BR112015030523B1

BR112015030523B1 - Produto para regular a fitossanidade, método para obter o dito produto e uso do mesmo

Info

Publication number: BR112015030523B1
Application number: BR112015030523-7A
Authority: BR
Inventors: Jóse Helenio Juanes Peris; Luis Juanes Peris; Roberto Ramos Ruiz; Margarita Parra Álvarez; Salvador Gil Grau
Original assignee: Servalesa, S.L.
Priority date: 2013-06-05
Filing date: 2013-06-05
Publication date: 2019-06-18
Also published as: AR096540A1; ES2624200T3; UY35598A; EP3005872B1; WO2014195525A1; HUE034730T2; EP3005872A1; PL3005872T3; BR112015030523A2; HRP20170582T1; RS56053B1; CY1118919T1; PT3005872T

Abstract

resumo da patente de invenção para: “produto para regular a fitossanidade, método para obter o dito produto e uso do mesmo”. a invenção se refere a uma composição para uso agrícola compreendendo um ingrediente ativo consistindo em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre 1 e 10. a invenção também se refere a um método para preparar a dita composição e a um método para aplicação da mesma. esta composição induz e estimula os mecanismos de defesa das plantas contra danos causados por agentes patogênicos (estresse biótico) e por seca, temperaturas altas e baixas, salinidade, metais pesados, radiações ultravioleta, acidez do solo, etc. (estresse abiótico). esta composição ativa ainda mais os mecanismos que causam o desenvolvimento vegetativo, promovendo uma melhora geral na vegetação e saúde da cultura, com muito pouco ou nenhum impacto ambiental.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: “PRODUTO PARA REGULAR A FITOSSANIDADE, MÉTODO PARA OBTER O DITO PRODUTO E USO DO MESMO”.

Campo da Invenção [001] A invenção se refere ao campo dos produtos para uso agrícola. Em particular, a invenção se refere a um produto para regular a fitossanidade, que é eficaz contra ambos os estresses biótico e abiótico em plantas e, ao mesmo tempo, promove uma melhora geral na vegetação e saúde da cultura. Antecedentes da Invenção [002] Há, atualmente, grande preocupação com a disponibilidade suficiente de alimentos para uma população mundial em constante crescimento. O objetivo é claro: a produção agrícola terá de ser duplicada até o ano de 2050 para atender às necessidades alimentares da população mundial.

[003] A indústria agroquímica tem feito grandes esforços para introduzir novos produtos no mercado para controlar pragas, doenças e ervas daninhas, mas o nível de concorrência desses fatores de estresse biótico ainda é alto, o que limita a quantidade e a qualidade das culturas. A introdução no mercado de um novo produto fitossanitário sintético envolve um processo longo e extremamente caro. Os requisitos quanto aos estudos toxicológicos, estudos ecotoxicológicos, estudos de impacto ambiental, estudos de resíduos, etc., limitam a capacidade das empresas para desenvolver novas substâncias ativas.

[004] Além da importância do impacto negativo de fatores de estresse biótico na produção agrícola, de uma perspectiva global, o papel limitante dos fatores que causam estresse abiótico são ainda muito mais importantes. Fatores como a seca, salinidade, acidez, temperaturas baixas e altas, escassez de água, radiações UV, metais pesados, etc., resultam em quase toda a área cultivada estar em condições subótimas para o crescimento vegetal, mesmo em países com agricultura desenvolvida.

[005] O objetivo do aprimoramento da cultura global (CE) deve ser uma

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 5/43

2/30 parte importante da Gestão Integrada da Saúde Vegetal. Nesse sentido, têm sido propostos novos produtos fitossanitários que são eficazes para o controle do estresse biótico e abiótico.

[006] Produtos orgânicos à base de cobre foram propostos, recentemente, como uma alternativa aos produtos inorgânicos à base de cobre, que têm um grande impacto ambiental. Deste modo, foi descrito um produto orgânico de cobre, para controlar agentes patogênicos de plantas, com base em uma combinação de complexos de cobre monoméricos e poliméricos, tais como pectinatos ou poligalacturonatos (ES 2.231.015 B1). O dito produto, no entanto, tem uma estabilidade físico-química baixa, o que provoca a formação de sólidos em suspensão e, portanto, uma eficácia agronômica inferior do mesmo. Também existem no mercado produtos que contêm heptagluconato de cobre (Hydromix, Alibio Biomix, Dabquel mix, etc.) de origem sintética, portanto, no seu processo de síntese, eles incorporam matéria inerte que, mais tarde, passa para a formulação final.

[007] Por outro lado, o documento ES 2303809B2 descreve uma composição contendo uma mistura de monogalacturonato de cobre e monogluconato de cobre como um ingrediente ativo. Embora a dita composição seja mais eficaz contra os agentes patogênicos de plantas e seja mais inócua do que a primeira, ela contém íons de cobre que podem precipitar na presença de gluconatos e galacturonatos, de modo que a quantidade de cobre solúvel e, portanto, a sua eficácia real, é reduzida.

[008] Por outro lado, são conhecidos, no estado da técnica, vários compostos fortificantes vegetais, para aumentar o vigor e a saúde da cultura, de modo que esta tenha um crescimento mais equilibrado, se desenvolva e produza melhor e para aumentar ainda mais as suas defesas para o controle de pragas e doenças. Estes compostos fortificantes vegetais ou bioestimulantes, geralmente, são de origem natural, obtidos ou a partir de agentes patogênicos ou a partir de material vegetal, tais como aminoácidos, glicosídeos, proteínas, extratos de algas, etc. Assim, por exemplo, extratos de

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 6/43

3/30 algas têm sido usados para promover o crescimento da mandarina e da laranja (Fornes et al., 2002, “Effect of a seaweed extract on the productivity of ‘de Nules' clementine mandarin and Navelina orange”, Botanica Marina 45:486489), ou o crescimento da pimenta (Arthur et al., 2003, “Effect of a seaweed concentrate on the growth and yield of three varieties of Capsicum annum, South African Journal of Botany 69, 207-211).

[009] Os presentes inventores descobriram uma composição para proteção vegetal a base de oligogalacturonatos de baixo peso molecular, que não incluem cobre e induzem e estimulam mecanismos de defesa nas plantas contra os danos causados por agentes patogênicos (estresse biótico) e por vários fatores adversos que causam estresse abiótico. Esta composição, adicionalmente, aumenta o vigor e a saúde da planta tratada.

[010] Neste contexto, a composição da invenção deve ser considerada um produto que regula a saúde vegetal, sendo a sua contribuição, portanto, fundamental para atingir os objetivos da chamada Segunda Revolução Verde, que pretende dobrar a produção de alimentos a partir de agora até o ano 2050. [011] Objeto da Invenção [012] Portanto, o objeto da presente invenção é proporcionar uma composição para uso agrícola, compreendendo um ingrediente ativo consistindo em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre 1 e 10.

[013] Outro objeto da presente invenção consiste em proporcionar um método para a preparação da dita composição.

[014] Outro objeto da presente invenção também é proporcionar um método para induzir uma resposta ao estresse biótico e/ou para induzir uma resposta ao estresse abiótico em plantas adequadas ao cultivo, bem como para induzir e estimular a autodefesa destas e/ou para aumentar seu vigor e saúde, que compreende aplicar a dita composição às plantas adequadas ao cultivo. [015] Descrição dos Desenhos [016] A Figura 1 mostra a aparência de plantas de Arabidopsis thaliana,

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 7/43

4/30 com 6 semanas de idade, submetidas à estresse hídrico e tratadas a cada 15 dias, após 15 dias de idade, com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM), uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (SVL-303) e uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (SVL-081).

[017] A Figura 2 mostra a aparência das folhas de plantas de pimenta com 4,5 meses de idade, submetidas à estresse hídrico 13 dias após o tratamento com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM), uma composição de sulfato de cobre penta-hidratado (aplicada em doses que fornecem o mesmo Cu que a composição SVL-081), uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (SVL303) e uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (SVL-081).

[018] A Figura 3 mostra a aparência das folhas de plantas de pimenta com 4,5 meses de idade, submetidas à estresse hídrico e tratadas a cada 15 dias, após 21 dias de idade, com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM), uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (SVL-303) e uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (SVL-081).

[019] A Figura 4 mostra o peso e altura de plantas de pimenta com 4,5 meses de idade, submetidas à estresse hídrico e tratadas a cada 15 dias, após 21 dias de idade, com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM), uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (SVL-303) e uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (SVL-081). N=1.

[020] A Figura 5 mostra a percentagem de perda de água em folhas de plantas de pimenta com 4,5 meses de idade, submetidas à estresse hídrico e tratadas a cada 15 dias, após 21 dias de idade, com uma composição de

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 8/43

5/30 oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM), uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (SVL303) e uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (SVL-081). N=10.

[021] A Figura 6 mostra a percentagem média de plantas de tomate afetadas pelo frio em plantas não tratadas (T1) e em plantas submetidas a um tratamento com uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (T2-SVL-081), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3SVL-303), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL-320) e com um produto do estado da técnica que induz defesas contra o estresse (T5).

[022] A Figura 7 mostra a percentagem média de plantas de tomate afetadas pelo frio, com relação à amostra submetida a um tratamento com uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (T2-SVL-081), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3-SVL-303), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL-320) e com um produto do estado da técnica que induz defesas contra o estresse (T5).

[023] A Figura 8 mostra o número médio de folhas infectadas com Phytophthora infestans em plantas de tomate não tratadas (T1) e em plantas de tomate submetidas a um tratamento com uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (T2-SVL-081), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3-SVL-303), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL-320) e com um produto do estado da técnica que induz defesas contra o estresse (T5).

[024] A Figura 9 mostra o número médio de plantas infectadas com Phytophthora infestans em plantas de tomate não tratadas (T1) e em plantas

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 9/43

6/30 de tomate submetidas a um tratamento com uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (T2-SVL-081), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3-SVL-303), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL-320) e com um produto do estado da técnica que induz defesas contra o estresse (T5).

[025] A Figura 10 mostra o número médio de plantas infectadas com Phytophthora infestans em plantas de tomate não tratadas (T1) e em plantas de tomate submetidas a um tratamento com uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (T2-SVL-081), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3-SVL-303), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL-320) e com um produto do estado da técnica que induz defesas contra o estresse (T5).

[026] A Figura 11 mostra o número médio de plantas mortas por Phytophthora infestans em plantas de tomate não tratadas (T1) e em plantas de tomate submetidas a um tratamento com uma composição comparativa de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu (T2-SVL-081), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3-SVL-303), com uma composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL-320) e com um produto do estado da técnica que induz defesas contra o estresse (T5).

[027] Descrição Detalhada da Invenção [028] A presente invenção proporciona uma composição para uso agrícola, daqui em diante denominada composição da invenção, compreendendo um ingrediente ativo consistindo em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre 1 e 10.

[029] No contexto da invenção, o termo mistura de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 10/43

7/30 e 10 se refere a uma mistura formada por alguns ou todos os seguintes: monômeros, dímeros, trímeros, tetrâmeros, etc., até decâmeros do ácido galacturônico.

[030] Em uma forma de realização particular da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre 1 e 8. Em outra forma de realização particular da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre 4 e 8. Em uma forma de realização preferida da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre 1 e 4.

[031] Em outra forma de realização particular, a composição da invenção compreende 0,1 a 10 % em peso de ingrediente ativo, em relação ao peso total da composição. Em uma forma de realização preferida, a composição da invenção compreende 0,5 a 5 % em peso de ingrediente ativo, em relação ao peso total da composição. Em uma forma de realização ainda mais preferida, a composição da invenção compreende 2 % em peso de ingrediente ativo, em relação ao peso total da composição.

[032] Em outra forma de realização particular da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 1 e 10. Em uma forma de realização preferida, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe e misturas destes, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 1 e 10. Em uma forma de realização ainda mais preferida, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 11/43

8/30 galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Fe e uma mistura de Zn e Mn, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 1 e 10.

[033] Estes metais foram selecionados devido ao seu caráter de ativação fisiológica. O papel destes metais como ativadores fisiológicos é amplamente reconhecido e descrito na literatura. Além disso, ao contrário do cobre que foi usado anteriormente, os seus efeitos fitotóxicos nas concentrações propostas para uso agrícola são praticamente nulos, porque as faixas de tolerância da maioria das plantas cultivadas com relação a estes são muito maiores do que aquelas para o cobre.

[034] Em outra forma de realização particular da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 1 e 4. Em outra forma de realização particular da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 4 e 10. Em outra forma de realização particular da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 4 e 8.

[035] Em uma forma de realização preferida da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe e misturas destes, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 1 e 4. Em outra forma de realização preferida da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 12/43

9/30 selecionado dentre Zn, Mn, Fe e misturas destes, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 4 e 10. Em outra forma de realização preferida da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe e misturas destes, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 4 e 8.

[036] Em uma forma de realização ainda mais preferida da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Fe e uma mistura de Zn e Mn, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 1 e 4. Em outra forma de realização ainda mais preferida da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Fe e uma mistura de Zn e Mn, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 4 e 10. Em outra forma de realização ainda mais preferida da composição da invenção, o ingrediente ativo consiste em uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Fe e uma mistura de Zn e Mn, em que o número de moléculas de ácido galacturônico varia entre 4 e 8.

[037] Em outra forma de realização particular, a composição da invenção compreende 0,1 a 20 % em peso de metal, em relação ao peso total da composição. Em uma forma de realização preferida, a composição da invenção compreende 1 a 10 % em peso de metal, em relação ao peso total da composição. Em uma forma de realização ainda mais preferida, a composição da invenção compreende 2 a 8 % em peso de metal, em relação ao peso total da composição. Assim, por exemplo, no caso do uso do Fe como metal de transição, a composição compreenderá, de preferência, 2 a 5 % em peso deste metal, de preferência, 3,5 %. Da mesma forma, no caso do uso de misturas de Mn e Zn, a composição compreenderá, de preferência, 2 a 6 % em peso da cada um destes metais, de preferência, 3 %.

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 13/43

10/30 [038] Além do ingrediente ativo descrito anteriormente, a composição da invenção pode conter outros componentes ou aditivos que facilitem a sua formulação para a aplicação posterior. Portanto, em outra forma de realização particular da composição da invenção, a composição compreende um ou mais aditivos conhecidos por um técnico no assunto, tais como agentes complexantes e estabilizadores, por exemplo. Portanto, qualquer composto com propriedades de estabilização do estado da técnica, tais como EDTA, ureia ou maltodextrina, por exemplo, pode ser usado como um estabilizador. Do mesmo modo, qualquer composto com propriedades complexantes do estado da técnica, tal como um gluconato, por exemplo, de preferência gluconato de sódio, pode ser usado como um agente de complexação. O gluconato usado na composição da invenção é um gluconato disponível comercialmente, que é praticamente puro, com um grau de pureza da ordem de 99 %, o que, ao contrário das patentes anteriores ES 2.231.015 B1 e ES 2.303.809 B2, não é obtido simultaneamente aos galacturonatos de pectinas, mas ao contrário, é adicionado subsequentemente à composição como um aditivo, para aumentar a solubilidade e a estabilidade desta.

[039] Em uma forma de realização particular, a composição da invenção compreende 18 a 22 % em peso de gluconato, em relação ao peso total da composição. Em uma forma de realização preferida, a composição da invenção compreende 20 % em peso de gluconato, em relação ao peso total da composição. Em outra forma de realização particular, a composição da invenção compreende 0,5 a 10 % em peso de EDTA, em relação ao peso total da composição. Em outra forma de realização particular, a composição da invenção compreende 1 a 20 % em peso de ureia, em relação ao peso total da composição. Em outra forma de realização particular, a composição da invenção compreende 0,5 a 10 % em peso de maltodextrina, em relação ao peso total da composição. Em uma forma de realização preferida, a composição da invenção compreende 4 % em peso de EDTA, em relação ao peso total da composição. Em uma forma de realização preferida, a

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 14/43

11/30 composição da invenção compreende 10 % em peso de ureia, em relação ao peso total da composição. Em uma forma de realização preferida, a composição da invenção compreende 2 % em peso de maltodextrina, em relação ao peso total da composição.

[040] Em outro aspecto, a invenção proporciona um método para a preparação da composição da invenção descrita acima, daqui em diante frente denominado método da invenção, compreendendo as etapas de:

[041] dissolver 10 a 25 % em peso de pectina, com relação ao peso total da composição final, em um álcool inferior a uma temperatura de 55 a 70 °C e adicionar 1 a 5 % em volume de um ácido forte, com relação ao volume total da composição final;

[042] filtrar a solução obtida na etapa (a) para separar uma fração líquida e um resíduo sólido; e [043] submeter a fração líquida obtida na etapa (b) à destilação fracionada para obter uma solução de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre 1 e 10.

[044] A pectina da etapa (a) é uma pectina alimentícia de frutas (fundamentalmente maça, pêssego e frutos cítricos), que é dissolvida em um álcool inferior. No contexto da invenção, o termo álcool inferior se refere a um álcool com 1 a 4 átomos de carbono, tal como metanol, etanol ou álcool isopropílico, por exemplo; de preferência metanol.

[045] A dita solução é preparada a uma temperatura apropriada, da ordem de 55 a 70 °C e com agitação, em um reator fechado com agitação ou em outro dispositivo adequado do estado da técnica. Em seguida, são é adicionado 1 a 5 % em volume de um ácido forte, com relação ao volume total da composição final. O dito ácido forte pode ser ácido clorídrico, ácido fosfórico ou ácido sulfúrico, de preferência ácido clorídrico. A agitação, então, é mantida durante o tempo necessário para que ocorra a reação completa, o que será da ordem de 24 horas. As condições descritas de temperatura elevada, baixo pH e tempo de agitação prolongado, causam uma hidrólise quase completa dos polímeros

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 15/43

12/30 de pectina, com a obtenção de oligômeros de ácido galacturônico de baixo peso molecular com 1 a 10 unidades de ácido galacturônico.

[046] Ao realizar esta reação na presença de metanol como um álcool inferior, por exemplo, o ácido galacturônico é metilado, ao contrário da síntese clássica, em que ocorre a hidrólise ácida (Singthong et al., Food Hydrocolloids 19 (5): 793-801). Esta diferença pode dar origem à atividade da composição da invenção, embora a invenção não pretenda aderir a uma teoria em particular. Além disso, uma vez que o álcool bloqueia a extremidade redutora das moléculas de ácido galacturônico, o potencial de redução do metal destas diminui, o que é claramente vantajoso no caso da esterificação dos oligômeros de ácido galacturônico da composição da invenção com um metal de transição. [047] Em uma forma de realização preferida do método da invenção, na etapa (a) são dissolvidos 14 % em peso de pectina, com relação ao peso total da composição final, em metanol a uma temperatura de 65 °C e são adicionados 1,9 % em volume de ácido clorídrico, com relação ao volume total da composição final.

[048] A filtração na etapa (b) pode ser realizada de acordo com qualquer método adequado do estado da técnica. Da forma semelhante, a destilação fracionada da etapa (c) pode ser realizada de acordo com qualquer método adequado do estado da técnica, a ser determinado por um técnico no assunto.

[049] Em uma forma de realização particular do método da invenção, o método compreende uma etapa adicional na qual a solução obtida na etapa (c) é aquecida até à secura para a obtenção de um pó de oligogalacturonato. Em outra forma de realização particular do método da invenção, o método compreende uma etapa adicional na qual um sal solúvel do metal de transição, selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes, é adicionado a uma solução aquosa do pó de oligogalacturonato obtido anteriormente, para a obtenção de uma solução de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com o dito metal de transição. Em uma forma de realização preferida, o metal de transição é selecionado dentre Fe e uma mistura de Zn e Mn. Em uma

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 16/43

13/30 forma de realização ainda mais preferida, o metal de transição é selecionado dentre Fe e uma mistura de Zn e Mn. Qualquer sal, que um técnico no assunto considere adequado, pode ser usado como um sal solúvel do metal de transição selecionado. Em uma forma de realização particular do método da invenção, o sal solúvel do metal de transição é um sulfato, um acetato, um cloreto, um carbonato ou um óxido.

[050] Em outra forma de realização particular do método da invenção, o método compreende uma etapa adicional na qual um sal solúvel do metal de transição, selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes, é adicionado à solução obtida na etapa (c) para a obtenção de uma solução de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com o dito metal de transição. Em uma forma de realização preferida, o metal de transição é selecionado dentre Zn, Mn, Fe e misturas destes. Em uma forma de realização ainda mais preferida, o metal de transição é selecionado dentre Fe e uma mistura de Zn e Mn. Qualquer sal, que um técnico no assunto considere adequado, pode ser usado como um sal solúvel do metal de transição selecionado. Em uma forma de realização particular do método da invenção, o sal solúvel do metal de transição é um sulfato, um acetato, um cloreto, um carbonato ou um óxido.

[051] Em outra forma de realização particular do método da invenção, o método compreende uma etapa subsequente na qual aditivos são adicionados à solução resultante de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes, obtida de acordo com um dos dois parágrafos anteriores.

[052] Conforme mencionado anteriormente, os ditos aditivos podem ser estabilizadores ou agentes complexantes, tais como EDTA, ureia, maltodextrina ou gluconato, por exemplo. Portanto, em uma forma de realização preferida do método da invenção, o aditivo é selecionado é um gluconato, de preferência gluconato de sódio.

[053] Quando o aditivo adicionado é um gluconato, os íons dos metais de transição selecionados são reduzidos a um menor grau pela composição de

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 17/43

14/30 galacturonatos da invenção, conforme mencionado anteriormente, ao contrário dos íons de cobre usados nas outras patentes pertencentes aos mesmos autores, que precipitam em uma proporção maior como cobre metálico, reduzindo assim a quantidade efetiva de metal disponível em solução e gerando problemas de resíduos.

[054] A composição da invenção assim obtida será aplicada por fertirrigação ou por pulverização foliar, em doses adequadas de acordo com as culturas, períodos vegetativos e outras circunstâncias não especificadas, alcançando, assim, a ação sistêmica do ingrediente ativo.

[055] Na pulverização foliar, a dose necessária da composição da invenção é dissolvida em uma quantidade suficiente de água para facilitar a distribuição uniforme do produto na cultura. A calibração correta dos equipamentos usados para a aplicação deve ser assegurada.

[056] Os padrões usuais aplicados nos tratamentos de fertirrigação serão seguidos na aplicação através do sistema de irrigação.

[057] Conforme indicado, a composição da invenção pode ser usada pela sua aplicação sobre as folhas das plantas ou através de irrigação, porque o seu efeito é mostrado igualmente por meio de mecanismos de resistência química adquirida e processos de defesa sistêmicos e naturais da planta. Isto significa que não é necessário cobrir completamente a árvore na aplicação foliar, simplificando, assim, o trabalho do agricultor. Com efeito, dado que o seu mecanismo de ação se move através da planta e que o próprio produto é sistêmico, não é necessária uma aplicação maciça, tal como a usada para os produtos de cobre convencionais, para a obtenção de um resultado adequado. Além disso, a possibilidade de ser usada na irrigação, além do conforto óbvio da aplicação, introduz uma variável de segurança mais alta, porque não tem nenhum impacto sobre a fauna útil. Como os diversos testes realizados mostram, não foram observados efeitos adversos em artrópodes úteis. O risco para organismos não alvo é considerado insignificante. Do mesmo modo, devido ao seu modo de ação específico, o potencial para criar resistências é

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 18/43

15/30 extremamente baixo. Em contraste, a composição da invenção pode ser parte de um plano de tratamento para limitar a ocorrência de resistências a fungicidas específicos.

[058] No mesmo sentido, a composição da invenção não apresenta riscos de acumulação de resíduos nas culturas ou nos produtos derivados (óleos, vinhos, etc.).

[059] A composição da invenção não apresenta riscos de fitotoxicidade, nem é tóxica para quem a aplica. Devido ás características da formulação, a composição da invenção tem um perfil toxicológico muito favorável, o que é uma vantagem evidente com relação à maioria das formulações usadas como fungicidas, particularmente com relação aos produtos à base de cobre.

[060] Por outro lado, a composição da invenção é eficaz para evitar os danos causados por fatores de estresse biótico, tais como agentes patogênicos, visto que atua sobre a planta de forma a induzir, na mesma, mecanismos de defesa contra o agente patogênico. A dita composição também apresenta uma eficácia excelente para a prevenção de danos causados por diversos fatores adversos que causam estresse abiótico em plantas. Ela também ativa os mecanismos que causam o desenvolvimento vegetativo, promovendo, portanto, uma melhora geral na vegetação e saúde da cultura. Deve ser destacado, adicionalmente, o fato de ser um produto natural, com muito pouco ou nenhum impacto ambiental, seguro para os usuários, para o meio ambiente e para os consumidores, conforme mencionado anteriormente.

[061] Em resumo, as vantagens da composição da invenção são as seguintes:

[062] - É um produto natural [063] - Aumenta a qualidade geral da cultura [064] - Confere resistência tanto ao estresse biótico como ao abiótico [065] - Tem um modo de ação baseado em um efeito desencadeador [066] - Em função da sua atividade, danos causados por agentes patogênicos são impossíveis

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 19/43

16/30 [067] - É um produto seguro para os usuários [068] - É um produto seguro para o meio ambiente [069] - É um produto seguro para os consumidores finais [070] - Tem muito pouco ou nenhum problema de resíduo [071] Portanto, em outro aspecto, a invenção proporciona um método para induzir uma resposta ao estresse biótico em plantas adequadas para o cultivo, que compreende a aplicação da composição descrita acima a tais plantas, por meio de fertirrigação ou pulverização foliar. Em uma forma de realização particular, a invenção proporciona um método para prevenir ou reduzir os danos causados por agentes patogênicos em plantas adequadas para o cultivo. [072] A composição da invenção permite atenuar os danos que podem causar doenças induzidas por agentes patogênicos fúngicos, Oomycetes e bactérias.

[073] A composição da invenção favorece a catálise da biossíntese de polifenóis e fitoalexinas, substâncias produzidas como um mecanismo de defesa natural em plantas, que são tóxicas para fungos e bactérias e por isso limita a propagação do agente patogênico. A composição da invenção atua, portanto, como um agente fungistático, antifúngico e bacteriostático, ao mesmo tempo em que gera autodefesa contra doenças de origem bacteriana ou fúngica.

[074] A invenção também proporciona um método para induzir uma resposta ao estresse abiótico em plantas adequadas para o cultivo, que compreende a aplicação, a tais plantas, da composição descrita acima por meio de fertirrigação ou pulverização foliar. Em uma forma de realização particular, a invenção proporciona um método para prevenir ou reduzir os danos causados pela seca, temperaturas elevadas, temperaturas baixas, salinidade, metais pesados, radiação ultravioleta e/ou acidez do solo. Em uma forma de realização preferida, a invenção proporciona um método para prevenir ou reduzir os danos causados pela seca, temperaturas elevadas e/ou temperaturas baixas.

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 20/43

17/30 [075] Da forma semelhante, em outro aspecto da invenção, é proporcionado um método para aumentar o vigor e a saúde de plantas adequadas para o cultivo, caracterizado pelo fato de compreender a aplicação, a tais plantas, da composição da invenção descrita acima, por meio de fertirrigação ou pulverização foliar.

[076] A composição da presente invenção favorece a fotossíntese e o desenvolvimento do tecido vegetal, de modo que as plantas das culturas tratadas com a dita composição apresentam um aumento considerável no vigor, tanto em relação às culturas não tratadas como em relação às culturas que são tratadas com produtos convencionais. A composição da invenção pode, portanto, ser considerada um produto de fortalecimento, que contribui para reforçar a vegetação das culturas, induzindo respostas de defesa ao estresse abiótico, que se traduzem em plantas vigorosas com excelente brilho e cor. Plantas mais vigorosas são, além disso, menos propensas a sofrer danos causados por infecções por agentes patogênicos.

[077] A dose de aplicação, bem como os intervalos de tempo entre as aplicações serão determinadas pelo tipo de planta a ser tratada, pelo fator de estresse a ser tratado (por exemplo, fungo, oomycete ou bactéria em questão) e pelo tipo de aplicação (pulverização foliar ou fertirrigação).

[078] Finalmente, a composição da invenção é muito estável e homogênea, por isso não requer agitação constante no tanque de aplicação e também não apresenta qualquer risco de entupimento de bicos e gotejadores.

[079] Os exemplos seguintes ilustram a invenção e não devem ser considerados como limitativos do seu âmbito.

[080] EXEMPLO I [081 ] Preparação de uma composição para uso agrícola contendo 2 % em peso de oligômeros de ácido galacturônico da invenção [082] 40 g de pectina alimentícia de maçã foram introduzidos em um reator fechado com agitação, ao qual foram adicionados 300 ml de metanol e depois 20 ml de ácido clorídrico 12 M. A mistura foi mantida com refluxo a uma

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 21/43

18/30 temperatura de 65 °C durante 24 horas. Em nenhum momento foi observada a dissolução completa da mistura. A mistura foi, em seguida, filtrada, separando desta forma duas frações: uma fração solúvel e uma fração insolúvel, que foi descartada. A fração solúvel foi, então, submetida à destilação fracionada para remover o excesso de metanol, deixando apenas a fração oligogalacturônica dissolvida em meio aquoso, denominada a seguir de solução AM.

[083] EXEMPLO II [084] Preparação de uma composição contendo oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe, com um teor de Fe de 3,5 % em peso [085] A solução de oligômeros de ácido galacturônico foi preparada como indicado no Exemplo I. Em seguida, foram adicionados 19,5 % em peso de sulfato de Fe a uma temperatura de 25 °C, com agitação, durante 2 horas, até estar completamente dissolvido. Assim, foi obtida uma solução de oligogalacturonatos de ferro e foram adicionados 20 % de gluconato de sódio disponível comercialmente para a obtenção da solução SVL-320.

[086] EXEMPLO III [087] Preparação de uma composição contendo oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Mn e Zn, com um teor de Mn de 3 % em peso e teor de Zn de 3 % em peso [088] A solução de oligômeros de ácido galacturônico foi preparada como indicado no Exemplo I. Em seguida, foram adicionados 9,5 % em peso de sulfato de Zn a uma temperatura de 25 °C, com agitação, durante 4 horas, até a dissolução completa. Desta forma, foi obtida uma solução de oligogalacturonatos de zinco e foram adicionados 20 % de gluconato de sódio disponível comercialmente para a obtenção da solução SVL-303.

[089] EXEMPLO 1 [090] Efeito das composições obtidas nos Exemplos I e III sobre o desenvolvimento vegetativo e estresse hídrico em plantas de Arabidopsis thaliana e de pimenta.

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 22/43

19/30 [091] Estudo de toxicidade.

[092] Este estudo foi realizado pelo Departamento de Fisiologia Vegetal do Centro de Pesquisa IVIA (Departamento de Fisiologia Vegetal del Centro de Investigación IVIA) de Valência.

[093] Material vegetal:

[094] - plantas de Arabidopsis thaliana com 1 e 2 meses de idade.

[095] - plantas de pimenta com 4,5 meses de idade, cultivadas em uma estufa sombreada durante dois meses e depois transportadas para uma área aquecida (entre 18 e 25 °C).

[096] Testes realizados:

[097] Uma dose de 3 ml/l, pH = 4,5 a 5,0, das composições testadas foi aplicada por meio de pulverização foliar a cada 15 dias.

[098] Para efeitos de comparação, uma composição de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu, com um teor de cobre de 5,5 % em peso, foi preparada de acordo com um método semelhante ao utilizado nos Exemplos II e III, mas usando sulfato de cobre e, em seguida foram adicionados 20 % de gluconato de sódio disponível comercialmente para a obtenção da solução SLV-081.

[099] Portanto, foram testadas as seguintes composições:

[100] - Solução AM, [101] - Solução SVL-303, e [102] - Solução SVL-081.

[103] Ambas as plantas de pimenta e as plantas de Arabidopsis thaliana foram submetidas a estresse hídrico através da remoção da irrigação. Os sintomas foram observados 25 dias após o início do estresse.

[104] Os seguintes parâmetros foram avaliados:

[105] - Percentagem de água na folha (%) [106] - Peso da parte aérea (g) [107] - Altura da planta (cm) [108] Toxicidade

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 23/43

20/30 [109] Foi observada a aparência das plantas de Arabidopsis thaliana com 6 semanas de idade, tratadas a cada 15 dias, após 15 dias de idade, com a solução AM, solução SLV-303 e solução SVL-081. Do mesmo modo, foi observada a aparência das folhas das plantas de pimenta de 4,5 meses de idade 13 dias após o tratamento indicado anteriormente com solução AM, solução de sulfato de cobre penta-hidratado (aplicada em doses que fornecem o mesmo Cu que a solução SVL-081), solução SVL-303 e solução SVL-081.

[110] Como pode ser visto nas Figuras 1 e 2, a aplicação de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Cu (SVL-081) causou dano foliar tanto em plantas de Arabidopsis thaliana como em plantas de pimenta e a solução de sulfato de cobre penta-hidratado (CuSO4 · 5H2O ) causou um menor crescimento da planta e menos brilho nas folhas. No entanto, nem a aplicação de oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM), nem a aplicação de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (SVL-303) apresentou dano foliar.

[111] Efeito sobre o desenvolvimento vegetativo [112] Altura [113] A altura foi medida e foi observada a aparência das plantas de pimenta com 4,5 meses de idade, tratadas a cada 15 dias, após 21 dias de idade, com a solução AM, solução SLV-303 e solução SVL-081. A linha tracejada marca uma altura de 34 cm.

[114] Como pode ser visto na Figura 3, o tratamento com oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM) estimulou o crescimento da planta em maior extensão, dando origem a plantas mais altas. A ordem dos tratamentos em relação a um efeito de plantas mais altas ou mais baixas foi:

[115] AM > SVL-303 > SVL-081.

[116] Biomassa [117] O peso das plantas de pimenta com 4,5 meses de idade, tratadas a cada 15 dias, após 21 dias de idade, com a solução AM, solução SLV-303 e solução SVL-081 foi medido.

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 24/43

21/30 [118] Como pode ser visto na Figura 4 (N = 1), apesar de terem sido observadas grandes diferenças na altura das plantas tratadas com oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM) e com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (SVL- 303), não foram observadas diferenças significativas no peso da parte aérea das plantas tratadas.

[119] Efeito sobre o estresse hídrico [120] Foi medida a percentagem de perda de água nas folhas das plantas de pimenta com 4,5 meses de idade, tratadas a cada 15 dias, após 21 dias de idade, com a solução AM, solução SLV-303 e solução SVL-081.

[121] Como pode ser visto na Figura 5 (N = 10), as plantas tratadas com oligômeros de ácido galacturônico da invenção (AM) e com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (SVL-303) suportam melhor o estresse hídrico, devido à aclimatação.

[122] No entanto, a composição de oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com cobre (SVL-081) apresentou sinergia negativa.

[123] A ordem crescente de sintomas de estresse, quantificada como a percentagem de perda de água nas folhas, foi a seguinte: SVL-081>SVL303=AM.

[124] As plantas mais estressadas amadurecem mais cedo. As plantas tratadas com SVL-081 tiveram pimentas maduras (vermelhas), enquanto as plantas tratadas com AM e SVL-303 tiveram flores e/ou pequenos frutos verdes (não maduros).

[125] Portanto, pode ser concluído que a composição da presente invenção favorece o aumento da resistência ao estresse hídrico (estresse abiótico).

[126] EXEMPLO 2 [127] Avaliação dos efeitos da composição obtida nos Exemplos II e III na cultura de tomate [128] O teste foi realizado pela empresa SICOP, que é reconhecida

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 25/43

22/30 oficialmente pelo Ministério da Agricultura Espanhol como sendo competente para realizar Testes Reconhecidos Oficialmente (Ensayos Oficialmente Reconocidos) (EOR 50/03) de acordo com o Decreto Real (Real Decreto) 2163/1994. A concepção das experiências, coleta de dados, análise de resultados e relatório final foram todos realizados de acordo com as boas práticas experimentais. O trabalho de campo foi realizado seguindo, principalmente, as Boas Práticas Agrícolas, de acordo com as diretrizes da OEPP, com alguns ajustes específicos de acordo com os objetivos do estudo.

[129] Composições testadas [130] Foi usado para efeitos de comparação, um produto que induz defesas contra o estresse do estado da técnica, relativo a um extrato microbiano fortificante vegetal, de agora em diante denominado de PSME, na forma de um pó molhável, a uma concentração de 108 CFU/g. Da mesma forma, a composição de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com Cu do Exemplo 1, com um teor de cobre de 5,5 % em peso, também foi usada para efeitos de comparação.

[131] Portanto, foram testadas as seguintes composições:

- Solução SVL-303,

- Solução SVL-320,

- Solução SVL-081, e

- PSME [132] Cultura [133] Cultura: Tomate

Nome botânico: Solanum lycopersicum

Ordem: Solanales

Família: Solanaceae

Subfamília: Solanoideae

Gênero: Solanum

Espécie: S. lycopersicum

Variedade: Santa West

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 26/43

23/30

Tipo: Enxertado em Maxifort [134] Data do transplante: 15/09/12 [135] Densidade de plantio: 1 planta/m². Podado para três hastes. Espaço entre as plantas: 2 x 0,5 m.

[136] Tipo de irrigação: Irrigação por gotejamento [137] Sistema de cultivo: Em baixo de plástico.

[138] Sistema de plantio: Semeadura em viveiro e depois transplantadas para o terreno final.

[139] Materiais e métodos [140] Condições do estudo [141] O desenho do teste foi por meio de canteiros distribuídos aleatoriamente. Foram realizadas quatro repetições para cada teoria contida no protocolo, a amostra sendo incluída nos canteiros de teste. Assim, o teste foi estabelecido em 20 canteiros independentes, cada um com uma área de superfície de 12 m².

[142] O material vegetal usado foi o tomate cereja em forma de pera, variedade Santa West, enxertado em Maxifort. Cada um dos canteiros compreendia cerca de 12 plantas podadas para três hastes.

[143] A fertirrigação da cultura foi a mesma em todos os canteiros.

[144] Características da estufa [145] O teste foi realizado em uma estufa com uma estrutura de ferro galvanizado. Foi usada uma estufa do tipo camalhões com sulcos com uma orientação Norte-Sul. A área de superfície total era 5.840 m², com dimensões de 80 m de comprimento e 73 m de largura. Ela tinha ventilação nas laterais e telhados, coberta com plástico. Tinha 4 metros de altura no cume e 3,5 metros na canaleta.

[146] O sistema de irrigação usado nesta estufa foi o de irrigação por gotejamento, com 2 gotejadores por m² e uma vazão de 3 l/h.

[147] Solo: Argiloso [148] Irrigações: As plantas pós-transplantadas foram irrigadas primeiro

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 27/43

24/30 imediatamente após o plantio e, em seguida, irrigadas por gotejamento a cada 1-2 dias.

[149] Trabalho manual: Nenhum. Capina manual mínima para remoção de ervas daninhas.

[150] Fertilizante: Adições de N, P2O5 e K2O por meio de fertirrigação para o ciclo de cultivo em todas as irrigações. Adições de microelementos através da água de irrigação.

[151 ] Água: Análise da água de irrigação

DETERMINAÇÕES	RESULTADOS
pH (20 °C)	7,80
Condutividade (ms/cm)	0,50
	MEQ/l	mg/l
Potássio	0,07	2,74
Sódio	1,05	24,15
Cálcio	2,51	50,30
Magnésio	1,78	21,64
Sulfatos	1,42	68,16
Cloretos	1,11	39,41
Nitratos	0,06	3,72
Bicarbonatos	2,62	159,82
Carbonatos	0,00	0,00
S.A.R.	0,72

[152] Manutenção [153] Sem aplicações de manutenção nos canteiros de teste.

[154] Tratamentos testados

	Produto	Dose
Amostra 1 (T1)	-	-
Amostra 2 (T2)	SVL-081	300 ml/100 l
Amostra 3 (T3)	SVL-303	300 ml/100 l
Amostra 4 (T4)	SVL-320	300 ml/100 l

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 28/43

25/30

Amostra 5 (T5)

PSME

200 g/100 I

[155] Aplicações [156] Foi realizado um total de 3 aplicações foliares. O mesmo equipamento foi usado em todas as aplicações. O tipo de máquina usada foi um pulverizador de mochila MARUYAMA motorizados, com uma pressão de trabalho de 5 atmosferas. O volume de caldo utilizado na primeira aplicação foi de 750 l/ha, na segunda aplicação foi de 800 l/ha e na terceira aplicação foi de 875 l/ha.

[157] Metodologia de aplicação [158] Especificamente, foram avaliados dois tipos de atividade:

[159] - A resposta da cultura para o efeito que induz a resistência ao estresse abiótico, particularmente a tolerância ao frio.

[160] - A resposta da cultura ao estresse biótico causado pelo agente patogênico Phytophthora infestans, em particular o número de folhas infectadas, o número de plantas infectadas por canteiro e o número de plantas mortas por canteiro.

[161] Realização do teste [162] Quando do início do teste, é estabelecido um planejamento que descreve as ações a serem executadas em todos os momentos acordo com o protocolo:

Data	Ação
17/12/2012	Avaliação prévia e 1^â aplicação
24/12/2012	Avaliação 7 dias após a primeira aplicação (7DA1 A) e 7 dias após a segunda aplicação (7DA2A)
31/12/2012	Avaliação 7 dias após a segunda aplicação (7DA2A) e 7 dias após a terceira aplicação (7DA3A)
07/01/2013	Avaliação 7 dias após a terceira aplicação (7DA3A)
14/01/2013	Avaliação 14 dias após a terceira aplicação (14DA3A)

[163] O teste foi realizado em uma área importante de cultivo de tomate, onde a doença ocorre naturalmente para o ciclo de cultivo em que foi realizado

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 29/43

26/30 o teste.

[164] De acordo com as diretrizes do protocolo, o teste foi iniciado preventivamente em 17 de dezembro. Nesta data, o cultivo estava entre os estádios 67 e 72 da escala BBCH (7 ou mais inflorescências com flores abertas até a 2- infrutescência, com o 1^Q fruto atingindo o tamanho típico). A segunda aplicação foi realizada em 24 de Dezembro, com a cultura entre os estádios 67 e 74 da escala BBCH (7 ou mais inflorescências com flores abertas até a 4^âinfrutescência, com o 1^Q fruto atingindo tamanho típico). A terceira aplicação foi realizada em 31 de Dezembro, com a cultura entre os estádios 72 e 79 da escala BBCH (2^â infrutescência com o 1^Q fruto atingindo o tamanho típico até 9 ou mais infrutescências, com frutos atingindo o tamanho típico).

[165] O início da doença em meados de Dezembro coincidiu com um período de umidade e temperaturas que foram ideais para o aparecimento de Phytophthora infestans. A manutenção das condições ideais para a doença deu origem a uma progressão lenta na amostra, que permitiu a condução correta do teste, sendo possível a comparação entre o efeito dos produtos com relação à amostra.

[166] Resultados

1- Tolerância ao frio [167] Com relação à cor das folhas, uma diferença na amostra com os canteiros tratados (folhas roxas com menos brilho) foi observada após 14 dias da última aplicação, de modo que outra avaliação foi feita 21 dias após a 3^âaplicação.

[168] A Tabela 1 mostra a média de plantas afetadas por canteiro.

[169] Tabela 1 - Percentagem média de plantas de tomate afetadas pelo frio submetidas a um tratamento com as diferentes soluções testadas

	14DA3A	21 DA3A
T1 -Amostra não tratada	37,50	43,75
T2-SVL-081	16,25	20,00
T3-SVL303	13,75	17,50

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 30/43

27/30

T4-SVL-320	17,50	18,75
T5-PSME	18,75	22,50

[170] A Figura 6 mostra estes resultados, onde pode ser observado que o tratamento com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3-SVL-303) tem um efeito claro sobre as folhas, onde podem ser observados mais brilho e um verde mais escuro, seguido pelo tratamento com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL320).

[171] Pode também ser observado que a amostra não tratada tem folhas de cor púrpura com menos brilho e que o extrato microbiano de fortalecimento vegetal (T5-PSME) é o tratamento com pior comportamento em comparação com os outros três.

[172] A Tabela 2 mostra as percentagens de plantas afetadas pelo frio, medida em relação à amostra não tratada.

[173] Tabela 2 - Percentagem de plantas de tomate afetadas pelo frio submetidas a um tratamento com as diferentes soluções testadas com relação à amostra não tratada

	14DA3A	21 DA3A
T2-SVL-081	56,67	54,29
T3-SVL303	63,33	60,00
T4-SVL-320	53,33	57,14
T5-PSME	50,00	48,57

[174] A Figura 7 mostra estes resultados, onde pode ser observado que o tratamento com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3-SVL-303) dá à planta maior tolerância ao frio, porque a cor das folhas tem um brilho mais intenso e menos tons de roxo. O tratamento com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL320) também torna a planta mais resistente ao frio, comportando-se de uma maneira muito semelhante à T3-SVL-303. Portanto, as ditas composições promovem respostas de resistência nas plantas, especialmente a primeira

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 31/43

28/30 delas.

[175] 2 - Número de folhas infectadas com o agente patogênico [176] A Tabela 3 mostra a evolução do número de folhas infectadas por canteiro, de acordo com cada um dos tratamentos.

[177] Tabela 3 - Número médio de folhas infectadas com Phytophthora infestans em plantas de tomate submetidas a tratamento com as diferentes soluções testadas

	Avaliação prévia	7DA1A	7DA2A	7DA3A	14DA3A
T1 -Amostra não tratada	2,25 a	11,50 a	14,50 a	13,25 a	17,00 a
T2-SVL-081	0,75 a	6,50 b	7,75 b	8,25 b	10,50 b
T4-SVL-303	1,50 a	4,75 b	8,25 b	7,25 b	9,25 b
T4-SVL-320	1,25 a	6,25 b	6,50 b	5,75 b	7,25 b
T5-PSME	1,00 a	5,75 b	8,50 b	7,00 b	9,00 b

[178] A Figura 8 mostra estes resultados, onde pode ser observado que os tratamentos mais eficazes são aqueles nos quais as plantas foram tratadas com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Zn/Mn (T3-SVL-303) e com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-CRC-320).

[179] 3 - Número de plantas infectadas por canteiro [180] A Tabela 4 mostra a evolução do número de plantas infectadas em cada canteiro, de acordo com cada um dos tratamentos.

[181] Tabela 4 - Número médio de plantas infectadas com Phytophthora infestans em plantas de tomate submetidas a tratamento com as diferentes soluções testadas

	Avaliação prévia	7DA1A	7DA2A	7DA3A	14DA3A
T1 -Amostra não tratada	0,00 a	2,75 a	3,25 a	6,75 a	7,50 a
T2-SVL-081	0,25 a	1,25 a	2,50 a	3,75 b	5,00 b
T4-SVL-303	0,25 a	1,75 a	3,00 a	3,00 b	4,00 b
T4-SVL-320	0,50 a	2,50 a	2,75 a	2,25 b	2,75 b

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 32/43

29/30

T5-PSME

0,00 a

1,50 a

2,50 a

2,75 b

3,00 b

[182] As Figuras 9 e 10 mostram estes resultados, onde pode ser observado que não ocorrem diferenças estatisticamente significativas entre os tratamentos e a amostra não tratada até sete dias após a segunda aplicação, pois o estudo foi iniciado de forma preventiva. Estas diferenças estatisticamente significativas entre os tratamentos e a amostra não tratada são mantidas até o fim.

[183] A melhor resposta ao agente patogênico é o da solução com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL320). A resposta da planta ocorreu em maior extensão, a medida em que o produto se acumulou gradualmente na planta, interrompendo a doença. Dadas as observações de campo, este tratamento previne o fungo de penetrar no córtex e a infecção permanece na epiderme.

[184] 4- Número de plantas mortas por canteiro [185] A Tabela 5 mostra a evolução do número de plantas mortas por canteiro, de acordo com cada um dos tratamentos.

[186] Tabela 5 - Número médio de plantas mortas por Phytophthora infestans em plantas de tomate submetidas a tratamento com as diferentes soluções testadas

	14DA3A	21 DA3A
T1 -Amostra não tratada	3,50	5,75
T2-SVL-081	1,75	3,00
T4-SVL-303	1,75	2,25
T4-SVL-320	0,75	1,00
T5-PSME	0,75	2,50

[187] A Figura 11 mostra estes resultados, onde pode ser observado que a solução com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL-320) faz com que a planta desenvolva um mecanismo de defesa, impedindo o agente patogênico de penetrar e impedindo que este sufoque a planta, portanto, causando uma menor taxa de mortalidade nas

Petição 870160002877, de 02/02/2016, pág. 33/43

30/30 plantas.

[188] Consequentemente, pode-se concluir que, como resposta a um tipo de estresse biótico causado por Phytophthora infestans, a aplicação da solução com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4SVL-320) apresenta um modo de ação completamente novo, relativamente aos fungicidas convencionais. Pode ser observado que a planta desenvolve um mecanismo de defesa como uma resposta à ação do produto, impedindo que o agente patogênico penetre no córtex, a infecção ficando limitada à epiderme, não sendo capaz de se espalhar. O efeito do tratamento é cumulativo.

[189] Em relação a ativação de respostas fisiológicas, o tratamento com oligômeros de ácido galacturônico da invenção esterificados com Fe (T4-SVL320) é o tratamento que apresentou o maior aumento na biomassa das plantas tratadas. Todos os tratamentos tiveram um efeito sobre o aumento do vigor da cultura, em relação à amostra não tratada. O padrão relativo ao extrato microbiano fortificante vegetal (T5-PSME) se comportou de forma pior que os demais tratamentos.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de uma composição compreendendo uma mistura de oligômeros de ácido galacturônico esterificados com um sal solúvel de metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes, como ingrediente ativo, caracterizado por o número de unidades de ácido galacturônico variar entre 1 e 10, como um agente agroquímico.
2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o número de moléculas de ácido galacturônico variar entre 1 e 4.
3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender 0,1 a 10 % em peso de ingrediente ativo em relação ao peso total da composição.
4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por compreender 2 % em peso de ingrediente ativo em relação ao peso total da composição.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender 0,1 a 20 % em peso de metal em relação ao peso total da composição. 6. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por

compreender 2 a 8 % em peso de metal em relação ao peso total da composição.
7. Método para a preparação da composição agroquímica para uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender as etapas de:

(a) dissolver 10 a 25 % em peso de pectina, com relação ao peso total da composição final, em um álcool inferior a uma temperatura de 55 a 70 °C e adicionar 1 a 5 % em volume de um ácido forte, com relação ao volume total da composição final;

(b) filtrar a solução obtida na etapa (a) para separar uma fração líquida e um resíduo sólido;

(c) submeter a fração líquida obtida na etapa (b) à destilação

2/2 fracionada, para obter uma solução de oligômeros de ácido galacturônico, em que o número de unidades de ácido galacturônico varia entre 1 e 10; e (d) adicionar um sal solúvel do metal de transição selecionado dentre Zn, Mn, Fe, Mo, Co e misturas destes à solução obtida na etapa (c).
8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por na etapa (a) serem dissolvidos 14 % em peso de pectina, com relação ao peso total da composição final, em metanol a uma temperatura de 65 °C e serem adicionados 1,9 % em volume de ácido clorídrico, com relação ao volume total da composição final.
9. Método para a indução de uma resposta ao estresse biótico em plantas adequadas para o cultivo, caracterizado por compreender a aplicação, a tais plantas, da composição agroquímica para uso tal como descrito nas reivindicações 1 a 6, por fertirrigação ou por pulverização foliar.
10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por ser para prevenção ou redução de danos causados por agentes patogênicos em plantas adequadas para o cultivo.
11. Método para a indução de uma resposta ao estresse abiótico em plantas adequadas para o cultivo, caracterizado por compreender a aplicação, a tais plantas, da composição agroquímica para uso tal como descrito nas reivindicações 1 a 6, por meio de fertirrigação ou pulverização foliar.
12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por ser para prevenção ou redução de danos causados por seca, temperaturas altas e temperaturas baixas.