BR112019008752A2 - composição sob a forma de pó que compreende complexos de ferro-proteína do leite e bactérias probióticas - Google Patents
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Abstract
a presente invenção refere-se a uma composição sob a forma de pó que compreende bactérias probióticas e ao menos um complexo de ferro-proteína do leite. tal complexo de ferro-proteína do leite vantajosamente não causa redução significativa na viabilidade das bactérias e, dessa forma, tal fonte de ferro é vantajosamente usada para fortificar uma composição sob a forma de pó que compreende bactérias probióticas.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para COMPOSIÇÃO SOB A FORMA DE PÓ, QUE COMPREENDE COMPLEXOS DE FERRO-PROTEÍNA DO LEITE E BACTÉRIAS PROBIÓTICAS.
CAMPO DA INVENÇÃO [001] A presente invenção se refere a uma composição sob a forma de pó que compreende bactérias probióticas e ao menos um complexo de ferro-proteína do leite. Tal complexo de ferro-proteína do leite vantajosamente não causa redução significativa na viabilidade das bactérias e, dessa forma, tal fonte de ferro é vantajosamente usada para fortificar uma composição sob a forma de pó que compreende bactérias probióticas.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [002] Bactérias benéficas e, em particular, bactérias probióticas, são adicionadas a uma ampla gama de produtos e especificamente a produtos sob a forma de pó a serem reconstituídos com um líquido, como composições nutricionais para bebês, crianças pequenas, mulheres durante a gravidez, durante a lactação ou antes da gravidez, idosos ou pessoas com necessidade de nutrição específica devido a uma condição médica adversa. Tais produtos normalmente compreendem uma grande variedade de macro e micronutrientes, a fim de satisfazer as necessidades nutricionais do consumidor. Para fins nutricionais, é de suma importância que o consumidor obtenha quantidades adequadas das bactérias probióticas e dos outros nutrientes.
[003] Um micronutriente particularmente importante é o ferro. Em todo o mundo, a deficiência de ferro é uma das deficiências de nutriente mais prevalente. Em seres humanos, o ferro é essencial para o funcionamento de um grande número de processos biológicos como ligação e transporte de oxigênio, regulação genética, função neurológica, função imune e regulação do crescimento e da diferenciação celular. A
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2/36 deficiência de ferro pode resultar em anemia, bem como em uma variedade de problemas de saúde, como problemas de tiroide, funções imunes e mentais, desempenho físico, desenvolvimento cognitivo, maior sensibilidade à insulina e fadiga. A deficiência de ferro é especialmente disseminada em mulheres grávidas e lactantes, e em crianças.
[004] O enriquecimento dos alimentos com ferro é uma abordagem para combater a deficiência de ferro. Portanto, a inclusão de uma fonte de ferro adicionada em composições ou suplementos dietéticos, particularmente, composições ou suplementos dietéticos para bebês, crianças pequenas, mulheres antes da gravidez, durante a gravidez e/ou durante a lactação, é altamente desejável. Diversos compostos de ferro têm sido empregados como agentes fortificantes de ferro em produtos alimentícios e suplementos nutricionais. Por exemplo, o sulfato ferroso é amplamente utilizado, devido ao seu preço relativamente baixo e alta biodisponibilidade.
[005] Entretanto, os inventores descobriram que vários compostos de ferro, quando usados para fortificar uma composição que contém uma bactéria probiótica, têm um efeito prejudicial sobre a viabilidade das bactérias probióticas (ver também o pedido copendente PCT/EP2016/063170 e EP16198292.1).
[006] Na maioria dos casos, os benefícios das bactérias probióticas são obtidos apenas quando as bactérias estão vivas no momento do consumo. Dessa forma, a fim de compensar a perda de bactérias probióticas viáveis e garantir que as quantidades apropriadas de tais bactérias vivas sejam liberadas para o consumidor, as bactérias probióticas são geralmente superdosadas no produto. Esta solução não é, entretanto, completamente satisfatória, porque a superdosagem é muito cara e gera resíduos.
[007] Dessa forma, um objeto da presente invenção consiste em
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3/36 fornecer composições que compreendam uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro adicionada, em que a viabilidade das bactérias probióticas não seja comprometida pela presença da fonte de ferro adicionada.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO [008] Os inventores descobriram surpreendentemente que um complexo de ferro-proteína do leite, quando usado como uma fonte de ferro em uma composição que contém bactérias probióticas, não causa uma redução na viabilidade das bactérias.
[009] Em um primeiro aspecto, a invenção fornece uma composição sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
[0010] Em um segundo aspecto, a invenção se refere ao uso de uma fonte de ferro para a fortificação de uma composição sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
[0011] Em um terceiro aspecto, a invenção fornece um processo para produzir uma composição sob a forma de pó que compreende
a) fornecer uma primeira composição sob a forma de pó;
b) misturar à primeira composição sob a forma de pó uma fonte de ferro para formar uma segunda composição sob a forma de pó; e
c) misturar ao menos uma bactéria probiótica à primeira composição sob a forma de pó antes ou ao mesmo tempo que a fonte de ferro ou misturar ao menos uma bactéria probiótica à segunda composição sob a forma de pó, após a adição da fonte de ferro, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite. [0012] Em um quarto aspecto, a invenção apresenta um método para produzir um produto que compreende reconstituir em um líquido
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4/36 uma composição sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
[0013] Em um quinto aspecto, a invenção fornece um produto que é ou que pode ser obtido pelo método da invenção.
[0014] Em um sexto aspecto, a invenção apresenta um método para fornecer uma nutrição a um Indivíduo que compreende alimentar o indivíduo com um produto da invenção, que é um produto comestível.
[0015] Em um sétimo aspecto, a invenção apresenta uma composição comestível sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro, para uso na prevenção, redução e/ou tratamento de deficiência de ferro em um indivíduo, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
[0016] Em um oitavo aspecto, a invenção apresenta um método para reduzir e/ou evitar a perda de bactérias probióticas durante a reconstituição de uma composição sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro adicionada, sendo que um complexo de ferro-proteína do leite é usado como a fonte de ferro adicionada.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0017] Figura 1: Representação gráfica da perda de viabilidade de Lactobacillus rhamnosus (depositado como CGMCC 1.3724) em composições que têm, respectivamente, 10 e 30 mg de ferro por 100 g de composição. Duas fontes de ferro diferentes são comparadas: sulfato de ferro dissolvido na forma secada por atomização e um complexo de ferro-caseína. A perda de Lactobacillus rhamnosus viável é significativamente menor com o complexo de ferro-caseína, em ambas as concentrações de ferro.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
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5/36
Definições [0018] Para uso na presente invenção, os termos complexo de ferro-proteína do leite designam um complexo formado de cátions de ferro quelado com proteínas do leite. As proteínas do leite são destinadas a abranger caseína, proteínas de soro de leite e misturas dos mesmos, bem como derivados ou frações de caseína ou de proteína de soro de leite.
[0019] Para uso na presente invenção, o termo bactérias probióticas se refere a preparações de células bacterianas vivas com um efeito benéfico sobre a saúde ou bem-estar do hospedeiro [Salminen S, et al., Probiotics: how they should be defined, Trends Food Sci. Technol, (1999), 10, 107-10], [0020] As bactérias são consideradas vivas quando são capazes de se multiplicar sob condições controladas de cultivo e formar colônias ou suspensões ou quando a atividade metabólica e/ou integridade de membrana do micro-organismo pode ser estabelecida com o uso de métodos conhecidos pelo versado na técnica, como por exemplo a citometria de fluxo. As bactérias probióticas submetidas a secagem são consideradas vivas quando são capazes de se multiplicar e/ou quando a integridade da membrana pode ser estabelecida, conforme descrito acima, após a reconstituição das bactérias com um líquido, como um líquido aquoso, de preferência água.
[0021] Para o propósito da presente invenção, reconstituição se refere à dissolução ou suspensão de um pó em um líquido como um líquido aquoso, de preferência água, um meio de reconstituição específico para uso em microbiologia analítica, ou uma bebida como leite ou suco. O líquido usado para reconstituição pode ser frio ou morno. De preferência, se refere à reconstituição com um líquido aquoso, de preferência com água.
[0022] Uma composição aquosa é destinada ao propósito da
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6/36 presente invenção, como um líquido que compreende ao menos uma fase aquosa. Ela pode ser, por exemplo, uma emulsão, uma solução ou dispersão aquosa ou água. De preferência, é uma emulsão de óleoem-água, uma solução ou suspensão aquosa ou água. Com mais preferência, é uma solução ou suspensão aquosa ou água. Com a máxima preferência, é água.
[0023] O termo ferro é aqui destinado a designar Fe2+ ou Fe3+ ou, dependendo da fonte de ferro usada, salvo especificação em contrário. [0024] Uma fonte de ferro adicionada é destinada ao propósito da presente invenção como um composto ferroso ou férrico adicionado à composição para o único benefício de suplementação de ferro. Dependendo da sua natureza, a composição pode compreender ferro proveniente de outros ingredientes, por exemplo de componentes de leite, frutas, vegetais, cereais ou fibras. O ferro presente em tais ingredientes não se destina a ser usado aqui como uma fonte de ferro adicionada, por estar inerentemente presente em um ingrediente que não é principalmente adicionado por seu teor de ferro, mas por seu valor nutricional geral.
[0025] Uma fonte de ferro é destinada ao propósito da presente invenção como sendo substancialmente a única fonte de ferro adicionada na composição, desde que outras fontes de ferro adicionadas sejam usadas em uma quantidade suficientemente pequena para não causar uma perda estatisticamente significativa de bactérias probióticas viáveis. O versado na técnica pode avaliar se uma perda estatisticamente significativa de bactérias viáveis é causada pela aplicação do método descrito nos exemplos do presente pedido e a aplicação de técnicas estatísticas comumente conhecidas para a análise dos resultados.
[0026] O termo exógeno, quando se refere a ferro ou fósforo no complexo se refere a ferro e/ou fósforo que foi adicionado durante o
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7/36 processo de produção do complexo e, dessa forma, se refere a ferro ou fósforo que não foi nativamente quelado com as proteínas do leite. [0027] O termo composição nutricional designa um produto destinado a fornecer uma nutrição completa ou uma nutrição suplementar a um indivíduo (isto é, para satisfazer as necessidades nutricionais essenciais de tal indivíduo) e em que o principal objetivo é fornecer nutrição. Uma composição nutricional tem como objetivo fornecer nutrientes específicos para um indivíduo com necessidades nutricionais específicas, como bebês, crianças pequenas, mulheres grávidas ou lactantes, idosos ou pessoas com condição médica adversa que requeiram alimentação especial (por exemplo, composições para alimentação por sonda ou composições para indivíduos pediátricos). Os produtos em que o aspecto hedônico é importante e as qualidades nutricionais não são de primordial importância e são excluídos dos produtos nutricionais. As composições nutricionais compreendem, de preferência, proteínas, gorduras, carboidratos e diversos micronutrientes.
[0028] Na presente invenção, o termo bebê significa uma criança entre o nascimento e 12 meses de idade. Os termos criança pequena se referem a uma criança entre 12 meses e 5 anos de idade, de preferência entre 12 meses e 3 anos de idade.
[0029] A expressão fórmula para bebês, como usada aqui, se refere a um produto alimentício que é destinado ao uso nutricional específico por bebês e que satisfaz, por si mesma, os requisitos nutricionais dessa categoria de pessoas (Artigo 2(c) da Diretiva 91/321/EEC 2006/141/EC da Comissão Européia, de 22 de dezembro de 2006, sobre fórmulas para bebês e fórmulas de transição). Ela também se refere a composições nutricionais destinadas a bebês segundo a definição do Codex Alimentarius (Codex STAN 72-1981) e Infant Specialities (incluindo Food for Special Medical Purpose). As fórmulas para bebês podem abranger as fórmulas de partida para bebês e as fórmulas de
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8/36 seguimento ou de transição. De modo geral, uma fórmula de partida é para bebês desde o nascimento como um substituto do leite materno. Uma fórmula de seguimento ou de transição é oferecida do 6o mês de vida em diante. Ela constitui o principal elemento líquido na dieta progressivamente diversificada dessa categoria de pessoa. Deve-se compreender que os bebês podem ser alimentados unicamente com fórmulas para bebês, ou que a fórmula para bebês pode ser usada como suplemento ou complemento do leite humano.
[0030] O leite de crescimento (ou GUM (growing-up milk)) é dado a partir de um ano. Ele é, de modo geral, uma bebida à base de leite adaptada para as necessidades nutricionais específicas de crianças pequenas.
[0031] A expressão alimento para bebês significa um produto alimentício destinado ao uso nutricional específico por bebês ou crianças, como crianças pequenas, durante os primeiros anos de vida. [0032] A expressão composição de cereais para bebês significa um produto alimentício à base de cereais destinado ao uso nutricional específico por bebês ou crianças, como crianças pequenas, durante os primeiros anos de vida.
[0033] A expressão fortificante se refere a composições nutricionais adequadas para serem misturadas ao leite materno ou a fórmulas para bebês. O leite materno deve ser compreendido como o leite da mãe ou do colostra da mãe, ou o leite de uma doadora ou o colostra do leite de uma doadora.
[0034] O termo suplemento se refere a uma composição que pode ser usada para suplementar ou complementar, a nutrição de um indivíduo.
[0035] O termo prebiótico significa carboidratos não digestíveis que afetam de modo benéfico o hospedeiro por estimular seletivamente o crescimento e/ou a atividade de bactérias saudáveis no cólon de
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9/36 seres humanos (Gibson GR, Roberfroid MB. Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics. J. Nutr. 1995;125:1401-12).
Composição [0036] A composição da presente invenção é uma composição sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro, sendo que a dita fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
[0037] Os presentes inventores surpreendentemente descobriram que, dentre os muitos constituintes de uma composição nutricional completa, como uma fórmula para bebês, o ferro adicionado foi responsável pela perda significativa de bactérias probióticas na composição reconstituída. Além disso, os presentes inventores identificaram que os complexos de ferro-proteína do leite puderam ser vantajosamente usados como fontes nutricionais de ferro, em combinação com as bactérias probióticas, sem causar perda significativa de viabilidade de tais bactérias probióticas.
[0038] A proteína do leite pode ser caseína, um derivado ou uma fração de caseína, soro de leite, um derivado ou fração de soro de leite ou uma mistura dos mesmos. De preferência, a proteína é fosfoproteína. Em uma modalidade preferencial, a proteína do leite no complexo de ferro-proteína do leite compreende caseína e/ou um derivado ou fração de caseína. Com a máxima preferência, a proteína do leite no complexo compreende caseína. Em uma modalidade preferencial, a proteína do leite presente no complexo consiste em caseína e/ou derivados ou frações de caseína. Com mais preferência, as proteínas do leite no complexo consistem em caseína.
[0039] A caseína pode ser obtida a partir de diversas fontes como leite, caseinato de sódio, caseinato de potássio, caseinato de amônio, caseinato de coalho, caseína ácida, como caseína lática e/ou sólidos
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10/36 de leite isento de gordura. De preferência, é caseinato de sódio, caseinato de potássio, caseinato de amônio e/ou caseína lática.
[0040] Em uma modalidade preferencial, o complexo é um complexo não micelar.
[0041] Em uma modalidade, a proteína do leite é derivada de uma fonte de leite que tem uma razão entre proteína e cálcio de ao menos 45:1. De preferência, a razão de peso entre proteína/cálcio na fonte de leite é de ao menos 58:1, com mais preferência, entre 58:1 e 640:1, com a máxima preferência, entre 70:1 e 95:1. Isto representa uma redução significativa da quantidade de cálcio na fonte de leite, já que o leite de vaca normalmente tem uma razão de peso entre proteína/cálcio de 26:1. Em uma outra modalidade preferencial, a proteína do leite é derivada de uma fonte de leite em que ao menos 70% de peso/volume do cálcio foi removido da fonte de leite. Tal fonte de leite é, de preferência, selecionada dentre leite integral, leite desnatado, leite com baixo teor de lactose, retentado de ultrafiltração, leite concentrado e combinações dos mesmos. Em uma modalidade o leite é leite bovino. A remoção de cálcio da fonte de leite é vantajosa pelo fato de que ajuda na ligação de quantidades maiores de ferro às proteínas do leite, especificamente pela remoção do cálcio quelado, que pode ser substituído por ferro.
[0042] Em uma outra modalidade, o complexo de ferro-proteína do leite compreende fósforo exógeno, com mais preferência, ortofósforo exógeno. De preferência, a razão de peso entre proteína e fósforo (de preferência, ortofosfato) é entre 64:1 e 6,25:1, de preferência menor que 32:1 e 6,25:1, de preferência, menor que 32:1 e 8:1, com mais preferência entre 28:1 e 8:1, com mais preferência ainda entre 25:1 e 8:1, com a máxima preferência entre 20:1 e 8:1. A presença de fósforo é vantajosa pelo fato de que ajuda na ligação eficaz do ferro às proteínas do leite, contribuindo assim para a ligação de altas quantidades de
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11/36 ferro nos complexos.
[0043] Em uma outra modalidade preferencial, o complexo é solúvel em uma solução em pH fisiológico, de preferência entre pH 6,6 e
6,9. Tal solubilidade é benéfica para evitar a formação de precipitados insolúveis em solução líquida nesse pH e também contribui para a boa biodisponibilidade ao complexo.
[0044] De preferência, o ferro no complexo é ferro exógeno. É vantajoso que o complexo compreenda ferro adicionado exogenamente, porque apenas pequenas quantidades de ferro são naturalmente ligadas às proteínas do leite, como a caseína. De preferência, o complexo compreende mais de 1%, em peso, de ferro ligado, com mais preferência de 1 20%, em peso, de ferro ligado, com mais preferência ainda, de 1 a 8%, em peso, com a máxima preferência, de 4 a 8%, em peso, de ferro ligado. Com mais preferência, a razão de peso entre proteína e ferro (de preferência, ferro exógeno) é entre 92:1 e 19,5:1, de preferência entre 90:1 e 19,5:1, com mais preferência entre 80:1 e 19,5:1, com a máxima preferência entre 50:1 e 19,5:1. É particularmente vantajoso poder ter tais altas quantidades de ferro ligadas às proteínas do leite no complexo, pois quanto mais alta for a carga de ferro no complexo, menor será a quantidade de complexos necessária para fortificar um produto.
[0045] Em uma modalidade preferencial, o cátion de ferro no complexo é Fe3+.
[0046] Em uma modalidade preferencial, o complexo é fornecido na forma de um pó.
[0047] Complexos particularmente preferenciais são aqueles descritos em US 2015/0164123 e em WOOO/51446, que estão ambos aqui incorporados, a título de referência. Tais documentos fornecem uma descrição detalhada dos processos que podem ser usados para produzir complexos como aqueles descritos acima e modalidades especí
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12/36 ficas de complexos que podem ser vantajosamente usados para o propósito da presente invenção.
[0048] Os complexos descritos em US 2015/0164123 são de máxima preferência. Eles são particularmente vantajosos por serem solúveis em produtos alimentícios líquidos aquosos ou bebidas mesmo quando altas quantidades de ferro estão ligadas à proteína do leite nos complexos. Dessa forma, os complexos vantajosamente não formam precipitados insolúveis, o que geraria opacidade quando adicionados a bebidas e soluções transparentes e que podem fornecer textura arenosa indesejável a produtos alimentícios e bebidas. Vantagens adicionais dos complexos descritos acima podem ser encontrados no documento de referência citado US 2015/0164123.
[0049] Agora, os presentes inventores descobriram que a maioria das fontes de ferro, como o hepta-hidrato de sulfato ferroso e o sulfato ferroso dissolvido na forma secada por atomização amplamente usados, causam ambos perda significativa de viabilidade das bactérias probióticas, enquanto nenhuma perda significativa de viabilidade das bactérias probióticas é observada com os complexos de ferro-proteína de leite, como descrito na presente invenção. Sem se ater à teoria, os presentes inventores identificaram que as bactérias probióticas eram particularmente sensíveis ao ferro livre no momento da reconstituição da composição em pó com um líquido. Acredita-se que no momento da reconstituição da composição em pó com um líquido, a lenta liberação de ferro livre permite que as bactérias probióticas tenham tempo suficiente para a reidratação antes que entrem em contato com o ferro livre, reduzindo assim a perda de viabilidade das bactérias probióticas.
[0050] Este efeito positivo é observado quando o complexo de ferro-proteína do leite é usado dessa forma e também quando tais complexos são dispersos em uma matriz amorfa, desde que a estrutura complexada permaneça. Tal ingrediente com complexos dispersos em
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13/36 uma matriz pode ser obtido pela mistura dos complexos em uma solução carreadora e secagem por atomização da solução carreadora. Veículo adequado compreende, por exemplo, maltodextrina. O versado na técnica pode avaliar de modo rotineiro se um produto ou ingrediente compreende complexos de ferro-proteína do leite pela combinação de uma avaliação de identificação de proteína como SDS-PAGE, análise mineral usando espectroscopia de emissão atômica ICP, bem como fazendo um teste de ferro livre com um composto como o hexacianoferrato de potássio que envolve mudanças de cor na presença de Fe2+ e Fe3+.
[0051] O uso dos complexos de ferro-proteína do leite descritos acima é particularmente vantajoso, uma vez que são ao mesmo tempo caracterizados pela boa biodisponibilidade e pelo baixo impacto prejudicial sobre a viabilidade de bactérias probióticas. Foi demonstrado que os compostos de ferro-proteína do leite, conforme descrito acima, são caracterizados por uma biodisponibilidade similar àquela do sulfato ferroso, que é o padrão ouro em termos de biodisponibilidade em seres humanos. Vide, por exemplo, US 2015/0164123 e WO 00/51446.
[0052] Em uma modalidade preferencial, ao menos 50%, em peso, com mais preferência ao menos 60%, em peso, com mais preferência ao menos 70%, em peso, com mais preferência ao menos 80% em peso, com mais preferência ainda, ao menos 90%, em peso, do ferro adicionado está na forma de um complexo de ferro-proteína do leite, conforme definido acima. Com mais preferência ainda, o complexo de ferro-proteína do leite, conforme definido acima, é substancialmente a única fonte de ferro adicionada na composição. Com a máxima preferência, o complexo de ferro-proteína do leite, conforme definido acima, é a única fonte de ferro adicionada na composição.
[0053] A fonte de ferro adicionada está, de preferência, presente
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14/36 em uma quantidade tal de modo a fornecer de 1 a 300 mg, de preferência de 1 a 250 mg, com mais preferência de 1 a 200 mg, com mais preferência de 1 a 100 mg, com mais preferência ainda de 1 a 75 mg, com a máxima preferência de 1 a 50 mg de ferro por 100 g de composição, com base no peso a seco total da composição.
[0054] Quaisquer bactérias probióticas vivas podem ser usadas na composição da invenção. Os exemplos fornecidos no presente pedido mostram que os complexos acima descritos não prejudicam a viabilidade das bactérias probióticas. O efeito não é cepa-específico e pode ser aplicado a uma ampla gama de cepas bacterianas.
[0055] Exemplos de bactérias probióticas que podem estar presentes na composição da presente invenção incluem bifidobactérias, lactobacilos, lactococos, enterococos, estreptococos, Leuconostoc, Escherichia, propionibactérias, ou combinações das mesmas, de preferência é uma bactéria do gênero Lactobacillus ou Bifidobacterium.
[0056] De preferência, a bactéria probiótica é selecionada dentre as espécies Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animal is, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus reuteri, Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Lactococcus diacetylactis, Lactococcus cremoris, Lactobacillus delbrueckii, subespécie bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii, subespécie lactis, Lactobacillus helveticus, Escherichia coli, Enterococcus faecium, Leuconostoc pseudomesenteroides, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus sakei, Streptococcus salivarius, bem como qualquer de suas subespécies e/ou misturas das mesmas.
[0057] Com mais preferência, ela é selecionada dentre as espé
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15/36 cies Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus delbrueckii, subspécie bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii, subespécie lactis, Lactobacillus helveticus, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus sakei e misturas das mesmas.
[0058] Exemplos de cepas bacterianas que podem estar vantajosamente presentes na composição incluem Bifidobacterium longum (depositada como ATCC 999), a Bifidobacterium longum (depositada como CNCM I 2618), a Bifidobacterium breve (depositada como CNCM I-3865), Bifidobacterium lactis (depositada como CNCM I3446), Lactobacillus johnsonii (depositada como CNCM 1-1225), Lactobacillus paracasei (depositada como CNCM 1-2116), Lactobacillus rhamnosus (depositada como CGMCC 1.3724), Streptococcus thermophilus (depositada como CNCM 1-1422), Streptococcus thermophilus (depositada como CNCM 1-4153), Streptococcus thermophilus (depositada como CNCM 1-1985), Streptococcus thermophilus (depositada como CNCM 1-3915), Lactobacillus casei (depositada como CNCM 1-1518), Lactobacillus casei (depositado como a ACA-DC 6002), Escherichia coli Nissle (depositada como DSM 6601), Lactobacillus bulgaricus (depositado como CNCM 1-1198), Lactococcus lactis (depositada como CNCM 1-4154), ou combinações das mesmas.
[0059] Cepas bacterianas mais preferenciais incluem Bifidobacterium longum (depositada como ATCC 999), Bifidobacterium longum (depositada como CNCM 1-2618), Bifidobacterium breve (depositada como CNCM I-3865), Bifidobacterium lactis (depositada como CNCM I3446), Lactobacillus johnsonii (depositada como CNCM 1-1225), Lac
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16/36 tobacillus paracasei (depositada como CNCM 1-2116), Lactobacillus rhamnosus (depositada como CGMCC 1.3724), Lactobacillus casei (depositada como CNCM 1-1518), Lactobacillus casei (depositada como a ACA-DC 6002), Streptococcus thermophilus (depositada como CNCM 1-3915) e Lactobacillus bulgaricus depositada como (CNCM I1198) ou combinações das mesmas.
[0060] Em uma modalidade preferencial adicional, a bactéria probiótica é selecionada dentre Bifidobacterium longum (depositada como ATCC BAA-999), Lactobacillus rhamnosus (depositada como CGMCC 1.3724) e Lactobacillus paracasei (depositada como CNCM 1-2116) e misturas das mesmas.
[0061] As bactérias probióticas estão, de preferência, presentes na composição em uma quantidade de ao menos 5E+06 UFC por grama de composição, em uma base de peso a seco, de preferência, de 5E+06 a 1E+12 UFC por grama de composição, com mais preferência, de 5E+06 a 5E+11 UFC por grama de composição, com a máxima preferência, de 5E+06 a 5E+10 UFC por grama de composição.
[0062] As bactérias probióticas selecionadas podem ser cultivadas de acordo com qualquer método adequado e podem ser preparadas para adição à composição por meio de técnicas conhecidas, como secagem por congelamento ou secagem por atomização, por exemplo. Alternativamente, as preparações bacterianas podem ser adquiridas junto a fornecedores especializados, como DSM, Dupont Danisco, Morinaga, Institut Roseli, Christian Hansen e Valio, já preparadas em uma forma adequada para adição a uma composição sob a forma de pó.
[0063] A composição sob a forma de pó pode estar sob a forma de pó livre ou sob a forma de pó comprimido, como na forma de um tablete. De preferência, a composição sob a forma de pó não se destina ao uso na forma de um pó, mas deve ser reconstituída em um líquido, de preferência em um líquido aquoso, com a máxima preferência em
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17/36 água, antes do uso.
[0064] As composições preferenciais sob a forma de pó da invenção incluem um produto alimentício ou de bebida, um produto de ração animal, um suplemento nutricional para seres humanos ou animais, uma composição farmacêutica ou uma composição cosmética.
[0065] Em uma outra modalidade preferencial, a composição em forma de pó é uma composição comestível.
[0066] Produtos alimentícios e de bebida incluem todos os produtos destinados a ser consumidos oralmente por seres humanos, com o propósito de proporcionar nutrição e/ou prazer. Em uma modalidade preferencial, o produto é uma composição nutricional. Com mais preferência, é uma composição nutricional selecionada dentre uma fórmula para bebês, um leite de crescimento, um alimento para bebês, uma composição de cereal para bebês, um fortificante, um suplemento e uma composição nutricional para mulheres grávidas ou lactantes. Com mais preferência, ela é selecionada dentre uma fórmula para bebês, um leite de crescimento, uma composição de cereal para bebês e uma composição nutricional para mulheres grávidas ou lactantes. Com mais preferência ainda, é selecionada dentre uma fórmula para bebês, um leite de crescimento e uma composição de cereal para bebês. Com a máxima preferência, é uma fórmula para bebês ou um leite de crescimento.
[0067] O produto pode também estar sob a forma de um produto de ração animal ou suplemento nutricional para animais. Preferencialmente, o animal é um mamífero. Exemplos de animais incluem primatas, vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ratos, camundongos, peixes, pássaros e similares.
[0068] Os suplementos nutricionais sob a forma de pó incluem suplementos em pó livre ou em pó comprimido, e tipicamente abrangem suplementos a serem dissolvidos em água ou polvilhados sobre ali
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18/36 mentos úmidos ou em uma bebida. Tais suplementos destinam-se a fornecer nutrientes adicionais e/ou um benefício de saúde ao indivíduo que o consome, bem como outros ingredientes benéficos, incluindo bactérias probióticas e ferro. Um suplemento de acordo com a presente invenção pode ser usado para fornecer nutrientes e/ou um benefício de saúde a seres humanos, bem como a animais, conforme definido acima. Suplementos nutricionais incluem, por exemplo, suplementos em pó a serem adicionados ao leite materno, por exemplo para bebês prematuros ou bebês com baixo peso ao nascer. Também incluem suplementos para mulheres antes da gravidez, durante a gravidez e/ou durante a lactação.
[0069] Composições farmacêuticas são composições destinadas a tratar ou evitar uma condição médica adversa em um indivíduo que esteja precisando das mesmas.
[0070] Composições cosméticas são tipicamente destinadas a proporcionar um efeito estético ao corpo e podem, de preferência, ser administradas por via oral.
[0071] A composição, de preferência a composição nutricional, de preferência compreende proteína, carboidratos, gorduras, vitaminas e/ou outros minerais. De preferência, compreende todos esses tipos de nutrientes.
[0072] As proteínas podem ser intactas ou hidrolisadas (extensiva ou parcialmente hidrolisadas).
[0073] A composição nutricional de acordo com a presente invenção, geralmente, contém uma fonte de lipídios. Isso é particularmente relevante se a composição nutricional da invenção for uma fórmula para bebês. Nesse caso, a fonte de lipídio pode ser qualquer lipídio ou gordura que seja adequado(a) para uso nas fórmulas para bebês. Algumas fontes de gordura preferenciais incluem óleo de babaçu, óleo de girassol de alto teor oleico e óleo de açafrão de alto teor oleico. Os
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19/36 ácidos graxos essenciais, ácido linoleico e ácido α-linoleico também podem ser adicionados, além de quantidades pequenas de ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa (LC-PUFAs), como o ácido araquidônico (ARA), ácido docosa-hexaenoico (DHA) e/ou ácido eicosapentanoico (EPA). Tais LC-PUFAs podem ser fornecidos sob a forma de óleo de peixe ou óleo microbiano. Os complexos de ferroproteína do leite, como aqui descritos, causam vantajosamente pouca ou mesmo nenhuma oxidação de LC-PUFAs.
[0074] A composição, de acordo com a presente invenção, pode conter uma fonte de carboidrato, como lactose, maltodextrina, amido e misturas dos mesmos. A composição, de acordo com a presente invenção, pode também conter um tipo específico de carboidratos: prebióticos. Os prebióticos que podem ser usados de acordo com a presente invenção não são particularmente limitados e incluem todas as substâncias alimentícias que promovem o crescimento de probióticos ou de micro-organismos benéficos para a saúde dos intestinos. De preferência, eles podem ser selecionados do grupo que consiste em oligossacarídeos, opcionalmente contendo frutose, galactose e manose; fibras dietárias, em particular fibras solúveis, fibras de soja; inulina; ou suas misturas. Alguns exemplos de prebióticos são fruto-oligossacarídeos (FOS), galacto-oligossacarídeos (GOS), isomalto-oligossacarídeos (IMO), xilo-oligossacarídeos (XOS), arabino-xilo-oligossacarídeos (AXOS), manano-oligossacarídeos (MOS), inulina, polidextrose, glicosilsacarose (GS), lactossacarose (LS), lactulose (LA), oligossacarídeos de palatinose (PAO), malto-oligossacarídeos, gomas e/ou seus hidrolisados, pectinas e/ou seus hidrolisados. Em uma modalidade específica, os prebióticos podem ser fruto-oligosacarídeos e/ou inulina. Produtos comerciais adequados que podem ser usados incluem combinações de FOS com inulina como o produto comercializado pela BENEO sob a marca registrada Orafti, ou a polidextrose comercializaPetição 870190045304, de 14/05/2019, pág. 23/53
20/36 da pela Tate & Lyle sob a marca registrada STA-LITE®.
[0075] Os prebióticos podem também ser um BMO (oligossacarídeo do leite bovino) e/ou um HMO (oligossacarídeo do leite humano), como os oligossacarídeos N-acetilados, oligossacarídeos sialilados, oligossacarídeos fucosilados e quaisquer misturas dos mesmos.
[0076] Um exemplo específico de prebiótico é uma mistura de galacto-oligossacarídeo(s), oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) e oligossacarídeo(s) sialilado(s) na qual o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) representa(m) de 0,5% a 4,0%, em peso, da mistura de oligossacarídeos, o(s) galacto-oligossacarídeo(s) representa(m) de 92,0% a 98,5%, em peso, da mistura de oligossacarídeos e o(s) oligossacarídeo(s) sialilado(s) representa(m) de 1,0% a 4,0%, em peso, da mistura de oligossacarídeos. Por exemplo, uma composição para uso de acordo com a invenção pode conter de 2,5% a 15,0%, em peso, de CMOSGOS com base na matéria seca, com a condição de que a composição compreenda ao menos 0,02%, em peso, de oligossacarídeo n-acetilado, ao menos 2,0%, em peso, de um galacto-oligossacarídeo e ao menos 0,04%, em peso, de um oligossacarídeo sialilado. Os documentos W02006087391 e WO2012160080 fornecem alguns exemplos de produção de tal mistura de oligossacarídeo.
[0077] A composição da invenção pode também conter todas as vitaminas, minerais e outros micronutrientes considerados essenciais na dieta diária e em quantidades significativas em termos nutricionais. As necessidades mínimas de certas vitaminas e minerais foram estabelecidas. Exemplos de minerais, vitaminas e outros micronutrientes opcionalmente presentes na composição da invenção incluem vitamina A, vitamina B1, vitamina B2, vitamina B6, vitamina B12, vitamina E, vitamina K, vitamina C, vitamina D, ácido fólico, inositol, niacina, biotina, ácido pantotênico, colina, cálcio, fósforo, iodo, magnésio, cobre, zinco, manganês, cloro, potássio, sódio, selênio, cromo, molibdênio,
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21/36 taurina e L-camitina. Os minerais são normalmente adicionados na forma de sal. A presença e as quantidades de minerais específicos e outras vitaminas variará dependendo do grupo alvo pretendido.
[0078] Os complexos de ferro-proteína do leite, como aqui descritos, causam vantajosamente pouca ou mesmo nenhuma oxidação de vitaminas, como vitamina A e vitamina C. Também os complexos de ferro-proteína do leite, como descritos aqui, causam pouca ou mesmo nenhuma oxidação de polifenóis, dessa forma também é preferencial que a composição da presente invenção compreenda polifenóis.
Processo para produzir uma composição sob a forma de pó [0079] Em uma madalidade, a presente invençãe se refere a um processe para produzir uma cempesiçãe seb a ferma de pó que compreende
a) fernecer uma primeira cempesiçãe seb a forma de pó;
b) misturar uma fonte de ferro com a primeira composição sob a forma de pó para obter uma segunda composição sob a forma de pó; e
c) misturar ao menos uma bactéria probiótica à primeira composição sob a forma de pó antes ou ao mesmo tempo que a fonte de ferro ou misturar ao menos uma bactéria probiótica à segunda composição sob a forma de pó, após a adição da fonte de ferro, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite. [0080] A composição sob a forma de pó, a fonte de ferro e as bactérias probióticas são conforme definido em qualquer uma das modalidades descritas acima na seção composição.
[0081] A primeira composição sob a forma de pó pode ser preparada com o uso de qualquer método conhecido na técnica, como, por exemplo, secagem por atomização. Nesse método, os ingredientes da composição são misturados em uma mistura úmida e atomizados em uma torre de secagem para formar um pó. Ingredientes sensíveis, co
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22/36 mo minerais ou vitaminas, por exemplo, podem também ser adicionados na forma seca antes, ao mesmo tempo ou após a adição da fonte de ferro e/ou das bactérias probióticas. Por exemplo, é comum que a fonte de ferro seja adicionada à primeira composição sob a forma de pó como uma pré-mistura de elemento-traço que compreende diversos minerais e vitaminas.
[0082] As bactérias probióticas são, de preferência, adicionadas sob a forma de uma pré-mistura compreendendo um veículo e, opcionalmente, agentes protetores. Veículos para bactérias probióticas são bem conhecidos pelo versado na técnica de incorporação de bactérias probióticas em produtos. O veículo é, de preferência, um carboidrato, como, por exemplo, maltodextrina. Uma ampla variedade de agentes protetores é conhecida pelo versado na técnica. Agentes protetores particularmente adequados são aqueles descritos no pedido de patente copendente PCT/EP16/065359 do mesmo requerente.
[0083] As etapas de misturar as bactérias probióticas e a etapa de misturar a fonte de ferro podem ser realizadas com o uso de qualquer método conhecido na técnica para misturar tais tipos de ingredientes com uma composição em pó. Por exemplo, a mistura pode ser preparada por misturação a seco, por adição direta na torre de secagem por atomização, em um leito fluidizado, ou em um dispositivo de aplicação de revestimento ou aglomerador ou na fase final de extrusão ou secagem por cilindro. De preferência, as bactérias probióticas e/ou a fonte de ferro são misturados com a composição em forma de pó por misturação a seco ou por adição em um leito fluidizado. Com a máxima preferência, as bactérias probióticas e/ou a fonte de ferro são misturadas com a composição em forma de pó por misturação a seco.
[0084] Em uma modalidade preferencial, ao menos 50%, em peso, com mais preferência ao menos 60%, em peso, com mais preferência ao menos 70%, em peso, com mais preferência ao menos 80% em
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23/36 peso, com mais preferência ainda, ao menos 90%, em peso, do ferro adicionado está na forma de uma fonte de ferro, conforme definido acima. Com mais preferência ainda, a fonte de ferro, conforme definida acima, é substancialmente a única fonte de ferro adicionada na composição. Com a máxima preferência, a fonte de ferro, conforme definido acima, é a única fonte de ferro adicionada na composição.
Uso dos complexos de ferro-proteína do leite para a fortificação de uma composição sob a forma de pó [0085] Os cpmplexps de ferro-proteína de leite pedem ser usades vantajesamente para a fertificaçãe de uma cempesiçãe seb a ferma de pó que cempreende ae menes uma bactéria prcbiótica. Tais fcntes de ferro fcrnecem vantajesamente ferro biedispenível, ae mesme tempe em que nãe causa nenhuma perda significativa de viabilidade das bactérias probióticas durante a reccnstituiçãc dc pó ccm um liquide, cerne água.
[0086] Os complexos de ferro-proteína do leite que têm uma biodisponibilidade similar à do sulfato ferroso, conforme descrito acima, são particularmente úteis para fortificar produtos alimentícios.
[0087] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a um método para fortificar uma composição sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica, sendo que o dito método compreende as etapas de
a) fornecer uma primeira composição sob a forma de pó;
b) misturar à primeira composição sob a forma de pó uma fonte de ferro para produzir uma segunda composição sob a forma de pó; e
c) misturar ao menos uma bactéria probiótica à primeira composição sob a forma de pó antes ou ao mesmo tempo que a fonte de ferro ou misturar ao menos uma bactéria probiótica à segunda composição sob a forma de pó, após a adição da fonte de ferro,
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24/36 sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite. [0088] A primeira composição sob a forma de pó, a segunda composição sob a forma de pó e as etapas de processo são conforme definidas na seção acima em relação ao processo para produzir a composição da invenção. Além disso, a composição sob a forma de pó, a fonte de ferro e as bactérias probióticas são conforme descrito acima em qualquer modalidade da seção de composição.
[0089] Em uma modalidade preferencial, ao menos 50%, em peso, com mais preferência ao menos 60%, em peso, com mais preferência ao menos 70%, em peso, com mais preferência ao menos 80% em peso, com mais preferência ainda, ao menos 90%, em peso, do ferro adicionado está na forma de uma fonte de ferro, conforme definido acima. Com mais preferência ainda, a fonte de ferro, conforme definida acima, é substancialmente a única fonte de ferro adicionada na composição. Com a máxima preferência, a fonte de ferro, conforme definido acima, é a única fonte de ferro adicionada na composição.
Composição para uso em um método para prevenir, reduzir e/ou tratar deficiência de ferro [0090] A composição da invenção fortificada com uma fonte de ferro altamente biodisponível, conforme descrito acima, a presente invenção também se refere a uma composição para uso em um método para prevenir, reduzir e/ou tratar deficiência de ferro em um indivíduo. Método para a produção de um produto [0091] A invenção se refere a um método para produzir um produto, de preferência um produto comestível, que compreende reconstituir em um líquido uma composição sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
[0092] A composição sob a forma de pó, as bactérias probióticas e a fonte de ferro são definidas em qualquer uma das modalidades desPetição 870190045304, de 14/05/2019, pág. 28/53
25/36 critas acima.
[0093] O uso de um complexo de ferro-proteína do leite é particularmente vantajoso quando a composição sob a forma de pó é reconstituída em um líquido. Os presentes inventores descobriram que as bactérias probióticas mostravam-se particularmente sensíveis no momento da reidratação e que a perda de viabilidade era particularmente crítica quando a composição sob a forma de pó era reconstituída com um líquido como água. Os presentes inventores também descobriram que os complexos de ferro-proteína do leite não provocavam perda significativa de viabilidade de bactérias probióticas naquele momento crítico, ao contrário das fontes comuns de ferro como o hepta-hidrato de sulfato ferroso ou o sulfato ferroso dissolvido na forma secada por atomização.
[0094] A reconstituição é, de preferência, executada com um líquido aquoso, com a máxima preferência, com água. A quantidade de líquido, de preferência água, adicionada para a reconstituição depende do tipo de produto que é preparado. O essencial para o propósito da presente invenção é que uma quantidade suficiente de líquido seja adicionada para reconstituir as bactérias probióticas naturais ao seu teor de umidade natural.
Produto [0095] A invenção também se refere a um produto, de preferência, um produto comestível, que é ou que pode ser obtido pelo método descrito acima. O produto compreende a composição sob a forma de pó, conforme definido em qualquer modalidade da presente invenção, reconstituído em um líquido. De preferência, ele é reconstituído em um líquido aquoso, de preferência, em água.
[0096] De preferência, o produto é um produto nutricional, obtido mediante reconstituição de uma composição nutricional, conforme descrito acima.
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Método para fornecer uma nutrição [0097] É também previsto um método para fornecer uma nutrição a um indivíduo que compreende alimentar o indivíduo com um produto comestível da invenção, de preferência com um produto nutricional da invenção. O produto usado neste método é uma composição alimentícia ou para bebidas. De preferência, é uma composição nutricional, conforme definido acima. Tais produtos são particularmente vantajosos porque compreendem uma fonte biodisponível de ferro e concentrações estáveis de bactérias probióticas, já que nenhuma perda significativa de bactérias probióticas é causada pela fonte de ferro adicionada.
[0098] Em uma modalidade, o método compreende as etapas de:
a) reconstituir uma composição comestível sob a forma de pó, de acordo com qualquer das modalidades da invenção; e
b) alimentar um indivíduo com a composição reconstituída. [0099] Em uma modalidade, o indivíduo é um indivíduo que apresenta privação de ferro ou um indivíduo em risco de desenvolver uma privação de ferro.
[00100] Em uma outra modalidade preferencial, a composição comestível é uma composição nutricional.
Método para evitar ou reduzir a perda de bactérias probióticas [00101] A invenção se refere a um método para reduzir e/ou evitar a perda de bactérias probióticas durante a reconstituição de uma composição sob a forma de pó que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro adicionada, sendo que um complexo de ferro-proteína do leite é usado como a fonte de ferro adicionada.
[00102] As bactérias probióticas, a fonte de ferro adicionada e a composição sob a forma de pó são conforme descrito em qualquer modalidade da seção composição.
[00103] Em uma modalidade preferencial, os complexos de ferro
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27/36 proteína do leite representam ao menos 50%, em peso, com mais preferência ao menos 60%, em peso, com mais preferência ao menos 70%, em peso, com mais preferência ao menos 80% em peso, com mais preferência ainda, ao menos 90%, em peso, do ferro adicionado na composição. Com mais preferência, os complexos de ferro-proteína são substancialmente a única fonte de ferro adicionada usada na composição. Com a máxima preferência, os complexos de ferroproteína do leite são a única fonte de ferro adicionada na composição. Em outras palavras, a composição não compreende nenhum outro composto ferroso ou férrico adicionado como uma fonte de ferro na composição.
[00104] Os presentes inventores demonstraram que pelo uso de complexos de ferro-proteína do leite em vez de outras fontes de ferro comumente adicionadas, como o hepta-hidrato de sulfato ferroso ou o sulfato ferroso dissolvido na forma secada por atomização, a perda de bactérias probióticas no momento da reconstituição da composição poderia ser evitada ou ao menos significativamente reduzida.
[00105] A fonte de ferro adicionada tem um impacto importante sobre a sobrevivência das bactérias probióticas, enquanto que o impacto das fontes de ferro presentes como parte de um ingrediente que não se destina principalmente ao propósito de suplementação de ferro é muito menor, devido à complexidade de tais ingredientes. Entre outras razões, o ferro que eles contêm geralmente não é encontrado na forma de ferro livre no momento da reconstituição da composição e, dessa forma, há uma redução dos efeitos potenciais nocivos do mesmo sobre as bactérias probióticas.
[00106] A presente invenção será descrita agora em mais detalhes por meio dos exemplos a seguir.
Exemplo 1: Efeito da fonte de ferro sobre a sobrevivência de Lactobacillus rhamnosus
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28/36 [00107] Quatro composições em pó (Amostras A a D) foram preparadas, sendo que cada uma compreende Lactobacillus rhamnosus seco (depositado como o CGMCC 1.3724), uma fonte de ferro e 100 g de maltodextrina. A composição das amostras está resumida na Tabela 1 abaixo.
Tabela 1: Composição das Amostras A a D
Ingrediente | Amostra A | Amostra B | Amostra C | Amostra D |
L rhamnosus seco1> | 90 mg | 90 mg | 90 mg | 90 mg |
Fonte de ferro: sulfato ferroso dissolvido sob a forma secada por atomização2) | 119 mg | 0 mg | 357 mg | 0 mg |
Fonte de ferro: complexo de ferro-caseína3> | 0 mg | 400 mg | 0 mg | 1.200 mg |
Maltodextrina | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g |
Quantidade de Fe2+ fornecida pela fonte de ferro | 10 mg | 10 mg | 30 mg | 30 mg |
1) Lactobacillus rhamnosus secado por atomização (depositado como CGMCC
1.3724) em matriz de maltodextrina. A quantidade total de bactérias vivas na composição é de 3,1 E+10 UFC/g.
2) Obtidas pela dissolução de sulfato ferroso em água a pH2 e secagem por atomização em uma matriz de maltodextrina. Esta fonte de ferro contém 8,4%, em peso, de Fe2+.
3) FerriPro2, origem Riddet Institute, Massey University, Nova Zelândia: complexo de ferro-caseína, conforme definido como complexo II no documento US 2015/0164123.
[00108] As amostras foram produzidas da seguinte forma. A maltodextrina, o probiótico em pó seco e a fonte de ferro foram adicionados juntos em um béquer plástico de 500 mL e misturados durante 5 minutos a 34 rpm com o uso de um misturador a seco Turbula® T2F (WAB, Suíça). Uma quantidade de 25 g de uma amostra recém-misturada foi diluída na proporção de 1/10 em uma solução salina aquosa de triptona suplementada com agente antiespumante a 37°C. Após 5 minutos de homogeneização com o uso de um Masticator® (IUL, Espanha), foram realizadas diluições decimais. A diluição apropriada resultando em 30-300 colônias após a incubação foi, então, transferida para uma placa de Petri e misturada com ágar MRS de acordo com o método pour-plate. Uma vez solidificadas, as placas foram incubadas a 37°C sob condições aeróbicas. Após 48 h de incubação, as colônias presenPetição 870190045304, de 14/05/2019, pág. 32/53
29/36 tes nas placas foram contadas.
[00109] Os resultados estão resumidos na Figura 1. Este gráfico mostra claramente a perda significativa de L. rhamnosus vivo observada nas composições reconstituídas quando o sulfato ferroso dissolvido na forma secada por atomização era usado. Em contrapartida, quando o complexo de ferro-caseína era usado nas mesmas condições, com a mesma quantidade de L. rhamnosus e a mesma quantidade de ferro, nenhuma perda significativa de L. rhamnosus era observada.
Exemplo 2: Efeito da fonte de ferro sobre a sobrevivência de Bifidobacterium loncium [00110] Cinco composições em pó (Amostras E a I) foram preparadas, cada uma compreendendo Bifidobacterium longum seco (depositado como ATCC BAA-999), uma fonte de ferro e 100 g de maltodextrina. A composição das cinco amostras está resumida na Tabela 2 abaixo.
Tabela 2: Composição das Amostras E a I
Ingrediente | Amostra E | Amostra F | Amostra G | Amostra H | Amostra I |
B. longum seco1’ | 100 mg | 100 mg | 100 mg | 100 mg | 100 mg |
Fonte de ferro: sulfato ferroso dissolvido sob a forma secada por atomização2’ | 0 mg | 298 mg | 0 mg | 595 mg | 0 mg |
Fonte de ferro: complexo de ferrocaseína3’ | 0 mg | 0 mg | 1.000 mg | 0 mg | 2.000 mg |
Maltodextrina | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g |
Quantidade de Fe2+ fornecida pela fonte de ferro | 0 mg | 25 mg | 25 mg | 50 mg | 50 mg |
1) Bifidobacterium longum secado por atomização (depositado como ATCC BAA999) em matriz de maltodextrina. A quantidade total de bactérias vivas na composição é de 2,4 E+10 CFU/g.
2) Obtidas pela dissolução de sulfato ferroso em água a um pH 2 e secagem por atomização em uma matriz de maltodextrina. Esta fonte de ferro contém 8,4%, em peso, de Fe2+.
3) Ferripro2, origem Riddet Institute, Massey University, Nova Zelândia [00111] As amostras foram produzidas da seguinte forma. A maltodextrina, o probiótico em pó seco e a fonte de ferro foram adicionados juntos em um béquer plástico de 500 mL e misturados durante 5 minutos a 34 rpm com o uso de um misturador a seco Turbula® T2F (WAB,
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Suíça). Uma quantidade de 25 g de uma amostra recém-misturada foi diluída na proporção de 1/10 em uma solução salina aquosa de triptona suplementada com agente antiespumante a 37°C. Após 5 minutos de homogeneização com o uso de um Masticator® (IUL, Espanha), foram realizadas diluições decimais. A diluição apropriada resultando em 30-300 colônias após a incubação foi, então, transferida para uma placa de Petri e misturada com ágar RCA de acordo com o método pour-plate. Uma vez solidificadas, as placas foram incubadas a 37°C sob condições anaeróbicas. Após 48 h de incubação, as colônias presentes nas placas foram contadas.
[00112] Os resultados estão resumidos no gráfico da Figura 2. O gráfico mostra claramente a perda significativa de L. longum vivo observada nas composições reconstituídas quando o sulfato ferroso dissolvido na forma secada por atomização era usado. Em contrapartida, quando o complexo de ferro-caseína era usado nas mesmas condições, com a mesma quantidade de B. longum e a mesma quantidade de ferro, nenhuma perda significativa de B. longum era observada.
Exemplo 3: Efeito da fonte de ferro sobre a sobrevivência de Bifidobacterium loncium [00113] Cinco composições em pó (Amostras I a M) foram preparadas, cada uma compreendendo Bifidobacterium longum seco (depositado como ATCC BAA-999), uma fonte de ferro e 100 g de fórmula para bebês. A composição das cinco amostras está resumida na Tabela 3 abaixo.
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Tabela 3: Composição das Amostras I a M
Ingrediente | Amostra I | Amostra J | Amostra K | Amostra L | Amostra M |
B. longum seco1) | 90 mg | 90 mg | 90 mg | 90 mg | 90 mg |
Fonte de ferro: sulfato ferroso dissolvido sob a forma secada por atomização2) | 0 mg | 119 mg | 0 mg | 357 mg | 0 mg |
Fonte de ferro: complexo de ferrocaseína3) | 0 mg | 0 mg | 478 mg | 0 mg | 1.439 mg |
Fórmula para bebês | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g |
Quantidade de Fe2+ fornecida pela fonte de ferro | 0 mg | 10 mg | 10 mg | 30 mg | 30 mg |
1) Bifidobacterium longum secado por atomização (depositado como ATCC BAA999) em matriz de maltodextrina. A quantidade total de bactérias vivas na composição é de 2,4 E+10 CFU/g.
2) Obtidas pela dissolução de sulfato ferroso em água a um pH 2 e secagem por atomização em uma matriz de maltodextrina. Esta fonte de ferro contém 8,4%, em peso, de Fe2+.
3) Ferripro2, origem Riddet Institute, Massey University, Nova Zelândia [00114] As amostras foram produzidas da seguinte forma. A fórmula para bebês, o probiótico em pó seco e a fonte de ferro foram adicionados juntos em um béquer plástico de 500 mL e misturados durante 5 minutos a 34 rpm com o uso de um misturador seco Turbula® T2F (WAB, Suíça). Uma quantidade de 25 g de uma amostra recémmisturada foi diluída na proporção de 1/10 em uma solução salina aquosa de triptona suplementada com agente antiespumante a 37°C. Após 5 minutos de homogeneização com o uso de um Masticator® (IUL, Espanha), foram realizadas diluições decimais. A diluição apropriada resultando em 30-300 colônias após a incubação foi, então, transferida para uma placa de Petri e misturada com ágar RCA de acordo com o método pour-plate. Uma vez solidificadas, as placas foram incubadas a 37°C sob condições anaeróbicas. Após 48 h de incubação, as colônias presentes nas placas foram contadas.
[00115] Os resultados estão resumidos no gráfico da Figura 3. O gráfico mostra claramente que a perda de B. longum vivo nas composições reconstituídas era significativamente menor quando a fonte de ferro usada era o complexo de ferro-caseína do que quando o sulfato ferroso dissolvido na forma secada por atomização era usado nas
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32/36 mesmas condições e com a mesma quantidade de B. longum e a mesma quantidade de ferro.
Exemplo 4: Efeito da fonte de ferro sobre a sobrevivência de Lactobacillus paracasei [00116] Cinco composições em pó (Amostras N a R) foram preparadas, cada uma compreendendo Lactobacillus paracasei seco (depositado como CNCM 1-2116), uma fonte de ferro e 100 g de maltodextrina. A composição das cinco amostras está resumida na Tabela 4 abaixo.
Tabela 4: Composição das Amostras N a R
Ingrediente | Amostra N | Amostra O | Amostra P | Amostra Q | Amostra R |
L paracasei seco1) | 100 mg | 100 mg | 100 mg | 100 mg | 100 mg |
Fonte de ferro: sulfato ferroso dissolvido sob a forma secada por atomização2) | 0 mg | 298 mg | 0 mg | 595 mg | 0 mg |
Fonte de ferro: complexo de ferro-caseína3) | 0 mg | 0 mg | 1.196 mg | 0 mg | 2.392 mg |
Maltodextrina | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g |
Quantidade de Fe2+ fornecida pela fonte de ferro | 0 mg | 25 mg | 25 mg | 50 mg | 50 mg |
1) Lactobacillus paracasei secado por atomização (depositado como CNCM I2116) em matriz de maltodextrina. A quantidade total de bactérias vivas na composição é de 2,4 E+10 CFU/g.
2) Obtidas pela dissolução de sulfato ferroso em água a um pH 2 e secagem por atomização em uma matriz de maltodextrina. Esta fonte de ferro contém 8,4%, em peso, de Fe2+.
3) Ferripro2, origem Riddet Institute, Massey University, Nova Zelândia [00117] As amostras foram produzidas da seguinte forma. A maltodextrina, o probiótico em pó seco e a fonte de ferro foram adicionados juntos em um béquer plástico de 500 mL e misturados durante 5 minutos a 34 rpm com o uso de um misturador a seco Turbula® T2F (WAB, Suíça). Uma quantidade de 25 g de uma amostra recém-misturada foi diluída na proporção de 1/10 em uma solução salina aquosa de triptona suplementada com agente antiespumante a 37°C. Após 5 minutos de homogeneização com o uso de um Masticator® (IUL, Espanha), foram realizadas diluições decimais. A diluição apropriada resultando em 30-300 colônias após a incubação foi, então, transferida para uma
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33/36 placa de Petri e misturada com ágar MRS de acordo com o método pour-plate. Uma vez solidificadas, as placas foram incubadas a 37°C sob condições aeróbicas. Após 48 h de incubação, as colônias presentes nas placas foram contadas.
[00118] Os resultados estão resumidos no gráfico da Figura 4. O gráfico mostra claramente a perda significativa de L. paracasei vivo observada nas composições reconstituídas quando o sulfato ferroso dissolvido na forma secada por atomização era usado. Em contrapartida, quando o complexo de ferro-caseína era usado nas mesmas condições, com a mesma quantidade de L. paracasei e a mesma quantidade de ferro, nenhuma perda significativa de L. paracasei era observada.
Exemplo 5: Efeito da fonte de ferro sobre a sobrevivência de Lactobacillus paracasei [00119] Cinco composições em pó (Amostras S a W) foram preparadas, cada uma compreendendo Lactobacillus paracasei seco (depositado como CNCM 1-2116), uma fonte de ferro e 100 g de fórmula para bebês. A composição das cinco amostras está resumida na Tabela 5 abaixo.
Tabela 5: Composição das Amostras S a W
Ingrediente | Amostra S | Amostra T | Amostra U | Amostra V | Amostra W |
L paracasei seco1’ | 90 mg | 90 mg | 90 mg | 90 mg | 90 mg |
Fonte de ferro: sulfato ferroso dissolvido sob a forma secada por atomização2’ | 0 mg | 119 mg | 0 mg | 357 mg | 0 mg |
Fonte de ferro: complexo de ferrocaseína3’ | 0 mg | 0 mg | 478 mg | 0 mg | 1.435 mg |
Fórmula para bebês | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g |
Quantidade de Fe2+ fornecida pela fonte de ferro | 0 mg | 10 mg | 10 mg | 30 mg | 30 mg |
1) Lactobacillus paracasei secado por atomização (depositado como CNCM I2116) em matriz de maltodextrina. A quantidade total de bactérias vivas na composição é de 2,4 E+10 CFU/g.
2) Obtidas pela dissolução de sulfato ferroso em água a um pH 2 e secagem por atomização em uma matriz de maltodextrina. Esta fonte de ferro contém 8,4%, em peso, de Fe2+.
3) Ferripro2, origem Riddet Institute, Massey University, Nova Zelândia
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34/36 [00120] As amostras foram produzidas da seguinte forma. A fórmula para bebês, o probiótico em pó seco e a fonte de ferro foram adicionados juntos em um béquer plástico de 500 mL e misturados durante 5 minutos a 34 rpm com o uso de um misturador seco Turbula® T2F (WAB, Suíça). Uma quantidade de 25 g de uma amostra recémmisturada foi diluída na proporção de 1/10 em uma solução salina aquosa de triptona suplementada com agente antiespumante a 37°C. Após 5 minutos de homogeneização com o uso de um Masticator® (IUL, Espanha), foram realizadas diluições decimais. A diluição apropriada resultando em 30-300 colônias após a incubação foi, então, transferida para uma placa de Petri e misturada com ágar MRS de acordo com o método pour-plate. Uma vez solidificadas, as placas foram incubadas a 37°C sob condições aeróbicas. Após 48 h de incubação, as colônias presentes nas placas foram contadas.
[00121] Os resultados estão resumidos no gráfico da Figura 5. Embora nenhuma perda significativa de probiótico tenha sido observada quando cada fonte de ferro era adicionada em uma quantidade tal de modo a fornecer 10 mg de ferro, observou-se um impacto evidente sobre a viabilidade de L. paracasei nas composições reconstituídas quando o sulfato ferroso dissolvido em forma secada por atomização era usado em uma quantidade fornecendo 30 mg de ferro. Em contrapartida, quando o complexo de ferro-caseína era usado nas mesmas condições, com a mesma quantidade de L. paracasei e a mesma quantidade de ferro, nenhuma perda significativa de L. paracasei era observada.
Exemplo 6: Efeito da fonte de ferro sobre a sobrevivência de Lactobacillus rhamnosus [00122] Cinco composições em pó (Amostras X a BB) foram preparadas, cada uma compreendendo Lactobacillus rhamnosus seco (depositado como CGMCC 1.3724), uma fonte de ferro e 100 g de fórmula
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35/36 para bebês. A composição das cinco amostras está resumida na Tabela 6 abaixo.
Tabela 6: Composição das Amostras X a BB
Ingrediente | Amostra X | Amostra Y | Amostra Z | Amostra AA | Amostra BB |
L. rhamnosus seco1) | 90 mg | 90 mg | 90 mg | 90 mg | 90 mg |
Fonte de ferro: sulfato ferroso dissolvido sob a forma secada por atomização2) | 0 mg | 119 mg | 0 mg | 357 mg | 0 mg |
Fonte de ferro: complexo de ferrocaseína3) | 0 mg | 0 mg | 478 mg | 0 mg | 1.435 mg |
Fórmula para bebês | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g | 100 g |
Quantidade de Fe2+ fornecida pela fonte de ferro | 0 mg | 10 mg | 10 mg | 30 mg | 30 mg |
1) Lactobacillus rhamnosus (depositado como CGMCC 1.3724) em uma quantidade de 3,1 E+10 UFC/g, em maltodextrina.
2) Obtido pela dissolução de sulfato ferroso em água a um pH 2 e secagem por atomização em uma matriz de maltodextrina. Esta fonte de ferro contém 8,4%, em peso, de Fe2+.
3) Ferripro2, origem Riddet Institute, Massey University, Nova Zelândia [00123] As amostras foram produzidas da seguinte forma. A fórmula para bebês, o probiótico em pó seco e a fonte de ferro foram adicionados juntos em um béquer plástico de 500 mL e misturados durante 5 minutos a 34 rpm com o uso de um misturador seco Turbula® T2F (WAB, Suíça). Uma quantidade de 25 g de uma amostra recémmisturada foi diluída na proporção de 1/10 em uma solução salina aquosa de triptona suplementada com agente antiespumante a 37°C. Após 5 minutos de homogeneização com o uso de um Masticator® (IUL, Espanha), foram realizadas diluições decimais. A diluição apropriada resultando em 30-300 colônias após a incubação foi, então, transferida para uma placa de Petri e misturada com ágar MRS de acordo com o método pour-plate. Uma vez solidificadas, as placas foram incubadas a 37°C sob condições aeróbicas. Após 48 h de incubação, as colônias presentes nas placas foram contadas.
[00124] Os resultados estão resumidos no gráfico da Figura 6. Este gráfico mostra claramente a perda significativa de L. rhamnosus vivo observada nas composições reconstituídas quando o sulfato ferroso dissolvido na forma secada por atomização era usado. Em contraparti
Petição 870190045304, de 14/05/2019, pág. 39/53
36/36 da, quando o complexo de ferro-caseina era usado nas mesmas condições, com a mesma quantidade de L. rhamnosus e a mesma quantidade de ferro, nenhuma perda significativa de L. rhamnosus era reduzida significativamente.
Claims (15)
- REIVINDICAÇÕES1. Composição sob a forma de pó, caracterizada pelo fato de que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
- 2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o complexo de ferro-proteína do leite compreende ferro exógeno.
- 3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a proteína do leite é caseína, um derivado de caseína, uma fração de caseína ou uma mistura dos mesmos.
- 4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o complexo de ferroproteína do leite é um complexo não micelar.
- 5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o complexo de ferroproteína do leite compreende fósforo exógeno, de preferência, ortofósforo exógeno.
- 6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o ferro no complexo de ferro-proteína do leite está na forma de Fe3+
- 7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a composição sob a forma de pó é uma composição nutricional.
- 8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a fonte de ferro está presente em uma quantidade tal de modo a fornecer de 1 a 300 mg de ferro por 100 g de composição.
- 9. Uso de uma fonte de ferro, caracterizado pelo fato de que é para a fortificação de uma composição sob a forma de pó, quePetição 870190045304, de 14/05/2019, pág. 41/532/3 compreende ao menos uma bactéria probiótica, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
- 10. Composição comestível sob a forma de pó, caracterizada pelo fato de que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro adicionada, para uso na prevenção, redução e/ou tratamento de deficiência de ferro em um indivíduo, sendo que a fonte de ferro adicionada é um complexo de ferro-proteína do leite.
- 11. Processo para produção de uma composição sob a forma de pó, caracterizado pelo fato de que compreende:a. fornecer uma primeira composição sob a forma de pó;b. misturar à primeira composição sob a forma de pó uma fonte de ferro para obter uma segunda composição sob a forma de pó; ec. misturar ao menos uma bactéria probiótica à primeira composição sob a forma de pó antes ou ao mesmo tempo que a fonte de ferro ou misturar ao menos uma bactéria probiótica à segunda composição sob a forma de pó, após a adição da fonte de ferro, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
- 12. Processo para produzir um produto, caracterizado pelo fato de que compreende reconstituir em um líquido uma composição sob a forma de pó, que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro, sendo que a fonte de ferro é um complexo de ferro-proteína do leite.
- 13. Produto, caracterizado pelo fato de que é obtenível pelo processo, como definido na reivindicação 12.
- 14. Método para fornecer uma nutrição a um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende alimentar o indivíduo com um produto, como definido na reivindicação 13, que é um produto comestível.Petição 870190045304, de 14/05/2019, pág. 42/533/3
- 15. Método para reduzir ou evitar a perda de bactérias probióticas durante a reconstituição de uma composição sob a forma de pó, que compreende ao menos uma bactéria probiótica e uma fonte de ferro adicionada, caracterizado pelo fato de que um complexo de ferroproteína do leite é usado como a fonte de ferro adicionada.
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