BR112019013001A2 - inibidores de histona desacetilase - Google Patents

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Abstract

trata-se de compostos e métodos para a inibição de enzimas de histona desacetilase ("hdac") (por exemplo, hdac1, hdac2 e hdac3).

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para INIBIDORES DE HISTONA DEACETILASE.
CAMPO DA TÉCNICA [001] No presente documento são fornecidos compostos e métodos para inibir enzimas histona deacetilase (HDAC) (por exemplo, HDAC1, HDAC2 e HDAC3).
ANTECEDENTES [002] Até a presente data, 18 enzimas HDAC foram identificadas em seres humanos, e há crescente evidência de que as 18 enzimas HDAC em seres humanos não têm função redundante. As enzimas HDAC são classificadas em três grupos principais com base em sua homologia a proteínas de levedura. A Classe I inclui HDAC1, HDAC2, HDAC3 e HDAC8 e tem homologia à RPD3 de levedura. A HDAC4, HDAC5, HDAC7 e HDAC9 pertencem à classe Ha e têm homologia à HDAC1 de levedura. A HDAC6 e HDAC10 contêm dois sítios catalíticos e são classificados como classe llb, ao passo que a HDAC11 conservou resíduos no centro catalítico da mesma que são compartilhados pelas deacetilases tanto de classe I quanto de classe II e é colocada na classe IV. Essas enzimas HDAC contêm zinco em seu sítio catalítico e são inibidas por compostos como tricostatina A (TSA) e vorinostat [ácido hidroxâmico suberoilanilida (SAHA)]. As enzimas HDAC de Classe III são conhecidas como sirtuínas. Estas têm homologia à Sir2 de levedura, exigem NAD+ como cofator e não contêm zinco no sítio catalítico. De modo geral, os inibidores de HDAC de enzimas HDAC dependentes de zinco incluem um grupo de ligação a Zn, assim como um domínio de reconhecimento de superfície.
[003] As enzimas HDAC estão envolvidas na regulação de vários processos celulares. As enzimas histona acetiltransferases (HATs) e de HDAC e deacetilato lisina acumulam resíduos nas extremidades N de proteínas histona, desse modo, afetando atividade transcricional.
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Mostrou-se, também, que as mesmas regulam acetilação póstraducional de pelo menos 50 proteínas não histona, tais como □tubulina (consultar, por exemplo, Kahn, N et al Biochem J 409 (2008) 581, Dokmanovic, M., e/a/Mol Cancer Res 5 (2007) 981).
[004] A alteração de expressão gênica através da modificação de cromatina pode ser realizada inibindo-se enzimas HDAC. Há prova de que a acetilação e desacetilação de histona são mecanismos por meio dos quais a regulação transcricional em uma célula - um evento grande na diferenciação, proliferação e apoptose celular - é obtida. Há uma hipótese de que esses efeitos ocorrem através de mudanças na estrutura de cromatina alterando-se a afinidade das proteínas histona para DNA enovelado no nucleossoma. Acredita-se que a hipoacetilação de proteínas histona aumenta a interação da histona com ao backbone de fosfato de DNA. A ligação entre a proteína histona e o DNA pode tornar o DNA inacessível para os elementos e maquinaria reguladores transcricionais. Mostrou-se que as enzimas HDAC catalisam a remoção de grupos acetila dos grupos D-amino de resíduos de lisina presentes na extensão N-terminal das histonas principais, desse modo, causando hipoacetilação das histonas e bloqueio da maquinaria transcricional e elementos reguladores.
[005] Portanto, a inibição de HDAC pode causar depressão transcricional mediada por histona deacetilase de genes supressores de tumor. Por exemplo, mostrou-se que as células tratadas em culturas com inibidores de HDAC uma indução consistente do inibidor de quinase p21, o que exerce uma importante função na parada no ciclo celular. Considera-se que os inibidores de HDAC aumenta a taxa de transcrição de p21 propagando-se o estado hiperacetilado de histonas na região do gene p21, desse modo, tornando o gene acessível à maquinaria transcricional. Além disso, as proteínas não histona envolvidas na regulação da morte celular e ciclo celular também se submete
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[006] Essa evidência sustenta o uso de inibidores de HDAC no tratamento de vários tipos de cânceres. Por exemplo, o vorinostat (ácido hidroxâmico suberoilanilida (SAHA)) foi aprovado pela FDA para tratar linfoma célula T cutânea e está sendo investigado para o tratamento de tumores sólidos e hematológicos. Além disso, outros inibidores de HDAC estão em desenvolvimento para o tratamento de leucemia mieloide aguda, doença de Hodgkin, síndromes mielodisplásicas e cânceres de tumor sólido.
[007] Além disso, mostrou-se que os inibidores de HDAC inibem citocinas pró-inflamatórias, tais como aquelas envolvidas em distúrbios autoimunes e inflamatórios (por exemplo, TNF-D). Por exemplo, mostrou-se que o inibidor de HDAC MS275 desacelera a progressão da doença e a destruição conjunta em artrite induzida por colágeno em modelos de rato e de camundongo. Mostrou-se que outros inibidores de HDAC tem eficácia no tratamento ou na melhora de distúrbios ou afecções inflamatórias em modelos in vivo ou testes para distúrbios, tais como doença de Crohn, colite e inflamação das vias aéreas e hiperresponsividade. Mostrou-se, também, que os inibidores de HDAC melhoram inflamação da medula espinhal, desmielinização e perda neuronal e axonal em encefalomielite autoimune experimental (consultar, por exemplo, Wanf, L, et al, Nat Rev Drug Disc 8 (2009) 969).
[008] A expansão de trinucleotídeos repetidos em DNA genômico está associada a muitas afecções neurológicas (por exemplo, doenças neurodegenerativas e neuromusculares) incluindo distrofia miotônica, atrofia muscular espinhal, síndrome do X frágil, doença de Huntington, ataxias espinocerebelares, esclorese lateral amiotrófica, doença de Kennedy, atrofia muscular espinhal e bulbar, ataxia de Friedreich e doença de Alzheimer. A expansão de trinucleotídeos repetidos pode cau
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4/137 sar doença alterando-se expressão gênica. Por exemplo, em doença de Huntington, ataxias espinocerebelares, síndrome do X frágil e distrofia miotônica, repetições expandidas causam o silenciamento de gene. Na ataxia de Friedreich, a anormalidade do DNA constatada em 98% dos pacientes com FRDA é uma hiperexpansão instável de uma repetição de trinucleotídeos de GAA no primeiro intron do gene frataxina (consultar Campuzano, et al., Science 271:1423 (1996)), o que causa insuficiência de frataxina resultando em uma neurodegeneração progressiva espinocerebelar. Visto que podem afetar a transcrição e corrigir potencialmente a desrregulação transcricional, os inibidores de HDAC foram testados, e mostrou-se que afetam positivamente doenças neurodegenerativas (consultar Herman, D., et al, Nat Chem Bio 2 551 (2006) para ataxia de Friedreich, Thomas, E.A., et al, Proc Natl Acad Sei USA 105 15564 (2008) para doença de Huntington).
[009] Os inibidores de HDAC também podem exercer uma função em afecções relacionadas a cognição e doenças. De fato, fica cada vez mais evidente que a transcrição é provavelmente um elementochave para processo de memória a longo prazo (Alberini, C.M., Physiol Rev 89 121 (2009)) destacando, assim outra função para inibidores de HDAC que penetram no CNS. Embora os estudos tenham mostrado que o tratamento com inibidores de HDAC não específicos, tais como butirato de sódio pode causar formação de memória a longo prazo (Stefanko, D.P., et al, Proc Natl Acad Sei USA 106 9447 (2009)), pouco se sabe sobre a função de isoformas específicas. Um número limitado de estudos mostrou que, dentro das enzimas HDAC de classe I, o alvo principal de butirato de sódio, o inibidor prototípico usado nos estudos de cognição, a HDAC2 (Guan, J-S., et al, Nature 459 55 (2009)) e a HDAC3 (McQuown, S.C., et al, J Neurosci 31 764 (2011)) regulam os processos de memória e, desse modo, são alvos interessantes para aprimoramento ou extinção da memória em afecções que afetam a
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5/137 memória tais como, porém sem limitação, doença de Alzheimer, transtorno de estresse pós-traumático ou vício em drogas.
[0010] Os inibidores de HDAC também podem ser úteis para tratar doenças infeciosas, tais como infecções por vírus. Por exemplo, o tratamento contra células infectadas com HIV com inibidores de HDAC e fármacos antirretrovirais podem erradicar vírus de células tratadas (Blazkova, J., et al J Infect Dis. 1Q de setembro de 2012;206(5):765 a 769; Archin, N.M., et al Nature 25 de julho de 2012, 487(7.408):482 a 485).
[0011] Alguns inibidores de HDAC anteriores revelados incluem uma porção química de nh2, que pode metabolizar sob afecções fisiológicas para fornecer um OPD de metabólito (ortoh2n y fenilenodiamina) NH2. OPD é um material tóxico. Desse modo, há a necessidade de inibidores de HDAC que compreendam uma porά n t
H * ção química de NH2 que, sob afecções fisiológicas, produzam quantidades inferiores, ou substancialmente nenhuma quantidade, de OPD.
SUMÁRIO [0012] No presente documento são fornecidos compostos da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, e métodos para usar compostos da fórmula (I), por exemplo, para inibir HDAC (por exemplo, um ou mais dentre HDAC1, HDAC2 e HDAC3):
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6/137 em que o anel A é um anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros ou um anel eespiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros, sendo que o anel A contém um átomo de anel nitrogênio e contém opcionalmente um átomo de anel adicional selecionado independentemente a partir de O, N e S; R1 é H, Ci-ealquila, C2-6alquenila, Ciehidroxialquila, C(O)Ci-6alquila, Co-salquileno-Cs-iocicloalquila ou Co3alquileno-C2-5heterocicloalquila que tem 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e N(Ci-4alquila); R2 é H, F, Cl ou CH3; R3 é Ci-3alquila; R4 é H, F ou Cl; e n é 0, 1 ou 2, desde que (a) 0 anel A não seja morfolino ou tiomorfolino; e (b) quando 0 anel A é piperazinila, R1 é C2-ealquenila, Ci-ehidroxialquila, C(O)Ci-6alquila, Co-salquileno-Cs1 ocicloalquila ou Co-3alquileno-C2-5Cicloheteroalquila que tem 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e N(Ci-4alquila).
[0013] No presente documento, também são fornecidas composições farmacêuticas que compreendem um composto, conforme revelado no presente documento, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0014] Além disso, são fornecidos métodos para usar os compostos, conforme revelado no presente documento, para inibir a HDAC (por exemplo, uma ou mais dentre HDAC1, HDAC2 e HDAC3) e métodos para tratar afecções associada a atividade aberrante de HDAC administrando-se um composto revelado no presente documento a um indivíduo que sofre de tal afecção.
DESCRIÇÃO DETALHADA [0015] No presente documento são fornecidos compostos da fórmula (I), composições farmacêuticas dos mesmos e métodos para usar compostos de fórmula (I), por exemplo, para inibir HDAC (por exemplo, um ou mais dentre HDAC1, HDAC2 e HDAC3):
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sendo que o anel A, R1, R2, R3 e R4 são definidos no presente documento.
[0016] Os compostos fornecidos no presente documento têm capacidade para formar pequenas quantidades de OPD sob afecções fisiológicas (por exemplo, um pH de cerca de 7,2 e 37 Ό). As afecções fisiológicas, conforme revelado no presente documento, estão destinadas a incluir uma temperatura de cerca de 35 a 40 Ό e um pH de cerca de 7,0 a cerca de 7,4 e mais tipicamente incluem um pH de
7,2 a 7,4 e uma temperatura de 36 a 38 Ό em um amb iente aquoso. Por pequenas quantidades de OPD, conforme usado no presente documento, entende-se que os compostos revelados no presente documento geram OPD sob afecções fisiológicas por 24 horas a uma quantidade de 30% ou inferior. Em algumas modalidades, a quantidade de OPD gerada em afecções fisiológicas por 24 horas é 25% ou inferior ou 20% ou inferior ou 15% ou inferior ou 10% ou inferior ou 5% ou inferior ou 1% ou inferior. A quantidade de OPD gerada pode ser medida indiretamente medindo-se a quantidade de ácido resultante da hidrólise de amida do composto. Em algumas modalidades, a medição de OPD gerada pode ser realizada por administração do composto conforme revelado no presente documento a um indivíduo, coleta de amostras plasmáticas durante 24 horas e pela determinação da quantidade de ODP e/ou do ácido relevante durante essas 24 horas.
DEFINIÇÕES [0017] As definições a seguir são usadas, salvo quando descrito de outro modo. Os valores específicos e gerais listados abaixo para radicais, substituintes e faixas servem apenas a título de ilustração; os valores não excluem outros valores definidos ou outros valores dentro
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8/137 das faixas definidas para os radicais e substituintes.
[0018] Conforme usado no presente documento, o termo cerca de antes de um valor numérico se refere a uma faixa de valores ±10% do valor especificado.
[0019] Conforme usado no presente documento, o termo aceitável com relação a uma formulação, composição ou ingrediente significa nenhum efeito prejudicial persistente na saúde geral do indivíduo que é tratado.
[0020] Conforme usado no presente documento, o termo alquila, empregada sozinha ou em combinação com outros termos, se refere a um grupo de hidrocarbonetos saturados que podem ser de cadeia reta ou ramificada. Em algumas modalidades, o grupo alquila contém 1 a 12, 1 a 8 ou 1 a 6 átomos de carbono. Em determinadas modalidades, a alquila inclui 1 a 6 átomos de carbono (C1-6 alquila). Em determinadas modalidades, alquila inclui 1 a 4 átomos de carbono (C1-4 alquila). Em determinadas modalidades, a alquila inclui 1 a 3 átomos de carbono (C1-3 alquila).
[0021] Conforme usado no presente documento, 0 termo alquileno empregado sozinho ou em combinação com outros termos, se refere a um radical divalente formado por remoção de um átomo de hidrogênio de alquila. Em algumas modalidades, 0 grupo alquileno contém 1 a 3 átomos de carbono.
[0022] Em algumas modalidades, a alquila inclui metila, etila, npropila, isopropila, n-butila, terc-butila, isobutila, sec-butila; homólogos superiores, tais como 2-metil-1 -butila, n-pentila, 3-pentila, n-hexila,
1,2,2-trimetilpropila, n-heptila, n-octila e semelhantes. Em algumas modalidades, a porção química de alquila é metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, terc-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila ou 2,4,4-trimetilpentila.
[0023] Conforme usado no presente documento, 0 termo alquila,
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9/137 empregada sozinha ou em combinação com outros termos, se refere a um grupo de hidrocarbonetos saturados com pelo menos uma ligação dupla que podem ser de cadeia reta ou ramificada. Em algumas modalidades, o grupo alquenila contém 2a12, 2a8ou2a6 átomos de carbono. Em determinadas modalidades, alquenila inclui etenila, propenila, 2-metilprop-1-enila, 1-but-3-enila, 1-pent-3-enila ou 1-hex-5enila. Em determinadas modalidades, a alquila inclui 2 a 6 átomos de carbono (C2-6 alquenila).
[0024] Conforme usado no presente documento, 0 termo cicloalquila, empregado sozinho ou em combinação com outros termos, se refere a uma porção química de hidrocarboneto cíclico saturada de 3 a 10 átomos de carbono. A cicloalquila inclui anéis saturados ou parcialmente insaturados, porém não contém um anel aromático. Em determinadas modalidades, a cicloalquila inclui uma porção química de hidrocarboneto saturado monocíclico ou biciclico de 3 a 10 átomos de carbono. Quando um grupo cicloalquila contém de 3 a 10 átomos de carbono, isso pode ser denominado no presente documento de C3-10 cicloalquila. Em algumas modalidades, 0 grupo cicloalquila contém 3 a 7, ou 3 a 6 átomos de anel carbono. Em algumas modalidades, grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila e ciclo-heptila. Em algumas modalidades, a cicloalquila inclui ciclopropila, ciclopentila e ciclo-hexila. Em algumas modalidades, a cicloalquila inclui ciclopropila; ou inclui ciclopentila; ou inclui ciclo-hexila; ou inclui adamantila.
[0025] Conforme usado no presente documento, 0 termo heterocicloalquila empregado sozinho ou em combinação com outros termos, se refere a um sistema de anel saturado que tem átomos de anel carbono e pelo menos um átomo de anel heteroátomo selecionado a partir de nitrogênio, enxofre e oxigênio (independentemente selecionado quando mais de um está presente), salvo quando especificado de
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10/137 outro modo. A heterocicloalquila inclui anéis saturados ou parcialmente insaturados, porém não contém um anel aromático. A heterocicloalquila pode incluir anéis fundidos, em ponte e eespiro. Quando o grupo heterocicloalquila contém mais de um heteroátomo, os heteroátomos podem ser iguais ou diferentes. Os grupos heterocicloalquila podem incluir sistemas de anel mono- ou bicíclicos (por exemplo, que tem 2 anéis fundidos). Por exemplo, um grupo heterocicloalquila fundido pode compreender dois anéis que compartilham átomos adjacentes (por exemplo, uma ligação covalente). Os grupos heterocicloalquila também podem incluir grupos heterocicloalquila em ponte. Conforme usado no presente documento, grupo heterocicloalquila em ponte se refere a uma porção química de heterocicloalquila que contém pelo menos um heteroátomo em ponte (por exemplo, nitrogênio ou carbono). A porção química C2-5 heterocicloalquila e semelhantes se referem a anéis heterocicloalquila que tem pelo menos 2 a 5 átomos de carbono em anel além do pelo menos 1 heteroátomo. Por exemplo, uma C2 heterocicloalquila pode ser um anel com 1 heteroátomo com três membros no anel e 2 átomos de anel carbono ou um anel com quatro membros, em que há 2 átomos de anel carbono e 2 heteroátomos no anel ou um anel com cinco membros, em que há 2 átomos de anel carbono e 3 heteroátomos no anel.
[0026] Em determinadas modalidades, a heterocicloalquila inclui um anel monocíclico de 4 a 7 átomos em anel. Em determinadas modalidades, a heterocicloalquila inclui um sistema de anel eespiro de 7 a 12 átomos em anel. Em determinadas modalidades, a heterocicloalquila inclui 1,2 ou 3 átomos de anel nitrogênio; ou 1 ou 2 átomos de anel nitrogênio; 2 átomos de anel nitrogênio; ou 1 átomo de anel nitrogênio. Em determinadas modalidades, a heterocicloalquila inclui 1 átomo de anel nitrogênio e 1 átomo em anel oxigênio ou enxofre.
[0027] Em determinadas modalidades, a heterocicloalquila inclui
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11/137 azetidinila, pirrolidinila, 2,5-di-hidro-1 H-pirrolinila, 2,5-di-hidro-1 Hpirrolila, piperidinila, piperazinila, piranila, tetra-hidropiranila, tetrahidrothiopiranila, 1,3-dioxinila, 1,3-dioxanila, 1,4-dioxinila, 1,4-dioxanila, peridroazepinila, pirazolidinila, imidazolinila, imidazolidinila, dihidropiridinila, tetra-hidropiridinila, oxazolinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, tiazolinila, tiazolidinila, quinuclidinila, isotiazolidinila, octahidroindolila, octa-hidroisoindolila, deca-hidroisoquinolila, tetrahidrofurila, 2-azaespiro[3.3]heptanila, 7-azabiciclo[2.2.1]heptanila e 8azabiciclo[3.2.1]octanila. Em algumas modalidades, a heterocicloalquila compreende piperidinila, piperazinila, azetidinila, azepanila ou diazepanila, por exemplo, piperidinila ou piperazinila. Em algumas modalidades, a heterocicloalquila compreende piperidinila, piperazinila, azetidinila, azepanila, pirrolidinila ou diazepanila. Os grupos espiro heterocicloalquila especificamente contemplados incluem anel espiro azetidinila fundidos a outro anel azetidinila ou um anel piperidinila ou um anel piperazinila e um anel espiro oxetanila fundido a um anel azetidinila ou um anel piperidinila ou um anel piperazinila ou um anel espiro ciclo-hexila fundido a um anel azetidinila ou um anel piperidinila ou um anel piperazinila.
[0028] Conforme usado no presente documento, o termo hidroxialquila e semelhantes empregados individualmente ou em combinação com outros termos, se refere a um grupo alquila que tem pelo menos um grupo hidróxi. Em determinadas modalidades, a hidroxialquila se refere a um grupo alquila que tem 1 grupo hidróxi. Em determinadas modalidades, a hidroxialquila se refere a um grupo alquila que tem
1,2 ou 3 grupos hidróxi.
[0029] O termo indivíduo se refere a um mamífero, tal como um camundongo, porquinho-da-índia, rato, cachorro ou ser humano. Em determinadas modalidades, mamífero inclui ovelha, cabra, cavalo, gato, coelho, macaco ou vaca. Os termos indivíduo e paciente são
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12/137 usados de maneira intercambiável. Em determinadas modalidades, o indivíduo é um ser humano; ou o indivíduo é um ser humano adulto; ou o indivíduo é uma criança humana.
[0030] Por trata, tratar e tratamento, no contexto de tratar uma doença ou distúrbio entende-se aliviar ou anular um distúrbio, doença ou afecção, ou um ou mais dentre os sintomas associados ao distúrbio, doença ou afecção; ou desacelerar a progressão, difusão ou piora de uma doença, distúrbio ou afecção ou de um ou mais sintomas dos mesmos. Muitas vezes, os efeitos benéficos que um indivíduo deriva de um agente terapêutico do não resultam em uma cura completa da doença, distúrbio ou afecção.
[0031] Embora os métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser usados na prática ou em testes, métodos e materiais são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes e outras referências mencionadas no presente documento são incorporadas a título de referência em sua totalidade. Em modalidade de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo definições, prevalecerá.
COMPOSTOS DA FÓRMULA (I) [0032] Os compostos da fórmula (I) são fornecidos no presente documento:
Figure BR112019013001A2_D0002
anel A é um anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros ou um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros, sendo que o anel A contém um átomo de anel nitrogênio e contém opcionalmente um átomo de anel adicional selecionado independentemente a partir de O, N, e S; R1 é H, Ci-ealquila, Czealquenila, Ci-ehidroxialquila, C(O)Ci-6alquila, Co-salquileno-Cs-iocicloalquila ou Co-3alquileno-C2
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13/137 sheterocicloalquila que tem 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N, e N(Ci-4alquila); R2 é H, F, Cl ou CH3; R3 é Ci-3alquila; R4 é H, F ou Cl; e n é 0, 1 ou 2, desde que (a) o anel A não seja morfolino ou tiomorfolino; e (b) quando o anel A é piperazinila, R1 é C2-6alquenila, Ci-6hidroxialquila, C(O)Ci-6alquila, Co-3alquileno-C3-iocicloalquila ou Co3alquileno-C2-5Ciclo-heteroalquila que tem 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e N(Ci-4alquila). Em algumas modalidades, R1 é H, Ci-6alquila, Cs-ehidroxialquila, C3-6alquenila ou Ci-2alquileno-C3locicloalquila; R2 é H; R3, caso esteja presente, é CH3, e R4 é H. Em determinadas modalidades, R1 é Ci-ealquila, Cs-ehidroxialquila ou Ci2alquileno-C3-iocicloalquila; R2 é H; R3, caso esteja presente, é CH3, e R4é F.
[0033] Em alguns casos, o composto da fórmula (I) tem as seguintes características: o anel A é piperidinila, azetidinila, azepanila, diazepanila, pirrolidinila,
Figure BR112019013001A2_D0003
Ci-6alquila, C2-6alquenila, Ci-ehidroxialquila, C(O)Ci-6alquila, Co3alquileno-C3-iocicloalquila ou Co-3alquileno-C2-5heterocicloalquila que tem 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N, e N(Ci4alquila); R2 é H, F, Cl ou CH3; R3 é Ci-salquila; R4 é H, F ou Cl; e n é 0, 1 ou 2.
[0034] Em alguns casos, o composto de fórmula (I) tem as seguintes características: anel A é piperidinila, azetidinila, azepanila, diazepanila, pirrolidinila,
Figure BR112019013001A2_D0004
Ci-ealquila, C2-6alquenila, Ci-ehidroxialquila ou Co-salquileno-Cswcicloalquila; R2 é H; R3 é Ci-salquila; R4 é H ou F; e n é 0, 1 ou 2. [0035] Em alguns casos, o composto de fórmula (I) tem as seguin
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14/137 tes características: o anel A é piperazinila; R1 é C2-6alquenila, Ciehidroxialquila ou Co-salquileno-Cs-iocicloalquila; R2 é H, F, Cl ou CH3; R3 é Ci-3alquila; R4 é H ou F; e n é 0, 1 ou 2. Em alguns casos, 0 composto da fórmula (I) te as seguintes características: 0 anel A é piperazinila; R1 é Ci-6hidroxialquila ou Co-salquileno-Cs-iocicloalquila; R2 é H; R3 é Ci-3alquila; R4 é H; e n é 0, 1 ou 2.
[0036] Em várias modalidades, 0 anel A é um anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros ou um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros, sendo que 0 anel A contém um átomo de anel nitrogênio e contém opcionalmente um átomo de anel adicional é selecionado independentemente a partir de O, N e S. Em várias modalidades, 0 anel é um a anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros ou um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros, em que anel A contém um átomo de anel nitrogênio e contém opcionalmente um átomo de anel nitrogênio adicional. Em várias modalidades, 0 anel A é um anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros ou um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros, sendo que 0 anel A contém um átomo de anel nitrogênio e contém opcionalmente um átomo de anel oxigênio. Em várias modalidades, 0 anel A é um anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros ou um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros, sendo que 0 anel A contém um átomo de anel nitrogênio e contém opcionalmente um átomo de anel enxofre. Em várias modalidades, 0 anel A é um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros que contém um ou dois átomos de anel nitrogênio ou um átomo de anel nitrogênio e um átomo de anel oxigênio. Em várias modalidades, 0 anel A é um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros que contém um ou dois átomos de anel nitrogênio. Em várias modalidades, 0 anel A é um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros que contém um átomo de anel nitrogênio. Em várias modalidades, 0 anel A é um anel espiro
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15/137 heterocicloalquila com 7 a 12 membros que contém dois átomos de anel nitrogênio. Em várias modalidades, o anel A é um anel espiro heterocicloalquila com 7 a 12 membros que contém um átomo de anel nitrogênio e um átomo de anel oxigênio. Em vários casos, o anel A é um anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros que contêm um ou dois átomos de anel nitrogênio. Em vários casos, o anel A é um anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros que contém um átomo de anel nitrogênio. Em vários casos, o anel A é um anel heterocicloalquila monocíclico com 4 a 7 membros que contêm um átomo de anel nitrogênio. Algumas porções químicas específicas de anel A contempladas incluem piperidinila, piperazinila, azetidinila, azepanila e diazepanila. Algumas porções químicas específicas de anel A contempladas incluem piperidinila, piperazinila, azetidinila, azepanila, diazepanila e pirrolidinila. Em determinadas modalidades, o anel A é piperidinila, piperazinila ou azetidinila. Em determinadas modalidades, o anel A é piperidinila, piperazinila, azetidinila ou pirrolidinila. Em determinadas modalidades, o anel A é piperidinila, pirrolidinila ou azetidinila. Em determinadas modalidades, o anel é azetidinila, azepanila ou diazepanila. Em determinadas modalidades, o anel A é azepanila ou diazepanila. Em determinadas modalidades, o anel A é piperidinila. Em determinadas modalidades, o anel A é piperazinila. Em determinadas modalidades, o anel A é azetidinila. Em determinadas modalidades, o anel A é azepanila. Em determinadas modalidades, o anel A é diazepanila. Em determinadas modalidades, o anel A é pirrolidinila. Algumas porções químicas específicas de anel espiro A contempladas incluem anel espiro azetidinila fundido a outro anel azetidinila ou um anel piperidinila ou um anel piperazinila e um anel espiro oxetanila fundido a um anel azetidinila ou um anel piperidinila ou um anel piperazinila ou um anel espiro ciclo-hexila fundido a um anel azetidinila ou um anel piperidinila ou um anel piperazinila. Em alguns casos, o anel A
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16/137 pode ser piperidinila ou piperazinila. Em vários casos, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Figure BR112019013001A2_D0005
Figure BR112019013001A2_D0006
[0037] Em vários casos, o anel A é selecionado a partir do grupo
Figure BR112019013001A2_D0007
Figure BR112019013001A2_D0008
[0038] R1 pode ser H, Ci-ealquila, C2-6alquenila, Ci-ehidroxialquila,
C(O)Ci-6alquila, Co-salquileno-Cs-iocicloalquila ou Co-3alquileno-C2 sheterocicloalquila que tem 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e N(Ci-4alquila). Em alguns casos, R1 é H. Em alguns casos, R1 é Ci-6alquila (por exemplo, metila, isopropila, sec-butila ou CH2C(CH3)3). Em alguns casos, R1 é metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila ou CHEC^CHsh). Em alguns casos, R1 é metila ou neopentila. Em alguns casos, R1 é metila. Em alguns casos, R1 é neopentila. Em alguns casos, R1 é Ci-ehidroxialquila (por exemplo,
). Em alguns casos, R1 é ho^C^. Em alguns casos, R1 é
Cs-iocicloalquila ou Ci-salquileno-Cs-iocicloalquila, por exemplo, o grupo
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Figure BR112019013001A2_D0009
cicloalquila é ciclopropila ou Cwcicloalquila, isto é, adamantila. Em alguns casos, R1 é Ci-3alquileno-C3-iocicloalquila, por exemplo,
Em alguns casos, R1 é ou ou
Figure BR112019013001A2_D0010
. Em alguns casos, R1 é
Figure BR112019013001A2_D0011
. Em alguns casos, R1 é
Figure BR112019013001A2_D0012
Em determinadas modalidades, R1 é C2-6alquenila. Em determinadas modalidades, R1 é
Figure BR112019013001A2_D0013
[0039] Em alguns casos, o composto da fórmula (I) tem seguintes
Figure BR112019013001A2_D0014
características:
selecionado a partir do grupo que consiste
Figure BR112019013001A2_D0015
CH3, R4 é H ou F; e n é 0, 1 ou 2.
[0040] Em alguns casos, 0 composto da fórmula (I) tem as seguintes características:
Figure BR112019013001A2_D0016
selecionado a partir do grupo que conPetição 870190072298, de 29/07/2019, pág. 22/157
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Figure BR112019013001A2_D0017
ou F; e n é Ο, 1 ou 2. Em determinadas modalidades, n é 0. Em determinadas modalidades, n é 1. Em determinadas modalidades, n é 2.
[0041] Em alguns casos, o composto da fórmula (I) tem as seguintes características:
Figure BR112019013001A2_D0018
do grupo que consiste em
Figure BR112019013001A2_D0019
R1 é selecionado a partir
Figure BR112019013001A2_D0020
R2 é H, F, Cl, ou CH3; R3 é CH3, R4 é H ou F; e n é 0, 1 ou 2.
[0042] Em alguns casos, o composto da fórmula (I) tem as seguintes características:
R
Figure BR112019013001A2_D0021
ou ho
Figure BR112019013001A2_D0022
R2 é H; R3 é CH3; R4 é H; e n é 0, 1 ou 2.
[0043] Em alguns casos, o composto da fórmula (I) tem as seguintes características: o anel A é piperidinila; R1 é H, Ci-ealquila, C2ealquenila, Ci-ehidroxialquila, ou Co-3alquileno-C3-iocicloalquila; R2 é H, F, Cl ou CH3; R3 é Ci-3alquila; R4 é H, F ou Cl; e n é 0, 1 ou 2. Em alguns casos, 0 composto de fórmula (I) tem as seguintes características: 0 anel A é piperidinila; R1 é H, Ci-ealquila, Czealquenila, Ci
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19/137 ehidroxialquila, ou Co-salquileno-Cs-iocicloalquila; R2 é H; R3 é Cisalquila; R4 é H ou F; e n é 0, 1 ou 2.
[0044] Em alguns casos, o composto da fórmula (I) tem as seguintes características: o anel A é azetidinila; R1 é H, Ci-ealquila, C2ealquenila, Ci-ehidroxialquila ou Co-salquileno-Cs-wcicloalquila; R2 é H, F, Cl ou CH3; R3 é Ci-3alquila; R4 é H, F ou Cl; e n é 0, 1 ou 2. Em alguns casos, 0 composto da fórmula (I) tem as seguintes características: 0 anel A é azetidinila; R1 é H ou Co-salquileno-Cs-wcicloalquila; R2 é H; R3 é Ci-salquila; R4 é H; e n é 0, 1 ou 2. Em alguns casos, 0 composto da fórmula (I) tem as seguintes características: 0 anel A é azetidinila; R1 é H ou Co-3alquileno-C3-iocicloalquila; R2 é H; R4 é H; e n é 0.
[0045] Em vários casos, R2 é H. Em alguns casos, R2 é F. Em alguns casos, R2é Cl. Em alguns casos, R2 é CH3.
[0046] Para os compostos da fórmula (I), n pode ser 0. Em determinadas modalidades, quando n é 1 ou 2, R3 é Ci-3alquila, e pode ser, por exemplo, CH3. Em determinadas modalidades, quando n é 2, cada R3 pode ser substituído no mesmo átomo do anel A ou em diferentes átomos do anel A. Em determinadas modalidades, quando n é 2, cada R3 é CH3 e cada R3 é substituído no mesmo átomo de anel A. Em determinadas modalidades, quando n é 2, cada R3 é CH3 e cada R3 é substituído em diferentes átomos de anel A.
[0047] R4 pode ser H ou pode ser F ou pode ser Cl. Em vários casos, R4 é H ou F. Em alguns casos, R4 é H. Em alguns casos, R4 é F.
[0048] Alguns compostos específicos contemplados no presente documento são listrados na Tabela 1.
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TABELA 1
Exemplo Estrutura
146 HO·-; ’ N ; ·: ' ’ · V N ' ... N.. .·< , HCI HCI
147 HCi t i -. I··· f -:····· N ' ri ' : H ! !·; ....···...<·· NH; HCi HC
171 Τ '··- ' O' N ' X?: ri. .....N.. ...-....J h NHSHCI ' HC! '
172 ... ,.N. . HU o i ri NH2HC
174 ' N ri - ,N . ..ri.. .:·;- H NH. HCI HC:
354 ΊΠ h <OvOri.
175 o J ^ri o-'l ..... ü D ,J '’--U ri if O ’N' ' kv^N,.^/ri H NH2
241 CFíC00H OVCOOH 0 /O HN-\ ,··>. U ^riW·’ \ N Ç riN.vXri.U H NH;, cf3cooh
238 0 ri'' v ri V--, N. .<· NH2
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Exemplo Estrutura
176 o fA ,, k Ji o < λ i' A 'N y \A.AA H NH2CF3COOH CFjCOGH
161 ΔΟΤΑ A
163 δ h y A
169 Αϋ,
162 +σΌγ
356 0 %Y ; ;Z''N Λ'· 1 ; Α'Δ ' N ' 'j v 4.,......1..,1,+ 11 L
357 ......... .. I Γ11 N' + 4 γ-’ 4‘· v HO ' : : 4 : H ! ' -7-„..x-+,.,..-Ax± nh2
379 o Ak Η N 'A' >1”N ^í —H NH2
181 OH .....,.......s ,.O ~1.......Ί 1 Ύ 4 T :x ,N, 4-! NH2
472 1'............ ° ,ô Y 4 Y Y' 'Ν' Y ; 1 Η ; Η 1 \.Λ,Α γ; nh2
485 A . ? í! τ' / A‘Z ΤΓ' A AaAA h nh2
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Exemplo Estrutura
486 H0, / ο rt-'X r—\ í ,L,, i '-N ? r γ ν' /-
477 octet/
478 tea//
480 ......... , ° /1 not “ 5 Γ / Η t ζ·Ν..^Ζ0;\Ζ Νί
479 0 t>:”/ Ν |^· |t Ν V Ν,Η ΝΗ2
482 0 Hcr;f Ύ // γ y ft ν X- Ν,^,,Χ,/ ΝΗ2
481 0 /¼ ' nh2
489 o /' / ”'N t 't//Λκ'N L-, N,., /a/J nh2
490 , ,,.,-,, ,. X / J HC/ Ν 4 X T ; nh2
491 o /;'/ v···/' n ' 'q r'^ V' n 'V X,,--n,H nh2 / \
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Exemplo Estrutura
478-1 Ο μ': . .. , íí 1, ; ’ν' ν' vy' ή' V HO : : : i H ;
478-11 0 H° ' μ,..©..,©/ H NH,
484 p HO : ! ! ; H .: (L, —7·, ,N.. .W., NH 2
492 o y 5,.. N,H NH 2
483 c ) H nh2
477-11 c v r r ir ) H ! NH,
477-1 o N Y vy^N nAV .L .N. A·... © H nh,. v x_,.- «·
487 .. I ... ° .Γ ry Ή j y V Ν'' V X^,,.,N....,. ,-¼... J H NH 2
488 ..... ! . ° Γί “τΛ.λ......u
[0049] Alguns compostos específicos contemplados incluem aqueles listrados na Tabela 2.
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TABELA 2
555
556 ,ΟΎΙαλ2
[0050] Em determinadas modalidades, o composto ou sal do mesmo é selecionado a partir da Tabela 1. Em determinadas modalidades, o composto ou sal do mesmo é selecionado a partir da Tabela
2. Em determinadas modalidades o composto ou sal do mesmo é selecionado a partir da Tabela 1 e da Tabela 2.
[0051] Em determinadas modalidades, o composto ou sal do mesmo é selecionado a partir do grupo que consiste nos compostos 485, 486, 479, 480, 483, 484, 482, 481, 489, 490, 491,492, 487, 488, 477, 477-I, 477-II, 478, 478-I, 478-II, 356, 359, 357, 379, 181, 472, 238, 241, 176, 171, 172, 174, 175, 354, 169, 161, 162, 163, 146, 147, 555, e 556 ou um single estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos.
[0052] Os compostos da fórmula (I) descritos no presente documento podem conter um ou mais centros assimétricos e, então, ocorrem como racematos e misturas racêmicas, únicos enantiômeros, diaestereômeros individuais e misturas diastereoméricas. Embora mostrado sem relação à estereoquímica na fórmula (I), a presente revelação inclui tais isômeros ópticos (enantiômeros) e diaestereômeros; assim como as misturas racêmicas e solucionadas, estereoisômeros R e S enantiomericamente puros; assim como outras misturas dos estereoisômeros R e S e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. O uso desses compostos deve cobrir a mistura racêmica ou qualquer um dos enantiômeros quirais.
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25/137 [0053] Uma pessoa versada na técnica também reconhecerá que é possível que haja tautômeros para os compostos descritos no presente documento. A revelação inclui todos os tautômeros, embora não mostrado nas fórmulas no presente documento. Todas as formas isoméricas de tais compostos são expressamente incluídas na presente revelação.
[0054] Os isômeros ópticos podem ser obtidos em forma pura por procedimentos padrão conhecidos pelas pessoas versadas na técnica e incluir, porém sem limitação, formação de sal diastereomérico, resolução cinética e síntese assimétrica. Consultar, por exemplo, Jacques, et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen, S.H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions página 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ, of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972), dentre os quais cada um é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Entende-se, também, que a presente revelação abrange todos os regioisômeros, e misturas dos mesmos, que podem ser obtidos em forma pura por procedimentos de separação pura conhecidos pelas pessoas versadas na técnica, e inclui, porém sem limitação, cromatografia em coluna, cromatografia de camada fina e cromatografia líquida de alto desempenho.
[0055] Os compostos descritos no presente documento também podem incluir todos os isótopos de átomos que ocorrem nos compostos intermediários ou finais. Os isótopos incluem aqueles átomos que têm o mesmo número atômico, porém números de massa diferentes. Por exemplo, isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério, de preferência, deutério.
[0056] Os compostos descritos no presente documento também incluem sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos revelados
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26/137 no presente documento. Conforme usado no presente documento, o termo sal farmaceuticamente aceitável se refere a um sal formado pela adição de um ácido farmaceuticamente aceitável ou base a um composto revelado no presente documento. Conforme usado no presente documento, o sintagma farmaceuticamente aceitável se refere a uma substância que é aceitável para uso em aplicações farmacêuticas a partir de uma perspectiva toxicológica e não interage de maneira adversa com o ingrediente ativo. Os sais farmaceuticamente aceitáveis, que incluem mono- e bissais, incluem, porém sem limitação, aqueles derivados de ácidos orgânicos e inorgânicos, tais como, porém sem limitação, ácidos acético, láctico, cítrico, cinâmico, tartárico, succínico, fumárico, maleico, malônico, mandélico, málico, oxálico, propiônico, clorídrico, bromídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, glicólico, pirúvico, metanossulfônico, etanossulfônico, toluenosdulfônico, salicílico, benzoico e ácidos aceitáveis conhecidos semelhantemente. As listas de sais adequados são encontradas Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a edição, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, página 1418; Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977); e Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use A Handbook; Wermuth, C. G. e Stahl, P. H. (edições) Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich, 2002 [ISBN 3-906390-26-8] dentre os quais cada um é incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade. MÉTODOS DE USO [0057] Todos os compostos e composições farmacêuticas fornecidos no presente documento podem ser usados em qualquer um dos métodos fornecidos no presente documento.
[0058] No presente documento, são fornecidos métodos para inibir uma ou mais enzimas HDAC (por exemplo, HDAC1 ou HDAC2; por exemplo, HDAC3) ou mais que uma HDAC (por exemplo, HDAC1 e HDAC2; por exemplo, HDAC1 e HDAC3; por exemplo, HDAC2 ou
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HDAC3; por exemplo, HDAC1, HDAC2 e HDAC3) com o uso de urn composto ou um sal das mesmas, conforme revelado no presente documento. Em algumas modalidades, os métodos podem incluir colocar em contato com uma ou mais enzimas HDAC (por exemplo, HDAC1 ou HDAC2; por exemplo, HDAC3) em uma amostra com um composto ou um sal das mesmas, conforme revelado no presente documento. Em outras modalidades, os métodos podem incluir administrar um composto ou um sal dos mesmos, conforme revelado no presente documento, a um indivíduo (por exemplo, um mamífero, tal como um ser humano).
[0059] Uma histona deacetilase (HDAC), conforme descrito no presente documento, pode ser qualquer polipeptídeo que tem recursos característicos de polipeptídeos que catalisam a remoção do grupo acetila (desacetilação) de proteínas-alvo acetiladas. Os atributos característicos das enzimas HDAC são conhecidos na técnica (consultar, por exemplo Finnin et al., 1999, Nature, 401:188). Desse modo, uma enzima HDAC pode ser um polipeptídeo que reprime a transcrição gênica desacetilando-se os grupos ε-amino de resíduos de lisina conservados localizados nas extremidades N de histonas, por exemplo, H3, H4, H2A, e H2B, que foram o nucleossoma. As enzimas HDAC também desatilam outras proteínas, tais como p53, E2F, a-tubulina e MyoD (consultar, por exemplo Annemieke et al., 2003, Biochem. J., 370:737). As enzimas HDAC também podem ser localizadas no núcleo e determinadas enzimas HDAC podem ser constatadas tanto no núcleo quanto no citoplasma.
[0060] Os compostos descritos no presente documento podem interagir com qualquer enzima HDAC. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento terão uma atividade pelo menos cerca de 2 vezes (por exemplo, pelo menos cerca de 5 vezes, 10 vezes, 15 vezes ou 20 vezes) maior para inibir uma ou mais enzi
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28/137 mas HDAC de classe I (por exemplo, HDAC1, HDAC2 ou HDAC3) em comparação a uma ou mais outras enzimas HDAC (por exemplo, uma ou mais enzimas HDAC de classe Ila, lib ou IV).
[0061] Em algumas modalidades, um composto ou um sal do mesmo, conforme revelado no presente documento, inibe seletivamente HDAC3, por exemplo, inibe seletivamente HDAC3 sobre HDAC1 e HDAC2 (por exemplo, exibindo uma seletividade de 5 vezes ou maior, por exemplo, exibindo uma seletividade de 25 vezes ou maior). Embora sem se ater a teoria, acredita-se que os inibidores HDAC3-seletivos possam aumentar a expressão de frataxina e, portanto, podem ser úteis no tratamento de afecções neurológicas (por exemplo, afecções neurológicas associada a expressão de frataxina reduzida, tal como ataxia de Friedreich). Além disso, acredita-se que a inibição de HDAC3 exerce uma função importante na consolidação de memória (McQuown SC et al, J Neurosci 31 764 (2011)). Os inibidores seletivos de HDAC3 fornecem vantagens para o tratamento de afecções neurológicas em relação ao uso de inibidores de HDAC de amplo espectro reduzindo-se toxicidades associadas a uma inibição de outras enzimas HDAC. Tais inibidores HDAC3-específicos podem fornecer um índice terapêutico maior, o que resulta em melhor tolerância em pacientes durante tratamento crônico ou a longo prazo.
[0062] Em algumas modalidades adicionais, os compostos inibem seletivamente a HDAC1 e/ou HDAC2 (por exemplo, exibindo seletividade de 5 vezes ou maior, por exemplo, exibindo seletividade de 25 vezes ou maior). A inibição de HDAC1 e/ou 2 pode ser útil no tratamento de câncer ou outra doença, conforme revelado no presente documento.
[0063] Em algumas modalidades, um composto ou um sal do mesmo, conforme revelado no presente documento, exibe penetração aprimorada no cérebro. Por exemplo, razões cérebro/plasma maiores
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29/137 que cerca de 0,25 (por exemplo, maiores que cerca de 0,50, maiores que cerca de 1,0, maiores que cerca 1,5, ou maiores que cerca 2,0) são observadas quando ratos, camundongos, cachorros ou macacos são dosados com alguns dos compostos revelados no presente documento. Em algumas modalidades, um composto ou um sal do mesmo, conforme revelado no presente documento, inibe seletivamente HDAC3, por exemplo, inibe seletivamente HDAC3 sobre HDAC1 e HDAC2 (por exemplo, exibindo uma seletividade de 5 vezes ou maior, por exemplo, exibindo uma seletividade de 25 vezes ou maior) e exibe penetração aprimorada no cérebro. Em algumas modalidades, um composto descrito no presente documento inibe seletivamente HDAC1 e/ou HDAC2, por exemplo, inibe seletivamente HDAC1 e/ou HDAC2 over HDAC3 (por exemplo, por exemplo, exibe seletividade de 5 vezes ou maior, por exemplo, exibe seletividade de 25 vezes ou maior) e exibe penetração adicional no cérebro.
[0064] Os compostos com penetração adicional no cérebro são adequados para terapias direcionadas para o cérebro (por exemplo, afecções neurológicas, tais como ataxia de Friedreich, distrofia miotônica, atrofia muscular espinhal, frágil X sindrome, doença de Huntington, ataxia espinocerebelar, doença de Kennedy, esclerose lateral amiotrófica, atrofia muscular espinhal e bulbar e doença de Alzheimer; uma afecção de danos à memória, demência frontotemporal; transtorno de estresse pós-traumático; um vício em drogas).
[0065] No presente documento, são fornecidos métodos para tratar uma doença ou distúrbio mediados por HDAC em um indivíduo (por exemplo, um mamífero, tal como um ser humano) com necessidade dos mesmos, o que inclui administrar um composto ou um sal do mesmo, conforme revelado no presente documento, ao indivíduo.
[0066] No presente documento, são fornecidos adicionalmente métodos para prevenir uma doença ou distúrbio mediados por HDAC
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30/137 em um indivíduo (por exemplo, um mamífero, tal como um ser humano) com necessidade do mesmo. A prevenção pode incluir atrasar o início ou reduzir o risco de desenvolver uma doença, distúrbio ou afecção ou sintomas dos mesmos.
[0067] A revelação fornece adicional mente um método para tratar um câncer em um paciente com necessidade do mesmo que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de HDAC, conforme descrito no presente documento, ou sal do mesmo. Em algumas modalidades, o câncer é um tumor sólido, neoplasma, carcinoma, sarcoma, leucemia ou linfoma. Em algumas modalidades, leucemias incluem leucemias agudas e leucemias crônicas, tais como leucemia linfoide aguda (ALL), leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide crônica (CLL), leucemia mielogenosa crônica (CML) e Leucemia de Células Pilosas; linfomas, tais como Linfomas Cutâneos de Célula T (CTCL), linfomas de células T periféricas não cutâneas, linfomas associados a vírus linfotrópico da célula T humana (fITLV), tais como leucemia/linfoma de células T do adulto (ATLL), doença de Hodgkin e linfomas de não Hodgkin, linfomas de células grandes, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL); linfoma de Burkitt; linfoma primário do sistema nervoso central (CNS); mieloma múltiplo; tumores sólidos na infância, tais com tumores no cérebro, neuroblastoma, retinoblastoma, tumor de Wilm, tumores ósseos e sarcomas de tecido mole, tumores sólidos comuns de adultos, tais como câncer de cabeça e pescoço (por exemplo, oral, laríngeo e esofágico), cânceres geniturinários (por exemplo, próstata, bexiga, renal, uterino, ovariano, testicular, retal e no cólon), câncer de pulmão, câncer de mama.
[0068] Em algumas modalidades, o câncer é (a) Cardíaco: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiossarcoma, lipossarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma e teratoma; (b) No Pulmão: carcinoma broncogênico (célula escamosa, célula pequena não diferenci
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31/137 al, célula grande não diferenciada, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (brônquico), adenoma brônquico, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; (c) Gastrointestinal: esôfago (carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, leiomiossarcoma, linfoma), estômago (carcinoma, linfoma, leiomiossarcoma), pâncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grosso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma viloso, hamartoma, leiomioma); (d) No Trato Geniturinário: rim (adenocarcinoma, tumor de Wilm (nefroblastoma), linfoma, leucemia), bexiga e uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células transicionais, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículos (seminoma, teratoma, carcinoma embrionário, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiais, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); (e) No Fígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; (f) Nos Ossos: sarcoma osteogênico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrossarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células reticulares), mieloma múltiplo, cordoma de tumor maligno de célula gigante, osteocondroma (exostoses osteocartilaginosas), condroma benigna, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide e tumores de células gigantes; (g) No Sistema Nervoso: crânio (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteite deformante), meninges (meningioma, meningosarcoma, gliomatose), cérebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma (pinealoma), glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congênitos), medula espinhal (neurofibroma, meningioma, glioma, sarcoma); (h)
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Ginecológico: útero (carcinoma endométrio), cérvix (carcinoma cervical, displasia cervical pré-tumor), ovários (carcinoma de ovário, cistoadenocarcinoma seroso, cistoadenocarcinoma mucinoso), carcinoma não classificado (tumores de células granulosa-tecais, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma boritoide), rabdomiossarcoma embironário, trompas de Falópio (carcinoma); (i) Hematológico: sangue (leucemia mieloide [aguda e crônica], leucemia linfoide aguda, leucemia linfoide crônica, doenças mieloproliferativas, múltiplo mieloma, síndrome mielodisplástica), doença de Hodgkin, linfoma de não Hodgkin (linfoma maligno); (j) Na Pele: melanoma maligno, carcinoma de células basais, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Karposi, nevos melanocíticos displásicos, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoríase; e (k) glândulas adrenais: afecções de neuroblastoma.
[0069] Em outro aspecto, é fornecido um método para tratar um distúrbio inflamatório em um paciente com necessidade do mesmo que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, conforme descrito no presente documento, ou sal do mesmo. Em algumas modalidades, o distúrbio inflamatório é uma doença inflamatória aguda e crônica, doença autoimune, doença alergênica, doença associada a estresse oxidativo e doenças caracterizadas pela hiperproliferação celular. Os exemplos não limitativos são afecções inflamatórias de uma articulação incluindo artrite reumatoide (RA) e artrite psoriática; doenças intestinais inflamatórias, tais como doença de Crohn e colite ulcerativa; epondiloartropatias; escleroderma; psoríase (incluindo psoríase mediada por célula T) e dermatoses inflamatórias, tais como uma dermatite, eczema, dermatite atópica, dermatite de
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33/137 contato, urticaria; vasculite (por exemplo, vasculite necrosante, cutânea e de hipersensibilidade); miosite eosinofílica, fascite eosinofílica; cânceres com infiltração de leucócitos da pele ou órgãos, lesão isquêmica, incluindo isquemia cerebral (por exemplo, lesão cerebral como um resultado de trauma, epilepsia, hemorragia ou derrame, dentre os quais cada um pode resultar em neurodegeneração); HIV, insuficiência cardíaca, doença hepática crônica, aguda ou maligna, tiroidite autoimune; lúpus eritematoso sistêmico, síndrome de Sjorgren, doenças pulmonares (por exemplo, ARDS); pancreatite aguda; esclorese lateral amiotrófica (ALS); doença de Alzheimer; caquexia/anorexia; asma; aterosclerose; síndrome da fadiga crônica, febre; diabete (por exemplo, diabetes tipo 2 ou diabetes tipo 1); glomerulonefrita; doença do enxerto contra hospedeiro (por exemplo, no transplante); choque hemorrágico; hiperalgesia: doença intestinal inflamatória; esclerose múltipla; miopatias (por exemplo, metabolismo de proteína muscular, esp. em sepse); osteoartrite; osteoporose; doença de Parkinson; dor; parto prematuro; psoríase; lesão de reperfusão; toxicidade induzida por citocina (por exemplo, choque séptico, choque endotóxico); efeitos colaterais de radioterapia, doença da articulação temporomandibular, metástase tumoral; ou uma afecção inflamatória resultante de tensão, entorse, danos à cartilagem, trauma, tal como queimadura, cirurgia ortopédica, infecção ou outros processos de doença.
[0070] Doenças e afecções alérgicas incluem, porém sem limitação, doenças alérgicas respiratórias, tais como asma, rinite alérgica, doenças de hipersensibilidade pulmonar, pneumonite de hipersensibilidade, pneumonias eosinofílicas (por exemplo, síndrome de Loeffler, pneumonia esinofílica crônica), hipersensibilidade do tipo atrasada, doenças pulmonares intersticiais (ILD) (por exemplo, fibrose pulmonar idiopática ou ILD associada a artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico, espondilite anquilosante, esclerose sistêmica, síndrome de
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Sjogren, poliomitose ou dermatomiosite); anafilaxia sistêmica ou resposta à hipersensibilidade, alergias a fármacos (por exemplo, a penicilina, cefalosporinas), alergias a picadas de insetos e semelhantes. [0071] Em outro aspecto, é fornecido um método para prevenir ou tratar um distúrbio relacionado à memória em um paciente com necessidade do mesmo que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, conforme descrito no presente documento. Os compostos podem ser usados para tratar pacientes com danos à memória associados a distúrbios cognitivos diretos, tais como amnesia, demência e delírio, demência frontotemporal; distúrbios de ansiedade, tais como fobias, distúrbios do pânico, estresse psicossocial (por exemplo, conforme observado em vítimas de desastre, catástrofe ou violência), transtorno obsessivo compulsivo, distúrbio de ansiedade generalizado e transtorno de estresse pós-traumático; transtornos do humor, tais como depressão e transtorno bipolar; e transtornos psicóticos, tais como esquizofrenia e transtorno delirante. Danos à memória, um marco das doenças neudrodegenerativas, tais como, porém sem limitação, Parkinson, Alzheimer, Huntington, esclorese lateral amiotrófica (ALS), ataxia espinocerebelar, assim como envelhecimento, também podem ser tratados com o uso de um composto revelado no presente documento. Além disso, os compostos revelados podem ser usados para tratar vício em drogas através da extinção do comportamento em busca de drogas.
[0072] Os inibidores de HDAC, por exemplo, inibidores seletivos de HDAC1 e/ou HDAC2, também podem ser úteis para tratar anemia falciforme (SCD) e β-talassemia (bT). Podem, também, ser úteis no tratamento de transtornos do humor ou transtornos cerebrais com neuroplasticidade mediada por comatina alterada (Schoreder, et al., PLoS ONE 8(8): e71323 (2013)).
[0073] Em outro aspecto, é fornecido um método para prevenir ou
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35/137 tratar um distúrbio de hemoglobina no paciente com necessidade do mesmo que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, conforme descrito no presente documento ou sal do mesmo. Os compostos podem ser usados para tratar pacientes com anemia falciforme ou β-talassemia. Em várias modalidades, o composto é um inibidor seletivo de HDAC1 e/ou HDAC2 e é usado para prevenir ou tratar o distúrbio de hemoglobina (por exemplo, anemia falciforme ou β-talassemia).
[0074] Além disso, é fornecido um método para prevenir ou tratar um transtorno do humor ou transtornos cerebrais com neuroplasticidade mediada por cromatina alterada em um paciente com necessidade do mesmo que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto conforme descrito no presente documento ou sal do mesmo. Os compostos, conforme descrito no presente documento, podem ser usados para tratar pacientes com um transtorno do humor.
[0075] Em um aspecto adicional, o presente pedido fornece métodos para tratar uma afecção neurológica (por exemplo, ataxia de Friedreich (FRDA), distrofia miotônica, atrofia muscular espinhal, sindrome do X frágil, doença de Huntington, uma ataxia espinocerebelar, doença de Kennedy, esclorese lateral amiotrófica, Niemann Pick, Pitt Hopkins, atrofia muscular espinhal e bulbar, doença de Alzheimer ou esquizofrenia, transtorno bipolar e doenças relacionadas) que incluem administrar um composto descrito no presente documento ou sal do mesmo a um paciente que tem uma afecção neurológica.
[0076] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento o uso de um composto descrito no presente documento ou sal do mesmo na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma afecção neurológica (por exemplo, ataxia de Friedreich, distrofia miotônica, atrofia muscular espinhal, sindrome do X frágil, do
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36/137 ença de Huntington, uma ataxia espinocerebelar, doença de Kennedy, esclorese lateral amiotrófica, Niemann Pick, Pitt Hopkins, atrofia muscular espinhal e bulbar ou doença de Alzheimer); uma afecção ou doença de danos à memória, a câncer; ou um distúrbio inflamatório ou uma infecção por Plasmodium falciparum (por exemplo, malária). [0077] Além disso, é fornecido no presente documento um método para usar um composto ou um sal do mesmo, conforme revelado no presente documento, para inibir a histona deacetilases classe I, sendo que essa inibição resulta em uma expressão de mRNA de frataxina aumentada in vitro nas células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de um paciente com ataxia de Friedreich. Em outras modalidades, os compostos ou um sal dos mesmos revelados no presente documento inibem a proliferação in vitro de células de câncer colorretal de maneira dependente de dose. Em modalidades adicionais, os compostos ou um sal dos mesmos revelados no presente documento aumentam a memória a longo prazo in vivo com o uso do paradigma inovador de reconhecimento de objetivo novo.
[0078] Em um aspecto adicional, é fornecido no presente documento um kit para o tratamento ou prevenção de um distúrbio selecionado a partir de um distúrbio neurológico (por exemplo, ataxia de Friedreich, distrofia miotônica, atrofia muscular espinhal, síndrome do X frágil, doença de Huntington, a ataxia espinocerebelar, doença de Kennedy, esclorese lateral amiotrófica, atrofia muscular espinhal e bulbar ou doença de Alzheimer), a afecção ou doença de danos à memória, um câncer, um distúrbio inflamatório ou uma infecção por Plasmodium falciparum (por exemplo, malária) em um paciente com necessidade do mesmo que compreende (i) um composto descrito no presente documento ou um sal do mesmo; e (ii) instruções que compreendem uma direção para administrar o dito composto ao dito paciente.
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37/137 [0079] Em outro aspecto, são fornecidos métodos para tratar uma afecção neurológica (por exemplo, ataxia de Friedreich, distrofia miotônica, atrofia muscular espinhal, sindrome do X frágil, doença de Huntington, ataxias espinocerebelares, doença de Kennedy, esclorese lateral amiotrófica, atrofia muscular espinhal e bulbar ou doença de Alzheimer) que incluem realizar qualquer um dentre os métodos acima, formular o composto candidato ou um sal do mesmo em uma composição farmacêutica e administrar a composição farmacêutica a um paciente que tem uma afecção neurológica.
[0080] Mostrou-se que os inibidores de HDAC têm atividade antimalárica (Andrews, et al., 2000, Int. J. Parasitol., 30:761 a 768; Andrews, et al., Antimicrob. Agents Chemother., 52:1.454 a 61). A presente revelação fornece métodos para tratar uma infecção por Plasmodium falciparum (por exemplo, malária) em um paciente com necessidade dos mesmos.
[0081] Os inibidores de HDAC também podem ser úteis para tratar doenças infeciosas, tais como infecções por vírus. Por exemplo, o tratamento contra células infectadas com HIV com inibidores de HDAC e fármacos antirretrovirais podem erradicar vírus de células tratadas (Blazkova, J., et al J Infect Dis. 1Q de setembro de 2012;206(5):765 a 9; Archin, N.M., et al Nature 25 de julho de 2012, 487(7.408):482 a 5). A presente revelação fornece métodos para tratar uma infecção por HIV com necessidade dos mesmos.
[0082] Em determinadas modalidades, é fornecido um método para tratar qualquer uma dentre as doenças ou transtornos descritos no presente documento que compreende administrar a um indivíduo com necessidade de tratamento dos mesmos um composto ou sal do mesmo de acordo com qualquer uma das várias modalidades reveladas no presente documento.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS
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38/137 [0083] Os inibidores de HDAC, conforme revelado no presente documento, podem ser administrados puros ou formados como composições farmacêuticas. As composições farmacêuticas incluem uma quantidade apropriada do inibidor de HDAC em combinação com um veículo apropriado e, opcionalmente, outros ingredientes úteis. Por exemplo, os outros ingredientes úteis incluem, porém sem limitação, materiais de encapsulamento ou aditivos, tais como aceleradores de absorção, antioxidantes, ligantes, tampões, agentes de revestimento, agentes colorantes, diluentes, agentes desintegrantes, emulsificantes, extensores, cargas, agentes flovarizantes, umectantes, lubrificantes, perfumes, conservantes, propulsores, agentes de liberação, agentes esterilizantes, adoçantes, solubilizantes, agentes umectantes e misturas dos mesmos.
[0084] Em determinadas modalidades, opcionalmente, em combinação com qualquer uma ou todas as várias modalidades acimas, é fornecida no presente documento composição farmacêutica de um composto revelado no presente documento, por exemplo, um composto da fórmula (I), um composto da Tabela 1, ou um composto da Tabela 2 ou estereoisômeros dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
[0085] Em determinadas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto da fórmula (I), ou estereoisômeros dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. Em determinadas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto da Tabela 1 ou um composto da Tabela 2, ou estereoisômeros do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. Em determinadas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto da Tabela
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1, ou estereoisômeros do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. Em determinadas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto da Tabela 2, ou estereoisômeros do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
[0086] Desse modo, são fornecidas no presente documento composições farmacêuticas que compreende um composto descrito no presente documento e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. As composições farmacêuticas são administradas a um indivíduo com necessidade do mesmo por qualquer rota o que torna o composto biodisponível. Em uma modalidade, a composição é uma formulação sólida adaptada para administração oral. Em outra modalidade, a composição é um comprimido, pó ou cápsula; ou a composição é um comprimido. Em uma modalidade, a composição é uma formulação líquida adaptada para administração oral. Em uma modalidade, a composição é uma formulação líquida adaptada para administração parenteral. Em outra modalidade, a composição é uma solução, suspensão ou emulsão; ou a composição é uma solução. Em outra modalidade, composições de forma sólida podem ser convertidas, logo antes do uso, em composições de forma líquida ou para administração oral ou administração parenteral. Essas composições de forma sólida particulares são fornecidas em forma de dose unitária e, desse modo, são usadas para fornecer uma unidade de dosagem líquida única. Essas e outras composições farmacêuticas e processos para preparar os mesmos são bem conhecidos na técnica. (Consultar, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D. B. Troy, Editor, 21a Edição, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006).
[0087] As dosagens podem variar dependendo da exigência do paciente, da gravidade da afecção que é tratada e do composto parti
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40/137 cular que é empregado. A determinação da dosagem apropriada para uma situação particular pode ser determinada por uma pessoa versada na técnica de medicina. A dosagem diária total pode ser dividida e administrada em porções ao longo do dia por meio de ou por meios que forneçam entrega contínua.
[0088] Os compostos e composições descritos no presente documento podem ser administrados incialmente em uma dosagem adequada que possa ser ajustada, conforme exigido, dependendo da resposta clínica desejada. Em determinadas modalidades, os compostos são administrados a um indivíduo em uma dosagem diária entre 0,01 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal. Em outras modalidades, a dose é de 1 a 1.000 mg/dia. Em determinadas modalidades, a dose diária é de 1 a 750 mg/dia; ou de 10 a 500 mg/dia.
[0089] Em outra modalidade, a composição farmacêutica está em uma forma de dosagem unitária. A composição pode ser subdividida em doses unitárias que contêm quantidades apropriadas para o componente ativo (ou componentes ativos). A forma de dosagem unitária pode ser um comprimido, cápsula ou pó em um frasco ou ampola ou pode ser o número apropriado de qualquer uma das mesmas em uma forma empacotada. A forma de dosagem unitária pode ser uma forma empacotada, sendo que o pacote que contém quantidades distintas de composição, tais como comprimidos empacotados, cápsulas ou pós em frascos ou ampolas. A quantidade de composto ativo (ou compostos ativos) em uma dose unitária da composição pode ser variada ou ajustada de cerca de 1 mg a cerca de 100 mg ou de cerca de 1 mg a cerca de 50 mg ou de cerca de 1 mg a cerca de 25 mg, de acordo com a aplicação particular.
SÍNTESE GERAL DE COMPOSTOS DA FÓRMULA (I) [0090] Os compostos da presente revelação podem ser preparados convenientemente em conformidade com os procedimentos deli
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41/137 neados na seção Exemplos, de materiais iniciais disponíveis comercialmente, compostos conhecidos na literatura ou intermediários preparados prontamente, empregando-se métodos e procedimentos sintéticos convencionais conhecidos pelas pessoas versadas na técnica. Os métodos e procedimentos sintéticos convencionais para a preparação de moléculas orgânicas e transformações de grupo funcional e manipulações podem ser obtidos prontamente a partir da literatura científica relevante ou de livros didáticos padrão no campo. Será observado que, quando condições de processo preferenciais ou típicas (isto é, temperaturas de reação, períodos, razões molares de reagentes, solventes, pressões, etc.) são fornecidas, outras condições de processo podem ser usadas, salvo quando declarado de outro modo. As condições ideais de reação podem variar com os reagentes particulares ou o solvente usado, porém tais condições podem ser determinadas por uma pessoa versada na técnica por procedimentos de otimização rotineiros. As pessoas versadas na técnica de síntese orgânica reconhecerão que a natureza e ordem das etapas sintéticas apresentadas podem variar com a finalidade de otimizar a formação dos compostos descritos no presente documento.
EXEMPLOS [0091] A síntese de compostos específicos foi realizada conforme a seguir.
ABREVIAÇÕES
Abreviação Significado
ACN Acetonitrila
AcOH Ácido acético
Boc Terc-butiloxicarbonila
BOC2O Dicarbonato de di-terc-butila
CS2CO3 Carbonato de césio
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DCE 1,2-dicloroetano
DCM Diclorometano
DIPEA di-isoproiletilamina
DMAP 4-dimetilaminopiridina
DMF dimetilformamida
DMSO Sulfóxido de metila
EtOH Etanol
EDCI 1-etil-3-(3-dimetilaminopopril)carbodiimida
Fmoc fluorenilmetiloxicarbonila
HATU Hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)- N, N, Ν', N-tetram eti I u rôn i o
HCI Ácido clorídrico
HPLC Cromatografia líquida de alto desempenho
Hz Hertz (s_1)
HOBt hidroxibenzotriazol
K2CO3 Carbonato de potássio
T3P Anidrido de ácido propilfosfônico
LC-MS Cromatografia líquida-espectrometria de massa
mg miligrama
MeOH metanol
ml mililitro
mm milímetro
pm micrômetro
mmol milimol
μΙ microlitro
mM milimolar
μΜ micromolar
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RMN Ressonância magnética nuclear
NaH Hidreto de sódio
STAB triacetoxiboroidreto de sódio
TEA trietilamina
TFA Ácido trifluoroacético
THF tetra-hidrofurano
TLC Cromatografia de camada fina
Esquema sintético para o Composto 485 e Composto 486:
Figure BR112019013001A2_D0023
[0092] Etapa 1: Síntese de 4-(4-(metoxicarbonil)benzil)-1,4diazepano-1-carboxilato de terc-butila (3): A uma solução agitada do composto 1 (1,92 g, 1,1 eq.) e do composto 2 (2 g, 1 eq.) em ACN (20 ml) foi adicionado carbonato de potássio (1,8 g, 1,5 eq.). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SO4, anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para afim de fornecer o composto do título 3 que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional.
[0093] Etapa 2: Síntese de cloridrato de metil 4-((1,4-diazepan-1
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44/137 il)metil)benzoato (4): A uma solução agitada do composto 3 (2,8 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (10 ml), HCI 4M em dioxano (20 ml) foi adicionado a 0Ό. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão da reação, uma mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e seco sob vácuo para gerar o composto do título 4 como sal HCI.
[0094] Etapa 3: Síntese de composto 5a para o Composto 485: A uma solução agitada do composto 4 (1 eq.) e carboxaldeído de ciclopropila (1,2 eq.) em DCM (10 vol.), foi adicionado ácido acético (6 eq.) e agitado à temperatura ambiente por 30 min. Para isso, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Em seguida, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro e evaporados para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 5a.
[0095] Etapa 3: Síntese do composto 5b para o Composto 486: A uma solução do Composto 4 (1 eq.) em etanol (10 vol.), foram adicionados TEA (2,5 eq.) e 2,2-dimetiloxirano (1,5 eq.). A mistura de reação foi aquecida a 80Ό por 12 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. Permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 5b.
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NQ Estrutura
1 0 <4 5a
2 o hox 5b
[0096] Etapa 4: Procedimento geral para síntese do composto 6a a 6b: A uma solução agitada do composto 5 (1 eq.) em metanol: água (1:1), NaOH (1,5 eq.) foi adicionada à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 80 O por 5 a 6 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi dissolvido em água e lavado com éter dietílico. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 6.
Figure BR112019013001A2_D0024
8b: A uma solução agitada do composto 6 (1 eq.) e (2aminofenil)carbamato de terc-butila (1,2 eq.) em ACN, piridina (6 eq.) e HATU (1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 90 Ό de um dia para o outr o, e o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi dividido em porções entre água e acetato de etila. A camada orgânica foi sepa
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46/137 rada, lavada com água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre NazSCXi anidro e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 8.
NQ Estrutura
1 jQ < Boc 8a
2 hoA Boc 8b
[0098] Etapa 6: Síntese de tricloridrato de A/-(2-aminofenil)-4-((4(ciclopoprilmetil)-l ,4-diazepan-1-il)metil)benzamida (Composto 485): A uma solução agitada do composto 8 (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.), HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada, o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e seco sob vácuo para gerar o composto do título 485 colmo um sal de HCI.
[0099] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 10,12 (s, 1H), 8,12 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,16 - 7,08 (m, 2H), 6,95 - 6,93 (m, 1H), 4,46 (s, 2H), 3,67 - 3,34 (m, 8H), 3,05 - 3,04 (m, 2H), 2,33 - 2,26 (m, 2H), 1,12 - 1,10 (m, 1H), 0,65 0,63 (m, 2H), 0,42 - 0,40 (m, 2H); LCMS: Calculada para C23H30N4O para base livre: 378,24; Observado: 379,15 (M+1)+.
[00100] Etapa 6: Síntese de A/-(2-aminofenil)-4-((4-(2-hidróxi-2metilpopril)-1,4-diazepan-1-il)metil)benzamida (Composto 486): A uma solução agitada do composto 8 (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão
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47/137 reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, seca sobre NazSCXt anidro e concentrada. O produto cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílicagel e HPLC preparativa para gerar o composto do título 486.
[00101] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,93 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,44 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,59 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 3,96 (s, 1H), 3,67 (s, 2H), 2,83 - 2,79 (m, 4H), 2,67 - 2,56 (m, 4H), 2,38 (s, 2H), 1,70 - 1,68 (m, 2H), 1,07 (s, 6H); LCMS: Calculada para C23H32N4O2: 396,25; Observado: 396,95 (M+1)+.
Esquema sintético para Composto 479 e Composto 480:
Figure BR112019013001A2_D0025
[00102] Etapa 1: Síntese de (fí)-4-(4-(metoxicarbonil)benzil)-2metilpiperazina-1-carboxilato de terc-butila (3): A uma solução agitada do composto 1 (1,92 g, 1,1 eq.) e do composto 2 (2 g, 1 eq.) em ACN (20 ml), carbonato de potássio (1,81 g, 1,5 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrado e concentrados sob pressão reduzida a fim de obter 0 produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de
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48/137 sílica-gel para gerar o composto do título 3.
[00103] Etapa 2: Síntese de (fí)-4-((3-metilpiperazin-1il)metil)benzoato de metila (4): A uma solução agitada do composto 3 (2,9 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 ml), HCI 4M em dioxano (15 ml) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e seco sob vácuo para produzir o composto do título 4 como sal de HCI.
[00104] Etapa 3: Síntese do composto 5a para o composto 479: A uma solução agitada do composto 4 (1 eq.) e carboxaldeído de ciclopropila (1,2 eq.) em DCM (10 vol.) foram adicionados ácido acético (6 eq.) e triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Em seguida, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro e evaporados para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 5a.
[00105] Etapa 3: Síntese do Composto 5b para o composto 480: A uma solução do Composto 4 (1 eq.) em etanol (10 vol.) TEA (2,5 eq.) e
2,2-dimetiloxirano (1,5 eq.) foram adicionados, e a mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão da reação, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar um composto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 5b.
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49/137
NQ Estrutura
1 o 5a
2 o ηοΨ^ν^ 5b
[00106] Etapa 4: Procedimento geral para síntese do composto 6a a 6b: À solução agitada do composto 5 (1 eq.) em metanokágua (1:1) foi adicionado NaOH (1,5 eq.) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 60 Ό por 5 a 6 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo resultante foi dissolvido em água e lavado com éter dietílico. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 6.
NQ Estrutura
1 o 6a
2 o ho4^n^ Ar^OH 6b
[00107] Etapa 5: Procedimento geral para síntese do composto 8a a 8b: A uma solução agitada do composto 6 (1 eq.) e (2aminofenil)carbamato de terc-butila (1,1 eq.) em ACN foram adicionados piridina (5 eq.) e HATU (1,5 eq.) à temperatura ambiente. Após agitação, a mistura de reação a 80 Ό por 12 a 16 horas, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo foi particionado entre água e acetato de etila. A camada orgânica foi separada, lavada com
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50/137 água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre NazSCXi anidro e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 8.
NQ Estrutura
1 boc 8a
2 Boc 8b
[00108] Etapa 6: Síntese de (fí)-N-(2-aminofenil)-4-((4(ciclopoprilmetil)-3-metilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 479): A uma solução agitada do composto 8 (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratifiçado com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, seca sobre Na2SÜ4 anidro e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel e HPLC preparativa para gerar o composto desejado 479.
[00109] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (s, 1H), 7,93 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,19-7,12 (m, 1H), 7,01 -6,88 (m, 1H), 6,78 - 6,76 (m, 1H), 6,64 - 6,55 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 3,50 (s, 2H), 2,93 - 2,91 (m, 1H), 2,65 - 2,53 (m, 3H), 2,17 - 2,09 (m, 2H), 1,88 - 1,86 (m, 1H), 0,93 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 0,81 - 0,79 (m, 1H), 0,46 - 0,42 (m, 2H), 0,06 - 0,05 (m, 2H), 2H unidos em pico de solvente; LCMS: Calculada para C23H30N4O: 378,24; Observado: 379,05 (M+1)+.
[00110] Etapa 6: Síntese de (R)-N-(2-aminofenil)-4-((4-(2-hidróxi-2
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51/137 metilpopril)-3-metilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 480): A uma solução agitada do composto 8 (0,3 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratifiçado com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, seca sobre Na2SÜ4 anidro e concentrada. A resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel e HPLC preparativa para gerar o composto do título 480.
[00111] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (s, 1H), 7,93 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,60 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 3,96 (s, 1H), 3,49 (s, 2H), 3,10 - 2,98 (m, 1H), 2,46 - 2,42 (m, 4H), 2,38 - 2,33 (m, 2H), 2,26 - 2,24 (m, 1H), 2,09 - 1,92 (m, 1H), 1,06 (d, J = 4,8 Hz, 6H), 0,94 (d, J = 6,0 Hz, 3H). LCMS: Calculada para C23H32N4O2: 396,25; Observado: 397,20 (M+1)+.
Esquema sintético para 0 Composto 483 e 0 Composto 484:
Figure BR112019013001A2_D0026
[00112] Etapa 1: Síntese de 4-(4-(metoxicarbonil)benzil)-2,2dimetilpiperazina-1-carboxilato de terc-butila (3): A uma solução agitada do composto 1 (0,4 g, 1 eq.) e aldeído 2 (0,367 g, 1,2 eq.) em DCM
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52/137 (15 ml) triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (0,553 g, 1,4 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC e LCMS. A mistura de reação foi dividida em porções entre DCM e água. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca sobre NazSCXi e evaporada para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto do título 3.
[00113] Etapa 2: Síntese de cloridrato de 4-((3,3-dimetilpiperazin-1 il)metil)benzoato de metila (4): A uma solução agitada do composto 3 (0,5 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 ml) HCI 4M em dioxano (15 ml) foi adicionado. A reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com npentano e seco sob vácuo para gerar o composto do título 4 como sal de HCI.
[00114] Etapa 3: Síntese do composto 5a para o composto 483: A uma solução agitada do composto 4 (1 eq.) e carboxaldeído de ciclopropila (1,2 eq.) em DCM (10 ml) ácido acético (6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para esse fim, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A conclusão da reação foi monitorada por TLC e LCMS. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, seca sobre NazSCXi e evaporada para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 5a.
[00115] Etapa 3: Síntese do composto 5b para o composto 484: A
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53/137 uma solução do Composto 4 (1 eq.) em etanol (10 vol.) TEA (3 eq.) e
2,2-dimetiloxirano (2,6 eq.) foram adicionados, e a mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 12 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. Permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar o composto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 5.
NQ Estrutura
1 o 5a
2 o 5b
[00116] Etapa 4: Procedimento geral para a síntese do composto 6a a 6b: A uma solução agitada do composto (1,0 eq.) em metanokágua (1:1) foi adicionado NaOH (1,5 eq.) à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 60 Ό por 12 a 18 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo resultante foi dissolvido em água e lavado com éter dietílico. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 6.
NQ Estrutura
1 o 6a
2 o HO4^n^ I^Y^oh 6b
[00117] Etapa 5: Síntese do composto 8a para o composto 483: A uma solução agitada do composto 6a (1 eq.) e do composto 7 (1,2 eq.) em DCM (10 vol.) DIPEA (2 eq.) e T3P (1,5 eq.) foram adicionados à
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54/137 temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC e LCMS. A mistura de reação foi dividida em porções entre DCM e água. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SÜ4 e evaporada para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 8a.
[00118] Etapa 5: Síntese do composto 8b para o composto 484: A uma solução agitada do composto 6b (1 eq.) e do composto 7(1,1 eq.) em ACN (piridina a 10 vol. (5 eq.) e HATU (1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. Após a agitação da mistura de reação a 80 Ό por 12 horas, a conclusão da reação foi monitorada por TLC e LCMS. A mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi particionado entre água e acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre Na2SÜ4 e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 8b.
NQ Estrutura
1 XÉ HN, n ' boc 8a
2 XZN. X^ HN, n, /v- Boc 8b
[00119] Etapa 6: Síntese de A/-(2-aminofenil)-4-((4-(ciclopoprilmetil)-
3,3-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 483): A uma solução agitada do composto 8a (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e
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55/137 estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCXt e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel e HPLC preparativa para gerar o composto desejado 483.
[00120] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,60 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,18-7,11 (m, 1H), 7,00-6,91 (m, 1H), 6,76 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,58 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 4,87 (s, 2H), 3,47 (s, 2H), 2,63 - 2,61 (m, 2H), 2,41 - 2,31 (m, 2H), 2,20 - 2,10 (m, 4H), 0,92 (s, 6H), 0,74 - 0,72 (m, 1H), 0,41 - 0,38 (m, 2H), 0,31 - 0,21 (m, 2H); LCMS: Calculada para C24H32N4O: 392,26; Observado: 393,20 (M+1)+.
[00121] Etapa 6: Síntese de A/-(2-aminofenil)-4-((4-(2-hidróxi-2metilpopril)-3,3-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 484): A uma solução agitada do composto 8b (0,15 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.), HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel e HPLC preparativa para gerar 0 composto desejado 484.
[00122] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (s, 1H), 7,93 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,42 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,99 6,96 (m, 1H), 6,78 - 6,76 (m, 1H), 6,61 - 6,59 (m, 1H), 4,88 (s, 2H),
3,93 (s, 1H), 3,32 (s, 2H), 2,74 - 2,72 (m, 2H), 2,46 - 2,32 (m, 2H), 2,10 - 2,00 (m, 4H), 1,05 (s, 6H), 0,93 (s, 6H); LCMS: Calculada para C24H34N4O2: 410,27; Observado: 411,25 (M+1)+.
Esquema Sintético para 0 Composto 481 e 0 Composto 482:
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Figure BR112019013001A2_D0027
[00123] Etapa 1: Síntese de (S)-4-(4-(metoxicarbonil)benzil)-3metilpiperazina-1-carboxilato (3) de terc-butila: A uma solução agitada do composto 1 (2 g, 1 eq.) e do composto 2 (2,29 g, 1 eq.) em ACN (20 ml) carbonato de potássio (4,2 g, 3 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, seca sobre Na2SO4, anidro filtrados e concentrados sob pressão reduzida a fim de fornecer um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto do título 3.
[00124] Etapa 2: Síntese de cloridrato de (S)-4-((2-metilpiperazin-1il)metil)benzoato de metila (3): A uma solução agitada do composto 3 (2,8 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (15 ml) HCI 4M em dioxano (5 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada e o resíduo resultante foi triturado com npentano, éter dietílico e seca sob vácuo para gerar o composto do título 4 como o sal de HCI.
[00125] Etapa 3: Síntese do composto 5a para o composto 481: A uma solução agitada do composto 4 (1 eq.) e carboxaldeído de ciclo
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57/137 propila (1,2 eq.) em DCM (10 ml) ácido acético (6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para esse fim, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A conclusão da reação foi monitorada por TLC e LCMS. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCri e evaporadas para gerar o composto desejado 5a.
[00126] Etapa 3: Síntese do composto 5b para o Composto 482: A uma solução do Composto 4 (1 eq.) em etanol (10 vol.) TEA (3 eq.) e
2,2-dimetiloxirano (1,5 eq.) foram adicionados, e a mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 12 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. Permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar o composto desejado 5b.
NQ Estrutura
1 0 5a
2 0 5b
[00127] Etapa 4: Procedimento geral para síntese do composto 6a a 6b: A uma solução agitada do composto 5 (1,0 eq.) em metanokágua (1:1) foi adicionado NaOH (1,5 eq.) à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 90 O por 5 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi dissolvido em água e lavado com éter dietílico. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 6.
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NQ Estrutura
1 0 AA''' Ar 0H 6a
2 O H0An^-' πΛοη AAA 6b
[00128] Etapa 5: Síntese do composto 8a para o Composto 481: A uma solução agitada do composto 6a (1 eq.) e composto 7 (1 eq.) em DCM (10 vol.) DIPEA (2 eq.) T3P (1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. Após agitação, a mistura de reação à temperatura ambiente de um dia para 0 outro, a mistura de reação foi dividida em porções entre DCM e água. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre Na2SÜ4 e evaporados para obter 0 produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto desejado 8a.
[00129] Etapa 5: Síntese do composto 8b para 0 Composto 482: A uma solução agitada do composto 6b (1 eq.) e do composto 7(1,1 eq.) em ACN (10 vol.) piridina (5 eq.) e HATU (1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. Após agitação, a mistura de reação a 80 Ό de um dia para 0 outro, a mistura de reação foi resfriada, concentrada, e 0 resíduo resultante foi particionado entre água e acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e HCI a 1% para remover traços de piridina, secos sobre Na2SÜ4 e concentrados. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto desejado 8b.
Petição 870190072298, de 29/07/2019, pág. 63/157
59/137
NQ Estrutura
1 e,
2 ΗοΛ/^Ν'^ι'' τ OOJ H hí.boc 8b
[00130] Etapa 6: Síntese de (S)-N-(2-aminofenil)-4-((4-(2-hidróxi-2metilpopril)-2-metilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 482): A uma solução agitada do composto 8b (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo cru foi purificado por HPLC preparativa para gerar o composto desejado 482.
[00131] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,60 (s, 1H), 7,91 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,18-7,11 (m, 1H), 6,97-6,93 (m, 1H), 6,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,60 - 6,56 (m, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,03 - 3,92 (m, 2H), 3,24 - 3,22 (m, 1H), 2,75 - 2,73 (m, 2H), 2,66 2,63 (m, 1H), 2,44-2,42 (m, 1H), 2,29-2,19 (m, 1H), 2,19-2,04 (m, 4H), 1,08 - 1,02 (m, 9H); LCMS: Calculada para C23H32N4O2: 396,25; Observado: 397 (M+1)+.
[00132] Etapa 6: Síntese de (S)-N-(2-aminofenil)-4-((4(ciclopoprilmetil)-2-metilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto481): A uma solução agitada do composto 8a (0,15 g, 1 eq.) em 1,4dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratifiçado com acetato de etila. Os ex
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60/137 tratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre NazSCXi e concentrados. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel e HPLC preparativa para gerar o composto desejado 481.
[00133] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,93 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,19-7,12 (m, 1H), 7,01 -6,92 (m, 1H), 6,78 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,60 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,04 - 4,00 (m, 1H), 3,22 - 3,18 (m, 1H), 2,79 - 2,64 (m, 2H), 2,61 2,53 (m, 1H), 2,43 - 2,41 (m, 1H), 2,19 - 2,05 (m, 4H), 2,00 - 1,92 (m, 1H), 1,08 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,80 - 0,78 (m, 1H), 0,44 - 0,41 (m, 2H), 0,06 - 0,02 (m, 2H); LCMS: Calculada para C23H30N4O: 378,24; Observado: 379,20 (M+1)+.
Esquema sintético para 0 Composto 489 e para 0 Composto 490:
Figure BR112019013001A2_D0028
[00134] Etapa 1: Síntese de (3fí,5S)-4-(4-(metoxicarbonil)benzil)3,5-dimetilpiperazina-1-carboxilato de terc-butila (3): A uma solução agitada do composto 1 (2,1 g, 1 eq.) e do composto 2 (2,3 g, 1 eq.) em ACN (20 ml) carbonato de potássio (4,1 g, 3 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para for
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61/137 necer um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel a fim de fornecer o composto 3.
[00135] Etapa 2: Síntese de cloridrato 4-(((2R,6S)-2,6dimetilpiperazin-1-il)metil)benzoato de metila (4): A uma solução agitada do composto 3 (2,5 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 ml) HCI 4M em dioxano (3 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 4 como o sal de HCI.
[00136] Etapa 3: Síntese do composto 5a para o Composto 489: A uma solução agitada do composto 4 (1 eq.) e carboxaldeído de ciclopropila (1,2 eq.) em DCM (10 vol.) ácido acético (6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para esse fim, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A conclusão da reação foi monitorada por TLC e LCMS. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre Na2SÜ4 e evaporados para gerar o composto desejado 5a.
[00137] Etapa 3: Síntese do composto 5b para o composto 490: A uma solução do Composto 4 (1 eq.) em etanol (10 vol.) TEA (3 eq.) e
2,2-dimetiloxirano (1,5 eq.) foram adicionados, e a mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 12 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. Permitiu-se que a mistura de reação resfriasse e fosse concentrada para gerar o composto desejado 5b.
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Figure BR112019013001A2_D0029
[00138] Etapa 4: Procedimento geral para síntese do composto 6a a 6b: A uma solução agitada do composto 5 (1,0 eq.) em metanokágua (1:1) foi adicionado NaOH (1,5 eq.) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 90 Ό por 5 horas. A concl usão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi dissolvido em água e lavado com éter dietílico. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 6.
NQ Estrutura
1 0 X7^N^^I '' I^T 0H v AxYz i 6a
2 H0^nA Aí^oh i 6b
[00139] Etapa 5: Procedimento geral para síntese do composto 8a a 8b: A uma solução agitada do composto 6 (1 eq.) e composto 7 (1,2 eq.) in DMF (5 ml), DIPEA (3 eq.) foi adicionada e agitada por 10 min. Para isso, HATU (1,5 eq.) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O progresso de
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63/137 reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi particionada entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SÜ4 anidro, filtrada e evaporada para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 8.
NQ Estrutura
1 = Boc 8a
2 \. . .n \ L+k kJ H HN. Boc = 8b
[00140] Etapa 6: Síntese de A/-(2-aminofenil)-4-(((2fí,6S)-4(ciclopoprilmetil)-2,6-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 489): A uma solução agitada do composto 8a (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.), HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre Na2SO4, filtrados e concentrados. A resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel e HPLC preparativa para gerar o composto do título 489.
[00141] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,58 (s, 1H), 7,90 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,01 -
6,92 (m, 1H), 6,77 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,61 - 6,59 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 3,78 (s, 2H), 2,84 - 2,81 (m, 2H), 2,60 - 2,56 (m, 2H), 2,14 - 2,05 (m, 2H), 1,77 (t, J = 10,6 Hz, 2H), 0,92 (d, J = 6,0 Hz, 6H), 0,87 - 0,73 (m, 1H), 0,49 - 0,38 (m, 2H), 0,10 - 0,03 (m, 2H); LCMS: Calculada
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64/137 para C24H32N4O: 392,26; Observado: 393,20 (M+1)+.
[00142] Etapa 6: Síntese de A/-(2-aminofenil)-4-(((2fí,6S)-4-(2hidróxi-2-metilpopril)-2,6-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 490): A uma solução agitada do composto 8b (1 eq.) em 1,4dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratifiçado com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre Na2SO4, filtrados e concentrados. A resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel e HPLC preparativa para gerar 0 composto do título 490.
[00143] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,58 (s, 1H), 7,90 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,98 -
6,94 (m, 1H), 6,77 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,64 - 6,55 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,77 (s, 2H), 2,86 - 2,78 (m, 2H), 2,60 - 2,57 (m, 2H), 2,13 (s, 2H), 1,96 (t, J = 10,6 Hz, 2H), 1,07 (s, 6H), 0,89 (d, J = 6,0 Hz, 6H); LCMS: Calculada para C24H34N4O2: 410,27; Observado: 411,25 (M+1)+.
Esquema sintético para 0 Composto 491 e Composto 492:
2 / '· N ri ri ri cr HC| em cixoapo Ί
Etapa-Ί
RA/Aiquilação
Etapa-3 rn->
< ..N..
NaOH
R.
5a-b
MeOH:H?O (1:11, &0 C.
Etapa-4
O HN
Λοη 7
Piridina, hatu. AcN. Refluxo
V H V H HN „
Soc
8a-b
Dioxano 4N.HCI
Etapa-6
R.
Figure BR112019013001A2_D0030
Composto-491
Com p os to-492
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65/137 [00144] Etapa 1: síntese de 4-(4-(metoxicarbonil)benzil)-3,3dimetilpiperazina-1-carboxilato de terc-butila (3): A uma solução agitada do composto amina 2 (0,5 g, 1 eq.) e aldeído 1 (0,421 g, 1,1 eq.) em DCM (10 ml) triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (0,693 g, 1,4 eq.) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro; o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi particionada entre DCM e água. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 3.
[00145] Etapa 2: Síntese de cloridrato de 4-((2,2-dimetilpiperazin-1il)metil)benzoato de metila (4): A uma solução agitada do composto de Boc 3 (0,6 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 ml) HCI 4M em dioxano (5 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso de reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 4 como o sal de HCI.
[00146] Etapa 3: Síntese do composto 5a: A uma solução agitada do composto de amina 4 (1 eq.) e aldeído correspondente (1,2 eq.) em DCM (10 vol.) ácido acético (6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para isso, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro; o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por
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66/137 cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado
5a.
[00147] Etapa 3: Síntese do Composto 5b: A uma solução do Composto 4 (0,4 g, 1 eq.) em etanol (5 vol.) TEA (2,5 eq.) e 2,2dimetiloxirano (1,5 eq.) foram adicionados, e a mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar um composto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 5b.
NQ Estrutura
1 0 v A 5a
2 0 T A 5b
[00148] Etapa 4: Síntese do composto 6a a 6b: A uma solução agitada de composto de éster em Metanol: Água (1:1) foi adicionado NaOH (1,5 eq.) à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 90 °C por 5 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi divido em porções entre éter dietílico e água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado.
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NQ Estrutura
1 0 Ar oh A 6a
2 0 H°Ka ί^ϊΛοΗ T UJU A 6b
[00149] Etapa 5: Síntese do composto 8a a 8b: A uma solução agitada de composto ácido 6 (1 eq.) e amina (1,1 eq.) em ACN piridina (6 eq.) e HATU (1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. Após agitação, a mistura de reação a 80 Ό por 12 a horas, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi particionado entre água e acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre NazSCXi e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 V H hn, A 8a
2 ηοΨ^ν^ rçor < 8b
[00150] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4-(2-hidróxi-2metilpopril)-2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 492): A uma solução agitada do composto de Boc 8b (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação
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68/137 resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCXi e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel/HPLC preparativa para gerar o composto desejado.
[00151] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,59 (s, 1H), 7,91 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,99 -
6,94 (m, 1H), 6,79 - 6,77 (m, 1H), 6,62 - 6,57 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,02 (s, 1H), 3,60 - 3,51 (m, 2H), 2,42 - 2,33 (m, 6H), 2,12 (s, 2H), 1,11-1,08 (m, 12H); LCMS Calculada para C24H34N4O2: 410,27; Observado: 411,30 (M + 1)+.
[00152] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4-(ciclopoprilmetil)-
2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 491): A uma solução agitada do composto de Boc 8a (0,14 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.), HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel/HPLC preparativa para gerar 0 composto desejado.
[00153] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,59 (s, 1H), 7,91 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,98 -
6,94 (m, 1H), 6,79 - 6,77 (m, 1H), 6,61 - 6,59 (m, 1H), 4,87 (s, 2H), 3,60 - 3,52 (m, 2H), 2,34 - 2,25 (m, 6H), 2,12 - 2,10 (m, 2H), 1,12 (s,
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6H), 0,88 - 0,75 (m, 1H), 0,49 - 0,39 (m, 2H), 0,09 - 0,03 (m, 2H);
LCMS Calculada para C24H32N4O: 392,26; Observado: 393,30 (M +
1)+·
Esquema sintético para 0 Composto 487 e para 0 Composto 488:
Figure BR112019013001A2_D0031
[00154] Etapa 1: Síntese do Composto 2a: A uma solução agitada do composto de amina 1 (1 eq.) e carboxaldeído de ciclopropila (1,2 eq.) em DCM (10 vol.) ácido acético (6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para isso, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para 0 outro; 0 progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter 0 produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto desejado 2a.
[00155] Etapa 1: Síntese do Composto 2b: A uma solução do Composto 1 (1 eq.) em etanol (10 ml) TEA (3 eq.) e 2,2-dimetiloxirano (1,5 eq.) foram adicionados, e a mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após con
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70/137 clusão, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar um composto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 2b.
NQ Estrutura
1 .r Boc a > 7 T 2a
2 rB°c HO , ps; N Ϊ 2b
[00156] Etapa 2: Síntese de Compostos 3a a 3b: A uma solução agitada do composto de Boc 3 (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano(5 vol.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso de reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 3 como o sal de HCI.
NQ Estrutura
1 HCI Λ 1 3a
2 HCI HO ΐ 3b
[00157] Etapa 3: Síntese do composto 5a a 5b: A uma solução agitada do composto 3 (1 eq.) e composto 4 (1 eq.) em ACN foi adicionado carbonato de potássio (3 eq.). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com
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71/137 água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, seca sobre Na2SO4, anidro filtrados e concentrados sob pressão reduzida a fim de fornecer um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto 5.
NQ Estrutura
1 o V 5 5a
2 Ho4^^NÍs/j 5 5b
[00158] Etapa 4: Síntese do composto 6a a 6b: A uma solução agitada de composto de éster em Metanol: Água (1:1) foi adicionado NaOH (1,5 eq.) à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 90 °C por 5 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi particionado entre éter dietílico e água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 o v 5 6a
2 HO^^^NÍsUi [<:ί>γχΌΗ 5 6b
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72/137 [00159] Etapa 5: Síntese do composto 8a a 8b: A uma solução agitada do composto 6 (1 eq.) e do composto 7 (1,2 eq.) em DCM, DIPEA (2 eq.) e T3P (1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas. O progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi dividida em porções entre DCM e água. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCri e evaporadas para obter 0 produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto desejado 8.
NQ Estrutura
1 . I O V H HN. Boc 5 8a
2 i i n HOy N Tsbj Γ || N I^ Z H HN, Boc 5 8b
[00160] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-(((3R,5S)-4(ciclopoprilmetil)-3,5-dimetilpiperazin-1 -il)metil)benzamida (Composto 487): A uma solução agitada do composto de Boc 8a (0,18 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCri e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel/HPLC preparativa para gerar 0 composto desejado.
[00161] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (s, 1H), 7,94 (d, J =
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8,0 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,01 -
6,92 (m, 1H), 6,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,64 - 6,55 (m, 1H), 4,89 (s, 2H), 3,46 (s, 2H), 2,80 - 2,78 (m, 2H), 2,66 - 2,64 (m, 2H), 2,59 - 2,57 (m, 2H), 1,74 (t, J = 10,4 Hz, 2H), 0,95 (d, J = 6,0 Hz, 6H), 0,85 - 0,83 (m, 1H), 0,43 - 0,39 (m, 2H), 0,07 - 0,06 (m, 2H); LCMS Calculada para C24H32N4O: 392,26; Observado: 393,20 (M + 1)+.
[00162] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-(((3R,5S)-4-(2hidróxi-2-metilpopril)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 488): A uma solução agitada do composto de Boc 8b (1 eq.) em
1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por HPLC preparativa para gerar 0 composto desejado.
[00163] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,96 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,58 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 3,88 (s, 1H), 3,47 (s, 2H), 2,71 - 2,69 (m, 2H), 2,47 - 2,37 (m, 4H), 2,07 - 2,05 (m, 2H), 1,07 - 0,99 (m, 12H); LCMS Calculada para C24H34N4O2: 410,27; Observado: 411,10(M + 1)+.
Esquema Sintético para 0 Composto 477, Composto 477-lsômero-l, Composto 477-lsômero-ll e Composto 478, Composto 478-lsômero-l, Composto 478-lsômero-ll
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Figure BR112019013001A2_D0032
[00164] Etapa 1: Síntese de (2R,5S)-2,5-dimetilpiperazina-1carboxilato de terc-butila (2): A uma solução agitada do composto 1 (0,5 g, 1 eq.) em DCM (15 ml) a 0 Ό Boc-anidreto (0,478 g, 0,5 eq.) dissolvido em DCM foi adicionado por gotejamento. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 24 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCXi e evaporadas para gerar o composto desejado 2.
[00165] Etapa 2: Síntese de (2R,5S)-4-(4-(metoxicarbonil)benzil)-
2,5-dimetilpiperazina-1-carboxilato de terc-butila (4): A uma solução agitada do composto 2 (0,85 g, 1 eq.) e do composto 3 (0,91 g, 1 eq.) em ACN (10 ml) carbonato de potássio (1,65 g, 3 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, seca sobre Na2SO4, anidro filtrados e concentrados sob pres
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75/137 são reduzida a fim de fornecer um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto 4.
[00166] Etapa 3: Síntese de cloridrato de 4-(((2S,5R)-2,5dimetilpiperazin-1-il)metil)benzoato de metila (5): A uma solução agitada do composto de Boc 4 (0,6 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (2 ml) foi adicionado HCI 4M em dioxano (1 ml), a reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 5 como o sal de HCI.
[00167] Etapa 4: Síntese do composto 6a para o composto 477: A uma solução agitada do composto de amina 5 (1 eq.) e aldeído (1,2 eq.) em DCM (10 vol.) ácido acético (6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para esse fim, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro; o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCXi e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 6a.
[00168] Etapa 4: Síntese do composto 6b para o composto 478: A uma solução do Composto 5 (1 eq.) em etanol (10 vol.) TEA (3 eq.) e
2,2-dimetiloxirano (1,5 eq.) foram adicionados, e a mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar um composto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 6b.
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NQ Estrutura
1 o 6a
2 O HO. JL. / n y r ll ° 6b
[00169] Etapa 5: Síntese de Compostos 7a a 7b: A uma solução agitada do composto de éster em Metanol:Água (1:1) NaOH (1,5 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 90 °C por 5 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi particionado entre éter dietílico e água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 0 X7^N^I '' ΠΤ 0H v 7a
2 0 ΠθΨ^Ν^·' í^jAoH 7b
[00170] Etapa 6: Síntese dos compostos 9a a 9b: A uma solução agitada do composto ácido (1 eq.) e amina (1,2 eq.) em ACN piridina (6 eq.) e HATU (1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 90 Ό de um dia para o outro; o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi dividido em porções entre água e acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre
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Na2SÜ4 e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 \7 N ]' r Y N 1 V H hn-o n boc 9a
2 n HNX p., Boc 9b
[00171] Etapa 7: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-(((2S,5R)-4(ciclopoprilmetil)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 477): A uma solução agitada do composto de Boc 9a (, 1 eq.) em 1,4dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel/HPLC preparativa para gerar o composto desejado.
[00172] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,93 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,60 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,07 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,10 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 2,97 (dd, J = 11,5, 2,8 Hz, 1H), 2,59 - 2,56 (m, 2H), 2,42 - 2,29 (m, 1H), 2,31 2,19 (m, 1H), 2,10-1,97 (m, 2H), 1,77 (t, J = 10,6 Hz, 1H), 1,10 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,89 - 0,74 (m, 4H), 0,53 - 0,36 (m, 2H), 0,07 - 0,05 (m, 2H); LCMS Calculada para C24H32N4O: 392,26; Observado: 393,30 (M + 1)+.
[00173] Etapa 6: Síntese do Composto 9 composto 477-lsômero-l,
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78/137 composto 477-lsômero-ll e composto 478-lsômero-l, composto 478lsômero-ll: A uma solução agitada do composto 7 (1 eq.) e composto 8 (1,2 eq.) em DMF (5 ml) DIPEA (3 eq.) foi adicionado e agitado por 10 minutos. Para esse fim, HATU (0,534 g, 1,5 eq.) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi dividida em porções entre acetato de etila e água. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 Ό \7 N ]' r il N V h hisl n boc 9a
2 HISL p., Boc 9b
[00174] Etapa 7: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4-(ciclopoprilmetil)-
2,5-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 477-lsômero-ll): A uma solução agitada do composto de Boc 9a (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.), HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCCb e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por HPLC preparativa quiral com o uso de uma coluna YMC CHIRALART CELLULOSE-SC, 250 mm x 4,6 mm, de uma coluna de 5 pm e entregue como o Composto 477-lsômero-l como uma base livre
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79/137 (temperatura ambiente é 17,19) e o Composto 477-lsômero-ll como base livre (temperatura ambiente é 25,46), em que a estereoquímica absoluta ainda não tem que ser confirmada.
[00175] Composto 477-lsômero-ll como base livre, 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,60 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,00 - 6,91 (m, 1H), 6,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,63 - 6,54 (m, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,06 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,09 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 2,97 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 2,35 - 2,26 (m, 4H), 2,06 - 2,04 (m, 1H), 1,77 (t, J = 10,6 Hz, 1H), 1,20 - 1,05 (m, 3H), 0,85 - 0,83 (m, 4H), 0,46 - 0,40 (m, 2H), 0,05 - 0,04 (m, 2H), 1 H unido em pico de solvente; LCMS Calculada para C24H32N4O: 392,26; Observado: 393,35 (M + 1)+.
[00176] Composto 477-lsômero-l como base livre, 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,91 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1 H),7,01 - 6,91 (m, 1H), 6,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,58 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,06 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,08 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 2,98 - 2,95 (m, 1H), 2,32 - 2,24 (m, 2H), 2,10 - 1,98 (m, 2H), 1,77 - 1,73 (m, 1H), 1,24 - 1,03 (m, 3H), 0,88 - 0,75 (m, 4H), 0,52 - 0,35 (m, 2H), 0,11 - 0,03 (m, 2H), 2H unidos em pico de solvente; LCMS Calculada para C24H32N4O: 392,26; Observado: 393 (M + 1)+.
[00177] Etapa 7: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-(((2S,5R)-4-(2hidróxi-2-metilpopril)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 478): A uma solução agitada do composto de Boc 9b (1 eq.) em
1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com
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80/137 água e salmoura, secas sobre NazSCri e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel/HPLC preparativa para gerar o composto desejado.
[00178] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,93 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,20 - 7,13 (m, 1H), 6,98 - 6,95 (m, 1H), 6,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,64 - 6,55 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,06 - 3,94 (m, 2H), 3,18 - 3,05 (m, 2H), 2,39 - 2,27 (m, 2H), 2,11 2,00 (m, 1H), 1,94-1,91 (m, 1 H), 1,80 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 1,07 - 1,05 (m, 9H), 0,85 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1H unidos em pico de solvente; LCMS Calculada para C24H34N4O2: 410,27; Observado: 411,25 (M + 1)+· [00179] Etapa 7: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4-(2-hidróxi-2metiIpopriI)-2,5-dimetiIpiperazin-1 -il)metil)benzamida (Composto 478lsômero-l): A uma solução agitada do composto de Boc 9b(1 eq.) em
1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano (5 vol.) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCri e concentradas. O resíduo cru foi purificado por HPLC preparativa quiral com 0 uso de uma coluna YMC Chiral AMYLOSE-SA, 250 mm x 4,6 mm, de uma coluna de 5 pm e entregue como um Composto 478-lsômero-l como base livre (temperatura ambiente é 10,52) e 0 Composto 478-lsômero-ll como base livre (temperatura ambiente é 13,77), em que a estereoquímica absoluta tem que ser confirmada.
[00180] Composto 478-lsômero-l como base livre 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,62 (s, 1H), 7,93 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,22 - 7,12 (m, 1H), 7,01 - 6,92 (m, 1H), 6,78 - 6,76 (m,
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Η), 6,61 - 6,57 (m, 1 Η), 4,88 (s, 2Η), 4,06 - 3,95 (m, 2H), 3,20 - 3,05 (m, 2H), 2,43 - 2,34 (m, 1H), 2,26 - 2,24 (m, 1H), 2,08 - 2,03 (m, 1H), 1,95- 1,91 (m, 1H), 1,83 - 1,77 (m, 1H), 1,10- 1,02 (m, 9H), 0,84 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1H unidos em pico de solvente; LCMS Calculada para C24H34N4O2: 410,27; Observado: 411,15 (M + 1)+.
[00181] Composto 478-lsômero-ll como base livre 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,00 - 6,91 (m, 1H), 6,77 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,58 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,03 - 3,99 (m, 2H), 3,15 - 3,08 (m, 2H), 2,52 - 2,49 (m, 1H), 2,38 - 2,36 (m, 1H), 2,26 2,24 (m, 1H), 2,06 - 2,05 (m, 1H), 1,95 - 1,91 (m, 1H), 1,80 - 1,78 (m, 1H), 1,09 - 1,02 (m, 9H), 0,84 (d, J = 6,0 Hz, 3H); LCMS Calculada para C24H34N4O2: 410,27; Observado: 411,15 (M + 1)+.
Esquema sintético para 0 Composto 356 e Composto 359
Figure BR112019013001A2_D0033
Figure BR112019013001A2_D0034
[00182] Etapa 1: Síntese de 4-(4-(metoxicarbonil)benzilideno)-2,2dimetilpiperidina-1-carboxilato de terc-butila(3): A uma solução agitada do composto 2 (3 g, 1,2 eq.) em THF seco (20 ml) a 0 O NaH (60 %, 0,506 g, 1,2 eq.) foi adicionado lentamente e agitado à mesma temperatura por 30 minutos. A essa solução, 0 composto 1 (2 g, 1 eq.) dis
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82/137 solvido em THF seco foi adicionado lentamente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com água e estratifiçada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel a fim de fornecer a mistura do composto desejado 3 (mistura Cis/Trans).
[00183] Etapa 2: Síntese de ácido 4-((1-(terc-butoxicarbonil)-2,2dimetilpiperidin-4-ilideno)metil)benzoico (4): A uma solução agitada da mistura do composto 3 (2,5 g, 1 eq.) em Metanol: Água (1:1, 20 ml) NaOH (0,417 g, 1,5 eq.) foi adicionada à temperatura ambiente. A mistura acima ficou à temperatura ambiente por 2 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo resultante foi neutralizado a pH = 7 com o uso de HCI a 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para fornecer a mistura do composto desejado.
[00184] Etapa 3: Síntese do Composto 6: A uma solução agitada do composto 4 (1 g, 1 eq.) e amina 5 (0,956 g, 1 eq.) em DMF, DIPEA (1,24 ml, 2,5 eq.) foi adicionada e agitada por 10 minutos. Para esse fim, HATU (1,65 g 1,5 eq.) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi dividida em porções entre acetato de etila e água. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para fornecer a mistura do composto desejado.
[00185] Etapa 4: Síntese do composto 7: A uma solução agitada do
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83/137 composto 6 (1,2 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano HCI 4M em dioxano foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e seco sob vácuo para fornecer a mistura do composto do título 7 como sal de HCI.
[00186] Etapa 5: Síntese do composto 8: A uma solução agitada do composto de amina 7 (1 eq.) e aldeído correspondente (1,5 eq.) em DCM ácido acético (6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para isso, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro; o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCXi e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para fornecer a mistura do composto desejado.
[00187] Etapa 6: Síntese do composto 9: Uma mistura do composto 7 (0,32 g, 1 eq.) e piperidina a 20% em DMF (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a mistura de reação foi diluída com água gelada. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para fornecer a mistura do composto desejado 9.
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84/137
NQ Estrutura
1 ga
2
[00188] Etapa 7: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((1-(ciclopoprilmetil)-
2,2-dimetilpiperidin-4-il)metil)benzamida (Composto 356): A uma solução agitada do composto 9a (0,05 g, 1 eq.) em metanol (5 ml), Pd/C a 10% (10% em p/p do substrato, 30 mg) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e n-pentano e, em seguida, seco sob vácuo para gerar o composto do título.
[00189] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,59 (s, 1H), 7,90 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,96 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,59 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 2,92 - 2,90 (m, 2H), 2,62 - 2,59 (m, 2H), 2,33 - 2,32 (m, 1H), 2,16 - 2,14 (m, 2H), 1,75 - 1,72 (m, 1H), 1,55 - 1,51 (m, 1H), 1,32 1,07 (m, 5H), 0,80 - 0,78(m, 4H), 0,45 - 0,34 (m, 2H), 0,07 - 0,04 (m, 2H); LCMS Calculada para C25H33N3O: 391,26; Observado: 391,95 (M + 1)+.
[00190] Etapa 7: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((2,2dimetilpiperidin-4-il)metil)benzamida (Composto 359): A uma solução agitada do composto 9b (0,08 g, 1 eq.) em metanol (5 ml) Pd/C a 10% (10% em p/p de substrato, 40 mg) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à tem
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85/137 peratura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e n-pentano e, em seguida, seco sob vácuo para gerar o composto do título.
[00191] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,60 (t, J =
7,5 Hz, 1H), 4,87 - 4,84 (m, 2H), 3,36 - 3,27 (m, 1H), 2,99 - 2,82 (m, 3H), 2,56 - 2,49 (m, 2H), 2,05 - 1,90 (m, 1H), 1,66 - 1,48 (m, 2H), 1,24-1,10 (m, 6H); LCMS Calculada para C21H27N3O: 337,22; Observado: 338,10(M + 1)+.
Esquema Sintético para 0 Composto 357:
Figure BR112019013001A2_D0035
[00192] Etapa 2: Síntese de 4-((2,2-dimetilpiperidin-4ilideno)metil)benzoato de metila (4): A uma solução agitada do composto 3 (0,85 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 ml) HCI 4M em dioxano (10 ml) foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e 0 resíduo resultante foi triturado
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86/137 com éter dietílico e seco sob vácuo para gerar a mistura do composto do título 4 (Cis/Trans mistura) como sal de HCI.
[00193] Etapa 3: Síntese de 4-((1 -(2-hidróxi-2-metilpopril)-2,2dimetilpiperidin-4-ilideno)metil)benzoato de metila (5): A uma solução do Composto 4 (0,35 g, 1 eq.) em etanol (10 ml) TEA (0,567 ml, 3 eq.) e 2,2-dimetiloxirano (0,42 ml, 3,5 eq.) foram adicionados, e a mistura de reação foi aquecida a 70 °C por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após A conclusão, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, concentrado para gerar o a mistura do composto desejado 5.
[00194] Etapa 4: Síntese de ácido 4-((1-(2-hidróxi-2-metilpopril)-2,2dimetilpiperidin-4-ilideno)metil)benzoico (6): A uma solução agitada do composto de éster 5 (0,4 g, 1 eq.) em MetanoLÁgua (1:1, 10 ml) NaOH (0,073 g, 1,5 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 70 O por 3 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi lavado com éter dietílico seguido pelo tratamento com água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para fornecer a mistura do composto desejado 6.
[00195] Etapa 5: Síntese de (2-(4-((1 -(2-hidróxi-2-metilpopril)-2,2dimetilpiperidin-4-ilideno)metil)benzamido)fenil)carbamato de tercbutila (8): A uma solução agitada do composto 6 (0,38 g, 1 eq.) e do composto 7 (0,299 g, 1,2 eq.) em DMF (7 ml) DIPEA (0,515 ml, 2,5 eq.) foi adicionada e agitada por 10 minutos. Para esse fim, HATU (0,683 g, 1,5 eq.) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi dividida em porções entre acetato de etila e água. As camadas
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87/137 orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para fornecer a mistura do composto desejado 8.
[00196] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((1-(2-hidróxi-2metilpopril)-2,2-dimetilpiperidin-4-ilideno)metil)benzamida (9): A uma solução agitada do composto 8 (0,5 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano HCI 4M em dioxane foi adicionado. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e seco sob vácuo para fornecer a mistura do composto do título 9 como sal de HCI.
[00197] Etapa 7: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((1-(2-hidróxi-2metilpopril)-2,2-dimetilpiperidin-4-il)metil)benzamida (Composto 357): A uma solução agitada do composto 9 (0,09 g, 1 eq.) em metanol (5 ml) Pd/C a 10% (10% em p/p de substrato, 40 mg) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e npentano e, em seguida, seco sob vácuo para gerar o composto do título.
[00198] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,59 (s, 1H), 7,89 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,01 -
6,92 (m, 1H), 6,77 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,64 - 6,55 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 3,90 - 3,88 (m, 1H), 2,92 - 2,89 (m, 1H), 2,31 - 2,28 (m, 1H), 1,81-1,78 (m, 2H), 1,45 - 1,29 (m, 4H), 1,28 - 1,01 (m, 10H), 0,98 (s, 3H), 2H unidos em pico de solvente; LCMS Calculada para C25H35N3O2: 409,27; Observado: 410,15(M + 1)+.
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Esquema Sintético para o composto 379:
Figure BR112019013001A2_D0036
[00199] Etapa 1: Síntese de 4-((dietoxifosforil)metil)benzoato de metila (2): Uma mistura do composto 1 (10 g, 1 eq.) e fosfito de trietila (8,96 ml, 1,2 eq.) foi aquecida em um tubo vedado a 120 Ό por 30 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para gerar o composto cru 2.
[00200] Etapa_________2: Síntese de 4-(4(metoxicarbonil)benzilideno)azepano-1-carboxilato de terc-butila (4): A uma solução agitada do composto 2 (0,5 g, 1 eq.) em THF seco (10 ml) a 0 Ό NaH (60 %, 0,063 g, 1,5 eq.) foi adicionado lentamente e agitado à mesma temperatura por 30 minutos. A essa solução, o composto 3 (0,261 g, 0,7 eq.) dissolvido em THF seco foi adicionado lentamente. A mistura de reação resultante foi agitada a 80 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com água e estratificada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água, secas sobre NazSCXi e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto dese
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89/137 jado.
[00201] Etapa 3: Síntese de cloridrato de 4-(azepan-4ilidenometil)benzoato de metila (5): A uma solução agitada do composto de Boc 4 (2,4 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (10 ml) HCI 4M em dioxano (4 ml) foi adicionado, e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 5 como o sal de HCI.
[00202] Etapa 4: Síntese de 4-((1 -(2-hidróxi-2-metilpopril)azepan-4ilideno)metil)benzoato de metila (6): A uma solução do Composto 5 (1,6 g, 1 eq.) em etanol (20 ml) TEA (2,75 ml, 3 eq.) e 2,2dimetiloxirano (0,47 g, 1 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar um composto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel.
[00203] Etapa 5: Síntese de ácido 4-((1-(2-hidróxi-2metilpopril)azepan-4-ilideno)metil)benzoico (7): A uma solução agitada do composto de éster 6 (1,9 g, 1 eq.) in MetanoLÁgua (1:1, 10 ml) NaOH (0,36 g, 1,5 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 70 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi lavado com éter dietílico seguido pelo tratamento com água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 7.
[00204] Etapa 6: Síntese de (2-(4-((1-(2-hidróxi-2metilpopril)azepan-4-ilideno)metil)benzamido)fenil)carbamato de tercbutila (8): A uma solução agitada do composto 7 (1,6 g, 1 eq.) e (2aminofenil)carbamato de terc-butila (1,1 g, 1 eq.) em DMF (10 ml) Dl
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PEA (2,28 ml, 2,5 eq.) foi adicionado e agitado por 10 minutos. Para esse fim, HATU (3 g, 1,5 eq.) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi particionada entre acetato de etila e água. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 8.
[00205] Etapa 7: A síntese de N-(2-aminofenil)-4-((1-(2-hidróxi-2metilpopril)azepan-4-ilideno)metil)benzamida (9): A uma solução agitada do composto de Boc 8 (1 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (5 ml) HCI 4M em dioxano (2 ml) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 9 como o sal de HCI.
[00206] Etapa 8: Síntese de di-cloridrato N-(2-aminofenil)-4-((1-(2hidróxi-2-metilpopril)azepan-4-il)metil)benzamida (Composto-379): A uma solução agitada de 9 (0,2 g, 1 eq.) em metanol (10 ml) Pd/C a 10% (20 mg) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 5 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e n-pentano e, em seguida, seco sob vácuo para gerar o composto do título.
[00207] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,13 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,01 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,18-7,16 (m, 2H), 7,05 - 7,03 (m, 1H), 3,58 - 3,00 (m, 7H), 2,61 - 2,57 (m, 2H), 1,93-1,61 (m, 7H), 1,23 (s, 6H); LCMS CalculaPetição 870190072298, de 29/07/2019, pág. 95/157
91/137 da para C24H33N3O2 (base livre): 395,26; Observado: 396,30 (M +
1)+·
Esquema Sintético para 0 Composto 181 e 0 Composto 472:
Figure BR112019013001A2_D0037
[00208] Etapa 1: Síntese de 4-((4-(2-hidróxi-2-metilpopril)piperidin1-il)metil)benzoato de metila (3): A uma solução agitada do composto 1 (1 g, 1 eq.) e do composto 2 (1,02 g, 1 eq.) em ACN (20 ml) carbonato de potássio (2,6 g, 3 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrado e concentrados sob pressão reduzida a fim de obter 0 produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto desejado 3.
[00209] Etapa 2: Síntese de ácido 4-((4-(2-hidróxi-2metilpopril)piperidin-1-il)metil)benzoico e ácido 4-((4-(2-metilprop-1-en1 -il)piperidin-1 -il)metil)benzoico (4 e 4a): A uma solução agitada do composto de éster 3 (0,3 g, 1 eq.) em Metanol:Água (1:1, 10 ml), Na
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OH (0,02 g, 5eq) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 70 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi lavado com éter dietílico seguido pelo tratamento com água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar a mistura do composto desejado 4 e 4a.
[00210] Etapa 3: Síntese de (2-(4-((4-(2-hidróxi-2meti I popri I )pi peridi n-1 -il)metil)benzamido)fenil)carbamato de (9Hfluoren-9-il)metila e (2-(4-((4-(2-metilprop-1 -en-1 -i I )pi peridi n-1 il)metil)benzamido) fenil)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila (6 e 6a): A uma solução agitada do composto 4 e 4a (0,3 g, 1 eq.) e composto 5 (0,339 g, 1 eq.) em DMF (10 ml) DIPEA (0,45 ml, 2,5 eq.) foi adicionada e agitada por 10 minutos. Para esse fim, HATU (0,586 g, 1,5 eq.) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi dividida em porções entre acetato de etila e água. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 6 (0,1 g, 16,14%) e composto 6a (0,13 g, 21%).
[00211] Etapa 4: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4-(2-hidróxi-2metilpopril)piperidin-1-il)metil)benzamida (Composto 181): A solução do composto 6 (0,1 g, 1 eq.) em piperidina a 20% em DMF (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a mistura de reação foi diluída com água gelada. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água; pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado.
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93/137 [00212] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,95 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 7,6, Hz, 1H), 6,58 (t, J =
7,2 Hz, 1H), 3,51 (s, 2H), 2,76 - 2,72 (m, 2H), 1,96 (t, J = 10,8 Hz, 2H), 1,70 - 1,68 (m, 2H), 1,43 - 1,40 (m, 1H), 1,30 - 1,09 (m, 4H), 1,07 (s, 6H); LCMS Calculada para C23H31N3O2 (base livre): 381,24; Observado: 382,20 (M + 1)+.
[00213] Etapa 5: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4-(2-metilprop-1en-1-il)piperidin-1-il)metil)benzamida (Composto 472): A solução do composto 6a (0,13 g, 1 eq.) em piperidina a 20% em DMF (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a mistura de reação foi diluída com água gelada. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água; pentano e seco sob vácuo para gerar 0 composto desejado.
[00214] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,95 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,58 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 4,95 4,87 (m, 1H), 4,71 - 4,50 (m, 1H), 3,50 (s, 2H), 2,81 - 2,71 (m, 2H), 2,13 - 2,00 (m, 1 H), 2,02 - 1,86 (m, 2H), 1,67 - 1,44 (m, 7H), 1,30 1,24 (m, 1H), 1,17 - 1,02 (m, 1H); LCMS Calculada para C23H29N3O (base livre): 363,23; Observado: 364,20 (M + 1)+.
Esquema sintético para 0 Composto 238 e para 0 Composto 241:
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Figure BR112019013001A2_D0038
[00215] Etapa 1: Síntese de 6-(4-(metoxicarbonil)benzil)-2,6diazaespiro[3.3]heptano-2-carboxilato de terc-butila (3): A uma solução agitada do composto 1 (1 g, 1 eq.) em DMF seco (10 ml) a 0 Ό NaH (60 %, 0,123 g, 1,5 eq.) foi adicionado lentamente e agitado à mesma temperatura por 30 minutos. A essa solução, composto 2 (0,47 g, 1 eq.) foi adicionada lentamente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com água e estratifiçada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água, secas sobre NazSCXi e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado.
[00216] Etapa 2: Síntese de ácido 4-((6-(terc-butoxicarbonil)-2,6diazaespiro[3.3]heptan-2-il)metil)benzoico (4): A uma solução agitada do composto de éster 3 (0,53 g, 1 eq.) em Metanol: Água (1:1, 8 ml), NaOH (0,091 g, 5eq) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 70 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi lavado com éter dietílico se
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95/137 guido pelo tratamento com água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto do título 4.
[00217] Etapa 3: Síntese do composto 6: A uma solução agitada do composto ácido 4 (1 eq.) e amina corresponde 5 (1 eq.) em DMF (10 ml) DIPEA (2,5 eq.) foi adicionada e agitada por 10 minutos. Para esse fim. HATU (1,5 eq.) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi dividida em porções entre acetato de etila e água. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 β°Ο'μ^ s jfl Γ] [| i +N. HN-. Fmoc 6a
2 Ύ A VnAM hn.Boc 6b
[00218] Etapa 4: Síntese do composto 7b e do Composto 241: A solução agitada do Composto 6a ou 6b (0,01 g, 1 eq.) em TFA/DCM a 50% (0,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi purificado por resina básica (sp-carbonato) para gerar o composto desejado.
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96/137
NQ Estrutura
1 o Μ N -Λ ..--¾.. z A i J UAA [ Y Η T nh:· TFA Composto 241
2 HNA íA Fmoc TFA 7b
[00219] 4-((2,6-diazaespiro[3.3]heptan-2-il)metil)-N-(2aminofenil)benzamida (Composto-241): Composto entregue como sal de TFA.
[00220] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 7,93 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,60 (t, J =
7,2 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,07 - 4,05 (m, 4H), 3,67 - 3,62 (m, 2H), 3,43 - 3,32 (m, 4H); LCMS Calculada para C19H22N4O (base livre): 322,18; Observado: 322,85 (M + 1)+.
[00221] Etapa 5: Síntese do composto (2-(4-((6-(ciclopoprilmetil)-
2,6-diazaespiro[3.3]heptan-2-il)metil)benzamido)fenil)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila (8): A uma solução agitada do composto de amina 7b (1 eq.) e aldeído correspondente (1,2 eq.) em DCM ácido acético (6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para esse fim, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para 0 outro; 0 progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCri e evaporadas para obter 0 produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna
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97/137 de sílica-gel para gerar o composto desejado.
[00222] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((6-(ciclopoprilmetil)-
2,6-diazaespiro[3.3]heptan-2-il)metil)benzamida (Composto-238): A solução do composto 8 (0,04 g, 1 eq.) em piperidina a 20% em DMF (1 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação diluída com água gelada e estratificada com MeOH/DCM a 10%. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com solução saturada de NaHCOs e salmoura, secas sobre NazSCXi e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílicagel para gerar o composto desejado.
[00223] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,91 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 6,4 Hz, 2H),7,15 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,97 -
6,95 (m, 1H), 6,78 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,59 - 6,57 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 3,58 - 3,56 (m, 2H), 3,24 - 3,21 (m, 8H), 2,22 - 2,20 (m, 2H), 1,24 - 1,22 (m, 1H), 0,39 - 0,31 (m, 2H), 0,05 - 0,04 (m, 2H); LCMS Calculada para C23H28N4O (base livre): 376,23; Observado: 376,95 (M + 1)+.
Esquema Sintético para 0 Composto 176:
Figure BR112019013001A2_D0039
[00224] Etapa 1: Síntese de (2-(4-formilbenzamido)fenil)carbamato de terc-butila (3): A uma solução agitada do composto 1 (0,5 g, 1 eq.) e do composto 2 (0,693 g, 1,2 eq.) em DMF (5 ml) HOBt (0,45 g, 1 eq.) e EDCI HCI (0,64 g, 1 eq.) foram adicionados. A mistura de reação re
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98/137 sultante foi agitada a 70 Ό por 4 horas; o progres so de reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com água e estratificada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com solução saturada de NaHCOs e salmoura, secas sobre Na2SO4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 3.
[00225] Etapa 2: Síntese de terc-butil (2-(4-(azetidin-1ilmetil)benzamido) fenil)carbamato (5) A uma solução agitada do composto 3 (0,3 g, 1 eq.) e do composto 4 (0,06 g, 1,2 eq.) em DCM (6 ml) ácido acético (0,317 g, 6 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. Para esse fim, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (0,561 g, 3 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro; o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com solução de NaHCOs saturada e estratificada com DCM. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SÜ4 e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 5.
[00226] Etapa 3: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-(azetidin-1ilmetil)benzamida (Composto 176): A mistura do composto 5 (0,07 g, 1 eq.) e TFA/DCM a 50% (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano, éter dietílico e seco sob vácuo para gerar o composto desejado como sal de TFA.
[00227] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,28 (s, 1H), 9,93 (s, 1H), 8,03 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 7,6
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Hz, 1H), 7,08 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,81 (t, J =
7,2 Hz, 1H), 4,44 - 4,42 (m, 2H), 4, 11 - 3,99 (m, 4H), 2,46 - 2,25 (m, 2H); LCMS Calculada para C17H19N3O (base livre): 281,15; Observado: 282,05 (M + 1)+.
Esquema Sintético para 0 Composto 171, Composto 172, Composto 174 e Composto 175:
} 0 |
R ''Q' NaOH R i Ç’' ........................> Λ (J ...................*· ! ! j
MeCN Ít 7ΰ aC. R,AVA,/ :
Figure BR112019013001A2_D0040
R-'-hOCj i’ld?ET?4
175
Figure BR112019013001A2_D0041
[00228] Etapa 1: Síntese de Composto 3: A uma solução agitada da amina respectiva 2 (1 eq.) em ACN a 0 O, carbonato de potássio (3 eq.) foi adicionada. Para esse fim, 0 composto 1 (1 eq.) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrado e concentrados sob pressão reduzida a fim de obter 0 produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto desejado 3a a 3d.
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Figure BR112019013001A2_D0042
[00229] Etapa 2: Síntese de Composto 4: A uma solução agitada de composto de éster correspondente 3a a 3d (1 eq.) em Metanol: Água (1:1), NaOH (1,5 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 70 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi lavado com éter dietílico seguido pelo tratamento com água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar a mistura do composto desejado 4a a 4d.
NQ Estrutura
1 o Γύ OH 4a
2 o ίί^ΐ'ΟΗ k/N.JV 4b
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101/137
NQ Estrutura
3 0 4c
4
[00230] Etapa 3: Síntese de Composto 6a a 6c: A uma solução agitada do composto de ácido respectivo 4a a 4c (1 eq.) e amina respectiva 5 (1,1 eq.) em ACN piridina (5 eq.) e HATU (1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente. Após agitação, a mistura de reação a 80 Ό de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi dividido em porções entre água e acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre NazSCri e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 6a a 6c.
[00231] Etapa 3: Síntese de Composto 6d: A uma solução agitada do composto 4d (1 eq.) e amina respectiva 5 (1 eq.) em DMF DIPEA (2,5 eq.) foi adicionada e agitada por 10 minutos. Para esse fim. HATU (1,5 eq.) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi dividida em porções entre acetato de etila e água. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCri e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 6d.
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NQ Estrutura
1 o í^íl 6a
2 X.N. HI\L Boc 6b
3 WX
4 HN'Fmoc 6d
[00232] Etapa 4: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-(piperidin-1ilmetil)benzamida (Composto 171): A uma solução agitada do composto de Boc 6a (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol), HCI 4M em dioxano (5 vol) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado como o sal de HCI.
[00233] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,28 (s, 2H), 8,13 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,30 7,22 (m, 3H), 4,35 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 3,30 - 3,27 (m, 2H), 2,88 - 2,85 (m, 2H), 1,85 - 1,65 (m, 5H), 1,37 - 1,35 (m, 1H); LCMS Calculada para C19H23N3O (base livre): 309,18; Observado: 309,90(M + 1)+.
[00234] Etapa 4: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4,4dimetilpiperidin-1-il)metil)benzamida (Composto 172): A uma solução agitada do composto de Boc 6b (1 eq.) em 1,4-dioxano(5 vol), HCI 4M
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103/137 em dioxane (5 vol) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado como o sal de HCI.
[00235] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,32 (s, 1H), 10,10 (bs, 1H), 8,13 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,74 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,24 - 7,16 (m, 3H), 4,40 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 3,24 - 3,00 (m, 4H), 1,71-1,65 (m, 2H), 1,52 - 1,48 (m, 2H), 1,01 (s, 3H), 0,96 (s, 3H); LCMS Calculado para C21H27N3O (base livre): 337,22; Observado: 337,88 (M + 1)+.
[00236] Etapa 4: Síntese de 4-((3-azaespiro[5.5]undecan-3-il)metil)N-(2-aminofenil)benzamida (Composto 174): A uma solução agitada do composto de Boc 6c (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxano(5 vol.) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e 0 resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar 0 composto desejado como 0 sal de HCI.
[00237] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,58 (s, 1H), 10,42 (s, 1H), 8,14 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,34 - 7,15 (m, 3H), 4,37 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 3,13 - 2,96 (m, 4H), 1,78 - 1,68 (m, 2H), 1,65 - 1,55 (m, 2H), 1,49 - 1,47 (m, 2H), 1,38 - 1,34 (m, 6H), 1,22-1,19 (m, 2H); 90,28%; LCMS Calculada para C24H31N3O (base livre): 377,25; Observado: 378,01 (M + 1)+.
[00238] Etapa 4: Síntese de 4-((2-oxa-7-azaespiro[3.5]nonan-7il)metil)-N-(2-aminofenil)benzamida (Composto 175): A mistura do composto 6d (10 mg, 1 eq.) e piperidina a 20% em DMF (0,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a mistura de reação foi
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104/137 diluída com água gelada. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água; pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado.
[00239] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,93 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,01 -
6,92 (m, 1H), 6,77 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,59 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,30 - 4,25 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 2,27 - 2,25 (m, 4H), 1,79 - 1,75 (m, 4H); LCMS Calculada para C21H25N3O2 (base livre): 351,19; Observado: 351,80 (M + 1)+.
Esquema Sintético para 0 Composto 354:
Figure BR112019013001A2_D0043
Figure BR112019013001A2_D0044
Figure BR112019013001A2_D0045
[00240] Etapa 1: Síntese de 4-((bromotrifenil-l5fosfanil)metil)benzoato de metila(2): A uma solução agitada do composto 1 (50 g, 1 eq.) em tolueno (500 ml) trifenil fosfina (55,5 g, 1 eq.) foi adicionada, e a mistura de reação foi aquecida a refluxo por 17 horas. Após 17 horas, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse à temperatura ambiente, 0 precipitado foi filtrado, lavado com tolueno seguido por hexano e seco sob vácuo para gerar 0 composto do título
2.
[00241] Etapas 2 e 3: Síntese de 4-(4-(metoxicarbonil)benzilideno) piperidina-1-carboxilato de terc-butila (4): A uma solução agitada do
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105/137 composto 2 (100 g, 1 eq.) em DMF (500 ml) a 0 Ό NaH (60 %, 2 07 g, 1,1 eq.) foi adicionado lentamente e agitado à mesma temperatura por 30 minutos. A essa solução, 4-oxopiperidina-1-carboxilato de tercbutila (10,75 g, 1,1 eq.) foi adicionado aOO. A mistura de reação resultante foi agitada a 65 O de um dia para o outro. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com água e estratifiçada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água, secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto do título 4.
[00242] Etapa 4: Síntese de ácido 4-((1-(tercbutoxicarbonil)piperidin-4-ilideno)metil)benzoico (5): A uma solução agitada do composto de éster 4 (1 g, 1 eq.) em MetanoLÁgua (1:1, 20 ml) NaOH (0,181 g, 1,5 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 70 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi lavado com éter dietílico seguido pelo tratamento com água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto do título 5.
[00243] Etapa________5: Síntese de 4-(4-((2(((benzilóxi)carbonil)amino)fenil) carbamoil)benzilideno)piperidina-1carboxilato de terc-butila (7): A uma solução agitada de composto ácido 5 (0,85 g, 1 eq.) e amina 6 (0,716 g, 1,1 eq.) em ACN (16 ml) piridina (1,05 ml, 5 eq.) e HATU (1,53 g, 1,5 eq.) foi adicionada à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 80 Ό por 16 horas; o progresso de reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a mistura de reação foi concentrada e resíduo resultante foi diluído com água e estratifiçada com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com
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106/137 água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre NazSCXi e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto do título 7.
[00244] Etapa 6: Síntese de cloridrato de (2-(4-(piperidin-4ilidenometil)benzamido) fenil)carbamato de benzila (8): A uma solução agitada do composto de Boc 7 (1 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (10 ml) HCI 4M em dioxano (4 ml) foi adicionado, e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após conclusão, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico; acetonitrila e seco sob vácuo para gerar o composto do título 8 como sal de HCI.
[00245] Etapa 9: Síntese de (3r,5r,7r)-adamantano-1-carbaldeído (11): A uma solução agitada do composto 10 (1 g, 1 eq.) em DCM (10 ml) aOO, PCC (1,42 g, 1,1 eq.) foi adicionado em porções. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a mistura resultante foi filtrada sobre um bloco de celita. O filtrado foi lavado com água; a camada orgânica foi separada; seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para gerar o composto do título 11.
[00246] Etapa 7: Síntese de (2-(4-((1 -(((3r,5r,7r)-adamantan-1 il)metil) piperidin-4-ilideno)metil)benzamido)fenil)carbamato de benzila (9): A uma solução agitada do composto 8 (0,3 g, 1 eq.) e composto 11 (0,155 g, 1,5 eq.) em (8 ml) tetra-isopropóxido de titânio (Ti(O/Pr)4)(1,04 g, 6 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. Após 5 minutos, STAB (0,298 g, 3 eq.) foi adicionado, e a mistura foi aquecida a 60 Ό por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com DCM e a mistura resultante foi filtrada sobre um bloco de celita. O filtrado foi concentrado, e o resíduo resultante foi purificado por croma
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107/137 tografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto do título 9. [00247] Etapa 8: Síntese de 4-((1 -(((3r,5r,7r)-adamantan-1 il)metil)piperidin-4-il)metil)-N-(2-aminofenil)benzamida (Composto 354): A uma solução agitada do composto 9 (0,11 g, 1 eq.) em metanol (3 ml) Pd/C a 10% (50 mg) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por HPLC preparativa para gerar o composto do título.
[00248] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,58 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,96 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,59 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,88 (s, 2H), 2,68 - 2,65 (m, 2H), 2,58 - 2,56 (m, 2H), 2,13 - 2,02 (m, 2H), 1,90 - 1,83 (m, 5H), 1,67 - 1,57 (m, 6H), 1,50 - 1,40 (m, 9H), 1,27 1,21 (m, 2H); LCMS Calculada para C30H39N3O (base livre): 457,31; Observado: 458,43 (M + 1)+.
Esquema Sintético para 0 Composto 169:
Figure BR112019013001A2_D0046
Figure BR112019013001A2_D0047
Figure BR112019013001A2_D0048
Figure BR112019013001A2_D0049
Figure BR112019013001A2_D0050
Figure BR112019013001A2_D0051
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108/137 [00249] Etapa 1: Síntese de 4-((bromotrifenil-l5fosfanil)metil)benzoato de metila(2): A uma solução agitada do composto 1 (50 g, 1 eq.) em tolueno (500 ml) trifenil fosfina (55,5 g, 1 eq.) foi adicionado, e a mistura de reação foi aquecida a refluxo por 17 horas. Após 17 horas, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse à temperatura ambiente, o precipitado foi filtrado, lavado com tolueno seguido por hexano e seco sob vácuo para gerar o composto do título 2.
[00250] Etapa 2 e 3: Síntese de 3-(4-(metoxicarbonil) benzilideno)azetidina-1-carboxilato de terc-butila (4): A uma solução agitada do composto 2 (70 g, 1 eq.) em DMF seco (350 ml) aO O NaH (60% em óleo mineral, 7,9 g, 1,4 eq.) foi adicionado lentamente e agitado à mesma temperatura por 30 minutos. A essa solução, 3-oxoazetidina-1carboxilato de terc-butila (24,4 g, 1 eq.) foi adicionado aO O. A mistura de reação resultante foi agitada a 65 Ό de um d ia para o outro. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi resfriada a 0 °C e arrefecida bruscamente com solução saturada de NH4CI, 0 precipitado foi filtrado. O resíduo foi obtido em acetonitrila, agitado para 10 min e filtrado novamente. O sólido foi lavado com acetonitrila. O produto cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto 4.
[00251] Etapa 4: Síntese de cloridrato de 4-(azetidin-3ilidenometil)benzoato de metila (5) A uma solução agitada do composto de Boc 4 (26 g, 1 eq.) em uma mistura de 1,4-dioxano:metanol (30 ml:20 ml) HCI 4M em dioxano (150 ml) foi adicionado, e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas. Após A conclusão, a mistura de reação foi concentrada e 0 resíduo resultante foi triturado com n-pentano, éter dietílico e seco sob vácuo para gerar 0 composto desejado 5 como sal de HCI.
[00252] Etapa 5: Síntese de 4-((1 -(ciclopoprilmetil)azetidin-3
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109/137 ilideno)metil)benzoato de metila (6): A uma solução agitada do composto 5 (1,5 g, 1 eq.) em DMF (20 ml) carbonato de césio (5,09 g, 2,5 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 10 minutos. A essa solução, (bromometil)ciclopropano (0,847 g, 1 eq.) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi agitada a 60 Ό por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com água gelada e estratificada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água, secas sobre NazSCXi e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 6.
[00253] Etapa 6: Síntese de ácido 4-((1 -(ciclopropilmetil)azetidin-3ilideno)metil)benzoico (7): A uma solução agitada do composto de éster 6 (0,53 g, 1 eq.) em uma mistura de MeOFLTHF (1:3) LiOH aquoso (0,258 g, 3 eq., dissolvido em 0,75 ml de água) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 5 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada e o resíduo resultante foi obtido em água e acidificado a um pH = 6 com o uso de HCI 2N. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 7.
[00254] Etapa 7: Síntese de (2-(4-((1 -(ciclopoprilmetil)azetidin-3ilideno)metil)benzamido)-5-fluorofenil)carbamato de terc-butila (8): A uma solução agitada do composto 7 (0,4 g, 1 eq.) e (2-amino-5fluorofenil)carbamato de terc-butila (0,407 g, 1,1 eq.) em DMF (10 ml) DIPEA (0,845 g, 4 eq.) foi adicionada e agitada por 10 minutos. Para esse fim, HATU (0,116 g, 1,5 eq.) foi adicionada, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. As
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110/137 camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e salmoura, secas sobre NazSCXi e evaporadas para obter o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado 8.
[00255] Etapa 8: Síntese de di-cloridrato de N-(2-amino-4fluorofenil)-4-((1-(ciclopoprilmetil)azetidin-3-ilideno)metil)benzamida (9): A uma solução agitada do composto de Boc 8 (0,18 g, 1 eq.) em
1,4-dioxano (1 ml) HCI 4M em dioxano (3 ml), e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico, acetonitrila e seco vácuo para gerar o composto desejado 9 como sal de HCI.
[00256] Etapa 9: Síntese de N-(2-amino-4-fluorofenil)-4-((1(ciclopoprilmetil) azetidin-3-il)metil)benzamida (Composto-169): A uma solução agitada do composto 9 (0,14 g, 1 eq.) em metanol (10 ml), Pd/C a 10% (30 mg) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 2 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e acetonitrila, em seguida, seco sob vácuo para gerar o composto do título.
[00257] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,52 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,11 - 7,07 (m, 1H), 6,55 - 6,51 (m, 1H), 6,37 - 6,33 (m, 1H), 5,22 (s, 2H), 3,27 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,88 - 2,85 (m, 2H), 2,80 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,64 - 2,61 (m, 1H), 2,21 2,20 (m, 2H), 0,68 - 0,66 (m, 1H), 0,40 - 0,29 (m, 2H), 0,06 - 0,04 (m, 2H); LCMS Calculada para C21H24FN3O (base livre): 353,19; Observado: 353,90 (M + 1)+.
Esquema sintético para 0 Composto 161, Composto 162, Composto
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111/137
Figure BR112019013001A2_D0052
[00258] Etapa 1: Síntese de 4-((bromotrifenil-l5fosfanil)metil)benzoato de metila(2): A uma solução agitada do composto 1 (50 g, 1 eq.) em tolueno (500 ml) trifenil fosfina (55,5 g, 1 eq.) foi adicionada, e a mistura de reação foi aquecida a refluxo por 17 horas. Após 17 horas, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse à temperatura ambiente, o precipitado foi filtrado, lavado com tolueno seguido por hexano e seco sob vácuo para gerar o composto do título
2.
[00259] Etapas 2 e 3: Síntese de 4-(4-(metoxicarbonil) benzilideno)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (4): A uma solução agitada do composto 2 (100 g, 1 eq.) em DMF (500 ml) a 0 Ό NaH (60%, 20 7 g, 1,1 eq.) foi adicionado lentamente e agitado à mesma temperatura por 30 minutos. A essa solução, 4-oxopiperidina-1-carboxilato de tercbutila (10,75 g, 1,1 eq.) foi adicionado aOO. A mistura de reação resultante foi agitada a 65 O de um dia para o outro. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com água e estratificada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água, secas sobre
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Na2SÜ4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto do título 4.
[00260] Etapa 4: Síntese de 4-(piperidin-4-ilidenometil)benzoato cloridrato de metila (5): A uma solução agitada do composto de Boc 4 (11 g, 1 eq.) em uma mistura de 1,4-dioxano:metanol (4:1, 200 ml), HCI 4M em dioxano (120 ml) foi adicionado, e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e seco sob vácuo para gerar o composto do título 5 como sal de HCI.
[00261] Etapa 5: Síntese do composto 6a: A uma solução do Composto 5 (0,5 g, 1 eq.) em etanol (10 ml) TEA (0,8 ml, 3 eq.) e 2,2dimetiloxirano (0,203 g, 1,5 eq.) foram adicionados à temperatura ambiente, e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar um composto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel.
[00262] Etapa 5: Síntese de compostos 6b e 6c: A uma solução agitada do composto 5 (3,5 g, 1 eq.) em DMF (35 ml) carbonato de césio (10,7 g, 2,5 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 10 minutos. A essa solução, (bromometil)ciclopropano (1,6 ml, 1,2 eq.) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi agitada a 70 O por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com água e estratifiçada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água, secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado.
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Figure BR112019013001A2_D0053
[00263] Etapa 6: Síntese do composto 7a a 7c: A uma solução agitada do composto de éster 6 (1 eq.) em Metanol: Água (1:1), NaOH (1,5 eq.) foi adicionada à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 70 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi lavado com éter dietílico seguido pelo tratamento com água. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 ΑνΟΠΟ OH o 7a
2 N H o 7b
3 O 7c
[00264] Etapa 7: Síntese do composto 8a a 8c: A uma solução agitada do composto ácido 7 (g, 1 eq.) e (2-amino-5-fluorofenil)carbamato de terc-butila (1,1 eq.) em ACN piridina (5 eq.) e HATU (1,5 eq.) foi adicionada à temperatura ambiente. Após agitação, a mistura de reação a 80 Ό de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitoPetição 870190072298, de 29/07/2019, pág. 118/157
114/137 rado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi dividido em porções entre água e acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre NazSCXi e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 0 8a
2 I avAT5/ h nhboc /Αχ N xA b/γ N -y-ks 0 ^>8b
3
[00265] Etapa 8: Síntese do composto 9a a 9c: A uma solução agitada do composto de Boc 8 (1 eq.) em 1,4-dioxano HCI 4M em dioxano foi adicionado, e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado como sal de HCI.
NQ Estrutura
1 HCI 0
2 HCI / h r 0 9b
3 HCI
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115/137 [00266] Etapa 10: Síntese do composto Β: A uma solução agitada do composto A (5 g, 1 eq.) em THF (100 ml) DMAP (0,312 g, 0,08 eq.) e anidrido de Boc (17,4 g, 2,5 eq.) dissolvido em THF foram adicionados. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com solução saturada de NaHCOs e estratifiçada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e seca sobre NazSCri e concentradas para gerar o composto desejado B.
[00267] Etapa 11: Síntese de (5-fluoro-2-nitrofenil)carbamato de terc-butila (C): A uma solução agitada do composto B (11 g, 1 eq.) em DCM (110 ml) a 0 Ό TFA (3,5 ml, 1,5 eq.) foi adiei onado. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a reação foi arrefecida bruscamente com solução saturada de NaHCOs e estratifiçada com acetato de etila. As camadas orgânicas foram separadas, lavadas com água e secas sobre NazSCri e concentradas para gerar o composto desejado C.
[00268] Etapa 12: Síntese de (2-amino-5-fluorofenil)carbamato de terc-butila (D): A uma solução agitada do composto C (4 g, 1 eq.) em THF seco (100 ml) sob atmosfera de argônio Ni Raney (2 g) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente de um dia para o outro. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e n-pentano e, em seguida, seco sob vácuo para gerar o composto do título D.
[00269] Etapa 9: Síntese de N-(2-amino-4-fluorofenil)-4-((1-(2hidróxi-2-metilpopril)piperidin-4-il)metil)benzamida (Composto 161): A
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116/137 uma solução agitada do composto 9c (0,05 g, 1 eq.) em metanol (1 ml) HCI metanólico (1 ml) e Pd/C a 10% (5 mg) foram adicionados, e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 4 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e npentano e, em seguida, seco sob vácuo para gerar o composto do título.
[00270] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,84 (s, 1H), 9,18 (bs, 1H), 7,98 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,22 - 7,20 (m, 1H), 6,76 - 6,74 (m, 1H), 6,59 - 6,57 (m, 1H), 3,57 - 3,54 (m, 2H), 3,29 - 3,25 (m, 1H), 3,16 - 3,14 (m, 2H), 3,05 - 2,89 (m, 4H), 2,72 2,65 (m, 1H), 2,60 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 1,78 - 1,68 (m, 4H), 1,25 (s, 6H); LCMS Calculada para C23H30FN3O2 (base livre): 399,23; Observado: 399,95 (M + 1)+.
[00271] Etapa 9: Síntese de N-(2-amino-4-fluorofenil)-4-((1(ciclopoprilmetil) piperidin-4-il)metil)benzamida (Composto 163): A uma solução agitada do composto 9b (0,05 g, 1 eq.) em metanol (1 ml), Pd/C a 10% (5 mg) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 4 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, 0 filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e 0 resíduo resultante foi triturado com éter dietílico e n-pentano e, em seguida, seco sob vácuo para gerar 0 composto do título.
[00272] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,19 (s, 1H), 9,80 (s, 1H), 7,97 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,21 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,74 - 6,71 (m, 1H), 6,57 - 6,55 (m, 1H), 3,57 - 3,44 (m, 2H),
2,92 - 2,73 (m, 4H), 2,67 - 2,63 (m, 2H), 1,87 - 1,70 (m, 3H), 1,64
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117/137
1,49 (m, 2H), 1,19 - 1,02 (m, 1H), 0,63 - 0,61 (m, 2H), 0,45 - 0,31 (m, 2H); LCMS Calculada para C23H28FN3O (base livre): 381,22; Observado: 381,95 (M + 1)+.
[00273] Etapa 9: Síntese de N N-(2-amino-4-fluorofenil)-4-((1neopentilpiperidin-4-il)metil)benzamida (Composto-162): A uma solução agitada de 9 (0,1 g, 1 eq.) em metanol (5 ml) Pd/C a 10% (10 mg) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 4 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada por um bloco de celita, 0 filtrado foi evaporado sob pressão reduzida, e 0 resíduo resultante foi purificado por cromatografia combiflash e SFC para gerar 0 composto desejado.
[00274] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,51 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,10 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 6,55 6,52 (m, 1H), 6,38 - 6,33 (m, 1H), 5,20 (s, 2H), 2,74 - 2,70 (m, 2H), 2,58 - 2,56 (m, 2H), 2,10 (t, J = 11,2 Hz, 2H), 1,49 - 1,46 (m, 3H), 1,24 - 1,22 (m, 2H), 1,04 - 1,02 (m, 1H), 0,82 (s, 9H), 1H unido em pico de solvente; LCMS Calculada para C24H32FN3O (base livre): 397,25; Observado: 398,37 (M + 1)+.
Esquema sintético para 0 Composto 146 e Composto 147:
Figure BR112019013001A2_D0054
fetaja? x -· 2
Figure BR112019013001A2_D0055
Figure BR112019013001A2_D0056
<45
Figure BR112019013001A2_D0057
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118/137 [00275] Etapa 1: Síntese de 4-(4-(metoxicarbonil)benzil)piperazina1-carboxilato de terc-butila (2): A uma solução agitada de piperazina-1carboxilato de terc-butila (2,92 g, 1,2 eq.) e carbonato de potássio (3,33 g, 3 eq.) em ACN (25 ml) composto 1 (3 g, 1 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, seca sobre Na2SÜ4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida a fim de fornecer um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto 2.
[00276] Etapa 2: Síntese de cloridrato de 4-(piperazin-1ilmetil)benzoato de metila (3): A uma solução agitada do composto de Boc 2 (4 g, 1 eq.) em 1,4-dioxano (2 ml) HCI 4M em dioxano foi adicionado, e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado 3.
[00277] Etapa 3: Síntese do composto 4a: A uma solução do Composto 3 (1 eq.) em 5 vol. de etanol TEA (3 eq.) foi adicionado seguido por 2,2-dimetiloxirano (2,5 eq.) à temperatura ambiente, e a mistura de reação foi aquecida a 90 °C por 4 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse, fosse concentrada para gerar um composto cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel.
[00278] Etapa 3: Síntese do composto 4b: A uma solução agitada do composto 3 (1 eq.) e carbonato de césio (3 eq.) em DMF (10 vol.) haleto de alquila correspondente (1,1 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida a 80 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi vertida
Petição 870190072298, de 29/07/2019, pág. 123/157
119/137 em água gelada e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, seca sobre Na2SÜ4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida a fim de fornecer um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel.
NQ Estrutura
1 o ΗΟ-γ'Ν'^ rA^OMe \ 4a
2 0 rj^^Y^OMe 4b
[00279] Etapa 4: Síntese do composto 5a a 5b: A uma solução agitada do composto de éster em Metanol:Água (1:1) NaOH (1,5 eq.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura acima foi aquecida a 90 °C por 5 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi dissolvido em água e lavado com éter dietílico. A camada aquosa foi neutralizada a pH = 7 com o uso de HCI 1N a 0 °C. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 o ΗΟ-γ'Ν'^ /Va \ 5a
2 0 5b
[00280] Etapa 5: Síntese do composto 6a a 6b: A uma solução agitada do composto ácido (1 eq.) e amina (1,1 eq.) em ACN (10 vol.) piridina (5eq) e HATU (1,5 eq.) foram adicionadas à temperatura ambiente. Após agitação, a mistura de reação a 80 Ό de um dia para o outro, o progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi
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120/137 particionado entre água e acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e HCI a 1% para remover traços de piridina, seca sobre Na2SO4 e concentrada. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto desejado.
NQ Estrutura
1 . I Ώ ΗΟ-γ'Ν'^ι ' H ην-ο Boc 6a
2 A k___n HNx Boc 6b
[00281] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4-(2-hidróxi-2metilpopril)piperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 146): A uma solução agitada do composto de Boc 6a (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxane (5 vol.) foi adicionado à temperatura ambiente. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar o composto desejado.
[00282] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 10,65 (s, 1H), 8,22 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,63 - 7,56 (m, 1H), 7,48 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,41 - 7,28 (m, 2H), 4,49 (s, 2H), 3,76 - 3,66 (m, 4H), 3,62-3,56 (m, 4H), 3,21 -3,16 (m, 2H), 1,26 (s, 6H); LCMS Calculada para C22H30N4O2 para base livre: 382,24; Observado: 382,90 (M + 1)+· [00283] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((4(ciclopoprilmetil)piperazin-1-il)metil)benzamida (Composto 147): A uma solução agitada do composto de Boc 6b (1 eq.) em 1,4-dioxano (5 vol.) HCI 4M em dioxane (5 vol.) à temperatura ambiente. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, e 0 resíduo resultante foi triturado com n-pentano e seco sob vácuo para gerar 0 composto desejado.
[00284] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,72 (s, 1H), 10,53
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121/137 (s, 1H), 8,18 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,56 - 7,49 (m, 1H), 7,42 - 7,34 (m, 1H), 7,31 - 7,30 (m, 2H), 4,42 (s, 2H), 3,72 3,70 (m, 2H), 3,55 - 3,44 (m, 6H), 3,10 - 3,02 (m, 2H), 1,11 - 1,09 (m, 1H), 0,63 - 0,62 (m, 2H), 0,41 -0,39 (m, 2H); LCMS Calculada para C22H28N4O para base livre: 364,23; Observado: 365,15 (M + 1)+. Esquema sintético para 0 Composto-555
Boc,
BOC
I 0 NaOH, MeOH:H2O (1:1).
:i 60 oC, 3 h Boc
NO'
KjN' y”
NHFmoc
Boc hl·N-NaH, THF, C °C a temp, ambiente, 12 h
Etapa-1
HCI 4M em Dixoano
Etapa-2
OH
HATU, DiPEA. DMF. 12 h. temp, ambiente
Etapa-3
Ν'' χγ'
NHFmoc
Etapa-4
NHFmoc piperidina a 20% em DMF, 0,5 h
Etapa-6
CiH.HN
NO
A.
NHFmoc
N Vr··' H nh2
Composto-555
CH^COON, DCM,
30_min..........
ii) STAB, 12 h, temp, ambiente
Etapa-5 [00285] Etapa________1: Síntese de (Z)-3-(4(metoxicarbonil)benzilideno)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (3): [00286] Etapa 1a: Síntese de 4-((dietoxifosforil)metil)benzoato de metila (2): Uma mistura de 4-(bromometil)benzoato de metila (10 g, 43,66 mmol, 1 eq.) e fosfito de trietila (10,8 g, 65,50 mmol, 1,5 eq.) foi aquecida em um tubo vedado a 130 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto do título 2.
[00287] Etapa________1b: Síntese de (Z)-3-(4(metoxicarbonil)benzilideno)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (3): A uma solução agitada do composto 2 (17 g, 59,39 mmol, 1,1 eq.) em THF anidro (100 ml) a 0 Ό NaH (3,88 g, 60% em p/p em óleo mineral 80,98 mmol, 1,5 eq.) foram adicionados sob atmosfera de N2. Após a agitação da mistura de reação por 30 minutos, uma solução do com
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122/137 posto 1 (10 g, 53,99 mmol, 1 eq.) em THF foi adicionada aO O. Em seguida, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrado e concentrado sob pressão reduzida para gerar um resíduo cru que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto do título
3.
[00288] Etapa 2: Síntese de ácido (Z)-4-((1-(tercbutoxicarbonil)pirrolidin-3-ilideno)metil)benzoico (4): A uma solução agitada do composto 3 (4 g, 12,62 mmol, 1 eq.) em metanokágua (1:1, 20 ml) NaOH (0,757 g, 18,92 mmol, 1,5 eq.) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 60 Ό por 3 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, o metanol foi removido sob pressão reduzida, e a mistura de reação foi acidificada com HCI 2N até pH ~ 5, durante esse período um sólido foi precipitado. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e seco sob pressão reduzida para gerar o composto do título 4.
[00289] Etapa 3: Síntese de (Z)-3-(4-((2-((((9H-fluoren-9il)metóxi)carbonil)amino)fenil)carbamoil)benzilideno)pirrolidina-1carboxilato de terc-butila (6):
[00290] Etapa 3a: Síntese de (2-aminofenil)carbamato de (9Hfluoren-9-il)metila (5): A uma solução agitada de benzeno-1,2-diamina (5 g, 46,29 mmol, 1 eq.) em DMF (20 ml) uma solução de FmocOSu (15,60 g, 46,29 mmol, 1 eq.) em DMF (50 ml) foi adicionada lentamente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com água. O sólido precipitado foi coletado por filtração e seco sob pressão reduzida. O
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123/137 composto cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto do título 5.
[00291] Etapa____________3b: (Z)-3-(4-((2-((((9H-fluoren-9il)metóxi)carbonil)amino) fenil)carbamoil)benzilideno)pirrolidina-1carboxilato de terc-butila (6): A uma solução agitada do composto 4 (3,8 g, 12,5 mmol, 1 eq.) e composto 5 (4,96 g, 15,04 mmol, 1,2 eq.) em DMF (20 ml) DIPEA (5,39 ml, 31,35 mmol, 2,5 eq.) foi adicionada e agitada por 10 minutos. A essa solução, o HATU (7,15 g, 18,31 mmol,
1,5 eq.) foi adicionada lentamente, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto cru foi purificado por cromatografia em coluna para gerar o composto do título 6.
[00292] Etapa 4: Síntese de cloridrato de (Z)-(2-(4-(pirrolidin-3ilidenometil)benzamido)fenil)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila (7): A uma solução agitada do composto 6 (2,1 g, 3,41 mmol, 1 eq.) em 1,4 dioxano (5 ml)a0C HCI 4M em dioxano (15 ml) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com solução saturada de NaHCOs e estratificado com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para gerar o composto 7 como sal de HCI.
[00293] Etapa 5: Síntese de (2-(4-((1 -(ciclopoprilmetil) pirrolidin-3il)metil)benzamido)fenil)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila (8): A uma solução agitada do composto de amina 7 (0,2 g, 0,362 mmol, 1
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124/137 eq,) e ciclopropanocarbaldeido (0,03 g, 0,435 mmol, 1,2 eq.) em DCM (10 ml) ácido acético (0,065 g, 1,086 mmol, 3 eq.) foi adicionado e agitado à temperatura ambiente por 30 minutos. A essa solução, triacetoxiboroidreto de sódio (STAB) (0,115 g, 0,543 mmol, 1,5 eq.) foi adicionado, e a agitação foi continuada à temperatura ambiente por 12 horas. O progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com solução saturada de NaHCOs e estratificada com DCM. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto cru foi purificado por cromatografia em coluna para gerar o composto do título 8.
[00294] Etapa 6: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((1(ciclopoprilmetil)pirrolidin-3-il)metil)benzamida (Composto-555): Uma solução do composto 8 (0,1 g, 0,175 mmol, 1 eq.) em piperidina a 20% em DMF (3 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com água gelada. O sólido precipitado foi coletado por filtração, em seguida, o sólido foi lavado com água, pentano e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel seguido por TLC preparatória para gerar o Composto-555.
[00295] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,60 (s, 1H), 7,91 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,94 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,56 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,86 (s, 2H), 3,53 - 3,47 (m, 1H), 3,17 - 3,15 (m, 2H), 2,97 - 2,95 (m, 2H), 2,80 - 2,74 (m, 2H), 2,00 - 1,84 (m, 1H), 1,67 - 1,50 (m, 1H), 0,88 0,77 (m, 1H), 0,56 - 0,54 (m, 2H), 0,33 - 0,32 (m, 2H), 2H unido em pico de solvente; LCMS 350,05 (M + 1)+.
Esquema sintético para o Composto 556:
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Figure BR112019013001A2_D0058
[00296] Etapa 1: Síntese de 4-((bromotrifenil-D5-fosfanil) metil)benzoato de metila (2): A uma solução agitada do composto 1 (75 g, 326 mmol, 1 eq.) em tolueno (1 L) trifenil fosfina (85,5 g, 326 mmol, 1 eq.) foi adicionada, e a mistura de reação foi aquecida a refluxo por 7 horas. Após 7 horas, permitiu-se que a mistura de reação resfriasse à temperatura ambiente. O precipitado formado foi filtrado, lavado com tolueno seguido por hexano e seco sob vácuo para gerar o composto 2.
[00297] Etapa 2 & 3: A síntese de 4-(4(metoxicarbonil)benzilideno)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (5): A uma solução agitada do composto 2 (50 g, 102 mmol, 1 eq.) em DMF anidra (500 ml) a 0 O NaH (4,9 g, 60% em p/p e m óleo mineral, 122 mmol, 1,2 eq.) foi adicionado sob atmosfera de N2. Após a agitação, a mistura de reação por 30 minutos, uma solução do composto 4 (24,3 g, 122 mmol, 1,2 eq.) em DMF foi adicionada, e a mistura de reação foi, em seguida, aquecida a 65 Ό por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi resfriada a 0 Ό, diluída com água gelada sob agitação, e 0 precipitado formado foi filtrado. O sólido obtido foi obtido em acetato de etila,
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126/137 agitado por 10 minutos, e a mistura resultante foi filtrada. O filtrado foi lavado com salmoura e água. A camada orgânica foi separada, seca sobre NazSCri anidro, e evaporada sob pressão reduzida para obter o produto, que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto 5.
[00298] Etapa 4: Síntese de cloridrato de 4-(piperidin-4ilidenometil)benzoato de metila (6): A uma solução agitada do composto 5 (30 g, 90,6 mmol, 1 eq.) em 1,4 dioxano:MeOH (210 ml: 40 ml) a 0 Ό HCI 4M em dioxano (85 ml) foi adicionado, e a mi stura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com éter dietílico. O sólido obtido foi filtrado e lavado com éter dietílico. O resíduo foi seco sob pressão reduzida para gerar o composto do título 6 como um sal de cloridrato.
[00299] Etapa 5: Síntese de 4-((1 -(ciclopoprilmetil)piperidin-4ilideno)metil)benzoato de metila (8): A uma solução agitada do composto 6 (12 g, 45 mmol) em DMF (250 ml) aOO, brometo de ciclopopril metileno 7 (5 ml, 50 mmol) e CS2CO3 (29,3 g, 90 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada a 60 °C por 4 horas. O progresso de reação foi monitorado por TLC e LCMS. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar 0 composto 8.
[00300] Etapa 6: Síntese de ácido 4-((1 -(ciclopoprilmetil)piperidin-4ilideno)metil)benzoico (9): A uma solução agitada do composto 8 (18,5 g, 64,91 mmol, 1 eq.) em metanol (300 ml) LiOH aquoso (4,1 g, 97,36 mmol em 60 ml de água) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas. O progresso da reação foi
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127/137 monitorado por TLC. Após a conclusão, o metanol foi removido sob pressão reduzida, e a mistura de reação foi acidificada com HCI 2N até que o pH = 3 a 4. O sólido resultante obtido foi filtrado, lavado com HCI 2N (2 I) e seco. O sólido foi lavado adicionalmente com éter dietílico (1 L), azeotropado com tolueno (3 X 500 ml) e seco sob vácuo para gerar o composto 9.
[00301] Etapa 7: Síntese de (2-(4-((1 -(ciclopoprilmetil)piperidin-4ilideno) metil)benzamido)fenil)carbamato de terc-butila (11):
[00302] Etapa 7a: Síntese de (2-aminofenil)Carbamato de tercbutila (10): A uma solução agitada de benzeno-1,2-diamina (54 g, 500 mmol, 1 eq.) em THF (500 ml), (Boc)2O (109,09 g, 500 mmol) em 150 ml THF foi adicionada lentamente a 0 O. A mistura de foi aquecida lentamente à temperatura ambiente e agitada por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi concentrada, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o composto 10.
[00303] Etapa 7b: síntese de (2-(4-((1 -(ciclopoprilmetil)piperidin-4ilideno)metil)benzamido)fenil)carbamato de terc-butila (11): A uma solução agitada do composto 9 (8,8 g, 32,47 mmol, 1 eq.) e composto 10 (8,1 g, 38,96 mmol, 1,2 eq.) em DMF (100 ml) DIPEA (23 ml, 129,8 mmol, 4 eq.) foi adicionada e agitada por 10 minutos. A essa solução, HATU (18,5 g, 48,70 mmol, 1,5 eq.) foi adicionado lentamente, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e estratificada com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, salmoura, secos sobre Na2SÜ4 anidro, filtrado e concentrado in vacuo. Ο resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para gerar o composto 11.
[00304] Etapa 8: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((1
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128/137 (ciclopoprilmetil)piperidin-4-ilideno)metil)benzamida (12): A uma solução agitada do composto 11 (7 g, 15,18 mmol, 1 eq.) em 1,4 dioxano:MeOH (21 ml: 7 ml) a 0 O HCI 4M em dioxano (21 ml) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi diluída com 1,4 dioxano, agitada por 15 minutos e filtrada. O resíduo foi obtido em éter dietílico, agitado por 15 minutos e filtrado novamente. O composto sólido foi seco sob pressão reduzida para gerar o composto 12 como sal de HCI.
[00305] Etapa 9: Síntese de N-(2-aminofenil)-4-((1(ciclopoprilmetil)piperidin-4-il)metil)benzamida (Composto-556): A uma solução agitada do composto 12 (0,1 g, 0,216 mmol, 1 eq.) em metanol (10 ml) Pd/C a 10% (50 mg) foi adicionada, e a mistura de reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio (pressão de balão) à temperatura ambiente por 2 horas. O progresso da reação foi monitorado por TLC. Após a conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O produto cru foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel para gerar o Composto-556.
[00306] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,58 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,96 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,59 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,85 (brs, 2 H), 3,01 - 2,93 (m, 2H), 2,59 - 2,57 (m, 2H), 2,25 - 2,23 (m, 2H), 2,01 - 1,95 (m, 2H), 1,58 - 1,54 (m, 3H), 1,26 - 1,23 (m, 2H), 0,82 - 0,81 (m, 1H), 0,48 - 0,45 (m, 2H), 0,09 - 0,05 (m, 2H); LCMS: 364,15 (M + 1)+.
INIBIÇÃO DA ENZIMA HDAC [00307] O ensaio de inibição de atividade da HDAC é realizado de acordo com o seguinte para determinar a capacidade de um composto de teste inibir a atividade enzimática da HDAC. As diluições em série
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129/137 dos inibidores de HDAC são preparadas em tampão de ensaio de HDAC (Tris/HCI 25 mM, pH 8,0, NaCI 137 mM, KCI 2,7 mM, MgCI2 1 mM, pH 8) em placas de ensaio com 96 poços (Fisher scientific, nQ 07200-309) e pré-incubadas por 2 horas à temperatura ambiente na presença de 125pg/ml BSA e purificadas HDAC1 (BPS Bioscience, San Diego, CA, nQ 50051), HDAC2 (BPS Bioscience, nQ 50053) ou HDAC3/NcoR2 (BPS Bioscience, nQ 50003) em concentrações de 1,25, 1,32 e 0,167 pg/ml, respectivamente. Em seguida da préincubação, o substrato Fluor-de-Lys™ (Enzo Life Sciences, Plymouth Meeting, PA, BML-KI104-0050) é adicionado a uma concentração final de 10 μΜ, e as placas são incubadas adicionalmente por 30 minutos à temperatura ambiente. A reação enzimática é parada pela adição de Trichostatin A (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, nQ T8552, concentração final: 100 nM) e tripsina (MP Biomedicals, Solon, OH, nQ 02101179) é adicionada para obter uma concentração final de 100pg/ml. Após uma incubação de 15 minutos à temperatura ambiente, a fluorescência é registrada com o uso de um fluorímetro Spectramax M2 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) com excitação a 365 nm e emissão a 460 nm. Os valores de IC50 são calculados com 0 uso de uma equação sigmoidal de resposta a dose (coeficiente angular variável) em GraphPad Prism® 5 para Windows (GraphPad Software, La Jolla, CA). DETERMINAÇÃO DE ESTABILIDADE ÁCIDA [00308] Uma solução 100μΜ do composto de teste é preparada por diluição de uma solução-mãe de DMSO 10 mM em uma solução de HCI 0,01 M em água desionizada. Imediatamente após a mistura, uma alíquota (100 μΙ) é amostrada e analisada por HPLC/UV. A área sob 0 pico do composto é determinada e usada como 0 ponto de referência de tempo zero. O restante das amostras plasmáticas ácidas é incubado a 50 O, e as amostras foram obtidas após 2, 4, e 24 ou 30 horas de incubação. Estas são analisadas pelo mesmo método de HPLC/UV,
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130/137 e a área do pico correspondente ao composto de teste é medida. Em seguida, a porcentagem restante em um determinado instante no tempo é calculada como a razão entre a área sob o pico após a incubação e aquela no instante zero vezes 100. Nessas modalidades em que um período de tempo de 30 horas é registrado, a porcentagem restante em 24 horas é obtida por interpelação da porcentagem restante versus a curva de tempo supondo um processo unimolecular, isto é, um decaimento monoexponencial.
ESTUDOS DE PENETRAÇÃO NO CÉREBRO [00309] Os compostos de teste são preparados ou em 0,5 mg/ml ou 5 mg/ml em hidroxipopril-p-ciclodextrina a 30%, acetato de sódio 100 mM pH 5,5, DMSO a 5%. Os ratos ou camundongos C57/BL6/J são dosados por via subeutânea a 5 mg/kg ou 50 mg/kg ou por via intravenosa a 5 mg/kg. Os animais são submetidos à eutanásia em uma prédose, 5, 15, 30 minutos, 1, 2 e 4 horas pós-dose, e plasma e cérebro obtidos. São usados três animais por dose a cada instante no tempo. Os níveis do composto no plasma e cérebro são determinados por métodos padrão de LC/MS/MS. A razão entre cérebro/plasma (BPR) é calculada como a razão entre a Cmax(cérebro)/Cmax(plasrna).
ENSAIO DE INIBIÇÃO DE DEACETILASE INIBIÇÃO IN VITRO (ENSAIO DE DAC) [00310] As células GM 15850 (linhagem celular linfoblastoide) são semeadas em placas de 96 poços em uma densidade apropriada (100.000 células/poço) em um meio RPMI1640 90 μΙ_ que contém soro bovino fetal a 10% em v/v (FBS), 1% em v/v penicilina/estreptomicina e L-glutamina a 1% em v/v. As diluições de composto são produzidas em DMSO a 100% seguido por diluição paralela nos meios com DMSO a 2%. 10 μΙ das diluições do composto são adicionadas às células para obter as concentrações desejadas. A concentração final de DMSO em cada poço é 0,2%. As células são incubadas por 4 horas a
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Ό com CO 2 a 5%. Após a incubação, as células são centrifugadas, e o sobrenadante é removido. Os péletes de célula são lavados com solução salina tamponada com fosfato a 100 μΙ (PBS) e, em seguida, lisadas com tampão de lise a 45 μΙ (tampão de ensaio de HDAC a pH 8,0 (Tris/HCI 25 mM, NaCI 137 mM, KCI 2,7 mM, MgCI21 mM) + Igepal CA-630 1% em v/v). A fim de iniciar a reação, o substrato de HDAC Kl104 (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) é adicionado a uma a concentração final de 50 μΜ. A reação é parada após 30 minutos de incubação pela adição do desenvolvedor 50 μΙ (tripsina 6 mg/ml em tampão de ensaio de HDAC). Permite-se que a reação se desenvolva por 30 minutos à temperatura ambiente, e o sinal de fluorescência é detectado com o uso de um fluorômetro (Spectramax M2, Molecular Devices, Sunnyvale, CA) com comprimentos de onda com excitação e emissão de 360 nm e 470 nm respectivamente. Os dados são ajustados a uma equação sigmoidal de dose-resposta com coeficiente angular variável em GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA) a fim de determinar a IC50. O fundo e 0 topo da curva são fixos à resposta média de fluorescência de poços de controle sem células e células, porém nenhum composto respectivamente.
ENSAIO DE PROLIFERAÇÃO DE CÉLULA [00311] As células HCT116 (5.000 células/poço) em meio McCoy 5A a 80 μΙ que contém FBS a 10% em v/v, 1% em v/v penicilina/estreptomicina e 1% em v/v L-glutamina são incubados em placas de 96 poços com compostos em várias concentrações por 72 horas a 37 O em uma atmosfera com CO 2 a 5%. As diluições de composto são produzidas em 100% DMSO seguido por diluições paralelas nos meios. A concentração final de DMSO em cada poço é 0,05%. Após 72 horas, 20μΙ de uma solução aquosa de 96 titulações celulares (Promega Corporation, Madison, Wl) são adicionados às células, e a placa é incubada a 37 O por mais 4 horas. Em segui da, a absorvência
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132/137 a 490 nm é registrada em um leitor de placa de 96 poços (Spectramax M2, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). A análise de dados é realizada no Microsoft Excel (Microsoft Corp, Redmond, WA).((amostras plasmáticas O.D. - controle positivo de O.D. em média)/(controle negativo de O.D. em média - controle positivo de O.D. em média))*100, em que O.D. é a absorvência em média, controle positivo de O.D. é a absorvência das células incubadas com tricostatina A a 5 μΜ e o controle negativo de O.D. é a absorvência medida a partir de células incubadas sem qualquer composto, é plotada em relação à concentração de composto, e uma IC50 é determinada por interpelação gráfica da concentração exigida para 50% de inibição do crescimento celular.
EFEITO DE INIBIDORES DE HDAC EM EXPRESSÃO DE MRNA DE (FXN) FRATAXINA [00312] Método: Quantificação de mRNA das células neuronals derivadas de iPSC tratadas pelo composto Células-tronco tratadas neuronais foram cultivadas em um meio A Neurobasal (Life technologies nQ 10888022)suplementado com N2, B27 (Life technologies nQ 17502048 e nQ 17504-044), L-glutamina (Life technologies nQ 25030081), suplementados com 20 ng/ml EGF (R&D Systems nQ 236-EG) e 20ng/ml bFGF (BioPioneer nQ HRP-0011). A diferenciação neuronal foi iniciada removendo-se fatores de crescimento e cultivando-se células em Neurobasal A com N2 e B27. Permitiu-se que as células fossem diferenciadas por 16 dias. O composto inibidor de HDAC foi adicionado e incubado por 24 horas. O isolamento de RNA foi realizado com 0 uso do minikit RNeasy Plus (QIAgen nQ 74134) com 0 uso de um instrumento QIAcube de acordo com a instruções do fabricante. A qRT-PCR foi realizada com 0 uso de qScript One-Step SYBR Green qRT-PCR Kit (Quanta Biosciences 170-8893BR) com as seguintes condições: 20 minutos a 50 Ό, 5 minutos a 95 Ό e, em seguida, 4 0 ciclos de 20 segundos a 95 Ό, 20 segundos a 55 Ό, 30 segundos a 72 Ό. As se
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133/137 quências iniciadoras para detectar a expressão de FXN foram: 5’CAGAGGAAACGCTGGACTCT-3’ e 5’-AGCCAGATTTGCTTGTTTGG3’.
[00313] Os dados para os compostos para fold inductions (variações de expressão) de iPSC e cLogP são mostrados Tabela 3. Os dados para compostos adicionais para fold induction de iPSC e cLogP são mostrados na Tabela 4. As faixas relatadas para cLogP se referem ao conteúdo a seguir. A < 1, 1 < B < 2, 2 < C < 3, 3 < D < 5, E >5. NA se refere a não disponível.
TABELA 3
Composto Fold Induction cLogP
146 (Tri-HCI) 1,8 B
147 (Tri-HCI) 1,8 C
171 (Di-HCI) 0,9 C
172 (Di-HCI) 1,4 D
174 (Di-HCI) 1,1 D
354 (base livre) 1,9 E
175 (base livre) 1,5 A
241 (Tri-TFA) 1,9 B
238 1,5 C
176 (Di-TFA) 1,5 B
161 1,2 D
163 1,2 D
169 1,3 C
162 1,3 D
356 2,0 D
357 1,7 D
359 (base livre) 1,9 D
379 (Di-HCI) 2,1 D
181 (base livre) 1,5 C
472 (base livre) 1,5 D
485 (Tri-HCI) 2,2 C
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Composto Fold Induction cLogP
486 1,9 B
477 (racêmico) 1,8 D
478 (racêmico) 2,1 C
480 2,0 C
479 (base livre) 2,2 D
482 (base livre) 1,7 C
481 (base livre) 1,6 D
489 (base livre) 1,5 D
490 (base livre) 1,4 C
491 (base livre) 1,7 D
478-isômero I (base livre) 1,6 C
478-isômero II (base livre) 1,5 C
484 (base livre) 1,6 C
492 (base livre) 1,2 C
483 (base livre) 1,7 D
477-isômero II 1,5 D
477-isômero I 1,4 D
487 (base livre) 1,3 D
488 (base livre) 1,5 C
TABELA 4
Composto Fold Induction cLogP
555 (base livre) 1,11 C
556 (base livre) ΝΑ D
PROTOCOLO PARA A ESTABILIDADE DE COMPOSTO EM HEPATÓCITOS [00314] A fim de avaliar a estabilidade e metabolismo de compostos de RGFP em hepatócitos. Esse ensaio foi projetado a fim de avaliar o metabolismo de compostos de RGFP, em seguida da incubação com um ser humano, macaco, cachorro e hepatócitos de ratos monitoran
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135/137 do-se ou o desaparecimento de fármaco parental ou aparecimento de metabolite com o uso de HPLC.
[00315] Equipamento: LC/MS/MS Tripla Quádrupla da Applied Biosystem; Balde de gelo, temporizador; placas de 96 poços; Falcon, nQ de Catálogo 353072; agitador de placas de 96 poços; Várias pipetas: 10 μΙ, 20 μΙ, 200 μΙ, e 1.000 μΙ; Tubos de ensaio: nQ de Catálogo VWR 47729 a 572, 13x 100 mm [00316] Procedimento: Ligar o aquecedor de banho de água a 37 Ό. Retirar o tampão de KHB e certificar de que está à temperatura ambiente antes do uso. Preparar a concentração de 2,5 mM do composto RGFP em estoque DMSO. Adicionar 10 μΙ de estoque de DMSO acima a tampão de KHB 2.490 μΙ; a concentração final do composto RGFP será 10 μΜ. Pré-aquecer 45 ml de InVitro de Meio HT a 37 Ό em um tubo cônico de 50 ml estéril. Adicionar 1,0 ml de Mistura Torpedo de Antibióticos a cada 45 ml de meio de HT InVitro. Transferir 13 ml de meio de HT morno com Mistura de Antibióticos em um tubo cônico de 15 ml. Cuidadosamente, remover os frascos de hepatócito do nitrogênio líquido (fase líquida). Imergir imediatamente o frasco em um banho de água de 37 Ό. Agitar suavemente até que o gelo derreta completamente. Não manter as células em um banho de água a 37 Ό por mais tempo que o necessário. Esvaziar imediatamente o teor do frasco em 13 ml de Meio de HT InVitro pré-aquecido com antibióticos. Enxaguar o frasco com os meios de HT que para o qual os hepatócitos acabaram de ser transferidos, para garantir a transferência completa. Centrifugar a suspensão celular em 600 RPM por 5 minutos à temperatura ambiente. Descartar o sobrenadante ou vertendo-se em uma movimentação (não verter parcialmente e reinverter o tubo centrífugo) ou aspirando-se com o uso de uma bomba de vácuo. Adicionar 1,0 ml de tampão de KHB (à temperatura ambiente) no tubo de pélete de hepatócito. Afrouxar o pélete de célula turbilhonando-se suavemente o
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136/137 tubo centrífugo. Transferir 100 μΙ da solução acima a um tubo diferente e adicionar 900 μΙ de tampão de KHB para contar as células. Determinar a contagem total de células e o número de células viáveis com o uso do método de exclusão por Azul de Tripano. Quando a contagem de célula é obtida, multiplicar o número por 10 (atribuir a o fator de diluição). Agora, adicionar o volume exigido de tampão de KHB ao tubo que contém hepatócitos de modo que a contagem final seja 2 milhões de células/ml. Dispensar 50 μΙ de 2 milhões de células/ml a uma placa de 96 poços e, em seguida, adicionar 50 μΙ de estoque de DMSO a poços respectivos (de modo que a concentração de compostos de RGFP seja 5 μΜ e o número de células seja 100.000 em cada poço). Colocar as placas em um agitador em um incubador a 37 O com CO 2 a 5%. Placas separadas a cada instante no tempo são recomendadas (Instantes do tempo: 0 h, 1 h, 2 h e 6 h). Após cada instante no tempo, adicionar 100 μΙ de solução de arrefecimento brusco.
[00317] A solução de arrefecimento brusco é uma solução de acetonitrila que contém 0 padrão interno RGFP531 (10 μΜ), ácido fórmico e fenilglioxol a 0,1% (400 μΜ). O ácido fórmico e fenilglioxal é usado para a identificação e quantificação de OPD, conforme mencionado acima. Pipetar para cima e para baixo algumas vezes para garantir uma parada completa de reação. Transferir toda a solução em um tubo de 1,5 ml, submeter a vórtice por completo, e centrifugar a 14.000 RPM a 4 Ό por 5 minutos para precipitar dejetos ce lulares. Transferir os 150 μΙ de sobrenadante aos frascos para análise com 0 uso de HPLC.
EFEITO DE COMPOSTOS NA MEMÓRIA A LONGO PRAZO PARA RECONHECIMENTO DE OBJETO [00318] Os ratos ou camundongos C57BL/6J foram manipulados durante 1 a 2 minutos por 5 dias e habituados ao aparelho experimental 5 minutos por dia por 4 dias consecutivos na ausência de objetos.
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Durante o teste de treinamento, ratos ou camundongos são colocados no aparelho experimental com dois objetos idênticos, e permitiu-se que os mesmos explorassem esses objetivos por 3 minutos, o que não resultou em memória a curto ou longo prazo (Stefanko, et al., 2009). Imediatamente após o treinamento, os ratos ou camundongos receberam injeções subcutâneas ou do veículo (glicerol a 20%, PEG 400 a 20%, poprileno glicol a 20% e acetato de sódio 100 mM, pH 5,4), composto de referência 1, RGFP109, inibidor de HDAC classe I, (3, 10, 30 mg/kg), composto de referência 2, RGFP136 (3, 10, 30 mg/kg) ou um composto de teste revelado no presente documento (3, 10, 30 mg/kg). 24 horas depois, os ratos ou camundongos foram testados quanto á retenção de memória (5 minutos) com o uso da tarefa de reconhecimento de objetos (TRO), na qual um objeto familiar é substituído por um objeto novo. Todos os ensaios de treinamento e de teste são gravados em vídeo e analisados por indivíduos que desconhecem a condição de tratamento e o genótipo dos indivíduos. Um rato ou camundongo é pontuado à medida que explora um objeto quando sua cabeça é orientada em direção ao objeto dentro de uma distância de 1 cm ou quando o nariz estiver tocando objeto. O tempo de exploração relativo é registrado e expresso por um índice de discriminação [Dl = (tnOvo ~ tfamiliar)/(tnovo + tfamiliar) x 100].
[00319] Várias modalidades foram descritas. No entanto, será entendido que várias modificações podem ser feitas sem haver afastamento do espírito do escopo da revelação. Consequentemente, outras modalidades são abrangidas pelo escopo das reivindicações a seguir.

Claims (48)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composto caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma:
    em que o anel A é um anel de heterocicloalquila monocíclico de 4 a
    7 membros ou um anel de heterocicloalquila de 7 a 12 membros espiro, em que o anel A contém um átomo de anel de nitrogênio e, opcionalmente, contém um átomo de anel adicional independentemente selecionado dentre O, N e S;
    R1 é H, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C1-6 hidroxialquila,
    C(O)Ci-6 alquila, C0-3 alquileno-Cs-w cicloalquila, ou C0-3 alquileno-C2-5 heterocicloalquila com 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e N(Ci-4 alquila);
    R2é H, F, Cl, ou CH3;
    R3 é C1-3 alquila;
    R4é H, F, ou Cl; e n é 0, 1, ou 2, com a condição de que (a) 0 anel A não é morfolino ou tiomorfolino; e (b) quando 0 anel A é piperazinila, R1 é C2-6 alquenila, C1-6 hidroxialquila, C(O)Ci-6 alquila, C0-3 alquileno-C3-io cicloalquila, ou alquileno Co-3-ciclo-heteroalquila C2-5 com 1 ou 2 heteroátomos selecionados dentre O, S, N e N(alquila C1-4).
  2. 2. Composto, de acordo coma reivindicação 1, caracteriza- do pelo fato de que R1 é H, C1-6 alquila, C3-6 hidroxialquila, C3-6 alquenila ou C1-2 alquileno-C3-io cicloalquila; R2 é H; R3, se presente, é CH3; e R4é H.
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  3. 3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anel A é um anel de heterocicloalquila espiro de 7 a 12 membros contendo um ou dois átomos de anel de nitrogênio ou um átomo de anel de nitrogênio e um átomo de anel de oxigênio.
  4. 4. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anel A é um anel de heterocicloalquila monocíclico de 4 a 7 membros contendo um ou dois átomos de anel de nitrogênio.
  5. 5. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anel A compreende piperidinila, piperazinila, azetidinila, azepanila, pirrolidinila ou diazepanila.
  6. 6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o anel A compreende piperidinila ou piperazinila.
  7. 7. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anel A é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019013001A2_C0001
    Figure BR112019013001A2_C0002
  8. 8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R1 é H, C1-5 alquila, C3-5 alquenila, C3-6 hidroxialquila ou C1-2 alquileno-Cs-w cicloalquila.
  9. 9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R1 é H, CH3, CH=C(CH3)2, CH2C(CH3)2OH, CH2C(CH3)3, CH2 ciclopropila ou CH2 adamantila.
  10. 10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica
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    3/9 ções 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R1 é H.
  11. 11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R1 é uma C1-6alquila.
  12. 12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R1 é metila, isopropila, secbutila ou CH2C (Chhh·
  13. 13. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R1 é C1-6 hidroxialquila.
  14. 14. Composto, de acordo com a reivindicação 13, caracteri- zado pelo fato de que R1 é .
  15. 15. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R1 é C3-10 cicloalquila ou Ci3 alquileno-Cs-w cicloalquila.
  16. 16. Composto, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que 0 grupo cicloalquila é ciclopropila.
  17. 17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R1 é C0-3 alquileno-Cw cicloalquila.
  18. 18. Composto, de acordo coma reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que r1a~a kâAy ' é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019013001A2_C0003
    Rí
    Figure BR112019013001A2_C0004
    R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em H, CH3,
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    Figure BR112019013001A2_C0005
    R2é H, F, Cl ou CH3;
    R3 é CH3;
    R4 é H ou F; e n é 0, 1 ou 2.
  19. 19. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que
    Figure BR112019013001A2_C0006
    R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em H, CH 3,
    Figure BR112019013001A2_C0007
    R2é H, F, Cl ou CH3;
    R3 é CH3;
    R4 é H ou F; e n é 0, 1 ou 2.
  20. 20. Composto, de acordo coma reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que
    Figure BR112019013001A2_C0008
    R2é H, F, Cl, ou CH3;
    R3 é CH3;
    R4 é H ou F; e n é 0, 1, ou 2.
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  21. 21. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que R2 é H.
  22. 22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que R2 é F.
  23. 23. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que R2 é CH3.
  24. 24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que R3 é CH3.
  25. 25. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que n é 0.
  26. 26. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que n é 1.
  27. 27. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que n é 2.
  28. 28. Composto, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que cada R3 é substituído no mesmo átomo no anel A.
  29. 29. Composto, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que cada R3 é substituído em átomos diferentes no anel A.
  30. 30. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo fato de que R4 é H ou F.
  31. 31. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo fato de que R4 é H.
  32. 32. Composto caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura conforme descrito na Tabela 1 ou na Tabela 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.
  33. 33. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que está na forma de um sal.
  34. 34. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de
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    6/9 que compreende o composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
  35. 35. Método de inibição seletiva de HDAC3 (in vitro ou in vivo), sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende colocar uma célula em contato com uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34.
  36. 36. Método de inibição seletiva de HDAC1 ou HDAC2 (in vitro ou in vivo), caracterizado pelo fato de que compreende colocar uma célula em contato com uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34.
  37. 37. Método de inibição seletiva de HDAC1, HDAC2 e HDAC3 (in vitro ou in vivo), sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende colocar uma célula em contato com uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34.
  38. 38. Método de tratamento de uma doença ou um distúrbio mediado por HDAC1 ou HDAC2 em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34, ao indivíduo.
  39. 39. Método de tratamento de uma doença ou distúrbio mediado por HDAC3 em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma quantidade
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    7/9 eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34, ao indivíduo.
  40. 40. Método de tratamento de uma doença ou distúrbio mediado por HDAC1, HDAC2 e HDAC3 em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34, ao indivíduo.
  41. 41. Método para tratar um distúrbio neurológico, como ataxia de Friedreich, distrofia miotônica, atrofia muscular espinhal, sindrome do X frágil, doença de Huntington, ataxia espinocerebelar, doença de Kennedy, esclerose lateral amiotrófica, Niemann Pick, Pitt Hopkins, atrofia muscular espinhal e bulbar e doença de Alzheimer; uma doença inflamatória; uma afecção de déficit de memória, demência frontotemporal ou uma dependência química em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição, como definida na reivindicação 34.
  42. 42. Método de tratamento da ataxia de Friedreich, distrofia miotônica, atrofia muscular espinhal, sindrome do X frágil, doença de Huntington, ataxia espinocerebelar, doença de Kennedy, esclerose lateral amiotrófica, Niemann Pick, Pitt Hopkins, atrofia muscular espinhal e bulbar ou doença de Alzheimer em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceutica
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    8/9 mente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34.
  43. 43. Método de tratamento de ataxia de Friedreich em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34.
  44. 44. Método de tratamento de uma infecção em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição, como definida na reivindicação 34.
  45. 45. Composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição como definida na reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que é para uso como um medicamento.
  46. 46. Composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição, como definida na reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de um distúrbio neurológico, tal como ataxia de Friedreich, distrofia miotônica, atrofia muscular espinal, síndrome de X frágil, doença de Huntington, ataxia espinocerebelosa, doença de Kennedy, esclerose lateral amiotrópica, Niemann Pick, Pitt Hopkins, atrofia muscular espinal e bulbar e doença de Alzheimer; uma doença inflamatória; uma afecção de déficit de memória, demência frontotemporal ou uma dependência química em um indivíduo com necessidade do mesmo.
  47. 47. Composto, como definido em qualquer uma das reivin
    Petição 870190072298, de 29/07/2019, pág. 150/157
    9/9 dicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição, como definida na reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de ataxia de Friedreich, distrofia miotônica, atrofia muscular espinal, síndrome de X frágil, doença de Huntington, ataxia espinocerebelar, doença de Kennedy, esclerose lateral amiotrópica, Niemann Pick, Pitt Hopkins, atrofia muscular espinal e bulbar ou doença de Alzheimer em um indivíduo com necessidade do mesmo.
  48. 48. Composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 33, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição, como definida na reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de ataxia de Friedreich em um indivíduo com necessidade do mesmo.
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