BR112017005113B1 - Composto de fórmula geral (i), método para preparar o composto de fórmula geral (i), método para preparar um composto de fórmula geral (iv), composição farmacêutica para o tratamento de doenças relacionadas com atividades anormais de jak3 e/ou jak1 quinases, uso do composto, e uso da composição farmacêutica - Google Patents
Composto de fórmula geral (i), método para preparar o composto de fórmula geral (i), método para preparar um composto de fórmula geral (iv), composição farmacêutica para o tratamento de doenças relacionadas com atividades anormais de jak3 e/ou jak1 quinases, uso do composto, e uso da composição farmacêutica Download PDFInfo
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Abstract
A presente invenção trata de uma aplicação de um composto que tem fórmula geral (I) como JAK3 e/ou JAK1 quinase e um método de preparação para o composto.
Description
[001] A presente invenção pertence ao campo da medicina, e se refere a compostos heterocíclicos aromáticos que têm atividade inibitória de Janus quinase 3 (JAK3) e/ou Janus quinase 1 (JAK1). A presente invenção também se refere ao método de preparação dos compostos, a composição farmacêutica que compreende o composto como um ingrediente ativo, e o uso farmacêutico do mesmo. O composto da presente invenção pode ser usado como o inibidor de JAK3 e/ou JAK1 quinase, e usado para as aplicações clínicas, tais como o tratamento/prevenção de doenças relacionadas com atividades anormais destas quinases, incluindo doenças autoimunes, doenças inflamatórias, cânceres e outras doenças.
[002] Em 2002, um total de 518 genes de proteína quinase em quinoma human foram identificados por Manning et al., em que 218 genes estão estreitamente relacionados com a ocorrência e o desenvolvimento de doenças humanas (Manning G., et al. 2002, Science, 298:1912-1934). Nos fármacos obtidos até agora, existem tantos quanto 20 % de agentes farmacêuticos usando enzimas como alvos, e particularmente, os fármacos que têm como alvo as proteínas quinases são de especial valor em aplicações clínicas.
[003] Proteína quinase é um tipo de enzima dependente de mensageiro intracelular que catalisa a fosforilação de proteínas particulares e implementa processos de sinalização, que incluem principalmente proteínas tirosina quinases (JAKs, Src, Abl, EGFR, FGFR, PDGFR etc.), proteínas serina/treonina quinases (PKC, MAPK, Rho quinases etc.), proteínas quinases biespecíficas (MAPKK) e fosfatidil inositol quinase (PI3K). O processo de fosforilação/desfosforilação de uma proteína quinase é capaz de regular vários processos biológicos em células diferentes, tais como o metabolismo, diferenciação celular, sobrevivência celular, apoptose, organogênese, angiogênese, e resposta imune etc. (Shchemelinin I., et al. 2006, Folia Biol., 52: 81-100).
[004] JAK quinases (Janus quinases, denominadas como JAKs para abreviar, incluindo 4 membros conhecidos: JAK3, JAK1, TYK2, e JAK2) são uma família pequena na superfamília de proteína tirosina quinase não receptora intracitoplásmica. JAK3 está distribuída na medula e sistema linfático, enquanto JAK1, TYK2 e JAK2 estão amplamente distribuídas em uma pluralidade de células de tecido. Quando JAKs se ligam a um receptor de citocina na superfície de célula, as JAKs acopladas a receptor são ativadas e deste modo o receptor é fosforilado, o que proporciona sítios de resposta de recrutamento, isto é, proteínas STAT fosforiladas por JAKs, para transdutores de sinal citoplasmático e ativadores de transcrição, proteínas STAT (STAT1~4, STAT5a, STAT5b, e STAT6). Após a dimerização, as proteínas STAT fosforiladas por JAKs são transferidas ao núcleo e regulam a expressão de genes. Esta via é chamada via de sinalização de JAK/STAT (O’Shea J. J., et al. 2013, N. Engl. J. Med., 368: 161-170).
[005] A via de sinalização de JAK/STAT é uma via de transdução de sinal estimulada por uma pluralidade de citocinas e receptores de fator de crescimento. Estas fatores incluem interleucinas (IL-2~7, IL-9, IL-10, IL-15, e IL-21), interferons (IFN-a, IFN-ß, e IFN-y), eritropoietina (EPO), fator de estimulação de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF), hormônio de crescimento (GH), prolactina (PRL), trombopoietina (TPO) etc., que estão envolvidos na proliferação de células imunes e de células-tronco hematopoiéticas, e desempenham um papel chave nos processos biológicos imunorregulatório (Ghoreschi K., et al. 2009, Immunol. Rev., 228: 273-287). Diferentes subtipos de JAK quinases podem ser ativados por diversos receptores, de modo a alcançar distintas funções biológicas.
[006] JAK1 pode se ligar a IL-10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-26, IL-28, IFN-a, IFN-y, IL-6 na família de gp130 e outros receptores que contêm yc (Rodig S J., et al. 1998, Cell, 93: 373-383). O experimento de knock-off de gene de JAK1 em um modelo de camundongo indicou que esta enzima desempenha um papel fundamental nos efeitos biológicos de tais lotes de receptores de citocina descritos acima (Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24). JAK1 é um novo alvo para doenças tais como doenças relacionadas com o sistema imune, inflamação e cânceres etc. Os inibidores de JAK1 podem ser usados para o tratamento/prevenção de doenças, incluindo, mas não limitado a, doenças autoimunes, inflamação e tumores (Hornakova T., et al. 2010, Blood, 115:3287-3295), tal como leucemia, linfomas, melanoma, artrite, psoríase, doença de Crohn, lúpus eritematoso, síndrome de imunodeficiência adquirida, doença de Behcet (Hou S., et al. 2013, Hum. Genet., 132:1049-1058), etc.
[007] Descobriu-se que JAK2 têm um papel significativo nos processos de regulação de uma pluralidade de receptores, incluindo EPO, GH, PRL, IL-3, IFN-y etc. (Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24; Levy D. E., et al. 2002, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 3: 651-662; O’Shea J. J., et al. 2002, Cell, 109 (supl.): S121-S131). Em um modelo de camundongo, o knock-off gene de JAK2 pode resultar em morte de animais anêmicos (Schindler C. et al. 2007, J. Biol. Chem., 282: 20059-20063); Enquanto em seres humanos, uma mutação de base JAK2V617F em gene de JAK2 está intimamente relacionada com a ocorrência de doenças mieloproliferativas, incluindo policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (ET), mielofibrose idiopática (IMF), e leucemia mieloide crônica (CML) etc. (Ghoreschi K., et al. 2009, Immunol. Rev., 228: 273-287). Assim, JAK2 se tornou um alvo exato para o tratamento/prevenção de tais doenças.
[008] JAK3 regula a sinalização celular através da ligação à cadeia gama comum (yc) nos complexos de citocina-receptor, tais como IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, e IL-21. A mutação em JAK3 ou yc pode conduzir a imunodeficiência severa combinada (SCID) (Villa A., et al. 1996, Blood, 88: 817-823). A atividade anormal de JAK3 é representada como redução significativa de células T e células NK, e perda das funções de células-B, que tem um forte impacto sobre as funções biológicas normais de sistema imune etc. Com base nas suas características funcionais e na distribuição especial dos tecidos, JAK3 se tornou um prometedor alvo farmacêutico para doenças relacionadas com o sistema imune, e assim os seus inibidores terão um grande valor clínico no tratamento/prevenção da artrite reumatoide (RA), doença de Crohn, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, diabetes do tipo I, psoríase, doenças alérgicas, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, leucemia, linfoma, transplante de órgãos e outras doenças (Papageorgiou A. C., et al. 2004, Trends Pharm. Sci., 2004, 25: 558-562).
[009] TYK2 é o primeiro membro da família de JAK e pode ser ativada por uma pluralidade de receptores, tais como interferons (IFNs), IL-10, IL-6, IL-12, IL-23, e IL-27. Em camundongos, a perda de função de TYK2 pode levar à deficiência nas vias de sinalização de muitos receptores de citocina, o que pode resultar em infecção por vírus, e diminuir a função imune antibacteriana e, assim, aumentar a possibilidade de infecção no pulmão (Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24). Além disso, a investigação no grupo de Larner A.C. demonstrou que TYK2 é útil para suprimir o crescimento e as metástases de câncer da mama (Zhang Q., et al. 2011, J. Interferon Cytokine Res., 31:671-677); recentemente, este grupo também relatou que TYK2 facilita a regulação da obesidade pela diferenciação de tecido adiposo marrom (BAT) em camundongos e seres humanos, de modo que possa proteger os organismos da obesidade, ou mesmo revertê- lo (Derecka M., et al., 2012, Cell Metab., 16:814-824). Isso poderia proporcionar uma nova oportunidade para os doentes obesos que sofrem de câncer.
[0010] Em novembro de 2012, o inibidor de pan- JAKs Xeljanz (Tofacitinib) de Pfizer foi aprovado pela FDA para o tratamento de RA. Em outubro de 2013, os dados clínicos de Fase III de Xeljanz para o tratamento de psoríase foram divulgados pela empresa. Em comparação com o teste duplo-cego de Enbrel (Etanercept), este fármaco satisfez os requisitos para um ensaio de não-inferioridade. No entanto, Xeljanz possui alguns efeitos colaterais, por exemplo, pode resultar na diminuição da quantidade de eritrócitos e de leucócitos, e aumento do nível de colesterol. Isto pode ser relacionado com a sua elevada atividade inibidora de JAK2 e baixa seletividade (Zak M., et al. 2012, J. Med. Chem., 55: 6176-6193). Portanto, é altamente demandado f para a pesquisa e descoberta de inibidores seletivos de JAK.
[0011] Existem vários inibidores seletivos de JAK em diferentes fases clínicas utilizados para o tratamento de doenças relacionadas com o sistema imune, tais como RA, doença de Crohn, psoríase, e mielofibrose, incluindo inibidor seletivo de JAK3 VX-509, inibidor seletivo de JAK1 GLPG0634 (Feist E., et al. 2013, Rheumatology, 52:1352-1357) e INCB39110 (http://www.incyte.com/research/pipeline) etc. Ademais, algumas patentes têm sido divulgadas para os inibidores seletivos, com diferentes tipos de estrutura: 1) inibidores seletivos de JAK3, tal como pirrolo [1,2- b]piridazina (WO2012125887), pirazolo [3,4-d]pirimidina (documento WO2011048082, documento WO2011134861, documento WO2012022681), diaminopirimidinas (documento WO2011029807, documento WO2012015972), pirrolo [2,3-b]piridina (documento JP2012012332), diamino-piridinil-3-formamida (documento WO2010061971, documento US20120108566), pirrolo [2,3- b]pirazina (documento WO2011144584, documento WO2011144585).; 2) inibidores seletivos de JAK1, tais como compostos tricíclicos (documento WO2011086053), pirazóis substituídos e pirróis (documento WO2010135650, documento WO2011112662), anilinoftalazinas (documento WO2012037132). Adicionalmente, também foram reveladas patentes para os inibidores seletivos de JAK2 e inibidores seletivos de TYK2, e os inibidores com ambos subtipos (JAK3/1, JAK1/2), que não serão mais descritos no presente documento.
[0012] A quinase de células T indutível (ITK), também denominada como Emt ou Tsk, é uma das tirosina quinases não receptoras na família de Tec. ITK é expressa em células T, células NKT e mastócitos. Esta quinase desempenha um papel chave na regulação da via de sinalização de receptor de célula T (TCR), CD28, CD2, receptor de quimiocina CXCR4 e FceR etc. A secreção de citocinas do tipo Th2 (incluindo IL- 4, IL-5, e IL-13 etc.) desempenha uma parte importante na regulação da inflamação imune. A deficiência de ITK tem um impacto sobre a resposta das células Th2, e deste modo alivia a reação inflamatória crônica ou tardia (Sahu N., et al. 2009, Curr. Top. Med. Chem., 9: 690-703; Lin T. A., et al. 2004, Biochemistry, 43: 11056-11062). A quinase linfocítica de células B (BLK) é uma das tirosina quinases não receptoras na família de Src, que é expressa em linfócitos B, e se refere ao crescimento e diferenciação de linfócitos B. A ligação forte entre BLK quinase ou fosfatase e correspondentes co-receptores tem um importante efeito sobre a regulação da via de sinalização de receptor de célula B (BCR), por exemplo, tal quinase pode influenciar a apoptose e retardo da formação de BCR (Texido G., et al. 2000, Mol. Cell Biol., 20: 1227-1233). BLK tem também influência importante sobre ativação de NF-KB mediada por receptor de célula pré-B (Saijo K., et al. 2003, Nat. Immunol., 4: 274-279). Pesquisas recentes têm demonstrado que BLK está relacionada com a patogênese de RA, lúpus eritematoso sistêmico e muitas outras doenças autoimunes (Simpfendorfer KR., et al. 2012, Hum. Mol. Genet., 21: 3918-3925; Génin E., et al. 2013, PLoS One, 8: e61044).
[0013] A quinase1 de ligação a TANK (TBK1), também denominada como NAK (quinase de ativação de NF-KB) ou T2K, é um tipo de proteína Ser/Thr quinase na família de IKK. TBK1 é amplamente expressa no estômago, cólon, pulmão, timo e fígado de camundongo; e também expressa nos órgãos linfoides e não linfoides de seres humanos, incluindo baço, cérebro e rim etc. Esta quinase tem influência sobre a regulação da resposta imune a bactérias e vírus, e a expressão de fatores relacionados com inflamação, tais como IL-6, TNF-a e IFN-ß, etc. Na via de sinalização de insulina, TBK1 pode mediar a fosforilação de Ser994 no receptor de insulina e o metabolismo dos lipídios. Estes resultados indicaram que TBK1 desempenha um papel importante em vários mecanismos imunopatológicos e imunobiológicos (Yu T., et al. 2012, Mediators Inflamm., 2012: 979105-979112; Hammaker D., et al. 2012, Rheumatology, 51: 610-618).
[0014] A família de receptor de fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR) incluindo 3 membros, isto é, VEGFR-1 (Flt1), VEGFR-2 (KDR/Flk1) e VEGFR-3 (Flt4), consiste em 7 regiões extracelulares com estrutura do tipo imunoglobulina, uma região de membrana e uma região de tirosina quinase, em que a atividade de tirosina quinase é ativada através da ligação entre o receptor e o ligando, tais como VEGFs A-F e fator de crescimento de placenta, induzindo ainda diversos efeitos biológicos em células, tais como efeitos importantes sobre o crescimento e diferenciação de células (Shibuya M., et al. 2010, Genes Cancer, 1: 1119-1123). Outras pesquisas demonstraram que o VEGFR1 é expresso em endoteliócitos, monócitos e macrófagos de um paciente com RA. VEGFA pode ativar VEGFR1, e resultar na proliferação de endoteliócitos e angiopoiese. A proteína VEGFA é altamente expressa na sinóvia, linfa, soro e tecido sinovial de um paciente com RA, e o nível de VEGFA é positivamente correlacionado com RA. VEGFR2 é expresso no tecido sinovial de um paciente com RA. VEGF A, C, e D podem ativar a sinalização de VEGFR2 e aumentar a permeabilidade vascular e a angiopoiese. VEGFC pode ser detectado em vários tipos de células na camada interna sinovial espessada de RA, especialmente em células perivasculares e células de músculo liso. VEGFR3 pode ser expresso em monócitos, macrófagos, algumas células dendríticas, vasos capilares de tecidos mamários normais e órgãos neuroendócrinos. Verificou-se, em algumas pesquisas, que VEGFR3 contribui para a ocorrência de doenças autoimunes, tais como RA, doença inflamatória do intestino, doenças de úlceras e doença de Crohn etc., e tumores relacionados com linfoangiogênese. No entanto, o mecanismo relevante não foi completamente entendido (D' Aura Swanson C, et al. 2009, Nat. Rev. Rheumatol., 5: 317-324; Aoki Y., et al. 2005, J. Natl. Cancer Inst., 97: 2-3).
[0015] Os inibidores de proteína quinase revelados no presente documento podem ser usados para o tratamento e/ou prevenção de doenças relacionados com o sistema imune, incluindo, mas não limitado a, RA, psoríase, doença de Crohn, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, diabetes do tipo I, doenças alérgicas, doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, leucemia, e linfoma, etc. Ao mesmo tempo, estes compostos ou uma composição farmacêutica que compreende os compostos como os ingredientes ativos terão eficácia clinica máxima para estas doenças na janela terapêutica segura.
[0016] Um aspecto da invenção se refere a compostos heterocíclicos aromáticos que têm atividade inibitória de JAK3 e/ou JAK1, incluindo seus derivados, tais como um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, estereoisômero, e pró-fármaco dos mesmos.
[0017] Um outro aspecto da invenção se refere a um método de preparação do composto descrito no presente documento.
[0018] Ainda um outro aspecto da invenção se refere a uma composição farmacêutica que compreende o composto da invenção como o ingrediente ativo, e uso clínico do composto ou a composição farmacêutica da invenção no tratamento/prevenção das doenças relacionadas com atividades anormais de quinases, tais como JAKs, e uso do composto ou a composição farmacêutica da invenção na preparação de um medicamento usado para o tratamento/prevenção das doenças relacionadas com atividades anormais de quinases, tais como JAKs.
[0019] A presente invenção proporciona um composto de fórmula geral (I), incluindo um pró-fármaco, estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo.
[0020] em que,
[0021] R1 é halogênio ou C1-C6 alquila;
[0022] R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxi, ciano, halo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcoxi, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alquilcarbonila e C1-C6 alquil amino;
[0023] R3 é hidrogênio ou halogênio;
[0024] R4 é hidrogênio ou C1-C4 alquila;
[0025] X é NH, O ou S;
[0026] Y é CO ou S(O)2;
[0027] Z é uma ligação covalente, CH2 ou (CH2)2;
[0028] n é um número inteiro de 1 a 4; e
[0029] Anel A é um anel benzeno, anel piridina ou anel piperidina. ou anel piperidina.
[0030] Em um aspecto preferível, a presente invenção proporciona um composto de fórmula geral (I), incluindo um pró-fármaco, estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo, em que,
[0031] R1 é halogênio ou C1-C6 alquila;
[0032] R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxi, ciano, fluoro, metila, etila, metoxila, difluorometila, trifluorometila, acetila e dimetilamino;
[0033] R3 é hidrogênio ou halogênio;
[0034] R4 é hidrogênio ou metila;
[0035] X é NH ou O;
[0036] Y é CO ou S(O)2;
[0037] Z é uma ligação covalente, CH2 ou (CH2)2;
[0038] n é um número inteiro de 1 a 4; e
[0039] Anel A é um anel benzeno, anel piridina ou anel piperidina.
[0040] Em um aspecto mais preferível, a presente invenção se refere a um composto de fórmula geral (I), incluindo um pró-fármaco, estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo, em que,
[0041] R1 é halogênio ou C1-C6 alquila;
[0042] R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxi, ciano, fluoro, metila, etila, metoxila, difluorometila, trifluorometila, acetila e dimetilamino;
[0043] R3 é hidrogênio ou fluoro;
[0044] R4 é metila;
[0045] X é NH;
[0046] Y é CO;
[0047] Z é uma ligação covalente;
[0048] n é um número inteiro de 1 a 4; e
[0049] Anel A é um anel benzeno, anel piridina.
[0050] Em um aspecto mais preferível, a presente invenção se refere a um composto de fórmula geral (I), incluindo um pró-fármaco, estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo, em que,
[0051] R1 é cloro, fluoro ou metila;
[0052] R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxi, ciano, fluoro, metila, etila, metoxila, difluorometila, trifluorometila, acetila e dimetilamino;
[0053] R3 é hidrogênio ou fluoro;
[0054] R4 é metila;
[0055] X é NH;
[0056] Y é CO;
[0057] Z é uma ligação covalente;
[0058] n é um número inteiro de 1 a 4; e
[0059] Anel A é um anel benzeno.
[0060] Em um aspecto mais preferível, a presente invenção se refere a um composto de fórmula geral (I), incluindo um pró-fármaco, estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo, em que,
[0061] R1 é cloro;
[0062] R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxi, ciano, fluoro, metila, etila, metoxila, difluorometila, trifluorometila, acetila e dimetilamino;
[0063] R3 é hidrogênio ou fluoro;
[0064] R4 é metila;
[0065] X é NH;
[0066] Y é CO;
[0067] Z é uma ligação covalente;
[0068] n é um número inteiro de 1 a 4; e
[0069] Anel A é um anel benzeno.
[0070] Em um particularmente aspecto preferível, a presente invenção se refere a um composto de fórmula geral (I), incluindo um pró-fármaco, estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo, em que,
[0071] R1 é cloro;
[0072] R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em ciano, fluoro e trifluorometila;
[0073] R3 é hidrogênio ou fluoro;
[0074] R4 é metila;
[0075] X é NH;
[0076] Y é CO;
[0077] Z é uma ligação covalente;
[0078] n=1;
[0079] Anel A é um anel benzeno.
[0080] Em um particularmente aspecto preferível, a presente invenção se refere a um composto de fórmula geral (I), incluindo um pró-fármaco, estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo, em que,
[0081] R1 é cloro;
[0082] R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em ciano;
[0083] R3 é hidrogênio ou fluoro;
[0084] R4 é metila;
[0085] X é NH;
[0086] Y é CO;
[0087] Z é uma ligação covalente;
[0088] n=1; e
[0089] Anel A é um anel benzeno.
[0090] A Fig. 1 é um diagrama esquemático que mostra o princípio do ensaio de atividade de Z'-LYTE quinase, que reflete os passos envolvidos no teste, incluindo a reação entre a quinase e o seu substrato, a reação cromogênica e a detecção.
[0091] O “Halogênio” descrito no presente documento se refere a flúor, cloro, bromo, ou iodo, e particularmente a flúor, cloro ou bromo.
[0092] A “alquila” descrita no presente documento inclui alquila linear, ramificada ou cíclica. Preferivelmente, a alquila é C1-C8 alquila, ou C1-C6 alquila; e particularmente preferivelmente, a alquila é C1-C4 alquila; e mais particularmente preferivelmente, a alquila é metila, etila, propila ou isopropila, n-butila, isobutila ou t- butila. A alquila no composto da presente invenção pode ser opcionalmente substituída ou não substituída, e o substituinte pode incluir alquila, halogênio, alcoxi, hidrocarbila, e hidroxila, etc. Exemplos da alquila da presente invenção incluem metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, t-butila, n-pentila, isopentila, n-hexila, isohexila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, e ciclohexila, etc.
[0093] O “alcoxi” descrito no presente documento se refere ao grupo formado pela união da alquila acima a um átomo de oxigênio, em que o átomo de oxigênio é capaz de formar uma ligação livremente, tal como metoxila, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi, isopropoxi, t-butoxi, ciclopropoxi, e ciclohexiloxi, etc.
[0094] A “alquilcarbonila” descrita no presente documento se refere ao grupo formado pela união da alquila acima a uma carbonila, tal como acetila, propionila, isopropionila, butirila, t-butirila, ciclopropionila, e ciclohexanoila, etc.
[0095] O “alquilamino” descrito no presente documento se refere ao grupo formado pela união da alquila acima a um grupo amino, tal como metilamino, etilamino, e 4- dimetilamino, etc.
[0096] O termo “farmacêutico” ou “farmaceuticamente aceitável” descrito no presente documento pode ser entendido como adequado para o uso em seres humanos e animais em um escopo razoável da medicina, e tolerável sem efeitos colaterais inaceitáveis, incluindo toxicidade, alergia, estimulação, complicações e assim por diante.
[0097] A presente invenção se refere a uma composição farmacêutica, que compreende o composto de fórmula (I) mencionado acima, incluindo um pró-fármaco, estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo, como o ingrediente ativo, e um carreador farmaceuticamente aceitável, adjuvante ou excipiente, etc. O carreador farmaceuticamente aceitável, adjuvante ou excipiente se refere a qualquer diluente, auxiliar e carreador que pode ser usado no campo farmacêutico, tal como, mas não limitado a, os materiais listados em “Handbook of Pharmaceutical Excipients”, 8a ed, 2013.
[0098] O composto descrito na presente invenção pode ser opcionalmente usado em combinação com um ou mais ingredientes ativos, em que a dosagem de cada componente e a razão dos mesmos pode ser determinada por um técnico no assunto com base no transtorno específico, condição específica do paciente e requisitos clínicos.
[0099] O composto ou composição farmacêutica descrito na presente invenção pode ser preparado em quaisquer formas farmacêuticas, que compreendem excipiente comum no campo farmacêutico, tal como, mas não limitado a, formulação oral (comprimido, cápsula, pó, grânulo, xarope, pílula etc.), injeção, formulação tópica etc. A formulação da presente invenção usualmente contém 0,5-70 % de ingrediente ativo em peso, e preferivelmente, 1-20 % de ingrediente ativo em peso.
[00100] O composto de fórmula (I) descrito no presente documento pode ser administrado a mamíferos (incluindo seres humanos) por via oral ou de injeção na prática clínica, e de preferência, por via oral. A dosagem é de 0,0001-200 mg/kg de peso corporal ao dia, e mais preferivelmente, 0,01-100 mg/kg de peso corporal ao dia, e o mais preferível, 0,1-50 mg/kg de peso corporal ao dia. Ao mesmo tempo, a melhor dosagem é determinada com base na condição do indivíduo, começando geralmente com uma dosagem mais baixa, e aumentando gradualmente a uma dosagem mais elevada.
[00101] Nos exemplos e exemplos preparativos da presente invenção, os compostos descritos no presente documento e os métodos de preparação dos mesmos são adicionalmente descritos e ilustrados. Deveria ser entendido que os exemplos preparativos e exemplos a seguir não limitarão de nenhum modo o escopo da invenção.
[00102] O método de preparação do derivado de fórmula (I) da invenção será descrito na seguinte via sintética. As matérias-primas, reagentes, catalisadores, e solventes etc. usados na via sintética esquemática podem ser preparados pelos métodos bem conhecidos a um técnico na química orgânica ou pode estar comercialmente disponível. Todos os derivados finais da invenção podem ser preparados pelos métodos descritos no diagrama esquemático ou outros métodos semelhantes. Estes métodos são bem conhecidos a um técnico na química orgânica. Todos os fatores variáveis usados nestes diagramas esquemáticos são definidos como a seguir ou de acordo com as reivindicações.
[00103] Método de preparação: (a) Intermediário III(a) pode ser comprado diretamente ou preparado de acordo com o seguinte método sintético ilustrativo:
[00104] O composto VIII é obtido por condensação entre diamina unilateralmente protegida VI e composto VII. Na reação de condensação, um agente de condensação de peptídeo é usado como o catalisador, tal como 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), N,N'- diciclohexilcarbodiimida (DCC), e N,N'-carbonildiimidazol (CDI) etc. A reação é levada a cabo na temperatura que varia de 0-60 °C por 2-72 h. O solvente usado na reação é um solvente comum, tal como benzeno, tolueno, tetrahidrofurano, dioxano, diclorometano, clorofórmio, N,N'-dimetilformamida etc. Álcali, tal como hidróxido de sódio, trietilamina ou piridina, etc., pode ser adicionado, se necessário.
[00105] O composto III(a) é obtido após remoção de Boc do composto resultante VIII sob a ação de ácido (preferivelmente, ácido trifluoroacético). A reação é levada a cabo em uma temperatura que varia de 0-60 °C por 0,5-2 h. O solvente usado na reação é diclorometano, tetrahidrofurano, N,N'-dimetil formamida, etc.
[00106] (b) Intermediário III(b) pode ser comprado diretamente ou preparado de acordo com o seguinte método sintético ilustrativo:
[00107] O composto X é obtido por condensação entre diamina unilateralmente protegida VI e composto VX. A reação é levada a cabo em uma temperatura que varia de 0-60 °C por 0,5-2 h. O solvente usado na reação é um solvente comum, tal como benzeno, tolueno, tetrahidrofurano, dioxano, diclorometano, clorofórmio, N,N'-dimetilformamida etc. Trietilamina, diisopropiletilamina, ou piridina é comumente usada como o agente de ligação a ácido; opcionalmente, base inorgânica, tal como NaOH, Na2CO3, NaOAc, etc., pode ser adicionada.
[00108] O composto III(b) é obtido após remoção de Boc do composto resultante X sob a ação de um ácido (preferivelmente, ácido trifluoroacético). A reação é levada a cabo em uma temperatura que varia de 0-60 °C por 0,5-2 h. Solvente comum usado na reação é diclorometano, tetrahidrofurano, N,N'-dimetilformamida, e água, etc. O ácido usado pode ser ácido trifluoroacético, ácido clorídrico etc.
[00109] (C) Intermediário V pode ser preparado pelo seguinte método sintético ilustrativo a seguir:
[00110] O composto XII é obtido por condensação entre Composto XI (comercialmente disponível ou preparado) e cloreto de acriloila na presença de um álcali (preferivelmente, diisopropiletilamina). O grupo nitro no composto resultante XII é então reduzido por pó de ferro para dar o intermediário alvo V. O álcali usado pode ser diisopropiletilamina, ou trietilamina, etc.
[00111] (D) O composto de fórmula (I) descrito no presente documento pode ser preparado pelo seguinte método sintético ilustrativo a seguir:
[00112] O composto IV é obtido por reação de substituição de composto II e composto III na presença de trietilamina, em que ambos compostos II e III podem ser comprados diretamente. A temperatura de reação é refluxo por 8-16 h. O solvente usado na reação é etanol, metanol, ou nbutanol, etc. O álcali usado é trietilamina, ou diisopropiletilamina, etc.
[00113] O composto I é obtido por reação de substituição de composto IV e o composto resultante V catalisado por um ácido (preferivelmente, ácido trifluoroacético). A temperatura de reação é refluxo com uma duração de 8-16 h. O solvente usado na reação é isopropanol, ou n-butanol, etc.; e o ácido usado na reação é ácido trifluoroacético, ou ácido clorídrico etc.
[00114] O composto de fórmula I pode ser purificado por métodos de separação comuns, tais como extração, recristalização, ou cromatografia em coluna, etc.
[00115] Os compostos representativos descritos na presente invenção são listados na Tabela 1. O número de composto é consistente com o “número de exemplo” na Seção de Exemplos, isto é, a síntese do composto 1 na Tabela 1 é descrito em “Exemplo 1”, e a síntese do composto 30 na Tabela 1 é descrito em “Exemplo 30”. Tabela 1. Compostos representativos da invenção
[00116] A presente invenção será descrita adicionalmente por referência aos exemplos a seguir. No entanto, o escopo da invenção não é limitado a estes exemplos. A porcentagem descrita no presente documento se refere à porcentagem em peso, a não ser que de outro modo indicado. Todas as faixas numéricas, tais como unidades de medição, condições de reação, e os estados físicos ou porcentagens de compostos, descritos no relatório descritivo são proporcionados para clara referência. Os resultados podem também ser alcançados pelo técnico no assunto quando a patente é praticada com temperaturas, concentrações, quantidades, e número de átomos de carbono e semelhantes fora da faixa ou diferentes dos valores individuais.
[00117] Preparação de 2-fluoro-N-metil-5- Nitroanilina
[00118] Sólido amarelo de 2-fluoro-N-metil-5- nitroanilina (19,0 g, rendimento de 87,0 %) foi preparado como a seguir. 2-fluoro-5-nitroanilina (20,0 g, 128,2 mmol) e paraformaldeído (16,0 g, 533,3 mmol) foram dissolvidos em 500 ml de metanol e agitados à temperatura ambiente. Subsequentemente, 100 ml de solução de metóxido de sódio (3,4 g, 63 mmol) em metanol foram adicionados gota a gota. Após agitação à temperatura ambiente por 16 horas, a solução de reação foi dividida em duas partes iguais, às quais NaBH4 (9,7 g, 255,2 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada por 15 min. A reação foi monitorada por LC-MS. Após a reação, a mistura foi vertida em solução aquosa de KOH a 1 M, e agitada para precipitar o sólido. O intermediário alvo foi obtido por filtração. LC-MS (m/z) 171 (M+1).
[00119] Exemplo 2
[00120] Preparação de N-(2-fluoro-5-nitrofenil)- N-metilacrilamida
[00121] Óleo amarelo de N-(2-fluoro-5- nitrofenil)-N-metilacrilamida (12,0 g, rendimento de 83,0 %) foi preparado como a seguir. 2-fluoro-N-metil-5-nitroanilina (11,0 g, 64,7 mmol) e DIPEA (23 ml, 129,4 mmol) foram dissolvidos em 100 ml de THF, e agitados à temperatura ambiente. Subsequentemente, cloreto de acriloila (11 ml, 129,4 mmol) foi adicionado gota a gota. Após agitação à temperatura ambiente por 1 h, a maioria do solvente de reação foi removida por evaporação. A solução foi então diluída pela adição de 100 ml de acetato de etila, lavada por solução salina saturada, seca, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para dar o intermediário alvo. LC-MS (m/z) 225 (M+1).
[00122] Exemplo 3
[00123] Preparação de N-(5-amino-2-fluorofenil)- N-metilacrilamida
[00124] Óleo marrom de N-(5-amino-2-fluorofenil)- N-metilacrilamida (5,6 g, rendimento de 54,0 %) foi preparado como a seguir. Pó de ferro (20,0 g, 357 mmol) e NH4Cl (20,0 g, 374 mmol) foram dissolvidos em 200 ml de água, aquecidos até 80 °C, e agitados por 0,5 h. Subsequentemente, 20 ml de solução de N-(2-fluoro-5-nitrofenil)-N-metilacrilamida (12,0 g, 53,6 mmol) em acetato de etila foram adicionados. Após agitação a 80 °C por 1 h, a solução de reação teve o pH ajustado a alcalino por solução aquosa de NaHCO3. A lama de ferro foi filtrada, e o filtrado foi extraído com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas e concentradas a pressão reduzida para dar o intermediário alvo. LC-MS (m/z) 195 (M+1).
[00125] Exemplo 4
[00126] Preparação de éster t-butílico de ácido N-(4-ciano-benzamino)propilaminofórmico
[00127] Sólido branco de éster t-butílico de ácido N-(4-ciano-benzamino)propilaminofórmico (850 mg, rendimento de 98,0 %) foi preparado como a seguir. O éster t- butílico de ácido 3-aminopropilaminofórmico (500 mg, 2,87 mmol) foi dissolvido em 20 ml de THF, ao qual cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (1,0 g, 5,24 mmol), 1-hidroxibenztriazol (580 mg, 4,30 mmol), DIPEA (1 ml, 5,63 mmol) e ácido 4-cianobenzoico (425 mg, 2,89 mmol) foram adicionados. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 20 h. Subsequentemente, o valor de pH da mistura foi ajustado a 8-10 por solução aquosa de NaHCO3. A mistura foi então extraída com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas e concentradas a pressão reduzida para dar o intermediário alvo. LC-MS (m/z) 304 (M+1).
[00128] Exemplo 5
[00129] Preparação de N-(3-aminopropil)-4-cianobenzamida
[00130] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- ciano-benzaida (350 mg, rendimento de 62,0 %) foi preparado como a seguir. O éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano- benzamino)propilaminofórmico (850 mg, 2,8 mmol) foi dissolvido em 10 ml de diclorometano, ao qual ácido trifluoroacético (500 µl, 6,7 mmol) foi adicionado. Após agitação à temperatura ambiente por 16 h, a solução de reação teve o pH ajustado a alcalino por solução aquosa de NaHCO3. Após evaporação até a secura, uma solução misturada de diclorometano/metanol (10:1) foi adicionada e então submetida a ultrassom. Após o sólido ter sido filtrado, o filtrado foi evaporado até a secura para dar o intermediário alvo. LC-MS (m/z) 204 (M+1).
[00131] Exemplo 6
[00132] Preparação de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) benzamida O
[00133] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- ciano-benzamida (3,5 g, rendimento de 78,0 %) foi preparado como a seguir. 2,4,5-tricloropirimidina (2,6 g, 14,2 mmol), N-(3-aminopropil)-4-ciano-benzamida (2,6 g, 12,8 mmol) e trietilamina (2 ml, 14 mmol) foram dissolvidos em 50 ml etanol. Após a solução de reação ter sido aquecida até 70 °C e agitada por 4 h, a reação foi concluída. A solução foi evaporada até a secura, e então lavada por dietil éter. O intermediário alvo foi obtido por filtração.. LC-MS (m/z) 351 (M+1).
[00134] Exemplo 7
[00135] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-ciano-benzamida
[00136] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-ciano-benzamida (3,1 g, rendimento de 60,0 %) foi preparado como a seguir. N-(3-aminopropil)-4-ciano- benzamida (4,0 g, 11,4 mmol), N-(5-amino-2-fluorofenil)-N- metilacrilamida (2,7 g, 13,9 mmol) e ácido trifluoroacético (1 ml, 7 mmol) foram dissolvidos em 60 ml de isopropanol. Após a solução de reação ter sido aquecida até 90 °C e agitada por 24 h, a reação foi concluída. A solução de reação foi vertida em solução aquosa de NaHCO3 para precipitar o sólido. A mistura repousou e foi então filtrada. O produto bruto foi dissolvido em acetato de etila e submetido a ultrassom. Após filtração, o composto alvo foi obtido. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,80-1,83 (m, 2H, CH2), 3,10-3,12 (m, 2H, CH2), 3,32 (s, 3H, CH3), 3,44-3,46 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,4 Hz, 1H, CH), 6,02-6,08 (m, 1H, CH), 6,18 (d, J=16,0 Hz, 1H, CH), 7,21-7,23 (m, 1H, Ar-H), 7,26-7,27 (m, 1H, Ar-H), 7,64 (s, 1H, pirimidina-NH), 7,91 (s, 1H, Ar-H), 7,93 (s, 1H, pirimidina-H), 7,95-7,96 (m, 2H, Ar-H), 7,97-7,98 (m, 2H, Ar- H), 8,72 (s, 1H, NH), 9,43 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 508 (M+1).
[00137] Exemplo 8
[00138] Preparação de N-(2-fluoro-5- nitrofenil)acrilamida
_
[00139] Sólido amarelo de N-(2-fluoro-5- nitrofenil)acrilamida (0,3 g, rendimento de 71,4 %) foi preparado a partir de 2-fluoro-5-nitroanilina (0,3 g, 2,0 mmol) e cloreto de acriloila (0,27 g, 3 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 2. LC-MS (m/z) 211 (M+1).
[00140] Exemplo 9
[00141] Preparação de N-(5-amino-2- fluorofenil)acrilamida
[00142] Sólido marrom de N-(5-amino-2- fluorofenil)acrilamida (0,1 g, rendimento de 46,7 %) foi preparado a partir de N-(2-fluoro-5-nitrofenil)acrilamida (0,125 g, 4,7 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 3. LC-MS (m/z) 181 (M+1).
[00143] Exemplo 10
[00144] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-trifluorometilbenzamino)propilamino fórmico o
[00145] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-trifluorometilbenzamino)propilamino fórmico (0,22 g, rendimento de 90 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (0,4 g, 2,4 mmol) e ácido 4-trifluorometil benzoico (0,38 g, 2 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 347 (M+1).
[00146] Exemplo 11
[00147] Preparação de N-(3-aminopropil)-4- trifluorometilbenzamida
[00148] Líquido amarelo de N-(3-aminopropil)-4- trifluorometilbenzamida (1,1 g, rendimento de 53 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- trifluorometilbenzamino)propilamino fórmico (2,8 g, 8 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC- MS (m/z) 247 (M+1).
[00149] Exemplo 12
[00150] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4- trifluorometilbenzamida
[00151] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)- 4-trifluorometilbenzamida (1,9 g, rendimento de 57 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (1,46 g, 8 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- trifluorometil benzamida (1,9 g, 8 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 393 (M+1).
[00152] Exemplo 13
[00153] Preparação de N-(3-(2-(3-acrilamido-4- fluoro-fenilamino)-5- cloropirimidinil-4-amino)propil)-4- trifluorometilbenzamida
[00154] Sólido cinza de N-(3-(2-(3-acrilamido-4- fluoro-fenilamino)-5-cloropirimidinila -4-amino)propil)- 4- trifluorometilbenzamida (18 mg, rendimento de 33 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)-4-trifluorometilbenzamida (39 mg, 0,1 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)acrilamida (20 mg, 0,11 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,85-1,88 (m, 2H, CH2), 3,32-3,37 (m, 2H, CH2), 3,55-3,58 (m, 2H, CH2), 5,76-5,79 (m, 1H, CH), 6,27-6,32 (m, 1H, CH), 6,61-6,68 (m, 1H, CH), 7,21 (t, J=10,04 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,36-7,40 (m, 1H, Ar-H), 7,82 (d, J=8,16 Hz, 2H, Ar-H), 8,02 (d, J=8,1 Hz, 2H, Ar-H), 8,16 (s, 1H, pirimidina-H), 8,28 (s, 1H, Ar-H), 8,37-8,38 (m, 1H, NH), 8,73-8,76 (m, 1H, NH), 9,99 (s, 1H, anel benzeno-NH), 10,28 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 537(M+1).
[00155] Exemplo 14
[00156] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-fluorobenzamino)propilamino fórmico
[00157] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-fluorobenzamino)propilaminofórmico (800 mg, rendimento de 94,1 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (500 mg, 2,87 mmol) e ácido 4-fluorobenzoico (400 mg, 2,86 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 297 (M+1).
[00158] Exemplo 15
[00159] Preparação de N-(3-aminopropil)-4- fluorobenzamida
[00160] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- fluorobenzamida (400 mg, rendimento de 75,2 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- fluorobenzamino)propilamino fórmico (800 mg, 2,70 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 197 (M+1).
[00161] Exemplo 16
[00162] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4- fluorobenzamida o
[00163] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)- 4-fluorobenzamida (440 mg, rendimento de 63,2 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (400 mg, 2,19 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- fluorobenzamida (400 mg, 2,03 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 343 (M+1).
[00164] Exemplo 17
[00165] Preparação de N-(3-(2-(3-acrilamido-4- fluoro-fenilamino)-5- cloropirimidinil-4-amino)propil)-4- fluorobenzamida
[00166] Sólido branco de N-(3-(2-(3-acrilamido-4- fluoro-fenilamino)-5- cloropirimidinil-4-amino)propil)-4- fluorobenzamida (8 mg, rendimento de 9,41 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4- fluorobenzamida (60 mg, 0,17 mmol) e N-(5-amino-2- fluorofenil)acrilamida (40 mg, 0,22 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,791,83 (m, 2H, CH2), 3,31-3,33 (m, 2H, CH2), 3,49-3,51 (m, 2H, CH2), 5,75 (d, J=11,2 Hz, 1H, CH), 6,26 (d, J=16,99 Hz, 1H, CH), 6,55-6,62 (m, 1H, CH), 7,11(t, J=9,92 Hz, 1H, Ar-H), 7,22 (t, J=5,66 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,28 (t, J=8,73 Hz, 2H, Ar-H), 7,47 (t, J=4,93 Hz, 1H, Ar-H), 7,88-7,93 (m, 3H, Ar-H, pirimidina-H), 8,31 (d, J=5,12 Hz, 1H, Ar-H), 8,50-8,52 (m, 1H, NH), 9,26 (s, 1H, anel benzeno-NH), 9,85 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 487 (M+1).
[00167] Exemplo 18
[00168] Preparação de N-(3-(2-cloro-5- metilpirimidinil-4-amino)propil)- 4-fluorobenzamida
[00169] Sólido branco de N-(3-(2-cloro-5- metilpirimidinil-4-amino)propil)-4- fluorobenzamida (40 mg, rendimento de 52,3 %) foi preparado a partir de 2,4-dicloro- 5-metilpirimidina (40 mg, 0,25 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- fluorobenzamida (40 mg, 0,20 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 323 (M+1).
[00170] Exemplo 19
[00171] Preparação de 4-fluoro-N-(3-(2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) amino)propil)benzamide
[00172] Sólido branco de 4-fluoro-N-(3-(2-(4-fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) -5-metilpirimidinil- 4-amino)propil)benzamida (5 mg, rendimento de 8,68 %) foi preparado a partir de N-(3-(2-cloro-5-metilpirimidinil-4- amino)propil)-4- fluorobenzamida (40 mg, 0,12 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (40 mg, 0,21 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,80-1,83 (m, 2H, CH2), 1,92 (s, 3H, CH3), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,30-3,32 (m, 2H, CH2), 3,42-3,44 (m, 2H, CH2), 5,58-5,61 (m, 1H, CH), 6,04-6,11 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 6,72 (t, J=5,17 Hz, 1H, Ar-H), 7,21 (t, J= 9,44 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,28 (t, J=8,8 Hz, 2H, Ar-H), 7,66-7,68 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-H), 7,88-7,92 (m, 2H, Ar-H), 7,987,99 (m, 1H, Ar-H), 8,51 (t, J=5,26 Hz, 1H, NH), 9,09 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 481 (M+1).
[00173] Exemplo 20
[00174] Preparação de N-(3-(2-cloro-5- metilpirimidinil-4-amino)propil) -4-trifluorometilbenzamida
[00175] Sólido branco de N-(3-(2-cloro-5-metilpirimidinil-4-amino)propil) -4-trifluorometil benzamida (0,26 g, rendimento de 72 %) foi preparado a partir de 2,4- dicloro-5-metilpirimidina (0,16 g, 1 mmol) e N-(3- aminopropil)-4- trifluorometilbenzamida (0,24 g, 1 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 373 (M+1).
[00176] Exemplo 21
[00177] Preparação de N-(3-(2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino) -5-metilpirimidinil-4- amino)propil)-4-trifluorometilbenzamida
[00178] Sólido branco de N-(3-(2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)-5- metilpirimidinil-4- amino)propil)-4-trifluorometilbenzamida (0,26 g, rendimento de 72 %) foi preparado a partir de N-(3-(2-cloro-5- metilpirimidinil-4-amino)propil)- 4-trifluorometilbenzamida (75 mg, 0,2 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil) -N- metilacrilamida (70 mg, 0,3 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,811,87 (m, 2H, CH2), 1,93 (s, 3H, CH3), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,363,38 (m, 2H, CH2), 3,44-3,46 (m, 2H, CH2), 5,58-5,61 (m, 1H, CH), 6,04-6,11 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 6,73 (t, J=5,64 Hz, 1H, Ar-H), 7,21 (t, J=9,4 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,66-7,68 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-H), 7,84 (d, J=8,3 Hz, 2H, Ar-H), 7,98-8,00 (m, 1H, Ar-H), 8,03 (d, J=8,1 Hz, 2H, Ar-H), 8,71-9,74 (m, 1H, NH), 9,10 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 531 (M+1).
[00179] Exemplo 22
[00180] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-trifluorometil benzamide
[00181] Sólido cinza de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-trifluorometilbenzamida (0,23 g, rendimento de 42 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4-trifluorometil benzamida (0,39 g, 1 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N- metilacrilamida (0,28 g, 1,5 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,811,84 (m, 2H, CH2), 3,31-3,33 (m, 2H, CH2), 3,45-3,47 (m, 2H, CH2), 5,60 (d, J=9,6 Hz, 1H, CH), 6,02-6,08 (m, 1H, CH), 6,18 (d, J=15,1 Hz, 1H, CH), 7,25-7,29 (m, 1H, Ar-H), 7,61-7,67 (m, 3H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,82-7,84 (m, 3H, Ar-H, pirimidina-H), 8,00-8,03 (m, 3H, Ar-H, NH), 8,71 (s, 1H, anel benzeno-NH), 9,71 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 551 (M+1).
[00182] Exemplo 23
[00183] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-fluorobenzamida
[00184] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-fluorobenzamida (117 mg, rendimento de 40,3 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)-4-fluorobenzamida (200 mg, 0,58 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (150 mg, 0,77 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H- RMN (DMSO-d6) d 1,78-1,81 (m, 2H, CH2), 3,28-3,29 (m, 2H, CH2), 3,32 (s, 3H, CH3), 3,43-3,45 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,8 Hz, 1H, CH), 6,05-6,09 (m, 1H, CH), 6,15-6,20 (m, 1H, CH), 7,22-7,30 (m, 4H, Ar-H), 7,64-7,66 (m, 1H, pirimidina- NH), 7,87-7,91 (m, 3H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,50 (t, J=5,2 Hz, 1H, NH), 9,43 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 501 (M+1).
[00185] Exemplo 24
[00186] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(1-metilpiperidinil-4-formamino)propilamino fórmico o
[00187] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(1-metilpiperidinil-4-formamino) propilamino fórmico (220 mg, rendimento de 25,6 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (500 mg, 2,87 mmol) e ácido 1-metilpiperidinil-4-carboxílico (410 mg, 2,87 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 300 (M+1).
[00188] Exemplo 25
[00189] Preparação de N-(3-aminopropil)-N- metilpiperidinil-4-formamida
[00190] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-1- metilpiperidinil-4-formamida (130 mg, rendimento de 80,1 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(1- metilpiperidinil-4-formamino)propilamino fórmico (220 mg, 0,74 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 200 (M+1).
[00191] Exemplo 26
[00192] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-1- metilpiperidinil-4- formamide
[00193] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-1- metilpiperidinil-4- formamida (200 mg, rendimento de 79,6 %) foi preparado a partir de 2,4,5-tricloropirimidina (130 mg, 0,71 mmol) e N- (3-aminopropil)-1-metilpiperidinil-4-formamida (130 mg, 0,65 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 346 (M+1).
[00194] Exemplo 27
[00195] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 1-metilpiperidinil-4-formamida
[00196] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-1-metilpiperidinil-4-formamida (12 mg, rendimento de 11,6 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-1- metilpiperidinil-4- formamida (80 mg, 0,23 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)- N- metilacrilamida (40 mg, 0,20 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,52- 1,58 (m, 4H, 2XCH2), 1, 74-1, 79 (m, 2H, CH2), 1, 96-1, 99 (m, 1H, CH), 2,11 (s, 3H, CH3), 3,05-3,12 (m, 4H, 2XCH2), 3,133,16 (m, 4H, 2XCH2), 3,18 (s, 3H, CH3), 5,60 (d, J=9,7 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,15-6,21 (m, 1H, CH), 7,257,30 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,64-7,69 (m, 1H, Ar-H), 7,76 (t, J=5,45 Hz, 1H, NH), 7,84-7,88 (m, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 9,43 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 504 (M+1).
[00197] Exemplo 28
[00198] Preparação de N-(3-(2-(3-acrilamido-4- fluorofenilamino)-5- cloropirimidinil-4-amino)propil)-4- ciano-benzamida
[00199] Sólido preto de N-(3-(2-(3-acrilamido-4- fluorofenilamino)-5- cloropirimidinil-4-amino)propil)-4- ciano-benzamida (20 mg, rendimento de 40 %) foi preparado a partir de 4-ciano-N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)benzamida (35 mg, 0,1 mmol) e N-(5-amino-2- fluorofenil)acrilamida (22 mg, 0,12 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,811,87 (m, 2H, CH2), 3,30-3,34 (m, 2H, CH2), 3,52-3,57 (m, 2H, CH2), 5,75-5,78 (m, 1H, CH), 6,25-6,30 (m, 1H, CH), 6,59-6,66 (m, 1H, CH), 7,19 (t, J=10,48 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,367,40 (m, 1H, Ar-H), 7,92-7,97 (m, 4H, Ar-H), 8,11 (s, 1H, pirimidina-H), 8,34 (d, J=4,6 Hz, 1H, Ar-H), 8,73 (t, J=5,44 Hz, 1H, NH), 9,95 (s, 1H, anel benzeno-NH), 10,05 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 494 (M+1).
[00200] Exemplo 29
[00201] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-dimetilaminobenzamino)propilamino fórmico
[00202] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-dimetilaminobenzamino)propilamino fórmico (840 mg, rendimento de 91,1 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (500 mg, 2,87 mmol) e ácido 4-dimetilaminobenzoico (475 mg, 2,87 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 322 (M+1).
[00203] Exemplo 30
[00204] Preparação de N-(3-aminopropil)-4- dimetilaminobenzamida o
[00205] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- dimetilaminobenzamida (500 mg, rendimento de 86,5 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- dimetilaminobenzamino)propilamino fórmico (840 mg, 2,62 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC- MS (m/z) 222 (M+1).
[00206] Exemplo 31
[00207] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -4-dimetilaminobenzamida
[00208] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4- dimetilamino benzamida (700 mg, rendimento de 84,3 %) foi preparado a partir de 2,4,5-tricloropirimidina (550 mg, 3,00 mmol) e N-(3- aminopropil)-4- dimetilaminobenzamida (500 mg, 2,26 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 368 (M+1).
[00209] Exemplo 32
[00210] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-dimetilaminobenzamida
[00211] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido) fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)-4-dimetilamino benzamida (49 mg, rendimento de 58,3 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4- dimetilaminobenzamida (50 mg, 0,14 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil) -N- metilacrilamida (30 mg, 0,15 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,741,78 (m, 2H, CH2), 2,95 (s, 6H, 2XCH3), 3, 25-3, 60 (m, 2H, CH2), 3,32 (s, 3H, CH3), 3,41-3,43 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,8 Hz, 1H, CH), 6,02-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,20 (m, 1H, CH), 6,68(d, J=9,8 Hz, 2H, Ar-H), 7,22-7,27 (m, 1H, Ar-H), 7,31-7,34 (m, 1H, Ar-H), 7,64-7,67 (m, 1H, pirimidina-NH), 7,70 (d, J=8,7 Hz, 2H, Ar-H), 7,89-7,90 (m, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,14 (t, J=5,6 Hz, 1H, NH), 9,43 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 526 (M+1).
[00212] Exemplo 33
[00213] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(2,4,6-trifluorobenzamino)propilamino fórmico
[00214] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(2,4,6-trifluorobenzamino)propilamino fórmico (200 mg, rendimento de 60,1 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (174 mg, 1,0 mmol) e ácido 2,4,6-trifluorobenzoico (176 mg, 1,0 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 333 (M+1).
[00215] Exemplo 34
[00216] Preparação de N-(3-aminopropil)-2,4,6- trifluorobenzamida
[00217] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-2,4,6- trifluorobenzamida (100 mg, rendimento de 43,1 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(2,4,6- trifluorobenzamino)propilamino fórmico (200 mg, 0,6 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 233 (M+1).
[00218] Exemplo 35
[00219] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-2,4,6- trifluorobenzamida
[00220] Sólido amarelo de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-2,4,6- trifluorobenzamida (120 mg, rendimento de 73,6 %) foi preparado a partir de 2,4,5-tricloropirimidina (100 mg, 0,55 mmol) e N-(3- aminopropil)-2,4,6-trifluorobenzamida (100 mg, 0,43 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 379 (M+1).
[00221] Exemplo 36
[00222] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 2,4,6-trifluorobenzamida
[00223] Sólido amarelo de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido) fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)-2,4,6-trifluorobenzamida (80 mg, rendimento de 58,3 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-2,4,6- trifluorobenzamida (120 mg, 0,32 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N- metilacrilamida (110 mg, 0,56 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,751,82 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,25-3,31 (m, 2H, CH2), 3,44-3,45 (m, 2H, CH2), 5,61 (d, J=9,5 Hz, 1H, CH), 6,04-6,11 (m, 1H, CH), 6,16-6,22 (m, 1H, CH), 7,22-7,28 (m, 4H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,67-7,69 (m, 1H, Ar-H), 7,87 (d, J=5,2 Hz, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,71 (t, J=5,4 Hz, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 537 (M+1).
[00224] Exemplo 37
[00225] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-metoxibenzamino)propilamino fórmico o
[00226] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-metoxibenzamino)propilamino fórmico (800 mg, rendimento de 90,4 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (500 mg, 2,87 mmol) e ácido 4-metoxibenzoico (437 mg, 2,87 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- metoxilbenzamino)propilamino fórmico (800 mg, 2,60 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 209 (M+1).
[00227] Exemplo 38
[00228] Preparação de N-(3-aminopropil)-4- metoxilbenzamida
[00229] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- metoxilbenzamida (500 mg, rendimento de 92,6 %) foi preparado
[00230] Exemplo 39
[00231] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4 -metoxilbenzamida
[00232] Sólido branco de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4-metoxil benzamida (600 mg, rendimento de 70,3 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (690 mg, 3,74 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- metoxilbenzamida (500 mg, 2,40 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 355 (M+1).
[00233] Exemplo 40
[00234] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-metoxilbenzamida
[00235] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-metoxilbenzamida (10 mg, rendimento de 13,9 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)-4-metoxil benzamida (50 mg, 0,14 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (30 mg, 0,15 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,77-1,80 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,283,31 (m, 2H, CH2), 3,43-3,45 (m, 2H, CH2), 3,80 (s, 3H, CH3), 5,59 (d, J=9,5 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 6,97 (d, J=8,7 Hz, 2H, Ar-H), 7,21-7,27 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,65-7,67 (m, 1H, Ar-H), 7,81 (d, J=8,7 Hz, 2H, Ar-H), 7,89 (d, J=6,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,31 (t, J=5,2 Hz, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 513 (M+1).
[00236] Exemplo 41
[00237] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(2-ciano-nicotinamino)propilamino fórmico
[00238] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(2-ciano-nicotinamino)propilamino fórmico (400 mg, rendimento de 91,3 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (250 mg, 1,44 mmol) e ácido 6-ciano-nicotínico (212 mg, 1,44 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 305 (M+1).
[00239] Exemplo 42
[00240] Preparação de N-(3-aminopropil)-6-ciano- Nicotinamida
[00241] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-6- ciano-nicotinamida (240 mg, rendimento de 89,6 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de 3-(2-ciano- nicotinamino)propilamino fórmico ácido (400 mg, 1,32 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC- MS (m/z) 205 (M+1).
[00242] Exemplo 43
[00243] Preparação de 6-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino) propil)nicotinamide
[00244] Sólido branco de 6-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) nicotinamida (80 mg, rendimento de 19,3 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (280 mg, 1,53 mmol) e N-(3-aminopropil)-6- ciano-nicotinamida (240 mg, 1,18 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 351 (M+1).
[00245] Exemplo 44
[00246] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 6-cianonicotinamida
[00247] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) amino)propil)-6-ciano-nicotinamida (15 mg, rendimento de 17,4 %) foi preparado a partir de 6-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)nicotinamida (60 mg, 0,17 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (46 mg, 0,24 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,81-1,88 (m, 2H, CH2), 3,21 (s, 3H, CH3), 3,32-3,36 (m, 2H, CH2), 3,46-3,51 (m, 2H, CH2), 5,61 (d, J=9,8 Hz, 1H, CH), 6,04-6,1 (m, 1H, CH), 6,17-6,22 (m, 1H, CH), 7,29(t, J=9,3 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,61-7,62 (m, 1H, Ar-H), 7,78 (s, 1H, Ar-H), 7,83 (d, J=5,3 Hz, 1H, Ar-H), 8,06 (s, 1H, pirimidina-H), 8,17 (d, J=7,4 Hz, 1H, Ar-H), 8,36-8,41 (m, 1H, Ar-H), 8,89 (t, J=5,4 Hz,1H, NH), 9,09 (s, 1H, Ar-H), 9,85 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 509 (M+1).
[00248] Exemplo 45
[00249] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-hidroxibenzamino)propilamino fórmico o
[00250] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-hidroxibenzamino)propilamino fórmico (600 mg, rendimento de 71,1 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropila t-butilamino fórmico (500 mg, 2,87 mmol) e ácido 4-hidroxibenzoico (440 mg, 2,87 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC- MS (m/z) 295 (M+1).
[00251] Exemplo 46
[00252] Preparação de N-(3-aminopropil)-4- hidroxibenzamida
[00253] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- hidroxibenzamida (300 mg, rendimento de 75,8 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- hidroxibenzamino)propilamino fórmico (600 mg, 2,04 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 195 (M+1).
[00254] Exemplo 47
[00255] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4-hidroxi benzamida
[00256] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4-hidroxi benzamida (200 mg, rendimento de 84,3 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (300 mg, 1,64 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- hidroxibenzamida (300 mg, 1,54 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 341 (M+1).
[00257] Exemplo 48
[00258] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-hidroxibenzamida
[00259] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-hidroxibenzamida (3 mg, rendimento de 1,3 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)-4-hidroxibenzamida (200 mg, 0,47 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (100 mg, 0,52 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H- RMN (DMSO-d6) d 1,75-1,81 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,27-3,29 (m, 2H, CH2), 3,42-3,44 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,4 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,20 (m, 1H, CH), 6,78 (d, J=7,9 Hz, 2H, Ar-H), 7,24-7,27 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,67-7,69 (m, 1H, Ar-H), 7,70 (d, J=8,1 Hz, 2H, Ar-H), 7,88-7,90 (m, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina- H), 8,20 (s, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH), 9,89 (s, 1H, OH). LC-MS (m/z) 499 (M+1).
[00260] Exemplo 49
[00261] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano-2-fluorobenzamino)propilamino fórmico
[00262] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano-2-fluorobenzamino)propilamino fórmico (450 mg, rendimento de 70,1 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (348 mg, 2,0 mmol) e ácido 4-ciano-2-fluobenzoico (330 mg, 2,0 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 322 (M+1).
[00263] Exemplo 50
[00264] Preparação de N-(3-aminopropil)-4-ciano- 2-fluorobenzamida
[00265] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- ciano-2-fluorobenzamida (278 mg, rendimento de 90,0 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano-2- fluorobenzamino)propilamino fórmico (450 mg, 1,4 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 222 (M+1).
[00266] Exemplo 51
[00267] Preparação de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -2-fluorobenzamida
[00268] Sólido branco de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -4-fluorobenzamida (312 mg, rendimento de 67,4 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (238 mg, 1,3 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- ciano-2- fluorobenzamida (278 mg, 1,26 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 368 (M+1).
[00269] Exemplo 52
[00270] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-ciano-2-fluorobenzamida
[00271] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-ciano-2-fluorobenzamida (106 mg, rendimento de 49,3 %) foi preparado a partir de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -2-fluorobenzamida (150 mg, 0,41 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N -metilacrilamida (87 mg, 0,45 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,80-1,83 (m, 2H, CH2), 3,20 (s, 3H, CH3), 3,30-3,31 (m, 2H, CH2), 3,45-3,47 (m, 2H, CH2), 5,61 (d, J=9,7 Hz, 1H, CH), 6,04-6,10 (m, 1H, CH), 6,15-6,21(m, 1H, CH), 7,20-7,25 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,62-7,65 (m, 1H, Ar-H), 7,75-7,76 (m, 2H, Ar-H), 7,88-7,94 (m, 2H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,57 (s, 1H, NH), 9,41 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 526 (M+1).
[00272] Exemplo 53
[00273] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano-3-fluorobenzamino)propilamino fórmico
[00274] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano-3-fluorobenzamino)propilamino fórmico (462 mg, rendimento de 71,9 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropila t-butilamino fórmico (348 mg, 2,0 mmol) e ácido 4-ciano-3-fluobenzoico (330 mg, 2,0 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 322 (M+1).
[00275] Exemplo 54
[00276] Preparação de N-(3-aminopropil)-4-ciano- 3-fluorobenzamida
[00277] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- ciano-3-fluorobenzamida (275 mg, rendimento de 86,5 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano-3- fluorobenzamino)propilamino fórmico (462 mg, 1,44 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 222 (M+1).
[00278] Exemplo 55
[00279] Preparação de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -3-fluorobenzamida
[00280] Sólido branco de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -4-fluorobenzamida (340 mg, rendimento de 74,6 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (229 mg, 1,25 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- ciano- 3-fluorobenzamida (275 mg, 1,24 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 368 (M+1).
[00281] Exemplo 56
[00282] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-ciano-3-fluorobenzamida
[00283] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-ciano-3-fluorobenzamida (98 mg, rendimento de 45,6 %) foi preparado a partir de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -3-fluorobenzamida (150 mg, 0,41 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N- metilacrilamida (87 mg, 0,45 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,81-1,84 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,33-3,35 (m, 2H, CH2), 3,45-3,46 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,7 Hz, 1H, CH), 6,02-6,09 (m, 1H, CH), 6,21-6,20(m, 1H, CH), 7,21-7,25 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,63-7,65 (m, 1H, Ar-H), 7,81-7,89 (m, 2H, Ar-H), 7,95 (s, 1H, pirimidina-H), 8,04-8,12 (m, 2H, Ar-H), 8,76 (t, J=5,6 Hz, 1H, NH), 9,45 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 526 (M+1).
[00284] Exemplo 57
[00285] Preparação de N-(3-(2-cloro-5- metilpirimidinil-4-amino)propil) -4-cianobenzamida
[00286] Sólido amarelo de N-(3-(2-cloro-5- metilpirimidinil-4-amino)propil)-4-ciano- benzamida (100 mg, rendimento de 60,6 %) foi preparado a partir de 2,4-dicloro- 5-metilpirimidina (82 mg, 0,5 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- ciano-benzamida (100 mg, 0,5 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 330 (M+1).
[00287] Exemplo 58
[00288] Preparação de 4-ciano-N-(3-(2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) -5-metilpirimidinil-4- amino)propil)benzamide
[00289] Sólido preto de 4-ciano-N-(3-(2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) -5-metilpirimidinil- 4-amino)propil)-benzamida (10 mg, rendimento de 3,3 %) foi preparado a partir de N-(3-(2-cloro-5-metilpirimidinil-4- amino)propil)-4-ciano- benzamida (100 mg, 0,61 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N- metilacrilamida (128 mg, 0,66 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H- RMN (DMSO-d6) d 1,82-1,85 (m, 2H, CH2), 1,92 (s, 3H, CH3), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,35-3,37 (m, 2H, CH2), 3,43-3,46 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,8 Hz,1H, CH), 6,04-6,1 (m, 1H, CH), 6,15- 6,20 (m, 1H, CH), 6,68 (t, J=5,5 Hz, 1H, Ar-H), 7,19 (t, J=9,5 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,65-7,67 (m, 2H, Ar-H), 7,937,99 (m, 5H, Ar-H, pirimidina-H), 8,69 (t, J=5,5 Hz, 1H, NH), 9,04 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 488 (M+1).
[00290] Exemplo 59
[00291] Preparação de N-(3-(2-cloro-5-fluoro- pirimidinil-4-amino)propil)-4-ciano- benzamida o
[00292] Sólido amarelo de N-(3-(2-cloro-5-fluoro- pirimidinil-4-amino)propil)-4-ciano -benzamida (100 mg, rendimento de 60,0 %) foi preparado a partir de 2,4-dicloro- 5-fluoro-pirimidina (83 mg, 0,5 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- ciano -benzamida (100 mg, 0,5 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 334 (M+1).
[00293] Exemplo 60
[00294] Preparação de 4-ciano-N-(3-(5-fluoro-2- (4-fluoro-3-(N-metilacrilamido) fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)benzamida
[00295] Sólido cinza de 4-ciano-N-(3-(5-fluoro-2- (4-fluoro-3-(N-metilacrilamido) fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)benzamida (49 mg, rendimento de 58,3 %) foi preparado a partir de N-(3-(2-cloro-5-fluoropirimidinil-4- amino)propil)-4-ciano- benzamida (100 mg, 0,30 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N- metilacrilamida (110 mg, 0,56 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H- RMN (DMSO-d6) d 1,84-1,85 (m, 2H, CH2), 3,18 (s, 3H, CH3), 3,33-3,35 (m, 2H, CH2), 3,42-3,43 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=8,6 Hz,1H, CH), 6,02-6,09 (m, 1H, CH), 6,15-6,20 (m, 1H, CH), 7,20 (t, J=9,1 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,47-7,49 (m, 1H, Ar-H), 7,63-7,64 (m, 1H, Ar-H), 7,88-7,89 (m, 2H, Ar-H), 7,92-7,96 (m, 4H, pirimidina-H, Ar-H), 8,68 (s, 1H, NH), 9,23 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 492 (M+1).
[00296] Exemplo 61
[00297] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(2-(4-cianofenil)acetamino)propilamino fórmico
[00298] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(2-(4-cianofenil)acetamino)propilamino fórmico (511 mg, rendimento de 80,6 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (348 mg, 2,0 mmol) e 2-(4-ciano-fenil) acético ácido (322 mg, 2,0 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC- MS (m/z) 318 (M+1).
[00299] Exemplo 62
[00300] Preparação de N-(3-aminopropil)-2-(4- cianofenil)acetamida
[00301] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-2-(4- cianofenil)acetamida (312 mg, rendimento de 89,4 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(2-(4- cianofenil)acetamino) propilamino fórmico (511 mg, 1,61 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC- MS (m/z) 218 (M+1).
[00302] Exemplo 63
[00303] Preparação de 2-(4-cianofenil)-N-(3-(2,5- dicloropirimidinila -4-amino)propil)acetamida
[00304] Sólido branco de 2-(4-cianofenil)-N-(3- (2,5-dicloropirimidinil-4-amino) propil)acetamida (360 mg, rendimento de 68,9 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (265 mg, 1,45 mmol) e N-(3-aminopropil)- 2-(4-cianofenil)acetamida (312 mg, 1,44 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 364 (M+1).
[00305] Exemplo 64
[00306] Preparação de N-(5-(5-cloro-4-(3-(2-(4- cianofenil)acetamino)propilamino) pirimidinil-2-amino)-2- fluorofenil)-N-metilacrilamida
[00307] Sólido branco de N-(5-(5-cloro-4-(3-(2- (4-cianofenil)acetamino)propilamino) pirimidinil-2-amino)-2- fluorofenil)-N-metilacrilamida (113 mg, rendimento de 53,1 %) foi preparado a partir de 2-(4-cianofenil)-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) acetamida (150 mg, 0,41 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (87 mg, 0,45 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,67-1,72 (m, 2H, CH2), 3,083,11 (m, 2H, CH2), 3,18 (s, 3H, CH3), 3,37-3,38 (m, 2H, CH2), 3,52 (s, 2H, CH2), 5,60 (d, J=10,2 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 7,19-7,22 (m, 1H, Ar-H), 7,26 (t, J=9,3 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,44 (d, J=8,1 Hz, 2H, Ar- H), 7,64-7,66 (m, 1H, Ar-H), 7,74 (d, J=8,2 Hz, 2H, Ar-H), 7,88-7,89 (m, 1H, Ar-H), 7,95 (s, 1H, pirimidina-H), 8,13 (t, J=5,6 Hz, 1H, NH), 9,39 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 522 (M+1).
[00308] Exemplo 65
[00309] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano-fenilsulfonamino)propilamino fórmico o u _
[00310] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano-fenilsulfonamino)propilamino fórmico (0,25 g, rendimento de 73,7 %) foi preparado como a seguir. Cloreto de 4-ciano-benzeno sulfonila (0,2 g, 1,0 mmol) e N-Boc-1,3- propano diamina (0,18 g, 1,03 mmol) foram dissolvidos em 5 ml de THF e agitados à temperatura ambiente. Subsequentemente, DIPEA (0,26 g, 2,0 mmol) foi adicionado e reagido por 4 h. A reação foi monitorada por LC-MS. Após a reação, solução saturada aquosa de NaHCO3 foi adicionada, e a mistura foi agitada para precipitar o sólido. O intermediário alvo foi obtido por filtração. LC-MS (m/z) 340 (M+1).
[00311] Exemplo 66
[00312] Preparação de N-(3-aminopropil)-4-ciano fenilsulfonamida o II NC
[00313] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- ciano-fenilsulfonamida (150 mg, rendimento de 85,2 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4-ciano- fenilsulfonamino)propilamino fórmico (250 mg, 0,74 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 240 (M+1).
[00314] Exemplo 67
[00315] Preparação de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) fenilsulfonamida
[00316] Sólido branco de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) fenilsulfonamida (150 mg, rendimento de 61,9 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (128 mg, 0,7 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- ciano- fenilsulfonamida (150 mg, 0,63 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 386 (M+1).
[00317] Exemplo 68
[00318] Preparação de 4-ciano-N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)benzenosulfonamida
[00319] Sólido branco de N-(5-(5-cloro-4-(3-(4- ciano-fenilsulfonamino)propilamino) pirimidinil-2-amino)-2- fluorofenil)-N-metilacrilamida (35 mg, rendimento de 30,7 %) foi preparado a partir de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) fenilsulfonamida (80 mg, 0,21 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N- metilacrilamida (43 mg, 0,22 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,63-1,70 (m, 2H, CH2), 2,802,85 (m, 2H, CH2), 3,17 (s, 3H, CH3), 3,34-3,35 (m, 2H, CH2), 5,60 (d, J=10,3 Hz, 1H, CH), 6,02-6,09 (m, 1H, CH), 6,15-6,20 (m, 1H, CH), 7,13-7,16 (m, 1H, Ar-H), 7,25 (t, J=9,4 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,65-7,67 (m, 1H, Ar-H), 7,81-7,82 (m, 1H, Ar-H), 7,88 (t, J=5,9 Hz, 1H, NH), 7,91 (d, J=8,4 Hz, 2H, Ar- H), 7,94 (s, 1H, pirimidina-H), 8,03 (d, J=8,4 Hz, 2H, Ar-H), 9,38 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 544 (M+1).
[00320] Exemplo 69
[00321] Preparação de 4-ciano-N-(3- hidroxipropil)benzamide
[00322] Líquido amarelo de 4-ciano-N-(3-hidroxipropil)benzamida (400 mg, rendimento de 99 %) foi preparado a partir de 3-amino-1-propanol (150 mg, 2 mmol) e ácido 4-cianobenzoico (294 mg, 2 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 205 (M+1).
[00323] Exemplo 70
[00324] Preparação de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-oxo)propil)benzamida o
[00325] Sólido amarelo de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-oxo) propil)benzamida (120 mg, rendimento de 17 %) foi preparado como a seguir. 4-ciano-N- (3-hidroxipropil)benzamida (408 mg, 2 mmol) foi dissolvida em 3 ml de DMF e agitada em um banho de gelo. Após 10 min, NaH (48 mg, 2 mmol) foi adicionado, e a mistura foi mantida em agitação. 10 min depois, 2,4,5-tricloropirimidina (366 mg, 2 mmol) foi adicionada, e a mistura foi retirada do banho de gelo e reagida à temperatura ambiente. A reação foi monitorada por LC-MS. Após a reação, a mistura foi vertida em 200 ml de salmoura para precipitar a substância viscosa amarela. A camada de água foi então decantada, e 200 ml de PE foram adicionados. Subsequentemente, a mistura foi submetida a ultrassom. O intermediário alvo foi obtido por filtração. LC-MS (m/z) 351 (M+1).
[00326] Exemplo 71
[00327] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-oxo)propil)-4- ciano-benzamida
[00328] Sólido marrom de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido) fenilamino)pirimidinil-4- oxo)propil)-4-ciano-benzamida (20 mg, rendimento de 20,0 %) foi preparado a partir de 4-ciano-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-oxo)propil)benzamida (70 mg, 0,2 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (50 mg, 0,24 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,98-2,06 (m, 2H, CH2), 3,18 (s, 3H, CH3), 3,40-3,47 (m, 2H, CH2), 4,45-4,51 (m, 2H, CH2), 5,60 (d, J=9,5 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 7,28 (t, J=9,4 Hz, 1H, pirimidina-NH), 7,64-7,67 (m, 1H, Ar-H), 7,78-7,80 (m, 1H, Ar-H), 7,93 (d, J=8,3 Hz, 2H, Ar-H), 7,98 (d, J=8,3 Hz, 2H, Ar-H), 8,32 (s, 1H, pirimidina-H), 8,77 (t, J=5,3 Hz, 1H, NH), 9,85 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 509 (M+1).
[00329] Exemplo 72
[00330] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(isonicotinamino)propilamino fórmico o
[00331] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(isonicotinamino)propilamino fórmico (1,0 g, rendimento de 78,0 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (800 mg, 4,60mmol) e cloreto de isonicotinoila (900 mg, 6,38 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 280 (M+1).
[00332] Exemplo 73
[00333] Preparação de N-(3-aminopropil)- isonicotinamida
[00334] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-isonicotinamida (180 mg, rendimento de 28,1 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3- (isonicotinamino)propilamino fórmico (1,0 g, 3,58 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 180 (M+1).
[00335] Exemplo 74
[00336] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidiny-4-amino)propil)isonicotinamida o
[00337] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)isonicotinamida (120 mg, rendimento de 32,8 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (276 mg, 1,51 mmol) e N-(3-aminopropil)- isonicotinamida (180 mg, 1,00 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 326 (M+1).
[00338] Exemplo 75
[00339] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) amino)propil)isonicotinamida
[00340] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) amino)propil)isonicotinamida (4,2 mg, rendimento de 2,3 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)isonicotinamida (120 mg, 0,36 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (70 mg, 0,36 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,80-1,84 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,263,33 (m, 2H, CH2), 3,45-3,47 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=10,1 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,15-6,20 (m, 1H, CH), 7,23-7,27 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,64-7,66 (m, 1H, Ar- H), 7,72 (d, J=5,6 Hz, 2H, Ar-H), 7,89 (d, J=5,2Hz, 1H, Ar- H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 7,70 (d, J=5,5 Hz, 2H, Ar-H), 8,73 (s, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 484 (M+1).
[00341] Exemplo 76
[00342] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-etilfenilformamino)propilamino fórmico o
[00343] Sólido branco de t-butil carbamato de 3- (4-etilbenzamino)propila (800 mg, rendimento de 91,1 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-aminopropil t-butilamino fórmico (500 mg, 2,87 mmol) e cloreto de 4- etilbenzoila (530 mg, 3,15 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 307 (M+1).
[00344] Exemplo 77
[00345] Preparação de N-(3-aminopropil)-4- Etilbenzamida
[00346] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- etilbenzamida (300 mg, rendimento de 55,7 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- etilbenzamino)propilamino fórmico (800 mg, 2,61 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 207 (M+1).
[00347] Exemplo 78
[00348] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4-etil benzamida o
[00349] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4-etil benzamida (500 mg, rendimento de 97,5 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (300 mg, 1,64 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- etilbenzamida (300 mg, 1,46 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 353 (M+1).
[00350] Exemplo 79
[00351] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-etilbenzamida
[00352] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-etilbenzamida (86 mg, rendimento de 59,4 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)-4-hidroxibenzamida (100 mg, 0,28 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (71 mg, 0,37 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,19 (t, J=7,6 Hz, 3H, CH3), 1,78-1,81 (m, 2H, CH2), 2,62-2,67 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,30-3,33 (m, 2H, CH2), 3,44-3,45 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=10,1 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 7,22-7,29 (m, 4H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,65-7,67 (m, 1H, Ar-H), 7,76 (m, J=8,0 Hz, 2H, Ar-H), 7,89 (d, J=5,2 Hz, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,37 (t, J=5,5 Hz, 1H, NH), 9,39 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 511 (M+1).
[00353] Exemplo 80
[00354] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-metilbenzamino)propilamino fórmico
[00355] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-metilbenzamino)propilamino fórmico (0,45 g, rendimento de 79 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (0,3 g, 1,95 mmol) e cloreto de 4-metilbenzoila (0,34 g, 1,95 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 76. LC-MS (m/z) 293 (M+1).
[00356] Exemplo 81
[00357] Preparação de N-(3-aminopropil)-4- metilbenzamida
[00358] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- metilbenzamida (290 mg, rendimento de 99 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- metilbenzamino)propilamino fórmico (450 mg, 1,54 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 193 (M+1).
[00359] Exemplo 82
[00360] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4-metil benzamide
[00361] Sólido branco de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4-metil benzamida (400 mg, rendimento de 78,1 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (300 mg, 1,64 mmol) e N-(3-aminopropil)-4- metilbenzamida (290 mg, 1,51 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 339 (M+1).
[00362] Exemplo 83
[00363] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-metilbenzamida
[00364] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-metil benzamida (200 mg, rendimento de 34,2 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)-4-metilbenzamida (400 mg, 1,18 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (400 mg, 2,06 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H- RMN (DMSO-d6) d 1,76-1,83 (m, 2H, CH2), 2,34 (s, 3H, CH3), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,29-3,33 (m, 2H, CH2), 3,44-3,45 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,7 Hz, 1H, CH), 6,03-6,10 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 7,22-7,26 (m, 4H, Ar-H, pirimidina- NH), 7,65-7,67 (m, 1H, Ar-H), 7,74 (d, J=8,0 Hz, 2H, Ar-H), 7,89 (d, J=5,2 Hz, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,38 (t, J=5,4Hz, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC- MS (m/z) 497 (M+1).
[00365] Exemplo 84
[00366] Preparação de éster t-butílico de 3- benzamidopropilamino fórmico ácido
,
[00367] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-benzamidopropilamino fórmico (700 mg, rendimento de 88,3 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (400 mg, 2,85 mmol) e cloreto de benzoila (500 mg, 3,57 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 76. LC-MS (m/z) 279 (M+1).
[00368] Exemplo 85
[00369] Preparação de N-(3-aminopropil)benzamide
[00370] Sólido branco de éster t-butílico de N- (3-aminopropil)benzamida (375 mg, rendimento de 80,4 %) foi preparado a partir de ácido 3-benzamidopropilamino fórmico (700 mg, 2,62 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 179 (M+1).
[00371] Exemplo 86
[00372] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidiny-4-amino)propil)benzamide
[00373] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)benzamida (556 mg, rendimento de 81,7 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (550 mg, 3,00 mmol) e N-(3- aminopropil)benzamida (375 mg, 2,1 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 325 (M+1).
[00374] Exemplo 87
[00375] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)benzamide
[00376] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)benzamida (245 mg, rendimento de 42,8 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)benzamida (400 mg, 1,23 mmol) e N-(5-amino-2- fluorofenil)-N-metilacrilamida (280 mg, 1,44 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO- d6) d 1,79-1,83 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,31-3,34 (m, 2H, CH2), 3,44-3,46 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,8 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 7,22-7,27 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,45 (d, J=7,5 Hz, 2H, Ar-H), 7,52 (t, J=7,1 Hz, 1H, Ar-H), 7,65-7,67 (m, 1H, Ar-H), 7,83 (d, J=5,2 Hz, 2H, Ar-H), 7,89 (d, J=7,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,46 (t, J=5,2Hz, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 483 (M+1).
[00377] Exemplo 88
[00378] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(3-trifluorometilbenzamino)propilamino fórmico
[00379] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(3-trifluorometilbenzamino)propilamino fórmico (640 mg, rendimento de 79,7 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (400 mg, 2,32 mmol) e cloreto de 3-trifluorometil benzoila (596 mg, 2,87 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 76. LC-MS (m/z) 347 (M+1).
[00380] Exemplo 89
[00381] Preparação de N-(3-aminopropil)-3- trifluorometilbenzamida
[00382] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-3- trifluorometilbenzamida (300 mg, rendimento de 66,0 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(3- trifluorometilbenzamino)propilamino fórmico (640 mg, 1,84 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 247 (M+1).
[00383] Exemplo 90
[00384] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -3-trifluorometilbenzamida
[00385] Sólido branco de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -3-trifluorometil benzamida (480 mg, rendimento de 93,2 %) foi preparado a partir de 2,4,5-tricloropirimidina (360 mg, 2,21 mmol) e N- (3-aminopropil)-3-trifluorometilbenzamida (300 mg, 1,47 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC- MS (m/z) 393 (M+1).
[00386] Exemplo 91
[00387] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 3-trifluorometilbenzamida
[00388] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-3-trifluorometilbenzamida (240 mg, rendimento de 35,7 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-3-trifluorometil benzamida (480 mg, 1,22 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N- metilacrilamida (260 mg, 1,34 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,801,87 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,32-3,37 (m, 2H, CH2), 3,44-3,48 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,6 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 7,21-7,25 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,65-7,67 (m, 1H, Ar-H), 7,71 (t, J=7,8 Hz, 1H, Ar-H), 7,88-7,90 (m, 2H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina- H), 8,14 (d, J=7,9 Hz, 1H, Ar-H), 8,16 (s, 1H, Ar-H), 8,72 (t, J=5,4 Hz, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 551 (M+1).
[00389] Exemplo 92
[00390] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(3-ciano-benzamino)propilamino fórmico
[00391] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(3-ciano-benzamino)propilamino fórmico (740 mg, rendimento de 80,6 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (600 mg, 3,44 mmol) e cloreto de 3-ciano-benzoila (500 mg, 3,02 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 76. LC-MS (m/z) 304 (M+1).
[00392] Exemplo 93
[00393] Preparação de N-(3-aminopropil)-3- cianobenzamida
[00394] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-3- cianobenzamida (300 mg, rendimento de 86,5 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(3-ciano- benzamino)propilamino fórmico (740 mg, 2,62 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 204 (M+1).
[00395] Exemplo 94
[00396] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-3-ciano benzamida
[00397] Sólido branco de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4-amino)propil)-3-ciano rendimento de 89,4 %) foi preparado a tricloropirimidina (360 mg, 2,21 mmol) e N-(3-aminopropil)-3- cianobenzamida (300 mg, 1,47 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 350 (M+1).
[00398] Exemplo 95
[00399] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 3-cianobenzamida
[00400] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) amino)propil)-3-cianobenzamida (210 mg, rendimento de 31,8 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4- amino)propil)-3-cianobenzamida (460 mg, 1,31 mmol) e N-(5- amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (280 mg, 1,44 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H- RMN (DMSO-d6) d 1,80-1,86 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,31-3,35 (m, 2H, CH2), 3,44-3,48 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=10,2 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 7,21-7,26 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,64-7,66 (m, 1H, Ar-H), 7,68-7,70 (m, 1H, Ar-H), 7,89-7,90 (m, 1H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 7,98 (d, J=7,7 Hz, 1H, Ar-H), 8,13 (d, J=7,9 Hz, 1H, Ar-H), 8,24 (s, 1H, Ar-H), 8,66 (t, J=5,7Hz, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 508 (M+1).
[00401] Exemplo 100
[00402] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(3-fluoro-4-trifluorometila benzamino)propilamino fórmico
[00403] Sólido amarelo de éster t-butílico de ácido 3-(3-fluoro-4-trifluorometila benzamino)propilamino fórmico (728 mg, rendimento de 100 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (348 mg, 2 mmol) e ácido 3-fluoro-4-trifluorometilbenzoico (416 mg, 2 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 365 (M+1).
[00404] Exemplo 101
[00405] Preparação de N-(3-aminopropil)-3-fluoro- 4-trifluorometilbenzamida
[00406] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-3- fluoro-4-trifluorometilbenzamida (264 mg, rendimento de 50 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(3- fluoro-4-trifluorometilbenzamino)propilamino fórmico (728 mg, 2 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 265 (M+1).
[00407] Exemplo 102
[00408] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-3-fluoro-4- trifluorometil benzamide
[00409] Sólido amarelo de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4-amino)propil) trifluorometilbenzamida (200 mg, rendimento preparado a partir de 2,4,5-tricloropirimidina (183 mg, 1,00 mmol) e N-(3-aminopropil)-3-fluoro-4-trifluorometil benzamida (264 mg, 1,00 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 411 (M+1).
[00410] Exemplo 103
[00411] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 3-fluoro-4-trifluorometilbenzamida
[00412] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-3-fluoro-4-trifluorometil benzamida (50 mg, rendimento de 20 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) trifluorometilbenzamida (205 mg, 0,5 mmol) e N-(5-amino-2- fluorofenil)-N-metilacrilamida (110 mg, 0,6 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H -RMN (DMSO-d6) d 1,81-1,86 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,32-3,36 (m, 2H, CH2), 3,45-3,47 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,4 Hz, 1H, CH), 6,02-6,09 (m, 1H, CH), 6,15-6,20 (m, 1H, CH), 7,207,24 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,64-7,66 (m, 1H, Ar-H), 7,83-7,92 (m, 4H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,75 (t, J=5,2 Hz, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 569 (M+1).
[00413] Exemplo 104
[00414] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(2,3,4,5-tetrafluorobenzamino)propilamino fórmico F O
[00415] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(2,3,4,5-tetrafluorobenzamino)propilamino fórmico (400 mg, rendimento de 57,1 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (348 mg, 2,00 mmol) e 2,3,4,5-tetrafluorobenzoila cloreto (848 mg, 4,00 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 76. LC-MS (m/z) 351 (M+1).
[00416] Exemplo 105
[00417] Preparação de N-(3-aminopropil)-2,3,4,5- tetrafluorobenzamida
[00418] Sólido branco de N-(3-aminopropil)- 2,3,4,5-tetrafluorobenzamida (250 mg, rendimento de 100 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3- (2,3,4,5-tetrafluorobenzamino)propilamino fórmico (350 mg, 1,00 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 251 (M+1).
[00419] Exemplo 106
[00420] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-2,3,4,5- tetrafluorobenzamida
[00421] Sólido branco de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4-amino)propil) tetrafluorobenzamida (200 mg, rendimento de 50 %) foi preparado a partir de 2,4,5-tricloropirimidina (183 mg, 1,00 mmol) e N-(3-aminopropil)-2,3,4,5-tetrafluorobenzamida (250 mg, 1,00 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 397 (M+1).
[00422] Exemplo 107
[00423] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 2,3,4,5-tetrafluorobenzamida
[00424] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-2,3,4,5-tetrafluorobenzamida (50 mg, rendimento de 18 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino) propil)-2,3,4,5 - tetrafluorobenzamida (200 mg, 0,5 mmol) e N-(5-amino-2- fluorofenil)-N-metilacrilamida (110 mg, 0,6 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO- d6) d 1,79-1,82 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,28-3,30 (m, 2H, CH2), 3,44-3,46 (m, 2H, CH2), 5,60 (d, J=9,8 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,21 (m, 1H, CH), 7,23-7,27 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,56-7,61 (m, 1H, Ar-H), 7,65-7,67 (m, 1H, Ar-H), 7,88 (d, J=5,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,95 (s, 1H, pirimidina-H), 8,52 (s, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno- NH). LC-MS (m/z) 555 (M+1).
[00425] Exemplo 108
[00426] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-acetilbenzamino)propilamino fórmico
[00427] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-acetilbenzamino)propilamino fórmico (385 mg, rendimento de 60,2 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (350 mg, 2,01 mmol) e ácido 4-acetilbenzoico (328 mg, 2,00 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 321 (M+1).
[00428] Exemplo 109
[00429] Preparação de 4-acetil-N-(3- aminopropil)benzamide
[00430] Sólido branco de 4-acetil-N-(3- aminopropil)benzamida (200 mg, rendimento de 75,8 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- acetilbenzamino)propilamino fórmico (385 mg, 1,20 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 221 (M+1).
[00431] Exemplo 110
[00432] Preparação de 4-acetil-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) benzamida o
[00433] Sólido branco de 4-acetil-N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) benzamida (120 mg, rendimento de 36,1 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (180 mg, 0,98 mmol) e 4-acetil-N-(3- aminopropil)benzamida (200 mg, 0,91 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 367 (M+1).
[00434] Exemplo 111
[00435] Preparação de 4-acetil-N-(3-(5-cloro-2- (4-fluoro-3-(N-metilacrilamido) fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)benzamida
[00436] Sólido branco de 4-acetil-N-(3-(5-cloro- 2-(4-fluoro-3-(N-metilacrilamido) fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)benzamida (83 mg, rendimento de 47,9 %) foi preparado a partir de 4-acetil-N-(3-(2,5-dicloropirimidinil- 4-amino)propil)benzamida (120 mg, 0,33 mmol) e N-(5-amino-2- fluorofenil)-N-metilacrilamida (70 mg, 0,36 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO- d6) d 1,79-1,85 (m, 2H, CH2), 2,61 (s, 3H, CH3), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,32-3,36 (m, 2H, CH2), 3,45-3,48 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,9 Hz, 1H, CH), 6,02-6,09 (m, 1H, CH), 6,15-6,20 (m, 1H, CH), 7,21-7,28 (m, 2H, pirimidina-NH, Ar-H), 7,64-7,69 (m, 1H, Ar-H), 7,88-7,89 (m, 1H, Ar-H), 7,94 (d, J=8,3 Hz, 2H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,01 (d, J=8,4 Hz, 2H, Ar- H), 8,65 (t, J=5,3 Hz, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno- NH). LC-MS (m/z) 525 (M+1).
[00437] Exemplo 112
[00438] Preparação de éster t-butílico de ácido 3-(4-difluorometilbenzamino)propilamino fórmico o
[00439] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 3-(4-difluorometilbenzamino)propilamino fórmico (780 mg, rendimento de 84,3 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de ácido 3-aminopropilamino fórmico (49 mg, 2,82 mmol) e ácido 4-difluorometilbenzoico (485 mg, 2,82 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 4. LC-MS (m/z) 329 (M+1).
[00440] Exemplo 113
[00441] Preparação de N-(3-aminopropil)-4- difluorometilbenzamida
[00442] Sólido branco de N-(3-aminopropil)-4- difluorometilbenzamida (180 mg, rendimento de 33,2 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 3-(4- difluorometilbenzamino)propilamino fórmico (780 mg, 2,38 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 229 (M+1).
[00443] Exemplo 114
[00444] Preparação de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4- difluorometilbenzamida
[00445] Sólido branco de N-(3-(2,5-dicloropirimidinil-4-amino)propil)-4- difluorometilbenzamida (250 mg, rendimento de 84,5 %) foi preparado a partir de 2,4,5-tricloropirimidina (180 mg, 0,98 mmol) e N-(3- aminopropil)-4-difluorometilbenzamida (180 mg, 0,79 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 375 (M+1).
[00446] Exemplo 115
[00447] Preparação de N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)propil)- 4-difluorometilbenzamida
[00448] Sólido branco de N-(3-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)propil)-4-difluorometilbenzamida (26 mg, rendimento de 23,2 %) foi preparado a partir de N-(3-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)propil) -4-difluorometilbenzamida (80 mg, 0,21 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil) -N- metilacrilamida (50 mg, 0,26 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,811,84 (m, 2H, CH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3,32-3,40 (m, 2H, CH2), 3,45-3,47 (m, 2H, CH2), 5,59 (d, J=9,4 Hz, 1H, CH), 6,03-6,09 (m, 1H, CH), 6,16-6,20 (m, 1H, CH), 6,94 (s, 0,4H, CHF2), 7,08 (s, 0,6H, CHF2), 7,22-7,26 (m, 2H, Ar-H, pirimidina-NH), 7,64-7,66 (m, 3H, Ar-H), 7,89-7,90 (m, 1H, Ar-H), 7,95 (d, J=7,3 Hz, 2H, Ar-H), 7,96 (s, 1H, pirimidina-H), 8,59 (s, 1H, NH), 9,40 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 533 (M+1).
[00449] Exemplo 120
[00450] Preparação de éster t-butílico de ácido 6-(4-ciano-benzamino)hexilamino fórmico
[00451] Sólido branco de éster t-butílico de ácido 6-(4-ciano-benzamino)hexilamino fórmico (1300 mg, rendimento de 73,4 %) foi preparado a partir de éster t- butílico de 6-hexilamino fórmico ácido (1100 mg, 5,09 mmol) e cloreto de 4-ciano-benzoila (900 mg, 5,45 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 76. LC-MS (m/z) 346 (M+1).
[00452] Exemplo 121
[00453] Preparação de N-(6-aminohexil)-4-ciano- benzamide
[00454] Sólido branco de N-(6-aminohexil)-4- ciano-benzamida (700 mg, rendimento de 75,6 %) foi preparado a partir de éster t-butílico de ácido 6-(4-ciano- benzamino)hexilamino fórmico (1300 mg, 3,76 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 5. LC-MS (m/z) 246 (M+1).
[00455] Exemplo 122
[00456] Preparação de 4-ciano-N-(6-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)hexil) benzamida o HN
[00457] Sólido branco de 4-ciano-N-(6-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)hexil) benzamida (80 mg, rendimento de 49,7 %) foi preparado a partir de 2,4,5- tricloropirimidina (120 mg, 0,66 mmol) e N-(6-aminohexil)-4- ciano-benzamida (100 mg, 0,41 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 6. LC-MS (m/z) 392 (M+1).
[00458] Exemplo 123
[00459] Preparação de N-(6-(5-cloro-2-(4-fluoro- 3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4-amino)hexil)- 4-cianobenzamida
[00460] Sólido branco de N-(6-(5-cloro-2-(4- fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino) pirimidinil-4- amino)hexil)-4-ciano-benzamida (47 mg, rendimento de 50,3 %) foi preparado a partir de 4-ciano-N-(6-(2,5- dicloropirimidinil-4-amino)hexil)benzamida (68 mg, 0,17 mmol) e N-(5-amino-2-fluorofenil)-N-metilacrilamida (46 mg, 0,24 mmol) com base nas etapas similares de acordo com o Exemplo 7. 1H-RMN (DMSO-d6) d 1,30-1, 32 (m, 4H, 2xCH2), 1, 52-1, 56 (m, 4H, 2XCH2), 3,19 (s, 3H, CH3), 3, 26-3, 29 (m, 2H, CH2), 3,363,37 (m, 2H, CH2), 5,60 (d, J=9,9 Hz, 1H, CH), 6,03-6,10 (m, 1H, CH), 6,17-6,21 (m, 1H, CH), 7,22-7,27 (m, 2H, pirimidina- NH, Ar-H), 7,59-7,61 (m, 1H, Ar-H), 7,93-7,98 (m, 6H, pirimidina-NH, Ar-H), 8,64 (s, 1H, NH), 9,38 (s, 1H, anel benzeno-NH). LC-MS (m/z) 550 (M+1).
[00461] Avaliação biológica in vitro
[00462] Estes métodos de teste são usados para a avaliação da atividade in vitro dos compostos descritos no presente documento, incluindo ensaio de atividade enzimática in vitro, ensaio de atividade de crescimento celular, e ensaio de atividade intracelular.
[00463] Estes ensaios visam avaliar exaustivamente as propriedades de atividade inibitória enzimática in vitro de vários compostos sobre quinases, tais como JAK, ITK, BLK, e VEGFR etc., suas características de seletividade de subtipo, e suas influências sobre as atividades biológicas, incluindo atividade de crescimento celular e atividade de regulação sobre a via de sinalização, dos modelos de células.
[00464] Exemplo A Detecção de atividade enzimática
[00465] O princípio básico do ensaio de atividade enzimática in vitro é com base na diferença entre as intensidades de sinais de fluorescência geradas em diferentes comprimentos de onda (445 nm e 520 nm) do substrato fosforilado e substrato não fosforilado, em que o substrato marcado por fluorescência específico é fosforilado pela quinase. Quando diferentes compostos de teste são adicionados, a inibição da atividade de quinase é representada como os diferentes graus de fosforilação de substrato, e assim como as diferentes intensidades de sinal de fluorescência, com base em que a atividade inibitória do composto sobre a quinase pode ser calculada. O princípio de detecção básico é ilustrado na Fig. 1.
[00466] Em uma detecção de atividade inibitória enzimática, JAK quinases recombinantes humanas marcadas por GST, incluindo JAK1/PV4774, JAK2/PV4210, JAK3/PV3855, TYK2/PV4790 e os seus correspondentes substratos específicos, incluindo Tir6 (Z'-LYTE® Kinase Assay Kit-Tyrosine 6 Peptide, JAK1/PV4122), Tir4 (Z'-LYTE® Kinase Assay Kit-Tyrosine 4 Peptide, JAK2/PV3193), Tir4 (Z'-LYTE® Kinase Assay Kit-Tyrosine 4 Peptide, JAK3/PV3193), Tir3 (Z'-LYTE® Kinase Assay Kit-Tyrosine 4 Peptide, TYK2/PV3192) são usados. Em todos os testes, o reagente de desenvolvimento A (PV3297) foi usado como o agente de teste. Todos os materiais mencionados acima foram comprados de Invitrogen.
[00467] O teste é levado a cabo de acordo com a instrução do fabricante (Invitrogen). O procedimento específico é como a seguir: (1) Preparação: tampão de reação de quinase (solução de trabalho) é preparado de acordo com a instrução; um gradiente de concentração do composto de teste é preparado pela diluição usando o tampão de reação de quinase (a mais alta concentração de composto é 10 µM para JAK1, JAK2, e TYK2 detecção, e 1 µM para detecção de JAK3, respectivamente). (2) 10 µl de sistema de reação, que compreende 2,5 µL de composto de teste, 5 µL de tampão de reação de quinase e 2,5 µL de solução de ATP (proporcionado pelo kit), é misturado e a reação é realizada à temperatura ambiente por 1 h. (3) Controles, incluindo um controle de solvente sem o composto de teste, um controle negativo sem ATP e um controle positivo com o substrato fosforilado, são testados juntamente com a detecção. Todos os testes são levados a cabo em triplicata. (4) Após a reação enzimática, 5 µL de tampão de desenvolvimento pré-formulado é adicionado, e a reação é realizada à temperatura ambiente por 1 h. Subsequentemente, a reação é terminada pela adição de 5 µL de tampão de parada. (5) O sinal de fluorescência em cada poço é detectado por um leitor Ascent Fluoroskan FL (Thermo Labsystems) em um comprimento de onda de excitação de 400 nm, e comprimentos de onda de emissão de 445 nm e 520 nm. A proporção de fosforilação de substrato é obtida por referência ao sinal de intensidade de fluorescência C445/F520. (6) A taxa inibitória enzimática do composto de teste pode ser calculada com base na seguinte equação: Taxa inibitória (%) = 1 - a proporção de fosforilação de substrato no poço de detecção/a proporção de fosforilação de substrato no poço de controle de solvente. A concentração inibitória de 50 % (IC50) pode ser calculada usando um calculador de IC50 com base nas taxas inibitórias de fosforilação para os compostos de teste em diferentes gradientes de concentração.
[00468] Com base no método acima, os compostos descritos no presente documento são enzimaticamente avaliados in vitro para JAKs (a concentração do composto de teste é de 30 nM para teste de JAK3 e JAK2, e 300 nM para teste de JAK1) usando Xeljanz (citrato de tofacitinibe) como o controle positivo. Os dados são sumarizados na Tabela 2. Tabela 2. Enzimática dados dos compostos representativos na presente invenção para inibição de JAKs
aRV = razão entre a taxa inibitória do composto de teste e essa de Xeljanz; ND (Sem dados)
[00469] Como indicado pelos dados acima na tabela, os compostos da invenção têm atividade inibitória seletiva de JAK3 e/ou JAK1 quinase, em comparação com o controle positivo.
[00470] Uma proporção dos compostos da presente invenção é submetida a triagem de perfil de quinase (QuinaseProfiler™)) e ensaio de atividade inibitória enzimática (IC50Profiler™)) confiando na empresa Eurofins (http://www.eurofins.com). Ademais, as quinases na família de JAK, as quinases que foram triadas para a sua atividade também incluem a maioria das quinases de Grupo 3F e Grupo 4 (ITK, BLK, TBK1, VEGFRs, ERBBs, etc.), e quinases relacionadas com o sistema sanguíneo (Zhang J. et al. 2009, Nat. Rev. Cancer., 9: 28-39). A concentração do composto de teste para a triagem de perfil de quinase é de 1 µM, e um gradiente de gradientes de concentração 9 semilog são usados para determinar IC50. A detecção é levada a cabo de acordo com o procedimento padrão da Eurofins Company. Brevemente, de acordo com os requisitos de diferentes reações de quinase, 0,2 µL de composto de teste (50 µM, dissolvido em sulfóxido de dimetila (DMSO)) é adicionado ao tampão de reação contendo quinase específica (o sistema de tampão contendo 20 mM de MOPS, 1 mM de EDTA, 0,01 % de Brij-35, 5 % de Glicerol, 0,1 % de ß-mercaptoetanol, 1 mg/ml de BSA, ou 50 mM de TRIS, 0,1 mM de EGTA, 0,1 mM de Na3VO4, 0,1 % de ß-mercaptoetanol, 1 mg/ml de BSA, com base no tipo de quinase usado). Subsequentemente, um substrato de quinase específico em uma concentração final de 50 µM (substrato específico usado para quinase específica) , 10 mM de Acetato de Mg e Y-33P ATP marcado por isótopo (radioatividade de cerca de 500 cpm/pmol) são sequencialmente adicionados a um volume total de 10 µL para o sistema de reação. Após incubação à temperatura ambiente por 40 min, a reação é terminada pela adição de 3 % de solução de ácido fosfórico. A mistura é então transferida a um secador de pulverização de baixa temperatura do tipo filtro (P30 filtermat), e lavada por 75 mM de solução de ácido fosfórico por 3 vezes e por metanol uma vez. Após a secagem, radioatividade é detectada. Para o procedimento específico, ver o procedimento padrão proporcionado por Eurofins Company: http://www.eurofins.com/media/9724077/kinaseprofiler assay pr otocol guide eurofins v64.pdf). Os dados são sumarizados na tabela a seguir (Tabela 3). Tabela 3. IC50 dos compostos representativos da invenção para a inibição em JAKs, ITK, BLK, TBK1 e VEGFR (nM)
ND (Sem dados)
[00471] Como indicado pelos dados na tabela acima, (1) alguns dos compostos da invenção têm atividade inibitória seletiva de JAK3 e/ou JAK1 quinase. (2) Alguns dos compostos da invenção têm atividade inibitória sobre uma parte de quinases na família de ITK, BLK, TBK1 e VEGFR.
[00472] Exemplo B Ensaio de atividade de crescimento celular
[00473] Como descrito acima, a expressão de JAK quinase é distribuída de uma maneira específica, e ademais nas células do sistema imune, é também expressa em alguns outros tipos de células. JAK3 é principalmente expresso em células T, enquanto outros subtipos estão amplamente distribuídos. JAK quinase potencialmente influencia a atividade de crescimento da célula alvo pela mediação de vários sinais de citocina. Os inibidores de JAK quinases podem ter diferentes efeitos sobre o crescimento de células de modelo pela inibição de diferentes subtipos de JAKs.
[00474] O ensaio de MTS é um método de rotina para a detecção da toxicidade de célula. O princípio básico é com base na capacidade de desidrogenase na mitocôndria de células vivas para reduzir um novo composto MTS formazan amarelo a formazan, de modo que a quantidade de células vivas é proporcional à quantidade de produto formazan pela detecção da absorbância a 490 nm (OD), deste modo especulando a quantidade de células vivas de acordo com o valor de OD, e entendendo a capacidade do composto de teste para inibir o crescimento de células ou destruir as células.
[00475] Neste experimento, o efeito dos compostos da invenção sobre a atividade de crescimento celular é avaliado pelo ensaio de MTS usando diferentes tipos de modelos de células, de modo a entender mais as suas atividades intracelulares.
[00476] Modelo de célula CTLL-2
[00477] A atividade de JAKs tem um efeito significativo sobre o crescimento de células imunes. Para células T proliferativas ativadas, o seu crescimento depende da atividade do receptor de fator de crescimento celular IL-2 e sua quinase a jusante JAK1 e JAK3.
[00478] Neste experimento, a linhagem de células T CTLL-2 de camundongo foi usada. A proliferação e crescimento desta linhagem celular dependem fortemente de IL- 2, e é comumente usado para avaliar o título ativo de IL-2 exógena. Pela inibição da atividade de quinase JAK1/3, a proliferação de CTLL-2 pode ser inibida sob cultura in vitro. A ativação e proliferação de célula T são também características patológicas importantes para várias doenças imunológicas. Assim, este modelo é também patologicamente relacionado.
[00479] Pela comparação da alteração de absorbância gerada pelas células tratadas pelos compostos de teste usando ensaio de MTS, a atividade de crescimento inibitória dos compostos de teste nas células de modelo pode ser realizada, e deste modo a potencial atividade inibitória dos compostos na via de JAK1/3 pode ser avaliada.
[00480] MTS é realizado de acordo com procedimento de rotina em uma placa de 96 poços.
[00481] As células de modelo são inoculadas em cada poço da placa de 96 poços em uma concentração apropriada (cerca de 20.000 células/poço). Após 24 h, os compostos de teste são adicionados em diferentes gradientes de concentração (a mais alta concentração de 10 µM). Um controle de solvente (DMSO) e um controle negativo são também realizados ao mesmo tempo. Cada experimento é repetido por 3 vezes. As células são detectadas após o cultivo por umas outras 24 h.
[00482] CTLL-2 é uma célula suspensa. Após incubação, 20 µL de mistura pré-formulada de MTS e PMS (em um razão de 20:1) é diretamente adicionado a cada poço. Após incubação a 37 °C por 2 h, é então detectado por um leitor de microplacas (490 nm).
[00483] O efeito do composto de teste sobre o crescimento celular é calculado pela comparação da alteração de valores de OD entre o poço de teste e o poço de controle de solvente, após subtração do fundo do controle negativo. Para os compostos de teste em diferentes gradientes de concentração, as taxas inibitórias no crescimento de células de modelo e suas concentrações inibitórias de crescimento de 50 % (GI 50) são, cada uma, calculadas. (2) Modelo de células HeLa e HUVEC
[00484] A célula HeLa é uma linhagem de células de câncer do colo do útero humano, e pertence à linhagem de células de tumor epitelial; HUVEC é uma célula endotelial da veia umbilical humana, e pertence à célula endotelial primária; ambos tipos de células expressam todos os subtipos exceto para JAK3.
[00485] A alteração de atividade de JAK quinase não tem influência significativa sobre os outros tipos de células exceto para as células imunes, e ambos modelos de células mencionados acima são principalmente usados para avaliar se existem quaisquer outros alvos de quinase ademais de JAK quinases ou existem toxicidades de célula não seletivas.
[00486] Neste experimento, um modelo de célula cultivada é incubado com os compostos de teste em diferentes concentrações por uma duração específica. O efeito do tratamento pelo composto de teste sobre o crescimento de células é detectado usando ensaio de MTS.
[00487] MTS é realizado de acordo com procedimento de rotina em uma placa de 96 poços.
[00488] As células de modelo são inoculadas em cada poço da placa de 96 poços em uma concentração apropriada (cerca de 5000 células/poço). Após 24 h, os compostos de teste são adicionados em diferentes gradientes de concentração (a mais alta concentração final é de 40 µM). Um controle de solvente (DMSO) e um controle negativo são também realizados ao mesmo tempo. Cada experimento é repetido por 3 vezes. As células são detectadas após o cultivo por umas outras 72 h.
[00489] Após todo o meio de cultura ser retirado por aspiração do poço, 100 µL de meio fresco e 20 µL de mistura pré-formulada de MTS e PMS (em uma razão de 20:1) são adicionados a cada poço. Após incubação a 37 °C por 2 h, é então detectado por um leitor de microplacas (490 nm).
[00490] A taxa inibitória de crescimento celular e GI50 do composto de teste são calculadas como acima.
[00491] Com base no método acima, a avaliação citológica é realizada aos compostos descritos no presente documento (para a detecção de célula CTLL-2, a concentração do composto de teste é de 300 nM; para a detecção de células HeLa e HUVEC, a concentração do composto de teste é de 10 nM). Os dados são sumarizados na tabela a seguir (Tabela 4). Tabela 4. As taxas de crescimento de diferentes cepas de célula tratadas pelos compostos representativos da invenção
ND (Sem dados)
[00492] Como indicado pelos dados na tabela acima, uma porção dos compostos da invenção têm atividade inibitória específica em célula CTLL-2.
[00493] Com base em métodos experimentais citológicos, os compostos da invenção é submetida a in vitro enzimática IC50 ensaio e GI50 ensaio de diferentes cepas de célula, usando Xeljanz como o controle positivo. Os resultados são sumarizados na tabela a seguir (Tabela 5). Tabela 5. GI50 dos compostos representativos da invenção em diferentes cepas de célula ( µM)
ND (Sem dados)
[00494] Como indicado pelos dados na tabela acima, os compostos da invenção têm atividade inibitória de JAK3 quinase altamente seletiva, e estes compostos também têm atividade inibitória específica favorável sobre células CTLL- 2, em comparação com o controle positivo.
[00495] Exemplo C Ensaio de atividade intracelular
[00496] Citocinas, JAK quinases e via de sinalização de proteína STAT constituem uma rede complexa. Pela ativação de um homodímero de um subtipo específico de JAK ou um heterodímero de diferentes subtipos, diferentes citocinas promovem a fosforilação de diferentes membros de proteína STAT. Em diferentes modelos de células, sinais para a fosforilação de STAT a jusante especificamente relacionados com o relevante subtipo de JAK pode ser detectado usando estimulação específica de citocina, enquanto a atividade da via é suprimida pelos inibidores de JAK através da inibição da atividade de quinases relacionadas, de modo que a atividade inibitória intracelular dos compostos de teste em diferentes subtipos de JAK pode ser avaliada.
[00497] Neste experimento, western blot (WB) e citometria de fluxo são usados para avaliar as atividades intracelulares dos compostos de teste pela comparação dos níveis relativos dos sinais de STATs fosforilados e não fosforilados em 5 modelos de células, incluindo U937, THP- 1, CTLL-2, UT-7/EPO e célula de sangue periférico humano ativado (hPBC). O anticorpo primário e anticorpo secundário usados em hibridização de WB neste experimento são comprados de Cell Signaling Company (http://www.cellsignal.com). Os anticorpos marcados por fluorescência usados em citometria de fluxo são comprados de eBiosciences Company (http://www.ebioscience.com).
[00498] U937 é uma linhagem de célula monocítica. Citocina IFN y induz a fosforilação de STAT5a a jusante pela ativação do heterodímero de JAK1/2, e inibe a fosforilação de STAT5a pela inibição da atividade de JAK1/2. Sobre tal base, a atividade inibitória intracelular dos compostos de teste em JAK1/2 pode ser avaliada pela detecção da alteração do nível de fosforilação de STAT5.
[00499] THP-1 é uma linhagem de célula monocítica. Citocina IL-4 induz a fosforilação de STAT6 a jusante pela ativação do heterodímero de JAK1/3, e um inibidor de JAK suprime a fosforilação de STAT6 pela supressão da atividade de JAK1/3. A atividade inibitória intracelular dos compostos em JAK1/3 pode ser avaliada pela detecção da alteração do nível de fosforilação de STAT6.
[00500] CTLL-2 é uma linhagem de célula T, e sua proliferação e crescimento dependem de citocina IL-2. Citocina IL-2 induz a fosforilação de STAT5 a jusante pela ativação do heterodímero de JAK1/3, e um inibidor de JAK suprime a fosforilação de STAT5 pela supressão da atividade de JAK1/3. A atividade inibitória intracelular dos compostos em JAK1/3 pode ser avaliada pela detecção da alteração do nível de fosforilação de STAT5.
[00501] UT-7/EPO é uma linhagem celular formada a partir da medula de um paciente que sofre de leucemia de célula gigante após o cultivo com indução de EPO, e tem resposta óbvia à citocina EPO. O sinal para EPO é transmitido via o homodímero de JAK2 e induz a fosforilação de STAT5 a jusante, enquanto um inibidor de JAK suprime a fosforilação de STAT5 pela supressão da atividade de JAK2. A atividade inibitória intracelular dos compostos em JAK2 pode ser avaliada pela detecção da alteração do nível de fosforilação de STAT5.
[00502] A proliferação dependente de citocina IL-2 é formada após ativação pela co-estimulação de célula de sangue periférico humano (hPBC) com anticorpo CD3. A via de sinal de crescimento é mediada pelo heterodímero de JAK1/3 e induz a fosforilação de STAT5 a jusante. A atividade inibitória intracelular dos compostos em JAK1/3 pode ser avaliada pela detecção da alteração do nível de fosforilação de STAT5.
[00503] Western blot (WB) (1) Tratamento pelo composto: o experimento é levado a cabo em uma placa de 6 poços. As células U937 e THP- 1 são, cada uma, cultivadas em densidade apropriada, em que o composto de teste é adicionado em diferentes concentrações. Após o cultivo durante a noite (16 h), IFN y ou IL-4 (10 ng/ml) é adicionado correspondentemente. As células são colhidas por centrifugação 30 min depois. (2) Extração de proteína e detecção de WB: após extração, o teor de proteína é determinado. A proteína é transferida a uma membrana após eletroforese PAGE. A detecção de WB é realizada de acordo com um procedimento padrão. Os anticorpos secundários usados para hibridização incluem STAT5 (#9363), STAT6 (#9362) e correspondente STAT5 fosforilado (#9351), STAT6 (#9361). A detecção é realizada de acordo com o método recomendado na instrução de anticorpo. (3) Detecção de sinal: o sinal de hibridização é detectado por formação de imagem de raios X. O sinal em escala de cinza obtido por varredura é convertido a sinal digital, e as intensidades de sinal para ambos STATs e STATs fosforilados são, cada um, calculadas para avaliar as atividades inibitórias de fosforilação dos compostos em STATs.
[00504] Citometria de fluxo (FCS) (1) Tratamento pelo composto: o experimento é levado a cabo em uma placa de 6 poços. THP-1, CTLL-2, UT7/EPO e célula de sangue periférico ativado in vitro (hPBC) de voluntários são, cada um, cultivados em densidade apropriada, em que o composto de teste é adicionado em diferentes concentrações. Após o cultivo durante a noite (16 h), IFN y, IL-4, IL-2 e EPO (10 ng/ml) são adicionados correspondentemente. As células são colhidas por centrifugação 30 min depois. (2) Fixação de célula e marcação por fluorescência: as células são fixas usando paraformaldeído (30 min), e subsequentemente tratadas para a permeabilidade de membrana em metanol resfriado (15 min). Após lavagem por tampão PBS, as células são suspensas, em que anticorpo STAT5 e STAT6 resistentes a fosforilação (p-STAT5 anti- Humano de Camundongo (pY694)-Fluor®488; p-STAT6 anti-Coelho de Camundongo (pY641)-Fluor®488) são adicionados em uma razão de 100:1, e incubados no escuro por 30 min. Após lavagem por PBS, as células são preparadas em suspensão para carga. (3) Detecção por citometria de fluxo: a detecção é levada a cabo usando citômetro de fluxo Guava® easyCyte de acordo com a instrução. A intensidade de fluorescência média (MFI) de uma amostra é detectada usando uma população de célula apropriada. Sobre tal base, as intensidades de sinal relativas são calculadas para os STATs fosforilados tratados pelos compostos em diferentes concentrações por referência ao sinal do controle negativo (sem estimulação de fator) e do positivo (com ambos estimulação de fator e controle de solvente) no experimento, de modo que a IC50 do composto para a atividade inibitória em fosforilação de STATs pode ser avaliada.
[00505] Com base nos métodos experimentais acima, os compostos da invenção são selecionados para WB e citometria de fluxo, em que uma porção dos compostos inibiu a fosforilação de STATs em modelos específicos de células com valores de IC50 são como a seguir. Os dados são sumarizados na tabela a seguir (Tabela 6). Tabela 6. Inibição dos compostos da invenção em fosforilação
ND (Sem dados)
[00506] Como indicado pelos dados na tabela acima, uma porção dos compostos da invenção têm atividade inibitória intracelular seletiva de JAK3 e/ou JAK1, que é consistente com o resultado obtido em avaliação enzimática in vitro.
[00507] Exemplo D Efeito dos compostos de teste no modelo de artrite induzida por colágeno (CIA) de ratos
[00508] Objetivo: neste teste, a artrite é induzida por colágeno de galinha em ratos Wistar. Após a administração in vivo dos compostos do Exemplo 7 e do Exemplo 22, a alteração do índice da doença para artrite em ratos é avaliada para determinar o efeito terapêutico dos compostos de teste em artrite de rato.
[00509] Animais experimentais: 36 ratos Wistar fêmeas foram comprados do centro de experimento animal, Sun Yat-Sen University (Guangzhou) com o peso corporal variando de 180 a 200 g no começo do experimento. Quatro grupos (8 ratos em cada grupo) foram usados como o modelo de artrite, e um outro grupo (4 ratos) foi usado como controle normal.
[00510] Materiais: colágeno tipo II de galinha e adjuvante completo de Freund foram comprados de Beijing Biolead Science e Technology Development Co., Ltd. Controle positivo: metotrexato (MTX).
[00511] Compostos de teste: os compostos do Exemplo 7 e Exemplo 22.
[00512] Método de preparação: os compostos de teste foram preparados pela adição dos mesmos à solução recentemente preparada de 0,2 % de CMC-Na + 0,1 % de Tween-80 em água estéril a uma concentração desejada e misturando minuciosamente através de ultrassom.
[00513] Modelo de CIA: o colágeno de galinha foi completamente emulsificado em volume igual de adjuvante completo de Freund, e subcutaneamente injetado na base da cauda do rato no dia 0 para sensibilização (250 µL/rato). Uma outra injeção foi realizada na base da cauda no dia 7 para imunização suplementar (100 µL/rato). Após a artrite ter ocorrido (cerca do dia 13), os ratos foram aleatoriamente divididos em 4 grupos com 8 ratos em cada grupo. A administração iniciou no dia 14 após a primeira imunização, e durou por 14 dias. Os membros de um rato foram visualmente inspecionados, e a gravidade de artrite foi pontuada em uma faixa de 1 a 4: 0 = normal; 1 = um ligeiro sintoma, com sinais, tais como tornozelo ou pulso inchado e vermelho; 2 = tornozelo ou pulso moderadamente inchado e vermelho; 3 = pata bastante inchada e vermelha, incluindo os dedos; 4 = articulação bastante inchada acompanhada com disfunção; a mais alta pontuação para cada rato foi de 16. A espessura dos dedos dos membros posteriores e o volume da pata foram medidos ao mesmo tempo.
[00514] Medicação: os ratos foram administrados i.g. com o composto do Exemplo 7 em uma concentração de 40 mg/kg duas vezes/dia; ou os ratos foram administrados i.g. com o composto de Exemplo 22 em uma concentração de 40 mg/kg duas vezes/dia. Para o controle positivo, 5 mg/kg de MTX foi intraperitonealmente injetados duas vezes por semana. A administração i.g. de solvente foi usada como o controle negativo. Os dados obtidos 14 dias após a administração e antes da administração foram comparados. Os resultados são listados na tabela a seguir (Tabela 7). Tabela 7. Eficácia dos compostos de teste no modelo de artrite induzida por colágeno (CIA) de ratos
Resultados: 1. Em comparação com o grupo de solvente, o grau de inchaço induzido pela artrite nos ratos foi significativamente inibido quando o composto do Exemplo 7 (40 mg/kg) foi administrado i.g., e as taxas inibitórias para todos os índices foram melhores que aquelas obtidas pelo controle positivo metotrexato; determinado efeito inibitório foi também observado para artrite nos ratos quando o composto do Exemplo 22 (40 mg/kg) foi administrado i.g.. 2. Em comparação com o grupo de solvente, o peso corporal dos ratos no grupo metotrexato diminuiu, sugerindo certa toxicidade de metotrexato aos ratos. Enquanto que o ganho de peso corporal dos ratos em ambos grupos do composto de teste do Exemplo 7 e 22 foi melhor que esse no solvente grupo, demonstrando que ambos os compostos do Exemplo 7 e 22 não têm toxicidade significativa. Os índices de eficácia/segurança do composto de Exemplo 7 são melhores que aqueles do controle positivo MTX.
Claims (21)
1. COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (I),
ou estereoisômero, sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato do mesmo, caracterizado por R1 ser halogênio ou C1-C6 alquila; R2 ser um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxi, ciano, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alcoxi, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alquilcarbonila e C1-C6 alquilamino; R3 ser hidrogênio ou halogênio; R4 ser hidrogênio ou C1-C4 alquila; X ser NH, O ou S; Y ser CO ou S(O)2; Z ser uma ligação covalente, CH2 ou (CH2)2; n ser um número inteiro de 1 a 4; e Anel A ser um anel benzeno, anel piridina ou anel piperidina.
2. COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser halogênio ou C1-C6 alquila; R2 ser um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxi, ciano, fluoro, metila, etila, metoxila, difluorometila, trifluorometila, acetila e dimetilamino; R3 ser hidrogênio ou halogênio; R4 ser hidrogênio ou metila; X ser NH ou O; Y ser CO ou S(O)2; Z ser uma ligação covalente, CH2 ou (CH2)2; n ser um número inteiro de 1 a 4; e anel A ser um anel benzeno, anel piridina ou anel piperidina.
3. COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: R1 ser halogênio ou C1-C6 alquila; R2 ser um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxi, ciano, fluoro, metila, etila, metoxila, difluorometila, trifluorometila, acetila e dimetilamino; R3 ser hidrogênio ou fluoro; R4 ser metila; X ser NH; Y ser CO; Z ser uma ligação covalente; n ser um número inteiro de 1 a 4; e Anel A ser um anel benzeno ou anel piridina.
4. COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: R1 ser cloro, fluoro ou metila; R2 ser um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxi, ciano, flúor, metila, etila, metoxila, difluorometila, trifluorometila, acetila e dimetilamino; R3 ser hidrogênio ou flúor; R4 ser metila; X ser NH; Y ser CO; Z ser uma ligação covalente; n ser um número inteiro de 1 a 4; e anel A ser um anel benzeno.
5. COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: R1 ser cloro; R2 ser um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxi, ciano, flúor, metila, etila, metoxila, difluorometila, trifluorometila, acetila e dimetilamino; R3 ser hidrogênio ou flúor; R4 ser metila; X ser NH; Y ser CO; Z ser uma ligação covalente; n ser um número inteiro de 1 a 4; e Anel A ser um anel benzeno.
6. COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: R1 ser cloro; R2 ser um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em ciano, fluoro e trifluorometila; R3 ser hidrogênio ou flúor; R4 ser metila; X ser NH; Y ser CO; Z ser uma ligação covalente; n=1; e Anel A ser um anel benzeno.
7. COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por: R1 ser cloro; R2 ser ciano; R3 ser hidrogênio ou flúor; R4 ser metila; X ser NH; Y ser CO; Z ser uma ligação covalente; n=1; e Anel A ser um anel benzeno.
8. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo composto ser selecionado a partir do grupo consistindo em: N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- cianobenzamida; N-(3-(2-(3-acrilamido-4-fluoro-fenilamino)-5- cloropirimidinil-4-amino)propil)-4-trifluorometilbenzamida; N-(3-(2-(3-acrilamido-4-fluoro-fenilamino)-5- cloropirimidinil-4-amino)propil)-4-fluorobenzamida; 4-fluoro-N-(3-(2-(4-fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino)- 5-metilpirimidinil-4-amino)propil)benzamida; N-(3-(2-(4-fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino)-5- metilpirimidinil-4-amino)propil)-4-trifluorometilbenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- trifluorometilbenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- fluorobenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-1- metilpiperidinil-4-formamida; N-(3-(2-(3-acrilamido-4-fluorofenilamino)-5-cloropirimidinil- 4-amino)propil)-4-cianobenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- dimetilaminobenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-2, 4, 6-trifluorobenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- metoxilbenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-6- cianonicotinamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- hidroxibenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- ciano-2-fluorobenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- ciano-3-fluorobenzamida; 4-ciano-N-(3-(2-(4-fluoro-3-(N-metilacrilamido)fenilamino)-5- metilpirimidinil-4-amino)propil)-benzamida; 4-ciano-N-(3-(5-fluoro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)benzamida; N-(5-(5-cloro-4-(3-(2-(4- cianofenil)acetamino)propilamino)pirimidil-2-amido)-2- fluorofenil)-N-metilacriloila; N-(5-(5-cloro-4-(3-(4- cianofenilsulfonamino)propilamino)pirimidil-2-amido)-2- fluorofenil)-N-metilacriloila; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-oxo)propil)-4- cianobenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)- isonicotinamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- etilbenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- metilbenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)benzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-3- trifluorometilbenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-3- cianobenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-3- fluoro-4-trifluorometilbenzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-2, 3, 4, 5-tetrafluorobenzamida; 4-acetil-N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4- amino)propil)benzamida; N-(3-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)propil)-4- difluorometilbenzamida; e N-(6-(5-cloro-2-(4-fluoro-3-(N- metilacrilamido)fenilamino)pirimidinil-4-amino)hexil)-4- cianobenzamida.
9. MÉTODO PARA PREPARAR O COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender reagir um composto de fórmula geral (IV)
com um composto de fórmula geral (V)
sob solvente orgânico e um catalisador para formar o composto de fórmula geral (I), em que R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxi, ciano, halo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcoxi, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alquilcarbonila e C1-C6 alquilamino; R3 é hidrogênio ou halogênio; R4 é hidrogênio ou C1-C4 alquila; X é NH, O ou S; Y é CO ou S(O)2; Z é uma ligação covalente, CH2 ou (CH2)2; n é um número inteiro de 1 a 4; e Anel A é um anel benzeno, anel piridina ou anel piperidina.
10. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo catalisador ser selecionado a partir do grupo consistindo em ácido trifluoroacsertico, ácido clorídrico e ácido metanossulfônico.
11. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo solvente orgânico ser selecionado a partir do grupo consistindo em isopropanol e N-butanol.
12. MÉTODO PARA PREPARAR UM COMPOSTO DE FÓRMULA GERAL (IV),
caracterizado por compreender reagir um composto de fórmula geral (III)
com um composto de fórmula geral (II)
sob solvente orgânico e um álcali para formar o composto de fórmula geral (IV), em que R1 é halogênio ou C1-C6 alquila; R2 é um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxi, ciano, halo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcoxi, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alquilcarbonila e C1-C6 alquilamino; X é NH ou O; Y é CO ou S(O)2; Z é uma ligação covalente, CH2 ou (CH2)2; n é um número inteiro de 1 a 4; e Anel A é um anel benzeno, anel piridina ou anel piperidina.
13. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo álcali ser selecionado a partir do grupo consistindo em trietilamina e diisopropiletilamina.
14. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo solvente orgânico ser selecionado a partir do grupo consistindo em etanol, metanol e N-butanol.
15. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS RELACIONADAS COM ATIVIDADES ANORMAIS DE JAK3 E/OU JAK1 QUINASES, caracterizada por compreender o composto de fórmula geral (I) de acordo com a reivindicação 1 como o ingrediente ativo, e um carreador farmaceuticamente aceitável, adjuvante ou diluente.
16. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 15, caracterizada por ser na forma de comprimido, cápsula, pó, xarope, licor, suspensão, injeção ou pomada.
17. USO DO COMPOSTO de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por ser na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças autoimunes, cânceres, doenças mieloproliferativas, doenças de reabsorção óssea ou doenças de enxerto contra hospedeiro.
18. USO DO COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 caracterizado por ser na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de artrite reumatoide, psoríase, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, diabetes do tipo I, leucemia, e linfoma.
19. USO DA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 16 caracterizado por ser na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças autoimunes, cânceres, doenças mieloproliferativas, doenças de reabsorção óssea e doenças de enxerto contra hospedeiro.
20. USO DA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 16 caracterizado por ser na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de artrite reumatoide, psoríase, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, diabetes do tipo I, leucemia, e linfoma.
21. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pela formulação da mesma ter uma dosagem unitária que varia de 0,0001 a 200 mg.
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| B06U | Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette] | ||
| B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
| B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 14/09/2015, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS |