BR112017026904B1

BR112017026904B1 - Formulações farmacêuticas injetáveis de lefamulina, e seu uso

Info

Publication number: BR112017026904B1
Application number: BR112017026904-0A
Authority: BR
Inventors: Mathias Ferencic; Werner Heilmayer; Peter Hinsmann; Wolfgang Wicha
Original assignee: Nabriva Therapeutics GmbH
Priority date: 2015-06-17
Filing date: 2016-06-14
Publication date: 2023-10-10
Also published as: AU2016278774A1; MX2017015812A; EA033988B1; ZA201707998B; KR102656841B1; DK3310331T3; CA2989372A1; AU2016278774C1; HUE053024T2; RS61327B1; BR112017026904A2; ES2843723T3; HK1252534A1; PT3310331T; EP3310331A1; CA2989372C; JP2018517777A; EA201890075A1; SI3310331T1; JP6818019B2

Abstract

formulações farmacêuticas injetáveis de lefamulina. a presente invenção refere-se a uma formulação farmacêutica injetável compreendendo um composto de fórmula (i), a referida formulação sendo tamponada em um valor de ph farmaceuticamente aceitável, especialmente um valor de ph de 2 a 6, em particular um valor de ph de 3 a 5,5, de preferência um valor de ph cerca de 4 a 5, particularmente de preferência cerca de 5. o composto (i) de lefamulina (bc-3781) contém propriedades antibióticas.

Description

[0001] A presente invenção se refere a composições farmacêuti cas compreendendo um composto de Fórmula (I), i.e., 14-O-{[(1R, 2R, 4R)-4-amino-2-hidróxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}- mutilina (doravante denominado "BC-3781") assim como sais dos mesmos.

[0002] Pleuromutilina, um composto de Fórmula é um antibiótico natural, produzido, por exemplo, pelos basidiomicetos Pleurotus mutilus e P. passeckerianus, vide, por exemplo, The Merck Index, 12th edition, item 7694.

[0003] Inúmeras outras pleuromutilinas com a estrutura anelar principal da pleuromutilina e sendo substituídas no grupo hidróxi primário já foram desenvolvidas, por exemplo, como antimicrobianos. Devido a sua pronunciada atividade antimicrobiana, foi constatado que um grupo de derivados de pleuromutilina, ciclo-hexilsulfanilacetilmutilinas substi- tuídas com amino-hidróxi, descritos no documento WO 2008/113089, são de particular interesse. Como descrito no documento WO2008/113089, 14-O-{[(4-Amino-2-hidróxi-ciclo-hexil)-sulfanil]-acetil}- mutilinas são compostos particularmente úteis por causa de sua atividade contra patógenos Gram-positivos e Gram-negativos, especialmente no contexto de infecções do trato respiratório e da pele e estruturas da pele. Em particular, 14-O-{[(1R, 2R, 4R)-4-amino-2-hidróxi- ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina (doravante denominada "BC-3781" ou "lefamulina") foi desenvolvida para uso sistêmico para tratar infecções graves em seres humanos. BC-3781 foi descrito, inter alia, por R. Novak, Are pleuromutilin antibiotics finally fit for human use?, Ann. N.Y. Acad. Sci. 1241 (2011) 71-81 e W. T. Prince et al., Phase II Clinical Study of BC-3781, a Pleuromutilin Antibiotic, in Treatment of Patients with Acute Bacterial Skin and Skin Structure Infections, Antimicrobial Agents and Chemotherapy Vol 57, No 5 (2013), 2087-2094. Esta última publicação ilustra uma primeira prova de conceito de um derivado de pleuromutilina para tratar infecções graves em seres humanos via administração sistêmica. A lefamulina pode ser administrada por via oral e intravenosa. Quando compostos são administrados por via intravenosa, geralmente são observadas intolerabilidades do sítio de administração. Irritações no sítio de infusão frequentemente são mais pro-nunciadas quando o composto é distribuído como infusão intravenosa e podem variar de leve a moderada e severa no contexto humano. Os efeitos da intolerância local incluem dor, eritema e flebite. S.H. Yalkowsky et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 87, No 7, 1998, 787 descreveram problemas relacionados à formulação associados à distribuição intravenosa da droga e relataram hemólise, precipitação, flebite e dor como os principais efeitos adversos. No entanto, nenhuma formulação ou desenvolvimento de formulações para pleu- romutilinas em geral ou para lefamulina em particular encontra-se des- crita nesta anterioridade.

[0004] G. Eichenbaum et al., Journal of Pharmacological and Toxi cological Methods, 68, 2013, 394 descreveram métodos para avaliar e melhorar a tolerabilidade do sítio de injeção de formulações intravenosas antes dos primeiros testes em seres humanos para compostos com baixa solubilidade em pH fisiológico do sangue, por exemplo, pH 7,4. A investigação concentrou-se no composto modelo JNJ-X que é zwiteriônico. BC-3781, no entanto, não é zwiteriônico nem tem baixa solubilidade no pH do sangue.

[0005] O documento WO 1999/30728 descreve composições inje táveis contendo dalfopristina/quinupristina em uma solução aquosa em combinação com um aditivo destinado a evitar ou reduzir efeitos de intolerância no sítio de injeção. Os aditivos abrangem soluções tampão. No entanto, o referido documento se refere à aplicação combinatorial de dalfopristina/quinupristina que são dois compostos distintos que são muito diferentes tanto em estrutura como em propriedades físico-químicas dos derivados de pleuromutilina, por exemplo, BC-3781. Além disso, o BC-3781 é empregado como o único composto para tratar infecções sérias, inter alia, causadas por patógenos altamente resistentes.

[0006] Outros documentos da técnica anterior descrevem o de senvolvimento de formulações e estudos para moléculas distintas que estão relacionadas com o melhoramento da tolerabilidade do sítio de infusão. Uma pequena seleção não exaustiva desta técnica anterior está listada a seguir: a) S. Gupta et al., Parenteral Formulation Development of Renin Inhibitor Abbott-72517, J. of Pharm. Sci. & Tech. 48(2):86-91 (1994) b) P. Simamora et al., "Studies in Phlebitis VIII: Evaluations of pH Solubilized Intravenous Dexverapamil Formulations", PDA J. of Pharm. Sci. & Tech. 50(2):123-128 (1996) c) L. Willems et al., Itraconazole oral solution and intravenous formulations: a review of pharmacokinetics and pharmacodynamics, Journal of Clinical Pharmacy and Therapeutics, 2001, 26, 159.

[0007] Todas as moléculas descritas nestes documentos da técni ca anterior são muito diferentes dos derivados de pleuromutilina em termos de estrutura e propriedades físico-químicas quando comparadas ao BC-3781. Assim sendo, a tarefa de desenvolver formulações com tolerância local melhorada para lefamulina foi muito diferente das abordagens descritas no estado da técnica.

[0008] Esta tarefa foi resolvida pelo objeto da reivindicação 1. Mo dalidades preferidas estão listadas nas reivindicações dependentes.

[0009] Em particular, a presente invenção está voltada para formu lações injetáveis de BC-3781, especialmente para administração intravenosa.

[00010] BC-3781 e sua síntese estão descritos, por exemplo, no documento WO 2008/113089.

[00011] Foi verificado que formulações injetáveis contendo BC-3781 que são tamponadas em um valor de pH farmaceuticamente aceitável, especialmente um valor de pH de 2 a 6, em particular um valor de pH 3 a 5,5, de preferência um valor de pH de cerca de 4 a 5, particularmente de preferência cerca de 5, evitam ou ao menos reduzem os efeitos de intolerância, em particular no sítio de injeção.

[00012] Além disso, verificou-se que o tampão é de preferência selecionado do grupo que consiste em tampões citrato, tampões fosfato e misturas dos mesmos. Um tampão citrato preferido é preparado por misturação de ácido cítrico com citrato trissódico.

[00013] A quantidade de tampão, especialmente de um tampão citrato, na formulação varia de preferência na faixa de 5 mM a 25 mM, de preferência 8 mM a 20 mM, especialmente de preferência cerca de 10 mM a cerca de 20 mM.

[00014] Mais preferido é um tampão citrato 10 mM a 20 mM, especialmente um tampão citrato 10 mM, de preferência usado em formulações clínicas em seres humanos.

[00015] Os outros constituintes da formulação injetável assim como suas respectivas quantidades podem ser selecionados pelo versado na técnica com base no conhecimento geral disponível.

[00016] Por exemplo, uma formulação injetável pode ser à base de solução salina normal, contendo 0,9% (p/v) de NaCl (doravante também abreviada "NSS") ou uma solução de dextrose em água, tal como 5% (p/v) de dextrose (anidra) em água (doravante também abreviada "D5W").

[00017] Uma composição preferida é à base de NSS e contém tampão citrato 10 mM a tampão citrato 20 mM, especialmente de preferência tampão citrato 10 mM.

[00018] A quantidade de BC-3781 na formulação pode variar de 100 mg/250 mL a 300 mg/250 mL de solução, de preferência cerca de 150 mg/250 mL de solução, calculada como BC-3781 na forma de base livre.

[00019] BC-3781 pode ser empregado para a preparação de formu lações injetáveis de acordo com a presente invenção na forma de um sal farmaceuticamente aceitável, especialmente um sal cristalino.

[00020] Formas preferidas de sal cristalino de BC-3781 estão apresentadas, por exemplo, no documento WO 2011/146954.

[00021] Em um aspecto da presente invenção, as formulações injetáveis empregam de preferência acetato e/ou L-lactato como sais far- maceuticamente aceitáveis de BC-3781, mais preferivelmente sal de acetato.

[00022] Em um outro aspecto, a presente invenção oferece formulações intravenosas que melhoram a tolerabilidade local do BC-3781 subsequente à aplicação intravenosa, em particular subsequente à infusão intravenosa.

[00023] A solubilidade do acetato de BC-3781 em vários meios é a seguinte:

[00024] Os problemas reportados de tolerabilidade local estão frequentemente associados à solubilidade insuficiente do composto em pH fisiológico o que, no entanto, não é o caso para o BC-3781. Outras questões que causam problemas de tolerância local podem estar relacionadas com questões de estabilidade dos compostos no pH fisiológico (por exemplo, pH 6,8 a 7,4), o que - mais uma vez - não é o caso para o BC-3781 porque se observa estabilidade excelente nessas faixas de pH.

[00025] O valor de pKa medido do BC-3781 é 9,41, o que significa que no pH fisiológico a maior parte do composto é ionizada.

[00026] Assim sendo, o efeito de tolerabilidade melhorada do BC-3781 quando distribuído nas formulações tamponadas e nos conceitos de formulação descritos neste pedido é completamente surpreendente.

[00027] Em princípio, uma solução tampão é preparada como uma combinação de ácidos fracos e seus sais (sais sódicos, etc.) ou de álcalis fracos e seus sais.

[00028] Em um aspecto, as formulações são preparadas usando-se um sistema ácido / base no qual pelo menos um dos constituintes é um ácido fraco ou uma base fraca cujo valor de pKa varia na faixa de 2 a 6 e no qual o pH resultante do sistema varia na região do referido valor de pKa ou abaixo dele.

[00029] A faixa de pH preferido para as formulações administradas a seres humanos varia de 3 a 5,5, mais preferivelmente de 4 a 5, particularmente de preferência é de cerca de 5. Outras faixas de pH preferido são de 4 a 6, de preferência 5 a 6.

[00030] Ainda mais preferivelmente, o sistema pode compreender um ou mais ácidos orgânicos ou inorgânicos fracos farmaceuticamente aceitáveis cujo valor de pKa varia na faixa de 2 a 6, combinados com sua base conjugada, com uma base forte ou com uma base fraca, ou alternativamente o sistema pode compreender um ou mais ácidos orgânicos ou inorgânicos fortes farmaceuticamente aceitáveis, combinados com pelo menos uma base fraca pertencente ao binário áci- do/base cujo valor de pKa varia na faixa de 2 a 6.

[00031] Os ácidos a seguir (ou suas bases conjugadas) são exemplos de ácidos que podem fazer parte da composição do sistema: ácido cítrico, ácido acético, ácido láctico, aminoácidos, ácido málico, ácido ascórbico, ácido glutâmico, ácido benzoico, histidina, ácido glutárico, ácido propiônico, ácido succínico, ácido fórmico, ácido maleico, ácido aspártico, ácido malônico, ácido glucônico, ácido gluco-heptônico, e ácido fosfórico. Estes ácidos podem ser combinados com sua base conjugada, com a base conjugada de um outro ácido fraco ou com hidróxido de sódio. As bases conjugadas dos ácidos mencionados acima também podem ser combinadas, onde apropriado, com ácido me- tanossulfônico, ácido clorídrico, ácido fosfórico ou ácido sulfúrico.

[00032] Entre estes exemplos, dados sem qualquer limitação implícita, aqueles que são mais particularmente vantajosos são ácido cítrico, ácido fosfórico e combinações dos dois e/ou das bases conjugadas dos mesmos.

[00033] As misturas resultantes resultam em uma solução tampona- da.

[00034] A formulação tamponada de acordo com a presente invenção pode compreender um veículo farmaceuticamente aceitável, de preferência selecionado do grupo que consiste em solução salina normal, solução de dextrose a 5% e misturas das mesmas, mais preferivelmente solução salina normal.

[00035] Outros veículos farmaceuticamente aceitáveis são, entre outros, soluções aquosas de glicose a 10% ou 40 %, Xilitol a 20%, solução salina de Ringer lactada (doravante denominada "LRS"), e misturas das mesmas.

[00036] As formulações finais de BC-3781 (veículo farmaceutica- mente aceitável, tampões e sal de BC-3781 opcionalmente com adjuvantes) terão uma osmolalidade farmaceuticamente aceitável, por exemplo, de 250 a 400 mosm/kg.

[00037] De acordo com a presente invenção, as soluções tampão podem ser preparadas de acordo com métodos conhecidos comumen- te usados, em particular por adição de hidróxido de sódio em uma quantidade predeterminada de ácido para atingir o pH desejado, que varia de 2 a 6, seguida pela adição de água até o volume desejado.

[00038] Em um aspecto da presente invenção, a solução tampona- da de BC-3781 pode ser estabelecida por reconstituição de uma solução de concentrado de tampão 100 mM a 1000 mM, de preferência 200 mM a 800 mM, mais preferivelmente 250 mM a 540 mM, em um veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável e por adição de BC-3781 de preferência como um sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo, sal de acetato (doravante abreviado por .Ac) ou sal de L- lactato (abreviado por .La) ou adição de uma solução 1 mg/mL a 100 mg/mL, de preferência 5 mg/l a 50 mg/mL, mais preferivelmente 10 mg/mL a 15 mg/mL de BC-3781 como um sal farmaceuticamente acei- tável, por exemplo, um sal de acetato ou L-lactato resultando na concentração final desejada de BC-3781.

[00039] Em um outro aspecto da presente invenção, todos os ingredientes da formulação, por exemplo, componentes tamponantes e BC-3781, de preferência como um sal farmaceuticamente aceitável, podem ser adicionados diretamente a um veículo intravenoso farma- ceuticamente aceitável.

[00040] Em um aspecto da presente invenção, sistemas tampão incluem tampão citrato, tampão fosfato e tampão acetato, de preferência tampão citrato e tampão fosfato ou misturas dos mesmos, mais preferivelmente tampão citrato em uma faixa de pH entre 3 e 6, de preferência pH 4 a 6, mais preferivelmente pH 5.

[00041] Os sistemas tampão podem ser preparados por dissolução de um ácido orgânico, por exemplo, ácido cítrico e acético, ou um ácido inorgânico, por exemplo, ácido fosfórico em água ou de preferência em um veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável e ajuste do pH com uma base, de preferência uma base alcalina, por exemplo, KOH e NaOH, mais preferivelmente NaOH.

[00042] Alternativamente um sistema tampão pode ser preparado por dissolução de um ácido orgânico, por exemplo, ácido cítrico e acético, ou um ácido inorgânico, por exemplo, ácido fosfórico, com a base conjugada apropriada, por exemplo, citrato trissódico, di-hidrogenofos- fato de sódio ou acetato de sódio, em água ou de preferência em um veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável. Opcionalmente o pH pode ser ajustado (ajuste fino) até o pH final desejado com ácido clorídrico ou hidróxido de sódio.

[00043] Opcionalmente, além dos agentes de tonicidade que são de preferência escolhidos em particular dentre glicose, cloreto de sódio, glicerol, sorbitol, manitol, frutose ou dextranas 40 e 70, nas formulações tamponadas as composições farmacêuticas podem conter um adjuvante farmaceuticamente aceitável, este adjuvante sendo escolhido dentre cossolventes, estabilizantes, agentes crioprotetores, dessecantes, cargas. Sem qualquer limitação implícita, os cossolventes e os agentes solubilizantes são de preferência escolhidos dentre polietileno glicóis (por exemplo, polietileno glicóis 300 e 400), propileno glicol, etanol e tensoativos tais como, por exemplo, polissorbato 80 ou derivados polioxietilenados (cremóforos); as cargas e os agentes crioprotetores são de preferência escolhidos dentre açúcares simples, por exemplo, glicose, manitol, frutose ou sorbitol, dissacarídeos, por exemplo, sacarose, lactose, trealose ou maltose; ou polímeros solúveis em água, por exemplo, dextranas, carboximetilcelulose, polivinilpirrolina ou gelatina;

[00044] E os estabilizantes são de preferência escolhidos dentre antioxidantes (por exemplo, ácido ascórbico, acetilcisteína, sais de ácido sulfuroso, monotioglicerol). Excipientes usados em formulações parente- rais estão descritos por Y. Mehmood et al., Open Science Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2015, 3(3), 19-27 e R. G. Strickley, Pharmaceutical Research, Vol 21, No 2, 201 - 230.

[00045] A dose humana de BC-3781 em formulações tamponadas vai variar entre 10 mg e 1000 mg, de preferência entre 15 mg e 500 mg, mais preferivelmente entre 25 mg e 300 mg, por exemplo, 150 mg. Opcionalmente a formulação pode ser administrada várias vezes ao dia, por exemplo, BID, TID dependendo da exigência do tratamento. O volume de administração pode variar de 10 mL a 1000 mL, de preferência 20 mL a 500 mL, mais preferivelmente entre 20 mL a 300 mL, por exemplo, 250 ou 300 mL em adultos.

[00046] Em uma modalidade preferida da formulação de acordo com a presente invenção, o tampão é tampão citrato 10 mM a 20 mM, o valor do pH da formulação varia de 3 a 5,5, de preferência pH 5, a concentração de BC-3781 varia entre 0,2 e 3 mg/mL (calculada na forma de base livre), e a formulação compreende um veículo farma- ceuticamente aceitável.

[00047] Em uma outra modalidade preferida, o tampão é tampão citrato 10 mM, o valor do pH da formulação varia de 3 a 5,5, de preferência pH 5, a concentração de BC-3781 varia entre 0,3 e 1,2 mg/mL (calculada na forma de base livre), e a formulação compreende um veículo farmaceuticamente aceitável.

[00048] Em uma outra modalidade preferida, o tampão é tampão citrato 10 mM, o valor do pH da formulação varia de 3 a 5,5, de preferência pH 5, a concentração de BC-3781 varia entre 0,3 e 0,6 mg/mL (calculada na forma de base livre) e a formulação compreende um veículo farmaceuticamente aceitável.

[00049] Fica entendido que os kits de apresentação para a formulação de BC-3781 opcionalmente com adjuvantes também se enquadram no contexto da presente invenção. Kits de apresentação de qualquer forma podem ser adequados.

[00050] Por exemplo, o tampão pode ser apresentado em um frasco de vidro opcionalmente como solução de concentrado de tampão para diluição posterior, de preferência em um veículo intravenoso farmaceu- ticamente aceitável. O concentrado de tampão pode ser diluído em bolsas de infusão ou frascos comercialmente disponíveis preenchidos com um veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável até a molari- dade desejada. O BC-3781 é adicionado como uma solução de concentrado até a concentração ou dose desejada.

[00051] Alternativamente, o concentrado de tampão pode ser usado para encher bolsas de infusão vazias (por exemplo, bolsas de EVA), diluído com um veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável até a molaridade desejada e finalmente o BC-3781 é adicionado como uma solução ou composto sólido na concentração desejada.

[00052] Além disso, o tampão pode ser apresentado em uma bolsa de infusão ou frasco de infusão na molaridade selecionada, de prefe- rência em um veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável, para reconstituição do BC-3781 o BC-3781 pode ser adicionado, por exemplo, como uma solução em bolsas/frascos de infusão tamponadas.

[00053] Alternativamente, o BC-3781 pode ser apresentado como um liofilizado ou solução de concentrado em um frasco de vidro para posterior diluição no veículo tampão, de preferência ambos em um veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável.

[00054] Além disso, os kits de apresentação podem abranger bolsas ou frascos de infusão prontos para uso contendo o tampão, um veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável, opcionalmente um adjuvante e BC-3781.

[00055] As formulações estéreis da presente invenção, por exemplo, adequadas entre outras coisas para administração em seres humanos, podem ser preparadas por métodos conhecidos comumente usados, por exemplo, filtração estéril e preenchimento asséptico, esterilização a quente ou radiação gama. O método selecionado vai depender da estabilidade do composto ou solução a ser esterilizada, por exemplo, métodos preferidos para esterilizar as soluções tampão e veículo intravenoso farmaceuticamente aceitável sem BC-3781 são filtrados estéreis seguidos por esterilização a quente. Soluções con-tendo BC-3781 são de preferência filtradas estéreis seguidas por pre-enchimento asséptico no recipiente apropriado, por exemplo, frasco de vidro, garrafa de vidro, bolsa de infusão.

[00056] Em todas as modalidades mencionadas acima, o veículo farmaceuticamente aceitável é de preferência NSS, LRS e/ou D5W, mais preferivelmente NSS.

[00057] Além disso, todas as modalidades mencionadas acima, o BC-3781 é de preferência empregado como um sal farmaceuticamente aceitável, em particular como acetato e/ou L-lactato, particularmente de preferência como acetato.

[00058] Um outro aspecto da presente invenção se refere a uma formulação de acordo com a presente invenção para uso no tratamento de doenças mediadas por micróbios.

[00059] Em uma modalidade preferida, a formulação é administrada via aplicação intravenosa.

[00060] Além disso, a presente invenção se refere a uma forma de apresentação farmacêutica compreendendo a formulação injetável de acordo com a presente invenção.

[00061] Além disso, a presente invenção se refere a um método de tratamento de doenças mediadas por micróbios onde uma formulação de acordo com a presente invenção é administrada a um indivíduo com necessidade da mesma.

[00062] No método de acordo com a presente invenção, a formulação é de preferência administrada via aplicação intravenosa.

[00063] A aplicação intravenosa inclui administração de bolo, bolo lento e infusão, inclusive infusão contínua.

[00064] As seguintes abreviações são usadas: API ingrediente farmacêutico ativo BID bis in die (duas vezes ao dia) EP Farmacopeia Europeia g grama JP Farmacopeia Japonesa kg quilograma l litros M molar mM milimolar min minutos mL mililitros NF formulário nacional q.s. quantum satis TID ter in die (três vezes ao dia) USP Farmacopeia Americana p/v peso/volume

Exemplos:

[00065] Os excipientes usados para preparar formulações (humanas) clínicas ou componentes das mesmas são de grau farmacopeico, por exemplo, USP e/ou EP, e/ou NF e/ou JP.

Exemplo 1: Preparação de formulações de 14-O-{[(1R, 2R, 4R)-4- amino-2-hidróxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina (BC-3781) usadas para investigar a tolerabilidade em um modelo de veia dorsal do rabo de rato a) Preparação/aquisição do veículo farmacêutico

[00066] A preparação do veículo farmacêutico NSS foi estabelecida por dissolução de NaCl 0,9% (p/v). D5W foi adquirido na Fresenius Kabi. b) Preparação de soluções tampão

c) Preparação final das formulações

[00067] O composto de teste 14-O-{[(1R, 2R, 4R)-4-amino-2- hidróxi-ciclo-hexilsulfanil]-acetil}-mutilina (BC-3781), presente como sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo, acetato ou L-lactato, foi dissolvido nas soluções tampão, NSS ou D5W até atingir uma concentração de 6 mg/mL (calculada na forma de base livre).

[00068] Por exemplo, as seguintes quantidades são pesadas:Exemplo 2: Preparação das formulações usadas nos estudos na fase clínica 1 para investigar diferenças de tolerância local - preparação de formulações de BC-3781 em solução salina normal com tampão citrato 10 mM, formulações de BC-3781 em solução salina normal e respectivos veículos medicamentosos (doravante denominados "formulações placebo" ou "placebo") a) Solução de concentrado de BC-3781 em solução salina normal

[00069] A preparação da solução de BC-3781 foi feita por dissolução de acetato de BC-3781 em água para injeção e adicionalmente dissolução em NaCl. Depois de filtração estéril, a solução foi subsequentemente introduzida em frascos em condições assépticas.

[00070] Outros sais crisl alinos preferidos de BC-3781 estão descri- tos no documento WO 2011/146954.

b) Soluções concentradas de tampão citrato

[00071] A solução tampão citrato foi preparada separadamente. Ácido cítrico e citrato trissódico foram dissolvidos em água para injeção e subsequentemente introduzidos em frascos.

[00072] Fórmula da batelada de solução de concentrado de tampão citrato 250 mM

[00073] A solução de concentrado de tampão citrato foi introduzida em frascos de 10 mL em condições estéreis (por exemplo, filtração estéril, autoclavagem).

[00074] Composição qualitativa e quantitativa dos fracos de tampão citrato 250 mM

[00075] Alternativamente o tampão citrato foi preparado em uma molaridade diferente.

[00076] Fórmula da batelada de solução de concentrado de tampão citrato 540 mM

[00077] A solução de concentrado de tampão citrato foi introduzida em frascos de 5 mL em condições estéreis (por exemplo, filtração estéril, autoclavagem).

c) Formulações clínicas

[00078] Dependendo do volume e da concentração requeridos da solução de infusão de BC-3781, bolsas estéreis são preenchidas com as quantidades requeridas de i) solução de concentrado de BC-3781 em solução salina normal (preparação descrita no Exemplo 2a)), ii) solução de concentrado de citrato (preparação descrita no Exemplo 2b) e iii) NSS comercialmente disponível.

[00079] As quantidades dos componentes do infusato usadas na preparação das formulações clínicas com concentrado de tampão citrato 250 mM para preparar as formulações de BC-3781 em tampão citrato estão mostradas na tabela abaixo. Além disso, a tabela também relaciona a preparação da formulação de referência de BC-3781 em formulações de NSS e NSS-placebo. # O pH dos infusatos resultantes é de cerca de 5.

[00080] As quantidades dos componentes do infusato usadas na preparação das formulações clínicas com concentrado de tampão citrato 540 mM para preparar a formulação de BC-3781 em tampão citrato estão mostradas na tabela abaixo. Além disso, a tabela também relaciona a preparação da formulação de referência de BC- 3781 na formulação de solução salina normal e na formulação placebo em solução salina normal. *solução de NaCl estéril comercialmente disponível, por exemplo, Ecobags; #O pH do infusato resultante é de cerca de 5.

[00081] Os componentes do infusato das formulações clínicas são introduzidos em bolsas de infusão vazias estéreis comercialmente disponíveis, por exemplo, bolsas de EVA de 300 mL ou 500 mL.

[00082] Alternativamente, a formulação também pode ser reconstituída por adição das quantidades necessárias da solução de concentrado de BC-3781 apresentada no Exemplo 2a) e a solução de concentrado de tampão apresentada no Exemplo 2b) às bolsas de infusão de solução salina normal comercialmente preenchidas. Opcionalmente, o volume de concentrado de BC-3781 e de solução de concentrado de tampão citrato é retirado das bolsas de infusão de solução salina normal comercial antes da adição.

[00083] As formulações clínicas descritas nas tabelas acima foram usadas para avaliar as diferenças de tolerância local da solução salina normal de BC-3781 e da formulação de tampão citrato em solução salina normal de BC-3781. As formulações de solução salina normal tamponada com citrato mostraram tolerância local superior em relação às formulações de solução salina normal.

[00084] Especificamente as duas formulações de BC-3781 diferentes a seguir • 150 mg de formulação de BC-3781 em solução salina normal em 270 mL infundidos durante 1 hora • 150 mg de formulação de BC-3781 em tampão citrate em solução salina normal em 270 mL infundidos durante 1 hora foram investigadas em um estudo randomizado, duplo-cego e controlado com placebo, fase 1.

Exemplo 3:

[00085] A formulação também pode ser preparada diretamente por dissolução de sal de BC-3781, NaCl, ácido cítrico, e citrato trissódico em água. Subsequentemente esta formulação pode ser introduzida em recipientes apropriados, por exemplo, bolsas de infusão, frascos de infusão, em condições assépticas. O pH da formulação é de cerca de 5 e pode ser ajustado seja com HCl ou NaOH para ser exatamente igual a 5,0, se necessário. Fórmula da batelada da bolsa de infusão pronta para uso (RTU) * A quantidade do sal de acetato de BC-3781 é maior e vai depender da potência (teor de base livre) do API. Entretanto, a concentração da formulação é 0,60 g/l de base livre de BC-3781.

Exemplo 4:

[00086] A formulação também pode ser preparada por preparação separada da solução de concentrado de BC-3781 introduzida em frascos e bolsas de solução salina normal tamponada com citrato sem fármaco.

[00087] A solução de concentrado de BC-3781 é preparada da maneira descrita no Exemplo 2 etapa a).

[00088] A solução tampão é preparada separadamente, filtrada em cartuchos de 0,45 μm para retenção de bactérias e partículas e intro-duzida em recipientes apropriados, por exemplo, bolsas de infusão ou frascos de infusão. O pH é de cerca de 5. Fórmula da batelada para bolsas de solução salina tamponada com citrate

[00089] Os recipientes de tampão resultantes são esterilizados por calor.

[00090] Por fim, o teor do frasco de concentrado de BC-3781 é diluído (reconstituído) na bolsa de infusão com tampão citrato produzindo a formulação final. A formulação de BC-3781 resultante corresponde a 150 mg de BC-3781 em solução salina normal com tampão citrato 10 mM com um pH de cerca de 5.

Exemplo 5:

[00091] Preparação do frasco de concentrado de tampão citrato contendo acetato de BC-3781 para reconstituição em bolsas de solução salina normal comercialmente disponíveis.

a) Preparação da solução tampão citrato 150 mM

[00092] A preparação dos concentrados de tampão 150 mM foi feita por dissolução das quantidades apropriadas de cítrico mono-hidratado com citrato trissódico di-hidratado em água. O pH resultante é de cerca de 5.

b) Preparação da solução de concentrado de acetato de BC-3781 em tampão citrato 150 mM

[00093] O equivalente a 150 mg de base livre de acetato de BC-3781 é dissolvido em 20 mL de tampão citrato 150 mM resultando em uma concentração de 7,5 mg/mL. A solução pode ser introduzida, por exemplo, em frascos de vidro.

[00094] Reconstituição de 20 mL da solução acima em, por exemplo, uma bolsa ou frasco de infusão de solução salina comercial de 250 mL vai resultar em 150 mg de base livre de BC-3781 em tampão citrato cerca de 10 mM com um pH de cerca de 5.

[00095] As formulações tamponadas da presente invenção foram investigadas in vivo em um modelo de rabo de rato assim como em um estudo clínico com humanos. Os detalhes das condições de teste e os resultados surpreendentes estão apresentados nos parágrafos que se seguem.

Descrição do modelo de rabo de rato para avaliar as tolerabilidades locais:

[00096] Foi desenvolvido um modelo de tolerabilidade do sítio de infusão para infusão de BC-3781 na veia dorsal do rabo de rato para investigar as potenciais formulações clínicas intravenosas de BC- 3781. Para tanto, ratas Sprague Dawley (SD) foram cateterizadas com um cateter venoso permanente (BD®, G21) e as diferentes formulações de BC-3781 em uma concentração de 6 mg/mL foram infundidas a uma taxa de infusão constante de 1 mL/min até uma dose final de 75 mg/kg. O plasma e a urina foram examinados quanto à presença de sinais de hemólise entre 5 e 30 minutos. A tolerância local no sítio de infecção (veia do rabo) foi examinada 24 horas após a aplicação. O sistema de escores desenvolvido junto com as informações sobre hemólise no plasma e/ou na urina foram coletados e usados para análise.

[00097] As formulações de infusão testadas foram classificadas de acordo com seus escores. A solução de infusão tamponada de BC-3781 mostrou tolerabilidade local melhorada, e para formulações tamponadas com pH abaixo de 7 não foi observada hemólise, ambos os efeitos sendo comparados com a formulação de referência em solução salina (NSS) e D5W.

Realização do teste e resultados: a) Modelo de tolerabilidade local

[00098] Para determinar a tolerabilidade local das formulações in-travenosas foi desenvolvido um modelo de infusão pela veia do rabo de rato para testar formulações de BC-3781 preparadas de acordo com o Exemplo 1. Para tanto, um sistema de escore foi empregado para descrever os sinais clínicos no sítio de injeção.

[00099] Um exame visual da veia dorsal do rabo 24 horas após a infusão foi definido como o ponto do tempo para leitura. Foram aplicados os seguintes escores: nenhuma anormalidade observada na veia dorsal do rabo depois de 24 horas obteve a classificação 0 pontos pequenas manchas vermelhas (equimoses) 1 ponto manchas moderadas 2 pontos, e manchas vermelhas arroxeadas mais severas obtiveram a classifica- ção 3 pontos.

[000100] Em caso de morte, foram calculados 3 pontos.

[000101] Como formulação de referência, foi usado BC-3781 dissolvido em NSS ou D5W (sem tampão) preparado de acordo com o Exemplo 1. Para discriminar as formulações, uma infusão de formulação de NSS e de D5W nas condições descritas acima causou hemólise de- tectável e irritação local moderada no sítio de infusão. Todas as formulações foram distribuídas como amostras cegas para o sítio de teste do animal. A revelação das formulações foi feita ao final do estudo.

b) Coleta de sangue

[000102] Sangue foi coletado da veia sublingual 15 minutos após o término da infusão, centrifugado a 2 g a 4 °C por 5 minutos. Plasma foi coletado e examinado visualmente quanto à presença de sinais de hemólise e depois disso foi armazenado a -20 °C. Para avaliar o impacto sobre a farmacocinética (PK) de várias formulações, as concentrações plasmáticas de BC-3781 foram determinadas e comparadas.

c) Urina

[000103] Depois do término da infusão, a anestesia foi removida e os animais foram mantidos em uma única gaiola sobre lençóis de tecido branco enquanto se recuperavam da anestesia. Pequenas gotas de urina eritroide observadas no tecido foram registradas como sinais de hemólise.

d) Análise dos dados

[000104] Os escores do modelo de tolerância local para cada formulação foram somados e então divididos pelo número correspondente de animais (n = 3-12). Além disso, sinais de hemólise no plasma e na urina foram levados em consideração para a classificação das formulações. Resultados no modelo de rabo de rato a) Formulações de BC-3781 testadas no modelo de infusão na veia do rabo de rato * a concentração de 6 mg/mL se refere ao teor de base livre de BC-3781

Preparação de formulações

[000105] A preparação das formulações está descrita no Exemplo 1. Nas formulações ativas, a quantidade necessária de BC-3781presente seja como sal de acetato ou de L-lactato foi dissolvida nas respectivas soluções tampão, NSS ou D5W como relacionado na tabela acima. Depois de dissolução completa, as diluições necessárias foram ime-diatamente administradas aos animais. A dose de 75 mg/kg de BC 3781 se refere ao teor de base livre de BC-3781. b) Especificações e origem dos animais

c) Cenário de infusão

[000106] A veia dorsal do rabo foi canulada por meio de um cateter venoso permanente (BD insyteTM, 24GA) depois de aquecimento do rabo com uma lâmpada de aquecimento por 5 minutos. Depois da ca- nulação, os ratos foram anestesiados com isoflurano em uma concentração de 5% para começar e 3,5% para manutenção da narcose (máscara). Através de uma bomba de seringa programável, várias formulações de BC-3781 foram infundidas na veia dorsal canulada do rabo do rato (1 mL/min, 6 mg/mL, cerca de 2 minutos). Após o término da infusão, o cateter foi lavado com 0,1 - 0,2 mL de solução salina. O cateter e a seringa foram descartados e a tubagem de ligação foi enxaguada com etanol e secada para reutilização. A dimensão do grupo por cenário de infusão foi 3. Resultados das formulações testadas no modelo de rabo de rato (escore de tolerância local e hemólise no plasma e na urina) * Legenda: A ativo; P placebo; N é o número de animais testados

[000107] Os resultados do teste confirmam o surpreendente efeito das soluções tamponadas de BC-3781. Todas as soluções tampona- das apresentam um escore de tolerabilidade melhor quando comparadas com as formulações de referência não tamponadas. Surpreendentemente, adicionalmente não foi observada hemólise para as soluções tamponadas de BC-3781, considerando-se que soluções não tampo- nadas ou soluções tamponadas em pH 7 causam hemólise observável no plasma e na urina. Estes efeitos surpreendentes não podem ser relacionados à solubilidade limitada do BC-3781 no pH do sangue e tampouco o efeito poderia ser causado pela estabilidade limitada do BC-3781 em pH fisiológico (cerca de 7).

Resultados de um estudo na fase clínica 1

[000108] A tolerabilidade local melhorada das formulações tampona- das de BC-3781 também foi confirmada em um estudo na fase clínica 1, que comparou formulações de BC-3781 em NSS (150 mg de BC-3781 em 270 mL) com BC-3781 em solução salina tamponada com citrato (150 mg de BC-3781 em 270 mL), preparada de acordo com o Exemplo 2. O estudo foi randomizado, duplo-cego e controlado com placebo (usando solução salina normal como placebo). No total foram tratados 60 indivíduos saudáveis - 25 machos e 35 fêmeas. O objetivo primário do estudo era dor moderada e eritema nos 3 primeiros dias. As formulações foram infundidas durante 1 hora e surpreen-dentemente a ocorrência de dor moderada e/ou eritema durante os 3 primeiros dias caiu para aproximadamente metade quando lefamulina foi administrado em solução salina tamponada com citrato. Por exemplo, de um total de 150 infusões no braço da solução salina, 13 infusões (8,7%) causaram dor moderada ao passo que no braço da solução salina tamponada com citrato apenas 6 das 150 infusões (4%) foram associadas à dor moderada.

Claims

1. Formulação farmacêutica injetável, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de Fórmula (I) a dita formulação sendo tamponada em um valor de pH farmaceuticamente aceitável de pH de 2 a 6, de 3 a 5,5, de 4 a 5, ou de 5, e sendo que o tampão é selecionado do grupo que consiste em tampões citrato, e misturas de tampões citrato e tampões fosfato

2. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zada pelo fato de que o tampão é um tampão citrato 10 a 20 mM, ou um tampão citrato 10 mM.

3. Formulação, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ca-racterizada pelo fato de que a formulação tamponada compreende um veículo farmaceuticamente aceitável selecionado do grupo que consiste em solução salina normal, solução de dextrose a 5%, e misturas das mesmas.

4. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi-cações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o tampão é um tampão citrato 10 mM a 20 mM, o valor do pH da formulação varia de 3 a 5,5 ou pH 5, a concentração do composto de Fórmula (I) varia entre 0,2 e 3 mg/mL (calculada na forma de base livre), e a formulação compreende um veículo farmaceuticamente aceitável.

5. Formulação, de acordo com a reivindicação 4, caracteriza-da pelo fato de que o tampão é um tampão citrato 10 mM, o valor do pH da formulação varia de 3 a 5,5 ou pH 5, a concentração do composto de Fórmula (I) varia entre 0,3 e 1,2 mg/mL (calculada na forma de base li-vre), e a formulação compreende um veículo farmaceuticamente aceitá-vel.

6. Formulação, de acordo com a reivindicação 5, caracteri-zada pelo fato de que o tampão é um tampão citrato 10 mM, o valor do pH da formulação varia de 3 a 5,5 ou pH 5, a concentração do composto de Fórmula (I) varia entre 0,3 e 0,6 mg/mL (calculada na forma de base livre), e a formulação compreende um veículo farmaceutica- mente aceitável.

7. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi-cações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é empregado como um sal farmaceuticamente aceitável, em particular, como acetato e/ou L-lactato, particularmente, de preferência, como acetato.

8. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi-cações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de uma doença mediada por patógeno Gram-positivo ou Gram- negativo.

9. Formulação, de acordo com a reivindicação 8, caracteri-zada pelo fato de que é administrada por meio de aplicação intravenosa.

10. Forma de apresentação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende a formulação injetável, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 7.

11. Uso de uma formulação, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição farmacêutica para tratamento de uma doença mediada por patógeno Gram-positivo ou Gram-negativo em um indivíduo em necessidade do mesmo.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a referida formulação é administrada por meio de aplicação intravenosa.