BR112019010002A2 - métodos para o uso de proteína de ligação galectina-3 detectada na urina para monitoramento da gravidade e progressão da nefrite lúpica - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se a modalidades da presente invenção que descrevem composições e métodos incorporando a medição de lgals3bp na urina de pacientes diagnosticados com nefrite lúpica (nl), a fim de monitorar a gravidade e progressão da nl.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MÉTODOS PARA O USO DE PROTEÍNA DE LIGAÇÃO GALECTINA-3 DETECTADA NA URINA PARA MONITORAMENTO DA GRAVIDADE E PROGRESSÃO DA NEFRITE LÚPICA. REIVINDICAÇÃO PRIORITÁRIA [001] Este pedido reivindica o benefício do pedido provisório de patente US n^Q de série 62/435.235, depositado em 16 de dezembro de 2016, que está aqui incorporado, por referência.

[002] O pedido instantâneo contém uma Listagem de Sequências que foi submetida eletronicamente em formato ASCII e está aqui incorporada a título de referência em sua totalidade. A dita cópia ASCII, criada em 15 de dezembro, 2017, é nomeada P16-214WO_SL.txt e tem 433.834 bites de tamanho.

CAMPO DA INVENÇÃO [003] A invenção refere-se geralmente à detecção de LGALS3BP na urina dentro de metodologias para detecção e monitoramento da progressão da nefrite lúpica (NL).

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [004] O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune caracterizada pela formação de complexos imunes contendo autoanticorpo (ICs) que desencadeiam a inflamação, o dano tecidual e a mortalidade prematura (Tsokos, GC, N Engl J Med (2011); 365:21102121). Os ICs do LES frequentemente contêm ácidos nucleicos que são reconhecidos por vários receptores imunes inatos que podem iniciar mecanismos patológicos, levando a produção de citocinas e, em última análise, a respostas imunes, levando a danos de órgãos. Devido à grande diversidade clínica e natureza idiopática do LES, a gestão de LES depende de suas manifestações específicas e gravidade. Por isso, medicamentos sugeridos para tratar o LES não são necessariamente eficazes para o tratamento de todas as manifestações e complicações

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2/117 como a nefrite lúpica (NL). Acredita-se que a patogênese da NL seja derivada da deposição de complexos imunes nos glomérulos renais que inicia uma resposta inflamatória, causando danos nos rins (Davidson A2016, Nature Reviews Rheumatology 12:143-153). Estima-se que 3060% dos pacientes com LES desenvolvam nefrite durante o curso de sua doença que requer avaliação médica e tratamento. A NL é uma doença progressiva, executando um curso de exacerbações clínicas e remissões. A NL de fase tardia é caracterizada por cicatrizes irreversíveis no rim, que não podem ser tratadas com fármacos atuais para LES, necessitando de um transplante de rim (Lionaki S et al., World Journal of Transplantation, 2014, 4(3): 176-182).

[005] Indicações gerais de nefrite lúpica são urina espumosa ou sangrenta devido à função de filtragem renal comprometida, levando à alta concentração urinária de proteínas. A nefrite lúpica é diagnosticada por biópsia renal (Schwartz N et al., Curr Opin Rheumatol. 2014). A função renal pode ser medida pelos testes de sangue na uréia (BUN), avaliação da creatinina sérica, exame de urina (proteína total, eritrócitos e cilindros celulares), teste de urina para detectar concentração de creatinina e de proteína, ou teste de urina de 24 horas para clearance de creatinina e excreção de proteínas. O acompanhamento adequado da doença renal em NL atualmente não é possível, uma vez que as biópsias são invasivas e geralmente apenas realizadas para o diagnóstico inicial. Embora a função renal possa ser aproximada utilizando testes atuais, todos eles falham para estimar o nível de inflamação causal (Zickert A, et al., Lupus Sci Med 2014, 1:e000018; Alvarado et al. Lupus 2014, 23: 840). Sem a capacidade de avaliar o estado inflamatório do rim, os médicos não podem avaliar com precisão a eficácia de seus tratamentos, pois estes tratamentos são dirigidos para resolver a inflamação em andamento. Monitoramento preciso da inflamação causal no rim pode ajudar médicos com decisões de

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3/117 tratamento agressivo e uma abordagem de tratamento-para-o alvo, de modo a retardar a progressão da doença, melhorando a vida do paciente, e reduzindo os custos dos cuidados com a saúde, evitando a necessidade de transplantes renais caros.

[006] O LES é tratado com antimaláricos, corticosteroides, antiinflamatórios não esteroides (NSAIDs), imunossupressores e os biológicos, como Belimumab (neutralização de BAFF) e Rituximab (depleção de células B). Enquanto muitos pacientes não respondem ou respondem apenas parcial mente para o padrão de tratamento de medicamentos listados acima, o uso prolongado de altas doses de corticosteroides e terapias citotóxicas pode ter profundos efeitos colaterais, como a supressão da medula óssea, aumento de infecções por organismos oportunistas, irreversível falência ovariana, alopecia e aumento do risco de malignidade. Complicações infecciosas coincidentes com LES ativo e seu tratamento com medicamentos imunossupressores são a causa mais comum de morte em pacientes com LES. Portanto, existe a necessidade de diagnósticos alternativos, que podem fornecer melhor um diagnóstico definitivo de LES/LNL e monitorar a atividade da doença para permitir um tratamento agressivo mais direcionado com menos efeitos colaterais.

[007] A proteína de ligação galectina-3 [outros nomes incluem: LGALS3BP (e todos os polimorfismos relacionados), uG3BP, G3BP, Mac2-BP, p90, proteína de ligação 3 solúvel de ligação à lectina galactosídeo, BTBD17B, CyCAP, gp90, antígeno L3, M2BP, proteína de ligação a Mac-2, MAC-2-BP e TANGG10B] é o produto gênico de um gene expresso de forma onipresente que pertence à família de receptores sequestrantes (Koths, K. et al. 1993 J. Biol. Chem. 268:14245). A proteína humana de 585 aminoácidos (AA) contém uma sequência sinal 18 aa e quatro domínios (Hohenester, E. et al. 1999 Nat. Struct. Biol. 6:228; Muller, S. A. et al. 1999 J. Mol. Biol. 291:801;

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Hellstern, S. et al. 2002 J. Biol. Chem. 277:15690). O domínio 1 é um grupo A de domínio de receptores sequestrantes, o domínio 2 é um domínio BTB/POZ que medeia fortemente a dimerização e o domínio 3 é um domínio de IVR, que também é encontrado após o domínio POZ na proteína de Drosophila Kelch. Embora pouco se sabe sobre o domínio 4, os domínios recombinantes 3 e 4 reproduzem o perfil de aderência de fase sólida de galectina-3BP de comprimento completo. A glicosilação em sete sítios N-ligados, gera um tamanho molecular de 85-97 kDa (Ullrich, A. et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:18401). Os dímeros da galectina-3BP formam oligômeros em forma linear e de anel, mais comumente decâmeros e dodecâmeros. LGALS3BP é uma proteína secretada por certos tipos de células tumorais em que níveis de expressão se correlacionam com a progressão tumoral (Grassadonia, A. et al. 2004 Glycoconj. J. 19:551). Além de seu efeito direto sobre a proliferação/ sobrevivência de células tumorais, LGALS3BP também pode regular positivamente a expressão do fator de crescimento endotelial vascular e promover a angiogênese. Seus níveis estão aumentados durante a infecção pelo VIH-1 e acredita-se que a sua atividade reduza a infectividade do vírus HIV-1 através da interferência com a maturação e a incorporação de proteínas de envelope em virions (Lodermeyer V et al. Retrovirology. 2013 24;10:111). Os níveis séricos de LGALS3BP estão aumentados em pacientes com doença de Behcet e se correlacionam com a atividade da doença (Lee YJ et al. Clin Exp Rheumatol. 2007 25(4 Suppl 45):S41 5). Níveis aumentados de LGALS3BP no plasma também são observados em determinadas coortes de pacientes com LES (Nielsen CT et al. Lupus Sci Med. 2014 19;1 (1)). LGALS3BP tem um elemento regulador IRF7 no seu promotor (Heinig M et al. Nature. 2010 23;467(7314):460-4) indicando a regulação pelo IFN tipo I e explicando sua ligação para infecções virais e inflamação.

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5/117 [008] Existe uma necessidade urgente, porém, ainda insatisfeita para uso em medicina clínica e investigação biomédica para melhorar as ferramentas não invasivas para: i) identificar se LES está prestes a se manifestar como NL, ii) avaliar alterações na fisiopatologia renal em NL em indivíduos já diagnosticados com NL e iii) avaliar a progressão/regressão da doença em indivíduos já diagnosticados com NL.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [009] A presente invenção fornece composições e métodos de avaliação do estado de inflamação renal presente e em andamento em um indivíduo mamífero com ou em risco de desenvolver NL, detectando a quantidade (por exemplo, determinação do nível) de proteína de ligação à galectina-3 (LGALS3BP) em uma amostra de fluido corporal. A presente invenção também fornece um método de monitoramento da eficácia de um tratamento para a fisiopatologia renal em NL, determinando o nível de LGALS3BP no fluido corporal antes e, especial mente, após os tratamentos concebidos para tratar as crises associadas com NL. As propriedades e características de LGALS3BP como um marcador preditivo permite a sua utilização desta forma para a detecção precoce de fisiopatologia renal em NL ou mudanças na fisiopatologia renal no status NL no contexto da NL.

[0010] Em uma modalidades, a presente invenção fornece um método para a detecção precoce de uma fisiopatologia renal em NL em um mamífero, compreendendo as etapas de: (i) obter ou fornecer uma amostra de fluido corporal de um mamífero que não está enfrentando uma doença aguda renal em NL, o fluido corporal selecionado do grupo consistindo de urina, plasma e soro; ii) detecção (por exemplo, determinando) o nível de LGALS3BP na amostra (por exemplo, usando um anticorpo contra LGALS3BP); e iii) avaliação da fisiopatologia renal no status NL do indivíduo, com base no nível de LGALS3BP na amostra.

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A avaliação da fisiopatologia renal no status NL pode ser utilizada para determinar se a fisiopatologia renal em NL é subclínica, estável ou progressiva (ou seja, doença renal progressiva). O método também fornece uma avaliação do status renal como uma fisiopatologia renal progressiva ou piorada em NL com apenas uma única amostragem e ensaio.

[0011] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para a detecção de qualquer mudança na fisiopatologia renal no status NL de um mamífero, compreendendo as etapas de: (i) obter uma primeira amostra de um fluido corporal de um mamífero exibindo pelo menos um sintoma de LES, o fluido corporal selecionado do grupo consistindo de urina, plasma e soro (em uma modalidade preferida o dito fluido corporal é urina); ii) detecção (por exemplo, determinando) o nível de LGALS3BP na primeira amostra (por exemplo, usando um anticorpo contra LGALS3BP); iii) obtenção de pelo menos uma amostra subsequente do fluido corporal do mamífero após um período de tempo depois da obtenção da primeira amostra; iv) detecção (por exemplo, determinando) o nível de LGALS3BP em pelo menos uma amostra subsequente (por exemplo, utilizando um anticorpo contra LGALS3PA); e v) avaliação da fisiopatologia renal no status NL do mamífero, baseado na comparação do nível de LGALS3PA em pelo menos uma amostra subsequente ao nível de LGALS3BP na primeira amostra. Geralmente, um nível maior de LGALS3BP na amostra subsequente é uma indicação da piora na fisiopatologia renal no status NL no indivíduo demonstrando pelo menos um sintoma de LES que indica a progressão iminente do LES em NL, enquanto que um nível reduzido ou semelhante de LGALS3BP na amostra subsequente é um indício de uma melhoria na fisiopatologia renal no status NL e um indicador LES do dito indivíduo não está prestes a progredir para o NL.

[0012] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um

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7/117 método para o monitoramento da eficácia de um tratamento para fisiopatologia renal em NL em um mamífero, compreendendo as etapas de: (i) fornecer ou obter uma amostra de avaliação inicial de um fluido corporal de um mamífero experimentando pelo menos um sintoma de NL, o fluido corporal selecionado do grupo consistindo de urina, plasma e soro (em uma modalidade preferida o dito fluido corporal é urina); ii) detectar (por exemplo, determinando) o nível de LGALS3BP na amostra da avaliação inicial (por exemplo, usando um anticorpo contra LGALS3BP); iii) fornecer pelo menos um tratamento para a fisiopatologia renal em NL para o mamífero; iv) fornecer ou obter pelo menos uma amostra pós-tratamento do fluido corporal do mamífero; v) detectar (por exemplo, determinando) o nível de LGALS3BP na amostra pós-tratamento (por exemplo, utilizando um anticorpo contra LGALS3BP); e vi) avaliar a eficácia do tratamento, com base na comparação do nível de LGALS3BP na amostra pós-tratamento para o nível de LGALS3BP na amostra da avaliação inicial.

[0013] Uma modalidade da presente invenção fornece um método para identificar o grau de fisiopatologia renal em NL em um mamífero ao longo do tempo, compreendendo as etapas de: i) obter, pelo menos, uma primeira amostra de um fluido corporal em um primeiro momento de um mamífero que está experimentando pelo menos um sintoma de NL, o fluido corporal selecionado do grupo consistindo de urina, plasma e soro (em uma modalidade preferida o dito fluido corporal é urina); ii) detectar (por exemplo, determinar) o nível de LGALS3BP na primeira amostra (por exemplo, utilizando um anticorpo contra LGALS3BP); iii) obter de pelo menos uma amostra subsequente do fluido corporal em um momento posterior à primeira vez do mamífero; iv) detectar (por exemplo, determinar) o nível de LGALS3BP em pelo menos uma amostra subsequente (por exemplo, utilizando um anticorpo contra LGALS3PA); e v) determinar a extensão da fisiopatologia renal em NL

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8/117 no mamífero ao longo do tempo, com base na comparação do nível de LGALS3BP em pelo menos uma amostra subsequente ao nível de LGALS3BP na primeira amostra.

[0014] Normalmente, o indivíduo mamífero é um ser humano.

Quando mais de uma amostra subsequente é desenhada, elas normalmente são obtidas e fornecidas de forma intermitente a partir do indivíduo, e em horários predeterminados, variando de um ou mais dias, para uma ou mais semanas, para um ou mais meses, a um ou mais anos. Outros regimes de amostragem também podem ser empregados. [0015] Em uma modalidade, o indivíduo mamífero também é avaliado para determinar se o indivíduo está experimentando outra condição que pode contribuir para o nível de LGALS3BP na amostra, tal condição, incluindo, mas limitada a, uma infecção viral ou bacteriana aguda, inflamação aguda, uma lesão aguda ou crônica para outro órgão ou câncer. Tal outra condição pode não afetar ou causar uma lesão ao rim. No entanto, tal condição por conta própria pode contribuir com a quantidade de LGALS3BP detectada na urina, tornando difícil distinguir tal LGALS3BP da LGALS3BP que é expressada como um resultado direto de uma fisiopatologia renal em NL. Alguns tipos de outras condições podem afetar níveis elevados de LGALS3BP que possam sobrecarregar a concentração de LGALS3BP resultante da lesão renal. [0016] Uma variedade de formatos de detecção de proteínas é contemplada, incluindo, mas não limitada a, ELISA (ensaio imunoabsorvente de ligação enzimática), tecnologia de imunoensaio SMC (contagem de molécula única) e Western Blot.

[0017] Em algumas modalidades, dispositivos de ensaio, em particular dispositivos ELISA, incluem placas de microtitulação revestidas. Em algumas modalidades, um reagente de captura (ou seja, anticorpo LGALS3BP) é aplicado nos poços de uma placa de microtitulação. Neste ensaio, uma amostra de teste (por exemplo,

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9/117 sangue ou urina) contendo potencialmente um analito de interesse (por exemplo, LGALS3BP) é colocada nos poços de uma placa de microtitulação que contêm o reagente de captura imobilizado. O analito liga especificamente o anticorpo imobilizado; em seguida, os materiais não ligados são lavados, deixando principalmente o complexo analitoanticorpo ligado à placa. Este complexo pode ser detectado em uma variedade de maneiras, como através do uso de um reagente detector rotulado, por exemplo, rotulado como anticorpo LGALS3BP. Uma vantagem do formato de placa de microtitulação é que várias amostras podem ser testadas simultaneamente (em conjunto com controles) cada uma em um ou mais poços diferentes da mesma placa; permitindo, assim, a análise de alta velocidade de diversas amostras.

[0018] Em algumas modalidades, um ensaio ELISA competitivo é utilizado (ver, por exemplo, patente US Nos. 5.958.715 e 5.484.707, cada uma das quais estão aqui incorporadas por referência. O ELISA competitivo pode ser quantitativo ou não quantitativo. Em um ELISA competitivo, os poços de uma placa de microtitulação são revestidos primeiro com uma proteína de fusão compreendendo todos ou um fragmento de LGALS3BP. A amostra a ser testada é adicionada à placa junto com um anticorpo que é específico para LGALS3BP. O LGALS3BP na amostra compete para ligação ao anticorpo com o peptídeo imobilizado. A placa é lavada e o anticorpo ligado ao LGALS3BP imobilizado, o polipeptídeo é então detectado usando qualquer método adequado (por exemplo, um anticorpo secundário compreendendo um marcador ou um grupo reativo com um sistema de detecção enzimático). A quantidade de sinal é inversamente proporcional à quantidade de LGALS3BP presente na amostra (por exemplo, um sinal alto é indicativo de quantidades baixas de LGALS3BP estando presente na amostra).

[0019] Em algumas modalidades, os dispositivos de imunoensaio

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10/117 da presente invenção permite o desempenho de ensaios baseados em membrana de custo relativamente baixo, descartáveis, para a identificação visual da presença (ou ausência) de um analito em uma amostra líquida. Tais dispositivos são normalmente formatados como varetas de nível independente (por exemplo, tiras de teste) ou como dispositivos tendo algum tipo de alojamento. Geralmente, um dispositivo de imunoensaio da presente invenção pode ser usado com tão pouco como cerca de 200 microlitros de amostra líquida, e a detecção de um analito na amostra pode (mas não precisa) ser concluída dentro de 2-5 minutos. Em modalidades preferidas, não são necessários instrumentos auxiliares para realizar tais testes, e tais dispositivos podem ser facilmente usados em clínicas, laboratórios e locais de campo.

[0020] Em algumas modalidades, o ELISA é um ensaio imunocromatográfico intercalado. Em geral, procedimentos imunocromatográfico sanduíche exigem a mistura da amostra que possa conter a substância para ser avaliada, por exemplo, LGALS3BP, com um anticorpo específico para LGALS3BP. O anticorpo, ou seja, reagente detector, é móvel e normalmente está associado a um marcador ou um outro reagente de sinalização, como, por exemplo, látex tingido, um metal coloidal sol, ou um radioisótopo. Esta mistura é então aplicada a um meio cromatográfico contendo uma faixa ou zona de anticorpos imobilizados que reconhecem LGALS3BP (ou seja, o anticorpo de captura ou reagente). Meio cromatográfico muitas vezes está sob a forma de uma tira que se assemelha a uma vareta. Quando o complexo de LGALS3BP e o reagente detector atinge a zona do anticorpo de captura imobilizado no meio cromatográfico, a ligação ocorre e o complexo reagente detector está localizado na zona. Isso indica a presença da molécula a ser avaliada. Esta técnica pode ser usada para obter resultados quantitativos ou semiquantitativos. Exemplos de imunoensaios sanduíche realizados em tiras de teste são

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11/117 descritos na patente US Nos. 4.168.146 e 4.366.241 que estão aqui incorporados por referência.

[0021] Em algumas modalidades um formato Western blot é usado para a detecção de proteínas de interesse. Western Blot referese à análise de proteína(s) (ou polipeptídeos) imobilizadas em um suporte, como nitrocelulose ou uma membrana. As proteínas são executadas em géis de acrilamida para separar as proteínas, seguido por transferência das proteínas do gel para um suporte sólido, como, por exemplo, uma nitrocelulose ou uma membrana de náilon. As proteínas imobilizadas são então expostas aos anticorpos com reatividade contra um antígeno de interesse. A ligação dos anticorpos pode ser detectada por vários métodos, incluindo o uso de anticorpos radiomarcados.

[0022] Em outra modalidade da presente invenção, é fornecido um método para gerar um resultado útil no diagnóstico e monitoramento não invasivo de patologia renal utilizando amostras obtidas a partir de um indivíduo mamífero. O método inclui: obtenção de um conjunto de dados associado com as amostras, em que o conjunto de dados compreende níveis de expressão de proteínas para marcadores selecionados do grupo consistindo de: creatinina urinária e proteinúria expressadas como uma razão de proteínas na urina: creatinina (uPCR); e introdução do conjunto de dados em um processo analítico que utiliza os dados para gerar um resultado útil no diagnóstico e monitoramento da patologia renal.

[0023] Em algumas modalidades, a definição de nefrite lúpica compreende um ou mais de: nefrite lúpica, glomerulonefrite de complexo imune idiopático, nefrite glomerular, nefrite túbulo-intersticial. [0024] Em algumas modalidades, os aspectos de diagnóstico da presente invenção podem informar melhor quando biópsias renais invasivas e/ou alterações nos regimes terapêuticos devem ser

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12/117 considerados. Uma biópsia renal diagnostica deve ser feita para orientar a terapia quando um paciente com lúpus apresenta evidências clínicas de nova inflamação nos rins, como a detecção de níveis aumentados de LGALS3BP como fornecido pelas modalidades de diagnóstico da presente invenção.

[0025] Em algumas modalidades a classificação renal de nefrite lúpica compreende uma ou mais de:

[0026] Doença de Classe I (glomerulonefrite mesangial mínima) na sua histologia tem uma aparência normal sob um microscópio de luz, mas depósitos mesangsiais são visíveis sob um microscópio eletrônico. Nesta fase, a urinálise é normal.

[0027] Doença de Classe II (glomerulonefrite proliferativa mesangial) é observada pela hipercelularidade mesangial e expansão de matriz. Hematúria microscópica com ou sem proteinúria pode ser vista. Hipertensão arterial, síndrome nefrótica e insuficiência renal aguda e são muito raras neste estágio.

[0028] Doença de Classe III (glomerulonefrite focal) é indicada por lesões escleróticas envolvendo menos de 50% dos glomérulos, que podem ser segmentar ou globais, e ativas ou crônicas, com lesões proliferativas endocapilares ou extracapilares. Sob a microscopia eletrônica, depósitos subendoteliais são observados, e algumas alterações mesangiais podem estar presentes. Imunofluorescência revela positiva para IgG, IgA, IgM, C3 e C1q (indicativo de depósitos de complexos imunes). Clinicamente, hematúria e proteinúria estão presentes, com ou sem síndrome nefrótica, hipertensão arterial e níveis elevados de creatinina sérica. Nefrite lúpica proliferativa difusa como vista em espécime de patologia.

[0029] Doença de Classe IV (nefrite proliferativa difusa) é o subtipo mais grave e o mais comum. Mais de 50% dos glomérulos estão envolvidos. Lesões podem ser segmentares ou globais, e ativas ou

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13/117 crônicas, com lesões proliferativas endocapilares ou extracapilares. Sob microscopia eletrônica, depósitos subendoteliais são observados, e algumas alterações mesangiais podem estar presentes. Clinicamente, hematúria e proteinúria estão presentes, frequentemente com síndrome nefrótica, hipertensão, hipocomplementemia, titulações elevadas de anti-dsDNA e creatinina sérica elevada.

[0030] Doença de Classe V (glomerulonefrite membranosa) é caracterizada por espessamento difuso da parede capilar glomerular (segmentalmente ou globalmente), com espessamento da membrana difusa e depósitos subepiteliais vistos sob o microscópio eletrônico. Clinicamente, o estágio V apresenta sinais de síndrome nefrótica. Hematúria microscópica e hipertensão arterial também podem ser vistas. O estágio V também pode levar a complicações trombóticas como trombose de veia renal ou embolia pulmonar.

[0031] Classe VI ou nefrite lúpica esclerosante avançada. Ela é representada por esclerose global envolvendo mais de 90% dos glomérulos, e representa a cura da lesão inflamatória prévia. Glomerulonefrite ativa não está normalmente presente. Este estágio é caracterizado por disfunção renal lentamente progressiva, com sedimento urinário relativamente brando. Resposta à imunoterapia é geralmente pobre. Uma inclusão tubulorreticular dentro de células do endotélio capilar é também característica de nefrite lúpica, e pode ser vista sob um microscópio eletrônico em todos os estágios. Não é, no entanto, diagnóstico, pois existe em outras condições, como a infecção pelo HIV. É pensado para ser devido à exposição crônica ao interferon. [0032] Conforme apresentado nos dados no pedido imediato, salvo indicação em contrário, LGALS3BP é medido em ng/ml. As razões LGALS3BP/creatinina são ng de LGALS3BP/mg de creatinina por ml de urina.

[0033] Em algumas modalidades, a fisiopatologia renal em NL de

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14/117 nefrite lúpica compreende um ou mais de: presença de depósitos imunes mesangiais, presença de depósitos imunes subendoteliais, presença de depósitos imunes subepiteliais, inflamação túbulointersticial, fibrose túbulo-intersticial, esclerose túbulo-intersticial, esclerose, glomerulonefrite crescêntica (presença de lesões cresceênticas ou proliferação extracapilar), proliferação extracapilar, proliferação endocapilar, glomerulonefrite proliferativa, glomerulopatia focal (ou glomerulonefrite focal), glomerulopatia focal segmentar (ou glomerulonefrite focal segmentar), glomerulopatia segmentar (ou glomerulonefrite segmentar), glomerulopatia membranosa, anormalidades da membrana basal glomerular (como espessamento), glomerulosclerosis (ou esclerose glomerular), hipercelularidade mesangial (ou proliferação mesangial), expansão da matriz mesangial, fibrose mesangial.

[0034] Em algumas modalidades, o processo analítico é um modelo de Análise Discriminante Linear. Além disso, em algumas modalidades, o processo analítico pode incluir o uso de um modelo preditivo. Em algumas modalidades, o processo analítico compreende comparar os conjuntos de dados obtidos com um conjunto de dados de referência.

[0035] Em algumas modalidades, o conjunto de dados de referência compreende os níveis de expressão de proteínas obtidas a partir de um ou mais indivíduos de controle saudáveis. Em outras modalidades, o método inclui ainda a obtenção de uma medida estatística de uma similaridade dos conjuntos de dados obtidos para o conjunto de dados de referência.

[0036] Em algumas modalidades, o método compreende ainda o uso da classificação para o diagnóstico, estadiamento, prognóstico, os níveis de inflamação renal, avaliando a extensão da progressão, monitorando uma resposta terapêutica, prevendo um episódio de inflamação intersticial-renal (INF), ou distinguindo manifestações

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15/117 instáveis ou estáveis de inflamação intersticial renal (INF) em indivíduos apresentando pelo menos um sintoma de NL.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0037] A Figura 1 mostra os níveis de expressão de mRNA de LGALS3BP em CMSPs isoladas de pacientes com HC e NL com assinatura de IFN-a baixa ou alta.

[0038] A Figura 2A apresenta dados mostrando que LGALS3BP é induzido por estímulos inflamatórios, incluindo, mas não limitado a, IFNa com expressão de LGALS3BP por QPCR usando RNA extraído de macrófagos humanos primários diferenciados in vitro ativados com estímulos indicados para 6h. Expressão entre as amostras foi normalizada utilizando HPRT1 como um gene constitutivo.

[0039] A Figura. 2B apresenta dados adicionais mostrando que LGALS3BP é induzido por estímulos inflamatórios, incluindo, mas não limitado a, IFN-a com LGALS3BP medido por ELISA em sobrenadantes de macrófagos humanos primários diferenciados in vitro ativados com estímulos indicados para 20h.

[0040] A Figura 3 mostra níveis de proteína LGALS3BP no soro, urina e plasma. Os níveis de LGALS3BP no plasma e urina foram medidos em doadores de controle saudáveis, pacientes com LES e NL por ELISA. Os níveis de proteína urinária LGALS3BP foram significativamente maiores (P<0,0001, ANOVA de um fator com pósteste de Tukey) em pacientes NL vs pacientes LES ou controles saudáveis. Esta diferença não é observada em amostras de soro obtidas a partir dos mesmos indivíduos. Não existe correlação linear entre os níveis de plasma e urina.

[0041] A Figura 4A mostra níveis de expressão do gene de LGALS3PA no glomérulo e túbulo-intersticial de secções de tecido renal de pacientes com HC e NL. Um total de 46 amostras (n=14 HC e 32 NL) do Banco europeu de cDNA renal foram processadas e utilizadas para

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16/117 análise de microarranjo conforme descrito (Berthier et al., Jl 2012). Secções de biópsia foram micro dissecadas manualmente em compartimentos glomerulares e túbulo-intersticiais em perfil da expressão gênica foi realizado utilizando-se os arranjos Human Genome U133A Affymetrix GeneChip, em que os níveis de expressão do gene para LGALS3BP foram significativamente maiores em ambos os glomérulos (p = 9.221 e-12) e os túbulo-intersticiais (p = 1,511e-4), em comparação com HC.

[0042] A Figura 4B mostra níveis de expressão do gene de CCL2 (MCP-1) no glomérulo e túbulo-intersticial de biópsias renais de pacientes com HC e NL. Um total de 46 amostras (n=14 HC e 32 NL) do Banco europeu de cDNA renal foram processadas e utilizadas para análise de microarranjo conforme descrito (Berthier et al., JI 2012). Secções de biópsia foram manualmente micro dissecadas em compartimentos do glomérulo e túbulo-intersticial e perfil da expressão gênica foi realizado usando os arranjos Human Genome U133A Affymetrix GeneChip, em que os níveis de expressão do gene para CCL2 (MCP-1) não foram equivalentes entre amostras HC e NL em ambos os glomérulos e túbulo-intersticiais.

[0043] A Figura 4C mostra níveis de expressão do gene de TNFSF12 no glomérulo e túbulo-intersticial de biópsias renais de pacientes com HC e NL. Um total de 46 amostras (n=14 HC e 32 NL) do Banco europeu de cDNA renal foram processadas e utilizadas para análise de microarranjo conforme descrito (Berthier et al., Jl 2012). Secções de biópsia foram micro dissecadas manualmente em compartimentos glomerulares e túbulo-intersticiais em perfil da expressão gênica foi realizado utilizando-se os arranjos Human Genome U133A Affymetrix GeneChip, em que os níveis de expressão do gene para TNFSF12 foram significativamente maiores nos glomérulos NL (p = 0,017), mas significativamente menores nos túbulos

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17/117 intersticiais (p=9,08e-5).

[0044] A Figura. 4D mostra a expressão da proteína de ligação galectina-3 em biópsias renais de voluntários saudáveis (HC), pacientes com NL com e sem nefrite túbulo-intersticial (TIN), pacientes com diabetes mellitus (DM) e nefropatia por IgA (IgAN). A proteína de ligação galectina-3 (áreas claras) foi corada com anticorpos analisados por microscopia de fluorescência.

[0045] A Figura 5 mostra a expressão de mRNA de LGALS3BP no modelo de camundongo NL BXSB-Yaa. Camundongos doentes foram sacrificados com 20 semanas de idade e a expressão renal de LGALS3BP analisada por NanoString e normalizada para expressão hprtl. Camundongos de controle são camundongos jovens BXSX-Yaa (9 semanas) antes do aparecimento da doença. Dano renal foi avaliado pela histologia.

[0046] A Figura 6A mostra LGALS3BP total normalizado para razões de creatinina urinária na urina de doadores de controles saudáveis (HC), com nefrite lúpica (NL) e lúpus eritematoso sistêmico (LES).

[0047] A Figura 6B mostra razões de proteína total para creatinina na urina de doadores de controles saudáveis (HC), com nefrite lúpica (NL) e lúpus eritematoso sistêmico (LES).

[0048] A Figura 6C mostra razões de albumina urinária para creatinina na urina de doadores de controles saudáveis (HC), com nefrite lúpica (NL) e lúpus eritematoso sistêmico (LES).

[0049] A Figura 7A mostra as correlações de medições de urinálise, em que as razões de albumina para creatinina e razões de proteína total para creatinina correlacionaram-se bem uma a outra com um coeficiente de correlação de 0,95.

[0050] A Figura 7B mostra as correlações de medições da urinálise, em que as razões de LGALS3BP para creatinina se correlacionam

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18/117 positivamente com a proteína total de razões de creatinina (R = 0,494). [0051 ] A Figura 7C mostra as correlações de medições da urinálise, em que as razões de LGALS3BP para creatinina se correlacionam positivamente com as razões de albumina para creatinina (R = 0,484). [0052] A Figura 8A mostra alterações nas medições da proteína urinária em pacientes em várias visitas. Todos os valores são apresentados como normalizado para os níveis de creatinina. Cada ponto representa uma amostra e cada linha representa um doador. A cor da linha representa o grupo de doença com amostras NL de cor roxa, amostras LES de cor ciano, amostras HC de cor cinza escuro.

[0053] A Figura 8B mostra alterações nas medições de albumina em pacientes em várias visitas. Todos os valores são apresentados como normalizado para os níveis de creatinina. Cada ponto representa uma amostra e cada linha representa um doador. A cor da linha representa o grupo de doença com amostras NL de cor roxa, amostras LES de cor ciano, amostras HC de cor cinza escuro.

[0054] A Figura 8C mostra alterações nas medições de LGALS3BP em pacientes em várias visitas. Todos os valores são apresentados como normalizado para os níveis de creatinina. Cada ponto representa uma amostra e cada linha representa um doador. A cor da linha representa o grupo de doença com amostras NL de cor roxa, amostras LES de cor ciano, amostras HC de cor cinza escuro.

[0055] A Figura 9 mostra as curvas de ligação de determinados anticorpos monoclonais anti-LGALS3BP. Diluições em série de anticorpos monoclonais identificados em telas de biblioteca fagos de anticorpos foram testadas para ligação em um ELISA utilizando placas de microtitulação revestidas com LGALS3BP humano recombinante de comprimento total. A ligação do anticorpo monoclonal ao LGALS3BP ligado à placa foi detectada com um anticorpo secundário anti-lg, conjugado com peroxidase de rábano silvestre (HRP). A ligação foi

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19/117 revelada utilizando substrato HRP e a densidade óptica foi medida a 450 nm.

[0056] A Figura 10A e a Figura 10B mostram o anticorpo monoclonal anti-LGALS3BP se emparelhando para ELISA sanduíche. 100 ng/mL de LGALS3BP recombinante (Figura 10B) foi utilizado como analito e comparado para tamponar apenas o controle (Figura 10A). Os anticorpos foram conjugados para microesferas e testados em um ensaio multiplex Luminex para determinar os melhores pares. Cada anticorpo foi detectado em um canal diferente, permitindo a avaliação dos pares no mesmo ambiente. Os valores são unidades arbitrárias do leitor Luminex. As colunas são anticorpos de captura, as linhas são anticorpos de detecção.

[0057] A Figura 11A mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb1-mAb9). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0058] A Figura 11B mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb3-mAb11). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0059] A Figura 11C mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar

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LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb3-mAb22). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0060] A Figura 11D mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA intercalado para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb114-mAb116). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0061] A Figura 12A mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb103-mAb116). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0062] A Figura 12B mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb109-mAb116). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

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21/117 [0063] A Figura 12C mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb110-mAb116). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0064] A Figura 12D mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb112-mAb116). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0065] A Figura 13A mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb105-mAb116). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0066] A Figura 13B mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb29-mAb116). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de

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22/117 controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0067] A Figura 13C mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb113-mAb116). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0068] A Figura 13D mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb102-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0069] A Figura 14A mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb103-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0070] A Figura 14B mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de

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23/117 captura - mAb de detecção (ou seja, mAb109-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0071] A Figura 14C mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb114-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0072] A Figura 14D mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb110-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES). Pacientes (LES).

[0073] A Figura 15A mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb116-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0074] A Figura 15B mostra um par de anticorpos monoclonais

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24/117 avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb112-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0075] A Figura 15C mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb105-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0076] A Figura 15D mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb25-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0077] A Figura 16A mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb26-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e

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25/117 pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0078] A Figura 16B mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb29-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0079] A Figura 16C mostra um par de anticorpos monoclonais avaliados para uso em um ELISA sanduíche para capturar e detectar LGALS3BP em amostras de urina humana. Os gráficos são derivados de experimentos de emparelhamento Luminex. É mostrado mAb de captura - mAb de detecção (ou seja, mAb113-mAb103). As concentrações de LGALS3BP são em ng/ml para amostras de urina de controles saudáveis (saudáveis), pacientes com nefrite lúpica (NL) e pacientes com lúpus eritematoso sistêmico extrarrenal (LES).

[0080] A Figura 17 apresenta os dados que mostram que LGALS3BP é estável na urina sob diferentes condições de armazenamento. Amostras de urina de 3 pacientes com NL (armazenado a -80C) foram descongeladas e armazenadas sob diferentes condições: congelamento-descongelamento repetidos, temperatura ambiente por 1h ou 18h, 37C ou 4C ou -20C durante a noite. Os níveis de LGALS3PA em amostras de urina foram medidos por ELISA sanduíche. São apresentadas média + EPM das duplicatas técnicas de 3 pacientes com NL.

[0081] A Figura 18 mostra que as concentrações urinárias de LGALS3BP (ng/ml) são significativamente elevadas em pacientes com NL de diferentes coortes de pacientes. LGALS3PA foi medido com nosso kit protótipo em amostras de urina de controles e pacientes

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26/117 indicados. Pacientes com NL foram obtidos de duas coortes diferentes, de dois locais diferentes nos EUA. Os níveis de LGALS3BP são significativamente mais elevados em ambas as coortes NL em comparação com todos os outros grupos (P<0,0001, ANOVA de um fator com teste de comparações múltiplas de Tukey). A área cinza representa a faixa de amostras controle sadias.

[0082] A Figura 19 apresenta razões de LGALS3BP para creatinina em amostras de urina de HC, LES, NL e IgAN.

[0083] A Figura 20 apresenta os mesmos dados da Figura 19 reformatados de modo que a razão de proteína urinária para creatinina (UPCR) seja a métrica apresentada no eixo y.

[0084] Na Figura 21 A, LGALS3BP mostra uma melhor separação de pacientes com NL dos pacientes com LES extrarrenal e controles saudáveis que CCL2 (MCP-1). LGALS3BP urinária foi medida em amostras de grupos indicados e normalizada para os níveis de creatinina urinária. ** P<0,01, *** P<0,00001, ANOVA de um fator com teste de comparações múltiplas de Tukey.

[0085] Na Figura 21B, LGALS3BP mostra uma melhor separação de pacientes com NL dos pacientes LES extrarrenal e controles saudáveis que CCL2 (MCP-1). CCL2 (MCP-1) urinária foi medida em amostras de grupos indicados e normalizada para os níveis de creatinina urinária. ** P<0,01, *** P<0,00001, ANOVA de um fator com teste de comparações múltiplas de Tukey.

[0086] A Figura 22A e Figura 22B descreveram dados confirmando que a detecção de LGALS3BP urinária dá melhor sensibilidade e especificidade para detectar NL do que CCL2 (MCP-1). As curvas de características de operação do receptor (ROC) de razões urinárias de LGALS3BP/creatinina (Cr) e CCL2 (MCP-1 )/creatinina para distinguir NL de controles saudáveis (HC) ou LES extrarrenal (LES).

[0087] A Figura 23A mostra as correlações de medições de

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27/117 urinálise, em que as razões de albumina para creatinina e razões de proteína total para creatinina se correlacionaram de perto uma a outra com um coeficiente de correlação de 0,965.

[0088] A Figura 23B mostra as correlações das medições de urinálise (usando os reagentes associados ao kit de diagnóstico apresentado na seção Experimental do pedido), em que as razões de LGALS3BP para creatinina mostram correlação positiva fraca com as razões de proteína total para creatinina (r = 0,494).

[0089] A Figura 24 mostra as correlações das medições de urinálise (usando os reagentes associados ao kit de diagnóstico apresentado na seção Experimental do pedido), em que as razões de LGALS3BP para creatinina mostram correlação positiva fraca com as razões de albumina para creatinina (r = 0,484).

[0090] A Figura 25 descreve dados mostrando as razões de LGALS3BP /creatinina urinária em diferentes grupos de doenças renais. O gráfico mostra o aumento dos níveis de LGALS3BP preferencial mente em NL quando ativo (queima). Isto mostra um padrão específico de doença na expressão de uG3BP e de uma tendência que é acionada por inflamação ativa no contexto da NL.

[0091] A Figura 26A mostra as médias para as razões de LGALS3BP /creatinina urinária em diferentes grupos de doenças renais. As concentrações de LGALS3BP urinária (ng/ml) foram normalizadas para a concentração de creatinina (mg/ml), log natural transformado e valores discrepantes foram excluídos para a análise dos dados. JMP pro v12 é utilizado incluindo ANOVA e comparações múltiplas não paramétricas de Wilcoxon.

[0092] A Figura 26B mostra os valores de p significativos entre os grupos de comparação. Os dados de LGALS3BP urinário foram normalizados para a concentração de creatinina, log natural transformado e valores discrepantes foram excluídos para a análise dos

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28/117 dados. JMP pro v12 é utilizado incluindo ANOVA e comparações múltiplas não paramétricas de Wilcoxon.

[0093] A Figura 27A, 27B e 27C mostram fraca correlação positiva entre as razões de LGALS3BP /creatinina urinária e proteínas urinária/creatinina em NL, independentemente do estado de doença (todos, ativos ou em remissão) [0094] A Figura 28A mostra para as razões da proteína urinária para creatinina (UPCR) na classificação da Sociedade Internacional de Nefrologia (ISN)/Sociedade de Patologia Renal (RPS) de NL na doença ativa versus pacientes em remissão. UPCR está associada com danos renais e sempre maior na doença ativa independentemente da classe ISN/RPS.

[0095] A Figura 28B mostra as razões de LGALS3BP / creatinina urinária na classificação da Sociedade Internacional de Nefrologia (ISN)ZSociedade de Patologia Renal (RPS) de NL na doença ativa versus pacientes em remissão. Os níveis de LGALS3BP /creatinina urinária estão elevados na doença ativa em comparação com remissão na classe II a IV, mas não V. Classe II a IV são formas inflamatórias de NL enquanto classe V é menos inflamatória, apoio adicional para LGALS3BP urinária sendo uma leitura de inflamação ativa no rim.

[0096] A Figura 29 mostra a variação, ao longo do tempo, dos níveis de LGALS3BP /creatinina urinária em pacientes com NL. A urina de pacientes com NL foi monitorada mensalmente.

[0097] A Figura 30 mostra como o início dos tratamentos específicos para NL reduz os níveis urinários de LGALS3BP ao longo do tempo. Especificamente, pacientes com NL recém-diagnosticados foram colocados em tratamento Eurolupus (específico) e os níveis urinários de LGALS3PA rastreados ao longo do tempo.

[0098] A Figura 31 se refere ao Gráfico da curva de referência típica da Tabela 9

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DESCRIÇÃO DETALHADA [0099] Em todo este relatório, salvo indicação ao contrário ou o contexto exija o contrário, referência a uma única etapa, composição da matéria, grupo de etapas ou grupo de composições da matéria será considerada como abrangendo uma pluralidade (ou seja, uma ou mais dessas etapas) dessas etapas, composições da matéria, grupos de etapas ou grupos de composições da matéria. Assim, como usado aqui, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem aspectos no plural, a menos que o contexto determine claramente o contrário. Para a modalidade, a referência a uma inclui uma única bem como duas ou mais; a referência a um inclui um único bem como dois ou mais; a referência a a inclui uma única bem como duas ou mais e assim por diante.

[00100] Cada modalidade da presente descrição aqui descrita é para ser aplicada, com as devidas modificações, a cada e todas outras modalidades, salvo indicação ao contrário.

[00101] Os versados na técnica compreenderão que a descrição aqui é suscetível às variações e modificações do que aquelas especificamente descritas. É para ser entendido que a descrição inclui todas essas variações e modificações. A descrição também inclui todas as etapas, recursos, composições e compostos referidos ou indicados no relatório descritivo, individual ou coletivamente, e qualquer e todas as combinações ou quaisquer duas ou mais dessas etapas ou desses recursos.

[00102] A presente descrição não deve ser limitada no escopo pelas modalidades específicas descritas aqui, que são destinadas com o propósito de exemplificação apenas. Produtos equivalentes funcionalmente, composições e métodos estão claramente no escopo da descrição, conforme descrito aqui.

[00103] A presente descrição é realizada sem experimentação

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30/117 indevida usando, salvo indicação em contrário, as técnicas convencionais de biologia molecular, microbiologia, virologia, tecnologia de DNA recombinante, síntese de peptídeo em solução, síntese de peptídeo em fase sólida e imunologia. Tais procedimentos são descritos, por modalidade, em Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York, Segunda Edição (1989), todos os Vols I, II, e III; Benny K. C. Lo, Antibody Engineering: Methods and Protocols, (2004) Humana Press, Vol. 248; DNA Cloning: A Practical Approach, Vols. I e II (D. N. Glover, ed., 1985), IRL Press, Oxford, todo o texto; Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach (M. J. Gait, ed, 1984) IRL Press, Oxford, todo o texto, e particularmente as folhas nele por Gait, pg 1-22; Atkinson et al., pg 35-81; Sproat et al., pp 83-115; e Wu et al., pg 135-151; Nucleic Acid Hybridization: A Practical Approach (B. D. Hames & S. J. Higgins, eds., 1985) IRL Press, Oxford, todo o texto; Immobilized Cells and Enzymes: A Practical Approach (1986) IRL Press, Oxford, todo o texto; Perbal, B., A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Methods In Enzymology (S. CoIowick and N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.), toda a série; J. F. Ramalho Ortigao, “The Chemistry of Peptide Synthesis” In: Knowledge database of Access to Virtual Laboratory website (Interactiva, Germany); Sakakibara Biochem. Biophys. Res. Commun 73: 336-342, 1976; Merrifield J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2154, 1963; Barany and Merrifield (1979) em The Peptides (Gross, E. and Meienhofer, J. eds.), vol. 2, pg. 1-284, Academic Press, New York. 12. Wunsch, E., ed. (1974) Synthese von Peptiden in Houben-Weyls Metoden der Organischen Chemie (Müller, E., ed.), vol. 15, 4^a ed., Partes 1 e 2, Thieme, Stuttgart; Bodanszky, M. (1984) Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Heidelberg; Bodanszky, M. & Bodanszky, A. (1984) The Practice of Peptide Synthesis, SpringerVerlag, Heidelberg; Bodanszky Int. J. Peptide Protein Res. 25: 449-474,

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1985; Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986, Blackwell Scientific Publications); e Animal Cell Culture: Practical Approach, 3^a ed (John R. W. Masters, ed., 2000), ISBN 0199637970, todo o texto.

[00104] Em todo este relatório descritivo, a palavra compreender, ou variações como compreende e compreendendo, será entendida como implicando a inclusão de um elemento indicado, de número inteiro ou etapa, ou grupo de elementos, de números inteiros ou etapas, mas não a exclusão de qualquer outro elemento, número inteiro ou etapa, ou grupo de elementos, números inteiros ou etapas.

[00105] Modalidades preferidas da presente invenção são baseadas no papel que LGALS3BP desempenha como um marcador preditivo em níveis quantitativos de inflamação renal em NL.

[00106] Uma sequência exemplificadora polipeptídica de LGALS3BP humana de comprimento total (SEQ ID NO: 1) é da seguinte forma: MTPPRLFWVWLLVAGTQGVNDGDMRLADGGATNQGRVEIFYRGQ WGTVCDNLWDLTDASVVCRALGFENATQALGRAAFGQGSGPIMLDE VQCTGTEASLADCKSLGWLKSNCRHERDAGVVCTNETRSTHTLDLS RELSEALGQIFDSQRGCDLSISVNVQGEDALGFCGHTVILTANLEAQA LWKEPGSNVTMSVDAECVPMVRDLLRYFYSRRIDITLSSVKCFHKLA SAYGARQLQGYCASLFAILLPQDPSFQMPLDLYAYAVATGDALLEKL CLQFLAWNFEALTQAEAWPSVPTDLLQLLLPRSDLAVPSELALLKAV DTWSWGERASHEEVEGLVEKIRFPMMLPEELFELQFNLSLYWSHEA LFQKKTLQALEFHTVPFQLLARYKGLNLTEDTYKPRIYTSPTWSAFVT DSSWSARKSQLVYQSRRGPLVKYSSDYFQAPSDYRYYPYQSFQTP QHPSFLFQDKRVSWSLVYLPTIQSCWNYGFSCSSDELPVLGLTKSG GSDRTIAYENKALMLCEGLFVADVTDFEGWKAAIPSALDTNSSKSTS SFPCPAGHFNGFRTVIRPFYLTNSSGVD

Definições [00107] Inflamação é usada aqui no sentido médico geral da palavra, e pode ser um; aguda ou crônica supurativa ou simples; localizada ou disseminada; resposta celular e tecidual iniciada ou sustentada por qualquer número de agentes químicos, físicos ou biológicos ou combinação de agentes.

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32/117 [00108] Estado inflamatório é usado para indicar a condição biológica relativa de um indivíduo resultante da inflamação, ou caracterizando o grau de inflamação.

[00109] Os termos paciente e indivíduo são usados nesta descrição para se referir a um mamífero sendo tratado ou com necessidade de tratamento para uma condição como NL. Os termos incluem pacientes humanos e voluntários, mamíferos não humanos, como primatas não humanos, grandes modelos animais e roedores. [00110] Uma amostra de um indivíduo pode incluir uma única célula ou várias células ou fragmentos de células ou uma alíquota de líquido corporal, tiradas do indivíduo, por meios incluindo punção venosa, excreção, ejaculação, massagem, biópsia, aspirado de agulha, amostra de lavagem, raspagem, incisão ou intervenção cirúrgica ou de outros meios conhecidos na técnica. A amostra é sangue, urina, fluido espinhal, linfa, secreções mucosas, líquido prostático, sêmen, hemolinfa ou qualquer outro fluido corporal conhecido na técnica para um indivíduo. A amostra é também uma amostra de tecido.

[00111] Terapia inclui todas as intervenções quer biológica, química, física, ou uma combinação das anteriores, destinada a manter ou alterar a condição biológica controlada de um indivíduo.

[00112] O termo proteína isolada destina a significar uma proteína ou um polipeptídeo que, em virtude da sua origem ou fonte de derivação, não é associado com os componentes associados naturalmente, que o acompanham em seu estado nativo; é substancialmente livre de outras proteínas da mesma fonte. Uma proteína pode ser substancialmente isenta de componentes naturalmente associados ou substancialmente purificados pelo isolamento, utilizando técnicas de purificação de proteínas conhecidas na técnica. Por substancialmente purificada significa que a proteína é substancialmente livre de agentes contaminantes, para modalidade,

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33/117 pelo menos cerca de 70% ou 75% ou 80% ou 85% ou 90% ou 95% ou 96% ou 97% ou 98% ou 99% livre de agentes contaminantes.

[00113] O termo recombinação deve ser entendido o produto de recombinação genética artificial. Assim, no contexto de uma proteína recombinante compreendendo um domínio de ligação ao antígeno, este termo não abrange um anticorpo de ocorrência natural dentro do corpo de um indivíduo que é o produto de recombinação natural que ocorre durante a maturação de células B. No entanto, se esse anticorpo for isolado, é para ser considerada uma proteína isolada compreendendo um domínio de ligação ao antígeno. Da mesma forma, se o ácido nucleico codificando a proteína for isolado e expressado utilizando meios recombi nantes, a proteína resultante é uma proteína recombinante compreendendo um domínio de ligação ao antígeno. Uma proteína recombinante também engloba uma proteína expressada por meios artificiais recombinantes quando está dentro de uma célula, tecido ou indivíduo, para a modalidade, na qual é expressada.

[00114] O termo proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BP deve incluir uma proteína de fusão de Ig (incluindo, mas não limitado a, um anticorpo anti- LGALS3BP) capaz de se ligar a LGALS3BP da maneira descrita e/ou alegada aqui.

[00115] O termo polipeptídeo ou cadeia de polipeptídeo será entendido como uma série de aminoácidos contíguos ligados por ligações peptídicas.

[00116] Como usado aqui, o termo domínio de ligação do antígeno entende-se uma região de um anticorpo que é capaz de se ligar especificamente a um antígeno, isto é, um VH ou um VL ou um Fv compreendendo tanto uma VH e uma VL. O domínio de ligação do antígeno não precisa ser no contexto de um anticorpo inteiro, para a modalidade, pode ser em forma isolada (por exemplo, um anticorpo de domínio) ou em outra forma (por exemplo, scFv).

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34/117 [00117] Para efeitos da presente descrição, o termo anticorpo inclui uma proteína capaz de especificamente se ligar para um ou poucos antígenos intimamente relacionados (por exemplo, LGALS3BP) em virtude de um domínio de ligação ao antígeno contido dentro de um Fv. Este termo inclui quatro anticorpos de cadeia (por exemplo, duas cadeias leves (L) e duas cadeias pesadas (H)), anticorpos recombinantes ou modificados (por ex., anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos, anticorpos enxertados com CDR, anticorpos primatizados, anticorpos desimunizados, anticorpos syn humanizados, meio-anticorpos, anticorpos biespecíficos). Um anticorpo inclui geralmente domínios constantes, que podem ser organizados em uma região constante ou fragmento constante ou fragmento cristalizável (Fc). Formas exemplares de anticorpos compreendem uma estrutura de quatro cadeias como sua unidade básica. Anticorpos de comprimento completo compreendem duas cadeias pesadas (~50 a 70 kDa cada) ligados covalentemente e duas cadeias leves (~23 kDa cada). Uma cadeia leve geral mente compreende uma região variável (se presente) e um domínio constante e em mamíferos é uma cadeia leve κ ou uma cadeia leve λ. Uma cadeia pesada geralmente compreende uma região variável e um ou dois domínio(s) constante(s) ligados por uma região de dobradiça para o(s) domínio(s) constante(s) adicional(ais). Cadeias pesadas de mamíferos são de um dos seguintes tipos α, δ, ε, γ e μ. Cada cadeia leve também é ligada covalentemente a uma das cadeias pesadas. Para a modalidade, as duas cadeias pesadas e as cadeias pesadas e leves são mantidas juntas por pontes dissulfeto de inter-cadeia e por interações não covalentes. O número de pontes dissulfeto inter-cadeia pode variar entre diferentes tipos de anticorpos. Cada cadeia tem uma região variável N-terminal (VH e VL onde cada tem aproximadamente 110 aminoácidos de comprimento) e um ou mais domínios constantes

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35/117 no C-terminal. O domínio constante da cadeia leve (CL, que é de aproximadamente 110 aminoácidos de comprimento) está alinhado com e ligado com bissulfeto ao primeiro domínio constante da cadeia pesada (CH1 que tem 330 a 440 aminoácidos em comprimento). A região variável da cadeia leve está alinhada com a região variável da cadeia pesada. A cadeia pesada de anticorpos pode ser compreender 2 ou mais domínios CH adicionais (como CH2, CH3 e similares) e pode compreender uma região de dobradiça entre os domínios constantes CH1 e CH2. Os anticorpos podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), classe (por exemplo, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4 e IgA1 e lgA2) ou subclasse.

[00118] Como usado neste aqui, a região variável refere-se a porções das cadeias leves e/ou pesadas de um anticorpo, conforme definido aqui que é capaz de se ligar especificamente a um antígeno e, inclui sequências de aminoácidos de regiões determinantes de complementaridade (CDRs), isto é, CDR1, CDR2 e CDR3, e regiões de estrutura (FRs). Para a modalidade, a região variável compreende três ou quatro FRs (por exemplo, FR1, FR2, FR3 e opcionalmente FR4) em conjunto com três CDRs. VH se refere a região variável da cadeia pesada. VL se refere a região variável da cadeia leve.

[00119] Como usado aqui, o termo regiões determinantes de complementaridade (syn. CDRs, ou seja, CDR1, CDR2 e CDR3) refere-se a resíduos de aminoácidos de uma região variável do anticorpo cuja presença é a principal contribuinte para a ligação do antígeno específica. Cada domínio da região variável (VH e VL) normalmente possui três regiões CDR identificadas como CDR1, CDR2 e CDR3. Em uma modalidade, as posições do aminoácido atribuídas a CDRs e FRs são definidas de acordo com as sequências de Kabat de Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 e 1991 (também referida aqui como sistema de

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36/117 numeração de Kabat). Em outra modalidade, as posições do aminoácido designadas de CDRs e FRs são definidas de acordo com o esquema de numeração de Chothia aprimorado. De acordo com o sistema de numeração de Kabat, as FRs e CDRs de VH são posicionadas como segue: resíduos 1 a 30 (FR1), 31 a 35 (CDR1), 36 a 49 (FR2), 50 a 65 (CDR2), 66 a 94 (FR3), 95 a 102 (CDR3) e de 103 a 113 (FR4). De acordo com o sistema de numeração de Kabat, as FRs e CDRs de VL são posicionadas como segue: resíduos 1 a 23 (FR1), 24 a 34 (CDR1), 35 a 49 (FR2), 50 a 56 (CDR2), 57 a 88 (FR3), 89 a 97 (CDR3) e 98 a 107 (FR4). A presente descrição não está limitada a FRs e CDRs, tal como definido pelo sistema de numeração de Kabat, mas inclui todos os sistemas de numeração, incluindo o sistema de numeração canônico ou de Chothia e Lesk J. Mol. Biol. 196: 901-917, 1987; Chothia et al., Nature 342: 877-883, 1989; e/ou Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948,1997; o sistema de numeração de Honnegher e Pliikthun J. Mol. Biol. 309:657-670, 2001; ou o sistema IMGT discutido em Giudicelli et al., Nucleic Acids Res. 25: 206-211, 1997. Em uma modalidade, as CDRs são definidas de acordo com o sistema de numeração de Kabat.

[00120] Como usado aqui, o termo Fv deve ser entendido como qualquer proteína, quer composto de vários polipeptídeos ou um único polipeptídeo, em que uma VL e uma VH se associa e forma um complexo tendo um domínio de ligação do antígeno que é capaz de se ligar especificamente a um antígeno. A VH e a VL que formam o domínio de ligação ao antígeno podem estar em uma única cadeia de polipeptídeo ou em diferentes cadeias polipeptídicas. Além disso, a FV da descrição (bem como qualquer proteína da descrição) pode ter vários domínios de ligação ao antígeno que pode ou não pode vincular o mesmo antígeno. Este termo deve ser entendido no sentido de englobar fragmentos diretamente provenientes de um anticorpo, bem como

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37/117 proteínas correspondentes a esses fragmentos produzidos através de meios recombinantes. Em algumas modalidades, a VH não está ligada a um domínio constante da cadeia pesada (CH) 1 e/ou a VL não está ligada a um domínio constante de cadeia leve (CL). Fv exemplar contendo polipeptídeos ou proteínas incluem um fragmento Fab, um fragmento FAB’, um fragmento F(ab'), scFv, um diacorpo, um triacorpo, um teracorpo, ou complexo de ordem superior, ou qualquer dos anteriores ligados a uma região constante ou seu domínio, para a modalidade, domínio CH2 ou CH3, para a modalidade, um minicorpo.

[00121] Um fragmento Fab consiste em um fragmento de ligação ao antígeno monovalente de uma imunoglobulina e pode ser produzido por digestão do anticorpo inteiro com a enzima papaína, para produzir um fragmento consistindo de uma cadeia leve intacta e uma parte de uma cadeia pesada ou pode ser produzida através de meios recombinantes.

[00122] Um fragmento Fab um anticorpo pode ser obtido por tratamento de um anticorpo inteiro com pepsina, seguido de redução, para produzir uma molécula, consistindo de uma cadeia leve intacta e uma parte de uma cadeia pesada, compreendendo uma VH e de um domínio constante único. Dois fragmentos Fab' são obtidos por anticorpo tratados desta forma. Um fragmento Fab’ também pode ser produzido por meios recombinantes.

[00123] Uma cadeia única Fv ou scFv é uma molécula recombinante contendo o fragmento de região variável (Fv) de um anticorpo no qual a região variável da cadeia leve e a região variável da cadeia pesada estão covalentemente ligados por um ligante polipeptídeo flexível adequado.

[00124] Como usado aqui, o termo se liga, em referência à interação de uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BP ou um domínio de ligação ao antígeno do mesmo com um

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38/117 antígeno significa que a interação é dependente da presença de uma estrutura particular (por exemplo, um determinante antigênico ou epítopo) com o antígeno. Para a modalidade, um anticorpo reconhece e se liga a uma estrutura da proteína específica em vez de a proteínas em geral. Se um anticorpo se liga ao epítopo A, a presença de uma molécula contendo o epítopo A (ou livre, sem marcador A), em uma reação contendo A marcado e o anticorpo, reduzirá a quantidade de A marcado ligado ao anticorpo.

[00125] Como usado neste documento, o termo especificamente se liga deve ser entendido que uma proteína da descrição (por exemplo, um anticorpo anti-LGALS3BP) reage ou se associa mais frequentemente, mais rapidamente, com maior duração e/ou com maior afinidade com um determinado antígeno ou células expressando o mesmo do que com antígenos ou células alternativos. Para a modalidade, uma proteína que se liga especificamente a um antígeno se liga a esse antígeno com grande afinidade, avidez, mais prontamente, e/ou com maior duração do que ele se liga a outros antígenos. Para a modalidade, uma proteína se liga a LGALS3BP com maior afinidade materialmente do que para outros ligantes da superfamília da imunoglobulina ou a antígenos comumente reconhecidos pelos anticorpos naturais polireativos (ou seja, por anticorpos de ocorrência natural conhecido por ligar uma variedade de antígenos naturalmente encontrados em humanos). É também entendido lendo esta definição que, para a modalidade, uma proteína que se liga especificamente a um primeiro antígeno pode ou não especificamente se ligar a um segundo antígeno. Como tal, ligação específica não exige necessariamente uma ligação exclusiva ou ligação não detectável de outro antígeno, este é o significado da expressão ligação seletiva.

[00126] Como usado aqui, o termo epítopo (syn. determinante

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39/117 antigênico deve ser entendido como uma região de LGALS3BP para a qual uma proteína compreendendo um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo se liga. Este termo não é necessariamente limitado a resíduos específicos ou estrutura para a qual a proteína faz contato. Para a modalidade, este termo inclui a região abrangendo aminoácidos contatados pela proteína e/ou pelo menos 5 a 10 ou 2 a 5 ou 1 a 3 aminoácidos fora desta região. Em algumas modalidades, o epítopo é uma série linear de aminoácidos. Um epítopo pode incluir também uma série de aminoácidos descontínuos que são posicionados perto um do outro quando LGALS3BP é dobrado, isto é, um epítopo conformacional. O versado na técnica também estará ciente de que o termo epítopo não se limita aos peptídeos ou polipeptídeos. Para a modalidade, o termo epítopo inclui agrupamentos de superfície quimicamente ativos de moléculas, como cadeias laterais de açúcar, cadeias laterais de fosforil ou cadeias laterais de sulfonila, e, em certas modalidades, podem ter características estruturais tridimensionais específicas, e/ou características de carga específica. Um epítopo ou peptídeo ou polipeptídeo compreendendo o mesmo pode ser administrado a um animal para gerar anticorpos contra o epítopo.

[00127] Como usado aqui, o termo diagnóstico, e suas variantes como, mas não limitado a, diagnosticar, diagnosticadas ou diagnosticando inclui qualquer diagnóstico primário de um estado clínico ou diagnóstico de doença recorrente.

MÉTODOS [00128] Os seguintes métodos foram usados para fornecer e preparar os materiais (incluindo, mas não limitado a, tecidos humanos e não humanos, células e proteínas) utilizados nos seguintes Exemplos Experimentais do pedido de patente.

[00129] Estimulação in vitro dos macrófagos humanos.

[00130] Os CMSPs humanos foram isolados de preparações de buffy

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40/117 coat (camada leucoplaquetária) de doadores saudáveis (New York Blood Center) usando Ficoll Paque Plus (GE Health Sciences), de acordo com as instruções do fabricante. Os monócitos foram purificados por aderência ao plástico para 90 minutos e, posteriormente, diferenciados para os macrófagos por cultura com 100 ng/ml, GM-CSF (Sargramostim, Sanofi), em RPMI 1640 (Gibco) contendo Pen/Strep e soro fetal bovino inativado a 10% (Corning). No dia 7, estímulos inflamatórios (recombinante IFNa, CpG para TLR9, LPS para TLR4, pequena molécula agonista para TLR7/8 e IFNa) foram adicionados e mRNA de LGALS3BP medido pelo qCPR após 6h e proteína LGALS3BP por ELISA após 20h. O mRNA foi medido com tecnologia Taqman (Applied Biosystems) e HPRT1 utilizado como um gene constitutivo para normalização. As amostras foram corridas em um instrumento Applied Biosystems QuantStudio. A proteína LGALS3BP foi medida com um kit ELISA disponível comercialmente (Abnova).

[00131] Expressão de LGALS3BP no cérebro.

[00132] O sangue total do paciente foi coletado e CMSPs foram isoladas por centrifugação de densidade Ficoll. As CMSPs foram congeladas a -80Ό em soro bovino fetal (FCS) a 90% contendo DMSO a 10%. Quando prontas para análise posterior, as células foram rapidamente descongeladas, lisadas com o tampão RLT (Qiagen) contendo 1% β-mercaptoetanol, e o RNA foi extraído utilizando o mini kit RNeasy (Qiagen). Isto foi seguido por tratamento de DNAsel e limpeza adicional utilizando microesferas SPRI (Life Technologies). O RNA-seq foi posteriormente realizado usando o protocolo Smartseq2. Os dados são apresentados como valores FPKM.

[00133] Expressão de LGALS3BP em rins de pacientes com NL e controles saudáveis [00134] Biópsias renais humanas foram coletadas após a obtenção de consentimento informado, processadas e usadas para análise de

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41/117 microarranjo. A informação do método detalhado pode ser encontrada na referência inicial (Berthier CC et al., Jl 2012). Estes dados foram acessados a partir do banco de dados GEO no GSE32591. Os dados de expressão linear são apresentados.

[00135] Expressão de LGALS3BP no modelo BXSB-Yaa.

[00136] Todos os procedimentos com animais foram realizados em conformidade com todas as leis locais e nacionais e regulamentos sobre cuidados com os animais. Camundongos BXSB-Yaa machos foram comprados de Jackson. Em 20 semanas de idade, os camundongos foram sacrificados por asfixia de CO2 e 0 sangue foi coletado através da veia cava. Na conclusão dos estudos os rins foram coletados, fixados em formalina e enviados para HistoTox Labs, onde foram processados para coloração de hematoxilina e eosina e pontuados para evidência histológica de danos por um patologista treinado. O sistema de pontuação utilizado foi modificado a partir de um sistema previamente publicado (Chan, O., Madaio, M.P., e Shlomchik, M.J. 1997. The roles of B cells in MRL/lpr murine lupus. Ann N Y Acad Sci 815:75-87) e avalia as seções do rim baseadas nas crescentes do glomérulo, moldes de proteína, inflamação intersticial e vasculite, e uma pontuação total de histologia é obtida com base em um escore composto destes parâmetros.

[00137] Coleta de Urina e Plasma [00138] O sangue total e a urina recém tirada foram obtidos de pacientes saudáveis ou pacientes com LES e NL. O sangue total foi coletado em tubos de heparina e enviados em temperatura ambiente. O Plasma foi coletado ao girar 0 sangue total a 720 x g por 10 minutos. O Plasma foi coletado e centrifugado novamente por 15 minutos a 2000 x g para remover as plaquetas. Todas as amostras foram armazenadas a -80C.

[00139] Métodos com base em biblioteca/ anticorpos

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42/117 [00140] A presente descrição também abrange a triagem de bibliotecas de anticorpos ou proteínas compreendendo os domínios de ligação ao antígeno (por exemplo, compreendendo regiões variáveis do mesmo) para identificar uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BP da descrição. Para a modalidade, uma biblioteca compreendendo uma VH da descrição e uma pluralidade de regiões VL pode ser rastreada para identificar uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BP da descrição.

[00141] Modalidades de bibliotecas contempladas por esta descrição incluem bibliotecas virgens de tratamento (de indivíduos não desafiados), bibliotecas imunizadas (de indivíduos imunizados com um antígeno) ou bibliotecas sintéticas. Ácidos nucleicos codificando anticorpos ou regiões do mesmo (por exemplo, regiões variáveis) são clonados por técnicas convencionais (por exemplo, conforme divulgado em Sambrook e Russel, eds, Clonagem Molecular: A Laboratory Manual, 3^a Ed, vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001) e usados para codificar e exibir as proteínas utilizando um método conhecido na técnica. Outras técnicas para a produção de bibliotecas de proteínas são descritas, por modalidade na patente US N°6.300.064 (por exemplo, uma biblioteca de HuCAL de Morphosys AG), patente US No. 5,885,793, Pat. US No. 6,204,023, Pat. US No. 6,291,158, ou patente US No. 6.248.516.

[00142] A proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BPs, de acordo com a descrição, pode ser proteínas secretadas solúveis ou pode ser apresentada como uma proteína de fusão na superfície de uma célula, ou partículas (por exemplo, um fago ou outro vírus, um ribossoma ou um esporo). Vários formatos de biblioteca de exibição são conhecidos na técnica. Para a modalidade, a biblioteca é uma biblioteca de exibição in vitro (por exemplo, uma biblioteca de exibição de ribossomo, uma biblioteca de exibição covalente ou

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43/117 biblioteca de exibição de mRNA, por exemplo, como descrita na patente US. No. 7.270.969). Em outra modalidade, a biblioteca de exibição é uma biblioteca de exibição de fagos onde as proteínas compreendendo domínios de ligação do antígeno de anticorpos são expressadas em fagos, por modalidade, como descrito na patente US No. 6,300,064, Pat. US No. 5,885,793, Pat. US No. 6,204,023, Pat. US No. 6,291,158, ou patente US No. 6.248.516. Outros métodos de exibição de fagos são conhecidos na técnica e são contemplados pela presente descrição. Da mesma forma, os métodos de exibição de células são contemplados pela descrição, para modalidade, bibliotecas de exibição de bactérias, para modalidade, conforme descrito na patente US N° 5.516.637; bibliotecas de exibição de levedura, para modalidade, conforme descrito na patente US N° 6.423.538; ou uma biblioteca de exibição de mamíferos.

[00143] Métodos de triagem de bibliotecas de exibição são conhecidos na técnica. Em uma modalidade, uma biblioteca de exibição da presente descrição é rastreada usando purificação por afinidade, por modalidade, como descrito em Scopes (Em: Protein purification: principles and practice, terceira edição, Springer Verlag, 1994). Métodos de purificação por afinidade geralmente envolvem contato de proteínas compreendendo os domínios de ligação do antígeno exibidos pela biblioteca com um antígeno-alvo (por exemplo, LGALS3BP) e, após lavagem, eluindo aqueles domínios que permanecem ligados ao antígeno.

[00144] Qualquer região variável ou scFvs identificados pela triagem são facilmente modificados em um anticorpo completo, se desejado. Métodos exemplares para modificar ou reformatar as regiões variáveis ou scFvs em um anticorpo completo são descritos, para modalidade, em Jones et al., J. Immunol. Methods 354: 85-90, 2010; ou Jostock et al., J. Immunol. Methods, 289: 65-80, 2004. Como alternativa, ou

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44/117 adicionalmente, métodos de clonagem padrão são usados, por exemplo, conforme descrito em Ausubel et al., (In: Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Interscience, ISBN 047 150338, 1987), e/ou (Sambrook et al., (In: Molecular Cloning: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York, terceira edição 2001).

[00145] Em uma modalidade, a presente descrição fornece um método para produzir ou isolar uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BP da descrição pela triagem de uma biblioteca de exibição, para a modalidade, a biblioteca de exibição de fago, para modalidade, conforme descrito na patente US No. 6.300.064 e/ou patente US No. 5.885.793. Para a modalidade, os presentes inventores isolaram scFvs por biopanning de uma biblioteca de gene de imunoglobulina humana scFv por rodadas de seleção contra o LGALS3BP humano recombinante de comprimento total. Uma vez isolado, uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BP da invenção pode ser clonada e expressada e opcionalmente formatada como, por uma modalidade, um anticorpo IgG 1 usando métodos conhecidos na técnica.

[00146] Em uma modalidade, a presente descrição fornece um método para produzir uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente para LGALS3BP, o método compreendendo:

[00147] (i) triagem de proteína de fusão de Ig que se liga especificamente à preparação de LGALS3BP ou biblioteca para uma proteína de ligação que se liga ao domínio extracelular do LGALS3BP, para a modalidade, o domínio extracelular de LGALS3BP humano recombinante; e [00148] (ii) isolamento de uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BP tendo uma afinidade de ligação desejada para o domínio extracelular do LGALS3BP.

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45/117 [00149] Em uma modalidade, uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a preparação de LGALS3BP é rastreada. Uma preparação de LGALS3BP pode ser feita, por a modalidade, imunizando um animal com um antígeno de LGALS3BP, de modo a produzir anticorpos que reagem com o domínio extracelular do LGALS3BP.

[00150] Em outra modalidade, uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a biblioteca de LGALS3BP é rastreada. A biblioteca pode ser uma biblioteca de fago, para a modalidade, uma biblioteca de fago de scFv ou uma biblioteca de fago de Fab.

[00151] Em uma modalidade, o método compreende a produção de uma população de partículas de fago exibindo em sua superfície uma população de ligação de moléculas com uma série de especificidades de ligação para um epítopo ou antígeno de LGALS3BP alvo. Tais partículas de fago compreendem um genoma de fagemídeo compreendendo um ácido nucléico codificando a proteína. Este ácido nucleico pode ser isolado, clonado e expressado em um sistema recombinante para produzir a proteína de fusão de Ig que se liga especificamente ao LGALS3BP da invenção.

[00152] Células exemplares usadas para expressar uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente ao LGALS3BP da descrição são células CHO, células do mieloma ou células HEK. A célula pode compreender ainda uma ou mais mutações genéticas e/ou deleções que facilitam a expressão de um anticorpo modificado. Uma modalidade não limitante é uma deleção de um gene que codifica uma enzima necessária para fucosilação de uma imunoglobulina ou um anticorpo expressado.

[00153] Purificação de proteínas [00154] Depois da produção/expressão, uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente ao LGALS3BP da descrição é purificada utilizando um método conhecido na técnica. Tal purificação fornece a

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46/117 proteína da descrição substancialmente livre de proteínas inespecíficas, ácidos, lipídios, carboidratos e similares. Em uma modalidade, a proteína estará em uma preparação, onde mais de 90% (por exemplo, 95%, 98% ou 99%) da proteína na preparação é uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente ao LGALS3BP da descrição.

[00155] Métodos padrão de purificação de peptídeo são empregados para obter uma proteína de fusão de Ig isolada que se liga especificamente ao LGALS3BP da descrição, incluindo, mas não limitada a, vários protocolos cromatografia líquida de alta pressão (ou desempenho) (HPLC) e de protocolos de isolamento de polipeptídeo não HPLC, como, por exemplo, cromatografia de exclusão de tamanho, cromatografia de troca iônica, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia de modo misto, métodos de separação de fase, separações eletroforéticas, métodos de precipitação, métodos de salinização/dessanilização, imunocromatografia e/ou outros métodos.

[00156] Proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a anticorpos LGALS3BPs / anti-LGALS3BP [00157] Modalidades selecionadas da presente invenção são baseadas na produção dos inventores dos anticorpos humanos que se ligam especificamente ao LGALS3BP. Estes anticorpos anti-LGALS3BP derivados de uma biblioteca de exibição de fagos de sequências scFv humanas; os clones de fago de scFv obtidos reformatados como um mAb de IgG 1.

[00158] A presente descrição é amplamente direcionada para uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente ao LGALS3BP compreendendo um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente ao LGALS3BP. Qqq [00159] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região

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47/117 variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 32; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 33 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 34 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 35; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 36; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 37. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 2.

[00160] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 38; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 39 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 40 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 41; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 42; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 43. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente

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48/117 mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 3.

[00161] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 44; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 45 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 46 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 47; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 48; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 49. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 4.

[00162] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 50; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 51 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 52 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 53; a VlCDR2 compreende a

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49/117 sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 54; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 55. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 5.

[00163] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 56; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 57 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 58 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 59; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 60; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 61. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 6.

[00164] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 62; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 63 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos

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50/117 aminoácidos da SEQ ID NO: 64 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 65; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 66; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 67. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 7.

[00165] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 68; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 69 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 70 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 71; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 72; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 73. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 8.

[00166] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de

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51/117 determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 74; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 75 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 76 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 77; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 78; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 79. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 9.

[00167] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 80; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 81 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 82 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 83; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 84; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 85. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 10.

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52/117 [00168] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 86; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 87 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 88 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 89; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 90; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 91. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 11.

[00169] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 92; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 93 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 94 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 95; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 96; e a VlCDR3

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53/117 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 97. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 12.

[00170] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 98; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 99 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 100 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 101; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 102; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 103. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 13.

[00171] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 104; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 105 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 106 e uma região variável de cadeia

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54/117 leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 107; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 108; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 109. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 14.

[00172] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 110; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 111 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 112 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 113; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 114; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 115. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 15.

[00173] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI

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55/117 compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 116; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 117 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 118 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 119; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 120; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 121. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 16.

[00174] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 122; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 123 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 124 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 125; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 126; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 127. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 17.

[00175] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma

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56/117 proteína de fusão de lg de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de lg compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 128; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 129 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 130 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 131; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 132; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 133. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de lg enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 18.

[00176] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de lg de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de lg compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 134; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 135 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 136 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 137; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 138; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 139.

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Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 19.

[00177] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 140; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 141 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 142 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 143; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 144; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 145. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 20.

[00178] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 146; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 147 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 148 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de

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58/117 complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 149; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 150; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 151. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 21.

[00179] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 152; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 153 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 154 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 155; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 156; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 157. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 22.

[00180] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 158;

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59/117 a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 159 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 160 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 161; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 162; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 163. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 23.

[00181] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 164; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 165 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 166 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 167; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 168; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 169. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 24.

[00182] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao

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LGALS3BP, onde a proteína de fusão de lg compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 170; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 171 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 172 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 173; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 174; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 175. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de lg enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 25.

[00183] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de lg de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de lg compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 176; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 177 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 178 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 179; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 180; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 181. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP

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61/117 da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 26.

[00184] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 182; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 183 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 184 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 185; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 186; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 187. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 27.

[00185] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 188; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 189 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 190 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência

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62/117 de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 191; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 192; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 193. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 28.

[00186] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 194; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 195 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 196 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 197; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 198; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 199. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 29.

[00187] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 200; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na

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SEQ ID NO: 201 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 202 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 203; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 204; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 205. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 30.

[00188] Em uma modalidade, a presente invenção revela uma proteína de fusão de Ig de LGALS3BP que se liga especificamente ao LGALS3BP, onde a proteína de fusão de Ig compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) que compreende três regiões de determinação de complementaridade (CDRs), em que VhCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 206; a VhCDR2 compreende uma sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 207 e a Vh CDR3 a sequência de aminoácidos mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 208 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs), em que VlCDRI compreende a sequência de aminoácido mostrada na SEQ ID NO: 209; a VlCDR2 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 210; e a VlCDR3 compreende a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 211. Uma condensação das três VhCDRs e as três VlCDRs de LGALS3BP da proteína de fusão de Ig enumeradas no parágrafo anteriormente mencionado é mostrada nos aminoácidos da SEQ ID NO: 31.

[00189] Em uma modalidade, a VH e a VL estão em uma única cadeia polipeptídica. Para a modalidade, uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente a LGALS3BP é:

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64/117 [00190] (i) um fragmento Fv de cadeia única (scFv); ou [00191] (ii) um scFv dimérico (di-scFv); ou [00192] (iii) (i) ou (ii) ligado a um Fc ou a um domínio constante da cadeia pesada (CH) 2 e/ou CH3; ou [00193] (iv) (i) ou (ii) ligado a uma proteína que se liga a uma célula efetora imune.

[00194] Em modalidades selecionadas da presente invenção, é contemplado que a VL e VH estejam em diferentes cadeias polipeptídicas. Por exemplo, uma proteína de fusão de Ig que se liga especificamente ao LGALS3BP é:

[00195] (i) um diacorpo; ou [00196] (ii) um triacorpo; ou [00197] (iii) um tetracorpo; ou [00198] (iv) um Fab; ou [00199] (v) um F(ab')2; ou [00200] (vi) um Fv; ou [00201] (vii) um de (i) a (vi) ligado a um Fc ou uma CH2 e/ou CH3 [00202] Em modalidades preferidas da presente invenção a proteína de fusão de Ig que se liga especificamente aos LGALS3BPs da presente invenção são anticorpos de comprimento completo.

[00203] As tabelas 1 - 7 apresentam diferentes sequências de aminoácidos descritivas de proteínas de fusão de Ig, que se liga especificamente aos LGALS3BPs descritos por diversas modalidades da presente invenção.

[00204] Tabela 1 - Sequências de VH e VL da CDR combinadas

mAb ID	HCDR1 /HCDR2/HCDR3/LCDR1 /LCDR2/LCDR3	Seq ID No:
mAb1	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLy sGlySerSerProTyrTyrTyrTyrGIyMetAspValGInSerValSerThrA snGlyAlaSerGInGInTyrAsnThrTrpProProValArq	2
mAb2	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAsp ThrAlaSerGIyGlyMetAspValGInSerValSerSerAsnGlyAlaSerGI nGInTyrGIyTyrSerGInlIeThr	3

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mAb ID	HCDR1 /HCDR2/HCDR3/LCDR1 /LCDR2/LCDR3	Seq ID No:
mAb3	GlyPheThrPheSerSerTyrGlylleSerGlySerGlyGlySerThrAlaLys AlaThrGlyTyrSerSerGlyTrpTyrGlyAlaTyrPheAspTyrGInSerVal SerSerSerTyrGlyAlaSerGInGInTyrGlySerSerProLeuThr	4
mAb4	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlaTh rT yrT yrArgSerLysT rpT yr AsnAlaArgGluPheGInAspSerSerSerTrpTyrGluGlyArgAlaPheA splleSerSerAspValGlyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrAlaG lySerSerValVal	5
mAb5	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlaTh rT yrT yrArgSerLysT rpT yr AsnAlaArgGlyGlyValGlyAlaThrTrpTyrTyrGlyMetAspValLysLe uGlyAspLysTyrGInAspSerGInThrTrpAspSerSerThrValVal	6
mAb6	GlyPheThrPheSerSerTyrSerlleTrpTyrAspGlySerAsnLysAlaAr gLeuGlySerGlyTrpSerLeuAspTyrSerSerAspValGlyGlyTyrAsn TyrAspValAsnSerSerTyrThrSerSerAsnThrLeuValVal	7
mAb7	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaAr gValGlySerGlyGlyTrpThrProAspTyrSerSerAspValGlyGlyTyrA snTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	8
mAb8	GlyPheThrPheSerAsnAlaTrplleLysSerLysAsnAspGlyGlyThrT hrThrThrAlaProSerLeuMetAspValSerSerTyrlleAlaThrAsnSerS erAspSerAlaAlaT rpAspAspSerLeu Asn AlaT yrVal	9
mAb9	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaAr gValGlySerGlyGlyTrpThrProAspTyrSerSerAsplleGlyGlyTyrAs nTyrGluValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	10
mAb 10	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaAr gValGlySerGlyGlyTrpThrProAspTyrSerSerAspValGlyGlyTyrA snTyrGluValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	11
mAb11	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaAr gValGlySerGlyGlyTrpThrProAspTyrSerSerAspValGlyGlyTyrA snTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	12
mAb 12	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlleTyrSerGlyGlySerThrAlaArgAsp LeuHisSerAlaAlaGlyPheAspTyrGlyAsnAsnTyrGluAsnAsnGlyT hrT rpAspSerSerLeuAsnValGlyVal	13
mAb 13	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlleTyrSerGlyGlySerThrAlaArgAsp PheGluGlySerGlyAlaLeuAspValAsnlleGlyAspLysArgTyrAspT hrGInValTrpAspThrAspThrAsnHisAlaVal	14
mAb 14	GlyPheThrPheSerAsnAlaTrplleLysSerLysAsnAspGlyGlyThrT hrThrThrAlaProSerLeuMetAspVallleLeuGlyHisTyrHisGlyLysA spAsnAsnSerArgAspArgSerGlyThrGInValLeu	15
mAb 15	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlleTyrSerGlyGlySerThrAlaArgAsp LeuSerTyrSerAspAlaPheAsplleSerSerAsnlleGlyAsnAsnTyrAs pAsnAspGlyThrTrpAspAsnSerLeuSerAlaValVal	16
mAb 16	GlyPheThrPheSerSerTyrGlylleTrpTyrAspGlyAsnAsnLysAlaAr gAspAsnSerGlySerTyrAsnTrpPheAsnProSerSerAspValGlyGI yTyrAsnTyrGluValSerSerSerTyrSerGlySerAsnAsnLeuValVal	17
mAb22	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlyGlyAsnLysAlaAr gValGlySerGlyGlyTrpThrProAspTyrSerSerAspValGlyGlyTyrA snTyrGluValThrSerSerTyrThrSerSerSerThrPheValVal	18
mAb 10 1	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaAr gAspArgGlyValGluGlyAlaTyrGlyMetAspValGInArgValArgSerS erTyrGlyAlaSerGInGInTyrGlySerSerProProArgllelle	19

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mAb ID	HCDR1 /HCDR2/HCDR3/LCDR1 /LCDR2/LCDR3	Seq ID No:
mAb 10 2	GlyTyrThrPheThrGIyTyrTyrIleAsnProAsnSerGIyGlyThrAlaArg GlyGlyAspCysSerSerThrSerCysTyrAspProAspTyrGIyGlySerlI eAlaSerAsnTyrLysAspAsnGInSerTyrGIySerGIyAsnValVal	20
mAb 10 3	GlyTyrThrPheThrSerTyrTyrIleAsnProSerGIyGlySerThrAlaArg GluAspHisAspTyrSerAsnGInGlyGlyPheAspTyrGInSerValThrS erAsnTyrGIyAlaSerGInGInTyrGIySerSerProThr	21
mAb 10 4	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlaTh rT yrT yrArgSerLysT rpT yr AsnAlaArgGluLysIleAlaValAlaGlyTyrTyrTyrGIyMetAspValLysL euGlyAspLysTyrGInAsnAsnGInAlaTrpAspSerSerAlaValVal	22
mAb 10 5	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlaTh rT yrT yrSerSerLysT rpT yr AsnAlaArgGlyGlySerSerGIuPheTyrTyrTyrGIyMetAspValLysLe uGlyAsnLysTyrGIuAsnAsnGInAlaTrpAspSerSerThrAlaVal	23
mAb 10 6	GlyPheThrPheAspAspTyrAlalleSerTrpAsnSerGIySerIleAlaLys AspIleAlaAlaGlyGlyLeuAspSerGInSerlIeSerSerTyrAlaAlaSer GlnGInSerTyrSerThrSerTrpThr	24
mAb 10 7	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArg GlyLeuGlyAspSerSerSerSerTyrThrSerAsnIleGlyAlaAsnHisThr LysAsnAlaAlaT rpAspAspSerLeuArgGlyT rpThr	25
mAb 10 8	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrplleTyrProGlyAspSerAspThrAlaSer GlyAlaSerProTyrTyrPheAspTyrSerLeuArgSerTyrTyrGIyLysAs nAsnSerArgAspSerSerGIyAsnHisTrpVal	26
mAb 10 9	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArg AspProValTyrSerSerSerTrpGlyGlyTyrAlaPheAsplleGInGlyVal AsnSerAspGlyAlaSerGInGInTyrAsnAsnTrpProTrpThr	27
mAb11 0	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysThrAr gValGIySerGIyGlyTrpThrProAspTyrSerSerAspValGIyGlyTyrA snTyrGIuValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	28
mAb11 1	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAsp ThrAlaSerGIyGlyMetAspValGInSerValSerSerAsnGlyAlaSerGI nGInTyrGIyTyrSerGInlIeThr	29
mAb11 2	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleTrpTyrAspGlySerAsnLysAlaAr gGluValValGIySerTyrTyrLeuAspTyrSerSerAsplleGlyGlyTyrLy sT yrAsp ValTh rGlySerT yrSerSerSerSerSerH isT yrVal	30
mAb11 3	GlyPheThrPheSerSerTyrTrplleLysGInAspGlySerGIuLysAlaAr gAspLeuHisCysGlySerSerCysGlyProGluAlaGInThrlIeSerSerT yrGIyAlaSerGInGInSerTyrSerThrProGInThr	31

[00205] Tabela 2 - Reatividade ELISA de VH e VL

ID do mAb	SEQ ID NO:	Reatividade ELISA de HuLGALS3BP (OD)	Reatividade ELISA de HuEGFR (OD)
mAb1		1,5794	0,0948
mAb2		2,559	0,0944
mAb3		2,5552	0,0936
mAb4		2,5288	0,0898
mAb5		0,8091	0,0856
mAb6		2,5542	0,0797
mAb7		1,6491	0,1006
mAb8		0,128	0,0899

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ID do mAb	SEQ ID NO:	Reatividade ELISA de HuLGALS3BP (OD)	Reatividade ELISA de HuEGFR (OD)
mAb9		2,5658	0,0984
mAb 10		2,4879	0,096
mAb11		2,5157	0,0978
mAb 12		2,5803	0,0939
mAb 13		2,5866	0,084
mAb 14		0,203	0,0901
mAb 15		0,8852	0,0785
mAb 16		2,549	0,0844
mAb22		2,47	0,0925
mAb101		Resposta da dose completa no qráfico
mAb102		Resposta da dose completa no qráfico
mAb103		Resposta da dose completa no qráfico
mAb104		Resposta da dose completa no qráfico
mAb105		Resposta da dose completa no qráfico
mAb106		Resposta da dose completa no qráfico
mAb107		Resposta da dose completa no qráfico
mAb108		Resposta da dose completa no qráfico
mAb109		Resposta da dose completa no qráfico
mAb110		Resposta da dose completa no qráfico
mAb111		Resposta da dose completa no qráfico
mAb112		Resposta da dose completa no qráfico
mAb113		Resposta da dose completa no qráfico

[00206] Tabela 3 - CDR5 discreto para sequências de VH e VL

mAb	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCÜR1	LCDR2	LCDR3
mAb1	GlyPheT hrPheSe rSerTyr Gly (SEQ ID NO: 32)	IleSerTyrA spGlySerA snLys (SEQ ID NO: 33)	AlaLysGly SerSerPro TyrTyrTyrT yrGIyMetA spVal (SEQ ID NO: 34)	GlnSerVal SerThrAsn (SEQ ID NO: 35)	GlyAlaSer (SEQ ID NO: 36)	GlnGInTyrAsnThrTrpProPro ValArg (SEQ ID NO: 37)
mAb2	GlyPheT hrValSer SerAsnT yr (SEQ	IleTyrSerGI yGlySerThr (SEQ ID NO: 39)	AlaArgAsp ThrAlaSer GlyGlyMet AspVal	GlnSerVal SerSerAsn (SEQ ID NO: 41)	GlyAlaSer (SEQ ID NO: 42)	GlnGInTyrGIyTyrSerGInlIeT hr (SEQ ID NO: 43)

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mAb	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCBR1	LCDR2	LC&R3
	ID NÓ: 38)		(SEQ ID NO: 40)
mAb3	GlyPheT hrPheSe rSerTyr Gly (SEQ ID NO: 44)	IleSerGIyS erGIyGlyS erThr (SEQ ID NO: 45)	AlaLysAlaT hrGIyTyrSe rSerGIyTrp TyrGIyAlaT yrPheAspT yr (SEQ ID NO: 46)	GlnSerVal SerSerSer Tyr (SEQ ID NO: 47)	GlyAlaSer (SEQ ID NO: 48)	GlnGInTyrGIySerSerProLeu Thr (SEQ ID NO: 49)
mAb4	GlyAspS erValSer SerAsnS erAlaAla (SEQ ID NO: 50)	ThrTyrTyrA rgSerLysTr pTyrAsn (SEQ ID NO: 51)	AlaArgGlu PheGInAsp SerSerSer TrpTyrGIu GlyArgAla PheAsplle (SEQ ID NO: 52)	SerSerAsp ValGIyGlyT yrAsnTyr (SEQ ID NO: 53)	AspValSer (SEQ ID NO: 54)	SerSerTyrAlaGlySerSerValV al (SEQ ID NO: 55)
mAb5	GlyAspS erValSer SerAsnS erAlaAla (SEQ ID NO: 56)	ThrTyrTyrA rgSerLysTr pTyrAsn (SEQ ID NO: 57)	AlaArgGly GlyValGIy AlaThrTrpT yrTyrGIyM etAspVal (SEQ ID NO: 58)	LysLeuGly AspLysTyr (SEQ ID NO: 59)	GlnAspSer (SEQ ID NO: 60)	GlnThrT rpAspSerSerTh rVal Vai (SEQ ID NO: 61)
mAb6	GlyPheT hrPheSe rSerTyrS er (SEQ ID NO: 62)	IleTrpTyrA spGlySerA snLys (SEQ ID NO: 63)	AlaArgLeu GlySerGIy TrpSerLeu AspTyr (SEQ ID NO: 64)	SerSerAsp ValGIyGlyT yrAsnTyr (SEQ ID NO: 65)	AspValAsn (SEQ ID NO: 66)	SerSerTyrThrSerSerAsnThr LeuValVal (SEQ ID NO: 67)
mAb7	GlyPheT hrPheSe rSerTyrP ro (SEQ ID NO: 68)	IleSerTyrA spGlySerA snLys (SEQ ID NO: 69)	AlaArgVal GlySerGIy GlyTrpThr ProAspTyr (SEQ ID NO: 70)	SerSerAsp ValGIyGlyT yrAsnTyr (SEQ ID NO: 71)	AspValSer (SEQ ID NO: 72)	SerSerTyrThrSerSerSerThr LeuValVal (SEQ ID NO: 73)
mAb8	GlyPheT hrPheSe rAsnAla Trp (SEQ ID NO: 74)	IleLysSerL ysAsnAsp GlyGlyThr Thr (SEQ ID NO: 75)	ThrThrAla ProSerLeu MetAspVal (SEQ ID NO: 76)	SerSerTyrlI eAlaThrAs nSer (SEQ ID NO: 77)	SerAspSer (SEQ ID NO: 78)	AlaAlaT rpAspAspSerLeuAs nAlaTyrVal (SEQ ID NO: 79)
mAb9	GlyPheT hrPheSe rSerTyrP ro (SEQ ID NO: 80)	IleSerTyrA spGlySerA snLys (SEQ ID NO: 81)	AlaArgVal GlySerGIy GlyTrpThr ProAspTyr (SEQ ID NO: 82)	SerSerAsp IleGlyGlyT yrAsnTyr (SEQ ID NO: 83)	GluValSer (SEQ ID NO: 84)	SerSerTyrThrSerSerSerThr LeuValVal (SEQ ID NO: 85)
mAb10	GlyPheT hrPheSe rSerTyrP ro (SEQ ID NO: 86)	IleSerTyrA spGlySerA snLys (SEQ ID NO: 87)	AlaArgVal GlySerGIy GlyTrpThr ProAspTyr (SEQ ID NO: 88)	SerSerAsp ValGIyGlyT yrAsnTyr (SEQ ID NO: 89)	GluValSer (SEQ ID NO: 90)	SerSerTyrThrSerSerSerThr LeuValVal (SEQ ID NO: 91)
mAb11	GlyPheT hrPheSe	IleSerTyrA spGlySerA	AlaArgVal GlySerGIy	SerSerAsp ValGIyGlyT	AspValSer	SerSerTyrThrSerSerSerThr LeuValVal (SEQ ID NO: 97)

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 76/701

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mAb	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCOR1	LCDR2	LCDR3
	rSerTyrP ro (SEQ ID NO: 92)	snLys (SEQ ID NO: 93)	GlyTrpThr ProAspTyr (SEQ ID NO: 94)	yrAsnTyr (SEQ ID NO: 95)	(SEQ ID NO: 96)
mAb12	GlyPheT hrValSer SerAsnT yr (SEQ ID NO: 98)	IleTyrSerGI yGlySerThr (SEQ ID NO: 99)	AlaArgAsp LeuHisSer AlaAlaGlyP heAspTyr (SEQ ID NO: 100)	GlyAsnAsn Tyr (SEQ ID NO: 101)	GluAsnAsn (SEQ ID NO: 102)	GlyThrT rpAspSerSerLeuAsn ValGlyVal (SEQ ID NO: 103)
mAb13	GlyPheT hrValSer SerAsnT yr (SEQ ID NO: 104)	IleTyrSerGI yGlySerThr (SEQ ID NO: 105)	AlaArgAsp PheGluGly SerGIyAIaL euAspVal (SEQ ID NO: 106)	AsnIleGlyA spLysArg (SEQ ID NO: 107)	TyrAspThr (SEQ ID NO: 108)	GI n VaIT rpAspTh rAspTh rAsn HisAlaVal (SEQ ID NO: 109)
mAb14	GlyPheT hrPheSe rAsnAla Trp (SEQ ID NO: 110)	IleLysSerL ysAsnAsp GlyGlyThr Thr (SEQ ID NO: 111)	ThrThrAla ProSerLeu MetAspVal (SEQ ID NO: 112)	IleLeuGlyH isTyrHis (SEQ ID NO: 113)	GlyLysAsp Asn (SEQ ID NO: 114)	AsnSerArgAspArgSerGIyThr GlnValLeu (SEQ ID NO: 115)
mAb15	GlyPheT hrValSer SerAsnT yr (SEQ ID NO: 116)	IleTyrSerGI yGlySerThr (SEQ ID NO: 117)	AlaArgAsp LeuSerTyr SerAspAla PheAsplle (SEQ ID NO: 118)	SerSerAsn IleGlyAsnA snTyr (SEQ ID NO: 119)	AspAsnAs P (SEQ ID NO: 120)	GlyThrT rpAspAsnSerLeuSer AlaValVal (SEQ ID NO: 121)
mAb16	GlyPheT hrPheSe rSerTyr Gly (SEQ ID NO: 122)	IleTrpTyrA spGlyAsnA snLys (SEQ ID NO: 123)	AlaArgAsp AsnSerGIy SerTyrAsn TrpPheAsn Pro (SEQ ID NO: 124)	SerSerAsp ValGIyGlyT yrAsnTyr (SEQ ID NO: 125)	GluValSer (SEQ ID NO: 126)	SerSerTyrSerGIySerAsnAsn LeuValVal (SEQ ID NO: 127)
mAb22	GlyPheT hrPheSe rSerTyrP ro (SEQ ID NO: 128)	IleSerTyrA spGlyGlyA snLys (SEQ ID NO: 129)	AlaArgVal GlySerGIy GlyTrpThr ProAspTyr (SEQ ID NO: 130)	SerSerAsp ValGIyGlyT yrAsnTyr (SEQ ID NO: 131)	GluValThr (SEQ ID NO: 132)	SerSerTyrThrSerSerSerThr PheValVal (SEQ ID NO: 133)
mAb101	GlyPheT hrPheSe rSerTyrA Ia (SEQ ID NO: 134)	IleSerTyrA spGlySerA snLys (SEQ ID NO: 135)	AlaArgAsp ArgGlyVal GluGlyAla TyrGIyMet AspVaI (SEQ ID NO: 136)	GlnArgVal ArgSerSer Tyr (SEQ ID NO: 137)	GlyAlaSer (SEQ ID NO: 138)	GlnGInTyrGIySerSerProPro Argllelle (SEQ ID NO: 139)
mAb102	GlyTyrT hrPheTh rGlyTyrT yr (SEQ ID NO: 140)	IleAsnProA snSerGIyG lyThr (SEQ ID NO: 141)	AlaArgGly GlyAspCys SerSerThr SerCysTyr AspProAsp Tyr (SEQ ID NO: 142)	GlyGlySerlI eAlaSerAs nTyr (SEQ ID NO: 143)	LysAspAsn (SEQ ID NO: 144)	GlnSerTyrGIySerGIyAsnVal Vai (SEQ ID NO: 145)

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 77/701

70/117

mAb	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LC0R1	LCDR2	LCDR3
mAb103	GlyTyrT hrPheTh rSerTyrT yr (SEQ ID NO: 146)	IleAsnProS erGIyGlyS erThr (SEQ ID NO: 147)	AlaArgGlu AspHisAsp TyrSerAsn GlnGlyGly PheAspTyr (SEQ ID NO: 148)	GlnSerVal ThrSerAsn Tyr (SEQ ID NO: 149)	GlyAlaSer (SEQ ID NO: 150)	GlnGInTyrGIySerSerProThr (SEQ ID NO: 151)
mAb104	GlyAspS erValSer SerAsnS erAlaAla (SEQ ID NO: 152)	ThrTyrTyrA rgSerLysTr pTyrAsn (SEQ ID NO: 153)	AlaArgGlu LysIleAlaV alAlaGlyTy rTyrTyrGIy MetAspVal (SEQ ID NO: 154)	LysLeuGly AspLysTyr (SEQ ID NO: 155)	GlnAsnAsn (SEQ ID NO: 156)	GlnAlaT rpAspSerSerAlaVal Vai (SEQ ID NO: 157)
mAb105	GlyAspS erValSer SerAsnS erAlaAla (SEQ ID NO: 158)	ThrTyrTyrS erSerLysTr pTyrAsn (SEQ ID NO: 159)	AlaArgGly GlySerSer GluPheTyr TyrTyrGIy MetAspVal (SEQ ID NO: 160)	LysLeuGly AsnLysTyr (SEQ ID NO: 161)	GluAsnAsn (SEQ ID NO: 162)	GlnAlaT rpAspSerSerTh rAla Vai (SEQ ID NO: 163)
mAb106	GlyPheT hrPheAs pAspTyr Ala (SEQ ID NO: 164)	IleSerTrpA snSerGIyS erlle (SEQ ID NO: 165)	AlaLysAspI leAlaAlaGI yGlyLeuAs pSer (SEQ ID NO: 166)	GlnSerlIeS erSerTyr (SEQ ID NO: 167)	AlaAlaSer (SEQ ID NO: 168)	GlnGInSerTyrSerThrSerTrp Thr (SEQ ID NO: 169)
mAb107	GlyTyrT hrPheTh rSerTyr Gly (SEQ ID NO: 170)	IleSerAlaT yrAsnGlyA snThr (SEQ ID NO: 171)	AlaArgGlyL euGlyAspS erSerSerS erTyr (SEQ ID NO: 172)	ThrSerAsnl leGlyAlaAs nHis (SEQ ID NO: 173)	ThrLysAsn (SEQ ID NO: 174)	AlaAlaT rpAspAspSerLeuArg GlyTrpThr (SEQ ID NO: 175)
mAb108	GlyTyrS erPheTh rSerTyrT rp (SEQ ID NO: 176)	IleTyrProGI yAspSerAs pThr (SEQ ID NO: 177)	AlaSerGIy AlaSerPro TyrTyrPhe AspTyr (SEQ ID NO: 178)	SerLeuArg SerTyrTyr (SEQ ID NO: 179)	GlyLysAsn (SEQ ID NO: 180)	AsnSerArgAspSerSerGIyAs nHisTrpVal (SEQ ID NO: 181)
mAb109	GlyTyrT hrPheTh rSerTyr Gly (SEQ ID NO: 182)	IleSerAlaT yrAsnGlyA snThr (SEQ ID NO: 183)	AlaArgAsp ProValTyr SerSerSer TrpGlyGly TyrAlaPhe Asplle (SEQ ID NO: 184)	GlnGlyVal AsnSerAsp (SEQ ID NO: 185)	GlyAlaSer (SEQ ID NO: 186)	GlnGInTyrAsnAsnT rpProT rp Thr (SEQ ID NO: 187)
mAb110	GlyPheT hrPheSe rSerTyrP ro (SEQ ID NO: 188)	IleSerTyrA spGlySerA snLys (SEQ ID NO: 189)	ThrArgVal GlySerGIy GlyTrpThr ProAspTyr (SEQ ID NO: 190)	SerSerAsp ValGIyGlyT yrAsnTyr (SEQ ID NO: 191)	GluValSer (SEQ ID NO: 192)	SerSerTyrThrSerSerSerThr LeuValVal (SEQ ID NO: 193)
mAb111	GlyPheT hrValSer SerAsnT	IleTyrSerGI yGlySerThr	AlaArgAsp ThrAlaSer GlyGlyMet	GlnSerVal SerSerAsn	GlyAlaSer (SEQ ID NO: 198)	GlnGInTyrGIyTyrSerGInlIeT hr (SEQ ID NO: 199)

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 78/701

71/117

mAb	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCOR1	LCDR2	LCDR3
	yr (SEQ ID NO: 194)	(SEQ ID NO: 195)	AspVal (SEQ ID NO: 196)	(SEQ ID NO: 197)
mAb112	GlyPheT hrPheSe rSerTyr Gly (SEQ ID NO: 200)	IleTrpTyrA spGlySerA snLys (SEQ ID NO: 201)	AlaArgGlu ValValGIyS erTyrTyrLe uAspTyr (SEQ ID NO: 202)	SerSerAsp IleGlyGlyT yrLysTyr (SEQ ID NO: 203)	AspValThr (SEQ ID NO: 204)	GlySerTyrSerSerSerSerSer HisTyrVal (SEQ ID NO: 205)
mAb113	GlyPheT hrPheSe rSerTyrT rp (SEQ ID NO: 206)	IleLysGInA spGlySerG luLys (SEQ ID NO: 207)	AlaArgAsp LeuHisCys GlySerSer CysGlyPro GluAla (SEQ ID NO: 208)	GlnThrlIeS erSerTyr (SEQ ID NO: 209)	GlyAlaSer (SEQ ID NO: 210)	GlnGInSerTyrSerThrProGIn Thr (SEQ ID NO: 211)

[00207] Tabela 4 - CDR5 discreto para sequências de LH

VHJD	SEQ iíilii NO:	VHjCDRI	SEQ iíiilil NÔ:	VH.CDR2	SEQ 10 NO:	VH„ÇDR3
VH_1	212	GlyAspSerlIe SerSerGIyTyr Trp	382	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	552	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_2	213	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	383	IleAsnProAsnSer GlyGlyThr	553	AlaArgGluValAlaThrIleProAlaH isPheAspTyr
VH_3	214	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	384	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	554	AlaArgAspTyrAsplleLeuThrGIy LeuAspTyr
VH_4	215	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	385	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	555	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_5	216	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	386	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	556	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_6	217	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	387	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	557	AlaLysAspT rpG lyTh rSerLeu Le uTyrGIyTyrPheAspTyr
VH_7	218	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	388	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	558	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_8	219	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	389	IleTyrSerGIyGlySe rThr	559	AlaArgAspPheGluGlySerGIyAI aLeuAspVal
VH_9	220	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	390	ThrTyrTyrSerSerL ysTrpTyrAsn	560	AlaArgGlyGlySerSerGIuPheTyr TyrTyrGIyMetAspVal
VH_10	221	GlyAspSerVal SerSerAspSer AlaSer	391	IleSerGIySerGIyGI ylleThr	561	AlaLysAspT rpAlaGlyTyrThrAsn GlyTrpTyrGIySer
VH_11	222	GlyGlySerlIeS erGIySerAsnT yrTyr	392	IleSerGIySerGIyGI ylleThr	562	AlaLysAspT rpAlaGlyTyrThrAsn GlyTrpTyrGIySer

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 79/701

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VHJD	SEQ HOt	VtLCORI	SEQ iiilil NO:	VH„C0R2	SEQ IO NO:	VH_C0R3
VH_12	223	GlyGlySerlIeS erSerSerAsnT rp	393	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	563	AlaLysAspArgSerArgArgAlaPr oTyrTyrPheAspTyr
VH_13	224	GlyGlySerlIeS erSerSerAsnT rp	394	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	564	AlaLysValTyrArgGlyTyrAspAla PheAsplle
VH_14	225	GlyGlySerlIeS erSerSerAsnT rp	395	IleTyrProGlyAspS erAspThr	565	AlaArgHisAlaGlyAspGlyGInIleA spTyr
VH_15	226	GlyGlySerlIeS erSerSerAsnT rp	396	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	566	AlaArgGluGlySerGIyLeuTyrTyr TyrTyrGIyMetAspVal
VH_16	227	GlyGlySerVal SerSerAsnSer AlaAla	397	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	567	AlaArgGlyGlySerGIyTrpTyrHis TyrPheAspTyr
VH_17	228	GlyGlyThrPhe SerSerTyrAla	398	IleSerGIyThrGIyGI yArgThr	568	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIySer
VH_18	229	GlyGlyThrPhe SerSerTyrAla	399	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	569	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_19	230	GlyGlyThrPhe SerSerTyrAla	400	IleTrpTyrAspGlyS erAsnLys	570	AlaArg LeuG lySerGIyT rpSerLe uAspTyr
VH_20	231	GlyPheThrPh eAsnThrTyrAI a	401	IleSerGIySerGIyA spArgThr	571	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpPheGlyAsn
VH_21	232	GlyPheThrPh eAsnThrTyrAI a	402	IleSerGIySerGIyA splleThr	572	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_22	233	GlyPheThrPh eAsnThrTyrAI a	403	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	573	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_23	234	GlyPheThrPh eAspAspTyrAI a	404	IleAsnAlaGlyAsnG lyAsnThr	574	AlaArgGlyGlyTyrCysSerSerThr SerCysT yrProAspT yrAsnT rpPh eAspPro
VH_24	235	GlyPheThrPh eAspAspTyrAI a	405	IleSerGIySerGIyA spArgThr	575	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrAlaAsn
VH_25	236	GlyPheThrPh eAspAspTyrAI a	406	IleTyrSerGIyGlySe rThr	576	AlaArg AspArgArgG lyGlyAsnT r pTyrGIuPheAspTyr
VH_26	237	GlyPheThrPh eAspAspTyrAI a	407	IleTyrSerGIyGlySe rThr	577	AlaArgGluGlyLeuAlaMetAlaGly TyrPheAspTyr
VH_27	238	GlyPheThrPh eGIyAsnHisGI y	408	IleLysHisAspGlyS erGIuGIn	578	AlaArgValAlaValGIyAlaAsnLeu AlaPheAsplle
VH_28	239	GlyPheThrPh eSerArgTyrGI y	409	IleSerGIySerGIyA spArgThr	579	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_29	240	GlyPheThrPh eSerAsnAlaTr P	410	IlelleProllePheGly ThrAla	580	AlaArgGlyMetAlaGInSerProAla PheAspTyr
VH_30	241	GlyPheThrPh eSerAsnAlaTr _e___________	411	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	581	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 80/701

73/117

VHJD	SEQ HOt	V«_C0R1	SEQ iiilil NO:	VH„C0R2	SEQ 10 NO:	VH„C0R3
VH_31	242	GlyPheThrPh eSerAsnAlaTr P	412	ThrTyrTyrAsnSerL ysTrpTyrAsn	582	AlaArgGluThrGIyGlyPheAspTy r
VH_32	243	GlyPheThrPh eSerAsnTyrAI a	413	IleAsnThrAspGlyG lyAsnThr	583	AlaArgAspProValArgGlyAspGI yTyrAsnPheAspTyr
VH_33	244	GlyPheThrPh eSerAsnTyrAI a	414	IleSerGIySerGIyA splleThr	584	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_34	245	GlyPheThrPh eSerAsnTyrAI a	415	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	585	AlaLysAlaThrGIyTyrSerSerGIy T rpT yrGIyAlaT yrPheAspT yr
VH_35	246	GlyPheThrPh eSerAsnTyrAI a	416	IleTyrHisSerGIySe rThr	586	AlaArgAspArgGlySerMetAspV al
VH_36	247	GlyPheThrPh eSerAsnTyrAI a	417	IleTyrProGlyAspS erAspThr	587	AlaArgLeuGlyArgThrSerHisGIn SerTrpAspLeuGlyTyr
VH_37	248	GlyPheThrPh eSerAsnTyrAI a	418	IleTyrProGlyAspS erAspThr	588	AlaSerGIyAlaSerProTyrTyrPhe AspTyr
VH_38	249	GlyPheThrPh eSerAsnTyrAI a	419	IleTyrSerGIyGlySe rThr	589	AlaArgGluSerAsnThrAlaAsnTh rHisPheAspTyr
VH_39	250	GlyPheThrPh eSerAsnTyrAI a	420	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	590	AlaArgG lyG ly Vai G lyAlaTh rT rp TyrTyrGIyMetAspVal
VH_40	251	GlyPheThrPh eSerAsnTyrGI y	421	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	591	AlaLysGInGInT rpLeuGlyTh rT rp TyrPheAspLeu
VH_41	252	GlyPheThrPh eSerAsnTyrGI y	422	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	592	AlaLysGlyLeuLeuValAlaSerlIe TyrAspAlaPheAsplle
VH_42	253	GlyPheThrPh eSerAspTyrAI a	423	IleSerTrpAsnSerG lySerlIe	593	AlaLysAspIleAlaAlaGlyGlyLeu AspSer
VH_43	254	GlyPheThrPh eSerAspTyrTy r	424	ValSerGIySerGIyT hrSerThr	594	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_44	255	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	425	IleAsnProAsnSer GlyAspThr	595	AlaArgG I uG I nT rpLeuGlyP roAla HisPheAspTyr
VH_45	256	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	426	IleAsnProAsnSer GlyGlyThr	596	AlaArgGluArgAsnArgAlaGlyGlu PheSerAlaPheAsplle
VH_46	257	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	427	IleGluProGlyAsnG lyAspThr	597	AlaArgGlyAlaSerGIyLeuAspPh e
VH_47	258	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	428	IleLysGInAspGlyS erGIuLys	598	AlaArgAspLeuHisCysGlySerSe rCysGlyProGluAla
VH_48	259	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	429	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	599	AlaArgAspProValTyrSerSerSer TrpGlyGlyTyrAlaPheAsplle

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 81/701

74/117

VHJD	SEQ NO:	V«_C0R1	SEQ iiilil NO:	VH„C0R2	SEQ 10 NO:	VH„C0R3
VH_49	260	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	430	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	600	AlaArgAspThrPheGlyGlyGlySe rTyrTyrGIyHisGlyTyr
VH_50	261	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	431	IleSerAsnAspGlyV alAsnAsn	601	AlaArgGluAsnSerAsnAlaT rpLy sValMetAspVal
VH_51	262	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	432	IleSerGIySerGIyA spArgThr	602	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_52	263	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	433	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	603	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_53	264	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	434	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	604	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsp GlyTrpTyrGIyAsn
VH_54	265	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	435	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	605	AlaLysAspTrpGlyAlaTyrSerSer GlyTrpTyrGIyAsp
VH_55	266	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	436	IleSerGIySerGIyGI yAsnIle	606	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrSerAsn GlyTrpTyrGIySer
VH_56	267	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	437	IleSerGIySerGIyGI ylleThr	607	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrSerAsn GlyTrpPheGlySer
VH_57	268	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	438	IleSerTyrAspGlyGI yAsnLys	608	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_58	269	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	439	IleSerTyrAspGlyS erAsnGIn	609	AlaValGIyValGIyPhelleThrAsp GlyTyrPheGInHis
VH_59	270	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	440	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	610	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_60	271	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	441	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	611	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_61	272	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	442	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	612	AlaLysGInGInT rpLeuGlyThrT rp TyrPheAspLeu
VH_62	273	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	443	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	613	AlaLysG I uT rpGlyGlyG lyAspSer ProThrAspMetGlyLeuPheAspT yr
VH_63	274	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	444	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	614	Th rArg Vai G lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_64	275	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	445	IleTrpTyrAspGlyA snAsnLys	615	AlaArgAspAsnSerGIySerTyrAs nTrpPheAsnPro
VH_65	276	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	446	IleTyrProGlyAspS erAspThr	616	AlaArgSerH isGlyGlySerAsnT rp PheAspPro
VH_66	277	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	447	IleTyrProGlyAspS erAspThr	617	AlaThrSerLeuGlyAspAspAlaPh eAsplle

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 82/701

75/117

VHJD	SEQ NO:	V«_C0R1	SEQ iiilil NO:	VH„C0R2	SEQ 10 NO:	VH„C0R3
VH_67	278	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	448	IleTyrProGlyAspS erGIuThr	618	AlaArg LeuG lyH isSerGIySerT rp TyrPheAspLeu
VH_68	279	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	449	IleTyrSerGIyGlySe rThr	619	AlaArgAspLeuSerTyrSerAspAI aPheAsplle
VH_69	280	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	450	IleTyrSerGIyGlySe rThr	620	AlaArgAspMetThrThrValAspAI aPheAsplle
VH_70	281	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	451	IleTyrSerGIyGlySe rThr	621	AlaArgAspThrAlaSerGIyGlyMet AspVal
VH_71	282	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	452	PheTyrSerGIyGly SerThr	622	AlaArgGluProTyrProGlyGlyPro PheAsplle
VH_72	283	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	453	IleSerAlaSerGIyGI ySerThr	623	AlaAsn LeuT y rG lyAspT y rAsn Al aTyr
VH_73	284	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	454	IleSerGIySerGIyA spArgThr	624	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_74	285	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	455	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	625	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_75	286	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	456	IleSerGIySerGIyGI ylleThr	626	AlaLysAspT rpAlaGlyTyrThrAsn GlyTrpTyrGIySer
VH_76	287	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	457	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	627	AlaLysAspLeuValLeuGly
VH_77	288	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	458	IleSerTrpAsnSerG lySerlIe	628	AlaLysAspTrpAspSerSerGIyTy rTrpProLeuPheAspTyr
VH_78	289	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	459	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	629	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_79	290	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	460	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	630	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_80	291	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	461	IleTrpTyrAspGlyS erAsnLys	631	AlaArgGluValValGIySerTyrTyr LeuAspTyr
VH_81	292	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	462	IleAsnProAsnSer GlyGlyThr	632	AlaArgGlyGlyAspCysSerSerTh rSerCysT yrAspProAspT yr
VH_82	293	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	463	IleLysGInAspGlyS erGIuLys	633	AlaArgIleGlyArgPheGlyArgLys TyrGIyMetAspVal
VH_83	294	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	464	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	634	AlaArgGlyLeuGlyAspSerSerSe rSerTyr
VH_84	295	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	465	IleSerGIySerGIyA splleThr	635	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsn GlyTrpTyrGIyAsn

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 83/701

76/117

VHJD	SEQ NO:	V«_C0R1	SEQ iiilil NO:	VH„C0R2	SEQ IO NO:	VH„com
VH_85	296	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	466	IleSerGIySerGIyA splleThr	636	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_86	297	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	467	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	637	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_87	298	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	468	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	638	AlaLysAspTrpGlyAlaTyrSerSer GlyTrpTyrGIyAsp
VH_88	299	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	469	IleSerGIySerGIyGI ylleThr	639	AlaLysAspT rpAlaGlyTyrThrAsn GlyTrpTyrGIySer
VH_89	300	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	470	IleSerGIyThrGIyGI yArgThr	640	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIySer
VH_90	301	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	471	IleSerTyrAspAlaT hrAsnAsn	641	AlaLysGluArgPheThrGIyGlyTyr TyrThrTyrPheAspTyr
VH_91	302	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	472	IleTyrHisSerGIySe rThr	642	AlaArgAlaGlyGlyLeuHisLeuAs pTyr
VH_92	303	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	473	IleTyrProGlyAspS erAspThr	643	AlaArgGlyAsnGlyAspGlyGlyPh eAspTyr
VH_93	304	GlyPheThrPh eSerSerTyrSe r	474	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	644	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_94	305	GlyPheThrPh eSerSerTyrTr P	475	IleSerGIySerGIyA splleThr	645	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_95	306	GlyPheThrPh eSerSerTyrTr P	476	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	646	AlaArgAspArgGlyValGIuGlyAla TyrGIyMetAspVal
VH_96	307	GlyPheThrPh eSerSerTyrTr P	477	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	647	AlaLysGlyLeuLeuValAlaSerlIe TyrAspAlaPheAsplle
VH_97	308	GlyPheThrPh eSerSerTyrTr P	478	IleTyrHisSerGIySe rThr	648	AlaArgGlySerAsnIlePheAsplle
VH_98	309	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	479	IleLysSerLysAsnA spGlyGlyThrThr	649	ThrThrAlaProSerLeuMetAspVa I
VH_99	310	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	480	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	650	AlaArgAspLeuThrPheGlySerGI yProThrArgAspTyr
VH_10 0	311	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	481	IleSerGIySerGIyA splleThr	651	AlaLysAspT rpAlaGlyTyrThrAsn GlyTrpTyrGIySer
VH_10 1	312	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	482	IleSerGIySerGIyA splleThr	652	AlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_10 2	313	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	483	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	653	AlaLysAspTrpGlyAlaTyrSerSer GlyTrpTyrGIyAsp

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 84/701

77/117

VHJD	SEQ NO:	V«_C0R1	SEQ iiilil NO:	VH„C0R2	SEQ IO NO:	VH„C0R3
VH_10 3	314	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	484	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	654	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_10 4	315	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	485	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	655	AlaLysAspT rpThrAsnGInT rpLe uAspAlaT yrPheAspT yr
VH_10 5	316	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	486	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	656	AlaLysGluThrlIeLeuTyrAsplIeL euThrGIyTyrTyrAsnGluGlyAlaP heAsplle
VH_10 6	317	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	487	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	657	AlaLysAspT rpG lyArg PheG lyGI uLeuLeuGluGlySerProTyr
VH_10 7	318	GlyPheThrPh eSerThrTyrAI a	488	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	658	AlaArgGluPheGInAspSerSerS erTrpTyrGIuGlyArgAlaPheAspll e
VH_10 8	319	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	489	IleAsnProAsnSer GlyGlyThr	659	AlaArgAspT rpG lyArgGly ValG ly AspSerGIyPheValAspTyr
VH_10 9	320	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	490	IleAsnProLysSerG lyGlyAla	660	AlaArgAspPheValGIyAlaSerLe uAspTyr
VH_11 0	321	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	491	IleSerGIySerGIyA spArgThr	661	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_11 1	322	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	492	IleSerSerSerGIyS erThrlle	662	AlaArgGlyTyrLeuGlyAlaTrpAsn ProAspPheTyrAspTyr
VH_11 2	323	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	493	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	663	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_11 3	324	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	494	IleThrGIySerGIyGI yThr	664	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpPheGlySer
VH_11 4	325	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	495	IleTyrProGlyAspS erAspThr	665	AlaArgLeuGlyAspGlySerAsnP heAspTyr
VH_11 5	326	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	496	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	666	AlaArgGluLysIleAlaValAlaGlyT yrTyrTyrGIyMetAspVal
VH_11 6	327	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	497	ThrTyrTyrAsnArgL ysTrpIleAsn	667	AlaArg AspG lyG lyT rpSerGIySer AlaLeuAspVal
VH_11 7	328	GlyTyrArgPhe ThrSerTyrTrp	498	IleTyrSerGIyGlySe rThr	668	AlaArgAspLeuHisSerAlaAlaGly PheAspTyr
VH_11 8	329	GlyTyrSerPhe ThrArgTyrTrp	499	IleLysSerLysAsnA spGlyGlyThrThr	669	ThrThrAlaProSerLeuMetAspVa I
VH_11 9	330	GlyTyrSerPhe ThrSerTyrTrp	500	IleSerGIySerGIyA spArgThr	670	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_12 0	331	GlyTyrSerPhe ThrSerTyrTrp	501	IleSerGIySerGIyA spArgThr	671	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_12 1	332	GlyTyrSerPhe ThrSerTyrTrp	502	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	672	Al a LysG I ySe rSe r P roT yrT yrT yr TyrGIyMetAspVal
VH_12 2	333	GlyTyrSerPhe ThrSerTyrTrp	503	IleTyrHisSerGIySe rThr	673	AlaArgAspGlyGlySerGIyTrpTyr AspTyr
VH_12 3	334	GlyTyrSerPhe ThrSerTyrTrp	504	IleTyrSerGIyGlySe rThr	674	AlaArgAspThrAlaSerGIyGlyMet AspVal
VH_12 4	335	GlyTyrSerPhe ThrSerTyrTrp	505	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	675	AlaArgGlyValThrVaIProTyrTyr TyrTyrGIyMetAspVal
VH_12 5	336	GlyTyrSerPhe ThrSerTyrTrp	506	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	676	AlaArgSerSerGIySerTyrGIyTyr PheGInHis
VH_12 6	337	GlyTyrThrPhe ThrArgAsnAla	507	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	677	AlaArgGluGlyThrAsplleTyrTyrT yrTyrGIyMetAspVal
VH_12 7	338	GlyTyrThrPhe ThrGIyTyrTyr	508	IleAspTyrSerGIyS erThr	678	AlaArgAspGlyTrpIleArgLysGlu AlaPheAspPro

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 85/701

78/117

VHJD	SEQ HOt	V«_C0R1	SEQ iiilil NO:	VH„C0R2	SEQ IO NO:	VH„C0R3
VH_12 8	339	GlyTyrThrPhe ThrGIyTyrTyr	509	IleLysSerLysAsnA spGlyGlyThrThr	679	ThrThrAlaProSerLeuMetAspVa I
VH_12 9	340	GlyTyrThrPhe ThrGIyTyrTyr	510	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	680	AlaArgAspProGlyGlyTyrTyrTyr TyrTyrGIyMetAspVal
VH_13 0	341	GlyTyrThrPhe ThrGIyTyrTyr	511	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	681	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_13 1	342	GlyTyrThrPhe ThrGIyTyrTyr	512	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	682	AlaLysLeuGlyGlySerTyrSerIleT yrTyrGIyMetAspVal
VH_13 2	343	GlyTyrThrPhe ThrGIyTyrTyr	513	IleTyrProGlyAspS erGIuThr	683	AlaArgAspGlyGlyAsnTyrGInPh eAspTyr
VH_13 3	344	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrAla	514	IlelleProllePheGly ThrAla	684	AlaArgThrGIyArgSerGIySerTyr TyrSerAspAlaPheAsplle
VH_13 4	345	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	515	IleAsnProSerGIyG lySerThr	685	AlaArgGluAspHisAspTyrSerAs nGInGlyGlyPheAspTyr
VH_13 5	346	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	516	IlelleProllePheGly ThrAla	686	AlaAlaArgAlaProGlyGlySerSer Ty rTy rTy rT y rG I yMet AspVal
VH_13 6	347	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	517	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	687	AlaArgAspProGlyTyrAspPheTr pSerGIyTyrSerAspVal
VH_13 7	348	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	518	IleSerGIySerGIyGI yArgThr	688	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpTyrGIyAsn
VH_13 8	349	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	519	IleSerTrpAsnSerG lySerlIe	689	AlaLysAspMetT rpGlySerLeuSe rlleValGIyAlaThrArgAlaPheAsp Tyr
VH_13 9	350	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	520	IleThrGIySerGIyGI yThr	690	AlaLysAspT rpAlaGlyT yrl leAsn GlyTrpPheGlySer
VH_14 0	351	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	521	IleTyrHisSerGIySe rThr	691	AlaArgGlyProLeuLeulleAlaAla AlaGlyThrAspTyrTyrTyrGIyMet AspVal
VH_14 1	352	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrTyr	522	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	692	AlaSerSerTyrGIyGlyAsnProLe uAspAlaPheAsplle
VH_14 2	353	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	523	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	693	AlaArgGluLysIleAlaValAlaGlyT yrTyrTyrGIyMetAspVal
VH_14 3	354	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	524	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	694	AlaArgGluPheGInAspSerSerS erTrpTyrGIuGlyArgAlaPheAspll e
VH_14 4	355	GlyAspSerVal SerSerAsnSer AlaAla	525	ThrTyrTyrArgSerL ysTrpTyrAsn	695	AlaArgG lyG ly Vai G lyAlaTh rT rp TyrTyrGIyMetAspVal
VH_14 5	356	GlyPheThrPh eAspAspTyrAI a	526	IleSerTrpAsnSerG lySerlIe	696	AlaLysAspIleAlaAlaGlyGlyLeu AspSer
VH_14 6	357	GlyPheThrPh eSerAsnAlaTr P	527	IleLysSerLysAsnA spGlyGlyThrThr	697	ThrThrAlaProSerLeuMetAspVa I
VH_14 7	358	GlyPheThrPh eSerAsnAlaTr P	528	IleLysSerLysAsnA spGlyGlyThrThr	698	ThrThrAlaProSerLeuMetAspVa I
VH_14 8	359	GlyPheThrPh eSerSerTyrAI a	529	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	699	AlaArgAspArgGlyValGIuGlyAla TyrGIyMetAspVal
VH_14 9	360	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI _	530	IleSerGIySerGIyGI ySerThr	700	AlaLysAlaThrGIyTyrSerSerGIy T rpT yrGIyAlaT yrPheAspT yr

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 86/701

79/117

VHJD	SEQ HOt	V«_C0R1	SEQ iiilil NO:	VH„C0R2	SEQ 10 NO:	VH„C0R3
VH_15 0	361	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	531	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	701	Al a LysG I ySe rSe r P roT yrT yrT yr TyrGIyMetAspVal
VH_15 1	362	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	532	IleTrpTyrAspGlyA snAsnLys	702	AlaArgAspAsnSerGIySerTyrAs nTrpPheAsnPro
VH_15 2	363	GlyPheThrPh eSerSerTyrGI y	533	IleTrpTyrAspGlyS erAsnLys	703	AlaArgGluValValGIySerTyrTyr LeuAspTyr
VH_15 3	364	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	534	IleSerTyrAspGlyGI yAsnLys	704	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_15 4	365	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	535	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	705	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_15 5	366	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	536	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	706	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_15 6	367	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	537	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	707	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_15 7	368	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	538	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	708	AlaArg ValG lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_15 8	369	GlyPheThrPh eSerSerTyrPr 0	539	IleSerTyrAspGlyS erAsnLys	709	Th rArg Vai G lySerGIyG lyT rpThr ProAspTyr
VH_15 9	370	GlyPheThrPh eSerSerTyrSe r	540	IleTrpTyrAspGlyS erAsnLys	710	AlaArg LeuG lySerGIyT rpSerLe uAspTyr
VH_16 0	371	GlyPheThrPh eSerSerTyrTr P	541	IleLysGInAspGlyS erGIuLys	711	AlaArgAspLeuHisCysGlySerSe rCysGlyProGluAla
VH_16 1	372	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	542	IleTyrSerGIyGlySe rThr	712	AlaArgAspLeuHisSerAlaAlaGly PheAspTyr
VH_16 2	373	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	543	IleTyrSerGIyGlySe rThr	713	AlaArgAspLeuSerTyrSerAspAI aPheAsplle
VH_16 3	374	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	544	IleTyrSerGIyGlySe rThr	714	AlaArgAspPheGluGlySerGIyAI aLeuAspVal
VH_16 4	375	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	545	IleTyrSerGIyGlySe rThr	715	AlaArgAspThrAlaSerGIyGlyMet AspVal
VH_16 5	376	GlyPheThrVal SerSerAsnTyr	546	IleTyrSerGIyGlySe rThr	716	AlaArgAspThrAlaSerGIyGlyMet AspVal
VH_16 6	377	GlyTyrSerPhe ThrSerTyrTrp	547	IleTyrProGlyAspS erAspThr	717	AlaSerGIyAlaSerProTyrTyrPhe AspTyr
VH_16 7	378	GlyTyrThrPhe ThrGIyTyrTyr	548	IleAsnProAsnSer GlyGlyThr	718	AlaArgGlyGlyAspCysSerSerTh rSerCysT yrAspProAspT yr
VH_16 8	379	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	549	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	719	AlaArgAspProValTyrSerSerSer TrpGlyGlyTyrAlaPheAsplle
VH_16 9	380	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrGIy	550	IleSerAlaTyrAsnGI yAsnThr	720	AlaArgGlyLeuGlyAspSerSerSe rSerTyr
VH_17 0	381	GlyTyrThrPhe ThrSerTyrTyr	551	IleAsnProSerGIyG lySerThr	721	AlaArgGluAspHisAspTyrSerAs nGInGlyGlyPheAspTyr

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 87/701

80/117 [00208] Tabela 5 - Sequências de VL da CDR combinadas

mAblD	VL_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VL_1	ThrSerAsnIleGlyAlaAsnHisThrLysAsnAlaAlaTrpAspAspSerLeuArgGlyTrpThr	722
VL_2	SerSerAspI leGlyGlyT yrLysT y rAsp ValTh rG I ySe rT yrSerSerSerSerSerHisT yrVal	723
VL_3	GlnSerlIeSerSerPheAlaAlaSerGInGInSerTyrSerThrProTrpThr	724
VL_4	GlnSerValSerSerAsnGlyAlaSerGInHisTyrAsnAsnTrpProProGInlIeThr	725
VL_5	GlnSerValSerSerAsnGlyAlaSerGInGInTyrGIyTyrSerGInlIeThr	726
VL_6	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	727
VL_7	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	728
VL_8	SerSerAsnIleGlyAlaGlyTyrAspSerSerAsnGInSerPheAspProSerLeuSerAspSerTrpVal	729
VL_9	SerGIySerlIeThrAspAspTyrGIuAspHisGInSerTyrAspAlaGluSerTrpVal	730
VL_10	GlnSerValSerSerAsnGlyAlaSerGInGInTyrGIyTyrSerGInlIeThr	731
VL_11	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspLeuLeuTyrVal	732
VL_12	GlnSerValSerSerSerTyrGIyAlaSerGInGInTyrGIyArgSerProPheThr	733
VL_13	GlnSerValThrSerAsnTyrGIyAlaSerGInGInTyrGIySerSerProThr	734
VL_14	ThrGIyAlaValThrSerGIyPheTyrSerAlaThrLeuLeuTyrTyrGIyGlyAlaGInProTrpVal	735
VL_15	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInLeuTrpAspGlyAlaSerAspLeuVallle	736
VL_16	GlnThrlIeSerSerTyrGIyAlaSerGInGInSerTyrSerThrProGInThr	737
VL_17	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	738
VL_18	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	739
VL_19	GlnArgValArgSerSerTyrGIyAlaSerGInGInTyrGIySerSerProProArglIelle	740
VL_20	GlnThrValSerAsnAsnAspAlaSerGInGInTyrGIySerSerProLeuThr	741
VL_21	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	742
VL_22	AsplleGluSerLysSerAspAspSerGInValTrpAspGlyllelleAsnGInValVal	743
VL_23	GlnGlyValArgAlaSerSerAlaAlaSerGInGInTyrGIyArgSerProThr	744
VL_24	GlnSerlIeSerSerTyrAlaAlaSerGInGInSerTyrSerThrProProTyrThr	745
VL_25	GlnSerValSerSerSerTyrGIyAlaSerGInGInTyrGIySerSerProGInTyrThr	746
VL_26	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpGlySerSerAsnAspProValVal	747
VL_27	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	748
VL_28	SerSerAsnIleGlyAsnAsnTyrAspAsnAsnGlyThrTrpAspSerSerLeuSerAlaValVal	749
VL_29	AsnIleGlyAlaLysSerAspAspSerGInValTrpAspAsnThrGIyAspHisProArgVallle	750
VL_30	GlnSerLeuValTyrSerAspGlyAsnThrTyrLysValSerMetGInGlyLysHisTrpProProThr	751
VL_31	SerLeuArgSerTyrTyrGIyLysAsnAsnSerArgAspSerSerGIyAsnHisTrpVal	752
VL_32	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisSerValVal	753
VL_33	AsnIleGlySerTyrSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisVallle	754
VL_34	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	755
VL_35	AsnLeuGlyGlyArgTyrGInAspLeuGInAlaTrpAspThrTyrThrValVal	756
VL_36	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	757
VL_37	SerLeuArgSerTyrTyrGIyLysAsnAsnSerArgAspSerSerGIyAsnHisValVal	758
VL_38	LysLeuGlyAspLysTyrGInAspThrGInAlaTrpAspSerSerThrAsnTyrVal	759
VL_39	GlnSerlIeAsnSerAsnGlyAlaSerGInGInPheGluGInTrpProLeuThr	760
VL_40	GlnArglIeSerLysTyrGIySerSerGInGInSerAspSerValProlleThr	761
VL_41	SerSerAsnIleGlyAlaGlyTyrArgGlyAspAsnGInSerHisAspGluSerLeuAsnSerLysVal	762

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 88/701

81/117

mAb ID	VL_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VL_42	GlnSerValSerSerAsnGlyAlaSerGInGInTyrGIySerSerProLeuThr	763
VL_43	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInLeuTrpAspGlyAlaSerAspLeuVallle	764
VL_44	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	765
VL_45	GlnSerValSerSerAsnGlyAlaSerGInGInTyrAsnAsnTrpProProGInTyrThr	766
VL_46	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspTyrValVal	767
VL_47	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerLeuSerAspHisVallle	768
VL_48	AsnIleGlyThrLysSerAspAspSerGInValTrpAspHisSerAsnAspHisValVal	769
VL_49	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerSerAlaTrpAspSerSerLeuThrAlaValVal	770
VL_50	AsnIleGlySerLysGlyAspAspArgGInValTrpAspThrAsnSerGInHisValVal	771
VL_51	SerSerAsnIleGlyAsnAsnGlyTyrAspAspAlaThrTrpAspAspArgLeuLysGlyTyrVal	772
VL_52	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspGInGlyVal	773
VL_53	GlyGlySerLeuAlaSerAsnTyrGIuAspLysGInSerTyrAspSerAlaAsnProLeuValVal	774
VL_54	AsnLeuGlyGlyTyrSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspLeuValVal	775
VL_55	SerGIySerIleAlaSerAsnTyrGIuAspAsnGInSerTyrAspThrSerAsnLeuValVal	776
VL_56	AsnIleGlySerLysAsnAspAspThrGInValTrpAspArgAsnThrGIyHisValVal	777
VL_57	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrGIuValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	778
VL_58	AsnIleGlyAsnLysAsnAspAspLysGInValTrpAspThrSerGIuTyrGInAsnArgVal	779
VL_59	SerGIySerIleAlaSerAsnTyrGIuHisAsnGInSerTyrAspAsnSerAsnProHisValVal	780
VL_60	SerSerAsnIleGlyAlaGlyTyrAspGlyAsnSerGInSerTyrAspSerSerLeuSerGIyPheTyrVal	781
VL_61	AsnIleGlyAsnLysAsnAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	782
VL_62	GlnGlylleSerSerTrpGlyAlaSerGInGInAlaAsnSerPheProlleThr	783
VL_63	SerGIySerIleAlaSerAsnTyrGIuAspAsnGInSerTyrAspSerSerAsnHisValVal	784
VL_64	GlnGlyValAsnSerAspGlyAlaSerGInGInTyrAsnAsnTrpProTrpThr	785
VL_65	LysLeuGlyAspLysTyrGIuAspThrGInAlaTrpAspThrSerAlaValVal	786
VL_66	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInLeuTrpAspAspSerSerAspHisValVal	787
VL_67	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	788
VL_68	SerLeuArgAspTyrTyrGIyLysAsnAsnSerArgAspSerSerGIyAsnHisValVal	789
VL_69	AsnIleGlyArgLysSerAspAspThrGInLeuTyrAspSerAspSerAspAsnValVal	790
VL_70	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisProVal	791
VL_71	SerLeuArgSerTyrTyrGIyLysAsnAsnSerArgAspSerSerGIyAsnLeuGlyVal	792
VL_72	GlnAsnlIeLeuThrAsnAlaAlaSerGInGInSerTyrSerlIeProTrpThr	793
VL_73	LysLeuGlyAsnLysTyrGIuAsnAsnGInAlaTrpAspSerSerThrAlaVal	794
VL_74	GlnSerlIeSerSerTyrAlaAlaSerGInGInSerTyrSerThrSerTrpThr	795
VL_75	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerAlaAlaTrpAspAspSerLeuAsnGlyGInValVal	796
VL_76	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	797
VL_77	AsnValGIyThrThrSerAspAspThrGInValTrpAspSerSerSerAspHisVallle	798
VL_78	LysIleGlySerTyrSerAspAspSerGInValTrpAspThrTyrGIyAspGInValVal	799
VL_79	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisProVal	800
VL_80	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerGIySerAspPheValVal	801
VL_81	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisProVal	802
VL_82	AsnIleGlySerGInSerAspAspSerGInValTrpAspGlySerAsnAspHisValVal	803
VL_83	AsnIleGlyArgGluSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerIleAspHisValVal	804

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 89/701

82/117

mAb ID	VL_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VL_84	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	805
VL_85	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	806
VL_86	AsnIleGlySerLysGlyAspAspSerGInValTrpAspAsnSerSerAspSerValVal	807
VL_87	GlyGlySerIleAlaSerAsnTyrLysAspAsnGInSerTyrGIySerGIyAsnValVal	808
VL_88	SerGIySerIleAlaSerAsnTyrGIuHisAsnGInSerPheAspArgAsnAsnProLysTrpVal	809
VL_89	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisLeuValVal	810
VL_90	LysLeuGlyAspLysTyrHisAspThrGInValTrpAspGlyThrThrAspHisPheLeu	811
VL_91	AsnIleGlySerLysSerTyrAspSerGInValTrpAspSerValSerAspProValMet	812
VL_92	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrGIuValSerSerSerTyrAlaGlySerAsnAsnLeuVal	813
VL_93	LysLeuGlyAspLysTyrGInAsnAsnGInAlaTrpAspSerSerAlaValVal	814
VL_94	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerThrSerAspHisProGluValVal	815
VL_95	AsnIleGlySerLysSerAspAspAspGInValTrpAspSerGIySerAspHisValVal	816
VL_96	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	817
VL_97	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	818
VL_98	SerSerAsnIleGlyAsnAsnTyrGIuAsnAsnGlyThrTrpAspSerSerLeuSerAlaGlyVal	819
VL_99	SerSerAsnIleGlyAlaGlyTyrAspGlyAsnSerGInSerTyrAspSerSerLeuSerTrpVal	820
VL_10 0	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnPheGlyValSerSerSerTyrArgIleArgAspSerLeuVal	821
VL_10 1	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	822
VL_10 2	GlyGlyGlylleAlaAspAsnTyrAspAspAspGInSerTyrAspSerAlaVaIProValVal	823
VL_10 3	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerAspAsnAspAsnSerGIuVallle	824
VL_10 4	AsnIleGlySerLysAsnAspAspAsnGInValTrpAspSerSerSerGIuHisValVal	825
VL_10 5	AsnIleGlySerAsnSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	826
VL_10 6	IleLeuGlyHisTyrHisGlyLysAspAsnAsnSerArgAspArgSerGIyThrGInValLeu	827
VL_10 7	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrGIuValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	828
VL_10 8	GlnSerValSerThrAsnGlyAlaSerGInGInTyrAsnThrTrpProProValArg	829
VL_10 9	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	830
VL_11 0	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	831
VL_11 1	LysIleGlySerLysIleHisAspSerGInValTrpAspValAsnThrAspHisValVal	832
VL_11 2	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrGIuValThrSerSerTyrThrSerSerSerThrPheValVal	833
VL_11 3	SerGIySerlIeValSerAsnTyrGIuAspAsnGInSerTyrAspSerGIyAsnValVal	834
VL_11 4	GlnSerValSerSerSerTyrGIyAlaSerGInGInTyrGIySerSerProLeuThr	835
VL_11 5	SerGIySerIleAlaThrAsnTyrGIuAspAsnGInSerTyrAspSerSerThrGIyVal	836
VL_11 6	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	837

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 90/701

83/117

mAb ID	VL_CDR1/2/3	SEQID NO:
VL_11 7	AsnIleGluSerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerGIyHisGInVal	838
VL_11 8	SerSerT yrl leAlaThrAsnSerSerAspSerAlaAlaT rpAspAspSerLeuAsnAlaT yrVal	839
VL_11 9	SerSerAsplleGlyGlyTyrAsnTyrGIuValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	840
VL_12 0	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	841
VL_12 1	SerSerAsnIleGlyAlaGlyTyrAspGlyAsnAsnAlaThrTrpAspAspSerLeuAsnAlaProTyrVal	842
VL_12 2	LysLeuGlyAsnLysTyrGInAspAspGInAlaTrpAspSerThrTyrValVal	843
VL_12 3	LysLeuGlyAspLysTyrGInAspThrGInAlaTrpAspSerThrThrLeuVal	844
VL_12 4	GlyGlySerIleAlaSerAsnTyrLysAspAsnGInSerTyrGIySerGIyAsnValVal	845
VL_12 5	SerSerAsnIleAlaSerAsnThrSerAsnAsnSerAlaTrpAspAspSerLeuHisThrTyrVal	846
VL_12 6	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrGIuValSerSerSerTyrAlaGlySerAspThrValVal	847
VL_12 7	SerSerAsnIleGlyAsnAsnTyrAspAsnAspGlyThrTrpAspAsnSerLeuSerAlaValVal	848
VL_12 8	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerSerSerAspHisValVal	849
VL_12 9	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	850
VL_13 0	SerSerAsnIleGlyAsnAsnTyrGIuAsnAsnGlyThrTrpAspSerSerLeuSerAlaValVal	851
VL_13 1	SerSerAspValGIyGlyTyrAspTyrGIuValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	852
VL_13 2	AsnIleGlySerLysSerAlaAspSerGInValTrpAspSerSerPheAspValAla	853
VL_13 3	AsnIleGlyAspLysArgTyrAspThrGInValTrpAspThrAspThrAsnHisAlaVal	854
VL_13 4	SerSerAspValGIyAlaTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrThrThrSerSerThrLeuVal	855
VL_13 5	LysLeuGlyAspLysTyrGInAspSerGInThrTrpAspSerSerThrValVal	856
VL_13 6	LysLeuGlyAspLysTyrGInAsplleGInAlaTrpAspArgSerSerTyrVal	857
VL_13 7	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrGIuValSerSerSerTyrSerGIySerAsnAsnLeuValVal	858
VL_13 8	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValAsnSerSerTyrThrSerSerAsnThrLeuValVal	859
VL_13 9	SerSerAsnIleGlyAlaGlyTyrAspGlyAsnSerGInSerTyrAspSerSerLeuSerGIySerGIyTyr Vai	860
VL_14 0	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrGIuValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	861
VL_14 1	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	862
VL_14 2	AsnIleGlySerLysSerAspAspSerGInValTrpAspSerGIyAsnIleHisProValVal	863
VL_14 3	GlyAsnAsnTyrGIuAsnAsnGlyThrTrpAspSerSerLeuAsnValGIyVal	864
VL_14 4	LysLeuGlyAsnLysTyrGInAspAsnGInAlaTrpAspSerSerThrAlaVal	865

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 91/701

84/117

mAb ID	VL_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VL_14 5	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrAlaGlySerSerValVal	866
VL_14 6	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrGIuValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrLeuValVal	867
VL_14 7	GlySerAsnIleGlyAlaGlyTyrAspGlyAsnIleAlaAlaTrpAspAspSerLeuAsnGlyLeuTyrVal	868
VL_14 8	SerSerAspValGIyGlyTyrAsnTyrAspValSerSerSerTyrThrSerSerSerThrPheValVal	869
VL_14 9	SerSerAsnIleGlylleAsnThrArgAsnAsnAlaAlaTrpAspAspSerLeuSerGIyTrpVal	870
VL_15 0	GlySerAsplleGlyAspTyrLysTyrAspValThrSerProHisThrProSerArgVallle	871
VL_15 1	SerSerAsnIleGlyAlaGlyTyrAspGlyAsnSerAlaAlaTrpAspAspGlyProSerGIyTyrVal	872
VL_15 2	LysLeuGlyAspLysTyrArgAspAsnGInAlaTrpAspSerSerThrValVal	873
VL_15 3	GlnSerlIeAspThrSerAlaAlaSerGInGInSerTyrSerThrProGInTyrThr	874
VL_15 4	GlnSerlIeSerSerTrpLysAlaSerGInGInTyrAsnThrTyrPheProThr	875

[00209] Tabela 6 - CDR5 discreto para sequências de VL

VLJ D	SEQ 10 NO:	VLCDR1	SEQ IO NÔ:	VL_CDR2	SEQ iilili NO:	VLCDR3
VL_1	876	ThrSerAsnIleGlyAlaAsn His	1030	ThrLysAsn	1184	AlaAlaT rpAspAspSerLeuArgGlyT r pThr
VL_2	877	SerSerAsplleGlyGlyTyr LysTyr	1031	AspValThr	1185	GlySerTyrSerSerSerSerSerHisTy rVal
VL_3	878	GlnSerlIeSerSerPhe	1032	AlaAlaSer	1186	GlnGInSerTyrSerThrProTrpThr
VL_4	879	GlnSerValSerSerAsn	1033	GlyAlaSer	1187	GlnHisTyrAsnAsnTrpProProGInlIe Thr
VL_5	880	GlnSerValSerSerAsn	1034	GlyAlaSer	1188	GlnGInTyrGIyTyrSerGInlIeThr
VL_6	881	AsnIleGlySerLysSer	1035	AspAspSe r	1189	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_7	882	AsnIleGlySerLysSer	1036	AspAspSe r	1190	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_8	883	SerSerAsnIleGlyAlaGly TyrAsp	1037	SerSerAsn	1191	GlnSerPheAspProSerLeuSerAsp SerTrpVal
VL_9	884	SerGIySerlIeThrAspAsp Tyr	1038	GluAspHis	1192	GlnSerTyrAspAlaGluSerTrpVal
VL_1 0	885	GlnSerValSerSerAsn	1039	GlyAlaSer	1193	GlnGInTyrGIyTyrSerGInlIeThr
VL_1 1	886	AsnIleGlySerLysSer	1040	AspAspSe r	1194	GlnValT rpAspSerSerSerAspLeuL euTyrVal
VL_1 2	887	GlnSerValSerSerSerTyr	1041	GlyAlaSer	1195	GlnGInTyrGIyArgSerProPheThr
VL_1 3	888	GlnSerValThrSerAsnTy r	1042	GlyAlaSer	1196	GlnGInTyrGIySerSerProThr
VL_1 4	889	ThrGIyAlaValThrSerGIy PheTyr	1043	SerAlaThr	1197	LeuLeuTyrTyrGIyGlyAlaGInProTr pVal
VL_1 5	890	AsnIleGlySerLysSer	1044	AspAspSe r	1198	GlnLeuT rpAspGlyAlaSerAspLeuV allle

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 92/701

85/117

VLJ 0	SEQ ID NO:	VLCDR1	SEQ ID NO:	VL_CDR2	SEQ iiilii NO:	VLCBR3
VL_1 6	891	GlnThrlIeSerSerTyr	1045	GlyAlaSer	1199	GlnGInSerTyrSerThrProGInThr
VL_1 7	892	AsnIleGlySerLysSer	1046	AspAspSe r	1200	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_1 8	893	AsnIleGlySerLysSer	1047	AspAspSe r	1201	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_1 9	894	GlnArgValArgSerSerTyr	1048	GlyAlaSer	1202	GlnGInTyrGIySerSerProProArglIe lie
VL_2 0	895	GlnThrValSerAsnAsn	1049	AspAlaSer	1203	GlnGInTyrGIySerSerProLeuThr
VL_2 1	896	AsnIleGlySerLysSer	1050	AspAspSe r	1204	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_2 2	897	AsplleGluSerLysSer	1051	AspAspSe r	1205	GlnValTrpAspGlyllelleAsnGInVal Vai
VL_2 3	898	GlnGlyValArgAlaSerSer	1052	AlaAlaSer	1206	GlnGInTyrGIyArgSerProThr
VL_2 4	899	GlnSerlIeSerSerTyr	1053	AlaAlaSer	1207	GlnGInSerTyrSerThrProProTyrTh r
VL_2 5	900	GlnSerValSerSerSerTyr	1054	GlyAlaSer	1208	GlnGInTyrGIySerSerProGInTyrTh r
VL_2 6	901	AsnIleGlySerLysSer	1055	AspAspSe r	1209	GlnValT rpGlySerSerAsnAspProV alVal
VL_2 7	902	AsnIleGlySerLysSer	1056	AspAspSe r	1210	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_2 8	903	SerSerAsnIleGlyAsnAs nTyr	1057	AspAsnAs n	1211	GlyThrT rpAspSerSerLeuSerAlaV alVal
VL_2 9	904	AsnIleGlyAlaLysSer	1058	AspAspSe r	1212	GlnValT rpAspAsnTh rG lyAspHisP r oArgVallle
VL_3 0	905	GlnSerLeuValTyrSerAs pGlyAsnThrTyr	1059	LysValSer	1213	MetGI nGlyLysH isT rpP roP roTh r
VL_3 1	906	SerLeuArgSerTyrTyr	1060	GlyLysAsn	1214	AsnSerArgAspSerSerGIyAsnHisT rpVal
VL_3 2	907	AsnIleGlySerLysSer	1061	AspAspSe r	1215	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisS erValVal
VL_3 3	908	AsnIleGlySerTyrSer	1062	AspAspSe r	1216	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV allle
VL_3 4	909	AsnIleGlySerLysSer	1063	AspAspSe r	1217	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_3 5	910	AsnLeuGlyGlyArgTyr	1064	GlnAspLe u	1218	GI n AlaT rpAspTh rTy rTh rVal Vai
VL_3 6	911	AsnIleGlySerLysSer	1065	AspAspSe r	1219	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_3 7	912	SerLeuArgSerTyrTyr	1066	GlyLysAsn	1220	AsnSerArgAspSerSerGIyAsnHisV alVal
VL_3 8	913	LysLeuGlyAspLysTyr	1067	GlnAspThr	1221	GlnAlaTrpAspSerSerThrAsnTyrV al
VL_3 9	914	GlnSerlIeAsnSerAsn	1068	GlyAlaSer	1222	GlnGInPheGluGInT rpProLeuThr
VL_4 0	915	GlnArglIeSerLysTyr	1069	GlySerSer	1223	GlnGInSerAspSerValProlleThr
VL_4 1	916	SerSerAsnIleGlyAlaGly TyrArg	1070	GlyAspAs n	1224	GlnSerHisAspGluSerLeuAsnSerL ysVal
VL_4 2	917	GlnSerValSerSerAsn	1071	GlyAlaSer	1225	GlnGInTyrGIySerSerProLeuThr

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 93/701

86/117

VLJ 0	SEQ ID NO:	VLCDR1	SEQ ID NO:	VL_CDR2	SEQ iiilii NO:	VLCBRS
VL_4 3	918	AsnIleGlySerLysSer	1072	AspAspSe r	1226	GlnLeuT rpAspGlyAlaSerAspLeuV allle
VL_4 4	919	AsnIleGlySerLysSer	1073	AspAspSe r	1227	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_4 5	920	GlnSerValSerSerAsn	1074	GlyAlaSer	1228	GlnGInTyrAsnAsnTrpProProGInT yrThr
VL_4 6	921	AsnIleGlySerLysSer	1075	AspAspSe r	1229	GlnValTrpAspSerSerSerAspTyrV alVal
VL_4 7	922	AsnIleGlySerLysSer	1076	AspAspSe r	1230	GlnValT rpAspSerLeuSerAspHisV allle
VL_4 8	923	AsnIleGlyThrLysSer	1077	AspAspSe r	1231	GlnValT rpAspHisSerAsnAspHisV alVal
VL_4 9	924	AsnIleGlySerLysSer	1078	AspAspSe r	1232	SerAlaT rpAspSerSerLeuThrAlaV alVal
VL_5 0	925	AsnIleGlySerLysGly	1079	AspAspAr g	1233	GlnValT rpAspThrAsnSerGInHisV alVal
VL_5 1	926	SerSerAsnIleGlyAsnAs nGly	1080	TyrAspAs P	1234	AlaThrT rpAspAspArgLeuLysGlyT yrVal
VL_5 2	927	AsnIleGlySerLysSer	1081	AspAspSe r	1235	GlnValT rpAspSerSerSerAspGInG lyVal
VL_5 3	928	GlyGlySerLeuAlaSerAs nTyr	1082	GluAspLys	1236	GlnSerTyrAspSerAlaAsnProLeuV alVal
VL_5 4	929	AsnLeuGlyGlyTyrSer	1083	AspAspSe r	1237	GlnValT rpAspSerSerSerAspLeuV alVal
VL_5 5	930	SerGIySerIleAlaSerAsn Tyr	1084	GluAspAs n	1238	GlnSerTyrAspThrSerAsnLeuValV al
VL_5 6	931	AsnIleGlySerLysAsn	1085	AspAspTh r	1239	GlnValT rpAspArg AsnTh rG lyHisV alVal
VL_5 7	932	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1086	GluValSer	1240	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_5 8	933	AsnIleGlyAsnLysAsn	1087	AspAspLy s	1241	GI n VaIT rpAspTh rSerG I uTy rG I n As nArgVal
VL_5 9	934	SerGIySerIleAlaSerAsn Tyr	1088	GluHisAsn	1242	GlnSerTyrAspAsnSerAsnProHisV alVal
VL_6 0	935	SerSerAsnIleGlyAlaGly TyrAsp	1089	GlyAsnSer	1243	GlnSerTyrAspSerSerLeuSerGIyP heTyrVal
VL_6 1	936	AsnIleGlyAsnLysAsn	1090	AspAspSe r	1244	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_6 2	937	GlnGlylleSerSerTrp	1091	GlyAlaSer	1245	GlnGInAlaAsnSerPheProlleThr
VL_6 3	938	SerGIySerIleAlaSerAsn Tyr	1092	GluAspAs n	1246	GlnSerTyrAspSerSerAsnHisValV al
VL_6 4	939	GlnGlyValAsnSerAsp	1093	GlyAlaSer	1247	GlnGInTyrAsnAsnT rpProT rpThr
VL_6 5	940	LysLeuGlyAspLysTyr	1094	GluAspThr	1248	GlnAlaT rpAspTh rSerAlaVal Vai
VL_6 6	941	AsnIleGlySerLysSer	1095	AspAspSe r	1249	GlnLeuT rpAspAspSerSerAspHisV alVal
VL_6 7	942	AsnIleGlySerLysSer	1096	AspAspSe r	1250	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_6 8	943	SerLeuArgAspTyrTyr	1097	GlyLysAsn	1251	AsnSerArgAspSerSerGIyAsnHisV alVal
VL_6 9	944	AsnIleGlyArgLysSer	1098	AspAspTh r	1252	GI n LeuT y rAspSerAspSerAspAsn ValVal

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 94/701

87/117

VLJ 0	SEQ ID NO:	VLCDR1	SEQ ID NO:	VL_CDR2	SEQ iiilii NO:	VLCDRS
VL_7 0	945	AsnIleGlySerLysSer	1099	AspAspSe r	1253	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisPr oVal
VL_7 1	946	SerLeuArgSerTyrTyr	1100	GlyLysAsn	1254	AsnSerArgAspSerSerGIyAsnLeu GlyVal
VL_7 2	947	GlnAsnlIeLeuThrAsn	1101	AlaAlaSer	1255	GlnGInSerTyrSerlIeProTrpThr
VL_7 3	948	LysLeuGlyAsnLysTyr	1102	GluAsnAs n	1256	GlnAlaT rpAspSerSerTh rAlaVal
VL_7 4	949	GlnSerlIeSerSerTyr	1103	AlaAlaSer	1257	GlnGInSerTyrSerThrSerTrpThr
VL_7 5	950	AsnIleGlySerLysSer	1104	AspAspSe r	1258	AlaAlaT rpAspAspSerLeuAsnGlyG InValVal
VL_7 6	951	AsnIleGlySerLysSer	1105	AspAspSe r	1259	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_7 7	952	AsnValGIyThrThrSer	1106	AspAspTh r	1260	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV allle
VL_7 8	953	LysIleGlySerTyrSer	1107	AspAspSe r	1261	GI n VaITrpAspTh rTy rG lyAspG I nV alVal
VL_7 9	954	AsnIleGlySerLysSer	1108	AspAspSe r	1262	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisPr oVal
VL_8 0	955	AsnIleGlySerLysSer	1109	AspAspSe r	1263	GlnValT rpAspSerGIySerAspPheV alVal
VL_8 1	956	AsnIleGlySerLysSer	1110	AspAspSe r	1264	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisPr oVal
VL_8 2	957	AsnIleGlySerGInSer	1111	AspAspSe r	1265	GlnValT rpAspGlySerAsnAspHisV alVal
VL_8 3	958	AsnIleGlyArgGluSer	1112	AspAspSe r	1266	GlnValTrpAspSerSerlIeAspHisVal Vai
VL_8 4	959	AsnIleGlySerLysSer	1113	AspAspSe r	1267	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_8 5	960	AsnIleGlySerLysSer	1114	AspAspSe r	1268	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_8 6	961	AsnIleGlySerLysGly	1115	AspAspSe r	1269	GlnValT rpAspAsnSerSerAspSerV alVal
VL_8 7	962	GlyGlySerIleAlaSerAsn Tyr	1116	LysAspAs n	1270	GlnSerTyrGIySerGIyAsnValVal
VL_8 8	963	SerGIySerIleAlaSerAsn Tyr	1117	GluHisAsn	1271	GlnSerPheAspArgAsnAsnProLys TrpVal
VL_8 9	964	AsnIleGlySerLysSer	1118	AspAspSe r	1272	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisL euValVal
VL_9 0	965	LysLeuGlyAspLysTyr	1119	HisAspThr	1273	GlnValT rpAspG lyTh rTh rAspH isPh eLeu
VL_9 1	966	AsnIleGlySerLysSer	1120	TyrAspSer	1274	GlnValT rpAspSerValSerAspProV alMet
VL_9 2	967	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1121	GluValSer	1275	SerSerTyrAlaGlySerAsnAsnLeuV al
VL_9 3	968	LysLeuGlyAspLysTyr	1122	GlnAsnAs n	1276	GlnAlaT rpAspSerSerAlaVal Vai
VL_9 4	969	AsnIleGlySerLysSer	1123	AspAspSe r	1277	GlnValT rpAspSerTh rSerAspH isP r oGIuValVal
VL_9 5	970	AsnIleGlySerLysSer	1124	AspAspAs P	1278	GlnValT rpAspSerG lySerAspHisV alVal
VL_9 6	971	AsnIleGlySerLysSer	1125	AspAspSe r	1279	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 95/701

88/117

VLJ 0	SEQ ID NO:	VLCDR1	SEQ ID NO:	VL_CDR2	SEQ iiilii NO:	vlcdrs
VL_9 7	972	AsnIleGlySerLysSer	1126	AspAspSe r	1280	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_9 8	973	SerSerAsnIleGlyAsnAs nTyr	1127	GluAsnAs n	1281	GlyThrT rpAspSerSerLeuSerAlaGI yVal
VL_9 9	974	SerSerAsnIleGlyAlaGly TyrAsp	1128	GlyAsnSer	1282	GlnSerTyrAspSerSerLeuSerTrpV al
VL_1 00	975	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnPhe	1129	GlyValSer	1283	SerSerT yrArgl leArgAspSerLeuVal
VL_1 01	976	AsnIleGlySerLysSer	1130	AspAspSe r	1284	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_1 02	977	GlyGlyGlylleAlaAspAsn Tyr	1131	AspAspAs P	1285	GlnSerTyrAspSerAlaValProValVa I
VL_1 03	978	AsnIleGlySerLysSer	1132	AspAspSe r	1286	GlnValT rpAspSerAspAsnAspAsn SerGIuVallle
VL_1 04	979	AsnIleGlySerLysAsn	1133	AspAspAs n	1287	GlnValT rpAspSerSerSerGIuHisVa IVal
VL_1 05	980	AsnIleGlySerAsnSer	1134	AspAspSe r	1288	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_1 06	981	IleLeuGlyHisTyrHis	1135	GlyLysAsp Asn	1289	AsnSerArgAspArgSerGIyThrGInV alLeu
VL_1 07	982	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1136	GluValSer	1290	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 08	983	GlnSerValSerThrAsn	1137	GlyAlaSer	1291	GlnGInTyrAsnThrTrpProProValAr g
VL_1 09	984	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1138	AspValSer	1292	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 10	985	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1139	AspValSer	1293	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 11	986	LysIleGlySerLysIle	1140	HisAspSer	1294	GlnValT rpAspValAsnThrAspHisV alVal
VL_1 12	987	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1141	GluValThr	1295	SerSerTyrThrSerSerSerThrPheV alVal
VL_1 13	988	SerGIySerlIeValSerAsn Tyr	1142	GluAspAs n	1296	GlnSerTyrAspSerGIyAsnValVal
VL_1 14	989	GlnSerValSerSerSerTyr	1143	GlyAlaSer	1297	GlnGInTyrGIySerSerProLeuThr
VL_1 15	990	SerGIySerIleAlaThrAsn Tyr	1144	GluAspAs n	1298	GlnSerTyrAspSerSerThrGIyVal
VL_1 16	991	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1145	AspValSer	1299	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 17	992	AsnIleGluSerLysSer	1146	AspAspSe r	1300	GlnValT rpAspSerG lyHisG I nVal
VL_1 18	993	SerSerTyrIleAlaThrAsn Ser	1147	SerAspSer	1301	AlaAlaT rpAspAspSerLeuAsnAlaT yrVal
VL_1 19	994	SerSerAsplleGlyGlyTyr AsnTyr	1148	GluValSer	1302	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 20	995	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1149	AspValSer	1303	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 21	996	SerSerAsnIleGlyAlaGly TyrAsp	1150	GlyAsnAs n	1304	AlaThrT rpAspAspSerLeuAsnAlaP roTyrVal
VL_1 22	997	LysLeuGlyAsnLysTyr	1151	GlnAspAs P	1305	GlnAlaTrpAspSerThrTyrValVal
VL_1 23	998	LysLeuGlyAspLysTyr	1152	GlnAspThr	1306	GlnAlaT rpAspSerThrThrLeuVal

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 96/701

89/117

VLJ 0	SEQ ID NO:	VLCDR1	SEQ ID NO:	VL_CDR2	SEQ iiilii NO:	VLCBR5
VL_1 24	999	GlyGlySerIleAlaSerAsn Tyr	1153	LysAspAs n	1307	GlnSerTyrGIySerGIyAsnValVal
VL_1 25	1000	SerSerAsnIleAlaSerAsn Thr	1154	SerAsnAs n	1308	SerAlaT rpAspAspSerLeuHisThrT yrVal
VL_1 26	1001	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1155	GluValSer	1309	SerSerTyrAlaGlySerAspThrValVa I
VL_1 27	1002	SerSerAsnIleGlyAsnAs nTyr	1156	AspAsnAs P	1310	GlyThrT rpAspAsnSerLeuSerAlaV alVal
VL_1 28	1003	AsnIleGlySerLysSer	1157	AspAspSe r	1311	GlnValT rpAspSerSerSerAspHisV alVal
VL_1 29	1004	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1158	AspValSer	1312	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 30	1005	SerSerAsnIleGlyAsnAs nTyr	1159	GluAsnAs n	1313	GlyThrT rpAspSerSerLeuSerAlaV alVal
VL_1 31	1006	SerSerAspValGIyGlyTyr AspTyr	1160	GluValSer	1314	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 32	1007	AsnIleGlySerLysSer	1161	AlaAspSer	1315	GlnValT rpAspSerSerPheAspValA Ia
VL_1 33	1008	AsnIleGlyAspLysArg	1162	TyrAspThr	1316	GlnValT rpAspTh rAspTh rAsn H isAI aVal
VL_1 34	1009	SerSerAspValGIyAlaTyr AsnTyr	1163	AspValSer	1317	SerSerTyrThrThrSerSerThrLeuVa I
VL_1 35	1010	LysLeuGlyAspLysTyr	1164	GlnAspSer	1318	GlnThrT rpAspSerSerTh rVal Vai
VL_1 36	1011	LysLeuGlyAspLysTyr	1165	GlnAsplle	1319	GlnAlaTrpAspArgSerSerTyrVal
VL_1 37	1012	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1166	GluValSer	1320	SerSerTyrSerGIySerAsnAsnLeuV alVal
VL_1 38	1013	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1167	AspValAs n	1321	SerSerTyrThrSerSerAsnThrLeuV alVal
VL_1 39	1014	SerSerAsnIleGlyAlaGly TyrAsp	1168	GlyAsnSer	1322	GlnSerTyrAspSerSerLeuSerGIyS erGIyTyrVal
VL_1 40	1015	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1169	GluValSer	1323	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 41	1016	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1170	AspValSer	1324	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 42	1017	AsnIleGlySerLysSer	1171	AspAspSe r	1325	GlnValTrpAspSerGIyAsnlIeHisPro ValVal
VL_1 43	1018	GlyAsnAsnTyr	1172	GluAsnAs n	1326	GlyThrT rpAspSerSerLeuAsnValG lyVal
VL_1 44	1019	LysLeuGlyAsnLysTyr	1173	GlnAspAs n	1327	GlnAlaT rpAspSerSerTh rAlaVal
VL_1 45	1020	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1174	AspValSer	1328	SerSerTyrAlaGlySerSerValVal
VL_1 46	1021	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1175	GluValSer	1329	SerSerTyrThrSerSerSerThrLeuVa IVal
VL_1 47	1022	GlySerAsnIleGlyAlaGly TyrAsp	1176	GlyAsnIle	1330	AlaAlaT rpAspAspSerLeuAsnGlyL euTyrVal
VL_1 48	1023	SerSerAspValGIyGlyTyr AsnTyr	1177	AspValSer	1331	SerSerTyrThrSerSerSerThrPheV alVal
VL_1 49	1024	SerSerAsnIleGlylleAsn Thr	1178	ArgAsnAs n	1332	AlaAlaT rpAspAspSerLeuSerGIyT r pVal
VL_1 50	1025	GlySerAsplleGlyAspTyr LysTyr	1179	AspValThr	1333	SerProHisThrProSerArgVallle

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 97/701

90/117

VLJ 0	SEQ ID NO:	VLCDR1	SEQ ID NO:	VL_CDR2	SEQ iiilii NO:	VUCDRS
VL_1 51	1026	SerSerAsnIleGlyAlaGly TyrAsp	1180	GlyAsnSer	1334	AlaAlaTrpAspAspGlyProSerGIyTy rVal
VL_1 52	1027	LysLeuGlyAspLysTyr	1181	ArgAspAs n	1335	GlnAlaT rpAspSerSerTh rVal Vai
VL_1 53	1028	GlnSerlIeAspThrSer	1182	AlaAlaSer	1336	GlnGInSerTyrSerThrProGInTyrTh r
VL_1 54	1029	GlnSerlIeSerSerTrp	1183	LysAlaSer	1337	GlnGInTyrAsnThrTyrPheProThr

[00210] Tabela 7 - Sequências de VH da CDR combinadas

mAblD	VH_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VH_1	GlyAspSerlIeSerSerGIyTyrTrplleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThr ProAspTyr	1338
VH_2	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlalleAsnProAsnSerGIyGlyThrAlaArgGluValAlaThrIlePro AlaHisPheAspTyr	1339
VH_3	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlalleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgAspTyrAsplleLeuTh rGlyLeuAspTyr	1340
VH_4	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlalleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrlIe AsnGlyTrpTyrGIyAsn	1341
VH_5	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlalleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrVal AsnGlyTrpTyrGIyAsn	1342
VH_6	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlalleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysAspTrpGlyThrSerLe uLeuTyrGIyTyrPheAspTyr	1343
VH_7	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTr pThrProAspTyr	1344
VH_8	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlalleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspPheGluGlySerGIyAI aLeuAspVal	1345
VH_9	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlaThrTyrTyrSerSerLysTrpTyrAsnAlaArgGlyGlySerSerGI uPheT yrT yrT yrGI yMetAspVal	1346
VH_10	GlyAspSerValSerSerAspSerAlaSerlIeSerGIySerGIyGlylleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrThr AsnGlyTrpTyrGIySer	1347
VH_11	GlyGlySerlIeSerGIySerAsnTyrTyrlIeSerGIySerGIyGlylleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrThrAs nGlyTrpTyrGIySer	1348
VH_12	GlyGlySerlIeSerSerSerAsnTrplleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysAspArgSerArgArgAlaPro TyrTyrPheAspTyr	1349
VH_13	GlyGlySerlIeSerSerSerAsnTrplleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysValTyrArgGlyTyrAspAla PheAsplle	1350
VH_14	GlyGlySerlIeSerSerSerAsnTrplleTyrProGlyAspSerAspThrAlaArgHisAlaGlyAspGlyGInlIe AspTyr	1351
VH_15	GlyGlySerlIeSerSerSerAsnTrpThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGluGlySerGIyLeuTy rTyrTyrTyrGIyMetAspVal	1352
VH_16	GlyGlySerValSerSerAsnSerAlaAlalleSerGIySerGIyGlySerThrAlaArgGlyGlySerGIyTrpTyr HisTyrPheAspTyr	1353
VH_17	GlyGlyThrPheSerSerTyrAlalleSerGIyThrGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIySer	1354
VH_18	GlyGlyThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1355
VH_19	GlyGlyThrPheSerSerTyrAlalleTrpTyrAspGlySerAsnLysAlaArgLeuGlySerGIyTrpSerLeuA spTyr	1356
VH_20	GlyPheThrPheAsnThrTyrAlalleSerGIySerGIyAspArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGI yTrpPheGlyAsn	1357
VH_21	GlyPheThrPheAsnThrTyrAlalleSerGIySerGIyAsplleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsnGly TrpTyrGIyAsn	1358

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 98/701

91/117

mAb ID	VH_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VH_22	GlyPheThrPheAsnThrTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1359
VH_23	GlyPheThrPheAspAspTyrAlalleAsnAlaGlyAsnGlyAsnThrAlaArgGlyGlyTyrCysSerSerThr SerCysTyrProAspTyrAsnTrpPheAspPro	1360
VH_24	GlyPheThrPheAspAspTyrAlalleSerGIySerGIyAspArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGI yTrpTyrAlaAsn	1361
VH_25	GlyPheThrPheAspAspTyrAlalleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspArgArgGlyGlyAsnTrpTyrG luPheAspTyr	1362
VH_26	GlyPheThrPheAspAspTyrAlalleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgGluGlyLeuAlaMetAlaGlyTyrP heAspTyr	1363
VH_27	GlyPheThrPheGlyAsnHisGlylleLysHisAspGlySerGIuGInAlaArgValAlaValGIyAlaAsnLeuAI aPheAsplle	1364
VH_28	GlyPheThrPheSerArgTyrGIylleSerGIySerGIyAspArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGI yTrpTyrGIyAsn	1365
VH_29	GlyPheThrPheSerAsnAlaTrpllelleProllePheGlyThrAlaAlaArgGlyMetAlaGInSerProAlaPhe AspTyr	1366
VH_30	GlyPheThrPheSerAsnAlaTrplleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1367
VH_31	GlyPheThrPheSerAsnAlaTrpThrTyrTyrAsnSerLysTrpTyrAsnAlaArgGluThrGIyGlyPheAsp Tyr	1368
VH_32	GlyPheThrPheSerAsnTyrAlalleAsnThrAspGlyGlyAsnThrAlaArgAspProValArgGlyAspGly TyrAsnPheAspTyr	1369
VH_33	GlyPheThrPheSerAsnTyrAlalleSerGIySerGIyAsplleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsnGI yTrpTyrGIyAsn	1370
VH_34	GlyPheThrPheSerAsnTyrAlalleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysAlaThrGIyTyrSerSerGIyTr pT yrGI yAlaT yrPheAspT yr	1371
VH_35	GlyPheThrPheSerAsnTyrAlalleTyrHisSerGIySerThrAlaArgAspArgGlySerMetAspVal	1372
VH_36	GlyPheThrPheSerAsnTyrAlalleTyrProGlyAspSerAspThrAlaArgLeuGlyArgThrSerHisGInS erTrpAspLeuGlyTyr	1373
VH_37	GlyPheThrPheSerAsnTyrAlalleTyrProGlyAspSerAspThrAlaSerGIyAlaSerProTyrTyrPheA spTyr	1374
VH_38	GlyPheThrPheSerAsnTyrAlalleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgGluSerAsnThrAlaAsnThrHisP heAspTyr	1375
VH_39	GlyPheThrPheSerAsnTyrAlaThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGlyGlyValGIyAlaThrTr pTyrTyrGIyMetAspVal	1376
VH_40	GlyPheThrPheSerAsnTyrGIylleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysGInGInTrpLeuGlyThrTrpT yrPheAspLeu	1377
VH_41	GlyPheThrPheSerAsnTyrGIylleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysGlyLeuLeuValAlaSerlIeTy rAspAlaPheAsplle	1378
VH_42	GlyPheThrPheSerAspTyrAlalleSerTrpAsnSerGIySerIleAlaLysAspIleAlaAlaGlyGlyLeuAsp Ser	1379
VH_43	GlyPheThrPheSerAspTyrTyrValSerGIySerGIyThrSerThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGI yTrpTyrGIyAsn	1380
VH_44	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleAsnProAsnSerGIyAspThrAlaArgGluGInTrpLeuGlyProAlaH isPheAspTyr	1381
VH_45	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleAsnProAsnSerGIyGlyThrAlaArgGluArgAsnArgAlaGlyGluP heSerAlaPheAsplle	1382
VH_46	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleGluProGlyAsnGlyAspThrAlaArgGlyAlaSerGIyLeuAspPhe	1383
VH_47	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleLysGInAspGlySerGIuLysAlaArgAspLeuHisCysGlySerSer CysGlyProGluAla	1384
VH_48	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgAspProValTyrSerSerSerTr pGlyGlyTyrAlaPheAsplle	1385
VH_49	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgAspThrPheGlyGlyGlySerT yrTyrGIyHisGlyTyr	1386

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 99/701

92/117

mAblD	VH_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VH_50	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerAsnAspGlyValAsnAsnAlaArgGluAsnSerAsnAlaTrpLys ValMetAspVal	1387
VH_51	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerGIySerGIyAspArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1388
VH_52	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1389
VH_53	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAspGly TrpTyrGIyAsn	1390
VH_54	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpGlyAlaTyrSerSerGI yTrpTyrGIyAsp	1391
VH_55	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerGIySerGIyGlyAsnIleAlaLysAspTrpAlaGlyTyrSerAsnGly TrpTyrGIySer	1392
VH_56	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerGIySerGIyGlylleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrSerAsnGly TrpPheGlySer	1393
VH_57	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlyGlyAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1394
VH_58	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnGInAlaValGIyValGIyPhelleThrAspGI yTyrPheGInHis	1395
VH_59	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1396
VH_60	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1397
VH_61	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysGInGInTrpLeuGlyThrTrpT yrPheAspLeu	1398
VH_62	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysGluTrpGlyGlyGlyAspSerP roThrAspMetGlyLeuPheAspTyr	1399
VH_63	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysThrArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1400
VH_64	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleTrpTyrAspGlyAsnAsnLysAlaArgAspAsnSerGIySerTyrAsn TrpPheAsnPro	1401
VH_65	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleTyrProGlyAspSerAspThrAlaArgSerHisGlyGlySerAsnTrpP heAspPro	1402
VH_66	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleTyrProGlyAspSerAspThrAlaThrSerLeuGlyAspAspAlaPhe Asplle	1403
VH_67	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleTyrProGlyAspSerGIuThrAlaArgLeuGlyHisSerGIySerTrpTy rPheAspLeu	1404
VH_68	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspLeuSerTyrSerAspAlaPheA spile	1405
VH_69	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspMetThrThrValAspAlaPheA spile	1406
VH_70	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspThrAlaSerGIyGlyMetAspV al	1407
VH_71	GlyPheThrPheSerSerTyrAlaPheTyrSerGIyGlySerThrAlaArgGluProTyrProGlyGlyProPhe Asplle	1408
VH_72	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerAlaSerGIyGlySerThrAlaAsnLeuTyrGIyAspTyrAsnAlaT yr	1409
VH_73	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerGIySerGIyAspArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGI yTrpTyrGIyAsn	1410
VH_74	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1411
VH_75	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerGIySerGIyGlylleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrThrAsnGly TrpTyrGIySer	1412
VH_76	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysAspLeuValLeuGly	1413
VH_77	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerTrpAsnSerGIySerIleAlaLysAspTrpAspSerSerGIyTyrTr pProLeuPheAspTyr	1414

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 100/701

93/117

mAb ID	VH_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VH_78	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1415
VH_79	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1416
VH_80	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleTrpTyrAspGlySerAsnLysAlaArgGluValValGIySerTyrTyrLe uAspTyr	1417
VH_81	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleAsnProAsnSerGIyGlyThrAlaArgGlyGlyAspCysSerSerThr SerCysT yrAspProAspT yr	1418
VH_82	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleLysGInAspGlySerGIuLysAlaArgIleGlyArgPheGlyArgLysTy rGlyMetAspVal	1419
VH_83	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgGlyLeuGlyAspSerSerSerS erTyr	1420
VH_84	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerGIySerGIyAsplleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsnGly TrpTyrGIyAsn	1421
VH_85	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerGIySerGIyAsplleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsnGly TrpTyrGIyAsn	1422
VH_86	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1423
VH_87	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpGlyAlaTyrSerSerGI yTrpTyrGIyAsp	1424
VH_88	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerGIySerGIyGlylleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrThrAsnGly TrpTyrGIySer	1425
VH_89	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerGIyThrGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIySer	1426
VH_90	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspAlaThrAsnAsnAlaLysGluArgPheThrGIyGlyTyrT yrThrTyrPheAspTyr	1427
VH_91	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleTyrHisSerGIySerThrAlaArgAlaGlyGlyLeuHisLeuAspTyr	1428
VH_92	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleTyrProGlyAspSerAspThrAlaArgGlyAsnGlyAspGlyGlyPhe AspTyr	1429
VH_93	GlyPheThrPheSerSerTyrSerlIeSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1430
VH_94	GlyPheThrPheSerSerTyrTrplleSerGIySerGIyAsplleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsnGly TrpTyrGIyAsn	1431
VH_95	GlyPheThrPheSerSerTyrTrplleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgAspArgGlyValGIuGlyAlaT yrGIyMetAspVal	1432
VH_96	GlyPheThrPheSerSerTyrTrplleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysGlyLeuLeuValAlaSerlIeTy rAspAlaPheAsplle	1433
VH_97	GlyPheThrPheSerSerTyrTrplleTyrHisSerGIySerThrAlaArgGlySerAsnIlePheAsplle	1434
VH_98	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleLysSerLysAsnAspGlyGlyThrThrThrThrAlaProSerLeuMetA spVal	1435
VH_99	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgAspLeuThrPheGlySerGIyP roThrArgAspTyr	1436
VH_100	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleSerGIySerGIyAsplleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrThrAsnGly TrpTyrGIySer	1437
VH_101	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleSerGIySerGIyAsplleThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrValAsnGly TrpTyrGIyAsn	1438
VH_102	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpGlyAlaTyrSerSerGI yTrpTyrGIyAsp	1439
VH_103	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1440
VH_104	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysAspTrpThrAsnGInTrpLeuA spAlaTyrPheAspTyr	1441
VH_105	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysGluThrlIeLeuTyrAsplleLeu ThrGIyTyrTyrAsnGluGlyAlaPheAsplle	1442

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94/117

mAblD	VH_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VH_106	GlyPheThrPheSerThrTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysAspTrpGlyArgPheGlyGluL euLeuGluGlySerProTyr	1443
VH_107	GlyPheThrPheSerThrTyrAlaThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGluPheGInAspSerSer SerTrpTyrGIuGlyArgAlaPheAsplle	1444
VH_108	GlyPheThrValSerSerAsnTyrIleAsnProAsnSerGIyGlyThrAlaArgAspTrpGlyArgGlyValGIyA spSerGIyPheValAspTyr	1445
VH_109	GlyPheThrValSerSerAsnTyrIleAsnProLysSerGIyGlyAlaAlaArgAspPheValGIyAlaSerLeuA spTyr	1446
VH_110	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeSerGIySerGIyAspArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1447
VH_111	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeSerSerSerGIySerThrIleAlaArgGlyTyrLeuGlyAlaTrpAsnPro AspPheTyrAspTyr	1448
VH_112	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1449
VH_113	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeThrGIySerGIyGlyThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGlyTrp PheGlySer	1450
VH_114	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeTyrProGlyAspSerAspThrAlaArgLeuGlyAspGlySerAsnPhe AspTyr	1451
VH_115	GlyPheThrValSerSerAsnTyrThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGluLysIleAlaValAlaGly T yrT yrT yrGI yMetAspVal	1452
VH_116	GlyPheThrValSerSerAsnTyrThrTyrTyrAsnArgLysTrpIleAsnAlaArgAspGlyGlyTrpSerGIyS erAlaLeuAspVal	1453
VH_117	GlyTyrArgPheThrSerTyrTrplleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspLeuHisSerAlaAlaGlyPheAs pTyr	1454
VH_118	GlyTyrSerPheThrArgTyrTrplleLysSerLysAsnAspGlyGlyThrThrThrThrAlaProSerLeuMetA spVal	1455
VH_119	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrplleSerGIySerGIyAspArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1456
VH_120	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrplleSerGIySerGIyAspArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1457
VH_121	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrplleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysGlySerSerProTyrTyrTyrTyr GlyMetAspVal	1458
VH_122	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrplleTyrHisSerGIySerThrAlaArgAspGlyGlySerGIyTrpTyrAspTyr	1459
VH_123	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrplleTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspThrAlaSerGIyGlyMetAspVa I	1460
VH_124	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrpThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGlyValThrVaIProTyrTyr TyrTyrGIyMetAspVal	1461
VH_125	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrpThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgSerSerGIySerTyrGIyTy rPheGInHis	1462
VH_126	GlyTyrThrPheThrArgAsnAlaThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGluGlyThrAsplleTyrTyr TyrTyrGIyMetAspVal	1463
VH_127	GlyTyrThrPheThrGIyTyrTyrIleAspTyrSerGIySerThrAlaArgAspGlyTrpIleArgLysGluAlaPhe AspPro	1464
VH_128	GlyTyrThrPheThrGIyTyrTyrlIeLysSerLysAsnAspGlyGlyThrThrThrThrAlaProSerLeuMetAs pVal	1465
VH_129	GlyTyrThrPheThrGIyTyrTyrlIeSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgAspProGlyGlyTyrTyrTyrTyr TyrGIyMetAspVal	1466
VH_130	GlyTyrThrPheThrGIyTyrTyrlIeSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPro AspTyr	1467
VH_131	GlyTyrThrPheThrGIyTyrTyrlIeSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysLeuGlyGlySerTyrSerlIeTyr TyrGIyMetAspVal	1468
VH_132	GlyTyrThrPheThrGIyTyrTyrlIeTyrProGlyAspSerGIuThrAlaArgAspGlyGlyAsnTyrGInPheAs pTyr	1469
VH_133	GlyTyrThrPheThrSerTyrAlallelleProllePheGlyThrAlaAlaArgThrGIyArgSerGIySerTyrTyrSe rAspAlaPheAsplle	1470

Petição 870190045945, de 16/05/2019, pág. 102/701

95/117

mAblD	VH_CDR1/2/3	SEQ ID NO:
VH_134	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleAsnProSerGIyGlySerThrAlaArgGluAspHisAspTyrSerAsnGI nGlyGlyPheAspTyr	1471
VH_135	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIyllelleProllePheGlyThrAlaAlaAlaArgAlaProGlyGlySerSerTyrTy iTyrTyrGIyMetAspVal	1472
VH_136	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgAspProGlyTyrAspPheTrpS erGIyTyrSerAspVal	1473
VH_137	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleSerGIySerGIyGlyArgThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGly TrpTyrGIyAsn	1474
VH_138	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleSerTrpAsnSerGIySerIleAlaLysAspMetTrpGlySerLeuSerlIe ValGIyAlaThrArgAlaPheAspTyr	1475
VH_139	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleThrGIySerGIyGlyThrAlaLysAspTrpAlaGlyTyrIleAsnGlyTrpP heGlySer	1476
VH_140	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleTyrHisSerGIySerThrAlaArgGlyProLeuLeulleAlaAlaAlaGlyT h rAspT y rTy rT y rG I yMet AspVal	1477
VH_141	GlyTyrThrPheThrSerTyrTyrlIeSerGIySerGIyGlySerThrAlaSerSerTyrGIyGlyAsnProLeuAs pAlaPheAsplle	1478
VH_142	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlaThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGluLysIleAlaVal AlaGlyTyrTyrTyrGIyMetAspVal	1479
VH_143	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlaThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGluPheGInAsp SerSerSerTrpTyrGIuGlyArgAlaPheAsplle	1480
VH_144	GlyAspSerValSerSerAsnSerAlaAlaThrTyrTyrArgSerLysTrpTyrAsnAlaArgGlyGlyValGIyAI aTh rT rpT y rT y rG I yMet AspVal	1481
VH_145	GlyPheThrPheAspAspTyrAlalleSerTrpAsnSerGIySerIleAlaLysAspIleAlaAlaGlyGlyLeuAs pSer	1482
VH_146	GlyPheThrPheSerAsnAlaTrplleLysSerLysAsnAspGlyGlyThrThrThrThrAlaProSerLeuMet AspVal	1483
VH_147	GlyPheThrPheSerAsnAlaTrplleLysSerLysAsnAspGlyGlyThrThrThrThrAlaProSerLeuMet AspVal	1484
VH_148	GlyPheThrPheSerSerTyrAlalleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgAspArgGlyValGIuGlyAlaT yrGIyMetAspVal	1485
VH_149	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerGIySerGIyGlySerThrAlaLysAlaThrGIyTyrSerSerGIyTrp T yrGI yAlaT yrPheAspT yr	1486
VH_150	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaLysGlySerSerProTyrTyrTyrTy rGlyMetAspVal	1487
VH_151	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleTrpTyrAspGlyAsnAsnLysAlaArgAspAsnSerGIySerTyrAsn TrpPheAsnPro	1488
VH_152	GlyPheThrPheSerSerTyrGIylleTrpTyrAspGlySerAsnLysAlaArgGluValValGIySerTyrTyrLe uAspTyr	1489
VH_153	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlyGlyAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1490
VH_154	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1491
VH_155	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1492
VH_156	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1493
VH_157	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysAlaArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1494
VH_158	GlyPheThrPheSerSerTyrProlleSerTyrAspGlySerAsnLysThrArgValGIySerGIyGlyTrpThrPr oAspTyr	1495
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VH_160	GlyPheThrPheSerSerTyrTrplleLysGInAspGlySerGIuLysAlaArgAspLeuHisCysGlySerSer CysGlyProGluAla	1497
VH_161	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspLeuHisSerAlaAlaGlyPheAs PB_______________________________________	1498

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96/117

mAb ID	VH_CDR1/2/3	SEQ ID N0:
VH_162	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspLeuSerTyrSerAspAlaPheA spile	1499
VH_163	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspPheGluGlySerGIyAlaLeuA spVal	1500
VH_164	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspThrAlaSerGIyGlyMetAspV al	1501
VH_165	GlyPheThrValSerSerAsnTyrlIeTyrSerGIyGlySerThrAlaArgAspThrAlaSerGIyGlyMetAspV al	1502
VH_166	GlyTyrSerPheThrSerTyrTrplleTyrProGlyAspSerAspThrAlaSerGIyAlaSerProTyrTyrPheAs pTyr	1503
VH_167	GlyTyrThrPheThrGIyTyrTyrIleAsnProAsnSerGIyGlyThrAlaArgGlyGlyAspCysSerSerThrS erCysT yrAspProAspT yr	1504
VH_168	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgAspProValTyrSerSerSerTr pGlyGlyTyrAlaPheAsplle	1505
VH_169	GlyTyrThrPheThrSerTyrGIylleSerAlaTyrAsnGlyAsnThrAlaArgGlyLeuGlyAspSerSerSerS erTyr	1506
VH_170	GlyTyrThrPheThrSerTyrTyrIleAsnProSerGIyGlySerThrAlaArgGluAspHisAspTyrSerAsnGI nGlyGlyPheAspTyr	1507

[00211 ] Ensaio e Kit de detecção de LGALS3BP [00212] Em uma modalidade da presente invenção é um kit. Este kit ELISA uG3BP humano é usado para a quantificação não radioativa do G3BP humano (proteína de ligação galectina-3, LGALS3BP, proteína de ligação 3 solúvel de ligação à lectina galactosídeo, M2BP; Mac-2 BP; proteína de ligação a 90K/Mac-2) em amostras de urina. Um kit é suficiente para medir 38 amostras desconhecidas em duplicado.

PRINCÍPIOS DO ENSAIO [00213] Este ensaio é um ELISA sanduíche com base, sequencialmente, em: 1) captura de moléculas de G3BP humano de amostras para as cavidades de uma placa de microtitulação revestida com um anticorpo monoclonal G3BP anti-humano, 2) lavagem de materiais não ligados de amostras, 3) ligação de um segundo anticorpo monoclonal G3BP anti-humano biotinilado para as moléculas capturadas, 4) lavagem de materiais não ligados de amostras, 5) ligação de estreptavidina-peroxidase de rábano (HRP) conjugada aos anticorpos biotinilados imobilizados, 6) lavagem do excesso de conjugados de enzima, e 7) quantificação de conjugados anticorpoenzima imobilizados pelo monitoramento de atividades da peroxidase

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97/117 de rábano na presença do substrato 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina (TMB). A atividade da enzima é medida espectrofotometricamente pelo aumento da absorvância a 450 nm - 590 nm após a acidificação dos produtos formados. Uma vez que o aumento na absorvância é diretamente proporcional à quantidade de G3PA humano capturado na amostra desconhecida, estes podem ser obtidos por interpelação a partir de uma curva de referência gerada no mesmo ensaio com padrões de referência de concentrações conhecidas de G3BP humano. Será entendido por um profissional versado na técnica que os anticorpos monoclonais G3BP anti-humanos descritos por SEQ ID NOs: 2-31 podem ser incorporados no presente ensaio.

REAGENTES FORNECIDOS [00214] Cada kit é suficiente para executar uma placa de 96 poços e contém os seguintes reagentes: (armazenar todos os reagentes a 28Ό).

Reagentes fornecidos	Volume	Quantidade
Placa de microtitulação com 2 seladores de placas	—	1 placa 2 seladores
G3BP humano padrão	liofilizado	2 frascos
Controles de qualidade 1 e 2 de G3BP humano	liofilizado	2 frascos
Tampão de ensaio	40 mL	1 garrafa
Tampão de Lavagem 10X	50 mL	2 garrafas
Anticorpos de detecção de G3BP humano	12 mL	1 garrafa
Solução enzimática	12 mL	1 garrafa
Solução de substrato	12 mL	1 garrafa
Solução Stop	12 mL	1 garrafa

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98/117

ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE [00215] Todos os componentes são enviados e armazenados a 28Ό. Padrões e controlos reconstituídos podem ser c ongelados para uso futuro, mas ciclos repetidos de congelamento/descongelamento devem ser evitados. Consulte as datas de vencimento de todos os reagentes antes do uso. Não misturar os reagentes de kits diferentes, a menos que eles tenham os mesmos números de lote.

MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO FORNECIDOS [00216] 1. Pipetas multicanal e pontas de pipeta: 5-50 pL e 50-300

RL [00217] 2. Pipetas e pontas de pipeta: 10 pL-20 pL ou 20 pL-100 pL [00218] 3. Reservatórios de reagente [00219] 4. Tubos de microfuga de polipropileno [00220] 5. Misturador de vórtice [00221] 6. Água desionizada [00222] 7. Leitor de placas de microtitulação com capacidade de leitura de absorvância a 450 nm e 590 nm [00223] 8. Agitador orbital de placa de microtitulação [00224] 9. Papel ou pano absorvente

COLETA E ARMAZENAMENTO DE AMOSTRA

Preparação de amostras de urina:

[00225] Centrifugar a amostra a 4Ό para remover d etritos e fazer o ensaio imediatamente ou alíquota e armazenar amostras a -20Ό.

[00226] Evitar ciclos repetidos de congelamento/descongelamento.

[00227] As amostras de urina podem exigir uma diluição 1:10 com tampão de ensaio antes do ensaio.

[00228] Observação:

[00229] Um máximo de 100 pl por poço de amostra de urina pura ou diluída pode ser usado.

[00230] Todas as amostras devem ser armazenadas em tubos de

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99/117 polipropileno. NÃO ARMAZENE AMOSTRAS EM VIDRO.

PREPARAÇÃO DO REAGENTE

PREPARAÇÃO DO G3BP HUMANO PADRÃO [00231 ] 1. Com uma pipeta, reconstituir o G3BP humano padrão com

500 μΙ_ de água destilada ou desionizada. Inverter e misturar delicadamente, deixar descansar por 5 minutos e, em seguida, misturar bem.

[00232] 2. Rotular sete tubos de microfuga de polipropileno como 1,

2, 3, 4, 5, 6 e 7. Adicionar 200 μΙ_ de tampão de ensaio aos tubos 1,2,

3, 4, 5 e 6. Preparar diluições em série pela adição de 500 μΙ_ do padrão reconstituído ao tubo 7, misturar bem e transferir 100 μΙ_ do tubo 7 para o tubo 6, misturar bem e transferir 100 μΙ_ do tubo 6 para o tubo 5, misturar bem e transferir 100 μΙ_ do tubo 5 para o tubo 4, misturar bem e transferir 100 μΙ_ do tubo 4 para o tubo 3, misturar bem e transferir 100 μΙ_ do tubo 3 para o tubo 2, misturar bem e transferir 100 μΙ_ do tubo 2 para o tubo 1, misturar bem. O padrão 0 ng/mL (Fundo) será o tampão de ensaio.

[00233] Observação: Trocar a ponta para cada diluição. Umedecer a ponta com padrão antes de dispensar. Porções não usadas de padrão reconstituído devem ser armazenadas em pequenas alíquotas a ^-20 ° C. Evitar múltiplos ciclos de congelamento/descongelamento.

Tubo #	Volume de água deionizada para adicionar	Volume do padrão para adicionar	Concentração de estoque padrão
Padrão reconstituído	500 μΙ_	0	200 ng/mL

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100/117

Tubo #	Volume de tampão de ensaio para adicionar	Volume de padrão para adicionar	Concentração padrão (ng/mL)
Tubo 7	0	500 pL de padrão reconstituído	200
Tubo 6	200 pl	100 pL do tubo 7	66,67
Tubo 5	200 pl	100 pL do tubo 6	22,22
Tubo 4	200 μΙ	100 pL do tubo 5	7,41
Tubo 3	200 μΙ	100 pL do tubo 4	2,47
Tubo 2	200 μΙ	100 pL do tubo 3	0,82
Tubo 1	200 μΙ	100 pL do tubo 2	0,27

PREPARAÇÃO DO REAGENTE (continuação)

B. Preparação dos controles de qualidade 1 e 2 de G3BP humano [00234] Reconstituir cada Controle de qualidade 1 e Controle de qualidade 2 do G3BP humano com 500 μΙ_ de água destilada ou deionizada e gentilmente inverter para garantir a hidratação completa (misturar delicadamente, deixar descansar por 5 minutos e, em seguida, misturar bem). Porções não usadas dos Controles de qualidade reconstituídos devem ser armazenados em pequenas alíquotas a ^-20 ° C. Evitar outros ciclos de congelamento/descongelamento.

C. Preparação de tampão de lavagem [00235] Levar o tampão de lavagem 10X à temperatura ambiente e misturar para trazer todos os sais para a solução. Diluir 50 mL de tampão de lavagem 10X com 450 mL de água deionizada. Armazenar porção não usada a 2-8Ό por até um mês.

PROCEDIMENTO DE ENSAIO ELISA para uG3BP humano

Aquecer todos os reagentes à temperatura ambiente antes de configurar o ensaio.

[00236] 1. Remover o número necessário de tiras da placa de ensaio

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101/117 de microtitulação. Tiras não usadas devem ser resseladas no saco de alumínio e armazenadas a 2-8Ό. Montar as tiras em um suporte da placa vazio. Adicionar 300 μΙ_ de tampão de lavagem diluído a cada poço da placa. Decantar o tampão de lavagem e remover o volume residual, invertendo a placa e batendo de forma inteligente em toalhas absorventes várias vezes. Repita o procedimento de lavagem mais duas vezes. Não deixar que os poços sequem antes de prosseguir para a próxima etapa. Se uma máquina automatizada for usada para o ensaio, siga as instruções do fabricante para lavar todas as etapas descritas nesse protocolo.

[00237] 2. Adicionar 50 uL de tampão de ensaio a todos os poços.

[00238] 3. Adicionar 50 μΙ_ de tampão de ensaio para cada um dos poços em branco.

[00239] 4. Adicionar 50 μΙ_ de padrões e controles de qualidade aos poços adequados (consultar a seção de Arranjo de placas de microtitulação para a ordem de colocação de amostra sugerida).

[00240] 5. Adicionar 50 μΙ_ de amostra de urina diluída aos poços adequados.

[00241] 6. Cobrir a placa com selador de placa e incubar à temperatura ambiente durante 2 horas em um agitador orbital de placas de microtitulação ajustado para rodar a uma velocidade moderada, cerca de 400 a 500 rpm.

[00242] 7. Remover o selador de placa e decantar reagentes da placa. Bata como antes para remover o volume residual no poço. Lavar os poços 3 vezes com tampão de lavagem diluído, 300 μΙ por poço por lavagem. Decantar e bater depois de cada lavagem para remover resíduos de tampão, (é recomendado adicionar uma etapa de agitação/imersão entre cada lavagem se estiver usando lavadora de placa automática).

[00243] 8. Adicionar 100 uL de anticorpo de detecção a cada poço.

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102/117

Re-cobrir a placa com selador e incubar à temperatura ambiente durante 1 hora em um agitador orbital de placas de microtitulação ajustado para rodar a uma velocidade moderada, cerca de 400 a -500 rpm.

[00244] 9. Remover o selador de placa e decantar reagentes da placa. Bata como antes para remover o volume residual no poço. Lavar os poços 3 vezes com tampão de lavagem diluído, 300 μΙ por poço por lavagem. Decantar e bater depois de cada lavagem para remover resíduos de tampão.

[00245] 10. Adicionar 100 uL de solução de enzima a cada poço.

Tampar a placa com selador e incubar com agitação moderada à temperatura ambiente durante 30 minutos no agitador de placas de microtitulação.

[00246] 11. Remover o selador, decantar os reagentes da placa e bater de leve a placa para remover o volume residual. Lavar os poços 4 vezes com tampão de lavagem diluído, 300 μΙ por poço por lavagem. Decantar e bater depois de cada lavagem para remover resíduos de tampão.

[00247] 12. Adicionar 100 pL de solução de substrato a cada poço, tampar a placa com o selador e agitar no agitador de placa por cerca de 5-20 minutos. A cor azul deve ser formada nos poços de padrões de G3BP humano com intensidade proporcional ao aumento das concentrações de G3BP humano.

Observação: A cor pode se desenvolver mais rapidamente ou mais lentamente do que o tempo de incubação recomendado dependendo da temperatura ambiente localizada. Monitorar visualmente o desenvolvimento de cor para otimizar o tempo de incubação.

[00248] 13. Remover o selador e adicionar 100 pL de solução Stop e agitar suavemente a placa com a mão para assegurar uma mistura completa de solução em todos os poços. A cor azul deve se tornar

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103/117 amarela após a acidificação. Limpar a parte inferior da placa de microtitulação para remover qualquer resíduo antes de ler no leitor de placa. Ler a absorvância a 450 nm (sinal) e 590 nm (fundo) em um leitor de placa dentro de 5 minutos e assegurar de que não há bolhas de ar em qualquer poço. Registrar a diferença de unidades de absorbância. A absorvência do padrão mais alto de G3BP humano deve ser de aproximadamente 2,5 - 3,5, ou não exceder a capacidade do leitor de placa usado.

[00249] Observação: Se as amostras de urina forem diluídas 1:10, os resultados finais, as concentrações ng/mL de G3BP em amostras, devem ser multiplicados por um fator de diluição de 10.

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Tabela 8: Procedimento de ensaio para o Kit ELISA uG3BP humano

Etapa 1

Etapa 2

Etapa 3

Etapas 4-5

Etapas 6-7

Etapa 8

Eta-pa 9

Eta-pa 10

Eta-pa 11

Etapas 12-13

Poço

Lavar a placa 3X com 300 pL tampão de lavagem IX. Remover tampão residual ao bater de forma inteligente em uma toalha absorvente.

Tam-pão de ensaio

Tam-pão de ensaio

Padrões/CQs/Amostras

Selar, agitar, incubar por 2h em temperatura ambiente. Lavar 3X com 300 pL de tampão de lavagem.

Anticor-po de detecção

Selar, agitar, incubar por 1 h em temperatura ambiente. Lavar 3X com 300 pL de tampão de lavagem.

Solução de en-zima

Selar, agitar, incubar por 30 min em temperatura ambiente. Lavar 4X com 300 pL de tampão de lavagem.

Substra-to

Selar, agitar, incubar por 5 a 20 min em temperatura ambiente.

parada

Ler a absorbância a 450 nm e 590 nm.

A1, B1

50 pL

50 pL

--

100 pL ▼

100 pL ▼

100 pL ▼

100 pL ▼

C1, D1

-

50pLdo Tubol

E1, F1

-

50pLdo Tubo 2

G1, H1

-

50pLdo Tubo 3

A2, B2

-

50pLdo Tubo 4

C2, D2

-

50pLdo Tubo 5

E2, F2

-

50pLdo Tubo 6

G2, H2

-

50pLdo Tubo 7

A3, B3

-

50 pL do QC1

C3, D3

-

50 pL do QC2

E3, F3

-

50 pL de amostra

G3, H3 Etc.

--

50 pL de amostra

104/116

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105/117 [00250] Tabela 9 Arranjo de placa de microtitulação (ELISA uG3BP humano)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Fundo (branco)

Tubo padrão 4

QC1

etc.

B

Fundo (branco)

Tubo padrão 4

QC1

etc.

C

Tubo padrão 1

Tubo padrão 5

QC2

D

Tubo padrão 1

Tubo padrão 5

QC2

E

Tubo padrão 2

Tubo padrão 6

Amostra 1

F

Tubo padrão 2

Tubo padrão 6

Amostra 1

G

Tubo padrão 3

Tubo 7 (Padrão reconstituído)

Amostra 2

H

Tubo padrão 3

Tubo 7 (Padrão reconstituído)

Amostra 2

CARACTERÍSTICAS DO ENSAIO

A. Sensibilidade [00251] A concentração mínima detectável (MinDC) de G3BP humano é de 0,08 ng/mL. Ela é calculada utilizando MILLIPLEX® Analyst 5.1. Ele mede o verdadeiro limite de detecção para um ensaio ao determinar matematicamente qual MinDC empírica seria se um número infinito de concentrações-padrão fosse executado para o ensaio sob as mesmas condições. Este valor relatado é a média mais 2 desvios padrão da MinDC de vários ensaios (n= 8).

B· Especificidade [00252] A par do anticorpo utilizado neste ensaio é específico para o G3BP humano.

C. Precisão

Variação intraensaio

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106/117

	Níveis médios (ng/mL)	Intra-ensaio %CV
1	219	5,9
2	636	5,6

Variação interensaio

	Níveis médios (ng/ml)	Inter-ensaio %CV
1	380	8,3
2	607	8,1

[00253] As variações de ensaio desse kit ELISA uG3BP foram estudadas em amostras de urina em dois níveis na curva-padrão de uG3BP. A variação intra-ensaio média foi calculada a partir dos resultados de oito determinações das amostras indicadas. A variação inter-ensaio média de cada amostra foi calculada a partir dos resultados de 8 ensaios separados com amostras duplicadas em cada ensaio. (As amostras de urina foram diluídas com tampão de ensaio antes do ensaio).

D· Recuperação do reforço de G3BP em amostras de ensaio [00254] A recuperação média do G3BP humano em oito amostras de urina é de 103%. Três concentrações de G3BP humano foram adicionadas a amostras de urina individuais (n=8) e o teor de G3BP resultante de cada amostra foi avaliado por ELISA uG3BP humano. A recuperação = [(G3BP observado / (concentração de G3BP reforçada + G3PB basal)] x 100%. (As amostras de urina foram diluídas com tampão de ensaio antes do ensaio).

E· Linearidade de diluição da amostra [00255] A % média de linearidade esperada em em oito amostras de urina é de 96%. Quantidades necessárias de tampão de ensaio foram adicionadas para fatores de diluição resultante de 1, 2, 4 e 8 ensaios, respectivamente. % esperada = (observada / esperada) x 100%. (As amostras de urina foram diluídas com tampão de ensaio antes do ensaio).

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EXEMPLOS EXPERIMENTAIS [00256] Os exemplos a seguir são destinados apenas para fins ilustrativos e não devem ser interpretados a limitar o escopo da invenção reivindicada.

EXEMPLO 1: Expressão de LGALS3BP é aumentada em CMSPs de pacientes com NL e correlaciona com o seu status de interferon [00257] A fim de encontrar marcadores preditivos da atividade da doença em pacientes com NL, os perfis de mRNA de CMSPs isoladas de pacientes com NL foram avaliados e comparados estes perfis aos de controles saudáveis (HC). As CMSPs foram isoladas de sangue total de doadores HC (n=4) e NL (n=9) por gradiente de Ficoll. Perfil da expressão gênica foi realizado por RNA-seq. Os valores FPKM são mostrados. Os pacientes com NL foram agrupados em baixo interferon (IFN) ou alto IFN com base na média da pontuação-z mediana de quatro genes induzíveis por IFN, IFI44L, RSAD2, MX1 e OAS2 (Hagberg N and Rõnnblom L, Scand J Immunol. 2015 Set;82(3):199-20). Os níveis de mRNA de LGALS3BP foram significativamente mais elevados no grupo NL (alto IFN) vs grupo NL (baixo IFN) (p = 0,044) e o grupo HC (p=0,028). A partir do perfil descrito acima, verificou-se que a expressão de mRNA de LGALS3BP foi um dos melhores genes cujos níveis podem ser usados para distinguir entre CMSPs de NL e HC (Figura 1). Observou-se também que houve significativa variabilidade nos níveis de LGALS3BP entre os pacientes com NL. Os pacientes com NL são frequentemente agrupados com base em seus níveis de interferon tipo I como medido pelos níveis de genes induzíveis por interferon (Scand J Immunol. 2015 Set;82(3):199-20). Uma avaliação subsequente determinou se os níveis de interferon entre as amostras NL poderia explicar a grande variabilidade observada em LGALS3BP. Nos pacientes com nefrite lúpica, uma distribuição bimodal nos genes induzíveis por interferon tipo I foi encontrada, indicando que alguns

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108/117 pacientes tiveram uma assinatura alta de interferon enquanto outros tiveram uma assinatura baixa de interferon. A fim de continuar a classificar os pacientes com nefrite lúpica nesses dois grupos, os níveis de expressão de quatro genes induzíveis por interferon conhecidos, IFI44L, RSAD2, OAS2 e MX1 foram combinados, tirando a média da pontuação-z dos quatro genes em todas as amostras. Amostras com pontuações de assinatura de interferon iguais ou abaixo da dos níveis medianos foram atribuídos ao grupo de baixo interferon. As amostras com pontuações de interferon acima da mediana foram designadas para o grupo de alto interferon. Depois de classificar os doadores para estes dois grupos, verificou-se que os níveis de LGALS3BP foram 5 vezes maiores no grupo de baixo interferon em comparação com controles saudáveis, e 30 vezes maior no grupo de alto interferon em comparação com controles saudáveis (p = 0,028; Figura 1). Além disso, os níveis de LGALS3BP foram 6 vezes maiores no grupo de alto interferon em comparação com o grupo de baixo interferon (p = 0,044). Estes dados demonstram que a expressão de LGALS3BP é aumentada em pacientes com NL e que a expressão de LGALS3BP é provavelmente regulada pelo interferon tipo I.

EXEMPLO 2: Expressão de LGALS3BP pode ser induzida por IFNa e outros estímulos inflamatórios [00258] LGALS3BP tem um local de ligação IRF7 de acordo com regulamento pelos interferons tipo I. A fim de descobrir que vias podem induzir a expressão de LGALS3BP, monócitos humanos primários foram diferenciados em macrófagos in vitro e foram posteriormente estimulados com IFNa, IFN_Y, agonista TLR4 (LPS), agonista TLR7/8 (resiquimod) e agonista TLR9 (CpG). IFNa, IFN_Y e LPS induziu a expressão do mRNA de LGALS3BP (Figura 2a) e aumento da secreção da proteína (Figura 2b). Todos os estímulos induziram secreção de IL-

6. Esses dados indicaram que não só interferons do tipo I podem

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109/117 conduzir a expressão de LGALS3BP, mas também IFN_Y e outros gatilhos inatos. Com base na localização de sítios de acetilação de histona, a expressão de LGALS3BP é regulada por fatores de ligação em quatro diferentes regiões do gene LGALS3BP: no sítio de início do promotor, em um potencializador a montante (região 5 K a montante), em um sítio intrônico, ou no 3' UTR. Digitalização de motivos por três diferentes métodos identificou reguladores transcricionais imunorelevantes. IRFs, AP-1, e STATs, bem como outros fatores importantes como o NF-KB foram encontrados em e ao redor do local do gene LGALS3BP. Previsão do fator de transcrição de ligação indica que a expressão de LGALS3BP é regulada pelos interferons através de fatores reguladores do interferon (IRFs) bem como outros estímulos imunes que ativam STATs, NF-kB e AP-1

EXEMPLO 3: A proteína LGALS3BP é aumentada na urina de pacientes com NL, mas não no plasma [00259] Para determinar se o aumento dos níveis de mRNA em CMSPs levou a níveis aumentados da proteína LGALS3BP no sangue do paciente, LGALS3BP foi medida por ELISA no plasma de pacientes com NL, pacientes com LES e doadores de controle saudáveis (HC). Nenhuma diferença significativa nos níveis plasmáticos de LGALS3BP entre esses três grupos foi encontrada apesar do mRNA regulado positivamente em CMSPs (Figura 3). Tem sido demonstrado que os CMSPs apenas contribuíram com pequenas quantidades de LGALS3BP total plasmático. No entanto, níveis de LGALS3BP significativamente mais elevados foram encontrados na urina de pacientes com NL comparados aos pacientes com LES e controles saudáveis.

EXEMPLO 4: Expressão de LGALS3BP é elevada nos rins de paciente com NL [00260] NL é caracterizado por inflamação do rim. Testes atuais para

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110/117 monitorar a atividade da doença mede a função renal no sangue e na urina, mas não inflamação causal. LGALS3BP é induzido por estímulos inflamatórios e sua elevada presença na urina pode refletir a inflamação do rim. A fim de determinar se a elevação de LGALS3BP urinário é relevante como uma medição da proteína urinária para monitorar a inflamação na nefrite lúpica, o perfil da expressão de mRNA de LGALS3BP foi analisada em biópsias renais. Conjunto de dados de GEO (GSE32592) que continha um total de 46 amostras de biópsia renal (n=14 HC e 32 NL) que foram coletadas do Banco Europeu de cDNA renal foi utilizado. Os glomérulos e túbulo-intersticiais foram isolados por microdissecação e o perfil de expressão foi realizado usando arranjos Affymetrix GeneChip. Após a avaliação inicial de controle de qualidade e normalização, o nível de expressão de LGALS3BP foi significativamente maior em ambos os glomérulos (1,5 vezes, p=9.2e-12) e túbulo-intersticial (2,2 vezes, p=1.5e-4) de pacientes com NL comparados com controles saudáveis (Figura 4a). O perfil de expressão de dois genes adicionais, CCL2 (MCP-1) e TNFSF12 (TWEAK), ambos os quais têm sido propostos como potenciais biomarcadores urinários (Schwartz et al. Ann Ν Y Acad Sei. agosto de 2007;1109:265-74) foi então avaliado. Nesse conjunto de dados, os níveis de expressão de CCL2 (MCP-1) (Figura 4b) foram encontrados como sendo equivalente entre amostras NL e HC em ambos os glomérulos (1,3 vezes, p=0,392) e túbulo-intersticial (0,7 vezes, p=0,33). Os níveis de expressão de TNFSF12 (Figura 4C) foram significativamente mais elevados nos glomérulos de amostras de NL (1,2 vezes, p=9,1e-5), mas significativamente menor no túbulointersticial de amostras NL (0,85, p=0,017). Esses dados sugerem que LGALS3PA pode ser um marcador preditivo urinário mais adequado do que CCL2 (MCP-1) e TNFSF12 para distinguir entre as amostras HC e NL.

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111/117 [00261] A expressão diferencial global também foi avaliada, a fim de elucidar todos os genes significativamente modulados em pacientes com NL. Usando o pacote limma R, um modelo foi construído para executar os cálculos de expressão diferencial enquanto controla para as diferenças de tecido. Isto permitiu a utilização de dados de ambos os glomérulos e túbulo-intersticial em conjunto. Dos 12.030 genes totais incluídos na análise, apenas 166 genes tiveram um valor p menor que 0,01 e uma mudança de desdobramento de pelo menos 2. Os genes regularam positivamente significativamente em NL numerado 137, enquanto 29 genes foram regulados negativamente em NL. Nesta análise, LGALS3BP tinha um valor p de 2,11 e-8 e estava no topo 3% de genes com o menor valor p. Estes dados confirmam que LGALS3BP é um dos poucos genes regulados positivamente significativamente em ambos os glomérulos e túbulo-intersticial de biópsias renais de NL e, assim, é um bom marcador preditivo.

[00262] Coloração das biópsias renais de NL com anticorpos antiLGALS3BP apresentaram aumento de níveis e padrões pontuados em determinadas áreas, especificamente em torno de túbulos em pacientes com e sem nefrite túbulo-intersticial (Figura 4d). O sinal de LGALS3BP em uma amostra de controle sadia foi menos intensa, mais difusa e principalmente devido à coloração de fundo do anticorpo secundário (FITC anti-coelho). Amostras de pacientes com diabetes mellitus (DM) e nefropatia por IgA (IgAN) apresentaram algumas, mas mais fracas coloração LGALS3BP do que NL.

EXEMPLO 5: Expressão de LGALS3BP é aumentada em um modelo de camundongo de NL apenas quando o dano renal é detectado [00263] Para investigar ainda mais se o aumento da expressão renal de LGALS3BP é induzida pela inflamação local sua expressão em camundongos com lupus BXSB-Yaa foi medida. Estes camundongos

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112/117 espontaneamente desenvolvem sintomas sistêmicos de inflamação e danos do tipo LES e NL nos rins. O modelo é baseado em uma duplicação do local Yaa, que engloba o gene TLR7 e resulta em aumento da expressão de TLR7 e inflamação de interferon tipo I. Medição do homólogo murino dos níveis elevados de LGALS3BP em camundongos foi encontrada com doença só quando o dano e a inflamação renal foram detectados por histologia avaliando crescentes glomerulares, moldes de proteína, inflamação intersticial e vasculite (Figura 5). Esses resultados indicam ainda que LGALS3BP é expressado local mente durante um processo inflamatório no rim.

EXEMPLO 6: Proteína LGALS3BP é elevada na urina de paciente com NL [00264] O seguinte experimento foi desenhado para determinar se a expressão aumentada de LGALS3BP nos rins do paciente foi traduzida em uma diferença mensurável nos níveis de proteína na urina, o que pode distinguir entre pacientes com NL, pacientes com LES e doadores de controle sadios. A proteína LGALS3BP foi medida por ELISA na urina de pacientes com NL, pacientes com LES e controles saudáveis. Depois de normalizar os dados para os níveis de creatinina urinária, verificouse que LGALS3BP (Figura 3A) foi significativamente maior em pacientes com NL do que com LES (6,8 vezes, p<0,001) e doadores HC (17,7 vezes, p<0,001). Houve também uma tendência para níveis mais elevados de LGALS3BP encontrados em pacientes com LES versus doadores HC, mas esta tendência não foi estatisticamente significativa (2,6 vezes, p=0,59).

[00265] Como os níveis de proteína na urina de LGALS3BP em comparação com outras leituras de urinálise comum, como, por exemplo, níveis de proteínas totais ou níveis de albumina foi considerado depois. Após a normalização de todos os valores de creatinina urinária, os níveis de proteína totais ou níveis de albumina

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113/117 foram encontrados para executar bem como para distinguir os pacientes com NL de LES e doadores HC. Ambos os níveis de proteína total (Figura 6B) e os níveis de albumina (Figura 6C) foram significativamente maiores em pacientes com NL do que com LES ou doadores HC (p<0,001 para ambos).

[00266] A fim de aplicar estes dados para a construção de um teste diagnóstico, valores associados com inflamação renal precisaram ser definidos. Para chegar a esses valores, o valor máximo das amostras de controle sadio foi definido como o valor de corte, o que significa que qualquer amostra com um valor maior que a amostra máxima de controle sadio provavelmente teria inflamação renal. O raciocínio para isto é baseado na suposição de que os doadores de controle sadios não devem ter qualquer inflamação e, portanto, os valores encontrados em controles saudáveis devem representar o intervalo normal. Para as razões de LGALS3BP/creatinina, razões de proteína/creatinina e razões de albumina/creatinina, os valores de corte foram de 3,133, 0,166 e 0,457, respectivamente. Usando esses valores, verificou-se que para LGALS3BP, amostras de 50 NL e 12 SLE estavam acima do valor de corte (Figura 6A). Para proteína total, amostras de 53 NL e 18 SLE estavam acima do valor de corte (Figura 6B). Para albumina, as amostras de 56 NL e 9 SLE estavam acima do valor de corte (Figura 6C). Esses dados sugerem que LGALS3BP é mais conservador na identificação de amostras que são susceptíveis de ter inflamação nos rins. Para as amostras de LES com níveis de LGALS3BP acima do valor de corte, estes podem ser pacientes em maior risco de desenvolvimento de nefrite lúpica ou pacientes com LES com NL não diagnosticada.

EXEMPLO 7: Níveis de urina de LGALS3BP não são um reflexo da função renal e capacidade de filtração [00267] Para validar LGALS3BP como um marcador preditivo para NL, o LGALS3BP detectado foi ainda examinado em termos de níveis

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114/117 de proteínas totais e albumina. Para determinar isso, os coeficientes de correlação de Pearson foram avaliados comparando estas três medidas uma a outra depois de normalizar os níveis de creatinina urinária. Através desta investigação empírica uma correlação muito forte entre os níveis de proteínas totais e albumina foi encontrada (R = 0,95; Figura 7A). Também encontramos correlações positivas entre LGALS3BP e proteína total (R=0,513; Figura 7B) e níveis de LGALS3BP e albumina (R=0,507; Figura 7C). Com base nestes coeficientes de correlação, estes dados demonstram que o LGALS3BP medido fornece uma leitura diferencial em relação à proteína total e albumina medidas. Mais especificamente, em amostras de pacientes que tinham níveis elevados de LGALS3BP e baixos níveis de proteína total este perfil de expressão é coerente com pacientes tendo altos níveis de inflamação em seus rins, mas níveis relativamente baixos de danos nos rins; de acordo com a fisiopatologia em NL da fase inicial de NL. Em amostras de pacientes apresentando baixos níveis de LGALS3BP e altos níveis de proteína total que o perfil de expressão é consistente com os pacientes com baixos níveis de inflamação nos rins, mas com um alto nível de danos nos rins; coerente com uma fisiopatologia em NL de doença renal da classe V de estágio avançado com risco de insuficiência renal. Estes dados demonstram que, medições urinárias de LGALS3BP fornecem informações de diagnóstico diferentes e com mais nuances sobre a gravidade e a progressão da NL em comparação à medição dos níveis da proteína total ou albumina na urina.

EXEMPLO 8: Níveis de LGALS3PA na urina variam ao longo do tempo [00268] Os pacientes com NL têm níveis mais elevados de proteína total, albumina e LGALS3BP em comparação com LES e doadores HC. Na maioria dos doadores de amostra estes valores permaneceram relativamente constantes, especialmente nos grupos HC e LES ao longo

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115/117 do tempo. Em alguns pacientes com NL, no entanto, reforços foram observados na proteína total (Figura 5A) e albumina (Figura 5B) e LGALS3BP (Figura 5C). Essas métricas são não apenas em e de si mesmos (ou seja, o monitoramento da inflamação renal em pacientes com NL) mas também são úteis para avaliar a eficácia de determinados tratamentos imunossupressores em pacientes com NL.

[00269] Para todos os efeitos nos Estados Unidos, cada publicação e documento de patente citados aqui são incorporados por referência, para todos os efeitos, como se cada publicação ou documento fosse especificamente e individualmente indicados para ser incorporados, aqui, por referência.

[00270] Enquanto a invenção tem sido descrita com referência às modalidades específicas, alterações podem ser feitas e equivalentes podem ser substituídos para se adaptarem a um contexto particular ou uso pretendido, conseguindo benefícios da invenção sem sair do escopo das reivindicações que se seguem.

EXEMPLO 9: Razões de LGALS3BP urinária/creatinina em diferentes grupos de doenças renais [00271] Como mostrado na Figura 25, o aumento dos níveis de LGALS3BP urinário preferencial mente em NL quando ativo (queima). Isto mostra um padrão específico de doença na expressão de LGALS3BP urinário e de uma tendência que é principalmente acionada por inflamação ativa no contexto da NL. Nefropatia diabética (DM), IgAN e ANCA mostram níveis baixos de LGALS3BP urinária. Considerando ANCA, DM é caracterizada por inflamação crônica de baixo grau, os dados mostram que os níveis de LGALS3BP urinário são específicos da doença e não são aumentados pelos estados inflamatórios renais não específicos de NL.

[00272] NL ativa vs. NL remitente mostra diferenças marcantes. Isto é significativo, tendo em vista as vantagens do ensaio de LGALS3BP

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116/117 urinário descrito neste pedido: para diferenciar entre doença ativa versus crônica. Conforme mostrado nas Figs 26A e 26 B, os dados de LGALS3BP urinário foram normalizados para a concentração de creatinina, log natural transformado e valores discrepantes foram excluídos para a análise dos dados. Além disso, JMP pro v12 foram utilizados, incluindo ANOVA e comparações múltiplas não paramétricas de Wilcoxon mostrando razões médias de LGALS3BP/creatinina e média do erro padrão. A linha pontilhada indica a média + 2 desvios padrão para controle sadio (132,95).

EXEMPLO 10: Razões de LGALS3BP urinário/creatinina e razões de proteína urinária/creatinina não se correlacionam em NL [00273] Como mostrado na Figura 27A, 27B e 27C, as amostras de urina do paciente foram comparadas para os níveis de LGALS3BP/creatinina e proteína total urinária/creatinina (UPCR). Estes dados demonstram que LGALS3BP/creatinina relatam sobre outra coisa (ou seja, inflamação) em vez de UPCR (ou seja, danos) na doença renal ativa NL. O fato de que LGALS3BP/Cr é elevado sem UPCR estar na NL ativa demonstra que esta métrica relata sobre inflamação ativa. O mesmo é verdadeiro para mais amostras tendo UPCR elevada, mas baixo LGALS3BP/Cr em remissão, indicando que a inflamação foi resolvida, mas o dano renal persiste. Pacientes em remissão, que, no entanto, apresentam LGALS3BP/Cr elevados, mas UPCR baixa correm o risco de um surto de NL. Nas referidas figuras anteriormente mencionadas, R2 são os coeficientes de correlação de Pearson.

EXEMPLO 11: Variação dos níveis de LG AL3BP urinária/creatinina em pacientes com NL [00274] Conforme mostrado na Figura 29, a variação, ao longo do tempo, dos níveis de LGALS3BP urinária/creatinina em pacientes com NL. Mais especificamente, a urina de pacientes com NL foi monitorada mensalmente. Estes dados indicam que os níveis de LGALS3BP

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117/117 urinário mudam ao longo do tempo se correlacionam como um indicador precoce de inflamação.

[00275] Entende-se que, à luz dos ensinamentos da presente invenção, para um versado na técnica certas alterações e modificações podem ser feitas sem que se desvie do espírito e escopo da invenção.

Claims (8)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Método para gerar dispositivo de dados no diagnóstico e monitoramento não invasivo de patologia renal usando amostras obtidas a partir de um indivíduo mamífero, caracterizado pelo fato de que compreende:

   (i) obter um conjunto de dados associado com as amostras, em que o conjunto de dados compreende níveis de expressão de proteínas para pelo menos dois marcadores selecionados do grupo consistindo de: LGALS3BP urinário, creatinina urinária e proteinúria expressadas como uma razão de proteínas: creatinina na urina (uPCR); e (ii) introduzir o conjunto de dados em um processo analítico que utiliza os dados para gerar um resultado útil no diagnóstico e monitoramento da patologia renal.
2. 2. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a patologia renal compreende um ou mais de: doenças glomerulares; doença lúpus eritematoso sistêmico (LES); inflamação intersticial em nefrite lúpica (NL); fibrose intersticial em nefrite lúpica (NL); inflamação intersticial-renal (INF); glomerulonefrite crescêntica; glomerulopatia membranosa e anormalidades da membrana basal glomerular.
3. 3. Método in vitro para predição e/ou diagnóstico de nefrite lúpica em um indivíduo afetado ou potencial mente afetado por lúpus eritematoso sistêmico, caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas: a) fornecer uma amostra de urina do dito indivíduo: b) medir os níveis de LGALS3BP, creatinina e proteína total na dita urina;

   c) expressar os níveis medidos de LGALS3BP e creatinina (c), como medido na etapa b), como a razão: LGALS3BP/C e d) comparar a dita razão LGALS3BP/C para a proteína total com um valor de controle, onde um aumento da razão de LGALS3BP/C para a proteína total no que diz

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   2/3 respeito ao dito valor de controle indica um desenvolvimento de nefrite lúpica.
4. 4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a medição dos ditos níveis de LGALS3BP e creatinina é realizada pelo método ELISA ou Western-Blot.
5. 5. Método in vitro para monitoramento da progressão de nefrite lúpica em um paciente afetado por lúpus eritematoso sistêmico, caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas: a) fornecer uma amostra de urina do dito indivíduo: b) medir os níveis de proteína de ligação galectina-3, creatinina e proteína total na dita urina;

   c) expressar os níveis medidos de LGALS3BP e creatinina (c), como medido na etapa b), como a razão: LGALS3BP/C para a dita proteína total em pelo menos uma primeira e, pelo menos, uma segunda amostra de urina do dito indivíduo, em que pelo menos a dita primeira e segunda amostras de urina obtidas em momentos diferentes; e d) comparar a dita razão de LGALS3BP/C medida para a dita concentração de proteína total obtida para a dita primeira e segunda amostras de urina.
6. 6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o dito pelo menos uma primeira e segunda amostra são, respectivamente, obtidas antes de iniciar a terapia e durante e/ou após esta terapia.
7. 7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a dita terapia inclui o tratamento com fármacos esteroides, imunossupressores, Rituximabe, ou inibidores da enzima de conversão da angiotensina.
8. 8. Método in vitro para o diagnóstico de lupus eritrematoso sistêmico e nefrite lúpica em um indivíduo discriminando-os de outras condições reumatológicas e nefrite glomerular primária, o dito método caracterizado pelo fato de que compreende: a) fornecer uma amostra de urina do dito indivíduo: b) medir os níveis de LGALS3BP, creatinina