BR112015017815B1

BR112015017815B1 - Método para prever o início dos sintomas extrapiramidais (eps) induzidos por um tratamento a base de antipsicótico

Info

Publication number: BR112015017815B1
Application number: BR112015017815-4A
Authority: BR
Inventors: Sergi Mas Herrero; Patricia Gassó Astorga; Cristina Malagelada Grau; Miquel Bernardo Arroyo; Amalia Lafuente Flo
Original assignee: Institut D'investigacions Biomèdiques August Pi I Sunyer; Universitat De Barcelona; Hospital Clinic De Barcelona; Centro De Investigación Biomédica En Red (Ciber)
Priority date: 2013-01-25
Filing date: 2014-01-24
Publication date: 2022-06-14
Also published as: CN104937113A; JP6695142B2; MX2015009726A; IL240129A0; US20180230541A1; ES2764154T3; IL240129B; KR20150107885A; EP2948563A1; US9822415B2; BR112015017815A2; AR095658A1; CA2898414C; EP2948563B1; CA2898414A1; JP2020089370A; US20150354005A1; MX371426B; WO2014114734A1; KR102033813B1

Abstract

MÉTODO PARA PREVER O INÍCIO DOS SINTOMAS EXTRAPIRAMIDAIS (EPS) INDUZIDOS POR UM TRATAMENTO A BASE DE ANTIPSICÓTICO. A invenção diz respeito a métodos para prever o início dos sintomas extrapiramidais (EPS) induzidos por um tratamento à base de antipsicóticos bem como métodos para fornecer medicamento personalizado a pacientes com base na sequência de vários SNPs associados com o início de EPS. A invenção diz respeito também a kits para realizar o diagnóstico e métodos de medicina preventiva.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[1] A invenção diz respeito a métodos para prever o início dos sintomas extrapiramidais (EPS) induzidos por um tratamento à base de antipsicótico bem como métodos para fornecer medicamento personalizado a pacientes. A invenção diz respeito também a kits para realizar o diagnóstico e métodos de medicina preventiva.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[2] Sintomas extrapiramidais emergentes de tratamento com antipsicótico (EPS) são frequentes e de reações adversas agudas sérias das drogas antipsicóticas, os sinais dos quais podem desenvolver dentro de poucos dias do início da medicação. EPS é um fenótipo complexo que inclui várias síndromes reconhecidas a saber parkinsonismo, acatisia, distonia aguda e discinesia. Enquanto a situação melhorou desde a era pré-clozapina, o problema do EPS não vai embora de jeito algum; por exemplo, em CATIE (Efeito Comparativo de Medicações Antipsicóticas em Pacientes com Esquizofrenia), uma tentativa grande de eficácia, 10,5% dos pacientes pararam sua medicação designada por razões relacionadas a EPS.

[3] Mesmo assim o mecanismo exato por trás da EPS não é claro, bloqueio de receptor de dopamina estriatal D2 (DRD2) é acreditado ser a causa principal. O controle essencial da atividade motora é assumido pelo gânglio basal, cujo constituinte principal é o estriato. No estriato dorsal, dopamina regula a atividade motora se interagindo com receptor de dopamina D1 (DRD1) ou DRD2, resultando em dois caminhos de projeção diferentes (caminho “direto” e “indireto”) e mais importantemente na estimulação oposta do tálamo. De acordo com este modelo, dopamina promove atividade motora aumentando a atividade do caminho direto e, concomitantemente inibindo o caminho indireto.

[4] Vários estudos tentaram identificar fatores de risco potencial para desenvolver EPS, tal como pouca idade, gênero masculino e diagnóstico psiquiátrico, especialmente distúrbios de humor. Marcadores farmacogenéticos tem sido também testados (Zhang and Malhotra, 2011, Expert Opin Drug Metab Toxicol 7:9-37). Embora alguma variante genética possa ter efeitos significativos no aparecimento de EPS (Gasso et al, 2009, Pharmacogenomics J 9:404-10; Greenbaum et al, 2009, Pharmacogenomics J 9: 103-10) nenhum fator único pode prever este fenômeno.

[5] Almoguera et al. [2012, Pharmacogenomics J. doi: 10.1038/tpj.2011.57 (Epub ahead of print Jan 3 2012)] descreve a associação das variantes genéticas em vários genes com efeitos adversos causados por risperidona em pacientes com esquizofrenia. Todos os variantes de gene analisados foram anteriormente descritos em relação à habilidade em prever resposta do paciente a risperidona ou efeitos adversos. Almoguera et al. ainda divulga que variantes de gene ADRB2 16Gly, SLC6A4 L/S, SLC6A4 S/S e DRD3 9Gly correlacionam com o início de eventos adversos sexuais, sonolência, EPS e ganho de peso em pacientes tratados com risperidona.

[6] WO 2011/148379 descreve genótipos associados com resistência à parkinsonismo e outras EPS induzidas por antipsicótico, em particular o SNP rs12678719 no gene ZFPM2 e SNP rs4606 no gene RGS2.

[7] WO 2007/144874 descreve genótipos associados com resistência à EPS induzido por antipsicóticos, especialmente SNPs rs2179652, rsl933695, rs2746073, rs4606, rsl819741 e rs1152746. Adicionalmente, este documento identifica genótipos associados com uma predisposição para o início ou agravo de EPS. Variantes de gene associados com EPS estão no gene RGS2.

[8] Xu et al. (2007, J.Clin.Psychiatry, 68: 1358-67) descreve a identificação do SNP rs3803300 no gene AKTl e de um aplótipo consistindo de 5 SNPs no dito gene que são associados com o início da esquizofrenia. Entretanto, nem o SNP rs3803300 ou o aplótipo mostram qualquer relação com o início de EPS.

[9] Assim, ainda existe uma necessidade na técnica para um método que permita a previsão do início de EPS induzido por um tratamento à base de antipsicótico.

BREVE DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[10] Os autores da presente invenção identificaram pela primeira vez um ajuste de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) que fornece um método confiável para a previsão do início de sintomas extrapiramidais (EPS) em pacientes sofrendo tratamento com antipsicóticos. Por exemplo, como mostrado no exemplo 1 da aplicação, algumas combinações alélicas dos SNPs rs1130214, rs456998, rs721 1818 e rsl053639 preveem um alto risco do paciente desenvolver EPS, enquanto outras combinações alélicas preveem um baixo risco do paciente desenvolver EPS.

[11] Assim, em um primeiro aspecto, a invenção diz respeito a um método para prever o início de sintomas extrapiramidais (EPS) induzidos por um tratamento à base de antipsicótico em um paciente, compreendendo i) determinar a sequência de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) de rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639 em uma amostra compreendendo material genético a partir do dito paciente, e ii) prever o risco de dito paciente a desenvolver EPS com base na sequência de ditos SNPs.

[12] Em outro aspecto, a invenção diz respeito a um método para selecionar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, compreendendo i) determinar a sequência de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639 em uma amostra compreendendo material genético a partir do dito paciente, e ii) selecionar dito paciente para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 com base na sequência dos ditos SNPs.

[13] Em outro aspecto, a invenção diz respeito a um método para selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequada para tratar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos, compreendendo i) determinar a sequência de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639 em uma amostra compreendendo material genético a partir do dito paciente, e ii) selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequada com base na sequência dos ditos SNPs, em que dito antipsicótico é selecionado do grupo consistindo de uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 e terapia a base de antipsicótico.

[14] Em outro aspecto, a invenção diz respeito a um kit compreendendo reagentes adequados para determinar a sequência de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639, em que ditos reagentes compreendem sondas de DNA ou RNA.

[15] Em outro aspecto, a invenção diz respeito ao uso de um kit compreendendo reagentes adequados para determinar a sequência dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639 para prever o início de EPS induzido por um tratamento à base de antipsicótico em um paciente com base na sequência de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639.

[16] Em outro aspecto, a invenção diz respeito a um antipsicótico de baia potência de bloqueio de DRD2 para uso no tratamento de uma doença tratável com antipsicóticos em um paciente, em que dito paciente tenha sido selecionado usando um método para selecionar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2.

[17] Em outro aspecto, a invenção diz respeito ao uso de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639 para prever o início de EPS induzido por um tratamento à base de antipsicótico em um paciente, para selecionar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 ou para selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequada para tratar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[18] Os autores da presente invenção identificaram pela primeira vez um ajuste de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) que fornece um método confiável para a previsão do início de sintomas extrapiramidais (EPS) em pacientes sofrendo tratamento com antipsicóticos.

[19] Os inventores realizaram um estudo onde 241 pacientes psiquiátricos recebendo uma terapia a base de antipsicótico foram selecionados por nove SNPs, e estudaram sua contribuição ao risco de EPS. Eles acharam que a combinação dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639 foi estatisticamente significativa. Este achado abriu portas para novas previsões genéticas de EPS no tratamento de doenças tratáveis com antipsicóticos, ajudando os médicos no projeto de terapia individualizada dos pacientes. Com base nestes achados, os inventores desenvolveram os métodos da presente invenção que serão descritos agora em detalhe.

[20] Para evitar dúvida, os métodos da invenção não envolvem diagnósticos praticados no corpo humano ou animal. Os métodos da invenção são preferencialmente conduzidos em uma amostra que foi anteriormente removida do paciente. Os kits da invenção, descritos aqui, podem incluir meios para extrair a amostra do paciente.Método para prever o início de EPS induzido por um tratamento à base de antipsicótico em um paciente

[21] Em um primeiro aspecto, a invenção diz respeito a um método (aqui referido como “primeiro método da invenção”) para prever o início de EPS induzido por um tratamento à base de antipsicótico em um paciente, compreendendo i) determinar a sequência dos polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) de rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs 1053639 em uma amostra compreendendo material genético de dito paciente, e ii) prever o risco de dito paciente em desenvolver EPS com base na sequência dos ditos SNPs.

[22] O termo “prever o início dos sintomas extrapiramidais (EPS) induzidos por um tratamento à base de antipsicótico”, é usado aqui para referir à probabilidade que um paciente irá desenvolver EPS como uma consequência de um tratamento com base em antipsicóticos. Os métodos preditivos da presente invenção podem ser usados clinicamente para fazer decisões de tratamento escolhendo as modalidades de tratamento mais apropriadas para qualquer paciente particular. Os métodos preditivos da presente invenção são ferramentas valiosas na previsão se um paciente é provável de desenvolver EPS respondem favoravelmente a um regime de tratamento, tal como tratamento à base de antipsicótico. A previsão pode incluir fatores prognósticos.

[23] Como será entendido por aqueles versados na técnica, a previsão, embora preferida a ser, necessita não ser correta para 100% dos pacientes avaliados. O termo, entretanto, requer que uma porção significativa estatisticamente de pacientes pode ser identificada como tendo uma probabilidade aumentada de ter um resultado dado. Se um paciente é estatisticamente significativo pode ser determinado sem muito esforço pela pessoa versada na técnica, usando várias ferramentas de avaliação de estatística bem conhecidas, p.ex., determinação de intervalos de confiança, determinação de valor-p, taxas de classificação validadas e semelhantes. Detalhes são achados em Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983. Intervalos de confiança preferidos são pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95%. Os valores-p são preferencialmente, 0,01, 0,005 ou menor.

[24] O termo “sintomas extrapiramidais” ou “EPS” ou “efeitos colaterais extrapiramidais (EPSE)”, como usado aqui, referem aos vários efeitos no controle motor, incluindo reações distônicas agudas, pseudoparkinsonismo, acatisia (uma inabilidade de sentar parada), tremores, movimentos do corpo repetitivos involuntários (discinesia tardia), sofridos como um resultado da tomada de drogas antipsicóticas. EPS são normalmente classificados usando a escala de classificação de Simpson-Angus. Esta escala contém 10 itens: andamento, queda do braço, agitação do ombro, rigidez do cotovelo, rigidez do pulso, pendulosidade da perna, queda da cabeça, toque da glabela, tremor, e salivação. Cada item é classificado entre 0 e 4. Uma pontuação total é obtida adicionando os itens e dividindo por 10. Pontuações de até 0,3 são consideradas dentro da faixa normal.

[25] O termo “tratamento” ou “terapia” inclui qualquer processo, ação, aplicação, terapia, ou semelhante, em que um paciente, incluindo um ser humano, é fornecido auxílio médico com o objetivo de melhorar a condição do paciente, diretamente ou indiretamente, ou lentamente diminuir a progressão de uma condição ou distúrbio no paciente, ou melhorar pelo menos um sintoma da doença ou distúrbio sob tratamento. O termo “tratamento à base de antipsicótico” ou “terapia a base de antipsicótico”, como usado aqui, refere a qualquer tratamento ou terapia que compreende pelo menos um antipsicótico.

[26] O termo “antipsicótico” ou “neuroléptico”, como usado aqui, refere a uma medicação psiquiátrica primariamente usada para gerenciar psicoses (incluindo delírios ou alucinações, bem como pensamentos desordenados), e está sendo cada vez mais usado no gerenciamento de distúrbios não psicóticos. Antipsicóticos são projetados com o código N05A de Química Terapêutica Anatômica (ATC). Antipsicóticos são amplamente divididos em dois grupos, os antipsicóticos típicos ou de primeira geração e os antipsicóticos atípicos ou de segunda geração. Os antipsicóticos típicos são classificados de acordo com sua estrutura química enquanto os antipsicóticos atípicos são classificados de acordo com suas propriedades farmacológicas. Estes incluem antagonistas de serotonina- dopamina (ver antagonistas de dopamina e antagonistas de serotonina), antipsicóticos de receptor alvejado de multi- ação (MARTA, aqueles visando vários sistemas), e agonistas parciais de dopamina, que são geralmente categorizados como atípicos.Recentemente, um novo sistema de classificação está sendo usado, em que antipsicóticos são divididos de acordo com sua potência no bloqueio do receptor dopaminérgico D2 (DRD2), p.ex. antipsicóticos são divididos em antipsicóticos de baixa, média e alta potência de bloqueio de DRD2. Antipsicóticos de baixa potência de bloqueio de DRD2 são conhecidos na técnica por ter uma menor probabilidade de induzir EPS em pacientes, enquanto antipsicóticos de média e alta potência de bloqueio de DRD2 são conhecidos na técnica por ter uma alta probabilidade de induzir EPS em pacientes. Exemplos não limitantes de antipsicóticos de baixa potência de bloqueio de DRD2 incluem clozapina, ziprasidona, quetiapina e olanzapina. Exemplos não limitantes de antipsicóticos de média potência de bloqueio de DRD2 incluem amisulprida, risperidona e zuclopenixol. Exemplos não limitantes de antipsicóticos de alta potência de bloqueio de DRD2 incluem haloperidol e clorpromazina (Gardner et al., 2005, Can Med Assoc J 172: 1703-11).

[27] O termo “paciente”, como usado aqui, refere a um indivíduo, tal como um humano, um primata não humano (p.ex., chimpanzés e outras espécies de macacos e símios); animais de fazenda, tais como pássaros, peixes, gado, ovelha, porcos, cabras, e cavalos; mamíferos domésticos, tais como cachorros e gatos; animais de laboratório incluindo roedores, tais como camundongos, ratos e porquinhos da índia. O termo não denota uma idade ou sexo em particular. Em uma modalidade particular da invenção, o paciente é um mamífero. Em uma modalidade preferida da invenção, o paciente é um humano. Em uma modalidade mais preferida da invenção, o paciente foi diagnosticado com uma doença tratável com antipsicóticos.

[28] Como uma pessoa versada na técnica irá reconhecer, um tratamento à base de antipsicótico não é apenas auxiliado no tratamento de um distúrbio ou doença que apresenta psicose, e pode ser usado para tratar outros tipos de distúrbios ou doenças. Assim, em outra modalidade particular do primeiro método da invenção, o paciente sofre de uma doença tratável com antipsicóticos. Como usado aqui, “doença tratável com antipsicóticos” refere a qualquer doença ou distúrbio cuja condição possa ser melhorada, cuja progressão possa ser diminuída, ou que pelo menos um sintoma possa ser melhorado sob tratamento com antipsicóticos. Exemplos não limitantes das doenças tratadas com antipsicóticos incluem esquizofrenia, transtorno esquizoafetivo, transtorno psicótico agudo, transtorno delirante, transtorno de personalidade esquizotípica, transtorno bipolar, transtorno obsessivo- compulsivo, transtorno de personalidade, depressão psicótica, transtorno de conduta, déficits cognitivos, náuseas e vômitos, e doença de Alzheimer.

[29] Em uma primeira etapa, o primeiro método da invenção compreende a determinação da sequência de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) de rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639 em uma amostra compreendendo material genético a partir do dito paciente.

[30] O termo “polimorfismo de nucleotídeo único” ou “SNP”, como usado aqui, refere a uma variação na sequência de nucleotídeo de um ácido nucleico que ocorre em um nucleotídeo único (A, C, T ou G), em que cada sequência possível está presente em uma proporção igual a ou maior que 1% da população. Os SNPs são tipicamente nomeados usando o número de acesso na base de dados de SNP (dbSNP) no National Center for Biotechnology Information (NCBI) acessível em http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/. Em geral, SNPs representam umas das mais comuns formas de variações genéticas. Estes polimorfismos aparecem quando um nucleotídeo único no genoma é alterado (tal como por substituição, adição ou exclusão). Cada versão da sequência com respeito ao sítio polimórfico é referida a como um alelo do sítio polimórfico. Os SNPs tendem a ser evolutivamente estáveis de geração em geração e, como tal, podem ser usados para estudar anormalidades genéticas específicas através de uma população. Se SNPs ocorrer na região de codificação de proteína, isto pode levar à expressão de uma forma variante, algumas vezes defeituosa, de proteína que pode levar ao desenvolvimento de uma doença genética. Alguns SNPs podem ocorrer em regiões de não- codificação, mas não obstante, pode resultar em emenda diferencial ou defeituosa, ou níveis de expressão de proteína alterados. SNPs podem então servir como indicadores eficazes de uma doença genética. SNPs podem também ser usados como ferramentas de diagnóstico e/ou prognóstico para identificar indivíduos com uma predisposição para uma doença ou para uma rápida evolução da doença, genotipando o indivíduo sofrendo da doença, e facilitando o desenvolvimento de droga com base no conhecimento revelado com respeito ao papel das proteínas alvo no processo de patogênese. Cada versão da sequência com respeito ao SNP é referida a como um alelo de SNP.

[31] O termo “alelo”, como usado aqui, diz respeito a uma ou duas ou mais formas de um gene, lócus ou polimorfismo genético. Algumas vezes, alelos diferentes podem resultar em traços diferentes; entretanto, outras vezes, alelos diferentes terão o mesmo resultado na expressão de um gene. A maioria dos organismos multicelulares tem dois pares de cromossomos, isto é, eles são diploides. Estes cromossomos são referidos como cromossomos homólogos. Organismos diploides tem uma cópia de cada gene (e um alelo) em cada cromossomo. Se ambos os alelos são os mesmos, eles são homozigotos. Se os alelos são diferentes, eles são heterozigotos.

[32] O termo “amostra” ou “amostra biológica”, como usado aqui, refere-se ao material biológico isolado a partir de um paciente. A amostra biológica contém qualquer material biológico adequado para detectar o SNP desejado e pode compreender material celular e/ou não celular do paciente. Na presente invenção, a amostra compreende material genético, p.ex. DNA, DNA genômico (gDNA), DNA complementar (cDNA), RNA, RNA nuclear heterogêneo (hnRNA), mRNA, etc., a partir do paciente sob estudo. A amostra pode ser isolada de qualquer tecido adequado ou fluido biológico tal como, por exemplo sangue, saliva, plasma, soro, urina, líquido cerebroespinhal (CSF), fezes, um esfregão bucal- faringeal ou bucal, uma espécie cirúrgica, e uma espécie obtida a partir de uma biópsia. Métodos para isolar célula e amostras de tecido são bem conhecidos àqueles versados na técnica. Em uma modalidade particular, a amostra é selecionada do grupo consistindo de sangue, urina, saliva, soro, plasma, um esfregão buco-faringeal ou bucal, cabelo, uma espécie cirúrgica, e uma espécie obtida a partir de uma biópsia. Na modalidade preferida, a amostra é selecionada a partir de sangue, cabelo, urina e saliva.

[33] Os termos “determinando a sequência de um SNP” ou “detectando um SNP” são usados indistintamente na presente invenção, e referem-se à determinação da sequência de um SNP particular em ambos alelos do paciente sob estudo. A determinação da sequência de SNP pode ser realizada por meio de processos múltiplos conhecidos por uma pessoa versada na técnica.

[34] Em algumas modalidades, por exemplo, quando a determinação da sequência dos SNPs é realizada em uma amostra para sangue inteiro, deve ser usado diretamente para detecção dos ditos SNPs. Em outras modalidades, o ácido nucleico é extraído de células que estão presentes em um fluido biológico (p.ex., sangue inteiro, saliva, fluido sinovial, etc.) como uma etapa inicial, e, em tais casos, o ácido nucleico total extraído das ditas amostras representaria o material de trabalho adequado para amplificação subsequente. Isolamento do ácido nucleico da amostra pode ser realizado por métodos conhecidos por uma pessoa versada na técnica. Ditos métodos podem ser achados, por exemplo, em Sambrook et al, 2001. "Molecular cloning: a Laboratory Manual", 3a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y., Vol. 1-3. Adicionalmente, como mencionado acima, em algumas modalidades, geração de ácidos nucleicos para análise a partir de amostras requer amplificação de ácido nucleico. Muitos métodos de amplificação se baseiam em uma reação de cadeia enzimática tal como, por exemplo, uma reação de cadeia de polimerase (PCR), uma reação de cadeia de ligase (LCR), ou uma replicação de sequência autossustentada, ensaios de amplificação de ciclos de toração, etc.; esta lista é meramente ilustrativa e de forma alguma limitante. Métodos para amplificar ácido nucleico são descritos em Sambrook et al, 2001 (citado em cima).

[35] Após isolar, e amplificar (se necessário), o ácido nucleico, as sequências dos SNPs diferentes da invenção são detectadas. Aqueles versados na técnica irão prontamente reconhecer que a análise de nucleotídeos presentes em um ou vários dos SNPs, ou polimorfismos, divulgados aqui em um ácido nucleico de paciente pode ser feita por qualquer método ou técnica capaz de determinar nucleotídeos presentes em um SNP ou polimorfismo. Por exemplo, um pode detectar SNPs no primeiro método da invenção realizando sequenciamento, mini-sequenciamento, hibridização, análise de fragmento de restrição, ensaio de ligação de oligonucleotídeo, PCR específico de alelo, ou uma combinação dos mesmos. Como tal, sistemas e métodos para detecção de SNPs, em geral incluem, mas não são limitados a, sequenciamento de ácido nucleico, métodos de hibridização e tecnologia de conjunto (p.ex. tecnologia disponível de Aclara Biosciences, Affymetrix, Agilent Technologies, Ilumina Inc., etc.); também técnicas com base em mudança de mobilidade em fragmentos de ácido nucleico amplificado, Polimorfismo Conformacional de filamento único (SSCP), eletroforese de gel de gradiente de desnaturação (DGGE), Clivagem de defasagem química (CMC), Polimorfismo de Fragmento de restrição (RFLPs), e análise de WAVE podem ser usados (Métodos Mo. Med. 2004; 108:173-88), e semelhantes. É claro, esta lista é meramente ilustrativa e de forma alguma limitante. Aqueles versados na técnica devem usar qualquer método apropriado para alcançar tal detecção. Como é óbvio na técnica, a sequência de ditos SNPs pode ser determinada a partir de tanto um filamento de ácido nucleico ou de ambos os filamentos. Na presente invenção, a sequência dos ditos SNPs são determinados a partir de ambos os filamentos.

[36] Em outra modalidade particular, a determinação da sequência dos ditos SNPs é realizada em tempo real por PCR.

[37] Os SNPs usados na presente invenção são identificados abaixo: - rs1130214 está localizado no gene AKT1 e corresponde à SEQ ID NO: 1; CTGGGGTTTCTCCCAGGAGGTTTTTG[G/T]GCTTGCGCTGGAGGGCTC TGGACTC - rs456998 está localizado no gene FCHSD1 e corresponde à SEQ ID NO: 2; CATTCTATTATGCTCATAATAAAAAT[G/T]TACTGAGGACTCTATGCC AGAAATT - rs7211818 está localizado no gene RPTOR e corresponde à SEQ ID NO:3; e AAAGCAGAAGGAAAGAAATAACAAAC[A/G]GCAGAAATCAATAAAATA GAGTACA - rsl053639 está localizado no gene DDIT4 e corresponde à SEQ ID NO: 4. GAGGCAGGAGCTGAGGGACTGATTCC[A/T]GTGGTTGGAAAACTGAGG CAGCCAC

[38] Em uma primeira etapa, o primeiro método da invenção compreende a previsão do risco de dito paciente em desenvolver EPS com base na sequência de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rsl053639.

[39] Nesta conexão, a invenção fornece não apenas alguns SNPs específicos que em combinação são significativamente associados com a previsão do início de EPS induzido por um tratamento à base de antipsicótico em um paciente, mas também as combinações alélicas correspondentes por alto e baixo risco para desenvolver EPS dos ditos SNPs, que são mencionados nas Tabelas 1 e 2. Assim, em uma modalidade particular, a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 1 é indicativa de que existe um alto risco do paciente desenvolver EPS. Em outra modalidade particular, a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 2 é indicativa de que existe um baixo risco do paciente desenvolver EPS.

[40] Tabela 1: Combinações alélicas que preveem um alto risco de desenvolvimento de EPS.

[41] Para cada dos SNPs: 0 = Homozigose para alelo 1; 1 = heterozigose para alelo 1/alelo 2; 2 = Homozigose para alelo 2. rs1130214 - alelo 1= G; alelo 2=T; - genótipo 0= GG; genótipo 1=GT; genótipo 2= TT rs456998: - alelo 1= T; alelo 2=G; - genótipo 0= TT; genótipo 1=GT; genótipo 2= GG rs7211818: - alelo 1 = A; alelo 2=G; - genótipo 0= AA; genótipo 1=AG; genótipo 2= GG rsl053639: - alelo 1= T; alelo 2=A; - genótipo 0= TT; genótipo 1=AT; genótipo 2= AA

[42] Tabela 2: Combinações alélicas que preveem um baixo risco em desenvolver EPS

Para cada dos SNPs: 0 = Homozigose para alelo 1; 1 = Heterozigose para alelo 1/alelo 2; 2= Homozigose para alelo 2. rs1130214: - alelo 1= G; alelo 2=T; genótipo 0= GG; genótipo 1=GT; genótipo 2= TT rs456998: alelo 1= T; alelo 2=G; genótipo 0= TT; genótipo 1=GT; genótipo 2= GG rs7211818: alelo 1= A; alelo 2=G; genótipo 0= AA; genótipo 1=AG; genótipo 2= GG rsl053639: alelo 1= T; alelo 2=A; genótipo 0= TT; genótipo 1=AT; genótipo 2= AA

[43]A expressão “risco em desenvolver EPS”, como usado aqui, refere a predisposição, suscetibilidade ou probabilidade de um paciente sendo tratado com uma terapia a base de antipsicótico desenvolver EPS. O risco em desenvolver EPS geralmente implica que existe um alto ou um baixo risco. Neste respeito, um paciente sendo tratado com uma terapia a base de antipsicótico em alto risco de desenvolver EPS é um paciente que apresenta uma combinação alélica de acordo com a Tabela 1. Assim, um paciente de alto risco em desenvolver EPS tem pelo menos 50%, ou pelo menos 60%, ou pelo menos 70%, ou pelo menos 80%, ou pelo menos 90%, ou pelo menos 95%, ou pelo menos 97%, ou pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de probabilidade em desenvolver EPS. Semelhantemente, um paciente sendo tratado com uma terapia a base de antipsicótico com baixo risco de desenvolver EPS é um paciente que apresenta uma combinação alélica de acordo com a Tabela 2. Assim, um paciente com baixo risco em desenvolver EPS tem pelo menos 0%, ou pelo menos 1%, ou pelo menos 2%, ou pelo menos 3%, ou pelo menos 5%, ou pelo menos 10%, ou pelo menos 20%, ou pelo menos 30%, ou pelo menos 40%, ou pelo menos 49% de probabilidade em desenvolver EPS.

[44] Em geral, a expressão “prever o risco”, “previsão do risco”, ou semelhante, diz respeito ao risco que um paciente sendo tratado com uma terapia a base de antipsicótico em desenvolver EPS tanto alto ou baixo. Como será entendido por aqueles versados na técnica, a previsão (ou o risco), embora preferido a ser, não necessita ser corrigida para 100% dos pacientes a serem avaliados. O termo, entretanto, requer que uma porção significativa estatisticamente de pacientes possa ser identificada como tendo uma probabilidade aumentada de desenvolvimento de EPS. Se um paciente é significativo estatisticamente pode ser determinado sem esforço adicional por uma pessoa versada na técnica usando várias ferramentas de avaliação estatística bem conhecidas, p.ex., determinação dos intervalos de confiança, determinação do valor-p, testes de T de Student, testes de Mann-Whitney, etc. Detalhes podem ser achados em Dowdy e Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983. Intervalos de confiança preferidos são pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%. Os valores-p são, preferencialmente 0,1, 0,5, 0,02, 0,01 ou menor.

[45] Método para selecionar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2

[46] A pessoa versada na técnica irá perceber que o valor previsto de SNPs rs1130214, rs456998, rs721181 e rs1053639 pode ser ainda colocado em prática para selecionar àqueles pacientes que estão em risco alto em desenvolver EPS induzido por antipsicótico para receber terapia com uma baixa probabilidade de induzir EPS, p.ex., uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2. Assim, em outro aspecto, a invenção diz respeito a um método para selecionar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 (aqui referido como “segundo método da invenção”), compreendendo i) determinar a sequência dos SNPs de rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639 em uma amostra compreendendo material genético a partir do dito paciente, e ii) selecionar dito paciente para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 na sequência dos ditos SNPs.

[47] Os termos “paciente”, “antipsicóticos”, “doença tratável com antipsicóticos”, “terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2”, “SNP”, "rs1130214", "rs456998", "rs7211818", "rsl053639", e “amostra compreendendo material genético”, e suas particularidades tem sido descritos em detalhe no contexto do primeiro método da invenção e são usados com o mesmo significado no contexto do segundo método de acordo com a invenção.

[48] Em uma primeira etapa, o segundo método da invenção compreende determinar a sequência de SNPs rs1l30214, rs456998, rs7211818 e rsl053639 em uma amostra compreendendo material genético a partir do dito paciente. As particularidades de determinar a sequência de SNPs tem sido descritas em detalhe no contexto do primeiro método da invenção bem como particularidades dos SNPs a serem detectados e são aplicados com o mesmo significado no contexto do segundo método de acordo com a invenção.

[49] Em uma segunda etapa, o segundo método da invenção compreende selecionar dito paciente para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 com base na sequência dos ditos SNPs.

[50] Em uma modalidade particular do segundo método da invenção, o paciente é selecionado para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixo bloqueio de DRD2 se a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 1 é detectada na amostra. Em uma modalidade preferida, o antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 é selecionado a partir do grupo consistindo de clozapina, ziprasidona, quetiapina e olanzapina.

[51] Em outra modalidade particular, a terapia a base de antipsicótico de baixo bloqueio de DRD2 adicionalmente compreende um adjuvante antiparkinsoniano. Como usado aqui, o termo “adjuvante” ou “terapia adjuvante” refere-se a qualquer tipo de tratamento de doença tratável com antipsicóticos dados como tratamento adicional, usualmente para diminuir a probabilidade dos antipsicóticos induzirem EPS. O objetivo de tal um tratamento adjuvante é melhorar o risco do paciente receber terapia para desenvolver EPS.

[52] Como usado aqui, o termo “antiparkinsoniano” refere a um tipo de droga que é pretendido a tratar e aliviar os sintomas da doença de Parkinson (PD) ou Parkinsonismo. A maior parte destas drogas age tanto aumentando atividade de dopamina ou reduzindo atividade de acetilcolina no sistema nervoso central. Exemplos de antiparkinsonianos incluem precursores dopaminérgico, inibidores b de oxidase monoamina seletiva, inibidores de transferase de catecol-o-metila (COMT), agonistas receptores de dopamina, e anticolinérgicos. Em uma modalidade preferida, o antiparkinsoniano é um anticolinérgico. Como usado aqui, o termo “anticolinérgico” refere a uma classe de drogas que inibem impulsos do nervo parassimpático seletivamente bloqueando a ligação do neurotransmissor acetilcolina a seu receptor nas células nervosas. As fibras nervosas do sistema parassimpático são responsáveis pelos movimentos involuntários de músculos suaves presentes no trato gastrointestinal, trato urinário, pulmões, etc. Anticolinérgicos são classificados de acordo com os receptores que são afetados em agentes antimuscarínicos, que operam os receptores de acetilcolina muscarínica, e agentes antinicotínicos, que operam nos receptores de acetilcolina nicotínica. Exemplos dos anticolinérgicos incluem, mas não são limitados a, benzotropina, ipratrópio, oxitrópio, tiotrópio, glicopirrolato, oxibutinina, tolterodina, clorfenamina, difenhidramina, dimenhidrinato, bupropion, hexametônio, tubocurarina, dextrometorfan, mecamilamina, e doxacurio.

[53] Método para selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequada para tratar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos

[54] A presente invenção também contempla a seleção de terapias personalizadas de acordo com as combinações alélicas dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639 presentes no paciente a ser tratado.

[55] Assim, em outro aspecto, a presente invenção diz respeito a um método para selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequado para tratar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos (aqui referidos como “terceiro método da invenção”), compreendendo i) determinar a sequência dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639 em uma amostra compreendendo material genético a partir do dito paciente, e ii) selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequado com base na sequência dos ditos SNPs, em que o dito antipsicótico é selecionado do grupo consistindo de uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 e qualquer terapia a base de antipsicótico.

[56] Os termos “paciente”, “antipsicótico”, “terapia a base de antipsicótico”, “doença tratável com antipsicóticos”, “terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2”, “SNP”, “rs1130214”, “rs456998”, “rs7211818”, “rs1053639”, e “amostra compreendendo material genético”, e suas particularidades tem sido descritas em detalhes no contexto do primeiro método da invenção e são usados com o mesmo significado no contexto do terceiro método de acordo com a invenção.

[57] Em uma primeira etapa, o terceiro método da invenção compreende determinar a sequência de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639 em uma amostra compreendendo material genético a partir do dito paciente. As particularidades de determinar a sequência de SNPs tem sido descritas em detalhes no contexto do primeiro método da invenção bem como particularidades dos SNPs a serem detectados e são aplicados com o mesmo significado no contexto do terceiro método de acordo com a invenção.

[58] Em uma segunda etapa, o terceiro método da invenção compreende selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequada com base na sequência dos ditos SNPs, em que o dito antipsicótico é selecionado do grupo consistindo de uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 e qualquer terapia a base de antipsicótico.

[59] Em uma modalidade particular, a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 1 é indicativa de que o dito paciente é selecionado para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, e a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 2 é indicativa de que o paciente é selecionado para receber qualquer terapia a base de antipsicótico.

[60] Em uma modalidade preferida, o antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 é selecionado do grupo consistindo de clozapina, ziprasidona, quetiapina e olanzapina.

[61] Em outra modalidade preferida, a terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 adicionalmente compreende um adjuvante antiparkinsoniano. Em uma modalidade mais preferida, o adjuvante antiparkinsoniano é um anticolinérgico. Os termos “adjuvante” e “antiparkinsoniano” e suas particularidades tem sido descritos em detalhes no contexto do segundo método da invenção e são usados com o mesmo significado no contexto do terceiro método de acordo com a invenção.

[62] O termo “qualquer terapia a base de antipsicótico”, como usado aqui, refere a uma terapia a base de um antipsicótico indistintamente selecionado do grupo consistindo de um antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, um antipsicótico de média potência de bloqueio de DRD2, e um antipsicótico de alta potência de bloqueio de DRD2. Assim, em uma modalidade preferida, a qualquer terapia a base de antipsicótico é selecionada a partir do grupo consistindo de um antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, um antipsicótico de média potência de bloqueio de DRD2, e um antipsicótico de alta potência de bloqueio de DRD2. Em uma modalidade mais preferida, o antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 é selecionado a partir do grupo consistindo de clozapina, ziprasidona, quetiapina e olanzapina. Em outra modalidade mais preferida, o antipsicótico de média potência de bloqueio de DRD2 é selecionado do grupo consistindo de amisulprida, risperidona e zuclopenixol. Em outra modalidade mais preferida, o antipsicótico de alta potência de bloqueio de DRD2 é selecionado a partir do grupo consistindo de haloperidol e clorpromazina.

[63] Kits da invenção

[64] A presente invenção também contempla a preparação dos kits para uso de acordo com a presente invenção.

[65] Assim, em outro aspecto geral, a presente invenção diz respeito a um kit (aqui referido como o “kit da invenção”), compreendendo reagentes adequados para determinar a sequência dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639, em que os reagentes do kit compreendem sondas de DNA ou RNA.

[66] Kits adequados incluem vários reagentes para uso de acordo com a presente invenção em recipientes adequados e materiais de acondicionamento, incluindo tubos, agulhas, e embalagens retráteis e moldadas a ar. Adicionalmente, os kits da invenção podem conter instruções para o uso simultâneo, sequencial ou separado dos diferentes componentes que estão no kit. Ditas instruções podem estar na forma de material impresso ou na forma de um suporte eletrônico capaz de armazenar instruções tais de modo que elas possam ser lidas por um paciente, tal como um meio de armazenamento eletrônico (discos magnéticos, fitas e semelhantes), meio óptico (CD-ROM, DVD) e semelhantes. Adicionalmente ou alternativamente, o meio pode conter endereços de internet que forneçam as ditas instruções.

[67] Materiais adequados para inclusão em um kit exemplar de acordo com a presente invenção compreendem um ou mais dos seguintes: pares de iniciadores de PCR específico de gene (oligonucleotídeos) que recozem os domínios da sequência de DNA ou cDNA que flanqueiam os SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639; reagentes capazes de amplificar um domínio de sequência específico em tanto DNA ou cDNA genômico sem o requerimento de realizar PCR; reagentes requeridos para discriminar entre os vários possíveis alelos nos domínios de sequência amplificados por amplificação de PCR ou não-PCR (p.ex., restrição de endonucleases, oligonucleotídeo que recoze preferencialmente a um alelo do polimorfismo, incluindo aqueles modificados para conter enzimas ou grupos químicos fluorescentes que amplificam o sinal dos oligonucleotídeos e fazem discriminação dos alelos mais robustos); ou reagentes requeridos a fisicamente separar produtos derivados de vários alelos (p.ex. agarose ou poliacrilamida e um tampão a ser usado em eletroforese, colunas de HPLC, géis de SSCP, géis de formamida ou um suporte de matriz para MALDI-TOF).

[68] Especificamente contemplados são kits compreendendo dois ou mais oligonucleotídeos específicos de alelo ou pares de oligonucleotídeos, em que cada dos oligonucleotídeos específicos de alelo ou par de oligonucleotídeo é direcionado a um dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639. Será apreciado que neste contexto o termo “direcionado a” significa um oligonucleotídeo ou par de oligonucleotídeo capaz de identificar o alelo presente no SNP. Por meio de ilustração, a presente invenção contempla um kit compreendendo um conjunto de sonda, compreendendo uma pluralidade de sondas de oligonucleotídeo que interrogam os SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639, em que as ditas sondas de oligonucleotídeo compõem até pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90% das sondas de oligonucleotídeo no conjunto de sondas.

[69] Em uma modalidade particular, o kit inclui um conjunto de pelo menos quatro sondas de oligonucleotídeo, cada sonda de oligonucleotídeo específica a um alelo dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639, em que as ditas sondas de oligonucleotídeo compõem pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90% das sondas de oligonucleotídeo no conjunto de sondas. Em uma modalidade preferida, o kit inclui um conjunto de quatro sondas de oligonucleotídeo, cada específica a um alelo dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639.

[70] Em uma modalidade particular, o kit inclui um conjunto de pelo menos quatro sondas de par de oligonucleotídeo, cada sonda de par de oligonucleotídeo específica a um alelo dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639, em que as ditas sondas de par de oligonucleotídeo compõem pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90% das sondas de oligonucleotídeo no conjunto de sondas. Em uma modalidade preferida, o kit inclui um conjunto de quatro sondas de par de oligonucleotídeo, cada específica a um alelo dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639.

[71] Em outro aspecto, a presente invenção diz respeito ao uso de um kit de acordo com a invenção para prever o início de EPS induzido por um tratamento à base de antipsicótico em um paciente com base na sequência de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639. As particularidades do kit de acordo com a invenção tem sido descritas em detalhe no contexto do kit da invenção e são aplicadas da mesma maneira no contexto dos usos do dito kit.

Terapias personalizadas da invenção

[72] O segundo método da invenção definido acima também permite fornecer terapias personalizadas para pacientes sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos. Em particular, pacientes que são considerados como tendo um alto risco de desenvolver EPS serão mais provavelmente beneficiados de uma terapia a base de antipsicótico conhecida a ter uma baixa probabilidade de induzir EPS. Reciprocamente, pacientes mostrando baixo risco em desenvolver EPS podem lidar com qualquer terapia a base de antipsicótico.

[73] Assim, em outro aspecto, a invenção diz respeito a um antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 para uso no tratamento de uma doença tratável com antipsicóticos em um paciente (aqui referido como “terapia personalizada da invenção”), em que o dito paciente é selecionado de acordo com o segundo método da invenção.

[74] As particularidades do segundo método da invenção tem sido descritas em detalhes no contexto do dito segundo método da invenção, e são aplicadas com o mesmo significado no contexto da terapia personalizada de acordo com a invenção.

[75] Os termos “paciente”, “antipsicótico”, “tratamento”, “doença tratável com antipsicóticos”, e “antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2” e suas particularidades tem sido descritos em detalhes no contexto do primeiro método da invenção e são usados com o mesmo significado no contexto da terapia personalizada de acordo com a invenção.

[76] Em uma modalidade particular, o antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 é selecionado a partir do grupo consistindo de clozapina, ziprasidona, quetiapina e olanzapina.

[77] Em outra modalidade particular, a terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 adicionalmente compreende um adjuvante antiparkinsoniano. Em uma modalidade mais preferida, o adjuvante antiparkinsoniano é um anticolinérgico. Os termos “adjuvante” e “antiparkinsoniano”, e suas particularidades tem sido descritos em detalhes no contesto do segundo método da invenção e são usados com o mesmo significado no contexto da terapia personalizada da invenção.

Usos da invenção

[78] Em outro aspecto, a invenção diz respeito ao uso dos SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639 para prever o início de EPS induzida por um tratamento à base de antipsicótico em um paciente (aqui referido como “primeiro uso da invenção”).

[79] Em uma modalidade particular do primeiro uso da invenção, a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 1 é indicativa de que existe um alto risco do paciente em desenvolver EPS.

[80] Em outra modalidade particular do primeiro uso da invenção, a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 2 é indicativa de que existe um baixo risco do paciente em desenvolver EPS.

[81] Em outro aspecto, a invenção diz respeito ao uso de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639 para selecionar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 (aqui referido como o “segundo uso da invenção”).

[82] Em uma modalidade particular do segundo uso da invenção, o paciente é selecionado para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 se a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 1 é detectada na amostra.

[83] Em outro aspecto, a invenção diz respeito ao uso de SNPs rs1130214, rs456998, rs7211818 e rs1053639 para selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequada para tratar um paciente sofrendo de uma doença tratável com antipsicóticos (aqui referidos como “terceiro uso da invenção”).

[84] Em uma modalidade particular do terceiro uso da invenção, a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 1 é indicativa de que o dito paciente é selecionado para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2.

[85] Em outra modalidade particular do primeiro uso da invenção, a presença de uma combinação alélica de acordo com a Tabela 2 é indicativa de que o paciente é selecionado para receber qualquer terapia a base de antipsicótico.

[86] Os termos e particularidades dos primeiro, segundo e terceiro métodos da invenção tem sido descritos em detalhe no contexto dos métodos da invenção e são usados com o mesmo significado no contexto dos usos de acordo com a invenção.

[87] A invenção é detalhada abaixo por meio dos seguintes exemplos que são meramente ilustrativos e não por meio de limitação do escopo da invenção.

EXEMPLOS Materiais e métodos Pacientes

[88] Cálculos de tamanho da amostra assumindo um nível de 5% de significância, 80% de potência e um risco de EPS (razão de probabilidade) de 2 associado com realizar os alelos estudados (frequências alélicas > 0,1). Cálculos foram realizados com software Quantol.2 (http://hydra.usc.edu/gxe).

[89] Um grupo de 321 pacientes psiquiátricos internados recebendo terapia de antipsicótico foi recrutado consecutivamente no Serviço de Psiquiatria do Hospital Clínico (Barcelona, Espanha) por um período de três anos (2002 - 2004). 241 pacientes deste grupo participaram no estudo farmacogenético de EPS apresentado aqui. Pacientes foram diagnosticados de acordo com o critério DSM-IV: 184 pacientes foram diagnosticados com esquizofrenia (n=125) e distúrbios relacionados (n=22 distúrbios esquizoafetivos; n=27 distúrbio psicótico agudo; n=9 distúrbio paranoico delirante; n=1 distúrbio esquizotípico); 40 foram diagnosticados como tendo distúrbios bipolares; e 17 tinham outros diagnósticos (incluindo distúrbio de personalidade, depressão psicótica, distúrbio de comportamento, comprometimento cognitivo leve e distúrbio obsessivo- compulsivo). EPS agudo induzido por medição antipsicótica foi avaliado usando a escala48 de Simpson-Angus. 69 pacientes apresentando EPS (Simpson-Angus > 3) durante o período de hospitalização e/ou um histórico de distúrbio de movimento foram considerados como casos. 172 pacientes sem EPS (Simpson-Angus < 3) durante o estudo ou anteriormente foram tomados como controles. Uma descrição inteira destas populações pode ser achada em estudos anteriores (Gassó et al, 2009, supra citado; Mas et al, 2012, Pharmacogenomics J 12:255-9). Consentimento informado por escrito e amostras de sangue inteiro foram obtidos de cada paciente. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Clínic.

[90] Para obter conjuntos de dados independentes para construção de previsão e avaliação de previsão, o conjunto de dados foi dividido em uma população de treinamento, e uma população de validação. Para este fim, divisão foi feita de acordo com o tratamento antipsicótico: um grupo de pacientes tratados com risperidona (n=114, 39 casos e 75 controles) (grupo 1) foi usado para treinar os dados e testar o melhor previsor; um segundo grupo (n=127, 30 casos e 97 controles) (grupo 2) com o resto dos pacientes tratados com outros antipsicóticos diferentes que risperidona (haloperidol n=27; clozapina n=24; amilsulprida n=3; olanzapina n=34; zuclopentixol n=6; ziprasidona n=10; quetiapina n=22) foi usado para validar o previsor. Como uma etapa final os autores da presente invenção testaram o previsor no grupo inteiro, referido como grupo 3 (n=241) (grupo 1 + grupo 3).

Seleção de SNPs e Genotipagem

[91] SNPs dos nove genes diferentes participando na regulação dos genes de caminho de mTOR foram selecionados de acordo com a seguinte estratégia: primeiro, uma pesquisa de literatura foi realizada usando várias bases de dados (PubMed, Ensembl, Genetic Association Database, SZGene, PDGene, AlzGene, MSGene) para encontrar SNPs naqueles genes que foram associados com distúrbios mentais; segundo, se nenhum SNP poderia ser achado, SNPs associados com outras doenças foram olhados pois esta associação poderia significar uma mudança funcional na proteína; terceiro, se por algum gene nenhum SNP pudesse ser selecionado das etapas anteriores, uma pesquisa foi realizada usando base de dados PupaSuit para detectar SNPs com funcionalidade prevista; finalmente o tipo (codificação sinônima, codificação não-sinônima, íntron, mRNA utr) e frequência do SNP foram verificados com a base de dados de SNP NCBIs (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp). Uma frequência menor que 10% leva à exclusão. Os SNPs selecionados são especificados na Tabela 3.

[92] Polimorfismos (Tabela 3) foram detectados com PCR em tempo real por ensaios pré-projetados de discriminação alélica TaqMan (ensaios de genotipagem TaqMan-SNP; sonda C_32127211 20 para detectar rs7874234, sonda C_3282533_10 para detectar rsl3335638, sonda C_ 11647371_10 para detectar rs2024627, sonda C_26352825_10 para detectar rs1130214, sonda C_31167105_10 para detectar rs456998, sonda C_8701299_10 para detectar rsl801582, sonda C_2747617_30 para detectar rs3737597, sonda C_1971465_10 para detectar rs7211818, sonda C_9596692_10 para detectar rsl053639), de Applied Biosystems de acordo com o guia do fabricante (Applied Biosystems, Foster City, California).Tabela 3: Lista de genes selecionados do caminho mTOR e SNPs com alelos correspondentes e informação de funcionalidade, junto com o valor-p para equilíbrio de Hardy-Weinberg, as frequências alélicas nos casos (EPS) e controles (sem EPS), e o valor-p da análise de associação alélica ajustado por sexo e idade no Grupo 1.

1Sublinhados os alelos associados 2valor-p para o equilíbrio de Hardy-Weinberg nos casos e controles 3Frequência de alelo nos casos (EPS) 4Frequência de alelos nos controles (sem EPS) 5Após correção de bonferroni, valor-p significativo < 0,005.

Estatísticas

[93] Para estimar a contribuição independente de cada SNP a risco de EPS, frequências de genótipo foram avaliadas por meios de métodos multivariantes com base em análise de regressão logística, usando o pacote SNPassoc R. Também, dados de SNP foram verificados por qualquer saída do equilíbrio de Hardy-Weinberg em ambas populações, casos e controles. As interações gene-gene foram analisadas por redução de dimensionalidade de multi-fator (MDR), como descrito em outro lugar, usando o software MDR 2.0 disponível no projeto de fonte aberta MDR (www.epistasis.org/software.html). Primeiro, usando Grupo 1 todas combinações de SNP possíveis foram construídas testando todas possíveis duas a quatro interações de loci usando validação cruzada em 10 vezes em uma pesquisa exaustiva (a amostra foi dividida em dez partes, usando nove partes para treinar os dados, e uma parte para testar. O processo foi repetido dez vezes usando cada vez uma parte diferente para testar). Como parâmetros de saída, os autores da presente invenção consideraram consistência da validação cruzada (medição da consistência da identificação das variações selecionadas com base no melhor modelo aplicado à computação durante validação cruzada em 10 vezes), precisão equilibrada de teste (medição do grau no qual a interação precisamente prevê situações de caso- controle e é a média dos testes realizados na validação cruzada em 10 vezes (etiqueta 1 indica boa previsão pelo modelo; etiqueta 0,5 indica que o modelo não foi melhor que o acaso em selecionar casos dos controles) e significância estatística (o valor-p do melhor modelo foi corrigido por teste múltiplo por 10.000 trocas com o Módulo 1.0 de Teste de Troca de MDR). Segundo, um atributo multiloco novo com o melhor modelo obtido foi criado. Este é o modelo com os melhores valores de saída descrito acima. O novo atributo foi construído e reanalisado de modo a calcular a estatística no conjunto de dados inteiro do Grupo 1, obtendo a razão de probabilidade e seu intervalo de confiança, valor-p, sensibilidade (TP/TP+FN, medições da habilidade em prever corretamente casos de EPS), especificidade (TN/TN+FP, medições da habilidade em rejeitar corretamente controles sem EPS), exatidão (TP+TN/TP+TN+FP+FN, medições da habilidade em prever corretamente pacientes com EPS e sem EPS) e precisão (TP/TP+FP, medição dos casos de EPS verdadeiramente previstos). Em terceiro lugar, o atributo construído foi validado no Grupo 2, e Grupo 3 obtendo as mesmas estatísticas que no conjunto de dados inteiros do grupo 1; razão de probabilidade e seu intervalo de confiança, valor- p, sensibilidade, especificidade, exatidão e previsão.

Resultados

[94] Nenhum dos nove SNPs estudados sozinhos contribuem significativamente para o risco de EPS quando foram testados no Grupo 1. Tabela 3 resume as frequências alélicas nos casos e controles, a análise de regressão logística foi ajustada por sexo e idade, e também o valor-p para o equilíbrio de Hardy-Weinberg.

[95] Os resultados da análise de MDR exaustiva são dados na Tabela 4. Um modelo de quatro vias incluindo variantes de rs1130214 (AKT1), rs456998 (FCHSD1), rs7211818 (Raptor) e rs1053639 (DDIT4) tiveram os melhores desempenhos globais (testando exatidão 0,660) e uma consistência de validação cruzada de 10/10 (teste de permutação p<0,0001).

[96] Tabela 4: Resultados da análise de redução de dimensão de multifator usada no Grupo 1 mostrando o melhor modelo de todas possíveis interações de um a quatro locos e seus parâmetros de saída, incluindo treinamento e exatidão de teste, consistência de validação cruzada 10 vezes e modelo de valor-p.

1Exatidão no conjunto de dados de treinamento 10 vezes 2Exatidão no conjunto de dados de teste 10 vezes 3Consistência de validação cruzada 10 vezes 4valor-p do melhor modelo corrigido por 10.000 trocas

[97] Um atributo multiloco com os quatro SNPs identificados foi construído e testado no conjunto de dados inteiro do grupo 1. Dois tipos de atributos foram identificados, p.ex. predispondo (Tabela 1) e não predispondo (Tabela 2). Portadores do atributo de predisposição (78,9% dos casos vs. 11,8% dos controles) foram 27 vezes mais prováveis de sofrer EPS que aqueles sem o atributo (OU 27,91; 95% CI 9.81-79.39; valor-p<0,0001). Nos atributos genéticos de predisposição construída corretamente previram 97 dos 114 pacientes (85,1% de exatidão), incluindo 30 de 39 casos com EPS (76,9% de sensibilidade), e 67 de 75 controles sem EPS (89,3% de especificidade). O atributo previu 38 casos, 30 casos positivos e 8 falsos-positivos (78,9% de precisão) (Tabela 5).

[98] Tabela 5: Estatísticas de conjunto de dados inteiros após a aplicação de previsores no Grupo 1, Grupo 2 e Grupo 3.

[99] Como testando um previsor na mesma população usada para treinar os dados é excessivamente otimista, os autores da presente invenção usaram grupo 2 para independentemente validar os atributos construídos. Quando o atributo foi testado no conjunto de dados inteiro do grupo 2, a exatidão diminuiu para 73,23%. Como o grupo 2 foi formado por pacientes tratados com tipos diferentes de antipsicótico (em contraposição ao grupo 1, que inclui apenas pacientes em tratamento com risperidona), uma nova variável foi incluída no modelo para somar esta variabilidade. Antipsicóticos foram categorizados de acordo com sua potência de bloqueio a DRD2. Quando esta nova variável (potência de antipsicótico) foi adicionada ao atributo genético de predisposição identificado no grupo 1, a exatidão no grupo 2 aumentou até 80,36% (109 pacientes corretamente previstos de 127) (Tabela 5); portadores do novo atributo de predisposição (70,0% dos casos vs. 9,27% dos controles) foram 22 vezes mais prováveis a sofrer de EPS do que aqueles sem o atributo (OR 22,81; 95% CI 8.0664.50; valor-p < 0,0001).

[100] O novo previsor que inclui os quatro SNPs (identificados no grupo 1) e a potência do antipsicótico (incluído na análise do grupo 2) foram validados no grupo 3 (grupo 1 mais grupo 3). Portadores de atributo de predisposição (85,5% dos casos vs. 16,3% dos controles) foram 30 vezes mais prováveis de sofrer de EPS do que aqueles sem o atributo (OR 30,24; 95% CI 13.86-66.39; valor-p < 0,0001). Como pode ser observado na Tabela 3 valores semelhantes de exatidão (203 casos corretamente previstos de 241), sensibilidade (59 dos 69 casos com EPS corretamente previstos) e especificidade (149 controles sem EPS de 172 corretamente previstos) foram obtidos com grupo 3. Previsão foi diminuída no grupo 3 com respeito ao grupo 1 (de 78,95% a 67,82%).

Claims

1. Método para auxiliar a previsão do início de sintomas extrapiramidais (EPS) induzidos por um tratamento à base de antipsicótico em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende: i) determinar a sequência dos polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) de rs1130214 (SEQ ID NO: 1), rs456998 (SEQ ID NO: 2), rs7211818 (SEQ ID NO: 3) e rs1053639 (SEQ ID NO: 4) em uma amostra compreendendo material genético do dito indivíduo, e ii) prever o risco do dito indivíduo desenvolver EPS com base na sequência dos ditos SNPs.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a presença de uma combinação alélica de acordo com haplótipos A-S é indicativa de que existe um alto risco de o indivíduo desenvolver EPS, ou em que a presença de uma combinação alélica de acordo com haplótipos i-xxvii é indicativa de que existe um baixo risco de o indivíduo desenvolver EPS, em que os haplótipos A-S são definidos como: Tabela 1:

para cada um dos SNPs na Tabela 1, 0 = homozigose para o alelo 1; 1 = um dos SNPs na Tabela 1, heterozigose para alelo 0 = homozigose 1/alelo 2; 2 = Homozigose para alelo 2; para rs1130214 (SEQ ID NO :1), o alelo 1 é um gene em que a 27a base na SEQ ID NO:1 é G; alelo 2 é um gene em que a 27a base na SEQ ID NO:1 é T; para rs456998 (SEQ ID NO: 2), o alelo 1 é um gene em que a 27a base na SEQ ID NO:2 é T; alelo 2 é um gene em que a 27a base na SEQ ID NO:2 é G; para rs7211818 (SEQ ID NO :3), alelo 1 é um gene em que a 27a base na SEQ ID NO:3 é A; alelo 2 é um gene em que a 27a base na SEQ ID NO:3 é G; para rs1053639 (SEQ ID NO :4), alelo 1 é um gene em que a 27a base na SEQ ID NO:4 é T; alelo 2 é um gene em que a 27a base na SEQ ID NO:4 é A; e em que haplótipos i-xxvii são definidos como: Tabela 2:

para cada um dos SNPs na Tabela 1, 0 = Homozigose para o alelo 1; 1 = Heterozigose para o alelo 1/alelo 2; 2= Homozigose para o alelo 2; para rs1130214 (SEQ ID NO:1), alelo 1 é um gene em que a 27ª base na SEQ ID NO:1 é G; alelo 2 é um gene em que a 27ª base na SEQ ID NO:1 é T; para rs456998 (SEQ ID NO:2), alelo 1 é um gene em que a 27ª base na SEQ ID NO:2 é T; alelo 2 é um gene em que a 27ª base na SEQ ID NO:2 é G; para rs7211818 (SEQ ID NO:3), alelo 1 é um gene em que a 27ª base na SEQ ID NO:3 é A; alelo 2 é um gene em que a 27ª base na SEQ ID NO:3 é G; para rs1053639 (SEQ ID NO:4), alelo 1 é um gene em que a 27ª base na SEQ ID NO:4 é T; alelo 2 é um gene em que a 27ª base na SEQ ID NO:4 é A.

3. Método para auxiliar a seleção de um indivíduo que sofre de uma doença tratável com antipsicóticos para receber uma terapia à base de antipsicóticos de baixa potência de bloqueio de DRD2, caracterizado pelo fato de que compreende: i) determinar a sequência dos SNPs rs1130214 (SEQ ID NO:1), rs456998 (SEQ ID NO:2), rs7211818 (SEQ ID NO:3) e rsl053639 (SEQ ID NO:4) em uma amostra compreendendo material genético do dito indivíduo, e ii) selecionar o dito indivíduo para receber uma terapia à base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 com base na sequência dos ditos SNPs.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é selecionado para receber uma terapia à base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 se a presença de uma combinação alélica dos haplótipos A-S da Tabela 1, conforme definida na reivindicação 2, for detectada na amostra.

5. Método para auxiliar na seleção de uma terapia à base de antipsicótico adequada para tratar um indivíduo que sofre de uma doença tratável com antipsicóticos, caracterizado pelo fato de que compreende: i) determinar a sequência de SNPs rs1130214 (SEQ ID NO:1), rs456998 (SEQ ID NO:2), rs7211818 (SEQ ID NO:3) e rsl053639 (SEQ ID NO:4) em uma amostra compreendendo material genético do dito indivíduo, e ii) selecionar uma terapia a base de antipsicótico adequada com base na sequência de ditos SNPs, em que dito antipsicótico é selecionado do grupo que consiste em uma terapia à base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 e qualquer terapia à base de antipsicótico.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a presença de uma combinação alélica dos haplótipos A-S da Tabela 1, conforme definida na reivindicação 2, é indicativa de que o dito indivíduo é selecionado para receber uma terapia à base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, e em que a presença de uma combinação alélica dos haplótipos i-xxvii da Tabela 2, conforme definida na reivindicação 2, é indicativa de que o indivíduo é selecionado para receber qualquer terapia à base de antipsicótico.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 e 6, caracterizado pelo fato de que qualquer terapia à base de antipsicótico é selecionada do grupo que consiste em um antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, um antipsicótico de média potência de bloqueio de DRD2, e um antipsicótico de alta potência de bloqueio de DRD2.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 7, caracterizado pelo fato de que a terapia à base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 compreende adicionalmente um adjuvante antiparkinsoniano.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o antiparkinsoniano é um anticilinérgico.

10. Antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 para o tratamento de uma doença tratável com antipsicóticos, caracterizado pelo fato de que o dito antipsicótico é usado no tratamento de um indivíduo selecionado por um método, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 3 e 4, ou um indivíduo em que uma amostra contendo seu material genético isolado mostra uma combinação alélica de acordo com haplótipos A-S da Tabela 1, conforme definida na reivindicação 2, nos polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) de rs1130214 (SEQ ID NO:1), rs456998 (SEQ ID NO:2), rs7211818 (SEQ ID NO:3) e rs 1053639 (SEQ ID NO:4).

11. Antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o dito tratamento compreende adicionalmente um adjuvante antiparkinsoniano.

12. Antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o antiparkinsoniano é um anticolinérgico.

13. Uso do SNPs rs1130214 (SEQ ID NO:1), rs456998 (SEQ ID NO:2), rs7211818 (SEQ ID NO:3) e rsl053639 (SEQ ID NO:4) caracterizado pelo fato de ser para auxiliar a previsão do início de EPS induzido por um tratamento à base de antipsicótico em um indivíduo, para obter dados para selecionar um indivíduo que sofre de uma doença tratável com antipsicóticos para receber uma terapia à base de antipsicóticos de baixa potência de bloqueio de DRD2, ou para auxiliar na seleção de uma terapia à base de antipsicótico adequada para tratar um indivíduo que sofre de uma doença tratável com antipsicóticos, em que a presença de uma combinação alélica de haplótipos A-S da Tabela 1, conforme definida na reivindicação 2, é indicativa de que uma terapia à base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 é selecionada para tratar o dito paciente e, em que a presença de uma combinação alélica de haplótipos i-xxvii da Tabela 2, conforme definida na reivindicação 2, é indicativa de que qualquer terapia à base de antipsicótico de potência de bloqueio de DRD2 é selecionado para tratar o dito paciente.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a presença de uma combinação alélica de haplótipos A-S da Tabela 1, conforme definida na reivindicação 2, é indicativa de que existe um alto risco do indivíduo desenvolver EPS, ou em que a presença de uma combinação alélica de haplótipos i-xxvii da Tabela 2, conforme definida na reivindicação 2, é indicativa de que existe um baixo risco do indivíduo desenvolver EPS, ou em que o indivíduo é selecionado para receber uma terapia à base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2 se a presença de uma combinação alélica de haplótipos A-S da Tabela 1, conforme definida na reivindicação 2, for detectada na amostra, ou em que a presença de uma combinação alélica de haplótipos A-S da Tabela 1, conforme definida na reivindicação 2, é indicativa de que o dito indivíduo é selecionado para receber uma terapia a base de antipsicótico de baixa potência de bloqueio de DRD2, ou em que a presença de uma combinação alélica de haplótipos i-xxvii da Tabela 2, conforme definida na reivindicação 2, é indicativa de que o indivíduo é selecionado para receber qualquer terapia à base de antipsicótico.