BR112017017229B1 - Composto, composto para uso médico ou na preparação de um medicamento e composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

COMPOSTO, COMPOSTO PARA USO MÉDICO OU NA PREPARAÇÃO DE UM MEDICAMENTO E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA. A presente invenção refere-se a compostos dotados com atividade inibitória de DDX3 de RNA helicase das fórmulas I e II e seu uso terapêutico, em particular para o tratamento de doenças virais.

Description

Campo da Invenção

[0001] A presente invenção refere-se a compostos com atividade inibitória de DDX3 de RNA helicase e seu uso terapêutico, em particular para o tratamento de doenças virais.

Técnica Anterior DDX3 e infecções virais

[0002] Os vírus são parasitas intracelulares obrigatórios e, como tal, eles exploram os mecanismos metabólicos de seus hospedeiros a fim de replicar (Alquist et al., 2003, Prussia et al., 2011). Tal habilidade extraordinária depende das interações específicas entre o vírus e os componentes principais da maquinaria celular. As análises transcriptômicas em todo o genoma e telas de siRNA revelaram que o número de proteínas hospedeiras envolvidas na resposta à infecção viral e/ou importantes para o ciclo de vida viral, excede 1.000 para vírus tais como HIV-1 (M. Friedrich et al., 2011) e HCV (Rupp et al., 2014). Dentre os caminhos consistentemente encontrados para serem destinados pelos vírus estão a resposta imune inata e caminhos envolvidos no metabolismo de RNA. A compreensão da rede complexa de interações de hospedeiro-patógeno pode prover novos caminhos para o tratamento de infecções virais, de fato, a identificação de fatores celulares essenciais para replicação viral provê totalmente novos alvos para abordagens alternativas para tratar infecções virais. O direcionamento de cofatores celulares de infecção viral pode, em princípio, limitar a ocorrência de resistência à droga, já que as proteínas celulares são menos propensas para mutar do que a proteínas virais (Garbelli et al., 2011). A fim de limitar a possibilidade de sérios efeitos colaterais devido à inibição de funções celulares normais da proteína alvo, é importante selecionar uma proteína que seja absolutamente essencial para o vírus, mas não para as células, e para direcionar apenas funções específicas da proteína alvo ou diretamente a interface de interação viral.

[0003] Estudos recentes revelaram que o polipeptídeo 3 DEAD-box ligado a X de ATPase celular/RNA helicase (DDX3) é fator de hospedeiro essencial para replicação de diferentes vírus. Cavignac et al. recentemente demonstraram que DDX3 está envolvida na replicação de vírus ssDNA. O estudo relatou que DDX3 representa um fator celular pró-viral que é supra regulado em células infectadas por Citomegalovírus. A expressão de DDX3 parece estar também envolvida no ciclo de vida de diversos vírus -ssRNA tais como Vírus de Lassa e Pneumovírus (Easton et al. 2015). A literatura mostrou claramente o papel dessa proteína humana na replicação viral de +ssRNA.

[0004] Além disso, Jefferson et al. recentemente identificaram DDX3 tal como uma Protease N-Terminal, proteína Npró-interação com papéis pró-virais. As interações descritas no papel sugeriram que muitos outros vírus também visam esse caminho celular. Particularmente, suas funções são conhecidas por serem exploradas por vírus que pertencem a diferentes famílias: Vírus da Imunodeficiência Humana 1 (HIV-1, Retroviridae), (Yedavalli et al., 2004), Vírus da Hepatite C (Owsianka et al., 1999), Vírus da Encefalite Japonesa, Vírus da Dengue (Noble et al., 2010), Vírus do Nilo Ocidental (respectivamente, HCV, JEV, DV, WNV Flaviviridae), Vírus Vaccinia (Schroder M et al., 2008), (VACV, Poxviridae), Norovírus (Vashit et al., 2012), (NV, Caliciviridae).

[0005] HIV-1 e HCV representam alguns dos patógenos humanos mais clinicamente importantes e economicamente relevantes. HIV-1 é o agente etiológico da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS) e é atualmente responsável por uma pandemia afetando >30.000.000 de pessoas em todo o mundo. HCV é um agente causativo tanto de hepatite aguda quanto crônica, infectando mais de 170 milhões de pessoas em todo o mundo. A maioria das infecções por HCV progride para cronicidade, levando, em última análise, em 20% dos casos para cirrose hepática e carcinoma hepatocelular (HCC). NV foi apenas recentemente reconhecido como o agente etiológico principal da gastroenterite alimentícia não bacteriana em todo o mundo (Glass et al., 2009). Isso equivale a >20.000.000 de casos a cada ano nos Estados Unidos sozinho com complicações severas e mesmo morte em torno de 800 casos por ano. NVs são agora reconhecidos como a segunda causa mais comum de morte nos EUA devido à doença gastrointestinal e o número de casos está aumentando. NVs foram ligados a várias doenças clínicas significativas; enterocolite necrosante, convulsões em bebês, encefalopatia, pneumatosis intestinalis e coagulação intravascular disseminada, bem como algumas outras. A infecção nos idosos e imunocomprometidos causa infecções crônicas a longo prazo (>1 ano) e pode resultar em morte. Dados clínicos indicam infecção do sistema nervoso. Atualmente, as drogas não estão disponíveis para tratamento de infecções por NV e há uma necessidade urgente para desenvolver tratamento para pacientes com NV a longo prazo e cronicamente infectados. O tratamento de HCV é eficaz em apenas cerca de 50% dos pacientes infectados com genótipo 1b, o mais amplamente circulante na Europa. E enquanto a eficácia dos regimes de tratamento atuais contra HCV tem recentemente melhorado com a adição de novos antivirais, esses visam apenas um genótipo do vírus e têm uma taxa aumentada de efeitos adversos, baixa tolerância e alto custo. Os problemas de terapia antirretroviral para HIV-1 são bem conhecidos: apesar de mais de 30 drogas aprovadas, as terapias atuais ainda são incapazes de erradicar o vírus do paciente infectado. Além disso, a eficácia da terapia de HIV-1 é frequentemente reduzida pelo desenvolvimento da resistência à droga. Assim, há uma necessidade urgente para melhorar nosso arsenal terapêutico a fim de confrontar esses vírus, os quais afetam milhões de pessoas em todo o mundo e colocam pressão substancial em nossos sistemas de saúde. Dado o envolvimento de DDX3 como um tema comum no ciclo de vida desses vírus, é um alvo empolgante para o desenvolvimento de novos compostos antivirais. O direcionamento de DDX3 pode mesmo oferecer a possibilidade de tratar simultaneamente HCV e HIV na coorte relativamente grande de pacientes coinfectados.

[0006] A primeira molécula pequena projetada para inibir a atividade ATPase de DDX3 (FE15, Ki = 5,4 μm) foi identificada por Maga et al. em 2008. Curiosamente, FE15 inibiu a replicação de HIV-1 (IIIB) em células MT4 com um EC50 de 86,7 μm, sem mostrar citotoxicidade (CC50 > 200 μm em MOLT-4 T- linfocítico). No mesmo ano, Yedavalli et al. identificaram os nucleosídeos expandidos no anel REN como ligantes DDX3 por meio de uma triagem biológica em uma biblioteca de inibidores conhecidos NTPase/helicase. Os derivados de REN foram capazes de inibir a atividade dependente de ATP de DDX3 e replicação de HIV-1 suprimida em células T e macrófagos derivados de monócito. Em 2011, um protocolo de otimização de sucesso em FE15 levou à identificação de inibidores DDX3 de segunda geração dotados de um perfil de atividade melhorado (como um exemplo FE109 que mostra um Ki de 0,2 μm). Além disso, os inibidores adicionais foram identificados com uma estrutura principal de triazina, com o melhor, FE87, que mostrou um Ki de 0,1 μm em DDX3, um valor de EC50 de 2,0 μm na inibição de carga viral de células mononucleadas de sangue periférico (PBMCs) infectadas com HIV e uma citotoxicidade de 20 μm em células HeLa (Índice de Seletividade = 10). Entretanto, mesmo se algum grau de seletividade tiver sido encontrado em experimentos in vitro, os principais inconvenientes de tal ATP mimético poderiam ser representados por uma baixa seletividade in vivo. Schütz et al., recentemente propôs um mecanismo geral para a abertura do local de ligação de RNA. Essa observação, acoplada com a presença de um resíduo conservado essencial para a atividade helicase, sugeriu que um inibidor capaz de visar esse local poderia trancar a DDX3 de helicase em uma conformação cataliticamente inativa. Nesta base, os primeiros inibidores de replicação de HIV-1 especificamente designados para visar o local de ligação de DDX3 RNA foram descobertos. Dentre eles, EI01D mostrou o melhor valor de atividade que é dotado com uma EC50 de 10 μm na inibição de carga viral de PBMCs infectadas com HIV.

A família DDX3 de RNA helicases

[0007] As helicases DEAD-box estão envolvidas em todos os aspectos do metabolismo de RNA. Seu papel é pensado para ser o desenrolamento de RNA, isto é, a remoção de motivos estruturais secundários, o desenrolamento de interações de RNA-RNA curtas e também a remoção de proteínas de ligação de RNA (Yang et al., 2006), DDX3 é uma ATPase/RNA helicase contendo todos os nove motivos conservados que caracterizam os membros da superfamília de RNA helicase incluindo o motivo Asp-Glu-Ala-Asp (D-E-A-D) epônimo, dentro de um elemento de núcleo estruturalmente conservado formando dois domínios tipo RecA. Os motivos de helicase conservados estão envolvidos na ligação de ATP, atividade ATPase, ligação de substrato de RNA e desenrolamento (Linder et al., 2004). A estrutura de cristal de DDX3 mostra que esses motivos conservados são encontrados em dois subdomínios conectados através de um ligante flexível curto. DDX3 contém um sinal de exportação nuclear (NES) em seu terminal N. O domínio amino-terminal 1 contém os Motivos de ligação de ATP Q, I (Walker A) e II (Walker B), e os Motivos de ligação de RNA Ia, Ib e o Motivo III. Os Motivos de ligação de RNA IV, V e Motivo VI, os quais podem coordenar a ATPase e atividades de desenrolamento, são encontrados no domínio de terminal carboxila 2.

Papéis celulares de DDX3

[0008] DDX3 foi postulada para estar envolvida em muitos caminhos metabólicos celulares. Evidência recente sugere que DDX3 está envolvida na exportação nuclear de mRNA em associação com outras proteínas de transporte CRM1 e TAP. O mecanismo proposto é que DDX3 liga tanto mRNAs quanto TAP no núcleo e subsequentemente ajudam a facilitar a exportação de mRNPs para o citoplasma. A interação com CRM1 parece ser importante apenas para a exportação de RNAs não emendados ou incompletamente emendados de HIV (Kohler A, et al., 2007). DDX3 interage com fatores de iniciação de tradução eIF4E, eIF4A, eIF4G, PABP e eIF3. Recentemente, Marsden e colegas de trabalho, demonstraram um papel para DDX3 na melhoria da tradução de um subconjunto específico de mRNAs celulares e virais que carregam características estruturais específicas dentro de suas 5’- UTRs.

[0009] Essas estruturas de RNA devem ser localizadas imediatamente adjacentes à estrutura da tampa para ser desenrolada por DDX3 a fim de preparar o mRNA para ligação de ribossoma.

DDX3 e regulamento de transcrição

[0010] DDX3 regula para baixo E-Caderina (Botlagunta et al., 2008) e estimula interferon (IFN) e expressão de p21 pela interação com seus respectivos promotores (Schroder et al., 2008). O efeito de DDX3 no promotor de IFN é independente de sua atividade ATPase ou função de desenrolamento, enquanto a função de ATPase é requerida para estimulação de promotor p21. Imunidade inata

[0011] O sistema imunológico inato é responsável pela detecção precoce de infecção viral, ao detectar ácidos nucleicos virais citoplásmicos através do subconjunto endossomal de receptores do tipo Toll (TLRs) e as helicases do tipo RIG (RLHs). Ambos os sistemas receptores levam à ativação dos fatores de transcrição NF-kB e IRF3 e IRF7, estimulando assim a produção de interferons antivirais do tipo I. DDX3 interage com as proteínas cinases IKKε e TBK-1, as cinases que fosforilam e ativam IRF3 e IRF7. Curiosamente, essa função de DDX3 é independente de ATPase (Schroder, et al., 2008). Além disso, DDX3 foi encontrada para interagir com IPS-1, a proteína adaptadora que facilita a sinalização de RLH e para ligar diretamente ao promotor de ifnb seguindo sua fosforilação por TBK1. Assim, enquanto há forte evidência que DDX3 humana contribui para indução de IFNβ, sua colocação exata nos caminhos de sinalização e mecanismo de ação não está clara. Schroeder et al. sugerem que DDX3 melhora diretamente a ativação de IKKε que age como um adaptador de estruturação a jusante que medeia a ativação coordenada de IKKε e IRF3. Foi mostrado que a produção de IFNα mediada por TLR7 após infecção por HIV contribui para ativação imune excessiva e imunopatologia. DDX3 poderia, portanto, também estar envolvida na ativação imune excessiva que contribui para a patologia de HIV, sugerindo que DDX3 inibidora pode ter benefício duplo no contexto de infecção por HIV.

DDX3 e replicação de Norovírus

[0012] O uso de um NV de camundongo como um modelo substituto para o NV humano geneticamente intimamente relacionado, junto com o sistema replicon de NV humano recentemente desenvolvido, permitiu o estudo do mecanismo de tradução de genoma de NV e replicação na cultura de célula. Vashist e colegas de trabalho demonstraram recentemente que DDX3 está associada com o genoma de RNA de NV durante a replicação nas células. É importante salientar durante a replicação de NV, DDX3 redistribui a partir de uma coloração citoplasmática amplamente difusa em uma coloração mais pontual que parcialmente sobrepõe com o local de replicação de vírus e o silenciamento de expressão de DDX3 significativamente reduz a replicação do vírus. A proteômica quantitativa baseada em SILAC confirmou que DDX3 foi enriquecida no complexo de replicação de NV.

DDX3 e replicação de HIV-1

[0013] A replicação de HIV-1 requer a exportação nuclear e tradução de derivados não divididos, individualmente divididos e multiplicados por partes dessa transcrição inicial. Os mRNAs completamente divididos codificam as proteínas regulatórias virais Tat, Rev e Nef. Rev é um fator de exportação de mRNA nuclear específico de sequência que se liga ao elemento de resposta de Rev (RRE) para mediar a exportação nuclear do complexo de Rev/RNA, através da interação com o receptor de exportação celular CRM1 e o cofator celular DDX3. Foi descoberto que a expressão de DDX3 é induzida nas células infectadas por HIV-1 pelo ativador transcricional viral Tat e o silenciamento de DDX3 abrogou a exportação de transcrições de HIV-1 não divididas/parcialmente divididas (Yedavalli, 2004). Entretanto, os detalhes moleculares de papel(eis) de DDX3 nesse caminho ainda estão por ser esclarecidos. Por exemplo, DDX3 não foi requerida para a exportação dependente de CRM1 de transcrições endógenas celulares, aumentando a possibilidade intrigante que essa função de DDX3 pode ser específica para RNAs de HIV-1. Além de seu papel na exportação de RNA viral, Ohlmann e colegas de trabalho mostraram que a redução do knock-down de DDX3 resulta na inibição específica de tradução de RNA genômico não dividido. Curiosamente, como mostrado para HCV e Norovírus, DDX3 também é encontrada em uma coloração pontual citoplasmática que colocaliza com o RNA genômico de HIV-1.

DDX3 e vírus (-)ssRNA

[0014] Foi descrito o envolvimento de DDX3 no ciclo de vida de diversos vírus -ssRNA tais como Vírus de Lassa e Pneumovírus (Easton et al. 2015). A família Filoviridae pertence à mesma classe de vírus e inclui o vírus Ebola e Marburg. A epidemia de Ebola entre 2014 e 2015 na África Ocidental suscitou preocupações sobre o risco de um surto difuso e de bioterrorismo; além disso, apesar da doença ter sido declarada erradicada no final de 2015, recentemente novos casos foram registrados. A inibição de DDX3 pode contrastar os efeitos da infecção e interromper a difusão através de inibição da replicação viral.

DDX3 e vírus (+)ssRNA

[0015] Os vírus do Grupo IV são caracterizados por um genoma de RNA de sentido positivo, que pode ser traduzido diretamente na proteína. A cadeia de RNA positivo serve como um modelo para uma polimerase dependente de RNA, produzindo um RNA de cadeia dupla que serve como modelo.

[0016] Os vírus de Classe IV são classificados em seis subclasses: Picornaviridae, Togaviridae, Coronaviridae, Hepevirdae, Caliciviridae, Flaviviridae e Astroviridae.

[0017] Estudos recentes demonstram claramente que DDX3 está envolvida na replicação dos vírus +ssRNA.

[0018] A Flaviviridae é uma grande família que consiste em três gêneros: Flavivírus, Pestivírus e Hepacivírus. Flaviviridae causa doenças significativas em populações humanas e de animais. Dentre eles, o gênero Flavivírus compreende: Vírus da Febre Amarela (YFV), Vírus da Encefalite Transmitida por Carrapatos (TBEV), Vírus da Encefalite Japonesa (JEV), Vírus da Dengue (DENV), Vírus do Nilo Ocidental (WNV) e Vírus da Zika (ZIKV). Recentemente, um surto de infecção do vírus da Zika, que é considerado a causa de defeito de nascença como microcefalia, explodiu no Brasil e os casos são relatados em outros países. Há uma necessidade urgente para contrastar a infecção e sua disseminação em todo o mundo com vacinas ou tratamentos; com base no envolvimento de DDX3 na replicação do vírus +ssRNA, os inibidores DDX3 podem inibir a replicação viral intracelular reduzindo as infecções, bem como sua disseminação.

[0019] Os Pestivírus são patógenos animais de maior importância econômica. O Pestivírus infecta mamíferos tais como bovinos e suínos e são a principal causa de síndromes hemorrágicas, aborto e doenças fatais da mucosa. Dentre eles, Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), Vírus da Doença de Fronteira (BDV) de carneiros, e Vírus da Febre Suína Clássica (CSFV). Jefferson et al recentemente identificaram DDX3 tal como proteína Npró- interação que pode ter papéis pró-virais. As interações descritas no artigo sugerem que muitos outros vírus também visam esse caminho celular. O gênero Hepacivírus inclui apenas o Vírus da Hepatite C (HCV).

DDX3 e replicação do Vírus da Hepatite C

[0020] HCV carrega um genoma de RNA de cadeia positiva que replica no citoplasma. Os complexos de replicação de RNA viral estão associados com a chamada rede membranosa composta de membranas derivadas de ER e gotas de lipídio (LDs). A composição precisa da rede membranosa é atualmente desconhecida, mas pensa-se que pode conter vários hospedeiros, bem como fatores virais. Owsianka e colegas de trabalho mostraram que a proteína de núcleo de HCV especificamente sequestra DDX3 de sua distribuição citoplasmática difusa normal para replicação de vírus/locais de montagem em LDs. A mutação de um dos resíduos chave na proteína de núcleo que são críticos para sua interação com DDX3 (Y35) mostrou que a interação de núcleo-DDX3 é dispensável para crescimento de vírus e morfogênese, entretanto, DDX3 em si é essencial para replicação de vírus. Esse papel duplo de DDX3 no contexto de infecção por HCV garante investigação adicional. Por outro lado, o sequestro de DDX3 por HCV é provável que afete as funções celulares de DDX3. Portanto, será importante investigar como a infecção por HCV modula a expressão de gene dependente de DDX3. Isso revelará se HCV manipula o papel de DDX3 na resposta imune antiviral e se o sequestro de DDX3 está ligado ao desenvolvimento do carcinoma hepatocelular.

DDX3 e replicação de JEV

[0021] O Vírus da Encefalite Japonesa (JEV) pertence à família flaviviridae e é transmitido entre hospedeiros animais e humanos por mosquitos Culex. A Encefalite Japonesa é predominante em todo o Leste e Sul da Ásia e o Círculo de Fogo. (Usha Kant Misra et al. 2010). Mao e colegas de trabalho demonstraram recentemente que DDX3 de helicase celular está envolvida na replicação de JEV. De fato, a redução da expressão de DDX3 inibe a replicação de JEV sugerindo que a atividade helicase de DDX3 é crucial para replicação viral. Os experimentos suspensos por GST e co-imunoprecipitação demonstraram que DDX3 poderia interagir com proteínas não estruturais de JEV 3 e 5. A co-imunoprecipitação e análise de microscópio confocal confirmaram que DDX3 interage e colocaliza com essas proteínas virais e RNA viral durante a infecção. Além disso, elas determinam que DDX3 se liga às regiões não traduzidas 5’ e 3’ de JEV. Usando um sistema replicon de JEV, eles demonstram que DDX3 regula positivamente a tradução de RNA viral, o qual pode afetar a replicação de RNA viral no estágio tardio da infecção por vírus.

DDX3 e replicação de DENV

[0022] O Vírus da Dengue (DENV) é um dos cinco sorotipos que causam a dengue. É um vírus de RNA de cadeia positiva única transmitido pelo mosquito da família Flaviviridae; gênero Flavivírus. Todos os cinco sorotipos podem causar o espectro completo da doença. Para determinar se as proteínas celulares foram requeridas para infecção por DENV, Khadka e colegas de trabalho usaram pequenos RNAs interferentes para inibir sua expressão. Dentre eles, DDX3 causou uma diminuição significativa na replicação de um replicon de DENV.

Replicação de DDX3 e WNV

[0023] Vírus do Nilo Ocidental (WNV) é um Flavivírus que pode causar infecção séria e potencialmente fatal do sistema nervoso central, com até 10% de mortalidade em humanos. O vírus poderia ser transmitido pelos mosquitos e pássaros selvagens. Humanos são principalmente infectados através de picadas de mosquito, mas a infecção pode ocorrer através de transplante de órgão e sangue.

[0024] A maioria dos casos clínicos é leve e presente com sintomas tipo gripe. Diversos casos com sinais de encefalite, meningo-encefalite ou meningite, são mais frequentemente observados dentre os idosos. Como isso afeta países na Europa a cada ano, a Febre do Nilo Ocidental é agora reconhecida como a principal causa de preocupação de saúde pública nessa região.

[0025] Harendra e colegas de trabalho demonstraram recentemente que diversos cofatores celulares estão envolvidos na replicação de WNV. Em particular, DDX3 é recrutada para os locais de replicação viral, conforme evidenciado por sua colocalização na região perinuclear com NS3 viral.

DDX3 e tênias

[0026] Equinococose (doença hidatida) e cisticercose, causadas pela proliferação de tênias larvais em órgãos vitais, estão dentre as doenças parasíticas mais graves em humanos e representam 2 das 17 Doenças Tropicais Negligenciadas priorizadas pela Organização Mundial de Saúde. As tênias larvais podem persistir assintomaticamente em um hospedeiro humano por décadas, eventualmente causando um espectro de patologias debilitantes e morte. Quando diagnosticada, a doença está frequentemente em um estágio avançado quando a cirurgia não é mais uma opção. As infecções por tênias são altamente predominantes em todo o mundo, e sua carga de doença humana foi estimada em 1 milhão de anos de vida ajustados por deficiência, comparável com tripanossomíase africana, cegueira do rio e dengue. As tênias (Platelmintos, Cestoda) são passivamente transmitidas entre os hospedeiros e parasitas virtualmente a cada espécie de vertebrado. Recentemente, Brindley e colegas de trabalho identificaram que enquanto vasa está ausente dos genomas de cestódeos e trematódeos, três genes do tipo DDX3, Smvlg1, Smvlg2, e Smvlg3, foram caracterizados em S. mansoni. Os perfis de expressão dessas helicases DEAD-box sugerem que eles desempenhem papéis similares à Vasa incluindo funções relacionadas à GMP e para manutenção de célula-tronco. O silenciamento de Smvlg3 indicou que essa enzima do tipo DDX3 é necessária para proliferação e manutenção de células germinais no esporocisto, uma população de células que compartilham uma assinatura molecular com neoblastos (células-tronco totipotentes adultas) de planarianos. Smvlg1, Smvlg2, e Smvlg3 podem ter assumido o papel de vasa e exibem assinaturas similares à GMP de outros metazoanos junto com os neoblastos de planarianos. À luz dessas observações, é plausível que essas RNA helicases do tipo DDX3 em esquistossomos poderiam realizar o papel de Vasa no caminho de piRNA. Por essas razões, o desenvolvimento de inibidores DDX3 poderia representar uma estratégia atrativa para o tratamento de infecções por tênias.

Sumário da Invenção

[0027] A presente invenção provê compostos capazes de suprimir as funções enzimáticas da proteína celular DDX3 (Polipeptídeo 3 DEAD; Ref. Seq. NP_001347), ou seja, desenrolamento de DNA/RNA (helicase).

[0028] Os compostos apresentados na presente invenção (Fórmulas I e II) demonstraram: 1. A capacidade de seletivamente suprimir a atividade enzimática da DDX3 in vitro; 2. A capacidade de suprimir a replicação de HIV-1 em células infectadas; 3. A capacidade de suprimir a replicação de HCV em células infectadas; 4. A capacidade de suprimir a replicação de JEV em células infectadas; 5. A capacidade de suprimir a replicação de WNV em células infectadas; 6. A capacidade de suprimir a replicação de DENV em células infectadas; 7. A capacidade de suprimir a replicação de NOROV em células infectadas; 8. A capacidade de suprimir a replicação de PRRSV em células infectadas; 9. A capacidade de suprimir a replicação do Vírus Ebola (EBOV) em células infectadas;

[0029] A presente invenção provê um composto da fórmula: em que X e Y são, cada um, independentemente, C ou N; A é arila não substituída ou substituída ou heteroarila não substituída ou substituída, em que o um ou mais substituintes na arila ou heteroarila são independentemente selecionados entre alquila C1-C6 não substituída ou substituída, alquenila C2-C6 não substituída ou substituída, alquinila C2-C6 não substituída ou substituída, haloalquila, halogênio, ORA, SRA, S(=O)(=O)-RA, SO2NHRA, COORB, OC(O)RB, C(O)RB, NRARB, OP(O)(ORA)2, NHC(O)RA, COONRARB, OS ou em que o um ou mais substituintes na alquila C1-C6 ou na alquenila C2- C6 ou na alquinila C2-C6 são independentemente selecionados entre ORA, COORB, OC(O)RB, C(O)RB NRARB, OP(O)(ORA)2, NHC(O)RA, NHC(O)ORA, COONRARB, SRA, S(=O)(=O)-RA, SO2NHRA; R1, R2, R3, R4, R6, R7 e R10 são, cada um, independentemente selecionados entre H, halogênio, alcóxi, alquila C1-C6, haloalquila, ORA, SRA, S(=O)(=O)-RA, SO2NHRA, COORB, OC(O)RB, NRARB, OP(O)(ORA)2, NHC(O)RA, COONRARB, NO2, CN, R2, R4, R7e R10 estão ausentes quando X e/ou Y for N; Z é um grupo heteroarila selecionado entre: em que R5 é H, alquila C1-C10 ou haloalquila C1-C8 não substituída ou substituída, fenila não substituída ou substituída, em que o um ou mais substituintes na alquila C1-C10 são independentemente selecionados entre halogênio, ORA, COORB, OC(O)RB, C(O)RB, NRARB, OP(O)(ORA)2, OC(O)NRARB, NHC(O)ORA, NHC(O)RA, COONRARB, OC(O)CHCHRC, em que o um ou mais substituintes na haloalquila são independentemente selecionados entre alcóxi, fenila, OH, COORB, OC(O)RB, C(O)RB, NRARB, OP(O)(ORA)2, OC(O)NRARB, NHC(O)ORA, NHC(O)RA, COONRARB, OC(O)CHCHRC em que o um ou mais substituintes na fenila são independentemente selecionados entre halogênio, haloalquila, alcóxi, alquila C1-C3, OH; RA e RB são, cada um, independentemente selecionados entre H, alquila C1-C6, aralquila não substituída ou substituída, haloalquila, ou RA e RB, com o nitrogênio ao qual são ligados, formam um anel saturado ou parcialmente insaturado de 4 a 7 membros opcionalmente contendo um ou mais heteroátomos adicionais independentemente selecionados entre N, S e O, sendo o anel opcionalmente substituído por um, dois ou mais grupos independentemente selecionados entre halogênio, alquila C1-C6, haloalquila, OH, alcóxi; RC é fenila substituída ou não substituída, 1,3-benzodioxolila, em que o um ou mais substituinte(s) na fenila são independentemente selecionados entre halogênio, haloalquila, alcóxi, alquila C1-C3, ou OH; em que o um ou mais substituintes na fenila são independentemente selecionados entre halogênio, haloalquila, alcóxi, alquila C1-C3, OH; R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados entre H, halogênio, alcóxi, COOH, nitro e pelo menos um de R8 e R9 é um grupo heteroarila selecionado entre: ou sal, solvato, estereoisômero destes, contanto que os compostos: sejam excluídos.

[0030] Preferivelmente, X e Y são C.

[0031] Preferivelmente, A é arila substituída. Mais preferivelmente; X e Y são C e A é arila substituída.

[0032] Ainda, mais preferivelmente, a arila substituída é fenila, preferivelmente substituída por um, dois ou mais grupos independentemente selecionados entre metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH, OMe.

[0033] Em outra realização preferida, A é heteroarila não substituída ou substituída, preferivelmente a heteroarila é piridinila ou isoquinolinila.

[0034] Mais preferivelmente; X e Y são C e A é heteroarila não substituída ou substituída, preferivelmente a heteroarila é piridinila ou isoquinolinila.

[0035] Preferivelmente, a piridinila ou isoquinolinila é substituída por um, dois ou mais grupos independentemente selecionados entre metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH, OMe.

[0036] Preferivelmente, RA e RB, com o nitrogênio ao qual são ligados, formam um anel saturado de 6 membros contendo um ou mais heteroátomos adicionais independentemente selecionados entre N e O, sendo o anel selecionado entre: - morfolinila - piperazinila opcionalmente substituídas por um, dois ou mais grupos independentemente selecionados entre alquila C1-C6, haloalquila, OH, alcóxi.

[0037] Preferivelmente, o composto da invenção é da fórmula I, em que Z é selecionado entre:

[0038] Em uma realização preferida, o composto da invenção é da fórmula I, em que Z é selecionado entre:e R5 é butila, terc-butila, metila, etila, isopentila, n-hexanila, fenila, CH2OH, CH2CH2OH, CH2CH2OCH3, CH2OCH2CH3, CHOHCH(CH3)(CH2CH2CH3), CH2CH2COOH, CH2CH2CH2N(CH3)2, CH2NRARB, CH2CH2NRARB, CH2CH2CH2NRARB, CH2CH2N(CH3)CH2C6H5, CH2CH2OP(O)(OCH3)2, CH2CH2OC(O)CHCH-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ila), CH2CH2OC(O)CH2CH(CH3)2, C4F9, CH2CH2CH2F ou CHFCH(CH3)(CH2CH2CH3) ou RA e RB, com o nitrogênio ao qual são ligados, formam um anel saturado de 6 membros selecionado entre: - morfolinila - piperazinila opcionalmente substituídas por um, dois ou mais grupos independentemente selecionados entre alquila C1-C6, haloalquila, OH, alcóxi.

[0039] Preferivelmente, o composto da invenção é da fórmula I, em que Z é selecionado entre:e A é fenila, piridinila ou isoquinolinila, sendo preferivelmente cada um independentemente substituído por um, dois ou mais grupos independentemente selecionados entre metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH ou OMe, e R5 é butila, terc-butila, metila, etila, isopentila, n-hexanila, fenila, CH2OH, CH2CH2OH, CH2CH2OCH3, CH2OCH2CH3, CHOHCH(CH3)(CH2CH2CH3), CH2CH2COOH, CH2CH2CH2N(CH3)2, CH2NRARB, CH2CH2NRARB, CH2CH2CH2NRARB, CH2CH2N(CH3)CH2C6H5, CH2CH2OP(O)(OCH3)2, CH2CH2OC(O)CHCH-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ila), CH2CH2OC(O)CH2CH(CH3)2, C4F9, CH2CH2CH2F, CHFCH(CH3)(CH2CH2CH3), ou RA e RB, com o nitrogênio ao qual são ligados, formam um anel saturado de 6 membros selecionado entre: - morfolinila - piperazinila opcionalmente substituídas por um, dois ou mais grupos independentemente selecionados entre alquila C1-C6, haloalquila, OH, alcóxi, e X e Y são C, e R1, R3, R4 são H, e R2 é H, F ou OMe.

[0040] Preferivelmente, o composto da invenção tem a fórmula II, em que um entre R8 ou R9 é selecionado entre:e o outro entre R8 ou R9 é H.

[0041] Preferivelmente, o composto da invenção tem a fórmula II, em que um entre R8 ou R9 é selecionado entre:e o outro entre R8 ou R9 é H,e A é fenila, preferivelmente substituída por metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH ou OMe.

[0042] Preferivelmente, o composto da invenção tem a fórmula II, em que um entre R8 ou R9 é selecionado entre:e o outro entre R8 ou R9 é H, e A é fenila, preferivelmente substituída por metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH, ou OMe, e R5 é H, butila, isopentila ou CH2OCH2CH3, e X e Y são C, e R6, R7e R10 são H.

[0043] Preferivelmente, o composto da invenção tem a fórmula II, em que um entre R8 ou R9 é selecionado entre: e o outro entre R8 ou R9 é H, e A é fenila, preferivelmente substituída por metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH ou OMe, e R5 é H, butila, isopentila ou CH2OCH2CH3, e X e Y são C, e R6, R7e R10 são H.

[0044] Preferivelmente, o composto da invenção tem a fórmula II, em que um entre R8 ou R9 é selecionado entre: e o outro entre R8 ou R9 é H, e A é isoquinolinila e R5 é H, butila, isopentila ou CH2OCH2CH3, e X e Y são C, e Re, R7e R10 são H.

[0045] Preferivelmente, o composto da invenção tem a fórmula II, em que um entre R8 ou R9 é selecionado entre: e o outro entre R8 ou R9 é H, e A é fenila, preferivelmente substituída por metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH ou OMe, e R5 é H, e X e Y são C, e Re, R7e R1o são H.

[0046] Preferivelmente, o composto da fórmula I ou II é selecionado da seguinte lista: ou sal, solvato, estereoisômero destes.

[0047] Mais preferivelmente, o composto da fórmula I ou II é selecionado da seguinte lista: ou sal, solvato, estereoisômero destes.

[0048] Preferivelmente, o composto da fórmula I ou II da invenção é um inibidor de DDX3.

[0049] Preferivelmente, o composto da fórmula I ou II, conforme definido acima, é para uso médico.

[0050] Em uma realização preferida, o composto da invenção para uso médico tem a fórmula II, em que R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados entre H, halogênio, alcóxi, COOH, e pelo menos um de R8 ou R9 é nitro ou grupo heteroarila selecionado entre:

[0051] Preferivelmente, o composto da invenção para uso médico tem a fórmula II, em que um entre R8 ou R9 é nitro.

[0052] Preferivelmente, o composto da invenção para uso médico tem a fórmula II, em que R8 é nitro e R9 é H ou R8 é H e R9 é nitro e A é fenila, preferivelmente substituída por metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH, ou OMe.

[0053] Preferivelmente, o composto da invenção para uso médico tem a fórmula II, em que R8 é nitro e R9 é H ou R8 é H e R9 é nitro e A é fenila, preferivelmente substituída por metila, isopropila, CF3, F, Cl, OH, ou OMe, e X e Y são C, e R6, R7e R10 são H.

[0054] A presente invenção provê, adicionalmente, um composto da fórmula I ou II conforme definido acima ou um sal farmacêutico aceitável, solvato, estereoisômero destes para uso no tratamento de uma doença viral.

[0055] Preferivelmente, a doença viral é modulada por DDX3.

[0056] Preferivelmente, a doença viral é causada por um vírus selecionado do grupo que consiste em: Vírus da Imunodeficiência Humana 1 (HIV-1), Vírus da Hepatite C, Vírus da Hepatite B, Vírus da Encefalite Equina do Oeste, Vírus da Encefalite Equina Venezuelana, Vírus da Encefalite Japonesa, Vírus da Encefalite Transmitida por Carrapatos, Vírus da Febre Amarela, Vírus da Encefalite de St. Louis, Vírus da Encefalite de Murray Valley, Vírus de Powassan, Vírus da Dengue, Vírus da Zika, Vírus do Nilo Ocidental, Vírus da Rubéola, Citomegalovírus, Vírus da O’nyong’nyong, Vírus Mayaro, Vírus do Rio Ross, Vírus Sindbis, Vírus da Encefalite Equina do Leste, Vírus Vaccinia, Vírus Influenza, Norovírus, Coronavírus da SRAG, Vírus da Chikunguya, Vírus de Lassa, Vírus Ebola, Vírus Lujo, Pneumovírus, Vírus da Síndrome de Febre Grave com Trombocitopenia, Vírus da Síndrome Reprodutiva e Respiratória dos Suínos, Poxvirus, Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), Vírus da Doença de Fronteira (VDF) de carneiros, e Virus da Febre Suína Clássica (VFSC).

[0057] Preferivelmente, o composto da fórmula I ou II, conforme definido acima, ou um sal farmacêutico aceitável, solvato, estereoisômero deste, é para uso no tratamento de uma doença viral causada por um vírus selecionado do grupo que consiste em: Vírus da Imunodeficiência Humana 1 (HIV-1), Vírus da Hepatite C, Vírus do Nilo Ocidental, Vírus da Dengue, Vírus da Encefalite Japonesa, Vírus da Síndrome Reprodutiva e Respiratória dos Suínos, Vírus Ebola, Vírus da Zika. Ainda, preferivelmente para uso no tratamento de uma doença viral causada por um vírus selecionado do grupo que consiste em: Vírus Ebola e Vírus da Zika.

[0058] Preferivelmente, o composto da fórmula I ou II para uso como medicamento ou para uso no tratamento de uma doença viral, é selecionado da seguinte lista:

[0059] A invenção provê ainda uma composição farmacêutica que compreende o composto das fórmulas I ou II da invenção e excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0060] Preferencialmente, a composição farmacêutica compreende, ainda, pelo menos um agente antiviral.

[0061] Ainda preferencialmente, o agente antiviral é selecionado do grupo que consiste em: um inibidor de transcriptase reversa de análogo de nucleosídeo ou não nucleosídeo, um inibidor de transcriptase reversa de análogo de nucleotídeo, um inibidor de serina protease NS3/4A, um inibidor de polimerase NS5B ou alfa interferon.

[0062] Na presente invenção:

[0063] O termo “substituído” significa que o grupo ou porção especificada tem qualquer átomo de hidrogênio, independentemente em cada átomo de carbono, átomo de nitrogênio ou outro átomo, que pode ser independentemente substituído por um substituinte.

[0064] O termo “halogênio” ou “halo” se refere a flúor, cloro, bromo ou iodo.

[0065] O termo “alquila” se refere a um radical de cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificado, consistindo unicamente em átomos de carbono e hidrogênio. Exemplos adequados da dita alquila incluem, entre outros, metila, etila, n-propila, isopropila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, terc- pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decanila, hexadecanila, eicosanila, etc.

[0066] O termo “alquila C1-C10” se refere a um radical de cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificado, consistindo unicamente em átomos de carbono e hidrogênio, tendo de um a dez átomos de carbono. Exemplos adequados de C1-10 alquila incluem, entre outros, metila, etila, n-propila, isopropila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, terc-pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decanila.

[0067] O termo “alquila C1-C6” se refere a um radical de cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificado, consistindo unicamente em átomos de carbono e hidrogênio, tendo de um a seis átomos de carbono. Exemplos adequados de alquila C1-C6 incluem, entre outros, metila, etila, n-propila, isopropila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, terc-pentila, hexila.

[0068] O termo “alquila C1-C3” se refere a um radical de cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificado, consistindo unicamente em átomos de carbono e hidrogênio, tendo de um a três átomos de carbono. Exemplos adequados de alquila C1-C3 são metila, etila, n-propila.

[0069] O termo “alquenila C2-C6” se refere a um radical de cadeia de hidrocarboneto não saturado linear ou ramificado, contendo pelo menos uma ligação dupla de carbono-carbono, consistindo unicamente em átomos de carbono e hidrogênio, tendo de dois a seis átomos de carbono. Exemplos adequados de alquenila C2-C6 incluem, entre outros, etenila, propenila, alila, isobutenila, pentenila, prenila, esenila, etc.

[0070] O termo “alquinila C2-C6” se refere a um radical de cadeia de hidrocarboneto não saturado linear ou ramificado, contendo pelo menos uma ligação tripla de carbono-carbono, consistindo unicamente em átomos de carbono e hidrogênio, tendo de dois a seis átomos de carbono. Exemplos adequados de alquinila C2-C6 incluem, entre outros, acetilenila, etinila, propinila, etc.

[0071] O termo grupo “haloalquila” é um grupo alquila linear ou ramificado, em que pelo menos um átomo de hidrogênio no átomo de carbono é substituído por halogênio e alquila é conforme definido aqui acima.

[0072] “Haloalquila” preferencialmente é um grupo haloalquila C1-C10 linear ou ramificado, mais preferencialmente grupo haloalquila C1-C8, mais preferencialmente grupo haloalquila C1-C6 linear ou ramificado, também preferencialmente é um grupo haloalquila C1-C4 linear ou ramificado, ou um grupo haloalquila C1-C2, sendo em particular, CHFCH(CH3)(CH2CH2CH3), CH2CH2CH2F, C4F9, CF3, CHF2, CH2F.

[0073] O termo “haloalquila C1-C10” se refere ao grupo alquila linear ou ramificado tendo de um a dez átomos de carbono em que pelo menos um hidrogênio em um átomo de carbono é substituído pelo halogênio e alquila é como definido aqui acima. A definição análoga é para haloalquila C1-C8, haloalquila C1-C6, haloalquila C1-C4 e haloalquila C1-C4 tendo de um a oito, um a seis e um a quarto ou um a dois átomos de carbono respectivamente.

[0074] O termo “alcóxi” indica uma unidade orgânica que tem a fórmula geral -OR, em que R é um alifático. Um grupo alcóxi pode ser, por exemplo, metóxi e etóxi. Exemplos adequados de grupos alcóxi incluem, entre outros, propóxi, isopropóxi, isobutóxi e terc-butóxi.

[0075] O termo “arila” representa um sistema de anel aromático mono ou bicíclico de, respectivamente, 6, 9 ou 10 átomos, exemplos adequados de tal arila são fenila, iondenila, indanila e naftila.

[0076] O termo “aralquila” representa qualquer radical univalente derivado de um radical alquila pela substituição de um ou mais átomos de hidrogênio por grupos arila, em que a arila é como definido aqui acima. Exemplos adequados de tal aralquila são benzila.

[0077] “Grupo substituído por aralquila” significa que qualquer átomo de hidrogênio em cada átomo de carbono independentemente pode ser independentemente substituído por um substituinte, exemplos adequados de substituintes incluem, entre outros, F, Cl, Br, CF3, alquila O-C1-C6, alquila C1C6, OH, alquila COC1-C6, alquila COOC1-C6.

[0078] O termo “heteroarila” significa um anel aromático monocíclico ou policíclico de 5 a 12 membros compreendendo átomos de carbono, átomos de hidrogênio e um ou mais heteroátomos, preferencialmente, de 1 a 3 heteroátomos, independentemente selecionados dentre nitrogênio, oxigênio e enxofre. Exemplos ilustrativos de grupos heteroarila incluem, entre outros, piridinila, piridazinila, pirimidila, pirazila, triazinila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, (1,2,3,)- e (1,2,4)-triazolila, pirazinila, tetrazolila, furila, tienila, isoxazolila, tiazolila, isoxazolila, oxazolila, indazolila, indolila, benzoimidazolila, quinolila, isoquinolinila e similares.

[0079] Os sais dos compostos da presente invenção também estão englobados dentro do escopo da invenção. Por causa de seu uso potencial na medicina, os sais dos compostos da fórmula I e II são preferencialmente farmaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados compreendem sais não tóxicos convencionais obtidos por salificação de um composto da fórmula I e II com ácidos inorgânicos (por exemplo, ácidos clorídrico, bromídrico, sulfúrico ou fosfórico), ou com ácidos orgânicos (por exemplo, ácidos acético, propiônico, succínico, benzoico, sulfanilico, 2-acetóxi-benzoico, cinâmico, mandélico, salicílico, glicólico, lático, oxálico, málico, maleico, malônico, fumárico, tartárico, cítrico, p- toluenossulfônico, metanossulfônico, etanossulfônico ou naftalenossulfônico). Para revisões em sais farmacêuticos adequados, consulte (32).

[0080] Além disso, os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com uma base orgânica ou inorgânica adequada tal como trietilamina, etanolamina, trietanolamina, diciclo-hexilamina, hidróxido de amônio, piridina. O termo “base inorgânica”, como usado aqui, tem seu significado comum como entendido por um técnico no assunto e amplamente se refere a um composto inorgânico que pode agir como um receptor de próton. O termo “base orgânica”, como usado aqui, também tem seu significado comum como entendido por um técnico no assunto e amplamente se refere a um composto orgânico que pode agir como um receptor de próton.

[0081] Outros sais farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem sais de metal alcalino e metal alcalino terroso farmaceuticamente aceitáveis tais como sais de sódio, potássio, cálcio ou magnésio; em particular, os sais farmaceuticamente aceitáveis de uma ou mais porções de ácido carboxílico que podem estar presentes no composto da fórmula I e II.

[0082] Outros sais, os quais não são farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, o sal de trifluoroacetato pode ser útil na preparação de compostos dessa invenção e esses formam um aspecto adicional da invenção. A invenção inclui dentro de seu escopo todas as formas estequiométricas e não estequiométricas possíveis dos sais dos compostos da fórmula I e II.

[0083] Além disso, os compostos da fórmula I e II podem existir em formas não solvatadas, bem como solvatadas com solventes farmaceuticamente aceitáveis tais como água, EtOH e similares.

[0084] Certos compostos da fórmula I e II podem existir nas formas estereoisoméricas (por exemplo, elas podem conter um ou mais átomos de carbono assimétricos). Os estereoisômeros individuais (enantiômeros e diastereômeros) e misturas desses estão incluídos dentro do escopo da presente invenção. A presente invenção também cobre os isômeros individuais dos compostos representados pela fórmula I e II como misturas com isômeros desses em que um ou mais centros quirais são invertidos. As misturas racêmicas podem ser separadas para dar seu enantiômero individual usando HPLC preparativa usando uma coluna com fase estacionária quiral ou resolvida para render enantiômeros individuais utilizando métodos conhecidos dos técnicos no assunto. Além disso, os compostos intermediários quirais podem ser resolvidos e usados para preparar enantiômeros individuais.

[0085] Os compostos da invenção ou solvatos/hidratos dos compostos da fórmula I e II ou sais podem existir em uma ou mais formas polimórficas. A invenção se estende para todas essas formas se em uma forma polimórfica pura ou quando misturada com qualquer outro material, tal como outra forma polimórfica.

[0086] Os compostos da fórmula I e II podem existir na forma zwitteriônica. Igualmente, entende-se que os compostos da fórmula I e II podem existir nas formas tautoméricas diferentes daquela mostrada na fórmula e essas também estão incluídas dentro do escopo da presente invenção.

[0087] Será estimado pelos técnicos no assunto que certos derivados protegidos dos compostos da invenção, que podem ser feitos antes de um estágio de desproteção final, podem não possuir atividade farmacológica como tal, mas podem, em certos casos, ser administrados de forma oral ou parentérica e, depois disso, metabolizados no corpo para formar compostos definidos no primeiro aspecto que são farmacologicamente ativos. Tais derivados podem, portanto, ser descritos como “pró-drogas”. Todos os derivados protegidos e pró-drogas dos compostos definidos no primeiro aspecto estão incluídos dentro do escopo da invenção. Exemplos de pró- drogas adequadas para os compostos da presente invenção são descritos em Drug of Today, Volume 19, Nuber 9, 1983, pp 499-538 e em Topics in Chemistry, Chapter 31, pp 306-316 e em “Design of Prodrugs” por H. Bundgaard, Elsevier, 1985, Chapter 1 (a revelação na qual o documento é incorporado aqui por referência). Será estimado adicionalmente pelos técnicos no assunto que certas porções, conhecidas dos técnicos no assunto como “pró- porções”, descrita por H. Bundgaard, em “Design of Prodrugs” (a revelação na qual o documento é incorporado aqui por referência) podem ser colocadas em funcionalidades apropriadas quando tais funcionalidades estão presentes dentro do composto definido no primeiro aspecto.

[0088] A invenção também inclui todas as variações isotópicas adequadas de um composto da invenção. Uma variação isotópica de um composto da invenção é definida como uma, na qual pelo menos um átomo é substituído por um átomo que tem o mesmo número atômico, mas uma massa atômica diferente da massa atômica usualmente encontrada na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem 2 3 13 14 15 17 18 31 32 35 18 36 s topos tas como H, H, C, C, N, O, O, P, P, S, F e Cl, respectivamente. Certas variações isotópicas da invenção, por exemplo, aquelas em que um isótopo radioativo tal como 3H ou 14C é incorporado, são úteis nos estudos de distribuição de tecido de droga e/ou substrato. Além disso, a substituição com isótopos, tais como deutério 2H, pode proporcionar certas vantagens terapêuticas que resultam de maior estabilidade metabólica. As variações isotópicas dos compostos da invenção podem geralmente ser preparadas por procedimentos convencionais tais como pelos métodos ilustrativos ou pelas preparações descritas nos exemplos a seguir usando variações isotópicas apropriadas de reagentes adequados.

[0089] Na presente invenção, uma patologia ou doença viral modulada por DDX3 é definida como uma patologia que pode ser induzida, desencadeada ou melhorada pela atividade e/ou expressão de proteína DDX3. A atividade de DDX3 pode ser medida por técnicas conhecidas na técnica, por exemplo, pela medição de atividade enzimática da proteína. A expressão de DDX3 também é medida por métodos comumente usados na técnica. Os compostos da presente invenção são particularmente adequados para o tratamento de pacientes que são resistentes a pelo menos um tratamento atualmente usado para infecção por HIV. Por exemplo, os pacientes resistentes aos inibidores de RT, inibidores de PR e/ou inibidores de IN.

[0090] Na presente invenção, os compostos como definido acima e excipiente ou diluentes adequados podem ser administrados em combinação com composição farmacêutica de drogas aprovadas para o tratamento das infecções por HIV-1 como parte da terapia antirretroviral altamente ativa (HAART).

[0091] A composição farmacêutica da invenção pode compreender uma combinação de pelo menos dois dos compostos da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável desses, e excipientes e/ou diluentes adequados e podem ser também administrados em combinação com composições farmacêuticas de drogas aprovadas para o tratamento das infecções por HCV como parte de terapia combinatória anti-HCV multidroga.

[0092] A composição farmacêutica da invenção pode compreender uma combinação de pelo menos dois dos compostos da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável desses, e excipientes e/ou diluentes adequados e pode ser também administrada em combinação com composições farmacêuticas de drogas aprovadas para o tratamento de cânceres como parte de terapia combinatória de câncer multidroga.

[0093] Preferencialmente, a composição farmacêutica que compreende pelo menos um ou dois dos compostos da invenção junto com pelo menos um composto aprovado para o tratamento de infecções por HIV-l está na mesma formulação ou um sal farmaceuticamente aceitável desses, e excipientes e/ou diluentes adequados para serem administrados como tal. Na presente invenção, os compostos da invenção ou seus sais podem ser administrados como puros ou como formulações farmacêuticas, isto é, adequados para administrações parentéricas, orais ou retais. Cada uma das ditas formulações pode conter excipientes e/ou cultivadores e/ou aditivos e/ou aglutinantes, revestimentos e/ou agentes de suspensão e/ou agentes emulsificantes, conservantes e/ou agentes de liberação de controle adequados para a forma farmacêutica selecionada. É um objetivo adicional da invenção um método para inibir a DDX3 de RNA helicases DEAD-box humanas que compreende colocar em contato o composto da invenção ou a composição como definido acima com DDX3 humana, inibindo assim a atividade de DDX3.

[0094] É um objetivo adicional da invenção um método para tratar uma doença viral em uma célula, compreendendo colocar a célula em contato com o composto ou a composição da invenção.

[0095] A invenção também provê composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um composto dessa invenção ou um sal ou solvato farmacêutico aceitável desse e um ou mais portadores, excipientes e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

[0096] As composições farmacêuticas podem ser escolhidas com base nas exigências de tratamento. Tais composições são preparadas por mistura e são adequadamente adaptadas para administração oral ou parentérica, e como tal podem ser administradas na forma de comprimidos, cápsulas, preparações orais, pós, grânulos, pílulas, soluções líquidas injetáveis ou infusíveis, suspensões, supositórios, preparação para inalação. Os comprimidos e cápsulas para administração oral são normalmente apresentados em dose unitária e contêm excipientes convencionais tais como aglutinantes, preenchedores (incluindo celulose, manitol, lactose), diluentes, agentes de compactação, lubrificantes (incluindo esterato de magnésio), detergentes, desintegrantes (por exemplo, polivinilpirrolidona e derivados de amido tais como amido de glicolato de sódio), agentes colorantes, agentes aromatizantes e agentes umectantes (por exemplo, lauril sulfato de sódio).

[0097] As composições sólidas orais podem ser preparadas por métodos convencionais de mistura, preenchimento ou compactação. A operação de mistura pode ser repetida para distribuir o princípio ativo por todas as composições que contêm grandes quantidades de preenchedores. As preparações líquidas orais podem estar na forma de, por exemplo, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, xaropes ou elixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou com um veículo adequado antes do uso. Tais preparações líquidas podem conter aditivos convencionais tais como agentes de suspensão, por exemplo, sorbitol, xarope, metil celulose, gelatina, hidroxietil celulose, carboximetil celulose, gel de estearato de alumínio ou gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes emulsionantes, tais como lecitina, mono-oleato sorbitano, ou acácia; veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), tais como óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos tais como ésteres de glicerina, propileno glicol ou álcool etílico; conservantes, tais como p- hidroxibenzoato de metila ou propila ou ácido sórbico e, se desejado, agentes colorantes e aromatizantes convencionais. As formulações orais também incluem formulações de liberação lenta convencionais tais como comprimidos ou grânulos entericamente revestidos.

[0098] A preparação farmacêutica para administração por inalação pode ser liberada a partir de um insuflador ou um pacote pressurizado de nebulizador.

[0099] Para administração parentérica, as dosagens unitárias de fluido podem ser preparadas, contendo o composto e um veículo estéril. O composto pode ser suspenso ou dissolvido, dependendo do veículo e da concentração. As soluções parentéricas são normalmente preparadas por dissolução do composto em um veículo, esterilizando por filtração, preenchendo frascos adequados e vedando. Vantajosamente, os adjuvantes tais como anestésicos locais, conservantes e agentes de tamponamento também podem ser dissolvidos no veículo. Para aumentar a estabilidade, a composição pode ser congelada após ter preenchido os frascos e removido a água sob vácuo. As suspensões parentéricas são preparadas substancialmente da mesma maneira, exceto que o composto pode ser suspenso no veículo em vez de ser dissolvido e esterilizado por exposição ao óxido de etileno antes de suspender no veículo estéril. Vantajosamente, um tensoativo ou agente umectante pode ser incluído na composição para facilitar a distribuição uniforme do composto da invenção.

[0100] A fim de aumentar a biodisponibilidade, os compostos podem ser formulados farmaceuticamente em lipossomas ou em nanopartículas. Os lipossomas aceitáveis podem ser neutros, negativa ou positivamente carregados, a carga sendo uma função da carga dos componentes do lipossoma e pH da solução do lipossoma. Os lipossomas podem ser normalmente preparados usando uma mistura de fosfolipídeos e colesterol. Os fosfolipídeos adequados incluem fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, ácido fosfatídico, fosfotidilglicerol, fosfatidilinositol. Polietileno glicol pode ser adicionado para melhorar o tempo de circulação sanguínea de lipossomas. As nanopartículas aceitáveis incluem nanopartículas de albumina e nanopartículas de ouro.

[0101] Para administração bucal ou sublingual, as composições podem ser comprimidos, drágeas, pastilhas ou gel.

[0102] Os compostos podem ser farmaceuticamente formulados como supositórios ou enemas de retenção, por exemplo, contendo bases de supositórios convencionais tais como manteiga de cacau, polietileno glicol, ou outros glicerídeos para administração retal.

[0103] Outros meios de administração dos compostos da invenção se referem ao tratamento tópico. As formulações tópicas podem conter, por exemplo, pomadas, cremes, loções, géis, soluções, pastas e/ou podem conter lipossomas, micelas e/ou microesferas. Exemplos de pomadas incluem pomadas oleaginosas tais como óleos vegetais, gorduras animais, hidrocarbonetos semissólidos, pomadas emulsionáveis tais como sulfato de hidroxiestearina, lanolina anidra, petrolato hidrofílico, álcool cetílico, monoestearato de glicerol, ácido esteárico, pomadas solúveis em água contendo polietileno glicóis de vários pesos moleculares. Cremes, como conhecidos dos especialistas em formulação, são líquidos viscosos ou emulsões semissólidas e contêm uma fase oleosa, um emulsionante e uma fase aquosa. A fase oleosa geralmente contém petrolato e um álcool tal como álcool cetílico ou esteárico. As formulações adequadas para administração tópica no olho também incluem colírios, em que o princípio ativo é dissolvido ou suspenso em um portador adequado, especialmente um solvente aquoso para o princípio ativo.

[0104] Um método adicional de administração dos compostos da invenção se refere à distribuição transdérmica. As formulações transdérmicas tópicas compreendem vetores convencionais aquosos e não aquosos, tais como cremes, óleos, loções ou pastas ou podem estar na forma de membranas ou emplastros medicamentosos.

[0105] Uma referência para as formulações está no livro por Remington (33).

[0106] Os compostos da presente invenção podem ser empregados para uso no tratamento e/ou prevenção das condições mencionadas acima sozinhas como uma terapia única ou em combinação com outros agentes terapêuticos por administrações separadas ou pela inclusão de dois ou mais princípios ativos na mesma formulação farmacêutica. Os compostos podem ser administrados de forma simultânea ou sequencial.

[0107] Os outros agentes terapêuticos podem ser quaisquer drogas antivirais para o tratamento das infecções por HIV-1 como parte da terapia antirretroviral altamente ativa (HAART). Exemplos não exaustivos de agentes adicionais adequados incluem, em particular, drogas que pertencem ao grupo de: um inibidor de transcriptase reversa de análogo de nucleosídeo ou não nucleosídeo, um inibidor de transcriptase reversa de análogo de nucleotídeo.

[0108] Os outros agentes terapêuticos podem ser drogas aprovadas para o tratamento das infecções por HCV como parte de terapia combinatória anti- HCV multidroga. Exemplos não exaustivos de agentes adicionais adequados incluem, em particular, drogas que pertencem ao grupo de: um inibidor de serina protease NS3/4A, um inibidor de polimerase NS5B ou alfa interferon.

[0109] A combinação pode ser administrada como composições separadas (simultâneas, sequenciais) dos componentes individuais do tratamento ou como uma forma de dosagem única contendo todos os agentes. Quando os compostos dessa invenção estão em combinação com outros princípios ativos, os princípios ativos podem ser formulados separadamente nas preparações de ingrediente único de uma das formas descritas acima e então providos como preparações combinadas, as quais são dadas em tempos iguais ou diferentes, ou podem ser formuladas em conjunto em uma preparação de dois ou mais ingredientes.

[0110] Os compostos da fórmula geral I e II podem ser administrados a um paciente em uma dose diária total, por exemplo, de 0,001 a 1.000 mg/kg de peso corporal diário. As composições unitárias de dosagem podem conter tais quantidades de submúltiplos dessas para compor a dose diária. O composto também pode ser administrado semanalmente ou qualquer outro dia. A determinação de dosagens ideais para um paciente particular é bem conhecida de um técnico no assunto. Como é prática comum, as composições são normalmente acompanhadas por instruções escritas ou impressas para uso no tratamento em questão.

[0111] Os compostos da invenção podem ser preparados em uma variedade de formas. Esses processos formam aspectos adicionais da invenção.

[0112] A presente invenção é ilustrada por meio de exemplos não limitantes.

Descrição Detalhada da Invenção MATERIAL E MÉTODOS Síntese Geral

[0113] Os reagentes foram obtidos a partir de fornecedores comerciais (por exemplo, Sigma-Aldrich). Todos os químicos comercialmente disponíveis foram usados conforme comprados sem purificação adicional. CH3CN secou-se sobre hidreto de cálcio, CH2Cl2 secou-se sobre hidreto de cálcio e THF secou-se sobre Na/benzofenona antes do uso, enquanto DMF foi comprada já anidra. As reações anidras foram executadas sob uma pressão positiva de N2 seco ou argônio. TLC foi executada usando placas de TCL da Merck de sílica-gel 60 F254. As purificações cromatográficas foram realizadas em colunas empacotadas com sílica-gel 60 da Merk, 23 a 400 mesh, para técnica de flash. Os espectros de 1H-RMN e 13C-RMN foram registrados em 400 MHz em um espectrômetro Brucker Avance DPX400. As mudanças químicas são relatadas em relação ao tetrametilsilano em 0,00 ppm. Os padrões de 1H são descritos usando as seguintes abreviações: s = singleto, d = dupleto, t = tripleto, q = quarteto, quint = quinteto, sx = sexteto, sept = septeto, m = multiplo, br = amplo sinal, br s = singleto amplo.

[0114] Os dados de espectro de massa (MS) foram obtidos usando um sistema Agilent 1100 LC/MSD VL system (G1946C) com uma vazão de 0,4 mL/min usando um sistema de solvente binário 25 de 95:5 álcool metílico/água. A detecção UV foi monitorada em 254 nm. Os espectros de massa foram adquiridos em varredura de modo positivo e negativo sobre a faixa de massa.

Experimentos de Irradiação de Micro-ondas

[0115] Os experimentos de irradiação de micro-ondas foram conduzidos usando a Unidade de Síntese de Descoberta CEM (CEM Corp., Matthews, NC). A máquina consiste em um sistema de distribuição de energia de microondas focado contínuo com saída de energia selecionável pelo operador de 0 a 300 W. A temperatura dos vasos de conteúdo foi monitorada usando controle de temperatura infravermelho calibrado montado sob o vaso de reação. Todos os experimentos foram realizados usando uma opção de agitação, pelo que os conteúdos dos vasos são agitados por meio de placa magnética de rotação localizada abaixo do chão da cavidade de micro-ondas e uma barra de agitação magnética revestida com Teflon no vaso.

[0116] Na presente invenção, as seguintes abreviações são usadas:

[0117] Exceto onde indicado de outra maneira, todas as temperaturas são expressas em °C (graus centígrados) ou K (Kelvin).

[0118] Os rendimentos foram calculados assumindo que os produtos eram 100% puros, se não indicado de outra maneira.EXEMPLOS EXEMPLO 1

[0119] Reagentes e condições: i.o-tolil-isocianato CH2Cl2, refluxo de 5 h, ii. H2, Pd/C, MeOH, 1 h; iii. a) t-BuONO, CH3CN, 20 min 0 °C; b) TMSN3,CH3CN, 2 h, t.a.; iv. Alcino 6a-c, CuSO<5 H2O, ascorbato de sódio, H2O tBuOH (1:1), PM 120 °C, 10 min; v. ácido alquinóico 7d-e, CuCl, L-Prolina, K2CO3, DMSO (seco) PM 65 °C, 20 min.Procedimento geral para a síntese dos compostos 3a e 3b:

[0120] A anilina adequada 2 ou 72 (3,62 mmol) foi adicionada a uma solução do isocianato adequada 1 ou 1a (5,43 mmol) em CH2Cl2 anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 4 horas a 60 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. O precipitado amarelo foi filtrado, lavado com DCM frio e éter de petróleo e seco sob alto vácuo para resultar no produto desejado na forma de um sólido branco.

[0121] 1-(4-nitrofenil)-3-o-tolilureia (3a). Rendimento de 63%; 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 9,7 (s, 1H, NH), 8,19-8,16 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 8,13 (s, 1H), 7,78-7,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69-7,66 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 7,19-7,13 (m, 2H), 7,00-6,97 (t, 1H, J = 12,0 Hz), 2,24 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 270 [M-H]-, 306 [M+Cl]-.

[0122] 1-(2-metoxi-4-nitrofenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (3b): Rendimento de 56%; 1H RMN (400 MHz, MeOD): δ8,40-8,38 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,95-7,91 (m, 2H), 7,74,-7,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,66-7,64 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,61-7,57 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,45(s, 1H), 3,97 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 354 [M-H]-.Procedimento geral para a síntese de 4a e 4b:

[0123] A ureia adequada 3a ou 3b (1,10 mmol) foi solubilizada em 30 mL de MeOH anidro e Paládio em carvão (50 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, e então a mistura foi filtrada em uma base de Celite, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi cristalizado a partir de acetonitrila.

[0124] 1-(4-aminofenil)-3-o-tolilureia (4a). Rendimento de 70%; sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 8,48 (s, 1H), 7,83-7,81 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,15-7,05 (m, 4H), 6,89-6,87(d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,50-6,48 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,72 (s, 2H), 2,20, (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 242,0 [M+H]+, 264 [M+Na]+, 505 [2M+Na]+.

[0125] 1-(4-amino-2-metoxifenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (4b): Rendimento de 70%; sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD): δ 8,04-8,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,49-7,44 (m, 2H), 7,38-7,36 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,10-7,06 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,27-6,26 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 3,74 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 326 [M+H]+.Procedimento geral para a síntese de 5a e 5b:

[0126] A anilina adequada 4a ou 4b (0,41 mmol) foi dissolvida em CH3CN e resfriada até 0 °C em um banho de gelo e sal. A essa solução agitada, adicionou-se tBuONO (0,61 mmol) e a mistura foi agitada durante 10 min; após esse tempo, TMSN3 (65 μL, 0,49 mmol) foi adicionado por gotejamento durante 10 min, e a solução castanha resultante foi agitada em t.a. Uma hora depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel.

[0127] 1-(4-azidofenil)-3-o-tolilureia (5a). (Eluente de Purificação: DCM- MeOH 9:1). Rendimento de 67%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d) δ 9,10 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,80-7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50-7,48 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,167,19 (m, 2H), 7,04-7,02 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,95-7,91 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,22 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 267 [M+Na]+, 557 [2M+Na]+.

[0128] 1-(4-azido-2-metoxifenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (5b): (Eluente de Purificação: PE-EA= 5:3). Rendimento de 98%; sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,41 (s, 1H), 8,23-8,18 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 8,068,00 (m, 2H), 7,62-7,55 (m, 2H), 7,24-7,20 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,84 (s, 3H) ppm. Procedimento geral para a preparação dos compostos 8 a-e

[0129] O alcino adequado (0,10 mmol) e a azida 5 (25 mg, 0,09 mmol) foram suspensos em uma mistura de 1:1 de água e t-BuOH (1,5 mL cada) em um balão de vidro de 10 mL equipado com uma pequena barra de agitação magnética. A este, adicionou-se ascorbato de sódio (0,1 equiv.) e sulfato de cobre(II) pentahidratado (0,10 mmol). A mistura foi, então, aquecida durante 10 min a 125 °C sob irradiação de micro-ondas, utilizando uma potência de irradiação de 300 W. Após esse tempo, o precipitado foi filtrado e purificado em sílica para resultar nos produtos finais 8a, 8b, 8c, 8d ou 8e.

[0130] 1-(4-(4-fenil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (8a). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 97%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 9,42 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,93-7,91 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7-85-7-80 (m, 3H), 7,70,-7,68 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,50-7,46 (m, 3H), 7,38-7,34 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,18-7,14 (m, 2H), 6,97-6,94 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, DMSO d-6): δ 153,09, 148,24, 140,57, 137,65, 131,33, 130,87, 130,71, 129,45, 128,63, 126,66, 125,79, 123,48, 121,83, 121,35, 119,88, 119,12 ppm. MS (ESI) m/z 368 [M-H]-, 404 [M+Cl]-.

[0131] 1-(4-(4-terc-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (8b). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 91%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 9,23 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,80-7,75 (m, 3H, Ph), 7,63,-7,61 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,17-7,11 (m, 2H), 6,96-6,93 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 2,23 (s, 3H), 1,32 (s, 9H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, DMSO d-6):δ 158,38, 155,30, 139,59, 135,73, 131,87, 131,75,130,66, 126,64, 125,48, 124,84, 121,22, 120,18, 117, 50, 30,33, 17,83 ppm. MS (ESI) m/z 348 [M-H]-, 384 [M+Cl]-.

[0132] 1-(4-(4-metanamina,N-[(fenil)metil]-N-metil-1H-1,2,3-triazol- 1il)fenil)-3-o-tolilureia (8c). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 90%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,43 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,51-7,43 (m, 6H), 7,31-7,23 (m, 4H), 7,12,-7,07 (m, 2H), 7,00-6,99 (t, J = 12,0 Hz 1H,), 3,75 (s, 2H,), 3,58 (s, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,14 (s, 1H) ppm. 13C-RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 154,31, 145,73, 139,98, 137,90, 135,90, 131,48, 130,60, 129,15, 128,39, 127,36, 126,58, 125,26, 124,61, 121,13, 120,08, 61,58, 51,88, 42,11, 17,89 ppm. MS (ESI) m/z 425,0 [M-H]-, 461,1 [M+Cl]-.

[0133] 1-(4-(4-hexil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia) (8d). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 83%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD): δ 8,16 (s, 1H), 7,93-7,91 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,71-7,69 (dd, J = 8,0 Hz 2H), 7,63-7,61 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 7,59-7,55 (m, 4H), 7,27,-7,23 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,74-2,70 (t, J = 8,0 Hz 2H), 1,70-1,65 (m, 2H), 1,37-1,31 (m, 6H), 0,87 (s, 3H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, MeOD): δ 153,58, 148,75, 139,86, 135,97, 132,58, 131,99, 125,99, 125,66, 124,06, 122,64, 120,74, 119,77, 119,30, 31,30, 29,08, 28,57, 24,92, 22,21, 12,98 ppm. MS (ESI) m/z 432 [M+H]+, 454 [M+Na]+.

[0134] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-2-metoxifenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (8e): O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE/EA 7:3). Rendimento de 60%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,21-8,19 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,91-7,89 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,50-7,46 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,20-7,15 (m, 2H), 7,04-7,03 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 2,75-2,71 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,62-1,53 (m, 3H), 0,900,88 (d, J = 6,0 Hz, 2H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ 154,00, 149,16, 135,94, 133,03, 128,55, 125,87, 124,30, 120,04, 118,70, 112,20, 103,47, 56,21, 38,30, 28,00, 23,74, 22,40 ppm. MS (ESI) m/z 448 [M+H]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 8 f e g

[0135] L-Prolina (1,9 mg, 0,01 mmol), CuCl (8,2 mg, 0,08 mmol), K2CO3, (13,7 mg), azida (20 mg, 0,08 mmol) e o ácido alquinóico adequado (0,08 mmol), foram sequencialmente adicionados a um balão de vidro de 10 mL equipado com um agitador magnético. O balão foi fechado com um septo e irradiado a 65 °C. Após 15 min, a mistura foi dividida entre 20 mL de água e AcOEt (40 mL), a camada orgânica foi separada, seca (Na2SO4) e o solvente removido sob vácuo para fornecer um resíduo castanho, que foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM-MeOH 98:2) para resultar nos compostos de triazol desejados 8e ou 8f.

[0136] 1-(4-(4-metil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (8f). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 77%, sólido branco. Rendimento 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,15 (s, 1H), 7,72-7,69 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,64-7,62 (m, 3H), 7,21-7,15 (m, 2H), 7,05-7,02 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,38 (s, 1H), 2,30 (s, 3H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ153,20, 151,00, 141,20, 138,2, 133,01, 131,8, 126,08, 124,23, 123,13,120,77, 120,28, 119,23, 16,60, 9,06 ppm. MS (ESI) m/z 306 [MH]-, 342 [M+Cl]-.

[0137] 1-(4-(4-etil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (8g). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 82%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,21 (s, 1H), 7,73-7,71 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,65-7,63 (m, 3H), 7,21-7,15 (m, 2H), 7,057,02 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,82-2,76 (q, J = 6,0 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,35-1,31 (t, J = 8,0 Hz, 3H), ppm. 13C-RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ152,60, 149,76, 140,30, 137,38, 131,86, 130,21, 128,32, 126,25, 123,33, 121,92, 120,59, 118,95, 118,77, 18,75, 17,20, 13,17 ppm. MS (ESI) m/z 320 [M-H]-, 356 [M+Cl]-.EXEMPLO 2

[0138] Reagentes e condições: i. CH2Cl2, refluxo de 6 h ii. H2, Pd/C, MeOH; iii. NaNO2, H2SO4 25%, 20 min 0 °C; iv. NaN3 2 h, t.a.; v. alcino, CuSO4^5 H2O, ascorbato de sódio, H2O t BuOH (1:1), PM 80 °C, 5 min.

[0139] 1-(4-metilpiridin-3-il)-3-(4-nitrofenil)ureia (11). 9 (500 mg, 3,62 mmol) foi adicionado a uma solução do-tolil-isocianato 10 (673 μL, 5,43 mmol) em CH2Cl2 anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 6 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O precipitado amarelo foi filtrado, lavado com DCM frio e éter de petróleo e seco sob alto vácuo para resultar no produto desejado 11 na forma de um sólido branco. Rendimento de 93%; 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 9,7 (s, 1H, NH), 8,19-8,16 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 8,13 (s, 1H), 7,78-7,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69-7,66 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 7,19-7,13 (m, 2H), 7,00-6,97 (t, 1H, J = 12,0 Hz), 2,24 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 272 [M+H]+, 306 [M+Cl]-.

[0140] 1-(4-metilpiridin-3-il)-3-(4-nitrofenil)ureia (12). Ureia 11 (500 mg, 1,8 mmol) foi solubilizada em 30 mL de MeOH anidro e Paládio 10% em carvão (50 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 2 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite, e purificada por cromatografia flash em sílica gel (DCM-MeOH 98:2). Rendimento de 80%; sólido branco, 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 8,48 (s, 1H), 7,837,81 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,15-7,05 (m, 4H), 6,89-6,87(d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,50-6,48 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,72 (s, 2H), 2,20, (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 242 0 [M+H]+ 264 [M+Na]+ 505 [2M+Na]+ ,, , .

[0141] 1-(4-azidofenil)-3-(4-metilpiridin-3-il)ureia (13). A uma suspensão agitada de amina 12 (400 mg, 1,6 mmol) em uma solução aquosa a 25% de H2SO4, a 0 °C, adicionou-se NaNO2 (227,9 mg, 3,3 mmol) em água, por gotejamento durante 20 min. Após esse tempo, uma solução de NaN3 (208 mg, 3,2 mmol) em água (3 mL) foi adicionada por gotejamento durante 20 min a 0 °C, então a mistura de reação foi agitada em t.a. Quatro horas depois, uma solução aquosa de NaOH foi adicionada e o pH foi alcalinizado até 10. A mistura de reação foi, então, extraída com EtOAc (3x40 mL), lavada com salmoura, e seca em Na2SO4 anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM- MeOH 9:1). Rendimento de 67%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d)δ 9,10 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,80-7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50-7,48 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,167,19 (m, 2H), 7,04-7,02 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,95-7,91 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,22 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 267 [M+Na]+, 557 [2M+Na]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 15a-b

[0142] O alcino adequado (0,10 mmol) e azida 13 (25 mg, 0,09 mmol) foram suspensos em uma mistura 1:1 de água e t-BuOH (1,5 mL cada) em um balão de vidro de 10 mL equipado com uma pequena barra de agitação magnética. A esta, adicionou-se ascorbato de sódio (0,1 equiv.) e sulfato de cobre(II) pentahidratado (0,10 mmol). A mistura foi, então, aquecida durante 5 min a 80 °C sob irradiação de micro-ondas, utilizando uma potência de irradiação de 300 W. Após esse tempo, o precipitado foi filtrado e purificado em sílica, para resultar nos produtos finais 15a ou 15b.

[0143] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(4-metilpiridin-3-il)ureia (15a). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 68%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,87 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,15-8,14 (d, J = 4Hz, 1H), 7,74-7,71 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,65-7,63 (J = 8,0 Hz, 2H), 7,30-7,29 (d, J = 4Hz, 1H), 4,704,67 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,06-1,99 (quint, J = 7,0 Hz, 2H), 1,411,36 (q, J = 6,0 Hz, 2H), 1,00-0,96 (q, J = 8,0 Hz, 2H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ164,69, 153,67, 143,82, 143,19, 141,39, 140,12, 134,50, 127,09, 125,50, 121,37, 118,72, 50,61, 30,06, 18,51, 14,20, 11,30 ppm. MS (ESI) m/z 320 [M-H]-, 356 [M+Cl]-.

[0144] 1-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(4-metilpiridin-3- il)ureia (15b). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 74%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,80 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,15-8,14 (d, J = 4Hz, 1H), 7,84-7,81 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,67-7,65 (J = 8,0 Hz, 2H), 7,34-7,31 (d, J = 4Hz, 1H), 2,782,74 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,63-1,60 (m, 3H), 0,97-0,95 (d, J = 8,0 Hz, 2H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ164,69, 153,67, 143,82, 143,19, 141,39, 140,12, 134,50, 127,09, 125,50, 121,37, 118,72, 38,28, 27,38, 22,87, 21,32, 16,59 ppm. MS (ESI) m/z 363 [M-H]-, 399 [M+Cl].EXEMPLO 3

[0145] Reagentes e condições: i. a) t-BuONO, CH3CN, 20 min 0 °C; b) TMSN3, CH3CN, 2 h, t.a.; ii. Alcino 30a-g, CuSO<5 H2O, ascorbato de sódio, H2O tBuOH (1:1), PM 120 °C, 10 min; iii. MeOH/NH4OH 3:1, t.a. 24 h; iv. H2, Pd/C, MeOH, 1 h, v. o-tolil-isocianato, CH2Cl2, 12 h, t.a.; vi. isocianato de 2- (trifluormetil)fenila, CH2Cl2, CH2Cl2, 12 h, vii. isocianato de 5-cloro-2-metilfenila,CH2Cl2, 12 h, t.a.

[0146] 1-azido-4-nitrobenzeno (16). 4-nitroanilina 2 (1000 mg, 7,24 mmol) foi dissolvida em CH3CN e resfriada a 0 °C em um banho de gelo e sal. A essa solução agitada, adicionou-se t BuONO (1033 μL, 8,69 mmol) e a mistura foi agitada durante 10 min, após esse tempo, TMSN3 (1441 μL, 10,86 mmol) foi adicionado por gotejamento durante 10 min, e a solução castanha resultante foi agitada em t.a. Uma hora depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (EP-EtOAc 9:1). Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d) δ 9,10 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,80-7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50-7,48 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,16-7,19 (m, 2H), 7,04-7,02 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,95-7,91 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,22 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 165 [M+H]+, 188 [M+Na]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 17a-h

[0147] O alcino adequado 30a-h (4,34 mmol) e azida 16 (594,11 mg, 3,62 mmol) foram suspensos em uma mistura 1:1 de água e t-BuOH (1,5 mL cada) em um balão de vidro de 10 mL equipado com uma pequena barra de agitação magnética. A esta, adicionou-se ascorbato de sódio (1,81 mmol) e sulfato de cobre(II) pentahidratado (1,81 mmol). A mistura foi, então, aquecida durante 10 min a 120 °C sob irradiação de micro-ondas, utilizando uma potência de irradiação de 300 W. Após esse tempo, o precipitado foi filtrado e purificado em sílica, para resultar nos compostos de triazol desejados 17a, 17b, 17c, 17d, 17e, 17f, 17g ou 17h.

[0148] 4-butil-1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (17a). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 80%, sólido amarelo. Rendimento 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,48 (s, 1H), 8,42-8,44 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,12-8,10 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,80-2,77 (t, -J = 7,6 Hz, 2H), 1,74-1,78 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 1,46-1,40 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 0,99-0,952 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 245 [M-H]-, 281 [M+Cl]-.

[0149] 4-isopentil-1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (17b). (Eluente de purificação: PE/EtOAc 9:1). Rendimento de 86%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,45-8,39 (m, 3H), 8,11-8,09 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 2,81-2,77 (t, 7,6 Hz, 2H), 1,64-1,61 (m, 3H), 0,98-0,96 (d, J = 7,4 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 260,9 [M+H]+.

[0150] 1-(4-nitrofenil)-4-(perfluorbutil)-1H-1,2,3-triazol (17c). (Eluente de purificação: PE/EA 95:5). Rendimento de 73%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ8,48-8,46 (dd, J = 8,1 Hz, 2H), 8,42 (s, 1H), 8,05-8,03 (dd, J = 8,1 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 442,9 [M+Cl]-.

[0151] Ácido 3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)propanoico (17d). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 70%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6): δ 8,52 (s, 1H), 8,43-8,41 (dd, J = 8,0Hz, 2H), 8,18-8,16 (dd, J = 8,0Hz, 2H), 3,06-3,03 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 2,782,74 (t, J = 8,0 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 261 [M-H]-.

[0152] 4-(2-etoximetil)-1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (17e). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 80%, sólido amarelo claro. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,34-8,31 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 8,14 (s, 1H), 7,957,93 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,65 (s, 2H), 3,61-3,56 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,20-1,16 (t, J = 7Hz, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 283,2 [M+Cl]-.

[0153] 4-(2-metoxietil)-1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (17f). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 78%, sólido amarelo pálido. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,40-8,38 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,97-7,95 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,74-3,71 (t, J = 6,0, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,10-3,07 (t, J = 6,0, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 283,2 [M+Cl]-.

[0154] Dibenzoato de 2-((benzoiloxi)metil)-5-((1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3- triazol-4-il)metoxi)tetrahidrofurano-3,4-diila (17g). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 86%, espuma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,31-8,29 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,12 (s, 1H), 7,99-7,95 (m, 4H), 7,92-7,89 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,85-7,83 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,54-7,29 (m, 5H), 7,29-7,25 (m, 4H), 5,87-5,86 (m, 1H), 5,73-5,72 (m, 1H), 5,43 (s, 1H), 4,99-4,96 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,84-4,74 (m, 3H), 4,58-4,54 (m, 1H) ppm. MS: m/z 270,9 [M+Na]+.

[0155] 4-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)butan-2-ona (17h). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 74%, sólido amarelo pálido. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,32 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,91 -7,88 (m, 2H), 3,32 - 2,77 (m, 4H), 2,12 (s, 3H), MS (ESI) m/z 259,1 [M-H]-.

[0156] 2-(hidroximetil)-5-((1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi)tetrahidrofurano-3,4-diol (18g). Composto 17g (155 mg, 0,23 mmol) foi dissolvido em 4:1 metanol/hidróxido de amônio concentrado (15 mL) e agitado em temperatura ambiente durante 24 h. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo e foi submetida à azeotropia 3 vezes com etanol. O produto bruto foi dissolvido em água (5 mL), extraído com cloreto de metileno (3 x 50 mL) e a camada aquosa foi concentrada sob vácuo. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,64 (s, 1H), 8,43-8,41 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 8,14-8,12 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 5,46 (s, 1H), 5,13-5,11 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,70-4,67 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,13-4,11 (m, 1H), 3,98-3,91 (m, 2H), 3,78-3,66 (m, 1H), 3,60-3,56 (m, 1H) ppm. MS: m/z 375 [M+Na]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 19a-h

[0157] O composto de triazol adequado 17 a-f, ou 18g (400 mg, 1,60 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH anidro e Paládio 10% em carvão (25 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então, a mistura foi filtrada em uma base de Celite, o solvente evaporado sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash em sílica gel com o eluente adequado.

[0158] 4-butil-1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol (19a). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 95:5). Rendimento de 80%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ7,98 (s, 1H), 7,43-7,41 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,78-6,76 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,72-2,68 (t, -J = 7,6 Hz, 2H), 1,70-1,64 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,40-1,35 (q, J = 6,7 Hz, 2H), 0,95-0,90 (t, J = 7,1 Hz, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 217 [M+H]+, 240 [M+Na]+.

[0159] 4-isopentil-1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol (19b). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 86%, sólido amarelo. Rendimento 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ7,99 (s, 1H), 7,43-7,41 (dd, J = 7,8 Hz, 2H), 6,78-6,76 (dd, J = 7,8Hz, 2H), 4,84 (s, 2H), 2,74-2,70 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,59-1,56 (m, 3H), 0,94-0,92 (d, J = 7,4 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 245 [M-H]-, 281 [M+Cl]-.

[0160] 4-(4-(perfluorbutil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)anilina (19c). O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6): δ 8,94 (s, 1H), 7,61-7,59 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 6,86-6,84 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 5,13 (s, 2H) ppm. 13C RMN (100 MHz Acetona-d6): δ 150,01, 136,84, 126,31, 123,92, 123,21, 118,89, 114,42, 113, 29 ppm. MS (ESI) m/z 377 [M-H]-, 413 [M+Cl]-.

[0161] Ácido 3-(1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)propanoico. (19d) O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD): δ 8,02 (s, 1H), 7,40-7,39 (dd, J = 4,0Hz, 2H), 6,75-6,74 (dd, J = 4,0Hz, 2H), 3,03-3,00 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 2,64-2,60 (t, J = 8,0 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 233 [M+H]+, 255 [M+Na]+.

[0162] 4-(2-etoximetil)-1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol (19e). O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,77 (s, 1H), 7,29-7,28 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,616,59 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,57 (s, 2H), 4,06 (s, 2H), 3,55-3,50 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,16-1,12 (t, J = 7,0 Hz, 3H) ppm. MS (ESI): m/z 219 [M+H]+.

[0163] 4-(2-metoxietil)-1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol (19f). O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,66 (s, 1H), 7,40-7,38 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,696,67 (d, J = 8 Hz, 2H), 3,82 (s, 2H), 3,69-3,66 (t, J = 6,4 Hz, 2H) 3,34 (s, 3H), 3,03-3,00 (t, J = 6 Hz, 2H) ppm. MS (ESI): m/z 219 [M+H]+.

[0164] 2-(hidroximetil)-5-((1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol-4- il)metoxi)tetrahidrofurano-3,4-diol (19g). O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99% Espuma. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,20 (s, 1H), 7,41-7,39 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 6,76-6,74 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 5,01 (s, 1H), 4,66-4,63 (d, J = 12Hz, 1H), 4,15, 4,12 (m, 1H), 4,01-3,98 (m, 1H), 3,96-3,95 (m, 1H), 3,79-3,75 (m, 1H), 3,62-3,57 (m, 1H) ppm. MS (ESI): m/z 345 [M+H]+.

[0165] 4-(1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)butan-2-ona (19h): O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d) δ 7,60 (s, 1H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,71 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,00 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,91 (t, J = 6,7 Hz, 3H), 2,14 (s, 3H), ppm. MS (ESI): m/z 231,1 [M+H]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 20-22a-h

[0166] A anilina adequada 19 a-h (100 mg, 0,46 mmol) foi adicionada a uma solução do isocianato adequado (85 μL, 0,65 mmol) em CH2CI2 anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 4 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash utilizando o eluente adequado.

[0167] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (20a). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 85%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,18 (s, 1H), 7,72-7,70 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,63-7,61 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,20-7,16 (m, 2H), 7,05-7,01 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 2,78-2,74 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,3 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 13C-RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ 153,09, 140,57, 137,65, 131,33, 130,69, 128,42,126,62, 123,44, 121,86, 121,09, 120,49, 119,08, 31,41, 25,18, 22,17, 18,34, 14,15 ppm. MS (ESI) m/z 348 [MH]-, 384 [M+Cl]-.

[0168] 1-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (20b). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 89%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,18 (s, 1H), 7,71-7,69 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,64-7,61 (m, 3H), 7,2-7,1 (m, 2H), 7,04-7,01 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,78-2,74 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 1,63-1,60 (m, 3H), 0,97 (s, 6H), ppm. 13C-RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ155,0, 150,71, 144,20, 140,26, 132,41, 130,09, 128,32, 126,08, 124,22, 123,12, 120,79, 119,76, 119,23, 38,28, 27,38, 22,87, 21,32, 16,59 ppm. MS (ESI) m/z 362 [M-H]-, 398 [M+Cl]-.

[0169] 1-(4-(4-(perfluorbutil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(o-tolil)ureia (20c). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 70%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 9,13 (s, 2H), 7,82-7,79 (dd, J = 8,1 Hz, 2H), 7,70-7,68 (dd, J = 8,1 Hz, 2H), 7,21-7,15 (m, 3H), 7,06, 7,02 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ154,16, 141,22, 136,08, 130,84, 130,07, 126,15, 124,43, 123,43, 121,48, 119,03, 115,86, 112,69, 110,20, 107,28, 16,93 ppm. 19F RMN (280 MHz, MeOD-d4): δ 83,03, 110,64, 124,80, 127,30 ppm MS (ESI) m/z 510 [M-H]-, 545,9 [M+Cl]-.

[0170] Ácido 3-(1-(4-(3-(2-(trifluormetil)fenil)ureido)fenil)-1H-1,2,3- triazol-4-il)propanoico (20d). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 95:5). Rendimento de 65%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,20 (s, 1H), 7,92-7,90 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,72-7,62 (m, 5H), 7,60,-7,57 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 7,30-7,26 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,05-3,02 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 2,72-2,69 (t, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 418 [M-H]-.

[0171] 1-(4-(4-(etoximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(o-tolil)ureia (20e). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 95:5). Rendimento de 83%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,41 (s, 1H), 7,73-7,64 (m, 5H), 4,59 (s, 2H), 3,64-3,59 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,23-1,20 (t, J = 6,7 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, MeOD-d4) δ153,69, 144,40, 140,44, 134,71, 132,83, 131,00, 129,85, 129,41, 125,84, 121,65, 120,1, 115,08, 65,65, 63,12, 16,45, 14,27 ppm. MS (ESI): m/z 351,9 [M+H]+.

[0172] 1-(4-(4-(2-metoxietil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (20f). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 95:5). Rendimento de 78%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,22 (s, 1H), 7,73-7,67 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,65-7,62 (m, 3H), 7,21-7,15 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,05-7,01 (t, J = 8,0 Hz, 1H,), 3,72-3,69 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,03-3,0 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H), 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 145,76, 140,09, 130,10, 126,08, 124,24, 123,14, 120,84, 120,68, 119,24, 70,97, 57,42, 25,61, 16,60 ppm. MS (ESI): m/z 351,9 [M+H]+.

[0173] 1-(4-(4-(3-oxobutil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(o-tolil)ureia (20h): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 95:5). Rendimento de 81%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3-d) δ 8,08 (s, 1H), 7,85 - 7,67 (m, 2H), 7,20 - 7,02 (m, 3H), 6,91 (s, 1H), 6,88 - 6,69 (m, 2H), 6,38 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 3,09 - 2,98 (m, 2H), 2,96 - 2,85 (m, 2H), 2,22 - 2,14 (m, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d) δ 206,98, 153,62, 137,21, 136,75, 131,73, 129,47, 127,74, 124,73, 123,07, 123,07, 122,19, 122,17, 121,34, 41,35, 28,57, 20,36, 17,35ppm. MS (ESI): m/z 362,5 [M-H]-.

[0174] 1-(3-cloro-2-metilfenil)-3-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1- il)fenil)ureia (21b). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 80%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 7,89 (s, 1H), 7,64-7,57 (m, 4H), 7,08-7,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,95-6,93 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 2,77-2,73 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,60-1,56 (m, 3H), 0,94-0,93 (d, J = 6,0 Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 153,48, 149,08, 139,85, 137,69, 131,73, 131,14, 126,60, 123,47, 121,61, 121,16, 119,74 ppm. MS (ESI): m/z 396 [M-H]-.

[0175] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (22a). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 78%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,16 (s, 1H), 7,93-7,92 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,71-7,68 (m, 2H), 7,64-7,61 (m, 3H), 7,597,55 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,27-7,23 (t, J = 8,0 Hz), 2,75-2,71 (t, J = 7,6 Hz), 1,721,64 (quint J = 7,5 Hz, 2H), 1,42-1,34 (sx J = 7,6 Hz, 2H), 0,96-0,92 (t, J = 7,6 Hz, 3H) ppm 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 153,67, 148,70, 139,78, 135,85, 132,39, 131,91, 125,96, 125,62, 124,03, 120,85, 119,82, 119,40, 31,30, 24,60, 21,97, 12,99 ppm. MS (ESI): m/z 402 [M-H]-.

[0176] 1-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (22b). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 72%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 9.11 (s, 1H), 7,83-7.81 (m, 2H), 7,654 (s, 1H), 7,48-7.46 (m, 4H), 7,41-7.37 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7,10-7.06 (t, J = 8.0Hz, 1H), 2,76-2.72 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1,60-1.54 (m, 3H), 0,88-0.87 (d, J = 6.0 Hz). 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 153.78, 149.36, 139.65, 135.58, 132.44, 131.92, 127.93, 126.53, 126.05, 125.22, 124.45, 122.48, 122.16, 121.09, 120.11, 119.37, 38.38, 27.62, 23.43, 22.27 ppm. MS (ESI): m/z 416.2 [M+H]+.

[0177] 1-(4-(4-(((3,4-di-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofurano-2-il)oxi)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (22g). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 86%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6): δ 9,05 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,13-8,11 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,79-7,72 (m, 5H), 7,67-7,61 (m, 2H), 7,29-7,26 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 5,03 (s, 1H), 4,85-4,82 (d, J = 12Hz, 1H), 4,69-4,66 (d, J = 12Hz, 1H), 4,23 (s, 2H), 4,08-4,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,98-3,94 (m, 2H), 3,81-3,79 (m, 1H), 3,623,56 (m, 1H) ppm. 13C RMN (100 MHz, Acetona d-6): δ 152,41, 145,37, 140,16, 136,73, 1332,82, 131,91, 125,92, 125,47, 123,78, 121,56, 121,30, 120,99, 119,27, 114,23, 106,76, 84,67, 75,10, 70,93, 63,07, 60,13 ppm. MS (ESI): m/z 508 [M-H]-, 543 [M+Cl]-.

[0178] Os compostos 30a e 30b foram adquiridos da Sigma Aldrich e utilizados sem purificação adicional.EXEMPLO 4

[0179] Reagentes e condições: i. Zn hu, CF3COOH, CH2CI2, 1 h, t.a.; ii. KOH, H2O, 2 h, t.a.; iii. NaOH, H2O, refluxo de 2 h.

[0180] 5, 5, 6, 6, 7, 7, 8, 8, 8-nonafluor-3-iodo-2-metiloct-3-en-2-ol (28).Composto 27 (2,04 mL 11,8 mmol) e 3 mL de CH2Cl2 foram adicionados a uma suspensão agitada de pós de Zinco (777 mg, 11,8 mmol) em 26 (1,15 mL, 11,8 mmol). A este, foram adicionadas 2 gotas de CF3COOH, e a mistura foi agitada em t.a. sob irradiação hu durante 1 h. Após esse tempo, a mistura de reação foi filtrada em uma base de Celite e o solvente removido sob pressão reduzida para resultar em um óleo incolor. Rendimento de 92%. 1H RMN (400 MHz, CDCI3-d): δ 6,85-6,78 (t, J = 12 Hz, 1H), 2,85 (s, 1H), 1,52-1,51 (s, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 126,49, 120,64, 118,77, 115,92, 113,40, 87,36, 71,79, 29,35 ppm. MS (ESI): m/z 429 [M-H]-.

[0181] 5, 5, 6, 6, 7, 7, 8, 8, 8-nonafluor-2-metiloct-3-in-2-ol (29). A uma solução sob agitação de KOH (434 mg, 7,7 mmol) em uma mistura de EtOH (20 mL) e água (5 mL), 28 (3330 mg, 7,7 mmol) foi adicionado por gotejamento. A mistura de reação foi agitada em t.a. durante 2 h, então, a seguir, HCl foi adicionado, e o pH ajustado para 7. Et2O foi adicionado e a mistura de reação foi extraída vária vezes e seca em Na2SO4 anidro. Rendimento de 90%, óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 1,49, (s, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 120,49, 118,68, 115,88, 113,38, 111,10, 82,10, 76,49, 64,83, 29,10 ppm. MS (ESI): m/z 431 [M-H]-.

[0182] 3, 3, 4, 4, 5, 5, 6, 6, 6-nonafluorhex-1-ina (30c). O Composto 29 (2114 mg, 7 mmol) foi adicionado a uma solução de 280 mg de NaOH em água. A mistura foi aquecida e imediatamente destilada (p.f. 40 °C). Rendimento de 78%. Óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 2,16, (s, 1H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ117,0, 108,12, 107,50, 80,32, 71,63 ppm. MS (ESI): m/z 243 [M-H]-.EXEMPLO 5

[0183] Reagentes e condições: i. Reagente de Jones, t.a., acetona, 1 h; ii.a) álcool adequado, NaOH (6 M) 20 min t.a.; b) dimetilssulfato ou dietilssulfato, 50-55 °C; iii. a) β-D-ribofuranose-1-acetato-2,3-5-tribenzoato, BF3 Et2O 0 °C, CH2Cl2, 15 min; b) K2CO3 15 min; iv. K2CO3, acetilacetona, EtOH, 90 °C, 12 h.

[0184] Ácido pent-4-inoico (30d). 23d (1 mL, 10,7 mmol) foi dissolvido em Acetona e resfriado até 0 °C. O reagente de Jones foi adicionado por gotejamento à solução, sob agitação vigorosa, até que a mistura de reação ficasse laranja. Deixou-se a mistura atingir a t.a., e mais reagente de Jones foi adicionado para manter a cor laranja. A mistura de reação foi agitada em t.a. durante 1 h, água foi então adicionada, e foi extraída com Et2O várias vezes, lavada com salmoura e seca em Na2SO4 anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o óleo resultante foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (Hexano/Et2O 8:2). Rendimento de 82%, óleo incolor. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 2,61-2,59 (m, 2H), 2,52-2,48 (m, 2H), 1,98-1,95 (m, 1H) ppm. Procedimento geral para a preparação dos compostos 30e e 30f.

[0185] A uma solução sob agitação de 200 g de NaOH em 300 mL de água (0,3 mol, 16,8 g) adicionou-se o álcool adequado (2,5 mL, 33,02 mmol). A este, adicionou-se lentamente o sulfato correspondente (15 mmol, 2082 mg) em 2 h por gotejamento e a mistura foi aquecida a 50 °C. O produto final foi destilado, a destilação foi interrompida em 95 °C, e então o teor do receptor foi lavado com solução aquosa fria de NH4Cl e separado.

[0186] 3-etoxiprop-1-ina (30e). Rendimento de 68% óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 4,13-4,13 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,60-3,55 (q, 2H), 2,412,40 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 1,24-1,22 (t, J = 4 Hz, 3H) ppm.

[0187] 4-metoxibut-1-ina (30f). Rendimento de 52% óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 3,52-3,49 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 2,47-2,43 (m, 2H), 1,991,97 (m, 1H) ppm.

[0188] 1-propinil-2,3,4-tri-O-benzoil-ribofuranose (30g): a uma solução de β-D-ribofuranose-1-acetato-2,3-5-tribenzoato (937 mg, 1,8 mmol) em diclorometano (8 mL), adicionou-se álcool propargílico (129 μL, 2,23 mmol) e BF^Et2O (344 μL, 2,79 mmol) a 0 °C e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h. Após esse tempo, K2CO3 (450 mg) foi adicionado e a agitação foi mantida por mais 15 min. Então, a mistura de reação foi filtrada e lavada com diclorometano. O filtrado foi lavado com água, a fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano (3 x 20 mL) e as fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4) e concentradas para resultar no composto 30g desejado como um sólido cristalino. Rendimento de 85%. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,07-7,00 (m, 4H), 7,87-7,85 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,55-7,43 (m, 3H), 7,41-7,34 (m, 4H), 7,29-7,25 (m, 2H), 5,93-5,90 (m, 1H), 5,77-5,76 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,50 (s, 1H), 4,70-4,65 (m, 2H), 4,50-4,46 (m, 1H), 4,20 (s, 2H), 2,45 (s, 1H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 166,10, 165,26, 165,07, 133,44, 133,33, 133,10, 129,75, 129,67, 129,11, 128,84, 128,43, 128,34, 128,29, 103,30, 79,30, 78,25, 75,48, 75,24, 72,07, 64,42, 54,49 ppm. MS (ESI) m/z: 523 [M+Na]+.

[0189] Hex-5-in-2-ona (30h): Uma mistura de cloreto de propargila (485 μL, 6,71 mmol), acetilacetona (758 μL, 7,38 mmol) e K2CO3 (1112 mg, 8,0 mmol) foi agitada em EtOH (10 mL), a 80 °C, durante 12 h. Após esse tempo, o EtOH foi parcialmente removido sob pressão reduzida, água (15 mL) foi adicionada, a fase aquosa foi separada e extraída com MTBE (3 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4). 30h foi finalmente purificado por destilação pf=71 °C. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2,66 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 2,41 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 2,14 (s, 1H), 1,92 (s, 1H) ppm.EXEMPLO 6

[0190] Reagentes e condições: i. alcino, CuSO<5 H2O, ascorbato de sódio, H2O tBuOH (1:1), PM 10 min, 120 °C; ii. KOH, TsCl, THF (seco) 24 h; iii. amina adequada, DCM, 9 h, 80 °C; iv 5%. NaOH (aq), dicarbonate de di-terc- butila, THF, t.a. 12 h v. H2, Pd/C, MeOH, 1 h, vi. isocianato adequado CH2Cl2, refluxo de 5 h; vii. isopropóxido de titânio; fosfonato de dietila, TEA, CH2Cl2, de um dia para o outro, t.a.; viii. ácido adequado, DCC, DMAP, CH2Cl2, DMF 9 h, t.a.Procedimento geral para a preparação dos compostos 31a-e

[0191] O alcino adequado (6,08 mmol) e azida 16 (831 mg, 5,07 mmol) foram suspensos em uma mistura 1:1 de água e t-BuOH (1,5 mL cada) em um balão de vidro de 10 mL equipado com uma pequena barra de agitação magnética. A esta, adicionou-se ascorbato de sódio (2,5 mmol) e sulfato de cobre(II) pentahidratado (2,50 mmol). A mistura foi, então, aquecida durante 10 min a 125 °C sob irradiação de micro-ondas, utilizando uma potência de irradiação de 300 W. Após esse tempo, o solvente foi removido sob pressão reduzida, adicionou-se água e a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As camadas orgânicas foram coletadas, lavadas com Salmoura e secas em Na2SO4. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel utilizando o eluente adequado para resultar nos compostos de triazol desejados 31a, 31b, 31c, 31d ou 31e.

[0192] (1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metanol (31a). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 90%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,47 (s, 1H), 8,42, 8,40 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,12,8,09 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,34 (s, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 221 [M+H]+, 243 [M+Na]+.

[0193] (1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etanol (31b). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 84%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,50 (1H, NCH), δ 8,44-8,42 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,148,12 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,90-3,87 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,02-2,99 (t, J = 6,0 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 235 [M+H]+, 257 [M+Na]+.

[0194] (1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)propanol (31c). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 88%, sólido amarelo 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ8,47 (s, 1H), 8,42, 8,40 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,12,8,09 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,66-3,63 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,89-2,85 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,981,92 (t, J = 8,0 Hz, 2H), MS (ESI) m/z 227 [M+H]+, 271 [M+Na]+.

[0195] 4-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)butan-1-ol (31d). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 85%, sólido amarelo 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4) δ 8,43 (s, 1H), 8,35 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 8,08 (m, Hz, 2H), 3,59 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,79 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,78 (q, J = 15,2 Hz, 2H), 1,61 (dt, J = 13,1, 6,4 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 361[M-H]-.

[0196] 2-metil-1-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)pentan-1-ol (31e). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 88%, sólido amarelo 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,39-8,37 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,05 (s, 1H), 7,98-7,96 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,91-4,84 (m, 1H), 2,82 (s, 1H), 2,06-2,03 (m, 1H), 1,51-1,12 (m, 4H), 0,93-0,86 (m, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3- d): δ 152,24, 147,33, 141,61, 125,52, 124,92, 120,36, 119,28, 71,60, 70,98, 38,88, 38,63, 35,06, 33,80, 20,31, 20,13, 15,25, 14,24, 13,80 ppm. MS (ESI) m/z 325,0 [M+Cl]-.Procedimento geral para a preparação dos compostos 32a-d

[0197] Cloreto de tosila (1,88 mmol, 359.00 mg), KOH (4,28 mmol, 240.39 mg) e o álcool adequado, foram agitados em 15 mL de THF anidro em um banho de gelo e sal, a 0 °C sob atmosfera de nitrogênio. Após 30 minutos, a mistura de reação foi agitada em t.a. Doze horas depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida, adicionou-se água e a mistura de reação foi extraída com DCM (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2SO4) e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE/ EtOAc 5:3).

[0198] 3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil 4-metilbenzenossulfonato (32 a). Rendimento de 72%. Sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,44-8,41 (d, J = 9,2 Hz, 2 H), 8,17 (s, 1H), 7,96-7,93 (d, J = 9,2 Hz, 2 H), 7,84-7,82 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,37-7,35 (d, J = 8 Hz, 2H), 5,29 (s, 2H), δ 2,45 (s, 3H) ppm. MS (ESI): m/z 397 [M+Na]+.

[0199] 3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil 4-metilbenzenossulfonato (32 b). Rendimento de 78%. Sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,42-8,39 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,98 (s, 1H), 7,95-7,93 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,75-7,73 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,32-7,30 (d, J = 8 Hz, 2H), 4,374,34 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,21-3,18 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,40 (s, 3H) ppm. MS (ESI): m/z 410,8 [M+Na]+.

[0200] 3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)propil-4-metilbenzenossulfonato (32 c). Rendimento de 83%. Sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,35-8,33 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,94-7,92 (m, 3H), 7,747,72 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,75-7,73 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,31-7,29 (d, J = 8 Hz, 2H), 4,09-4,06 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,88-2,84 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,12-2,07 (quint, J = 6,0 Hz, 2H ppm. MS (ESI): m/z 402,8 [M+H]+, 424,8 [M+Na]+.

[0201] 4-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)butil-4-metilbenzenossulfonato (32d). Rendimento de 90%. Sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,38 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,75 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,06 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 2,80 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 2,42 (s, 2H), 1,89 - 1,64 (m, 3H), MS (ESI): m/z 417,1 [M+H]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 33e-i.

[0202] A uma solução do tosilato adequado, foi adicionada a amina correspondente, a 0 °C. A mistura de reação foi agitada a 80 °C em um tubo vedado. Após 24 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash em sílica gel.

[0203] 4-(3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)morfolina (33e). (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 95%. Sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,6 (s, 1H), 8,46-8,44 (d, J = 8 Hz, 2H), 8,17-8,14 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,76 (s, 2H), 3,71-3,69 (m, 4H), 2,57-2,55 (m, 4H) ppm. MS(ESI): m/z 412,9 [M+Na]+, 289,9 [M+H]+.

[0204] 4-(3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil)morfolina (33f). (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 92%. Sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,51 (s,1H), 8,43-8,40 (d, J = 8 Hz, 2H), 8,13-8,10 (d, J = 8 Hz, 2H), 3,72-3,69 (m, 4H), 3,01-2,99 (t, J = 2 Hz, 2H) 2,77-2,73 (t, J = 8 Hz, 2H), δ 2,57-2,55 (m, 4H), MS (ESI): m/z 303,9 [M+H]+.

[0205] 4-(3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)propil)morfolina (33g). (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 90%. Sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona): δ 8,51 (s,1H), 8,43-8,41 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 8,19-8,16 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 3,59-3,57 (m, 4H), 2,83-2,80 (t, J = 7,6 Hz, 2H) 2,40-2,36 (m, 4H), δ 2,57-1,93-1,86 (t, J = 7,6 Hz, 2H), MS (ESI): m/z 303,9 [M+H]+.

[0206] 1-metil-4-(3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)propil)piperazina (33h). (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 69%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,22-8,20 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,85-7,82 (m, 3H), 2,69-2,66 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,31-2,26 (m, 10H), 2,10 (s, 3H), 1,821,74 (quint, J = 5,9 Hz, 2H) ppm. MS (ESI): m/z 330,9 [M+H]+, 353 [M+Na]+.

[0207] 4-(3-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)propil)dimetilamina (33i). (Eluente de purificação: DCM-metanol 95:5). Rendimento de 69%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,63 (s, 1H), 8,43-8,41 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 8,16-8,14 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 3,14-3,10 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,93-2,90 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,81 (s, 6H), 2,21-2,13 (quint, J = 8,0 Hz, 2H) ppm. MS (ESI): m/z 317,9 [M+H]+, 339,9 [M+Na]+.

[0208] 4-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)butan-1-amina (33l). 32d (500 mg, 1,2 mmol) foi solubilizada em DCM anidro (2 mL), em um balão. A mistura de reação foi resfriada até -78 °C, e amônia foi borbulhada na solução. O tubo foi vedado e a mistura resultante foi agitada em t.a. durante 12 h. Após esse tempo, o solvente foi removido sob pressão reduzida. HCl 3N foi adicionado e o precipitado amarelo resultante foi filtrado e recristalizado a partir de ACN. Rendimento de 80%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,42 (s, 1H), 8,33 (d, J = 8,6 Hz, 3H), 8,04 (d, J = 8,5 Hz, 3H), 2,77-2,74 (m, 4H), 1,80 - 1,66 (m, 2H), 1,57-1,55 (m, 2H), 0,81 (m, 2H) ppm. MS (ESI): m/z 262 [M+H]+, 284 [M+Na]+.

[0209] (4-(1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)butil)carbamato de terc- butila (33m): 33l (110 mg, 0,42 mmol) e Boc2O (139 mg, 0,63 mmol) foram agitados em uma mistura de 10 mL de NaOH (aq) 5% e THF (10 mL) em t.a. durante 8 h. Após esse tempo, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o pH ajustado em 6 pela adição de HCl 1N. A mistura de reação foi extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2SO4) e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/ MeOH 98:2). Rendimento de 93%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,95-7,92 (m 2H), 4,61 (s, 1H), 3,13-3,10 (m 2H), 2,78 (m, 2H), 1,75-1,70 (m, 2H), 1,49 - 1,43 (m, 2H), 1,39 (s, 9H) ppm.Procedimento geral para a preparação dos compostos 34a-i e m.

[0210] O composto de triazol 31a-d adequado, ou 33e-i (400 mg, 1,60 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH anidro e Paládio 10% em carvão (25 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite, o solvente evaporado sob pressão reduzida.

[0211] (1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metanol (34a). Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,09 (s, 1H), 7,46-7,41 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,81-6,75 (d, J = 8,0 Hz 2H), 2,29 (s, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 191 [M+H]+, 213 [M+Na]+.

[0212] (1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etanol (34b). Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,09 (s, 1H), 7,46-7,41 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,81-6,75 (d, J = 8,0 Hz 2H), 3,86-3,83 (t, J = 6 Hz, 2H) 2,952,93 (t, J = 6 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 205 [M+H]+, 227 [M+Na]+.

[0213] 1-(1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)-2-metilpentan-1-ol (34d). Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,12 (s, 1H), 7,45-7,43 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,79-6,77 (d, J = 8,4Hz, 2H), 4,76-4,62 (m, 1H), 1,98-1,90 (m, 1H), 1,54-1,12 (m, 4H), 0,94-0,88 (m, 6H) ppm. MS (ESI): m/z 261,3 [M+H]+, 282,9 [M+Na]+.

[0214] 4-(4-(3-morfolinometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzenamina (34e). Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (MeOD-d4): δ 8,25 (s, 1H), 7,477,43 (d, J = 8 Hz, 2H), 6,80-6,76 (d, J = 8 Hz, 2H), 3,84 (s, 2H) 3,72-3,71 (m, 4H), 2,68-2,67 (m, 4H) ppm. MS (ESI): m/z 259,9 [M+H]+, 281,9 [M+Na]+.

[0215] 4-(4-(3-morfolinoetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzenamina (34f). Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,09 (s, 1H), 7,44-7,40 (d, J = 8 Hz, 2H), 6,79-6,75 (d, J = 8 Hz, 2H), 3,71-3,68 (m, 4H), 2,97-2,93 (t, J = 8 Hz, 2H) 2,73-2,69 (t, J = 8 Hz, 2H), 2,54-2,53 (m, 4H) ppm. MS: m/z 273,9 [M+H]+.

[0216] 4-(4-(3-dimetilaminopropil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzenamina (34g). Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,21 (s, 1H), 7,47-7,45 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,82-6,80 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,253,21 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,90-2,85 (m, 8H), 2,15-2,18 (quint, J = 8,0 Hz, 2H) ppm. MS (ESI): m/z 246,0 [M+H]+.

[0217] 4-(4-(3-morfolinopropil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzenamina (34h). Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,04 (s, 1H), 7,44-7,42 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,78-6,76 (d, J = 8 Hz, 2H), 3,67-3,64, (m, 4H), 2,74-2,72 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,43-2,38 (m, 6H), 1,91-1,84 (quint, J = 8,0 Hz, 2H) ppm. MS (ESI): m/z 287,9 [M+H]+, 309,9 [M+Na]+.

[0218] 4-(4-(3-metilpiperazinopropil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzenamina (34i). Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 7,56 (s, 1H) 7,37-7,26 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,69-6,67 (d, J = 8Hz, 2H), 2,75-2,72 (t, J = 7,6Hz, 2H), 2,48-2,40 (m, 9H), 2,26 (s, 1H), 1,90-1,86 (quint, J = 7,4 Hz, 2H) ppm. MS (ESI): m/z 301,1 [M+H]+, 323,2 [M+Na]+.

[0219] (4-(1-(4-aminofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)butil)carbamato de terc- butila (34m): Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,57 (s, 1H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,70 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 4,62 (s, 1H), 3,12 (s, 2H), 2,74 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 1,79 - 1,61 (m, 2H), 1,61 - 1,43 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), ppm. MS (ESI): m/z 332,4 [M+H]+, 354,1 [M+Na]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 35a-i.

[0220] A anilina adequada 34a-i (0,10 mmol) foi adicionada a uma solução do isocianato adequado 1 ou 24 (0,15 mmol) em MeOH anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 9 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para proporcionar o produto final 35a, 35b ou 35g como um sólido branco. Alternativamente, o resíduo foi cristalizado a partir de MeOH para proporcionar o composto 35e ou 35f.

[0221] 1-(4-(4-(hidroximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (35a). (Eluente de purificação: DCM-metanol 95:5). Rendimento de 79%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 9,23 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,80-7,76 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,80-7,76 (m, 3H), 7,64,-7,62 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,17-7,12 (m, 2H), 6,96-6,93 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,58 (s, 2H), 2,24 (s, 3H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, DMSO d-6): δ 153,09, 140,57, 137,78, 131,50, 131,09, 128,46,127,04, 123,60, 122,38, 121,27, 120,49, 118,84, 55,44, 18,36 ppm. MS (ESI) m/z 322,1 [M-H]-, 358 [M+Cl]-.

[0222] 1-(4-(4-(hidroxietil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (35b). (Eluente de purificação: DCM-metanol 95:5). Rendimento de 75%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 9,23 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,04 (1H, s), 7,80-7,76 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,75-7,73 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,64-7,62 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,17-7,11 (2H, m), 6,96-6,93 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,71-3,67 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,84-2,81 (t, J = 6,8 Hz, 2H) 2,24 (s, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, DMSO d-6): δ 145,80, 140,71, 137,74, 131,44, 130,79, 128,38, 126,71, 123,47, 121,89, 121,15, 119,11, 66,75, 29,68, 18,37 ppm. MS(ESI): m/z 360 [M+Na]+.

[0223] 1-(4-(4-(3-hidroxipropil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (35c). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 80%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): 7,79-7,77 (d, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,49-7,47 (m, 3H), 7,43-7,40 (m, 3H), 7,12-7,10 (t, 1H), 3,66-3,63 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,89-2,85 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,98-1,92 (t, J = 8,0 Hz, 2H), MS (ESI) m/z 407 [M+H]+, 429 [M+Na]+.

[0224] 1-(4-(4-(3-hidroxihexan-2-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil) ureia (35d). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 77%. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 7,81-7,79 (d, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,51-7,49 (m, 3H), 7,42-7,38 (m, 3H), 7,11-7,08 (m, 1H), 4,76-4,62 (m, 1H), 1,98-1,90 (m, 1H), 1,54-1,12 (m, 4H), 0,94-0,88 (m, 6H) ppm. MS (ESI): m/z 446 [M-H]-.

[0225] 1-(4-(4-(morfolinometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (35e). O resíduo foi cristalizado a partir de MeOH. Rendimento de 69%, cristais brancos. 1H RMN (MeOD-d4): δ 8,37 (s, 1H), 7,75-7,73 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,66-7,606 (m, 3H), 7,21-7,17 (m, 2H), 7,06-7,02 t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,73 (s, 2H), ), 3,71-3,69 (m, 4H) 2,565-2,54 (m, 4H), 2,30 (s, 3H) ppm. 13C RMN (MeOD-d4): δ 144,47, 143,79, 140,39, 131,54, 130,09, 126,08, 124,23, 123,11, 122,06, 120,89, 119,23, 66,20, 52,92, 16,85 ppm. MS: m/z 392,9 [M+H]+.

[0226] 1-(4-(4-(morfolinoetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (35f). O resíduo foi cristalizado a partir de MeOH. Rendimento de 75%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO d-6): δ 9,24 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,80-7,78 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,75-7,72 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,63-7,61 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,17-7,11 (m, 3H), 6,96-6,92 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,57-3,55 (m, 4H) 2,87-2,83 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 2,62-2,58 (t, J = 8 Hz, 2H), 2,41-2,40 (m, 4H) 2,23 (s, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, DMSO d-6): δ 145,59, 140,51, 137,64, 131,36, 130,69, 128,36, 126,64, 123,44, 121,81, 121,12, 120,72,119,09, 66,66, 58,12, 53,62, 23,20, 18,33 ppm. MS (ESI): m/z 421,2 [M+H]+, 443 [M+Na]+.

[0227] 1-(4-(4-(morfolinopropil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o-tolilureia (35g). (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 70%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,23 (s, 1H), 7,73-7,71 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,65-7,63 (d, J = 7,6Hz, 2H), 7,21-7,15 (m, 2H), 7,05-7,02 (t, J = 7,4Hz, 1H), 3,70-3,67 (m, 4H), 2,82-2,78 (t, J = 8Hz, 2H), 2,48-2,43 (m, 6H), 2,29 (s, 1H), 1,98-1,90 (quin, J = 8,0Hz, 2H) ppm. 13C RMN (100 MHz, MeOD-d4) δ 145,61, 140,53, 137,67, 131,38, 130,71, 128,37, 126,66, 123,48, 121,87, 121,21, 120,77,119,21, 66,21, 58,22, 53,47, 25,78, 22,99, 18,11 ppm. MS (ESI): m/z 406,9 [M+H]+, 428,9 [M+Na]+.

[0228] 4-(4-(3-(4-metilpiperazin-1-il)propil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzenamina (35h). (Eluente de purificação: DCM-metanol 99:1). Rendimento de 69%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,24 (s, 1H), 7,72-7,63 (m, 4H), 7,19-7,14 (m, 2H), 7,04-7,00 (t, J = 8Hz, 1H), 2,81-2,78 (t, J = 7,6Hz, 2H), 2,63-2,60 (m, 8H), 2,52-2,48 (t, J = 8Hz, 2H), 2,36 (s, 1H), 2,30 (s, 1H), 1,98-1,91 (quint, J = 7,6 Hz, 2H) ppm. 13C RMN (100 MHz, MeOD- d4) δ 154,19, 147,95, 140,27, 136,32, 131,61, 130,03, 126,13, 124,15, 123,14, 120,73, 120,14, 120,01, 119,28, 57,08, 53,97, 51,82, 44,18, 25,78, 22,72, 16,78 ppm. MS (ESI): m/z 434 [M+H]+, 457,2[M+Na]+.

[0229] 1-(4-(4-(dimetilaminopropil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-o- tolilureia (35i). (Eluente de purificação: DCM-metanol 95:5). Rendimento de 67%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,30 (s, 1H), 7,74-7,72 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,67-7,62 (m, 3H), 7,21-7,15 (m, 2H), 7,06-7,02 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,08-3,04 (t, J = 8 Hz, 2H), 2,89-2,85 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,62-2,58 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,77 (s, 6H), 2,3 (s, 3H), 2,15-2,08 (quint, J = 7,6 Hz, 2H), ppm. 13C RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ 154,17, 146,69,140,35, 136,28, 131,54, 130,10, 126,06, 124,2, 123,10, 120,76, 120,34, 119,2, 57,27, 42,5, 29,28, 24,43, 21,97, 16,69 ppm. MS (ESI): m/z 376,9 [M-H]-, 412,9 [M+Cl]-.

[0230] (2-(1-(4-(3-(o-tolil)ureido)fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil) fosfato de dietila (36). 35b (35 mg, 0,10 mmol) foi solubilizado em 6 mL de CH2Cl2 anidro, então (Et2O)2POCl (17 μL, 0,12 mmol), TEA (42 μL, 0,30 mmol) e Ti(tBuO)4 foram adicionados sequencialmente utilizando uma seringa. A mistura de reação foi agitada em t.a. durante 11 h, então o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash em sílica gel. (PE-EtOAc 2:1). Rendimento de 75% óleo amarelo. 1H RMN (400MHz, CDCl3- d): δ 8,37 (s, 1H), 7,70- 7,68 (m, 2H), 7,48-7,38 (m, 5H), 7,20-7,12 (m, 2H), 7,02-6,98 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 4,40-4,36 (t J = 8,0 Hz, 2H), 4,13-4,07 (q, J = 7,6 Hz, 4H), 3,18-3,15 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,32-1,29 (t, J = 7,0 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 153,60, 143,78, 140,09, 136,29, 131,37, 130,69, 130,42, 129,97, 126,87, 126,62, 124,50, 123,44, 120,95, 120,12, 119,53, 66,42, 66,25, 27,06, 17,90, 16,03 ppm. MS (ESI): m/z 472 [M-H]-, 508 [M+Cl]-.Procedimento geral para a preparação dos compostos 37-39.

[0231] O álcool adequado 35b-c, (25 mg, 0,07 mmol), ácido (10 μL, 0,07 mmol), N,N’- diciclohexilcarbodiimida (22 mg, 0,11 mmol) e DMAP (3 mg, 0,01 mmol) foram agitados a 0 °C durante 30 min em uma mistura de CH2Cl2 10 mL e DMF 2 mL. Após esse tempo, deixou-se a mistura de reação atingir a t.a. e esta foi agitada durante 12 h. O solvente foi, então, removido sob pressão reduzida, EtOAc foi adicionado e a mistura foi lavada com solução aquosa de LiCl a 5%, seca em Na2SO4 anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel com o eluente adequado.

[0232] 2-(1-(4-(3-(o-tolil)ureido)fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil-3-metilbutanoato (37). (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 74%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,72 (s, 1H), 7,56-7,48 (m, 5H), 7,25-7,23 (m, 3H), 7,17-7,14 (m, 2H), 6,61 (s, 1H), 4,41-4,38 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,14-3,11 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,18-2,16 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 0,92-0,89 (d, J = 6,8 Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3): δ 173,05, 153,62, 144,95, 139,21, 136,93, 135,65, 136,19, 132,73, 132,18, 131,54, 131,00, 127,53, 126,98, 126,62, 125,34, 121,28, 120,30, 119,94, 62,75, 43,32, 25,57, 22,45, 17,88 ppm. MS (ESI): m/z 420 [M-H]-, 456 [M+Cl]-.

[0233] 2-(1-(4-(3-(2-(trifluormetil)fenil)ureido)fenil)-1H-1,2,3-triazol-4- il)etil-3-metilbutanoato (38). (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 68%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,19 (s, 1H), 7,98-7,96 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,58-7,50 (m, 5H), 7,38 (s, 1H), 7,21-7,17 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,43-4,39 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,16-3,13 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,19-2,17 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 2,15-2,08 (m, 1H), 0,92-0,90 (d, J = 8Hz, 2H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 172,0, 150,9, 139,4, 132,9, 130,1, 129,3, 125,7, 124,7, 124,2, 121,2, 120,7, 118,0, 116,0, 65,7, 46,4, 26,0, 25,0, 20,6 ppm. MS (ESI): m/z 474 [M-H]-, 510 [M+Cl]-.

[0234] 2-(1-(4-(3-(2-(trifluormetil)fenil)ureido)fenil)-1H-1,2,3-triazol-4- il)etil-3-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)acrilato (39). (Eluente de purificação: DCM- metanol 98:2). Rendimento de 68%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz. CDCl3- d): δ 8.12 (s. 1H). 8.02-8.00 (d. J = 8Hz. 1H). 7.60 (s. 1H). 7.58-7.52 (m. 7H). 7.34 (s. 1H). 7.22-7.18 (t. J = 8Hz. 1H). 7.00-6.97 (m. 2H). 6.80-6.78 (d. J = 8 Hz). 6.28-6.24 (d. J = 12Hz. 1H). 5.99 (s. 2H). 4.55-4.52 (t. J = 12.4 Hz. 2H). 3.22-3.25 (t. J = 12.0 Hz. 2H) ppm. 13C RMN (100 MHz. CDCl3-d): δ 167.7. 152.9. 118.6. 117.9. 145.8. 138.4. 133.4. 131.6. 129.7. 127.6. 126.4. 124.9.121.3. 118.7. 116.2. 115.9. 108.4. 106.7. 103.1. 69.0. 24.2 ppm. MS (ESI): m/z 564.5 [M-H]-. 600.3 [M+Cl]-.EXEMPLO 7

[0235] Reagentes e condições: i. Deoxo-Fluor®, CH2Cl2 anidro, 12 h, t.a.; ii. H2, Pd/C, MeOH, 1 h, iii. Isocianato de 2-(trifluormetil)fenila CH2Cl2, 5 h, t.a.; Procedimento geral para a preparação dos compostos fluorados 40a-c:

[0236] O álcool adequado 31a, 31c ou 31d (400 mg, 1,38 mmol) foi dissolvido em 15 mL de CH2CI2 e Deoxo-Fluor® (533 μL, 2,48 mmol) foi adicionado a -40 °C. Após agitação durante 2 h a -40 °C, a mistura de reação foi aquecida até a t.a. e agitada de um dia para o outro. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel.

[0237] 4-(fluormetil)-1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (40a): (Eluente de Purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 67%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, ACETONA-d6): δ 8,94 (s, 1H), 8,49-8,46 (dd, J = 8,8 Hz, 2H), 8,258,23 (dd, J = 8,8 Hz, 2H), 5,64 (s, 1H), 5,52 (s, 1H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, ACETONA-d6): δ 147,50, 144,31, 141,34, 125,43, 123,38, 120,89, 76,00-74,39 (JCF= 161,0 Hz) ppm.

[0238] 4-(3-fluorpropil)-1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (40b): (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 57%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,40-8,38 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,97-7,95 (d, J = 9,2Hz, 2H), 7,90 (s, 1H), 4,61-4,59 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,49-4,46 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 2,98-2,94 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,23-2,10 (m, 2H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 184,54, 147,08, 141,29, 125,53, 120,27, 119,09, 83,73-82,09 (JCF= 164Hz), 29,86-29,66 (JCF= 20Hz), 21,41ppm.

[0239] 4-(1-fluor-2-metilpentil)-1-(4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (40c): (Eluente de purificação: DCM-metanol 98:2). Rendimento de 67%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,38-8,35 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,63-5,45 (m, 1H), 2,22-2,16 (m, 1H), 1,56-1,38 (m, 4H), 0,84-0,92 (m, 3H), 0,79-0,75 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 291 [M-H]-, 327 [M+Cl]-.Procedimento geral para a preparação dos compostos 41a-c

[0240] O composto de triazol adequado 40a, 40b ou 40c (100 mg, 0,34 mmol) foi solubilizado em 10 mL de MeOH anidro e Paládio 10% em carvão (30 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite e o solvente evaporado sob pressão reduzida.

[0241] 4-(4-(fluormetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)anilina (41a): Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, ACETONA-d6): δ 7,94 (s, 1H), 7,467,44 (dd, J = 8,8 Hz, 2H), 6,77-6,75 (dd, J = 8,4 Hz, 2H), 5,62 (s, 1H), 5,50(s, 1H) ppm. MS (ESI) m/z 193 [M+H]+, 215 [M+Na]+.

[0242] 4-(4-(3-fluorpropil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)anilina (41b): Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,51 (s, 1H), 7,84-7,82 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,36-7,34 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,90 (s, 1H), 5,91-4,89 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,99-4,96 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 2,98-2,94 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,232,10 (m, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 221 [M+H]+, 243 [M+Na]+.

[0243] 4-(4-(1-fluor-2-metilpentil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)anilina (41c): Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 7,83 (s, 1H), 7,42-7,40 (d, J = 8,4Hz, 2H), 6,71-6,69 (d, J = 8,4Hz, 2H), 5,60-5,41 (m, 1H), 4,08 (s, 2H), 2,22-2,18 (m, 1H), 1,60-1,20 (m, 4H), 0,94-0,82 (m, 3H), 0,890,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 263 [M+H]+, 285 [M+Na]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 42a, 42b e 42c

[0244] O composto de anilina adequado 41a-c (100 mg, 0,46 mmol) foi adicionado a uma solução do isocianato de 0-(trifluormetil)fenila 24 (85 μL, 0,65 mmol) em CH2Cl2 anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 4 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash utilizando o eluente adequado.

[0245] 1-(4-(4-(fluormetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (42a). (Eluente de Purificação: DCM/EA 95:5). Rendimento de 79%. 1H RMN (400 MHz, ACETONA-d6): δ 9,09 (s, 1H), 8,648,63 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,15-8,13 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,82-7,64 (m, 5H), 7,317,27 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 5,60 (s, 1H), 5,44 (s, 1H) ppm 13C-RMN (100 MHz, ACETONA-d6): δ 152,2, 140,56, 140,57, 132,95, 131,72, 125,90, 125,48, 123,78, 122,80, 121,13, 119,28, 76,16-74,53 (JCF=163,0 Hz) ppm MS (ESI) m/z 378 [M-H]-, 414 [M+Cl]-.

[0246] 1-(4-(4-(3-fluorpropil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2(trifluormetil) fenil) ureia. (42b). Rendimento de 87%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,80 s (1H), 7,93 (s, 1H), 7,75-7,73 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,51-7,49 (m, 3H), 7,42-7,39 (m, 3H), 7,11-7,09 (t, 1H), 5,91-4,89 (m, J = 5,7 Hz, 1H), 4,99-4,96 (m, J = 5,7 Hz, 1H), 2,98-2,94 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,23-2,10 (m, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 408 [M+H]+, 430 [M+Na]+, 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 152,91, 139,44, 132,83, 129,62, 126,77, 121,88, 120,43, 119,13, 115,88, 83,7382,09 (JCF= 164Hz), 32,71-32, 51 (JC-F=20Hz), 27,31 ppm.

[0247] 1-(4-(4-(1-fluor-2-metilpentil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil) fenil) ureia (42c): Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,83 s (1H), 7,90 (s, 1H), 7,79-7,77 (d, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,49-7,47 (m, 3H), 7,43-7,40 (m, 3H), 7,12-7,10 (t, 1H), 5,61-5,42 (m, 1H), 2,32-2,10 (m, 1H), 1,42-1,40 (m, 2H), 1,29-1,21 (m, 2H), 0-98-0,86 (m, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 153,85, 147,65, 139,63, 135,31, 132,49, 131,75, 127,90, 126,82, 126,14, 125,17, 124,81, 122,84, 122,54, 121,20, 120,34, 92,81- 91,18(JC-F=164Hz), 90,72-90,49 (JC-F=23Hz), 37,64-37,44 (JC-F=20 Hz); 34,45, 33,55, 19,98, 14,07, 13,80 ppm. MS (ESI) m/z 450,1 [M+H]+, 472,1[M+Na]+.EXEMPLO 8

[0248] Reagentes e condições: i. NaN3, NH4Cl, DMF, refluxo de 12 h; ii. K2CO3, 1-iodobutano ou 1-clorometiletileter, CH3CN, 12 h, t.a.; iii. H2, Pd/C, MeOH 30 min; iv. Isocianato adequado CH2Cl2, 9 h, t.a.; v. a) 3-amino,4- metilpiridina, trifosgênio, DMAP, CH2Cl2, 0 °C, b). anilina adequada 9 h, t.a. CH2Cl2, 9 h, t.a.;

[0249] 5-(4-nitrofenil)-2H-tetrazol (44). Uma mistura de 4-nitrobenzonitrila (600 mg, 4,05 mmol), azida de sódio (790 mg, 12,15 mmol), cloreto de amônio (867 mg, 16,20 mmol) e DMF (5 mL) foram aquecidos a 120 °C durante 12 h. Então, deixou-se a reação esfriar até a t.a. e adicionou-se água com agitação contínua. A mistura foi, então, acidificada até pH 2 com HCl 6N. A mistura de reação foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL) e seca em Na2SO4, e o solvente foi removido sob pressão reduzida para resultar em um resíduo amarelo que foi cristalizado a partir do etanol. Rendimento de 80%, sólido branco. 1H RMN (MeOD-d4): δ 8,40-8,38 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 8,28-8,28 (d, 2H, J = 8 Hz) ppm. 13C RMN (MeOD-d4): δ 156,72, 149,46, 131,32, 128,18, 124,07 ppm. MS: m/z 189,9 [M-H]-.

[0250] 2-butil-5-(4-nitrofenil)-2H-tetrazol (45). Uma suspensão de 44 (200 mg, 1,05 mmol), K2CO3 (174 mg, 1,26 mmol) e n-butiliodeto (144 μL, 1,26 mmol), em Acetonitrila foi submetida a refluxo durante 4 h. Após esse tempo, a mistura de reação foi concentrada sob vácuo, adicionou-se água e o resíduo foi extraído com AcOEt (3 x 25 mL), lavado com salmoura e seco em Na2SO4. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE-DCM 1:8). Rendimento de 82%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,26 (m, 4H), 4,67-4,63(t, J = 7,6Hz, 2H), 2,03-1,98 (quint, J = 6,8 Hz, 2H), 1,40-1,34 (sx, J = 7,2 Hz, 2H) 0,95-0,92 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 163,05, 148,74,133,42,127,53, 124,10, 53,20, 31,22,19,57,13,30ppm. MS: m/z 220 [M+H]+.

[0251] 2-(etoximetil)-5-(4-nitrofenil)-2H-tetrazol (46). Uma suspensão de 44 (50 mg, 0,26 mmol), K2CO3 (43 mg, 0,31 mmol) e clorometiletileter (28 μL, 0,31 mmol) em Acetonitrila foi submetido a refluxo durante 12 h. Após esse tempo, a mistura de reação foi concentrada sob vácuo, adicionou-se água e o resíduo foi extraído com AcOEt (3 x 25 mL), lavado com salmoura e seco em Na2SO4. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE-DCM 1:7). Rendimento de 66%, sólido amarelo. Uma suspensão de 1H RMN (Acetona d-6): δ 8,42-8,34 (m, 4H), 6,05 (s, 2H), 3,79-3,69 (m, 2H), 1,191,09 (m, 3H) ppm; 13C RMN (Acetona d-6): δ 163,80, 149,22, 133,18, 127,83, 123,94, 81,90, 66,35, 14,34 ppm.

[0252] 4-(2-butil-2H-tetrazol-5-il)anilina (47). Composto 45 (100 mg, 0,40 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH anidro e Paládio 10% em carvão (5 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite, o solvente evaporado sob pressão reduzida. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 7,90-7,88 (d, J = 8,0Hz, 2H), 6,71-6,69 (d, J = 8,0Hz, 2H), 4,57-4,53 (t, J = 7,6Hz, 2H), 4,03 (s, 2H), 2,00-1,92, (quint, J = 8,1 Hz, 2H), 1,38-1,23 (sx, J = 8,0Hz, 2H), 0,93-0,89 (t, J = 8,0Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 165,62, 148,77, 128,04, 117,56, 114,87, 113,12, 52,69, 31,38, 19,56, 12,17 ppm MS (ESI): m/z 218 [M+H]+, 239,9 [M+Na]+.

[0253] 4-(2-(etoximetil)-2H-tetrazol-5-il)anilina (48). Composto 46 (150 mg, 0,60 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH anidro e Paládio 10% em carvão (5 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite, o solvente evaporado sob pressão reduzida. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 7,97-7,95 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 6,75-6,73 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 5,870 (s, 2H), 3,69-68 (m, 2H), 1,241 (s, 3H) ppm. MS: m/z 220 [M+H]+.

[0254] 1-(4-(2-butil-2H-tetrazol-5-il)fenil)-3-(o-tolil)ureia (49). Composto 47 (0,10 mmol) foi adicionado a uma solução de isocianato de o-tolila (0,15 mmol) em MeOH anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 9 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para fornecer o produto final como um sólido branco. (DCM-MeOH 98:2). Rendimento de 73%. 1H RMN (Acetona d-6): δ 8,60 (s, 1H), 8,03-8,01 (d, J = 8Hz, 2H), 7,92-7,90 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,55 (s, 1H), 7,18-7,14 (m, 2H), 6,99-6,95 (t, J = 7,6Hz, 1H), 4,714,67 (t, J = , 2H), 2,27 (s, 1H), 2,03-1,98 (m, 2H), 1,43-1,34 (sx, J = 7,6 Hz, 2H), 0,97-0,94 (t, J = 7,4 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (Acetona): δ 164,91, 152,54, 142,16, 137,33, 130,35, 128,48, 127,64, 126,40, 123,44, 122,20, 121,37, 118,75, 52,47, 31,09, 19,34, 17,17, 12,73 ppm. MS: m/z 351 [M+H]+.

[0255] 1-(4-(2-(etoximetil)-2H-tetrazol-5-il)fenil)-3-(o-tolil)ureia (50). Composto 48 (0,10 mmol) foi adicionado a uma solução de isocianato de o- tolila (0,15 mmol) em MeOH anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 9 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para fornecer o produto final como um sólido branco. (DCM-MeOH 98:2). Rendimento de 62%. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,06-8,04 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,65-7,62 (m, 3H), 7,21-7,15 (m, 2H), 7,05-7,01 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 5,95 (s, 2H), 3,74-3,69 (q, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,20-1,17 (t, 3H, J = 6,8 Hz) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 142,06, 136,14, 130,47, 127,51, 126,33, 124,73, 123,05, 120,95, 118,61, 80,93, 66,18, 16,61, 13,32 ppm. MS: m/z 375 [M+Na]+.

[0256] 1-(4-(2-butil-2H-tetrazol-5-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (51). Composto 47 (0,10 mmol) foi adicionado a uma solução de isocianato de o-tolila (0,15 mmol) em MeOH anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 9 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para fornecer o produto final como um sólido branco. (DCM-MeOH 98:2). Rendimento de 70%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 7,93-7,91 (d, J = 8 Hz,2H), 7,82-7,80 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,48-7,39 (m, 2H), 7,36-7,34 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,09-7,05 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,60-4,57 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,011,97 (m, 2H), 1,39-1,33 (m, 2H), 0,95-0,91 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 153,54, 140,20, 135,38, 132,54, 127,60, 126,29, 126,11, 125,23, 124,54, 122,43, 122,01, 120,07, 52,96, 31,27, 19,60, 13,34 ppm MS (ESI) m/z 405 [M+H]+, 428 [M+Na]+.

[0257] 1-(4-(2-butil-2H-tetrazol-5-il)fenil)-3-(4-metilpiridin-3-il)ureia (52): Uma solução de 4-metilpiridin-3-amina (41 mg, 0,3835 mmol) e DMAP (19 mg, 0,1534 mmol) em 5 mL de CH2Cl2 foi adicionada por gotejamento a uma solução gelada de trifosgênio em CH2Cl2, durante 30 min, então anilina 47 foi adicionada em uma porção, e a mistura de reação foi agitada em t.a. durante 12 h. Após esse tempo, HCl 2M foi adicionado e a mistura foi extraída com CH2Cl2 (3 x 20 mL). As camadas orgânicas foram coletadas, lavadas com Salmoura e secas em Na2SO4. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (CH2Cl2-MeOH 98:2). Rendimento de 70%. 1H RMN (400MHz, MeOD-d4): δ 8,87 (s, 1H), 8,15 (d, 1H), 8,03-8,61 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,63-7,61 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,30-7,29 (d, J = 4Hz, 1H), 4,71-4,67 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,06-1,99 (q, J = 9,3Hz, 2H), 1,42-1,36, (q, 2H), 1,00-0,97 (t, J = 8,0Hz, 3H) ppm. 13C RMN (MeOD-d4): δ 164,69, 153,57, 143,82, 143,19, 141,39, 140,12, 134,50, 127,09, 125,50, 121,37, 118,72, 52,64, 31,03, 19,38, 16,20, 12,29 ppm. MS (ESI) m/z 353,2 [M+H]+, 375,2 [M+Na]+.EXEMPLO 9

[0258] Reagentes e condições: i. trifosgênio, amina aromática adequada, DMAP, CH2Cl2 0 °C 20 min, ii. anilina adequada, t.a. CH2Cl2, 9 h, t.a.;

[0259] Os derivados de ureia 55a-g são apresentados na Tabela 1 Procedimento geral para a preparação de 55a-q:

[0260] Uma solução da amina aromática adequada (41 mg, 0,3835 mmol) e DMAP (19 mg, 0,1534 mmol) em 5 mL de CH2Cl2 foi adicionada por gotejamento a uma solução gelada de trifosgênio em CH2Cl2 durante 30 min, então a anilina adequada 17a-c foi adicionada em uma porção, e a mistura de reação foi agitada em t.a. durante 12 h. Após esse tempo, HCl 2M foi adicionado e a mistura foi extraída com CH2Cl2 (3 x 20 mL). As camadas orgânicas foram coletadas, lavadas com Salmoura e secas em Na2SO4. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel utilizando o eluente adequado.

[0261] 1-(2-fluorfenil)-3-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)ureia (55a): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 68%, sólido branco. 1H RMN (400MHz, MeOD-d4): δ 8,07-8,03 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,56-7,50 (m, 4H), 7,08-6,75 (m, 3H) 2,76- 2,72 (t, J = 8,0Hz, 2H), 1,641,54 (m, 3H), 0,92-0,90 (d, 6H) ppm. 13C RMN (MeOD-d4): δ 154,32, 152,91, 139,45, 132,87, 129,94, 129,06, 123,88, 121,63, 119,11, 115,72, 38,37, 27,62, 23,41, 22,29 ppm. MS (ESI) m/z 366 [M-H]-, 402 [M+Cl]-.

[0262] 1-(3-fluorfenil)-3-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)ureia (55b): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 70%, sólido branco. 1H RMN (400MHz, MeOD-d4): δ 7,74-7,73 (m, 1H), 7,54-7,53 (m, 4H), 7,34-7,32 (m, 1H), 7,25-7,24 (m, 1H), 7,18-7,16 (m 1H), 7,07-7,06 (m, 1H), 6,68-6,65 (t, J = 8,0Hz, 1H), 2,75- 2,73 (t, J = 8,0Hz, 2H), 1,62-1,58 (m, 3H), 0,92-0,90 (d, 6H) ppm. 13C RMN (MeOD-d4): δ 164,10, 153,91, 139,83, 137,51, 133,81, 133,49, 131,51, 129,82, 121,61, 119,17, 117,24, 116,51, 42,71, 29,12, 27,21, 23,27 ppm. MS (ESI) m/z 366 [M-H]-, 402 [M+Cl]-.

[0263] 1-(4-fluorfenil)-3-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)ureia (55c): (Eluente de purificação: PE/EA 7:3). Rendimento de 63%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6): δ 8,48 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,71-7,66 (m, 4H), 7,53-7,49 (m, 2H), 7,02-6,97 (m, 2H), 2,72-2,68 (m, 2H), 1,601,53 (m, 3H), 0,90-0,88 (d, J = 8,0 Hz, 6H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, Acetona-d6): δ 159,71, 152,58, 140,25, 136,40, 131,97, 130,07, 124,70, 120,60, 119,06, 118,60, 115,20, 38,53, 27,36, 23,31, 21,58 ppm. MS (ESI) m/z 366 [M-H]-, 402 [M+Cl]-.

[0264] 1-(3-cloro-2-metilfenil)-3-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil) ureia (55d): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 80%, sólido branco. 1H RMN (MeOD-d4): δ 7,89 (s, 1H), 7,64-7,57 (m, 4H), 7,08-7,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,95-6,93 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 2,77-2,73 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,60-1,56 (m, 3H), 0,94-0,93 (d, J = 6,0 Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 153,48, 149,08, 139,85, 137,69, 131,73, 131,14, 126,60, 123,47, 121,61, 121,16, 119,74 ppm. MS (ESI): m/z 396 [M-H]-.

[0265] 1-(4-(4-(etoximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(5-isopropil-2- metilfenil) ureia (55e): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 70%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,39 (s, 1H), 7,85 (s,1H), 7,46-7,37 (m, 4H), 7,02-7,00 (d, J = 8,0Hz,1H), 6,89-6,87 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,66 (s,2H), 3,63-3,58 (q, J = 7,8 Hz, 2H), 2,81, 2,75 (m, 1H), 2,10 (s, 1H), 1,231,20 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 1,16-1,14 (d, J = 8,0 Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 154,22, 147,65, 145,95, 139,97, 135,57, 131,52, 131,52, 130,54, 128,69, 123,47, 122,80, 121,22, 120,96, 120,01, 66,40, 63,90, 33,66, 23,92, 17,42, 15,09 ppm. MS (ESI) m/z 394,1 [M+H]+, 416,1 [M+Na]+.

[0266] 1-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(isoquinolin-5- il)ureia (55f): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 63%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 9,22 (s, 1H), 8,46 (m, 1H), 8,228,20 (m, 2H), 7,96 (s, 1H), 7,89-7,87 (d, J = 8,0Hz, 1H), 7,73-7,67 (m, 5H), 2,78-2,74 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,61-1,57 (m, 3H), 0,93-0,92 (d, J = 6,0 Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 152,81, 142,11, 140,21, 139,45, 132,84, 129,87, 129,01, 124,88, 121,62, 119,11, 115,75, 114,81, 112,42, 42,66, 30,11, 27,76, 23,21 ppm. MS (ESI) m/z 399,1 [M-H]-, 435,1 [M+Cl]-.

[0267] 1-(1-cloro-3-metilisoquinolin-4-il)-3-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3- triazol-1-il)fenil)ureia (55g): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 60%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,34-8,32 (d, J = 8,0Hz, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,08-8,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,89-7,84 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,74, 7,20 (m, 3H), 7,67-7,65 (d, J = 8,0Hz, 2H), 2,79-2,75 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,62 (s, 3H), 1,64-1,61 (m, 3H), 0,93-0,92 (d, J = 6,0 Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ151,88, 148,47, 139,86, 137,05, 134,65, 132,12, 131,84, 128,04, 126,23, 122,63, 121,02, 119,62, 119,1, 114,81, 112,41, 38,27, 29,45, 27,45, 22,84, 21,44, 19,03 ppm. MS (ESI) m/z 447,1 [M-H]-, 483,1 [M+Cl]-.

[0268] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(5-(ciclopentiloxi)-2- metilfenil)ureia (55h)): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 76%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6): δ 8,64 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,74-7,65 (m, 5H), 7,48 (s, 1H), 7,01-7,99 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,51-6,48 (dd, J = 5,6 Hz, J = 5,6 Hz,0,2 Hz, 1H), 4,75-4,74 (m, 1H), 2,75-2,70 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,91-1,88 (m, 2H), 1,77-1,63 (m, 8H), 1,42- 1,38(m, 2H), 1,01-1,98 (t, J = 8Hz, 3H), 13C RMN (100 MHz Acetona-d6): δ 154,56, 153,62, 136,75, 136,64, 135,76, 128,05, 125,09, 123,49, 123,07, 123,07, 122,17, 122,17, 109,66, 106,38, 82,15, 33,39, 33,39, 29,99, 27,92, 24,10, 24,10, 22,18, 17,35, 14,02.

[0269] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(5-(metoximetoxi)-2-metilfenil)ureia (55i): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 70%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6): δ = 8,63 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,76 - 7,60 (m, 5H), 7,51 (s, 1H), 7,03 (d, J = 8,3, 2H), 6,64 (dd, J = 8,3, 2,6, 2H), 5,12 (s, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,71 (t, J = 7,6, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,66 (m, 2H), 1,43 - 1,34 (m, 2H), 0,93 - 0,89 (t,J = 7,8Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz Acetona-d6): δ 156,07, 152,45, 148,35, 140,15, 138,13, 131,93, 131,11, 129,97, 120,57, 119,10, 118,18, 111,30, 109,96, 109,81, 94,35 55,45, 29,99, 27,92, 22,18, 17,35, 14,02 ppm. MS (ESI) m/z 408,1 [M-H]-, 444,1 [M+Cl]-.

[0270] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(3-fluorfenil)ureia (55l): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 80%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d) δ 7,34 (s, 2H), 7,11 - 6,93 (m, 4H), 6,66 (s, 2H), 6,48 (s, 2H), 6,25 (d, J = 7,5 Hz, 4H), 6,14 - 6,03 (m, 4H), 5,94 (s, 2H), 5,73 (s, 2H), 2,03 - 1,98 (m, 4H), 1,00 - 0,95 (m, 3H), 0,69 - 0,64 (m, 3H), 0,28 - 0,22 (m, 6H), 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d) δ: 160,36, 154,56, 154,07, 140,81, 136,75, 135,76, 129,04, 125,09, 123,07, 123,07, 122,17, 122,17, 117,53, 111,81, 110,08, 29,99, 27,92, 22,18, 14,02,ppm. MS (ESI) m/z 352 [M-H]-, 388 [M+Cl]-.

[0271] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(3-fluorfenil)ureia (55m): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 80%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d) δ: 7,78 (s, 1H), 7,59 (m, 4H), 7,37 (d, J = 10,6, 1H), 7,22 (dd, J = 15,4, 7,2, 1H), 7,08 (d, J = 8,0, 1H), 6,71 (t, J = 8,2, 1H), 2,77 (t, J = 7,6, 2H), 1,77 - 1,54 (m, 2H), 1,47 - 1,17 (m, 2H), 0,96- 0,93 (t, J = 7Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d) δ 160,36, 154,56, 154,07, 140,81, 136,75, 135,76, 129,04, 125,09, 123,07, 123,07, 122,17, 122,17, 117,53, 111,81, 110,08, 29,99, 27,92, 22,18, 14,02ppm. MS (ESI) m/z 352 [M-H]-, 388 [M+Cl]-.

[0272] 1-(3-fluorfenil)-3-(4-(4-(3-oxobutil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)ureia (55n): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 75%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6) δ 8,54-8,51 (m, 2H), 8,15 (s, 1H), 7,81 - 7,56 (m, 4H), 7,58 - 7,55 (d,J = 12Hz, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,28 - 7,26 (d, J = 8Hz, 1H), 6,73-6,69 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 2,95-2,88 (m, 4H), 2,12 (s, 3H), ppm. 13C RMN (100 MHz, Acetona-d6) δ 206,98, 160,36, 154,07, 153,06, 140,81, 136,75, 135,76, 129,04, 123,07, 123,07, 122,17, 122,17, 121,34, 117,53, 111,81, 110,08, 41,35, 28,57, 20,36,ppm. MS (ESI) m/z 366 [M-H]-, 402 [M+Cl]-.

[0273] 1-(4-(4-(etoximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(3-fluorfenil)ureia (55o): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 72%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6) δ: 8,46 - 8,38 (m, 3H), 7,76 - 7,70 (m, 4H), 7,58 - 7,55 (d,J = 11Hz, 1H), 7,27-7,24 (t, J = 6 Hz, 1H), 7,17-7,15(d, J = 7Hz, 1H), 6,74-6,71 (t, J = 7Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 3,57-3,52 (q, J = 6,7 Hz, 2H), 1,16-1,13 (t, J = 6,6 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, Acetona d6) δ 164,26, 161,86, 152,22, 145,85, 140,05, 131,95, 130,14, 121,06, 120,89, 119,35, 114,13, 108,63, 108,42, 105,64, 105,38, 65,30, 63,54, 14,55, -43,88,ppm. MS (ESI) m/z 354 [M-H]-, 390 [M+Cl]-.

[0274] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(2-metil-5-(3- oxobutil)fenil)ureia (55p): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 72%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4) δ 8,18 (s, 1H), 7,70 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,62 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,49 (s, 1H), 7,08 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,79- 2,73 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,47 - 1,36 (m, 2H), 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz MeOD-d4) δ 208,15, 154,56, 139,69, 138,44, 136,75, 135,76, 130,90, 128,16, 125,90, 125,09, 123,54, 123,07, 123,07, 122,17, 122,17, 40,44, 31,99, 29,99, 28,57, 27,92, 22,18, 17,35, 14,02 ppm. MS (ESI) m/z 417,9 [M-H]-, 453,8 [M+Cl]-.

[0275] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)-3-(5-fluorpiridin-3-il)ureia (55q): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 99:2). Rendimento de 67%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4) δ 9,30 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 8,10 - 7,99 (m, 2H), 7,92 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,66 - 7,57 (m, 3H), 6,52 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 2,74 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,71 (p, J = 7,9 Hz, 2H), 1,48 - 1,34 (m, 2H), 1,00 (t, J = 6,6 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz MeOD-d4) δ 159,43, 154,56, 154,07, 139,94, 136,75, 135,76, 134,14, 133,93, 125,09, 123,07, 123,07, 122,17, 122,17, 115,14, 29,99, 27,92, 22,18, 14,02 ppm. MS (ESI) m/z 353 [M-H]-.EXEMPLO 10

[0276] Reagentes e condições: i. Pir., 5 h, t.a. ii. H2, Pd/C, MeOH; iii a) t- BuONO, CH3CN, 20 min 0 °C; b) TMSN3, CH3CN, 2 h, t.a.; iii (para 58e) a) NaNO2, H2SO4 25%, 20 min 0 °C; b) NaN3 2 h, t.a.; v. alcino, CuSO4^5 H2O, ascorbato de sódio, H2O tBuOH (1:1), PM 10 min, 120 °C;

[0277] A lista de derivados sintetizados de sulfonamida derivados é apresentada na Tabela 2. Procedimento geral para a preparação de sulfonamidas 58-59a-e:

[0278] A uma solução agitada da amina aromática adequada (1 eq.) em 5 mL de piridina anidra, adicionou-se o cloreto de sulfonila correspondente (1,1 eq) a 0 °C. A solução correspondente foi agitada em t.a. sob atmosfera de nitrogênio durante 5 h. Após o término da reação, a mistura foi acidificada com 20 mL de HCl 2N, a fase aquosa foi extraída várias vezes e as fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4) e concentradas.

[0279] N-(2-hidroxi)-3-nitro-fenilbenzenossulfonamida (58a). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 84%. 1H RMN (Acetona): δ 8,70 (s, 1H), 8,59, (s, 1H), 8,45-8,42 (d, J = 12 Hz, 1H), 8,13-8,12 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 7,83-7,79 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,36-7,34 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,02-6,98 (t, J = 8 Hz, 1H), 6,83-6,76 (m, 2H), MS (ESI): m/z 292,8 [M-H]-.

[0280] N-(2-hidroxi)-4-nitro-fenilbenzenossulfonamida (59a). 1H RMN (MeOD-d4): δ 8,25-8,22 (dd, 2H, J = 8,4 Hz), δ 7,93-7,91 (dd, 2H, J = 8,4 Hz), 7,33-7,31 (d, 1H), 6,97-6,94 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,76-6,73 (t, J = 7,6 Hz, H), 6,66-6,64 (d, J = 8 Hz,1 H) ppm. 13C RMN (MeOD-d4): δ 150,36, 150,06, 128,56, 127,06, 125,55, 123,55, 119,29, 115,53 ppm. MS: m/z 292,8 [M-H]-.

[0281] N-(4-metoxi)-3-nitro-fenilbenzenossulfonamida (58b). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 84%. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,57 (s, 1H), 8,39-8,37 (d, J = 8Hz, 1H), 7,97-7,95 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,65-7,61 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,996,97 (dd, J = 8,1 Hz, 2H), 6,78-6,76 (dd, J = 8,1 Hz, 2H), 6,69 (s, 1H), 3,75 (s, 3H) ppm. MS (ESI): m/z 309 [M+H]+.

[0282] N-(2-trifluormetil)-3-nitro-fenilbenzenossulfonamida (58c). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (Hexano-AcOEt 3:1).Rendimento de 84%. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,56 (s, 1H), 8,40-8,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,06-8,04 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,86-7,84 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,697,64 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,61-7,57 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,52-7,50 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,31-7,27 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 148,16, 140,78, 133,53, 133,17, 132,66, 130,53, 127,79, 126,83, 126,78, 126,31, 124,91, 122,51, 122,02 MS (ESI): m/z 286,8 [M+Na]+.

[0283] N-(2-trifluormetil)-4-nitro-fenilbenzenossulfonamida (59c). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 84%. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 8,27-8,25 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,91-7,89 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,87-7,85 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,61-7,57 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,53-7,51 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,32-7,25 (t, J = 8 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 150,80, 144,33, 139,34, 133,61, 128,99, 127,14, 126,03, 124,00 ppm.

[0284] N-(2-metil)-3-nitro-fenilenzenesulfonamida (58d). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 84%. 1H RMN (Acetona): δ 8,49-8,47 (m, 2H), 8,09-8,07 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,87-7,83 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,17-7,10 (m, 4H) ppm.

[0285] N-(isoquinolin-6-il)-3-nitrobenzenossulfonamida (58e): (Eluente de purificação: PE-AcOEt: 4-1). Rendimento de 67%. 1H RMN (DMSO d-6): δ 9,56 (s, 1H), 8,52-8,50 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,44-8,41 (m, 2H), 8,21-8,19 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,07-8,05 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,01-7,99 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,797,70 (m, 2H), 7,55-7,53 (d, J = 7,7 Hz, 1H) ppm.

[0286] N-(2-metil)-4-nitro-fenilenzenesulfonamida (59d). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 84%. 1H RMN (400 MHz CDCl3-d):δ 8,28-8,251 (m, 2H), 7,917,88 (m, 2H), 7,27-7,25- (d, J = 6,4 Hz, 2H), 7,18-7,12 (m, 2H), 2,02 (s, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz CDCl3-d): δ 150,17, 145,28, 133,35, 131,20, 128,45, 127,27, 125,19, 124,30, 17,61 ppm. MS: m/z 314,8 [M+Na]+.Procedimento geral para a preparação das sulfonamidas 60a-e e 61a-d

[0287] A sulfonamida adequada (400 mg, 1,35 mmol) foi solubilizada em 20 mL de EtOH anidro e Paládio em carvão (60 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h. Então, a mistura foi filtrada em uma base de Celite, foi concentrada sob vácuo e o produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel com o eluente adequado.

[0288] 3-amino-N-(2-hidroxifenil)benzenossulfonamida (60a) (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 92%. 1H RMN (Acetona): δ 8,29 (s, 1H), 7,27-7,24 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,14-7,09 (m, 2H), 6,99-6,97 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,95-6,92 (t, J = 8 Hz, 1H), 6,82-6,75 (m, 2H), 6,74-6-72 (t, J = 4 Hz, 1H), MS (ESI): m/z 286,8 [M+Na]+.

[0289] 4-amino-N-(2-hidroxifenil)benzenossulfonamida (61a) 1H RMN (MeOD-d4): δ 7,55-7,53 (dd, J = 8,8 Hz, 2H,), 7,42-7,40 (dd, J = 8,8 Hz, 2H), 7,22-7,18 (m, 1H,), 6,90-6,84 (m, 2H), 6,70-6,66 (m, 2H), 6,55-6,53 (d, J = 8,8 Hz, 1H) ppm. MS: m/z 286,8 [M+H]+.

[0290] 3-amino-N-(4-metoxifenil)benzenossulfonamida (60b) (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 92%. 1H RMN (Acetona): δ 7,3 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,17-7,14 (m, 2H), 6,96-6,94 (dd, J = 8Hz, 2H), 6,72-6,70 (dd, J = 8,0Hz, 2H), 3,72 (s, 3H) ppm. MS: m/z 300,8 [M+Na]+.

[0291] 3-amino-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (60c) (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 84%. 1H RMN (Acetona): δ 7,63-7,61 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,51-7,58 (m, 2H), 7,24-7,20 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,19-7,17 (m, 2H), 7,07-7,05 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,90-6,88 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,10 (s, 1H), MS (ESI): m/z 338,8 [M+Na]+.

[0292] 4-amino-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (61c) (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 84%. 1H RMN (Acetona): δ 7,53-7,51 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,49-7,46 (m, 2H), 7,45-7,43 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,30-7,28 (t, J = 8Hz, 1H), 6,62-6,60 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 5,10 (s, 1H), MS (ESI): m/z 338,8 [M+Na]+.

[0293] 3-amino-N-(o-tolil)benzenossulfonamida (60d) 1H RMN (Acetona): δ 8,14 (s, 1H), 7,2-6,92 (m, 6H), 6,92-6,86 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,85-6,84 (d, J = 8 Hz, 1H), 2,11 (s, 3H) ppm. MS (ESI): m/z 262,9 [M+H]+, 284,8 [M+Na]+.

[0294] 3-amino-N-(isoquinolin-6-il)benzenossulfonamida (60e):Composto 59e (400 mg, 1,35 mmol) foi solubilizado em 20 mL de EtOH anidro e Paládio em carvão (60 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h. Então, a mistura foi filtrada em uma base de Celite, concentrada sob vácuo e o produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE-AcOEt: 4-1). Rendimento de 67%. 1H RMN (DMSO d-6): δ 10,23 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 9,41-9,40 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,95-7,84 (m, 2H), 7,59-7,56 (t, J = 8Hz, 1H), 7,43-7,41 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,09-7,06 (t, J = 8,0Hz, 1H), 6,80-6,78 (d, J = 8,0Hz, 1H), 6,66-6,64 (d, J = 8,0Hz), 5,50 (s, 2H) ppm. MS (ESI): m/z 299,8 [M+H]+, 321,8 [M+Na]+.Procedimento geral para a preparação das azidas 62a-c e 63a-d

[0295] Amina (100 mg, 0,41 mmol) foi dissolvida em CH3CN e resfriada até 0 °C em um banho de gelo e sal. A essa solução agitada, adicionou-se tBuONO, e a mistura foi agitada durante 10 min. Após esse tempo, TMSN3 foi adicionado por gotejamento durante 10 min e a solução castanha resultante foi agitada em t.a. Uma hora depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel com o eluente adequado.

[0296] 3-azido-N-(2-hidroxifenil)benzenossulfonamida (62a). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). 1H RMN (Acetona): δ 8,42 (s, 1H), 7,58-7,56 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,53-7,49 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,44 (s, J = 8 Hz, 1H), 7,34-7,32 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,28-7,27 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,00-6,96 (t, J = 8,0 Hz, 1H) 6,81-6,77 (m, 2H), MS (ESI): m/z 288,8 [M-H]-.

[0297] 4-azido-N-(2-hidroxifenil)benzenossulfonamida (63a). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). 1H RMN (MeOD-d4): δ 7,73-7,72 (dd, J = 2,4 Hz, 2H), 7,36-7,35 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,09-7,07 (dd, J = 8,8 Hz, 2H), 6,94-6,90 (m, H), 6,73-6,66 (m, 2H) ppm. MS: m/z 312,8 [M+Na]+.

[0298] 3-azido-N-(2-metoxifenil)benzenossulfonamida (62b). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 92%. 1H RMN (Acetona): δ 7,5 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,27-7,24 (m, 2H), 7,06-7,04 (dd, J = 8Hz, 2H), 6,74-6,72 (dd, J = 8,0Hz, 2H), 3,73 (s, 3H) ppm. MS: m/z 300,8 [M+Na]+.

[0299] 3-azido-N-(o-tolil)benzenossulfonamida (62c). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 4:1). 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 7,51-7,49 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,43-7,39 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,30-7,28 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,15-7,09 (m, 4H), 6,75 (s, 1H), 2,02 (s, 3H) ppm. MS (ESI): m/z 310,8 [M+Na]+.

[0300] 3-azido-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (62d). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 4:1). 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 7,84-7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,56-7,50 (m, 3H), 7,43-7,37 (m, 2H), 7,27-7,23 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,18- 7,16 (d, J = 8Hz, 1H), 6,87 (s, 1H) ppm. MS (ESI): m/z 364,8 [M+Na]+.

[0301] 4-azido-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (63c). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 4:1). 1H RMN (400 MHz CDCl3-d): δ 7,81-7,79 (d, J = 7,6Hz, 1H), 7,74-7,71 (d, J = 7,4Hz, 1H), 7,52-7,46 (m, 2H), 7,22-7,18 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,02-6,98 (m, 3H) ppm. m/z 364,7 [M+Na]+.

[0302] 3-azido-N-(isoquinolin-6-il)benzenossulfonamida (62e): A amina adequada (100 mg, 0,41 mmol) foi dissolvida em CH3CN e resfriada até 0 °C em um banho de gelo e sal. A essa solução agitada, adicionou-se tBuONO e a mistura foi agitada durante 10 min. Após esse tempo, TMSN3 foi adicionado por gotejamento durante 10 min e a solução castanha resultante foi agitada em t.a. Uma hora depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE-AcOEt: 4-1). Rendimento de 67%. 1H RMN (DMSO d-6): δ1H RMN (DMSO d-6): δ 9,03 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,74-7,33 (m, 6H), 7,09-7,07 (d, J = 8,0 Hz, 1H) ppm. MS (ESI): m/z 325,8 [M+H]+, 347,7 [M+Na]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 64a, 64b, 64c, 64d, 64e, 64f, 65a, 65c, 66d, 67d e 68.

[0303] O alcino adequado (6,08 mmol) e a azida adequada (5,07 mmol) foram suspensos em uma mistura 1:1 de água e t-BuOH (1,5 mL cada) em um balão de vidro de 10 mL equipado com uma pequena barra de agitação magnética. A esta, adicionou-se ascorbato de sódio (2,5 mmol) e sulfato de cobre(II) pentahidratado (2,50 mmol). A mistura foi, então, aquecida durante 10 min a 125 °C sob irradiação de micro-ondas, utilizando uma potência de irradiação de 300 W. Após esse tempo, o solvente foi removido sob pressão reduzida, adicionou-se água e a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As camadas orgânicas foram coletadas, lavadas com Salmoura e secas em Na2SO4. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel utilizando o eluente adequado para resultar nos compostos de triazol desejados 64a, 64b, 64c, 64d, 64e, 64f, 65a, 65c, 66d, 67d e 68.

[0304] 3-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(2-hidroxifenil)benzenossulfonamida (64a). (Eluente de purificação: Hexano- AcOEt 3:1). Rendimento de 82%. 1H RMN (400 MHz, Acetona): δ 8,48 (s, 1H), 8,34-8,31 (m, 2H), 8,11-8,09 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,81-7,79 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,717,67 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,37-7,35 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,99-6,95, (t, J = 8 Hz, 1H), 6,81-6,77 (m, 2H), 13C RMN (100 MHz, Acetona): δ 149,88, 142,46, 137,68, 130,44, 137,68, 130,44, 126,66, 126,50, 124,40, 124,19, 123,58, 119,90, 119,47, 118,32, 115,59, 31,30, 24,94, 21,95, 13,19, MS (ESI): m/z 370,7 [M-H]-.

[0305] 4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(2-hidroxifenil)benzenossulfonamida (65a). (Eluente de purificação: Hexano- AcOEt 4:1). Rendimento de 80 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4): δ 8,34 (s, H), 7,93-7,87 (m, 4H), 7,33-7,31 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,96-6,92 (m, 1H), 6,765-7,727 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,67-6,65 (d, J = 8 Hz, 1H), 2,78-2,74 (t, J = 7,6 Hz, 2H) 1,74-1,66 (quint, 2H), 1,45-1,36 (sx, 2H), 1,27-1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H,) ppm. 13C RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ 150,64, 149,22, 140,03, 129,07, 126,59, 125,18, 124,12, 119,86, 115,45, 31,12, 24,93, 22,10, 12,91 ppm. MS: m/z 372,8 [M+H]+, 394,8 [M+Na]+.

[0306] 3-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(4-metoxifenil)benzenossulfonamida (64b). (Eluente de Purificação: Hexano- AcOEt 3:1). Rendimento de 79%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,10 (s, 1H), 7,95-7,93 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,68-7,66 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,56-7,52 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,07-7,04 (dd, J = 8,2Hz, 2H), 6,77-6,75 (dd, J = 8,2Hz, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,78-2,75 (t, J = 7,7Hz, 2H), 1,71-1,64 (quin, J = 7,4 Hz, 2H), 1,43-1,36 (sx, J = 7,6 Hz, 2H), 0,95-0,91 (t J = 7,6Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, MeOD-d4): δ 158,45, 149,70, 141,20, 137,55, 130,75, 127,59, 125,89, 124,43, 119,27, 118,84, 114,46, 55,90, 31,84, 25,52, 21,87, 13,85 ppm. MS: m/z 372,8 [M+H]+, 394,8 [M+Na]+.

[0307] 3-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(o-tolil)benzenossulfonamida (64c). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 90%. 1H RMN (400MHz, Acetona): δ 8,56 (s, 1H), 8,35,8,33 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,25-8,23 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,14-8,11 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,74-7,72 (m, 2H), 7,17-7,10 (m 4H), 2,77-2,73 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,73-1,65 (q, J = 8,0 Hz, 2H), 1,43-1,37 (quint, J = 8,0 Hz, 2H), 0,95-0,91 (t, J = 8 Hz, 1H) ppm. 13C RMN (100 MHz, Acetona): 149,06, 142,56, 137,76, 134,78, 134,16, 130,91, 130,72, 126,78, 126,51, 126,37, 126,28, 123,51, 119,46, 118,11 31,22, 24,95, 21,95, 17,18, 13,18 ppm. MS (ESI): m/z 371,7 [M+H]+.

[0308] 3-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (64d) (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 90%. 1H RMN (Acetona): δ 8,78 (s, 1H), 8,41-8,37 (m, 3H), 8,18-8,16 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,89-7,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,82-7,78 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,69-7,61 (m 2H), 7,54-7-52 (d, J = 8Hz, 1H), 7,45-7,44 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 2,77-2,73 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,71-1,67 (q, J = 8,0 Hz, 2H), 1,45-1,35 (quint, J = 8,0 Hz, 2H), 0,94-0,89 (t, J = 8,0 Hz, 1H) ppm. 13C RMN (Acetona): 149,1, 142,66, 137,89, 134,15, 133,28, 130,93, 127,40, 126,90, 126,28, 124,80, 123,85, 122,29, 119,54, 118,03, 31,22, 24,95, 21,95, 13,18ppm. MS (ESI): m/z 425 [M+H]+.

[0309] 4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (65c). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 93%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,797,81 (m, 4H) 7,75 (s, 1H), 7,57-7,53 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,51-7,49 (d, J = 8Hz, 1H), 8,41-8,37 (m, 3H), 8,18-8,16 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,89-7,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,82-7,78 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,69-7,61 (m 2H), 7,54-7-52 (d, J = 8Hz, 1H), 6,94, (s, 1H), 2,79-2,75 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,73-1,65 (quint, J = 8,0 Hz, 2H), 1,43-1,36 (sx, J = 8,0 Hz, 2H), 0,95-0,91 (t, J = 8,0 Hz, 1H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): 149,9, 140,8, 137,99, 133,88, 133,56, 129,53, 126,71, 125,70, 124,94, 124,09, 122,27, 120,88, 118,45, 31,32, 25,24, 22,24, 13,76 ppm. MS (ESI): m/z 425 [M+H]+.

[0310] 3-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(isoquinolin-6-il)benzenossulfonamida (64e). (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 77%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 9,23 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,89-7,83 (m, 3H), 7,66-7,62 (m, 3H), 7,55-7,46 (m, 2H), 2,74-2,71 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 1,66-1,59 (quint, J = 8,0 Hz, 2H), 1,39-1,25 (sx, J = 8,0 Hz, 2H), 0,90-0,86 (t, J = 8,0 Hz, 1H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): 152,43, 149,84, 142,93, 141,34, 137,68, 132,70, 131,10, 130,51, 129,38, 128,51, 127,38, 126,85, 124,13, 118,81, 115,75, 31,36, 25,25, 22,26, 13,62 ppm. MS (ESI): m/z 408,8 [M+H]+.

[0311] 3-(4-(etoximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (66d): (Eluente de purificação: PE/EtOAc 7:2). Rendimento de 85%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3- d): δ 8,09 (1H, s), 7,99-7,97 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,79-7,75 (t, 8,8 Hz, 1H), 7,607,47 (m, 3H), 7,26-7,22 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,66 (s, 2H), 3,63-3,58 (q, 2H), 1,241,20 (t, J = 6,8 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): 146,95, 140,78, 137,44, 133,39, 130,80, 126,99, 126,07, 125,84, 124,87, 124,69, 122,09, 120,58, 118,71, 66,39, 63,99, 15,07 ppm. MS (ESI): m/z 427 [M+H]+.

[0312] 3-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzeno sulfonamida (67d): (Eluente de purificação: PE/EtOAc 7:2). Rendimento de 78%, sólido amarelo. 1H RMN (CDCl3): δ 8,06 (s, 1H), 8,01-8,00 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,84-7,82 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,76-7,74 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,69 (1H, s), 7,60-7,56 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,53-7,49 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,27-7,25 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 2,80-2,78 (m, 2H), 1,62 (m, 3H), 0,99-0,94 (m, 6H) ppm. 13C RMN (CDCl3): δ 149,95, 145,96, 143,95, 137,71, 133,39, 160,71, 126,68, 125,29, 124,91, 124,15, 118,51, 38,27, 27,62, 23,51, 22,36 ppm. MS: m/z 438,8 [M+H]+.

[0313] 3-(4-(etoximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)-N-(isoquinolin-6-il)benzenossulfonamida (68e): (Eluente de purificação: Hexano-AcOEt 3:1). Rendimento de 74%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,22 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,90-7,17 (m, 3H), 7,70-7,67 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,63,7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,56-7,48 (m, 2H), 4,66 (s, 2H), 3,62-3,57 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,22-1,18 (t, J = 7,8 Hz, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): 152,57, 146,93, 143,22, 141,49, 137,46, 132,52, 130,90, 128,22, 127,44, 124,33, 120,66, 119,97, 66,51, 63,97, 15,11 ppm. MS (ESI): m/z 425 [M+H]+.EXEMPLO 11

[0314] Reagentes e condições: i. Pir., 5 h, t.a.; ii. NaN3, NH4Cl, DMF, refluxo de 12 h; iii. K2CO3, H2O, refluxo de 15 min.

[0315] 3-ciano-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (69) A uma solução agitada de 68 (1 eq.) em 5 mL de piridina anidra, adicionou-se cloreto de sulfonila 57d (1,1 eq) a 0 °C. A solução correspondente foi agitada em t.a. sob atmosfera de nitrogênio, durante 5 h. Após o término da reação, a mistura foi acidificada com HCl 1N, a fase aquosa foi extraída várias vezes e as fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4) e concentradas. (PE-AcOEt 7:3). Rendimento de 75%, branco sólido. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,99-7,94 (m, 2H), 7,82-7,80 (m, 2H), 7,60-7,51 (m, 3H), 7,30-7,26 (t, J = 8Hz, 1H), 6,97 (s, 1H) ppm. MS (ESI): m/z 425 [M+H]+.

[0316] 3-(2H-tetrazol-5-il)-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (70). Uma mistura de 69 (500 mg, 1,53 mmol), NaN3 (299 mg, 4,60 mmol), NH4Cl (328 mg, 6,12 mmol) em DMF (5 mL) foi aquecida a 130 °C durante 6 h. Após esse tempo, deixou-se a reação atingir a t.a. e adicionou-se água com agitação contínua. A mistura foi, então, acidificada até pH 2. A mistura foi extraída com DCM (3 x 25 mL) e lavada com solução aquosa 5% de LiCl, então seca em Na2SO4 anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM-MeOH 94:6). Rendimento de 95%, sólido branco. pf 138,40 °C. 1H RMN (400 MHz, CDCl3- d) : δ 8,47 (s, 1H), 8,20-8,18 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,75-7,73 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,48-7,40 (m, 2H), 7,31-7,28 (m, 2H), 7,07-7,03 (t, J = 7,6Hz, 1H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 163,42, 140,86, 133,70, 133,01, 131,54, 130,13, 130,00, 129,15, 127,37, 126,62, 126,10, 125,85, 124,65, 123,08, 119,22 ppm MS.

[0317] Sal de 3-(2H-tetrazol-5-il)-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida benzenossulfonamida de potássio (71). 70 (50 mg, 0,13 mmol) e K2CO3 (37,42 mg, 0,26 mmol) foram dissolvidos em 1,5 mL de água. Após o fim da geração de CO2, a solução foi submetida a refluxo durante 15 min e, a seguir, evaporada até secar. O sólido resultante foi recristalizado a partir de ACN. Pf 224-226. Rendimento de 82%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d) : δ 8,02 (s, 1H), 7,81-7,79 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,56-7,54 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,44-7,40 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,446,40 (t, J = 7,9 Hz, 1H) ppm.EXEMPLO 12

[0318] Reagentes e condições: i. a) t-BuONO, CH3CN, 20 min 0 °C; b) TMSN3, CH3CN, 2 h, t.a.; ii. CuSO4^5 H2O, ascorbato de sódio, H2O tBuOH (1:1), PM 120 °C, 10 min, iii. H2, Pd/C, MeOH, 1 h, iv. isocianato de 2- (trifluormetil)fenila, CH2Cl2, 5 h, t.a.Procedimento geral para a preparação dos compostos 74 e 75.

[0319] 4-Nitroanilina adequada (7,24 mmol) foi dissolvida em CH3CN e resfriada até 0 °C em um banho de gelo e sal. A essa solução agitada, adicionou-se tBuONO (8,69 mmol) e a mistura foi agitada durante 10 min; após esse tempo, TMSN3 (10,86 mmol) foi adicionado por gotejamento durante 10 min, e a solução castanha resultante foi agitada em t.a. Uma hora depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel.

[0320] 1-azido-2-metoxi-4-nitrobenzeno (74): (Eluente de purificação: PE/AcOEt 7:3). Rendimento de 88%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3- d): δ 7,74-7,72 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,65 (s, 1H), 6,96-6,94 (d, J = 8,0Hz, 2H), 3,91 (s, 3H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 152,03, 144,93, 153,31, 120,03, 117,03, 106,97, 56,42 ppm. MS (ESI) m/z 195,1 [M+H]+, 218,1 [M+Cl]-.

[0321] 1-azido-2-fluor-4-nitrobenzeno (75): (Eluente de purificação: PE/EA 9:1). Rendimento de 60%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,02-7,92 (m, 2H), 7,19-7,15 (t, J = 16Hz, 1H) ppm.Procedimento geral para a preparação dos compostos 76 e 77.

[0322] O alcino adequado 14a ou 14b (0,10 mmol) e a azida adequada (0,09 mmol) foram suspensos em uma mistura 1:1 de água e t-BuOH (1,5 mL cada) em um balão de vidro de 10 mL equipado com uma pequena barra de agitação magnética. A esta, adicionou-se ascorbato de sódio (0,1 equiv.) e sulfato de cobre(II) pentahidratado (0,10 mmol). A mistura foi, então, aquecida durante 10 min a 125 °C sob irradiação de micro-ondas, utilizando uma potência de irradiação de 300 W. Após esse tempo, o precipitado foi filtrado e purificado em sílica, para resultar nos produtos finais 76 ou 77.

[0323] 4-isopentil-1-(2-metoxi-4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (76): (Eluente de purificação: PE/EA 8:3). Rendimento de 94%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,24 (s, 1H), 8,00-7,98 (d, J = 8,0Hz, 1H), 7,84-7,80 (m, 2H), 2,76-2,72 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,60-1,54 (m, 3H), 0,88-0,87 (d, J = 6,0 Hz) ppm. MS (ESI) m/z 291,32 [M+H]+.

[0324] 4-butil-1-(2-fluor-4-nitrofenil)-1H-1,2,3-triazol (77). (Eluente de purificação: PE/EA 7:3). Rendimento de 63%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,24-8,20 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 8,12-8,10 (m, 2H), 7,91-7,90 (d, J = 4,0Hz, 1H), 2,72-2,69 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 1,65-1,58 (m, 2H), 1,36-1,27 (m, 2H), 0,86-0,82 (m, 3H) ppm.Procedimento geral para a preparação dos compostos 78 e 79

[0325] O composto de triazol adequado 76 ou 78 (1,60 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH e Paládio 10% em carvão (25 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite e o solvente evaporado sob pressão reduzida para se obter 78 ou 79 como compostos puros.

[0326] 4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-3-metoxianilina (78): O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%, sólido amarelo. Rendimento 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,58 (s, 1H), 7,27-7,25 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 6,28 (s, 1H), 6,22-6,20 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 4,14 (s, 2H), 3,64 (s, 3H), 2,73-2,69 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,57-1,54 (m, 3H), 0,89-0,88 (d, J = 5,6 Hz, 6H) ppm.

[0327] 4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-3-fluoranilina (79). O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,57 (s, 1H), 7,41-7,39 (d, J = 8,0 Hz 1H), 6,44-6,42 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,25 (s, 2H), 1,65-1,62 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 1,65-1,62 (m, 2H), 1,35-1,32 (m, 2H), 0,89-0,85 (m, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 235 [M+H]+.Procedimento geral para a preparação dos compostos 80 e 81.

[0328] A anilina adequada 78 ou 79 (0,10 mmol) foi adicionada a uma solução de isocianato de 2-(trifluormetil)fenila (0,15 mmol) em DCM anidro (15 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 9 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para proporcionar o produto final 80 ou 81.

[0329] 1-(4-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-3-metoxifenil)-3-(2-(trifluormetil) fenil)ureia (80): (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 78%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,12-8,06 (m, 2H), 7,92 (s, 1H), 7,61-7,54 (m, 3H), 7,26-7,21 (m, 2H), 7,18 (s, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,83-2,80 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 1,71-1,63 (m, 3H), 0,98-0,97 (d, J = 7,8Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3): δ 153,05, 152,05, 148,40, 136,61, 134,63, 132,90, 127,92, 126,70, 126,17, 124,85, 124,78, 122,62, 122,53, 121,46, 121,08, 114,12, 56,43, 38,52,27,77, 23,66, 22,52 ppm. MS (ESI) m/z 448,3 [M+H]+.

[0330] 1-(4-(4-butil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-3-fluorfenil)-3-(2-(trifluormetil) fenil)ureia (81). (Eluente de purificação: DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 70%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,99-7,97 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 7,91-7,89 (d, J = 8,0, 1H), 7,86-7,79 (m, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,72-7,68 (t, J = 8,0, 1H), 7,60-7,53 (m, 2H), 7,27-7,20 (m, 2H), 2,79-2,75 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,71-1,67 (t, 16,0 Hz, 2H), 1,42-1,37 (m, 2H), 0,94-0,90 (t, 16,0 Hz, 3H) ppm.MS (ESI) m/z 420 [M-H]-.EXEMPLO 13

[0331] Reagentes e condições: i. NaN3, HCl, EtOH: H2O, refluxo, 12 h; ii. CuSO4^5 H2O, ascorbato de sódio, H2O-THF (1:1), t.a. 5 h, iii. H2, Pd/C, MeOH, 1 h, iv. isocianato de 2-(trifluormetil)fenila CH2Cl2, 5 h, t.a.

[0332] 2-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)-5-nitropiridina (84). Uma solução de 2-cloro-5-nitropiridina 82 (100 mg, 0,63 mmol) em uma mistura de etanol (8 mL) e água (3 mL) foi cuidadosamente tratada com NaN3 (81 mg, 1,26 mmol). HCl concentrado (0,8 mL) foi adicionado por gotejamento em t.a. A reação foi agitada sob refluxo e então resfriada até a t.a. Após esse tempo, NaHCO3 saturado foi adicionado e o pH ajustado em 7. DCM (15 mL) foi adicionado e a reação foi lavada com água. As camadas orgânicas foram secas em Na2SO4 e concentradas para proporcionar a resíduo amarelo. O resíduo e o alcino adequado (90 μL, 0,75 mmol) foram suspensos em uma mistura 1:1 de água e THF (1,5 mL cada). A esta, adicionou-se ascorbato de sódio (1,0 equiv.) e sulfato de cobre(II) pentahidratado (1,0 mmol). A mistura foi agitada em t.a. durante 5 h. Após esse tempo, a reação foi dividida entre solução aquosa saturada de NH4Cl e AcOEt, e agitada durante 15 min. A camada orgânica foi separada, seca em Na2SO4 e o solvente removido sob vácuo.

[0333] O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM/MeOH 98:2). Rendimento de 75%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 9,28 (s, 1H), 8,67-8,64 (m, 1H), 8,36-8,32 (m, 2H), 2,80-2,76 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 1,67-1,58 (m, 3H), 0,84-0,82 (d, J = 8,0Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 152,24, 150,03, 144,99, 143,23, 134,59, 118,55, 114,44, 113,60, 38,08, 27,56, 23,48, 22,32 ppm. MS (ESI) m/z 260,3 [M-H]-.

[0334] 6-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)piridin-3-amina (85): 84 (1,60 mmol) foi solubilizada em 30 mL de MeOH anidro e Paládio 10% em carvão (25 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%, sólido amarelo. Rendimento 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,14 (s, 1H), 7,92-7,90 (m, 2H), 7,17-7,14 (m, 1H), 3,89 (s, 2H), 2,80-2,76 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 1,74-1,58 (m, 3H), 0,95-0,93 (d, J = 8,0 Hz, 6H) ppm. MS (ESI) m/z 232,3 [M+H]+.

[0335] 1-(6-(4-isopentil-1H-1,2,3-triazol-1-il)piridin-3-il)-3-(2-(trifluormetil) fenil)ureia (86). Anilina 85 (0,10 mmol) foi adicionada a uma solução de isocianato de 2-(trifluormetil)fenila (0,15 mmol) em CH2Cl2 anidro (15 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 9 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para fornecer o produto final como um sólido branco. (Eluente de purificação: DCM-MeOH 98:2). Rendimento de 61%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6): δ 9,14 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,28-8,24 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,14-8,12 (d, J = 8,0Hz, 1H), 8,06-8,04 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,70-7,64 (m, 2H), 7,33-7,30 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,80-2,75 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 1,64-1,61 (m, 3H), 0,96-0,94 (d, J = 8,0 Hz, 6H) ppm. 13C RMN (100 MHz, Acetona-d6): δ 152,31, 148,41, 144,17, 138,61, 138,26, 136,46, 132,84, 128,80, 125,95, 125,65, 123,96, 117,98, 117,71, 113,35, 38,34, 27,33, 23,23, 21,91, 21,64 ppm. MS (ESI) m/z 419,3 [M+H]+.EXEMPLO 14

[0336] Reagentes e condições: i. Ac2O, pir, 0 °C até t.a.; ii. NH4OH, 95 °C, 5 h; iii. HNO3, CH3COOH, 0 °C até t.a. 3 h; iv. POCl3, 110 °C, 1 h; v. H2, Pd/C, MeOH, 1 h; vi. SnC^2H2O, HCl t.a. 18 h.

[0337] 4-acetilisocroman-1,3-diona (88): Piridina (2 mL) foi lentamente adicionada a uma massa fluida de ácido homoftálico (1000 mg, 5,55 mmol) em anidrido acético a 0 °C com agitação. A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 5 h. Após esse tempo, Et2O foi adicionado e o sólido branco resultante foi coletado por filtração e enxaguado duas vezes com éter. Rendimento de 75%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3 d): δ 8,25-8,23 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,70-7,68 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,60-7,58 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,39-7,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,62 (s, 1H).

[0338] 3-metilisoquinolin-1-ol (89): À 4-acetilisocroman-1,3-diona (1000 mg, 4,90 mmol), adicionou-se lentamente NH4OH aquoso saturado (9 mL). A suspensão amarela clara resultante foi aquecida em um tubo vedado a 95 °C durante 5 h. Então, a mistura de reação foi resfriada até a t.a. e diluída com água. O sólido branco resultante foi coletado por filtração sob pressão reduzida e seco. Rendimento de 99%. Sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3 d): δ 11,61(br s, 1H), 8,39-8,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,62-7,58 (t, J = 8,0Hz, 1H), 7,46-7,39 (m, 2H), 6,30 (s, 1H), 2,40 (s, 3H) ppm.

[0339] 3-metil-4-nitroisoquinolin-1-ol (90): a uma solução de 89 (800 mg, 5,02 mmol), em ácido acético (7 mL), adicionou-se lentamente ácido nítrico 90% (fumegante) (2 mL), a 0 °C com agitação. Deixa-se a mistura de reação aquecer até a t.a. e esta foi agitada durante 3 h. Adicionou-se água e o sólido resultante foi coletado por filtração e seco. Rendimento de 90%, sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3 d): δ 12,03(br s, 1H), 8,21-8,19 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,82-7,78 (t, J = 8,0Hz, 1H), 7,73-7,17 (d, 1H), 7,58-7,54 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,42 (s, 3H) ppm.

[0340] 1-cloro-3-metil-4-nitroisoquinolina (91): Uma mistura de 90 (100 mg, 0,49 mmol) e POCl3 (5 mL) foi aquecida com agitação a 110 °C durante 1 h. POCl3 foi removido por destilação e o resíduo resultante foi neutralizado com NaHCO3 aquoso e extraído com AcOEt (3 x 25 mL). As camadas orgânicas foram coletadas e lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida para se obter o composto puro. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3 d): δ 8,31-8,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,847,80 (t, J = 8,0Hz, 1H), 7,71-7,68 (m, 1H), 2,65 (s, 3H) ppm.

[0341] 1-cloro-3-metilisoquinolin-4-amina (53g). A uma solução de 91 (800 mg, 3,59 mmol) em HCl concentrado (15 mL), adicionou-se SnCl2 2H2O. A mistura de reação foi agitada durante 18 h em t.a. Após esse tempo, esta foi despejada em água gelada e o pH ajustado em 8 pela adição de NaOH 1N. A mistura de reação foi extraída com AcOEt (3 x 25 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 para se obter um resíduo que foi cristalizado a partir de Etanol para se obter o composto puro. Rendimento de 84%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3 d): δ 8,23-8,20 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,75-7,73 (d, J = 8,0Hz, 1H), 7,73-7,64 (t, 1H), 7,59-7,55 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,95 (s, 2H), 2,53 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 193,0 [M+H]+.EXEMPLO 15

[0342] Reagentes e condições: i. a) H2SO4-H2O (3:1), 100 °C, 30 min; b) NaNO2 0 °C até a t.a.; ii. a) NaH, DMF 0 °C até a t.a. b) iodeto de ciclopentila (para 94a) ou MOM-Cl (para 94b) 65 °C, 1 h; iii. H2, Pd/C, MeOH, 1 h.

[0343] 4-metil-3-nitrofenol (93): 92 (200 mg, 1,31 mmol) foi dissolvido em uma mistura 3:1 de H2SO4-H2O. A mistura resultante foi aquecida até 100 °C durante 30 min. Após esse tempo, a reação foi resfriada até 0 °C e a solução de NaNO2 foi adicionada por gotejamento. Após 1 h, a mistura foi aquecida até o refluxo. Após o término, a mistura foi extraída com EtOAc várias vezes e as fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4) e concentradas. A mistura resultante foi purificada por cromatografia flash (Eluente de purificação: PE- AcOEt 9:1). Sólido amarelo, Rendimento de 70%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,48 (s, 1H), 7,17 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,01 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 5,84 (s, 1H), 2,48 (s, 3H) ppm.Procedimento geral para a síntese de 94a e 94b:

[0344] 93 (500 mg, 3,26 mmol) foi dissolvido em DMF anidro (3 mL) sob atmosfera de nitrogênio. A este, NaH (86 mg, 3,58 mmol) foi adicionado a 0 °C em uma porção. Após 20 min, a solução do derivado de halogênio adequado (3,9 mmol) em DMF (1 mL) (iodeto de ciclopentila para 94a ou clorometilmetiléter para 94b) foi adicionada utilizando uma cânula. A solução resultante foi agitada em t.a. durante 2 h. Após o término da reação, adicionou- se água e a mistura foi extraída com EtOAc várias vezes, lavada com LiCl (aq) 5%, e as fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4) e concentradas.

[0345] 4-(ciclopentiloxi)-1-metil-2-nitrobenzeno (94a): (Eluente de purificação: PE-AcOEt 95:5). Rendimento de 70%. Líquido amarelo, 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,44 - 7,43 (m, 1H), 7,16 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,98 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 4,81 - 4,68 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 1,98 - 1,69 (m, 6H), 1,67 - 1,52 (m, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 222,0 [M+H]+.

[0346] 4-(metoximetoxi)-1-metil-2-nitrobenzeno (94b): 94b foi obtido como um composto puro. Rendimento de 99%. líquido amarelo, 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,62 (s, 1H), 7,34 - 6,90 (m, 2H), 5,16 (s, 2H), 3,45 (s, 3H), 2,49 (s, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 198,2 [M+H]+.Procedimento geral para a síntese de 54a e 54b:

[0347] O composto nitro adequado 94a ou 94b (0,40 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH e Paládio 10% em carvão (5 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para fornecer 54a ou 54b como um composto puro.

[0348] 5-(ciclopentiloxi)-2-metilanilina (54a): Sólido amarelo. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 6,92 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,31-6,24 (m, 2H), 4,93 - 4,49 (m, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,86-1,78 (m, 6H), 1,61 (s, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 192,3 [M+H]+.

[0349] 5-(metoximetoxi)-2-metilanilina (54b): Sólido amarelo. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d) δ 6,93 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,40 (m, 2H), 5,11 (s, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,47 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), MS (ESI) m/z 168,1 [M+H]+.EXEMPLO 16

[0350] Reagentes e condições: i. NaOH, H2O 40 °C, 20 min; ii. H2, Pd/C, MeOH, 12 h.

[0351] 4-(4-metil-3-nitrofenil)but-3-en-2-ona (96): A uma mistura de 3- nitro-4-metilbenzaldeído (300 mg, 1,8 mmol), acetona (20 mL) e água (10 mL), NaOH aquoso 5% (1 mL) foi lentamente adicionado a 40 °C. Após 20 min, a acetona foi removida sob pressão reduzida. O resíduo foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada sob pressão reduzida. Rendimento de 76%, óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,93 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,33 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 2,42 (s, 4H), 2,24 (s, 3H) ppm.

[0352] 4-(3-amino-4-metilfenil)butan-2-ona (55n): Composto 95 (0,40 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH e Paládio 10% em carvão (5 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 12 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, CDCfe) δ 7,02 - 6,86 (m, 1H), 6,55 - 6,40 (m, 1H), 3,93 (s, 2H), 3,38 (s, 1H), 2,73 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 21,6, 14,4 Hz, 1H), 2,10 (s, 1H), 2,08 (s, 1H), MS (ESI) m/z 178,0 [M+H]+.EXEMPLO 17

[0353] Reagentes e condições: i. N^OKHCl/NaOH, EtOH/H2O, t.a. 1 h; ii. N-clorosuccinimida, DMF seco, t.a. 3 h; iii. 1-hexina, CuSO<5 H2O, ascorbato de sódio, H2O tBuOH (1:1), KHCO3, PM 80 °C, 15 min,; iv. Zinco, DCM,CH3COOH, t.a. 7 min; v. 2-(trifluormetil)-fenil-isocianato, CH2Cl2 seco, t.a. 12 h.

[0354] Benzaldeído oxima (98): Cloridrato de hidroxilamina (1103 mg, 15,8 mmol) foi dissolvido em água (10 mL) e neutralizado com uma solução aquosa de NaOH 10%. Uma solução de 97 (2000 mg, 13,2 mmol) em etanol foi adicionada lentamente a esta mistura com agitação em t.a. durante 1 h. Após esse tempo, etanol foi evaporado sob pressão reduzida. Adicionou-se água e a mistura de reação foi extraída com diclorometano (3x40 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca com sulfato de sódio anidro. 98 foi utilizado para outras reações sem purificação adicional. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,25 - 8,23 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,73-7,72 (t, J = 7,2 Hz, 2H) ppm. MS (ESI) m/z 164,9 [M-H]-.

[0355] Cloreto de N-hidroxi-4-nitrobenzimidoila (99): 98 (100 mg, 0,60 mmol) foi dissolvido em DMF seco (2 mL) sob atmosfera de nitrogênio. A esta solução sob agitação, adicionou-se N-clorosuccinimida (96,5 mg, 0,72 mmol). O início da reação foi acelerada pelo uso de luz UV durante 20 min. Após 3 h, a mistura foi despejada em gelo triturado e extraída três vezes com Et2O. As camadas orgânicas foram coletadas, secas em Na2SO4 anidro e o solvente foi evaporado. 99 foi utilizado para outras reações sem purificação adicional.

[0356] 5-butil-3-(4-nitrofenil)isoxazol (100): 1-hexina (28 μL, 0,25 mmol), 99 (50 mg, 0,25 mmol), KHCO3 (119 mg, 1,08 mmol) foram suspensos em uma mistura 1:1 de água e t-BuOH (1,5 mL cada) em um balão de vidro de 10 mL equipado com uma pequena barra de agitação magnética. A esta, adicionou-se ascorbato de sódio (2 mg, 0,02 mmol) e sulfato de cobre(II) pentahidratado (2 mg, 0,02 mmol). A mistura foi, então, aquecida durante 7 min a 80 °C sob irradiação de micro-ondas, utilizando uma potência de irradiação de 300 W. Após esse tempo, os solventes foram parcialmente removidos, o resíduo foi agitado com solução de NH4Cl (10 mL) e NH4OH (0,5 mL) durante 15 min, e então extraído com EtOAc. O resíduo foi finalmente purificado em sílica gel para resultar nos produtos finais. (PE/EtOAc 98:2). Rendimento de 76%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,31-8,29 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,97-7,95 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,35 (s, 1H), 2,84-2,80 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,77-1,70 (m, 2H), 1,46-1,41 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 0,98-0,94 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ppm.

[0357] 4-(5-butilisoxazol-3-il)anilina (101): 99 (100 mg, 0,40 mmol) foi dissolvida em DCM e resfriada até 0 °C. Pó de zinco (392 mg, 6 mmol) e AcOH (366 μL) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada em t.a. durante 30 min. Após esse tempo, a mistura foi filtrada em uma base de Celite. O pH foi ajustado em 7 pela adição de NaHCO3 (ss) e a mistura foi extraída várias vezes. As camadas orgânicas foram coletadas, lavadas com Salmoura e secas em Na2SO4 anidro. Rendimento de 70%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,597,57 (m, 2H), 6,72-6,71 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 6,18 (s, 1H), 3,84 (s, 2H), 2,77-2,73 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,74-1,67 (m, 2H), 1,46-1,37 (m, 2H), 0,96-0,93 (t, J = 7,6 Hz, 3H) ppm. MS (ESI) m/z 216,9 [M+H]+.

[0358] 1-(4-(5-butilisoxazol-3-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (102): 100 (100 mg, 0,46 mmol) foi adicionado a uma solução do isocianato de 1- (trifluormetil)fenila 24 (85 μL, 0,65 mmol) em CH2Cl2 anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 4 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash (PE/EtOAc 95:5). Rendimento de 73%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,99-7,97 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,71-7,69 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,58-7,56 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,51-7,18 (m, 2H), 7,03 (s, 2H), 2,78-2,77 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 1,71-1,61 (m, 2H), 1,42-1,40 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 0,96-0,87 (t, J = 6,8 Hz, 3H) ppm 13C-RMN (100 MHz, CDCl3-d): δ 174,66, 163,30, 152,83, 139,94, 136,25, 134,15, 133,10, 128,10, 126,20, 125,37, 124,86, 124,63, 124,22, 120,74, 98,30, 29,99, 26,83, 22,62, 13,94 ppm. MS (ESI) m/z 402,2 [MH]-.EXEMPLO 18

[0359] Reagentes e condições: i. N^OKHCl/NaOH, EtOH/^O, t.a. 12 h; ii. ácido valérico, EDC-HCl, HOBT, DMAP, CH2CI2 seco, DMF seco, t.a. 12 h; iii. Fe0, NH4Cl, EtOH, H2O, 80 °C, 30 min; v. 2-(trifluormetil)-fenilisocianato, CH2Cl2 seco, t.a. 12 h.

[0360] N'-hidroxi-4-nitrobenzimidamida (103): cloridrato de hidroxilamina (469 mg, 6,75 mmol) foi dissolvido em água e neutralizado com NaOH 2N. A solução de 102 (500 mg, 3,37 mmol) em etanol foi adicionada com agitação contínua. A mistura de reação foi agitada em t.a. durante 12 h e então foi extraída com DCM. A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca. Rendimento de 88,3%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,26-8,24 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,82-7,80 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 4,89 (s, 2H), 1,57 (s, 1H) ppm. MS (ESI) m/z 181,9 [M+H]+,MS (ESI) m/z 182,1 [M+H]+.

[0361] 5-butil-3-(4-nitrofenil)-1,2,4-oxadiazol (104): Cloridrato de EDC (1587 mg, 8,28 mmol), HOBt (373 mg, 2,76 mmol) e DIPEA (1,44 mL) foram dissolvidos em uma mistura 10:1 de DCM e DMF (22 mL) a 0 °C. Ácido valérico (300 μL, 8,28 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada sob atmosfera de nitrogênio durante 1 h em t.a. Após esse tempo, 103 (4,1 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada em t.a. durante 1 h e então a 110 °C durante 12 h. Após esse tempo, o solvente foi removido sob pressão reduzida e extraído com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa de LiCl 5% e seca em Na2SO4. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel. (PE/EtOAc 9:1). Rendimento de 73%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,20-8,18 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,13-8,11 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,91-2,87 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,82-1,74 (m, 2H), 1,44-1,34 (m, 2H), 0,91-0,88 (t, J = 7,6 Hz, 3H) ppm.

[0362] 4-(5-butil-1,2,4-oxadiazol-3-il)anilina (105): 104 (95 mg, 0,38 mmol) foi solubilizado em uma mistura de EtOH (30 mL) e 2,5 mL de água. A esta, pó de ferro (107,2 mg, 1,92 mmol) e NH4Cl (11 mg, 0,19 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida a 80 °C e agitada durante 30 min. Após esse tempo, a reação foi aquecida até a t.a. e filtrada em uma base de Celite. A mistura foi concentrada e água (15 mL) foi adicionada, seguida pela extração com EtOAc. As camadas orgânicas foram lavadas com Salmoura e secas em Na2SO4. Rendimento de 95%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,84-7,83 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 6,70-6,68 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 3,82 (s, 2H), 2,902,86 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,82-1,79 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,43-1,41 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 0,95-0,92 (t, J = 6,4 Hz, 3H) ppm.

[0363] 1-(4-(5-butil-1,2,4-oxadiazol-3-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (106): 105 (0,46 mmol) foi adicionada a uma solução do isocianato de 1-(trifluormetil)fenila 24 (85 μL, 0,65 mmol) em CH2CI2 anidro (10 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 4 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash (PE/EtOAc 9:1). Rendimento de 76%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,58-7,56 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,44-7,41 (m, 3H), 7,25 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 1,86-1,82 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,48-1,42 (m, 2H), 0,96-0,94 (t, J = 7,6 Hz, 3H) ppm 13C-RMN (100 MHz, ACETONA-d6): δ 180,10, 152,51, 142,51, 136,56, 132,78, 127,87, 125,98, 125,32, 123,81, 120,98, 118,33, 25,69, 21,82, 13,03 ppm.EXEMPLO 19

[0364] Reagentes e condições: i. ^SOVEtOH, 100 °C, 3 h; ii. ^H^O, EtOH, 100 °C, 48 h; iii. Valeraldeído, EtOH, 100 °C, 12 h; iv. I2, K2CO3, DMSO, 100 °C, 12 h; v. H2, Pd/C (10%), CH3OH, 4 h; vi. 2-(trifluormetil)-fenilisocianato, CH2Cl2 seco, t.a. 12 h.

[0365] 4-Nitrobenzoato de etila (108): 107 (200 mg, 1,19 mmol) foi solubilizada em uma mistura de H2SO4 (4 mL) e EtOH (10 mL). A mistura foi agitada a 100 °C durante 1 h. Após esse tempo, o solvente foi parcialmente evaporado sob pressão reduzida e o pH ajustado em 6 com NaHCO3. A reação foi extraída com EtOAc, lavada com Salmoura e seca em Na2SO4. Rendimento de 90%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,26-8,24 (d, J = 8,8, 2H), 8,19-8,17 (d, J = 8,8, 2H), 4,43-4,38 (m, 2H), 1,41-1,38 (t, J = 7,2, 3H) ppm.

[0366] 4-nitrobenzohidrazida (109): a uma solução de 108 (180 mg, 0,92 mmol) em EtOH (20 mL), adicionou-se N2H<H2O (236 μL). A solução resultante foi aquecida até o refluxo durante 48 h. Após esse tempo, a mistura foi aquecida em t.a. e os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi cristalizado em ACN. Rendimento de 85%. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d): δ 8,31-8,29 (d, J = 8,8, 2H), 7,99-7,97 (d, J = 8,8, 2H) ppm.

[0367] 2-butil-5-(4-nitrofenil)-1,3,4-oxadiazol (110): Uma solução de valeraldeído (58,7 μL, 0,55 mmol) e 109 (100 mg, 0,55 mmol) em EtOH foi aquecida até o refluxo durante 12 h. Após esse tempo, o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi redissolvido em DMSO (3 mL) e K2CO3 (228,04 mg, 1,65 mmol) e I2 (155,63 mg, 0,66 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 12 h. Após o término da reação, a mistura foi resfriada e tratada com Na2S2O3, então extraída com EtOAc (3 x 25 mL), lavada com Salmoura e seca em Na2SO4. O resíduo foi purificado por cromatografia flash. (PE/EtOAc 9:1). Rendimento de 70%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,35-8,33 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,22-8,20 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 2,972,93 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,86-1,82 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,49-1,44 (m, 2H), 0,990,95 (t, J = 6,8 Hz, 3H) ppm.

[0368] 4-(5-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)anilina (111): O composto 110 (0,40 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH e Paládio 10% em carvão (5 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Rendimento de 99% Eluente. DCM/MeOH 98:2. Rendimento de 72%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,80-7,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,71-6,69 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,07 (s, 2H), 2,88-2,84 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,82-1,75 (m, 2H), 1,48-1,39 (m, 2H), 0,96-0,93 (t, J = 7,6 Hz, 3H) ppm.

[0369] 1-(4-(5-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (112): Anilina 111 (31 mg, 0,14 mmol) foi adicionada a uma solução de isocianato de 2-(trifluormetil)fenila (22 μL, 0,15 mmol) em CH2Cl2 anidro (15 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 9 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para fornecer o produto final como um sólido branco. (Eluente de purificação: PE/EtOAc 7:3). Rendimento de 71%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d): δ 7,95-7,93 (d, J = 8,4, 2H), 7,677,65 (d, J = 8,8, 2H), 7,63-7,59 (m, 2H), 7,31-7,27 (m, 2H), 2,96-2,92 (d, J = 7,6, 2H), 1,86-1,78 (m, 2H), 1,51-1,42 (m, 2H), 1,00-0,97 (t, J = 7,2, 3H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, ACETONA-d6): δ 166,35, 164,11, 152,03, 142,81, 136,48, 132,79, 127,35, 125,90, 125,55, 123,65, 118,51, 29,30, 29,11, 28,92, 28,73,28,54, 24,56, 21,82, 12,95 ppm.

[0370] EXEMPLO 20

[0371] Reagentes e condições: i. EtOH/H2SO4, 100 °C, 3 h; ii. ^H^O, EtOH, 100 °C, 12 h; iii. CH3ONa, CH3OH seco, t.a. 1 h; iv, CH3COOH, 0° C, 2 h; v. H2, Pd/C (10%), CH3OH, 3 h; v. 2-(trifluormetil)-fenilisocianato, CH2Cl2 seco, t.a. 12 h.

[0372] 4-nitrobenzohidrazida (109): a uma solução de 108 (180 mg, 0,92 mmol) em EtOH (20 mL), adicionou-se N2H<H2O (236 μL). A solução resultante foi aquecida até o refluxo durante 48 h. Após esse tempo, a mistura foi aquecida em t.a. e os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi cristalizado em ACN. Rendimento de 85%. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d): δ 8,31-8,29 (d, J = 8,8, 2H), 7,99-7,97 (d, J = 8,8, 2H) ppm.

[0373] Pentanoato de etila (114): 113 (1000 mg, 9,79 mmol) foi solubilizado em uma mistura de H2SO4 (4 mL) e EtOH (10 mL). A mistura foi agitada a 100 °C durante 3 h. Após esse tempo, o solvente foi parcialmente evaporado sob pressão reduzida e o pH ajustado em 6 com NaHCO3. A reação foi extraída com EtOAc, lavada com Salmoura e seca em Na2SO4. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 4,12-4,07 (q, J = 7,2, 2H), 2,29-2,25 (t, J = 8,0 Hz, 2H,), 1,62-1,54 (m,2H), 1,37-1,30 (q, J = 8,0 Hz, 2H,), 1,28-1,18 (t, J = 8,0 Hz, 3H) ppm.

[0374] Pentanohidrazida (115): A uma solução de 114 (420 mg, 3,22 mmol) em EtOH (20 mL), adicionou-se N2H<H2O (783 μL). A solução resultante foi aquecida até o refluxo durante 12 h. Após esse tempo, a mistura foi aquecida em t.a. e os voláteis foram removidos sob vácuo. 115 foi utilizado para outras reações sem purificação adicional. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,25 (s, 1H), 2,15-2,119 (d, J = 7,6, 2H), 1,64-1,57 (m, 2H), 1,37-1,28 (m, 2H), 0,92-0,88 (t, J = 7,2, 3H) ppm.

[0375] 3-butil-5-(4-nitrofenil)-4H-1,2,4-triazol (117): Uma solução a 30% de MeONa (2,36 mmol) em Metanol anidro foi adicionada por gotejamento a uma solução de 116 (3,98 mmol) em CH3OH. A mistura de reação foi agitada em t.a. durante 1 h. O pH foi ajustado em 6 com CH3COOH a 0 °C, então 115 (4,3 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada em t.a. durante 2 h, então o solvente foi removido sob pressão reduzida. Tolueno (10 mL) foi adicionado e a reação foi aquecida até o refluxo com um trap Dean-Stark durante 12 h. Após esse tempo, a reação foi resfriada, e água e EtOAc foram adicionados. A mistura foi agitada em t.a. durante 30 min, então extraída, lavada com Salmoura e seca em Na2SO4. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash. (PE/EtOAc 6:4). Rendimento de 60%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d: δ 8,37-8,35 (d, J = 8,4, 2H), 8,29-8,24 (d, J = 7,6, 2H), 1,84-1-76 (m, 2H), 1,46-1,39 (m, 2H), 0,98-0,946 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, ACETONA-d6): δ 160,05, 159,25, 148,07, 136,95, 127,13, 124,00, 77,39, 77,08, 76,76, 29,98, 26,36, 22,29, 13,58 ppm.

[0376] 4-(5-butil-4H-1,2,4-triazol-3-il)anilina (118): 117 (0,40 mmol) foi solubilizado em 30 mL de MeOH e Paládio 10% em carvão (5 mg) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob Atmosfera de Hidrogênio durante 1 h, então a mistura foi filtrada em uma base de Celite e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (PE/EtOAc/TEA 6:4:0.5). Rendimento de 70%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3- d): δ 7,77-7,75 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 6,68-6,66 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 4,13 (s, 1H), 2,77-2,75 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 1,72-1,71 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 1,38-1,34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 0,91-0,88 (m, 3H) ppm.

[0377] 1-(4-(5-butil-4H-1,2,4-triazol-3-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (119): Anilina 118 (25 mg, 0,11 mmol) foi adicionada a uma solução de isocianato de 2-(trifluormetil)fenila (18 μL, 0,11 mmol) em CH2Cl2 anidro (15 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 12 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para fornecer o produto final como um sólido branco. (Eluente de purificação: PE/EtOAc 7:3). Rendimento de 70%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d): δ 7,95-7,89 (m, 4H), 7,66-7,56 (m, 4H), 7,29-7,25 (m), 2,81-2,77 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 1,79-1,72 (m, 2H), 1,45-1,36 (m, 2H), 0,98-0,94 (t, J = 7,6 Hz, 3H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, MeOD-d6): δ153,58, 146,64, 140,81, 135,86, 132,40, 126,77, 126,01, 125,67, 124,01, 121,78, 121,44, 118,53, 30,00, 29,31, 25,76, 21,88, 12,61 ppm.

[0378] EXEMPLO 21

[0379] Reagentes e condições: i. SOCl2, 100 °C, 1 h; ii. 115, DMAP,CH2Cl2, 0 °C, 12 h; iii. Reagente de Lawesson, dioxano, 80 °C, 12 h. iv. Fe0,NH4Cl, EtOH, H2O, 80 °C, 1 h; v. 2-(trifluormetil)-fenilisocianato, CH2Cl2 seco, t.a. 12 h.

[0380] Cloreto de 4-nitrobenzoila (120): 107 (719,8 mg, 4,30 mmol) foi agitado com 1 mL de SOCl2 anidro, a 100 °C, durante 1 h. O excesso de SOCl2 foi removido por destilação. 120 foi utilizado para outras reações sem purificação adicional.

[0381] 4-nitro-N'-pentanoilbenzohidrazida (121): Uma solução de 120 (500 mg, 4,30 mmol) e DMAP (525 mg, 4,30 mmol) em DCM seco (5 mL) foi adicionada por gotejamento a uma solução de 120 em DCM anidro. A mistura resultante foi agitada em t.a. em diante. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH/TEA 98:2:0.5). Rendimento de 67%. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d): δ 8,34-8,31 (d, J = 8,8, 2H), 8,08-8,06 (d, J = 8,8, 2H), 2,34-2,30 (q, J = 7,2, 2H), 1,71-1,57 (q, 2H), 1,47-1,35 (t, J = 7,7 Hz, 3H) ppm.

[0382] 2-butil-5-(4-nitrofenil)-1,3,4-tiadiazol (122): Reagente de Lawesson (458 mg, 1,31 mmol) foi adicionado a uma solução sob agitação de 121 em dioxano anidro (20 mL). A mistura de reação foi agitada a 80 °C durante 24 h. O dioxano foi removido sob pressão reduzida e o resíduo obtido foi dissolvido em água. O pH foi alcalinizado em 9 pela adição de NaHCO3 (aq) e as fases orgânicas foram lavadas com salmoura e secas em Na2SO4. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (PE/EtOAc 8:2). Rendimento de 60%. 1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 8,39-8,37 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 8,26-8,24 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 3,22-3,18 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,87-1,79 (m, 2H), 1,51-1,42 (m, 2H), 0,98-0,94 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ppm.

[0383] 4-(5-butil-1,3,4-tiadiazol-2-il)anilina (123): 122 (58 mg, 0,22 mmol) foi solubilizado em uma mistura de EtOH (30 mL) e água 2,5 mL. A esta, pó de ferro (62 mg, 1,1 mmol) e NH4Cl (6 mg, 0,11 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida a 80 °C e agitada durante 30 min. Após esse tempo, a reação foi aquecida até a t.a. e filtrada em uma base de Celite. A mistura foi concentrada e água (15 mL) foi adicionada, seguida pela extração com EtOAc. As camadas orgânicas foram lavadas com Salmoura e secas em Na2SO4. Rendimento de 75%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 7,72-7,70(d, J = 8,0, 2H), 6,70-6,68 (d, J = 8,0, 2H), 3,96 (s, 2H), 3,10-3,06 (t, J = 8,0, 2H), 1,821,75 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,49-1,40 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 0,97-0,93 (t, J = 8,0 Hz,3H) ppm. MS (ESI) m/z 234,1 [M+H]+.

[0384] 1-(4-(5-butil-1,3,4-tiadiazol-2-il)fenil)-3-(2-(trifluormetil)fenil)ureia (124): Anilina 123 (25 mg, 0,11 mmol) foi adicionada a uma solução de isocianato de 2-(trifluormetil)fenila (17 μL, 0,11 mmol) em CH2CI2 anidro (15 mL) em uma porção. A solução foi agitada durante 12 horas em t.a. sob uma atmosfera de nitrogênio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado em sílica para fornecer o produto final como um sólido branco. (Eluente de purificação: PE/EtOAc 7:3). Rendimento de 68%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3-d) δ 7,57 (m, 5H), 7,31 - 7,22 (m, 2H), 7,18 (dd, J = 7,5, 1,6 Hz, 1H), 6,97 (td, J = 7,5, 1,6 Hz, 1H), 4,18 (s, 1H), 2,75 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 1,65 (dq, J = 7,7, 5,6 Hz, 2H), 1,46 - 1,32 (m, 2H), 1,32 - -1,07 (m, 3H) ppm.

[0385] EXEMPLO 22

[0386] Reagentes e condições: i. HSO3Cl, 2 h, 120 °C (82%); ii. Pir., 5 h, t.a.; iii. H2SO4/EtOH, 100 °C, 3 h; iv. ^H^O, EtOH, 100 °C, 48 h; v. a) EtOH, 100 °C, 12 h; b) I2, K2CO3, DMSO, 100 °C, 12 h.

[0387] Ácido 3-(clorosulfonil)benzoico (126): Ácido clorossulfônico (2 mL, 300,4 mmol,) foi adicionado a 125 (500 mg, 40,9 mmol) e a mistura foi agitada a 120 °C durante 2 h. Após esse tempo, a mistura foi adicionada por gotejamento a uma mistura de EtOAc (200 mL) e gelo triturado. O precipitado resultante foi coletado, dissolvido em acetato de etila, lavado com água (3 x 25 mL) e Salmoura, seco em Na2SO4, e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8,80 (t, J = 1,4 Hz, 1H), 8,40 (m 1H), 8,19 (m, 1H), 7,69 (t, J = 7,5 Hz, 1H) ppm.

[0388] Ácido 3-(N-(2-(trifluormetil)fenil)sulfamoil)benzóico (127): A uma solução agitada de 2-trifluormetil-fenilanilina (1 eq.) em 5 mL de piridina anidra, adicionou-se cloreto de sulfonila 126 (1,1 eq) a 0 °C. A solução correspondente foi agitada em t.a. sob atmosfera de nitrogênio durante 5 h. Após o término da reação, a mistura foi acidificada com HCl 1N, a fase aquosa foi extraída várias vezes e as fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4) e concentradas. (PE-AcOEt 95:5). Rendimento de 75%, sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 9,44 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,71 (s, 1H), 6,08 (s, 1H), ppm. MS (ESI): m/z 344 [M-H]-.

[0389] 3-(N-(2-(trifluormetil)fenil)sulfamoil)benzoato de etila (128): 127 (200 mg, 1,19 mmol) foi solubilizado em uma mistura de H2SO4 (4 mL) e EtOH (10 mL). A mistura foi agitada a 100 °C durante 1 h. Após esse tempo, o solvente foi parcialmente evaporado sob pressão reduzida e o pH foi ajustado em 6 com NaHCO3. A reação foi extraída com EtOAc, lavada com Salmoura e seca em Na2SO4. Rendimento de 87%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,41 (s, 1H), 8,20 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,91 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,60 - 7,44 (m, 2H), 7,25 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,74 (t, J = 7,9Hz, 1H), 4,36 (q,J = 7,6 Hz, 2H), 1,38 (t, J = 7,5Hz, 3H), ppm.

[0390] 3-(hidrazinacarbonil)-N-(2-(trifluormetil)fenil)benzenossulfonamida (129): A uma solução de 128 (90 mg, 0,24 mmol) em EtOH (20 mL), adicionou-se N2H<H2O (58 μL). A solução resultante foi aquecida até o refluxo durante 48 h. Após esse tempo, a mistura foi aquecida em t.a. e os voláteis foram removidos sob vácuo. O resíduo foi cristalizado em ACN. Rendimento de 85%. 1H RMN (400 MHz, Acetona-d6): δ 7,39 (dd, J = 7,5, 1,4 Hz, 1H), 7,18 (ddd, J = 19,2, 12,6, 1,0 Hz, 2H), 6,84 (td, J = 7,5, 1,4 Hz, 1H), 6,71 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 6,07 - 6,01 (m, 2H), 5,79 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,64 (s, 1H), 2,05 (s, 1H), 2,00 (d, J = 0,8 Hz, 3H), 1,66 (s, 1H), ppm.

[0391] 2-butil-5-(4-nitrofenil)-1,3,4-oxadiazol (130): Uma solução de valeraldeído (15 μL, 0,14 mmol) e 129 (50 mg, 0,14 mmol) em EtOH, foi aquecida até o refluxo durante 12 h. Após esse tempo, o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi redissolvido em DMSO (3 mL) e K2CO3 (58 mg, 0,42 mmol) e I2 (43 mg, 0,16 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 12 h. Após o término da reação, a mistura foi resfriada e tratada com Na2S2O3, e então extraída com EtOAc (3 x 25 mL), lavada com Salmoura e seca em Na2SO4. O resíduo foi purificado por cromatografia flash. (PE/EtOAc 8:2). Rendimento de 73%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3-d): δ 8,21 (s, 2H), 8,04 (s, 2H), 7,86 (s, 2H), 7,65 (s, 2H), 7,33 (s, 2H), 7,17 (s, 2H), 6,81 (s, 2H), 6,69 (s, 2H), 6,19 (s, 2H), 2,73 - 2,68 (m, 4H), 1,67 - 1,62 (m, 3H), 1,40 - 1,35 (m, 3H), 1,01 - 0,96 (m, 6H),ppm. 13C RMN (100 MHz, CDCl3-d) δ 166,44, 162,20, 144,51, 139,07, 135,27, 133,84, 132,13, 131,76, 128,46, 128,22, 127,97, 127,75, 123,87, 27,52, 26,97, 22,18, 14,02 ppm.EXEMPLO 23

[0392] Reagentes e condições: i. N^OKHCl/NaOH, EtOH/H2O, t.a. 12 h; ii. ácido valérico, EDC-HCl, HOBt, DMAP, CH2Cl2 seco, DMF seco, t.a. 12 h.

[0393] Hidroxi-3-(N-(2-(trifluormetil)fenil)sulfamoil)benzimidamida (133): Cloridrato de hidroxilamina (469 mg, 6,75 mmol) foi dissolvido em água e neutralizado com NaOH 2N. A solução de 132 (3,37 mmol) em etanol foi adicionada com agitação contínua. A mistura de reação foi agitada em t.a. durante 12 h, foi então extraída com DCM. A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca. Rendimento de 99%. 1H RMN (400 MHz, Acetona): δ 8,23 (s, 1H), 7,98 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,47 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,39 (t, J = 7,2 Hz, 1H), MS (ESI) m/z 362,1 [M+H]+.

[0394] 3-(5-butil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-N-(2-(trifluormetil)fenil) benzenossulfonamida (134): HCl de EDC (1587 mg, 8,28 mmol), HOBt (373 mg, 2,76 mmol) e DIPEA (1,44 mL) foram dissolvidos em uma mistura 10:1 de DCM e DMF (22 mL) a 0 °C. Ácido valérico (300 μL, 8,28 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada sob atmosfera de nitrogênio durante 1 h em t.a. Após esse tempo, 133 (4,1 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada em t.a. durante 1 h e então a 110 °C durante 12 h. Após esse tempo, o solvente foi removido sob pressão reduzida e extraído com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa de LiCl 5%, e seca em Na2SO4. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel. (PE/EtOAc 7:3). Rendimento de 73%. 1H RMN (400 MHz, Acetona) δ 8,29 (s, 1H), 8,07 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,70 - 7,53 (m, 2H), 7,43 (dd, J = 15,2, 7,8 Hz, 2H), 6,47 (s, 2H), 2,47 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,63 (dd, J = 15,1, 7,5 Hz, 2H), 1,38 (dd, J = 14,9, 7,5 Hz, 2H), 0,92 (t, J = 7,4 Hz, 3H), ppm. 13C RMN (101 MHz, Acetona) δ 169,93, 154,59, 141,46, 134,45, 133,19, 130,93, 129,43, 128,77, 127,07, 126,88, 126,64, 125,30, 32,17, 26,90, 22,02, 13,12, MS (ESI) m/z 426,3 [M+H]+.EXEMPLO 24 Estudos ADME in vitro

[0395] As propriedades de ADME dos compostos são, na realidade, de importância primária. Baixa solubilidade e baixa permeabilidade estão dentre as principais causas de falha durante o desenvolvimento da droga. Em geral, é importante tentar encontrar um bom equilíbrio entre a permeabilidade de bicamada de lipídeo, que afeta a absorção gastrointestinal por difusão passiva após dosagem oral e solubilidade. Por essas razões, as propriedades físico- químicas de nossos compostos foram previstas, começando das primeiras fases, usando o programa de previsão QikProp (QP) (QikProp, versão 3.3, Schrodinger, LLC, New York, NY, 2010).

[0396] Alguns experimentos in vitro foram conduzidos para estabelecer rapidamente a absorção/estabilidade dos candidatos de droga na fase precoce: solubilidade aquosa, ensaio de permeabilidade de membrana artificial paralela (PAMPA) e determinação de estabilidade de microssoma de fígado humano (HLM).Materiais e Métodos

[0397] Químicos. Todos os solventes, reagentes, eram da Sigma-Aldrich Srl (Milan, Italy). Dodecano foi comprado de Fluka (Milão, Itália). Doadores masculinos agrupados de 20 mg/mL-1 de HLM eram de BD GentestBiosciences (San Jose, Califórnia). Foi usada água de qualidade Milli-Q (Millipore, Milford, EUA). Placas de filtro hidrofóbicas (MultiScreen-IP, Clear Plates, 0,45 μ m de diâmetro de tamanho de poro), microplacas de 96 poços e microplacas transplantes de UV de 96 poços foram obtidas junto à Millipore (Bedford, MA, USA).

[0398] Ensaio de Permeabilidade de Membrana Artificial Paralela (PAMPA). A solução doadora (0,5 mM) foi preparada por diluição de solução estoque de composto de dimetilsulfóxido a 1 mM (DMSO) usando tampão de fosfato (pH 7,4, 0,025 M). Os filtros foram revestidos com 5 μ L de 1% (p/v) de uma solução de dodecano de fosfatidilcolina preparada de solução de CHCl3 de 10% em p/v, para permeabilidade intestinal. A solução doadora (150 μL) foi adicionada em cada poço da placa de filtro. Para cada poço da placa receptora foram adicionados 300 μL de solução (50% de DMSO em tampão de fosfato). Todos os compostos foram testados em três placas diferentes em dias diferentes. O sanduíche foi incubado por 5 h à temperatura ambiente sob agitação suave. Após o tempo de incubação, as placas foram separadas e as amostras foram tiradas dos lados do receptor e doador e analisadas usando LC com detecção UV a 280 nm.

[0399] A análise de LC foi realizada com um sistema HPLC Varian Prostar (Varian Analytical Instruments, EUA) equipado com uma bomba binária com uma válvula de injeção manual e Detector UV-VIS modelo Prostar 325. As separações cromatográficas foram conduzidas usando uma coluna Polaris C18-A (150 a 4,6 mm, 5 μm de tamanho de partícula) em uma vazão de 0,8 mL min-1 com uma fase móvel composta de 60% de ACN/40% de H2O.

[0400] A permeabilidade (Papp) para PAMPA foi calculada de acordo com a equação a seguir, obtida junto à Wohnsland e Faller e Sugano et al. Equação com alguma modificação a fim de obter valores de permeabilidade em cm s-1,

[0401] onde VA é o volume no poço receptor, VD é o volume no poço doador (cm3), A é a “área eficaz” da membrana (cm2), t é o tempo de incubação (s) e r a razão entre a concentração de droga no receptor e concentração de equilíbrio da droga no volume total (VD+VA). A concentração de droga é estimada pelo uso da integração de área de pico.

[0402] As retenções da membrana (%) foram calculadas de acordo com a seguinte equação:

[0403] onde r é a razão entre a concentração de droga no receptor e concentração de equilíbrio, D, A, e Eq representaram a concentração de droga na solução doadora, receptora e de equilíbrio, respectivamente.

[0404] Ensaio de Solubilidade em Água. Cada composto sólido (1 mg) foi adicionado em 1 mL de água. As amostras foram agitadas em um banho agitador à temperatura ambiente por 24 a 36 h. As suspensões foram filtradas através de um filtro de nylon de 0,45 μm (Acrodisc), e o composto solubilizado determinado pelo ensaio de LC-MS-MS. Para cada composto, a determinação foi realizada em triplicado.

[0405] Para a quantificação, foi usado um sistema de LC-MS consistindo em um aparelho Varian (Varian Inc) que inclui uma unidade de desgaseificação de solvente a vácuo, duas bombas (212-LC), um espectrômetro de massa MSD Quadrupolo Triplo (Mod. 320-LC) com interface ES e Controle de Sistema de Estação de Trabalho Varian MS software Vers. 6.9. A separação cromatográfica foi obtida usando uma coluna Pursuit C18 (50 x 2,0 mm) (Varian) com 3 μ m de tamanho de partícula e eluição gradiente: eluente A sendo ACN e eluente B consistindo em água. A análise começou com 0% de eluente A, que foi linearmente aumentado até 70% em 10 min, então lentamente aumentou para até 98% até 15 min. A vazão foi de 0,2 mL min-1 e o volume de injeção foi de 5 μL. O instrumento operou no modo positivo e os parâmetros foram: detector 1850 V, pressão de gás de secagem 25,0 psi, temperatura de desolvatação 300,0 °C, gás nebulizador 40,0 psi, agulha 5000 V e blindagem 600 V. O nitrogênio foi usado como gás nebulizador e gás de secagem. A dissociação induzida por colisão foi realizada usando Argônio como o gás de colisão em uma pressão de 1,8 mTorr na célula de colisão.

[0406] Ensaio de Estabilidade Microssomal. Cada composto na solução de DMSO foi incubado a 37 °C por 60 min em tampão de fosfato a 125 mM (pH 7,4), 5 μL de proteína microssomal de fígado humano (0,2 mg mL-1), na presença de um sistema de geração de NADPH em um volume final de 0,5 mL (concentração final do composto, 50 μM); DMSO não excedeu 2% (solução final). A reação foi interrompida pelo resfriamento com gelo e adição de 1,0 mL de acetonitrila. As misturas de reação foram então centrifugadas, e a droga original e metabólitos foram subsequentemente determinados por LC-UV-MS.

[0407] A análise cromatográfica foi realizada com um sistema Agilent 1100 LC/MSD VL (G1946C) (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) constituído por uma unidade de desgaseificação de solvente a vácuo, uma bomba binária gradiente de alta pressão, um detector de UV série 1100, e um espectrômetro de massa de bancada VL modelo 1100 MSD.

[0408] A separação cromatográfica foi obtida usando uma coluna Varian Polaris C18-A (150 a 4,6 mm, 5 μm de tamanho de partícula) e eluição gradiente: eluente A sendo ACN e eluente B consistindo em água. A análise começou com 2% de eluente A, que foi rapidamente elevada até 70% em 12 min, então lentamente elevada até 98% em 20 min. A vazão foi de 0,8 mL min-1 e volume de injeção foi de 20 μ L.

[0409] O instrumento quadrupolar único de detecção de espectros de massa série Agilent 1100 (MSD) foi equipado com o spray ortogonal API-ES (Agilent Technologies, Palo Alto, CA). O nitrogênio foi usado como gás nebulizador e de secagem. A pressão do gás nebulizador, o fluxo do gás de secagem, a tensão capilar, a tensão do fragmentador e a temperatura de vaporização foram ajustadas em 40 psi, 9 L/min, 3000 V, 70 V, e 350 °C, respectivamente. A detecção de UV foi monitorada em 280 nm. A determinação de LC-ESI-MS foi realizada pela operação de MSD no modo de íon positivo. Os espectros foram adquiridos sobre uma faixa de varredura de m/z 100 a 1500 usando um tamanho de etapa de 0,1 u. A porcentagem de composto não metabolizado foi calculada por comparação com soluções de referência EXEMPLO 25 Biologia Ensaios enzimáticos Ensaios de Helicase

[0410] A atividade helicase de DDX3 tipo selvagem foi monitorada pela medição da conversão de um RNA de cadeia dupla (ds) (rotulado na extremidade 5’ de uma cadeia com um fluorescente 6-FAM) em ácido nucleico de cadeia única (ss). Uma concentração final de substrato de RNA a 25 nM foi usada nos experimentos, a menos que indicado de outra forma. As reações foram realizadas em TrisHCl a 50 mM pH 7,5, DTT a 1 mM, 0,2 mg/mL de BSA, 5% de glicerol e ATP a 100 μM, MgCl2 a 10 mM em 37 °C graus por 10’ e interrompidas pela adição de EDTA a 50 mM pH 8. Os produtos foram separados através da não desnaturação de 8% de PAGE em 5 W por 4 horas em tampão TBE a 4 °C. Os substratos e produtos foram quantificados por densitometria de varredura a laser (Thyphoon-TRIO, GE Healthcare).

Proteínas

[0411] DDX3 humana recombinante foi clonada, expressa e purificada como descrito (Franca et al. Proteins 2007, 67, 1128-37).

Ensaios antivirais Atividade antiviral in vitro (EC50) e citotoxicidade (CC50) de Vírus da Dengue (DENV) e Vírus do Nilo Ocidental (WNV).

[0412] Em torno de 104 de célula Huh7 (fornecidas por Apath, LLC) cultivadas em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) (Invitrogen, Carlsbad, CA) suplementadas com 10% de soro bovino fetal, 1% de aminoácidos não essenciais, 100 unidades/mL de penicilina e 100 unidades/mL de estreptomicina (DMEM completo) por poço foram infectadas por 1 h com Vírus da Dengue tipo 2 (DENV-2; Cepa C de Nova Giné, NCPV ref. 0006041v) ou cepa 99 Nova Iorque de Vírus do Nilo Ocidental (WNV-NY99; NCPV ref. 0209291v) em MOI (multiplicidade de infecção) de 0,5 em placas de 96 poços. Após lavar a entrada viral, diluições em série de 10 vezes de controle de DMSO ou inibidores DDX3 foram imediatamente adicionadas em duplicatas aos poços correspondentes junto com meio completo de DMEM fresco (concentrações finais de 100, 10, 1, 0,1 e 0,01 μM). 48 h após infecção inicial, as células foram fixadas com 4% de PFA e imunocoloridas contra a proteína E viral (envelope) usando anticorpos primários de proteína Anti-E específica (Anti-DENV: Abcam Cat. Num. ab41349; Anti-WNV: Abcam Cat. Num. ab156843) e um anticorpo secundário AlexaFLuor488 (Invitrogen, Cat. Num. A11029). DAPI foi usado para coloração dos núcleos. As placas foram analisadas com o microscópio automático ImageXpress, usando a objetiva Plan Fluor 20X. O microscópio foi ajustado para dois canais (FITC e DAPI). Foram tiradas entre 4 e 9 imagens por poço por condição em campos objetivos arbitrários. Foram analisadas entre 500 e 1000 imagens usando o Software CellProfiler (Broad Institute of MIT, http://www.cellprofiler.org/). As imagens foram limiares para subtração posterior e tamanhos de ponto fluorescente alvo e as intensidades foram analisadas. As contagens verdes positivas e contagens azuis de núcleos foram estimadas por imagem por condição.

[0413] Porcentagem relativa de infectividade e toxicidade para cada composto foi estimada pela normalização do número de sinais verdes (contagens positivas) e sinais azuis (contagens de núcleo) para controles tratados com DMSO, respectivamente. Valores de EC50 e CC50 foram calculados em GraphPad (http://www.graphpad.com/) através da aplicação de uma regressão não linear com dose de log vs. Resposta normalizada para os dados de CellProfiler.

Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) e citotoxicidade (CC50) no sistema replicon de HCV.

[0414] A atividade antiviral foi executada em placas de 96 poços de fundo branco claro, e os ensaios de citotoxicidade foram realizados em placas claras de 96 poços. A células LucUbiNeo-ET foram semeadas em uma densidade de 104/poço em 100 μL de D-MEM sem seleção de antibióticos. Após 24h, diluição em série de nove vezes dos compostos, com 3 repetições em cada diluição, foi preparada em D-MEM e adicionada aos poços apropriados, rendendo concentrações de 125 a 0,00032 μg/mL em um volume final de 100 μL de D- MEM. Após 2 dias de incubação, os inventores determinaram a atividade antiviral (EC50) pela quantificação da luciferase com a luciferase BriteLite Plus (Perkin Elmer). Em resumo, as células LucUbiNeo-ET foram colhidas com a adição de 50 μL de luciferase por poço, e após 2 minutos de agitação, a luz foi lida em um Luminômetro Fluoroskan Ascent FL.

[0415] A toxicidade (CC50) foi analisada nas células Lunet/HuH7 pela adição de 10 μL de MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2i)-2,5- difeniltetrazólio) por poço. Após 4h de incubação a 37 °C em uma atmosfera umidificada com 5% de CO2, a quantidade de formazan produzido foi quantificada espectrofotometricamente a 550/620 nm (C. Pannecouque et al., Nature protocol 2008; 3 (3): 427-434). Os valores de EC50 e CC50 foram calculados para cada composto em GraphPad pela aplicação de uma regressão não linear com dose de log vs. resposta normalizada para os dados do CellProfiler. Esses ensaios foram feitos em duplicata.

Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) e citotoxicidade (CC50) no sistema de cultura de célula infecciosa de HCV.

[0416] As células nativas Huh-7.5/RFP(TagRFP)-NLS-IPS/mitoEGFP foram semeadas em placas claras de 96 poços no dia anterior a uma concentração de 6400 células/poço. No dia seguinte, as células foram infectadas com o sobrenadante infecciosos Jc1 quimera de HCV (genótipo 2a) em uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,02. Após 24h, as células foram lavadas com PBS e o meio foi substituído com meio de crescimento completo com ou sem compostos. Diluição em série de nove vezes de compostos, com 3 repetições em cada diluição, foi preparada em D-MEM e adicionada aos poços apropriados, rendendo concentrações de 125 a 0,00032 μg/mL em um volume final de 100 μL de D-MEM. Após 2 dias de incubação, as culturas foram imunocoloridas para anticorpo monoclonal NS5A 9E10 conforme descrito por Lindenbach (Lindenbach B. D. et al. Complete Replication of Hepatitis C Virus in Cell Culture. Science 2005; 309: 623-626). As células únicas NS5A+ de HCV foram manualmente contadas para cada poço.

[0417] A toxicidade (CC50) foi analisada nas células nativas Huh- 7,5/RFP(TagRFP)-NLS-IPS/mitoEGFP pela adição de 10 μL de MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio) por poço. Após 4 h de incubação a 37 °C em uma atmosfera umidificada com 5% de CO2, a quantidade de formazan produzido foi quantificada espectrofotometricamente a 550/620 nm (C. Pannecouque et al., Nature protocol 2008; 3 (3): 427-434). Os valores de EC50 e CC50 foram calculados para cada composto em GraphPad pela aplicação de uma regressão não linear com dose de log vs. resposta normalizada para os dados de CellProfiler. Esses ensaios foram feitos em duplicata.

Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) e citotoxicidade (CC50) no sistema de cultura de célula infecciosa de HIV.

[0418] A viabilidade de célula HeLa na presença dos compostos foi determinada pelos ensaios de MTT padrão. A suscetibilidade de cepas recombinantes de HIV-1 para drogas foi realizada como anteriormente relatado (Paolucci et al., 2004). Em detalhes, 0,5 μg de cada construto de plasmídeo de HIV-1 foi transfectado em células CD4+ HeLa pelo uso de reagente de lipofectina, de acordo com as recomendações do fabricante (Invitrogen, Groningen, The Netherlands). Após 3 dias de incubação a 37 °C, os sobrenadantes de célula, os quais continham vírus recombinantes viáveis reconstituídos, foram coletados. A quantificação das cepas recombinantes recém-produzidas foi obtida pela determinação do número de cópias do HIV RNA nos sobrenadantes de cultura de célula. Em detalhe, os sobrenadantes de cultura de célula HeLa CD4+ transfectadas que contêm 1 x 109/mL de cópias de RNA foram usados para infectar alíquotas de 20 x 106 de células mononucleares de sangue periférico estimuladas por fito-hemaglutinina (PBMC) obtidas de doadores de sangue soronegativos para HIV. Após 4 h de incubação, os sobrenadantes foram removidos e PBMC infectadas foram incubadas a 37 °C em 10 mL de meio de RPMI 1640 (Eurobio, Les Ulis Cedex B, France) suplementadas com 20% de soro bovino fetal (Life Technologies, Ltd., Paisley, UK), L-glutamina a 2 mM, 100 U/mL de penicilina, 100 μg/mL de estreptomicina, 50 U/mL de interleucina-2 (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany), 5 μg/mL de hidrocortisona (Sigma Chemical Co., St. Louis, MA) e com diluições de quatro vezes de drogas antirretrovirais. O controle “sem droga” para cada diluição de droga foi incluído em cada ensaio. O RNA de HIV- 1 no sobrenadante de cultura de célula foi quantificado depois de 72 h após a infecção. As cepas de HIV-1 recombinantes de paciente nativos em tratamento foram analisadas. O grau de inibição da replicação viral foi medido pela determinação no nível de RNA de HIV-1 nos sobrenadantes de culturas de célula e foi expresso como o aumento de vezes em 50% das concentrações inibitórias (IC50) para variantes de HIV-1 recombinantes resistentes, comparado com o IC50 para a variante recombinante tipo selvagem. Cada teste foi realizado em triplicado.

[0419] A toxicidade (CC50) foi analisada em PBMCs primárias humanas. Doses crescentes dos compostos testados foram adicionadas em 2 x 106 de células. O meio de cultura suplementado com composto fresco foi substituído a cada 24 horas. Após 72 horas de exposição contínua das células para os compostos a 37 °C, a viabilidade da célula foi medida com a ensaio de viabilidade de CellTiter 96® (Promega), que contém MTS [3-(4,5-dimetilthiazol- 2i)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazólio, sal interno] e um reagente de acoplamento de elétron (etossulfato de fenazina). Os ensaios são realizados pela adição de 20 μL do reagente CellTiter 96® diretamente para os poços de cultura, incubando por 4 horas e então registrando a absorvência a 490 nm com um leitor de placa de 96 poços. A quantidade de produto formazan como medido pela quantidade de absorvência a 490 nm é diretamente proporcional ao número de células vivas na cultura. As determinações para cada dose de composto estavam em quadruplicado. Os valores de CC50 foram calculados a partir das curvas de resposta de dose usando os valores médios de cada conjunto de determinações.

Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) e citotoxicidade (CC50) no sistema de cultura de célula infecciosa de JEV.

[0420] As células de rins de hamster bebê (BHK)-21 (C-13,AmericanTypeCultureCollection) foram mantidas no meio essencial mínimo de Dulbecco (Invitrogen) suplementadas com 10% de soro bovino fetal (FCS)(GIBCO), penicilina (100 μg/mL) e estreptomicina (100 U/mL) a 37 °C e 5% de CO2. A cepa de JEV (NJ2008, ID de Acesso ao GenBank: GQ918133 foi propagada nas células BHK-21, a titulação viral foi determinada pelo ensaio de formação de placa nas células BHK-21. No primeiro experimento, as drogas (20 μM) foram incubadas primeiro com as células por 3 h, então as células foram lavadas três vezes com PBS (Na2HPO4 a 10 mM, KH2PO4 a 2 mM, pH 7,4, NaCl a 137 mM, KCl a 2,7 mM) e então as drogas (20μM) foram inoculadas simultaneamente com o vírus (MOI = 0,01) por 2 h a 37 °C. As células foram lavadas com PBS por três vezes e as drogas (20 μM) foram adicionadas de volta às células com a mesma concentração (20 μM, diluídas com 2% de FCS DMEM). As células foram cultivadas por 48 h. O sobrenadante foi colhido, diluído e inoculado em células BHK-21 (1,2 x 106 células/poço) em uma placa de 6 poços por 2 h a 37 °C. Os inóculos de vírus em excesso foram removidos por enxague dos poços com PBS por três vezes. Subsequentemente, o meio de sobreposição (2% de agarose com baixo ponto de fusão com meio de DMEM contendo 2% de FBS) foi adicionado em cada poço e as placas foram ainda incubadas a 37 °C com 5% de CO2 por 3 dias. As células foram coloridas com 0,5% de violeta de cristal. As determinações para cada dose de composto foram em quadruplicado. Os valores de CC50 foram calculados a partir das curvas de resposta de dose usando os valores médios de cada conjunto de determinações.

Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) no sistema de cultura de célula infecciosa de PRRSV (vírus da síndrome respiratório e reprodutiva do suíno).

[0421] De acordo com as exigências de diferentes experimentos, as células MARC-145 foram infectadas com PRRSV em MOIs de 0,1, 1 ou 10, ou infecção simulada com solução salina tamponada de fosfato (PBS). Após 1 h de incubação a 37 °C, os vírus ilimitados foram removidos por lavagem três vezes com PBS e cultivados em DMEM suplementado com 8% de FBS a 37 °C por vários comprimentos de tempo. Para a indução de autofagia e experimentos de inibição, as células MARC-145 foram pré-tratadas com concentrações variantes de rapamicina ou 3-MA por 4 h antes da infecção viral. As células MARC-145 foram então infectadas com PRRSV em MOI de 1. Após 1h de incubação a 37 °C, os vírus ilimitados foram removidos por lavagem três vezes com PBS e cultivados em DMEM suplementados com 2% de FBS contendo concentrações variantes de composto, 3-MA ou a quantidade correspondente de sulfóxido de dimetila (DMSO, controle) a 37 °C por 24 h. As determinações para cada dose de composto foram em quadruplicado. Os valores de CC50 foram calculados a partir de curvas de resposta de dose usando os valores médios de cada conjunto de determinações.

RESULTADOS Atividade antienzimática

[0422] A atividade antienzimática dos compostos representativos contra a DDX3 de helicase é relatada na Tabela 5.

[0423] Tabela 5: Atividade de compostos contra DDX3 de helicase. representativos da invenção

[0424] a IC50: concentração de inibição 50 ou dose necessária para inibir 50% da enzima, n.a Composto não ativo. * não determinado

[0425] Vários inibidores DDX3 da invenção mostraram atividade submicromolar. Em particular, os compostos 22b, 55a, 55b, 64 e são aproximadamente dez vezes mais ativos do que o composto EI01D previamente relatado.

[0426] Tabela 6: Dados de seletividade no composto 20a

[0427] [a] O valor >200 indica que menos de 20% de inibição foi observado em 200 μM, a concentração mais alta testada. EXEMPLO 26 Atividade Antiviral

[0428] Os compostos selecionados da Tabela 5 foram testados contra os vírus nos quais DDX3 está envolvida.

[0429] As potências antivirais e toxicidade dos compostos mais ativos são resumidas nas Tabelas 7 a 15 abaixo. É importante notar que os inibidores DDX3 identificados são capazes de inibir a replicação de diferentes vírus tais como HCV, HIV, DENV, WNV, JEV.

[0430] Tabela 7. Atividade antiviral e citotóxicas de compostos selecionados contra o sistema replicon do Vírus da Hepatite C (HCV).

[0431] a EC50: Concentração eficaz 50 ou concentração necessária para inibir 50% de morte celular induzida por HCV, avaliada com o método luciferase nas células LucUbiNeo-ET.

[0432] b CC50 concentração citotóxica 50 ou concentração necessária para induzir 50% de morte de células não infectadas, avaliadas com o método MMT nas células LUNET.

[0433] *Composto previamente publicado6

[0434] Os dados mostraram que o composto EI01D previamente relatado foi encontrado completamente inativo contra HCV.

[0435] Tabela 8. Atividade antiviral e citotóxica de compostos selecionados contra sistema de cultura de célula infecciosa de Vírus da Hepatite C (HCV).

[0436] a EC50: concentração eficaz 50 ou concentração necessária para inibir 50% de morte celular induzida por HCV Jc1 (vírus genótipo 2a), avaliada com o método de imuno-histoquímica (IHC) contra o antígeno de HCV NS5A nas células HuH7.5.

[0437] b CC50: concentração citotóxica 50 ou concentração necessária para induzir 50% de morte de células não infectadas, avaliada com o método MTT nas células HuH7.5.

[0438] Tabela 9. Atividade antiviral e citotóxica de compostos selecionados contra Vírus da Imunodeficiência (HIV).

[0439] a EC50: concentração eficaz 50 ou concentração necessária para inibir 50% de morte celular induzida por HIV, avaliada com células de PBMC após 72 h. PBMC: Células Mononucleares de Sangue Periférico

[0440] b CC50: concentração requerida para inibir 50% da viabilidade das células,

[0441] c: não determinado;

[0442] *Composto previamente publicado. 6

[0443] Tabela 10. Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) e citotoxicidade (CC50) no sistema de cultura de célula infecciosa do Vírus do Nilo Ocidental (WNV).

[0444] a EC50: concentração eficaz 50 ou concentração necessária para inibir 50% de morte celular induzida por WNV, avaliada com células Huh7.

[0445] b CC50: concentração requerida para inibir 50% de viabilidade de células.

[0446] Tabela 11. Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) e citotoxicidade (CC50) no sistema de cultura de célula infecciosa do Vírus da Dengue (DENV).

[0447] a EC50: concentração eficaz 50 ou concentração necessária para inibir 50% de morte celular induzida por DV, avaliada com células Huh7.

[0448] b CC50 concentração requerida para inibir 50% de viabilidade de células.

[0449] Tabela 12. Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) e citotoxicidade (CC50) no sistema de cultura de célula infecciosa de JEV.

[0450] a A titulação viral foi determinada por ensaio de formação de placa em células de rins de hamster bebê (BHK-21) .

[0451] b CC50: concentração requerida para inibir 50% de viabilidade de células.* Compostode referência publicado6

[0452] Tabela 13. Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) no sistema de cultura de célula infecciosa de PRRSV.

[0453] a A titulação viral foi determinada pelo ensaio de formação de placa em células MARC-145.EXEMPLO 27 Avaliação de atividade antiviral em cepas de HIV-1 que carregam mutações que conferem resistência às drogas atualmente usadas para tratar infecção por HIV.

[0454] As linhagens de célula MT-2 e TZM-bl e os clones infecciosos usados para avaliar a atividade antiviral do composto 16d foram todos obtidos através do Programa de Reagente de AIDS (ARP, Divisão de AIDS, NIAID, NIH). A suscetibilidade às drogas de clones de NIH foi previamente caracterizada através do ensaio fenotípico “Phenosense” (disponível em Quest Diagnostics, laboratório Monogram Biosciences, São Francisco, EUA). As características da referência e de vírus resistentes são mostradas na tabela a seguir:

[0455] PIs: inibidores de protease; NRTIs: inibidores de transcriptase reversa de nucleosídeo; NNRTIs: inibidores de transcriptase reversa de nucleosídeo; INIs: inibidores integrase.

[0456] Os valores de IC50 da cepa NL4-3 de referência tipo selvagem de HIV-1 e vírus que carregam mutações resistentes foram determinados em um ensaio fenotípico consistindo em um primeiro ciclo de replicação na linhagem de célula MT-2 seguida por uma rodada adicional de replicação em células TZM-bl. As células MT-2 foram semeadas em uma concentração de 50.000 células/poço em uma placa de 96 poços e infectada com a cepa de referência NL4-3 na presença de diluições de cinco vezes dos compostos. Após 48 a 72 horas, 50 μl do sobrenadante de cada poço, contendo vírus produzido na primeira rodada de infecção, foram usados para infectar as células TZM-bl semeadas em uma placa de 96 poços em uma concentração de 30.000 células/poço. Dois dias depois, as células foram lisadas adicionando 40 μl de Tampão de Lise Glo (Promega) para cada poço por 5 minutos, então 40 microlitros de Reagente Luciferase Bright-Glo (Promega) foram adicionados em cada poço para contagem de unidades de luminescência reativa (RLU) usando Sistema de detecção Glo-Max Multi (Promega). Os valores de RLU de cada poço foram elaborados usando o software GraphPad v5.0 para calcular a IC50 de cada composto.

[0457] Tabela 14. Avaliação da atividade antiviral in vitro (EC50) no Sistema de cultura de célula infecciosa de HIV.

[0458] a EC50: concentração eficaz 50 ou concentração necessária para inibir 50% de morte celular induzida por HIV, avaliada em um ensaio fenotípico consistindo em um primeiro ciclo de replicação na linhagem de célula MT-2 seguida por uma rodada adicional de replicação nas células TZM-bl.

[0459] Tabela 15. Atividade antiviral do composto 20a contra cepas de HIV- 1 que carregam os padrões mais comuns de mutações de resistência selecionadas por drogas atualmente usados para tratar infecção por HIV-1.

[0460] [a] Número do catálogo de Programa de Reagente de NIH AIDS (www.aidsreagent.org). [b] PIs: inibidores de protease; NRTIs: inibidores de transcriptase reversa de nucleotídeos; NNRTIs: inibidores de transcriptase reversa de não nucleotídeos; INIs: inibidores de integrase. [c] razão entre a cepa resistente IC50 e a cepa tipo selvagem IC50. [d] cepa de referência tipo selvagem NL4-3 HIV-1. EXEMPLO 28 Avaliação da atividade antiviral in vitro no Sistema de cultura de célula infecciosa EBOV.

[0461] As células Vero E6 foram semeadas em placas de 48 poços no dia anterior à infecção. 24 h depois, as células foram infectadas com EBOV expressando GFP (EBOV/GFP) em uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,1 na presença de diferentes compostos em concentração de 5 μM no meio livre de soro por 1 h a 37°, então o inóculo for removido e substituído por 3% de meio de cultura de FCS contendo droga a 5 μM, as células foram então incubadas 48 h a 37 °C. Quarenta e oito horas depois, as células foram destacadas da placa com tripsina e fixada por 20 min com 3% de para formaldeído tamponado de PBS antes da análise de citometria de fluxo em um aparelho Beckman Coulter Gallios (Beckman, Brea, CA, EUA). A entrada de vírus é ajustada para conseguir de 50 a 70% de células infectadas em 48 h. As células infectadas são identificadas pela expressão de GFP (Ebola GFP), já que GFP é inserido como um gene viral no genoma do ebola, a intensidade de GFP (MFI) está relacionada à replicação viral. O valor negativo indica o nível de fundo na condição não infectada. Todos os dados representam médias e SD de três experimentos independentes.

[0462] Tabela 16. Avaliação da atividade antiviral in vitro no Sistema de cultura de célula infecciosa EBOV.

[0463] a A titulação viral foi determinada nas células Vero E6.

[0464] Os resultados demonstram que os compostos mostraram uma atividade anti-HIV nas células, bem como uma boa atividade inibitória contra os vírus do grupo IV tais como infecções anti-HCV, WNV, JEV e DENV. Os compostos 20a, 20b, 22a, 22b, 55a e 55b mostraram a melhor atividade contra HCV. Os resultados mostraram também que a droga 20a, 22a e 20b pode significativamente inibir infecções por DENV e WNV. Os compostos 51 e 66d são capazes de afetar a replicação de EBOV (vírus do Grupo V), demonstrando a atividade contra os vírus (-)ssRNA.

[0465] Em conclusão, a atividade anti-HIV dos compostos da invenção foi avaliada por atividade in vitro usando uma proteína DDX3 humana recombinante produzida em E. Coli. A atividade antiviral do composto 20a também foi avaliada com vírus que carregam mutações de resistência que conferem alto nível de resistência a maioria dos antivirais aprovados para tratar infecção por HIV. O composto 20a reteve toda a atividade contra todos os vírus resistentes testados, confirmando seu novo mecanismo de ação e o potencial para superar a resistência ao HIV.

[0466] O IC50 foi calculado para cada molécula e representa a concentração do inibidor capaz de reduzir a atividade de DDX3 em 50%. Os ensaios enzimáticos mostraram que são inibidores seletivos da DDX3 de helicase humana. Os compostos mais ativos foram otimizados, ainda, e testados nas doenças virais.

[0467] Os resultados obtidos e relatados nos Exemplos mostram que os compostos da invenção foram capazes de: 1) Inibir a atividade de helicase de proteína DDX3 humana ao interagir com o local de ligação de RNA e interferir com as etapas catalíticas subsequentes; 2) Suprimir a replicação de HIV-1 em células infectadas sem nenhuma toxicidade a células não infectadas usadas como controle; 3) Suprimir a replicação de HCV em células infectadas sem nenhuma toxicidade a células não infectadas como controle; 4) Suprimir a replicação de WNV em células infectadas sem nenhuma toxicidade a células não infectadas usadas como controle; 5) Suprimir a replicação de DENV em células infectadas sem nenhuma toxicidade a células não infectadas usadas como controle; 6) Suprimir a replicação de JEV em células infectadas sem nenhuma toxicidade a células não infectadas usadas como controle; 7) Suprimir a replicação de PRRSV em células infectadas sem nenhuma toxicidade a células não infectadas usadas como controle; 8) Suprimir a replicação de cepas mutantes de HIV-1 em células infectadas. 9) Suprimir a replicação de EBOV em células infectadas sem nenhuma toxicidade a células não infectadas usadas como controle.

[0468] Referências 1. Paul Ahlquist, Amine O. Noueiry, Wai-Ming Lee, David B. Kushner, and Billy T. Dye. Host factors in positive-strand RNA virus genome replication. J. Virol. 2003, 15, 8181-8186. 2. Andrew Prussia, Pahk Thepchatri, James P. Snyder and Richard K. Plemper. Systematic Approaches towards the Development of Host-Directed Antiviral Therapeutics. Int. J. Mol. Sci. 2011, 12, 4027-4052. 3. Brian M. Friedrich, Natallia Dziuba, Guangyu Li , Mark A. Endsley, James L. Murray, Monique R. Ferguson. Host factors mediating HIV-1 replication. Virus Research 2011, 161, 101- 114. 4. Rupp D, Bartenschlager R. Targets for antiviral therapy of hepatitis C. Semin Liver Dis. 2014, 34, 9-21. 5. Garbelli, A., Radi, M., Falchi, F., Beermann, S., Zanoli, S., Manetti, F., Dietrich, U., Botta, M., Maga, G. Targeting the human DEAD-box polypeptide 3 (DDX3) RNA helicase as a novel strategy to inhibit viral replication. Curr Med Chem.; 2011, 18, 3015-3027. 6. 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Claims (12)

1. Composto caracterizado por ser selecionado entre: ou sal farmaceuticamente aceitável.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser selecionado entre: ou sal farmaceuticamente aceitável destes.

3. Composto ou sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1 ou 2 caracterizado por ser um inibidor DDX3.

4. Composto ou sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por ser para uso médico ou na preparação de um medicamento.

5. Composto ou sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por ser para uso no tratamento de uma doença viral ou para preparar um medicamento para tratar a mesma.

6. Composto para uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pela doença viral ser modulada por DDX3.

7. Composto para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 ou 6, caracterizado pela doença viral ser causada por um vírus que é resistente a pelo menos um composto selecionado do grupo que consiste em: inibidor de protease; inibidor nucleosídeo de transcriptase reversa, inibidor não nucleosídeo de transcriptase reversa ou inibidor de integrase.

8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7 caracterizado por ser para uso no tratamento de uma doença viral em que a doença viral é causada por um vírus selecionado do grupo que consiste de: Vírus da Imunodeficiência Humana 1 (HIV-1), Vírus da Hepatite C, Vírus da Hepatite B, Vírus da Encefalite Equina do Leste, Vírus da Encefalite Equina do Oeste, Vírus da Encefalite Equina Venezuelana, Vírus da Encefalite Japonesa, Vírus da Encefalite Transmitida por Carrapatos, Vírus da Febre Amarela, Vírus da Encefalite de St. Louis, Vírus da Encefalite de Murray Valley, Vírus de Powassan, Vírus da Dengue, Vírus da Zika, Vírus do Nilo Ocidental, Vírus da Rubéola, Citomegalovírus, Vírus da O’nyong’nyong, Vírus Mayaro, Vírus do Rio Ross, Vírus Sindbis, Vírus Vaccinia, Vírus Influenza, Norovírus, Coronavírus da SRAG, Vírus da Chikunguya, Vírus de Lassa, Vírus Ebola, Vírus Lujo, Pneumovírus, Vírus da Síndrome de Febre Grave com Trombocitopenia, Vírus da Síndrome Reprodutiva e Respiratória dos Suínos, Poxvírus, Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), Vírus da Doença da Fronteira (VDF) de carneiros, e Vírus da Febre Suína Clássica (VFSC).

9. Composto, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por ser no tratamento de uma doença viral causada por um vírus selecionado do grupo que consiste de: Vírus da Imunodeficiência Humana 1 (HIV-1), Vírus da Hepatite C, Vírus do Nilo Ocidental, Vírus da Dengue, Vírus da Encefalite Japonesa, Vírus da Síndrome Reprodutiva e Respiratória dos Suínos, Vírus Ebola, Vírus da Zika.

10. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender o composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9 e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por compreender adicionalmente pelo menos um agente antiviral.

12. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo agente antiviral ser selecionado do grupo que consiste em: um inibidor nucleosídeo ou não nucleosídeo de análogo de transcriptase reversa, um inibidor de transcriptase reversa análogo de nucleotídeo, um inibidor de serina protease NS3/4A, um inibidor de polimerase NS5 ou interferon-alfa.