BR112015004003B1

BR112015004003B1 - aparelho para processar material biológico humano contendo tecido fibroso e método para processar tecido adiposo

Info

Publication number: BR112015004003B1
Application number: BR112015004003A
Authority: BR
Inventors: J Katz Adam; Llull Ramon; W Cimino William
Original assignee: The Gid Group Inc
Priority date: 2012-09-06
Filing date: 2013-09-05
Publication date: 2020-05-19
Also published as: US20190085283A1; BR112015004003A2; EP3075841A1; WO2014039697A1; EP2834344A1; US20160030486A1; US20220325228A1; EP3896145A1; EP2834344B1; US11261418B2; EP3075841B1

Abstract

1/1 resumo aparelho de processamento de tecido e método para processar tecido adiposo um aparelho portátil útil para coleta e processamento de material biológico humano contendo gordura, tal como extraído durante um procedimento de lipoplastia para preparar um produto concentrado (por exemplo, fração vascular, estromática) ou uma composição de enxerto de gordura. o aparelho tem um recipiente com um volume de contenção com um volume de retenção de tecido e um volume de filtrado, separados por um filtro e com uma porção afilada para um volume de coleta para coletar o produto concentrado. aberturas de entrada e de sucção proporcionam acesso ao volume de retenção de tecido e volume de filtrado, respectivamente, e uma abertura de extração fornece acesso versátil para a remoção de material processado concentrado alvo ou material de enxerto de gordura, cujo acesso pode ser através de um lúmen através de um eixo de misturador rotativo. as aberturas de acesso podem ser configuradas para acesso somente a partir de cima do recipiente. o aparelho pode incluir um coletor de tecido disposto no volume de retenção de tecido para contatar e recolher colágeno ou outro tecido fibroso. um método de processamento de tecido adiposo para concentrar células vasculares leuco estromáticas inclui processamento de múltiplas etapas utilizando um recipiente portátil.

Description

“APARELHO PARA PROCESSAR MATERIAL BIOLÓGICO HUMANO CONTENDO TECIDO FIBROSO E MÉTODO PARA PROCESSAR TECIDO ADIPOSO

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido de patente reivindica um benefício do pedido de patente US 61/697.716 intitulado “Tissue Processing Apparatus And Method For Processing Adipose Tissue”, depositado em 6 de setembro de 2012. Esse pedido incorpora mediante referência todo o conteúdo de todos e de cada um dos seguintes pedidos de patentes: pedido de patente US 61/697.716; Pedido de patente PCT/US2013/021156, depositado em 11 de janeiro de 2013 e designando os Estados Unidos; pedido de patente US 61/585.566 depositado em 11 de janeiro de 2012; pedido de patente

PCT/US2011/043451, depositado em 8 de julho de 2011, que designou os Estados Unidos e entrou na fase nacional dos Estados Unidos como pedido US 13/808.550; e pedido de patente US 61/363.150, depositado em 9 de julho de 2010.

CAMPO DA INVENÇÃO

[0002] A invenção refere-se a um aparelho relacionado à coleta e processamento de material biológico humano e aos métodos de processamento de tecido adiposo, por exemplo, para preparar um enxerto de gordura ou um concentrado com células vasculares leuco estromáticas. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0003] O tecido adiposo é reconhecido como uma promissora fonte de células-tronco com pelo menos potencial de diferenciação multipotente. Lipoaspirado obtido durante um procedimento de

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2/106 lipoplastia, tal como cirurgia de lipoaspiração, pode ser processado para preparar uma assim chamada fração vascular estromática (SVF) que é rica em células vasculares leuco estromáticas, que incluem as células-tronco. Processamento para preparar SVF pode incluir a lavagem de lipoaspirado com solução salina, seguida por digestão enzimática dos tecidos lavados utilizando colagenase, e centrifugação do material digerido para preparar o SVF na forma de um grânulo centrifugado. Tal coleta e processamento de tecido envolvem várias etapas, com transferência de conteúdo entre diferentes recipientes de processo para diferentes etapas de coleta e processamento de tecido, o que é complicado e oferece oportunidades significativas de erro ou contaminação.

[0004] Algumas tentativas foram feitas para conceber recipientes portáteis em que o lipoaspirado pode ser coletado e, em seguida, processado no interior do recipiente para digerir o tecido e preparar um concentrado rico em células vasculares leuco estromáticas. Os benefícios potenciais do uso de tais recipientes portáteis incluem uma menor necessidade de transferência de material entre os recipientes para executar diferentes etapas do processo e uma redução na necessidade de vários recipientes de processamento, especialmente concebidos. No entanto, tal processamento de múltiplas etapas em recipientes portáteis enfrenta significativas limitações de concepção e de funcionamento de equipamento e de processo, especialmente quando se tenta processar volumes relativamente grandes de tecido adiposo de

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3/106 uma só vez. Células vasculares leuco estromáticas desejadas, incluindo células-tronco, são sensíveis às condições de processamento e a viabilidade das células recuperadas pode sofrer significativamente se o processamento não for controlado adequadamente. Além disso, a recuperação das células a partir do recipiente é de importância crucial. Significativo potencial existe para perda de células valiosas para a recuperação a partir do recipiente, tal como pelas células que grudam ao equipamento interno e superfícies dentro do recipiente. Um problema com o processamento de múltiplas etapas em um único recipiente portátil é que o modelo de recipiente e as operações de processamento devem acomodar os diferentes requisitos de cada uma das diferentes etapas do processo a serem realizadas no recipiente único, e com limitações de volume graves em relação a um tamanho prático para tal recipiente portátil. Em comparação, os sistemas de processamento que envolvem a transferência de conteúdos entre vários recipientes diferentes para o desempenho de diferentes etapas do processo se beneficiam de uma capacidade para otimizar o projeto de equipamento e processo para cada recipiente de processo que é dedicada para o desempenho de uma única etapa de um processo global. Portanto, processamento de múltiplos contêineres tem vantagens significativas em termos de otimização de processos e equipamento passo-a-passo. Além disso, um projeto de múltiplos contêineres é mais adequado para automação, por exemplo, com transferência automatizada de material processado através de condutos entre os diferentes

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4/106 recipientes de processo ou com controle automatizado de parâmetros de processo para a uniformidade e controle de processo.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0005] Descreve-se um aparelho portátil, usos de tais aparelhos e métodos para o processamento de material biológico humano, e cujo material biológico pode conter tecido fibroso, tal como é o caso com o tecido adiposo. Tecido fibroso tal como colágeno aumenta a complexidade de processamento, por exemplo, devido ao potencial de entupimento de filtros e a interferência com a separação dos componentes celulares desejados. O tratamento pode incluir aplicações para preparar um material biológico lavado ou limpo ou para liberar e preparar um concentrado de partes de um insumo de material biológico. No contexto do tecido adiposo, o processamento pode ser dirigido para a preparação de tecido lavado para um enxerto de gordura ou para preparar um produto concentrado rico em células vasculares leuco estromáticas. Células vasculares leuco estromáticas podem ser aqui referidas também como células vasculares estromáticas ou células de frações vasculares estromáticas.

[0006] A obtenção de uma elevada recuperação de um concentrado de células vasculares leuco estromáticas viáveis a partir de tecido adiposo e a remoção eficaz de tal material concentrado de tal concentrado a partir do recipiente de uma maneira conveniente têm sido desafios operacionalmente significativos para o processamento de múltiplas etapas em recipiente único. Também desafiador tem sido proporcionar um

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5/106 modelo de aparelho de recipiente portátil que ofereça versatilidade em ser adaptável tanto para aplicações que envolvem a preparação do tecido adiposo lavado para enxerto de gordura e para aplicações que envolvem a digestão do tecido adiposo e entrega e concentração de células vasculares leuco estromáticas. A presença de componentes de tecido fibroso, tal como colágeno, no tecido adiposo, complica o processamento, e especialmente no contexto de separar células vasculares leuco estromáticas para recuperação em um concentrado com um elevado rendimento em um produto concentrado de alta qualidade a partir de um recipiente de processamento de múltiplas etapas. Além disso, mesmo após a preparação de tal concentrado de células em um recipiente de processamento de múltiplas etapas, a remoção do material de concentrado de células a partir do recipiente é complicada pela presença de outros materiais que possam permanecer no recipiente após a preparação do concentrado de células e uma possível perda física de células vasculares leuco estromáticas através de aderência de células às superfícies expostas no interior do recipiente (por exemplo, superfícies das paredes do recipiente, filtros, misturadores ou outros componentes do aparelho dispostos no recipiente).

[0007] Uma primeira modalidade da descrição é fornecida por um aparelho para processamento de material biológico humano contendo tecido fibroso. O tecido fibroso pode compreender colágeno e/ou outros componentes do tecido fibroso, por exemplo, como é habitualmente o caso com

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6/106 lipoaspirado. O aparelho inclui um coletor de tecido disposto em um volume de retenção de tecido de um recipiente. A presença de tecido fibroso apresenta um problema significativo em relação à recuperação das células vasculares leuco estromáticas a partir de lipoaspirado, especialmente durante o processamento de volumes grandes de tecido através de múltiplas etapas de processamento em um único recipiente. Este tecido fibroso pode tender a aglomerar e entupir um filtro através do qual as células vasculares estromáticas passam para a coleta. Problemas com tecido fibroso podem ser reduzidos até certo ponto pela utilização de um pré-filtro a montante do recipiente para filtrar o tecido fibroso antes da introdução no recipiente. No entanto, tais pré-filtros não são fáceis de usar e introduzem complexidade adicional para o profissional médico executar uma operação de lipoplastia. Além disso, mesmo com a utilização de tal pré-filtro, um tecido fibroso pode ainda ser introduzido no recipiente e pode ter um impacto significativo na coleta de células do recipiente. A inclusão de um coletor de tecido no recipiente pode reduzir significativamente ou mesmo, em alguns casos, eliminar a necessidade e complexidade do uso de um pré-filtro separado para remover algum ou todo o tecido fibroso antes da introdução do tecido no recipiente para processamento.

[0008] O aparelho da primeira modalidade inclui um recipiente que tem um volume de contenção interno, o volume de contenção interno incluindo um volume de retenção de tecido e um volume de filtrado. Um filtro é disposto no

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7/106 interior do volume de contenção interno com o volume de retenção de tecido, em um lado do filtro e o volume de filtrado no outro lado do filtro com o volume de retenção de tecido e o volume de filtrado estando em comunicação de fluido através do filtro. Uma abertura de entrada, em comunicação de fluido com o volume de retenção de tecido é configurada para acessar o volume de retenção de tecido para a introdução de material biológico humano no volume de retenção de tecido. Uma abertura de sucção em comunicação de fluido com o volume de filtrado é configurada para acessar ao volume de filtrado para aspiração de material a partir do volume de filtrado. Um coletor de tecido é disposto no volume de retenção de tecido e giratório em relação ao recipiente, em pelo menos uma primeira direção de rotação em torno de um eixo geométrico de rotação. O coletor de tecido pode incluir pelo menos um membro dentado que se desloca

através	de uma parte	do	volume de	retenção	de
tecido,	quando o coletor	de	tecido	é girado	na
primeira	direção. O	membro	dentado pode	ser

configurado com uma pluralidade de dentes para coletar e reter o tecido fibroso quando o coletor de tecido é girado na primeira direção em contato com material biológico humano contendo o tecido fibroso disposto no volume de retenção de tecido.

[0009] Um número determinado de aperfeiçoamentos de características e de características adicionais é aplicável ao aparelho da primeira modalidade. Esses aperfeiçoamentos de características e características adicionais podem ser usados individualmente ou em qualquer

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8/106 combinação. Como tal, cada uma das seguintes características pode ser, mas não precisa ser utilizada com qualquer outra característica ou combinação da primeira modalidade, ou qualquer outra modalidade da descrição.

[0010] Cada um desses membros dentados pode incluir pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco dentes e pode incluir um espaço aberto entre os dentes de cada par dos dentes adjacentes. Cada um desses membros dentados pode incluir até 10, até 20 ou até 25 ou mais de tais dentes. Uma borda dianteira de um membro dentado

pode	ser constituída com	pelo	menos	10	por	cento
pelo	menos 20	por	cento	pelo	menos	30	por	cento
pelo	menos 40	por	cento	pelo	menos	50	por	cento

pelo menos 60 por cento ou mais de espaços abertos. Tal borda de ataque de um membro dentado pode ser constituída por não mais do que 99 por cento, 90 por cento, 80 por cento, 70 por cento, 60 por cento ou 50 por cento de dentes. Por espaço na borda dianteira de um membro dentado composta de tais espaços abertos, entende-se o espaço entre os topos dos dentes, e da mesma forma o espaço de uma borda dianteira formada por um membro dentado refere-se ao espaço ao longo da borda ocupado pelos topos dos dentes.

[0011] O coletor de tecido pode incluir pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, ou pelo menos 5 de tais membros dentados. O coletor de tecido pode incluir de 6 até 10, ou mesmo mais, de tais membros dentados. Quando o coletor de tecido inclui vários membros dentados, alguns ou todos os tais membros dentados podem ter a mesma

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9/106 configuração ou uma configuração diferente, por exemplo, em relação ao tamanho do membro, desenho do dente, número de dentes, densidade de dentes, ou outras características de concepção.

[0012] O aparelho pode incluir pelo menos 1 ou pelo menos 2 ou mais desses coletores de tecido. O aparelho da primeira modalidade pode incluir apenas um, até dois ou mais desses coletores de tecido; quando o aparelho inclui uma pluralidade de coletores de tecido, dois ou mais dos coletores de tecido podem ser da mesma configuração ou de diferentes configurações.

[0013] Um membro dentado pode ter uma primeira extremidade localizada radialmente na direção do eixo geométrico de rotação e uma segunda extremidade localizada radialmente afastada do eixo geométrico. Tal segunda extremidade pode estar localizada a uma distância a partir do eixo geométrico de pelo menos um centímetro, pelo menos 2 centímetros, pelo menos 3 centímetros ou, pelo menos cinco centímetros ou mais a partir do eixo geométrico. Tal segunda extremidade pode estar localizada a uma distância do eixo geométrico de até 6 centímetros, até 8 centímetros, até 10 centímetros ou mais a partir do eixo geométrico.

[0014] Os dentes podem se projetar para um lado dianteiro, ou borda do membro dentado quando o coletor de tecido é girado na primeira direção. Os dentes podem se projetar em um plano de rotação do membro dentado quando o coletor de tecido é girado na primeira direção. Os dentes podem ter uma altura em uma faixa que tem um limite inferior de 1 milímetro, 2 milímetros, 3 milímetros

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10/106 ou 5 milímetros e um limite superior de 20 milímetros, 15 milímetros ou 10 milímetros em relação a uma parte inferior de um espaço aberto adjacente.

[0015] O aparelho da primeira modalidade pode ter um ou mais do que um impulsor de mistura no volume de retenção de tecido. Um impulsor de mistura pode ser configurado para direcionar o fluxo axial do impulsor de mistura na direção do coletor de tecido. Tal impulsor de mistura pode incluir pelo menos uma parte configurada para raspar uma parte do filtro quando o impulsor de mistura é operado. Cada tal parte de um impulsor de mistura configurada para raspar uma parte do filtro pode incluir uma parte de borda periférica de uma pá de impulsor. Pelo menos uma parte de cada tal parte do filtro pode estar em uma parte afilada do filtro que está disposta em uma parte afilada do volume de contenção interno. O coletor de tecido e o tal impulsor de mistura podem ser coaxiais e rotativos em torno de um eixo geométrico comum de rotação. Um espaçamento ao longo de um eixo geométrico, tal como entre um impulsor de mistura e um membro dentado do coletor de tecido pode ser de pelo menos 0,25 centímetros, pelo menos 0,5 centímetros pelo menos 1 centímetro ou pelo menos, 2 centímetros. Um espaçamento ao longo do eixo geométrico entre tal impulsor de mistura e um membro dentado do coletor de tecido pode ser de até 3 centímetros, até 5 centímetros ou ainda mais. Tal impulsor de mistura pode estenderse a uma distância radial a partir do primeiro eixo geométrico e o coletor de tecido pode estender-se a

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11/106 uma segunda distância radial a partir do eixo geométrico, com a segunda distância radial que é maior do que a primeira distância radial. Essa segunda distância radial pode ser de pelo menos 1 milímetro, de pelo menos 2 milímetros ou de pelo menos 3 milímetros maior do que tal primeira distância radial. Essa segunda distância radial pode ser de não mais do que 3 centímetros, não mais do que 2 centímetros, ou não mais do que 1 centímetro maior do que a tal primeira distância radial.

[0016] Além de tal impulsor de mistura, que pode ser um primeiro impulsor de mistura, o aparelho da primeira modalidade pode incluir um ou mais impulsores de mistura adicionais dispostos no volume de retenção de tecido. O aparelho da primeira modalidade pode incluir um segundo impulsor de mistura configurado para dirigir o fluxo axial em uma direção para longe a partir do coletor de tecido quando o eixo giratório é girado na primeira direção. O coletor de tecido e tal segundo impulsor de mistura podem ser coaxiais e rotativos em torno de um eixo geométrico comum na primeira direção. Um espaçamento ao longo de um eixo geométrico entre tal segundo impulsor de mistura e um membro dentado do coletor de tecido pode ser de pelo menos 0,25 centímetros, de pelo menos 0,5 centímetros, de pelo menos, 1 centímetro ou de pelo menos 2 centímetros. Um espaçamento ao longo de um eixo geométrico entre tal segundo impulsor de mistura e um membro dentado do coletor de tecido pode ser de até 3 centímetros, de até 5 centímetros ou ainda mais. Tal segundo impulsor de

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12/106 mistura pode se estender por uma terceira distância radial a partir de um eixo geométrico que é de pelo menos 1 milímetro, de pelo menos 2 milímetros ou, de pelo menos 3 milímetros, menor do que a distância radial a partir do eixo geométrico, na qual o coletor de tecido pode se estender. Tal terceira distância radial pode ser de não mais do que 3 centímetros, não mais do que 2 centímetros, ou não mais do que 1 centímetro, maior do que a distância radial na qual o coletor de tecido pode se estender.

[0017] O aparelho da primeira modalidade pode ser orientável em uma primeira orientação em que a abertura de entrada e a abertura de saída são configuradas para acesso a partir de cima do recipiente para dentro do volume de contenção interno. O aparelho da primeira modalidade pode ser configurado para ter acesso total ao volume de contenção interno a partir de cima do recipiente na primeira orientação.

[0018] O aparelho da primeira modalidade pode incluir uma abertura de extração configurada para acessar o volume de contenção interno para remover o material biológico processado a partir do volume de contenção interno. Tal abertura de extração pode ser configurada para acesso a partir de cima do recipiente para a contenção do volume interno, quando o aparelho estiver orientado em uma primeira orientação. O acesso através de tal abertura de extração pode ser através de um lúmen que se prolonga através de um eixo giratório alinhado com o eixo geométrico. Em uma configuração alternativa, nenhum acesso pode

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13/106 ser fornecido para dentro do volume de contenção através de um lúmen interno que se prolonga através de um eixo giratório.

[0019] Uma obstrução permanente pode ser colocada em tal lúmen para impedir tal acesso. O aparelho pode ser configurado para ser utilizado para preparar uma transferência de gordura, ou enxerto de gordura, quando tal obstrução permanente é colocada em tal lúmen através de um eixo giratório. Tal obstrução permanente pode estar na forma de um caldeamento ou de soldadura ou de um bujão permanente. Como uma alternativa, um eixo geométrico de misturador sólido pode ser utilizado em vez de uma obstrução em um lúmen. Tecido processado no volume de retenção de tecido, por exemplo, tecido adiposo lavado para utilização em um enxerto de gordura, pode ser removido a partir do volume de retenção de tecido a partir de uma abertura de acesso auxiliar ou adicional fornecida no volume de retenção de tecido. Tal abertura de acesso adicional pode proporcionar acesso através de uma parte superior do recipiente para dentro do volume de retenção de tecido. Para remover o tecido processado a partir do volume de retenção de tecido adiposo, uma seringa pode ser inserida ou acoplada com a abertura de acesso adicional e o aparelho inclinado para fazer com que o tecido processado no volume de retenção de tecido se acumule na vizinhança do orifício de acesso adicional para ser retirado para dentro da seringa. Como uma alternativa o tecido processado no volume de retenção de tecido pode ser removido através da abertura de entrada, que pode ser de um modo

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14/106 semelhante ao descrito para a tal abertura de acesso adicional.

[0020] O filtro pode ter um tamanho de separação de pelo menos 70 microns, de pelo menos 100 mícrons, de menos 150 mícrons, de pelo menos 175 microns ou, de pelo menos 200 microns. O filtro pode ter um tamanho de separação não superior a 800 microns, não superior a 700 microns, não superior a

600 microns, não superior a 500 microns, não superior a 475 microns, não superior a 450 microns, não superior a 425 microns, não maior do que 400 mícrons, não superior a 350 mícrons, não superior a

300 microns ou não superior a 250 microns. Para algumas aplicações, o filtro pode ter um tamanho de separação que é maior do que 400 mícrons, por exemplo, para aplicações de processamento de célula quando o aparelho da primeira modalidade deve ser usado para recuperar um concentrado de fração vascular estromática a partir de tecido adiposo. Embora as células vasculares estromáticas passem facilmente através de um filtro de 200 mícrons, um tamanho de filtro maior pode ser vantajoso para promover a recuperação da maior parte das células ou de substancialmente todas as células vasculares estromáticas no volume de filtrado. Filtros de tamanho menor podem entupir em um grau que reduz significativamente o rendimento das células em termos de coleta de células e recuperação do volume de filtrado. Em algumas outras aplicações, o filtro pode ter um tamanho de separação de 400 mícrons ou menos, por exemplo, para o processamento de tecido adiposo para utilização em uma operação de enxerto de gordura, ou de transferência de gordura. O

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15/106 filtro pode não ser tão susceptível a entupimento nessas aplicações e um filtro de tamanho menor permite a retenção desejada de tecido adiposo no volume de retenção de tecido. Por dimensão de separação, se quer dizer o tamanho em que o filtro realiza a separação das partículas que passam e das partículas rejeitadas pelo filtro durante a operação normal. O tamanho de separação pode ser determinado pelo tamanho das aberturas providas na superfície de um filtro, tal como o tamanho da malha de um filtro de saco de malha ou de um filtro de tela de malha rígida.

[0021] O aparelho da primeira modalidade pode ser configurado para ser recebido em uma centrífuga para a centrifugação do recipiente.

[0022] O aparelho da primeira modalidade pode compreender tecido biológico humano compreendendo tecido fibroso disposto no volume de retenção de tecido em contato com o membro dentado. O tecido fibroso pode compreender colágeno. Tecido a ser processado no aparelho da primeira modalidade pode compreender gordura removido de um paciente durante um procedimento lipoplastia (por exemplo, lipoaspirado). Por exemplo, o termo tecido pode ser aqui usado para se referir ao tecido íntegro, tecido rompido, fragmentos de tecido, e fluidos biológicos associados com ou separados a partir do tecido. O aparelho pode ser orientável em uma orientação de coleta para coleta de material biológico humano, ou tecido, tal como pode compreender tecido adiposo coletado durante um procedimento de lipoplastia. A orientação de coleta

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16/106 também é aqui referida como uma orientação de acesso ou uma primeira orientação, e os termos são usados alternadamente. Por conveniência de descrição, exceto quando observado, o aparelho é descrito como estando orientado em tal orientação de coleta. Como tal, referências relacionais, como para cima, baixo, cima, baixo, acima, abaixo, em elevação, verticais, horizontais e outros, são em relação ao aparelho, como orientado na orientação de coleta. O aparelho pode ser configurado de tal modo que o aparelho pode ser suportado de maneira estável na orientação de coleta. Por exemplo, o aparelho pode ter uma base configurada para fazer a interface com uma superfície plana, substancialmente horizontal (por exemplo, topo de balcão ou topo de mesa) para suportar de forma estável o aparelho na orientação de coleta, ou pode ser realizada em uma estrutura de montagem que sustenta o aparelho na orientação de coleta. Embora esta orientação seja referida como uma orientação “de coleta” deve entender-se que o uso do aparelho não está limitado apenas na orientação de coleta ou que apenas coleta de material biológico humano possa ser realizada enquanto o aparelho está orientado na orientação de coleta. O aparelho pode ser vantajosamente configurado para permitir o desempenho de muitas operações diferentes, com o aparelho, quando o aparelho está orientado na orientação de coleta.

[0023] O aparelho da primeira modalidade pode ser utilizado em uma variedade de aplicações de processamento. O aparelho pode, por exemplo, ser utilizado para a preparação de

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17/106 concentrados ou partes separadas do material biológico humano coletado, por exemplo, para produzir uma fração vascular estromática rica em células vasculares leuco estromáticas, incluindo células-tronco, derivadas de tecido adiposo. Como outro exemplo, o aparelho pode ser usado para preparação de um enxerto de gordura compreendendo tecido adiposo. O aparelho tem uma concepção que acomoda a retenção de um material alvo (por exemplo, células vasculares leuco estromáticas ou gordura) em um único recipiente a partir da coleta, através da preparação de um produto desejado contendo o material alvo. Por material alvo, entende-se algum componente, ou componentes de alguma parte ou partes de material biológico humano coletado de interesse para a recuperação após transformação no aparelho, tal como recuperação de uma forma concentrada ou modificada em relação ao material biológico humano colhido (por exemplo, concentrado de fração vascular estromática rico em células-tronco e outras células vasculares leuco estromáticas, fração contendo gordura limpa para aplicações de enxerto de gordura).

[0024] O aparelho da primeira modalidade pode ser utilizado durante várias etapas de processamento para preparar, por exemplo, um concentrado de fração vascular estromática (por exemplo, concentrado rico em células vasculares leuco estromáticas) a partir de material biológico humano que compreende gordura ou um enxerto de gordura contendo tecido adiposo, sem a necessidade de transferir um material-alvo a ser processado entre diferentes recipientes para diferentes etapas

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18/106 de processamento. O aparelho pode ser utilizado inicialmente para coletar o material biológico humano (por exemplo, tecido e fluidos) durante um procedimento de lipoplastia ou outro procedimento de extração de tecidos, ou tecido que já tenha sido extraído em outro processo pode ser introduzido no aparelho de processamento. O aparelho e, portanto, também o recipiente do aparelho, pode ser portátil e facilmente transportável entre os locais onde as diferentes operações de coleta ou de processamento podem ser realizadas.

[0025] O aparelho da primeira modalidade pode ter um volume de coleta no interior do volume de filtrado (ou seja, é uma parte do volume de filtrado). O volume de coleta pode ter uma elevação inferior correspondente a uma elevação inferior do volume de filtrado. O volume de coleta pode ter uma elevação superior que é menor do que uma elevação inferior do volume de retenção de tecido.

[0026] O aparelho da primeira modalidade pode incluir uma abertura de extração em comunicação de fluido com o volume de contenção interno e configurada para remoção de material biológico obtido a partir do volume de contenção interno. Qualquer uma, ou todas, dentre a abertura de entrada, a abertura de sucção e a abertura de extração pode ser configurada para acesso a partir de cima do recipiente para dentro do volume de contenção interno. A abertura de extração pode estar localizada acima de uma parte do filtro, de modo que a ponta avançada de uma agulha hipodérmica atravessa o filtro, quando a ponta da agulha

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19/106 hipodérmica é avançada a partir da abertura de extração para dentro do volume de coleta. O volume de coleta pode incluir um nadir e a abertura de extração pode ser posicionada acima do ponto mais baixo de modo que a ponta de uma agulha hipodérmica introduzida através da abertura de extração pode ser avançada verticalmente para baixo, para a vizinhança do ponto mais baixo do volume de coleta.

[0027] O aparelho da primeira modalidade pode ser configurado para avançar uma agulha hipodérmica através de um lúmen e para fora da extremidade distal do lúmen para acessar ao volume de coleta com uma ponta de avanço da agulha hipodérmica. A extremidade distal do lúmen pode estar localizada no volume de retenção de tecido acima de uma parte do filtro, de modo que a ponta de avanço da agulha hipodérmica pode perfurar e passar através do filtro, quando a ponta da agulha hipodérmica sai da extremidade distal do lúmen e é avançada a partir da extremidade distal do lúmen para o volume de coleta. O volume de coleta pode incluir um nadir, e um eixo geométrico do lúmen podem ser alinhados de modo que a ponta de uma agulha hipodérmica que sai da extremidade distal do lúmen pode ser avançada para a vizinhança do ponto mais baixo do volume de coleta. A agulha hipodérmica pode, assim, acessar ao volume de coleta para permitir a injeção de material para dentro e/ou aspiração de material a partir do volume de coleta (por exemplo, a aspiração do concentrado de fração vascular estromática ou outro material biológico coletado processado de coleta no volume durante o processamento).

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[0028] O aparelho da primeira modalidade pode ser concebido para uso único, e perfurar o filtro com uma agulha hipodérmica pode vantajosamente proporcionar um mecanismo de segurança para impedir reutilização, e os riscos que lhe estão associados, ao danificar o filtro de uma forma que torna o filtro impróprio para reutilização.

[0029] Como observado, a abertura de sucção está em comunicação de fluido com o volume de filtrado. Por orifício de aspiração em comunicação de fluido com o volume de filtrado, entende-se que a abertura de sucção esteja ligada de modo fluido diretamente com o volume de filtrado, e não indiretamente através do volume de retenção de tecido e o filtro. A comunicação de fluido pode ser proporcionada por um conduto dedicado que se estende a partir da abertura de sucção para uma localização desejada dentro do volume de filtrado onde é desejado aplicar sucção diretamente para o volume de filtrado. A abertura de sucção pode estar em comunicação de fluido com uma parte afilada do volume de contenção interno através de um conduto que proporciona a comunicação do fluido entre o orifício de aspiração para um local no interior do volume de filtrado, que também está dentro da parte afilada do volume de contenção interno. O conduto pode prolongar-se através do volume de filtrado ao lado do orifício de aspiração para tal local dentro do volume de filtrado. A abertura de sucção pode ser colocada acima da parte afilada do volume de contenção interno. A abertura de sucção pode ser configurada para acesso pela

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21/106 abertura de sucção acima do recipiente. A abertura de sucção pode ser configurada para ligação a um sistema de vácuo para sucção de material a partir do volume de filtrado, tal como o material que passa através do filtro a partir do volume de retenção de tecido para o volume de filtrado.

[0030] O aparelho da primeira modalidade pode incluir várias aberturas de sucção. Por exemplo, o aparelho pode incluir uma primeira abertura de sucção tal como descrito no parágrafo anterior, que está em comunicação de fluido com um primeiro local no volume de filtrado no interior da parte afilada do volume de contenção interno através de um primeiro conduto, e o aparelho pode incluir uma segunda abertura de sucção através do qual os componentes que passam através do filtro a partir do volume de retenção de tecido para o volume de filtrado podem ser aspirados a partir do volume de filtrado através de um segundo conduto que se prolonga a partir da segunda abertura de sucção para um segundo local no volume de filtrado. O segundo conduto pode ser configurado para permitir o ajuste da elevação do segundo local no volume de filtrado.

[0031] Qualquer um ou mais dentre a abertura de entrada, a abertura de sucção de outras aberturas que dão acesso ao volume de contenção interno pode ser configurada para acesso através da abertura a partir de cima. Desta forma, o acesso através de cada uma dessas aberturas pode ser convenientemente a partir de cima do aparelho, proporcionando uma vantagem significativa para um usuário do aparelho em que um usuário pode

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22/106 concentrar todas as tais manipulações de acesso a partir de cima do aparelho, enquanto o aparelho está em uma posição normal na orientação coletiva, por exemplo, com o aparelho independente sobre uma superfície de trabalho plana, como uma mesa ou bancada. Embora tal acesso a partir de cima, o recipiente pode estar em certo ângulo em relação à vertical, em uma modalidade preferida, o acesso através de tal abertura está em uma direção vertical a partir de cima do recipiente. Em uma aplicação preferida, todo o acesso ao volume de contenção interno pode ser através de aberturas de acesso em que cada tal abertura de acesso (por exemplo, a abertura de entrada, abertura de sucção, abertura de extração, outras aberturas) é configurada para acesso através da abertura de acesso apenas a partir de cima do recipiente. Em outra execução preferida, todas as aberturas de acesso podem ser configuradas para acesso através de cada uma dessas aberturas de acesso na direção vertical a partir de cima do recipiente.

[0032] O volume de contenção interno do recipiente pode ter uma parte afilada que se afila no sentido descendente. A parte afilada pode ter uma área de seção transversal que afila, ou reduz em tamanho, na direção do fundo de um volume de coleta. A parte afilada do volume de contenção interno pode ajudar a dirigir e concentrar material denso alvo (por exemplo, células densas, fração vascular estromática) em direção e para dentro do volume de coleta. Pelo menos uma parte do volume de coleta pode estar localizada dentro ou abaixo de tal parte afilada. Pelo menos uma parte da parte

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23/106 afilada pode estar localizada acima do volume de coleta. A parte afilada do volume de contenção interno pode ter uma forma afilada ou qualquer outra forma com uma área em corte transversal que afila para reduzir em tamanho na direção do fundo do volume de coleta. Em diferentes modalidades pelo menos uma parte da parte afilada pode estar localizada acima do volume de coleta. A parte afilada pode ter uma geometria de conicidade uniforme (por exemplo, taxa constante de conicidade) ou pode ter uma geometria cone variando (por exemplo, taxa variável de conicidade na direção do afilamento).

[0033] Em algumas modalidades, o volume de contenção interno pode ter pelo menos uma primeira parte afilada e uma segunda parte afilada que é localizada verticalmente mais baixo do que a primeira parte afilada, em que a primeira parte afilada tem uma maior taxa de conicidade do que a segunda parte afilada. A primeira parte afilada pode ser definida, pelo menos em parte, por uma primeira superfície de parede interna do recipiente que está em um primeiro ângulo em relação à horizontal, quando o aparelho está em uma orientação de acesso em uma faixa que tem um limite inferior de 20°, 25°, 30°, 35°, 40°, ou 45° e um limite superior de 65°, 60°, 55°, ou 50°C e a segunda parte afilada pode ser definida, pelo menos em parte, por uma segunda superfície de parede interna do recipiente que está em um segundo ângulo em relação à horizontal, quando o aparelho está em uma orientação de acesso em uma faixa que tem um limite inferior de 50°, 60°, 65° ou 70° e um limite

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24/106 superior de 89°, 88°, 85° ou 82°, desde que o segundo ângulo seja maior do que o primeiro ângulo. Tal primeira parte afilada, por exemplo, como visto em uma seção transversal vertical plana, pode ser definida, pelo menos em parte, por outras das tais primeiras superfícies das paredes internas opostas. Essa segunda parte afilada em uma seção transversal vertical deste tipo pode ser definida, pelo menos em parte, por outras das tais segundas superfícies de paredes internas opostas. A segunda parte afilada pode ser eliminada parcialmente ou inteiramente dentro do volume de filtrado. A segunda parte afilada pode incluir pelo menos uma parte de um volume de coleta no interior do volume de filtrado ou pode estar inteiramente dentro de tal volume de coleta. A segunda parte afilada pode estar ou pode ser uma parte de uma cavidade de grânulo localizado em uma parte inferior de tal volume de coleta. O volume no interior da segunda parte afilada do volume de contenção interno pode estar em uma faixa que tem um limite inferior de 0,2 por cento, 0,3 por cento, 0,5 por cento, 0,7 por cento ou 0,8 por cento da parte de processamento de volume disponível do recipiente que está dentro o volume de retenção de tecido e um limite superior de 2,5 por cento, 2 por cento, 1,5 por cento, 1,2 por cento ou 1,1 por cento da parte de processamento de tais volumes disponíveis do recipiente que está dentro do volume de retenção de tecido. Essa parte do volume de processamento disponível no volume de retenção de tecido pode ser uma capacidade de volume do aparelho para a alimentação de material biológico humano (por

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25/106 exemplo, alimentação de tecido adiposo) que pode ser processado no aparelho. Para algumas modalidades, a segunda parte afilada do volume de contenção interno pode ter um volume em uma faixa com um limite inferior de 0,3 centímetros cúbicos, 0,5 centímetros cúbicos, 0,7 centímetros cúbicos, 0,8 centímetros cúbicos, 0,9 centímetros cúbicos ou 1,0 centímetros cúbicos e um limite superior de 5 centímetros cúbicos, 3 centímetros cúbicos, 2 centímetros cúbicos, 1,5 centímetros cúbicos, ou 1,3 centímetros cúbicos. A segunda parte afilada pode ter uma dimensão vertical quando o aparelho está em uma orientação de acesso de pelo menos 1 centímetro, pelo menos 1,5 centímetros pelo menos 2 centímetros ou pelo menos 2,5 centímetros. A segunda parte afilada pode ter uma dimensão em altura vertical, quando o aparelho está na orientação de acesso de até 10 centímetros, até 5 centímetros, até a 4 cm ou até 3 centímetros. O volume de contenção interno pode incluir uma terceira parte afilada que está localizada abaixo da segunda parte afilada que tem uma taxa de conicidade maior do que a segunda parte afilada. Uma terceira parte afilada pode ser definida, pelo menos em parte, por uma terceira superfície de parede interna do recipiente que se encontra em um ângulo em relação à horizontal que é menor do que o segundo ângulo. O terceiro ângulo pode ter um valor, tal como descrito anteriormente para o primeiro ângulo, desde que o segundo ângulo seja maior que o terceiro ângulo. A terceira parte afilada pode ocupar a parte mais inferior de um volume de coleta no volume de filtrado, o que pode

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26/106 ser uma parte mais baixa de uma cavidade de grânulo. A terceira parte afilada pode ter uma dimensão em altura vertical, quando o aparelho está em uma orientação de acesso que é menor do que uma dimensão de altura na vertical da segunda parte afilada. A terceira parte afilada pode ter uma dimensão de altura na vertical tal que não é maior do que 1 centímetro ou não maior do que 0,5 centímetros. A terceira parte afilada pode ter um volume que é menor do que o volume da segunda parte afilada. A terceira parte afilada pode ter um

volume	que	não	é	maior	do	que	0,5	centímetros
cúbicos,	que	não	é	maior	do	que	0,3	centímetros
cúbicos,	ou	não	é	maior	do	que	0,2	centímetros

cúbicos. A primeira parte afilada pode ter uma dimensão de altura na vertical abaixo de uma parte inferior do filtro, que é menor do que uma dimensão de altura na vertical da segunda parte afilada, e tal dimensão de altura na vertical da primeira parte afilada pode ser de pelo menos 0,5 centímetros ou pelo menos 1 centímetro. A primeira parte afilada pode beneficamente ajudar os materiais de fração vascular estromática a se mover para a segunda parte afilada quando o aparelho é centrifugado. A segunda parte afilada, e também a terceira parte afilada se presente, pode ser uma cavidade de grânulo ou ser parte da mesma, como discutido abaixo.

[0034] Surpreendentemente, verificouse que o material de uma fase de grânulo contendo um concentrado de células vasculares leuco estromáticas de tecido adiposo, tais como podem ser formados durante a centrifugação, pode ser

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27/106 diretamente aspirado a partir de um volume de coleta no fundo do volume de filtrado sem primeiro sobrepor as fases de remover materiais menos densos e sem dispersar o material da fase de grânulo em suspensão de um líquido. Embora a fase de grânulo possa ter tipicamente uma viscosidade muito elevada, verificou-se que é possível aspirar o material de fase de grânulo, por exemplo, através de uma agulha hipodérmica, sem diluir primeiro o material de fase de grânulo para reduzir a viscosidade, e sem irrupção prejudicial de fase líquida aquosa de baixa viscosidade sobrejacente, durante a aspiração. Isto permite simplificação significativa no processamento para remover esse material de fase de grânulo em algumas modalidades.

[0035] O volume de contenção interno do aparelho da primeira modalidade pode incluir uma cavidade de grânulo que pode ajudar a facilitar a remoção eficaz de material de fase de grânulo por aspiração direta. A cavidade de grânulo pode ser disposta em uma parte inferior do volume de filtrado abaixo de uma elevação inferior do filtro e acessível apenas a partir de cima quando o aparelho está em uma orientação de acesso. Tal cavidade de grânulo que pode ser configurada como uma câmara estreita relativamente profunda, para ajudar a facilitar a aspiração direta efetiva de material da fase de grânulo, tal como um concentrado de células vasculares leuco estromáticas.

[0036] Uma cavidade de grânulo pode também incluir uma segunda parte afilada, e também, opcionalmente, uma terceira parte afilada, do

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28/106 volume de contenção interno abaixo de uma primeira parte afilada, conforme descrito acima.

[0037] O volume de filtrado pode incluir uma parte afilada inferior abaixo de uma elevação inferior do filtro e, acima de uma elevação superior de uma cavidade de grânulo. A parte afilada inferior do volume de filtrado pode ser definida por superfícies de parede interna do recipiente que são individualmente inclinadas em relação à horizontal com um ângulo máximo que não é maior do que 60°, quando o recipiente está em uma orientação de acesso. A parte afilada inferior do volume de filtrado pode ser ou incluir aquela parte de uma primeira parte afilada do volume de contenção interno, como discutido acima, que está localizada abaixo do filtro, pelo menos uma parte da cavidade de grânulo pode ser definida por uma superfície de parede do recipiente inclinado em relação à horizontal com um ângulo que é maior do que o ângulo máximo quando o aparelho está na posição de acesso. A superfície de parede do recipiente que define pelo menos uma parte da cavidade de grânulo pode estar inclinada em relação à horizontal em um ângulo de pelo menos 70°, pelo menos 75° pelo menos 80°, ou pelo menos 85°. A superfície de parede do recipiente que define pelo menos uma parte da cavidade de grânulo pode estar inclinada em relação à horizontal em um ângulo de 90° (vertical) ou menos do que 90°, quando o aparelho está na posição de acesso.

[0038] Uma cavidade de grânulo pode ter um volume em uma faixa com um limite inferior de 0,3 centímetros cúbico, 0,5 centímetros cúbicos,

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0,7 centímetros cúbicos, 0,8 centímetros cúbicos, 0,9 centímetros cúbicos ou 1,0 centímetro cúbico e um limite superior de 5 centímetros cúbicos, 3 centímetros cúbicos, 2 centímetros cúbicos, 1,5 centímetros cúbicos, ou 1,3 centímetros cúbicos.

[0039] Uma cavidade de grânulo pode ter uma dimensão em altura vertical, quando o aparelho está em uma orientação de acesso de pelo menos um centímetro, pelo menos 1,5 centímetros pelo menos 2 centímetros ou pelo menos 2,5 centímetros. Uma cavidade de grânulo pode ter uma dimensão em altura vertical, quando o aparelho está na orientação de um acesso de até 10 centímetros, até 5 centímetros, até a 4 cm ou até 3 centímetros.

[0040] Uma cavidade de grânulo pode ter pelo menos uma parte com um comprimento vertical de 1 centímetro, uma dimensão horizontal máxima ao longo do comprimento vertical de não mais que 5 mm e uma dimensão horizontal mínima ao longo do comprimento vertical não menor do que 1,5 milímetros. Ter pelo menos tal parte pode facilitar a recepção de uma extremidade distal de uma agulha hipodérmica ou outro tubo de aspiração em um volume estreito relativamente profundo para aspiração do material da fase de grânulo sem ruptura prematura significativa da fase aquosa líquida menos densa que pode estar disposta acima da fase de grânulo após a centrifugação.

[0041] Uma parte afilada do volume de contenção interno pode ter um nadir de parte afilada correspondendo com uma elevação inferior do volume de contenção interno. A elevação da parte inferior de um volume de coleta pode corresponder à

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30/106 elevação inferior do volume de contenção interno. As superfícies das paredes do recipiente, que definem uma parte afilada do volume de contenção interno, podem cobrir um ponto no nadir de parte afilada. Essa é uma configuração particularmente benéfica, especialmente para aplicações em que o material alvo deve ser recolhido e removido a partir do volume de coleta, adjacente ao ponto mais baixo da parte afilada. Tal nadir de parte afilada pode estar localizado em uma cavidade de grânulo localizada na parte inferior de um volume de coleta.

[0042] O aparelho da primeira modalidade pode ser configurado com um tamanho muito conveniente a partir de vários pontos de vista, e com o uso eficiente do volume de contenção interno para facilitar a coleta eficiente do material biológico e versatilidade no processamento pós-coleta. O aparelho pode ser feito sob medida para o transporte manual conveniente, por exemplo, entre um local onde o material biológico humano pode ser coletado para outros locais diferentes, onde uma variedade de transformações de material coletado pode ser realizada. O aparelho pode também ser dimensionado para a manipulação conveniente, por uma pessoa.

[0043] Para muitas aplicações, o aparelho da primeira modalidade pode ser dimensionado e configurado de tal modo que o volume de contenção tenha um volume interno em uma faixa com um limite inferior de 100 centímetros cúbicos, de 200 centímetros cúbicos, de 250 centímetros cúbicos, de 300 centímetros cúbicos, 500

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31/106 centímetros cúbicos, 600 centímetros cúbicos ou 700 centímetros cúbicos e um limite superior de 1500 centímetros cúbicos, 1300 centímetros cúbicos, 1100 centímetros cúbicos, 1000 centímetros cúbicos, de 900 centímetros cúbicos, de 800 centímetros cúbicos, de 500 centímetros cúbicos, de 400 centímetros cúbicos ou 300 centímetros cúbicos, desde que o limite superior seja maior do que o limite inferior. Uma faixa preferida para muitas aplicações é a do volume de contenção interno estar em uma faixa de 700 centímetros cúbicos a 1.000 centímetros cúbicos. Outra faixa preferida para algumas aplicações é para o volume de contenção interno estar dentro de uma faixa a partir de 100 centímetros cúbicos a 400 centímetros cúbicos, tal como, por exemplo, ao preparar um concentrado de células vasculares leuco estromáticas para administração à vizinhança de uma junta para o tratamento de osteoartrite por volume de contenção interno, entende-se o volume interno total contido dentro das paredes que definem o recipiente, incluindo o volume que é ocupado por hardware interno, tal como, por exemplo, pode ser ocupado por um dispositivo de mistura, um membro de barreira, condutos de sucção, aba de barreira, etc. Como será considerado, a menos que a totalidade do volume de contenção interno esteja disponível para o processamento dentro do volume de contenção interno.

[0044] Os termos “volume de processamento disponível” ou “volume útil” são aqui utilizados de modo permutável para se referir à parte do volume de contenção interno que é

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32/106 efetivamente disponível para receber e processar material biológico humano, e os aditivos (por exemplo, lavar outros aditivos); durante a utilização do aparelho da primeira modalidade para a coleta de material biológico ou para o processamento pós-coleta. Este volume de processamento disponível é igual ao volume de contenção interno menos partes do volume de contenção interno ocupadas por hardware (por exemplo, dispositivo de mistura, filtro, aba, tubos de sucção, membro de barreira, etc.) e partes menos desocupadas do volume de contenção interno não eficazmente acessíveis para ocupação por material biológico durante operações de coleta, ou por material biológico, ou por aditivos, durante o processamento posterior à coleta. Por exemplo, o volume de processamento disponível pode excluir um pequeno volume na parte superior do recipiente que está acima de uma extensão inferior da abertura de entrada para dentro do volume de contenção interno. Este pequeno espaço vazio pode ser benéfico para permitir espaço para o fluido escorrer para dentro do recipiente quando o conteúdo do recipiente pode ser agitado internamente ou misturado externamente (por exemplo, por uma mesa de agitador). Para muitas aplicações, o volume de processamento disponível pode estar em uma faixa com um limite inferior de 75 centímetros cúbicos, 100 centímetros cúbicos, de 200 centímetros cúbicos, de 300 centímetros cúbicos, de 400 centímetros cúbicos, de

500 centímetros cúbicos, de 600 centímetros cúbicos, de 650 centímetros cúbicos ou 700 centímetros cúbicos e um limite superior de 1300

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33/106 centímetros cúbicos, 1100 centímetros cúbicos, 1000 centímetros cúbicos, de 900 centímetros cúbicos, de 850 centímetros cúbicos, de 800 centímetros cúbicos, de 750 centímetros cúbicos, de 600 centímetros cúbicos, de 500 centímetros cúbicos, de 400 centímetros cúbicos ou 300 centímetros cúbicos, desde que o limite superior é maior do que o limite inferior. Em uma modalidade preferida, para muitas aplicações, o volume de processamento disponível pode estar em uma faixa a partir de 700 centímetros cúbicos a 850 centímetros cúbicos.

[0045] Vantajosamente, o aparelho da primeira modalidade pode ser configurado de modo que uma grande parte do volume disponível de processamento esteja dentro do volume de retenção de tecido, enquanto permitindo ainda um elevado nível de desempenho para várias operações de processamento. O volume de retenção de tecido pode compreender pelo menos 60 por cento pelo menos 65 por cento ou pelo menos 70 por cento do volume de processamento disponível com o recipiente. Muitas vezes, o volume de retenção de tecido será composto por não mais de 95 por cento, não mais do que 90 por cento ou não mais de 85 por cento do volume de processamento disponível. Para muitas modalidades preferidas, o volume de retenção de tecido pode compreender uma parte do volume disponível de processamento que é de pelo menos 50 centímetros cúbicos, pelo menos 100 centímetros cúbicos, de pelo menos 200 centímetros cúbicos, de pelo menos 300 centímetros cúbicos, de pelo menos 400 centímetros cúbicos, pelo menos 500 centímetros cúbicos, de pelo menos 600 centímetros ou pelo

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34/106 menos 650 centímetros cúbicos. O aparelho pode, vantajosamente, ser configurado com apenas uma pequena parte do volume de processamento disponível ocupada por um volume de coleta, localizado abaixo do filtro. Por exemplo, o volume de coleta pode compreender não mais do que 10 por cento, não mais do que 7 por cento ou mais do que 5 por cento do volume de processamento disponível.

[0046] Para muitas modalidades preferidas do aparelho se pode ter um volume de coleta que não é mais do que 75 centímetros cúbicos, não é mais do que 50 centímetros cúbicos, não mais do que 30 centímetros cúbicos, não mais do que 20 centímetros cúbicos, não mais do que 10 centímetros cúbicos ou não mais de 5 centímetros cúbicos. O volume de coleta pode ser de pelo menos 1 centímetro cúbico, pelo menos 2 centímetros cúbicos, ou, pelo menos 4 centímetros cúbicos. Em uma modalidade preferida, o volume de coleta pode estar em uma faixa de 10 centímetros cúbicos a 30 centímetros cúbicos. Para outras modalidades, o volume de coleta pode ser menor do que 10 centímetros cúbicos. Normalmente, todo o volume de coleta fará parte do volume de processamento disponível.

[0047] Uma área importante de aplicação médica para a utilização do aparelho da primeira modalidade é a de preparar um concentrado de células vasculares leuco estromáticas para uso no tratamento da osteoartrite, por exemplo, nas proximidades de uma articulação do paciente. Em algumas aplicações para o tratamento de osteoartrite, o aparelho pode ser configurado com

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35/106 um volume relativamente pequeno de contenção interna concebido para processar um volume de tecido adiposo para preparar um volume de células vasculares leuco estromáticas que pode ser adequado para utilização em uma formulação de injeção única para tratamento da osteoartrite em uma articulação. Em algumas modalidades, o aparelho pode ter um volume de contenção interno com um volume em uma faixa com um limite inferior de 150 centímetros cúbicos, de 200 centímetros cúbicos ou 250 centímetros cúbicos e um limite superior de 400 centímetros cúbicos, de 350 centímetros cúbicos ou 300 centímetros cúbicos. O aparelho pode ser concebido com um volume de retenção de tecido que inclua uma parte do volume de processamento disponível do aparelho em uma faixa com um limite inferior de 50 centímetros cúbicos, 75 centímetros cúbicos ou 100 centímetros cúbicos e um limite superior de 250 centímetros cúbicos, 200 centímetros cúbicos de 150 centímetros cúbicos ou 125 centímetros cúbicos. O aparelho pode ser concebido para coletar um volume de fase de grânulo, que pode corresponder a um volume de cavidade de grânulo, em uma faixa a partir de 0,5 centímetros cúbicos, 0,75 centímetros cúbicos ou 1 centímetro cúbico e um limite superior de 2,5 centímetros cúbicos, 2 centímetros cúbicos, 1,5 centímetros cúbicos centímetros cúbicos ou 1,3 centímetros cúbicos.

[0048] O aparelho da primeira modalidade pode ser embalado dentro de um invólucro hermético, por exemplo, como embalado para o transporte e armazenamento anterior ao uso. O

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36/106 aparelho pode ser esterilizado antes da embalagem e mantido em um ambiente estéril dentro do invólucro hermético, pelo menos até que o dispositivo seja retirado do recinto hermético para uso. O aparelho pode ser concebido para uma única utilização após a remoção do invólucro hermético. Depois de tal uso único, o aparelho pode ser descartado de forma apropriada.

[0049] Uma segunda modalidade da descrição é fornecida por um aparelho para processamento de material biológico humano, incluindo um recipiente que tem um volume de contenção interno, o volume de contenção interno incluindo um volume de retenção de tecido e um volume de filtrado. Um filtro é disposto no interior do volume de contenção interno com o volume de retenção de tecido, de um lado do filtro e o volume de filtrado no outro lado do filtro com o volume de retenção de tecido e o volume de filtrado estando em comunicação de fluido através do filtro. Uma abertura de entrada, em comunicação de fluido com o volume de retenção de tecido é configurada para acessar ao volume de retenção de tecido para a introdução de material biológico humano no volume de retenção de tecido. Uma abertura de sucção em comunicação de fluido com o volume de filtrado é configurada para acessar ao volume de filtrado para material de aspiração a partir do volume de filtrado. O volume de filtrado inclui uma cavidade de grânulo em um volume de coleta situado abaixo de uma elevação inferior do filtro.

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[0050] Um número determinado de aperfeiçoamentos de características e de características adicionais é aplicável ao aparelho da segunda modalidade. Esses aperfeiçoamentos de características e características adicionais podem ser usados individualmente ou em qualquer combinação. Como tal, cada uma das seguintes características pode ser, mas não precisa ser utilizada com qualquer outra característica ou combinação da segunda modalidade ou qualquer outra modalidade da descrição.

[0051] O aparelho da segunda modalidade pode ser, ou incluir qualquer característica ou uma combinação de todas as características descritas em relação à primeira modalidade. A cavidade de grânulo do aparelho da segunda modalidade pode ser ou ter qualquer característica ou características descritas relativamente a uma cavidade de grânulo para o aparelho da primeira modalidade. O aparelho da segunda modalidade pode ter uma concepção que não inclua um coletor de tecido como descrito em relação à primeira modalidade.

[0052] Uma terceira modalidade da descrição é fornecida por um método de processamento de tecido adiposo para concentrar células vasculares leuco estromáticas associadas com o tecido adiposo. O método combina um tratamento específico em combinação com um recipiente portátil de um aparelho para processamento de material biológico humano contendo tecido fibroso, para resolver as limitações de concepção significativas associadas com a

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38/106 utilização de recipientes portáteis de processamento de múltiplas etapas de tecido adiposo. O método da terceira modalidade inclui o processamento de múltiplas etapas dentro de um recipiente portátil que tem um filtro no interior do recipiente. O processamento de múltiplas etapas inclui a lavagem do tecido adiposo no interior do recipiente para remover contaminantes a partir do tecido adiposo. Após a lavagem, o método inclui a digestão de tecido adiposo no interior do recipiente, compreendendo a adição ao recipiente de um volume de meio de digestão contendo a enzima até contato com o tecido adiposo lavado no recipiente. Depois de permitir a digestão enzimática no recipiente por um tempo de retenção seguinte à adição do meio de digestão, o método inclui a disposição do recipiente de centrifugação em uma centrífuga e a centrifugação do recipiente de modo a formar fases de densidades separadas no interior do recipiente, as fases de densidades separadas incluindo fases de materiais de densidade inferior e uma fase de grânulo de maior densidade compreendendo células vasculares leuco estromáticas. Após a centrifugação, o método inclui a remoção seletiva de materiais da fase de grânulo a partir do recipiente.

[0053] O método particularmente aborda o processamento dentro do contexto restrito de processamento de múltiplas etapas dentro de um único recipiente portátil. O método pode permitir processamento eficaz dentro de um recipiente portátil, de tal modo a tratar de problemas de modelo de processamento e equipamentos inerentes

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39/106 associados com o processamento de múltiplas etapas em recipientes portáteis e sem perdas excessivas de viabilidade celular ou perdas físicas das células com a adesão às superfícies do equipamento e do recipiente no interior do recipiente.

[0054] Um número determinado de aperfeiçoamentos de características e características adicionais é aplicável à terceira modalidade da invenção. Esses aperfeiçoamentos de características e características adicionais podem ser usados individualmente ou em qualquer combinação. Como tal, cada uma das seguintes características pode ser, mas não precisa ser utilizada com qualquer outra característica ou combinação da terceira modalidade ou qualquer outra modalidade da descrição.

[0055] Em modalidades preferidas, o recipiente portátil pode ser um recipiente de um aparelho da primeira modalidade ou da segunda modalidade da invenção. Um primeiro lado do filtro no interior do recipiente pode ser um volume de filtrado e um segundo lado do filtro no recipiente pode ser um volume de retenção de tecido de um recipiente de um aparelho da primeira modalidade ou da segunda modalidade. Alternativamente, o recipiente portátil pode ser outro do que um recipiente do aparelho de acordo com a primeira modalidade ou a segunda modalidade. O método pode incluir, após a centrifugação, a remoção do recipiente da centrífuga antes da remoção seletiva.

[0056] A remoção seletiva pode incluir a inserção de um tubo de aspiração a partir do exterior para dentro do recipiente para entrar em

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40/106 contato com a fase de grânulo no interior do recipiente e aspirar pelo menos uma maior parte do material da fase de grânulo através do tubo de aspiração para fora do recipiente sem material de suspensão a fase de grânulo em suspensão de um líquido. A aspiração do material da fase de grânulo sem suspender primeiro o material em suspensão em um líquido, é por vezes aqui referida como aspiração direta do material da fase de grânulo. Essa aspiração direta pode ser realizada sem a remoção de fases de materiais de baixa densidade acima da fase de grânulo, pode ser realizada após a remoção de algumas, mas não todas as fases de material de baixa densidade ou pode ser realizada após a remoção de todas as fases de material de baixa densidade. As fases de material de baixa densidade podem incluir uma fase aquosa acima da fase de grânulo e antes da aspiração, a fase aquosa de densidade mais baixa não pode ser removida a partir de cima da fase de grânulo. Esta fase aquosa pode ser deixada em substancialmente intacta no interior do recipiente durante a aspiração, e pode permanecer no recipiente após a aspiração. Algumas ou todas as fases de material de baixa densidade podem permanecer no recipiente após a aspiração. A inserção pode compreender a inserção do tubo de aspiração para baixo, para dentro do recipiente a partir de cima. Quando as fases de material de baixa densidade permanecem no recipiente durante a aspiração, o tubo de aspiração pode ser inserido para baixo através das fases de material de baixa densidade e para o material da fase de grânulo localizado abaixo das fases de material de baixa

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41/106 densidade. O tubo de aspiração pode ser uma agulha (por exemplo, agulha hipodérmica), uma cânula ou outro dispositivo com um canal de comunicação de fluido. Para muitas aplicações, uma agulha hipodérmica de calibre 18 a 22 pode ser usada para o tubo de aspiração. Durante a aspiração, o tubo de aspiração pode estar em comunicação de fluido com um recipiente de fluido, e a aspiração pode incluir a coleta de pelo menos uma maior parte do material da fase de grânulo no recipiente de fluido. Tal recipiente de fluido pode ser uma seringa ou outros aparelhos de contenção de fluido. Ao remover seletivamente o material de grânulo, da fase, sem a necessidade de remoção antes de fases de material menos denso, acima da fase de grânulo, a operação do processo de remoção do material da fase de grânulo pode ser consideravelmente simplificada e a possibilidade de erros de processamento e perda de células por adesão às superfícies do aparelho pode ser significativamente reduzida. O receptáculo do fluido pode ser pré-carregado com um meio de dispersão que se mistura com o material da fase de grânulo no recipiente de fluido quando o material de dispersão é introduzido no recipiente de fluidos durante a aspiração. O meio de dispersão pode ser um meio líquido para dispersar e suspender as células do material da fase de grânulo. O meio de dispersão pode ser um material de gel ou semelhante a gel, no qual as células do material da fase de grânulo podem ser dispersas e retidas. O meio de dispersão pode ser um veículo de entrega para o material celular (por exemplo, células vasculares leuco estromáticas) da fase de grânulo, e tal

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42/106 material celular pode ser administrado a um paciente em uma composição de entrega incluindo o material celular e meio de dispersão. Alguns exemplos para um meio de dispersão que pode ser pré-carregado no recipiente de fluido incluem composições que podem ser ou incluir um ou mais dos seguintes, isoladamente ou com outros componentes: solução salina (por exemplo, uma solução salina equilibrada, solução equilibrada de Hank), solução cristalóide (por exemplo, solução de lactato de Ringer), ácido hialurônico e materiais à base de ácido hialurônico. Estes materiais à base de ácido hialurônico podem ser composições de substrato ou de suporte à base de ácido hialurônico. Qualquer desses materiais listados para possível utilização como ou inclusão em um meio de dispersão também pode ser parte de uma composição de entrega final para administração a um paciente. O volume de meio de dispersão pré-carregado para o recipiente de fluido pode ser de qualquer volume conveniente para a aplicação. Em algumas modalidades preferidas, o meio de dispersão pode estar presente em um volume suficiente para impedir a acumulação de material da fase de grânulo no recipiente de fluido. O meio de dispersão do fluido no recipiente pode ter um volume de tal forma que uma proparte em volume do volume do meio de dispersão para o volume do material de fase de grânulo introduzida no receptáculo do fluido durante a aspiração é de pelo menos 1:1, pelo menos 2:1, ou pelo menos 3:1. Muitas vezes, tal proparte em volume pode ser de até 10:1, até 7:1, até 5:1; até 3:1 ou até 2:1. Em algumas modalidades, o meio de dispersão no

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43/106 recipiente de fluido pode ter um volume de pelo menos 1 milímetro pelo menos dois mililitros ou pelo menos 3 mililitros. Em algumas modalidades, o meio de dispersão no recipiente de fluido pode ter um volume de até 10 ml, até 7 mililitros, até 5 ml, até 3 ml ou superior a 2 mililitros. Uma mistura formada no recipiente de fluido durante a aspiração pode ser processada posteriormente para preparar uma composição de entrega, incluindo o material da fase de grânulo ou a mistura pode ser na forma de uma composição de entrega que é preparada tal como preparada no recipiente de fluido para administração direta ao um paciente, tal como por injeção direta a partir do recipiente de fluido para o paciente após a conclusão da aspiração. O tratamento posterior pode incluir a centrifugação da mistura formada no recipiente de fluido para reformar uma fase de grânulo, a separação do material da fase de grânulo de outras fases de material, tipicamente, menos densas, que se formam durante a centrifugação, seguida de formulação da fase de grânulo com outros componentes para preparar uma composição de entrega desejada, que pode incluir qualquer um dos componentes que podem ser utilizados como meio de dispersão ou de quaisquer outros componentes adequados para uma composição de entrega. Quando a composição de entrega deve ser injetada em uma articulação para o tratamento de osteoartrite, a composição de entrega pode em algumas modalidades preferidas ter um volume total em uma faixa com um limite inferior de

0,5 mililitros, 1 mililitro ou mililitros 2 e um limite superior de 5 mililitros, 4 mililitros ou 3

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44/106 mililitros. A composição de entrega pode incluir um volume de material da fase de grânulo em uma faixa com um limite inferior de 0,25 mililitros, 0,5 mililitros, 0,75 mililitro, ou 1 mililitro e um limite superior de 2,5 mililitros, 2 mililitros ou 1,5 mililitros. Quando o material da fase de grânulo inclui um concentrado de células vasculares leuco estromáticas, a composição de entrega inclui uma mistura de diferentes células presentes na fração vascular leuco estromática, sem purificação e sem cultura. Essa é distinguível de outras composições de tratamento que podem ser preparadas usando apenas alguns tipos de células isoladas a partir da mistura de células de frações vasculares leuco estromáticas ou utilizando células de cultura.

[0057] Em algumas modalidades, a remoção seletiva do material da fase de grânulo pode envolver a remoção de um ou mais, ou de todas as camadas de material de fases de baixa densidade antes da remoção do material da fase de grânulo do recipiente. Quando as fases de material de baixa densidade são removidas antes da remoção do material da fase de grânulo, remover a as fases de material de densidade inferior pode incluir a remoção de tais fases de material de baixa densidade a partir do recipiente de sequência de aumento da densidade, o que pode incluir a aspiração de minúsculas fases de material de densidade do recipiente, através da extremidade aberta de um conduto de aspiração disposta no recipiente. De preferência, uma extremidade aberta de tal conduto de sucção pode ser disposta no

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45/106 recipiente não diretamente por cima da fase de grânulo, para reduzir a possibilidade de que a sucção criada no recipiente perturbe estruturalmente a fase de grânulo. Em algumas modalidades preferidas, a fase de grânulo permanece no lugar e fixa, em relação ao recipiente, enquanto as fases de material de baixa densidade são removidas. Em algumas modalidades, remover as fases de material de baixa densidade pode incluir inclinar o recipiente durante a aspiração das fases de material de baixa densidade para promover o fluxo de pelo menos uma parte de aspiração final das fases de material de baixa densidade no interior do recipiente lateralmente para fora a partir do grânulo e para a extremidade aberta do conduto de sucção. O recipiente pode incluir um canto localizado lateralmente à fase de grânulo, e que pode ser localizado a uma altura do recipiente, que é maior do que a elevação inferior da fase de grânulo, ou mesmo maior do que uma elevação superior da fase de grânulo. A inclinação pode promover o fluxo de fluido das fases de material de baixa densidade lateralmente para o canto para a aspiração a partir da vizinhança do canto na extremidade aberta do conduto de sucção. Em algumas modalidades preferidas, as fases de material de baixa densidade podem ser removidas através de uma parte superior do recipiente.

[0058] O método pode incluir uma ou mais etapas outras do que, ou em adição a qualquer uma ou qualquer combinação das etapas mencionadas acima. Qualquer outra etapa adicional pode ser realizada entre qualquer uma das etapas mencionadas

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46/106 acima ou pode ser executada antes ou depois de qualquer das etapas mencionadas acima.

[0059] Quando as fases de material de baixa densidade são removidas a partir do recipiente antes da remoção do material da fase de grânulo, o método pode incluir, após a remoção das fases de material de densidade inferior, a introdução de líquido de suspensão aquosa dentro do recipiente e dispersão de células da fase de grânulo no líquido em suspensão, de modo a formar uma dispersão das células no líquido de suspensão. O líquido de suspensão pode ser introduzido em um volume em uma faixa com um limite inferior de 1, 2, ou 5 mililitros e um limite superior de 25, 20, ou 12 mililitros. Um volume de líquido de suspensão de aproximadamente 10 mililitros pode ser usado para muitas modalidades. A proparte em volume do líquido em suspensão para o volume da fase de grânulo pode estar em uma faixa que tem um limite inferior de 1:1, 2:1, 3:1 ou 5:1 e um limite superior de 25:1, 20:1, 15:1 ou 12:1. A proparte em volume de aproximadamente 10: 1 pode ser utilizada em muitas modalidades. Depois de ser disperso em um líquido de suspensão, o líquido em suspensão com células dispersas pode ser removido a partir do recipiente. De um modo preferido pelo menos a maior parte do líquido em suspensão é removida do recipiente e, mais preferivelmente substancialmente todo o líquido de suspensão e substancialmente todas as células a partir da fase de grânulo são removidas do recipiente com o líquido de suspensão.

O líquido de suspensão e as células dispersas podem ser removidos através de uma parte superior do

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47/106 recipiente, mesmo que o líquido de suspensão e as células dispersas possam ser removidos a partir de uma localização de um fundo do recipiente adjacente. Esse líquido em suspensão e as células dispersas podem ser removidos para cima através de um membro oco disposto para baixo, para dentro do recipiente, por exemplo, através de uma agulha oca ou cânula. Em algumas modalidades, tal membro oco pode perfurar e se estender ao longo do filtro. Tal membro oco pode ser um tubo de aspiração, como descrito acima, e pode estar em comunicação de fluido com um recipiente de fluido, como descrito acima.

[0060] Após a remoção seletiva, o material de fase de grânulo removido do recipiente pode ser processado e/ou misturado com outros componentes, conforme desejado, por exemplo, para preparar uma composição de entrega desejada para administração a um paciente. Quando o material da fase de grânulo é suspenso em primeiro líquido da suspensão no recipiente antes da remoção, o processamento posterior pode incluir a centrifugação da mistura, recuperando-se o material da fase de grânulo e formulação do material da fase de grânulo para preparar uma composição de entrega. Tal composição de entrega pode ser ou ter características tais como descrito acima.

[0061] Para a digestão, meio de digestão pode ser adicionado ao recipiente a uma proparte em volume do volume do meio para digerir o volume de tecido adiposo no interior do recipiente está em uma faixa de desde 0,6:1 a 2:1 e em que o meio de digestão fornece 150 a 300 unidades de

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48/106 digestão de colágeno (CDU) por mililitro de volume de catalisador, e em que o volume catalítico é o total do volume de meio de digestão e o volume de tecido adiposo no interior do recipiente. A digestão pode compreender, após a adição do volume de meio de digestão, permitindo a digestão enzimática no interior do recipiente para um tempo de retenção de uma faixa de desde 20 minutos a 50 minutos, enquanto o recipiente é colocado em um ambiente de temperatura controlada com o ambiente de temperatura controlada mantido dentro uma faixa de temperatura desde 32°C a 38°C e com agitação ocasional pelo menos de conteúdos dentro do recipiente. O meio de digestão pode fornecer unidades de digestão de colágeno (CDU) por mililitro de volume de catalisador dentro de uma escala que é mais estreita do que a faixa relacionada acima. Esse intervalo pode ter um limite inferior de 150, 175 ou 200 CDU e um limite máximo de 300, 275 ou 250 CDU. Em algumas modalidades, o meio de digestão pode fornecer aproximadamente 225 CDU por milímetro do volume catalítico. A este respeito, o volume catalítico é o volume total do meio de digestão adicionado ao recipiente e o volume de tecido adiposo já disposto no interior do recipiente quando o meio de digestão foi adicionado. Por exemplo, se o volume do meio de digestão adicionado ao recipiente é igual ao volume de tecido adiposo já disposto no interior do recipiente, então o meio de digestão terá de conter uma concentração de enzima colagenase que é o dobro da concentração desejada em relação ao volume catalítico. Como será considerado, o tecido adiposo

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49/106 como coletado terá associado contaminantes, mas em aplicações preferenciais com lavagem completa, o tecido adiposo deve ser limpo da maioria dos contaminantes de modo a que substancialmente todo o volume de material sobre um lado do tecido de retenção do filtro na o recipiente pode ser tecido adiposo.

[0062] A relação de volume meio digestão de tecido adiposo pode ser em uma faixa mais estreita do que a descrita acima. Tal relação de volume pode ter um limite inferior de 0,6:1, 0,75:1 ou 0,9:1 e pode ter um limite superior de 2:1, 1,75:1, 1,5:1 ou 1,25:1. Por várias modalidades, a relação de volume meio de digestão para lavada tecido adiposo pode ser de aproximadamente 1:1.

[0063] O tempo de retenção durante a digestão pode estar dentro de um intervalo mais estreito do que o descrito acima. O tempo de retenção pode estar em uma faixa que tem um limite inferior de 20 minutos, 25 minutos ou 30 minutos e um limite superior de 50 minutos, 45 minutos ou 40 minutos. Por várias modalidades, o tempo de retenção pode ser de aproximadamente 35 minutos.

[0064] A digestão pode incluir agitação contínua do conteúdo durante uma parte ou substancialmente todo, o tempo de retenção. A agitação pode incluir misturar, periodicamente ou continuamente, com um misturador rotativo disposto no interior do recipiente. A agitação pode incluir movimento periódico ou contínuo do recipiente para fazer com agitação do conteúdo dentro do recipiente. A agitação pode incluir agitando o

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50/106 recipiente, tal como em um agitador-aquecedor. Um ambiente de temperatura controlada pode ser fornecido por um agitador-aquecedor.

[0065] O controle da temperatura pode ser implementado em vários pontos no processamento do método. Digestão forma, quando adicionado ao recipiente pode estar dentro de uma faixa de temperaturas que tem um limite inferior de 32°C, 33°C, 34°C ou 35°C e um limite superior de 38°C ou 37°C. A temperatura no interior de um ambiente com temperatura controlada durante a digestão pode ser mantida em uma faixa mais estreita do que o indicado acima. Um ambiente de temperatura controlada pode ser mantido dentro de uma faixa de temperaturas que tem um limite inferior de 32°C, 33°C, 34°C ou 35°C e um limite superior de 38°C ou 37°C. Lavar líquido, quando adicionado ao recipiente, pode estar dentro de uma faixa de temperaturas que tem um limite inferior de 32°C, 33°C, 34°C ou 35°C e um limite superior de 38°C ou 37°C.

[0066] A lavagem pode incluir pelo menos um ciclo de lavagem ou de vários ciclos de lavagem, com cada ciclo de lavagem, compreendendo: a adição de um volume de líquido de lavagem aquosa para o recipiente para contatar com o tecido adiposo no interior do recipiente; misturando o líquido de lavagem e o tecido adiposo no recipiente; e remover pelo menos a maioria do líquido de lavagem com os contaminantes do recipiente sobre um primeiro lado (por exemplo, volume de filtrado) do filtro e reter pelo menos a maior parte do tecido adiposo no recipiente

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51/106 disposta sobre um segundo lado do filtro (por exemplo, volume de retenção de tecido). Para cada ciclo de lavagem, uma proparte de volume de adição de líquido de lavagem pode ser controlada. A proparte de volume de líquido de lavagem refere-se, além disso, a uma proparte em volume do volume de líquido de lavagem para um volume de tecido adiposo no interior do recipiente para que o líquido de lavagem que está a ser adicionado durante o ciclo de lavagem. A proparte de volume de líquido de lavagem disso pode estar em uma faixa que tem um limite inferior de 0,5:1, 0,7:1 ou 0,8:1 e um limite superior de 4:1, 3:1, 2:1 ou 1,5:1. Para muitas aplicações a proparte em volume de adição de líquido de lavagem pode ser de aproximadamente 1:1. A relação de volume cumulativo de adição de líquido de lavagem pode ser de pelo menos 2:1, ou pelo menos 3:1. A relação de volume cumulativo de adição de líquido de lavagem refere-se a uma soma das propartes de volume para todos os ciclos de lavagem.

[0067] A lavagem pode incluir mais do que dois ciclos de lavagem. Em algumas modalidades, a lavagem pode compreender pelo menos três ciclos de lavagem. Para muitas modalidades, três ciclos de lavagem podem ser suficientes, enquanto para outras modalidades, dois ciclos de lavagem podem ser suficientes.

[0068] Cada ciclo de lavagem pode incluir a remoção de líquido de lavagem (de preferência pelo menos a maioria do líquido de lavagem e, mais preferivelmente substancialmente todo o líquido de lavagem) por aspiração a partir

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52/106 do volume de filtrado do recipiente sobre o primeiro lado do filtro. Durante tal aspiração, o líquido de lavagem pode ser removido por meio de uma parte superior do recipiente.

[0069] Misturando o líquido de lavagem pode incluir a funcionar um misturador rotativo disposto no recipiente. O misturador rotativo pode ser operável manualmente, tal como por um cabo fixado a um eixo geométrico de rotação disposto através de uma parte superior do recipiente. A mistura pode incluir manualmente (mão) a manipulação de tal identificador para rodar manualmente o misturador no interior do recipiente. Em diferentes modalidades preferidas, essa mistura pode ser realizada após a adição do líquido de lavagem, e de preferência logo após essa adição, para homogeneizar o líquido de lavagem e o tecido adiposo sendo lavado. Tal misturador rotativo pode também ser utilizado para misturar o meio de digestão e o tecido adiposo após a adição do meio de digestão para o recipiente, e, de preferência logo após essa adição, para homogeneizar o meio e lavou-se a digestão do tecido adiposo para ser digerido.

[0070] O líquido de lavagem utilizado durante a lavagem pode, mas não necessita de ser da mesma composição de cada ciclo de lavagem. O líquido de lavagem pode incluir um ou mais aditivos. Por exemplo, o líquido de lavagem para um ou mais dos ciclos de lavagem pode incluir um ou mais de um de um agente anticoagulante, um antibiótico e um antifúngico. Em algumas modalidades preferidas, para pelo menos um ciclo de

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53/106 lavagem, o líquido de lavagem que inclui pelo menos um de um agente anticoagulante, um antibiótico ou um antifúngico. Em outra aplicação, durante pelo menos um ciclo de lavagem, o líquido de lavagem que inclui um agente anticoagulante, um antibiótico e um antifúngico. Um exemplo preferido de um agente anticoagulante é heparina.

[0071] O método pode incluir, não mais tarde que 50 minutos a seguir à adição do volume de meio de digestão, a adição de um reagente de interrupção para o recipiente para parar a atividade enzimática no interior do recipiente. A adição de um reagente de interrupção para o recipiente pode ser realizada dentro de um período de tempo mais estreito do que o descrito acima. O meio de digestão pode ser adicionado dentro de um período de tempo até 45 minutos após a adição do volume de meio de digestão, não mais de 40 minutos após a adição do volume de meio de digestão ou não mais de 35 minutos após a adição do volume de meio de digestão. O reagente de interrupção pode compreender albumina humana. O meio de interrupção pode ser adicionado em uma quantidade suficiente para parar substancialmente a atividade enzimática no interior do recipiente. O reagente de interrupção pode, preferencialmente, ser adicionado antes da centrifugação do recipiente após a digestão.

[0072] O recipiente pode ser convenientemente transportado entre locais diferentes para o desempenho de processamento diferente nos diferentes locais, e preferivelmente pode ser transportada manualmente por ser

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54/106 transportada por uma pessoa. Por exemplo, em um ambiente de temperatura controlada pode ser localizado em um local e a centrífuga pode ser localizado em uma localização diferente, e o método pode ainda compreender, após o tempo de retenção em um ambiente com temperatura controlada, o transporte do recipiente a partir dessa localização para a localização do centrifugar para o desempenho da centrifugação. Como outro exemplo, um ou mais ciclos de lavagem pode ocorrer em ainda uma localização diferente, e o método pode incluir o transporte do recipiente a partir da localização de um ciclo de lavagem para o local de um ambiente de temperatura controlada. Ao transportar o recipiente de um local para outro se entende que o recipiente,

juntamente com o	conteúdo do	recipiente,	é
fisicamente movido de	um local para	outro local,	ou
não existem paragens intermédias	ao longo	do
caminho.
[0073] O	método	permite	o

processamento conveniente e controlado de quantidades significativas de tecido adiposo de uma maneira conveniente. O volume de tecido adiposo (incluindo contaminantes), disposta no volume de retenção de tecido do recipiente sobre o segundo lado do filtro no início da lavagem pode ser em um intervalo com um limite inferior de 50, 100, 150,

200 ou 250 centímetros cúbicos e um limite superior de 700, 600, 500, 400, 300 ou 200 centímetros cúbicos, desde que o limite superior é maior do que o limite inferior.

[0074] Deve ser considerado que quando é feita referência a “tecido adiposo” ou um seu

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55/106 volume em relação a um método da invenção, pode ser referência ao tecido adiposo íntegro e quaisquer contaminantes associados que se encontram presentes com o tecido íntegro. Estes contaminantes provenientes de materiais biológicos extraídos dos indivíduos para se obter o tecido adiposo. Os contaminantes que podem estar associados com o tecido adiposo incluem, por exemplo, sangue, lipídios livres, partículas pequenas e detritos e outros materiais que possam ter sido coletados com o tecido adiposo ou resultar da degradação durante a operação de coleta ou de processamento de tecido. Os valores desses contaminantes serão geralmente maiores no tecido adiposo não lavado no início das operações de lavagem e será geralmente inferior, conforme o mandado de operações de digestão, após a lavagem.

[0075] Uma quarta modalidade da descrição é fornecida por um método de processamento de tecido adiposo usando um aparelho da primeira modalidade, ou da segunda modalidade. O método inclui o processamento no recipiente do aparelho, incluindo o tecido adiposo no interior do recipiente de lavagem para a remoção de contaminantes a partir do tecido adiposo. O tecido adiposo lavada pode ser usado, por exemplo, para a preparação de um enxerto de gordura.

[0076] Um número determinado de aperfeiçoamentos de características e características adicionais é aplicável com a quarta modalidade da invenção. Estes aperfeiçoamentos de características e características adicionais podem ser usados individualmente ou em qualquer

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56/106 combinação. Como tal, cada uma das seguintes características pode ser, mas não precisa ser utilizada com qualquer outra característica ou combinação da quarta modalidade ou qualquer outra modalidade da descrição.

[0077] A lavagem pode incluir qualquer característica ou combinação de quaisquer características discutidas em relação com a terceira modalidade da invenção. Após a lavagem, lavou-se o tecido adiposo pode então ser removido do aparelho, antes ou após a mistura dos aditivos para o tecido adiposo lavada, por exemplo, para utilização em um enxerto de gordura.

[0078] Uma quinta modalidade da descrição é fornecida por utilização de concentrado de células vasculares leuco estromáticas de tecido adiposo para o tratamento de osteoartrite.

[0079] Uma composição de tratamento para uso no tratamento da osteoartrite pode compreender um concentrado de uma mistura de células vasculares leuco estromáticas como recuperada do processamento de tecido adiposo, por

exemplo	, sem purificação de	um	tipo	específico	de
célula	ou tipo de células	a	partir	da mistura
fração	vascular estromática	e	sem	a	cultura	de

células. A composição pode ser, ou incluir qualquer composição de entrega ou parte dele descrito em relação com a terceira modalidade ou qualquer outra modalidade da descrição.

[0080]	Um método	para o tratamento	de
osteoartrite	pode	incluir a	administração a	um
paciente de	tal	composição	de tratamento.	A
administração	pode	envolver a	injeção da composição

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57/106 de tratamento em ou na proximidade de uma articulação a ser tratado para a osteoartrite. A administração pode ser por injeção a partir de um recipiente de fluido (por exemplo, seringa) no qual o material de fase de grânulo é aspirado diretamente e em que a composição de tratamento foi

preparada	para incluir meio de	dispersão	pré-
carregados	para o recipiente	de fluido,	por
exemplo, como descrito acima.
	0081] Uma sexta	modalidade	da
descrição	é fornecida por um	método para a

recuperação de um produto concentrado compreendendo células vasculares leuco estromáticas do tecido adiposo. O método inclui aspirar diretamente a partir de um material de fase de grânulo recipiente de processamento preparado a partir de processamento de tecido adiposo no recipiente. O material da fase de grânulo pode ser ou ter qualquer característica ou combinação de quaisquer características descritas em relação a qualquer outra modalidade da descrição. O material da fase de grânulo pode ter sido formado no recipiente por qualquer método descrito em relação a qualquer outra modalidade da descrição. O recipiente pode ser um aparelho como descrito em relação a qualquer outra modalidade da descrição. Estas e outras modalidades da invenção serão mais bem compreendidas mediante referência aos desenhos e descrição exemplificativa fornecida abaixo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0082] A Figura 1 ilustra vistas:

superior, em perspectiva, lateral e de extremidade

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de uma modalidade	de um aparelho	de	coleta	e de
processamento de tecidos.
[0083]	A Figura 2 ilustra	outra	vista
em perspectiva do	mesmo aparelho	de	coleta	e de
processamento de tecidos da Figura	1.
[0084]	A Figura 3 ilust	ra o	mesmo

aparelho de coleta e de processamento de tecidos da

Figura 2 com um invólucro removido.

[0085] A Figura 4 ilustra o mesmo aparelho de coleta e de processamento de tecidos da

Figura 3	com um [0086]	filtro removido.	ilustra	várias
A figura	5
regiões	dentro	do aparelho	de	coleta	e de
processamento de	tecidos da Figura	2.
	[0087]	A Figura 6	ilustra uma	agulha
inserida	em	um aparelho	de	coleta	e de

processamento de tecidos.

[0088] As Figuras 7A e 7B ilustram um conduto que pode ser trasladado em um aparelho de coleta e de processamento de tecidos.

[0089] As Figuras 8-11 ilustram várias operações em um método de processamento de tecido dentro de um aparelho de coleta e de processamento de tecidos.

[0090] A Figura 12 ilustra vistas: superior, em perspectiva, lateral e de extremidade de outra modalidade de um aparelho de coleta e de processamento de tecidos.

[0091] A Figura 13 ilustra uma vista explodida do mesmo aparelho de coleta e de processamento de tecidos da Figura 12.

[0092] As Figuras, 14 e 15, ilustram uma parte de outra modalidade de um aparelho de

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59/106 coleta e de processamento de tecidos incluindo um coletor de tecido rotativo.

[0093] A Figura 16 ilustra algumas configurações exemplares de dentes para um membro dentado para um coletor de tecido rotativo.

[0094] A Figura 17 ilustra uma vista em corte que ilustra algumas características de outra modalidade de um aparelho de coleta e de processamento de tecido.

[0095] A Figura 18 ilustra o mesmo aparelho de coleta e de processamento de tecidos da Figura 17 que ilustra uma agulha inserida em uma cavidade de grânulo para aspirar o material de fase de grânulo.

[0096] A Figura 19 é um diagrama generalizado de blocos de processo de uma modalidade de um método de processamento de tecido adiposo.

[0097] A Figura 20 é um diagrama generalizado de blocos de processo de outra modalidade de um método de processamento de tecido adiposo.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERIDAS

[0098] A descrição seguinte de modalidades pode ser exemplificada mediante referência à coleta e processamento do tecido que compreende gordura, mas os princípios descritos aplicam-se igualmente a coleta e processamento de outros tecidos.

[0099] Faz-se referência às Figuras 111 relativas às características de um aparelho 300 útil para a coleta de tecido que compreende gordura removida de um paciente durante um procedimento de

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60/106 lipoplastia e/ou para pós-coleta, processamento de múltiplas etapas de gordura recolhida em um único recipiente. Na Figura 1, o aparelho 300 é ilustrado em uma orientação de coleta. A orientação de coleta é a orientação em que o aparelho 300 pode ser colocado durante a coleta de tecido adiposo removido de um paciente durante um procedimento lipoplastia. O aparelho 300 pode também ser colocado na posição de coleta durante a fase de pós-processamento de coleta de gordura recolhida como descrito abaixo. Consequentemente, as referências subsequentes aqui para a orientação do aparelho 300, tal como superior, inferior, superior e inferior, se referirão a tal orientação de coleta. Como ilustrado, o aparelho 300 tem uma altura aparelho HA, um aparelho de comprimento L, e uma profundidade aparelho (ou largura) D. O aparelho 300 também inclui uma abertura de sucção 302 e um abertura de entrada 304. A abertura de sucção 302 e a abertura de entrada 304 são dispostas na parte superior do aparelho 300, quando o aparelho 300 está colocado na posição de coleta conforme ilustrado na Figura 1. Na Figura 1, e em certas outras figuras seguintes, as aberturas são ilustradas como tendo as tampas 328 na mesma. Tais tampões 328 são utilizados para cobrir as várias aberturas e podem ser removidos e substituídos quando necessário durante a utilização do aparelho 300.

[00100] O aparelho 300 inclui um invólucro 306 e uma tampa 308. O invólucro 306 é um membro de tigela unitária em que o único acesso para o interior, ou na cavidade do invólucro 306 é

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61/106 através da abertura na parte superior do invólucro 306. Como ilustrado na Figura 1, esta abertura na parte superior do invólucro 306 pode ser coberto pela tampa 308. A tampa 308 e o invólucro 306 podem ser rígidos. A tampa 308 e o invólucro 306 são, de preferência, feitos de um material polimérico transparente, tal como uma composição de polímero de polipropileno clarificado, que proporciona uma baixa adesão celular e clareza razoável. A tampa 308 e o invólucro 306 podem ser fabricados mediante moldagem por injeção. A tampa 308 pode ser ligada ao invólucro 306 por quaisquer meios adequados, incluindo encaixe, de aperto e/ou de colagem para o reservatório 306. Em conjunto, a forma de invólucro 306 e tampa 308 de um recipiente 322 com um volume de contenção interno 330 (ver Figura 5 e que acompanham a discussão abaixo) dentro do aparelho 300. O volume de contenção interno 330 é o volume no interior da cavidade do invólucro 306 coberto pela tampa 308, e é o volume disponível para a eliminação de hardware e tecido material a ser processado no recipiente. Este recipiente pode ter uma HC altura do recipiente. O invólucro 306 pode incluir um conjunto de base integral 310 que suporta pode apoiar o aparelho 300 com a orientação de coleta quando o aparelho é colocado sobre uma superfície horizontal. A altura do aparelho de HA é maior do que a altura do recipiente HC pela distância das projeções acima da parte superior do recipiente para a abertura de entrada 304, a abertura de sucção 302, 328 tampões e outras características que se projetam para cima, descrito abaixo. O invólucro 306 pode ser convenientemente

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62/106 projetado para caber de forma eficiente dentro de uma cuba de centrífuga. As projeções acima da altura do recipiente HC podem ser configuradas de modo a não interferir com a operação de tal centrífuga. Como visto na Figura 1, o aparelho de comprimento L é igual ao comprimento do recipiente e o aparelho de profundidade é igual à profundidade do recipiente (ou largura). Como considerado, as dimensões de: altura, comprimento e profundidade, correspondentes, do volume de contenção interno 330 irá igualar as dimensões de altura, comprimento e profundidade do recipiente menos as espessuras correspondentes das paredes do invólucro 306 e a tampa 308. Como ilustrado na Figura 1, as características podem ser formadas integralmente com a tampa 308. Por exemplo, como ilustrado na Figura 1, a abertura de sucção 302 e o abertura de entrada 304 são integralmente formados como uma peça unitária fabricado com a tampa 308. Deve ser considerado que tais características podem ser fornecidas como peças separadas e, em seguida, montadas, tal como por colagem ou por outros meios. Para a integridade estrutural, a fabricação de uma peça unitária como é geralmente preferido.

[00101] A Figura 2 ilustra outra vista

em	perspectiva	do	aparelho	300	com	as tampas 328
para aberturas	e	removidos	com	um	cabo instalado
382	. A Figura	3	ilustra o	aparelho	300 na mesma

orientação como na figura 2 com o invólucro 306 e 382 manipular removido. Com o invólucro 306 removido, um filtro 312 pode ser visto que está disposta no interior do volume de contenção interno 330. O filtro 312 pode ter um tamanho de separação

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63/106 em uma faixa apropriada para a aplicação interna (por exemplo, enxerto ou preparação de concentrado de glóbulos de gordura). O filtro é de preferência feito de um material de malha. Um material preferido é uma malha de rede de nylon. Também são visíveis dentro do volume de contenção interno 330 é um conduto de abertura de sucção 314 que se prolonga para baixo a partir da abertura de aspiração 302. Além disso, tal como ilustrado na Figura 3, todos os componentes do aparelho 300, com exceção para o reservatório 306, está interligado à tampa 308. A este respeito, o subconjunto ilustrado na Figura 3, pode ser montado como ilustrado, e inserida dentro do invólucro 306.

[00102] A Figura 4 ilustra outra vista em perspectiva do aparelho 300. A Figura 4 ilustra o aparelho 300 com a mesma orientação tal como na Figura 3 com ambos, o invólucro 306 e o filtro 312

removidos.	Com o	filtro 312	removido,	uma aba	de
barreira de fluxo	324	que se	prolonga para baixo	a
partir da	tampa	308	para	dentro do	volume	de
contenção	interno	330	é visível. Em um	exemplo,	a

aba de barreira de fluxo pode estender-se entre 5 mm e 50 milímetros para baixo a partir da tampa 308. A aba de barreira de fluxo 324 pode servir como um ponto de fixação para o filtro 308 de tal modo que o filtro 312 pode ser fixado em relação à tampa 308. A aba de barreira de fluxo 324 pode também servir para evitar que o material entre um volume de retenção de tecido 332 (descrito abaixo) e movendo-se imediatamente através do filtro 312 para o volume de filtrado 334. O volume de retenção de tecido 332 é a parte do volume de contenção

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64/106 interno 330, contida dentro do filtro de barreira 312 e 324 abaixo da aba da tampa 308. O volume de filtrado 334 é a parte do volume de contenção interno 330 colocada no exterior do filtro de barreira 312 e a aba 324. Com a aba de barreira de fluxo 324 no lugar, o material entrando na abertura de entrada 304 deve ser pelo menos movido para baixo do nível mais baixo da aba de barreira de fluxo 324 antes que seja capaz de passar através do filtro 312 para o volume de filtrado 334. A aba de barreira de fluxo 324 pode ser parte de um módulo que inclui a aba de barreira de fluxo 324 e o filtro 312. Este subconjunto é montado na tampa 308 com quatro parafusos 326.

[00103] O filtro 312 é assimétrico em relação à tampa 308 e o invólucro 306 em que é configurado para fornecer uma folga entre o lado esquerdo (como se vê na Figura 3) e o invólucro 306 para a abertura de sucção 302 e da abertura de aspiração do conduto 314. Uma parcela do filtro 312 pode ser disposta em torno (por exemplo, repouso ou em torno de) uma parte do conduto 314 a abertura de sucção.

[00104] Com o filtro 312 removido (Figura 4), um dispositivo de mistura 316 pode ser visto. O dispositivo de mistura 316 inclui um eixo giratório 318 e um conjunto de elementos de mistura 320. O eixo geométrico de rotação do eixo giratório 318 pode ser através de um eixo geométrico central do eixo giratório 318. Os membros de mistura 320 estão na forma de pás que se estendem para fora a partir do eixo giratório 318. Deste modo, quando o eixo giratório 318 é girado, os membros de mistura

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320 serão girados através dos materiais dentro do volume de retenção de tecido 332 para auxiliar na mistura dos materiais no interior do volume de contenção interno 330, e em particular dentro do tecido volume de retenção 332. O eixo giratório 318 se estende a partir do lado de fora do volume de contenção interno 330 e a tampa 308 para o interior do volume de contenção interno 330. À medida que o eixo giratório 318 pode rodar em relação à tampa 308, os membros de mistura 320 fixados ao eixo giratório 318 são também giratórios em relação à tampa 308. O eixo giratório 318 pode ser feito a partir de uma composição de metal, tal como aço inoxidável (por exemplo, do tipo 303, 304, ou 316).

Alternativamente, o eixo giratório 318 pode ser feito a partir de uma composição de polímero de alta resistência, tal como um produto de resina Ultem ™.

[00105] O eixo giratório 318 pode incluir uma interface de cabo 380 (Figura 3), que pode fornecer uma interface para o cabo 382 (Figura

2) para ser interligado à parte do eixo giratório

318 do lado de fora do volume de contenção interno

330. A interface de cabo 380 da Figura 3 está na forma de um par de superfícies paralelas dispostas sobre a parte do eixo giratório 318 do lado de fora do volume de contenção interno 330. O cabo 382 tem um par de superfícies de acoplamento, paralelo, interior e configurado de tal modo que, quando o cabo 382 é colocado sobre a interface cabo 380,

girando a	alavanca	382	irá	resultar	na
transformação	do eixo	giratório	318 e	do
dispositivo	de mistura	316.	Tal	interface	380

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66/106 também permite para o cabo 382 seja removido da e substituído na interface de cabo 380, conforme necessário durante a utilização do aparelho 300.

[00106] A Figura 5 é uma vista esquemática lateral do aparelho 300 que ilustra o dispositivo de mistura 316 e filtrar 312 dentro do invólucro 306. O volume de contenção interno 330 é todo o volume dentro do invólucro 306 e por baixo da tampa 308. Em conjunto, as partes do invólucro 306 e tampa 308 que contêm o volume de contenção interno 330 formam um recipiente 322 do aparelho 300. O filtro 312 divide e separa o volume interno de contenção 330 do recipiente 322 para dentro do volume de retenção de tecido 332 disposta no interior do filtro 312, e um volume de filtrado 334 disposto no interior do invólucro 306 do lado de fora do filtro 312. O volume de filtrado 334 é a parte do volume de contenção interno 330 em que entra depois de filtrado que passa através do filtro 312 a partir do volume de retenção de tecido 332.

[00107] Disposta no interior do volume de contenção interno 330 na parte inferior do invólucro 306, 350 abaixo de um nível que é igual ou inferior ao menor extensão do filtro 312 (e, por conseguinte, também abaixo do ponto mais baixo do volume de retenção de tecido 332), é uma coleta volume de 336, de tal modo que o volume de coleta 336 ocupa a parte mais baixa do volume de filtrado 334, localizada abaixo da elevação mais baixa do volume de retenção de tecido 332.

[00108] O invólucro 306 tem uma parte de parede afilada 338 que define uma parte afilada

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340 do volume de contenção interno 330, de tal modo que a área da seção transversal da parte afilada 340 do volume de contenção interno 330 afila com uma área de seção transversal redutor em uma direção para a parte inferior do recipiente 322. Por afilamento, se quer dizer que a área em corte transversal em um plano horizontal (supondo que o aparelho 300 esteja colocado na posição de coleta) torna-se menor no sentido do cone (por exemplo, em uma direção ortogonal ao plano horizontal). A parte afilada 340 do volume de contenção interno 330 ocupa a parte do volume de contenção interno 330 abaixo de um nível 352, onde a parte de parede afilada 338 corresponde a uma parte da parede direita 342 do invólucro 306. A parte de parede afilada 338 é ilustrada como tendo uma superfície plana e uniforme inclinado parede. O ângulo de inclinação das superfícies da parte de parede afilada não precisa ser uniforme a partir do topo para o fundo da parte afilada 340 do volume de contenção interno 330, e podem variar a partir de cima para baixo com partes com diferentes ângulos de inclinação, e pode ter uma superfície curva, desde que a área da seção transversal é a redução na direção do cone. Além disso, a parte de parede afilada 338 não precisa ser uniforme em torno do perímetro, da parte afilada 340, do volume de contenção interno 330. Por exemplo, na modalidade nas Figuras 3-5, a parte de parede afilada 338 tem uma inclinação mais acentuada nas extremidades do que na parte dianteira ou de trás do aparelho 300.

[00109] O invólucro 306 pode compreender uma parte superior 344 geralmente acima

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68/106 de um nível de 354 e tendo uma parte de superfície primeira parede 348 que define uma parte superior correspondente 368 do volume de contenção interno 330. Substancialmente toda a parte de superfície primeira parede 348 pode ter uma inclinação relativa à horizontal de pelo menos 75°. Por exemplo, substancialmente toda a parte de superfície primeira parede 348 pode ser substancialmente vertical (90° de inclinação em relação à horizontal). O invólucro 306 pode incluir uma parte inferior 346, localizada abaixo da parte superior 344 e tendo uma parte de superfície segunda parede 358 que define uma parte inferior correspondente 360 do volume de contenção interno 330. A parte inferior 360 pode incluir a parte de parede afilada 338 que define a parte afilada 340 do volume de contenção interno 330. Substancialmente toda a parte de parede afilada 338 pode de preferência ter uma inclinação em relação à horizontal em uma faixa de 30° a 60°, embora possam ser utilizados outros ângulos ou superfícies curvas. A parte afilada 340 do volume de contenção interno 330 pode ocupar substancialmente a totalidade da parte inferior 360 do volume de contenção interno 330. Pelo menos uma primeira parte 362 do filtro 312 pode ser disposta na parte superior 368 do volume de contenção interno 330 e uma segunda parte 364 do filtro 312 pode ser disposta na parte inferior 360 do volume de contenção interno 330. A parte de parede afilada 338 pode formar um nadir 384 na sua cota mais baixa. O ponto mais baixo 384 pode também ser um nadir do volume de coleta 336, o volume de filtrado

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334, o recipiente 322, e o volume de contenção interno 330.

[00110] O volume de contenção interno 330 pode incluir um processamento disponível volume ou de volume utilizáveis 366 o qual pode ser a parte do volume de contenção interno 330 que é utilizável e/ou pode ser normalmente ocupada por materiais dentro do recipiente 322, durante o uso normal. Por exemplo, o volume disponível de processamento 366 pode ser a parte do volume de contenção interno 330 abaixo de um nível 356 que coincide com a extensão da parte inferior de uma abertura através da tampa 308 e que não é ocupada por partes (por exemplo, hardware interno) do aparelho 300 no interior do volume de contenção interno 330, tal como o dispositivo de mistura 316, aba de barreira 324, filtro 312, e abertura de sucção do conduto 314. A parte superior do volume de processamento disponível pode ser à elevação da extensão inferior da abertura de entrada 304, que pode definir um nível máximo de enchimento dentro do volume de contenção interno 330.

[00111] A abertura de entrada 304 em comunicação de fluido com o volume de retenção de tecido 332 através da tampa 308 está configurado para introduzir o tecido adiposo que compreende diretamente para dentro do volume de retenção de tecido 332 durante um procedimento lipoplastia. No entanto, a utilização do aparelho 300 não é tão limitada, e o tecido pode ser introduzido no aparelho usando tecido previamente recolhida em outro recipiente e transferida para o aparelho 300. Uma abertura de acesso adicional 372 em comunicação

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70/106 de fluido através da tampa 308, com o tecido volume de retenção 332, proporciona uma via adicional para dentro do volume de retenção de tecido 332, por exemplo, para a introdução de aditivos.

[00112] A abertura de sucção 302 está em comunicação de fluido, através da tampa 308, com o volume de filtrado de sucção 334 através da abertura de conduto 314 que se estende a partir da abertura de sucção 302 para dentro da parte afilada 340 do volume de contenção interno 330 na vizinhança do topo da câmara de coleta 336. A abertura de sucção 302 é configurada para ligação a um sistema de vácuo, por exemplo, através da ligação de um conduto de sucção através da qual se pode aplicar sucção através de um sistema de vácuo para sucção do volume de filtrado 334 de material que passa através do filtro 312 de retenção do tecido de volume 332 para dentro do volume de filtrado 334.

[00113] O eixo giratório 318 pode incluir um elemento de contato do filtro 37 (Figura 5) que está desviado do eixo geométrico de rotação do eixo giratório 318. A extremidade inferior do elemento de contato do filtro 376 pode contatar uma parte do filtro 312, como ilustrado na figura 5. À medida que o eixo giratório 318 é girado, o elemento de contato do filtro 376 pode rodar em um trajeto circular em torno do eixo geométrico de rotação do eixo giratório 318 permanecendo em contato com e movendo-se ao longo de uma parte do filtro 312. Este contato pode fazer com que o filtro 312 se deforme e tal deformação e/ou o contato entre o elemento de contato 376 do filtro

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312 e podem fazer com que materiais que possam ter

aderido	ao filtro 312	nessa região	se desprendam	do
filtro	312.	Assim,	o membro de	contato 376	do
filtro	pode	ajudar	a manter o	filtro livre	de

entupimento e aumentando a eficácia do filtro 312.

[00114] O eixo giratório 318 pode incluir um lúmen 374. A parte superior do lúmen 374 é visível na Figura 3. O lúmen 374 pode ter uma extremidade distal 386 (Figura 4) no interior do volume de retenção de tecido 332 e uma extremidade proximal 388 (Figura 3) no exterior do volume de contenção interno 330 e, assim, pode permitir o acesso ao volume de retenção de tecido 332 através da mesma. O lúmen 374 pode ser disposto ao longo do eixo geométrico central do eixo giratório 318. O lúmen 374 proporciona, assim, um canal de acesso ao volume de contenção interno 330. Como descrito adicionalmente abaixo, o lúmen 374 pode proporcionar o acesso para a remoção de material processado a partir de contenção interna o volume 330. A este respeito, a abertura através da tampa 308, através do qual o eixo giratório 308 estende atua como uma abertura de extração por meio do qual o acesso é fornecido através do lúmen 374 que passa através dessa abertura. O aparelho 300 pode incluir um bujão de 378 (ilustrado na Figura 4 e não representado na Figura 3) que pode ser colocado na extremidade proximal 388 do lúmen 374 para vedar o lúmen 374.

[00115] Como ilustrado na Figura 6, uma agulha hipodérmica 392 pode ser inserida através do lúmen 374 e pode ser avançada para fora da extremidade distal 386 do lúmen 374 e para perfurar

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72/106 através do filtro 312 para acessar diretamente o volume de coleta 336 (o volume sob a linha 410 na Figura 6). Assim, a agulha hipodérmica 392 pode ser utilizada para injetar material, ou remover (aspiração) material a partir do volume de coleta 336. Além disso, como o eixo geométrico de lúmen 374 está orientado verticalmente, o acesso ao volume de coleta 336 através da agulha hipodérmica 392 é por inserção vertical para baixo, para dentro do lúmen 374 de cima do recipiente. Tal inserção vertical, juntamente com a capacidade do aparelho 300 para ser colocada sobre uma superfície plana na orientação de coleta, permite um acesso fácil utilização para o volume de coleta 336, e ajuda a evitar complicações que podem comprometer as operações para coletar material valioso processado a partir do volume de coleta 430.

[00116] A agulha hipodérmica 392 pode ser interligada a uma seringa 394. A extremidade proximal 388 do lúmen 374 pode incluir um receptáculo cônico adaptado para acoplar-se com uma ponta afilada da seringa 394. A este respeito, como se ilustra na Figura 6, a profundidade de penetração pela agulha hipodérmica 392 para dentro do volume de coleta 336, quando a ponta afilada da seringa 394 está em contato com o receptáculo cônico do lúmen 374 pode ser controlada através do controle do comprimento da agulha hipodérmica 392 que se estende a partir da seringa 394. Além disso, a extremidade proximal 386 do lúmen 374 pode incluir uma funcionalidade, tal como um entalhe, para reter um anel de vedação (não ilustrado) de tal modo que quando a seringa 394 é posicionada

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73/106 contra a extremidade proximal 388 do lúmen 374, o anel-O forma uma vedação entre a extremidade proximal 388 do lúmen 374 e a seringa 394 (isto é, uma vedação através do anel de vedação entre a superfície de parede no receptáculo cônico e uma superfície de parede exterior da ponta da seringa inserida no receptáculo cônico).

[00117] Passando para as Figuras 7A e 7B, a segunda abertura de sucção 370 inclui um elemento 396 que pode ser trasladado que pode ser traduzido para cima e para baixo em relação à tampa 308 para fazer variar a profundidade (elevação dentro do volume de filtrado 334) à qual o material a partir do volume de filtrado 334 é tirado através da segunda abertura de sucção 370. Exemplos de várias profundidades (elevações) em que o membro 396 pode ser posicionado são ilustrados nas Figuras 7A, 8, 9 e 11, e são discutidos abaixo em relação aos métodos de utilização do aparelho 300. O ajuste entre o membro que pode ser trasladado 396 e a abertura através da tampa 308 da segunda abertura de sucção 370 é tal que o membro que pode ser trasladado 396 pode ser facilmente trasladado para cima e para baixo para um nível desejado, enquanto se mantém um ajuste apertado o suficiente para permitir que um vácuo aplicado ao elemento que pode ser trasladado 396 puxe de forma adequada, o material para fora do volume de filtrado 334.

[00118] Em geral, as peças discutidas com referência ao aparelho 300 podem ser feitas de qualquer material biocompatível adequado. Em particular, o invólucro 306 pode ser feito de um material polímero biocompatível transparente para

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74/106 permitir a inspeção do conteúdo no seu interior. Parafusos 326, 392 e o eixo giratório 318 podem ser feitos a partir de metal, tal como aço inoxidável. Outras partes do conjunto 300, representadas na Figura 1, podem ser feitas a partir de polímeros biocompatíveis adequados.

[00119] Várias dimensões exemplares de um exemplo não limitador de um aparelho específico 300 serão agora descritas com referência às figuras 1 e 5. Neste exemplo, o aparelho 300 tem altura aparelho de HA de aproximadamente 157 mm, um comprimento L do aparelho de aproximadamente 145 milímetros, e um aparelho de profundidade D de aproximadamente 126 milímetros. A altura do volume de contenção HC é aproximadamente 124 milímetros. O exemplo tem um volume de processamento disponível 366 de aproximadamente 760 ml e um volume de coleta de aproximadamente 23 mililitros. A parte do volume de retenção de tecido 332 que coincide com o volume de processamento disponível 366 é de aproximadamente 580 mililitros. Como será considerado, um mililitro é igual em volume de um centímetro cúbico, e os volumes indicados aqui em mililitros pode ser equivalentemente indicado como centímetros cúbicos.

[00120] Em um método para processar tecidos de um procedimento lipoplastia utilizando o aparelho 300, o tecido pode ser submetido a processamento de múltiplas etapas dentro do volume de contenção interno 330 para preparar dentro do aparelho 300 de um produto concentrado que compreende pelo menos um componente alvo, ou, pelo menos um material alvo, a partir do tecido. Tecido

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75/106 a ser tratado pode ser introduzido no volume de retenção de tecido 332 através da abertura de entrada 304. O tecido pode ser pré-filtrado, se desejado, antes de ser introduzido no volume de retenção de tecido 332. O método pode compreender a lavagem de tecidos no volume de contenção interno 330 com um líquido de lavagem. Opcionalmente, a lavagem pode incluir a centrifugação do aparelho 300. Após a lavagem, o método pode compreender digestão de tecido no interior do volume de contenção interno 330. Após a digestão, o método pode incluir a centrifugação do aparelho 300 para preparar o volume de coleta 336 que compreende um produto concentrado pelo menos um componente alvo. Por exemplo, o produto concentrado pode compreender, ou pode consistir essencialmente em fração vascular estromática do tecido adiposo, e um componente alvo podem ser células-tronco do tecido adiposo.

[00121] Durante a lavagem, o líquido de lavagem pode ser adicionado ao volume de contenção interno 330 para contato com o tecido no interior do volume de retenção de tecido 332 e com pelo menos uma parte, de preferência uma maioria e mais preferivelmente mais, o líquido de lavagem que passa através do filtro 312 para o volume de filtrado 334. O líquido de lavagem pode lavar um ou mais componentes do tecido embora mantendo tecido lavado no volume de retenção de tecido 332. O tecido lavado pode ser retido no volume de retenção de tecido 332 através do filtro 312. O líquido de lavagem, que passa pelo volume de filtrado 334, pode ser removido a partir do volume de filtrado

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334, juntamente com qualquer componente, ou componentes, lavado a partir do tecido.

Opcionalmente, após a adição do líquido de lavagem, o aparelho 300 pode ser centrifugado para proporcionar um elevado grau de separação do líquido de lavagem a partir do tecido retido no volume de retenção de tecido 332. Em seguida, o líquido de lavagem pode ser removido a partir do volume de filtrado por 334 a aspiração através da abertura de sucção 302 do aparelho 300. A lavagem pode incluir várias etapas de lavagem. Durante a lavagem, o dispositivo de mistura 316 pode ser rodada fazendo rodar o cabo 382 para misturar o conteúdo do volume de contenção interno e auxiliar

o processo	de lavagem.
[	00122] Durante	a digestão,	uma enzima,
tal como,	por exemplo,	colagenase,	pode	ser
adicionada	ao volume de	contenção	interno	330
através da	abertura de acesso adicional 372	ou
através da	abertura de entrada 304.	Durante	a
digestão, o dispositivo de	mistura 3	16 pode	ser

girado para auxiliar no processo de digestão.

[00123] Após a adição da enzima, a digestão pode compreender agitação conteúdo do volume de contenção do aparelho 300 durante um tempo e a uma temperatura suficiente para que a digestão se proceder a uma extensão significativamente para soltar o componente alvo, ou material, na forma desejada capaz de passar através do filtro 312. A agitação pode envolver qualquer método para agitar o conteúdo do volume de contenção interno 330, incluindo, por exemplo, um ou ambos de: (a) agitação do aparelho 300 para

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77/106 agitar os conteúdos dentro do aparelho 300 e (b) misturando o conteúdo dentro do aparelho 300 fazendo rodar o dispositivo de mistura 316 utilizando o identificador 382.

[00124] A centrifugação de pós-digestão promove a separação do componente de destino a partir do tecido digerido e passagem do componente de destino através do filtro 312 para a coleta do volume de coleta 336. O componente de destino pode incluir células vasculares leuco estromáticas (por exemplo, as células-tronco) do tecido adiposo. Como ilustrado na Figura 8, de múltiplas fases de materiais pode coletar dentro do volume de filtrado 334. A primeira (inferior) fase de material pode ser uma pequena camada de células vermelhas do sangue 428 situadas na região do volume de filtrado 334 abaixo da linha 408. Este volume abaixo da linha 408 ocupa uma parte inferior do volume de coleta 336. A segunda fase de material pode ser uma camada fração vascular estromática do tecido adiposo 430 e pode estar localizado na região do volume de filtrado 334 abaixo da linha 412 e acima

da linha 408. Como	será considerado, a	camada	de
células	vermelhas	de sangue 428,	e a	camada	de
fração	de estroma	vascular 430,	não	podem	ser
divididas por uma	linha nítida,	e a	camada	de
células	de sangue	podem grau 428	para	dentro	da
parte	inferior da camada de	fração	vascular

estromática 430. Este volume abaixo da linha 412 e acima da linha 408 também ocupa uma parte do volume de coleta 336. A camada fração vascular estromática 430, ou a camada de fração vascular estromática 430 em conjunto com a camada de células vermelhas do

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sangue 428, poderá	estar	na	forma	de	um grânulo, e
pode ser referida	como	uma	fase	de	grânulo. Uma
terceira fase de	material	pode	se	r uma camada

aquosa 432 que ocupa a região do volume de filtrado 334 abaixo da linha 406 e acima da linha 412. Uma quarta fase de material pode ser uma camada adiposa desagregada 434 que ocupa a região do volume de filtrado 334 abaixo a linha 414 e acima da linha 406. Uma quinta fase de material pode ser uma camada de óleo 436 que ocupa a região do volume de filtrado 334 abaixo da linha 416 e acima da linha 414. As camadas de fases separadas como ilustrado são fornecidos para ilustrar o posicionamento relativo e não se destinam a representar uma escala real dos tamanhos relativos das fases, com exceção de que a camada de células vermelhas do sangue 428 e fração vascular estromática camada 430 estão contidos dentro do volume de coleta 336 e as outras camadas se estendem por cima do volume de coleta. Como será considerado, as fases de material 428, 430, 432, 434 e 436 estão em ordem de diminuir a densidade, com a camada de células de sangue vermelho 428 sendo a fase mais densa e com a camada aquosa 432, desagregado uma camada 434 e o descarte camada de óleo 436 todos ser menos densa do que a camada de fração vascular estromática 430.

[00125] O membro que pode ser trasladado 396 da segunda abertura de sucção 370 pode ser empregado para remover primeiro a camada de óleo 436, em seguida, para remover a camada adiposa desagregada 434, e, em seguida, para remover a camada aquosa 432. Como ilustrado na Figura 8, o membro que pode ser trasladado 396 pode

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79/106 ser posicionado de tal modo que a extremidade do membro que pode ser trasladado 396 está disposta no

interior	da	camada	de óleo de	sucção 436. Sucção
aplicada	ao	membro	que pode	ser trasladado	396
removerá	o	fluido.	À medida	que o fluido	é
removido,	o	membro que pode ser	trasladado pode	ser

reduzido para remover o líquido adicional para baixo até um nível desejado, que pode ser a remoção de todas ou a maioria das camadas 436, 434 e 432. Por exemplo, uma vez que a camada de óleo 436 foi removida, o membro que pode ser trasladado 396 pode ser reduzido na camada adiposa desagregada 434 e, em seguida, a camada aquosa 432 para a remoção sequencial de estas camadas. A Figura 9 ilustra a camada aquosa 432, parcialmente removida (depois da remoção das camadas superiores 436 e 434 de tal modo que a parte superior da camada aquosa 432 está na linha 418. Como outro exemplo, o membro que pode ser trasladado 396 pode ser inicialmente inserido na posição ilustrada na Figura 9 e sucção aplicada até que uma parte da camada aquosa 432 seja removida e também a camada adiposa desagregada 434 e a camada de óleo 436 são removidas acima da linha 418, resultando no arranjo da Figura 9.

[00126] Uma vez completamente inserido dentro do volume de filtrado 334, o membro que pode ser trasladado 396 pode não ser operável para remover uma parte da camada aquosa 432, enquanto o aparelho está na posição de coleta. Por conseguinte, um utilizador pode inclinar ligeiramente o aparelho 300, como ilustrado na Figura 10, para remover ainda mais a camada aquosa 432. Como ilustrado, a fração vascular estromática

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430 abaixo da linha 412 pode formar um grânulo que pode conservar a sua posição, quando o aparelho 300 é inclinado. Este atributo do grânulo permite que o aparelho 300 seja inclinado de tal modo que a camada aquosa 432 flui lateralmente no sentido do elemento que pode ser trasladado 396, disposto

próximo	da	interface entre	a parte de	parede
afilada	338	do	invólucro	306	e a parte da	parede
direita	342	do	invólucro	306,	como ilustrado pela
linha	420,	na	Figura	10.	Tal inclinação	pode

permitir que a sucção seja aplicada à camada aquosa 432 sem que afete substancialmente a sucção da fração vascular estromática 430, a qual permanece no lugar e fixada relativamente ao recipiente. Quando a camada aquosa 432 tiver sido satisfatoriamente removida, o aparelho 300 pode ser devolvido à sua orientação de coleta, como ilustrado na Figura 11, para a remoção da fração vascular estromática 430 a partir do volume de coleta 336.

[00127] Para remover o material da fase de grânulo após as fases de material menos denso, tenha sido removido a partir de cima da fase de grânulo, a agulha hipodérmica 392 pode ser inserido dentro do volume de coleta 336 a partir da seringa 394, tal como ilustrado na Figura 6 e um fluido diluente (por exemplo, líquido de suspensão) pode ser injetado para dentro do volume de coleta 336 de modo a que o fluido diluente, fração vascular estromática 430 e a camada de células vermelhas do sangue em conjunto 428 ocupam pelo menos uma parte do volume coletado, e são de preferência limitada ao volume de coleta. Depois da injeção do fluido

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81/106 diluente, um utilizador pode bater suavemente o aparelho 300 de encontro a uma superfície dura para fazer com que o fluido diluente para misturar com a fração vascular estromática e a camada de células vermelhas do sangue. Uma segunda agulha hipodérmica pode, então, ser inserido através do lúmen 374 e a mistura de células do sangue fração vascular diluente/estroma/vermelho pode ser retirada do aparelho 300, para completar a remoção seletiva do material da fase de grânulo a partir do recipiente 322 em relação a outras fases de materiais menos densos.

[00128] Uma técnica alternativa para remover o material da fase de grânulo após as fases de material menos denso, tenha sido removido a partir de cima da fase de grânulo, é inserir a agulha hipodérmica 392 tal como ilustrado na Figura 6 para a fase de grânulo. A fase de grânulo pode então ser diretamente aspirada através da agulha hipodérmica 392 para dentro da seringa 394, para completar a remoção seletiva do material da fase de grânulo a partir do recipiente 322 em relação aos outros materiais, fases menos densas. Desta forma, o material da fase de grânulo pode ser removido do recipiente 322 sem material de grânulo da fase de suspensão em um líquido de suspensão.

[00129] Como uma alternativa adicional de processamento, o material da fase de grânulo (glóbulos vermelhos camada 428 e estroma vascular fração 430) pode ser removido do recipiente 322 sem primeiro remover as fases de material menos denso, a camada aquosa (432, 434 desagregada camada adiposa e a camada de óleo de 436), ou pelo menos

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82/106 sem remover todas essas fases materiais menos densos. Por exemplo, uma agulha hipodérmica (semelhante à da Figura 6) pode ser inserida através do lúmen 374 com a ponta distal da agulha disposta na fase de grânulo e o material da fase de grânulo pode então ser diretamente aspirado através da agulha hipodérmica e em uma seringa em comunicação de fluido com a agulha hipodérmica. Esta técnica pode permitir a remoção seletiva do material da fase de grânulo a partir do recipiente 322 sem primeiro remover as fases menos densas de material e sem suspender o material da fase de grânulo em suspensão de um líquido. Após a remoção do material da fase de grânulo, as fases de material menos denso, pode permanecer no interior do recipiente 322. A remoção por tal técnica simplifica significativamente o processamento, uma vez que o processamento associado com a remoção das fases materiais menos densos (incluindo leves pancadas no recipiente) pode ser eliminado, reduzindo os erros de processamento potenciais e perda de potencial das células-alvo para a adesão às superfícies de recipientes ou de equipamentos.

[00130] Com referência agora às Figuras 12 e 13, outra modalidade é ilustrada para um aparelho de coleta e processamento de tecido. Como ilustrado nas Figuras 12 e 13, o aparelho de coleta e processamento de tecido 450 tem uma orientação de coleta em um, posição vertical, autônoma quando apoiado por suportes de base 452. O aparelho 450 inclui uma tampa 454 cobrindo um invólucro semelhante à tigela 456, que compõem um recipiente que tem um volume de contenção interno sob a tampa

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83/106 dentro do reservatório. O aparelho inclui uma primeira abertura de sucção 458, uma segunda abertura de sucção 460, uma abertura de entrada 462 e uma abertura de acesso auxiliar 464, o qual pode ser geralmente como descreve por características semelhantes do aparelho 300 descrito em relação às Figuras 1-11.

[00131] A primeira abertura de sucção 458 está ligada a um conduto de sucção 466 que se estende desde a primeira abertura de sucção 458 para dentro de uma parte afilada de um volume de contenção interno do aparelho 450. A segunda abertura de sucção 460 está adaptada para receber um conduto de sucção que pode ser trasladado, semelhante ao o membro que pode ser trasladado 396, descrito em relação à Figura 7. O aparelho 450 inclui um filtro 468, suspenso a partir da tampa 454 e que divide o volume de contenção interno no aparelho de entre um volume de retenção disposta no interior do tecido de filtro 468 e um volume de filtrado disposta na outro lado do filtro 468. O aparelho 450 inclui um misturador rotativo disposto no interior do volume de filtrado que inclui hélices 470 ligadas a um eixo giratório 472, o qual pode ser girado para operar o misturador rotativo e fazer com que os rotores 470 para misturar e fazer circular fluido dentro o volume de contenção interno do aparelho 450. O eixo giratório 472 inclui um lúmen interno que se estende de uma extremidade proximal do lado de fora do recipiente do aparelho a uma extremidade distal do volume de retenção de tecido, para permitir o acesso para dentro do volume de contenção interno em um modo

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84/106 semelhante ao discutido anteriormente para o aparelho 300 ilustrado nas Figuras 1-7. Um bujão removível 474 pode ser disposto em uma extremidade proximal do lúmen para vedar o lúmen do lúmen quando não está em uso. O eixo giratório inclui uma interface de cabo que pode ser ligada a um cabo manual manipulável 476 (Figura 13) para operar o misturador rotativo. O aparelho 450 inclui tampas fixadas 478 que podem ser usadas para tampar a primeira parte de sucção 458, segunda abertura de sucção 460 e abertura de entrada de 462, conforme necessário, como para vedar o recipiente para transporte entre os locais de processamento ou durante a agitação em um agitador mais quente durante operações de digestão. O aparelho 450 é operável substancialmente da mesma maneira como descrito anteriormente para o aparelho 300 ilustrado nas Figuras 1-11. O aparelho 450 inclui marcações de volume de gradação 480 que indicam o volume contido dentro do volume de retenção de tecido (dentro do filtro 468) até diferentes elevações do recipiente 450 quando na orientação acesso.

[00132] É feit a agora referência às Figuras 12-15. As Figuras, 14 e 15, ilustram uma configuração de um conjunto rotativo alternativo que pode ser disposta no volume de retenção de tecido de um aparelho de retenção de tecido, e por conveniência de descrição e brevidade serão discutidas no contexto de uma modalidade alternativa do dispositivo 450, ilustrada nas Figuras 12 e 13. Os números de referência utilizados nas Figuras 14 e 15 são os mesmos

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85/106 utilizados nas Figuras 12 e 13 para os dispositivos semelhantes. As Figuras, 14 e 15, ilustram um coletor de tecido giratório 482, que pode alternativamente ser referido como um pente de tecido ou, mais particularmente, como um pentetecido fibroso. Como ilustrado nas Figuras 14 e 15, a tampa 454 tem a primeira abertura de sucção 458, a segunda abertura de sucção 460, a abertura de entrada 462 e uma abertura de eixo geométrico auxiliar 464 proporcionando acesso através da tampa 454 para dentro do volume de contenção interno do recipiente do aparelho 450. As hélices misturadoras 470 são ilustradas montadas no eixo giratório 472. Por conveniência de descrição, nas Figuras 14 e 15, 470a da hélice é designada inferior e superior da hélice é designada 470B. Também é ilustrada uma extremidade terminal de um lúmen 484, que passa através do eixo giratório 472 para proporcionar o acesso a partir de cima da tampa 454 para dentro do volume de contenção interno do recipiente do aparelho 450.

[00133] Como ilustrado nas Figuras 14 e 15, o coletor de tecido 482 está disposta sobre o eixo geométrico 472 entre o intermediário 470a e da hélice 470B. As hélices 470 alternativas, podem ser referidas como impulsores ou impulsores de mistura. Também é ilustrado nas Figuras 14 e 15 é um sentido de rotação 488 representado por uma seta e ilustrando um sentido de rotação para fazer rodar o eixo geométrico 472 para fazer girar as hélices 470 e o coletor de tecido 482 durante uma eventual operação do aparelho. O sentido de rotação 488 corresponde com as setas direcionais em uma placa

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86/106 ilustrada na Figura 13 que é visível na parte superior do dispositivo para ilustrar sentido de rotação para a operação do aparelho 450.

[00134] O coletor de tecido 482 inclui quatro membros da coleta de tecidos 486, que também podem ser referidos como lâminas de coleta de tecido. Os membros de coleta de tecido 486 incluem uma pluralidade de dentes 490 e os espaços abertos

492, configurado com um espaço aberto 492 localizado entre cada par de dentes adjacentes 490. Os membros de coleta de tecido 486, portanto, têm uma configuração dentada que facilita engate e de coleta de tecido fibroso, tais como o colágeno, quando o coletor de tecido 482 é girado no sentido de rotação 488, tal como pode ser afetada pela rotação do eixo giratório 472 utilizando o identificador 476. Os espaços abertos 492 podem alternativamente ser referidos como ranhuras ou recessos, e os espaços abertos 492 fornecer locais para tecido fibroso se envolver com o coletor de tecido 482 a ser coletado e retido. Como o tecido fibroso recolhe nos espaços abertos 492, o tecido fibroso pode também tendem a enrolar em torno do eixo giratório 472 para auxiliar na retenção do tecido fibroso. Através da coleta e manutenção do tecido fibroso usando o coletor de tecido 482, ligando do filtro 468 pode ser significativamente reduzido porque menos do tecido fibroso está disponível para coletar e ligue o filtro 468. Os dentes 490 têm uma parte superior (saliência máxima de um dente 490 relativamente ao fundo de um espaço aberto adjacente 492) que é, assim, disposto para uma borda dianteira do membro correspondente 486

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87/106 quando o coletor de tecido 482 é girado no sentido de rotação 488. A parte inferior de um espaço aberto 492 pode ser a parte mais rebaixada do espaço aberto em relação ao topo de um dente adjacente 490, tal como definida pela geometria da superfície do elemento 486. Na configuração ilustrada nas Figuras 14 e 15, cada membro 486 inclui seis dentes 490; e cinco espaços abertos 492.

[00135] Com referência continuada às Figuras 12-15, as características de uma ou ambas os hélices 470 podem ser configuradas para auxiliar a coleta de tecido fibroso pelo coletor de tecido 482 e a reduzir o potencial de entupimento do filtro 468. Tal como ilustrado nas Figuras 12-15, uma ou ambas as hélices 470 pode ter lâminas inclinadas que impulsionarão o fluxo direto de líquido a partir do respectivo propulsor 470, em uma direção axial em relação ao eixo geométrico de rotação do eixo giratório 472. Como ilustrado nas Figuras 14 e 15, a configuração da hélice inferior 470a pode incluir pás de impulsor 494 que são projetadas com um ângulo que impulsionará o fluxo de fluido em uma direção axial para cima, ao longo do eixo giratório 472, dirigido para o coletor de tecido 482, quando o eixo giratório 472 é girado no sentido de rotação 488. Este tipo de bombeamento para cima pela ação da hélice 470a pode auxiliar no tecido fibroso em movimento para longe do filtro 468 e para o coletor de tecido 482 para contatar os membros de coletar 486. De modo semelhante, como ilustrado nas Figuras 14 e 15, a parte superior da hélice 470B pode ter lâminas inclinadas 493 que

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88/106 propulsionam o fluxo de fluido em uma direção axial para cima, para o lado de baixo da tampa 454 e de distância a partir do coletor de tecido 482, quando o eixo giratório 472 é girado no sentido de rotação

488. Esta ação de bombeamento para cima pela 470B hélice pode ajudar a puxar o tecido através do coletor de tecido 482 para promover a coleta de tecido fibroso pelos membros 486. Como um acessório de criação, membros de coleta de tecido 486 podem estender-se em uma direção radial para fora a partir do eixo geométrico do eixo giratório 472 a uma distância superior àquela quer uma das ou ambas as lâminas das hélices 470a, b. Em particular, é preferido que os membros 486 possam estender-se em uma direção radial a uma distância que está para além da distância radial de uma extensão máxima das lâminas 494 do propulsor 470a inferior, e em um aumento adicional dos membros 486 pode estender-se em uma direção radial mais distante do que uma extensão máxima das lâminas 493, 494 de cada uma das hélices 470A e 470B. Desta forma, os membros 486 podem ser configurados para coletar tecido fibroso para além da extensão radial de uma ou ambas as hélices 470a, b.

[00136] Em um aperfeiçoamento, de uma ou mais das lâminas 494 pode ser configurado para raspar pelo menos uma parte do filtro 468, quando o eixo giratório 472, e, portanto, também a parte inferior 470a da hélice, é girado na direção de rotação 488. Na configuração ilustrada nas Figuras 12-15, tal raspagem do filtro 468 pode ser realizada configurando uma parte de borda de fundo 495 e/ou parte de aresta inclinada 496 de uma

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89/106 lâmina 494 para contatar e raspar superfícies do filtro 468. A este respeito, a borda inclinada parte 496 de uma lâmina 494 pode ser configurada para corresponder com e contatar uma parte afilada correspondente do filtro 468. Uma borda dianteira da pá 494 pode ter uma largura afilada para auxiliar na raspagem tecido para longe da superfície do filtro 468. Por exemplo, a configuração da pá 494, como ilustrado na Figura

14, inclui uma superfície chanfrada 497 para uma borda dianteira da parte de borda inclinada 496 que pode ajudar a levantar o tecido afastado do filtro 468, quando a hélice inferior 470a é girada na direção de rotação 488.

[00137] Como ilustrado nas Figuras 14 e

15, os dentes 490 dos membros 486 pode ter superfícies inclinadas em relação a uma borda dianteira mais fácil que facilitam a rotação do coletor de tecido 482 através do tecido que podem ser eliminados no volume de retenção de tecido do recipiente do aparelho 450.

[00138] Um coletor de tecido giratório, por exemplo, como ilustrado nas Figuras 14 e 15, podem ser preferencialmente utilizados em combinação com pelo menos um impulsor de mistura e/ou em combinação com pelo menos dois impulsores de mistura (como ilustrado no exemplo das Figuras 14 e 15). Em alternativa, o coletor de tecido pode ser usado por si só e não em combinação com qualquer impulsor de mistura separado. Quando um impulsor de mistura separado é usado, um ou mais, tais impulsor de mistura separada pode incluir uma ou mais lâminas agudos (por exemplo, lâminas 494,

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493 de hélices 470a, b das Figuras 14 e 15) que conferem fluxo axial para mistura, ou um ou mais, tais impulsor de mistura separada pode incluir uma ou mais lâminas que conferem sem tom de fluxo radial (por exemplo, membros de mistura 320 da Figura 4). Quando um coletor de tecido rotativo é utilizado sozinho, sem qualquer impulsor de mistura separado, o coletor de tecido, por si só pode servir também como um misturador rotativo com os membros de coleta de tecido que também atue como membros de mistura para misturar o conteúdo dentro de um volume de retenção de tecido. Em uma modalidade preferida, um coletor de tecido rotativo é usado em combinação com pelo menos um impulsor de mistura. Quando só um impulsor de mistura está presente, é mais preferida de dispor o impulsor de mistura a uma cota mais baixa em um eixo giratório (por exemplo, hélice 470a das Figuras 14 e 15), embora uma disposição alternativa seja incluir o impulsor de mistura em uma elevação maior em um eixo giratório (por exemplo, hélice 470B das Figuras 14 e 15). Uma configuração preferida é que o impulsor de mistura e cada coletor de tecido para ser coaxial e ligado a e acionado rotativamente por um único eixo giratório, embora tal não seja necessário em um regime de único eixo geométrico.

Por exemplo, um ou mais impulsores de mistura pode ser ligado a e acionado por um ou mais eixo geométricos que podem rodar separar a partir de um eixo giratório que aciona um coletor de tecido giratório. A coleta de tecidos e aparelho de processamento pode ter vários coletores rotativos de tecidos, que podem ter as mesmas ou diferentes

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91/106 configurações e podem ser acionados pelas mesmas ou por diferentes eixos geométricos que podem girar.

[00139] Os dentes e espaços abertos adjacentes sobre os membros da coleta de tecido, de um coletor de tecido rotativo, podem ter uma variedade de configurações. Não é necessário que os dentes de ser a mesma altura ou de configuração ou de que os espaços abertos ser do mesmo tamanho ou configuração, tanto no mesmo membro de coleta de tecidos ou em tecidos diferentes membros de coleta.

[00140] É feita referência à Figura 16 que ilustra alguns exemplos de configurações para espaços abertos e dentes para um membro de coleta de tecidos. Os números de referência correspondentes com os membros de coleta de tecido, os dentes e os espaços abertos são os mesmos utilizados nas Figuras 14 e 15, por conveniência de descrição. A Figura 16 ilustra cinco exemplos de configurações (AE) que ilustram alguns exemplos de diferentes configurações para os dentes 490 e 492 espaços abertos para um membro de coleta de tecido 486. Exemplos A, B e C têm os dentes 490 que tem uma altura h (distância entre o topo de um dente 490 e a parte inferior de um espaço aberto adjacente 492) que é igual para todos os dentes 490. Exemplo D ilustra uma configuração em que alguns dentes 490 tem uma altura h2 maior do que a

altura h1	de	alguns outros dentes	490. Exemplo	E
ilustra	uma	configuração	com	três alturas
diferentes	de	dentes (H1, H2,	H3).	Exemplos D e	E
ilustram também configurações	em que nem todos	os

dentes 490, e espaços abertos 492, são configurados com a mesma geometria.

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[00141] É feita referência à Figura 17, que ilustra outra modalidade para um aparelho de processamento e coleta de tecido. A Figura 17 ilustra um aparelho 600 incluindo uma tampa 602 e um invólucro 604 que formam um recipiente que tem um volume de contenção interno incluindo um volume de retenção de tecido 606 e um volume de filtrado 608 dispostos em lados diferentes de um filtro 610. O aparelho 600 é ilustrado em uma orientação de acesso, uma vez que será apoiado pelo suporte de base 611 que são formados integralmente com o invólucro 604. Uma abertura de sucção 612 está em comunicação de fluido com o volume de filtrado 608 e através do qual o material pode ser removido a partir do volume de filtrado 608. Uma abertura de entrada 614 é provida para introdução de tecido ou outro material no volume de retenção de tecido 606. O aparelho 600 pode incluir peças adicionais (por exemplo, aberturas de acesso, abertura de sucção, abertura auxiliar adicional), tal como descrito para modalidades anteriores. O aparelho 600 inclui um conjunto rotativo 616 incluindo um impulsor de mistura 618 e um coletor de tecido 620. O impulsor de mistura 618, coletor de tecido 620 e um separador 622 são montados em um eixo giratório (não ilustrado) que se estende a partir de cima do recipiente através da tampa 602 e para dentro do volume de retenção de tecido 606. O eixo giratório inclui um lúmen central, que se prolonga através do eixo giratório a partir do exterior e é aberto na parte inferior do conjunto de mistura perto da parte inferior do volume de retenção de tecido 606 um pouco acima do filtro 610. O lúmen é acessível

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93/106 através da remoção de uma tampa 624. A tampa 602, invólucro 604, volume de retenção de tecido 606, volume de filtrado 608, filtro 610, suportes de base 611, abertura de sucção 612, abertura de entrada 614, eixo giratório, impulsor de mistura 618 e coletor de tecido 620 podem ter quaisquer características de modelo ou configurações como descrito anteriormente em relação às características do aparelho descrito em qualquer das Figuras 1-16 correspondentes. O aparelho 600, no entanto, inclui uma cavidade de grânulo 626 na parte inferior do volume de filtrado 608, como será discutido mais abaixo.

[00142] Em algumas modalidades preferidas, o coletor de tecido 620 pode ter uma concepção análoga à do coletor de tecido correspondente descrito com respeito às Figuras 1416 e o impulsor de mistura 618 pode ser configurado com pás inclinadas para a produção de fluxo axialmente para cima em direção ao coletor de tecido 620, quando o eixo giratório é girado em um sentido apropriado. As lâminas do impulsor de mistura 618 podem ser concebidas vantajosamente com partes que raspam o filtro 610 quando o eixo giratório 616 é girado, de um modo semelhante ao descrito acima com respeito às Figuras 14-16. O lúmen através do eixo geométrico de rotação pode ser alinhado com um volume de coleta localizado no volume de filtrado 608 abaixo da parte inferior do filtro 610, e pode proporcionar o acesso para a remoção conveniente de material processado a partir da cavidade de grânulo 626 do volume de coleta localizado por baixo do filtro 610.

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[00143] Vários exemplos de dimensões são ilustrados para o aparelho 600. Uma primeira dimensão de altura D1 ilustra a dimensão vertical da parte inferior do volume de coleta em um nadir do volume de filtrado 608 para uma elevação superior do volume de coleta ocupado pela cavidade de grânulo 626. Segunda dimensão da altura D2 ilustra a dimensão vertical da parte inferior para o topo do volume de coleta que está abaixo do filtro 610. A terceira dimensão de altura D3 ilustra a dimensão vertical da parte inferior do filtro 610 para a parte inferior de uma aba 628 a partir do qual o filtro 610 está suspenso. Quarta dimensão da altura D4 ilustra a extensão vertical da aba 628. Ângulo A1 é um ângulo entre horizontal e uma primeira superfície interior afilada da parede 630 do recipiente que define pelo menos uma parte do volume de filtrado 608, incluindo a definição de pelo menos uma parte de o volume da coleta. Ângulo A2 é um ângulo a partir da horizontal para uma segunda superfície afilada da parede interior 632 do recipiente que define pelo menos uma parte da cavidade de grânulo. Ângulo A3 é um ângulo entre horizontal e uma terceira superfície de parede interior afilada do recipiente que define pelo menos uma parte de fundo das dimensões 626. Exemplo de cavidade de grânulo para uma modalidade de exemplo de modalidade do aparelho

600	inclui 25,7 milímetros	para	D1,	37,1	milímetros
para	D2, 55,	9 milímetros	para	D3,	7,9	milímetros
para	D4, 45°	para A1, 80°	para	A2,	e 30	para A3.
Tal	exemplo	pode ser concebido	de	modo	a incluir,

por exemplo, um volume de contenção interno de

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95/106 aproximadamente 270 centímetros cúbicos e um volume de cavidade de grânulo 626, de aproximadamente 1,2 centímetros cúbicos, e com o volume de filtrado 606 configurado para acomodar o processamento de aproximadamente 110 centímetros cúbicos de tecido adiposo no volume de retenção de tecido 606 para a preparação de uma fase de grânulo incluindo concentrado de frações vasculares leuco estromáticas que pode preencher ou quase encher a cavidade de grânulo 626.

[00144] A localização e configuração da cavidade de grânulo 626 na modalidade do aparelho 600, ilustrado na Figura 17, facilitam a aspiração direta de material de uma fase de grânulo que pode acumular-se na cavidade de grânulo 626, proporcionando uma câmara relativamente profunda e estreita que ajuda a facilitar a aspiração eficaz do material da fase de grânulo sem também aspirar grandes quantidades de material sobrejacente de fases de materiais menos densos que podem se formar durante o processamento de centrifugação. A Figura 18 ilustra o aparelho 600 da Figura 17, em que uma agulha hipodérmica 640 é inserida através do espaço interior do eixo giratório para ter acesso ao material de fase de grânulo 642 a partir de cima para aspiração direta do material de fase de grânulo 642 a partir da cavidade de grânulo 626 através da agulha hipodérmica 640 para fora do recipiente e para uma seringa 644. Tal aspiração direta do material de fase de grânulo 642 pode ser realizada sem remover primeiro o material menos denso, 646 a partir de cima do material de fase de grânulo 642 e sem suspensão do material de fase de

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96/106 grânulo 646 em um líquido da suspensão. A seringa 644 pode ser pré-carregada com uma quantidade de meio de dispersão que se mistura com o material da fase de grânulo disperso e aspirado, uma vez que é introduzido na seringa 644. Isto pode ajudar a evitar a aglomeração do material de fase de grânulo na seringa. A mistura resultante de material de fase de grânulo e meio de dispersão pode ser removida e processada adicionalmente para preparar uma composição para administração a um paciente ou a mistura pode ser administrada diretamente a um paciente como uma composição de entrega, tal como por injeção em um paciente na proximidade de uma articulação para tratar de osteoartrite na articulação. Se uma mistura na seringa for removida a partir da seringa 644 para continuar o processamento, a mistura pode ser centrifugada para material de fase de grânulo separada e líquido em suspensão e o material da fase de grânulo separada pode ser recuperado e formulado com outros componentes em uma composição de entrega, a qual pode, por exemplo, incluir um material de estrutura ou podem incluir dispersão em um novo meio de dispersão com propriedades e com um volume desejado para uma aplicação de um tratamento especial. Qualquer das superfícies de parede que definem pelo menos uma parte de qualquer da primeira parte afilada, segunda parte afilada e terceira parte afilada pode ter geometria plana inclinada com um ângulo de inclinação constante, como ilustrado nas Figuras 17 e 18 para os ângulos A1, A2 e A3 ou pode ter uma geometria curva com um ângulo de inclinação variável. Quando tal superfície tem uma geometria

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curva, o	respectivo	ângulo pode ser	o	ângulo	de
inclinação	de uma linha tangente a	um	ponto	na
geometria	curva. [00145] A	Figura 19 é	um	diagrama

generalizado de blocos de processo que ilustra uma modalidade de um método envolvendo o processamento de múltiplas etapas dentro de um recipiente portátil, tal como, por exemplo, utilizando um tecido de coleta e aparelho de processamento como anteriormente descrito. Como ilustrado na Figura 19, o método inclui uma etapa de lavagem 502, durante a qual o tecido adiposo disposto dentro de um recipiente portátil é lavado para remover contaminantes a partir do tecido adiposo. Os contaminantes que podem estar associados com o tecido adiposo incluem, por exemplo, sangue, lipídios livres, partículas pequenas e detritos e outros materiais que possam ter sido coletados com o tecido adiposo ou resultar da degradação durante uma operação de coleta de tecido.

[00146] A lavagem 502 pode incluir um ou vários ciclos de lavagem durante o qual o tecido adiposo é lavado com líquido de lavagem dentro do recipiente. O líquido de lavagem, por exemplo, pode ser uma solução tampão, tal como solução de Ringer com lactato ou Solução Equilibrada de Hank, e pode ter aditivos adicionais, tais como um ou mais de um agente anticoagulante, um antibiótico e um antifúngico. Um agente anticoagulante pode vantajosamente impedir a coagulação do sangue que pode estar presente, e pode ajudar a lavagem eficaz do sangue a partir do tecido adiposo. Antibióticos e antifúngicos pode ajudar a proteger contra

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98/106 problemas associados com a contaminação inadvertida fora do tecido adiposo no interior do recipiente. Tal líquido de lavagem pode também incluir um ou mais agentes tampão, tal como glicina. Um material preferido para o uso como um agente anticoagulante é heparina.

[00147] Durante um ciclo de lavagem, líquido de lavagem é misturado com o tecido adiposo no recipiente e, em seguida, de preferência, substancialmente todo o líquido de lavagem com contaminantes lavados a partir do tecido adiposo é removido do recipiente a partir de um volume de filtrado em um primeiro lado de um filtro dentro o recipiente mantendo o tecido adiposo lavado em um volume de retenção de tecido do recipiente em um segundo lado do filtro.

[00148] A lavagem pode incluir qualquer das características acima discutidas.

[00149] Após a lavagem 502, o tecido adiposo lavado no recipiente é submetido a uma etapa de digestão 504. O meio de digestão, tal como uma solução de enzima contendo colagenase, é adicionado ao recipiente para contatar o tecido adiposo lavado. O meio de digestão pode, por exemplo, ser adicionado em uma proparte em volume em uma faixa de meio de digestão: tecido adiposo de 0,6:1 a 2:1. O meio de digestão pode conter enzima de colagenase, por exemplo, em uma quantidade suficiente para fornecer de 150 a 300 unidades de digestão de colágeno (CDU) por mililitro do volume catalítico. O volume catalítico refere-se ao volume total do meio de digestão e de tecido adiposo no interior do recipiente ao qual é adicionado o meio

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99/106 de digestão. Após o meio de digestão ser adicionado ao recipiente, a digestão enzimática no interior do recipiente é deixada prosseguir durante um tempo de retenção, por exemplo, de 20 minutos até 50 minutos, enquanto o recipiente é colocado em um ambiente de temperatura controlada mantido dentro de uma faixa de temperaturas de preferência de 32°C a 38°C, e com agitação pelo menos ocasional, e de preferência, substancialmente contínua, do conteúdo do recipiente. A etapa de digestão 504 pode incluir qualquer uma ou qualquer combinação dos aperfeiçoamentos de características e características adicionais discutidos acima.

[00150] O método, como ilustrado na Figura 19 também inclui uma etapa de interromper digestão 506 que ocorre depois da etapa de digestão 504. A etapa de interromper digestão 506, de preferência não deve ocorrer mais cedo do que no final do tempo de retenção para a digestão enzimática no ambiente de temperatura controlada, mas em todo o caso deve ser realizada com maior preferência dentro de 50 minutos após a adição do meio de digestão ao recipiente durante a etapa de digestão 504. A etapa de digestão 506 pode incluir a adição de um reagente de interrupção ao recipiente para parar a atividade enzimática de forma positiva no interior do recipiente. Isto é importante, porque se a atividade enzimática não for interrompida, a digestão no interior do recipiente pode prosseguir para um indesejável grau em que a enzima pode destruir a viabilidade de um número significativo das células vasculares leuco estromáticas.

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[00151] Como ilustrado na Figura 19, o método inclui, após a etapa de interromper digestão 506, uma etapa de centrifugação 508. A etapa de centrifugação 508 é executada com o recipiente disposto em uma centrífuga e a centrífuga é operada para centrifugar o recipiente de modo a formar fases separadas de densidade no interior do recipiente. Estas fases separadas de densidade incluem uma fase de grânulo de alta densidade rica em células vasculares leuco estromáticas, que pode formar fase de grânulo adjacente a uma parte inferior do recipiente. As fases separadas de densidade também podem incluir as fases de material de baixa densidade. Por menor densidade, entende-se que as fases de material de baixa densidade têm uma densidade mais baixa do que a fase de grânulo. Quando o recipiente é orientado com o grânulo adjacente ao fundo do recipiente (por exemplo, em uma orientação de acesso para o recipiente), as fases de material de baixa densidade serão eliminadas no recipiente acima da fase de grânulo. As fases de material de baixa densidade podem incluir, por ordem decrescente de densidade, uma camada aquosa, uma camada adiposa desagregada (contendo restos de tecido adiposo desagregado) e uma camada de óleo. A fase de grânulo é enriquecida em, e pode ser na maior parte, ou mesmo substancialmente inteiramente composta de células vasculares leuco estromáticas (por exemplo, fração vascular estromática). Em um lado da fase de grânulo oposta às fases de material de baixa densidade pode ser disposta uma pequena fase de glóbulos vermelhos. Desde que a lavagem do tecido

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101/106 adiposo seja completada durante a etapa de lavagem 502, esta fase de glóbulos vermelhos pode ser extremamente pequena, e em alguns casos, pode ser difícil distinguir a partir de uma parte inferior da fase de grânulo. A etapa de centrifugação 508 pode incluir qualquer uma ou qualquer combinação dos aperfeiçoamentos de características e características adicionais discutidos acima.

[00152] Como ilustrado na Figura 19, a etapa de interromper digestão 506 é executada depois da etapa de digestão 504 e antes da etapa de centrifugação 508. Tal sequenciação é preferível, mas não necessária. Em uma variação, a etapa de interromper digestão 506 pode ser realizada após a centrifugação 508. No entanto, como a digestão enzimática continuaria durante a centrifugação, essa variação na seqüência não é a preferida para proporcionar um melhor controle sobre a velocidade e extensão da digestão enzimática.

[00153] Após a etapa de centrifugação 508 ter sido completada, o recipiente pode ser removido da centrífuga e submetido a uma etapa 510 de eliminar seletivamente material da fase de grânulo. As células vasculares leuco estromáticas, que incluem células-tronco contidas na fase de grânulo representam um valioso produto. Para a utilização eficaz destas células vasculares leuco estromáticas valiosas, é geralmente necessário remover as células do recipiente. Este tem sido um problema importante no contexto da utilização de recipientes portáteis de várias etapas de processamento que é endereçável com várias modalidades da invenção. Durante a etapa 510, o

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102/106 material da fase de grânulo é removido a partir do volume de contenção interno do recipiente, para fora do recipiente separado das fases de material menos denso. A etapa 510 pode incluir qualquer uma das características, como discutido acima. Em algumas alternativas de processamento, o material da fase de grânulo pode ser diretamente aspirado através de um tubo de aspiração (por exemplo, agulha hipodérmica) inserido na fase de grânulo a partir de cima e o material da fase de grânulo pode ser aspirado diretamente a partir do recipiente através do tubo de aspiração, por exemplo, para dentro de uma seringa ou outro recipiente de fluido localizado fora do recipiente.

[00154] Com referência agora à Figura 20, é ilustrada outra modalidade de modalidade de um método, incluindo uma abordagem alternativa para a remoção seletiva de material da fase de grânulo a partir do recipiente. A modalidade ilustrada na Figura 20 inclui a etapa de lavagem 502, a etapa de digestão 504, a etapa de interromper digestão 506, a etapa de centrifugação 508 e a etapa de remover seletivamente o material de fase de grânulo 510, como discutido com a Figura 19, mas que ilustra mais pormenores de algumas alternativas de processamento para a etapa 510. Como ilustrado na Figura 20, a etapa 510 inclui as etapas 511, 512 e 514. Durante a etapa 511, as fases de material de baixa densidade formadas durante a centrifugação podem ser removidas do recipiente, enquanto a fase de grânulo foi retida no interior do recipiente, de preferência mantendo a fase de grânulo em um estado sem perturbações, no lugar, no local do recipiente

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103/106 onde o grânulo foi coletado durante a centrifugação. A etapa 511 pode incluir qualquer uma ou qualquer combinação das características tal como discutido acima. Como ilustrado na Figura 20, após a etapa de remoção da fase de baixa densidade 511, o método inclui uma etapa de dispersão de células 512. Durante a etapa de dispersão de células 512, líquido da suspensão aquosa é introduzido no recipiente para misturar com a fase de grânulo e para atuar como um meio de dispersão para dispersar as células da fase de grânulo em suspensão no líquido. A dispersão de células a partir da fase de grânulo pode ser auxiliada por leves pancadas no recipiente para desalojar e romper a fase de grânulo para auxiliar a dispersão eficaz das células vasculares leuco estromáticas no líquido em suspensão. A etapa de dispersão das células 512 pode incluir qualquer uma das características, como discutido acima. Após a etapa de dispersão de células 512, o processamento ilustrado na Figura 20 inclui uma etapa de remoção de células dispersas 514, durante a qual a maior parte, e de preferência substancialmente a totalidade, do líquido em suspensão com as células dispersas da fase de grânulo é removida a partir do recipiente, para assim se recuperar as células vasculares leuco estromáticas a partir do recipiente. A etapa de remoção de células dispersas 514 pode incluir qualquer das características acima discutidas.

[00155] Como uma alternativa ao processamento para a etapa de remoção seletiva de material de fase de grânulo 510, ilustrado na

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Figura 20, após a etapa de remoção de material de fase de baixa densidade 511, o material da fase de

grânulo poderia	ser removido	do recipiente	por
aspiração	direta	através de um	tubo de aspiração,
tal como	uma	agulha hipodérmica. Com esta
alternativa de	processamento	, as células	do
material da fase	de grânulo não	seriam dispersas	ou
suspensas	em um	líquido de	suspensão antes	da
remoção a	partir	do recipiente.
	[00156]	A discuss	ão anterior	da
invenção	e sua	s diferentes	modalidades foram

apresentadas para fins de ilustração e descrição. O precedente não se destina a limitar a invenção apenas à forma ou formas aqui especificamente descritas. Por conseguinte, as variações e modificações comensuráveis com os ensinamentos acima, e a habilidade ou conhecimento da técnica relevante, estão dentro do âmbito da presente invenção. As modalidades descritas acima, além disso, se destinam a explicar os melhores modos conhecidos para a prática da invenção e para permitir que outros versados na técnica utilizem a invenção em tais, ou outras, modalidades e com várias modificações requeridas pelas aplicações ou utilizações específicas da presente invenção. Embora a descrição da invenção tenha incluído descrição de um ou mais possíveis modalidades e certas variações e modificações, outras variações e modificações estão dentro do âmbito da invenção, por exemplo, como pode estar dentro da habilidade e conhecimento daqueles versados na técnica após a compreensão da presente descrição. Pretende-se obter os direitos que incluem modalidades

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105/106 alternativas até o limite permitido, incluindo estruturas, funções, faixas ou etapas alternativas, permutáveis e/ou equivalentes, àquelas reivindicados, sejam ou não tais estruturas, funções, faixas ou etapas alternativas, permutáveis e/ou equivalentes aqui descritas, e sem a intenção de dedicar publicamente qualquer matéria patenteável. Além disso, qualquer característica descrita ou reivindicada, com respeito a qualquer modalidade descrita pode ser combinada em qualquer combinação com uma ou mais de quaisquer outras características de qualquer outra modalidade ou modalidades, na medida em que as características não sejam necessariamente compatíveis tecnicamente, e todas essas combinações estão dentro do âmbito da presente invenção.

Os termos compreendendo, contendo, incluindo e tendo, e variações gramaticais destes termos, destinam-se a ser inclusivos e não limitadores, em que a utilização de tais termos, indica a presença de uma condição ou característica, mas não com a exclusão da presença também de qualquer outra condição ou característica. O uso dos termos compreendendo, contendo, incluindo e tendo, e variações gramaticais destes termos no que refere à presença de um ou mais componentes, subcomponentes ou materiais, também inclui e se destina a descrever as modalidades mais específicas em que o termo compreendendo, contendo, incluindo ou tendo (ou a variação de tal termo) conforme o caso é substituído por qualquer dos termos mais limitados consistindo essencialmente em ou consiste em ou

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106/106 “que consiste apenas” (ou a variação gramatical adequada desses termos mais limitados). Por exemplo, uma declaração de que algo compreende” um ou mais elementos declarados, também pretende incluir e descrever as modalidades mais específicas, mais limitadas de algo que consiste essencialmente do” elemento ou elementos declarados, e algo que consiste no” elemento ou elementos declarados. Exemplos de várias características foram providos para fins de ilustração, e os termos exemplo”, por exemplo”, e similares indicam exemplos ilustrativos que não são limitadores e não devem ser interpretados como limitando uma característica ou características a qualquer exemplo determinado. O termo pelo menos” seguido de um número (por exemplo, pelo menos um”) significa aquele número ou mais do que aquele número. O termo em pelo menos uma parte de” significa a totalidade ou uma parte que é menos do que a totalidade. O termo pelo menos uma parte” significa a totalidade ou uma parte que é menos do que a totalidade.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Aparelho (300) para processar material biológico humano contendo tecido fibroso, o aparelho (300) compreendendo:

um recipiente (322) tendo um volume de contenção interno (330), o volume de contenção interno (330) incluindo um volume de retenção de tecido (332) e um volume de filtrado (334);

um filtro (312) disposto no interior do volume de contenção interno (330) com o volume de retenção de tecido (332) em um lado do filtro (312) e o volume de filtrado (334) no outro lado do filtro (312) com o volume de retenção de tecido (332) e o volume de filtrado (334) estando em comunicação de fluido através do filtro (312);

uma abertura de entrada (304) em comunicação de fluido com o volume de retenção de tecido (332) e configurada para acessar o volume de retenção de tecido (332) para a introdução de material biológico humano no volume de retenção de tecido (332); e uma abertura de sucção (302) em comunicação de fluido com o volume de filtrado (334) e configurada para acessar o volume de filtrado (334) para aspiração de material a partir do volume de filtrado (334);

o aparelho (300) sendo caracterizado por compreender:

um coletor de tecido (482) disposto no volume de retenção de tecido (332) e giratório em relação ao recipiente (322) em pelo menos uma primeira direção de rotação em torno de um eixo geométrico de rotação, o coletor de tecido (482)

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2/6 incluindo pelo menos um membro dentado que varre através de uma parte do volume de retenção de tecido (332) quando o coletor de tecido (482) é girado na primeira direção, o membro dentado sendo configurado com uma pluralidade de dentes (490) para coletar e reter tecido fibroso quando o coletor de tecido (482) é girado na primeira direção em contato com material biológico humano contendo tecido fibroso disposto no volume de retenção de tecido (332);

em que cada membro dentado tem uma primeira extremidade localizada radialmente em direção ao eixo geométrico e uma segunda extremidade localizada radialmente para fora do eixo geométrico, cada membro dentado incluindo entre a primeira extremidade e a segunda extremidade pelo menos três dentes (490) e um espaço aberto entre os dentes (490) de cada par de dentes (490) adjacentes e os dentes (490) se projetam para um lado dianteiro do membro dentado quando o coletor de tecido (482) é girado na primeira direção.

2. Aparelho (300), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada membro dentado inclui pelo menos 5 dos dentes (490).
3. Aparelho (300), de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o coletor de tecido (482) compreende pelo menos dois dos membros dentados.

4. Aparelho (300), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a segunda

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3/6 extremidade de cada membro dentado é localizada entre 1 e 10 centímetros a partir do eixo geométrico; e cada um dos dentes (490) tem uma altura de a partir de 1 milímetro a 10 milímetros em relação a uma parte inferior de cada espaço aberto adjacente (492).

5. Aparelho (300), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que os dentes (490) se projetam em um plano de rotação do membro dentado quando o coletor de tecido (482) é girado na primeira direção.

6. Aparelho (300), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por compreender um impulsor de mistura no volume de retenção de tecido (332) , em que: o impulsor de mistura é configurado para

dirigir o fluxo axial do impulsor de mistura em uma direção no sentido do coletor de tecido (482);

o impulsor de mistura inclui pelo menos uma parte configurada para raspar uma parte do filtro (312), quando o impulsor de mistura é operado; e o coletor de tecido (482) e o impulsor de mistura são coaxiais e giratórios em torno do eixo geométrico na primeira direção.

7. Aparelho (300), de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que cada parte do impulsor de mistura configurada para raspar uma parte do filtro (312) inclui uma parte

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4/6 de borda periférica de uma lâmina impulsora do impulsor de mistura; e em que pelo menos uma parte de cada parte do filtro (312) está em uma parte afilada do filtro (312) que é disposta em uma parte afilada do volume de contenção interno (330).

8. Aparelho (300), de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que o impulsor de mistura se estende até uma primeira distância radial a partir do eixo geométrico e o coletor de tecido (482) se estende até uma segunda distância radial a partir do eixo geométrico, em que a segunda distância radial é maior do que a primeira distância radial por pelo menos 1 milímetro.

9. Aparelho (300), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por compreender uma abertura de extração configurada para acessar o volume de contenção interno (330) para remover material biológico processado a partir do volume de

contenção interno (330), em que:

o aparelho (300) é orientável em uma primeira orientação na qual a abertura de entrada (304) e a abertura de sucção (302) são configuradas para acesso através das mesmas a partir de cima do recipiente (322) e para dentro do volume de contenção interno (330);

a abertura de extração é configurada para acesso através da mesma a partir de cima do recipiente (322) para dentro do volume de contenção interno (330), quando o aparelho (300) é orientado na primeira orientação;

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5/6 o acesso através da abertura de extração é através de um lúmen (374) se estendendo através de um eixo giratório (308) alinhado com o eixo geométrico;

o volume de contenção interno (330) inclui uma cavidade de grânulo disposta em uma parte inferior do volume de filtrado (334) abaixo de uma elevação inferior do filtro (312) e acessível apenas a partir de cima quando o aparelho (300) está em uma orientação de acesso;

o volume de filtrado (334) inclui uma parte afilada inferior abaixo de uma elevação inferior do filtro (312) e acima de uma elevação superior da cavidade de grânulo;

a parte afilada inferior do volume de filtrado (334) é definida por superfícies internas de parede do recipiente (322) que são individualmente inclinadas em relação à horizontal em um ângulo máximo inferior a 60°, quando o recipiente (322) está na orientação de acesso; e pelo menos uma parte da cavidade de grânulo é definida por uma superfície de parede do recipiente (322) inclinada em relação à horizontal em um ângulo que é maior do que o ângulo máximo quando o aparelho (300) está na orientação de acesso.

10. Método para processar tecido adiposo usando um aparelho (300), do tipo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o método compreendendo processar no recipiente (322) do aparelho (300), o método sendo caracterizado por compreender a etapa de lavar o tecido adiposo no

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6/6 interior do recipiente (322) para remover contaminantes do tecido adiposo.