BR112014002911B1 - método para obtenção de uma fração de células e composição que compreende uma linhagem de l. bulgaricus - Google Patents
método para obtenção de uma fração de células e composição que compreende uma linhagem de l. bulgaricus Download PDFInfo
- Publication number
- BR112014002911B1 BR112014002911B1 BR112014002911-3A BR112014002911A BR112014002911B1 BR 112014002911 B1 BR112014002911 B1 BR 112014002911B1 BR 112014002911 A BR112014002911 A BR 112014002911A BR 112014002911 B1 BR112014002911 B1 BR 112014002911B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- pylori
- composition
- bulgaricus
- cncm
- lineage
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 241000186672 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Species 0.000 claims abstract description 34
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 16
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 29
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 7
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 abstract description 6
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 abstract description 6
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 12
- 241001473947 Helicobacter pylori SS1 Species 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 10
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 10
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 8
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 8
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 6
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 6
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 6
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 4
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 2
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 2
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 2
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150092610 PKH2 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000011587 gastric lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 101100232400 Buchnera aphidicola subsp. Thelaxes suberi ibp gene Proteins 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010015137 Eructation Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000650817 Homo sapiens Semaphorin-4D Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 101100339902 Pseudomonas putida nicB gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 206010067171 Regurgitation Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102100027744 Semaphorin-4D Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- TYXNQDAIWMHZAY-UHFFFAOYSA-N [C].NC(N)=O Chemical compound [C].NC(N)=O TYXNQDAIWMHZAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000007320 autophagy mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000027687 belching Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 235000015155 buttermilk Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000002318 cardia Anatomy 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000021121 fermented vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 206010016766 flatulence Diseases 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 101150006844 groES gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 208000024798 heartburn Diseases 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 101150010713 hspA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 1
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 229940126409 proton pump inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000000612 proton pump inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 101150080234 vacA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1238—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using specific L. bulgaricus or S. thermophilus microorganisms; using entrapped or encapsulated yoghurt bacteria; Physical or chemical treatment of L. bulgaricus or S. thermophilus cultures; Fermentation only with L. bulgaricus or only with S. thermophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/746—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for lactic acid bacteria (Streptococcus; Lactococcus; Lactobacillus; Pediococcus; Enterococcus; Leuconostoc; Propionibacterium; Bifidobacterium; Sporolactobacillus)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/123—Bulgaricus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
LINHAGEM DE L. BULGARICUS CAPAZ DE INIBIR A ADESÃO DE LINHAGENS DE H. PYLORI A CÉLULAS EPITELIAIS. A presente invenção refere-se a uma linhagem de Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus, apropriada para uso no tratamento ou na prevenção de infecção com Helicobacter pylori.
Description
[001] A presente invenção refere-se ao campo de pró-bióticos. Particularmente, a invenção pertence a uma nova linhagem de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, útil para o tratamento ou a prevenção de infecção de Helicobacter pylori.
[002] De acordo com uma definição recentemente aprovada pela National Yogurt Association (NYA) ou o International Life Science Institute (ILSI) nos USA, pró-bióticos são micro-organismos vivos que com ingestão em uma quantidade suficiente exercem benefícios de saúde além de nutrição básica. Bactérias pró-bióticas foram descritas entre espécies pertencendo aos gêneros Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus e Lactococcus, comumente usados na indústria de laticínios. Pró-bióticos são pensados intervirem no nível da flora intestinal através de impedimento de desenvolvimento de microorganismos patogênicos e/ou através de ação mais direta sobre o sistema imune.
[003] Helicobacter pylori (H. pylori) é uma bactéria de forma espiral Gram-negativa que coloniza a camada de muco gástrico humano de mais que 50% da população mundial. Embora a maioria de indivíduos infectados com H. pylori seja assintomática embora seu epitélio gástrico mostre sinal de inflamação, 15% a 20% de indivíduos infectados com H. pylori desenvolvem doenças. Realmente, H. pylori é o principal agente causador de gastrite ativa crônica, doenças de úlcera péptica, atrofia, metaplasia, displasia, câncer gástrico e linfoma de tecido linfoide associado com mucosa gástrica (MALT) (ver para revisão Fox and Wang, 2007 e Polk e Peek, 2010).
[004] Durante infecção, H. pylori se liga especificamente a células epiteliais gástricas forrando o epitélio gástrico através de várias moléculas de adesão (adesinas) produzidas pelas bactérias tais como proteínas BabA e SabA. Adesão às células epiteliais gástricas protege as bactérias de fluxo líquido, movimento peristáltico e desprendimento da camada mucosa. Adesão de H. pylori à mucosa gástrica induz caminhos de transdução de sinal dentro de células epiteliais gástricas, conduzindo a danos de célula epitelial gástrica e atrofia via tensão oxidante, apoptose e/ou mecanismos de autofagia. Da mesma maneira, adesão de H. pylori a células epiteliais gástricas é uma etapa chave no estabelecimento de uma infecção da mucosa gástrica.
[005] O tratamento padrão em pacientes infectados com H. pylori são dois antibióticos associados a um inibidor de bomba de prótons (PPI), assim chamada terapia tripla. Entretanto, a taxa de erradicação de H. pylori seguindo terapia tripla está caindo devido à resistência a antibiótico, ou pobre aquiescência. Ainda, a despeito de vários experi-mentos clínicos, ainda não existe vacina efetiva disponível no mercado.
[006] Parece, a partir do citado anteriormente, que há uma ne cessidade de alternativas ou complementos para terapia tripla para o tratamento ou para a prevenção de infecção com H.pylori.
[007] Foi proposto, como uma alternativa, usar bactérias de ácido lático pró-bióticas (LAB) que produzem ácido lático, bacteriocinas e outras substâncias antimicrobianas. Boyanova et al. (2009) verificou várias linhagens de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (L. bul- garicus) que inibem o crescimento de linhagens de H. pylori, incluindo linhagens resistentes a antibióticos, in vitro (usando um processo de difusão cavidade - agar), em uma maneira dependente de linhagem. Entretanto, as linhagens L. bulgaricus estudadas não são claramente identificadas e não são publicamente disponíveis. Simova et al. (2009) selecionou várias bactérias de ácido lático produzindo bacteriocina. Então, eles determinaram a atividade antimicrobiana das ditas linha- gens através de análise de atividade antimicrobiana de sobrenadante isento de células (CFS) destas linhagens através de dois processos in vitro: um processo de difusão cavidade - agar e o ensaio de diluição crítica de Barefoot and Klaenhammer. Eles verificaram que o CFS da linhagem de L. bulgaricus BB18 inibe o crescimento de um amplo es-pectro de micro-organismos patogênicos (bactérias ou leveduras), in-cluindo linhagens de H. pylori, devido sua atividade antimicrobiana.
[008] Os inventores isolaram uma nova linhagem de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus e verificaram, in vitro e in vivo, que esta linhagem inibe a adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais. Esta linhagem de L. bulgaricus (chamada DN_100_0602 ou CNCM I4428) por isso pode ser usada para o tratamento ou a prevenção de infecção com H. pylori, alvejando uma principal etapa no estabelecimento desta infecção, a saber, através de inibição de adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais.
[009] Da mesma maneira, um objeto da presente invenção é a linhagem de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus depositada, de acordo com o Tratado de Budapeste, em CNCM (Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes, 25 rue du Docteur Roux, Paris) em 3 fevereiro de 2011, sob o número de acesso CNCM I-4428.
[0010] Esta linhagem CNCM I-4428 tem as seguintes característi cas: - morfologia: micro-organismo Gram-positivo, imóvel, forma de bastão, bacilos longos com granulações, - metabolismo: homofermentativo, catalase (-), - fermentação de açúcares (resultados obtidos com um teste API 50 CH em um meio MRS a 37oC por 48 horas): glicose, frutose, manose e lactose.
[0011] Ainda, esta linhagem é capaz de inibir a adesão de linha gens de H. pylori a células epiteliais in vitro e in vivo.
[0012] Como aqui usado, o termo "inibição de adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais" referesse a uma inibição significante (isto é, inibição total ou parcial) da adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais. A inibição da adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais pode ser medida in vitro, como mostrado no exemplo 1 abaixo.
[0013] A presente invenção também abrange linhagens mutantes ou geneticamente transformadas derivadas da linhagem parente CNCM I-4428, contanto que elas sejam capazes de inibir a adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais. Estas linhagens mutantes ou geneticamente transformadas podem ser linhagens em que um ou mais genes endógenos da linhagem parente sofreram mutação, por exemplo, para modificar algumas de suas propriedades metabólicas (por exemplo, sua habilidade para fermentar açúcares, sua resistência a acidez, sua sobrevivência para transporte no trato gastrointestinal, suas propriedades pós-acidulação ou sua produção de metabólito). Elas também podem ser linhagens resultantes da transformação genética da linhagem parente CNCM I-4428 através de um ou mais genes de interesse, por exemplo, de modo a conferir às ditas linhagens geneticamente transformadas características fisiológicas, ou para permitir que as mesmas expressem proteínas de interesse terapêutico ou para vacinas que sejam desejadas administrar através das ditas linhagens. Estas linhagens podem ser obtidas a partir da linhagem CNCM I-4428 por meio das técnicas convencionais para mutagênese randômica ou direcionada para sítio e transformação genética de Lactobacilli, tais como aqueles descritos por Gury et al. (2004) ou por Perea Vélez et al., 2007, ou por meio da técnica conhecida como "embaralhamento de genoma" (Patnaik et al., 2002 e Wang et al., 2007).
[0014] Um objeto da presente invenção é também um processo para obtenção de uma linhagem de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus capaz de inibir a adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais, compreendendo uma etapa de mutagênese ou transformação genética da linhagem CNCM I-4428.
[0015] Um objeto da presente invenção é também frações de célu las que podem ser obtidas a partir de uma linhagem de L. bulgaricus como definida acima, preferivelmente a linhagem CNCM I-4428, contando que elas sejam capazes de inibir a adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais. Elas são em particular preparações de DNA ou preparações de parede de bactérias obtidas de culturas da dita linhagem. Elas também podem ser sobrenadantes de cultura ou frações destes sobrenadantes. Por meio de exemplo, sobrenadante livre de células (CFS) da linhagem CNCM I-4428 pode ser obtido usando o processo para obtenção de um CFS de partir de uma outra linhagem de L. bulgaricus, mostrada em Simova et al., 2009.
[0016] Um objeto da presente invenção é também um processo para obtenção de uma fração de células que é capaz de inibir a adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais, compreendendo as etapas de: a) cultura de uma linhagem de L. bulgaricus como definida acima, preferivelmente a linhagem CNCM I-4428, e b) obtenção de fração de células a partir da cultura na etapa a).
[0017] Um objeto da presente invenção é também uma composi ção compreendendo uma linhagem de L. bulgaricus de acordo com a presente invenção, preferivelmente a linhagem CNCM I-4428, ou uma fração de células obtida a partir da dita linhagem de acordo com a pre-sente invenção.
[0018] Na composição da invenção, a dita linhagem pode ser usa da na forma de bactérias inteiras que podem estar vivas ou mortas. Alternativamente, a dita linhagem pode ser usada na forma de um li- sado de bactérias ou na forma de frações bacterianas; as frações bac- terianas apropriadas para este uso podem ser escolhidas, por exemplo, através de testes de suas propriedades sobre a adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais. Preferivelmente as células bacterianas estão presentes como células viáveis, vivas.
[0019] As composições da invenção podem estar em qualquer forma apropriada para administração, em particular administração oral. Isto inclui, por exemplo, sólidos, semissólidos, líquidos, e pulverizados. Composição líquida é genericamente preferida por facilidade de admi-nistração, por exemplo, como drinques.
[0020] A composição pode compreender pelo menos 105 cfu, pre ferivelmente pelo menos 106 cfu, por g de peso seco, de pelo menos uma linhagem de bactérias como mencionado acima.
[0021] A composição ainda pode compreender outras linhagens de bactérias que não as linhagens de acordo com a presente invenção, em particular linhagens pró-bióticas, tais como Lactobacillus, Bifido-bacterium, Streptococcus ou Lactococcus.
[0022] Quando as bactérias estão na forma de bactérias vivas, a composição tipicamente pode compreender 105 a 1013 unidades de formação de colônia (cfu), preferivelmente pelo menos 106 cfu, mais preferivelmente pelo menos 107 cfu, ainda mais preferivelmente pelo menos 108 cfu, e mais preferivelmente pelo menos 109 cfu por g de peso seco da composição. No caso de uma composição líquida, isto corresponde genericamente a 104 a 1012 unidades de formação de colônia (cfu), preferivelmente pelo menos 105 cfu, mais preferivelmente pelo menos 106 cfu, ainda mais preferivelmente pelo menos 107 cfu, e mais preferivelmente pelo menos 109 cfu/ mL.
[0023] A composição pode ser uma composição nutricional, inclu indo produtos alimentícios, suplementos alimentícios e alimento funci-onal. Um "suplemento de alimento" designa um produto fabricado a partir de compostos usualmente usados em alimentos, mas que está na forma de comprimidos, pulverizado, cápsulas, dose ou qualquer outra forma usualmente não associada com alimentos, e que tem efeitos benéficos para saúde de alguém. Um "alimento funcional" é um alimento que também tem efeitos benéficos para saúde de alguém. Em particular, suplementos alimentícios e alimento funcional podem ter um efeito fisiológico - protetor ou curativo - contra uma doença, por exemplo, contra uma doença crônica.
[0024] A composição nutricional de acordo com a invenção tam bém inclui um alimento de bebê, uma fórmula de leite infantil, ou uma fórmula de acompanhamento infantil. Preferivelmente a presente com-posição é um produto nutracêutico ou farmacêutico, um suplemento nutricional ou alimento médico.
[0025] A composição pode ser um produto laticínio, preferivelmen te um produto laticínio fermentado. O produto fermentado pode estar presente na forma de um líquido ou presente na forma de um pulverizado seco obtido por secagem de líquido fermentado. Exemplos de produtos laticínios incluem leite fermentado e/ou soro de leite coalhado fermentado em forma fixa, agitada ou bebível, queijo e iogurte.
[0026] O produto fermentado também pode ser um vegetal fer mentado, tal como soja fermentada, cereais e/ou frutas em formas fixas, agitadas ou bebíveis.
[0027] Em uma modalidade preferida, o produto fermentado é um produto fresco. Um produto fresco, que não sofreu severas etapas de tratamento térmico, tem a vantagem de que as linhagens de bactérias presentes estão na forma viva.
[0028] Um objeto da presente invenção é também uma linhagem de L. bulgaricus como definida acima, preferivelmente a linhagem CNCM I-4428, ou uma composição como definida acima para uso como um medicamento para tratamento ou prevenção de infecção com Helicobacter pylori.
[0029] Um objeto da presente invenção é também uma linhagem de L. bulgaricus como definida acima, preferivelmente a linhagem CNCM I-4428, ou uma composição como definida acima para uso como um medicamento, preferivelmente um medicamento para tratamento ou prevenção de infecção com H. pylori.
[0030] Um objeto da presente invenção é também uma linhagem de L. bulgaricus como definida acima, preferivelmente a linhagem CNCM I-4428, ou uma composição como definida acima para a fabricação de um medicamento, preferivelmente um medicamento para tratamento ou prevenção de infecção com H. pylori.
[0031] Um objeto da presente invenção é também um processo para tratamento ou prevenção de infecção com H. pylori em um sujeito em sua necessidade, o dito processo compreendendo administração ao dito sujeito de uma quantidade terapeuticamente efetiva de uma linhagem de L. bulgaricus como definida acima, preferivelmente a linhagem CNCM I-4428, ou uma composição como definida acima.
[0032] Determinação de uma quantidade terapeuticamente efetiva é bem conhecida por aqueles versados na técnica, especialmente em vista da exposição detalhada aqui provida.
[0033] Um objeto da presente invenção é também um processo para tratamento ou prevenção de infecção com H. pylori em um sujeito em sua necessidade, o dito processo compreendendo administração ao dito sujeito de uma quantidade terapeuticamente efetiva de uma linhagem de L. bulgaricus como definida acima, preferivelmente a linhagem CNCM I-4428, ou uma composição como definida acima.
[0034] Determinação de uma quantidade terapeuticamente efetiva é bem conhecida a partir daqueles versados na técnica, especialmente em vista da exposição detalhada aqui provida.
[0035] Um objeto da presente invenção é também um processo para a fabricação de um medicamento, preferivelmente um medicamento para tratamento ou prevenção de infecção com H. pylori, o dito processo compreendendo incorporação de uma linhagem de L. bulga- ricus como definida acima, em pelo menos um diluente, veículo ou ex- cipiente farmaceuticamente aceitável.
[0036] Como aqui usado, o tratamento ou prevenção abrange inter alia: infecção preventiva, estabilização de carga de H. pylori e/ou dimi-nuição de carga de H. pylori. O tratamento ou prevenção também abrange endereçamento de pelo menos um dos sintomas associados com H. pylori mencionados acima.
[0037] Métodos para diagnóstico de infecção com H. pylori são conhecidos na técnica. Por meio de exemplo, diagnóstico de infecção com H. pylori pode ser feito através de um teste de anticorpo de sangue, um teste de antígeno de fezes ou um teste de respiração de ureia carbono. Ele também pode ser feito através de biópsia sob endoscopia seguido por um teste de urease, um exame histológico ou uma cultura microbiana.
[0038] Os sintomas ou doenças associados com infecção de H. pylori são dor de estômago, azia, refluxo ácido, dor abdominal, regurgi-tação, vômito, eructação, flatulência, náusea, gastrite tal como gastrite ativa crônica, doenças de úlcera péptica, atrofia, metaplasia, displasia, câncer gástrico e linfoma de tecido linfoide associado com mucosa gástrica (MALT).
[0039] A presente invenção será mais claramente entendida a par tir da descrição que ainda se segue, a qual referesse a exemplos ilus-trando as propriedades anti-infecção da linhagem CNCM I-4428 assim como às figuras apostas.
[0040] A Figura 1 mostra evolução em peso (em gramas) de ca mundongos infectados por H. pylori SS1 recebendo um produto con-trolado, ou infectados por H. pylori SS1 e tratados com L. bulgaricus CNCM I-4428, ou infectados por H. pylori SS1 e tratados com L. bulga- ricus CNCM I-1632 (Lb 130), medida justo antes de tratamento (primeira barra), 3 semanas após o tratamento (segunda barra) e justo antes de sacrifício (terceira barra).
[0041] A Figura 2 mostra o escore de infecção obtido através de imuno-histoquímica usando anticorpos anti-H. pylori em camundongos (i) não infectados por H. pylori, (ii) infectados por H. pylori SS1 recebendo um produto controlado (leite não fermentado), (iii) infectados por H. pylori SS1 e tratados com L. bulgaricus CNCM I-1632 (Lb 130) e (iv) infectados por H. pylori SS1 e tratados com L. bulgaricus CNCM I4428. Definição de escores: 0: nenhuma glândula infectada, 1: raras glândulas infectadas, 2: 25% de glândulas infectadas, 3: de 25 a 50% de glândulas infectadas, 4: > 50% de glândulas infectadas.
[0042] A Figura 3 mostra a quantificação de DNA de H. pylori SS1obtido por PCR de tempo real em camundongos (i) não infectados por H. pylori, (ii) infectados por H. pylori SS1 mas, recebendo um produto controlado (leite não fermentado), (iii) infectados por H. pylori SS1
[0043] E tratados com L. bulgaricus CNCM I-4428 e (iv) infectador por H. pylori SS1 e tratados com L. bulgaricus CNCM I-1632 (Lb 130).
[0044] O método descrito por Oleastro et al. (2008) foi usado com modificações para avaliar o efeito de duas linhagens de Lactobacillus delbrueckiisubsp. Bulgaricus (CNCM I-4428 e CNCM I-1632 depositadas em CNCM em 25 de outubro de 1995) sobre as propriedades adesivas de H. pylori a células epiteliais.
[0045] Duas linhagens de H. pylori foram testadas: a linhagem J99 (BabA2; ATCC número: 700824) e a linhagem 09,193 (BabA1, isolada no Japão por Yoshio Yamaoka, da Oita University). Estas linhagens fo- ram testadas com uma MOI (multiplicidade de infecção) de 50. Células de H. pylori foram transferidas em tampão PBS após uma cultura de 24 horas em pylori agar (Biomérieux, France). A concentração de suspensões bacterianas das duas linhagens de H. pylori respectivamente foi normalizada em 2.108 cfu/mL (correspondendo a OD600 nm = 1).
[0046] Duas suspensões de Lactobacillus delbrueckii subsp. bul- garicus foram testadas com uma MOI de 50 (correspondendo a 25 mi- crolitros de suspensão normalizada de L. bulgaricus por cavidade).
[0047] 100 000 células AGS epiteliais (ATCC número: CRL-1739) foram inoculadas no dia anterior de experimento de infecção em 500 microlitros de meio DMEM F12 complementado com soro bovino fetal em 10%.
[0048] 1 mL de suspensão de H. pylori foi centrifugado 10 minutos em 10 000 g. O pélete foi ressuspenso em 1 mL de Diluente A (de PKH2 Green Fluorescent Cell Linker Kit, Sigma Aldrich, Saint-Louis) e 2,5 microlitros de PKH2 (Sigma Aldrich, Saint-Louis) foram adicionados. A suspensão foi incubada 2 minutos e 30 segundos em temperatura ambiente. A coloração foi interrompida pela adição de 2 mL de soro bovino fetal. Então 4 mL de meio DMEM/F12 foram adicionados antes de centrifugação da suspensão por 10 minutos em 10 000 g. O pélete foi novamente suspenso em 4 mL de meio de cultura e centrifugada 10 minutos em 10 000 g. Esta etapa de lavagem foi repetida duas vezes para remover excesso de fluorcromo.
[0049] Células AGS epiteliais foram dissociadas com tripsina se guindo condições padrões após três lavagens com PBS para descartar bactérias não aderentes. Emissão fluorescente foi analisada por cito- metria de fluxo. Fluorescência foi medida usando o citômetro de fluxo FACSCalibur (Becton Dickinson). Cada condição foi realizada em tri- plicatas.
[0050] Infecção com H. pylori foi realizada em duas condições - em condição de pré-infecção (pré): a suspensão de L. bulgaricus a ser testada foi adicionada às células AGS epiteliais 1h30 antes de infecção com H. pylori. Células foram analisadas por citome- tria de fluxo 1h30 após a infecção (tempo de incubação total de 3 horas); - em condição de coinfecção (co): a suspensão de L. bulga- ricus a ser testada e uma linhagem de H. pylori foram adicionadas às células AGS epiteliais ao mesmo tempo e as células foram analisadas por citometria de fluxo após um tempo de incubação de 1h 30.
[0051] O valor controle de intensidade de fluorescência é obtido com as células AGS epiteliais incubadas com linhagens de H. pylori por 1h 30.
[0052] Porcentagem de valores de adesão é dada em relação à adesão de H. pylori a células epiteliais AGS sem exposição a L. bulga- ricus, que foram fixados em 100%.
[0053] Resultados foram analisados a partir de valor médio obtido de triplicatas e eles foram feitos escores que eles foram significante- mente diferentes de acordo com o teste de Student (P < 0,05).
[0054] Os resultados são mostrados na Tabela 1 que se segue. Tabela 1: resultados obtidos com 2 linhagens de L. bulgaricus para seu efeito sobre adesão de H. pylori a células AGS epiteliais.
[0055] Definição de escores: -3: significante aumento em adesão, 0: nenhum efeito significante sobre adesão, 1: inibição significante de adesão a partir de 1 a 10%, 2: significante inibição de adesão a partir de 11 a 20%, 3: significante inibição de adesão a partir de 21 a 30%, 4: significante inibição de adesão superior a 30%.
[0056] Os resultados mostram que uma suspensão bacteriana da linhagem CNCM I-4428 inibe a adesão de duas linhagens de H. pylori (J99 e 09,193) a células AGS epiteliais em duas diferentes condições (pré- e coincubação), mas que uma suspensão bacteriana da linhagem CNCM I-1632 não tem esta propriedade.
[0057] H. pylori linhagem SS1 tendo uma habilidade de coloniza ção muito boa de mucosa gástrica de camundongos (Lee et al., 1997) foi usada. Identidade da linhagem foi verificada através de sequencia- mento de genes glm e hspA e vacA.
[0058] Produtos de leite fermentado por 2 linhagens diferentes de L. bulgaricus (CNCM I-4428 ou CNCM I-1632) foram preparados como se segue: Primeiro cultura em MRSn foi preparada a partir de linhagem congelada e incubada a 37oC por 17 horas. Uma segunda cultura foi preparada em leite desnatado enriquecido com extrato de levedura (2 g/L) através de inoculação a 1% a partir da primeira cultura e incubada a 37oC por 17 horas. Uma terceira cultura foi preparada em leite enriquecido com extrato de levedura (2 g/L) através de inoculação em 1% a partir da segunda cultura e incubação a 37oC até pH 4,7 ser atingido. O produto foi finalmente preparado por inoculação de leite enriquecido com extrato de levedura (2 g/L) em 1% com a terceira cultura até pH 4,7 ser atingido. Produtos foram estocados a -80oC. Contagem bacteriana foi realizada em MRSn após 48 horas de incubação. Contagem bacteriana foi 6.108 e 1,3.109 cfu/mL, respectivamente para linhagens CNCM I-4428 e CNCM I-1632.
[0059] 55 camundongos fêmeas BALB/cBy/J de 5 semanas de idade (Charles River, France) e testados como SPF (<<livres de pató- geno específico>>) foram divididos em grupos: 3 grupos de 15 camun-dongos foram infectados e 1 grupo de 10 camundongos foi usado como controle não infectado. Camundongos foram alimentados com alimento pobre em vitaminas para aperfeiçoar o desenvolvimento de lesão induzida por H. pylori.
[0060] Camundongos de 6 semanas de idade receberam uma di eta hídrica por 1 dia e então foram alimentados - forçados na manhã seguinte com 250 microlitros de uma suspensão enriquecida da linhagem de H. pylori SS1 (1 a 2 placas de Petri de H. pylori para 5 camundongos). Os camundongos foram colocados em uma gaiola com uma dieta normal. Então, os camundongos receberam novamente uma dieta hídrica na noite. Este protocolo foi repetido por 3 dias.
[0061] Oito semanas após sua infecção, camundongos foram tra tados por 6 semanas com produtos de leite contendo uma linhagem de L. bulgaricus. 120 g de produto de leite foram dados por gaiola por dia em garrafas de alimentação ao invés de água. As garrafas de alimentação foram trocadas cada dia. Para avaliar a quantidade de produtos ingeridos por animal, as garrafas de alimentação foram pesadas. Ainda, camundongos foram pesados justo antes de tratamento, 3 semanas após o tratamento e justo antes de sacrifício (resultados são mostrados na Figura 1).
[0062] Grupos controles de camundongos receberam leite enri- quecido com extrato de levedura (2 g/L) (isto é, sem qualquer linhagem de L. bulgaricus).
[0063] Camundongos foram sacrificados através de deslocamento cervical. Laparotomia foi realizada. Estômagos foram isolados e mucosa gástrica foi lavada em soro fisiológico.
[0064] Estômago foi cortado através de metade a partir de esôfago para o duodeno. Para a metade direita de estômago, cárdia foi eliminada, e então esta metade de estômago foi colocada em soro fisiológico para ser usada para o estudo molecular. A metade esquerda de estômago foi usada para histologia.
[0065] A metade esquerda de estômago foi fixada 1 noite em for mol 3,7% e lavada com etanol 70% e então embutida em parafina e seccionada em espessura de 3 micrômetros.
[0066] Imuno-histoquímica foi realizada com um anticorpo antíge- nos anti-H. pylori: anticorpo primário: anti-H. pylori (Dako, Ref. B0471); anticorpo secundário e DAB: Dako EnVision+ System - HRP (DAB) (Dako, Ref. K4011).
[0067] Estômagos direitos foram homogeneizados (rompidos) em 0,2 mL de soro fisiológico com um Potter - Elvehjem (o tubo foi pesado com e sem o tecido de estômago para conhecer o peso do tecido).
[0068] ADN total foi extraído do estômago triturado com o kit Arrow Stool DNA (NorDiag, Norvège) seguindo recomendações de fornecedor. Para cada estômago triturado DNA total foi novamente suspenso em 180 microlitros de tampão TRIS (10 mM).
[0069] Presença de DNA de H. pylori foi quantificada em extratos de DNA através de PCR de tempo real. Amplificação foi feita com ini-ciadores alvejando rRNA 23S, presente em duas cópias em H. pylori seguindo o processo descrito por Oleastro et al. (2003). Para 20 micro- litros de mistura (MgCl2 25 mM, iniciadores HPY-A e HPY-S 20 μM descritos por Ménard et al., 2002, sonda sensora que é marcada 5’ com LC-Red 640 e fosforilada 3’ e sonda âncora que é marcada 3’ com fluoresceína (ambas sondas descritas por Oleastro et al. 2003) 20 μM, tampão contendo a enzima (10X, kit FastStart DNA Master Hybridization probes, Roche Diagnostics), 5 μL de DNA em 200 ng/μL foram adicionados para serem amplificados em Light Cycler ROCHE, usando o seguinte programa: Desnaturação: 95°C 10 minutos Amplificação: 50 ciclos 20oC/s 95oC 0 s 60oC 20 s 72oC 12 s Fusão: 95oC 0 s 38oC 50 s 20oC/s 2.2 Resultados
[0070] Os escores de infecção obtidos através de imuno- histoquímica para L. bulgaricus linhagens CNCM I-4428 e CNCM I1632 (Lb 130) são mostrados na Figura 2. Estes resultados mostram que administração de produto de leite fermentado com a linhag m CNCM I-4428 para camundongos infectados por H. pylori diminui signi- ficantemente o escore de infecção mas que o tratamento com o produto leite fermentado com a linhagem CNCM I-1632 não diminui a carga de H. pylori. REFERÊNCIAS - Boyanova L et al., Lett Appl Microbiol. 2009;48:579-84. - Fox JG and Wang TC., J Clin Invest. 2007;117:60-9. - Gury J et al., Arch Microbiol. 2004;182:337-45. - Lee A et al., Gastroenterology. 1997;112:1386-97. - Ménard A et al., Antimicrob Agents Chemother. 2002;46:1156-7. - Oleastro M et al., J Clin Microbiol. 2003;41:397-402. - Oleastro M, et al., J Infect Dis. 2008;198:1379-87. - Patnaik R et al., Nat Biotechnol. 2002;20:707-12. - Perea Vélez M et al., Appl Environ Microbiol. 2007;73:3595-604. - Polk DB and Peek RM Jr., Nat Rev Cancer. 2010;10:403- 14. - Simova ED et al., J Appl Microbiol. 2009;106:692-701. - Wang Y et al., J Biotechnol. 2007;129:510-5.
Claims (8)
1. Método para obtenção de uma fração de células que é capaz de inibir a adesão de linhagens de H. pylori a células epiteliais, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (a) cultivar de uma linhagem de L. Bulgaricus depositada sob o número de acesso \CNCM I-4428, e (b) obter a fração de células da cultura na etapa (a).
2. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma linhagem de L. Bulgaricus depositada sob o número de acesso CNCM I-4428, a referida composição sendo uma composição nutricional.
3. Composição de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a referida composição é um produto alimentício, um suplemento alimentar ou um alimento funcional.
4. Composição de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a referida composição é um alimento para bebês, uma fórmula de leite infantil ou uma fórmula de acompanhamento infantil.
5. Composição de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a referida composição é um produto nutricêutico, um produto farmacêutico, um suplemento nutricional ou um alimento médico.
6. Composição de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a referida composição é um produto laticínio, de preferência um produto laticínio fermentado.
7. Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a referida composição é um iogurte ou um queijo.
8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 7, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos 106 cfu, por grama, da linhagem de L. Bulgaricus depositada sob o número de acesso CNCM I-4428.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/IB2011/053552 WO2013021239A1 (en) | 2011-08-09 | 2011-08-09 | New strain of l. bulgaricus capable of inhibiting the adhesion of h. pylori strains to epithelial cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BR112014002911A2 BR112014002911A2 (pt) | 2017-03-01 |
| BR112014002911B1 true BR112014002911B1 (pt) | 2020-12-08 |
Family
ID=44645757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BR112014002911-3A BR112014002911B1 (pt) | 2011-08-09 | 2011-08-09 | método para obtenção de uma fração de células e composição que compreende uma linhagem de l. bulgaricus |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9272007B2 (pt) |
| EP (1) | EP2742125B1 (pt) |
| JP (1) | JP5997769B2 (pt) |
| CN (1) | CN103987839B (pt) |
| AR (1) | AR087463A1 (pt) |
| BR (1) | BR112014002911B1 (pt) |
| ES (1) | ES2627767T3 (pt) |
| MX (1) | MX350212B (pt) |
| RU (1) | RU2584600C2 (pt) |
| WO (1) | WO2013021239A1 (pt) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9925225B2 (en) | 2014-09-26 | 2018-03-27 | Nubiome, Inc. | Treatment and prophylaxis for gastroesophageal reflux disease |
| CN111118106B (zh) * | 2019-12-20 | 2021-12-17 | 善恩康生物科技（苏州）有限公司 | 一株可以抑制幽门螺旋杆菌的嗜酸乳杆菌la-10a及其应用 |
| CN116024129B (zh) * | 2022-11-29 | 2024-09-24 | 光明乳业股份有限公司 | 一株能够与幽门螺杆菌共聚集的卷曲乳杆菌及其应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1148064A1 (en) * | 2000-04-17 | 2001-10-24 | Vrije Universiteit Brussel | Lactobacillus johnsonii bacteriocin, active against Helicobacter pylori |
| CN101314763B (zh) * | 2007-06-01 | 2011-06-08 | 统一企业(中国)投资有限公司 | 具有抗胃肠道致病菌、抗氧化和降血压作用的短双歧杆菌及其用途 |
| JP5679255B2 (ja) * | 2009-12-28 | 2015-03-04 | 株式会社明治 | 酸素耐性が増強された微生物およびその利用 |
-
2011
- 2011-08-09 US US14/237,740 patent/US9272007B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-08-09 MX MX2014001572A patent/MX350212B/es active IP Right Grant
- 2011-08-09 ES ES11755445.1T patent/ES2627767T3/es active Active
- 2011-08-09 RU RU2014108605/10A patent/RU2584600C2/ru active
- 2011-08-09 WO PCT/IB2011/053552 patent/WO2013021239A1/en active Application Filing
- 2011-08-09 BR BR112014002911-3A patent/BR112014002911B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-08-09 EP EP11755445.1A patent/EP2742125B1/en not_active Not-in-force
- 2011-08-09 JP JP2014524456A patent/JP5997769B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-08-09 CN CN201180072799.XA patent/CN103987839B/zh not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-08-03 AR ARP120102859A patent/AR087463A1/es not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20140205571A1 (en) | 2014-07-24 |
| US9272007B2 (en) | 2016-03-01 |
| EP2742125B1 (en) | 2017-03-15 |
| MX2014001572A (es) | 2015-03-05 |
| RU2584600C2 (ru) | 2016-05-20 |
| RU2014108605A (ru) | 2015-09-20 |
| CN103987839A (zh) | 2014-08-13 |
| CN103987839B (zh) | 2016-11-23 |
| BR112014002911A2 (pt) | 2017-03-01 |
| WO2013021239A1 (en) | 2013-02-14 |
| JP2014522667A (ja) | 2014-09-08 |
| EP2742125A1 (en) | 2014-06-18 |
| JP5997769B2 (ja) | 2016-09-28 |
| MX350212B (es) | 2017-08-30 |
| ES2627767T3 (es) | 2017-07-31 |
| AR087463A1 (es) | 2014-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109789170A (zh) | 包含细菌菌株的组合物 | |
| RU2567009C2 (ru) | ШТАММ Lactococcus lactis ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ РАССТРОЙСТВА ПИЩЕВАРЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | |
| KR20080081186A (ko) | 새로운 락트산간균 균주 및 헬리코박터 필로리에 대한 그사용 | |
| JP7126004B2 (ja) | 組成物及びその使用 | |
| KR101228035B1 (ko) | 신규한 유산균 및 이를 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물 | |
| WO2011148355A1 (en) | Probiotic strains for use in improving the enteric nervous system | |
| CN105008924B9 (zh) | 用于治疗和/或预防腹泻的益生菌菌株 | |
| Kolida et al. | Gastrointestinal microflora: probiotics | |
| CN116083325B (zh) | 一种改善幽门螺杆菌相关性胃肠疾病的鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| WO2018112740A1 (zh) | 一种加氏乳杆菌及其培养方法和应用 | |
| CN113637603B (zh) | 一种肠道乳杆菌及其应用 | |
| JP5816273B2 (ja) | 経上皮抵抗の改善に用いるためのプロバイオティクス株 | |
| US20150284675A1 (en) | Streptococcus thermophilus strains for treating helicobacter pylori infection | |
| CN111494431B (zh) | 益生菌在制备治疗肝脏疾病制剂中的应用 | |
| BR112014002911B1 (pt) | método para obtenção de uma fração de células e composição que compreende uma linhagem de l. bulgaricus | |
| CN117004503B (zh) | 一株唾液联合乳杆菌mb1及其在制备助睡眠和调理肠胃食品药品中的应用 | |
| JP5868519B2 (ja) | ロイテリン産生ラクトバチルス・ブレビス | |
| Conway et al. | Strategies for the isolation and characterisation of functional probiotics | |
| WO2013027087A1 (en) | A non-reuterin-producing lactobacillus reuteri strain for treating helicobacter pylori infection | |
| TWI316545B (en) | Novel lactobacillus rhamnosus strain lv108 and uses thereof | |
| CN115109718B (zh) | 一株屎肠球菌菌株及其用途 | |
| CN111172054B (zh) | 一种干酪乳杆菌组合制剂及其应用 | |
| RU2708146C2 (ru) | Средство для улучшения состояния пищеварения | |
| JP2024515351A (ja) | 付着性侵入性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）に対するバクテリオファージ療法 | |
| CN117327612A (zh) | 一种能够增加肠道蠕动性的益生菌及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B07D | Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette] | ||
| B06F | Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette] | ||
| B07G | Grant request does not fulfill article 229-c lpi (prior consent of anvisa) [chapter 7.7 patent gazette] | ||
| B06T | Formal requirements before examination [chapter 6.20 patent gazette] | ||
| B06A | Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette] | ||
| B07A | Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette] | ||
| B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
| B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 09/08/2011, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. |
|
| B21F | Lapse acc. art. 78, item iv - on non-payment of the annual fees in time |
Free format text: REFERENTE A 11A ANUIDADE. |
|
| B24J | Lapse because of non-payment of annual fees (definitively: art 78 iv lpi, resolution 113/2013 art. 12) |
Free format text: EM VIRTUDE DA EXTINCAO PUBLICADA NA RPI 2682 DE 31-05-2022 E CONSIDERANDO AUSENCIA DE MANIFESTACAO DENTRO DOS PRAZOS LEGAIS, INFORMO QUE CABE SER MANTIDA A EXTINCAO DA PATENTE E SEUS CERTIFICADOS, CONFORME O DISPOSTO NO ARTIGO 12, DA RESOLUCAO 113/2013. |