BR112017022942B1 - Composições compreendendo anakinra, e seu uso - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÕES COMPREENDENDO ANAKINRA. A presente invenção refere-se a composições compreendendo anakinra, tampão, e, opcionalmente, pelo menos um osmólito e, opcionalmente, excipientes adicionais. Adicionalmente, a presente invenção refere-se ao uso de referidas composições para tratamento de, por exemplo, distúrbios oftálmicos.

Description

Campo da Invenção

[0001] A presente invenção se refere às composições compreendendo anakinra, tampão, e, opcionalmente, pelo menos um osmólito e, opcionalmente, excipientes adicionais. Adicionalmente, a presente invenção se refere ao uso de referidas composições para tratamento de distúrbios oftálmicos.

Antecedentes da Invenção

[0002] A família da interleucina-1 é um grupo de proteínas envolvidas na regulação imune e respostas inflamatórias. Membros do grupo intermedeiam uma faixa de doenças, tais como artrite reumatoide, doença inflamatória do intestino, asma, diabetes, leucemia e psoríase.

[0003] A anakinra é uma forma recombinante de uma proteína agonista de receptor de interleucina-1 (IL-1ra) que ocorre naturalmente, funcionando como um inibidor competitivo para ligação de receptor de IL-1. A IL-1ra tem uma função de equilíbrio com relação às outras variantes pró-inflamatórias de IL-1 (Clin. Therapeutics 2004, 26, 19601975). Uma deficiência de IL-1ra pode, desse modo, ser um fator de risco para um número de doenças autoimunes. Os sintomas destas doenças podem ser aliviados pelo tratamento com anakinra.

[0004] Os componentes em uma formulação de fármaco de proteína podem incluir agenres de tamponamento, agentes de tonicidade, antioxidantes, estabilizadores, tensoativos, agentes de tamponamento, agentes quelantes, e conservantes. Kineret®, uma formulação de anakinra a pH 6,5 adequada para injeção, contêm citrato de sódio, cloreto de sódio, dissódio EDTA, polissorbato 80, e água. A seleção de citrato de sódio como componente de tampão para anakinra na formulação de Kineret® foi à base de estudos detalhados que avaliam a estabilidade de curto e longo prazo de anakinra. Vários componentes de tampão potenciais foram avaliados, fosfato de sódio sendo um, e citrato de sódio foi identificado como proporcionando a estabilidade ótima com relação à agregação de anakinra (WO 2005/097195). A agregação de anakinra foi um maior problema para a seleção do componente de tampão, estabilizadores, e temperatura de armazenagem. A concentração do citrato de sódio foi minimizada o máximo possível, considerando seu efeito de irritação local conhecido após injeção.

[0005] A anakinra foi também formulada sem citrato de sódio de modo a evitar os problemas reportados com tolerância local no local de injeção subcutânea (WO 2012/108828). Os componentes apropriados em uma formulação de fármaco de proteína, e seus respectivos níveis, são determinados pelo, por exemplo, uso pretendido.

[0006] Os produtos de fármaco líquidos de moléculas biológicas com uma composição pré-especificada e pH podem ser fabricados por vários processos. O modo mais comum é preparar soluções de estoque com composições especificadas e pH e, em seguida, misturar estas juntas para obter um veículo. O veículo é, em seguida, a proteína ativa em uma solução aquosa a uma composição final com um pH predefinido.

[0007] A IL-1 também desempenha um papel em um número de distúrbios do olho, tal como a iniciação e manutenção da inflamação e dor associadas com doença do olho seco, e a vermelhidão e prurido associados com conjuntivite alérgica. Foi mostrado que a IL-1ra pode ser capaz de impedir e tratar certos distúrbios do olho relacionados à IL- 1 (WO 2009/025763, Amparo et al., JAMA Ophthalmology 2013, 131, 6, 715-723). No WO 2014/160371, formulações estáveis de uma proteína de citocima quimérica de IL-1ß/IL-1ra para administração tópica no olho, são reveladas.

[0008] Um desafio com formulações de fármaco de proteína em geral é a pobre estabilidade da proteína ativa. Consequentemente, existe uma necessidade de uma formulação de receptor de interleucina- 1 oftálmica com estabilidade aperfeiçoada.

Descrição da Invenção

[0009] É um objetivo da presente invenção proporcionar novas composições de anakinra com estabilidade aperfeiçoada.

[00010] Outro objetivo da presente invenção é proporcionar novas composições de anakinra adequadas para uso em terapia, tal terapia, de preferência, incluindo administração tópica de tais composições de anakinra.

[00011] Outro objetivo da presente invenção é proporcionar novas composições de anakinra com baixas concentrações de anakinra, tal como de 0,01 mg/mL a 30 mg/mL de anakinra.

Breve Descrição dos Desenhos

[00012] FIG 1. mostra o teor de monômero de anakinra em soluções de anakinra após armazenagem a 35°C formuladas em concentrações diferentes de tampões de HEPES, comparado com soluções de anakinra após armazenagem a 35°C formuladas em tampão de citrato.

[00013] FIG 1A mostra dados com o osmólito taurina sendo adicionado, e FIG 1B mostra dados com o osmólito hidroxiprolina sendo adicionado. Detalhes adicionais são proporcionados no Exemplo 7.

[00014] FiG 2. mostra teor de monômero de anakinra em 25 mg/mL de soluções de anakinra após armazenagem a 35°C formuladas em tampões de citrato HEPES ou citrato com osmólitos. Detalhes adicionais são proporcionados no Exemplo 8.

[00015] FIG 3. mostra o teor de monômero de anakinra em soluções de anakinra após armazenagem a 35°C formuladas em tampões de HEPES ou citrato. Detalhes adicionais são proporcionados no Exemplo 9.

[00016] Uma composição compreendendo anakinra e tampão, conforme definida nesta descrição, é vantajosa em que ela exibe estabilidade sob certas condições. As condições que um produto comercial de anakinra pode experimentar incluem armazenagem de longo prazo sob condições refrigeradas, armazenagem de curto prazo sob condições ambientes, e estresse mecânico durante transporte, todas destas sendo condições que a composição acima desenvolver para suportar.

[00017] Com o termo "anakinra"é significativo uma forma recombinante de agonista de receptor de IL-1 (IL-1ra) tendo a sdequência de amino ácidp 152 mostrada como posições 26-177 na Sequência de Referência de NCBI NP_776214.1 (www.ncbi.nlm.nih.gov). Adicionalmente, o termo "anakinra" deve ser compreendido como incluindo formas modificadas de anakinra, por exemplo, variantes de aminoácido tendo pelo menos 90%, 95%, 97% ou 99% de identidade com a sequência de aminoácido de anakinra. O técnico no assunto compreenderá que muitas combinações de anulações, inserções, inversões, e substituições podem ser feitas dentro da sequência de amino ácido de anakinra, provido que a molécula resultante ("a variante de anakinra") é biologicamente ativa, por exemplo, possessa a capacidade de inbibir IL-1. Variantes de anakinra particulares são descritas em, por exemplo, Patente dos Estados Unidos Nos. 5.075.222; 6.858.409 e 6.599.873. • termo "anakinra" adicionalmente inclui proteínas de fusão compreendendo anakinra. A anakinra pode ser formatada para ter um tamanho hidrodinâmico maior, por exemplo, por fixação de grupos de polialquilenoglicol (por exemplo, um grupo de polietilenoglicol (PEG)), albumina de soro, transferrina, receptor de transferrina, ou pelo menos a porção de ligação de transferrina desta, uma região de anticorpo Fc, ou por conjugação de um domínio de anticorpo.

[00018] Por "tampão" é significativo uma entidade química usada para impedir mudanças no pH. Uso de um tampão constitui um meio de manter o pH a um valor quase constante em uma ampla variedade de aplicações químicas. HEPES, ou 4-(2-hidroxietil)-1-ácido piperazinaetanossulfônico, é um agente de tamponamento químico orgânico zwitteriônico que proporciona a composição conforme aqui revelada com propriedades vantajosas em comparação com outros tampões. Em particular, o uso de um tampão de HEPES pode proporcionar uma composição estável. Outro tampão que pode ser usado na composição conforme aqui descrita é tampão de citrato de sódio. Citrato de sódio é I sal de sódio de ácido cítrico, e tem previamente sido demonstrado proporcionar composições de anakinra para injeção com estabilidade aperfeiçoada. Contudo, conforme demonstrado nos exemplos em anexo, o citrato de sódio em combinação com HEPES surpreendentemente estabiliza as composições compreendendo anakinra a uma concentração de cerca de 2 a 30 mg/ml em certas condições, tais como temperaturas de armazenagem elevadas. Em particular, o tampão de HEPES sozinho, surpreendentemente estabiliza composições compreendendo anakinra a uma concentração de cerca de 2 a 30 mg/ml em certas condições tais como temperaturas de armazenagem elevadas. O tampão de HEPES é um tampão conhecido na técnica; contudo, ele não é geralmente usado no campo farmacêutico de administração tópica de agentes farmacêuticos ao olho.

[00019] É, em um aspecto da invenção, proporcionada uma composição, compreendendo:

[00020] . 0,01 mg/mL a 30 mg/mL de anakinra;

[00021] . tampão, selecionado de HEPES e uma mistura de HEPES e citrato de sódio; e

[00022] opcionalmente, pelo menos um osmólito.

[00023] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende pelo menos um osmólito.

[00024] Em uma concretização deste aspecto, referida tampão é tampão de HEPES.

[00025] Em uma concretização deste aspecto, referida tampão estabiliza o pH da composição a um pH de 6 a 7.

[00026] Em uma concretização deste aspecto, é proporcionada uma composição, compreendendo:

[00027] . 0,01 mg/mL a 30 mg/mL de anakinra; tampão, selecionado de HEPES e uma mistura de HEPES e citrato de sódio, no qual referido tampão estabiliza o pH da composição a um pH de 6 a 7; e, opcionalmente, pelo menos um osmólito. Tipicamente, a concentração de anakinra é 0,05 mg/mL a 30 mg/mL, tal como cerca de 0,1 mg/mL a 30 mg/mL, tal como cerca de 0,5 mg/mL a 30 mg/mL, tal como cerca de 1 mg/mL a 30 mg/mL, tal como cerca de 1,5 mg/mL a 30 mg/mL, tal como cerca de 2 mg/mL a 30 mg/mL, tal como cerca de 5 mg/mL, tal como cerca de 10 mg/mL, tal como cerca de 15 mg/mL, tal como cerca de 20 mg/mL, ou tal como cerca de 25 mg/mL.

[00028] Em uma concretização deste aspecto, é proporcionada uma composição, compreendendo:

[00029] . 2 mg/mL a 30 mg/mL de anakinra; tampão, selecionado de HEPES e uma mistura de HEPES e citrato de sódio, no qual referido tampão estabiliza o pH da composição a um pH de 6 a 7; e, opcionalmente, pelo menos um osmólito.

[00030] Em uma concretização deste aspecto, referido tampão é uma mistura de citrato de sódio e HEPES.

[00031] Um osmólito deve, neste contexto, ser compreendido como uma entidade química que tem o potencial de modificar a osmolaridade de uma solução e proporcionar um efeito de estabilização. A osmolaridade é uma propriedade coligativa que depende no número total de moles de todas as entidades dissolvidas em 1000 g de solvente. Exemplos não limitantes de osmólitos são L-prolina; D-treonina; L- serina; mioinositol; maltitol; D-rafinose; penta-hidrato; hidroxiprolina; taurina; glicina betaína; sacarose; manitol; L-prolina; D-treonina; L- serina, e metionina.

[00032] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende pelo menos um osmólito. Referido pelo menos um osmólito pode ser selecionado de taurina, prolina, hidroxiprolina, manitol, e metionina. Em outra concretização, referido pelo menos um osmólito é selecionado de taurina, prolina, e hidroxiprolina. Em outra concretização, referido pelo menos um osmólito é taurina. Em outra concretização, referido pelo menos um osmólito é hidroxiprolina. Em outra concretização, referido pelo menos um osmólito representa uma mistura de taurina e hidroxiprolina.

[00033] Em uma concretização deste aspecto, referido pelo menos um osmólito representa 15 mg/mL a 40 mg/mL de taurina, tal como 15, 20, 25, 30, 35 ou 40 mg/mL de taurina. Outras concretizações incluem as concentrações de taurina conforme colocadas nos exemplos.

[00034] Em uma concretização deste aspecto, referido pelo menos um osmólito representa 15 mg/mL a 40 mg/mL de hidroxiprolina, tal como 15, 20, 25, 30, 35 ou 40 mg/mL hidroxiprolina. Outras concretizações incluem as concentrações de hidroxiprolina conforme colocadas nos exemplos.

[00035] Em uma concretização deste aspecto, referida composição adicionalmente compreende um ou mais de um agente quelante, surfactant, e um regulador de tonicidade.

[00036] Um "agente quelante"é uma entidade química que pode formar duas ou mais ligações coordenadas separadas entre um ligante de polidentato (ligado múltiplo) e um átomo central único. Usualmente estes ligantes são compostos orgânicos, exemplos dos quais são ácido aminopolicarboxílico sintético, tal como ácido etileno diamina tetraacético (EDTA) e ácido dietileno triamina pentaacético (DPTA); fosfonatos; agentes naturais, tais como os anéis de porfirina de clorofila e hemoglobina; polissacarídeos; ácidos polinucleicos; amino ácidos, tais como ácido glutâmico e histidina; diácidos orgânicos, tal como malato, e polipeptídeos, tal como fitoquelatina. Em adição, muitas espécies microbiais produzem pigmentos solúveis em água que servem como agente quelantes, denominados sideroforos. Por exemplo, espécies de Pseudomonassão conhecidas por secretarem piochelina e pioverdina que ligam ferro. Outro exemplo é enterobactina, produzida por E. coli, que é o agente quelante mais forte conhecido. Ácido cítrico tem propriedades quelantes e é, portanto, usado para capturar íons multivalentes e, consequentemente, como um exemplo, água macia em sabões e detergentes de lavanderia.

[00037] Em uma concretização, referida composição compreende um agente quelante. Referido agente quelante pode ser selecionado de EDTA; DPTA; fosfonato; um agente quelante natural; um sideroforo; um polissacarídeo; um ácido polinucleico; um amino ácido; um diácido orgânico, e um polopeptídeo. Exemplos específicos de tais agentes quelantes são definidios acima. Em uma concretização deste aspecto, referido agente quelante é EDTA.

[00038] Pelo termo "tensoativo"é significativo um composto que reduz a tensão superficial (ou tensão interfacial) entre uma fase líquida e uma fase de gás, entre dois líquidos, ou entre um líquido e um sólido. Os tensoativos são anfifílicos, significando que eles contêm ambos grupos hidrofóbicos e grupos hidrofílicos. Os tensoativos se difundirão em água e adsorverão nas interfaces entre ar e água, ou na interface entre óleo e água, no caso onde a água é mistirada com óleo.

[00039] Em uma concretização, referida composição compreende pelo menos um tensoativo. Exemplos não limitantes de tensoativos adequados para uso na referida composição incluem, mas não são limitados a, polímeros de bloco de óxido de etileno e óxido de prolileno, tal como poloxâmeros que são copolímeros de tribloco compostos de uma cadeia central de óxido de polipropileno flanqueada por duas cadeias de óxido de polietileno, um exemplo do qual é pluronic F68; sorbitan monolaurato; sorbitol éster; poliglicerol ácido graxo éster; cocamida DEA lauril sulfato; alcanolamida; polioxietileno propileno glicol estearato; polioxietileno lauril éter; polioxietileno cetil éter; polissorbato, tal como polissorbato 80 (PS80, também conhecido como polioxietileno sorbitano mono-oleato, ou Tween 80™), e polissorbato 20 (PS20); glicerol monoestearato; glicerol distearato; sorbitol monopalmitato; polioxietileno sorbitano monooleato; polioxietileno sorbitano monolaurato, e propileno glicol monoestearato. Em uma concretização, referido tensoativo é não iônico. Em uma concretização, referido tensoativo é selecionado de polissorbato 80 e pluronic F68. De preferência, referido tensoativo é polissorbato 80.

[00040] Pelo termo "regulador de tonicidade"é geralmente significativo um agente que ajusta a osmolaridade de uma solução e, mais especificamente, um agente que ajusta a osmolaridade a um valor de osmolaridade perto do valor de osmolaridade de um fluido fisiológico.

[00041] Em uma concretização, referida composição compreende one ou mais regulador(es) de tonicidade. Reguladores de tonicidade adequados incluem, mas não são limitados a: cloreto de sódio (NaCl), sorbitol; manitol, sacarose, trehalose, ou outros açúcares. Em uma concretização deste aspecto, referido regulador de tonicidade é NaCl.

[00042] Em uma concretização, referida composição compreende EDTA como um agente quelante, polissorbato 80 como um tensoativo, e NaCl como um regulador de tonicidade.

[00043] Em uma concretização deste aspecto, referido tampão estabiliza o pH da composição a um pH de cerca de 6,5. Conforme explanado em qualquer lugar aqui, a função de um tampão é manter o pH a um valor quase constante. Nesta concretização, o tampão, desse modo, mantém o pH da composição a cerca de 6,5.

[00044] Em uma concretização deste aspecto, é proporcionada uma composição, no qual referida composição tem uma osmolaridade de cerca de 150 a 320 mOsmol/kg. Quando a osmolaridade de uma solução é descrita como isotônica/hipertônica, ou hipotônica, a denotação tonicidade significa que a pressão osmótica da solução é relacionada àquela de uma solução fisiológica. Em geral, uma solução isotônica tem uma osmolaridade de aproximadamente 280 a 320 mOsm/kg.

[00045] Em uma concretização, referida composição compreende um osmólito, a concentração do qual é ajustada para proporcionar uma composição isotônica. Em particular, tal composição pode ter uma osmolaridade de 280 a 320 mOsmol/kg. As preparações isotônicas são geralmente preferidas para administrações tópicas, visto que elas tipicamente tendem a serem menos irritantes do que soluções não- isotônicas. Uma composição isotônica, de preferência, tendo uma osmolaridade no intervalo definido, é adequada para administração ocular, visto que sua osmolaridade está dentro da mesma faixa como a osmolaridade do olho.

[00046] Contudo, as composições hipotônicas podem também ser úteis para administração ocular. Consequentemente, em uma concretização, referida composição compreende um osmólito, no qual a concentração de referido osmólito é ajustada para proporcionar uma composição hipotônica. Em particular, tal composição pode ter uma osmolaridade de 150 a 280 mOsmol/kg. Uma composição hipotônica pode proporcionar propriedades vantajosas quando administrada ao olho de um paciente, em particular, se referido paciente experimenta olho(s) seco(s). A composição pode, em seguida, proporcionar alívio ao paciente por umedecimento do olho.

[00047] Em uma concretização, a composição compreende adicionalmente ingredientes, tais como um ou mais conservante(s). Um conservante pode ser adicionado a uma composição de modo a, por exemplo, manter sua segurança microbiológica.

[00048] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[00049] . 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[00050] . 5 mM a 50 mM de tampão de HEPES, no qual referido tampão estabiliza o pH da composição a um pH de 6 a 7; e

[00051] . mg/mL a 100 mg/mL de um osmólito selecionado de taurina e hidroxiprolina.

[00052] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[00053] . 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[00054] . 5 mM a 50 mM de tampão de HEPES, no qual referido tampão estabiliza o pH da composição a um pH de 6 a 7; e

[00055] . 1 mg/mL a 100 mg/mL de um osmólito selecionado de taurina, prolina, hidroxiprolina, manitol e metionina;

[00056] . 0,05 mM a 1 mM de EDTA;

[00057] . 0,01% a 1% de polissorbato 80; e

[00058] . 0,1 mg/mL a 5 mg/mL de NaCl.

[00059] As composições conforme definidas acima foram submetidas a testes de estabilidade, e revelaram em tais testes propriedades benéficas.

[00060] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[00061] . 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[00062] . 5 mM a 50 mM de tampão de HEPES, no qual referido tampão estabiliza o pH da composição a pH de 6 a 7;

[00063] . 1 mg/mL a 50 mg/mL de um osmólito selecionado de taurina, prolina e hidroxiprolina;

[00064] . 0,05 mM a 1 mM de EDTA;

[00065] . 0,01% a 1% de polissorbato 80; e

[00066] . 0,1 mg/mL a 5 mg/mL de NaCl.

[00067] As composições conforme definidas acima foram submetidas a testes de estabilidade, e têm, em tais testes, boas propriedades.

[00068] Em uma concretização deste aspecto, referido tampão é de cerca de 5 mM a cerca de 15 mM de tampão de HEPES. Referido tampão de HEPES pode adicionalmente estabilizar o pH da composição a cerca de 6,5.

[00069] Em uma concretização deste aspecto, referido tampão é cerca de 10 mM de tampão de HEPES. Referido tampão de HEPES pode adicionalmente estabilizar o pH da composição a cerca de 6,5.

[00070] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[00071] . 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[00072] . uma mistura de 5 mM a 50 mM de tampão de HEPES e 0,05 mM a 2 mM de tampão de citrato de sódio, no qual referida mistura tampão estabiliza o pH da composição a um pH de 6 a 7;

[00073] . 1 mg/mL a 100 mg/mL de um osmólito selecionado de taurina, prolina, hidroxiprolina, manitol e metionina;

[00074] . 0,05 mM a 1mM de EDTA;

[00075] . 0,01% a 1% de polissorbato 80; e

[00076] . 0,1 mg/mL a 5 mg/mL de NaCl.

[00077] As composições conforme definidas acima foram submetidas a testes de estabilidade, e têm, em tais testes, boas propriedades.

[00078] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[00079] . 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[00080] . uma mistura de 5 mM a 50 mM de tampão de HEPES e 0,05 mM a 2 mM de tampão de citrato de sódio, no qual referida mistura tampão estabiliza o pH da composição a um pH de 6 a 7;

[00081] . 1 mg/mL a 50 mg/mL de um osmólito selecionado de taurina, prolina e hidroxiprolina;

[00082] . 0,05 mM a 1 mM de EDTA;

[00083] . 0,01% a 1% de polissorbato 80; e

[00084] . 0,1 mg/mL a 5 mg/mL de NaCl.

[00085] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[00086] . 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[00087] . 10 mM - 50 mM de tampão de HEPES; e

[00088] .15 mg/mL - 25 mg/mL de taurina.

[00089] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[00090] . 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[00091] . 10 mM - 50 mM de tampão de HEPES; e

[00092] . 20 mg/mL - 30 mg/mL de hidroxiprolina.

[00093] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[00094] . 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[00095] . 10 mM - 50 mM de tampão de HEPES;

[00096] . 10 mg/mL - 15 mg/mL de taurina; e

[00097] . 10 mg/mL - 15 mg/mL de hidroxiprolina.

[00098] As composições conforme definidas acima foram submetidas a testes de estabilidade, e têm, em tais testes, boas propriedades.

[00099] Em uma concretização deste aspecto, referido tampão é uma mistura de 10 mM de tampão de HEPES e 1,2 mM de tampão de citrato de sódio. Referida mistura de tampão pode, adicionalmentemore, estabilizar o pH da composição a cerca de 6,5.

[000100] Em uma concretização deste aspecto, referido pelo menos um osmólito representa taurina. Em particular, referido pelo menos um osmólito representa 20 mg/mL a 40 mg/mL de taurina.

[000101] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[000102] . 5 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[000103] . 10 mM de tampão de HEPES, que estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5;

[000104] . 0,5 mM de EDTA;

[000105] . 0,1% de polissorbato 80;

[000106] . 1 mg/mL a 1,5 mg/mL de NaCl; e

[000107] . 30 mg/mL taurina.

[000108] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[000109] . 5 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[000110] . uma mistura de 10 mM de HEPES e 1,2 mM de tampão de citrato de sódio, que estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5;

[000111] . 0,5 mM de EDTA;

[000112] . 0,1% de polissorbato 80;

[000113] . 1 mg/mL a 1,5 mg/mL de NaCl; e

[000114] . 30 mg/mL de taurina.

[000115] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[000116] . 5 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[000117] . 10 mM de tampão de HEPES, que estabiliza o pH da com posição a cerca de 6,5; e

[000118] . cerca de 30 mg/mL de taurina.

[000119] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[000120] . 5 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[000121] . 10 mM de tampão de HEPES, que estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5; e

[000122] . cerca de 30 mg/mL de hidroxiprolina.

[000123] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende:

[000124] . 5 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[000125] . 10 mM de tampão de HEPES, que estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5;

[000126] . 0,5 mM de EDTA;

[000127] . 0,1% de Polissorbato 80;

[000128] . 1 mg/mL a 1,5 mg/mL de NaCl; e

[000129] . cerca de 30 mg/mL de taurina.

[000130] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende de cerca de 15 mg/mL a cerca de 25 mg/mL de anakinra.

[000131] Em uma concretização deste aspecto, referida composição compreende

[000132] . 5 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra;

[000133] . uma mistura de 10 mM de HEPES e 1,2 mM de tampão de citrato de sódio, que estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5;

[000134] . 0,5 mM de EDTA;

[000135] . 0,1% de polissorbato 80;

[000136] . 1 mg/mL a 1,5 mg/mL de NaCl; e

[000137] . 30 mg/mL de taurina.

[000138] Em uma concretização, a composição, de acordo com os aspectos aqui revelados, está livre ou essencialmente livre de citrato.

[000139] Em uma concretização, a composição, de acordo com os aspectos aqui revelados, é administrada topicamente a um indivíduo, por exemplo, um ser humano ou outro mammal. A administração tópica, por exemplo, inclui administração ocular, isto é, administração ao olho; administração dermal ou mucosal.

[000140] Em um aspecto da presente invenção, as composições são administradas topicamente ao olho.

[000141] Os fármacos oftálmicos tópicos são geralmente autoadministrados pelos pacientes. Desde que o paciente possa estar armazenando um fármaco por um peíodo de tempo relativamente longo, e para conveniência também necessite ser capaz de manusear o fármaco por algum momento à temperatura ambiente, a formulação pode ser submetida a temperaturas mais altas e maiores níveis de estresse de agitação do que uma formulação que seja tipicamente armazenada somente por um médico ou farmacêutico antes da administração, ou, alternativamente, para um paciente que manuseia um fármaco sensível à temperatura somente objetivado na medicação da residência do paciente. Conforme é conhecido na técnica, as proteínas são mais sensíveis à agitação e temperatura elevada do que moléculas pequenas. O estresse de agitação pode conduzir à precipitação, e estresse de calor pode conduzir à precipitação e à degradação química. Em adição, durante carregamento de um composto em um dispositivo de distribuição, pode existir exposição à estrese de calor.

[000142] As composições da presente invenção são úteis no tratamento de distúrbios tópicos, tal como distúrbios oftálmicos, distúrbios relacionados a IL-1, distúrbios oculares inflamatórios, e, em particular, distúrbios relacionados a IL-1 oftálmicos.

[000143] Os distúrbios relacionados a IL-1 incluem síndrome primária ou secundária de Sjogren, tal como queratoconjuntivite sicca associada com sínfrome de Sjogrens, síndrome de não Sjogren, tal como doença da glandula lacrimal ou obstrução do duto lacrimal; distúrbios do olho seco, ceratite sicca, síndrome de sicca, xeroftalmia, distúrbio do filme lacrimal, produção lacrimal diminuída, deficiência lacrimal aquosa, olho seco associado com doença de enxerto-versus-hospedeiro, e disfunção da glândula meibomiana.

[000144] Os distúrbios também incluem condições inflamatórias da superfície ocular da córnea, neovascularização da córnea, ceratite, incluindo ceratite ulcerative periférica, e ceratite microbial; cicatrização da ferida da córnea, transplante/ceratoplastia da córnea, cirurgia da queratoprótese, transplante lamelar, transplante endotelial seletivo.

[000145] Os distúrbios também incluem distúrbios que afetam a conjunctiva, tal como distúrbios de cicatrização conjuntival e conjuntivite, por exemplo, conjuntivite alérgica e conjuntivite alérgica severa, síndrome penfigoide e síndrome de Stevens-Johnson.

[000146] Os distúrbios também incluem reações alérgicas que afetam o olho, tal como doença do olho alérgica severa (atópica) também conhecida como conjuntivite alérgica.

[000147] Os distúrbios também incluem distúrbios autoimunes que afetam o olho, tal como oftalmia simpatética, síndrome de Vogt- Koyanagi Harada (VKH), retinocoriodopatia de birdshot, penfigoide cicatricial ocular, iridociclite heterocrônica de Fuch, e várias formas de uveíte.

[000148] Os distúrbios também incluem retinopatia diabética, edema macular diabético, uveíte, doença oftálmica da toreoide, ectropion/entropion, alergia de lente de contato, e doença do olho seco.

[000149] Consequentemente, em um aspecto da invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica para uso no tratamento de um distúrbio oftálmico. As composições farmacêutica da invenção podem ser formuladas em uma variedade de formas, tais como gotas no olho, suspensões e pomadas.

[000150] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio ocular inflamatório.

[000151] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio relacionado a IL-1.

[000152] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio relacionado a IL-1 oftálmico.

[000153] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é selecionado de síndrome primária ou secundária de Sjogren, tal como queratoconjuntivite sicca associada com síndrome de Sjogren, síndrome de Não Sjogren, tal como doença da glândula lacrimal, ou obstrução do duto lacrimal; distúrbios do olho seco, ceratite sicca, síndrome de sicca, xeroftalmia, distúrbio do filme lacrimal, produção lacrimal diminuída, deficiência lacrimal aquosa, olho seco associado com doença de enxerto-versus-hospedeiro, disfunção da glândula meibomiana, condições inflamatórias da superfície ocular da córnea, neovascularização da córnea, ceratite, incluindo ceratite ulcerativa periférica, ceratite microbial, cicatrização da ferida da córnea, transplante/ceratoplastia da córnea, cirurgia da queratoprótese, transplante lamelar, transplante endotelial seletivo, distúrbios de cicatrização conjuntival, conjuntivite, por exemplo, conjuntivite alérgica e severa, conjuntivite alérgica, síndrome penfigoide e síndrome de Stevens-Johnson, reações alérgicas que afetam o olho, tal como doença do olho alérgica severa (atópica), também conhecida como conjuntivite alérgica, distúrbios autoimunes que afetam o olho, tais como oftalmia simpatética, síndrome de Vogt-Koyanagi Harada (VKH), retinocoriodopatia de birdshot, penfigoide cicatricial ocular, iridociclite heterocrônica de Fuch, e várias formas de uveíte, retinopatia diabética, edema macular diabético, doenla oftálmica da toreoide, ectropion/entropion, alergia de lente de contato, e doença do olho seco.

[000154] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é selecionado de síndrome primária ou secundária de Sjogren, síndrome de não Sjogren; distúrbio do olho seco, ceratite sicca, síndrome de sicca, xeroftalmia, distúrbio do filme lacrimal, produção lacrimal diminuída, deficiência lacrimal aquosa, olho seco associado com doença de enxerto-versus-hospedeiro, disfunção da glândula meibomiana, condições inflamatórias da superfície ocular da córnea, neovascularização da córnea, ceratite, cicatrização da ferida da córnea, transplante/ceratoplastia da córnea, cirurgia da queratoprótese, transplante lamelar, transplante endotelial seletivo, distúrbios de cicatrização conjuntival, conjuntivite alérgica, síndrome penfigoide, síndrome de Stevens-Johnson, oftalmia simpatética, síndrome de Vogt- Koyanagi Harada (VKH), retinocoriodopatia de birdshot, penfigoide cicatricial ocular, iridociclite heterocrônica de Fuch, retinopatia diabética, edema macular diabético, doenla oftálmica da toreoide, ectropion/entropion, alergia de lente de contato, e doença do olho seco.

[000155] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é conjuntivite alérgica.

[000156] Em um aspecto da invenção, é provido o uso de uma composição farmacêutica na preparação de um medicamento útil no tratamento de um distúrbio oftálmico.

[000157] Em uma concretização deste aspecto de uso, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio ocular inflamatório.

[000158] Em uma concretização do aspecto do uso, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio relacionado a IL-1.

[000159] Em uma concretização do aspecto do uso, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio relacionado a IL-1 oftálmico.

[000160] Em uma concretização do aspecto do uso, referido distúrbio oftálmico é selecionado de um distúrbio oftálmico conforme definido em outros aspectos aqui.

[000161] Em um aspecto da invenção, é proporcionado um método para tratamento de um distúrbio oftálmico, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica da invenção a um indivíduo em necessidade do mesmo. Tipicamente, referido indivíduo é um mamífero, tal como um ser humano.

[000162] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio ocular inflamatório.

[000163] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é conjuntivite alérgica.

[000164] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio relacionado a IL-1.

[000165] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é um distúrbio relacionado a IL-1 oftálmico.

[000166] Em uma concretização deste aspecto, referido distúrbio oftálmico é selecionado de um distúrbio oftálmico conforme definido em outros aspectos aqui.

[000167] Em uma concretização deste aspecto, referido composição farmacêutica é administrado topicamente. Em particular, referida composição farmacêutica é administrada topicamente ao olho do indivíduo.

[000168] Alguns processos de produção ou enchimento requerem pelo menos breve exposição de uma composição a uma temperatura relativamente alta. Desse modo, para proposta de produção, é frequentemente requerido que uma composição seja de temperatura estável, por exemplo, tal que ela possa suportar as condições requeridas para a produção e dispensa da composição em um recipiente.

[000169] Em um aspecto da presente invenção, é proporcionado um dispositivo de distribuição de fármaco compreendendo uma composição conforme aqui definida.

[000170] Em uma concretização, referido dispositivo de distribuição de fármaco é um recipiente de multi uso, ou um recipiente de uso único.

[000171] Por "recipiente de uso único ou multi uso"é significativo um recipiente que retenha a composição, e seja projetado para distribuir uma ou várias doses em uma ocasião específica (recipiente de uso único), ou distribua várias doses em ocasiões múltiplas (recipiente de multi uso). Recipientes de multi uso de fármacos estéreis tipicamente contêm composições incluindo um ou mais conservantes, de modo a permitir a abertura do recipiente para retirada das varias doses sob vários dias, ainda mantendo a segurança microbiológica da composição.

[000172] Em uma concretização, a composição da invenção é provida em um recipiente de vedação de enchimento por sopro.

[000173] Por "recipiente de vedação de enchimento por sopro"é significativo um recipiente produzido de um material polimérico que é formado, enchido, e vedado em um processo contínuo sem intervenção humana, em uma área encerrada estéril no interior de uma máquina. A tecnologia pode ser usada para produzir assepticamente formas de dosagem líquidas farmacêuticas estéreis. Por exemplo, o carregamento de uma formulação em um recipiente de vedação de enchimento por sopro (BFS) pode resultar em exposição da formulação à temperaturas elevadas, em adição à agitação e/ou estresse mecânico associado com o processo de enchimento.

[000174] A composição conforme aqui revelada, de preferência, exibe estabilidade aperfeiçoada sob condições particulares. A estabilidade da composição pode, por exemplo, será ensaiada pelo uso de um ou mais métodos aqui descritos, tais como avaliação de aparência visual; espectroscopia de UV; HPLC de exclusão de tamanho (SE-HPLC); HPLC de fase reversa (RP-HPLC); HPLC de troca de cátion (CE- HPLC); turbidez; um teste de contagem de partícula de obscuramento de luz; um teste de contagem de partícula microscópico, ou nível de teor de monômero. Quando avaliações da estabilidade são feitas à base da aparência visual, a opalescência da composição, cor, e teor de particulados são, por exemplo, avaliados. O técnico no assunto está ciente de outros métodos para a avaliação da estabilidade de uma composição.

[000175] Em uma concretização relevante aos vários aspectos da invenção conforme aqui revelada, a composição é estável após armazenagem por um período de pelo menos uma semana, pelo menos duas semanas, pelo menos três semanas, pelo menos quatro semanas, pelo menos cinco semanas, ou pelo menos seis semanas, ou mais longo, tal como 3, 4, 5 ou 6 meses, sob condições ambientes.

[000176] Em uma concretização, a composição é estável à uma temperatura de cerca de 20°C a cerca de 40°C, por exemplo, à uma temperatura de cerca de 25°C a cerca de 35°C, tal como à uma temperatura de cerca de 30°C, por um período de tempo de pelo menos dois dias; três dias; cinco dias; uma semana; dez dias; duas semanas; três semanas; quatro semanas; cinco semanas, ou seis semanas.

[000177] Em uma concretização, a composição é estável à uma temperatura de cerca de 2°C a cerca de 15°C, por exemplo, à uma temperatura de cerca de 2°C a cerca de 8°C, por um período de tempo de pelo menos uma semana; duas semanas; três semanas; quatro semanas; cinco semanas; seis semanas; oito semanas, 16 semanas, 20 semanas, 25 semanas, 30 semanas, 35 semanas, 40 semanas, 45 semanas, um mês, dois meses, três meses, quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, oito meses, ou mais, tal como 1 a 5 anos.

[000178] Exemplos

[000179] Material e métodos gerais

[000180] Os seguintes materiais e métodos foram usados nos Exemplos abaixo. A solução de estoque de anakinra: 220 mg/mL de anakinra em CSE (isto é, citrato, sal, EDTA) tampão: 10 mM de citrato de sódio, 140 mM de cloreto de sódio, 0,5 mM de EDTA, pH 6,5.

[000181] Métodos de HPLC foram efetuados de acordo com protocolos de padrão domésticos. Para análise de cromatografia de exclusão de tamanho (SE-HPLC), uma coluna de TSK-Gel G2000 SWXL 7,8 mm x 30 cm foi usada. A fase móvel foi tampão de CSE, o volume de injeção / concentração foi 100 µL / 5 mg/mL, o comprimento de onda foi 280 nm, e a taxa de fluxo foi 0,5 mL/min.

[000182] Para análise de cromatogragia líquida de alta pressão de troca de cátion (CE-HPLC), uma coluna de Tosoh SP5PW Protein Pak 7,5 mm x 7,5 cm foi usada, a fase móvel A foi 20 mM de MES, pH 5,5, e fase móvel B foi 20 mM de MES, 1 M de NaCl, pH 5,5. O volume de injeção / concentração foi 100 µL / 5 mg/mL, o comprimento de onda foi 280 nm, e a taxa de fluxo foi 0,5 mL/min.

[000183] Para análise de cromatografia líquida de fase reversa, coluna Phenomenex Jupiter C4 RP 250 x 4,6 mm foi usada. A fase móvel A foi 0,1% de TFA em água, e a fase móvel B foi 0,1% de TFA em 90% de Acetonitrila. O volume de injeção/concentração foi 50 µL / 0,3 mg/mL, o comprimento de onda foi 215 nm, e a taxa de fluxo foi 1 mL/min.

[000184] Observações visuais foram feitas nas composições por meio de inspeção da solução em um recipiente de vidro circular, contra um pano de fundo preto e branco. Opalescência (turbidez) e particulados visuais foram notados.

[000185] A turbidez das composições foi quantificada usando um Turbodímetro HACH 2100AN. Os valores de turbodímetro são quotados em unidades de turbidez nefelométricas (NTU) onde um valor numérico representa grau de turbidez ou opalescência de uma solução. EXEMPLO 1

[000186] Estabilidade de composições de osmólito a 35°C

[000187] Solução de estoque de anakinra foi diluída a 30 mg/mL de anakinra em composições de osmólito com ou sem NaCl. Onze osmólitos diferentes foram testados conforme segue:

[000188] Solução de estoque de anakinra diluída com soluções aquosas de osmólitos em água deionizada, composições 1-11. As concentrações de NaCl, citrato e EDTA após diluição da solução de estoque de anakinra em tampão de CSE com as soluções aquosas de osmólito: NaCl = 19,1 mM (1,12 mg/ml); citrato = 1,36 mM; EDTA = 0,07 mM, e

[000189] Solução de estoque de anakinra diluída com soluções aquosas de osmólitos em 19,2 mM de NaCl, composições 12-22. Concentrations de NaCl, citrato e EDTA após diluição da solução de estoque de anakinra em tampão de CSE com as soluções aquosas de NaCl - osmólito: NaCl = 38,2 mM (2,24 mg/ml); citrato = 1,36 mM; EDTA = 0,07 mM.

[000190] As composições (22 no todo) foram ajustadas para pH 6,5 +/- 0,1, armazenadas a 35°C e monitoradas por 2 semanas. Tabela 1. Composições de anakinra (30 mg/mL) diluída com soluções de osmólito. Todas as composições contêm 1,36 mM de tampão de citrate, e 0,07 mM de EDTA.

[000191] Mudanças mínimas foram observadas ambas em termos de teor de monômero por SE-HPLC, e medidas turbidez por período de análise de 2 semana; contudo, as composições contendo NaCl foram visualmente mais claras do que aquelas preparadas com água deionizada.

[000192] Quatro composições de osmólito proporcionaram aperfeiçoamentos à base da aparência visual, com teor de particulado oticamente claro e mínimo após 2 semanas a 35°C: 12 (prolina + NaCl), 18 (hidroxiprolina + NaCl), 19 (taurina + NaCl) e 22 (manitol + NaCl.

[000193] Estas quatro composições foram visualmente mais claras comparadas a outras composições, mostrando que estes quatro osmólitos proporcionaram um efeito de estabilização na anakinra. EXEMPLO 2

Formulação de anakinra em vários tampões Formulação em tampão de HEPES

[000194] Solução de estoque de anakinra foi diluída a 60 mg/mL de proteína em tampão de CSE, e dialisada em 10 mM de HEPES, 38,2 mM de NaCl, pH 6,3, 6,5 e 6,9. Em todos os casos, 10 mL de solução de proteína foi dialisada contra 2 x 2L de tampão.

[000195] Após diálise, as composições foram adicionalmente diluídas a 30 mg/mL de anakinra com 10 mM de Tampão de HEPES contendo vários osmólitos, e 38,2 mM de NaCl, tal que as composições seriam isotônicas em um alvo de 280-320 mOsm/kg. No todo, 12 composições foram preparadas (4 osmólitos a pH 6,3, 6,5 e 6,9, respectivamente), e armazenadas a 35°C, com análise total a t = 0, 2, 4 e 8 semanas. Como uma referência, anakinra 30 mg/mL em CSE foi usada. Esta composição foi armazenada e testada sob condições idênticas como as outras composições.

[000196] A concentração medida por 280 nm de UV não indicou perda de proteína pelo período de análise de 8 semanas. Após armazenagem, existe uma redução no teor de monômero para todas as amostras conforme medido por SE-HPLC. O teor de monômero de anakinra medido por SE-HPLC após 4 semanas foi significantemente mais alto do que em tampão de HEPES comparada ao tampão de CSE (> 99,0% vs 97,9%).

[000197] Foi identificado que após 2 semanas de armazenagem a 35°C, foi geralmente melhor para anakinra formulada em tampão de HEPES do que anakinra formulada em tampão de CSE. Em comparação, a turbidez de 30 mg/mL de solução de anakinra em tampão de CSE a pH 6,5, armazenada por 2 semanas a 35°C, foi 15,6 de NTU. Dados comparáveis para anakinra formulada em tampão de HEPES a pH 6,5 com osmólitos foi 6-9 de NTU após duas semanas de armazenagem. Para amostras a pH 6,3 e 6,9, os valores de turbidez foram em todos os casos, exceto um (prolina, pH 6.3) melhores do que a turbidez de anakinra em tampão de CSE no mesmo pH. Para anakinra, amostras em tampão de HEPES a pH 6,5 incluindo prolina, hidroxiprolina, taurina ou manitol, turbidez foi baixa mesmo após 8 semanas, ver Tabela 2 abaixo. Tabela 2: Turbidez de anakinra formulada em tampão de HEPES incluindo osmólito.

Formulação de anakinra em tampão de His HCl

[000198] Solução de estoque de anakinra foi diluída a 60 mg/mL de anakinra em CSE, e dialisada em 10 mM His de HCl, 38,2 mM de NaCl, pH 6,5.

[000199] Após diálise, as composições foram adicionalmente diluídas a 30 mg/mL de anakinra em várias ocmposições de osmólito (taurina, hidroxiprolina, prolina, manitol) também contendo 10 mM de His HCl e 38,2 mM de NaCl, tal que as composições seriam isotônicas em um alvo de 280 mOsm/kg. As composições foram armazenadas a 35°C, e análise total foi efetuada a t = 0, 2 e 4 semanas.

[000200] A concentração de proteína medida não mostrou perda de teor de proteína após 4 semanas a 35°C. • método de análise de SE-HPLC mostrou uma redução no teor de monômero; contudo, muitas composições contendo anakinra em tamãpo His foram superior à anakinra em tampão de CSE, ver Tabela 3. Tabela 3: Teor de monômero de anakinra formulada em tampão His incluindo osmólito após armazenagem a 35°C.

Formu ação de anakinra em tampão Tris HCl

[000201] A solução de estoque de anakinra foi diluída a 60 mg/mL de anakinra em tampão de CSE, e dialisada em 10 mM de Tris HCl, 38,2 mM de NaCl, pH 6,5.

[000202] Após diálise, as composições foram adicionalmente diluídas a 30 mg/mL de anakinra em várias composições de osmólito também contendo 10 mM de Tris HCl e 38,2 mM de NaCl, tal que as composições seriam isotônicas em um alvo de 280 mOsm/kg. As composições foram armazenadas a 35°C, e análise total foi efetuada a t = 0, 2 e 4 semanas.

[000203] Similarmente, as composições não mostraram perda de teor de proteína após medição de concentração de proteína após 4 semanas a 35°C. SE-HPLC mostrou uma leve diminuição no teor de monômero após aemazenagem a 35°C, mas a diminuição foi geralmente inferior à anakinra no tampão de CSE, ver Tabela 4. Tabela 4:Teor de monômero de anakinra formulada em tampão Tris incluindo osmólito após armazenagem a 35°C.

Conclusão

[000204] Uma comparação da estabilidade de anakinra 30 mg/mL em CSE, HEPES, His e Tris tampão mostrou que a setabilidade após 4 semanas é melhor em HEPES, tampões His e Tris do que em CSE. A conclusão total é que tampão de HEPES proporciona ótima estabilidade de anakinra, e que isto se aplica também na presença de um osmólito. Estas composições à base do tampão de HEPES dão o melhor perfil de estabilidade total quando todos os métodos analíticos (concentração de proteína, SE-HPLC e turbidez) foram levedas em consideração.

EXEMPLO 3

[000205] Composições, compreendendo anakinra em tampão de HEPES, e pelo menos um agente osmolítico

Preparação

[000206] Solução de estoque de anakinra congelada foi descongelada e dialisada contra 10 mM de HEPES, NaCl (2,24 mg/mL), EDTA (0,5 mM), polissorbato 80 (PS80: 1 mg/mL), a um pH de 6,5 junto com vários osmólitos.

[000207] Todas as amostras foram dialisadas em uma escala 2 x 12,5 mL contra 2 x 2000 mL de tampão. Após diálise, a solução foi aliquotada e diluída com composição de estoque de osmólitos/NaCl/ EDTA/PS80. As concentrações dos osmólitos foram variadas para obter isotonicidade (280-320 mOsmol/kg) nas composições finais. As composições obtidas são colocadas na Tabela 5. • material diluído foi armazenado em tubos de vidro a 30°C, e avaliado visualmente para turbidez em intervalos regulares durante 2 semanas de armazenagem. Os resultados são apresentados na Tabela 5. Tabela 5: Turbidez de composições de anakinra em tampão de HEPES, 0,19 mg/ml de EDTA, 1 mg/ml de PS80, e outros componentes conforme definidos abaixo.

[000208] Conforme pode ser visto na Tabela 5, as composições de anakinra em tampão de HEPES compreendendo os osmólitos taurina, prolina e manitol, revelaram melhores resultados em termos de turbidez após 14 dias de armazenagem. As composições incluindo o osmólito taurina mostraram resultados superiores do que composições incluundo qualquer dos outros osmólitos.

EXEMPLO 4

[000209] Composições, compreendendo anakinra em tampão de citrato, e pelo menos um osmólito

Preparação

[000210] Solução de estoque de anakinra congelada foi descongelada e diluída com 10 mM de citrato de sódio, 2,24 mg/mL de NaCl, 0,5 mM de EDTA, polissorbato 80 1 mg/mL, pH 6,5, e vários osmólitos. A concentração dos osmólitos foi variada para obter composições isotônicas (cerca de 300 mOsmol/kg). A diluição resulta em composições conforme revelado na Tabela 6 abaixo. • material diluído foi armazenado em tubos de vidro a 30°C, e analisado em intervalos regulares durante 8 semanas de armazenagem. Tabela 6: Turbidez de composições de anakinra em 10 mM de tampão de citrato de sódio, 1 mg/ml de PS80, 2,24 mg/ml de NaCl, 0,19 mg/ml de EDTA, e os componentes definidos abaixo.

[000211] Para composições de anakinra compreendendo tampão de citrato, os osmólitos selecionados proporcionam algum efeito de estabilização, dependendo do osmólito específico e relativo entre si, e mais notavelmente a uma baixa concentração de proteína. Os osmólitos selecionados são taurina, manitol, prolina, metionina, e hidroxiprolina, Osmólitos tais como mioinositol ou sacarose não proporcionam efeito de estabilização.

EXEMPLO 5

[000212] Composições, compreendendo anakinra em uma mistura de tampão de HEPES e tampão de citrato, e pelo menos um osmólito Preparação

[000213] A solução de estoque de anakinra foi diluída para concentrações de anakinra de 2, 15 e 25 mg/mL com uma solução consistindo de 10 mM de HEPES, 2,24 mg/mL de NaCl, 0,5 mM de EDTA, polissorbato 80, 1 mg/mL, pH 6,5, e vários osmólitos.

[000214] A concentração dos osmólitos foi variada para obter composições isotônicas (300 mOsmol/kg). As composições resultantes contêm residuais de citrato de sódio a 0,1, 0,7 e 1,1 mM, respectivamente, para as concentração de anakinra de 25, 15 e 2 mg/mL anakinra. A diluição resultou nas composições apresentadas na Tabela 7. • material diluído foi armazenado em tubos de vidro a 30°C, e analisadas em intervalos regulares durante 8 semanas de armazenagem. Tabela 7: Turbidez de composições de anakinra compreendendo 2,24 mg/ml de NaCl, 0,19 mg/ml de EDTA, 1 mg/ml de PS80, e os componentes definidos abaixo.

[000215] Os resultados confirmaram o efeito de estabilização previamente observado dos osmólitos, desta vez em uma combinação de HEPES e tampão de citrato. Os osmólitos de prolina, hidroxiprolina, taurina, manitol e metionina mostraram efeitos similares na turbidez de 2-25 mg/mL de soluções de anakinra em composições de HEPES/ tampão de citrate. Outros osmólitos, tais como sacarose ou mioinositol, não proporcionam proteção de anakinra conforme exibido no grande aumento de turbidez após armazenagem.

EXEMPLO 6 Estudo de tolerabilidade

[000216] Composições de estoque de anakinra congeladas (no tampão de citrato com NaCl e EDTA) foram descongeladas, aliquotadas e diluídas com composições de estoque de HEPES/NaCl/EDTA/ PS80 e vários osmólitos. As concentrações dos osmólitos foram variadas para obter isotonicidade (280-320 mOsmol/kg) nas composições finais, exceto para a composição hipotônica "K" tendo uma osmolaridade de 200-250 mOsmol/kg. As composições testadas são colocadas na Tabela 8. Tabela 8: Composições testadas para tolerância local.

[000217] Coelhos albinos de estirpe NZW New Zealand White, de qualquer gênero, foram divididos em grupos de três (3). Cada grupo foi testado com uma formulação (Ítem de teste, Tabela 8), O teste foi realizado por instilação de 50 µL da respectiva formulação no olho direito. As instilações foram realizadas durante cinco (5) dias em um regime diariamente conforme descrito acima. Todas as instilações foram realizadas sobre um período de 8 horas durante cada dia.

[000218] 1° dia: cinco (5) instilações de 50 µL nos olhos direitos dentro de 20 min

[000219] 2° dia: duas vezes diariamente instilações de 50 µL no olho direito

[000220] 3° dia: quatro vezes diariamente instilações de 50 µL nos olhos direitos

[000221] 4° dia: seis vezes diariamente instilações de 50 µL nos olhos direitos

[000222] 5° dia: oito vezes diariamente instilações de 50 µL nos olhos direitos

[000223] A avaliação do estudo foi realizada por observações oculares diárias usando o Sistema de classificação de Draize (Draize JH, Woodgard G and Calvery HO. Métodos para o estudo de irritação e toxicidade de substâncias aplicadas topicamente à pele e membranas mucosas, J, Pharmacol, Exp. Ther, 1944; 82: 377-390). As observações foram realizadas em ambos os olhos.

[000224] 1° dia: Sistema de classificação de Draize com um oftalmoscópío: no pré-teste, imediatamente após a primeira administração, então 0,5h, 1h, e 4h após a última administração.

[000225] 2° dia ao 5° dia: Sistema de classificação de Draize com um oftalmoscópío: duas vezes diariamente antes da primeira e após a última administração do dia. Resultados

[000226] Todas as composições foram geralmente bem toleradas quando instiladas no olho, conforme resumido na Tabela 9 abaixo. Observações de vermelhidão da conjuntiva foram feitas em uma ocasião após a instilação inicial em um animal cada por composição para composições com prolina, hidroxiprolina e manitol. Esta foi transiente, e não encontrada durante instilações repetidas. Um dos animais instilados com metinona (teste ítem E) mostraram sinais de opacidade corneal que mais provavelmente representam um trauma corneal que não estava relacionado ao tratamento. É concluído que todas as composições testadas podem ser administradas ocularmente sem efeitos severos de intolerância. Adicionalmente, a composição hipotônica "K" tendo uma osmolaridade de 200-250 mOsmol/kg, não proporciona observações aberrantes. Tabela 9: Resultados de teste de tolerância local

EXEMPLO 7

[000227] Estabilidade de anakinra em concentrações de HEPES diferentes com ou sem osmólitos a 35°C

Preparação

[000228] Solução de estoque de anakinra congelada foi descongelada, diluída a 50 mg/mL de Anakinra, e dialisada por um total de ~18 horas (durante a noite) a 2-8°C contra uma solução de 10, 25 ou 50 mM de HEPES, 38,2 mM de NaCl, a pH 6,5. As soluções resultantes foram aliquotadas e diluídas com soluções diferentes de HEPES / NaCl / osmólito para produzir as composições finais conforme descrito na Tabela 10 abaixo. A concentração dos osmólitos foi variada para obter composições isotônicas (cerca de 280 mOsmol/kg). Estas soluções foram usadas para os experimentos nos Exemplos 7, 8 e 9 abaixo. Tabela 10: Composições de anakinra finais após diluição com soluções de estoque. Todas as composições contêm 2,23 mg/mL de NaCl, e têm um pH de 6,5. As concentrações de taurina e hidroxiprolina foram variadas para alcançar soluções isotônicas, a menos que de outro modo denotado na Tabela. Amostras com 10 mM de citrato também contêm 0,5 mM de EDTA.

[000229] Soluções com 2, 15 e 25 mg/mL de anakinra em tampão de HEPES de três concentrações diferentes e, opcionalmente, com um dos dois osmólitos foram preparadas conforme descrito na Tabela 10 acima. Amostras de controle nas mesmas concentrações de anakinra, mas formuladas em tampão de citrato, foram também preparadas.

[000230] As soluções preparadas foram armazenadas em tubos de vidro a 35°C, e analisadas em intervalos regulares durante 8 semanas, por medição do teor de monômero de anakinra, Os resultados analíticos são revelados na Tabela 11, e para a concentração de proteína 25 mg/mL na FIG 1. Tabela 11: Teor de monômero em % determinado por SEC-HPLC conforme descrito acima, em 2, 15 e 25 mg/mL de composições de anakinra em 10 mM de tampões de citrato ou de HEPES de concentrações diferentes. O tampão de citrato também contém 2,24 mg/ml de NaCl e 0,19 mg/ml de EDTA (0,5 mM), As amostras de HEPES foram opcionalmente formuladas com um dos dois osmólitos diferentes. As concentrações de osmólito são colocadas na Tabela 10 acima,

Conclusões

[000231] Os resultados analíticos na Tabela 11 e FIG 1 mostram que a diminuição no teor de monômero foi maior para amostra com tampão de citrato. As amostras com tampão de HEPES mostram uma diminuição comparativamente maior no teor de monômero. A variação na concentração de HEPES na faixa 10 a 50 mM não afeta a estabilidade de anakinra.

EXEMPLO 8

[000232] Estabilidade de anakinra em concentrações diferentes em HEPES com osmólitos a 35°C

Preparação

[000233] Soluções com 2, 15 e 25 mg/mL de anakinra em tampão de HEPES e osmólitos foram preparadas conforme descrito no Exemplo 7 e Tabela 10 acima. Amostras de controle nas mesmas concentrações de anakinra, mas formuladas em tampão de citrato, foram também preparadas.

[000234] As soluções preparadas foram armazenadas em tubos de vidro a 35°C e analisadas em intervalos regulares durante 8 semanas. Os resultados analíticos são revelados na Tabela 12 e para a concentração de proteína 2, 15 e 25 mg/mL na FIG 2. Tabela 12: Teor de monômero em % de anakinra determinado por SEC- HPLC, conforme descrito acima, em composições de anakinra em tampões de citrato ou de HEPES. Os 10 mM de tampão de citrato de sódio contêm 2,24 mg/ml de NaCl, 0,19 mg/ml de EDTA (0,5 mM). O tampão de HEPES contém os componentes definidos abaixo. As concentrações de osmólito são colocadas na Tabela 10 acima.

Conclusões

[000235] Os resultados analíticos na Tabela 12 e FIG 2 mostram que a diminuição no teor de monômero foi maior para amostra com tampão de citrate. As amostras com tampão de HEPES mostram uma diminuição comparativamente menor no teor de monômero do que aquelas amostras que contêm tampão de citrate. Os dois osmólitos taurina ou hidroxiprolina mostram efeitos de estabilização similares.

EXEMPLO 9 Estabilidade de anakinra em composições de HEPES com ou sem osmólitos a 35°C

[000236] Soluções com 15 mg/mL de anakinra em tampão de HEPES e osmólitos foram preparadas conforme descrito no Exemplo 7 e Tabela 10 acima. Amostras de controle nas mesmas concentrações de anakinra, mas formuladas em tampão de citrato, foram também preparadas.

[000237] As soluções preparadas contendo anakinra 15 mg/mL formuladas em 10 mM de HEPES com ou sem osmólitos, ou em 10 mM de tampão de citrato sem osmólitos, foram armazenadas em tubos de vidro a 35°C, e analisadas em intervalos regulares durante 8 semanas de armazenagem. Os resultados analíticos são revelados na Tabela 13 e FIG 3. Tabela 13: Teor de monômero em % determinado por SEC-HPLC conforme descrito acima, em 15 mg/mL de composições de anakinra em 10 mM de tampões de citrato ou de HEPES. O tampão de citrato também contém 2,24 mg/ml de NaCl e 0,19 mg/ml de EDTA (0,5 mM). As amostras de HEPES foram formuladas com ou sem osmólitos. As concentrações de osmólito são colocadas na Tabela 10 acima.

Conclusões

[000238] Os resultados analíticos na Tabela 13 e FIG 3 mostram que a diminuição no teor de monômero foi maior para o experimento 103 contendo citrato, mas sem HEPES ou osmólitos. Os outros experimentos mostraram uma diminuição na ordem 117, 118 > 104, 107, Para experimentos sem osmólitos, o tampão de HEPES gena menos diminuição de monômero de anakinra do que tampão de citrato, Em todos os experimentos onde HEPES e um ou dois osmólitos são incluídos, a diminuição no teor de monômero é inferior a experimentos com HEPES sem qualquer osmólito.

Claims (27)

1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende: 0,01 mg/mL a 30 mg/mL de anakinra; tampão, selecionado a partir de HEPES e uma mistura de HEPES e citrato de sódio; e pelo menos um osmólito, selecionado do grupo consistindo em taurina, manitol, metionina, prolina e hidroxiprolina.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido tampão é tampão de HEPES.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o referido tampão estabiliza o pH da composição a um pH de 6 a 7.

4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que compreende 2 mg/mL a 30 mg/mL de anakinra.

5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um osmólito é selecionado a partir de taurina e hidroxiprolina.

6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um osmólito é taurina.

7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um osmólito é hidroxiprolina.

8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um ou mais de um agente quelante, um tensoativo, e um regulador de tonicidade.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o referido agente quelante é EDTA, o referido tensoativo é polissorbato 80, e o referido regulador de tonicidade é NaCl.

10. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que o tampão estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5.

11. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que a concentração de referido osmólito é ajustada para proporcionar uma composição isotônica.

12. Composição, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a referida composição tem uma osmolaridade de 280 a 320 mOsmol/kg.

13. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que a concentração de referido osmólito é ajustada para proporcionar uma composição hipotônica.

14. Composição, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que a referida composição tem uma osmolaridade de 150 a 280 mOsmol/kg.

15. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende: • 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra; • 5 mM a 50 mM de tampão de HEPES, no qual referido tampão estabiliza o pH da composição a pH de 6 a 7; e • 1 mg/mL a 100 mg/mL de um osmólito selecionado a partir de taurina e hidroxiprolina.

16. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende: • 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra; • 5 mM a 50 mM de tampão de HEPES, no qual referido tampão estabiliza o pH da composição a pH de 6 a 7; • 1 mg/mL a 100 mg/mL de um osmólito selecionado a partir de taurina, prolina, hidroxiprolina, manitol e metionina; • 0,05 mM a 1 mM de EDTA; • 0,01% a 1% de polissorbato 80; e • 0,1 mg/mL a 5 mg/mL de NaCl.

17. Composição, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizada pelo fato de que o referido tampão é 10 mM de tampão de HEPES, que estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5.

18. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um osmólito representa 15 mg/mL a 40 mg/mL de taurina.

19. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um osmólito representa 20 mg/mL a 40 mg/mL de taurina.

20. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um osmólito representa 20 mg/mL a 40 mg/mL de hidroxiprolina.

21. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que compreende: • 5 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra; • 10 mM de tampão de HEPES, que estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5; e • cerca de 30 mg/mL de taurina.

22. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que compreende • 5 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra; • 10 mM de tampão de HEPES, que estabiliza o pH da composição a cerca de 6,5; • 0,5 mM de EDTA; • 0,1% de Polissorbato 80; • 1 mg/mL a 1,5 mg/mL de NaCl; e • cerca de 30 mg/mL de taurina.

23. Composição, de acordo com a reivindicação 21 ou 22, caracterizada pelo fato de que compreende de cerca de 15 mg/mL a cerca de 25 mg/mL de anakinra.

24. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende: • 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra; • 10 mM - 50 mM de tampão de HEPES; e • 15 mg/mL - 25 mg/mL de taurina.

25. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende: • 2 mg/mL a 25 mg/mL de anakinra; • 10 mM - 50 mM de tampão de HEPES; e • 15 mg/mL - 25 mg/mL de hidroxiprolina.

26. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizada pelo fato de que é armazenada em um recipiente de dose única ou recipiente de multidose.

27. Uso de uma composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizada pelo fato de que é para preparação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio oftálmico em um indivíduo, e/ou de um distúrbio ocular inflamatório em um indivíduo, e/ou de distúrbio oftálmico relacionado a IL-1 em um indivíduo, e/ou de síndrome primária ou secundária de Sjogren, síndrome de Não Sjogren; distúrbio do olho seco, ceratite sicca, síndrome de sicca, xeroftalmia, distúrbio do filme lacrimal, produção lacrimal diminuída, deficiência lacrimal aquosa, olho seco associado com doença de enxerto-versus-hospedeiro, disfunção da glândula meibomiana, condições inflamatórias da superfície ocular da córnea, neovascularização da córnea, ceratite, cicatrização da ferida da córnea, transplante/ceratoplastia da córnea, cirurgia da queratoprótese, transplante lamelar, transplante endotelial seletivo, distúrbios de cicatrização conjuntival, conjuntivite alérgica, síndrome penfigoide, síndrome de Stevens-Johnson, oftalmia simpatética, síndrome de Vogt- Koyanagi Harada (VKH), retinocoriodopatia de birdshot, penfigoide cicatricial ocular, iridociclite heterocrônica de Fuch, retinopatia diabética, edema macular diabético, doença oftálmica da toreoide, ectropion/entropion, alergia de lente de contato, ou doença do olho seco, em um indivíduo.