de scFv são conhecidas na técnica e são descritas, por exemplo, na Patente dos EUA 5.892.019. Moléculas de imunoglobulina ou anticorpo abrangidas por esta divulgação podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), classe (por exemplo, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, lgA1 e lgA2) ou subclasse de molécula de imunoglobulina.
[073]Por “especificamente se liga a”, isto geralmente significa que uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste se liga a um epítopo por intermédio de seu domínio de ligação a antígeno e que a ligação impõe alguma complementaridade entre o domínio de ligação a antígeno e o epítopo. De acordo com esta definição, uma molécula de ligação é dito
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30/95 “especificamente se ligar” a um epítopo quando ele se liga a este epítopo, por intermédio de seu domínio de ligação a antigeno mais facilmente do que seria se ligar a um epítopo não relacionado, aleatório. O termo “especificidade” é usado aqui para qualificar a afinidade relativa pela qual uma certa molécula de ligação se liga a um certo epítopo. Por exemplo, molécula de ligação “A” pode ser julgada como tendo uma especificidade mais alta para um epítopo dado do que molécula de ligação “B” ou molécula de ligação “A” pode ser dita se ligar ao epítopo “C” com uma especificidade mais alta do que ela tem para o epítopo “D” relacionado.
[074]Uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste divulgada aqui pode ser dito se ligar a um antigeno alvo com uma taxa de dissociação (k(off)) de menos do que ou igual a 5 X 10’2 s’1, 10’2 s’ 1, 5 X 10’3 s'1, 10’3 s'1, 5 X 10’4 s’1, 10’4 s’1, 5 X 10’5 s’1 ou 10’5 s’1 5 X 10’6 s’1, 10’6 s’1, 5 X IO’7 s’1 ou IO’7 s’1.
[075]Uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado divulgada aqui pode ser dito se ligar a um antigeno alvo com uma taxa de associação (k(on)) maior do que ou igual a 103 M-1 s’ 1,5X103M'1 s’1, 104 M’1 s'1,5X104 M’1 s’1, 105 M’1 s-1,5X105 M’1 s’1, 106 M’1 s’1 ou 5X 106 M’1 s'1 ou 107 M’1 s’1.
[076]Uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste é dita como inibindo competitivamente a ligação de um anticorpo de referência ou fragmento de ligação a antigeno a um epítopo dado se ela preferencialmente se ligar a este epítopo à medida que ele bloqueia, a algum grau, a ligação do anticorpo de referência ou fragmento de ligação a antigeno ao epítopo. A inibição competitiva pode ser determinada por qualquer método conhecido na técnica, por exemplo, ensaios ELISA de competição. Uma molécula de ligação pode ser dita como inibindo competitivamente a ligação do anticorpo de referência ou fragmento de ligação a antigeno a um epítopo dado em pelo menos 90 %, pelo menos 80 %, pelo
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31/95 menos 70 %, pelo menos 60 % ou pelo menos 50 %.
[077]Como usado aqui, o termo “afinidade” refere-se a uma medida da intensidade da ligação de um epítopo individual com um ou mais domínios de ligação, por exemplo, de uma molécula de imunoglobulina. Ver, por exemplo, Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2a ed. 1988) nas páginas 27 a 28. Como usado aqui, o termo “avidez” refere-se à estabilidade global do complexo entre uma população de se ligar a domínios e um antigeno. Ver, por exemplo, Harlow nas páginas 29 a 34. Avidez é relacionada tanto à afinidade de domínios de ligação individuais na população com epítopos específicos e também às valências das imunoglobulinas e do antigeno. Por exemplo, a interação entre um anticorpo monoclonal bivalente e um antigeno com uma estrutura de epítopo altamente de repetição, tal como um polímero, seria uma de avidez alta. Uma interação entre um anticorpo monoclonal bivalente com um receptor presente em uma densidade alta em uma superfície de célula também seria de avidez alta.
[078]Moléculas de ligação ou fragmentos de ligação a antigeno, variantes ou derivados destes como divulgado aqui também podem ser descritos ou especificados em termos de sua reatividade cruzada. Como usado aqui, o termo “reatividade cruzada” refere-se à capacidade de uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste, específica para um antigeno, de reagir com um segundo antigeno; uma medida de afinidade entre duas substâncias antigênicas diferentes. Assim, uma molécula de ligação é reativa cruzada se ela se liga a um epítopo exceto o único que induziu sua formação. O epítopo reativo cruzado geralmente contém muitas das mesmas características estruturais complementares como o epítopo de indução e em alguns casos, pode realmente ajustar melhor do que o original.
[079]Uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste também pode ser descrita ou especificada em termos de
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32/95 sua afinidade de ligação a um antígeno. Por exemplo, uma molécula de ligação pode se ligar a um antígeno com uma constante de dissociação ou Kd não maior do que 5 x10'2M, 10'2M, 5 x 10'3M, 10’3M, 5 x 10’4M, 10’4M, 5 x 10’5M, 10’5M, 5 x 10’6M, 10’ 6 M, 5 x 10’7 M, 10’7 M, 5 x 10’8 M, 10’8 M, 5 x 10’9 M, 10’9 M, 5 x 10’10 M, 10’10 M, 5 x 10’ 11 Μ, 10’11 M, 5 x 10'12M, 10'12M, 5 x 10’13M, 10’13M, 5 x 10’14M, 10’14M, 5 x 10’15M ou IO’15 M.
[080]Fragmentos de anticorpo incluindo anticorpos de cadeia única ou outros domínios de ligação podem existir sozinhos ou em combinação com um ou mais dos seguintes: região da dobradiça, domínios CH1, CH2, CH3 ou CH4, cadeia J ou componente secretório. Também incluídos são fragmentos de ligação a antígeno que podem incluir qualquer combinação de região(ões) variável(is) com uma ou mais de uma região da dobradiça, domínios CH1, CH2, CH3 ou CH4, uma cadeia J ou um componente secretório. Moléculas de ligação, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno destes podem ser de qualquer origem animal incluindo aves e mamíferos. Os anticorpos podem ser anticorpos humanos, de murino, asno, coelho, cabra, porquinho-da-índia, camelo, lhama, cavalo ou frango. Em uma outra modalidade, a região variável pode ser condrictoide em origem (por exemplo, de tubarões). Como usado aqui, anticorpos “humanos” incluem anticorpos tendo a sequência de aminoácido de uma imunoglobulina humana e incluem anticorpos isolados de bibliotecas de imunoglobulina humana ou de animais transgênicos para uma ou mais imunoglobulinas humanas e podem, em alguns exemplos, expressar imunoglobulinas endógenas e alguns não, como descrito infra e, por exemplo em, Pat. dos EUA N2 5.939.598 por Kucherlapati etal.
[081]Como usado aqui, o termo “subunidade de cadeia pesada” inclui sequências de aminoácido derivadas de uma cadeia pesada de imunoglobulina, uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo compreendendo uma subunidade de cadeia pesada inclui pelo menos um de: um domínio VH, um domínio CH1, um
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33/95 domínio da dobradiça (por exemplo, região da dobradiça superior, intermediária e/ou inferior), um domínio CH2, um domínio CH3, um domínio CH4 ou uma variante ou fragmento destes. Por exemplo, uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste pode incluir, além de um domínio VH, um domínio CH1; domínio CH1, uma dobradiça e um domínio CH2; um domínio CH1 e um domínio CH3; um domínio CH1, uma dobradiça e um domínio CH3; ou um domínio CH1, um domínio da dobradiça, um domínio CH2 e um domínio CH3. Em certos aspectos uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste pode incluir, além de um domínio VH, um domínio CH3 e um domínio CH4; ou um domínio CH3, um domínio CH4 e uma cadeia J. Além disso, uma molécula de ligação para o uso na divulgação pode carecer de certas porções da região constante, por exemplo, todo ou parte de um domínio CH2. Será entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica que estes domínios (por exemplo, a subunidade de cadeia pesada) podem ser modificados tal que eles variam em sequência de aminoácido da molécula de imunoglobulina original.
[082]As subunidades de cadeia pesada de uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou fragmento, variante ou derivado deste, podem incluir domínios derivados de diferentes moléculas de imunoglobulina. Por exemplo, uma subunidade de cadeia pesada de um polipeptideo pode incluir um domínio CH1 derivado de uma molécula de lgG1 e uma região da dobradiça derivada de uma molécula de lgG3. Em um outro exemplo, uma subunidade de cadeia pesada pode incluir uma região da dobradiça derivada, em parte, de uma molécula de lgG1 e, em parte, de uma molécula de lgG3. Em um outro exemplo, uma subunidade de cadeia pesada pode compreender uma dobradiça quimérica derivada, em parte, de uma molécula de IgG 1 e, em parte, de uma molécula de lgG4.
[083]Como usado aqui, o termo “subunidade de cadeia leve” inclui sequências de aminoácido derivadas de uma cadeia leve de imunoglobulina. A subunidade de
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34/95 cadeia leve inclui pelo menos um de um domínio VL ou CL (por exemplo, Ck ou Cà).
[084]Moléculas de ligação, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes podem ser descritas ou especificadas em termos do(s) epítopo(s) ou porção(ões) de um antígeno que elas reconhecem ou especificamente se ligam. A porção de um antígeno alvo que especificamente interage com o domínio de ligação a antígeno de um anticorpo é um “epítopo” ou um “determinante antigênico”. Um antígeno alvo pode compreender um único epítopo ou pelo menos dois epítopos e pode incluir qualquer número de epítopos, dependendo do tamanho, conformação e tipo de antígeno.
[085]Como previamente indicado, as estruturas de subunidade e configuração tridimensional das regiões constantes das várias classes de imunoglobulina são bem conhecidas. Como usado aqui, o termo “domínio VH” inclui o domínio variável amino terminal de uma cadeia pesada de imunoglobulina e o termo “domínio CH1” inclui o domínio constante de região primária (a mais amino terminal) de uma cadeia pesada de imunoglobulina. O domínio CH1 é adjacente ao domínio VH e é amino terminal à região da dobradiça de uma molécula de cadeia pesada de imunoglobulina típica.
[086]Como usado aqui o termo “domínio CH2” inclui a porção de uma cadeia pesada molécula que estende, por exemplo, de cerca do aminoácido 244 ao aminoácido 360 de um anticorpo de IgG usando esquemas de numeração convencionais (aminoácidos 244 a 360, sistema de numeração de Kabat; e aminoácidos 231 a 340, sistema de numeração EU; ver Kabat EA et al. op. cit. O domínio CH3 estende do domínio CH2 ao C-terminal da molécula de IgG e compreende aproximadamente 108 aminoácidos. Certas classes de imunoglobulina, por exemplo, IgM, incluem ainda uma região CH4.
[087]Como usado aqui, o termo “região da dobradiça” inclui a porção de uma molécula de cadeia pesada que une o domínio CH1 ao domínio CH2. Esta região da dobradiça compreende aproximadamente 25 aminoácidos e é flexível, permitindo
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35/95 assim que as duas regiões de ligação a antigeno N-terminais se movam independentemente.
[088]Como usado aqui o termo “ligação dissulfeto” inclui a ligação covalente formada entre dois átomos de enxofre. O aminoácido cisteína compreende um grupo tiol que pode formar uma ligação ou ponte dissulfeto com um segundo grupo tiol. Em certas moléculas de IgG, as regiões CH1 e CL são ligadas por uma ligação dissulfeto e as duas cadeias pesadas são ligadas por duas ligações dissulfeto em posições correspondendo a 239 e 242 usando o sistema de numeração de Kabat (posição 226 ou 229, sistema de numeração EU).
[089]Como usado aqui, o termo “anticorpo quimérico” refere-se a um anticorpo em que a região ou sítio imunorreativos são obtidos ou derivados de uma primeira espécie e a região constante (que pode ser intacta, parcial ou modificada) é obtida de uma segunda espécie. Em algumas modalidades a região ou sítio de ligação ao alvo serão de uma fonte não humana (por exemplo, camundongo ou primata) e a região constante é humana.
[090]Os termos “anticorpo multiespecífico ou “anticorpo biespecífico” referemse a um anticorpo que tem domínios de ligação para dois ou mais epítopos diferentes dentro de uma única molécula de anticorpo. Outras moléculas de ligação além da estrutura de anticorpo canônica podem ser construídas com duas especificidades de ligação. A ligação do epítopo por anticorpos biespecíficos ou multiespecíficos pode ser simultânea ou sequencial. Triomas e hibridomas híbridos são dois exemplos de linhagens celulares que podem secretar anticorpos biespecíficos. Anticorpos biespecíficos também podem ser construídos por meios recombinantes. (Strõhlein e Heiss, Future Oncol. 6:1387 - 94 (2010); Mabry e Snavely, IDrugs. /3:543 - 9 (2010)). Um anticorpo biespecífico também pode ser um diacorpo.
[091]Como usado aqui, o termo “anticorpo engendrado” refere-se a um anticorpo em que o domínio variável na cadeia pesada e leve ou ambas é alterado
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36/95 pela substituição pelo menos parcial de um ou mais aminoácidos nas regiões CDR ou de estrutura. Em certos aspectos, CDRs inteiras de um anticorpo de especificidade conhecida podem ser enxertadas nas regiões de estrutura de um anticorpo heterólogo. Embora CDRs alternadas possam ser derivadas de um anticorpo da mesma classe ou ainda subclasse como o anticorpo do qual as regiões de estrutura são derivadas, CDRs também podem ser derivadas de um anticorpo de classe diferente, por exemplo, de um anticorpo de uma espécie diferente. Um anticorpo engendrado em que uma ou mais CDRs “doadoras” de um anticorpo não humano de especificidade conhecida são enxertadas em uma região de estrutura de cadeia pesada ou leve humana é referido aqui como um “anticorpo humanizado”. Em certos aspectos nem todas as CDRs são substituídas com as CDRs completas da região variável doadora e ainda a capacidade de ligação a antígeno do doador pode ser ainda transferida para os domínios variáveis receptores. Dadas as explanações apresentadas, por exemplo, nas Pat. dos EUA N22 5.585.089, 5.693.761,5.693.762 e 6.180.370, estará bem dentro da competência daquele habilitado na técnica, realizando-se experimentação de rotina ou testando-se por tentativa sucessiva para obter um anticorpo engendrado ou humanizado funcional.
[092]Como usado aqui o termo “engendrado” inclui manipulação de moléculas de ácido nucleico ou polipeptídeo por meios sintéticos (por exemplo, por técnicas recombinantes, síntese peptídica in vitro, por ligação enzimática ou química de peptídeos ou alguma combinação destas técnicas).
[093]Como usado aqui, os termos “ligado”, “fundido” ou “fusão” ou outros equivalentes gramaticais podem ser usados permutavelmente. Estes termos referemse à união de dois ou mais elementos ou componentes, por quaisquer que sejam os meios incluindo meios de conjugação química ou recombinantes. Uma “fusão em estrutura” refere-se à união de dois ou mais estruturas de leitura aberta (ORFs) de polinucleotídeo para formar uma ORF mais longa contínua, em uma maneira que
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37/95 mantém a estrutura de leitura traducional das ORFs originais. Assim, uma proteína de fusão recombinante é uma única proteína contendo dois ou mais segmentos que correspondem a polipeptídeos codificados pelas ORFs originais (segmentos estes que não são normalmente assim unidos em natureza.) Embora a estrutura de leitura seja assim feita contínua por todos os segmentos fundidos, os segmentos podem ser física ou espacialmente separados por, por exemplo, sequência ligadora em estrutura. Por exemplo, polinucleotídeos que codificam as CDRs de uma região variável de imunoglobulina podem ser fundidos, em estrutura, mas são separados por um polinucleotídeo que codifica pelo menos uma região de estrutura de imunoglobulina ou regiões CDR adicionais, contanto que as CDRs “fundidas” sejam cotraduzidas como parte de um polipeptideo contínuo.
[094]No contexto de polipeptídeos, uma “sequência linear” ou uma “sequência” é uma ordem de aminoácidos em um polipeptideo em uma direção de terminal amino a carboxila em que aminoácidos que estão perto um do outro na sequência são contíguos na estrutura primária do polipeptideo. Uma porção de um polipeptideo que é “amino-terminal” ou “N-terminal” a uma outra porção de um polipeptideo é que a porção que chega mais cedo na cadeia de polipeptideo sequencial. Similarmente uma porção de um polipeptideo que é “carbóxi-terminal” ou “C-terminal” a uma outra porção de um polipeptideo é aquela porção que chega mais tarde na cadeia de polipeptideo sequencial. Por exemplo, em um anticorpo típico, o domínio variável é “N-terminal” à região constante e a região constante é “C-terminal” ao domínio variável.
[095]O termo “expressão” como usado aqui refere-se a um processo pelo qual um gene produz um produto bioquímico, por exemplo, um polipeptideo. O processo inclui qualquer manifestação da presença funcional do gene dentro da célula incluindo, sem limitação, silenciamento genético assim como tanto expressão transitória quanto expressão estável. O mesmo inclui sem limitação transcrição do gene em RNA
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38/95 mensageiro (mRNA) e a tradução de tal mRNA em polipeptídeo(s). Se o produto desejado final for um produto bioquímico, a expressão inclui a criação deste produto bioquímico e quaisquer precursores. A expressão de um gene produz um “produto genético”. Como usado aqui, um produto genético pode ser um ácido nucleico, por exemplo, um RNA mensageiro produzido por transcrição de um gene ou um polipeptídeo que é traduzido de um transcrito. Produtos genéticos descritos aqui incluem ainda ácidos nucleicos com modificações pós-transcricionais, por exemplo, poliadenilação ou polipeptídeos com modificações pós-traducionais, por exemplo, metilação, glicosilação, a adição de lipídeos, associação com outras subunidades proteicas, divagem proteolítica e semelhantes.
[096]Como usado aqui, o termo “neuroinflamação” refere-se à inflamação que ocorre no sistema nervoso central (SNC) e é tipificada por ativação de astrócitos e células microgliais, geração de espécies reativas de oxigênio e a expressão, por exemplo, superexpressão de citocinas pró-inflamatórias no cérebro. Citocinas próinflamatórias típicas incluem, mas não são limitadas a interleucina-6 (IL-6), interleucina-1 beta (IL-1 β) e fator alfa de necrose tumoral (TNF-α). Neuroinflamação pode ser causada por uma doença, transtorno ou lesão tal como esclerose múltipla (MS), meningite, edema cerebral, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, infecção viral ou bacteriana, exposição ambiental tal como poluição ou toxinas, envelhecimento ou uma combinação destes. Em alguns exemplos neuroinflamação pode ser a causa de neurodegeneração subsequente ao cérebro, em outros exemplos neuroinflamação pode ser o resultado de neurodegeneração.
[097]Como usado aqui, o termo “neurodegeneração” refere-se à ruptura, dano ou morte real de células no SNC e cérebro, por exemplo, a perda de estrutura e/ou função de neurônios ou outras células cerebrais. Neurodegeneração pode ser o resultado de neuroinflamação e/ou a causa de neuroinflamação.
[098]Como usado aqui o termo “doença, transtorno ou lesão
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39/95 neurodegenerativos ou neuroinflamatórios” refere-se ao escopo completo de doenças, transtornos ou lesões que finalmente resultam em neuroinflamação ou neurodegeneração. Exemplos incluem, sem limitação, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, síndrome de Down, ataxia, esclerose lateral amiotrófica (ALS), esclerose múltipla, (MS), epilepsia, meningite, edema cerebral, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, demência frontotemporal (FTD), dano cognitivo relacionado a HIV, lúpus do SNC, perda cognitiva leve ou uma combinação destes.
[099]Termos tais como “tratando” ou “tratamento” ou “para tratar” ou “aliviando” ou “para aliviar” referem-se a medidas terapêuticas que curam, retardam, reduzem sintomas de e/ou param ou desaceleram a progressão de uma condição ou transtorno patológicos diagnosticados existentes. Termos tais como “prevenir”, “prevenção”, “evitar”, “retrocesso” e semelhantes referem-se a medidas profiláticas ou preventivas que previnem o desenvolvimento de uma condição ou transtorno patológicos alvejados não diagnosticados. Assim, “aqueles em necessidade do tratamento” podem incluir aqueles já com o transtorno; aqueles propensos a ter o transtorno; e aqueles em quem o transtorno deve ser prevenido.
[0100]0 termo “quantidade terapeuticamente eficaz” refere-se a uma quantidade de um anticorpo, polipeptideo, polinucleotídeo, molécula orgânica pequena ou outro fármaco eficaz para “tratar” uma doença, transtorno ou lesão em um sujeito ou mamífero. No caso de câncer, a quantidade terapeuticamente eficaz do fármaco pode reduzir o número de células cancerígenas; retardar ou parar a divisão da célula do câncer, reduzir ou retardar um aumento no tamanho do tumor; inibir, por exemplo, suprimir, retardar, prevenir, parar, atrasar ou reverter infiltração de célula cancerosa em órgãos periféricos incluindo, por exemplo, a difusão do câncer em tecido mole e osso; inibir, por exemplo, suprimir, retardar, prevenir, encolher, parar, atrasar ou reverter a metástase tumoral; inibir, por exemplo, suprimir, retardar,
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40/95 prevenir, parar, atrasar ou reverter o crescimento tumoral; aliviar a algum grau um ou mais dos sintomas associados com o câncer, reduzir a morbidez e mortalidade; melhorar a qualidade de vida; ou uma combinação de tais efeitos. À medida que o fármaco previne o crescimento e/ou mata células cancerígenas existentes, ele pode ser referido como citostático e/ou citotóxico.
[0101]Por “sujeito” ou “indivíduo” ou “animal” ou “paciente” ou “mamífero”, destina-se a qualquer sujeito, particularmente um sujeito mamífero, para quem a diagnose, prognose ou terapia é desejada. Sujeitos mamíferos incluem seres humanos, animais domésticos, animais de criação e animais de zoológico, esportes ou de estimação tais como cães, gatos, porquinhos-da-índia, coelhos, ratos, camundongos, cavalos, suínos, vacas, ursos e assim por diante.
[0102]Como usado aqui, frases tais como “um sujeito que se beneficiaria de terapia” e “um animal em necessidade do tratamento” inclui sujeitos, tais como sujeitos mamíferos, que se beneficiariam da administração de uma terapia como descrito aqui.
[0103]Como usado aqui, o termo “provedor de saúde” refere-se a indivíduos ou instituições que diretamente interagem e/ou administram terapias a sujeitos vivos, por exemplo, pacientes humanos. Exemplos não limitantes de provedores de saúde incluem médicos, enfermeiros, técnicos, terapeutas, farmacêuticos, consultores, profissionais de medicina alternativa, instalações médicas, consultórios médicos, hospitais, salas de emergência, clínicas, centros de cuidado urgente, clínicas/instalações de medicina alternativa e qualquer outra entidade fornecendo tratamento geral e/ou especializado, avaliação, manutenção, terapia, medicação e/ou aconselhamento referindo-se à toda ou qualquer porção de, estado de saúde de um paciente, incluindo mas não limitado a médicos gerais, médicos especializados, cirúrgicos e/ou qualquer outro tipo de tratamento, avaliação, manutenção, terapia, medicação e/ou aconselhamento.
[0104]Como usado aqui, o termo “laboratório clínico” refere-se a uma
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41/95 instalação para obter dados e/ou a examinação e/ou o processamento de dados obtidos de um sujeito vivo e/ou materiais derivados de um sujeito vivo, por exemplo, um ser humano. Exemplos não limitante de processamento incluem radiográfico (por exemplo, raios X), fluorográficos, tomográficos (por exemplo, varreduras por Tomografiade Emissão Positrônicaou PET)ou imagiologiade ressonância magnética (MRI) de um sujeito, produto biológico, bioquímico, sorológico, químico, imunoematológico, hematológico, biofísico, citológico, patológico, genético ou outra examinação de materiais derivados do corpo humano, para o propósito de fornecer dados ou informação, por exemplo, para a diagnose, prevenção ou tratamento de qualquer doença ou deficiência de ou a avaliação da saúde de sujeitos vivos, por exemplo, seres humanos. Estas examinações podem incluir procedimentos para obter dados de imagiologia do sujeito, para coletar ou de outro modo obter uma amostra, preparar, determinar, medir ou de outro modo descrever a presença ou ausência de várias substâncias no corpo de um sujeito vivo, por exemplo, um ser humano ou uma amostra obtida do corpo de um sujeito vivo, por exemplo, um ser humano.
[0105]Como usado aqui, o termo “provedor de benefícios de saúde” abrange partes, organizações ou grupos individuais fornecendo, apresentando, oferecendo, pagando em todo ou em parte ou sendo de outro modo associados com o fornecimento de um acesso do paciente a um ou mais benefícios de saúde, planos de benefício, seguro de saúde e/ou programas de conta de despesas de saúde.
[0106]Em alguns aspectos, um provedor de saúde pode administrar ou instruir um outro provedor de saúde a administrar uma terapia para tratar uma doença, transtorno ou lesão particular. Um provedor de saúde pode implementar ou instruir um outro provedor de saúde ou paciente, ambos sob o controle do primeiro provedor de saúde, para realizar as ações seguintes: submeter a um estudo de imagem ou realizar um estudo de imagem em um paciente, obter uma amostra, processar uma amostra, submeter uma amostra, receber uma amostra, transferir uma amostra, analisar ou
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42/95 medir uma amostra, quantificar uma amostra, fornecer os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra, receber os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra, comparar/classificar os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma ou mais amostras, fornecer a comparação/classificação de uma ou mais amostras, obter a comparação/classificação de uma ou mais amostras, administrar uma terapia (por exemplo, comparando resultados de imagiologia de valor de referência com resultados obtidos a seguir de um regime de tratamento), começar a administração de uma terapia, cessar a administração de uma terapia, continuar a administração de uma terapia, interromper temporariamente a administração de uma terapia, aumentar a quantidade de um agente terapêutico administrado, diminuir a quantidade de um agente terapêutico administrado, continuar a administração de uma quantidade de um agente terapêutico, aumentar a frequência de administração de um agente terapêutico, diminuir a frequência de administração de um agente terapêutico, manter a mesma frequência de dosagem sobre um agente terapêutico, substituir uma terapia ou agente terapêutico por pelo menos uma outra terapia ou agente terapêutico, combinar uma terapia ou agente terapêutico com pelo menos uma outra terapia ou agente terapêutico adicional.
[0107]Em alguns aspectos, um provedor de benefícios de saúde pode autorizar ou negar, por exemplo, estudos de imagiologia, coleta de uma amostra, processamento de uma amostra, submissão de uma amostra, recebimento de uma amostra, transferência de uma amostra, análise ou medição de uma amostra, quantificação de uma amostra, fornecimento de resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra, transferência de resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra, comparação/classificação dos resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma ou mais amostras, transferência da comparação/classificação de uma ou mais amostras, administração de uma terapia
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43/95 ou agente terapêutico, começo da administração de uma terapia ou agente terapêutico, cessação da administração de uma terapia ou agente terapêutico, continuação da administração de uma terapia ou agente terapêutico, interrupção temporária da administração de uma terapia ou agente terapêutico, aumento da quantidade de agente terapêutico administrado, diminuição da quantidade de agente terapêutico administrado, continuação da administração de uma quantidade de um agente terapêutico, aumento na frequência de administração de um agente terapêutico, diminuição na frequência de administração de um agente terapêutico, manter a mesma frequência de dosagem sobre um agente terapêutico, substituir uma terapia ou agente terapêutico por pelo menos uma outra terapia ou agente terapêutico ou combinar uma terapia ou agente terapêutico com pelo menos uma outra terapia ou agente terapêutico adicional. Em certos aspectos, um provedor de benefícios de saúde pode autorizar ou negar tratamento com base nos resultados de um ensaio diagnóstico concomitante, por exemplo, estudos de imagiologia que mostram se uma certa terapia é eficaz em um paciente individual dado.
[0108]Em alguns aspectos, um laboratório clínico pode, por exemplo, realizar estudos de imagiologia em um paciente sob ordens de um provedor de saúde, comparar estudos de imagiologia de valor de referência e continuação depois que uma dada terapia é administrada, coletar ou obter uma amostra, processar uma amostra, submeter uma amostra, receber uma amostra, transferir uma amostra, analisar ou medir uma amostra, quantificar uma amostra, fornecer os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra, receber os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra, comparar/classificar os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma ou mais amostras, fornecer a comparação/classificação de uma ou mais amostras, obter a comparação/classificação de uma ou mais amostras ou outras atividades relacionadas. Um laboratório clínico tipicamente realiza testes ordenados por um
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44/95 provedor de saúde ou um provedor de benefícios de saúde e tipicamente trabalha sob o controle de provedor de saúde e/ou provedor de benefícios de saúde ou em uma empresa conjunta com provedor de saúde e/ou provedor de benefícios de saúde.
Descrição do polipeptideo alvo - SEMA4D [0109]Como usado aqui, os termos “semaforina-4D”, “SEMA4D” e “polipeptideo de SEMA4D” são usados permutavelmente, como são “SEMA4D” e “Sema4D”. Em certas modalidades, SEMA4D é expressado na superfície de ou secretado por uma célula. Em uma outra modalidade, SEMA4D é ligado à membrana. Em uma outra modalidade, SEMA4D é solúvel, por exemplo, sSEMA4D. Em uma outra modalidade, SEMA4D pode incluir um SEMA4D de tamanho natural ou um fragmento deste ou um polipeptideo variante de SEMA4D, onde o fragmento de SEMA4D ou polipeptideo variante de SEMA4D mantém algumas ou todas as propriedades funcionais do SEMA4D de tamanho natural.
[0110]A proteína SEMA4D humana de tamanho natural é uma proteína de transmembrana homodimérica consistindo em duas cadeias de polipeptideo de 150 kDa. SEMA4D pertence à família de semaforina de receptores de superfície celular e também é referido como CD100. Tanto SEMA4D/Sema4D humano quanto de camundongo são proteoliticamente clivados de sua forma de transmembrana para gerar formas solúveis de 120 kDa, dando origem a duas isoformas de Sema4D (Kumanogoh et al., J. Cell Science 116(7):3464 (2003)). Semaforinas consistem em proteínas solúveis e ligadas à membrana que foram originalmente definidas como fatores de orientação axonal que desempenham um papel importante em estabelecer conexões precisas entre neurônios e seu alvo apropriado. Estruturalmente considerada uma semaforina de classe IV, SEMA4D consiste em uma sequência de sinal amino-terminal seguida por um domínio ‘Sema’ característico, que contém 17 resíduos de cisteína conservados, um domínio semelhante a Ig, um estiramento rico em lisina, uma região de transmembrana hidrofóbica e uma cauda citoplásmica.
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45/95 [0111]O polipeptídeo de SEMA4D inclui uma sequência de sinal de cerca de 13 aminoácidos seguido por um domínio de semaforina de cerca de 512 aminoácidos, um domínio semelhante à imunoglobulina (semelhante à Ig) de cerca de 65 aminoácidos, um estiramento rico em lisina de 104 aminoácidos, uma região de transmembrana hidrofóbica de cerca de 19 aminoácidos e uma cauda citoplásmica de 110 aminoácidos. Um sítio de consenso para fosforilação de tirosina na cauda citoplásmica sustenta a associação prognosticada de SEMA4D com uma tirosina cinase (Schlossman etal., Eds. (1995) Leucocyte Typing V (Oxford University Press, Oxford).
[0112]SEMA4D é conhecido como tendo pelo menos três receptores funcionais, Plexina-B1, Plexina-B2 e CD72. Plexina-B1, é expressado em tecidos não linfoides e mostrou ser um receptor de alta afinidade (1 nM) para SEMA4D (Tamagnone etal., Cell 99:71 - 80 (1999)). A estimulação de SEMA4D de sinalização de Plexina B1 mostrou induzir o colapso de cone de crescimento de neurônios e induzir o colapso de extensão do processo e apoptose de oligodentrócitos (Giraudon etal., J. Immunol. /72:1246 -1255 (2004); Giraudon etal., NeuroMolecularMed. 7-.207 - 216 (2005)). Depois de se ligar a SEMA4D, a sinalização de Plexina B1 medeia a inativação de R-Ras, levando a uma diminuição na fixação mediada por integrina à matriz extracelular, assim como à ativação de RhoA, levando ao colapso celular por reorganização do citoesqueleto. Ver Kruger etal., Nature Rev. Mol. Cell Biol. 6:789 800 (2005); Pasterkamp, TRENDS in Cell Biology 15:61 - 64 (2005)). Plexina-B2 tem uma afinidade intermediária para SEMA4D e um relato recente indica que PLXNB2 é expressado em queratinócitos e ativa células T γδ positivas para SEMA4D para contribuir para o reparo epitelial (Witherden et al., Immunity. 24 de agosto de 2012;37(2):314 - 25).
[0113]Em tecidos linfoides, CD72 é utilizado como um receptor de SEMA4D de baixa afinidade (300 nM) (Kumanogoh et al., Immunity 13:621 - 631 (2000)).
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Células B e células apresentadoras de antígeno (APC) expressam CD72 e anticorpos anti-CD72 têm muitos dos mesmos efeitos como sSEMA4D, tais como realce de respostas de célula B induzida por CD40 e irradiação de célula B de CD23. CD72 é considerado como agindo como um regulador negativo de respostas de célula B recrutando-se a tirosina fosfatase SHP-1, que pode associar com muitos receptores inibitórios. A interação de SEMA4D com CD72 resulta na dissociação de SHP-1 e a perda deste sinal de ativação negativo. SEMA4D mostrou promover a estimulação de célula Tea agregação e sobrevivência de célula B in vitro. A adição de células que expressam SEMA4D ou sSEMA4D realça proliferação de célula B induzida por CD40 e produção de imunoglobulina in vitro e acelera respostas de anticorpo in vivo (Ishida et al., Inter. Immunol. 15:1027 - 1034 (2003); Kumanogoh e H. Kukutani, Trends in Immunol. 22:670 - 676 (2001)). sSEMA4D realça a maturação induzida por CD40 de DCs, incluindo supra-regulação de moléculas coestimuladoras e secreção aumentada de IL-12. Além disso, sSEMA4D pode inibir a migração de célula imune, que pode ser revertida pela adição de anticorpos anti-SEMA4D de camundongo de bloqueio (Elhabazi et al., J. Immunol. 166:4341 - 4347 (2001); Delaire et al., J. Immunol. 166:4348-4354 (2001)).
[0114]Sema4D é expressado em níveis altos em órgãos linfoides, incluindo o baço, timo e linfonodos e em órgãos não linfoides, tais como o cérebro, coração e rim. Em órgãos linfoides, Sema4D é abundantemente expressado em células T latentes mas apenas fracamente expressado em células B latentes e células apresentadoras de antígeno (APCs), tais como células dendríticas (DCs).
[0115]A ativação celular aumenta a expressão superficial de SEMA4D assim como a geração de SEMA4D solúvel (sSEMA4D). O padrão de expressão de SEMA4D sugere que o mesmo desempenha um importante papel fisiológico assim como patológico no sistema imune. SEMA4D mostrou promover a ativação, agregação e sobrevivência de célula B; realçar a Proliferação induzida por CD40 e
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47/95 produção de anticorpo; realçar a resposta do anticorpo a antígenos dependentes de célula T; aumentar a proliferação de célula T; realçar a maturação de célula dendrítica e capacidade para estimular células T; e é diretamente implicado na desmielinização e degeneração axonal (Shi et al., Immunity 13:633 - 642 (2000); Kumanogoh et al., J Immunol 169:1175 - 1181 (2002); e Watanabe et al., J Immunol 167:4321 - 4328 (2001)).
Anticorpos anti-SEMA4D [0116]Anticorpos que se ligam a SEMA4D foram descritos na técnica. Ver, por exemplo, Publ. dos EUA N22 2008/0219971 A1, US 2010/0285036 A1 e US 2006/0233793 A1, Pedidos de Patente Internacionais WO 93/14125, WO 2008/100995 e WO 2010/129917 e Herold etal., Int. Immunol. 7(1): 1 -8 (1995), cada um dos quais é aqui incorporado em sua totalidade por referência. Em certos aspectos, os anticorpos fornecidos aqui são anticorpos antagonistas de SEMA4D, em que eles interferem com, inibem, bloqueiam ou destroem uma ou mais atividades ou funções de SEMA4D [0117]Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de SEMA4D bloqueia a interação de SEMA4D com um ou mais de seus receptores, por exemplo, PlexinaB1, Plexina-B2 e/ou CD72. Anticorpos anti-SEMA4D tendo estas propriedades podem ser usados nos métodos fornecidos aqui. Anticorpos que podem ser usados incluem, mas não são limitados a MAbs VX15/2503, 67, 76, 2282 e fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes que são completamente descritos em US 2010/0285036 A1 e US 2008/0219971 A1. Mab VX15/2503 também é referido aqui como “VX15”, e os termos podem ser usados permutavelmente. VX15 compreende uma região variável de cadeia pesada com a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e uma região variável de cadeia leve com a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5. Anticorpos adicionais que podem ser usados nos métodos fornecidos aqui incluem o anticorpo de BD16 descrito em US 2006/0233793 A1 assim como
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48/95 fragmentos de ligação a antigeno, variantes ou derivados destes; ou qualquer um de MAb 301, MAb 1893, MAb 657, MAb 1807, MAb 1656, MAb 1808, Mab 59, MAb 2191, MAb 2274, MAb 2275, MAb 2276, MAb 2277, MAb 2278, MAb 2279, MAb 2280, MAb 2281, MAb 2282, MAb 2283, MAb 2284 e MAb 2285, assim como quaisquer fragmentos, variantes ou derivados destes como descrito em US 2008/0219971 A1. Em certas modalidades um anticorpo anti-SEMA4D para o uso nos métodos fornecidos aqui se ligam a SEMA4D humano, de murino ou tanto humano quanto de murino. Também úteis são anticorpos que se ligam ao mesmo epítopo como qualquer um dos anticorpos anteriormente mencionados e/ou anticorpos que competitivamente inibem a ligação ou atividade de qualquer um dos anticorpos anteriormente mencionados.
[0118]Em certas modalidades, um anticorpo anti-SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste útil nos métodos fornecidos aqui tem uma sequência de aminoácido que tem pelo menos cerca de 80 %, cerca de 85 %, cerca de 88 %, cerca de 89 %, cerca de 90 %, cerca de 91 %, cerca de 92 %, cerca de 93 %, cerca de 94 % ou cerca de 95 % de identidade de sequência à sequência de aminoácido para uma molécula de anticorpo anti-SEMA4D de referência, por exemplo, aquelas descritas acima. Em uma outra modalidade, a molécula de ligação compartilha pelo menos cerca de 96 %, cerca de 97 %, cerca de 98 %, cerca de 99 % ou 100 % de identidade de sequência a um anticorpo de referência.
[0119]Em certos aspectos, o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste pode inibir a interação de SEMA4D com seu receptor, por exemplo, Plexina-B1, Plexina-B2 ou CD72. Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste pode inibir a transdução de sinal de Plexina-B1 mediada por SEMA4D.
[0120]Em certos aspectos, o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste competitivamente inibe um anticorpo
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49/95 de referência compreendendo uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5 de ligar-se a SEMA4D. Em certos aspectos, o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste se liga ao mesmo epítopo de SEMA4D como um anticorpo de referência compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5. Em certos aspectos, a VH do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2 e HCDR3 e a VL compreende três cCDRs LCDR1, LCDR2 e LCDR3, as CDRs compreendendo as sequências de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, respectivamente exceto para pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis substituições de aminoácido conservatives únicas em uma ou mais das CDRs. Em certos aspectos as CDRs compreendem as sequências de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, respectivamente.
[0121]Em certos aspectos a VH do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste compreende uma sequência de aminoácido pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 1 e a VL do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste compreende uma sequência de aminoácido pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 5; ou a VH compreende uma sequência de aminoácido pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 9 e a VL compreende uma sequência de aminoácido pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90
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50/95 %, 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 10. Em certos aspectos, a VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e a VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5; ou a VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 9 e a VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 10.
[0122]Também incluídos para o uso nos métodos fornecidos aqui são polipeptídeos que codificam anticorpos anti-SEMA4D ou fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes como descrito aqui, polinucleotídeos que codificam tais polipeptídeos, vetores compreendendo tais polinucleotídeos e células hospedeiras compreendendo tais vetores ou polinucleotídeos, todos para produzir anticorpos anti-SEMA4D ou fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes para o uso nos métodos descritos aqui.
[0123]Variantes biologicamente ativas adequadas dos anticorpos antagonistas de SEMA4D da divulgação podem ser usadas nos métodos da presente divulgação. Tais variantes manterão as propriedades de ligação desejadas do anticorpo anti-SEMA4D precursor. Métodos para fabricar variantes de anticorpo estão geralmente disponíveis na técnica.
[0124]Métodos para mutagênese e alterações de sequência de nucleotídeo são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Walker e Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York); Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488 - 492 (1985); Kunkel et al., Methods Enzymol. 154:367 - 382 (1987); Sambrook etal. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, N.Y.); Pat. dos EUA N2 4.873.192; e as referências citadas neste; aqui incorporados por referência. Orientação como para substituições de aminoácido apropriadas que não afetam a atividade biológica do polipeptideo de interesse pode ser encontrada no modelo de Dayhoff etal. (1978) em Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Lavagemton, D.C.), páginas 345 - 352, aqui incorporado por referência em sua totalidade. O modelo de Dayhoff etal. usa a matriz
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51/95 de similaridade de aminoácido (matriz PAM 250) de Mutação Pontual Aceita (PAM) para determinar substituições de aminoácido conservatives adequadas. Em certos aspectos, substituições conservatives, tais como troca de um aminoácido com um outro tendo propriedades similares são usadas. Exemplos de substituições de aminoácido conservatives como mostrado pela matriz PAM 250 do modelo de Dayhoff etal. incluem, mas não são limitadas a, Gly^Ala, Val«->lle«->Leu, Asp«->Glu, Lys^Arg, Asn«->Gln e Phe^Trp^Tyr.
[0125]Na construção de variantes da molécula de ligação ao antagonista de SEMA4D, por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação a antigeno deste, polipeptídeos de interesse, modificações são feitas tal que variantes continuam a possuir as propriedades desejadas, por exemplo, sendo capazes de se ligar especificamente a um SEMA4D, por exemplo, SEMA4D humano, de murino ou tanto humano quanto de murino, por exemplo, expressado na superfície de ou secretado por uma célula e tendo atividade de bloqueio de SEMA4D, como descrito aqui. Em certos aspectos, mutações feitas no DNA que codifica o polipeptídeo variante mantêm a estrutura de leitura e não criam regiões complementares que podem produzir estrutura de mRNA secundária. Ver Publicação do Pedido de Patente EP N2 75.444.
[0126]Métodos para medir molécula de ligação anti-SEMA4D, por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste, especificidade de ligação incluem, mas não são limitados a, ensaios de ligação competitivos padrão, ensaios para monitorar a secreção de imunoglobulina por células T ou células B, ensaios de proliferação de célula T, ensaios de apoptose, ensaios ELISA e semelhantes. Ver, por exemplo, tais ensaios divulgados em WO 93/14125; Shi et al., Immunity 13:633 - 642 (2000); Kumanogoh et al., J Immunol /69:1175 1181 (2002); Watanabe etal., J Immunol /67:4321 - 4328 (2001); Wang etal., Blood 97:3498 - 3504 (2001); e Giraudon et al., J Immunol /72(2):1246 - 1255 (2004), todos os quais são aqui incorporados por referência.
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52/95 [0127]Métodos para medir a capacidade anti-angiogênica de um anticorpo anti-SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste são bem conhecidos na técnica.
[0128]Quando debatido aqui se qualquer particular polipeptideo, incluindo as regiões constantes, CDRs, domínios VH ou VL domínios divulgados aqui, for pelo menos cerca de 65 %, cerca de 70 %, cerca de 75 %, cerca de 80 %, cerca de 85 %, cerca de 90 %, cerca de 91 %, cerca de 92 %, cerca de 93 %, cerca de 94 %, cerca de 95 %, cerca de 96 %, cerca de 97 %, cerca de 98 %, cerca de 99 % ou ainda cerca de 100 % idêntica a um outro polipeptideo, a % de identidade pode ser determinada usando métodos e programas/software de computador conhecidos na técnica tais como, mas não limitados, ao programa BESTFIT (Wisconsin Sequence Analysis Package, Versão 8 para Unix, Genetic Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, Wis. 53711). BESTFIT usa o algoritmo de homologia local de Smith e Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482 - 489, para encontrar o melhor segmento de homologia entre duas sequências. Quando do uso de BESTFIT ou qualquer outro programa de alinhamento de sequência para determinar se uma sequência particular é, por exemplo, 95 % idêntica a uma sequência de referência de acordo com a presente divulgação, os parâmetros são ajustados, certamente, tal que a porcentagem de identidade é calculada sobre o tamanho natural da sequência de polipeptideo de referência e que intervalos em homologia de até 5 % do número total de aminoácidos na sequência de referência são permitidos.
[0129]Para propósitos da presente divulgação, a porcentagem de identidade de sequência pode ser determinada usando o algoritmo de pesquisa de homologia de Smith-Waterman usando uma pesquisa de intervalo afim com uma penalidade de abertura do intervalo de 12 e uma penalidade de extensão do intervalo de 2, matriz BLOSUM de 62. O algoritmo de pesquisa de homologia de Smith-Waterman é mostrado em Smith e Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482 - 489. Uma variante
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53/95 pode, por exemplo, diferir de um anticorpo de referência anti-SEMA4D (por exemplo, MAb VX15/2503, 67, 76 ou 2282) em apenas 1 a 15 resíduos de aminoácido, apenas 1 a 10 resíduos de aminoácido, tal como 6 a 10, apenas 5, apenas 4, 3, 2 ou ainda 1 resíduo de aminoácido.
[0130]A região constante de um anticorpo anti-SEMA4D pode ser mutada para alterar a função efetora em vários modos. Por exemplo, ver a Pat. dos EUA N2 6.737.056B1 e Publicação do Pedido de Patente dos EUA N2 2004/0132101A1, que divulgam mutações de Fc que otimizam a ligação do anticorpo a receptores de Fc.
[0131]Em certos anticorpos anti-SEMA4D ou fragmentos, variantes ou derivados destes úteis nos métodos fornecidos aqui, a porção Fc pode ser mutada para diminuir a função efetora usando técnicas conhecidas no ramo. Por exemplo, a supressão ou inativação (através de mutações de ponto ou outros meios) de um domínio de região constante pode reduzir a ligação do receptor Fc do anticorpo modificado circulante aumentando desse modo a localização do tumor. Em outros casos, modificações de região constante compatíveis com a presente divulgação moderam a ligação ao complemento e assim reduzem a meia-vida do soro. Ainda outras modificações da região constante podem ser usadas para modificar ligações dissulfeto ou porções oligossacarídeo que levam em consideração a localização realçada devido à especificidade do antígeno ou flexibilidade do anticorpo aumentadas. O perfil fisiológico resultante, biodisponibilidade e outros efeitos bioquímicos das modificações, tais como localização do tumor, biodistribuição e meiavida do soro, podem ser facilmente medidos e quantificados usando técnicas imunológicas bem conhecidas sem experimentação indevida.
[0132]Anticorpos anti-SEMA4D para o uso nos métodos fornecidos aqui incluem derivados que são modificados, por exemplo, pela ligação covalente de qualquer tipo de molécula ao anticorpo tal que a ligação covalente não impede o anticorpo de se ligar especificamente ao seu epítopo cognato. Por exemplo, mas não
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54/95 por via de limitação, os derivados de anticorpo incluem anticorpos que foram modificados, por exemplo, por glicosilação, acetilação, pegilação, fosforilação, amidação, derivação por grupos de proteção/bloqueio conhecidos, divagem proteolítica, ligação a um ligante celular ou outra proteína, etc. Qualquer uma de numerosas modificações químicas pode ser realizada por técnicas conhecidas, incluindo, mas não limitadas à divagem química específico, acetilação, formilação, etc. Adicionalmente, o derivado pode conter um ou mais aminoácidos não clássicos.
[0133]Uma “substituição de aminoácido conservative” é uma em que o resíduo de aminoácido é substituído com um resíduo de aminoácido tendo uma cadeia lateral com uma carga similar. Famílias de resíduos de aminoácido tendo cadeias laterais com cargas similares foram definidas na técnica. Estas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais betaramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Alternativamente, mutações podem ser introduzidas aleatoriamente ao longo de toda ou parte da sequência de codificação, tal como por mutagênese de saturação e os mutantes resultantes podem ser triados quanto à atividade biológica para identificar mutantes que mantêm a atividade (por exemplo, a capacidade de se ligar a um polipeptideo anti-SEMA4D ou para bloquear a interação de SEMA4D com seu receptor).
[0134]Por exemplo, é possível introduzir mutações apenas em regiões de estrutura ou apenas em regiões CDR de uma molécula de anticorpo. Mutações introduzidas podem ser mutações com troca de sentido silenciosas ou neutras, isto é, não têm nenhum ou pouco, efeito sobre a capacidade de um anticorpo de se ligar ao
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55/95 antigeno. Estes tipos de mutações podem ser úteis para otimizar o uso do códon ou melhorar a produção de anticorpo de um hibridoma. Alternativamente, mutações com troca de sentido não neutras podem alterar a capacidade de um anticorpo de se ligar ao antigeno. Uma pessoa de habilidade na técnica seria capaz de projetar e testas moléculas mutantes com propriedades desejadas tal como nenhuma alteração na atividade de ligação a antigeno ou alteração na atividade de ligação (por exemplo, melhoras na atividade de ligação a antigeno ou mudança na especificidade do anticorpo). A seguir da mutagênese, a proteína codificada pode ser rotineiramente expressada e a atividade funcional e/ou biológica da proteína codificada, (por exemplo, capacidade de se ligar imunoespecificamente a pelo menos um epítopo de um polipeptideo de SEMA4D) pode ser determinada usando técnicas descritas aqui ou modificando-se rotineiramente técnicas conhecidas no ramo.
[0135]Em certas modalidades, os anticorpos antagonistas de SEMA4D para o uso nos métodos fornecidos aqui compreendem pelo menos uma região determinante de complementaridade (CDR) otimizada. Por “CDR otimizada” é intencionado que a CDR foi modificada e otimizada para melhorar a afinidade de ligação e/ou atividade anti-SEMA4D que é comunicada a um anticorpo anti-SEMA4D compreendendo a CDR otimizada. “Atividade anti-SEMA4D” ou “atividade de bloqueio de SEMA4D” pode incluir atividade que modula uma ou mais das atividades seguintes associadas com SEMA4D: ativação, agregação e sobrevivência de célula B; Proliferação induzida por CD40 e produção de anticorpo; resposta do anticorpo a antígenos dependentes de célula T; proliferação de célula T ou outra célula imune; maturação de célula dendrítica; desmielinização e degeneração axonal; apoptose de precursores neurais pluripotentes e/ou oligodentrócitos; indução de migração de célula endotelial; inibição de migração espontânea de monócito; inibição, retardo ou redução do crescimento tumoral celular ou metástase, ligação à plexina B1 de superfície celular ou outro receptor ou qualquer outra associação de atividade com
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SEMA4D solúvel ou SEMA4D que é expressado na superfície de células SEMA4D+. Em uma modalidade particular, a atividade anti-SEMA4D inclui a capacidade de inibir, retardar ou reduzir as metástases tumorais, em combinação com inibição, retardo ou redução de crescimento tumoral celular primário e metástases tumorais ou independentemente do crescimento tumoral celular primário e metástases tumorais. A atividade anti-SEMA4D também pode ser atribuída a uma diminuição na incidência ou severidade de doenças associadas com a expressão de SEMA4D, incluindo, mas não limitadas a, certos tipos de cânceres incluindo linfomas, doenças autoimunes, doenças inflamatórias incluindo doenças inflamatórias do sistema nervoso central (SNC) e sistema nervoso periférico (SNP), rejeições ao transplante e angiogênese invasiva. Exemplos de anticorpos otimizados com base em MAb BD16 anti-SEMA4D de murino foram descritos na Publ. dos EUA N2 2008/0219971 A1, Pedido de Patente Internacional WO 93/14125 e Herold et al., Int. Immunol. 7(1): 1 - 8 (1995), cada um dos quais é aqui incorporado por referência em sua totalidade. As modificações podem envolver a substituição de resíduos de aminoácido dentro da CDR tal que um anticorpo anti-SEMA4D mantém especificidade para o antígeno de SEMA4D e tem afinidade de ligação melhorada e/ou atividade anti-SEMA4D melhorada.
Astrócitos e ativação de astrócito [0136]Astrócitos são células gliais especializadas que realizam muitas funções complexas essenciais no SNC saudável, incluindo regulação do fluxo sanguíneo, homeostase de fluido/íon/pH/neurotransmissor, formação/função de sinapse, energia e metabolismo e manutenção da barreira sangue-cérebro (Barres BA, Neuron 60:430-440 (2008). Importantemente, astrócitos respondem à lesão do SNC através de um processo referido como astrogliose reativa, resultando em “astrócitos reativos” ou “ativação de astrócito”, os termos usados permutavelmente aqui. Astrogliose reativa pode servir como uma principal marca patológica de doenças neuroinflamatórias e neurodegenerativas. A evidência crescente aponta para o
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57/95 potencial de astrogliose reativa para desempenhar papéis primários ou contribuintes em transtornos do SNC por intermédio de perda de funções normais do astrócito ou ganho de atividades anormais. Dado seu papel central em muitas doenças do SNC, existe uma necessidade significativa para identificar e testar rigorosamente novos alvos moleculares que restauram a função normal do astrócito para eficazmente reduzir ou ainda reverter a progressão da doença. Existem várias vias potenciais através das quais os astrócitos podem afetar doenças do SNC.
[0137]Astrócitos podem desempenhar um papel central na função cerebral afetando-se a atividade de neurônios através da distribuição de substratos energéticos da circulação (por exemplo, captação de glicose dos capilares) aos neurônios. Ver P. Lecca, Technical Report CoSBi 07/2007, University of Trento Centre for Computational and Systems Biology, disponível em www.cosbi.eu/research/publications?pdf=5041 (visitado por último em 30 de janeiro de 2017). Lecca relata que neurônios contribuem no máximo 50 % de volume cortical cerebral e que os astrócitos excedem em número os neurônios (Id.). Um único astrócito pode fazer contato com muitas células. Astrócitos são células em forma de estrela com múltiplas projeções finas, que cobrem a superfície inteira dos capilares que alimentam o cérebro. Assim, astrócitos formam a primeira barreira celular encontrada pela glicose que entra no parênquima cerebral. Portanto, astrócitos são um maior sítio de captação de glicose no SNC (Id.).
[0138]A captação de glicose no astrócito é provocada por glutamato (ver FIG. 7, de Raichle ME e Mintun MA, Ann. Rev. Neurosci. 29:449 - 76 (2006)). Raichle e Mintun observam que a captação de glutamato provoca a utilização de glicose não oxidativa em astrócitos (glicólise aeróbica) e captação de glicose da circulação através do transportador de glicose GLUT1. Glutamato é o principal neurotransmissor excitatório do córtex cerebral (FIG. 7). Ver também, Hertz, L et al., J. Cerebr. Blood Flow Metab. 27:219 - 249 (2007) e Kasiscke, HD, etal., Science 305:99 - 103 (2004). Projeções de astrócito embalam as sinapses entre os neurônios e pode absorver o
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58/95 glutamato livre e convertê-lo àglutamina (Maragakis, NJ e JD Rothstein Nature Clinical Practice/Neurology 2:679 - 689 (2006)). A captação e a conversão consomem energia, requerendo duas moléculas de ATP por glutamato absorvido. A regulação de níveis de glutamato nas sinapses é importante porque transmissor excitatório em excesso pode provocar excitotoxicidade e neurodegeneração.
[0139]Durante a astrogliose reativa, entretanto, astrócitos podem recuar suas projeções e não embalar mais as sinapses ou absorver glutamato em excesso. Consequentemente, o metabolismo da glicose em astrócitos e em particular a captação da glicose dos capilares, podem ser reduzidos. Astrócitos reativos infraregulam o receptor de glutamato e glicólise e transporte de glicose associados, que podem ser detectados como um sinal de FDG-PET reduzido. Astrogliose reativa é uma principal marca patológica de doenças neuroinflamatórias e neurodegenerativas. A evidência crescente aponta para o potencial de astrogliose reativa para desempenhar papéis primários ou contribuintes em transtornos do SNC por intermédio de perda de funções de astrócito normais ou ganho de atividades anormais. Dado seu papel central em muitas doenças do SNC, existe uma necessidade significativa de identificar e rigorosamente testar novos alvos moleculares que restauram a função normal do astrócito para eficazmente reduzir ou ainda reverter a progressão da doença. Existem várias vias potenciais através das quais os astrócitos podem afetar doenças do SNC.
[0140]Astrócitos e suporte de célula precursora de oligodentrócito (OPC). A desmielinização que ocorre em doenças neuroinflamatórias, tais como esclerose múltipla, é associada com a destruição e perda acentuadas de células compreendendo a linhagem de oligodentrócito (Ozawa K, etal. Brain 117:1311 -1322 (1994)). Mecanismos de remielinização endógenos falham durante a fase de recuperação em parte por causa da incapacidade das OPCs de diferenciar completamente em oligodentrócitos mielinizantes maduros (Wolswijk G. Brain /23:105
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- 115 (2000)). Dados obtidos de outros modelos de desmielinização experimentalmente induzidos indicam que OPCs recentemente amadurecidas, ao contrário de oligodentrócitos maduros sobreviventes, são necessários para a remielinização durante a fase de recuperação (Levine JM, Reynolds R. Exp Neurol. 160'333 - 347 (1999)). Astrócitos mostraram desempenhar um papel significativo em sustentar a função e viabilidade da linhagem de oligodentrócito. Por exemplo, Talbott e colegas mostraram que em lesões desmielinizadas induzidas por brometo de etídio, astrócitos são necessários para que OPCs de Nkx2,2+/Olig2+ diferenciem completamente em oligodentrócitos e realizem a remielinização (Talbott, JF, et al., Exp Neurol. 192'11 - 24 (2005)). Arai e Lo demonstram in vitro que astrócitos fornecem suporte de fator trófico solúvel a OPCs que protegem estas células de estresse oxidativo aumentado (Arai, K. e Lo, E. H. J. Neurosci. Fies. 88' 758-763 (2010)). Outros mostraram que a inibição a ativação de astrócito nos cenários de encefalomielite autoimune experimental, neurite óptica experimental e lesão da medula espinhal leva a perfis de remielinização melhorados e medidas de efeito funcionais (Brambilla R, et al., J Immunol /82:2628-2640 (2009); Brambilla R, etal., J Neuroinflammation 9:213; Brambilla R, etal, J Exp Med202:145-156 (2005)).
[0141]Dado o papel que os astrócitos desempenham na facilitação de sobrevivência e função de OPC, a justaposição de OPCs que expressam SEMA4D e astrócitos que expressam receptor de SEMA4D sugere que a ativação relacionada à doença de astrócitos com supra-regulação associada de receptores de plexina-B e a sinalização de SEMA4D pode afetar a função de OPC.
[0142]Astrócitos e suporte neuronal. A evidência acumulada indica que astrócitos desempenham papéis em transmissão sináptica através da liberação regulada de moléculas sinapticamente ativas incluindo glutamato, purinas (ATP e adenosina), GABA e D-serina (revisado por Halassa MM etal., Trends MolMed /3:5463 (2007); Nedergaard M et al. Trends Neurosci 26:523-530 (2003)). A liberação de
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60/95 tais gliotransmissores ocorre em resposta a mudanças na atividade sináptica neuronal, envolve a excitabilidade do astrócito como refletido por aumentos na sinalização de cálcio no astrócito e pode alterar a excitabilidade neuronal (Id.). Além de ter efeitos diretos sobre a atividade sináptica por intermédio da liberação de gliotransmissores, astrócitos têm o potencial de exercer influências potentes e a longo prazo sobre a função sináptica através da liberação de fatores de crescimento e moléculas relacionadas (Barres BA Neuron 60:430-440 (2008)).
[0143]Astrócitos e integridade da barreira sangue-cérebro (BBB). Astrócitos desempenham um papel essencial na formação da barreira sangue-cérebro (BBB) e em regular o transporte através do BBB, um processo homeostático crítico para função neuronal apropriada. O BBB é uma estrutura endotelial cerebral altamente complexa do sistema neurovascular diferenciado compreendido de pericitos, astrócitos e células endoteliais. O compromisso de BBB foi implicado em várias doenças neurodegenerativas, incluindo meningite, edema cerebral, epilepsia, doença de Alzheimer (AD), doença de Parkinson (PD), acidente vascular cerebral, esclerose lateral amiotrófica (ALS) e esclerose múltipla (MS); revisado por (Zlokovic BV Nat Rev Neurosci. 12:723 - 738 (2011)).
[0144]Astrócitos são células “polarizadas” em que eles estendem processos membranosos especializados compreendidos de mecanismo celular único e componentes de membrana que interagem com tipos específicos de células. Por exemplo, processos astrocíticos proximais a microvasos ou membranas cerebrais são caracterizados por uma densidade alta do canal d’água, aquaporina 4 (Aqp4) (Neely JD, et al., Proc Natl Acad Sei USA 98:14108 - 14113 (2001); Amiry-Moghaddam M, et al., Proc Natl Acad Sei USA /00:2106 - 2111 (2003)). Ao contrário, processos astrocíticos que defrontam-se a regiões sinápticas são enriquecidos em transportadores de glutamato, enquanto a densidade de Aqp4 é comparativamente baixa (Nielsen S et ai., (1997) J Neurosci /7:171 - 180 (1997); Chaudhry FA et ai.,
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Neuron 15-.711 - 720 (1995)). A polarização astrocítica é interrompida em um cérebro que sofre neurodegeneração. Por exemplo, no cenário de doença de Alzheimer, intensidades de manchamento com Aqp4 significativamente diminuem em regiões com carga de placa amiloide significativa. De fato, Yang e colegas mostraram que o acúmulo de patologia amiloide em camundongos AD tg-ArcSwe é ligado temporalmente e espacialmente à perda de polarização astrocítica (Yang JL, etal., J Alzheimer’s Dis. 27:711 - 22 (2011)).
[0145] Papel da sinalização de SEMA4D em promover a ativação de astrócito e astrogliose reativa. Dada a associação do receptor de Expressão de SEMA4D e a ativação de marcador astrocítico GFAP, existe a possibilidade de que a sinalização de SEMA4D pode potenciar a ativação de astrócito, desse modo fornecendo um mecanismo de “alimentação de avanço” durante estados de doença. Ver, por exemplo, Patente dos EUA N2 9249227, incorporada aqui por referência em sua totalidade.
Captação de Glicose Aumentada em Regiões Cerebrais como um Indicador Precoce de Eficácia do Tratamento com Anticorpo Antagonista de SEMA4D [0146]A divulgação fornece um teste de biomarcador precoce para determinar se o tratamento com anticorpo antagonista de SEMA4D é provável de ser eficaz em tratar uma doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos em um sujeito. O teste impõe medir um nível de valor de referência de captação de glicose cerebral no paciente, por exemplo, por imagiologia de Tomografia de Emissão Positrônica com 18F-Fluorodesoxiglicose (FDG-PET), administrando uma ou mais doses iniciais do anticorpo antagonista de SEMA4D ao sujeito e depois medir novamente a captação de glicose no cérebro do sujeito. Pacientes que estão sofrendo de um déficit acumulado, algumas vezes referido aqui como um déficit histórico, na captação de glicose cerebral, por exemplo, devido ao acúmulo de astrócitos reativos na patologia da doença como explicado em qualquer lugar aqui, apresentarão como
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62/95 responsivos à terapia com o anticorpo antagonista de SEMA4D quando a nova medição de captação de glicose, por exemplo, por intermédio de FDG-PET, mostra um aumento quando comparado à medição do valor de referência. Isto indicaria que o déficit na captação de glicose é relacionado a um mecanismo patogênico que pode ser revertido por antagonista de SEMA4D. O déficit na captação de glicose pode ter desenvolvido durante um período de semanas, meses ou anos antes da iniciação do tratamento. Se nenhum aumento no sinal de FDG-PET for observado, uma conclusão pode ser feita de modo que o paciente não seja responsive à terapia com anticorpo antagonista de SEMA4D porque o paciente não tem nenhum déficit na captação de glicose cerebral ou a base patogênica de tal déficit nesta doença ou de modo que o paciente não possa ser revertido por terapia com antagonista de SEMA4D. Em ambos os casos, o tratamento com o anticorpo antagonista de SEMA4D depois pode ser ajustado ou descontinuado.
[0147]Em certos aspectos, a divulgação fornece um método para determinar se um antagonista de anticorpo de semaforina 4D (SEMA4D) ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste será eficaz em tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios definidos ou específicos, onde o método inclui: administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver esta doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; medir o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste; e continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou descontinuar ou ajustar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou
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63/95 fragmento, variante ou derivado deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
[0148]Em certos aspectos, as medições de captação de glicose cerebral podem ser realizadas, por exemplo, por um laboratório clínico, sob a direção e controle claros de um provedor de saúde. Em certos aspectos, um provedor de saúde pode ordenar as medições de captação de glicose cerebral a serem realizadas. Em certos aspectos as medições de captação de glicose cerebral podem ser realizadas por um laboratório clínico e o laboratório clínico depois pode instruir ou aconselhar o provedor de saúde do melhor tratamento para o sujeito ou paciente. Por exemplo, o método pode incluir medir, por exemplo, por um laboratório clínico, o nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro de um sujeito apresentado como tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; e depois medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste ao sujeito por um provedor de saúde; e depois instruir o provedor de saúde a continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste se um aumento em captação de glicose cerebral sobre o valor de referência for detectado; ou instruir o provedor de saúde a descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada. Em certos aspectos a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D e a medição de captação de glicose no cérebro do sujeito podem ser realizadas pela mesma pessoa ou instalação. Em certos aspectos, os métodos como fornecidos aqui podem ser ordenados por um provedor de benefícios de saúde antes de autorizar o pagamento para outro tratamento com o anticorpo antagonista de SEMA4D.
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64/95 [0149]Como será entendido por aqueles de habilidade comum na técnica, uma “dose eficaz” de um anticorpo antagonista de SEMA4D pode variar entre sujeitos ou pacientes individuais. A divulgação fornece ainda um método no qual para determinar uma dose eficaz para um sujeito individual. Medindo-se mudanças na captação de glicose no cérebro de um sujeito individual, um provedor de saúde pode usar o método fornecido aqui para ajustar a dosagem para encontrar a dose mais eficaz para um sujeito dado. Por exemplo, se nenhuma mudança ou apenas uma pequena mudança for observada na captação de glicose sobre o valor de referência depois de uma administração dada de um anticorpo antagonista de SEMA4D, a dosagem do anticorpo pode ser aumentada seguido por uma nova medição de captação de glicose no cérebro do sujeito. Se uma mudança depois for observada, o provedor de saúde pode continuar o tratamento do sujeito com esta dosagem. Em certos aspectos, medições múltiplas de captação de glicose podem ser tomadas para “sintonizar” a dosagem ideal do anticorpo antagonista de SEMA4D para um sujeito ou paciente dado. Cuidado deve, entretanto, ser tomado para permitir que tempo suficiente para um déficit histórico ou contemporâneo acumule que podería estar sujeito à reversão por tratamento com antagonista de SEMA4D. Isto pode ser estabelecido para cada doença de interesse retardando-se a ressunção do tratamento de vários meses a, em uma doença muito lentamente progressiva, vários anos.
[0150]A divulgação fornece ainda um método para tratar um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, onde o método inclui: administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; medir o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da
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65/95 administração, por exemplo, por FDG-PET; e continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou descontinuar ou ajustar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada. O método de tratamento pode incluir ainda medir o nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro do sujeito ou em alguns aspectos tal medição do valor de referência pode ter sido realizada previamente.
[0151]Como observado acima, o método de tratamento pode ser ainda “sintonizado” por medições adicionais de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir de ajustes na dosagem do anticorpo antagonista de SEMA4D. Além disso, as medições de captação de glicose do tratamento podem ser realizadas, por exemplo, por um laboratório clínico, sob a direção e controle claros de um provedor de saúde. Em certos aspectos, um provedor de saúde pode ordenar as medições de captação de glicose a serem realizadas como parte de um regime de tratamento. Em certos aspectos as medições de captação de glicose podem ser realizadas por um laboratório clínico e o laboratório clínico depois pode instruir ou aconselhar o provedor de saúde quanto ao tratamento do sujeito ou paciente. Em certos aspectos a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D e a medição de captação de glicose no cérebro do sujeito podem ser realizadas pela mesma pessoa ou instalação. Em certos aspectos, os métodos como fornecidos aqui podem ser ordenados por um provedor de benefícios de saúde antes de autorizar o pagamento para outro tratamento com o anticorpo antagonista de SEMA4D.
[0152]Em certos aspectos, o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste para o uso nos métodos fornecidos aqui pode inibir a interação de SEMA4D com seu receptor, por exemplo, Plexina-B1, Plexina-B2 ou
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CD72. Em certos aspectos, o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste pode inibir a transdução de sinal de Plexina-B1 mediada por SEMA4D. Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste é relacionado ao anticorpo antagonista de SEMA4D VX15. Por exemplo em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste pode competitivamente inibir ou se ligar ao mesmo epítopo como VX15, isto é, um anticorpo de referência compreendendo uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5 de ligar-se a SEMA4D. Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D tem uma VH com três regiões determinantes de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2 e HCDR3 e uma VL com três CDRs LCDR1, LCDR2 e LCDR3, onde as CDRs compreendem as sequências de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, respectivamente exceto para pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis substituições de aminoácido conservativas únicas em uma ou mais das CDRs. Em certos aspectos o anticorpo antagonista de SEMA4D tem uma VH com três regiões determinantes de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2 e HCDR3 e uma VL com três CDRs LCDR1, LCDR2 e LCDR3 e onde as CDRs compreendem as sequências de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, respectivamente. Em certos aspectos a VH do anticorpo antagonista de SEMA4D tem uma sequência de aminoácido pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 1 e a VL do anticorpo antagonista de SEMA4D tem uma sequência de aminoácido pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 5; ou a VH tem uma sequência de
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67/95 aminoácido pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 9 e a VL tem uma sequência de aminoácido pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 % ou 100 % idêntica à SEQ ID NO: 10. Em certos aspectos a VH do anticorpo antagonista de SEMA4D tem a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e a VL do anticorpo antagonista de SEMA4D tem a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5; ou a VH do anticorpo antagonista de SEMA4D tem a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 9 e a VL do anticorpo antagonista de SEMA4D tem a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 10.
[0153]De acordo com os métodos fornecida aqui, uma primeira dose do anticorpo antagonista de SEMA4D pode ser administrada e depois doses adicionais do anticorpo antagonista de SEMA4D podem ser administradas daí em diante, por exemplo, pelo menos uma vez a cada semana, pelo menos uma vez a cada duas semanas, pelo menos uma vez a cada três semanas, pelo menos uma vez por mês ou pelo menos uma vez a cada dois meses e assim por diante. Se o tratamento for descoberto como sendo eficaz de acordo com os métodos fornecidos aqui, a administração do anticorpo de SEMA4D pode ser continuada por quanto tempo for necessário, em alguns casos, por toda a vida do sujeito ou paciente ou em outros casos por um período de tempo discreto até que a doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos do sujeito ou paciente estejam sob controle, sejam curados ou os sintomas diminuam.
[0154]De acordo com os métodos fornecidos aqui, a medição do valor de referência da captação de glicose no cérebro do sujeito é tipicamente medida exatamente antes da primeira dose do anticorpo antagonista de SEMA4D, mas pode, em certos exemplos ocorrer mais cedo ou em certos exemplos pode ocorrer imediatamente depois da primeira dose do anticorpo antagonista de SEMA4D. Nestes
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68/95 métodos em que ajustes às dosagens estão sendo avaliados, uma nova medição de “valor de referência” pode ser tomada algum tempo depois da primeira dose, de vários meses a vários anos dependendo da taxa de progressão da doença. Em relação à medição do valor de referência, a recuperação do déficit acumulado ou “histórico” na captação de glicose que é um marcador de tratamento eficaz com um anticorpo antagonista de SEMA4D pode ocorrer rapidamente a seguir da primeira dose do anticorpo antagonista de SEMA4D ou pode durar um período de tempo ou doses múltiplas do anticorpo antagonista de SEMA4D a serem observáveis usando tecnologia disponível, por exemplo, FDG-PET. Consequentemente, a nova medição de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação ao valor de referência pode ocorrer, por exemplo, pelo menos uma semana depois da primeira dose, pelo menos duas semanas depois da primeira dose, pelo menos um mês depois da primeira dose, pelo menos dois meses depois da primeira dose, pelo menos três meses depois da primeira dose, pelo menos quatro meses depois da primeira dose, pelo menos cinco meses depois da primeira dose, pelo menos seis meses depois da primeira dose ou ainda mais tarde ou qualquer combinação destes.
[0155]Em certos aspectos, o paciente ou sujeito que passa pelos métodos como fornecido aqui é um sujeito mamífero, por exemplo, um roedor, um primata não humano ou um sujeito humano.
[0156]A doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios que podem se beneficiar da administração de um anticorpo antagonista de SEMA4D de acordo com os métodos fornecidos aqui podem ser, por exemplo, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, síndrome de Down, ataxia, esclerose lateral amiotrófica (ALS), esclerose múltipla, (MS), epilepsia, meningite, edema cerebral, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, demência frontotemporal (FTD), dano cognitivo relacionado a HIV, lúpus do SNC, perda cognitiva leve ou uma combinação destes.
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69/95 [0157]Em certos aspectos a doença é doença de Huntington (HD), como descrito em qualquer lugar aqui. Em certos aspectos o sujeito está em risco de desenvolver HD devido ao histórico familiar de HD ou teste genético, por exemplo, um teste mostrando que o gene HTT do sujeito compreende 36 ou mais repetições de CAG. Um benefício dos métodos como fornecido aqui é que tais sujeitos frequentemente não exibem nenhum sintoma superficial de HD, mas estão claramente em risco. Como mostrado nos Exemplos, o tratamento precoce pode fornecer um benefício sobre o tratamento mais tardio e tais indivíduos podem ser avaliados como se eles pudessem se beneficiar do tratamento com um anticorpo antagonista de SEMA4D de acordo com os métodos fornecidos aqui muito antes que eles exibam quaisquer sintomas superficiais. Em certos aspectos o sujeito é suspeito de ter HD devido, por exemplo, à disfunção motora suave, perda cognitiva leve ou características neuropsiquiátricas suaves. Testes para determinar tais disfunções suaves são bem conhecidos àqueles de habilidade comum na técnica e estão disponíveis na literatura, por exemplo, em Bates, GP, etal., Nature Reviews/Disease Primers /:1 - 21 (2015). Em certos aspectos, o sujeito já é diagnosticado como tendo HD devido, por exemplo, a uma classificação de Escala de Classificação de Doença de Huntington Uniforme elevada (UHDRS), uma classificação de Batería de Avaliação Cognitiva de Doença de Huntington (HD-CAB) aumentada, avaliações motoras quantitativas ou uma combinação destes. Nestes sujeitos conhecidos como estando em risco de HD, o sujeito pode estar no estágio pré-sintomático de HD, o estágio pródromo inicial de HD, estágio pródromo tardio de HD, e, a seguir da diagnose, o estágio de manifesto inicial de HD, o estágio de manifesto moderado de HD ou estágio de manifesto avançado de HD. Os sinais e sintomas dos vários estágios de HD podem ser encontrados, por exemplo, em Bates, GP, etal., Nature Reviews/Disease Primers /:1 - 21 (2015).
Métodos de Tratamento Usando Anticorpos Antagonistas de SEMA4D
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70/95 [0158]Os métodos diagnósticos da divulgação referem-se ao uso de anticorpos antagonistas de SEMA4D, incluindo fragmentos de ligação a antígeno, variantes e derivados destes, para tratar um sujeito tendo uma doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos ou para avaliar se o sujeito se beneficiará do tratamento com um anticorpo antagonista de SEMA4D. Ainda que o seguinte debate refira-se à administração de um anticorpo antagonista de SEMA4D, os métodos descritos aqui também são aplicáveis aos fragmentos de ligação a antígeno, variantes e derivados de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou outros produtos biológicos ou moléculas pequenas que mantêm as propriedades desejadas de um anticorpo antagonista de SEMA4D da divulgação, por exemplo, capazes de se ligar especificamente a SEMA4D, por exemplo, SEMA4D humano, de camundongo ou humano e de camundongo, tendo atividade neutralizante de SEMA4D e/ou bloquear a interação de SEMA4D com seu receptor, por exemplo, Plexina-B1.
[0159]Em um aspecto, a divulgação fornece a administração de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ou outro produto biológico ou molécula pequena que se liga a e neutraliza SEMA4D como descrito aqui a um paciente, onde o paciente tem, é suspeito de ter ou tem o risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos. Em um outro aspecto, o tratamento também é intencionado a incluir a administração de uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste a um paciente, onde o paciente tem, é suspeito de ter ou tem o risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos.
[0160]Os anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação destes como descrito aqui são úteis para o tratamento de várias doenças, transtornos ou lesões neuroinflamatórios ou neurodegenerativos. Em alguns aspectos, o tratamento é intencionado a induzir uma melhoria nos sintomas associados com a
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71/95 doença, transtorno ou lesão. Em outras modalidades, o tratamento é intencionado a reduzir, retardar ou parar um aumento nas manifestações dos sintomas. Em outros aspectos, o tratamento é intencionado a inibir, por exemplo, suprimir, retardar, impedir, parar ou reverter uma manifestação dos sintomas. Em outros aspectos, o tratamento é intencionado a aliviar, a algum grau, um ou mais dos sintomas associados com o transtorno. Nestas situações, os sintomas podem ser, por exemplo, sintomas neuropsiquiátricos, sintomas cognitivos e/ou disfunção motora. Em outros aspectos, o tratamento é intencionado a reduzir a morbidez e a mortalidade. Em outros aspectos, o tratamento é intencionado a melhorar a qualidade de vida.
[0161]Em um aspecto, a divulgação refere-se ao uso de anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação a antigeno, variantes ou derivados destes, como um medicamento, em particular para o uso no tratamento de várias doenças, transtornos ou lesões neuroinflamatórios ou neurodegenerativos para melhorar os sintomas associados com o transtorno.
[0162]De acordo com os métodos da presente divulgação, pelo menos um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste ou outro produto biológico ou molécula pequena como definido em qualquer lugar aqui pode ser usado para promover uma resposta terapêutica positiva com respeito à doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos. Uma “resposta terapêutica positiva” com respeito à doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos é intencionada a incluir uma melhoria nos sintomas associados com o transtorno. Tais respostas terapêuticas positivas não são limitadas à via de administração e podem compreender administração ao doador, ao tecido do doador (tal como por exemplo perfusão orgânica), ao hospedeiro, qualquer combinação destes e semelhantes. Em particular, os métodos fornecidos aqui são dirigidos para inibir, prevenir, reduzir, aliviar ou diminuir a progressão de uma doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou
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72/95 neurodegenerativos em um paciente. Assim, por exemplo, uma melhoria no transtorno pode ser caracterizada como uma ausência de sintomas clinicamente observáveis, uma diminuição na incidência de sintomas clinicamente observáveis ou uma mudança nos sintomas clinicamente observáveis.
[0163]Os anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes ou outros produtos biológicos ou moléculas pequenas podem ser usados em combinação com pelo menos um ou mais tratamentos adicionais para doenças, transtornos ou lesões neuroinflamatórios ou neurodegenerativos; onde a terapia adicional é administrada antes, durante ou subsequente à terapia com anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste. Assim, onde as terapias combinadas compreendem a administração de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste, em combinação com a administração de um outro agente terapêutico, os métodos da divulgação abrangem a coadministração, usando formulações separadas ou uma única formulação farmacêutica, com administração simultânea ou consecutiva em qualquer ordem.
[0164]Em certos aspectos a doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos podem ser, por exemplo, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, síndrome de Down, ataxia, esclerose lateral amiotrófica (ALS), demência frontotemporal (FTD), dano cognitivo relacionado a HIV, lúpus do SNC, perda cognitiva leve, esclerose múltipla, epilepsia, meningite ou uma combinação destes. Em certos aspectos de qualquer um dos procedimentos anteriormente mencionados, a doença neurodegenerativa é doença de Huntington.
[0165]Em alguns aspectos, um provedor de saúde pode administrar ou instruir um outro provedor de saúde a administrar uma terapia compreendendo uma quantidade eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D, onde o sujeito tem, é suspeito de ter ou está em risco de contrair uma doença, transtorno ou lesão
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73/95 neuroinflamatórios ou neurodegenerativos. Um provedor de saúde pode implementar ou instruir um outro provedor de saúde ou paciente a realizar as ações seguintes: obter uma amostra ou imagem, processar uma amostra ou imagem, submeter uma amostra ou imagem, receber uma amostra ou imagem, transferir uma amostra ou imagem, analisar ou medir uma amostra ou imagem, quantificar uma amostra ou imagem, fornecer os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra ou imagem, receber os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra ou imagem, comparar/classificar os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma ou mais amostras ou imagens, fornecer a comparação/classificação de uma ou mais amostras, obter a comparação/classificação de uma ou mais amostras ou imagens, administrar uma terapia, por exemplo, uma quantidade eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D, começar a administração de uma terapia, cessar a administração de uma terapia, continuar a administração de uma terapia, interromper temporariamente a administração de uma terapia, aumentar a quantidade de um agente terapêutico administrado, diminuir a quantidade de um agente terapêutico administrado, continuar a administração de uma quantidade de um agente terapêutico, aumentar a frequência de administração de um agente terapêutico, diminuir a frequência de administração de um agente terapêutico, manter a mesma frequência de dosagem sobre um agente terapêutico, substituir uma terapia ou agente terapêutico por pelo menos uma outra terapia ou agente terapêutico, combinar uma terapia ou agente terapêutico com pelo menos uma outra terapia ou agente terapêutico adicional.
[0166]Em alguns aspectos, um provedor de benefícios de saúde pode autorizar ou negar, por exemplo, realizando imagiologia, coleta de uma amostra ou imagem, processamento de uma amostra ou imagem, submissão de uma amostra ou imagem, recebimento de uma amostra ou imagem, transferência de uma amostra ou imagem, análise ou medição uma amostra ou imagem, quantificação de uma amostra
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74/95 ou imagem, fornecimento de resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra ou imagem, transferência dos resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra ou imagem, comparação/classificação dos resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma ou mais amostras ou imagens, transferência da comparação/classificação de uma ou mais amostras ou imagens, administração de uma terapia ou agente terapêutico, começo da administração de uma terapia ou agente terapêutico, cessação da administração de uma terapia ou agente terapêutico, continuação da administração de uma terapia ou agente terapêutico, interrupção temporária da administração de uma terapia ou agente terapêutico, aumento da quantidade de agente terapêutico administrado, diminuição da quantidade de agente terapêutico administrado, continuação da administração de uma quantidade de um agente terapêutico, aumento na frequência de administração de um agente terapêutico, diminuição na frequência de administração de um agente terapêutico, manutenção da mesma frequência de dosagem sobre um agente terapêutico, substituição de uma terapia ou agente terapêutico por pelo menos uma outra terapia ou agente terapêutico ou combinação de uma terapia ou agente terapêutico com pelo menos uma outra terapia ou agente terapêutico adicional.
[0167]Além disso, um provedor de benefícios de saúde pode, por exemplo, autorizar ou negar a prescrição de uma terapia, autorizar ou negar a cobertura para terapia, autorizar ou negar o reembolso para o custo da terapia, determinar ou negar a elegibilidade para terapia, etc.
[0168]Em alguns aspectos, o laboratório clínico pode, por exemplo, coletar ou obter uma amostra ou imagem, processar uma amostra ou imagem, submeter uma amostra ou imagem, receber uma amostra ou imagem, transferir uma amostra ou imagem, analisar ou medir uma amostra ou imagem, quantificar uma amostra ou imagem, fornecer os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma amostra ou imagem, receber os resultados obtidos depois de
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75/95 analisar/medir/quantificar uma amostra ou imagem, comparar/classificar os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma ou mais amostras ou imagens, fornecer a comparação/classificação de uma ou mais amostras ou imagens, obter a comparação/classificação de uma ou mais amostras ou imagens ou outras atividades relacionadas.
[0169]Em certos aspectos, qualquer um dos procedimentos anteriormente mencionados pode ser usado para determinar se um sujeito tem uma doença, transtorno ou lesão neuroinflamatórios ou neurodegenerativos em que mudanças na captação de glicose podem ser um fator patogênico sujeito ao tratamento com um antagonista de SEMA4D.
[0170]Em alguns aspectos, um provedor de saúde, laboratório clínico ou outra entidade pode, por exemplo, coletar ou obter uma imagem, processar uma imagem, submeter uma imagem, receber uma imagem, transferir uma imagem, analisar ou medir uma imagem, quantificar uma imagem, fornecer os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma imagem, receber os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma imagem, comparar/classificar os resultados obtidos depois de analisar/medir/quantificar uma ou mais imagens, fornecer a comparação/classificação de uma ou mais imagens, obter a comparação/classificação de uma ou mais imagens ou outras atividades relacionadas. Imagens que podem ser usadas em tais aspectos incluem, mas não são limitadas a, imagens obtidas por angiografia, ultrassom, tomografia computadorizada (CT), imagiologia de ressonância magnética (MRI), tomografia de emissão positrônica (PET), por exemplo, FDG-PET, tomografia de coerência óptica (OCT), espectroscopia próxima do infravermelho (NIRS) e fluorescência de NIR. Em certas modalidades, técnicas de imagiologia que foram descritas na literatura podem ser usadas (Tardif etal. Circ Cardiovasc Imaging 4:319 -333 (2011)).
Composições Farmacêuticas e Métodos de Administração
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76/95 [0171 ]Métodos de preparar e administrar anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes a um sujeito em necessidade destes são bem conhecidos a ou são facilmente determinados por aqueles habilitados na técnica. A via de administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste, pode ser, por exemplo, oral, parenteral, por inalação ou tópica. O termo parenteral como usado aqui inclui, por exemplo, administração intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutânea, retal ou vaginal. Embora todas estas formas de administração sejam claramente consideradas como estando dentro do escopo da divulgação, um exemplo de uma forma para administração seria uma solução para injeção, em particular para injeção intravenosa ou intra-arterial ou gotejamento. Uma composição farmacêutica adequada para injeção pode compreender um tampão (por exemplo, tampão de acetato, fosfato ou citrato), um tensoativo (por exemplo, polisorbato), opcionalmente um agente estabilizante (por exemplo, albumina humana), etc. Entretanto, em outros métodos compatíveis com os ensinamentos aqui, anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes podem ser liberados diretamente ao sítio da população celular adversa desse modo aumentando a exposição do tecido doente ao agente terapêutico.
[0172]Como debatido aqui, anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação a antígeno, variantes ou derivados destes podem ser administrados em uma quantidade farmaceuticamente eficaz para o tratamento in vivo de doenças, transtornos ou lesões neuroinflamatórios ou neurodegenerativos. Sob este aspecto, será avaliado que os anticorpos antagonistas de SEMA4D divulgados podem ser formulados de modo a facilitar a administração e promover a estabilidade do agente ativo. Em certas modalidades, composições farmacêuticas de acordo com a presente divulgação compreendem um portador farmaceuticamente aceitável, não
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77/95 tóxico, estéril tal como solução salina fisiológica, tampões não tóxicos, preservantes e semelhantes. Para os propósitos do presente pedido, uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno, variante ou derivado deste, deve ser mantida para significar uma quantidade suficiente para obter a ligação eficaz a um alvo e para obter um benefício, por exemplo, melhorar os sintomas associados com um transtorno neurodegenerativo. Os métodos diagnósticos fornecidos aqui permitem que a pessoa habilitada determine e/ou “sintonize” a quantidade eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste para qualquer sujeito ou paciente individual.
[0173]As composições farmacêuticas usadas nesta divulgação compreendem portadores farmaceuticamente aceitáveis, incluindo, por exemplo, trocadores de íon, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, tais como albumina sérica humana, substâncias tampão tais como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas de glicerida parciais de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tais como sulfato de protamina, hidrogeno fosfato de dissódio, hidrogeno fosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, silica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinilpirrolidona, substâncias com base em celulose, polietilenoglicol, carboximetilcelulose de sódio, poliacrilatos, ceras, polímeros em bloco de polietilenopolioxipropileno, polietilenoglicol e lanolina.
[0174] Preparações para administração parenteral incluem soluções, suspensões e emulsões aquosas ou não aquosas estéreis. Exemplos de solventes não aquosos são propileno glicol, polietilenoglicol, óleos vegetais tais como óleo de oliva e ésteres orgânicos injetáveis tais como oleato de etila. Portadores aquosos incluem, por exemplo, água, soluções, emulsões ou suspensões alcoólicas/aquosas, incluindo solução salina e meio tamponado. Na divulgação objeto, portadores farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não são limitados a, tampão de fosfato a 0,01 a 0,1 M, por exemplo, cerca de 0,05 M ou solução salina a 0,8 %. Outros veículos
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78/95 parenterais comuns incluem soluções de fosfato de sódio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sódio, Ringer lactato ou óleos fixos. Veículos intravenosos incluem reabastecedores de fluido e nutriente, reabastecedores de eletrólito, tais como aqueles com base em dextrose de Ringer e semelhantes. Preservantes e outros aditivos também podem estar presentes tais como, por exemplo, antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes e gases inertes e semelhantes.
[0175]Mais particularmente, composições farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem soluções aquosas estéreis (onde solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Em tais casos, a composição deve ser estéril e deve ser fluida à medida que seringabilidade fácil existe. A mesma deve ser estável sob as condições de fabricação e armazenamento e pode ser preservada contra a ação contaminante de microrganismos, tais como bactérias e fungos. O portador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietilenoglicol líquido e semelhantes) e misturas adequadas destes. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. Formulações adequadas para o uso nos métodos terapêuticos divulgados aqui são descritas em Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.) 16aed. (1980).
[0176]A prevenção da ação de microrganismos pode ser obtida por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal e semelhantes. Em muitos casos, agentes isotônicos podem ser incluídos, por exemplo, açúcares, poliálcoois, tais como manitol, sorbitol ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser ocasionada incluindo-se na composição um agente que retarda a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.
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79/95 [0177]Em qualquer caso, soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas incorporando-se um composto ativo (por exemplo, um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste, por si só ou em combinação com outros agentes ativos) na quantidade necessária em um solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados aqui, conforme necessário, seguido por esterilização filtrada. Geralmente, dispersões são preparadas incorporando-se o composto ativo em um veículo estéril, que contém um meio de dispersão básico e os ingredientes adicionais necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, métodos de preparação incluem secagem a vácuo e liofilização, que produzem um pó de um ingrediente ativo mais qualquer ingrediente desejado adicional de uma solução previamente filtrada estéril deste. As preparações para injeções são processadas, cheias em recipientes tais como ampolas, sacos, garrafas, seringas ou frascos e vedadas sob condições assépticas de acordo com métodos conhecidos na técnica. Além disso, as preparações podem ser embaladas e vendidas na forma de um kit. Tais artigos de fabricação podem ter rótulos ou folhetos informativos indicando que as composições associadas são úteis para tratar um sujeito sofrendo de ou predisposto a uma doença ou transtorno.
[0178]Formulações parenterais podem ser uma única dose de bolo, uma infusão ou uma dose de bolo de carga seguida com uma dose de manutenção. Estas composições podem ser administradas em intervalos fixos ou variáveis específicos, por exemplo, uma vez por dia ou em uma base “conforme necessário”.
[0179]Certas composições farmacêuticas usadas nesta divulgação podem ser oralmente administradas em uma forma de dosagem aceitável incluindo, por exemplo, cápsulas, tabletes, suspensões ou soluções aquosas. Certas composições farmacêuticas também podem ser administradas por aerossol nasal ou inalação. Tais composições podem ser preparadas como soluções em solução salina, utilizando
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80/95 álcool benzílico ou outros preservantes adequados, promotores de absorção para realçar a biodisponibilidade e/ou outros agentes solubilizantes ou dispersantes convencionais.
[0180]A quantidade de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste, a ser combinado com os materiais portadores para produzir uma única forma de dosagem variará dependendo do hospedeiro tratado e do modo de administração particular e pode ser determinada de acordo com os métodos fornecidos aqui. A composição pode ser administrada como uma dose única, doses múltiplas ou durante um período de tempo estabelecido em uma infusão. Regimes de dosagem também podem ser ajustados para fornecer a resposta desejada ideal (por exemplo, uma resposta terapêutica ou profilática).
[0181]De acordo com o escopo da presente divulgação, anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação a antigeno, variantes ou derivados destes podem ser administrados a um ser humano ou outro animal de acordo com os métodos de tratamento anteriormente mencionados em uma quantidade suficiente para produzir um efeito terapêutico. Os anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação a antigeno, variantes ou derivados destes podem ser administrados a tal ser humano ou outro animal em uma forma de dosagem convencional preparada combinando-se o anticorpo da divulgação com um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável convencional de acordo com técnicas conhecidas. Será reconhecido por uma pessoa de habilidade na técnica que a forma e o caráter do portador ou diluente farmaceuticamente aceitável é dita pela quantidade de ingrediente ativo com o qual deve ser combinada, pela via de administração e outras variáveis bem conhecidas. Aqueles habilitados na técnica avaliarão ainda que um coquetel compreendendo uma ou mais espécies de anticorpos antagonistas de SEMA4D ou fragmentos de ligação a antigeno, variantes ou derivados destes, da divulgação, pode ser usado.
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81/95 [0182]A quantidade de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação, variante ou derivado deste, a ser administrado é facilmente determinada por uma pessoa de habilidade comum na técnica de acordo com a presente divulgação. Fatores que influenciam o modo de administração e a respectiva quantidade de um anticorpo antagonista de SEMA4D, fragmento de ligação a antígeno, variante ou derivado deste incluem, mas não são limitados, à severidade da doença, ao histórico da doença e à idade, altura, peso, saúde e condição física do indivíduo passando por terapia. Similarmente, a quantidade de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento, variante ou derivado deste, a ser administrado será dependente do modo de administração e se o sujeito passará por uma dose única ou doses múltiplas deste agente.
[0183]A prática da presente divulgação utilizará, a menos que de outro modo indicado, técnicas convencionais de biologia celular, cultura celular, biologia molecular, biologia transgênica, microbiologia, DNA recombinante e imunologia, que estão dentro da habilidade da técnica. Tais técnicas são explicadas completamente na literatura. Ver, por exemplo, Sambrook et al., ed. (1989) Molecular Cloning A Laboratory Manual (2â ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press); Sambrook et al., ed. (1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs Harbor Laboratory, NY); D. N. Glover ed., (1985) DNA Cloning, Volumes I e II; Gait, ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis; Mullis etal. Pat. dos EUA N2 4.683.195; Hames e Higgins, eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization; Hames e Higgins, eds. (1984) Transcription And Tradution; Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (Alan R. Liss, Inc.); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986); Perbal (1984) A Practical Guide To Molecular Cloning; the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Miller e Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors For Mammal Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory); Wu et al., eds., Methods In Enzymology, Vols. 154 e 155; Mayer e Walker, eds. (1987) Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology
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82/95 (Academic Press, London); Weir e Blackwell, eds., (1986) Handbook Of Experimental Immunology, Volumes l-IV; Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1986); e em Ausubel etal. (1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Baltimore, Md.).
[0184]Os princípios gerais de engenharia de anticorpo são apresentados em Borrebaeck, ed. (1995) Antibody Engineering (2a ed.; Oxford Univ. Press). Os princípios gerais de engenharia de proteína são apresentados em Rickwood et al., eds. (1995) Protein Engineering, A Practical Approach (IRL Press at Oxford Univ. Press, Oxford, Eng.). Os princípios gerais de anticorpos e ligação a anticorpo-hapteno são apresentados em: Nisonoff (1984) Molecular Immunology (2a ed.; Sinauer Associates, Sunderland, Mass.); e Steward (1984) Antibodies, Their Structure and Function (Chapman e Hall, New York, N.Y.). Adicionalmente, métodos padrão em imunologia conhecidos na técnica e não especificamente descritos são geralmente seguidos como em Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York; Stites et al., eds. (1994) Basic and Clinical Immunology (8a ed; Appleton & Lange, Norwalk, Conn.) e Mishell e Shiigi (eds) (1980) Selected Methods in Cellular Immunology (W.H. Freeman e Co., NY).
[0185]Documentos de referência padrão apresentando princípios gerais de imunologia incluem Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York; Klein (1982) J., Immunology: The Science of Self-Nonself Discrimination (John Wiley & Sons, NY); Kennett et al., eds. (1980) Monoclonal Antibodies, Hybridoma: A New Dimension in Biological Analyses (Plenum Press, NY); Campbell (1984) “Monoclonal Antibody Technology” in Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, ed. Carga et al., (Elsevier, Amsterdam); Goldsby et al., eds. (2000) Kuby Immunology (4a ed.; H. Freeman e & Co.); Roitt et al. (2001) Immunology (6a ed.; London: Mosby); Abbas et al. (2005) Cellular and Molecular Immunology (5a ed.; Elsevier Health Sciences Division); Kontermann e Dubel (2001) Antibody Engineering
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83/95 (Springer Verlag); Sambrook e Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press); Lewin (2003) Genes VIII (Prentice Hall 2003); Harlow e Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press); Dieffenbach e Dveksler (2003) PCR Primer (Cold Spring Harbor Press).
[0186]Todas as referências citadas acima, assim como todas as referências citadas aqui, são incorporadas aqui por referência em suas totalidades.
[0187]Os exemplos seguintes são oferecidos por via de ilustração e não por via de limitação.
Exemplos
Exemplo 1: Protocolo Clínico [0188]O protocolo para o Coorte A da Experiência Clínica de Sinal é mostrado na FIG. 1. Trinta e seis (36) indivíduos que eram de 21 anos de idade ou mais velhos com pródromo tardio (classificação do produto CAG-age (classificação CAP) de mais do que 200 e Nível de Confiança de Diagnóstico (DCL) de 2 ou 3) ou HD manifesto inicial (Capacidade Funcional Total (TFC) maior do que ou igual a 11) foram registrados no Coorte de Sinal A. Todos os sujeitos registrados também passaram por teste genético com uma repetição de CAG conhecida maior do que ou igual a 36. Todos os sujeitos foram capazes e forneceram consentimento informado para a participação no estudo. Os sujeitos foram randomizados com 17 pacientes designados ao grupo de tratamento VX15 e 19 pacientes designados ao grupo de tratamento com placebo. 21 sujeitos de estado pródromo e 15 manifesto inicial foram registrados. Um resumo dos pacientes registrados no estudo é mostrado na Tabela 2
Tabela 2: Dados do Paciente
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Todos Estado HD HD Prodrome tardio HD Manifesto inicial
ÉiiilllM 22 15 7
Feminino lllllll
% 61,1 71,4 46,7
Masculino N 14 6 8
lllllll 38,9 28,6 53,3
BiiliM 36 21 15
ill IIM^ N
11·^ 100,0 100,0 100,0
Caucasians 36 21 15
Í|M illlllllll
% 100,0 100,0 100,0
Negro ou Afro-americano 36 21 15
illlllllll
% 100,0 100,0 100,0
Asiático 36 21 15
illlllll
lllllllllllllllll 100,0 100,0 100,0
Havaiano Nativo ou Outro Ilhéu Pacífico 36 21 15
jii J N
100,0 100,0 100,0
índio americano ou Nativo do Alasca 36 21 15
Não N
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Todos Estado HD HD Prodrome tardio HD Manifesto inicial
100,0 100,0 100,0
N 36 21 15
lllllll 100,0 100,0 100,0
Idade 11·^ 36 21 15
Média 46,78 42,57 52,67
Padrão 12,68 12,68 10,41
Min 22,00 22,00 32,00
Max 68,00 64,00 68,00
Idade de Início 11·^ 15
Média 49,93
Padrão 11,36
Min 31,54
Max 63,81
Anos desde o Início N 15
Média 3,25
Padrão 3,23
Min 0,05
Max 9,84
Anos de educação il· 36 21 15
Média 14,44 14,05 15,00
Padrão 2,21 1,80 2,65
Min 9,00 12,00 9,00
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Todos Estado HD HD Prodrome tardio HD Manifesto inicial
Max 20,00 18,00 20,00
Cognitivo de Montreal II· 36 21 15
Mêdía 26,61 26,95 26,13
Padrão 1,82 1,80 1,81
Min 23,00 23,00 23,00
Max 30,00 30,00 28,00
36 21 15
Média 12,03 12,29 11,67
Padrão 0,88 0,85 0,82
11,00 11,00 11,00
Max 13,00 13,00 13,00
Avaliação Funcionai 36 21 15
Média 24,17 24,10 24,27
Padrão 1,08 1,26 0,80
Min 21,00 21,00 23,00
Max 25,00 25,00 25,00
Q69:lnde pendência 36 21 15
Média 93,89 96,19 90,67
Padrão 6,67 6,10 6,23
80,00 80,00 80,00
Max 100,00 100,00 100,00
Motor total lllllllllllillllllll 36 21 15
Média 14,72 10,43 20,73
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Todos Estado HD HD Prodrome tardio HD Manifesto inicial
Padrão 8,95 4,07 10,50
Min 4,00 4,00 10,00
Max 47,00 20,00 47,00
AVALIAÇÃO DOS N 36 21 15
COMPORTAMENTOS COM Média 7,50 8,76 5,73
PROBLEMA Padrão 7,73 8,81 5,71
Min 0,00 0,00 0,00
Max 29,00 29,00 19,00
Nível de confiança de diagnostico 18 18
anormalidades, pode ser sinais de HD N
50 % a 89 % de confiança % 50,0 85,7
anormalidades, sinais de HD N 3 3
prováveis 90 % a 98 % de confiança 8,3 14,3
anormalidades, sinais de HD N 15 15
inequívocos > 99 % de confiança % 41,7 100,0
Alefo 1 (de Lab) I· 36 21 15
Média 42,56 43,00 41,93
Padrão 2,96 3,13 2,69
Min 38,00 38,00 38,00
Max 52,00 52,00 49,00
Alelo 2(de Lab) ίβ 36 21 15
Média 18,39 17,29 19,93
Padrão 3,65 2,70 4,30
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Todos Estado HD HD Pródromo tardio HD Manifesto inicial
9,00 9,00 15,00
30,00 23,00 30,00
CAP (age*(Atelo 1 - 33,66)) N 36 21 15
Média 388,29 366,57 418,71
iiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii 78,00 63,56 87,98
195,30 247,38 195,30
Max 569,74 485,68 569,74
[0189]Como mostrado na FIG. 1, os sujeitos do Coorte A foram tratados por 6 meses com VX15 ou placebo e depois todos os sujeitos foram tratados com VX15 por um adicional de 5 meses, seguido por 3 meses de continuação.
[0190]Gs pacientes do Coorte A foram tratados com doses intravenosas por 6 meses de VX15 (n=17) em 20 mg/kg ou placebo (n=19). Esta porção do estudo foi cega. Depois dos 6 meses iniciais, todos os sujeitos registrados no Coorte A continuaram o estudo com tratamento aberto com VX15/2503 por 5 meses adicionais. Os vários grupos de estudo e uma linha do tempo dos tratamentos são mostrados na FIG. 2 que também indica a nomenclatura usada abaixo para descrever diferentes regimes de tratamento e períodos de tempo, por exemplo, PV(7-0) indica o grupo que é tratado com placebo (P) durante os primeiros 6 meses e com VX15 (V) durante os 5 meses seguintes e foca na mudança em volume MRI ou sinal de FDG-PET entre o valor de referência no início do estudo, consulta 0 e consulta 7 no final dos 6 meses, (7-0). Este é o controle utilizado para a comparação a todos outros períodos de tratamento com VX15 de 5 ou 6 meses. A cada consulta mensal, os pacientes foram triados quanto à segurança, tolerabilidade e eficácia. Amostra sanguíneas foram
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89/95 testadas quanto a SEMA4D solúvel em soro total (sSEMA4D). No curso das consultas mensais, avaliações de eficácia foram administradas em intervalos regulares. Estas incluíram a Batería de Avaliação Cognitiva de Doença de Huntington (HD-CAB) e batería motora quantitativa (Q-Motor). A HD-CAB pode diferenciar os sujeitos de controle, pré-HD e HD inicial. A batería tem sensibilidade alta ao estado de doença, com grandes tamanhos de efeito e psicometria de alta confiabilidade e bem caracterizada e efeitos práticos (Stout JC, et a!., Mov Disord. 29:1281 - 1288 (2014). Os sintomas motores em HD podem ser objetivamente avaliados usando avaliações de Q-Motor. A batería de Q-Motor inclui avaliações de diferentes tarefas motoras relacionadas às tarefas diárias funcionalmente relevantes (ver, por exemplo, Tabrizi SJ, et a!., Lancet Neurol. 8:791 - 801 (2009). No valor de referência, t=0 e durante a consulta mensal 7 (v7) no final dos 6 meses de tratamento e consulta 12 (v12) no final dos 11 meses de tratamento todos os pacientes passaram por imagiologia de MRI e um subconjunto de pacientes recebeu imagiologia de FDG-PET. Múltiplas regiões cerebrais foram analisadas quanto a mudanças nos sinais de MRI e FDG-PET. As regiões cerebrais primárias de interesse (ROI) para MRI são mostradas nas Tabelas 3 e 4 e para FDG-PET na Tabela 5. Onde aplicável, medições separadas foram feitas para os hemisférios esquerdo e direito e sua média também foi calculada.
Tabela 3: MEDIDAS DO VOLUME CORTICAL DE MRI
Interesse Precedente* ROI
Primário Giro pré-central
Primário Giro supramarginal
Primário Giro temporal superior
Primário Giro temporal médio
Primário Giro frontal médio rostral
Secundário Giro frontal médio caudal
Secundário Pares operculares
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Secundário Pares triangulares
Secundário Pares Orbitais
Secundário Giro temporal inferior
Secundário Córtex temporal transversal
Secundário Giro frontal superior
Secundário Lóbulo paracentral
Secundário Giro pós-central
Secundário Córtex pré-cúneo
Secundário Giro lingual
Secundário Córtex pericalcarino
Secundário Córtex cúneo
Secundário Córtex occipital lateral
Secundário Córtex cingulado anterior rostral
Secundário Córtex cingulado anterior caudal
Secundário Córtex cingulado posterior
Secundário Parietal inferior
Secundário Parietal superior
Secundário Orbitofrontal mediano
Tabela 4: MEDIDAS DE VOLUME DE MRI
Interesse Precedente* ROI
Primário Caudado
Primário Putâmen
Primário Substância branca total
Secundário Hipocampo
Secundário Amídala
Secundário Globo pálido
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Secundário Tálamo
*Com base em estudos prévios de histórico natural de doença de Huntington Tabela 5: ROI CEREBRAL PARA MEDIDAS DE CAPTAÇÃO DE FDG-PET
Medidas de captação de FDG subcortical: Tálamo
Caudado
Putâmen
Pálido
Hipocampo
Amídala
Diencéfalo ventral
Haste cerebral
Ventrículo lateral
Ventrículo lateral inferior
32 Ventrículo
42 Ventrículo
52 Ventrículo
Medidas de captação de FDG cortical: Córtex entorrinal
Fusíforme
Parietal inferior
Temporal inferior
Temporal médio
Para-hipocampal
Frontal superior
Parietal superior
Temporal superior
Polo temporal
Medidas de captação de FDG global: Parênquima cerebral anterior
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Volume intracraniano
Substância branca cerebelar
Substância cinzenta cerebelar
Substância branca cortical
Hipointensidades da substância branca
[0191]Depois que todos os sujeitos do Coorte A receberam 6 meses de tratamento cego, uma análise dos dados primários da porção dupla-cega do Coorte A foi concluída. Depois que todos os sujeitos do Coorte A concluíram 11 meses do tratamento, uma análise dos dados de imagiologia foi concluída.
[0192]Os tratamentos foram bem tolerados e a complacência foi excelente. Nenhum sinal preocupante quanto à segurança foi identificado.
[0193]Análises Estatísticas dos Métodos seguiram o princípio do Intenção de Tratamento (ITT) e usaram métodos estatísticos padrão, teste exato de Fisher, quiquadrado e regressão logística para dados categóricos, testes t de duas amostras, análise de covariância e modelo de efeito misto com medidas repetidas (MMRM) para dados contínuos.
[0194]Os resultados de MRI para o Coorte A são mostrados nas FIGs. 3 a 6. Estes resultados mostram mudanças médias em volume detectado por MRI de diferente ROI cerebral entre diferentes pontos no tempo de comprimento comparável em sujeitos tratados com VX15 vs placebo como detalhado abaixo. O volume MRI é expressado em mm3 como determinado por métodos que serão familiares àqueles de habilidade comum na técnica. Quando comparado à redução em volume MRI observada durante os primeiros 6 meses do tratamento com placebo, PV(7-0), tratamento com VX15 em todos os outros 5 a 6 meses, VV(7-0), PV(12-7) e VV(12-7), preveniram ou minimizaram a redução relacionada à doença em volume cerebral na maioria de ROI. Para cada tal comparação, a hipótese nula de distribuição aleatória em torno de diferença zero pode ser rejeitada com significância P<0,001 como
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93/95 determinado pelo teste estatístico do qui-quadrado. Na FIG. 6, os resultados comparando as mudanças de volume MRI no grupo de placebo (PV (12-0)) que primeiro atravessaram ao tratamento com VX15 depois de 6 meses, consulta 7 e o grupo que recebeu tratamento com VX15 por todo o período inteiro (VV (12-0)) demonstrou que, comparado ao grupo que recebeu terapia com VX15 durante todos os 11 meses, atrasou o início do tratamento no grupo de placebo depois de 6 meses não compensou pela redução no volume MRI durante os primeiros 6 meses do tratamento com placebo sozinho. Isto demonstra um benefício preventivo ao início do tratamento precoce e sugere que VX15 é uma terapia modificadora de doença. Isto é mostrado esquematicamente na metade de topo da FIG. 12.
[0195]Os resultados observados em imagiologia de FDG-PET são mostrados nas FIGs. 8 a 11. FDG-PET é expressado em SUV (Valores de Captação Padrão) para cada ROI cerebral em relação a uma região de referência, haste cerebral, (SUVR) para cada regime de tratamento e período de tempo observado. Na primeira metade da experiência, um aumento supranumerário na captação de glicose foi observado no grupo tratado com SEMA4D (VV (7-0)) quando comparado ao grupo tratado com placebo de controle (PV (7-0)) (FIG. 8). Isto é, o aumento médio no sinal de FDG-PET na maioria de ROI cerebral do grupo tratado com VX15 VV(7-0) foi maior do que a diminuição média observada no grupo de placebo PV(7-0) para a mesma ROI durante o mesmo período de tempo. Do mesmo modo, uma comparação da imagiologia de FDG-PET dos pacientes tratados com placebo nos primeiros seis meses de tratamento (PV (7-0)) e os mesmos pacientes quando tratados com VX15 durante os 5 meses finais da experiência (PV (12-7)), mostraram um aumento relativo supranumerário na captação de glicose (FIG. 9). Em ambos os exemplos, a hipótese nula de distribuição aleatória em torno de diferença zero pode ser rejeitada com p < 0,001 usando o teste estatístico do qui-quadrado. Ao contrário, a comparação do sinal de FDG-PET médio obtido durante os cinco meses finais dos pacientes previamente
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94/95 tratados com VX15 durante os primeiros 6 meses, (VV (12-7)) com o grupo de placebo durante a primeira parte da experiência (PV (7-0)), não indica nenhuma diferença significativa de uma distribuição aleatória em torno de zero pelo mesmo teste do quiquadrado (FIG. 10). Do mesmo modo, nenhuma diferença significativa foi observada entre o grupo tratado com VX15 (VV (12-0)) e o grupo tratado com placebo (PV (120)) durante os 11 meses inteiros do tratamento (FIG. 11).
[0196]O tratamento com VX15 claramente resultou em um aumento supranumerário em sinal de FDG-PET em relação à diminuição observada no grupo de placebo durante os primeiros 6 meses do período de tratamento se a comparação for entre VV(7-0) e PV(7-0) ou PV(12-7) e PV(7-0). Entretanto, o tratamento contínuo com VX15 durante os 5 meses seguintes, VV(12-7), não repete o mesmo efeito de tratamento grande mas parece apenas prevenir ou minimizar outro declínio no sinal de FDG-PET. Sem ser ligado a uma teoria particular, uma interpretação razoável do benefício supranumerário do tratamento inicial com VX15 é que ele reverte um déficit histórico na captação de glicose que acumulou antes de iniciar o tratamento. É possível que isto reflita a reversão de astrócitos reativos acumulados à função de astrócito normal, incluindo transporte de glutamato aumentado e captação de glicose e glicólise. Entretanto, uma vez que este benefício é capturado por tratamento com VX15 durante VV(7-0), ele não é repetido com tratamento contínuo durante VV(12-7). O efeito é mostrado esquematicamente na metade de fundo da FIG. 12. A observação desta correção do déficit histórico na captação de glicose pode fornecer um biomarcador precoce do efeito de tratamento.
[0197]A amplitude e escopo da presente divulgação não devem ser limitados por qualquer uma das modalidades exemplares descritas acima, mas devem ser definidos apenas de acordo com as reivindicações seguintes e seus equivalentes.
Ta bela 6: Sequências
SEQ ID NO Descrição
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95/95
1 VX15/2503 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYSFSDYYMHWVRQAPGQGLEW MGQINPTTGGASYNQKFKGKATITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCA RYYYGRHFDVWGQGTTVTVSS
2 VX15/2503 HCDR1 GYSFSDYYMH
3 VX15/2503 HCDR2 QINPTTGGASYNQKFKG
4 VX15/2503 HCDR3 YYYGRHFDV
5 VX15/2503 VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGQPP KLLIYAASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSNED PYTFGQGTKLEIK
6 VX15/2503 LCDR1 KASQSVDYDGDSYMN
7 VX15/2503 LCDR2 AASNLES
8 VX15/2503 LCDR3 QQSNEDPYT
9 Mab 67 VH QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFSDYYMHWVKQSPENSLEWI GQINPTTGGASYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLKSLTSEESAVYYCTR YYYGRHFDVWGQGTTVTVSS
10 Mab 67 VL DIVMTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGQPP KLLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSNEDP YTFGGGTKLEIK
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Claims (32)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Método para determinar se um antagonista de anticorpo de semaforina 4D (SEMA4D) ou fragmento de ligação a antigeno deste pode ser eficaz em tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios;
    (b) medir o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da administração do antagonista de SEMA4D; e
    1. continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou ii. descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  2. 2. Método para determinar se um antagonista de anticorpo de semaforina 4D (SEMA4D) ou fragmento de ligação a antigeno deste será eficaz em tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) medir o nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro de um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios;
    (b) administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antigeno deste ao sujeito;
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    2/10 (c) medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste; e
    i. continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou ii. descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  3. 3. Método para determinar uma dose eficaz de um antagonista de anticorpo de semaforina 4D (SEMA4D) ou fragmento deste para tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) administrar uma dose de partida de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios;
    (b) medir o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da administração do antagonista de SEMA4D; e
    i. ajustar a dose do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado, o ajuste determinado no nível de aumento, ou ii. descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  4. 4. Método, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda aumentar a dose de anticorpo antagonista de SEMA4D em
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    3/10 relação àquele testado na etapa (b) e medir novamente a mudança no nível de captação de glicose em relação a um novo valor de referência em um paciente previamente não tratado diferente ou no mesmo paciente a seguir da retirada do tratamento no mesmo paciente por um período de tempo determinado para permitir o acúmulo de um déficit histórico nesta doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios e ajustar ainda a dose do anticorpo antagonista de SEMA4D se um outro aumento for detectado.
  5. 5. Método para determinar uma dose eficaz de um antagonista de anticorpo de semaforina 4D (SEMA4D) ou fragmento deste para tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) medir o nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro de um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios;
    (b) administrar uma dose de partida de um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ao sujeito;
    (c) medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste; e
    i. ajustar a dose do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado, o ajuste determinado no nível de aumento, ou ii. descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  6. 6. Método, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda aumentar a dose de anticorpo antagonista de SEMA4D em relação àquele testado na etapa (c) e medir novamente a mudança no nível de
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    4/10 captação de glicose em relação a um novo valor de referência em um paciente previamente não tratado diferente ou no mesmo paciente a seguir da retirada do tratamento no mesmo paciente por um período de tempo determinado para permitir o acúmulo de um déficit histórico nesta doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios e ajustar ainda a dose do anticorpo antagonista de SEMA4D se um outro aumento for detectado.
  7. 7. Método para tratar um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios;
    (b) medir o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da administração do antagonista de SEMA4D; e
    i. continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou ii. descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  8. 8. Método para tratar um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) medir o nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro de um sujeito tendo, determinado a ter ou suspeito de ter uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios;
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    5/10 (b) administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ao sujeito;
    (c) medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste; e
    i. continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou ii. descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  9. 9. Método para determinar se um antagonista de anticorpo de semaforina 4D (SEMA4D) ou fragmento de ligação a antígeno deste será eficaz em tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste a um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios;
    (b) ordenar a medição do nível de captação de glicose no cérebro do sujeito em relação a um nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro do sujeito medido antes da administração do antagonista de SEMA4D; e
    i. continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou ii. descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  10. 10. Método para determinar se um antagonista de anticorpo de semaforina 4D
    Petição 870190081061, de 20/08/2019, pág. 109/128
    6/10 (SEMA4D) ou fragmento de ligação a antígeno deste será eficaz em tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) ordenar a medição of um nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro de um sujeito tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios;
    (b) administrar um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ao sujeito;
    (c) ordenar nova medição do nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste; e
    i. continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou ii. descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  11. 11. Método para determinar se um antagonista de anticorpo de semaforina 4D (SEMA4D) ou fragmento de ligação a antígeno deste será eficaz em tratar uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:
    (a) medir o nível de valor de referência da captação de glicose no cérebro de um sujeito apresentado como tendo, suspeito de ter ou em risco de desenvolver uma doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios; e (b) medir novamente o nível de captação de glicose no cérebro do sujeito a seguir da administração ou um anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento de ligação a antígeno deste ao sujeito por um provedor de saúde; e
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    7/10
    i. instruir o provedor de saúde a continuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se um aumento na captação de glicose sobre o valor de referência for detectado; ou ii. instruir o provedor de saúde a descontinuar a administração do anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se nenhuma mudança ou uma diminuição na captação de glicose em relação ao valor de referência for detectada.
  12. 12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste inibe a interação de SEMA4D com seu receptor.
  13. 13. Método, de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADO pelo fato de que o receptor é Plexina-B1, Plexina-B2 ou CD72.
  14. 14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste inibe a transdução de sinal de Plexina-B1 mediada por SEMA4D.
  15. 15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste competitivamente inibe um anticorpo de referência compreendendo uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5 de ligar-se a SEMA4D.
  16. 16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo antagonista de SEMA4D ou fragmento deste se liga ao mesmo epítopo de SEMA4D como um anticorpo de referência compreendendo uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5.
  17. 17. Método, de acordo com a reivindicação 15 ou reivindicação 16,
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    8/10
    CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo antagonista de SEMA4D compreende uma VH e uma VL, em que a VH compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2 e HCDR3, em que a VL compreende três CDRs LCDR1, LCDR2 e LCDR3 e em que as CDRs compreendem as sequências de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, respectivamente exceto para pelo menos uma ou duas substituições de aminoácido conservatives únicas em uma ou mais das CDRs.
  18. 18. Método, de acordo com a reivindicação 15 ou reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo antagonista de SEMA4D compreende uma VH e uma VL, em que a VH compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2 e HCDR3, em que a VL compreende três CDRs LCDR1, LCDR2 e LCDR3 e em que as CDRs compreendem as sequências de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, respectivamente.
  19. 19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 18, CARACTERIZADO pelo fato de que a VH compreende uma sequência de aminoácido pelo menos 90 % idêntica à SEQ ID NO: 1 e a VL compreende uma sequência de aminoácido pelo menos 90 % idêntica à SEQ ID NO: 5.
  20. 20. Método, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que a VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 1 e a VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID NO: 5.
  21. 21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, CARACTERIZADO pelo fato de que uma primeira dose do anticorpo antagonista de SEMA4D é administrada e depois o anticorpo antagonista de SEMA4D é administrado pelo menos uma vez a cada semana, pelo menos uma vez a cada duas semanas, pelo menos uma vez a cada três semanas, pelo menos uma vez por mês ou pelo menos uma vez a cada dois meses daí em diante.
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    9/10
  22. 22. Método, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que a medição do valor de referência da captação de glicose é medida exatamente antes da primeira dose do anticorpo antagonista de SEMA4D.
  23. 23. Método, de acordo com a reivindicação 21 ou reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de que a mudança na captação de glicose em relação ao valor de referência é medida pelo menos uma semana depois da primeira dose, pelo menos duas semanas depois da primeira dose, pelo menos um mês depois da primeira dose, pelo menos dois meses depois da primeira dose, pelo menos três meses depois da primeira dose, pelo menos quatro meses depois da primeira dose, pelo menos cinco meses depois da primeira dose, pelo menos seis meses depois da primeira dose ou qualquer combinação destes.
  24. 24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, CARACTERIZADO pelo fato de que a captação de glicose no cérebro do sujeito é medida por imagiologia de Tomografia de Emissão Positrônica com 18FFluorodesoxiglicose (FDG-PET).
  25. 25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é um ser humano.
  26. 26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios são doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, síndrome de Down, ataxia, esclerose lateral amiotrófica (ALS), esclerose múltipla, (MS), epilepsia, meningite, edema cerebral, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, demência frontotemporal (FTD), dano cognitivo relacionado a HIV, lúpus do SNC, perda cognitiva leve ou uma combinação destes.
  27. 27. Método, de acordo com a reivindicação 26, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença, transtorno ou lesão neurodegenerativos ou neuroinflamatórios são
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    10/10 doença de Huntington (HD).
  28. 28. Método, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito está em risco de desenvolver HD devido ao histórico familiar de HD ou teste genético.
  29. 29. Método, de acordo com a reivindicação 28, CARACTERIZADO pelo fato de que o teste genético revela 36 ou mais repetições de CAG no gene HTT do sujeito.
  30. 30. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 29, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é suspeito de ter HD devido à disfunção motora suave, perda cognitiva leve ou características neuropsiquiátricas suaves.
  31. 31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 30, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é diagnosticado como tendo HD devido à atrofia cerebral, uma classificação de Escala de Classificação de Doença de Huntington Uniforme elevada (UHDRS), uma classificação de Batería de Avaliação Cognitiva de Doença de Huntington (HD-CAB) aumentada, uma classificação de Avaliação Motora Quantitativa de Doença de Huntington aumentada ou uma combinação destas.
  32. 32. Método, de acordo com a reivindicação 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito está no estágio pré-sintomático, pródromo inicial, pródromo tardio, manifesto inicial, manifesto moderado ou manifesto avançado de HD.
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