BR112017004014B1

BR112017004014B1 - Processo de produção de produtos de proteína de soja ("s810") e seus referidos produtos

Info

Publication number: BR112017004014B1
Application number: BR112017004014-0A
Authority: BR
Inventors: Kevin I. Segall; Martin Schweizer; Brent E. Green
Original assignee: Burcon Nutrascience (Mb) Corp
Priority date: 2014-08-27
Filing date: 2015-08-27
Publication date: 2022-06-28
Also published as: TW201613483A; AU2019271991A1; TWI698183B; TW202103576A; JP2017525378A; US20200196628A1; AU2015309651B2; EP3185695A1; WO2016029314A1; US20210307356A1; US10433571B2; KR20170046165A; JP6723224B2; RU2020127891A; RU2017109727A; CA2958907C; BR112017004014A2; AU2019271991B2; CA2958907A1; TWI764163B

Abstract

PREPARAÇÃO DE PRODUTOS DE PROTEÍNA DE SOJA ("S810"). A presente invenção é dirigida a produtos de proteína de soja, é muito reduzido em, ou livres de, notas de sabor beany e úteis para a fortificação de produtos alimentares e bebidas e preparados sem a utilização de sal no processo. Os produtos de proteína de soja da presente invenção são obtidos através da extração de fonte de proteína de soja com água para formar uma solução aquosa de proteína de soja, pelo menos separa parcialmente a solução de proteína de soja aquosa a partir da fonte de proteína de soja residual, ajustando o pH da solução aquosa de proteína de soja para um pH de cerca de 1,5 a cerca de 3,6 para solubilizar, pelo menos, uma porção da proteína e formar uma solução de proteína de soja, em seguida, acidificou-se a separação da solução de proteína de soja acidificado a partir do material sólido insolúvel em ácido. A solução de proteína de soja acidificados podem ser secos após a sua concentração e diafiltração opcional para formar um produto de proteína de soja, que pode ser um isolado. O material sólido insolúvel em ácido pode ser lavado com água acidificada e depois secou-se para formar um outro produto de proteína de soja. Estes produtos podem ser secas com o pH ácido em que foram preparados ou podem ser ajustados de pH antes da secagem.

Description

CAMPO DE INVENÇÃO

[0001] A presente invenção se refere aos produtos de proteína da soja e novos métodos inventivos para a preparação de produtos de proteína da soja.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] As Patentes US Números 8.563.071 e 8.691.318 e Pedido de Patente US número 13/879.418 depositado em 1° de agosto de 2013 (Número de Publicação da Patente US 20130316069 em 28 de novembro de 2013) ("S701"), cedida ao cessionário desta e as divulgações das mesmas que são incorporadas ao presente documento como referência descrevem procedimentos para a preparação de produtos de proteína, com uma excelente solubilidade, estabilidade ao calor e limpidez em soluções com pH baixo, bem como um sabor limpo, sem gosto de grão.

[0003] O Pedido de Patente US número 13/924.860 depositado em 24 de junho de 2013 (Publicação de Patente US número 2014-0010940 de 9 de janeiro de 2014) ("S701N2") e os Pedidos de Patente US Números 12/975.805 depositado em 22 de dezembro de 2010 (Publicação das Patentes US número US 2011-0165314 publicada em 7 de julho de 2011) e 13/518.217 depositado em 5 de setembro de 2012 (publicação da patente US Número US 2012-0322980), cedidos ao cessionário do presente documento e cujas revelações são incorporadas ao presente documento como referência são descritas formas de pH neutro ou próximo do neutro de produtos de proteína da soja descritos acima. Estes produtos, com o seu sabor limpo são úteis para as composições alimentícias tendo um pH neutro ou próximo de neutro. Embora a solubilidade seja ainda desejável, aplicações alimentícias em pH neutro ou próximo do neutro normalmente não são transparentes e assim a solubilidade e limpidez completas em água não são necessariamente uma exigência.

[0004] Nos procedimentos descritos nas referidas Patentes US números 8.563.071 e 8.691.318 e Pedidos de Patente US números 13/879.418, 13/924.860, 12/975.805 e 13/ 518.217, a extração da proteína é efetuada com uma solução de sal de cálcio. A solução de sal de cálcio auxilia na solubilização da proteína a partir da fonte de proteína, enquanto que a separa do ácido fítico, que é precipitado e se mantém com a fonte de proteína residual. A solução de extrato de proteína é opcionalmente diluída com água e ajustada em pH de cerca de 1,5 a cerca de 4,4 de modo a proporcionar uma solução de proteína de purificada, acidificada. Embora não se pretenda estar limitado por qualquer teoria em particular, pensa-se que o sabor limpo dos produtos de proteína da soja obtido por estes procedimentos é promovido pelo tratamento de baixo pH da amostra, de preferência em combinação com as etapas subsequentes e opcionais de processamento da membrana.

[0005] Uma preocupação em potencial com os procedimentos descritos nas referidas Patentes US números 8.563.071 e 8.691.318 e Pedidos de Patente US números 13/879.418, 13/924.860, 12/975.805 e 13/ 518.217 é a quantidade de sal de cálcio necessária para efetuar a etapa de extração de proteína e os custos e os problemas com a quantidade de sal que entra no processo, bem como a valorização ou eliminação de sais de cálcio nos fluxos de resíduos do processo. Uma redução ou eliminação de sal de cálcio pode resultar em economias significativas nos custos de processamento e produção dos produtos proteicos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0006] A presente invenção se refere aos produtos novos e inventivos de proteína da soja que apresentam muito poucas notas ou estão substancialmente isentos de sabor de grão e novos processos inventivos para a sua preparação, processos esses que não incluem a adição direta e o uso de sal de cálcio ou outro sal na extração da proteína a partir do material da fonte de proteína ou em qualquer outra etapa do processo.

[0007] Consequentemente, em um aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de produção de um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso, de preferência pelo menos cerca de 90% em peso (N x 6,25) em base seca, método esse que compreende: (a) extração de uma fonte de proteína da soja com água para causar a solubilização da proteína da soja a partir da fonte de proteína e para formar uma solução aquosa de proteína da soja, (b) separação de pelo menos parcialmente a solução aquosa de proteína da soja a partir da fonte de proteína da soja residual, (c) ajuste do pH da solução aquosa de proteína da soja a um pH de cerca de 1,5 a cerca de 3,6 para produzir uma solução de proteína da soja acidificada, (d) separação do material sólido insolúvel em ácido a partir da solução de proteína da soja acidificada, (e) concentração opcional da solução de proteína da soja acidificada por uma técnica de membrana seletiva, (f) diafiltração opcional da solução de proteína da soja opcionalmente concentrada, (g) secagem opcional da solução concentrada de proteína da soja opcionalmente diafiltrada.

[0008] Em uma modalidade da presente invenção, quando preparada a um pH baixo, o produto de proteína da soja da presente invenção está bem adaptado para uso em aplicações alimentícias possuindo um pH baixo.

[0009] Em uma modalidade da presente invenção, o pH da solução de proteína da soja acidificada ou a solução de proteína da soja acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é ajustada para menos de cerca de 8,0, antes da etapa de secagem opcional. Em outra modalidade da presente invenção, o pH da solução de proteína da soja acidificada ou a solução de proteína da soja acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é ajustada para cerca de 6,0 a cerca de 8,0, antes da etapa de secagem opcional. Em outra modalidade da presente invenção, o pH da solução de proteína da soja acidificada ou a solução de proteína da soja acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é ajustada para cerca de 6,5 a cerca de 7,5, antes da etapa de secagem opcional.

[0010] Em uma modalidade da presente invenção, quando o produto de proteína da soja é fornecido em pH neutro ou próximo do neutro, o mesmo está em uma forma adaptada para uso em aplicações alimentícias neutras ou quase neutras, tais como bebidas ou barras neutras.

[0011] Em uma modalidade da presente invenção, o material sólido insolúvel em ácido resultante do processo da presente invenção e coletado como descrito na etapa (d) acima sendo ainda processado para fornecer outro produto de proteína da soja. Este produto pode geralmente apresentar menor pureza e um nível mais elevado de notas com sabor de grão em comparação com os produtos derivados da solução da proteína da soja acidificada. No entanto, a pureza e o sabor do produto derivado do material sólido insolúvel em ácido são tais que o mesmo ainda é adequado para uso em aplicações alimentícias e de bebidas.

[0012] Em uma modalidade da presente invenção, o material sólido insolúvel em ácido é, opcionalmente, seco de modo a formar um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) em uma base de peso seco.

[0013] Em uma modalidade da presente invenção, o pH do material sólido insolúvel em ácido é ajustado para menos de cerca de 8,0, antes da etapa de secagem opcional. Em outra modalidade da presente invenção, o pH do material insolúvel em ácido é ajustado para cerca de 6,0 a cerca de 8,0, antes da etapa de secagem opcional. Em outra modalidade da presente invenção, o pH do material insolúvel em ácido é ajustado para cerca de 6,5 a cerca de 7,5, antes da etapa de secagem opcional.

[0014] Em uma modalidade da presente invenção, o material sólido insolúvel em ácido é lavado por mistura com cerca de 1 a cerca de 20 volumes de água com um pH selecionado do grupo que consiste em cerca de 1,5 a cerca de 3,6 e aproximadamente o mesmo que o pH do material insolúvel em ácido, em seguida, é separado a partir da água de lavagem antes da etapa de secagem opcional.

[0015] Em uma modalidade da presente invenção, o pH do material insolúvel em ácido lavado é ajustado para menos de cerca de 8,0, antes da etapa de secagem opcional. Em outra modalidade da presente invenção, o pH do material insolúvel lavado em ácido é ajustado para cerca de 6,0 a cerca de 8,0, antes da etapa de secagem opcional. Em outra modalidade da presente invenção, o pH do material insolúvel lavado em ácido é ajustado para cerca de 6,5 a cerca de 7,5, antes da etapa de secagem opcional.

[0016] Em uma modalidade da presente invenção, a água de lavagem é combinada com a solução de proteína da soja acidificada da etapa de separação (d) e processada tal como na etapa (e), (f) e/ou (g).

[0017] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de extração (a) é efetuada a uma temperatura de cerca de 1°C a cerca de 100°C. Em outra modalidade da presente invenção, a etapa de extração (a) é efetuada a uma temperatura de cerca de 15°C a cerca de 65°C. Em outra modalidade da presente invenção, a etapa de extração (a) é efetuada a uma temperatura de cerca de 50°C a cerca de 60°C.

[0018] Em uma modalidade da presente invenção, a água usada para a extração contém um agente de ajuste de pH, de modo a que a extração é realizada a um pH de cerca de 6 a cerca de 11. Em outra modalidade da presente invenção, a água usada para a extração contém um agente de ajuste de pH, de modo a que a extração é realizada a um pH de cerca de 7 a cerca de 8,5. Em outra modalidade da presente invenção, o agente de ajuste de pH é o hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, ou qualquer outro álcali de classificação alimentícia convencional e combinações do mesmo.

[0019] Em uma modalidade da presente invenção, a água usada para a extração contém um antioxidante.

[0020] Em uma modalidade da presente invenção, a solução aquosa de proteína da soja resultante da etapa de separação (b) tem uma concentração de proteína de cerca de a cerca de 50 g/L. Em outra modalidade da presente invenção, a solução aquosa de proteína da soja tem uma concentração de proteína de cerca de 10 a cerca de 50 g/L.

[0021] Em uma modalidade da presente invenção, seguindo a etapa de separação (b) e antes da etapa de acidificação (c), a solução aquosa de proteína da soja é tratada com um adsorvente para remover os compostos de cor e/ou odor da solução aquosa de proteína.

[0022] Em uma modalidade da presente invenção, seguindo a etapa de separação (b) e antes da etapa de acidificação (c), a solução aquosa de proteína da soja é ajustada a temperatura entre cerca de 1 a cerca de 35°C. Em outra modalidade, a temperatura da solução aquosa de proteína da soja é ajustada para cerca de 15 a cerca de 35°C.

[0023] Em uma modalidade da presente invenção, o pH da referida solução aquosa de proteína da soja é ajustado na etapa de acidificação (c) para cerca de 2,0 a cerca de 2,5.

[0024] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína aquosa acidificada após a etapa de separação (d) é submetida a uma etapa de tratamento térmico. Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de tratamento térmico é efetuada para inativar fatores antinutricionais lábeis ao calor. Em uma modalidade da presente invenção, os fatores antinutricionais são inibidores de tripsina termolábeis. Em outra modalidade da presente invenção, a etapa de tratamento térmico é efetuada para pasteurizar a solução de proteína aquosa acidificada.

[0025] Em uma modalidade da presente invenção, o tratamento térmico é efetuado a uma temperatura de cerca de 70°C até cerca de 160°C durante cerca de 10 segundos a cerca de 60 minutos. Em outra modalidade da presente invenção, o tratamento térmico é efetuado a uma temperatura de cerca de 80°C até cerca de 120°C durante cerca de 10 segundos a cerca de 5 minutos. Em outra modalidade da presente invenção, o tratamento térmico é efetuado a uma temperatura de cerca de 85°C a cerca de 95°C durante cerca de 30 segundos a cerca de 5 minutos.

[0026] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja acidificada tratada termicamente é resfriada até uma temperatura de cerca de 2°C a cerca de 65°C. Em outra modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja acidificada tratada termicamente é resfriada até uma temperatura de cerca de 50°C a cerca de 60°C.

[0027] Em uma modalidade da presente invenção, a solução aquosa de proteína da soja acidificada é seca para proporcionar um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b.

[0028] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja aquosa acidificada é submetida à etapa de concentração (e). Em outra modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja aquosa acidificada é submetida à etapa de concentração (e) para produzir uma solução de proteína da soja concentrada e acidificada tendo uma concentração de proteína de cerca de 50 a cerca de 300 g/L.

[0029] Em outra modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja aquosa acidificada é submetida à etapa de concentração (e) para produzir uma solução de proteína da soja concentrada e acidificada tendo uma concentração de proteína de cerca de 100 a cerca de 200 g/L.

[0030] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de concentração (e) é efetuada por ultrafiltração utilizando uma membrana com um peso molecular de corte de cerca de 1.000 a cerca de 1.000.000 Dalton. Em outra modalidade da presente invenção, a etapa de concentração (e) é efetuada por ultrafiltração utilizando uma membrana com um peso molecular de corte de cerca de 1.000 a cerca de 100.000 Dalton.

[0031] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja acidificada é submetida à etapa de diafiltração (f). Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de diafiltração (f) é efetuada usando água ou água acidificada com a solução de proteína da soja aquosa acidificada na ausência da etapa de concentração (e) ou antes ou após concentração parcial ou completa das mesmas.

[0032] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de diafiltração (f) é efetuada usando cerca de 1 a cerca de 40 volumes de solução de diafiltração. Em outra modalidade da presente invenção, a etapa de diafiltração (f) é efetuada usando cerca de 2 a cerca de 25 volumes da solução de diafiltração.

[0033] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de diafiltração (f) é efetuada até que nenhuma quantidade adicional significativa de contaminantes ou cor visível esteja presente no permeado.

[0034] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de diafiltração (f) é efetuada até que o retentado tenha sido suficientemente purificado, de modo a proporcionar uma proteína de soja isolada com um teor de proteína de pelo menos cerca de 90% em peso (N x 6,25) d.b.

[0035] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de diafiltração (f) é efetuada usando uma membrana com um peso molecular de corte de cerca de 1.000 a cerca de 1.000.000 Dalton. Em outra modalidade da presente invenção, a etapa de diafiltração (f) é efetuada usando uma membrana com um peso molecular de corte de cerca de 1.000 a cerca de 100.000 Dalton.

[0036] Em uma modalidade da presente invenção, um antioxidante está presente no meio de diafiltração durante pelo menos parte da etapa de diafiltração (f).

[0037] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de concentração (e) e/ou a etapa de diafiltração (f) são efetuados a uma temperatura de cerca de 2°C a cerca de 65°C. Em outra modalidade da presente invenção, a etapa de concentração (e) e/ou etapa de diafiltração (f) são efetuadas a uma temperatura de cerca de 50°C a cerca de 60°C.

[0038] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja acidificada opcional, parcial ou completamente concentrada e opcionalmente diafiltrada é submetida a uma etapa de tratamento térmico. Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de tratamento térmico é efetuada para inativar fatores antinutricionais termolábeis, incluindo os inibidores de tripsina lábeis ao calor.

[0039] Em uma modalidade da presente invenção, o tratamento térmico é efetuado a uma temperatura de cerca de 70°C até cerca de 160°C durante cerca de 10 segundos a cerca de 60 minutos. Em outra modalidade da presente invenção, o tratamento térmico é efetuado a uma temperatura de cerca de 80°C até cerca de 120°C durante cerca de 10 segundos a cerca de 5 minutos. Em outra modalidade da presente invenção, o tratamento térmico é efetuado a uma temperatura de cerca de 85°C a cerca de 95°C durante cerca de 30 segundos a cerca de 5 minutos.

[0040] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja tratada termicamente é resfriada até uma temperatura de cerca de 2°C a cerca de 65°C. Em outra modalidade da presente invenção, a solução de proteína da soja tratada termicamente é resfriada até uma temperatura de cerca de 50°C a cerca de 60°C.

[0041] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é tratada com um adsorvente para remover a cor e/ou compostos de odor.

[0042] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é pasteurizada antes da secagem.

[0043] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de pasteurização é realizada a uma temperatura de cerca de 55°C a cerca de 75°C durante cerca de 15 segundos a cerca de 60 minutos.

[0044] Em uma modalidade da presente invenção, a solução de proteína de soja acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é submetida à etapa de secagem (g) para proporcionar um isolado de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 90% em peso (N x 6,25) d.b. O Requerente identificou esta proteína isolada de soja como S810.

[0045] Em uma modalidade da presente invenção, o pH da solução de proteína da soja acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é ajustado para menos de cerca de 8,0, antes da etapa de secagem opcional (g). Em outra modalidade da presente invenção, o pH da solução de proteína da soja acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é ajustado para cerca de 6,0 a cerca de 8,0, antes da etapa de secagem opcional (g). Em outra modalidade da presente invenção, o pH da solução de proteína da soja acidificada opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada é ajustado para cerca de 6,5 a cerca de 7,5, antes da etapa de secagem opcional (g).

[0046] Em uma modalidade da presente invenção, a etapa de concentração opcional e/ou etapa de diafiltração opcional são realizadas de uma maneira favorável para a remoção de inibidores de tripsina.

[0047] Em uma modalidade da presente invenção, um agente redutor está presente durante a etapa de extração (a). Em outra modalidade da presente invenção, um agente redutor está presente durante a etapa de concentração opcional (e) e/ou a etapa de diafiltração opcional (f). Em outra modalidade da presente invenção, um agente redutor é adicionado à solução de proteína de soja opcionalmente concentrada e opcionalmente diafiltrada a antes da etapa de secagem (g) e/ou ao produto de proteína da soja seca. Em uma modalidade da presente invenção, o agente redutor é selecionado a partir do grupo consistindo em sulfito de sódio, sesteiam, N-acetilcisteína e suas combinações. Em uma modalidade da presente invenção, a presença do agente de redução destina-se a interromper ou reorganizar as ligações dissulfeto de inibidores de tripsina para obter uma redução da atividade do inibidor de tripsina.

[0048] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b. e que é preparado sem uma etapa e o processo envolvendo a adição direta de sal, e sem uma etapa de processo que envolve a precipitação de proteína a um pH de cerca de 4,0 a cerca de 5,0 e apresentando pouco ou nenhum sabor de grão. Em uma modalidade da presente invenção, a obtenção do produto de proteína da soja não requer a utilização de enzimas. Em outra modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja contém mais de cerca de 1,5% em peso d.b. de ácido fítico. Em outra modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja tem um teor em proteína de pelo menos cerca de 90% em peso (N x 6,25) d.b. Em outra modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja tem uma baixa atividade do inibidor de tripsina.

[0049] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um produto alimentício formulado para conter o produto de proteína da soja da presente invenção. Em uma modalidade da presente invenção, o produto alimentício é uma bebida.

[0050] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b., e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 2, entre cerca de 45 e 66%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água em um pH de cerca de 3, entre cerca de 35 e 65%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 4, de menos de cerca de 35%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 5, de menos de 30%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 6, entre cerca de 25 e cerca de 55%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 7, entre cerca de 36 e cerca de 65%. Em uma modalidade da presente invenção, a solubilidade do produto de proteína da soja é determinada pelo método do Exemplo 6.

[0051] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b., e uma capacidade de mais de 3,0 mL/g de ligação a água, e um a solubilidade da proteína em proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 2 e cerca de 3 de mais de cerca de 45%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 4 de menos de cerca de 25%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 5 de menos de cerca de 30%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 6 de menos de 65%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 7 de mais de cerca de 58%. Em uma modalidade da presente invenção, a solubilidade do produto de proteína da soja é determinada pelo método do Exemplo 6. Em outra modalidade da presente invenção, a capacidade de ligação à água é determinada pelo método do Exemplo 10.

[0052] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b, e um teor de ácido fítico de mais de 1,5% em peso, e uma solubilidade de proteína em proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 2 dentre cerca de 10 e cerca de 35%, e uma solubilidade de proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 3 de menos de cerca de 40%, e uma solubilidade de proteína da proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 4 e cerca de 5 de menos de cerca de 30%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 6 de menos de cerca de 40%, e uma solubilidade da proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 7, entre cerca de 15 e cerca de 40%. Em uma modalidade da presente invenção, a solubilidade do produto de proteína da soja é determinada pelo método do Exemplo 6.

[0053] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja com um perfil de peso molecular compreendendo: cerca de 26% a cerca de 42% superior a cerca de 100.000 Da, cerca de 31 a cerca de 52% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 4 a cerca de 21% de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 Da, e cerca de 3 a cerca de 25% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular compreende: cerca de 31 a cerca de 37% maior que cerca de 100.000 Da, cerca de 36 a cerca de 47% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 9 a cerca de 16% a partir de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 Da, e cerca de 8 a cerca de 20% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado a um pH de cerca de 3,5. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado pelo método do Exemplo 7. Em uma modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja possuindo um dos perfis de peso molecular acima mencionados tem um teor de ácido fítico superior à cerca dede 1,5% em peso.

[0054] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja com um perfil de peso molecular compreendendo: cerca de 22% a cerca de 85% superior a cerca de 100.000 Da, cerca de 8% a cerca de 50% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 0 a cerca de 23% de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 Da, e cerca de 0 a cerca de 18% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular compreende: cerca de 27% a cerca de 80% superior a cerca de 100.000 Da, cerca de 13% a cerca de 45% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 4% a cerca de 18% a partir de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 Da, e cerca de 2% a cerca de 13% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado a um pH de cerca de 3,5. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado pelo método do Exemplo 7. Em uma modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja possuindo um dos perfis de peso molecular acima mencionados tem um teor de ácido fítico superior à cerca dede 1,5% em peso. Em outra modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja possuindo um dos perfis de peso molecular acima mencionados tem um teor de ácido fítico superior à cerca dede 2,0% em peso.

[0055] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja com um perfil de peso molecular compreendendo: cerca de 4% a cerca de 34% maior que cerca de 100.000 Da, cerca de 10% a cerca de 42% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 2% a cerca de 22% de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 Da, e cerca de 22% a cerca de 72% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular compreende: cerca de 9% a cerca de 29% superior a cerca de 100.000 Da, cerca de 15% a cerca de 37% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 7% a cerca de 17% a partir de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 da, e cerca de 27% a cerca de 67% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado a um pH de cerca de 3,5. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado pelo método do Exemplo 7. Em uma modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja possuindo um dos perfis de peso molecular acima mencionados tem um teor de ácido fítico superior à cerca dede 1,5% em peso. Em outra modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja possuindo um dos perfis de peso molecular acima mencionados tem um teor de ácido fítico superior à cerca dede 2,0% em peso.

[0056] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja com um perfil de peso molecular compreendendo: cerca de 11% a cerca de 35% maior que cerca de 100.000 Da, cerca de 19% a cerca de 39% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 9% a cerca de 28% de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 da, e cerca de 19% a cerca de 38% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular compreende: cerca de 16% a cerca de 30% maior que cerca de 100.000 Da, cerca de 24% a cerca de 34% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 14% a cerca de 23% a partir de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 Da, e cerca de 21% a cerca de 33% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado a um pH de cerca de 6. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado pelo método do Exemplo 11. Em uma modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja tem um teor de ácido fítico superior a cerca de 1,5% em peso.

[0057] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja com um perfil de peso molecular compreendendo: cerca de 2% a cerca de 32% superior a cerca de 100.000 Da, cerca de 17% a cerca de 42% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 8 a cerca de 38% de cerca de 5000 a cerca de 15000 da, e cerca de 19% a cerca de 46% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular compreende: cerca de 7% a cerca de 27% superior a cerca de 100.000 Da, cerca de 22% a cerca de 37% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 13% a cerca de 33% a partir de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 Da, e cerca de 24% a cerca de 41% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado a um pH de cerca de 6. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado pelo método do Exemplo 11. Em uma modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja tem um teor de ácido fítico superior a cerca de 1,5% em peso. Em outra modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja tem um teor de ácido fítico superior a cerca de 2,0% em peso.

[0058] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja com um perfil de peso molecular compreendendo: cerca de 1 a cerca de 30% maior que cerca de 100.000 Da, cerca de 27 a cerca de 50% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 6% a cerca de 36% de cerca de 5.000 a cerca de 15000 da, e cerca de 14 a cerca de 49% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular compreende: cerca de 6% a cerca de 25% maior que cerca de 100.000 Da, cerca de 32 a cerca de 45% a partir de cerca de 15.000 a cerca de 100.000 Da, cerca de 11 a cerca de 31% a partir de cerca de 5.000 a cerca de 15.000 Da, e cerca de 19% a cerca de 44% desde cerca de 1.000 até cerca de 5.000 Da. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado a um pH de cerca de 6. Em uma modalidade da presente invenção, o perfil de peso molecular do produto de proteína da soja é determinado pelo método do Exemplo 11. Em uma modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja tem um teor de ácido fítico superior a cerca de 1,5% em peso. Em outra modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja tem um teor de ácido fítico superior a cerca de 2,0% em peso.

[0059] Por conseguinte, em outro aspecto da presente invenção, é provido um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b, e um teor de ácido fítico superior a cerca de 2,0% em peso, que possui uma leitura L* de uma solução preparada por dissolução de proteína em pó suficiente para fornecer 0,48 g de proteínas em 15 mL de água, de mais de cerca de 60, leitura ab* para uma solução preparada por dissolução de proteína em pó suficiente para fornecer 0,48 g de proteína em 15 mL de água, de menos de cerca de 26, e uma solubilidade de proteína na proteína a 1% em peso/volume em água a um pH de cerca de 6 dentre cerca de 10 e cerca de 50%. Em outra modalidade da presente invenção, o produto de proteína da soja fornecendo soluções tendo as referidas leituras L* e b*, e possuindo a solubilidade acima mencionada em água a um pH de cerca de 6, tem um teor de ácido fítico superior à cerca dede 3,0%.

[0060] Os produtos de proteína da soja produzidos de acordo com os processos da presente invenção revelados no presente documento são adequados para utilização em uma ampla variedade de aplicações convencionais, de produtos proteicos, incluindo, mas não limitado à fortificação de proteína de alimentos processados e bebidas e como ingredientes funcionais de alimentos e bebidas. Outros usos dos produtos de proteína da soja da presente invenção são em alimentos para animais de companhia, alimentos para animais e em aplicações industriais e cosméticas e em produtos de cuidado pessoal.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0061] A figura 1 é um fluxograma esquemático de uma modalidade de um processo da presente invenção.

DESCRIÇÃO GERAL DA INVENÇÃO

[0062] A etapa inicial do processo de proporcionar os produtos de proteína da soja da presente invenção envolve a solubilização de proteína da soja a partir de uma fonte de proteína da soja. A fonte de proteína da soja pode ser grãos de soja ou qualquer produto de soja ou subproduto derivado da transformação de feijões de soja, incluindo, mas não limitado à farinha de soja, flocos de soja, grãos de soja e farinha de soja. A fonte de proteína da soja pode ser utilizada sob a forma de gordura total, forma parcialmente desengordurada ou forma totalmente desengordurada. Quando a fonte de proteína da soja contiver uma quantidade apreciável de gordura, uma etapa de remoção de óleo, geralmente é necessária durante o processo. A proteína de soja recuperada a partir da fonte de proteína da soja pode ser a proteína de ocorrência natural em plantas de soja ou o material proteico pode ser uma proteína modificada por manipulação genética, mas possuindo as propriedades hidrofóbicas e polares características da proteína natural.

[0063] Os produtos de proteína da soja da presente invenção podem ser preparados a partir de fonte de proteínas de soja ou por um processo descontínuo ou um processo contínuo ou um processo semicontínuo. A solubilização da proteína a partir do material da fonte de proteína da soja é efetuada utilizando água. A água utilizada pode ser água da torneira ou água com diferentes níveis de pureza. Osmose reversa (RO) é o preferido água purificada.

[0064] O pH da extração pode ser de cerca de 6 a cerca de 11, preferivelmente cerca de 7,0 a cerca de 8,5. Hidróxido de sódio de qualidade alimentícia, hidróxido de potássio ou qualquer outro álcali de classificação alimentícia convencional e combinações podem ser adicionados à água para ajustar o pH da extração, conforme necessário. A solubilização de proteína é efetuada a uma temperatura dentre cerca de 1°C a cerca de 100°C, de preferência cerca de 15°C a cerca de 65°C, mais preferivelmente cerca de 50°C a cerca de 60°C, preferencialmente acompanhada por agitação para diminuir a o tempo de solubilização, que é geralmente de cerca de 1 a cerca de 60 minutos. É preferido efetuar a solubilização para extrair substancialmente tanta proteína a partir da fonte de proteína da soja quanto for praticável, de modo a proporcionar um elevado rendimento global doe produto.

[0065] A extração da proteína a partir da fonte de proteína da soja, quando realizada em uma operação contínua, é realizada de qualquer modo consistente com a execução de uma extração contínua de proteína a partir da fonte de proteína da soja. Em uma modalidade, a fonte de proteína da soja é continuamente misturada com a água e a mistura é transportada através de um tubo ou conduto com um comprimento e com uma vazão por um tempo de residência suficiente para efetuar a extração desejada de acordo com os parâmetros descritos no presente documento.

[0066] A concentração da fonte de proteína da soja em água durante a etapa de solubilização pode variar amplamente. Os valores de concentração típicos são de cerca de 5 a cerca de 15% peso/volume.

[0067] A etapa de extração de proteína tem o efeito adicional de solubilizar gorduras que podem estar presentes na fonte de proteína da soja, o que resulta nas gorduras estando presente na fase aquosa.

[0068] A solução de proteína resultante da etapa de extração tem geralmente uma concentração de proteína de cerca de 5 a cerca de 50 g/L, de preferência cerca de 10 a cerca de 50 g/L.

[0069] A água de extração pode conter um antioxidante. O antioxidante pode ser qualquer antioxidante convencional, tal como sulfito de sódio ou ácido ascórbico. A quantidade de antioxidante empregue pode variar de cerca de 0,01 a cerca de 1% em peso da solução, de preferência cerca de 0,05% em peso. O antioxidante pode servir para inibir a oxidação de quaisquer compostos fenólicos na solução de proteína.

[0070] A fase aquosa resultante da etapa de extração pode então ser separada do volume da fonte de proteína da soja residual, de qualquer maneira convencional, tal como pelo emprego de uma centrífuga decantadora. De preferência, o material da fonte de proteína da soja residual mais fino é deixado na solução de proteína da soja, mas, se desejado, estes sólidos mais finos podem ser removidos de qualquer maneira convencional, tal como por centrifugação de disco e/ou filtração. A etapa de separação pode ser realizada na mesma temperatura que a etapa de extração ou a qualquer temperatura dentro do intervalo de cerca de 1°C a cerca de 100°C, de preferência cerca de 15°C a cerca de 65°C, mais preferivelmente cerca de 50°C a cerca de 60°C. O material da fonte de proteína da soja residual separada pode ser seco para eliminação ou posteriormente tratado, de modo a recuperar a proteína residual. A proteína residual pode ser recuperada por reextração da fonte de proteína da soja residual separada com água fresca e a solução de proteína produzida após clarificação combinada com a solução de proteína inicial para posterior processamento como descrito abaixo. Um procedimento de extração em contracorrente pode também ser utilizado. A fonte de proteína da soja residual separada pode, alternativamente, ser processada por qualquer outro procedimento convencional para recuperar a proteína residual.

[0071] A solução aquosa de proteína da soja pode ser tratada com um antiespumante, tal como de qualquer qualidade alimentícia adequada, antiespumante que não seja a base de silicone, para reduzir o volume de espuma formado após processamento adicional. A quantidade de antiespumante empregado é geralmente superior a cerca dede 0,0003% peso/volume. Alternativamente, o antiespumante na quantidade descrita pode ser adicionado nas etapas de extração.

[0072] A solução de proteína da soja aquosa separada pode ser submetida a uma operação de desengorduramento, se desejado ou necessário. O Desengorduramento da solução de proteína da soja aquosa separada pode ser conseguido por qualquer procedimento convencional.

[0073] A solução de proteína da soja aquosa pode ser tratado com um adsorvente, tal como carvão ativado granulado, para remover os compostos de cor e/ou odor. Tal tratamento adsorvente pode ser efetuado sob quaisquer condições convencionais, em geral, à temperatura ambiente da solução de proteína aquosa separada.

[0074] A solução de proteína da soja é, então, ajustada em pH para um valor de cerca de 1,5 a cerca de 3,6, de preferência cerca de 2,0 a cerca de 2,5 por adição de qualquer ácido de grau alimentício convencional, tal como o ácido clorídrico, ácido fosfórico ou qualquer outro ácido de qualidade alimentícia convencional e as suas combinações. Para as proteínas de soja, a precipitação isoelétrica é tipicamente realizada a cerca de pH 4,5. Ao ajustar o pH para valores mais baixos no processo da presente invenção, uma maior parte das proteínas, de preferência, uma parte significativa das proteínas, tal como cerca de 25% em peso ou mais, de preferência cerca de 60% em peso ou mais, mais preferivelmente cerca de 80% em peso ou mais da proteína, é solúvel na solução acidificada. A proteína restante está contida no que é denominado o material sólido insolúvel em ácido, que é removido a partir da solução de proteína da soja acidificada por quaisquer meios convencionais, tais como a utilização de uma centrífuga de pilha de discos e ainda processada tal como descrito abaixo. O ajuste de pH pode ser feito a uma temperatura da solução de proteína da soja, mas de preferência a temperatura da solução de proteína da soja por ajuste do pH é de 1°C a 35°C, mais preferivelmente 15°C a 35°C como uma proporção aumentada de proteína da soja é solúvel na solução de proteína acidificada em temperaturas mais baixas. Se desejado, a solução de proteína da soja pode ser diluída com água antes da etapa de acidificação descrita acima.

[0075] Se desejado, o pH da solução de proteína acidificada pode ser reduzido ainda mais, antes do posterior processamento. O pH foi ajustado da solução de proteína acidificada ainda deve estar na gama de cerca de 1,5 a cerca de 3,6, de preferência cerca de 2,0 a cerca de 2,5.

[0076] A solução aquosa de proteína da soja acidificada pode ser submetida a um tratamento térmico para inativar fatores antinutricionais termolábeis, tais como inibidores de tripsina, presentes em tal solução, como resultado de extração a partir do material da fonte de proteína da soja durante a etapa de extração. Tal etapa de aquecimento também fornece o benefício adicional de reduzir a carga microbiana. Geralmente, a solução de proteína é aquecida até uma temperatura de cerca de 70°C até cerca de 160°C, de preferência cerca de 80°C até cerca de 120°C, mais preferivelmente cerca de 85°C a cerca de 95°C, durante cerca de 10 segundos a cerca de 60 minutos, de preferência cerca de 10 segundos a cerca de 5 minutos, mais preferencialmente cerca de 30 segundos a cerca de 5 minutos. A solução de proteína da soja acidificada tratada termicamente em seguida pode ser resfriada para posterior processamento como descrito abaixo, a uma temperatura de cerca de 2°C a cerca de 65°C, de preferência cerca de 50°C a cerca de 60°C.

[0077] A solução aquosa de proteína da soja acidificada resultante pode ser seca diretamente para produzir um produto de proteína da soja. A fim de proporcionar um produto de proteína da soja possuindo um teor de impurezas reduzido, tal como um isolado de proteína da soja, a solução de proteína de soja aquosa acidificada pode ser processada como descrito a seguir antes da secagem. Adicionalmente, acredita-se que o processamento conforme descrito a seguir tenha efeito benéfico no sabor do produto.

[0078] A solução aquosa de proteína da soja acidificada pode ser concentrada para proporcionar uma solução concentrada de proteína da soja tendo uma concentração de proteína de cerca de 50 a cerca de 300 g/L, de preferência cerca de 100 a cerca de 200 g/L.

[0079] A etapa de concentração pode ser efetuada de qualquer maneira convencional de acordo com operação em batelada ou operação contínua, tal como empregando qualquer técnica de membrana seletiva convencional, tais como ultrafiltração ou diafiltração, usando membranas, tais como, membranas de fibra oca ou membranas enroladas em espiral com um peso molecular de corte apropriado, tal como cerca de 1.000 a cerca de 1.000.000 Dalton, preferivelmente de cerca de 1.000 a cerca de 100.000 Dalton, tendo em conta diferentes materiais e configurações de membrana, e, para um funcionamento contínuo, dimensionada para permitir o grau desejado de concentração, conforme a solução de proteína aquosa passa através das membranas.

[0080] Como é bem conhecido, a ultrafiltração e técnicas de membrana seletiva similares permitem que espécies de baixo peso molecular passem através da mesma, evitando a espécie de maior peso molecular faça isso. As espécies de baixo peso molecular incluem materiais de peso molecular baixo extraídos a partir do material da fonte, tais como carboidratos, pigmentos, proteínas de baixo peso molecular e fatores antinutricionais, tais como inibidores de tripsina, que são propriamente proteínas de baixo peso molecular. O corte de peso molecular da membrana é usualmente escolhido para assegurar a retenção de uma proporção significativa da proteína na solução, ao mesmo tempo permitindo que os contaminantes passem, tendo em conta os diferentes materiais de membrana e configurações.

[0081] A solução concentrada de proteína da soja, em seguida, pode ser submetida a uma etapa de diafiltração usando água. A água de diafiltração possui preferencialmente um pH igual ao da solução de proteína a ser diafiltrada. Tal diafiltração pode ser efetuada utilizando desde cerca de 1 a cerca de 40 volumes de solução de diafiltração, de preferência cerca de 2 a cerca de 25 volumes de solução de diafiltração. Na operação de diafiltração, novas quantidades de contaminantes são removidas a partir da solução aquosa de proteína da soja por meio de passagem através da membrana com o permeado. Isso purifica a solução de proteína aquosa pode também reduzir a sua viscosidade. A operação de diafiltração pode ser efetuada até que nenhuma quantidade significativa de contaminantes ou de cor visível esteja presente no permeado ou até que o retentado seja suficientemente purificado, de modo a proporcionar um isolado de proteína de soja com um teor em proteína de pelo menos cerca de 90% em peso (N x 6,25) d.b. Tal diafiltração pode ser efetuada utilizando a mesma membrana como para a etapa de concentração. No entanto, se desejado, a etapa de diafiltração pode ser efetuada utilizando uma membrana separada com um peso molecular de corte diferente, tal como uma membrana com um peso molecular de corte na gama de cerca de 1.000 a cerca de 1.000.000 Dalton, de preferência cerca de 1.000 a cerca de 100.000 Dalton, tendo em conta diferentes materiais e configuração de membrana.

[0082] Alternativamente, a etapa de diafiltração pode ser aplicada à solução de proteína aquosa acidificada antes da concentração ou à solução de proteína aquosa acidificada parcialmente concentrada. A diafiltração também pode ser aplicada em vários pontos durante o processo de concentração. Quando a diafiltração é aplicada antes da concentração ou à solução parcialmente concentrada, a solução diafiltrada resultante pode então ser adicionalmente concentrada. Diafiltrar várias vezes conforme a solução de proteína é concentrada pode permitir que uma concentração mais elevada final, totalmente concentrada de proteína seja alcançada. Isto reduz o volume de material a ser seco.

[0083] A etapa de concentração e a etapa de diafiltração podem ser efetuadas no presente documento de um modo tal que o produto de proteína da soja, subsequentemente recuperado contenha menos de cerca de 90% em peso de proteína (N x 6,25) d.b., tal como pelo menos cerca de 60% em peso de proteína (N x 6,25) d.b. Ao concentrar parcialmente e/ou diafiltrar parcialmente a solução aquosa de proteína da soja, é possível remover apenas parcialmente contaminantes. Esta solução de proteína pode então ser seca para fornecer um produto de proteína da soja com níveis de pureza mais baixos.

[0084] Um antioxidante pode estar presente na água de diafiltração durante pelo menos parte da etapa de diafiltração. O antioxidante pode ser qualquer antioxidante convencional, tal como sulfito de sódio ou ácido ascórbico. A quantidade de antioxidante empregada na água de diafiltração depende dos materiais empregados e pode variar de cerca de 0,01 a cerca de 1% em peso, de preferência cerca de 0,05% em peso. O antioxidante pode servir para inibir a oxidação de compostos fenólicos presentes em quaisquer solução de proteína da soja.

[0085] A etapa de concentração opcional e a etapa de diafiltração opcional podem ser efetuadas a qualquer temperatura convencional, geralmente cerca de 2°C a cerca de 65°C, de preferência cerca de 50°C a cerca de 60°C, e durante o período de tempo para obter o grau desejado de concentração e diafiltração. A temperatura e outras condições utilizadas até um determinado grau dependem do equipamento de membrana utilizado para efetuar a transformação da membrana, a concentração de proteína desejada da solução e a eficácia da remoção de contaminantes para o permeado.

[0086] Como mencionado anteriormente, a soja contém inibidores de tripsina antinutricionais. O nível de atividade inibidora de tripsina no produto final de proteína da soja pode ser controlado pela manipulação das diversas variáveis de processo.

[0087] Como observado acima, o tratamento térmico da solução aquosa acidificada de proteína da soja pode ser utilizado para inativar os inibidores de tripsina termolábil. A solução de proteína da soja acidificada parcialmente concentrada ou totalmente concentrada pode também ser tratada termicamente para inativar os inibidores de tripsina termolábil. Quando o tratamento térmico é aplicado à solução de proteína da soja acidificada parcialmente concentrada, a solução tratada termicamente resultante pode então ser adicionalmente concentrada.

[0088] Além disso, as etapas de concentração e/ou diafiltração podem ser operadas de um modo favorável para a remoção de inibidores de tripsina no permeado, juntamente com os outros contaminantes. A remoção dos inibidores de tripsina é promovida pela utilização de uma membrana de maior tamanho de poro, tal como 30.000 a 1.000.000 Da, operando a membrana em temperaturas elevadas, tais como cerca de 30°C a cerca de 65°C, de preferência cerca de 50°C a cerca de 60°C e empregando um maior volume de meio de diafiltração, tal como 10 a 40 volumes.

[0089] O processamento de acidificação e membrana da solução de proteína da soja a um pH inferior, tal como 1,5 a 3, pode reduzir a atividade do inibidor de tripsina em relação ao processamento da solução em pH mais elevado, tal como 3 a 3,6. Quando a solução de proteína é concentrada e/ou diafiltrada na extremidade baixa da gama de pH, pode ser desejável elevar o pH da solução antes da secagem. O pH da solução concentrada de proteína e/ou diafiltrada pode ser aumentado para o valor desejado, por exemplo de pH 3, por adição de qualquer álcali de classificação alimentícia convencional, tal como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio e suas combinações.

[0090] Além disso, uma redução da atividade do inibidor de tripsina pode ser obtida através da exposição de materiais de soja aos agentes de redução que interrompem ou reorganizam as ligações dissulfeto dos inibidores. Apenas reagentes redutores adequados incluem sulfito de sódio, cisteína, N-acetilcisteína, qualquer outro agente de redução convencional e suas combinações.

[0091] A adição de tais agentes de redução pode ser efetuada em várias etapas do processo global. O agente redutor pode ser adicionado com o material da fonte de proteína da soja na etapa de extração, pode ser adicionado à solução de proteína da soja aquosa seguindo a remoção do material da fonte de proteína da soja residual, pode ser adicionado ao retentado diafiltrado antes da secagem ou pode ser misturados a seco com o produto de proteína da soja seca. A adição do agente redutor pode ser combinada com a etapa de fase de tratamento térmico e de processamento da membrana, como descrito acima.

[0092] Se for desejado reter os inibidores de tripsina ativa na solução de proteína, isto pode ser conseguido por eliminação ou redução da intensidade da etapa de tratamento térmico, não utilizando agentes redutores, operando em concentração opcional e etapas de diafiltração opcionais no ponto mais alto da faixa de pH, tal como 3 a 3,6, utilizando uma membrana de concentração e diafiltração com um tamanho de poro menor, operando a membrana em temperaturas mais baixas e empregando menos volumes de meio de diafiltração.

[0093] A solução de proteína opcionalmente concentrada e diafiltrada pode estar sujeita a uma operação de desengorduramento adicional, se necessário. O desengorduramento da solução de proteína opcionalmente concentrada e diafiltrada pode ser obtido por qualquer procedimento convencional.

[0094] A solução de proteína aquosa acidificada opcionalmente concentrada e diafiltrada pode ser tratada com um adsorvente, tal como carvão ativado granulado, para remover os compostos de cor e/ou odor. Tal tratamento adsorvente pode ser efetuado em quaisquer condições convencionais, em geral, à temperatura ambiente da solução de proteína.

[0095] A solução de proteína da soja aquosa, opcionalmente concentrada e diafiltrada pode ser pasteurizada antes da secagem ou processamento adicional. Tal pasteurização pode ser efetuada sob quaisquer condições de pasteurização convencionais. Geralmente, a solução de proteína de soja opcionalmente concentrada e diafiltrada é aquecida a uma temperatura de cerca de 55°C a cerca de 75°C durante cerca de 15 segundos a cerca de 60 minutos. A solução de proteína da soja pasteurizada pode então ser resfriada, tal como a uma temperatura de cerca de 20°C a cerca de 35°C.

[0096] A solução de proteína da soja, opcionalmente concentrada e diafiltrada e opcionalmente pasteurizada, em seguida, pode ser seca por quaisquer meios convencionais tais como secagem por pulverização ou secagem por congelamento para proporcionar um produto de proteína da soja. Alternativamente, a solução de proteína de soja concentrada, diafiltrada e opcionalmente pasteurizada pode ser ajustada no pH para um valor inferior a cerca de 8,0, de preferência cerca de 6,0 a cerca de 8,0, mais preferencialmente cerca de 6,5 a cerca de 7,5 antes da secagem opcional. O pH pode ser elevado em qualquer modo convencional, tal como pela adição de hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou qualquer outra solução alcalina convencional de qualidade alimentícia e combinações dos mesmos. Se a solução de proteína não for pasteurizada antes de ajuste do pH, a pasteurização pode ser realizada após o ajuste do pH utilizando as condições descritas acima.

[0097] O produto de proteína da soja (preparado com ou sem a etapa de ajuste do pH antes da secagem opcional) tem um teor de proteína superior a cerca de 60% em peso d.b. De um modo preferido, o produto de proteína da soja é um isolado com um teor de proteína em excesso de cerca de 90% em peso de proteína (N x 6,25) d.b.

[0098] De acordo com outro aspecto da presente invenção, o material sólido insolúvel em ácido capturado após o ajuste do pH da solução de proteína da soja para a faixa de cerca de 1,5 a cerca de 3,6, de preferência cerca de 2,0 a cerca de 2,5 pode ser opcionalmente diluído com água RO então opcionalmente seco para formar um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b. Alternativamente, o pH do material sólido insolúvel em ácido opcionalmente diluído pode ser aumentado para um valor inferior a cerca de 8,0, de preferência cerca de 6,0 a cerca de 8,0, mais preferencialmente cerca de 6,5 a cerca de 7,5 por quaisquer meios convencionais, tais como através da adição de solução de hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou de qualquer outra solução alcalina de grau alimentício convencional e suas combinações antes da secagem opcional para formar um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b. De preferência, o material sólido insolúvel em ácido é lavado a fim de remover os contaminantes e aumentar a pureza e o sabor do produto. O material sólido insolúvel em ácido pode ser lavado por suspensão dos sólidos entre cerca de 1 e cerca de 20 volumes, preferencialmente cerca de 1 a cerca de 10 volumes de água RO com um pH dentro da gama de cerca de 1,5 a cerca de 3,6 e, de preferência combinando o pH da material sólido insolúvel em ácido. A etapa de lavagem pode ser realizada em qualquer temperatura convencional, tal como cerca de 15°C a cerca de 35°C. O material sólido insolúvel em ácido é misturado com a solução de lavagem para qualquer período de tempo convencional, de preferência 15 minutos ou menos. O material sólido insolúvel em ácido lavado pode depois ser separado da solução de lavagem com ácido por quaisquer meios convencionais, tais como por centrifugação usando uma centrífuga de discos empilhados. A solução de lavagem com ácido pode ser adicionada à solução de proteína acidificada para processamento adicional, como discutido acima. O material sólido insolúvel em ácido lavado pode ser opcionalmente diluído com água RO e em seguida, opcionalmente seco por quaisquer meios convencionais tais como secagem por pulverização ou secagem por congelamento para proporcionar um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b. Alternativamente, o pH do material sólido insolúvel em ácido, opcionalmente diluído lavado pode ser ajustado para um valor inferior a cerca de 8,0, de preferência cerca de 6,0 a cerca de 8,0, mais preferencialmente cerca de 6,5 a cerca de 7,5 por quaisquer meios convencionais, tais como através da adição de solução de hidróxido de sódio, solução de hidróxido de potássio ou qualquer outra solução alcalina convencional de qualidade alimentícia e combinações dos mesmos, antes da secagem opcional. O sabor de produtos derivados do material sólido insolúvel em ácido pode ser geralmente mais elevado nas notas com sabor de feijão em comparação com os produtos preparados através do processamento da fração de proteína solúvel em ácido. No entanto, o sabor dos produtos derivados do material sólido insolúvel em ácido é tal que os produtos são adequados para uso em aplicações alimentícias e de bebidas.

[0099] Uma etapa de pasteurização pode ser empregada no material sólido insolúvel em ácido, opcionalmente diluído ou material sólido insolúvel em ácido opcionalmente lavado e diluído antes da etapa de secagem opcional. Tal pasteurização pode ser efetuada sob quaisquer condições de pasteurização convencionais. Geralmente, o material sólido insolúvel em ácido, opcionalmente diluído ou material sólido insolúvel em ácido opcionalmente diluído e lavado é aquecido a uma temperatura de cerca de 55°C a cerca de 75°C durante cerca de 15 segundos a cerca de 60 minutos. O material sólido insolúvel em ácido pasteurizado opcionalmente diluído ou material sólido insolúvel em ácido opcionalmente lavado e diluído então pode ser resfriado, tal como a uma temperatura de cerca de 20°C a cerca de 35°C. Se o material sólido insolúvel em ácido, opcionalmente diluído ou material sólido insolúvel em ácido opcionalmente diluído e lavado não for pasteurizado antes do ajuste do pH, a pasteurização pode ser realizada após o ajuste do pH utilizando as condições descritas acima.

[00100] Referindo-nos agora à Figura 1, que mostra um processo 10 de acordo com um aspecto da presente invenção, uma fonte de proteína da soja é submetida a uma extração inicial com água, a um pH de cerca de 6 a cerca de 11, preferivelmente cerca de 7,0 a cerca de 8,5 a 12. A solução de extrato de proteína, em seguida é completa ou parcialmente purificada por a remoção da fonte de proteína da soja residual em 14, com os sólidos removidos sendo coletados em 16. A solução de extrato de proteína 18, em seguida, é ajustada no pH em 20 a cerca de 1,5 a cerca de 3,6, de preferência cerca de 2,0 a cerca de 2,5. O material insolúvel em ácido é removido por centrifugação em 22 obtendo-se o material sólido insolúvel em ácido 24 e de uma solução de proteína acidificada em 26.

[00101] O material sólido insolúvel em ácido recuperado pode ser opcionalmente lavado em 28 com a água apresentando o mesmo pH que os sólidos, ou seja, cerca de 1,5 a cerca de 3,6, de preferência cerca de 2,0 a cerca de 2,5, e os sólidos opcionalmente lavados 34 podem ser opcionalmente ajustado em pH até um valor inferior a cerca de 6,0 a 46, em seguida, secos a 48 para proporcionar um produto de proteína da soja designada S810PA a 50 com um teor em proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b.

[00102] Alternativamente, os sólidos opcionalmente lavados 34 são ajustados a um pH geralmente de cerca de 6,0 a cerca de 8,0, de preferência cerca de 6,5 a cerca de 7,5, em 36 e seco em 38, para proporcionar um produto de proteína da soja designada S810PN em 40 com um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b.

[00103] O centrifugado de lavagem 30 da etapa de lavagem opcional 28 pode ser adicionado à solução de proteína acidificada 26. A solução de proteína solúvel pode ser reduzida em pH dentro da gama de cerca de 1,5 a cerca de 3,6, de preferência cerca de 2,0 a cerca de 2,5 em 60. A solução de proteína solúvel é então submetida à concentração opcional e/ou diafiltração opcional em 62. O retentado 64 a partir da concentração opcional e/ou etapa de diafiltração opcional pode ser opcionalmente ajustado em pH para um valor inferior a cerca de 6,0 em 76, em seguida, seco em 78 para proporcionar um produto de proteína da soja designado S810A em 80, com um teor em proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b. De um modo preferido, o produto S810A é um isolado tendo um teor de proteína de pelo menos cerca de 90% em peso (N x 6,25) d.b. Alternativamente, o retentado 64 a partir da concentração opcional e/ou etapa de diafiltração opcional é ajustado a um pH geralmente de cerca de 6,0 a cerca de 8,0, preferencialmente cerca de 6,5 a cerca de 7,5, em 66, em seguida, seco em 68 para proporcionar um produto de proteína da soja designado S810N em 70, com um teor de proteína de pelo menos cerca de 60% em peso (N x 6,25) d.b. De um modo preferido, o produto S810N é um isolado tendo um teor de proteína de pelo menos cerca de 90% em peso (N x 6,25) d.b.

[00104] Os produtos de proteína S810A e S810PA podem ser usados sozinhos ou podem ser combinados por mistura a seco em 84. Alternativamente, o produto combinado 810A/810PA pode ser formado por mistura do material sólido insolúvel em ácido, opcionalmente lavado e ajustado a um pH de menos de cerca de 6,0 em 46 com a concentração opcional/ retentado de diafiltração opcional, opcionalmente ajustado a um pH de menos de cerca de 6,0 em 76 e secagem da mistura em 86. Os produtos de proteína S810N e S810PN podem ser usados sozinhos ou podem ser combinados por mistura a seco em 84. Alternativamente, o produto combinado S810N/S810PN pode ser formado por mistura do material sólido insolúvel em ácido, opcionalmente lavado, ajustado para um pH de cerca de 6,0 a cerca de 8,0, de preferência cerca de 6,5 a cerca de 7,5 em 36 com a concentração opcional/retentado de diafiltração opcional, ajustado para um pH de cerca de 6,0 a cerca de 8,0, de preferência cerca de 6,5 a cerca de 7,5 em 66 e a secagem da mistura em 82.

EXEMPLOS Exemplo 1

[00105] Este Exemplo descreve a preparação de produtos de proteína da soja de acordo com uma modalidade do método da presente invenção.

[00106] Quilo 'A' de flocos de soja desengordurados foi adicionado ao litro 'b' de água purificada de osmose inversa, juntamente com uma solução de Não suficiente (50% peso/peso) para ajustar o pH a um alvo de 8,5. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos para proporcionar uma solução de proteína aquosa. O pH foi verificado e corrigido para cerca de 8,5 periodicamente ao longo do tempo de extração. Sólidos suspensos grosseiros foram removidos por centrifugação usando uma centrífuga de decantação. Adicionou-se 'c' gramas de antiespuma e, em seguida, os sólidos mais finos removidos utilizando uma centrífuga de discos empilhados para produzir "d" litros de solução de proteína possuindo um teor em proteína de "e" por cento em peso. O pH da solução de proteína foi então reduzido para um pH alvo de "f" por meio da adição de solução de Ou (22 BÉ Ou diluído com um volume igual de água) e a solução foi centrifugada usando uma centrífuga de discos empilhados para proporcionar "g" litros de solução de proteína acidificada com pH "h", bem como "i" kg de material sólido insolúvel em ácido.

[00107] A solução de proteína acidificada, tendo um teor de proteína de "j" por cento em peso, foi aquecida então reduzida em volume a partir de "k" litros para "l" litros por concentração em uma membrana de poliéter sulfona tendo um corte de peso molecular de 100.000 Dalton, operada a uma temperatura de cerca de "m" graus Celsius. A solução de proteína concentrada, com um teor de proteína de "n" por cento em peso foi diafiltrada na mesma membrana com "o" litros de água RO em pH "p", com a operação de diafiltração conduzida a cerca de "q" graus Celsius. A solução de proteína diafiltrada, tendo um teor de proteína de "r" por cento em peso foi então ainda concentrada até um teor de proteína de "s" por cento em peso. "T" de solução de proteína diafiltrada e concentrada foi obtido e representado um rendimento de "u" da proteína na solução de proteína antes da etapa de acidificação. "V" kg da solução de proteína diafiltrada e concentrada foram secos por pulverização para produzir um produto encontrado possuindo um teor de proteína de "w" por cento em peso (N x 6.25) d.b. O produto foi denominado S810A "X". "Y" kg de solução de proteína diafiltrada e concentrada foram ajustados para "z" usando uma solução "aa" de NaOH/KOH, "ab" kg de solução de pH ajustado foi então diluído com "ac" litros de água e a solução tendo um pH de "ad" foi seca por pulverização para produzir um produto verificado como apresentando um teor de proteína de "ae" por cento (N x 6,25) d.b. O produto foi denominado S810N 'X'.

[00108] O material sólido insolúvel em ácido coletado da centrífuga em pilha de discos tinha um teor de proteína de "af" por cento em peso. Uma porção "ag" em quilos destes sólidos foi misturada com "ah" L de água RO em pH 'ai' durante 30 minutos à temperatura ambiente, em seguida operou novamente através da centrífuga de pilha de discos. "Aj" kg de material sólido insolúvel em ácido lavado foi coletado com um teor de proteína de "ak" por cento em peso e representou um rendimento de "ai" por cento da proteína na solução de proteína antes da etapa de acidificação. O material sólido insolúvel em ácido lavado foi em seguida pasteurizado a cerca de "am" °C durante "an" minutos. "Ao" kg de "ap" material sólido insolúvel em ácido foi pulverizado a seco para se obter um produto que possa ter um teor de proteína de "aq" por cento (N x 6.25) d.b. O produto foi denominado "x" S810PA. "Ar" kg de material sólido insolúvel em ácido "p" foi elevado em pH para "as" usando uma solução de NaOH/KOH e a amostra seca para se obter um produto que possa ter um teor de proteína de "at" por cento (N x 6,25) d.b. O produto foi denominado "x" S810PN.

[00109] Parâmetros de "a" a "at" são descritos na Tabela 1 que se segue: Tabela 1 - Parâmetros para a produção de produtos

Exemplo 2

[00110] Este Exemplo descreve a preparação de produtos de proteína da soja de acordo com uma modalidade do método da presente invenção.

[00111] "A" kg de flocos de soja desengordurados foi adicionado a "b" L de água purificada de osmose reversa (RO) e o pH foi ajustado para um alvo de 7,5 com solução de NaOH (50 por cento peso/peso) e uma solução de HCl, conforme necessário. A mistura foi agitada a cerca de 60°C durante 30 minutos para proporcionar uma solução de proteína aquosa. O pH foi verificado e corrigido para cerca de 7,5 periodicamente ao longo do tempo de extração. Sólidos em suspensão mais grosseiros foram removidos por centrifugação usando uma centrífuga de decantação para proporcionar uma solução de proteína parcialmente purificada com um teor de proteína de "c" por cento em peso, que foi então resfriada até cerca de 20°C. O pH da solução de proteína parcialmente clarificado foi, em seguida, reduzido para um pH alvo de 2,0 por adição de solução de HC1 (22 BÉ HC1 diluído com um volume igual de água) e a solução foi centrifugada usando uma centrífuga de discos empilhados para proporcionar "d" L de solução proteica acidificada possuindo um pH "e", bem como "f" kg de material sólido insolúvel em ácido.

[00112] O "f" kg de material sólido insolúvel em ácido foi misturado com "g" em litros de água RO a pH 2 e, em seguida, a amostra centrifugada utilizando uma centrífuga de discos empilhados para proporcionar "h" em litros de solução de lavagem acidificada possuindo um pH, "i" bem como "j" kg de material sólido insolúvel lavado em ácido.

[00113] "K" em litros de solução de proteína acidificada foi combinado com a T em litros de solução de lavagem acidificada para fornecer a solução de alimentação da membrana. A solução de alimentação da membrana, com um teor de proteína de "m" por cento em peso, foi aquecida, em seguida, reduzida em volume a partir "n" em litros para "o" em litros por concentração em uma membrana de poliéter sulfona tendo um peso molecular de corte de 100.000 Dalton, operado a uma temperatura de cerca de "p" °C. A solução concentrada de proteína, com um teor de proteína de "q" por cento em peso, foi diafiltrada na mesma membrana com "r" em litro de água RO a cerca de pH "s", com a operação de diafiltração conduzida a cerca de "t" °C. A solução de proteína diafiltrada, tendo um teor de proteína de "u" por cento em peso foi então ainda concentrada até um teor de proteína de "v" por cento em peso. "W" de solução de proteína diafiltrada e concentrada foi obtido e representou um rendimento de "x" por cento da proteína na solução de proteína parcialmente purificada. "Y" de solução de proteína diafiltrada e concentrada foi diluída com "z" em litros de água e a solução, tendo um pH de "aa" foi seca por pulverização para produzir um produto verificado como apresentando um teor de proteína de "ab" por cento (N x 6,25) d.b. O produto foi denominado "ac" S810A. "Ad" de solução de proteína diafiltrada e concentrada foi ajustado para pH "ae" utilizando solução de NaOH/KOH. A solução concentrada e diafiltrada de pH ajustado foi diluída com "af" litros de água e a solução, com um pH de "ag" foi seca por pulverização para produzir um produto que possa ter um teor de proteína de "ah" por cento (N x 6,25) d.b. O produto foi denominado "ac" S810N.

[00114] "J" kg de material sólido insolúvel em ácido lavado foi diluído com "ai" kg de água e depois pasteurizado a cerca "aj" °C por "ak" segundos. O material ácido insolúvel em sólido "ai" coletado tinha um teor de proteína de "am" por cento em peso e representou um rendimento "an" por cento da proteína na solução de proteína parcialmente purificada. Material sólido insolúvel em ácido "al" teve o pH elevado para "ao" usando uma solução de NaOH/KOH e a amostra foi seca por pulverização para se obter um produto que foi verificado como tendo um teor de proteína de "p" por cento (N x 6,25) d.b. O produto foi denominado "ac" S810PN.

[00115] Parâmetros "a" a "ap" são descritos na Tabela 2 que se segue: Tabela 2 - Parâmetros para a produção de produtos S810

Exemplo 3

[00116] Este Exemplo ilustra um procedimento para efetivação de outra modalidade da presente invenção.

[00117] "A" kg de flocos de soja desengordurados foi adicionado a "b" L de água (RO) purificada por osmose reversa, juntamente com uma solução de NaOH suficiente para ajustar o pH para um alvo de 7,5. A mistura foi agitada a cerca de 60°C durante 15 minutos para proporcionar uma solução de proteína aquosa. O pH foi verificado e corrigido para cerca de 7,5 periodicamente ao longo do tempo de extração.

[00118] Sólidos em suspensão mais grosseiros foram removidos por centrifugação usando uma centrífuga de decantação. A solução parcialmente purificada resultante, com um teor de proteína de "c" por cento em peso foi diluída com "d" L de água RO e em seguida resfriada até aproximadamente 20°C. O pH da solução de proteína foi então reduzido a um alvo de pH 2,0 por adição de uma solução de HCl (22BÉ) e a solução foi centrifugada usando uma centrífuga de pilha de discos para proporcionar "e" L de solução de proteína acidificada possuindo um pH de "f".

[00119] A solução de proteína acidificada tendo um teor de proteína de "g" por cento em peso foi aquecida, em seguida, reduzida em volume a partir de "h" em L a cerca de "i" em L por concentração em uma membrana de poliéter sulfona (PES), tendo um corte de peso molecular de 100.000 Dalton, operando a uma temperatura de cerca de "j" °C. Concomitante com a etapa de concentração, a solução de proteína acidificada foi diafiltrada com "k" de água purificada em osmose inversa. A eficiência de diafiltração foi calculada em pontos ao longo da etapa de diafiltração e concentração. A solução de proteína concentrada e diafiltrada foi capturada em bateladas, cada uma tendo uma concentração de proteína de cerca de "l" por cento em peso. Tomados em conjunto, a solução de proteína diafiltrada e concentrada representou um rendimento de "m" por cento da proteína na solução de extrato parcialmente purificada.

[00120] Uma alíquota "n" em kg da solução de proteína diafiltrada e concentrada processado com uma eficiência de diafiltração de aproximadamente "o" X foi diluída com "p" L de água RO e seca por pulverização para render um produto tendo um teor de proteína de "q" por cento (N x 6,25) d.b. O produto foi denominado "r" "s".

[00121] Uma segunda alíquota "t" kg de solução de proteína diafiltrada, concentrada e processada com uma eficiência de diafiltração de cerca de "u" X foi diluída com "v" L de água de osmose inversa e seca por pulverização para produzir um produto tendo um teor de proteína de "w" por cento (N x 6,25) d.b. O produto foi designado como "r" "x".Tabela 3 - Parâmetros para a fabricação de produtos S810

Exemplo 4

[00122] Este Exemplo descreve a produção de produtos de proteína da soja de acordo com os métodos das Patentes US números 8.563.071 e 8.691.318 e Pedido de Patente US número 13/879.418 arquivado 1° de agosto de 2013 (Publicação de Patente US número 2013-0316069 publicada em 28 de novembro, 2013) ("S701").

[00123] "A" kg de "b" foi combinado com "c" L de "d" solução de M CaC12 em "e" e agitado por "f" minutos para fornecer uma solução aquosa de proteína. A maior parte dos sólidos residuais foi removida e a solução de proteína resultante foi parcialmente purificada por centrifugação com uma centrífuga decantadora. A esse centrifugado foi adicionado "g" g de antiespuma e, em seguida, a amostra foi ainda purificada através de centrifugação com uma centrífuga de discos empilhados para fornecer "h" L de centrifugado com um teor de proteína "I" por cento em peso. A amostra foi adicionalmente purificada por filtração para prover "j" L de solução de proteína com um teor de proteína de "k" por cento em peso.

[00124] "I" L de solução de proteína purificada foi então adicionado a "M" L de água de osmose inversa purificada e o pH da amostra reduzido a "n" com HC1 diluído.

[00125] A solução de extrato de proteína diluída e acidificada foi reduzida em volume de "o" L para "p" L por concentração em uma membrana de poliéter sulfona (PES) com um corte de peso molecular de "q" Dalton, operado a uma temperatura de cerca de "r" °C. A solução acidificada de proteína, com um teor de proteína de "s" por cento em peso foi diafiltrada com "t" L de água de osmose inversa purificada, com a operação de diafiltração conduzida a cerca de "u" °C. A solução de proteína diafiltradaresultante era, então, "v". A solução de proteína concentrada e diafiltrada, tendo um teor de proteína de "w" por cento em peso, representou um rendimento de "X" por cento em peso da solução de proteína purificada inicial, "y" kg da solução de proteína concentrada e diafiltrada foi diluído com "z" L de água, em seguida, "aa" kg da amostra foi seco para se obter um produto que foi verificado como apresentando um teor de proteína de "ab" por cento (N x 6,25) d.b. O produto recebeu a denominação "ac" S701.

[00126] Os parâmetros "a" a "ac" para cinco operações são apresentados na Tabela 4 que se segue:Tabela 4 - Parâmetros das operações para produzir S701

Exemplo 5

[00127] Este Exemplo descreve a produção de produtos de proteína da soja de acordo com os métodos do Pedido de Patente acima mencionado US número 13/924.860 arquivado em 24 de junho de 2013 (Publicação do Pedido Patente US número 2014-0010940 de 9 de janeiro de 2014) ("S701N2").

[00128] "A" kg de flocos brancos de soja desengordurada foram combinados com "b" L de "c" de solução de CaC12 M a cerca de 60°C e agitados durante 30 minutos para proporcionar uma solução de proteína aquosa. A maior parte dos flocos de soja residuais foi removida e a solução de proteína resultante foi parcialmente purificada por centrifugação com um decantador centrífugo para produzir "d" L de centrifugado com um teor de proteína de "e" por cento em peso. A este centrifugado foi adicionado "f" g de agente antiespuma misturado com "g" L de água e, em seguida, a amostra foi ainda purificada através de centrifugação com uma centrífuga de discos empilhados para proporcionar "h" L de centrado com um teor de proteína de "i" por cento em peso.

[00129] Este centrifugado foi depois adicionado ao "j" L de água purificada de osmose inversa a 50°C e o pH da amostra reduzido para "k" com HC1 que havia sido diluído 1:1 com água.

[00130] A solução de extrato de proteína diluída e acidificada foi reduzida em volume a partir de "l" L para "m" L por concentração em uma membrana poliéter sulfona (PES), tendo um peso molecular de corte de 100.000 Dalton, operado a uma temperatura de cerca de "n" °C. A solução de proteína foi acidificada, com um teor de proteína de "o" por cento em peso, foi diafiltrada com "p" L de água de osmose inversa purificada, com a operação de diafiltração conduzida a cerca de "q" °C. A solução de proteína diafiltrada resultante foi ainda concentrada para proporcionar uma solução com um teor de proteína de "r" por cento em peso e, em seguida, diluída com água até um teor de proteína de "s" por cento em peso. "T" L da solução de proteína foi então ainda diluída com "u" L água. O pH da solução de proteína foi então ajustado para cerca de "v" com uma solução "w", em seguida, "x". "y" da solução de pH ajustado, com um pH de "z", teor de proteína de "ss" por cento em peso e representando um rendimento de "ab" por cento em peso de pós-centrifugado em pilha de disco que foi seco por pulverização para produzir um produto que foi verificado ter um teor de proteína "ac" por cento em peso (N x 6,25) d.b. O produto recebeu a designação "ad".

[00131] Os valores para os parâmetros de "a" a "ad" em quatro operações são fornecidos na Tabela que se segue.Tabela 5 - Parâmetros das operações para produzir S701N2

Exemplo 6

[00132] Este Exemplo ilustra a solubilidade da proteína dos produtos de proteína da soja preparados sem o uso de sal de acordo com a presente invenção como descrito nos Exemplos 1 a 3, os produtos de proteína da soja preparados com o uso de sal de cálcio, tal como descrito nos Exemplos 4 e 5 e os isolados de proteína de soja comerciais Pro Fam 825 e 875 (ADM, Decatur, IL). A solubilidade foi testada por uma versão modificada do procedimento de Morr e outros, J. Food Sci., 50:1715-1718.

[00133] Proteína em pó suficiente para fornecer 0,5 g de proteína foi pesada em uma proveta e, em seguida, foi adicionada uma pequena quantidade de água purificada por osmose inversa (RO) e a mistura foi agitada até que uma pasta macia fosse formada. Água adicional foi depois adicionada para trazer o volume para aproximadamente 45 mL. Os teores da proveta foram depois lentamente agitados durante 60 minutos, utilizando um agitador magnético. O pH foi determinado imediatamente depois dispersão da proteína e foi ajustado ao nível apropriado (2, 3, 4, 5, 6 ou 7) com NaOH ou HCl diluído. O pH foi medido e corrigido periodicamente durante os 60 minutos de agitação. Após os 60 minutos de agitação, as amostras foram feitas até 50 mL de volume total com água RO, obtendo-se uma dispersão de proteína a 1 por cento em peso/volume. O teor de proteína das dispersões foi medido por análise de combustão utilizando um Determinador de Nitrogênio Leco. Alíquotas das dispersões foram então centrifugadas a 7.800 g durante 10 minutos, o que sedimentou material insolúvel e rendeu um sobrenadante. O teor proteico do sobrenadante foi medido por análise Leco e a solubilidade do produto calculada como se segue:Solubilidade (%) = (% de proteína no sobrenadante/ % de proteína na dispersão inicial) x 100 Valores calculados como sendo superiores a 100% foram reportados como 100%.

[00134] A solubilidade da proteína dos diversos produtos em diferentes valores de pH é mostrada na Tabela 6.Tabela 6 - Solubilidade de produtos de proteína da soja em diferentes valores de pH

[00135] Conforme pode ser visto a partir dos resultados apresentados na Tabela 6, todos os produtos da presente invenção tinham solubilidade limitada na gama de pH de 4-5. Os produtos derivados a partir da solução proteica acidificada foram mais solúveis do que os produtos derivados do material de ácido de sólidos insolúveis a um pH de 2-3 e a um pH de 7.

Exemplo 7

[00136] Este Exemplo ilustra o perfil de peso molecular dos produtos de proteína da soja preparados sem o uso de sal de acordo com a presente invenção como descrito nos Exemplos 1 a 3, os produtos de proteína da soja preparados com o uso de sal de cálcio, tal como descrito nos Exemplos 4 e 5 e o proteína de soja comercial isola Pro Fam 825 e 875 (ADM, Decatur, IL).

[00137] Perfis de peso molecular foram determinados por cromatografia de exclusão de tamanho utilizando um sistema Varian ProStar HPLC equipado com uma coluna Phenomenex BioSep série 300 x 7,8 mm S-2000. A coluna continha meio de suporte rígido de sílica ligado hidrofílico de 5 micra de diâmetro, com 145 Angstrom de tamanho de poro.

[00138] Antes das amostras de proteína da soja serem analisadas, uma curva padrão foi preparada utilizando um padrão de proteína BioRad (BioRad produto #151-1901) que contém proteínas com pesos moleculares conhecidos entre 17.000 Dalton (mioglobulina) e 670.000 Dalton (tiroglobulina) com Vitamina B12 adicionada como um marcador de baixo peso molecular de 1.350 Dalton. Uma solução 0,9% peso/volume do padrão de proteína, foi preparada em água, filtrada com um disco de filtro de tamanho de poro de 0,45, em seguida, uma alíquota de 50 μL operou na coluna usando uma fase móvel de fosfato 0,05 M/NaCl 0,15 M, pH 6, contendo 0,02% de azida de sódio. A vazão da fase móvel foi de 1 mL/min. e os componentes foram detectados com base na absorvância a 280 nm. Com base nos tempos de retenção destas moléculas de peso molecular conhecido, uma fórmula de regressão foi desenvolvida relacionando o log natural do peso molecular para o tempo de retenção em minutos.

[00139] Tempo de retenção (min.) = -0.955 x 1n (peso molecular) + 18,502 (32 = 0,999)

[00140] Para a análise das amostras de proteína da soja, 0,05 M de NaCl, pH 3,5 contendo 00,02% de azida de sódio foi usado como fase móvel e também para dissolver amostras secas. As amostras de proteínas foram misturadas com uma solução de fase móvel a uma concentração a 1% em peso/volume, colocadas num agitador durante pelo menos 1 hora, em seguida filtradas utilizando discos de filtro de tamanho de poro de 0,45 μm. O tamanho de injeção da amostra era de 50 μL. A vazão da fase móvel foi de 1 mL/minuto e os componentes foram detectados com base na absorvância a 280 nm.

[00141] A fórmula de regressão acima relativa ao peso molecular e tempo de retenção foi usada para calcular os tempos de retenção que correspondiam aos pesos moleculares de 100.000 Da, 15.000 Da, 5.000 Da e 1.000 Da. O sistema de HPLC ProStar foi usado para calcular as áreas de pico que se encontram dentro destes intervalos de tempo de retenção e a percentagem de proteína ((área de pico/área de pico total de proteína) x 100) que cai em uma determinada faixa de peso molecular foi calculada. Observe que os dados não foram corrigidos pelo fator de resposta de proteínas.

[00142] Os perfis de peso molecular dos produtos preparados tal como descrito nos Exemplos 1-5 e os produtos comerciais são mostrados na Tabela 8.Tabela 7 - Perfil de proteínas HPLC de vários produtos

[00143] Conforme pode ser visto a partir dos resultados mostrados na Tabela 7, os produtos da presente invenção tinham perfis de peso molecular que eram diferentes dos produtos comerciais testados.

Exemplo 8

[00144] Este exemplo contém uma avaliação do teor de ácido fítico dos produtos de proteína da soja preparados sem o uso de sal de acordo com a presente invenção, como descrito nos Exemplos 1 a 3, os produtos de proteína da soja preparados com o uso de sal de cálcio, tal como descrito nos Exemplos 4 e 5 e isolados de proteína de soja comercial Pro Fam 825 e 875 (ADM, Decatur, IL). Teor de ácido fítico foi determinado utilizando o método de Latta e Eskin (J. Agric. Food Chem, 28: 1313-1315).

[00145] Os resultados obtidos estão expostos na Tabela 8 que se segue. Tabela 8 - Teor de ácido fítico de vários produtos

[00146] Como pode ser visto a partir dos resultados apresentados na Tabela 8, o teor de ácido fítico de todos os produtos da presente invenção foi notavelmente maior do que o teor de ácido fítico dos produtos preparados com sal de cálcio, e também mais elevado do que o teor de ácido fítico da produtos comerciais.

Exemplo 9

[00147] Este exemplo contém uma avaliação da cor em solução e do nível de névoa de soluções dos produtos de proteína da soja preparados sem o uso de sal de acordo com a presente invenção, como descrito nos Exemplos 1 a 3, os produtos de proteína da soja preparados com a utilização de sal de cálcio, tal como descrito nos Exemplos 4 e 5 e isolados de proteína de soja comercial Pro Fam 825 e 875 (ADM, Decatur, IL). As soluções dos produtos de proteína foram preparadas por dissolução de proteína em pó suficiente para fornecer 0,48 g de proteínas em 15 mL de água RO. O pH das soluções foi medido com um medidor de pH e o nível de cor e turvação avaliados usando um instrumento HunterLab ColorQuest XE operado em modo de transmissão. Os resultados são mostrados na Tabela 9 que se segue.Tabela 9 - Valores de cor e turvação para amostras em solução

[00148] Conforme pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 9, os valores L* determinadas para as soluções dos produtos resultantes da solução de proteína acidificada da presente invenção eram mais leves do que as soluções de isolados de proteína de soja comercial.

Exemplo 10

[00149] Este Exemplo contém uma avaliação da capacidade de ligação de água dos produtos de proteína da soja preparados de acordo com a presente invenção sem a utilização de sal, tal como descrito nos Exemplos 1 a 3 e os isolados de proteína de soja comercial Pro Fam 825 e 875 (ADM, Decatur, IL).

[00150] A capacidade dos produtos de ligação de água foi determinada através do seguinte procedimento. A proteína em pó (1 g) foi pesada no interior de tubos de centrifugação (50 mL) de peso conhecido. A esse pó foram adicionados aproximadamente 20 mL de água de osmose inversa purificada (RO) em pH natural. Os teores dos tubos foram misturados usando um misturador de vórtex a uma velocidade moderada durante 1 minuto. As amostras foram incubadas à temperatura ambiente durante 4 minutos, em seguida, misturadas com vórtice durante 30 segundos. Isto foi seguido por incubação à temperatura ambiente durante 4,5 minutos e depois mais 30 segundos de agitação no vórtex. As amostras foram em seguida centrifugadas a 1.000 g durante 15 minutos a 20°C. Após centrifugação, o sobrenadante foi cuidadosamente removido, assegurando-se que todo o material sólido permanecesse no tubo. O tubo de centrifugação foi então pesado novamente e determinou-se o peso da amostra saturada de água.

[00151] A capacidade de ligação da água (WBC) foi calculada como: WBC (mL/g) = (massa de amostra de água saturada - massa da amostra inicial)/(massa da amostra inicial x teor de sólidos total da amostra)

[00152] Os resultados são mostrados na Tabela 10.Tabela 10 - Capacidade de ligação de água dos produtos de proteínas

[00153] Como pode ser visto a partir dos resultados apresentados na Tabela 10, os produtos da presente invenção tinham capacidades de ligação mais elevada de água do que os produtos comerciais avaliados.

Exemplo 11

[00154] Este exemplo é outra ilustração do perfil de peso molecular dos produtos de proteína da soja preparados sem o uso de sal de acordo com a presente invenção como descrito nos Exemplos 1 a 3, os produtos de proteína da soja preparados com o uso de sal de cálcio, tal como descrito nos Exemplos 4 e 5 e os isolados de proteína de soja comercial Pro Fam 825 e 875 (ADM, Decatur, IL).

[00155] Perfis de peso molecular foram determinados por cromatografia de exclusão de tamanhos utilizando um sistema Varian ProStar HPLC equipado com uma coluna Phenomenex BioSep 300 x 7,8 mm série S-2000. A coluna continha meios de suporte rígido de sílica ligados hidrofílicos, 5 micra de diâmetro, com 145 Angstrom de tamanho de poro.

[00156] Antes das amostras de proteína da soja serem analisadas, uma curva padrão foi preparada utilizando um padrão de proteína BioRad (BioRad produto #151-1901) que contém proteínas com pesos moleculares conhecidos entre 17.000 Dalton (mioglobulina) e 670.000 Dalton (tiroglobulina) com Vitamina B12 adicionada como um baixo marcador de peso molecular de 1.350 Dalton. Uma solução de 0,9 por cento peso/volume do padrão de proteína, foi preparada em água, filtrada com um disco de filtro de poro de 0,45 μm poro, em seguida, uma operação de alíquota de 50 μL na coluna usando uma fase móvel de fosfato 0,05 M/NaCl 0,15 M, pH 6, contendo 0,02 por cento de azida de sódio. A vazão da fase móvel foi de 1 mL/min. e os componentes foram detectados com base na absorvância a 280 nm. Com base nos tempos de retenção destas moléculas de peso molecular conhecido, uma fórmula de regressão foi desenvolvida relacionando o log natural do peso molecular com o tempo de retenção em minutos.

[00157] Tempo de retenção (min.) = - 0,865 x 1n (peso molecular 17,154) + (R2 = 0,98)

[00158] Para a análise das amostras de proteína da soja, fosfato 0,05 M/NaCl 0,15 M, pH 6, contendo 0,02 por cento de azida de sódio foi usada como fase móvel e também para dissolver amostras secas. As amostras de proteínas foram misturadas com uma solução de fase móvel a uma concentração a 1% em peso/volume, colocadas num agitador durante pelo menos 1 hora, em seguida, filtradas utilizando discos de filtro de tamanho de poro de 0,45 μm. A quantidade de injeção de amostra era de 50 μL. A vazão da fase móvel foi de 1 mL/minuto e os componentes foram detectados com base na absorvância a 280 nm.

[00159] A fórmula de regressão acima relativa ao peso molecular e tempo de retenção foi usada para calcular os tempos de retenção que correspondiam aos pesos moleculares de 100.000 Da, 15.000 Da, 5.000 Da e 1.000 Da. O sistema de HPLC ProStar foi usado para calcular as áreas de pico que se encontram dentro destes intervalos de tempo de retenção e a percentagem de proteína ((área de pico no intervalo/área de pico total de proteína) x 100) caindo em um determinado intervalo de peso molecular foi calculada. Observe que os dados não foram corrigidos pelo fator de resposta de proteínas.

[00160] Os perfis de peso molecular dos produtos preparados tal como descrito nos Exemplos 1-5 e os produtos comerciais são mostradas na Tabela 11.Tabela 11 - Perfil de proteínas em HPLC de vários produtos

[00161] Conforme pode ser visto a partir dos resultados mostrados na Tabela 11, os produtos da presente invenção tinham perfis de peso molecular que eram diferentes dos produtos comerciais testados.

SUMÁRIO DA DIVULGAÇÃO

[00162] O sumário desta descrição proporciona novos produtos de proteína da soja da invenção de sabor melhorado e métodos para fabricação de produtos de proteína da soja novos e inventivos de sabor melhorado, os quais métodos não envolvem a adição direta e emprego de sais de cálcio ou outros sais de extração da proteína de soja a partir da fonte de proteína da soja ou em qualquer outra etapa do processo. São possíveis modificações dentro do âmbito da presente invenção.

Claims

1. Processo de produção de um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos 60% em peso e pelo menos 90% em peso (N x 6,25) em uma base de peso seco, caracterizado por: (a) extração de uma fonte de proteína da soja com água a um pH de 6 a 11 para causar a solubilização da proteína da soja a partir da fonte de proteína e para formar uma solução aquosa de proteína da soja, (b) separação, pelo menos parcialmente, da solução aquosa de proteína da soja a partir da fonte de proteína da soja residual, (c) ajuste do pH da solução aquosa da proteína da soja a um pH de 1,5 a 3,6, preferencialmente 2,0 a 2,5, para produzir uma solução de proteína da soja acidificada e um material sólido insolúvel em ácido, (d) separação do material sólido insolúvel em ácido a partir da solução de proteína da soja acidificada, (e) concentração opcional da solução de proteína da soja acidificada por uma técnica de membrana seletiva, (f) diafiltração opcional da solução de proteína da soja, opcionalmente centrifugada, e (g) secagem opcional da solução de proteína da soja opcionalmente concentrada e diafiltrada; em que o processo não compreende a adição direta e o uso de cálcio ou outro sal na extração da proteína do material fonte de proteína ou em qualquer outra etapa.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a) o referido material sólido insolúvel em ácido é seco para formar um produto de proteína da soja possuindo um teor de proteína de pelo menos 60% em peso (N x 6,25) em uma base de peso seco; ou b) o pH do material insolúvel em ácido é ajustado para um valor de menos de 8,0, 6,0 a 8,0 ou 6,5 a 7,5, antes da etapa de secagem opcional; ou c) o referido material sólido insolúvel em ácido é lavado por mistura com 1 a 20 volumes de água tendo um pH de 1,5 a 3,6 ou aproximadamente o mesmo que o pH do material insolúvel em ácido, e em seguida, é separado a partir da água de lavagem antes da etapa de secagem opcional.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o pH do material insolúvel lavado em ácido, fornecido pela etapa c) é ajustado para um valor de menos de 8,0, 6,0 a 8,0 ou 6,5 a 7,5, antes da etapa de secagem opcional.

4. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a água de lavagem é combinada com a solução de proteína da soja acidificada da etapa (d) e processada como em pelo menos uma das etapas (e) a (g).

5. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a referida etapa de extração (a) é efetuada a uma temperatura de 1°C a 100°C, 15°C a 65°C, ou 50°C a 60°C; e em que a referida água utilizada para a etapa de extração (a) contém um agente de ajuste de pH de modo que a extração é realizada a um pH de 7 a 8,5; e em que o agente de ajuste do pH é preferencialmente hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou suas combinações; e em que a referida solução aquosa de proteína da soja tem uma concentração de proteína de 5 a 50 g/L ou de 10 a 50 g/L e a referida água de extração contém preferencialmente um antioxidante.

6. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o pH da solução de proteína da soja acidificada opcionalmente concentrada e diafiltrada é ajustado para um valor de menos de 8,0, 6,0 a 8,0 ou 6,5 a 7,5, antes da etapa de secagem (g).

7. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a solução de proteína da soja acidificada concentrada e diafiltrada é sujeita a etapa de secagem (g) de modo a proporcionar um isolado de proteína de soja com um teor em proteína de pelo menos 90% em peso (N x 6,25) d.b.

8. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a referida solução de proteína da soja aquosa acidificada é submetida à etapa de concentração (e) para produzir uma solução de proteína da soja acidificada centrifugada tendo uma concentração de proteína de 50 a 300 g/L ou de 100 a 200 g/L; a referida etapa de concentração (e) sendo efetuada por ultrafiltração utilizando uma membrana com um peso molecular de corte de 1.000 a 1.000.000 Dalton ou de 1000 a 100.000 Dalton; e em que a solução de proteína da soja acidificada, solução de proteína da soja parcialmente acidificada e concentrada ou solução de proteína da soja concentrada e acidificada é opcionalmente submetida à etapa de diafiltração (f); a referida etapa de diafiltração (f) sendo efetuada usando água ou água acidificada, usando volumes de solução de diafiltração de 1 a 40 volumes ou de 2 a 25 volumes, preferencialmente até que nenhuma quantidade significativa de contaminantes ou de cor visível esteja presente no permeado, e/ou até que o retentado tenha sido suficientemente purificado, de modo a proporcionar uma proteína isolada de soja com um teor em proteína de pelo menos 90% em peso (N x 6,25) d.b; a referida etapa de diafiltração (f) sendo efetuada usando uma membrana com um peso molecular de corte de 1.000 a 1.000.000 Dalton ou de 1.000 a 100.000 Dalton com um antioxidante preferencialmente estando presente no meio de diafiltração durante pelo menos parte da etapa de diafiltração (f); a referida etapa de concentração (e) e a etapa de diafiltração (f) preferencialmente sendo efetuadas a uma temperatura de 2°C a 65°C ou de 50°C a 60°C.